EA201892561A1 20190430 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2019\PDF/201892561 Полный текст описания [**] EA201892561 20170505 Регистрационный номер и дата заявки US62/333,886 20160510 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2017/031197 Номер международной заявки (PCT) WO2017/196647 20171116 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21904 Номер бюллетеня [**] ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ GDF15 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Название документа [8] A61K 9/00, [8] A61K 38/00, [8] A61K 38/18, [8] C07K 14/00, [8] C07K 14/495, [8] C07K 14/765 Индексы МПК [US] Армстронг Энтони, [US] Коннор Джудит Энн, [US] Фурман Дженнифер, [US] Хуан Чичи, [US] Хантер Майкл Дж., [US] Линь-Шмидт Сефань, [US] Нельсон Серена, [US] Рангвала Шамина, [US] Малликан Шэннон, [US] Чавес Хосе Антонио Сведения об авторах [US] ЯНССЕН БАЙОТЕК, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201892561a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Описаны гибридные белки, содержащие белок, продлевающий период полужизни, линкер и белок GDF15. Также описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие гибридные белки, рекомбинантные клетки с ними, композиции, содержащие гибридные белки, и способы применения гибридных белков для лечения или профилактики заболеваний, расстройств или состояний.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Описаны гибридные белки, содержащие белок, продлевающий период полужизни, линкер и белок GDF15. Также описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие гибридные белки, рекомбинантные клетки с ними, композиции, содержащие гибридные белки, и способы применения гибридных белков для лечения или профилактики заболеваний, расстройств или состояний.


Евразийское (21) 201892561 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61K 9/00 (2006.01)
2019 04 30 A61K 38/00 (2006.01)
A61K 38/18 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки C07K14/00 (2006.0l)
2017.05.05 C07K14/495 (2006.01)
C07K14/765 (2006.01)
(54) ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ GDF15 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
(31) 62/333,886
(32) 2016.05.10
(33) US
(86) PCT/US2017/031197
(87) WO 2017/196647 2017.11.16
(71) Заявитель:
ЯНССЕН БАЙОТЕК, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Армстронг Энтони, Коннор Джудит Энн, Фурман Дженнифер, Хуан Чичи, Хантер Майкл Дж., Линь-Шмидт Сефань, Нельсон Серена, Рангвала Шамина, Малликан Шэннон, Чавес Хосе Антонио (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Описаны гибридные белки, содержащие белок, продлевающий период полужизни, линкер и белок GDF15. Также описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие гибридные белки, рекомбинант-ные клетки с ними, композиции, содержащие гибридные белки, и способы применения гибридных белков для лечения или профилактики заболеваний, расстройств или состояний.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-553370ЕА/085
[0001] ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ GDF15 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Настоящее изобретение относится к гибридным белкам GDF15. В частности, настоящее изобретение относится к гибридному белку, содержащему белок, продлевающий период полужизни, линкер и белок GDF15, нуклеиновым кислотам и экспрессионным векторам, кодирующим гибридные белки, рекомбинантным клеткам с ними, а также фармацевтическим композициям, содержащим эти гибридные белки. Также предложены способы продуцирования гибридных белков и применения гибридных белков для лечения метаболических расстройств.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Белок GDF15, член семейства TGF0, - это секретируемый белок, который циркулирует в плазме в виде гомодимера с молекулярной массой 2 5 кДа. У большинства субъектов уровни белка GDF15 в плазме варьируют в интервале 150-1150 пг/мл (Tsai et al. , J Cachexia Sarcopenia Muscle. 2012, 3: 239-243) . Уровни белка GDF15 в плазме возрастают в состоянии травмы, при сердечно-сосудистых и определенных типах онкологических заболеваний. Полагают, что данное возрастание обусловлено цитопротекторным механизмом. Высокие уровни белка GDF15 в плазме связаны с потерей массы тела вследствие анорексии и кахексии при онкологических заболеваниях, а также при почечной и сердечной недостаточности. В одном клиническом исследовании уровни белка GDF15 служили в качестве независимого прогностического фактора резистентности к инсулину у субъектов, страдающих ожирением, но не больных диабетом (Kempf et al., Eur. J. Endo. 2012, 167: 671678). Исследование на близнецах показало, что различия в уровнях белка GDF15 в парах близнецов коррелировали с различиями в индексах массы тела (ИМТ) в соответственных парах, подтверждая, что GDF15 служит долгосрочным регулятором энергетического гомеостаза (Tsai et al., PLoS One. 2015, 10 (7):e0133362).
[0004] Белок GDF15 был подробно изучен как биомаркер
нескольких сердечно-сосудистых и других видов заболеваний; кроме того, была описана защитная роль GDF15 при гипертрофии миокарда и ишемическом поражении (Collinson, Curr. Opin. Cardiol. 2014, 29: 366-371; Kempf et al. , Nat. Med. 2011, 17: 581-589; Xu et al. , Circ Res. 2006, 98: 342-50) . Было показано, что белок GDF15 играет важную роль в защите от повреждений почечных канальцев и интерстициальных тканей в моделях диабета 1 и 2-го типов у мышей (Mazagova et al. , Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2013; 305: F1249-F1264). Предполагается, что белок GDF15 обеспечивает защитное действие против гибели сенсорных и моторных нейронов в процессе старения и улучшает восстановление после повреждения периферических нервов (Strelau et al., J. Neurosci. 2009, 29: 13640-13648; Mensching et al. , Cell Tissue Res. 2012, 350: 225238) . Фактически было показано, что трансгенные мыши с белком GDF15 имеют большую продолжительность жизни, чем контрольные из одного помета с ними, и это может указывать на то, что эта молекула служит фактором долговременного выживания (Wang et al., Aging. 2014, 6: 690-700).
[0005] В многочисленных работах продемонстрировано улучшение переносимости глюкозы и чувствительности к инсулину в моделях мышей после введения белка GDF15. Две независимых линии трансгенных мышей со сверхэкспрессией GDF15 имели пониженную массу тела и массу жировой ткани, а также улучшенную переносимость глюкозы (Johnen et al. , Nat. Med. 2007, 13: 13331340; Macia et al. , PLoS One. 2012, 7: e34868; Chrysovergis et al., Int. J. Obesity. 2014, 38: 1555-1564). Сообщалось об увеличении полного расхода энергии и окислительного метаболизма у трансгенных мышей с белком GDF15 (Chrysovergis et al. , 2014, Id.). Это сопровождалось возрастанием экспрессии термогенных генов в бурой жировой ткани и возрастанием экспрессии липолитических генов в белой жировой ткани. Мыши, у которых не хватало гена GDF15, имели увеличенную массу тела и массу жировой ткани (Tsai et al., PIoS One. 2013, 8 (2): e55174). Было показано, что содержащий Fc гибридный белок с GDF15 вызывает уменьшение массы тела, а также улучшение переносимости глюкозы и чувствительности к инсулину на модели яванских макаков,
страдающих ожирением, после еженедельного введения в период шести недель (W0 2013/113008).
[0006] Предполагается, что влияние белка GDF15 на массу тела достигается за счет сокращения потребления пищи и увеличения расхода энергии. GDF15 может улучшать регуляцию гликемии посредством зависимых и не зависимых от массы тела механизмов.
[0007] На основании этих вместе взятых наблюдений можно предполагать, что увеличение уровней GDF15 может оказаться полезным при терапии метаболических заболеваний. Таким образом, в данной области существует потребность в композициях на основе GDF15, которые можно применять для лечения или профилактики метаболических заболеваний, расстройств или состояний.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008] Настоящее изобретение удовлетворяет данную
потребность, предлагая гибридные белки GDF15, которые
демонстрируют повышенную растворимость/стабильность и проявляют
признаки, указывающие на возможность их применения для лечения
или профилактики метаболических заболеваний, расстройств или
состояний. Такие признаки включают, например, уменьшение массы
тела, улучшение переносимости глюкозы, улучшение
чувствительности к инсулину у субъекта, которому вводят гибридный белок в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения.
[0009] В одном общем аспекте настоящее изобретение относится к гибридному белку, содержащему: (а) белок, продлевающий период полужизни, (Ь) линкер и (с) белок GDF15, причем гибридный белок составлен от N-конца до С-конца в порядке (а) - (Ь) - (с) .
[0010] В одном варианте осуществления настоящего
изобретения белок GDF15 представляет собой человеческий белок
GDF15 или его функциональный вариант. В конкретных вариантах
осуществления белок GDF15 содержит зрелый белок GDF15 или его
функциональный вариант. В более конкретных вариантах
осуществления белок GDF15 содержит аминокислотную
последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную
последовательностям SEQ ID NO: 6-11. В других конкретных вариантах осуществления белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 11, такую как аминокислотная последовательность, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID N0: 6-11.
[ООН] В одном варианте осуществления настоящего изобретения белок, продлевающий период полужизни, представляет собой человеческий сывороточный альбумин (HSA) или его функциональный вариант. В конкретных вариантах осуществления белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID N0: 1. В других конкретных вариантах осуществления белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 1-3.
[0012] В одном варианте осуществления настоящего
изобретения линкер представляет собой гибкий линкер. В
конкретных вариантах осуществления гибкий линкер содержит
последовательность (GGGGS)n, где п составляет от 2 до 20,
предпочтительно от 4 до 10. В еще одном варианте осуществления
настоящего изобретения линкер гибридного белка представляет
собой структурированный линкер. В конкретных вариантах
осуществления структурированный линкер содержит
последовательность (АР)п или (ЕАААК)п, где п составляет от 2 до 20, предпочтительно от 4 до 10.
[0013] В вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID N0: 5, 25-30, 36-37, 40, 48, 55-60 или 64-75. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-30, 40, 55-60 и 70. В более конкретном варианте осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 60.
[0014] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение
относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей гибридный белок настоящего изобретения.
[0015] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к экспрессионному вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок настоящего изобретения.
[0016] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к рекомбинантной клетке-хозяину, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок настоящего изобретения.
[0017] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к способу продуцирования гибридного белка настоящего изобретения. При этом способ включает в себя этапы, на которых: (1) культивируют клетку-хозяина, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок, в условиях, при которых продуцируется гибридный белок, и (2) выделяют гибридный белок, продуцированный клеткой-хозяином.
[0018] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей гибридный белок настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.
[0019] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок настоящего изобретения, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0020] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему фармацевтическую композицию настоящего изобретения.
[0021] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики метаболического заболевания, расстройства или состояния, причем способ включает введение нуждающемуся в лечении субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества фармацевтической композиции настоящего изобретения. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию вводят субъекту подкожно или внутривенно.
[0022] В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения способ лечения метаболического расстройства, выбранного из группы, состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы, повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии, диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда, застойной сердечной недостаточности или ревматоидного артрита, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, содержит введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-30, 40, 55-60 и 70, и фармацевтически приемлемый носитель. В конкретном варианте осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 60, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0023] Другие аспекты, признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из представленного ниже описания, включающего подробное описание изобретения и его предпочтительных вариантов осуществления, и прилагаемой формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0024] Предшествующее краткое изложение, а также последующее подробное описание изобретения, будут более понятными при рассмотрении вместе с прилагаемыми чертежами. Необходимо понимать, что изобретение не ограничено точными вариантами осуществления, показанными на чертежах.
[0025] На чертежах показано следующее.
[0026] На Фиг. 1А и 1В показана кристаллическая структура GDF15, в которой дисульфидные мостики между первым и вторым остатками цистеина (С1-С2) образуют петлю на N-конце этого белка.
[0027] На Фиг. 2 показано влияние подкожного введения гибридных белков в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения, например, гибридных белков FP1 (SEQ ID N0: 60) и 6xHis-FPl (SEQ ID NO: 26 с гексагистидиновой меткой
(6xHis), присоединенной на N-конце), на потребление пищи мышами линии C57BL/6; показано суммарное потребление пищи за 2 4 часа после введения. Цифры, показанные внутри столбцов, означают проценты снижения по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель (фосфатно-солевой буферный раствор (PBS)), ± SEM (стандартная погрешность средней величины); N=no 8 животных в группе во всех группах, за исключением группы с N=9, получавшей FP1, 16 нмоль/кг. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0028] На Фиг. 3 показано влияние подкожного введения FP1 и 6xHis-FPl (SEQ ID NO: 26 с гексагистидиновой меткой (6xHis), присоединенной на N-конце), на потребление пищи крысами линии Спрег-Доули; показано суммарное потребление пищи за 4 8 часов после введения. Цифры, показанные внутри столбцов, означают проценты снижения по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель (PBS) ± SEM; N=no 8 животных в группе. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0029] На Фиг. 4 показано изменение массы тела у мышей с алиментарным ожирением (DI0) во время введения FP1. Стрелки указывают время (дни) подкожного введения после введения начальной дозы (день 0) ; N=no 8 животных в группе. * р < 0,05 для группы с дозой FP1 1 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; # р < 0,05 для группы с дозой FP1 10 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0030] На Фиг. 5А и 5В показаны уровни глюкозы в крови мышей DIO, измеренные в пероральном тесте на переносимость глюкозы (OGTT), проведенном через 14 дней, в которые дозу FP1 вводили каждые 3 дня (q3d) , причем уровни выражены в виде площади под кривой (AUC) . N=no 8 животных в группе. * р < 0,05 для группы с дозой FP1 1 нмоль/кг, по сравнению с носителем в
контроле; значения р рассчитывали с помощью дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0031] На Фиг. б показаны уровни глюкозы в крови мышей DI0, измеренные после еды, во время введения FP1. N=no 8 животных в группе. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0032] На Фиг. 7 показана оценка резистентности к инсулину на основе гомеостатической модели (H0MA-IR) у мышей DI0 после 4 часов голодания, проведенная через 14 дней, в которые вводили FP1. N=no 8 животных в группе. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0033] На Фиг. 8 показано изменение массы тела у мышей ob/ob во время введения FP1 каждые 3 дня (q3d). Стрелки указывают время (дни) подкожного введения после введения начальной дозы (день 0) ; N=no 9 животных в группе. * р < 0,05 для группы с дозой FP1 10 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; # р < 0,05 для группы с дозой FP1 1 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0034] На Фиг. 9 показаны уровни глюкозы в крови мышей ob/ob во время введения FP1. Стрелки указывают время (дни) подкожного введения после введения начальной дозы (день 0); N=no 9 животных в группе. * р < 0,05 для группы с дозой FP1 10 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; # р < 0,05 для группы с дозой FP1 1 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0035] На Фиг. 10 показана зависимость от времени средней (± стандартное отклонение, СО) концентрации лекарственного средства
FP1 в сыворотке после внутривенного (в/в) и подкожного (п/к) введения 2 мг/кг мышам линии C57BI/6.
[0036] На Фиг. 11 показана зависимость от времени средней (± СО) концентрации лекарственного средства FP1 в сыворотке после в/в и п/к введения 2 мг/кг крысам линии Спрег-Доули.
[0037] На Фиг. 12 показана зависимость от времени средней (± СО) концентрации лекарственного средства FP1 в сыворотке после в/в и п/к введения 1 мг/кг яванским макакам, в соответствии с определениями иммунологическим методом.
[0038] На Фиг. 13 показана зависимость от времени концентрации FP1 (нг/мл) в виде интактного димера в сыворотке после однократного в/в введения яванским макакам, в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата (IA)/жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХМС).
[0039] На Фиг. 14 показана зависимость от времени концентрации FP1 (нг/мл) в виде интактного димера в сыворотке после однократного п/к введения яванским макакам, в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата/ЖХМС.
[0040] На Фиг. 15 показана концентрация FP1, представленная в процентах (%) от исходной концентрации, через 0, 4, 24 и 48 часов после инкубации ex vivo в плазме, полученной от двух человеческих субъектов (Sub), в соответствии с определениями иммунологическим методом.
[0041] На Фиг. 16 показана средняя концентрация FP1 в виде интактного димера, представленная в процентах (%) от концентрации в момент времени 0, через 0, 4, 24 и 48 часов после инкубации ex vivo в плазме, полученной от двух человеческих субъектов (Sub), в соответствии с определениями интактного вещества методом иммуноафинного захвата/ЖХМС.
[0042] На Фиг. 17 показано быстрое потребление пищи перед и после однократного введения тощим мышам-самцам линии C57BL6N белка GDF15 с различными вариантами N-концевой делеции (SEQ ID N0: 92, 111 и 112), по сравнению с диким типом гибрида без делеции (SEQ ID 26 с меткой бх His, присоединенной на N-конце) . N=no 8 животных в группе; * р < 0,05, по сравнению с носителем в
контроле; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0043] На Фиг. 18 показано влияние однократной дозы FP2 на потребление пищи мышами линии C57BL/6; в частности, показано суммарное потребление пищи за 2 4 часа после введения. Цифры, показанные внутри виде столбцов, означают проценты снижения по сравнению с контрольной группой, получавшей PBS (среднее ± SEM); N=no 8 животных в группе во всех группах, за исключением группы с N=6, получавшей 6xHis-FPl. ** р < 0,01, *** р < 0,001, **** р < 0,0001; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа и критерия Даннетта для множественных сравнений.
[0044] На Фиг. 19 показано суммарное потребление пищи, измеренное у крыс линии Спрег-Доули за 2 4 часа после введения однократной дозы FP2. Цифры, показанные внутри виде столбцов, означают проценты снижения по сравнению с контрольной группой, получавшей PBS (среднее ± SEM); N=no 8 животных в группе. ** р < 0,01; значения р рассчитывали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0045] На Фиг. 20 показано процентное изменение массы тела мышей DIO во время введения FP2 по схеме q3d. Стрелки указывают время подкожных инъекций FP2; N=no б животных в группе; * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле, с помощью двухфакторного дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0046] На Фиг. 21 А и 21 В показана площадь под кривой (AUC) для уровней концентрации глюкозы в крови, измеренных в тесте OGTT через 14 дней, в которые мышам DIO вводили FP2 по схеме q3d. * р < 0,05, с помощью однофакторного дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений, N=no 8 животных в группе.
[0047] На Фиг. 22А показаны уровни инсулина в плазме, измеренные в тесте OGTT через 8 дней, в которые мышам DIO
вводили FP2 по схеме q3d. * р < 0,05, носитель в контроле, по сравнению с группами, получавшими FP2 (0,3 нмоль/кг); FP2 (10 нмоль/кг); и розиглитазон. # р < 0,05, по сравнению с группой, получавшей розиглитазон (10 мг/кг), с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений.
[0048] На Фиг. 22В показана AUC для уровней инсулина в плазме, измеренных в тесте OGTT через 8 дней, в которые мышам DIO вводили FP2 по схеме q3d. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле; # р < 0,05, по сравнению с группой, получавшей розиглитазон.
[0049] На Фиг. 23 показаны уровни глюкозы в крови, измеренные после еды, через 8 дней, в которые мышам DIO вводили FP2 по схеме q3d. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле, с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений, N=no 8 животных в группе.
[0050] На Фиг. 24 показана оценка HOMA-IR у мышей DIO после 5 часов голодания, проведенная через 14 дней, в которые вводили FP2 по схеме q3d. * р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле, с помощью однофакторного дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений, для N=no 8 животных в группе.
[0051] На Фиг. 2 5 показаны концентрации FP2 в сыворотке после внутривенного (в/в) введения 2 мг/кг и подкожного (п/к) введения 2 мг/кг мышам линии C57BI/6. Значения представляют собой среднее ± СО (N=5 проб на каждый момент времени).
[0052] На Фиг. 2 6 показаны концентрации FP2 в сыворотке после внутривенного (в/в) введения 2 мг/кг и подкожного (п/к) введения 2 мг/кг крысам линии Спрег-Доули. N=5 проб на каждый момент времени.
[0053] На Фиг. 27 показана концентрация FP2 в плазме у яванских макак, в соответствии с определениями иммунологическим методом. Значения представляют собой среднее ± СО при N=3, за исключением N=2 при в/в введении, на день 22 (через 52 8 часов) .
в/в - внутривенно, п/к - подкожно.
[0054] На Фиг. 28 показана концентрация FP2 в виде интактного димера в плазме у яванских макак, в соответствии с определениями методом ЖХМС. Значения представляют собой среднее ± SEM при N=3, за исключением N=2 при подкожном (п/к) введении через 168 часов, N=1 при п/к введении через 120 часов и 432 часа, и N=1 при внутривенном (в/в) введении через 168 часов и 432 часа.
[0055] На Фиг. 29 показана стабильность ex vivo FP2 в человеческой плазме (нормализованное извлечение в процентах) в течение 48 часов, в соответствии с определениями иммунологическим методом.
[0056] На Фиг. 30 показана стабильность ex vivo FP2 в человеческой плазме (нормализованное извлечение в процентах) в течение 48 часов, в соответствии с определениями методом ЖХМС.
[0057] На Фиг. 31 показаны кривые зависимости от концентрации для FP2 и гетеродимера HSA-GDF15:GDF15, полученные с помощью анализа рАКТ в клетках SK-N-AS, экспрессирующих рекомбинантный человеческий рецептор GFRAL (N=3).
[0058] На Фиг. 32 показано суточное потребление пищи (г) яванскими макаками перед и после введения однократной дозы FP1.
* р < 0,05, для группы с дозой FP1 10 мг/кг, по сравнению с носителем в контроле.
[0059] На Фиг. 33 показано изменение массы тела яванских макак в процентах перед и после введения однократной дозы FP1. * р < 0,05, для группы с дозой FP1 10 мг/кг, по сравнению с носителем в контроле; # р < 0,05, для дозы 3 мг/кг, по сравнению с носителем в контроле, с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений, для N=no 8 животных в группе.
[0060] На Фиг. 34 показано суточное потребление пищи (г) яванскими макаками перед и после введения однократной дозы FP2.
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле, с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений, для N=no 8 животных
в группе.
[0061] На Фиг. 35 показано изменение массы тела яванских макак в процентах перед и после введения однократной дозы FP2. * р < 0,05, для группы с дозой FP2 10 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле, # р < 0,05, для дозы FP2 3 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле, & р < 0,05, для дозы FP2 1 нмоль/кг, по сравнению с носителем в контроле, с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями и критерия Тьюки для множественных сравнений, для N=no 8 животных в группе.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0062] В разделе "Предпосылки создания изобретения" и в тексте настоящей заявки приведены цитаты или описания различных публикаций, статей и патентов; каждая из этих ссылок полностью включена в настоящее описание путем ссылки. Обсуждение документов, актов, материалов, устройств, изделий и т. п., которые были включены в настоящее описание, приведено в качестве контекста для настоящего изобретения. Такое обсуждение не является допущением того, что любой из или все такие источники являются частью предшествующего состояния знаний в отношении каких-либо описываемых или заявленных изобретений.
[0063] Все технические и научные термины в настоящем документе, если не указано иное, имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в области, к которой относится данное изобретение. В ином случае, определенные термины в настоящем документе имеют значения, установленные в настоящем описании. Все патенты, опубликованные заявки на патенты и публикации, упомянутые в настоящем документе, включены в него путем ссылки, как если бы они полностью излагались в настоящем документе. Следует отметить, что в настоящем документе и в приложенной формуле изобретения форма единственного числа включает объекты и во множественном числе, если из контекста явно не следует иное.
[0064] Настоящее изобретение относится к гибридному белку, содержащему (а) белок, продлевающий период полужизни, (Ь) линкер и (с) белок GDF15, причем гибридный белок составлен от N-конца
до С-конца в порядке (a)-(b)-(с).
[0065] Оказалось, что гибридный белок в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения, содержащий белок, продлевающий период полужизни, линкер и белок GDF15, продлевает период полужизни белка GDF15, причем гибридные белки настоящего изобретения показывают метаболические эффекты, которые демонстрируют пригодность их применения в качестве терапевтических средств для лечения и профилактики метаболических заболеваний, расстройств или состояний. Подобные эффекты включают, без ограничения, снижение массы тела, улучшение переносимости глюкозы и улучшение чувствительности к инсулину у животных, которым вводили гибридные белки.
[0066] Используемый в настоящем документе термин "гибридный белок" относится к белку, имеющему две или более частей, ковалентно связанных вместе, при этом каждая из частей происходит от разных белков.
[0067] Гибридные белки в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения могут включать любой белок GDF15. Используемый в настоящем документе термин "белок GDF15" относится к любому природному белку дикого типа из семейства ростового фактора дифференцировки 15 или любому его функциональному варианту. Белок GDF15 может происходить от любого млекопитающего, такого как человек или другое приемлемое млекопитающее, такое как мышь, кролик, крыса, свинья, собака или примат. В конкретных вариантах осуществления белок GDF15 представляет собой человеческий белок GDF15 или его функциональный вариант. В предпочтительных вариантах осуществления белок GDF15 представляет собой зрелый белок GDF15 или его функциональный вариант.
[0068] Используемый в настоящем документе термин "зрелый белок GDF15" относится к части пре-про-белка GDF15, которая отделяется от полноразмерного белка после внутриклеточного расщепления по сайту расщепления RXXR, подобному сайту расщепления фурина. Зрелые белки GDF15 секретируются как гомодимеры, связанные через дисульфидные мостики. В одном варианте осуществления настоящего изобретения зрелый белок
GDF15, кратко именуемый GDF15(197-308) (SEQ ID NO: б), содержит аминокислоты 197-308 из полноразмерного человеческого белка GDF15.
[0069] Используемый в настоящем документе термин "функциональный вариант" относится к варианту родительского белка, имеющему существенную или значительную степень идентичности с родительским белком и сохраняющему по меньшей мере одну из биологических активностей родительского белка. Функциональный вариант родительского белка можно приготавливать способом, известным в данной области, в контексте настоящего описания. Функциональный вариант может включать одну или более модификаций аминокислотной последовательности родительского белка. Модификации могут изменять физико-химические свойства полипептида, например, улучшать термостабильность полипептида, изменять специфичность субстрата, изменять оптимум рН и т. п. Модификации также могут изменять биологические активности родительского белка при условии, что они не уничтожают или не подавляют все биологические активности родительского белка.
[0070] В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения функциональный вариант родительского белка содержит замену, предпочтительно консервативную замену аминокислот родительского белка, которая не оказывает значительного влияния на биологическую активность родительского белка. Консервативные замены включают, без ограничения, замены аминокислот в пределах группы основных аминокислот (аргинин, лизин и гистидин), кислых аминокислот (глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота), полярных аминокислот (глутамин и аспарагин), гидрофобных аминокислот (лейцин, изолейцин и валин), ароматических аминокислот (фенилаланин, триптофан и тирозин) и малых аминокислот (глицин, аланин, серии, треонин и метионин). Необычные или искусственные аминокислоты (такие, как 4-гидроксипролин, 6-Ы-метиллизин, 2-аминоизомасляная кислота, изовалин и альфа-метилсерин) также можно применять для замены стандартных аминокислотных остатков в родительском белке.
[0071] В соответствии с другими вариантами осуществления настоящего изобретения функциональный вариант родительского
белка содержит делецию и/или вставку из одной или более аминокислот в родительском белке. Например, функциональный вариант зрелого белка GDF15 может включать делецию и/или вставку из 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более аминокислот в зрелом белке GDF15, предпочтительно делецию от 1 до 30 аминокислот на N-конце зрелого белка GDF15.
[0072] В соответствии с другими вариантами осуществления настоящего изобретения функциональный вариант родительского белка содержит замену, предпочтительно консервативную замену аминокислот, и делецию и/или вставку, предпочтительно малую делецию и/или вставку аминокислот, в родительском белке.
[0073] В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения гибридный белок изобретения содержит белок GDF15, имеющий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности зрелого белка GDF15, такой как GDF15(197-308) (SEQ ID N0: 6); или аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности зрелого белка GDF15, усеченной на N-конце, такой как GDF15(200-308) (SEQ ID N0: 7), GDF15 (201-308) (SEQ ID NO: 8), GDF15 (202-308) (SEQ ID NO: 9), GDF15 (203-308) (SEQ ID NO: 10) или GDF15 (211-308) (SEQ ID NO: 11) . Белок GDF15 может иметь по меньшей мере одну из замен, вставок и делеций в SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11, при условии, что он сохраняет по меньшей мере одну из биологических активностей белка GDF15, таких как его влияние на потребление пищи, уровни глюкозы в крови, резистентность к инсулину, массу тела ит. п.
[0074] В конкретных вариантах осуществления гибридный белок настоящего изобретения содержит белок GDF15, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, включая, без ограничения, аминокислотные последовательности SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11.
[0075] В гибридных белках в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения можно применять любой приемлемый белок, продлевающий период полужизни. Используемый в
настоящем документе термин "белок, продлевающий период полужизни" может обозначать любой белок или его фрагмент, о котором известно, что он продлевает период полужизни белков, с которыми его соединяют. Примеры таких белков, продлевающих период полужизни, включают, без ограничения, человеческий сывороточный альбумин (HSA), домен константной области (Fc) иммуноглобулина (Ig) или трансферрин (Tf) . В вариантах осуществления настоящего изобретения белок, продлевающий период полужизни, содержит HSA или его функциональный вариант. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 1. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения белок, продлевающий период полужизни, содержит HSA или его функциональный вариант, в котором остаток цистеина в положении 34 молекулы HSA заменен серином или аланином.
[0076] В конкретных вариантах осуществления гибридный белок настоящего изобретения содержит белок, продлевающий период полужизни, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 1-3.
[0077] В гибридных белках в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения можно применять любой приемлемый линкер. Используемый в настоящем документе термин "линкер" относится к связывающему компоненту, содержащему пептидный линкер. Предпочтительно, чтобы линкер помогал обеспечивать правильную укладку, минимизировать стерические препятствия и не нарушал существенным образом структуру каждого функционального компонента в пределах гибридного белка. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения пептидный линкер содержит 2-120 аминокислот. Например, пептидный линкер содержит 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95,
96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120 аминокислот.
[0078] В вариантах осуществления настоящего изобретения линкер повышает гибкость компонентов гибридного белка. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения линкер может представлять собой гибкий линкер, содержащий последовательность (GGGGS)n, включая, без ограничения, GS-
(GGGGS)n или AS-(GGGGS)n-GT, где п составляет от 2 до 20, например 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15.
[0079] В других вариантах осуществления настоящего изобретения линкер структурирован. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения линкер может представлять собой структурированный линкер, содержащий последовательность
(АР)п или (ЕАААК)п, включая, без ограничения, AS-(АР)n-GT или AS- (ЕАААК) n-GT, где п составляет от 2 до 20, например 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15. В других вариантах осуществления настоящего изобретения линкер содержит последовательности (GGGGA) n, (PGGGS)n, (AGGGS)п или GGS-
(EGKSSGSGSESKST)n-GGS, где п составляет от 2 до 20.
[0080] В вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID NO: 5, 25-30, 36-37, 40, 48, 55-56, 59-60 или 64-75. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 25-30, 36-37, 40, 48, 55-56, 59-60 и 64-75. В более конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 25-30, 40, 55-56, 55-56, 59-60 и 70. В дополнительных более конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гибридный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 60 или SEQ ID NO: 26. Гибридный белок может также включать малое удлинение (удлинения) на аминном или карбоксильном конце белка, такое как метка, упрощающая очистку,
например, полигистидиновая метка, антигенный эпитоп или связывающий домен.
[0081] Описанный в настоящем документе гибридный белок можно характеризовать или оценивать по биологическим активностям GDF15, включая, без ограничения, влияние на потребление пищи, пероральные тесты на переносимость глюкозы, измерения уровней глюкозы в крови, анализ на резистентность к инсулину, изменения массы тела, фармакокинетический анализ, токсикокинетический анализ, иммунологические методы и масс-спектрометрический анализ уровня и стабильности полноразмерных гибридных белков, а также анализ стабильности ex vivo в плазме человеческой крови.
[0082] В настоящем изобретении также предложена выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гибридный белок настоящего изобретения. В вариантах осуществления настоящего изобретения выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID N0: 5, 25-30, 36-37, 40, 48, 55-56, 59-60 или 64-75. В конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-31, 36-37, 40, 48, 55-56, 59-60 и 64-75. В более конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-30, 40, 5556, 59-60 и 70. В дополнительных более конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидные последовательности SEQ ID N0: 76-91.
[0083] В соответствии с другими вариантами осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гибридный белок, может представлять собой экспрессионный вектор. Экспрессионные векторы включают, без ограничения, векторы для экспрессии рекомбинантных белков и векторы для доставки нуклеиновых кислот в субъекте, для экспрессии в ткани субъекта, например, вирусные векторы. Примеры вирусных векторов, приемлемых для применения в настоящем изобретении, включают, без
ограничения, аденовирусные векторы, адено-ассоциированные вирусные векторы, лентивирусные векторы и т. п. Вектор также может представлять собой невирусный вектор. Примеры невирусных векторов включают, без ограничения, плазмиды, искусственные хромосомы бактерий, искусственные хромосомы дрожжей, бактериофаги и т. п. Вектор может включать любые элементы для выполнения обычной функции экспрессионного вектора, например, промотор, связывающий рибосомы элемент, терминатор, усилитель, селективный маркер или точку начала репликации.
[0084] В соответствии с другими вариантами осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гибридный белок, может иметь оптимизированные кодоны с целью улучшения рекомбинантной экспрессии от желаемой клетки-хозяина, такой как человеческая эмбриональная клетка почек (НЕК) или клетка яичника китайского хомячка (СНО), с помощью известных в данной области способов в контексте настоящего описания.
[0085] В настоящем изобретении также предложена клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует гибридный белок настоящего изобретения. Клетки-хозяева включают, без ограничения, клетки-хозяева для экспрессии рекомбинантных белков и клетки-хозяева для доставки нуклеиновой кислоты в субъекте для экспрессии в ткани субъекта. Примеры клеток-хозяев, приемлемых для применения в настоящем изобретении, включают, без ограничения, клетки НЕК или СНО.
[0086] В еще одном общем аспекте настоящее изобретение относится к способу продуцирования гибридного белка настоящего изобретения. В общем аспекте способ содержит этапы, на которых: (1) культивируют клетку-хозяина, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок, в условиях, при которых продуцируется гибридный белок, и (2) выделяют гибридный белок, продуцированный клеткой-хозяином. Гибридный белок можно дополнительно очистить с помощью способов, известных в данной области.
[0087] В некоторых вариантах осуществления гибридный белок экспрессируют в клетках-хозяевах и выделяют из них с помощью сочетания из одного или более стандартных методов очистки,
включая, без ограничения, аффинную хроматографию, эксклюзионную хроматографию, ультрафильтрацию и диализ. Предпочтительно, чтобы гибридный белок был полностью очищен от любых протеаз.
[0088] В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция, содержащая гибридный белок настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.
[0089] В настоящем изобретении дополнительно предложена композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок настоящего изобретения, и фармацевтически приемлемый носитель. Композиции, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок настоящего изобретения, могут содержать носитель для доставки, для введения молекулы нуклеиновой кислоты в клетку с целью экспрессии гибридного белка. Примеры носителей для доставки нуклеиновых кислот включают липосомы, биосовместимые полимеры, включая природные полимеры и синтетические полимеры, липопротеины, полипептиды, полисахариды, липополисахариды, искусственные вирусные оболочки, металлические частицы, бактерии, вирусы, такие как бакуловирусы, аденовирусы и ретровирусы, бактериофаги, космиды, плазмиды, грибковые векторы и другие рекомбинантные носители, обычно используемые в данной области и описанные ранее для экспрессии в разных эукариотических хозяевах.
