|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] В настоящем изобретении предусмотрены триспецифические и/или тривалентные связывающие белки, содержащие четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией, и где вторая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит один вариабельный домен. В настоящем изобретении также предусмотрены способы получения триспецифических и/или тривалентных связывающих белков и варианты применения таких связывающих белков. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
В настоящем изобретении предусмотрены триспецифические и/или тривалентные связывающие белки, содержащие четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией, и где вторая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит один вариабельный домен. В настоящем изобретении также предусмотрены способы получения триспецифических и/или тривалентных связывающих белков и варианты применения таких связывающих белков.
Евразийское (21) 201892312 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2017.04.13
(51) Int. Cl.
C07K16/24 (2006.01) C07K16/28 (2006.01) C07K16/32 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
(54) ТРИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ И/ИЛИ ТРИВАЛЕНТНЫЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ
(31) (32) (33)
(86) (87) (88) (71)
(72)
(74)
62/322,036; 62/331,191; 62/412,187; EP17305298.6
2016.04.13; 2016.05.03; 2016.10.24;
2017.03.17
US; US; US; EP
PCT/US2017/027488
WO 2017/180913 2017.10.19
2018.02.08
Заявитель: САНОФИ (FR)
Изобретатель:
Нейбел Гари Дж., У Лань, Сьюнг Эдвард, Вэй Ронни (US), Бенинга Йохен, Рао Эрколе, Лойшнер Вульф Дирк, Байль Кристиан, Ланге Кристиан, Корвей Карстен (DE), Ян Цжи-Юн (US)
Представитель: Медведев В.Н. (RU)
(57) В настоящем изобретении предусмотрены триспецифические и/или тривалентные связывающие белки, содержащие четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией, и где вторая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит один вариабельный домен. В настоящем изобретении также предусмотрены способы получения триспецифических и/или тривалентных связывающих белков и варианты применения таких связывающих белков.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-552918ЕА/042 ТРИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ И/ИЛИ ТРИВАЛЕНТНЫЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ
ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает преимущество приоритета по предварительной заявке на патент США с регистрационным № 62/322036, поданной 13 апреля 2016 г., предварительной заявке на патент США с регистрационным № 62/331191, поданной 3 мая 2016 г., предварительной заявке на патент США с регистрационным № 62/412187, поданной 24 октября 2016 г., и заявке на европейский патент № ЕР17305298.6, поданной 17 марта 2017 г.; которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛВНОСТЕЙ В ТЕКСТОВОМ ФАЙЛЕ
ASCII
[0002] Содержание нижеследующего представленного текстового файла ASCII включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте: машиночитаемая форма (CRF) перечня последовательностей (название файла: 183952027140SEQLISTING.txt, дата составления: 11 апреля 2017 г., размер: 200 Кб).
ОБЛАСТВ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0003] Настоящее изобретение относится к триспецифическим и/или тривалентным связывающим белкам, содержащим четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией, и где вторая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит один вариабельный домен. Настоящее изобретение также относится к способам получения триспецифических и/или тривалентных связывающих белков и вариантам применения таких связывающих белков.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] Биотерапевтические препараты на основе
моноклональных антител стали важным направлением в разработке
новых лекарственных средств. Технология моноклональных антител предлагает специфическое нацеливание на конкретную популяцию клеток и точную доставку в них сигналов и/или полезной нагрузки и обеспечивает длительный биологический эффект посредством функций, опосредованных Fc-фрагментом. Попытки, предпринятые в области конструирования антител, позволили разработать биспецифические антитела, в которых объединены специфичности двух моноклональных антител, для различных путей применения в биологических целях, расширяя область разработки лекарственных средств на основе антител. Недавно открытые нейтрализующие антитела с улучшенной широтой спектра действия и активностью могут обеспечивать больше возможных вариантов разработки биотерапевтических препаратов для лечения комплексных заболеваний, таких как рак, артрит, и/или воспалительных нарушений.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] В данном документе предусмотрены мультиспецифические связывающие белки (например, антитела), которые образуют три антигенсвязывающих участка. Эти связывающие белки могут специфически связывать один, два или три антигена-мишени или белка-мишени.
[0006] В одном варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
vL3-cL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0007] В некоторых вариантах осуществления вторая и/или третья полипептидная цепь дополнительно содержит Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0008] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъ3-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Сн3 [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0009] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок является тривалентным, но
биспецифическим и способен специфически связывать три антигена-мишени, два из которых являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок по настоящему изобретению является тривалентным, но моноспецифическим и способен специфически связывать три антигена-мишени, все из которых являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени.
[0010] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок по настоящему изобретению содержит один, два или три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают белок-мишень, выбранный из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4 (также известного как VTCN1), В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2 (также известного как МСР-1), CCL3 (также известного как MIP-la), CCL4
(также известного как MIP-lb), CCL5 (также известного как RANTES), CCL7 (также известного как МСР-3), CCL8 (также известного как МСР-2), CCL11 (также известного как эотаксин), CCL15 (также известного как MIP-ld), CCL17 (также известного как TARC), CCL19 (также известного как MIP-3b), CCL20 (также известного как MIP-3a), CCL21 (также известного как MIP-2), CCL24 (также известного как МР1Е-2/эотаксин-2), CCL25 (также известного как ТЕСК), CCL26 (также известного как эотаксин-3), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23 (также известного как FCER2, рецептор для IgE) , CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80 (также известного как В7-1), CD86 (также известного как В7-2), CD122, CD137 (также известного как 41ВВ), CD137L, CD152
(также известного как CTLA4), CD154 (также известного как CD40L), CD160, CD272, CD273 (также известного как PDL2), CD274
(также известного как PDL1), CD275 (также известного как В7Н2), CD276 (также известного как В7НЗ), CD278 (также известного как ICOS), CD279 (также известного как PD-1), CDH1 (также известного как Е-кадгерин), хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1 (также известного как M-CSF), CSF-2 (также известного как GM-CSF), CSF
3 (также известного как GCSF), CX3CL1 (также известного как
SCYD1), CXCL12 (также известного как SDF1), CXCL13, CXCR3, DNGR-
1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1,
FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2,
HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa,
IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7,
IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral,
IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb (также известного как рецептор для
IL25) , IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4 (также
известного как интегрин Ь4), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина,
LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, 0X4О,
OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1,
SLC, SPG64, ST2 (также известного как рецептор для IL33),
STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2,
TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP (также
известного как корецептор для IL7Ra), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA,
Vstm3, WUCAM и XCR1 (также известного как GPR5/CCXCR1). В
некоторых вариантах осуществления один или несколько
вышеуказанных антигенов-мишеней представляют собой антигены-
мишени человека. В некоторых вариантах осуществления связывающий
белок по настоящему изобретению является триспецифическим и
способен специфически связывать три различных антигена-мишени,
выбранных из вышеприведенного перечня. В некоторых вариантах
осуществления связывающий белок по настоящему изобретению
является тривалентным, но биспецифическим и способен
специфически связывать три антигена-мишени, выбранных из
вышеприведенного перечня, два из которых являются идентичными. В
некоторых вариантах осуществления связывающий белок по
настоящему изобретению является тривалентным, но
моноспецифическим и способен специфически связывать три антигена-мишени, выбранных из вышеприведенного перечня, все из которых являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок специфически связывает три белка-мишени, которые соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному опухолевому белку-мишени. В некоторых вариантах
осуществления один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD3. В некоторых вариантах осуществления один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD2 8. В некоторых вариантах осуществления указанный опухолевый белок-мишень представляет собой CD38. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок специфически связывает три белка-мишени, которые соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному белку-мишени, выбранному из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[ООН] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VL2-L!-VL1-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную
формулой:
VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VLI, VL2 и VL3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 2, 4,
10, 14, 18, 22, 115;
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под
(a)
любым из SEQ ID NO: 43-59, 123-125;
(c) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167;
(d) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140, и 149; или
(e) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи, показанные в таблицах 2-5; и
где:
(a) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 1, 3, 9,
13, 17, 21, 114;
(b) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122;
(c) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166;
(d) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ
ID N0: 25-42, 120-122, и 126-128; или
(e) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0012] В некоторых вариантах осуществления вторая и/или третья полипептидная цепь дополнительно содержит Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0013] В другом варианте осуществления настоящего
изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры; где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют
перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь; где:
(a) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 2, 4,
10, 14, 18, 22, 115;
(b) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125;
(c) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167;
(d) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140, и 149; или
(e) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи, показанные в таблицах 2-5;
где:
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 1, 3, 9,
13, 17, 21, 114;
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122;
(c) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166;
(d) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122, и 126-128; или
(е) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0014] В некоторых вариантах осуществления каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167; и каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166. В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140, и 149; и (d) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122, и 126-128
[0015] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, (a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45; (b) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45; (с) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит
CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 8; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57; (d) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 38, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57; (е) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59; (f) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59; (g) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 140; (h) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 140; (i) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125; или (j) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125. В
некоторых вариантах осуществления (a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45.
[0016] В некоторых вариантах осуществления связывающий
белок содержит один антигенсвязывающий участок, который
специфически связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает
антиген-мишень, например, опухолевый белок-мишень. В некоторых
вариантах осуществления связывающий белок содержит
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1. В некоторых вариантах осуществления VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который
специфически связывает CD3 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека. В некоторых вариантах осуществления VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, a VH3 и VL3 образуют третий связывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок специфически связывает опухолевый белок-мишень человека, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит: (а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 152, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 153; или (Ь) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 154, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 155. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит: (а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 160, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 161; или (Ь) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 162, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 163. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в
таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит: (а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 156, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 157; (b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 158, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 159; (с) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 164, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 165; (d) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 150, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 151; или (е) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 166, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 167. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи связывающего домена антитела к Нег2, антитела к CD19, антитела к CD2 0, антитела к CD3 8 или антитела к LAMP1, показанные в таблицах 2-5.
[0017] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VL1_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную
формулой:
VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VLI, VL2 и VL3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 61, 63,
69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, имеющие по меньшей мере одну аминокислотную последовательность,
(a)
приведенную под любым из SEQ ID N0: 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 8 6, 88, 94;
(c) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 169, 171, и 173;
(d) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 141-147, 178, и 179; или
(e) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи, показанные в таблицах 2-5; и
где:
(a) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 60, 62,
68, 73, 75, 81, 85, 87, 93; или
(b) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, имеющие по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93;
(c) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 168, 170, и 172;
(d) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0: 129-137; или
(e) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0018] В некоторых вариантах осуществления вторая и/или третья полипептидная цепь дополнительно содержит Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи
иммуноглобулина.
[0019] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи
иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 61, 63,
69, 71, 74, 76, 82, 86, 88, 94;
(b) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, имеющие по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 8 6, 88, 94;
(c) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 169, 171, и 173;
(d) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 141-147, 178, и 179; или
(e) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи, показанные в таблицах 2-5;
где:
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо представляет собой
вариабельный домен, полученный из аминокислотной
последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 60, 62,
68, 73, 75, 81, 85, 87, 93;
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, имеющие по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87, 93;
(a)
(c) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 168, 170, и 172;
(d) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0: 129-137;
(e) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0020] В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2
и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного
домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 169, 171 и 173; и
каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит последовательность
вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 168,
170 и 172. В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2
и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области
легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность,
выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 141-147, 178 и 179;
и каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 129-137.
[0021] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, (a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; (b) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; (с) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; (d) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; (е) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; (f) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; (g) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; (h) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; (i) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; или (j) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144. В некоторых вариантах осуществления один или несколько из VH1, VL1, VH2/ VL2, vH3 и VL3 содержат одну, две или три последовательности CDR антитела, показанные в таблицах 2-5.
[0022] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, где один, два или три антигенсвязывающих участка специфически связывают цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa. В некоторых вариантах осуществления (a) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека; (b) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека; (с) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека; (d) VH1 и VL1 образуют первый
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека; (е) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека; или (f) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 168, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 169. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 0, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 171. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 172, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 173.
[0023] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, вторая и/или третья полипептидная цепь дополнительно содержит Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи
иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления каждый из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней.
[0024] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, по меньшей мере один из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления каждый из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления один, два, три или все четыре из Llf L2, L3 и L4 имеют длину, составляющую 0-15 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере два из Llf L2, L3 и L4 имеют длину, составляющую 1-15 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления (а) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID N0: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148) ; или (b) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148) . В некоторых вариантах осуществления Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT; содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2
содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0025] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и 366 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, 366, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A и Y407V. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, 366, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A и Y407V; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при
этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и/или вторая Fc-области содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S. В некоторых вариантах осуществления домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V. В некоторых вариантах осуществления домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W. В некоторых вариантах осуществления домены Снз как второй, так и третьей полипептидных
цепей содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; и где только одна из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F. В некоторых вариантах осуществления домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl человека, и где только один из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K. В некоторых вариантах осуществления домены Снз второй и третьей полипептидных цепей
представляют собой домены Снз IgG4 человека, и при этом каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgG4 человека, и при этом каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены
представляют собой L234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl человека, и при этом каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека.
[0026] В некоторых вариантах осуществления любого из связывающих белков, описанных в данном документе, домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T3 66W; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит
аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и где четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354, Збб, 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C, T366W, H435R и Y436F; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y4 07V; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи. В некоторых вариантах осуществления вторая и/или третья полипептидные цепи содержат Fc-область IgGl или IgG4 человека.
[0027] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок, содержащий первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь, третью полипептидную цепь и четвертую полипептидную цепь, где:
(а) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 2;
(b) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 2;
(c) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь
(b)
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14;
(d) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14;
(e) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
(d)
аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(f) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(g) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 22;
(h) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
(f)
под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 22;
(i) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 61;
(j) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0:
60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 61;
(к) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 71 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 71;
(1) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 7 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 7 6; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 75 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 75; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(m) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 82 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 82; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 81 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 81; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(п) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 8 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 88; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 87 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 87; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(о) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 94 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 94; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 93 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 93; третья полипептидная цепь
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 5; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(р) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(q) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(г) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(s) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(t) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 115; или
(и) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 115.
[0028] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрена выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую связывающий белок или его полипептид в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с одним из вышеуказанных вариантов осуществления. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрена выделенная клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вышеуказанных
вариантов осуществления. В другом варианте осуществления
настоящего изобретения предусмотрена выделенная клетка-хозяин,
содержащая вектор экспрессии в соответствии с любым из
вышеуказанных вариантов осуществления. В некоторых вариантах
осуществления выделенная клетка-хозяин представляет собой клетку
млекопитающего или клетку насекомого. В одном варианте
осуществления настоящего изобретения предусмотрена векторная
система, содержащая один или несколько векторов, кодирующих
первую, вторую, третью и четвертую полипептидные цепи
связывающего белка в соответствии с любым из вышеуказанных
вариантов осуществления. В некоторых вариантах осуществления
векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую
полипептидную цепь связывающего белка, второй вектор, кодирующий
вторую полипептидную цепь связывающего белка, третий вектор,
кодирующий третью полипептидную цепь связывающего белка, и
четвертый вектор, кодирующий четвертую полипептидную цепь
связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления
векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую и
вторую полипептидные цепи связывающего белка, и второй вектор,
кодирующий третью и четвертую полипептидные цепи связывающего
белка. В некоторых вариантах осуществления один или несколько
векторов представляют собой векторы экспрессии. В одном варианте
осуществления настоящего изобретения предусмотрена выделенная
клетка-хозяин, содержащая векторную систему в соответствии с
любым из вышеуказанных вариантов осуществления. В одном варианте
осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ
получения связывающего белка, при этом способ включает: а)
культивирование клетки-хозяина в соответствии с любым из
вышеуказанных вариантов осуществления в условиях, при которых
клетка-хозяин экспрессирует связывающий белок; и Ь) выделение
связывающего белка из клетки-хозяина. В одном варианте
осуществления настоящего изобретения предусмотрена
фармацевтическая композиция, содержащая связывающий белок в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления и фармацевтически приемлемый носитель.
[0029] В другом варианте осуществления настоящего
изобретения предусмотрен способ предупреждения и/или лечения рака у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного связывающего белка или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены связывающий белок или фармацевтическая композиция в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления для применения в предупреждении и/или лечении рака у пациента. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления для производства лекарственного препарата для предупреждения и/или лечения рака у пациента. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней, выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR
1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[0030] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ предупреждения и/или лечения воспалительного заболевания или нарушения у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного связывающего белка или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены связывающий белок или фармацевтическая композиция в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления для применения в предупреждении и/или лечении воспалительного заболевания или нарушения у пациента. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен связывающий белок в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления для производства лекарственного препарата для предупреждения и/или лечения воспалительного заболевания или нарушения у пациента. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa. В некоторых вариантах осуществления два из трех связывающих участков специфически связывают цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один
связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней, выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[0031] В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ очистки связывающего белка, выработанного клеткой-хозяином, включающий:
(а) получение в клетке-хозяине связывающего белка, содержащего четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-L!-VL1-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру,
представленную формулой:
VHi-L3-VH2-L4-CHi-mapHMp-CH2-CH3 [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV]
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь; где только один из домена Снз второй полипептидной цепи и домена Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4
человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F;
(b) приведение связывающего белка, полученного на (а), в контакт с белком А и
(c) элюирование связывающего белка от белка А в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих 0 либо 2 домена Снз/ содержащих аминокислотные замены H435R и Y436F.
[0032] В некоторых вариантах осуществления домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает: (d) приведение связывающего белка, элюированного на
(с) , в контакт с аффинной средой для легких каппа-цепей и (е) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких каппа-цепей в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает после (е) (f) приведение связывающего белка, элюированного на (е), в контакт с аффинной средой для легких лямбда-цепей и (д) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких лямбда-цепей в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL каппа-цепей. В некоторых вариантах осуществления домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает: (d) приведение связывающего белка, элюированного на
(с) , в контакт с аффинной средой для легких лямбда-цепей и (е) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких
лямбда-цепей в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL каппа-цепей. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает после (е) (f) приведение связывающего белка, элюированного на (е), в контакт с аффинной средой для легких каппа-цепей и (д) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких каппа-цепей в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок выявляют на одной или нескольких из (с) и (е) с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC). В некоторых вариантах осуществления домены Снз и/или Fc-области второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз и/или Fc-области IgGl или IgG4 человека.
[0033] Следует понимать, что один, несколько или все признаки различных вариантов осуществления, описанных в данном документе, можно комбинировать с получением других вариантов осуществления настоящего изобретения. Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут очевидны специалисту в данной области. Эти и другие варианты осуществления настоящего изобретения дополнительно описаны с помощью нижеследующего подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0034] На фиг. 1А-1С показаны схематические представления триспецифических связывающих белков, содержащих четыре
полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, специфически связывающих три белка-мишени, где первая пара полипептидов содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией (VH1-VH2 и VL2-VL1), которые образуют два антигенсвязывающих участка, и где вторая пара полипептидов содержит один вариабельный домен (VH3 и VL3), образующий один антигенсвязывающий участок. На фиг. 1А показан триспецифический связывающий белок, содержащий мутацию по типу "выступы-во-впадины", где выступ находится на второй паре полипептидов с одним вариабельным доменом. На фиг. 1В показан триспецифический связывающий белок, содержащий мутацию по типу "выступы-во-впадины", где выступ находится на первой паре полипептидов, характеризующихся перекрестной ориентацией. На фиг. 1С показана ориентация вариабельных доменов в полипептидных цепях и ориентация выступов/впадин для связывающих белков, показанных в таблицах 1-3. "Тяжелая цепь А" (например, третья полипептидная цепь по настоящему изобретению) обозначает вариабельный домен тяжелой цепи А. "Легкая цепь А" (например, четвертая полипептидная цепь по настоящему изобретению) обозначает вариабельный домен легкой цепи А. "Тяжелая цепь В" (например, вторая полипептидная цепь по настоящему изобретению) обозначает вариабельный домен 1 и вариабельный домен 2 тяжелой цепи В. "Легкая цепь В" (например, первая полипептидная цепь по настоящему изобретению) обозначает вариабельный домен 1 и вариабельный домен 2 легкой цепи В.
[0035] На фиг. 2 показаны результаты ELISA-анализа, с помощью которого определяли связывание триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3 (связывающего белка 1) или антитела изотипического контроля с CD3, CD28 и Нег2 человека. Связанные антитела выявляли с помощью вторичного антитела к Fab, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP).
[0036] На фиг. ЗА-ЗС показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения Нег2+ раковых клеток молочной железы с применением триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD28 и CD3 (называемого в данном документе "связывающим белком 1"), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28
x CD3), антитела IgGl к Нег2 или контрольного антитела (IgGl
человека) с использованием РВМС человека при Е:Т=10. На фиг. ЗА
показаны результаты специфического уничтожения клеток ZR-75-1,
опосредованного триспецифическим антителом. На фиг. ЗВ показаны
результаты специфического уничтожения клеток AU565,
опосредованного триспецифическим антителом. На фиг. ЗС показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток ZR-75-1 и AU5 65.
[0037] На фиг. 4 и 5 показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения Нег2+ раковых клеток молочной железы с помощью триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3 (связывающего белка 1), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к Нег2 или контрольного антитела (IgGl человека). На фиг. 4 показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток ZR-75-1 с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС) от донора КР45926 при Е:Т=10. На фиг. 5 показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток AU565 с использованием РВМС человека от донора КР45944 при Е:Т=10. Фиг. 4 и 5 подтверждают результаты уничтожения клеток, аналогичные показанным на фиг. ЗА-ЗС с использованием РВМС от другого донора.
[0038] На фиг. 6А и 6В показана активация (CD69+) и
пролиферация Т-клеток человека, обработанных триспецифическим
связывающим белком, представляющим собой антитело IgG4 к Нег2,
CD28 и CD3 (HER2/CD2 8supxCD3mid; называемым в данном документе
"связывающим белком 1"), триспецифическим связывающим белком,
представляющим собой антитело IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3, в котором
отсутствует связывающий домен антитела к CD2 8
(HER2/ACD2 8supxCD3
mid) г триспецифическим связывающим белком,
представляющим собой антитело IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3, в котором
отсутствует связывающий домен антитела к CD3
(HER2/CD2 8supxACD3 mid) , триспецифическим связывающим белком, представляющим собой антитело IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3, в котором
отсутствуют связывающие домены как антитела к CD2 8, так и
антитела к CD3 (HER2/A (CD28supxACD3mid) ) , контрольным
моноклональным антителом к CD3 или контрольным антителом IgG4. На фиг. 6А показана активация (CD69+) CD4+ Т-клеток человека от трех доноров. На фиг. 6В показана активация (CD69+) CD8+ Т-клеток человека от трех доноров. CD2 8sup: суперагонистическое антитело к CD2 8. CD3mid: антитело к CD3.
[0039] На фиг. 7А-С показана активация сигнальных путей IL-2, NFKB И ядерного фактора активированных Т-клеток (NFAT) посредством передачи сигнала от антитела к CD3 и антитела к CD2 8, измеренная с помощью анализа гена люциферазы с использованием Т-клеток Jurkat человека с конструкцией промотор IL-2-ген люциферазы (фиг. 7А) , конструкцией промотор NFKB-ген люциферазы (фиг. 7В) или конструкцией промотор NFAT-ген люциферазы (фиг. 7С). Тестируемыми антителами были описанные выше со ссылкой на фиг. 6A-6D.
[0040] На фиг. 8 показаны результаты ELISA-анализа, с помощью которого определяли связывание триспецифического антитела IgG4 к CD19, CD28 и CD3 (называемого в данном документе "связывающим белком 3") или антитела изотипического контроля с CD3, CD2 8 и CD19. Связанные антитела выявляли с помощью вторичного антитела к Fab, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP).
[0041] На фиг. 9A-9N показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD19+ клеток лимфомы GCB-типа человека с помощью триспецифического антитела IgG4 к CD19, CD2 8 и CD3 (называемого в данном документе "связывающим белком 3") или указанных контролей с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 9А показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток 0CI-LY19. На фиг. 9В показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток 0CI-LY19. На фиг. 9С показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток 0CI-LY19 с использованием РВМС от донора КР48572 при Е:Т=10. На
фиг. 9D показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток 0CI-LY19 с использованием РВМС от донора КР48573 при Е:Т=10. На фиг. 9Е показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток лимфомы KARPASS-422 человека с использованием РВМС от донора КР48572 при Е:Т=10. На фиг. 9F показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток KARPASS-422 с использованием РВМС от донора КР48573 при Е:Т=10. На фиг. 9G показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток хронического В-клеточного лейкоза МЕС1 человека с использованием РВМС от донора КР48572 при Е:Т=10. На фиг. 9Н показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток множественной миеломы RPMI822 6 человека с использованием РВМС от донора КР48775 при Е:Т=10. На фиг. 91 показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток лимфомы Беркитта Raj i человека с использованием РВМС от донора КР48572 при Е:Т=10. На фиг. 9J показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы HBL1 человека с использованием РВМС от донора КР48775 при Е:Т=10. На фиг. 9К показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток крупноклеточной лимфомы SUDHL8 с использованием РВМС от донора КР48572 при Е:Т=10. На фиг. 9L показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток SUDHL8 с использованием РВМС от донора КР48573 при Е:Т=10. На фиг. 9М показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток В-клеточной лимфомы ARH77 человека с использованием РВМС от донора КР48775 при Е:Т=10. На фиг. 9N показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток 0CI-Ly3 с использованием РВМС от донора КР48775 при Е:Т=10.
[0042] На фиг. 10 показаны результаты ELISA-анализа, с помощью которого определяли связывание триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5) или антитела изотипического контроля с CD3, CD28 и CD38. Связанные
антитела выявляли с помощью вторичного антитела к Fab, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP).
[0043] На фиг. 11A-11D показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток множественной миеломы человека с помощью триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) . На фиг. НА показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток M0LP-8 с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 11В показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток RPMI-822 6 с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. НС показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток KMS-12-BM с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 11D показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток MOLP-8, RPMI-8226 и KMS-12-BM.
[0044] На фиг. 12A-12D показаны результаты опосредованного
антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток
множественной миеломы человека с помощью триспецифического
антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5),
биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3),
антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) с
использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при
Е:Т=10. На фиг. 12А показаны результаты опосредованного
антителами специфического уничтожения клеток NCI-H92 9. На фиг.
12В показаны результаты опосредованного антителами
специфического уничтожения клеток MM.1S. На фиг. 12С показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток MM.1R. На фиг. 12D показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток NCI-H929, MM.1S и MM.1R.
[0045] На фиг. 13A-13D показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток
множественной миеломы человека с помощью триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 13А показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток ОРМ-2. На фиг. 13В показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток KMS-2 6. На фиг. 13С показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток U266. На фиг. 13D показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток ОРМ-2, KMS-2 6 и U22 6.
[0046] На фиг. 14А-14С показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток лимфомы человека с помощью триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 14А показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток SUDHL-8. На фиг. 14В показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток 0CI-LY19. На фиг. 14С показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток SUDHL-8 и 0CI-LY19.
[0047] На фиг. 15A-15D показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток ALL с помощью триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5), биспецифического антитела IgG4 к CD2 8 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) с использованием РВМС человека в качестве эффекторных клеток при Е:Т=10. На фиг. 15А показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток K0PN-8. На фиг. 15В показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток HAL-1. На фиг. 15С
показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения клеток CCRF-SB. На фиг. 15D показаны результаты FACS-анализа, с помощью которого определяли экспрессию указанных маркеров на поверхности клеток KOPN-8, HAL-1 и CCRF-SB.
[0048] На фиг. 16 показаны результаты опосредованного антителами специфического уничтожения CD3 8+ раковых клеток миеломы с помощью триспецифических антител IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (называемых в данном документе "связывающим белком 5" и "связывающим белком б" в зависимости от конкретного используемого связывающего домена антитела к CD28), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (huCD28 х CD3), антитела IgGl к CD38, контрольного антитела IgGl к CD38 или контрольного антитела (IgGl человека) с использованием РВМС от донора РК45926 при Е:Т=10.
[004 9] На фиг. 17А и 17В показана активация сигнальных путей IL-2, NFKB И ядерного фактора активированных Т-клеток (NFAT) посредством передачи сигнала от антитела к CD3 и антитела к CD2 8, измеренная с помощью анализа гена люциферазы с использованием Т-клеток Jurkat человека с конструкцией промотор IL-2-ген люциферазы (фиг. 17А) или конструкцией промотор NFAT-ген люциферазы (фиг. 17В) . Тестируемыми антителами были триспецифическое антитело IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающий белок 5, обозначенное как "Tri-Ab"), триспецифическое антитело IgG4 к CD38, CD28 и CD3, в котором отсутствует CD28-связывающий домен (обозначенное как "Tri-Ab (ACD28)"), триспецифическое антитело IgG4 к CD38, CD28 и CD3, в котором отсутствует CD3-связывающий домен (обозначенное как "Tri-Ab (ACD3)"), и триспецифическое антитело IgG4 к CD38, CD28 и CD3, в котором отсутствуют CD3- и CD28-связывающие домены (обозначенное как "Tri-Ab (ACD28xACD3)") . Для каждого из указанных Tri-Ab анализы гена люциферазы выполняли в двух повторностях.
[0050] На фиг. 18А-18Е показаны результаты исследования токсичности с повышением дозы с использованием триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3 (называемого в данном документе "связывающим белком 1") у приматов, отличных от человека
(повышение дозы от 0,1, 0,5, 2,5, 5, 10 до 100 мкг/кг; животные обозначены как "409" и "410") . На фиг. 18А показаны результаты анализа процентного содержания циркулирующих CD4+ Т-клеток у каждого животного через б часов после введения триспецифического антитела к Her2, CD2 8 и CD3. На фиг. 18В показаны результаты анализа процентного содержания циркулирующих CD8+ Т-клеток у каждого животного через б часов после введения триспецифического антитела к Her2, CD2 8 и CD3. На фиг. 18С показаны результаты анализа активации (CD69+) циркулирующих CD4+ Т-клеток через б часов после введения дозы. На фиг. 18D показаны результаты анализа активации (CD69+) циркулирующих CD8+ Т-клеток через б часов после введения дозы. На фиг. 18Е показано высвобождение воспалительных цитокинов, наблюдаемое через б часов после введения триспецифического антитела к Her2, CD2 8 и CD3, для каждого введения дозы.
[0051] На фиг. 19А-В показана противоопухолевая активность триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3 (называемого в данном документе "связывающим белком 1") in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, которым были имплантированы клетки ВТ474. На фиг. 19А показано изменение массы тела мышей, обработанных триспецифическим связывающим белком, представляющим собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольным PBS. На фиг. 19В показано изменение объема опухоли у мышей, обработанных триспецифическим связывающим белком, представляющим собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольным PBS.
[0052] На фиг. 20А-20Н показана противоопухолевая активность триспецифического антитела IgG4 к Her2, CD2 8 и CD3
(называемого в данном документе "связывающим белком 1") in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью РВМС человека, которым были имплантированы клетки ВТ474. На фиг. 20А показан эффект от введения триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях, герцептина в указанных концентрациях или контрольной среды-носителя в отношении массы тела мышей. На фиг.
20В показана дозозависимая противоопухолевая активность триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, герцептина или указанных контролей у отдельных мышей. На фиг. 2°С показан средний объем опухоли у мышей после введения триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольного PBS. На фиг. 20D показан средний объем опухоли у мышей после введения герцептина в указанных концентрациях или контрольного PBS. На фиг. 20Е показана столбчатая диаграмма, иллюстрирующая средний объем опухоли в день 34 у мышей после введения триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях, герцептина в указанных концентрациях или контрольного PBS. На фиг. 20F показана средняя масса опухоли в день 34 у мышей после введения триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях, герцептина в указанных концентрациях или контрольного PBS. На фиг. 20G показаны CD45+, CD3+, CD4 + , CD8+ клетки человека в крови мышей в конце исследования. На фиг. 20Н показаны CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ клетки человека в селезенках мышей в конце исследования.
[0053] На фиг. 21A-F показаны результаты исследования токсичности с повышением дозы с использованием триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5) у приматов, отличных от человека (повышение дозы от 0,1, 0,5, 2,5, 5, 10 до 100 мкг/кг) . На фиг. 21А показана активация Т-клеток (CD69+) (линейная диаграмма) и пролиферация (столбчатая диаграмма) циркулирующих CD4+ Т-клеток после введения триспецифического антитела к CD38, CD28 и CD3. На фиг. 21В показана активация Т-клеток (CD69+) (линейная диаграмма) и пролиферация (столбчатая диаграмма) циркулирующих CD8+ Т-клеток после введения триспецифического антитела к CD38, CD28 и CD3. На фиг. 21С показано высвобождение IL6 у животных, получающих триспецифическое антитело к CD38, CD28 и CD3, через б часов после каждого введения дозы по отдельным животным. На фиг. 21D
показано высвобождение IL10 у животных, получающих триспецифическое антитело к CD38, CD28 и CD3, через б часов после каждого введения дозы по отдельным животным. На фиг. 21Е показано высвобождение TNFa у животных, получающих триспецифическое антитело к CD38, CD28 и CD3. На фиг. 21F показано высвобождение IFNy у животных, получающих триспецифическое антитело к CD38, CD28 и CD3, через б часов после каждого введения дозы по отдельным животным.
[0054] На фиг. 22А-22С показана противоопухолевая активность триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5) in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, которым были имплантированы клетки множественной миеломы RPMI-8226, трансдуцированные CD38 и PD-L1. В качестве пилотного исследования в данном эксперименте определяли рабочий диапазон доз для связывающего белка 5. На фиг. 22А показана кривая роста опухоли in vivo в группах, получающих триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контроли. На фиг. 22В показаны инфильтрирующие опухоль CD8+ Т-клетки человека у мышей, которым вводили триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, или указанные контроли. На фиг. 22С показаны инфильтрирующие опухоль CD4+ Т-клетки человека у мышей, которым вводили триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, или указанные контроли.
[0055] На фиг. 23A-23D показана активность
триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5) in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, которым были имплантированы клетки RPMI-8226, трансдуцированные CD38 и PD-L1. На фиг. 23А показано изменение массы тела мышей, обработанных триспецифическим связывающим белком, представляющим собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольным PBS. На фиг. 23В показано изменение объема опухоли у
мышей, обработанных триспецифическим связывающим белком, представляющим собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольным PBS. На фиг. 23С показаны значения объема опухоли в каждой группе в день 19. Значения объема опухоли во всех группах обработки характеризовались заметным снижением, статистически значимо отличаясь от значений в контрольной группе PBS. На фиг. 23D показана концентрация воспалительных цитокинов IFN-g, TNF и IL-2 в сыворотке крови мышей через четыре часа после введения первой дозы триспецифического связывающего белка, представляющего собой антитело к CD3 8, CD2 8 и CD3, в указанных концентрациях или контрольного PBS.
[0056] На фиг. 24 и 25 показана активация Т-клеток in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, путем введения триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5; треугольники), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (квадраты) или антитела IgG4 к CD2 8 (кружки), определяемая по увеличению процентного содержания CD69+ Т-клеток. На фиг. 24 показана активация CD4+ Т-клеток in vivo. На фиг. 25 показана активация CD8+ Т-клеток in vivo.
[0057] На фиг. 26А-26С показана активация Т-клеток in vivo в модели на мышах NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, путем введения триспецифического антитела IgG4 к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5; треугольники), биспецифического антитела IgG4 к CD28 и CD3 (квадраты) или антитела IgG4 к CD28 (кружки), определяемая по уровням воспалительных цитокинов в сыворотке крови. На фиг. 26А показаны уровни IL-2 в сыворотке крови. На фиг. 26В показаны уровни TNF в сыворотке крови. На фиг. 26С показаны уровни IFN-y в сыворотке крови.
[0058] На фиг. 27А и 27В показана очистка указанных белков с помощью эксклюзионной хроматографии. На фиг. 27А показана очистка связывающих белков 9-15 с помощью эксклюзионной хроматографии. На фиг. 27В показана очистка связывающих белков
16-19 с помощью эксклюзионной хроматографии.
[0059] На фиг. 28А изображены триспецифический связывающий белок, используемый в экспериментах по оптимизации схемы очистки, и конфигурация необязательных признаков связывающего белка (например, легких цепей каппа/лямбда, мутаций по типу выступов/впадин и мутаций H435R/Y436F).
[0060] На фиг. 28В показана каждая из тестируемых конфигураций.
[0061] На фиг. 29 показаны иллюстративные хроматограммы, полученные в ходе аналитической хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC), демонстрирующие, что триспецифические связывающие белки можно было отличить от неправильно спаренных структур.
[0062] На фиг. ЗОА и ЗОВ показана успешная очистка связывающего белка с CODV-плечом с легкой цепью лямбда, Fab-плечом с легкой цепью каппа, мутациями по типу выступов в C0DV-плече, мутациями по типу впадин в Fab-плече и RF-мутациями в Fab-плече с помощью белка А с последующими стадиями очистки в KappaSelect (GE Healthcare). Успешная очистка связывающего белка от неправильно спаренных структур была продемонстрирована посредством хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC; фиг. ЗОА) и SDS-PAGE (фиг. ЗОВ).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0063] В настоящем изобретении предусмотрены
триспецифические и/или тривалентные связывающие белки, содержащие четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связываются с одним или несколькими белками-мишенями, где первая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит два вариабельных домена, характеризующихся перекрестной ориентацией, и где вторая пара полипептидов, образующих связывающий белок, содержит один вариабельный домен.
Общие определения
[0064] Используемые в соответствии с настоящим изобретением следующие термины, если не указано иное, следует понимать как имеющие следующие значения. Если контекстом не требуется иное,
термины в единственном числе будут включать формы множественного числа, и термины во множественном числе будут включать форму единственного числа.
[0065] Используемый в данном документе термин "полинуклеотид" относится к полимерам в виде однонитевой или двунитевой нуклеиновой кислоты, имеющих длину по меньшей мере 10 нуклеотидов. В определенных вариантах осуществления нуклеотиды, составляющие полинуклеотид, могут представлять собой рибонуклеотиды, или дезоксирибонуклеотиды, или модифицированную форму любого типа нуклеотида. Такие модификации включают модификации оснований, как, например, бромуридин, модификации рибозы, как, например, арабинозид и 2',3'-дидезоксирибоза, и модификации межнуклеотидных связей, как, например, фосфотиоат, фосфодитиоат, фосфоселеноат, фосфодиселеноат, фосфоанилотиоат, фосфоаниладат и фосфоамидат. Термин "полинуклеотид" конкретно подразумевает однонитевые и двунитевые формы ДНК.
[0066] "Выделенный полинуклеотид" представляет собой полинуклеотид, имеющий геномное, кДНК- или синтетическое происхождение или характеризующийся некоторой их комбинацией, который: (1) не ассоциирован со всем полинуклеотидом, в котором выделенный полинуклеотид встречается в природе, или его частью, (2) связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе, или (3) не встречается в природе в виде части более крупной последовательности.
[0067] "Выделенный полипептид" представляет собой такой
полипептид, который: (1) не содержит по меньшей мере некоторых
других полипептидов, с которыми он обычно встречается, (2)
фактически не содержит других полипептидов из одного и того же
источника, например, из одного и того же вида, (3)
экспрессируется клеткой из другого вида, (4) был отделен по
меньшей мере от приблизительно 50 процентов полинуклеотидов,
липидов, углеводов или других веществ, с которыми он связан в
природе, (5) не связан (посредством ковалентного или
нековалентного взаимодействия) с частями полипептида, с которыми
"выделенный полипептид" связан в природе, (6) функционально
связан (посредством ковалентного или нековалентного
взаимодействия) с полипептидом, с которым он не связан в природе, или (7) не встречается в природе. Такой выделенный полипептид может кодироваться геномной ДНК, кДНК, мРНК или другой РНК синтетического происхождения или любой их комбинацией. Предпочтительно выделенный полипептид не содержит в значительной степени полипептидов или других загрязнителей, которые встречаются в его природном окружении, которые бы вызывали затруднения при его применении (терапевтическом, диагностическом, профилактическом, исследовательском или ином).
[0068] Встречающиеся в природе антитела обычно предусматривают тетрамер. Каждый такой тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, при этом каждая пара имеет одну полноразмерную "легкую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу приблизительно 2 5 кДа) и одну полноразмерную "тяжелую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу приблизительно 50-70 кДа) . Используемые в данном документе термины "тяжелая цепь" и "легкая цепь" обозначают любой полипептид иммуноглобулина, содержащий последовательность вариабельного домена, достаточную для придания специфичности в отношении антигена-мишени. Аминоконцевая часть каждой легкой и тяжелой цепей обычно содержит вариабельный домен из приблизительно 10 0110 аминокислот или больше, который обычно отвечает за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи обычно определяет константный домен, ответственный за эффекторную функцию. Таким образом, во встречающемся в природе антителе полноразмерный полипептид, представляющий собой тяжелую цепь иммуноглобулина, содержит вариабельный домен (VH) и три константных домена (CHi, СН2 и Снз) i где домен VH находится на аминоконце полипептида, а домен Снз находится на карбоксильном конце, и полноразмерный полипептид, представляющий собой легкую цепь иммуноглобулина, содержит вариабельный домен (VL) и константный домен (CL) , где домен VL находится на аминоконце полипептида, а домен CL находится на карбоксильном конце.
[0069] Легкие цепи человека обычно классифицируют как легкие цепи каппа и лямбда, а тяжелые цепи человека обычно классифицируют как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон, и они
определяют изотип антитела IgM, IgD, IgG, IgA и IgE
соответственно. IgG имеет несколько подклассов, в том числе без
ограничения IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM имеет подклассы, в том
числе без ограничения IgMl и IgM2. IgA аналогичным образом
подразделяют на подклассы, в том числе без ограничения IgAl и
IgA2. В полноразмерных легких и тяжелых цепях вариабельные и
константные домены обычно соединены с помощью "J"-области из
приблизительно 12 или больше аминокислот, при этом тяжелая цепь
также содержит "D''-область из приблизительно 10 или больше
аминокислот. См., например, FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY (Paul, W., ed.,
Raven Press, 2nd ed., 1989), которая включена посредством ссылки
во всей своей полноте для всех целей. Вариабельные области
каждой пары легкая/тяжелая цепь обычно образуют
антигенсвязывающий участок. Вариабельные домены встречающихся в природе антител обычно характеризуются одинаковой общей структурой относительно консервативных каркасных областей (FR), соединенных с помощью трех гипервариабельных областей, также называемых определяющими комплементарность областями или CDR. CDR из двух цепей каждой пары обычно выровнены с помощью каркасных областей, что может обеспечивать возможность связывания со специфическим эпитопом. От аминоконца к карбоксильному концу вариабельные домены как легкой, так и тяжелой цепей обычно содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4.
[0070] Термин "совокупность CDR" обозначает группу из трех CDR, которые содержатся в одной вариабельной области, способной связывать антиген. Точные границы этих CDR определяли по-разному в соответствии с различными системами. Система, описанная Rabat (Rabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST (Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд. (1987) и (1991)), не только предусматривает однозначную систему нумерации остатков, применимую к любой вариабельной области антитела, но также предусматривает точные границы остатков, определяющие три CDR. Эти CDR могут называться CDR в соответствии с Rabat. Chothia и коллеги (Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17; Chothia et al. , 1989, Nature 342:
877-83) обнаружили, что определенные субфрагменты в пределах CDR
в соответствии с Rabat принимают почти идентичные конформации
пептидного каркаса, несмотря на наличие большого различия на
уровне аминокислотной последовательности. Эти субфрагменты были
обозначены как LI, L2 и L3 или HI, Н2 и НЗ, где "L" и "Н"
обозначают области легкой цепи и тяжелой цепи соответственно.
Эти области могут называться CDR в соответствии с Chothia,
границы которых совпадают с CDR в соответствии с Rabat. Другие
границы, определяющие CDR, которые совпадают с CDR в
соответствии с Rabat, были описаны Padlan, 1995, FASEB J. 9:
133-39; MacCallum, 1996, J. Mol. Biol. 262(5): 732-45; и
Lefranc, 2003, Dev. Сотр. Immunol. 27: 55-77. Еще одни
определения границ CDR могут не строго соответствовать одной из
систем, приведенных в данном документе, но тем не менее будут
совпадать с CDR в соответствии с Rabat, несмотря на то, что они
могут быть укорочены или удлинены с учетом прогностических или
экспериментальных выводов о том, что конкретные остатки или
группы остатков или даже все CDR не влияют в значительной
степени на связывание антигена. В способах, используемых в
данном документе, могут применять CDR, определенные в
соответствии с любой из этих систем, несмотря на то, что в
определенных вариантах осуществления применяют CDR, определенные
в соответствии с Rabat или Chothia. Идентификация прогнозируемых
CDR с помощью аминокислотной последовательности хорошо известна
в данной области, например, в Martin, А.С. "Protein sequence and
structure analysis of antibody variable domains" в Antibody
Engineering, Vol. 2. Rontermann R., Dtibel S., eds. Springer-
Verlag, Berlin, p. 33-51 (2010) . Аминокислотную
последовательность вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи можно также исследовать с целью идентификации последовательностей CDR с помощью других традиционных способов, например, путем сравнения с известными аминокислотными последовательностями других вариабельных областей тяжелой и легкой цепей с определением областей гипервариабельности последовательности. Пронумерованные последовательности можно выравнивать вручную или путем использования программы
выравнивания, такой как одна из пакета программ CLUSTAL, как описано в Thompson, 1994, Nucleic Acids Res. 22: 4673-80. Молекулярные модели традиционно применяют для того, чтобы правильно определить каркасные и CDR-области и таким образом скорректировать основанные на последовательности выравнивания.
[0071] Используемый в данном документе термин "Fc"
обозначает молекулу, будь то в мономерной или мультимерной
форме, содержащую последовательность, не являющуюся частью
антигенсвязывающего фрагмента, которая получена в результате
расщепления антитела или получена другими способами, и при этом
она может содержать шарнирную область. Исходный
иммуноглобулиновый источник нативного Fc предпочтительно происходит от человека и может представлять собой любой из иммуноглобулинов, тем не менее предпочтительными являются IgGl и IgG2. Молекулы Fc составлены из мономерных полипептидов, которые могут быть связаны в димерные или мультимерные формы посредством ковалентной (т. е. дисульфидных связей) и нековалентной связи. Число межмолекулярных дисульфидных связей между мономерными субъединицами нативных молекул Fc варьирует от 1 до 4, в зависимости от класса (например, IgG, IgA и IgE) или подкласса (например, IgGl, IgG2, IgG3, IgAl и IgGA2). Одним примером Fc является димер с дисульфидной связью, полученный в результате расщепления IgG папаином. Термин "нативный Fc", используемый в данном документе, является общим для мономерных, димерных и мультимерных форм.
[0072] F(ab)-фрагмент обычно содержит одну легкую цепь и домены VH и СН1 одной тяжелой цепи, где часть VH-CHi тяжелой цепи F(ab)-фрагмента не может образовывать дисульфидную связь с другим полипептидом тяжелой цепи. Как используется в данном документе, F(ab)-фрагмент также может содержать одну легкую цепь, содержащую два вариабельных домена, разделенных аминокислотным линкером, и одну тяжелую цепь, содержащую два вариабельных домена, разделенных аминокислотным линкером, и домен СН1 •
[0073] F(ab')-фрагмент обычно содержит одну легкую цепь и часть одной тяжелой цепи, которая содержит большую часть
константной области (между доменами CHi и Снг) г вследствие чего межцепочечная дисульфидная связь может быть образована между двумя тяжелыми цепями с образованием молекулы F(ab')2-
[0074] Используемый в данном документе термин "связывающий белок" обозначает не встречающуюся в природе (или рекомбинантную или сконструированную) молекулу, которая специфически связывается по меньшей мере с одним антигеном-мишенью и которая содержит четыре полипептидные цепи, которые образуют по меньшей мере три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
V^-Li-VLi-Lz-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3- CHI [HI]
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой: VL3- CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи
иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0075] "Рекомбинантная" молекула представляет собой молекулу, которая была получена, экспрессирована, создана или выделена рекомбинантными способами.
[0076] В одном варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены связывающие белки, характеризующиеся биологической и иммунологической специфичностью в отношении одного-трех антигенов-мишеней. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептидные цепи, которые образуют такие связывающие белки. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены векторы экспрессии, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептидные цепи, которые образуют такие связывающие белки. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрены клетки-хозяева, которые экспрессируют такие связывающие белки (т. е. содержащие молекулы нуклеиновой кислоты или векторы, кодирующие полипептидные цепи, которые образуют такие связывающие белки).
[0077] Используемый в данном документе термин "способность к обмену" обозначает способность к взаимозамене вариабельных доменов в формате связывающего белка, при этом с сохранением укладки и наивысшей аффинности связывания. "Способность к полному обмену" относится к способности менять порядок доменов как VHi, так и VH2 и, следовательно, порядок доменов VLi и VL2 в полипептидной цепи формулы I или полипептидной цепи формулы II (т. е. обращать порядок), при этом поддерживая полную функциональность связывающего белка, о чем свидетельствует сохранение аффинности связывания. Кроме того, следует отметить, что обозначения VH и VL относятся лишь к положению домена в конкретной белковой цепи в конечном формате. Например, VH1 и VH2 могут быть получены из доменов VL1 и VL2 исходных антител и
помещены в положения, соответствующие VHi и VH2 связывающего белка. Аналогично, VLi и VL2 могут быть получены из доменов VHi и VH2 исходных антител и помещены в положения, соответствующие VHi и VH2 связывающего белка. Таким образом, обозначения VH и VL относятся к существующему в данный момент положению, а не к первоначальному положению в исходном антителе. Следовательно, домены VH и VL являются "способными к обмену".
[0078] Используемый в данном документе термин "антиген", или "антиген-мишень", или "антигенная мишень" обозначает молекулу или часть молекулы, которая может связываться связывающим белком и дополнительно может использоваться у животного для получения антител, способных связываться с эпитопом этого антигена. Антиген-мишень может иметь один или несколько эпитопов. С учетом того, что каждый антиген-мишень распознается связывающим белком, связывающий белок способен конкурировать с интактным антителом, которое распознает антиген-мишень .
[0079] Термин "Нег2" обозначает рецептор эпидермального фактора роста человека 2 типа, который является представителем семейства рецепторов эпидермального фактора роста.
[0080] "CD3" означает полипептид фактора 3 кластера дифференцировки и представляет собой поверхностный белок Т-клеток, который обычно является частью Т-клеточного рецепторного (TCR) комплекса.
[0081] "CD28" означает полипептид 28 кластера дифференцировки и представляет собой поверхностный белок Т-клеток, передающий костимулирующие сигналы для активации и выживания Т-клеток.
[0082] "CD19" означает полипептид 19 кластера дифференцировки и расположен на В-клетках.
[0083] "CD20" означает полипептид 20 кластера дифференцировки и представляет собой активированный гликозилированный фосфопротеин, экспрессируемый на поверхности В-клеток.
[0084] "CD38" означает полипептид 38 кластера
дифференцировки и представляет собой гликопротеин,
обнаруживаемый на поверхности многих иммунных клеток.
[0085] "LAMP1" означает мембранный белок 1, ассоциированный с лизосомами.
[0086] "IL-4" означает интерлейкин-4 и представляет собой цитокин, который индуцирует дифференцировку "необученных" хелперных Т-клеток.
[0087] "IL-13" означает интерлейкин-13 и представляет собой цитокин, секретируемый многими типами клеток, как, например, Т-клетками.
[0088] "TNFa" означает фактор некроза опухоли альфа и представляет собой цитокин, вовлеченный в системное воспаление.
[0089] Термин "активатор, привлекающий Т-клетки" обозначает связывающие белки, направленные на иммунную систему хозяина, более конкретно на цитотоксическую активность Т-клеток, а также направленные на опухолевый белок-мишень.
[0090] Термин "моноспецифический связывающий белок" обозначает связывающий белок, который специфически связывается с одним антигеном-мишенью.
[0091] Термин "моновалентный связывающий белок" обозначает связывающий белок, который имеет один антигенсвязывающий участок.
[0092] Термин "биспецифический связывающий белок" обозначает связывающий белок, который специфически связывается с двумя различными антигенами-мишенями.
[0093] Термин "бивалентный связывающий белок" обозначает связывающий белок, который имеет два связывающих участка.
[0094] Термин "триспецифический связывающий белок" обозначает связывающий белок, который специфически связывается с тремя различными антигенами-мишенями.
[0095] Термин "тривалентный связывающий белок" обозначает связывающий белок, который имеет три связывающих участка. В конкретных вариантах осуществления тривалентный связывающий белок может связываться с одним антигеном-мишенью. В других вариантах осуществления тривалентный связывающий белок может связываться с двумя антигенами-мишенями. В других вариантах осуществления тривалентный связывающий белок может связываться с
тремя антигенами-мишенями.
[0096] "Выделенный" связывающий белок представляет собой связывающий белок, который был идентифицирован и отделен и/или извлечен из компонента своего природного окружения. Компоненты-загрязнители его природного окружения представляют собой вещества, которые бы вызывали затруднения при диагностических или терапевтических применениях связывающего белка, и могут включать ферменты, гормоны и другие растворенные вещества белковой или небелковой природы. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок будет очищенным: (1) до более чем 95% по весу антитела, как определяется способом Лоури, и наиболее предпочтительно до более чем 99% по весу, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с применением секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенности с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с применением кумасси голубого или предпочтительно серебряного красителя. Выделенные связывающие белки включают связывающий белок in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент природного окружения связывающего белка не будет присутствовать.
[0097] Используемые в данном документе термины "в значительной степени чистый" или "в значительной степени очищенный" обозначают соединение или структуру, которая является преобладающей присутствующей структурой (т. е. в расчете на моль она более многочисленна, чем любая другая отдельная структура в композиции). В некоторых вариантах осуществления в значительной степени очищенная фракция представляет собой композицию, где структура составляет по меньшей мере приблизительно 50% (в расчете на моль) от всех присутствующих макромолекулярных структур. В других вариантах осуществления в значительной степени чистая композиция будет содержать более чем приблизительно 80%, 85%, 90%, 95% или 99% от всех макромолекулярных структур, присутствующих в композиции. В еще одних вариантах осуществления структура является очищенной до необходимой гомогенности (загрязняющие структуры не могут быть
выявлены в композиции с помощью традиционных способов выявления), где композиция состоит фактически из одной макромолекулярной структуры.
[0098] Используемый в данном документе термин "нейтрализующий" связывающий белок обозначает молекулу, которая способна блокировать или в значительной степени снижать эффекторную функцию антигена-мишени, с которым она связывается. Используемый в данном документе термин "в значительной степени снижать" означает снижение эффекторной функции антигена-мишени на по меньшей мере 60%, предпочтительно на по меньшей мере 7 0%, более предпочтительно на по меньшей мере 75%, еще более предпочтительно на по меньшей мере 8 0%, еще более предпочтительно на по меньшей мере 85%, наиболее предпочтительно на по меньшей мере 90%.
