(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к антителам против TIM-3 и композициям антител и их применению для усиления иммунитета у пациента, например, для лечения злокачественных опухолей.
Евразийское (21) 201892294 (13) Al
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07K16/28 (2006.01)
2019.04.30 A61P 35/00 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2017.04.11
(54) АНТИТЕЛА И КОМПОЗИЦИИ ПРОТИВ TIM-3
(31) (32)
62/321,476 2016.04.12
(33) US
(86) PCT/EP2017/058696
(87) WO 2017/178493 2017.10.19
(71) Заявитель: СИМФОГЕН А/С (DK)
(72) Изобретатель:
Линдстед Трине, Геттинг Торбен, Галлер Гюнтер Роланд, Гад Моника, Грандал Майкл Монрад, Кофод Клаус, Крагх Михаэль (DK), Хорек Иван Дэвид (US), Букен Томас, Педерсен Миккель Вандаль (DK)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU) (57) Настоящее изобретение относится к антителам против TIM-3 и композициям антител и их применению для усиления иммунитета у пациента, например, для лечения злокачественных опухолей.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
АНТИТЕЛА И КОМПОЗИЦИИ ПРОТИВ TIM-3
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННУЮ ЗАЯВКУ
[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет патентной заявки США 62/321476, поданной 12 апреля 2016 года, раскрытие которой в полном объеме включено в настоящее описание посредством ссылки.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Заявка содержит список последовательностей, который подан в электронном виде в формате ASCII и включен, таким образом, посредством ссылки в полном объеме. Указанная ASCII копия, созданная 26 сентября 2018 года, имеет название Список последовательсностей.txt и размер 156742 Б. ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] TIM-3 (содержащий домен иммуноглобулина Т-клеток и муцина 3), также известный как HAVCR2 (клеточный рецептор 2 вируса гепатита А) или CD366, является элементом семейства белков с доменом иммуноглобулина Т-клеток и муцина. У человека ген Havcr2 кодирует TIM-3, который представляет собой 33 кДа гликопротеин I типа с мембранным дистальным доменом IgV и мембранным проксимальным доменом муцина. Во внутриклеточном домене он содержит консервативную область из пяти остатков Туг, фосфорилирование которых происходит при связывании лиганда. TIM-3 экспрессирует определенный спектр различных клеток, относящихся к адаптивному и врожденному звеньям иммунной системы, включая Т-клетки, дендритные клетки, макрофаги и естественные киллерные (NK) клетки. На наивных Т-клетках экспрессия TIM-3 снижена, но значительно возрастает при активации Т-клеток. В отличие от Т-клеток, врожденные клетки, такие как дендритные клетки, NK клетки и моноциты, имеют высокую базовую экспрессию TIM-3. TIM-3 связан с несколькими, главным образом разнородными, лигандами, в том числе галектином-9, фосфатидилсерином, СЕАСАМ-1 и HMGB-1, но точные роли этих лигандов в настоящее время не известны.
ингибитором контрольной точки, существует относительно мало доказательств, подтверждающих идею о том, что TIM-3 напрямую опосредует супрессию активации Т-клеток или секрецию цитокинов таким образом, которых схож, например, с PD-1. Кроме того, и в отличие от PD-1, TIM-3 похоже играет роль в регуляции клеток врожденной системы и, в частности, дендритных клеток. Большинство функциональных данных, относящихся к TIM-3 и его роли в иммунологии опухолей, поступает из исследований in vivo с использованием различных антител. В большинстве этих исследований, из-за плохой валидации антител, не ясно, опосредованы ли эффекты антител к TIM-3 через ингибирование связывания лигандов или через агонистический эффект, оказываемый на мишень.
[0005] Ввиду свойств регуляции иммунного ответа у TIM-3, его исследовали в качестве потенциальной мишени для иммунотерапии, в том числе для лечения злокачественной опухоли и аутоиммунных заболеваний. Одно антитело против TIM-3 в настоящее время находится на клинических испытаниях, но в настоящее время больше нет одобренных антител против TIM-3.
[0006] Ввиду решающей роли TIM-3 в качестве иммунного
модулятора, существует необходимость в новой и
усовершенствованной иммунной терапии, которая направлена на TIM-3, чтобы лечить злокачественные опухоли и определенные нарушения иммунной системы.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007] Настоящее изобретение направлено на новые рекомбинантные антитела, нацеленные на TIM-3, а также фармацевтические композиции, содержащие одно или несколько этих антител, например, антитело против TIM-3, которое через активность на TIM-3 активирует различные клетки иммунной системы, такие как профессиональные антигенпредставляющие клетки (например, дендритные клетки и макрофаги) и Т-клетки (например, хелперные Т-клетки и цитотоксические Т-клетки). Настоящее изобретение также направлено на применение антител и фармацевтических композиций для усиления иммунитета у пациента и для лечения злокачественных опухолей, берущих начало в таких
тканях, как кожа, легкое, кишечник, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, грудь, желудок, матка и поджелудочная железа. По сравнению с лечением, доступным в настоящее время для таких злокачественных опухолей, в том числе лечение антителами, предусмотрено, что антитела по изобретению могут обеспечивать превосходный клинический ответ отдельно или в комбинации с другим терапевтическим средством для злокачественной опухоли, таким как антитело, направленное на белок другой иммунной контрольной точки.
[0008] В некоторых вариантах осуществления настоящее
изобретение предусматривает антитело против TIM-3 или его
антигенсвязывающую часть, где антитело против TIM-3 представляет
собой антитело, обозначаемое в настоящем описании как антитело
15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 20131,
20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299,
15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300,
20362 или 20621, или вариант любого из них, где вариант,
например, может содержать определенные минимальные
аминокислотные изменения относительно указанного антитела (например, изменения 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10 аминокислот, которые могут иметь место, например, в каркасных областях), не теряя антигенсвязывающей специфичности антитела.
[0009] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 конкурирует за связывание с TIM-3 человека с или связывается с тем же эпитопом TIM-3 человека, что и любое одно из антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 и 20621.
[0010] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 содержит H-CDR3, содержащую аминокислотную
последовательность H-CDR3 из SEQ ID N0:9, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92102112, 122132142, 152162172, 182192202, 212, 222 или 232.
[ООН] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 содержит H-CDR1-3, содержащую последовательности H-CDR1-3,
соответственно, из SEQ ID N0:7-9, 30-32, 40-42, 50-52, 60-62, 70-72, 80-82, 90-92, 100-102, 110-112, 120-122, 130-132, 140142, 150-152, 160-162, 170-172, 180-182, 190-192, 200-202, 210212, 220-222 или 230-232.
[0012] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), который по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентичен по аминокислотной последовательности из SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 228.
[0013] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет VH, которая содержит SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 22 8.
[0014] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет тяжелую цепь (НС), которая содержит аминокислотную последовательность VH из SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 228 и аминокислотную последовательность константной области тяжелой цепи (СН) из SEQ ID N0:5 или SEQ ID N0:23, 24 или 2 5.
[0015] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 содержит L-CDR3, содержащую аминокислотную
последовательность L-CDR3 из SEQ ID N0:12, 35, 45, 55, 65, 75, 85, 95, 105, 115, 125, 135, 145, 155, 165, 175, 185, 195, 205, 215, 225 или 235.
[0016] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 содержит L-CDR1-3, содержащую последовательности L-CDR1-3, соответственно, из SEQ ID N0:10-12, 33-35, 43-45, 53-55, 63-65, 73-75, 83-85, 93-95, 103-105, 113-115, 123-125, 133-135, 143145, 153-155, 163-165, 173-175, 183-185, 193-195, 203-205, 213215, 223-225 или 2 33-235.
[0017] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по
меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 22 9.
[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 имеет VL, которая содержит аминокислотную
последовательность VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 22 9.
[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет легкую цепь (LC), которая содержит аминокислотную последовательность VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 22 9 и аминокислотную последовательность константной области легкой цепи из SEQ ID N0:6.
[0020] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 содержит любую из вышеуказанных последовательностей тяжелой цепи и любую из вышеуказанных последовательностей легкой цепи.
[0021] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 содержит H-CDR3 и L-CDR3, содержащие аминокислотные последовательности H-CDR3 и L-CDR3, соответственно, из SEQ ID N0:9 и 12, 32 и 35, 42 и 45, 52 и 55, 62 и 65, 72 и 75, 82 и 85, 92 и 95, 102 и 105, 112 и 115, 122 и 125, 132 и 135, 142 и 145, 152 и 155, 162 и 165, 172 и 175, 182 и 185, 192 и 195, 202 и 205, 212 и 215, 222 и 225, а также 2 32 и 2 35.
[0022] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие
последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3, соответственно, из SEQ ID N0:7-12, 30-35, 40-45, 50-55, 60-65, 70-75, 80-85, 90-95, 100-105, 110-115, 120-125, 130-135, 140-145, 150-155, 160-165, 170-175, 180-185, 190-195, 200-205, 210-215, 220-225 или 230235.
[0023] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет VH, которая по меньшей мере на 90% (например, по
меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере 99%) идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 228, и VL, которая по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 229.
[0024] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 имеет VH, которая содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88,
98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218
или 22 8, и VL, которая содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 229.
[0025] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 имеет LC, которая содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 229, и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:6; и НС, которая содержит (i) аминокислотную последовательность SEQ ID N0:3, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 228, и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, или (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 228 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:23, 24 или 25.
[0026] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению содержит аминокислотные последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3 из:
a) SEQ ID N0:7-12, соответственно;
b) SEQ ID N0:30-35, соответственно;
SEQ
NO:
50-55, соответственно;
SEQ
NO:
60-65, соответственно;
SEQ
NO:
70-75, соответственно;
SEQ
NO:
80-85, соответственно;
SEQ
NO:
90-95, соответственно;
SEQ
NO:
100-105, соответственно;
j )
SEQ
NO:
110-115, соответственно;
SEQ
NO:
120-125, соответственно;
SEQ
NO:
130-135, соответственно;
SEQ
NO:
140-145, соответственно;
SEQ
NO:
150-155, соответственно;
SEQ
NO:
160-165, соответственно;
SEQ
NO:
170-175, соответственно;
SEQ
NO:
180-185, соответственно;
SEQ
NO:
190-195, соответственно;
SEQ
NO:
200-205, соответственно;
SEQ
NO:
210-215, соответственно;
SEQ
NO:
220-225, соответственно; или
SEQ
NO:
230-235, соответственно.
[0027]
некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению конкурирует за связывание с TIM-3 человека с или связывается с тем же эпитопом TIM-3 человека, что и антитело, вариабельные домены тяжелых и легких цепей которого содержат аминокислотные последовательности из:
SEQ
и 4
, соответственно;
SEQ
соответственно;
SEQ
29,
соответственно;
SEQ
39,
соответственно;
SEQ
49,
соответственно;
SEQ
59,
соответственно;
SEQ
69,
соответственно;
SEQ
79,
соответственно;
SEQ
89,
соответственно;
SEQ
99,
соответственно;
SEQ
8 и
109, соответственно;
SEQ
NO:
118
119,
соответственно;
SEQ
128
129,
соответственно;
SEQ
138
139,
соответственно;
SEQ
148
149,
соответственно;
SEQ
158
159,
соответственно;
SEQ
168
169,
соответственно;
SEQ
178
179,
соответственно;
SEQ
188
189,
соответственно;
SEQ
198
199,
соответственно;
SEQ
208
209,
соответственно;
SEQ
218
219,
соответственно; или
SEQ
228
229,
соответственно.
[0028]
некоторых
вариантах осуществления
TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере на 90% идентичными аминокислотным последовательностям:
SEQ
NO:
3 и 4, соответственно;
SEQ
NO:
и 4, соответственно;
SEQ
NO:
и 29, соответственно;
SEQ
NO:
и 39, соответственно;
SEQ
NO:
и 49, соответственно;
SEQ
NO:
и 59, соответственно;
SEQ
NO:
и 69, соответственно;
SEQ
NO:
и 79, соответственно;
SEQ
NO:
и 89, соответственно;
j )
SEQ
NO:
и 99, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 109, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 119, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 129, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 139, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 149, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 159, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 169, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 179, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 189, соответственно;
t) SEQ ID N0:198 и 199, соответственно; u) SEQ ID N0:208 и 209, соответственно; v) SEQ ID N0:218 и 219, соответственно; или w) SEQ ID N0:228 и 229, соответственно.
[0029] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению содержит тяжелую цепь и легкую цепь, вариабельные домены которых имеют аминокислотные последовательности:
SEQ
и 4
, соответственно;
SEQ
4, соответственно;
SEQ
29, соответственно;
SEQ
39, соответственно;
SEQ
49, соответственно;
SEQ
59, соответственно;
SEQ
69, соответственно;
SEQ
79, соответственно;
SEQ
89, соответственно;
j )
SEQ
99, соответственно;
SEQ
8 и
109, соответственно;
SEQ
8 и
119, соответственно;
SEQ
8 и
129, соответственно;
SEQ
8 и
139, соответственно;
SEQ
8 и
149, соответственно;
SEQ
8 и
159, соответственно;
SEQ
8 и
169, соответственно;
SEQ
8 и
179, соответственно;
SEQ
8 и
189, соответственно;
SEQ
8 и
199, соответственно;
SEQ
8 и
209, соответственно;
SEQ
8 и
219, соответственно; или
SEQ
8 и
229, соответственно.
[0030]
некоторых вариантах осуществления
TIM-3 по изобретению содержит:
а) тяжелую цепь (НС), содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:3 и 5, и легкую цепь (LC) , содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:38 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
d) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:48 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:49 и б;
e) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:58 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:59 и б;
f) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:68 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6;
д) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:78 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и б;
h) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:88 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:89 и б;
i) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:98 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:99 и б;
j ) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:108 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и б;
к) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:118 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и б;
1) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:128 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:129 и б;
т) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:138 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и б;
о) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:158 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и б;
р) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:168 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:169 и 6;
q) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:17 9 и 6;
г) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и 6;
s) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:198 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и 6;
t) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:208 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:2 09 и 6;
и) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:218 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и 6; или
v) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:228 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:229 и 6.
[0031] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 по изобретению содержит:
a) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
b) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:28 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:29 и 6;
a)
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:48 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:49 и б;
d) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:58 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:59 и б;
e) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:68 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6;
д) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:78 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и 6;
h) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:88 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:89 и 6;
i) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:98 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:99 и 6;
j ) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:108 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и 6;
к) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:118 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и 6;
1) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:128 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:129 и 6;
т) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:138 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и 6;
п) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:14 9 и 6;
р) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:168 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:169 и 6;
q) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:17 9 и 6;
г) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и 6;
s) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:198 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и 6;
t) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:208 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:2 09 и 6;
и) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:218 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и 6; или
v) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:228 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:229 и 6.
[0032] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 по изобретению содержит:
a) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
b) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:28 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:29 и 6;
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:38 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
d) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:48 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
a)
f) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:68 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:69 и 6;
д) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:78 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и 6;
h) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:88 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:89 и 6;
i) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:98 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:99 и 6;
j ) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:108 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и 6;
к) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:118 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и 6;
1) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:128 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:129 и 6;
т) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:138 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и 6;
п) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:14 9 и 6;
о) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:158 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6;
р) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:168 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
г) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и 6;
s) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:198 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и 6;
t) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:208 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:2 09 и 6;
и) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:218 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и 6; или
v) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:228 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:229 и 6.
[0033] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 по изобретению содержит:
a) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
b) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:28 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:29 и 6;
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:38 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
d) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:48 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:49 и 6;
e) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:58 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:59 и 6;
a)
д) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:78 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и 6;
h) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:88 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:89 и 6;
i) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:98 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:99 и 6;
j ) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:108 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и 6;
к) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:118 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и 6;
1) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:128 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:129 и 6;
т) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:138 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и 6;
п) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:14 9 и 6;
о) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:158 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6;
р) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:168 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:169 и 6;
q) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:17 9 и 6;
s) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:198 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и 6;
t) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:208 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:2 09 и б;
и) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:218 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и б; или
v) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:228 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:229 и 6.
[0034] В определенных вариантах осуществления изобретение относится к антителу против TIM-3 или его антигенсвязывающей части, где указанное антитело содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности из SEQ ID N0:7-12, соответственно.
[0035] В определенных вариантах осуществления изобретение относится к антителу против TIM-3 или его антигенсвязывающей части, где указанное антитело содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4.
[0036] В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к антителу против TIM-3, которое содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 25, и легкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
[0037] Изобретение также относится к антителу против TIM-3
или его антигенсвязывающей части, которые связываются с эпитопом
из TIM-3, содержащим аминокислотные остатки F61 и 1117 из SEQ ID
N0:236 (например, антитело 15086.15086, 15086.16837,
15086.17145, 15086.17144, 20293 или 20131). В некоторых вариантах осуществления эпитоп дополнительно содержит
аминокислотный остаток R69 (например, антитело 1508 6.1508 6, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 или 20293). В других вариантах осуществления эпитоп дополнительно содержит Р50, Е62, М118 и D120 (например, антитело 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 или 2 0131) и может дополнительно содержать аминокислотные остатки R69, V60 и G64 (например, антитело 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 или 1508 6.17144).
[0038] В конкретных вариантах осуществления антитело или часть связывается с эпитопом из TIM-3, содержащим аминокислотные остатки Р50, V60, F61, Е62, G64, R69, 1117, М118 и D120 из SEQ ID N0:236 (например, антитело 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, или 15086.17144), аминокислотные остатки F61, R69 и 1117 из SEQ ID N0:236 (например, антитело 20293) или аминокислотные остатки Р50, F61, Е62, 1117, М118 и D120 из SEQ ID N0:236 (например, антитело 20131).
[0039] Изобретение также относится к моноклональному антителу или его антигенсвязывающей части, которые связываются с эпитопом из TIM-3, содержащим аминокислотные остатки 62-67 из SEQ ID N0:236 (например, антитело 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 или 20293). Кроме того, изобретение относится к моноклональному антителу или его антигенсвязывающей части, которые связываются с эпитопом из TIM-3, содержащим аминокислотные остатки 114-117 из SEQ ID N0:236 (например, антитело 20131) .
[0040] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 представляет собой антитело IgG, например, антитело IgG человека. В определенных вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну мутацию в области FC. В конкретных вариантах осуществления антитело содержит мутацию в одной или нескольких из аминокислотных положений тяжелой цепи 228, 233, 234 и 235, которые пронумерованы в соответствии со схемой нумерации IMGT. Например, один или оба аминокислотных остатка в положениях 234 и 235 можно мутировать в Ala и/или аминокислотный остаток в положении 22 8 можно мутировать в Pro.
[0041] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению имеет по
a) связывается с TIM-3 человека с KD 23 нМ или меньше, как измеряют посредством поверхностного плазмонного резонанса;
b) связывается с TIM-3 яванского макака с KD 22 нМ или меньше, как измеряют посредством поверхностного плазмонного резонанса;
c) связывается с TIM-3 человека с ЕС50 1,2 нМ или меньше, как измеряют посредством ELISA;
d) связывается с TIM-3 яванского макака с ЕС50 4 6 нМ или меньше, как измеряют посредством ELISA;
e) увеличивает секрецию IFN-y в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
f) увеличивает секрецию IFN-y в двунаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
д) увеличивает секрецию TNF-a в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
h) увеличивает секрецию TNF-a дендритными клетками; и
i) ингибирует взаимодействие TIM-3 с фосфатидилсерином.
Примеры такого антитела включают, без ограничения, антитело
15086.15086 (имеющее по меньшей мере свойства а, с, d, е, g и h); антитело 15086.17145 (имеющее по меньшей мере свойства а, с,
d, е, g, h и i), антитело 15086.16837 или 15086.17144 (имеющее по меньшей мере свойства а, end), антитело 20293 или 20131 (имеющее по меньшей мере свойства а, Ь, с, d, е, f и h) , антитело 20362 (имеющее по меньшей мере свойства с, е, f и h) и антитело 19324, 19416, 19568, 20185, 20300 или 20621 (имеющее по меньшей мере свойства с, d, е, f и h) . В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению имеет все указанные свойства. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть имеет по меньшей мере свойства а, с, d,
e, д и п. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть имеет по меньшей мере свойства а, с, d, е, д, h и i. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть
имеет по меньшей мере свойства а, с и d. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть имеет по меньшей мере свойства а, Ь, с, d, е, f и h. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть имеет по меньшей мере свойства с, е, f и п. В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть имеет по меньшей мере свойства с, d, е, f и п.
[0042] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению увеличивает активность NK клеток. В некоторых вариантах осуществления эта активность может опосредовать ADCC.
[0043] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению не конкурирует за связывание с TIM-3 с ABTIM3 (из РСТ публикации WO 2015/117002) и/или тАЫ5 (из РСТ публикации WO 2016/111947) . В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 или антигенсвязывающая часть по изобретению не связывается с тем же эпитопом, что и ABTIM3 и/или тАВ15; например, антитело или часть по изобретению связывается с одним или несколькими остатками на TIM-3, с которыми не связываются ABTIM3 и/или тАЫ5.
[0044] В других аспектах, настоящее изобретение
предусматривает фармацевтические композиции, содержащие по
меньшей мере одно антитело против TIM-3 или его
антигенсвязывающую часть, как раскрыто в настоящем описании, и
фармацевтически приемлемый эксципиент, необязательно с
дополнительным терапевтическим средством, таким как
химиотерапевтическое средство, антинеопластическое средство, антиангиогенное средство, ингибитор тирозинкиназы или ингибитор пути TIM-3.
[0045] Настоящее изобретение дополнительно предусматривает выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть, или и то и другое, из антитела против TIM-3 или
[0046] Настоящее изобретение также относится к векторам, содержащим такую выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, где указанный вектор необязательно дополнительно содержит управляющую экспрессией последовательность.
[0047] Настоящее изобретение также предусматривает клетки-хозяева, содержащие нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть, или и то и другое, из антитела против TIM-3, как раскрыто в настоящем описании.
[0048] Настоящее изобретение также относится к способу получения антитела против TIM-3 или его антигенсвязывающей части, как раскрыто в настоящем описании, который включает предоставление клетки-хозяина, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, и нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть из антитела против TIM-3 или антигенсвязывающей части, как раскрыто в настоящем описании, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела или части, и выделение получаемого антитела или части.
[0049] Настоящее изобретение также относится к полиспецифической (например, биспецифической) связывающей молекуле, имеющей антигенсвязывающую часть антитела против TIM-3, описанную в настоящем описании, и антигенсвязывающую часть другого, отличного антитела, такого как другое антитело против TIM-3 (например, другое антитело против TIM-3, описанное в настоящем описании) или антитело, которое направлено на другой белок, такой как другой белок иммунной контрольной точки, антиген злокачественной опухоли или другая молекула клеточной поверхности, активность которой опосредует патологическое состояние, такое как злокачественная опухоль.
[0050] Настоящее изобретение также относится к способу усиления иммунитета у пациента (например, пациента-человека), который включает введение указанному пациенту антитела против
[0051] Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ направленного воздействия на злокачественную опухоль у пациента (например, пациента-человека) , который включает введение указанному пациенту антитела против TIM-3 или его антигенсвязывающей части или полиспецифической (например, биспецифической) связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления злокачественная опухоль берет начало в ткани, выбранной из группы, состоящей из кожа, легкое, кишечник, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, грудь, желудок, матка и поджелудочная железа. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет лейкоз (например, острый миелолейкоз), лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет солидную опухоль (например, запущенную или метастазирующую солидную опухоль). В некоторых вариантах осуществления пациент страдает меланомой, немелкоклеточным раком легких, раком толстой кишки или почечноклеточной карциномой. В определенных вариантах осуществления способ дополнительно включает введение химиотерапевтического средства, антинеопластического средства, антиангиогенного средства, ингибитора тирозинкиназы и/или ингибитора пути TIM-3.
[0052] Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитела против TIM-3 или антигенсвязывающие части или полиспецифические (например, биспецифические) связывающие молекулы, как раскрыто в настоящем описании, для применения в указанном выше лечении; для применения указанных антител, антигенсвязывающих частей или полиспецифических связывающих молекул в качестве лекарственных средств для указанного выше лечения; и применения указанных антител, антигенсвязывающих частей или полиспецифических связывающих молекул для получения лекарственных средств для указанного выше лечения, т. е. лечения
пациента-человека, нуждающегося в этом, чтобы усиливать его/ее иммунную систему, и лечения пациента-человека со злокачественной опухолью, такой как одна из указанных выше злокачественных опухолей. Настоящее изобретение также предусматривает промышленные изделия, содержащие антитела против TIM-3 или антигенсвязывающие части или полиспецифические (например, биспецифические) связывающие молекулы, описанные в настоящем описании, а также способы получения указанных промышленных изделий.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0053] На фиг. 1 представлены кривые доза-эффект антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 для продуцирования IFN-y в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов (MLR).
[0054] На фиг. 2 представлены кривые доза-эффект антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 для продуцирования TNF-a в однонаправленном MLR анализе.
[0055] На фиг. 3 представлен эффект, оказываемый на субпопуляции очищенных дендритных клеток антителами 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144, который измеряли в виде уровней TNF-a, с использованием анализа электрохемилюминесценции цитокинов Meso Scale.
[0056] На фиг. 4 представлено связывание TIM-3-Fc с положительными по фосфатидилсерину (PtdS) (апоптозными) клетками в присутствии антитела против TIM-3 по изобретению, а также положительного контроля антитела против TIM-3 и двух отрицательных контролей антител. А: антитело против TIM-3 по изобретению [1508 6.17145]; В: отрицательное контрольное не блокирующее антитело против TIM-3 [15338.15338]; С: эталонное антитело против TIM-3 [18571.18571]; D: отрицательное контрольное антитело против PD-1 Keytruda(r) (пембролизумаб).
[0057] На фиг. 5 представлены кривые доза-эффект для 9 антител против TIM-3 и продуцирования IFN-y в однонаправленном MLR анализе.
[0058] На фиг. 6 представлены кривые доза-эффект для 10
[0059] На фиг. 7 представлены кривые доза-эффект для 9 антител против TIM-3 и продуцирования TNF-a в полученных из моноцитов дендритных клетках от двух независимых доноров.
[0060] На фиг. 8 представлен обзор групп эпитопов (категорий эпитопов), идентифицированных с помощью анализа конкурентного связывания для панели из 18 антител против TIM-3. Обведенные кругом антитела, соединенные черными линиями, обозначают перекрестную блокирующую активность в обеих ориентациях. Обведенные квадратом антитела обозначают однонаправленное блокирование, когда антитело тестируют только в растворе. Штриховые линии показывают однонаправленное блокирование, когда антитела только иммобилизуют. Антитела группируют в соответствии с паттернами конкуренции с другими антителами против TIM-3. Антитело 15086.17145 представлено как "15086".
[0061] На фиг. 9 представлены местоположения эпитопов антител на структуре домена IgV TIM-3 человека (PDB 5F71) . Схематическое изображение домена IgV TIM-3 человека представлено в трех различных ориентациях и показано местоположение сайта связывания фосфатидилсерина. Местоположения картированных эпитопов представлены темными цветами на пространственной модели TIM-3 для каждого антитела. Fab фрагмент 1508 6 представлен как "15086" и Fab фрагмент 20293 представлен как "20293". ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0062] Настоящее изобретение предусматривает новые антитела против TIM-3 человека, которые можно использовать для усиления иммунной системы у пациента-человека, такого как пациент со злокачественной опухолью. Если не указано иное, как используют в настоящем описании, "TIM-З" относится к TIM-3 человека. Полипептидная последовательность TIM-З человека доступна под номером доступа Uniprot Q8TDQ0 (HAVR2_HUMAN), которая представлена здесь в виде SEQ ID N0:236.
[0063] Термин "антитело" (АЬ) или "иммуноглобулин" (Ig),
как используют в настоящем описании, относится к тетрамеру, содержащему две тяжелые (Н) цепи (приблизительно 50-70 кДа) и две легкие (L) цепи (приблизительно 25 кДа), связанные дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (СН) . Каждая легкая цепь состоит из вариабельного домена легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL) . Домены VH и VL можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, называемые "определяющими комплементарность областями" (CDR), расположенные между областями, которые более консервативны, которые называют "каркасными областями" (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR (H-CDR в настоящем описании обозначает CDR из тяжелой цепи; и L-CDR в настоящем описании обозначает CDR из легкой цепи) и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Присвоение номеров аминокислот в тяжелой или легкой цепи может находиться в соответствии с определениями IMGT(r) (Lefranc et al., Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)); или определениями Rabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 и 1991)); Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); или Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).
[00 64] Термин "рекомбинантное антитело" относится к антителу, которое экспрессирует клетка или клеточная линия, содержащая нуклеотидную последовательность(и), которая кодирует антитело, где указанная нуклеотидная последовательность(и) в природе не связана с клеткой.
[00 65] Термин "выделенный белок", "выделенный полипептид" или "выделенное антитело" относится к белку, полипептиду или антителу, который по своему происхождению или источнику получения (1) не связан с естественно связанными компонентами, которые сопровождают его в его нативном состоянии, (2) не содержит другие белки от тех же видов, (3) экспрессирует клетка от другого вида и/или (4) не встречается в природе. Таким образом, полипептид, который синтезируют химически или
синтезируют в клеточной системе, отличной от клетки, из которой он естественно происходит, будет "выделенным" из его естественно связанных компонентов. Белок также можно делать по существу не содержим естественно связанные компоненты посредством выделения, используя способы очистки белков, хорошо известные в данной области.
[0066] Как используют в настоящем описании, термин "зародышевая линия" относится к нуклеотидным и аминокислотным последовательностям генов антител и сегментов генов, как они переходят от родителей к потомку через половые клетки. Последовательности зародышевой линии отличаются от нуклеотидных последовательностей, кодирующих антитела в зрелых В-клетках, которые изменены посредством событий рекомбинации и гипермутации во время хода созревания В-клеток. Антитело, в котором используют конкретную последовательность зародышевой линии, имеет нуклеотидную или аминокислотную последовательность, которая выравнивается с этой нуклеотидной последовательностью зародышевой линии или с аминокислотной последовательностью, которая ее определяет, более близко, чем с любой другой нуклеотидной или аминокислотной последовательностью зародышевой линии.
[00 67] Термин "аффинность" относится к мере привлечения между антигеном и антителом. Собственную привлекательность антитела для антигена обычно выражают как равновесную константу аффинности связывания (KD) для конкретного взаимодействия антитело-антиген. Говорят, что антитело специфично связывается с антигеном, когда KD составляет < 1 мМ, предпочтительно < 100 нМ. Константу аффинности связывания KD можно измерять, например, посредством поверхностного плазмонного резонанса (BIAcoreTM) или интерферометрии бислоев, например, с использованием системы ProteOn(tm) XPR36 SPR из Bio-Rad или системы Octet(tm).