[0090] Фармацевтически приемлемый носитель может включать один или более из фармацевтически приемлемого эксципиента, буферного раствора, стабилизатора, а также других материалов, известных специалистам в данной области. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают, без ограничения, один или более из воды, солевого раствора, буферного раствора, изотонических агентов, таких как сахара, многоатомных спиртов, вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консервантов, а также их сочетания. Такие материалы должны быть нетоксичными и должны не влиять на эффективность активного ингредиента в применяемых дозах и концентрациях. Определенные свойства носителя или другого материала могут зависеть от пути введения, например, внутримышечным, подкожным, пероральным, внутривенным, кожным, интрамукозальным (например, в слизистую
кишечника), интраназальным или внутрибрюшинным путем. Например, жидкие фармацевтические композиции по существу включают жидкий носитель, такой как вода, углеводороды, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Также можно включать физиологический солевой раствор, раствор глюкозы или другого сахарида, или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Композиции для парентерального введения можно хранить в лиофилизированной форме или в виде раствора, при этом их, как правило, помещают в контейнер, имеющий стерильный порт доступа, такой как пакет для внутривенного раствора или флакон, имеющий пробку, выполненную с возможностью прокалывания иглой для подкожных инъекций.
[0091] В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция может содержать один или более дополнительных компонентов, таких как другой активный ингредиент.
[0092] Настоящее изобретение также относится к наборам, содержащим фармацевтическую композицию настоящего изобретения. Наборы могут содержать первый контейнер, в котором имеется высушенный гибридный белок настоящего изобретения, и второй контейнер, в котором имеется водный раствор, предназначенный для смешивания с высушенным гибридным белком перед введением субъекту, либо только один контейнер, содержащий жидкую фармацевтическую композицию настоящего изобретения. Набор может содержать блок введения на одну дозу фармацевтической композиции настоящего изобретения или блок введения на множество доз. Набор может также включать один или более предварительно заполненных шприцев (например, шприцев с жидкостью и шприцев с лиофилизатом). Набор может также содержать инструкцию по его применению. Такая инструкция может описывать применение и свойства материалов, предоставленных в наборе, и ее можно составлять в соответствии с конкретным метаболическим расстройством, подлежащим лечению.
[0093] Настоящее изобретение также относится к применению описанных в настоящем документе фармацевтических композиций для лечения или профилактики метаболического заболевания,
расстройства или состояния, такого как диабет 2-го типа, повышенные уровни глюкозы, повышенные уровни инсулина, ожирение, дислипидемия, диабетическая нефропатия, ишемическое поражение миокарда, застойная сердечная недостаточность или ревматоидный артрит. В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения способ лечения или профилактики метаболического заболевания, расстройства или состояния содержит введение нуждающемуся в лечении субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества фармацевтической композиции настоящего изобретения. Любые из описанных в настоящем документе фармацевтических композиций можно применять в способе настоящего изобретения, включая фармацевтические композиции, содержащие гибридный белок настоящего изобретения, или фармацевтические композиции, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую гибридный белок.
[0094] Используемый в настоящем документе термин "субъект" означает любое животное, конкретно млекопитающее, наиболее конкретно человека, которое будет или было подвергнуто лечению способом в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения. Используемый в настоящем документе термин "млекопитающее" охватывает любое млекопитающее. Примеры млекопитающих включают, без ограничения, коров, лошадей, овец, свиней, кошек, собак, мышей, крыс, кроликов, морских свинок, приматов, кроме человека (NHP), таких как низшие и высшие обезьяны, и т. п., и более конкретно, человека.
[0095] "Метаболическое заболевание, расстройство или состояние" означают любое расстройство, связанное с аномальным метаболизмом. Примеры метаболических заболеваний, расстройств или состояний, которые можно лечить в соответствии со способом настоящего изобретения, включают, без ограничения, диабет 2-го типа, повышенные уровни глюкозы, повышенные уровни инсулина, ожирение, дислипидемию, диабетическую нефропатию, ишемическое поражение миокарда, застойную сердечную недостаточность или ревматоидный артрит.
[0096] Используемые в настоящем документе термины "лечить", "лечение" относятся к введению композиции субъекту для
достижения желаемого терапевтического или клинического исхода у
субъекта. В одном варианте осуществления термины "лечить",
"лечение" относятся к введению фармацевтической композиции
настоящего изобретения для снижения, ослабления или замедления
прогрессии или развития метаболического расстройства, такого как
диабет 2-го типа, повышенные уровни глюкозы, повышенные уровни
инсулина, ожирение, дислипидемия, диабетическая нефропатия,
ишемическое поражение миокарда, застойная сердечная
недостаточность или ревматоидный артрит.
[0097] Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество терапевтически активного соединения, необходимого для получения желаемого биологического или клинического эффекта. В соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, достаточное для обеспечения положительных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Терапевтически эффективное количество можно вводить за одну или более процедур введения. Применительно к болезненному состоянию, эффективное количество представляет собой количество, достаточное для облегчения, стабилизации или задержки развития заболевания. В соответствии с конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество представляет собой количество гибридного белка, необходимое для лечения или профилактики метаболического заболевания, расстройства или состояния, такого как диабет 2-го типа, повышенные уровни глюкозы, повышенные уровни инсулина, ожирение, дислипидемия, диабетическая нефропатия, ишемическое поражение миокарда, застойная сердечная недостаточность или ревматоидный артрит.
[0098] В соответствии с вариантами осуществления настоящего
изобретения фармацевтическую композицию настоящего изобретения
можно вводить субъекту любым способом, известным специалистам в
данной области в контексте настоящего описания, например, с
применением внутримышечного, подкожного, перорального,
внутривенного, кожного, интрамукозального (например, в слизистую кишечника), интраназального или внутрибрюшинного пути введения.
В конкретных вариантах осуществления фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят субъекту путем внутривенной инъекции или подкожной инъекции.
[0099] Такие параметры, как величина дозы, частота введения и продолжительность введения фармацевтической композиции субъекту в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения, не ограничены каким-либо конкретным образом. Оптимальные значения таких параметров могут зависеть от различных факторов, таких как особенности субъекта, подлежащего лечению, конкретное метаболическое заболевание, подлежащее лечению, степень тяжести заболевания, путь введения и т. п., при этом специалист в данной области сможет определить оптимальные значения для таких параметров с целью достижения желаемого терапевтического или клинического исхода. Например, фармацевтическую композицию можно вводить один раз в день или более одного раза в день, например, два раза, три раза, четыре раза и т. п. Обычная доза гибридного белка может варьировать в интервале от около 0,1 мкг/кг до около 100 мг/кг или более, в зависимости от факторов, таких как перечислены выше.
ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0100] Вариант осуществления 1 представляет собой гибридный белок, содержащий: (а) белок, продлевающий период полужизни, (Ь) линкер и (с) белок GDF15; причем гибридный белок составлен от N-конца до С-конца в порядке (a)-(b)-(с).
[0101] Вариант осуществления 2 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 1, в котором белок GDF15 представляет собой человеческий белок GDF15 или его функциональный вариант.
[0102] Вариант осуществления 3 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 1, в котором белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0: 6-11.
[0103] Вариант осуществления 4 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 1, в котором белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 11.
[0104] Вариант осуществления 5 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 4, в котором белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 6-11.
[0105] Вариант осуществления б представляет собой гибридный белок любого из вариантов осуществления 1-5, в котором белок, продлевающий период полужизни, содержит человеческий сывороточный альбумин (HSA) или его функциональный вариант.
[0106] Вариант осуществления 7 представляет собой гибридный белок варианта осуществления б, в котором белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID N0: 1.
[0107] Вариант осуществления 8 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 7, в котором белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 1-3.
[0108] Вариант осуществления 9 представляет собой гибридный белок любого из вариантов осуществления 1-8, в котором линкер представляет собой гибкий линкер.
[0109] Вариант осуществления 10 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 9, в котором линкер содержит последовательность (GGGGS)n, где п составляет от 2 до 20, например GS-(GGGGS)x8 или AS-(GGGGS)x8-GT.
[ОНО] Вариант осуществления 11 представляет собой гибридный белок любого из вариантов осуществления 1-9, в котором линкер представляет собой структурированный линкер.
[0111] Вариант осуществления 12 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 11, в котором линкер содержит последовательность (АР)п или (ЕАААК)п, где п составляет от 2 до 20, например AS-(АР)n-GT или AS-(ЕАААК)n-GT.
[0112] Вариант осуществления 13 представляет собой гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID N0: 5, 25-31, 36-37, 40, 48, 55-60 или 64-75.
[0113] Вариант осуществления 14 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 13, содержащий
аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-31, 36-37, 40, 48, 55-60 и 64-75.
[0114] Вариант осуществления 15 представляет собой гибридный белок варианта осуществления 14, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-30, 40, 55-60 и 70.
[0115] Вариант осуществления 16 представляет собой выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок любого одного из вариантов осуществления 1-15.
[0116] Вариант осуществления 17 представляет собой выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность SEQ ID N0: 76-91.
[0117] Вариант осуществления 18 представляет собой экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты варианта осуществления 16 или 17.
[0118] Вариант осуществления 19 представляет собой клетку-хозяина, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты варианта осуществления 16 или 17.
[0119] Вариант осуществления 20 представляет собой способ продуцирования гибридного белка любого одного из вариантов осуществления 1-15, содержащий этапы, на которых: (1) культивируют клетку-хозяина, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок, в условиях, при которых продуцируется гибридный белок; и (2) выделяют гибридный белок, продуцированный клеткой-хозяином.
[0120] Вариант осуществления 21 представляет собой способ варианта осуществления 20, в котором стадия выделения содержит очистку гибридного белка с удалением протеаз.
[0121] Вариант осуществления 22 представляет собой
фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически
эффективное количество гибридного белка любого одного из вариантов осуществления 1-15 и фармацевтически приемлемый носитель.
[0122] Вариант осуществления 23 представляет собой
фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически
эффективное количество молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих
гибридный белок любого одного из вариантов осуществления 1-15 и фармацевтически приемлемый носитель.
[0123] Вариант осуществления 24 представляет собой набор, содержащий фармацевтическую композицию варианта осуществления 22 или 2 3.
[0124] Вариант осуществления 25 представляет собой способ лечения или профилактики метаболического расстройства, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции любого из вариантов осуществления 22 и 23.
[0125] Вариант осуществления 26 представляет собой способ варианта осуществления 25, в котором метаболическое расстройство выбрано из группы, состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы, повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии, диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда, застойной сердечной недостаточности или ревматоидного артрита.
[0126] Вариант осуществления 27 представляет собой способ варианта осуществления 2 5 или 2 6, в котором фармацевтическую композицию вводят субъекту подкожно или внутривенно.
[0127] Вариант осуществления 28 представляет собой способ лечения метаболического расстройства, выбранного из группы, состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы, повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии, диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда, застойной сердечной недостаточности или ревматоидного артрита, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, при этом способ включает подкожное или внутривенное введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 5, 25-30, 40, 55-60 и 70, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0128] Вариант осуществления 29 представляет собой способ лечения метаболического расстройства, выбранного из группы, состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы, повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии,
диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда, застойной сердечной недостаточности или ревматоидного артрита, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, при этом способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей гибридный белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 60, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0129] Вариант осуществления 30 представляет собой способ любого одного из вариантов осуществления 25-29, в котором фармацевтическую композицию вводят субъекту внутривенно или подкожно.
[0130] Вариант осуществления 31 представляет собой гибридный белок любого одного из вариантов осуществления 1-15 для применения при лечении или профилактике метаболического расстройства, выбранного из группы, состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы, повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии, диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда, застойной сердечной недостаточности или ревматоидного артрита.
ПРИМЕРЫ
[0131] Для дополнительной иллюстрации характера настоящего изобретения предложены следующие примеры изобретения. Следует понимать, что следующие ниже примеры не ограничивают изобретение, и что объем изобретения определен прилагаемыми пунктами формулы изобретения.
[0132] Пример 1. Конфигурация гибридных молекул, содержащих GDF15 - влияние усечений GDF15
[0133] Подобно другим членам семейства TGF|3, белок GDF15 синтезируется как пре-про-белок, который образует димер в эндоплазматическом ретикулуме и подвергается фуриновому расщеплению с продуцированием секретируемого зрелого GDF15 (аминокислоты 197-308). Секретируемый зрелый гомодимер GDF15 имеет массу около 25 кДа, и каждый мономер способен образовывать до 4 внутримолекулярных дисульфидных связей с одним межмолекулярным дисульфидом, связывающим компоненты гомодимера.
[0134] Кристаллическая структура GDF15 определена в настоящем изобретении и показана на Фиг. 1А и 1В. Из кристаллической структуры видно, что С-конец зрелого GDF15 скрыт на границе раздела димеров, в то время как N-конец остается открытым. Этот открытый конец позволяет связывать гибридные белки, такие как белки, продлевающие период полужизни, с N-концом GDF15.
[0135] В кристаллической структуре также виден новый узор дисульфидных мостиков между цистеиновыми остатками GDF15. В то время как TGF|3l имеет мостики С1-СЗ и С2-С7 (т. е. мостики между его первым и третьим цистеиновыми остатками, а также между его вторым и седьмым цистеиновыми остатками), GDF15 имеет мостики С1-С2 и СЗ-С7 (см. Фиг. 1А и 1В) . Эти уникальные дисульфидные мостики приводят к замыканию петли, образованной мостиком С1-С2, который расположен на N-конце белка и на удалении от цистеинового узла, который содержит другие дисульфидные связи. Исходя из структуры, можно предположить, что N-конец GDF15 может не быть критическим для образования димера или общего складывания белка, и что GDF15 и присоединенные молекулы на его N-конце могут быть толерантны к делециям на N-конце, которые удаляют остатки С1 и С2, остатки внутри петли С1-С2 и даже остатки на С-конце, связанные с С2.
[0136] Пример 2. Конфигурация гибридных молекул, содержащих GDF15 - влияние линкера
[0137] Были оценены различные линкеры между молекулой HSA и молекулой GDF15. Оценке подвергались как гибкие линкеры, содержащие последовательность (GGGGS)n, так и структурированные линкеры, содержащие последовательность (АР)п или (ЕАААК)п, где п составляет 2-20.
[0138] Гибридные белки, содержащие различные линкеры, сравнивали по их биофизическим свойствам, их влиянию на эффективность потребления пищи тощими мышами, их фармакокинетическим (ФК) параметрам у мышей, и их стабильности ex vivo в человеческой крови. Результаты испытаний вариантов линкеров показаны в табл. 1. Молекула, содержащая SEQ ID N0: 31,
которая содержала линкер (ЕАААК)8, по данным ВЭЖХ образовывала агрегаты. Оставшиеся семь вариантов линкеров по табл. 1 не образовывали агрегатов.
[0139] Таблица 1. Обобщенные данные анализа вариантов линкеров
очистки
[0140] Для этих вариантов также оценивалась стабильность линкеров по исследованиям in vivo у мышей, а также по исследованиям стабильности ex vivo в пробах человеческой цельной крови и плазмы. В анализе результатов, полученных в этих исследованиях, применяли две формы обнаружения. Оценку интактности линкера проводили методом иммуноанализа с парами антител, анти-GDFlS для захвата и анти-HSA для обнаружения, причем определяли наличие обеих молекул с какой-либо из сторон линкера. Более широкую картину целостности всей молекулы
анализировали методом жидкостной хроматографии/масс-
спектрометрии (ЖХМС) с использованием различных суррогатных пептидных последовательностей из HSA и GDF15. Иммуноанализ показал стабильный ФК профиль для всех вариантов линкеров и отсутствие потери концентрации в пробах плазмы с добавками для любого из вариантов линкеров по результатам наблюдения в течение 4 8 часов. Результаты ЖХМС согласовывались с результатами иммуноанализа, подтверждая, что суррогатные пептиды из различных участков молекул HSA и GDF15 были интактными. ФК профиль вариантов линкеров, подвергнутых анализу методом ЖХМС с использованием суррогатных пептидов, показал аналогичные тенденции для различных вариантов линкеров, причем все они на 7-й день имели обнаруживаемые уровни. Все варианты, приведенные в табл. 1, за исключением SEQ ID 31, имели желаемые биофизические свойства и ФК параметры.
[0141] Варианты линкеров оценивали по их активности in vivo путем проведения исследований потребления пищи тощими мышами. В табл. 2 показано влияние вариантов линкеров на эффективность гибридного белка в отношении снижения потребления пищи. Показано явное влияние линкера на указанную эффективность. Что касается гибких линкеров (GGGGS)п, увеличение длины линкера от 2 до 4-8 привело к существенному увеличению эффективности гибридного белка. Для более ригидных линкеров (АР)п эта тенденция была менее очевидной, подтверждая, что решающую роль в эффективности гибридного белка играет степень свободы молекулы GDF15.
[0142] Таблица 2. Влияние линкера на эффективность in vivo гибридных белков HSA-GDF15 у тощих мышей
SEQ ID NO*
Линкер
Снижение потребления пищи, % (среднее)
AS(GGGGS) 2GT
28, 8
GS(GGGGS)4
40,5
AS(GGGGS)8GT
60,7
AS (AP) 5GT
48,2
AS (AP) 10GT
66, 2
AS(AP)20GT
55, 1
AS(EAAAK) 4GT
51, 9
* Ha N-конец была присоединена метка бх His для целей очистки
[0143] Пример 3. Конфигурация гибридных молекул, содержащих GDF15 - влияние мутаций HSA
[0144] Были составлены рекомбинантные белки, состоящие из белка, продлевающего период полужизни, человеческого сывороточного альбумина, присоединенного к N-концу GDF15 посредством линкер. Такая конфигурация будет обеспечивать целостность интерфейса димеризации GDF15 и допускать соединение через нативные межцепочечные дисульфидные мостики, приводя к образованию гомодимера GDF15, в котором из каждого плеча GDF15 выдвинут слитый с ним HSA. При таком подходе для создания гомодимера HSA-GDF15 требуется только один ген.
[0145] Нативный человеческий сывороточный альбумин содержит 35 цистеиновых (Cys, С) остатков, которые образуют 17 дисульфидных мостиков, при этом остаток Cys-34 является единственным свободным цистеином в молекуле. Было показано, что этот свободный остаток Cys-34 функционирует как акцептор свободных радикалов, улавливая множество активных форм кислорода (R0S) и активных форм азота (RNS). Поэтому свободный остаток Cys заменили так, чтобы минимизировать риск гетерогенности в результате окисления.
[0146] Свободный цистеин в положении 34 HSA заменили на серии либо аланин, и анализировали гибридные молекулы GDF15 с мутацией HSA (C34S) или HSA (С34А) . Обе молекулы очищали с применением трехэтапного способа очистки: (i) ионообменная хроматография, (ii) гидрофобная хроматография и (iii) эксклюзионная хроматография. Сразу же после создания этих молекул анализ ВЭЖХ показал, что обе молекулы были чистыми и не содержали агрегатов (табл. 3) .
[0147] Однако через две недели после создания гибридного белка с мутацией HSA (С34А) (содержащего SEQ ID N0: 48), анализ ВЭЖХ показал наличие в нем агрегатов, тогда как гибридный белок с мутацией HSA (C34S) (содержащий SEQ ID N0: 40) и через четыре недели не содержал агрегатов.
[0150] Авторы изобретения наблюдали, что остаток аргинина в положении аминокислоты 198 GDF15 (R198) предрасположен к расщеплению протеазами в гибридных молекулах HSA-GDF15. Такое расщепление приводит к образованию гетерогенной популяции и нежелательно для терапевтических композиций. Это расщепление можно предотвратить с помощью смеси ингибиторов протеаз. Были проведены исследования способов очистки для удаления протеазы. В табл. 4 перечислены два типа колонок для проведения аффинной хроматографии HSA, которые испытывались для очистки гибридных белков HSA-GDF15, с определением методом ВЭЖХ. Сразу после очистки гибридные белки HSA-GDF15, очищенные обоими способами, были на 10 0% чистыми и интактными. При низких концентрациях (2-5 мг/мл) белки, очищенные обоими способами, оставались интактными в течение всего периода испытания 4 недели. Однако при высоких концентрациях (4 0-50 мг/мл) только смола с антителами к HSA (CaptureSelect) очищала от протеазы белки, которые затем оставались интактными в течение всего периода испытания 4 недели. Смола с лигандами HSA (Albupure) очищала белки, которые вначале были интактными, но затем во время хранения в высоких концентрациях подвергались расщеплению. Добавление смеси ингибиторов протеаз (PI) и ЭДТА полностью подавляло расщепление партии гибридного белка HSA-GDF15 в высокой концентрации, очищенной с помощью смолы Albupure. Таким образом, способ очистки играет решающую роль в создании стабильной терапевтической композиции. Соответствующая деградация не наблюдалась in vivo или ex vivo, подтверждая, что после очистки
терапевтической композиции от протеазы расщепление гибридных белков не является проблемой in vivo. Таким образом, способы очистки, позволяющие эффективно удалять возможные молекулы протеазы во время приготовления, например применение смолы CaptureSelect, играют ключевую роль в успешном производстве терапевтических препаратов GDF15, которые являются гомогенными, интактными и стабильными.
[0151] Таблица 4. Расщепление гибридных белков HSA-GDF15 протеазами можно предотвратить с помощью способов очистки проб
[0153] Кристаллическая структура GDF15, показанная на Фиг. 1А и 1В, позволяет предположить, что N-конец GDF15, затронутый в вариантах делеции, не является критическим для образования димера или общего складывания белка. Это также позволяет предположить, что такие N-концевые делеции не повлияют на взаимодействие с возможными рецепторами. Гибридные белки HSA-GDF15, содержащие различные делеции N-конца GDF15, были испытаны на активность in vivo.
[0154] Были запланированы варианты N-концевых делеций GDF15, которые удаляли сайт расщепления протеазами в GDF15 (R198). Непосредственно за остатком R198, у остатков N199-G200 имеется потенциальный сайт дезамидирования, а дезамидирование
субстрата тоже нежелательно в терапевтических композициях. N-концевые делеции GDF15 могут одновременно удалить и сайт протеолитического расщепления, и сайты дезамидирования. Полученные в результате варианты делеций GDF15, которые были встроены в гибридные белки с HSA, включали GDF15 (2 01-308; SEQ ID NO: 8), GDF15 (202-308; SEQ ID NO: 9) и GDF15 (211-308; SEQ ID NO: 11). Исследования in vivo у мышей показали, что варианты GDF15 с N-концевыми делециями по-прежнему активно влияют на снижение потребления пищи (Фиг. 17) . Экспериментальные данные подтвердили, что такие варианты GDF15 с N-концевыми делециями правильно экспрессируются, образуют надлежащие димеры и активны in vivo.
[0155] Пример 6. Неактивные мутанты GDF15
[0156] В табл. 5 перечислены двенадцать мутантов GDF15, которые были созданы для подавления активности GDF15 in vivo и определения функционального эпитопа GDF15. Эти мутанты включают пять точечных мутантов, два двойных мутанта и пять тройных мутантов. Гибридные белки HSA-GDF15, содержащие эти мутации, были характеризованы по их биофизическим свойствам и активности (табл. 5) . Из 12 мутантов один не экспрессировался, а четыре со временем образовывали агрегаты, указывая на то, что эти мутации нарушают складывание белков и их биофизические свойства. Четыре из оставшихся семи мутантов содержали точечную мутацию GDF15, и эти мутанты испытывали на мышах на предмет снижения потребления пищи по сравнению с диким типом. Три из этих точечных мутантов (I89R, I89W и W32A) утратили активность in vivo, а один мутант (Q60W) остался таким же активным, как дикий тип. Эти результаты показывают, что мутация I8 9R, I8 9W или W32A прерывает взаимодействие рецептора/корецептора с GDF15, подтверждая, что функциональные эпитопы GDF15 находятся возле остатков 189 и W32. Мутации пронумерованы на основе зрелого GDF15, вставленного в гибридный белок, т. е. "1" относится к 1-й аминокислоте зрелого GDF15 (SEQ ID NO: 6), а "89" относится к 89-й аминокислоте зрелого белка GDF15.
[0157] Таблица 5. Обобщенные данные биофизических свойств и активности гибридных белков, содержащих мутанты GDF15
очистки
[0158] Пример 7. Экспрессия и способы очистки [0159] Экспрессия
[0160] Для экспрессии 20 мл и больше, экспрессию проводили в клетках НЕК Expi2 93(tm), выращенных в среде экспрессии Expi2 93(tm). Клетки выращивали при температуре 37 °С, при встряхивании со
скоростью 125 об/мин, в среде с 8% С02. Клетки трансфицировали с плотностью 2,5х106 клеток/мл, с использованием набора экспрессии Expi2 93(tm). На каждый литр трансфицированных клеток, 1 мг тотальной ДНК разводили в 25 мл Opti-MEM, и 2,6 мл реагента Expi2 93(tm) разводили в 2 5 мл Opti-MEM, и инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. Разведенную ДНК и разведенный реагент Expi2 93 объединяли и инкубировали в течение 2 0 минут при комнатной температуре. Затем комплекс ДНК добавляли к клеткам. Клетки помещали на ночь во встряхиватель-инкубатор. На следующий день после трансфекции, 5 мл реагента Enhancer 1 из набора разводили в 50 мл реагента Enhancer 2 из набора, и весь объем из двух реагентов Enhancer добавляли к клеткам. Трансфицированные клетки помещали обратно в инкубатор на 4 дня до их отбора. Клетки концентрировали центрифугированием при 6000 g в течение 30 минут, а затем фильтровали через фильтр с ячейкой 0,2 мкм перед этапом очистки.
[0161] Экспрессию также проводили в клетках СНО. Плазмиду подвергали очистке и анализу. Перед трансфекцией 1 аликвоту в 2 00 мкг плазмидной ДНК, содержащей кодирующую область HSA-GDF15, линеаризовали путем расщепления рестрикционным ферментом Acl I. Расщепление данной рестрикционной эндонуклеазой обеспечивает удаление гена резистентности к ампициллину. Две линеаризованные аликвоты по 15 мкг ДНК трансфицировали в двух порциях по 1х107 клеток СНО (обозначены как пулы трансфекции А и В) с помощью электроманипулятора клеток ВТХ ЕСМ 830 Electro Cell Manipulator (Harvard Apparatus, г. Холлистон, штат Массачусетс, США) . Клетки подвергали 3-кратной электропорации под напряжением 250 вольт с длительностью импульсов 15 миллисекунд и интервалами между импульсами 5 секунд, в кювете с шириной зазора 4 мм. Трансфицированные клетки переносили во встряхиваемую колбу, содержащую MACH-l+L-глутамин, и инкубировали в течение 1 суток. Пул трансфекции А и пул трансфекции В центрифугировали, ресуспендировали в среде MACH-1+MSX и переносили во встряхиваемые колбы для инкубации в течение б суток. Трансфицированные клетки, продуцирующие HSA-гибридный белок, из
пула трансфекции А и пула трансфекции В объединяли и высевали в метилцеллюлозу на 8-й день после электропорации. [0162] Очистка
[0163] Проводили двухэтапную очистку с применением смолы CaptureSelect и эксклюзионной хроматографии. Супернатанты над клетками от временно трансфицированных клеток Expi2 93(tm) загружали в предварительно уравновешенную (PBS, рН 7,2) колонку со смолой CaptureSelect для связывания HSA (Матрица аффинности к человеческому альбумину CaptureSelect от компании ThermoFisher Scientific) при приблизительной емкости 10 мг белка на 1 мл смолы. После загрузки несвязанные белки удаляли путем промывания колонки PBS с рН 7,2 в количестве 10 объемов колонки (CV) . HSA-GDF15, который был связан в колонке, элюировали 10 объемами CV раствора 2 М МдС12 в 2 0 мМ трис, рН 7,0. Соответствующие пикам фракции отбирали, фильтровали (0,2 мкм) и диализировали против
PBS с рН 7,2 при температуре 4 °С. После диализа белок повторно фильтровали (0,2 мкм) и концентрировали до подходящего объема перед загрузкой на колонку 26/60 Superdex 200 (GE Healthcare). Фракции белка, элюированные из колонки эксклюзионной хроматографии (SEC) с высокой степенью чистоты (по определению методом SDS-PAGE), объединяли. Концентрацию белка определяли по поглощению света 280 нм на спектрофотометре BioTek Synergy НТТМ. Качество очищенных белков оценивали методом SDS-PAGE и аналитической эксклюзионной ВЭЖХ (SE-HPLC, система Dionex HPLC). Уровни эндотоксина измеряли методом LAL-теста (Pyrotell(r)-T, Associates of Cape Cod).
[0164] Также проводили двухэтапную очистку с применением смолы Albupure и эксклюзионной хроматографии. Гибридные белки HSA-GDF15 очищали при комнатной температуре с применением смолы AlbuPure (ProMetic Biosciences Ltd), в которой использован иммобилизованный синтетический триазиновый лиганд для селективного связывания HSA. К смоле AlbuPure добавляли супернатанты с экспрессией. Затем смолу промывали, сначала 4 объемами CV PBS с рН 7,2, а затем 4 объемами CV буферного раствора 50 мМ трис с рН 8,0, 150 мМ NaCl. HSA-GDF15, который
был связан в колонке, элюировали 4 объемами CV PBS с рН 7,2, содержащего 100 мМ октаноата натрия. Фракции, содержащие белок, концентрировали до объема 10 мл с помощью концентратора-центрифуги с отсечением по молекулярной массе 30 000 кДа (Amicon) , а затем пропускали через колонку 26/60 Superdex S200pg (GE) , уравновешенную PBS с рН 7,2. Фракции после эксклюзионной хроматографии, содержащие гомодимер HSA-GDF15, идентифицировали методом SDS-PAGE и объединяли для анализа. Степень чистоты белка оценивали методом SDS-PAGE и SE-HPLC.
[0165] Примеры 8-14 и 19 включают характеризацию примера гибридного белка настоящего изобретения, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. Этот гибридный белок представляет собой полностью рекомбинантный белок, который существует в виде гомодимерного гибрида HSA и зрелого человеческого GDF15, соединенных линкером, содержащим 42 аминокислоты и состоящим из глициновых и сериновых остатков, GS-(GGGGS)8. Расчетная молекулярная масса этого гибридного белка составляет 162 696 дальтон, а единственный нативный свободный цистеин в положении 34 HSA был заменен серином. Далее в примерах этот конкретный гибридный белок HSA-GDF15 для простоты будет именоваться просто "FP1". Вариант FP1 с меткой бх His (6xHis-FP1, SEQ ID NO: 26), содержащий линкер AS-(GGGGS)x8-GT, использовали для сравнения в некоторых из приведенных ниже примеров.
[0166] Пример 8. Влияние FP1 на потребление пищи мышами линии C57BL/6
[0167] Цель данного эксперимента заключалась в том, чтобы продемонстрировать зависимое от дозы воздействие FP1 на ингибирование потребления пищи мышами линии C57BL/6.
[0168] Самцы мышей линии C57BL/6 в течение минимум 72 часов проходили акклиматизацию в клетках BioDAQ. Затем мышей на основании потребления пищи в предыдущие 2 4 часа разделяли на шесть групп по восемь животных. В период с 16:00 до 17:00 животных взвешивали и вводили им носитель или композицию, содержащую FP1, путем подкожной инъекции. Изменение массы корма для каждой клетки непрерывно регистрировалось системой BioDAQ в
течение 4 8 часов после инъекций. Для сравнения в настоящем исследовании использовали 6xHis-FPl.
[0169] Результаты (Фиг. 2 и табл. б) представлены как среднее значение суммарного потребления пищи для заданного промежутка времени. Результаты показали, что подкожное введение FP1 мышам линии C57BL/6 существенно ингибировало потребление пищи по сравнению с животными, получавшими носитель, при всех дозах и во все моменты времени в ходе испытания. Введение 6xHis-FP1 вызывало снижение потребления пищи при дозе 8 нмоль/кг.
[0170] Таблица б. Влияние подкожного введения FP1 на потребление пищи мышами линии C57BL/6; показано суммарное потребление пищи за 12, 24 и 48 часов после введения
* р < 0,05, по сравнению с PBS; ** р < 0,01, по сравнению с PBS; *** р < 0,001, по сравнению с PBS; **** р < 0,0001, по сравнению с PBS
Однофакторный дисперсионный анализ и критерий Тьюки для множественных сравнений; л=8 на группу
[0171] Пример 9. Влияние FP1 на потребление пищи крысами линии Спрег-Доули
[0172] Цель данного эксперимента заключалась в том, чтобы продемонстрировать зависимое от дозы воздействие FP1 на ингибирование потребления пищи у крыс линии Спрег-Доули.
[0173] Самцы крыс линии Спрег-Доули в течение минимум 72 часов проходили акклиматизацию в клетках BioDAQ. Затем крыс на
основании потребления пищи в предыдущие 2 4 часа разделяли на шесть групп по восемь животных. В период с 16:00 до 17:00 животных взвешивали и вводили им носитель или композицию, содержащую гибридный белок, путем подкожной инъекции. Изменение массы корма для каждой клетки непрерывно регистрировалось системой BioDAQ в течение 4 8 часов после инъекций. Для сравнения в настоящем исследовании использовали 6xHis-FPl.
[0174] Результаты представлены на Фиг. 3 и в табл. 7. Подкожное введение FP1 в дозах 2,5 нмоль/кг и 10 нмоль/кг ингибировало потребление пищи по сравнению с животными, получавшими носитель. Ингибирование достигало статистической значимости только при самой высокой испытанной дозе (10 нмоль/кг) через 24 и 48 часов после введения. Введение FP1 вызывало снижение потребления пищи при дозе 8 нмоль/кг, и этот эффект был значимым через 2 4 и 4 8 часов.
[0175] Таблица 7. Влияние подкожного введения FP1 на потребление пищи крысами линии Спрег-Доули; показано суммарное потребление пищи за 12, 24 и 48 часов после введения
* р < 0,05, по сравнению с PBS; ** р < 0,01, по сравнению с
PBS
Однофакторный дисперсионный анализ и критерий Тьюки для
множественных сравнений; л=8 на группу
[0176] Пример 10. Влияние FP1 на гомеостаз глюкозы и массу тела у мышей с алиментарным ожирением (DIO)
[0177] Цель настоящего эксперимента состояла в оценке влияния FP1 на потребление пищи, массу тела и гомеостаз глюкозы в течение двух недель введения у мышей DI0 линии C57BL/6.
[0178] Самцов мышей DI0 взвешивали и подкожно вводили им дозы FP1 2 мл/кг каждые три дня (q3d) в день 0, 3, б, 9 и 12. Группам, получавшим носитель и розиглитазон, вводили PBS по аналогичной схеме. Животным контрольной группы розиглитазон добавляли в корм в количестве 0,015%, доступ к корму не ограничивали. Массы тела мышей и пищи регистрировали ежедневно. Уровни глюкозы измеряли с помощью глюкометра (One Touch(r) Ultra(r), Lifescan, г. Милпитас, штат Калифорния, США) . Массу жировой и нежировой ткани у мышей, находящихся в сознании, количественно измеряли методом ЯМР с разрешением по времени (TD-NMR), с помощью прибора Bruker Mini-Spec LF110. Пероральный тест на переносимость глюкозы (OGTT) у мышей проводили после 4 часов голодания. Глюкозу в крови измеряли через надрез на хвосте через 0, 30, 60, 90 и 120 минут после введения через желудочный зонд 2 г/кг глюкозы, 10 мл/кг. Инсулин измеряли через 0, 30 и 90 минут после введения глюкозы.
[0179] В конце исследования мышей умерщвляли посредством ингаляции С02 и отбирали посмертную пробу крови. Сыворотку помещали в планшет на 9 6 лунок на влажный лед, а затем хранили при температуре -8 0 °С. Извлекали печень и оценивали содержание жира по отношению к общей массе на срезах печени методом TD-NMR на приборе Bruker MiniSpec mq60, в соответствии с инструкцией производителя.
[0180] Рассчитывали оценку резистентности к инсулину натощак по гомеостатической модели (HOMA-IR) на основании произведения глюкозы натощак (в мг/дл) и инсулина (в мЕд/л) , деленного на коэффициент 405.
