|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] В заявке описана композиция, содержащая комбинацию последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей необходимый полипептид, который вызывает иммунный ответ у млекопитающего, и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
В заявке описана композиция, содержащая комбинацию последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей необходимый полипептид, который вызывает иммунный ответ у млекопитающего, и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию.
Евразийское (21) 201892124 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2017.03.21
(51) Int. Cl.
A61K39/00 (2006.01) C12N 9/48 (2006.01) C12N 9/64 (2006.01)
(54) ДНК-КОНСТРУКЦИИ АНТИТЕЛ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
(31) 62/311,316; 62/332,381; 62/376,162; (57) В заявке описана композиция, содержа-
62/396,748; 62/396,750; 62/417,093; щая комбинацию последовательности нуклеино-
62/429,454; 62/429,473 вой кислоты, кодирующей необходимый полипеп-
(32) 2016.03.21; 2016.05.05; 2016.08.17; тид, который вызывает иммунный ответ у млекопи-
2016.09.19; 2016.09.19; 2016.11.03; тающего, и последовательности нуклеиновой кис-
2016.12.02; 2016.12.02 лоты, кодирующей антитело, его фрагмент, его ва-
(33) US риант или их комбинацию.
(86) PCT/US2017/023479
(87) WO 2017/165460 2017.09.28 (71)(72) Заявитель и изобретатель:
УЭЙНЕР ДЭВИД Б.; МУТХУМАНИ КАРУППИАХ; ФЛИНГАЙ СЕЛЕКЕ; САРДЕСАЙ НИРАНДЗАН; ЭЛЛИОТТ САРА; ЯНЬ ЦЗЯНЬ; ПАТЕЛ АМИ (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-552568ЕА/045 ДНК-КОНСТРУКЦИИ АНТИТЕЛ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Перекрестная ссылка на родственные заявки
[0001] Эта заявка заявляет приоритет предварительной заявки США № 62/311,316, поданной 21 марта 2 016 г., предварительной заявки США № 62/396,748, поданной 19 сентября 2016 г., предварительной заявки США № 62/396,750, поданной 19 сентября 2016 г., предварительной заявки США № 62/417,093, поданной 3 ноября 2016 г., предварительной заявки США № 62/332,381, поданной 4 мая 2016 г., предварительной заявки США № 62/376,162, поданной 17 августа 2016 г., предварительной заявки США № 62/429,454, поданной 2 декабря 2016 г., и предварительной заявки США № 62/429,473, поданной 2 декабря 2016 г., каждая из которых в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.
Область техники
[0002] Настоящее изобретение относится к комбинации ДНК-
вакцины с композицией, содержащей рекомбинантную
последовательность нуклеиновой кислоты, для создания одного или
более синтетических антител и их функциональных фрагментов in
vivo. Композиции согласно изобретению обеспечивают улучшенные
способы индукции иммунных ответов и профилактической и/или
терапевтической иммунизации индивидов против антигена.
Уровень техники
[0003] Молекула иммуноглобулина содержит по две цепи каждого типа - легкой (L) и тяжелой (Н) цепи, которые ковалентно связаны дисульфидными связями (показанными как S-S) между остатками цистеина. Вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL) создают связывающий участок молекулы антитела. Константная область тяжелой цепи состоит из трех константных доменов (CHI, СН2 и СНЗ) и (гибкой) шарнирной области. Легкая цепь также имеет константный домен (CL) . Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат четыре каркасные области (FR; FR1, FR2, FR3 и FR4) и три определяющие комплементарность области (CDR; CDR1, CDR2 и CDR3). Соответственно, они представляют собой очень сложные генетические системы, сборка
которых in vivo является трудной.
[0004] Нацеленные моноклональные антитела (mAb) представляют одно из наиболее важных терапевтических достижений за последние 2 5 лет. Сегодня этот тип иммунной терапии повсеместно применяют против многих аутоиммунных заболеваний, для лечения рака, а также инфекционных заболеваний. В случае злокачественных образований в настоящее время многие варианты терапии на основе иммуноглобулина (Ig) применяют в комбинации со схемами цитотоксической химиотерапии, направленными против опухолей. Этот комбинированный подход существенно улучшил общую выживаемость. Множество препаратов mAb имеют лицензию для применения против конкретных видов рака, включая ритуксан (ритуксимаб), химерное mAb, нацеленное на CD20, для лечения неходжкинской лимфомы и ипилимумаб (ервой), человеческое mAb, которое блокирует CTLA-4 и которое применяли для лечения меланомы и других злокачественных образований. Кроме того, бевацизумаб (авастин) является другим значимым гуманизированным mAb, которое нацелено на VEGF и неоваскуляризацию опухолей и применяется для лечения колоректального рака. Возможно, наиболее высокопрофильным mAb для лечения злокачественных образований является трастузумаб (герцептин), гуманизированный препарат, нацеленный на Her2/neu, который продемонстрировал значительную эффективность против рака молочной железы в подгруппе пациентов. Более того, большое количество mAb применяются в лечении аутоиммунных расстройств и, в частности, заболеваний крови.
[0005] Кроме лечения рака, пассивный перенос поликлональных Ig опосредует профилактическую эффективность против большого числа инфекционных заболеваний, включая дифтерию, гепатиты А и В, бешенство, столбняк, ветряную оспу и респираторно-синцитиальный вирус (РСВ). В действительности несколько препаратов поликлонального Ig обеспечивают временную защиту от конкретных инфекционных агентов у индивидов, путешествующих в эндемичные для заболевания районы, в обстоятельствах, когда не хватает времени для генерации защитных Ig посредством активной вакцинации. Кроме того, было продемонстрировано, что у детей с иммунным дефицитом паливизумаб (синагис), mAb, которое нацелено
на инфекцию РСВ, обеспечивает клиническую защиту против РСВ.
[0006] В настоящее время доступные терапевтические антитела, имеющиеся на рынке, относятся к изотипам человеческого IgGl. Эти антитела включают гликопротеины, несущие два N-связанных двухантенарных олисахарида комплексного типа, связанных с константной областью (Fc) антитела, в которой большинство олигосахаридов являются кор-фукозилированными. Оно выполняет эффекторные функции антителозависимой клеточной токсичности (АЗКЦ) и комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ) посредством взаимодействия Fc с лейкоцитарными рецепторами (FcyR) или комплементом. Существует явление снижения in vivo эффективности терапевтических антител (по сравнению с in vitro условиями), что приводит к необходимости больших доз терапевтических антител - иногда еженедельных доз, составляющих несколько сотен миллиграммов. Это происходит главным образом вследствие конкуренции между сывороточным IgG и терапевтическими антителами за связывание с FcyRIIIa на естественных клетках-киллерах (NK). Эндогенный человеческий сывороточный IgG ингибирует АЗКЦ, индуцируемую терапевтическими антителами. Таким образом, нефукозилированные терапевтические антитела могут иметь повышенную эффективность у людей. Нефукозилированные терапевтические антитела имеют намного большую аффинность связывания в отношении FcyRIIIa, чем фукозилированный человеческий сывороточный IgG, что является предпочтительным вариантом преодоления препятствий, создаваемых человеческим плазменным IgG.
[0007] Варианты лечения на основе антител не лишены риска. Одним из таких рисков является антителозависимое усиление (АЗУ) , которое происходит, когда не нейтрализующие противовирусные белки облегчают попадание вируса в клетки-хозяев, что приводит к повышенной инфективности в клетках. Некоторые клетки не содержат на поверхности обычные рецепторы, которые вирусы используют для попадания внутрь. Антивирусные белки (т. е. антитела) связываются с Fc-рецепторами антител, которые имеются в плазматической мембране некоторых из этих клеток. Вирусы
связываются с антигенсвязывающим участком в одном конце антитела. Этот вирус может использовать этот механизм для инфицирования человеческих макрофагов, что приводит к тому, что обычно слабая вирусная инфекция становится опасной для жизни. Наиболее широко известный пример АЗУ происходит в условиях инфекции вирусом денге (DENV). Оно наблюдается, когда человек, который ранее был инфицирован одним серотипом DENV, через много месяцев или лет инфицируется другим серотипом. В таких случаях клиническое течение заболевания является более тяжелым, а такие люди имеют более высокую вирусемию по сравнению с теми, у кого АЗУ не проявляется. Это объясняет результаты наблюдений, что если первичные (первые) инфекции вызывают в основном несущественное заболевание (ЛД (Лихорадка Денге)) у детей, вторичная инфекция (повторная инфекция в более позднее время) более вероятно связана с тяжелым заболеванием (ГЛД (Геморрагическая Лихорадка Денге)и/или СШД (Синдром Шока Денге)) как у детей, так и у взрослых. Существует четыре различающихся по антигенным свойствам серотипа DENV (DENV-1 - DENV-4). Инфицирование DENV индуцирует выработку нейтрализующих гомотипических антител в виде иммуноглобулина G (IgG), которые на всю жизнь обеспечивают иммунитет против инфицирующего серотипа. Инфицирование DENV также приводит к появлению некоторой степени перекрестно-защитного иммунитета против других трех серотипов. Кроме индукции нейтрализующих гомотипических антител инфекция DENV также может индуцировать гетеротипические антитела, которые нейтрализуют вирус только частично или не нейтрализуют вообще. Выработка таких перекрестно-реактивных, но не нейтрализующих антител может быть причиной более тяжелых вторичных инфекций. После попадания внутрь белой кровяной клетки репликация вируса становится необнаруживаемой, что в итоге приводит к генерации очень высоких вирусных титров, которые вызывают тяжелое заболевание.
[0008] Клинический эффект терапии mAb является впечатляющим. Однако остаются проблемы, которые ограничивают применение и распространение этого терапевтического подхода. Некоторые из них включают высокую стоимость производства этих
сложных биологических препаратов, что может ограничивать их применение в более широкой популяции, в частности, в развивающихся странах, где они могли бы иметь большое значение. Кроме того, частая необходимость в повторном введении mAb для достижения и поддержания эффективности может служить препятствием в контексте логистики и соблюдение пациентом режима лечения. Существует необходимость в новых антителах, которые бы снизили или устранили проблему низкой in vivo эффективности терапевтических антител вследствие конкуренции с сывороточными IgG. Существует необходимость в новых антителах, которые могут устранить антителозависимое усиление для таких вирусов, как вирус Денге, ВИЧ, РСВ и других. Существует необходимость в биспецифических антителах, бифункциональных антителах и смесях антител для выполнения нескольких функций, которые могли бы оказаться терапевтическими или профилактическими. Также существует необходимость в вариантах комбинированной терапии, в которых можно использовать описанные в данном документе синтетические антитела наряду с иммуностимуляцией системы-хозяина посредством иммунизации вакциной, включая вакцину на основе ДНК. Кроме того, долгосрочная стабильность этих составов антител часто является короткой и не оптимальной. Таким образом, в данной области техники остается потребность в синтетической молекуле антитела, которую можно доставлять субъекту безопасным и малозатратным образом.
Сущность изобретения
[0009] В настоящем изобретении предложена комбинация композиции, которая вызывает иммунный ответ у млекопитающего против антигена, с композицией, содержащей рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию.
[0010] В одном аспекте настоящего изобретения предложены
конструкции нуклеиновых кислот, способные экспрессировать
полипептид, который вызывает иммунный ответ у млекопитающего
против антигена. Конструкции нуклеиновых кислот состоят из
кодирующей нуклеотидной последовательности и промотора,
функционально связанного с кодирующей нуклеотидной
последовательностью. Кодирующая нуклеотидная последовательность экспрессирует полипептид, причем полипептид включает консенсусные антигены. Промотор регулирует экспрессию полипептида в организме млекопитающего.
[ООН] В другом аспекте настоящего изобретения предложены вакцины на основе ДНК-плазмиды, которые способны генерировать у млекопитающего иммунный ответ против антигена. Вакцины на основе ДНК-плазмиды состоят из ДНК-плазмиды, способной экспрессировать консенсусный антиген в организме млекопитающего, и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества. ДНК-плазмида состоит из промотора, функционально связанного с кодирующей последовательностью, которая кодирует консенсусный антиген.
[0012] В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы инициации иммунного ответа против антигена у млекопитающего, включающие доставку вакцины на основе ДНК-плазмиды в ткань млекопитающего, при этом вакцина на основе ДНК-плазмиды содержит ДНК-плазмиду, способную экспрессировать консенсусный антиген в клетке млекопитающего, чтобы вызвать иммунный ответ у млекопитающего, и электропорацию клеток ткани, чтобы обеспечить попадание ДНК-плазмид в клетки.
[0013] Настоящее изобретение относится к способу генерации синтетического антитела в организме субъекта. Этот способ может включать введение субъекту композиции, содержащей рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело или его фрагмент. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может экспрессироваться в организме субъекта для генерации синтетического антитела.
[0014] Сгенерированное синтетическое антитело может быть дефукозилированным. Сгенерированное синтетическое антитело может содержать две мутации замены лейцина на аланин в СН2-области Fc-области.
[0015] Антитело может содержать полипептид тяжелой цепи или его фрагмент и полипептид легкой цепи или его фрагмент. Полипептид тяжелой цепи или его фрагмент может кодироваться первой последовательностью нуклеиновой кислоты, а полипептид
легкой цепи или его фрагмент может кодироваться второй
последовательностью нуклеиновой кислоты. Рекомбинантная
последовательность нуклеиновой кислоты может содержать первую
последовательность нуклеиновой кислоты и вторую
последовательность нуклеиновой кислоты. Рекомбинантная
последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать промотор для экспрессии первой последовательности нуклеиновой кислоты и второй последовательности нуклеиновой кислоты в виде одного транскрипта в организме субъекта. Промотор может представлять собой промотор цитомегаловируса (ЦМВ).
[0016] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую участок расщепления протеазой. Третья последовательность нуклеиновой кислоты может располагаться между первой последовательностью нуклеиновой кислоты и второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Протеаза субъекта может распознавать и расщеплять участок расщепления протеазой.
[0017] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой
кислоты может экспрессироваться в организме субъекта для
генерации полипептидной последовательности антитела.
Полипептидная последовательность антитела может содержать полипептид тяжелой цепи или его фрагмент, участок расщепления протеазой и полипептид легкой цепи или его фрагмент. Протеаза, вырабатываемая субъектом, может распознавать и расщеплять участок расщепления протеазой полипептидной последовательности антитела, генерируя, таким образом, расщепленный полипептид тяжелой цепи и расщепленный полипептид легкой цепи. Синтетическое антитело может быть создано расщепленным полипептидом тяжелой цепи и расщепленным полипептидом легкой цепи
[0018] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать первый промотор для экспрессии первой последовательности нуклеиновой кислоты в виде первого транскрипта и второй промотор для экспрессии второй последовательности нуклеиновой кислоты в виде второго
транскрипта. Первый транскрипт может транслироваться в первый полипептид, а второй транскрипт может транслироваться во второй полипептид. Синтетическое антитело может быть создано первым и вторым полипептидом. Первый промотор и второй промотор могут быть одинаковыми. Промотор может представлять собой промотор цитомегаловируса (ЦМВ).
[0019] Полипептид тяжелой цепи может содержать вариабельную тяжелую область и константную тяжелую область 1. Полипептид тяжелой цепи может содержать вариабельную тяжелую область, константную тяжелую область 1, шарнирную область, константную тяжелую область 2 и константную тяжелую область 3. Полипептид легкой цепи может содержать вариабельную легкую область и константную легкую область.
[0020] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать последовательность Козак. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать сигнальный пептид иммуноглобулина (Ig) . Сигнальный пептид Ig может содержать сигнальный пептид IgE или IgG.
[0021] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой
кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную
последовательность из SEQ ID N0: 1, 2, 5, 41, 43, 45, 46, 47, 48, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 и 80. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 3, 4, 6, 7, 40, 42, 44, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 63 и 79.
[0022] Настоящее изобретение также относится к способу
генерации синтетического антитела в организме субъекта. Этот
способ может включать введение субъекту композиции, содержащей
первую рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую полипептид тяжелой цепи или его фрагмент, и вторую
рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую полипептид легкой цепи или его фрагмент. Первая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может
экспрессироваться в организме субъекта для генерации первого полипептида, а вторая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может экспрессироваться в организме субъекта для генерации второго полипептида. Синтетическое антитело может быть создано первым и вторым полипептидами.
[0023] Первая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать первый промотор для экспрессии первого полипептида в организме субъекта. Вторая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать второй промотор для экспрессии второго полипептида в организме субъекта. Первый промотор и второй промотор могут быть одинаковыми. Промотор может представлять собой промотор цитомегаловируса (ЦМВ).
[0024] Полипептид тяжелой цепи может содержать вариабельную тяжелую область и константную тяжелую область 1. Полипептид тяжелой цепи может содержать вариабельную тяжелую область, константную тяжелую область 1, шарнирную область, константную тяжелую область 2 и константную тяжелую область 3. Полипептид легкой цепи может содержать вариабельную легкую область и константную легкую область.
[0025] Первая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты и вторая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты могут дополнительно содержать последовательность Козак. Первая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты и вторая рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты могут дополнительно содержать сигнальный пептид иммуноглобулина (Ig). Сигнальный пептид Ig может содержать сигнальный пептид IgE или IgG.
[0026] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу предотвращения или лечения заболевания у субъекта. Этот способ может включать генерацию синтетического антитела в организме субъекта в соответствии с одним из вышеизложенных способов. Синтетическое антитело может быть специфическим в отношении чужеродного антигена. Чужеродный антиген может быть получен из вируса. Вирус может представлять собой вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус Чикунгунья (CHIKV) или
вирус Денге.
[0027] Вирус может представлять собой ВИЧ. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 1, 2, 5, 46, 47, 48, 49, 51, 53, 55 и 57. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 3, 4, 6, 7, 50, 52, 55, 56, 62 и 63.
[0028] Вирус может представлять собой CHIKV. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 59 и 61. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 58, 60, 97, 98, 99 и 100.
[0029] Вирус может представлять собой вирус Зика. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 121, 122, 123, 125, 127, 129, 131 или 133. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 124, 126, 128, 130 или 132.
[0030] Вирус может представлять собой вирус Денге. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 45. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 44.
[0031] Синтетическое антитело может быть специфическим в отношении собственного антигена. Собственный антиген может представлять собой Нег2. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность
нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 41 и 43. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 40 и 42.
[0032] Синтетическое антитело может быть специфическим в отношении собственного антигена. Собственный антиген может представлять собой PSMA. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность из SEQ ID N0: 80. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты из SEQ ID N0: 79.
[0033] Настоящее изобретение также относится к продукту, получаемому одним из вышеописанных способов. Продукт может представлять собой одну ДНК-плазмиду, способную экспрессировать функциональное антитело. Продукт может состоять из двух или более разных ДНК-плазмид, способных экспрессировать компоненты функционального антитела, которые объединяются in vivo с образованием функционального антитела.
[0034] Настоящее изобретение также относится к способу лечения субъекта от инфекции патогеном, включающему: введение нуклеотидной последовательности, кодирующей синтетическое антитело, специфическое в отношении патогена. Этот способ может дополнительно включать введение антигена патогена для генерации иммунного ответа у субъекта.
[0035] Настоящее изобретение также относится к способу лечения субъекта от рака, включающему: введение нуклеотидной последовательности, кодирующей раковый маркер, для индукции АЗКЦ.
[0036] Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей синтетическое антитело, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере около 95% идентичности по всей длине последовательности нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID N0:
[0037] Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей синтетическое антитело, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID N0: 79.
[0038] Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей синтетическое антитело, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, имеющий по меньшей мере около 95% идентичности по всей длине аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID N0: 8 0.
[0039] Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей синтетическое антитело, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID N0: 80.
[0040] Любая из вышеописанных молекул нуклеиновых кислот может содержать экспрессионный вектор.
[0041] Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей одну или более из вышеописанных молекул нуклеиновых кислот. Композиция также может содержать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
Краткое описание графических материалов
[0042] На фигуре 1, включающей фигуры 1A-1D, изображена
конструкция и экспрессия плазмиды CVM1-иммуноглобулин G (IgG) и
CVM-l-Fab dMAb. На фигуре 1А изображена in vitro экспрессия
CVMl-Fab. Конструкциями CVMl-Fab, CVMl-вариабельная тяжелая цепь
(VH) и CVMl-вариабельная легкая цепь (VL) трансфицировали клетки
2 93Т для определения in vitro экспрессии с помощью ферментного
иммуносорбентного анализа связывания (ИФА). Образцы
анализировали через 0, 24 и 48 часов после трансфекции. Клетки трансфицировали пустой каркасной плазмидой pVaxl, служившей в качестве отрицательного контроля. На фигуре 1В изображена in vitro экспрессия CVMl-IgG. Конструкцией CVMl-IgG трансфицировали клетки 2 93Т для определения in vitro экспрессии с помощью ферментного иммуносорбентного анализа связывания (ИФА). Образцы
анализировали через 0, 24 и 48 часов после трансфекции. Клетки трансфицировали пустой каркасной плазмидой pVaxl, служившей в качестве отрицательного контроля. На фигуре 1С изображена in vitro экспрессия CVMl-IgG и CVMl-Fab. Мыши (Вб.Cg-Foxnlnu/J) возрастом 5-6 недель получали однократную 100 мкг внутримышечную инъекцию плазмид CVMl-IgG, CVM1-VH, CVM1-VL или CVMl-Fab с последующей электропорацией (5 мышей на группу). Инъекцию вектора pVaxl использовали в качестве отрицательного контроля. У внутримышечно инъецированных мышей измеряли сывороточные уровни IgG в различные моменты времени. На фигуре 1D приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие связывание сывороткой мышей, которым вводили CVMl-IgG, оболочечного белка
(Env) вируса Чикунгунья (CHIKV). Планшеты ИФА покрывали рекомбинантным оболочечным белком CHIKV или вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) (подтип В; MN) и исследовали сыворотку, полученную на 15 сутки от мышей, которым делали однократную инъекцию CVMl-IgG, CVMl-Fab или pVaxl.