[0068] Термин "koff" относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Константу скорости диссоциации koff можно измерять посредством интерферометрии бислоев, например, с использованием системы
[0069] Термин "эпитоп", как используют в настоящем описании, относится к части (детерминанте) антигена, которая специфически связывается с антителом или родственной молекулой, такой как биспецифическая связывающая молекула. Эпитопные детерминанты в целом состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи углеводов или Сахаров, и в целом имеют конкретные характеристики трехмерной структуры, а также конкретные характеристики заряда. Эпитоп может быть "линейным" или "конформационным". В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком (например, антигеном) и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) идут линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия находятся среди аминокислотных остатков на белке, которые отделены друг от друга в первичной аминокислотной последовательности. Когда на антигене определяют желаемый эпитоп, можно создавать антитела к этому эпитопу с использованием способов, хорошо известных в данной области. Например, антитело к линейному эпитопу можно создавать, например, посредством иммунизации животного пептидом, имеющим аминокислотные остатки линейного эпитопа. Антитело к конформационному эпитопу можно создавать, например, посредством иммунизации животного с использованием минидомена, содержащего релевантные аминокислотные остатки конформационного эпитопа. Антитело к конкретному эпитопу также можно создавать, например, посредством иммунизации животного целевой молекулой, представляющей интерес, или ее релевантной частью (например, ECD из TIM-З) и последующего скрининга на связывание с эпитопом.
[0070] Можно определять, связывается ли антитело с тем же эпитопом или конкурирует за связывание с антителом против TIM-3 по изобретению, с использованием известных в данной области способов, в том числе, без ограничения, конкурентного анализа, связывания эпитопов и сканирования аланином. В некоторых вариантах осуществления тестовое антитело и антитело против TIM-3 по изобретению связывается с по меньшей мере одним общим
остатком (например, по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или девятью общими остатками) на TIM-З. В дополнительных вариантах осуществления контактирующие остатки на TIM-З полностью идентичны между тестовым антителом и антителом против TIM-З по изобретению. В одном из вариантов осуществления антителу против TIM-З по изобретению позволяют связываться с TIM-З при насыщающих условиях и затем измеряют способность тестового антитела связываться с TIM-З. Если тестовое антитело способно связываться с TIM-З одновременно с эталонным антителом против TIM-З, то тестовое антитело связывается с другим эпитопом, нежели эталонное антитело против TIM-З. Однако, если тестовое антитело не способно связываться с TIM-З одновременно, то тестовое антитело связывается с тем же эпитопом, перекрывающимся эпитопом или эпитопом, который находится в непосредственной близости от эпитопа, связываемого антителом против TIM-З по изобретению. Этот эксперимент можно осуществлять с использованием, например, ELISA, RIA, BIACORETM, интерферометрии бислоев или проточной цитометрии. Для того чтобы тестировать, имеет ли антитело против TIM-З перекрестную конкуренцию с другим антителом против TIM-З, можно использовать конкурентный способ, описанный выше, в двух направлениях, т. е. определять, если известное антитело блокирует тестовое антитело, и наоборот. Такие эксперименты по перекрестной конкуренции можно осуществлять, например, с использованием прибора IBIS МХ96 SPR или системы Octet(tm).
[0071] В определенных случаях может быть желательно изменять один или несколько аминокислотных остатков CDR для того, чтобы повышать аффинность связывания с целевым эпитопом. Это известно как "созревание аффинности". В данной области известны различные способы созревания аффинности, например, способ сканирующего насыщающего мутагенеза in vitro, описанный в Burks et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:412-417 (1997), и способ пошагового созревания аффинности in vitro из Wu et al., Proc Natl Acad Sci USA 95:6037-6042 (1998).
[0072] Термин "антигенсвязывающая часть" антитела (или просто "часть антитела"), как используют в настоящем описании,
относится к одной или нескольким частям или фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связываться с антигеном (например, TIM-З человека или его частью). Показано, что определенные фрагменты полноразмерного антитела могут выполнять антигенсвязывающую функцию антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином "антигенсвязывающая часть", включают (i) Fab фрагмент: одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CHI; (ii) F(ab')2 фрагмент: двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab фрагмента, связанные дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) Fd фрагмент, состоящий из доменов VH и CHI; (iv) Fv фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, (v) dAb фрагмент, который состоит из домена VH; и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), способную специфично связываться с антигеном. Кроме того, несмотря на то, что два домена Fv фрагмента, VL и VH, соединены с помощью отдельных генов, их можно соединять, используя рекомбинантные способы, с помощью синтетического линкера, который позволяет делать их в виде одной белковой цепи, в которой домены VL и VH образуют пары для того, чтобы формировать одновалентные молекулы (известные как одноцепочечный Fv (scFv)). Также в изобретение входят антигенсвязывающие молекулы, содержащие VH и/или VL. В случае VH, молекула также может содержать одно или несколько из области СН1, шарнира, СН2 или СНЗ. Такие одноцепочечные антитела также предназначены для включения в термин "антигенсвязывающая часть" антитела. Также включены другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела. Диатела представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессированы в одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который слишком короток для того, чтобы сделать возможным образование пар между двумя доменами на одной и той же цепи, тем самым принуждая домены образовывать пары с комплементарными доменами другой цепи и создавая два антигенсвязывающих участка.
[0073] Части антител, такие как фрагменты Fab и F(ab')2/ можно получать из целых антител с использованием общепринятых
способов, таких как расщепление целых антител папаином или пепсином. Кроме того, антитела, части антител и молекулы иммуноадгезии можно получать с использованием стандартных способов рекомбинантной ДНК, например, как раскрыто в настоящем описании.
[0074] Класс (изотип) и подкласс антител против TIM-З можно определять любым известным в данной области способом. В целом, класс и подкласс антитела можно определять с использованием антител, которые обладают специфичностью к конкретному классу и подклассу антител. Такие антитела доступны коммерчески. Класс и подкласс можно определять посредством ELISA, вестерн-блоттинга, а также других способов. Альтернативно класс и подкласс можно определять посредством секвенирования целиком или частично константных областей тяжелых и/или легких цепей антител, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и подклассов иммуноглобулинов и определения класса и подкласса антител.
[0075] При упоминании конкретных аминокислотных остатков в заданном положении последовательности антитела, указание, например, "35S" относится к положению и остатку, т. е. в этом случае указано, что остаток серина (S) присутствует в положении 35 последовательности. Аналогичным образом, указание, например, "13Q+35S" относится к двум остаткам в соответствующих положениях.
[0076] Если не указано иное, все номера аминокислотных остатков антител, упоминаемые в этом раскрытии, относятся к схеме нумерации IMGT(r).
Антитела против TIM-3
[0077] Настоящее изобретение предусматривает антитела, направленные против TIM-З, и их антигенсвязывающие части. В конкретном варианте осуществления антитела, раскрытые в настоящем описании, представляют собой антитела человека, создаваемые у трансгенных крыс, которые способны создавать антитела с идиотипами человека.
[0078] Преимущество новых антител против TIM-З по изобретению состоит в том, что они могут сильно активировать дендритные клетки (см., например, пример 4) . Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, полагают, что антитела против TIM-З по изобретению способны стимулировать Т-клетки (например, опухолеспецифичные Т-клетки) через активацию дендритных клеток. Кроме того, в настоящей заявке впервые продемонстрировано, что антитела против TIM-З изотипа IgGl или IgG2 имеют высокие уровни активности, тогда как антитела изотипа IgG4 или IgGl-LALA не функциональны или слабо функциональны (см., например, примеры 3 и 4) . Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, данные авторов изобретения подсказывают, что антитело против TIM-З, которое может сшивать TIM-З через Fc рецепторы, представляет собой особенно сильный активатор иммунной системы. Например, антитело IgG2 против TIM-3 по изобретению может связываться с FcyR2A, встречающимся на дендритных клетках, и полагают, что оно активирует дендритные клетки посредством сшивки молекул TIM-З на них.
[0079] Антитела против TIM-З, раскрытые в настоящем описании, можно обозначать с помощью 5-цифрового номера, например, "20131", или с помощью 10-цифрового номера, например, "1508 6.16837". 10-цифровые номера с пятью первыми одинаковыми цифрами получают из одного и того же родительского антитела, как в случае антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144. Полагают, что такие антитела, которые имеют одни и те же шесть CDR, имеют одинаковые или по существу одинаковые свойства связывания мишени. Как видно по последовательностям белков и ДНК, предоставленным в настоящем описании, варианты 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 имеют только различие в одну аминокислоту в последовательности VH по сравнению с родительским антителом 15086 ("1508 6.1508 6"), а именно Е вместо Q в положении б, тогда как аминокислотные последовательности VL идентичны. Также видно, что эти варианты различаются в первую очередь по их формату/подклассу антитела, т. е.:
15086.15086: IgGl
[008 0] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-9, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:3;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:3;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:3 и 5;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:10-12, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-12,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:3, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:3, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:3 и 5; и LC которого содержит
[0081] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-9, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:15;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15 и 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:10-12, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-12,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:15, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-9, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:15;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:23 или 24;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:10-12, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-12,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:15, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:15 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:23 или 24; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:30-32, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:28;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:28;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:28 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:33-35, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:29;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:29;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:29 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:30-35,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:28, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:29;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:28, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:29; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:28 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:29 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:40-42, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:38;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:38;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:38 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:43-45, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:39;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:39;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:40-45,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:38, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:39;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:38, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:39; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:38 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:50-52, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:48;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:48;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:48 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:53-55, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:49;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:49;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:49 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:50-55,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:48, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:49;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:48, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:49; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:48 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:49 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:60-62, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:58;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:58;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:58 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:63-65, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:59;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:59;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:59 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:60-65,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:58, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:59;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:58, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:59; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:58 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:59 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:70-72, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:68;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:68;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:68 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:73-75, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:69;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:69;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:70-75,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:68, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:69;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:68, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:69; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:68 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:80-82, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:78;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:78;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:78 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:83-85, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:79;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:79;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:80-85,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:78, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:79;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:78, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:79; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:78 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:79 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:90-92, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:88;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:88;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:88 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:93-95, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:89;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:89;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:89 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:90-95,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:88, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:89;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:88, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:89; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:88 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:89 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:100-102, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:98;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:98;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:98 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:103-105, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:99;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:99;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:99 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:100-105,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:98, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:99;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:98, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:99; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:98 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:99 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:110-112, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:108;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:108;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:108 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:113-115, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:109;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:109;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:110-115,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:108, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:109;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:108, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:109; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:108 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:109 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:120-122, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:118;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:118;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:118 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:123-125, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:119;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:119;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:120-125,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:118, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:119;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:118, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:119; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:118 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:119 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:130-132, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:128;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:128;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:128 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:133-135, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:129;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:129;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:129 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:130-135,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:128, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:12 9;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:128, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:129; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:128 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:12 9 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:140-142, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:138;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:138;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:138 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:143-145, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:139;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:139;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:140-145,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:138, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:139;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:138, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:139; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:138 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:139 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:150-152, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:148;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:148;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:153-155, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:149;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:149;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:149 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:150-155,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:148, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:149;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:148, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:149; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:148 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:149 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:160-162, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:158;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:158;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:158 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:163-165, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:159;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:159;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:160-165,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:158, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:159;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:158, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:159; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:158 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:170-172, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:168;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:168;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:168 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:173-175, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:169;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:169;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:169 и 6;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:170-175,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:168, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:169;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:168, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:169; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:168 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:169 и 6.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:180-182, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:178;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:178;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:183-185, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:179;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:179;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:179 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:180-185,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:178, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:179;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:178, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:179; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:178 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:179 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:190-192, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:188;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:188;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:193-195, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:189;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:189;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:190-195,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:188, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:189;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:188, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:189; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:188 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:200-202, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:198;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:198;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:198 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:203-205, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:199;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:199;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:200-205,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:198, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:199;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:198, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:199; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:198 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:199 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:210-212, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:208;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:208;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:208 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:213-215, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:209;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:209;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:209 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:210-215,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:208, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:209;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:208, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:209; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:208 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:209 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:220-222, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:218;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:218;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:218 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:223-225, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:219;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:219;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:220-225,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:218, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:219;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:218, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:219; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:218 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:219 и б.
a) антитела, H-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:230-232, соответственно;
b) антитела, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID N0:22 8;
c) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:228;
d) антитела, тяжелая цепь (НС) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:228 и SEQ ID N0:5, 23, 2 4 или 25;
e) антитела, L-CDR1-3 которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:233-235, соответственно;
f) антитела, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:22 9;
g) антитела, VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:229;
h) антитела, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:22 9 и б;
i) антитела, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:230-235,
соответственно;
j) антитела, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:228, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:22 9;
к) антитела, VH которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:228, и VL которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:229; и
1) антитела, НС которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:22 8 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:5, 23, 24 или 25; и LC которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:22 9 и б.
TIM-З или его антигенсвязывающая часть конкурирует за связывание с TIM-З человека с или связывается с тем же эпитопом TIM-3 человека что и антитело 15086.15086, имеющее формат IgGl, антитело 15086.16837, имеющее формат IgGl LALA, антитело 15086.17145, имеющее формат IgG2, или антитело 15086.17144, имеющее формат IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело по изобретению представляет собой IgG. В некоторых вариантах осуществления антитело по изобретению имеет формат IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
[0105] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть конкурирует за связывание с TIM-З человека с или связывается с тем же эпитопом TIM-3 человека, что и антитело 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 или 20621. В некоторых вариантах осуществления антитело по изобретению имеет формат IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
[0106] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающая часть не конкурирует за связывание с TIM-З человека с или не связывается с тем же эпитопом TIM-З человека, что и любые или все из антител из категории 1 (эталонное антитело mAb 15), категории 2 (например, антитела 15105 и 15107) и категории 8 (например, антитела 15174 и 15175) эпитопов, как определено далее в примере 12 .
[0107] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающая часть не конкурирует за связывание с TIM-З человека с или не связывается с тем эпитопом TIM-З человека, что и любые или все из антител из категории 2 (например, антитела 15105 и 15107) и категории 8 (например, антитела 15174 и 15175) эпитопов, как определено далее в примере 12.
[0108] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающая часть не конкурирует за связывание с TIM-З человека с или не связывается с тем же эпитопом TIM-З человека, что и любые или все антитела
[0109] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З конкурирует за связывание с TIM-З человека или связывается с тем же эпитопом TIM-З человека, что антитело, CDR1-3 тяжелых цепей (Н) и CDR1-3 легких цепей (L) которого содержат, соответственно, SEQ ID N0:7-12, 30-35, 40-45, 50-55, 60-65, 7075, 80-85, 90-95, 100-105, 110-115, 120-125, 130-135, 140-145, 150-155, 160-165, 170-175, 180-185, 190-195, 200-205, 210-215, 220-225 или 230-235.
[ОНО] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH) , который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с SEQ ID N0:3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 22 8, например, по меньшей мере на 95% идентичен, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен указанной последовательности.
[0111] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с SEQ ID N0:3, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 22 8, например, по меньшей мере на 95% идентичен, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен указанной последовательности; и константную область тяжелой цепи (СН), которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID N0:5, например, по меньшей мере на 95% идентична, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична SEQ ID N0:5.
[0112] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет тяжелую цепь (НС), которая содержит аминокислотную последовательность VH из SEQ ID N0:3, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208,
[0113] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с SEQ ID N0:15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 22 8, например, по меньшей мере на 95% идентичен, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен указанной последовательности; и константную область тяжелой цепи (СН), которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID N0:23, 24 или 25, например, по меньшей мере на 95% идентична, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере 99% на идентична SEQ ID N0:23, 24 или 25. В конкретных вариантах осуществления СН по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID N0:25, например, по меньшей мере на 95% идентична, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична SEQ ID N0:25
[0114] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет тяжелую цепь (НС), которая содержит аминокислотную последовательность VH из SEQ ID N0:15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 или 22 8, и аминокислотную последовательность СН из SEQ ID N0:23, 2 4 или 25. В конкретных вариантах осуществления тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность СН из SEQ ID N0:25.
[0115] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 22 9, например, по меньшей мере на 95% идентичен, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен
[0116] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 22 9, например, по меньшей мере на 95% идентичен, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен с указанной последовательностью; и константную область легкой цепи (CL) , которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID N0:6, например, по меньшей мере на 95% идентична, например, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична SEQ ID N0:6.
[0117] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З имеет легкую цепь (LC), которая содержит аминокислотную последовательность VL из SEQ ID N0:4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219 или 229, и аминокислотную последовательность CL из SEQ ID N0:6.
[0118] В определенных вариантах осуществления антитело против TIM-З содержит любую одну из описанных выше тяжелых цепей и любую одну из описанных выше легких цепей.
[0119] В некоторых вариантах осуществления любое из антител против TIM-З или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, может ингибировать связывание лигандов, таких как галектин-9, СЕАС7АМ1, HMGB-1 и фосфатидилсерин, с TIM-3.
[0120] В одном из вариантов осуществления введение антитела против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающей части может активировать дендритные клетки, обуславливая их созревание и, тем самым, их способность стимулировать Т-клетки. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, полагают, что антитела против TIM-З по изобретению выполняют функцию активаторов TIM-З дендритных клеток, в соответствии с чем их
эффект, оказываемый на дендритные клетки, служит для того, чтобы стимулировать Т-клетки. В обстановке, связанной с опухолью, антитела против TIM-З, таким образом, будут вызывать созревание и активацию дендритных клеток, ассоциированных с опухолью, что ведет к активации опухолеспецифических Т-клеток.
[0121] В некоторых вариантах осуществления любое из антител против TIM-З или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, может связываться с TIM-З человека с KD по меньшей мере 100, по меньшей мере 50, по меньшей мере 40, по меньшей мере 30, по меньшей мере 25, по меньшей мере 20, по меньшей мере 15, по меньшей мере 10, по меньшей мере 9, по меньшей мере 8, по меньшей мере 7 или по меньшей мере б нМ. В определенных вариантах осуществления KD определяют с использованием поверхностного плазмонного резонанса.
[0122] В некоторых вариантах осуществления любое из антител против TIM-З или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, может связываться с TIM-З яванского макака с KD по меньшей мере 100, по меньшей мере 50, по меньшей мере 40, по меньшей мере 30, по меньшей мере 25, по меньшей мере 24, по меньшей мере 23, по меньшей мере 22, по меньшей мере 21 или по меньшей мере 2 0 нМ. В определенных вариантах осуществления KD определяют с использованием поверхностного плазмонного резонанса.
[0123] В некоторых вариантах осуществления любое из антител против TIM-З или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, может иметь авидность к TIM-З человека с ЕС50^2, 1,5, 1, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 или 0,15 нМ. В некоторых вариантах осуществления любое из антител против TIM-З или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, может иметь авидность к TIM-З яванского макака с ЕС50 <80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2, 1, 5, 1, 0, 5, 0, 4, 0, 3, 0,2 или 0,15 нМ.
[0124] В одном из вариантов осуществления введение антитела против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающей части непосредственно может активировать Т-клетки.
[0125] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающая часть связывается с эпитопом из TIM-З, который содержит по меньшей мере один (например, по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь или по меньшей мере девять) из следующих остатков из SEQ ID N0:236: Р50, V60, F61, Е62, G64, R69, 1117, М118 и D120. Предусмотрен эпитоп с любой комбинацией вышеуказанных остатков.
[0126] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающая часть связывается с эпитопом из TIM-З, который содержит остатки 62-67 и/или 114-117 из SEQ ID N0:236. В некоторых вариантах осуществления антитело или часть связывается с остатками 62-67 (или их фрагментом, таким как фрагмент из одного, двух, трех, четырех или пяти остатков) из SEQ ID N0:236 (например, антитела 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 и 20293). В некоторых вариантах осуществления антитело или часть связывается с остатками 114-117 (или их фрагментом, таким как фрагмент из одного, двух или трех остатков) из SEQ ID N0:236 (например, антитело 2 0131) . Также предусмотрен эпитоп с любой комбинацией вышеуказанных остатков.
[0127] Класс антитела против TIM-З, получаемого с помощью способов, описанных в настоящем описании, можно изменять или переключать на другой класс или подкласс. В одном аспектов изобретения молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VL или VH, выделяют с использованием способов общеизвестных в данной области, так, что она не содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие CL или СН. Затем молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие VL или VH, функционально связывают с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей CL или СН, соответственно, из молекулы иммуноглобулина другого класса. Этого можно достигать с использованием вектора или молекулы нуклеиновой кислоты, которые содержат цепь CL или СН, как описано выше. Например, антитело против TIM-З, которое исходно представляло собой IgM, может представлять собой класс,
переключенный на IgG. Кроме того, переключение классов можно использовать для того, чтобы превращать один подкласс IgG в другой, например, из IgGl в IgG2. Константную область легкой цепи к можно менять на константную область легкой цепи X. Предпочтительный способ получения антитела по изобретению с желаемым изотипом Ig включает стадии выделения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь антитела против TIM-З, и молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь антитела против TIM-З, получения вариабельного домена тяжелой цепи, лигирования вариабельного домена тяжелой цепи с константной областью тяжелой цепи желаемого изотипа, экспрессии легкой цепи и лигированной тяжелой цепи в клетке и сбора антитела против TIM-З с желаемым изотипом.
[0128] Антитело против TIM-З по изобретению может представлять собой молекулу IgG, IgM, IgE, IgA или IgD, но обычно представляет собой изотип IgG, например, подкласс IgG IgGl, IgG2a или IgG2b, IgG3 или IgG4. В одном из вариантов осуществления антитело представляет собой IgGl. В другом варианте осуществления антитело представляет собой IgG2.
[0129] В одном из вариантов осуществления антитело против TIM-З может содержать по меньшей мере одну мутацию в Fc-области. Известно множество различных мутаций Fc, где эти мутации обеспечивают измененную эффекторную функцию. Например, во многих случаях желательно снижать или устранять эффекторную функцию, например, когда нежелательными являются взаимодействия лиганд/рецептор или в случае конъюгатов антитело-лекарственное средство. Аминокислотные положения в Fc-области, которые могут быть полезны для мутаций, чтобы снижать эффекторную функцию, включают одно или несколько из положений 228, 233, 234 и 235, где аминокислотные положения пронумерованы в соответствии со схемой нумерации IMGT(r).
[0130] В одном из вариантов осуществления можно мутировать один или оба аминокислотных остатка в положениях 234 и 235, например, из Leu в Ala (L234A/L235A). Эти мутации снижают эффекторную функцию Fc-области антител IgGl. Дополнительно или
альтернативно, аминокислотный остаток в положении 22 8 можно мутировать, например, в Pro. В другом варианте осуществления аминокислотный остаток в положении 2 33 можно мутировать, например, в Pro, аминокислотный остаток в положении 2 34 можно мутировать, например, в Val и/или аминокислотный остаток в положении 235 можно мутировать, например, в Ala. Аминокислотные положения пронумерованы в соответствии со схемой нумерации IMGT(r).
[0131] В другом варианте осуществления, где антитело относится к подклассу IgG4, оно может содержать мутацию S22 8P, т. е. имеет пролин в положении 22 8, где аминокислотное положение пронумеровано в соответствии со схемой нумерации Eu IMGT(r). Известно, что эта мутация снижает нежелательный обмен плечами Fab (Angal et al., Mol Immunol. 30:105-8 (1993)).
[0132] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть по изобретению может представлять собой часть более крупной молекулы иммуноадгезии, сформированной посредством ковалентного или нековалентного ассоциирования антитела или части антитела с одним или несколькими другими белками или пептидами. Примеры таких молекул иммуноадгезии включают использование область сердцевины стрептавидина для получения тетрамерной молекулы scFv (Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101 (1995)) и использование остатка цистеина, маркерного пептида и С-концевой полигистидиновой метки для получения двухвалентных и биотинилированных молекул scFv (Kipriyanov et al., Mol. Immunol. 31:1047-1058 (1994)). Другие примеры включают встраивание одной или нескольких CDR антитела в молекулу ковалентно или нековалентно для создания из нее иммуноадгезина, который специфически связывается с антигеном, представляющим интерес. В таких вариантах осуществления CDR (одну или несколько) можно встраивать в качестве части более крупной полипептидной цепи, можно ковалентно связывать с другой полипептидной цепью или можно встраивать нековалентно.
[0133] В другом варианте осуществления можно создавать
слитое антитело или иммуноадгезии, которые содержат целиком или частично антитело против TIM-З по изобретению, связанное с другим полипептидом. В определенных вариантах осуществления только вариабельные домены антитела против TIM-З связывают с полипептидом. В определенных вариантах осуществления домен VH антитела против TIM-З связывают с первым полипептидом, тогда как домен VL антитела против TIM-З связывают со вторым полипептидом, который ассоциирован с первым полипептидом таим образом, что домены VH и VL могут взаимодействовать друг с другом для того, чтобы формировать антигенсвязывающий участок. В другом предпочтительном варианте осуществления домен VH отделяют от домена VL линкером так, что домены VH и VL могут взаимодействовать друг с другом (например, одноцепочечные антитела). Затем антитело УН-линкер-УЬ связывают с полипептидом, представляющим интерес. Кроме того, можно создавать слитые антитела, в которых два (или больше) одноцепочечных антител связывают друг с другом. Это можно использовать, если хотят создавать двухвалентное или поливалентное антитело в одной полипептидной цепи или если хотят создавать биспецифическое антитело.
[0134] Для того чтобы создавать одноцепочечное антитело (scFv), VH- и VL-кодирующие фрагменты ДНК функционально связывают с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например, кодирующим аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)3 (SEQ ID N0:240), так что последовательности VH и VL можно экспрессировать в виде непрерывного одноцепочечного белка с доменами VL и VH, соединенными гибким линкером. См. , например, Bird et al., Science 242:423 426 (1988); Huston et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 5883 (1988); и McCafferty et al. , Nature 348:552 554 (1990) . Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если только используют одну VH и VL; двухвалентным, если используют две VH и VL; или поливалентным, если используют больше чем две VH и VL. Можно создавать биспецифические или поливалентные антитела, которые специфично связываются, например, с TIM-З человека и другой молекулой.
молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих антитела против TIM-3.
Например, "каппа-тела" (111 et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), "миниантитела" (Martin et al. , EMBO J. 13:5303-9 (1994)), "диатела" (Holliger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA
90:6444-6448 (1993)) или "янусины" (Traunecker et al., EMBO J.
10:3655-3659 (1991) и Traunecker et al. , Int. J. Cancer (Suppl.)
7:51-52 (1992)) можно получать с использованием стандартных
молекулярно-биологических способов, придерживаясь положений
описания.
[0136] Можно получать производное антитела против TIM-З или
антигенсвязывающей части по изобретению, или связывать их с
другой молекулой (например, другим пептидом или белком). В
целом, производные антител или их частей получают так, что на
связывание TIM-З не оказывают нежелательного влияния посредством
получения производных или мечения. Соответственно,
предусмотрено, что антитела и части антител по изобретению включают как интактные, так и модифицированные формы антител человека против TIM-З, которые описаны в настоящем описании. Например, антитело или часть антитела по изобретению можно функционально связывать (посредством химической связи, генетического слияния, нековалентного ассоциирования или иным образом) с одной или несколькими другими молекулярными частицами, таким как другое антитело (например, биспецифическое антитело или диател), средство обнаружения, фармацевтическое средство и/или белок или пептид, которые могут опосредовать ассоциирование антитела или части антитела с другой молекулой (такой как область сердцевины стрептавидина или полигистидиновая метка).
[0137] Производное антитела одного типа получают
посредством сшивки двух или больше антител (одного и того же или
различных типов, например, чтобы создавать биспецифические
антитела). Подходящие сшиватели включают те, которые являются
гетеробифункциональными, имеет две различные реакционноспособные
группы, разделенные подходящим спейсером (например, сложный м-
малеимидобензоил-^гидроксисукцинимидовый эфир) или
[0138] Также производное антитела против TIM-З можно получать с использованием химической группы, такой как полиэтиленгликоль (PEG), метильная или этильная группа или углеводная группа. Эти группы можно использовать для усовершенствования биологических характеристик антитела, например, для увеличения времени полужизни в сыворотке.
[0139] Антитело в соответствии с настоящим изобретением
также можно метить. Как используют в настоящем описании, термины
"метка" или "меченный" относятся ко встраиванию другой молекулы
в антитело. В одном из вариантов осуществления метка
представляет собой поддающийся обнаружению маркер, например,
встраивание радиоактивно меченной аминокислоты или присоединение
к полипептиду биотинированных фрагментов, которые можно
обнаруживать с помощью маркерного авидина (например,
стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер, или
ферментативная активность, которую можно обнаруживать
оптическими или колориметрическими способами). В другом варианте
осуществления метка или маркер могут быть терапевтическими,
например, конъюгат лекарственного средства или токсин. В данной
области известны различные способы мечения полипептидов и
гликопротеинов, которые можно использовать. Примеры меток для
полипептидов включают, но не ограничиваясь этим, следующее:
радиоизотопы или радионуклиды (например, 3Н, 14С, 15N, 35S, 90Y,
"Тс, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, FITC,
родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки
(например, пероксидаза хрена, (3-галактозидаза, люцифераза,
щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные маркеры, группы
биотинила, предварительно определяемые эпитопы полипептидов,
распознаваемые вторичным репортером (например, пара
последовательностей лейциновой молнии, сайты связывания для вторичных антител, металл-связывающие домены, эпитопные метки), магнитные средства, такие как хелаты гадолиния, токсины, такие
как токсин коклюша, таксол, цитохалазин В, грамицидин D, бромистый этидий, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи. В некоторых вариантах осуществления метки прикрепляют с помощью спейсерных плеч различной длины, чтобы снижать потенциальное стерическое затруднение.
[014 0] В определенных вариантах осуществления антитела по изобретению могут присутствовать в нейтральной форме (включая цвиттер-ионные формы) или в виде положительно или отрицательно заряженных частиц. В некоторых вариантах осуществления антитела могут образовывать комплексы с противоионом для того, чтобы формировать фармацевтически приемлемую соль.
[0141] Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к комплексу, содержащему одно или несколько антител и один или несколько противоионов, где противоионы получают из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований.
Биспецифические связывающие молекулы
[0142] В дополнительном аспекте изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, обладающей специфичностью связывания антитела против TIM-З, описанного в настоящем описании, и специфичностью связывания другого антитела против TIM-З (например, другого антитела против TIM-З, описанного в настоящем описании) или антитела, которое направлено на другой белок, такой как другой белок иммунной контрольной точки, антиген злокачественной опухоли или другая молекула клеточной поверхности, активность которой опосредует патологическое состояние, такое как злокачественная опухоль. Такие биспецифические связывающие молекулы известны в данной области, и примеры биспецифических связывающих молекул различных типов приведены в другом месте в настоящем описании. Молекулы нуклеиновой кислоты и векторы
последовательностям нуклеиновой кислоты, кодирующим антитела против TIM-З или их антигенсвязывающие части, описанные в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления различные молекулы нуклеиновой кислоты кодируют аминокислотные последовательности тяжелых цепей и легких цепей антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей части. В других вариантах осуществления одна и та же молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотные последовательности тяжелых цепей и легких цепей антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей части.
