EA201892509A1 20190430 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2019\PDF/201892509 Полный текст описания [**] EA201892509 20131112 Регистрационный номер и дата заявки US61/725,859 20121113 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21904 Номер бюллетеня [**] АНТИТЕЛА К ГЕМАГГЛЮТИНИНУ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ Название документа [8] A61K 39/42, [8] C07K 16/10, [8] A61P 31/16 Индексы МПК [US] Сюй Минь, [US] Балаж Мерседес, [US] Чай Нин, [US] Чанг Ненси, [US] Чиу Генри, [US] Цзинь Чжаоюй, [US] Линь Чжунхуа, [US] Лупардус Патрик Дж., [US] Накамура Джеральд Р., [US] Парк Хёнджу, [US] Свем Ли Р. Сведения об авторах [US] ДЖЕНЕНТЕК, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201892509a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Описаны антитела к гемагглютинину, содержащие антитела к гемагглютинину композиции и способы их применения.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Описаны антитела к гемагглютинину, содержащие антитела к гемагглютинину композиции и способы их применения.


Евразийское (21) 201892509 (13) A1
патентное
ведомство
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки
2013.11.12
(51) Int. Cl.
A61K39/42 (2006.01) C07K16/10 (2006.01) A61P31/16 (2006.01)
(54) АНТИТЕЛА К ГЕМАГГЛЮТИНИНУ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
(31) (32)
61/725,859
2012.11.13
(33) US
(62) 201590731; 2013.11.12
(71) Заявитель: ДЖЕНЕНТЕК, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Сюй Минь, Балаж Мерседес, Чай Нин, Чанг Ненси, Чиу Генри, Цзинь Чжаоюй, Линь Чжунхуа, Лупардус Патрик Дж., Накамура Джеральд Р., Парк Хёнджу, Свем Ли Р. (US)
(74) Представитель:
Угрюмов В.М., Глухарёва А.О., Гизатуллина Е.М., Строкова О.В., Лебедев В.В., Гизатуллин Ш.Ф., Осипенко Н.В., Костюшенкова М.Ю., Парамонова К.В. (RU)
АНТИТЕЛА К ГЕМАГГЛЮТИНИНУ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
ОПИСАНИЕ
Родственные заявки
Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США № 61/725859, поданной 13 ноября 2012 г., полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Перечень последовательностей
Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Указанная копия ASCII, созданная 22 октября 2013 г., названа P4982Rl_US_SL.txt и ее размер составляет 222627 байт.
Область техники
Настоящее изобретение включает антитела к гемагглютинину, содержащие антитела к гемагглютинину композиции и способы их применения.
Уровень техники
Ежегодно во всем мире инфекция вируса гриппа вызывает три - пять миллионов случаев тяжелой болезни и 250000 - 500000 смертельных случаев. Только в США ежегодно 5% - 20% жителей инфицируются вирусом гриппа, причем большинство указанных инфекций вызвано вирусом гриппа А. (Смотрите, например, Dushoff et al, (2006) Am J Epidemiology 163:181-187; Thompson et al., (2004) JAMA 292:1333-1340; Thompson et al, (2003) JAMA 289:179-186.) Ежегодно в США приблизительно 200000 людей госпитализируют со связанными с гриппом осложнениями, приводящими к 7000 - 30000 смертельным исходам в год. Связанная с инфекцией вируса гриппа нагрузка на затраты на здравоохранение и снижение производительности труда являются очень дорогостоящими. Госпитализация и смертельные исходы могут происходить в таких группах с высоким риском, как пожилые люди, дети и хронические больные.
Вирусы гриппа представляют собой сегментированные заключенные в мембрану вирусы с отрицательной нитью РНК, принадлежащие семейству Orthomyxoviridae. Вирус гриппа А состоит из 9 структурных белков и 1 неструктурного белка, которые включают в себя три белка вирусной поверхности: гемагглютинин (НА или Н), нейраминидазу (NA или N) и белок матрикса 2 (М2). Сегментированная природа генома вируса гриппа обеспечивает возможность того, что при смешанном инфицировании клетки различными штаммами вируса гриппа имеет место механизм генетической реассортации (т.е. обмена геномными сегментами). Ежегодные эпидемии гриппа происходят, когда изменяются антигенные свойства белков вирусной поверхности: гемагглютинина и нейраминидазы. Механизм измененной антигенности является двойственным: антигенный шифт, вызванный генетической реаранжировкой между человеческими и животными вирусами после коинфицирования клеток-хозяев по меньшей мере двумя вирусными подтипами, который может вызвать пандемию; и антигенный дрейф, вызванный небольшими изменениями в белках гемагглютинине и нейраминидазе на вирусной поверхности, который может вызвать эпидемии гриппа.
Вирусы гриппа А можно дополнительно классифицировать на разные подтипы в зависимости от различных вирусных белков гемагглютинина и нейраминидазы, расположенных на их поверхности. Каждый подтип вируса гриппа А определяется комбинацией своих белков гемагглютинина и нейраминидазы. Существуют 16 известных подтипов НА (HI - HI6) и 9 известных подтипов NA (N1 - N9). 16 подтипов гемагглютинина дополнительно классифицируют на две филогенетических группы: группа 1 включает в себя подтипы гемагглютинина HI, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9, НИ, Н12, Н13 и Н16; группа 2 включает в себя подтипы гемагглютинина НЗ, Н4, Н7, НЮ, Н14 и Н15.
Гемагглютинин стимулирует прикрепление вируса и вход в клетку-хозяина; нейраминидаза необходима для баддинга вируса из инфицированной клетки. Гемагглютинин вируса гриппа А содержит две структурно отдельных области -область глобулярной головки и область "ножки", или стеблевую область. Область глобулярной головки содержит сайт связывания с рецептором, отвечающий за прикрепление вируса к клетке-мишени. Область "ножки" (или стебля) гемагглютинина содержит слитый пептид, который необходим для слияния мембран между оболочкой вируса и эндосомальной мембраной инфицированной клетки. (Смотрите, например,
Bouvier and Palese (2008) Vaccine 26 Suppl 4: D49-53; Wiley et al, (1987) Ann Rev Biochem 556:365-394.)
Современное лечение инфекции вируса гриппа включает такие ингибиторы нейраминидазы, как осельтамивир и занамивир. Осельтамивир представляет собой широко используемый возможный вариант профилактического и раннего терапевтического воздействия на инфекцию вируса гриппа А. (Смотрите, например, Kandel и Hartshorn (2001) BioDrugs: Clinical Immunotherapy, Biopharmaceuticals and Gene Therapy 15:303-323; Nicholson et al, (2000) Lancet 355:1845-1850; Treanor et al, (2000) JAMA 283:1016-1024; и Welliver et al, (2001) JAMA 285:748-754.) Тем не менее, лечение осельтамивиром должно начинаться не позже 48 часов от появления симптома для обеспечения существенной клинической эффективности. (Смотрите, например, Aoki et al (2003) J Antimicrobial Chemotherapy 51:123-129.) Указанная необходимость отрицательно сказывается на способности осельтамивира лечить тяжелобольных пациентов, которые, как правило, находятся за пределами оптимального 48-часового терапевтического окна во время обращения за медицинской помощью. Следовательно, в последнее время значительный фокус был направлен на выявление терапевтических средств от вируса гриппа для лечения госпитализированных пациентов, инфицированных вирусом гриппа. Одна стратегия была сфокусирована на разработке человеческих моноклональных антител (mAb), которые нацеливаются на высококонсервативный эпитоп на "ножке" гемагглютинина вируса гриппа А. (Смотрите, например, Corti et al., (2011) Science 333:850-856; Ekiert et al, (2009) Science 324:246-251; Ekiert et al, (2011) Science 333:843-850; Sui etal, (2009) Nature Structural & Molecular Biology 16:265-273; Dreyfus et al, (2012) Science 337:1343-1348; Wu et al, (2012) J Virology 2012.09.034; Clementi et al, (2011) PLoS One 6:1-10. Также смотрите международные патентные публикации №№ WO2009/115972, WO2011/117848, WO2008/110937, WO2010/010466, WO2008/028946, WO2010/130636, WO2012/021786, WO2010/073647, WO2011/160083, WO2011/111966, WO2002/46235 и WO2009/053604; патенты США №№ 5631350 и 5589174.)
В некоторых сообщениях описаны моноклональные антитела (mAb), которые связывают гемагглютинин и широко нейтрализуют вирус гриппа А. Например, Corti с соавт. (ранее) описали антитело FI6v3, которое было клонировано из человеческой плзматической клетки и, как показано, нейтрализует вирусы гриппа А человека, принадлежащие как к подтипам гемагглютинина группы 1 и группы 2. mAb FI6v3 было
обнаружено в результате героической попытки проанализировать приблизительно 104000 плазматических клеток человека. Кроме того, Dreyfus с соавт. (ранее) недавно описали идентификацию антитела CR9114 с помощью пэннинга фагового дисплея; было показано, что антитело CR9114 связывается с высококонсервативным эпитопом "ножки", общим для гемагглютинина вируса гриппа А и гемагглютинина вируса гриппа В.
Несмотря на указанные сообщения, в настоящей области техники продолжает существовать потребность в новых видах терапии вируса гриппа А, эффективных против подтипов вируса гриппа А группы 1 и группы 2. Настоящее изобретение удовлетворяет указанную потребность и включает другие преимущества в лечении инфекции вируса гриппа А.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение включает антитела к гемагглютинину, содержащие антитела к гемагглютинину композиции и способы их применения.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 191;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш NO: 193;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш NO: 194;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш NO: 195;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш NO: 196; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш NO: 197.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к
гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ Ш NO: 235.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ Ш NO: 234.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 234, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 235.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 139.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 147.
Согласно некоторым вариантам осуществления выделенное антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 147, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 139.
Настоящее изобретение также включает выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение также включает векторы, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение также включает клетки-хозяева, содержащие нуклеиновую кислоту или вектор согласно настоящему изобретению. Вектор может относиться к любому типу, например, представлять собой рекомбинантный вектор, такой как экспрессионный вектор. Можно использовать любую из разнообразия клеток-хозяев. Согласно одному варианту осуществления клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку, например, Е. coli. Согласно другому варианту осуществления клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, например, клетку млекопитающего, такую как клетку яичника китайского хомячка (СНО).
Настоящее изобретение дополнительно включает способ получения антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению. Например, настоящее изобретение включает способы получения антитела к гемагглютинину (которое, как определено в настоящем документе, включает в себя полноразмерное антитело и его фрагменты), причем способ включает экспрессию в подходящей клетке-хозяине рекомбинантного
вектора согласно настоящему изобретению, кодирующего антитело к гемагглютинину или его фрагменты так, чтобы получить антитело или его фрагменты. Согласно некоторым вариантам осуществления способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению (или его фрагменты) так, чтобы экспрессировалась нуклеиновая кислота. Способ может дополнительно содержать выделение антитела к гемагглютинину или его фрагментов из культуры клетки-хозяина или среды культивирования клетки-хозяина.
Настоящее изобретение также включает композиции, содержащие антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению. Композиция может дополнительно содержать дополнительное терапевтическое средство (например, такой ингибитор нейраминидазы, как осельтамивир или занамивир; другое антитело, такое как другое антитело к гемагглютинину или антитело к М2; и т.д.).
Настоящее изобретение также включает композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в профилактике инфекции вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в профилактике инфекции вируса гриппа А. Настоящее изобретение дополнительно включает композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в лечении инфекции вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в лечении инфекции вируса гриппа А. Настоящее изобретение дополнительно включает композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в ингибировании инфекции вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению для применения в ингибировании инфекции вируса гриппа А.
Композиции, содержащие антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, также можно использовать в производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предусмотрено для применения в ингибировании,
лечении или профилактике инфекции вируса гриппа А. Согласно определенным вариантам осуществления лекарственное средство может дополнительно содержать дополнительное терапевтическое средство (например, такой ингибитор нейраминидазы, как осельтамивир или занамивир; другое антитело, такое как другое антитело к гемагглютинину или антитело к М2; и т.д.).
Настоящее изобретение также включает способ ингибирования инфекции вируса гриппа А, причем способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, содержащей антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, тем самым ингибируя инфекцию вируса гриппа А. Настоящее изобретение также включает способ лечения инфекции вируса гриппа А, причем способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, содержащей антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, тем самым обеспечивая лечение инфекции вируса гриппа А. Настоящее изобретение также включает способ профилактики инфекции вируса гриппа А, причем способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, содержащей антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, тем самым обеспечивая профилактику инфекции вируса гриппа А.
Настоящее изобретение также включает способ ингибирования, лечения или профилактики инфекции вируса гриппа А, причем способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, содержащей антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, и введение пациенту эффективного количества дополнительного терапевтического средства, тем самым обеспечивая ингибирование, лечение или профилактику инфекции вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой такой ингибитор нейраминидазы, как осельтамивир или занамивир. Согласно другим вариантам осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой другое антитело к гемагглютинину. Согласно другим вариантам осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитело к М2. Согласно различным аспектам такого комбинированного лечения терапевтические средства вводят приблизительно в то же время, вводят вместе или вводят один за другим или последовательно. Согласно конкретным вариантам осуществления ингибитор нейраминидазы вводят перед введением антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает применение антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению в производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предусмотрено для применения в ингибировании, лечении или профилактике инфекции вируса гриппа А. Согласно определенным вариантам осуществления лекарственное средство может дополнительно содержать дополнительное терапевтическое средство (например, такой ингибитор нейраминидазы, как осельтамивир или занамивир; другое антитело, такое как другое антитело к гемагглютинину или антитело к М2; и т.д.).
Согласно различным аспектам антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению связывает гемагглютинин. Согласно некоторым аспектам антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению связывает гемагглютинин группы
1, связывает гемагглютинин группы 2 или связывает гемагглютинин группы 1 и группы
2. Согласно другим аспектам антитело к гемагглютинину согласно настоящему
изобретению связывает гемагглютинин и нейтрализует вирус гриппа А. Согласно
некоторым вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему
изобретению нейтрализует вирус гриппа A in vitro, in vivo или in vitro и in vivo.
Краткое описание чертежей
На фигурах 1А и 1В представлены данные, показывающие анализ FACS анти-гемагглютинин-положительных (гемагглютинин НЗ+ и гемагглютинин Н1+) плазмобластов, начиная с 7 дня после вакцинации мононуклеаров периферической крови человека (РВМС) перед обогащением в отношении SCID/ врожденного отсутствия клеток-естественных киллеров у мышей (фигура 1А) и с 8 дня после внутриселезеночной имплантации после обогащения в отношении SCID/ врожденного отсутствия клеток-естественных киллеров у мышей с предварительно приготовленной антигенной смеси и без нее (фигура 1В) на верхней и нижней панелях, соответственно.
На фигуре 2 представлены данные, показывающие анализ спленоцитов, полученных, начиная с 8 дня после внутриселезеночной имплантации РВМС от отдельных мышей с SCID/мышей с врожденным отсутствием клеток-естественных киллеров без предварительно приготовленной смеси РВМС/антиген (кружки) и с предварительно приготовленной смесью РВМС/ антиген (квадраты), в виде процентное отношения гемагглютинин (Н1)+/С038ы§;11 плазмобластов. Треугольник указывает на мышей, которые представляют гемагглютинин Н1+ плазмобласты.
На фигуре 3 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 антителами к гемагглютинину согласно настоящему изобретению.
На фигурах 4А и 4В представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 (фигура 4А) и группы 2 (фигура 4В) моноклональным антителом 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш N0: 177).
На фигурах 5А и 5В представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 (фигура 5А) и группы 2 (фигура 5В) моноклональным антителом 81.39 SVSH-NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ IDNO: 171).
На фигуре 6 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 моноклональным антителом 39.18 ВН.
На фигуре 7 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 моноклональным антителом 36.89.
На фигуре 8 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 моноклональным антителом mAb9 01F3.
На фигуре 9 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию различных штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 моноклональным антителом шАЬ23 06С2.
На фигуре 10 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию экспрессирующего гемагглютинин Н5 псевдовируса моноклональным антителом 39.29 NCvl.
На фигуре 11 представлены данные, показывающие in vitro нейтрализацию вируса птичьего гриппа H7N7 моноклональным антителом 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ ID N0: 177).
На фигурах 12А, 12В, 12С и 12D представлены данные, показывающие процентную выживаемость мышей, инфицированных различными штаммами вируса гриппа A (A/PR/8/1934 (PR8), фигура 12А; A/Port Chalmers/1/1973 (РС73), фигура 12В; A/Hong Kong/1/1968 (НК68), фигура 12С); и A/Aichi/2/1968 (Aichi68), фигура 12D) и
которым вводили различные количества моноклонального антитела 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ ID N0: 177).
На фигуре 13 представлены данные, показывающие процентную выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа A A/PR/8/1934 и которым вводили различные количества моноклонального антитела 39.29 NCvl.
На фигуре 14 представлены данные, показывающие процентную выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа A A/Hong Kong/1/1968 (вирус гриппа А, характеризующийся высоким значением IC50) и которым вводили различные количества моноклонального антитела 39.29 NCvl.
На фигуре 15 представлены данные, показывающие процентную выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа A A/Port Chalmers/1/1973 и которым вводили различные количества моноклонального антитела 39.29 NCvl.
На фигуре 16 представлены данные, показывающие процентную выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа A A/Aichi/2/1968 и которым вводили различные количества моноклонального антитела 39.29 NCvl.
На фигуре 17 представлены данные сравнения процентной выживаемости мышей, инфицированных штаммом A/PR/8/1934 вируса гриппа А и которым вводили 50:50 смесь моноклонального антитела 39.29 D8C2 и моноклонального антитела 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ ГО N0: 177) или осельтамивир (Tamiflu(r)).
На фигуре 18 представлены данные, показывающие сравнение процентной выживаемости мышей, инфицированных штаммом A/PR/8/1934 вируса гриппа А и которым вводили моноклональное антитело 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ ГО N0: 177), осельтамивир (Tamiflu(r)) или комбинацию моноклонального антитела 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ ГО N0: 177) и осельтамивира.
На фигурах 19А и 19В представлены данные сравнения процентной выживаемости хорьков, инфицированных штаммом A/Vietnam/1203/04 (H5N1) вируса гриппа А и которым вводили моноклональное антитело 39.29 D8C2 (фигура 19А), моноклональное антитело 81.39 В1С1 (фигура 19В) или осельтамивир (Tamiflu(r)) через 48 часа или 72 часа после инфицирования.
На фигуре 20 показано выравнивание аминокислотных последовательностей гемагглютинина из гемагглютинина HI, Н2, НЗ, Н5 и Н7, показывающее контактирующие с гемагглютинином остатки (заштрихованные) моноклонального антитела 39.29NCvl и связывающий гемагглютинин эпитоп.
На фигурах 21А и 21В представлены данные экспериментов конкурентного ELISA различных моноклональных антител согласно настоящему изобретению, конкурирующих за связывание с меченным биотином моноклональным антителом 39.29 с гемагглютинином HI из A/NWS/1933 (фигура 21А) и гемагглютинином НЗ из А/НК/8/1968 (фигура 21В).
На фигурах 22А и 22В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 В1С1 (SEQ Ш N0: 113 и 111, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ ID NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 23А и 23В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVSH-NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ ГО NO: 171) (SEQ ГО NO: 117 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ ГО NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 24А и 24В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 B1F1 (SEQ ГО NO: 119 и 111, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ ГО NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 25А и 25В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVDS ("SVDS", раскрытое как SEQ ГО
NO: 172) (SEQ Ш NO: 113 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 26А и 26В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVSS ("SVSS", раскрытое как SEQ Ш NO: 173) (SEQ Ш NO: 122 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 27А и 27В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVDH ("SVDH", раскрытое как SEQ Ш NO: 174) (SEQ Ш NO: 124 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 28А и 28В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи mAb 81.39 SVSH ("SVSH", раскрытое как SEQ ID NO: 171) (SEQ ГО NO: 126 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ ГО NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 29А и 29В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVSH.NFP ("SVSH", раскрытое как SEQ ГО NO: 171) (SEQ ГО NO: 128 и 115, соответственно) с зародышевой линией
вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 30А и ЗОВ представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVDS.F ("SVDS", раскрытое как SEQ Ш N0: 172) (SEQ Ш N0: 130 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 31А и 31В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 81.39 SVDS.Y ("SVDS", раскрытое как SEQ Ш NO: 172) (SEQ Ш NO: 132 и 115, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 237, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 32А и 32В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 D2C4 (SEQ Ш NO: 136 и 134, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах ЗЗА и 33В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 D8C2 (SEQ Ш NO: 140 и 138,
соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 34А и 34В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 NCvl (SEQ Ш NO: 144 и 142, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 35 А и 35В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 D8E7 (SEQ Ш NO: 146 и 138, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 330*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 36А и 36В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 NFPP ("NFPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 175) (SEQ Ш NO: 150 и 148, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 37А и 37В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 NYPP ("NYPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 176) (SEQ Ш NO: 152 и 148, соответственно) с зародышевой линией вариабельной
области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 38А и 38В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) (SEQ Ш NO: 235 и 234, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 3-30*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV3-30*01) (SEQ Ш NO: 236 и 245, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 39А и 39В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.18 В11 (SEQ Ш NO: 156 и 154, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 169*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV1-69*01) (SEQ Ш NO: 236 и 238, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 40А и 40В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 39.18 Е12 (SEQ Ш NO: 156 и 158, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 3-15*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV3-15*01) и зародышевой линией вариабельной области 169*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV1-69*01) (SEQ Ш NO: 236 и 238, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 41А и 41В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 36.89 (SEQ Ш NO: 162 и 160, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 1-5*03 каппа цепи иммуноглобулина (IGKVl-5*03) и зародышевой линией вариабельной области 1-18*01 тяжелой цепи
иммуноглобулина (IGHV1-18*01) (SEQ Ш NO: 239 и 240, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 42А и 42В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 9.01F3 (SEQ Ш N0: 166 и 164, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 1-44*01 легкой цепи иммуноглобулина (IGKV1-44*01) и зародышевой линией вариабельной области 12*02*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHVl-2*02) (SEQ Ш NO: 241 и 242, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
На фигурах 43А и 43В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела 23.06С2 (SEQ Ш NO: 170 и 168, соответственно) с зародышевой линией вариабельной области 2-30*01 каппа цепи иммуноглобулина (IGKV2-30*01) и зародышевой линией вариабельной области 439*01 тяжелой цепи иммуноглобулина (IGHV4-39*01) (SEQ Ш NO: 243 и 244, соответственно). Аминокислоты пронумерованы согласно нумерации Kabat. Указаны CDR Kabat, Chothia и контактные CDR.
Подробное описание изобретения I. Определения
"Акцепторная каркасная область человека" для целей настоящего документа представляет собой каркасную область, содержащую аминокислотную последовательность каркасной области вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркасной области вариабельного домена тяжелой цепи (VH), происходящую из каркасной области иммуноглобулина человека или консенсусной каркасной области человека согласно определению ниже. Акцепторная каркасная область человека, "происходящая из" каркасной области иммуноглобулина человека или консенсусной каркасной области человека, может содержать такую же аминокислотную последовательность или она может содержать изменения аминокислотной последовательности. Согласно некоторым вариантам осуществления число аминокислотных изменений составляет 10 или меньше, 9 или меньше, 8 или меньше, 7
или меньше, 6 или меньше, 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. Согласно некоторым вариантам осуществления акцепторная каркасная область человека VL является идентичной в отношении последовательности с последовательностью каркасной области иммуноглобулина человека VL или последовательностью консенсусная каркасная область человека.
Термин "аффинность" относится к силе общей суммы нековалентных взаимодействий между отдельным сайтом связывания молекулы (например, антитела) и его партнера связывания (например, антигена). Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин "аффинность связывания" относится к исходной аффинности связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между участниками пары связывания (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y, как правило, может быть представлено с помощью константы диссоциации (Kd). Аффинность может быть измерена с помощью известных в настоящей области техники общепринятых способов, включающих в себя описанные в настоящем документе. Конкретные иллюстративные и приводимые в качестве примера варианты осуществления для измерения аффинности связывания описаны ниже.
Антитело "с созревшей аффинностью" относится к антителу с одним или несколькими изменениями в одной или нескольких гипервариабельных областях (HVR) по сравнению с родительским антителом, которое не обладает такими изменениями, приводящими к улучшению аффинности антитела к антигену.
Термины "антитело к гемагглютинину" и "антитело, которое связывается с гемагглютинином" относятся к антителу, которое связывает гемагглютинин со значительной аффинностью так, что антитело является применимым в качестве диагностического и/или терапевтического средства в нацеленном воздействии на гемагглютинин, включая в себя нацеленное воздействие на гемагглютинин вируса гриппа. Согласно одному варианту осуществления степень связывания антитела к гемагглютинину с неродственным, не являющимся гемагглютинином белком меньше чем приблизительно 10% от связывания антитела с гемагглютинином, что измеряют, например, с помощью радиоиммуноанализа (RIA). Согласно определенным вариантам осуществления антитело, которое связывается с гемагглютинином, характеризуется константой диссоциации (Kd), составляющей < 1 мкМ, < 100 нМ, < 10 нМ, < 1 нМ, < 0,1 нМ, < 0,01 нМ или < 0,001 нМ (например, 10"8М или меньше, например, от 10"8М до 10"13 М, например, от 10"9 М до 10"13 М). Согласно определенным вариантам
осуществления антитело к гемагглютинину связывается с эпитопом гемагглютинина, который является консервативным в отношении гемагглютинина из различных штаммов, подтипов и изолятов вируса гриппа А.
Термин "антитело" в настоящем документе используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая без ограничения моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют необходимую антигенсвязывающую активность.
Термин "фрагмент антитела" относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Фрагмент антитела также относится к молекуле, отличающейся от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает гемагглютинин и нейтрализует вирус гриппа А. Примеры фрагменты антител включают в себя без ограничения Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; диатела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител (например, scFv); и образованные из фрагментов антител мультиспецифические антитела.
Выражение "антитело, которое связывается с аналогичным эпитопом" в качестве ссылки на антитело относится к антителу, которое блокирует связывание рассматриваемого антитела с его антигеном в анализе конкурентного связывания на 50% или более, и наоборот, рассматриваемое антитело блокирует связывание антитела с его антигеном в анализе конкурентного связывания на 50% или более. Иллюстративный анализ конкурентного связывания представлен в настоящем документе.
Термин "химерное" антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи происходит из конкретного источника или вида, тогда как оставшаяся часть тяжелой и/или легкой цепи происходит из другого источника или вида.
Термин "класс" антитела относится к типу константного домена или константной области, который содержится в его тяжелой цепи. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgAi и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются а, 8, s, у и ц, соответственно.
Используемый в настоящем документе термин "цитотоксическое средство" относится к веществу, которое ингибирует или препятствует осуществлению функции клеток и/или вызывает разрушение клеток. Цитотоксические средства включают в себя без ограничения радиоактивные изотопы (например, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 и радиоактивные изотопы Lu); химиотерапевтические средства или лекарственные средства (например, метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие средства); ингибирующие рост средства; такие их ферменты и фрагменты, как нуклеолитические ферменты, антибиотики, и такие токсины, как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, включающие в себя их фрагменты и/или варианты, и раскрытые ниже различные противоопухолевые или противораковые средства.
"Эффекторные функции" относятся к таким биологическим активностям, присущим Fc-области антитела, которые изменяются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают в себя: связывание Clq и комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание Fc-рецептора; опосредованная антителами клеточная цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; отрицательная регуляция рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора); и В-клеточная активация.
"Эффективное количество" средства, например, фармацевтического состава, относится к количеству, эффективному, в необходимых дозировках и в течении необходимых периодов времени, для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата.
Используемый в настоящем документе термин "Fc-область" означает С-концевую область тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Термин включает Fc-области с нативной последовательностью и вариантные Fc-области. Согласно одному варианту осуществления Fc-область тяжелой цепи IgG человека распространяется от Cys226 или от Рго230 до карбокси-конца тяжелой цепи. Тем не менее, С-концевой лизин (Lys447) Fc-области может присутствовать или нет. Если иное не указано в настоящем документе, нумерация аминокислотных остатков в Fc-области или константной области соответствует Европейской (EU) системе нумерации, также имеющей название индекс
EU, как описано в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"Каркасный" или "FR" относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельной области (HVR). FR вариабельного домена, как правило, состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности HVR и FR, как правило, находятся в следующей последовательности в VH (или VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Термины "полноразмерное антитело", "интактное антитело" и "полное антитело" используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения антитела, характеризующегося структурой, по существу сходной с нативной структурой антитела, или характеризующегося тяжелыми цепями, которые содержат определенную в настоящем документе область Fc.
Термины "клетка-хозяин," "клеточная линия-хозяин" и "клеточная культура-хозяин" используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая в себя потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают в себя "трансформантов" и "трансформированные клетки", которые включают в себя первично трансформированную клетку и полученную из нее потомство независимо от числа пассажей. Потомство может быть не полностью идентичным в содержании нуклеиновых кислот относительно родительской клетки, но может содержать мутации. Мутантное потомство, которое характеризуется такой же функцией или биологической активностью, в отношении которых был проведен скрининг или отбор в исходно трансформированной клетке, включено в настоящий документ.
"Антитело человека" представляет собой антитело, которое содержит аминокислотную последовательность, соответствующую таковой у антитела, произведенного человеком или клеткой человека или происходящего из не относящегося к человеку источника, который использует репертуары антитела человека или другие кодирующие антитело человека последовательности. Это определение антитела человека специально исключает гуманизированное антитело, содержащее не относящиеся к человеку антигенсвязывающие остатки.
"Консенсусная каркасная область человека" представляет собой каркасную область, которая представляет собой наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки в отборе последовательностей каркасной области VL или VH иммуноглобулина
человека. Как правило, отбор последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека происходит из подгруппы последовательностей вариабельного домена. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу, как в Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Согласно одному варианту осуществления для VL подгруппа представляет собой подгруппу каппа I, как в Kabat et al, ранее. Согласно одному варианту осуществления для VH подгруппа представляет собой подгруппу Ш, как в Kabat et al, ранее.
"Гуманизированное" антитело относится к химерному антителу, содержащему аминокислотные остатки из не относящихся к человеку HVR и аминокислотные остатки из FR человека. Согласно определенным вариантам осуществления гуманизированное антитело будет содержать, по существу, все по меньшей мере из одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или, по существу, все HVR (например, CDR) соответствуют таковым у не относящегося к человеку антитела, и все или, по существу, все FR соответствуют таковым у антитела человека. Гуманизированное антитело необязательно может содержать по меньшей мере часть константной области антитела, происходящей из антитела человека. "Гуманизированная форма" антитела, например, не относящегося к человеку антитела, относится к антителу, которое подверглось гуманизации.
Используемый в настоящем документе термин "гипервариабельная область" или "HVR" относится к каждой из областей вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными в отношении последовательности ("определяющие комплементарность области" или "CDRs") и/или образуют структурно определенные петли ("гипервариабельные петли") и/или содержат контактирующие с антигеном остатки ("антигенные контакты"). Как правило, антитела содержат шесть HVR: три в VH (HI, Н2, НЗ) и три в VL (LI, L2, L3). Иллюстративные HVR в настоящем документе включают в себя:
(a) гипервариабельные петли, встречающиеся на аминокислотных остатках 2632 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (HI), 53-55 (Н2) и 96-101 (НЗ) (Chothia and Lesk, J. Mol Biol 196:901-917 (1987));
(b) CDR, встречающиеся на аминокислотных остатках 24-34 (LI), 50-56 (L2), 8997 (L3), 31-35b (HI), 50-65 (H2) и 95-102 (НЗ) (Kabat et al., Sequences of Proteins of
(a)
Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
(c) антигенные контакты, встречающиеся на аминокислотных остатках 27с-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (HI), 47-58 (Н2) и 93-101 (НЗ) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); и
(d) комбинации (a), (b) и/или (с), включая в себя аминокислотные остатки HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (HI), 26-35b (HI), 49-65 (Н2), 93-102 (НЗ) и 94-102 (НЗ).
Если иное не указано, остатки HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки FR) в настоящем документе нумеруют согласно Kabat et al., ранее.
"Иммуноконъюгат" представляет собой антитело, конъюгированное с одной или несколькими гетерологичными молекулами, включая в себя без ограничения цитотоксическое средство.
"Индивидуум" или "субъект" представляет собой млекопитающее. Млекопитающие включают в себя без ограничения одомашненных животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, людей и не относящихся к человеку приматов, таких как низшие приматы), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс). Согласно определенным вариантам осуществления индивидуум или субъект представляет собой человека.
"Выделенное" антитело представляет собой антитело, которое было выделено из компонента его естественного окружения. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело очищают до более чем 95% или 99% чистоты, что определяют с помощью, например, электрофоретических (например, SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия), изоэлектрическое фокусирование (IEF), капиллярный электрофорез) или хроматографических способов (например, ионный обмен или обращенно-фазовая ВЭЖХ). Для обзора способов оценки чистоты антитела, смотрите, например, Flatman et al., J. Chromatogr. В 848:79-87 (2007).
"Выделенная" нуклеиновая кислота относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая была выделена из компонента ее естественного окружения. Выделенная нуклеиновая кислота включает в себя молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, который, как правило, содержат молекулу нуклеиновой кислоты, но молекула
нуклеиновой кислоты присутствует внехромосомно или в положении на хромосоме, которое отличается от ее естественного положения на хромосоме.
"Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к гемагглютинину" относится к одной или нескольким молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим тяжелые и легкие цепи антитела (или их фрагменты), включая в себя такую(ие) молекулу(ы) нуклеиновой кислоты в одном векторе или отдельных векторах и такой(ие) молекулу(ы) нуклеиновой кислоты, присутствующую в одном или нескольких положениях в клетке-хозяине.
Используемый в настоящем документе термин "моноклональное антитело" относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е., отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантов антител, например, содержащих встречающиеся в природе мутации или возникшие в ходе получения препарата моноклональных антител, причем такие варианты, как правило, присутствуют в незначительных количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые, как правило, включают в себя различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело в препарате моноклональных антител направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, определение "моноклональное" указывает на характер антитела как антитела, полученного из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует рассматривать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, подлежащие использованию согласно настоящему изобретению моноклональные антитела могут быть получены с помощью разнообразных техник, включающих без ограничения способ на основе гибридом, способы на основе рекомбинантной ДНК, способы на основе фагового дисплея и способы, использующие трансгенных животных, содержащих часть или все локусы иммуноглобулина человека, причем такие способы и другие иллюстративные способы получения моноклональных антител описаны в настоящем документе.
"Свободное антитело" относится к антителу, которое не конъюгировано с гетерологическим фрагментом (например, цитотоксическим фрагментом) или радиоактивной меткой. Свободное антитело может присутствовать в фармацевтическом составе.
"Нативные антитела" относятся к встречающимся в природе молекулам иммуноглобулина с различными структурами. Например, нативные антитела IgG представляются собой гетеротетрамерные гликопротеины, составляющие приблизительно 150000 Да, состоящие из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, которые соединены дисульфидными связями. В направлении от N- к С-концу, каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область (VH), также имеющую название вариабельный тяжелый домен или вариабельный домен тяжелой цепи, за которым следуют константные домены (CHI, СН2 и СНЗ). Аналогично, в направлении от N- к С-концу, каждая легкая цепь содержит вариабельную область (VL), также имеющую название вариабельный легкий домен или вариабельный домен легкой цепи, за которым следует константный легкий (CL) домен. Легкая цепь антитела может принадлежать к одному из двух типов, имеющих название каппа (к) и лямбда (X), на основании аминокислотной последовательности ее константного домена.
Используемый термин "листок-вкладыш" относится к инструкциям, обычно вкладываемым в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировании, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
"Идентичность аминокислотной последовательности в процентах (%)" по отношению к выбранной полипептидной последовательности определяют как процентное отношение аминокислотных остатков в исследуемой последовательности, которые являются идентичными аминокислотным остаткам в выбранной полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения пробелов, при необходимости, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности, и без учета любых консервативных замен в качестве части идентичности последовательности. Выравнивание с целью определения процентной идентичности аминокислотной последовательности можно осуществить различными путями, находящимися в пределах квалификации специалистов в настоящей области техники, например, используя такое общедоступное программное обеспечение, как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в настоящей области техники могут определить соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включающие в
себя любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Однако в целях данного изобретения значения идентичности аминокислотных последовательностей в % получают с использованием компьютерной программы сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа сравнения последовательностей ALIGN-2 разработана Genentech, Inc., и подана с документацией для пользователей в Бюро регистрации авторских прав США, Washington D.C., 20559, где она зарегистрирована с регистрационным номером авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 общедоступной от Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния, или может быть скомпилирована из исходной программы. Программа ALIGN-2 должна быть компилирована для использования на операционной системе UNIX, включая цифровую версию UNLX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей установлены программой ALIGN-2 и не изменяются.
В ситуациях, где ALIGN-2 используется для сравнений аминокислотных последовательностей, идентичность аминокислотной последовательности в % для данной аминокислотной последовательности А по сравнению или по отношению к данной аминокислотной последовательности В (что можно альтернативно сформулировать как данная аминокислота последовательность А, которая характеризуется или содержит определенную идентичность аминокислотной последовательности в % по сравнению или по отношению к данной аминокислотной последовательности В) рассчитывают следующим образом:
100 х дробь X/Y
где X представляет собой число аминокислотных остатков, оцененных как идентичные совпадения с помощью программы выравнивания последовательностей ALIGN-2 в этом выравнивании программы А и В, и где Y представляет собой общее число аминокислотных остатков в В. Следует понимать, что в случае, когда длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, % идентичности аминокислотной последовательности А по отношению к В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В по отношению к А. Если конкретно не указано иное, все используемые в настоящем документе значения % идентичности аминокислотной последовательности получены, как описано в описанном выше абзаце с использованием компьютерной программы ALIGN-2.
Термин "фармацевтический состав" относится к препарату, который находится в такой форме, чтобы обеспечить возможность биологической активности активного ингредиента, содержащегося в нем, быть эффективной, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсическими для субъекта, которому будут вводить состав.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к ингредиенту в фармацевтическом составе, отличному от активного ингредиента, который является нетоксическими для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает в себя без ограничения буфер, вспомогательное вещество, стабилизатор или консервант.