[0099] Термин "эпитоп" подразумевает любую детерминанту,
предпочтительно полипептидную детерминанту, способную
специфически связываться с иммуноглобулином или Т-клеточным рецептором. В определенных вариантах осуществления эпитопные детерминанты включают химически активные поверхностные группы молекул, такие как аминокислоты, боковые цепи Сахаров, фосфорильные группы или сульфонильные группы, и в определенных вариантах осуществления могут иметь специфические характеристики трехмерной структуры и/или специфические характеристики заряда. Эпитоп представляет собой область антигена, которая связывается антителом или связывающим белком. В определенных вариантах осуществления считается, что связывающий белок специфически связывает антиген, если он предпочтительно распознает свой антиген-мишень в сложной смеси белков и/или макромолекул. В некоторых вариантах осуществления считается, что связывающий белок специфически связывает антиген, если равновесная константа диссоциации составляет < 10~8 М, более предпочтительно если равновесная константа диссоциации составляет < 10~9 М и наиболее предпочтительно если константа диссоциации составляет < 10~10 М.
[0100] Константу диссоциации (KD) связывающего белка можно определить, например, с помощью поверхностного плазмонного
резонанса. В целом в анализе поверхностного плазмонного резонанса измеряют связывающие взаимодействия между лигандом (антигеном-мишенью на биосенсорной матрице) и аналитом (связывающим белком в растворе) в реальном времени с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) с применением системы BIAcore (Pharmacia Biosensor; Пискатауэй, Нью-Джерси). Анализ поверхностного плазмонного резонанса можно также выполнять посредством иммобилизации аналита (связывающего белка на биосенсорной матрице) и представления лиганда (антигена-мишени). Используемый в данном документе термин "KD" обозначает константу диссоциации взаимодействия между конкретным связывающим белком и антигеном-мишенью.
[0101] Используемый в данном документе термин "специфически связывается" обозначает способность связывающего белка или его антигенсвязывающего фрагмента связываться с антигеном, содержащим эпитоп, с Kcl, составляющей по меньшей мере приблизительно 1х1(Г6 М, 1х1(Г7 М, 1х1(Г8 М, 1х1(Г9 М, 1х1(Г10 М, lxlCr11 М, lxlCT12 М или больше, и/или связываться с эпитопом с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза превышает его аффинность в отношении неспецифического антигена.
[0102] Используемый в данном документе термин "линкер" обозначает один или несколько аминокислотных остатков, вставленных между доменами иммуноглобулина для обеспечения подвижности, достаточной для того, чтобы домены легкой и тяжелой цепей сворачивались в иммуноглобулины с перекрестно расположенными двумя вариабельными областями. Линкер вставляют в переходную область между вариабельными доменами или между вариабельным и константным доменами, соответственно, на уровне последовательности. Переходную область между доменами можно идентифицировать, поскольку приблизительный размер доменов иммуноглобулина хорошо известен. Точное местоположение переходной области между доменами можно определить путем определения положения пептидных отрезков, которые не образуют элементов со вторичной структурой, такой как бета-слои или альфа-спирали, как показано с помощью экспериментальных данных
или как можно предположить с помощью методик моделирования или прогнозирования вторичной структуры. Линкеры, описанные в данном документе, обозначены как Li, который расположен на легкой цепи между С-концом домена VL2 и N-концом домена VLi; и L2, который расположен на легкой цепи между С-концом домена VLi и N-концом домена CL. Линкеры тяжелой цепи называют как L3, который расположен между С-концом домена VHi и N-концом домена VH2; и L4, который расположен между С-концом домена VH2 и N-концом домена CHI •
[0103] Используемый в данном документе термин "вектор" относится к любой молекуле (например, нуклеиновой кислоте, плазмиде или вирусу), используемой для переноса закодированной информации в клетку-хозяина. Термин "вектор" подразумевает молекулу нуклеиновой кислоты, которая способна транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой ее связали. Одним типом вектора является "плазмида", которая обозначает кольцевую двунитевую молекулу ДНК, в которую могут быть вставлены дополнительные сегменты ДНК. Другим типом вектора является вирусный вектор, при этом в геном вируса могут быть вставлены дополнительные сегменты ДНК. Определенные векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальную точку начала репликации, и эписомные векторы для млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомные векторы для млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяина, и за счет этого они реплицируются вместе с геномом хозяина. Кроме того, определенные векторы способны управлять экспрессией генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются в данном документе "рекомбинантными векторами экспрессии" (или просто "векторами экспрессии"). Как правило, векторы экспрессии, полезные в технологиях рекомбинантных ДНК, часто находятся в форме плазмид. Термины "плазмида" и "вектор" могут использоваться взаимозаменяемо в данном документе, поскольку плазмида является наиболее широко используемой формой вектора. Однако, подразумевается, что в настоящее изобретение включены и другие
формы векторов экспрессии, такие как вирусные векторы (например, ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы с дефектной репликацией), которые выполняют эквивалентные функции.
[0104] Используемая в данном документе фраза "рекомбинантная клетка-хозяин" (или "клетка-хозяин") обозначает клетку, в которую был введен рекомбинантный вектор экспрессии. Подразумевается, что рекомбинантная клетка-хозяин или клетка-хозяин обозначают не только конкретную рассматриваемую клетку, но также и потомство такой клетки. Поскольку в последующих поколениях могут возникать определенные модификации вследствие мутации либо влияний окружающей среды, такое потомство в действительности может не быть идентичным родительской клетке, однако такие клетки по-прежнему включены в объем используемого в данном документе термина "клетка-хозяин". Широкое разнообразие систем экспрессии в клетке-хозяине можно применять для экспрессии связывающих белков, в том числе системы экспрессии на основе бактерий, дрожжей, бакуловирусов и клеток млекопитающих (а также системы экспрессии на основе фагового дисплея). Примером подходящего бактериального вектора экспрессии является pUC19. Для рекомбинантной экспрессии связывающего белка клетку-хозяина трансформируют или трансфицируют одним или несколькими рекомбинантными векторами экспрессии, несущими фрагменты ДНК, кодирующие полипептидные цепи связывающего белка, вследствие чего полипептидные цепи экспрессируются в клетке-хозяине и предпочтительно секретируются в среду, в которой клетки-хозяева культивируются, при этом из данной среды можно извлечь связывающий белок.
[0105] Используемый в данном документе термин "трансформация" обозначает изменение генетических характеристик клетки, и при этом клетка была трансформирована, если ее модифицировали с тем, чтобы она содержала новую ДНК. Например, клетка является трансформированной, если она генетически модифицирована по сравнению с ее нативным состоянием. После трансформации трансформирующая ДНК может подвергаться рекомбинации с ДНК клетки путем физической интеграции в хромосому клетки, или может временно сохраняться в виде
эписомального элемента без репликации, или может реплицироваться независимо как плазмида. Считается, что клетка является стабильно трансформированной, если ДНК реплицируется при делении клетки. Используемый в данном документе термин "трансфекция" обозначает захват чужеродной или экзогенной ДНК клеткой, и при этом клетка была "трансфицирована", если экзогенную ДНК ввели внутрь от клеточной мембраны. Ряд методик трансфекции хорошо известен из уровня техники. Такие методики можно применять для введения одной или нескольких экзогенных молекул ДНК в подходящие клетки-хозяева.
[0106] Используемый в данном документе термин "встречающийся в природе" и применяемый в отношении объекта обозначает тот факт, что объект может обнаруживаться в природе и не был подвергнут манипуляциям со стороны человека. Например, полинуклеотид или полипептид, присутствующий в организме (в том числе вирусах), который может быть выделен из природного источника и который не был преднамеренно модифицирован человеком, является встречающимся в природе. Аналогично, используемый в данном документе термин "не встречающийся в природе" обозначает объект, который не обнаруживается в природе или который был структурно модифицирован или синтезирован человеком.
[0107] Как используется в данном документе, двадцать стандартных аминокислот и их аббревиатуры соответствуют общепринятой практике. Стереоизомеры (например, D-аминокислоты) двадцати стандартных аминокислот; не встречающиеся в природе аминокислоты и аналоги, такие как а-,а-двузамещенные аминокислоты, N-алкиламинокислоты, молочная кислота и другие нестандартные аминокислоты также могут быть подходящими компонентами полипептидных цепей связывающих белков. Примеры нестандартных аминокислот включают 4-гидроксипролин, у-карбоксиглутамат, s-N,N,N-триметиллизин, s-N-ацетиллизин, 0-фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, a-N-метиларгинин и другие подобные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В системе обозначений
полипептидов, используемой в данном документе, левое направление представляет собой направление в сторону аминоконца, а правое направление представляет собой направление в сторону карбоксильного конца в соответствии со стандартной практикой и правилами.
[0108] Встречающиеся в природе остатки можно разделить на классы на основании общих свойств боковой цепи:
(1) гидрофобные: Met, Ala, Val, Leu, lie, Phe, Trp, Tyr,
Pro ;
(2) полярные гидрофобные: Arg, Asn, Asp, Gin, Glu, His, Lys, Ser, Thr;
(3) алифатические: Ala, Gly, lie, Leu, Val, Pro;
(4) алифатические гидрофобные: Ala, lie, Leu, Val, Pro;
(5) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gin;
(6) кислые: Asp, Glu;
(7) основные: His, Lys, Arg;
(8) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(9) ароматические: His, Trp, Туг, Phe; и
(10) ароматические гидрофобные: Phe, Trp, Туг.
[0109] Консервативные аминокислотные замены могут включать обмен представителя одного из этих классов на другого представителя того же класса. Неконсервативные замены могут включать обмен представителя одного из этих классов на представителя другого класса.
[ОНО] Специалист в данной области сможет определить
подходящие варианты полипептидных цепей связывающих белков с
помощью общеизвестных методик. Например, специалист в данной
области может идентифицировать подходящие области в
полипептидной цепи, которые можно изменить без нарушения
активности, путем нацеливания на области, которые, как
предполагается, не являются важными с точки зрения активности.
Альтернативно специалист в данной области может идентифицировать
остатки и части молекул, которые являются консервативными среди
сходных полипептидов. Кроме того, даже области, которые могут
быть важными с точки зрения биологической активности или с точки
зрения структуры, могут подвергаться консервативным
аминокислотным заменам без нарушения биологической активности или без неблагоприятного воздействия на структуру полипептида.
[0111] Используемый в данном документе термин "пациент" подразумевает субъектов-людей и субъектов-животных.
[0112] Используемые в данном документе термины "лечение" или "лечить" обозначают как терапевтическое лечение, так и профилактические или предупреждающие меры. К нуждающимся в лечении относят тех, у которых имеется нарушение, а также тех, которые предрасположены к нарушению, или тех, у которых нужно предупредить нарушение. В конкретных вариантах осуществления связывающие белки можно применять для лечения людей с раком или людей, подверженных раку, или для уменьшения тяжести рака у субъекта-человека. Связывающие белки также можно применять для предупреждения рака у пациента-человека. В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой множественную миелому, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, лимфому, рак молочной железы, такой как Нег2+ рак молочной железы, лимфому из В-клеток зародышевого центра или В-клеточный острый лимфобластный лейкоз. В других вариантах осуществления связывающие белки можно применять для лечения людей с воспалительными нарушениями или людей, подверженных воспалительным нарушениям, или для уменьшения тяжести воспалительных нарушений у субъекта-человека.
[0113] Используемые в данном документе термины "фармацевтическая композиция" или "терапевтическая композиция" обозначают соединение или композицию, способные индуцировать необходимый терапевтический эффект при введении пациенту должным образом.
[0114] Используемый в данном документе термин "фармацевтически приемлемый носитель" или "физиологически приемлемый носитель" обозначает одно или несколько веществ состава, подходящие для осуществления или улучшения доставки связывающего белка.
[0115] Термины "эффективное количество" и "терапевтически эффективное количество" при использовании в отношении фармацевтической композиции, содержащей один или несколько
связывающих белков, обозначают количество или дозу, достаточные для получения необходимого терапевтического результата. Более конкретно, терапевтически эффективное количество представляет собой количество связывающего белка, достаточное для ингибирования, на некоторый период времени, одного или нескольких клинически определенных патологических процессов, ассоциированных с состоянием, подлежащим лечению. Эффективное количество может меняться в зависимости от конкретного связывающего белка, подлежащего применению, а также зависит от ряда факторов и состояний, связанных с пациентом, подлежащим лечению, и тяжестью нарушения. Например, если связывающий белок подлежит введению in vivo, то факторы, такие как возраст, масса тела и состояние здоровья пациента, а также кривые "доза-эффект" и данные о токсичности, полученные в доклиническом исследовании на животных, будут входить в число таковых учитываемых факторов. Определение эффективного количества или терапевтически эффективного количества указанной фармацевтической композиции находится в пределах компетенции специалистов в данной области.
[0116] В одном варианте осуществления настоящего
изобретения предусмотрена фармацевтическая композиция,
содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество связывающего белка.
Триспецифические и/или тривалентные связывающие белки
[0117] В одном варианте осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) различных антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь содержит структуру,
представленную формулой: VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0118] В одном варианте осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHI [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0119] В одном варианте осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) различных антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VL1-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3- CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0120] В одном варианте осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: V^-Li-VLi-Lz-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3- CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи
иммуно гло булина;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0121] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь и вторая полипептидная цепь характеризуются перекрестной ориентацией, при этом они образуют два различных антигенсвязывающих участка. В некоторых вариантах осуществления VH1 и VL1 образуют связывающую пару и образуют первый антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления VH2 и VL2 образуют связывающую пару и образуют второй антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления третий полипептид и четвертый полипептид образуют третий антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления VH3 и VL3 образуют связывающую пару и образуют третий антигенсвязывающий участок.
[0122] В одном варианте осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) антигенов-мишеней или белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VDi-Li-VD2-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
Увз-Ъз-Ум-Ьц-Снг-шарнир-Снг-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iiiapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
vL3- CL [IV] где:
VDi представляет собой вариабельный домен тяжелой или легкой цепи первого иммуноглобулина;
VD2 представляет собой вариабельный домен тяжелой или легкой цепи второго иммуноглобулина;
VD3 представляет собой вариабельный домен тяжелой или легкой цепи третьего иммуноглобулина;
VD4 представляет собой вариабельный домен тяжелой или легкой цепи четвертого иммуноглобулина;
VH3 представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина ;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0123] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один, два или три антигена-мишени или белка-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок связывает три антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок связывает три различных антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления два антигенсвязывающих участка связывают один и тот же антиген-мишень. В этих вариантах осуществления
связывающий белок содержит два одинаковых связывающих домена или разные связывающие домены и/или специфически связывает различные антигены или эпитопы на одном и том же антигене-мишени. В некоторых вариантах осуществления три антигенсвязывающих участка связывают один и тот же антиген-мишень. В этих вариантах осуществления связывающий белок содержит три одинаковых связывающих домена или разные связывающие домены и/или специфически связывает различные антигены или эпитопы на одном и том же антигене-мишени.
[0124] В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо представляет собой вариабельный домен, полученный из аминокислотной последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 2, 4, 10, 14, 18, 22 или 115; и каждый из VHI, VH2 и VH3 независимо представляет собой вариабельный домен, полученный из аминокислотной последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 1, 3, 9, 13, 17, 21 или 114. В других вариантах осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо представляет собой вариабельный домен, полученный из аминокислотной последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88 или 94; и каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо представляет собой вариабельный домен, полученный из аминокислотной последовательности, приведенной под любым из SEQ ID N0: 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87 или 93. В других вариантах осуществления каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125; и каждый из VHIJ VH2 И Vh3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122. В других вариантах осуществления каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 61, 63, 69, 71, 74, 76, 82, 86, 88 или 94; и каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 60, 62, 68, 73, 75, 81, 85, 87 или 93. В некоторых вариантах осуществления каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0125] В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2
и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного
домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 169, 171 и 173;
и/или каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 168, 170 и 172. В некоторых вариантах
осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0: 141-147, 178 и 179; и/или каждый из VH1,
VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность
области тяжелой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 129-137. В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165 и 167; и/или каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164 и 166. В некоторых вариантах осуществления каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140 и 14 9; и/или каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие комплементарность области вариабельного домена тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122 и 126-128. В некоторых вариантах осуществления каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области и/или
последовательность вариабельного домена легкой цепи, показанные в таблицах 2-5.
[0126] В определенных вариантах осуществления порядок доменов VHi и VH2 и, следовательно, порядок доменов VLi и VL2 в полипептидной цепи формулы I или полипептидной цепи формулы II меняется (т. е. порядок становится обратным).
[0127] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 1, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 2, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 2.
[0128] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 1, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 2, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 2.
[0129] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 14.
[0130] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 14.
[0131] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 18.
[0132] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 18.
[0133] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID
NO: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 21, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 22, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 22.
[0134] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 21, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID
NO: 22, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 22.
[0135] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 63, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 62, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 61, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 61.
[0136] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 69, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 68, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 68; третья полипептидная цепь
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 61, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 61.
[0137] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 69, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 68, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 71 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 71, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 71.
[0138] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 7 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной
последовательности под SEQ ID NO: 7 6, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 7 6; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 75 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 75, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 75; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 73, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 74, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 74.
[0139] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 82 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 82, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 82; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 81 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 81, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 81; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 73, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:
74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 74, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 74.
[0140] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 8 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 88, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 8 8; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 87 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 87, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 87; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 86, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 86.
[0141] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 94 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 94, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 94; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 93 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 93,
необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 93; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 85, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 86, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 86.
[0142] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 69, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 68, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 73, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 74, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 74.
[0143] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 69, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 68, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 85, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 8 5; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 86, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 86.
[0144] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 63, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 62, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 73, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR
полипептидной цепи под SEQ ID NO: 7 3; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 74, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 74.
[0145] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 63, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 62, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 85, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 86, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 86.
[0146] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 114, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 115, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 115.
[0147] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 114, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 115, необязательно содержащую
CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 115.
[0148] В других вариантах осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) различных белков-мишеней, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VL2-L!-VL1-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз (впадина) [II];
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 (выступ) [III];
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи
иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[014 9] В других вариантах осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению представляет собой
триспецифический и/или тривалентный связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько (например, три) белков-мишеней, где первая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
V^-Li-VLi-Lz-CL [I]
и вторая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз (впадина) [II];
и третья полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 (выступ) [III];
и четвертая полипептидная цепь имеет структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHI представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0150] В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь и вторая полипептидная цепь характеризуются перекрестной ориентацией, при этом они образуют два различных антигенсвязывающих участка. В некоторых вариантах осуществления VH1 и VL1 образуют связывающую пару и образуют первый антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления VH2 и VL2 образуют связывающую пару и образуют второй антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления третий полипептид и четвертый полипептид образуют третий антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления VH3 и VL3 образуют связывающую пару и образуют третий антигенсвязывающий участок. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь и третья полипептидная цепь содержат одну или несколько модификаций. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь и третья полипептидная цепь связывающего белка являются разными, например, имеют разные домены СН1, СН2 и/или Снз (как, например, домены, содержащие модификацию, описанную в данном документе). В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь и четвертая полипептидная цепь содержат одну или несколько модификаций. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь и четвертая полипептидная цепь связывающего белка являются разными, например, имеют разные домены CL (как, например, домены, содержащие модификацию, описанную в данном документе, и/или домены CL лямбда- и каппа-цепей).
[0151] В некоторых вариантах осуществления связывающий
белок согласно настоящему изобретению содержит
антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99%
или на 100% идентична SEQ ID NO: 150, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 150, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 151, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 152, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 152, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
153, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 153. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
154, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 154, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 155, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок
153,
согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 156, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 156, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
157, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 157. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
158, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 158, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 159, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 159. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 160, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 160, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по
157,
меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
161, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 161. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
162, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 162, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 163, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 164, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 164, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 165, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере
161,
98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 166, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 166, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 167, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 168, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 168, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
169, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 169. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:
170, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 17 0, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 171, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 171. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок
169,
согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 172, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 172, и/или вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 173, необязательно содержащий CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 173.
[0152] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывается с одним, двумя или тремя антигенами-мишенями с равновесной константой диссоциации (KD) , меньшей или равной 1 мкМ, 50 0 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 5 нМ или 1 нМ. Приводимые в качестве примера анализы для определения KD известны из уровня техники. Например, в некоторых вариантах осуществления KD определяют путем измерения кинетических параметров связывания при температуре от 0°С до 37°С (например, при 0°С, 4°С, 25°С или 37°С) с помощью методик, описанных в примере 1 (например, SPR или ELISA).
[0153] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению активирует CD4+ и/или CD8+ Т-клетки in vitro и/или индуцирует опосредованное антителами уничтожение клеток, экспрессирующих один или несколько антигенов-мишеней для одного или нескольких связывающих доменов связывающего белка, in vitro. Приводимые в качестве примера анализы уничтожения клеток и активации Т-клеток in vitro известны из уровня техники. Например, в некоторых вариантах осуществления уничтожение клеток и/или активацию Т-клеток in vitro анализируют с помощью методик, описанных в примере 1.
[0154] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению специфически связывается с
одним или несколькими цитокинами и/или блокирует передачу сигнала, опосредованную ими. Приводимые в качестве примера анализы высвобождения цитокинов известны из уровня техники. Например, в некоторых вариантах осуществления высвобождение цитокинов анализируют с помощью методик, описанных в примере 1.
[0155] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает антиген-мишень или белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает белок-мишень на Т-клетках, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие участки специфически связывают опухолевый белок-мишень, например, выбранный из CD3 и CD2 8 соответственно. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие участки специфически связывают опухолевый белок-мишень, например, выбранный из CD2 8 и CD3 соответственно. В некоторых вариантах осуществления третий антигенсвязывающий участок специфически связывает CD19, CD20, CD38, Нег2 или LAMP1. Дополнительные примеры таких мишеней и белков-мишеней приведены ниже.
[0156] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3,
второй антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который
специфически связывает антиген-мишень или белок-мишень. В
некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно
настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий
участок, который специфически связывает CD2 8, второй
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3,
и третий антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает антиген-мишень или белок-мишень. Дополнительные
примеры таких антигенов-мишеней или белков-мишеней приведены
ниже. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок
согласно настоящему изобретению содержит первый
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека. В некоторых вариантах осуществления третий антигенсвязывающий участок специфически связывает CD19, CD20, CD38, Нег2 или LAMP1.
Дополнительные примеры таких опухолевых антигенов-мишеней или опухолевых белков-мишеней приведены ниже.
[0157] В некоторых вариантах осуществления
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 152, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 153; или вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 154, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 155. Дополнительные последовательности VH, VL и/или CDR антител, которые специфически связывают CD3, подходящие для применения в любом из связывающих белков, описанных в данном документе, можно найти в международной публикации № W0201 б/11662 б, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит (i) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 34, 35 и 36 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 52, 53 и 54 соответственно или (ii) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 34, 35 и 36 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 149, 53 и 54 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, является частью полипептидной цепи, содержащей аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID N0: 3. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, является частью полипептидной цепи, содержащей аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или
аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 4.
[0158] В некоторых вариантах осуществления
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 160, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 161; или вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 162, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит (i) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID NO: 28, 2 9 и 3 0 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID NO: 46, 47 и 48 соответственно или (ii) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID NO: 31, 32 и 33 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID NO: 49, 50 и 51 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, является частью полипептидной цепи, содержащей аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR полипептидной цепи под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, является частью полипептидной цепи, содержащей аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 4, необязательно содержащую CDR, которые на 100% идентичны CDR
полипептидной цепи под SEQ ID N0: 4.
[0159] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 8, или первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD38, где:
антигенсвязывающий участок, специфически связывающий CD3, содержит (i) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 34, 35 и 36 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 52, 53 и 54 соответственно или (ii) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 34, 35 и 36 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 149, 53 и 54 соответственно; и
антигенсвязывающий участок, специфически связывающий CD2 8, содержит (i) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 28, 2 9 и 3 0 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 46, 47 и 48 соответственно или (ii) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 31, 32 и 33 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 49, 50 и 51 соответственно; и
антигенсвязывающий участок, специфически связывающий CD3 8, содержит (i) три CDR тяжелой цепи под SEQ ID N0: 40, 41 и 42 соответственно и три CDR легкой цепи под SEQ ID N0: 58, 44 и 59 соответственно.
[0160] В некоторых вариантах осуществления
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 156, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 157; вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 158, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под
SEQ ID NO: 159; вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 164, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 165; вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 150, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 151; или вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 166, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 167. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит шесть CDR или вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи, показанные в таблицах 2-5. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит шесть CDR связывающего домена антитела к Нег2, антитела к CD19, антитела к CD20, антитела к CD38 или антитела к LAMP1, показанные в таблицах 2-5.
[0161] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ьз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iiiapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи
иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 169, 171 и 173; и
где:
каждый из VHi, VH2 И VH3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 168, 170 и 172.
[0162] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру,
представленную формулой: VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ьз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
Сн2 представляет собой константный домен Сн2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют
перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь; где:
каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 141-147, 178 и 179; и
где:
каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 129-137.
[0163] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VL1_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъ3-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Сн3 [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой
цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина ;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167; и
где:
каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166.
[0164] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ьз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [Н] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
Сн2 представляет собой константный домен Сн2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140 и 149; и
где:
каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 25-42, 120-122 и 126-128.
[0165] В некоторых вариантах осуществления связывающий
белок согласно настоящему изобретению содержит
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и антигенсвязывающий участок, который специфически связывает антиген-мишень, отличный от CD3 или CD2 8. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, и антигенсвязывающий участок, который специфически связывает антиген-мишень человека, отличный от CD3 или CD2 8. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит (а) антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит (i) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 152, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 153, (ii) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 154, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 155, (iii) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6, и вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54, или (iv) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34,
CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6, и вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; (b) антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит (i) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 160, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 161, (ii) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 162, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 163, (iii) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30, и вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48, или (iv) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33, и вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; и (с) антигенсвязывающий участок, который специфически связывает антиген-мишень, отличный от CD3 или CD2 8. В некоторых вариантах
осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или 10, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или 9, и третью и четвертую полипептидные цепи, где третья и четвертая полипептидные цепи образуют антигенсвязывающий домен, который специфически связывает антиген-мишень, отличный от CD3 или CD2 8. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий участок, который специфически связывает антиген-мишень, отличный от CD3 или CD2 8, связывает антиген-мишень, выбранный из A2AR, APRIL, АТРОазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4 (также известного как VTCN1), В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2 (также известного как МСР-1), CCL3 (также известного как MIP-la), CCL4 (также известного как MIP-lb), CCL5 (также известного как RANTES), CCL7
(также известного как МСР-3), CCL8 (также известного как МСР-2), CCL11 (также известного как эотаксин), CCL15 (также известного как MIP-ld), CCL17 (также известного как TARC), CCL19 (также известного как MIP-3b), CCL20 (также известного как MIP-За), CCL21 (также известного как MIP-2), CCL24 (также известного как МР1Е-2/эотаксин-2), CCL25 (также известного как ТЕСК), CCL26
(также известного как эотаксин-3), CCR3, CCR4, CD19, CD20, CD23
(также известного как FCER2, рецептор для IgE), CD24, CD27, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80 (также известного как В7-1), CD86
(также известного как В7-2), CD122, CD137 (также известного как 41ВВ), CD137L, CD152 (также известного как CTLA4), CD154 (также известного как CD40L), CD160, CD272, CD273 (также известного как PDL2), CD274 (также известного как PDL1), CD275 (также известного как В7Н2), CD276 (также известного как В7НЗ), CD278
(также известного как ICOS), CD279 (также известного как PD-1),
CDH1 (также известного как Е-кадгерин), хитиназы, CLEC9, CLEC91,
CRTH2, CSF-1 (также известного как M-CSF), CSF-2 (также
известного как GM-CSF), CSF-3 (также известного как GCSF),
CX3CL1 (также известного как SCYD1), CXCL12 (также известного
как SDF1), CXCL13, CXCR3, DNGR-1,
эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A,
FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb (также известного как рецептор для IL25), IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4 (также известного как интегрин Ь4), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, 0X4О, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (также известного как рецептор для IL33), STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP (также известного как корецептор для IL7Ra), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1 (также известного как GPR5/CCXCR1).
[0166] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45.
[0167] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45.
[0168] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45.
[0169] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 55,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57.
[0170] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57.
[0171] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59.
[0172] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 58,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59.
[0173] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 140.
[0174] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 140.
[0175] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 9, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142.
[0176] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 6, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142.
[0177] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 6, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142.
[0178] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 9, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147.
[0179] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 8, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147.
[0180] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 6, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144.
[0181] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 131; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 8, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144.
[0182] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 6, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147.
[0183] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 6, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144.
[0184] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 9, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147.
[0185] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 9, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 6, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144.
[0186] В некоторых вариантах осуществления VHi содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 2 9, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125.
[0187] В некоторых вариантах осуществления VH1 содержит CDR-
Н1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:
31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ
ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 123,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125.
Антигены-мишени
[0188] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывает один или несколько (например, один, два или три) следующих антигенов-мишеней или белков-мишеней: A2AR, APRIL, АТРОазу, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4 (также известный как VTCN1), В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2 (также известный как МСР-1), CCL3 (также известный как MIP-la), CCL4
(также известный как MIP-lb), CCL5 (также известный как RANTES), CCL7 (также известный как МСР-3), CCL8 (также известный как МСР-2), CCL11 (также известный как эотаксин), CCL15 (также известный как MIP-ld) , CCL17 (также известный как TARC) , CCL19 (также известный как MIP-3b), CCL20 (также известный как MIP-3a) , CCL21
(также известный как MIP-2), CCL24 (также известный как MPIF-2/эотаксин-2), CCL25 (также известный как ТЕСК), CCL26 (также известный как эотаксин-3), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23
(также известный как FCER2, рецептор для IgE), CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80 (также известный как В7-1), CD86
(также известный как В7-2), CD122, CD137 (также известный как 41ВВ), CD137L, CD152 (также известный как CTLA4), CD154 (также известный как CD40L), CD160, CD272, CD273 (также известный как PDL2), CD274 (также известный как PDL1), CD275 (также известный как В7Н2), CD276 (также известный как В7НЗ), CD278 (также известный как ICOS), CD279 (также известный как PD-1), CDH1
(также известный как Е-кадгерин), хитиназу, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1 (также известный как M-CSF), CSF-2 (также известный как GM-CSF), CSF-3 (также известный как GCSF), CX3CL1 (также известный как SCYD1), CXCL12 (также известный как SDF1), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазу 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-бета, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6,
IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb (также известный как рецептор для IL25) , IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4 (также известный как интегрин Ь4), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептин, LPFS2, молекулу МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3y-l, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарный рецептор, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (также известный как рецептор для IL33), STEAP2, Syk-киназу, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP (также известный как корецептор для IL7Ra), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1 (также известный как GPR5/CCXCR1). В некоторых вариантах осуществления один или несколько вышеуказанных антигенов-мишеней представляют собой антигены-мишени человека.
[0189] В одном варианте осуществления связывающие белки специфически связываются с одним или несколькими опухолевыми антигенами-мишенями (например, белками-мишенями). В других вариантах осуществления связывающие белки специфически связываются с одним или несколькими опухолевыми белками-мишенями и одним или несколькими белками-мишенями на Т-клетках, в том числе с Т-клеточным рецепторным комплексом. Эти связывающие белки, являющиеся активаторами, привлекающими Т-клетки, способны временно рекрутировать Т-клетки к клеткам-мишеням с одновременной активацией цитолитической активности Т-клеток. Примеры белков-мишеней на Т-клетках включают без ограничения CD3 и CD2 8, среди прочих. Дополнительные примеры таких антигенов-мишеней или белков-мишеней приведены выше. В некоторых вариантах осуществления триспецифические связывающие белки можно получить путем объединения антигенсвязывающих доменов двух или более моноспецифических антител (исходных антител) в одно антитело. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывает один или несколько (например, один, два или три) следующих антигенов-мишеней: CD3, CD19, CD2 0, CD28, CD38, Her2, LAMP1, IL-4, IL-13 и TNFa.
[0190] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тривалентный связывающий белок способен связывать три антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления
настоящего изобретения тривалентный связывающий белок способен связывать три различных антигена-мишени. В одном варианте осуществления связывающий белок является триспецифическим, и одна пара легкая цепь-тяжелая цепь способна связывать два различных антигена-мишени или эпитопа, и одна пара легкая цепь-тяжелая цепь способна связывать один антиген-мишень или эпитоп. В другом варианте осуществления связывающий белок способен связывать три опухолевых антигена-мишени. В другом варианте осуществления связывающий белок способен связывать три различных опухолевых антигена-мишени. В других вариантах осуществления связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких антигенов-мишеней.
[0191] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывает один или несколько опухолевых белков-мишеней. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три эпитопа на одном опухолевом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три различных эпитопа на одном опухолевом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен связывать два различных эпитопа на первом опухолевом белке-мишени и один эпитоп на втором опухолевом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления первый и второй опухолевый белки-мишени являются разными. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три различных опухолевых белка-мишени.
[0192] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывает один или несколько цитокиновых белков-мишеней. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три эпитопа на одном цитокиновом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три различных эпитопа на одном цитокиновом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен связывать два различных эпитопа на первом цитокиновом белке-мишени и один эпитоп на втором цитокиновом белке-мишени. В
некоторых вариантах осуществления первый и второй цитокиновый белки-мишени являются разными. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать три различных цитокиновых белка-мишени. В некоторых вариантах осуществления один или несколько цитокиновых белков-мишеней представляют собой один или несколько из IL-4, IL-13 и/или TNFa. Дополнительные примеры цитокиновых белков-мишеней приведены ниже.
[0193] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок по настоящему изобретению связывает один или несколько опухолевых белков-мишеней и один или несколько Т-клеточных белков-мишеней. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать один опухолевый белок-мишень и два различных эпитопа на одном Т-клеточном белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать один опухолевый белок-мишень и два различных Т-клеточных белка-мишени (например, CD2 8 и CD3). В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать один Т-клеточный белок-мишень и два различных эпитопа на одном опухолевом белке-мишени. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок способен специфически связывать один Т-клеточный белок-мишень и два различных опухолевых белка-мишени. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая полипептидные цепи связывающего белка образуют два антигенсвязывающих участка, которые специфически нацеливаются на два Т-клеточных белка-мишени, а третья и четвертая полипептидные цепи связывающего белка образуют антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая полипептидные цепи связывающего белка образуют два антигенсвязывающих участка, которые специфически нацеливаются на два опухолевых белка-мишени, а третья и четвертая полипептидные цепи связывающего белка образуют антигенсвязывающий участок, который специфически связывает Т-клеточный белок-мишень. В некоторых вариантах осуществления один или несколько опухолевых белков-мишеней представляют собой один
или несколько из CD3, CD19, CD20, CD28, CD38, Her2, LAMP1, IL-4, IL-13 и/или TNFa. В некоторых вариантах осуществления один или несколько Т-клеточных белков-мишеней представляют собой один или несколько из CD3 и CD28. Дополнительные примеры опухолевых белков-мишеней и Т-клеточных белков-мишеней приведены выше.
[0194] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению связывает независимо друг от друга один, два или три одинаковых или разных антигена-мишени или белка-мишени, выбранных из цитокиновых белков-мишеней, опухолевых антигенов-мишеней или опухолевых белков-мишеней, Т-клеточных белков-мишеней, ингибиторов контрольных точек иммунного ответа, модуляторов контрольных точек иммунного ответа, молекул-костимуляторов контрольных точек иммунного ответа и/или молекул-мишеней на поверхности иммунной клетки. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению является тривалентным, но биспецифическим и способен специфически связываться с двумя одинаковыми антигенами-мишенями или белками-мишенями. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению способен специфически связывать два различных эпитопа на одном цитокиновом белке-мишени, опухолевом антигене-мишени или опухолевом белке-мишени, Т-клеточном белке-мишени, ингибиторе контрольных точек иммунного ответа, модуляторе контрольных точек иммунного ответа, молекуле-костимуляторе контрольных точек иммунного ответа и/или молекуле-мишени на поверхности иммунной клетки. Дополнительные примеры таких антигенов-мишеней или белков-мишеней приведены выше.
[0195] Связывающие белки согласно настоящему изобретению можно получить с использованием доменов или последовательностей, полученных или происходящих из любого антитела человека или антитела нечеловеческого происхождения, в том числе, например, из антител человека, мыши или гуманизированных антител.
Линкеры
[0196] В некоторых вариантах осуществления длина линкеров Llf L2, L3 и L4 варьирует от нуля аминокислот (длина=0) до приблизительно 100 аминокислот или менее 100, 50, 40, 30, 20 или
15 аминокислот или меньше. Длина линкеров также может составлять 10, 9, 8, 7, б, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту. Все из Li, L2, L3 и L4 в одном связывающем белке могут иметь одну и ту же аминокислотную последовательность, или все из них могут иметь разные аминокислотные последовательности.
[0197] Примеры подходящих линкеров включают один остаток глицина (Gly); пептид из двух остатков глицина (Gly-Gly); трипептид (Gly-Gly-Gly); пептид с четырьмя остатками глицина (Gly-Gly-Gly-Gly; SEQ ID NO: 98); пептид с пятью остатками глицина (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; SEQ ID NO: 99); пептид с шестью остатками глицина (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; SEQ ID NO: 100) ; пептид с семью остатками глицина (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; SEQ ID NO: 101); пептид с восемью остатками глицина (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly; SEQ ID NO: 102). Можно использовать другие комбинации аминокислотных остатков, как, например, пептид Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 103), пептид Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 104), пептид Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 105) и пептид Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly (SEQ ID NO: 148). Другие подходящие линкеры включают один остаток Ser и Val; дипептид Arg-Thr, Gin-Pro, Ser-Ser, Thr-Lys и Ser-Leu; Thr-Lys-Gly-Pro-Ser (SEQ ID NO: 106), Thr-Val-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 107), Gln-Pro-Lys-Ala-Ala (SEQ ID NO: 108), Gln-Arg-Ile-Glu-Gly (SEQ ID NO: 109); Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-Ser (SEQ ID NO: 110), Arg-Thr-Val-Ala-Ala-Pro-Ser (SEQ ID NO: 111), Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 112) и His-Ile-Asp-Ser-Pro-Asn-Lys (SEQ ID NO: 113) . Вышеперечисленные примеры не предназначены для какого-либо ограничения объема настоящего изобретения, и при этом было показано, что линкеры, содержащие выбранные случайным образом аминокислоты, выбранные из группы, состоящей из валина, лейцина, изолейцина, серина, треонина, лизина, аргинина, гистидина, аспартата, глутамата, аспарагина, глутамина, глицина и пролина, подходят для связывающих белков. Что касается дополнительных описаний последовательностей линкеров, см., например, W02012135345.
[0198] Состав и последовательность аминокислотных остатков
в линкере может меняться в зависимости от типа элемента вторичной структуры, который необходимо достигнуть при помощи линкера. Например, глицин, серии и аланин являются наиболее подходящими для линкеров, характеризующихся максимальной гибкостью. Некоторые комбинации глицина, пролина, треонина и серина применимы, если необходим более жесткий и удлиненный линкер. При необходимости любой аминокислотный остаток может рассматриваться как линкер в комбинации с другими аминокислотными остатками для конструирования более длинных пептидных линкеров в зависимости от требуемых свойств.
[0199] В некоторых вариантах осуществления длина 1^ по
меньшей в два раза превышает длину L3. В некоторых вариантах
осуществления длина L2 по меньшей в два раза превышает длину L4.
В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере в
два раза превышает длину L3, а длина L2 по меньшей мере в два
раза превышает длину L4. В некоторых вариантах осуществления
имеет длину 3-12 аминокислотных остатков, L2 имеет длину 3-14
аминокислотных остатков, L3 имеет длину 1-8 аминокислотных
остатков, и L4 имеет длину 1-3 аминокислотных остатка. В
некоторых вариантах осуществления имеет длину 5-10
аминокислотных остатков, L2 имеет длину 5-8 аминокислотных остатков, L3 имеет длину 1-5 аминокислотных остатков, и L4 имеет длину 1-2 аминокислотных остатка. В некоторых вариантах осуществления Li имеет длину 7 аминокислотных остатков, L2 имеет длину 5 аминокислотных остатков, L3 имеет длину 1 аминокислотный остаток, и L4 имеет длину 2 аминокислотных остатка. В некоторых вариантах осуществления Li имеет длину 10 аминокислотных остатков, L2 имеет длину 10 аминокислотных остатков, L3 имеет длину 0 аминокислотных остатков, и L4 имеет длину 0 аминокислотных остатков. В некоторых вариантах осуществления каждый из Li, L2, L3 и L4 имеет независимо выбранную длину, составляющую от 0 до 15 аминокислот (например, 0, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот), где по меньшей мере два линкера имеют длину 1-15 аминокислот (например, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот). В некоторых вариантах осуществления каждый из Llf
L2, L3 и L4 имеет длину 0 аминокислот.
[0200] В некоторых вариантах осуществления Li, L2, L3 и/или L4 содержат последовательность Asp-Lys-Thr-His-Thr (SEQ ID NO: 525). В некоторых вариантах осуществления Li содержит последовательность Asp-Lys-Thr-His-Thr (SEQ ID NO: 525). В некоторых вариантах осуществления L3 содержит последовательность Asp-Lys-Thr-His-Thr (SEQ ID NO: 525).
[0201] В некоторых вариантах осуществления Llf L2, L3 и/или L4 содержат последовательность, полученную из встречающейся в природе последовательности в участке соединения между вариабельным доменом антитела и константным доменом антитела (например, описанной в WO2012/135345) . Например, в некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность, находящуюся в переходной области между эндогенными доменами VH и CHi или между эндогенными доменами VL и CL (например, каппа- или лямбда-цепей). В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность, находящуюся в переходной области между эндогенными доменами VH и CHi человека или между эндогенными доменами VL и CL человека (например, каппа- или лямбда-цепей человека).
[0202] В некоторых вариантах осуществления Llf L2, L3 и/или
L4 содержат последовательность Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ
ID NO: 175) . В некоторых вариантах осуществления Li содержит
последовательность Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 175) .
В некоторых вариантах осуществления Li содержит
последовательность Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 175) , L2 содержит последовательность Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-Arg (SEQ ID NO: 176), L3 содержит последовательность Ser, и L4 содержит последовательность Arg-Thr. В некоторых вариантах осуществления L3 содержит последовательность Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 175) . В некоторых вариантах осуществления Li содержит последовательность Ser, L2 содержит последовательность Arg-Thr, L3 содержит последовательность Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro (SEQ ID NO: 175), и L4 содержит последовательность Thr-Lys-Gly-Pro-Ser-Arg (SEQ ID NO: 176) .
[0203] В некоторых вариантах осуществления каждый из Llf L2,
L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из
(GGGGS)п (где п представляет собой целое число от 0 до 5; SEQ ID
N0: 174), GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID
NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO:
175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах
осуществления Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO:
175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3
содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность
RT. В некоторых вариантах осуществления 1^ содержит
последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит
последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину 0
аминокислот, и L4 имеет длину 0 аминокислот. В некоторых
вариантах осуществления содержит последовательность GGSGSSGSGG
(SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ
ID NO: 148), L3 имеет длину 0 аминокислот, и L4 имеет длину 0
аминокислот. В некоторых вариантах осуществления содержит
последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет
длину 0 аминокислот, L3 содержит последовательность
GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину 0 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления и L2 имеют длину ноль
аминокислот, а каждый из L3 и L4 содержит независимо выбранную последовательность, выбранную из (GGGGS)п (где п представляет собой целое число от 0 до 5; SEQ ID NO: 174), GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах осуществления L3 и L4 имеют длину ноль аминокислот, а каждый из Li и L2 содержит независимо выбранную последовательность, выбранную из (GGGGS)п (где п представляет собой целое число от 0 до 5; SEQ ID NO: 174), GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148).
Fc-области и константные домены
[0204] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую Fc-область,
связанную с CHI, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит третью полипептидную цепь, дополнительно содержащую Fc-область, связанную с СН1, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую Fc-область, связанную с СН1, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, и третью полипептидную цепь, дополнительно содержащую Fc-область, связанную с СН1, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0205] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит один или два варианта Fc. Термин "вариант Fc", используемый в данном документе, обозначает молекулу или последовательность, которая модифицирована по сравнению с нативным Fc, но все еще содержит участок связывания для рецептора реутилизации FcRn (неонатального Fc-рецептора). Приводимые в качестве примера варианты Fc и их взаимодействие с рецептором реутилизации известны из уровня техники. Таким образом, термин "вариант Fc" может предусматривать молекулу или последовательность, полученную в результате гуманизации нативного Fc нечеловеческого происхождения. Кроме того, нативный Fc содержит области, которые можно удалить, поскольку они обеспечивают структурные признаки или биологическую активность, которые не требуются для антителоподобных связывающих белков согласно настоящему изобретению. Таким образом, термин "вариант Fc" предусматривает молекулу или последовательность, в которой отсутствует один или несколько участков или остатков нативного Fc или в которой были модифицированы один или несколько участков или остатков Fc, воздействующих на или вовлеченных в: (1) образование
дисульфидной связи, (2) несовместимость с выбранной клеткой-хозяином, (3) гетерогенность N-концов при экспрессии в выбранной клетке-хозяине, (4) гликозилирование, (5) взаимодействие с системой комплемента, (6) связывание с Fc-рецептором, отличным от рецептора реутилизации, или (7) антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC).
[0206] Для улучшения выхода связывающих белков домены Снз можно изменить с помощью технологии "выступы-во-впадины", которая описана подробно с несколькими примерами, например, в международной публикации № W0 96/027011, Ridgway et al. , 1996, Protein Eng. 9: 617-21; и Merchant et al. , 1998, Nat. Biotechnol. 16: 677-81. В частности, взаимодействующие поверхности двух доменов Снз изменяют для повышения гетеродимеризации обеих тяжелых цепей, содержащих эти два домена Снз- Каждый из двух доменов Снз (из двух тяжелых цепей) может представлять собой "выступ", тогда как другой представляет собой "впадину". Введение дисульфидного мостика дополнительно стабилизирует гетеродимеры (Merchant et al., 1998; Atwell et al., 1997, J. Mol. Biol. 270: 26-35) и повышает выход. В определенных вариантах осуществления выступ находится на второй паре полипептидов с одним вариабельным доменом. В других вариантах осуществления выступ находится на первой паре полипептидов, характеризующихся перекрестной ориентацией. В еще одних вариантах осуществления домены Снз не содержат "выступ-во-впадине".
[0207] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутацию по типу "выступа" на второй полипептидной цепи и мутацию по типу "впадины" на третьей полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутацию по типу "выступа" на третьей полипептидной цепи и мутацию по типу "впадины" на второй полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления мутация по типу "выступа" предусматривает замену(замены) в положениях, соответствующих положениям 354 и/или Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные
замены представляют собой S354C, T366W, T366Y, S354C и T366W или S354C и T366Y. В некоторых вариантах осуществления мутация по типу "выступа" предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W. В некоторых вариантах осуществления мутация по типу "впадины" предусматривает замену(замены) в положениях, соответствующих положениям 407 и необязательно 349, Збб и/или 368 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные замены представляют собой Y407V или Y407T и необязательно Y349C, T366S и/или L368A. В некоторых вариантах осуществления мутация по типу "впадины" предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V.
[0208] В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям Збб и необязательно 354 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой T366W или T366Y и необязательно S354C; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям 407 и необязательно 349, Збб и/или 368 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y4 07V или Y4 07T и необязательно Y349C, T366S и/или L368A.
[0209] В некоторых вариантах осуществления вторая
полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям 407 и необязательно 349, Збб и/или 368 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y4 07V или Y4 07T и необязательно Y349C, T366S и/или L368A; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям Збб и необязательно 354 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой T366W или T366Y и необязательно S354C.
[0210] В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотная замена представляет собой T366W; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям Збб, 368 и/или 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой T366S, L368A и/или Y407V.
[0211] В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную
область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотную(аминокислотные) замену(замены) в положениях, соответствующих положениям Збб, 368 и/или 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой T366S, L368A и/или Y407V; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотная замена представляет собой T366W.
[0212] В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A и Y407V. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C,
T366S, L368A и Y407V; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека.
[0213] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько мутаций для улучшения времени полужизни в сыворотке крови (см., например, Hinton, P.R. et al. (2006) J. Immunol. 176(1):346-56). В некоторых вариантах осуществления мутация предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую первую Fc-область, связанную с СН1, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, и при этом третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с СН1, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и СНЗ тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая и/или вторая Fc-области содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутации по типу выступов и впадин и одну или несколько мутаций для улучшения времени полужизни в сыворотке крови. В некоторых вариантах осуществления
первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека.
[0214] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько мутаций для улучшения стабильности, например, шарнирной области и/или поверхности контакта димера IgG4 (см., например, Spiess, С. et al. (2013) J. Biol. Chem. 288:265832 6593). В некоторых вариантах осуществления мутация предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сп2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и при этом третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутации по типу выступов и впадин и одну или несколько мутаций для улучшения стабильности. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека.
[0215] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько мутаций для улучшения очистки, например, путем модулирования аффинности к реагенту для очистки. Например, известно, что гетеродимерные связывающие белки можно
избирательно очистить от их гомодимерных форм, если одна из двух Fc-областей гетеродимерной формы содержит мутацию(мутации) , снижающие или устраняющие связывание с белком А, поскольку гетеродимерная форма будет характеризоваться промежуточной аффинностью к средству для очистки на основе белка А по сравнению с любой гомодимерной формой и может быть избирательно элюирована с белка А, например, посредством использования другого значения рН (см., например, Smith, E.J. et al. (2015) Sci. Rep. 5:17 943) . В некоторых вариантах осуществления мутация предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сп2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и при этом третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; и где только одна из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутации по типу выступов и впадин и одну или несколько мутаций для улучшения очистки. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека.
[0216] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько мутаций для снижения эффекторной функции, например, антителозависимого клеточного фагоцитоза, опосредованного Fc
рецепторами (ADCP), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 2 34 и 2 35 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления Fc-области второй и третьей полипептидных цепей представляют собой Fc-области IgGl человека, и при этом каждая из Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234, 235, 329 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A, L235A и Р329А. В некоторых вариантах осуществления Fc-области второй и третьей полипептидных цепей представляют собой Fc-области IgGl человека, и где каждая из Fc
областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234, 235 и 329 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A, L235A и Р329А. В некоторых вариантах осуществления мутация предусматривает замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит вторую полипептидную цепь, дополнительно содержащую первую Fc-область, связанную с CHI/ при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и при этом третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит мутации по типу выступов и впадин и одну или несколько мутаций для снижения эффекторной функции. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека. В некоторых вариантах осуществления первая и/или вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека. Что касается дополнительного описания мутаций Fc-области в положении 32 9, см., например, Shields, R.L.et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604 и WOl999051642 .
[0217] В некоторых вариантах осуществления типы мутаций, описанные выше, можно комбинировать в любом порядке или комбинации. Например, связывающий белок согласно настоящему изобретению может содержать две или более мутаций по типу "выступа" и "впадины", одну или несколько мутаций для улучшения времени полужизни в сыворотке крови, одну или несколько мутаций
для улучшения стабильности IgG4, одну или несколько мутаций для улучшения очистки и/или одну или несколько мутаций для снижения эффекторной функции, описанных выше.
[0218] В определенных вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению содержит первую полипептидную цепь, которая содержит домен CL лямбда-цепи; домен Снз второй полипептидной цепи, который содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; домен Снз третьей полипептидной цепи, который содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и четвертую полипептидную цепь, которая содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354, Збб, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C, T366W, H435R и Y436F; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V; и при этом
четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления первая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи; при этом домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; при этом домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и при этом четвертая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи .
[0219] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению очищают с помощью аффинной хроматографии на белке А, аффинной хроматографии легких цепей каппа (например, с использованием смолы KappaSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare) и необязательно аффинной хроматографии легких цепей лямбда (например, с использованием смолы LambdaFabSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare). В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению очищают с помощью аффинной хроматографии с белком А, аффинной хроматографии легких цепей лямбда (например, с использованием смолы LambdaFabSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare) и необязательно аффинной хроматографии легких цепей каппа (например, с использованием смолы KappaSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare). В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит две Fc-области, каждая из которых содержит домен Снз/ и только один из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y4 3 6F. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению последовательно очищают с
помощью аффинной хроматографии на белке А, затем аффинной хроматографии легких цепей каппа (например, с использованием смолы KappaSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare), а затем необязательно аффинной хроматографии легких цепей лямбда (например, с использованием смолы LambdaFabSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare). В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению очищают с помощью аффинной хроматографии с белком А, затем аффинной хроматографии легких цепей лямбда (например, с использованием смолы LambdaFabSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare), а затем необязательно аффинной хроматографии легких цепей каппа
(например, с использованием смолы KappaSelect в соответствии с инструкциями производителя; GE Healthcare). Например, в некоторых вариантах осуществления связывающий белок приводят в контакт с белком А, элюируют с белка А в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих 0 либо 2 домена Снз/ содержащих аминокислотные замены H435R и Y436F, приводят в контакт с аффинной средой для легких цепей каппа (например, используемой со смолой KappaSelect; GE Healthcare) и элюируют из аффинной среды для легких цепей каппа в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей
(например, в соответствии с инструкциями производителя). Условия, подходящие для элюирования с белка А, известны из уровня техники, в том числе без ограничения элюирование в ступенчатом градиенте рН 4,5-2,8. В некоторых вариантах осуществления используется белок А или вариант белка А, применимый для очистки белков. В некоторых вариантах осуществления белок А присоединен к подложке или смоле, например, в качестве части среды для хроматографии. В некоторых вариантах осуществления после элюирования из аффинной среды для легких цепей каппа связывающий белок приводят в контакт с аффинной средой для легких цепей лямбда (например, используемой со смолой LambdaFabSelect; GE Healthcare) и элюируют из аффинной среды для легких цепей лямбда в условиях, подходящих для
отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL каппа-цепей (например, в соответствии с инструкциями производителя). В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению выявляют с помощью HIC-хроматографии. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит первую полипептидную цепь, которая содержит домен CL лямбда-цепи; домен Снз второй полипептидной цепи, который содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; домен Снз третьей полипептидной цепи, который содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и четвертую полипептидную цепь, которая содержит домен CL каппа-цепи. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок вырабатывается клеткой-хозяином. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок очищают от среды для культивирования клеток или экстракта клеток-хозяев. В некоторых вариантах осуществления связывающие белки секретируются клеткой-хозяином или вырабатываются клеткой-хозяином и экстрагируются из нее (например, перед приведением в контакт с белком А) . В некоторых вариантах осуществления связывающий белок находится в среде для культивирования клеток или экстракте клеток-хозяев при приведении в контакт с белком А. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок очищают от других связывающих белков, полипептидов и/или других клеточных компонентов.
[0220] В некоторых вариантах осуществления CHI, СН2, СНЗ и CL триспецифических связывающих белков, описанных в данном документе, могут содержать любую из последовательностей СН1, СН2, СНЗ и CL связывающих белков 1-53.