[0043] На фигуре 2, включающей фигуры 2A-2D, изображены
анализ связывания и нейтрализующая активность антител CVM1-
иммуноглобулин G (IgG). На фигуре 2А изображен
иммунофлуоресцентный анализ, демонстрирующий, что IgG, полученный от мышей, которым вводили CVMl-IgG, был способен связываться с оболочечным белком (Env) вируса Чикунгунья
(CHIKV). CHIKV-инфицированные клетки Vero фиксировали через 2 4
после инъекции и оценивали с помощью анализа иммунофлуоресценции
для выявления экспрессии антигена CHIKV Env (зеленый цвет) . Ядра
клеток окрашивали DAPI (синий цвет). Сыворотку от контрольных
мышей, инъецированных pVaxl, использовали в качестве
отрицательного контроля. На фигуре 2В изображена аффинность
связывания сыворотки от CVMl-IgG-инъецированных мышей (сутки 15)
с белками-мишенями. Связывание исследовали методом вестерн-
блоттинга, используя клеточные лизаты CHIKV- или
ложноинфицированных клеток. Мембраны с перенесенным белком повторно зондировали антителом против [3-актина в качестве загрузочного контроля. Представленное в данном документе
изображение было вырезано из оригинального изображения и
является репрезентативным для нескольких гелей. На фигуре 2С
изображен анализ методом сортировки флуоресцентно-активированных
клеток связывания сыворотки от инъецированных плазмидами мышей с
CHIKV-инфицированными клетками. По оси х указано окрашивание
зеленым флуоресцентным белком (ЗФБ) с применением лентивирусного
ЗФБ-псевдовируса, дополненного CHIKV Env. По оси у
продемонстрировано окрашивание инфицированных клеток
человеческим IgG, вырабатываемым у мышей через 15 суток после инъекции CVMl-IgG. Также показано окрашивание контрольным анти-CHIKV антителом (Env-антителом), а также окрашивание в отсутствие антител и pVaxl. Наличие и число двойных положительных клеток указывает на наличие и уровень связывания сыворотки с CHIKV-инфицированными клетками. На фигуре 2D изображено, что сыворотка от мышей, инъецированных CVMl-IgG посредством электропорации, обладает нейтрализующей активностью против некоторого количества штаммов CHIKV (т. е., Ross, LR2006-0PY1, IND-63-WB1, РС-08, DRDE-0 б и SL-CH1) . Титры нейтрализующего антитела нанесены на график, а 50% ингибиторные концентрации (значения IC50; в скобках) рассчитывали с помощью программного обеспечения Prism GraphPad. Аналогичные результаты наблюдали в 2 независимых экспериментах, причем в каждом эксперименте было по меньшей мере 10 мышей на группу.
[0044] На фигуре 3, включающей фигуры 3A-3D, изображены характеристики in vivo иммунной защиты, обеспечиваемой CVMl-Fab и CVM1-иммуноглобулином G (IgG). На фигуре ЗА изображено, что мышей BALB/c инъецировали 100 мкг pVaxl (отрицательный контроль), конструкций CVMl-IgG, CVMl-вариабельная тяжелая цепь и CVMl-вариабельная легкая цепь на 0 сутки и стимулировали вирусом чикунгунья (CHIKV) на 2 сутки. Мышей ежедневно осматривали и записывали уровень выживаемости в течение 2 0 суток после вирусной стимуляции. На фигуре ЗВ изображено, что мышей BALB/c инъецировали 100 мкг pVaxl (отрицательный контроль), конструкций CVMl-IgG, CVMl-вариабельная тяжелая цепь и CVMl-вариабельная легкая цепь на 0 сутки и стимулировали вирусом чикунгунья (CHIKV) на 3 0 сутки. Мышей ежедневно осматривали и
записывали уровень выживаемости в течение 2 0 суток после вирусной стимуляции. На фигуре ЗС изображена защита мышей при разных путях стимуляции CHIKV. Две группы мышей инъецировали 100 мкг CVMl-IgG внутримышечным путем с последующей вирусной стимуляцией на 2 сутки путем подкожной инокуляции. Мышей ежедневно осматривали и записывали уровень выживаемости в течение 2 0 суток после вирусной стимуляции. Черной стрелкой указаны инъекции плазмид; красной стрелкой указано время вирусной стимуляции. Каждая группа состояла из 10 мышей, а результаты представляли 2 независимых эксперимента. На фигуре 3D изображена защита мышей при разных путях стимуляции CHIKV. Две группы мышей инъецировали 100 мкг CVMl-IgG внутримышечным путем с последующей вирусной стимуляцией на 2 сутки путем интраназальной инокуляции. Мышей ежедневно осматривали и записывали уровень выживаемости в течение 2 0 суток после вирусной стимуляции. Черной стрелкой указаны инъекции плазмид; красной стрелкой указано время вирусной стимуляции. Каждая группа состояла из 10 мышей, а результаты представляли 2 независимых эксперимента.
[0045] На фигуре 4, включающей фигуры 4A-4D, изображены сравнительные и комбинированные исследования с CVM1-иммуноглобулином G (IgG) и ДНК-вакциной на основе оболочечного белка (Env) вируса чикунгунья (CHIKV). На фигуре 4А приведен анализ выживаемости мышей BALB/c, которых инъецировали 100 мкг CVMl-IgG, 100 мкг pVaxl (отрицательный контроль) или 25 мкг ДНК CHIKV-Env на 0 сутки и стимулировали на 2 сутки CHIKV Del-03 (JN578247; 1 х 107 бляшкообразующих единиц в общем объеме 25 мкл) . Мышей осматривали в течение 2 0 суток после стимуляции и записывали уровень выживаемости. На фигуре 4В приведен анализ выживаемости мышей BALB/c, к которым применяли однократную инъекцию 100 мкг CVMl-IgG на 0 сутки или 3 иммунизации по 2 5 мкг ДНК CHIKV Env на 0 сутки, 14 сутки и 28 сутки, а затем стимулировали на 35 сутки в тех же условиях и тем же изолятом CHIKV. Мышей осматривали в течение 2 0 суток после стимуляции и записывали уровень выживаемости. На фигуре 4С приведен анализ
выживаемости групп из 20 мышей BALB/c, к которым применяли
однократную инъекцию 100 мкг CVMl-IgG на 0 и 3 сутки иммунизации
ДНК CHIKV Env (25 мкг) на 0 сутки, 14 сутки и 2 8 сутки. Затем
половину мышей стимулировали на 2 сутки, а оставшуюся половину
стимулировали на 35 сутки в тех же условиях и тем же изолятом
CHIKV, как описано выше. Черной стрелкой указана инъекция
плазмид, а красной стрелкой указано время вирусной стимуляции.
Мышей осматривали в течение 2 0 суток после стимуляции и
записывали уровень выживаемости. На фигуре 4D приведены
экспериментальные результаты, демонстрирующие индукцию
стабильных и системных анти-CHIKV Env антител после однократной инъекции CVMl-IgG (человеческие анти-CHIKV Env) и иммунизации CHIKV-Env (мышиные анти-CHIKV Env) через 1 неделю после второй иммунизации у мышей.
[004 6] На фигуре 5, включающей фигуры 5А-5С, изображены
характеристики патологического отека лап и изменений массы у
стимулированных вирусом мышей, вакцинированных CVM1-
иммуноглобулином G (IgG) и/или ДНК оболочечного белка (Env) вируса чикунгунья (CHIKV). На фигуре 5А изображены вирусные титры через 1 неделю после стимуляции CHIKV у мышей, которые получали CVMl-IgG, CHIKV-Env, CVMl-IgG плюс CHIKV-Env или pVaxl (контроль). Каждая точка представляет средние вирусные титры для 10 мышей. Планки погрешностей указывают стандартную погрешность среднего значения. На фигуре 5В приведен средний суточный прирост массы (± стандартное отклонение [СО]) после подкожной инокуляции изолята CHIKV среди мышей, которые получали CVMl-IgG, CHIKV-Env, CVMl-IgG плюс CHIKV-Env или pVaxl. Мышей взвешивали на указанные сутки после инокуляции. Результаты представлены в виде средней массы тела (± СО) . На фигуре 5С изображен отек задних лап, который количественно оценивали с помощью калиперов на указанные сутки среди мышей, которые получали CVMl-IgG, CHIKV-Env, CVMl-IgG плюс CHIKV-Env или pVaxl. Данные представляют средние значения (± СО).
[0047] На фигуре б, включающей фигуру 6А и фигуру 6В, изображен клеточный иммунный анализ для стимулированных вирусом
мышей, вакцинированных CVMl-IgG и/или ДНК CHIKV-Env. На фигуре 6А приведены концентрации уровней анти-CHIKV человеческого IgG, измеренные у мышей, которых инъецировали CVMl-IgG плюс CHIKV-Env, а затем стимулировали на 35 сутки в тех же условиях изолятом CHIKV. Концентрации уровней анти-CHIKV человеческого IgG измеряли в указанные моменты времени после инъекции. На фигуре 6В изображены Т-клеточные ответы в спленоцитах мышей, инъецированных CVMl-IgG плюс CHIKV-Env, после стимуляции CHIKV-специфическими пептидами. IFN-y ELISPOT проводили для образцов на 35 сутки. Указанные данные представляют по меньшей мере 2 независимых эксперимента.
[0048] На фигуре 7 приведены характеристики сывороточных уровней провоспалительных цитокинов у инфицированных CHIKV мышей. Уровни цитокинов (TNF-a, IЪ- 1 (3 и IL-6) измеряли у мышей через одну неделю после стимуляции методом специфического анализа ИФА. Мыши, инъецированные CHIKV IgG и CHIKV-Env, имели
аналогичные и существенно сниженные сывороточные уровни TNF-a, IL-ip и IL-6. Данные представляют среднее по 3 лункам значение на мышь (п=10 на группу).
[0049] На фигуре 8 приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие индукцию стабильных и системных антител против Env вируса Зика. Ответы анти-ZIKV антител индуцируются иммунизацией ZIKV-prME +ZV-DMAb. Мышей А12 9 (п=4) три раза В/М иммунизировали 2 5 мкг плазмиды ZIKV-prME с 2-недельными интервалами или один раз ZIKV-DMAb. Анализировали связывание с рекомбинантным оболочечным белком ZIKV в сыворотке животных в разные указанные моменты времени. Индукция стабильных и системных анти-ZIKV Env антител после однократной инъекции ZV-IgG (человеческие анти-ZIKV) и иммунизации ZIKV-prME (мышиные антитела против оболочечного белка ZIKV). Приведенные данные представляют по меньшей мере два независимых эксперимента, и приведены средние значения ОП450 ± СО.
[0050] На фигуре 9 изображена структура белка ZIKV-E.
[0051] На фигуре 10 изображен рабочий процесс для разработки и получения характеристик dMAB против вируса Зика.
[0052] На фигуре 11 изображено связывание ИФА для ZIKV-Env-специфических моноклональных антител.
[0053] На фигуре 12 изображен вестерн-блоттинг для ZV Env и ZV тАВ. Загрузка - 2 мкг оболочечного белка rZV; для моноклонального антитела к ZV использовали разведение 1:250.
[0054] На фигуре 13 изображено выравнивание VH и VL для ZIKA mAb.
[0055] На фигуре 14 изображено выравнивание VH и VL и идентичность для ZIKA mAb и матрицы RMSD.
[0056] На фигуре 15 изображено наложение модели mAb.
[0057] На фигуре 16 приведено сравнение областей CDR.
[0058] На фигуре 17 изображено выравнивание VH и VL для тАВ 1С2А6, 8D10F4 и 8A9F9.
[0059] На фигуре 18 изображена модель 1С2А6 Fv.
[0060] На фигуре 19 приведены обобщенные данные по биофизическим характеристикам Fv для 8D10F4, 1С2А6, 8A9F9, 3F12E9 и 1D4G7.
[0061] На фигуре 20, включающей фигуры 2 0А-2 0Е, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие конструкцию ДНК-вакцины на основе консенсусной области ZIKV-prME. На фигуре 2OA приведено схематическое представление ДНК-вакцины на основе ZIKV-prME с указанием клонирования гМЕ в экспрессионный вектор pVaxl млекопитающих. Стратегия создания консенсусной конструкции была адаптирована для консенсусной последовательности ZIKV-prME. Кодон-оптимизирвоанные синтетические гены конструкции ргМЕ включали синтетическую лидерную последовательность IgE. Оптимизированную генную конструкцию вставляли в участки BamHl и Xhol модифицированного вектора pVaxl под управлением промотора ЦМВ. На фигуре 2 0В изображена модель строения белков ZIKV-E, демонстрирующая перекрытие мишени вакцины с потенциально релевантными эпитопными областями. Несколько изменений, сделанных в целях разработки вакцины, находятся в доменах II и III (расположенных в пунктирной рамке на вставке, посередине слева). Изменения специфических для вакцины остатков в этих областях показаны в фиолетовом СРК-формате на представленном в виде ленты каркасе димера белка Е (оболочечного) (каждая цепь
показана в светло- и темно-зеленом цвете соответственно). Области, соответствующие определенному EDE, указаны в голубом цвете, а петля слияния указана в синем цвете. Остаток 11е15б (T156I) белка Е вакцины, смоделированный находящимся на поверхности петли 150, является частью N-связанного мотива гликозилирования NXS/T в нескольких других штаммах ZIKV, а также в некотором числе штаммов вируса Денге. На фигуре 2°С приведен анализ экспрессии методом ДСН-ПААГ для экспрессии белка ZIKV-prME в клетках 2 93Т с применением анализа методом вестерн-блоттинга. Клетки 2 93Т трансфицировали плазмидой ZIKV-prME и анализировали клеточные лизаты и супернатанты в отношении экспрессии конструкции вакцины с иммунизированной пан-флавивирусом сывороткой. Маркеры молекулярной массы белка (кДа); клеточный лизат и супернатант из трансфицированных ZIKV-prME клеток и положительный контроль rZIKV-E загружали как указано. На фигуре 2 0D приведен анализ экспрессии методом ДСН-ПААГ для экспрессии белка ZIKV-prME в клетках 2 93Т с применением анализа методом вестерн-блоттинга. Клетки 2 93Т трансфицировали плазмидой ZIKV-prME и анализировали клеточные лизаты и супернатанты в отношении экспрессии конструкции вакцины с иммунизированной ZIKV-prME сывороткой. Маркеры молекулярной массы белка (кДа); клеточный лизат и супернатант из трансфицированных ZIKV-prME клеток и положительный контроль rZIKV-E загружали как указано. На фигуре 2 0Е приведен иммунофлуоресцентный анализ (ИФА) для экспрессии белка ZIKV-prME в клетках 293Т. Клетки трансфицировали 5 мкг плазмиды ZIKVprME. Через двадцать четыре часа после трансфекции проводили иммунофлуоресцентное мечение с добавлением сыворотки (1:100) от иммунизированных ZIKV-prME мышей с последующим добавлением вторичного антимышиного IgG-AF4 8 8 антитела для выявления. Показано окрашивание сыворотки от иммунизированных ZIKV-prME и pVaxl мышей. Панели DAPI показывают контрольное окрашивание клеточных ядер. Панели наложения представляют комбинации профилей окрашивания антимышиным IgG-AF488 и DAPI. DAPI, 4',б-диамидино-2-фенилиндол; ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0062] На фигуре 21, включающей фигуры 21A-21D, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие характеристики клеточных иммунных ответов у мышей после вакцинации ДНК-вакциной ZIKV-prME. На фигуре 21А изображена хронология иммунизаций и иммунный анализ, используемый в исследовании. На фигуре 21В приведен анализ методом ELISpot, в котором измеряли секрецию IFN-y в спленоцитах в ответ на иммунизацию ZIKV-prME. Мышей C57BL/6 (п=4/группа) три раза В/М иммунизировали 25 мкг pVaxl или ДНК-вакциной ZIKV-prME с последующей электропорацией. Генерацию IFN-y, как показатель индукции клеточных иммунных ответов, измеряли методом анализа ELISpot для IFN-y. Спленоциты, собранные через 1 неделю после третьей иммунизации, инкубировали в присутствии одного из шести пептидных пулов, охватывающих весь белок ргМ и оболочечный белок. Результаты показаны в виде графиков из составных прямоугольников. Данные представляют среднее число СОЕ (спот-образующих единиц) на миллион спленоцитов, при этом значения представляют средние ответы в каждом ± с. п. с. На фигуре 21С изображен эпитопный состав
ZIKVprME-специфического IFN-y ответа, определенный путем стимуляции матриксных пептидных пулов через 1 неделю после третьей иммунизации. Значения представляют средние ответы в каждой группе ± с. п. с. Эксперименты проводили независимым образом по меньшей мере три раза, получая аналогичные результаты. На фигуре 21D приведен анализ методом проточной цитометрии Т-клеточных ответов. Иммунизация ZIKV-prME индуцирует повышение числа секретирующих IFN-y и TNF-a клеток при стимуляции пептидами ZIKV. Через одну неделю после иммунизации вакциной ZIKV-prME спленоциты культивировали в присутствии объединенных пептидов ZIKV (5 мкМ) или только R10. Частоту появления клеток, секретирующих специфические к пептиду ZIKV IFN-y и TNF-a, измеряли методом проточной цитометрии. Однофункциональные гейты устанавливали на основании отрицательных контрольных (нестимулированных) образцов и соответствующим образом помещали среди образцов. Приведено процентное содержание общих ответов Т-клеток CD8+. Эти данные представляют два независимых эксперимента
по иммунизации. IFN, интерферон; TNF, фактор некроза опухолей; ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0063] На фигуре 22, включающей фигуры 22А-22Е, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие, что ответы анти-ZIKV антитела индуцируются вакцинацией ZIKV-prME. На фигуре 22А приведен анализ ИФА, в котором измеряли выработку связывающего антитела (измеряемую по значениям ОП450) у иммунизированных мышей. Мышей C57BL/6 (п=4) три раза В/М иммунизировали 25 мкг плазмиды ZIKV-prME или pVaxl с 2-недельными интервалами. Связывание с rZIKV-E анализировали с использованием сыворотки от животных в разные моменты времени (21, 35 и 50 сутки) после иммунизации при различных разведениях. Указанные данные представляют по меньшей мере три независимых эксперимента. На фигуре 22В изображен анализ конечных титров связывания. Разницу в конечных титрах анти-ZIKV, вырабатываемых в ответ на иммуноген ZIKV-prME, анализировали в сыворотке от иммунизированных животных после каждой повторной инъекции. На фигуре 22С изображен анализ методом вестерн-блоттинга специфических к rZIKV-E антител, индуцируемых иммунизацией ZIKV-prME. Белок rZIKV-E электрофорировали в 12,5% ДСН полиакриламидном геле и анализировали методом вестерн-блоттинга с использованием объединенной сыворотки от иммунизированных ZIKV-prME мышей (35 сутки). Связывание с rZIKV-E указано наконечниками стрелок. На фигуре 22D изображен иммунофлуоресцентный анализ специфических к ZIKV антител, индуцируемых иммунизацией ZIKV-prME. Клетки Vero, инфицированные ZIKV-MR7 6 6 или ложноинфицированные, окрашивали объединенной сывороткой от иммунизированных ZIKV-prME мышей (35 сутки) с последующим применением антимышиного-АЕ488 вторичного антитела для выявления. На фигуре 22Е приведен анализ нейтрализации бляшкообразования (PRNT) для нейтрализующих антител, индуцируемых иммунизацией ZIKV-prME. Образцы сыворотки от иммунизированных ZIKV-prME мышей исследовали в отношении их способности нейтрализовать инфективность ZIKV in vitro. PRNT50 определяли как показатель сывороточного разведения, которое могло ингибировать 50% введенного вируса. Значения в скобках указывают PRNT50. Контрольную сыворотку ZIKV-Cap (ДНК-вакцина,
экспрессирующая капсидный белок ZIKV) и pVaxl использовали в качестве отрицательного контроля. ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0064] На фигуре 23, включающей фигуры 2 3А-2 3Е, приведены
экспериментальные результаты, демонстрирующие индукцию ZIKV-
специфических клеточных иммунных ответов после вакцинации ZIKV-
prME отличных от человека приматов (ОЧП). На фигуре 2ЗА приведен
анализ методом ELISpot, в котором измеряли секрецию IFN-y в
мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) в ответ на
иммунизацию ZIKV-prME. Макаков резус на 0 и 4 недели
интрадермально иммунизировали 2 мг плазмиды ZIKV-prME, вводимой
в объеме 1 мг в каждый из двух участков, при этом за
иммунизацией незамедлительно следовала интрадермальная
электропорация. МКПК выделяли до иммунизации и на б неделю и использовали для анализа ELISPOT для выявления IFN-y-секретирующих клеток в ответ на стимуляцию пептидами ZIKV-prME, как описано в разделе "Материалы и методы". Приведено число вырабатывающих IFN-y клеток, полученное на миллион МКПК, для шести пептидных пулов, охватывающих весь белок ргМЕ. Значения представляют средние ответы в каждой группе (n=5) ± с. п. с. На фигуре 2 3В изображено выявление ответов ZIKV-prME-специфических антител после ДНК-вакцинации. Анти-ZIKV IgG антитела измеряли до иммунизации и на б неделю методом ИФА. На фигуре 2 3С изображены конечные титры ИФА для антител против оболочечного белка ZIKV после первой и второй иммунизаций. На фигуре 23D приведен анализ методом вестерн-блоттинга с использованием соответствующей б неделе иммунной сыворотки MP, демонстрирующей связывание с рекомбинантным оболочечным белком. На фигуре 23Е изображена активность PRNT сыворотки MP, иммунизированных ZIKV-prME. Сыворотку до иммунизации и соответствующую б неделе иммунную сыворотку от отдельных обезьян исследовали методом анализа нейтрализации бляшкообразования (PRNT) в отношении способности нейтрализовать инфективность ZIKV in vitro. PRNT50 определяли как показатель сывороточного разведения, которое могло ингибировать 50% введенного вируса. Рассчитанные значения
(PRNT50) приведены для каждой обезьяны. IFN, интерферон; ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0065] На фигуре 24, включающей фигуры 2 4A-2 4F, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие данные по выживаемости мышей, у которых отсутствовал рецептор интерферонов а, Р типа I, после инфекции ZIKV. На фигуре 2 4А изображена выживаемость мышей IFNAR_/~ после инфекции ZIKV. Мышей дважды иммунизировали 2 5 мкг ДНК-вакцины ZIKV-prME с 2-недельными интервалами и стимулировали вирусом ZIKV-PR2 0 9 через 1 неделю после второй иммунизации 1 х 106 бляшкообразующих единиц. На фигуре 2 4В изображена выживаемость мышей IFNAR_/~ после инфекции ZIKV. Мышей дважды иммунизировали 2 5 мкг ДНК-вакцины ZIKV-prME с 2-недельными интервалами и стимулировали вирусом ZIKV-PR209 через 1 неделю после второй иммунизации 2 х 106 бляшкообразующих единиц. На фигуре 24С приведено изменение массы животных, иммунизированных 1 х 106 бляшкообразующих единиц. На фигуре 2 4D приведено изменение массы животных, иммунизированных 2 х 106 бляшкообразующих единиц. На фигуре 2 4Е приведена клиническая оценка животных, иммунизированных 1 х 106 бляшкообразующих единиц. На фигуре 24F приведена клиническая оценка животных, иммунизированных 2 х 106 бляшкообразующих единиц. Обозначение клинической оценки следующее: 1: отсутствие заболевания, 2: сниженная подвижность; 3: сгорбленная поза и сниженная подвижность; 4: хождение на задних конечностях с опорой на костяшки пальцев (частичный паралич); 5: паралич одной задней конечности; и б: паралич обеих задних конечностей. Данные отображают результаты по двум независимым экспериментам с 10 мышами на группу в эксперименте. ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0066] На фигуре 25, включающей фигуры 2 5A-2 5D, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие, что однократная иммунизация вакциной ZIKV-prME обеспечивала защиту против стимуляции ZIKV у мышей, у которых отсутствовал рецептор интерферонов а, Р типа I. Мышей иммунизировали один раз и
стимулировали 2 х 106 бляшкообразующих единиц ZIKV-PR2 0 9 через 2 недели после однократной иммунизации. Кривые выживаемости построены для 10 мышей на группу в эксперименте. На фигуре 2 5А продемонстрировано, что вакцина ZIKV-prME предотвращала ZIKA-индуцированные неврологические аномалии в головном мозге мышей. На фигуре 2 5В изображены срезы головного мозга от вакцинированных pVaxl и ZIKV-prME групп, которые были получены через 7-8 суток после стимуляции и окрашены Н &Е (гематоксилином и эозином) для гистологии. Срезы, полученные от репрезентативных незащищенных pVaxl контрольных животных, демонстрируют наличие патологии, (i) : ядерные фрагменты с нейропилями коры головного мозга (на вставках приведен увеличенный масштаб и стрелки для указания ядерных фрагментов); (ii): периваскулярная инфильтрация сосудов в коре, лимфоцитарная инфильтрация и дегенеративные клетки; (iii): периваскулярная инфильтрация, клеточная дегенерация и ядерные фрагменты в коре головного мозга; и (iv): дегенеративные нейроны в гиппокампе (стрелки). Пример нормальной ткани от вакцинированных ZIKV-prME мышей соответствует нормальным границам (v и vi). На фигуре 2 5С приведены уровни РНК ZIKV в образцах плазмы от мышей после вакцинации и вирусной стимуляции в указанные сутки после инфицирования. Результаты указаны в виде геномных эквивалентов на миллилитр плазмы. На фигуре 25D приведены уровни РНК ZIKV в тканях головного мозга, которые анализировали на 2 8 сутки после инфицирования. Результаты указаны в виде геномного эквивалента на грамм ткани. ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0067] На фигуре 2 6, включающей фигуру 2 6А и фигуру 2 6В, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие защиту мышей, у которых отсутствовал рецептор интерферонов а, (3 типа I, после пассивного переноса анти-ZIKV иммунной сыворотки после стимуляции ZIKV. Объединенную анти-ZIKV иммунную сыворотку отличных от человека приматов (ОЧП), титрованную в отношении IgG против вируса ZIKA, вводили мышам В/Б (150 мкл/мышь) через 1 сутки после П/К стимуляции вирусом ZIKA (106 бляшкообразующих единиц на мышь). В качестве контроля соответствующим по возрасту
мышам вводили нормальную обезьянью сыворотку и фосфатно-солевой буфер (ФСБ) (150 мкл/мышь). На фигуре 2 6А приведено изменение массы тела мышей во время течения инфекции и лечения. Каждая точка представляет среднее значение и стандартную погрешность рассчитанной массы до стимуляции (сутки 0) для каждой мыши. На фигуре 2 6В приведена выживаемость мышей после введения иммунной сыворотки отличных от человека приматов (ОЧП). ZIKV-prME, предшественник мембраны и оболочки вируса Зика.