[0144] Упоминание о нуклеотидной последовательности охватывает ее комплемент, если не указано иное. Таким образом, упоминание о нуклеиновой кислоте, имеющей конкретную последовательность, следует понимать как охватывающее ее комплементарную нить, с ее комплементарной последовательность. Термин "полинуклеотид", как упоминают в настоящем описании, обозначает полимерную форму нуклеотидов по меньшей мере 10 оснований в длину, рибонуклеотидов или дезоксинуклеотидов или модифицированной формы нуклеотида любого типа. Термин включает одно- и двухцепочечные формы.
[0145] Изобретение также относится к нуклеотидным последовательностям, которые по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% или 99% идентичны одной или нескольким нуклеотидными последовательностям, указанным в настоящем описании, например, нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:3, 4, 7-12, 15, 28-35, 38-45, 48-55, 5865, 68-75, 78-85, 88-95, 98-105, 108-115, 118-125, 128-135, 138145, 148-155, 158-165, 168-175, 178-185, 188-195, 198-205, 208215, 218-225 и 228-235. Термин "процент идентичности последовательностей" в контексте последовательностей нуклеиновой кислоты относится к остаткам в двух последовательностях, которые являются одинаковыми при выравнивании с максимальным соответствием. Длина сравнения идентичности последовательностей может превышать отрезок из по меньшей мере приблизительно 9 нуклеотидов, обычно по меньшей мере приблизительно 18 нуклеотидов, более обычно по меньшей мере приблизительно 2 4
нуклеотида, обычно по меньшей мере приблизительно 2 8 нуклеотидов, более обычно по меньшей мере приблизительно 32 нуклеотида и предпочтительно по меньшей мере приблизительно 3 6, 4 8 или больше нуклеотидов. Существует множество различных алгоритмов, известных в данной области, которые можно использовать для того, чтобы измерять идентичность последовательностей нуклеотидов. Например, полинуклеотидные последовательности можно сравнивать с использованием FASTA, Gap или Bestfit, которые представляют собой программы в Wisconsin Package версии 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. FASTA, которая включает, например, программы FASTA2 и FASTA3, предоставляет выравнивания и процент идентичности последовательностей для областей наилучшего перекрытия между запрашиваемыми и искомыми последовательностями (см., например, Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); и Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998); включенные в настоящее описание посредством ссылки). Если не указано иное, используют параметры по умолчанию для конкретной программы или алгоритма. Например, процент идентичности последовательностей между последовательностями нуклеиновой кислоты можно определять с использованием FASTA с ее параметрами по умолчанию (размер слова б и коэффициент NOPAM для матрицы замен) или с использованием Gap с ее параметрами по умолчанию, как предоставлено в GCG версии 6.1, включенной в настоящее описание посредством ссылки.
[0146] В одном из аспектов, изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1, 2, 13, 14, 26, 27, 36, 37, 46, 47, 56, 57, 66, 67, 76, 77, 86, 87, 96, 97, 106, 107, 116, 117, 126, 127, 136, 137, 146, 147, 156, 157, 166, 167, 176, 177, 186, 187, 196, 197, 206, 207, 216, 217, 226 и 227. Изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% или 99% идентичны любой из указанных нуклеотидных
[0147] В любом из вышеуказанных вариантов осуществления молекулы нуклеиновой кислоты можно выделять. Молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую и/или легкую цепь антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей части по изобретению, можно выделять из любого источника, который продуцирует такое антитело или часть. В различных вариантах осуществления, молекулы нуклеиновой кислоты выделяют из В-клеток, которые экспрессируют антитело против TIM-З, выделенное у животного, которое иммунизировали антигеном TIM-З человека, или из иммортализованной клетки, полученной из такой В-клетки. Способы выделения нуклеиновых кислот, кодирующих антитело, общеизвестны в данной области. мРНК можно выделять и использовать для получения кДНК для использования в полимеразной цепной реакции (ПЦР) или клонировании кДНК генов антител. В определенных вариантах осуществления молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению можно синтезировать, а не выделять.
[014 8] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую домен VH из антитела против TIM-3 или антигенсвязывающей части по изобретению, соединенную с сохранением рамки считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей константную область тяжелой цепи из любого источника. Аналогичным образом, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую домен VL из антитела против TIM-З или антигенсвязывающую часть по изобретению, которая соединена с сохранением рамки считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей константную область легкой цепи из любого источника.
[014 9] В дополнительном аспекте по изобретению, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельный домен тяжелой (VH) и/или легкой (VL) цепей, можно "превращать" в полноразмерные гены антител. В одном из вариантов осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены VH или VL, превращают в полноразмерные гены антител посредством вставки в экспрессирующий вектор, уже кодирующий константные домены
тяжелой цепи (СН) или константные домены легкой цепи (CL), соответственно, так что сегмент VH функционально связывают с сегментом(ами) СН в векторе и/или сегмент VL функционально связывают с сегментом CL в векторе. В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены VH и/или VL, превращают в полноразмерные гены антител посредством связывания, например, лигирования, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей домены VH и/или VL, с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей домен СН и/или CL, используя стандартные молекулярно-биологические способы. Затем молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полноразмерные тяжелые и/или легкие цепи, можно экспрессировать в клетке, в которую их вводили, и выделять антитело против TIM-3.
[0150] Молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать для рекомбинантной экспрессии больших количеств антител против TIM-3. Молекулы нуклеиновой кислоты также можно использовать для получения, например, химерных антител, биспецифических антител, одноцепочечных антител, иммуноадгезинов, диател, мутантных антител и производных антител, как раскрыто в настоящем описании.
[0151] В другом варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению используют в качестве зонд или ПЦР праймера для последовательности специфического антитела. Например, нуклеиновую кислоту можно использовать в качестве зонда в диагностических способах или в качестве ПЦР праймера для того, чтобы амплифицировать области ДНК, которые можно использовать, inter alia, для выделения дополнительных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные домены антител против TIM-З. В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты представляют собой олигонуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды происходят из высоко вариабельных доменов тяжелых и легких цепей антитела, представляющего интерес. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды кодируют целиком или частично одну или несколько CDR антител против TIM-З или их антигенсвязывающих частей по изобретению, как раскрыто в настоящем описании.
[0152] В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты и векторы можно использовать для создания мутантных антител против TIM-З. Мутации можно вводить в вариабельные домены тяжелых и/или легких цепей антител, например, чтобы изменять связывающее свойство антитела. Например, мутацию можно создавать в одной или нескольких из CDR для увеличения или уменьшения KD антитела против TIM-З, для увеличения или уменьшения koff или для изменения специфичности связывания антитела. В другом варианте осуществления одну или несколько мутаций выполняют в аминокислотном остатке, который, как известно, изменен по сравнению с зародышевой линией в моноклональном антителе по изобретению. Мутации можно создавать в CDR или каркасной области вариабельного домена или в константной области. В предпочтительном варианте осуществления мутации выполняют в вариабельном домене. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько мутаций выполняют в аминокислотном остатке, который, как известно, изменен по сравнению с зародышевой линией в CDR или каркасной области вариабельного домена антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению.
[0153] В другом варианте осуществления мутацию в каркасную область(и) вводят с тем, чтобы получаемая каркасная область(и) имела аминокислотную последовательность соответствующего гена зародышевой линии. Мутацию можно создавать в каркасной области или константной области для увеличения времени полужизни антитела против TIM-З. См., например, РСТ публикацию WO 00/09560. Мутацию в каркасной области или константной области также можно создавать для того, чтобы изменять иммуногенность антитела и/или предоставлять участок для ковалентного или нековалентного связывания с другой молекулой. В соответствии с изобретением, одно антитело может иметь мутации в любой одной или нескольких из CDR или каркасных областей вариабельного домена или в константной области.
[0154] В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает вектор, подходящих для экспрессии одной или обеих из цепей антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей
части, как раскрыто в настоящем описании. Термин "вектор", как используют в настоящем описании, обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, способную транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой плазмиду, т. е. круглый двухцепочечный фрагмент ДНК, в который можно лигировать дополнительные сегменты ДНК. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой вирусный вектор, в котором дополнительные ДНК сегменты можно лигировать в вирусный геном. В некоторых вариантах осуществления векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный участок начала репликации, и эписомные векторы млекопитающих). В других вариантах осуществления векторы
(например, не эписомные векторы млекопитающих) можно встраивать в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяина и тем самым реплицировать вместе с геномом хозяина. Кроме того, определенные векторы способны управлять экспрессией генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы обозначают в настоящем описании как "рекомбинантные экспрессирующие векторы"
(или просто "экспрессирующие векторы").
[0155] Изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют тяжелую цепь антитела против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающей части, легкую цепь антитела против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающей части, или и тяжелые и легкие цепи антитела против TIM-З по изобретению или его антигенсвязывающей части. Изобретение дополнительно предусматривает векторы, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие слитые белки, модифицированные антитела, фрагменты антител и их зонды.
[0156] В некоторых вариантах осуществления антитела против
TIM-З по изобретению или их антигенсвязывающие части
экспрессируют посредством встраивания ДНК, кодирующей частичные
или полноразмерные легкие и тяжелые цепи, получаемые как описано
выше, в экспрессирующие векторы так, что гены функционально
связывают с необходимыми управляющими экспрессией
последовательностями, такими как транскрипционные и
трансляционные управляющие последовательности. Экспрессирующие
векторы включают плазмиды, ретровирусы, аденовирусы,
аденоассоциированные вирусы (AAV), вирусы растений, такие как
вирус мозаики цветной капусты, вирус табачной мозаики, космиды,
YAC, эписомы, полученные из EBV, и т. п.Кодирующую
последовательность антитела можно лигировать в вектор так, что
транскрипционные и трансляционные управляющие последовательности
в векторе служат своей предполагаемой функции регуляции
транскрипции и трансляции кодирующей последовательности
антитела. Экспрессирующий вектор и управляющие экспрессией
последовательности можно выбирать так, чтобы они были
совместимыми с используемой экспрессирующей клеткой-хозяином.
Кодирующую последовательность легкой цепи антитела и кодирующую
последовательность тяжелой цепи антитела можно вставлять в
отдельные векторы и можно функционально связывать с одними и
теми же или различными управляющими экспрессией
последовательностями (например, промоторами). В одном из
вариантов осуществления обе кодирующие последовательности
вставляют в один и тот же экспрессирующий вектор, и их можно
функционально связывать с одними и теми же управляющими
экспрессией последовательностями (например, общий промотор), с
отдельными идентичными управляющими экспрессией
последовательностями (например, промоторами) или с различными управляющими экспрессией последовательностями (например, промоторам). Кодирующие последовательности антитела можно вставлять в экспрессирующий вектор с помощью стандартных способов (например, лигирование комплементарных участков рестрикции на фрагменте гена антитела и векторе или лигирование тупых концов, если участки рестрикции отсутствуют).
[0157] Удобным вектором является тот, который кодирует функционально полную последовательность СН или CL иммуноглобулина человека, с подходящими участками рестрикции, сконструированными с тем, чтобы любую последовательность VH или VL можно было легко вставлять и экспрессировать, как описано выше. НС- и LC-кодирующие гены в таких векторах могут содержать последовательности интронов, которые будут вести к увеличенному
общему выходу белка антитела посредством стабилизации родственной мРНК. Последовательности интронов фланкируют донорными и акцепторными сайтами сплайсинга, которые определяют, где будет происходить сплайсинг РНК. Местоположение последовательностей интронов может быть в вариабельных или константных областях цепей антитела или как в вариабельных, так и в константных областях, когда используют несколько интронов. Полиаденилирование и терминация транскрипции могут происходить в нативных хромосомных участках ниже по направлению считывания от кодирующих областей. Рекомбинантный экспрессирующий вектор также может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела клеткой-хозяином. Ген цепи антитела можно клонировать в вектор так, что сигнальный пептид связывают с сохранением рамки считывания с аминоконцом цепи иммуноглобулина. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (т. е. сигнальный пептид из не иммуноглобулинового белка).
[0158] В дополнение к генам цепей антител, рекомбинантные
экспрессирующие векторы по изобретению могут нести регуляторные
последовательности, которые управляют экспрессией генов цепей
антител в клетке-хозяине. Специалисты в данной области примут во
внимание, что конструкция экспрессирующего вектора, в том числе
выбор регуляторных последовательностей, может зависеть от таких
факторов, как выбор клетки-хозяина, подлежащей трансформации,
желаемый уровень экспрессии белка и т. д. Предпочтительные
регуляторные последовательности для экспрессии в клетках-
хозяевах млекопитающих включают вирусные элементы, которые
задают высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих,
такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из ретровирусных
LTR, цитомегаловируса (CMV) (такие как промотор/энхансер CMV) ,
вируса обезьян 40 (SV40) (такие как промотор/энхансер SV40),
аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса
(AdMLP)), вируса полиомы и мощные промоторы млекопитающих, такие
как нативные промоторы иммуноглобулинов и актина. Дополнительное
описание вирусных регуляторных элементов и их
последовательностей см., например, в патентах США 5168062,
4510245 и 4968615. В данной области известны способы экспрессии антител у растений, в том числе описание промоторов и векторов, а также трансформации растений. См., например, патент США 6517529. Также в данной области хорошо известны способы экспрессии полипептидов в бактериальных клетках или грибковых клетках, например, клетках дрожжей.
[0159] В дополнение к генам цепей антител и регуляторным последовательностям, рекомбинантные экспрессирующие векторы по изобретению могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, участки начала репликации), и гены селективных маркеров. Ген селективного маркера облегчает отбор клеток-хозяев, в которые введен вектор (см., например, патенты США 4399216, 4634665 и 5179017) . Например, обычно ген селективного маркера придает устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат, клетке-хозяину, в которую введен вектор. Например, гены селективных маркеров включают ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для использования в dhfr-клетках-хозяевах с метотрексатным отбором/амплификацией) , ген пео (для G418 отбора) и ген глутаматсинтетазы.
[0160] Термин "управляющая экспрессией последовательность", как используют в настоящем описании, обозначает полинуклеотидные последовательности, которые необходимы для осуществления экспрессии и процессинга кодирующих последовательностей, с которыми их лигируют. Управляющие экспрессией последовательности включают подходящие последовательности инициации транскрипции, терминации, промоторов и энхансеров; эффективные сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые увеличивают эффективность трансляции (т. е. консенсусная последовательность Козак); последовательности, которые повышают стабильность белка; и когда желательно, последовательности, которые увеличивают секрецию белка. Свойства таких управляющих последовательностей различаются в зависимости от организма-хозяина; у прокариот
такие управляющие последовательности в целом включают промотор, участок связывания рибосомы и последовательность терминации транскрипции; у эукариот, в целом, такие управляющие последовательности включают промоторы и последовательность терминации транскрипции. Термин "управляющие последовательности" предназначен для того, чтобы включать, как минимум, все компоненты, присутствие которых обязательно для экспрессии и процессинга, а также может включать дополнительные компоненты, присутствие которых является благоприятным, например, лидерные последовательности и последовательности партнера слияния.
Клетки-хозяева и способы получения антитела и композиции антитела
[0161] Дополнительный аспект по изобретению относится к способам получения композиций антител и антител и их антигенсвязывающих частей по изобретению. Один из вариантов осуществления по этому аспекту изобретения относится к способу получения антитела, как определено в настоящем описании, который включает предоставление рекомбинантной клетки-хозяина, способной экспрессировать антитело, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела, и выделение получаемого антитела. Антитела, получаемые посредством такой экспрессии в таких рекомбинантных клетках-хозяевах, обозначают в настоящем описании как "рекомбинантные антитела". Изобретение также относится к клеткам потомства таких клеток-хозяев и антителам, продуцируем ими.
[0162] Термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин"), как используют в настоящем описании, обозначает клетку, в которую введен рекомбинантный экспрессирующий вектор. Изобретение относится к клеткам-хозяевам, которые могут содержать, например, вектор в соответствии с изобретением, описанный выше. Изобретение также относится к клеткам-хозяевам, которые содержат, например, нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть, или и то и другое из антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей
части по изобретению. Следует понимать, что "рекомбинантная клетка-хозяин" и "клетка-хозяин" обозначает не только конкретную рассматриваемую клетку, но также потомство такой клетки. Поскольку определенные модификации могут встречаться в последующих поколениях из-за влияния мутаций или окружающей среды, такое потомство фактически может не быть идентичным родительской клетке, но все еще входит в объем термина "клетка-хозяин", как используют в настоящем описании.
[0163] Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела
против TIM-З, и векторы, содержащие эти молекулы нуклеиновой
кислоты, можно использовать для трансфекции подходящих клеток-
хозяев млекопитающих, растений, бактерий или дрожжей.
Трансформацию можно опосредовать любым известным способом
введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Способы введения
гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо
известны в данной области и включают декстран-опосредованную
трансфекцию, преципитацию с фосфатом кальция, полибрен-
опосредованную трансфекцию, слияние протопластов,
электропорацию, инкапсуляцию полинуклеотида(ов) в липосомы и
прямую микроинъекцию ДНК в ядра. Кроме того, молекулы
нуклеиновой кислоты можно вводить в клетки млекопитающих с
помощью вирусных векторов. Способы трансформации клеток хорошо
известны в данной области. См., например, патенты США 4399216,
4912040, 4740461 и 4959455. Способы трансформации клеток
растения хорошо известны в данной области, в том числе,
например, Agrobacterium-опосредованная трансформация,
биолистическая трансформация, прямая инъекция, электропорация и вирусная трансформация. Способы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток также хорошо известны в данной области.
[0164] Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают многие иммортализованные клеточные линии, доступные в American Type Culture Collection (АТСС). Они включают, inter alia, клетки яичника китайского хомяка (СНО), клетки NS0, клетки SP2, клетки НЕК-293Т, клетки 293 Freestyle (Invitrogen), клетки NIH-3T3, клетки HeLa, клетки почки детеныша хомяка (ВНК), клетки
гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) , клетки А54 9 и множество других клеточных линий. Конкретные предпочитаемые клеточные линии выбирают, определяя, какие клеточные линии имеют высокие уровни экспрессии. Другие клеточные линии, которые можно использовать, представляют собой клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9 или Sf21. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие гены антител, вводят в клетки-хозяева млекопитающих, антитела продуцируют посредством культивирования клеток-хозяев в течение определенного периода времени, достаточного для того, чтобы сделать возможной экспрессию антитела в клетках-хозяевах или, более предпочтительно, секрецию антитела в среду для культивирования, в которой растят клетки-хозяева. Антитела можно извлекать из среды для культивирования с использованием стандартных способов очистки белка. Клетки-хозяева растений включают, например, Nicotiana, Arabidopsis, ряску, кукурузу, пшеницу, картофель и т. д. Бактериальные клетки-хозяева включают Е. coli и виды Streptomyces. Дрожжевые клетки-хозяева включают Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris.
[0165] Кроме того, экспрессию антител по изобретению или их антигенсвязывающих частей в продуцирующих клеточных линиях можно усиливать с использованием множества известных способов. Например, система экспрессии гена глутаминсинтетазы (система GS) представляет собой общий подход для усиления экспрессии при определенных условиях. Система GS рассмотрена в целом и частично в связи с патентами ЕР 0 216 846, 0 256 055, 0 323 997 и 0 338 841.
[0166] Вероятно антитела, экспрессируемые различными клеточными линиями или трансгенными животными, будут иметь паттерны гликозилирования, отличные друг от друга. Однако, все антитела, кодируемые молекулами нуклеиновой кислоты, предусмотренными в настоящем описании, или содержащие аминокислотные последовательности, предусмотренные в настоящем описании, являются частью настоящего изобретения, независимо от
Фармацевтические композиции
[0167] Другой аспект изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного ингредиента (или в качестве единственного активного ингредиента) антитело против TIM-З или его антигенсвязывающую часть, биспецифическую связывающую молекулу или композицию антитела против TIM-З по изобретению. Фармацевтическая композиция может содержать любую композицию антитела против TIM-3, биспецифическую связывающую молекулу или антитело или его антигенсвязывающую часть, как раскрыто в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления композиции предназначены для улучшения, предотвращения и/или лечения связанного с TIM-3 нарушения (например, нарушения, отличающегося сверхэкспрессией или сверхактивностью TIM-З или любого из его лигандов) и/или злокачественной опухоли. В некоторых вариантах осуществления композиции предназначены для активации иммунной системы. В определенных вариантах осуществления композиции предназначены для улучшения, предотвращения и/или лечения злокачественной опухоли, происходящей из таких тканей, как кожа, легкое, кишечник, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, грудь, желудок, матка и поджелудочная железа.
[0168] В целом, антитела по изобретению или их антигенсвязывающие части или биспецифические связывающие молекулы по изобретению, подходят для введения в виде состава в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, например, как описано ниже.
[0169] Фармацевтические композиции по изобретению содержат одно или несколько антител против TIM-З или связывающие части или биспецифические связывающие молекулы по изобретению, например, одно или два антитела против TIM-З или связывающих части или биспецифических связывающих молекулы. В одном из вариантов осуществления композиция содержит одно антитело против
[0170] В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере одно антитело против TIM-З или его антигенсвязывающую часть, например, одно антитело против TIM-З или часть, или одну биспецифическую связывающую молекулу и одно или несколько дополнительных антител, которые направлены на один или несколько релевантных рецепторов клеточной поверхности, например, один или несколько релевантных рецепторов злокачественной опухоли.
[0171] Термин "эксципиент" используют в настоящем описании
для того, чтобы описывать любой ингредиент, отличный от
соединения(й) по изобретению. Выбор эксципиента(ов) в
значительной степени зависит от таких факторов, как конкретный
способ введения, эффект эксципиента, оказываемый на
растворимость и стабильность, и свойства дозированной формы. Как
используют в настоящем описании, "фармацевтически приемлемый
эксципиент" включает любые и все растворители, дисперсионные
среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства,
изотонические и задерживающие абсорбцию средства и т. п.,
которые являются физиологически совместимыми. Некоторые примеры
фармацевтически приемлемых эксципиентов представляют собой воду,
физиологический раствор, фосфатно-солевой буфер, декстрозу,
глицерин, этанол и т. п., а также их сочетания. Во многих
случаях они предпочтительно включают изотонические средства,
например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит,
или хлорид натрия в композиции. Дополнительные примеры
фармацевтически приемлемых веществ представляют собой
смачивающие средства или незначительные количества
вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие средства, консерванты или буферы, которые увеличивают срок хранения или эффективность антитела.
[0172] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению и способы их получения без труда видны специалистам в данной области. Получение таких композиций и способов можно найти, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19-е изд.
[0173] Фармацевтическую композицию по изобретению можно
получать, упаковывать или продавать большими партиями, в виде
отдельно стандартной дозы или в виде множества отдельных
стандартных доз. Как используют в настоящем описании,
"стандартная доза" представляет собой дискретное количество
фармацевтической композиции, содержащее предварительно
определяемое количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента в целом равно дозе активного ингредиента, которую следует вводить субъекту, или удобной доле такой дозы, например, такой как половина или одна треть от такой дозы.
[0174] Любой способ введения пептидов, белков или антител, принятый в данной области, можно подходящим образом использовать для антител и антигенсвязывающих частей по изобретению.
[0175] Фармацевтические композиции по изобретению обычно
подходят для парентерального введения. Как используют в
настоящем описании, "парентеральное введение" фармацевтической
композиции включает любой путь введения, отличающийся физическим
преодолением ткани субъекта и введением фармацевтической
композиции через отверстие в ткани, что таким образом в целом
ведет к прямому введению в кровоток, мышцу или внутренний орган.
Парентеральное введение, таким образом, включает, но не
ограничиваясь этим, введение фармацевтической композиции
посредством инъекции композиции, посредством внесения композиции
через хирургический разрез, посредством внесения композиции
через не хирургическую рану, проникающую в ткань, и т. п. В
частности, предусмотрено, что парентеральное введение включает,
но не ограничиваясь этим, подкожную, интраперитонеальную,
внутримышечную, интрастернальную, внутривенную,
внутриартериальную, интратекальную, внутрижелудочковую,
внутриуретральную, внутричерепную и интрасиновиальную инъекцию или инфузии; и способы инфузии при диализе почек. Также предусмотрена регионарная перфузия. Конкретные варианты осуществления включают внутривенный и подкожный пути.
[017 6] Составы фармацевтической композиции, подходящей для парентерального введения, обычно содержат активный ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический физиологический раствор. Такие составы можно получать, упаковывать или продавать в форме, подходящей для болюсного введения или для непрерывного введения. Инъецируемые составы можно получать, упаковывать или продавать в стандартной дозированной форме, например, в ампулах, или в контейнерах с несколькими дозами, которые содержат консервант. Составы для парентерального введения включают, но не ограничиваясь этим, суспензии, растворы, эмульсии в маслянистых или водных носителях, пасты и т. п.Такие составы дополнительно могут содержать один или несколько дополнительных ингредиентов, включая в качестве неограничивающих примеров суспендирующее, стабилизирующее или диспергирующее средство. В одном из вариантов осуществления состава для парентерального введения активный ингредиент предоставляют в сухой (т. е. порошковой или гранулярной) форме для восстановления с использованием подходящего носителя (например, стерильной апирогенной воды) перед парентеральным введением восстановленной композиции. Парентеральные составы также включают водные растворы, которые могут содержать эксципиенты, такие как соли, углеводы и буферные средства (предпочтительно с рН от 3 до 9) , но, для некоторых применений, их можно более подходящим образом формулировать в виде стерильного неводного раствора или в виде высушенной формы, подлежащей использованию в сочетании с подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода. Образцовые формы для парентерального введения включают растворы или суспензии в стерильных водных растворах, например, водные растворы пропиленгликоля или декстрозы. При желании, такие дозированные формы можно подходящим образом забуферивать. Другие парентерально вводимые составы, которые можно использовать, включают те, которые содержат активный ингредиент в микрокристаллической форме или в липосомном препарате. Составы для парентерального введения можно формулировать для незамедлительного и/или модифицированного высвобождения. Составы
[0177] Например, в одном из аспектов стерильные инъецируемые растворы можно получать посредством внедрения антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей части, биспецифической связывающей молекулы или композиции антитела против TIM-З в требуемом количестве в подходящий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, при необходимости, после чего следует стерилизация фильтрованием. В целом, дисперсии получают посредством внедрения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из тех, что перечислены выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъецируемых растворов, предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и лиофилизация, которая дает порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора, который предварительно стерильно фильтровали. Надлежащую текучесть раствора можно поддерживать, например, с помощью покрытия, такого как лецитин, посредством поддержания требуемого размера частицы в случае дисперсии и с помощью поверхностно-активных средств. Пролонгированную абсорбцию инъецируемых композиций можно осуществлять посредством включения в композицию средства, которое задерживает абсорбцию, например, моностеаратных солей и желатина, и/или с использованием покрытий с модифицированным высвобождением (например, покрытий с медленным высвобождением).
[017 8] Антитела по изобретению также можно вводить интраназально или посредством ингаляции, обычно в форме сухого порошка (отдельно, в виде смеси или в виде частицы из смешанных компонентов, например, смешанных с подходящим фармацевтически приемлемым эксципиентом), из ингалятора сухого порошка, в виде распыляемого аэрозоля из контейнера под давлением, насоса, спрея, атомизатора (предпочтительно атомизатора, использующего электрогидродинамику для получения мелкодисперсного тумана) , или небулайзера, с использованием или без использования подходящего
[0179] Контейнер под давлением, насос, спрей, атомизатор или небулайзер в целом содержит раствор или суспензию антитела по изобретению, которые содержат, например, подходящее средство для диспергирования, солюбилизации или продления высвобождения активного средства, пропеллент(ы) в качестве растворителя.
[0180] Перед использованием в сухом порошковом или
суспензионном составе, лекарственный продукт обычно
микронизируют до размера, подходящего для доставки посредством ингаляции (обычно меньше 5 мкм) . Этого можно достигать любым подходящим способом измельчения, таким как размол на спиральной струйной мельнице, размол на струйной мельнице в псевдоожиженном слое, обработка сверхкритическим текучим веществом для формирования наночастиц, гомогенизация высокого давления или распылительная сушка.
[0181] Можно формулировать капсулы, блистеры и картриджи для использования в ингаляторе или инсуффляторе, содержащие порошковую смесь соединения по изобретению, подходящей порошковой основы и модификатора эффективности.
[0182] Подходящий состав раствора для использования в атомизаторе с использованием электрогидродинамики для получения мелкодисперсного тумана может содержать подходящую дозу антитела по изобретению на одно приведение в действие, и объем приведения в действие, например, может варьировать от 1 мкл до 100 мкл.
[0183] Подходящие ароматизаторы, такие как ментол и левоментол, или подсластители, такие как сахарин или сахарин натрия, можно добавлять в те составы по изобретению, которые предназначены для ингаляционного/интраназального введения.
[0184] Составы для ингаляционного/интраназального введения
можно формулировать для незамедлительного и/или
модифицированного высвобождения. Составы с иодифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, прерывистое, контролируемое, нацеленное и запрограммированное высвобождение.
[0185] В случае ингаляторов сухого порошка и аэрозолей, единицу дозирования определяют с помощью клапана, который доставляет отмеренное количество. Единицы в соответствии с
изобретением обычно устроены для того, чтобы вводить отмеренную дозу или "пшик" антитела по изобретению. Общую суточную дозу обычно вводят в однократной дозе или, более обычно, в виде разделенных доз на всем протяжении суток.
[018 6] Антитела и части антител по изобретению также можно формулировать для введения через оральный путь. Оральное введение может включать проглатывание с тем, чтобы соединение попадало в желудочно-кишечный тракт, и/или буккальное, лингвальное или сублингвальное введение, посредством которого соединение попадает в кровоток непосредственно изо рта.
[0187] Составы, подходящие для орального введения, включают твердые, полутвердые и жидкие системы, такие как таблетки; мягкие или твердые капсулы, содержащие мульти- или наночастицы, жидкости или порошки; пастилки (в том числе заполненные жидкостью); жвачки; гели; быстро диспергируемые дозированные формы; пленки; капсулы; спреи; и буккальные/мукоадгезивные пластыри.