Используемый в настоящем документе термин "гемагглютинин" относится к любому нативному гемагглютинину из любого источника вируса гриппа, если не указано иное. Термин включает "полноразмерный", непроцессированный гемагглютинин, а также любую форму гемагглютинина, которая является результатом процессинга в вирусе гриппа или инфицированной вирусом гриппа клетке. Термин также включает в себя встречающиеся в природе варианты гемагглютинина, например, сплайс-варианты или аллельные варианты. Аминокислотные последовательности иллюстративных белков гемагглютинина из различных штаммов вируса гриппа А показаны в SEQ ID N0: 225 (Н2 из АЛарап/305/1957), 226 (НЗ из A/Perth/16/2009), 227 (Н5 из A/Vietnam/1203/2004), 228 (Н7 из A/chicken/NSW/1/1997), 229 (HI из A/California/07/2009), 230 (HI из A/NSW/1933), 231 (НЗ из A/Hong Kong/8/1968), 232 (Н7 из A/Netherlands/219/2003) и 233 (A/South Carolina/1918).
Используемый в настоящем документе термин "лечение" (и такие его грамматические варианты, как "лечить" или "проведение лечения") относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественное течение жизни индивидуума, подлежащего лечению, и может быть проведено либо для профилактики, либо при развитии клинической патологии. Требуемые эффекты лечения включают в себя без ограничения профилактику возникновения или рецидива заболевания (например, профилактику возникновения или рецидива инфекции вируса гриппа А), снижение (например, процесс снижения) или облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или опосредованных патологических последствий заболевания, уменьшение скорости прогрессирования заболевания, уменьшение интенсивности или временное облегчение болезненного состояния и ремиссию или улучшенный прогноз. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела согласно настоящему
изобретению применяют для временной задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевание.
Термин "вариабельная область" или "вариабельный домен" относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, который вовлечен в связывание антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL, соответственно) нативного антитела, как правило, характеризуются аналогичными структурами, причем каждый домен содержит четыре консервативных каркасных области (FR) и три гипервариабельных области (HVR). (Смотрите, например, Kindt et al. КиЪу Immunology, 6th ed., W.H. Freeman и Co., page 91 (2007).) Одного домена VH или VL может быть достаточно для придания антигенсвязывающей специфичности. Кроме того, антитела, которые связывают конкретный антиген, можно выделить с использованием домена VH или VL из антитела, которое связывает антиген для скрининга библиотеки комплементарных доменов VL или VH, соответственно. Смотрите, например, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991).
Используемый в настоящем документе термин "вектор" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной переносить другую нуклеиновую кислоту, к которой она присоединена. Термин включает в себя вектор в качестве самореплицирующейся структуры нуклеиновой кислоты, а также вектор, встроенный в геном клетки - хозяина, в которую он был введен. Определенные векторы способны направлять экспрессию нуклеиновых кислот, к которым они функционально присоединены. Такие векторы в настоящем документе имеют название "экспрессионный векторы".
П. Композиции и способы
Согласно одному аспекту настоящее изобретение основано, частично, на антителах к гемагглютинину и их применениях. Согласно определенным вариантам осуществления предусмотрены антитела, которые связываются с гемагглютинином. Антитела согласно настоящему изобретению применимы, например, для диагностики, лечения или профилактики инфекции вируса гриппа А.
А. Иллюстративные антитела к гемагглютинину
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает выделенные антитела, которые связываются с гемагглютинином. Согласно определенным вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему
изобретению связывает гемагглютинин, связывает гемагглютинины группы 1, связывает гемагглютинины группы 2 или связывает гемагглютинины группы 1 и группы 2. Согласно другим вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению нейтрализует вирус гриппа A in vitro. Согласно другим вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению нейтрализует вирус гриппа A in vivo. Согласно другим вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает инфекцию вируса гриппа А, предотвращает инфекцию вируса гриппа А, ингибирует инфекцию вируса гриппа А или лечит инфекцию вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению предотвращает, ингибирует или снижает опосредованное гемагглютинином слияние между мембраной вируса гриппа и эндосомальными мембранами инфицированной клетки (таким образом, осуществляя профилактику, ингибирование или снижение проникновение вирусной РНК в цитоплазму инфицированной клетки, таким образом, осуществляя профилактику, ингибирование или снижение дополнительного распространения инфекции вируса гриппа.)
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 180; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 188.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 183; (е) HVR-
L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 189.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 188.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 184; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 188.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 185; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 188.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную
последовательность согласно SEQ Ш NO: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 183; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 188.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 183; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 190.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 190.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 186; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 189.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 179; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 180 и 181; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 182, 183, 184, 185 и 186; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 188, 189 и 190.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 180 и 181.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 182, 183, 184, 185 и 186; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 188, 189 и 190.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 180; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f)
HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ Ш N0: 188.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 183; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 189.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 188.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 184; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 188.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность согласно SEQ Ш NO: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 185; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ Ш N0: 188.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 183; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 188.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 183; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 190.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 182; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 190.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 178; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 179; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 181; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 186; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 187; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 189.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 111 и 115.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130 и 132.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 111 и 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDNO: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130 и 132.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО NO: 111, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 113.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 117.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш NO: 111, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 119.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 113.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 122.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 124.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 126.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 128.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную
область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 130.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 115, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 132.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: ПО, 114и120.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 112, 116, 118, 121, 123, 125, 127, 129 и 131.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: ПО, 114 и 120, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQIDNO: 112, 116, 118, 121, 123, 125, 127, 129 и 131.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: ПО, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 112.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 116.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: ПО, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 118.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную
последовательность согласно SEQ Ш NO: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 112.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 120, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 121.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 123.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 125.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 127.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 129.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 114, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 131.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 191; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 193; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-
L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 197.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 192; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 193; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 197.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 191; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 193; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 198.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 191; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 193; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 199.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 191 и 192; (Ь)
HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 193; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 194.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 195; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 197, 198 и 199.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 191; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 193; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 197.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 192; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 193; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 197.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 191; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 193; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 194; (d) HVR-L1, содержащую
аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 195; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ Ш N0: 198.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 191; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 193; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 194; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 195; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 196; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ГО N0: 199.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 134, 138, 142, 148 и 234.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 136, 140, 144, 146, 150, 152 и 235.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 134, 138, 142, 148 и 234, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 136, 140, 144, 146, 150, 152 и 235.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 134, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 136.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 138, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 140.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 142, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 144.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 138, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 146.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 148, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 150.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 148, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 152.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 148, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 140.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 234, и вариабельную
область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 235.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 133, 137, 141 и 147.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 135, 139, 143, 145, 149 и 151.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 133, 137, 141 и 147, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 135, 139, 143, 145, 149 и 151.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 133, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 135.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 137, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 139.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 141, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 143.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 137, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 145.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 147, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 149.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 147, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 151.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 147, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 139.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 200; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 201; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 202; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0 : 203; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 204; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 205.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 200; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 201; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 202.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0 : 203; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 204; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 205.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 200; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 201; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную
последовательность согласно SEQ Ш NO: 202; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0 : 203; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 204; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 205.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 154 и 158.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 156.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 154 и 158, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 156.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 154, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 156.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 158, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 156.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 153 и 157.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQIDNO: 155.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность,
выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 153 и 157, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 155.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 153, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 155.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 157, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 155.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 206; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 207; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 208; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 209; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 210; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 211.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 206; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 207; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 208.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 209; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 210; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 211.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно
SEQ Ш NO: 206; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш NO: 207; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 208; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 209; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 210; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 211.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 160.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 162.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 160, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 162.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 159.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQIDNO: 161.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 159, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 161.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 212; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 213; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 214; (d) HVR-L1,
содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 215; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 216; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 217.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 212; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 213; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 214.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 215; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 216; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 217.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 212; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 213; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 214; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 215; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 216; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 217.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 164.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 166.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 164, и вариабельную
область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 166.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 163.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 165.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 163, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 165.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину, содержащее по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 218; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 219; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 220; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 221; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 222; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 223.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VH, выбранные из (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 218; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 219; и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 220.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности HVR VL, выбранные из (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 221; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 222; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 223.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 218; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ Ш N0: 219; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 220; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 221; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 222; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 223.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 168.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 170.
Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение включает антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 168, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ IDNO: 170.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 167.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQIDNO: 169.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 167, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ГО N0: 169.
Согласно любому из приведенных выше вариантов осуществления антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению является гуманизированным. Согласно одному варианту осуществления антитело к гемагглютинину содержит такие HVR, как в любому из приведенных выше вариантов осуществления и дополнительно
содержит акцепторную каркасную область человека, например, каркасная область иммуноглобулина человека или консенсусную каркасную область человека.
Согласно другому аспекту антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), характеризующуюся по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ Ш NO: 111, 115, 134, 138, 142, 148, 154, 158, 160, 164, 168 и 234. Согласно определенным вариантам осуществления последовательность VH, характеризующаяся по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но антитело к гемагглютинину, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с гемагглютинином. Согласно определенным вариантам осуществления в общем 1-10 аминокислот были замещены, подвергнуты вставке и/или делеции в SEQ ID NO: 111, 115, 134, 138, 142, 148, 154, 158, 160, 164, 168 или 234. Согласно определенным вариантам осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами HVR (т.е. в FR). Необязательно антитело к гемагглютинину содержит последовательность VH в SEQ ГО NO: 111, 115, 134, 138, 142, 148, 154, 158, 160, 164, 168 или 234, включая в себя посттрансляционные модификации указанной последовательности.
Согласно другому аспекту предусмотрено антитело к гемагглютинину, причем антитело содержит вариабельный домен легкой цепи (VL), характеризующийся по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 136, 140, 144, 146, 150, 152, 156, 162, 166, 170 и 235. Согласно определенным вариантам осуществления последовательность VL, характеризующаяся по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но антитело к гемагглютинину, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с гемагглютинином. Согласно определенным вариантам осуществления в общем 1-10 аминокислот были замещены, подвергнуты вставке и/или делеции в SEQ ГО NO: 113,
117, 119, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 136, 140, 144, 146, 150, 152, 156, 162, 166, 170 или 235. Согласно определенным вариантам осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами HVR (т.е. в FR). Необязательно антитело к гемагглютинину содержит последовательность VL в SEQ Ш N0: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 136, 140, 144, 146, 150, 152, 156, 162, 166, 170 или 235, включая в себя посттрансляционные модификации указанной последовательности.
Согласно другому аспекту предусмотрено антитело к гемагглютинину, причем антитело содержит VH, как в любом из предусмотренных выше вариантов осуществления и VL, как в любом из предусмотренных выше вариантов осуществления. Согласно одному варианту осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 111, 115, 134, 138, 142, 148, 154, 158, 160, 164, 168 или 234 и SEQ ГО NO: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 136, 140, 144, 146, 150, 152, 156, 162, 166, 170 или 235, соответственно, включая в себя посттрансляционные модификации указанных последовательностей.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение включает антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и предусмотренное в настоящем документе антитело к гемагглютинину. Например, согласно определенным вариантам осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и антитело к гемагглютинину, содержащее последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 111 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 113; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 117; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 111 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 119; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 113; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 122; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 124; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 126; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 128; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 130; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 132; последовательность VH согласно SEQ ГО NO: 134 и последовательность VL согласно SEQ ГО NO: 136;
последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 138 и последовательность VL согласно SEQ Ш NO: 140; последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 142 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 144; последовательность VH согласно SEQ ID N0: 138 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 146; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 148 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 150; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 148 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 152; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 148 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 140; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 234 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 235; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 154 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 156; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 158 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 156; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 160 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 162; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 164 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 166; или последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 168 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 170.
Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения антитело к гемагглютинину согласно любому из приведенных выше вариантов осуществления представляет собой моноклональное антитело, включая в себя химерное, гуманизированное антитело или антитело человека. Согласно одному варианту осуществления антитело к гемагглютинину представляет собой фрагмент антитела, например, фрагмент Fv, Fab, Fab', scFv, диатело или фрагмент F(ab')2. Согласно другому варианту осуществления антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное антитело, например, антитело IgGl или другой класс или изотип антител, определенный в настоящем документе.
Согласно дополнительному аспекту антитело к гемагглютинину согласно любому из вышеперечисленных вариантов осуществления может характеризоваться любым из признаков, отдельно или в комбинации, описанных в разделах 1-7 ниже:
1. Аффинность антител
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело характеризуется константой диссоциации (Kd), составляющей < 1 мкМ, < 100 нМ, < 10 нМ, < 1 нМ, < 0,1 нМ, < 0,01 нМ или < 0,001 нМ (например, 10"8М или меньше, например, от 10"8М до 10"13М, например, от 10"9М до 10"13 М).
Согласно одному варианту осуществления Kd измеряют с помощью анализа связывания меченного изотопом антигена (RIA). Согласно одному варианту осуществления RIA проводят с вариантом Fab представляющего интерес антитела и его антигена. Например, аффинность связывания в растворе Fab по отношению к антигену измеряют путем приведения в равновесие Fab с минимальной концентрацией меченного (1251) антигена в присутствии серий титрования немеченого антигена, затем проводя захват связанного антигена с помощью покрытого антителами к Fab планшета (смотрите, например, Chen et al, J. Mol Biol. 293:865-881(1999)). Для создания условий для анализа, многолуночные планшеты MICROTITER(r) (Thermo Scientific) покрывают в течение ночи с помощью 5 мкг/мл захватывающего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ карбоната натрия (рН 9,6), и затем блокировали с помощью 2% (вес/объем) альбумина бычьей сыворотки в PBS в течение 2-5 часов при комнатной температуре (приблизительно 23°С). В неадсорбирующем планшете (Nunc № 269620) меченный 100 пМ или 26 пМ [1251] антиген смешивают с серийными разведениями представляющего интерес Fab (например, в соответствии с оценкой антитела к VEGF, Fab-12, в Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). Представляющий интерес Fab затем инкубируют в течение ночи; хотя инкубацию могут продолжать в течение более длительного периода (например, приблизительно 65 часов) для обеспечения достижения равновесного состояния. После этого, смеси переносят на планшет для захвата для инкубации при комнатной температуре (например, в течение одного часа). Затем удаляют раствор и планшеты отмывают восемь раз с помощью 0,1% полисорбата 20 (TWEEN-20(r)) в PBS. После высушивания планшетов добавляют 150 мкл/лунка сцинтилляционной жидкости (MICROSCINT-20(tm); Packard) и проводят количественную оценку планшетов на гамма-счетчике TOPCOUNT(tm) (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, который давал меньше или равное 20% от максимального связывания, выбирают для использования в анализах конкурентного связывания.
Согласно другому варианту осуществления Kd измеряют с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса BIACORE(r). Например, анализ с использованием BIACORE(r)-2000 или BIACORE (r)-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) проводят при 25°С с иммобилизированными антигенными СМ5 чипами при ~10 единиц ответа (RU). Согласно одному варианту осуществления биосенсорные чипы из карбоксиметилированного декстрана (СМ5, BIACORE, Inc.) активируют с помощью N-этил-Л^'-(3-диметиламинопропил)-карбодиимид гидрохлор ид a (EDC) и N
гидроксисукцинимида (NHS) согласно инструкциям поставщика. Антиген разбавляют с помощью 10 мМ ацетата натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед введением пробы с объемной скоростью потока, составляющей 5 мкл/минута для достижения приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После введения пробы антигена 1 М этаноламин вводят для блокирования непрореагированных групп. Для измерений кинетических параметров двукратные серийные разведения Fab (0,78 нМ -500 нМ) вводят в поверхностно-активное средство (PBST): PBS с 0,05% полисорбата 20 (TWEEN-20(tm)) при 25°С при объемной скорости потока, составляющей приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (касс) и скорости диссоциации (кдисс ) рассчитывают с использованием простой модели связывания в соотношении 1:1 Ленгмюра (программное обеспечение для проведение оценки BIACORE (r) версии 3.2) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (Kd) рассчитывают как соотношение кдисс /касс Смотрите, например, Chen et al, J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 10^ М~1 с~1 в описанном выше анализе поверхностного плазмонного резонанса, то скорость ассоциации можно определить с использованием техники гашения флуоресценции, в которой измеряется увеличение или уменьшение интенсивности испускания флуоресценции (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, 16 нм полоса пропускания) при 25°С 20 нМ антитела к антигену (форма Fab) в PBS, рН 7,2 в присутствии увеличивающихся концентраций антигена, что измеряют в таком спектрометре, как оснащенный режимом остановленного потока спектрофотометр (Aviv Instruments) или спектрофотометр 8000-series SLM-AMINCO (tm) (ThermoSpectronic) со смесительной кюветой. 2. Фрагменты антител
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антител включают в себя без ограничения фрагменты Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv и scFv и другие описанные ниже фрагменты. Для обзора определенных фрагментов антител, смотрите Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Для обзора фрагментов scFv, смотрите, например, Pluckthiin, в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); смотрите также международную патентную публикацию WO 93/16185 и патенты США №№ 5571894 и 5587458. Для обсуждения фрагментов Fab и F(ab')2, содержащих остатки
эпитопа связывания рецептора реутилизации и характеризующихся увеличенным периодом полужизни in vivo, смотрите патент США № 5869046.
Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут являться бивалентными или биспецифическими. Смотрите, например, Европейский патент ЕР 404097; международную патентную публикацию WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); и Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).
Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь вариабельный домен тяжелой цепи или его часть или весь вариабельный домен легкой цепи антитела или его часть. Согласно определенным вариантам осуществления однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (Domantis, Inc., Waltham, MA; смотрите, например, патент США № 6248516 В1).
Фрагменты антител можно получить с помощью различных техник, включающих в себя без ограничения протеолитическую обработку интактного антитела, а также получение с помощью рекомбинантных клеток - хозяев (например, Е. coli или фага), как описано в настоящем документе.
3. Химерные и гуманизированные антитела
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело представляет собой химерное антитело. Определенные химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567 и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Согласно одному примеру химерное антитело содержит не относящуюся к человеку вариабельную область (например, вариабельную область, происходящую от мыши, крысы, хомяка, кролика или не относящегося к человеку примата, такого как нечеловекообразная обезьяна) и константную область человека. Согласно дополнительному примеру химерное антитело представляет собой антитело "с переключенным классом", в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с исходным антителом. Химерные антитела включают в себя их антигенсвязывающие фрагменты.
Согласно определенным вариантам осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, не относящееся к человеку антитело является гуманизированным для снижения иммуногенности по отношению к людям, сохраняя при этом специфичность и аффинность исходного не
относящегося к человеку антитела. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или несколько вариабельных доменов, в которых HVR, например, CDR (или их части) происходят из не относящегося к человеку антитела, и FR (или их части) происходят из последовательностей антитела человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области человека. Согласно некоторым вариантам осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе замещены соответствующими остатками из не относящегося к человеку антитела (например, антитела, из которого происходят остатки HVR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.
Гуманизированные антитела и способы их получения рассматривают, например, в Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al, Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'I Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); патентах США №№ 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (описывающей прививание определяющей специфичность области (SDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (описывающей "изменение поверхности"); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (описывающей "перестановку FR"); и Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) и Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (описывающей подход "направляемой селекции" для перестановки FR).
Каркасные области человека, которые могут быть использованы для гуманизации, включают в себя без ограничения: каркасные области, выбранные с применением способа "наилучшего соответствия" (смотрите, например, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); каркасные области, происходящие из консенсусной последовательности антител человека конкретной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (смотрите, например, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); и Presta et al. J. Immunol, 151:2623 (1993)); зрелых (соматически созревших) каркасных областей человека или зародышевых каркасных областей человека (смотрите, например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасных областей, происходящих из библиотек скрининга FR (смотрите, например, Baca et al., J. Biol Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al., J. Biol Chem. 271:22611-22618 (1996)).
4. Антитела человека
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело представляет собой антитело человека. Антитела человека могут быть получены с использованием различных техник, известных в настоящей области техники, или с использованием техник, описанных в настоящем документе. Антитела человека описаны в общем в van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 36874 (2001) и Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
Антитела человека могут быть получены путем введения иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для образования интактных антител человека или интактных антител с вариабельными областями человека в ответ на сенсибилизацию антигеном. Такие животные, как правило, содержат все или часть локусов иммуноглобулина человека, которые замещают эндогенные локусы иммуноглобулина или которые присутствуют внехромосомно или случайным образом интегрированы в хромосомы животного. У таких трансгенных мышей эндогенные локусы иммуноглобулина, как правило, были инактивированы. Для обзора способов получения антител человека из трансгенных животных, смотрите Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). Смотрите также, например, патенты США №№ 6075181 и 6150584, описывающие технологию XENOMOUSE(tm); патент США № 5770429, описывающий технологию НиМАВ(r); патент США № 7041870, описывающий технологию К-М MOUSE(r), и публикация заявки на патент США № 2007/0061900, описывающий технологию VELOCIMOUSE(r)). Вариабельные области человека из интактных антител, образованных такими животными, могут быть дополнительно модифицированы, например, путем комбинации с различными константными областями человека.
Антитела человека также могут быть образованы способами на основе гибридом. Были описаны клеточные линии миеломы человека и мышино-человеческие гетеромиеломные клеточные линии для получения моноклональных антител человека (Смотрите, например, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); и Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).) Антитела человека, образованные посредством технологии на основе В-клеточной гибридомы человека также описаны в Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006). Дополнительные способы включают в себя описанные, например, в патенте США №
7189826 (описывающем получение моноклональных антител IgM человека из гибридомных клеточных линий) и Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (описывающей человек-человеческие гибридомы). Технология на основе гибридомы человека (технология Trioma) также описана в Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005).
Антитела человека также могут быть получены путем выделения последовательностей вариабельного домена клона Fv, выбранных из полученных от человека библиотек фагового дисплея. Такие последовательности вариабельного домена могут затем комбинироваться с необходимым константным доменом человека. Техники отбора антител человека из библиотек антител описаны ниже.
5. Полученные из библиотек антитела
Антитела согласно настоящему изобретению могут быть выделены с помощью скрининга комбинаторных библиотек в отношении антител с необходимой активностью или активностями. Например, разнообразные способы известны в настоящей области техники для создания библиотек фагового дисплея и скрининг таких библиотек в отношении антител с необходимыми характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в Hoogenboom et al. в Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, в Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); и Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).
Согласно определенным способам на основе фагового дисплея репертуары генов VH и VL отдельно клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПНР) и рекомбинируют случайным образом в фаговые библиотеки, которые могут затем подвергать скринингу в отношении связывающегося с антигеном фага, как описано в Winter et al., Ann. Rev. Immunol, 12: 433-455 (1994). Фаг, как правило, проявляет фрагменты антител, либо как одноцепочечные фрагменты Fv (scFv), либо как фрагменты Fab. Библиотеки из иммунизированных источников обеспечивают высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования
гибридом. Альтернативно, нативный репертуар может быть клонирован (например, из человека) для обеспечения одного источника антител к широкому диапазону чужих, а также своих антигенов без какой-либо иммунизации, как описано Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). В конце концов, нативные библиотеки могут быть получены синтетически путем клонирования неаранжированных V-генных сегментов из стволовых клеток, и с использованием праймеров 17ДР, содержащих случайную последовательность для кодирования высоковариабельных областей CDR3 и для осуществления реаранжировки in vitro, как описано Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки антител человека, включают в себя, например: патент США № 5750373 и публикации заявок на выдачу патентов США №№ 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.
Антитела или фрагменты антител, выделенные из библиотек антител человека, включают антитела человека или фрагменты антител человека согласно настоящему документу.
6. Мультиспецифические антитела
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело представляет собой мультиспецифические антитело, например, биспецифическое антитело. Мультиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела со специфичностями связывания по меньшей мере для двух различных сайтов. Согласно определенным вариантам осуществления одна из специфичностей связывания включается для гемагглютинина, а другая для любого другого антигена. Согласно определенным вариантам осуществления биспецифические антитела могут связываться с двумя различными эпитопами гемагглютинина. Биспецифические антитела также могут использоваться для локализации цитотоксических средств в клетках, которые экспрессируют гемагглютинин. Биспецифические антитела могут быть получены в виде полноразмерных антител или фрагментов антител.
Техники получения мультиспецифических антител включают в себя без ограничения рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелой цепи с легкой цепью иммуноглобулина, характеризующихся различными специфичностями (смотрите Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), международную патентную публикацию WO 93/08829 и Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)) и конструирование по
принципу "выступ-во-впадину" (смотрите, например, патент США № 5731168). Мультиспецифические антитела также могут быть получены путем конструирования электростатических регулирующих эффектов для создания Fc-гетеродимерных молекул антитела (международная патентная публикация WO 2009/089004А1); поперечного связывания двух или более антитела или фрагментов (смотрите, например, патент США № 4676980 и Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); использования лейциновых молний для получения биспецифических антител (смотрите, например, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)); использования технологии "диател" для создания биспецифических фрагментов антител (смотрите, например, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); и использования одноцепочечных димеров Fv (sFv) (смотрите, например, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); и получения триспецифических антител, описанных, например, в Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
Сконструированные антитела с тремя или более функциональными сайтами связывания антигена, включающие в себя "антитела осьминога" также включены в настоящий документ (смотрите, например, заявку на выдачу патента США № 2006/0025576А1).
Антитело или фрагмент в настоящем документе также включает в себя "FAb двойного действия" или "DAF", содержащий сайт связывания антигена, который связывает гемагглютинин, а также другой, отличный от указанного, антиген (смотрите, например, заявку на выдачу патента США № 2008/0069820).
7. Варианты антител
Согласно определенным вариантам осуществления включаются варианты аминокислотных последовательностей представленных в настоящем документе антител. Например, может быть необходимым улучшение аффинности связывания и/или других биологических свойств антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела могут быть получены путем введения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или с помощью пептидного синтеза. Такие модификации включают в себя, например, делеции и/или вставки и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Любая комбинация делеции, вставки и замены может осуществляться для получения конечного конструкта, при условии, что конечный конструкт обладает необходимыми характеристиками, например, связыванием с антигеном.
а) Варианты с заменами, вставками и делениями
Согласно определенным вариантам осуществления включаются варианты антител и/или варианты связывающих полипептидов с одной или несколькими аминокислотными заменами. Представляющие интерес сайты для мутагенеза с заменами включают в себя HVR и FR. Консервативные замены показаны в таблице 1 под заголовком "предпочтительные замены". Более существенные изменения представлены в таблице под заголовком "репрезентативные замены" и замены, дополнительно описанные ниже с указанием классов боковых цепей аминокислот. Аминокислотные замены могут быть введены в представляющее интерес антитело и/или связывающий полипептид, и продукты могут быть подвергнуты скринингу в отношении необходимой активности, например, сохраненного/улучшенного связывания с антигеном, сниженной иммуногенности или улучшенной ADCC или CDC.
Исходный остаток
Репрезентативные замены
Предпочтительные замены
Met (М)
Leu; Phe; He
Leu
Phe (F)
Trp; Leu; Val; He; Ala; Tyr
Туг
Pro (P)
Ala
Ala
Ser(S)
Thr
Thr
Thr (T)
Val; Ser
Ser
Trp(W)
Tyr; Phe
Tyr
Tyr(Y)
Trp; Phe; Thr; Ser
Phe
Val (V)
He; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин
Leu
По общим свойствам боковых цепей аминокислоты можно подразделить на следующие группы:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, He;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gin;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Туг, Phe.
Неконсервативные замены будут включать замену представителя одного их этих классов другим классом.
Одним из типов вариантов замен являются замены одного или нескольких остатков гипервариабельной области родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Как правило, полученный(е) вариант(ы), выбранный(е) для дальнейшего исследования, будет(ут) характеризоваться модификациями (например, улучшения) определенных биологических свойств (например, увеличенная аффинность, сниженная иммуногенность) относительно родительского антитела и/или будет(ут) характеризоваться по существу сохраненными определенными биологическими свойствами родительского антитела. Иллюстративный вариант замены представляет собой антитело с созревшей аффинностью, которое может быть получено общепринятым способом, например, с использованием
описанных в настоящем документе техник созревания аффинности на основе фагового дисплея. Кратко, один или несколько остатков HVR мутируют и варианты антител представляют на фаге и подвергают скринингу в отношении конкретной биологической активности (например, аффинности связывания).
Изменения (например, замены) могут быть произведены в HVR, например, для улучшения аффинности антитела. Такие изменения могут быть произведены в "горячих точках" HVR, т.е. остатках, кодируемых кодонами, которые подверглись мутации с высокой частотой в ходе процесса соматического созревания (смотрите, например, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)) и/или остатках, которые контактируют с антигеном, при этом полученную вариантную VH или VL анализируют в отношении аффинности связывания. Созревание аффинности путем конструирования и повторного отбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom et al. в Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al, ed., Humana Press, Totowa, NJ, (2001).) Согласно некоторым вариантам осуществления созревания аффинности в выбранные для созревания вариабельные гены вводят разнообразие с помощью любого из различных способов (например, 1ТЦР с внесением ошибок, перестановка цепей или направленный на олигонуклеотиды мутагенез). Затем создают вторичную библиотеку. Библиотеку затем подвергают скринингу для идентификации любых вариантов антител с необходимой аффинностью. Другой способ введения разнообразия включает направленные на HVR подходы, в которых рандомизируют несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков). Вовлеченные в связывание с антигеном остатки HVR могут быть специфически идентифицированы, например, с использованием сканирующего аланином мутагенеза или моделирования. Зачастую направленное воздействие производят, в частности, на CDR-H3 и CDR-L3.
Согласно определенным вариантам осуществления замены, вставки или делеции могут происходить с пределах одной или нескольких HVR при условии, что изменения по существу не изменяют способность антитела связывать антиген. Например, консервативные изменения (например, представленные в настоящем документе консервативные замены), которые по существу не изменяют аффинность связывания, могут быть произведены в HVR. Такие изменения могут находиться, например, за пределами контактирующих с антигеном остатков в HVR. Согласно определенным вариантам осуществления представленных выше вариантных последовательностей VH
и VL каждая HVR либо является неизмененной, либо содержит не более чем одну, две или три аминокислотных замены.
Применимый способ идентификации остатков или областей антитела, которые могут быть мишенью для мутагенеза, называется "сканирующий аланином мутагенез", описанный Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. Согласно указанному способу остаток или группу остатков-мишеней (например, такие заряженные остатки, как arg, asp, his, lys и glu) идентифицируют и замещают нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином) для определения того, подверглось ли воздействию взаимодействие антитела с антигеном. Дополнительные замены могут быть введены в положения аминокислот, демонстрирующие функциональную чувствительность к исходным заменам. Альтернативно или дополнительно, можно проанализировать кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело для идентификации участков контакта между антителом и антигеном. Такие контактирующие остатки и соседние остатки могут быть подвергнуты нацеленному воздействию или удалены в качестве кандидатов для замены. Варианты могут быть подвергнуты скринингу для определения того, содержат ли они необходимые свойства.
Вставки аминокислотной последовательности включают в себя амино- и/или карбокси-концевые слияния, составляющие в длину в диапазоне от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки одного или множественных аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры концевых вставок включают в себя антитело с N-концевым остатком метионила. Другие содержащие вставки варианты молекулы антитела включают в себя слияние на N- или С-конце антитела с ферментом (например, для ADEPT (опосредованной антителами терапии с использованием ферментов и пролекарственных средств)) или полипептидом, который увеличивает период полужизни антитела в сыворотке.
Ъ) Варианты гликозилирования
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело изменяют для увеличения или уменьшения степени, в которой антитело гликозилировано. Вставка или делеция сайтов гликозилирования в антитело может быть общепринятым способом осуществлено путем изменения аминокислотной последовательности так, чтобы создать или удалить один или несколько сайтов гликозилирования.
Если антитело содержит область Fc, прикрепленный к нему углевод может быть изменен. Образованные клетками млекопитающего нативные антитела, как правило, содержат разветвленный, состоящий из двух ветвей олигосахарид, который, как правило, прикреплен с помощью связи через атом N к Asn297 домена СН2 области Fc. Смотрите, например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать в себя различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, прикрепленную к GlcNAc в "ножке" состоящей из двух ветвей структуры олигосахарида. Согласно некоторым вариантам осуществления модификации олигосахарида в антителе согласно настоящему изобретению могут быть произведены для создания вариантов антител с определенными улучшенными свойствами.
Согласно одному варианту осуществления включаются варианты антител, характеризующиеся структурой углевода, в которой отсутствует фукоза, прикрепленная (напрямую или опосредованно) к области Fc. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяют путем расчета среднего количества фукозы в цепи сахара в положении Asn297, относительно суммы всех гликоструктур, прикрепленных к Asn 297 (например, сложные, гибридные структуры и структуры с высоким содержанием маннозы), что измеряют с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF, как описано, например, в международной патентной публикации WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина приблизительно в положении 297 в области Fc (европейская нумерация остатков области Fc); тем не менее, Asn297 также может быть расположен приблизительно на ± 3 аминокислоты выше или ниже от положения 297, т.е., между положениями 294 и 300, вследствие незначительных вариаций последовательностей в антителах. Такие варианты фукозилирования могут характеризоваться улучшенной функцией ADCC (опосредованная антителами клеточная цитотоксичность). Смотрите, например, патентные публикации США №№ US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к "дефукозилированным" или "фукозодефицитным" вариантам антител, включают в себя: заявку на выдачу патента США № US 2003/0157108; международные патентные публикации WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; заявки на выдачу патентов США №№ US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865;
международные патентные публикации WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных производить дефукозилированные антитела, включают в себя Lecl3 СНО клетки с недостаточностью в отношении фукозилирования белков (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на выдачу патента США № US 2003/0157108 Al, Presta, L; и международная патентная публикация WO 2004/056312 Al, Adams et al., особенно в примере 11), и такие нокаутные клеточные линии, как СНО клетки с нокаутом гена альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8 (смотрите, например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и международную патентную публикацию WO2003/085107).
Дополнительно включаются варианты антител с разделенными пополам олигосахаридами, например, в которых состоящий из двух ветвей олигосахарид, прикрепленный к области Fc антитела, разделен пополам с помощью GlcNAc. Такие варианты антител могут характеризоваться сниженным фукозилированием и/или улучшенной функцией ADCC. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в международной патентной публикации WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.) и заявке на выдачу патента США № US 2005/0123546 (Umana et al.). Также включаются варианты антител по меньшей мере с одним остатком галактозы в олигосахариде, прикрепленном к области Fc. Такие варианты антител могут характеризоваться улучшенной функцией CDC (комплементзависимая цитотоксичность). Такие варианты антител описаны, например, в международных патентных публикациях WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.).
с) Варианты области Fc
Согласно определенным вариантам осуществления одна или несколько аминокислотных модификаций могут быть введены в представленную в настоящем документе область Fc антитела, тем образуя вариант области Fc. Вариант области Fc может содержать последовательность области Fc человека (например, область Fc IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 человека), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) на одном или нескольких положениях аминокислоты.
Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение включает вариант антитела, характеризующийся некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, которые делают его необходимым кандидатом для применений, в которых период полужизни антитела in vivo является важным, но при этом определенные эффекторные функции (такие как комплементзависимая цитотоксичность и ADCC) являются излишними или вредными. In vitro и/или in vivo анализы цитотоксичности могут быть проведены для подтверждения снижения/истощения активностей CDC и/или ADCC. Например, анализы связывания с рецептором Fc (FcR) могут быть проведены, чтобы убедиться в том, что у антитела отсутствует связывание FcDR (следовательно, вероятно, отсутствует активность ADCC), но сохраняется способность к связыванию FcRn. Первичные клетки, опосредующие ADCC, клетки - естественные киллеры, экспрессируют только FcDDRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcD DRI, FcDDRII и FcDDRIII. Экспрессия FcR гематопоэтических клетках обобщенно представлена в таблице 3 на странице 464 Ravetch and Kinet, Аппи. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991). EH ограничивающие примеры анализов in vitro для оценки активности ADCC представляющей интерес молекулы описаны в патенте США № 5500362 (смотрите, например, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'I Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, let al,Proc. Nat'lAcad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (смотрите Bruggemann, M. et al, J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). Альтернативно, могут использоваться способы на основе нерадиоактивных анализов (смотрите, например, ACTFM нерадиоактивный анализ цитотоксичности для проточной цитометрии (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; и CytoTox 96(r) нерадиоактивный анализ цитотоксичности (Promega, Madison, WI). Применимые эффекторные клетки для таких анализов включают в себя мононуклеары периферической крови (РВМС) и клетки-естественные киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно, ADCC активность представляющей интерес молекулы может быть оценена in vivo, например, на такой животной модели, как модель, раскрытая в Clynes et al Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Анализы связывания Clq также могут быть проведены для подтверждения того, что антитело не способно связывать Clq и, следовательно, у него отсутствует активность CDC. Смотрите, например, ELISA анализ связывания Clq и СЗс в международных патентных публикациях WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента может быть проведен анализ CDC (смотрите, например, Gazzano-Santoro
et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. etal, Blood 101:1045-1052 (2003); и Cragg, M.S. и M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). Связывание FcRn и in vivo определения клиренса/периода полужизни также могут быть проведены с использованием известных в настоящей области техники способов (смотрите, например, Petkova, S.B. etal.Jnt'l. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006)).
Антитела со сниженной эффекторной функцией включают в себя антитела с заменой одного или нескольких остатков области Fc: 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (патент США № 6737056). Такие мутанты Fc включают в себя мутанты Fc с заменами двух или более положений аминокислот: 265, 269, 270, 297 и 327, включающие в себя так называемый мутант Fc "DANA" с заменой остатков 265 и 297 на аланин (патент США № 7332581).