[0068] На фигуре 27, включающей фигуры 2 7A-2 7D, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие характеристики иммунных ответов вакцины ZIKV-prME-MR7бб или ZIKV-prME-Бразилия у мышей C57BL/6. На фигуре 27А приведен анализ ELISpot и ИФА, в котором измеряли ответы клеток и антител после вакцинации ДНК-вакцинами ZIKV-prME-MR7 6 6 и ZIKV-prME-Бразилия. Мышей C57BL/6
(п=4/группа) три раза внутримышечно иммунизировали 2 5 мкг ZIKV-prME-MR7 6 6 с последующей in vivo ЭП. Генерацию IFN-y, как показатель индукции клеточного иммунного ответа, измеряли с помощью ELISpot для IFN-y. Спленоциты, собранные через одну неделю после третьей иммунизации, инкубировали в присутствии одного из шести пептидных пулов, охватывающих весь белок ргМ и оболочечный белок. Результаты показаны в виде графиков из составных прямоугольников. Данные представляют среднее число СОЕ
(спот-образующих единиц) на миллион спленоцитов, при этом значения представляют средние ответы в каждом ± с. п. с. На фигуре 27В приведен анализ ELISpot и ИФА, в котором измеряли ответы клеток и антител после вакцинации ДНК-вакцинами ZIKV-prME-MR7 66 и ZIKV-prME-Бразилия. Мышей C57BL/6 (п=4/группа) три раза внутримышечно иммунизировали 2 5 мкг ZIKV-prME-Бразилия с последующей in vivo ЭП. Генерацию IFN-y, как показатель индукции клеточного иммунного ответа, измеряли с помощью ELISpot для IFN-у. Спленоциты, собранные через одну неделю после третьей иммунизации, инкубировали в присутствии одного из шести пептидных пулов, охватывающих весь белок ргМ и оболочечный белок. Результаты показаны в виде графиков из составных прямоугольников. Данные представляют среднее число СОЕ (спот
образующих единиц) на миллион спленоцитов, при этом значения представляют средние ответы в каждом ± с. п. с. На фигуре 2 7С приведен анализ ИФА, в котором измеряли выработку связывающего антитела у иммунизированных мышей C57BL/6. Связывание с rZIKV-E анализировали с использованием сыворотки мышей на 35 сутки после иммунизации при различных разведениях. На фигуре 2 7D приведен анализ ИФА, в котором измеряли выработку связывающего антитела у иммунизированных мышей C57BL/6. Связывание с rZIKV-E анализировали с использованием сыворотки мышей на 35 сутки после иммунизации при различных разведениях.
[0069] На фигуре 28, включающей фигуры 2 8A-2 8D, приведены
экспериментальные результаты, демонстрирующие экспрессию,
очистку и характеристики оболочечного белка ZIKV. На фигуре 28А
изображена клонирующая плазмида для экспрессии гZIKV Е. На
фигуре 2 8В приведены характеристики рекомбинантного белка ZIKV-E
(rZIKV-E), полученные методом анализа ДСН-ПААГ и вестерн-
блоттинга. Полоска 1 - БСА-контроль; Полоска 2 - лизаты из
культур Е. coli, трансформированные векторной плазмидой рЕТ-2 8а,
очищали с помощью никелевых колонок для аффинной хроматографии
со смолой и разделяли методом ДСН-ПААГ после индукции ИПТГ.
Полоска 3, 37 рекомбинантный очищенный белок ZV-E анализировали
методом вестерн-блоттинга с использованием антитела против His-
метки. Полоска М, маркер молекулярной массы белка. На фигуре 2 8С
приведена оценка очищенного белка rZIKV-E в отношении его
антигенности. Планшеты ИФА покрывали rZIKV-E, а затем
инкубировали с различными разведениями иммунной сыворотки от
мышей, иммунизированных вакциной ZIKV-prME или антителом к пан-
флавивирусу в качестве положительного контроля. Связанный IgG
выявляли путем добавления конъюгированного с пероксидазой
антимышиного антитела с последующим применением
тетраметилбензидинового субстрата, как описано в
экспериментальном примере. На фигуре 2 8D приведено выявление методом вестерн-блоттинга очищенного белка rZIKV-E с иммунной сывороткой от иммунизированных ZIKV ргМЕ мышей. В ДСН-ПААГ гель загружали различные концентрации очищенного белка rZIKV-E, как
описано. Использовали разведение 1:100 иммунной сыворотки и козьего антимышиного антитела при 1:15 ООО в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывки мембраны визуализировали на инфракрасном визуализаторе Odyssey. Использовали стандартные значения молекулярной массы белка Odyssey. Стрелками указано положение белка rZIKV-E.
На фигуре 29, включающей фигуры 29А-29С, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие характеристики иммунных ответов ZIKA-prME у мышей IFNARr7-. Анализ ELISpot и ИФА, в котором измеряли ответы клеток и антител на ZIKV-prME у мышей IFNART7-. Мышей (п=4/группа) три раза внутримышечно иммунизировали 2 5 мкг ZIKV-prME с последующей in vivo ЭП. На фигуре 2 9А изображена генерация IFN-y, как показатель индукции клеточного иммунного ответа, измеренная с помощью ELISPOT для IFN-y. На фигуре 2 9В приведен анализ ИФА, в котором измеряли выработку связывающего антитела у иммунизированных мышей IFNAR_/~ . Связывание с rZIKV-E анализировали с использованием сыворотки мышей в различные моменты времени после иммунизации. На фигуре 29С приведен анализ конечных титров анти-ZIKV антител, вырабатываемых у иммунизированных мышей IFNARr7-.
[0070] На фигуре 30, включающей фигуры 30A-30D, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие нейтрализующую активность иммунной сыворотки от макаков резус, иммунизированных против ZIKV-prME. Клетки SK-N-SH и U87MG были ложноинфицированы или инфицированы MR766 при МЗ 0,01 БОЕ/клетка в присутствии объединенной сыворотки отличных от человека приматов (ОЧП), иммунизированных вакциной ZIKV-prME (нед. б) . Инфективность вируса Зика анализировали через 4 суток после инфицирования с помощью непрямого иммунофлуоресцентного анализа (ИФА) с использованием сыворотки от вакцинированных ZIKV-prME отличных от человека приматов (ОЧП). На фигуре ЗОА приведены фотографии окрашенных срезов образцов тканей, полученные с помощью объектива с 2 Ох увеличением, демонстрирующие ингибирование инфекции вирусами ZIKV MR7 6 6 и PR2 0 9 в Vero, SK-N-SH и U8 7MG. На фигуре ЗОВ приведены фотографии окрашенных срезов образцов
тканей, полученные с помощью объектива с 2 Ох увеличением,
демонстрирующие ингибирование инфекции вирусами ZIKV SK-N-SH и
U87MG в Vero, SK-N-SH и U87MG. На фигуре 3°С приведена
гистограмма, показывающая процентное содержание инфицированных
(ЗФБ-положительных) клеток, демонстрирующая ингибирование
инфекции вирусами ZIKV MR7 6 6 м PR2 0 9 в Vero, SK-N-SH и U8 7MG. На
фигуре 30D приведена гистограмма, показывающая процентное
содержание инфицированных (ЗФБ-положительных) клеток,
демонстрирующая ингибирование инфекции вирусами ZIKV SK-N-SH и U87MG в Vero, SK-N-SH и U87MG.
[0071] На фигуре 31, включающей фигуры 31A-31D, приведены экспериментальные результаты, демонстрирующие, что ZIKV является вирулентным у мышей IFNAR_/~. Эти данные подтверждают, что ZIKV является вирулентным у IFNAR_/~, приводя к заболеваемости и смертности. На фигуре 31А приведены кривые выживаемости Каплана-Мейера для мышей IFNAR_/~ инокулированных путем внутричерепной инъекции 106 БОЕ вируса ZIKV-PR209. На фигуре 31В приведены кривые выживаемости Каплана-Мейера для мышей IFNAR_/~ инокулированных путем внутривенной инъекции 106 БОЕ вируса ZIKV-PR2 09. На фигуре 31С приведены кривые выживаемости Каплана-Мейера для мышей IFNAR_/~ инокулированных путем внутрибрюшинной инъекции 106 БОЕ вируса ZIKV-PR209. На фигуре 31D приведены кривые выживаемости Каплана-Мейера для мышей IFNAR_/~ инокулированных путем подкожной инъекции 106 БОЕ вируса ZIKV-PR2 09. На фигуре 31А приведено изменение массы тела мышей во время течения инфекции для всех путей инокуляции. Подробное описание изобретения
[0072] В одном варианте реализации в изобретении предложена композиция, содержащая одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или более антигенов, и одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих одно или более антител или их фрагментов.
[0073] В одном варианте реализации в изобретении предложена композиция, содержащая комбинацию композиции, которая вызывает иммунный ответ у млекопитающего против необходимой мишени, и
композиции, содержащей рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию.
[0074] В одном варианте реализации рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело, содержит последовательности, которые кодируют тяжелую цепь и легкую цепь. В частности, полипептиды тяжелой цепи и легкой цепи, экспрессируемые с рекомбинантных последовательностей нуклеиновых кислот, могут быть собраны в синтетическое антитело. Полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи могут взаимодействовать друг с другом так, что сборка приводит к получению синтетического антитела, способного связывать антиген, являющийся более иммуногенным, по сравнению с антителом, не прошедшим описанную в данном документе сборку, и способного вызывать или индуцировать иммунный ответ против антигена.
[0075] Кроме того, эти синтетические антитела более быстро генерируются в организме субъекта, чем антитела, которые вырабатываются в ответ на индуцированный антигеном иммунный ответ. Синтетические антитела способны эффективно связывать и нейтрализовать ряд антигенов. Синтетические антитела также способны эффективно защищать от и/или стимулировать выживаемость при заболевании.
[0076] В другом аспекте настоящего изобретения предложены вакцины на основе ДНК-плазмиды, которые способны генерировать у млекопитающего иммунный ответ против необходимой мишени (например, антигена). Вакцины на основе ДНК-плазмиды состоят из ДНК-плазмиды, способной экспрессировать консенсусный антиген в организме млекопитающего, и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества. ДНК-плазмида состоит из промотора, функционально связанного с кодирующей последовательностью, которая кодирует консенсусный антиген.
1. Определения
[0077] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно подразумевается специалистом в данной области техники. В случае противоречия, приоритет имеет
настоящий документ, включая определения. Предпочтительные способы и материалы описаны ниже, хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, могут быть использованы на практике или при проверке настоящего изобретения. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упоминаемые в данном документе, в полном объеме включены посредством ссылки. Описанные в данном документе материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными и не подразумевают ограничения.
[0078] В контексте данного документа подразумевается, что термины "содержит (-ат)", "включает (-ют)", "имеющий", "имеет", "может" и их варианты являются открытыми переходными фразами, терминами или словами, которые не исключают возможности наличия дополнительных действий или структур. Формы единственного числа включают отсылки к множественному числу, если иное четко не следует из контекста. В настоящем изобретении также предусмотрены другие варианты реализации, "содержащие", "состоящие из" и "состоящие преимущественно из" представленных в данном документе вариантов реализации или элементов, приведенных явным образом или нет.
[0079] "Антитело" может означать антитело классов IgG, IgM, IgA, IgD или IgE или их фрагменты или производные, включая Fab, F(ab')2, Fd и одноцепочечные антитела и их фрагменты. Антитело может представлять собой антитело, выделенное из образца сыворотки млекопитающего, поликлональное антитело, прошедшее аффинную очистку антитело или их смеси, которые проявляют достаточную специфичность связывания с необходимым эпитопом или полученной из него последовательностью.
[0080] В контексте данного документа "фрагмент антитела" относится к части интактного антитела, содержащей антигенсвязывающий участок или вариабельную область. Эта часть не включает константные домены тяжелой цепи (т. е. СН2, СНЗ или СН4 в зависимости от изотипа антитела) Fc-области интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваются этим, фрагменты Fab, фрагменты Fab', фрагменты Fab'-SH, фрагменты F(ab')2, фрагменты Fd, фрагменты Fv, диатела,
одноцепочечные молекулы Fv (scFv), одноцепочечные полипептиды, содержащие только один вариабельный домен легкой цепи, одноцепочечные полипептиды, содержащие три CDR вариабельного домена легкой цепи, одноцепочечные полипептиды, содержащие только одну вариабельную область тяжелой цепи, одноцепочечные полипептиды, содержащие три CDR вариабельной области тяжелой цепи.
[0081] "Антиген" относится к белкам, которые способны генерировать иммунный ответ в организме-хозяине. Антиген может распознаваться и связываться антителом. Антиген может иметь происхождение, связанное с организмом или внешней средой.
[0082] В контексте данного документа "кодирующая последовательность" или "кодирующая нуклеиновая кислота" относится к нуклеиновой кислоте (молекуле РНК или ДНК), которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую приведенное в данном документе антитело. Кодирующая последовательность может дополнительно содержать сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования, способными управлять экспрессией в клетках индивида или млекопитающего, которому вводят нуклеиновую кислоту. Кодирующая последовательность может дополнительно содержать последовательности, которые кодируют сигнальные пептиды.
[0083] В контексте данного документа термин
"комплементарная" может означать нуклеиновую кислоту, характеризующуюся Уотсон-Криковским (например, A-T/U и C-G) или Хугстиновским спариванием оснований между нуклеотидами или нуклеотидными аналогами молекул нуклеиновых кислот.
[0084] В контексте данного документа термин "постоянный ток" используется для определения тока, проходящего или воздействующего на ткань или клетки, определяющие указанную ткань, в течение длительности электрического импульса, подаваемого на ту же самую ткань. Электрический импульс подается из описанных в данном документе устройств для электропорации. Ток остается постоянным в указанной ткани в течение действия электрического импульса, так как предложенное в данном документе
устройство для электропорации имеет цепь обратной связи, предпочтительно характеризующуюся мгновенной обратной связью. Цепь обратной связи может измерять сопротивление ткани (или клеток) во время длительности импульса и давать команду устройству для электропорации для изменения вырабатываемой электрической энергии (например, повышения напряжения) так, чтобы ток в одной ткани оставался постоянным в течение электрического импульса (порядка микросекунд) и от импульса к импульсу. В некоторых вариантах реализации цепь обратной связи содержит контроллер.
[0085] В контексте данного документа термины "обратная связь по току" или "обратная связь" могут использоваться взаимозаменяемо и могут означать активный ответ предложенных устройств для электропорации, который включает измерение тока в ткани между электродами и соответствующее изменение вырабатываемой устройством ЭП энергии, чтобы поддерживать ток на постоянном уровне. Этот постоянный уровень задается пользователем до инициации последовательности импульсов или электрической обработки. Обратная связь может осуществляться электропорационным компонентом, например, контроллером, устройства для электропорации, так как электрический контур в нем может непрерывно отслеживать ток в ткани между электродами и сравнивать этот отслеживаемый ток (или ток в ткани) с заданным током и непрерывно проводить корректировку вырабатываемой энергии для поддержания отслеживаемого тока на заданном уровне. Контур обратной связи может характеризоваться мгновенным действием, так как он является аналоговым замкнутым контуром обратной связи.
[0086] В контексте данного документа термин
"децентрализованный ток" может означать профиль электрического тока, подаваемого из различных матриц с игольчатыми электродами описанных в данном документе устройств для электропорации, при этом профили минимизируют или, предпочтительно, устраняют появление связанного с электропорацией теплового стресса в любой области электропорируемой ткани.
[0087] В контексте данного документа взаимозаменяемые
термины "электропорация", "электропермеабилизация" или
"электрокинетическое усиление" ("ЭП") могут относиться к применению трансмембранных электрических импульсов для индукции микроскопических путей (пор) в биомембране; их наличие позволяет биомолекулам, таким как плазмиды, олигонуклеотиды, миРНК, лекарства, ионы и вода, проходить с одной стороны клеточной мембраны на другую.
[0088] В контексте данного документа термин "эндогенное антитело" может относиться к антителу, генерируемому у субъекта, которому вводят эффективную дозу антигена для индукции гуморального иммунного ответа.
[0089] В контексте данного документа термин "механизм обратной связи" может относиться к процессу, осуществляемому программным обеспечением или аппаратным обеспечение (или техническим обеспечением) , который заключается в получении и сравнении импеданса необходимой ткани (до, во время и/или после подачи импульса энергии) с заданным значением, предпочтительно током, и коррекции подаваемого импульса энергии для достижения заданного значения. Механизм обратной связи может осуществляться аналоговым замкнутым контуром.
[0090] "Фрагмент" может обозначать полипептидный фрагмент антитела, который является функциональным, т. е. может связываться с необходимой мишенью и имеет такое же предполагаемое действие, что и полноразмерное антитело. Фрагмент антитела может быть на 10 0% идентичным полноразмерному антителу, за исключением отсутствия по меньшей мере одной аминокислоты в N- и/или С-конце, в каждом случае с сигнальными пептидами и/или метионином в позиции 1 или без. Фрагменты могут содержать 2 0% или более, 25% или более, 30% или более, 35% или более, 40% или более, 45% или более, 50% или более, 55% или более, 60% или более, 65% или более, 70% или более, 75% или более, 80% или более, 85% или более, 90% или более, 91% или более, 92% или более, 93% или более, 94% или более, 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более, 99% или более процентов длины конкретного полноразмерного антитела, за исключением добавления любого гетерологичного сигнального пептида. Фрагмент
может содержать фрагмент полипептида, который на 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более или 99% или более идентичен антителу, и дополнительно содержать N-концевой метионин или гетерологичный сигнальный пептид, который не был включен при расчете процента идентичности. Фрагменты могут дополнительно содержать N-концевой метионин и/или сигнальный пептид, такой как сигнальный пептид иммуноглобулина, например, сигнальный пептид IgE или IgG. N-концевой метионин и/или сигнальный пептид могут быть связаны с фрагментом антитела.
[0091] Фрагмент последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело, может быть на 100% идентичным полноразмерной последовательности, за исключением отсутствия по меньшей мере одного нуклеотида в 5' и/или 3' конце, в каждом случае с последовательностями, кодирующими сигнальные пептиды и/или метионин в позиции 1, или без. Фрагменты могут содержать 20% или более, 25% или более, 30% или более, 35% или более, 40% или более, 45% или более, 50% или более, 55% или более, 60% или более, 65% или более, 70% или более, 75% или более, 80% или более, 85% или более, 90% или более, 91% или более, 92% или более, 93% или более, 94% или более, 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более, 99% или более процентов длины конкретной полноразмерной кодирующей последовательности, за исключением добавления любого гетерологичного сигнального пептида. Фрагмент может содержать фрагмент, который кодирует полипептид, который на 95% или более, 96% или более, 97% или более, 98% или более или 99% или более идентичен антителу, и дополнительно, необязательно, содержать последовательность, кодирующую N-концевой метионин или гетерологичный сигнальный пептид, который не был включен при расчете процента идентичности. Фрагменты могут дополнительно содержать последовательности для N-концевого метионина и/или сигнального пептида, такого как сигнальный пептид иммуноглобулина, например, сигнальный пептид IgE или IgG. Кодирующая последовательность, кодирующая N-концевой метионин и/или сигнальный пептид, может быть связана с фрагментом кодирующей последовательности.
[0092] В контексте данного документа термин "генетическая
конструкция" относится к молекулам ДНК или РНК, которые содержат
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок, такой
как антитело. Кодирующая последовательность содержит сигналы
инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными
элементами, включая промотор и сигнал полиаденилирования,
способными управлять экспрессией в клетках индивида, которому
вводят молекулу нуклеиновой кислоты. В контексте данного
документа термин "форма с возможностью экспрессии" относится к
генным конструкциям, которые содержат необходимые регуляторные
элементы, функционально связанные с кодирующей
последовательностью, которая кодирует белок так, что в случае присутствия в клетке индивида будет происходить экспрессия кодирующей последовательности.