[0188] Жидкие составы включают суспензии, растворы, сиропы
и крепкие настои. Такие составы можно использовать в качестве
наполнителей в мягких или твердых капсулах (выполненных,
например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы), и они
обычно содержат носитель, например, воду, этанол,
полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или
подходящее масло, и одно или несколько эмульгирующих средств и/или суспендирующих средств. Жидкие составы также можно получать посредством восстановления твердого вещества, например, из саше.
Терапевтическое использование антител и композиций по изобретению
[0189] В одном из аспектов, антитела против TIM-З и их антигенсвязывающие части, композиции против TIM-З и биспецифические связывающие молекулы по изобретению используют для усиления или активации иммунной системы у человека, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет состояние, которое отличается сверхэкспрессией или сверхактивностью TIM-З или любого из его лигандов. В некоторых
вариантах осуществления пациент имеет иммунную супрессию. В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть, композиция или биспецифическая связывающая молекула предназначены для использования в лечении злокачественной опухоли, например, злокачественных опухолей, которые берут начало в таких тканях, как кожа, легкое, кишечник, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, грудь, желудок, матка и поджелудочная железа, и любых злокачественных опухолей или других состояний, которые зависят от активности TIM-З и/или при которых пациент экспрессирует или чрезмерно экспрессирует галектин-9, фосфатидилсерин, СЕАСАМ-1 и/или HMGB-1. Злокачественные опухоли, которые лечат антителами против TIM-З, их антигенсвязывающими частями, композициями антитела против TIM-З и/или биспецифическими связывающими молекулами по изобретению, могут включать, например, меланому, немелкоклеточный рак легких, рак толстой кишки, почечноклеточную карциному, лейкоз (например, острый миелолейкоз) и солидные опухоли (например, запущенные или метастазирующие солидные опухоли).
[0190] В некоторых вариантах осуществления злокачественные опухоли, которые лечат антителами против TIM-З, их антигенсвязывающими частями, композициями против TIM-З и/или биспецифическими связывающими молекулами по изобретению, могут включать, например, меланому (например, запущенную или метастазирующую меланому), немелкоклеточную злокачественную опухоль легких, плоскоклеточную злокачественную опухоль головы и шеи, почечноклеточную карциному, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, глиобластому, глиому, плоскоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, гепатоцеллюлярную карциному, рак мочевого пузыря, рак верхних мочевых путей, рак пищевода, рак гастроэзофагеального перехода, рак желудка, рак печени, рак ободочной кишки, карциному толстой кишки, множественную миелому, саркому, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, миелодиспластический синдром, назофарингеальную злокачественную опухоль, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый лимфобластный
лейкоз, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, рак яичников, рак желудочно-кишечного тракта, первичный перитонеальный рак, рак фаллопиевых труб, уротелиальный рак, HTLV-ассоциированный Т-клеточный лейкоз/лимфому, рак предстательной железы, урогенитальный рак, менингиому, адренокортикальный рак, глиосаркому, фибросаркому, рак почки, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак эндометрия, базальноклеточный рак кожи, рак аппендикса, рак желчных путей, рак слюнной железы, запущенный рак из клеток Меркеля, диффузную В-крупноклеточную лимфому, фолликулярную лимфому, мезотелиому и солидные опухоли.
[0191] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть, композиция или биспецифическая связывающая молекула предназначены для использования в лечении вирусных и/или паразитарных инфекций, например, где патогены ингибируют иммунный ответ хозяина.
[0192] "Лечить" и "лечение" относятся к способу облегчения или устранения биологического нарушения и/или по меньшей мере одного из его сопутствующих симптомов. Как используют в настоящем описании, "облегчать" заболевание, нарушение или состояние обозначает снижение тяжести и/или частоты возникновения симптомов заболевания, нарушения или состояния. Кроме того, в настоящем описании упоминания о "лечении" включают упоминания об излечивающем, паллиативном и профилактическом лечении.
[0193] "Терапевтически эффективное количество" относится к вводимому количеству терапевтического средства, которое облегчает в определенной степени один или несколько симптомов нарушения, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество терапевтического средства против злокачественной опухоли, например, может вести к уменьшению опухоли, увеличенной выживаемости, элиминации клеток злокачественной опухоли, сниженному прогрессированию заболевания, купированию метастазов или другим клиническим конечным точкам, желаемым работниками здравоохранения.
[0194] Композиции антител или антитела или их антигенсвязывающие части по изобретению можно вводить отдельно
или в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами или антителами (или в виде любого их сочетания). Фармацевтические композиции, способы и использование по изобретению, таким образом, также охватывают варианты осуществления комбинаций (совместное введение) с другими активными средствами, как подробно описано далее.
[0195] Как используют в настоящем описании, термины "совместное введение", "совместно вводимый" и "в комбинации с", относящиеся к композициям антител, антителам и их антигенсвязывающим частям, а также биспецифическим связывающим молекулам по изобретению с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, предназначены для того, чтобы обозначать и относиться к и включать следующее:
одновременное введение такой комбинации из композиции
антитела/антитела/антигенсвязывающей части/биспецифической
связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) пациенту, нуждающемуся в лечении, когда такие компоненты формулируют вместе в одной дозированной форме, которая высвобождает указанные компоненты указанному пациенту по существу в одно и то же время,
- по существу одновременное введение такой комбинации из
композиции антитела/антитела/антигенсвязывающей
части/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и
терапевтического средства(в) пациенту, нуждающемуся в лечении,
когда такие компоненты формулируют отдельно друг от друга в
отдельных дозированных формах, которые указанный пациент
принимает по существу в одно и то же время, после чего
происходит высвобождение указанных компонентов указанному
пациенту по существу в одно и то же время,
- последовательное введение такой комбинации из композиции антитела/антитела/антигенсвязывающей части/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) пациенту, нуждающемуся в лечении, когда такие компоненты формулируют отдельно друг от друга в отдельных дозированных формах, которые указанный пациент принимает в последовательные моменты времени со значимым временным
-
- последовательное введение такой комбинации из композиции антитела/антитела/антигенсвязывающей части/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) пациенту, нуждающемуся в лечении, когда такие компоненты формулируют вместе в одной дозированной форме, которая высвобождает указанные компоненты контролируемым образом, после чего происходит их параллельное, последовательное и/или перекрывающееся высвобождение указанному пациенту в одни и те же и/или различные моменты времени, где каждую часть можно вводить через один и тот же или другой путь.
[0196] Композиции антител, антитела и их антигенсвязывающие
части и биспецифические связывающие молекулы по изобретению
можно вводить без дополнительного терапевтического лечения, т.
е. в качестве обособленной терапии. Альтернативно, лечение
композициями антител и антителами и их антигенсвязывающими
частями по изобретению может включать по меньшей мере одно
дополнительное терапевтическое лечение (комбинированное
лечение). В некоторых вариантах осуществления композиция
антитела или антитело или его антигенсвязывающую часть можно
совместно вводить или формулировать с другим
лекарством/лекарственным средством для лечения злокачественной
опухоли. Дополнительное терапевтическое лечение может содержать,
например, химиотерапевтическое, антинеопластическое или
антиангиогенное средство, другое антитело против злокачественной опухоли и/или лучевую терапию.
[0197] Комбинируя композиции антител, антитела или
антигенсвязывающие части или биспецифические связывающие
молекулы по изобретению со средствами, о которых известно, что
они индуцируют терминальную дифференцировку клеток
злокачественной опухоли, можно дополнительно усовершенствовать эффект. Такие соединения, например, можно выбирать из группы, состоящей из ретиноевой кислоты, транс-ретиноевых кислот, цис-ретиноевых кислот, фенилбутирата, фактора роста нервов,
тетрадеканоилфорбол-13-ацетата, гексаметилен-бис-ацетамида, трансформирующего фактора роста (3, масляной кислоты, циклического AMP и веснаринона. В некоторых вариантах осуществления соединение выбрано из группы, состоящей из ретиноевой кислоты, фенилбутирата, полностью транс-ретиноевой кислоты и активной формы витамина D.
[0198] Фармацевтические изделия, содержащие композицию
антитела против TIM-З, антитело против TIM-З или его
антигенсвязывающую часть или биспецифическую связывающую
молекулу по изобретению и по меньшей мере одно другое средство
(например, химиотерапевтическое, антинеопластическое или
антиангиогенное средство) можно использовать в качестве
комбинированного лечения для одновременного, раздельного или
последовательного введения при терапии злокачественной опухоли.
Другое средством может представлять собой любое средство,
подходящее для лечения конкретной рассматриваемой
злокачественной опухоли, например, средство, выбранное из
группы, состоящей из алкилирующих средств, например, производных
платины, таких как цисплатин, карбоплатин и/или оксалиплатин;
растительных алкалоидов, например, паклитаксела, доцетаксела
и/или иринотекана; противоопухолевых антибиотиков, например,
доксорубицина (адриамицина), даунорубицина, эпирубицина,
идарубицина митоксантрона, дактиномицина, блеомицина,
актиномицина, лутеомицина, и/или митомицина; ингибиторов топоизомераз, таких как топотекан; и/или антиметаболитов, например, фторурацила и/или других фторпиримидинов.
[0199] Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающую часть, биспецифическую связывающую молекулу или композицию антитела против TIM-З по изобретению также можно использовать в комбинации с другой терапией против злокачественной опухоли, такой как вакцины, цитокины, ингибиторы ферментов и Т-клеточная терапия. В случае вакцины, она может представлять собой, например, белковую, пептидную или ДНК вакцину, содержащую один
или несколько антигенов, которые релевантны для злокачественной опухоли, подлежащей лечению, или вакцину, содержащую дендритные клетки вместе с антигеном. Подходящие цитокины включают, например, IL-2, IFN-y и GM-CSF. Примером типа ингибитора фермента, который обладает активностью против злокачественной опухоли, является ингибитор индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), например, 1-метил-Б-триптофан (1-D-MT). Адоптивная Т-клеточная терапия относится к различным способам иммунотерапии, которые включают размножение или конструирование собственных Т-клеток пациентов, чтобы распознавать и атаковать их опухоли.
[0200] Также предусмотрено, что антитело против TIM-З или его антигенсвязывающую часть, биспецифическую связывающую молекулу или композицию антитела против TIM-З по изобретению можно использовать в дополнительной терапии в связи с ингибиторами тирозинкиназ. Существуют синтетические молекулы с низкой молекулярной массой, преимущественно производные хиназолина, которые взаимодействуют с внутриклеточным доменом тирозинкиназ рецепторов и ингибируют индуцируемое лигандами фосфорилирование рецепторов посредством конкуренции за внутриклеточный сайт связывания Мд-АТФ.
[02 01] В некоторых вариантах осуществления композицию антитела, биспецифическую связывающую молекулу или антитело или его антигенсвязывающую часть можно использовать в комбинации с другим лекарством/лекарственным средством, которое опосредует активацию иммунной системы, включая в качестве неограничивающих примеров, средство, которое опосредует экспрессию или активность A2AR, BLTA, В7-НЗ, В7-Н4, CTLA-4, CD27, CD28, CD39, CD40, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160, CGEN-15049, СНК1, СНК2, CTLA-3, СЕАСАМ (например, СЕАСАМ-1 и/или СЕАСАМ-5), галектина-9, GITR, HVEM, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, LAG-3, NKG2A, ОХ40, PD-1/PD-L1/PD-L2, TIGIT, TGFR-P, TNFR2, VISTA и/или 2В4. В определенных вариантах осуществления средством является антитело или антигенсвязывающий его фрагмент, которые связываются с одной из вышеуказанных молекул.
[02 02] В определенных аспектах, антитела и
антигенсвязывающие части, композиции и биспецифические
связывающие молекулы по изобретению можно вводить в комбинации с
другим ингибитором пути TIM-З, который может направленно
воздействовать на TIM-З или один или несколько его лигандов.
Примеры таких ингибиторов включают другие антитела против TIM-3
и антитела, которые направленно воздействуют на лиганды и/или
корецепторы TIM-З, такие как галектин-9, HMGB-1,
фосфатидилсериновые липиды, СЕАСАМ1, LILRAl-б или LILRB1-5.
[0203] Понятно, что композиции антител, биспецифические связывающие молекулы и антитела и их антигенсвязывающие части по изобретению можно использовать в способе лечения, как раскрыто в настоящем описании, можно использовать в лечении, как раскрыто в настоящем описании, и/или можно использовать в изготовлении лекарственного средства для лечения, как раскрыто в настоящем описании.
Доза и путь введения
[02 04] Композиции антител по изобретению следует вводить в эффективном количестве для лечения рассматриваемого состояния, т. е. в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого результата. Терапевтически эффективное количество может варьировать в соответствии с такими факторами, как конкретное состояние, подлежащее лечению, возраст, пол и масса пациента, и вводят ли антитела в качестве обособленного лечения или в комбинации с одним или несколькими дополнительными лечениями против злокачественных опухолей.
[02 05] Схемы дозирования можно корректировать для обеспечения оптимального желаемого ответа. Например, можно вводить один болюс, можно вводить несколько разделенных доз с течением времени или дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать, как указывают потребности терапевтической ситуации. В частности, благоприятно формулировать парентеральные композиции в форме единицы дозирования для простоты введения и однородности дозы. Форма единицы дозирования, как используют в настоящем описании, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для пациентов/субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит предварительно
определяемое количество активного соединения, вычисленное для получения желаемого терапевтического эффекта, в связи с необходимым фармацевтическим носителем. Описание для форм единиц дозирования по изобретению в целом продиктовано и непосредственно зависит от (а) уникальных характеристик химиотерапевтического средства и конкретного терапевтического или профилактического эффекта, которого нужно достигать, и (Ь) ограничений, присущих области компаундирования такого активного соединения для лечения, чувствительности у индивидуумов.
[0206] Таким образом, специалист в данной области примет во
внимание, исходя из раскрытия, предоставленного в настоящем
описании, что дозу и схему дозирования корректируют в
соответствии со способами, общеизвестными в области терапии. То
есть, можно легко устанавливать максимальную переносимую дозу, а
также можно определять эффективное количество, обеспечивающее
поддающийся обнаружению терапевтический эффект у пациента, как
позволяют временные требования для введения каждого средства
обеспечивать для пациента поддающийся обнаружению
терапевтический эффект. Соответственно, хотя определенная доза и схемы введения приведены в качестве примера в настоящем описании, эти примеры ни коим образом не ограничивают дозу и схему введения, которые можно предусматривать для пациента при практическом осуществлении настоящего изобретения.
[0207] Следует отметить, что значения доз могут варьировать вместе с типом и тяжестью состояния, подлежащего облегчению, и могут включать однократные или многократные дозы. Кроме того, следует понимать, что для любого конкретного субъекта конкретные схемы дозирования следует корректировать с течением времени в соответствии с индивидуальными потребностями и профессиональным суждением человека, осуществляющего введение или инспектирующего введение композиций, и что диапазоны доз, изложенные в настоящем описании, являются только образцовыми и не предназначены для того, чтобы ограничивать объем или практическую реализацию осуществляемой композиции. Кроме того, схема дозирования композиций по данному изобретению может быть основана на различных факторах, в том числе типе заболевания, возрасте,
массе, поле, медицинском состоянии пациента, тяжести состояния, пути введения и конкретном используемом антителе. Таким образом, схема дозирования может варьировать широко, но ее можно определять обычным образом с использованием стандартных способов. Например, дозы можно корректировать на основании фармакокинетических или фармакодинамических параметров, которые могут включать клинические эффекты, такие как токсические эффекты, и/или лабораторных значений. Таким образом, настоящее изобретение относится к индивидуальному повышению дозы, как определяет специалист в данной области. Определение подходящих доз и схем общеизвестно в релевантной области, и следует понимать, что его охватит специалист в данной области после предоставления положений, раскрытых в настоящем описании.
[02 08] Предусмотрено, что подходящая доза композиции антитела по изобретению находится в диапазоне 0,1-100 мг/кг, таком как приблизительно 0,5-50 мг/кг, например, приблизительно 1-2 0 мг/кг. Композицию антитела, например, можно вводить в дозе по меньшей мере 0,25 мг/кг, например, по меньшей мере 0,5 мг/кг, такой как по меньшей мере 1 мг/кг, например, по меньшей мере 1,5 мг/кг, такой как по меньшей мере 2 мг/кг, например, по меньшей мере 3 мг/кг, такой как по меньшей мере 4 мг/кг, например, по меньшей мере 5 мг/кг; и например, вплоть до самое большее 50 мг/кг, такой как вплоть до самое большее 30 мг/кг, например, вплоть до самое большее 20 мг/кг, такой как вплоть до самое большее 15 мг/кг. Введение обычно повторяют с подходящими интервалами, например, раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели, и до тех пор, пока считает подходящим ответственный врач, который может необязательно повышать или снижать дозу по мере необходимости.
[02 09] Эффективное количество для терапии опухоли можно измерять по его способности стабилизировать прогрессирование заболевания и/или улучшать симптомы у пациента, и предпочтительно обращать прогрессирование заболевания, например, по уменьшению размера опухоли. Способность антитела, антигенсвязывающей части, биспецифической связывающей молекулы или композиции по изобретению ингибировать злокачественную
опухоль можно оценивать с помощью анализов in vitro, например, как описано в примерах, а также в подходящих животных моделях, которые позволяют прогнозировать эффект для опухолей человека. Подходящие схемы дозирования следует выбирать для того, чтобы обеспечивать оптимальный терапевтический ответ в каждой конкретной ситуации, например, вводить в виде однократного болюса или в виде непрерывной инфузии, и с возможной корректировкой дозы, как указывают потребности в каждом случае. Диагностическое применение и композиции
[0210] Антитела и антигенсвязывающие части по настоящему изобретению также можно использовать в диагностических процессах
(например, in vitro, ex vivo). Например, антитела и части можно
использовать для того, чтобы обнаруживать и/или измерять уровень
TIM-З в образце от пациента (например, образце ткани или образце
текучего вещества организма, таком как воспалительный экссудат,
кровь, сыворотка, текучее вещество кишечника, слюна или моча).
Подходящие способы обнаружения и измерения включают
иммунологические способы, такие как проточная цитометрия,
твердофазный иммуносорбентный анализ (ELISA), анализ
хемилюминесценции, радиоиммунологический анализ и
иммуногистология. Изобретение дополнительно охватывает наборы
(например, диагностические наборы), содержащие антитела и антигенсвязывающие части, описанные в настоящем описании.
[0211] Если не определено иное в настоящем описании, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, должны иметь значения, в которых их обычно понимают средние специалисты в данной области. Образцовые способы и материалы описаны далее, хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, что описаны в настоящем описании, также можно использовать при практической реализации или тестировании настоящего изобретения. В случае противоречия, данное описание, в том числе определения, имеет определяющую роль .
[0212] В целом, номенклатура и способы, используемые в связи с культурой клеток и тканей, молекулярной биологией, иммунологией, микробиологией, генетикой, аналитической химией,
фармацевтической химией, а также химией белков и нуклеиновых кислот и гибридизацией, которые описаны в настоящем описании, являются общеизвестными и широко используемыми в данной области. Ферментативные реакции и способы очистки осуществляют в соответствии с описаниями производителей, как обычно выполняют в данной области или как раскрыто в настоящем описании.
[0213] Кроме того, пока контекст не требует иного, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. На всем протяжении этого описания и вариантов осуществления следует понимать, что слова "иметь" и "содержать" или вариации, такие как "имеет", "имеющий", "содержит" или "содержащий", подразумевают включение приведенного целого числа или группы целых чисел, но не исключение любого другого целого числа или группы целых чисел.
[0214] Все публикации и другие источники, упомянутые в настоящем описании, включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме. Несмотря на то, что множество документов цитировано в настоящем описании, это цитирование не составляет допущение о том, что любые из этих документов составляют часть общедоступных знаний в данной области.
[0215] Для лучшего понимания этого изобретения приведены следующие примеры. Эти примеры служат только иллюстративным целям, и их не следует толковать в качестве ограничения объема изобретения каким-либо образом.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Клонирование антител против TIM-З из В-клеток
крысы
[0216] В этом примере описан способ, используемый для создания антител против TIM-З человека по изобретению. ДНК и аминокислотные последовательности антител также предоставлены. Материалы и способы
[0217] Антитела против TIM-З по изобретению выделяли из репертуара антител, полученных у крыс OmniRat(r) (Osborn et al., J
Immunol. 190 (4) :1481-90 (2013)), штамма крыс из ОМТ (Open Monoclonal Technology, Inc.), который продуцирует антитела с идиотипами полностью человека. Клонирование генов антител, полученных у крыс, из антителосекретирующих В-клеток (ASC), отсортированных по отдельным клеткам, осуществляли с помощью технологии обнаружения антител Symplex(tm) (Meijer et al., J Mol Biol 358(3):764-72 (2006)).
[0218] Библиотеку антител Symplex(tm) получали из В-клеток, отсортированных по отдельным клеткам, у иммунизированных OmniRat(r) крыс, библиотека содержит когнатные пары, кодирующие VH и VL, для каждой отсортированной В-клетки. Конструкции с репертуаром антител, кодирующие полностью иммуноглобулины человека в формате IgGl или IgG2, трансфицировали в клетки Expi2 93, и осуществляли скрининг клеточных супернатантов по связывающим свойствам в высокопропускном формате. Успешные результаты скрининга анализировали посредством секвенирования ДНК и извлекали последовательности ДНК, кодирующее антитела. Выбранные клоны антител экспрессировали и тестировали функционально, как описано ниже. В таблице 1 представлены последовательности нуклеиновой кислоты вариабельного домена тяжелой и легкой цепи клона антитела 1508 6.1508 6. В таблице 2 представлены аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи для указанного клона антитела, и в таблице 4 представлены аминокислотные последовательности CDR тяжелой и легкой цепи. В таблице 3 представлены аминокислотные последовательности константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи к IgGl.
[0219] Из-за использования вырожденных праймеров в Symplex(tm)
клонировании фрагментов кДНК, кодирующих антитела,
корректировали множество миссенс-мутаций на аминоконцах тяжелой и легкой цепей в определенных антителах (например, антителах 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144). В таблице 5 представлены последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи на уровне ДНК из оптимизированного антитела, обозначаемого 15086.16837, 15086.17145 или 15086.17144 (эти три
варианта различаются подвидом изотипа, но имеют идентичные
последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи).
Процесс оптимизации включает согласование аминоконцевой
коррекции с зародышевой линией, а также оптимизацию
использования кодонов. Целями согласования с
последовательностями зародышевой линии человека было IGHV4-31 для вариабельных доменов тяжелых цепей и IGKV3-11 для вариабельных доменов легких цепей.
[022 0] Идентифицировали дополнительные антитела,
отличающиеся различными категориями эпитопов. Последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи этих антител представлены в таблице 9 и таблице 10. Идентифицировали дополнительные функциональные антитела, а их последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи представлены в таблице 12 и таблице 13.
Результаты
[0221] В таблице 1 представлены ДНК последовательности, кодирующие Symplex(tm)-клонированное антитело 1508 6.1508 6.
Последовательность (от N-конца к С-концу)
Белковая последовател ьность VH (SEQ ID N0:3)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGrYWSWTRQHPGMGLEWIGYISrSGSIY YT Р S LKS RLTIS VDT S KNQFS LKLS S VTAADTAVYYCASiDSlVGSMRDriyGQGTLVTVS S
Белковая последовател ьность VL (SEQ ID N0:4)
ЕIVLTQSРATLSLSРGERATLSСRASQS VSSYLAWYQQКРGQAPRLLIYDASNRATGIР А RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPirjTGGGTKVEIK
[0223] В таблице 3 представлены константные области тяжелой и легкой цепей.
[0224] В таблице 4 представлены определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой и легкой цепи, которые содержат антитела 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144. Последовательности CDR в настоящем описании определяли в соответствии с определениями IMGT(r) для CDR1 и CDR2. Для CDR3 тяжелой и легкой цепи определения в настоящем описании включают один дополнительный аминокислотный остаток выше по направлению считывания от IMGT-CDR3 (Cys) и один дополнительный аминокислотный остаток ниже по направлению считывания (Тгр для CDR3 VH, Phe для CDR3 VL).
Таблица 4: Белковые последовательности CDR антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144
[022 6] В таблице б представлены выведенные белковые последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи, которые содержат антитела 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144. CDR представлены полужирным и курсивным начертанием. Следует отметить, что белковая последовательность VL является такое же, как неоптимизированная белковая последовательность VL.
Последовательность (от N-конца к С-концу)
Белковая
последовательность VH (SEQ ID N0:15)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWTRQHPGMGLEWIGY ISYSGSIYYT PSLKSRLTISVDTSKNQFSLKLS S VT AAD TAVYYСASLDSWG SMRDnVGQGTLVTVS S
Белковая
последовательность VL (SEQ ID N0:4)
ЕIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAVSYQQКPGQAPRLLIYDAS NRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSITOPirjTGGGTKV
EIK
[0227] В таблице 7 представлены ДНК последовательности, кодирующие константные области антител в различных изотипических форматах.
LALA
интроны
GGAGGGAGGGTGTCTGCTGGAAGCCAGGCTCAGCGCTCCTGCCTGGACGCAT
(SEQ ID
CCCGGCTATGCAGTCCCAGTCCAGGGCAGCAAGGCAGGCCCCGTCTGCCTCT
NO:17)
TCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTG
GCTTTTTCCCCAGGCTCTGGGCAGGCACAGGCTAGGTGCCCCTAACCCAGGC
CCTGCACACAAAGGGGCAGGTGCTGGGCTCAGACCTGCCAAGAGCCATATCC
GGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCAAAGGCCAAACTCTCCACT
CCCTCAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATTCCAGTAACTCCCAATCTT
CTCTCTGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCC
CAGGTAAGCCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCC
TAGAGTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACACGTCCAC
CTCCATCTCTTCCTCAGCACCTGAAgccgccGGGGGACCGTCAGTCTTCCTC
TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCA
CATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTG
GTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAG
CAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGG
ACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCC
AGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGTGGGACCCGTGGGGTG
CGAGGGCCACATGGACAGAGGCCGGCTCGGCCCACCCTCTGCCCTGAGAGTG
ACCGCTGTACCAACCTCTGTCCCTACAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGT
ACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGAC
CTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGC
AATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCG
ACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCA
GCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC
TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA
Констант
Константная
GCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCA
ная
область
CCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGA
область
тяжелой
ACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACC
тяжелой
цепи IgG4
TTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGA
цепи
(S228P), за
CCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCA
IgG4
исключением
СAAG С С СAG СAACАС СAAG GT G GACAAGAGAGT Т GAGT С САААТAT G GT С С С
(S228P)
интронов
CCATGCCCAcCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCC
(SEQ ID
TGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGT
N0:18)
CACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAAC
TGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG
AGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCA
GGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTC
CCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGC
СACAG GT GTACAC CCTGCCCC CAT С С CAG GAG GAGAT GAC CAAGAAC CAG GT
CAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAG
TGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGC
TGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAG
CAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTG
САСААС СAC ТACACACAGAAGAG CCTCTCCCTGTCTCTG G GTAAA
Констант
Константная
GCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCA
ная
область
CCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGA
область
тяжелой
ACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACC
тяжелой
цепи IgG4
TTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGA
цепи
(S228P),
CCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCA
IgG4
включая
СAAG С С СAG СAACAC СAAG GT G GACAAGAGAGT T G GT GAGAG G С CAG CACAG
(S228P)
интроны
GGAGGGAGGGTGTCTGCTGGAAGCCAGGCTCAGCCCTCCTGCCTGGACGCAC
(SEQ ID
CCCGGCTGTGCAGCCCCAGCCCAGGGCAGCAAGGCAGGCCCCATCTGTCTCC
N0:19)
TCACCCGGAGGCCTCTGACCACCCCACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTG
GATTTTTCCACCAGGCTCCGGGCAGCCACAGGCTGGATGCCCCTACCCCAGG
CCCTGaGCATACAGGGGCAGGTGCTGCGCTCAGACCTGCCAAGAGCCATATC
CGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCAAAGGCCAAACTCTCCAC
TCCCTCAGCTCAGACACCTTCTCTCCTCCCAGATCTGAGTAACTCCCAATCT
TCTCTCTGCAGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCAcCATGCCCAGGTAAG
CCAACCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCTAGAGTAG
CCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACGCATCCACCTCCATCT
CTTCCTCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCC
AAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTG
GTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGG
ATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAA
CAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTG
AACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCA
TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGTGGGACCCACGGGGTGCGAGGGCC
ACATGGACAGAGGTCAGCTCGGCCCACCCTCTGCCCTGGGAGTGACCGCTGT
GCCAACCTCTGTCCCTACAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTG
CCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGG
TCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA
GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCC
TTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGA
ATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACA
GAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Констант
Константная
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCA
ная
область
CCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGA
область
тяжелой
ACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACC
тяжелой
цепи IgG2,
TTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGA
цепи
CCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCA
IgG2
исключением
CAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTC
(SEQ ID
интронов
GAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCT
N0:20)
TCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCAC
GTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGG
Т AC GT G GAC G G С GT G GAG GT G С AT AAT G С СAAGACAAAG С С AC G G GAG GAG С AGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGA CTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCA GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AG GT GTACAC CCTGCCCC CAT С С С G G GAG GAGAT GAC CAAGAAC CAG GT CAG CCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGG GAGAG СAAT G G G CAG С C G GAGAACAAC TACAAGAC CACAC С T С C CAT G С T G G ACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAG GTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
Констант ная
область тяжелой цепи IgG2
(SEQ ID N0:21)
Константная
область
тяжелой
цепи IgG2,
включая
интроны
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCA CCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGA ACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACC TTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGA CCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCA CAAG С С CAG CAACAC CAAG GT G GACAAGACAGT T G GT GAGAG G С CAG С T CAG GGAGGGAGGGTGTCTGCTGGAAGCCAGGCTCAGCCCTCCTGCCTGGACGCAC CCCGGCTGTGCAGCCCCAGCCCAGGGCAGCAAGGCAGGCCCCATCTGTCTCC TCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTG GCTTTTTCCACCAGGCTCCAGGCAGGCACAGGCTGGGTGCCCCTACCCCAGG CCCTTCACACACAGGGGCAGGTGCTTGGCTCAGACCTGCCAAAAGCCATATC CGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCGACCCCAAAGGCCAAACTGTCCAC TCCCTCAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATCCGAGTAACTCCCAATCT TCTCTCTGCAGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGGTAAG CCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCTAGAGTAG CCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCTGGGTGCTGACACGTCCACCTCCATCT CTTCCTCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAA ACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTG GTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACG G C GT G GAG GT G CATAAT G С CAAGACAAAG С CAC G G GAG GAG CAGT T CAACAG CACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAAC GGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCG AGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGTGGGACCCGCGGGGTATGAGGGCCACA TGGACAGAGGCCGGCTCGGCCCACCCTCTGCCCTGGGAGTGACCGCTGTGCC AACCTCTGTCCCTACAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCC GGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTC TTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAA GAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
Констант
CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGT
ная
TGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG
область
AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCC
легкой
С AG GAGAGT GT С AC AGAG С AG GAC AG С AAG GAC AG С AC С T AC AG С С T С AG С A
цепи к
G CAC С С T GAC G С T GAG CAAAG CAGAC TAC GAGAAACACAAAGT CTACGCCTG
(SEQ ID
CGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGG
N0:22)
GGAGAGTGT
[022 8] В таблице 8 представлены белковые последовательности константных областей антител в различных изотипических форматах.