Описаны определенные варианты антител с улучшенным или сниженным связыванием с FcRs. (Смотрите, например, патент США № 6737056; международную патентную публикацию WO 2004/056312 и Shields et al, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).) Согласно определенным вариантам осуществления вариант антитела содержит область Fc с одной или несколькими аминокислотными заменами, которые улучшают ADCC, например, замены в положениях 298, 333 и/или 334 области Fc (европейская нумерация остатков). Согласно некоторым вариантам осуществления осуществляют такие изменения в области Fc, которые приводят к измененному (т.е., либо улучшенному, либо сниженному) связыванию Clq и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC), например, как описано в патенте США № 6194551, международной патентной публикации WO 99/51642 и Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
Антитела с увеличенными периодами полужизни и улучшенным связыванием с неонатальным рецептором Fc (FcRn), которые отвечают за перенос материнских IgG плоду (Guyer et al, J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al, J. Immunol. 24:249 (1994)), описаны в заявке на выдачу патента США № US2005/0014934A1 (Hinton et al). Такие антитела содержат область Fc с одной или несколькими заменами в них, которые улучшают связывание области Fc с FcRn. Такие варианты Fc включают в себя варианты с заменами на одном или нескольких остатках области Fc: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, замену остатка области Fc 434 (патент США № 7371826). Смотрите также Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); патент США № 5648260; патент США №
5624821 и международную патентную публикацию WO 94/29351, относящиеся к другим примерам вариантов области Fc.
d) Сконструированные с помощью цистеина варианты антител
Согласно определенным вариантам осуществления может быть необходимым создать сконструированные с помощью цистеина антитела, например, "тиоМАЬ", в которых один или несколько остатков антитела замещены остатками цистеина. Согласно конкретным вариантам осуществления замещенные остатки находятся на доступных сайтах антитела. Путем замещения этих остатков цистеином реакционные тиольные группы в результате чего размещаются на доступных сайтах антитела и могут использоваться для конъюгации антитела с другими фрагментами, такими как фрагменты лекарственного средства или фрагменты линкер-лекарственное средство, для образования описанного дополнительно в настоящем документе иммуноконъюгата. Согласно определенным вариантам осуществления любой один или несколько следующих остатков могут быть замещены цистеином: V205 (согласно нумерации согласно Kabat) легкой цепи; All8 (согласно европейской нумерации) тяжелой цепи и S400 (согласно европейской нумерации) области Fc тяжелой цепи. Сконструированные с помощью цистеина антитела могут быть получены, как описано, например, в патенте США №7521541.
e) Производные антител
Согласно определенным вариантам осуществления представленное в настоящем документе антитело может быть дополнительно модифицирован так, чтобы содержать дополнительные небелковые фрагменты, которые известны в настоящей области техники и легко доступны. Подходящие для получения производных антитела фрагменты включают в себя без ограничения растворимые в воде полимеры. Не ограничивающие примеры растворимых в воде полимеров включают в себя без ограничения полиэтиленгликоль (PEG), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, карбоксиметицеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена и малеинового ангидрида, полиаминокислоты (или гомополимеры, или статистические сополимеры) и декстран или сополимер n-винилпирролидона и полиэтиленгликоля, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры полипропиленоксида и этиленоксида,
полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерол) поливиниловый спирт и их смеси. Соединение полиэтиленгликоль-пропиональдегид может являться преимущественным в производстве вследствие своей стабильности в воде. Полимер может характеризоваться любым молекулярным весом и может быть разветвленным или неразветвленным. Число прикрепленных к антителу полимеров может варьировать, и если прикреплено более одного полимера, они могут представлять собой одинаковые или различные молекулы. В общем, число и/или тип полимеров, используемых в получении производных, может быть определено на основании факторов, включающих в себя без ограничения конкретные свойства или функции антитела, подлежащие улучшению, будет ли использоваться производное антитела в терапии при определенных состояниях и т.д.
Согласно другому варианту осуществления представлены конъюгаты антитела с небелковым фрагментом, которые могут быть селективно нагреты путем воздействия облучения. Согласно одному варианту осуществления небелковый фрагмент представляет собой углеродную нанотрубку (Каш et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). Облучение может характеризоваться любой длиной волны и включает в себя без ограничения длины волн, которые не оказывают вредного воздействия на обычные клетки, но нагревают небелковый фрагмент до температуры, при которой погибают клетки, расположенные вблизи от конъюгата антитела с небелковым фрагментом.
В. Рекомбинантные способы и композиции
Антитела могут быть получены с использованием рекомбинантных способов и композиций, например, как описано в патенте США № 4816567. Согласно одному варианту осуществления предусмотрена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая описанное в настоящем документе антитело к гемагглютинину. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела (например, легкую и/или тяжелую цепи антитела). Согласно дополнительному варианту осуществления включается один или несколько векторов (например, векторы экспрессии), содержащие такую нуклеиновую кислоту. Согласно дополнительному варианту осуществления включается клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. Согласно одному такому варианту осуществления клетка-хозяин содержит (например, была трансформирована с): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту,
которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. Согласно одному варианту осуществления клетка-хозяин является эукариотической, например, клетка яичника китайского хомячка (СНО) или лимфоидная клетка (например, клетка YO, NSO, Sp20). Согласно одному варианту осуществления включается способ получения антитела к гемагглютинину, причем способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, представленные выше, при условиях, подходящих для экспрессии антитела, и необязательно выделение антитела из клетки-хозяина (или среды для клеточной культуры-хозяина).
Для рекомбинантного получения антитела к гемагглютинину, нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, например, описанное выше, выделяют и вставляют в один или несколько векторов для дополнительного клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такую нуклеиновую кислоту можно легко выделить и секвенировать с использованием общепринятых процедур (например, с использованием олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи антитела).
Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии кодирующих антитело векторов включают в себя описанные в настоящем документе прокариотические или эукариотические клетки. Например, антитела можно получить в бактериях, в частности, когда гликозилирование и эффекторная функция Fc не являются необходимыми. Для экспрессии фрагментов антител и полипептидов в бактериях, смотрите, например, патенты США №№ 5648237, 5789199 и 5840523. (Смотрите также Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, описывающую экспрессию фрагментов антител в Е. coli). После экспрессии антитело можно выделить из суспензии бактериальных клеток в растворимую фракцию и можно дополнительно очистить.
Кроме прокариот, такие эукариотические микроорганизмы, как гифомицеты или дрожжи, являются подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии для кодирующих антитело векторов, включающих в себя штаммы грибов и дрожжей, чьи
пути гликозилирования были "гуманизированы", приводя к образованию антитела с частично или полностью человеческим паттерном гликозилирования. Смотрите Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), и Li etal, Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
Подходящие клетки-хозяева для экспрессии гликозилированного антитела также получают из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают в себя клетки растений и насекомых. Были идентифицированы различные штаммы бакуловирусов, которые могут быть использованы вместе с клетками насекомых, в частности, для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda.
Культуры растительных клеток также могут использоваться в качестве хозяев. Смотрите, например, патенты США №№ 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описывающие технологию PLANTIBODIES(tm) для получения антител в трансгенных растениях).
Клетки позвоночных также могут использоваться в качестве хозяев. Например, могут применяться клеточные линии млекопитающего, которые приспособлены для выращивания в суспензии. Другие примеры применимых клеточных линий-хозяев млекопитающего представляют собой линию клеток почки мартышки С VI, трансформированную с помощью SV40 (COS-7); линия клеток почки эмбриона человека (клетки293 или 293, как описано, например, в Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); клетки почки новорожденного хомяка (ВНК); клетки Сертоли мыши (клетки ТМ4, как описано, например, в Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); клетки почки мартышки (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени крысы Буффало (BRL ЗА); клетки легких человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); опухоль молочной железы мыши (ММТ 060562); клетки TRI, как описано, например, в Mather et al, Annals NY. Acad. Sci. 383:44-68 (1982); клетки MRC 5 и клетки FS4. Другие применимые клеточные линии-хозяева млекопитающего включают в себя клетки яичника китайского хомячка (СНО), включающие в себя клетки DHFR- СНО (Urlaub et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); и такие миеломные клеточные линии, как Y0, NS0 и Sp2/0. Для обзора определенных клеточных линий-хозяев млекопитающего, подходящих для получения антител, смотрите, например, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
С. Анализы
Предусмотренные в настоящем документе антитела к гемагглютинину можно идентифицировать, подвергнуть скринингу или охарактеризовать в отношении их физических/химических свойств и/или биологических активностей с помощью различных известных в настоящей области техники анализов.
1. Анализы связывания и другие анализы
Согласно одному аспекту антитело согласно настоящему изобретению исследуют в отношении его антигенсвязывающей активности, например, с помощью таких известных способов, как ELISA, вестерн-блоттинг и т.д.
Согласно другому аспекту анализы конкурентного связывания можно использовать для идентификации антитела, которое конкурирует за связывание гемагглютинина с любым антителом к гемагглютинину, описанным в настоящем документе. Согласно определенным вариантам осуществления такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), с которым связывается описанное в настоящем документе антитело к гемагглютинину (например, антитело к гемагглютинину, содержащее последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 111 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 113; последовательность VH согласно SEQ Ш N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 117; последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 111 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 119; последовательность VH согласно SEQ Ш N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 113; последовательность VH согласно SEQ Ш N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ Ш N0: 122; последовательность VH согласно SEQ ID N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 124; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 126; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 128; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 130; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 115 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 132; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 134 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 136; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 138 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 140; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 142 и последовательность VL согласно
SEQ Ш NO: 144; последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 138 и последовательность VL согласно SEQ Ш NO: 146; последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 148 и последовательность VL согласно SEQ Ш NO: 150; последовательность VH согласно SEQ Ш NO: 148 и последовательность VL согласно SEQ ID N0: 152; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 148 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 140; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 234 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 235; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 154 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 156; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 158 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 156; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 160 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 162; последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 164 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 166; или последовательность VH согласно SEQ ГО N0: 168 и последовательность VL согласно SEQ ГО N0: 170. Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело предусмотрены в Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols" in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
В иллюстративном анализе конкурентного связывания иммобилизированный гемагглютинин инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с гемагглютинином, и второе немеченое антитело, которое анализируют в отношении его способности конкурировать с первым антителом за связывание с гемагглютинином. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизированный гемагглютинин инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не содержащем второе немеченое антитело. После инкубации при условиях, обеспечивающих возможность для связывания первого антитела с гемагглютинином, избыток несвязанного антитела удаляют и измеряют количество метки, связанной с иммобилизированным гемагглютинином. Если количество метки, связанной с иммобилизированным гемагглютинином, значительно снижено в исследуемом образце относительно контрольного образца, то это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с гемагглютинином. Смотрите Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. Анализы активности
Согласно одному аспекту предусмотрены анализы для идентификации антител к гемагглютинину и их фрагментов, характеризующихся биологической активностью. Биологическая активность может включать в себя, например, специфическое связывание с гемагглютинином вируса гриппа А, нейтрализацию вируса гриппа А и т.д. Также предусмотрены антитела и композиции, содержащие антитела или их фрагменты, характеризующиеся такой биологической активностью in vivo и/или in vitro.
Согласно определенным вариантам осуществления антитело согласно настоящему изобретению исследуют в отношении такой биологической активности. Смотрите примеры 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 13 для иллюстративного описания таких анализов.
D. Иммуноконъюгаты
Настоящее изобретение также включает иммуноконъюгаты, содержащие описанное в настоящем документе антитело к гемагглютинину конъюгированное с одним или несколькими такими цитотоксическими средствами, как химиотерапевтические средства или лекарственные средства, ингибирующие рост средства, токсины (например, белковые токсины, ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или их фрагменты), или радиоактивными изотопами.
Согласно одному варианту осуществления иммуноконъюгат представляет собой конъюгат антитела с лекарственным средством (ADC), в котором антитело конъюгировано с одним или несколькими лекарственными средствами, включающими в себя без ограничения майтанзиноид (смотрите патенты США №№ 5208020, 5416064 и Европейский патент ЕР 0 425 235 В1); такой ауристатин, как фрагменты DE и DF лекарственного средства монометилауристатин (ММАЕ и MMAF) (смотрите патенты США №№ 5635483, 5780588 и 7498298); доластатин; калихеамицин или его производное (смотрите патенты США №№ 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 и 5877296; Hinman etal, Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); и Lode et al, Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); антрациклин, например, дауномицин или доксорубицин (смотрите Kratz et al., Current Med. Chem. 13 All'-523 (2006); Jeffrey et al, Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al, Bioconj. Chem. 16:717721 (2005); Nagy et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al,
Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al, J. Med. Chem. 45:43364343 (2002) и патент США № 6630579); метотрексат; виндезин; такой таксан, как доцетаксел, паклитаксел, ларотаксел, тезетаксел, и ортатаксел; трихотекан и СС1065. Согласно другому варианту осуществления иммуноконъюгат содержит описанное в настоящем документе антитело, конъюгированное с ферментативно активным токсином или его фрагментом, включающим в себя без ограничения А-цепь дифтерийного токсина, не связывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, А-цепь экзотоксина (из Pseudomonas aeruginosa), А-цепь рицина, А-цепь арбина, А-цепь модецина, альфа-сарцин, белки Aleurites fordii, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, РАРП и PAP-S), ингибитор момордики харантской, курцин, кротин, ингибитор мыльнянки лекарственной, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трикотецены.
Согласно другому варианту осуществления иммуноконъюгат содержит описанное в настоящем документе антитело, конъюгированное с радиоактивный атом для образования радиоконъюгата. Для получения радиоконъюгированных антител доступно множество радиоактивных изотопов. Примеры включают в себя At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 и радиоактивные изотопы Lu. Если конъюгат используют для обнаружения, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например, tc99m или I123, или спиновую метку для визуализации посредством ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (также известной как магнитно-резонансная томография, mri), такую как также йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.
Конъюгаты антитела и цитотоксического вещества можно получать с использованием множества бифункциональных средств для присоединения белка, таких как сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(М-малеимидометил)циклогексан-1 -карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат НС1), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидо соединения (такие как бис(п-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как 2,6-диизоцианат толуола) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин можно получать, как описано в Vitetta et al, Science 238:1098 (1987). Меченная углеродом-14
1 -изотиоцианатбензил-3 -метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTP А) представляет собой иллюстративное хелатирующее средство для конъюгации радионуклеотида с антителом. Смотрите WO94/11026. Линкер может представлять собой "расщепляемый линкер", облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного средства в клетке. Например, можно использовать неустойчивый к кислотам линкер, чувствительный к пептидазам линкер, фотолабильный линкер, диметиловый линкер или содержащий дисульфид линкер (Chari et al, Cancer Res. 52:127-131 (1992); патент США№ 5208020).
Иммуноконъюгаты или ADC согласно настоящему документу специально включают без ограничения такие конъюгаты, полученные с помощью с использованием реагентов для поперечного сшивания, включающих в себя без ограничения BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, МРВН, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC, и сульфо-SMPB, и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые являются коммерчески доступными (например, от Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).
E. Способы и композиции для диагностики и обнаружения Согласно определенным вариантам осуществления любое из предусмотренных в настоящем документе антител к гемагглютинину является применимым для обнаружения присутствия гемагглютинина или вируса гриппа А в биологическом образце. Используемый в настоящем документе термин "обнаружение" включает количественное или качественное обнаружение. Согласно определенным вариантам осуществления биологический образец содержит клетку или ткань, такую как, например, из легкого, верхних дыхательных путей, носослезного канала, крови, мокроты, или содержит биологический образец, полученный с помощью мазка из носа или зева.
Согласно одному варианту осуществления предусмотрено антитело к гемагглютинину для применения в способе диагностики или обнаружения. Согласно дополнительному аспекту предусмотрен способ обнаружения присутствия гемагглютинина или вируса гриппа А в биологическом образце. Согласно определенным вариантам осуществления способ включает приведение в контакт биологического образца с описанным в настоящем документе антителом к гемагглютинину при условиях, обеспечивающих возможность связывания антитела к
гемагглютинину с гемагглютинином и обнаружение сформировался ли комплекс между антителом к гемагглютинину и гемагглютинином. Такой способ может представлять собой in vitro или in vivo способ. Согласно одному варианту осуществления антитело к гемагглютинину используют для выбора субъектов, допущенных к терапии с помощью антитела к гемагглютинину, например, когда гемагглютинин представляет собой биомаркер для выбора пациентов.
Иллюстративные нарушения, которые можно диагностировать с использованием антитела согласно настоящему изобретению, включают в себя инфекцию вируса гриппа А, включая в себя инфекцию вируса гриппа А у детей, детей первого года жизни, взрослых и пожилых людей.
Согласно определенным вариантам осуществления предусмотрены меченые антитела к гемагглютинину. Метки включают в себя без ограничения метки или фрагменты, которые обнаруживаются напрямую (такие как флюоресцентные, хромофорные, электронно-плотные, хемилюминесцентные и радиоактивные метки), а также такие фрагменты, как ферменты или лиганды, от которые обнаруживаются опосредованно, например, посредством ферментативной реакции или молекулярного взаимодействия. Иллюстративные метки включают в себя без ограничения радиоактивные изотопы 32Р, 14С, 1251, 3Н и 1311, такие флуорофоры, как редкоземельные хелаты или флуоресцеин и его производные, родамин и его производные, дансил, умбеллиферон, люциферазы, например, люциферазу светлячка и бактериальную люциферазу (патент США № 4737456), люциферин, 2,3-дигидрофталазиндионы, пероскидазу хрена (HRP), щелочную фосфатазу, Р-галактозидазу, глюкоамилазу, лизозим, сахаридоксидазы, например, глюкозоксидазу, галактозоксидазу и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, такие гетероциклические оксидазы, как уриказа и ксантиноксидаза, соединенные с ферментом, который использует перекись водорода для окисления предшественника красителя, например, HRP, лактопероксидазой или микропероксидазой, биотин/авидин, спиновые метки, бактериофагальные метки, стабильные свободные радикалы и подобное.
F. Фармацевтические составы
Фармацевтические составы антитела к гемагглютинину, описанного в настоящем документе, получают путем смешивания указанного антитела, характеризующегося требуемой степенью чистоты, с одним или несколькими необязательными фармацевтически приемлемыми носителями (Remington's
Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях и включают в себя без ограничения: такие буферы, как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включающие в себя аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; такие алкилпарабены, как метилпарабен или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и m-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; такие белки, как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; такие гидрофильные полимеры, как поливинилпирролидон; такие аминокислоты, как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включающие в себя глюкозу, маннозу или декстрины; такие хелатирующие средства, как EDTA; такие сахара, как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; такие солеобразующие противоионы как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или такие неионные поверхностно-активные средства, как полиэтиленгликоль (PEG). Иллюстративные фармацевтически приемлемые носители в настоящем документе дополнительно включают в себя такие средства диспергирования лекарственных средств в межклеточном пространстве, как активные в нейтральных условиях растворимые гликопротеины гиалуронидазы (sHASEGP), например, растворимые гликопротеины гиалуронидазы РН-20 человека, такие как rHuPH20 (HYLENEX(r), Baxter International, Inc.). Определенные иллюстративные sHASEGP и способы применения, включающие в себя rHuPH20, описаны в публикациях заявок на выдачу патента США №№ 2005/0260186 и 2006/0104968. Согласно одному аспекту sHASEGP комбинируют с одним или несколькими такими дополнительными гликозаминогликаназами, как хондоитиназы.
Иллюстративные лиофилизированные составы антител описаны в патенте США № 6267958. Водные составы антител включают в себя составы, описанные в патенте США № 6171586 и международной патентной публикации WO2006/044908, причем последние составы включают в себя гистидин-ацетатный буфер.
Состав в настоящем документе может также содержать больше одного активного ингредиента при необходимости для конкретного назначения в отношении
лечения, предпочтительно активные ингредиенты с комплементарными активностями, которые не влияют друг на друга неблагоприятно. Например, может быть необходимым дополнительно обеспечить ингибитор нейраминидазы, антитело к гемагглютинину, антитело к М2 и т.д. Такие активные ингредиенты соответствующим образом присутствуют в комбинации в количествах, которые являются эффективными для предусмотренных целей.
Активные ингредиенты могут быть заключены в микрокапсулы, полученные, например, с помощью техник коацервации или полимеризации на границе фаз, например, микрокапсулы из гидроксиметилцеллюлозы или желатина и микрокапсулы из поли-(метилметакрилата), соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственного средства (например, липосомах, альбуминовых микрогранулах, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях. Такие техники раскрыты в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
Могут быть получены препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают в себя полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих антитело, причем указанные матрицы находятся в форме имеющих определенную форму изделий, например, пленок или микрокапсул.
Составы, предназначенные для применения для in vivo введения, как правило, являются стерильными. Стерильность может быть без труда достигнута, например, с помощью фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны.
G. Терапевтические способы и композиции
Любое из предусмотренных в настоящем документе антител к гемагглютинину можно использовать в терапевтических способах.
Согласно одному аспекту предусмотрено антитело к гемагглютинину для применения в качестве лекарственного средства. Согласно дополнительным аспектам предусмотрено антитело к гемагглютинину для применения в лечении, профилактике или ингибировании инфекции вируса гриппа А. Согласно определенным вариантам осуществления предусмотрено антитело к гемагглютинину для применения в способе лечения. Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину для применения в способе лечения индивидуума, характеризующегося инфекцией вируса гриппа А, включающем введение индивидууму эффективного количества антитела к гемагглютинину. Согласно одному такому
варианту осуществления способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, описанного ниже. Согласно дополнительным вариантам осуществления настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину для применения в профилактике, ингибировании или снижении опросредованного гемагглютинином слияния между вирусной мембраной вируса гриппа А и эндосомальными мембранами инфицированной клетки, таким образом предотвращая проникновение вирусной РНК в цитоплазму инфицированной клетки и предотвращая дополнительное распространение инфекции. Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение включает антитело к гемагглютинину для применения в способе профилактики, ингибирования или лечения инфекции вируса гриппа А у индивидуума, включающем введение индивидууму эффективного количества антитела к гемагглютинину для профилактики, ингибирования или лечения инфекции вируса гриппа А. "Индивидуум" согласно любому из описанных выше вариантов осуществления предпочтительно представляет собой человека.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение включает применение антитела к гемагглютинину в производстве или получении лекарственного средства. Согласно одному варианту осуществления лекарственное средство предусмотрено для лечения инфекции вируса гриппа А. Согласно дополнительному варианту осуществления лекарственное средство предусмотрено для применения в способе лечения инфекции вируса гриппа А, включающем введение индивидууму, характеризующемуся инфекцией вируса гриппа А, эффективного количества лекарственного средства. Согласно одному такому варианту осуществления способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, описанного ниже. Согласно дополнительному варианту осуществления лекарственное средство предусмотрено для профилактики, ингибирования или снижения опосредованного гемагглютинином слияния между вирусной мембраной вируса гриппа А и эндосомальными мембранами инфицированной клетки, таким образом, предотвращая проникновение вирусной РНК в цитоплазму инфицированной клетки и предотвращая дополнительное распространение инфекции. Согласно дополнительному варианту осуществления лекарственное средство предусмотрено для применения в способе профилактики, ингибирования или лечения инфекции вируса гриппа А у индивидуума,
включающем введение индивидууму количества лекарственного средства, эффективного для профилактики, ингибирования или снижения инфекции вируса гриппа А. "Индивидуум" согласно любому из приведенных выше вариантов осуществления может представлять собой человека.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение включает способ лечения инфекции вируса гриппа А. Согласно одному варианту осуществления способ включает введение индивидууму, характеризующемуся такой инфекцией вируса гриппа А, эффективного количества антитела к гемагглютинину. Согласно одному такому варианту осуществления способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного описанного в настоящем документе дополнительного терапевтического средства. "Индивидуум" согласно любому из приведенных выше вариантов осуществления может представлять собой человека.
Настоящее изобретение включает антитела к гемагглютинину, эффективные в ингибировании, профилактике или лечении инфекции вируса гриппа А у индивидуума (например, субъекта или пациента). Согласно некоторым аспектам антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению является эффективным в профилактическом лечении индивидуума для предотвращения инфекции вируса гриппа А у индивидуума.
Согласно некоторым аспектам подходящий для лечения с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению индивидуум представляет собой индивидуума, характеризующегося или предполагаемо характеризующегося наличием инфекции вируса гриппа А. Согласно некоторым вариантам осуществления такие индивидуумы включают в себя детей первого года жизни, детей, взрослых и пожилых людей. Согласно некоторым вариантам осуществления индивидуума госпитализируют с инфекцией вируса гриппа А. Согласно другим вариантам осуществления индивидуум, характеризующийся инфекцией вируса гриппа А, характеризуется одним или несколькими сопутствующими патологиями, такими как, например, иммунодефицит, беременность, заболевание легких, заболевание сердца, заболевание почек, или сочетанной инфекцией (например, бактериальной инфекцией или вирусной инфекцией, такой как бактериальная или вирусная пневмония).
Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает тяжесть инфекции вируса гриппа А, снижает длительность инфекции вируса гриппа А или снижает
инфекционность вируса гриппа А. Согласно другим аспектам лечение инфекции вируса гриппа А с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению включает дополнительную пользу, включая в себя снижение длительности нахождения в стационаре, снижение или профилактику необходимости в использовании палаты интенсивной терапии (ICU), снижение или профилактику необходимости во вспомогательной или искусственной вентиляции легких, снижение или профилактику необходимости в применении дополнительного кислорода и снижение смертности. Согласно некоторым аспектам снижение длительности пребывания в стационаре составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней или дольше чем 5 дней. Согласно некоторым аспектам снижение необходимости в использовании палаты интенсивной терапии составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней или дольше чем 5 дней. Согласно некоторым аспектам снижение необходимости во вспомогательной или искусственной вентиляции легких составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней или дольше чем 5 дней. Согласно некоторым аспектам снижение необходимости в применении дополнительного кислорода составляет 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней или дольше чем 5 дней. Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает такие симптомы заболевания инфекцией вируса гриппа А, как, например, лихорадка, острый ринит, озноб, боль в горле, мышечная боль, боли в теле, головная боль, кашель, заложенность носа, слабость или утомляемость, раздраженные или слезящиеся глаза и общий дискомфорт.
Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает время, необходимое для нормализации дыхательной функции, например, снижение времени, необходимого для нормализации частоты дыхательных движений или снижение времени, необходимого для нормализации насыщения кислородом. Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает время для возвращения к нормальному насыщению кислородом, например, до насыщения кислородом, составляющего приблизительно 92% или больше, что измеряют через 24-часовой период без введения дополнительного кислорода. Согласно другим аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению снижает время для нормализации
витальных признаков, таких как частота сердечных сокращений, давление крови, частота дыхательных движений и температура.
Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению улучшает вирусологические конечные критерии оценки, такие как, например, титр вируса гриппа. Титр вируса можно измерить с помощью различных путей, известных специалисту в настоящей области техники, таких как, например, вирусная площадь под кривой (AUC), измеряемая, например, с помощью gill IP или инфекционных доз в тканевой культуре (ТСШ50). Согласно некоторым аспектам лечение приводит к больше чем или равному 50% снижению вирусной AUC, что измеряют с помощью gill IP или ТСШ50.
Согласно различных аспектам настоящего изобретения предусмотренное в настоящем документе антитело к гемагглютинину является эффективным в лечении инфекции вируса гриппа А при введении приблизительно через 12 часов, приблизительно через 24 часов, приблизительно через 36 часов, приблизительно через 48 часов, приблизительно через 60 часов, приблизительно через 72 часов, приблизительно через 84 часов и приблизительно через 96 часов после появления симптомов (например, возникновения болезни). Согласно другим аспектам предусмотренное в настоящем документе антитело к гемагглютинину является эффективным в лечении инфекции вируса гриппа А при введении приблизительно через 24 часов - 48 часов после появления симптомов (например, у индивидуума наблюдались симптомы в течение 24 - 48 часов) при введении приблизительно через 48 часов - 72 часов после появления симптомов, или при введении приблизительно через 72 часов - 96 часов после появления симптомов. Согласно определенным вариантам осуществления настоящего изобретения антитело к гемагглютинину согласно настоящему изобретению является эффективным в лечении или снижении инфекции вируса гриппа А и расширяет терапевтическое окно современного стандарта лечения (например, осельтамивира) за пределы 48 часов после появления симптомов.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение включает фармацевтические составы, содержащие любое из предусмотренных в настоящем документе антител к гемагглютинину, например, для применения в любом из приведенных выше терапевтических способов. Согласно одному варианту осуществления фармацевтический состав содержит любое из предусмотренных в настоящем документе антител к гемагглютинину и фармацевтически приемлемый
носитель. Согласно другому варианту осуществления фармацевтический состав содержит любое из предусмотренных в настоящем документе антител к гемагглютинину и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, описанное ниже.
Антитела согласно настоящему изобретению можно применять либо отдельно, либо в комбинации с другими средствами в терапии. Например, антитело согласно настоящему изобретению можно вводить совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор нейраминидазы (например, занамивир, осельтамивир фосфат, амантадин, римантадин), антитело к М2, антитело к гемагглютинину и т.д. Согласно некоторым аспектам лечение индивидуума, характеризующегося инфекцией вируса гриппа А, с помощью антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению, совместно введенного с ингибитором нейраминидазы, обеспечивает синергетический терапевтический эффект по сравнению с лечением с помощью любого из средств отдельно.
Такие описанные выше комбинированные виды терапии включают комбинированное введение (когда два или более терапевтических средств включены в один и то же состав или отдельные составы) и отдельное введение, в случае которого введение антитела согласно настоящему изобретению может происходить перед, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического средства или средств. Согласно одному варианту осуществления введение антитела к гемагглютинину и введение дополнительного терапевтического средства происходит с интервалом в пределах приблизительно одного месяца или в пределах приблизительно одной, двух или трех недель, в пределах приблизительно одного, двух, трех, четырех, пяти или шести дней или в пределах приблизительно одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, восьми, десяти, двенадцати, шестнадцати, двадцати или двадцати четырех часов друг от друга.
Антитело согласно настоящему изобретению (и любое дополнительное терапевтическое средство) можно вводить с помощью любого подходящего способа, включая в себя парентеральный, интрапульмонарный и интраназальный путь, и, если требуется местное лечение, с помощью внутриочагового введения. Парентеральные инфузии включают в себя внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное,
интраперитонеальное или подкожное введение. Дозировка может происходить с помощью любого подходящего пути, например, с помощью инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, частично в зависимости от того, является введение кратковременным или хроническим. Различные схемы дозирования, включая в себя без ограничения однократные или многократные введения в различные временные точки, болюсное введение и импульсную инфузию, предусмотрены в настоящем документе.
Антитела согласно настоящему изобретению будут введены в состав, дозированы и введены тем способом, который согласуется с надлежащей медицинской практикой. Факторы, которые необходимо учитывать в этом контексте, включают в себя конкретное подлежащее лечению нарушение, конкретное подлежащее лечению млекопитающее, клиническое состояние конкретного пациента, причину нарушения, место доставки средства, способ введения, схему введения и другие факторы, известные медицинским сотрудникам. Нет такой необходимости, но антитело необязательно вводят в состав с одним или несколькими средствами, используемым в настоящее время для профилактики или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество таких других средств зависит от количества антитела, присутствующего в составе, типа нарушения или лечения и других факторов, обсуждаемых выше. Их, как правило, используют в таких же дозировках и вводят теми же путями, которые описаны в настоящем документе, или приблизительно от 1 до 99% от дозировок, описанных в настоящем документе, или в любой дозировке и с помощью любого пути, который эмпирически/клинически определяют как приемлемый.
Для профилактики или лечения заболевания приемлемая дозировка антитела согласно настоящему изобретению (при использовании отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими дополнительными терапевтическими средствами) будет зависеть от типа подлежащего лечению заболевания, типа антитела, тяжести и течения заболевания, того факта, вводят ли антитело для превентивных или же терапевтических целей, предшествующей терапии, клинической истории пациента и ответа на антитело и решения лечащего врача. Антитело подходящим образом вводят пациенту один раз или в течение серии введений. В зависимости от типа и тяжести заболевания приблизительно 1 мкг/кг - приблизительно 45 мг/кг (например, приблизительно 1,0 мг/кг - приблизительно 15 мг/кг) антитела может представлять собой начальную потенциальную дозировку для введение пациенту, независимо,
например, от того, будет ли это одно или несколько отдельных введений, или введение будет осуществляться путем непрерывной инфузии. Одна типичная ежедневная дозировка может находиться в диапазоне от приблизительно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или больше, в зависимости от упомянутых выше факторов. Для повторных введений в течение нескольких дней или длительнее в зависимости от состояния лечение будет, как правило, продолжаться, пока не произойдет требуемое подавление симптомов заболевания. Иллюстративные дозировки антитела будут находиться в диапазоне приблизительно 1,0 мг/кг - приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг -приблизительно 30 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг - приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг - приблизительно 10 мг/кг, или приблизительно 1,0 мг/кг -приблизительно 5 мг/кг. Таким образом, пациенту может быть введена одна или несколько доз, составляющих приблизительно 1,0 мг/кг, 2,5 мг/кг, 5,0 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 30 мг/кг или 45 мг/кг (или любая их комбинация). Такие дозы могут быть введены периодически, например, каждый день, каждые два дня, каждые три дня и т.д. Может быть введена начальная повышенная насыщающая доза с последующей одной или несколькими пониженными дозами. Дозировка также может представлять собой такую фиксированную дозу, как, например, 200 мг, 400 мг, 600 мг, 800 мг, 1000 мг, 1200 мг, 1400 мг, 1500 мг, 1600 мг, 1800 мг, 2000 мг, 2200 мг, 2400 мг, 2500 мг, 2600 мг, 2800 мг, 3000 мг, 3200 мг, 3400 мг, 3600 мг и т.д. Прогресс указанной терапии можно легко подвергнуть мониторингу с помощью традиционных техник и анализов.
Следует понимать, что любой из приведенных выше составов или терапевтических способов может быть проведен с использованием иммуноконъюгата согласно настоящему изобретению вместо или в дополнение к антителу к гемагглютинину.
Н. Изделия
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предусмотрено изделие, содержащее материалы, применимые для лечения, профилактики и/или диагностики описанных выше нарушений. Изделие содержит контейнер и этикетку или вкладыш, вложенный в упаковку или наклеенный на контейнер. Подходящие контейнеры включают в себя, например, бутылки, флаконы, шприцы, пакеты для внутривенного введения раствора и т.д. Контейнеры быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в комбинации с другой композицией является эффективной для лечения,
профилактики и/или диагностики состояния и может иметь стерильное входное отверстие (например, таким контейнером может быть пакет для внутривенного введения раствора или сосуд, имеющий пробку, протыкаемую иглой для подкожных инъекций). По меньшей мере одно активное средство в композиции представляет собой антитело согласно настоящему изобретению. На этикетке или вкладыше в упаковке указано, что композиция применяется для лечения выбранного конкретного состояния. Более того, изделие может содержать (а) первый контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция содержит антитело согласно настоящему изобретению; и (Ь) второй контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция дополнительно содержит цитотоксическое или иное терапевтическое средство. Изделие согласно указанному варианту осуществления настоящего изобретения может дополнительно содержать листок-вкладыш, на котором указано, что композиции могут использоваться для лечения конкретного состояния. Альтернативно или дополнительно, изделие может дополнительно содержать второй (или третий) контейнер, содержащий такой фармацевтически приемлемый буфер, как бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), фосфатно-солевой буфер, раствор Рингера и раствор декстрозы. Дополнительно он может включать в себя другие материалы, необходимые для коммерческого производства и для потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Следует понимать, что любое из приведенных выше изделий может включать в себя иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению вместо или в дополнение к антителу к гемагглютинину.
III. Примеры
Далее представлены примеры способов и композиций по настоящему изобретению. Подразумевается, что на практике могут применяться различные другие варианты осуществления, принимая во внимание общее описание, представленное выше.
Пример 1. Идентификация антител к гемагглютинину с помощью фагового дисплея
Конструирование фаговых библиотек от вакцинированных вирусом гриппа доноров-людей
Антитела, направленные против гемагглютинина вируса гриппа А, идентифицировали с применением библиотеки фагового дисплея, сконструированной из мононуклеаров периферической крови (РВМС), выделенных из доноров-людей, вакцинированных вакциной против сезонного вируса гриппа следующим образом.
Препараты Leukopac от нормальных доноров-людей, которые получали вакцину против сезонного гриппа Fluvirin(r) (Novartis, партия № 111796Р1) за 7 дней до забора у них крови, получали от Blood Centers of the Pacific (San Francisco, CA). РВМС выделяли из Leukopac с применением стандартных методик. РВМС сортировали в отношении CD19+/CD20" клеток-плазмобластов с помощью FACS. РНК из CD19+/CD20" отсортированных плазмобластов экстрагировали с применением набора для очистки RNeasy (Qiagen, USA) и кДНК получали из выделенной РНК путем обратной транскрипции с применением обратной транскриптазы Superscript(r) Ш (Invitrogen, USA). Гены вариабельной области тяжелой цепи (VH), вариабельной области каппа цепи (VK) и вариабельной области легкой цепи (VL) человека амплифицировали с помощью ПЦР из кДНК с применением следующих обратных и прямых смесей праймеров ДНК.