Нуклеиновые кислоты
[0221] Стандартные технологии рекомбинантной ДНК применяют для конструирования полинуклеотидов, которые кодируют полипептиды, образующие связывающие белки, включения этих
полинуклеотидов в рекомбинантные векторы экспрессии и введения таких векторов в клетки-хозяева. См., например, Sambrook et al., 2 001, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed.) . Ферментативные реакции и методики очистки можно выполнять в соответствии со спецификациями производителей, как обычно выполняют в данной области техники или как описано в данном документе. Если не предусмотрены конкретные определения, то терминология, используемая в контексте аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, а также лабораторные процедуры и методики таковых, описанные в данном документе, являются общеизвестными и широко используемыми в данной области техники. Аналогично, традиционные методики можно применять для вариантов химического синтеза, вариантов химического анализа, фармацевтического получения, составления, доставки и лечения пациентов.
[0222] Другие аспекты настоящего изобретения относятся к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую любой из связывающих белков, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота функционально связана с гетерологичным промотором для управления транскрипцией последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей связывающий белок. Промотор может означать контролирующие последовательности нуклеиновой кислоты, которые управляют транскрипцией нуклеиновой кислоты. Первая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, где первая последовательность нуклеиновой кислоты расположена в функциональной связи со второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор функционально связан с последовательностью, кодирующей связывающий белок, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности. Примеры промоторов могут включать без ограничения промоторы, полученные из геномов вирусов (таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц,
цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В, вирус обезьян 4 0 (SV4 0) и т. п.), гетерологичные промоторы эукариот (такие как промотор гена актина, промотор гена иммуноглобулина, промоторы генов белков теплового шока и т. п.), CAG-промотор (Niwa et al., Gene 108 (2):193-9, 1991), промотор гена фосфоглицераткиназы (PGK), индуцируемый тетрациклином промотор (Masui et al., Nucleic Acids Res. 33:e43, 2005), lac-систему, trp-систему, tac-систему, trc-систему, основные операторные и промоторные области фага лямбда, промотор гена 3-фосфоглицераткиназы, промоторы гена кислой фосфатазы дрожжей и промотор гена альфа-фактора спаривания дрожжей. Полинуклеотиды, кодирующие связывающие белки согласно настоящему изобретению, могут находиться под контролем конститутивного промотора, индуцируемого промотора или любого другого подходящего промотора, описанного в данном документе, или другого подходящего промотора, который легко распознает специалист в данной области.
[0223] В некоторых вариантах осуществления выделенную нуклеиновую кислоту включают в вектор. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой вектор экспрессии. Векторы экспрессии могут содержать одну или несколько регуляторных последовательностей, функционально связанных с полинуклеотидом, подлежащим экспрессии. Термин "регуляторная последовательность" подразумевает промоторы, энхансеры и другие элементы, контролирующие экспрессию (например, сигналы полиаденилирования). Примеры подходящих энхансеров могут включать без ограничения энхансерные последовательности из генов млекопитающих (таких как гены глобина, эластазы, альбумина, ос-фетопротеина, инсулина и т. п.) и энхансерные последовательности из вируса эукариотических клеток (такие как энхансер SV4 0 на участке позднего начала репликации (100-270 п. о.), ранний промотор/энхансер цитомегаловируса, энхансер полиомы на участке позднего начала репликации, энхансеры аденовирусов и т. п.). Примеры подходящих векторов могут включать, например, плазмиды, космиды, эписомы, транспозоны и вирусные векторы (например, векторы на основе аденовируса, вируса осповакцины, вируса
Синдбис, вируса кори, вируса герпеса, лентивируса, ретровируса, аденоассоциированного вируса и т. д.). Векторы экспрессии можно применять для трансфекции клеток-хозяев, таких как, например, клетки бактерий, клетки дрожжей, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Биологически функциональные векторы на основе ДНК вируса и плазмидной ДНК, способные экспрессироваться и реплицироваться в хозяине, известны из уровня техники и могут применяться для трансфекции любой клетки, представляющей интерес.
[0224] Другие аспекты настоящего изобретения относятся к векторной системе, содержащей один или несколько векторов, кодирующих первую, вторую, третью и четвертую полипептидные цепи любого из связывающих белков, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую полипептидную цепь связывающего белка, второй вектор, кодирующий вторую полипептидную цепь связывающего белка, третий вектор, кодирующий третью полипептидную цепь связывающего белка, и четвертый вектор, кодирующий четвертую полипептидную цепь связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую и вторую полипептидные цепи связывающего белка, и второй вектор, кодирующий третью и четвертую полипептидные цепи связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую и третью полипептидные цепи связывающего белка, и второй вектор, кодирующий вторую и четвертую полипептидные цепи связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую и четвертую полипептидные цепи связывающего белка, и второй вектор, кодирующий вторую и третью полипептидные цепи связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления векторная система содержит первый вектор, кодирующий первую, вторую, третью и четвертую полипептидные цепи связывающего белка. Один или несколько векторов векторной системы могут представлять собой любые из векторов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления один или
несколько векторов представляют собой векторы экспрессии. Выделенные клетки-хозяева
[0225] Другие аспекты настоящего изобретения относятся к выделенной клетке-хозяину, содержащей один или несколько выделенных полинуклеотидов, векторов и/или векторных систем, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку бактерии
(например, клетку Е. coli) . В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку дрожжей (например, клетку S. cerevisiae) . В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку насекомого. Примеры клеток-хозяев насекомого могут включать, например, клетки Drosophila (например, клетки S2), клетки Trichoplusia ni
(например, клетки High Five(tm)) и клетки Spodoptera frugiperda
(например, клетки Sf21 или Sf9) . В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего. Примеры клеток-хозяев млекопитающего могут включать, например, клетки эмбриональной почки человека
(например, клетки 2 93 или 2 93, субклонированные для роста в суспензионной культуре), клетки Expi2 93(tm), клетки СНО, клетки почки новорожденного хомячка (например, ВНК, АТСС CCL 10), клетки Сертоли мыши (например, клетки ТМ4), клетки почки обезьяны (например, CV1 АТСС CCL 70), клетки почки африканской зеленой мартышки (например, VERO-76, АТСС CRL-1587), клетки карциномы шейки матки человека (например, HELA, АТСС CCL 2), клетки почки собаки (например, MDCK, АТСС CCL 34), клетки печени крысы линии Buffalo (например, BRL ЗА, АТСС CRL 1442), клетки легкого человека (например, W138, АТСС CCL 75), клетки печени человека (например, Hep G2, НВ 8065), клетки опухоли молочной железы мыши (например, ММТ 060562, АТСС CCL51), клетки TRI, клетки MRC 5, клетки FS4, линию клеток гепатомы человека
(например, Hep G2) и клетки миеломы (например, клетки NS0 и Sp2/0).
[0226] Другие аспекты настоящего изобретения относятся к способу получения любого из связывающих белков, описанных в
данном документе. В некоторых вариантах осуществления способ предусматривает: а) культивирование клетки-хозяина (например, любой из клеток-хозяев, описанных в данном документе), содержащей выделенную нуклеиновую кислоту, вектор и/или векторную систему (например, любое из выделенных нуклеиновых кислот, векторов и/или векторных систем, описанных в данном документе) , в условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует связывающий белок; и Ь) выделение связывающего белка из клетки-хозяина. Способы культивирования клеток-хозяев в условиях, обеспечивающих экспрессию белка, хорошо известны рядовому специалисту в данной области. Способы выделения белков из культивируемых клеток-хозяев хорошо известны рядовому специалисту в данной области, в том числе, например, с помощью аффинной хроматографии (например, двухстадийной аффинной хроматографии, включающей аффинную хроматографию на белке А с последующей эксклюзионной хроматографией). Пути применения связывающих белков
[0227] Связывающие белки можно использовать в любом известном способе анализа, таком как анализы конкурентного связывания, прямые и непрямые сэндвич-анализы и анализы иммунопреципитации для выявления и количественного определения одного или нескольких антигенов-мишеней. Связывающие белки будут связывать один или несколько антигенов-мишеней с аффинностью, которая соответствует используемому способу анализа.
[0228] Для диагностических применений в определенных вариантах осуществления связывающие белки можно метить выявляемым фрагментом. Выявляемый фрагмент может представлять собой любой фрагмент, который способен непосредственно либо опосредованно генерировать выявляемый сигнал. Например, выявляемый фрагмент может представлять собой радиоизотоп, такой как 3Н, 14С, 32Р, 35S, 1251, "Тс, ш1п или 67Ga; флуоресцентное или хемилюминесцентное соединение, такое как изотиоцианат флуоресцеина, родамин или люциферин; или фермент, такой как щелочная фосфатаза, (3-галактозидаза или пероксидаза хрена.
[0229] Связывающие белки также применимы для визуализации
in vivo. Связывающий белок, меченный выявляемым фрагментом, можно вводить животному, предпочтительно в кровоток, и анализировать присутствие и положение меченного антитела в организме хозяина. Связывающий белок можно метить любым фрагментом, который можно выявить в организме животного с помощью ядерного магнитного резонанса, рентгенологического исследования либо с помощью других способов выявления, известных из уровня техники.
[0230] Связывающие белки также можно применять для активации клеток, нацеливания на опухоль, нейтрализации форм активности цитокинов, нейтрализации вирусной инфекции, комбинации нескольких событий передачи сигнала для лечения рака, артрита и/или воспалительных нарушений. Например, в некоторых вариантах осуществления связывающий белок специфически связывает один, два или три антигена-мишени, выбранных из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4
(также известного как VTCN1), В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2 (также известного как МСР-1), CCL3 (также известного как MIP-la), CCL4 (также известного как MIP-lb), CCL5 (также известного как RANTES), CCL7 (также известного как МСР-3), CCL8
(также известного как МСР-2), CCL11 (также известного как эотаксин), CCL15 (также известного как MIP-ld) , CCL17 (также известного как TARC), CCL19 (также известного как MIP-3b), CCL20
(также известного как MIP-3a), CCL21 (также известного как MIP-2), CCL24 (также известного как МР1Е-2/эотаксин-2), CCL25 (также известного как ТЕСК), CCL26 (также известного как эотаксин-3), CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23 (также известного как FCER2, рецептор для IgE), CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80 (также известного как В7-1), CD86 (также известного как В7-2), CD122, CD137 (также известного как 41ВВ), CD137L, CD152
(также известного как CTLA4), CD154 (также известного как CD40L), CD160, CD272, CD273 (также известного как PDL2), CD274
(также известного как PDL1), CD275 (также известного как В7Н2), CD276 (также известного как В7НЗ), CD278 (также известного как ICOS), CD279 (также известного как PD-1), CDH1 (также известного как Е-кадгерин), хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1 (также
известного как M-CSF), CSF-2 (также известного как GM-CSF), CSF-3 (также известного как GCSF), CX3CL1 (также известного как SCYD1), CXCL12 (также известного как SDF1), CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb (также известного как рецептор для IL25) , IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4 (также известного как интегрин Ь4), ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, 0X4О, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2 (также известного как рецептор для IL33), STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP (также известного как корецептор для IL7Ra), TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1 (также известного как GPR5/CCXCR1). В некоторых вариантах осуществления один или несколько вышеуказанных антигенов-мишеней представляют собой антигены-мишени человека.
[0231] В некоторых вариантах осуществления связывающий
белок согласно настоящему изобретению вводят пациенту,
нуждающемуся в этом, для лечения или предупреждения рака.
Например, в некоторых вариантах осуществления связывающий белок
содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень (например, два антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают поверхностные белки Т-клеток, и один антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, или два антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают опухолевые белки-мишени, и один антигенсвязывающий участок, который специфически связывает поверхностный белок Т-клеток). В определенных
вариантах осуществления связывающий белок содержит
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из CD19, CD2 0, CD3 8, Нег2 и LAMP1. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек.
[0232] В некоторых вариантах осуществления связывающий белок согласно настоящему изобретению вводят пациенту, нуждающемуся в этом, для лечения или предупреждения воспалительного заболевания или нарушения. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из IL-4, IL-13 и TNFa. В некоторых вариантах осуществления связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек.
[0233] Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему связывающий белок и другие реагенты, применимые для выявления уровней антигенов-мишеней в биологических образцах. Такие реагенты могут включать выявляемую метку, блокирующую сыворотку крови, образцы положительного и отрицательного контроля и реагенты для выявления. В некоторых вариантах осуществления набор содержит композицию, содержащую любой связывающий белок, полинуклеотид, вектор, векторную систему и/или клетку-хозяина, описанные в данном документе. В некоторых вариантах осуществления набор содержит контейнер и этикетку или листок-вкладыш на контейнере или вместе с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, мешки с раствором для IV-инъекции и т. д. Контейнеры могут быть изготовлены из ряда материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в комбинации с другой композицией является эффективной для лечения, предупреждения и/или диагностирования состояния и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может
представлять собой мешок с раствором для внутривенной инъекции или флакон с пробкой, которую можно проколоть гиподермической иглой для инъекций). В некоторых вариантах осуществления на этикетке или листке-вкладыше указывается, что композиция применяется для предупреждения, диагностирования и/или лечения предпочтительного состояния. Альтернативно или дополнительно изделие или набор может дополнительно содержать второй (или третий) контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), фосфатно-солевой буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Он может дополнительно включать другие вещества, необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в том числе другие буферы, разбавители, наполнители, иглы и шприцы.
Терапевтические композиции на основе связывающих белков и их введение
[0234] Терапевтические или фармацевтические композиции,
содержащие связывающие белки, находятся в пределах объема
настоящего изобретения. Такие терапевтические или
фармацевтические композиции могут содержать терапевтически эффективное количество связывающего белка или конъюгата связывающего белка с лекарственным средством в смеси с фармацевтически или физиологически приемлемым средством для составления, выбранным в соответствии со способом введения.
[0235] Приемлемые вещества для составления предпочтительно являются нетоксичными для получающих их пациентов при используемых дозах и концентрациях.
[0236] Фармацевтическая композиция может содержать вещества
для составления, предназначенные для модификации, поддержания
или сохранения, например, рН, осмолярности, вязкости,
прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности,
стабильности, скорости растворения или высвобождения, всасывания
или проникновения композиции. Подходящие вещества для
составления включают без ограничения аминокислоты (такие как
глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин),
противомикробные средства, антиоксиданты (такие как аскорбиновая
кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия), буферы (такие
как борат, бикарбонат, Tris-HCl, цитраты, фосфаты или другие
органические кислоты), объемообразующие вещества (такие как
маннит или глицин), хелатирующие вещества (такие как
этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA)), комплексообразующие
вещества (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-
циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин),
наполнители, моносахариды, дисахариды и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины), белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины), красители, ароматизаторы и разбавители, эмульгаторы, гидрофильные полимеры
(такие как поливинилпирролидон), низкомолекулярные полипептиды, солеобразующие противоионы (такие как ион натрия), консерванты
(такие как хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая
кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен,
пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода), растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль), сахароспирты (такие как маннит или сорбит), суспендирующие вещества, поверхностно-активные вещества или смачивающие вещества (такие как плюроники; PEG; сложные эфиры сорбита; полисорбаты, такие как полисорбат 2 0 или полисорбат 80; тритон; трометамин; лецитин; холестерин или тилоксапол), вещества, повышающие стабильность (такие как сахароза и сорбит), вещества, повышающие тоничность (такие как галогениды щелочных металлов - предпочтительно хлорид натрия или калия - или маннит, сорбит), среды для доставки, разбавители, вспомогательные вещества и/или фармацевтические адъюванты (см., например, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (18th Ed., A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company 1990) и его последующие издания, которые включены в данный документ посредством ссылки для любой цели).
[0237] Оптимальную фармацевтическую композицию будет определять специалист в данной области в зависимости, например, от предполагаемого пути введения, формата доставки и требуемой дозы. На такие композиции могут оказывать влияние физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость выведения in vivo связывающего белка.
[0238] Основная среда или носитель в фармацевтической композиции могут быть водными либо неводными по своей природе. Например, подходящей средой или носителем для инъекции может быть вода, физиологический солевой раствор или искусственная спинномозговая жидкость, возможно, с добавкой других веществ, общепринятых для композиций для парентерального введения. Нейтральный забуференный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином, представляют собой дополнительные приводимые в качестве примера среды. Другие приводимые в качестве примера фармацевтические композиции содержат буфер Tris со значением рН, составляющим приблизительно 7,0-8,5, или ацетатный буфер со значением рН, составляющим приблизительно 4,0-5,5, который может дополнительно включать сорбит или подходящий заменитель. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиции на основе связывающего белка могут быть получены для хранения в форме лиофилизированной лепешки или водного раствора путем смешивания выбранной композиции с требуемой степенью чистоты с необязательными средствами для составления. Кроме того, связывающий белок может быть составлен в форме лиофилизата с применением подходящих вспомогательных веществ, таких как сахароза.
[0239] Фармацевтические композиции согласно настоящему
изобретению могут предназначаться для парентеральной или
подкожной доставки. Альтернативно композиции могут
предназначаться для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт, например, перорально. Получение таких фармацевтически приемлемых композиций находится в пределах компетенции специалиста в данной области.
[0240] Компоненты состава присутствуют в концентрациях, которые являются приемлемыми для места введения. Например, буферы используют для поддержания значения рН композиции на физиологическом уровне или при немного меньшем значении рН, обычно в диапазоне значений рН от приблизительно 5 до приблизительно 8.
[0241] Если предусмотрено парентеральное введение, то терапевтические композиции для применения могут быть в форме не
содержащего пирогенов приемлемого для парентерального введения водного раствора, содержащего требуемый связывающий белок в фармацевтически приемлемой среде. Особенно подходящей средой для парентеральной инъекции является стерильная дистиллированная вода, с помощью которой связывающий белок составляют в виде стерильного изотонического раствора с подходящими консервантами. Еще один препарат может предусматривать состав на основе требуемой молекулы со средством, таким как инъецируемые микросферы, биоразлагаемые частицы, полимерные соединения (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), гранулы или липосомы, которое обеспечивает контролируемое или замедленное высвобождение продукта, который затем может быть доставлен посредством депо-инъекции. Можно также использовать гиалуроновую кислоту, и она может оказывать эффект обеспечения длительного пребывания в кровотоке. Другие подходящие средства для введения требуемой молекулы включают имплантируемые устройства для доставки лекарственных средств.
[0242] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция может быть составлена для ингаляции. Например, связывающий белок может быть составлен в виде сухого порошка для ингаляции. Растворы для ингаляций на основе связывающего белка можно также составлять с пропеллентом для аэрозольной доставки. В еще одном варианте осуществления растворы можно распылять.
[0243] Также предусматривается, что определенные составы можно вводить перорально. В одном варианте осуществления настоящего изобретения связывающие белки, которые вводят таким способом, можно составлять с такими носителями, которые обычно используют при составлении твердых лекарственных форм, таких как таблетки и капсулы, или без них. Например, капсула может быть предназначена для высвобождения активной части состава в момент попадания в пищеварительный тракт, где биодоступность повышается до максимума, а распад до попадания в системный кровоток сводится к минимуму. Можно включать дополнительные вещества для облегчения всасывания связывающего белка. Также можно использовать разбавители, ароматизаторы, легкоплавкие воски, растительные масла, смазывающие вещества, суспендирующие
средства, средства для улучшения распадаемости таблеток и связующие средства.
[0244] Другая фармацевтическая композиция может включать эффективное количество связывающих белков в смеси с нетоксичными вспомогательными веществами, которые являются подходящими для изготовления таблеток. Путем растворения таблеток в стерильной воде или другой подходящей среде можно получить растворы в форме со стандартной дозой. Подходящие вспомогательные вещества включают без ограничения инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат или бикарбонат натрия, лактоза или фосфат кальция; или связующие вещества, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; или смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк.
[0245] Дополнительные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению будут очевидны специалистам в данной области, в том числе составы, включающие связывающие белки, в форме с замедленной или контролируемой доставкой. Методики составления ряда других средств с замедленной или контролируемой доставкой, таких как липосомные носители, биоразлагаемые микрочастицы или пористые гранулы и формы для депо-инъекций, также известны специалистам в данной области. Дополнительные примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые полимерные матрицы в форме изделий определенной формы, например, пленок или микрокапсул. Матрицы с замедленным высвобождением могут включать сложные полиэфиры, гидрогели, полилактиды, сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, поли(2-гидроксиэтилметакрилат), этиленвинилацетат или поли-D(-)-3-гидроксимасляную кислоту. Композиции с замедленным высвобождением также могут включать липосомы, которые можно получить любым из нескольких известных из уровня техники способов.
[024 6] Фармацевтические композиции, подлежащие применению для введения in vivo, обычно должны быть стерильными. Этого можно достичь путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны. Если композиция является лиофилизированной, то стерилизация с помощью этого способа может быть проведена либо
до, либо после лиофилизации и восстановления. Композиция для парентерального введения может храниться в лиофилизированной форме или в форме раствора. Кроме того, композиции для парентерального введения, как правило, помещают в контейнер, имеющий стерильное входное отверстие, например, мешок с раствором для внутривенной инъекции или флакон с пробкой, которую можно проколоть гиподермической иглой для инъекций.
[0247] После того как фармацевтическая композиция составлена, ее можно хранить в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества или в виде обезвоженного или лиофилизированного порошка. Такие составы можно хранить либо в готовой к применению форме, либо в форме (например, лиофилизированной), требующей восстановления перед введением.
[0248] Настоящее изобретение также охватывает наборы для получения единицы для однократного введения дозы. Каждый из наборов может содержать как первый контейнер с высушенным белком, так и второй контейнер с водным составом. В объем настоящего изобретения также включены наборы, содержащие одно- и многокамерные предварительно заполненные шприцы (например, шприцы с жидкостью и шприцы с лиофилизатом).
[024 9] Эффективное количество фармацевтической композиции на основе связывающего белка, подлежащей терапевтическому применению, будет зависеть, например, от терапевтического случая и целей. Специалисту в данной области будет понятно, что подходящие уровни доз для лечения будут, таким образом, меняться отчасти в зависимости от доставляемой молекулы, показания, в соответствии с которым будут применять связывающий белок, пути введения и метрических характеристик (массы тела, поверхности тела или размера органа) и состояния (возраста и общего состояния здоровья) пациента. Соответственно врач может подобрать дозу и видоизменить путь введения для получения оптимального терапевтического эффекта.
[0250] Частота дозирования будет зависеть от фармакокинетических параметров связывающего белка в составе, подлежащем применению. Обычно врач будет вводить композицию до
тех пор, пока доза не достигнет такого уровня, при котором достигается необходимый эффект. Следовательно, композицию можно вводить в виде однократной дозы, в виде двух или более доз (которые могут содержать одинаковое количество требуемой молекулы или могут не содержать его) в течение определенного периода времени или в виде непрерывной инфузии посредством имплантируемого устройства или катетера. Дополнительное уточнение подходящей дозировки выполняется стандартным способом рядовыми специалистами в данной области и находится в диапазоне задач, которые они обычно выполняют. Подходящие дозировки можно определять с помощью соответствующих данных о дозозависимом ответе.
[0251] Путь введения фармацевтической композиции
соответствует известным способам, например, перорально;
посредством инъекции с помощью внутривенного,
интраперитонеального, интрацеребрального
(интрапаренхиматозного), интрацеребровентрикулярного,
внутримышечного, внутриглазного, внутриартериального,
интрапортального или внутриочагового путей; с помощью систем с замедленным высвобождением или с помощью имплантируемых устройств. При необходимости композиции можно вводить в виде болюсной инъекции или непрерывно путем инфузии или с помощью имплантируемого устройства.
[0252] Композицию также можно вводить местно посредством имплантации мембраны, губки или другого подходящего материала, в который необходимая молекула была поглощена или инкапсулирована. Если применяют имплантируемое устройство, то устройство можно имплантировать в любую подходящую ткань или орган, и доставка требуемой молекулы может осуществляться посредством диффузии, болюсного введения с регулируемым во времени высвобождением или непрерывного введения.
[0253] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу предупреждения и/или лечения пролиферативного заболевания или нарушения (например, рака). В некоторых вариантах осуществления способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере
одного из связывающих белков, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят в комбинации с одним или несколькими противораковыми терапевтическими средствами (например, любым противораковым терапевтическим средством, известным из уровня техники). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят перед одним или несколькими противораковыми терапевтическими средствами. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят одновременно с одним или несколькими противораковыми терапевтическими средствами. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят после одного или нескольких антиретровирусных терапевтических средств.
[0254] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу предупреждения и/или лечения воспалительного заболевания или нарушения (например, рака). В некоторых вариантах осуществления способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного из связывающих белков, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят в комбинации с одним или несколькими противовоспалительными терапевтическими средствами (например, любым противовоспалительным терапевтическим средством, известным из уровня техники). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят перед одним или несколькими противовоспалительными терапевтическими средствами. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят одновременно с одним или несколькими противовоспалительными терапевтическими средствами. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один связывающий белок вводят после одного или нескольких противовоспалительных терапевтических средств.
[0255] Без ограничения настоящего изобретения ряд вариантов осуществления настоящего изобретения описан ниже с целью
иллюстрации.
[0256] Пункт 1. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHi [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0257] Пункт 2. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ьз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [И] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
[0258] Пункт 3. Связывающий белок по пункту 1, где вторая и/или третья полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0259] Пункт 4. Связывающий белок по любому из пунктов 1-3, где по меньшей мере один из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0260] Пункт 5. Связывающий белок по любому из пунктов 1-3, где каждый из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
[0261] Пункт б. Связывающий белок по любому из пунктов 1-3 и п. 5, где (а) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148); или (b) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148).
[0262] Пункт 7. Связывающий белок по любому из пунктов 1-5,
где
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(a)
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0263] Пункт 8. Связывающий белок по любому из пунктов 1-7, где связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени.
[0264] Пункт 9. Связывающий белок по любому из пунктов 1-8, где связывающий белок специфически связывает три белка-мишени, которые соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному опухолевому белку-мишени.
[0265] Пункт 10. Связывающий белок по пункту 9, где один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD3.
[0266] Пункт 11. Связывающий белок по пункту 9 или пункту 10, где один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD28.
[0267] Пункт 12. Связывающий белок по любому из пунктов 911, где указанный опухолевый белок-мишень представляет собой CD38 .
[0268] Пункт 13. Связывающий белок по любому из пунктов 18, где связывающий белок специфически связывает три белка-мишени, которые соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному белку-мишени, выбранному из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРОазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A,
FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Тр55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[0269] Пункт 14. Связывающий белок по любому из пунктов 113, где связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней.
[0270] Пункт 15. Связывающий белок по пункту 14, где один или несколько белков-мишеней выбраны из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3bi-l, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP,
TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[0271] Пункт 16. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHi [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59,
123-125, 138-140, и 149; и
где:
(a) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166; или
(b) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ
ID N0: 25-42, 120-122, и 126-128.
[0272] Пункт 17. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VL1_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ь3-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Сн3 [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина ;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Сн2; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, и 167; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59,
123-125, 138-140, и 149; и
где:
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, и 166; или
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ
ID N0: 25-42, 120-122, и 126-128.
[0273] Пункт 18. Связывающий белок по пункту 16, где вторая
и/или третья полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0274] Пункт 19. Связывающий белок по любому из пунктов 1618, где по меньшей мере один из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0275] Пункт 20. Связывающий белок по любому из пунктов 1618, где каждый из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
[0276] Пункт 21. Связывающий белок по любому из пунктов 1618 и п. 20, где (а) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148) ; или (b) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148) .
[0277] Пункт 22. Связывающий белок по любому из пунктов 1620, где:
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID
NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0278] Пункт 23. Связывающий белок по любому из пунктов 1622, где:
(a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 0;
VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID NO: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 25, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 26, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 27;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 43, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 45;
(b) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51; VH2 содержит
(a)
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 3 6; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45;
(с) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57;
(d) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57;
(e) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
(d)
последовательность под SEQ ID NO: 3 6; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59;
(f) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33;
VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 40, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 41, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 42;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 59;
( последовательность под SEQ ID NO: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 0;
(h) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 0;
(i) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125; или
(j) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 50, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID NO: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 12 0, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 121, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 122;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 125.
[0279] Пункт 24. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II]
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHi [III]
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи
иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где:
(a) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 169, 171 и 173; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
141-147, 178 и 179;
где:
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 168, 170 и 172; или
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID NO: 129-137.
[0280] Пункт 25. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих
участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL2-Li-VLi_L2-CL [I]
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VHi-L3-VH2-L4-CHi-mapmip-CH2-CH3 [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iHapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: vL3-cL [IV] где:
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина ;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина ;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина ;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Llf L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь; где:
(a) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 169, 171 и 173; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
141-147, 178 и 179;
где:
(a) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 168, 170 и 172; или
(b) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID NO: 129-137.
[0281] Пункт 26. Связывающий белок по пункту 24, где вторая и/или третья полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
[0282] Пункт 27. Связывающий белок по любому из пунктов 242 6, где по меньшей мере один из Li, L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0283] Пункт 28. Связывающий белок по любому из пунктов 242 6, где каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
[0284] Пункт 29. Связывающий белок по любому из пунктов 242 6 и п. 28, где (а) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148) ; или (b) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо содержит
последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID
NO: 148) .
[0285] Пункт 30. Связывающий белок по любому из пунктов 2428, где:
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
[0286] Пункт 31. Связывающий белок по любому из пунктов 2430, где:
(a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142;
(b) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142;
(c) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(d) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2
(c)
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(е) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
(f) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
(g) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2
(f)
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(h) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
(i) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; или
(j) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 144.
[0287] Пункт 32. Связывающий белок по любому из пунктов 1, 3-16, 18-24 и 26-31, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V.
[0288] Пункт 33. Связывающий белок по любому из пунктов 1, 3-16, 18-24 и 26-31, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4
человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W.
[0289] Пункт 34. Связывающий белок по любому из пунктов 1,
3- 16, 18-24 и 26-33, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S.
[0290] Пункт 35. Связывающий белок по любому из пунктов 2,
4- 15, 17, 19-23, 25 и 27-31, где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V.
[0291] Пункт 36. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 4-15, 17, 19-23, 25 и 27-31, где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены
представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W.
[0292] Пункт 37. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 4-15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35 и 36, где домены Снз как второй, так и третьей полипептидных цепей содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S.
[0293] Пункт 38. Связывающий белок по любому из пунктов 1,
3- 16, 18-24 и 26-34, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl или IgG4 человека; и где только одна из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F.
[0294] Пункт 39. Связывающий белок по любому из пунктов 2,
4- 15, 17, 19-23, 25, 27-31 и 35-37, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl или IgG4 человека, и где только один из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F.
[0295] Пункт 40. Связывающий белок по любому из пунктов 1, 3-16, 18-24, 26-34 и 38, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область
иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 22 8 и 4 09 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K.
[0296] Пункт 41. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 4-15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35-37 и 39, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgG4 человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 22 8 и 4 09 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K.
[0297] Пункт 42. Связывающий белок по любому из пунктов 1,
3- 16, 18-24, 26-34, 38 и 40, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 2 34 и 2 35 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A.
[0298] Пункт 43. Связывающий белок по любому из пунктов 2,
4- 15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35-37, 39 и 41, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgG4 человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 2 34 и 2 35 IgG4
человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A.
[0299] Пункт 44. Связывающий белок по любому из пунктов 1,
3- 16, 18-24, 26-34, 38 и 40, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 2 34 и 2 35 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A.
[0300] Пункт 45. Связывающий белок по любому из пунктов 2,
4- 15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35-37, 39 и 41, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 2 34 и 2 35 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A.
[0301] Пункт 46. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 4-15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35-37, 39, 41, 43 и 45, где VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, где VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, и где VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека.
[0302] Пункт 47. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 4-15, 17, 19-23, 25, 27-31, 35-37, 39, 41, 43 и 45, где VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, где VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает CD3 человека, и где VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека.
[0303] Пункт 48. Связывающий белок по пункту 4 6 или пункту 47, где третий антигенсвязывающий участок специфически связывает опухолевый белок-мишень человека, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1.
[0304] Пункт 49. Связывающий белок по любому из пунктов 4 648, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 152, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 153; или
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 154, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 155.
[0305] Пункт 50. Связывающий белок по любому из пунктов 4 64 9, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 160, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 161; или
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 162, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 163.
[0306] Пункт 51. Связывающий белок по любому из пунктов 4650, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит:
(а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 156, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 157;
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 158, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 159;
(c) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 164, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 165;
(d) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 150, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 151; или
(e) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 166, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 167.
[0307] Пункт 52. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 17, 35-37, 39, 41, 43 и 45, где:
(a) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека;
(b) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека;
(c) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека;
(a)
(d) VHI и VLI образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека;
(e) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека; или
(f) VHI и VLI образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека.
[0308] Пункт 53. Связывающий белок по пункту 52, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 168, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 169.
[0309] Пункт 54. Связывающий белок по пункту 52 или пункту 53, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 0, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 171.
[0310] Пункт 55. Связывающий белок по любому из пунктов 5254, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 172, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 173.
[0311] Пункт 56. Связывающий белок по любому из пунктов 155, где:
(a) домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или
(b) домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, и домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека.
[0312] Пункт 57. Связывающий белок по любому из пунктов 2, 17, 25, 35-37, 39, 41 и 43-55, где первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и где четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи.
[0313] Пункт 58. Связывающий белок, содержащий первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь, третью полипептидную цепь и четвертую полипептидную цепь, где:
(а) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 2;
(b) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 2;
(c) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 14;
(d) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая
(b)
полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14;
(e) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(f) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
(e)
95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(g) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 22;
(h) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 22;
(i) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 61;
(j) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 61;
(к) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной
последовательности под SEQ ID NO: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 71 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 71;
(1) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 7 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 7 6; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 75 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 75; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(m) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 82 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 82; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 81 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 81; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(п) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 8 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 88; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 87 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 87; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(о) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 94 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 94; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 93 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 93; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(р) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая
полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 7 3; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(q) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(г) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 7 3; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(s) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(t) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 115; или
(и) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 115.
[0314] Пункт 59. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую связывающий белок по любому из пунктов 1-58.
[0315] Пункт 60. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по пункту 59.
[0316] Пункт 61. Выделенная клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по пункту 59.
[0317] Пункт 62. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по пункту 60.
[0318] Пункт 63. Выделенная клетка-хозяин по пункту 61 или пункту 62, где клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего или клетку насекомого.
[0319] Пункт 64. Фармацевтическая композиция, содержащая связывающий белок по любому из пунктов 1-58 и фармацевтически приемлемый носитель.
[0320] Пункт 65. Способ предупреждения и/или лечения рака у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного связывающего белка по любому из пунктов 1-23 и 32-58 или фармацевтической композиции по пункту 64.
[0321] Пункт 66. Способ по пункту 65, где связывающий белок содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень.
[0322] Пункт 67. Способ по пункту 66, где связывающий белок содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD2 0, CD3 8, Нег2 и LAMP1.
[0323] Пункт 68. Способ по любому из пунктов 65-67, где по меньшей мере один связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим средством.
[0324] Пункт 69. Способ предупреждения и/или лечения воспалительного заболевания или нарушения у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного связывающего белка по любому из пунктов 115, 24-45 и пунктов 52-58 или фармацевтической композиции по пункту 64.
[0325] Пункт 70. Способ по пункту 69, где связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa.
[0326] Пункт 71. Способ по пункту 69 или пункту 70, где по меньшей мере один связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством.
[0327] Пункт 72. Способ по любому из пунктов 65-71, где пациентом является человек.
[0328] Пункт 73. Способ по пункту 65 или пункту 69, где связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней, выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122,
CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3bi-l, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, Syk-киназы, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1 .
[0329] Пункт 74. Связывающий белок по любому из пунктов 123 и 32-58 или композиция по пункту 64 для применения в предупреждении и/или лечении рака у пациента.
[0330] Пункт 75. Связывающий белок для применения или
композиция для применения по пункту 74, где связывающий белок
содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически
связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой
антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень.
[0331] Пункт 76. Связывающий белок для применения или композиция для применения по пункту 75, где связывающий белок содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD2 0, CD3 8, Нег2 и LAMP1.
[0332] Пункт 77. Связывающий белок для применения или композиция для применения по любому из пунктов 7 4-7 6, где связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим
средством.
[0333] Пункт 78. Связывающий белок по любому из пунктов 115, 24-45 и 52-58 или фармацевтическая композиция по пункту 64 для применения в предупреждении и/или лечении воспалительного заболевания или нарушения у пациента.
[0334] Пункт 79. Связывающий белок для применения или композиция для применения по пункту 78, где связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa.
[0335] Пункт 80. Связывающий белок для применения или композиция для применения по пункту 7 8 или пункту 79, где связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством.
[0336] Пункт 81. Связывающий белок для применения или композиция для применения по любому из пунктов 74-80, где пациентом является человек.
[0337] Пункт 82. Связывающий белок для применения или композиция для применения по пункту 7 4 или пункту 78, где связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней, выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1, эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35,
ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PR0M1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
[0338] Пункт 83. Способ очистки связывающего белка, вырабатываемого клеткой-хозяином, включающий:
(a) получение связывающего белка по любому из пунктов 2, 17, 25, 35-37, 41, 43, 45 и 46-55 в клетке-хозяине, где только один из домена Снз второй полипептидной цепи и домена Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F;
(b) приведение связывающего белка, полученного на (а) , в контакт с белком А и
(c) элюирование связывающего белка с белка А в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих 0 либо 2 домена Снз/ содержащих аминокислотные замены H435R и Y436F, с очисткой таким образом связывающего белка.
[0339] Пункт 84. Способ по пункту 83, где домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает:
(с!) приведение связывающего белка, элюированного на (с) , в контакт с аффинной средой для легких цепей каппа и
(е) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких цепей каппа в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей.
[0340] Пункт 85. Способ по пункту 84, дополнительно включающий после (е):
(f) приведение связывающего белка, элюированного на (е) , в контакт с аффинной средой для легких цепей лямбда и
(д) элюирование связывающего белка из аффинной среды для
легких цепей лямбда
в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL каппа-цепей.
[0341] Пункт 86. Способ по пункту 83, где домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает:
(с!) приведение связывающего белка, элюированного на (с) , в контакт с аффинной средой для легких цепей лямбда и
(е) элюирование связывающего белка из аффинной среды для
легких цепей лямбда в условиях, подходящих для отделения
связывающего белка от связывающих белков, содержащих только
домены CL каппа-цепей.
[0342] Пункт 87. Способ по пункту 8 6, дополнительно включающий после (е):
(f) приведение связывающего белка, элюированного на (е) , в контакт с аффинной средой для легких цепей каппа и
(д) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких цепей каппа
в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей.
[0343] Пункт 88. Способ по любому из пунктов 83-87, где первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; где домен Снз третьей
полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и где четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи.
[0344] Пункт 89. Способ по любому из пунктов 83-8 8, где связывающий белок выявляют на одной или нескольких из (с) и (е) с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC).
[0345] Пункт 90. Способ по любому из пунктов 83-89, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl или IgG4 человека.
ПРИМЕРЫ
[034 6] Приведенные ниже примеры иллюстрируют конкретные варианты осуществления настоящего изобретения и различные варианты их применения. Они приведены только для пояснительных целей, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем настоящего изобретения. Пример 1. Материалы и способы
[0347] Следующие материалы и способы применяли в экспериментах, описанных в примерах 2-5.
Конструкция триспецифических антител
[0348] Схематическая иллюстрация общей конструкции триспецифических антител проиллюстрирована на фиг. 1А-1С.
Отдельные триспецифические антитела конструировали на основании 5 параметров: 1) отбора связывающих участков антитела; 2) учета положения каждого связывающего участка; 3) выбора линкеров для биспецифического связывающего плеча (т. е. тяжелой цепи/легкой цепи В на фиг. 1С) ; 4) внедрения мутаций по типу "выступа" и "впадины" в соответствующие половины антитела; 5) выбора изотипа Fc (IgGl или IgG4). После сборки аминокислотных последовательностей для каждой триспецифической молекулы синтезировали четыре гена для каждого триспецифического Ab с использованием кодонов, предпочтительных для человека (CambrY Applied Biosciences, Кембридж, Массачусетс, США), и клонировали в вектор экспрессии для эукариотических клеток.
Получение и очистка триспецифических антител
[034 9] Триспецифические антитела получали посредством транзиентной трансфекции клеток Expi2 93 4 экспрессионными плазмидами с помощью набора для трансфекции ExpiFectamine(tm) 2 93
(Thermo Fisher Scientific) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, 25% (вес/вес) каждой плазмиды разбавляли в Opti-MEM, смешивали с предварительно разбавленным реагентом ExpiFectamine в течение 20-30 минут при комнатной температуре
(RT) и добавляли в клетки Expi293 (2,5х106 клеток/мл). Часто применяли оптимизацию трансфекции для определения наилучшего соотношения плазмид в целях получения триспецифического антитела с хорошим выходом и чистотой.
[0350] Через 4-5 дней после трансфекции надосадочную жидкость культуры трансфицированных клеток собирали и фильтровали через фильтрующий блок на 0,45 мкм (Nalgene). Триспецифическое антитело в надосадочной жидкости очищали с помощью 3-стадийной процедуры. На первой стадии применяли аффинную очистку с помощью белка А, и связанное Ab элюировали с помощью "буфера для элюирования IgG" (Thermo Fisher Scientific). На второй стадии продукт подвергали диализу против PBS (рН 7,4) в течение ночи с 2 заменами буфера PBS. Любой осадок очищали путем фильтрации через фильтрующий блок на 0,45 мкм (Nalgene) перед следующей стадией. На третьей стадии применяли очистку с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) (Hiload 16/600 Superdex 200 pg или Hiload 26/600 Superdex 200 pg, GE Healthcare) для удаления агрегатов и других структур в препарате. Фракции анализировали с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях для идентификации фракций, содержащих мономерное триспецифическое антитело, перед их объединением. Очищенное антитело можно разделить на аликвоты и хранить при -8 0°С в течение длительного срока.
ELISA-анализы
[0351] Свойства связывания очищенных антител анализировали с помощью способов или ELISA, или SPR. Для ELISA использовали соответствующие антигены для каждого связывающего участка в
триспецифическом антителе для покрывания 9б-луночного Immuno Plate (Nunc 439454, Thermo Fisher Scientific) в течение ночи при 4°С с использованием 2 мкг/мл каждого антигена в PBS (рН 7,4) . Покрытый планшет блокировали с помощью 5% обезжиренного молока+2% BSA в PBS в течение одного часа при RT с последующим трехкратным промыванием в PBS+0,25% Tween 20 (Aqua Max 400, Molecular Devices). Антитела (триспецифические и контрольные Ab) получали в серийном разведении и добавляли в планшеты для ELISA
(100 мкл/лунка в двух повторностях), инкубировали при RT в течение часа с последующим 5-кратным промыванием с помощью PBS+0,25% Tween 20.
[0352] После промывания в каждую лунку добавляли вторичное антитело к Fab человека, конъюгированное с HRP (1:5000, № по кат. 109-035-097, Jackson ImmunoResearch Inc), и инкубировали при RT в течение 3 0 минут. После 5-кратного промывания с помощью PBS+0,25% Tween 20 в каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата пероксидазы ТМВ для микролунок (KPL, Гейтерсберг, Мэриленд, США) . Реакцию прекращали путем добавления 50 мкл 1 М H2S04 и OD450 измеряли с помощью SpectraMax М5 (Molecular Devices) и анализировали с помощью программного обеспечения SoftMax Ргоб.З
(Molecular Devices). Окончательные данные переносили в программное обеспечение GraphPad Prism (GraphPad Software, Калифорния, США) и откладывали на графике, как показано. ЕС50 рассчитывали с помощью того же программного обеспечения. Анализы SPR
[0353] Для полного кинетического анализа отбирали две пары тяжелых и легких цепей. Получение кинетических характеристик очищенных антител выполняли с помощью технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) на BIACORE 3000 (GE Healthcare). Применяли анализ захвата с использованием захвата антителами, специфичными к метке, и ориентации исследуемых антител. Для захвата белковых конструкций, содержащих Fc, использовали набор для захвата антител человека (GE Healthcare), а для захвата белковых конструкций, содержащих His-метку, использовали набор для захвата His-меченых молекул (GE Healthcare). Захватывающее
антитело иммобилизовали посредством первичных аминогрупп (11000 RU) на чипе СМ5 высокой чистоты (GE Life Sciences) с помощью стандартных процедур. Анализируемое антитело захватывали при скорости потока 10 мкл/мин. со скорректированным значением RU, что должно было давать в результате максимальный сигнал связывания с аналитом, обычно составляющий 3 0 RU.
[0354] Для приводимого в качестве примера анализа рекомбинантные IL13 человека (№ по каталогу IL012) и IL4 человека (№ по каталогу IL004) приобретали у Millipore, рекомбинантный TNFa человека (№ по каталогу Н8 916) приобретали у Sigma Aldrich. Измеряли кинетические параметры связывания с рекомбинантными IL4 и IL13 человека в диапазоне концентраций от 0,1 до 3 нМ для IL4 и от 0,8 до 25 нМ для IL13. Для TNFa человека использовали диапазон концентраций от 3 до 100 нМ. В качестве аналитического буфера использовали HBS-EP (10 мМ HEPES, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA и 0, 005% поверхностно-активное вещество Р20) при скорости потока 30 мкл/мин. Поверхности чипов подвергали регенерации с помощью регенерирующего раствора из соответствующего набора для захвата. Кинетические параметры анализировали и рассчитывали с помощью пакета программ BIAevaluation v4.1 с использованием проточной кюветы без захваченного антитела в качестве эталона и модели Ленгмюра для связывания 1:1 с переносом массы. Для изучения одновременного связывания антигенов триспецифические антитела захватывали с помощью поверхности для захвата антителами к иммуноглобулинам человека. Антигены использовали в единственных концентрациях 3 нМ для IL4, 2 5 нМ для IL13 и 100 нМ для TNFa. Для демонстрации одновременного связывания всех трех антигенов вводили смесь IL4, IL13 и TNFa. В отдельных циклах анализов IL13 вводили отдельно с последующим введением IL4 либо TNFa и после этого совместно вводили IL4/TNFa либо совместно вводили TNFa/IL4. Конечные ответы, измеренные в каждом цикле, сравнивали для демонстрации сходства последовательного связывания двух либо трех антигенов и одновременного связывания смеси всех трех антигенов.
Анализы активации и пролиферации Т-клеток in vitro
[0355] РВМС человека очищали от лейкоцитарной пленки, приобретенной у Blood Research Component (Бруклин, Массачусетс, США) , с помощью способа с использованием Ficoll-Paque Plus. Вкратце, свежую лейкоцитарную пленку вначале разбавляли в соотношении 1:3 в PBS (рН 7,4) и тщательно смешивали с раствором Ficoll-Paque Plus (фиколл) перед использованием путем переворачивания бутылки несколько раз. В каждую пробирку Leucosep(r) добавляли 15 мл среды с градиентом плотности и центрифугировали в течение 3 0 с при 1000 х g и RT. Среда теперь находилась ниже пористой перегородки. 30-40 мл разбавленной лейкоцитарной пленки затем осторожно вливали в каждую пробирку Leucosep и центрифугировали при 8 00 х g в течение 15 минут при комнатной температуре с отключением торможения и максимальным ускорением на уровне 5. Слой плазмы крови удаляли, а оставшуюся часть надосадочной жидкости, обогащенную содержащимися в ней РВМС, переносили в новую пробирку (пробирка Leucosep не удерживалась в перевернутом положении в течение больше чем 2 секунд) . РВМС в обогащенной ими фракции промывали в 4 5 мл PBS и осаждали путем центрифугирования при 250 х g в течение 10 минут при комнатной температуре. Промывание повторяли, и содержимое нескольких пробирок объединяли в одной пробирке. Клетки ресуспендировали в 2 0 мл PBS и подсчитывали с помощью Bio-Rad ТС20 .
[0356] Для настройки анализа активации Т-клеток in vitro очищенные РВМС человека ресуспендировали в культуральной среде (RPMI164 0 с 10% FBS, дополненной глутамином/стрептомицином) (Thermo Fisher Scientific) (106 клеток/мл). Различные триспецифические и контрольные антитела в указанных концентрациях добавляли в каждую лунку или использовали для покрывания планшета перед использованием, как описано в Stebbings, R. et al. (2007) J. Immunol. 179:3325-3331, и инкубировали в течение 16-24 часов в инкубаторе для культивирования тканей. Клетки осаждали путем центрифугирования и собирали надосадочную жидкость для измерения высвобождения цитокинов либо сливали. Клетки окрашивали флуоресцентно
меченными антителами для выявления маркеров Т-клеток (CD3, CD4, CD8 и т. д.) и маркеров активации (CD69, CD62L и т. д.) и анализировали путем прогона образцов на проточном цитометре Fortessa (Beckton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния) с последующим анализом с помощью программного обеспечения FlowJo (FlowJo vlO), и данные откладывали на графике, как показано.
[0357] Для настройки анализа пролиферации Т-клеток in vitro очищенные РВМС человека ресуспендировали в культуральной среде (RPMI164 0 с 10% FBS, дополненной глутамином/стрептомицином) (Thermo Fisher Scientific) (106 клеток/мл). В каждую лунку добавляли различные триспецифические и контрольные антитела в указанных концентрациях и инкубировали в течение 1-7 дней в инкубаторе для культивирования тканей. Клетки осаждали путем центрифугирования, и надосадочную жидкость собирали для измерения высвобождения цитокинов либо сливали. Клетки окрашивали флуоресцентно меченными антителами для выявления маркеров Т-клеток (CD3, CD4, CD8 и т. д.) и маркеров активации (CD69, CD62L ит. д.) и анализировали путем прогона образцов на проточном цитометре Fortessa (Beckton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния) с последующим анализом с помощью программного обеспечения FlowJo (FlowJo vlO), и данные откладывали на графике, как показано.
Анализ уничтожения клеток in vitro
[0358] Очищенные РВМС человека использовали для анализов уничтожения различных раковых клеток in vitro с помощью различных триспецифических антител. Вкратце, анализ уничтожения настраивали в 9б-луночном планшете с V-образным дном лунок. 4 0 мл РВМС от каждого донора высевали на каждый планшет при 2x10Лб клеток/мл и подготавливали 3 0 мл клеток-мишеней, меченных РКН2 6 (Sigma, № MINI26), при 2,5х10Л5 клеток/мл (4 мкл красителя для окрашивания до 1х10Л7 клеток). В каждую лунку вначале добавляли 2 0 мкл/лунка тестируемых белков в различных концентрациях или РМА с последующим добавлением 8 0 мкл/лунка меченых клеток-мишеней в каждую лунку (2х10л4 клеток/лунка). Затем в каждую лунку добавляли 100 мкл РВМС с достижением в лунке Е:Т=10:1
(2х10л5 клеток/лунка) и инкубировали в течение 24 часов в инкубаторе при 37°С и 5% С02. Клетки осаждали путем центрифугирования и собирали надосадочную жидкость для измерения высвобождения цитокинов либо сливали. Клетки окрашивали фиксируемым фиолетовым окрашивающим буфером для мертвых клеток Vivid LIVE/DEAD(tm) (Life Technology, № L34955) (окрашивающий буфер получали путем добавления 60 мкл реагента Vivid в 60 мл PBS) . Клетки ресуспендировали в 100 мкл окрашивающего буфера путем инкубирования в течение 15 мин. при RT в темноте. После промывания клеток в 1 х PBS клетки ресуспендировали в 2 00 мкл PBS с 0,5% параформальдегидом, а данные о РКН2 6+ Vivid+ раковых клетках собирали с помощью проточного цитометра Fortessa
(Beckton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния) с последующим анализом с применением программного обеспечения FlowJo. Процентную величину уничтожения рассчитывают как "специфическое уничтожение-спонтанное уничтожение/общее количество клеток" и откладывают на графике, как показано. Анализ высвобождения цитокинов
[0359] Для измерения концентраций воспалительных цитокинов в анализах активации in vitro, анализах уничтожения in vitro, анализах активации in vivo у мышей NSG, гуманизированных с помощью CD34+ клеток пуповинной крови, и исследовании токсичности собирали надосадочную жидкость культуры клеток и образцы сыворотки крови разбавляли в соответствии с протоколом производителя с использованием высокочувствительного 13-плексного набора Milliplex для Т-клеток человека (EMD Millipore). Затем их анализировали с помощью системы EMD Millipore MAGPIX(r) и программного обеспечения MILLIPLEX(r) Analyst 5.1.
Мьшиные модели и исследования эффективности in vivo
[0360] Мышей NSG, которым трансплантировали CD34+
гемопоэтические стволовые клетки человека (hu-CD34),
использовали в качестве мышиной модели in vivo. У этих мышей
развиваются мультилинейные иммунные клетки человека, и они
представляют собой валидированную платформу для
иммуноонкологических исследований эффективности (см., например, Shultz, L.D. et al. (2014) Cold Spring Harb. Protoc. 2014:694708) . Hu-CD34+ мышей NSG получают путем инъекции CD34 + гемопоэтических стволовых клеток, что демонстрирует эффективную трансплантацию мультилинейных популяций иммунных клеток человека, в том числе Т-клеток, В-клеток и некоторых других популяций (McDermott, S.P. et al. (2010) Blood 116:193-200). Мультилинейный гемопоэз происходит в течение периода 12 недель. Трансплантация является устойчивой в течение более одного года без реакции "трансплантат против хозяина".
[0361] Для исследования эффективности с использованием мышей NSG hu-CD34 мышей приобретали у The Jackson Laboratory
(Мэн, США), а популяции клеток человека валидировали перед использованием. Как правило, для инокуляции опухоли каждой мыши использовали 5x106 опухолевых клеток, смешанных с Matrigel (BD Biosciences) (50% об./об.). После достижения опухолью размера в диапазоне 100-150 мм3 мышей отбирали и рандомизировали в каждую группу для исследования. Антитела давали внутривенно в указанных дозах 3 раза в неделю. Массу тела отслеживали 1-3 раза в неделю. Размер опухоли измеряли путем измерений опухоли штангенциркулем 1-3 раза/неделя. Всех мышей умерщвляли при достижении опухолью размера 1500 мм3 или через 24 часа после введения последней дозы. Образцы терминальной крови (0,3 мл) собирали в пробирки для отделения сыворотки крови, перемешивали путем осторожного пятикратного переворачивания и помещали в штатив для пробирок. Терминальные опухоли также собирали и взвешивали перед помещением в фиксатор для иммуногистохимического анализа.
[0362] Мышей NSG, гуманизированных с помощью РВМС человека
(hu-PBMC), использовали в качестве другой мышиной модели in
vivo. Этих мышей получают путем инъекции очищенных РВМС человека
от здоровых доноров, которые характеризуются наиболее короткими
сроками приживления трансплантата при использовании зрелых
мононуклеарных клеток периферической крови и позволяют проводить
краткосрочные исследования, требующие усиленного
функционирования эффекторных Т-клеток и Т-клеток памяти и NK
клеток, и они подходят для краткосрочного исследования эффективности (3-4 недели) ввиду реакции "трансплантат против хозяина".