[0181] Введение мышам DIO FP1 по схеме q3d в дозах 1 нмоль/кг и 10 нмоль/кг приводило к снижению массы тела (табл. 8)
и потребления пищи (табл. 9). Указанные снижения достигали статистической значимости только в определенные моменты времени, как описано ниже.
[0182] FP1 вызывал снижение массы тела при дозах 1 (со 2-го до 14-го дня) и 10 нмоль/кг (с 1-го до 14-го дня) у мышей DI0 (табл. 8 и Фиг. 4) . Значительное снижение потребления пищи наблюдали в 1-й и 2-й дни исследования при дозе 1 нмоль/кг и в 1, 8 и 9-й дни при дозе 10 нмоль/кг (табл. 9).
[0183] Таблица 8. Изменение массы тела (% от начальной) во
время введения FP1 у мышей DI0
Введение День
Носитель
Н/П
FP1 (нмоль/кг)
0,1 1 10
Розиглитазон
10 мг/кг в день
0,1 ± 0,2
-0, 1 ± 0,4
0,6 ± 0,4
0,2 ± 0,3
0,1 ± 0,2
-0, 8 ± 0,3
-0,2 ± 0,3
0,4 ± 0,3
-0,3 ± 0,4
-0,9 ± 0,2
0,0 ± 0,0
0,0 ± 0,0
0,0 ± 0,0
0,0 ± 0,0
0,0 ± 0,0
0,1 ± 0,2
-0, 1 ± 0,4
-1,5 ± 0,5
-2, 8 ± 0, 4*
1,9 ± 0,2
0,0 ± 0,3
-0, 8 ± 0,5
-3,2 ± 0, 4*
-3, 1 ± 0,5*
2,2 ± 0,5
-0,2 ± 0,4
-0, 4 ± 0,4
-3,2 ± 0, 6*
-4, 0 ± 0,7*
2,6 ± 0,5
-0, 4 ± 0,5
-0,7 ± 0,5
-3, 8 ± 0, 6*
-4, 4 ± 0, 8*
3,0 ± 0,5*
-0,5 ± 0,4
-1, 0 ± 0,3
-4, 0 ± 0,5*
-4, 6 ± 0, 9*
3, 8 ± 0,6*
-0, 4 ± 0, 6
-0,5 ± 0,5
-3, 8 ± 0, 4*
-5, 6 ± 0, 9*
4,0 ± 0,7*
-0,3 ± 0,5
-0,5 ± 0,5
-4, 3 ± 0, 6*
-6, 1 ± 0, 9*
5,5 ± 0,8*
-0, 6 ± 0,5
-0,5 ± 0,5
-4, 2 ± 0, 6*
-6, 7 ± 1, 1*
6, 1 ± 0, 9*
-0, 4 ± 0,5
-0,2 ± 0,5
-4, 5 ± 0, 6*
-7, 2 ± 1,2*
7,0 ± 1,0*
-0,3 ± 0,5
0,3 ± 0,5
-4, 4 ± 0, 8*
-7, 8 ± 1,2*
7,8 ± 1,1*
-0,5 ± 0,5
0,5 ± 0,4
-4, 4 ± 0, 8*
-1,9 ± 1, 4*
8,2 ± 1,2*
-0, 8 ± 0, 6
0,8 ± 0,5
-4, 3 ± 1, 0*
-1,9 ± 1,5*
8,5 ± 1,2*
-0, 8 ± 0, 6
0,5 ± 0,5
-3, 9 ± 0, 9*
-8, 7 ± 1, 6*
8,6 ± 1,3*
-1,7 ± 0, 6
-0, 4 ± 0,5
-4, 6 ± 1, 0*
-9, 0 ± 1,7*
1,6 ± 1,3*
Данные представлены как среднее ± SEM. п=8 на группу.
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0184] Таблица 9. Суточное потребление пищи (г) во время введения FP1 у мышей DI0
Введение День
Носитель
Н/П
FP1 (нмоль/кг)
0,1 1 10
Розиглитазон
10 мг/кг в день
2,9 ± 0,1
3,0 ± 0,2
2,9 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,8 ± 0,1
3,0 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,8 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,9 ± 0,1
3,1 ± 0,1
2,1 ± 0,2*
1, 5 ± 0,1*
3,6 ± 0,1*
3,0 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,3 ± 0,1*
2,6 ± 0,2
3,9 ± 0,2*
2,8 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,6 ± 0,1
2,4 ± 0,2
3,5 ± 0,1*
2,3 ± 0,1
2,6 ± 0,1
2,2 ± 0,1
2,3 ± 0,1
3,3 ± 0,1*
2,8 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,6 ± 0,1
3,7 ± 0,2*
2,8 ± 0,1
3,1 ± 0,1
2,9 ± 0,1
2,4 ± 0,2
3,7 ± 0,2*
2,7 ± 0,1
2,9 ± 0,1
2,6 ± 0,1
2,4 ± 0,1
3,8 ± 0,2*
2,7 ± 0,1
2,9 ± 0,1
2,6 ± 0,1
2,1 ± 0,1*
3,5 ± 0,2*
3,0 ± 0,1
3,3 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,5 ± 0,2*
4,3 ± 0,2*
2,6 ± 0,1
3,0 ± 0,1
2,6 ± 0,1
2,2 ± 0,1
3,6 ± 0,1*
2,9 ± 0,1
3,1 ± 0,1
2,7 ± 0,2
2,6 ± 0,2
3,4 ± 0,1*
2,7 ± 0,1
3,1 ± 0,1
3,0 ± 0,1
3,0 ± 0,2
3,6 ± 0,2*
2,6 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,8 ± 0,1
2,2 ± 0,2
3,2 ± 0,1*
Данные представлены как среднее ± SEM. п=8 на группу.
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0185] По данным теста OGTT, выполненного на 14-й день исследования, FP1 существенно снижал уровни глюкозы по сравнению с животными, получавшими носитель, во все моменты времени после времени 0 и при всех трех дозах, применявшихся в испытании (табл. 10). Этот показатель дополнительно количественно определяли как полную площадь под кривой (AUC) и дельта AUC, которые были значительно меньше, по сравнению с животными, получавшими носитель, при всех трех дозах, применявшихся в испытании (табл. 10 и Фиг. 5А и 5В).
день), на 7-й день и на 13-й день исследования (табл. 11 и Фиг.
[0186] Таблица 10. Уровни глюкозы в крови (мг/дл) по данным теста OGTT, проведенного через четырнадцать дней, в которые
б). FP1 вызывал снижение уровня глюкозы в крови статистически значимым образом при дозах 1 нмоль/кг и 10 нмоль/кг на 13-й день исследования.
[0188] Таблица 11. Уровни глюкозы в крови после еды во время введения FP1 у мышей DI0 по схеме q3d
Время после начала введения (дней)
Введение
Доза (нмоль/кг)
Носитель
Н/П
17 7,6+10,9
173,6+10,6
225,3+23,0
FP1
0,1
174,1+8,5
171,8+16,3
196,4+8,1
167,5+7,8
135,1+11,2
165,3+10,3*
165,3+13,7
145,3+4,9
153,8+7,5*
Розиглитазон
10 мг/кг в день
18 9,6+17,3
122,6+8,1*
154,8+6,5*
Данные представлены как среднее ± SEM. п=8 на группу.
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0189] Уровни инсулина в плазме, измеренные в тесте OGTT, были значительно выше в группе, получавшей FP1, чем в соответственной группе, получавшей носитель, для дозы 0,1 нмоль/кг через 3 0 минут, и ниже при дозах 1 и 10 нмоль/кг в тот же момент времени (табл. 12) . Амплитуда уровня инсулина в тесте OGTT, измеренная по полной площади под кривой, была выше, чем у группы, получавшей носитель, для дозы 0,1 нмоль/кг FP1 (табл. 12), и ниже при дозах 1 и 10 нмоль/кг. В обоих случаях статистическая значимость была достигнута только при самой низкой дозе. В момент времени через 90 минут у мышей, получавших 1 и 10 нмоль/кг FP1, уровень инсулина был ниже; однако этот эффект не достиг статистической значимости. Измерения на основании модели HOMA-IR, как показателя чувствительности к инсулину, были проведены на 14-й день исследования. В этот момент времени введение FP1 привело к снижению HOMA-IR или к улучшенной чувствительности к инсулину при дозе 10 нмоль/кг (табл. 13 и Фиг. 7).
[0190] Таблица 12. Уровни инсулина в плазме (пг/мл),
измеренные в тесте OGTT, проведенном через четырнадцать дней, в которые мышам DIO вводили FP1 по схеме q3d
[0191] Таблица 13. Модель HOMA-IR после голодания у мышей DI0 через четырнадцать дней, в которые им вводили FP1 по схеме q3d
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0192] Величина снижения веса, достигнутая к 13 дню, не
привела к измеримым изменениям абсолютной массы жировой ткани или относительной (%) массы жировой ткани при любой дозе (табл. 14) . При дозе 10 нмоль/кг наблюдали значительное снижение абсолютной массы нежировой ткани. Этого снижения не наблюдали при выражении в виде относительной (%) массы нежировой ткани. Массу печени мышей измеряли при посмертной аутопсии на 15-й день исследования (табл. 15). Введение FP1 приводило к снижению абсолютной массы печени и массы печени, выраженной в процентах от массы тела, при дозе 10 нмоль/кг. Снижение наблюдали при дозе 1 нмоль/кг, но оно не достигало статистической значимости ни по одному из параметров. Содержание жира в печени измеряли по биопсийному материалу методом ЯМР (табл. 16) . Гибридный белок FP1 снижал содержание печеночного жира, измеряемого в процентах от массы биопсийного материала, при дозах 1 и 10 нмоль/кг. Это снижение было значительным при более высокой дозе.
[0193] Таблица 14. Состав тела через тринадцать дней введения FP1 по схеме q3d у мышей DIO
[0194] Таблица 15. Масса печени через пятнадцать дней введения FP1 по схеме q3d у мышей DI0
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0195] Таблица 16. Содержание жира в печени, измеренное через пятнадцать дней введения FP1 по схеме q3d, у мышей DIO
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0196] Пример 11. Влияние FP1 на уровни глюкозы в крови и массу тела у мышей ob/ob
[0197] Цель этого эксперимента состояла в оценке влияния FP1 на массу тела и уровни глюкозы в крови через восемь дней введения мышей ob/ob с ожирением, гипергликемией и дефицитом лептина.
[0198] Самцов мышей ob/ob взвешивали и подкожно вводили им дозы FP1 2 мл/кг через каждые три дня (q3d) на 0, 3 и б-й день. Массы тела мышей и пищи регистрировали ежедневно. Уровни глюкозы измеряли ежедневно с помощью глюкометра. В конце исследования мышей умерщвляли и отбирали посмертную пробу крови.
[0199] FP1 в дозе 1 нмоль/кг значительно снижал массу тела (выраженную в процентах от начальной массы тела) у мышей ob/ob,
начиная со 2-го дня и по 8-й день, по сравнению с мышами, получавшими носитель. FP1 в дозе 10 нмоль/кг снижал массу тела (выраженную в процентах от начальной массы тела) у мышей ob/ob, начиная с 1-го дня и по 8-й день, по сравнению с мышами, получавшими носитель (табл. 17 и Фиг. 8).
[0200] Таблица 17. Изменение массы тела (% от начальной) во время введения FP1 по схеме q3d у мышей ob/ob
Введение
Носитель
FP1
День
Н/П
1 нмоль/кг
10 нмоль/кг
-2,5 ± 0,3
-2,8+0,4
-3, 6 + 0,5
-2,4 ± 0,3
-3, 0 + 0,5
-3,5 + 0,5
-1,9 ± 0,2
-2,5 + 0,4
-2,8 + 0,3
-0,3 ±0,3
0,1 + 0,2
-0,3 + 0,2
0,0 ± 0,0
0,0 + 0,0
0,0 + 0,0
0,5 ± 0,2
-1, 6 + 0,2
-2,3 + 0,5*
1,1 ± 0,2
-1,8+0,4*
-2,0 + 0,9*
1,3 ± 0,3
-2,5 + 0,4*
-3,1 + 1,1*
1,8 ± 0,3
-3, 3 + 0,5*
-4,2 + 1,3*
1,8 ± 0,4
-3, 5 + 0,5*
-4,7 + 1,5*
2,0 ± 0,5
-4,0 + 0,7*
-5,7 + 1,6*
2,8 ± 0,6
-4, 8 + 0,8*
-6,3 + 1,7*
3,5 ± 0,8
-4,5 + 1,0*
-6,1 + 1,9*
Данные представлены как среднее ± SEM. п=8 на группу.
* р < 0,05 по сравнению с таковыми в группе, получавшей носитель.
[0201] FP1 в дозе 10 нмоль/кг снижал уровни глюкозы после еды у мышей ob/ob в 1-й и 2-й дни исследования, а также с 4-го дня по 8-й день, по сравнению с мышами, получавшими носитель. Снижение уровня глюкозы в крови наблюдали при дозе 1 нмоль/кг; однако этот эффект не достиг статистической значимости (табл. 18 и Фиг. 9).
[0202] Таблица 18. Уровни глюкозы после еды у мышей ob/ob во время введения FP1 по схеме q3d
[0204] Фармакокинетика у мышей
[0205] FP1 внутривенно и подкожно вводили самкам мышей линии C57BL/6 в дозе 2 мг/кг в PBS с рН 7. В течение 7 дней после введения обоими путями отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства. Концентрацию FP1 определяли методом иммуноанализа. Зависимость концентрации лекарственного средства в сыворотке от времени сведена в табл. 19 и 20, и показана на Фиг. 10.
[0206] Таблица 19. Зависимость концентрации FP1 в сыворотке (нМ) от времени после однократного введения подкожно самкам мышей линии C57BL/6
FP1, доза, подкожно
Момент времени
Результат животного 56 (нМ)
Результат животного 57 (нМ)
Результат животного 58 (нМ)
Результат животного 60 (нМ)
Результат животного 63 (нМ)
Средний результат (нМ)
Станд. откл.
4 ч.
32,299
50,735
42,766
32,407
23,018
36,245
10,698
24 ч.
88,822
106,418
88,648
103,841
80,346
93,615
11,093
72 ч.
33,563
38,473
32,473
33,625
32,769
34,181
2,451
96 ч.
20,639
24,988
21,247
19,356
20,771
21,400
2, 124
День 7
5,399
6, 919
7,234
5, 994
5, 637
6,237
0, 803
[0207] Таблица 20. Зависимость концентрации FP1 в сыворотке (нМ) от времени после однократного введения внутривенно самкам мышей линии C57BL/6
FP1, доза, внутривенно
Момент времени
Результат животного 52 (нМ)
Результат животного 53 (нМ)
Результат животного 65 (нМ)
Результат животного 66 (нМ)
Результат животного 70 (нМ)
Средний результат (нМ)
Станд. откл.
1 ч.
240,419
233,318
232,484
276,913
272,727
251,172
21,857
24 ч.
86,823
95,774
80,201
93,153
88,853
88,961
6, 027
72 ч.
33,634
37,447
33,108
41,680
34,034
35,981
3, 612
96 ч.
22,666
20,588
19,458
33,718
20,361
23,358
5,909
День 7
7,401
5, 606
4,896
8, 556
4,205
6, 133
1, 803
[0208] Фармакокинетический анализ показал, что период терминальный полужизни FP1 у мышей линии C57BL/6 после подкожного и внутривенного введения составлял 1,67 и 1,57 дня, соответственно (табл. 21). Средняя биодоступность FP1 после подкожного введения составила ~ 71%.
[0209] Таблица 21. Среднее (± СО) значение фармакокинетических параметров FP1 после внутривенного и подкожного введения в дозе 2 мг/кг самкам мышей линии C57BL/6
Путь введения
tl/2
(дни)
CL или CL/F (мл/день/ кг)
Vss (мл/ кг)
Стах
(нг/ мл)
т * (дни)
AUCo-посл.
(день* нг/мл)
AUCo-inf (день* нг/мл)
Подкожно
Среднее
1,67
49,48
14 994
38 315
40 734
(СО)
(0,14)
(4,791)
(1776)
(3851)
(4072)
Внутривенно
Среднее
1,57
35,00
69,03
40 231
0,04
55 263
57 531
(СО)
(0,19)
(3,13)
(5,8)
(3500)
(4853)
(5416)
Примечание. * Ттах (медиан.)
[0210] Фармакокинетика у крыс
[0211] FP1 внутривенно и подкожно вводили самкам крыс линии Спрег-Доули в дозе 2 мг/кг в PBS с рН 7. В течение 7 дней после введения обоими путями отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства. Концентрацию FP1 определяли методом иммуноанализа. Зависимость
концентрации лекарственного средства в сыворотке от времени сведена в табл. 22 и 23, и показана на Фиг. 11.
[0212] Таблица 22. Зависимость концентрации FP1 в сыворотке (нМ) от времени после однократного введения подкожно самкам крыс линии Спрег-Доули
FP1, группа 3 (доза, подкожно)
Момент времени
Результат животного 53 (нМ)
Результат животного 55 (нМ)
Результат животного 67 (нМ)
Результат животного 68 (нМ)
Результат животного 69 (нМ)
Средний результат (нМ)
Станд. откл.
4 ч.
4, 766
3,500
3, 932
3, 546
3,250
3,799
0, 593
24 ч.
45,118
53,192
39,196
39,823
40,804
43,627
5, 826
72 ч.
18,900
24,102
23,124
23,718
18,933
21,755
2, 615
96 ч.
12,193
14,333
14,185
14,669
11,256
13,327
1,511
День 7
2, 805
2, 821
2,447
3,438
2, 358
2,774
0, 426
[0213] Таблица 23. Зависимость концентрации FP1 в сыворотке (нМ) от времени после однократного введения внутривенно самкам крыс линии Спрег-Доули
[0214] Фармакокинетический анализ показал, что терминальный период полужизни FP1 у крыс линии Спрег-Доули после подкожного и внутривенного введения составлял 1,34 и 1,51 дня, соответственно (табл. 24). Средняя биодоступность FP1 после подкожного введения составила ~ 23%.
[0215] Таблица 24. Среднее (± СО) значение фармакокинетических параметров FP1 после внутривенного и подкожного введения в дозе 2 мг/кг самкам крыс линии Спрег-Доули
Путь
tl/2
CL или CL/F
Vss
т *
AUCo-посл.
AUCo-inf
введен
(дни)
(мл/день/кг)
(мл/кг)
(нг/мл)
(дни)
(день*нг/
(день*нг/
[0216] Фармакокинетика у обезьян
[0217] FP1 внутривенно и подкожно вводили новым самцам яванского макака (Масаса fascicularis) в дозе 1 мг/кг в PBS с рН 7. В течение 21 дня после введения обоими путями отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства иммунологическим методом анализа. Зависимость концентрации лекарственного средства в сыворотке от времени сведена в табл. 25 и 2 6, и показана на Фиг. 12.
FP1 (доза, внутривенно)
[0218] Таблица 25. Зависимость концентрации FP1 в сыворотке (нМ) от времени после однократного введения подкожно яванским макакам, в соответствии с определениями иммунологическим методом
[0221] Таблица 27. Среднее (± СО) значение фармакокинетических параметров FP1 после внутривенного и подкожного введения в дозе 1 мг/кг яванским макакам
[0222] Количественное определение концентрации интактного димера в сыворотке яванских макак после внутривенного и подкожного введения проводили методом иммуноафинного захвата/ЖХМС (табл. 28 и 29 и Фиг. 13 и 14) . Концентрации,
определяемые данным методом, были близки к концентрациям, определяемы методом иммуноанализа (IA), доказывая, что в организме яванских макак FP1 циркулирует в виде интактного димера без заметной подверженности метаболическим изменениям.
[0223] Таблица 28. Зависимость концентрации FP1 в виде интактного димера в сыворотке (нг/мл) от времени после однократного внутривенного введения яванским макакам в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата/ЖХМС
День
Интактный димер по данным масс-спектрометрии (объединенные пробы)
Данные иммуноанализа (средн.)
0, 00
0,25
9625
8959
1, 00
15 799
14 219
2, 00
17 671
17 373
3, 00
19 130
17 476
5, 00
12 284
15 633
7, 00
10 808
12 971
10, 00
8910
10 143
14, 00
5814
7034
18, 00
4074
5054
22, 00
2967
3694
[0225] Концентрацию аналитов в сыворотке яванских макак
после внутривенного и подкожного введения также измеряли методом
иммуноафинного захвата/расщепления трипсином/жидкостной
хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХМС/МС) (табл.
3 0 и 31) . Выбранные триптические пептиды, а именно: ALV
(ALVLIAFAQYLQQSPFEDHVK), ASL (ASLEDLGWADWVLSPR) и TDT
(TDTGVSLQTYDDLLAK), расположены внутри FP1 вблизи от N-конца области HSA, N-конца GDF15 и С-конца GDF15, соответственно. Пептиды отслеживали как суррогатные пептиды FP1. Концентрации всех суррогатных пептидов были близки друг другу и концентрациям, измеренным методом иммуноанализа, доказывая, что последовательность GDF15 в FP1 остается интактной и связана с полной последовательностью HSA in vivo.
[0226] Таблица 30. Зависимость концентрации в сыворотке (нг/мл) суррогатных пептидов, представляющих различные области FP1, от времени после однократного внутривенного введения яванским макакам в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата/расщепления трипсином /жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХМС/МС)
Момент времени
FP1 в среднем (нг/мл)
Станд. откл.
Данные иммуно анализа (нг/мл)
День
Часы
ALV
TDT
ASL
ALV
TDT
ASL
0,00
< LLOQ
< LLOQ
< LLOQ
Н/П
Н/П
Н/П
0,0
0,04
32400,0
39766,7
33333,3
2623,0
3162,8
2722,7
34536,9
0,25
29100,0
27166,7
30600,0
3439,5
1006,6
2095,2
30328,1
1,00
24366,7
23300,0
23800,0
4215,8
3996,2
4100,0
24088,7
2,00
19433,3
17733,3
18700,0
1457,2
1193,0
854, 4
19448,6
3,00
18100,0
17200,0
17166,7
360, 6
871,8
1001,7
17271,6
5,00
120
15966,7
14033,3
14233,3
1001,7
642, 9
1011,6
16282,3
7,00
168
13733,3
11800,0
12100,0
1115,0
600, 0
300, 0
13673,6
10, 00
240
9303,3
8570,0
8570,0
2290,1
1682,2
1685,9
10973,0
14, 00
336
5860,0
5890,0
6056, 7
415, 8
312, 2
388, 0
6878,9
18, 00
432
4143,3
4400,0
4226,7
374, 3
52, 9
571, 2
4628,6
22, 00
528
2830,0
3256,7
2753,3
355, 4
420,0
319, 0
3984,0
[0227] Таблица 31. Зависимость концентрации в сыворотке (нг/мл) суррогатных пептидов, представляющих различные области FP1, от времени после однократного подкожного введения яванским макакам в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата/расщепления трипсином/жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХМС/МС)
[0229] Целью данного исследования был анализ стабильности FP1 в человеческой плазме ex vivo. Свежую незамороженную человеческую плазму получали из гепаринизированной крови двух субъектов (одного мужчины и одной женщины) путем центрифугирования. FP1 инкубировали в этой матрице при температуре 37°С с осторожным перемешиванием в течение 0, 4, 24 и 4 8 часов. Концентрацию FP1 определяли методом иммуноанализа. Среднее отличие в процентах от начальной концентрации (0 часов) варьировало в интервале от -4,1 до -12,9 и не увеличивалось со временем, что свидетельствует о стабильности FP1 в человеческой
плазме в течение до 4 8 часов ex vivo (табл. 32 и Фиг. 15).
[0230] Таблица 32. Концентрация FP1 (мкг/мл) через 0, 4, 24 и 48 часов (ч.) инкубации ex vivo в плазме, полученной от двух человеческих субъектов (Sub), в соответствии с определениями иммунологическим методом
Проба ex vivo
Конц. в плазме мужчины
Sub 1 (мкг/мл)
% отличия ТО
Конц. в плазме женщины
Sub 2 (мкг/мл)
отличия ТО
Средняя
конц. (мкг/мл)
отличия ТО
Плазма, Т 0 ч. FP1
11,503
Н/П
12,649
Н/П
12,076
Н/П
Плазма, Т 4 ч. FP1
10,524
-8,5
10,521
-16,8
10,523
-12, 9
Плазма, Т 24 ч. FP1
9, 934
-13, 6
12,402
-2, 0
11,168
-7,5
Плазма, Т 48 ч. FP1
10,582
-8, 0
12,575
-0, 6
11,578
-4,1
[0231] Количественное определение концентрации интактного димера после инкубации в человеческой плазме проводили методом иммуноафинного захвата/ЖХМС. Концентрации, определенные данным методом, оставались стабильными с течением времени (0, 4, 2 4 и 48 часов), доказывая, что FP1 сохраняется в человеческой плазме ex vivo в виде интактного димера в течение до 48 часов (табл. 33 и Фиг. 16).
[0232] Таблица 33. Средняя концентрация FP1 (мкг/мл) в виде интактного димера и отличие (%) от начальной концентрации через 0, 4, 24, 4 8 часов инкубации ex vivo в плазме, полученной от двух человеческих субъектов, в соответствии с определениями методом иммуноафинного захвата/ЖХМС
[0234] Для обнаружения антилекарственного антитела (ADA) у
животных и в клинических пробах будут разработаны методы анализа
иммунного ответа (IR) . Анализ иммунного ответа (IR) будет
определять ADA-положительные пробы для сравнения статуса по ADA
с результатами фармакокинетического/токсикокинетического (РК/ТК)
анализа, что позволит оценивать воздействие и
фармакокинетические параметры FP1. Клинический анализ иммунного ответа будет применяться для просмотра проб сыворотки, подтверждения специфичности ADA-положительных проб и определения титра ADA для подтвержденных положительных проб. Затем будет разработан метод анализа нейтрализующих антител (NAb), применимый к положительным пробам от ADA-положительных субъектов, подтвержденным на стадии 1 программы. Далее будет выполнено определение перекрестной реактивности ADA в отношении эндогенного GDF15 для применения на стадии 2 программы. Перед выполнением первого исследования у человека (FIH) будет проведена оценка риска иммуногенности, а при надлежащем обосновании возможно проведение дополнительных анализов для характеристики иммунного ответа.
[0235] Пример 14. Токсикологический план
[0236] Поскольку эндогенный рецептор-мишень для GDF15 не выявлен, отсутствуют функциональные данные в отношении FP1, как и данные о связывании in vitro. Тем не менее, исследования фармакологических показателей и эффективности однократных и множественных доз, проведенные на крысах, мышах и яванских макаках, продемонстрировали активность FP1 у этих видов, что свидетельствует о его влиянии на снижение потребления пищи, снижение массы тела и модуляцию переносимости глюкозы в пероральном тесте. В качестве грызунов и не-грызунов в токсикологическом исследовании, на основании результатов по эффективности, приняты крыса и обезьяна, соответственно, учитывая однако тот факт, что собственное воздействие FP1 на рецептор у этих видов (в отличие от человека) охарактеризовано не полностью.
[0237] Примеры 15-19 включают характеристику другого примера гибридного белка настоящего изобретения, описанного в
примере 5, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 92 (кодируемую последовательностями нуклеотидов SEQ ID N0: 92 (оптимизация кодонов 1) и 110 (оптимизация кодонов 2)) . Этот гибридный белок представляет собой полностью рекомбинантный белок, который существует в виде гомодимера гибрида HSA (C34S) и варианта делеции зрелого человеческого GDF15 (201-308; SEQ ID N0: 8), соединенных содержащим 42 аминокислоты линкером, состоящим из глициновых и сериновых остатков GS-(GGGGS)s-Единственный нативный свободный цистеин в положении 34 HSA был заменен на серии. Далее в примерах этот конкретный гибридный белок HSA-GDF15 для простоты будет именоваться "FP2".
[0238] Пример 15. Влияние FP2 на потребление пищи мышами линии C57BL/6
[0239] Выполняли оценку способности FP2 снижать потребление пищи самцами мышей линии C57BL/6 после введения однократной дозы. В данном исследовании использовали самцов мышей линии C57BL/6 (в возрасте 10-12 недель), полученных от компании Taconic Biosciences (г. Хадсон, штат Нью-Йорк, США). Мышей размещали в клетках по отдельности, в помещении с регулируемой температурой и 12-часовым циклом чередования освещения и темноты
(6:00/18:00), и предоставляли им неограниченный доступ к воде и корму. Самцы мышей линии C57BL/6 в течение минимум 72 часов проходили акклиматизацию в клетках BioDAQ; затем мышей на основании потребления пищи за последние 2 4 часа разделяли на шесть групп, по восемь животных. В период с 16:00 до 17:00 животных взвешивали и вводили им носитель или композиции путем подкожной инъекции. Изменение массы корма для каждой клетки непрерывно регистрировалось системой BioDAQ в течение 4 8 часов после введения композиции. Для сравнения в настоящем исследовании использовали препарат 6xHis-FPl.
[0240] FP2 оказывал значительное влияние на снижение потребления пищи через 12, 24 и 48 часов после введения при всех уровнях дозы, применявшихся в испытании (табл. 34) . У мышей наблюдали снижение в процентном изменении потребления пищи по сравнению с PBS во все моменты времени и при всех уровнях дозы
(табл. 35).
Данные представлены как среднее + SEM. * р < 0,05, по сравнению с PBS ** р < 0,01, по сравнению с PBS *** р < 0,001, по сравнению с PBS
**** р < о,0001, по сравнению с PBS, соответственно
Статистические анализы: метод дисперсионного анализа и критерий Даннетта для множественных сравнений.
в течение 4 8 часов у мышей линии C57BL/6
п=8 на группу, за исключением 6xHis-FPl, 8 нмоль/кг (п=б).
Анорексигенный эффект FP2 выражен как относительное снижение потребления пищи по сравнению с PBS в контроле,
соответственно.
Данные представлены как среднее ± SEM. * р < 0,05, по сравнению с PBS ** р < 0,01, по сравнению с PBS *** р < 0,001, по сравнению с PBS
**** р < о,0001, по сравнению с PBS, соответственно
Статистические анализы: метод дисперсионного анализа и критерий Даннетта для множественных сравнений.
п=8 на группу, за исключением 6xHis-FPl, 8 нмоль/кг (п=б).
[0241] Пример 16. Влияние FP2 на потребление пищи крысами линии Спрег-Доули
[0242] Выполняли оценку способности FP2 снижать потребление пищи и прирост массы тела у самцов крыс линии Спрег-Доули после введения однократной дозы. Животных получили от компании Charles Rivers Labs (г. Уилмингтон, штат Массачусетс, США) , они имели массу тела 200-225 г и были использованы в течение одной недели после доставки. Животных размещали в клетках по отдельности на подстилках Alpha Dry, и с пластиковой трубкой для подачи, в помещении с регулируемой температурой и 12-часовым циклом чередования освещения и темноты. Им предоставляли неограниченный доступ к воде и кормили кормом для лабораторных грызунов; Корм для грызунов Irradiated Certified PicoLab(r) Rodent Diet 20, 5K75* (поставщик: Purina Mills, г. Сент-Луис, штат Миссури, через ASAP, г. Квакертаун, штат Пенсильвания, США) . Перед введением дозы каждую крысу взвешивали и регистрировали массу тела.
[0243] Животные в течение минимум 72 часов проходили акклиматизацию в клетках BioDAQ; затем крыс на основании потребления пищи за последние 24 часа разделяли на шесть групп по восемь животных. В период с 16:00 до 17:00 животных взвешивали и вводили им носитель или композиции путем подкожной инъекции. Изменение массы корма для каждой клетки непрерывно регистрировалось системой BioDAQ в течение 4 8 часов после введения композиции. Для сравнения в настоящем исследовании использовали препарат 6xHis-FPl.
[0244] После введения однократной дозы FP2 измеряли
зависимое от дозы снижение потребления пищи. При дозе 0,3 нмоль/кг не наблюдали существенных отличий в потреблении пищи. При дозе 1 нмоль/кг наблюдали значительное влияние на снижение потребления пищи через 12 часов, но не через 24 или 48 часов. При уровнях дозы 3 и 10 нмоль/кг наблюдали значительное снижение потребления пищи во все моменты времени (табл. 3 6, Фиг. 19) . Снижение в процентном изменении потребления пищи по сравнению с PBS наблюдали во все моменты времени и при всех уровнях дозы (табл. 37) .
Данные представлены как среднее + SEM. * р < 0,05, по сравнению с PBS ** р < 0,01, по сравнению с PBS
*** р < 0,001, по сравнению с PBS, соответственно Статистические анализы: метод дисперсионного анализа и
в течение 4 8 часов крысами линии Спрег-Доули
критерий Даннетта для множественных сравнений. п=8 на группу
FP2, 1 нмоль/кг
19,3 ± 4,7*
20,8 + 4,1
11,5 + 5,5
FP2, 3 нмоль/кг
25,9+6,1**
32,0 + 4,7**
26,2 + 6, 5**
FP2, 10 нмоль/кг
27,4 + 4,8***
33,8 + 4,1**
31,2 + 6,4**
6xHis-FPl, 8 нмоль/кг
30,8+6,6***
37,0 + 5,4**
29,9 + 8, 8**
Анорексигенный эффект FP2 выражен как относительное снижение потребления пищи по сравнению с PBS в контроле, соответственно.
Данные представлены как среднее + SEM. * р < 0,05, по сравнению с PBS ** р < 0,01, по сравнению с PBS
*** р < 0,001, по сравнению с PBS, соответственно Статистические анализы: метод дисперсионного анализа и критерий Даннетта для множественных сравнений. п=8 на группу.
[0245] Пример 17. Влияние FP2 на потребление пищи, массу тела и гомеостаз глюкозы у мышей с алиментарным ожирением (DIO) линии C57BL/6
[024 6] Выполняли оценку способности FP2 снижать потребление пищи и массу тела, а также улучшать гомеостаз глюкозы при многократной дозе у самцов мышей DIO линии C57BL/6 в течение 8 дней. В данном исследовании использовали самцов мышей DIO линии C57BL/6 (в возрасте 21 недели, откормленные жиросодержащим кормом в течение 15 недель), полученные от компании Taconic Biosciences (г. Хадсон, штат Нью-Йорк, США) . Мышей размещали в клетках по отдельности, в помещении с регулируемой температурой и 12-часовым циклом чередования освещения и темноты (6:00/18:00), им предоставляли неограниченный доступ к воде и давали корм Research Diet D12492 (Research Diets, г. Нью-Брансуик, штат Нью-Джерси, США). Перед экспериментом мыши больше 1 недели проходили акклиматизацию в виварии для мышей. Конечными результатами исследования являлись измерения потребления пищи, массы тела, состава тела и гликемических показателей (тест OGTT, уровень глюкозы в крови). За один день перед введением дозы животных взвешивали и разделяли на группы по массе тела (BW).
Дозу мышам вводили путем подкожной инъекции. Животные, которым вводили FP2, получали данную композицию на 0-й день, 3-й день, б-й день, 9-й день и 12-й день. Группа, получавшая носитель, и группа, получавшая розиглитазон, в эти дни получали стерильный PBS подкожно. Розиглитазон добавляли в корм в количестве 0,015%, доступ к корму не ограничивали. Массу тела и потребление пищи регистрировали ежедневно в течение пятнадцати дней. Уровень глюкозы в крови измеряли на 0, 7 и 13-й дни. Пероральный тест на переносимость глюкозы (OGTT) проводили на 14-й день. Уровни инсулина измеряли в выбранные моменты времени в ходе проведения теста OGTT. На 15-й день мышей умерщвляли посредством ингаляции СОг и отбирали посмертные пробы крови через пункцию сердца для анализа воздействия. Отдельную ветвь ФК проводили в группах, состоящих из трех мышей на каждую дозу, всего 15 мышей.