Обратный УН BssHII.HuVHl:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 1) BssHII.HuVH2:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGRTCACCTTGAAGGAGTC (SEQ Ш NO: 2) BssHII.HuVH3.1:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTC (SEQ Ш NO: 3) BssHII.HuVH3.2:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTC (SEQ Ш NO: 4) BssHII.HuVH3.3:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGAAGTGCAGCTGGTGGAGTC (SEQ Ш NO: 5)
BssHII.HuVH4.1:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTC (SEQ Ш NO: 6) BssHII.HuVH4.2:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTC (SEQ Ш NO: 7) BssHII.HuVH5:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGARGTGCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 8) BssHII.HuVH6:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTACAGCTGCAGCAGTC (SEQ Ш NO: 9) BssHII.HuVH7:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTGCAGCTGGTGCAATC (SEQ Ш NO: 10) BssHII.HuVHl A: ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTCCAGCTTGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 11)
BssHII.HuVHl B: ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTTCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 12)
BssHII.HuVHl.С:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTCCAGCTGGTACAGTC (SEQ Ш NO: 13) BssHII.HuVHl.D:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGATGCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 14) BssHII.HuVHl.E:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAAATCCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 15) BssHII.HuVHl.F:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGAGGTCCAGCTGGTGCAGTC (SEQ Ш NO: 16) BssHII.HuVH3.A:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTC (SEQ Ш NO: 17) BssHII.HuVH3.B:
ATCGTTTCATAAGCGCGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAC (SEQ Ш NO: 18) BssHII.HuVH4.A:
ATCGTTTCATAAGCGCGCCAGGTGCAGCTACAGCAGTG (SEQ Ш NO: 19)
Прямой VH Nhel.JH 2:
GACATTCTACGAGCTAGCTGAGGAGACAGTGACCAGGGT (SEQ Ш NO: 20)
Nhel.JH 1/4/5: GAC ATTCT ACGAGCTAGCTGAGGAGACGGTGACC AGGGT
(SEQ Ш NO: 21) Nhel.JHJ:
GACATTCTACGAGCTAGCTGAAGAGACGGTGACCATTGTC (SEQ Ш NO: 22) NheI.JH6:
GACATTCTACGAGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCGTGG (SEQ Ш NO: 23)
Обратный УК Nhel.OL.HuVKl:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGACATCCAGWTGACCCAGTC (SEQ Ш NO: 24) NheI.OL.HuVK2:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGATGTTGTGATGACTCAGTC (SEQ Ш NO: 25) NheI.OL.HuVK3:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGAAATTGTGWTGACRCAGTC (SEQ Ш NO: 26) NheI.OL.HuVK4:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGATATTGTGATGACCCACAC (SEQ Ш NO: 27) NheI.OL.HuVK5:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGAAACGACACTCACGCAGTC (SEQ Ш NO: 28) NheI.OL.HuVK6:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCGAAATTGTGCTGACTCAGTC (SEQ Ш NO: 29)
Прямой УК
NcoI.JKl-: AGTTCATGCCATGGTTTTGATTTCCACCTTGGTCCCTT (SEQ Ш NO: 30)
NcoI.JK2-: AGTTCATGCCATGGTTTTGATCTCCACCTTGGTCCC (SEQ Ш NO:
31)
NcoI.JK3-: AGTTCATGCCATGGTTTTGATATCCACTTTGGTCCCAG (SEQ Ш NO: 32)
NcoI.JK4-: AGTTCATGCCATGGTTTTGATCTCCAGCTTGGTCCCT (SEQ Ш NO: 33)
NcoI.JK5-: AGTTCATGCCATGGTTTTAATCTCCAGTCGTGTCCCTT (SEQ Ш NO: 34)
Обратный VL Nhel.OL.HuVLl.l:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTG GTGGCAGCCAGTCTGTG CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 35) NheI.OL.HuVL1.2:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCAGTCTGTG YTGACGCAGCC (SEQ Ш NO: 36) NheI.OL.HuVL1.3:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCAGTCTGTC GTGACGCAGCC (SEQ Ш NO: 37) NheI.OL.HuVL2:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCARTCTGCC CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 38) NheI.OL.HuVL3.1:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCTCCTATGWG CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 39) NheI.OL.HuVL3.2:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCTCTTCTGAG CTGACTCAGGA (SEQ Ш NO: 40) NheI.OL.HuVL4:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCACGTTATA CTGACTCAACC (SEQ Ш NO: 41) NheI.OL.HuVL5:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCAGGCTGTG CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 42) NheI.OL.HuVL6:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCAATTTTATG CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 43)
NheI.OL.HuVL7/8:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCAGRCTGTG GTGACYCAGGA (SEQ Ш NO: 44)
NheI.OL.HuVL9:
TCTCCTCAGCTAGCGGTGGCGGCGGTTCCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGTGGTGG CAGCCWGCCTGTG CTGACTCAGCC (SEQ Ш NO: 45)
Прямой VL
NcoI.JLl-: AGTTCATGCCATGGTTAGGACGGTGACCTTGGTCC (SEQ Ш NO:
46)
NcoI.JL2/3-: AGTTCATGCCATGGTTAGGACGGTCAGCTTGGTCC (SEQ Ш NO:
47)
NcoI.JL7-: AGTTCATGCCATGGTGAGGACGGTCAGCTGGGTG (SEQ Ш NO:
48)
Полученные амплифицированные продукты кДНК собирали с scFv с применением перекрывающейся ПЦР со следующими перекрывающимися праймерами.
BssHII.VH.OL+: ATCGTTTCATAAGCGCGCSA (SEQ ID N0:49)
NotI.JK.OL-: AGTTCATGCCATGGTTTTGAT (SEQ ГО N0: 50)
NotI.JL.OL-: AGTTCATGCCATGGTKAGGAC (SEQIDN0:51)
Очищенные фрагменты scFv кДНК (1 мкг) и фагемидный вектор p2056BNN (2 мкг) обрабатывали с помощью эндонуклеазы рестрикции BssHJJ и Ncol (New England Biolabs, USA). Фагемидный вектор p2056BNN представляет собой модифицированную версию pS2025e (Sidhu et al, (2004) J Mol Biol 338:299-310), сконструированную так, чтобы она содержала сайты рестрикции BssHJJ, Nhel и Ncol. Фрагменты scFv кДНК затем лигировали в вектор p2056BNN (соотношение 6:1 М) с применением фермента Т4 ДНК лигазы (New England Biolabs). Полученные продукты лигирования кДНК/фага очищали с применением набора для очищения ПЦР (Qiagen, USA) и трансформировали в электрон-компетентные клетки SS320 Е. coli. Размер фаговой библиотеки оценивали путем помещения 10 мкл разведенной в соотношении 1:10 культуры библиотеки на
планшеты с LB/карбенициллином. Культуру библиотеки затем дополнительно амплифицировали и размножали до общего объема, составляющего 60 мл 2YT среды и экспрессию фага-scFv индуцировали путем коинфицирования с помощью хелперного фага М13К07. Канамицин затем добавляли к культуре библиотеки и инкубировали со встряхиванием в течение 30 часов при 30 °С. Культуру библиотеки затем центрифугировали до получения осадка клеток. Содержащий фага-scFv супернатант осаждали с помощью 5х PEG/2,5 М NaCl и ресуспендировали в PBS.
Сортировка и скрининг фаговой библиотеки для идентификации антител к гемагглютинину
Белки гемагглютинин HI и НЗ вируса гриппа А (полученные, как описано ниже в примере 2) использовали в качестве антигенов для сортировки фаговой библиотеки. Антигенами гемагглютинином HI и НЗ покрывали 96-луночный планшет Maxisorp с высокой степенью связывания. Планшеты и фаговые библиотеки предварительно блокировали с помощью буфера для блокирования фагов (фосфатно-солевой буфер (PBS), 1% (масс./объем) бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 0,05% (объем/объем) tween-20 (PBS-T)) и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре. Блокированную фаговую библиотеку (100 мкл) добавляли к покрытым гемагглютинином лункам и инкубировали в течение 3 часов. Несвязанных фагов отмывали с планшетов с применением 0,05% PBS-Tween и связанные фаги элюировали с помощью 100 мкл 50 мМ НС1 и 500 мМ NaCl в течение 30 минут с последующей нейтрализацией с помощью 100 мкл 1 М основания Tris (рН 7,5). Выделенных фагов амплифицировали в клетки Е. coli XL-1 Blue. Полученные фаги осаждали и подвергали другому циклу пэннинга/селекции в отношении белков гемагглютинина. Во время последующих циклов пэннинга/селекции фаги-антитела инкубировали с одинаковыми или различными антигенами-гемагглютинином. Жесткость отмывки планшетов постепенно повышали от 15х отмывки до 40х отмывки.
После 2-3 циклов пэннинга и селекции наблюдали значительное обогащение специфических к гемагглютинину фагов. 96 фаговых клонов выбирали из сортировки библиотеки для определения того, связываются ли они специфически с гемагглютинином HI и/или НЗ. Вариабельные области фаговых клонов, проявляющих специфическое связывание с белками гемагглютинина секвенировали для идентификации фаговых клонов, содержащих уникальные последовательности
нуклеиновой кислоты иммуноглобулина. Определяли дополнительные характеристики уникальных фаговых антител, которые связывают гемагглютинин HI и/или НЗ по меньшей мере в 5 раз сильнее фонового значения. Полученные из фагов представляющие интерес клоны реформатировали в IgG путем клонирования областей VL И VH конкретных клонов в экспрессионные векторы LPG3 и LPG4, соответственно, транзиторно экспрессировали в клетках 293 млекопитающих и очищали с применением колонки с белком А. Два антитела (тАЬ9 и тАЬ23) идентифицировали для дополнительного анализа. (Смотрите пример 5 ниже).
Пример 2. Обогащение и распространение плазмобластов
Для обнаружения и идентификации редких антител против гемагглютинина вируса гриппа А разработали следующую технику обогащение и распространение плазмобластов. (Смотрите находящуюся в процессе одновременного рассмотрения заявку на выдачу патента США № 61/725764, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.)
Препараты Leukopac от нормальных доноров-людей, которые получали вакцину против сезонного гриппа Fluvirin(r) (Novartis, партия № 111796Р1) за 7 дней до забора у них крови, получали от Blood Centers of the Pacific (San Francisco, CA). Мононуклеары периферической крови (РВМС) выделяли из Leukopac с применением стандартных методик. Самок мышей SCID/мышей с врожденным отсутствием клеток-естественных киллеров возрастом шесть-восемь недель приобретали в Charles River Laboratories (Hollister, С А) и помещали и содержали в Genentech в соответствии с руководствами Ассоциации по уходу за лабораторными животными США (American Association of Laboratory Animal Care). Все экспериментальные исследования проводили при одобрении Институционального комитета по содержанию и использованию животных Genentech Lab Animal Research в аккредитованной согласно AAALACi лаборатории в соответствии с Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных и применяемыми законами и нормами. Leukopac или кровь от здоровых доноров-людей получали после получения подписанного информированного согласия и одобрения этического комитета, предоставленного Западным экспертным советом организаций (Western Institutional Review Board).
In vivo управляемое антигеном обогащение и распространение плазмобластов проводили с применением внутриселезеночной трансплантации РВМС следующим
образом. Выделенные РВМС ресуспендировали с антигенами - гемагглютинином (0,1-2 мкг для каждого миллиона В клеток) и инкубировали в течение 30 минут при 37°С (предварительно полученная смесь РВМС/антиген). После указанной инкубации РВМС отмывали для удаления несвязанных антигенов. Для обогащения в отношении плазмобластов, которые производят перекрестнореагирующие антитела к гемагглютинину варианты антигена-гемагглютинина, используемые для предварительно полученной смеси РВМС/антиген и сортировки отдельных клеток, специально выбирали для того, чтоб их отличить от вариантов антигена-гемагглютинина, содержащихся в противогриппозной вакцине Fluvirin(r). Антигены -гемагглютинин, используемые в настоящем исследовании, следовательно, включали в себя гемагглютинин HI из изолята вируса гриппа A A/NWS/1933 (гемагглютинин вируса гриппа А группы 1), гемагглютинин НЗ из изолята вируса гриппа A A/Hong Kong/8/1968 (гемагглютинин вируса гриппа А группы 2) и гемагглютинин Н7 из изолята вируса гриппа A A/Netherlands/219/2003 (гемагглютинин вируса гриппа А группы 2). Антигены - гемагглютинин получали в Genentech с применением стандартных техник молекулярной биологии.
6-8 недельных самок мышей с SCID/мышей с врожденным отсутствием клеток-естественных киллеров (Charles River Laboratories, Hollister, CA) облучали сублетальной дозой, составляющей 350 рад с применением источника цезия-137. Полимиксин В (110 мг/л) и неомицин (1,1 г/л) добавляли в питьевую воду в течение 7 дней после облучения. Через четыре часа после облучения левую паховую область каждой мыши брили и предварительно обрабатывали с помощью Betadine(r) (Purdue Pharma, Stamford, CT) и 70% спирта. Хирургические процедуры проводили под анестезией с применением асептических хирургических процедур. 1 см разрез кожи производили непосредственно ниже границы ребер каждой мыши с последующим разрезом брюшной стенки и брюшной полости. Селезенку каждой мыши аккуратно извлекали и в нее вводили с помощью инъекции 50x106 РВМС человека, ресуспендированных в 30 мкл PBS. Разрезы закрывали в мышечном слое и на коже с применением шовного материала 5-0 Vicryl(r) (Ethicon, Somerville, NJ) и хирургических скобок, соответственно. Для экспериментов по сортировке антигенспецифических клеток мышей умерщвляли на 8 день после трансплантации и собирали их селезенки.
Отдельные клеточные суспензии из клеток селезенки, полученных от мышей, окрашивали коктейлем моноклональных антител CD38 РЕСу7 человека (BD
Biosciences, San Jose, CA) и IgGDylight (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA), которые характеризуют IgG+ плазмобласты человека как CD38high/IgG+ экспрессия. Для идентификации перекрестно-реагирующих в отношении гемагглютинина плазмобластов в пределах суспензии выделенных клеток селезенки клетки окрашивали с помощью гемагглютинина HI из изолята вируса гриппа А A/NWS/1933 и гемагглютинина НЗ из изолята вируса гриппа A A/Hong Kong/8/1968, которые предварительно конъюгировали с FITC или РЕ, соответственно, с применением наборов для прикрепления меток Lightning-Link(r) (Innova Biosciences, Cambridge, UK).
На фигуре 1A показан анализ репрезентативных данных FACS анти-гемагглютинин-положительных плазмобластов, начиная с 7 дня после вакцинации РВМС перед обогащением мышей с SCID/мышей с врожденным отсутствием клеток-естественных киллеров (т.е. перед введением предварительно полученной смеси РВМС/антиген). На фигуре 1В показан анализ репрезентативных данных FACS гемагглютинин-положительных плазмобластов, начиная с 8 дня после трансплантации после обогащения в отношении SCID/ врожденного отсутствия клеток-естественных киллеров у мышей, сравнивая отсутствие предварительно полученной смеси и предварительно полученную антигенную смесь на верхней и нижней панелях, соответственно. Как показано на фигурах 1А и 1В, предварительно полученная смесь РВМС/антиген перед внутриселезеночной инъекцией приводила к повышенной частоте Н3+/Н1+ анти-гемагглютининовых плазмобластов.
На таблице 2 ниже показано сравнение частот встречаемости анти-Н1+/анти-НЗ+ плазмобластов перед и после обогащение в отношении SCID, описанное в настоящем документе. Как показано на таблице 2 анти-Н1+/анти-НЗ+ плазмобластов в значительной степени увеличилась с применением способов обогащения в отношении SCID/врожденного дефицита клеток-естественных киллеров у мышей согласно настоящему изобретению по сравнения с наблюдаемой без обогащения в отношении SCID/врожденного дефицита клеток-естественных киллеров у мышей.
приготовленная смесь |
Образцы затем анализировали в присутствии включения пропидийхлорида мертвыми клетками на высокоскоростном клеточном сортере Aria (BD Biosciences, San Jose, CA) и анти-гемагглютинин-специфические плазмобласты сортировали методом серийных разведений в 96-луночные планшеты для тканевых культур, содержащие 50 мкл RPMI среду для культивирования клеток, дополненной 5% фетальной бычьей сывороткой с низким содержанием IgG. (Gibco, Grand Island, NY). Пять миллионов живых клеток зарегистрировали для всех анализируемых профилей. Профили анализировали с помощью программного обеспечения Flowjo версии 9.4.11.
На фигуре 2 показан анализ спленоцитов, полученных, начиная с 8 дня после трансплантации от отдельных мышей с SCID/c врожденным отсутствием клеток-естественных киллеров, показывающий стохастический ответ, сравнивая отсутствие предварительно полученной смеси (кружки) и предварительно полученную антигенную смесь (квадраты). Данные представлены в виде процентного отношения анти-Н1+/С038ы^ плазмобластов. Треугольник указывает на мышей, которые представляли анти-Н1+ плазмобласты.
Указанные результаты показали, что перекрестно-реагирующие с гемагглютинином в широком диапазоне плазмобласты обнаруживали, если антигены -гемагглютинин вируса гриппа А группы 1 (например, гемагглютинин HI) и группы 2 (например, гемагглютинин НЗ, гемагглютинин Н7) инкубировали с РВМС перед внутриселезеночной трансплантацией. Указанные результаты дополнительно указывают на то, что in vitro стимуляция примированных антигеном гемагглютинином РВМС от вакцинированных противогриппозной вакциной доноров стимулировала специфическое к гемагглютинину - антигену обогащение плазмобластов у реципиентов с SCID/врожденным дефицитом клеток-естественных киллеров у мышей.
Пример 3. Клонирование IgG из отдельных плазмобластов
Перекрестно-реагирующие с гемагглютинином HI и НЗ человека плазмобласты (описанные выше) сортировали методом серийных разведений, получая приблизительно 950 плазмобластов. Отдельные плазмобласты сортировали напрямую в U-донные 96-луночные микропланшеты, содержащие 50 мкл RPMI, содержащей 5%
фетальной бычьей сывороткой с низким содержанием IgG. Планшеты центрифугировали в течение 5 минут при 600 х g (Beckman Coulter, Brea, CA) и среду аккуратно удаляли путем аспирации. Клетки ресуспендировали и дважды отмывали в 90 мкл PBS в соответствии с такой же процедурой.
Для получения кДНК, кодирующей вариабельные области тяжелых цепей и легких цепей, каждую клетку ресуспендировали в 6 мкл реакционной смеси обратной транскриптазы (RT), содержащей 2 единиц RNaseout (Invitrogen, Grand Island, NY), 0,5 мМ 4dNTP (Perkin Elmer, Waltham, MA), 1,5 мМ MgCh, 37,5 мМ KC1, 10 мМ DTT (дитиотреитол), 0,25% Nonidet P40 (US Biological, Marblehead, MA), 0,1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (Sigma-Aldrich), 25 мМ Tris рН 8,3, 0,25 пкмоль специфических в отношении константной области IgGi-4, константной области каппа цепи и константной области лямбда цепи олигонуклеотидов (показанных ниже) и 40 Ед Superscript Ш (Invitrogen, Grand Island, NY).
Константная область IgGi-4: GAAGTAGTCCTTGACCAGGCAG (SEQ Ш NO: 52) Константная область каппа цепи: CTCAGCGTCAGGGTGYTGCTGAG (SEQ Ш NO: 53)
Константная область лямбда цепи: GGGTKTGGT S GTC ТС С AC (SEQ ID NO: 54)
Реакцию инкубировали в течение 3 х 30-минутных интервалов при 45°С, 50°С и 55° С каждый. После инкубации реакционную смесь разводили до 15 мкл с помощью буфера ТЕ (10 мМ Tris НС1, 1 MMEDTA). Начальные полимеразные цепные реакции (ПЦР) проводили для амплификации тяжелых цепей IgG, каппа цепей и лямбда цепей с применением 2 мкл разведенного RT коктейля, описанного выше, и смеси Advantage-GC 2 Polymerase Mix (Clontech, Mountain View, CA) в соответствии с протоколами, предусмотренными производителями. Амплификации ПЦР проводили с применением вырожденных олигонуклеотидов на основании последовательности зародышевой линии вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи и последовательностей константной области, показанных ниже.
IGVHla
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGC
(SEQ ГО NO: 55)
IGVHlb
IGVH2
IGVH3
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGC
CAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCC
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGG
(SEQ ID NO: 56) (SEQ ID NO: 57) (SEQ ID NO: 58)
IGVH4
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCC
(SEQ
NO:
59)
IGVH5
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGG
(SEQ
NO:
60)
IGVH6
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCC
(SEQ
NO:
61)
IGVH7
CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGG
(SEQ
NO:
62)
IGKV1
GHCATCCRGWTGACCCAGTCTC
(SEQ
NO:
63)
IGKV2
GATRTTGTGATGACYCAGWCTC
(SEQ
NO:
64)
IGKV3
GAAATWGTRWTGACRCAGTCTC
(SEQ
NO:
65)
IGKV4
GACATCGTGATGACCCAGTCTCC
(SEQ
NO:
66)
IGKV5
GAAACGACACTCACGCAGTCTC
(SEQ
NO:
67)
IGKV6
GAWRTTGTGMTGACWCAGTCTC
(SEQ
NO:
68)
IGLV1
CAGTCTGTGYTGACKCAGCCRCCCTC
(SEQ
NO:
69)
IGLV2
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCT
(SEQ
NO:
70)
IGLV3
TCCTATGAGCTGACWCAGSHVCCCKC
(SEQ
NO:
71)
IGLV4
CAGCCTGTGCTGACTCARTCVCCCTC
(SEQ
NO:
72)
IGLV5
CAGCCTGTGCTGACTCAGCCAACTTC
(SEQ
NO:
73)
IGLV6
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCAC
(SEQ
NO:
74)
IGLV7
CAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCC
(SEQ
NO:
75)
IGLV8
CAGACTGTGGTGACCCAGGAGCC
(SEQ
NO:
76)
IGLV9
CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACC
(SEQ
NO:
77)
HC301,5 константная область GCAGCCCAGGGCSGCTGTGC (SEQ Ш NO: 78)
Каппа 102 константная область GCACACAACAGAGGCAGTTCCAG (SEQ Ш NO: 79)
Лямбда 202 константная область CTTGRAGCTCCTCAGAGGAG (SEQ Ш NO: 80)
Каждую из реакций 1ТЦР-амплификции тяжелой цепи и легкой цепи делили на две реакции следующим образом: семейства тяжелых цепей VH. 1.2.3 (праймеры IGVHla, IGVHlb, IGVH2, IGVH3) и VH.4.5.6.7 (праймеры IGVH4, IGVH5, IGVH6 и IGVH7); семейства каппа цепей VK. 1.2.3 (праймеры IGKV1, IGKV2 и IGKV3) и VK.4,5,6 (праймеры IGVK4, IGVK5 и IGVK6); и семейства лямбда цепей (VL. 1.2.3.4.5 (IGLV1, IGLV2, IGLV3, IGLV4 и IGLV5) и VL.6.7.8.9 (праймеры IGLV6, IGLV7, IGLV8
и IGLV9). Протокол ступенчатой ПЦР-амплификации использовали для циклического изменения температуры.
После реакции продукты ПЦР-амплификации обрабатывали эндонуклеазой 1 (Ехо) и щелочной фосфатазой креветки (SAP) для удаления избыточных нуклеотидов и праймеров из каждой реакции ПЦР-амплификации (U.S. Biologicals, Marblehead, MA). Начальные продукты ПЦР-амплификации напрямую секвенировали для определения вариабельных последовательностей как тяжелых цепей, так и легких цепей с применением секвенирования Sanger. Вторые вложенные ПЦР-амплификации проводили с применением совпадающих в отношении зародышевых линий вариабельных олигонуклеотидов тяжелой цепи и легкой цепи для введения относящихся к млекопитающему последовательностей клонирования сигнальных и константных областей с применением следующих олигонуклеотидных праймеров.
sVHla:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTGGAGTA CATTCACAGG (SEQ Ш NO: 81)
sVH2:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGATCACCT (SEQ Ш NO: 82)
sVH3vv:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAG (SEQ Ш NO: 83)
sVH3gl:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGAGG (SEQ Ш NO: 84)
sVH4:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGGTGCAGCTGCAGG (SEQ Ш NO: 85)
sVH5:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGAGGTGCA (SEQ Ш NO: 86)
sVH6:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGGTACAGC (SEQ Ш NO: 87)
sVH7:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGGTGCA (SEQ Ш NO: 88)
sVKl:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTG (SEQ Ш NO: 89)
sVK2:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGATATTGTGATGACTCAGTCTCACTCTCCCTGC (SEQ Ш NO: 90)
sVK3:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTG (SEQ Ш NO: 91)
sVK4:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTG (SEQ Ш NO: 92)
sVK5:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGAAACGACACTCACGCAGTCTCCAGC (SEQ Ш NO: 93)
sVK6:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAGAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCG (SEQ Ш NO: 94)
sVLl:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGTCTGTGYTGACKCAGCCRCCCTC (SEQ Ш NO: 95)
sVL2:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGTCTGCCCTGACTCAGCCT (SEQ Ш NO: 96)
sVL3:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCATCCTATGAGCTGACWCAGSHVCCCKC (SEQ Ш NO: 97)
sVL4:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGCCTGTGCTGACTCARTCVCCCTC (SEQ Ш NO: 98)
sVL5:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGCCTGTGCTGACTCAGCCAACTTC (SEQ Ш NO: 99)
sVL6:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCAAATTTTATGCTGACTCAGCCCCAC (SEQ Ш NO: 100)
sVL7:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCC (SEQ Ш NO: 101)
sVL8:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGACTGTGGTGACCCAGGAGCC (SEQ Ш NO: 102)
wVL9:
CCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTG GAGTACATTCACAGCCTGTGCTGACTCAGCCACC (SEQ Ш NO: 103)
Константная область тяжелой цепи: GCCAGGGGGAAGACCGATG (SEQ Ш NO:
104)
Константная область каппа цепи:
CTGGGATAGAAGTTATTCAGCAGGCACACAACAGAAGCAGTTCCAGATTTCAACT GCTC (SEQ ID N0: 105)
Константная область лямбда цепи: CTTGRAGCTCCTCAGAGGAG (SEQ ГО NO:
80)
Реакции 1ТЦР-амплификации проводили с применением ДНК полимеразы PrimeStar HS с GC (Takara Bio, Shiga, Japan) согласно рекомендациям производителя. После реакций ПЦР-амплификации продукты амплификации обрабатывали с помощью описанного выше Exo/SAP. Тяжелую вариабельную цепь и легкую вариабельную цепь, кодирующие продукты ПЦР-амплификации, вводили в экспрессионный вектор млекопитающего с применением процедур без рестрикционной эндонуклеазы. 20 мкл продуктов ПЦР-амплификации отжигали на матрицах одноцепочечной ДНК человека для цепей IgGi, каппа и лямбда цепей с применением протокола мутагенеза Kunkel. (Смотрите Kunkel (1985) PNAS 82:488-492.) Правильно встроенные конструкты подтверждали с помощью секвенирования ДНК. Плазмиды, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелые цепи и легкие цепи, котрансфектировали в клетки почки эмбриона человека 293Т с применением реагента для трансфекции Fugene (Roche Diagnostic, Indianapolis, FN) для транзиторной экспрессии и анализировали в отношении экспрессии и связывания, как описано ниже в примере 4.
Пример 4. Анализ скрининга гемагглютинина с помощью ELISA
Способность каждого моноклонального антитела к гемагглютинину, полученного, как описано выше, связываться с различными подтипами гемагглютинина исследовали с помощью ELISA следующим образом. Различные экспрессирующие гемагглютинин плазмиды трансфектировали в клетки 293Т, описанные выше. Они включали в себя гемагглютинин HI из вируса гриппа A HINl/South Carolina/1918, гемагглютинин НЗ из вируса гриппа A H3N2/Perth/2009, гемагглютинин Н5 из вируса гриппа A H5Nl/Viet/2004 и гемагглютинин Н7 из вируса гриппа А H7N7/Netherlands/2003. Через два дня клетки лизировали в 50 мМ Tris, рН 8, 5 мМ EDTA, 150 мМ NaCl, 1% Triton Х-100 вместе с коктейлем ингибиторов протеазы (Roche). Ядра очищали путем центрифугирования и полученные лизаты сортировали при -80°С.
Для скрининга с помощью ELISA 384-луночные планшеты (Nunc MaxiSorp) покрывали 5 мкг/мл лектина Galanthus nivalis (Sigma) в PBS. Планшеты отмывали и затем покрывали разведениями клеточных лизатов, содержащих различные экспрессированные гемагглютинины. Планшеты отмывали и инкубировали с различными разведениями антител к гемагглютинину и впоследствии с вторичным антителом козы к HRP человека (Jackson). Планшеты отмывали и обрабатывали для обнаружения субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин).
Приблизительно 950 плазмобластов получали из сортировки методом серийных разведений, описанной выше в примере 2. Из них 840 моноклональных антител транзиторно экспрессировали в клетки 293Т и подвергали скринингу с помощью ELISA в отношении связывания с подтипами гемагглютинина HI, НЗ, Н5 и Н7, получая 82 моноклональных антитела, которые связываются с гемагглютинином вируса гриппа А группы 1 или группы 2 и 20 моноклональных антител, которые связываются гемагглютининами как вируса гриппа А группы 1, так и группы 2.
Пример 5. In vitro нейтрализация вируса гриппа А
Способность антител к гемагглютинину согласно настоящему изобретению вызывать связывание широкого диапазона подтипов гемагглютинина и нейтрализацию панели изолятов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 in vitro исследовали следующим образом.
Клетки MDCK выращивали в среде DMEM, дополненной 10% FBS в виде отдельного 25% конфлюэнтного монослоя в 96-луночных черных с прозрачным дном планшетов для получения изображения (Costar 3904). Каждый подтип/штамм вируса гриппа А разводили в среде для разбавления вируса гриппа (DMEM + 0,2%BSA, 2 мкг/мл обработанного ТРСК трипсина) до значения MOI, составляющего 1 и инкубировали в течение 1 часа при 37°С с изменяющимися концентрациями (в диапазоне от 0,02 нМ до 1,600 нМ) каждого антитела. Каждой смесью антител о/вирус гриппа инфицировали клетки MDCK в течение 16 часов при 37°С в 5% СО2 инкубаторе перед фиксацией клеток с помощью холодного 100% этанола. Зафиксированные клетки затем окрашивали с помощью Hoechst 33342 (Invitrogen, № по кат. Н3570) для визуализации клеточных ядер и определения общего количества клеток. Клетки также окрашивали реактивным в широком диапазоне моноклональным антителом (Millipore, № по кат. МАВ8258), специфическим в отношении нуклеопротеина вируса гриппа А для определения количества инфицированных клеток.
Клетки визуализировали с применением Image Express Micro (Molecular Devices) и данные изображений анализировали с применением программного обеспечения MetaXpress 3.1. Процентное отношение инфицированных клеток определяли и отмечали на графике на оси Y, а по оси X отмечали Log 10 концентрации антитела. Все анализы относительно нейтрализации проводили в трех параллелях. Данные соотносили с кривой нелинейной регрессии зависимости эффекта от дозы и представляли на фигуре 3 в виде значений IC50 в нМ с 95% доверительными интервалами (95% CI).
Подтип гемагглютинина (НА) каждого штамма вируса гриппа А представлен в таблице, показанной на фигуре 3.
Кривые зависимости in vitro нейтрализации от дозы получали с применением различных концентраций моноклональных антител, описанных в настоящем документе, к широкой панели штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2. На фигурах 4А и 4В показаны кривые нейтрализации mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) по отношению к панели штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2, соответственно. Как показано на фигурах 4А и 4В, mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) являлось эффективным при in vitro нейтрализации всех исследуемых штаммов вируса гриппа А. (Смотрите также фигуру 3.) Кроме того, на фигурах 5А и 5В показаны кривые нейтрализации mAb 81.39 SVSH-
NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ Ш NO: 171) во отношению к панели штаммов вируса гриппа А группы 1 и группы 2, соответственно. Как показано на фигурах 5А и 5В, mAb 81.39 SVSH-NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ ID N0: 171) являлось эффективным при in vitro нейтрализации всех исследуемых штаммов вируса гриппа А. (Смотрите также фигуру 3.)
Четыре антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению (в частности, mAb 39.18 Bll, mAb 36.89, mAb9,01F3 и тАЬ23,06С2) являлись эффективными in vitro при нейтрализации штаммов вируса гриппа А либо группы 1, либо группы 2, но не обеих групп. В частности, mAb 39.18 Bll являлось эффективным при in vitro нейтрализации всей исследуемой панели вируса гриппа А группы 1, но было не способно нейтрализовать штаммы вируса гриппа А группы 2. (Смотрите фигуру 6 и фигуру 3.) Напротив, mAb 36.89, mAb9,01F3 и тАЬ23,06С2 были способны нейтрализовать всю исследуемую панель вируса гриппа А группы 2, но не способны нейтрализовать любой исследуемый изолят вируса гриппа А группы 1. (Смотрите фигуры 7, 8 и 9, показывающее кривые in vitro нейтрализации для mAb 36.89, mAb9,01F3 и тАЬ23,06С2, соответственно; также смотрите фигуру 3.)
Обобщая, указанные результаты показали, что моноклональные антитела согласно настоящему изобретению были способны нейтрализовать дозозависимым образом различные изоляты/штаммы вируса гриппа A in vitro. Кроме того, указанные результаты показали, что методика обогащение плазмобластов, описанная в настоящем документе, приводит к идентификации моноклональных антител, способных к нейтрализации штаммов вируса гриппа А как группы 1, так и группы 2 только из 950 выделенных плазмобластов.
Исследования нейтрализации in vitro также проводили с применением псевдотипа вируса, сконструированного для экспрессии гемагглютинина Н5 для исследования эффективности антитела согласно настоящему изобретению в нейтрализации вируса гриппа A H5N1. В частности, вирус псевдотипа ВИЧ, несущий поверхностный белок гемагглютинин Н5, исследовали в отношении нейтрализации с помощью mAb 39.29 NCvl на клетках 293Т следующим образом. Вирус псевдотипа Н5 получали путем котрансфекции клеток 293Т с тремя плазмидами: А8.9, FCMV-GFP и плазмидой, экспрессирующей гемагглютинин Н5 из изолята вируса гриппа А H5Nl/Vietnam/1203/2004. Вирус очищали с помощью ультрацентрифугирования через 20% сахарозу. Для инфицирования вирус псевдотипа инкубировали с различными
количествами mAb 39.29 NCvl перед добавлением к целевым 293Т клетками, культивированным в 96-луночных планшетах. Через два дня количество инфицированных клеток определяли путем подсчета GFP-положительных клеток. Инфекцию нормировали к числу инфицированных клеток при наименьшей используемой концентрации антитела. Результаты представлены на фигуре 10. Как показано на фигуре 10, mAb 39.29 NCvl проявляло дозозависимую in vitro нейтрализацию по отношению к вирусу псевдотипа, экспрессирующему поверхностный белок гемагглютинин Н5. Полученные данные указывают на то, что антитела согласно настоящему изобретению будут эффективными в лечении и профилактике штаммов вируса гриппа A H5N1.
Вирус птичьего гриппа также исследовали в отношении способности антител согласно настоящему изобретению проявлять активность in vitro нейтрализации следующим образом. Вирус гриппа A H7N7 A/Equine/1 /Prague/56 переносили на клетки MDCK до достижения высокой степени инфекционности. Полученный вирус гриппа А H7N7 A/Equine/1 /Prague/5 6 использовали в анализах нейтрализации (с применением способов, описанных выше для mAb 39.29 NCvl) на клетках MDCK. Результаты указанных экспериментов представлены на фигуре 11. Как показано на фигуре 11, mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) проявляло дозозависимую in vitro нейтрализацию в отношении вируса гриппа H7N7 A/Equine/1 /Prague/5 6, экспрессирующего поверхностный белок гемагглютинин Н7.
Обобщая, указанные результаты показывают, что антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению проявляли дозозависимую активность нейтрализации в отношении разнообразных штаммов вируса гриппа А. В частности, два антитела к гемагглютинину (mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) и mAb 81.39 SVSH-NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ Ш NO: 171)) являлись эффективными в нейтрализации всех исследуемых штаммов вируса гриппа А, включая в себя нейтрализацию как штаммов вируса гриппа А группы 1 (А/СА/7/2009, A/Brisbane/59/2007, A/Solomon/3/2006, A/New Caledonia/20/1999, A/PR/8/1934 и A/Japan/305/1957), так и штаммов вируса гриппа А группы 2 (A/Victoria/361/2011, A/Perth/16/2009, A/Brisbane/10/2007, A/Wisconsin/67/2005, A/Victoria/3/1975, A/Port Chalmers/1/1973, A/HK/8/1968 и A/Aichi/2/1968).
Кроме того, указанные результаты показывают, что антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению (например, mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое
как SEQ Ш NO: 177) (фигуры 4А и 4В) и mAb 81.39 SVSH-NYP ("SVSH", раскрытое как SEQ Ш N0: 171) (фигуры 5А и 5В)) являлись эффективными в нейтрализации разнообразных различных сезонных штаммов H1N1 вируса гриппа А, штаммов H3N2 вируса гриппа А, штамма H2N2 вируса гриппа А и штамма вирус гриппа А, связанного с пандемией в Японии в 1957 г. (АЛарап/305/1957). Эти результаты указывают на то, что антитела согласно настоящему изобретению являются эффективными в лечении и профилактике сезонной инфекции вируса гриппа А и штаммов вируса гриппа А, связанных с пандемиями гриппа.
Пример 6. Эффективность in vivo mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ ID NO: 177) у мышей
Исследование эффективности in vivo mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) в отношении инфекции вируса гриппа А у мышей проводили следующим образом. Мышей DBA/2J (Jackson Lab, Bar Harbor, ME) инфицировали интраназально с помощью 50 мкл различных штаммов вируса гриппа А, разбавленных в среде для разбавления вируса гриппа (DMEM, 0,2% BSA, 2 мкг/мл обработанного ТРСК трипсина) в минимальной LDioo дозе. Четыре различных штамма вируса гриппа А, проявляющих диапазон in vitro IC50 значений, использовали в указанной серии экспериментов, включая в себя: H1N1 A/PR/8/1934 (Genentech; IC50 2,0 нМ), используемый в дозе 40 БОЕ на мышь; H3N2 A/Hong Kong/1/1968 (ViraPur, San Diego, CA; IC50 45,1 нМ), используемый в дозе 3 БОЕ на мышь; H3N2 A/Port Chalmers/1/1973 (ViraPur, San Diego, С A; IC50 2,2 нМ), используемый в дозе 1,5x104 БОЕ на мышь; и H3N2 A/Aichi/2/1968 (ViraPur, San Diego, С A; IC50 35 нМ), используемый в дозе 2x102 БОЕ на мышь. Инфекции вируса гриппа позволяли прогрессировать в течение 72 часов до внутривенного введения mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177).
Через 72 часа после инфицирования вирусом гриппа А различные количества mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) вводили внутривенно мышам в дозе, составляющей 900 мкг/мышь (приблизительно 45 мг/кг), 300 мкг/мышь (приблизительно 15 мг/кг) и 100 мкг/мышь (приблизительно 5 мг/кг) в 200 мкл PBS. Контрольным животным вводили mAb gD5237 (моноклональное антитело, специфическое в отношении гликопротеина D вируса простого герпеса (HSV)) в самой высокой исследуемой эквивалентной дозе mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как
SEQ Ш NO: 177) (т.е. приблизительно 45 мг/кг). Мышей подвергали мониторингу ежедневно в отношении состояния организма и выживаемости, а также ежедневно взвешивали до 21 дня после инфицирования. Все дозы mAb39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш N0: 177) по сравнению с контролем во всех четырех инфекциях штаммов вируса гриппа А давали логарифмический ранговый критерий, составляющий Р <0,01.