[0363] Для исследования эффективности с использованием мышей NSG hu-PBMC мышей NSG в возрасте 8-10 недель (№ по кат.: 005557, NOD.Cg-Prkdcscid I12rgtmlWj1/SzJ) приобретали у The Jackson Laboratory (Мэн, США) . Каждой мыши инокулировали 5x106 опухолевых клеток, смешанных с Matrigel (BD Biosciences) (50% об./об.). После достижения опухолью размера в диапазоне 50-100 мм3 каждую мышь подвергали восстановлению с помощью 10x1О6 РВМС человека от здорового донора. Восстановление с помощью клеток человека подтверждали на следующий день. После достижения опухолью размера в диапазоне 100-150 мм3 мышей отбирали и рандомизировали в каждую группу для исследования. Антитела давали внутривенно в указанных дозах 3 раза в неделю. Массу тела отслеживали 1-3 раза в неделю. Размер опухоли измеряли путем измерений опухоли штангенциркулем 1-3 раза/неделя. Всех мышей умерщвляли при достижении опухолью размера 150 0 мм3 или через 2 4 часа после введения последней дозы. Образцы терминальной крови (0,3 мл) собирали в пробирки для отделения сыворотки крови, перемешивали путем осторожного пятикратного переворачивания и помещали в штатив для пробирок. Терминальные опухоли также собирали и взвешивали перед помещением в фиксатор для иммуногистохимического анализа.
Исследование переносимости и фармакокинетических параметров
у NHP
[0364] Все исследования на NHP проводили в Covance (Принстон, Нью-Джерси, США) в соответствии с протоколом IACUC Covance. Во всех исследованиях использовали самцов макаков-крабоедов, ранее не получавших лекарственное средство и белок или ранее не получавших белок. Согласно плану исследования обезьян отбирали и распределяли по группам, соответствующим каждому триспецифическому антителу. Антитело давали посредством внутривенной инфузии в подкожную вену в течение 1 часа. Возрастающие дозы давали в подряд идущие дни в случае с низкими
дозами ( < 10 мкг/кг) , но с интервалом в 1-2 дня в случае с более высокими дозами (> 10 мкг/кг) в целях наблюдения. Образцы крови собирали через 0 часов (только в день 1), 0,5 часа (в процессе инфузии), 1 и б часов после начала инфузии у всех животных после каждой дозы, как указано. Дополнительные незапланированные образцы крови собирали по усмотрению руководителя исследования, патологоанатома и/или ветеринара-клинициста. Всех животных возвращали в колонию в день 60. РВМС и сыворотку крови получали из образцов крови с помощью стандартных способов и сохраняли для будущего анализа.
Анализ репортерного гена люциферазы
[0365] Клетки Jurkat IL2-luc2P GloResponse(tm), требующие размораживания перед использованием (Promega, артикульный № CS187002), и клетки Jurkat NF7AT-Luc2 GloResponse(tm) (Promega, № по кат. CS176401) приобретали у Promega (Висконсин, США) и подготавливали к использованию в соответствии с протоколом производителя.
[0366] Вкратце, клетки размораживали в течение 2 мин. на водяной бане при 37°С и осторожно переносили в коническую центрифужную пробирку на 15 мл, содержащую 10 мл предварительно нагретой среды R10. Пробирку центрифугировали при ЗООд в течение 5 мин. при RT. Надосадочную жидкость удаляли и клетки ресуспендировали в 2 0 мл предварительно нагретой среды R10 и переносили в культуральный флакон на 7 5 см2 с последующим инкубированием в инкубаторе для культивирования тканей при 37°С до тех пор, пока клетки не становились растущими и стабильными (~ 3-4 дня). Клетки разделяли дважды в неделю до 0,1еб клеток/мл. Клетки выдерживали в среде R10+гигромицин В для отбора. Клетки использовали для анализов через ~ 7 дней после размораживания.
[0367] Для стимуляции антителами получали триспецифические или контрольные антитела в различных концентрациях и подвергали серийному разведению в PBS. В каждую лунку распределяли по 2 5 мкл антител. В случае с Ab, связанными с планшетом, использовали планшет MaxiSorp, который инкубировали при 4°С в течение ночи. В
случае с растворимыми Ab использовали планшет с U-образным дном лунок. Репортерные клетки ресуспендировали до 0,3-0,5еб/мл, и в каждую лунку добавляли по 175 мкл клеток и инкубировали в СОг-инкубаторе при 37°С в течение б часов. Затем планшет вынимали из инкубатора и оставляли уравновешиваться до температуры окружающей среды (10-15 мин.). Затем в каждую лунку
аналитического планшета добавляли по 50 мкл реагента Bio-Glo(tm) (Promega, № по кат. G7 941) (температура окружающей среды). После инкубирования в течение 5 минут измеряли активность люминесценции с помощью счетчика для микропланшетов MicroBeta2 LumiJET (Perkin Elmer; время считывания 1 с) . Данные откладывали на графике с помощью программного обеспечения GraphPad Prism. Конформационная стабильность
[0368] Измерения термостабильности (например, точек плавления Тт) проводили посредством дифференциальной сканирующей флуориметрии (DSF). Образцы разбавляли в буфере D-PBS
(Invitrogen) до конечной концентрации 0,2 мкг/мкл с включением 4х концентрированного раствора красителя SYPRO оранжевого
(Invitrogen, 5000Х исходный раствор в DMSO) в D-PBS в белых полуокаймленных 9б-луночных планшетах (BIORAD). Все измерения проводили дважды с применением прибора для ПЦР в реальном времени MyiQ2 (BIORAD). Кривые, выражающие отрицательные первые производные (-d(RFU)/dT) кривых плавления, получали с помощью программного обеспечения iQ5 v2.1 (BIORAD). Затем данные экспортировали в Microsoft Excel для определения Тт и графического представления данных. Измерения IC50
Выявление активности антител в отношении IL-4 и IL-13 с помощью репортерной линии клеток
[0369] Формы активности биспецифических антител или их
производных в отношении цитокинов IL4 и IL13 определяли с
использованием коммерчески доступных репортерных клеток HEK-Blue
IL-4/IL-13 (InvivoGen). Клетки HEK-Blue IL-4/IL-13
сконструированы для отслеживания активации сигнального пути STAT6 с помощью IL-4 или IL13. Стимуляция клеток любым из
цитокинов приводит к выработке репортерным геном секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), которую можно измерить в надосадочной жидкости культуры с помощью анализа QUANTI-Blue. Для тестирования форм активности антител в отношении IL4 или IL13 цитокины предварительно инкубировали в течение 1 часа с антителами в различных концентрациях и добавляли к 50000 клеток HEK-Blue IL-4/IL-13. Опосредованную цитокинами индукцию выработки SEAP измеряли после 24-часового инкубирования в надосадочной жидкости культуры клеток с помощью анализа QUANTI-Blue (InvivoGen). Каждый эксперимент выполняли при п=3 точки данных для каждой концентрации антитела. Концентрацию полумаксимального ингибирования (IC50) для каждого антитела рассчитывали с помощью внутреннего приложения Biostat-Speed V2.0 (Sanofi).
Выявление активности антител в отношении TNFa с помощью репортерной линии клеток
[0370] Формы активности биспецифических антител или их
производных в отношении TNFa определяли путем использования
коммерчески доступных репортерных клеток HEK-Blue TNF-a
(InvivoGen). Клетки HEK-Blue TNF-a сконструированы для выявления
биологически активного TNFa путем отслеживания активации
сигнального пути NFkB посредством экспрессии репортерного гена
секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), уровень
которой можно измерить в надосадочной жидкости культуры с
помощью анализа QUANTI-Blue (InvivoGen). Для определения форм
активности антител в отношении TNFa цитокины предварительно
инкубировали в течение 1 часа с антителами в различных
концентрациях и добавляли к 50000 клеток HEK-Blue TNF-a.
Опосредованную цитокинами индукцию выработки SEAP измеряли через
2 4 часа в надосадочной жидкости культуры с помощью анализа
QUANTI-Blue (InvivoGen). Каждый эксперимент выполняли при п=3
точки данных для каждой концентрации антитела. Для каждого
антитела рассчитывали концентрацию полумаксимального
ингибирования.
Пример 2. Общий обзор триспецифических связывающих белков
[0371] Для получения триспецифических связывающих белков была разработана новая стратегия. Триспецифические белки содержали четыре полипептида, которые образовывали три участка, связывающих мишени (фиг. 1А-С). Каждый участок, связывающий мишень, содержал домены VH и VL из антитела, нацеливающегося на отличный от других антиген-мишень человека (см., например, таблицу 1) . Триспецифические связывающие белки содержали первую пару полипептидов, которые содержали два вариабельных домена, характеризующиеся перекрестной ориентацией, которые образовывали два различных антигенсвязывающих участка (называемые форматом Ig C0DV), и вторую пару полипептидов, каждый из которых содержал по одному вариабельному домену, которые образовывали третий антигенсвязывающий участок (ФИГ. 1А и 1В) .
Таблица 1. SEQ ID NO тяжелой и легкой цепи связывающих белков 1-21 и антигены-мишени, на которые направлены связывающие белки
№ связывающего белка
SEQ ID NO
Направлен на:
1, 2, 3, 4
Нег2 х (CD28 х CD3)
1, 2, 9, 10
Нег2 х (CD28 х CD3)
13, 14, 3, 4
CD19 х (CD28 х CD3)
13, 14, 9, 10
CD19 х (CD28 х CD3)
17, 18, 3, 4
CD38 х (CD28 х CD3)
17, 18, 9, 10
CD38 х (CD28 х CD3)
21, 22, 3, 4
LAMP1 х (CD28 х CD3)
21, 22, 9, 10
LAMP1 х (CD28 х CD3)
60, 61, 62, 63
TNFa х (IL4 х IL13)
60, 61, 68, 69
TNFa х (IL13 х IL4)
60, 71, 68, 69
TNFa х (IL13 х IL4)
73, 74, 75, 76
IL13 х (IL4 х TNFa)
73, 74, 81, 82
IL13 х (TNFa х IL4)
85, 86, 87, 88
IL4 х (IL13 х TNFa)
85, 86, 93, 94
IL4 x (TNFa x IL13)
73, 74, 68, 69
IL13 x (IL13 x IL4)
85, 86, 68, 69
IL4 x (IL13 x IL4)
73, 74, 62, 63
IL13 x (IL4 x IL13)
85, 86, 62, 63
IL4 x (IL4 x IL13)
114, 115, 3, 4
CD20 x (CD28 x CD3)
114, 115, 9, 10
CD20 x (CD28 x CD3)
[0372] Первая пара полипептидов (которые содержали два
вариабельных домена) содержала первый полипептид, имеющий
структуру Уь2-линкер-?ь1-линкер-константный домен легкой цепи
иммуноглобулина, и второй полипептид, имеющий структуру VH1-
линкер-Ун2-линкер-константный домен CHi тяжелой цепи
иммуноглобулина, с получением в результате пары полипептидов,
которые характеризовались перекрестной ориентацией,
образовывавших два различных антигенсвязывающих участка: VH1-VL1 и VH2-VL2 (фиг. 1С, см. легкие и тяжелые цепи В) . В таблице А представлена сводная информация о конструкции биспецифического плеча (т. е. плеча, содержащего тяжелые и легкие цепи В) вариантов иллюстративных триспецифических связывающих белков на основе IgGl и IgG4, содержащая указание различных комбинаций линкеров, используемых в биспецифическом плече триспецифических связывающих белков. Вторая пара полипептидов (каждый из которых содержал один вариабельный домен) содержала первый полипептид, имеющий структуру Унз_константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина, и второй полипептид, имеющий структуру VL3-константный домен легкой цепи иммуноглобулина, с получением в результате пары полипептидов, которые образовывали третий антигенсвязывающий участок: VH3-VL3 (фиг. 1С, см. легкие и тяжелые цепи А) . Кроме того, триспецифические связывающие белки конструировали таким образом, что любой из доменов Снз мог содержать модификацию по типу выступа или впадины для облегчения гетеродимеризации антител (фиг. 1).
Таблица А. Сводная информация о конструкции
биспецифического плеча триспецифических связывающих белков в
104), GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104)] или [ GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), ]/[GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), ]
Пример 3. Активность связывания и опосредованное антителами специфическое уничтожение in vitro, присущие активаторам, привлекающим Т-клетки
[0373] В этом примере описаны анализы in vitro для получения характеристик форм активности активаторов, привлекающих Т-клетки.
[0374] С использованием подхода, описанного в примере 2 выше в отношении конструирования триспецифических связывающих
белков, получали четыре триспецифических связывающих белка
(связывающие белки 1, 3, 5 и б) . Эти триспецифические связывающие белки создавали посредством трансплантации в каркас триспецифического связывающего белка доменов VH и VL, выделенных из антител, нацеливающихся на различные белки человека: CD3, CD19, CD28, CD38 или Нег2. Связывающий белок 1 конструировали таким образом, что первая пара полипептидов (которые образовывали два антигенсвязывающих участка) нацеливалась на CD2 8 и CD3, а вторая пара полипептидов (которые образовывали один антигенсвязывающий участок) нацеливалась на Нег2
(связывающий белок 1=Нег2 х (CD28 х CD3)). Связывающий белок 3 конструировали таким образом, что первая пара полипептидов
(которые образовывали два антигенсвязывающих участка) нацеливалась на CD2 8 и CD3, а вторая пара полипептидов (которые образовывали один антигенсвязывающий участок) нацеливалась на CD19 (связывающий белок 3=CD19 х (CD28 х CD3)). Связывающий белок 5 конструировали таким образом, что первая пара полипептидов (которые образовывали два антигенсвязывающих участка) нацеливалась на CD28 и CD3, а вторая пара полипептидов
(которые образовывали один антигенсвязывающий участок) нацеливалась на CD3 8 (связывающий белок 5=CD3 8 х (CD2 8 х CD3)). Связывающий белок б конструировали таким образом, что первая пара полипептидов (которые образовывали два антигенсвязывающих участка) нацеливалась на CD28 и CD3, а вторая пара полипептидов
(которые образовывали один антигенсвязывающий участок) нацеливалась на CD3 8 (связывающий белок 6=CD3 8 х (CD2 8 х CD3)).
Анализы in vitro с использованием триспецифических связывающих белков, содержащих антитело к Нег2
[0375] Для тестирования способности триспецифических связывающих белков нацеливаться на три различных антигена человека и связывать их сначала изучали специфичность связывающего белка 1 к его мишеням с помощью ELISA-анализа. Связывающий белок 1 был способен связывать все три своих белка-мишени - CD3, CD2 8 и Нег2 (фиг. 2), - что указывало на то, что каждый связывающий домен в триспецифическом формате сохранял свою функцию.
[0376] Клетки ZR-75-1, AU565 (Her2 + ) , ARH-77 (CD19+), MOLP-8, RPMI-8226, KMS-12_BM, NCI-H929, MM.l.S, MM.l., R OPM-2, KMS-26 и U266 (CD38+) метили мембранным красителем PKH-26 (Sigma) и использовали в качестве клеток-мишеней в анализе цитотоксичности. Эти меченые линии клеток культивировали совместно с обогащенной общей популяцией Т-клеток человека при соотношении Е:Т, составляющем 10:1, в присутствии триспецифического антитела, биспецифического антитела или контрольных белков в повышающихся концентрациях в течение 24 часов. Степень клеточного лизиса в клетках-мишенях определяли путем окрашивания маркером для выявления живых/мертвых клеток (Life Technologies) и измерения количества мертвых клеток в популяции меченых клеток-мишеней путем прогона образцов на проточном цитометре Fortessa (Beckton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния) с последующим анализом с помощью программного обеспечения FlowJo (FlowJo vlO).
[0377] Линии Her2+, CD19+, CD38+ опухолевых клеток окрашивали конъюгированными с флуоресцентной меткой антителами к CD3, CD28, CD19, CD38, LAMP1 и/или Нег2 человека (Biolegend). Также было предусмотрено окрашивание соответствующими изотипически сходными контрольными антителами. Данные о клетках затем собирали с помощью прибора Fortessa (Beckton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния). Проточный анализ выполняли на FlowJo vlO. Результаты уничтожения, опосредованного различными связывающими белками, показаны на фиг. ЗА-5, 9А, 9В и 11А-16.
[0378] Тестировали способность связывающего белка 1 индуцировать опосредованное антителами уничтожение опухолевых клеток, экспрессирующих белки HER2 на своей поверхности. Связывающий белок 1 был не только способен связываться со всеми тремя своими белками-мишенями, но он также был способен индуцировать опосредованное антителами уничтожение клеток из Нег2+ линий клеток (фиг. ЗА-4). Связывающий белок 1 демонстрировал сильные формы активности опосредованного антителами уничтожения клеток, тогда как биспецифическое Ab к CD3/CD2 8 и антитело к Нег2 проявляли минимальные формы
активности уничтожения (фиг. ЗА, ЗВ, 4 и 5), что демонстрировало эффективность использования триспецифического Ab для привлечения Т-клеток к опухолевым клеткам посредством опухолевого антигена
(HER2) и маркеров Т-клеток (CD3 и CD28). Антитело к CD3/CD28 не только является важным для рекрутирования Т-клеток, но также обеспечивает более эффективную активацию Т-клеток и передачу сигналов выживания, потенциально улучшая эффективность.
[0379] Дополнительно проводили исследования активации и пролиферации Т-клеток, а также выработки цитокинов in vitro с использованием триспецифического антитела к Her2 х CD2 8 х CD3
(связывающего белка 1). Связывающий белок 1 и контрольные варианты, у которых один или два связывающих домена
инактивированы путем сайт-направленного мутагенеза (ACD2 8 инактивирован связывающий домен антитела к CD2 8; ACD3 инактивирован связывающий домен антитела к CD3; A(CD3 х CD2 8) инактивированы как связывающий домен антитела к CD3, так и связывающий домен антитела к CD28), использовали в анализе активации РВМС человека in vitro, как описано в примере 1. Результаты показали, что связывающий белок 1 эффективно активировал как первичные CD4+ Т-клетки, так и CD8+ Т-клетки человека in vitro. Инактивация связывающего домена антитела к CD2 8 приводила к снижению силы активации, что указывало на важность косигнального пути, запускаемого антителами к CD2 8. Инактивация связывающего участка антитела к CD3 придавала связывающему белку 1 минимальную активность, что позволяло предположить, что антитело к CD3 обеспечивало передачу сигнала, активирующего первичные Т-клетки (фиг. 6А и 6В) . Аналогичные результаты были получены при использовании репортерных линий Т-клеток человека с промоторами IL2 и NFAT (Jurkat-IL2 и Jurkat-NFAT) (фиг. 7А-7С).
Анализы in vitro с использованием триспецифических связывающих белков, содержащих связывающий домен антитела к CD19
[0380] Триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD19, CD28 и CD3, был способен связывать свои антигены-мишени (фиг. 8), что указывало на то, что каждый
связывающий домен в триспецифическом формате сохранял свою функцию.
[0381] Триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD19, CD28 и CD3, также был способен индуцировать опосредованное антителами уничтожение CD19+ клеток (фиг. 9A-9N). Аналогично, триспецифический связывающий белок, представляющий собой антитело к CD19, CD2 8 и CD3, демонстрировал сильную активность в отношении клеток лимфомы человека, тогда как все из антитела к CD3/CD28, антитела к CD19 и антитела изотипического контроля проявляли минимальные формы активности уничтожения, что демонстрировало эффективность использования триспецифического Ab для привлечения Т-клеток к опухолевым клеткам посредством опухолевого антигена (CD19) и маркеров Т-клеток (CD3 и CD28).
Анализы in vitro с использованием триспецифических связывающих белков, содержащих связывающий домен антитела к CD3 8
[0382] Как наблюдалось и для связывающих белков 1 и 3, связывающий белок 5 был способен связывать все три своих белка-мишени (CD3, CD28 и CD38) согласно оценке с помощью ELISA-анализа (фиг. 10) , что указывало на то, что каждый связывающий домен в триспецифическом формате сохранял свою функцию.
[0383] Также было обнаружено, что связывающий белок 5 индуцирует опосредованное антителами уничтожение клеток (фиг. 11A-15D) в отношении 9 линий клеток множественной миеломы человека с различными уровнями экспрессии CD38 и CD28 (см. фиг. 11D, 12D и 13D) . Аналогично, триспецифический связывающий белок 5 демонстрировал сильную активность уничтожения клеток множественной миеломы человека, тогда как и антитело к CD38, и антитело изотипического контроля проявляли минимальные формы активности уничтожения, что демонстрировало эффективность использования триспецифического Ab для привлечения Т-клеток к опухолевым клеткам посредством опухолевых антигенов (CD38 и CD28) и маркеров Т-клеток (CD3 и CD28). Биспецифическое контрольное антитело к CD3/CD2 8 также проявляло очень слабую активность уничтожения в отношении CD2 8+ клеток ММ (см. фиг. 11В, 12А-С и 13А-С).
[0384] Эти результаты демонстрируют, что платформа на основе триспецифического антитела, описанная в данном документе, обеспечивает возможность объединения связывающих участков для двух опухолевых маркеров или двух связывающих участков для маркеров Т-клеток, обеспечивая гибкость научных разработок и различных путей применения. Связывающий белок 5 также был эффективным против 5 линий CD3 8+ клеток лимфомы человека (фиг. 14С и 15D), проявляя сильные формы активности уничтожения (фиг. 14А-В и 15А-С).
[0385] Тестировали опосредованное антителами уничтожение клеток в отношении линии клеток множественной миеломы RPMI822 6 с использованием связывающих белков 5 и б, и их значения ЕС50 рассчитывали и сравнивали с показателями биспецифического антитела в формате C0DV, нацеливающегося на CD28 и CD3 (фиг. 16 и таблица В) . Связывающие белки 5 и б отличаются только связывающим доменом антитела к CD2 8; связывающий белок 5 содержит связывающий домен суперагонистического антитела к CD2 8, тогда как связывающий белок б содержит связывающий домен традиционного антитела к CD2 8. Связывающий белок 5 проявлял более сильную активность уничтожения.
Таблица В. Значения ЕС50, рассчитанные для биспецифических и триспецифических связывающих белков
ЕС50 (пМ)
huCD28 х CD3, IgG4
56, 16
Связывающий белок 5, IgG4
0,3787
Связывающий белок 6, IgG4
5,709
[0386] Активность триспецифического связывающего белка 5, представляющего собой антитело к CD38, CD28 и CD3, и контрольных вариантов, у которых один или два связывающих домена инактивированы путем сайт-направленного мутагенеза (ACD2 8 инактивирован связывающий домен антитела к CD2 8; ACD3 инактивирован связывающий домен антитела к CD3; A(CD3 х CD2 8) инактивированы как связывающий домен антитела к CD3, так и связывающий домен антитела к CD28), тестировали с использованием репортерных линий Т-клеток человека с промоторами IL2 и NFAT
(Jurkat-IL2 и Jurkat-NFAT) в анализе активации in vitro согласно описанному в примере 1. Результаты показали, что связывающий белок 5 эффективно активировал in vitro промоторы как IL2, так и NFAT человека (фиг. 17А и 17В) . Инактивация связывающего домена антитела к CD2 8 приводила к снижению силы активации, которое было более выраженным для репортера IL2, что указывало на важность косигнального пути, запускаемого антителами к CD2 8. Инактивация связывающего участка антитела к CD3 придавала связывающему белку 5 минимальную активность, что позволяло предположить, что антитело к CD3 обеспечивало передачу сигнала, активирующего первичные Т-клетки.
Пример 4. Активность активаторов, привлекающих Т-клетки, in
vivo
[0387] В этом примере описаны эксперименты по получению характеристик свойств и форм активности активаторов, привлекающих Т-клетки, содержащих связывающие домены антитела к Нег2 или антитела к CD3 8, in vivo.
Анализы in vivo с использованием триспецифических связывающих белков, содержащих связывающий домен антитела к Нег2
[0388] Исследование с повышением дозы с использованием триспецифического антитела к Her2, CD2 8 и CD3 проводили на приматах, отличных от человека (фиг. 18А-18Е), согласно описанному в примере 1. Все три связывающих домена связывающего белка 1 перекрестно реагируют с CD3/CD28/HER2 обезьян. Исследование токсичности с повышением дозы предназначалось для оценки профиля потенциальной токсичности молекулы. Образцы крови собирали для процедур выделения сыворотки крови и РВМС. После каждого введения дозы исследовали популяции циркулирующих Т-клеток (фиг. 18А и 18В) наряду с активацией субпопуляций Т-клеток (CD69+) (фиг. 18С и 18D) . Процентное содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток в кровотоке увеличивалось при повышении низкой дозы, но в конечном счете уменьшалась при повышении высокой дозы. Значительная активация CD4+ и CD8+ Т-клеток была выраженной только при дозе 100 мкг/кг, что позволяло предположить относительно довольно высокую максимальную переносимую дозу. Также измеряли уровни некоторых цитокинов в
сыворотке крови. Значительное высвобождение цитокинов наблюдалось только при наиболее высокой дозе (100 мкг/кг; фиг. 18Е) .
[0389] Затем изучали эффект триспецифического связывающего белка 1, представляющего собой антитело к Her2, CD2 8 и CD3, в отношении роста опухоли в моделях на гуманизированных мышах согласно описанному в примере 1 (фиг. 19А-20Н) . На фиг. 19А и 19В обобщены результаты, полученные с помощью модели на мышах NSG, которым были трансплантированы CD34+ гемопоэтические стволовые клетки человека (hu-CD34) и инокулированы HER2+ раковые клетки молочной железы человека линии ВТ474. Во всех группах доз были явно выражены значительные формы противоопухолевой активности. Противоопухолевая активность была дозозависимой, что является статистически значимым отличием по сравнению с контрольной группой при 25 мкг/кг. Ни в одной из групп обработки не наблюдалась значительная потеря массы тела.
[0390] Также проводили 2-е исследование in vivo с использованием модели на мышах NSG, подвергнутых восстановлению с помощью РВМС человека, которым были инокулированы HER2+ раковые клетки молочной железы человека линии ВТ4 7 4 (фиг. 20А-20Н) . В группах, получавших высокую дозу (100 и 500 мкг/кг), наблюдались значительные формы противоопухолевой активности. У 40% мышей в группе, получавшей 500 мкг/кг, наблюдалось уменьшение размеров опухоли. Противоопухолевая активность была дозозависимой. Противоопухолевая активность в группах, обработанных дозами 100 и 500 мкг/кг, была значительно лучшей, чем в группах, обработанных антителом к HER2 (0,1-10 мг/кг) , что указывало на лучшую противоопухолевую активность связывающего белка 1. Ни в одной из групп обработки не наблюдалась значительная потеря массы тела.
Анализы in vivo с использованием триспецифических связывающих белков, содержащих связывающий домен антитела к CD3 8
[0391] Исследование с повышением дозы проводили на
приматах, отличных от человека, с использованием
триспецифического антитела к CD38, CD28 и CD3 (связывающего белка 5) согласно описанному в примере 1 (фиг. 21A-21F) . Два из
трех связывающих доменов связывающего белка 5 перекрестно реагируют с CD3 и CD2 8 обезьян. Исследование токсичности с повышением дозы предназначалось для оценки профиля потенциальной токсичности молекулы. Образцы крови собирали для процедур выделения сыворотки крови и РВМС. После каждого введения дозы исследовали популяции циркулирующих Т-клеток (фиг. 21А и 21В, столбчатые диаграммы) наряду с активацией субпопуляций Т-клеток (CD69+) (фиг. 21А и 21В, линейные диаграммы). Процентное содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток в кровотоке увеличивалось при повышении низкой дозы, но в конечном счете уменьшалось при повышении высокой дозы. Значительная активация CD4+ и CD8+ Т-клеток была выраженной только при дозе 100 мкг/кг, что позволяло предположить относительно довольно высокую максимальную переносимую дозу. Также измеряли уровни некоторых цитокинов в сыворотке крови. Значительное высвобождение цитокинов наблюдалось только при наиболее высокой дозе (100 мкг/кг; фиг. 21C-21F).
[0392] Затем тестировали активность триспецифического антитела к CD3 8, CD2 8 и CD3 in vivo у гуманизированных мышей (фиг. 22A-23D) согласно описанному в примере 1. На фиг. 22А-22С обобщен результат пилотного исследования по определению дозы с использованием модели на мышах NSG, которым были трансплантированы CD34+ гемопоэтические стволовые клетки человека (hu-CD34) и имплантированы клетки ММ человека линии RPMI-822 6, трансдуцированные CD38 и PD-L1, обработанных связывающим белком 5 в дозах 5, 50 и 100 мкг/кг. Значительная противоопухолевая активность была явно выраженной только в группе, обработанной с помощью 5 мкг/кг (фиг. 22А) . У мышей, обработанных связывающим белком 5 (5 мкг/кг), наблюдали инфильтрацию CD8+ Т-клеток (фиг. 22В и 22С).
[0393] В рамках той же модели выполняли проспективное исследование с использованием связывающего белка 5 в дозе 0,04-5 мкг/кг (фиг. 23A-23D). Значительная противоопухолевая активность демонстрировалась во всех группах, обработанных связывающим белком 5 (фиг. 23В), что статистически значимо отличалось от контроля в конце исследования (фиг. 23С) . Ни в одной из групп
обработки не наблюдалась значительная потеря массы тела (фиг. 23А). У мышей, обработанных связывающим белком 5 или контрольным PBS в указанных концентрациях, наблюдалась дозозависимая индукция выработки сывороточных воспалительных цитокинов IFN-y, TNF-a и IL-2 через четыре часа после введения первой дозы (фиг. 23D), что указывало на эффективную активацию Т-клеток триспецифическим связывающим белком 5 in vivo.
[0394] Гуманизированным с помощью CD34+ клеток мышам NSG
(п=3) инъецировали i. v. 100 мкг/кг триспецифического Ab
(треугольники), биспецифического Ab (квадраты) или
моноспецифического Ab (кружки). Активацию CD4+ или CD8+ Т-клеток измеряли через 0 (до инъекции), 1, 24 и 72 часа после инъекции Ab путем определения среднего % увеличения уровня CD69, % уменьшения уровня CD62L и/или концентрации воспалительных цитокинов в плазме крови в каждый момент времени с помощью мультиплексной технологии Luminex хМАР. Результаты определения активации Т-клеток различными триспецифическими антителами показаны на фиг. 24-26С.
[0395] Системную активацию Т-клеток in vivo изучали в модели на мышах NSG, которым были трансплантированы CD34+ гемопоэтические стволовые клетки человека (hu-CD34), после введения связывающего белка 5 и контрольных биспецифического антитела IgG4 к CD3/CD28 и антитела IgG4 к CD28 (фиг. 24). Мышам в группах по 3 особи вводили 100 мкг/кг связывающего белка 5 и контрольных антител. Образцы крови собирали до введения и через 1 час, 24 часа и 72 часа после введения. Образцы сыворотки крови мышей и Т-клеток человека выделяли из крови и сохраняли для анализа активации Т-клеток и для измерения уровня сывороточных цитокинов. На фиг. 24 и 25 показано, что как CD4+, так и CD8+ Т-клетки человека активировались через 1 час после инфузии антител с возвращением к исходному уровню через 72 часа. На фиг. 26А-26С показано повышение высвобождения сывороточных IFN-y, TNF-a и IL-2 у одних и тех же мышей, которое наблюдалось через 1 час после инфузии, с возвращением к исходному уровню спустя 24 часа. Эти результаты демонстрировали, что как связывающий белок 5, так и
биспецифическое антитело IgG4 к CD3/CD2 8 являются эффективными в активации Т-клеток в указанной животной модели, что делает их подходящими для исследования эффективности in vivo.
Пример 5. Определение характеристик триспецифических и биспецифических тривалентных связывающих белков, направленных на цитокины
[0396] В следующем примере описаны эксперименты по определению характеристик стабильности, свойств связывания и форм активности новых триспецифических и биспецифических тривалентных связывающих белков, нацеливающихся на цитокины человека.
[0397] Конструировали триспецифические связывающие белки (например, которые связывают три различных белка-мишени; связывающие белки 9-15) , а также биспецифические тривалентные связывающие белки (например, которые связывают один антиген бивалентно и один антиген моновалентно; связывающие белки 16-19) (таблица С) . За исключением связывающего белка 11, в котором константный домен каппа-цепи использовали как в LC C0DV, так и в LC Fab-плеча, все другие связывающие белки (9-10 и 12-19) получали с константным доменом каппа-цепи в LC C0DV и константным доменом лямбда-цепи в LC Fab-плеча. В качестве Fc-каркаса использовали последовательность IgGl. При том, что НС C0DV содержит мутации RF по типу выступов (S354C, T366W; H435R и Y436F), НС Fab-плеча содержит мутации по типу впадин (Y349C, T366S, L368A, Y407V).
Таблица С. Сводная информация о
триспецифических/тривалентных связывающих белках, направленных
на IL-4/lL-13/TNFa
Антитело
Специфичность
Конструкция
Формат
Связывающий белок 9
(Антитело к IL4 х антитело к IL13) х антитело к TNFa
(Fab CODV) х Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий белок 10
(Антитело к IL13 х антитело к IL4) х антитело к TNFa
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий
(Антитело к IL13 х
(Fab CODV) x
Триспецифический
белок 11
антитело к IL4) х антитело к TNFa
Fab-Fc IgGl
Связывающий белок 12
(Антитело к IL4 х антитело к TNFa) х антитело к IL13
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий белок 13
(Антитело к TNFa х антитело к IL4) х антитело к IL13
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий белок 14
(Антитело к IL13 х антитело к TNFa) х антитело к IL4
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий белок 15
(Антитело к TNFa х антитело к IL13) х антитело к IL4
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Триспецифический
Связывающий белок 16
(Антитело к IL13 х антитело к IL4) х антитело к IL13
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Биспецифический тривалентный
Связывающий белок 17
(Антитело к IL13 х антитело к IL4) х антитело к IL4
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Биспецифический тривалентный
Связывающий белок 18
(Антитело к IL4 х антитело к IL13) х антитело к IL13
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Биспецифический тривалентный
Связывающий белок 19
(Антитело к IL4 х антитело к IL13) х антитело к IL4
(Fab CODV) x Fab-Fc IgGl
Биспецифический тривалентный
[0398] Триспецифические и биспецифические тривалентные
связывающие белки получали и очищали согласно описанному выше (фиг. 27).
Таблица D. Очистка связывающих белков 16-19 с помощью SEC
Конструкция
Объем удерживания (мл)
Высота пика (mAU)
Площадь (шАи*мл)
Агрегация (%)
MW согласно SEC (кДа)
Расчетная MW (кДа)
Связывающий белок 16
3, 02
64, 8
8,1
1,5
211
Связывающий белок 17
2,99
65, 9
8,9
2,1
225
172
Связывающий белок 18
3,01
72, 9
8,8
0,0
214
171
Таблица Е. Сводная информация о термостабильности, определенной с помощью DSF, и процентном содержании мономеров, определенном с помощью препаративной эксклюзионной хроматографии, для различных триспецифических связывающих белков
[0400] Для оценки аффинности связывания каждого отдельно взятого связывающего домена антитела в триспецифическом формате для каждого отдельно взятого антигена выполняли анализ SPR, описанный ранее. Результаты сопоставляли со значениями аффинности исходных антител (таблицы F, G и Н).
Таблица F. Сводная информация о результатах анализа поверхностного плазмонного резонанса для IL-4 с различными триспецифическими связывающими белками
Конструкция
[1/M*s]
[1/с]
Rmax
ChiA2
[М]
IL4
8,70Е+07
1,57Е-04
1,81Е-12
0,24
IL13
TNFa
Связывающий белок 9
7,86Е+07
3,80Е-04
4,83Е-12
0,309
Связывающий белок 10
1,88Е+07
8,41Е-05
4,47Е-12
0, 763
Связывающий белок 11
5,92Е+07
2,39Е-04
4,04Е-12
0,198
Связывающий белок 12
6,02Е+07
2,39Е-04
3,97Е-12
0,406
Связывающий белок 13
3,57Е+07
1,81Е-04
5,07Е-12
0,257
Связывающий белок 14
8,96Е+07
1,52Е-04
1,69Е-12
0,254
Связывающий белок 15
7,35Е+07
1,23Е-04
1,67Е-12
0, 547
Таблица G. Сводная информация о результатах анализа
поверхностного плазмонного резонанса для IL-13 с различными
триспецифическими связывающими белками
Конструкция
[1/M*s]
Kd [1/с]
KD [М]
Rmax
ChiA2
IL4
IL13
2,44Е+05
2,50Е-05
1,ОЗЕ-10
0, 938
TNFa
Связывающий белок 9
6,25Е+05
9,27Е-06
1,48Е-11
0,176
Связывающий белок 10
7,16Е+05
3,76Е-05
5,25Е-11
0, 145
Связывающий белок 11
2,95Е+05
4,28Е-05
1,45Е-10
0, 372
Связывающий белок 12
4,17Е+05
5,06Е-05
1,21Е-10
0, 338
Связывающий белок 13
6,15Е+05
7,58Е-05
1,23Е-10
0,186
Связывающий белок 14
6,93Е+05
1,19Е-04
1,72Е-10
0,232
Связывающий белок 15
2,50Е+05
5,61Е-05
2,24Е-10
0, 631
Таблица Н.Сводная информация о результатах анализа
поверхностного плазмонного резонанса для TNFa с различными триспецифическими связывающими белками
триспецифических связывающих белков выполняли клеточный анализ с использованием различных наборов НЕК Blue (Invivogen). Цитокины предварительно инкубировали с антителами к цитокинам в различных концентрациях в течение 3 0 минут при комнатной температуре в 9 6-луночном планшете. Контроли предусматривали использование только цитокина или только антитела. 50000 клеток НЕК Blue (клетки НЕК Blue TNFa/ILIB (InvivoGen, № по кат. hkb-tnfill); клетки НЕК Blue STAT-б (InvivoGen, № по кат. Hkb.stat6)) добавляли к смеси цитокин/антитело и инкубировали в течение 23 часов при 37°С, 5% С02 в инкубаторе. В каждую лунку культурального планшета добавляли реагент QuantiBlue и инкубировали в течение 2 часов при 37°С. OD измеряли при 62 0 нм и IC50 рассчитывали с помощью BioStat Speed 2.0. Результаты анализа различных триспецифических антител с использованием репортерных клеток НЕК Blue показаны в таблицах I и М.
[0402] Затем рассчитывали значения IC50 для связывающих белков 9-15 и сопоставляли их со значениями для отдельных исходных антител (таблица I).
Таблица I.Сводная информация об анализах с использованием репортерных клеток НЕК Blue (данные о IC50) для различных триспецифических связывающих белков
Конструкция
1С50 для IL4 (нг/мл)
1С50 для IL13 (нг/мл)
1СБ0 для
TNFa (нг/мл)
IL4
2,14Е+00 1,85Е+00 1,82Е+01
IL13
1,10Е+02 8,83Е+01 1,42Е+01
TNFa
3,63Е+00 5,78Е+00 2,41Е+00
Связывающий белок 9
4,51Е+00
1,77Е+02
3,95Е+01
Связывающий белок 10
5,93Е+00
4,68Е+02
4,76Е+01
Связывающий белок 11
6,96Е+00
4,89Е+02
2,65Е+01
Связывающий белок 12
5,ОЗЕ+00
1,83Е+02
2,17Е+01
Связывающий белок 13
1,38Е+01
7,54Е+01
2,26Е+01
Связывающий белок 14
1,02Е+01
1,20Е+02
6,26Е+00
Связывающий белок 15
1,ЗОЕ+01
1,07Е+02
2,38Е+01
[0403] Термостабильность биспецифических тривалентных связывающих белков измеряли с помощью дифференциальной сканирующей флуориметрии (DSF; таблица J).
Таблица J. Сводная информация о термостабильности, определенной с помощью DSF, для различных тривалентных связывающих белков
Tml
Тш2
Конструкция
(°С)
(°С)
IL4
IL13
Связывающий белок 16
Связывающий белок 17
Связывающий белок 18
Связывающий белок 19
[0404] Аффинность связывания и количество белков-мишеней, связанных каждым из биспецифических тривалентных связывающих белков, измеряли для IL-4 (таблица К) и IL-13 человека (таблицы К и L) .
Таблица К. Сводная информация о результатах анализа поверхностного плазмонного резонанса для IL-4 с различными
тривалентными связывающими белками
Констру кция
Захват, RU
Анал
Ка (1/М* с)
Kd (1/с)
Rmax (RU)
KD (М)
Chi 2
Масса связа иных белко в, кДа
Колич ество связа иных IL
IL4
116
IL4
8,70 Е+07
1, 57
Е-04
1,81 Е-12
0,240
СвяЗыва ющий белок 16
218
IL4
4,77 Е+07
2,80 Е-04
5,88 Е-12
0, 172
СвяЗыва ющий белок 17
218
IL4
3,16
Е+08
7, 60 Е-04
2,40 Е-12
0,278
СвяЗыва ющий белок 18
215
IL4
3, 52
Е+07
3,59 Е-04
1, 02 Е-12
0,408
СвяЗыва ющий белок 19
226
IL4
8,27 Е+07
3,85 Е-04
4, 65 Е-12
0,486
Таблица L. Сводная информация о результатах анализа
поверхностного плазмонного резонанса для IL-13 с различными
тривалентными связывающими белками
Масса
Колич
Конструк
Захват
(1/М*
(1/с
Rmax
Аналит
Chi 2
связа
ество
ция
, RU
(RU)
(М)
иных
связа
связывающих белков 16-19 (таблица М).
Таблица М.Сводная информация об анализах с использованием репортерных клеток НЕК Blue (данные IC50) для различных тривалентных связывающих белков
Конструкция
1С50 для IL4 (нг/мл)
1С50 для IL13 (нг/мл)
IL4
6,07Е+00
IL13
1,12Е+03
Связывающий белок 16
1,ЗОЕ+01
1,24Е+03
Связывающий белок 17
8,62Е+00
9,ЗОЕ+03
Связывающий белок 18
1,46Е+01
1,10Е+03
Связывающий белок 19
5,73Е+00
6,93Е+03
Пример 6. Оптимизация формата триспецифического связывающего белка
[0406] Проблема со многими существующими форматами гетеродимерных связывающих белков (например, биспецифическими антителами и их вариантами) заключается в том, что очистка только требуемых гетеродимерных структур без включения также каких-либо гомодимерных структур может быть затруднительной. Таким образом, значительный интерес представляет способ эффективной очистки требуемого гетеродимерного связывающего белка, например, для промышленного производства.
[0407] Как описано в данном документе, связывающие белки согласно настоящему изобретению могут содержать несколько дополнительных признаков, в том числе без ограничения мутации по типу выступов и впадин (например, для содействия надлежащему образованию гетеродимеров) и мутации для улучшения очистки. В дополнение, эти связывающие белки содержат две легкие цепи, что приводит к четьгрем возможным конфигурациям: две легкие цепи каппа, две легкие цепи лямбда, легкая цепь каппа в плече с двумя вариабельными доменами ("CODV-плече") и легкая цепь лямбда в традиционном плече антитела ("Fab-плече")/ а также легкая цепь лямбда в CODV-плече и легкая цепь каппа в Fab-плече.
[0408] Таким образом, предпринимали эксперименты для определения способа, обеспечивающего возможность эффективной очистки требуемого связывающего белка, представляющего интерес. Варианты связывающих белков также тестировали в отношении эффективности их очистки.
[0409] На фиг. 28А показана схема приводимого в качестве примера связывающего белка согласно настоящему изобретению, на которой указаны изменения, приводящие к уникальным конфигурациям. В данных экспериментах тестировали эффект расположения легких цепей каппа и лямбда (например, две каппа-цепи, две лямбда-цепи, каппа-цепь в CODV-плече и лямбда-цепь в Fab-плече, а также лямбда-цепь в CODV-плече и каппа-цепь в Fab-плече) , мутации по типу выступов и впадин (например, мутации по типу выступов в CODV-плече и мутации по типу впадин в Fab-плече или мутации по типу впадин в CODV-плече и мутации по типу выступов в Fab-плече), а также мутации H435R/Y436F ("мутации RF", например, мутации RF в CODV- или Fab-плече или отсутствие мутаций RF) . Тестировали в общей сложности 18 различных вариантов, показанных на фиг. 28В. В этих экспериментах C0DV-плечо имело антигенсвязывающие участки, специфичные к TNFa (т. е. последовательности VH и VL под SEQ ID N0: 168 и 169 соответственно) и IL4 (т. е. последовательности VH и VL под SEQ ID N0:170 и 171 соответственно), тогда как Fab-плечо имело антигенсвязывающий участок, специфичный к IL13 (т. е. последовательности VH и VL под SEQ ID N0: 172 и 173
соответственно). S354C и T366W использовали в качестве мутаций по типу выступов, a Y349C, T366S, L368A и Y407V использовали в качестве мутаций по типу впадин.
[0410] Различные стадии обработки тестировали в отношении возможности отслеживать правильное спаривание CODV- и Fab-плеч (например, в противоположность гомодимерам CODV или Fab), а также правильное спаривание тяжелых цепей и легких цепей (например, в противоположность спариванию между легкой цепью Fab-плеча и тяжелой цепью CODV-плеча или между тяжелой цепью Fab-плеча и легкой цепью CODV-плеча). Было обнаружено, что аналитическая эксклюзионная хроматография (SEC) является неэффективной в распознавании правильного спаривания тяжелой цепи и легкой цепи; было обнаружено, что связывающие белки с легкой цепью Fab-плеча, ошибочно спаренной с тяжелой цепью CODV, и гомодимерные связывающие белки с двумя Fab-плечами элюировались совместно с требуемыми триспецифическими связывающими белками. Однако было обнаружено, что аналитическая хроматография гидрофобных взаимодействий (HIC) обеспечивала отделение требуемых триспецифических связывающих белков от связывающих белков с легкой цепью Fab-плеча, ошибочно спаренной с тяжелой цепью CODV, и гомодимерных связывающих белков с двумя Fab-плечами (фиг. 29).
[0411] 18 конфигураций связывающих белков, показанных на фиг. 28В, очищали с помощью аффинной хроматографии с белком А, а затем посредством очистки с помощью KappaSelect (GE Healthcare). Структуры отслеживали с помощью HIC-хроматографии. Одну конфигурацию связывающего белка эффективно очищали без включения ошибочно спаренных структур: легкая цепь лямбда в CODV-плече, легкая цепь каппа в Fab-плече, мутации по типу выступов в CODV-плече, мутации по типу впадин в Fab-плече и мутации RF в Fab-плече. HIC-хроматография (фиг. ЗОА), SDS-PAGE (фиг. ЗОВ) и анализ массы интактного образца продемонстрировали, что была очищена отдельная структура, соответствующая требуемому триспецифическому связывающему белку.
[0412] По этим результатам определяют конфигурацию связывающего белка, обеспечивающую возможность более эффективной
очистки связывающих белков, представляющих интерес, от неправильно спаренных структур. Кроме того, было показано, что способ очистки с помощью белка А с последующими стадиями очистки с помощью KappaSelect обеспечивает эффективное отделение связывающих белков, представляющих интерес, от неправильно спаренных структур.
[0413] Хотя настоящее изобретение включает различные варианты осуществления, следует понимать, что видоизменения и модификации будут очевидны специалистам в данной области. Таким образом, предполагается, что прилагаемая формула изобретения охватывает все такие эквивалентные вариации, которые попадают в пределы объема настоящего изобретения. Кроме того, названия разделов, используемые в данном документе, представлены лишь в целях систематизации, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие описываемый объект настоящего изобретения.
[0414] Каждый вариант осуществления, описанный в данном документе, можно объединять с любым другим вариантом осуществления или вариантами осуществления, если четко не указано противоположное. В частности, любой признак или вариант осуществления в качестве предпочтительного или преимущественного может быть объединен с другим признаком или признаками или вариантом осуществления или вариантами осуществления, указанными в качестве предпочтительных или преимущественных, если четко не указано противоположное.
[0415] Все источники литературы, цитируемые в настоящей заявке, явным образом включены посредством ссылки в данный документ.
ПОСЛЕДОВАТЕЛВНОСТИ
Таблица 1. SEQ ID NO тяжелой и легкой цепи связывающих белков 1-21 и целевые антигены, на которые нацелены связывающие белки.