[0247] Анализ зависимости воздействие-ответ (E-R) для FP2 у мышей DIO
[0248] Большинство животных в фармакодинамических (ФД) ветвях (эффективность) в последний день исследования, когда отбирали фармакокинетические (ФК) пробы, имели необнаружимые концентрации лекарственного средства, возможно из-за иммуногенности. Таким образом, при проведении анализа зависимости воздействие-ответ (на 3, б и 9-й дни, соответственно) средние профили ФК из ветвей ФК, вместо отдельных ФК из ветвей ФД, использовали для изменения массы тела
(%) относительно исходного уровня в ветвях ФД при соответственном уровне дозы. Этот метод предполагает, что с точки зрения воздействия лекарственного средства ветви ФК ведут себя аналогично ветвям ФД.
[024 9] Для корреляции между воздействием и данными ответа
(логарифмически преобразованные концентрации лекарственных препаратов) использовали модель Emax ((GraphPad Prism б, log
(агонист) против ответа)). Угловой коэффициент Хилла был принят равным 1. Следует отметить, что подобранные моделью значения ЕСю-ЕС5о для 3, б и 9 дней отличались не более чем вдвое, несмотря на то, что оценки Етах были различными (Етах=-4,2б%, 8,18% и -9,85%, соответственно). У некоторых животных на 9-й
день также наблюдали снижение воздействия лекарственного средства ввиду возможного образования ADA, и поэтому оценки параметра E-R на основании данных на 9-й день следует интерпретировать с осторожностью.
[0250] Влияние двухнедельного воздействия FP2 на потребление пищи, массу тела, гомеостаз глюкозы и содержание жира в печени оценивали у самцов у мышей с алиментарным ожирением (DI0) линии C57BL/6. В ветви ФК исследования до 9-го дня исследования, воздействие в группе введения, получавшей дозу 0,3 нмоль/кг, составило 1,7-3,3 нМ FP2, в группе введения, получавшей дозу 1,0 нмоль/кг - 7,1-14 нМ, в группе введения, получавшей дозу 3,0 нмоль/кг - 20,8-41,6 нМ, в группе введения, получавшей дозу 10 нмоль/кг - 28,5-112,9 нМ FP2 (п=2 или 3, табл. 49) . После 9-го дня наблюдалось снижение уровней циркуляции у большинства животных, несмотря на постоянное введение препарата по схеме q3d (табл. 49) . В согласии с этим ускоренным выведением, большинство животных в ветви ФД исследования на 15-й день имело необнаружимые уровни циркулирующего FP2 (табл. 50).
[0251] Введение FP2 мышам DI0 по схеме q3d привело к снижению потребления пищи (табл. 38), массы тела (табл. 39, 40 и Фиг. 20) и уровня глюкозы в крови после еды, по сравнению с носителем в контроле (табл. 4 3 и Фиг. 23). Значительное снижение потребления пищи наблюдали на 2-й день, 5-й день, 8-й день при дозе 0,3 нмоль/кг, с 1-го дня по 7-й день при дозе 1,0 нмоль/кг, на 1-й день, 2-й день, с 4-го дня по б-й день, и на 8-й день при дозе 3,0 нмоль/кг, а также на 1-й день, с 3-го дня по б-й день, на 8-й день и на 9-й день при дозе 10,0 нмоль/кг. Процентное изменение массы тела было значительным с 5-го дня по 13-й день при дозе 0,3 нмоль/кг, с 3-го дня по 13-й день при дозах 1,0 нмоль/кг и 10,0 нмоль/кг, и с 4-го дня по 13-й день при дозе 3,0 нмоль/кг. Изменение массы тела в граммах было значительным с 8-го дня при дозе 0,3 нмоль/кг, с б-го дня при дозе 1,0 нмоль/кг, с 7-го дня при дозе 3,0 нмоль/кг и с 5-го дня при дозе 10,0 нмоль/кг. Снижение уровней глюкозы в крови после еды было значительным на 7-й день у животных с уровнем дозы 3,0 нмоль/кг,
и было значительным на 13-й день у животных с уровнями дозы 3,0 и 10,0 нмоль/кг.
[0252] Мыши DIO, получавшие FP2 по схеме q3d, на 14-й день имели улучшенную переносимость глюкозы по сравнению с носителем в контроле, по данным теста с пероральным введением глюкозы (табл. 41; Фиг. 21А и 21В) . Уровень глюкозы значительно снижался через 30 минут в группе, получавшей дозу 0,3 нмоль/кг, через 60 минут и 120 минут в группе, получавшей дозу 1,0 нмоль/кг, через 120 минут в группе, получавшей дозу 3,0 нмоль/кг, и через 30, 90 и 120 минут в группе, получавшей дозу 10,0 нмоль/кг. Полная площадь под кривой была значительной для всех групп по дозам. Уровни инсулина по данным теста переносимости глюкозы значительно снижались через 3 0 минут в группах, получавших дозы 0,3 и 10,0 нмоль/кг (табл. 42; Фиг. 22А и 22В). Кроме того, по сравнению с животными, получавшими носитель, наблюдали значительное снижение вычисленного значения HOMA-IR после голодания у мышей DIO через 14 дней, в которые им вводили FP2 по схеме q3d в дозе 10,0 нмоль/кг, что указывает на улучшенную чувствительность к инсулину (табл. 44 и Фиг. 24).
[0253] Состав тела измеряли методом МРТ в -1-й день перед началом исследования и на 13-й день (табл. 47 и табл. 48) . Введение FP2 в дозах 1,0 нмоль/кг и 10,0 нмоль/кг мышам DIO приводило к значительному снижению массы жировой ткани на 13-й день; при этом не наблюдалось изменений массы нежировой ткани во всех подопытных группах. На 13-й день подопытная группа, получавшая 10,0 нмоль/кг, имела значительное увеличение относительной (%) массы нежировой ткани и значительное относительное (%) снижение массы жировой ткани по сравнению с группой, получавшей носитель. С -1-го по 13-й день были значительными изменения массы нежировой ткани в подопытных группах, получавших 0,3 нмоль/кг, 1,0 нмоль/кг и 10,0 нмоль/кг, и были значительными относительные изменения (%) массы нежировой ткани в подопытных группах, получавших 1,0, 3,0 и 10,0 нмоль/кг. С -1-го по 13-й день были значительными изменения массы жировой ткани и относительные изменения (%) массы нежировой ткани во всех подопытных группах по сравнению с носителем в контроле.
[0254] Не наблюдали существенных отличий в уровнях эндогенного мышиного GDF15 в сыворотке между животными, получавшими носитель и получавшими FP2 по схеме q3d в течение 15 дней (табл. 4 6).
[0255] Заключение: результаты показывают, что повышение воздействия лекарственного средства по существу связано с большим (%) изменением массы тела относительно исходной на уровне популяции по всем подопытным группам в исследовании, в 3, б и 9-й дни.
[0256] Воздействие FP2 в течение двух недель приводило к снижению потребления пищи, снижению массы тела, снижению уровня глюкозы в крови, улучшению переносимости глюкозы и чувствительности к инсулину у мышей DI0. Значительное снижение потребления пищи за множество дней было достигнуто введением доз 1,0, 3,0 и 10,0 нмоль/кг по схеме q3d. Масса тела существенно снижалась, начиная с третьего - пятого дня после начала исследования. Уровень глюкозы в крови после еды значительно снизился на 13-й день после введения FP2 в дозах 3,0 и 10,0 нмоль/кг по схеме q3d. Чувствительность к инсулину, которую оценивали по значительному снижению значения HOMA-IR после голодания, была достигнута через 14 дней, в которые животным вводили FP2 в дозе 10,0 нмоль/кг по схеме q3d. На 13-й день наблюдали значительное повышение процентной массы нежировой ткани и значительное снижение процентной массы жировой ткани у мышей DIO, получавших FP2 в дозе 10,0 нмоль/кг по схеме q3d.
2,8± 0,1
2,1±0,2*
2,2±0,1*
2,2±0,0*
1,9±0,1*
2,7±0,2
2,8± 0,1
2,3±0,2
2,1±0,1*
2,2±0,1*
2,0±0,1*
2,8±0,2
2,б± 0,2
2,±0,1
2,0±0,1*
2,0+0,2
2,1±0,1
2,9±0,2
2,7± 0,2
2,1±0,1*
2,2±0,1
2,0±0,1*
2,0±0,1*
3,1±0,2
2,8± 0,1
2,3±0,1
2,3±0,2
2,3±0,2Л
2,1±0,2*
3,2±0,1
2,б± 0,1
2,5±0,1
2,4±0,2
2,3±0,2Л
2,1± 0,2
3,0±0,2
2,9± 0,1
2,5±0,1
2,8±0,2
2,6+0,4
2,6± 0,1
3,3 ± 0,1
2,8± 0,1
2,7±0,2
2,8±0,1
2,8+0,2
2,9± 0,1
3,1 ± 0,2
2,7± 0,1
2,5±0,2
2,б±0,1
2,6+0,1
2,2± 0,1
3,1 ± 0,2
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе, за исключением данных
для п=7, которые отмечены значком Л
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
после 13 дней введения
сравнений
-0, 4 ± 0, 6
-5,1 ± 0,7*
-7, 4 ± 0,8*
-6, 9 ± 0,7*
-8, 5 ± 0, 9*
1,1 ± 0,9
0, 2 ± 0, 8
-5,1 ± 0,7*
-7,7 ± 0, 9*
-7, 4 ± 0,7*
-8, 7 ± 0, 9*
2,0 ± 1,0
0, 2 ± 1,0
-6, 1 ± 0,8*
-7, 9 ± 0, 9*
-8, 0 ± 0, 8*
-9, 7 ± 0, 8*
2,4 ± 1,1
0, 5 ± 1,1
-6, 0 ± 0, 9*
-8, 4 ± 0, 9*
-8, 8 ± 0, 9*
-10,1 ± 1, 0*
3,1 ± 1,0
1, 1 ± 1,2
-5,7 ± 0,8*
-8, 1 ± 0, 9*
-8, 9 ± 0, 9*
-10,7 ± 1,2*
3,5 ± 1,2
1, 2 ± 1,3
-6, 1 ± 0, 9*
-8,2 ± 0,8*
-8, 6 ± 1,3*
-11,1 ± 1, 4*
3,7 ± 1,2
1, 4 ± 1,3
-6, 3 ± 1,2*
-7,7 ± 0,8*
-8,2 ± 1, 4*
-10,9 ± 1, 4*
4,1 ± 1,3
1,7 + 0, 9
-5,8 + 1,4*
-7,1 + 1,0*
-7,2 + 1, 4*
-10,9 + 1, 4*
4,7 ± 1,3
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
13 дней введения
сравнений
44, 5 ± 0,7
43,2 ± 0,7
42, 7 ± 0, 6
43, 1 ± 0,7
42, 6 ± 0, 6
45,3 ± 0,7
44, 5 ± 0,7
43, 0 ± 0,7
42, 2 ± 0, 6
42, 5 ± 0,7
42, 0 ± 0,7
45,2 ± 0,7
44, 5 ± 0,7
42, 4 ± 0,7
41, 8 ± 0,5
42, 2 ± 0,7
41,5 ± 0, 6*
45,2 ± 0,7
44, 5 ± 0,7
42, 0 ± 0,7
41,3 ± 0, 6*
41, 6 ± 0,7
40,7 ± 0,5*
44,9 ± 0,8
44, 7 ± 0,7
42, 0 ± 0,7
41, 1 ± 0, 6*
41, 4 ± 0,7*
40, 6 ± 0,5*
45,3 ± 0,8
44, 7 ± 0,7
41, 6 ± 0,7*
41, 1 ± 0,7*
41, 1 ± 0,7*
40,2 ± 0, 6*
45,5 ± 0,8
44, 8 ± 0,7
41, 6 ± 0, 8*
40, 8 ± 0,7*
40, 8 ± 0, 8*
40, 0 ± 0, 8*
45,8 ± 0,7
45,1 + 0,7
41,8 + 0, 8*
41,0 + 0, 8*
40,8 + 0, 8*
39,8 + 0, 8*
46,0 ± 0,8
45, 2 ± 0, 8
41, 6 ± 0, 8*
40, 9 ± 0,7*
40, 8 ± 0, 9*
39, 6 ± 0, 9*
46,1 ± 0,8
45, 3 ± 0,7
41,5 ± 0, 9*
41,2 ± 0,7*
41, 0 ± 0, 9*
39, 7 ± 0, 9*
46,3 ± 0,9
45, 4 ± 0,7
41,7 ± 0, 9*
41, 4 ± 0, 8*
41,5 ± 0, 9*
39, 7 ± 0, 9*
46,5 ± 0,9
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
тесте OGTT, проведенном через 14 дней введения
сравнений
Носитель
Н/П
161 ± 10
225 ± 17
228 ± 14
208 ± 18
213 ± 19
25 429 ± 1228
6094 ± 1430
FP2
0,3
144 ± 4
163 ± 14*
209 ± 11
180 ± 12
171 ± 7
21 270 ± 399*
3985 ± 521
1,0
151 ± 9
179 ± 18
188 ± 7
179 ± 13
163 ± 8*
21 096 ± 754*
2972 ± 907
3, 0
149 ± 8
180 ± 18
179 ± 11*
164 ± 6
163 ± д*
20 338 ± 876*
2426 ± 1058
10, 0
134 ± 6
163 ± 7*
190 ± 13
152 ± 7*
163 ± 8*
19 599 ± 614*
3539 ± 1198
R X U 0 S Ю Ю л) 0 & Л S
мг/кг в день
132 ± 9
152 ± 10*
162 ± 13*
138 ±
159 ± д*
17 904 ± 632*
2139 ± 1179
Значения представляют среднее ± SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
сравнений для значений уровней глюкозы;
однофакторный дисперсионный анализ, критерий множественных
OGTT, проведенном через 14 дней введения
сравнений Тьюки для AUC
3, 0
3,0 ± 0,3
8,4 ± 1,5
2,5 ± 0,3
498,6 ± 77,0
10, 0
2,4 ± 0,4
4, 3 ± 0,5*
2,1 ± 0,4
295,5 ± 32,0
Розиглитазон
10 мг/кг в день
0,9 ± 0,1
1, 8 ± 0,2*
0,8 ± 0,1
118,5 ± 9,6*
Значения представляют среднее ± SEM по данным от 8 животных в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
сравнений для значений уровней инсулина;
однофакторный дисперсионный анализ, критерий множественных
сравнений Тьюки для AUC
Значения представляют среднее ± SEM по данным от 8 животных в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: двухфакторный дисперсионный анализ
с повторными измерениями, критерий Тьюки для множественных
сравнений
Таблица 44. Значение HOMA-IR после голодания у мышей DIO
через 14 дней, в которые им вводили FP2 по схеме q3d
Введение
Доза (нмоль/кг)
HOMA-IR
Носитель
Н/П
48,7 ± 9,2
FP2
0,1
30, 1 + 6,6
1,0
30,5 + 3,8
3, 0
31,3 + 3,2
10, 0
22,7 + 3,1*
Розиглитазон
10 мг/кг в день
8,7 + 1,0*
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле
FP2 по схеме q3d
Статистические анализы: однофакторный дисперсионный анализ, критерий Тьюки для множественных сравнений
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: однофакторный дисперсионный анализ,
критерий Тьюки для множественных сравнений
Таблица 46. Уровни мышиного GDF15 (пг/мл) в сыворотке мышей
DIO через 15 дней введения FP2 по схеме q3d
Введение
Доза (нмоль/кг)
mGDF15
Носитель
Н/П
258,3 ±21,4
FP2
0,1
214,1 ± 10,3
1,0
191,б ± 12,7
3, 0
254,5 ±28,6
10, 0
202,0 ± 10,0
Розиглитазон
10 мг/кг в день
509, б ± 26,2*
Значения представляют среднее ± SEM по данным от 8 животных в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле
схеме q3d, на состав тела (г), по данным МРТ
Значения представляют среднее ± SEM по данным от 8 животных
Статистические анализы: однофакторный дисперсионный анализ, критерий Тьюки для множественных сравнений
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: однофакторный дисперсионный анализ,
на состав тела (%), по данным МРТ
критерий Тьюки для множественных сравнений
Значения представляют среднее + SEM по данным от 8 животных
в каждый момент времени и в каждой группе
* р < 0,05, по сравнению с носителем в контроле Статистические анализы: однофакторный дисперсионный анализ,
исследования у мышей DIO, получавших введение по схеме q3d
критерий Тьюки для множественных сравнений
нмоль/ кг
7, 073
10,595
8, 966
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
6, 689
13,967
10,802
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
3,0 нмоль/ кг
20,802
26,329
27,863
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
23,563
32,020
41,576
1, 168
< L0Q
< L0Q
< L0Q
21,704
30,101
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
10,0 нмоль/ кг
28,495
33,050
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
70,779
112,898
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
70,404
111,767
55,117
< L0Q
< L0Q
< L0Q
< L0Q
Данные выражены в виде концентрации у каждого животного.
< Ъ00_=ниже предела количественного определения; LOQ=0,494
Группа введения (нмоль/кг)
** Значения в 3, б, 9 и 12-й дни непосредственно перед введением следующей дозы
Данные выражены в виде концентрации у каждого животного.
< Ъ00_=ниже предела количественного определения; LOQ=0,494
[0257] Пример 18. Фармакокинетика FP2 у различных видов животных и иммунный ответ
[0258] Фармакокинетика у мышей
[0259] Фармакокинетические свойства FP2 оценивали путем подкожного введения самкам мышей линии C57BL/6. FP2 вводили подкожно (п=5 проб на каждый момент времени) и внутривенно (п=5 проб на каждый момент времени) самкам мышей линии C57BL/6 (Sage Laboratories, г. Сент-Луис, штат Миссури, США) при уровне дозы
2,0 мг/кг в PBS (рН 7,3-7,5). В последний момент времени отбирали пробы терминальной крови. В течение 168 часов отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства. Уровни FP2 измеряли методом иммуноанализа. Профили концентрации лекарственного средства в плазме сведены в табл. 51 и 52, и показаны на Фиг. 25.
[0260] Фармакокинетический анализ показал, что терминальный период полужизни FP2 у мышей линии C57BL/6 после внутривенного и подкожного введения составил ~ 1,51 и 1,76 дня, соответственно, а средняя биодоступность после подкожного введения составила ~ 61%.
Таблица 51. Концентрация FP2 в сыворотке (нг/мл) после
однократного введения внутривенно (в/в) мышам линии C57BL/6
однократного введения подкожно (п/к) мышам линии C57BL/6
Путь введения
tl/2
(дни)
CL или
CL/F (мл/день /кг)
Vz или
Vz/F (мл/кг)
(нг/мл)
Т * (дни)
AUCo-посл.
(дни* нг/мл)
AUCo-inf
(дни* нг/мл)
Подкожно
Среднее
1,76
108
15619
44972
48379
0,16
4870
8563
9147
Внутривенно
Среднее
1,51
44297
0, 042
76 269
79253
0,18
3743
3788
4051
[0261] Фармакокинетика у крыс
[0262] FP2 вводили подкожно (п=5 проб на каждый момент времени) и внутривенно (п=5 проб на каждый момент времени) самкам крыс линии Спрег-Доули (Sage Laboratories, г. Сент-Луис, штат Миссури, США) при уровне дозы 2,0 мг/кг в PBS (рН 7,3-7,5). В последний момент времени отбирали пробы терминальной крови. В течение 168 часов отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства. Уровни FP2 измеряли методом иммуноанализа. Профили концентрации лекарственного средства в плазме сведены в табл. 54 и 55, и показаны на Фиг. 26. Фармакокинетические параметры, рассчитанные на основании этих данных, сведены в табл. 56.
[0263] Фармакокинетический анализ FP2 у крыс линии Спрег-Доули показал, что терминальный период полужизни после внутривенного и подкожного введения составил ~ 1,4 6 и 1,37 дня, соответственно, а средняя биодоступность после подкожного введения составила ~ 28%.
Таблица 54. Концентрация FP2 в сыворотке (нг/мл) после однократного введения подкожно (п/к) крысам линии Спрег-Доули
Путь введения
tl/2
(дни)
CL или CL/F (мл/день/ кг)
Vz или Vz/F (мл/ кг)
Стах
(нг/ мл)
Т *
•¦-max
(дни)
AUCo-посл.
(дни* нг/мл)
AUCo-inf
(дни* нг/мл)
Подкожно
Среднее
1, 37
165
7515
22 614
24 036
0, 04
1092
2509
2893
Внутривенно
Среднее
1,46
48 357
0, 042
83 271
86 089
0, 12
7135
6081
5820
[0264] Фармакокинетика у обезьян
[0265] FP2 вводили подкожно в дозе 1 мг/кг и внутривенно в дозе 1 мг/кг трем самцам яванского макака каждому, в PBS (рН 7,0-7,6). В течение 21 дня отбирали пробы крови, обрабатывали сыворотку и измеряли концентрации лекарственного средства.
[0266] Фармакокинетические (ФК) параметры FP2
характеризовали после введения яванским макакам однократной дозы внутривенно (1,0 мг/кг) и подкожно (1,0 мг/кг) . Зависимость концентрации лекарственного средства в плазме от времени после введения подкожно, по данным иммуноанализа и ЖХМС, сведена в табл. 57 и 58, соответственно, а после введения внутривенно, по данным иммуноанализа и ЖХМС, сведена в табл. 59 и 60, соответственно. Данные иммуноанализа представлены в виде графика на Фиг. 27, а данные ЖХМС представлены на Фиг. 28.
[0267] Исходя из результатов иммуноанализа, среднее значение терминального периода полужизни (tl/2) FP2 после
внутривенного и подкожного введения на основании NCA составило ~ 7,05 и ~ 8,51 дня, соответственно. Средние ФК параметры после внутривенного и подкожного введения сведены в табл. 61. Исходя из результатов иммунологического биоанализа, среднее расчетное значение терминального периода полужизни (tl/2) FP2 после внутривенного и подкожного введения на основании модели без компартментов составило 7,05 и 8,51 дня, соответственно. Средняя биодоступность (F%) FP2 у яванских макак после подкожного введения согласно расчетам на основании AUCo-iast составила 98,5%, а согласно расчетам на основании AUCo-inf составила 109,2%.
введение
<
1000
< 1000
< 1000
< 1000
Н/П
6110,0
5910
6200,0
6073,3
85, 7
10 420,0
11 300,0
10 860,0
359, 3
560, 0
13 510,0
14 960,0
15 010,0
880, 8
690, 0
13 450,0
13 380,0
13 506,7
93, 9
120
040, 0
11 040,0
Н/П
168
8680,0
9400,0
9040,0
293, 9
240
6940,0
7070,0
7140,0
7050,0
58, 6
336
4400,0
4580,0
4430,0
4470,0
55, 7
432
2910,0
2910,0
Н/П
528
<
1000
< 1000
< 1000
< 1000
Н/П
-=не
удалось выполнить
анализ в
первый раз,
пробы
недостаточно для повторного анализа
#=неправильно маркированная пробирка, проба исключена из анализа
Н/П - не применимо
Иммуноанализ
528
< 80, 0
2069,0
2416,2
2242,6
Н/П
Н/П - не применимо
ЖХМС
недостаточно для повторного анализа Н/П - не применимо
ФК параметры представляют собой средние значения ФК по
#=неправильно маркированная пробирка, проба исключена из анализа
данным иммуноанализа, на основании NCA. *Ттах (медиана)
[0268] Анализ стабильности в человеческой плазме
[0269] Стабильность FP2 исследовали в свежей
гепаринизированной плазме ex vivo при 37°С в течение до 48 часов.
Свежую незамороженную человеческую плазму получали из
гепаринизированной крови двух субъектов (одного мужчины и одной
женщины) путем центрифугирования. FP2 инкубировали в этой
матрице при температуре 37°С с осторожным перемешиванием в
течение 0, 4, 24 и 48 часов. Концентрацию FP2 определяли методом
иммуноанализа. Количественное определение концентрации
интактного димера в этой матрице при условиях анализа проводили методом независимого иммуноафинного захвата/ЖХМС.
[0270] По данным иммуноанализа коэффициент извлечения в процентах от исходной концентрации варьировал в интервале 104,894,1 и не уменьшался с течением времени, доказывая, что FP2 стабилен в человеческой плазме ex vivo в течение до 48 часов (Фиг. 29 и табл. 62) . По данным ЖХМС, концентрация оставалась стабильной во времени, доказывая, что JNJ-64739090 остается в человеческой плазме ex vivo в виде интактного димера в течение до 48 часов (Фиг. 30 и табл. 63).
[0271] Пример 19. Эффективность FP1 и FP2 у яванских макак [0272] Были оценены влияния FP1 и FP2 на потребление пищи и
массу тела после введения однократной дозы у новых яванских
макак.
[0273] FP1 подкожно вводили группе новых яванских макак в трех разных уровнях доз: 1, 3 и 10 нмоль/кг. Также в исследование включили группу, получавшую носитель. Животным вводили препарат по слепому методу. Исследование продолжалось в целом б недель: в течение 2 недель измеряли исходные уровни потребления пищи и собирали данные, и в течение 4 недель собирали данные после одноразового введения композиции. Воздействия лекарственного препарата в плазме измеряли на 1, 7, 14, 21 и 28-й день после введения.
[0274] Введение яванским макакам однократной дозы FP1 приводило к снижению потребления пищи и массы тела, по сравнению с носителем в контроле (Фиг. 32-33). Значительное снижение суточного потребления пищи наблюдали на 4, 5, б и 8-12-й дни при уровне дозы 10 нмоль/кг (Фиг. 32). Среднее суточное потребление пищи за неделю значительно снизилось на 2-й неделе после введения уровня дозы 10 нмоль/кг. При уровне дозы 3 нмоль/кг наблюдали ось значительное процентное снижение среднего
потребления пищи за неделю на 2-й неделе после введения дозы, по сравнению с потреблением до введения дозы, а при уровне дозы 10 нмоль/кг наблюдали значительное процентное снижение среднего потребления пищи за неделю на 1-й и 2-й неделях после введения дозы, по сравнению с потреблением до введения дозы. Значительное процентное снижение массы тела по сравнению с 0-м днем наблюдали на 28-й день при уровне дозы 3 нмоль/кг, и на 14, 21 и 28-й дни при уровне дозы 10 нмоль/кг (Фиг. 33).
[0275] FP2 подкожно вводили группе новых яванских макак в трех разных уровнях доз: 1, 3 и 10 нмоль/кг. Также в исследование включили группу, получавшую носитель. Животным вводили препарат по слепому методу. Исследование продолжалось в целом 11 недель: в течение 5 недель измеряли исходные уровни потребления пищи и собирали данные, в течение 1 недели вводили препарат, и в течение 5 недель собирали данные о стадии выведения. Воздействия лекарственного препарата в плазме измеряли на 1, 7, 14, 21, 28, 35 и 42-й дни после введения.
[0276] Введение яванским макакам однократной дозы FP2 приводило к снижению потребления пищи и массы тела, по сравнению с носителем в контроле (Фиг. 34-35). Значительное снижение суточного потребления пищи наблюдали на 3, 5-8, 10 и 12-й дни при уровне дозы 3 нмоль/кг, и на 3-38 и 40-й дни при уровне дозы 10 нмоль/кг (Фиг. 34) . Среднее суточное потребление пищи за неделю значительно снизилось на 1-й неделе после введения дозы 3 нмоль/кг, и значительно снизилось на 1-6-й неделях после введения дозы 10 нмоль/кг. При уровне дозы 3 нмоль/кг наблюдали значительное процентное снижение среднего суточного потребления пищи за неделю на 2-й неделе после введения дозы, по сравнению с потреблением до введения дозы, а при уровне дозы 10 нмоль/кг наблюдали значительное процентное снижение среднего суточного потребления пищи за неделю на 1-6-й неделях после введения дозы, по сравнению с потреблением до введения дозы. Значительное процентное изменение массы тела по сравнению с 0 днем наблюдали на 21-42-й дни при уровне дозы 1 нмоль/кг, на 14-42-й дни при уровне дозы 3 нмоль/кг, и на 7-42-й дни при уровне дозы 10 нмоль/кг (Фиг. 34).
[0277] Пример 20. Гетеродимер HSA-GDF15:GDF15
[0278] Было проведено исследование биоактивности гетеродимера HSA-GDF15:GDF15.
[0279] Для создания гетеродимера HSA-GDF15:GDF15 были разработаны два конструкта. Первый конструкт содержал HSA, соединенный с N-концом зрелого GDF15 (АА 203-308) посредством глицин-серинового линкера (SEQ ID N0: 93) . Второй конструкт содержал меченный бх гистидином HSA, соединенный с N-концом зрелого GDF15 (АА 197-308) посредством глицин-серинового линкера и сайта расщепления протеазы HRV3C (SEQ ID N0: 94). Эти плазмиды котрансфицировали в соотношении 1: 1 в системе Expi2 93(tm) Expression (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с протоколом производителя. Пептиды секретировались как белки HSA-GDF15, включая гетеродимерную и гомодимерную формы, в которых мономеры связывались посредством дисульфидных мостиков.
[0280] Супернатанты с клеточных культур временно трансфицированных клеток Expi2 93(tm) собирали через 5 дней после трансфекции, осветляли центрифугированием и стерилизовали фильтрованием (0,2 мкм, мембрана PES, Corning). Осветленные супернатанты загружали в колонку HisTrap HP (GE Healthcare), уравновешенную раствором 20 мМ фосфата натрия, 500 мМ NaCl с рН 7,4. После загрузки несвязанный белок удаляли путем промывания колонки уравновешивающим буферным раствором. Белки HSA-GDF15, включая гетеродимерную и гомодимерную формы, связывались в колонке и элюировались раствором 20 мМ фосфата натрия, 150 мМ имидазола с рН 7,4. Фракции элюата объединяли и инкубировали в течение ночи при температуре 4°С в присутствии меченного бх гистидином фермента HRV3C (компания Janssen) для получения гетеродимера HSA-GDF15:GDF15. После инкубации раствор белка диализовали в уравновешивающем буферном растворе для удаления имидазола, а затем еще раз пропускали через колонку HisTrap HP. Гетеродимер HSA-GDF15:GDF15, элюировали раствором 20 мМ фосфата натрия, 50 мМ имидазола с рН 7,4 на этапе промывания, при этом меченные гистидином белки удерживались. Гетеродимер дополнительно подвергали очистке методом эксклюзионной
хроматографии (SEC) на колонке HiLoad 26/60 Superdex 200 pg (GE Healthcare) уравновешенной в lx DPBS, pH 7,2. Фракции элюата из колонки SEC, содержащие HSA-GDF15:GDF15 высокой чистоты (по данным SDS-PAGE) объединяли и фильтровали. Концентрации белка определяли по поглощению при 280 нм на спектрофотометре BioTek SynergyHTTM. Качество очищенных белков оценивали методами SDS-PAGE и аналитической эксклюзионной ВЭЖХ (система ВЭЖХ Ultimate 3000). Уровни эндотоксина измеряли методом LAL-теста (Pyrotell(r)-Т, Associates of Cape Cod) . Очищенный белок хранили при 4 °С.
[0281] Клетки SK-N-AS (АТСС), стабильно экспрессирующие рецептор GDF15 (GFRAL), за 24 часа перед анализом высевали в среду для выращивания (10% FBS) в планшете на 9 6 лунок. Через 2 4 часа клетки истощали в течение 3 часов в инкубаторе при температуре 37 °С, для чего среду культивирования заменяли на 200 мкл эссенциальной среды Игла, модифицированной по способу Дульбекко (DMEM), с добавлением 1% лошадиной сыворотки HI. Затем среду с добавлением 1% лошадиной сыворотки HI заменяли на 2 00 мкл АВ1 и дополнительно инкубировали в течение 2 часов в инкубаторе при температуре 37 °С. При проведении анализа изо всех лунок аспирировали АВ1, добавляли 100 мкл исследуемой композиции в разных концентрациях в АВ2, после чего планшет инкубировали в течение 15 мин. в инкубаторе при температуре 37 °С. Через 15 минут исследуемый раствор извлекали и добавляли 3 0 мкл лизирующего буфера (содержится в наборе для обнаружения), планшет встряхивали на планшетном шейкере при комнатной температуре в течение 3 0 мин. Для обнаружения, 16 мкл лизированной пробы переносили в планшет для анализа на 384 лунки и добавляли 4 мкл детекторных антител HTRF рАКТ. Планшет инкубировали в течение ночи при комнатной температуре, а затем считывали сигнал HTRF на приборе Envision (Perkin Elmer).
[0282] Значения ЕС50 рассчитывали методом нелинейной регрессии (подгонки кривой) с помощью программного приложения GraphPad Prism(r). Данные представляли как среднее+стандартная ошибка (СО) по трем отдельным экспериментам, с тремя повторностями на каждую точку данных. Молекулярную идентичность
гетеродимера HSA-GDF15:GDF15 подтверждали методом масс-спектрометрии. Сдвиг кривой гетеродимера влево указывает на то, что гетеродимер HSA-GDF15:GDF15 обладает большей мощностью в индуцировании рАКТ по сравнению с соответственной молекулой гомодимера с дополнительным альбумином.
[0283] Пример 21. Термостабильность линкера
[0284] Исследовали термостабильность для различных
линкеров, соединяющих HSA и GDF15. Для оценки способности к
фрагментированию и образованию агрегатов гибридные белки HSA-
GDF15 с разными линкерами разводили до концентрации 10 мг/мл.
После добавления ЭДТА и метионина пробы инкубировали при
температуре 4 0°С в течение 14 дней. Затем пробы разводили до
концентрации 1 мг/мл и оценивали методом
эксклюзионной/высокоэффективной жидкостной хроматографии (SEES ЭЖХ) . В этих белках количественно определяли процентное содержание интактного белка, а также фрагментов и агрегатов. В табл. 64 показано, что белки HSA-GDF15 с линкерами, состоящими из повторов АР, наиболее устойчивы к фрагментированию в условиях тепловой нагрузки.
[0285] Чтобы оценить, влияют ли эти линкеры на взаимодействие GDF15 с его рецептором, проводили иммунный анализ, при котором на планшет наносили гибридный белок GFRAL-Fc и определяли анти-GDFlS или анти-HSA с использованием моноклональных антител к GDF15 (Janssen) и к HSA (Kerafast, Inc., г. Бостон, штат Массачусетс, США). Анализ показал, что все эти варианты линкеров, представленные в табл. 66, связываются с рецептором схожим образом.
119
(АР) 12
2,36
97, 64
121
GGS-(EGKSSGSGSESKST) 3-GGS
1, 67
85, 24
13, 09
123
GS(PGGGS)8
2, 96
88, 12
8, 91
125
GS(AGGGS)8
3,44
86, 22
10,34
127
GGS-(EGKSSGSGSESKST)2-GGS
1,71
91, 17
7, 12
[0286] Хотя изобретение включает подробное описание со ссылкой на конкретные варианты его осуществления, специалисту в данной области будет очевидно, что в него могут быть внесены различные изменения и модификации, без отступления от существа и объема настоящего изобретения.