На фигурах 12А, 12В, 12С и 12D показана процентная выживаемость (общее время в днях) мышей, которым вводили различные количества mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш N0: 177) через 72 часа после инфицирования с помощью вируса гриппа A A/PR/8/1934, A/Port Chalmers/1/1973, A/Hong Kong/1/1968 и A/Aichi/2/1968, соответственно. Как показано на фигурах 12А, 12В, 12С и 12D, 100% смертность наблюдалась на 14 день у инфицированных мышей, которым вводили контрольное антитело. Тем не менее, инфицированные мыши, которым вводили моноклональное антитело согласно настоящему изобретению, продемонстрировали повышенную выживаемость. В частности, 100% выживаемость наблюдалась у мышей, инфицированных вирусом гриппа A/Port Chalmers/1/1973 или вирусом гриппа A/Aichi/2/1968 во всех исследуемых дозах mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177). (Смотрите фигуры 12В и 12D.)
Указанные результаты показали, что моноклональные антитела согласно настоящему изобретению являются эффективными в лечении различных инфекций вируса гриппа А. Кроме того, указанные данные показали, что моноклональные антитела согласно настоящему изобретению являлись эффективными в лечении инфекции вируса гриппа А при введении не позднее чем через по меньшей мере 72 часа после инфицирования вирусом гриппа А.
Пример 7. In vivo эффективность mAb 39.29 NCvl у мышей
Для исследования in vivo эффективности mAb 39.29 NCvl у мышей, антитело вводили в/в мышам, инфицированным четырьмя различными изолятами вируса гриппа А, которые проявляли диапазон in vitro IC50 значений. Мышей DBA/2J (Jackson Lab , Bar Harbor, ME) инфицировали интраназально с помощью 50 мкл различных штаммов вируса гриппа А, разбавленных средой для разбавления вирусов гриппа (DMEM, 0,2% BSA, 2 мкг/мл обработанного ТРСК трипсина) в минимальной LD100 дозе.
В одной серии экспериментов изолят вируса гриппа A H1N1 A/PR/8/1934 использовали при 40 БОЕ на мышь. Через 72 часа после инфицирования антитело к гемагглютинину mAb 39.29 NCvl вводили внутривенно в дозе, составляющей приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 1.7 мг/кг или приблизительно 0,56 мг/кг в 200 мкл PBS внутривенно. Получающие контрольное лечение животные получали mAb gD5237, которое являлось специфическим в отношении гликопротеина D HSV в самой высокой исследуемой эквивалентной дозе mAb 39.29 NCvl. Мышей подвергали мониторингу в отношении состояния организма и выживаемости и взвешивали до 21 дня после инфицирования.
Для инфицированных H1N1 A/PR/8/1934 мышей одна в/в доза mAb 39.29 NCvl, составляющая 15 мг/кг на мышь, являлась эффективной по сравнению с таковой, наблюдаемой с применением контрольного антитела IgG. (Смотрите фигуру 13.) В частности, 100% смертность наблюдалась в получающей контрольное лечение группе на 12 день, тогда как одна доза, составляющая 15 мг/кг mAb 39.29 NCvl, спасла 87,5% инфицированных мышей. Трехкратно пониженная доза, составляющая 100 мкг на мышь (приблизительно 5 мг/кг) mAb 39.29 NCvl проявляла некоторую эффективность, будучи способной защитить 25% животных от летального инфицирования, тогда как дозы, составляющие приблизительно 1,7 мг/кг или приблизительно 0,56 мг/кг, продемонстрировали минимальную эффективность, которая была выше, чем наблюдаемая в получающей контрольное лечение группе. (Смотрите фигуру 13.)
В другой серии экспериментов in vivo эффективность mAb 39.29 NCvl дополнительно исследовали в отношении адаптированного в отношении мышей штамма вируса гриппа A H3N2 Hong Kong (H3N2 A/Hong Kong/1/1968), который характеризуется десятикратно повышенной in vitro IC50 по сравнению с A/PR8/1934. Как наблюдали в предыдущих экспериментах, описанных выше, мыши, получившие лечение с помощью контрольного антитела после инфицирования вирусом гриппа А, продемонстрировали 100% смертность на 12 день. (Смотрите фигуру 14.) Тем не менее, однократная доза mAb 39.29 NCvl, составляющая приблизительно 45 мг/кг или приблизительно 15 мг/кг, была способна защитить 87,5% и 75% мышей, соответственно. Минимально эффективная доза, составляющая 15 мг/кг in vivo mAb 39.29 NCvl в моделях инфицирования вирусом гриппа А как A/PR8/1934, так и A/Hong Kong/1/1968 являлась очень сходной, несмотря на наблюдаемое различие в in vitro IC50
значениях для mAb 39.29 NCvl между указанными двумя штаммами. (Смотрите фигуры 3 и 14.)
Для дополнительного исследования in vivo эффективности mAb 39.29 NCvl титрование дозы mAb 39.29 NCvl исследовали в отношении двух дополнительных штаммов вируса гриппа A, Port Chalmers (H3N2 A/Port Chalmers/1/1973) и Aichi (H3N2 A/Aichi/2/1968). mAb 39.29 NCvl характеризуется in vitro IC50 против Port Chalmers, составляющей 2,9 нМ, что очень сходно со значением для A/PR8/1934, тогда как Aichi характеризуется значением IC50 in vitro, составляющим 35,0 нМ, значением, близким таковому для A/Hong Kong/1/1968. Как показано на фигуре 15 и фигуре 16, 100% смертность наблюдалась у получающих контрольное лечение животных на 12 день и 10 день для моделей Port Chalmers и Aichi, соответственно. Моноклональное антитело 39.29 NCvl проявляло очень высокую эффективность против обоих штаммов вируса гриппа А при всех исследуемых дозах (например, 45 мг/кг, 15 мг/кг, 5 мг/кг и 1,7 мг/кг).
Эти данные указывали частично на то, что существовала небольшая корреляция между in vitro IC50 для mAb 39.29 NCvl и in vivo минимальной эффективной дозой. Тем не менее, однократная доза, составляющая 15 мг/кг, введенная в/в через 72 часа после инфицирования, была эффективной во всех четырех мышиных моделях вируса гриппа А, несмотря на диапазон in vitro IC50 значений для указанных штаммов вируса гриппа А.
Пример 8. In vivo эффективность mAb 39.29 и осельтамивира при тяжелой инфекции вируса гриппа А у мышей
Для сравнения эффективности антител к гемагглютинину согласно настоящему изобретению с эффективностью осельтамивира фосфата (Tamiflu(r)) у мышей проводили следующие исследования. Мышей Balb/c (Charles River Laboratories, Hollister, CA) в возрасте 6 недель инфицировали интраназально с помощью 50 мкл H1N1 A/PR/8/1934 в 100-кратной летальной дозе (5X104 БОЕ/мышь). Через 48 часов после инфицирования антитело к гемагглютинину 39.29 (смесь 50:50 mAb 39.29 D8C2 и mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177)) вводили в виде однократной дозы, составляющей приблизительно 15 мг/кг, или контрольный IgG в 200 мкл PBS внутривенно. В указанных экспериментах схему дозирования осельтамивира, состоящую из 2 мг, дозируемых дважды в день (BID) в течение пяти дней, сравнивали с однократной дозой, составляющей 300 мкг в/в (~15 мг/кг) mAb
39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177). Логарифмический ранговый критерий для mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) или осельтамивира по сравнению с контролем дал р <0,01 и критерий максимальной вероятности для mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) по сравнению с осельтамивиром дал р <0,05. (Осельтамивир (т.е. Tamiflu(r)) получали от Toronto Research Chemicals, № по кат. 0701000.)
Как показано на фигуре 17, 100% смертность наблюдалась на 9 день у получавших лечение с помощью контрольного IgG (mAb gD5237) животных. BID лечение осельтамивиром в течение 5 дней защитило от смертельного исхода только 37,5% мышей. Тем не менее, однократная доза смеси, составляющая 15 мг/кг mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177), защитила 87,5% инфицированных животных от летального заражения вирусом гриппа А. (Смотрите фигуру 17.) Полностью эффективная доза 15 мг/кг смеси mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытое как SEQ Ш NO: 177) проявили себя лучше, чем осельтамивир у мышей, тяжело инфицированных вирусом гриппа А.
Указанные результаты показали, что однократная доза моноклонального антитела согласно настоящему изобретению являлась более эффективной при лечении инфекции вируса гриппа А, чем 5-дневное лечение с помощью осельтамивира.
Пример 9. Эффективность in vivo mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ ID NO: 177) у мышей с совместным введением осельтамивира и без него
Введение осельтамивира является эффективным в снижении инфекции вируса гриппа А у человека, если его вводят не позже чем через 48 часов после появления симптомов. К сожалению, осельтамивир показал минимальную эффективность у пациентов, у которых выявили симптомы позднее, чем через 48 часов. Следовательно, следующие эксперименты проводили для исследования того, будет ли совместное введение моноклонального антитела согласно настоящему изобретению и осельтамивира показывать улучшенную эффективность по сравнению с лечением любым из них отдельно. Указанные эксперименты проводили с применением модели тяжелой инфекции гриппа у мышей, описанной выше в примере 8. Вкратце, самок мышей Balb/C (Charles River Laboratories) инфицировали с помощью 100-кратной летальной дозы (5x104 БОЕ) A/PR/8/1934 за 72 часа до в/в введения однократной дозы, составляющей 100 мкг mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177)
(приблизительно 6 мг/кг, предварительно установленная субэффективная доза), контрольного IgG, 2 мг BID осельтамивира или комбинации однократной дозы mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) и осельтамивира в течение 5 дней. Логарифмический ранговый критерий комбинированного лечения по сравнению с лечением с помощью mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) или осельтамивира дает р <0,01.
Как предполагали, получившие лечение с помощью контрольного IgG животные проявляли 100% смертность через 9 дней после инфицирования. (Смотрите фигуру 18.) Смертность, наблюдаемая у получивших лечение с помощью контроля животных, была очень сходна с таковой для групп, получивших только осельтамивир или субэффективную дозу mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177). Тем не менее, совместное введение субэффективной дозы mAb 39.29 NWPP ("NWPP", раскрытого как SEQ Ш NO: 177) вместе с осельтамивиром значительно улучшало выживаемость по сравнению с выживаемостью, наблюдаемой при лечении только одним из средств, давая в результате 87,5% выживаемость. (Смотрите фигуру 18.)
Указанные результаты показали, что синергетический эффект на лечение инфекции вируса гриппа А происходил при комбинированной терапии с применением моноклонального антитела согласно настоящему изобретению, используемого в комбинации с осельтамивиром, ингибитором нейраминидазы.
Пример 10. Антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению проявляют себя лучше, чем осельтамивир в модели инфекции вируса гриппа А H5N1 у хорьков
Модели инфекции вируса гриппа А у хорьков часто используют для изучения профилактической и терапевтической эффективности противогриппозных терапевтических средств. Хорьков рассматривают в качестве клинически релевантной животной модели для инфекции вируса гриппа А у человека. (Смотрите Matsuoka et al, (2009) Current Protocols in Microbiology, Chapter 15, Unit 15G 12.)
Для исследования in vivo эффективности mAb 39.29 D8C2 и mAb 81.39 B1C1 в отношении изолята H5N1 вируса гриппа А человека у хорьков провели следующие исследования. Исследование H5N1 у хорьков проводили по контракту в Lovelace Respiratory Research Institute (Albuquerque, NM). Самцов хорьков (Mustela putorius furo) инфицировали интраназальной дозой, составляющей 1x103 БОЕ высоко вирулентного
штамма H5N1 A/Vietnam/1203/04 вируса гриппа А (доза LD90). Животных инфицировали за 48 или 72 часа до введения антитела в/в путем или осельтамивира (Tamiflu(r)) с помощью перорального зонда. Получающие контрольное лечение животные получали 25 мг/кг в/в дозу шАВ gD5237, моноклонального антитела к гликопротеину D HSV. Получающие противогриппозное лечение животные получали 25 мг/кг в/в дозы или mAb 39.29 D8C2, или mAb 81.39 В1С1 через 48 или 72 часа после инфицирования вирусом гриппа. Каждая получавшая лечение с помощью антитела группа включала в себя 10 хорьков. Получавшие осельтамивир животные получали дважды в день пероральную дозу, составляющую 25 мг/кг в течение 5 дней. Животных подвергали мониторингу ежедневно в отношении потери массы тела, наличия лихорадки и физического состояния организма.
В соответствии с инфекцией H5N1 большинство инфицированных хорьков продемонстрировали ранние признаки заболевания верхних дыхательных путей через 48 часов после инфицирования. Как предполагали для летальной дозы H5N1, получавшая лечение с помощью отрицательного контроля группа проявляла 90% смертность на 14 день после инокуляции. (Смотрите фигуры 19А и 19В.)
Напротив, хорьки, которые получали однократную дозу mAb 39.29 D8C2 либо через 48, либо через 72 часа после инфицирования вирусом гриппа, продемонстрировали 80% и 90% выживаемость (20% и 10% смертность), соответственно. (Смотрите фигуру 19А.) Аналогично, хорьки, которые получали однократную дозу mAb 81.39 В1С1 либо через 48, либо через 72 часа после инфицирования, продемонстрировали 100% и 80% выживаемость (0% и 20% смертность), соответственно. (Смотрите фигуру 19В.) Независимо от времени начала лечения получившие лечение с помощью осельтамивира группы продемонстрировали 50% смертность.
Указанные результаты показали, что нейтрализующие в широком диапазоне антитела к гемагглютинину согласно настоящему изобретению в высокой степени проявляли защитный эффект в лечении тяжелой инфекции вируса гриппа A H5N1 у хорьков и были более эффективными, чем осельтамивир при введении или через 48 или через 72 часа после инфицирования вирусом гриппа А.
Пример 11. Кристаллизация и сбор данных
Для исследования структурной основы для перекрестной реактивности антител согласно настоящему изобретению в отношении гемагглютинина, фрагмент Fab mAb 39.29 NCvl совместно кристаллизировали с рекомбинантным гемагглютинином НЗ из штамма вируса гриппа А человека A/Perth/16/2009 следующим образом.
Экспрессия и очищение белка
Для лучшего понимания структурной основы для нейтрализации гемагглютинина кристаллическую структуру фрагмента Fab mAb 39.29 NCvl в комплексе с гемагглютинином определяли следующим образом. Нуклеиновую кислоту, кодирующую внеклеточный домен гемагглютинина НЗ Perth (НЗНА, A/Perth/16/2009, аминокислотные остатки 25-520 (SEQ Ш NO: 226 для аминокислотной последовательности полноразмерного гемагглютинина НЗ (НЗНА)) клонировали в вектор pACGP67 (BD Biosciences) в одной рамке считывания с сайтом расщепления тромбина (LVPRGS, SEQ ID NO: 106), "фолдон" последовательностью тримеризации (PGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLG, SEQ ID NO: 107) и С-концевой 6xHis меткой (SEQ ГО NO: 108). Рекомбинантный бакуловирус создавали путем котрансфекции клеток SJ9 с вектором H3HA-pACGP67 и линеаризированной ДНК бакуловируса (Pharmingen).
Для создания рекомбинантного белка НЗНА клетками PRO Trichoplusia ni инфицировали рекомбинантный бакуловирус с применением значения MOI, составляющего 1 и выращивали в течение 72 часов при 27°С. Клеточные супернатанты обрабатывали с помощью 50 мМ Tris-HCl, рН 7,5, 5 мМ СаСЬ и 1 мМ NiCh с последующим центрифугированием и фильтрованием. Среду затем концентрировали и буфер заменяли на 10 мМ Tris, рН 8,0 и 150 мМ NaCl (TBS), содержащий 20 мМ имидазол путем тангенциальной проточной фильтрации и белок захватывали с помощью Ni-агарозы и элюировали в TBS, содержащий 200 мМ имидазол. Фолдон метку отщепляли в течение ночи с помощью тромбина и НЗНА концентрировали и дополнительно очищали на экслюзионной колонке Superdex 200 16/60, уравновешенной в TBS.
Для получения комплекса гемагглютинин-Fab mAb 39.29 NCvl Fab (под контролем промотора PhoA) экспрессировали в Е. coli в течение ночи при 30°С. Клетки осаждали путем центрифугирования при 6000 об/мин в течение 15 минут и лизировали с помощью микрофлюидизации в PBS, дополненном 25 мМ EDTA и 1 мМ PMSF.
Клеточный осадок удаляли путем центрифугирования при 10000 об/мин в течение 1 ч при 4°С. Полученный супернатант пропускали через колонку с белком G и Fab элюировали с помощью 0,58% уксусной кислоты. Дополнительное очищение mAb 39.29 NCvl Fab проводили с помощью хроматографии с применением SP сефарозы с применением градиента от 0 до 1 М NaCl в 20 мМ MES, рН 5,5. Для получения комплекса НА/39.29 НЗНА инкубировали в течение ночи с избытком mAb 39.29 NCvl Fab с последующим концентрированием и эксклюзионной хроматографией S200 в TBS для выделения комплекса. Комплекс концентрировали до 10 мг/мл для экспериментов по кристаллизации.
Кристаллизация
Образование кристаллов комплекса НЗ НА/39.29 NCvl Fab обнаружили в 0,1 М фосфат-цитратного буфера, рН 4,2 с применением 40% PEG 300 в качестве осадителя (условие С6, фильтр разреженных матриц JCSG+, Qiagen). В конечном счете выращивали кристаллы дифракционного качества при 19°С в сидячих каплях, содержащих 0,1 мкл белка и 0,1 мкл 0,1 М фосфат-цитратного буфера, рН 4,2, 40% PEG 300 и 0,7% 1-бутанола. Кристаллы криоконсервировали в маточном растворе с последующим сверхбыстрым замораживанием и хранением в жидком азоте. Данные собирали в условиях криоконсервации в канале синхронного излучения Canadian Light Source CMCF-08ID и обрабатывали с применением MOSFLM и SCALA. Кристалл принадлежал пространственной группе 1213, с размерами кристаллической решетки, составляющими а=Ь=с=204,4 и а=Р=у=90°.
Определение структуры
Начальные фазы получали путем молекулярного замещения с помощью PHASER с применением структуры НЗНА (PDB 3SDY) в качестве поисковой модели. Впоследствии части Fc и Fv из Fab замещали отдельно с применением PHASER и подвергали начальным циклам уточнения твердого тела с помощью Phenix. Модель проходила через несколько повторяющихся циклов регулирования с помощью COOT и имитации отжига, уточнения координат и b-фактора с помощью Phenix. Молекулы сахара, обнаруженные на сайтах гликозилирования, связанных с Asn, добавляли с применением пакета программного обеспечения Carboload от Phenix и конечные циклы уточнения проводили с применением REFMAC5. Конечную модель уточняли при 3,1 А
со значениями R/Rfree, составляющими 19,9 и 25,9%, соответственно. Статистические критерии Рамачандрана, рассчитанные с помощью Molprobity, показывают, что 89,7% остатков лежат в предпочтительных областях с 1,1% выбросов. Контакты анализировали с применением программного обеспечения Protein Interfaces, Surfaces, and Assemblies (PISA) и структурные фигуры получали с помощью PYMOL.
Пример 12. Определение структурных характеристик эпитопа 39.29 на гемагглютинине НЗ
Описанный выше в примере 11 фрагмент Fab mAb 39.29 NCvl совместно кристаллизовали с рекомбинантным гемагглютинином НЗ из штамма вируса гриппа А человека A/Perth/16/2009. Кристаллическую структуру комплекса антител о/гемагглютинин определяли при разрешении 3.1 А. Общая структура гемагглютинина НЗ A/Perth/16/2009 была аналогичной ранее определенным структурами гемагглютинина за исключением небольших реаранжировок и нарушения упорядоченности в спираль 1 НА2/линкер спирали 2. Нарушение упорядоченности в указанных положениях наблюдали ранее при условиях кристаллизации с низким значением рН, что согласуется с указанным комплексом, кристаллизирующимся при рН 4,2 (Ekiert et al, (2011) Science 333:843-850). Кристаллическая структура комплекса антитело/НА продемонстрировала одну молекулу mAb 39.29 Fab, связанную с каждым мономером нерасщепленного тримера НЗ НА. Фрагменты как легкой цепи, так и тяжелой цепи Fab-фрагментов mAb 39.29 NCvl были везде хорошо видны, обеспечивая возможность для исследования с близкого расстояния взаимодействия Fv с НА.
Определили, что эпитоп для mAb 39.29 NCvl находится на области "ножки" гемагглютинина НЗ, грубо говоря, на верхушке спирали А НА2. Указанную область "ножки" гемагглютинина впервые идентифицировали как нейтрализующий в широком диапазоне эпитоп для вирусов гриппа А, экспрессирующих подтипы гемагглютинина группы 1 (Ekiert etal, (2009) Science 324:246-251; Sui et al, (2009) Nature Structural & Molecular Biology 16:265-273)) и позднее как нейтрализующий эпитоп для штаммов вируса гриппа А, несущих подтипы гемагглютинина группы 1 и группы 2 (Corti et al, (2011) Science 333:850-856). Антитело mAb 39.29 NCvl использует обширные контакты тяжелых и легких цепей, чтобы удерживать приблизительно 1175 А2 площадь поверхности "ножки" гемагглютинина. Тяжелая цепь mAb 39.29 NCvl вносит свой вклад в связывания, главным образом, посредством выступающей гидрофобной петли
CDRH3, которая проникает в неглубокую неполярную бороздку, прилежащую к спирали НА2 А и находится снизу консервативного сайта гликозилирования гемагглютинина группы 2 на Asn54. Указанная петля CDRH3 выступает за пределы боковой цепи Phe99 для взаимодействия с Thr334, Пе390 и Пе393 гемагглютинина НЗ, при этом создавая полярные контакты главной цепи с GlcNAc, прикрепленным к Asn54 гемагглютинина НЗ. Петля CDRH3 mAb 39.29 NCvl также создает Р-поворот на GlylOO, который, вероятно, стабилизируется межпетельными контактами главной цепи между Val98 и Не 100А. Не 100А обращен вниз для взаимодействия с консервативным ТгрЗбб гемагглютинина НЗ, тогда как Val98 и РгоЮОС также создает ван-дер-ваальсовы контакты с "ножкой" гемагглютинина НЗ. Оставаясь на границе между тяжелой и легкой цепями, ProlOOD и ТгрЮОЕ завершают длинную петлю CDRH3 и действуют для заякоривания петли на месте.
Легкая цепь mAb 39.29 NCvl также в значительной степени вносит свой вклад в взаимодействие с "ножкой" гемагглютинина НЗ, создавая контакты "ножки" гемагглютинина НЗ со всеми тремя петлями CDR легкой цепи, а также с каркасными остатками. Из приблизительно 1100 А2 занимаемой гемагглютинином площади поверхности -60% занимает легкая цепь (640А2 по сравнению с 480А2 для легкой цепи и тяжелой цепи, соответственно). Asn32 CDRL1 создает водородную связь с остатками Asp391 и Asn394 спирали НА2 А НЗ, тогда как His31 CDRL1 складывается перпендикулярно оси боковой цепи Asn376 гемагглютинина НЗ. Ser52 в петле CDRL2 также создает полярные контакты с Asn398. В пределах петли CDRL3 каркаса Asn93 контактирует с Asp391, тогда как Тгр94 создает взаимодействие лжатионов с Lys384 в спирали НА2 А. Интересно, что mAb 39.29 также создает ряд контактов каркасной области с гемагглютинином, в первую очередь, посредством каркасных взаимодействий повтора SGSGSG (SEQ Ш NO: 109) в бета-цепи 6 в IgKV3 с аминокислотными остатками 403 - 405 в полипептиде гемагглютинина НЗ. Ser67 в mAb 39.29 NCvl также создает полярные взаимодействия с Asp48 и Thr404 в гемагглютинине НЗ.
Все три петли CDR легкой цепи mAb 39.89 NCvl вносят свой вклад в связывание эпитопа "ножки" НЗ НА, составляя приблизительно 60% общей площади занимаемой поверхности. Указанная большая зависимость контактов легкой цепи является уникальной среди известных связывающих и нейтрализующих антител к гемагглютинину группы 1 и группы 2, причем легкая цепь антитела F16v3 занимает
только 20% от общей площади занимаемой поверхности, и легкая цепь антитела CR9114 не создает контактов с эпитопом.
Несмотря на структурную консервативность, подтипы гемагглютинина группы 1 и группы 2 значительно различаются по уровню первичной аминокислотной последовательности. Для сравнения контактирующих остатков mAb 39.29 NCvl НЗНА с другими подтипами гемагглютинина, авторы настоящего изобретения выравнивали аминокислотную последовательность гемагглютинина НЗ из вируса гриппа A/Perth/16/2009 с репрезентативными аминокислотными последовательностями гемагглютинина из других штаммов вируса гриппа: НША из A/California/07/2009; Н2НА из A/Japan/305/1957; Н5НА из A/Vietnam/1203/2004; и Н7НА из A/chicken/NSW/1/1997. Аминокислотная нумерация гемагглютинина НЗ из A/Perth/16/2009 в кристаллической структуре совпадает с последовательностью гемагглютинина НЗ, используемой в выравнивании. Выравнивание последовательности гемагглютинина осуществляли с применением clustalW и аминокислотных последовательностей, соответствующих гемагглютинину HI из A/California/07/2009, гемагглютинину Н2 из A/Japan/305/1957, гемагглютинину НЗ из A/Perth/19/2009, гемагглютинину Н5 из A/Vietnam/1203/2004 и гемагглютинину Н7 из A/chicken/NSW/1/1997. Кристаллическую структуру использовали для определения контактирующих остатков между фрагментом Fab 39.29 NCvl и "ножкой" гемагглютинина НЗ.
Выравнивание представлено на фигуре 20. Контактирующие с гемагглютинином остатки (заштрихованные серым) определяют как остатки в пределах 4,5А mAb 39.29 NCvl. Каждый аминокислотный остаток, который характеризуется больше чем 50% своей доступной площади поверхности, занимаемой mAb 39.29 NCvl Fab, отмечают звездочкой.
Высокая степень консервативности последовательностей наблюдается среди контактирующих остатков, которые вносят значительных вклад в связывание mAb 39.29 NCvl с указанным эпитопом. (Смотрите фигуру 20.) Это наблюдение указывает на то, что mAb 39.29 NCvl связывает молекулы гемагглютинина группы 1 и группы 2 посредством того же эпитопа "ножки", который наблюдается в кристаллической структуре, описанной выше. Указанный эпитоп аналогичен эпитопу гемагглютинина, идентифицированному для антитела к гемагглютинину FI6v3 (Corti et al, (2011), ранее). Тем не менее, mAb 39.29 NCvl связывается в другой ориентации по отношению к
"ножке" гемагглютинина, чем это делает FI6v3. Сравнение структур 39.29 NCvl, F16v3 и CR9114 в комплексе с НА выявило, что все три антитела связываются с эпитопом, который включает в себя спираль НА2 А и является смежным с неполярными группами. Тем не менее, каждое из трех антител характеризуется уникальной ориентацией связывания, причем каждая тяжелая цепь связывается с аналогичным топографическим положением на НА, но с таким положением легкой цепи, при котором происходит поворот на -60° (F16v3) или -120° (CR9114) по сравнению с 39.29 NCvl. Также уникальным для mAb 39.29 NCvl является то, что повтор SGSGSG легкой цепи IgKV3 (SEQ Ш NO: 109) в каркасной области бета-цепи 6 создает контакт с НЗ НА. Следовательно, структура 39.29 представляет третье решение для связывания указанного высококонсервативного эпитопа и подчеркивает важность вовлечения спирали НА2 А для широкомасштабной нейтрализации вируса гриппа А.
Кристаллографические данные относительно mAb 39.29 в комплексе с гемагглютинином НЗ из штамма A/Perth/16/2009 вируса гриппа А человека выявили следующие контактирующие положения: 34, 36, 54, 70, 292, 294, 305, 307, 334, 363, 364, 365, 366, 379, 380, 382, 383, 384, 386, 387, 390, 391, 393, 394, 395, 397, 398, 401, 403, 404 и 405. Антитело FI6v3 продемонстрировало следующие контактирующие положения: 334, 352, 356, 363, 364, 365, 366, 381, 383, 384, 386, 387, 388, 390, 391, 393, 394, 397, 398, 401 и 402. Положения аминокислотных остатков соответствовало гемагглютинину НЗ из штамма A/Perth/16/2009 вируса гриппа A (SEQ ID NO: 226). (Смотрите международные патентные публикации №№: WO 2010/010466 и WO 2013/011347; Corti et al. (2011) Science 333:850-856.) Наряду с тем, что наблюдалось некоторое перекрывание, mAb 39.29 продемонстрировало большое число контактирующих положений в пределах гемагглютинина, чем FI6v3.
Факт того, что CDR антител mAb 39.29 NCvl и FI6v3 не характеризовались гомологией последовательностей и что оба антитела вовлечены в сходный, но не идентичный эпитоп "ножки" различными путями, указывает на, что существуют различные пути для антител, чтобы связаться с консервативным эпитопом "ножки" и нейтрализовать в широком диапазоне вирусы гриппа А.
Пример 13. Конкурентный анализ ELISA
Конкурентные анализы ELISA разработали с применением гемагглютинина HI из вируса гриппа A/WSN/1933 и гемагглютинина НЗ из вируса гриппа A/Hong
Kong/8/1968. В покрытых гемагглютинином планшетов для ELISA осуществляли связывание исследуемого антитела при различных концентрациях (ось X) перед добавлением насыщающих концентраций меченного биотином mAb 39.29. Если исследуемое антитело конкурировало за эпитоп гемагглютинина mAb 39.29, то сигнал ELISA биотина (ось Y) уменьшался как функция увеличения концентрации исследуемого антитела. Данные связывания соотносили с нелинейной кривой зависимости ответа от дозы для определения значения ЕС50 , представленного в нМ.
mAb 39.29 IgG биотинилировали посредством аминного сочетания согласно рекомендованному производителем протоколу (Sulfo-NHS-LC-LC, Pierce, Rockford, IL). Конечная маточная концентрация биотинилированного mAb составляла 13,2 мМ. Для определения оптимальной концентрации для использования биотинилированное антитело 39.29 серийно титровали против иммобилизированного гемагглютинина HI из вируса гриппа A A/WSN/1933 и гемагглютинина НЗ из вируса гриппа A A/Hong Kong/8/1968. Рекомбинантные белки - гемагглютинин HI и НЗ разбавляли до 2 мкг/мл в фосфатфатно-солевом буфере (PBS) и распределяли (по 100 мкл) в 96-луночные планшеты Nunc Maxisorp (Nunc, Rochester, NY). Планшеты покрывали в течение ночи при 4°С, отмывали в PBS и затем блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре с помощью PBS, содержащего 1% бычий сывороточный альбумин (BSA, Sigma-Aldrich, St. Louis, МО).
В каждый планшет затем добавляли 100 мкл серийно разведенного биотинилированного mAb 39.29, начиная с исходной концентрации, составляющей 88 нМ с 1/3 разведениями в PBS, содержащем 1,0% BSA и 0,05% полисорбат 20 (Sigma-Aldrich). Через 1 ч инкубации планшеты отмывали и затем инкубировали с 100 мкл 1:5000 разведения конъюгированной со стрептавидином пероксидазы хрена (Caltag Laboratories, Carlsbad, CA) в течение 30 минут при комнатной температуре. После инкубации планшеты отмывали и проявляли с помощью 100 мкл субстрата ТМВ (Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc. Gaithersburg, MD). Планшеты считывали на планшет-ридере SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA.) при ОП, составляющей 450 нм. Определили, что оптимальная концентрация биотинилированного mAb составила 1 нМ.
Различные концентрации (ось х) моноклональных антител 39.18, 36.89, 81.39 39.29, mAb 9, mAb 23 согласно настоящему изобретению и контрольного IgG инкубировали с покрытыми гемагглютинином планшетами в течение 30 минут при
комнатной температуре. Начальная концентрация составляла 200 нМ с последующим 3-кратным серийным разведением. Биотинилированное mAb 39.29 добавляли до конечной субнасыщающей концентрации, составляющей 1 нМ. После инкубации в течение 1 часа планшеты отмывали и инкубировали с 100 мкл 1:5000 разведения конъюгированной со стрептавидином пероксидазы хрена в течение 45-минут. Планшеты отмывали и затем проявляли с помощью раствора ТМВ. Если исследуемое антитело конкурировало за эпитоп НА mAb 39.29, сигнал ELISA биотина (ось Y) уменьшался как функция увеличения концентрации исследуемого антитела. Данные связывания соотносили с кривой нелинейной зависимости ответа от дозы для определения значения ЕС50 , представленного в нМ.
На фигурах 21А и 21В показаны результаты конкурентного анализа ELISA для mAb в отношении связывания с НША из A/NWS/1933 (фигура 21А) или НЗНА из А/НК/8/1968 (фигура 21В). Результаты показали, что все mAb 39.29, mAb 81.39, mAb 39.18 и mAb 36.89 связываются с перекрывающимся эпитопом "ножки" гемагглютинина (фигуры 21А и 21В). В частности, mAb 81.39 и mAb 39.18 конкурируют за связывание с mAb 39.29 на "ножке" гемагглютинина HI (фигура 21А), тогда как mAb 81.39 и mAb 36.89 конкурируют за связывание с mAb 39.29 с идентифицированным эпитопом "ножки" на гемагглютинине НЗ (фигура 21В).
Путем применения конкурентных анализов ELISA было установлено, что моноклональные антитела 81.39, 39.18, 36.89, mAb 9 и mAb 23 связываются с высококонсервативным эпитопом "ножки" гемагглютинина, идентифицированным с помощью структурного анализа. В частности, mAb 81.39 и mAb 39.18 конкурируют за связывание mAb 39.29 на "ножке" гемагглютинина HI группа 1. Кроме того, mAb 81.39, mAb 36.89, mAb 9 и mAb 23 конкурируют за связывание с mAb 39.29 с идентифицированным эпитопом "ножки" на гемагглютинине НЗ группы 2. Как предполагали, поскольку mAb 39.18 нейтрализует только изоляты гриппа А группы 1, оно не конкурирует за связывание mAb 39.29 с эпитопом на гемагглютинине группы 2. Аналогично, mAb 36.89, mAb 9 и mAb 23 нейтрализует только изоляты гриппа А группы 2 и, следовательно, не конкурирует за связывание mAb 39.29 на гемагглютинине HI группа 1. Данные указанных экспериментов дополнительно обобщены в таблице 3 ниже.
Таблица 3
Изолят гриппа
Подтип НА
mAb 39.18
mAb 39.29
mAb 81.39
mAb 36.89
mAb 9
mAb 23
A/NWS/1933
Grpl/Hl
0,88
2,8
2,15
А/НК/8/1968
Grp2/H3
2,54
4,21
1,32
8,42
1,84
EC50 представлена в нМ
- Указывает ЕС 50 > 200 нМ
Пример 14. Безопасность и фармакокинетика антитела к вирусу гриппа А у здоровых волонтеров
Проводили исследование 1 фазы действия однократных нарастающих доз mAb 39.29-NWPP у здоровых субъектов - мужчин и женщин в возрасте 18 лет или старше. Начальную дозировку для исследования безопасности, переносимости и фармакокинетики у здоровых взрослых субъектов осуществляли путем в/в введения однократной дозы (1,5 мг/кг, 5 мг/кг, 15 мг/кг или 45 мг/кг) тАЬ39.29. тАЬ39.29 был безопасным и хорошо переносился при всех уровнях дозы после периода последующего наблюдения, составляющего по меньшей мере 58 дней для уровня дозы, составляющего 45 мг/кг, и 120 дней для уровня дозы, составляющего 1,5 мг/кг. О каких-либо серьезных побочных эффектах, связанных с исследуемым лекарственным средством, не сообщалось.
Концентрации mAb 39.29 в сыворотке проявляли двухфазный характер с начальной быстрой фазой распределения с последующей медленной фазой элиминации. тАЬ39.29 продемонстрировал линейную фармакокинетику (РК). Среднее значение Сшах увеличивалось пропорционально дозе, составляя 33,5 мкг/мл для группы, получающей дозу 1,5 мг/кг, и 1180 мкг/мл для группы, получающей дозу 45 мг/кг. Аналогично, среднее значение AUCo-infmity в группе составляло 518 и 5530 мкг /мл*день для групп, получающих дозы 1,5 мг/кг и 15 мг/кг, соответственно, и является приблизительно пропорциональным дозе. На основании доступных данных РК у здоровых субъектов - мужчин и женщин mAb 39.29, по-видимому, характеризуется РК-профилем, согласующимся с таковым у типичного антитела IgGl человека со средним периодом полужизни, составляющим приблизительно 20 дней (средний диапазон, составляющий 19,3-22,2).
Пример 15. 2 фаза исследования антитела к гемагглютинину вируса гриппа
2 фазу клинического исследования антитела к гемагглютинину вируса гриппа А согласно настоящему изобретению проводят следующим образом. Госпитализированным индивидуумам с инфекцией вируса гриппа А вводят антитело к гемагглютинину вируса гриппа А согласно настоящему изобретению путем внутривенного введения в дозе, составляющей 1,5 мг/кг, 5 мг/кг, 15 мг/кг или 45 мг/кг. Альтернативно, индивидуумам вводят антитело в фиксированной дозе, составляющей 120 мг, 400 мг, 1200 мг или 3600 мг. Индивидуумам также могут вводить осельтамивир (Tamiflu(r)) (современный стандарт лечения) перед, во время или после введения антитела к гемагглютинину вируса гриппа А. Как правило, используют режим однократного дозирования антитела, хотя предусмотрены и последующие дозы.
Введение антитела к гемагглютинину вируса гриппа А согласно настоящему изобретению демонстрирует эффективность в лечении инфекции вируса гриппа А, включая в себя снижение инфекционности вируса гриппа А, снижение длительности пребывания в стационаре, снижение или профилактику необходимости в применении палаты интенсивной терапии, снижение или профилактику необходимости во вспомогательной или искусственной вентиляции легких, снижение или профилактику необходимости в применении дополнительного кислорода и снижение смертности.