Аминокислотные последовательности связывающего белка 1
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела
Н-цепь антитела к Her2 с "выступом"
EvqlvesggglvqpggslrlscaasgfniJcdtyih
SEQ ID NO: 1
к Нег2 с "выступом")
wvrqapgkglewvariyptngy tryadsvkgrfti sadtskntaylqmnslraedtavyуcsrwggdgfy amdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpa vlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkps ntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfpp kpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvd gvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwln gkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvyt lppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesng qpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqeg nvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
Легкая цепь А (L-цепь антитела к Нег2)
L-цепь антитела к Her2
Diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvntavaw yqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsrsgtd ftltisslqpedfatyycqtjhyttpptfgqgtkve ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfу preakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysl sstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfn rgec
SEQ ID NO: 2
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckasgytirtsyyih wvrqapgqglewigsiypgmvntnyaqkfqgratl tvdtsista ymelsrlrsddtavyyc trshygldw nirdvwgkgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr 1sсaas gftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspf'dywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss
SEQ ID NO: 3
iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28:
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliyJcvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdf tlkisrveaedvgvyycgqgrtqypf t f gs gtkveikgqpkaapdiqmtqspsslsasvgdrvti tcqasqniyvwlnwyqqkpgkapklliyJcasnlht gvpsrf sgs gsgtdf tltisslqpediatyycqqgr cjtypytf gqgtkleiktkgpsrtvaapsvf ifpps deqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkv yacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 4
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 1
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к Нег2 с "выступом")
Н-цепь антитела к Her2 с "выступом"
gaagtgcagctggtggaatctggcggcggactggt gcagcctggcggatctctgagactgagctgtgccg ccagcggcttcaacatcaaggacacctacatccac tgggtgcgccaggcccctggcaagggactggaatg ggtggccagaatctaccccaccaacggctacacca gatacgccgacagcgtgaagggccggttcaccatc agcgccgacaccagcaagaacaccgcctacctgca gatgaacagcctgcgggccgaggacaccgccgtgt actactgtagtagatggggaggcgacggcttctac gccatggactattggggccagggcaccctcgtgac cgtgtctagtgcgtcgaccaagggcccatcggtgt tccctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaa tctacagccgccctgggctgcctcgtgaaggacta ctttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctg gcgctctgacaagcggcgtgcacacctttccagcc gtgctccagagcagcggcctgtactctctgagcag cgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggcacca agacctacacctgtaacgtggaccacaagcccagc
SEQ ID NO: 5
aacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaagta cggccctccctgccctccttgcccagcccctgaat ttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccccca aagcccaaggacaccctgatgatcagccggacccc cgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccagg aagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtggac ggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccag agaggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgt ccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaac ggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg cctgcccagctccatcgagaaaaccatcagcaagg ccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtatacc ctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaacca ggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttctacc ccagcgacattgccgtggaatgggagagcaacggc cagcccgagaacaactacaagaccaccccccctgt gctggacagcgacggctcattcttcctgtactcca agctgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggc aacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccct gcacaaccactacacccagaagtccctgtctctgt ccctgggcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к Нег2)
L-цепь антитела к
Her2gacatccagatgacccagagccccagcagcc tgtctgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacc tgtagagccagccaggacgtgaacaccgccgtggc ctggtatcagcagaagcctggcaaggcccccaagc tgctgatctacagcgccagcttcctgtacagcggc gtgcccagcagattcagcggaagcagaagcggcac cgacttcaccctgaccatcagctccctgcagcccg aggacttcgccacctactactgccagcagcactac accaccccccccacatttggccagggcaccaaggt ggaaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgt tcatcttcccacctagcgacgagcagctgaagtcc ggcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaactt ctacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgg
SEQ ID NO: 6
acaacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagc gtgaccgagcaggacagcaaggactccacctacag cctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgact acgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacc caccagggcctgtctagccccgtgaccaagagctt caaccggggcgagtgt
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctggtgcagtctggcg
ccgaggtcgtgaaacctggcgcctctgtgaaggtg
tcctgcaaggccagcggctacacctttaccagcta
ctacatccactgggtgcgccaggcccctggacagg
gactggaatggatcggcagcatctaccccggcaac
gtgaacaccaactacgcccagaagttccagggcag
agccaccctgaccgtggacaccagcatcagcaccg
cctacatggaactgagccggctgagaagcgacgac
accgccgtgtactactgcacccggtcccactacgg
cctggattggaacttcgacgtgtggggcaagggca
ccaccgtgacagtgtctagcagccaggtgcagctg
Тяжелая цепь В
gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag
(Н-цепь антитела
aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea
SEQ ID
к CD28 и CD3 со
ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag
NO: 7
"впадиной")
gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat
caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg
ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg
gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa
cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact
gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat
tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag
tcggaccgccagcacaaagggcccatcggtgttcc
ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct
acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt
tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg
ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg
ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt
cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatccagatgacccagagcccc
SEQ ID NO: 8
agcagcctgtctgccagcgtgggcgacagagtgac catcacctgtcaggccagccagaacatctacgtgt ggctgaactggtatcagcagaagcccggcaaggcc cccaagctgctgatctacaaggccagcaacctgca caccggcgtgcccagcagattttctggcagcggct ccggcaccgacttcaccctgacaatcagctccctg cagcccgaggacattgccacctactactgccagca gggccagacctacccctacacctttggccagggca ccaagctggaaatcaagaccaagggccccagccgt acggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccacc tagcgacgagcagctgaagtccggcacagcctctg tcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgag gccaaagtgcagtggaaggtggacaacgccctgca gagcggcaacagccaggaaagcgtgaccgagcagg acagcaaggactccacctacagcctgagcagcacc ctgacactgagcaaggccgactacgagaagcacaa ggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgt ctagccccgtgaccaagagcttcaaccggggcgag tgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 2
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к Нег2 с "выступом")
Н-цепь антитела к Her2 с "выступом"
EvqlvesggglvqpggslrlscaasgfhiJcdtyih wvrqapgkglewvariyptngytryadsvkgrfti sadtskntaylqmnslraedtavyуcsrwggdgfy amdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpa vlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkps ntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfpp kpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvd gvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwln gkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvyt lppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesng qpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqeg nvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
SEQ ID NO: 1
Легкая цепь А (L-цепь антитела к Нег2)
L-цепь антитела к Нег2
Diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvntavaw yqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsrsgtd ftltisslqpedfatyycqtjhyttpptfgqgtkve ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfу preakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysl sstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfn rgec
SEQ ID NO: 2
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgfslsdygvh wvrqppgkglewlgviwagggtnynpslksrktis kdtsknqvslklssvtaadtavyycardkgysyyy smdywgqgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr lscaasgftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
SEQ ID NO: 9
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliykvsnrfsgvpdrfsgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfgs gtkveikgqpkaapdivltqspaslavspgqrati tcrasesveyyvtslmqwyqqkpgqppkllifaas nvesgvparfsgsgsgtdftltinpveandvanyу cqqsrkvpytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfi
SEQ ID NO: 10
fppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadye khkvyacevthqglsspvtksfnrgec
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 2
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к Нег2 с "выступом")
Н-цепь антитела к Her2 с "выступом"
gaagtgcagctggtggaatctggcggcggactggt gcagcctggcggatctctgagactgagctgtgccg ccagcggcttcaacatcaaggacacctacatccac tgggtgcgccaggcccctggcaagggactggaatg ggtggccagaatctaccccaccaacggctacacca gatacgccgacagcgtgaagggccggttcaccatc agcgccgacaccagcaagaacaccgcctacctgca gatgaacagcctgcgggccgaggacaccgccgtgt actactgtagtagatggggaggcgacggcttctac gccatggactattggggccagggcaccctcgtgac cgtgtctagtgcgtcgaccaagggcccatcggtgt tccctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaa tctacagccgccctgggctgcctcgtgaaggacta ctttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctg gcgctctgacaagcggcgtgcacacctttccagcc gtgctccagagcagcggcctgtactctctgagcag cgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggcacca agacctacacctgtaacgtggaccacaagcccagc aacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaagta cggccctccctgccctccttgcccagcccctgaat ttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccccca aagcccaaggacaccctgatgatcagccggacccc cgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccagg aagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtggac ggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccag agaggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgt ccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaac ggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg cctgcccagctccatcgagaaaaccatcagcaagg ccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtatacc
SEQ ID NO: 5
ctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaacca ggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttctacc ccagcgacattgccgtggaatgggagagcaacggc cagcccgagaacaactacaagaccaccccccctgt gctggacagcgacggctcattcttcctgtactcca agctgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggc aacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccct gcacaaccactacacccagaagtccctgtctctgt ccctgggcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к Нег2)
L-цепь антитела к
Her2gacatccagatgacccagagccccagcagcc tgtctgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacc tgtagagccagccaggacgtgaacaccgccgtggc ctggtatcagcagaagcctggcaaggcccccaagc tgctgatctacagcgccagcttcctgtacagcggc gtgcccagcagattcagcggaagcagaagcggcac cgacttcaccctgaccatcagctccctgcagcccg aggacttcgccacctactactgccagcagcactac accaccccccccacatttggccagggcaccaaggt ggaaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgt tcatcttcccacctagcgacgagcagctgaagtcc ggcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaactt ctacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgg acaacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagc gtgaccgagcaggacagcaaggactccacctacag cctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgact acgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacc caccagggcctgtctagccccgtgaccaagagctt caaccggggcgagtgt
SEQ ID NO: 6
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctgcaggaatctggcc
ctggcctcgtgaagcctagccagaccctgagcctg acctgtaccgtgtccggcttcagcctgagcgacta cggcgtgcactgggtgcgccagccacctggaaaag
SEQ ID NO: 11
gcctggaatggctgggcgtgatctgggctggcgga ggcaccaactacaaccccagcctgaagtccagaaa gaccatcagcaaggacaccagcaagaaccaggtgt ccctgaagctgagcagcgtgacagccgccgatacc gccgtgtactactgcgccagagacaagggctacag ctactactacagcatggactactggggccagggca ccaccgtgaccgtgtcatcctctcaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgcttcgaccaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct
gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatcgtgctgacacagagccct gctagcctggccgtgtctcctggacagagggccac catcacctgtagagccagcgagagcgtggaatatt acgtgaccagcctgatgcagtggtatcagcagaag cccggccagccccccaagctgctgattttcgccgc cagcaacgtggaaagcggcgtgccagccagatttt ccggcagcggctctggcaccgacttcaccctgacc atcaaccccgtggaagccaacgacgtggccaacta ctactgccagcagagccggaaggtgccctacacct ttggccagggcaccaagctggaaatcaagaccaag ggccccagccgtacggtggccgctcccagcgtgtt catcttcccacctagcgacgagcagctgaagtccg gcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttc
SEQ ID NO: 12
tacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgga caacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagcg tgaccgagcaggacagcaaggactccacctacagc ctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgacta cgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgaccc accagggcctgtctagccccgtgaccaagagcttc aaccggggcgagtgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 3
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD19 (В34) с "выступом")
Н-цепь антитела к CD19 (B34) с "выступом"
Qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgyafssywmn wvrqapgqglewigqiwpgdgdtnynqkfkgratl tadeststaymelsslrsedtavyycarretttvg ryyyamdywgqgttvtvssastkgpsvfplapcsr stsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvh tfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvd hkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvf lfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfn wyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhq dwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprep qvytlppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavew esngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksr wqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
SEQ ID NO: 13
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD19 (В34))
L-цепь антитела к CD19 (B34)
Dlvltqspaslavspgqratitckasqsvdydgds ylnwyqqkpgqppklliydasnlvsgvparfsgsg sgtdftltinpveandtanyycqqstedpwtfgqg tkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcll nnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskds tyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvt ksfnrgec
SEQ ID NO: 14
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckasgytirtsyyih wvrqapgqglewigsiypgmvntnyaqkfqgratl
SEQ ID NO: 3
tvdtsista ymelsrlrsddtavyyc trshygldw nirdvwgkgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr 1sсaas gftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspirdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliyJcvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdf tiki srveaedvgvy у cgqgtqypf t f gs gtkveikgqpkaapdiqmtqspsslsasvgdrvti tcqasqniyvwlnwyqqkpgkapklliyJcasnlht gvpsrf sgs gsgtdf tltisslqpediatyycqqg gtypytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfifpps deqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkv yacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 4
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 3
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD19 (В34) с "выступом")
Н-цепь антитела к CD19 (B34) с "выступом"
caggtgcagctggtgcagagcggcgccgaagtgaa gaagcctggcagcagcgtgaaggtgagctgcaagg ccagcggctatgccttcagcagctactggatgaac tgggtgaggcaggcacctggccagggcctggagtg gataggccaaatatggcctggcgatggcgacacca actacaaccagaagttcaagggcagagcgaccttg
SEQ ID NO: 15
accgccgacgagagcaccagcaccgcgtacatgga
gctgagcagcctgaggagcgaggacaccgccgtgt
actattgcgccagaagggagaccaccaccgtgggc
aggtactactacgccatggactactggggccaggg
aaccaccgtgaccgtgagcagcgcctcgaccaagg
gcccatcggtgttccctctggccccttgcagcaga
agcaccagcgaatctacagccgccctgggctgcct
cgtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgt
cctggaactctggcgctctgacaagcggcgtgcac
acctttccagccgtgctccagagcagcggcctgta
ctctctgagcagcgtcgtgacagtgcccagcagca
gcctgggcaccaagacctacacctgtaacgtggac
cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagcgggt
ggaatctaagtacggccctccctgccctccttgcc
cagcccctgaatttctgggcggaccctccgtgttc
ctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgat
cagccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtgg
atgtgtcccaggaagatcccgaggtgcagttcaat
tggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaa
gaccaagcccagagaggaacagttcaacagcacct
accgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag
gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggt
gtccaacaagggcctgcccagctccatcgagaaaa
ccatcagcaaggccaagggccagccccgcgagcct
caagtgtataccctgcccccttgccaggaagagat
gaccaagaaccaggtgtccctgtggtgtctcgtga
aaggcttctaccccagcgacattgccgtggaatgg
gagagcaacggccagcccgagaacaactacaagac
caccccccctgtgctggacagcgacggctcattct
tcctgtactccaagctgaccgtggacaagagccgg
tggcaggaaggcaacgtgttcagetgetccgtgat
gcacgaggccctgcacaaccactacacccagaagt
ccctgtctctgtccctgggcaag
Легкая цепь А
L-цепь антитела к CD19
SEQ ID
(L-цепь антитела
(B34)gacctcgtgctgacccagagccctgcgagc
NO: 16
к CD19 (В34))
ctggctgtgagccctggccagagagccaccatcac ctgcaaagccagccagagcgtggactacgacggcg acagctacctcaactggtaccagcagaagcctggc cagccccccaagctgctgatttacgatgccagcaa cctggtgagcggcgtgcctgctagattcagcggct ccggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaac cccgtggaggccaacgacaccgccaactactactg ccagcagagcacggaggacccctggaccttcggcc agggcacaaagctggagatcaagcgtacggtggcc gctcccagcgtgttcatcttcccacctagcgacga gcagctgaagtccggcacagcctctgtcgtgtgcc tgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaagtg cagtggaaggtggacaacgccctgcagagcggcaa cagccaggaaagcgtgaccgagcaggacagcaagg actccacctacagcctgagcagcaccctgacactg agcaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgc ctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccg tgaccaagagcttcaaccggggcgagtgt
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctggtgcagtctggcg
ccgaggtcgtgaaacctggcgcctctgtgaaggtg tcctgcaaggccagcggctacacctttaccagcta ctacatccactgggtgcgccaggcccctggacagg gactggaatggatcggcagcatctaccccggcaac gtgaacaccaactacgcccagaagttccagggcag agccaccctgaccgtggacaccagcatcagcaccg cctacatggaactgagccggctgagaagcgacgac accgccgtgtactactgcacccggtcccactacgg cctggattggaacttcgacgtgtggggcaagggca ccaccgtgacagtgtctagcagccaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat
SEQ ID NO: 7
caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecatcagccgg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgccagcacaaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatccagatgacccagagcccc agcagcctgtctgccagcgtgggcgacagagtgac catcacctgtcaggccagccagaacatctacgtgt ggctgaactggtatcagcagaagcccggcaaggcc cccaagctgctgatctacaaggccagcaacctgca caccggcgtgcccagcagattttctggcagcggct ccggcaccgacttcaccctgacaatcagctccctg cagcccgaggacattgccacctactactgccagca gggccagacctacccctacacctttggccagggca ccaagctggaaatcaagaccaagggccccagccgt acggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccacc tagcgacgagcagctgaagtccggcacagcctctg tcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgag gccaaagtgcagtggaaggtggacaacgccctgca gagcggcaacagccaggaaagcgtgaccgagcagg acagcaaggactccacctacagcctgagcagcacc ctgacactgagcaaggccgactacgagaagcacaa ggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgt ctagccccgtgaccaagagcttcaaccggggcgag tgt
SEQ ID NO: 8
Аминокислотные последовательности связывающего белка 4
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела
Н-цепь антитела к CD19 (B34) с "выступом"
SEQ ID NO: 13
к CD19 (В34) с "выступом")
Qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgyafssywmn wvrqapgqglewigqiwpgdgdtnynqkfkgratl tadeststaymelsslrsedtavyycarretttvg ryyyamdywgqgttvtvssastkgpsvfplapcsr stsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvh tfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvd hkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvf lfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfn wyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhq dwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprep qvytlppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavew esngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksr wqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD19 (В34))
L-цепь антитела к CD19 (B34)
Dlvltqspaslavspgqratitckasqsvdydgds ylnwyqqkpgqppklliydasnlvsgvparfsgsg sgtdftltinpveandtanyycqqstedpwtfgqg tkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcll nnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskds tyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvt ksfnrgec
SEQ ID NO: 14
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgfslsdygvh wvrqppgkglewlgviwagggtnynpslksrktis kdtsknqvslklssvtaadtavyycardkgysyyy smdywgqgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr lscaasgftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf
SEQ ID NO: 9
nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliykvsnrfsgvpdrfsgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfgs gtkveikgqpkaapdivltqspaslavspgqrati tcrasesveyyvtslmqwyqqkpgqppkllifaas nvesgvparfsgsgsgtdftltinpveandvanyу cqqsrkvpytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfi fppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadye khkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 10
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 4
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD19 (В34) с "выступом")
Н-цепь антитела к CD19 (B34) с "выступом"
caggtgcagctggtgcagagcggcgccgaagtgaa gaagcctggcagcagcgtgaaggtgagctgcaagg ccagcggctatgccttcagcagctactggatgaac tgggtgaggcaggcacctggccagggcctggagtg gataggccaaatatggcctggcgatggcgacacca actacaaccagaagttcaagggcagagcgaccttg accgccgacgagagcaccagcaccgcgtacatgga gctgagcagcctgaggagcgaggacaccgccgtgt actattgcgccagaagggagaccaccaccgtgggc aggtactactacgccatggactactggggccaggg aaccaccgtgaccgtgagcagcgcctcgaccaagg gcccatcggtgttccctctggccccttgcagcaga agcaccagcgaatctacagccgccctgggctgcct cgtgaaggactactttcccgagcccgtgaccgtgt cctggaactctggcgctctgacaagcggcgtgcac acctttccagccgtgctccagagcagcggcctgta
SEQ ID NO: 15
ctctctgagcagcgtcgtgacagtgcccagcagca gcctgggcaccaagacctacacctgtaacgtggac cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagcgggt ggaatctaagtacggccctccctgccctccttgcc cagcccctgaatttctgggcggaccctccgtgttc ctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgat cagccggacccccgaagtgacctgcgtggtggtgg atgtgtcccaggaagatcccgaggtgcagttcaat tggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaa gaccaagcccagagaggaacagttcaacagcacct accgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggt gtccaacaagggcctgcccagctccatcgagaaaa ccatcagcaaggccaagggccagccccgcgagcct caagtgtataccctgcccccttgccaggaagagat gaccaagaaccaggtgtccctgtggtgtctcgtga aaggcttctaccccagcgacattgccgtggaatgg gagagcaacggccagcccgagaacaactacaagac caccccccctgtgctggacagcgacggctcattct tcctgtactccaagctgaccgtggacaagagccgg tggcaggaaggcaacgtgttcagetgetccgtgat gcacgaggccctgcacaaccactacacccagaagt ccctgtctctgtccctgggcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD19 (В34))
L-цепь антитела к CD19
(B34)gacctcgtgctgacccagagccctgcgagc
ctggctgtgagccctggccagagagccaccatcac
ctgcaaagccagccagagcgtggactacgacggcg
acagctacctcaactggtaccagcagaagcctggc
cagccccccaagctgctgatttacgatgccagcaa
cctggtgagcggcgtgcctgctagattcagcggct
ccggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaac
cccgtggaggccaacgacaccgccaactactactg
ccagcagagcacggaggacccctggaccttcggcc
agggcacaaagctggagatcaagcgtacggtggcc
gctcccagcgtgttcatcttcccacctagcgacga
SEQ ID NO: 16
gcagctgaagtccggcacagcctctgtcgtgtgcc tgctgaacaacttctacccccgcgaggccaaagtg cagtggaaggtggacaacgccctgcagagcggcaa cagccaggaaagcgtgaccgagcaggacagcaagg actccacctacagcctgagcagcaccctgacactg agcaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgc ctgcgaagtgacccaccagggcctgtctagccccg tgaccaagagcttcaaccggggcgagtgt
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctgcaggaatctggcc
ctggcctcgtgaagcctagccagaccctgagcctg acctgtaccgtgtccggcttcagcctgagcgacta cggcgtgcactgggtgcgccagccacctggaaaag gcctggaatggctgggcgtgatctgggctggcgga ggcaccaactacaaccccagcctgaagtccagaaa gaccatcagcaaggacaccagcaagaaccaggtgt ccctgaagctgagcagcgtgacagccgccgatacc gccgtgtactactgcgccagagacaagggctacag ctactactacagcatggactactggggccagggca ccaccgtgaccgtgtcatcctctcaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgcttcgaccaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg
SEQ ID NO: 11
ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg
SEQ ID NO: 12
cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatcgtgctgacacagagccct gctagcctggccgtgtctcctggacagagggccac catcacctgtagagccagcgagagcgtggaatatt acgtgaccagcctgatgcagtggtatcagcagaag cccggccagccccccaagctgctgattttcgccgc cagcaacgtggaaagcggcgtgccagccagatttt ccggcagcggctctggcaccgacttcaccctgacc atcaaccccgtggaagccaacgacgtggccaacta ctactgccagcagagccggaaggtgccctacacct ttggccagggcaccaagctggaaatcaagaccaag ggccccagccgtacggtggccgctcccagcgtgtt catcttcccacctagcgacgagcagctgaagtccg gcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttc tacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgga caacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagcg tgaccgagcaggacagcaaggactccacctacagc ctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgacta cgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgaccc accagggcctgtctagccccgtgaccaagagcttc aaccggggcgagtgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 5
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD38 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD38 с "выступом"
Qvqlvqsgaevakpgtsvklsckasgytftdywmq wvkqrpgqglewigtiypgdgdtgyaqkfqgkatl tadkssktvymhlsslasedsavyycargdyygsn sldywgqgtsvtvssastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpa vlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkps ntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfpp kpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvd gvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwln gkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvyt lppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesng qpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqeg
SEQ ID NO: 17
nvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD38)
L-цепь антитела к CD38
Divmtqshlsmstslgdpvsitckasqdvstvvaw yqqkpgqsprrliysasyryigvpdrftgsgagtd ftftissvqaedlavyycqqhysppytfgggtkle ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfу preakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysl sstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfn rgec
SEQ ID NO: 18
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckasgytirtsyyih wvrqapgqglewigsiypgmvntnyaqkfqgratl tvdtsista ymelsrlrsddtavyyc trshygldw nirdvwgkgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr 1sсaas gftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspf'dywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
SEQ ID NO: 3
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliyJcvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdf tiki srveaedvgvy у cgqgtqypf t f gs gtkveikgqpkaapdiqmtqspsslsasvgdrvti tcqasqniyvwlnwyqqkpgkapklliyJcasnlht gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpediatyycqqg
SEQ ID NO: 4
qtypy tfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfifpps
deqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs
gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkv
уacevthqglsspvtksfnrgec
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 5
Н-цепь антитела к CD38 с "выступом"
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtggc
caagcctggcacaagcgtgaagctgagctgcaagg
ccagcggctacaccttcaccgactactggatgcag
tgggtcaagcagaggccaggccagggcctggaatg
gatcggcacaatctatcccggcgacggcgataccg
gctacgcccagaagtttcagggcaaggccaccctg
accgccgacaagagcagcaagaccgtgtacatgca
cctgagcagcctggccagcgaggacagcgccgtgt
actattgcgccagaggcgactactacggcagcaac
agcctggactattggggccagggcaccagcgtgac
agtgtctagtgcgtcgaccaagggcccatcggtgt
tccctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaa
Тяжелая цепь А
tctacagccgccctgggctgcctcgtgaaggacta
Н-цепь антитела
ctttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctg
SEQ ID
к CD38 с
gcgctctgacaagcggcgtgcacacctttccagcc
NO: 19
"выступом"
gtgctccagagcagcggcctgtactctctgagcag
cgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggcacca
agacctacacctgtaacgtggaccacaagcccagc
aacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaagta
cggccctccctgccctccttgcccagcccctgaat
ttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccccca
aagcccaaggacaccctgatgatcagccggacccc
cgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccagg
aagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtggac
ggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccag
agaggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgt
ccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaac
ggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg
cctgcccagctccatcgagaaaaccatcagcaagg
ccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtatacc ctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaacca ggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttctacc ccagcgacattgccgtggaatgggagagcaacggc cagcccgagaacaactacaagaccaccccccctgt gctggacagcgacggctcattcttcctgtactcca agctgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggc aacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccct gcacaaccactacacccagaagtccctgtctctgt ccctgggcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD38)
L-цепь антитела к
CD38gacatcgtgatgacccagagccacctgagca tgagcaccagcctgggcgaccccgtgtccatcacc tgtaaagccagccaggacgtgtccaccgtggtggc ctggtatcagcagaagcctggccagagccccagac ggctgatctacagcgccagctatcggtacatcggc gtgcccgacagattcaccggaagcggagccggcac cgacttcaccttcaccatcagctctgtgcaggccg aggacctggccgtgtactactgccagcagcactac agccccccctacacctttggcggaggcaccaagct ggaaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgt tcatcttcccacctagcgacgagcagctgaagtcc ggcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaactt ctacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgg acaacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagc gtgaccgagcaggacagcaaggactccacctacag cctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgact acgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacc caccagggcctgtctagccccgtgaccaagagctt caaccggggcgagtgt
SEQ ID NO: 20
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctggtgcagtctggcg
ccgaggtcgtgaaacctggcgcctctgtgaaggtg tcctgcaaggccagcggctacacctttaccagcta
SEQ ID NO: 7
ctacatccactgggtgcgccaggcccctggacagg gactggaatggatcggcagcatctaccccggcaac gtgaacaccaactacgcccagaagttccagggcag agccaccctgaccgtggacaccagcatcagcaccg cctacatggaactgagccggctgagaagcgacgac accgccgtgtactactgcacccggtcccactacgg cctggattggaacttcgacgtgtggggcaagggca ccaccgtgacagtgtctagcagccaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgccagcacaaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc
aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatccagatgacccagagcccc agcagcctgtctgccagcgtgggcgacagagtgac catcacctgtcaggccagccagaacatctacgtgt ggctgaactggtatcagcagaagcccggcaaggcc cccaagctgctgatctacaaggccagcaacctgca caccggcgtgcccagcagattttctggcagcggct ccggcaccgacttcaccctgacaatcagctccctg cagcccgaggacattgccacctactactgccagca gggccagacctacccctacacctttggccagggca ccaagctggaaatcaagaccaagggccccagccgt acggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccacc tagcgacgagcagctgaagtccggcacagcctctg
SEQ ID NO: 8
tcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgag gccaaagtgcagtggaaggtggacaacgccctgca gagcggcaacagccaggaaagcgtgaccgagcagg acagcaaggactccacctacagcctgagcagcacc ctgacactgagcaaggccgactacgagaagcacaa ggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgt ctagccccgtgaccaagagcttcaaccggggcgag tgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 6
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD38 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD38 с "выступом"
qvqlvqsgaevakpgtsvklsckasgytftdywmq wvkqrpgqglewigtiypgdgdtgyaqkfqgkatl tadkssktvymhlsslasedsavyycargdyygsn sldywgqgtsvtvssastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpa vlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkps ntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfpp kpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvd gvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwln gkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvyt lppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesng qpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqeg nvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
SEQ ID NO: 17
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD38)
L-цепь антитела к CD38
Divmtqshlsmstslgdpvsitckasqdvstvvaw yqqkpgqsprrliysasyryigvpdrftgsgagtd ftftissvqaedlavyycqqhysppytfgggtkle ikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfу preakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysl sstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfn rgec
SEQ ID NO: 18
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgfslsdygvh
SEQ ID NO: 9
"впадиной")
wvrqppgkglewlgviwagggtnynpslksrktis kdtsknqvslklssvtaadtavyycardkgysyyy smdywgqgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr lscaasgftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliykvsnrfsgvpdrfsgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfgs gtkveikgqpkaapdivltqspaslavspgqrati tcrasesveyyvtslmqwyqqkpgqppkllifaas nvesgvparfsgsgsgtdftltinpveandvanyу cqqsrkvpytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfi fppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadye khkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 10
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 6
Тяжелая цепь А Н-цепь антитела к CD38 с "выступом"
Н-цепь антитела к CD38 с "выступом"
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtggc caagcctggcacaagcgtgaagctgagctgcaagg ccagcggctacaccttcaccgactactggatgcag tgggtcaagcagaggccaggccagggcctggaatg gatcggcacaatctatcccggcgacggcgataccg gctacgcccagaagtttcagggcaaggccaccctg
SEQ ID NO: 19
accgccgacaagagcagcaagaccgtgtacatgca
cctgagcagcctggccagcgaggacagcgccgtgt
actattgcgccagaggcgactactacggcagcaac
agcctggactattggggccagggcaccagcgtgac
agtgtctagtgcgtcgaccaagggcccatcggtgt
tccctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaa
tctacagccgccctgggctgcctcgtgaaggacta
ctttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctg
gcgctctgacaagcggcgtgcacacctttccagcc
gtgctccagagcagcggcctgtactctctgagcag
cgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggcacca
agacctacacctgtaacgtggaccacaagcccagc
aacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaagta
cggccctccctgccctccttgcccagcccctgaat
ttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccccca
aagcccaaggacaccctgatgatcagccggacccc
cgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccagg
aagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtggac
ggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccag
agaggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgt
ccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaac
ggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg
cctgcccagctccatcgagaaaaccatcagcaagg
ccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtatacc
ctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaacca
ggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttctacc
ccagcgacattgccgtggaatgggagagcaacggc
cagcccgagaacaactacaagaccaccccccctgt
gctggacagcgacggctcattcttcctgtactcca
agctgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggc
aacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccct
gcacaaccactacacccagaagtccctgtctctgt
ccctgggcaag
Легкая цепь А
L-цепь антитела к
SEQ ID
(L-цепь антитела
CD38gacatcgtgatgacccagagccacctgagca
NO: 20
к CD38)
tgagcaccagcctgggcgaccccgtgtccatcacc tgtaaagccagccaggacgtgtccaccgtggtggc ctggtatcagcagaagcctggccagagccccagac ggctgatctacagcgccagctatcggtacatcggc gtgcccgacagattcaccggaagcggagccggcac cgacttcaccttcaccatcagctctgtgcaggccg aggacctggccgtgtactactgccagcagcactac agccccccctacacctttggcggaggcaccaagct ggaaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgt tcatcttcccacctagcgacgagcagctgaagtcc ggcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaactt ctacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgg acaacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagc gtgaccgagcaggacagcaaggactccacctacag cctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgact acgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacc caccagggcctgtctagccccgtgaccaagagctt caaccggggcgagtgt
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctgcaggaatctggcc
ctggcctcgtgaagcctagccagaccctgagcctg acctgtaccgtgtccggcttcagcctgagcgacta cggcgtgcactgggtgcgccagccacctggaaaag gcctggaatggctgggcgtgatctgggctggcgga ggcaccaactacaaccccagcctgaagtccagaaa gaccatcagcaaggacaccagcaagaaccaggtgt ccctgaagctgagcagcgtgacagccgccgatacc gccgtgtactactgcgccagagacaagggctacag ctactactacagcatggactactggggccagggca ccaccgtgaccgtgtcatcctctcaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat
SEQ ID NO: 11
caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecatcagccgg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgcttcgaccaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca aggccgcccccgacatcgtgctgacacagagccct gctagcctggccgtgtctcctggacagagggccac catcacctgtagagccagcgagagcgtggaatatt acgtgaccagcctgatgcagtggtatcagcagaag cccggccagccccccaagctgctgattttcgccgc cagcaacgtggaaagcggcgtgccagccagatttt ccggcagcggctctggcaccgacttcaccctgacc atcaaccccgtggaagccaacgacgtggccaacta ctactgccagcagagccggaaggtgccctacacct ttggccagggcaccaagctggaaatcaagaccaag ggccccagccgtacggtggccgctcccagcgtgtt catcttcccacctagcgacgagcagctgaagtccg gcacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttc tacccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtgga caacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagcg tgaccgagcaggacagcaaggactccacctacagc ctgagcagcaccctgacactgagcaaggccgacta cgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgaccc accagggcctgtctagccccgtgaccaagagcttc aaccggggcgagtgt
SEQ ID NO: 12
Аминокислотные последовательности связывающего белка 7
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к LAMP1 с
Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgyif'tnynih
SEQ ID NO: 21
"выступом")
wvkkspgqglewigaiypgrigdapysqkfqgkatl tadtststtymelsslrsedtavyусvranwdvaf aywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsest aalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavl qssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsnt kvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkp kdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgv evhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngk eykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlp pcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqp ennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnv fscsvmhealhnhytqkslslslgk
Легкая цепь А (L-цепь антитела к LAMP1)
L-цепь антитела к LAMP1
Di qmt qsp s s 1 s a svgdrvt i t с kasqdidrymavj yqdkpgkaprllihdtstlqsgvpsrfsgsgsgrd ytltisnlepedfatyyclqydnlwtfgggtkvei krtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysls stltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee
SEQ ID NO: 22
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckasgytirtsyyih wvrqapgqglewigsiypgmvntnyaqkfqgratl tvdtsista ymelsrlrsddtavyyc trshygldw nirdvwgkgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr 1sсaas gftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspf'dywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss
SEQ ID NO: 3
iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliyJcvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfqs gtkveikgqpkaapdiqmtqspsslsasvgdrvti tcqasqniyvwlnwyqqkpgkapklliyJcasnlht gvpsrf sgs gsgtdf tltisslqpediatyycqqgr qtypytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfifpps deqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkv уacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 4
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 7
Тяжелая цепь А Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaa gaaacccggcagcagcgtgaaggtgtcctgcaagg ccagcggctacatcttcaccaactacaacatccac tgggtcaagaagtccccaggccagggcctggaatg gatcggcgccatctatcccggaaacggcgacgccc cttacagccagaagttccagggcaaggccaccctg accgccgataccagcacctccaccacctacatgga actgagcagcctgcggagcgaggacaccgccgtgt actattgcgtgcgggccaactgggatgtggccttc gcctattggggccagggcacactcgtgaccgtgtc ctctgcgtcgaccaagggcccatcggtgttccctc tggccccttgcagcagaagcaccagcgaatctaca gccgccctgggctgcctcgtgaaggactactttcc cgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcgctc tgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtgctc cagagcagcggcctgtactctctgagcagcgtcgt gacagtgcccagcagcagcctgggcaccaagacct
SEQ ID NO: 23
acacctgtaacgtggaccacaagcccagcaacacc aaggtggacaagcgggtggaatctaagtacggccc tccctgccctccttgcccagcccctgaatttctgg gcggaccctccgtgttcctgttccccccaaagccc aaggacaccctgatgatcagccggacccccgaagt gacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaagatc ccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcacaacgccaagaccaagcccagagagga acagttcaacagcacctaccgggtggtgtccgtgc tgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaa gagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcc cagctccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagg gccagccccgcgagcctcaagtgtataccctgccc ccttgccaggaagagatgaccaagaaccaggtgtc cctgtggtgtctcgtgaaaggcttctaccccagcg acattgccgtggaatgggagagcaacggccagccc gagaacaactacaagaccaccccccctgtgctgga cagcgacggctcattcttcctgtactccaagctga ccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaacgtg ttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaa ccactacacccagaagtccctgtctctgtccctgg gcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к LAMP1)
L-цепь антитела к
LAMPlgacatccagatgacccagagccccagcagc ctgtctgccagcgtgggcgacagagtgaccatcac atgcaaggccagccaggacatcgatcggtacatgg cctggtatcaggacaagcccggcaaggcccccaga ctgctgatccacgataccagcacactgcagagcgg cgtgcccagcagattttccggctctggcagcggca gagactacaccctgaccatcagcaacctggaaccc gaggacttcgccacctactactgcctgcagtacga caacctgtggaccttcggcggaggcaccaaggtgg aaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgttc atcttcccacctagcgacgagcagctgaagtccgg cacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttct
SEQ ID NO: 24
acccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggac aacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagcgt gaccgagcaggacagcaaggactccacctacagcc tgagcagcaccctgacactgagcaaggccgactac gagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgaccca ccagggcctgtctagccccgtgaccaagagcttca accggggcgagtgt
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctggtgcagtctggcg
ccgaggtcgtgaaacctggcgcctctgtgaaggtg tcctgcaaggccagcggctacacctttaccagcta ctacatccactgggtgcgccaggcccctggacagg gactggaatggatcggcagcatctaccccggcaac gtgaacaccaactacgcccagaagttccagggcag agccaccctgaccgtggacaccagcatcagcaccg cctacatggaactgagccggctgagaagcgacgac accgccgtgtactactgcacccggtcccactacgg cctggattggaacttcgacgtgtggggcaagggca ccaccgtgacagtgtctagcagccaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgccagcacaaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg
SEQ ID NO: 7
ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и
CD28gacatcgtgatgacccagacccccctgagcc tgagcgtgacacctggacagcctgccagcatcagc tgcaagagcagccagagcctggtgcacaacaacgc caacacctacctgagctggtatctgcagaagcccg gccagagcccccagtccctgatctacaaggtgtcc aacagattcagcggcgtgcccgacagattctccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaagatca gccgggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactat tgtggccagggcacccagtaccccttcacctttgg cagcggcaccaaggtggaaatcaagggccagccca
SEQ ID NO: 8
aggccgcccccgacatccagatgacccagagcccc agcagcctgtctgccagcgtgggcgacagagtgac catcacctgtcaggccagccagaacatctacgtgt ggctgaactggtatcagcagaagcccggcaaggcc cccaagctgctgatctacaaggccagcaacctgca caccggcgtgcccagcagattttctggcagcggct ccggcaccgacttcaccctgacaatcagctccctg cagcccgaggacattgccacctactactgccagca gggccagacctacccctacacctttggccagggca ccaagctggaaatcaagaccaagggccccagccgt acggtggccgctcccagcgtgttcatcttcccacc tagcgacgagcagctgaagtccggcacagcctctg tcgtgtgcctgctgaacaacttctacccccgcgag gccaaagtgcagtggaaggtggacaacgccctgca gagcggcaacagccaggaaagcgtgaccgagcagg acagcaaggactccacctacagcctgagcagcacc ctgacactgagcaaggccgactacgagaagcacaa ggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgt ctagccccgtgaccaagagcttcaaccggggcgag tgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 8
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом")
Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckascjyi:ftnyni.h wvkkspgqglewigaiypcjngdapysqkf qgkatl tadtststtymelsslrsedtavyусvranwdvaf aywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsest aalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavl qssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsnt kvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkp kdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgv evhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngk eykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlp pcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqp
SEQ ID NO: 21
ennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnv fscsvmhealhnhytqkslslslgk
Легкая цепь А (L-цепь антитела к LAMP1)
L-цепь антитела к LAMP1
Di qmt qsp s s 1 s a svgdrvt i t с kasqdidrymavj yqdkpgkaprllihdtstlqsgvpsrfsgsgsgrd ytltisnlepedfatyyclqydnlwtfgggtkvei krtvaapsvf if ppsdeqlksgtaswcllnnf yp reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysls stltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee
SEQ ID NO: 22
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной"
Qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgfslsdygvh wvrqppgkglewlgviwagggtnynpslksrktis kdtsknqvslklssvtaadtavyycardkgysyyy smdywgqgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr lscaasgftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
SEQ ID NO: 9
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliykvsnrfsgvpdrfsgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfgs gtkveikgqpkaapdivltqspaslavspgqrati tcrasesveyyvtslmqwyqqkpgqppkllifaas
SEQ ID NO: 10
nvesgvparfsgsgsgtdftltinpveandvanyу cqqsrkvpytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfi fppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadye khkvyacevthqglsspvtksfnrgec
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 8
Тяжелая цепь А Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
Н-цепь антитела к LAMP1 с "выступом"
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaa gaaacccggcagcagcgtgaaggtgtcctgcaagg ccagcggctacatcttcaccaactacaacatccac tgggtcaagaagtccccaggccagggcctggaatg gatcggcgccatctatcccggaaacggcgacgccc cttacagccagaagttccagggcaaggccaccctg accgccgataccagcacctccaccacctacatgga actgagcagcctgcggagcgaggacaccgccgtgt actattgcgtgcgggccaactgggatgtggccttc gcctattggggccagggcacactcgtgaccgtgtc ctctgcgtcgaccaagggcccatcggtgttccctc tggccccttgcagcagaagcaccagcgaatctaca gccgccctgggctgcctcgtgaaggactactttcc cgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcgctc tgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtgctc cagagcagcggcctgtactctctgagcagcgtcgt gacagtgcccagcagcagcctgggcaccaagacct acacctgtaacgtggaccacaagcccagcaacacc aaggtggacaagcgggtggaatctaagtacggccc tccctgccctccttgcccagcccctgaatttctgg gcggaccctccgtgttcctgttccccccaaagccc aaggacaccctgatgatcagccggacccccgaagt gacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaagatc ccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcacaacgccaagaccaagcccagagagga acagttcaacagcacctaccgggtggtgtccgtgc tgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaa
SEQ ID NO: 23
gagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcc cagctccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagg gccagccccgcgagcctcaagtgtataccctgccc ccttgccaggaagagatgaccaagaaccaggtgtc cctgtggtgtctcgtgaaaggcttctaccccagcg acattgccgtggaatgggagagcaacggccagccc gagaacaactacaagaccaccccccctgtgctgga cagcgacggctcattcttcctgtactccaagctga ccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaacgtg ttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaa ccactacacccagaagtccctgtctctgtccctgg gcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к LAMP1)
L-цепь антитела к
LAMPlgacatccagatgacccagagccccagcagc ctgtctgccagcgtgggcgacagagtgaccatcac atgcaaggccagccaggacatcgatcggtacatgg cctggtatcaggacaagcccggcaaggcccccaga ctgctgatccacgataccagcacactgcagagcgg cgtgcccagcagattttccggctctggcagcggca gagactacaccctgaccatcagcaacctggaaccc gaggacttcgccacctactactgcctgcagtacga caacctgtggaccttcggcggaggcaccaaggtgg aaatcaagcgtacggtggccgctcccagcgtgttc atcttcccacctagcgacgagcagctgaagtccgg cacagcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttct acccccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggac aacgccctgcagagcggcaacagccaggaaagcgt gaccgagcaggacagcaaggactccacctacagcc tgagcagcaccctgacactgagcaaggccgactac gagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgaccca ccagggcctgtctagccccgtgaccaagagcttca accggggcgagtgt
SEQ ID NO: 24
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со
"BnaflHHoi4"caggtgcagctgcaggaatctggcc
SEQ ID NO: 11
к CD28 и CD3 со "впадиной")
ctggcctcgtgaagcctagccagaccctgagcctg acctgtaccgtgtccggcttcagcctgagcgacta cggcgtgcactgggtgcgccagccacctggaaaag gcctggaatggctgggcgtgatctgggctggcgga ggcaccaactacaaccccagcctgaagtccagaaa gaccatcagcaaggacaccagcaagaaccaggtgt ccctgaagctgagcagcgtgacagccgccgatacc gccgtgtactactgcgccagagacaagggctacag ctactactacagcatggactactggggccagggca ccaccgtgaccgtgtcatcctctcaggtgcagctg gtggaatctggcggcggagtggtgcagcctggcag aagcctgagactgagetgtgccgccagcggcttea ccttcaccaaggcctggatgcactgggtgcgccag gcccctggaaagcagctggaatgggtggcccagat caaggacaagagcaacagctacgccacctactacg ccgacagcgtgaagggccggttcaecateagcegg gacgacagcaagaacaccctgtacctgcagatgaa cagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactact gtcggggcgtgtactatgccctgagccccttcgat tactggggccagggaaccctcgtgaccgtgtctag tcggaccgcttcgaccaagggcccatcggtgttcc ctctggccccttgcagcagaagcaccagcgaatct acagccgccctgggctgcctcgtgaaggactactt tcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacaagcggcgtgcacacctttccagccgtg ctccagagcagcggcctgtactctctgagcagcgt cgtgacagtgcccagcagcagcctgggcaccaaga cctacacctgtaacgtggaccacaagcccagcaac accaaggtggacaagcgggtggaatctaagtacgg ccctccctgccctccttgcccagcccctgaatttc tgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccga agtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaggaag atcccgaggtgcagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccagaga
ggaacagttcaacagcacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggactggctgaacggc aaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcct gcccagctccatcgagaaaaccatcagcaaggcca agggccagccccgcgagcctcaagtgtgtaccctg ccccctagccaggaagagatgaccaagaaccaggt gtccctgagctgtgccgtgaaaggcttctacccca gcgacattgccgtggaatgggagagcaacggccag cccgagaacaactacaagaccaccccccctgtgct ggacagcgacggctcattcttcctggtgtccaagc tgaccgtggacaagagccggtggcaggaaggcaac gtgttcagctgctccgtgatgcacgaggccctgca caaccactacacccagaagtccctgtctctgtccc tgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
Anti-CD3 x Anti-CD28-L:
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgag cgtgacacctggacagcctgccagcatcagctgca agagcagccagagcctggtgcacaacaacgccaac acctacctgagctggtatctgcagaagcccggcca gagcccccagtccctgatctacaaggtgtccaaca gattcagcggcgtgcccgacagattctccggcagc ggctctggcaccgacttcaccctgaagatcagccg ggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactattgtg gccagggcacccagtaccccttcacctttggcagc ggcaccaaggtggaaatcaagggccagcccaaggc cgcccccgacatcgtgctgacacagagccctgcta gcctggccgtgtctcctggacagagggccaccatc acctgtagagccagcgagagcgtggaatattacgt gaccagcctgatgcagtggtatcagcagaagcccg gccagccccccaagctgctgattttcgccgccagc aacgtggaaagcggcgtgccagccagattttccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaccatca accccgtggaagccaacgacgtggccaactactac tgccagcagagccggaaggtgccctacacctttgg ccagggcaccaagctggaaatcaagaccaagggcc
SEQ ID NO: 12
ccagccgtacggtggccgctcccagcgtgttcatc ttcccacctagcgacgagcagctgaagtccggcac agcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacc cccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggacaac gccctgcagagcggcaacagccaggaaagcgtgac cgagcaggacagcaaggactccacctacagcctga gcagcaccctgacactgagcaaggccgactacgag aagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccacca gggcctgtctagccccgtgaccaagagcttcaacc ggggcgagtgt
Аминокислотные последовательности связывающего белка 20
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD2 0 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD20 с "выступом"
Qvqlqqpgaelvkpgasvkmsckascjyt:ftsynmh wvkqtpgrglewigaiypgrigdtsynqkf kgkatl tadkssstaymqlsslts eels a vy у cars tyyggd wyfnvwgagttvtvsaastkgpsvfplapcsrsts estaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfp avlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkp sntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfp pkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyv dgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwl ngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvy tlppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesn gqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqe gnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
SEQ ID NO: 114
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD2 0)
L-цепь антитела к CD20
Qivlsqspailsaspgekvtmtcrasssvsyihwf qqkpgsspkpwiyatsnlasgvpvrfsgsgsgtsy sltisrveaedaatyyccjqvtsrippt f gggtklei krtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysls stltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee
SEQ ID NO: 115
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 с "выступом"
SEQ ID NO: 3
к CD28 и CD3 с "выступом")
Qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckasgytr~tsyyih wvrqapgqglewigsiypgmvntnyaqkfqgratl tvdtsista ymelsrlrsddtavyyc trshygldw nr~dvwgkgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr 1sсaas gftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
Divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliyJcvsnrf sgvpdrf sgs gsgtdf tiki srveaedvgvy у cgqgtqypf t f gs gtkveikgqpkaapdiqmtqspsslsasvgdrvti tcqasqniyvwlnwyqqkpgkapklliyJcasnlht gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpediatyycqqg gtypytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfifpps deqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkv уacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 4
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 20
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD2 0 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD20 с "выступом"
caggtgcagctgcagcagcctggcgccgaactcgt gaaacctggcgcctccgtgaagatgagctgcaagg ccagcggctacaccttcaccagctacaacatgcac tgggtcaagcagacccccggcagaggcctggaatg gatcggcgccatctaccccggcaacggcgacacct
SEQ ID NO: 116
cctacaaccagaagttcaagggcaaggccaccctg
accgccgacaagagcagcagcacagcctacatgca
gctgtccagcctgaccagcgaggacagcgccgtgt
actactgcgccagaagcacctactacggcggcgac
tggtacttcaacgtgtggggagccggcaccaccgt
gacagtgtctgctgcttcgaccaagggcccatcgg
tgttccctctggccccttgcagcagaagcaccagc
gaatctacagccgccctgggctgcctcgtgaagga
ctactttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaact
ctggcgctctgacaagcggcgtgcacacctttcca
gccgtgctccagagcagcggcctgtactctctgag
cagcgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggca
ccaagacctacacctgtaacgtggaccacaagccc
agcaacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaa
gtacggccctccctgccctccttgcccagcccctg
aatttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccc
ccaaagcccaaggacaccctgatgatcagccggac
ccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtccc
aggaagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtg
gacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc
cagagaggaacagttcaacagcacctaccgggtgg
tgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctg
aacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaa
gggcctgcccagctccatcgagaaaaccatcagca
aggccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtat
accctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttct
accccagcgacattgccgtggaatgggagagcaac
ggccagcccgagaacaactacaagaccaccccccc
tgtgctggacagcgacggctcattcttcctgtact
ccaagctgaccgtggacaagagccggtggcaggaa
ggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggc
cctgcacaaccactacacccagaagtccctgtctc
tgtccctgggcaag
Легкая цепь А
L-цепь антитела к CD20
SEQ ID
(L-цепь антитела к CD2 0)
cagatcgtgctgagccagagccctgccatcctgag cgcttccccaggcgagaaagtgaccatgacctgca gagccagcagcagcgtgtcctacatccactggttc cagcagaagcccggcagcagccccaagccttggat ctacgccaccagcaatctggccagcggagtgcctg tgcggtttagcggctctggcagcggcacaagctac agcctgaccatcagccgggtggaagccgaagatgc cgccacctactactgccagcagtggaccagcaacc cccccacatttggcggaggcaccaagctggaaatc aagcgtacggtggccgctcccagcgtgttcatctt cccacctagcgacgagcagctgaagtccggcacag cctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccc cgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggacaacgc cctgcagagcggcaacagccaggaaagcgtgaccg agcaggacagcaaggactccacctacagcctgagc agcaccctgacactgagcaaggccgactacgagaa gcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagg gcctgtctagccccgtgaccaagagcttcaaccgg ggcgagtgt
NO: 117
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 со "впадиной")
Н-цепь антитела к CD2 8 и CD3 со "впадиной"
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaggtcgt gaaacctggcgcctctgtgaaggtgtcctgcaagg ccagcggctacacctttaccagctactacatccac tgggtgcgccaggcccctggacagggactggaatg gatcggcagcatctaccccggcaacgtgaacacca actacgcccagaagttccagggcagagccaccctg accgtggacaccagcatcagcaccgcctacatgga actgagccggctgagaagcgacgacaccgccgtgt actactgcacccggtcccactacggcctggattgg aacttcgacgtgtggggcaagggcaccaccgtgac agtgtctagcagccaggtgcagctggtggaatctg gcggcggagtggtgcagcctggcagaagcctgaga ctgagctgtgccgccagcggcttcaccttcaccaa
SEQ ID NO: 7
ggcctggatgcactgggtgcgccaggcccctggaa agcagctggaatgggtggcccagatcaaggacaag agcaacagctacgccacctactacgccgacagcgt gaagggccggttcaecatcagccgggacgacagca agaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgcgg gccgaggacaccgccgtgtactactgtcggggcgt gtactatgccctgagccccttcgattactggggcc agggaaccctcgtgaccgtgtctagtcggaccgcc agcacaaagggcccatcggtgttccctctggcccc ttgcagcagaagcaccagcgaatctacagccgccc tgggctgcctcgtgaaggactactttcccgagccc gtgaccgtgtcctggaactctggcgctctgacaag cggcgtgcacacctttccagccgtgctccagagca gcggcctgtactctctgagcagcgtcgtgacagtg cccagcagcagcctgggcaccaagacctacacctg taacgtggaccacaagcccagcaacaccaaggtgg acaagcgggtggaatctaagtacggccctccctgc cctccttgcccagcccctgaatttctgggcggacc ctccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggaca ccctgatgatcagccggacccccgaagtgacctgc gtggtggtggatgtgtcccaggaagatcccgaggt gcagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgc acaacgccaagaccaagcccagagaggaacagttc aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgt gctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtaca agtgcaaggtgtccaacaagggcctgcccagctcc atcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccagcc ccgcgagcctcaagtgtgtaccctgccccctagcc aggaagagatgaccaagaaccaggtgtccctgagc tgtgccgtgaaaggcttctaccccagcgacattgc cgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaaca actacaagaccaccccccctgtgctggacagcgac ggctcattcttcctggtgtccaagctgaccgtgga caagagccggtggcaggaaggcaacgtgttcagct gctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactac
acccagaagtccctgtctctgtccctgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28 со "впадиной")
L-цепь антитела к CD3 и CD28 со "впадиной"
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgag cgtgacacctggacagcctgccagcatcagctgca agagcagccagagcctggtgcacaacaacgccaac acctacctgagctggtatctgcagaagcccggcca gagcccccagtccctgatctacaaggtgtccaaca gattcagcggcgtgcccgacagattctccggcagc ggctctggcaccgacttcaccctgaagatcagccg ggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactattgtg gccagggcacccagtaccccttcacctttggcagc ggcaccaaggtggaaatcaagggccagcccaaggc cgcccccgacatccagatgacccagagccccagca gcctgtctgccagcgtgggcgacagagtgaccatc acctgtcaggccagccagaacatctacgtgtggct gaactggtatcagcagaagcccggcaaggccccca agctgctgatctacaaggccagcaacctgcacacc ggcgtgcccagcagattttctggcagcggctccgg caccgacttcaccctgacaatcagctccctgcagc ccgaggacattgccacctactactgccagcagggc cagacctacccctacacctttggccagggcaccaa gctggaaatcaagaccaagggccccagccgtacgg tggccgctcccagcgtgttcatcttcccacctagc gacgagcagctgaagtccggcacagcctctgtcgt gtgcctgctgaacaacttctacccccgcgaggcca aagtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagagc ggcaacagccaggaaagcgtgaccgagcaggacag caaggactccacctacagcctgagcagcaccctga cactgagcaaggccgactacgagaagcacaaggtg tacgcctgcgaagtgacccaccagggcctgtctag ccccgtgaccaagagcttcaaccggggcgagtgt
SEQ ID NO: 8
Аминокислотные последовательности связывающего белка 21
Тяжелая цепь А
Н-цепь антитела к CD20 с "выступом"
SEQ ID
(Н-цепь антитела к CD2 0 с "выступом")
qvqlqqpgaelvkpgasvkmsckascjytirtsynmh wvkqtpgrglewigaiypgrigdtsynqkfkgkatl tadkssstaymqlsslts eels a vy у cars tyyggd wyfnvwgagttvtvsaastkgpsvfplapcsrsts estaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfp avlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkp sntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfp pkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyv dgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwl ngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvy tlppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesn gqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqe gnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk
NO: 114
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD2 0)
L-цепь антитела к CD20
qivlsqspailsaspgekvtmtcrasssvsyihwf qqkpgsspkpwiyatsnlasgvpvrfsgsgsgtsy sltisrveaedaatyyccjqvtsrippt f gggtklei krtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysls stltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnr gee
SEQ ID NO: 115
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 с "выступом"
qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgfslsdygvh wvrqppgkglewlgviwagggtnynpslksrktis kdtsknqvslklssvtaadtavyycardkgysyyy smdywgqgttvtvsssqvqlvesgggvvqpgrslr lscaasgftftkawmhwvrqapgkqlewvaqikdk snsyatyyadsvkgrftisrddskntlylqmnslr aedtavyycrgvyyalspfdywgqgtlvtvssrta stkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpep vtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtv pssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppc ppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtс vvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf
SEQ ID NO: 9
nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpss iektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvsls cavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsd gsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhy tqkslslslgk
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28 divmtqtplslsvtpgqpasisckssqslvhnnan tylswylqkpgqspqsliykvsnrfsgvpdrfsgs gsgtdftikisrveaedvgvyуcgqgtqypftfgs gtkveikgqpkaapdivltqspaslavspgqrati tcrasesveyyvtslmqwyqqkpgqppkllifaas nvesgvparfsgsgsgtdftltinpveandvanyу cqqsrkvpytfgqgtkleiktkgpsrtvaapsvfi fppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadye khkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO: 10
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 21
Тяжелая цепь А (Н-цепь антитела к CD2 0 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD20 с "выступом"
caggtgcagctgcagcagcctggcgccgaactcgt gaaacctggcgcctccgtgaagatgagctgcaagg ccagcggctacaccttcaccagctacaacatgcac tgggtcaagcagacccccggcagaggcctggaatg gatcggcgccatctaccccggcaacggcgacacct cctacaaccagaagttcaagggcaaggccaccctg accgccgacaagagcagcagcacagcctacatgca gctgtccagcctgaccagcgaggacagcgccgtgt actactgcgccagaagcacctactacggcggcgac tggtacttcaacgtgtggggagccggcaccaccgt gacagtgtctgctgcttcgaccaagggcccatcgg tgttccctctggccccttgcagcagaagcaccagc gaatctacagccgccctgggctgcctcgtgaagga ctactttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaact ctggcgctctgacaagcggcgtgcacacctttcca gccgtgctccagagcagcggcctgtactctctgag cagcgtcgtgacagtgcccagcagcagcctgggca
SEQ ID NO: 116
ccaagacctacacctgtaacgtggaccacaagccc agcaacaccaaggtggacaagcgggtggaatctaa gtacggccctccctgccctccttgcccagcccctg aatttctgggcggaccctccgtgttcctgttcccc ccaaagcccaaggacaccctgatgatcagccggac ccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtccc aggaagatcccgaggtgcagttcaattggtacgtg gacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc cagagaggaacagttcaacagcacctaccgggtgg tgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggactggctg aacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaa gggcctgcccagctccatcgagaaaaccatcagca aggccaagggccagccccgcgagcctcaagtgtat accctgcccccttgccaggaagagatgaccaagaa ccaggtgtccctgtggtgtctcgtgaaaggcttct accccagcgacattgccgtggaatgggagagcaac ggccagcccgagaacaactacaagaccaccccccc tgtgctggacagcgacggctcattcttcctgtact ccaagctgaccgtggacaagagccggtggcaggaa ggcaacgtgttcagctgctccgtgatgcacgaggc cctgcacaaccactacacccagaagtccctgtctc tgtccctgggcaag
Легкая цепь А (L-цепь антитела к CD2 0)
L-цепь антитела к CD20
cagatcgtgctgagccagagccctgccatcctgag cgcttccccaggcgagaaagtgaccatgacctgca gagccagcagcagcgtgtcctacatccactggttc cagcagaagcccggcagcagccccaagccttggat ctacgccaccagcaatctggccagcggagtgcctg tgcggtttagcggctctggcagcggcacaagctac agcctgaccatcagccgggtggaagccgaagatgc cgccacctactactgccagcagtggaccagcaacc cccccacatttggcggaggcaccaagctggaaatc aagcgtacggtggccgctcccagcgtgttcatctt cccacctagcgacgagcagctgaagtccggcacag cctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacccc
SEQ ID NO: 117
cgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggacaacgc cctgcagagcggcaacagccaggaaagcgtgaccg agcaggacagcaaggactccacctacagcctgagc agcaccctgacactgagcaaggccgactacgagaa gcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccaccagg gcctgtctagccccgtgaccaagagcttcaaccgg ggcgagtgt
Тяжелая цепь В (Н-цепь антитела к CD28 и CD3 с "выступом")
Н-цепь антитела к CD28 и CD3 с "выступом"
caggtgcagctgcaggaatctggccctggcctcgt gaagcctagccagaccctgagcctgacctgtaccg tgtccggcttcagcctgagcgactacggcgtgcac tgggtgcgccagccacctggaaaaggcctggaatg gctgggcgtgatctgggctggcggaggcaccaact acaaccccagcctgaagtccagaaagaccatcagc aaggacaccagcaagaaccaggtgtccctgaagct gagcagcgtgacagccgccgataccgccgtgtact actgcgccagagacaagggctacagctactactac agcatggactactggggccagggcaccaccgtgac cgtgtcatcctctcaggtgcagctggtggaatctg gcggcggagtggtgcagcctggcagaagcctgaga ctgagctgtgccgccagcggcttcaccttcaccaa ggcctggatgcactgggtgcgccaggcccctggaa agcagctggaatgggtggcccagatcaaggacaag agcaacagctacgccacctactacgccgacagcgt gaagggccggttcaecatcagccgggacgacagca agaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgcgg gccgaggacaccgccgtgtactactgtcggggcgt gtactatgccctgagccccttcgattactggggcc agggaaccctcgtgaccgtgtctagtcggaccgct tcgaccaagggcccatcggtgttccctctggcccc ttgcagcagaagcaccagcgaatctacagccgccc tgggctgcctcgtgaaggactactttcccgagccc gtgaccgtgtcctggaactctggcgctctgacaag
SEQ ID NO: 118
cggcgtgcacacctttccagccgtgctccagagca gcggcctgtactctctgagcagcgtcgtgacagtg cccagcagcagcctgggcaccaagacctacacctg taacgtggaccacaagcccagcaacaccaaggtgg acaagcgggtggaatctaagtacggccctccctgc cctccttgcccagcccctgaatttctgggcggacc ctccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggaca ccctgatgatcagccggacccccgaagtgacctgc gtggtggtggatgtgtcccaggaagatcccgaggt gcagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgc acaacgccaagaccaagcccagagaggaacagttc aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgt gctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtaca agtgcaaggtgtccaacaagggcctgcccagctcc atcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccagcc ccgcgagcctcaagtgtgtaccctgccccctagcc aggaagagatgaccaagaaccaggtgtccctgagc tgtgccgtgaaaggcttctaccccagcgacattgc cgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaaca actacaagaccaccccccctgtgctggacagcgac ggctcattcttcctggtgtccaagctgaccgtgga caagagccggtggcaggaaggcaacgtgttcagct gctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactac acccagaagtccctgtctctgtccctgggcaag
Легкая цепь В (L-цепь антитела к CD3 и CD28)
L-цепь антитела к CD3 и CD28
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgag
cgtgacacctggacagcctgccagcatcagctgca
agagcagccagagcctggtgcacaacaacgccaac
acctacctgagctggtatctgcagaagcccggcca
gagcccccagtccctgatctacaaggtgtccaaca
gattcagcggcgtgcccgacagattctccggcagc
ggctctggcaccgacttcaccctgaagatcagccg
ggtggaagccgaggacgtgggcgtgtactattgtg
gccagggcacccagtaccccttcacctttggcagc
ggcaccaaggtggaaatcaagggccagcccaaggc
SEQ ID NO: 119
cgcccccgacatcgtgctgacacagagccctgcta gcctggccgtgtctcctggacagagggccaccatc acctgtagagccagcgagagcgtggaatattacgt gaccagcctgatgcagtggtatcagcagaagcccg gccagccccccaagctgctgattttcgccgccagc aacgtggaaagcggcgtgccagccagattttccgg cagcggctctggcaccgacttcaccctgaccatca accccgtggaagccaacgacgtggccaactactac tgccagcagagccggaaggtgccctacacctttgg ccagggcaccaagctggaaatcaagaccaagggcc ccagccgtacggtggccgctcccagcgtgttcatc ttcccacctagcgacgagcagctgaagtccggcac agcctctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctacc cccgcgaggccaaagtgcagtggaaggtggacaac gccctgcagagcggcaacagccaggaaagcgtgac cgagcaggacagcaaggactccacctacagcctga gcagcaccctgacactgagcaaggccgactacgag aagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccacca gggcctgtctagccccgtgaccaagagcttcaacc ggggcgagtgt
ELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPG
Легкая цепь А
LC:
DIQMT QS Р S S L S AS VGDRVTIТ CRASQGimTYLAW Y QQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASS YL S LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 61
Тяжелая цепь В
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMTDPSDGETRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DSAVYYC TRLKEYGNYDSF
YFDVWGAGTLVTVSSEVQLKESGPGLVAPGGSLSIT CTVSGFSLTDSSINWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGRI
DYADALKSRLSISKDSSKSQVFLEMTSLRTDDTATY YCARDGYFPYAMDFWGQGT SVTVSSAS TKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 62
Легкая цепь В
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLESGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQNAEDSRTFGGGTKL EIKGGSGSSGSGGDIQMTQSPASLSVSVGDTITLTC HASQNJDWLSWFQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVP SRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQAHSYP FTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS
SEQ ID NO: 63
DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 9
Тяжелая цепь А
НС:
gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtg cagcccggcagaagcctgagactgagctgcgccgcc agcggcttcaccttcgacgactacgccatgcactgg gtccgccaggcccctggcaagggcctggaatgggtg tccgccatcacctggaacagcggccacatcgactac gccgacagcgtggaaggccggttcaecatcagccgg gacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaac agcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgc gccaaggtgtcctacctgagcaccgccagcagcctg gactactggggccagggcaccctggtgacagtgtcc agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccccctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggcacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgag cccgtgacagtgtcctggaactctggcgccctgacc agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagtcc agcggcctgtacagcctgagcagcgtggtcacagtg cccagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagcccagcaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcccccctgccctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccccccaaagcccaag gacaccctgatgatcagccggacccccgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccctgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcccccatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagcctaga gagccccaagtctgcaccctgccccccagcagagat
SEQ ID NO: 64
gagetgaccaagaaccaggtgtccctgagetgegee gtgaagggcttctaccccagcgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accaccccccctgtgctggacagcgacggctcattc ttcctggtgtccaagctgacagtggacaagagccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatg cacgaggccctgcacaaccattacacccagaagtcc ctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatccagatgacccagagccccagcagcctgagc gccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgtcgg gccagccagggcatccggaactacctggcctggtat cagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatc tacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcccagc agattcagcggcagcggctccggcaccgacttcacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacgtggcc acctactactgccagcggtacaacagagccccctac accttcggccagggcaccaaggtggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagcagcgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag agcaacaacaaatacgccgcctccagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
SEQ ID NO: 65
Тяжелая цепь В
HC:
caggtgcagctgcagcagagcggccctgagctggtc aagcctggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggatccactgg atcaagcagcggcctggccagggcctggaatggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacacggctg aaccagagattccagggcagagccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgg
SEQ ID NO: 66
agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccggctgaaagagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggagccggcaccctggtcacc gtgtccagcgaagtgcagctgaaagaaagcggccct ggcctggtggcccctggcggcagcctgagcatcacc tgtaccgtgtccggcttcagcctgaccgacagcagc atcaactgggtccgacagccccctggcaagggcctc gagtggctgggaatgatctggggcgacggccggatc gactacgccgacgccctgaagtcccggctgagcatc agcaaggacagcagcaagagccaggtgttcctggaa atgaccagcctgcggaccgacgacaccgccacctac tactgcgccagggacggctacttcccctacgccatg gatttctggggccagggcaccagcgtgaccgtgtcc tctgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa
tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
Gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggcggctccggcagcagcggctctggc ggcgatatccagatgacccagtcccccgcctccctg agcgtgtccgtgggcgacaccatcaccctgacatgc cacgccagccagaacatcgacgtgtggctgagctgg ttccagcagaagcctggcaacatccctaagctgctc atctataaggcctccaacctgcacaccggcgtgccc agcaggttttccggctctggcagcggcaccggcttt accctgacaatcagcagcctgcagcccgaggatatc gccacatattactgtcagcaggcccacagctacccc ttcacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggcagcggaagctccggctccggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg
SEQ ID NO: 67
accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 10
Тяжелая цепь А
НС:
EVQLVES GGGLVQPGRS LRLSCAAS GFTFDDYAMFM VRQAPGKGLEWVSAITJWSGHIDYADSVEGRFTISR DNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK VSYLSTASSL DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRD ELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 60
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIBNYLAWY QQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPyTFGQGTKVEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASS YL S LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 61
Тяжелая цепь В
HC:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDYADALKSRLSISKD S S KS QVFLEMT S LRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW GQGTSVTVSSQVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASG YSFTSYWimIKQRPGQGLEWIGMIDPSDGETRLNQ RFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYYCTR LKEYGtf YDSFYFDVWGAGTLVTVS SASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE
SEQ ID NO: 68
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTIТLТCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASWLHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG GSGSSGSGGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASE SVDSYGQSYMHWYQQKAGQPPKLLIYiASNLESGVP ARFSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDS KTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 69
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 10
Тяжелая цепь А
НС:
gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtg cagcccggcagaagcctgagactgagctgcgccgcc agcggcttcaccttcgacgactacgccatgcactgg gtccgccaggcccctggcaagggcctggaatgggtg tccgccatcacctggaacagcggccacatcgactac gccgacagcgtggaaggccggttcaecatcagccgg gacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaac agcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgc gccaaggtgtcctacctgagcaccgccagcagcctg gactactggggccagggcaccctggtgacagtgtcc agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccccctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggcacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgag cccgtgacagtgtcctggaactctggcgccctgacc agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagtcc agcggcctgtacagcctgagcagcgtggtcacagtg cccagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc
SEQ ID NO: 64
aacgtgaaccacaagcccagcaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcccccctgccctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccccccaaagcccaag gacaccctgatgatcagccggacccccgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccctgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcccccatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagcctaga gagccccaagtctgcaccctgccccccagcagagat gagetgaccaagaaccaggtgtccctgagetgcgcc gtgaagggcttctaccccagcgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accaccccccctgtgctggacagcgacggctcattc ttcctggtgtccaagctgacagtggacaagagccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatg cacgaggccctgcacaaccattacacccagaagtcc ctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatccagatgacccagagccccagcagcctgagc gccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgtcgg gccagccagggcatccggaactacctggcctggtat cagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatc tacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcccagc agattcagcggcagcggctccggcaccgacttcacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacgtggcc acctactactgccagcggtacaacagagccccctac accttcggccagggcaccaaggtggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagcagcgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg
SEQ ID NO: 65
aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag agcaacaacaaatacgccgcctccagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctgaaagagtccggccctggactggtg gcccctggcggcagcctgagcatcacctgtaccgtg tccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtccgacagccccctggcaagggcctggaatggctg ggcatgatctggggcgacggccggatcgactacgcc gacgccctgaagtcccggctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggaaatgaccagc сtgcggaccgacgacaccgccacctactactgcgcc agggacggctacttcccctacgccatggatttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgtccagtcaggtc cagetgcagcagagcggccctgagetggtcaagcct ggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggccagcggc tacagcttcaccagctactggatccactggatcaag cagcggcctggccagggcctcgagtggatcggaatg atcgaccccagcgacggcgagacacggctgaaccag agattccagggcagagccaccctgaccgtggacgag agcaccagcaccgcctacatgcagctgcggagcccc accagcgaggacagcgccgtgtactactgcacccgg ctgaaagaatacggcaactacgacagcttctacttc gacgtgtggggagccggcaccctggtcaccgtgtct agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac
SEQ ID NO: 97
acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaagggc ggcagcggcagctccggctctggcggcgatatcgtg ctgacccagtctcccgcctccctggccgtgtctctg ggccagagagccaccatcagctgccgggccagcgag agcgtggacagctacggccagagctacatgcactgg tatcagcagaaggccggacagccccctaaactgctc atctacctggcctccaacctggaaagcggcgtgccc
SEQ ID NO: 70
gccaggttttccggcagcggctccagaaccgacttc accctgacaatcgaccccgtgcaggccgaggacgcc gccacatattactgtcagcagaacgccgaggacagc agaacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggctccggctccagcggatctggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 1
Тяжелая цепь А
HC:
EVQLVES GGGLVQPGRS LRLSCAAS GFTFDDYAMFM VRQAPGKGLEWVSAITJWSGHIDYADSVEGRFTISR DNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK VSYLSTASSL DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRD ELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 60
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIBNYLAWY QQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT
SEQ ID NO: 71
LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Тяжелая цепь В
НС:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDYADALKSRLSISKD SSKSQVFLEMTSLRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSQVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASG YSFTSYWimIKQRPGQGLEWIGMIDPSDGETRLNQ
RFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYYCTR LKEYGtf YDSFYFDVWGAGTLVTVS SASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 68
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASWLHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG GSGSSGSGGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASF, SVDSYGQSYMHWYQQKAGQPPKLLIYiASNLFSGVP ARFSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQWAEDS RTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 69
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 11
Тяжелая цепь А
HC:
gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtg cagcccggcagaagcctgagactgagctgcgccgcc agcggcttcaccttcgacgactacgccatgcactgg gtccgccaggcccctggcaagggcctggaatgggtg
SEQ ID NO: 64
tccgccatcacctggaacagcggccacatcgactac
gccgacagcgtggaaggccggttcaecateagcegg
gacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaac
agcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgc
gccaaggtgtcctacctgagcaccgccagcagcctg
gactactggggccagggcaccctggtgacagtgtcc
agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccccctg
gcccctagcagcaagagcacatctggcggcacagcc
gccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgag
cccgtgacagtgtcctggaactctggcgccctgacc
agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagtcc
agcggcctgtacagcctgagcagcgtggtcacagtg
cccagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc
aacgtgaaccacaagcccagcaacaccaaggtggac
aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac
acctgtcccccctgccctgcccctgaactgctgggc
ggaccctccgtgttcctgttccccccaaagcccaag
gacaccctgatgatcagccggacccccgaagtgacc
tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccctgaa
gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg
cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac
aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgaccgtg
ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag
tgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcccccatc
gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagcctaga
gagccccaagtctgcaccctgccccccagcagagat
gagetgaccaagaaccaggtgtccctgagetgcgcc
gtgaagggcttctaccccagcgatatcgccgtggaa
tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag
accaccccccctgtgctggacagcgacggctcattc
ttcctggtgtccaagctgacagtggacaagagccgg
tggcagcagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatg
cacgaggccctgcacaaccattacacccagaagtcc
ctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
SEQ ID
gacatccagatgacccagagccccagcagcctgagc gccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgtcgg gccagccagggcatccggaactacctggcctggtat cagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatc tacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcccagc agattcagcggcagcggctccggcaccgacttcacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacgtggcc acctactactgccagcggtacaacagagccccctac accttcggccagggcaccaaggtggaaatcaagcgt acggtggccgctccttccgtgttcatcttccctccc tccgacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtg gtgtgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggcc aaggtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtcc ggcaactcccaggagtccgtcaccgagcaggactcc aaggacagcacctactccctgtcctccaccctgacc ctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtac gcctgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccct gtgaccaagtccttcaaccggggcgagtgc
NO: 72
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctgaaagagtccggccctggactggtg gcccctggcggcagcctgagcatcacctgtaccgtg tccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtccgacagccccctggcaagggcctggaatggctg ggcatgatctggggcgacggccggatcgactacgcc gacgccctgaagtcccggctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggaaatgaccagc сtgcggaccgacgacaccgccacctactactgcgcc agggacggctacttcccctacgccatggatttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgtccagtcaggtc cagetgcagcagagcggccctgagetggtcaagcct ggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggccagcggc tacagcttcaccagctactggatccactggatcaag cagcggcctggccagggcctcgagtggatcggaatg atcgaccccagcgacggcgagacacggctgaaccag agattccagggcagagccaccctgaccgtggacgag
SEQ ID NO: 97
agcaccagcaccgcctacatgcagctgcggagcccc accagcgaggacagcgccgtgtactactgcacccgg ctgaaagaatacggcaactacgacagcttctacttc gacgtgtggggagccggcaccctggtcaccgtgtct agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac
SEQ ID NO: 70
gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaagggc ggcagcggcagctccggctctggcggcgatatcgtg ctgacccagtctcccgcctccctggccgtgtctctg ggccagagagccaccatcagctgccgggccagcgag agcgtggacagctacggccagagctacatgcactgg tatcagcagaaggccggacagccccctaaactgctc atctacctggcctccaacctggaaagcggcgtgccc gccaggttttccggcagcggctccagaaccgacttc accctgacaatcgaccccgtgcaggccgaggacgcc gccacatattactgtcagcagaacgccgaggacagc agaacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggctccggctccagcggatctggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
/Аминокислотные последовательности связывающего белка 12
Тяжелая цепь А
НС:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDYADALKSRLSISKD SSKSQVFLEMTSLRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
SEQ ID NO: 73
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELT KNQVS L S CAVKG FYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTТ Р PVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG
Легкая цепь А
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLESGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQNAEDSRTFGGGTKL
EIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAS SYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC S
SEQ ID NO: 74
Тяжелая цепь В
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMIDPSDGETRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DS AVY YC \TRLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLS CAAS GFTFDDYAMmVRQAPGKGLEmSAITWNSGH JDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAV YYCAKVSyLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 75
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWY QQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
SEQ ID NO: 76
LTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKG
GSGSSGSGGDIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQ NIDVWLSWFQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVP SRFS GSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFG
GGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPSDEQL KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 12
Тяжелая цепь А
НС:
gaggtgcagctgaaggagagcggccccggcctggtg gcccccggcggcagcctgagcatcacctgcaccgtg agcggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtgcgccagccccccggcaagggcctggagtggctg ggcatgatctggggcgacggccgcatcgactacgcc gacgccctgaagagccgcctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggagatgaccagc ctgcgcaccgacgacaccgccacctactactgcgcc cgcgacggctacttcccctacgccatggacttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgccagc accaagggccccagcgtgttccccctggcccctagc agcaagagcacatctggcggcacagccgccctgggc tgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaca gtgtcctggaactctggcgccctgaccagcggagtg cataccttccctgccgtgctgcagtccagcggcctg tacagcctgagcagcgtggtcacagtgcccagcagc agcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaac cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaggtg gaacccaagagctgcgacaagacccacacctgtccc ccctgccctgcccctgaactgctgggcggaccctcc gtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctg atgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtg gtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttc aattggtacgtggacggcgtggaagtgcataacgcc aagaccaagcccagagaggaacagtacaacagcacc
SEQ ID NO: 77
taccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtg tccaacaaggccctgcctgcccccatcgagaaaacc atcagcaaggccaagggccagcctagagagccccaa gtctgcaccctgccccccagcagagatgagctgacc aagaaccaggtgtccctgagctgcgccgtgaagggc ttctaccccagcgatatcgccgtggaatgggagagc aacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccc cctgtgctggacagcgacggctcattcttcctggtg tccaagctgacagtggacaagagccggtggcagcag ggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggcc ctgcacaaccattacacccagaagtccctgagcctg agccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggacagcccaaggctgccccctcggtc accctgttccccccaagcagcgaggaactgcaggcc aacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttc taccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgat agctctcccgtgaaggccggcgtggaaaccaccacc cccagcaagcagagcaacaacaaatacgccgccagc agctacctgagcctgacccccgagcagtggaagtcc caccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggc agcaccgtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgc age
SEQ ID NO: 78
Тяжелая цепь В
HC:
caggtgcagctgcagcagagcggccctgagctggtc
SEQ ID NO: 79
aagcctggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggatccactgg atcaagcagcggcctggccagggcctggaatggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacacggctg aaccagagattccagggcagagccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgg agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccggctgaaagagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggagccggcaccctggtcacc gtgtccagcgaagtgcagctggtggaaagcggcgga ggcctggtgcagcccggcagaagcctgagactgagc tgcgccgccagcggcttcaccttcgacgactacgcc atgcactgggtccgacaggcccctggcaaaggactg gaatgggtgtccgccatcacctggaacagcggccac atcgactacgccgacagcgtggaaggccggttcacc atcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctg cagatgaacagcctgcgggccgaggataccgccgtg tattattgcgccaaggtgtcctacctgagcaccgcc agcagcctggactactggggccagggcaccctcgtg acagtgtcctccgcttccaccaagggccccagcgtg ttccctctggcccctagcagcaagagcacatctggc ggaacagccgccctgggctgcctggtcaaggactac tttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggt gccctgacaagcggagtgcataccttccctgccgtg ctgcagagcagcggcctgtactctctgagcagcgtg gtcaccgtgccaagcagcagcctgggcacccagacc tacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacacc aaggtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgac aagacccacacctgtcctccctgtcctgcccctgaa ctgctgggcggaccctccgtgttcctgttccctcca aagcccaaggataccctgatgatcagccggacccct gaagtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgag gatcccgaagtgaagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcataacgccaagaccaagcccagagag gaacagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtg
ctgacagtgctgcaccaggactggctgaacggcaaa gagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcca gcccctatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggc cagccccgcgagcctcaggtgtacacactgcctcca tgccgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctg tggtgcctcgtgaagggcttctacccctccgatatc gccgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaac aactacaagaccacccctcccgtgctggacagcgac ggctcattcttcctgtacagcaagctgaccgtggac aagtcccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgc tctgtgatgcacgaggccctgcacaaccggttcacc cagaagtccctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccagcagcctgagc gccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgtcgg gccagccagggcatccggaactacctggcctggtat cagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatc tacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcccagc agattcagcggcagcggctccggcaccgacttcacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacgtggcc acctactactgccagcggtacaacagagccccctac accttcggccagggcaccaaggtggaaatcaagggc ggctctggcagctccggcagcggcggagacattcag atgacacagtcccccgccagcctgtccgtgtccgtg ggcgataccatcaccctgacatgccacgccagccag aacatcgacgtgtggctgagctggttccagcagaaa cctggcaacatccctaagctgctcatctataaggcc agcaacctgcacacaggcgtgccctccagattctcc ggctctggctctggcaccggctttacactgacaatc agttctctgcagcctgaggatatcgccacatattac tgtcagcaggcccacagctaccctttcaccttcgga ggcggcaccaagctcgagattaagggcggaagcggc tcctccggctccggcggacgtacggtggccgctcct tccgtgttcatcttccctccctccgacgagcagctg aagtccggcaccgcctccgtggtgtgtctgctgaac
SEQ ID NO: 80
aacttctaccctcgggaggccaaggtgcagtggaag gtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggag tccgtcaccgagcaggactccaaggacagcacctac tccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgac tacgagaagcacaaggtgtacgcctgtgaggtgacc caccagggcctgtccagccctgtgaccaagtccttc aaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 1
Тяжелая цепь А
HC:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIPTGDGKIDYADALKSRLSISKD S S KS QVFLEMT S LRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELT KNQVS L S CAVKG FYPSDIAVEWE SNGQPENNYKT T P PVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 73
Легкая цепь А
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLESGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQWAEDSKTFGGGTKL
EIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAS SYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC S
SEQ ID NO: 74
Тяжелая цепь В
HC:
EVQLVES GGGLVQPGRS LRLSCAAS GFTFDDYAMFM VRQAPGKGLEWVSA JTJWSGHJDYADSVEGRFTISR DNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSL DYWGQGTLVTVSSQVQLQQSGPELVKPGASVKISCK
SEQ ID NO: 81
AS GYSFTSYWim IKQRPGQGLEWIGMIDPSDGETR
LNQRFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYY С \TRLKEYGNYDSFYFDVW GAG T L VT VS SAS TKGPSV FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG GSGSSGSGGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ GJRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAaSTLQSGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFG QGTKVEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPSDEQL KSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 82
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 13
Тяжелая цепь А
HC:
gaggtgcagctgaaggagagcggccccggcctggtg gcccccggcggcagcctgagcatcacctgcaccgtg agcggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtgcgccagccccccggcaagggcctggagtggctg ggcatgatctggggcgacggccgcatcgactacgcc gacgccctgaagagccgcctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggagatgaccagc ctgcgcaccgacgacaccgccacctactactgcgcc cgcgacggctacttcccctacgccatggacttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgccagc
SEQ ID NO: 77
accaagggccccagcgtgttccccctggcccctagc
agcaagagcacatctggcggcacagccgccctgggc
tgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaca
gtgtcctggaactctggcgccctgaccagcggagtg
cataccttccctgccgtgctgcagtccagcggcctg
tacagcctgagcagcgtggtcacagtgcccagcagc
agcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaac
cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaggtg
gaacccaagagctgcgacaagacccacacctgtccc
ccctgccctgcccctgaactgctgggcggaccctcc
gtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctg
atgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtg
gtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttc
aattggtacgtggacggcgtggaagtgcataacgcc
aagaccaagcccagagaggaacagtacaacagcacc
taccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag
gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtg
tccaacaaggccctgcctgcccccatcgagaaaacc
atcagcaaggccaagggccagcctagagagccccaa
gtctgcaccctgccccccagcagagatgagctgacc
aagaaccaggtgtccctgagctgcgccgtgaagggc
ttctaccccagcgatatcgccgtggaatgggagagc
aacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccc
cctgtgctggacagcgacggctcattcttcctggtg
tccaagctgacagtggacaagagccggtggcagcag
ggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggcc
ctgcacaaccattacacccagaagtccctgagcctg
agccccggc
LC:
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc
Легкая цепь А
gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga
SEQ ID NO: 78
accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggacagcccaaggctgccccctcggtc accctgttccccccaagcagcgaggaactgcaggcc aacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttc taccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgat agctctcccgtgaaggccggcgtggaaaccaccacc cccagcaagcagagcaacaacaaatacgccgccagc agctacctgagcctgacccccgagcagtggaagtcc caccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggc agcaccgtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgc age
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtg cagcccggcagaagcctgagactgagctgcgccgcc agcggcttcaccttcgacgactacgccatgcactgg gtccgacaggcccctggcaagggcctggaatgggtg tccgccatcacctggaacagcggccacatcgactac gccgacagcgtggaaggccggttcaecateagcegg gacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaac agcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgc gccaaggtgtcctacctgagcaccgccagcagcctg gactactggggccagggcaccctggtcaccgtgtcc agtcaggtccagctgcagcagagcggccctgagctg gtcaagcctggcgccagcgtgaagatcagctgcaag gccagcggctacagcttcaccagctactggatccac tggatcaagcagcggcctggccagggcctcgagtgg atcggcatgatcgaccccagcgacggcgagacacgg ctgaaccagagattccagggcagagccaccctgacc gtggacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctg cggagccccaccagcgaggatagcgccgtgtattat tgcacccggctgaaagagtacggcaactacgacagc ttctacttcgacgtgtggggagccggcaccctcgtg acagtgtcctccgcttccaccaagggccccagcgtg
SEQ ID NO: 83
ttccctctggcccctagcagcaagagcacatctggc ggaacagccgccctgggctgcctggtcaaggactac tttcccgagcccgtgaccgtgtcctggaactctggt gccctgacaagcggagtgcataccttccctgccgtg ctgcagagcagcggcctgtactctctgagcagcgtg gtcaccgtgccaagcagcagcctgggcacccagacc tacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacacc aaggtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgac aagacccacacctgtcctccctgtcctgcccctgaa ctgctgggcggaccctccgtgttcctgttccctcca aagcccaaggataccctgatgatcagccggacccct gaagtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgag gatcccgaagtgaagttcaattggtacgtggacggc gtggaagtgcataacgccaagaccaagcccagagag gaacagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtg ctgacagtgctgcaccaggactggctgaacggcaaa gagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcca gcccctatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggc cagccccgcgagcctcaggtgtacacactgcctcca tgccgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctg tggtgcctcgtgaagggcttctacccctccgatatc gccgtggaatgggagagcaacggccagcccgagaac aactacaagaccacccctcccgtgctggacagcgac ggctcattcttcctgtacagcaagctgaccgtggac aagtcccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgc tctgtgatgcacgaggccctgcacaaccggttcacc cagaagtccctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc
SEQ ID NO; 84
acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaagggc ggcagcggcagctccggcagcggcggagacattcag atgacacagtcccccagcagcctgtccgccagcgtg ggcgacagagtgaccatcacctgtcgggccagccag ggcatccggaactacctggcctggtatcagcagaaa cctggcaaggcccctaaactgctcatctacgccgcc agcacactgcagtctggcgtgccctccagattctcc ggaagcggctccggcaccgatttcaccctgacaatc tcatctctgcagcctgaggacgtggccacatattac tgccagagatacaacagagccccctacacctttggc cagggcaccaaggtcgagattaagggcggatccggc tccagcggcagcggaggacgtacggtggccgctcct tccgtgttcatcttccctccctccgacgagcagctg aagtccggcaccgcctccgtggtgtgtctgctgaac aacttctaccctcgggaggccaaggtgcagtggaag gtggacaacgccctgcagtccggcaactcccaggag tccgtcaccgagcaggactccaaggacagcacctac tccctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgac tacgagaagcacaaggtgtacgcctgtgaggtgacc caccagggcctgtccagccctgtgaccaagtccttc aaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 14
Тяжелая цепь А
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMTDPSDGETRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DSAVYYC TRLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPS RDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN
SEQ ID NO: 85
YKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTIТLТCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLS LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 86
Тяжелая цепь В
НС:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDYADALKSRLSISKD SSKSQVFLEMTSLRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASG FTFDDYAMmVRQAPGKGLEmSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK VSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP
SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 87
Легкая цепь В
LC:
IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQ QKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTL TIS SLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKGG SGSSGSGGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASFS VDSYGQSYMHWYQQKAGQPPKLLIYiASNLFSGVPA RFSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDSK TFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN
SEQ ID NO: 88
SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 14
Тяжелая цепь А
НС:
caggtgcagctgcagcagagcggccccgagctggtg aagcccggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggattcactgg atcaagcagcgccccggccagggcctggagtggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacccgcctg aaccagcgcttccagggccgcgccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgc agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccgcctgaaggagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggcgccggcaccctggtgacc gtgagcagcgccagcaccaagggccccagcgtgttc cccctggcccctagcagcaagagcacatctggcggc acagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttc cccgagcccgtgacagtgtcctggaactctggcgcc ctgaccagcggagtgcataccttccctgccgtgctg cagtccagcggcctgtacagcctgagcagcgtggtc acagtgcccagcagcagcctgggcacccagacctac atctgcaacgtgaaccacaagcccagcaacaccaag gtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgacaag acccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactg ctgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccgaa gtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggac cctgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcataacgccaagaccaagcccagagaggaa cagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtgctg accgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaagag tacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcc cccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccag cctagagagccccaagtctgcaccctgccccccagc agagatgagetgaccaagaaccaggtgtccctgage
SEQ ID NO: 89
tgcgccgtgaagggcttctaccccagcgatatcgcc gtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaac tacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggc tcattcttcctggtgtccaagctgacagtggacaag agccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgcagc gtgatgcacgaggccctgcacaaccattacacccag aagtccctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagctctgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag agcaacaacaaatacgccgccagcagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
SEQ ID NO: 90
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctgaaagagtccggccctggactggtg gcccctggcggcagcctgagcatcacctgtaccgtg tccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtccgacagccccctggcaagggcctggaatggctg ggcatgatctggggcgacggccggatcgactacgcc gacgccctgaagtcccggctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggaaatgaccagc сtgcggaccgacgacaccgccacctactactgcgcc
SEQ ID NO: 91
agggacggctacttcccctacgccatggatttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgtcctccgaagtg cagctggtggaaagcggcggaggcctggtgcagccc ggcagaagcctgagactgagctgcgccgccagcggc ttcaccttcgacgactacgccatgcactgggtccgc caggctcccggaaagggactcgagtgggtgtccgcc atcacctggaacagcggccacatcgattacgccgat agcgtggaaggccggttcaecatcagccgggacaac gccaagaacagcctgtacctgcagatgaacagcctg agagccgaggataccgccgtgtactactgtgccaag gtgtcctacctgagcaccgccagcagcctggactac tggggacagggaaccctggtcaccgtgtccagcgct tccaccaagggccccagcgtgttccctctggcccct agcagcaagagcacatctggcggaacagccgccctg ggctgcctggtcaaggactactttcccgagcccgtg accgtgtcctggaactctggtgccctgacaagcgga gtgcataccttccctgccgtgctgcagagcagcggc ctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtgccaagc agcagcctgggcacccagacctacatctgcaacgtg aaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaag gtggaacccaagagctgcgacaagacccacacctgt cctccctgtcctgcccctgaactgctgggcggaccc tccgtgttcctgttccctccaaagcccaaggatacc ctgatgatcagccggacccctgaagtgacctgcgtg gtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaagtgaag ttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcataac gccaagaccaagcccagagaggaacagtacaacagc acctaccgggtggtgtccgtgctgacagtgctgcac caggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaag gtgtccaacaaggccctgccagcccctatcgagaaa accatcagcaaggccaagggccagccccgcgagcct caggtgtacacactgcctccatgccgggacgagctg accaagaaccaggtgtccctgtggtgcctcgtgaag ggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggag agcaacggccagcccgagaacaactacaagaccacc
cctcccgtgctggacagcgacggctcattcttcctg tacagcaagctgaccgtggacaagtcccggtggcag cagggcaacgtgttcagctgctctgtgatgcacgag gccctgcacaaccggttcacccagaagtccctgagc ctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccagcagcctgagc gccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgtcgg gccagccagggcatccggaactacctggcctggtat cagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatc tacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcccagc agattcagcggcagcggctccggcaccgacttcacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacgtggcc acctactactgccagcggtacaacagagccccctac accttcggccagggcaccaaggtggaaatcaagggc ggctctggcagctccggctctggcggcgatatcgtg ctgacccagtctcccgccagcctggccgtgtctctg ggccagagagccaccatcagctgcagagccagcgag agcgtggacagctacggccagagctacatgcattgg tatcagcagaaagccggccagcctcctaaactgctc atctacctggccagcaacctggaatccggcgtgccc gccaggttttccggcagcggcagcagaaccgatttc acactgacaatcgaccccgtgcaggccgaggatgcc gccacatattactgtcagcagaacgccgaggacagc cggaccttcggcggaggcaccaagctcgagattaag ggcggaagcggctccagcggcagtggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
SEQ ID NO: 92
Аминокислотные последовательности связывающего белка 15
Тяжелая цепь А
НС:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMIDPSDGFTRLNQRFQGRATLTV DESTSTAYMQLRS Р Т S Е DSAVYYC1RLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPS RDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 85
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTGVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASS YL S LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 86
Тяжелая цепь В
HC:
EVQLVES GGGLVQPGRS LRLSCAAS GFTFDDYAMFM VRQAPGKGLEWVSAITJWSGHIDYADSVEGRFTISR DNAKNS L YLQMNS LRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSL DYWGQGTLVTVSSEVQLKESGPGLVAPGGSLSITCT VSGFSLTDSSINWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDY ADALKSRLSISKDSSKSQVFLEMTSLRTDDTATYYC ARDGYFPYAMDFWGQGT S VTVS SAS TKGPS VFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH
SEQ ID NO: 93
QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
Легкая цепь В
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLESGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQNAEDSRTFGGGTKL EIKGGSGSSGSGGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGJRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAasrLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAP YTFGQGTKVEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 94
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 15
Тяжелая цепь А
HC:
caggtgcagctgcagcagagcggccccgagctggtg aagcccggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggattcactgg atcaagcagcgccccggccagggcctggagtggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacccgcctg aaccagcgcttccagggccgcgccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgc agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccgcctgaaggagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggcgccggcaccctggtgacc gtgagcagcgccagcaccaagggccccagcgtgttc cccctggcccctagcagcaagagcacatctggcggc acagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttc cccgagcccgtgacagtgtcctggaactctggcgcc ctgaccagcggagtgcataccttccctgccgtgctg cagtccagcggcctgtacagcctgagcagcgtggtc acagtgcccagcagcagcctgggcacccagacctac atctgcaacgtgaaccacaagcccagcaacaccaag
SEQ ID NO: 89
gtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgacaag acccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactg ctgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccgaa gtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggac cctgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcataacgccaagaccaagcccagagaggaa cagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtgctg accgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaagag tacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcc cccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccag cctagagagccccaagtctgcaccctgccccccagc agagatgagetgaccaagaaccaggtgtccctgage tgcgccgtgaagggcttctaccccagcgatatcgcc gtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaac tacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggc tcattcttcctggtgtccaagctgacagtggacaag agccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgcagc gtgatgcacgaggccctgcacaaccattacacccag aagtccctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagctctgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag
SEQ ID NO: 90
agcaacaacaaatacgccgccagcagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
Тяжелая цепь В
НС:
gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtg cagcccggcagaagcctgagactgagctgcgccgcc agcggcttcaccttcgacgactacgccatgcactgg gtccgacaggcccctggcaagggcctggaatgggtg tccgccatcacctggaacagcggccacatcgactac gccgacagcgtggaaggccggttcaecatcagccgg gacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaac agcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgc gccaaggtgtcctacctgagcaccgccagcagcctg gactactggggccagggcaccctggtcaccgtgtcc tccgaagtgcagctgaaagagtccggccctggcctg gtggcccctggcggcagcctgagcatcacctgtacc gtgtccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaac tgggtccgccagcctcccggaaagggactcgagtgg ctgggcatgatctggggcgacggccggatcgattac gccgatgccctgaagtcccggctgagcatcagcaag gacagcagcaagagccaggtgttcctggaaatgacc agcctgagaaccgacgacaccgccacctactactgt gcccgggacggctacttcccctacgccatggatttc tggggacagggaaccagcgtgaccgtgtccagcgct tccaccaagggccccagcgtgttccctctggcccct agcagcaagagcacatctggcggaacagccgccctg ggctgcctggtcaaggactactttcccgagcccgtg accgtgtcctggaactctggtgccctgacaagcgga gtgcataccttccctgccgtgctgcagagcagcggc ctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtgccaagc agcagcctgggcacccagacctacatctgcaacgtg aaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaag gtggaacccaagagctgcgacaagacccacacctgt cctccctgtcctgcccctgaactgctgggcggaccc
SEQ ID NO: 95
tccgtgttcctgttccctccaaagcccaaggatacc ctgatgatcagccggacccctgaagtgacctgcgtg gtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaagtgaag ttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcataac gccaagaccaagcccagagaggaacagtacaacagc acctaccgggtggtgtccgtgctgacagtgctgcac caggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaag gtgtccaacaaggccctgccagcccctatcgagaaa accatcagcaaggccaagggccagccccgcgagcct caggtgtacacactgcctccatgccgggacgagctg accaagaaccaggtgtccctgtggtgcctcgtgaag ggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggag agcaacggccagcccgagaacaactacaagaccacc cctcccgtgctggacagcgacggctcattcttcctg tacagcaagctgaccgtggacaagtcccggtggcag cagggcaacgtgttcagctgctctgtgatgcacgag gccctgcacaaccggttcacccagaagtccctgagc ctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggcggctccggcagcagcggctctggc ggcgatatccagatgacccagtcccccagcagcctg agcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacctgt agagccagccagggcatccggaactacctggcttgg tatcagcagaaacccggaaaggcccctaaactgctc atctacgccgccagcaccctgcagtccggcgtgcca agcagattctccggctctggcagcggcaccgatttc
SEQ ID NO: 96
acactgacaatcagcagcctgcagcccgaggatgtg gccacctattattgccagagatacaacagagccccc tacaccttcggccagggcaccaaggtcgagattaag ggcggaagcggcagctccggctccggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 16
Тяжелая цепь А
HC:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIPTGDGKIDYADALKSRLSISKD S S KS QVFLEMT S LRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELT KNQVS L S CAVKG FYPSDIAVEWE SNGQPENNYKT T P PVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 73
Легкая цепь А
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLESGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQNAEDSRTFGGGTKL
EIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAS SYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC
SEQ ID NO: 74
Тяжелая цепь В
НС:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGRIDYADALKSRLSISKD SSKSQVFLEMTSLRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSQVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASG YSFTSYWimIKQRPGQGLEWIGMIDPSDGETRLNQ
RFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYYCTR LKEYGNYDSFYFDVWGAGTLVTVS SASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 68
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG GSGSSGSGGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCPASF SVDSYGQSYMHWYQQKAGQPPKLLIYiASNLFSGVP ARFSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDS PTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 69
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 16
Тяжелая цепь А
HC:
gaggtgcagctgaaggagagcggccccggcctggtg gcccccggcggcagcctgagcatcacctgcaccgtg agcggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtgcgccagccccccggcaagggcctggagtggctg
SEQ ID NO: 77
ggcatgatctggggcgacggccgcatcgactacgcc
gacgccctgaagagccgcctgagcatcagcaaggac
agcagcaagagccaggtgttcctggagatgaccagc
ctgcgcaccgacgacaccgccacctactactgcgcc
cgcgacggctacttcccctacgccatggacttctgg
ggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgccagc
accaagggccccagcgtgttccccctggcccctagc
agcaagagcacatctggcggcacagccgccctgggc
tgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaca
gtgtcctggaactctggcgccctgaccagcggagtg
cataccttccctgccgtgctgcagtccagcggcctg
tacagcctgagcagcgtggtcacagtgcccagcagc
agcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaac
cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaggtg
gaacccaagagctgcgacaagacccacacctgtccc
ccctgccctgcccctgaactgctgggcggaccctcc
gtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctg
atgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtg
gtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttc
aattggtacgtggacggcgtggaagtgcataacgcc
aagaccaagcccagagaggaacagtacaacagcacc
taccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag
gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtg
tccaacaaggccctgcctgcccccatcgagaaaacc
atcagcaaggccaagggccagcctagagagccccaa
gtctgcaccctgccccccagcagagatgagctgacc
aagaaccaggtgtccctgagctgcgccgtgaagggc
ttctaccccagcgatatcgccgtggaatgggagagc
aacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccc
cctgtgctggacagcgacggctcattcttcctggtg
tccaagctgacagtggacaagagccggtggcagcag
ggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggcc
ctgcacaaccattacacccagaagtccctgagcctg
agccccggc
Легкая цепь А
LC:
SEQ ID
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggacagcccaaggctgccccctcggtc accctgttccccccaagcagcgaggaactgcaggcc aacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttc taccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgat agctctcccgtgaaggccggcgtggaaaccaccacc cccagcaagcagagcaacaacaaatacgccgccagc agctacctgagcctgacccccgagcagtggaagtcc caccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggc agcaccgtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgc age
NO: 78
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctgaaagagtccggccctggactggtg gcccctggcggcagcctgagcatcacctgtaccgtg tccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtccgacagccccctggcaagggcctggaatggctg ggcatgatctggggcgacggccggatcgactacgcc gacgccctgaagtcccggctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggaaatgaccagc сtgcggaccgacgacaccgccacctactactgcgcc agggacggctacttcccctacgccatggatttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgtccagtcaggtc cagetgcagcagagcggccctgagetggtcaagect ggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggccagcggc tacagcttcaccagctactggatccactggatcaag cagcggcctggccagggcctcgagtggatcggaatg atcgaccccagcgacggcgagacacggctgaaccag
SEQ ID NO: 97
agattccagggcagagccaccctgaccgtggacgag agcaccagcaccgcctacatgcagctgcggagcccc accagcgaggacagcgccgtgtactactgcacccgg ctgaaagaatacggcaactacgacagcttctacttc gacgtgtggggagccggcaccctggtcaccgtgtct agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC: SEQ ID
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc NO: 70
gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaagggc ggcagcggcagctccggctctggcggcgatatcgtg ctgacccagtctcccgcctccctggccgtgtctctg ggccagagagccaccatcagctgccgggccagcgag agcgtggacagctacggccagagctacatgcactgg tatcagcagaaggccggacagccccctaaactgctc atctacctggcctccaacctggaaagcggcgtgccc gccaggttttccggcagcggctccagaaccgacttc accctgacaatcgaccccgtgcaggccgaggacgcc gccacatattactgtcagcagaacgccgaggacagc agaacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggctccggctccagcggatctggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 17
Тяжелая цепь А
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMTDPSDGETRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DSAVYYC TRLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL
SEQ ID NO: 85
QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPS RDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTIТLТCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTCVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLS LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 86
Тяжелая цепь В
НС:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIPTGDGPIDYADALKSRLSISKD SSKSQVFLEMTSLRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSQVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASG YSFTSYWimIKQRPGQGLEWIGMIDPSDGFTRLNQ
RFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYYCTR LKEYGNYDSFYFD VWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 68
Легкая цепь В
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTCVPSRFSGSGSGTGFT
SEQ ID NO: 69
LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG GSGSSGSGGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASE SVDSYGQSYMHWYQQKAGQPPKLLIYiASNLESGVP
ARFSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDS KTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 17
Тяжелая цепь А
НС:
caggtgcagctgcagcagagcggccccgagctggtg aagcccggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggattcactgg atcaagcagcgccccggccagggcctggagtggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacccgcctg aaccagcgcttccagggccgcgccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgc agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccgcctgaaggagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggcgccggcaccctggtgacc gtgagcagcgccagcaccaagggccccagcgtgttc cccctggcccctagcagcaagagcacatctggcggc acagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttc cccgagcccgtgacagtgtcctggaactctggcgcc ctgaccagcggagtgcataccttccctgccgtgctg cagtccagcggcctgtacagcctgagcagcgtggtc acagtgcccagcagcagcctgggcacccagacctac atctgcaacgtgaaccacaagcccagcaacaccaag gtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgacaag acccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactg ctgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccgaa gtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggac cctgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcataacgccaagaccaagcccagagaggaa
SEQ ID NO: 89
cagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtgctg accgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaagag tacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcc cccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccag cctagagagccccaagtctgcaccctgccccccagc agagatgagetgaccaagaaccaggtgtccctgage tgcgccgtgaagggcttctaccccagcgatatcgcc gtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaac tacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggc tcattcttcctggtgtccaagctgacagtggacaag agccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgcagc gtgatgcacgaggccctgcacaaccattacacccag aagtccctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
Gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagctctgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag agcaacaacaaatacgccgccagcagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
SEQ ID NO: 90
Тяжелая цепь В
HC:
gaggtgcagctgaaagagtccggccctggactggtg gcccctggcggcagcctgagcatcacctgtaccgtg
SEQ ID NO: 97
tccggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtccgacagccccctggcaagggcctggaatggctg ggcatgatctggggcgacggccggatcgactacgcc gacgccctgaagtcccggctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggaaatgaccagc сtgcggaccgacgacaccgccacctactactgcgcc agggacggctacttcccctacgccatggatttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgtccagtcaggtc cagetgcagcagagcggccctgagetggtcaagcct ggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggccagcggc tacagcttcaccagctactggatccactggatcaag cagcggcctggccagggcctcgagtggatcggaatg atcgaccccagcgacggcgagacacggctgaaccag agattccagggcagagccaccctgaccgtggacgag agcaccagcaccgcctacatgcagctgcggagcccc accagcgaggacagcgccgtgtactactgcacccgg ctgaaagaatacggcaactacgacagcttctacttc gacgtgtggggagccggcaccctggtcaccgtgtct agcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag
tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaagggc ggcagcggcagctccggctctggcggcgatatcgtg ctgacccagtctcccgcctccctggccgtgtctctg ggccagagagccaccatcagctgccgggccagcgag agcgtggacagctacggccagagctacatgcactgg tatcagcagaaggccggacagccccctaaactgctc atctacctggcctccaacctggaaagcggcgtgccc gccaggttttccggcagcggctccagaaccgacttc accctgacaatcgaccccgtgcaggccgaggacgcc gccacatattactgtcagcagaacgccgaggacagc agaacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggctccggctccagcggatctggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag
SEQ ID NO: 70
gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 18
Тяжелая цепь А
HC:
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSLTDSSINW VRQPPGKGLEWLGMIWGDGPIDYADALKSRLSISKD S S KS QVFLEMT S LRT DDTATYYCARDGYFPYAMDFW
GQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELT KNQVS L S CAVKG FYPSDIAVEWE SNGQPENNYKT T P PVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 73
Легкая цепь А
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLFSGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDSPTFGGGTKL
EIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAS SYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC S
SEQ ID NO: 74
Тяжелая цепь В
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMIDPSDGFTRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DS AVY YC \TRLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSEVQLKESGPGLVAPGGSLSIT CTVS GFSLTDSS JNWVRQPPGKGLEWLGMJPTGDGPJ
SEQ ID NO: 62
DYADALKSRLSISKDSSKSQVFLEMTSLRTDDTATY YCARDGYFPYAMDFWGQGT SVTVSSAS TKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
Легкая цепь В
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLFSGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDSPTFGGGTKL
EIKGGSGSSGSGGDIQMTQSPASLSVSVGDTITLTC HASQWJDWLSWFQQKPGNIPKLLIYKASWLHTCVP
SRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQAHSYP FTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 63
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 18
Тяжелая цепь А
HC:
gaggtgcagctgaaggagagcggccccggcctggtg gcccccggcggcagcctgagcatcacctgcaccgtg agcggcttcagcctgaccgacagcagcatcaactgg gtgcgccagccccccggcaagggcctggagtggctg ggcatgatctggggcgacggccgcatcgactacgcc gacgccctgaagagccgcctgagcatcagcaaggac agcagcaagagccaggtgttcctggagatgaccagc ctgcgcaccgacgacaccgccacctactactgcgcc cgcgacggctacttcccctacgccatggacttctgg ggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgccagc accaagggccccagcgtgttccccctggcccctagc
SEQ ID NO: 77
agcaagagcacatctggcggcacagccgccctgggc tgcctggtcaaggactacttccccgagcccgtgaca gtgtcctggaactctggcgccctgaccagcggagtg cataccttccctgccgtgctgcagtccagcggcctg tacagcctgagcagcgtggtcacagtgcccagcagc agcctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaac cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaggtg gaacccaagagctgcgacaagacccacacctgtccc ccctgccctgcccctgaactgctgggcggaccctcc gtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctg atgatcagccggacccccgaagtgacctgcgtggtg gtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttc aattggtacgtggacggcgtggaagtgcataacgcc aagaccaagcccagagaggaacagtacaacagcacc taccgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccag gactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtg tccaacaaggccctgcctgcccccatcgagaaaacc atcagcaaggccaagggccagcctagagagccccaa gtctgcaccctgccccccagcagagatgagctgacc aagaaccaggtgtccctgagctgcgccgtgaagggc ttctaccccagcgatatcgccgtggaatgggagagc aacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccc cctgtgctggacagcgacggctcattcttcctggtg tccaagctgacagtggacaagagccggtggcagcag ggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggcc ctgcacaaccattacacccagaagtccctgagcctg agccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc
SEQ ID NO: 78
gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggacagcccaaggctgccccctcggtc accctgttccccccaagcagcgaggaactgcaggcc aacaaggccaccctcgtgtgcctgatcagcgacttc taccctggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgat agctctcccgtgaaggccggcgtggaaaccaccacc cccagcaagcagagcaacaacaaatacgccgccagc agctacctgagcctgacccccgagcagtggaagtcc caccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggc agcaccgtggaaaagaccgtggcccccaccgagtgc age
Тяжелая цепь В
HC:
caggtgcagctgcagcagagcggccctgagctggtc aagcctggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggatccactgg atcaagcagcggcctggccagggcctggaatggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacacggctg aaccagagattccagggcagagccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgg agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccggctgaaagagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggagccggcaccctggtcacc gtgtccagcgaagtgcagctgaaagaaagcggccct ggcctggtggcccctggcggcagcctgagcatcacc tgtaccgtgtccggcttcagcctgaccgacagcagc atcaactgggtccgacagccccctggcaagggcctc gagtggctgggaatgatctggggcgacggccggatc gactacgccgacgccctgaagtcccggctgagcatc agcaaggacagcagcaagagccaggtgttcctggaa atgaccagcctgcggaccgacgacaccgccacctac tactgcgccagggacggctacttcccctacgccatg gatttctggggccagggcaccagcgtgaccgtgtcc tctgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc
SEQ ID NO: 66
gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
Gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc
SEQ ID NO: 67
gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggcggctccggcagcagcggctctggc ggcgatatccagatgacccagtcccccgcctccctg agcgtgtccgtgggcgacaccatcaccctgacatgc cacgccagccagaacatcgacgtgtggctgagctgg ttccagcagaagcctggcaacatccctaagctgctc atctataaggcctccaacctgcacaccggcgtgccc agcaggttttccggctctggcagcggcaccggcttt accctgacaatcagcagcctgcagcccgaggatatc gccacatattactgtcagcaggcccacagctacccc ttcacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggcagcggaagctccggctccggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
Аминокислотные последовательности связывающего белка 19
Тяжелая цепь А
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMTDPSDGETRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DSAVYYC TRLKEYGNYDSF YFDVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPS RDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCS
SEQ ID NO: 85
VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Легкая цепь А
LC:
DIQMTQSPASLSVSVGDTIТLТCHASQNIDVWLSWF QQKPGNIPKLLIYKASNXHTGVPSRFSGSGSGTGFT LTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPFTFGGGTKLEIKG
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVAWKADS S PVKAGVETTTPSKQSNNKYAASS YL S LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO: 86
Тяжелая цепь В
HC:
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS GYSFTSYWIWJ IKQRPGQGLEWIGMIDPSDGFTRLNQRFQGRATLTV DE S T S TAYMQLRS P T S E DSAVYYC TRLKEYGNYDSF
YFDVWGAGTLVTVSSEVQLKESGPGLVAPGGSLSIT CTVSGFSLTDSSIMtfVRQPPGKGLEWLGMIWGDGPI
DYADALKSRLSISKDSSKSQVFLEMTSLRTDDTATY YCARDGYFPYAMDFWGQGT SVTVS SAS TKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 62
Легкая цепь В
LC:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGQSY MHWYQQKAGQPPKLLIYiASWLFSGVPARFSGSGSR TDFTLTIDPVQAEDAATYYCQQMAEDSPTFGGGTKL
EIKGGSGSSGSGGDIQMTQSPASLSVSVGDTITLTC HASQNJDWLSWFQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVP
SRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQAHSYP FTFGGGTKLEIKGGSGSSGSGGRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA
SEQ ID NO: 63
CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Нуклеотидные последовательности связывающего белка 19
Тяжелая цепь А
НС:
caggtgcagctgcagcagagcggccccgagctggtg aagcccggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggattcactgg atcaagcagcgccccggccagggcctggagtggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacccgcctg aaccagcgcttccagggccgcgccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgc agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccgcctgaaggagtacggcaactacgacagcttc tacttcgacgtgtggggcgccggcaccctggtgacc gtgagcagcgccagcaccaagggccccagcgtgttc cccctggcccctagcagcaagagcacatctggcggc acagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttc cccgagcccgtgacagtgtcctggaactctggcgcc ctgaccagcggagtgcataccttccctgccgtgctg cagtccagcggcctgtacagcctgagcagcgtggtc acagtgcccagcagcagcctgggcacccagacctac atctgcaacgtgaaccacaagcccagcaacaccaag gtggacaagaaggtggaacccaagagctgcgacaag acccacacctgtcccccctgccctgcccctgaactg ctgggcggaccctccgtgttcctgttccccccaaag cccaaggacaccctgatgatcagccggacccccgaa gtgacctgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggac cctgaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtg gaagtgcataacgccaagaccaagcccagagaggaa cagtacaacagcacctaccgggtggtgtccgtgctg accgtgctgcaccaggactggctgaacggcaaagag tacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgcc cccatcgagaaaaccatcagcaaggccaagggccag cctagagagccccaagtctgcaccctgccccccagc agagatgagetgaccaagaaccaggtgtccctgage tgcgccgtgaagggcttctaccccagcgatatcgcc
SEQ ID NO: 89
gtggaatgggagagcaacggccagcccgagaacaac tacaagaccaccccccctgtgctggacagcgacggc tcattcttcctggtgtccaagctgacagtggacaag agccggtggcagcagggcaacgtgttcagctgcagc gtgatgcacgaggccctgcacaaccattacacccag aagtccctgagcctgagccccggc
Легкая цепь А
LC:
gacatccagatgacccagagccccgccagcctgagc gtgtccgtgggcgataccatcaccctgacctgccac gccagccagaacatcgacgtgtggctgagctggttc cagcagaagcccggcaacatccccaagctgctgatc tacaaggccagcaacctgcacaccggcgtgcccagc agattcagcggctctggcagcggcaccggctttacc ctgaccatcagcagcctgcagcccgaggatatcgcc acctactactgccagcaggcccacagctaccccttc accttcggcggaggcaccaagctggaaatcaaggga cagcccaaggctgccccctcggtcaccctgttcccc ccaagctctgaggaactgcaggccaacaaggccacc ctcgtgtgcctgatcagcgacttctaccctggcgcc gtgaccgtggcctggaaggccgatagctctcccgtg aaggccggcgtggaaaccaccacccccagcaagcag agcaacaacaaatacgccgccagcagctacctgagc ctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctac agctgccaggtcacacacgagggcagcaccgtggaa aagaccgtggcccccaccgagtgcagc
SEQ ID NO: 90
Тяжелая цепь В
HC:
caggtgcagctgcagcagagcggccctgagctggtc aagcctggcgccagcgtgaagatcagctgcaaggcc agcggctacagcttcaccagctactggatccactgg atcaagcagcggcctggccagggcctggaatggatc ggcatgatcgaccccagcgacggcgagacacggctg aaccagagattccagggcagagccaccctgaccgtg gacgagagcaccagcaccgcctacatgcagctgcgg agccccaccagcgaggacagcgccgtgtactactgc acccggctgaaagagtacggcaactacgacagcttc
SEQ ID NO: 66
tacttcgacgtgtggggagccggcaccctggtcacc gtgtccagcgaagtgcagctgaaagaaagcggccct ggcctggtggcccctggcggcagcctgagcatcacc tgtaccgtgtccggcttcagcctgaccgacagcagc atcaactgggtccgacagccccctggcaagggcctc gagtggctgggaatgatctggggcgacggccggatc gactacgccgacgccctgaagtcccggctgagcatc agcaaggacagcagcaagagccaggtgttcctggaa atgaccagcctgcggaccgacgacaccgccacctac tactgcgccagggacggctacttcccctacgccatg gatttctggggccagggcaccagcgtgaccgtgtcc tctgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctg gcccctagcagcaagagcacatctggcggaacagcc gccctgggctgcctggtcaaggactactttcccgag cccgtgaccgtgtcctggaactctggtgccctgaca agcggagtgcataccttccctgccgtgctgcagagc agcggcctgtactctctgagcagcgtggtcaccgtg ccaagcagcagcctgggcacccagacctacatctgc aacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggac aagaaggtggaacccaagagctgcgacaagacccac acctgtcctccctgtcctgcccctgaactgctgggc ggaccctccgtgttcctgttccctccaaagcccaag gataccctgatgatcagccggacccctgaagtgacc tgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggatcccgaa gtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtg cataacgccaagaccaagcccagagaggaacagtac aacagcacctaccgggtggtgtccgtgctgacagtg ctgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaag tgcaaggtgtccaacaaggccctgccagcccctatc gagaaaaccatcagcaaggccaagggccagccccgc gagcctcaggtgtacacactgcctccatgccgggac gagctgaccaagaaccaggtgtccctgtggtgcctc gtgaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaa tgggagagcaacggccagcccgagaacaactacaag accacccctcccgtgctggacagcgacggctcattc
ttcctgtacagcaagctgaccgtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttcagctgctctgtgatg cacgaggccctgcacaaccggttcacccagaagtcc ctgagcctgagccctggc
Легкая цепь В
LC:
gacatcgtgctgacccagagccctgccagcctggcc gtgtctctgggccagagagccaccatcagctgccgg gccagcgagagcgtggacagctacggccagagctac atgcactggtatcagcagaaggccggccagcccccc aagctgctgatctacctggccagcaacctggaaagc ggcgtgcccgccagattcagcggcagcggcagcaga accgacttcaccctgaccatcgaccccgtgcaggcc gaggacgccgccacctactactgccagcagaacgcc gaggacagccggaccttcggcggaggcaccaagctg gaaatcaagggcggctccggcagcagcggctctggc ggcgatatccagatgacccagtcccccgcctccctg agcgtgtccgtgggcgacaccatcaccctgacatgc cacgccagccagaacatcgacgtgtggctgagctgg ttccagcagaagcctggcaacatccctaagctgctc atctataaggcctccaacctgcacaccggcgtgccc agcaggttttccggctctggcagcggcaccggcttt accctgacaatcagcagcctgcagcccgaggatatc gccacatattactgtcagcaggcccacagctacccc ttcacctttggcggcggaacaaagctcgagattaag ggcggcagcggaagctccggctccggcggacgtacg gtggccgctccttccgtgttcatcttccctccctcc gacgagcagctgaagtccggcaccgcctccgtggtg tgtctgctgaacaacttctaccctcgggaggccaag gtgcagtggaaggtggacaacgccctgcagtccggc aactcccaggagtccgtcaccgagcaggactccaag gacagcacctactccctgtcctccaccctgaccctg tccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcc tgtgaggtgacccaccagggcctgtccagccctgtg accaagtccttcaaccggggcgagtgc
SEQ ID NO: 67
Антитело к LAMP1
GYIFTNYNIH (SEQ ID NO:126)
AIYPGNGDAP (SEQ ID NO:127)
ANWDVAFAY (SEQ ID NO:128)
KASQDIDRYMA (SEQ ID NO:138)
DTSTLQS (SEQ ID NO:139)
LQYDNLWT (SEQ ID N0:140)
Антитело к TNFa
GFTFDDYAMH (SEQ ID NO:129)
AITWNSGHID (SEQ ID NO:130)
VSYLSTASSLDY (SEQ ID NO:131)
RASQGIRNYLA (SEQ ID N0:141)
AASTLQS (SEQ ID NO:178)
QRYNRAPYT (SEQ ID NO:142)
Антитело к IL4
GYSFTSYWIH (SEQ ID NO:132)
MIDPSDGET (SEQ ID NO:133)
LKEYGNYDSFYFDV (SEQ ID NO:134)
HASQNIDVWLS (SEQ ID NO:143)
KASNLHT (SEQ ID NO:179)
QQAHSYPFT (SEQ ID NO:144)
Антитело к IL13
GFSLTDSSIN (SEQ ID NO:135)
MIWGDGRID (SEQ ID NO:136)
DGYFPYAMDF (SEQ ID NO:137)
RASESVDSYGQSYMH (SEQ ID NO:145)
LASNLES (SEQ ID N0:146)
QQNAEDSRT (SEQ ID NO:147)
к CD28-2
2TSFYNPSLKS RKTISKDTS KNQVSLKLS SVTAADTAVYYCARDKGYSYYYSMDYWGQ
GTTVTVSS (SEQ ID N0:162)
KLLIFAASNVESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDVANYYCQeSi? KVPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID N0:163)
Антитело к CD38
QVQLVQ S GAEVAKPGTSVKLSCKAS GYTFrDYWMQWVKQRPGQGLEWIGTIYPGDG DTGYAQКFQGKAT LTADКS S KTVYMHL S S LAS ED SAVYYС ARGDYYGSNSLDYWGQ
GTSVTVSS (SEQ ID NO:164)
DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSrWAWYQQKPGQSPRRLI YSASYRYIGVPDRFTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPY TFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:165)
Антитело к LAMP1
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYIFTNYNIHMVKKSPGQGLEWIGAIYPGNG DAPYSQKFQGKATLTADTSTSTTYMELSSLRSEDTAVYYCVRANWDVAFAyWGQGT LVTVSS (SEQ ID N0:166)
DI QMTQ S P S S L S AS VGDRVTIT CKR.SQDIDRYMAVSYQDКP GKAP RLLI EDTSTLQSGVPSRFSGSGSGRDYTLTISNLEPEDFATYYCLQYDNLWT
FGGGTKVEIK (SEQ ID NO:167)
Антитело к TNFa
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFrFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSG HIDYADSVEGRFTIS RDNAKNS LYLQMNS LRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWG
QGTLVTVSS (SEQ ID NO:168)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIKNriAWYQQKPGKAPKLLI YAASriQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYMRAPy
TFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:169)
Антитело к IL4
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGrSFrsnVIHWIKQRPGQGLEWIGMIDPSDG ETRLNQRFQGRATLTVDESTSTAYMQLRSPTSEDSAVYYCTRiJCEyGNyDSFyFDV
WGAGTLVTVSS (SEQ ID N0:170)
DIQMTQSPASLSVSVGDTITLTCHASQNIDVWiSWFQQKPGNIPKLLI YKASNiHrGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQAHSYPF TFGGGTKLEIK (SEQ ID N0:171)
Антитело к IL13
EVQLKESGPGLVAPGGSLSITCTVSGFSirDSSIWWVRQPPGKGLEWLGMIlVGDGR IDYADALKSRLSISKDSSKSQVFLEMTSLRTDDTATYYCARDGYFPYAMDFWGQGT
SVTVSS
(SEQ ID NO:172)
DIVLTQ S PAS LAVS LGQRATIS CRASESVDSYGQSYhfflMYQQKAGQP P К L LIYLASNLESGVP AR FSGSGSRTDFTLTIDPVQAEDAATYYСQQNA EDSRTFGGGTKLEIK (SEQ ID N0:173)
Примечание: в аминокислотных последовательностях, приведенных выше, последовательности CDR
выделены жирным шрифтом и курсивом.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> YANG, Zhi-yong NABEL, Gary J. WU, Lan SEUNG, Edward WEI, Ronnie BENINGA, Jochen RAO, Ercole LEUSCHNER, Wulf Dirk BEIL, Christian LANGE, Christian CORVEY, Carsten
<120> ТРИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ И/ИЛИ ТРИВАЛЕНТНЫЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ <130> 183952027140
<140> Пока еще не назначен <141> Одновременно с этим
<150> US 62/322,036 <151> 2016-04-13
<150> US 62/331,191
<151> 2016-05-03
<150> US 62/412,187
<151> 2016-10-24
<150> EP 17305298.6 <151> 2017-03-17
<160> 179
<170> FastSEQ для Windows версии 4.0
<210> 1 <211> 447 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<210> 2 <211> 214 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 3 <211> 571 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
130 135 140
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met His Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser
165 170 175
Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr
210 215 220
Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Arg Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
565 570
<210> 4 <211> 338 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
115 120 125
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
130 135 140
Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
145 150 155 160
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly
165 170 175
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
180 185 190
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
195 200 205
Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
210 215 220
Ile Lys Thr Lys Gly Pro Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
245 250 255
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
260 265 270
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
275 280 285
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
290 295 300
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
305 310 315 320
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
325 330 335
Glu Cys
<210> 5 <211> 1341 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 5
gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga agctgtgccg ccagcggctt caacatcaag cctggcaagg gactggaatg ggtggccaga gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac ggcgacggct tctacgccat ggactattgg gcgtcgacca agggcccatc ggtgttccct tctacagccg ccctgggctg cctcgtgaag tggaactctg gcgctctgac aagcggcgtg ggcctgtact ctctgagcag cgtcgtgaca tacacctgta acgtggacca caagcccagc aagtacggcc ctccctgccc tccttgccca ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc tgcgtggtgg tggatgtgtc ccaggaagat ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc ggccagcccc gcgagcctca agtgtatacc aaccaggtgt ccctgtggtg tctcgtgaaa tgggagagca acggccagcc cgagaacaac gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag ctgtctctgt ccctgggcaa g ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60 gacacctaca tccactgggt gcgccaggcc 120 atctacccca ccaacggcta caccagatac 180 agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240 accgccgtgt actactgtag tagatgggga 300 ggccagggca ccctcgtgac cgtgtctagt 360 ctggcccctt gcagcagaag caccagcgaa 420 gactactttc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 cacacctttc cagccgtgct ccagagcagc 540 gtgcccagca gcagcctggg caccaagacc 600 aacaccaagg tggacaagcg ggtggaatct 660 gcccctgaat ttctgggcgg accctccgtg 720 ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780 cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 cccagagagg aacagttcaa cagcacctac 900 caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tccatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1020 ctgccccctt gccaggaaga gatgaccaag 1080 ggcttctacc ccagcgacat tgccgtggaa 1140 tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200 accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 1260 gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
1341
<210> 6 <211> 642 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 6
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtctgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca ggacgtgaac accgccgtgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gaagcagaag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca ccccccccac atttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttcccacct 360 agcgacgagc agctgaagtc cggcacagcc tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgcgagg ccaaagtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gaaagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgaca 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600 ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 7 <211> 1713 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 7
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtcgtgaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta cacctttacc agctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120 cctggacagg gactggaatg gatcggcagc atctaccccg gcaacgtgaa caccaactac 180 gcccagaagt tccagggcag agccaccctg accgtggaca ccagcatcag caccgcctac 240 atggaactga gccggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcac ccggtcccac 300 tacggcctgg attggaactt cgacgtgtgg ggcaagggca ccaccgtgac agtgtctagc 360 agccaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420 ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480 gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540 acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600 accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660 ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720 tctagtcgga ccgccagcac aaagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780 agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840 gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900 ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960 ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020 cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080 ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380 agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440 gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500 attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620 tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680 acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1713
<210> 8 <211> 1014 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60 atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120 tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180 agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240 agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300 ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360 atccagatga cccagagccc cagcagcctg tctgccagcg tgggcgacag agtgaccatc 420 acctgtcagg ccagccagaa catctacgtg tggctgaact ggtatcagca gaagcccggc 480 aaggccccca agctgctgat ctacaaggcc agcaacctgc acaccggcgt gcccagcaga 540 ttttctggca gcggctccgg caccgacttc accctgacaa tcagctccct gcagcccgag 600 gacattgcca cctactactg ccagcagggc cagacctacc cctacacctt tggccagggc 660 accaagctgg aaatcaagac caagggcccc agccgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 720 atcttcccac ctagcgacga gcagctgaag tccggcacag cctctgtcgt gtgcctgctg 780 aacaacttct acccccgcga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 840 ggcaacagcc aggaaagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 900 agcaccctga cactgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 960 acccaccagg gcctgtctag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 1014
<210> 9 <211> 571 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Lys Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
130 135 140
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met His Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser
165 170 175
Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr
210 215 220
Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Arg Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
565 570
<210> 10
<211> 342
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala
115 120 125
Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala
130 135 140
Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Val Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln
145 150 155 160
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn
165 170 175
Val Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
180 185 190
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Val Ala Asn
195 200 205
Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Lys Gly Pro Ser Arg Thr Val Ala Ala
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
245 250 255
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
260 265 270
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
275 280 285
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
290 295 300
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
305 310 315 320
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
325 330 335
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340
<210> 11 <211> 1713
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 11
caggtgcagc tgcaggaatc tggccctggc ctcgtgaagc ctagccagac cctgagcctg 60 acctgtaccg tgtccggctt cagcctgagc gactacggcg tgcactgggt gcgccagcca 120 cctggaaaag gcctggaatg gctgggcgtg atctgggctg gcggaggcac caactacaac 180 cccagcctga agtccagaaa gaccatcagc aaggacacca gcaagaacca ggtgtccctg 240 aagctgagca gcgtgacagc cgccgatacc gccgtgtact actgcgccag agacaagggc 300 tacagctact actacagcat ggactactgg ggccagggca ccaccgtgac cgtgtcatcc 360 tctcaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420 ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480 gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540 acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600 accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660 ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720 tctagtcgga ccgcttcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780 agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840 gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900 ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960 ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020 cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080 ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380 agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440 gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500 attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620
tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680 acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1713
<210> 12 <211> 1026 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 12