[0093] Употребляемые в данном документа термины "идентичная" или "идентичность" в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидов могут означать, что последовательности имеют заданный процент остатков, являющихся одинаковыми на протяжении заданной области. Процент можно рассчитывать путем оптимального выравнивания двух последовательностей, сравнения двух последовательностей на протяжении заданной области, определения числа позиций, в которых в обеих последовательностях находится идентичный остаток, для получения числа совпадающих позиций, деления числа совпадающих позиций на общее число позиций в заданной области и умножения результата на 100 для получения процента идентичности последовательностей. В случае, когда две последовательности имеют разную длину или выравнивание приводит к получению одного или более ступенчатых концов и заданная область сравнения включает только одну последовательность, остатки этой одной последовательности включаются в знаменатель, но не в числитель при расчете. При сравнении ДНК и РНК тимин (Т) и урацил (U) могут считаться эквивалентными. Идентичность можно оценивать вручную, или используя компьютерный алгоритм выравнивания последовательностей, такой как BLAST или BLAST 2.0.
[0094] В контексте данного документа термин "импеданс" может использоваться при обсуждении механизма обратной связи и
может быть преобразован в значение силы тока по закону Ома, делая возможным сравнение с текущим значением силы тока.
[0095] В контексте данного документа термин "иммунный ответ" может означать активацию иммунной системы организма-хозяина, например, млекопитающего, в ответ на внесение одной или более нуклеиновых кислот и/или пептидов. Иммунный ответ может иметь форму клеточного или гуморального ответа или их обоих.
[0096] В контексте данного документа термины "нуклеиновая кислота" или "олигонуклеотид", или "полинуклеотид" могут означать по меньшей мере два нуклеотида, ковалентно связанных вместе. Описание одной цепи также определяет последовательность комплементарной цепи. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает комплементарную цепь описанной одной цепи. Много вариантов нуклеиновой кислоты можно использовать в тех же целях, что и заданную нуклеиновую кислоту. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает по существу идентичные нуклеиновые кислоты и их комплементарные последовательности. Одна цепь обеспечивает зонд, который может гибридизироваться с последовательностью-мишенью в жестких условиях гибридизации. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает зонд, который гибридизируется в жестких условиях гибридизации.
[0097] Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными или могут содержать части как двухцепочечной, так и одноцепочечной последовательности. Нуклеиновая кислота может представлять собой ДНК, как геномную, так и кДНК, РНК или гибрид, когда нуклеиновая кислота может содержать комбинации дезоксирибо- и рибонуклеотидов, и комбинации оснований, включая урацил, аденин, тимин, цитозин, гуанин, инозин, ксантин, гипоксантин, изоцитозин и изогуанин. Нуклеиновые кислоты можно получать методами химического синтеза или рекомбинантными методами.
[0098] В контексте данного документа выражение "функционально связанный" может означать, что экспрессия гена находится под управлением промотора, с которым он пространственно соединен. Промотор может располагаться 5' (выше) или 3' (ниже) гена, находящегося под его управлением. Расстояние
между промотором и геном может быть приблизительно таким же самым, что и расстояние между этим промотором и геном, которым он управляет, в гене, из которого получен промотор. Как известно в данной области техники это расстояние можно варьировать без потери функциональности промотора.
[0099] В контексте данного документа термины "пептид", "белок" или "полипептид" могут означать связанную последовательность аминокислот и могут быть природными, синтетическими или представлять собой модификацию или комбинацию природных и синтетических.
[00100] В контексте данного документа термин "промотор" может означать синтетическую или полученную из природного источника молекулу, которая способна обеспечивать, активировать или усиливать экспрессию нуклеиновой кислоты в клетке. Промотор может содержать одну или более специфических транскрипционных регуляторных последовательностей для дополнительного усиления экспрессии и/или для изменения пространственной экспрессии и/или временной экспрессии. Промотор также может содержать удаленные энхансерные или репрессорные элементы, которые могут быть расположены на расстоянии до нескольких тысяч пар оснований от начала участка транскрипции. Промотор может быть получен из источников, включая вирусы, бактерии, грибы, растения, насекомых и животных. Промотор может регулировать экспрессию генного компонента конститутивным или дифференциальным образом по отношению к клетке, ткани или органу, в которых происходит экспрессия, или по отношению к стадии развития, на которой происходит экспрессия, или в ответ на внешние стимулы, такие как физиологический стресс, патогены, ионы металлов или индуцирующие агенты. Типовые примеры промоторов включают промотор бактериофага Т7, промотор бактериофага ТЗ, промотор SP6, оператор-промотор lac, промотор tac, поздний промотор SV4 0, ранний промотор SV4 0, промотор RSV-LTR, промотор CMV IE, ранний промотор SV4 0 или поздний промотор SV4 0 и промотор CMV IE.
[00101] Термины "сигнальный пептид" и "лидерная последовательность" взаимозаменяемо используются в данном документе и относятся к аминокислотной последовательности,
которая может быть связана с амино-концом приведенного в данном документе белка. Сигнальные пептиды/лидерные последовательности, как правило, управляют локализацией белка. Используемые в данном документе сигнальные пептиды/лидерные последовательности предпочтительно облегчают секрецию белка из клетки, в которой он вырабатывается. После секреции из клетки сигнальные пептиды/лидерные последовательности часто отщепляются от остатка белка, часто называемого зрелым белком. Сигнальные пептиды/лидерные последовательности связаны с N-концом белка.
[00102] В контексте данного документа "жесткие условия
гибридизации" могут означать условия, в которых первая
последовательность нуклеиновой кислоты (например, зонд) будет
гибридизироваться со второй последовательностью нуклеиновой
кислоты (например, мишенью), например, в комплексной смеси
нуклеиновых кислот. Жесткие условия зависят от
последовательности и будут разными в разных обстоятельствах. Жесткие условия можно выбрать так, что они были на около 5-10°С ниже температуры плавления (Тп) для конкретной последовательности при определенных ионной силе и рН. Тп может представлять собой температуру (при определенных ионной силе, рН и концентрации нуклеиновой кислоты), при которой 50% зондов, комплементарных мишени, гибридизируются с последовательностью-мишенью в равновесном состоянии (так как последовательности-мишени присутствуют в избытке, при Тп, 50% зондов оказываются занятыми в равновесном состоянии). Жесткие условия могут быть такими, при которых концентрация соли составляет менее чем около 1,0 М ионов натрия, например, около 0,01-1,0 М концентрация ионов натрия
(или других солей) при рН 7,0-8,3, а температура составляет по меньшей мере около 30°С для коротких зондов (например, около 1050 нуклеотидов) и по меньшей мере около 60°С для длинных зондов
(например, более чем около 50 нуклеотидов) . Жесткие условия также можно обеспечить путем добавления дестабилизирующих агентов, таких как формамид. Для избирательной или специфической гибридизации положительный сигнал может по меньшей мере в 2-10 раз превышать фоновую гибридизацию. Примеры жестких условий
гибридизации включает следующие: 50% формамид, 5х SSC и 1% ДСН, инкубация при 42°С, или 5х SSC, 1% ДСН, инкубация при 65°С с промывкой в 0,2х SSC и 0,1% ДСН при 65°С.
[00103] В контексте данного документа взаимозаменяемо используемые термины "субъект" и "пациент" относятся к любому позвоночному, включая, но не ограничиваясь этим, млекопитающее (например, корову, свинью, верблюда, ламу, лошадь, козу, кролика, овцу, хомяков, морскую свинку, кошку, собаку, крысу и мышь, отличного от человека примата (например, обезьяну, такую как яванский или резус-макак, шимпанзе и т. д.) и человека). В некоторых вариантах реализации субъект может представлять собой человека или не человека. Субъект или пациент может проходить другие формы лечения.
[00104] В контексте данного документа выражение "по существу комплементарная" может означать, что первая последовательность по меньшей мере на 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична комплементарной цепи второй последовательности на протяжении 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или более нуклеотидов или аминокислот, или что две последовательности гибридизируются в жестких условиях гибридизации.
[00105] В контексте данного документа выражение "по существу идентичные" может означать, что первая и вторая последовательность идентичны по меньшей мере на 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% на протяжении области из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 или более нуклеотидов или аминокислот, или, в случае нуклеиновых кислот, что первая последовательность является по существу комплементарной с комплементарной цепью второй последовательности.
[00106] В контексте данного документа термин "синтетическое антитело" относится к антителу, которое кодируется рекомбинантной последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в данном документе, и вырабатывается в организме субъекта.
[00107] В контексте данного документа термин "лечение" может означать защиту субъекта от заболевания посредством предотвращения, супрессии, подавления или полного устранения заболевания. Предотвращение заболевания включает введение субъекту вакцины согласно настоящему изобретению до начала заболевания. Супрессия заболевания включает введение субъекту вакцины согласно настоящему изобретению после индукции заболевания, но до его клинического проявления. Подавление заболевания включает введение субъекту вакцины согласно настоящему изобретению после клинического проявления заболевания.
[00108] Термин "вариант", используемый в данном документе в отношении нуклеиновой кислоты, может означать (i) часть или фрагмент указанной нуклеотидной последовательности; (ii) комплементарную цепь указанной нуклеотидной последовательности или ее часть; (iii) нуклеиновую кислоту, которая является по существу идентичной указанной нуклеиновой кислоте или ее комплементарной цепи; или (iv) нуклеиновую кислоту, которая гибридизируется в жестких условиях с указанной нуклеиновой кислотой, ее комплементарной цепью или последовательностью, по существу идентичной ей.
[00109] Термин "вариант" в отношении пептида или
полипептида, который отличается по аминокислотной
последовательности вследствие вставки, делеции или
консервативной замены аминокислот, но сохраняет по меньшей мере один вид биологической активности. Вариант также может означать белок с аминокислотной последовательностью, которая является по существу идентичной указанному белку с аминокислотной последовательностью, который сохраняет по меньшей мере один вид биологической активности. Консервативные замены аминокислот, т. е. замещение аминокислоты другой аминокислотой с аналогичными
свойствами (например, гидрофильностью, степенью и распределением заряженных областей), известны в данной области техники как включающие, как правило, незначительные изменения. Эти незначительные изменения можно частично определить на основании индекса гидропатичности аминокислот, как известно в данной области техники. Kyte с соавт., J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982). Индекс гидропатичности аминокислоты основан на оценке ее гидрофобности и заряда. В данной области техники известно, что аминокислоты с аналогичными индексами гидропатичности можно взаимно заменять с сохранением функции белка. В одном аспекте проводят замену аминокислот, имеющих индекс гидропатичности ± 2. Гидрофильность аминокислот также можно использовать для определения замен, которые бы привели к получению белков, сохраняющих биологическую функцию. Учет гидрофильности аминокислот в контексте пептида позволяет рассчитывать наибольшую локальную среднюю гидрофильность этого пептида, что является полезным показателем, который, как сообщалось, хорошо коррелирует с антигенностью и иммуногенностью. Патент США № 4554101, в полном объеме включенный в данный документ посредством ссылки. Замена аминокислот, имеющих аналогичные значения гидрофильности, может привести к получению пептидов, сохраняющих биологическую активность, например, иммуногенность, как известно в данной области техники. Замены можно проводить с аминокислотами, имеющими значения гидрофильности в пределах ± 2 относительно друг друга. Как на индекс гидрофобности, так и на значение гидрофильности аминокислот влияет конкретный тип боковой цепи этой аминокислоты. В соответствии с этим наблюдением понятно, что аминокислотные замены, совместимые с биологической функцией, зависят от относительного сходства аминокислот и, в частности, боковых цепей этих аминокислот, проявляемого в гидрофобности, гидрофильности, заряде, размере и других свойствах.
[00110] Вариант может представлять собой последовательность нуклеиновой кислоты, которая является по существу идентичной на протяжении всей длины последовательности всего гена или ее
части. Последовательность нуклеиновой кислоты может быть на 8 0%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичной на протяжении всей длины последовательности гена или ее части. Вариант может представлять собой аминокислотную последовательность, которая является по существу идентичной на протяжении всей длины аминокислотной последовательности или ее части. Аминокислотная последовательность может быть на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичной на протяжении всей длины аминокислотной последовательности или ее части.
[00111] В контексте данного документа термин "вектор" может означать последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую точку начала репликации. Вектор может представлять собой плазмиду, бактериофаг, бактериальную искусственную хромосому или дрожжевую искусственную хромосому. Вектор может представлять собой ДНК- или РНК-вектор. Вектор может представлять собой как самореплицирующийся внехромосомный вектор, так и вектор, который интегрируется в геном организма-хозяина.
[00112] В случае перечисления в данном документе числовых диапазонов явным образом и с той же степенью точности подразумевается и каждое промежуточное число. Например, в случае диапазона 6-9, кроме чисел б и 9 подразумеваются числа 7 и 8, а в случае диапазона 6,0-7,0, явным образом подразумеваются числа 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 и 7,0.
2. Композиция
[00113] В одном аспекте в настоящем изобретении предложена
комбинация композиции, которая вызывает иммунный ответ у
млекопитающего против антигена, с композицией, содержащей
рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Композицию можно вводить нуждающемуся в этом субъекту для облегчения in vivo экспрессии и образования синтетического антитела.
[00114] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к комбинации первой композиции, которая вызывает
иммунный ответ у млекопитающего против антигена, и второй композиции, содержащей рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. В одном варианте реализации первая композиция содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую один или более антигенов. В одном варианте реализации первая композиция содержит ДНК-вакцину.
[00115] Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. При введении нуждающемуся в этом субъекту композиция может приводить к генерации синтетического антитела в организме субъекта. Синтетическое антитело может связывать молекулу-мишень (т. е. антиген), присутствующую у субъекта. Такое связывание может нейтрализовать антиген, блокировать распознавание антигена другой молекулой, например, белком или нуклеиновой кислотой, и вызывать или индуцировать иммунный ответ на антиген.
[00116] Синтетическое антитело может обеспечивать лечение, предотвращение и/или защиту от заболевания у субъекта, которому вводят композицию. Синтетическое антитело посредством связывания антигена может обеспечивать лечение, предотвращение и/или защиту от заболевания у субъекта, которому вводят композицию. Синтетическое антитело может способствовать выживаемости при заболевании у субъекта, которому вводят композицию. Синтетическое антитело может обеспечивать по меньшей мере около 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% выживаемости при заболевании у субъекта, которому вводят композицию. В других вариантах реализации синтетическое антитело может обеспечивать по меньшей мере около 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79% или 80% выживаемости при заболевании у субъекта, которому вводят композицию.
[00117] Композиция может приводить к генерации синтетического антитела в организме субъекта в течение по меньшей мере около 1 часа, 2 часов, 3 часов, 4 часов, 5 часов, б часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов,
13 часов, 14 часов, 15 часов, 20 часов, 25 часов, 30 часов, 35 часов, 40 часов, 45 часов, 50 часов или 60 часов после введения композиции субъекту. Композиция может приводить к генерации синтетического антитела в организме субъекта в течение по меньшей мере около 1 суток, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, б суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или 10 суток после введения композиции субъекту. Композиция может приводить к генерации синтетического антитела в организме субъекта в течение от около 1 часа до около б суток, от около 1 часа до около 5 суток, от около 1 часа до около 4 суток, от около 1 часа до около 3 суток, от около 1 часа до около 2 суток, от около 1 часа до около 1 суток, от около 1 часа до около 72 часов, от около 1 часа до около 60 часов, от около 1 часа до около 48 часов, от около 1 часа до около 36 часов, от около 1 часа до около 24 часов, от около 1 часа до около 12 часов или от около 1 часа до около 6 часов после введения композиции субъекту.
[00118] При введении нуждающемуся в этом субъекту композиция может приводить к генерации синтетического антитела в организме субъекта быстрее, чем происходит генерация эндогенного антитела у субъекта, которому вводят антиген, чтобы индуцировать гуморальный иммунный ответ. Композиция может приводить к генерации синтетического антитела по меньше мере на около 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, б суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или 10 суток раньше генерации эндогенного антитела у субъекта, которому вводят антиген, чтобы индуцировать гуморальный иммунный ответ.
[00119] Композиция согласно настоящему изобретению может иметь характеристики, необходимые для эффективных композиций, такие как безопасность в том смысле, что композиция не приводит к болезни или смерти; защита от болезни; обеспечение легкости введения, небольшое количество побочных явлений, биологическая стабильность и низкая стоимость, приходящаяся на дозу.
[00120] В другом аспекте настоящего изобретения предложены вакцины на основе ДНК-плазмиды, которые способны генерировать у млекопитающего иммунный ответ против антигена. Вакцины на основе ДНК-плазмиды состоят из ДНК-плазмиды, способной экспрессировать
консенсусный антиген в организме млекопитающего, и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества. ДНК-плазмида состоит из промотора, функционально связанного с кодирующей последовательностью, которая кодирует консенсусный антиген.
[00121] В некоторых вариантах реализации последовательности ДНК по данному документу могут иметь удаленную на 5' конце лидерную последовательность IgE, а белковые последовательности по данному документу могут иметь удаленную на N-конце лидерную последовательность IgE.
[00122] В некоторых вариантах реализации ДНК-плазмида содержит кодирующую последовательность, которая кодирует антиген, минус лидерная последовательность IgE на N-конце кодирующей последовательности. В некоторых вариантах реализации ДНК-плазмида дополнительно содержит лидерную последовательность IgE, присоединенную на N-конце кодирующей последовательности и функционально связанную с промотором.
[00123] ДНК-плазмида может дополнительно содержать последовательность полиаденилирования, присоединенную на С-конце кодирующей последовательности. Предпочтительно ДНК-плазмида является кодон-оптимизированной.
[00124] В некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество представляет собой адъювант. Предпочтительно адъювант выбран из группы, состоящей из: IL-12 и IL-15. В некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество представляет собой агент, облегчающий трансфекцию. Предпочтительно, агент, облегчающий трансфекцию, представляет собой полианион, поликатион или липид и более предпочтительно - поли-Ъ-глутамин. Предпочтительно поли-L-глутамин находится в концентрации менее б мг/мл. Предпочтительно вакцина на основе ДНК-плазмид имеет общую концентрацию ДНК-плазмид 1 мг/мл или более.
[00125] В некоторых вариантах реализации ДНК-плазмида включает некоторое количество уникальных ДНК-плазмид, при этом каждая из уникальных ДНК-плазмид кодирует полипептид, содержащий
консенсусный антиген.
[00126] В некоторых вариантах реализации настоящего
изобретения вакцины на основе ДНК-плазмиды могут дополнительно
содержать адъювант. В некоторых вариантах реализации адъювант
выбран из группы, состоящей из: альфа-интерферона, гамма-
интерферона, тромбоцитарного фактора роста (PDGF) , TNFa, TNF|3,
GM-CSF (ГМКСФ), эпидермального фактора роста (EGF), кожного
привлекающего Т-клетки хемокина (СТАСК), эпителиального,
экспрессируемого вилочковой железой хемокина (ТЕСК),
мукозального эпителиального хемокина (МЕС), IL-12, IL-15, МНС, CD8 0, CD8 6, включая IL-15, имеющий удаленную сигнальную последовательность и необязательно имеющий сигнальный пептид из IgE. Другие гены, которые могут оказаться полезными адъювантами, включают кодирующие: МСР-1, MIP-1-альфа, MIP-lp, IL-8, RANTES, L-селектин, Р-селектин, Е-селектин, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-4, мутантные формы IL-18, CD40, CD40L, фактор роста сосудов, фактор роста фибробластов, IL-7, фактор роста нервов, фактор роста сосудистого эндотелия, Fas, рецептор TNF, Fit, Аро-1, р55, WSL-1, DR3, TRAMP, Аро-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, Caspase ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD8 8, IRAK, TRAF6, IkB, Inactive NIK, SAP K, SAP-1, JNK, гены отклика интерферона, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK LIGAND, 0x40, 0x40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 и их функциональные фрагменты. В некоторых предпочтительных вариантах реализации адъювант выбран из IL-12, IL-15, СТАСК, ТЕСК или МЕС.
[00127] В некоторых вариантах реализации способы инициации иммунного ответа у млекопитающих против консенсусного антигена включают способы индукции мукозальных иммунных ответов. Такие способы включают введение млекопитающему одного или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональных фрагментов или их экспрессируемых кодирующих последовательностей в комбинации с ДНК-плазмидой, содержащей описанный выше
консенсусный антиген. Один или более из белка СТАСК, белка ТЕСК, белка МЕС и их функциональных фрагментов можно вводить до, одновременно или после введения предложенных в данном документе вакцин на основе ДНК-плазмид. В некоторых вариантах реализации млекопитающему вводят выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует один или более белков, выбранных из группы, состоящей из: СТАСК, ТЕСК, МЕС и их функциональных фрагментов. 3. ДНК-вакцина
[00128] Как описано выше, композиция может содержать иммуногенные композиции, такие как вакцины, содержащие один или более антигенов. Вакцину можно использовать для защиты против любого числа антигенов, таким образом, осуществляя лечение, предотвращение и/или защиту против патологий, связанных с антигенами. Вакцина может существенно индуцировать иммунный ответ субъекта, которому вводят вакцину, обеспечивая, таким образом, защиту от инфекции антигеном и ее лечение.
[00129] Вакцина может представлять собой ДНК-вакцину,
пептидную вакцину или комбинированную ДНК и пептидную вакцину.
ДНК-вакцина может содержать последовательность нуклеиновой
кислоты, кодирующую антиген. Последовательность нуклеиновой
кислоты может представлять собой ДНК, РНК, кДНК, их вариант, их
фрагмент или их комбинацию. Последовательность нуклеиновой
кислоты также может содержать дополнительные последовательности,
которые кодируют линкер, лидерные или метящие
последовательности, которые связаны с антигеном пептидной связью. Пептидная вакцина может содержать антигенный пептид, антигенный белок, их вариант, их фрагмент или их комбинацию. Комбинированная ДНК и пептидная вакцина может содержать вышеописанную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген, и антигенный пептид или белок, при этом антигенный пептид или белок и кодируемый антиген имеют одинаковую аминокислотную последовательность.