кодирующие вариабельные домены тяжелых и легких цепей антител против TIM-З, используемых для категоризации эпитопов.
AC AT AC AAC G С AGAC T С С GT GAAG GGCCGGTT С AC CAT С T С С AGAGAC AAT T С C AAG AACAC GCTGTTTCTG CAAAT GAACAG С С T GAGAG С C GAG GACAC G G С C GTATAT TAC TGTGCGAAAATTTTTGGGTCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACAGTCTCGAGT
20131 VL
GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCC AC CAT CAAC T G CAAGT С CAG С CAGAGT GT T T TATACAG С T С CAACAATAAGAAC TAC TTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGACA TCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTAACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAG CAATATTATAGTGGTCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
20293 VH
ACGTGACAGGGCGCGCCCAGGTCCAGCTGCAGGAGAGCGGTCCCGGACTGGTGAAGC CATCCCAGACACTGAGCCTGACTTGTACTGTGAGCGGCGGTAGCATCTCCAGCGGCG GCTACTATTGGTCCTGGATCAGGCAGCACCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCT ACATCTACTATAGCGGCTCTATCTACTATAACCCTTCCCTGAAGAGCCGGGTGACCA TCTCTGTGGACACATCCAAGAATCAGTTCTATCTGAAGCTGTCTTCCGTGACCGCCG CTGATACAGCCGTGTACTATTGCGCCTCACTGATGGTCTGGGGGGTCATGGGCGATT ACTGGGGGCAGGGCACACTGGTCACAGTCTCGAGT
20293 VL
GAGATTGTGCTGACCCAGTCTCCCGCCACCCTGTCTCTGAGTCCTGGCGAGAGAGCC ACCCTGAGCTGCAGAGCCTCTCAGTCCGTGTCCAGCTATCTGGCCTGGTATCAGCAG AAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCTCCAATAGAGCCACCGGC ATCCCTGCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCTCC AGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGCGGTCCGACTGGCCT С С TACAT T T G G С CAAG G CAC CAAG GT G GAAAT CAAG
15105 VH
CAGGTCACCTTGAAGGAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAGGCCCTCGGAGACCCTGTCC CTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGC CAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATAGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACC AACTACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GAGT CAC CATAT CAGTAGAC GC GAC CAAGAAA CAATTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGT GCGAGATATTGGGAGCTCCCTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCG AGT
15105 VL
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC AC CAT CAC TTGCCGGG CAAGT CAG G G CAT TAGAAAT GAT T TAG G С T G GTAT CAG CAG AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGC AG С С T G CAG С С T GAAGAT T T T G CAAC T TAT TAC T GT С TACAG CATAATAGT TAC С С T CCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG
15107 VH
CAGATGCAGCTGGTGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCC CTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGC CAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACC AACTACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GAGT CAC CAT GT CAGT T GACAC GT C CAAGCAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGT GCGAGATGGTGGGAGCTTCCTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT
15107 VL
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC AC CAT CAC TTGCCGGG СAAGT СAG G G CAT TAGAAAT GAT T TAG G С T G GTAT СAG СAG AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGC AG С С T G CAG С С T GAAGAT T T T G CAAC T TAT TAC T GT С TACAG CATAATAGT TAC С C G TGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG
15109 VH
CAGATGCAGCTGGTGCAATGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCC CTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGC CAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACC AACTACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GAGT CAC CATAT CAGTAGACAC GT C CAAGAAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGT GCGAGGTTTTACTATGCTCCGAACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACC GTCTCGAGT
15109 VL
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC ACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGACAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGC AG С С T G CAG С С T GAT GAT T T T G CAAC T TAT TAC T G С CAACAGTATAATAGT TAT T С C ACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
15174 VH
CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCC CTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAATTACTACTGGGGCTGG ATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGG AACAC CTACTACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GAGT CAC CATAT С C GTAGACAC GT С C AAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTAT TACTGTGCGAGACAGACAGTGGCTGGCCCCCTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACC CTGGTCACCGTCTCGAGT
15174 VL
GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC ACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAACTCACTCTCACCATCAGC AG С С T G CAG С С T GAT GAT T T T G CAAC T TAT TAC T G С CAACAGTATAATAGT TAT T СA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAG
15175 VH
CAGGTCCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAG GTCTCCTGCAAGGCTGCTGGATACACCTTAACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGA CAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAGTGGTGGC T CAAACAAT G CACAGAAGT T T CAG G G CAG G GT CAC CAT GAC CAG G GACAC GT C CAT C AG CACAG С С TACAT G GAG С T GAG CAG G С T GAGAT С T GAC GACAC G G С C GT GTAT TAC TGTGCGAGAGAGGGTCCCCTGTATAGCAGTGGCTGGTACGAGGGTGCTTTTGATATC TGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT
15175 VL
GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC ACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGTTGGTTGGCCTGGTATCAGCAG
AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGC AG С С T G СAG С С T GAT GAT T T T G СAAC T TAT TAC T G С СAACAGTATAATAGT TAT T С T CCGGGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAG
15260 VH
CAGATGCAGCTACAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCA CTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGG ATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCC AAGTGGTATTCTGCTTTTGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGAC ACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCT GTGTATTACTGTGCAAGAGAGGGTAGCAGTGGCTGGTACGGATACGTCCACCACTGG GGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT
15260 VL
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGTATCTCTGGGAGAAACTGTC AC CAT C GAAT GT C GAG CAAGT GAG GACAT T TACAAT G GT T TAG CAT G GTAT CAG CAG AAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAATAGCTTGCATACTGGG GTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACACAGTATTCTCTCAAGATAAAC AGCCTGCAATCTGAAGATGTCGCAAGTTATTTCTGTCAACAGTATTACGATTATCCT CCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
15284 VH
106
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCC CTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCTTCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGG ATCCGCCAGCCCCCTGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGATCTTCTATTATAGTGGG ACCACCTAC TACAAC CCGTCCCT CAAGAGT C GAGT CAC CATAT С C G CACACAC GT С C AAGAGCCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTAT TACTGTGCGAGAGGGGGAGAATATTTTGACCGGTTACTCCCCTTTGACTACTGGGGC CAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT
15284 VL
107
GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC AC CAT CAC TTGCCGGGC CAGT CAG G G CAT TAG CAGT TAT T TAG С С T G GTAT CAG СAA AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGGAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGC AG С С T G CAG С С T GAAGAT T T T G CAAC T TAT TAC T GT CAACAG С T TAATAGT TAC С СA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
15299 VH
116
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGA CTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGC CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGC ACATAC TAC G CAGAC T С C GT GAAG GGCCGGTT CAC CAT С T С CAGAGACAAT T С CAAG AACAC G С T GTAT С T G CAAAT GAACAG С С T GAGAG С C GAG GACAC G G С C GTATAT TAC TGTGTGAAAGATGGGGCAGGAGGCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC GTCTCGAGT
15299 VL
117
GATATTGTGATGACGCAGTCTTCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC AC CAT CAC TTGCCGGG CAAGT CAG G G CAT TATAAAT CAT T TAG G С T G GTAT CAG CAT AAACCAGGGAAAGCCCCTAATCGCCTAATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGC AGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACGGCATAATAGTTACCCT
CCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG
15353 VH
126
CAGGTGCAGCTACAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCC CTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTGGTCACTACTGGAGCTGG ATCCGCCAGCACCCAGGGAGGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGG AG CAT С TAC TACAAC CCGTCCCT CAAGAGT С GAC T TAC СATAT СAGTAGACAC GT С T AAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTAT TACTGTGCGAGTTATTACTATGCCAGTAGTGGTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAA GGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT
15353 VL
127
GAAACGACACTCACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCC ACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAG AAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGC ATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGC AGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCT CCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
15354 VH
136
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGA CTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAATTATGCCATGAGCTGGGTCCGC CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTCGTGGTGGTAGC ACATTCTTCGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AG CAC G С T GTAT С T G CAAAC GAACAG С С T GAGAG С C GAG GACAC G G С C GTATAT TAC TGTGCGAAAGGGGGCCCGTTGTATAACTGGAACGACGGTGATGGTTTTGATATCTGG GGCCAAGGGACCACGGTCACAGTCTCGAGT
15354 VL
137
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCC ACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAG AAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGT ATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGC AGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCACTTTATTACTGTCAGCAGTATGATAACTGGCCT CCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
17244 VH
146
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGA CTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCCGC CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTGGTGGTGGTGGTTCC ATATAC TAC G CAGAC T С T GT GAAG G G С C GAT T CAC CAT С T С CAG G GACAAC G С CAAG AACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTTC TGTGCGAGAGGGAACTGGGGATCGGCGGCTCTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATG GTCACGGTCTCGAGT
17244 VL
147
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC ACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAACAATTATTTAGCCTGGTTTCAGCAG AAACCAGGGAGAGCCCCTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGG GTCCCATCGAAGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGC AG С С T G CAG С С T GAAGAT T T T G CAAC T TAT TAC T G С CAACAGTATAATAGT TAC С С T CCAACTCTCGGCCCTGGGACCAACGTGGATATCAAA
17245 VH
156
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGA CTCTCCTGTACAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGC
CAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGC G СATAC TAC G СAGAC T С С GT GAAG GGCCGGTT CAC CAT С T С СAGAGACAAT T С СAAG AACAC G С T GTAT С T G CAAAT GAACAG С С T GAGAG С C GAG GACAC G G С C GTATAT TAC TGTGTGAAAGATGGGGCAGGAGGCTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACC GTCTCGAGT
17245 VL
157
GACATCCAGTTGACCCAGTCCCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC AC CAT CAC TTGCCGGG CAAGT CAG G G CAT TAGAAAT CAT T TAG G С T G GTAT CAG CAG AAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTAATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGG GTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGC AG С С T G CAG С С T GAAGAT T T T G CAAC T TAT TAC T GT С TACAG CATAATAGT TAC С С T CCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG
[0230] В таблице 10 представлены выведенные белковые последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи антител против TIM-З, используемых для категоризации эпитопов. CDR представлены полужирным и курсивным начертанием.
VSS
15109 VL
EIVLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGTAPKLLIYJCASSLESG VPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSTSITFGGGTKVEIK
15174 VH
QVQLQQSGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSG WTYYNPSLKSRVTISVDTS KNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQrVAGPiFDYWGQGT
LVTVSS
15174 VL
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITСRASQSISSWLAWYQQКPGKAPKVLIY2CASSLESG VPSRFSGSGSGTELTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSTSFITFGPGTKVDIK
15175 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAAGYTiirGyyMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGG SNNAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGPirSSGIVyEGAFDI 1VGQGTMVTVSS
15175 VL
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYJCASSLESG VPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYWSrSPGirFGGGTKVEIK
15260 VH
QMQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRrrYKS KWYSAFAVSVKS RITINPDTSKNQFSLQLNSVT P EDTAVYYCAKEGSSGWYGYVHHW
GQGTLVTVSS
15260 VL
EIVLTQSPASLSVSLGETVTIECRASEDIYUGLAWYQQKPGKSPQLLIYMfllfSLHTG VPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDVASYFCQQYYDYPPrFGQGTKVEIK
15284 VH
108
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSFSSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGIFYYSG 2TYYNP S LKS RVT ISAHT SKSQFSLKLSS VT AAD T AVY Y CARGGE YFDRLiPFDYWG
QGTLVTVSS
15284 VL
109
EIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLESG VPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQiNSYPFrFGPGTKVDIK
15299 VH
118
QVQLVE S GGGLVQ P GGS LRL S CTAS GFTFSSYAMS WVRQAP GKGLEWVS AIGGSGGS TYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDGAGGFDnVGQGTLVT
VSS
15299 VL
119
DIVMTQSSSSLSASVGDRVTITCRASQGIINHLGWYQHKPGKAPNRLIYAASSLQSG VPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLRHNSYPPrFGQGTKVEIK
15353 VH
128
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSINSGGHYWSWIRQHPGRGLEWIGYirrSG SIYYNP S LKS RLTISVDT S KNQFS LKLS SVTAADTAVYYCASYYYASSGDAFDIWGQ
GTMVTVSS
15353 VL
129
ETTLTQSPATLSLSPGERATLSСRASQSVSSYLAWYQQКPGQAPRLLIYDASN RATG IP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIК
15354 VH
138
QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFrFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGGS TFFAD S VKGRFTIS RDN S KS T L YLQTN S LRAEDTAVYYCAKGGPiYNWIfDGDGFDIiy
GQGTTVTVSS
15354 VL
139
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATG IPARFSGTGSGTEFTLTISSLQSEDFALYYCQQYDNWPPWTFGQGTKVEIК
17244 VH
148
QVQLQESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFrFSDrYMTWIRQAPGKGLEWISriSGGGGS lYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFCARGNlVGSAAiDIiyGQGTM
VTVSS
17244
149
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNyLAWFQQKPGRAPKSLIYAASSLQSG
VPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQyUSyPPriGPGTNVDIK
17245 VH
158
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVS AIGGSGGS AYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDGAGGFDnVGQGTLVT
VSS
17245 VL
159
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIPJfHLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSG VPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCiQHNSTPPrFGQGTKVEIK
[0231] В таблице 11 представлены CDR категоризационнх антител против TIM-3. SEQ ID NO:для CDR представлены под каждой последовательностью. Последовательности CDR в настоящем описании определяли в соответствии с определениями IMGT(r) для CDR1 и CDR2. Для CDR3 тяжелой и легкой цепи определения в настоящем описании включают один дополнительный аминокислотный остаток выше по направлению считывания от IMGT-CDR3 (Cys) и один дополнительный аминокислотный остаток ниже по направлению считывания (Тгр для CDR3 VH, Phe для CDR3 VL).
Таблица 11: Белковые последовательности CDR
категоризационных антител против TIM-3
Антител о
HCDR1
HCDR2
HCDR3
LCDR1
LCDR 2
LCDR3
20131
GFTLSSYA
ISGSGGST
CAKIFGSYYFDYW
QSVLYSSNN KNY
WTS
CQQYYSGPPT F
20293
GGSISSGG YY
IYYSGSI
CAS LMVWGVMGDYW
QSVSSY
DAS
CQQRSDWPPT F
15105
GGSFSGYY
INHSGST
CARYWELPDYW
QGIRND
AAS
CLQHNSYPPT F
15107
GGSFSGYY
INHSGST
CARWWELPDYW
QGIRND
AAS
CLQHNSYPWT F
15109
GGSFSGYY
INHSGST
CARFYYAPNFDYW
QSISSW
KAS
CQQYNSYSTF
15174
GGSISSSN YY
IYYSGNT
CARQTVAGPLFDYW
QSISSW
KAS
CQQYNSYSFT F
15175
GYTLTGYY
INPNSGGS
CAREGPLYSSGWYEGA FDIW
QSISSW
KAS
CQQYNSYSPG LTF
15260
GDSVSSNS AA
TYYRSKWY S
CAREGSSGWYGYVHHW
EDIYNG
NAN
CQQYYDYPPT F
100
101
102
103
104
105
15284
GGSFSSSS YY
FYYSGTT
CARGGEYFDRLLPFDY W
QGISSY
AAS
CQQLNSYPFT F
110
111
112
113
114
115
15299
GFTFSSYA
IGGSGGST
CVKDGAGGFDYW
QGIINH
AAS
CLRHNSYPPT F
120
121
122
123
124
125
15353
GGSINSGG HY
IYYSGSI
CAS YYYAS S GDAFDIW
QSVSSY
DAS
CQQRSNWPPT F
130
131
132
133
134
135
15354
GFTFSNYA
ISGRGGST
CAKGGPLYNWNDGDGF DIW
QSVSSN
GAS
CQQYDNWPPW TF
140
141
142
143
144
145
17244
GFTFSDYY
ISGGGGSI
CARGNWG SAAL DIW
QGINNY
AAS
CQQYNSYPPT L
150
151
152
153
154
155
17245
GFTFSSYA
IGGSGGSA
CVKDGAGGFDYW
QGIRNH
AAS
CLQHNSYPPT F
160
161
162
163
164
165
[0232] В таблице 12 представлены ДНК последовательности, кодирующие вариабельные домены тяжелых и легких цепей дополнительных антител против TIM-З, которые идентифицировали в качестве функциональных антител. Последовательности для функциональных антител 20131 и 2 02 93 представлены выше в таблице 9.
GAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACC ATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTGGT С С GAT CAC С T T С G G С СAAG G GACAC GAC T G GAGAT TAAG
1941 6 VH
176
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTC ACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGC CAG CAC С CAG G GAAG G G С С T G GAGT G GAT T G GGTACAT C TAT TACAGT G G GAG CAT С TAC TACAAC С C GT С C CT CAGGAGT C GACT TAC CATAT CAGTAGACAC GT CTAAGAAC CAGT T C TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGACTCCT TATTACTATGGTTCGGGGAGTTATGGGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACTGTC TCGAGT
1941 6 VL
177
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC CTCTCCTG CAG G G C CAGT CAGAGT GT TAACAAC TACTTAGCCTGGTAC CAACAGAAAC С T GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCC AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCCATCACCTTCGGCCAA G G GACAC GAC T G GAGAT TAAA
1956 8 VH
186
CAGATGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCTCAGACCCTGTCCCTC ACCTGCACTGTGTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGTTGGTTACTACTGGAACTGGATCCGC CAG CAC С CAG G GAAG G G С С T G GAGT T CAT T G GGTACAT C TAT TACAGT G G GAG CAT С TAC TACAATСCGT СCCT CAAGAGT CGAGTTACCATAT СCGTAGACACGT CTAAGAACCAGTT C TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCCTATATTACTGTGCGAGCGTC GGTATAGTGGGAGCCTCCTACTTTGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTCTCG AGT
1956 8 VL
187
GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCC AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTATCACCTTCGGCCAA G G GACAC GAC T G GAGATCAAG
2018 5 VH
196
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTC TCCTGTGCAGTCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCT CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACAAC G CAGAC T С C GT GAAG GGCCGGTT CAC CAT С T С CAGAGACAAT T С CAAGAACAC G С T GTAT CTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAATTTTT GGGTCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT
2018 5 VL
197
GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACC AT CAAC T G CAAGT С CAG С CAGAGT GT T T TATACAG С T С CAATAATAAGAAC TACTTAGCT TGGTACCAGCAGAAATCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGG GAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACC ATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTGGT CCACCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
2030
206
CAGGTCCAGCTACAGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCATCCTGGGGGGTCCCTAAGACTC
0 VH
TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTTGACACCTATGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCT CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGCGGTAGTGGTGGTAGCACATACTAC G СAGAC Т С С GT GAAG GGCCGGTT CAC CAT С T С CAGAGACAAC T С CAAGAACAC G С T GTAT С T G CAAAT GAACAG С С T GAGAGAC GAG GACAC G G С C GTATAT TACTGTGC GAAGATAGT G GGAGTTACCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACGGTCTCGAGT
2030 0 VL
207
GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACC AT CAAC T G CAAGT С CAG С CAGAGT GT T T TATACAG GT С CAACAATAAGAAC TAT T TAG С T TGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGG GAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACC ATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTGGT С C GAT CAC С T T C G G С CAAG G GACAC GAC T G GAGAT TAAG
2036 2 VH
216
CAGGTCACCTTGAAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTC ACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTCATTACTGGAGCTGGATCCGC CAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTCTTACAGTGGGAGCACCTAC TACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GACT TAC CATAT CAGTAGACAC GT CTAAGAAC CAGT T C TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGACCGCG TATTACGATATTTTGACTGGTTACCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACG GTCTCGAGT
2036 2 VL
217
GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCGACAGGGCCACTGGCATCCCAGCC AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGATCACCTTCGGCCAA G G GACAC GAC T G GAGATCAAG
2062 1 VH
226
CAGGTGCAGCTACAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTC ACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGC CAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTCTTATAGTGGGAGTATCTAC TACAAC С C GT С C CT CAAGAGT C GAGT TAC CATAT CAGTAGACAC GT CTAAGAAC CAGT T C TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCACGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGACCGCG TATTACGATCTTTTGACTGGTTACCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACG GTCTCGAGT
2062 1 VL
227
GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCC AGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCT GAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGATCACCTTCGGCCAA G G GACAC GAC T G GAGAT TAAG
;0233] В таблице 13 представлены выведенные белковые
последовательности вариабельных доменов тяжелых и легких цепей дополнительных антител против TIM-З, которые идентифицировали как функциональные антитела. CDR представлены полужирным и курсивным начертанием. Последовательности функциональныю антител
[0234] В таблице 14 представлены CDR дополнительных
функциональных антител против TIM-3. SEQ ID ЫО:для CDR представлены под каждой последовательностью. Последовательности CDR в настоящем описании определяли в соответствии с определениями IMGT(r) для CDR1 и CDR2. Для CDR3 тяжелой и легкой цепи определения в настоящем описании включают один дополнительный аминокислотный остаток выше по направлению считывания от IMGT-CDR3 (Cys) и один дополнительный аминокислотный остаток ниже по направлению считывания (Тгр для CDR3 VH, Phe для CDR3 VL) . Последовательности функциональных антител 20131 и 20293 представлены выше в таблице 11.
Таблица 14: Белковые последовательности CDR дополнительных функциональных антител против TIM-3
аффинности связывания со значениями KD приблизительно 19-2 3 нМ. "IgGl LALA" относится к присутствию мутаций "LALA" в тяжелой цепи (L234A/L235A, нумерация в соответствии со схемой нумерации Eu (Edelman et al. , Proc. Natl. Acad. USA 63:78-85 (1969)), которые, как известно, снижают эффекторную функцию Fc-области антител IgGl (Armour et al., Eur J Immunol. 29(8) :2613-24 (1999); Hezareh et al., J Virol. 75 (24) :12161-68 (2001); и Hessel et al. , Nature 449(7158):101-104 (2007)). Материалы и способы
[023 6] Кинетический анализ связывания осуществляли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используя Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) в комбинации с прибором Ibis МХ96 SPR (IBIS Technologies, The Netherlands). Анализ визуализации поверхностного плазмонного резонанса осуществляли на SPR датчиках G-a-hu-IgG Fc SensEye(r) (Ssens BV, The Netherlands). Антитела против TIM-3 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 разводили до 0,15 мкг/мл в PBS-T (1х PBS с 0,05% Tween 20, рН 7,4) . Антитела наносили на G-a-hu-IgG Fc SensEye(r) в течение 15 минут с использованием Continuous Flow Microspotter. После нанесения, SensEye(r) располагали в биологическом датчике IBIS МХ96 и осуществляли кинетический анализ посредством применения так называемой кинетической титровальной серии (Karlsson et al., Anal Biochem. 349(1) :136-47 (2006)), где мономерный антиген ECD TIM-З человека (Aero Biosystems) впрыскивали в увеличивающихся концентрациях от 2 нМ до 100 нМ без применения стадий регенерации поверхности после каждого впрыска антигена. Ассоциацию антигена осуществляли в течение 5 минут, а диссоциацию антигена осуществляли в течение 45 минут. Зарегистрированные ответы связывания аппроксимировали к простой модели связывания Ленгмюра 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2 для вычисления констант скорости ассоциации (kon или ка) , скорости диссоциации (koff или KD) и аффинности (KD) . Результаты
[0237] Кинетические измерения, которые выполняли в системе IBIS, демонстрировали, что антитела 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 в четырех различных изотипических форматах, все имели очень схожую кинетику связывания со значениями KD в диапазоне 19-2 3 нМ (таблица 15).
vitro
[0238] Панель уникальных m7Ab подкласса IgGl клонировали, как описано выше (пример 1), и осуществляли их скрининг по функциональной активности в одной концентрации (25 мкг/мл) в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов (MLR) . Наиболее функциональное антитело против TIM-3 (15086.15086) переформатировали в подклассы IgGl LALA (15086.16837), IgG2 (15086.17145) и IgG4 (15086.17144).
[0239] Этот пример демонстрирует функциональную активность in vitro для антител против TIM-З различных подклассов IgG посредством индукции дозозависимой секреции цитокинов в однонаправленном MLR анализе. Материалы и способы
[024 0] В однонаправленном MLR анализе дендритные клетки (DC) и С04-положительные (CD4+) Т-клетки, выделенные у двух различных здоровых доноров, совместно культивируют, чтобы индуцировать реакцию на конкретный аллоантиген, что ведет к
продуцированию цитокинов и активации/пролиферации Т-клеток.
Дендритные клетки дифференцировали из CD14+ моноцитов
посредством б суток культивирования с 2 0 нг/мл гранулоцитарно-
макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и 20
нг/мл интерлейкина-4 (IL-4) и смешивали в соотношении 1:10 с
CD4+ Т-клетками, выделенными из мононуклеарных клеток
периферической крови (РВМС) из материала здорового донора. После
5 суток культивирования собирали супернатанты и определяли
уровни IFN-y и TNF-a с использованием анализа
электрохемилюминесценции цитокинов Meso Scale. Вэ том анализе используют электрохемилюминесцентные метки (SULFO-TAG), которые конъюгированы с идентифицирующими антителами. Когда на пластинчатые электроды подают ток, метка SULFO-TAG испускает свет, и интенсивность света измеряют для того, чтобы количественно определять цитокины в образцах. Результаты
[0241] Кривые доза-эффект в однонаправленном MLR анализе для антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144 представлены на фиг. 1 и 2. Кривые доза-эффект создавали посредством двухкратного титрования антител при начальной концентрации 50 мкг/мл. Каждая точка на графике представляет усредненное для трех повторений, причем величина ошибки представляет SEM.
[0242] Антитела 15086.15086 и 15086.17145 (варианты IgGl и IgG2) демонстрировали схожую функциональность и индуцировали дозозависимое увеличение в IFN-y и TNF-a в однонаправленном MLR анализе. Антитело 15086.17144 (вариант IgG4) индуцировало ответ только в двух наивысших концентрациях, тогда как у антитела 15086.16837 (IgGl LALA вариант) функциональность не наблюдали.
Пример 4: Эффект антитела против TIM-З, оказываемый на очищенные субпопуляции клеток
[0243] Сначала сообщали, что продуцирующие IFN-y CD4+ Т-хелперные клетки и CD8+ (СБ8-положительные) Т-цитотоксические клетки избирательно экспрессируют TIM-З, для которого продемонстрировано, что он является негативным регулятором Т
клеточного ответа. Впоследствии обнаружена высокая эндогенная экспрессия TIM-З в дендритных клетках, моноцитах и естественных киллерных (NK) клетках (Freeman et al., Immunol Rev 235:172-89 (2010); Kuchroo et al., Nat Rev Immunol 8:577-580 (2008); Anderson et al., Science 318:1141-1143 (2007); и Da Silva et al. , Cancer Immunol Res 2:410-422 (2014)). Этот пример показывает, как связывание TIM-З антителами против TIM-3 оказывает прямой эффект на дендритные клетки, что ведет к увеличению секреции TNF-a. Материалы и способы
[0244] РВМС, наивные CD4+ Т-клетки и наивные CD8+ клетки выделяли из материала здорового донора. Дендритные клетки от трех здоровых индивидуумов-доноров получали, как описано ранее в примере 3. Субпопуляции выделенных клеток инкубировали в течение 5 суток с 10 мкг/мл указанных антител и определяли уровни TNF-a с использованием анализа электрохемилюминесценции цитокинов Meso Scale.
Результаты
[0245] Прямой эффект антител 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144, оказываемый на субпопуляции очищенных клеток, представлен на фиг. 3, где каждый столбик представляет усредненное для пяти повторений и величина ошибки представляет SEM. Результаты демонстрируют, что присутствие IgGl (1508 6.1508 6) или IgG2 (15086.17145) варианта антитела против TIM-З вело к увеличению секреции TNF-a дендритнысми клетками ото всех трех доноров. Схожий эффект наблюдали в популяции РВМС, содержащей несколько субпопуляций клеток, экспрессирующих TIM-3 (например, моноциты и NK-клетки). IgGl LALA (15086.16837) и IgG4 (1508 6.17144) варианты оказывали только минимальный эффект на секрецию TNF-a. Ни одно из тестированных антител не оказывало эффекта на наивные CD4+ Т-клетки или наивные CD8+ Т-клетки.
Пример 5: Проточный цитометрический анализ антител против TIM-З на блокирующую фосфатидилсерин активность
[0246] Этот пример иллюстрирует, как антитело против TIM-3 по изобретению [15086.17145] тестировали на блокирующую
фосфатидилсерин (PtdS) активность посредством выполнения проточного цитометрического конкурентного анализа с использованием апоптозных клеток с поверхностью, положительной по фосфатидилсерину, и меченного флуорохромом растворимого TIM-3.