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60 atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120 tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180 agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240 agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300 ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360 atcgtgctga cacagagccc tgctagcctg gccgtgtctc ctggacagag ggccaccatc 420 acctgtagag ccagcgagag cgtggaatat tacgtgacca gcctgatgca gtggtatcag 480 cagaagcccg gccagccccc caagctgctg attttcgccg ccagcaacgt ggaaagcggc 540 gtgccagcca gattttccgg cagcggctct ggcaccgact tcaccctgac catcaacccc 600 gtggaagcca acgacgtggc caactactac tgccagcaga gccggaaggt gccctacacc 660 tttggccagg gcaccaagct ggaaatcaag accaagggcc ccagccgtac ggtggccgct 720 cccagcgtgt tcatcttccc acctagcgac gagcagctga agtccggcac agcctctgtc 780 gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgc gaggccaaag tgcagtggaa ggtggacaac 840 gccctgcaga gcggcaacag ccaggaaagc gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc 900 tacagcctga gcagcaccct gacactgagc aaggccgact acgagaagca caaggtgtac 960 gcctgcgaag tgacccacca gggcctgtct agccccgtga ccaagagctt caaccggggc 1020 gagtgt 1026
<210> 13 <211> 451 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Gly Lys
450
<210> 14 <211> 218 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 14
Asp Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 15 <211> 1353 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 15
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgaa gtgaagaagc ctggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta tgccttcagc agctactgga tgaactgggt gaggcaggca 120 cctggccagg gcctggagtg gataggccaa atatggcctg gcgatggcga caccaactac 180 aaccagaagt tcaagggcag agcgaccttg accgccgacg agagcaccag caccgcgtac 240 atggagctga gcagcctgag gagcgaggac accgccgtgt actattgcgc cagaagggag 300 accaccaccg tgggcaggta ctactacgcc atggactact ggggccaggg aaccaccgtg 360 accgtgagca gcgcctcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 420 agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 480 gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 540 ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 600 ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 780 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 900 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caagtgtata ccctgccccc ttgccaggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctcgtga aaggcttcta ccccagcgac 1140 attgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1260 tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc aag 1353
<210> 16 <211> 654 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 16
gacctcgtgc tgacccagag ccctgcgagc ctggctgtga gccctggcca gagagccacc 60 atcacctgca aagccagcca gagcgtggac tacgacggcg acagctacct caactggtac 120 cagcagaagc ctggccagcc ccccaagctg ctgatttacg atgccagcaa cctggtgagc 180 ggcgtgcctg ctagattcag cggctccggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcaac 240 cccgtggagg ccaacgacac cgccaactac tactgccagc agagcacgga ggacccctgg 300 accttcggcc agggcacaaa gctggagatc aagcgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 360 atcttcccac ctagcgacga gcagctgaag tccggcacag cctctgtcgt gtgcctgctg 420 aacaacttct acccccgcga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480 ggcaacagcc aggaaagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540 agcaccctga cactgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 600 acccaccagg gcctgtctag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 654
<210> 17 <211> 447 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 18 <211> 214 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 19 <211> 1341 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 19
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ccaggccagg gcctggaatg gatcggcaca gcccagaagt ttcagggcaa ggccaccctg atgcacctga gcagcctggc cagcgaggac tactacggca gcaacagcct ggactattgg gcgtcgacca agggcccatc ggtgttccct tctacagccg ccctgggctg cctcgtgaag tggaactctg gcgctctgac aagcggcgtg ggcctgtact ctctgagcag cgtcgtgaca tacacctgta acgtggacca caagcccagc aagtacggcc ctccctgccc tccttgccca gtggccaagc ctggcacaag cgtgaagctg 60 gactactgga tgcagtgggt caagcagagg 120 atctatcccg gcgacggcga taccggctac 180 accgccgaca agagcagcaa gaccgtgtac 240 agcgccgtgt actattgcgc cagaggcgac 300 ggccagggca ccagcgtgac agtgtctagt 360 ctggcccctt gcagcagaag caccagcgaa 420 gactactttc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 cacacctttc cagccgtgct ccagagcagc 540 gtgcccagca gcagcctggg caccaagacc 600 aacaccaagg tggacaagcg ggtggaatct 660 gcccctgaat ttctgggcgg accctccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc tgcgtggtgg tggatgtgtc ccaggaagat ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc ggccagcccc gcgagcctca agtgtatacc aaccaggtgt ccctgtggtg tctcgtgaaa tgggagagca acggccagcc cgagaacaac gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag ctgtctctgt ccctgggcaa g ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780 cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 cccagagagg aacagttcaa cagcacctac 900 caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 9 60 tccatcgaga aaaccatcag caaggccaag 1020 ctgccccctt gccaggaaga gatgaccaag 1080 ggcttctacc ccagcgacat tgccgtggaa 1140 tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200 accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 1260 gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
1341
<210> 20
<211> 642 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 20
gacatcgtga tgacccagag ccacctgagc atcacctgta aagccagcca ggacgtgtcc ggccagagcc ccagacggct gatctacagc agattcaccg gaagcggagc cggcaccgac gaggacctgg ccgtgtacta ctgccagcag ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg agcgacgagc agctgaagtc cggcacagcc ccccgcgagg ccaaagtgca gtggaaggtg gaaagcgtga ccgagcagga cagcaaggac ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac atgagcacca gcctgggcga ccccgtgtcc 60 accgtggtgg cctggtatca gcagaagcct 120 gccagctatc ggtacatcgg cgtgcccgac 180 ttcaccttca ccatcagctc tgtgcaggcc 240 cactacagcc ccccctacac ctttggcgga 300 gccgctccca gcgtgttcat cttcccacct 360 tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420 gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 tccacctaca gcctgagcag caccctgaca 540 gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600 cggggcgagt gt 642
<210> 21 <211> 445
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
Ser
Ser
Gly Leu
Tyr
Ser
Leu
Ser
Ser
Val
Val
Thr
Val
Pro
Ser
Ser
180
185
190
Ser
Leu
Gly Thr
Lys
Thr
Tyr
Thr
Cys
Asn
Val
Asp
His
Lys
Pro
Ser
195
200
205
Asn
Thr
Lys Val
Asp
Lys
Arg
Val
Glu
Ser
Lys
Tyr
Gly
Pro
Pro
Cys
210
215
220
Pro
Pro
Cys Pro
Ala
Pro
Glu
Phe
Leu
Gly
Gly
Pro
Ser
Val
Phe
Leu
225
230
235
240
Phe
Pro
Pro Lys
Pro
Lys
Asp
Thr
Leu
Met
Ile
Ser
Arg
Thr
Pro
Glu
245
250
255
Val
Thr
Cys Val
Val
Val
Asp
Val
Ser
Gln
Glu
Asp
Pro
Glu
Val
Gln
260
265
270
Phe
Asn
Trp Tyr
Val
Asp
Gly Val
Glu
Val
His
Asn
Ala
Lys
Thr
Lys
275
280
285
Pro
Arg
Glu Glu
Gln
Phe
Asn
Ser
Thr
Tyr
Arg
Val
Val
Ser
Val
Leu
290
295
300
Thr
Val
Leu His
Gln
Asp
Trp
Leu
Asn
Gly
Lys
Glu
Tyr
Lys
Cys
Lys
305
310
315
320
Val
Ser
Asn Lys
Gly
Leu
Pro
Ser
Ser
Ile
Glu
Lys
Thr
Ile
Ser
Lys
325
330
335
Ala
Lys
Gly Gln
Pro
Arg
Glu
Pro
Gln
Val
Tyr
Thr
Leu
Pro
Pro
Cys
340
345
350
Gln
Glu
Glu Met
Thr
Lys
Asn
Gln
Val
Ser
Leu
Trp
Cys
Leu
Val
Lys
355
360
365
Gly
Phe
Tyr Pro
Ser
Asp
Ile
Ala
Val
Glu
Trp
Glu
Ser
Asn
Gly
Gln
370
375
380
Pro
Glu
Asn Asn
Tyr
Lys
Thr
Thr
Pro
Pro
Val
Leu
Asp
Ser
Asp
Gly
385
390
395
400
Ser
Phe
Phe Leu
Tyr
Ser
Lys
Leu
Thr
Val
Asp
Lys
Ser
Arg
Trp
Gln
405
410
415
Glu
Gly Asn Val
Phe
Ser
Cys
Ser
Val
Met
His
Glu
Ala
Leu
His
Asn
420
425
430
His
Tyr
Thr Gln
Lys
Ser
Leu
Ser
Leu
Ser
Leu
Gly
Lys
435
440
445
<210> 22 <211> 213 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln Asp Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 23 <211> 1335
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 23
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta catcttcacc aactacaaca tccactgggt caagaagtcc 120 ccaggccagg gcctggaatg gatcggcgcc atctatcccg gaaacggcga cgccccttac 180 agccagaagt tccagggcaa ggccaccctg accgccgata ccagcacctc caccacctac 240 atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actattgcgt gcgggccaac 300 tgggatgtgg ccttcgccta ttggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc ctctgcgtcg 360 accaagggcc catcggtgtt ccctctggcc ccttgcagca gaagcaccag cgaatctaca 420 gccgccctgg gctgcctcgt gaaggactac tttcccgagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480 tctggcgctc tgacaagcgg cgtgcacacc tttccagccg tgctccagag cagcggcctg 540 tactctctga gcagcgtcgt gacagtgccc agcagcagcc tgggcaccaa gacctacacc 600 tgtaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agcgggtgga atctaagtac 660 ggccctccct gccctccttg cccagcccct gaatttctgg gcggaccctc cgtgttcctg 720 ttccccccaa agcccaagga caccctgatg atcagccgga cccccgaagt gacctgcgtg 780 gtggtggatg tgtcccagga agatcccgag gtgcagttca attggtacgt ggacggcgtg 840 gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggaacagt tcaacagcac ctaccgggtg 900 gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaagagta caagtgcaag 960 gtgtccaaca agggcctgcc cagctccatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 1020 ccccgcgagc ctcaagtgta taccctgccc ccttgccagg aagagatgac caagaaccag 1080 gtgtccctgt ggtgtctcgt gaaaggcttc taccccagcg acattgccgt ggaatgggag 1140 agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200 tcattcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagagcc ggtggcagga aggcaacgtg 1260 ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgtct 1320 ctgtccctgg gcaag 1335
<210> 24 <211> 639 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 24
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtctgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgca aggccagcca ggacatcgat cggtacatgg cctggtatca ggacaagccc 120 ggcaaggccc ccagactgct gatccacgat accagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180 agattttccg gctctggcag cggcagagac tacaccctga ccatcagcaa cctggaaccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgcctgcag tacgacaacc tgtggacctt cggcggaggc 300 accaaggtgg aaatcaagcg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc 360 gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgcgaggcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa 480 agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgacactg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 600 tctagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
<210> 25 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 25
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
1. 5
<210> 26 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 26
Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr
1. 5
<210> 27 <211> 13 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 27
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1. 5 10
<210> 28 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 28
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1. 5
<210> 29 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 29
Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr
1. 5
<210> 30 <211> 13 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 30
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val
1. 5 10
<210> 31 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 31
Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr Gly
1. 5
<210> 32 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 32
Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr
1. 5
<210> 33 <211> 13 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 33
Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp
1. 5 10
<210> 34 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
1. 5
<210> 35 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 35
Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser
1. 5
<210> 36 <211> 12 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 36
Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr
1. 5 10
<210> 37 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 37
Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp
1. 5
<210> 38 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 38
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr
1. 5
<210> 39 <211> 16 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
1. 5 10 15
<210> 40 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 40
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Trp
1. 5
<210> 41 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 41
Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr
1. 5
<210> 42 <211> 13 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 42
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr
1. 5 10
<210> 43 <211> 6 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 43
Gln Asp Val Asn Thr Ala
1. 5
<210> 44 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 44 Ser Ala Ser
<210> 45
<211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 45
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1. 5
<210> 46 <211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 46
Gln Asn Ile Tyr Val Trp
1. 5
<210> 47
<211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 47
Lys Ala Ser
<210> 48
<211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 48
Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr
1. 5
<210> 49 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 49
Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Val Thr Ser Leu 1. 5 10
<210> 50 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 50 Ala Ala Ser 1
<210> 51 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 51
Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1. 5
<210> 52 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 52
Gln Ser Leu Val His Asn Asn Ala Asn Thr Tyr
1. 5 10
<210> 53 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 53
Lys Val Ser
<210> 54 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<223> Синтетическая конструкция
<400> 54
Gly Gln Gly Thr Gln Tyr Pro
1. 5
<210> 55 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 55
Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr 1. 5 10
<210> 56 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 56 Asp Ala Ser 1
<210> 57 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 57
Gln Gln Ser Thr Glu Asp Pro Trp Thr
1. 5
<210> 58 <211> 6 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 58
Gln Asp Val Ser Thr Val
1. 5
<210> 59 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 59
Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr
1. 5
<210> 60 <211> 450 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 61
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser 210
<210> 62 <211> 570 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 62
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Lys
115 120 125
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly Ser Leu Ser Ile Thr
130 135 140
Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser Ser Ile Asn Trp Val
145 150 155 160
Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Met Ile Trp Gly
165 170 175
Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Glu Met Thr Ser Leu
195 200 205
Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Phe
210 215 220
Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
245 250 255
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
260 265 270
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
275 280 285
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
325 330 335
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
465 470 475 480
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
530
535
540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565
570
<210> 63 <211> 345 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 63
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
115 120 125
Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys
130 135 140
His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys
145 150 155 160
Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His
165 170 175
Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
210 215 220
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
340
345
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 64
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgccaggcc 120 cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180 gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360 agcgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ctagcagcaa gagcacatct 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgacagtg 480 tcctggaact ctggcgccct gaccagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagtcc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtc acagtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cccccctgcc ctgcccctga actgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 780 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg accctgaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 900 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccccatcga gaaaaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caagtctgca ccctgccccc cagcagagat 1080 gagctgacca agaaccaggt gtccctgagc tgcgccgtga agggcttcta ccccagcgat 1140 atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg gtgtccaagc tgacagtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccattac 1320 acccagaagt ccctgagcct gagccccggc 1350
<210> 65 <211> 639 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 65
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gggacagccc aaggctgccc cctcggtcac cctgttcccc 360 ccaagcagcg aggaactgca ggccaacaag gccaccctcg tgtgcctgat cagcgacttc 420 taccctggcg ccgtgaccgt ggcctggaag gccgatagct ctcccgtgaa ggccggcgtg 480 gaaaccacca cccccagcaa gcagagcaac aacaaatacg ccgcctccag ctacctgagc 540 ctgacccccg agcagtggaa gtcccaccgg tcctacagct gccaggtcac acacgagggc 600 agcaccgtgg aaaagaccgt ggcccccacc gagtgcagc 639
<210> 66 <211> 1710 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 66
caggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtcaagc ctggcgccag cgtgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga tccactggat caagcagcgg 120 cctggccagg gcctggaatg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacacggctg 180
aaccagagat tccagggcag agccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240 atgcagctgc ggagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccggctgaaa 300 gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gagccggcac cctggtcacc 360 gtgtccagcg aagtgcagct gaaagaaagc ggccctggcc tggtggcccc tggcggcagc 420 ctgagcatca cctgtaccgt gtccggcttc agcctgaccg acagcagcat caactgggtc 480 cgacagcccc ctggcaaggg cctcgagtgg ctgggaatga tctggggcga cggccggatc 540 gactacgccg acgccctgaa gtcccggctg agcatcagca aggacagcag caagagccag 600 gtgttcctgg aaatgaccag cctgcggacc gacgacaccg ccacctacta ctgcgccagg 660 gacggctact tcccctacgc catggatttc tggggccagg gcaccagcgt gaccgtgtcc 720 tctgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ctagcagcaa gagcacatct 780 ggcggaacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 840 tcctggaact ctggtgccct gacaagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagagc 900 agcggcctgt actctctgag cagcgtggtc accgtgccaa gcagcagcct gggcacccag 960 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 1020 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cctccctgtc ctgcccctga actgctgggc 1080 ggaccctccg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggata ccctgatgat cagccggacc 1140 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg atcccgaagt gaagttcaat 1200 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 1260 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccag cccctatcga gaaaaccatc 1380 agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caggtgtaca cactgcctcc atgccgggac 1440 gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1500 atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccctccc 1560 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtcccgg 1620 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctct gtgatgcacg aggccctgca caaccggttc 1680 acccagaagt ccctgagcct gagccctggc 1710
<210> 67 <211> 1035 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 67
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc ggcgatatcc agatgaccca gtcccccgcc accctgacat gccacgccag ccagaacatc cctggcaaca tccctaagct gctcatctat agcaggtttt ccggctctgg cagcggcacc cccgaggata tcgccacata ttactgtcag ggcggaacaa agctcgagat taagggcggc gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc gacagcacct actccctgtc ctccaccctg aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag aaccggggcg agtgc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60 agctacggcc agagctacat gcactggtat 120 ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180 agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240 tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300 aagggcggct ccggcagcag cggctctggc 360 tccctgagcg tgtccgtggg cgacaccatc 420 gacgtgtggc tgagctggtt ccagcagaag 480 aaggcctcca acctgcacac cggcgtgccc 540 ggctttaccc tgacaatcag cagcctgcag 600 caggcccaca gctacccctt cacctttggc 660 agcggaagct ccggctccgg cggacgtacg 720 ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780 taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840 caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900 accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960 ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
1035
<210> 68 <211> 570 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Arg Leu Asn Gln Arg Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp
195 200 205
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp
210 215 220
Ser Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
245 250 255
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
260 265 270
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
275 280 285
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
325 330 335
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
465 470 475 480
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 69 <211> 345 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
115 120 125
Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu
130 135 140
Ser Val Asp Ser Tyr Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys
145 150 155 160
Ala Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu
165 170 175
Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Gln Asn Ala Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
210 215 220
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 340 345
<210> 70 <211> 1035
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция <400> 70
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60 ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120 ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gctctggcag cggcaccggc tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa gggcggcagc ggcagctccg gctctggcgg cgatatcgtg 360 ctgacccagt ctcccgcctc cctggccgtg tctctgggcc agagagccac catcagctgc 420 cgggccagcg agagcgtgga cagctacggc cagagctaca tgcactggta tcagcagaag 480 gccggacagc cccctaaact gctcatctac ctggcctcca acctggaaag cggcgtgccc 540 gccaggtttt ccggcagcgg ctccagaacc gacttcaccc tgacaatcga ccccgtgcag 600 gccgaggacg ccgccacata ttactgtcag cagaacgccg aggacagcag aacctttggc 660 ggcggaacaa agctcgagat taagggcggc tccggctcca gcggatctgg cggacgtacg 720 gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780 gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840 gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900 gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960 aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020 aaccggggcg agtgc 1035
<210> 71 <211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 72 <211> 642 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 72
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctcctt ccgtgttcat cttccctccc 360 tccgacgagc agctgaagtc cggcaccgcc tccgtggtgt gtctgctgaa caacttctac 420 cctcgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 480 gagtccgtca ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 540 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gtgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ctgtgaccaa gtccttcaac cggggcgagt gc 642
<210> 73 <211> 447 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 73
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
355 360 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 74 <211> 217 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 74
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
215
<210> 75 <211> 573 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Val
115 120 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
130 135 140
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val
145 150 155 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp
165 170 175
Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr
180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr
210 215 220
Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
340 345 350
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
355 360 365
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
370 375 380
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
385 390 395 400
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
405 410 415
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
420 425 430
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
435 440 445
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
450 455 460
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
465 470 475 480
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
485 490 495
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
500 505 510
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
515 520 525
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
530 535 540
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
545 550 555 560
Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 76 <211> 341 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
115 120 125
Ser Val Ser Val Gly Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln
130 135 140
Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile
145 150 155 160
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro
165 170 175
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile
180 185 190
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala
195 200 205
His Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
245 250 255
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
260 265 270
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
275 280 285
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
305 310 315 320
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
325 330 335
Asn Arg Gly Glu Cys 340
<210> 77 <211> 1341
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 77
gaggtgcagc tgaaggagag cggccccggc ctggtggccc ccggcggcag cctgagcatc 60 acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt gcgccagccc 120 cccggcaagg gcctggagtg gctgggcatg atctggggcg acggccgcat cgactacgcc 180 gacgccctga agagccgcct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240 gagatgacca gcctgcgcac cgacgacacc gccacctact actgcgcccg cgacggctac 300 ttcccctacg ccatggactt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgag cagcgccagc 360 accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc cctagcagca agagcacatc tggcggcaca 420 gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcctggaac 480 tctggcgccc tgaccagcgg agtgcatacc ttccctgccg tgctgcagtc cagcggcctg 540 tacagcctga gcagcgtggt cacagtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaggtgga acccaagagc 660 tgcgacaaga cccacacctg tcccccctgc cctgcccctg aactgctggg cggaccctcc 720 gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac accctgatga tcagccggac ccccgaagtg 780 acctgcgtgg tggtggacgt gtcccacgag gaccctgaag tgaagttcaa ttggtacgtg 840 gacggcgtgg aagtgcataa cgccaagacc aagcccagag aggaacagta caacagcacc 900 taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960 aagtgcaagg tgtccaacaa ggccctgcct gcccccatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1020 aagggccagc ctagagagcc ccaagtctgc accctgcccc ccagcagaga tgagctgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgag ctgcgccgtg aagggcttct accccagcga tatcgccgtg 1140 gaatgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac 1200 agcgacggct cattcttcct ggtgtccaag ctgacagtgg acaagagccg gtggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccatta cacccagaag 1320 tccctgagcc tgagccccgg c 1341
<210> 78 <211> 651 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 78
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60 atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac agctacggcc agagctacat gcactggtat 120 cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180 ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240 cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300 accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc aagggacagc ccaaggctgc cccctcggtc 360 accctgttcc ccccaagcag cgaggaactg caggccaaca aggccaccct cgtgtgcctg 420 atcagcgact tctaccctgg cgccgtgacc gtggcctgga aggccgatag ctctcccgtg 480 aaggccggcg tggaaaccac cacccccagc aagcagagca acaacaaata cgccgccagc 540
agctacctga gcctgacccc cgagcagtgg aagtcccacc ggtcctacag ctgccaggtc 600 acacacgagg gcagcaccgt ggaaaagacc gtggccccca ccgagtgcag c 651
<210> 79 <211> 1719 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 79
caggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtcaagc ctggcgccag cgtgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga tccactggat caagcagcgg 120 cctggccagg gcctggaatg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacacggctg 180 aaccagagat tccagggcag agccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240 atgcagctgc ggagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccggctgaaa 300 gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gagccggcac cctggtcacc 360 gtgtccagcg aagtgcagct ggtggaaagc ggcggaggcc tggtgcagcc cggcagaagc 420 ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc accttcgacg actacgccat gcactgggtc 480 cgacaggccc ctggcaaagg actggaatgg gtgtccgcca tcacctggaa cagcggccac 540 atcgactacg ccgacagcgt ggaaggccgg ttcaccatca gccgggacaa cgccaagaac 600 agcctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggata ccgccgtgta ttattgcgcc 660 aaggtgtcct acctgagcac cgccagcagc ctggactact ggggccaggg caccctcgtg 720 acagtgtcct ccgcttccac caagggcccc agcgtgttcc ctctggcccc tagcagcaag 780 agcacatctg gcggaacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt tcccgagccc 840 gtgaccgtgt cctggaactc tggtgccctg acaagcggag tgcatacctt ccctgccgtg 900 ctgcagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtggtca ccgtgccaag cagcagcctg 960 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag 1020 aaggtggaac ccaagagctg cgacaagacc cacacctgtc ctccctgtcc tgcccctgaa 1080 ctgctgggcg gaccctccgt gttcctgttc cctccaaagc ccaaggatac cctgatgatc 1140 agccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga tcccgaagtg 1200 aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag 1260 gaacagtaca acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggactgg 1320 ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ccctgccagc ccctatcgag 1380 aaaaccatca gcaaggccaa gggccagccc cgcgagcctc aggtgtacac actgcctcca 1440 tgccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtggt gcctcgtgaa gggcttctac 1500 ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1560 acccctcccg tgctggacag cgacggctca ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1620 aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgctctg tgatgcacga ggccctgcac 1680 aaccggttca cccagaagtc cctgagcctg agccctggc 1719
<210> 80 <211> 1023 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 80
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg ggcaccaagg tggaaatcaa gggcggctct atgacacagt cccccgccag cctgtccgtg cacgccagcc agaacatcga cgtgtggctg cctaagctgc tcatctataa ggccagcaac ggctctggct ctggcaccgg ctttacactg gccacatatt actgtcagca ggcccacagc ctcgagatta agggcggaag cggctcctcc tccgtgttca tcttccctcc ctccgacgag ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120 gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180 ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300 ggcagctccg gcagcggcgg agacattcag 360 tccgtgggcg ataccatcac cctgacatgc 420 agctggttcc agcagaaacc tggcaacatc 480 ctgcacacag gcgtgccctc cagattctcc 540 acaatcagtt ctctgcagcc tgaggatatc 600 taccctttca ccttcggagg cggcaccaag 660 ggctccggcg gacgtacggt ggccgctcct 720 cagctgaagt ccggcaccgc ctccgtggtg 780
tgtctgctga acaacttcta ccctcgggag ctgcagtccg gcaactccca ggagtccgtc tccctgtcct ccaccctgac cctgtccaag tgtgaggtga cccaccaggg cctgtccagc tgc gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc 840 accgagcagg actccaagga cagcacctac 900 gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc 9 60 cctgtgacca agtccttcaa ccggggcgag 1020
1023
<210> 81 <211> 573 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser
115 120 125
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
130 135 140
Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His Trp Ile Lys Gln
145 150 155 160
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp
165 170 175
Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr
180 185 190
Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr
195 200 205
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly
210 215 220
Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
245 250 255
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
290 295 300
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
305 310 315 320
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
325 330 335
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
340 345 350
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
355 360 365
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
370 375 380
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
385 390 395 400
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
405 410 415
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
420 425 430
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
435 440 445
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
450 455 460
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
465 470 475 480
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
485 490 495
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
500 505 510
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
515 520 525
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
530 535 540
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
545 550 555 560
Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565 570
<210> 82 <211> 341 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 82
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
115 120 125
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
130 135 140
Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
145 150 155 160
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
165 170 175
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
180 185 190
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr
195 200 205
Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
245 250 255
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
260 265 270
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
275 280 285
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
290 295 300
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
305 310 315 320
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
325 330 335
Asn Arg Gly Glu Cys 340
<210> 83 <211> 1719 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 83
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgacaggcc 120 cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180 gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt caccgtgtcc 360 agtcaggtcc agctgcagca gagcggccct gagctggtca agcctggcgc cagcgtgaag 420 atcagctgca aggccagcgg ctacagcttc accagctact ggatccactg gatcaagcag 480 cggcctggcc agggcctcga gtggatcggc atgatcgacc ccagcgacgg cgagacacgg 540 ctgaaccaga gattccaggg cagagccacc ctgaccgtgg acgagagcac cagcaccgcc 600 tacatgcagc tgcggagccc caccagcgag gatagcgccg tgtattattg cacccggctg 660 aaagagtacg gcaactacga cagcttctac ttcgacgtgt ggggagccgg caccctcgtg 720 acagtgtcct ccgcttccac caagggcccc agcgtgttcc ctctggcccc tagcagcaag 780 agcacatctg gcggaacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt tcccgagccc 840 gtgaccgtgt cctggaactc tggtgccctg acaagcggag tgcatacctt ccctgccgtg 900 ctgcagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtggtca ccgtgccaag cagcagcctg 960 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac cacaagccct ccaacaccaa ggtggacaag 1020 aaggtggaac ccaagagctg cgacaagacc cacacctgtc ctccctgtcc tgcccctgaa 1080 ctgctgggcg gaccctccgt gttcctgttc cctccaaagc ccaaggatac cctgatgatc 1140 agccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga tcccgaagtg 1200 aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag 1260 gaacagtaca acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggactgg 1320 ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ccctgccagc ccctatcgag 1380 aaaaccatca gcaaggccaa gggccagccc cgcgagcctc aggtgtacac actgcctcca 1440 tgccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtggt gcctcgtgaa gggcttctac 1500 ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1560 acccctcccg tgctggacag cgacggctca ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1620 aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgctctg tgatgcacga ggccctgcac 1680 aaccggttca cccagaagtc cctgagcctg agccctggc 1719
<210> 84 <211> 1023 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag agattcagcg gctctggcag cggcaccggc gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag ggcaccaagc tggaaatcaa gggcggcagc atgacacagt cccccagcag cctgtccgcc cgggccagcc agggcatccg gaactacctg cctaaactgc tcatctacgc cgccagcaca ggaagcggct ccggcaccga tttcaccctg gccacatatt actgccagag atacaacaga gtcgagatta agggcggatc cggctccagc tccgtgttca tcttccctcc ctccgacgag tgtctgctga acaacttcta ccctcgggag ctgcagtccg gcaactccca ggagtccgtc tccctgtcct ccaccctgac cctgtccaag tgtgaggtga cccaccaggg cctgtccagc tgc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60 gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120 gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180 tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300 ggcagctccg gcagcggcgg agacattcag 360 agcgtgggcg acagagtgac catcacctgt 420 gcctggtatc agcagaaacc tggcaaggcc 480 ctgcagtctg gcgtgccctc cagattctcc 540 acaatctcat ctctgcagcc tgaggacgtg 600 gccccctaca cctttggcca gggcaccaag 660 ggcagcggag gacgtacggt ggccgctcct 720 cagctgaagt ccggcaccgc ctccgtggtg 780 gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc 840 accgagcagg actccaagga cagcacctac 900 gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc 960 cctgtgacca agtccttcaa ccggggcgag 1020
1023
<210> 85 <211> 452 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 85
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 86 <211> 213 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gln Pro Lys Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser 210
<211> 568 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 87
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile
165 170 175
Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
180 185 190
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser
210 215 220
Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
245 250 255
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
260 265 270
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
275 280 285
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
290 295 300
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
305 310 315 320
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
325 330 335
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
340 345 350
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
355 360 365
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
370 375 380
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
385 390 395 400
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
405 410 415
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
420 425 430
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
435 440 445
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
450 455 460
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
465 470 475 480
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
485 490 495
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
500 505 510
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
515 520 525
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
530 535 540
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
545 550 555 560
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565
<210> 88 <211> 344 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
290 295 300
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
305 310 315 320
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
325 330 335
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 340
<210> 89 <211> 1356 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 89
caggtgcagc tgcagcagag cggccccgag ctggtgaagc ccggcgccag cgtgaagatc 60 agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc agctactgga ttcactggat caagcagcgc 120 cccggccagg gcctggagtg gatcggcatg atcgacccca gcgacggcga gacccgcctg 180 aaccagcgct tccagggccg cgccaccctg accgtggacg agagcaccag caccgcctac 240 atgcagctgc gcagccccac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcac ccgcctgaag 300 gagtacggca actacgacag cttctacttc gacgtgtggg gcgccggcac cctggtgacc 360 gtgagcagcg ccagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccctag cagcaagagc 420 acatctggcg gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgagcccgtg 480 acagtgtcct ggaactctgg cgccctgacc agcggagtgc ataccttccc tgccgtgctg 540 cagtccagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtcacag tgcccagcag cagcctgggc 600 acccagacct acatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaag 660 gtggaaccca agagctgcga caagacccac acctgtcccc cctgccctgc ccctgaactg 720 ctgggcggac cctccgtgtt cctgttcccc ccaaagccca aggacaccct gatgatcagc 780 cggacccccg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc acgaggaccc tgaagtgaag 840 ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900 cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaaag agtacaagtg caaggtgtcc aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa 1020 accatcagca aggccaaggg ccagcctaga gagccccaag tctgcaccct gccccccagc 1080 agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc ctgagctgcg ccgtgaaggg cttctacccc 1140 agcgatatcg ccgtggaatg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 ccccctgtgc tggacagcga cggctcattc ttcctggtgt ccaagctgac agtggacaag 1260 agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cattacaccc agaagtccct gagcctgagc cccggc 1356
<210> 90 <211> 639 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 90
gacatccaga tgacccagag ccccgccagc ctgagcgtgt ccgtgggcga taccatcacc 60 ctgacctgcc acgccagcca gaacatcgac gtgtggctga gctggttcca gcagaagccc 120 ggcaacatcc ccaagctgct gatctacaag gccagcaacc tgcacaccgg cgtgcccagc 180 agattcagcg gctctggcag cggcaccggc tttaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag gcccacagct accccttcac cttcggcgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa gggacagccc aaggctgccc cctcggtcac cctgttcccc 360 ccaagctctg aggaactgca ggccaacaag gccaccctcg tgtgcctgat cagcgacttc 420 taccctggcg ccgtgaccgt ggcctggaag gccgatagct ctcccgtgaa ggccggcgtg 480 gaaaccacca cccccagcaa gcagagcaac aacaaatacg ccgccagcag ctacctgagc 540 ctgacccccg agcagtggaa gtcccaccgg tcctacagct gccaggtcac acacgagggc 600 agcaccgtgg aaaagaccgt ggcccccacc gagtgcagc 639
<211> 1704 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 91
gaggtgcagc tgaaagagtc cggccctgga ctggtggccc ctggcggcag cctgagcatc 60 acctgtaccg tgtccggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt ccgacagccc 120 cctggcaagg gcctggaatg gctgggcatg atctggggcg acggccggat cgactacgcc 180 gacgccctga agtcccggct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240 gaaatgacca gcctgcggac cgacgacacc gccacctact actgcgccag ggacggctac 300 ttcccctacg ccatggattt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgtc ctccgaagtg 360 cagctggtgg aaagcggcgg aggcctggtg cagcccggca gaagcctgag actgagctgc 420 gccgccagcg gcttcacctt cgacgactac gccatgcact gggtccgcca ggctcccgga 480 aagggactcg agtgggtgtc cgccatcacc tggaacagcg gccacatcga ttacgccgat 540 agcgtggaag gccggttcac catcagccgg gacaacgcca agaacagcct gtacctgcag 600 atgaacagcc tgagagccga ggataccgcc gtgtactact gtgccaaggt gtcctacctg 660 agcaccgcca gcagcctgga ctactgggga cagggaaccc tggtcaccgt gtccagcgct 720 tccaccaagg gccccagcgt gttccctctg gcccctagca gcaagagcac atctggcgga 780 acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcccg agcccgtgac cgtgtcctgg 840 aactctggtg ccctgacaag cggagtgcat accttccctg ccgtgctgca gagcagcggc 900 ctgtactctc tgagcagcgt ggtcaccgtg ccaagcagca gcctgggcac ccagacctac 960 atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 1020 agctgcgaca agacccacac ctgtcctccc tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 1080 tccgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag gataccctga tgatcagccg gacccctgaa 1140 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 1200 gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggaaca gtacaacagc 1260 acctaccggg tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 1320 tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg ccagccccta tcgagaaaac catcagcaag 1380 gccaagggcc agccccgcga gcctcaggtg tacacactgc ctccatgccg ggacgagctg 1440 accaagaacc aggtgtccct gtggtgcctc gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1500 gtggaatggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg 1560 gacagcgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1620 cagggcaacg tgttcagctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaaccg gttcacccag 1680 aagtccctga gcctgagccc tggc 1704
<210> 92 <211> 1035 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
ctgagcgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 aactacctgg cctggtatca gcagaagccc 120 gccagcacac tgcagagcgg cgtgcccagc 180 ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240 tacaacagag ccccctacac cttcggccag 300 ggcagctccg gctctggcgg cgatatcgtg 360 tctctgggcc agagagccac catcagctgc 420 cagagctaca tgcattggta tcagcagaaa 480 ctggccagca acctggaatc cggcgtgccc 540 gatttcacac tgacaatcga ccccgtgcag 600 cagaacgccg aggacagccg gaccttcggc 660 agcggctcca gcggcagtgg cggacgtacg 720 ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780 taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840 caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900 accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960 ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020
<400> 92
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc atcacctgtc gggccagcca gggcatccgg ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg ggcaccaagg tggaaatcaa gggcggctct ctgacccagt ctcccgccag cctggccgtg agagccagcg agagcgtgga cagctacggc gccggccagc ctcctaaact gctcatctac gccaggtttt ccggcagcgg cagcagaacc gccgaggatg ccgccacata ttactgtcag ggaggcacca agctcgagat taagggcgga gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc gacagcacct actccctgtc ctccaccctg aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag
aaccggggcg agtgc
1035
<210> 93 <211> 568
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
420 425 430
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
435 440 445
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
450 455 460
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
465 470 475 480
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
485 490 495
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
500 505 510
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
515 520 525
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
530 535 540
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
545 550 555 560
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
565
<210> 94 <211> 345 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 94
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
115 120 125
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
130 135 140
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
145 150 155 160
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
180 185 190
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr
195 200 205
Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
210 215 220
Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr
225 230 235 240
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
245 250 255
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
260 265 270
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
275 280 285
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
290 295 300
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
305 310 315 320
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
325 330 335
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 340 345
<210> 95 <211> 1704 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 95
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgcgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt ccgacaggcc 120 cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgcc atcacctgga acagcggcca catcgactac 180 gccgacagcg tggaaggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt caccgtgtcc 360 tccgaagtgc agctgaaaga gtccggccct ggcctggtgg cccctggcgg cagcctgagc 420 atcacctgta ccgtgtccgg cttcagcctg accgacagca gcatcaactg ggtccgccag 480 cctcccggaa agggactcga gtggctgggc atgatctggg gcgacggccg gatcgattac 540 gccgatgccc tgaagtcccg gctgagcatc agcaaggaca gcagcaagag ccaggtgttc 600 ctggaaatga ccagcctgag aaccgacgac accgccacct actactgtgc ccgggacggc 660 tacttcccct acgccatgga tttctgggga cagggaacca gcgtgaccgt gtccagcgct 720 tccaccaagg gccccagcgt gttccctctg gcccctagca gcaagagcac atctggcgga 780 acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcccg agcccgtgac cgtgtcctgg 840 aactctggtg ccctgacaag cggagtgcat accttccctg ccgtgctgca gagcagcggc 900 ctgtactctc tgagcagcgt ggtcaccgtg ccaagcagca gcctgggcac ccagacctac 960 atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 1020 agctgcgaca agacccacac ctgtcctccc tgtcctgccc ctgaactgct gggcggaccc 1080 tccgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag gataccctga tgatcagccg gacccctgaa 1140 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 1200 gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggaaca gtacaacagc 1260 acctaccggg tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 1320 tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg ccagccccta tcgagaaaac catcagcaag 1380 gccaagggcc agccccgcga gcctcaggtg tacacactgc ctccatgccg ggacgagctg 1440 accaagaacc aggtgtccct gtggtgcctc gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1500 gtggaatggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg 1560 gacagcgacg gctcattctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1620 cagggcaacg tgttcagctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaaccg gttcacccag 1680 aagtccctga gcctgagccc tggc 1704
<210> 96 <211> 1035 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 96
gacatcgtgc tgacccagag ccctgccagc ctggccgtgt ctctgggcca gagagccacc 60 atcagctgcc gggccagcga gagcgtggac agctacggcc agagctacat gcactggtat 120 cagcagaagg ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggaaagc 180 ggcgtgcccg ccagattcag cggcagcggc agcagaaccg acttcaccct gaccatcgac 240
cccgtgcagg ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggacagccgg 300 accttcggcg gaggcaccaa gctggaaatc aagggcggct ccggcagcag cggctctggc 360 ggcgatatcc agatgaccca gtcccccagc agcctgagcg ccagcgtggg cgacagagtg 420 accatcacct gtagagccag ccagggcatc cggaactacc tggcttggta tcagcagaaa 480 cccggaaagg cccctaaact gctcatctac gccgccagca ccctgcagtc cggcgtgcca 540 agcagattct ccggctctgg cagcggcacc gatttcacac tgacaatcag cagcctgcag 600 cccgaggatg tggccaccta ttattgccag agatacaaca gagcccccta caccttcggc 660 cagggcacca aggtcgagat taagggcgga agcggcagct ccggctccgg cggacgtacg 720 gtggccgctc cttccgtgtt catcttccct ccctccgacg agcagctgaa gtccggcacc 780 gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc taccctcggg aggccaaggt gcagtggaag 840 gtggacaacg ccctgcagtc cggcaactcc caggagtccg tcaccgagca ggactccaag 900 gacagcacct actccctgtc ctccaccctg accctgtcca aggccgacta cgagaagcac 960 aaggtgtacg cctgtgaggt gacccaccag ggcctgtcca gccctgtgac caagtccttc 1020 aaccggggcg agtgc 1035
<210> 97 <211> 1710 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 97
gaggtgcagc tgaaagagtc cggccctgga ctggtggccc ctggcggcag cctgagcatc 60 acctgtaccg tgtccggctt cagcctgacc gacagcagca tcaactgggt ccgacagccc 120 cctggcaagg gcctggaatg gctgggcatg atctggggcg acggccggat cgactacgcc 180 gacgccctga agtcccggct gagcatcagc aaggacagca gcaagagcca ggtgttcctg 240 gaaatgacca gcctgcggac cgacgacacc gccacctact actgcgccag ggacggctac 300 ttcccctacg ccatggattt ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgtc cagtcaggtc 360 cagctgcagc agagcggccc tgagctggtc aagcctggcg ccagcgtgaa gatcagctgc 420 aaggccagcg gctacagctt caccagctac tggatccact ggatcaagca gcggcctggc 480 cagggcctcg agtggatcgg aatgatcgac cccagcgacg gcgagacacg gctgaaccag 540 agattccagg gcagagccac cctgaccgtg gacgagagca ccagcaccgc ctacatgcag 600 ctgcggagcc ccaccagcga ggacagcgcc gtgtactact gcacccggct gaaagaatac 660 ggcaactacg acagcttcta cttcgacgtg tggggagccg gcaccctggt caccgtgtct 720 agcgcttcca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ctagcagcaa gagcacatct 780 ggcggaacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 840 tcctggaact ctggtgccct gacaagcgga gtgcatacct tccctgccgt gctgcagagc 900 agcggcctgt actctctgag cagcgtggtc accgtgccaa gcagcagcct gggcacccag 960 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 1020 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgt cctccctgtc ctgcccctga actgctgggc 1080 ggaccctccg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggata ccctgatgat cagccggacc 1140 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg atcccgaagt gaagttcaat 1200 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 1260 aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccag cccctatcga gaaaaccatc 1380 agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct caggtgtaca cactgcctcc atgccgggac 1440 gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1500 atcgccgtgg aatgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccctccc 1560 gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtcccgg 1620 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctct gtgatgcacg aggccctgca caaccggttc 1680 acccagaagt ccctgagcct gagccctggc 1710
<210> 98 <211> 4 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<210> 99 <211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция <400> 99
Gly Gly Gly Gly Gly
1. 5
<210> 100
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 100
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1. 5
<210> 101
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 101
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1. 5
<210> 102
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 102
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1. 5
<210> 103 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5
<210> 104 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 104
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5 10
<210> 105 <211> 15 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 105
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5 10 15
<210> 106 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 106
Thr Lys Gly Pro Ser
1. 5
<210> 107 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 107
Thr Val Ala Ala Pro
1. 5
<210> 108 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 108
Gln Pro Lys Ala Ala
1. 5
<210> 109 <211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 109
Gln Arg Ile Glu Gly
1. 5
<210> 110 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
1. 5
<210> 111 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 111
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
1. 5
<210> 112 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 112
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
1. 5
<210> 113 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 113
His Ile Asp Ser Pro
1. 5
Asn Lys
<210> 114 <211> 448 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 115 <211> 213 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 116 <211> 1344
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 116
caggtgcagc tgcagcagcc tggcgccgaa ctcgtgaaac ctggcgcctc cgtgaagatg 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacaaca tgcactgggt caagcagacc 120 cccggcagag gcctggaatg gatcggcgcc atctaccccg gcaacggcga cacctcctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgccgaca agagcagcag cacagcctac 240 atgcagctgt ccagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcgc cagaagcacc 300 tactacggcg gcgactggta cttcaacgtg tggggagccg gcaccaccgt gacagtgtct 360 gctgcttcga ccaagggccc atcggtgttc cctctggccc cttgcagcag aagcaccagc 420
gaatctacag ccgccctggg ctgcctcgtg tcctggaact ctggcgctct gacaagcggc agcggcctgt actctctgag cagcgtcgtg acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tctaagtacg gccctccctg ccctccttgc gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaggaa gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgccc aagggccagc cccgcgagcc tcaagtgtat aagaaccagg tgtccctgtg gtgtctcgtg gaatgggaga gcaacggcca gcccgagaac agcgacggct cattcttcct gtactccaag ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac tccctgtctc tgtccctggg caag aaggactact ttcccgagcc cgtgaccgtg 480 gtgcacacct ttccagccgt gctccagagc 540 acagtgccca gcagcagcct gggcaccaag 600 agcaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 ccagcccctg aatttctggg cggaccctcc 720 accctgatga tcagccggac ccccgaagtg 780 gatcccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 840 aagcccagag aggaacagtt caacagcacc 900 caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960 agctccatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1020 accctgcccc cttgccagga agagatgacc 1080 aaaggcttct accccagcga cattgccgtg 1140 aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac 1200 ctgaccgtgg acaagagccg gtggcaggaa 1260 gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320
1344
<210> 117 <211> 639 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 117
cagatcgtgc tgagccagag ccctgccatc ctgagcgctt ccccaggcga gaaagtgacc 60 atgacctgca gagccagcag cagcgtgtcc tacatccact ggttccagca gaagcccggc 120 agcagcccca agccttggat ctacgccacc agcaatctgg ccagcggagt gcctgtgcgg 180 tttagcggct ctggcagcgg cacaagctac agcctgacca tcagccgggt ggaagccgaa 240 gatgccgcca cctactactg ccagcagtgg accagcaacc cccccacatt tggcggaggc 300 accaagctgg aaatcaagcg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc 360 gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgcgaggcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa 480 agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgacactg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 600 tctagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
<210> 118 <211> 1713 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 118
caggtgcagc tgcaggaatc tggccctggc ctcgtgaagc ctagccagac cctgagcctg 60 acctgtaccg tgtccggctt cagcctgagc gactacggcg tgcactgggt gcgccagcca 120 cctggaaaag gcctggaatg gctgggcgtg atctgggctg gcggaggcac caactacaac 180 cccagcctga agtccagaaa gaccatcagc aaggacacca gcaagaacca ggtgtccctg 240 aagctgagca gcgtgacagc cgccgatacc gccgtgtact actgcgccag agacaagggc 300 tacagctact actacagcat ggactactgg ggccagggca ccaccgtgac cgtgtcatcc 360 tctcaggtgc agctggtgga atctggcggc ggagtggtgc agcctggcag aagcctgaga 420 ctgagctgtg ccgccagcgg cttcaccttc accaaggcct ggatgcactg ggtgcgccag 480 gcccctggaa agcagctgga atgggtggcc cagatcaagg acaagagcaa cagctacgcc 540 acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg ttcaccatca gccgggacga cagcaagaac 600 accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgtcgg 660 ggcgtgtact atgccctgag ccccttcgat tactggggcc agggaaccct cgtgaccgtg 720 tctagtcgga ccgcttcgac caagggccca tcggtgttcc ctctggcccc ttgcagcaga 780 agcaccagcg aatctacagc cgccctgggc tgcctcgtga aggactactt tcccgagccc 840 gtgaccgtgt cctggaactc tggcgctctg acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg 900 ctccagagca gcggcctgta ctctctgagc agcgtcgtga cagtgcccag cagcagcctg 960 ggcaccaaga cctacacctg taacgtggac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 1020
cgggtggaat ctaagtacgg ccctccctgc ggaccctccg tgttcctgtt ccccccaaag cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag agcaaggcca agggccagcc ccgcgagcct gagatgacca agaaccaggt gtccctgagc attgccgtgg aatgggagag caacggccag gtgctggaca gcgacggctc attcttcctg tggcaggaag gcaacgtgtt cagctgctcc acccagaagt ccctgtctct gtccctgggc cctccttgcc cagcccctga atttctgggc 1080 cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1140 tcccaggaag atcccgaggt gcagttcaat 1200 gccaagacca agcccagaga ggaacagttc 1260 accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1320 ggcctgccca gctccatcga gaaaaccatc 1380 caagtgtgta ccctgccccc tagccaggaa 1440 tgtgccgtga aaggcttcta ccccagcgac 1500 cccgagaaca actacaagac caccccccct 1560 gtgtccaagc tgaccgtgga caagagccgg 1620 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1680 aag 1713
<210> 119 <211> 1026 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 119
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cacctggaca gcctgccagc 60 atcagctgca agagcagcca gagcctggtg cacaacaacg ccaacaccta cctgagctgg 120 tatctgcaga agcccggcca gagcccccag tccctgatct acaaggtgtc caacagattc 180 agcggcgtgc ccgacagatt ctccggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240 agccgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg gccagggcac ccagtacccc 300 ttcacctttg gcagcggcac caaggtggaa atcaagggcc agcccaaggc cgcccccgac 360 atcgtgctga cacagagccc tgctagcctg gccgtgtctc ctggacagag ggccaccatc 420 acctgtagag ccagcgagag cgtggaatat tacgtgacca gcctgatgca gtggtatcag 480 cagaagcccg gccagccccc caagctgctg attttcgccg ccagcaacgt ggaaagcggc 540 gtgccagcca gattttccgg cagcggctct ggcaccgact tcaccctgac catcaacccc 600 gtggaagcca acgacgtggc caactactac tgccagcaga gccggaaggt gccctacacc 660 tttggccagg gcaccaagct ggaaatcaag accaagggcc ccagccgtac ggtggccgct 720 cccagcgtgt tcatcttccc acctagcgac gagcagctga agtccggcac agcctctgtc 780 gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgc gaggccaaag tgcagtggaa ggtggacaac 840 gccctgcaga gcggcaacag ccaggaaagc gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc 900 tacagcctga gcagcaccct gacactgagc aaggccgact acgagaagca caaggtgtac 960 gcctgcgaag tgacccacca gggcctgtct agccccgtga ccaagagctt caaccggggc 1020 gagtgt 1026
<210> 120 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 120
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn
1. 5
<210> 121 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
1. 5
<210> 122
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 122
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val 1. 5 10
<210> 123 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 123
Ser Ser Val Ser Tyr
1. 5
<210> 124 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 124
Ala Thr Ser 1
<210> 125
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 125
Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro
1. 5
<210> 126 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Asn Ile His 1. 5 10
<210> 127 <211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 127
Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ala Pro
1. 5 10
<210> 128
<211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 128
Ala Asn Trp Asp Val Ala Phe Ala Tyr
1. 5
<210> 129 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 129
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His 1. 5 10
<210> 130 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 130
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp 1. 5 10
<210> 131 <211> 12 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 131
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr
1. 5 10
<210> 132 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 132
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His 1. 5 10
<210> 133
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 133
Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr
1. 5
<210> 134 <211> 14 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 134
Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val 1. 5 10
<210> 135 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 135
Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser Ser Ile Asn 1. 5 10
<210> 136 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 136
Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp 1. 5
<210> 137 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 137
Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe 1. 5 10
<210> 138 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 138
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr Met Ala 1. 5 10
<210> 139 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 139
Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1. 5
<210> 140 <211> 8 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 140
Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
1. 5
<210> 141 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<223> Синтетическая конструкция
<400> 141
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala 1. 5 10
<210> 142 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 142
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1. 5
<210> 143 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 143
His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp Leu Ser 1. 5 10
<210> 144 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 144
Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe Thr
1. 5
<210> 145 <211> 15 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 145
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Gln Ser Tyr Met His
1. 5 10 15
<210> 146 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 146
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1. 5
<210> 147 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 147
Gln Gln Asn Ala Glu Asp Ser Arg Thr
1. 5
<210> 148 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 148
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly
1. 5 10
<210> 149 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 149
Gln Ser Leu Val His Asn Asn Gly Asn Thr Tyr
1. 5 10
<210> 150 <211> 120 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 150
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
1. 5 10
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala 35 40 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly 50 55
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 151 <211> 107 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 151
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 152 <211> 121 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 152
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 153
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 154 <211> 121 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Gly Val Tyr Tyr Ala Leu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 155 <211> 112 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 155
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro 1. 5 10 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys 20
Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15
Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn
25 30 Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 4
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val
50 55 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 65 70 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val
Thr Gln Tyr Pro Phe Thr Phe Gly 100
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
75 80 Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
90 95 Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105 110
<210> 156
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 157 <211> 111 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 157
Asp Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<211> 121 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 158
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala 115 120
<210> 159 <211> 106 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 159
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 160 <211> 120 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr 20 25
<223> Синтетическая конструкция
Lys Pro Gly Ala
Phe Thr Ser Tyr 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 161 <211> 107 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 161
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 162 <211> 120 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 162
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Lys Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Lys Gly Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 163 <211> 111 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 163
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Val Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Val Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 164 <211> 120 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 164
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr
1. 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 165 <211> 107 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 166 <211> 118 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Lys Lys Ser Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Ala Pro Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ala Asn Trp Asp Val Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 167 <211> 106 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 167
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Arg Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln Asp Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
105
<210> 168 <211> 121 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 168
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 169 <211> 107 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 170 <211> 123 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1. 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Gly Glu Thr Arg Leu Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Arg Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Lys Glu Tyr Gly Asn Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 171 <211> 107 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 171
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Leu Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asp Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 172 <211> 118 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 172
Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Ser
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Ala Asp Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Thr Ser Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Phe Pro Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 173 <211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 173
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1. 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 174 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> (1)..(5)
<223> Может отсутствовать или присутствовать или присутствует в повторах до 5 раз
<400> 174
Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5
<210> 175 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 175
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro 1. 5
<211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 176
Asp Lys Thr His Thr
1. 5
<210> 177 <211> 6 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 177
Thr Lys Gly Pro Ser Arg
1. 5
<210> 178 <211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 178
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1. 5
<210> 179
<211> 7 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 179
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1. 5
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II];
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHI [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV]; где
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
2. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, которые специфически связывают один или несколько белков-мишеней, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iiiapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] ; где
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
и где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь.