[00130] Вакцина может индуцировать гуморальный иммунный ответ у субъекта, которому вводят вакцину. Индуцированный гуморальный иммунный ответ может быть специфическим в отношении антигена. Индуцированный гуморальный иммунный ответ может быть
реактивным с антигеном. Гуморальный иммунный ответ может быть индуцирован у субъекта, которому вводят вакцину, в от около 1,5 раз до около 16 раз, от около 2 раз до около 12 раз или от около 3 раз до около 10 раз. Гуморальный иммунный ответ может быть индуцирован у субъекта, которому вводят вакцину, в по меньшей мере около 1,5 раза, по меньшей мере около 2,0 раза, по меньшей мере около 2,5 раза, по меньшей мере около 3,0 раза, по меньшей мере около 3,5 раза, по меньшей мере около 4,0 раза, по меньшей мере около 4,5 раза, по меньшей мере около 5,0 раз, по меньшей мере около 5,5 раз, по меньшей мере около 6,0 раз, по меньшей мере около 6,5 раз, по меньшей мере около 7,0 раз, по меньшей мере около 7,5 раз, по меньшей мере около 8,0 раз, по меньшей мере около 8,5 раз, по меньшей мере около 9,0 раз, по меньшей мере около 9,5 раз, по меньшей мере около 10,0 раз, по меньшей мере около 10,5 раз, по меньшей мере около 11,0 раз, по меньшей мере около 11,5 раз, по меньшей мере около 12,0 раз, по меньшей мере около 12,5 раз, по меньшей мере около 13,0 раз, по меньшей мере около 13,5 раз, по меньшей мере около 14,0 раз, по меньшей мере около 14,5 раз, по меньшей мере около 15,0 раз, по меньшей мере около 15,5 раз или по меньшей мере около 16,0 раз.
[00131] Гуморальный иммунный ответ, индуцируемый вакциной, может включать повышение уровня нейтрализующих антител у субъекта, которому вводят вакцину, по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину. Нейтрализующие антитела могут быть специфическими в отношении антигена. Нейтрализующие антитела могут быть реактивными с антигеном. Нейтрализующие антитела могут обеспечивать защиту от инфекции и/или лечение инфекции и связанных с ней патологий у субъекта, которому вводят вакцину.
[00132] Гуморальный иммунный ответ, индуцируемый вакциной, может включать повышение уровня антител IgG у субъекта, которому вводят вакцину, по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину. Эти антитела IgG могут быть специфическими в отношении антигена. Эти антитела IgG могут быть реактивными с антигеном. Предпочтительно гуморальный ответ является перекрестно-реактивным в отношении двух или более штаммов антигена. Уровень антитела IgG у субъекта, которому вводят вакцину, может быть
повышен в от около 1,5 раз до около 16 раз, от около 2 раз до около 12 раз или от около 3 раз до около 10 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину. Уровень антитела IgG у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышен в по меньшей мере около 1,5 раза, по меньшей мере около 2,0 раза, по меньшей мере около 2,5 раза, по меньшей мере около 3,0 раза, по меньшей мере около 3,5 раза, по меньшей мере около 4,0 раза, по меньшей мере около 4,5 раза, по меньшей мере около 5,0 раз, по меньшей мере около 5,5 раз, по меньшей мере около 6,0 раз, по меньшей мере около 6,5 раз, по меньшей мере около 7,0 раз, по меньшей мере около 7,5 раз, по меньшей мере около 8,0 раз, по меньшей мере около 8,5 раз, по меньшей мере около 9,0 раз, по меньшей мере около 9,5 раз, по меньшей мере около 10,0 раз, по меньшей мере около 10,5 раз, по меньшей мере около 11,0 раз, по меньшей мере около 11,5 раз, по меньшей мере около 12,0 раз, по меньшей мере около 12,5 раз, по меньшей мере около 13,0 раз, по меньшей мере около 13,5 раз, по меньшей мере около 14,0 раз, по меньшей мере около 14,5 раз, по меньшей мере около 15,0 раз, по меньшей мере около 15,5 раз или по меньшей мере около 16,0 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00133] Вакцина может индуцировать клеточный иммунный ответ у субъекта, которому вводят вакцину. Индуцированный клеточный иммунный ответ может быть специфическим в отношении антигена. Индуцированный клеточный иммунный ответ может быть реактивным с антигеном. Предпочтительно клеточный ответ является перекрестно-реактивным в отношении двух или более штаммов антигена. Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать инициацию ответа Т-клеток CD8+. Инициированный ответ Т-клеток CD8+ может быть реактивным с антигеном. Инициированный ответ Т-клеток CD8+ может быть полифункциональным. Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать инициацию ответа Т-клеток CD8+, при котором Т-клетки CD8+ вырабатывают интерферон-гамма (IFN-y), фактор некроза опухолей альфа (TNF-a), интерлейкин-2 (IL-2) или комбинацию IFN-y и TNF-a.
[00134] Индуцированный клеточный иммунный ответ может
включать повышение ответа Т-клеток CD8+ у субъекта, которому вводят вакцину, по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину. Ответ Т-клеток CD8+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышен в от около 2 раз до около 3 0 раз, от около 3 раз до около 25 раз или от около 4 раз до около 20 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину. Ответ Т-клеток CD8+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышен в по меньшей мере около 1,5 раза, по меньшей мере около 2,0 раза, по меньшей мере около 3,0 раза, по меньшей мере около 0 раза, по меньшей мере около 5, 0 раз, по меньшей мере около 0 раз, по меньшей мере около 6,5 раз, по меньшей мере около
0 раз, по меньшей мере около 7,5 раз, по меньшей мере около 0 раз, по меньшей мере около 8,5 раз, по меньшей мере около 0 раз, по меньшей мере около 9,5 раз, по меньшей мере около 10,0 раз, по меньшей мере около 10,5 раз, по меньшей мере около 11,0 раз, по меньшей мере около 11,5 раз, по меньшей мере около 12,0 раз, по меньшей мере около 12,5 раз, по меньшей мере около 13,0 раз, по меньшей мере около 13,5 раз, по меньшей мере около 14,0 раз, по меньшей мере около 14,5 раз, по меньшей мере около 15,0 раз, по меньшей мере около 16,0 раз, по меньшей мере около 17,0 раз, по меньшей мере около 18,0 раз, по меньшей мере около 19,0 раз, по меньшей мере около 2 0,0 раз, по меньшей мере около 21,0 раз, по меньшей мере около 22,0 раз, по меньшей мере около 2 3,0 раз, по меньшей мере около 2 4,0 раз, по меньшей мере около 2 5,0 раз, по меньшей мере около 2 6,0 раз, по меньшей мере около 2 7,0 раз, по меньшей мере около 2 8,0 раз, по меньшей мере около 2 9,0 раз или по меньшей мере около 3 0,0 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00135] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD8+, которые вырабатывают IFN-y. Частота появления Т-клеток CD3+CD8+IFN-y+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 3 раз, 4 раз, 5 раз, б раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз по сравнению с субъектом,
которому не вводят вакцину.
[00136] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD8+, которые вырабатывают TNF-a. Частота появления Т-клеток CD3+CD8+TNF-a+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 3 раз, 4 раз, 5 раз, б раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз или 14 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00137] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD8+, которые вырабатывают IL-2. Частота появления Т-клеток CD3+CD8+IL-2+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 0,5 раз, 1,0 раз, 1,5 раз, 2,0 раз, 2,5 раз, 3,0 раз, 3,5 раз, 4,0 раз, 4,5 раз или 5,0 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00138] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD8+, которые вырабатывают как IFN-y, так и TNF-a. Частота появления Т-клеток CD3+CD8 + IFN-y+TNF-a+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 25 раз, 30 раз, 35 раз, 40 раз, 45 раз, 50 раз, 55 раз, 60 раз, 65 раз, 70 раз, 75 раз, 80 раз, 85 раз, 90 раз, 95 раз, 100 раз, 110 раз, 120 раз, 130 раз, 140 раз, 150 раз, 160 раз, 170 раз или 180 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00139] Клеточный иммунный ответ, индуцированный вакциной, может включать инициацию ответа Т-клеток CD4+. Инициированный ответ Т-клеток CD4+ может быть реактивным с необходимым антигеном. Инициированный ответ Т-клеток CD4+ может быть полифункциональным. Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать инициацию ответа Т-клеток CD4+, при котором Т-клетки CD4+ вырабатывают IFN-y, TNF-a, IL-2 или комбинацию IFN-y и TNF-a.
[00140] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD4+, которые вырабатывают IFN-y. Частота появления Т-клеток CD3+CD4+IFN-y+ у
субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 3 раз, 4 раз, 5 раз, б раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00141] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD4+, которые вырабатывают TNF-a. Частота появления Т-клеток CD3+CD4+TNF-a+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 3 раз, 4 раз, 5 раз, б раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз, 20 раз, 21 раза или 22 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00142] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD4+, которые вырабатывают IL-2. Частота появления Т-клеток CD3+CD4+IL-2+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 3 раз, 4 раз, 5 раз, б раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз, 20 раз, 21 раз, 22 раз, 23 раз, 24 раз, 25 раз, 26 раз, 27 раз, 28 раз, 29 раз, 30 раз, 31 раз, 32 раз, 33 раз, 34 раз, 35 раз, 36 раз, 37 раз, 38 раз, 39 раз, 40 раз, 45 раз, 50 раз, 55 раз или 60 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00143] Индуцированный клеточный иммунный ответ может включать повышение частоты появления Т-клеток CD3+CD4+, которые вырабатывают как IFN-y, так и TNF-a. Частота появления Т-клеток CD3+CD4 + IFN-y+TNF-a+ у субъекта, которому вводят вакцину, может быть повышена в по меньшей мере около 2 раз, 2,5 раз, 3,0 раз, 3,5 раз, 4,0 раз, 4,5 раз, 5,0 раз, 5,5 раз, 6,0 раз, 6,5 раз, 7,0 раз, 7,5 раз, 8,0 раз, 8,5 раз, 9,0 раз, 9,5 раз, 10,0 раз, 10,5 раз, 11,0 раз, 11,5 раз, 12,0 раз, 12,5 раз, 13,0 раз, 13,5 раз, 14,0 раз, 14,5 раз, 15,0 раз, 15,5 раз, 16,0 раз, 16,5 раз, 17,0 раз, 17,5 раз, 18,0 раз, 18,5 раз, 19,0 раз, 19,5 раз, 20,0 раз, 21 раз, 22 раз, 23 раз, 24 раз, 25 раз, 26 раз, 27 раз, 28
раз, 29 раз, 30 раз, 31 раз, 32 раз, 33 раз, 34 раз или 35 раз по сравнению с субъектом, которому не вводят вакцину.
[00144] Вакцина согласно настоящему изобретению может иметь характеристики, необходимые для эффективных вакцин, такие как безопасность в том смысле, что сама вакцина не приводит к болезни или смерти; защита от болезни в результате воздействия живых патогенов, таких как вирусы или бактерии; индукция нейтрализующего антитела для предотвращения инфицирования клеток; индукция защитных Т-клеток против внутриклеточных патогенов; и обеспечение легкости введения, небольшое количество побочных явлений, биологическая стабильность и низкая стоимость, приходящаяся на дозу.
[00145] Вакцина может дополнительно индуцировать иммунный ответ при введении в разные ткани, такие как мышцы или кожа. Вакцина может дополнительно индуцировать иммунный ответ при введении путем электропорации или инъекции, или подкожного или внутримышечного введения.
[0014 6] Конструкции вакцин и плазмиды
[00147] Вакцина может содержать конструкции нуклеиновых кислот или плазмиды, которые кодируют один или более антигенов. Конструкции нуклеиновых кислот или плазмиды могут включать или содержать одну или более гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот. В данном документе предложены генетические конструкции, которые могут содержать последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует антигены. Генетическая конструкция может присутствовать в клетке в виде функциональной внехромосомной молекулы. Генетическая конструкция может представлять собой линейную минихромосому, включая центромеры, теломеры или плазмиды или космиды. Генетические конструкции могут включать или содержать одну или более гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот.
[00148] Генетические конструкции могут иметь форму плазмид, экспрессирующих антиген в любом порядке.
[00149] Генетическая конструкция также может быть частью генома рекомбинантного вирусного вектора, включая рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный аденоассоциированный вирус и
рекомбинантную вакцину. Генетическая конструкция также может быть частью генетического материала в ослабленных живых микроорганизмах или рекомбинантных микробных векторах, которые живут в клетках.
[00150] Генетические конструкции могут содержать регуляторные элементы для генной экспрессии кодирующих последовательностей нуклеиновой кислоты. Регуляторные элементы могут представлять собой промотор, энхансер, инициирующий кодон, стоп-кодон или сигнал полиаденилирования.
[00151] Последовательности нуклеиновых кислот могут составлять генетическую конструкцию, которая может представлять собой вектор. Вектор может быть способен экспрессировать антиген в клетке млекопитающего в количестве, эффективном, чтобы вызвать иммунный ответ у млекопитающего. Вектор может быть рекомбинантным. Вектор может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген. Вектор может представлять собой плазмиду. Вектор можно применять для трансфекции клеток нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, причем трансформированную клетку-хозяина культивируют и поддерживают в условиях, в которых происходит экспрессия антигена.
[00152] Кодирующие последовательности могут быть оптимизированы для стабильности и высоких уровней экспрессии. В некоторых случаях кодоны выбирают так, чтобы снизить образование вторичной структуры РНК, которая образуется вследствие внутримолекулярного связывания.
[00153] Вектор может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антигены, и может дополнительно содержать инициирующий кодон, который может располагаться выше одной или более последовательностей, кодирующих раковый антиген, и стоп-кодон, который может располагаться ниже последовательности (ей), кодирующей (-их) антиген. Инициирующий и терминирующий кодон может находиться в рамке с кодирующей (-ими) последовательностью (-ями) антигена. Вектор также может содержать промотор, функционально связанный с кодирующей (-ими) последовательностью (-ями) антигена. Промотор, функционально
связанный с кодирующей (-ими) последовательностью (-ями) антигена, может представлять собой промотор вируса обезьян 4 0
(SV40), промотор вируса опухоли молочной железы мышей (MMTV), промотор вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), такой как промотор длинных концевых повторов (ДКП) бычьего вируса иммунодефицита (БВИ), промотор вируса Молони, промотор вируса лейкоза птиц (ВЛП), промотор цитомегаловируса (ЦМВ), такой как немедленно-ранний промотор ЦМВ, промотор вируса Эпштейна-Барр
(ВЭБ) или промотор вируса саркомы Рауса (ВСР). Промотор также может представлять собой промотор из человеческого гена, такого как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатинин или человеческий металлотионеин. Промотор также может быть тканеспецифическим промотором, таким как промотор, специфический в отношении мышц или кожи, природный или синтетический. Примеры таких промоторов описаны в публикации заявки на патент США № US20040175727, содержание которой в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки.
[00154] Вектор также может содержать сигнал
полиаденилирования, который может располагаться ниже кодирующей
(-их) последовательности (-ей) антигена. Сигнал
полиаденилирования может представлять собой сигнал
полиаденилирования SV4 0, сигнал полиаденилирования ДКП, сигнал
полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH), сигнал
полиаденилирования человеческого гормона роста (hGH) или сигнал
полиаденилирования человеческого р-глобина. Сигнал
полиаденилирования SV4 0 может представлять собой сигнал полиаденилирования из вектора рСЕР4 (Invitrogen, San Diego, СА).
[00155] Вектор также может содержать энхансер, расположенный выше антигена. Энхансер может быть необходим для экспрессии ДНК. Энхансер может представлять собой энхансер человеческого актина, человеческого миозина, человеческого гемоглобина, человеческого мышечного креатинина или вирусный энхансер, например, из ЦМВ, ГА, РСВ или ВЭБ. Энхансеры полинуклеотидной функции описаны в патентах США № 5593972,
5962428 и WO94/016737, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки.
[00156] Вектор также может содержать точку начала репликации млекопитающего для внехромосомной поддержки вектора и выработки множества копий вектора в клетке. Вектор может представлять собой pVAXl, рСЕР4 или pREP4 от Invitrogen (San Diego, СА) , который может содержать точку начала репликации вируса Эпштейна-Барр и область, кодирующую ядерный антиген EBNA-1, которая может обеспечивать многокопийную эписомальную репликацию без интеграции. Вектор может представлять собой вариант pVAXl или pVaxl с изменениями, такой как описанная в данном документе вариантная плазмида. Вариантная плазмида pVaxl представляет собой вариант из 2 998 пар оснований каркасной векторной плазмиды pVAXl (Invitrogen, Carlsbad СА) . Промотор ЦМВ расположен в пределах оснований 137-724. Промотор Т7/участок примирования соответствует основаниям 664-683. Некоторое количество участков клонирования соответствуют основаниям 696811. Бычий сигнал полиаденилирования GH соответствует основаниям 829-1053. Ген устойчивости к канамицину соответствует основаниям 1226-2020. Точка начала репликации соответствует основаниям 2320-2993.
[00157] На основании последовательности pVAXl, доступной от
Invitrogen, были обнаружены следующие мутации в
последовательности pVAXl, которую использовали в качестве каркаса для набора плазмид 1-6, приведенных в данном документе:
[00158] С > G241 в промоторе ЦМВ
[00159] С > Т 1942 каркас, ниже сигнала полиаденилирования бычьего гормона роста (bGHpolyA)
[00160] А > - 2876 каркас, ниже гена канамицина
[00161] С > Т 3277 в точке начала репликации pUC (Ori), высококопийная мутация (смотрите Nucleic Acid Research 1985)
[00162] G > С 3753 в самом конце pUC Ori выше участка RNASeH
[00163] В парах оснований 2, 3 и 4 проводят замену с ACT на CTG в каркасе выше промотора ЦМВ.
[00164] Каркас вектора может представлять собой pAV0242.
Вектор может представлять собой дефективный по репликации аденовирусный вектор типа 5 (Ad5).
[00165] Вектор также может содержать регуляторную последовательность, которая может хорошо подходить для генной экспрессии в клетке млекопитающего или человека, в которую внесен вектор. Одна или более описанных в данном документе последовательностей раковых антигенов могут содержать кодон, который может обеспечивать более эффективную транскрипцию кодирующей последовательности в клетке-хозяине.
[00166] Вектор может представлять собой pSE420 (Invitrogen, San Diego, Calif.), который можно использовать для выработки белка в Escherichia coli (Е. coli) . Вектор также может представлять собой pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.), который можно использовать для выработки белка в штаммах дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Вектор также может принадлежать полной бакуловирусной системе экспрессии МАХВАС(tm) (Invitrogen, San Diego, Calif.), которую можно использовать для выработки белка в клетках насекомых. Вектор также может представлять собой pcDNA I или pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Calif.), которые можно использовать для выработки белка в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомяка (СНО). Вектор может представлять собой экспрессионные векторы или системы для выработки белка общепринятыми методами и из легкодоступных стартовых материалов, включая описанные в Sambrook с соавт., Molecular Cloning and Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor (1989), которая в полном объеме включена посредством ссылки.
4. Кодируемое ДНК антитело
[00167] Как описано выше, композиция может содержать
рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты.
Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Антитело более подробно описано ниже.
[00168] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой
кислоты может представлять собой гетерологичную
последовательность нуклеиновой кислоты. Рекомбинантная
последовательность нуклеиновой кислоты может содержать по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты или одну или более гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот.
[00169] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой
кислоты может представлять собой оптимизированную
последовательность нуклеиновой кислоты. Такая оптимизация может повышать или изменять иммуногенность антитела. Оптимизация также может улучшать транскрипцию и/или трансляцию. Оптимизация может включать в себя одно или более из следующего: лидерную последовательность с низким содержанием GC для повышения транскрипции; стабильность мРНК и оптимизацию кодонов; добавление последовательности Козака (например, GCC АСС) для повышения трансляции; добавление лидерной последовательности иммуноглобулина (Ig), кодирующей сигнальный пептид; и удаление по мере возможности цис-действующих мотивов последовательностей (т. е. внутренних ТАТА-боксов).
а. Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты
[00170] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать одну или более конструкций рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты. Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более компонентов, которые более подробно описаны ниже.
[00171] Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную
последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует
полипептид тяжелой цепи, его фрагмент, его вариант или их
комбинацию. Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную
последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид легкой цепи, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать гетерологичную
последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует участок
расщепления протеазой или пептидазой. Конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты может содержать одну или
более лидерных последовательностей, причем лидерная
последовательность кодирует сигнальный пептид. Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более промоторов, один или более интронов, одну или более областей терминации транскрипции, один или более инициирующих кодонов, один или более терминирующих или стоп-кодонов и/или один или более сигналов полиаденилирования. Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты также может содержать одну или более линкерных или метящих последовательностей. Метящая последовательность может кодировать гемагглютининовую (ГА) метку.
(1) Полипептид тяжелой цепи
[00172] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид тяжелой цепи, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Полипептид тяжелой цепи может содержать вариабельную область тяжелой цепи (VH) и/или по меньшей мере одну константную область тяжелой цепи (СН) . По меньшей мере одна константная область тяжелой цепи может содержать константную область тяжелой цепи 1 (СН1), константную область тяжелой цепи 2 (СН2) и константную область тяжелой цепи 3 (СНЗ) и/или шарнирную область.
[00173] В некоторых вариантах реализации полипептид тяжелой цепи может содержать область VH и область СН1. В других вариантах реализации полипептид тяжелой цепи может содержать область VH, область СН1, шарнирную область, область СН2 и область СНЗ.
[00174] Полипептид тяжелой цепи может содержать набор определяющих комплементарность областей ("CDR"). Набор CDR может содержать три гипервариабельные области из области VH. Начиная с N-конца полипептида тяжелой цепи, эти CDR обозначаются "CDR1", "CDR2" и "CDR3" соответственно. CDR1, CDR2 и CDR3 полипептида тяжелой цепи могут вносить свой вклад в связывание или
распознавание антигена.
(2) Полипептид легкой цепи
[00175] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид легкой цепи, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Полипептид легкой цепи может содержать вариабельную область легкой цепи (VL) и/или константную область легкой цепи (CL).
[00176] Полипептид легкой цепи может содержать набор определяющих комплементарность областей ("CDR"). Набор CDR может содержать три гипервариабельные области из области VL. Начиная с N-конца полипептида легкой цепи, эти CDR обозначаются "CDR1", "CDR2" и "CDR3" соответственно. CDR1, CDR2 и CDR3 полипептида легкой цепи могут вносить свой вклад в связывание или распознавание антигена.
(3) Участок расщепления протеазой
[00177] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую участок расщепления протеазой. Участок расщепления протеазой может распознаваться протеазой или пептидазой. Протеаза может представлять собой эндопептидазу или эндопротеазу, например, но не ограничиваясь этим, фурин, эластазу, HtrA, кальпаин, трипсин, химотрипсин, трипсин и пепсин. Протеаза может представлять собой фурин. В других вариантах реализации протеаза может представлять собой сериновую протеазу, треониновую протеазу, цистеиновую протеазу, аспартатную протеазу, металлопротеазу, протеазу глутаминовой кислоты или любую протеазу, которая расщепляет внутреннюю пептидную связь (т. е. не расщепляет N-концевую или С-концевую пептидную связь).