Материалы и способы
[0247] Блокирующую фосфатидилсерин активность изучали в клеточном анализе, в котором Т-клетки Jurkat индуцировали проходить апоптоз посредством обработки ставроспорином (из Streptomyces sp. , Sigma-Aldrich, USA) . Во время апоптоза происходит транслокация PtdS с цитоплазматической стороны плазматической мембраны на клеточную поверхность, что делает возможным связывание R-PE-меченного химерного белка TIM-3 человека-Fc, подлежащего анализу посредством проточной цитометрии. Коммерчески доступный рекомбинантный химерный белок TIM-3-Fc (R &D Systems, USA) конъюгировали с R-PE с использованием Lightning-Link(r) R-Phycoerythrin Conjugation Kit
(Innova Biosciences, UK). Для каждой концентрации антитела, подлежащей тестированию, 25 мкл разведения TIM-3-PE
(соответствует приблизительно 0,33 мкг TIM-3-Fc) смешивали с 25 мкл антитела (начиная с конечных 2 0 мкг/мл) в буфере для связывания Annexin V (BD Pharmingen(tm), USA) и инкубировали при комнатной температуре (RT) в течение 2 0 минут перед добавлением к клеткам. Т-клетки Jurkat культивировали в присутствии 1 мкМ ставроспорина в течение 2 ч, промывали один раз в RT буфере для связывания и для каждого теста 2x105 клеток в 50 мкл буфера для связывания комбинировали со смесью антитела/Т1М-3-РЕ. После 15 мин инкубации при RT добавляли 100 мкл буфера для связывания, клетки осаждали посредством центрифугирования и пеллеты ресуспендировали в 100 мкл буфера для связывания для регистрации. Связывание TIM-3-PE с апоптозными клетками количественно определяли посредством проточной цитометрии с обнаружением флуоресценции РЕ (MFI). Параллельно экспозицию PtdS на поверхностях клеток, обработанных ставроспорином, подтверждали посредством окрашивания Annexin V-PE (РЕ Annexin V
Keytruda(r) (пембролизумаб; Merck & Co., Inc.) использовали в качестве отрицательного контроля для связывания TIM-3/блокирования PtdS и эталонное антитело против TIM-3 ABTIM3
[18571.18571] (W0 2015/117002 Al; Novartis AG) использовали в качестве положительного контроля для связывания TIM-3/блокирования PtdS. Кроме того, другое антитело против TIM-3
[15338.15338], которое ранее идентифицировали как не блокирующее антитело, также использовали в качестве отрицательного контроля для блокирования PtdS. Результаты
[0248] Результаты конкурентного эксперимента представлены на фиг. 4. Антитело против TIM-3 [1508 6.17145] способно ингибировать взаимодействие растворимого TIM-3-Fc с PtdS, представленным на клетках, в зависимости от дозы (фиг. 4А) . При 3,125 мкг/мл оно блокирует связывание TIM-3-Fc с PtdS-положительными клетками до 2% связывания, обнаруживаемого в присутствии не блокирующего антитела против TIM-3 [15338.15338]
(фиг. 4В) . Эталонное антитело против TIM-3 [18571.18571] способно блокировать связывание до 3,2% при той же концентрации
(фиг. 4С) . Результаты для отрицательного контрольного антитела против PD-1 Keytruda(r) представлены на фиг. 4D.
Пример 6: Клонирование аналогов эталонного антитела против
TIM-3
[0249] Эталонные аналоги антител против TIM-3 ABTIM3 и тАЫ5 используют в нескольких примерах в настоящем описании. Эталонные аналоги создавали как описано ниже.
[0250] Аминокислотные последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи из ABTIM3 и тАЫ5 получали из патентных заявок, приведенных далее в таблице 16. Аминокислотные последовательности фрагментов вариабельной тяжелой цепи (VH) и вариабельной легкой цепи (VL) подвергали обратной трансляции в ДНК последовательности с использованием кодонов человека. Соответствующие ДНК фрагменты затем синтезировали и клонировали в экспрессирующие векторы, содержащие константные области
тяжелых цепей человека (любого одного из четырех различных изотипических форматов: IgGl, IgGl-LALA, IgG2 или IgG4) или константные области легких цепей к человека, что вело к полноразмерным последовательностям тяжелых и легких цепей антител. Для того чтобы предотвращать обмен плечами Fab в варианте IgG4, остаток серина в положении 22 8 (нумерация EU) заменяли на пролин (Angal et al. , Mol. Immunol. 30:105-108 (1993)). Клетки CHO трансфицировали получаемыми экспрессирующими плазмидами с использованием стандартной системы экспрессии белка. После экспрессии антитела, соответствующие антительные супернатанты очищали с использованием стандартной очистки хроматографией на колонке с белком А.
Пример 7: Функциональная оценка in vitro для дополнительных антител против TIM-З в однонаправленном MLR анализе
[0251] Этот пример демонстрирует функциональную активность in vitro для девяти дополнительных антител против TIM-3 посредством индукции дозозависимой секреции IFN-y в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов (MLR) .
Материалы и способы
[02 52] Однонаправленный MLR анализ проводили, как описано выше в примере 3. Вкратце, дендритные клетки (DC) и CD4+ Т
клетки совместно культивировали в течение 5 суток в присутствии указанных антител. После 5 суток культивирования собирали супернатанты и определяли уровни IFN-y с использованием анализа электрохемилюминесценции IFN-y Meso Scale. Результаты
[02 53] Кривые доза-эффект для 9 дополнительных антител против TIM-З представлены на фиг. 5. Все 9 антител индуцировали дозозависимое увеличение уровней IFN-y в этом анализе. Стоит отметить, что эффект не наблюдали у эталонных антител ABTIM3 и тАЫ5. Кривые доза-эффект создавали посредством двухкратного титрования антител с начальной концентрацией 100 мкг/мл. каждая точка на графике представляет усредненное для трех повторений и величина ошибки представляет SEM.
Пример 8: функциональная оценка in vitro для дополнительных антител против TIM-З в двунаправленном MLR анализе
[02 54] Этот пример демонстрирует функциональную активность in vitro для 10 антител против TIM-З посредством индукции дозозависимой секреции IFN-y в анализе двунаправленной реакции смешанных лимфоцитов (MLR).
Материалы и способы
[02 55] В двунаправленном MLR анализе мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) от двух различных здоровых доноров совместно культивировали для того, чтобы индуцировать реакцию на конкретный аллоантиген, ведущую к продуцированию цитокинов и активации/пролиферации Т-клеток. РВМС от двух различных доноров смешивали в соотношении 1:1. После 5 суток культивирования собирали супернатанты и определяли уровни IFN-y с использованием анализа электрохемилюминесценции цитокинов Meso Scale.
Результаты
[0256] Кривые доза-эффект для 10 антител против TIM-3 представлены на фиг. 6 для одной пары доноров. Все антитела против TIM-З индуцировали дозозависимое увеличение уровней IFN-y в этом анализе. Стоит отметить, что не наблюдали эффект эталонных антител ABTIM3 и тАЫ5. Кривые доза-эффект создавали посредством двухкратного титрования антител с начальной
Пример 9: функциональная оценкя in vitro для дополнительных антител против TIM-З в анализе дендритных клеток
[02 57] Этот пример демонстрирует функциональную активность in vitro для 9 антител против TIM-З посредством индукции дозозависимой секреции TNF-a дендритными клетками, полученными из моноцитов.
Материалы и способы
[0258] CD14+ моноциты выделяли из мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) из материала здорового донора. Дендритные клетки (DC) проходили дифференцировку из CD14+ моноцитов за б суток культивирования с 2 0 нг/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и 20 нг/мл интерлейкина-4 (IL-4) . Полученные из моноцитов дендритные клетки собирали и культивировали в течение 5 суток в присутствии указанных антител. После 5 суток культивирования собирали супернатанты и определяли уровни TNF-a с использованием анализа электрохемилюминесценции TNF-a Meso Scale.
Результаты
[0259] Кривые доза-эффект для 9 дополнительных антител против TIM-З представлены на фиг. 7. Все 9 антител против TIM-3 индуцировали дозозависимое увеличение уровней TNF-a для полученных из моноцитов дендритных клеток у двух независимых доноров. Следует отметить, что не наблюдали эффект эталонных антител ABTIM3 и тАЫ5. Кривые доза-эффект создавали посредством двухкратного титрования антител с начальной концентрацией 100 мкг/мл. Каждая точка на графике представляет усредненное для трех повторений и величина ошибки представляет SEM.
Пример 10: Измерение аффинностей антител к TIM-З человека и яванского макака
[02 60] Этот пример демонстрирует аффинности связывания Fab фрагментов против TIM-З с внеклеточными доменами TIM-З человека и яванского макака, как измеряют посредством поверхностного
[02 61] Кинетический анализ связывания осуществляли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используя Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) в комбинации с прибором IBIS МХ96 SPR (IBIS Technologies, The Netherlands).
[02 62] Fab фрагменты против TIM-3 создавали из вариантов со
скорректированной последовательностью для выбранных антител в
формате IgGl LALA с использованием стандартных наборов для
ферментативного расщепления (Genovis, Sweden). Fab фрагменты
почечают как Fab [номер антитела]. Аминокислотная
последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, используемя для Fab 1508 6, представляет собой скорректированную последовательность, представленную в SEQ ID N0:7. TIM-З кДНК, кодирующую внеклеточный домен TIM-З человека и яванского макака, синтезировали и клонировали в вектор, содержащий промотор CMV и последовательность Fc IgGl человека (АА Р101-К330), что вело к С-концевому слиянию Fc IgGl с клонированным ECD TIM-З. Слитые конструкции TIM-3-Fc создавали посредством стандартных способов ПЦР и инженерии, и осуществляли временю экспрессию белка в 2 мл культуре с использованием экспрессирующей системы ExpiCHO(tm). слитые конструкции TIM-3 человека-Fc собирали после 9 суток и супернатанты тестировали на аффинность связывания с Fab фрагментами против TIM-З посредством SPR. Антигены очищали с использованием стандартных процедур и захватывали на G-a-hu-IgG Fc SensEye(r) (Ssens BV, The Netherlands) в течение 15 минут с использованием Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) . После нанесения, SensEye(r) располагали в биологическом датчике IBIS МХ96, оставшиеся участки захвата блокировали и захваченные белки фиксировали на поверхности с использованием набора FixIT (Ssens BV, The Netherlands). Кинетический анализ осуществляли посредством применения так называемой кинетической титровальной серии (Karlsson R. 2006), где мономерные Fab фрагменты антител по
изобретению впрыскивали в увеличивающихся концентрациях от 1 нМ до 100 нМ без применения стадий регенерации поверхности после каждой инъекции Fab. Ассоциацию Fab осуществляли в течение 15 минут и диссоциацию антигена осуществляли в течение 15 минут. Зарегистрированные ответы связывания аппроксимировали к простой модели связывания Ленгмюра 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2 для вычисления констант скорости ассоциации (kon или ка) , скорости диссоциации (koff или KD) и аффинности (KD) . Результаты
[02 63] Результаты измерения аффинности показывают, что Fab 15086, Fab 20293, и Fab 20131 и два эталонные антитела связывают TIM-З человека и яванского макака с различными аффинностями. Подробная кинетика связывания представлена далее в таблице 17.
[02 64] Этот пример демонстрирует авидности связывания антител против TIM-З с ECD TIM-З человека и яванского макака, как измеряют посредством ELISA.
Материалы и способы
[02 65] Связывание антитело-антиген измеряли посредством ELISA с нанесенными слитыми антигенами TIM-3-Fc по 1 мкг/мл. Антигены человека и яванского макака получали из Sino Biologicals. Антитела против TIM-З инкубировали с ненесенными антигенами в различных концентрациях, начиная с 150 мкг/мл (1000 нМ) в 2-кратных серийных титрованиях. После промывания связанные антитела обнаруживали с помощью вторичных антител, конъюгированных с HRP (пероксидазой хрена).
Результаты
[0266] ELISA демонстрировал, что все оцениваемые антитела способны связываться ECD TIM-З и человека и яванского макака. Приведена концентрация антител против TIM-З, дающая полумаксимальное связывание (ЕС50) . Все тестированные антитела связывали TIM-З человека со значениям ЕС50 приблизительно 1 нМ или ниже, хотя значительно большую вариацию наблюдали при связывании с TIM-З яванского макака (таблица 18) . Некоторые антитела, такие как 20131, 20185, 20293 и ABTIM3, демонстрировали идентичное связывание с TIM-З и человека и яванского макака. Другие антитела, такие как 19324, 19416, 19568 и 2 0300, демонстрировали промежуточное связывание с TIM-3 яванского макака, тогда как антитела 20362, 20621 и 15086.17145 демонстрировали слабую перекрестную реактивность в отношении TIM-З яванского макака (больше чем 100-кратное снижение ЕС50) . Кривые связывания для антител, которые демонстрировали наименьшую перекрестную реактивность к TIM-З яванского макака, ясно демонстрировали насыщенное связывание с антигеном при тестировании в наивысшей концентрации при ELISA оценке.
Таблица 18: Авидности связывания (ЕС50) антител против TIM-3 с TIM-З человека или яванского макака, как измеряют посредством
Антитело
EC50 (нМ)
Соотношение ЕС50 яванского макака/человек а
TIM-3 человека
TIM-3
яванского
макака
19324
0,73
18,38
19416
0,20
9, 42
19568
0,38
30,20
20131
0, 13
0, 13
20185
0, 17
0, 15
20293
0,31
0, 32
20300
1, 13
45, 30
20362
0,26
124,80
481
20621
0,22
29,70
135
15086.17145
0, 125
17,50
134
18564 ABTIM3
0, 07
0, 07
Пример 12: Категоризация эпитопов антител против TIM-3
[02 67] Этот пример иллюстрирует, как антитела против TIM-3 по изобретению можно группировать по категориям эпитопов на основании паттернов парной конкуренции. Антитела, относящиеся к различным категориям эпитопов, распознают различные эпитопы на внеклеточном домене (ECD) TIM-3. Материалы и способы
[02 68] Исследование парной конкуренции антител осуществляли
посредством анализа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) с
использованием Continuous Flow Microspotter (CFM) (Wasatch
Microf luidics, US) в комбинации с прибором IBIS МХ96 SPR (IBIS
Technologies, The Netherlands). Анализ визуализации
поверхностного плазмонного резонанса осуществляли на SPR датчике G-a-hu-IgG Fc SensEye(r) (Ssens BV, The Netherlands). Всего 16 антител IgG2 против TIM-3 человека и два эталонных антитела IgG4 (ABTIM3 и тАЫ5) разводили до 15 мкг/мл в буфере PBS, содержащем 0,05% Tween 2 0 (PBS-T), рН 7,0. Антитела захватывали на поверхности датчика против Fc посредством нанесения в течение 15 минут с использованием Continuous Flow Microspotter. После
нанесения, SensEye(r) располагали в биологическом датчике IBIS МХ96 и оставшиеся участки против Fc блокировали посредством впрыска 30 мкг/мл неспецифического IgGl человека. Захваченные антитела конъюгировали с поверхностью, используя набор Fixlt (Ssens BV, The Netherlands). После подготовки датчика осуществляли конкурентный анализ антител с использованием классического сэндвич-анализа, в котором иммобилизованные антитела связывали 200 нМ растворимого одновалентного антигена TIM-3 (Aero Biosystems, China), после чего следовало исследование связывания с другим антителом против TIM-З. Затем осуществляли индивидуальные впрыски каждого из 18 антител против TIM-З, разведенных до 15 мкг/мл в буфере PBS-T, чтобы устанавливать паттерны конкуренции антител. После каждого цикла конкуренции, поверхность датчика регенерировали с использованием 100 мМ буфера Н3Р04, рН 3,0. Результаты
[02 69] Паттерн конкуренции 18 антител против TIM-3 представлен на фиг. 8. Антитела тАЫ5 (категория 1), 15105 и 15107 (категория 2), 15260 и ABTIM3 (категория 3), 17244
(категория 7) и 15174 и 15175 (категория 8) не демонстрировали
функциональной активности в клеточных MLR анализах, описанных в
настоящем описании, но включены, поскольку они распознавали
различающиеся эпитопы. Антитела категории 8 тестировали только в
растворе, поскольку связывание TIM-З значительно снижено, когда
эти антитела захватывают на поверхности датчика
(однонаправленное блокирование). Таким образом, эти антитела представлены квадратами. Обнаружено, что функциональные антитела против TIM-З связывают три перекрестно конкурирующих категории эпитопов (категории 4, 5 и 6) . Функциональные антитела, относящиеся к категории эпитопов 4, включали антитела 2 0 621, 20293, 19568, 20362, 15086.17145 и 19416. Эти антитела перекрестно блокировали друг друга и антитела из категорий эпитопов 3, 5, б и 7. Функциональные антитела, относящиеся к категории эпитопов 5, включали антитела 20131 и 20185. Эти антитела перекрестно блокировали друг друга и антитела из
категорий эпитопов 3, 4, б и 7. Дополнительно, 20131 и 20185 также предотвращали связывание тАЫ5, только когда их захватывали на поверхности датчика (однонаправленное блокирование, штриховые линии). Наконец, функциональные антитела, относящиеся к категории эпитопов б, включали антитела 19324 и 20300. Эти антитела перекрестно блокировали друг друга и все другие антитела за исключением антител из категории 2.
[0270] Из результатов, приведенных выше, можно заключить, что функциональные антитела из категорий эпитопов 4, 5 и б связывают эпитопы, которые отличаются от эталонных антител ABTIM3 (категория 3) и тАЫ5 (категория 1) (фиг. 1), поскольку каждая группа категоризации имеет уникальные паттерны конкуренции по сравнению с другими антителами против TIM-З в панели.
Пример 13: Картирование эпитопов антител против TIM-3 посредством мутагенеза TIM-3
[0271] Эпитопы антител в целом можно охарактеризовать как линейные эпитопы (также называемые непрерывными эпитопами) или конформационные эпитопы (также называемые прерывистыми эпитопами). Хотя линейные эпитопы определяют на основании одной непрерывной аминокислотной последовательности, конформационные эпитопы могут состоять из многих меньших прерывистых линейных последовательностей или отдельных контактных остатков. Совокупность контактных остатков, которые образуют кластер в области межмолекулярного белкового контакта между антителом и антигеном, также называют горячей точкой (Moreira et. al., Proteins 68(4):803-12 (2007)). Сейчас общепризнано, что большинство эпитопов В-клеток являются прерывистыми по природе
(Sivalingam and Shepherd, Mol Immunol. 51 (3-4):304-9 (2012)), Kringelum et al. , Mol Immunol. 53 (1-2):24-34 (2013)), причем усредненный эпитоп охватывает 15-22 аминокислотных остатка, из которых 2-5 аминокислот вносят наибольший вклад в связывание
(Sivalingam and Shepherd, выше).
[0272] С помощью ранжирования аффинности связывания с 129 различными мутантам TIM-З, этот пример иллюстрирует, как связывание эпитопов для Fab 15086, Fab 20293 и Fab 20131 можно
Материалы и способы
[0273] Рецептор TIM-З человека состоит из внеклеточного
домена (ECD) из 181 аминокислоты (остатки 22-202), за которым
следует трансмембраный домен (остатки 203-223) и
цитоплазматический домен (остатки 224-301) . TIM-З относится к суперсемейству иммуноглобулинов и ECD состоит из двух доменов -домена муцина и домена IgV. Домен IgV содержит двухслойный |3-сэндвич, выполненный из взаимодействий 7 антипараллельных |3-тяжей, расположенных в двух р-листах с GFCC' р-тяжами на одной
стороне и BED р-тяжами на противоположной стороне. Два р-листа стабилизированы дисульфидной связью между отстатками С54-С123. Доступна кристаллическая структура для IgV TIM-З человека (PDB 5F71). Домен IgV TIM-З не имеет тяж А, как другие домены IgV, но обладает двумя дополнительными дисульфидными связями (С58-С63 и С52-С110), которые располагают петли СС' и FG в непосредственной близости, образуя уникальное углубление для связывания лиганда фосфатидилсерина (PS). Существует кристаллическая структура TIM-3 мыши в комплексе с лигандом PS (ЗКАА), демонстрирующая при связывании лиганда контакт с петлями СС' и FG.
[0274] Идентифицировано несколько лигандов и/или корецепторов для TIM-З, в том числе HMGB-1, галектин-9, СЕАСАМ-1 и фосфатидилсерин (Chiba et al. , Nat. Immunology 13(9) :832-42 (2012), Li et al. , Hepatology 56(4):1342-51 (2012), DeKruyff et al., J Immunology 184 (4) :1918-30 (2010), Das et al., Immunol Rev. 276(1):97-111 (2017)).
[0275] Белковые последовательности для TIM-3 человека и
ортологов загружали из UniProt; человек (Q8TDQ0; SEQ ID N0:236),
яванский макак (Масаса fascicularis, G7P6Q7; SEQ ID N0:237),
мышь (Mus musculus, Q8VIM0; SEQ ID N0:238) и крыса (Rattus
norvegicus, P0C0K5; SEQ ID N0:239). Эти последовательности
представлены в таблице 23. Идентичность последовательностей
между разичными внеклеточными аминокислотными
[027 6] По кристаллическим структурам и аминокислотным последовательностям идентифицировали аминокислотные остатки, экспонированные на поверхности, и разрабатывали 82 индивидуальных аланиновых замены в ECD TIM-З человека (сканирование аланином).
[0277] Для картирования линейных эпитопов в контексте структуры нативного TIM-З человека, создавали 47 химерных белков, где 10 аминокислот в последовательности ECD TIM-3 человека последовательно заменяли на последовательность мыши в сегментах, которые перекрывались на 5 аминокислот и добавляли версии от крысы и яванского макака в критических петлях. Замены последовательностей осуществляли во внеклеточном домене TIM-3 человека, охватывающем аминокислоты 22-199.
[0278] кДНК, кодирующую внеклеточный домен TIM-З человека, синтезировали и клонировали в вектор, содержащий промотор CMV и последовательность Fc IgGl человека (АА Р101-К330), что давало С-концевое слияние Fc IgGl с клонированным ECD TIM-З. Мутантные слитые конструкции из TIM-З человека и Fc создавали с помощью стандартных способов ПЦР и инженерии, и осуществляли временю экспрессию белка в 2 мл культуре с использованием экспрессирующей системы ExpiCHO(tm). Слитые конструкции из TIM-3 человека и Fc собирали, очищали и тестировали на аффинность связывания с Fab фрагментами против TIM-З посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Слитые белки TIM-3 иммобилизовали на G-a-hu-IgG Fc SensEye(r) (Ssens BV, The Netherlands) в течение 15 минут с использованием Continuous Flow
Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) . После нанесения, SensEye(r) располагали в биологическом датчике IBIS МХ96 и захваченные белки фиксировали на поверхности с использованием набора FixIT (Ssens BV, The Netherlands). Кинетический анализ осуществляли посредством применения так называемой кинетической титровальной серии (Karlsson R. 2006), где мономерные Fab фрагменты антител по изобретению впрыскивали в увеличивающихся концентрациях от 1 нМ до 100 нМ без применения стадий регенерации поверхности после каждого впрыска Fab. Ассоциацию Fab осуществляли в течение 15 минут и диссоциацию антигена осуществляли в течение 15 минут. Зарегистрированные ответы связывания аппроксимировали к простой модели связывания Ленгмюр 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2 для вычисления констатнт скорости ассоциации (kon или ка), скорости диссоциации (koff или KD) и аффинность (KD) . Результаты
[0279] Аффинность связывания Fab против TIM-3 15086, 20293, 20131 и эталонных аналогов ABTIM3 и тАЫ5 оценивали в отношении измененного связывания с мутантными конструкциями TIM-3.
[0280] Аффинности связывания Fab фрагментов с мутантными конструкциями TIM-З выражали в виде соотношения KD мутанта/Кв дикого типа (нормализованная аффинность связывания). В таблицах 2 0 и 21 представлены химерные белки и аланиновые мутанты, которые давали дифференцирующие результаты. По меньшей мере 5-кратное снижение аффинности использовали в качестве пороговых критериев для обнаружения сниженной аффинности связывания с мутантными конструкциями TIM-З. В некоторых случаях нельзя обнаруживать связывание с конкретными Fab. Эти конструкции перечислены как NB (не связывающие).
[0281] Анализ показывал, что связывающие эпитопы для Fab против TIM-3 15086, 20293 и 20131 четко отличались по сравнению с эталонными антителами ABTIM3 и тАЫ5. 15086 и 20293 не связывают химерный белок с последовательностью мыши, вставленной в положениях 62-67, близи связывающих лиганд петель СС' и FG, тогда как эталонное ABTIM3 не связывает (таблица 20). Эпитоп для
(таблица 21) . Fab 20293 имел эпитоп, очень схожий с 15086, за исключением того, что остатки М118 и D120 влияли на связывание только с 1508 6, когда их мутировали в аланин. Обнаружено, что Fab 2 0131 связывал другой эпитоп, присутствующий в петле FG в остатках 114-117, и он был расширен посредством сканирования аланином и в него включены остатки 118, 12 0, а также остатки СС' F61 и Е62. Общей для 15086, 20293 и 20131 была чувствительность к аланиновой мутации в положении F61, к которому ни одно из двух эталонных антител не проявляло чувствительность. Несмотря на то, что эталонное антитело тАЬ15 не связывало мутантную последовательность в положениях 62-67, аналогично 15086 и 20293, эпитоп для тАЬ15 четко отличался, поскольку это антитело не связывалось с двумя дополнительными конструкциями, где последовательность в положениях 74-85 заменяли на мышиную. Антитело ABTIM3 четко демонстрировало другой эпитоп, отпределяемый линейными конструкциями, мутированными в положениях 22-28, 107-144 и 123-128, как свидетельствовала измененная аффинность связывания с этими белками (таблица 20) . Сводка по находкам при картировании эпитопов представлена далее в таблице 22, а молекулярная модель расположения эпитопов на поверхности домена IgV TIM-З представлена на фиг. 9.
[0282] Вкратце, авторы изобретения показали на молекулярном уровне, посредством анализа связывания с панелью из 129 мутантов TIM-З, что три Fab 15086, 20293 и 20131 распознают уникальные, но частично перекрывающиеся эпитопы в верхней части домена IgV TIM-З. Эта находка согласуется с анализом категоризации эпитопов
(пример 12), который показывает, что все три антитела связывают переркывающиеся перекрестно конкурирующие эпитопы, которые вместе образуют функциональную поверхность на домене IgV TIM-3. Эти эпитопы четко перекрываются с сайтом связывания фосфатидилсерина, а также аминокислотой Е62, которая важна для связывания HMGB-1 и СЕACAMI (Chiba et al. , Nat. Immunology
13(9):832-42 (2012), Das et al., Immunol Rev. 27 б (1) :97-111 (2017)), тогда как два эталонных антитела имеют эпитопы, расположенные больше на средней части домена IgV (тАЫ5) и на другой стороне домена IgV (ABTIM3). Результаты согласуются с данными о категоризации эпитопов, которые показывают, что тАЫ5 и ABTIM3 могут одновременно связывать TIM-З (пример 12) . На основании местоположения эпитопа для 15086, 20293 и 20131, для каждого антитела предсказана способность блокировать связывание лигандов TIM3 (фосфатидилсерина, СЕАСАМ-1 и HMGB-1.