3. Связывающий белок по п.1, где вторая и/или третья
полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную
с СН1, при этом Fc-область содержит шарнирную область
иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи
иммуноглобулина.
4. Связывающий белок по п.1 или п. 2, где по меньшей мере один из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую О аминокислот.
5. Связывающий белок по п.1 или п. 2, где каждый из Llf L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
6. Связывающий белок по п.1 или п. 2, где (а) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGS GGGGS GGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148); или (b) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148).
7. Связывающий белок по п.1 или п.2, где
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO:
148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
8. Связывающий белок по п.1 или п. 2, где связывающий белок является триспецифическим и способен специфически связывать три различных антигена-мишени.
9. Связывающий белок по любому из пп. 1-8, где связывающий белок специфически связывает три белка-мишени, которые соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному опухолевому белку-мишени.
10. Связывающий белок по п. 9, где один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD3.
11. Связывающий белок по п.9 или п.10, где один из указанных белков-мишеней на Т-клетках представляет собой CD2 8.
12. Связывающий белок по любому из пп. 9-11, где указанный опухолевый белок-мишень представляет собой CD3 8.
13. Связывающий белок по любому из пп. 1-8, где связывающий
белок специфически связывает три белка-мишени, которые
соответствуют двум белкам-мишеням на Т-клетках и одному белку-
мишени, выбранному из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРОазы,
BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5,
В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7,
CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25,
CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28,
CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152,
CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279,
CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3,
CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1,
эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A,
FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2,
HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1,
11.
ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, ЫТРБазы-1, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, Т14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1 .
14. Связывающий белок по п.1 или п.2, где связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней .
15. Связывающий белок по п.14, где один или несколько
белков-мишеней выбраны из группы, состоящей из A2AR, APRIL,
АТРБазы, BAFF, BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4,
В7Н5, В7Н6, В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5,
CCL7, CCL8, CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24,
CCL25, CCL26, CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27,
CD28, CD38, CD39, CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L,
CD152, CD154, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278,
CD279, CDH1, хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-
3, CX3CL1, CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1,
эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A,
FCER1, FLAP, F0LH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2,
HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1,
ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra,
IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2,
IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35,
ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС
класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3bi-l, ОХ40, OX40L, PD-1H,
тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2,
STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2,
TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP,
TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
16. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные
цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi-L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II];
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHI [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV]; где
VL1 представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где
(а) каждый из VLI, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165 и 167; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ ID N0: 43-59, 123-125, 138-140 и 149; и где
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164 и 166; или
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ
ID N0: 25-42, 120-122 и 126-128.
17. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VL1_L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъ3-?н2-Ъ4-Сн1-шарнир-Сн2-Сн3 [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-mapHHp-CH2-CH3 [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV]; где
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и CH2; и
1л1г L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где
(a) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165 и 167; или
(b) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, приведенную под любым из SEQ ID NO: 43-59,
123-125, 138-140 и 149; и
где
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164 и 166; или
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, приведенную под любым из SEQ
ID NO: 25-42, 120-122 и 126-128.
18. Связывающий белок по п.16, где вторая и/или третья полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную с СН1, при этом Fc-область содержит шарнирную область
иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
19. Связывающий белок по п.16 или п.17, где по меньшей мере один из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую О аминокислот.
20. Связывающий белок по п. 16 или п. 17, где каждый из Li, L2, L3 или L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
21. Связывающий белок по п. 16 или п. 17, где (а) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148); или (b) каждый из L.!, L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148).
22. Связывающий белок по п.16 или п.17, где:
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175), L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
23. Связывающий белок по п.16 или п.17, где:
23.
(a) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45;
(b) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
(a)
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 25, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 26, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 27;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 45;
(c) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57;
(d) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3,
(c)
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 37, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 38, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 39;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 55, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 56, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 57;
(е) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 40, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 58, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59;
(f) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 31, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 32, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 33;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 50, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID NO: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
NO: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 40, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 41, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 42;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 58, CDR-L2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 44, и CDR-L3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 59;
(g) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 30; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
(f)
последовательность под SEQ ID NO: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 8; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 0;
(h) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 6, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 127, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 12 8;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 138, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 139, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 0;
(i) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 28, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 29, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 30;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 4 6, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 47, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 48; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125; или
(j) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 31, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 32, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 33; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 9, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 50, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 51; VH2 содержит
CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 34, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 35, и CDR-H3, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 36; VL2 содержит CDR-L1,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 52,
CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID
N0: 53, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID N0: 54; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 12 0, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 121, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 122;
и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 123, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 124, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 125.
24. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-L!-VL1-L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VHI-L3-VH2-L4-CHI [II];
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VH3-CHi [III];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV]; где
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VHi представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
СН1 представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуноглобулина; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где
(a) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 169, 171 и 173; или
(b) каждый из VL1, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие
комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:
141-147, 178 и 179;
где
(a) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID N0: 168, 170 и 172; или
(b) каждый из VH1, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID N0: 129-137.
25. Связывающий белок, содержащий четыре полипептидные цепи, которые образуют три антигенсвязывающих участка, где первая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VL2-Li-VLi_L2-CL [I];
и вторая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
?н1-Ъз-?н2-Ь4-Сн1-шарнир-Сн2-Снз [II] ;
и третья полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой:
VH3-CHi-iiiapmip-CH2-CH3 [Ш];
и четвертая полипептидная цепь содержит структуру, представленную формулой: VL3-CL [IV] ; где
VLi представляет собой первый вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL2 представляет собой второй вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VL3 представляет собой третий вариабельный домен легкой цепи иммуно гло булина;
VH1 представляет собой первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH2 представляет собой второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
VH3 представляет собой третий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина;
CL представляет собой константный домен легкой цепи иммуно гло булина;
CHi представляет собой константный домен CHi тяжелой цепи иммуно гло булина;
СН2 представляет собой константный домен СН2 тяжелой цепи иммуно гло булина;
Снз представляет собой константный домен Снз тяжелой цепи иммуно гло булина;
шарнир представляет собой шарнирную область
иммуноглобулина, соединяющую домены CHi и Снг; и
Li, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;
где полипептид формулы I и полипептид формулы II образуют перекрестно расположенную пару легкая цепь-тяжелая цепь;
где
(а) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 169, 171 и 173; или
(b) каждый из VLi, VL2 и VL3 независимо содержит определяющие комплементарность области легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 141-147, 178 и 179; где
(a) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит
последовательность вариабельного домена, приведенную под любым
из SEQ ID NO: 168, 170 и 172; или
(b) каждый из VHi, VH2 и VH3 независимо содержит определяющие
комплементарность области тяжелой цепи, содержащие
аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
состоящей из SEQ ID NO: 129-137.
26. Связывающий белок по п.24, где вторая и/или третья полипептидные цепи дополнительно содержат Fc-область, связанную с CHi, при этом Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина.
27. Связывающий белок по п.2 4 или п.25, где по меньшей мере один из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
28. Связывающий белок по п. 2 4 или п. 25, где каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую по меньшей мере одну аминокислоту.
29. Связывающий белок по п. 2 4 или п. 25, где (а) каждый из Llf L2, L3 и L4 независимо имеет длину, составляющую ноль аминокислот, или содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148); или (b) каждый из Li, L2, L3 и L4 независимо содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), S, RT, TKGPS (SEQ ID NO: 106), GQPKAAP (SEQ ID NO: 175) и GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148).
30. Связывающий белок по п.2 4 или п.25, где:
(a) Li содержит последовательность GQPKAAP (SEQ ID NO: 175),
L2 содержит последовательность TKGPS (SEQ ID NO: 106), L3 содержит последовательность S, и L4 содержит последовательность RT;
(b) Li содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L2 содержит последовательность GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 104), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот;
(c) Li содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L2 содержит последовательность GGSGSSGSGG (SEQ ID NO: 148), L3 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот; или
(d) Li содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), L2 имеет длину, составляющую 0 аминокислот, L3 содержит последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 105), и L4 имеет длину, составляющую 0 аминокислот.
31. Связывающий белок по п.2 4 или п.25, где:
(a) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; и VL3
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142;
(b) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 47, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142;
(c) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2
(b)
содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(d) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(e) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
(f) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 129, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 130, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 131; VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 141, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 178, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 142; VH2
(e)
содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
( содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147;
(h) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH2
содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL2
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH3
содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144;
(i) VHi содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3,
содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134;
VLi содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую
аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2
содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; и VL3 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; или
(j) VH1 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; VL1 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144; VH2 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 135, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 136, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 137; VL2 содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 145, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 146, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 147; VH3 содержит CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 132, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 133, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 134; и VL3
содержит CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 143, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 179, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 144.
32. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16 и 24, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A и Y407V.
33. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16 и 24, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где первая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y34 9C, T366S, L368A и Y407V; и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, где вторая Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W.
32.
34. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16, 24, 32 и 33, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина, и где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M428L и N434S.
35. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17 и 25, где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y407V.
36. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17 и 25, где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368 и 407 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A и Y4 07V; и где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W.
37. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25, 35 и 36, где домены Снз как второй, так и третьей полипептидных цепей содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 428 и 434 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой M42 8L и
32.
N434S.
38. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16, 24 и 32-34, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl или IgG4 человека; и где только одна из первой и второй Fc-областей содержат аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F.
39. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25 и 35-37, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl или IgG4 человека, и где только один из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F.
40. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16, 24, 32-34 и 38, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K.
38.
41. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25, 35-37 и 39, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgG4 человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 228 и 409 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S228P и R409K.
42. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16, 24, 32-34, 38 и 40, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены Сн2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgG4 человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A.
43. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25, 35-37, 39 и 41, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgG4 человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой F234A и L235A.
44. Связывающий белок по любому из пп. 1, 16, 24, 32-34, 38 и 40, где вторая полипептидная цепь дополнительно содержит первую Fc-область, связанную с CHi, при этом первая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи иммуноглобулина; где третья полипептидная цепь дополнительно содержит вторую Fc-область, связанную с CHi, при этом вторая Fc-область содержит шарнирную область иммуноглобулина и константные домены СН2 и Снз тяжелой цепи
38.
иммуноглобулина; где первая и вторая Fc-области представляют собой Fc-области IgGl человека; и где каждая из первой и второй Fc-областей содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A.
45. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25, 35-37, 39 и 41, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl человека, и где каждый из доменов Снз содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 234 и 235 IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой L234A и L235A.
46. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 35-37, 39, 41, 4 3 и 45, где VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, где VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, и где VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека.
47. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 35-37, 39, 41, 4 3 и 45, где VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8 человека, где VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3 человека, и где VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень человека.
48. Связывающий белок по п. 4 6 или п.47, где третий антигенсвязывающий участок специфически связывает опухолевый белок-мишень человека, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1.
49. Связывающий белок по любому из пп. 4 6-4 8, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, содержит:
(а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 152, и
вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 153; или
(Ь) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 154, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 155.
50. Связывающий белок по любому из пп. 4 6-4 9, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, содержит:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 160, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 161; или
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 162, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 163.
51. Связывающий белок по любому из пп. 4 6-50, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, содержит:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 156, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 157;
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 158, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 159;
(c) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 164, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 165;
(d) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 150, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 151; или
(a)
(е) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 166, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 167.
52. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 35-37, 39, 41, 43 и 45, где:
(a) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека;
(b) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека;
(c) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека;
(d) VH1 и VL1 образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека;
(e) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека; или
(a)
(f) VHi и VLi образуют первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, VH2 и VL2 образуют второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает TNFa человека, a VH3 и VL3 образуют третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека.
53. Связывающий белок по п.52, где антигенсвязывающий
участок, который специфически связывает TNFa человека, содержит
вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную
последовательность под SEQ ID N0: 168, и вариабельный домен
легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под
SEQ ID N0: 169.
54. Связывающий белок по п. 52 или п. 53, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL4 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 170, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 171.
55. Связывающий белок по любому из пп. 52-54, где антигенсвязывающий участок, который специфически связывает IL13 человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 172, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 173.
56. Связывающий белок по любому из пп. 1-55, где:
(a) домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или
(b) домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, и домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека.
57. Связывающий белок по любому из пп. 2, 17, 25, 35-37, 39, 41 и 43-55, где первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где
57.
аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и где четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи.
58. Связывающий белок, содержащий первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь, третью полипептидную цепь и четвертую полипептидную цепь, где:
(a) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 2;
(b) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:
(a)
1; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 2 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 2;
(c) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14;
(d) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 13 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 13; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 14 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 14;
(e) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную
(c)
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(f) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 17 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 17; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 18 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 18;
(g) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь
(f)
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 22 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 22;
(h) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 10 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 10; вторая
полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 9 или аминокислотную последовательность, которая
на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной
последовательности под SEQ ID NO: 9; третья полипептидная цепь
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 21 или
аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:
21; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 22 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 22;
(i) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 63 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 63; вторая
полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 62 или аминокислотную последовательность, которая
на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной
последовательности под SEQ ID NO: 62; третья полипептидная цепь
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 60 или
аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:
60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную
последовательность под SEQ ID NO: 61 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 61;
(j) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 61 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 61;
(к) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 60 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 60; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 71 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 71;
(1) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 7 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 7 6; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность
под SEQ ID NO: 75 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 75; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(m) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 82 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 82; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 81 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 81; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(п) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 8 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 88; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 87 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 87; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0:
8 5; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(о) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 94 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 94; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 93 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 93; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(р) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(q) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 69 или аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 69; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 68 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 68; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 85; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(г) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 73 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 73; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 74 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 74;
(s) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 63 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 63; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 62 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 62; третья полипептидная цепь
содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 85 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 5; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 8 6 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 8 6;
(t) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 4 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 4; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 3 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 3; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 115; или
(и) первая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 10 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 10; вторая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 9 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 9; третья полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 114 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 114; и четвертая полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0: 115 или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична
аминокислотной последовательности под SEQ ID N0: 115.
59. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую связывающий белок по любому из пп. 1-58.
60. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.59.
61. Выделенная клетка-хозяин, содержащая молекулу
нуклеиновой кислоты по п.59.
62. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.60 .
63. Выделенная клетка-хозяин по п. 61 или п.62, где клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего или клетку насекомого.
64. Фармацевтическая композиция, содержащая связывающий белок по любому из пп. 1-58 и фармацевтически приемлемый носитель.
65. Способ профилактики и/или лечения рака у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного связывающего белка по любому из пп. 1-23 и 32-58 или фармацевтической композиции по п.64.
66. Способ по п.65, где связывающий белок содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень.
67. Способ по п.66, где связывающий белок содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1.
68. Способ по любому из пп. 65-67, где по меньшей мере один связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим средством.
69. Способ профилактики и/или лечения воспалительного
заболевания или нарушения у пациента, включающий введение
пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере
одного связывающего белка по любому из пп. 1-15, 24-45 и 52-58 или фармацевтической композиции по п.64.
70. Способ по п.69, где связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa.
71. Способ по п. 69 или п. 70, где по меньшей мере один связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством.
72. Способ по любому из пп. 65-71, где пациентом является человек.
73. Способ по п.65 или п.69, где связывающий белок способен
ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней,
выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF,
BAFFR, ВСМА, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, В7Н1, В7Н4, В7Н5, В7Н6,
В7Н7, B7RP1, В7-4, СЗ, С5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8,
CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26,
CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39,
CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154,
CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1,
хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1,
CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1,
эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A,
FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2,
HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1,
ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra,
IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2,
IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35,
ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС
класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3bi-l, ОХ40, OX40L, PD-1H,
тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2,
STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2,
TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP,
TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
74. Связывающий белок по любому из пп. 1-23 и пп. 32-58 или
композиция по п. 64 для применения в профилактике и/или лечении рака у пациента.
75. Связывающий белок для применения или композиция для применения по п.74, где связывающий белок содержит один антигенсвязывающий участок, который специфически связывает поверхностный белок Т-клеток, и другой антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень.
76. Связывающий белок для применения или композиция для применения по п.75, где связывающий белок содержит первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD3, второй антигенсвязывающий участок, который специфически связывает CD2 8, и третий антигенсвязывающий участок, который специфически связывает опухолевый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из CD19, CD20, CD38, Нег2 и LAMP1.
77. Связывающий белок для применения или композиция для применения по любому из пп. 7 4-7 6, где связывающий белок вводят совместно с химиотерапевтическим средством.
78. Связывающий белок по любому из пп. 1-15, 24-45 и 52-58 или фармацевтическая композиция по п. 64 для применения в профилактике и/или лечении воспалительного заболевания или нарушения у пациента.
79. Связывающий белок для применения или композиция для применения по п.78, где связывающий белок содержит три антигенсвязывающих участка, каждый из которых специфически связывает цитокиновый белок-мишень, выбранный из группы, состоящей из IL-4, IL-13 и TNFa.
80. Связывающий белок для применения или композиция для применения по п.7 8 или п.7 9, где связывающий белок вводят совместно с противовоспалительным средством.
81. Связывающий белок для применения или композиция для применения по любому из пп. 74-80, где пациентом является человек.
82. Связывающий белок для применения или композиция для применения по п. 7 4 или п.78, где связывающий белок способен ингибировать функцию одного или нескольких белков-мишеней, выбранных из группы, состоящей из A2AR, APRIL, АТРБазы, BAFF,
75.
BAFFR, BCMA, BlyS, ВТК, BTLA, B7DC, B7H1, B7H4, B7H5, B7H6,
B7H7, B7RP1, B7-4, СЗ, C5, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8,
CCL11, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL21, CCL24, CCL25, CCL26,
CCR3, CCR4, CD3, CD19, CD20, CD23, CD24, CD27, CD28, CD38, CD39,
CD40, CD70, CD80, CD86, CD122, CD137, CD137L, CD152, CD154,
CD160, CD272, CD273, CD274, CD275, CD276, CD278, CD279, CDH1,
хитиназы, CLEC9, CLEC91, CRTH2, CSF-1, CSF-2, CSF-3, CX3CL1,
CXCL12, CXCL13, CXCR3, DNGR-1,
эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1, EGFR, ENTPD1, FCER1A, FCER1, FLAP, FOLH1, Gi24, GITR, GITRL, GM-CSF, Her2, HHLA2, HMGB1, HVEM, ICOSLG, IDO, IFNa, IgE, IGF1R, IL2R-6eTa, IL1, ILIA, IL1B, IL1F10, IL2, IL4, IL4Ra, IL5, IL5R, IL6, IL7, IL7Ra, IL8, IL9, IL9R, IL10, rhILlO, IL12, IL13, IL13Ral, IL13Ra2, IL15, IL17, IL17Rb, IL18, IL22, IL23, IL25, IL27, IL33, IL35, ITGB4, ITK, KIR, LAG3, LAMP1, лептина, LPFS2, молекулы МНС класса II, NCR3LG1, NKG2D, NTPDa3bi-l, ОХ40, OX40L, PD-1H, тромбоцитарного рецептора, PROM1, S152, SISP1, SLC, SPG64, ST2, STEAP2, Syk-киназы, TACI, TDO, T14, TIGIT, TIM3, TLR, TLR2, TLR4, TLR5, TLR9, TMEF1, TNFa, TNFRSF7, Tp55, TREM1, TSLP, TSLPR, TWEAK, VEGF, VISTA, Vstm3, WUCAM и XCR1.
83. Способ очистки связывающего белка, продуцируемого клеткой-хозяином, включающий:
(a) получение связывающего белка по любому из пп. 2, 17, 25, 35-37, 41, 43, 45 и 46-55 в клетке-хозяине, где только один из домена Снз второй полипептидной цепи и домена Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 435 и 436 IgGl или IgG4 человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой H435R и Y436F;
(b) приведение связывающего белка, полученного на (а) , в контакт с белком А и
(c) элюирование связывающего белка с белка А в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих 0 либо 2 домена Снз/ содержащих аминокислотные замены H435R и Y436F.
(a)
84. Способ по п.83, где домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает:
(с!) приведение связывающего белка, элюированного на (с) , в контакт с аффинной средой для легких цепей каппа и
(e) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких цепей каппа в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей.
85. Способ по п.84, дополнительно включающий после (е):
(f) приведение связывающего белка, элюированного на (е) , в контакт с аффинной средой для легких цепей лямбда и
(д) элюирование связывающего белка из аффинной среды для
легких цепей лямбда
в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL каппа-цепей.
86. Способ по п.83, где домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека; или домен CL первой полипептидной цепи представляет собой домен CL лямбда-цепи человека, а домен CL четвертой полипептидной цепи представляет собой домен CL каппа-цепи человека, и способ дополнительно включает:
(с!) приведение связывающего белка, элюированного на (с) , в контакт с аффинной средой для легких цепей лямбда и
(е) элюирование связывающего белка из аффинной среды для
легких цепей лямбда в условиях, подходящих для отделения
связывающего белка от связывающих белков, содержащих только
домены CL каппа-цепей.
87. Способ по п.8 6, дополнительно включающий после (е):
(f) приведение связывающего белка, элюированного на (е) , в контакт с аффинной средой для легких цепей каппа и
(g) элюирование связывающего белка из аффинной среды для легких цепей каппа
в условиях, подходящих для отделения связывающего белка от связывающих белков, содержащих только домены CL лямбда-цепей.
88. Способ по любому из пп. 83-87, где первая полипептидная цепь содержит домен CL лямбда-цепи; где домен Снз второй полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 354 и Збб IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой S354C и T366W; где домен Снз третьей полипептидной цепи содержит аминокислотные замены в положениях, соответствующих положениям 349, Збб, 368, 407, 435 и 436 IgGl человека в соответствии с EU-индексом, где аминокислотные замены представляют собой Y349C, T366S, L368A, Y407V, H435R и Y436F; и где четвертая полипептидная цепь содержит домен CL каппа-цепи.
89. Способ по любому из пп. 83-8 8, где связывающий белок выявляют на одной или нескольких из (с) и (е) с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC).
90. Способ по любому из пп. 83-89, где домены Снз второй и третьей полипептидных цепей представляют собой домены Снз IgGl или IgG4 человека.
По доверенности
Фиг. 1А
Фиг. IB
Легкая цепь А
Легкая цепь В
Фиг. 2
ф IgG человека
¦ Связывающий белок 1, IgG4
Фиг. ЗА
Фиг. ЗВ
ZR-75-1
AU565
Связывающий белок 1, IgG4
IgG4 к
huCD28xCD3
j/\gG\ к Her2 - ^^IgGl человека
2 х tr
x x
О H
100
ч= 80
X *>
H (L)
Связывающий белок 1, IgG4
IgG l к Her2
IgG4 к
huCD28xCD3
IgGl человека
(Л Ю
logio конц. белка (пМ)
IgG4 к huCD28 х CD3
* Связывающий белок 1, IgG4
IgGl к Нег2
¦ IgGl человека
Фиг. ЗС
ZR-75-1/С D28xCD3
Донор КР45926
IgG4 к
huCD28xCD3
^IgGl кНег2 ^ IgGl человека
3 х
<и
<и S <и 3 к к
о н
100
AU565/CD28xCD3
Донор КР45944
Связывающий белок 1, IgG4 ^
СТ) СЛ
logio конц. белка (пМ)
# IgG4 к huCD28 х CD3
• Связывающий белок 1, IgG4
¦ IgGl к Нег2 Ф IgGl человека
СБ4_донор 2
10
Фиг. 6А
о н и
Ч 5Й
HER2/CD28 CD8 донор 2
о н
ч 5Й
80 л
0,01
0,1
Доза (мкг/мл)
сл ю
о н и
Ч 5Й
40-
НЕК2ЩС028штхСОЗтШ) "#> Контрольное антитело к CD3 (LALA) !gG4
Фиг. 6В
4s"""
TTTTnf
"T-П~ГТТТ|
0,01
0,1 1 Доза (мкг/мл)
Передача сигнала IL-2
Передача сигнала NFkB
сть
40-
S эо-
^го-
10-
СЛ Ю
Передача сигнала NFAT
сЯ3
| Стимуляция 29 ч.]
| Связанные на планшете]
[100 нМ]
¦ IgG человека
¦ Связывающий белок 3, IgG4
U и и и
и в о н
В U О
0CI-LY19
a s
и н
3 В х х х 5
* О
ЕГ К X
CD3
GCB/OCL-LY19 (СБ19~62578/клетка)
80 6040 20 О
100
Связывающий белок 3, IgG4 Ч
/ IgG4 KhuCD28xCD3 ^CllV'^Gl KCDIQ
""•^-IgGl человека
CD28
logio конц. белка (пМ)
CD19
Фиг. 9В
1 Изотип
Клетка-мишень: OCI-LY19 Донор РВМС: КР48572
Клетка-мишень: OCI-LY19 60-j Донор РВМС: КР48573
-** IgG человека CD19/C28xCD3
20-
IgG человека CD19/C28xCD3
-10 12 log[aнтитeлo], пМ
10 12 3 4 ^[антитело], пМ
•10 12 3 log[aнтитeлo], nM
Клетка-мишень: MeCl Донор РВМС: КР48572
Клетка-мишень: RPMI8226 Донор РВМС: КР48775
IgG человека CD19/C28xCD3
30-
80-
70-
SO-
SO-^ у/ ~*~ IgG человека
Щ / CD19/C28xCD3
30j ^..^.^....^
о. 1 ... .А.
^[антитело], пМ
0 1 2 ^[антитело], пМ
Фиг. 91
Клетка-мишень: Raji 30- Донор РВМС: КР48572
Фиг. 9J
Клетка-мишень: HBL1 Донор РВМС: КР48775
сл ю
20-
*** IgG человека CD19/C28xCD3
70 4
ggi / -¦- IgG человека
401 / CD19/C28xCD3
301 20 i
-|"ТТГ|
-10 12 3 4 log[aнтитeлo], пМ
-10 1 2 3 4 1о§[антитело], пМ
Фиг. 9L
30-
Клетка-мишень: SUDHL8 Донор РВМС: КР48572
10-
-\ гттчтгп|-rvrYrrrq 1-тита" s-sii"nnTWT|r-г(tm)т-гт1та|
-10 1 2 3 4
log[aнтитeлo], пМ
IgG человека CD19/CD28xCD3
Клетка-мишень: SUDHL8 4 <Ь Донор РВМС: КР48573
20 J У ~*~ IgG человека
I JL_^^T _ CD19/CD28xCD3
io-J
10 1 2 3 4 log[aнтитeлo], пМ
401 30~
10-o-f
Клетка-мишень: ARH77 Донор РВМС: КР48775
-*¦ IgG человека CD19/CD28xCD3
0 12 3 4 log[aнтитeлo], пМ
¦ IgG человека
¦ Связывающий белок 5, IgG4
Фиг. 11В
ЕЕ С?
ЕГ w К *-
CD 3 3 к s
ЕГ К X
MM/MOLP-8 (СБ38~577304/клетка)
Связывающий белок 5,
^IgG4 к huCD28xCD3 ^IgGl к CD38
IgGl человека
9 12 3 4
logio конц. белка (пМ)
Фиг. ПС
А X <а V <а
<а
X X <о
о н
ЕГ S ЕЙ
MM/RPMI-8226 (СБ38~128713/клетка)
ici| Связывающий белок 5,
1^G4K1IUCD28XCD3
IgGl KCD38
IgGl человека
logio конц. белка (пМ)
СТ)
MM/KMS-12-ВМ (СБ38~103013/клетка)
ЕЕ С?
m к 3 ЁЭ
ЕЕ ЕЕ ЕЕ 5 CD
о н
ЕГ ?
Связывающий белок 5, IgG4
IgG4 к
huCD28xCD3 l/ .IgGl к ^ CD38
IgGl человека
¦ IgG4 к huCD28 х CD3
• Связывающий белок 5, IgG4
• IgGl к CD38
* IgG 1 человека
MOLP-8
RPMI-8226
KMS-12-BM
Фиг. 12А
MM/NCI-H929 (СБ38~88452/клетка)
Связывающий белок 5, ю{ IgG4
IgG4KhuCD28xCD3 "-" <-IgGl к CD38
^IgGl человека
ЙГ w CD *н
S § <и к
х и н
3 Э ЕЕ X X 5
о н
ЕГ S ЕЕ
IgG4 KhuCD28xCD3 IgGl KCD38
IgGl человека
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 12С
MM/MM. 1R (СБ38~53796/клетка)
1"!
^ 2 3
logio конц. белка (пМ)
Связывающий белок 5, IgG4
ЕЕ С?
CD о\
ЕГ w
CD v
CD CD
3 э
ЕЕ ЕЕ
CD I
ЕГ ЕЕ ЕЕ
2 20
IgG4 к huCD28 х CD3 Связывающий белок 5, IgG4
• IgGl к CD38
• IgGl человека
-IgGl человека
CDS
CD28
CD38
в о
U и в в
SH "
В О
NCI-H929
MM.1.S
сл ю
MM.1.R
щ Изотип
Фиг. 12D
ММ/ОРМ-2 (СБ38~41948/клетка)
!0Э
Связывающий белок 5, IgG4
^IgG4 KhuCD28xCD3 "IgGl KCD38
gGl человека
logio конц. белка (пМ)
ФИГ. 13С
100
EE CP
(L) v
2 x
CD CD
3 В 4C
BE EE
BE S
о н
ЕГ ЕЕ ЕЕ
ЕЕ гс н
MM/KMS-26 (СБ38~29696/клетка)
Связывающий белок 5, IgG4
lgG4 KhuCD28xCD3 ^IgGl к CD38
IgGl человека
logio конц. белка (пМ)
Ю О
СЛ КЗ
. во
CD А
ЕЕ _
ЕГ °-
^ ЕЕ
CD CD
з а
ЕЕ S3
BE S
ЕГ ЕЕ ЕЕ
Связывающий белок 5, IgG4
#IgG4 к huCD28 х CD3 "Связывающий белок 5, IgG4
¦IgGl к CD38 •IgG 1 человека
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 14А
Фиг. 14В
GCB/SUDHL-8 (СБ38~327209/клетка)
GCB/OCL-LY19 (СБ38~33504/клетка)
s и н си ч
CD ох Т w CD S S Я
я s а:
О Ь
Связывающий белок 5, IgG4
<-IgGl к CD38
д ^IgG4 к huCD28xCD3
^MgGl человека
-10 12 logio конц. белка (пМ)
я _
CD <5х
CD си
3 В
я § "
CD Т
Я и
Связывающий белок 5, IgG4
о - г logio конц. белка (пМ)
IgGl человека
ГО ГО
сл ю
IgG4 к huCD28 х CD3 ф Связывающий белок 5, IgG4
• IgGl к CD38
¦ IgGl человека
ГО 4^
logio конц. белка (пМ) Фиг. 15С 1о§10 конц- белка (пМ)
B-ALL/CCRF-SB (СБ38~11044/клетка)
Связывающий белок 5, IgG4
• IgG4 к huCD28 х CD3
• Связывающий белок 5, IgG4 •IgGl к CD38 •igGl человека
^igGl к CD38
IgGl человека
MM/RPMI (СБ38~128713/клетка) Донор РК45926
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 17В
Передача сигнала NFAT
300 л
:с ¦
Ю СЛ
Антитела IgG4 [5 нМ]
Антитела IgG4 [5 нМ]
Стимуляция 5 ч.
Фиг. 18А
Фиг. 18В
CD4+ Т-клетки
CD8+ Т-клетки
/ \
53 ю о
/ /
409 •"Ш"' 4-10
/ /
\ Л
\ X
О ю
сл ю
~т г г т~~г~~-г -"^f-
0 0,1 0,5 2,5 5,0 10 100
_т_т, т 1 г г-- Т"
0 0,1 0,5 2,5 5,0 10 100
Доза (мкг/кг)
Доза (мкг/кг)
Си.м,мая pr.oia ; |i 11.05 HI м in ;ы о
ь част; нос. к* r.i'.c кмшч . [о ;ы
Фиг. 18С
Фиг. 18D
CD4+ Т-клетки
Сильная рвота if р <0,05 отн. дозы О
IFN-g_6 ч.
IL-2 6 ч.
ОД 1
IgG4 к HER2/CD28supxCD3mid (мкг/кг)
10-
зон
100
IgG4 к HER2/CD28supxCD3mid (мкг/кг)
IL-6 6 ч.
IL-10 6 ч.
со о
сл ю
2000
| шШпщ *Яг*ф***Г-I г ' I
1 10 100
IgG4 к HER2/CD28supxCD3mid (мкг/кг)
S50O-
§ iOOO-
"и;
600-i
ОД 1 10 юс
IgG4 к HER2/CD28supxCD3mid (мкг/кг)
409
ФИГ. 18Е
- Ab к CD3/CD28/HER2 ^Ab к CD3/CD28/HER2 -ЛгАЬ к CD3/CD28/HER2 ¦Ab к CD3/CD28/HER2
носитель 1 мкг/кг, 2 qw 5 мкг/кг, 2 qw 25 мкг/кг, 2 qw
Масса тела
10-1
PBS
500 мкг/кг 100 мкг/кг 25 мкг/кг "Ф" 5 мкг/кг 10 мг/кг 1 мг/кг 0,1 мг/кг
CD3/CD28/Her2
Герцептин
со го
сл ю
CD3/CD28/Her2, 5 мкг/кг
PBS
5 мкг/кг
го г5 V) "о Дни после имплантации
СО СО
сл ю
Герцептин, 10 мг/кг
Герцептин, 1 мг/кг
Герцептин, 0,1 мг/кг
1500-
PBS 10 мг/кг
г ооо
1500
PBS 1 мкг/кг
1S00
PBS
ОД мкг/кг
юоо
25 30 35 40
Дни после имплантации
s о
с о
ю О
Дни после имплантации
S о
с о
о 1000
20 25 S0 35 40
Дни после имплантации
Фиг. 20В
Герцептин
Фиг. 20Е
100
Объем опухоли в день 34
500 100 25
мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мг/кг мг/кг мкг/кг
400'
S о
с о
ю О
> а ю О
20 25 30 35
Дни после имплантации
Фиг. 20F Масса опухоли в день 34
1900-, 9 1700-11000 800 600400200 0
pBS 500 100 25 5 10 1 100 мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мг/кг мг/кг мкг/кг
CD45 человека
CD3+(hCD45+)
100 80 Н
§ 60 4
о н
40200
¦ о0 О
к " о
w о н
100 80
"1 1 I -I -Г"
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
CD4+(CD^f)
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
CD8*(CD3t)
со сл
сл ю
1001 80
1 so
" 40
о н
2 20
О А
А
w о
О АД А
в ¦
_-г-пг
<Ъ л? \^ v4S \ " о
о н
А А
О О
ОО О
100-1 8060- •
40- #~ 4
20-0-J-"-
-!§ -.тт-".-р-у--^_ _
^ ^ ^ 4 г?>
8 к
" О
100 80 60 40 20 Н О
CD45 человека
2Г4 А А
(D 00 (D
(D О
" О
100 8060-| " /
40 '
20'
0х_,-яЦЬ
CD3*(hCD45+)
¦Лу Ф Ф ^*fniiJ
it А
1 1 1 т-
ч^/ ////ч
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
CT)
CD8+(CD:*)
100!
5 во-(
8 40 "
g 20 0
О _ _ А^
^ Л* А*
Фиг. 20Н
Фиг. 21А
Фиг. 21В
CD4+ Т-клетки
CD8+ Т-клетки
16 п
15 !
" Я"
н о
0 0,1
-г-
2,5 5,0 10
Доза (мкг/кг)
-40
-20
-10
100
о н
" о
а ю
о н о 10
0,1 0,5 2,5 5,0 10 Доза (мкг/кг)
100
сл ю
1L-S
Фиг. 21С
Фиг. 2 ID
2000 1500'
1000 500
0,1 1 10 100 IgG4 к CD38/ CDlSsupXCDSmid (мкг/кг)
IL-10
1 10 100 IgG4 к CD38/ Ст^хСОЗпм (мкг/кг)
Ср. значение исх. уровня = 9,2 пг/мл
* Цитокин, измеренный через 6 ч. после введения дозы
СО СО
сл го
Фиг. 2 IE
TNFa
1001 Ср. значение исх. уровня : 21 пг/мл
80-1
20-j \ у
Фиг. 2 IF
0,1 1 10 100 lgG4 к CD38/
CDlSsupXCDSmid (мкг/кг) ы
СЛ Ю
iFNg
"о i
80-
Ср. значение исх. уровня ^ ^ 411
= 4.2 пг/мл / 414
20-
0 Ь III II и!,*-г-пЛ'ищ-r*W!(tm)i'-
ОД 1 Ю *Цитокин, измеренный
IgG4 к CD38/ через CDZSsupXCDSmw (мкг/кг) 6 ч. после введения
дозы
2500 n
ss 2000
¦ SAR650984
CD3/CD28/CD38, 1 мкг/кг CD3/CD28/CD38, 50 мкг/кг
-в- CD3/CD28/CD38, 100 мкг/кг
Антитело к hCD8
Антитело к hCD4
Фиг. 22С
РВ S
-"- CD3/CD28/CD38, 0,04 мкг/кг CD3/CD28/CD38, 0,2 мкг/кг CD3/CD28/CD38, 1 мкг/кг ^ CD3/CD28/CD38, 5 мкг/кг
Фиг. 23С
День 19_все группы
р=0,0224
сл ю
Группа лечения
IFN-g
TNF
"00
4000
3600 2000-г
1900
1000 500
о мкг/кг
1"'
100^
59-
мкг/кг
4^ 4^
1000-
0J_
мкг/кг
<0
Фиг. 24
IgG4 к CD38SBi9xCD28SUpXCD3mid -*- IgG4 к CD28supxCD3mid
IgG4KCD28sup
Фиг. 26А IL-2
160 n
100
"и;
Время после инъекции (часы)
Время после инъекции (часы)
Связывающий белок 5, IgG4 " IgG4 к CD28XCD3 IgG4 к CD28
Время после инъекции (часы)
Связывающий белок 9
Связывающий белок 10 Связывающий белок 11
Связывающий белок 12
Связывающий белок 13 Связывающий белок 14
Связывающий белок 15
Связывающий белок 16
Связывающий белок 17
Связывающий белок 18
Связывающий белок 19 ?о
oj
Фиг. 27B
Фиг. 28А
CODV-плечо
TNF 1L4
Fab-плечо
IL13
CL-варианты (каппа или лямбда)
CL-варианты (каппа или лямбда)
4^ СО
сл ю
RF-варианты
RF-варианты
Варианты выступа/впадины
CODV-плечо
Fab-плечо
CODV-плечо
Fab-плечо
RF-мутация
K;iiiii;i
Кмппм
Впадина
Выступ
Отсутствие RF
Каши
Кмппм
Впадина
Выступ
Впадина
I\';INII;I
K;IIIII;I
Вт тпт
Выступ
1 II
Каши
. ISIMO I;I
1 м
IU Mill
()гсутствие RF
Кипим
. ISIMO I;I
1 м
iiiii
Впадина
Кмммм
. ISIMO IM
1 II
IIIII
1 II
. ISIMO I;I
K;IIIII;I
1 м
IU Mill
() i сутствие RF'
. IJIMO I;I
K;IIIII;I
1 м
IU Mill
Впадина
. ISIMO. I;I
Кмппм
1 п
IU Mill
Выступ
K;IIIII;I
Кмппм
1 м
IU Mill
()гсутствие RF
K;IIIII;I
Кмппм
1 м
IU Mill
Впадина
Кмннм
Кмппм
1 м
IU Mill
1 > I> ICI > II
Кмннм
. ISIMO I;I
Впадина
Выступ
Отсутствие RF
Кмппм
. ISIMO I;I
Впадина
Выступ
Впадина
Кмннм
. ISIMO I;I
Впадина
Высту 11
1 > 1> 1С1> II
. ISIMO IM
K;INII;I
Впадина
Выступ
Отсутствие RF
. ISIMO I;I
Кмппм
Впадина
Выступ
1'ilU ими
. ISIMO I;I
Кмппм
Впадина
Выступ
1 > 1> 1С1> II
51/52
ИСПРАВЛЕННЫЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 91) IS А/ЕР
52/52
T**r-r
Фиг. ЗОА
Broad 8509
6511
6512
Quad
RangeBoccx.J^
BOCCI.
HC-
BOCCT.
не-
восст.
восст.
не-
iBOCCT.
восст.
color
кДа
-
- ¦ ¦ ,
кДа
245
315
¦ ;Ж;
250
190
180
135
140
100
-via*
|.':Ч'1
,.-.,"•¦
,Vi,^l-'r,
.r J, . ¦
teaaWL-...- ;
4,6
Фиг. ЗОВ
ИСПРАВЛЕННЫЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 91) ISA/ЕР
(19)
(19)
(19)
280
280
281
281
286
286
287
287
297
297
298
298
303
303
304
304
314
314
315
315
320
320
321
321
327
327
328
328
331
331
332
332
347
347
348
348
358
358
359
359
374
374
375
375
385
385
382
382
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 8
<400> 34
Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp
<400> 34
Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 39
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 39
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<220>
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<210> 64 <211> 1350
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 68
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 68
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 84
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 84
<210> 87
<210> 87
<210> 91
<210> 91
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 98
Gly Gly Gly Gly
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 98
Gly Gly Gly Gly
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 103
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 103
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 121
Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr
<400> 121
Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 126
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 126
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<220>
<210> 153 <211> 112
<210> 153 <211> 112
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp
<210> 158
<210> 158
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 170
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 170
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 170
<210> 176
<210> 176
383
383
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 4
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 7В
Фиг. 7 А
Фиг. 8
Фиг. 8
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9D
Фиг. 9С
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9Н
Фиг. 9G
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 9К
Фиг. 10
Фиг. 10
Фиг. ПА
Фиг. ПА
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. ПА
Фиг. ПА
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
12 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 13А
Фиг. 13В
Фиг. 15А
0 1 ? 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 15А
0 1 ? 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 15А
0 1 ? 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 15А
0 1 ? 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 15А
0 1 ? 3
logio конц. белка (пМ)
Фиг. 16
Фиг. 16
Фиг. 19А
Фиг. 19А
Фиг. 19А
Фиг. 19А
Фиг. 20А
Фиг. 20А
Фиг. 20D
Фиг. 20D
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
ФИГ. 20G IgG4KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 KHer2/CD28supxCD3mid Герцептин
IgG4 к Her2/CD28supxCD3mid Герцептин
Фиг. 22В
Фиг. 22В
Фиг. 22В
Фиг. 23D
Фиг. 23D
Фиг. 23D
Фиг. 23D
Фиг. 23D
Фиг. 23D
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 26В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
Фиг. 28В
|