[00178] Участок расщепления протеазой может содержать одну или более аминокислотных последовательностей, которые стимулируют расщепление или повышают его эффективность. Одна или более аминокислотных последовательностей могут стимулировать или повышать эффективность образования или генерации дискретных полипептидов. Одна или более аминокислотных последовательностей
могут содержать 2А пептидную последовательность.
(4) Линкерная последовательность
[00179] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать одну или более линкерных последовательностей. Линкерная последовательность может пространственно разделять или связывать один или более описанных в данном документе компонентов. В других вариантах реализации линкерная последовательность может кодировать аминокислотную последовательность, которая пространственно разделяет или связывает два или более полипептидов.
(5) Промотор
[00180] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более промоторов. Один или более промоторов могут представлять собой любой промотор, способный управлять генной экспрессией и регулировать генную экспрессию. Такой промотор представляет собой цис-действующий элемент последовательности, необходимый для транскрипции с помощью ДНК-зависимой РНК-полимеразы. Выбор промотора, применяемого для управления генной экспрессией, зависит от конкретного применения. Промотор может располагаться приблизительно на таком же расстоянии от точки начала транскрипции в конструкции рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты, что и от точки начала транскрипции в своем природном окружении. При этом это расстояние можно варьировать без потери функциональности промотора.
[00181] Промотор может быть функционально связан с гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи. Промотор может представлять собой промотор, эффективный для экспрессии в эукариотических клетках. Промотор, функционально связанный с кодирующей последовательностью, может представлять собой промотор ЦМВ, промотор вируса обезьян 40 (SV40), такой как ранний промотор SV4 0 и поздний промотор SV4 0, промотор вируса опухоли молочной железы мышей (MMTV), промотор вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), такой как промотор длинных концевых повторов (ДКП) бычьего вируса иммунодефицита (БВИ),
промотор вируса Молони, промотор вируса лейкоза птиц (ВЛП), промотор цитомегаловируса (ЦМВ), такой как немедленно-ранний промотор ЦМВ, промотор вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) или промотор вируса саркомы Рауса (ВСР). Промотор также может представлять собой промотор из человеческого гена, такого как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатинин, человеческий полиэдрин или человеческий металлотионеин.
[00182] Промотор может представлять собой конститутивный промотор или индуцибельный промотор, который инициирует транскрипцию, только когда клетка-хозяин подвергается воздействию некоторого внешнего стимула. В случае многоклеточного организма промотор также может быть специфическим в отношении конкретной ткани или органа, или стадии развития. Промотор также может быть тканеспецифическим промотором, таким как промотор, специфический в отношении мышц или кожи, природный или синтетический. Примеры таких промоторов описаны в публикации заявки на патент США № US20040175727, содержание которой в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки.
[00183] Промотор может быть связан с энхансером. Энхансер может располагаться выше кодирующей последовательности. Энхансер может представлять собой энхансер человеческого актина, человеческого миозина, человеческого гемоглобина, человеческого мышечного креатинина или вирусный энхансер, например, из ЦМВ, FMDV, РСВ или ВЭБ. Энхансеры полинуклеотидной функции описаны в патентах США № 5593972, 5962428 и W094/016737, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки.
(6) Интрон
[00184] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более интронов. Каждый интрон может содержать функциональные донорные и акцепторные участки сплайсинга. Интрон может содержать энхансер сплайсинга. Интрон может содержать один или более сигналов, необходимых для эффективного сплайсинга.
(7) Область терминации транскрипции
(7)
[00185] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать одну или более областей терминации транскрипции. Область терминации транскрипции может располагаться ниже кодирующей последовательности, чтобы обеспечивать эффективную терминацию. Область терминации транскрипции может быть получена из того же гена, что и вышеописанный промотор, или может быть получена из одного или более других генов.
(8) Инициирующий кодон
[00186] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более инициирующих кодонов. Инициирующий кодон может располагаться выше кодирующей последовательности. Инициирующий кодон может находиться в рамке с кодирующей последовательностью. Инициирующий кодон может быть связан с одним или более сигналами, необходимыми для эффективной инициации трансляции, например, но не ограничиваясь этим, участком связывания рибосомы.
(9) Терминирующий кодон
[00187] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более терминирующих или стоп-кодонов. Терминирующий кодон может располагаться ниже кодирующей последовательности. Терминирующий кодон может находиться в рамке с кодирующей последовательностью. Терминирующий кодон может быть связан с одним или более сигналами, необходимыми для эффективной терминации трансляции.
(10) Сигнал полиаденилирования
[00188] Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты может содержать один или более сигналов
полиаденилирования. Сигнал полиаденилирования может содержать
один или более сигналов, необходимых для эффективного
полиаденилирования транскрипта. Сигнал полиаденилирования может
располагаться ниже кодирующей последовательности. Сигнал
полиаденилирования может представлять собой сигнал
полиаденилирования SV4 0, сигнал полиаденилирования ДКП, сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH), сигнал полиаденилирования человеческого гормона роста (hGH) или сигнал
полиаденилирования человеческого р-глобина. Сигнал
полиаденилирования SV4 0 может представлять собой сигнал полиаденилирования из плазмиды рСЕР4 (Invitrogen, San Diego, СА) .
(11) Лидерная последовательность
[00189] Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты может содержать одну или более лидерных
последовательностей. Лидерная последовательность может
кодировать сигнальный пептид. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина (Ig), например, но не ограничиваясь этим, сигнальный пептид IgG и сигнальный пептид IgE.
b. Компоновка конструкции рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты
[00190] Как описано выше, рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать одну или более конструкций рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты, при этом каждая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более компонентов. Один или более компонентов подробно описаны выше. Один или более компонентов, когда они включены в конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты, могут располагаться в любом порядке по отношению друг к другу. В некоторых вариантах реализации один или более компонентов могут располагаться в конструкции рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты так, как описано ниже.
(1) Компоновка 1
[00191] В одной компоновке первая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид тяжелой цепи, а вторая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид легкой цепи.
[00192] Первая конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты может быть помещена в вектор. Вторая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может быть помещена во второй или отдельный вектор. Размещение конструкции рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты в векторе более подробно описано ниже.
[00193] Первая конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать
промотор, интрон, область терминации транскрипции, инициирующий
кодон, терминирующий кодон и/или сигнал полиаденилирования.
Первая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой
кислоты может дополнительно содержать лидерную
последовательность, причем лидерная последовательность
расположена выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи. Соответственно, сигнальный пептид, кодируемый лидерной последовательностью, может быть связан пептидной связью с полипептидом тяжелой цепи.
[00194] Вторая конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать
промотор, инициирующий кодон, терминирующий кодон и сигнал
полиаденилирования. Вторая конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать лидерную последовательность, причем лидерная последовательность расположена выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи. Соответственно, сигнальный пептид, кодируемый лидерной последовательностью, может быть связан пептидной связью с полипептидом легкой цепи.
[00195] Соответственно, один пример компоновки 1 может включать первый вектор (и, таким образом, первую конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид тяжелой цепи, который содержит VH и СН1, и второй вектор (и, таким образом, вторую конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид легкой цепи, который содержит VL и CL.
Второй пример компоновки 1 может включать первый вектор (и,
таким образом, первую конструкцию рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид тяжелой цепи, который содержит VH, СН1, шарнирную область, СН2 и СНЗ, и второй вектор (и, таким образом, вторую конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид легкой цепи, который содержит VL и CL. (2) Компоновка 2
[00196] Во второй компоновке конструкция рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты может содержать
гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую полипептид тяжелой цепи, и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид легкой цепи. Гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид тяжелой цепи, может располагаться выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи. В альтернативном варианте гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид легкой цепи, может располагаться выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи.
[00197] Конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты можно помещать в вектор, как более подробно описано ниже.
[00198] Конструкция рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты может содержать гетерологичную
последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую участок
расщепления протеазой и/или линкерную последовательность. При
включении в конструкцию рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты гетерологичная последовательность
нуклеиновой кислоты, кодирующая участок расщепления протеазой, может располагаться между гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты,
кодирующей полипептид легкой цепи. Соответственно, участок расщепления протеазой позволяет разделять полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи на разные полипептиды после экспрессии. В других вариантах реализации при включении в конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты линкерной последовательности она может располагаться между гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
[00199] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать промотор, интрон, область терминации транскрипции, инициирующий кодон, терминирующий кодон и/или сигнал полиаденилирования. Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один или более промоторов. Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты также может содержать два промотора так, что один промотор может быть связан с гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, а второй промотор может быть связан с гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи. В других вариантах реализации конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать один промотор, связанный с гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
[00200] Конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать две лидерные последовательности, причем первая лидерная последовательность расположена выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, а вторая лидерная последовательность расположена выше (или на 5' конце) гетерологичной последовательности
нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи. Соответственно, сигнальный пептид, кодируемый первой лидерной последовательностью, может быть связан пептидной связью с полипептидом тяжелой цепи, а второй сигнальный пептид, кодируемый второй лидерной последовательностью, может быть связан пептидной связью с полипептидом легкой цепи.
[00201] Соответственно, один пример компоновки 2 может
включать вектор (и, таким образом, конструкцию рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид
тяжелой цепи, который содержит VH и СН1, и полипептид легкой
цепи, который содержит VL и CL, в котором линкерная
последовательность расположена между гетерологичной
последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
[00202] Второй пример компоновки 2 может включать вектор (и, таким образом, конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид тяжелой цепи, который содержит VH и СН1, и полипептид легкой цепи, который содержит VL и CL, в котором гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая участок расщепления протеазой, расположена между гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
[00203] Третий пример компоновки 2 может включать вектор (и, таким образом, конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид тяжелой цепи, который содержит VH, СН1, шарнирную область, СН2 и СНЗ, и полипептид легкой цепи, который содержит VL и CL, в котором линкерная последовательность расположена между гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
[00204] Четвертый пример компоновки 2 может включать вектор (и, таким образом, конструкцию рекомбинантной последовательности
нуклеиновой кислоты), кодирующий полипептид тяжелой цепи,
который содержит VH, СН1, шарнирную область, СН2 и СНЗ, и
полипептид легкой цепи, который содержит VL и CL, в котором
гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующая участок расщепления протеазой, расположена между гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид тяжелой цепи, и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид легкой цепи.
с. Экспрессия из конструкции рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты
[00205] В других вариантах реализации конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может содержать, в числе одного или более компонентов, гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид тяжелой цепи, и/или гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид легкой цепи. Соответственно, конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может облегчать экспрессию полипептида тяжелой цепи и/или полипептида легкой цепи.
[00206] В случае применения описанной выше компоновки 1 первая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может облегчать экспрессию полипептида тяжелой цепи, а вторая конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может облегчать экспрессию полипептида легкой цепи. В случае применения описанной выше компоновки 2 конструкция рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты может облегчать экспрессию полипептида тяжелой цепи и полипептида легкой цепи.
[00207] После экспрессии, например, но не ограничиваясь этим, в клетке, организме или млекопитающем, полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи могут формировать синтетическое антитело. В частности, полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи могут взаимодействовать друг с другом так, что сборка приводит к получению синтетического антитела, способного связывать антиген. В других вариантах реализации полипептид
тяжелой цепи и полипептид легкой цепи могут взаимодействовать друг с другом так, что сборка приводит к получению синтетического антитела, являющегося более иммуногенным по сравнению с антителом, не прошедшим описанную в данном документе сборку. В других вариантах реализации полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи могут взаимодействовать друг с другом так, что сборка приводит к получению синтетического антитела, способного вызывать или индуцировать иммунный ответ против антигена.
d. Вектор
[00208] Описанную выше конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты можно помещать в один или более векторов. Один или более векторов могут содержать точку начала репликации. Один или более векторов могут представлять собой плазмиду, бактериофаг, бактериальную искусственную хромосому или дрожжевую искусственную хромосому. Один или более векторов могут представлять собой как самореплицирующийся внехромосомный вектор, так и вектор, который интегрируется в геном организма-хозяина.
[00209] Один или более векторов могут представлять собой гетерологичную экспрессионную конструкцию, которая в общем случае является плазмидой, которую используют для внесения конкретного гена в клетку-мишень. После того, как экспрессионный вектор попадает в клетку, полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи, которые кодируются конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты, начинают вырабатываться рибосомальными комплексами клеточного аппарата транскрипции и трансляции. Один или более векторов могут экспрессировать большие количества стабильной матричной РНК и, следовательно, белков.
(1) Экспрессионный вектор
[00210] Один или более векторов могут представлять собой кольцевую плазмиду или линейную нуклеиновую кислоту. Кольцевая плазмида и линейная нуклеиновая кислота способны управлять экспрессией конкретной нуклеотидной последовательности в соответствующей клетке субъекта. Один или более векторов,
содержащих конструкцию рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты, могут быть химерными, что означает, что по меньшей мере один из их компонентов является гетерологичным по отношению к по меньшей мере одному из других его компонентов. (2) Плазмида
[00211] Один или более векторов могут представлять собой плазмиду. Плазмиду можно применять для трансфекции клеток конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты. Плазмиду можно применять для внесения конструкции рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты в организм субъекта. Плазмида также может содержать регуляторную последовательность, которая может хорошо подходить для генной экспрессии в клетке, в которую внесена плазмида.
[00212] Плазмида также может содержать точку начала репликации млекопитающего для внехромосомной поддержки плазмиды и выработки множества копий плазмиды в клетке. Плазмида может представлять собой pVAXl, рСЕР4 или pREP4 от Invitrogen (San Diego, СА) , которые могут содержать точку начала репликации вируса Эпштейна-Барр и область, кодирующую ядерный антиген EBNA-1, которая может обеспечивать многокопийную эписомальную репликацию без интеграции. Скелет плазмиды может представлять собой pAV0242. Плазмида может представлять собой дефективную по репликации аденовирусную плазмиду типа 5 (Ad5).
[00213] Плазмида может представлять собой pSE420 (Invitrogen, San Diego, Calif.), которую можно использовать для выработки белка в Escherichia coli (Е. coli). Плазмида также может представлять собой pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.), которую можно использовать для выработки белка в штаммах дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Плазмида также может принадлежать полной бакуловирусной системе экспрессии МАХВАС(tm) (Invitrogen, San Diego, Calif.), которую можно использовать для выработки белка в клетках насекомых. Плазмида также может представлять собой pcDNA I или pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Calif.), которые можно использовать для выработки белка в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомяка (СНО).
(3) Кольцевой и линейный вектор
[00214] Один или более векторов могут представлять собой кольцевую плазмиду, которая может трансформировать клетку-мишень путем интеграции в клеточный геном или существовать внехромосомно (например, автономно-реплицирующаяся плазмида с точкой начала репликации). Вектор может представлять собой pVAX, pcDNA3.О или provax, или любой другой экспрессионный вектор, способный экспрессировать полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи, кодируемые конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты.
[00215] Также в данном документе предложена линейная нуклеиновая кислота или линейная экспрессионная кассета ("ЛЭК"), которую возможно эффективно доставлять субъекту путем электропорации и которая способна экспрессировать полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи, кодируемые конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты. ЛЭК может представлять собой любую линейную ДНК, в которой отсутствует какой-либо фосфатный остов. ЛЭК может не содержать каких-либо генов устойчивости к антибиотикам и/или фосфатный остов. ЛЭК может не содержать другие последовательности нуклеиновых кислот, не связанные с экспрессией необходимого гена.
[00216] ЛЭК может быть получена из любой плазмиды, которую возможно линеаризовать. Плазмида может быть способна экспрессировать полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи, кодируемые конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты. Плазмида может представлять собой pNP (Пуэрто-Рико/34) или рМ2 (Новая Каледония/99) . Плазмида может представлять собой WLV009, pVAX, pcDNA3.О или provax, или любой другой экспрессионный вектор, способный экспрессировать полипептид тяжелой цепи и/или полипептид легкой цепи, кодируемые конструкцией рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты.
[00217] ЛЭК может представлять собой рсгМ2. ЛЭК может представлять собой pcrNP. pcrNP и pcrMR могут быть получены из pNP (Пуэрто-Рико/34) и рМ2 (Новая Каледония/99) соответственно.
(4) Способ получения вектора
[00218] В данном документе предложен способ получения одного или более векторов, в которые была помещена рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты. После конечного этапа субклонирования вектор можно использовать для инокуляции клеточной культуры в крупномасшабном ферментационном чане с помощью известных в данной области техники способов.
[00219] В других вариантах реализации после конечного этапа субклонирования вектор можно использовать с одним или более устройствами для электропорации (ЭП) . Устройства для ЭП более подробно описаны ниже.
[00220] Один или более векторов можно готовить или получать, используя комбинацию известных устройств и методик, но предпочтительно их получают с помощью методики получения плазмид, описанной в WO/2008/148010, опубликованной 4 декабря 2 008 г. В некоторых примерах описанные в данном документе ДНК-плазмиды можно готовить в концентрациях, превышающих или равных 10 мг/мл. Методики получения также включают применение различных устройств и протоколов, которые являются общеизвестными для специалистов в данной области техники, в дополнение описанным в заявке на патент США, серийный № 60/939,792, включая описанные в лицензированном патенте США № 7,238,522, изданном 3 июля 2007 г. Вышеуказанные заявка и патент, серийный № 60/939,792 и патент США № 7,238,522, соответственно, в полном объеме включены в данный документ.
5. Антитело
[00221] Как описано выше, рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Антитело может связываться или вступать в реакцию с антигеном, который более подробно описан ниже.
[00222] Антитело может содержать набор определяющих комплементарность областей ("CDR") тяжелой цепи и легкой цепи, перемежающих соответственно набор каркасных областей ("FR") тяжелой цепи и легкой цепи, которые обеспечивают поддержку CDR и определяют пространственную взаимосвязь CDR относительно друг
друга. Набор CDR может содержать три гипервариабельные области из V-области тяжелой или легкой цепи. Начиная с N-конца тяжелой или легкой цепи, эти CDR обозначаются "CDR1", "CDR2" и "CDR3" соответственно. Следовательно, антигенсвязывающий участок может включать шесть CDR, составляющих набор CDR из каждой V-области тяжелой и легкой цепи.
[00223] Протеолитический фермент папаин предпочтительно расщепляет молекулы IgG с получением нескольких фрагментов, два из которых (фрагменты F(ab)) содержат ковалентный гетеродимер, который содержит интактный антигенсвязывающий участок. Фермент пепсин способен расщеплять молекулы IgG с получением нескольких фрагментов, включая фрагмент F(ab')2/ который содержит оба антигенсвязывающих участка. Соответственно, антитело может представлять собой Fab или F(ab')2. Fab может содержать полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи. Полипептид тяжелой цепи Fab может содержать область VH и область СН1. Полипептид легкой цепи Fab может содержать область VL и область CL.
[00224] Антитело может представлять собой иммуноглобулин (Ig) . Ig может представлять собой, например, IgA, IgM, IgD, IgE и IgG. Иммуноглобулин может содержать полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи. Полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина может содержать область VH, область СН1, шарнирную область, область СН2 и область СНЗ. Полипептид легкой цепи иммуноглобулина может содержать область VL и область CL.
[00225] Антитело может представлять собой поликлональное или моноклональное антитело. Антитело может представлять собой химерное антитело, одноцепочечное антитело, антитело с созревшей аффинностью, человеческое антитело, гуманизированное антитело или полностью человеческое антитело. Гуманизированное антитело может представлять собой антитело от отличного от человека вида, которое связывает необходимый антиген, имеющее одну или более определяющих комплементарность областей (CDR) от отличного от человека вида и каркасные области из молекулы человеческого иммуноглобулина.
[00226] Антитело может представлять собой биспецифическое
антитело, более подробно описанное ниже. Антитело может представлять собой бифункциональное антитело, также более подробно описанное ниже.
[00227] Как описано выше, антитело может генерироваться у субъекта после введения субъекту композиции. Антитело может характеризоваться определенным временем полужизни в организме субъекта. В некоторых вариантах реализации антитело можно модифицировать, чтобы продлить или укоротить его время полужизни в организме субъекта. Такие модификации более подробно описаны ниже.
[00228] Антитело может быть дефукозилированным, как более подробно описано ниже.
[00229] Антитело можно модифицировать, чтобы снизить или предотвратить антителозависимое усиление (АЗУ) заболевания, связанного с антигеном, как более подробно описано ниже.
a. Биспецифическое антитело
[00230] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать биспецифическое антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Биспецифическое антитело может связываться или вступать в реакцию с двумя антигенами, например, двумя антигенами, более подробно описанными ниже. Биспецифическое антитело может состоять из фрагментов двух описанных в данном документе антител, что, таким образом, позволяет биспецифическому антителу связываться или вступать в реакцию с двумя необходимыми молекулами-мишенями, которые могут включать антиген, который более подробно описан ниже, лиганд, включая лиганд для рецептора, рецептор, включая лиганд-связывающий участок на рецепторе, комплекс лиганд-рецептор и маркер, включая раковый маркер.
b. Бифункциональное антитело
[00231] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать бифункциональное антитело, его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Бифункциональное антитело может связываться или вступать в реакцию с описанным ниже антигеном. Бифункциональное антитело также можно модифицировать, чтобы придать антителу дополнительную
функциональность помимо распознавания и связывания антигена. Такая модификация может включать, но не ограничивается этим, сопряжение с фактором Н или его фрагментом. Фактор Н представляет собой растворимый регулятор активации комплемента и, таким образом, может вносить свой вклад в иммунный ответ посредством комплемент-опосредованного лизиса (КОЛ).
c. Продление времени полужизни антитела
[00232] Как описано выше, антитело можно модифицировать, чтобы продлить или укоротить время полужизни антитела в организме субъекта. Модификация может продлевать или укорачивать время полужизни антитела в сыворотке субъекта.
[00233] Модификация может присутствовать в константной области антитела. Модификация может представлять собой одну или более аминокислотных замен в константной области антитела, которые продлевают время полужизни антитела по сравнению со временем полужизни антитела, не содержащего одну или более аминокислотных замен. Модификация может представлять собой одну или более аминокислотных замен в домене СН2 антитела, которые продлевают время полужизни антитела по сравнению со временем полужизни антитела, не содержащего одну или более аминокислотных замен.
[00234] В некоторых вариантах реализации одна или более аминокислотных замен в константной области могут включать замещение остатка метионина в константной области остатком тирозина, остатка серина в константной области остатком треонина, остатка треонина в константной области остатком глутамата или любую их комбинацию, продлевая, таким образом, время полужизни антитела.