Введение антитела к гемагглютинину вируса гриппа А согласно настоящему изобретению демонстрирует эффективность в лечении инфекции вируса гриппа А путем снижения времени для нормализации дыхательной функции (например, снижение времени, необходимого для нормализации частоты дыхательных движений или снижение времени, необходимого для нормализации насыщения кислородом), снижение времени для возвращения к нормальному насыщению кислородом, например, до насыщения кислородом, составляющего приблизительно 92% или больше, что измеряют через 24-часовой период без введения дополнительного кислорода, или снижение времени для нормализации витальных признаков, таких как частота сердечных сокращений, давление крови, частота дыхательных движений и температура.
Статистические анализы
Статистику рассчитывали с применением программного обеспечения JMP версии 9.0.2 (SAS Institute). Эксперименты по выживаемости сравнивали с применением логарифмического рангового критерия, /^-значения < 0,05 считали
существенными. Кривые и значения IC50 наносили на графики и рассчитывали с применением программного обеспечения Graphpad Prism версии 5.0.
Несмотря на то, что вышеизложенное изобретение было описано подробно путем иллюстрации и примера для целей ясности понимания, описания и примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения. Раскрытия всей патентной и научной литературы, процитированные в настоящем документе, полностью включены посредством ссылки.
<120> АНТИТЕЛА К ГЕМАГГЛЮТИНИНУ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
<130> P4982R1-WO
<140> <141>
<150> 61/725,859 <151> 2012-11-13
<160> 245
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1 <211> 38
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 1
atcgtttcat aagcgcgcca ggtgcagctg gtgcagtc 38
<210> 2 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 2
atcgtttcat aagcgcgcca grtcaccttg aaggagtc 38
<210> 3 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 3
atcgtttcat aagcgcgcga ggtgcagctg gtggagtc 38
<210> 4 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 4
atcgtttcat aagcgcgcca ggtgcagctg gtggagtc 38
<210> 5 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 5
atcgtttcat aagcgcgcga agtgcagctg gtggagtc 38
<210> 6 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 6
atcgtttcat aagcgcgcca ggtgcagctg caggagtc 38
<210> 7 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 7
atcgtttcat aagcgcgcca gctgcagctg caggagtc 38
<210> 8 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 9 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 9
atcgtttcat aagcgcgcca ggtacagctg cagcagtc 38
<210> 10 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 10
atcgtttcat aagcgcgcca ggtgcagctg gtgcaatc 38
<210> 11 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 11
atcgtttcat aagcgcgcca ggtccagctt gtgcagtc 38
<210> 12 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 12
atcgtttcat aagcgcgcca ggttcagctg gtgcagtc 38
<210> 13 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 13
atcgtttcat aagcgcgcca ggtccagctg gtacagtc 38
<210> 14 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 14
atcgtttcat aagcgcgcca gatgcagctg gtgcagtc 38
<210> 15 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 15
atcgtttcat aagcgcgcca aatccagctg gtgcagtc 38
<210> 16 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 16
atcgtttcat aagcgcgcga ggtccagctg gtgcagtc 38
<210> 17 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 17
atcgtttcat aagcgcgcga ggtgcagctg ttggagtc
<210> 18 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 18
atcgtttcat aagcgcgcga ggtgcagctg gtggagac 38
<210> 19 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 19
atcgtttcat aagcgcgcca ggtgcagcta cagcagtg 38
<210> 20 <211> 39 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 20
gacattctac gagctagctg aggagacagt gaccagggt 39
<210> 21 <211> 39 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 21
gacattctac gagctagctg aggagacggt gaccagggt 39
<210> 22 <211> 40 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический
<400> 22
gacattctac gagctagctg aagagacggt gaccattgtc 40
<210> 23 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 23
gacattctac gagctagctg aggagacggt gaccgtgg 38
<210> 24 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 24
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60 acatccagwt gacccagtc 79
<210> 25 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 25
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60 atgttgtgat gactcagtc 79
<210> 26 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 27 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 27
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60 atattgtgat gacccacac 79
<210> 28 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 28
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60 aaacgacact cacgcagtc 79
<210> 29 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 29
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60 aaattgtgct gactcagtc 79
<210> 30 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 31 <211> 36 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 31
agttcatgcc atggttttga tctccacctt ggtccc 36
<210> 32
<211> 38
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 32
agttcatgcc atggttttga tatccacttt ggtcccag 38
<210> 33
<211> 37
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 33
agttcatgcc atggttttga tctccagctt ggtccct 37
<210> 34 <211> 38 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 34
agttcatgcc atggttttaa tctccagtcg tgtccctt 38
<210> 35 <211> 79
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 35
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 agtctgtgct gactcagcc 79
<210> 36 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 36
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 agtctgtgyt gacgcagcc 79
<210> 37 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 37
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 agtctgtcgt gacgcagcc 79
<210> 38 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 38
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 artctgccct gactcagcc 79
<210> 39 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 39
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagct 60 cctatgwgct gactcagcc 79
<210> 40 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 40
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagct 60 cttctgagct gactcagga 79
<210> 41 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 41
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 acgttatact gactcaacc 79
<210> 42 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 42
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 aggctgtgct gactcagcc 79
<210> 43 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 43
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagca 60 attttatgct gactcagcc 79
<210> 44 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 44
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 agrctgtggt gacycagga 79
<210> 45 <211> 79 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 45
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcc 60 wgcctgtgct gactcagcc 79
<210> 46 <211> 35 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 46
agttcatgcc atggttagga cggtgacctt ggtcc 35
<210> 47 <211> 35 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический
<400> 47
agttcatgcc atggttagga cggtcagctt ggtcc 35
<210> 48 <211> 34 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 48
agttcatgcc atggtgagga cggtcagctg ggtg 34
<210> 49 <211> 20 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 49
atcgtttcat aagcgcgcsa 20
<210> 50 <211> 21 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 50
agttcatgcc atggttttga t 21
<210> 51 <211> 21 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 51
agttcatgcc atggtkagga c 21
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид"
<400> 52
gaagtagtcc ttgaccaggc ag 22
<210> 53 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид"
<400> 53
ctcagcgtca gggtgytgct gag 23
<210> 54 <211> 18 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический олигонуклеотид"
<400> 54
gggtktggts gtctccac 18
<210> 55 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 55
caggtgcagc tggtgcagtc tggggc 26
<210> 56 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 57 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 57
caggtcacct tgaaggagtc tggtcc 26
<210> 58 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 58
gaggtgcagc tggtggagtc tggggg 26
<210> 59 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 59
caggtgcagc tgcaggagtc gggccc 26
<210> 60 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 60
gaggtgcagc tggtgcagtc tgg 23
<210> 61 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 61
caggtacagc tgcagcagtc aggtcc 2 6
<210> 62 <211> 23
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 62
caggtgcagc tggtgcaatc tgg 23
<210> 63 <211> 22 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 63
ghcatccrgw tgacccagtc tc 22
<210> 64 <211> 22 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 64
gatrttgtga tgacycagwc tc 22
<210> 65
<211> 22 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 66 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 66
gacatcgtga tgacccagtc tcc 23
<210> 67
<211> 22 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 67
gaaacgacac tcacgcagtc tc 22
<210> 68
<211> 22 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 68
gawrttgtgm tgacwcagtc tc 22
<210> 69
<211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 69
cagtctgtgy tgackcagcc rccctc 26
<210> 70 <211> 21 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 70
cagtctgccc tgactcagcc t 21
<210> 71 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 71
tcctatgagc tgacwcagsh vccckc 26
<210> 72 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 72
cagcctgtgc tgactcartc vccctc 26
<210> 73 <211> 26 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 73
cagcctgtgc tgactcagcc aacttc 26
<210> 74 <211> 24 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 74
aattttatgc tgactcagcc ccac
<210> 75 <211> 24 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 75
caggctgtgg tgactcagga gccc 24
<210> 76 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 76
cagactgtgg tgacccagga gcc 23
<210> 77 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 77
cagcctgtgc tgactcagcc acc 23
<210> 78 <211> 20 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 78
gcagcccagg gcsgctgtgc 20
<210> 79 <211> 23 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический
праймер"
<400> 79
gcacacaaca gaggcagttc cag 23
<210> 80 <211> 20 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 80
cttgragctc ctcagaggag 20
<210> 81 <211> 66 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 81
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacagg 66
<210> 82 <211> 72 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 82
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacagatcac ct 72
<210> 83 <211> 65 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 84 <211> 66 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 84
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagagg 66
<210> 85 <211> 78 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 85
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacaggtgca gctgcagg 78
<210> 86 <211> 70 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 86
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagaggtgca 70
<210> 87 <211> 72 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 88 <211> 70 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 88
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacaggtgca 70
<210> 89 <211> 95 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 89
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagacatcca gatgacccag tctccatcct ccctg 95
<210> 90 <211> 95 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 90
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagatattgt gatgactcag tctcactctc cctgc 95
<210> 91 <211> 101 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 92
<211> 101
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 92
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cagacatcgt gatgacccag tctccagact ccctggctgt g 101
<210> 93 <211> 88 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 93
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagaaacgac actcacgcag tctccagc 88
<210> 94 <211> 94 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 94
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cagaaattgt gctgactcag tctccagact ttcg 94
<210> 95
<211> 88 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 96
<211> 83 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 96
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacagtctgc cctgactcag cct 83
<210> 97
<211> 88 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 97
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 catcctatga gctgacwcag shvccckc 88
<210> 98 <211> 88 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 98
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacagcctgt gctgactcar tcvccctc 88
<210> 99 <211> 88 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 100 <211> 86 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 100
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 caaattttat gctgactcag ccccac 86
<210> 101 <211> 86 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 101
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacaggctgt ggtgactcag gagccc 86
<210> 102 <211> 85 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 102
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60 cacagactgt ggtgacccag gagcc 85
<210> 103 <211> 85 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<210> 104 <211> 19 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 104
gccaggggga agaccgatg 19
<210> 105 <211> 59 <212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 105
ctgggataga agttattcag caggcacaca acagaagcag ttccagattt caactgctc 59
<210> 106 <211> 6
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 106
Leu Val Pro Arg Gly Ser 1 5
<210> 107 <211> 31 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 107
Pro Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr
1 5 10 15
Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
20 25 30
<210> 108 <211> 6 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетическая 6xHis метка"
<400> 108
His His His His His His 1 5
<210> 109 <211> 6 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 109
Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 110 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 110
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 111 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 111
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 112 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 112
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 113 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 113
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 114 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 115 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 115
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 116 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 116
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 117 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 117
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 118 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 118
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 119 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 119
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 120 <211> 349 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 340 345
<210> <211> <212>
121
216 PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 121
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 122 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 122
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 123
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 124 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 124
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 125 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 125
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 126 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 126
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
20 25 30
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 127 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 127
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> <211> <212>
128 109 PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 129 <211> 216 <212> PRT
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 129
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 130 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 130
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 131 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 131
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 132 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 132
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Thr Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> <211> <212>
133 455
PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 134 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 134
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 135 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 135
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 136
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 137 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 137
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 138 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 138
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 139 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 139
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 140
<211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 140
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 141 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 141
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Pro Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Pro Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 142 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический
<400> 142
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Pro Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Pro Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 143 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 143
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 144 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 144
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 145 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 145
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 146 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 146
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 147 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 147
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 148 <211> 125
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 149 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 150 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 150
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> <211> <212>
151 216 PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 151
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 152 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 152
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 153 <211> 450 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Gln Leu Tyr Lys Gly Tyr Tyr His His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 154 <211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Gln Leu Tyr Lys Gly Tyr Tyr His His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 155 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 155
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Asn Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Asp Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 156 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 156
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Asn Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Asp Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 157 <211> 450 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 157
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Gln Leu Tyr Lys Gly Tyr Tyr His His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Gly Lys
450
<210> 158
<211> 120 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Gln Leu Tyr Lys Gly Tyr Tyr His His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 159 <211> 455 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Thr Gly Asn Thr His Tyr Ala Lys Asn Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Met Ile Gln Gly Val Val Thr Leu Tyr Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 160 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Thr Gly Asn Thr His Tyr Ala Lys Asn Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Met Ile Gln Gly Val Val Thr Leu Tyr Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 161 <211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 161
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Val Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Thr Ser Asn Ser Gln
85 90 95
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 162 <211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 162
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Val Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
<210> <211> <212>
163 452
PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 163
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ala Tyr
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Phe Gly Gly Thr His Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ala Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asp Arg Leu Ile Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Trp Arg Ala Ala Ala Val Ile Met Asp Gln Phe Tyr Lys Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Arg Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ala Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
<210> 164
<211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 164
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Phe Gly Gly Thr His Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ala Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asp Arg Leu Ile Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Trp Arg Ala Ala Ala Val Ile Met Asp Gln Phe Tyr Lys Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 165 <211> 219 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 165
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Tyr Asn
20 25 30
Pro Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Thr Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Thr Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 166 <211> 110 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Pro Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Thr Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Thr Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 167 <211> 447 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 167
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Leu Ile Gly Thr Gly
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Met Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr His Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Asp Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu
65 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Gln Tyr Tyr
85 90 95
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Arg Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ala Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> <211> <212>
168 120
PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 168
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Leu Ile Gly Thr Gly
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Met Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr His Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Asp Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu
65 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Gln Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Tyr Asn Trp Gly Ile Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> <211> <212>
169 216
PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 169
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Pro Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
<210> 170 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 170
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Pro Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
20 25 30
Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 171 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 171
Ser Val Ser His
<210> 172 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 172
Ser Val Asp Ser
<210> 173 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 173
Ser Val Ser Ser
<210> 174 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 174
Ser Val Asp His 1
<210> 175 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 175
Asn Phe Pro Pro
<210> 176 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<210> 177 <211> 4 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 177
Asn Trp Pro Pro
<210> 178
<211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 178
Gly Phe Ala Phe His Asn Arg Ala Met His
1 5 10
<210> 179
<211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 179
Ala Leu Ile Tyr Phe Asp Gly Ser Lys Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 180 <211> 19 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
Asp His Trp
<210> 181
<211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 181
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
1 5 10 15
Asp His
<210> 182 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 182
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 183 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 183
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser His Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 184 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<400> 184
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 185 <211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 185
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp His Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 186
<211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 186
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 187 <211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 187
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5
<210> 188 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<210> 189
<211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 189
Gln His Tyr Thr Asn Tyr Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 190 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 190
Gln His Tyr Thr Asn Phe Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 191 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 191
Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Val His
1 5 10
<210> 192 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 192
Gly Pro Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Val His
1 5 10
<210> 193 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 193
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 194 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 194
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Asn
<210> 195 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 195
Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 196 <211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<210> 197 <211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 197
Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 198
<211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 198
Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 199 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 199
Gln His Tyr Ser Asn Tyr Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 200 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 200
Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr Gly Ile Ser
1 5 10
<210> 201 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 201
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
1 5 10 15
Gln Gly
<210> 202 <211> 13 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 202
Ala Arg Arg Gln Gln Leu Tyr Lys Gly Tyr Tyr His His
1 5 10
<210> 203 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 203
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ala Asn Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 204
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 204
Gly Ala Ser Thr Arg Asp Thr 1 5
<210> 205 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 205
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 206
<211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 206
Gly Tyr Ser Phe Asn Asn Tyr Gly Ile Asn
1 5 10
<210> 207 <211> 18
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 207
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Thr Gly Asn Thr His Tyr Ala Lys Asn Phe
1 5 10 15
Glu Gly
<210> 208
<211> 19
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 208
Ala Arg Ala Met Ile Gln Gly Val Val Thr Leu Tyr Leu Arg Pro Gly
1 5 10 15
<210> 209 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 209
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 210
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 210
Lys Val Ser Thr Leu Glu Ser 1 5
<210> 211 <211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 211
Gln Arg Tyr Thr Ser Asn Ser Gln Gly Phe Thr
1 5 10
<210> 212 <211> 10 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 212
Gly Tyr Thr Phe Asn Ala Tyr Tyr Ile His
1 5 10
<210> 213 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 213
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Phe Gly Gly Thr His Tyr Ala Arg Lys Phe
1 5 10 15
Gln Gly
<210> 214 <211> 18 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 214
Val Arg Trp Arg Ala Ala Ala Val Ile Met Asp Gln Phe Tyr Lys Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 215 <211> 13 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 215
Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Tyr Asn Pro Val Ser
1 5 10
<210> 216 <211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<210> 217
<211> 11 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 217
Ala Ala Trp Asp Asp Thr Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 218
<211> 12 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 218
Gly Gly Leu Ile Gly Thr Gly Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5 10
<210> 219
<211> 17 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 219
Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr His Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 220 <211> 12 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<210> 221 <211> 16
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 221
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 222
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 222
Lys Ile Ser Asn Arg Asp Ser 1 5
<210> 223
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 223
Met Gln Ala Thr His Trp Pro Leu Thr 1 5
<210> 224 <211> 566 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<220>
<221> MOD_RES
<222> (239)..(240)
<223> Любая аминокислота
<400> 224
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn
1 5 10 15
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Pro Ser Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Ser Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Ser Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Ile Arg Pro Lys Val Arg Xaa Xaa
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565
<210> 225 <211> 562 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 225
Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp
1 5 10 15
Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Met Val Asp
20 25 30
Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Leu
35 40 45
Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Asn Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Leu Glu Leu Gly Asp Cys Ser Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro
65 70 75 80
Glu Cys Asp Arg Leu Leu Ser Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Met Glu
85 90 95
Lys Glu Asn Pro Arg Asp Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Ser Phe Asn Asp
100 105 110
Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Val Lys His Phe Glu Lys
115 120 125
Val Lys Ile Leu Pro Lys Asp Arg Trp Thr Gln His Thr Thr Thr Gly
130 135 140
Gly Ser Arg Ala Cys Ala Val Ser Gly Asn Pro Ser Phe Phe Arg Asn
145 150 155 160
Met Val Trp Leu Thr Lys Lys Gly Ser Asp Tyr Pro Val Ala Lys Gly
165 170 175
Ser Tyr Asn Asn Thr Ser Gly Glu Gln Met Leu Ile Ile Trp Gly Val
180 185 190
His His Pro Asn Asp Glu Thr Glu Gln Arg Thr Leu Tyr Gln Asn Val
195 200 205
Gly Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Lys Arg Ser Thr
210 215 220
Pro Glu Ile Ala Thr Arg Leu Lys Val Asn Gly Gln Gly Gly Arg Met
225 230 235 240
Glu Phe Ser Trp Thr Leu Leu Asp Met Trp Asp Thr Ile Asn Phe Glu
245 250 255
Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Glu Tyr Gly Phe Lys Ile Ser Lys
260 265 270
Arg Gly Ser Ser Gly Ile Met Lys Thr Glu Gly Thr Leu Glu Asn Cys
275 280 285
Glu Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro
290 295 300
Phe His Asn Val His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val
305 310 315 320
Lys Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln
325 330 335
Ile Glu Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly
340 345 350
Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn
355 360 365
Asp Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala
370 375 380
Phe Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn
385 390 395 400
Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg
405 410 415
Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp
420 425 430
Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu
435 440 445
Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met
450 455 460
Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe
465 470 475 480
Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Thr Gly Thr
485 490 495
Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu
500 505 510
Ile Lys Gly Val Lys Leu Ser Ser Met Gly Val Tyr Gln Ile Leu Ala
515 520 525
Ile Tyr Ala Thr Val Ala Gly Ser Leu Ser Leu Ala Ile Met Met Ala
530 535 540
Gly Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile
545 550 555 560
Cys Ile
<210> 226 <211> 566 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 226
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Cys Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Gln Lys Leu Pro Gly Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly
20 25 30
His His Ala Val Pro Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp
35 40 45
Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Ser Ser Ser Thr
50 55 60
Gly Glu Ile Cys Asp Ser Pro His Gln Ile Leu Asp Gly Lys Asn Cys
65 70 75 80
Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro Gln Cys Asp Gly Phe Gln
85 90 95
Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val
115 120 125
Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Asn Asn Glu Ser Phe Asn Trp Thr
130 135 140
Gly Val Thr Gln Asn Gly Thr Ser Ser Ala Cys Ile Arg Arg Ser Lys
145 150 155 160
Asn Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr His Leu Asn Phe Lys
165 170 175
Tyr Pro Ala Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Asn Glu Gln Phe Asp Lys
180 185 190
Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Gly Thr Asp Lys Asp Gln Ile
195 200 205
Phe Leu Tyr Ala Gln Ala Ser Gly Arg Ile Thr Val Ser Thr Lys Arg
210 215 220
Ser Gln Gln Thr Val Ser Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg Val Arg
225 230 235 240
Asn Ile Pro Ser Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly
245 250 255
Asp Ile Leu Leu Ile Asn Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly
260 265 270
Tyr Phe Lys Ile Arg Ser Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala
275 280 285
Pro Ile Gly Lys Cys Asn Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile
290 295 300
Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Arg Ile Thr Tyr Gly Ala
305 310 315 320
Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met
325 330 335
Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala
340 345 350
Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Arg Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys
370 375 380
Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu
385 390 395 400
Ile Gly Lys Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser
405 410 415
Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr
420 425 430
Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu
435 440 445
Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe
450 455 460
Glu Lys Thr Lys Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn
465 470 475 480
Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Gly Ser
485 490 495
Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asp Val Tyr Arg Asp Glu Ala Leu
500 505 510
Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys
515 520 525
Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys
530 535 540
Val Ala Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile
545 550 555 560
Arg Cys Asn Ile Cys Ile
565
<210> 227 <211> 568
<212> PRT
<213> Вирус гриппа А
Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val
20 25 30
Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile
35 40 45
Leu Glu Lys Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys
50 55 60
Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn
65 70 75 80
Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val
85 90 95
Glu Lys Ala Asn Pro Val Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn
100 105 110
Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu
115 120 125
Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser
130 135 140
Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe
145 150 155 160
Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile
165 170 175
Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp
180 185 190
Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln
195 200 205
Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg
210 215 220
Leu Val Pro Arg Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly
225 230 235 240
Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn
245 250 255
Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile
260 265 270
Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly
275 280 285
Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser
290 295 300
Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys
305 310 315 320
Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser
325 330 335
Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile
340 345 350
Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr
355 360 365
Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys
370 375 380
Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser
385 390 395 400
Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe
405 410 415
Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp
420 425 430
Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met
435 440 445
Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu
450 455 460
Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly
465 470 475 480
Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu
485 490 495
Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala
500 505 510
Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly
515 520 525
Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala
530 535 540
Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly
545 550 555 560
Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 228 <211> 562 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 228
Met Asn Thr Arg Ile Leu Ile Leu Thr Leu Thr Ala Val Ile His Thr
1 5 10 15
Asn Ala Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ser Asn Gly Thr
20 25 30
Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Val Glu Val Val Asn Ala Thr
35 40 45
Glu Thr Val Glu Gln Met Asn Ile Pro Arg Ile Cys Thr Lys Gly Lys
50 55 60
Lys Ala Ile Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Ile Val Thr Gly
65 70 75 80
Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ile
85 90 95
Glu Arg Arg Glu Gly Asn Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Val Asn
100 105 110
Glu Glu Ala Leu Arg Gln Ile Leu Arg Gly Ser Gly Gly Ile Asn Lys
115 120 125
Glu Thr Thr Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Val Thr
130 135 140
Ser Ala Cys Arg Arg Ser Glu Ser Ser Phe Tyr Ala Glu Met Lys Trp
145 150 155 160
Leu Leu Ser Asn Thr Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser
165 170 175
His Ser Gly Ser Thr Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Asn Tyr Gln Gln Ser Phe Val Pro
210 215 220
Ser Pro Gly Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Ile Asp
225 230 235 240
Phe His Trp Leu Ile Leu Asn Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Ser Phe
245 250 255
Asn Gly Ala Phe Val Ala Pro Asp Arg Val Ser Phe Phe Lys Gly Glu
260 265 270
Ser Thr Gly Ile Gln Ser Glu Val Pro Val Asp Ala Asn Cys Glu Gly
275 280 285
Glu Cys Tyr His Ser Gly Gly Thr Ile Thr Ser Asn Leu Pro Phe Gln
290 295 300
Asn Val Asn Ser Arg Ala Val Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Ile Pro
325 330 335
Arg Lys Arg Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu
340 345 350
Asn Gly Trp Glu Gly Leu Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln
355 360 365
Asn Ser Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser
370 375 380
Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr
385 390 395 400
Asn Gln Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Asn Glu Val Glu Lys
405 410 415
Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Ile Thr Glu Val
420 425 430
Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg
450 455 460
Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu
465 470 475 480
Ile Phe His Lys Cys Asp Asp Asp Cys Met Ala Ser Ile Arg Asn Asn
485 490 495
Thr Tyr Asp His Ser Thr Tyr Arg Glu Glu Ala Met Gln Asn Arg Leu
500 505 510
Lys Ile Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Val Ile Leu
515 520 525
Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Leu Leu Leu Ala Ile Ala Met
530 535 540
Gly Leu Gly Phe Ile Cys Val Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile
545 550 555 560
Cys Ile
<210> 229 <211> 566 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 229
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Pro Ser Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Ser Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Ser Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Ile Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565
<210> 230 <211> 565
<212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 230
Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Tyr Ala Phe Val Ala Thr Asp
1 5 10 15
Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Ile Phe Glu Lys Asn Val Ala Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Arg His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Lys Gly Ile
50 55 60
Ala Pro Leu Gln Leu Gly Lys Cys Asn Ile Thr Gly Trp Leu Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Asp Ser Leu Leu Pro Ala Arg Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Pro Asn Ser Glu Asn Gly Ala Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Leu
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Thr
130 135 140
Phe Asn Gly Val Thr Val Ser Cys Ser His Arg Gly Lys Ser Ser Phe
145 150 155 160
Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Leu Thr Lys Lys Gly Asp Ser Tyr Pro Lys
165 170 175
Leu Thr Asn Ser Tyr Val Asn Asn Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu
180 185 190
Trp Gly Val His His Pro Ser Ser Ser Asp Glu Gln Gln Ser Leu Tyr
195 200 205
Ser Asn Gly Asn Ala Tyr Val Ser Val Ala Ser Ser Asn Tyr Asn Arg
210 215 220
Arg Phe Thr Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Lys Val Lys Asp Gln His
225 230 235 240
Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Glu Pro Gly Asp Thr Ile
245 250 255
Leu Ser Arg Gly Phe Glu Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Ser Met
275 280 285
His Glu Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ser Ile Asn Ser
290 295 300
Asn Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro
305 310 315 320
Lys Tyr Val Arg Ser Thr Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn
325 330 335
Ile Pro Ser Ile Gln Tyr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe
340 345 350
Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His
355 360 365
His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr
370 375 380
Gln Asn Ala Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu
385 390 395 400
Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu
405 410 415
Glu Lys Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu
420 425 430
Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu
435 440 445
Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Leu Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys
450 455 460
Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys
465 470 475 480
Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Arg
485 490 495
Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Leu Val
530 535 540
Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln
545 550 555 560
Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 231 <211> 566 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 231
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Phe Cys Leu Ala Leu Gly
1 5 10 15
Gln Asp Leu Pro Gly Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly
20 25 30
His His Ala Val Pro Asn Gly Thr Leu Val Lys Thr Ile Thr Asp Asp
35 40 45
Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Ser Ser Ser Thr
50 55 60
Gly Lys Ile Cys Asn Asn Pro His Arg Ile Leu Asp Gly Ile Asp Cys
65 70 75 80
Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro His Cys Asp Val Phe Gln
85 90 95
Asn Glu Thr Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Phe Ser Asn
100 105 110
Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val
115 120 125
Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Ile Thr Glu Gly Phe Thr Trp Thr
130 135 140
Gly Val Thr Gln Asn Gly Gly Ser Asn Ala Cys Lys Arg Gly Pro Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Val Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Asn Asp Asn Phe Asp Lys
180 185 190
Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asn Gln Glu Gln Thr
195 200 205
Ser Leu Tyr Val Gln Glu Ser Gly Arg Val Thr Val Ser Thr Arg Arg
210 215 220
Ser Gln Gln Ser Ile Ile Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Trp Val Arg
225 230 235 240
Gly Gln Ser Ser Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly
245 250 255
Asp Val Leu Val Ile Asn Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly
260 265 270
Tyr Phe Lys Met Arg Thr Gly Lys Ser Ser Ile Met Ser Ser Asp Ala
275 280 285
Pro Ile Asp Thr Cys Ile Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile
290 295 300
Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Lys Ile Thr Tyr Gly Ala
305 310 315 320
Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met
325 330 335
Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala
340 345 350
Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly
355 360 365
Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys
370 375 380
Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Val
385 390 395 400
Ile Glu Lys Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser
405 410 415
Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu
435 440 445
Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe
450 455 460
Glu Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn
465 470 475 480
Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser
485 490 495
Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asp Val Tyr Arg Asp Glu Ala Leu
500 505 510
Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys
515 520 525
Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys
530 535 540
Val Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Arg Gly Asn Ile
545 550 555 560
Arg Cys Asn Ile Cys Ile
565
<210> 232 <211> 562 <212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<400> 232
Met Asn Thr Gln Ile Leu Val Phe Ala Leu Val Ala Ser Ile Pro Thr
1 5 10 15
Asn Ala Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ser Asn Gly Thr
20 25 30
Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Val Glu Val Val Asn Ala Thr
35 40 45
Glu Thr Val Glu Arg Thr Asn Val Pro Arg Ile Cys Ser Lys Gly Lys
50 55 60
Glu Arg Arg Glu Gly Ser Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Val Asn
100 105 110
Glu Glu Ala Leu Arg Gln Ile Leu Arg Glu Ser Gly Gly Ile Asp Lys
115 120 125
Glu Thr Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Thr Thr
130 135 140
Ser Ala Cys Arg Arg Ser Gly Ser Ser Phe Tyr Ala Glu Met Lys Trp
145 150 155 160
Leu Leu Ser Asn Thr Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser
165 170 175
Tyr Lys Asn Thr Arg Lys Asp Pro Ala Leu Ile Ile Trp Gly Ile His
180 185 190
His Ser Gly Ser Thr Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gly Ser Gly Asn
195 200 205
Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Asn Tyr Gln Gln Ser Phe Val Pro
210 215 220
Ser Pro Gly Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Ile Asp
225 230 235 240
Phe His Trp Leu Ile Leu Asn Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Ser Phe
245 250 255
Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Ser Phe Leu Arg Gly Lys
260 265 270
Ser Met Gly Ile Gln Ser Glu Val Gln Val Asp Ala Asn Cys Glu Gly
275 280 285
Asp Cys Tyr His Ser Gly Gly Thr Ile Ile Ser Asn Leu Pro Phe Gln
290 295 300
Asn Ile Asn Ser Arg Ala Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln
305 310 315 320
Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln
355 360 365
Asn Ala Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser
370 375 380
Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr
385 390 395 400
Asn Gln Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Thr Glu Val Glu Arg
405 410 415
Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val
420 425 430
Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr
435 440 445
Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Lys
450 455 460
Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu
465 470 475 480
Ile Phe His Lys Cys Asp Asp Asp Cys Met Ala Ser Ile Arg Asn Asn
485 490 495
Thr Tyr Asp His Ser Lys Tyr Arg Glu Glu Ala Ile Gln Asn Arg Ile
500 505 510
Gln Ile Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Val Ile Leu
515 520 525
Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Ile Leu Leu Ala Ile Ala Met
530 535 540
Gly Leu Val Phe Ile Cys Val Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile
545 550 555 560
Cys Ile
<400> 233
Met Glu Ala Arg Leu Leu Val Leu Leu Cys Ala Phe Ala Ala Thr Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Lys Gly Ile
50 55 60
Ala Pro Leu Gln Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Ser Asn Ser Glu Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Lys Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Glu
130 135 140
Thr Thr Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Ser Tyr Ala Gly Ala Ser Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Leu Thr Lys Lys Gly Ser Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Val Asn Asn Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Val His His Pro Pro Thr Gly Thr Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Ser Val Gly Ser Ser Lys Tyr Asn
210 215 220
Arg Arg Phe Thr Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln
225 230 235 240
Ala Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Glu Pro Gly Asp Thr
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Phe
260 265 270
Ala Leu Asn Arg Gly Ser Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asp Ala Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro His Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Ser Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Arg Ser Thr Lys Leu Arg Met Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn
405 410 415
Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Arg Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Ala Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Val Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Leu
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565
<210> 234 <211> 125 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 234
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ala Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Gly Pro Val Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 235
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser His Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 236 <211> 107 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 236
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 237
<211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 237
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 238 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 239 <211> 107 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 239
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 240 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 240
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 241 <211> 110 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 241
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 242 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 242
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 243 <211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 243 Asp Val Val 1
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 244 <211> 113 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 244
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Ser
<210> 245
<211> 112 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<400> 245
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Выделенное антитело к гемагглютинину, содержащее три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 180 и 181;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 182, 183, 184, 185 и 186;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 188, 189 и 190.
2. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130 и 132.
3. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 111 и 115.
4. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 111 и 115, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 113, 117, 119, 122, 124, 126, 128, 130 и 132.
5. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQIDNO: 112, 116, 118, 121, 123, 125, 127, 129 и 131.
2.
6. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: ПО, 114 и 120.
7. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 1, причем антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 110, 114 и 120, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112, 116, 118, 121, 123, 125, 127, 129 и 131.
8. Выделенное антитело к гемагглютинину, содержащее три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 201;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 202;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 203;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 205.
9. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156.
10. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 154 и 158.
11. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
10.
состоящей из SEQ ID NO: 154 и 158, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156.
12. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 155.
13. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQIDNO: 153 и 157.
14. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 8, причем антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 153 и 157, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 155.
15. Выделенное антитело к гемагглютинину, содержащее три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 207;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 209;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 211.
16. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162.
17. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160.
16.
18. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162.
19. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161.
20. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159.
21. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 15, причем антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161.
22. Выделенное антитело к гемагглютинину, содержащее три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 213;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 214;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 215;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 217.
23. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 22, причем антитело содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166.
24. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 22, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164.
23.
25. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 22, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166.
26. Выделенное антитело к гемагглютинину по п.22, причем антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165.
27. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 22, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163.
28. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 22, причем антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165.
29. Выделенное антитело к гемагглютинину, содержащее три гипервариабельных области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), причем:
(a) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 218;
(b) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 219;
(c) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220;
(d) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 221;
(e) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 222; и
(f) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 223.
30. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170.
30.
31. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168.
32. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170.
33. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 169.
34. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 167.
35. Выделенное антитело к гемагглютинину по п. 29, причем антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 167, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 169.
36. Выделенное антитело к гемагглютинину по пп. 1-35, где антитело представляет собой антитело человека.
37. Способ лечения, ингибирования или профилактики инфекции вируса гриппа А у нуждающегося в этом индивидуума, причем способ включает введение индивидууму эффективного количества композиции, содержащей антитело к гемагглютинину по любому из пп. 1-35, тем самым обеспечивая лечение, ингибирование или профилактику инфекции вируса гриппа А.
38. Способ по п. 37, причем способ дополнительно включает введение индивидууму дополнительного терапевтического средства.
30.
39. Способ по п. 38, при котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор нейраминидазы, антитело к гемагглютинину или антитело к М2.
40 Композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-35.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-35 и фармацевтически приемлемый носитель.
42. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп. 1-35.
43. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 42.
44. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 43 так, чтобы получить антитело.
45. Применение антитела к гемагглютинину по любому из пп. 135 в производстве лекарственного средства.
46. Применение по п. 45, при котором лекарственное средство предусмотрено для лечения, ингибирования или профилактики инфекции вируса гриппа А.
41.
НЗ Н '
\^^r^r^r^^^^r1 1ГГ ,.LRTTJT-. " (tm) - ¦= ¦
ФИГ. 1В
ФИГ. 1А
% H1+C038hi плазмобласты
0,1i
Процентное отношение I 0.01
o09oo
??nOU
0,001-

Только клетки
ФИГ. 2
_-|
Предварительно полученная антигенная смесь
37.1a
3S.2S
a i .33
3o.es
At в | > rAfc 23
Лтамм гриппа
подтип
IC33
2'5ч'
Я:'Ч.
ЮЗ 2
a-HI
10 и J
;"":
23ч SI:-4'.
IC52j 25ч
1'М> 1 ci:^,r
1С 52
35ч
!С52
/!,Г.
25ч
АСА 7*22-22
27:.'.:
22-3'
" 5 •" 3
* '5
' 2-2.2
', 4е,
2.45-324
5 j
3.3 -*:.:
25/
22'-3".4
'4:3
•23-''4
ЧА-
!!'
J.'
'.3-7.4
г 2
s,7 .-= }
:.*
4¦ г
2.3' -*.2
2.2
\3-3.3
' 2
'.2.32
'•IA
"• "
'.4-4.'
4.4.3 •
3.7
14-5.:
2.4
2-4.4."
3.:
2.4-5.2
25.3-54/
'2.2
...^
,AP &T''5'22I2
•,м
3,2
24.3.;
'.5
'.2-2.3
2.::-' 5 j '2,5 b.J-45
4,2
3,3-5,4
A""5:re:':-2237
2,2
^ ^ и, ^
¦.г
'. ¦ ¦ 2,2
- i
'3-24 j2:'
¦'.2-Зт4
5,3
4.5-3,2
А л s^-s - E7
'.3
JM-'. 5
2 Е'
2.3' -2.2 j 7,3
4.3-".2
3.35
358-' 3
AV:!r= 2;'?75
'.2-2.4
г.г- 3.'
2 2
254^5^1^2
2,3-3', 2
3,7
2,3.5,2
1 So,'
' ' • *-2
'.2
2."-4: j 'S.4
"2,5-25,2
2.4
* 5 - 3,6
,AH4P25s
ffi
45/
25.'-722
2:2
"4,5.47,5
34'
'?:-:2.'i 543 j255-2425
u ; i
335
242 -47;.