[0287] Последовательности, на которые в настоящей заявке приводятся ссылки, представлены ниже в таблице:
WT - дикий тип
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
Человеческий сывороточный альбумин, WT (HSA)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GL
Вариант HSA, C34S
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV
ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GL
Вариант HSA, С34А
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GL
HSA (C34S)-GS(GGGGS) 4-GDF15 (WT) гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
Зрелый GDF15 (197-308)
ARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFR AANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLA KDCHCI
Усеченный зрелый GDF15 (200-308)
GDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAAN MHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDC HCI
Усеченный зрелый GDF15 (201-308)
DHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANM HAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCH CI
Усеченный зрелый GDF15 (202-308)
HCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMH AQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHC I
Усеченный зрелый GDF15 (203-308)
CPLGPGRCC RLHTVRASLEDLGWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHA QIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
Усеченный зрелый GDF15 (211-308)
С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LHR LKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-AS(GGGGS)2GT--GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASGGGGSGGGGSGTARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPR EVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVLIQ KTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-AS(GGGGS)8GT -GDF15 (WT)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGTARNGDHC PLGPGRCC RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQ IKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-AS(AP)5GT-GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASAPAPAPAPAPGTARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPR
EVQVTMCIGAC P S QFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVLIQ KTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) AS (AP) 10GT -GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPGTARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDL GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVP ASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -AS (AP) 20GT-GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPGTARNGDHC PLGPGRCC RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQ IKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -AS (EAAAK) 4GT -GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLASEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKGTARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDL
GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVP ASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-AS (EAAAK) 8GT-GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL G LAS EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK GTARN G D H C PLGPGRCC RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQ IKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-GS(GGGGS) 4-GDF15 гибрид (мутант, делеция 13)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCSRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVT MCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLКPDTVPАРСCVPASYNPMVLIQKTDTG VSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 гибрид (мутант, делеция 14)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTM
СIGACPSQFPAANMHAQIKTSLHRLКPDTVPАРССVPASYNPMVLIQKTDTGV SLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34A)-
GS(GGGGS)4-GDF15
гибрид
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34A)-GS(GGGGS)8-GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPL
G P GRC С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIК TSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34A)-(AP) 10-GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWAD WVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-(AP)10-GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWAD WVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-GS-(GGGGS) 8-GDF15 (WT)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPL
G P GRC С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIК TSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (I89R)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLRQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (I89W)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLWQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (L34A, S35A, R37A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW
ADWVAAPAEVQVTMCIGAC P S Q FPAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (V87A, I89A, L98A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMALAQKTDTGVSAQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (L34A, S35A, I89A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVAAP REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLAQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS) 4-GDF15 (V87A, I8 9A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW
ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMALAQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (Q60W)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAWIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS) 4-GDF15 (W32A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADAVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (W29A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGA
ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (Q60A, S64A, R67A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGW ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAAIKTALHALКP DTVPАР СCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS)4-GDF15 (W29A, Q60A, I61A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGA ADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAAAKT SLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S) -GS(GGGGS) 4-GDF15 (W29A, W32A)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGA
ADAVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPAS YNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 5
gacgcccacaagagcgaggtggcccaccggttcaaggacctgggcgaggagaa cttcaaggccctggtgctgatcgccttcgcccagtacctgcagcagtccccct tcgaggaccacgtgaagctggtgaacgaggtgaccgagttcgccaagacctgc gtggccgacgagagcgccgagaactgcgacaagagcctgcacaccctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtggccaccctgcgggagacctacggcgagatggccg actgctgcgccaagcaggagcccgagcggaacgagtgcttcctgcagcacaag gacgacaaccccaacctgccccggctggtgcggcccgaggtggacgtgatgtg caccgccttccacgacaacgaggagaccttcctgaagaagtacctgtacgaga tcgcccggcggcacccctacttctacgcccccgagctgctgttcttcgccaag cggtacaaggccgccttcaccgagtgctgccaggccgccgacaaggccgcctg cctgctgcccaagctggacgagctgcgggacgagggcaaggccagcagcgcca agcagcggctgaagtgcgccagcctgcagaagttcggcgagcgggccttcaag gcctgggccgtggcccggctgagccagcggttccccaaggccgagttcgccga ggtgagcaagctggtgaccgacctgaccaaggtgcacaccgagtgctgccacg gcgacctgctggagtgcgccgacgaccgggccgacctggccaagtacatctgc gagaaccaggacagcatcagcagcaagctgaaggagtgctgcgagaagcccct gctggagaagagccactgcatcgccgaggtggagaacgacgagatgcccgccg acctgcccagcctggccgccgacttcgtggagagcaaggacgtgtgcaagaac tacgccgaggccaaggacgtgttcctgggcatgttcctgtacgagtacgcccg gcggcaccccgactacagcgtggtgctgctgctgcggctggccaagacctacg agaccaccctggagaagtgctgcgccgccgccgacccccacgagtgctacgcc aaggtgttcgacgagttcaagcccctggtggaggagccccagaacctgatcaa gcagaactgcgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagttccagaacgccc tgctggtgcggtacaccaagaaggtgccccaggtgagcacccccaccctggtg gaggtgagccggaacctgggcaaggtgggcagcaagtgctgcaagcaccccga ggccaagcggatgccctgcgccgaggactacctgagcgtggtgctgaaccagc tgtgcgtgctgcacgagaagacccccgtgagcgaccgggtgaccaagtgctgc accgagagcctggtgaaccggcggccctgcttcagcgccctggaggtggacga gacctacgtgcccaaggagttcaacgccgagaccttcaccttccacgccgaca tctgcaccctgagcgagaaggagcggcagatcaagaagcagaccgccctggtg gagctggtgaagcacaagcccaaggccaccaaggagcagctgaaggccgtgat ggacgacttcgccgccttcgtggagaagtgctgcaaggccgacgacaaggaga cctgcttcgccgaggagggcaagaagctggtggccgccagccaggccgccctg ggcctgggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccgctcgcaacggtgaccactgccctctgggtcctg gtcgctgctgccgcctgcacaccgttcgcgcttctctggaagacctgggttgg gctgactgggttctgtctcctcgcgaagttcaggttaccatgtgcatcggtgc ttgcccttctcagttccgcgctgctaacatgcacgctcagatcaaaacctctc tgcaccgcctgaaacctgacaccgttcctgctccttgctgcgttcctgcttct tacaaccctatggttctgatccagaaaaccgacaccggtgtttctctgcagac
ctacgacgacctgctggctaaagactgccactgcatc
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 25
gatgetcataagtccgaagtcgcccaсадаttcaaggacctcggagaagaaaa ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcggtggagggggcagcggtggtggaggatccggtaccgcgcg caacggggaccactgtccgctcgggcccgggcgttgctgccgtctgcacacgg tccgcgcgtcgctggaagacctgggctgggccgattgggtgctgtcgccacgg gaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggc aaacatgcacgcgcagatcaagacgagcctgcaccgcctgaagcccgacacgg tgccagcgccctgctgcgtgcccgccagctacaatcccatggtgctcattcaa aagaccgacaccggggtgtcgctccagacctatgatgacttgttagccaaaga ctgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 26
gatgetcataagtccgaagtcgcccaсадаttcaaggacctcggagaagaaaa ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcggaggtggcggatcaggtggcggaggtagcggtggaggcgg ctctggcggaggtggatcaggcggaggaggttccggtggaggaggctcaggag gaggaggaagtggaggagggggatccggtaccgcgcgcaacggggaccactgt ccgctcgggcccgggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctgga agacctgggctgggccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgacca tgtgcatcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcag atcaagacgagcctgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctg cgtgcccgccagctacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccgggg tgtcgctccagacctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 27
gatgetcataagtccgaagtcgcccaсадаttcaaggacctcggagaagaaaa ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcgcacctgcccccgctccagctcctgcaccaggtaccgcgcg caacggggaccactgtccgctcgggcccgggcgttgctgccgtctgcacacgg tccgcgcgtcgctggaagacctgggctgggccgattgggtgctgtcgccacgg gaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggc aaacatgcacgcgcagatcaagacgagcctgcaccgcctgaagcccgacacgg tgccagcgccctgctgcgtgcccgccagctacaatcccatggtgctcattcaa aagaccgacaccggggtgtcgctccagacctatgatgacttgttagccaaaga ctgccactgcata
Нуклеиновая
gatgetcataagtccgaagtcgcccaсадаttcaaggacctcggagaagaaaa
кислота, кодирующая SEQ ID NO: 28
ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcgcacctgcccccgctccagcacccgccccagcccctgctcc cgcaccagctcctgcaccaggtaccgctcgcaacggtgaccactgccctctgg gtcctggtcgctgctgccgcctgcacaccgttcgcgcttctctggaagacctg ggttgggctgactgggttctgtctcctcgcgaagttcaggttaccatgtgcat cggtgcttgcccttctcagttccgcgctgctaacatgcacgctcagatcaaaa cctctctgcaccgcctgaaacctgacaccgttcctgctccttgctgcgttcct gcttcttacaaccctatggttctgatccagaaaaccgacaccggtgtttctct gcagacctacgacgacctgctggctaaagactgccactgcatc
Нуклеиновая кислота,
gatgetcataagtccgaagtcgcccacagattcaaggacctcggagaagaaaa ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt
кодирующая SEQ ID NO: 29
tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcgcacctgcccccgctccagccccagctcctgcacctgctcc agcaccagctcctgcaccagctccagcccctgcacctgcacccgctccagccc cagctcctgcacctgctccagcaccaggtaccgcgcgcaacggggaccactgt ccgctcgggcccgggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctgga agacctgggctgggccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgacca tgtgcatcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcag atcaagacgagcctgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctg cgtgcccgccagctacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccgggg tgtcgctccagacctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота,
gatgetcataagtccgaagtcgcccacagattcaaggacctcggagaagaaaa ttttaaggccctcgtgcttatcgccttcgcccaatacctccagcagtccccgt
кодирующая SEQ ID NO: 30
tcgaggaccacgtgaagctcgtgaacgaagtgaccgagtttgccaagacttgt gtggcggatgaatccgccgagaactgcgacaagagcctccacacgctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtcgccacgctgagagaaacttacggagagatggccg actgctgcgcaaagcaggagccggaacggaacgaatgcttcctgcaacataag gacgataaccctaacttgcctcgcctggtccgccctgaggtcgacgtgatgtg caccgcgttccacgacaacgaggaaacctttcttaagaagtacctgtacgaga ttgcgcggaggcacccttatttctacgcccccgaactgttgttcttcgccaag cggtacaaggctgcctttaccgaatgctgccaggccgccgataaggcggcttg cctgctgccgaagctcgacgagttgcgcgatgaggggaaggcgtcctccgcta agcagcggctgaaatgtgcgagcctccagaagttcggggagcgcgccttcaag gcctgggccgtggcgcgcctgtctcaacggttcccgaaggccgagttcgccga agtgtcgaagctggtcaccgacctgacgaaagtgcacaccgaatgttgtcacg gcgatctgctggaatgcgccgatgacagagccgatttggccaagtacatctgc gaaaaccaggacagcatttcgtcaaagctgaaggaatgctgcgaaaagccctt gctggaaaagtcccactgcatcgcggaagtggagaacgacgagatgcccgccg acctcccgtccctggccgccgatttcgtggagtcgaaggatgtgtgcaagaac tacgcagaagccaaggacgtgttcctgggaatgtttctgtatgagtacgcccg ccgccacccggactactcggtcgtgctcctgctgcgactggcaaagacctacg aaaccactctggagaagtgctgcgccgccgcggacccgcacgagtgctacgca aaggtgttcgacgagttcaagccacttgtcgaggagcctcagaacctgatcaa gcagaactgcgaactgttcgagcagctgggagagtacaaattccagaacgcgc ttctcgtgcgctacaccaagaaggtcccccaggtgtccactccgaccctggtg gaagtgtccaggaacctgggaaaggtcggctccaagtgttgcaagcatcccga ggctaagcgcatgccctgcgccgaggactacttgtccgtggtgctgaatcagc tgtgcgtgctccatgaaaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgaatcgctcgtgaaccggcggccgtgcttttccgcactggaggtggacga aacctacgtgccgaaggagttcaacgcagaaaccttcactttccacgccgaca tctgcactctgtccgagaaggagcggcagattaagaagcagactgccctggtg gagcttgtgaaacacaagcctaaggccaccaaagagcagctgaaggccgtcat ggatgatttcgcggccttcgtggaaaagtgttgtaaagcggacgacaaggaga cttgcttcgccgaagaaggaaagaagctcgtggcagcgtcacaggccgctctg ggcctcgctagcgaagcagcagccaaagaagcagccgcaaaagaagcagccgc taaggaggccgcagcaaagggtaccgcgcgcaacggggaccactgtccgctcg ggcccgggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctg ggctgggccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcat cggcgcgtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaaga cgagcctgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgccc gccagctacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgct ccagacctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая
кислота,
кодирующая
gacgcccacaagagcgaggtggcccaccggttcaaggacctgggcgaggagaa cttcaaggccctggtgctgatcgccttcgcccagtacctgcagcagtccccct tcgaggaccacgtgaagctggtgaacgaggtgaccgagttcgccaagacctgc
SEQ ID NO: 40
gtggccgacgagagcgccgagaactgcgacaagagcctgcacaccctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtggccaccctgcgggagacctacggcgagatggccg actgctgcgccaagcaggagcccgagcggaacgagtgcttcctgcagcacaag gacgacaaccccaacctgccccggctggtgcggcccgaggtggacgtgatgtg caccgccttccacgacaacgaggagaccttcctgaagaagtacctgtacgaga tcgcccggcggcacccctacttctacgcccccgagctgctgttcttcgccaag cggtacaaggccgccttcaccgagtgctgccaggccgccgacaaggccgcctg cctgctgcccaagctggacgagctgcgggacgagggcaaggccagcagcgcca agcagcggctgaagtgcgccagcctgcagaagttcggcgagcgggccttcaag gcctgggccgtggcccggctgagccagcggttccccaaggccgagttcgccga ggtgagcaagctggtgaccgacctgaccaaggtgcacaccgagtgctgccacg gcgacctgctggagtgcgccgacgaccgggccgacctggccaagtacatctgc gagaaccaggacagcatcagcagcaagctgaaggagtgctgcgagaagcccct gctggagaagagccactgcatcgccgaggtggagaacgacgagatgcccgccg acctgcccagcctggccgccgacttcgtggagagcaaggacgtgtgcaagaac tacgccgaggccaaggacgtgttcctgggcatgttcctgtacgagtacgcccg gcggcaccccgactacagcgtggtgctgctgctgcggctggccaagacctacg agaccaccctggagaagtgctgcgccgccgccgacccccacgagtgctacgcc aaggtgttcgacgagttcaagcccctggtggaggagccccagaacctgatcaa gcagaactgcgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagttccagaacgccc tgctggtgcggtacaccaagaaggtgccccaggtgagcacccccaccctggtg gaggtgagccggaacctgggcaaggtgggcagcaagtgctgcaagcaccccga ggccaagcggatgccctgcgccgaggactacctgagcgtggtgctgaaccagc tgtgcgtgctgcacgagaagacccccgtgagcgaccgggtgaccaagtgctgc accgagagcctggtgaaccggcggccctgcttcagcgccctggaggtggacga gacctacgtgcccaaggagttcaacgccgagaccttcaccttccacgccgaca tctgcaccctgagcgagaaggagcggcagatcaagaagcagaccgccctggtg gagctggtgaagcacaagcccaaggccaccaaggagcagctgaaggccgtgat ggacgacttcgccgccttcgtggagaagtgctgcaaggccgacgacaaggaga cctgcttcgccgaggagggcaagaagctggtggccgccagccaggccgccctg ggcctgggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccgcgcgcaacggggaccactgtccgctcgggcccg ggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctgggctgg gccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgc gtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaagacgagcc tgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcccgccagc tacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgctccagac ctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 55
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcaggccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg
agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttaggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtg gaggtggcagtggaggagggggatccgcgcgcaacggggaccactgtccgctc gggcccgggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacct gggctgggccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgca tcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaag acgagcctgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcc cgccagctacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgc tccagacctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 56
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcaggccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg
agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttagcacctgcccccgctccagcacccgccccagcccctgctcccgcacc agctcctgcaccagcgcgcaacggggaccactgtccgctcgggcccgggcgtt gctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctgggctgggccgat tgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgcgtgccc gagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaagacgagcctgcacc gcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcccgccagctacaat cccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgctccagacctatga tgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID N0: 40 (оптимизация
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcagtccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg
кодонов 1)
actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttaggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccgcgcgcaacggggaccactgtccgctcgggcccg ggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctgggctgg gccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgc gtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaagacgagcc tgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcccgccagc tacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgctccagac ctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID N0: 40 (оптимизация кодонов 2)
gacgcccacaagagcgaggtggcccacagattcaaggacctgggcgaggaaaa cttcaaggccctggtgctgatcgccttcgcccagtacctgcagcagagcccct tcgaggaccacgtgaagctggtcaacgaagtgaccgagttcgccaagacctgc gtggccgacgagagcgccgagaactgcgacaagagcctgcacaccctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtggccaccctgcgggaaacctacggcgagatggccg actgctgcgccaagcaggaacccgagcggaacgagtgcttcctgcagcacaag
gacgacaaccccaacctgcccagactcgtgcggcccgaggtggacgtgatgtg caccgccttccacgacaacgaggaaaccttcctgaagaagtacctgtacgaga tcgccagacggcacccctacttctacgcccccgagctgctgttcttcgccaag cggtacaaggccgccttcaccgagtgctgccaggccgccgataaggccgcctg cctgctgcccaagctggacgagctgagagatgagggcaaggccagctccgcca agcagcggctgaagtgcgccagcctgcagaagttcggcgagcgggcctttaag gcttgggctgtggcccggctgagccagagattccccaaggccgagtttgccga ggtgtccaagctggtcaccgacctgaccaaggtgcacaccgagtgttgtcacg gcgacctgctggaatgcgccgacgacagagccgacctggccaagtacatctgc gagaaccaggacagcatcagcagcaagctgaaagagtgctgcgagaagcccct gctggaaaagagccactgtatcgccgaggtggaaaacgacgagatgcccgctg acctgcccagcctggccgccgacttcgtggaaagcaaggacgtgtgcaagaac tacgccgaggccaaggatgtgttcctgggcatgttcctgtatgagtacgcccg cagacaccccgactacagcgtggtgctgctgctgcggctggccaagacctacg agacaaccctggaaaagtgctgcgccgctgccgacccccacgagtgctacgcc aaggtgttcgacgagttcaagcctctggtggaagaaccccagaacctgatcaa gcagaactgcgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagttccagaacgccc tgctcgtgcggtacaccaagaaagtgccccaggtgtccacccccaccctggtc gaagtgtcccggaacctgggcaaagtgggcagcaagtgctgcaagcaccctga ggccaagcggatgccctgcgccgaggactacctgtccgtggtgctgaaccagc tgtgcgtgctgcacgagaaaacccccgtgtccgacagagtgaccaagtgctgt accgagagcctggtcaacagacggccctgcttcagcgccctggaagtggacga gacatacgtgcccaaagagttcaacgccgagacattcaccttccacgccgaca tctgcaccctgagcgagaaagagcggcagatcaagaagcagaccgccctggtc gagctggtcaagcacaagcccaaggccaccaaagaacagctgaaggccgtgat ggacgacttcgccgccttcgtcgagaagtgttgcaaggccgacgacaaagaga catgcttcgccgaagagggcaagaaactggtggccgcctctcaggccgccctg ggactgggatctggcggcggaggaagcggaggcggaggatctgggggaggcgg ctctggcggagggggatccgccagaaatggcgaccactgtcccctgggccctg gccggtgttgcagactgcacacagtgcgggccagcctggaagatctgggctgg gccgattgggtgctgagccccagagaagtgcaggtcacaatgtgcatcggcgc ctgccccagccagttcagagccgccaacatgcacgcccagatcaagaccagcc tgcaccggctgaagcccgacaccgtgcctgccccttgttgcgtgcccgccagc tacaaccccatggtgctgattcagaaaaccgacaccggcgtgtccctgcagac ctacgacgatctgctggccaaggactgccactgcatc
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID N0: 48
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcaggccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg
cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttaggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccgcgcgcaacggggaccactgtccgctcgggcccg ggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctgggctgg gccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgc gtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaagacgagcc tgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcccgccagc tacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgctccagac ctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID N0: 59
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcagtccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa
ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttagcacctgcccccgctccagcacccgccccagcccctgctcccgcacc agctcctgcaccagcgcgcaacggggaccactgtccgctcgggcccgggcgtt gctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacctgggctgggccgat tgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgcatcggcgcgtgccc gagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaagacgagcctgcacc gcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcccgccagctacaat cccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgctccagacctatga tgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 60 (оптимизация кодонов 1)
gatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaagaaaa tttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcagtccccat ttgaagatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgt gttgctgatgagtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttgg agacaaattatgcacagttgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctg actgctgtgcaaaacaagaacctgagagaaatgaatgcttcttgcaacacaaa gatgacaacccaaacctcccccgattggtgagaccagaggttgatgtgatgtg cactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaaatacttatatgaaa ttgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctttgctaaa
aggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgcca aacagagactcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaa gcatgggcagtagctcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcaga agtttccaagttagtgacagatcttaccaaagtccacacggaatgctgccatg gagatctgcttgaatgtgctgatgacagggcggaccttgccaagtatatctgt gaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaaggaatgctgtgaaaaacctct gttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatgagatgcctgetg acttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaaaaac tatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaag aaggcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatg aaaccactctagagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgcc aaagtgttcgatgaatttaaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaa acaaaattgtgagctttttgagcagcttggagagtacaaattccagaatgcgc tattagttcgttacaccaagaaagtaccccaagtgtcaactccaactcttgta gaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatgttgtaaacatcctga agcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcctgaaccagt tatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctgc acagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatga aacatacgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagata tatgcacactttctgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgtt gagctcgtgaaacacaagcccaaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttat ggatgatttcgcagcttttgtagagaagtgctgcaaggctgacgataaggaga cctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgctgcaagtcaagctgcctta ggcttaggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtg gaggtggcagtggaggagggggatccgcgcgcaacggggaccactgtccgctc gggcccgggcgttgctgccgtctgcacacggtccgcgcgtcgctggaagacct gggctgggccgattgggtgctgtcgccacgggaggtgcaagtgaccatgtgca tcggcgcgtgcccgagccagttccgggcggcaaacatgcacgcgcagatcaag acgagcctgcaccgcctgaagcccgacacggtgccagcgccctgctgcgtgcc cgccagctacaatcccatggtgctcattcaaaagaccgacaccggggtgtcgc tccagacctatgatgacttgttagccaaagactgccactgcata
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID N0: 70
gacgcccacaagagcgaggtggcccaccggttcaaggacctgggcgaggagaa cttcaaggccctggtgctgatcgccttcgcccagtacctgcagcagtccccct tcgaggaccacgtgaagctggtgaacgaggtgaccgagttcgccaagacctgc gtggccgacgagagcgccgagaactgcgacaagagcctgcacaccctgttcgg cgacaagctgtgcaccgtggccaccctgcgggagacctacggcgagatggccg actgctgcgccaagcaggagcccgagcggaacgagtgcttcctgcagcacaag gacgacaaccccaacctgccccggctggtgcggcccgaggtggacgtgatgtg caccgccttccacgacaacgaggagaccttcctgaagaagtacctgtacgaga tcgcccggcggcacccctacttctacgcccccgagctgctgttcttcgccaag
cggtacaaggccgccttcaccgagtgctgccaggccgccgacaaggccgcctg cctgctgcccaagctggacgagctgcgggacgagggcaaggccagcagcgcca agcagcggctgaagtgcgccagcctgcagaagttcggcgagcgggccttcaag gcctgggccgtggcccggctgagccagcggttccccaaggccgagttcgccga ggtgagcaagctggtgaccgacctgaccaaggtgcacaccgagtgctgccacg gcgacctgctggagtgcgccgacgaccgggccgacctggccaagtacatctgc gagaaccaggacagcatcagcagcaagctgaaggagtgctgcgagaagcccct gctggagaagagccactgcatcgccgaggtggagaacgacgagatgcccgccg acctgcccagcctggccgccgacttcgtggagagcaaggacgtgtgcaagaac tacgccgaggccaaggacgtgttcctgggcatgttcctgtacgagtacgcccg gcggcaccccgactacagcgtggtgctgctgctgcggctggccaagacctacg agaccaccctggagaagtgctgcgccgccgccgacccccacgagtgctacgcc aaggtgttcgacgagttcaagcccctggtggaggagccccagaacctgatcaa gcagaactgcgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagttccagaacgccc tgctggtgcggtacaccaagaaggtgccccaggtgagcacccccaccctggtg gaggtgagccggaacctgggcaaggtgggcagcaagtgctgcaagcaccccga ggccaagcggatgccctgcgccgaggactacctgagcgtggtgctgaaccagc tgtgcgtgctgcacgagaagacccccgtgagcgaccgggtgaccaagtgctgc accgagagcctggtgaaccggcggccctgcttcagcgccctggaggtggacga gacctacgtgcccaaggagttcaacgccgagaccttcaccttccacgccgaca tctgcaccctgagcgagaaggagcggcagatcaagaagcagaccgccctggtg gagctggtgaagcacaagcccaaggccaccaaggagcagctgaaggccgtgat ggacgacttcgccgccttcgtggagaagtgctgcaaggccgacgacaaggaga cctgcttcgccgaggagggcaagaagctggtggccgccagccaggccgccctg ggcctgggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggatctggtggaggtgg cagtggaggagggggatccgctcgcaacggtgaccactgccctctgggtcctg gtcgctgctgccgcctgcacaccgttcgcgcttctctggaagacctgggttgg gctgactgggttctgtctcctcgcgaagttcaggttaccatgtgcatcggtgc ttgcccttctcagttccgcgctgctaacatgcacgcttggatcaaaacctctc tgcaccgcctgaaacctgacaccgttcctgctccttgctgcgttcctgcttct tacaaccctatggttctgatccagaaaaccgacaccggtgtttctctgcagac ctacgacgacctgctggctaaagactgccactgcatc
HSA (C34S) -GS-(GGGGS)8 -GDF15 (делеция 4)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV
ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDHCPLGPGR С С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LH RLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
HSA (C34S)-GS-(GGGGS)8-GDF15 (делеция 5)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHCPLGPGRC C RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LHR LKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
бх-гистидиновая
метка-
HSA (C34S)-
GS-(GGGGS) 8-
Сайт HRV3C белка
GDF15
EFHHHHHHDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNE VTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPER NECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYA PELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQ KFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDR ADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFV ESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAA ADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVP QVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPV SDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQ IKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKL VAASQAALGLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSLEVLFQGPARNGDHCPLGPGR С C RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LH RLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 92 (оптимизация кодонов 1)
GAT G CACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT C G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGTGAAT GAAGTAACT GAATTT GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С CAAAC CT С С С С С GAT TGGTGAGACCAGAGGTT GAT GT GAT GT G CACTGCTTTT CAT GACAAT GAAGAGACAT T T T T GAAAAAATAC T TATAT GAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG
CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA ААСAGAGAC Т СAAGT GT G С СAGT С Т С САААААТ Т Т G GAGAAAGAG С Т Т Т СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT CAAGATT CGAT СТ CCAGTAAACT GAAGGAAT GCT GT GAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC ТAT ТAGT Т С GT ТACAC CAAGAAAGTАС С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТТ GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САССАААТ GCT GC ACAGAATCCTTGGTGAACAGGCGACCATGCTTTTCAGCTCTGGAAGTCGATGA ААСATAC GT Т С С СAAAGAGT Т ТААТGСТ GAAACATТ САССТТ СCAT GСAGATА ТAT G САСАС Т Т Т С Т GAGAAG GAGAGACАААТCAAGAAACAAACT GCACTT GTT GAG С Т С GT GAAACACAAG С С СAAG G СААСAAAAGAG СААС Т GAAAG С Т GT ТAT GGATGATTTCGCAGCTTTTGTAGAGAAGTGCTGCAAGGCTGACGATAAGGAGA CCTGCTTTGCCGAGGAGGGTAAAAAACTTGTTGCTGCAAGTCAAGCTGCCTTA GGGCTTGGAAGCGGCGGAGGGGGGAGTGGCGGCGGTGGCTCCGGGGGGGGCGG ATCCGGCGGAGGGGGCAGCGGGGGTGGAGGGAGTGGCGGGGGAGGATCAGGGG GAGGAGGATCAGGAGGGGGCGGAAGTGATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGG TGTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGA CTGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCC CCAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCAC CGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAA TCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATG AT GAC TTGTTAGC СAAAGAC T G С СAC Т G СATА
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 7
GGGGACCACTGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCG CGCGTCGCTGGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGG TGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAAC ATGCACGCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCC AGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGA CCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGC CACTGCATA
Нуклеиновая
кислота,
кодирующая
GACCACTGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCGCGC GTCGCTGGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGC AAGTGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAACATG
SEQ ID NO: 8 (оптимизация кодонов 1)
CACGCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGC GCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCG ACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCAC TGCATA
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 8 (оптимизация кодонов 2)
GATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGGTGTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGC TTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGACTGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTAC AAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATG CACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGC GCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCG ACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCAC TGCATA
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 8 (оптимизация кодонов 3)
GATCATTGTCCCCTTGGACCGGGTAGATGCTGTCGCCTGCACACTGTGCGGGC TTCACTGGAGGACCTCGGCTGGGCTGACTGGGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGC AAGTGACCATGTGCATCGGCGCCTGTCCTTCGCAATTCCGGGCCGCGAATATG CACGCCCAGATCAAGACCTCCCTGCATCGCCTCAAGCCCGACACTGTGCCTGC TCCATGCTGTGTGCCGGCCTCCTATAACCCCATGGTGCTGATCCAGAAAACCG ATACCGGCGTCAGCCTGCAGACGTATGATGATCTGCTGGCCAAGGACTGCCAT TGCATC
100
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 9 (оптимизация кодонов 1)
CACTGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCGCGCGTC GCTGGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGCAAG TGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAACATGCAC GCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCC CTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACA CCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGC ATA
101
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 9 (оптимизация кодонов 2)
CATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGGTGTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTC ACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGACTGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAG TCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCAC GCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCC CTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACA CCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGC ATA
102
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 9 (оптимизация кодонов 3)
CATTGTCCCCTTGGACCGGGTAGATGCTGTCGCCTGCACACTGTGCGGGCTTC ACTGGAGGACCTCGGCTGGGCTGACTGGGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGCAAG TGACCATGTGCATCGGCGCCTGTCCTTCGCAATTCCGGGCCGCGAATATGCAC GCCCAGATCAAGACCTCCCTGCATCGCCTCAAGCCCGACACTGTGCCTGCTCC ATGCTGTGTGCCGGCCTCCTATAACCCCATGGTGCTGATCCAGAAAACCGATA CCGGCGTCAGCCTGCAGACGTATGATGATCTGCTGGCCAAGGACTGCCATTGC АТС
103
Нуклеиновая
кислота,
кодирующая
TGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCGCGCGTCGCT GGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGCAAGTGA CCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAACATGCACGCG
SEQ ID NO: 10 (оптимизация кодонов 1)
CAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTG CTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCG GGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGCATA
104
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 10 (оптимизация кодонов 2)
TGCCCTCTCGGGCCCGGACGGTGTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACT TGAAGACCTTGGATGGGCCGACTGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCA CAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCC CAGATAAAAACCAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTG CTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCG GGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGCATA
105
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 10 (оптимизация кодонов 3)
TGTCCCCTTGGACCGGGTAGATGCTGTCGCCTGCACACTGTGCGGGCTTCACT GGAGGACCTCGGCTGGGCTGACTGGGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGCAAGTGA CCATGTGCATCGGCGCCTGTCCTTCGCAATTCCGGGCCGCGAATATGCACGCC CAGATCAAGACCTCCCTGCATCGCCTCAAGCCCGACACTGTGCCTGCTCCATG CTGTGTGCCGGCCTCCTATAACCCCATGGTGCTGATCCAGAAAACCGATACCG GCGTCAGCCTGCAGACGTATGATGATCTGCTGGCCAAGGACTGCCATTGCATC
106
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 11 (оптимизация кодонов 1)
TGCCGTCTGCACACGGTCCGCGCGTCGCTGGAAGACCTGGGCTGGGCCGATTG GGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGA GCCAGTTCCGGGCGGCAAACATGCACGCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGC CTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCC CATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATG ACTTGTTAGC СAAAGAC Т G С СAC Т G СATА
107
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 11 (оптимизация кодонов 2)
TGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGACTG GGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCA GCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACCGC CTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCC CATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATG ACTTGTTAGC СAAAGAC Т G С СAC Т G СATА
108
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 11 (оптимизация кодонов 3)
TGTCGCCTGCACACTGTGCGGGCTTCACTGGAGGACCTCGGCTGGGCTGACTG GGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCCTGTCCTT CGCAATTCCGGGCCGCGAATATGCACGCCCAGATCAAGACCTCCCTGCATCGC CTCAAGCCCGACACTGTGCCTGCTCCATGCTGTGTGCCGGCCTCCTATAACCC CATGGTGCTGATCCAGAAAACCGATACCGGCGTCAGCCTGCAGACGTATGATG ATCTGCTGGCCAAGGACTGCCATTGCATC
109
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 60 (оптимизация кодонов 2)
GATGCGCACAAGTCGGAAGTGGCCCATCGCTTTAAGGACCTGGGAGAAGAGAA CTTCAAGGCCCTGGTCCTGATCGCGTTCGCCCAGTACCTCCAGCAGTCCCCGT TTGAGGACCACGTCAAGCTTGTGAACGAAGTGACCGAGTTCGCAAAGACTTGT GTGGCCGATGAGTCCGCCGAAAACTGCGACAAGTCCCTGCACACCTTGTTCGG AGACAAGCTGTGCACCGTCGCGACTTTGCGGGAGACTTACGGCGAAATGGCGG ACTGCTGCGCAAAGCAGGAGCCCGAAAGGAACGAGTGCTTCCTGCAACACAAG GACGACAACCCGAACCTTCCGAGACTCGTGCGGCCTGAGGTCGACGTGATGTG СAC Т G CAT Т С CAT GATААС GAAGAAACAT Т С С Т GAAGAAGTАС С Т GTAT GAAA TTGCCAGACGCCACCCGTACTTCTACGCCCCCGAACTGCTGTTCTTCGCCAAG
AGATACAAGGCCGCCTTTACCGAATGTTGTCAAGCCGCCGATAAGGCAGCGTG CCTGCTGCCGAAGTTGGACGAGCTCAGGGACGAAGGAAAGGCCTCGTCCGCCA AGCAGAGGCTGAAGTGCGCGTCGCTCCAGAAGTTTGGAGAGCGGGCTTTTAAG GCCTGGGCAGTGGCTAGGTTGAGCCAGAGGTTCCCCAAGGCGGAGTTTGCCGA AGTGTCCAAGCTCGTGACTGACCTGACTAAAGTCCATACCGAATGCTGCCACG GCGATCTGCTCGAATGCGCAGATGACCGGGCGGATTTGGCCAAGTACATTTGC GAAAACCAAGACTCCATAAGCTCCAAGCTGAAGGAGTGCTGTGAAAAGCCTСТ GCTCGAGAAGTCCCACTGTATCGCCGAGGTGGAGAACGACGAAATGCCGGCAG ACCTCCCTAGCCTGGCAGCCGACTTCGTCGAATCCAAGGACGTGTGCAAGAAC TACGCCGAAGCGAAGGACGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTACGCCAG ACGGCATCCAGACTACTCCGTGGTGCTTCTCTTGCGGCTGGCCAAGACTTATG AAACGACCCTGGAGAAATGTTGCGCTGCTGCTGACCCACACGAGTGCTACGCC AAAGTGTTCGACGAGTTTAAGCCTCTCGTGGAGGAACCCCAGAACCTCATCAA GCAGAACTGCGAACTTTTCGAGCAGCTCGGGGAGTACAAGTTCCAAAACGCGC TGCTTGTCCGCTACACCAAGAAAGTGCCGCAAGTGTCCACACCGACCCTCGTG GAAGTGTCCAGGAACCTGGGCAAAGTCGGAAGCAAATGTTGCAAGCACCCCGA AGCCAAGCGCATGCCGTGCGCAGAGGACTACCTTTCGGTGGTGTTGAACCAGC TCTGCGTCCTGCACGAAAAGACCCCGGTGTCAGACCGCGTGACCAAGTGCTGT ACCGAAAGCCTCGTGAATCGGCGCCCCTGCTTCTCGGCCCTGGAGGTGGACGA AACTTACGTGCCGAAAGAGTTCAACGCGGAAACCTTCACCTTTCATGCCGATA TCTGCACCCTGTCCGAGAAGGAGCGGCAGATCAAGAAGCAGACCGCCCTGGTG GAG С Т Т GT GAAACACAAG С С GAAG G С СAC ТAAG GAACAG С Т GAAG G С С GT CAT GGACGATTTCGCTGCCTTCGTCGAGAAGTGCTGCAAGGCCGACGACAAGGAGA CTTGCTTCGCTGAAGAAGGGAAGAAGCTTGTGGCCGCTAGCCAGGCTGCACTG GGACTGGGTAGCGGTGGAGGGGGATCAGGGGGTGGTGGATCGGGAGGAGGAGG ATCAGGAGGTGGCGGCTCAGGAGGAGGCGGATCAGGCGGTGGAGGATCCGGAG GCGGAGGATCGGGTGGAGGAGGCTCAGCGAGGAACGGGGATCATTGTCCCCTT GGACCGGGTAGATGCTGTCGCCTGCACACTGTGCGGGCTTCACTGGAGGACCT CGGCTGGGCTGACTGGGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCA TCGGCGCCTGTCCTTCGCAATTCCGGGCCGCGAATATGCACGCCCAGATCAAG ACCTCCCTGCATCGCCTCAAGCCCGACACTGTGCCTGCTCCATGCTGTGTGCC GGCCTCCTATAACCCCATGGTGCTGATCCAGAAAACCGATACCGGCGTCAGCC TGCAGACGTATGATGATCTGCTGGCCAAGGACTGCCATTGCATC
110
Нуклеиновая кислота, кодирующая SEQ ID NO: 92 (оптимизация кодонов 2)
GATGCGCACAAGTCGGAAGTGGCCCATCGCTTTAAGGACCTGGGAGAAGAGAA CTTCAAGGCCCTGGTCCTGATCGCGTTCGCCCAGTACCTCCAGCAGTCCCCGT TTGAGGACCACGTCAAGCTTGTGAACGAAGTGACCGAGTTCGCAAAGACTTGT GTGGCCGATGAGTCCGCCGAAAACTGCGACAAGTCCCTGCACACCTTGTTCGG AGACAAGCTGTGCACCGTCGCGACTTTGCGGGAGACTTACGGCGAAATGGCGG ACTGCTGCGCAAAGCAGGAGCCCGAAAGGAACGAGTGCTTCCTGCAACACAAG GACGACAACCCGAACCTTCCGAGACTCGTGCGGCCTGAGGTCGACGTGATGTG СAC Т G CAT Т С CAT GATААС GAAGAAACAT Т С С Т GAAGAAGTАС С Т GTAT GAAA TTGCCAGACGCCACCCGTACTTCTACGCCCCCGAACTGCTGTTCTTCGCCAAG
AGATACAAGGCCGCCTTTACCGAATGTTGTCAAGCCGCCGATAAGGCAGCGTG CCTGCTGCCGAAGTTGGACGAGCTCAGGGACGAAGGAAAGGCCTCGTCCGCCA AGCAGAGGCTGAAGTGCGCGTCGCTCCAGAAGTTTGGAGAGCGGGCTTTTAAG GCCTGGGCAGTGGCTAGGTTGAGCCAGAGGTTCCCCAAGGCGGAGTTTGCCGA AGTGTCCAAGCTCGTGACTGACCTGACTAAAGTCCATACCGAATGCTGCCACG GCGATCTGCTCGAATGCGCAGATGACCGGGCGGATTTGGCCAAGTACATTTGC GAAAACCAAGACTCCATAAGCTCCAAGCTGAAGGAGTGCTGTGAAAAGCCTCT GCTCGAGAAGTCCCACTGTATCGCCGAGGTGGAGAACGACGAAATGCCGGCAG ACCTCCCTAGCCTGGCAGCCGACTTCGTCGAATCCAAGGACGTGTGCAAGAAC TACGCCGAAGCGAAGGACGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTACGCCAG ACGGCATCCAGACTACTCCGTGGTGCTTCTCTTGCGGCTGGCCAAGACTTATG AAACGACCCTGGAGAAATGTTGCGCTGCTGCTGACCCACACGAGTGCTACGCC AAAGTGTTCGACGAGTTTAAGCCTCTCGTGGAGGAACCCCAGAACCTCATCAA GCAGAACTGCGAACTTTTCGAGCAGCTCGGGGAGTACAAGTTCCAAAACGCGC TGCTTGTCCGCTACACCAAGAAAGTGCCGCAAGTGTCCACACCGACCCTCGTG GAAGTGTCCAGGAACCTGGGCAAAGTCGGAAGCAAATGTTGCAAGCACCCCGA AGCCAAGCGCATGCCGTGCGCAGAGGACTACCTTTCGGTGGTGTTGAACCAGC TCTGCGTCCTGCACGAAAAGACCCCGGTGTCAGACCGCGTGACCAAGTGCTGT ACCGAAAGCCTCGTGAATCGGCGCCCCTGCTTCTCGGCCCTGGAGGTGGACGA AACTTACGTGCCGAAAGAGTTCAACGCGGAAACCTTCACCTTTCATGCCGATA TCTGCACCCTGTCCGAGAAGGAGCGGCAGATCAAGAAGCAGACCGCCCTGGTG GAG С T T GT GAAACACAAG С С GAAG G С СAC TAAG GAACAG С T GAAG G С С GT CAT GGACGATTTCGCTGCCTTCGTCGAGAAGTGCTGCAAGGCCGACGACAAGGAGA CTTGCTTCGCTGAAGAAGGGAAGAAGCTTGTGGCCGCTAGCCAGGCTGCACTG GGACTGGGTAGCGGTGGAGGGGGATCAGGGGGTGGTGGATCGGGAGGAGGAGG ATCAGGAGGTGGCGGCTCAGGAGGAGGCGGATCAGGCGGTGGAGGATCCGGAG GCGGAGGATCGGGTGGAGGAGGCTCAGATCATTGTCCCCTTGGACCGGGTAGA TGCTGTCGCCTGCACACTGTGCGGGCTTCACTGGAGGACCTCGGCTGGGCTGA CTGGGTGCTGTCCCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCCTGTC CTTCGCAATTCCGGGCCGCGAATATGCACGCCCAGATCAAGACCTCCCTGCAT CGCCTCAAGCCCGACACTGTGCCTGCTCCATGCTGTGTGCCGGCCTCCTATAA CCCCATGGTGCTGATCCAGAAAACCGATACCGGCGTCAGCCTGCAGACGTATG ATGATCTGCTGGCCAAGGACTGCCATTGCATC
111
HSA (C34S)-GS-(GGGGS)8-(делеция 5) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC
TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHCPLGPGRC С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LHR LKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
112
HSA (C34S)-GS-(GGGGS)8-(делеция 14) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSCRLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAP CCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
113
(Делеция 2) HSA (C34S)-GS-(GGGGS)8-(делеция 4) GDF15
HKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVA DESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRY KAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAW AVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICEN QDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYA EAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKV FDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEV SRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTE SLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVEL VKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDHCPLGPGRCC RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRL KPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
114
ДНК для SEQ ID NO: 113
(делеция 2) HSA (C34S)-GS-(GGGGS)8-(делеция 4) GDF15
СACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAAT T T СAA AGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCATTTGAAG AT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T G СAAAAACATGTGTTGCT GAT GAGT СAG С T GAAAAT T GT GACAAAT СAC T T СATAC CCTTTTTG GAGACAA ATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTGACTGCT GT GСAAAACAAGAAC СT GAGAGAAATGAAT GCTT CTT GCAACACAAAGAT GAC AACCCAAACCTCCCCCGATTGGTGAGACCAGAGGTTGATGTGATGTGCACTGC T T T T CAT GACAAT GAAGAGACAT T T T T GAAAAAATAC T TATAT GAAAT T G С СA GAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAAAGGTAT
AAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTGCCTGTT GCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCAAACAGA GACTCAAGTGTGCCAGTCTCCAAAAATTTGGAGAAAGAGCTTTCAAAGCATGG GCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGAAGTTTC СAAGT TAGT GACAGAT С T TAC СAAAGT С СACAC G GAAT G С T G С CAT G GAGAT С TGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGTGAAAAT CAAGATTCGATCTCCAGTAAACTGAAGGAATGCTGTGAAAAACCTCTGTTGGA AAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTGACTTGC CTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAACTATGCT GAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAGAAGGCA TCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATGAAACCA CTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCCAAAGTG TTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAAACAAAA TTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGCTATTAG T T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTAGAGGTС Т СAAGAAAC С TAG GAAAAGT G G G СAG САААТ GT Т GTАААСAT С С Т GAAG СAAA AAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGTTATGTG Т GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САССАААТ GСТ GСACAGAA TCCTTGGTGAACAGGCGACCATGCTTTTCAGCTCTGGAAGTCGATGAAACATA С GT Т С С СAAAGAGT Т ТААТ G С Т GAAACAT Т САС С Т Т С CAT G СAGATATAT G СA СAC T T T С T GAGAAG GAGAGACАААТCAAGAAACAAACT GCACTT GTT GAGCT С GT GAAACACAAG С С СAAG G СААСAAAAGAG СААС Т GAAAG С Т GT ТAT G GAT GA TTTCGCAGCTTTTGTAGAGAAGTGCTGCAAGGCTGACGATAAGGAGACCTGCT TTGCCGAGGAGGGTAAAAAACTTGTTGCTGCAAGTCAAGCTGCCTTAGGGCTT GGAAGCGGCGGAGGGGGGAGTGGCGGCGGTGGCTCCGGGGGGGGCGGATCCGG CGGAGGGGGCAGCGGGGGTGGAGGGAGTGGCGGGGGAGGATCAGGGGGAGGAG GATCAGGAGGGGGCGGAAGTGATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGGTGTTGC CGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGACTGGGT GCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCAGCC AGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACCGCCTG AAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCAT GGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACT T GT TAG С СAAAGAC T G С СAC T G СATA
115
HSA (C34S)-GA-(GGGGA) 8-(делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC
TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGAGGGGAGGGGAGGGGAGGGGAGGGGAGGGGAGGGGAGGGGADHCPLGPGR С С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LH RLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
116
ДНК для SEQ ID NO: 115
HSA (C34S)-GA-(GGGGA) 8-(делеция 4) GDF15
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С CAAAC СТ С С С С С GAT TGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С СAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT СAAGAT Т С GAT С Т С СAGTАААС Т GAAG GAAT G С Т GTGAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САССАААТ GCT GC ACAGAATCCTTGGTGAACAGGCGACCATGCTTTTCAGCTCTGGAAGTCGATGA ААСATAC GT Т С С СAAAGAGT Т ТААТ G С Т GAAACAT Т САС С Т Т С CAT G СAGATА ТAT G САСАС Т Т Т С Т GAGAAG GAGAGACАААТСAAGAAACАААСТ GСACТТ GTТ GAG С Т С GT GAAACACAAG С С СAAG G СААСAAAAGAG СААС Т GAAAG С Т GT ТAT GGATGATTTCGCAGCTTTTGTAGAGAAGTGCTGCAAGGCTGACGATAAGGAGA CCTGCTTTGCCGAGGAGGGTAAAAAACTTGTTGCTGCAAGTCAAGCTGCCTTA GGGCTTGGTGCTGGAGGAGGCGGGGCGGGCGGCGGGGGTGCCGGTGGGGGTGG CGCAGGGGGAGGTGGTGCGGGTGGTGGTGGGGCTGGTGGGGGAGGTGCAGGCG GTGGCGGTGCCGGGGGGGGTGGCGCGGATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGG TGTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGA
CTGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCC CCAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCAC CGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAA TCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATG AT GAC TTGTTAGC СAAAGAC T G С СAC T G СATA
117
HSA (C34S)-(AP) 10- (делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLS P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVL IQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
118
ДНК для SEQ ID NO: 117 HSA (C34S)-(AP)ю-(делеция 4) GDF15
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С САААС СТ СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С СAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT СAAGAT Т С GAT С Т С СAGTАААС Т GAAG GAAT G С Т GTGAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC
TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САССАААТ GCT GC ACAGAATCCTTGGTGAACAGGCGACCATGCTTTTCAGCTCTGGAAGTCGATGA ААСATAC GT Т С С СAAAGAGT Т ТААТ G С Т GAAACAT Т САС С Т Т С CAT G СAGATА ТAT G САСАС Т Т Т С Т GAGAAG GAGAGACАААТСAAGAAACАААСТ GСACТТ GTТ GAG С Т С GT GAAACACAAG С С СAAG G СААСAAAAGAG СААС Т GAAAG С Т GT ТAT GGATGATTTCGCAGCTTTTGTAGAGAAGTGCTGCAAGGCTGACGATAAGGAGA CCTGCTTTGCCGAGGAGGGTAAAAAACTTGTTGCTGCAAGTCAAGCTGCCTTA GGGCTTGCACCAGCCCCTGCCCCTGCACCTGCACCTGCTCCCGCACCGGCTCC AGCCCCAGCTCCGGATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGGTGTTGCCGCCTCC ACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGACTGGGTGCTGTCC CCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCCCAGCCAGTTTCG CGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCG ACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTC ATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGC СAAAGAC Т G С СAC Т G СATА
119
HSA (C34S)-(AP) 12- (делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWAD WVL S Р REVQVTMCIGAC Р S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYN PMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
120
ДНК для SEQ ID NO: 119 HSA (C34S)-(AP) 12- (делеция 4) GDF15
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С САААС СТ СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG
CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С СAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT СAAGAT Т С GAT С Т С СAGTАААС Т GAAG GAAT G С Т GTGAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САССАААТ GCT GC ACAGAATCCTTGGTGAACAGGCGACCATGCTTTTCAGCTCTGGAAGTCGATGA ААСATAC GT Т С С СAAAGAGT Т ТААТ G С Т GAAACAT Т САС С Т Т С CAT G СAGATА ТAT G САСАС Т Т Т С Т GAGAAG GAGAGACАААТСAAGAAACАААСТ GСACТТ GTТ GAG С Т С GT GAAACACAAG С С СAAG G СААСAAAAGAG СААС Т GAAAG С Т GT ТAT GGATGATTTCGCAGCTTTTGTAGAGAAGTGCTGCAAGGCTGACGATAAGGAGA CCTGCTTTGCCGAGGAGGGTAAAAAACTTGTTGCTGCAAGTCAAGCTGCCTTA GGGCTTGCACCAGCCCCTGCCCCTGCACCTGCACCTGCTCCCGCACCGGCTCC AGCCCCAGCTCCGGCTCCAGCTCCTGATCATTGCCCTCTCGGGCCCGGACGGT GTTGCCGCCTCCACACTGTGAGGGCTTCACTTGAAGACCTTGGATGGGCCGAC TGGGTGCTGTCCCCAAGAGAGGTACAAGTCACAATGTGTATTGGCGCCTGCCC CAGCCAGTTTCGCGCCGCTAACATGCACGCCCAGATAAAAACCAGCCTGCACC GCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAAT CCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGA Т GAC TTGTTAGC СAAAGAC Т G С СAC Т G СATА
121
HSA (C34S)- GGS-(EGKSSGSGSESKST)3 -GGS- (делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL
GLGGSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGSDHC PLGPGRCC RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQ IKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
122
ДНК для SEQ ID
NO: 121 HSA (C34S)- GGS-(EGKSSGSGSESKST)
3-GGS- (делеция
4) GDF15
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С САААС СТ СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С СAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT СAAGAT Т С GAT С Т С СAGTАААС Т GAAG GAAT G С Т GTGAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GTTGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT САСААААТ GCT GT ACTGAGAGCTTGGTCAACAGGCGGCCGTGCTTCAGCGCCCTCGAGGTGGATGA GACTTATGTCCCAAAGGAGTTTAATGCGGAAACTTTTACTTTCCACGCAGACA TTTGCACCTTGTCTGAAAAGGAAAGACAGATTAAGAAACAGACTGCTCTTGTG GAAC Т G GTAAAACATАААС СAAAAG С ТAC GAAG GAG СAG С Т ТAAG G С Т GT ТAT GGATGATTTCGCCGCGTTTGTCGAGAAGTGCTGCAAAGCGGACGATAAGGAAA CTTGCTTTGCAGAGGAAGGTAAGAAACTCGTAGCGGCAAGTCAGGCTGCGCTT GGCCTTGGAGGCAGTGAAGGCAAATCCTCTGGGAGTGGCTCTGAAAGTAAATC CACCGAGGGCAAATCCAGTGGATCTGGGTCTGAATCTAAGTCTACCGAGGGGA AGTCTTCTGGCAGTGGGTCAGAATCTAAATCTACAGGCGGCTCTGACCATTGC CCGTTGGGACCAGGACGCTGCTGTCGCCTTCATACAGTGCGAGCGAGTTTGGA AGACCTGGGCTGGGCTGACTGGGTGCTTAGCCCTCGGGAGGTCCAGGTCACAA TGTGCATTGGCGCGTGTCCCAGTCAATTTAGAGCAGCAAATATGCACGCCCAA
ATAAAAACCTCCCTGCATAGGCTTAAGCCAGATACTGTCCCCGCACCATGCTG TGTGCCTGCTTCTTACAATCCTATGGTACTCATCCAGAAGACCGACACGGGAG TTAGCCTCCAGACTTATGACGACCTCTTGGCTAAAGATTGCCATTGTATT
123
HSA (C34S)-GS-(PGGGS)8-(делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSPGGGSPGGGSPGGGSPGGGSPGGGSPGGGSPGGGSPGGGSDHCPLGPGR С С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LH RLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
124
ДНК для SEQ ID NO: 123
HSA (C34S)-GS-(PGGGS)8-(делеция 4) GDF15
GAT G С AC AC AAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T T AAAGAT T T G G GAGAAGAAAA. TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTG СAAAACAAGAAC С T GAGAGAAAT GAAT GCTTCTTG СAACACAAA GAT GACAAC С САААС СТ СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С СAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT Т Т С СAAGT ТAGT GACAGAT С Т ТАС СAAAGT С СACAC G GAAT G С Т G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT СAAGAT Т С GAT С Т С СAGTАААС Т GAAG GAAT G С Т GTGAAAAACCT СТ GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ СТT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA
AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GT TGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT CACGAAAT GTT GC ACAGAGTCACTGGTCAACAGGAGACCTTGCTTCTCCGCTCTTGAGGTTGACGA AACGTATGTССCAAAAGAGTTCAACGCСGAAACGTTTACGTTTCATGCGGACA TATGCACTCTCAGTGAGAAGGAGCGACAAATCAAAAAACAGACTGCTCTTGTA GAGT T G GTAAAACACАААС С TAAAG СAACAAAAGAG СААТ T GAAAG С T GTGAT GGACGATTTTGCAGCTTTCGTAGAAAAGTGCTGCAAGGCCGACGATAAAGAAA CCTGTTTCGCTGAAGAAGGCAAAAAACTTGTTGCGGCATCTCAGGCCGCTCTT GGACTTGGGAGCCCGGGTGGCGGGTCTCCAGGCGGAGGCTCTCCGGGCGGAGG TAGTCCCGGAGGGGGTAGTCCGGGCGGCGGTTCTCCAGGTGGAGGTTCTCCTG GTGGTGGCAGTCCTGGCGGAGGATCTGATCACTGTCCCCTTGGGCCCGGGAGG TGCTGCCGACTTCATACAGTTCGCGCCAGCCTTGAAGATTTGGGGTGGGCCGA CTGGGTGTTGAGCCCGAGAGAGGTCCAAGTCACGATGTGTATTGGAGCCTGTC CCTCTCAATTCCGAGCCGCAAATATGCATGCGCAAATAAAGACGAGTCTCCAT CGGTTGAAGCCTGATACTGTCCCAGCTCCGTGCTGCGTCCCCGCGAGTTATAA T С С CAT G GT С С T TATACAGAAAACAGACAC T G GT GT СAG С С T T СAGAC GTAT G ACGATTTGCTTGCTAAAGACTGTCATTGTATT
125
HSA (C34S)-GS-(AGGGS)8-(делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL GLGSAGGGSAGGGSAGGGSAGGGSAGGGSAGGGSAGGGSAGGGSDHCPLGPGR С С RLHTVRAS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKT S LH RLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
126
ДНК для SEQ ID NO: 125
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTGCAAAACAAGAACCTGAGAGAAATGAATGCTTCTTGCAACACAAA GAT GACAAC С САААС СТ СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA
AACAGAGAC T СAAGT GT G С CAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT T T С СAAGT TAGT GACAGAT С T TAC СAAAGT С СACAC G GAAT G С T G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT CAAGATT CGAT CT CCAGTAAACT GAAGGAAT GCT GTGAAAAACCT CT GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ CTT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GT TGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT CACTAAAT GTT GT ACCGAGTCTCTTGTTAATAGGCGGCCATGCTTCAGTGCATTGGAAGTCGACGA AAC С TAT GTAC СAAAG GAGT T СAAC G СAGAAACAT T TACAT T С CAT GCT GATA T С T G СACAT T GAG С GAGAAAGAGAGACAGAT TAAGAAACAGACAG CGCTTGTT GAAC T G GT TАААСACАААС СAAAAG С TAC СAAG GAG СAG С T TAAG G СAGTAAT GGATGACTTCGCGGCCTTTGTCGAGAAATGTTGTAAAGCGGATGATAAAGAGA CATGCTTCGCCGAAGAGGGCAAAAAACTTGTAGCGGCAAGCCAGGCCGCACTG GGTCTCGGTAGTGCGGGCGGTGGTTCAGCGGGGGGAGGATCTGCAGGTGGTGG CTCAGCGGGTGGCGGTAGCGCTGGGGGGGGCTCCGCAGGTGGGGGATCAGCAG GCGGCGGATCAGCCGGCGGTGGATCCGACCACTGTCCTCTCGGGCCTGGTCGG TGTTGCCGCCTCCATACTGTGCGCGCGTCTCTTGAGGATCTGGGGTGGGCTGA TTGGGTTCTCTCTCCCCGCGAAGTGCAGGTGACCATGTGTATTGGTGCTTGCC СAAGT СААТ T С С GAG СAG С TAACAT G СAC G С С СAGAT СAAGAC TAG С С T G CAT CGGCTTAAGCCCGACACTGTTCCTGCCCCTTGCTGTGTTCCTGCATCTTATAA T С СААТ G GT С С Т GAT С СAGAAAAC С GATAC G G GT GTAT CAT Т G САААСATAC G ACGACTTGCTTGCCAAAGATTGCCATTGCATT
127
HSA (C34S)- GGS-(EGKSSGSGSESKST)2 -GGS- (делеция 4) GDF15
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLWEVTEFAKTC VADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHK DDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAK RYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFK AWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYIC ENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKN YAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYA KVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLV EVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC TESLWRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALV ELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAAL
GLGGSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGSDHCPLGPGRCCRLHTVR AS L E D L GWADWVL S P REVQVTMCIGAC P S Q FRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVP APCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
128
ДНК для SEQ ID NO: 127
GAT G СACACAAGAGT GAG GT T G С T CAT С G GT T TAAAGAT T T G G GAGAAGAAAA TTTCAAAGCCTTGGTGTTGATTGCCTTTGCTCAGTATCTTCAGCAGTCCCCAT T T GAAGAT CAT GTAAAAT TAGT GAAT GAAGTAACT GAAT T T GСAAAAACATGT GTTGCTGATGAGTCAGCTGAAAATTGTGACAAATCACTTCATACCCTTTTTGG AGACAAATTATGCACAGTTGCAACTCTTCGTGAAACCTATGGTGAAATGGCTG ACTGCTGTGCAAAACAAGAACCTGAGAGAAATGAATGCTTCTTGCAACACAAA GAT GACAAC С САААС CT СССССGATTGGTGAGACCAGAGGTТ GAT GT GAT GTG CACTGCTTTT CAT GACААТ GAAGAGACAT Т Т Т Т GAAAAAATAC Т ТATATGAAA TTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCCTTTTCTTTGCTAAA AGGTATAAAGCTGCTTTTACAGAATGTTGCCAAGCTGCTGATAAAGCTGCCTG CCTGTTGCCAAAGCTCGATGAACTTCGGGATGAAGGGAAGGCTTCGTCTGCCA AACAGAGAC T СAAGT GT G С CAGT С T С СAAAAAT T T G GAGAAAGAG С T T T СAAA GCATGGGCAGTAGCTCGCCTGAGCCAGAGATTTCCCAAAGCTGAGTTTGCAGA AGT T T С СAAGT TAGT GACAGAT С T TAC СAAAGT С СACAC G GAAT G С T G С CAT G GAGATCTGCTTGAATGTGCTGATGACAGGGCGGACCTTGCCAAGTATATCTGT GAAAAT CAAGATT CGAT CT CCAGTAAACT GAAGGAAT GCT GTGAAAAACCT CT GTTGGAAAAATCCCACTGCATTGCCGAAGTGGAAAATGATGAGATGCCTGCTG ACTTGCCTTCATTAGCTGCTGATTTTGTTGAAAGTAAGGATGTTTGCAAAAAC TATGCTGAGGCAAAGGATGTCTTCCTGGGCATGTTTTTGTATGAATATGCAAG AAGGCATCCTGATTACTCTGTCGTGCTGCTGCTGAGACTTGCCAAGACATATG AAACCACTCTAGAGAAGTGCTGTGCCGCTGCAGATCCTCATGAATGCTATGCC AAAGTGTTCGATGAATTTAAACCTCTTGTGGAAGAGCCTCAGAATTTAATCAA ACAAAATTGTGAGCTTTTTGAGCAGCTTGGAGAGTACAAATTCCAGAATGCGC TAT TAGT T С GT TACAC CAAGAAAGTAC С С СAAGTGT СААСТ ССААСТ CTT GTА GAGGTСТCAAGAAACCTAGGAAAAGTGGGCAGCAAATGTTGTAAACATССТGA AGCAAAAAGAATGCCCTGTGCAGAAGACTATCTATCCGTGGTCCTGAACCAGT TAT GT GT GT TGCATGAGAAAACGCCAGTAAGT GACAGAGT CACGAAAT GCT GT ACAGAATCCCTCGTGAATAGAAGGCCCTGCTTCTCTGCCCTTGAGGTGGACGA GACTTACGTCCCTAAGGAGTTTAACGCCGAGACCTTTACTTTTCATGCTGATA TTTGCACCCTTTCCGAAAAGGAGCGGCAGATCAAGAAACAAACAGCCTTGGTG GAAC T С GTAAAACATАААС С СAAAG С CAC СAAG GAACAAC T TAAAG CTGT TAT GGATGACTTCGCAGCCTTCGTCGAGAAATGTTGCAAGGCGGATGATAAGGAAA CGTGTTTTGCTGAGGAAGGGAAGAAGTTGGTTGCTGCCTCTCAAGCGGCTCTG GGGCTTGGCGGATCAGAGGGGAAGTCCTCCGGGTCCGGTAGCGAGTCCAAATC TAC G GAAG G GAAGT CAT CCGGTTCTGGGT СAGAGT С САААТ С СACAG GAG GAT CAGACCATTGCCCATTGGGACCAGGACGATGTTGTCGCCTGCATACGGTAAGA GCGTCTCTGGAGGATCTCGGCTGGGCCGATTGGGTTCTCTCACCACGAGAAGT ACAGGTCACAATGTGCATAGGAGCTTGTCCGAGCCAATTCCGGGCGGCTAATA TGCACGCACAGATCAAGACCTCTTTGCACCGCTTGAAGCCCGATACCGTGCCA
GCACCGTGTTGCGTCCCAGCATCTTACAACCCTATGGTTTTGATACAGAAAAC TGACACAGGTGTGAGCCTCCAGACATATGATGATTTGCTGGCTAAGGATTGCC ACTGTATA
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Janssen Biotech, Inc. Anthony Armstrong Judith Ann Connor Jennifer Furman Chichi Huang Michael J. Hunter Xiefan Lin-Schmidt Serena Nelson Shamina Rangwala Shannon Mullican Jose Antonio Chavez
<120> Гибридные белки GDF15 и их применение
<130> JBI5086WOPCT
<140> Неизвестно <141> Настоящим
<150> 62/333,886
<151> 10.05.2016 г.