[00235] В других вариантах реализации одна или более аминокислотных замен в константной области могут включать замещение остатка метионина в домене СН2 остатком тирозина, остатка серина в домене СН2 остатком треонина, остатка треонина в домене СН2 остатком глутамата или любую их комбинацию, продлевая, таким образом, время полужизни антитела.
d. Дефукозилирование
[00236] Рекомбинантная последовательность нуклеиновой
кислоты может кодировать антитело, которое не является фукозилированным (т. е. дефукозилированное антитело или нефукозилированное антитело), его фрагмент, его вариант или их комбинацию. Фукозилирование включает добавление к молекуле сахара фукозы, например, присоединение фукозы к N-гликанам, О-гликанам и гликолипидам. Соответственно, в дефукозилированном антителе фукоза не присоединена к углеводным цепям константной области. В свою очередь, это отсутствие фукозилирования может улучшать связывание FcyRIIIa и антителозависимую клеточную цитотоксическую (АЗКЦ) активность антитела по сравнению с фукозилированным антителом. Следовательно, в некоторых вариантах реализации нефукозилированное антитело может проявлять повышенную активность АЗКЦ по сравнению с фукозилированным антителом.
[00237] Антитело можно модифицировать так, чтобы предотвратить или ингибировать фукозилирование антитела. В некоторых вариантах реализации такое модифицированное антитело может проявлять повышенную активность АЗКЦ по сравнению с немодифицированным антителом. Модификация может присутствовать в тяжелой цепи, легкой цепи или их комбинации. Модификация может представлять собой одну или более аминокислотных замен в тяжелой цепи, одну или более аминокислотных замен в легкой цепи или их комбинацию.
е. Сниженный ответ АЗУ
[00238] Антитело можно модифицировать, чтобы снизить или предотвратить антителозависимое усиление (АЗУ) заболевания, связанного с антигеном, но при этом нейтрализовать антиген. Например, антитело можно модифицировать, чтобы снизить или предотвратить АЗУ заболевания, связанного с DENV, который более подробно описан ниже, но при этом нейтрализовать DENV.
[00239] В некоторых вариантах реализации антитело можно модифицировать так, чтобы оно содержало одну или более аминокислотных замен, которые снижают или предотвращают связывание антитела с FcyRla. Одна или более аминокислотных замен могут присутствовать в константной области антитела. Одна
или более аминокислотных замен могут включать замещение остатка лейцина остатком аланина в константной области антитела, т. е. также называемое в данном документе LA, мутацией LA или заменой LA. Одна или более аминокислотных замен могут включать замещение каждого из двух остатков лейцина остатком аланина в константной области антитела, которое также называется в данном документе LALA, мутацией LALA или заменой LALA. Присутствие замен LALA может предотвращать или блокировать связывание антитела с FcyRla и, таким образом, модифицированное антитело не усиливает заболевание или не вызывает АЗУ заболевания, связанного с антигеном, но при этом нейтрализует антиген, б. Антиген
[00240] Вакцины на основе ДНК-плазмиды кодируют антиген или
его фрагмент или вариант. Синтетическое антитело направлено на
данный антиген или его фрагмент или вариант. Антиген может
представлять собой последовательность нуклеиновой кислоты,
аминокислотную последовательность или комбинацию.
Последовательность нуклеиновой кислоты может представлять собой ДНК, РНК, кДНК, их вариант, их фрагмент или их комбинацию. Аминокислотная последовательность может представлять собой белок, пептид, его вариант, его фрагмент или их комбинацию.
[00241] Антиген может быть получен из любого числа организмов, например, вирусов, паразитов, бактерий, грибов или млекопитающих. Антиген может быть связан с аутоиммунным заболеванием, аллергией или астмой. В других вариантах реализации антиген может быть связан с раком, герпесом, гриппом, гепатитом В, гепатитом С, вирусом папилломы человека (ВПЧ) или вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).
[00242] В некоторых вариантах реализации антиген является чужеродным. В некоторых вариантах реализации антиген является собственным антигеном.
а. Чужеродные антигены
[00243] В некоторых вариантах реализации антиген является чужеродным. Чужеродный антиген представляет собой любое несобственное вещество (т. е. имеет происхождение за пределами организма субъекта), которое при внесении в организм способно
стимулировать иммунный ответ. (1) Вирусные антигены
[00244] Чужеродный антиген может представлять собой
вирусный антиген, его фрагмент или его вариант. Вирусный антиген
может принадлежать вирусу из одного из следующих семейств:
Adenoviridae , Arenaviridae , Bunyaviridae , Caliciviridae r
Coronaviridae , Filoviridae r Hepadnaviridae r Eerpesviridae r
Orthomyxoviridae , Papovaviridae r Paramyxoviridae r Parvoviridae r
Picornaviridae , Poxviridae r Reoviridae r Retrovir idae r
Rhabdoviridae или Togaviridae. Вирусный антиген может быть получен из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса чикунгунья (CHIKV), вируса лихорадки Денге, папилломавирусов, например, вируса папилломы человека (ВПЧ), полиовируса, вирусов гепатита, например, вируса гепатита А (ВГА), вируса гепатита В (ВГВ), вируса гепатита С (ВГС), вируса гепатита D (ВТО) и вируса гепатита Е (ВГЕ), вируса натуральной оспы (Variola major и minor), вируса осповакцины, вируса гриппа, риновирусов, вирусов конского энцефалита, вируса краснухи, вируса желтой лихорадки, норовируса, вируса гепатита А, вируса Т-клеточного лейкоза человека (ВТЛЧ-I), вируса лейкоза ворсистых клеток (ВТЛЧ-11), вируса калифорнийского энцефалита, хантавируса (геморрагической лихорадки), вируса бешенства, вируса лихорадки Эбола, вируса Марбург, вируса кори, вируса свинки, респираторно-синцитиального вируса (РСВ), простого герпеса 1 (герпеса ротовой полости), простого герпеса 2 (генитального герпеса), опоясывающего герпеса (ветряной оспы или ветрянки), цитомегаловируса (ЦМВ), например, ЦМВ человека, вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), флавивируса, вируса ящура, вируса Ласса, аренавируса или вируса, вызывающего рак. (а) Антиген вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) [00245] Вирусный антиген может быть получен из вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). В некоторых вариантах реализации антиген ВИЧ может представлять собой оболочечный белок подтипа А, оболочечный белок подтипа В, оболочечный белок подтипа С, оболочечный белок подтипа D, белок Nef-Rev подтипа В, белок Gag подтипа А, В, С или D, белок MPol, последовательности нуклеиновых кислот или аминокислот для Env A, Env В, Env С, Env
D, В Nef-Rev, Gag или любую их комбинацию.
[00246] Синтетическое антитело, специфическое в отношении ВИЧ, может содержать фрагмент Fab, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 48, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 3, и аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 49, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 4. Синтетическое антитело может содержать аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 4 6, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: б, и аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 47, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 7. Фрагмент Fab содержит аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 50. Фрагмент Fab может содержать аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 53, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 52.
[00247] Синтетическое антитело, специфическое в отношении
ВИЧ, может включать Ig, содержащий аминокислотную
последовательность согласно SEQ ID NO: 5. Ig может содержать аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 1, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 62. Ig может содержать аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 2, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 63. Ig может содержать аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 55, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 54, и аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 57, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 56.
[00248] ДНК-вакцина, кодирующая антиген ВИЧ, может включать вакцину, кодирующую оболочечный белок подтипа А, оболочечный белок подтипа В, оболочечный белок подтипа С, оболочечный белок подтипа D, белок Nef-Rev подтипа В, белок Gag подтипа А, В, С
или D, белок MPol, последовательности нуклеиновых кислот или аминокислот для Env A, Env В, Env С, Env D, В Nef-Rev, Gag или любую их комбинацию. Примеры ДНК-вакции, кодирующих антиген ВИЧ, включают описанные в патенте США № 8168769 и WO2015/073291, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки. (Ъ) Вирус чикунгунья
[0024 9] Вирусный антиген может быть получен из вируса чикунгунья. Вирус чикунгунья принадлежит к роду альфавирусов семейства тогавирусов. Вирус чикунгунья передается человеку через укус инфицированных москитов, например, из рода Aedes.
[00250] Синтетическое антитело, специфическое в отношении CHIKV, может содержать фрагмент Fab, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 59, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 58, и аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 61, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 60. Синтетическое антитело, специфическое в отношении CHIKV, может включать Ig, кодируемый одной из SEQ ID N0: 97-100.
[00251] ДНК-вакцина может кодировать антиген CHIKV. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены CHIKV, включают описанные в патенте США № 8852609, содержание которого в полном объеме включено посредством ссылки. ДНК-вакцина, кодирующая антиген CHIKV, может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую одну из SEQ ID N0: 81-88. ДНК-вакцина, кодирующая антиген CHIKV, может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность SEQ ID N0: 89-96. Например, в одном варианте реализации ДНК-вакцина кодирует консенсусный белок CHIKV El. В одном варианте реализации консенсусный белок CHIKV El содержит аминокислотную последовательность согласно одной из SEQ ID N0: 81 или 84. В одном варианте реализации ДНК-вакцина, кодирующая консенсусный белок CHIKV El, содержит последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 8 9 или 92. В одном варианте реализации ДНК-вакцина кодирует консенсусный белок CHIKV Е2. В одном варианте реализации консенсусный белок CHIKV
Е2 содержит аминокислотную последовательность согласно одной из SEQ ID N0: 82 или 85. В одном варианте реализации ДНК-вакцина, кодирующая консенсусный белок CHIKV Е2, содержит последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 90 или 93. В одном варианте реализации ДНК-вакцина кодирует капсидный консенсусный белок CHIKV. В одном варианте реализации капсидный консенсусный белок CHIKV содержит аминокислотную последовательность согласно одной из SEQ ID N0: 83 или 86. В одном варианте реализации ДНК-вакцина, кодирующая капсидный консенсусный белок CHIKV, содержит последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 91 или 94. В одном варианте реализации ДНК-вакцина кодирует консенсусный белок CHIKV Env. В одном варианте реализации консенсусный белок CHIKV Env содержит аминокислотную последовательность согласно одной из SEQ ID N0: 87 или 88. В одном варианте реализации ДНК-вакцина, кодирующая консенсусный белок CHIKV Env, содержит последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 95 или 9 б.
(с) Вирус Денге
[00252] Вирусный антиген может быть получен из вируса Денге. Антиген вируса Денге может представлять собой один из трех белков или полипептидов (С, ргМ и Е) , которые образуют вирусную частицу. Антиген вируса Денге может представлять собой один из семи других белков или полипептидов (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b, NS5), которые принимают участие в репликации вируса. Вирус Денге может принадлежать к одному из пяти штаммов или серотипов вируса, включая DENV-1, DENV-2, DENV-3 и DENV-4. Антиген может представлять собой любую комбинацию из нескольких антигенов вируса Денге.
[00253] Синтетическое антитело, специфическое в отношении вируса Денге, может включать Ig, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 45, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 44.
[00254] ДНК-вакцина может кодировать антиген вируса Денге. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антиген вируса Денге, включают описанные в патенте США № 8835620 и WO2014/144786, содержание
которых в полном объеме включено посредством ссылки. (d) Антиген гепатита
[00255] Вирусный антиген может включать антиген вируса гепатита (т. е. антиген гепатита) или его фрагмент или его вариант. Антиген гепатита может представлять собой антиген или иммуноген, полученный из одного или более из вируса гепатита А (ВГА), вируса гепатита В (ВГВ), вируса гепатита С (ВГС), вируса гепатита D (ВГБ) и/или вируса гепатита Е (ВГЕ)
[00256] Антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГА. Антиген гепатита может представлять собой капсидный белок ВГА, неструктурный белок ВГА, их фрагмент, их вариант, или их комбинацию.
[00257] Антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГС. Антиген гепатита может представлять собой нуклеокапсидный белок ВГС (т. е., коровый белок), оболочечный белок ВГС (например, Е1 и Е2), неструктурный белок ВГС (например, NS1, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a и NS5b) , их фрагмент, их вариант, или их комбинацию.
[00258] Антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГБ. Антиген гепатита может представлять собой антиген ВГБ дельта, его фрагмент или его вариант.
[00259] Антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГЕ. Антиген гепатита может представлять собой капсидный белок ВГЕ, его фрагмент или его вариант.
[00260] Антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГВ. Антиген гепатита может представлять собой коровый белок ВГВ, поверхностный белок ВГВ, ДНК-полимеразу ВГВ, белок ВГВ, кодируемый геном X, их фрагмент, их вариант или их комбинацию. Антиген гепатита может представлять собой коровый белок ВГВ генотипа А, коровый белок ВГВ генотипа В, коровый белок ВГВ генотипа С, коровый белок ВГВ генотипа D, коровый белок ВГВ генотипа Е, коровый белок ВГВ генотипа F, коровый белок ВГВ генотипа G, коровый белок ВГВ генотипа Н, поверхностный белок ВГВ генотипа А, поверхностный белок ВГВ генотипа В, поверхностный белок ВГВ генотипа С, поверхностный белок ВГВ генотипа D, поверхностный белок ВГВ генотипа Е,
поверхностный белок ВГВ генотипа F, поверхностный белок ВГВ генотипа G, поверхностный белок ВГВ генотипа Н, их фрагмент, их вариант или их комбинацию.
[00261] В некоторых вариантах реализации антиген гепатита может представлять собой антиген, полученный из ВГВ генотипа А, ВГВ генотипа В, ВГВ генотипа С, ВГВ генотипа D, ВГВ генотипа Е, ВГВ генотипа F, ВГВ генотипа G или ВГВ генотипа Н.
[00262] ДНК-вакцина может кодировать антиген гепатита. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены гепатита, включают описанные в патентах США № 8829174, 8921536, 9403879, 9238679, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки.
(e) Антиген вируса папилломы человека (ВПЧ)
[00263] Вирусный антиген может включать антиген, полученный из ВПЧ. Антиген ВПЧ может принадлежать типам ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 45, 52 и 58, которые приводят к раку шейки матки, раку прямой кишки и/или другим видам рака. Антиген ВПЧ может принадлежать типам ВПЧ б и 11, которые приводят к генитальным бородавкам и по известным данным вызывают рак головы и шеи.
[00264] Антигены ВПЧ могут представлять собой домены ВПЧ Еб или Е7 из каждого типа ВПЧ. Например, в случае ВПЧ типа 16 (ВПЧ16) антиген ВПЧ16 может включать антиген ВПЧ16 Еб, антиген ВПЧ16 Е7, а также их фрагменты, варианты или комбинации. Аналогично, антиген ВПЧ может представлять собой ВПЧ б Еб и/или Е7, ВПЧ 11 Еб и/или Е7, ВПЧ 18 Еб и/или Е7, ВПЧ 31 Еб и/или Е7, ВПЧ 33 Еб и/или Е7, ВПЧ 52 Еб и/или Е7 или ВПЧ 58 Еб и/или Е7, а также их фрагменты, варианты или комбинации.
[00265] ДНК-вакцина может кодировать антиген ВПЧ. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены ВПЧ, включают описанные в WO/2 008/014521, опубликованной 31 января 2 008 г.; публикации заявки на патент США № 2 0160038584; патентах США № 8389706 и 9050287, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки.
(f) Антиген РСВ
[00266] Вирусный антиген может включать антиген РСВ. Антиген РСВ может представлять собой слитый белок человеческого РСВ (также называемый в данном документе "РСВ F", "белок РСВ F"
и "белок F") или его фрагмент или вариант. Слитый белок человеческого РСВ может быть консервативным для подтипов РСВ А и В. Антиген РСВ может представлять собой белок РСВ F или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23994.1) . Антиген РСВ может представлять собой белок РСВ F из штамма РСВ А2 (GenBank ААВ59858.1) или его фрагмент или вариант. Антиген РСВ может представлять собой мономер, димер или тример белка РСВ F или его фрагмент или вариант.
[00267] Белок РСВ F может находиться в форме, предшествующей слиянию, или форме после слияния. Предшествующая слиянию форма РСВ F вызывает появление высоких титров нейтрализующих антител у иммунизированных животных и защищает животных от стимуляции РСВ.
[00268] Антиген РСВ может представлять собой гликопротеин присоединения человеческого РСВ (также называемый в данном документе "РСВ G", "белок РСВ G" и "белок G") или его фрагмент или вариант. Белок G человеческого РСВ отличается для подтипов РСВ А и В. Антиген может представлять собой белок РСВ G или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23993). Антиген РСВ может представлять собой белок РСВ G из подтипа РСВ В, изолят Н5601, подтипа РСВ В, изолят Н1068, подтипа РСВ В, изолят Н5598, подтипа РСВ В, изолят Н1123, или их фрагмент или вариант.
[00269] В других вариантах реализации антиген РСВ может представлять собой неструктурный белок 1 ("белок NS1") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок NS1 РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23987.1). Антиген РСВ также может представлять собой неструктурный белок 2 ("белок NS2") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок NS2 РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23988.1). Антиген РСВ может дополнительно представлять собой нуклеокапсидный ("N") белок человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок N РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long
(GenBank AAX23989.1). Антиген РСВ может представлять собой фосфопротеин ("Р") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок Р РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23990.1). Антиген РСВ также может представлять собой белок матрикса ("М") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок М РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23991.1).
[00270] В других вариантах реализации антиген РСВ может представлять собой малый гидрофобный белок ("SH") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок SH РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23992.1). Антиген РСВ также может представлять собой белок матрикса 2-1 ("М2-1") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок М2-1 РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23995.1). Антиген РСВ может дополнительно представлять собой белок матрикса 2-2 ("М2-2") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок М2-2 РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23997.1). Антиген РСВ может представлять собой белок полимеразы L ("L") человеческого РСВ или его фрагмент или вариант. Например, антиген РСВ может представлять собой белок L РСВ или его фрагмент или вариант из штамма РСВ Long (GenBank ААХ23996.1).
[00271] В дополнительных вариантах реализации антиген РСВ может иметь оптимизированную аминокислотную последовательность белка NS1, NS2, N, Р, М, SH, М2-1, М2-2 или L. Антиген РСВ может представлять собой белок человеческого РСВ или рекомбинантный антиген, например, любой из белков, кодируемых человеческим геномом РСВ.
[00272] В других вариантах реализации антигер РСВ может представлять собой, но не ограничивается этим, белок РСВ F из штамма РСВ Long, белок РСВ G из штамма РСВ Long, оптимизированную аминокислотную последовательность РСВ G,
человеческий геном РСВ из штамма РСВ Long, оптимизированную аминокислотную последовательность РСВ F, белок РСВ NS1 из штамма РСВ Long, белок РСВ NS2 из штамма РСВ Long, белок РСВ N из штамма РСВ Long, белок РСВ Р из штамма РСВ Long, белок РСВ М из штамма РСВ Long, белок РСВ SH из штамма РСВ Long, белок РСВ М2-1 из штамма РСВ Long, белок РСВ М2-2 из штамма РСВ Long, белок РСВ L из штамма РСВ Long, белок РСВ G из подтипа РСВ В, изолят Н5601, белок РСВ G из подтипа РСВ В, изолят Н1068, белок РСВ G из подтипа РСВ В, изолят Н5598, белок РСВ G из подтипа РСВ В, изолят Н1123 или их фрагмент или вариант.
[00273] ДНК-вакцина может кодировать антиген РСВ. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены РСВ, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20150079121, содержание которой включено посредством ссылки.
(д) Антиген гриппа
[00274] Вирусный антиген может включать антиген, полученный из вируса гриппа. Антигены гриппа представляю антигены, способные вызывать иммунный ответ у млекопитающего против одного или более серотипов гриппа. Антиген может содержать полноразмерный продукт трансляции HA0, субъединицу НА1, субъединицу НА2, их вариант, их фрагмент или их комбинацию. Гемагглютининовый антиген гриппа может быть получен из нескольких штаммов гриппа А серотипа HI, серотипа Н2, гибридной последовательности, полученной из разных наборов из нескольких штаммов гриппа А серотипа HI, или получен из нескольких штаммов гриппа В. Гемагглютининовый антиген гриппа может быть получен из гриппа В.
[00275] Антиген гриппа также может содержать по меньшей мере один антигенный эпитоп, который может быть эффективным против конкретных иммуногенов гриппа, против которых можно индуцировать иммунный ответ. Антиген может обеспечивать полный репертуар антигенных участков и эпитопов, присутствующих в интактном вирусе гриппа. Антиген может быть получен из последовательностей гемагглютининового антигена из множества штаммов вируса гриппа А одного серотипа, например, множества штаммов вируса гриппа А серотипа HI или серотипа Н2. Антиген
может представлять собой гибридную последовательность гемагглютининового антигена, полученную при комбинации двух разных последовательностей гемагглютининового антигена или их частей. Каждая из двух разных последовательностей гемагглютининового антигена может быть получена из отличного набора множества штаммов вируса гриппа А одного серотипа, например, множества штаммов вируса гриппа А серотипа HI. Антиген может представлять собой последовательность гемагглютининового антигена, полученную из последовательностей гемагглютининового антигена из множества штаммов вируса гриппа В.
[00276] В некоторых вариантах реализации антиген гриппа может представлять собой антиген HI НА, Н2 НА, НЗ НА, Н5 НА или ВНА.
[00277] Синтетическое антитело, специфическое в отношении антигена гриппа, может включать Ig, содержащий аминокислотную последовательность согласно одной из SEQ ID N0: 155-161. Синтетическое антитело, специфическое в отношении антигена гриппа, может кодироваться молекулой нуклеиновой кислоты, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты согласно одной из SEQ ID N0: 162-170.
[00278] ДНК-вакцина может кодировать антиген гриппа. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены гриппа, включают описанные в WO/2 008/014521, опубликованной 31 января 2 008 г.; патентах США № 9592285, 8298820; публикациях заявок на патент США № 20160022806, 20160175427, содержание которых в полном объеме включено посредством ссылки.
(h) Вирус Эбола
[00279] Вирусный антиген может быть получен из вируса Эбола. Болезнь, вызываемая вирусом Эбола (БВЭ), или геморрагическая лихорадка Эбола (ГЛЭ) включает любой из четырех из пяти известных вирусов Эбола, включая вирус Бундибугийо (BDBV), вирус Эбола (EB0V), Суданский вирус (SUDV) и вирус леса Тай (TAFV, также называемый эболавирусом Кот-д'Ивуара (эболавирусом Берега Слоновой Кости, CIEB0V).
[00280] Синтетическое антитело, специфическое в отношении
антигена вируса Эбола. Синтетическое антитело, специфическое в отношении вируса Эбола, может включать Ig, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID N0:143, SEQ ID N0:145 или SEQ ID NO: 147. Синтетическое антитело, специфическое в отношении вируса Эбола, может кодироваться молекулой нуклеиновой кислоты, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 142, SEQ ID N0:144, SEQ ID N0:146 или SEQ ID NO: 148.
[00281] ДНК-вакцина может кодировать антиген Эбола. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены Эбола, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20150335726, содержание которой включено посредством ссылки.