AAr-2'252
33.2
2'.'-53,2
3" ¦'- '
'3.3
51-22.4 i" 721332-2332
- и" -
? 1
'75-4'v
ФИГ.З
¦ ABnsbane/59/2007 Jk A"S 3 о п зп.'З '2 О 0 6
Ў A'lVe А С al d on ш-20/ '999
ф A'PR'8''934
О A'Japan/305: " 957
39 29 .Д"| ФИГ. 4А
# A'Victoriao6' '20''
¦ A'Perthr6,'2009 Д ABrisbare" 0/2007 Ў A'VViscDnsm S7-2005
Ф АЛЛctona/ЗГ 975
О A/Port Chalmers;" 'J 973
? А'нюегэее
39 29 .r/i
# н/СА,7-'2009
¦ -vBrebBne S 9'2007
A A'Solonon/S.'2006
Ў A/few Caldonia'20/*999
¦ PfvS-"934
О A."'Japan/305"'9S7
-Сгэ '0"s "О"7 *D'3 "О"5 81.39 (M)
ФИГ. 5А
# A..',Vict3ria/3e"."20-' ¦ A/Perth-* 6/20 09
А !-Вп5Ьзпе'0-2007 Ў A..'vVis!:onsin.'S7'2005
¦ A.Victona.-3.-"9?5
81 ..33 (M) ФИГ. 5B
A.Port Chalmers.""'973
ф Л'СА/7/2009
И A/Brisbane/59/2007
A A'Soiomon/3/2006
Ў AfNew Caldoma/20/1998
Antibody (M) ФИГ. 6
# А'Л/iCton а/361/2011 ¦ A/Perth/16/2009
A A/Brisbane/10/2007 Ў A/WisconsirV67/20Q5
10-6 10-5
¦ AVictona'3/1975 О A/Port Chalmers/1/1973 О A/HK/8/1968 Л AAichi/2/1968
10- & 10-S 10-7
Antibody (M)
Ф A//Victona,'361/2011 j Ш A/Perth/16/2009 j
A A/Brisbane/10/2007 Ў A/WffiConsin/67/2005
mAb 9 (M) ФИГ. 8
# AM/icton a/361/2011 И A/Perth/16/2009
A A/Bnsbane/10/2007 ? A/Wisconsin/67/2005
¦ A/Vicioria/3/1975
u-t--i i--• r i-(tm)-m- 1
10-11 10-10 10-5 10-8 10-7 Ю-6 10-5
mAb 23 (M)
04- г -г- т -г -1 1
Ю-11 1Q"10 10"9 10"в Ю-7 10"6 Ю-5
Антитело (М)
ФИГ. 11
10080 6040-
20-
PR8
День
ФИГ. 12А
н о
ей Ю
мкг мкг
¦• Контр. IgG S
мкг
-О-900 А- 300
1008060-
40Н 20 0
PC 73
# Контрольный IgG
-П-900МКГ [
А 300м КГ !
100 МКГ
10 15 20
День
ФИГ. 12В
10080804020 0-
НК68
." Контр. IgG
-о-900мкг
-*- 300мкг
- -¦ юомкг
н о о S
CD ей Ю К
л РЭ
10080604020-
Aichi68
I -" Контрольный IgG ЧГ~800МКГ
- А ¦ ЗОО^кр
- - 100мкг
10 15
День
ФИГ. 12С
5 10 15
День
ФИГ. 12D
10080 i 6040200
:в; Контр. IgG
Ф-39.?Я
15 МГ/КГ •А- 39 29
-т-з9^/кг
1-! мг/кг
-*- 39,29
О ЭЬ мг/кг
60-
40-
"¦ #v Контр. IgG
-Ш--39,?Я I
45 мг/кг -¦••39'ь I
15 МГ/КГ
39.29 I
5мг/кг
-f-39,29 I
! 7мг/кг
День
ФИГ. 13
День
ФИГ. 14
10080 604020 0
-Г(tm)-
~^~Контр. IgG -в- • 39,29 45 мг/кг -¦¦¦39 29 15 мг/кг
-А-39,29 .г , _ "" "" Э мг/кг
-39 25
"1,7 мг/кг
i 10 15
День
ФИГ. 15
10 15
День
ФИГ. 16
100-
# Контр. IgG
-О ¦ 39-29 -¦А--Tamilu
Н 75
сЗ 50-
РЭ о-
-1л
...ф ..Контр. IgG
-О-39.29 -A - Tani'lu
-О- Conbination
10 15
День
ФИГ. 17
10 15
День
ФИГ. 18
100-
A-"-6-f
_Контр. IgG
-О--39 29 484 - Ў - 25 29 72 ч
ami'iLi 48ч -О-¦ ~amifln ¦24
75-
<и 50-
25-
• it
• гКонтр. IgG
-О- -61 39 4ВЧ
-81 39 72ч ¦А-- 'smifiii
48ч -О- "emiflu
7i4
4 6 8 10 12 14
День
ФИГ. 19А
4 8 8 10 12 14
День
ФИГ. 19В
EI:: Eli: 2 F.1V2
ES71
Hit:: 727 i 7272
7 272
r.:
EI": I E2K2
:-:272
ЕГ74
7-.71
КЗ'." 2
ESl-Л
":iT.r 11YT "A"At: - - AК 1С
-, I-:A: : in ii ITATR - -G DO Г С
:77 7i: ;.i E Y : г с i 77 я; 7i: c-7:7 ? ГАГ IC ic-
-.I; <-•,- иАГ7EГ.~ < ? DO1С13
xt: r?:i:in гя\:г ЕТГ -ADK ICIS
D7E &GX1 CTfk 37 A? IE IG 7Ct: ZA 3? 115!: ?I
:¦"c-71 с 7ir з:z z iz ic- :c z: я з: ' 11c-7: z
E E ET 3ZICC ? - ?E QI ID G7 ГС! IT DA 11GD ?Q
e: GTI сф. D G7 7? и 1= DCB VA G> ; 11 GE
d'AVZ ??.! СПУ - G77AID1G0CG1I3IYTG??0
M-IEEYE
TV DTFF17.H11 EE VK ЕГ Z777ZIFF- D5. WTOE ГГ TG 3-Е
7?DI А? 1 RE 17АЕ EG7I17:ПП Е 7 С-77 QV GTE
л: DY zzi 7.н ii Б?. :ЕГ ii-:: ?:: ? к- Е Е .rs Е ЕFAEI G7S
77 7Z ZA7_R0 II RG S3 GZ t~7 F77 G7 77 ?31 5. П- 57Г
- К GK5Y? ТС ?7. EY Z7 07.37171 71'/31 Н Е? ЕГ SA DO 051 -7 ЗБ D7?7A 73 ZY77TSGZ С'.'С Г Z 7G7E Е? 7D ZT ZQ RT1
-iter 7.Y? Ai :лг z:: ?i: > :z gr DTI Y: ;-?З7Н E? ЗГ Р: < DO : ri
- TYT- rr TR E YK: ТЕ OZ DUTI: f з z E E? I:D AAZO TTI
TD0AA7?07Г7EY7!"TEtTZTAlI7> ?31HEE 3ETTZ-
z: я: RZZ ".т. 77 ZG :: "Y Y. ; rir z:- 7: rr ZA ZG 717.7 z:яг717 GO33?2*zгz"rnz'':~ гz ::rzz z3::i 177
KZ GERI'RYRNI 7SRI EZ Y/: 717 7? 3D I 111 EE TG!7_IA? RI AT RЈ7.'."7 GO EG Я.' :Z7 F^TTI7F7DAZ IT" FE7G7F ZA? EY AY 71 E ? GA EI'OYi; GO SG 71DZ E~;l II1Y;? KD 7,R ГГ E7' :GAF 7AP
7 27 2 EI71
¦;:zfT73c
Ltf.tT СОГ? S3 AI 7IE1ГГ07Г ЕГ IГ13 7.3 27 Y7 7.БГ 7171. AC 317f !??!?--
0 r? is AZ r::ri?7E t?v E? irrc-zc ?: -t,ZCZ ГРКЗЕ1 ? $ Z 'f.Z'zQ КЛ'Кл Z Г Y3 AC ?R i~.r 701* П 71 Afc 3"H"rV?I -
2"pf.-7T7cg гг-;:зАгр^]4'ZFE> :I E?ir гз zc?: ?70'."v!:Ј 5A73 7.C ?7 T.:?.Q7. ?111 AC 3-5 KЈ "7? 7.1
- ЈR --ER
7C 7? 7777
KR777.
2-4 С 145 J4Ј
K.7.
7272 K27J
ES"I 7"74-
E2t:2 7272
E3i-;i
7~74
EI::I
7272 727 2
:-:i-7:
Et74
7Г 77 017 Z 7 .-.Z Z:: 37 31 771Y7 7C 77AC 13 E 777101717Я71137 = 75=. 01RZ7AF ZD 3T
4 С С
у -т> -
4C5
7IC-:
-726
7Tt:
4 CI
10° 101 Антитело (М)
ФИГ. 21А
2.52.0-
о 1,53
О 1.0" 0.5-
10"2
Q) Контроль
¦ 39,18 А 39,29 Ў 81,39 ¦ 36.89 Ш mAb 9 ? mAb 23
io3
Легкая цепь, каппа
Ј> atfta • CDR L1
: : j 4 5 h ¦ t s i. г. л 25 it:" :s :? 22 ;: 22 2s
2; 2: if L
- .- E : : E
j: 52 32 jj К
:C-KV3-I5"1 ? : T г : ; ? ? я : : = т = :- : i • : : = :
?. A 3
- E T
EE 2
4 j'
31.35 В1С1 Е : т : : = г :-. : : = 7 a 7 2 1 ? A 7 : = :
? s .=
4 .... ? T
\z) = : л
a 2'
KSDK-CL'H I'd
Cf stra • CDP L2
Г i-S j? 42 42 42 43 44 4: 44 4" 4S 45 5, 52 52 Si S4 i 5 2 2 ? 25 5b Г 53 55 5. "2 bit ii 64 55 ii S" tS 0 "2 "i IGKV'3-lE'Cl 2 2 К = 2- 2 --. ? ? 2 2 2 Y I 2 2-. 1 7 ? . ! Г~Т~" ГТ12 2 r i F ? ? 2 ? 2 5 2 7 ? 7
31.33 E1CI ; 2 ? 7- 2 ; i r ? : 2 !.т: ¦: = :?. = :? :-. : 2 2 г к ? ? = 2 ? : з 2 7 z F
¦чаэг! ¦ С P R 23 Crntra-CDRLS
'2 "i ¦; "5 *6 ¦- *i
:GKV'3.!5'C1 7 2 7 2 ? ? 2 91 3= E1C1 2 2 Й; 2 ? ? 2 intact -
3', §2 Si S3 Si 55 2s Г Sit а; У. 5: !: *j '4 55
; ? : "
? ? : 2
tils i- as ;
'2:4 22s ::i:::
f 7 ? 2 У
:G"J4
ФИГ\22А
Тяжелая цепь . [.. ЧХ1:1И." •
! Ozl <- в - "PR ril
Номер по Kabat ; :. :- .2 .." .; :- :. .. .-.1." ..; .¦¦. .. .-. .- .: -. з .-. :" - 2. -.. -.. -:¦
;GHV3-3C'DI : v ; : ~ з з з з з : : ; ::-•:;.= \ : i ¦ П г : з з з г .: •> . = ! Tjs ': ?;.;:¦;?
51 33 Е1С1 ; v ; 2 т з = :¦:•:- т з ? = :?: з з ] : ,Y; г;'-; '7- < = . . jj т з ; i ? ; J
Номер no Kabat -: ;¦. г ^ з. 2. ~. ~ з ; з; и г и i: ¦.. -.. -,. -,- -.з .-. -,r -. ¦- ~\ •> . - \- > ; Е. > . ; з з
:GHV3-3C'Dl 222т - ~ГТ~Т~Т~Т~. ~: Г7 :; • ; :~ГТ~Г~~ ¦ :|¦ г з : з ? : :: з ? : : з : ; ¦> . -:, з :
S1 3S ВIС1 : : з - -, к |з; з ,з 7: . , : з з у ; - g _-;; = F ;::=?:: з \;: з; з ; ± z з т.
i.i 1.3 2.4 з.; i.-i ..з
-v(tm)
ФИГ. 22B
Cf-ztf'a - CD'R"!-3
Легкая цепь, каппа
Кээа - L •
Crztf-a - CDR L1
: . j 4 5 ь • ъ i i; ii :s 14:e r :s ;? :: г: з
.4 Л Lt 1"
; ЕЕ: F F ir
.' - Л
13КЛ-*:*;' : : v ! : ; = i i : : = v = F E- E ¦ s : : s :
F л E i
5 ?
= = * : А д •
!*;=S.S^.VF i ; 7 :' 7 ; E : i 7 : • 7 = : ; E i 7 : = :
F E ;
- S 7
E ¦'=¦ :; : л я :
C-:i"a - CDR L2
Г Si Sf 4". lf> .'.V!':' ; ; ; г
:-?S'.S^\VF ; ; ? 7
,5 44 ,5 45 4" 4S 4? 5, 5: li !• 54 Я S
E 55 !S 5" 5S 55 6. Я i! ii 5, S! H Г 5S Й
' &zVra~- CDR L3
.. .. .. ., -6 -s -j s; s; s. ¦. s. 3j 6i s? я ?i ii ^ :5 4 =: : • F1^ Г 55 ?;
. : . ¦
2 ; Ti 2 л E , ,
7 ?
5*J4
5' KS/SKVF
ФИГ. 23A
Номер по Kabat
з з ¦ ; .
!. 5- :-. = : 55 5^ 55 56 5" " 53 %, §1 "; 65 Ь4 iz U Г " 6; \
*; -j % -5 -s ¦" *s -* si i: a A s 2 ; 2 i; 2 к :; 2 : 2 : - i ii з : ; 2 :; = i- :; 7 ;~ 2:1; .t 1. 2 2
-lass - CSR
Номер ПО Kabat ¦. . :. . ¦-¦ .: :,: ;; - 7 Z : ¦ ~ ~.
ФИГ. 23B
3 ISHJVV,
Легкая цепь, каппа
.- .г
:Gt\V3-iS*rj| Е : т ?. г : = г- я : : Е 7 5 - :¦ ¦ з А
31.3SB1F1 Е : т .". 7 ; 5 г- А 7 : з 7 з з ; з з я
Ов ¦ CDR L1
• з з : з з ..- ; з а .:
зззз I • я з : ! Г- ', ', , з 7 з з :: з я, " з
733 зз.чЗ ; 3 7 з :: i л < х з
Осел • CDR L2
| Co-,!> :;-CDRL2 j
у si зз ;: ;: ;з и 45 ;* г ;з ;з 53 з: si 55 г; А = з з г 55 56 5" 53 5? v, *з а а и ы и ь" S3 в "3 "3
IGKvS-lS'CI : ; у г з ; 1 ? -:. -_ : ; : ^ТТТ^7Г7~^Т7 ГТТ1; з г А ? з = з з з з з з з з
91.39 B1FI ; ; 7 з з- ; i г ? з : :-,'! з ;з д з з з д з з з г А З Г З З З З З З З Е Г
Тяжелая цепь
Номер по Kabat : :GHV3-3CC! ; '¦•
81.39B1F1 ; х
i E
E E it 1"
: F : F
Cii:tr,a- CtJR И
_•_ . - .: к
I '> Ш^с'сч^-^ ^ П
zrkT- SBH ^2 -I
Номер no Kabat ., ., .- .. _ ^ . ¦. -_ ¦__ =.:: .- *. -z. .. :; .. .•.-•. -;. -. -= -. - -:
lGHv3-3Or0i : : E - v Т~~'""~Г"1 ! Г": Г~Ё:: у Ш : F"""'T"T] F r : : = F E З a r :: : ;
81.33 В1F! E : E д v i ;:: E 'Y F; . . : ; E [• -i E ЕЛЕЕ V F EF.EE ЕЕ?: :; = :- .•: : iv
С1-:1.- s - CDR fl
Номер no Kabat
ibiii' H ft г". Я ;i ?4 '?¦? " Г ;S E"s 1.. Г- E E E E : E = E 2 4 iY. l.i 1:3
1:5;-.s ;.-
л ? I
ФИГ. 24B
a i
Легкая цепь, каппа
:GKV3-15'C1 З
В1 as SVDS i
:; зз :з :- :ч зь :- зз
з г з г F А
CDF? L"
Cn:t-:a
: CDR LI
Ca7ta::-CCR L'
: : .
.- - 3:
. .373
2 J 1 A • " 3
. ,37
; = :; : A/i ¦
- CDR L2
r зь;: i: ^ ii ~ -л а r а а зз з: зз зз А з : з i :з зз.3" за я s. s: si si 4" t" ^ is -з ":
."GKV3-iS"Ci A 3 r : • TT з: f " -- ¦ т-yi - - . . ? . г . E , H - . г .
91.38 SvDS ; ; r ? ; ; s г ? L : ;т! т [s i • r ; A : з : ? = = з з з з :- г :¦ 7 з -
.. .. -5 .. ^ g_ й s. s. a, ,4 g. ffi i6 ?_ s; ;
:GKV3-1!'C1 : : : : = F : ; ? E 7 - A 7 7 r 81.39 SvDS 7 : ^: : ? 3 : ; ? ? : ? A 7 ; - : ; .5; 7 :; * F _?_.= 1
3 3 E Г '3: ?" '5 Я 333
:L ЗЗЗ I.; 235 ::J
L5- f
5*3234
ФИГ?25А
C*H 6 5
is :s:s ;s зз a
5 3 3 3 5 : 3:3
.5 id
"а зз-зз з
: " " : з
. ;:¦ .- :\
г ?. V ;в "71?; 7 ?
-5 4l 45 42 43 2 .4 2 2- f
91 3S SvDS \i\ v
r~- "ш^тпъ -1
C37iari.CCRb2 j
Номер no Kabat - -з - \. i. .- з : 3: s- з; :¦. з- 5: зз -,. ¦.; > ". ¦- -i г -: -з \ ¦: з ".- ¦- -:¦ ¦-. \. з. ;.
3GHV'3-3u*C 1 3-2 2 л 7 .-. 7 2 2 2 , ,2 3 3 3i 7 2 I .4. 2 2 7 7 3 i 2 7 2 2 2 7 3 11 3 7 !"' 7 2 2 2 2 ^
31,35 SvDS з 2 з л v : ;зЗ: 2 з: , ,2 з з - ? 2 i з к : з 7 7 з з з 2 2 з з з з т з; з ;t з";2 ;
ФИГ. 25B
Легкая цепь, каппа
*.ЈSЈ! -CDRL'
CnVa • CDR LI
i 2 з 4 5 f " § i
~~ is 13 _J *5 ±5 2l ^3
Ж/3-\*И - : "•' :'. : ; 5 r- :
: : v = r : E = A : : s :
? A 5 ;
'vKj &.CDR L2
0 :f -a • CDR L2
г ;s ;? i.
IGr.v'3-1E"*J1 ; ; 5 г
613S svss ; ; ? г
-• -;- :
51 55 54 A 5
- 2 2
¦ 55 54 5" 53 25 ii CI it *3 л г :
¦ :
• Г
Кзоа: ¦ CCR ii 'O-dfr a - CDR13
Caniarl-CL-RLi
., ., -;( -e -j j- j. S1 K Ј, ^ j- ij S; "5 51 52 55 54 55 A = 2 2 I 2'5i 5' 5s 55 IV.
I6KV'3-1E*S1 3 S1 33 SVSS 2
ФИГ\ 26A
Номер по Kabat
а 1.38 sv'ss
? з
• з
34 3 3 55 54 55 'Л 5" 53 55 *: 55 "к '53 *4 '.5 is f б? '35
:- з ¦ з з - ;
¦: •
"ч "5 S3 33
з ;
ФИГ. 26B
Легкая цепь, каппа
Kaaai-CDRLi
CritMa - CDR L1
Сэ"'а:( • CEJR Li
i .2 з i 5 i - J ? ::• .
: :: ii л 35 is r is is i. :: i: .?
.: E E : E - 55
5 . 5. :. :. .-4 ::
'.GKv3-l!"i I Z ~ " Z ; s F A :
2373ззззлз13 :
3 A 3 ; E 7
= E :; : A % E
B1.3S SVDH i : v ¦];; ; ; =
Oj" : i з
в.аза.'-СьВ L2 C"-t> --a - CDR L2 Co7ta:t-CDR .2
j(tm) 33 35 43 45 45 43 44 45 4Ј
С 4-2 4;
5. 55 53 23 54 A 3 2
3 2 2 5 5-
5" 5s 55 i'i 52 si -Л t-5 '2 *s t" 52 -3
5 "2 "2
:GK'.'3-15':I ; ; • ? 3 ; A F ? :
2 A 3 E ¦ . . .
, . A 2
3 2 2- A ? F E 3 5 3 S 2- "
I E
31.35 SVDH : ; • 3 3 ; A ; :- 2
1 "71 7
: 3'- A 3 2 F . . ,
¦ 24 7
32? A 73333352"
Г I
¦\aDai
¦ CDR 13"'
:?r;^ jj ,
"2 "3 -4 -
: "t - "5 "5 53 53 ь; 3ii 84 55 S5 a" 55
r - -
r. T5 . .
_ 5:j _
- . 2 . .
GKV3-15T! 7 2 2
31.35 SVDH 2 : [A;
3 2 _ 1 3 2 3 ¦ A . 2
2 J] 2 Li: 3 * ^TL- ¦
- ¦
" ~
. ; -L4. *
E 2 ; 2 3 •
ФИГ^27А
Тяжелая цепь
Номер по Kabat . :GHV3-3C-;I :
Sl.33 SVDH
b * 3
ii :• ii is
: : _ :
к.аэз[. CCR r-2
Номер no Kabat --. зз:: -: ,? з. 2.322 з.- з- зз 5-.:-- ;; :¦, -.. \: ¦.; •: .; •.; -. -. -; - з ч -- -: з:. . . - 2 з
:6HV3-3S-S1 з 2 2 i 7 * зг : 5 г . .:;s5FJJi:5Ti
31 35 SvDH 2- 2 ; д т.л з; , , : з з. Г" 2'; 2 з А з 2 т ?
'0=fr'ia • CDR КЗ
Е 3
з :
Номер по Kabat ._.. .=.. .¦ .... ^;...::., ;-3: - ...з ; : : ; ¦ : з
.GHV3-3CC1 3 31.3Е SvDH 2
2'? 235 33 1 2 3 5
. 12 . х
.,3 233 222
"¦ 2 2 > . "
ФИГ. 27В
Легкая цепь, каппа
Кзза! - ССЧ L"
Centra - CDR L1
; : з 4 з s ' i s :: :i з: ii a15 it:" зз з
ЕЕ: E
:GKV3-1S*:I З З : ." З ; З З ; З З З З ? З • F ; З
E S E
s s :; : A E
В1.35 SVSH E E 7 'L; E ; s r д i : s т = ? : E F A :
E E E
7 A 3 ; S 7
s ¦ ='.¦:; : A T у
С'Д'! • CDR L2
I Ca-.ts:t-SfflBL2 |
Г 52 S3 3. 33 43 ii 44 ,3 i" 4" iЈ 4? !. 33 53 53 5- A E E 3 E 55 !5 5" 55 !? 5! 55 53 55 '34 iS si 5" is 55 "5 "3
ФИГ. 28А
3GKV3-15'C1 ; А г ? з : з з ГГТНГТТ I ! ! i '. ГГТ]; з г А ; з з з з :- з з з з .•
Й1 згз SVSH : ; ;•: з з ; А З ? : : ;'7; з };з А З З ? АЗ : з з .-. з г з : з •; з : з Е З
Тяжелая цепь
2 2 7 r 2- 7
2 5 7 A. *J 2
iff"::"? :A Л =
Номер по Kabat : i i * s t * • s ::• :i .: :J к зз :t:" :s a i: :i :s u ;" a :? a :s": и n в к и A s к r я " i: " " "
:GHv3-2:-Ci З ¦ 2 2 З 2 v ; r 273122 2 : A A
91 35 SVSH i-i 7 ; : 7 z 2 7= : з v v ; г ; • 7 : • : ; : A A
K.aaai-CCR > -2
Od!~.t ¦ CDR -2 j
rt-CDR кГ 1
Номер no Kabat
:GHV3-3:'3I
51.33 SVSH -; - - 2: • ' '
2 ¦ 2 2 :. :- zz 5- Г zz 32 : . _
¦ 2 : 2- -: : ¦ ." - _
F T
5 F
27 S2 S3 A 2
2 3 J 3 ¦: 2 .4 S 2
ЧаЗЗ|- ere
Cr-;tKa.'CDRh3
Номер no Kabat .-:. Д; • •..
Чз^ж'-ССЧнГ
J ::
IGH','3.3C:i ? A 2 2 2 A 5 ¦ 7 91,33 SVSH F I'f 3 2 2 A 7 2 7
KV.lf..}.. X.1.1.
: , 2 :
з I
3 5 :Sl-J1'2T
ФИГ. 28B
Легкая цепь, каппа _ --- -
. . . ¦ : - - : .¦ : .
'J-'?':-' 2 3 7 1 3 2 5 2 ? 3 2 E " 2 Г 3 E 3 2- 7 2 E 2 *• "='.•=-4FP E 3 7 1. 2 2 5 Г 2- 2 2 3 7 2 2 3 2 3 2- 2 1 2 2
Ozt*-m ¦ CDR LI
И 25 21 2? I I С 2 I F II 21 24 31 32 33 34 3a 36
H к В Q 3 ? 3 3 2! I 11 ? T
S A 73 Q 22 ? 3 ; 1 j I I 111 I
Oil-* - CDR L2
I Сз-Jsc: • CCR 12 [
it и JS 32 ii зз зз зз " r 45 " 5. si зз зз з; :-. з з з з зз и $* ;s 55 ": *: "i ь, " > л г а "з -з *•
ISKVV='j' 32723 2 А 27212 7 "ТЛ"ТТ"ТТ"'-^^ 2 2 i 7 7 3 3 3 3 3 3 3 2 7
25Sv'Јh.'^c 2 2 7 3 3 2 J f 7 2 1 :т: 2 :2; i 3 7 7 A2337A775333337I2
iteaat - CCR Li C-Sf ;a - CDR L3
Contact-CDR 13
-2 "3 --. "5 *> : " *5 *? 5. S3 52 S3 ii 53 Si E" 38 55 5 . 53 52 55 34
5- i! ii IV
34 2. 2 23 5 22"
1G"..2.-;-;- : : : ; E з 2? S-.'S^\FP з : Ц] з з 3
з з
2 4
; J :;
7 J
? 13KJ4
"V"
ФИГ. 29A
KE3S!-CL?H HI
1 G'-oira- CDR ^1
L'3-Js.-l-
" 13 е. г- V'
is :-. л :?;-ii ; : : F ¦: : ; " : F i :
i- ii lb ^
- 2
г Ц"
21 22* S3 21 Si S2 si
A .4 3 ' = ?. 1 т.
2 :¦ :¦ "П'л V 7 . i W т л
I -.aaal-CDR I
Номер ПО Kabat .. > -¦ : :. : ; 1 :- :: IF ¦. . . ¦.- :: i- ¦." ; ¦-" "1 \ \. " " " \- 7. 2. ¦. ., 1 1
Id-'.V'L'l' 2 2 2 Л 1 -1 ; ; l ^^^^^j^^-^ 7 7 " г p - ¦, 3 г ;, 7 - ; - ; " 7; 3 ;
* S-v(tm) ; : i л . ,я ;:: : "i" F: . .1 2 s _! ;; ¦: ¦ :-, 2 2 ; т з ? : : 2 s 2 : : s • :; : ;"; 2:2. ; я = :
Cr.!":t-:iiRH3
Номер no Kabat ;-_:.;,;-;.:, .. .. ^L, : -: - - - -
i:s 21; ..5::", i:s ::s n: in 222 .:s
is-^;:? 1- :-. 2 *2? s-s- \" ? ;l 2
: 2 .-
" 2 1 2
: 2 --
2 ¦ 2
= = :SH-V,
ФИГ. 29B
30/57
Легкая цепь, каппа
:: i i 5 i : s ? .i .2 :*:"
.C-KV3.|='C1 2 : v : < : ; = i :- z : з т з : з •
Bl 33 SvDS F 2 з v v;; 7 : з 2 A 7 : з 7 з г- з з
Чем; ¦ CERj/
Cr;tr,a- CDR L1
r ^iaii.CPRLH
.: .:' '.. Л '.: V '-. 3 5 : 3 5 .; .- : 5 .- .5 :'
7 А 7 3 3 3 I 2 А 3 \ '. '. '. '. '. Г~5 2 7 3 !; 2 А', л 3
3 - 7 2 2 2 7А 2 2 2 7 ;_Г; 2 7 I А л 2
Кань CLR L.2 C-^t* s • CDR L2
Cords:! - CDR 12
:GKV3-I:';I
Bl 33 SVDS F
,5 ,: 3; -z :. :. 33 23
7 12 2
3 12 ["'>
A 5
ftssm- CCR L3 Cbii-a'.'CtlR'LS
"5 "З S3 33 31 53 54 35 S5 fc" Si 5; 5. 53
:GKV3-!5"C1 7 2 7 2 5 3 1 2 5 2 2 7 A 7 2 3
SI 26 SV'DS.F 7 : [A; : : = i : ! - 7 r A 7 т ¦
ФИГ. 30A
5 i
s 5
is :i
IS I?
15 .
55 •> • IS 35 ;з
31 33 SvDS F \i \ ~ ; :
3 3 5 5
к. ЭЙЗ! -:
zl-ZZH ы
Номер no Kabat . ¦ . ¦ : . Г.. :.
55 55 55 55 5" 5S 53 SI si 51 ii S3- ii 55 4* 5§ *5
'3 ¦" 85 31 51
IGH'/2-3:"3i 91.39 Sv'DS.F
3 5
KaDai- CCR нЗ_ 'С-гл-s - CDP r3
r -" r~ - w : : i : - :
i:i 15J r
3 I-?
.5 . .3 .3.
" - 3 3 3 - ' 3
3 3
к i. i . , , ., . , , . . , "г у
"s is: "
: -.- з - з s
= j " -¦ .
r :
ФИГ\ зов
Легкая цепь, каппа
"Згаз: - CLR LT
Cr:tr.a-CDRL"i
. . .- , 3 ¦. " : 3 ; .- .: 32 .5
з : : ¦ г is :" .> ; з: зз зз к is а
:GKV3-15*21 Е : т •> . : ; = г- А : : = т = т- : г ? А : : ; :
? Г "
з 7 з з :; 1 А'Х 2
51.3= SvDS Y г : ; 'й з ; = г- :- : : з v = г з г ? А : : з :
" д 2 ^
5 7 ; з 7 4 ' л 7
K3iai-CrjH.L2
Cr:t"a - CDR L2
1 Cm^-CDRii I
5* 551 35 ,.. ii ,2 ii 44 ii ii i~ ,i ii 5, L 52 5i ii A 7 : I E 55 5" 5* i) Ы I. 51 53 54 55 5л 5" ti ft " "3
iGKv'3.15'21 ; ; F •¦ E ; А г ? : : : з 'ТТ~ПТ"Т~; ; 7- ~-=~T Е- з 2 A ? 2 3 : з з s з 7 2 7
Bl.33 Sv'DS.V ; ; 7 r E ; A 7 F : : ; A E 7 F A E : : 2 A F F 2 ; s ; E : 7 E F
IGKV3-15'21 31.33 Sv'DS.V
COR LS
Crstt-a
- Ш L3
55 Г 'it
?5 55 55 51 55 54
-: - "- .1 I ¦ Г ' 7: "
i 1 С
: E ¦ . .
ФИГ. 31A
IGHV'3-3C"1 31.39 5VDS.Y ;
FC?DtFiTcTfj
Номер no Kabat
. _____
:: Г :.-
S5 tf i" ii _i '
~T1F I : :
F I
-• -¦ -. -- -i _, s: j_ _-
_•; г ¦ :; : : i : ; t. •:.
81.33 S'.
E E IJHJTD:
ФИГ. 31B
Легкая цепь, каппа
Ch_.r _ - CDR L1
• 2 4 5 5 " 5 5 *
_f 2 я = _ _ _ : ;э 2." 5. 5* з5 St 3a 5%
33.2SD2C=; ¦ ;-
.t . , 3 2 л
. . .-• - , 2 - - -
_ Ь Г J _ Г ,-l
r I 2 ; 5 V 5 2 32 2 A ' * 2
: * ¦- , ... 5 .¦ _ .-, "л" j
. CT^~CWL1
I • .12* 22 j
3" 35 55 ,3 43 42 45 44 45 45 4" 45 45 5 . 52 5 2 55 54 .4 2 3 3 2 55 55 5" 56 55 55 55 52 bS 54 5 5 5 5 5" ii 53 "1 "5
:GKv'3-1**33:1 ; ; г ? 3 : 24 F ¦ 2:2 з ГТТ~ГТ"Т- . ~~~ . ГТ1: 2 г 2, 2 2 2 з з з з : з зз з
3S.29D2C- ; : ¦* 2 : : А ; ? 1 : 2 з j з 34 = : ? А ;Т; -з 2 г А ? з з ; з з з з з ;з д
".на;
CD" L:
Сгг> а'
-C_RL3'"
."cr>
<
- а -.- г :
. 7- .
5 55 5" sS
г_ г. -5 г-
г: - 2 2 3
3 - - :
GKV3-1 _'С 1 3 1
" 3 3 2 2 1 2 2 2
Г .4
2 2 3
_____
Г . . . .
.1:":"
3S.29D2C- : 2
" 2 ; 2" 5 2 2' 5 2 2
'Г 1
- V -
. у. у ^- ,. ..
з-КХ- ¦
¦ 2
: . ¦
ФИГ. 32А
..._.."....,J
Тяжелая цепь
, К_м> CDR и-
С--;-.- - ¦ CDR М
С arte! -ССЧ г'
Номер по Kabat
35.2SD2Cii ;1; V :
s - s ? :.
¦ 5 _ _ _
.:¦ . .: .-,
; с ; ?
: г- _
is is I.
Ii 15 55 A 5
5 56 5" 55
T|. v F . IT T ?
Кзвз.-СОЧ иг C.il-C.Rbi I
Номер no Kabat
:_Hv3-a_"_i
3= 29D2C
5: 5" ::• :r -5 ^ - .
" % "b " -6 "5 5, 6_ 35. ?.
•; = F 7 i ¦ : ; ч s
Cr_tMe - CDR 5-3
| С:.-5::-С2Чи..
Номер no Kabat _" _=;..- .r _ . . r: .: .
'C-HV3-3C*;I - к i i
3S.29D2C- ? [i 7 :
:_ч4
ФИГ. 32В
Легкая цепь, каппа
...K-tB. • ССЧ_1 C> _tha - CDR LI
.GKv3-1.':i - : v
ЭЁ,2306С2 i : v
" .3
3 ~ 3 2 V 3 45 2" 13 5 3 :
зз- .: .-. .
"3 "5 .". j.
¦1 33 s-.
.л 2
3 X 3
Ka.a'..C_R _2 Cmtf.a - CDR L2
Cc^.tzl ¦ CDR L2
4a.al. CDS Cb_tha.C6R"L3
Cr.la:!-CDRL
-. "5 " 5 - -
:_KV'3-1_*.l T 2 3 2 2 5 ¦ & 2.D8C2 2 i 3 2 :.2 2
'3 -3 ": 52 Et S3 54 55 Sj 5" 55 " 33 52 5. 35 54 5! } z
___________
:. a _ , . .
3 3 3 55i 5" 35 55 2 :i 251 1.3
155 l.i 32"
.O.J4
ФИГ. 33A
:Zz ¦
•> У 37 п Е^ i: А
:GHV3-3C
: Е _ ; : Е ¦г, = : ? : s
.= ;;::-¦
? ; л г :• :*•
Г ^ "7_^т:ТчГ1 1
, CJ-"!E-1-CDH rl 1
Номер по Kabat .. -:- -¦ ._- :- :- ; :_- - ¦_ -: -- •.- ¦¦ •-- - -: г .:.=:- Е :
ISHV3.3C"D1 ; I Е к 7 ; ¦;Т~П ! П ГТТТ" • Т ТТ~Т~~~ ¦ z I ¦ Е Е Е Е • : •: = ? г, : : Е Е ; к :; Е Е
33 29 D3C2 Е : Е " т > : = у . ,7 : :;; Е 7 Е Е Т ? : ? Е 7 : Е ; Е :; Е 5 :; 7 |7 ¦ Е : ; *. :; Е :
С-¦ CDR "3
ЩгТ
НОМер ПО Kabat :. = ¦¦• :' :: ?- --'У- г'.-.- -г ЕЕЕЕ":-Е
:о.'/з-з;"_1 ;АЕ ~ ~
35.2SD9C2 - i
5 IGHJ4
ФИГ. ззв
Легкая цепь, каппа
. i s 4 5 < " 5 з з: и п is :; " :s:
IGKV3-1S'_1 I 3 5' ?! 7 3 5 3 Я 3 1 3 5" 5 Г 3 3 7 Я 3 1 3 3 35f 29NCvl 3 3 7 7 3 E 3 A 3 1 3 7 S • 3 • 3 A 3 1 3 3
- сеч L;
Cf r_ih а - CDR L1
-
CVtaif-CCRi.
= з з з - и 15
зз i: si 53 35 J! з?
• я г г,
з з 3 я * з
3 fj1 Я ; 'i 3
naaat-CDfiL2
Cfzlfm ¦ CDR L2
I _мз:1 1
5" 55 55 5. 45 43 45 44 55 i'l 4" is 43 5 .- 53 51 3 5 54 A 3 3 7 I 5: 55 5" 55 55 53 5. 51 ЬЗ ti 45 55 6" 5; 55 "3
ZGKV1-15*01 : ; 3 з -3 : А Г З З : З J ; я г : ? . ; ; ; ; зГТ1з з з А З З З З З З З З Г З Г
3s.2sNCvi ;; F 7 3 ; А 3 г 3 3 3 3 3 А 3 7 г А -,Е. З З I А 3 Г 3 3 3 3- 3 3 3 ;3_ V-
-Хл\ ¦ С5Ч L3
&-,e--.j-DR'L-~-
"5 "3 "5 - "5 "5 53 S3 51 53 54 il ii Г й
45 " • 3
" "'J4
3 3 L7 5 3 3 u= 3 3 3 A 7 3 7 3
: .=,: 3 L=; :; * з J.J-.
7 3 3
ФИГ. 34A
IGHV_-3_-_1
33.23 NCvl
is is
Номер ПО Kabat ;: .. ..- ;_. : -- ; • : f: •. . 3 :- : ¦¦ ;- -3 "
"GHV3-3_ .1
33 2=NC-,'1
" ¦¦ ¦:. -5. .4 5
з ? :; : : • : з .". :: s
Номер ПО Kabat _v _¦_ _i j; .j ь_ t_ 5* ^ 55 i.; : с ; ; • у ;
_1 ? A E : 3 - ;з 23 23r> 3Cv1 ? [г. 3 3 3 A T I
:s з:
3.t 5." з:а 513 53. зз.
ii: из
5 5 ISHJ4
ФИГ. 34B
Легкая цепь, каппа
5 3 3 4 3 5*5
:GKv3-1!'Cl •:-,'.•!: ; з з
39.23DSET E : i : ; з з
- .5 .:
' Чзва-CtR и
, C--!-_ ¦ CDRL1 _
j" 'Co-,:_:t - CDR _з
; 2, x
:I :t _$ r я з : : E E its t- :•; ii 5i ii it 55 it.