<160> 128
<170> PatentIn, версия 3.5
<210> 1 <211> 585 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант HSA
<400> 1
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 580 585
<210> 2 <211> 585 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 2
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 580 585
<210> 3 <211> 585 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант HSA
<400> 3
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ala Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Tyr Lys Phe Gin Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gin Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gin Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
lie Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gin lie Lys Lys Gin Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 580 585
<210> 4 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
Gly Gly Gly Ser 20
<210> 5 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 5
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu lie Ala Phe Ala Gin Tyr Leu Gin
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu lie Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr lie Cys Glu Asn Gin Asp Ser lie Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys lie Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gin Asn Leu lie Lys Gin Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gin Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gin lie Lys Lys Gin Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
<210> 6 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 6
Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
20 25 30
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
50 55 60
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
85 90 95
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 7 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 <400> 7
Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
1 5 10 15
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
20 25 30
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
85 90 95
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 8 <211> 108 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 <400> 8
Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val
1 5 10 15
Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro
20 25 30
Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe
35 40 45
Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu
50 55 60
Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr
85 90 95
Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 9 <211> 107 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg
20 25 30
Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg
35 40 45
Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys
50 55 60
Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro
65 70 75 80
Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr
85 90 95
Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 10 <211> 106 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 <400> 10
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
<210> 11 <211> 98 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 11
Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala
1 5 10 15
Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly
20 25 30
Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys
35 40 45
Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys
50 55 60
Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr
65 70 75 80
Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His
85 90 95
Cys Ile
<210> 12 <211> 42 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 12
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 13 <211> 42 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 13
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala 35 40
<210> 14 <211> 20 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 14
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro 20
<210> 15 <211> 24 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 15
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 20
<210> 16 <211> 48 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 16
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu
20 25 30
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
35 40 45
<210> 17 <211> 42 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 17
Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser 35 40
<210> 18 <211> 42 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 18
Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser 35 40
<210> 19 <211> 34 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 19
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly
20 25 30
Gly Ser
<210> 20 <211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 20
Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Thr
1 5 10
<210> 21 <211> 44 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 21
Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Thr 35 40
<210> 22 <211> 14 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<210> 23 <211> 24 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 23
Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly Thr 20
<210> 24 <211> 44 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 24
Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
20 25 30
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly Thr 35 40
<210> 25
<211> 711
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 25
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gin Tyr Leu Gin
20 25 30
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gin Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu
595 600 605
Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu
610 615 620
Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val
625 630 635 640
Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met
645 650 655
His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val
660 665 670
Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile
675 680 685
Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu
690 695 700
Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710
<210> 26 <211> 741
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 26
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Gly Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro
625 630 635 640
Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
645 650 655
Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met
660 665 670
Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala
675 680 685
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
690 695 700
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
705 710 715 720
Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys
725 730 735
Asp Cys His Cys Ile
740
<210> 27 <211> 711 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 27
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Gly Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu
595 600 605
Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu
610 615 620
Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val
625 630 635 640
Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met
645 650 655
His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val
660 665 670
Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile
675 680 685
Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu
690 695 700
Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710
<210> 28 <211> 721 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 28
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly
595 600 605
Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
610 615 620
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
625 630 635 640
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
645 650 655
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
660 665 670
Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
675 680 685
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
690 695 700
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
705 710 715 720
Ile
<210> 29 <211> 741
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 29
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
595 600 605
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
610 615 620
Pro Ala Pro Gly Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro
625 630 635 640
Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
645 650 655
Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met
660 665 670
Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gin Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala
675 680 685
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
690 695 700
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
705 710 715 720
Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys
725 730 735
Asp Cys His Cys Ile
740
<210> 30 <211> 721 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Glu Ala Ala Ala Lys
580 585 590
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Gly
595 600 605
Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
610 615 620
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
625 630 635 640
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
645 650 655
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
660 665 670
Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
675 680 685
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
690 695 700
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
705 710 715 720
Ile
<210> 31 <211> 741 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gin Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Ser Glu Ala Ala Ala Lys
580 585 590
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
595 600 605
Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
610 615 620
Ala Ala Lys Gly Thr Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro
625 630 635 640
Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
645 650 655
Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met
660 665 670
Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala
675 680 685
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
690 695 700
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
705 710 715 720
Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys
725 730 735
Asp Cys His Cys Ile
740
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер <400> 32
Ala Ser Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Lys Glu Ala Ala Ala Lys Gly Thr 20
<210> 33 <211> 44 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 33
Ala Ser Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
20 25 30
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Gly Thr 35 40
<210> 34 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 34
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 35 <211> 15 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 35
<210> 36 <211> 706
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 36
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys
595 600 605
Ser Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala
610 615 620
Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly
625 630 635 640
Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys
645 650 655
Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys
660 665 670
Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr
675 680 685
Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His
690 695 700
<210> 37 <211> 705 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 37
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys
595 600 605
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
610 615 620
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
625 630 635 640
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
645 650 655
Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
660 665 670
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
675 680 685
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
690 695 700
Ile 705
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер <400> 38
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser 20
<210> 39
<211> 25 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 39
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25
<210> 40
<211> 719
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 40
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 41 <211> 30 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 41
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 42 <211> 35 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 42
Gly Gly Ser 35
<210> 43 <211> 40 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 43
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40
<210> 44 <211> 45 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 44
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
<210> 45 <211> 50 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser 50
<210> 46 <211> 55 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 46
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 50 55
<210> 47 <211> 60 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 47
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
<210> 48 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 48
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ala Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 49 <211> 65
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 49
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser 65
<210> 50 <211> 70 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 50
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser 65 70
<210> 51 <211> 75 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 51
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75
<210> 52 <211> 80 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
<210> 53 <211> 85 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser 85
<210> 54 <211> 90 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 54
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 85 90
<210> 55 <211> 739 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 55
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ala Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg
625 630 635 640
Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp
645 650 655
Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile
660 665 670
Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile
675 680 685
Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys
690 695 700
Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp
705 710 715 720
Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys
725 730 735
His Cys Ile
<210> 56 <211> 717
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 56
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ala Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Arg Asn
595 600 605
Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
610 615 620
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
625 630 635 640
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
645 650 655
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
660 665 670
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
675 680 685
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
690 695 700
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 57 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 57
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 58
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ala Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 59 <211> 717 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 59
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Arg Asn
595 600 605
Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
610 615 620
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
625 630 635 640
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
645 650 655
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
660 665 670
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
675 680 685
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
690 695 700
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 60 <211> 739 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 60
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg
625 630 635 640
Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp
645 650 655
Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile
660 665 670
Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile
675 680 685
Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys
690 695 700
Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp
705 710 715 720
Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys
725 730 735
His Cys Ile
<210> 61
<211> 95 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 61
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
85 90 95
<210> 62 <211> 100 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 62
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Ser 100
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер <400> 63
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10
<210> 64
<211> 719
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 64
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Arg Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 65 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 65
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Trp Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 66 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 66
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Ala Ala Pro Ala Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 67 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 67
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Ala Leu Ala Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Ala Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 68 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 68
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Ala Ala Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ala Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 69 <211> 719
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 69
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Ala Leu Ala Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 70 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 70
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Trp Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 71
<211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок <400> 71
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Ala Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 72 <211> 719
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 72
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Ala Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 73 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 73
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Ala Ile Lys Thr Ala Leu
660 665 670
His Ala Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 74 <211> 719 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 74
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Ala Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Ala Ala Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<210> 75 <211> 719
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 75
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
610 615 620
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Ala Ala Asp Ala Val
625 630 635 640
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
645 650 655
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
660 665 670
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
675 680 685
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 76
gacgcccaca agagcgaggt ggcccaccgg ttcaaggacc tgggcgagga gaacttcaag 60
gccctggtgc tgatcgcctt cgcccagtac ctgcagcagt cccccttcga ggaccacgtg 120
aagctggtga acgaggtgac cgagttcgcc aagacctgcg tggccgacga gagcgccgag 180
aactgcgaca agagcctgca caccctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt ggccaccctg 240
cgggagacct acggcgagat ggccgactgc tgcgccaagc aggagcccga gcggaacgag 300
tgcttcctgc agcacaagga cgacaacccc aacctgcccc ggctggtgcg gcccgaggtg 360
gacgtgatgt gcaccgcctt ccacgacaac gaggagacct tcctgaagaa gtacctgtac 420
gagatcgccc ggcggcaccc ctacttctac gcccccgagc tgctgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggccg ccttcaccga gtgctgccag gccgccgaca aggccgcctg cctgctgccc 540
aagctggacg agctgcggga cgagggcaag gccagcagcg ccaagcagcg gctgaagtgc 600
gccagcctgc agaagttcgg cgagcgggcc ttcaaggcct gggccgtggc ccggctgagc 660
cagcggttcc ccaaggccga gttcgccgag gtgagcaagc tggtgaccga cctgaccaag 720
gtgcacaccg agtgctgcca cggcgacctg ctggagtgcg ccgacgaccg ggccgacctg 780
gccaagtaca tctgcgagaa ccaggacagc atcagcagca agctgaagga gtgctgcgag 840
aagcccctgc tggagaagag ccactgcatc gccgaggtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctgccca gcctggccgc cgacttcgtg gagagcaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 960
gaggccaagg acgtgttcct gggcatgttc ctgtacgagt acgcccggcg gcaccccgac 1020
tacagcgtgg tgctgctgct gcggctggcc aagacctacg agaccaccct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg ccgaccccca cgagtgctac gccaaggtgt tcgacgagtt caagcccctg 1140
gtggaggagc cccagaacct gatcaagcag aactgcgagc tgttcgagca gctgggcgag 1200
tacaagttcc agaacgccct gctggtgcgg tacaccaaga aggtgcccca ggtgagcacc 1260
cccaccctgg tggaggtgag ccggaacctg ggcaaggtgg gcagcaagtg ctgcaagcac 1320
cccgaggcca agcggatgcc ctgcgccgag gactacctga gcgtggtgct gaaccagctg 1380
tgcgtgctgc acgagaagac ccccgtgagc gaccgggtga ccaagtgctg caccgagagc 1440
ctggtgaacc ggcggccctg cttcagcgcc ctggaggtgg acgagaccta cgtgcccaag 1500
gagttcaacg ccgagacctt caccttccac gccgacatct gcaccctgag cgagaaggag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtg gagctggtga agcacaagcc caaggccacc 1620
aaggagcagc tgaaggccgt gatggacgac ttcgccgcct tcgtggagaa gtgctgcaag 1680
gccgacgaca aggagacctg cttcgccgag gagggcaaga agctggtggc cgccagccag 1740
gccgccctgg gcctgggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cgctcgcaac ggtgaccact gccctctggg tcctggtcgc 1860
tgctgccgcc tgcacaccgt tcgcgcttct ctggaagacc tgggttgggc tgactgggtt 1920
ctgtctcctc gcgaagttca ggttaccatg tgcatcggtg cttgcccttc tcagttccgc 1980
gctgctaaca tgcacgctca gatcaaaacc tctctgcacc gcctgaaacc tgacaccgtt 2040
cctgctcctt gctgcgttcc tgcttcttac aaccctatgg ttctgatcca gaaaaccgac 2100
accggtgttt ctctgcagac ctacgacgac ctgctggcta aagactgcca ctgcatc 2157
<210> 77 <211> 2133 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 77
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cggtggaggg ggcagcggtg gtggaggatc cggtaccgcg 1800
cgcaacgggg accactgtcc gctcgggccc gggcgttgct gccgtctgca cacggtccgc 1860
gcgtcgctgg aagacctggg ctgggccgat tgggtgctgt cgccacggga ggtgcaagtg 1920
accatgtgca tcggcgcgtg cccgagccag ttccgggcgg caaacatgca cgcgcagatc 1980
aagacgagcc tgcaccgcct gaagcccgac acggtgccag cgccctgctg cgtgcccgcc 2040
agctacaatc ccatggtgct cattcaaaag accgacaccg gggtgtcgct ccagacctat 2100
gatgacttgt tagccaaaga ctgccactgc ata 2133
<210> 78 <211> 2223 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 78
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cggaggtggc ggatcaggtg gcggaggtag cggtggaggc 1800
ggctctggcg gaggtggatc aggcggagga ggttccggtg gaggaggctc aggaggagga 1860
ggaagtggag gagggggatc cggtaccgcg cgcaacgggg accactgtcc gctcgggccc 1920
gggcgttgct gccgtctgca cacggtccgc gcgtcgctgg aagacctggg ctgggccgat 1980
tgggtgctgt cgccacggga ggtgcaagtg accatgtgca tcggcgcgtg cccgagccag 2040
ttccgggcgg caaacatgca cgcgcagatc aagacgagcc tgcaccgcct gaagcccgac 2100
acggtgccag cgccctgctg cgtgcccgcc agctacaatc ccatggtgct cattcaaaag 2160
accgacaccg gggtgtcgct ccagacctat gatgacttgt tagccaaaga ctgccactgc 2220
ata 2223
<210> 79 <211> 2133 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 79
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cgcacctgcc cccgctccag ctcctgcacc aggtaccgcg 1800
cgcaacgggg accactgtcc gctcgggccc gggcgttgct gccgtctgca cacggtccgc 1860
gcgtcgctgg aagacctggg ctgggccgat tgggtgctgt cgccacggga ggtgcaagtg 1920
accatgtgca tcggcgcgtg cccgagccag ttccgggcgg caaacatgca cgcgcagatc 1980
aagacgagcc tgcaccgcct gaagcccgac acggtgccag cgccctgctg cgtgcccgcc 2040
agctacaatc ccatggtgct cattcaaaag accgacaccg gggtgtcgct ccagacctat 2100
gatgacttgt tagccaaaga ctgccactgc ata 2133
<210> 80 <211> 2163 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 80
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cgcacctgcc cccgctccag cacccgcccc agcccctgct 1800
cccgcaccag ctcctgcacc aggtaccgct cgcaacggtg accactgccc tctgggtcct 1860
ggtcgctgct gccgcctgca caccgttcgc gcttctctgg aagacctggg ttgggctgac 1920
tgggttctgt ctcctcgcga agttcaggtt accatgtgca tcggtgcttg cccttctcag 1980
ttccgcgctg ctaacatgca cgctcagatc aaaacctctc tgcaccgcct gaaacctgac 2040
accgttcctg ctccttgctg cgttcctgct tcttacaacc ctatggttct gatccagaaa 2100
accgacaccg gtgtttctct gcagacctac gacgacctgc tggctaaaga ctgccactgc 2160
atc 2163
<210> 81 <211> 2223 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 81
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cgcacctgcc cccgctccag ccccagctcc tgcacctgct 1800
ccagcaccag ctcctgcacc agctccagcc cctgcacctg cacccgctcc agccccagct 1860
cctgcacctg ctccagcacc aggtaccgcg cgcaacgggg accactgtcc gctcgggccc 1920
gggcgttgct gccgtctgca cacggtccgc gcgtcgctgg aagacctggg ctgggccgat 1980
tgggtgctgt cgccacggga ggtgcaagtg accatgtgca tcggcgcgtg cccgagccag 2040
ttccgggcgg caaacatgca cgcgcagatc aagacgagcc tgcaccgcct gaagcccgac 2100
acggtgccag cgccctgctg cgtgcccgcc agctacaatc ccatggtgct cattcaaaag 2160
accgacaccg gggtgtcgct ccagacctat gatgacttgt tagccaaaga ctgccactgc 2220
ata 2223
<210> 82 <211> 2163
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 82
gatgctcata agtccgaagt cgcccacaga ttcaaggacc tcggagaaga aaattttaag 60
gccctcgtgc ttatcgcctt cgcccaatac ctccagcagt ccccgttcga ggaccacgtg 120
aagctcgtga acgaagtgac cgagtttgcc aagacttgtg tggcggatga atccgccgag 180
aactgcgaca agagcctcca cacgctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt cgccacgctg 240
agagaaactt acggagagat ggccgactgc tgcgcaaagc aggagccgga acggaacgaa 300
tgcttcctgc aacataagga cgataaccct aacttgcctc gcctggtccg ccctgaggtc 360
gacgtgatgt gcaccgcgtt ccacgacaac gaggaaacct ttcttaagaa gtacctgtac 420
gagattgcgc ggaggcaccc ttatttctac gcccccgaac tgttgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggctg cctttaccga atgctgccag gccgccgata aggcggcttg cctgctgccg 540
aagctcgacg agttgcgcga tgaggggaag gcgtcctccg ctaagcagcg gctgaaatgt 600
gcgagcctcc agaagttcgg ggagcgcgcc ttcaaggcct gggccgtggc gcgcctgtct 660
caacggttcc cgaaggccga gttcgccgaa gtgtcgaagc tggtcaccga cctgacgaaa 720
gtgcacaccg aatgttgtca cggcgatctg ctggaatgcg ccgatgacag agccgatttg 780
gccaagtaca tctgcgaaaa ccaggacagc atttcgtcaa agctgaagga atgctgcgaa 840
aagcccttgc tggaaaagtc ccactgcatc gcggaagtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctcccgt ccctggccgc cgatttcgtg gagtcgaagg atgtgtgcaa gaactacgca 960
gaagccaagg acgtgttcct gggaatgttt ctgtatgagt acgcccgccg ccacccggac 1020
tactcggtcg tgctcctgct gcgactggca aagacctacg aaaccactct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg cggacccgca cgagtgctac gcaaaggtgt tcgacgagtt caagccactt 1140
gtcgaggagc ctcagaacct gatcaagcag aactgcgaac tgttcgagca gctgggagag 1200
tacaaattcc agaacgcgct tctcgtgcgc tacaccaaga aggtccccca ggtgtccact 1260
ccgaccctgg tggaagtgtc caggaacctg ggaaaggtcg gctccaagtg ttgcaagcat 1320
cccgaggcta agcgcatgcc ctgcgccgag gactacttgt ccgtggtgct gaatcagctg 1380
tgcgtgctcc atgaaaagac cccagtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgaatcg 1440
ctcgtgaacc ggcggccgtg cttttccgca ctggaggtgg acgaaaccta cgtgccgaag 1500
gagttcaacg cagaaacctt cactttccac gccgacatct gcactctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatta agaagcagac tgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc taaggccacc 1620
aaagagcagc tgaaggccgt catggatgat ttcgcggcct tcgtggaaaa gtgttgtaaa 1680
gcggacgaca aggagacttg cttcgccgaa gaaggaaaga agctcgtggc agcgtcacag 1740
gccgctctgg gcctcgctag cgaagcagca gccaaagaag cagccgcaaa agaagcagcc 1800
gctaaggagg ccgcagcaaa gggtaccgcg cgcaacgggg accactgtcc gctcgggccc 1860
gggcgttgct gccgtctgca cacggtccgc gcgtcgctgg aagacctggg ctgggccgat 1920
tgggtgctgt cgccacggga ggtgcaagtg accatgtgca tcggcgcgtg cccgagccag 1980
ttccgggcgg caaacatgca cgcgcagatc aagacgagcc tgcaccgcct gaagcccgac 2040
acggtgccag cgccctgctg cgtgcccgcc agctacaatc ccatggtgct cattcaaaag 2100
accgacaccg gggtgtcgct ccagacctat gatgacttgt tagccaaaga ctgccactgc 2160
ata 2163
<210> 83 <211> 2157 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 83
gacgcccaca agagcgaggt ggcccaccgg ttcaaggacc tgggcgagga gaacttcaag 60
gccctggtgc tgatcgcctt cgcccagtac ctgcagcagt cccccttcga ggaccacgtg 120
aagctggtga acgaggtgac cgagttcgcc aagacctgcg tggccgacga gagcgccgag 180
aactgcgaca agagcctgca caccctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt ggccaccctg 240
cgggagacct acggcgagat ggccgactgc tgcgccaagc aggagcccga gcggaacgag 300
tgcttcctgc agcacaagga cgacaacccc aacctgcccc ggctggtgcg gcccgaggtg 360
gacgtgatgt gcaccgcctt ccacgacaac gaggagacct tcctgaagaa gtacctgtac 420
gagatcgccc ggcggcaccc ctacttctac gcccccgagc tgctgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggccg ccttcaccga gtgctgccag gccgccgaca aggccgcctg cctgctgccc 540
aagctggacg agctgcggga cgagggcaag gccagcagcg ccaagcagcg gctgaagtgc 600
gccagcctgc agaagttcgg cgagcgggcc ttcaaggcct gggccgtggc ccggctgagc 660
cagcggttcc ccaaggccga gttcgccgag gtgagcaagc tggtgaccga cctgaccaag 720
gtgcacaccg agtgctgcca cggcgacctg ctggagtgcg ccgacgaccg ggccgacctg 780
gccaagtaca tctgcgagaa ccaggacagc atcagcagca agctgaagga gtgctgcgag 840
aagcccctgc tggagaagag ccactgcatc gccgaggtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctgccca gcctggccgc cgacttcgtg gagagcaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 960
gaggccaagg acgtgttcct gggcatgttc ctgtacgagt acgcccggcg gcaccccgac 1020
tacagcgtgg tgctgctgct gcggctggcc aagacctacg agaccaccct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg ccgaccccca cgagtgctac gccaaggtgt tcgacgagtt caagcccctg 1140
gtggaggagc cccagaacct gatcaagcag aactgcgagc tgttcgagca gctgggcgag 1200
tacaagttcc agaacgccct gctggtgcgg tacaccaaga aggtgcccca ggtgagcacc 1260
cccaccctgg tggaggtgag ccggaacctg ggcaaggtgg gcagcaagtg ctgcaagcac 1320
cccgaggcca agcggatgcc ctgcgccgag gactacctga gcgtggtgct gaaccagctg 1380
tgcgtgctgc acgagaagac ccccgtgagc gaccgggtga ccaagtgctg caccgagagc 1440
ctggtgaacc ggcggccctg cttcagcgcc ctggaggtgg acgagaccta cgtgcccaag 1500
gagttcaacg ccgagacctt caccttccac gccgacatct gcaccctgag cgagaaggag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtg gagctggtga agcacaagcc caaggccacc 1620
aaggagcagc tgaaggccgt gatggacgac ttcgccgcct tcgtggagaa gtgctgcaag 1680
gccgacgaca aggagacctg cttcgccgag gagggcaaga agctggtggc cgccagccag 1740
gccgccctgg gcctgggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cgcgcgcaac ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt 1860
tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg 1920
ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg 1980
gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg 2040
ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac 2100
accggggtgt cgctccagac ctatgatgac ttgttagcca aagactgcca ctgcata 2157
<210> 84 <211> 2217 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 84
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagg ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttaggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1860
ggcagtggag gagggggatc cgcgcgcaac ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt 1920
tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg 1980
ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg 2040
gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg 2100
ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac 2160
accggggtgt cgctccagac ctatgatgac ttgttagcca aagactgcca ctgcata 2217
<210> 85 <211> 2151 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 85
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagg ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttagcacc tgcccccgct ccagcacccg ccccagcccc tgctcccgca 1800
ccagctcctg caccagcgcg caacggggac cactgtccgc tcgggcccgg gcgttgctgc 1860
cgtctgcaca cggtccgcgc gtcgctggaa gacctgggct gggccgattg ggtgctgtcg 1920
ccacgggagg tgcaagtgac catgtgcatc ggcgcgtgcc cgagccagtt ccgggcggca 1980
aacatgcacg cgcagatcaa gacgagcctg caccgcctga agcccgacac ggtgccagcg 2040
ccctgctgcg tgcccgccag ctacaatccc atggtgctca ttcaaaagac cgacaccggg 2100
gtgtcgctcc agacctatga tgacttgtta gccaaagact gccactgcat a 2151
<210> 86 <211> 2157
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок <400> 86
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 9 60
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttaggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cgcgcgcaac ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt 1860
tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg 1920
ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg 1980
gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg 2040
ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac 2100
accggggtgt cgctccagac ctatgatgac ttgttagcca aagactgcca ctgcata 2157
<210> 87 <211> 2157
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 87
gacgcccaca agagcgaggt ggcccacaga ttcaaggacc tgggcgagga aaacttcaag 60
gccctggtgc tgatcgcctt cgcccagtac ctgcagcaga gccccttcga ggaccacgtg 120
aagctggtca acgaagtgac cgagttcgcc aagacctgcg tggccgacga gagcgccgag 180
aactgcgaca agagcctgca caccctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt ggccaccctg 240
cgggaaacct acggcgagat ggccgactgc tgcgccaagc aggaacccga gcggaacgag 300
tgcttcctgc agcacaagga cgacaacccc aacctgccca gactcgtgcg gcccgaggtg 360
gacgtgatgt gcaccgcctt ccacgacaac gaggaaacct tcctgaagaa gtacctgtac 420
gagatcgcca gacggcaccc ctacttctac gcccccgagc tgctgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggccg ccttcaccga gtgctgccag gccgccgata aggccgcctg cctgctgccc 540
aagctggacg agctgagaga tgagggcaag gccagctccg ccaagcagcg gctgaagtgc 600
gccagcctgc agaagttcgg cgagcgggcc tttaaggctt gggctgtggc ccggctgagc 660
cagagattcc ccaaggccga gtttgccgag gtgtccaagc tggtcaccga cctgaccaag 720
gtgcacaccg agtgttgtca cggcgacctg ctggaatgcg ccgacgacag agccgacctg 780
gccaagtaca tctgcgagaa ccaggacagc atcagcagca agctgaaaga gtgctgcgag 840
aagcccctgc tggaaaagag ccactgtatc gccgaggtgg aaaacgacga gatgcccgct 900
gacctgccca gcctggccgc cgacttcgtg gaaagcaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 960
gaggccaagg atgtgttcct gggcatgttc ctgtatgagt acgcccgcag acaccccgac 1020
tacagcgtgg tgctgctgct gcggctggcc aagacctacg agacaaccct ggaaaagtgc 1080
tgcgccgctg ccgaccccca cgagtgctac gccaaggtgt tcgacgagtt caagcctctg 1140
gtggaagaac cccagaacct gatcaagcag aactgcgagc tgttcgagca gctgggcgag 1200
tacaagttcc agaacgccct gctcgtgcgg tacaccaaga aagtgcccca ggtgtccacc 1260
cccaccctgg tcgaagtgtc ccggaacctg ggcaaagtgg gcagcaagtg ctgcaagcac 1320
cctgaggcca agcggatgcc ctgcgccgag gactacctgt ccgtggtgct gaaccagctg 1380
tgcgtgctgc acgagaaaac ccccgtgtcc gacagagtga ccaagtgctg taccgagagc 1440
ctggtcaaca gacggccctg cttcagcgcc ctggaagtgg acgagacata cgtgcccaaa 1500
gagttcaacg ccgagacatt caccttccac gccgacatct gcaccctgag cgagaaagag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtc gagctggtca agcacaagcc caaggccacc 1620
aaagaacagc tgaaggccgt gatggacgac ttcgccgcct tcgtcgagaa gtgttgcaag 1680
gccgacgaca aagagacatg cttcgccgaa gagggcaaga aactggtggc cgcctctcag 1740
gccgccctgg gactgggatc tggcggcgga ggaagcggag gcggaggatc tgggggaggc 1800
ggctctggcg gagggggatc cgccagaaat ggcgaccact gtcccctggg ccctggccgg 1860
tgttgcagac tgcacacagt gcgggccagc ctggaagatc tgggctgggc cgattgggtg 1920
ctgagcccca gagaagtgca ggtcacaatg tgcatcggcg cctgccccag ccagttcaga 1980
gccgccaaca tgcacgccca gatcaagacc agcctgcacc ggctgaagcc cgacaccgtg 2040
cctgcccctt gttgcgtgcc cgccagctac aaccccatgg tgctgattca gaaaaccgac 2100
accggcgtgt ccctgcagac ctacgacgat ctgctggcca aggactgcca ctgcatc 2157
<210> 88 <211> 2157 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 88
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagg ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttaggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cgcgcgcaac ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt 1860
tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg 1920
ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg 1980
gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg 2040
ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac 2100
accggggtgt cgctccagac ctatgatgac ttgttagcca aagactgcca ctgcata 2157
<210> 89 <211> 2151 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 89
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttagcacc tgcccccgct ccagcacccg ccccagcccc tgctcccgca 1800
ccagctcctg caccagcgcg caacggggac cactgtccgc tcgggcccgg gcgttgctgc 1860
cgtctgcaca cggtccgcgc gtcgctggaa gacctgggct gggccgattg ggtgctgtcg 1920
ccacgggagg tgcaagtgac catgtgcatc ggcgcgtgcc cgagccagtt ccgggcggca 1980
aacatgcacg cgcagatcaa gacgagcctg caccgcctga agcccgacac ggtgccagcg 2040
ccctgctgcg tgcccgccag ctacaatccc atggtgctca ttcaaaagac cgacaccggg 2100
gtgtcgctcc agacctatga tgacttgtta gccaaagact gccactgcat a 2151
<210> 90 <211> 2217 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 90
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag gcttaggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1860
ggcagtggag gagggggatc cgcgcgcaac ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt 1920
tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg 1980
ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg 2040
gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg 2100
ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac 2160
accggggtgt cgctccagac ctatgatgac ttgttagcca aagactgcca ctgcata 2217
<210> 91 <211> 2157 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 91
gacgcccaca agagcgaggt ggcccaccgg ttcaaggacc tgggcgagga gaacttcaag 60
gccctggtgc tgatcgcctt cgcccagtac ctgcagcagt cccccttcga ggaccacgtg 120
aagctggtga acgaggtgac cgagttcgcc aagacctgcg tggccgacga gagcgccgag 180
aactgcgaca agagcctgca caccctgttc ggcgacaagc tgtgcaccgt ggccaccctg 240
cgggagacct acggcgagat ggccgactgc tgcgccaagc aggagcccga gcggaacgag 300
tgcttcctgc agcacaagga cgacaacccc aacctgcccc ggctggtgcg gcccgaggtg 360
gacgtgatgt gcaccgcctt ccacgacaac gaggagacct tcctgaagaa gtacctgtac 420
gagatcgccc ggcggcaccc ctacttctac gcccccgagc tgctgttctt cgccaagcgg 480
tacaaggccg ccttcaccga gtgctgccag gccgccgaca aggccgcctg cctgctgccc 540
aagctggacg agctgcggga cgagggcaag gccagcagcg ccaagcagcg gctgaagtgc 600
gccagcctgc agaagttcgg cgagcgggcc ttcaaggcct gggccgtggc ccggctgagc 660
cagcggttcc ccaaggccga gttcgccgag gtgagcaagc tggtgaccga cctgaccaag 720
gtgcacaccg agtgctgcca cggcgacctg ctggagtgcg ccgacgaccg ggccgacctg 780
gccaagtaca tctgcgagaa ccaggacagc atcagcagca agctgaagga gtgctgcgag 840
aagcccctgc tggagaagag ccactgcatc gccgaggtgg agaacgacga gatgcccgcc 900
gacctgccca gcctggccgc cgacttcgtg gagagcaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 9 60
gaggccaagg acgtgttcct gggcatgttc ctgtacgagt acgcccggcg gcaccccgac 1020
tacagcgtgg tgctgctgct gcggctggcc aagacctacg agaccaccct ggagaagtgc 1080
tgcgccgccg ccgaccccca cgagtgctac gccaaggtgt tcgacgagtt caagcccctg 1140
gtggaggagc cccagaacct gatcaagcag aactgcgagc tgttcgagca gctgggcgag 1200
tacaagttcc agaacgccct gctggtgcgg tacaccaaga aggtgcccca ggtgagcacc 1260
cccaccctgg tggaggtgag ccggaacctg ggcaaggtgg gcagcaagtg ctgcaagcac 1320
cccgaggcca agcggatgcc ctgcgccgag gactacctga gcgtggtgct gaaccagctg 1380
tgcgtgctgc acgagaagac ccccgtgagc gaccgggtga ccaagtgctg caccgagagc 1440
ctggtgaacc ggcggccctg cttcagcgcc ctggaggtgg acgagaccta cgtgcccaag 1500
gagttcaacg ccgagacctt caccttccac gccgacatct gcaccctgag cgagaaggag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtg gagctggtga agcacaagcc caaggccacc 1620
aaggagcagc tgaaggccgt gatggacgac ttcgccgcct tcgtggagaa gtgctgcaag 1680
gccgacgaca aggagacctg cttcgccgag gagggcaaga agctggtggc cgccagccag 1740
gccgccctgg gcctgggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggatc tggtggaggt 1800
ggcagtggag gagggggatc cgctcgcaac ggtgaccact gccctctggg tcctggtcgc 1860
tgctgccgcc tgcacaccgt tcgcgcttct ctggaagacc tgggttgggc tgactgggtt 1920
ctgtctcctc gcgaagttca ggttaccatg tgcatcggtg cttgcccttc tcagttccgc 1980
gctgctaaca tgcacgcttg gatcaaaacc tctctgcacc gcctgaaacc tgacaccgtt 2040
cctgctcctt gctgcgttcc tgcttcttac aaccctatgg ttctgatcca gaaaaccgac 2100
accggtgttt ctctgcagac ctacgacgac ctgctggcta aagactgcca ctgcatc 2157
<210> 92 <211> 735
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 92
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
645 650 655
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
660 665 670
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
705 710 715 720
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730 735
<210> 93 <211> 734 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 93
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
625 630 635 640
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
645 650 655
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
660 665 670
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
675 680 685
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
690 695 700
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
705 710 715 720
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730
<210> 94 <211> 735 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 94
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val
35 40 45
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
50 55 60
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
65 70 75 80
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
85 90 95
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
100 105 110
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
115 120 125
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
130 135 140
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
165 170 175
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
180 185 190
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
195 200 205
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
210 215 220
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
225 230 235 240
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
245 250 255
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
290 295 300
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
305 310 315 320
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
325 330 335
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
340 345 350
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys
355 360 365
Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu
370 375 380
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys
385 390 395 400
Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu
405 410 415
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
420 425 430
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
435 440 445
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
450 455 460
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
465 470 475 480
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
485 490 495
Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
500 505 510
Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
545 550 555 560
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
565 570 575
Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly
580 585 590
Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
595 600 605
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Ala
610 615 620
Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
645 650 655
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
660 665 670
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
705 710 715 720
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730 735
<210> 95 <211> 2205
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 95
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag ggcttggaag cggcggaggg gggagtggcg gcggtggctc cggggggggc 1800
ggatccggcg gagggggcag cgggggtgga gggagtggcg ggggaggatc agggggagga 1860
ggatcaggag ggggcggaag tgatcattgc cctctcgggc ccggacggtg ttgccgcctc 1920
cacactgtga gggcttcact tgaagacctt ggatgggccg actgggtgct gtccccaaga 1980
gaggtacaag tcacaatgtg tattggcgcc tgccccagcc agtttcgcgc cgctaacatg 2040
cacgcccaga taaaaaccag cctgcaccgc ctgaagcccg
acacggtgcc agcgccctgc
2100
tgcgtgcccg ccagctacaa tcccatggtg ctcattcaaa agaccgacac cggggtgtcg 2160 ctccagacct atgatgactt gttagccaaa gactgccact gcata 2205
<210> 96 <211> 327 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 96