ND - не определяли
(ABTIM3) тАЫ5
Р50А
82,7
4, 9
53, 5
4,2
308, 8
V60A
11,3
1,7
1,0
1, б
1,4
F61A
1,0
0, 9
Е62А
38, 0
3,7
6, 5
4,4
4,0
G64A
18,5
2, 0
0, 9
2,1
1,7
R69A
0,7
I114A
1,3
0, 8
4,8
1,5
1,3
I117A
75, 2
9,3
0, 9
1,2
М118А
14,4
0,4
0, 9
1,0
D120A
7,1
2,1
23,3
б, 5
4,4
Е121А
1,1
0, 8
2,5
10, б
1,3
Аланиновые мутанты с < 5-кратным изменением KD
Аланиновые мутанты с > 5-кратным изменением KD
Связывание аланиновых мутантов отсутствовало
Белок
Аминокислотная последовательность
TIM-З человека, UniProt Q8TDQ0 (SEQ ID N0:236)
MFSHLPFDCVLLLLLLLLTRSSEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNWLRTDERDVNYWTS RYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIKPAKVTPAPTRQRDFTAAFPRMLTTRGHGPA ETQTLGSLPDINLTQISTLANELRDSRLANDLRDSGATIRIGIYIGAGICAGLALALIFGALIFKWYSHSKEKIQNLSLI SLANLPPSGLANAVAEGIRSEENIYTIEENVYEVEEPNEYYCYVSSRQQPSQPLGCRFAMP
TIM-З яванского макака, UniProt G7P6Q7 (SEQ ID N0:237)
MFSHLPFDCVLLLLLLLLTRSSEVEYIAEVGQNAYLPCSYTPAPPGNLVPVCWGKGACPVFDCSNWLRTDNRDVNDRTS GRYWLKGDFHKGDVSLTIENVTLADSGVYCCRIQIPGIMNDEKHNVKLWIKPAKVTPAPTLQRDLTSAFPRMLTTGEHG PAETQTPGSLPDVNLTVSNFFCELQIFTLTNELRDSGATIRTAIYIAAGISAGLALALIFGALIFKWYSHSKEKTQNLSL ISLANIPPSGLANAVAEGIRSEENIYTIEEDVYEVEEPNEYYCYVSSGQQPSQPLGCRVAMP
TIM-3 мыши, UniProt
MFSGLTLNCVLLLLQLLLARSLENAYVFEVGKNAYLPCSYTLSTPGALVPMCWGKGFCPWSQCTNELLRTDERNVTYQKS SRYQLKGDLNKGDVSLIIKNVTLDDHGTYCCRIQFPGLMNDKKLELKLDIKAAKVTPAQTAHGDSTTASPRTLTTERNGS
ДНК
Белок
H-CDR1
H-CDR2
H-CDR3
L-CDR1
L-CDR2
L-CDR3
15086.15086
15086.16837/ 15086.17145/ 15086.17144
20131
20293
15105
15107
15109
15174
15175
15260
100
101
102
103
104
105
15284
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
15299
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
15353
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
15354
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
17244
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
17245
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
19324
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
19416
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
19568
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
20185
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205
20300
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
20362
216
217
218
219
220
221
222
223
224
225
20621
226
227
228
229
230
231
232
233
234
235
SEQ ID №
Последовательность
Белковая последовательность константной области тяжелой цепи IgGl
Белковая последовательность константной области легкой цепи к IgGl
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgGl-LALA, за исключением интронов
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgGl-LALA, включая интроны
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgG4 (S228P), за исключением интронов
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgG4 (S228P), включая интроны
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgG2, за исключением интронов
ДНК последовательность константной области тяжелой цепи IgG2, включая интроны
ДНК последовательность константной области легкой цепи к
Белковая последовательность константной области тяжелой цепи IgGl-LALA
Белковая последовательность константной области тяжелой цепи IgG4 (S228P)
Белковая последовательность константной области тяжелой цепи IgG2
236
TIM-З человека
237
TIM-З яванского макака
238
TIM-З мыши
239
TIM-З крысы
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> СИМФОГЕН А/С
<120> АНТИТЕЛА И КОМПОЗИЦИИ ПРОТИВ TIM-3
<130> 022675.WO053
<140> <141>
<150> 62/321,476
<151> 2016-04-12 <160> 240
<170> PatentIn версии 3.5
<210> 1 <211> 360 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 1
caggtgcagc tacagcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ttggacccgt 120
cagcacccag ggatgggcct ggagtggatt ggatacatct cttacagtgg gagtatctat 180
tacactccgt ccctcaagag tcgacttacc atatcagtgg acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tatattactg tgcgagtttg 300
gattcctggg gatctaaccg tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360
<210> 2 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 2
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagattaa g 321
<210> 3 <211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Thr Arg Gln His Pro Gly Met Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Asp Ser Trp Gly Ser Asn Arg Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 4 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 5 <211> 330
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 5
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 6 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 6
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105
<210> 7 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 7
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> <211>
8 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 8
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 9 <211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 9
Cys Ala Ser Leu Asp Ser Trp Gly Ser Asn Arg Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 10 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 10
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 11 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 11
Asp Ala Ser
<210> 12 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 12
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 13 <211> 360 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 13
caggtgcagc tgcaggagag tggccccgga ctggtcaagc cttcacagac tctgagcctg 60
acctgcacag tgtctggcgg aagtatcagc tccgggggtt actattggag ctggacccga 120
cagcacccag gaatgggtct ggaatggatc gggtacattt catatagcgg ctccatctac 180
tatacaccct cactgaaaag caggctgacc atttccgtgg acacatctaa gaaccagttc 240
agcctgaaac tgtctagtgt gacagccgct gatactgcag tctactattg tgcctccctg 300
gactcttggg gcagtaatag agattactgg ggccagggaa ctctggtcac cgtctcgagt 360
<210> 14 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 14
gagatcgtgc tgactcagtc cccagccacc ctgtcactga gcccaggaga acgagcaacc 60
ctgtcttgca gggcctccca gtctgtcagc tcctacctgg cttggtatca gcagaagccc 120
gggcaggcac ctcgactgct gatctacgac gccagtaaca gagctaccgg tattcccgcc 180
cgcttcagtg gttcaggcag cggaacagac tttaccctga caatctctag tctggagcct 240
gaagatttcg ccgtgtacta ttgtcagcag aggtctaatt ggccactgac atttggcgga 300
gggactaagg tcgagatcaa g 321
<210> 15 <211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Thr Arg Gln His Pro Gly Met Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Thr Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Asp Ser Trp Gly Ser Asn Arg Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 16 <211> 990
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 16 gcctccacca
ggcacagcgg
tggaactcag
ggactctact
tacatctgca
aaatcttgtg
ccgtcagtct
gaggtcacat
tacgtggacg
agcacgtacc
gagtacaagt
aaagccaaag
atgaccaaga
gccgtggagt
ctggactccg
cagcagggga
cagaagagcc agggcccatc ccctgggctg gcgccctgac ccctcagcag acgtgaatca acaaaactca tcctcttccc gcgtggtggt gcgtggaggt gtgtggtcag gcaaggtctc ggcagccccg accaggtcag gggagagcaa acggctcctt acgtcttctc tctccctgtc ggtcttcccc cctggtcaag cagcggcgtg cgtggtgacc caagcccagc cacatgccca cccaaaaccc ggacgtgagc gcataatgcc cgtcctcacc caacaaagcc agaaccacag cctgacctgc tgggcagccg cttcctctat atgctccgtg cccgggtaaa ctggcaccct gactacttcc cacaccttcc gtgccctcca aacaccaagg ccgtgcccag aaggacaccc cacgaagacc aagacaaagc gtcctgcacc ctcccagccc gtgtacaccc ctggtcaaag gagaacaact agcaagctca atgcatgagg cctccaagag ccgaaccggt cggctgtcct gcagcttggg tggacaagag cacctgaagc tcatgatctc ctgaggtcaa cgcgggagga aggactggct ccatcgagaa tgcccccatc gcttctatcc acaagaccac ccgtggacaa ctctgcacaa cacctctggg gacggtgtcg acagtcctca cacccagacc agttgagccc cgccggggga ccggacccct gttcaactgg gcagtacaac gaatggcaag aaccatctcc ccgggaggag cagcgacatc gcctcccgtg gagcaggtgg ccactacacg
120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 990
<210> 17 <211> 1596
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 17
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttggtgag 300
aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagcgctc ctgcctggac 360
gcatcccggc tatgcagtcc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct gcctcttcac 420
ccggaggcct ctgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc tttttcccca 480
ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taacccaggc cctgcacaca aaggggcagg 540
tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg acctaagccc 600
accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct cccagattcc 660
agtaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc 720
accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc 780
tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct 840
cttcctcagc acctgaagcc gccgggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca 900
aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc 9 60
acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca 1020
agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg 1080
tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc 1140
tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt ggggtgcgag 1200
ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac cgctgtacca 1260
acctctgtcc ctacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1320
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1380
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1440
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1500
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1560
tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaa 1596
<210> 18 <211> 981 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 18
gcttccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300
aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360
ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420
tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660
gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840
gacggctcct tcttcctcta cagcaggctc accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900
aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960
ctctccctgt ctctgggtaa a 981
<210> 19 <211> 1588 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 19
gcttccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240
tacacctgca aggccagcac gcaccccggc ccggaggcct aggctccggg gtgctgcgct caccccaaag gagtaactcc caggtaagcc cctgcatcca gcacctgagt ctcatgatct cccgaggtcc ccgcgggagg caggactggc tccatcgaga ggacagaggt ccctacaggg gaccaagaac cgtggagtgg ggactccgac ggaggggaat gaagagcctc acgtagatca agggagggag tgtgcagccc ctgaccaccc cagccacagg cagacctgcc gccaaactct caatcttctc aacccaggcc gggacaggcc tcctgggggg cccggacccc agttcaactg agcagttcaa tgaacggcaa aaaccatctc cagctcggcc cagccccgag caggtcagcc gagagcaatg ggctccttct gtcttctcat tccctgtctc caagcccagc ggtgtctgct cagcccaggg cactcatgct ctggatgccc aagagccata ccactccctc tctgcagagt tcgccctcca ccagccgggt accatcagtc tgaggtcacg gtacgtggat cagcacgtac ggagtacaag caaagccaaa caccctctgc agccacaggt tgacctgcct ggcagccgga tcctctacag gctccgtgat tgggtaaa aacaccaagg ggaagccagg cagcaaggca cagggagagg ctaccccagg tccgggagga agctcagaca ccaaatatgg gctcaaggcg gctgacgcat ttcctgttcc tgcgtggtgg ggcgtggagg cgtgtggtca tgcaaggtct ggtgggaccc cctgggagtg gtacaccctg ggtcaaaggc gaacaactac caggctcacc gcatgaggct tggacaagag ctcagccctc ggccccatct gtcttctgga ccctgagcat ccctgcccct ccttctctcc tcccccatgc ggacaggtgc ccacctccat ccccaaaacc tggacgtgag tgcataatgc gcgtcctcac ccaacaaagg acggggtgcg accgctgtgc cccccatccc ttctacccca aagaccacgc gtggacaaga ctgcacaacc agttggtgag ctgcctggac gtctcctcac tttttccacc acaggggcag gacctaagcc tcccagatct ccaccatgcc cctagagtag ctcttcctca caaggacact ccaggaagac caagacaaag cgtcctgcac cctcccgtcc agggccacat caacctctgt aggaggagat gcgacatcgc ctcccgtgct gcaggtggca actacacaca
300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1588
<210> 20 <211> 978 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 20
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 300
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 360
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 420
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 480
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 540
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 600
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 660
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 720
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 780
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 840
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 900
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 960
tccctgtctc cgggtaaa 978
<210> 21 <211> 1585 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 21
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttggtgag 300
aggccagctc agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagccctc ctgcctggac 360
gcaccccggc tgtgcagccc cagcccaggg cagcaaggca ggccccatct gtctcctcac 420
ccggaggcct ctgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc tttttccacc 480
aggctccagg caggcacagg ctgggtgccc ctaccccagg cccttcacac acaggggcag 540
gtgcttggct cagacctgcc aaaagccata tccgggagga ccctgcccct gacctaagcc 600
gaccccaaag gccaaactgt ccactccctc agctcggaca ccttctctcc tcccagatcc 660
gagtaactcc caatcttctc tctgcagagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc 720
caggtaagcc cctgcatcca gcaccacctg atgatctccc gaggtccagt cgggaggagc gactggctga atcgagaaaa cagaggccgg tacagggcag caagaaccag ggagtgggag ctccgacggc ggggaacgtc gagcctctcc agcccaggcc gggacaggcc tggcaggacc ggacccctga tcaactggta agttcaacag acggcaagga ccatctccaa ctcggcccac ccccgagaac gtcagcctga agcaatgggc tccttcttcc ttctcatgct ctgtctccgg tcgccctcca ccagctgggt gtcagtcttc ggtcacgtgc cgtggacggc cacgttccgt gtacaagtgc aaccaaaggt cctctgccct cacaggtgta cctgcctggt agccggagaa tctacagcaa ccgtgatgca gtaaa gctcaaggcg gctgacacgt ctcttccccc gtggtggtgg gtggaggtgc gtggtcagcg aaggtctcca gggacccgcg gggagtgacc caccctgccc caaaggcttc caactacaag gctcaccgtg tgaggctctg ggacaggtgc ccacctccat caaaacccaa acgtgagcca ataatgccaa tcctcaccgt acaaaggcct gggtatgagg gctgtgccaa ccatcccggg taccccagcg accacacctc gacaagagca cacaaccact cctagagtag ctcttcctca ggacaccctc cgaagacccc gacaaagcca tgtgcaccag cccagccccc gccacatgga cctctgtccc aggagatgac acatcgccgt ccatgctgga ggtggcagca acacgcagaa
780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1585
<210> 22 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 22
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 23 <211> 330
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 23
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 24 <211> 327
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 24
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115
120
125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 25 <211> 326
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 25
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 1 5
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 26 <211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 26
caggtgcagc tacagcagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttaagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtggtag cacatacaac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaattttt 300
gggtcctact actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcacagtctc gagt 354
<210> 27 <211> 339 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 27
gaaattgtga tgacacagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactggac atctacccgg 180
gaatccgggg tccctaaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtggt 300
cctccgacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 28 <211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Asn Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Phe Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 29 <211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 29
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Gly Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 30 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 30
Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Ala 1 5
<210> 31 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 31
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 32 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 32
Cys Ala Lys Ile Phe Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 33 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 33
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 34 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 34 Trp Thr Ser 1
<210> 35 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 35
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 36 <211> 377 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 36
acgtgacagg gcgcgcccag gtccagctgc aggagagcgg tcccggactg gtgaagccat
cccagacact gagcctgact tgtactgtga gcggcggtag catctccagc ggcggctact 120
attggtcctg gatcaggcag cacccaggca agggcctgga gtggatcggc tacatctact 180
atagcggctc tatctactat aacccttccc tgaagagccg ggtgaccatc tctgtggaca 240
catccaagaa tcagttctat ctgaagctgt cttccgtgac cgccgctgat acagccgtgt 300
actattgcgc ctcactgatg gtctgggggg tcatgggcga ttactggggg cagggcacac 360
tggtcacagt ctcgagt 377
<210> 37
<211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 37
gagattgtgc tgacccagtc tcccgccacc ctgtctctga gtcctggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagcctctca gtccgtgtcc agctatctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggccaggctc cccggctgct gatctacgat gcctccaata gagccaccgg catccctgcc 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga ccatctccag cctggaaccc 240
gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag cggtccgact ggcctcctac atttggccaa 300
ggcaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 38 <211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 38
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Tyr Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Met Val Trp Gly Val Met Gly Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 39 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 39
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 40 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 40
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 41 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 41
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile 1 5
<210> 42 <211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 42
Cys Ala Ser Leu Met Val Trp Gly Val Met Gly Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 43 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 43
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 44 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 44 Asp Ala Ser 1
<210> 45 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 45
Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 46 <211> 345
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 46
caggtcacct tgaaggagtg gggcgcagga ctgttgaggc cctcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gataggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacgcga ccaagaaaca attctccctg 240
aagctgacct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag atattgggag 300
ctccctgact actggggcca gggcaccctg gtcaccgtct cgagt 345
<210> 47 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 47
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa g
321
<210> 48 <211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 48
Gln Val Thr Leu Lys Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Ala Thr Lys Lys Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Trp Glu Leu Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser 115
<210> 49 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 49
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln 35
Lys Pro
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 50
Gln Ser 55
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu 65 70
Phe Thr
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 85
Tyr Cys
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr 100
Lys Val
Glu Ile Lys 105
<210> 50 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 50
Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr 1 5
<210> 51 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 51
Ile Asn His Ser Gly Ser Thr 1 5
<210> 52 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 52
Cys Ala Arg Tyr Trp Glu Leu Pro Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 53
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 53
Gln Gly Ile Arg Asn Asp 1 5
<210> 54 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 54
Ala Ala Ser 1
<210> 55 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 55
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 56 <211> 345 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 56
cagatgcagc tggtgcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatgtca gttgacacgt ccaagcacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag atggtgggag 300 cttcctgact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cgagt 345
<210> 57
<211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 57
gaaattgtgt tgacgcagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 58 <211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 58
Gln Met Gln Leu Val Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys His Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
Arg Trp Trp Glu Leu Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser 115
<210> 59 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 59
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 60 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 60
Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr 1 5
<210> 61 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 61
Ile Asn His Ser Gly Ser Thr 1 5
<210> 62 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 62
Cys Ala Arg Trp Trp Glu Leu Pro Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 63 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 63
Gln Gly Ile Arg Asn Asp 1 5
<210> 64 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 64 Ala Ala Ser 1
<210> 65 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 65
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 66 <211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 66
cagatgcagc tggtgcaatg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag gttttactat 300
gctccgaact ttgactactg gggccagggc accctggtca ccgtctcgag t 351
<210> 67 <211> 318 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 67
gaaattgtgt tgacgcagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggacagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attccacttt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 68 <211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 68
Gln Met Gln Leu Val Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Tyr Tyr Ala Pro Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 69 <211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 69
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 70 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 70
Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr 1 5
<210> 71 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 71
Ile Asn His Ser Gly Ser Thr 1 5
<210> 72 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 72
Cys Ala Arg Phe Tyr Tyr Ala Pro Asn Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 73 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 73
Gln Ser Ile Ser Ser Trp 1 5
<210> 74 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 74
Lys Ala Ser
<210> 75 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 75
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Thr Phe
1 5 10
<210> 76 <211> 360 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 76
caggtgcagc acctgcactg cagcccccag tacaacccgt tccctgaagc acagtggctg tgcagcagtc tctctggtgg ggaaggggct ccctcaagag tgagttctgt gccccctctt gggcccagga ctccatcagc ggagtggatt tcgagtcacc gaccgccgca tgactactgg ctggtgaagc agtagtaatt gggagtatct atatccgtag gacacggctg ggccagggaa cttcggagac actactgggg attatagtgg acacgtccaa tgtattactg ccctggtcac cctgtccctc ctggatccgc gaacacctac gaaccagttc tgcgagacag cgtctcgagt
120 180 240 300 360
<210> 77 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 77
gaaattgtga tgacgcagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaggtcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ctcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa g 321
<210> 78 <211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 78
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Thr Val Ala Gly Pro Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
120
<210> 79 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 79
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Leu Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105
<210> 80 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 80
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 81 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 81
Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr 1 5
<210> 82 <211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 82
Cys Ala Arg Gln Thr Val Ala Gly Pro Leu Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 83 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 83
Gln Ser Ile Ser Ser Trp 1 5
<210> 84 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 84
Lys Ala Ser
<210> 85 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 85
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 86 <211> 375
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 86
caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg ctgctggata caccttaacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gccttgagtg gatgggacgg atcaacccta acagtggtgg ctcaaacaat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggt 300
cccctgtata gcagtggctg gtacgagggt gcttttgata tctggggcca agggacaatg 360
gtcaccgtct cgagt 375
<210> 87 <211> 327 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 87
gaaattgtga tgacgcagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agttggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctccggg gctcactttc 300
ggcggaggga ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 88 <211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 88
Gln Val Gln 1
Leu Val Gln Ser Gly Ala
Glu Val Lys Lys
Pro Gly Ala 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Asn Asn Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Pro Leu Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Glu Gly Ala Phe
100 105 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 89 <211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 89
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Pro
85 90 95
Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 90 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 90
Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Tyr Tyr 1 5
<210> 91 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 91
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser 1 5
<210> 92 <211> 20
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 92
Cys Ala Arg Glu Gly Pro Leu Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Glu Gly Ala
1 5 10 15
Phe Asp Ile Trp 20
<210> 93
<211> 6 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<400> 93
Gln Ser Ile Ser Ser Trp 1 5
<210> 94 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 94
Lys Ala Ser
<210> 95 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 95
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Pro Gly Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 96
<211> 372
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 96
cagatgcagc acctgtgcca cagtccccat tctgcttttg cagttctccc agagagggta tacagcagtc tctccgggga cgagaggcct cagtatctgt tgcagctgaa gcagtggctg aggtccagga cagtgtctct tgagtggctg gaaaagtcga ctctgtgact gtacggatac ctggtgaagc agcaacagtg ggaaggacat ataaccatca cccgaggaca gtccaccact cctcgcagac ctgcttggaa actacaggtc acccagacac cggctgtgta ggggccaggg cctctcactc ctggatcagg caagtggtat atccaagaac ttactgtgca caccctggtc
120 180 240 300 360
accgtctcga gt
372
<210> 97 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 97
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagcttcc ctgtctgtat ctctgggaga aactgtcacc 60
atcgaatgtc gagcaagtga ggacatttac aatggtttag catggtatca gcagaagcca 120
gggaaatctc ctcagctcct gatctataat gcaaatagct tgcatactgg ggtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggtacacag tattctctca agataaacag cctgcaatct 240
gaagatgtcg caagttattt ctgtcaacag tattacgatt atcctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 98 <211> 124
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 98
Gln Met Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Ala Phe Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Tyr Val His
100 105 110
His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
<210> 99 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 99
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Glu Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 100 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 100
Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala
1 5 10
<210> 101 <211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 101
Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser 1 5
<210> 102 <211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 102
Cys Ala Arg Glu Gly Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Tyr Val His His Trp
1 5 10 15
<210> 103 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 103
Glu Asp Ile Tyr Asn Gly 1 5
<210> 104 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 104 Asn Ala Asn 1
<210> 105 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Tyr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 106 <211> 369
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 106
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccttcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120
cagccccctg ggaaggggct ggagtggatt gggatcttct attatagtgg gaccacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgcac acacgtccaa gagccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagaggg 300
ggagaatatt ttgaccggtt actccccttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcgagt 369
<210> 107 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 107
gaaattgtga tgacgcagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt acccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 108 <211> 123
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 108 Gln Val Gln 1
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 5 10
Pro Ser Glu
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ile Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ala His Thr Ser Lys Ser Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Glu Tyr Phe Asp Arg Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 109 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 109
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105
<210> 110 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 110
Gly Gly Ser Phe Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr
1 5 10
<210> 111 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 111
Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr 1 5
<210> 112 <211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 112
Cys Ala Arg Gly Gly Glu Tyr Phe Asp Arg Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 113 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 113
Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 114 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 114
Ala Ala Ser
<210> 115 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 115
Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 116
<211> 351 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 116
caggtgcagc tcctgtacag ccagggaagg gcagactccg ctgcaaatga gcaggaggct tggtggagtc cctctggatt ggctggagtg tgaagggccg acagcctgag ttgactactg tgggggaggc cacctttagc ggtctcagct gttcaccatc agccgaggac gggccaggga ttggtacagc agctatgcca attggtggta tccagagaca acggccgtat accctggtca cgggggggtc tgagctgggt gtggtggtag attccaagaa attactgtgt ccgtctcgag cctgagactc ccgccaggct cacatactac cacgctgtat gaaagatggg
120 180 240 300 351
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 117
gatattgtga tgacgcagtc ttcatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattata aatcatttag gctggtatca gcataaacca 120
gggaaagccc ctaatcgcct aatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacgg cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 118 <211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Gly Ala Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 119 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 119
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ile Asn His
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Arg His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 120 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 120
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5
<210> 121 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 121
Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 122 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 122
Cys Val Lys Asp Gly Ala Gly Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 123 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 123
Gln Gly Ile Ile Asn His
1 5
<210> 124 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 124 Ala Ala Ser 1
<210> 125 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 125
Cys Leu Arg His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 126 <211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 126
caggtgcagc tacagcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcaac agtggtggtc actactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaggggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcatctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgacttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagttat 300
tactatgcca gtagtggtga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcgagt 366
<210> 127 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 127
gaaacgacac tcacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 128 <211> 122
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 128
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly
20 25 30
Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Tyr Tyr Tyr Ala Ser Ser Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 129 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 129
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 130 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 130
Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly Gly His Tyr
1 5 10
<210> 131 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 131
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile 1 5
<210> 132 <211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 132
Cys Ala Ser Tyr Tyr Tyr Ala Ser Ser Gly Asp Ala Phe Asp Ile Trp
1 5 10 15
<210> 133 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 133
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 134 <211> 3 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 134
Asp Ala Ser
<210> 135 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 135
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 136 <211> 372
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 136
caggtgcagc tgcaggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cctctggatt cacctttagt aattatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtggtag cacattcttc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagag cacgctgtat 240
ctgcaaacga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagggggc 300
ccgttgtata actggaacga cggtgatggt tttgatatct ggggccaagg gaccacggtc 360
acagtctcga gt 372
<210> 137 <211> 324 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 137
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcactgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cactttatta ctgtcagcag tatgataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 138 <211> 124
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 138
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Ser Thr Phe Phe Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Thr Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Pro Leu Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Asp Gly Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 139 <211> 108
<212> Белок
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 139
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Thr Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 140 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 140
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5
<210> 141 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 141
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 142 <211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 142
Cys Ala Lys Gly Gly Pro Leu Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Asp Gly Phe
1 5 10 15
Asp Ile Trp
<210> 143 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 143
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 144 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 144 Gly Ala Ser 1
<210> 145 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 145
Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 146 <211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 146
caggtgcagc tgcaggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgacctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatttcatac attagtggtg gtggtggttc catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgttt atttctgtgc gagagggaac 300
tggggatcgg cggctcttga tatctggggc caagggacaa tggtcacggt ctcgagt 357
<210> 147 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 147
gaaattgtgt tgacgcagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattaac aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggagagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcg 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac tctcggccct 300
gggaccaacg tggatatcaa a 321
<210> 148 <211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 148
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Trp Gly Ser Ala Ala Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 149 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Leu Gly Pro Gly Thr Asn Val Asp Ile Lys 100 105
<210> 150 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 150
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr 1 5
<210> 151 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 151
Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile
1 5
<210> 152 <211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 152
Cys Ala Arg Gly Asn Trp Gly Ser Ala Ala Leu Asp Ile Trp
1 5 10
<210> 153 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 153
Gln Gly Ile Asn Asn Tyr 1 5
<210> 154 <211> 3 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 154
Ala Ala Ser
<210> 155 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 155
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr Leu
1 5 10
<210> 156
<211> 351 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 156
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attggtggta gtggtggtag cgcatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgt gaaagatggg 300
gcaggaggct ttgactactg gggccagggc accctggtca ccgtctcgag t 351
<210> 157
<211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatcatttag gctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagcgcct aatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 158 <211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Gly Ala Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 159 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 159
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn His
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 160 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 160
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5
<210> 161 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 161
Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala
1 5
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 162
Cys Val Lys Asp Gly Ala Gly Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 163 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 163
Gln Gly Ile Arg Asn His 1 5
<210> 164 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 164 Ala Ala Ser 1
<210> 165 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 165
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 166 <211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 166
cagatgcagc tacagcagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ctagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaagatagtg 300
ggagctaccc actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcacggtctc gagt 354
<210> 167 <211> 339 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 167
gaaattgtga tgacacagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtggt 300
ccgatcacct tcggccaagg gacacgactg gagattaag 339
<210> 168 <211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 168
Gln Met Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Leu Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Val Gly Ala Thr His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 169
<211> 113 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 169
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Gly Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 170 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 170
Gly Phe Thr Val Ser Ser Tyr Ala 1 5
<210> 171 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 171
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 172 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 172
Cys Ala Lys Ile Val Gly Ala Thr His Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 173 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 173
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 174 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 174 Trp Ala Ser 1
<210> 175 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 175
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 176 <211> 366 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 176
caggtgcagc tggtggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcaac agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcatctac 180
tacaacccgt ccctcaggag tcgacttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tttattactg tgcgactcct 300
tattactatg gttcggggag ttatggggac tactggggcc agggcaccct ggtcactgtc 360
tcgagt 366
<210> 177 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 177
gacatccaga tgacccagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcccatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 178 <211> 122
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Thr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Gly Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 179 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 179
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 180 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 180
Gly Gly Ser Ile Asn Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> <211>
181 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 181
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile 1 5
<210> 182 <211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 182
Cys Ala Thr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Gly Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 183 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 183
Gln Ser Val Asn Asn Tyr 1 5
<210> 184 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 184 Asp Ala Ser 1
<210> 185 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 185
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 186 <211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 186
cagatgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttctcagac cctgtccctc 60
acctgcactg tgtctggtgg ctccatcagc agtgttggtt actactggaa ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagttcatt gggtacatct attacagtgg gagcatctac 180
tacaatccgt ccctcaagag tcgagttacc atatccgtag acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccc tatattactg tgcgagcgtc 300
ggtatagtgg gagcctccta ctttgagtac tggggccagg gaaccctggt cacagtctcg 360
agt 363
<210> 187 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 187
gaaattgtga tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagatcaa g 321
<210> 188 <211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 188
Gln Met Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Val
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Phe Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Val Gly Ile Val Gly Ala Ser Tyr Phe Glu Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> <211>
189 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 189
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
35 40 45
Leu Ile
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75
Glu Pro 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp 85 90
Pro Ile 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 190 <211> 10
<212> Белок
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 190
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Val Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 191 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 191
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile 1 5
<210> 192 <211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 192
Cys Ala Ser Val Gly Ile Val Gly Ala Ser Tyr Phe Glu Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 193 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 193
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 194 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 194
Asp Ala Ser 1
<210> 195 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 195
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 196 <211> 354 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 196
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggttcggc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtggtag cacatacaac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaattttt 300
gggtcctact actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc gagt 354
<210> 197 <211> 339 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 197
gaaattgtga tgacacagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca ataataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaatcagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtggt 300 ccaccgacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 198 <211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Asn Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Phe Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 199 <211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 199
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Gly Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 200 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 200
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5
<210> 201 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 201
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 202 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 202
Cys Ala Lys Ile Phe Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 203 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 203
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 204 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 204 Trp Ala Ser 1
<210> 205 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 205
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 206 <211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 206
caggtccagc tacagcagtc tgggggaggc ttggttcatc ctggggggtc cctaagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgttgac acctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagcggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca actccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggccgtat attactgtgc gaagatagtg 300
ggagttaccc actttgacta ctggggccag ggcaccctgg tcacggtctc gagt 354
<210> 207 <211> 339 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 207
gaaattgtga tgacgcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacaggtcca acaataagaa ctatttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtggt 300
ccgatcacct tcggccaagg gacacgactg gagattaag 339
<210> 208 <211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 208
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Val Gly Val Thr His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 209
<211> 113 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 209
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Gly Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 210 <211> 8
<212> Белок
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 210
Gly Phe Thr Val Asp Thr Tyr Ala 1 5
<210> 211 <211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 211
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 212 <211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 212
Cys Ala Lys Ile Val Gly Val Thr His Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 213 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 213
Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 214 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 214 Trp Ala Ser 1
<210> 215 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 215
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 216 <211> 369 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 216
caggtcacct tgaaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtc attactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct cttacagtgg gagcacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgacttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgaccgcg 300
tattacgata ttttgactgg ttaccctttt gactactggg gccagggaac cctggtcacg 360
gtctcgagt 369
<210> 217 <211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 217
gaaattgtga tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagatcaa g 321
<210> 218 <211> 123
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 218
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Thr Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 219 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 219
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 35
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asp Arg Ala 50 55
Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr 85
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg 100
Leu Glu Ile Lys
105
<210> 220 <211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 220
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly His Tyr
1 5 10
<210> 221 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 221
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5
<210> 222 <211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<400> 222
Cys Ala Thr Ala Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 223 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 223
Gln Ser Val Ser Ser Tyr 1 5
<210> 224 <211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 224 Asp Ala Ser 1
<210> 225 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 225
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 226
<211> 369 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 226
caggtgcagc tacagcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct cttatagtgg gagtatctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gactgccacg gacacggccg tgtattactg tgcgaccgcg 300
tattacgatc ttttgactgg ttaccctttt gactactggg gccagggaac cctggtcacg 360
gtctcgagt 369
<210> 227
<211> 321 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<400> 227
gaaattgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa g 321
<210> 228 <211> 123
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 228
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Thr Ala Tyr Tyr Asp Leu Leu Thr Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 229 <211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 229
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 230 <211> 10
<212> Белок
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 230
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 231 <211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 231
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 232 <211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 232
Cys Ala Thr Ala Tyr Tyr Asp Leu Leu Thr Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 233 <211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 233
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 234 <211> 3
<212> Белок
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 234 Asp Ala Ser 1
<210> 235 <211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 235
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 236 <211> 301
<212> Белок
<400> 236
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu
1 5 10
<213> Homo sapiens
Leu Leu Leu
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly
50 55 60
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile
100 105 110
Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val
115 120 125
Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe
130 135 140
Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala
145 150 155 160
Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile
165 170 175
Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu
180 185 190
Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Gly Ile Tyr Ile Gly Ala Gly
195 200 205
Ile Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu Ile Phe Gly Ala Leu Ile Phe
210 215 220
Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys Ile Gln Asn Leu Ser Leu Ile
225 230 235 240
Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu
245 250 255
Gly Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Asn Val Tyr
260 265 270
Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln
275 280 285
Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro
290 295 300
<210> 237 <211> 302
<212> Белок
<213> Macaca fascicularis
<400> 237
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Ile Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Pro Ala Pro Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Asp Cys Ser
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Asn Arg Asp Val Asn Asp Arg Thr Ser
65 70 75 80
Gly Arg Tyr Trp Leu Lys Gly Asp Phe His Lys Gly Asp Val Ser Leu
85 90 95
Thr Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg
100 105 110
Ile Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys His Asn Val Lys Leu
115 120 125
Val Val Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Leu Gln Arg
130 135 140
Asp Leu Thr Ser Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Gly Glu His Gly
145 150 155 160
Pro Ala Glu Thr Gln Thr Pro Gly Ser Leu Pro Asp Val Asn Leu Thr
165 170 175
Val Ser Asn Phe Phe Cys Glu Leu Gln Ile Phe Thr Leu Thr Asn Glu
180 185 190
Leu Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Thr Ala Ile Tyr Ile Ala Ala
195 200 205
Gly Ile Ser Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu Ile Phe Gly Ala Leu Ile
210 215 220
Phe Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys Thr Gln Asn Leu Ser Leu
225 230 235 240
Ile Ser Leu Ala Asn Ile Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala
245 250 255
Glu Gly Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Asp Val
260 265 270
Tyr Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Gly
275 280 285
Gln Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Val Ala Met Pro
290 295 300
<211> 281
<212> Белок <213> Mus musculus
<400> 238
Met Phe Ser Gly Leu Thr Leu Asn Cys Val Leu Leu Leu Leu Gln Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Arg Ser Leu Glu Asn Ala Tyr Val Phe Glu Val Gly Lys
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Leu Ser Thr Pro Gly Ala Leu
35 40 45
Val Pro Met Cys Trp Gly Lys Gly Phe Cys Pro Trp Ser Gln Cys Thr
50 55 60
Asn Glu Leu Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asn Val Thr Tyr Gln Lys Ser
65 70 75 80
Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Gly Asp Leu Asn Lys Gly Asp Val Ser Leu
85 90 95
Ile Ile Lys Asn Val Thr Leu Asp Asp His Gly Thr Tyr Cys Cys Arg
100 105 110
Ile Gln Phe Pro Gly Leu Met Asn Asp Lys Lys Leu Glu Leu Lys Leu
115 120 125
Asp Ile Lys Ala Ala Lys Val Thr Pro Ala Gln Thr Ala His Gly Asp
130 135 140
Ser Thr Thr Ala Ser Pro Arg Thr Leu Thr Thr Glu Arg Asn Gly Ser
145 150 155 160
Glu Thr Gln Thr Leu Val Thr Leu His Asn Asn Asn Gly Thr Lys Ile
165 170 175
Ser Thr Trp Ala Asp Glu Ile Lys Asp Ser Gly Glu Thr Ile Arg Thr
180 185 190
Ala Ile His Ile Gly Val Gly Val Ser Ala Gly Leu Thr Leu Ala Leu
195 200 205
Ile Ile Gly Val Leu Ile Leu Lys Trp Tyr Ser Cys Lys Lys Lys Lys
210 215 220
Leu Ser Ser Leu Ser Leu Ile Thr Leu Ala Asn Leu Pro Pro Gly Gly
225 230 235 240
Leu Ala Asn Ala Gly Ala Val Arg Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr
245 250 255
Thr Ile Glu Glu Asn Val Tyr Glu Val Glu Asn Ser Asn Glu Tyr Tyr
260 265 270
Cys Tyr Val Asn Ser Gln Gln Pro Ser 275 280
<210> 239 <211> 282
<212> Белок
<213> Rattus norvegicus
<400> 239
Met Phe Ser Trp Leu Pro Phe Ser Cys Ala Leu Leu Leu Leu Gln Pro
1 5 10 15
Leu Pro Ala Arg Ser Leu Glu Asn Ala Tyr Thr Ala Glu Val Gly Lys
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Val Pro Ala Pro Gly Thr Leu
35 40 45
Val Pro Ile Cys Trp Gly Lys Gly Ser Cys Pro Leu Leu Gln Cys Ala
50 55 60
Ser Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Thr Asn Val Thr Tyr Arg Lys Ser
65 70 75 80
Arg Arg Tyr Gln Leu Lys Gly Asn Phe Tyr Lys Gly Asp Met Ser Leu
85 90 95
Thr Ile Lys Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Thr Tyr Cys Cys Arg
100 105 110
Ile Gln Phe Pro Gly Pro Met Asn Asp Glu Lys Leu Glu Leu Lys Leu
115 120 125
Ser Ile Thr Glu Pro Ala Lys Val Ile Pro Ala Gly Thr Ala His Gly
130 135 140
Asp Ser Thr Thr Ala Ser Pro Arg Thr Leu Thr Thr Glu Gly Ser Gly
145 150 155 160
Ser Glu Thr Gln Thr Leu Val Thr Leu His Asp Asn Asn Gly Thr Lys
165 170 175
Ile Ser Thr Trp Ala Asp Glu Ile Lys Asp Ser Gly Glu Thr Ile Arg
Thr Ala Val His Ile Gly Val Gly Val Ser Ala Gly Leu Ala Leu Ala
195 200 205
Leu Ile Leu Gly Val Leu Ile Leu Lys Trp Tyr Ser Ser Lys Lys Lys
210 215 220
Lys Leu Gln Asp Leu Ser Leu Ile Thr Leu Ala Asn Ser Pro Pro Gly
225 230 235 240
Gly Leu Val Asn Ala Gly Ala Gly Arg Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile
245 250 255
Tyr Thr Ile Glu Glu Asn Ile Tyr Glu Met Glu Asn Ser Asn Glu Tyr
260 265 270
Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Gln Gln Pro Ser 275 280
<210> 240 <211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, где антитело конкурирует за связывание с TIM-З человека с или связывается с тем же эпитопом TIM-З человека, что и антитело, вариабельные домены тяжелых и легких цепей которого содержат аминокислотные последовательности:
SEQ
и 4, соответственно;
SEQ
и 4, соответственно;
SEQ
и 29, соответственно;
SEQ
и 39, соответственно;
SEQ
и 49, соответственно;
SEQ
и 59, соответственно;
SEQ
и 69, соответственно;
SEQ
и 79, соответственно;
SEQ
и 89, соответственно;
j )
SEQ
и 99, соответственно;
SEQ
8 и 109, соответственно;
SEQ
8 и 119, соответственно;
SEQ
8 и 129, соответственно;
SEQ
8 и 139, соответственно;
SEQ
8 и 149, соответственно;
SEQ
8 и 159, соответственно;
SEQ
8 и 169, соответственно;
SEQ
8 и 179, соответственно;
SEQ
8 и 189, соответственно;
SEQ
8 и 199, соответственно;
SEQ
8 и 209, соответственно;
SEQ
8 и 219, соответственно; или
SEQ
8 и 229, соответственно.