Л л E А "й E
Kac_.CDR .2 C!-1-.._DRL2
Co-4.1! • CDP L2
-¦ 1- ir - t. -i -.: ¦.- -. -7 i. :. 5. 5; :- A 5
:Oiv3-l!'Cl ; ; • r :• ; A З ¦ : i : E TIT: :- .
3S.2 &D9E7 3 3 F 3 3 3. A 3 F 1 1 3 " 3 A 3 3 F . .
A E : E
E 35 Зь 5* 55 35 Я *3 si si hi *5 " •/ bis *? \. "3 5 3 4 F 5 3 3 3 3 5 6 I E Г
¦ E E E 3 E
Kara ¦ ZSH L3
"5 " "5 "3 5. S3 51 ij i- 55 35 5" SS S3 53 3"3 51 55 54 35 A 3 3 3 3 3 "35 5" 35 55 ,
¦ 33 5 _.4 3". 515 53"
ISKV3-1_-31 3 3S 2SD3E7 E
.331333
; ¦ а г . . .
;35 3 LS; 3 л FUTl.
F IGKJ4 j'
ФИГ. 35A
iri ii ft sat ¦ :> __r_ • CDR H1
:_HV3-3D*:I
3S.23D-E?
_ _ . . . _ . _ : - .!
3 }5 Г ii ii 4. ,1 ;i ii
-" 7 ? ; я r- E E
. s v : i :¦ _ ?
fesat. CCR ^2
______
CD-t_i.C.PH2
Номер no Kabat
It 5? Я 51 "5 ii ii Ы '35 S* 55 55 •
s: si
:GHV_-3_'_I
39.29DBE7
3 E
F 5
;;: E
3 3:3
.4 s
СГ° НЗ.
Cr_.fr _ -CDR'^3
C_1__I - CDR ^3
Номер no Kabat 55 ш 55 55 .* ss зз 53 53 s: зз з;|35 зб 5"._ _s з.-з г, з з з з з з з
:GHV3-3C*C1 ? Л 1 : : " т 1 з? - 33.23DSE7 з ii; з Е : :, : з ¦
з'? зз- ::з зз; зз; зз5 lit з." :л ;зз 15. ззз из ззз
ФИГ. 35В
Легкая цепь, каппа
- CCR Li
C-.t- a • CDR LI
C:-;:- -:.- _
: _ 5 4 : t, - з " :;.
- :¦ .- з .
.5 35 31 35
_5 .-. A 5 5 3 3 . : .. 55 5 5 5 - .:
3a.2S.!.FPF • : т [i'.i : ; з F J :
3 3 7 5 3 3 3 3 A
3 3 3 3
Mb,:-::-3
Cn.tMg - CDR L2
I Z-THZ'. - ССЧ L2 [
3" 55 5? " 43 i_ 45 44 .5 4s 4" 4s1 43 5 5 51 51 55 54 .4 3 3 3 1 55 5. !" 55 53 i'. 5. 41 55 44 "5 ii i' ii .5 ". "5
:GK't_-1_*2! 33 3 3-33 A 57173 3 ' 3 A 3 - 3~ ; ~ ; ; : I : 3?А 37333333377
33 2S.NFPF ; ; F 5 : ; А з F : з з 7 з А з 7 = А ;З. ; з г ; ? з з з з з з з з =з' з
tesa- СРВ ЗЗ &•"!• з - CDR L3
:З.УЗ-1ГС1
J3 25 NFPF
сД:ШТГ
¦j "4 *3 "5 •• "5 ~- _. ?3 55 54 55 55 У ii 53 5. 55 53 35 54 55 А 3 3 3 3 3 "55 5" 53 55 .
з з ; з з з з А т •¦: з з ^ 1 з .
LIS 1 [451 Ш *_"ЛЬ
3SSJ4
ФИГ. 36А
! CruF-a ¦ CDR -1
3S.29.NFPP if 7
'. т .r . 35 35 .5 A 5 5* ..' .. . r -' -. - * ¦.
v v ; F з ? = з т : з : A A = Гз Г7 : _ _ : A ._ з ! Л ч v 7 ; ; : :¦ r 7 7 ; ' _ f?; з : ? : з : A A З З- З З З З З А ;"Г И , . |" 7 ? ; A F З ¦
ГТГ^ГсЖ^Г!
Causes ССЯ Н2 ' |
Номер по Kabat к ЮНУЭ-ЭС" 1 з з E ; v TTTTT. 7": firTTTTTTTTTj:'' з з з з • з з; з ? :: з : у з ; я з з з
3_ 23? NFPP •'- з з 7 ззз . . з зз з А з з 7 ? з | з з з з з : : з г з I з з ; ?. :; • :
цг> CDR Ид ?••:!•¦_ • CCR -3
Сх.г:! - С-СН
Номер по Kabat : . ¦ •,;,: . ¦¦:_ г.^:. . г;
:GHv3-3C"l F А 3 3 3 А 5 У 3 ~~~ 3S23 NFPP з Й з з з А 7 у у
> . _ ' . ......
IG"J4
ФИГ. 36В
Легкая цепь, каппа
Crctr.a - CDR LI
C3^'"3_^"_'
. . : . : • ' : ;
:: :г зз 34 is it :*зз а г, г;:: и
:i _.::"=:: ¦ r __ :?
.' EE " .5 .4 55 ii
:GKV'3.15*:I I з ~ х : ; з г- А :
:=¦.•=.__.;.::_:
3 A = : E V
E E 5 E A " 1
Э3.25 MYFP 1 : v
з з " :":::=": 1 ? :
= i 5 :
E ^г;я :: 1 A 3" E
frsfra - CDR L2 Co-is:! - CCP L2
:•¦ 36 зз 4: :GKV3-i:r:i : ; • r 33.2S NYFF з : г з
с _ : :- : :.. :5 :
.rr rL__
35 55 5- 55 53 53 53 53 65 54 5: 6" 53 55 55>
3 5 A ? 5 3 3 3 3 3 s ч г
r..3S5i-CC4 L35 'Oit-a-CARLS
"3 "5 "4 "5 "5 " -5 " 54 83 S3 53 54 55 it Г ii 53 33 33 5_ 35- 54 55 A 3 3 3 E Г "56 5" 55 ii 53' U5 55 3 5 .5 3-.. 33 5 .5b 33"
3 3 3
3 3 3
:G*J4
33.2S NYPP
3 3
ФИГ. 37A
rr НЕМ-'СОН HI !
Тяжелая цепь - ,;:",,,.. - - -
Номерпо Kabat : i s 4 з ь * i ь :. :i 12 is • ; и и i: is i? :. зз is i; is i. г is is s: зз si ii а а E И 5- is is ;. -n ;i ii
¦ г г - -.
¦ л т. - ~; . :" ¦
Е- F
3 Е 3 Е Е А .. г . ,
3_.2 &.!.YPP;f ¦ ;
- " _ _ _ _
Е А 4 5
I -:;
; Е = Е i=T Е . .
Номер по Kabat
:c3HV3-3c:i
32.29.NYPP
i": -Л 4" 45 1 E 5' 5" •
CD-ZS-N ССР. Ь_ !
55 54 55 55 5" 35 55 6; 51 53 ci 54 55 5s 5' 55 55
.• = r
"5 "5 33 51 51 к
tVar'i.t.QRH"
Номер no Kabat
.-_ - .;.-. -.. -.. r. r-'r:.' -~ -.
39.25 ЫРР J ? з :
i :;. 3 35 Е
:> зи
ФИГ. 37В
Легкая цепь, каппа
¦ ._ - _
С-Л'г - CDR L1
IGK.V3-15'Si г : v У. . : = :-;.:
3 3 3
5 з з з з з. к з
3_.2_.NvVPF : : 7 [;j 7 ; з з . 7 7
3 7 3 7-371:
7 3-. 2 ;
!... -'• 2 S : л I
.:.а_эЬ ССЯ ._
frstra - CDR L2
I Сед-:; • .2 [.
3" 33 5" 3. -35 33 ii ii ii ii i" ii " s: 5. 32 53 33.- 2 3 3 3 55 55 5" 58 53 52 !5 il 53 5i 53 55 j* 55 55 \ *:
IGKV3-15"C 1 ; ; 7 2 3 ; A 7 2 1 2 2 \ ГТ~^~Г~Г1 '. ~, \ '. Г"7] 3 23AE723S33E333
_3._S.N'/.FF 2 2 ;' 2 2 2 .5 2 ? 2 2 2 2 j 2- 2 • 2 7 32 ;!: 3 2 2 32 ? 7 3 3 2 3 5 2 7 ;3 7
Каээ1 - CpR L5 'Cr'stha-CDRI-'
Cortts-I - С С R Li
" "3 *i "5 "5 *• "5 "5 j; 51 Si it Si 53 if I" ii 55 51 52 52 35 ?i 55 A 3 2 2 I 2 -55 5" 35 55 '
F 6
7 2
* ?LL.F.;.
:ЗК'/3-15". 1 2 2 2 2 3 5 2 2 5 3 3_.2_.N'.VPP 2 2 2 2 L'f 3 2 2 2 2
1:1 iii 5.5 in-: 153 5.5
2- 2 F 7 E 2 f ;6fJ4
2 2 - 2 1 •¦
ФИГ. 38A
Тяжелая цепь
•_!:* <-Z:"
O.tra • CDR Ч
Номер по Kabat
_; .- .:. :•. / .. :- , ..
.-.:.- L" :: _? _. .¦_ .-. .:-.- - :. ..- ¦ -. -. -_-
:GHV3-3.':I 2,
39.28.NWPP :|:
Г TZ &TZ 1
2-; i :; ;::
> . -3" ii -.г:.:.:.. : I :. :- :: :-. :- :3 :: :. :. .3 :\ •-. :¦ •/ :.
5 з
IGHV3.32"C1 :¦ : ¦ т, ¦; •_ 3 &.2ЭЛ"ЛРР :• : з -, ;:
. - i ¦.
_i L л E з
3 3^ - ¦'' 2 ~
К ESS!- CGR -3
Номер no Kabat
_" S" 35 Si Г 32 S 55 33 ?:....'.. 33 5" 3. 53 ЗЗ.'З, 3 2 2 3 2 3 3
. 3 235
;GHV'3-3C*31 ? E 3 Г i 7 2 2 2 3S.29.l\i',\FP 3 [":. 2 2 2.: -; v ;
E 2 !2SrJJ4 .5 S
ФИГ. 38B
Легкая цепь, каппа
CrctPH-CDRL1
Co-fel-GW LI
: : j - . ь - & . :
El 1. 15 l- 15 15 Г IS 15 2: 21 22 15
24 15 lb 2" A 3 1 2 2 7 15 15
5'. 5_ 52 55 54 55 5.
:GKV3-I_':i Е : т * : : Е г- :- :
2 E T 3 Г 2 E F A 2 2 E 2
3 4 5 2 ST
з з з A ii 7
351ВВ11 Е Е •;: :j: ; = -;,:
1 3 7 3 2 3 E 7 i'.V.i 3 2 5 2
7 A 2 ; 5 7
. 1-1-
JRTT
Q_4-_-CDRL2
zmU
5- -5 5 : 4. - 1 -1 -5 4- -5 -" -'. -5 : 5: 55 :¦¦ A 2
:GKV3 1S*_1 2 ; У з з 2 A 7 ? 2 2 2 71ТГГ1~Г7Т"
3S.13B1! 1 2 5" 7 з ; ;si 2 F 2 1 3 7! 3 A 3 7 F , .
I 5: 55 !' 5 5 22 65 55 52 55 54 t! 55 t" 53 55 " "1
' &_tr aVC'DR'LS"
-5 .. -j - -i s_ s: 6; s; S4 j. Јi j- fe Јt i, j; si a; 5:
:o;v3.i_,:r : 2 2 2 2 = 1 ; 2 2 з г ; - з I
35 IflBI 1 2 2 2 2 2 2 I ; 3 E 2 2 A 7 _ 2
¦55 j' 35
25 5 25 5
:G> ФИГ. 39A
Тяжелая цепь
Ji 3331 ¦
Cr:tr._. CDR hi
T"'C:..iki.CCR U"
Номер no Kabat
:GHvi-as'Ci ;
3S.1BB11 if
i 5
5 t
25 2" Is 15
2 3 7 T
3 3[iiy
35 55 15 . 3
35 54 53
3 55 5" 55 35 43 41 41 43
1 Cr-fr - ¦ CDR :
Cxi":;-CCHH2 1
Номер no Kabat
3: 5.- - 5
_ = -
:GHV!-83'C! 33 1SB11
1 2
3 5
:> :!• _ - CDR-*>
C37te::.CgRtg
55 54 55 55 53 §5 55 53 55 52 53 3, "5 5* 5" 55 325.3 4 2 3 3 E
_GH VI ¦ 3 E 3 3 24 7 2 7 3 ~ ~~.
3S.1BB11 5 5 E 2 2 4. 7 2 2 2 A 3 I^X .. ГзГ'ГГ?" ¦ ¦
7 2 2
"33
ФИГ. 39B
Легкая цепь, каппа
Кгэа: - SCR l;. Gratia-CDR L1
:gkv'3-i_'ci -33.1В Ш з
i . г А з s
: : з
= :-:.??.."
з i :
=..=;..
. , = :
_ A ,
: з з "
: :
.- i = ; . ,
¦ ¦ ' - • -
- -¦
I cT-FT^TrJITLl
I _ачг:ьСРЙ12 |
Г 35 35 ,'. 43 43 ii 44 43 4s 4" is 43 :, 33 3 3 53 3, к 3 3 3 3 33 35 3" 3 5 53 :.. el 51 . 5 54 ,5 ц .,- 55 " -.
.GKV3-1E" 1 ззтзз : зз 33113 з НГТ~з з ?"~ Г- I ! ГТ|: з з л ?. з з ; з з- з з з з з
33.13 Е12 ; ; У г- з ; |з; г з з : з з [ з к з : з :¦ з з, з з к ~ г з ; з з з з : з з
ISBDS!- CDR Li
¦; ¦-. ": "" : г .- v. ;i .-1 i- :5 : ¦. 5':: .-. г. г. г- .:-=::• - г. Г- т5
; : ¦ :: * з{зТ
3 3 3 3 3 3 3 5 4 : : - - z r - r ;
з.з ?
7 з з • .GK.J2
ФИГ. 40A
Тяжелая цепь
Номер по Kabat
:; j t ! > ¦ t s ;'¦::_:).,_:!!' :S И го 21
:_HV1._s*Ci ; т ; i т v ? ? r m Е з т :-• т ;
3S.1S EiS ; v ; : т ; s з " v ? з з з = \Ь у т з
jgaal-CCFi ьг ]
______ ______
Ii 13 lb _" IS 13 jj 53 31 33 ii 35 ~ 3 5. > " is 55 ii il il .3
з з; ¦
MX,' - CDFi f-2
1 С-гП • SDR-. 1 '
_W_:i-CCPK! 1
Номер no Kabat
ii i5 __
iB ii 53 К
55 55 55 35 5* 5a !5 5.- 5. 5l 55 5i 5 5 6 5 t" 55 55 '
"5 "3 55 53 55 ?.
:3Hv.-_s-_!
33.1B.E12
" .4
з :-. ; .• з i з 5 : з ;'v j з E ;v_ 3 : 5 3
'Cr.'Ke^CfJRr.'
Номер no Kabat :,.¦::r. _:.-. r-'-:.-. s ::_•: г : :v 5
..: ..- ..5
:3Hv1-__'_l 3 з 3
33.12 E12 з з з
з з :_Hjr3i
5 .5
ФИГ. 40B
Легкая цепь, каппа
r_": - С_Ч L*
CMtf--a - CDR LI
f '' &iia:l':CrjR |
i i ; -. i с ¦ s _ J ;
;: л a :$ .* is ;s _: _:a
.3 .5 1'J A 3 3 3 i Z ii ii ii L j".- .4 .3 _5
. : .i = " : : г ¦ : : : :
Э* S3 : : ff!т ; :- г s :
_:-:::=::: :
f -. з ; _ : .J..::. " : A S :
a-stha- CDR L2
I Cr.!s::.CDRL2 [
r 35 ss it a i': а а n а г а а- ... i: ы a a :-. = : : z 5! v. г и a ": s: " ": " ii г > я " \ ~. IGKvl-5'СЗ ; ; r r : - A r- ? : : : з ~г"; з ~7 : , Г*. ! ! ГТ1з v ? з з г з i 5 _ з A T _ г 3S.S3 ; : г z z у A -¦ ¦ z z : з F = "':: z , . . . , i з з v :¦ ¦ :¦ г = := := :¦:• F
(Cass: ¦
CCP L:
O-f a
СбРШ
C_R Li
3 "
ФИГ. 41А
Тяжелая цепь
Номер по Kabat . . -
IGHVI-I9-:I : т ;
зз.as ; -,- :
.: л .
у; = ¦
И 5, 55
55 5" ii
ii ii ii
Номер no Kabat
:GHVI-IS-*I -
36.95
-. -¦ ,5 --
: . : i .
:- 55 .-. 3" 3: iz . '. ¦.. ¦.:
., ., ., ,f. .. -s -j, 4. j_ ь: -
" E ~~ E ¦. : _ " : E : = : A ¦ E ;т- г
¦ j:?- -..- -13
Номер no Kabat
3^.9
v,
Ой:; • CCS ^3 rb: 86 i" 85 b> 5. ?: 515i 51 55 5" 55 55 :..; E
¦;? ii. i.i lii Hi lis i> ir
"E'Y pi E ; E E
• : : : -
..- 155
-. .1. ...
" E E зач'-зл
ФИГ. 41B
Легкая цепь, каппа
Номер ПО Kabat . . ; : ; .
:Gi_vl-"'Јt ; з т : : : 7 г з ,
9.01F3 ;Т; s 7 7 ; I 7 = .
:: ;5 ,i r :s :" ... ii
7 Г
ii i: a
КгзМ_- ССР L'
О -!'-л - CDR L1
-тЗ
i r is :s .v. si s: ss s; if se
__aai_ Crstha
CSRTT" CDR iz
Номер no Kabat
58 э? 53 55 53 55 55 55 55 7 5 E F E E EE 1
t 5" 55 55 *:
fesaal ¦ CCR L'S !> :[:• .a - CDR Л
Номер no Kabat
Contest-C_R 5.S
55 "5 " "i "5 5 5 55 S3 ii 54 55 55 8* S3 35 53 53 53 55 54 5? .4 E 3 5 E 37;5)6 Г 55 55 ::;
:c5_.vi----ci
53.C1 F3
: =
3 3 3 3
.IT: у
ФИГ 42A
Тяжелая цепь
\г~л\- GL3R т <з
Номер по Kabat
3.C1F3
.. .: .
.• .- :-
:-. з т :• i з ~ ?
У А 3
? А 3
:• ... .. /- .: ;
. Л .г : -. -.-
Номер по Kabat { .. .- . • • =. г. у. .. -.- -.- = . . , . =., • . • -. -_ • •. -: • ; -. . -. • :
:GhVl-2"C2 з : з X .• ~:'~-~~Т"Т'~ '. Г"ТНПТ~ГТ~зГ~з ; ~~т f ; з!? 7 : л 7 ? : : з : з : к г :; 11=37.
3.D1F3 ззз.;? з а : :; г . . :: •'? з з у;'; з к 77 ; з з у 7 г 7 з : :А': з : ::,-у А З з у;':', ? з
KiMi-CrjW из
Семг:: • CDR rl
Номер по Kabat ¦::.; :;= , ;-:: ,Т,. R.;, R: ;J,= Г ,-, ;S ;:S .: <
IGHV'1.2'22 г 5 3 3 7 7 7 У I А 3 , X 3 7 I " з ; 3 3 3 7 3 7 3 3 IC-OS*
S.:1F3 з з 7 А 7 з з :{'7:з ;> ; - А А .- ; з > : з з у з ? , . . 1з: з 7 | % з ; з з [зз; т : т з з Э" ЭГЛ Зародышевые линии человека
ФИГ. 42В
Легкая цепь, каппа
С-г. I--г ¦ CDR L1
Номер по Kabat . . . . i : - : - . ..
:: is и i; a r
i г is- :? r. s; ss si и st
:GKV'2.3:-:I :
23 2SC2 :
: :
Cfiatma-ЂDR.L2
Г C^a:i"c2RL2 Г
Номер ПО Kabat .:: ;r -. .. .. -¦ =, :. i:y - - ; : ; :: у у у -. :. ,; > : :: ¦• -: ¦., 6 У У
:GKV2.3C"CI ; ; ¦ г :• ; = г- ; г- : : ¦ 23C2C2;,?' ¦: ? f :- ; s г ? :~ : : v
Номер no Kabat
; 'Crstf-'3;C'DRTF
?l Si !,. 55 5, !! = ; :
______
ii I : A r H и Г ... ,
r r %а, i- ah ai
1.2 i:i :ii us i.t
5XJ4
ФИГ. 43A
Тяжелая цепь
Orrtr.a - CDR г1
CD-is;:
Номер no Kabat
: :
.5 It
15 15
1515
15 15 35 51 55 55 54 35 .4. 3 35 5" 55 55 43
23.2SC2 ;
2 F
3 ?
Номер no Kabat ir 4S 45 4- lS a :- K * = : 5.5 34 55 55 5- 55 " 55 55 5. 45 54 55 5j ,* -s- 5* •; -г -J Ч "5 "5 - i *з 5: 5. s; j г : IGHv'4-3S'2l зз : ? 7, i ~f~ГТ-! ! ГТ~ТНГТНГТ~ГТ^Г1Н7 з. ~TlF T З З З T З З З F : г з : у з з з зз 22.2SC2 з ¦> .• з д з ззз :'=' . . .з з з з з з з н: г з з ¦ з з v зз з з ::' з : з :• :: з :'г2_'?' з г зз; ? з т
C^trsa -'C'DR'HJ '
Номер no Kabat ;. -
;GHvi-3s*:i з к 34 : з з- у 23.CSC2
515i <4"5 ?i 5" 53
: - 3 : 3 5
I ! "я"
:T:i s
. . r
3 3 :G^J2-D-5 5
Зародышевые линии человека
ФИГ. 43В
PATENT COOPERATION TREATY
PCT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
(PCT Article 18 and Rules 43 and 44)
Applicant's or agent's file reference P4982R1-WO
FOR FURTHER SEE FORM PCT/ISA/220
ACTION as we" as> where applicable, item 5 below.
International application No. PCT/US2013/069567
International filing date (day/month/year) 12 November 2013 (12-11 -2013)
(Earliest) Priority Date (day/month/year) 13 November 2012 (13-11 -2012)
Applicant
GENENTECH, INC.
This international search report has been prepared by this International Searching Authority and is transmitted to the applicant according to Article 18. A copy is being transmitted to the International Bureau.
This international search report consists of a total of _
sheets.
It is also accompanied by a copy of each prior art document cited in this report.
1. Basis of the report
a. With regard to the language, the international search was carried out on the basis of: | X | the international application in the language in which it was filed | | a translation of the international application into_
., which is the language
of a translation furnished for the purposes of international search (Rules 12.3(a) and 23.1 (b))
This international search report has been established taking into account the rectification of an obvious mistake authorized by or notified to this Authority under Rule 91 (Rule 43.6itws(a)).
With regard to any nucleotide and/or amino acid sequence disclosed in the international application, see Box No. I. Certain claims were found unsearchable (See Box No. II) Unity of invention is lacking (see Box No III)
4. With regard to the title,
| X | the text is approved as submitted by the applicant
| | the text has been established by this Authority to read as follows:
5. With regard to the abstract,
| X | the text is approved as submitted by the applicant
| | the text has been established, according to Rule 38.2, by this Authority as it appears in Box No. IV. The applicant
may, within one month from the date of mailing of this international search report, submit comments to this Authority
6. With regard to the drawings,
a. the figure of the drawings to be published with the abstract is Figure No. 15
| X | as suggested by the applicant
| | as selected by this Authority, because the applicant failed to suggest a figure
| | as selected by this Authority, because this figure better characterizes the invention
b. | | none of the figures is to be published with the abstract
Form PCT/ISA/210 (first sheet) (July 2009)
International application No. PCT/US2013/069567
Box No. I Nucleotide and/or amino acid sequence(s) (Continuation of item 1 .c of the first sheet)
1. With regard to any nucleotide and/or amino acid sequence disclosed in the international application and necessary to the claimed invention, the international search was carried out on the basis of:
(means)
(time)
QO ? ?
on paper
in electronic form
in the international application as filed
together with the international application in electronic form
subsequently to this Authority for the purpose of search
In addition, in the case that more than one version or copy of a sequence listing and/or table relating thereto has been filed or furnished, the required statements that the information in the subsequent or additional copies is identical to that in the application as filed or does not go beyond the application as filed, as appropriate, were furnished.
3. Additional comments:
Form PCT/ISA/210 (continuation of first sheet (1)) (July 2009)
International application No.
PCT/US2013/069567
Box No. II Observations where certain claims were found unsearchable (Continuation of item 2 of first sheet)
This international search report has not been established in respect of certain claims under Article 17(2)(a) for the following reasons: 1. | | Claims Nos.:
because they relate to subject matter not required to be searched by this Authority, namely:
Claims Nos.:
because they relate to parts of the international application that do not comply with the prescribed requirements to such an extent that no meaningful international search can be carried out, specifically:
3. Claims Nos.:
because they are dependent claims and are not drafted in accordance with the second and third sentences of Rule 6.4(a).
Box No. Ill Observations where unity of invention is lacking (Continuation of item 3 of first sheet)
This International Searching Authority found multiple inventions in this international application, as follows:
see additional sheet
1. As all required additional search fees were timely paid by the applicant, this international search report covers all searchable
I 1 claims.
2. | | As all searchable claims could be searched without effort justifying an additional fees, this Authority did not invite payment of
additional fees.
I у I As only some of the required additional search fees were timely paid by the applicant, this international search report covers only those claims for which fees were paid, specifically claims Nos.:
l-14(completely); 43-53(partially)
| | No required additional search fees were timely paid by the applicant. Consequently, this international search report is restricted to the invention first mentioned in the claims; it is covered by claims Nos.:
Remark on Protest The additional search fees were accompanied by the applicant's protest and, where applicable, the
' ' payment of a protest fee.
The additional search fees were accompanied by the applicant's protest but the applicable protest
' ' fee was not paid within the time limit specified in the invitation.
| X | No protest accompanied the payment of additional search fees.
Form PCT/ISA/210 (continuation of first sheet (2)) (April 2005)
International application No
PCT/US2013/069567
A. CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER
INV. A61K39/42 C07K16/10 A61P31/16 ADD.
According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B. FIELDS SEARCHED
Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols)
A61K C07K
Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practicable, search terms used)
EPO-Internal, BIOSIS, EMBASE, WPI Data, CHEM ABS Data
C. DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT
Category* Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages
Relevant to claim No.
US 2011/274702 Al (LANZAVECCHIA ANTONIO [CH]) 10 November 2011 (2011-11-10) paragraphs [0004], [0008], [0010], [0019], [0020], [0023], [0034] -[0036], [0040], [0043] - [0048]; examples 1, 2, 4-6; tables 9,10
1-14, 43-53
W0 2011/117848 Al (POMONA RICERCA S R L [IT]; BURI0NI ROBERTO [IT]; CLEMENTI MASSIMO [IT])
29 September 2011 (2011-09-29)
cited in the application
the whole document, in particular claim 1
1-14, 43-53
-/-
X Further documents are listed in the continuation of Box C.
See patent family annex.
* Special categories of cited documents :
"A" document defining the general state of the art which is not considered to be of particular relevance
"E" earlier application or patent but published on or after the international filing date
"L" documentwhich may throw doubts on priority claim(s) orwhich is cited to establish the publication date of another citation or other special reason (as specified)
"O" document referring to an oral disclosure, use, exhibition or other means
"T" later document published after the international filing date or priority date and not in conflict with the application but cited to understand the principle or theory underlying the invention
"X" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered novel or cannot be considered to involve an inventive step when the document is taken alone
"Y" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered to involve an inventive step when the document is combined with one or more other such documents, such combination being obvious to a person skilled in the art
Category*
Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages
Relevant to claim No.
NAKAMURA GERALD ET AL: "An In Vivo Human-Plasmablast Enrichment Technique Allows Rapid Identification of Therapeutic Influenza A Antibodies", CELL HOST & MICROBE,
vol. 14, no. 1, 17 July 2013 (2013-07-17), pages 93-103, XP028679533, ISSN: 1931-3128, DOI: 10.1016/J.CH0M.2013.06.004 the whole document
1-14, 43-53
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
Information on patent family members
International application No
PCT/US2013/069567
Patent document cited in search report
Publication date
Patent family member(s)
Publication date
US 2011274702 Al
10-11-2011 NONE
WO 2011117848 Al
29-09-2011
CN 102958539 A
EA 201290955 Al
EP 2552485 Al
US 2013022608 Al
W0 2011117848 Al
06-03-2013 29-03-2013 06-02-2013 24-01-2013 29-09-2011
W0 2010010466 A2 28-01-2010
AU 2009275226 Al
AU 2009275227 Al
CA 2731686 Al
A A
CA 2733218 Al
CN 102164613
CN 102216327
CO 6341572 A2
A A
CR 20110079 A
CR 20110084
EC SP11010823
EP 2313112 A2
EP 2313433 A2
JP 2011528901
JP 2011528902
KR 20110047193
KR 20110049802
MA 32577
NZ 590890
NZ 590891
RU 2011105062
US 2010080813 Al
US 2010086555 Al
W0 2010010466 A2
W0 2010010467 A2
04 04 12 12
28-0128-0128-0128-0124-0812-1021-1118-0718-0731-08-
27270101-
06-05 12-05 01-08 31-05 28-03
27- 08 01-04 08-04
28- 01 28-01 2010 2010 2010 2010 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2011 2013 2013 2012 2010 2010 2010 2010
27-
International Application No. PCT/US2013/069567
FURTHER INFORMATION CONTINUED FROM PCT/ISA/ 210
This International Searching Authority found multiple (groups of) inventions in this international application, as follows:
1. claims: l-7(completely); 43-53(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 1 and related subject-matter.
2. claims: 8-14(completely); 43-53(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 8 and related subject-matter.
3. claims: 15-21(completely); 43-53(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 15 and related subject-matter.
4. claims: 22-28(completely); 43-53(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 22 and related subject-matter.
5. claims: 29-35(completely); 43(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 29 and related subject-matter.
6. claims: 36-42(completely); 43(partially)
An isolated anti-hemagglutinin antibody as recited in present claim 36 and related subject-matter.
(19)
(19)
(19)
(19)
(19)
100
100
109
112
112
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ДЖЕНЕНТЕК, ИНК.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ДЖЕНЕНТЕК, ИНК.
<400> 8
atcgtttcat aagcgcgcga rgtgcagctg gtgcagtc
<400> 8
atcgtttcat aagcgcgcga rgtgcagctg gtgcagtc
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
праймер"
праймер"
<400> 26
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60
<400> 26
tctcctcagc tagcggtggc ggcggttccg gaggtggtgg ttctggcggt ggtggcagcg 60
aaattgtgwt gacrcagtc
aaattgtgwt gacrcagtc
<400> 30
agttcatgcc atggttttga tttccacctt ggtccctt 38
<400> 30
agttcatgcc atggttttga tttccacctt ggtccctt 38
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
праймер"
праймер"
<210> 52 <211> 22
<210> 52 <211> 22
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<400> 56
caggtccagc tggtgcagtc tggggc
<400> 56
caggtccagc tggtgcagtc tggggc
<400> 65
gaaatwgtrw tgacrcagtc tc
<400> 65
gaaatwgtrw tgacrcagtc tc
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический праймер"
<400> 83
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 83
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cacag
cacag
<400> 87
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 87
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cacaggtaca gc
cacaggtaca gc
<400> 91
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 91
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
101
cagaaattgt gttgacacag tctccagcca ccctgtcttt g
101
cagaaattgt gttgacacag tctccagcca ccctgtcttt g
<400> 95
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 95
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cacagtctgt gytgackcag ccrccctc
cacagtctgt gytgackcag ccrccctc
<400> 99
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 99
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cacagcctgt gctgactcag ccaacttc
cacagcctgt gctgactcag ccaacttc
<400> 103
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
<400> 103
ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt 60
cacagcctgt gctgactcag ccacc
cacagcctgt gctgactcag ccacc
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340
350
345
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
340
350
345
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
100 105 110
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260
270
265
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
260
270
265
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Arg Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180
190
185
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
180
190
185
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe His Asn Arg
20 25 30
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
<210> 123
<210> 123
<211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<211> 216 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
35 40 45
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
<210> 136 <211> 109
<210> 136 <211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид"
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
полипептид"
полипептид"
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Gly Lys
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro 5 10
Gly Lys
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro 5 10
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
<400> 153
<400> 153
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
<400> 154
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
<400> 154
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Thr Ser Asn Ser Gln
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Thr Ser Asn Ser Gln
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Gly Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Ser Leu Gly Lys 450
Ser Leu Gly Lys 450
<400> 166
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
<400> 166
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Tyr Asn
20 25 30
10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Tyr Asn
20 25 30
Cys Ala Arg Tyr Asn Trp Gly Ile Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg
100 105 110
Cys Ala Arg Tyr Asn Trp Gly Ile Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 176
Asn Tyr Pro Pro
<400> 176
Asn Tyr Pro Pro
<400> 180
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
1 5 10 15
<400> 180
Ala Val Pro Gly Pro Ile Phe Gly Ile Phe Pro Pro Trp Ser Tyr Phe
1 5 10 15
<220>
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 188
Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<400> 188
Gln His Tyr Thr Asn Trp Pro Pro Arg Leu Thr
1 5 10
<400> 196
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser 1 5
Asp Tyr Trp
<400> 216
Ser Asn Thr Glu Arg Pro Ser 1 5
<400> 216
Ser Asn Thr Glu Arg Pro Ser 1 5
<400> 220
Ala Arg Tyr Asn Trp Gly Ile Arg Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<400> 220
Ala Arg Tyr Asn Trp Gly Ile Arg Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Asn Lys Lys Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Tyr Ser Asn
100 105 110
Asn Lys Lys Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Tyr Ser Asn
100 105 110
Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly
355 360 365
Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly
355 360 365
<400> 227
<400> 227
Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser
1 5 10 15
Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Lys Asn Thr Arg Asn Glu Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly Ile His
180 185 190
Tyr Lys Asn Thr Arg Asn Glu Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly Ile His
180 185 190
Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr
435 440 445
Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr
435 440 445
Ile Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Phe Ala
260 265 270
Ile Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Phe Ala
260 265 270
Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn
500 505 510
Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn
500 505 510
Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Val Tyr Gln
515 520 525
Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Val Tyr Gln
515 520 525
Asn Gly Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Ser Gly Ser Thr
165 170 175
Asn Gly Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Ser Gly Ser Thr
165 170 175
Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr
420 425 430
Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr
420 425 430
Arg Thr Val Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Ile Thr Gly
65 70 75 80
Arg Thr Val Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Ile Thr Gly
65 70 75 80
Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Ser Ala Asp Leu Ile Ile
85 90 95
Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Ser Ala Asp Leu Ile Ile
85 90 95
Glu Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Ile Pro
325 330 335
Glu Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Ile Pro
325 330 335
Lys Arg Arg Arg Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu
340 345 350
Lys Arg Arg Arg Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu
340 345 350
<210> 233
<211> 566
<210> 233
<211> 566
<212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<212> PRT
<213> Вирус гриппа А
<210> 235
<210> 235
<211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<211> 109 <212> PRT
<213> Искусственная последовательность
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
<400> 238
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
<400> 238
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met
Thr Gln Ser Pro 5
Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 10 15
Met
Thr Gln Ser Pro 5
Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 10 15
Cys Ala Arg Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Cys Ala Arg Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
2/57
1/57
2/57
1/57
2/57
1/57
2/57
1/57
2/57
3/57
4/57
4/57
ФИГ. 4B
ФИГ. 4B
4/57
4/57
ФИГ. 4B
ФИГ. 4B
4/57
4/57
ФИГ. 4B
ФИГ. 4B
4/57
4/57
ФИГ. 4B
ФИГ. 4B
5/57
5/57
6/57
6/57
ФИГ. 7
ФИГ. 7
6/57
6/57
ФИГ. 7
ФИГ. 7
7/57
7/57
ФИГ. 9
ФИГ. 9
8/57
1201
8/57
1201
10/57
100-
9/57
10/57
100-
9/57
10/57
100-
9/57
10/57
100-
9/57
10/57
100-
9/57
10/57
100-
9/57
10/57
100-
11/57
10/57
100-
11/57
10/57
100-
11/57
10/57
100-
11/57
10/57
100-
11/57
12/57
12/57
ФИГ. 20
ФИГ. 20
12/57
12/57
ФИГ. 20
ФИГ. 20
13/57
13/57
13/57
13/57
14/57
14/57
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
16/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
18/57
17/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat :
19/57
19/57
19/57
19/57
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
20/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
22/57
21/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat ;
23/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat . . ;
23/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat . . ;
23/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat . . ;
23/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat . . ;
24/57
24/57
25/57
25/57
25/57
25/57
25/57
25/57
26/57
26/57
27/57
27/57
27/57
27/57
27/57
27/57
27/57
27/57
28/57
28/57
28/57
28/57
28/57
28/57
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
29/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
31/57
Crctra-CDRM
Тяжелая цепь Номер по Kabat , -
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
32/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
34/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
34/57
33/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat .. ,
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
35/57
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
36/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
38/57
37/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
38/57
39/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
38/57
39/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
39/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
39/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
39/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
40/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
42/57
41/57
Тяжелая цепь Номер по Kabat
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
43/57
Тяжелая цепь
Номер по Kabat ; .
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
44/57
45/57
45/57
45/57
45/57
45/57
45/57
45/57
45/57
46/57
46/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
47/57
48/57
48/57
48/57
48/57
48/57
48/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
49/57
50/57
50/57
50/57
50/57
50/57
50/57
50/57
50/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
51/57
52/57
52/57
52/57
52/57
52/57
52/57
54/57
54/57
54/57
54/57
54/57
54/57
54/57
54/57
55/57
55/57
55/57
55/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
56/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
57/57
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
page 1 of 3
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 2 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
page 2 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 3 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
page 3 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
page 3 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
page 3 of 3
Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)
Form PCT/ISA/210 (patent family annex) (April 2005)