ggggaccact gtccgctcgg gcccgggcgt tgctgccgtc tgcacacggt ccgcgcgtcg 60
ctggaagacc tgggctgggc cgattgggtg ctgtcgccac gggaggtgca agtgaccatg 120
tgcatcggcg cgtgcccgag ccagttccgg gcggcaaaca tgcacgcgca gatcaagacg 180
agcctgcacc gcctgaagcc cgacacggtg ccagcgccct gctgcgtgcc cgccagctac 240
aatcccatgg tgctcattca aaagaccgac accggggtgt cgctccagac ctatgatgac 300
ttgttagcca aagactgcca ctgcata 327
<210> 97 <211> 324 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 <400> 97
gaccactgtc cgctcgggcc cgggcgttgc tgccgtctgc acacggtccg cgcgtcgctg 60
gaagacctgg gctgggccga ttgggtgctg tcgccacggg aggtgcaagt gaccatgtgc 120
atcggcgcgt gcccgagcca gttccgggcg gcaaacatgc acgcgcagat caagacgagc 180
ctgcaccgcc tgaagcccga cacggtgcca gcgccctgct gcgtgcccgc cagctacaat 240
cccatggtgc tcattcaaaa gaccgacacc ggggtgtcgc tccagaccta tgatgacttg 300
ttagccaaag actgccactg cata 324
<210> 98 <211> 324 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 <400> 98
gatcattgcc ctctcgggcc cggacggtgt tgccgcctcc acactgtgag ggcttcactt 60 gaagaccttg gatgggccga ctgggtgctg tccccaagag aggtacaagt cacaatgtgt 120
attggcgcct gccccagcca gtttcgcgcc gctaacatgc acgcccagat aaaaaccagc 180
ctgcaccgcc tgaagcccga cacggtgcca gcgccctgct gcgtgcccgc cagctacaat 240
cccatggtgc tcattcaaaa gaccgacacc ggggtgtcgc tccagaccta tgatgacttg 300
ttagccaaag actgccactg cata 324
<210> 99 <211> 324 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 99
gatcattgtc cccttggacc gggtagatgc tgtcgcctgc acactgtgcg ggcttcactg 60
gaggacctcg gctgggctga ctgggtgctg tccccacggg aggtgcaagt gaccatgtgc 120
atcggcgcct gtccttcgca attccgggcc gcgaatatgc acgcccagat caagacctcc 180
ctgcatcgcc tcaagcccga cactgtgcct gctccatgct gtgtgccggc ctcctataac 240
cccatggtgc tgatccagaa aaccgatacc ggcgtcagcc tgcagacgta tgatgatctg 300
ctggccaagg actgccattg catc 324
<210> 100 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 100
cactgtccgc tcgggcccgg gcgttgctgc cgtctgcaca cggtccgcgc gtcgctggaa 60
gacctgggct gggccgattg ggtgctgtcg ccacgggagg tgcaagtgac catgtgcatc 120
ggcgcgtgcc cgagccagtt ccgggcggca aacatgcacg cgcagatcaa gacgagcctg 180
caccgcctga agcccgacac ggtgccagcg ccctgctgcg tgcccgccag ctacaatccc 240
atggtgctca ttcaaaagac cgacaccggg gtgtcgctcc agacctatga tgacttgtta 300
gccaaagact gccactgcat a 321
<210> 101 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 101
cattgccctc tcgggcccgg acggtgttgc cgcctccaca
ctgtgagggc
ttcacttgaa
gaccttggat gggccgactg ggtgctgtcc ccaagagagg tacaagtcac aatgtgtatt 120
ggcgcctgcc ccagccagtt tcgcgccgct aacatgcacg cccagataaa aaccagcctg 180
caccgcctga agcccgacac ggtgccagcg ccctgctgcg tgcccgccag ctacaatccc 240
atggtgctca ttcaaaagac cgacaccggg gtgtcgctcc agacctatga tgacttgtta 300
gccaaagact gccactgcat a 321
<210> 102 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 102
cattgtcccc ttggaccggg tagatgctgt cgcctgcaca ctgtgcgggc ttcactggag 60
gacctcggct gggctgactg ggtgctgtcc ccacgggagg tgcaagtgac catgtgcatc 120
ggcgcctgtc cttcgcaatt ccgggccgcg aatatgcacg cccagatcaa gacctccctg 180
catcgcctca agcccgacac tgtgcctgct ccatgctgtg tgccggcctc ctataacccc 240
atggtgctga tccagaaaac cgataccggc gtcagcctgc agacgtatga tgatctgctg 300
gccaaggact gccattgcat c 321
<210> 103 <211> 318 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 103
tgtccgctcg ggcccgggcg ttgctgccgt ctgcacacgg tccgcgcgtc gctggaagac 60
ctgggctggg ccgattgggt gctgtcgcca cgggaggtgc aagtgaccat gtgcatcggc 120
gcgtgcccga gccagttccg ggcggcaaac atgcacgcgc agatcaagac gagcctgcac 180
cgcctgaagc ccgacacggt gccagcgccc tgctgcgtgc ccgccagcta caatcccatg 240
gtgctcattc aaaagaccga caccggggtg tcgctccaga cctatgatga cttgttagcc 300
aaagactgcc actgcata 318
<210> 104 <211> 318 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 104
tgccctctcg ggcccggacg gtgttgccgc ctccacactg tgagggcttc acttgaagac 60
cttggatggg ccgactgggt gctgtcccca agagaggtac aagtcacaat gtgtattggc 120
gcctgcccca gccagtttcg cgccgctaac atgcacgccc agataaaaac cagcctgcac 180
cgcctgaagc ccgacacggt gccagcgccc tgctgcgtgc ccgccagcta caatcccatg 240
gtgctcattc aaaagaccga caccggggtg tcgctccaga cctatgatga cttgttagcc 300
aaagactgcc actgcata 318
<210> 105 <211> 318 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 105
tgtccccttg gaccgggtag atgctgtcgc ctgcacactg tgcgggcttc actggaggac 60
ctcggctggg ctgactgggt gctgtcccca cgggaggtgc aagtgaccat gtgcatcggc 120
gcctgtcctt cgcaattccg ggccgcgaat atgcacgccc agatcaagac ctccctgcat 180
cgcctcaagc ccgacactgt gcctgctcca tgctgtgtgc cggcctccta taaccccatg 240
gtgctgatcc agaaaaccga taccggcgtc agcctgcaga cgtatgatga tctgctggcc 300
aaggactgcc attgcatc 318
<210> 106
<211> 294
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 106
tgccgtctgc acacggtccg cgcgtcgctg gaagacctgg gctgggccga ttgggtgctg 60
tcgccacggg aggtgcaagt gaccatgtgc atcggcgcgt gcccgagcca gttccgggcg 120
gcaaacatgc acgcgcagat caagacgagc ctgcaccgcc tgaagcccga cacggtgcca 180
gcgccctgct gcgtgcccgc cagctacaat cccatggtgc tcattcaaaa gaccgacacc 240
ggggtgtcgc tccagaccta tgatgacttg ttagccaaag actgccactg cata 294
<210> 107
<211> 294 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 107
tgccgcctcc acactgtgag ggcttcactt gaagaccttg gatgggccga ctgggtgctg 60
tccccaagag aggtacaagt cacaatgtgt attggcgcct gccccagcca gtttcgcgcc 120
gctaacatgc acgcccagat aaaaaccagc ctgcaccgcc tgaagcccga cacggtgcca 180
gcgccctgct gcgtgcccgc cagctacaat cccatggtgc tcattcaaaa gaccgacacc 240
ggggtgtcgc tccagaccta tgatgacttg ttagccaaag actgccactg cata 294
<210> 108 <211> 294 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15
<400> 108
tgtcgcctgc acactgtgcg ggcttcactg gaggacctcg gctgggctga ctgggtgctg 60
tccccacggg aggtgcaagt gaccatgtgc atcggcgcct gtccttcgca attccgggcc 120
gcgaatatgc acgcccagat caagacctcc ctgcatcgcc tcaagcccga cactgtgcct 180
gctccatgct gtgtgccggc ctcctataac cccatggtgc tgatccagaa aaccgatacc 240
ggcgtcagcc tgcagacgta tgatgatctg ctggccaagg actgccattg catc 294
<210> 109 <211> 2217 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 109
gatgcgcaca agtcggaagt ggcccatcgc tttaaggacc tgggagaaga gaacttcaag 60
gccctggtcc tgatcgcgtt cgcccagtac ctccagcagt ccccgtttga ggaccacgtc 120
aagcttgtga acgaagtgac cgagttcgca aagacttgtg tggccgatga gtccgccgaa 180
aactgcgaca agtccctgca caccttgttc ggagacaagc tgtgcaccgt cgcgactttg 240
cgggagactt acggcgaaat ggcggactgc tgcgcaaagc aggagcccga aaggaacgag 300
tgcttcctgc aacacaagga cgacaacccg aaccttccga gactcgtgcg gcctgaggtc 360
gacgtgatgt gcactgcatt ccatgataac gaagaaacat tcctgaagaa gtacctgtat 420
gaaattgcca gacgccaccc gtacttctac gcccccgaac tgctgttctt cgccaagaga 480
tacaaggccg cctttaccga atgttgtcaa gccgccgata aggcagcgtg cctgctgccg 540
aagttggacg agctcaggga cgaaggaaag gcctcgtccg ccaagcagag gctgaagtgc 600
gcgtcgctcc agaagtttgg agagcgggct tttaaggcct gggcagtggc taggttgagc 660
cagaggttcc ccaaggcgga gtttgccgaa gtgtccaagc tcgtgactga cctgactaaa 720
gtccataccg aatgctgcca cggcgatctg ctcgaatgcg cagatgaccg ggcggatttg 780
gccaagtaca tttgcgaaaa ccaagactcc ataagctcca agctgaagga gtgctgtgaa 840
aagcctctgc tcgagaagtc ccactgtatc gccgaggtgg agaacgacga aatgccggca 900
gacctcccta gcctggcagc cgacttcgtc gaatccaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 9 60
gaagcgaagg acgtgttcct gggaatgttc ctgtacgagt acgccagacg gcatccagac 1020
tactccgtgg tgcttctctt gcggctggcc aagacttatg aaacgaccct ggagaaatgt 1080
tgcgctgctg ctgacccaca cgagtgctac gccaaagtgt tcgacgagtt taagcctctc 1140
gtggaggaac cccagaacct catcaagcag aactgcgaac ttttcgagca gctcggggag 1200
tacaagttcc aaaacgcgct gcttgtccgc tacaccaaga aagtgccgca agtgtccaca 1260
ccgaccctcg tggaagtgtc caggaacctg ggcaaagtcg gaagcaaatg ttgcaagcac 1320
cccgaagcca agcgcatgcc gtgcgcagag gactaccttt cggtggtgtt gaaccagctc 1380
tgcgtcctgc acgaaaagac cccggtgtca gaccgcgtga ccaagtgctg taccgaaagc 1440
ctcgtgaatc ggcgcccctg cttctcggcc ctggaggtgg acgaaactta cgtgccgaaa 1500
gagttcaacg cggaaacctt cacctttcat gccgatatct gcaccctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc gaaggccact 1620
aaggaacagc tgaaggccgt catggacgat ttcgctgcct tcgtcgagaa gtgctgcaag 1680
gccgacgaca aggagacttg cttcgctgaa gaagggaaga agcttgtggc cgctagccag 1740
gctgcactgg gactgggtag cggtggaggg ggatcagggg gtggtggatc gggaggagga 1800
ggatcaggag gtggcggctc aggaggaggc ggatcaggcg gtggaggatc cggaggcgga 1860
ggatcgggtg gaggaggctc agcgaggaac ggggatcatt gtccccttgg accgggtaga 1920
tgctgtcgcc tgcacactgt gcgggcttca ctggaggacc tcggctgggc tgactgggtg 1980
ctgtccccac gggaggtgca agtgaccatg tgcatcggcg cctgtccttc gcaattccgg 2040
gccgcgaata tgcacgccca gatcaagacc tccctgcatc gcctcaagcc cgacactgtg 2100
cctgctccat gctgtgtgcc ggcctcctat aaccccatgg tgctgatcca gaaaaccgat 2160
accggcgtca gcctgcagac gtatgatgat ctgctggcca aggactgcca ttgcatc 2217
<210> 110 <211> 2205
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 110
gatgcgcaca agtcggaagt ggcccatcgc tttaaggacc tgggagaaga gaacttcaag 60 gccctggtcc tgatcgcgtt cgcccagtac ctccagcagt ccccgtttga ggaccacgtc 120
aagcttgtga acgaagtgac cgagttcgca aagacttgtg tggccgatga gtccgccgaa 180
aactgcgaca agtccctgca caccttgttc ggagacaagc tgtgcaccgt cgcgactttg 240
cgggagactt acggcgaaat ggcggactgc tgcgcaaagc aggagcccga aaggaacgag 300
tgcttcctgc aacacaagga cgacaacccg aaccttccga gactcgtgcg gcctgaggtc 360
gacgtgatgt gcactgcatt ccatgataac gaagaaacat tcctgaagaa gtacctgtat 420
gaaattgcca gacgccaccc gtacttctac gcccccgaac tgctgttctt cgccaagaga 480
tacaaggccg cctttaccga atgttgtcaa gccgccgata aggcagcgtg cctgctgccg 540
aagttggacg agctcaggga cgaaggaaag gcctcgtccg ccaagcagag gctgaagtgc 600
gcgtcgctcc agaagtttgg agagcgggct tttaaggcct gggcagtggc taggttgagc 660
cagaggttcc ccaaggcgga gtttgccgaa gtgtccaagc tcgtgactga cctgactaaa 720
gtccataccg aatgctgcca cggcgatctg ctcgaatgcg cagatgaccg ggcggatttg 780
gccaagtaca tttgcgaaaa ccaagactcc ataagctcca agctgaagga gtgctgtgaa 840
aagcctctgc tcgagaagtc ccactgtatc gccgaggtgg agaacgacga aatgccggca 900
gacctcccta gcctggcagc cgacttcgtc gaatccaagg acgtgtgcaa gaactacgcc 960
gaagcgaagg acgtgttcct gggaatgttc ctgtacgagt acgccagacg gcatccagac 1020
tactccgtgg tgcttctctt gcggctggcc aagacttatg aaacgaccct ggagaaatgt 1080
tgcgctgctg ctgacccaca cgagtgctac gccaaagtgt tcgacgagtt taagcctctc 1140
gtggaggaac cccagaacct catcaagcag aactgcgaac ttttcgagca gctcggggag 1200
tacaagttcc aaaacgcgct gcttgtccgc tacaccaaga aagtgccgca agtgtccaca 1260
ccgaccctcg tggaagtgtc caggaacctg ggcaaagtcg gaagcaaatg ttgcaagcac 1320
cccgaagcca agcgcatgcc gtgcgcagag gactaccttt cggtggtgtt gaaccagctc 1380
tgcgtcctgc acgaaaagac cccggtgtca gaccgcgtga ccaagtgctg taccgaaagc 1440
ctcgtgaatc ggcgcccctg cttctcggcc ctggaggtgg acgaaactta cgtgccgaaa 1500
gagttcaacg cggaaacctt cacctttcat gccgatatct gcaccctgtc cgagaaggag 1560
cggcagatca agaagcagac cgccctggtg gagcttgtga aacacaagcc gaaggccact 1620
aaggaacagc tgaaggccgt catggacgat ttcgctgcct tcgtcgagaa gtgctgcaag 1680
gccgacgaca aggagacttg cttcgctgaa gaagggaaga agcttgtggc cgctagccag 1740
gctgcactgg gactgggtag cggtggaggg ggatcagggg gtggtggatc gggaggagga 1800
ggatcaggag gtggcggctc aggaggaggc ggatcaggcg gtggaggatc cggaggcgga 1860
ggatcgggtg gaggaggctc agatcattgt ccccttggac cgggtagatg ctgtcgcctg 1920
cacactgtgc gggcttcact ggaggacctc ggctgggctg actgggtgct gtccccacgg 1980
gaggtgcaag tgaccatgtg catcggcgcc tgtccttcgc aattccgggc cgcgaatatg 2040
cacgcccaga tcaagacctc cctgcatcgc ctcaagcccg acactgtgcc tgctccatgc 2100 tgtgtgccgg cctcctataa ccccatggtg ctgatccaga aaaccgatac cggcgtcagc 2160 ctgcagacgt atgatgatct gctggccaag gactgccatt gcatc 2205
<210> 111 <211> 734
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 111
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
625 630 635 640
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
645 650 655
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
660 665 670
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
675 680 685
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile 725 730
<210> 112 <211> 725 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок <400> 112
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
625 630 635 640
Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met
645 650 655
Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala
660 665 670
Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys
705 710 715 720
Asp Cys His Cys Ile
725
<210> 113 <211> 733 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 113
His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn
1 5 10 15
Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser
20 25 30
Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala
35 40 45
Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu
50 55 60
His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu
65 70 75 80
Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg
85 90 95
Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg
100 105 110
Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn
115 120 125
Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His
130 135 140
Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys
145 150 155 160
Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala
195 200 205
Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala
210 215 220
Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His
225 230 235 240
Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala
245 250 255
Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys
260 265 270
Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile
275 280 285
Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala
290 295 300
Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala
305 310 315 320
Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His
325 330 335
Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu
340 345 350
Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr
355 360 365
Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn
370 375 380
Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys
385 390 395 400
Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val
405 410 415
Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys
450 455 460
Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val
465 470 475 480
Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val
485 490 495
Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys
500 505 510
Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val
515 520 525
Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala
530 535 540
Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp
545 550 555 560
Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala
565 570 575
Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
580 585 590
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
595 600 605
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
610 615 620
Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
625 630 635 640
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
645 650 655
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
660 665 670
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
705 710 715 720
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730
<210> 114 <211> 2199
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 114
cacaagagtg aggttgctca tcggtttaaa gatttgggag aagaaaattt caaagccttg 60
gtgttgattg cctttgctca gtatcttcag cagtccccat ttgaagatca tgtaaaatta 120
gtgaatgaag taactgaatt tgcaaaaaca tgtgttgctg atgagtcagc tgaaaattgt 180
gacaaatcac ttcataccct ttttggagac aaattatgca cagttgcaac tcttcgtgaa 240
acctatggtg aaatggctga ctgctgtgca aaacaagaac ctgagagaaa tgaatgcttc 300
ttgcaacaca aagatgacaa cccaaacctc ccccgattgg tgagaccaga ggttgatgtg 360
atgtgcactg cttttcatga caatgaagag acatttttga aaaaatactt atatgaaatt 420
gccagaagac atccttactt ttatgccccg gaactccttt tctttgctaa aaggtataaa 480
gctgctttta cagaatgttg ccaagctgct gataaagctg cctgcctgtt gccaaagctc 540
gatgaacttc gggatgaagg gaaggcttcg tctgccaaac agagactcaa gtgtgccagt 600
ctccaaaaat ttggagaaag agctttcaaa gcatgggcag tagctcgcct gagccagaga 660
tttcccaaag ctgagtttgc agaagtttcc aagttagtga cagatcttac caaagtccac 720
acggaatgct gccatggaga tctgcttgaa tgtgctgatg acagggcgga ccttgccaag 780
tatatctgtg aaaatcaaga ttcgatctcc agtaaactga aggaatgctg tgaaaaacct 840
ctgttggaaa aatcccactg cattgccgaa gtggaaaatg atgagatgcc tgctgacttg 900
ccttcattag ctgctgattt tgttgaaagt aaggatgttt gcaaaaacta tgctgaggca 960
aaggatgtct tcctgggcat gtttttgtat gaatatgcaa gaaggcatcc tgattactct 1020
gtcgtgctgc tgctgagact tgccaagaca tatgaaacca ctctagagaa gtgctgtgcc 1080
gctgcagatc ctcatgaatg ctatgccaaa gtgttcgatg aatttaaacc tcttgtggaa 1140
gagcctcaga atttaatcaa acaaaattgt gagctttttg agcagcttgg agagtacaaa 1200
ttccagaatg cgctattagt tcgttacacc aagaaagtac cccaagtgtc aactccaact 1260
cttgtagagg tctcaagaaa cctaggaaaa gtgggcagca aatgttgtaa acatcctgaa 1320
gcaaaaagaa tgccctgtgc agaagactat ctatccgtgg tcctgaacca gttatgtgtg 1380
ttgcatgaga aaacgccagt aagtgacaga gtcaccaaat gctgcacaga atccttggtg 1440
aacaggcgac catgcttttc agctctggaa gtcgatgaaa catacgttcc caaagagttt 1500
aatgctgaaa cattcacctt ccatgcagat atatgcacac tttctgagaa ggagagacaa 1560
atcaagaaac aaactgcact tgttgagctc gtgaaacaca agcccaaggc aacaaaagag 1620
caactgaaag ctgttatgga tgatttcgca gcttttgtag agaagtgctg caaggctgac 1680
gataaggaga cctgctttgc cgaggagggt aaaaaacttg ttgctgcaag tcaagctgcc 1740
ttagggcttg gaagcggcgg aggggggagt ggcggcggtg gctccggggg gggcggatcc 1800
ggcggagggg gcagcggggg tggagggagt ggcgggggag gatcaggggg aggaggatca 1860
ggagggggcg gaagtgatca ttgccctctc gggcccggac ggtgttgccg cctccacact 1920
gtgagggctt cacttgaaga ccttggatgg gccgactggg tgctgtcccc aagagaggta 1980
caagtcacaa tgtgtattgg cgcctgcccc agccagtttc gcgccgctaa catgcacgcc 2040
cagataaaaa ccagcctgca ccgcctgaag cccgacacgg tgccagcgcc ctgctgcgtg 2100
cccgccagct acaatcccat ggtgctcatt caaaagaccg acaccggggt gtcgctccag 2160
acctatgatg acttgttagc caaagactgc cactgcata 2199
<210> 115 <211> 735 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 115
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ala Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
645 650 655
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
660 665 670
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
705 710 715 720
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730 735
<210> 116 <211> 2205 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 116
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag ggcttggtgc tggaggaggc ggggcgggcg gcgggggtgc cggtgggggt 1800
ggcgcagggg gaggtggtgc gggtggtggt ggggctggtg ggggaggtgc aggcggtggc 1860
ggtgccgggg ggggtggcgc ggatcattgc cctctcgggc ccggacggtg ttgccgcctc 1920
cacactgtga gggcttcact tgaagacctt ggatgggccg actgggtgct gtccccaaga 1980
gaggtacaag tcacaatgtg tattggcgcc tgccccagcc agtttcgcgc cgctaacatg 2040
cacgcccaga taaaaaccag cctgcaccgc ctgaagcccg acacggtgcc agcgccctgc 2100
tgcgtgcccg ccagctacaa tcccatggtg ctcattcaaa agaccgacac cggggtgtcg 2160
ctccagacct atgatgactt gttagccaaa gactgccact gcata 2205
<210> 117 <211> 713
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Asp His Cys
595 600 605
Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser
610 615 620
Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val
625 630 635 640
Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala
645 650 655
Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp
660 665 670
Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val
675 680 685
Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp
690 695 700
Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710
<210> 118 <211> 2139
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 118
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag ggcttgcacc agcccctgcc cctgcacctg cacctgctcc cgcaccggct 1800
ccagccccag ctccggatca ttgccctctc gggcccggac ggtgttgccg cctccacact 1860
gtgagggctt cacttgaaga ccttggatgg gccgactggg tgctgtcccc aagagaggta 1920
caagtcacaa tgtgtattgg cgcctgcccc agccagtttc gcgccgctaa catgcacgcc 1980
cagataaaaa ccagcctgca ccgcctgaag cccgacacgg tgccagcgcc ctgctgcgtg 2040 cccgccagct acaatcccat ggtgctcatt caaaagaccg acaccggggt gtcgctccag 2100 acctatgatg acttgttagc caaagactgc cactgcata 2139
<210> 119
<211> 717 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 119
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
580 585 590
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
595 600 605
Pro Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
610 615 620
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
625 630 635 640
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
645 650 655
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
660 665 670
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
675 680 685
<210> 120 <211> 2151 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 120
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440
ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500
gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560
agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620
aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680
gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740
gctgccttag ggcttgcacc agcccctgcc cctgcacctg cacctgctcc cgcaccggct 1800
ccagccccag ctccggctcc agctcctgat cattgccctc tcgggcccgg acggtgttgc 1860
cgcctccaca ctgtgagggc ttcacttgaa gaccttggat gggccgactg ggtgctgtcc 1920
ccaagagagg tacaagtcac aatgtgtatt ggcgcctgcc ccagccagtt tcgcgccgct 1980
aacatgcacg cccagataaa aaccagcctg caccgcctga agcccgacac ggtgccagcg 2040
ccctgctgcg tgcccgccag ctacaatccc atggtgctca ttcaaaagac cgacaccggg 2100
gtgtcgctcc agacctatga tgacttgtta gccaaagact gccactgcat a 2151
<210> 121 <211> 741 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 121
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser
580 585 590
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly
595 600 605
Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
610 615 620
Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met
660 665 670
Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala
675 680 685
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
690 695 700
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
705 710 715 720
Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys
725 730 735
Asp Cys His Cys Ile
740
<210> 122 <211> 2223
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 122
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca caaaatgctg tactgagagc 1440
ttggtcaaca ggcggccgtg cttcagcgcc ctcgaggtgg atgagactta tgtcccaaag 1500
gagtttaatg cggaaacttt tactttccac gcagacattt gcaccttgtc tgaaaaggaa 1560
agacagatta agaaacagac tgctcttgtg gaactggtaa aacataaacc aaaagctacg 1620
aaggagcagc ttaaggctgt tatggatgat ttcgccgcgt ttgtcgagaa gtgctgcaaa 1680
gcggacgata aggaaacttg ctttgcagag gaaggtaaga aactcgtagc ggcaagtcag 1740
gctgcgcttg gccttggagg cagtgaaggc aaatcctctg ggagtggctc tgaaagtaaa 1800
tccaccgagg gcaaatccag tggatctggg tctgaatcta agtctaccga ggggaagtct 1860
tctggcagtg ggtcagaatc taaatctaca ggcggctctg accattgccc gttgggacca 1920
ggacgctgct gtcgccttca tacagtgcga gcgagtttgg aagacctggg ctgggctgac 1980
tgggtgctta gccctcggga ggtccaggtc acaatgtgca ttggcgcgtg tcccagtcaa 2040
tttagagcag caaatatgca cgcccaaata aaaacctccc tgcataggct taagccagat 2100
actgtccccg caccatgctg tgtgcctgct tcttacaatc ctatggtact catccagaag 2160
accgacacgg gagttagcct ccagacttat gacgacctct tggctaaaga ttgccattgt 2220
att 2223
<210> 123 <211> 735 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 123
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Pro Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
645 650 655
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
660 665 670
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
705 710 715 720
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730 735
<210> 124 <211> 2205 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 124
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca cgaaatgttg cacagagtca 1440
ctggtcaaca ggagaccttg cttctccgct cttgaggttg acgaaacgta tgtcccaaaa 1500
gagttcaacg ccgaaacgtt tacgtttcat gcggacatat gcactctcag tgagaaggag 1560
cgacaaatca aaaaacagac tgctcttgta gagttggtaa aacacaaacc taaagcaaca 1620
aaagagcaat tgaaagctgt gatggacgat tttgcagctt tcgtagaaaa gtgctgcaag 1680
gccgacgata aagaaacctg tttcgctgaa gaaggcaaaa aacttgttgc ggcatctcag 1740
gccgctcttg gacttgggag cccgggtggc gggtctccag gcggaggctc tccgggcgga 1800
ggtagtcccg gagggggtag tccgggcggc ggttctccag gtggaggttc tcctggtggt 1860
ggcagtcctg gcggaggatc tgatcactgt ccccttgggc ccgggaggtg ctgccgactt 1920
catacagttc gcgccagcct tgaagatttg gggtgggccg actgggtgtt gagcccgaga 1980
gaggtccaag tcacgatgtg tattggagcc tgtccctctc aattccgagc cgcaaatatg 2040
catgcgcaaa taaagacgag tctccatcgg ttgaagcctg atactgtccc agctccgtgc 2100
tgcgtccccg cgagttataa tcccatggtc cttatacaga aaacagacac tggtgtcagc 2160
cttcagacgt atgacgattt gcttgctaaa gactgtcatt gtatt 2205
<210> 125 <211> 735 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 125
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser
580 585 590
Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
645 650 655
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
660 665 670
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
705 710 715 720
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725 730 735
<210> 126 <211> 2205
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 126
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ctaaatgttg taccgagtct 1440
cttgttaata ggcggccatg cttcagtgca ttggaagtcg acgaaaccta tgtaccaaag 1500
gagttcaacg cagaaacatt tacattccat gctgatatct gcacattgag cgagaaagag 1560
agacagatta agaaacagac agcgcttgtt gaactggtta aacacaaacc aaaagctacc 1620
aaggagcagc ttaaggcagt aatggatgac ttcgcggcct ttgtcgagaa atgttgtaaa 1680
gcggatgata aagagacatg cttcgccgaa gagggcaaaa aacttgtagc ggcaagccag 1740
gccgcactgg gtctcggtag tgcgggcggt ggttcagcgg ggggaggatc tgcaggtggt 1800
ggctcagcgg gtggcggtag cgctgggggg ggctccgcag gtgggggatc agcaggcggc 1860
ggatcagccg gcggtggatc cgaccactgt cctctcgggc ctggtcggtg ttgccgcctc 1920
catactgtgc gcgcgtctct tgaggatctg gggtgggctg attgggttct ctctccccgc 1980
gaagtgcagg tgaccatgtg tattggtgct tgcccaagtc aattccgagc agctaacatg 2040
cacgcccaga tcaagactag cctgcatcgg cttaagcccg acactgttcc tgccccttgc 2100
tgtgttcctg catcttataa tccaatggtc ctgatccaga aaaccgatac gggtgtatca 2160
ttgcaaacat acgacgactt gcttgccaaa gattgccatt gcatt 2205
<210> 127 <211> 727 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> гибридный белок
<400> 127
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser
580 585 590
Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu
625 630 635 640
Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val
645 650 655
Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met
660 665 670
His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val
675 680 685
Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile
690 695 700
Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu
705 710 715 720
Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
725
<210> 128 <211> 2181 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
<400> 128
gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60
gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt ccccatttga agatcatgta 120
aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180
aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240
cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300
tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360
gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420
gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480
tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540
aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600
gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660
cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720
gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780
gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840
aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900
gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 9 60
gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020
tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080
tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140
gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200
tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260
ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320
cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380
tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca cgaaatgctg tacagaatcc 1440
ctcgtgaata gaaggccctg cttctctgcc cttgaggtgg acgagactta cgtccctaag 1500
gagtttaacg ccgagacctt tacttttcat gctgatattt gcaccctttc cgaaaaggag 1560
cggcagatca agaaacaaac agccttggtg gaactcgtaa aacataaacc caaagccacc 1620
aaggaacaac ttaaagctgt tatggatgac ttcgcagcct tcgtcgagaa atgttgcaag 1680
gcggatgata aggaaacgtg ttttgctgag gaagggaaga agttggttgc tgcctctcaa 1740
gcggctctgg ggcttggcgg atcagagggg aagtcctccg ggtccggtag cgagtccaaa 1800
tctacggaag ggaagtcatc cggttctggg tcagagtcca aatccacagg aggatcagac 1860
cattgcccat tgggaccagg acgatgttgt cgcctgcata cggtaagagc gtctctggag 1920
gatctcggct gggccgattg ggttctctca ccacgagaag tacaggtcac aatgtgcata 1980
ggagcttgtc cgagccaatt ccgggcggct aatatgcacg cacagatcaa gacctctttg 2040
caccgcttga agcccgatac cgtgccagca ccgtgttgcg tcccagcatc ttacaaccct 2100
atggttttga tacagaaaac tgacacaggt gtgagcctcc agacatatga tgatttgctg 2160
gctaaggatt gccactgtat a 2181
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Гибридный белок, содержащий:
a. белок, продлевающий период полужизни,
b. линкер, и
c. белок GDF15;
причем гибридный белок составлен от N-конца до С-конца в порядке (а)-(Ь)-(с).
2. Гибридный белок по п. 1, в котором белок GDF15
представляет собой зрелый белок GDF15 или его функциональный
вариант.
3. Гибридный белок по п. 1, в котором белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11.
4. Гибридный белок по п. 3, в котором белок GDF15 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10 и 11.
5. Гибридный белок по любому одному из пп. 1-4, в котором белок, продлевающий период полужизни, представляет собой человеческий сывороточный альбумин (HSA) или его функциональный вариант.
6. Гибридный белок по п. 5, в котором белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 1.
7. Гибридный белок по п. б, в котором белок, продлевающий период полужизни, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2 и 3.
8. Гибридный белок по любому одному из пп. 1-7, в котором линкер представляет собой гибкий линкер.
9. Гибридный белок по п. 8, в котором линкер содержит последовательность (GGGGS)п, где п составляет от 2 до 20.
10. Гибридный белок по любому одному из пп. 1-7, в котором линкер представляет собой структурированный линкер.
11. Гибридный белок по п. 10, в котором линкер содержит последовательность (АР)п или (ЕАААК)п, где п составляет от 2 до 20 .
12. Гибридный белок по любому одному из пп. 1-7, в котором
линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GGGGA)n, (PGGGS)n, (AGGGS)n или GGS-(EGKSSGSGSESKST)n-GGS, где n составляет от 2 до 20.
13. Гибридный белок, содержащий аминокислотную
последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную
последовательностям SEQ ID NO: 5, 25-30, 36-37, 40, 48, 55-56,
59-60, 64-75, 92, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125 или 127.
14. Гибридный белок по п. 13, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 25-30, 40, 55-56, 59-60, 70, 92, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125 и 127.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую гибридный белок по любому одному из пп. 1-14.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 15, по меньшей мере на 90% идентичная последовательностям SEQ ID NO: 76-91, 95, 109, 110, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126 и 128.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 16, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 76-91, 95, 109, 110, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126 и 128.
18. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок по любому одному из пп. 1-14.
19. Вектор по п. 18, содержащий нуклеотидную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
76-91 и 95, 109, 110, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126 и 128.
20. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок по любому одному из пп. 1-14.
21. Способ продуцирования гибридного белка по любому одному из пп. 1-14, включающий этапы, на которых:
(1) культивируют клетку-хозяина, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок, в условиях, при которых продуцируется гибридный белок; и
(2) выделяют гибридный белок, продуцированный клеткой-хозяином.
22. Фармацевтическая композиция, содержащая гибридный белок
по любому одному из пп. 1-14 и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок по любому одному из пп. 1-14, и фармацевтически приемлемый носитель.
24. Способ лечения или профилактики метаболического расстройства, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 22 или 23 .
25. Способ лечения расстройства, выбранного из группы,
состоящей из метаболического расстройства, выбранного из группы,
состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы,
повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии,
диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда,
застойной сердечной недостаточности и ревматоидного артрита у
нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту
терапевтически эффективного количества фармацевтической
композиции, содержащей гибридный белок, содержащий
аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 60, и
фармацевтически приемлемый носитель.
26. Способ лечения расстройства, выбранного из группы,
состоящей из метаболического расстройства, выбранного из группы,
состоящей из диабета 2-го типа, повышенных уровней глюкозы,
повышенных уровней инсулина, ожирения, дислипидемии,
диабетической нефропатии, ишемического поражения миокарда,
застойной сердечной недостаточности и ревматоидного артрита у
нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту
терапевтически эффективного количества фармацевтической
композиции, содержащей гибридный белок, содержащий
аминокислотную последовательность SEQ ID N0: 92, и
фармацевтически приемлемый носитель.
27. Димер, содержащий две полипептидные цепи, в котором каждая цепь содержит от N-конца до С-конца область HSA, линкер и область GDF15; причем область HSA содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID N0: 1, 2 или 3, и при этом область
25.
GDF15 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11.
28. Димер по п. 27, в котором область HSA содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2 и 3.
29. Димер по п. 27, в котором область GDF15 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10 и 11.
30. Димер по п. 27, в котором две полипептидные цепи связаны дисульфидными мостиками.
31. Димер по п. 27, в котором область HSA и область GDF15 соединены посредством полипептидного линкера.
32. Димер по п. 31, в котором область HSA и область GDF15 соединены посредством гибкого линкера.
33. Димер по п. 32, в котором полипептидный линкер содержит последовательность (GGGGS)п, где п составляет от 2 до 20.
34. Димер по п. 31, в котором область HSA и область GDF15 соединены посредством структурированного линкера.
35. Димер по п. 34, в котором полипептидный линкер содержит последовательность (АР)п или (ЕАААК)п, где п составляет от 2 до 20 .
36. Димер по п. 31, в котором линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GGGGA)n, (PGGGS)n, (AGGGS)n или GGS-(EGKSSGSGSESKST)n-GGS, где n составляет от 2 до 20.
37. Димер, содержащий (i) первую полипептидную цепь, содержащую первую область HSA на N-конце, линкер и первую область GDF15 на С-конце, и (ii) вторую полипептидную цепь, содержащую вторую область GDF15; причем область HSA содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID N0: 1, 2 или 3, и при этом первая область GDF15 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательностям SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11, а вторая область GDF15 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90%
28.
идентичную последовательностям SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 или 11.
38. Димер по п. 37, в котором область HSA содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2 и 3.
39. Димер по п. 37, в котором область GDF15 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: б, 7, 8, 9, 10 и 11.
40. Димер по п. 37, в котором линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GGGGS)n, (AP)n, (EAAAK)n, (GGGGA)n, (PGGGS)n, (AGGGS)n или GGS-(EGKSSGSGSESKST)n-GGS, где n составляет от 2 до 20 .
41. Димер по п. 37, в котором две полипептидные цепи связаны дисульфидными мостиками.
42. Полипептид, содержащий аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
7, 8, 9, 10 и 11.
43. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96-108.
44. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96-108.
45. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96-108.
По доверенности
553370
Фиг. IB
GDF15
j3 4 5
1 ARNGDHCPLG PGRCCRLaTV RASLEDLGWA DWYLSPREVQ VTMCIGACPS
I 1 !
51 QFRAANMHAQ IKTSLHRLKP DTVPAPCCVP ASYNPMVblQ KTDTGVSLQT 101 YDDLLAKEK^H CI
О i _ : __ __ ______ : ____
TGЈj33 > | 2 3
ySGfCj
I 1 4 5
1 ALDTNYCFRN LEENCCVRPL YIDFRQDLGW KWVHEPKGYY ANFСSGP(JPY
51 LRSADTTHST VLGLYNTLNP EASASPCCVP QDLEPLTILY
YVGRTPKVEQ
Г(tm)~~"
101 LSNMVVKSCK CS
8 L_ 9
Фиг. 2
Фиг. 5А
Фиг. 5В
Фиг. 6
\ "А Т S t Z
> > "
s / г
ч / -С / -
^ rJ т
Носитель FP1, 0,1 нмоль/кг FP1, 1 нмоль/кг FP1, 10 нмоль/кг ЕШ Розиглитазон, 10 мг/кг с кормом
Дни после введения начальной дозы
Фиг. 8
~(r)" Носитель (PBS) "да" FP1, 1 нмоль/кг FP1, 10 нмоль/кг
Фиг. 9
Носитель (PBS) ~(r)~ FP1, 1 нмоль/кг -a- FP1, 10 нмоль/кг
-8 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Дни после введения начальной дозы
Время (дни)
Фиг. 10
Время (дни)
Фиг. 11
Время (дни)
Фиг. 12
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 Время (дни)
Фиг. 16
Фиг. 17
Ш Носитель (PBS) Щ HSA-GDF15 (197-308), 8 нмоль/кг Ш HSA-GDF15 (201-308), 8 нмоль/кг Ш HSA-GDF15 (202-308), 8 нмоль/кг Щ HSA-GDF15 (211-308), 8 нмоль/кг
Часов после введения препарата
Фиг. 18
Фиг. 19
Фиг. 20
Фиг. 21А
Фиг. 22А
15-
Носитель
FP2, 0,3 нмоль/кг
FP2, 1,0 нмоль/кг
FP2, 3,0 нмоль/кг FP2, 10 нмоль/кг Розиглитазон, 10 мг/кг с кормом
Минуты после стимуляции глюкозой
Фиг. 23
НШ Носитель
Ш FP2, 0,3 нмоль/кг
Ш FP2, 1,0 нмоль/кг
ЦЦ FP2, 3,0 нмоль/кг
В FP2, 10 нмоль/кг
ШП Розиглитазон, 10 мг/кг с кормом
Дни после введения начальной дозы
Время (дни)
Фиг. 25
Фиг. 26
0 1 2 3 4 5 6 7
Время (дни)
Фиг. 27
Фиг. 29
130 г 120 [
0 ч. 4 ч. 24 ч. 48 ч.
Момент времени
BFP2 (женщина) QFP2 (мужчина)
Фиг. 31
=Г 25G0-!
Ф х
S 2 GGS
2 с;
1500-
Ч 10ОО-си Ф
I 5004 л ц ф
гомодимер (HSA-GDF15)x2 гетеродимер (HSA-GDF15:GDF15)
о о
о о
нмоль, log
Фиг. 32
Дней после Rx
Фиг. 33
Дней после Rx
Фиг. 34
Фиг. 35
(19)
Ill
110
113
113
136
136
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
<220>
<220>
<223> вариант HSA
<223> вариант HSA
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gin Asn Leu lie Lys Gin Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gin Leu Gly Glu
385 390 395 400
Gin Asn Leu lie Lys Gin Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gin Leu Gly Glu
385 390 395 400
<400> 4
<400> 4
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
35 40 45
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
35 40 45
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
50 55 60
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
50 55 60
<400> 9
His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg
1 5 10 15
<400> 9
His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg
1 5 10 15
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile 100 105
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile 100 105
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40
<220>
<220>
<223> Линкер
<223> Линкер
<400> 22
<400> 22
Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly Thr
1 5 10
Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly Thr
1 5 10
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gin Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gin Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
<400> 30
<400> 30
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
<400> 31
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
<400> 31
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gin Ile Lys Lys Gin Thr Ala
515 520 525
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gin Ile Lys Lys Gin Thr Ala
515 520 525
<210> 32 <211> 24
<210> 32 <211> 24
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Cys Ile 705
Cys Ile 705
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
<210> 38 <211> 20
<210> 38 <211> 20
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
595 600 605
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
<400> 53
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
<400> 53
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
<210> 58 <211> 719
<210> 58 <211> 719
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
<220>
<220>
<223> гибридный белок
<223> гибридный белок
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
85 90 95
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
625 630 635 640
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
690 695 700
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
<210> 76 <211> 2157
<210> 76 <211> 2157
<223> последовательность, кодирующая гибридный белок
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Glu Phe His His His His His His Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
1 5 10 15
Glu Phe His His His His His His Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
1 5 10 15
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
20 25 30
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
260 265 270
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
275 280 285
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
515 520 525
Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
530 535 540
Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
530 535 540
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
690 695 700
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
690 695 700
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
705 710 715 720
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
705 710 715 720
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
675 680 685
Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala
675 680 685
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
690 695 700
Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys
690 695 700
Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu
165 170 175
Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu
165 170 175
Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala
180 185 190
Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala
180 185 190
Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly
420 425 430
Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly
420 425 430
Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu
435 440 445
Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu
435 440 445
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
675 680 685
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
675 680 685
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
690 695 700
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
690 695 700
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala
580 585 590
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala
580 585 590
Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly
595 600 605
Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly
595 600 605
<400> 117
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
<400> 117
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
690 695 700
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
690 695 700
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
705 710 715
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro
625 630 635 640
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu Gly Pro
625 630 635 640
Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
645 650 655
Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu
645 650 655
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
675 680 685
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
690 695 700
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly
595 600 605
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly
595 600 605
Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu
610 615 620
Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp His Cys Pro Leu
610 615 620
137
137
1/39
1/39
2/39
2/39
2/39
2/39
2/39
2/39
8/39
8/39
9/39
9/39
10/39
10/39
10/39
10/39
11/39
11/39
11/39
11/39
11/39
11/39
12/39
12/39
15/39
15/39
19/39
19/39
19/39
19/39
19/39
19/39
20/39
20/39
25/39
25/39
25/39
25/39
27/39
27/39
27/39
27/39
29/39
29/39
30/39
30/39
35/39
35/39
36/39
36/39