2 .
Антитело
против TIM-3 или антигенсвязывающая
п.1, где антитело против TIM-З представляет собой:
а) антитело, определяющие комплементарность области 1-3
тяжелых цепей (H-CDR) которого и определяющие комплементарность
области 1-3 легких цепей (L-CDR) которого содержат
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-12,
соответственно;
c) антитело, тяжелая цепь (НС) которого содержит (i) аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15 и аминокислотную последовательность SEQ ID N0:25, 23 или 24, или (ii) аминокислотные последовательности из SEQ ID N0:3 и 5;
d) антитело, вариабельный домен легкой цепи (VL) которого содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4;
e) антитело, легкая цепь (LC) которого содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6;
f) антитело, VH которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:15 или 3, и VL которого по меньшей мере на 90% идентична по последовательности аминокислотной последовательности SEQ ID N0:4;
g) антитело, VH которого содержит аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:15 или 3, и VL которого содержит
аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4; или
h) антитело, НС которого содержит (i) аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:15 и аминокислотную
последовательность SEQ ID N0:25, 23 или 24, или (ii)
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:3 и 5; и LC которого
содержит аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и 6.
3. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть,
где указанное антитело содержит аминокислотные
последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3:
SEQ
NO:
: 7
-12, соответственно;
SEQ
NO:
: 3
0-35,
соответственно;
SEQ
NO:
: 4
0-45,
соответственно;
SEQ
NO:
: 5
0-55,
соответственно;
SEQ
NO:
: 6
0-65,
соответственно;
SEQ
NO:
: 7
0-75,
соответственно;
SEQ
NO:
: 8
0-85,
соответственно;
SEQ
NO:
: 9
0-95,
соответственно;
SEQ
NO:
: 1
00-105
, соответственно;
SEQ
NO:
: 1
10-115
, соответственно;
SEQ
120-
125,
соответственно;
SEQ
130-
135,
соответственно;
SEQ
140-
145,
соответственно;
SEQ
150-
155,
соответственно;
SEQ
160-
165,
соответственно;
SEQ
170-
175,
соответственно;
SEQ
180-
185,
соответственно;
SEQ
190-
195,
соответственно;
SEQ
200-
205,
соответственно;
SEQ
210-
215,
соответственно;
SEQ
220-
225,
соответственно;
SEQ
230-
235,
соответственно.
4. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, где указанное антитело содержит VH и VL с аминокислотными последовательностями, которые по меньшей мере на 90% идентичны
) кислотным
последовательностям:
SEQ
NO:
и 4, соответственно;
SEQ
NO:
и 4, соответственно;
SEQ
NO:
и 29, соответственно;
SEQ
NO:
и 39, соответственно;
SEQ
NO:
и 49, соответственно;
SEQ
NO:
и 59, соответственно;
SEQ
NO:
и 69, соответственно;
SEQ
NO:
и 79, соответственно;
SEQ
NO:
и 89, соответственно;
j )
SEQ
NO:
и 99, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 109, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 119, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 129, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 139, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 149, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 159, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 169, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 179, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 189, соответственно;
SEQ
NO:
8 и 199, соответственно;
v) SEQ ID N0:218 и 219, соответственно; или
w) SEQ ID N0:228 и 229, соответственно.
5. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, где указанное антитело содержит НС и LC, вариабельные домены которых имеют аминокислотные последовательности:
SEQ
и 4, соответственно;
SEQ
3 и 4, соответственно;
SEQ
и 29, соответственно;
SEQ
и 39, соответственно;
SEQ
и 49, соответственно;
SEQ
и 59, соответственно;
SEQ
и 69, соответственно;
SEQ
и 79, соответственно;
SEQ
и 89, соответственно;
j )
SEQ
: 98
и 99, соответственно;
SEQ
: 10E
и 109, соответственно;
SEQ
: 116
и 119, соответственно;
SEQ
: 126
и 129, соответственно;
SEQ
: 136
и 139, соответственно;
SEQ
: 146
и 149, соответственно;
SEQ
: 156
S и 159, соответственно;
SEQ
: 166
J и 169, соответственно;
SEQ
: 176
J и 179, соответственно;
SEQ
: 186
J и 189, соответственно;
SEQ
: 196
S и 199, соответственно;
SEQ
: 206
] и 209, соответственно;
SEQ
: 216
] и 219, соответственно; или
SEQ
: 226
] и 229, соответственно.
Антитело
против TIM-3 по п.5, в котором
указанная LC дополнительно содержат
последовательности:
a) SEQ ID N0:5 и б, соответственно;
b) SEQ ID N0:25 и б, соответственно;
c) SEQ ID N0:23 и б, соответственно; или
аминокислотные
7. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть,
где указанное антитело содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:7-12,
соответственно.
8. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, где указанное антитело содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID N0:4.
9. Антитело против TIM-З, которое содержит НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:15 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
10. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим аминокислотные остатки F61 и 1117.
11. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по п.10, где эпитоп дополнительно содержит аминокислотный остаток R69 TIM-3.
12. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по п.10, где эпитоп дополнительно содержит аминокислотные остатки Р50, Е62, М118 и D120 TIM-3.
13. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по п.12, где эпитоп дополнительно содержит аминокислотные остатки V60 и G64 TIM-3.
14. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим аминокислотные остатки Р50, V60, F61, Е62, G64, R69, 1117, М118 и D120.
15. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим аминокислотные остатки F61, R69 и 1117.
16. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим аминокислотные остатки Р50, F61, Е62, 1117, М118 и D120.
17. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим аминокислотные остатки 62-67.
7.
18. Антитело против TIM-З по любому из пп.1-5, 7, 8 и 1018, где антитело представляет собой антитело IgG человека.
19. Антитело против TIM-З по п.19, где антитело содержит по меньшей мере одну мутацию в области Fc.
20. Антитело против TIM-З по п.20, где антитело содержит мутацию в одном или нескольких аминокислотных положениях 22 8, 233, 234 и 235 тяжелой цепи, которые пронумерованы в соответствии со схемой нумерации IMGT.
21. Антитело против TIM-З по п. 21, в котором один или оба аминокислотных остатков в положениях 234 и 235 мутированы вА1а, и/или в котором аминокислотный остаток в положении 228 мутирован в Pro.
22. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-22, где антитело или часть имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:
a) связывается с TIM-З человека с KD 23 нМ или меньше, как измеряют посредством поверхностного плазмонного резонанса;
b) связывается с TIM-З яванского макака с KD 22 нМ или меньше, как измеряют посредством поверхностного плазмонного резонанса;
c) связывается с TIM-З человека с ЕС50 1,2 нМ или меньше, как измеряют посредством ELISA;
d) связывается с TIM-З яванского макака с ЕС50 4 6 нМ или меньше, как измеряют посредством ELISA;
e) увеличивает секрецию IFN-y в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
f) увеличивает секрецию IFN-y в двунаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
д) увеличивает секрецию TNF-a в однонаправленном анализе реакции в смешанной культуре лимфоцитов;
h) увеличивает секрецию TNF-a из дендритных клеток; и
i) ингибирует взаимодействие TIM-З с фосфатидилсерином.
25. Фармацевтическая композиция по п.24, которая
дополнительно содержит химиотерапевтическое средство,
антинеопластическое средство, антиангиогенное средство,
ингибитор тирозинкиназы или ингибитор пути TIM-3.
26. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая
нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь
или ее антигенсвязывающую часть, или нуклеотидную
последовательностью, которая кодирует легкую цепь или ее
антигенсвязывающую часть, или и обе цепи антитела против TIM-3
по любому из пп.1-2 3.
27. Вектор, который содержит выделенную молекулу
нуклеиновой кислоты по п.2 6, где указанный вектор дополнительно
содержит контрольную последовательность экспрессии.
28. Клетка-хозяин, содержащая нуклеотидную
последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее
антигенсвязывающую часть, и нуклеотидную последовательность,
которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть,
антитела против TIM-З по любому из пп.1-23.
29. Способ получения антитела против TIM-З или его антигенсвязывающей части, который включает наличие клетки-хозяина по п.28, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела или части, и выделение получаемого антитела или части.
30. Биспецифическая связывающая молекула, которая имеет антигенсвязывающую часть антитела против TIM-З по любому из пп.1-23 и антигенсвязывающую часть другого, отличающегося антитела.
31. Способ усиления иммунитета у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение указанному пациенту антитела против TIM-З или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-23, фармацевтической композиции по п. 2 4 или 2 5 или биспецифической связывающей молекулы по п.30.
29.
который включает введение указанному пациенту антитела против TIM-З или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-23, фармацевтической композиции по п. 2 4 или 2 5 или биспецифической связывающей молекулы по п.30.
33. Способ по п. 31 или 32, который дополнительно включает
введение пациенту химиотерапевтического средства,
антинеопластического средства, антиангиогенного средства,
ингибитора тирозинкиназы или ингибитора пути TIM-3.
34. Применение антитела против TIM-З или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-23 или биспецифической связывающей молекулы по п.3 0 для получения лекарственного средства для усиления иммунитета у пациента, нуждающегося в этом.
35. Применение антитела против TIM-З или антигенсвязывающей части по любому одному из пп.1-23 или биспецифической связывающей молекулы по п. 30 для получения лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли у пациента.
36. Применение по п. 34 или 35, где указанное лекарственное
средство дополнительно содержит химиотерапевтическое средство,
антинеопластическое средство, антиангиогенное средство,
ингибитор тирозинкиназы или ингибитор пути TIM-3.
37. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-23 или биспецифическая связывающая молекула по п.3 0 для применения для усиления иммунитета у пациента, нуждающегося в этом.
38. Антитело против TIM-З или антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-23 или биспецифическая связывающая молекула по п.3 0 для применения в лечении злокачественной опухоли у пациента.
39. Антитело, антигенсвязывающая часть или биспецифическая связывающая молекула для применения по п. 37 или 38, где указанное антитело, антигенсвязывающую часть или биспецифическую связывающую молекулу вводят вместе с химиотерапевтическим средством, антинеопластическим средством, антиангиогенным средством, ингибитором тирозинкиназы или ингибитором пути TIM-3.
40. Способ по п. 32 или 33; применение по п. 35 или 36; или антитело, часть или биспецифическая связывающая молекула по п.3 8
33.
или 39, где злокачественная опухоль возникает в коже, легком, кишечнике, яичнике, головном мозге, предстательной железе, почке, мягких тканях, гематопоэтической системе, голове и шее, печени, мочевом пузыре, груди, желудке, матке или поджелудочной железе.
41. Способ; применение; или антитело, часть или биспецифическая связывающая молекула по п.4 0, где пациент страдает лейкозом, лимфомой Ходжкина или неходжкинской лимфомой.
42. Способ; применение; или антитело, часть или биспецифическая связывающая молекула по п.40, где пациент имеет солидную опухоль.
43. Способ; применение; или антитело, часть или биспецифическая связывающая молекула по п.40, где пациент страдает меланомой, немелкоклеточным раком легких, раком толстой кишки или почечно-клеточной карциномой.
По доверенности
ФИГ. 1
Концентрация антитела (мкг/мл)
552780
ФИГ. 2
о о.
о о.
CD Т
ш о;
О О.
о о
аз I- о ю аз о. ю о
4000-i
3000-
2000-
1000-
-А- [15086.15086] lgG1
¦(c)¦¦ [15086.16837] lgG1 LALA
[15086.17144] lgG4 ¦ &¦ [15086.17145] lgG2
-•- Контрольное mAb
0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10
Концентрация антитела (мкг/мл)
100
ФИГ. 3
TNFa (пг/мл)
о о о о о о
СО -fc-
о о
о о
о о
ю о о о о
_|
о о о о сл о о о о -I
Без обработки Контрольное mAb
(15086.15086) lgG1 ¦ (15086.17145) lgG2 ¦ (15086.16837) lgG1 LALA-
(15086.17144) lgG4-
Без обработки Контрольное mAb
(15086.15086) lgG1 ¦
(15086.17145) lgG2-(15086.16837) lgG1 LALA-
(15086.17144) lgG4-
Без обработки-^ Контрольное mAb
(15086.15086) lgG1
(15086.17145) lgG2 (15086.16837) lgG1 LALA-|
(15086.17144) lgG4
Без обработки-Контрольное mAb
(15086.15086) lgG1
(15086.17145) lgG2 (15086.16837) lgG1 LALA-j}
(15086.17144) lgG4
Без обработки-Контрольное mAb-I
inlnln -о ОО ооо го00
СО-С^
ООО
тзтзтз
ООО
CD CD -I -I ¦pz PZ
ООО
СО hO -^
(15086 15086) lgG1 ^ЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯЯ Јh
(15086.17145) lgG2 (15086.16837) lgG1 LALA-j
(15086.17144) lgG4-J
Без обработки-) Контрольное mAb-p
(15086.15086) lgG1
(15086.17145) lgG2 (15086.16837) lgG1 LALA-j
(15086.17144) lgG4-^
ФИГ. 4
fflA.b-54.2i [15086.17145]
10000,0
4000,0
со со о; ш
О 2000,0
0.0
1од(концентрации) мкг/мл
,с-с-з ,:-12 ,c-is- ,1Э5 ,7 &i 2,125 12.5:0
тАЬ-5?25 7157,3 75S-5.1 6SS2. & &37-i,7 3238.1 1ЧБ 35,- 37.4
гсДЬ-6240 [15:3S,'5:.38]
10000,0
8000,0 --
6000,0 --
4000,0 --
CO CO
m О
2000,0 --
0,0
!од(концентрации) мкг/мл
Г. 4 (продолжение) с
mAb-56J№ [18571.13571]
СО со о; ш
О 2000.0
0.0
:::: о
10000,0
ГГ 8000,0 --
' woo,о
со со о;
СО 2000,0
0,0
1од(концентрации) мкг/мл
Keytruda
!од(концентрации) мкг/мл
ФИГ. 5
19324
o-i
0.0001
-Контрольное mAb
0.01 1 100 10000
19568
Концентрация антитела (мкг/мл)
-Контрольное mAb
00.0001
0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
¦ Контрольное mAb
¦ 19416
0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл) Контрольное mAb
20131
0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
§L i 40°] -Контрольное mAb
^"o goo
- ex. > s Ю
CD О
ni CD 200>
m in
" I ^ CD
0.0001
= ffi CZ О
CD ^
0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
0.0001 0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
ФИГ. 5 (продолжение)
40°-| - Контрольное mAb
4oo-| - Контрольное mAb
20362
I о
I I со
- о_
> s ио
CD О
1С <Х>
CQ 1С
S О
300
100-
ID CD 300-
CD CQ О co
0.0001 0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
0.0001 0.01 1 100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
40°] -Контрольное mAb
0.0001
10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
ФИГ. 6
- Контрольное mAb
5800-1
- Контрольное mAb
¦ 600-
400-
200-
CQ О СО
0.0001 0.01
100 10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
Концентрация антитела (мкг/мл)
-600-1
- Контрольное mAb
со о
' CD
10000 m
-800
- Контрольное mAb
Концентрация антитела (мкг/мл)
Концентрация антитела (мкг/мл)
ФИГ. 6 (продолжение)
800-
СХ. о
о ?=
3Z zn
' CD
^- н-
| о
600-
- ex.
CD О
П= CD
400-
о; Щ
m 51
200-
CD ^
ir со
S CQ
аЗ ^
со ^
800-
ex. о
о m
m m
"- со
^- н-
| О
600-
- ex.
> S uo
CD О
m CD
CQ 1П
400-
§_°
о; Щ
m 5=
200-
CD ^
ir со
S CQ
CD "
Концентрация антитела (мкг/мл)
Концентрация антитела (мкг/мл)
- Контрольное mAb
*800'
о 600' ю со
400-
200'
> S "-О CD О m CD со m Я. О
IT со ^ со о аЗ g
CQ ^
0.01
- Контрольное mAb
100
10000
Концентрация антитела (мкг/мл)
Концентрация антитела (мкг/мл)
ФИГ. 7
Донор 1
150000т
Контрольное mAb
19324
1 10 100
Концентрация антитела (мкг/мл)
Донор 2
4000-.
¦Контрольное mAb
'tD ^
0 ^ о. о
ее х
1 ?
CD ^ 5 СО
^ о
CD со
о. о 3000-
2000-
1000-
0.1
100
юоо
Концентрация антитела (мкг/мл)
ФИГ. 8
Категория 8.
ищи
Категория 4 /
I Категория 8
Функциональные mAb
/ I Категория 1: mAb15 ^ Категория 2:15105,15107 со Категория 3:AbTIM3,15260 Категория 4:20621,20293,19568,20362,15086,19416 " 20131,20185 19324, 20300 17244
15174,15175
""в Категория 2
ФИГ. 9
90 "связывание
TIMS " . лиганДа
15086 90'
20293 90°
20131 90'
ФИГ. 9 (продолжение)
ABTIM3 90 °
тАЫ5
2420-552780ЕА/042
2420-552780ЕА/042
[0004] Несмотря на предположение о том, что TIM-3 является
[0004] Несмотря на предположение о том, что TIM-3 является
2420-552780ЕА/042
2420-552780ЕА/042
[0004] Несмотря на предположение о том, что TIM-3 является
[0004] Несмотря на предположение о том, что TIM-3 является
c) SEQ ID N0:40-45, соответственно;
c) SEQ ID N0:40-45, соответственно;
b) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:28 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:29 и 6;
b) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:28 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:29 и 6;
п) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:14 9 и 6;
п) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:148 и 5, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:14 9 и 6;
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
c) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:38 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
N0:38 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:39 и 6;
о) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
о) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:158 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6;
N0:158 и 23, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:159 и 6;
SEQ ID N0:49 и 6;
e) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:58 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:59 и 6;
SEQ ID N0:49 и 6;
e) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID
N0:58 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности
SEQ ID N0:59 и 6;
SEQ ID N0:169 и 6;
q) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:17 9 и 6;
SEQ ID N0:169 и 6;
q) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:178 и 24, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:17 9 и 6;
f) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:68 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6;
f) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:68 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:69 и 6;
г) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и 6;
г) НС, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:188 и 25, и LC, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID N0:189 и 6;
меньшей мере одно из следующих свойств:
антигенсвязывающей части, как раскрыто в настоящем описании.
антигенсвязывающей части, как раскрыто в настоящем описании.
TIM-3 или его антигенсвязывающей части или полиспецифической (например, биспецифической) связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании.
TIM-3 или его антигенсвязывающей части или полиспецифической (например, биспецифической) связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании.
антител против TIM-3 и продуцирования IFN-y в двунаправленном MLR анализе. Антитело 15086.17145 представлено как "15086".
Octet(tm).
15086.16837 15086.17145 15086.17144
15086.16837 15086.17145 15086.17144
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
аминокислотные последовательности SEQ ID N0:4 и б.
[0082] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0082] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[0083] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0083] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[0084] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0084] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[0085] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0085] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[008 6] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[008 6] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[0087] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0087] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[008 8] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[008 8] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
TIM-З выбирают из группы, состоящей из:
[008 9] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[008 9] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0090] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0090] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0091] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0091] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0092] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0092] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0093] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0093] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0094] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0094] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0095] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0095] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0096] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0096] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0097] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0097] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0098] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0098] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0099] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0099] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0100] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0100] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0101] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0101] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0102] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0102] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0103] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0103] В некоторых вариантах осуществления антитело против
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
TIM-З выбрано из группы, состоящей из:
[0104] В некоторых вариантах осуществления антитело против
[0104] В некоторых вариантах осуществления антитело против
из категории 2 (например, антитела 15105 и 15107) эпитопов, как определено далее в примере 12.
из категории 2 (например, антитела 15105 и 15107) эпитопов, как определено далее в примере 12.
218 или 22 8, и аминокислотную последовательность СН из SEQ ID N0:5.
218 или 22 8, и аминокислотную последовательность СН из SEQ ID N0:5.
указанной последовательности.
указанной последовательности.
[0135] В других вариантах осуществления другие
[0135] В других вариантах осуществления другие
модифицированные антитела можно получать с использованием
модифицированные антитела можно получать с использованием
гомобифункциональными (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры доступны, например, в Pierce Chemical Company, Rockford, II.
гомобифункциональными (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры доступны, например, в Pierce Chemical Company, Rockford, II.
[0143] Настоящее изобретение также относится к молекулам и
[0143] Настоящее изобретение также относится к молекулам и
последовательностей.
почки африканской зеленой мартышки (COS), клетки
почки африканской зеленой мартышки (COS), клетки
состояния гликозилирования антител, и, в более общем смысле, независимо от присутствия или отсутствия посттрансляционной модификации(й).
состояния гликозилирования антител, и, в более общем смысле, независимо от присутствия или отсутствия посттрансляционной модификации(й).
TIM-3 по изобретению или его связывающую часть.
TIM-3 по изобретению или его связывающую часть.
(Mack Publishing Company, 1995) . Фармацевтические композиции предпочтительно изготавливают в соответствии с условиями GMP (Good Manufacturing Practice).
(Mack Publishing Company, 1995) . Фармацевтические композиции предпочтительно изготавливают в соответствии с условиями GMP (Good Manufacturing Practice).
с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, прерывистое, контролируемое, нацеленное и запрограммированное высвобождение.
с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, прерывистое, контролируемое, нацеленное и запрограммированное высвобождение.
пропеллента, или в виде назальных капель.
пропеллента, или в виде назальных капель.
интервалом между каждым введением, после чего происходит высвобождение указанных компонентов указанному пациенту по существу в различные моменты времени; и
интервалом между каждым введением, после чего происходит высвобождение указанных компонентов указанному пациенту по существу в различные моменты времени; и
диметилсульфоксида, активной формы витамина D3, рецептора гамма,
активированного пролифератором пероксисом, 12-0-
диметилсульфоксида, активной формы витамина D3, рецептора гамма,
активированного пролифератором пероксисом, 12-0-
синтетической органической химией, медицинской и
100
Таблица 2: Белковые последовательности вариабельных доменов Зутр1ех(tm)-клонированного антитела 1508 6.1508 6
102
Таблица б: Белковые последовательности вариабельных доменов оптимизированных антител 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144
102
Таблица б: Белковые последовательности вариабельных доменов оптимизированных антител 15086.16837, 15086.17145 и 15086.17144
103
103
109
112
112
117
20131 и 2 02 93 представлены выше в таблице 10.
116
117
20131 и 2 02 93 представлены выше в таблице 10.
116
117
20131 и 2 02 93 представлены выше в таблице 10.
118
119
119
123
124
Apoptosis Detection Kit I, BD Pharmingen(tm)) . Антитело против PD-1
126
126
127
концентрацией 100 мкг/мл. Каждая точка на графике представляет усредненное для трех повторений и величина ошибки представляет SEM.
127
концентрацией 100 мкг/мл. Каждая точка на графике представляет усредненное для трех повторений и величина ошибки представляет SEM.
128
плазмонного резонанса (SPR). Материалы и способы
128
плазмонного резонанса (SPR). Материалы и способы
129
129
130
*ND: не определяли
Пример 11: ELISA определение связывания антитела с ECD TIM-3 человека и яванского макака
130
*ND: не определяли
Пример 11: ELISA определение связывания антитела с ECD TIM-3 человека и яванского макака
131
ELISA
131
ELISA
132
132
134
подразделять на линейные эпитопы и горячие точки, которые отличаются от эпитопов, распознаваемых эталонными антителами ABTIM3 и тАЫ5.
134
подразделять на линейные эпитопы и горячие точки, которые отличаются от эпитопов, распознаваемых эталонными антителами ABTIM3 и тАЫ5.
135
последовательностями TIM-З представлена далее в таблице 19.
135
последовательностями TIM-З представлена далее в таблице 19.
137
1508 6 на TIM-З выходил за пределы этого аминокислотного фрагмента, включая Р50, V60, F61, Е62, G64, R69 и остатки петли FG 1117, М118, D120, как свидетельствовало сканирование аланином
136
139
139
140
140
144
Таблица 25: Последовательности константной области и TIM-3
144
Таблица 25: Последовательности константной области и TIM-3
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
120
115
120
115
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 105
<400> 105
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<210> 117
<211> 321
<210> 117
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
10 15
<220>
<220>
<213> Искусственная последовательность
<400> 157
gacatccagt tgacccagtc cccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
<400> 157
gacatccagt tgacccagtc cccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<210> 162 <211> 12
<210> 162 <211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<220>
120
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac aactacttag cctggtacca acagaaacct
120
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac aactacttag cctggtacca acagaaacct
120
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac aactacttag cctggtacca acagaaacct
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccgaca gggccactgg catcccagcc 180
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccgaca gggccactgg catcccagcc 180
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<220>
<221> источник
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид"
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<213> Искусственная последовательность
50 55 60
<210> 238
180
190
185
180
190
185
145
146
b) антитело, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) которого
содержит аминокислотную последовательность SEQ ID N0:15 или 3;
148
u) SEQ ID N0:208 и 209, соответственно;
148
u) SEQ ID N0:208 и 209, соответственно;
d) SEQ ID N0:24 и б, соответственно.
d) SEQ ID N0:24 и б, соответственно.
149
149
150
18. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть,
которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим
аминокислотные остатки 114-117.
150
18. Антитело против TIM-З или его антигенсвязывающая часть,
которые связываются с эпитопом на TIM-З человека, содержащим
аминокислотные остатки 114-117.
151
24. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело против
TIM-З или антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-23 и
фармацевтически приемлемый эксципиент.
151
24. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело против
TIM-З или антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-23 и
фармацевтически приемлемый эксципиент.
32. Способ лечения злокачественной опухоли у пациента,
32. Способ лечения злокачественной опухоли у пациента,
152
152
1/13
1/13
2/13
2/13
2/13
2/13
2/13
2/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
3/13
4/13
5/13
4/13
5/13
6/13
6/13
6/13
6/13
6/13
6/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
7/13
8/13
8/13
8/13
8/13
8/13
8/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
9/13
10/13
10/13
10/13
10/13
10/13
10/13
10/13
10/13
10/13
12/13
13/13
13/13
13/13
13/13