(1) Вирус Зика
[00282] Вирусный антиген может быть получен из вируса Зика. Причиной болезни Зика является инфекция вирусом Зика, которая может передаваться людям через укус инфицированных москитов или передаваться половым путем среди людей. Антиген Зика может включать оболочечный белок вируса Зика, белок NS1 вируса Зика или капсидный белок вируса Зика.
[00283] Синтетическое антитело, специфическое в отношении антигена Зика. Синтетическое антитело, специфическое в отношении вируса Зика, может включать Ig, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ
104, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: ID NO: 121 или SEQ ID NO: 122.
[00284] ДНК-вакцина может кодировать антиген Зика. ДНК-
вакцина, кодирующая антиген Зика, может содержать
последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую
аминокислотную последовательность, содержащую одну из SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 133. ДНК-вакцина, кодирующая антиген Зика,
может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую одну из SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 12 6, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130 и SEQ ID NO: 132. (j) Вирус Марбург
[00285] Вирусный антиген может быть получен из вируса Марбург. Иммуногены вируса Марбург, которые можно использовать для индукции общего иммунитета против нескольких подтипов или серотипов вируса Марбург. Антиген может быть получен из оболочечного гликопротеина вируса Марбург.
[00286] ДНК-вакцина может кодировать антиген Марбург.
Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены Марбург, включают
описанные в патенте США № 9597388, содержание которого в полном
объеме включено посредством ссылки. ДНК-вакцина, кодирующая
антиген вируса Марбург, может содержать последовательность
нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную
последовательность, содержащую одну из SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 152 и SEQ ID NO: 154. ДНК-вакцина, кодирующая антиген вируса Марбург, может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую одну из SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 151 и SEQ ID NO: 153 .
(2) Бактериальные антигены
[00287] Чужеродный антиген может представлять собой
бактериальный антиген, его фрагмент или его вариант. Бактерии
могут принадлежать любому из следующих типов: Acidobacteria,
Actinobacteria, Aquificae, Bacteroidetes, Caldiserica,
Chlamydiae, Chlorobi, Chloroflexi, Chrysiogenetes,
Cyanobacteria, Deferribacteres, Deinococcus-Thermus,
Dictyoglomi, Elusimicrobia, Fibrobacteres, Firmicutes,
Fusobacteria, Gemmatimonadetes, Lentisphaerae, Nitrospira,
Planctomycetes, Proteobacteria, Spirochaetes, Synergistetes,
Tenericutes, Thermodesulfobacteria, Thermotogae и
Verrucomicrobia.
[00288] Бактерия может быть грамположительной бактерией или грамотрицательной бактерией. Бактерия может быть аэробной бактерией или анаэробной бактерией. Бактерия может быть аутотрофной бактерией или гетеротрофной бактерией. Бактерия
может быть мезофильной, нейтрофильной, экстремофильной, ацидофильной, алкалофильной, термофильной, психрофильной, галофильной или осмофильной.
[00289] Бактерия может представлять собой бактерию сибирской язвы, устойчивую к антибиотикам бактерию, болезнетворную бактерию, бактерию, вызывающую пищевое отравление, инфекционную бактерию, бактерию сальмонеллы, бактерию стафилококка, бактерию стрептококка или бактерию столбняка. Бактерия может представлять собой микобактерию, Clostridium tetani, Yersinia pestis, Bacillus anthracis, метициллин-резистентную Staphylococcus aureus (MRSA) или Clostridium difficile. Бактерия может представлять собой Mycobacterium tuberculosis.
[00290] Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены Clostridium difficile, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20140341936, содержание которой включено посредством ссылки.
[00291] Примеры ДНК-вакции, кодирующих антигены MRS А, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20140341944, содержание которой включено посредством ссылки.
(а) Антигены Mycobacterium tuberculosis
[00292] Бактериальный антиген может представлять собой антиген Mycobacterium tuberculosis (т. е. антиген ТБ или иммуноген ТБ) или его фрагмент или его вариант. Антиген ТБ может быть получен из семейства антигенов ТБ Ад85, например, Ад85А и Ад8 5В. Антиген ТБ может быть получен из семейства антигенов ТБ Esx, например, EsxA, EsxB, EsxC, EsxD, EsxE, EsxF, EsxH, EsxO, EsxQ, EsxR, EsxS, EsxT, EsxU, EsxV и EsxW.
[00293] ДНК-вакцина может кодировать антиген Mycobacterium tuberculosis. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены Mycobacterium tuberculosis, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20160022796, содержание которой включено посредством ссылки.
(3) Паразитарные антигены
[00294] Чужеродный антиген может представлять собой паразитарный антиген или его фрагмент или вариант. Паразит может представлять собой простейший организм, гельминта или
эктопаразита. Гельминт (т. е. червь) может представлять собой плоского червя (например, сосальщики и ленточные черви), скребня или круглого червя (например, острицы). Эктопаразит может представлять собой вшей, блох и клещей.
[00295] Паразит может представлять собой любого паразита,
вызывающего одно из следующих заболеваний: акантамебный кератит,
амебиаз, аскаридоз, бабезиоз, балантидиаз, байлисаскаридоз,
болезнь Чагаса, клонорхоз, кохлиомия, криптоспоридиоз,
дифиллоботриоз, дракункулез, эхинококкоз, элефантиаз,
энтеробиоз, фасциолез, фасциолопсиоз, филяриатоз, жиардиаз, гнатостомоз, гименолепидоз, изоспороз, лихорадка Катаямы, лейшманиоз, болезнь Лайма, малярия, метагонимоз, миаз, онхоцеркоз, педикулез, чесотка, шистозоматоз, сонная болезнь, стронгилоидоз, тениоз, токсокароз, токсоплазмоз, трихинеллез и трихиуриаз.
[00296] Паразит может представлять собой акантамебу, анисакиса, Ascaris lumbricoides, овода, Balantidium coli, постельного клопа, Cestoda (ленточного червя), клеща, Cochliomyia hominivorax, дизентерийную амебу, Fasciola hepatica, Giardia lamblia, анкилостому, Leishmania, Linguatula serrata, печеночного сосальщика, глазного червя, Paragonimus - легочного сосальщика, острицу, Plasmodium falciparum, шистосому, Strongyloides stercoralis, клеща, ленточного червя, Toxoplasma gondii, Trypanosoma, власоглава или Wuchereria bancrofti.
(а) Антиген малярии
[00297] Чужеродный антиген может представлять собой антиген малярии (т. е. антиген PF или иммуноген PF) или его фрагмент или его вариант. Антиген может быть получен из паразита, вызывающего малярию. Вызывающий малярию паразит может представлять собой Plasmodium falciparum. Антиген Plasmodium falciparum может включать антиген спорозоита (CS).
[00298] В некоторых вариантах реализации антиген малярии может представлять собой один из иммуногенов P. falciparum CS; LSA1; TRAP; CelTOS; и Amal. Иммуногены могут быть полноразмерными или представлять иммуногенные фрагменты полноразмерных белков.
[00299] В других вариантах реализации антиген малярии может представлять собой TRAP, который также называется SSP2. В других вариантах реализации антиген малярии может представлять собой CelTOS, который также называется Ад2 и является высококонсервативным антигеном Plasmodium. В дополнительных вариантах реализации антиген малярии может представлять собой Amal, который является высококонсервативным антигеном Plasmodium. В некоторых вариантах реализации антиген малярии может представлять собой антиген CS.
[00300] В других вариантах реализации антиген малярии может представлять собой слитый белок, содержащий комбинацию двух или более белков PF, приведенных в данном документе. Например, слитые белки могут содержать два или более компонента из иммуногена CS, иммуногена ConLSAl, иммуногена ConTRAP, иммуногена ConCelTOS и иммуногена ConAmal, связанные непосредственно вплотную друг к другу или связанные спейсером или одной или более промежуточными аминокислотами. В некоторых вариантах реализации слитый белок содержит два иммуногена PF; в некоторых вариантах реализации слитый белок содержит три иммуногена PF, в некоторых вариантах реализации слитый белок содержит четыре иммуногена PF, а в некоторых вариантах реализации слитый белок содержит пять иммуногенов PF. Слитые белки с двумя иммуногенами PF могут содержать: CS и LSA1; CS и TRAP; CS и CelTOS; CS и Amal; LSA1 и TRAP; LSA1 и CelTOS; LSA1 и Amal; TRAP и CelTOS; TRAP и Amal; или CelTOS и Amal. Слитые белки с тремя иммуногенами PF могут содержать: CS, LSA1 и TRAP; CS, LSA1 и CelTOS; CS, LSA1 и Amal; LSA1, TRAP и CelTOS; LSA1, TRAP и Amal; или TRAP, CelTOS и Amal. Слитые белки с четырьмя иммуногенами PF могут содержать: CS, LSA1, TRAP и CelTOS; CS, LSA1, TRAP и Amal; CS, LSA1, CelTOS и Amal; CS, TRAP, CelTOS и Amal; или LSA1, TRAP, CelTOS и Amal. Слитые белки с пятью иммуногенами PF могут содержать CS или CS-alt, LSA1, TRAP, CelTOS и Amal.
[00301] ДНК-вакцина может кодировать антиген малярии. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены малярии, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20130273112,
содержание которой включено посредством ссылки. (4) Грибковые антигены
[00302] Чужеродный антиген может представлять собой грибковый антиген или его фрагмент или вариант. Грибы могут принадлежать роду аспергилл, кожных бластомицет, дрожжей Candida (например, Candida albicans) r Coccidioidesr Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattiir dermatophyte, Fusarium species, Histoplasma capsulatum, Mucoromycotinar Pneumocystis jirovecii, Sporothrix schenckii, Exserohilum или Cladosporium. b. Собственные антигены
[00303] В некоторых вариантах реализации антиген является собственным антигеном. Собственный антиген может быть составляющей частью организма субъекта, которая способна стимулировать иммунный ответ. В некоторых вариантах реализации собственный антиген не провоцирует иммунный ответ, если субъект не находится в состоянии заболевания, например, аутоиммунного заболевания.
[00304] Собственные антигены могут включать, но не ограничиваются этим, цитокины, антитела против вирусов, таких как перечисленные выше, включая ВИЧ и Денге, антигены, влияющие на прогрессирование или развитие рака, и рецепторы клеточной поверхности или трансмембранные белки.
(1) WT-1
[00305] Собственный антиген может представлять собой ген-супрессор опухоли Вильмса 1 (WT1), его фрагмент, его вариант или их комбинацию. WT1 является транскрипционным фактором, содержащим в N-конце богатый пролином/глутамином ДНК-связывающий домен и четыре цинк-пальцевых мотива в С-конце. WT1 играет роль в нормальном развитии урогенитальной системы и взаимодействует с многочисленными факторами, например, р53, известным опухолевым супрессором, и сериновой протеазой HtrA2, которая расщепляет WT1 в нескольких участках после обработки цитотоксическим препаратом. Мутация WT1 может приводить к образованию опухоли или рака, например, опухоли Вильмса или опухолей, экспрессирующих WT1.
[00306] ДНК-вакцина может кодировать антиген WT-1. Примеры
ДНК-вакцин, кодирующих антигены WT-1, включают описанные в публикациях заявок на патент США № 20150328298 и 20160030536, содержание которых включено посредством ссылки.
(2) EGFR
[00307] Собственный антиген может включать рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) или его фрагмент или вариацию. EGFR (также называемый ЕгЬВ-1 и HER1) представляет собой рецептор клеточной поверхности для представителей семейства эпидермальных факторов роста (EGF-семейства) внеклеточных белковых лигандов. EGFR является представителем семейства рецепторов ЕгЬВ, которое включает четыре близкородственные рецепторные тирозинкиназы: EGFR (ErbB-1), HER2/c-neu (ErbB-2), Her 3 (ErbB-3) и Her 4 (ErbB-4). Мутации, влияющие на экспрессию или активность EGFR, могут приводить к раку.
[00308] Антиген может включать антиген ErbB-2. Erb-2 (человеческий рецептор эпидермального фактора роста 2) также известен как Neu, HER2, CD340 (кластер дифференцировки 340) или р185 и кодируется геном ERBB2. Было показано, что амплификация или сверхэкспрессия этого гена играет роль в развитии и прогрессировании определенных агрессивных типов рака молочной железы. Приблизительно у 2 5-3 0% женщин с раком молочной железы происходит генетическое изменение в гене ERBB2, что приводит к выработке повышенного количества HER2 на поверхности опухолевых клеток. Сверхэкспрессия HER2 стимулирует быстрое деление клеток и, таким образом, HER2 маркирует опухолевые клетки.
[00309] Синтетическое антитело, специфическое в отношении HER2, может содержать фрагмент Fab, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 41, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 40, и аминокислотную последовательность согласно SEQ ID N0: 43, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID N0: 42.
(3) Кокаин
[00310] Собственный антиген может представлять собой антиген рецептора кокаина. Рецепторы кокаина включают
переносчики дофамина.
(4) PD-1
[00311] Собственный антиген может включать белок
запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1). Белок
запрограммированной гибели 1 (PD-1) и его лиганды, PD-L1 и PD-L2, доставляют ингибиторные сигналы, которые регулируют баланс между активацией Т-клеток, переносимостью и иммунопатологией. PD-1 представляет собой 288-аминокислотную белковую молекулу клеточной поверхности, содержащую внеклеточный домен IgV, за которым следует трансмембранная область и внутриклеточный хвост.
[00312] ДНК-вакцина может кодировать антиген PD-1. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены PD-1, включают описанные в публикациях заявок на патент США № 20170007693, содержание которой включено посредством ссылки.
(5) 4-1ВВ
[00313] Собственный антиген может включать лиганд 4-1ВВ. Лиганд 4-1ВВ представляет собой трансмембранный гликопротеин типа 2, принадлежащий суперсемейству TNF. Лиганд 4-1ВВ может экспрессироваться на активированных Т-лимфоцитах. 4-1ВВ является индуцируемой активацией Т-клеточной костимулирующей молекулой. Сигнализация 4-1ВВ повышает регуляцию генов выживаемости, усиливает деление клеток, индуцирует выработку цитокинов и предотвращает индуцированную активацией клеточную гибель для Т-клеток.
(6) CTLA4
[00314] Собственный антиген может включать CTLA-4 (антиген цитотоксических Т-лимфоцитов 4), также известный как CD152 (кластер дифференцировки 152) . CTLA-4 представляет собой белковый рецептор, находящийся на поверхности Т-клеток, которые приводит к клеточной иммунной атаке на антигены. Антиген может представлять собой фрагмент CTLA-4, такой как внеклеточный V-домен, трансмембранный домен и цитоплазматический хвост, или их комбинацию.
(7) IL-6
[00315] Собственный антиген может включать интерлейкин б (IL-6). IL-6 стимулирует воспалительные и аутоиммунные процессы
при многих заболеваниях, включая, но не ограничиваясь этим, диабет, атеросклероз, депрессию, болезнь Альцгеймера, системную красную волчанку, множественную миелому, рак, болезнь Бехчета и ревматоидный артрит.
(8) МСР-1
[00316] Собственный антиген может включать моноцитарный хемотактический белок-1 (МСР-1). МСР-1 также называется хемокиновым (мотив С-С) лигандом 2 (CCL2) или малым индуцибельным цитокином А2. МСР-1 представляет собой цитокин, который принадлежит к семейству хемокинов СС. МСР-1 привлекает моноциты, Т-клетки памяти и дендритные клетки к участкам воспаления, возникшим вследствие повреждения ткани или инфекции.
(9) Амилоид бета
[00317] Собственный антиген может включать амилоид бета (А|3) или его фрагмент или вариант. Антиген Ар может содержать пептид АР (X-Y), причем аминокислотная последовательность от аминокислотной позиции X до аминокислоты Y человеческой последовательности белка АР, включая как X, так и Y, в частности, до аминокислотной последовательности от аминокислотной позиции X до аминокислотной позиции Y аминокислотной последовательности DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGWIATVIVI (SEQ ID N0: 171) (соответствующей аминокислотным позициям от 1 до 4 7; запрашиваемая человеческая последовательность), или его варианты. Антиген АР может содержать полипептид АР полипептида
Ap(X-Y),
где
X может
быть равен 1, 2, 3, 4, 5, 6,
7, 8,
11, 12,
13,
14, 15,
16, 17, 1
8, 19, 20, 21
, 22, 23
, 24,
25,
26,
27, 28,
29,
3 0, 31 или 32, а
Y может быть
равен 47
, 46,
45,
44,
43, 42,
41,
40, 39,
38, 37, 36, 35, 34, 33
, 32, 31
, 30,
29,
28,
27, 26,
25,
24, 23, 22, 21, 20, 19,
18, 17,
или
15.
Полипептид АР может
содержать фрагмент, который
составляет
меньшей
мере
15, по
меньшей
мере 16, по
меньшей
мере
17,
меньшей
мере
18, по
меньшей
мере 19, по
меньшей
мере
20,
меньшей
мере
21, по
меньшей
мере 22, по
меньшей
мере
23,
меньшей
мере
24, по
меньшей
мере 25, по
меньшей
мере
30,
меньшей
мере
35, по
меньшей
мере 3 6, по
меньшей
мере
37,
меньшей мере 38, по меньшей мере 39, по меньшей мере 40, по меньшей мере 41, по меньшей мере 42, по меньшей мере 43, по меньшей мере 44, по меньшей мере 4 5 или по меньшей мере 4 6 аминокислот.
(10) ТВ-10
[00318] Собственный антиген может включать индуцируемый интерфероном (IFN)-гамма белок 10 (IP-10). IP-10 также известен как малый индуцибельный цитокин В10 или содержащий мотив С-Х-С хемокин 10 (CXCL10). CXCL10 секретируется несколькими типами клеток, такими как моноциты, эндотелиальные клетки и фибробласты, в ответ на IFN-y.
(11) PSMA
[00319] Собственный антиген может включать простатический специфический мембранный антиген (PSMA). PSMA также известен как глутаматкарбоксипептидаза II (GCPII), Ы-ацетил-Ь-аспартил-Ь-глутаматпептидаза I (NAALADase I), пептидаза NAAG или фолатгидролаза (F0LH). PMSA представляет собой интегральный мембранный белок, экспрессируемый в большом количестве клетками рака предстательной железы.
[00320] В некоторых вариантах реализации рекомбинантная
последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело,
направленное против PMSA (анти-PMSA антитело), может
представлять собой рекомбинантную последовательность нуклеиновой
кислоты, включающую конструкцию рекомбинантной
последовательности нуклеиновой кислоты в компоновке 2.
[00321] В других вариантах реализации анти-PMSA антитело,
кодируемое рекомбинантной последовательностью нуклеиновой
кислоты, может быть модифицировано, как описано в данном
документе. Одна такая модификация представляет
дефукозилированное антитело, которое, как продемонстрировано в примерах, проявляет повышенную активность АЗКЦ по сравнению с коммерческими антителами. Модификация может присутствовать в тяжелой цепи, легкой цепи или их комбинации. Модификация может представлять собой одну или более аминокислотных замен в тяжелой цепи, одну или более аминокислотных замен в легкой цепи или их
комбинацию.
[00322] Антитело, специфическое в отношении PSMA и
модифицированное так, чтобы не быть фукозилированным, может
кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты,
приведенной в SEQ ID N0: 79. SEQ ID NO: 7 9 кодирует аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID N0: 80.
[00323] ДНК-вакцина может кодировать антиген PSMA. Примеры ДНК-вакцин, кодирующих антигены PSMA, включают описанные в публикации заявки на патент США № 20130302361, содержание которой включено посредством ссылки.
с. Другие антигены
[00324] В некоторых вариантах реализации антиген представляет собой антиген, отличный от чужеродного антигена и/или собственного антигена.
(a) ВИЧ-1 VRC01
[00325] Другой антиген может представлять собой ВИЧ-1 VRC01. ВИЧ-1 VCR01 представляет собой нейтрализующее антитело с С04-связывающим участком для ВИЧ. ВИЧ-1 VCR01 контактирует с частями ВИЧ-1, включая части в пределах петли D gpl20, CD4-связывающей петли и У5-области ВИЧ-1.
(b) ВИЧ-1 PG9
[00326] Другой антиген может представлять собой ВИЧ-1 PG9. ВИЧ-1 PG9 представляет собой основателя растущего семейства гликан-зависимых человеческих антител, которые преимущественно связывают тримерный оболочечный (Env) гликопротеин (др) ВИЧ (ВИЧ-1) и в широком смысле нейтрализуют вирус.
(c) ВИЧ-1 4Е10
[00327] Другой антиген может представлять собой ВИЧ-1 4Е10. ВИЧ-1 4Е10 представляет собой нейтрализующее анти-ВИЧ антитело. ВИЧ-1 4Е10 направлен против линейных эпитопов, картированных на близкую к мембране внешнюю область (MPER) ВИЧ-1, которая расположена в С-конце эктодомена др41.
(d) ВД-SFl
[00328] Другой антиген может представлять собой ВД-SFl. ВД-SFl представляет собой нейтрализующее антитело, которое связывает оболочечный белок четырех серотипов вируса Денге.
(e) BM-SF2
[00329] Другой антиген может представлять собой Bfl-SF2. ВД-SF2 представляет собой нейтрализующее антитело, которое связывает эпитоп вируса Денге. Bfl-SF2 может быть специфическим в отношении серотипа DENV4.
(f) ВД-БЕЗ
[00330] Другой антиген может представлять собой Bfl-SF3. ВД-SF3 представляет собой нейтрализующее антитело, которое связывает цепь EDIII А оболочечного белка вируса Денге.
7. Вспомогательные вещества и другие компоненты композиции
[00331] Композиция может дополнительно содержать
фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может представлять собой функциональные молекулы, такие как молекулы базовых растворов, носителей или разбавителей. Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может представлять собой облегчающий трансфекцию агент, который может включать поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (ИМКОМ), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЛПС, включая монофосфориллипид А, мурамилпептиды, аналоги хинона, везикулы, такие как сквален и сквален, гиалуроновая кислота, липиды, липосомы, ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные облегчающие трансфекцию агенты.
[00332] Облегчающий трансфекцию агент представляет собой полианион, поликатион, включая поли-Ъ-глутамат (LGS), или липид. Облегчающий трансфекцию агент представляет собой поли-Ъ-глутамат, а поли-Ъ-глутамат может присутствовать в композиции в концентрации менее б мг/мл. Облегчающий трансфекцию агент, который также может включать поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (ИМКОМ), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЛПС, включая монофосфориллипид А, мурамилпептиды, аналоги хинона и везикулы, такие как сквален и сквален, и гиалуроновую кислоту, также можно использовать для введения в сочетании с композицией. Композиция также может содержать облегчающий трансфекцию агент, такой как липиды,
липосомы, включая лецитиновые липосомы или другие липосомы, известные в данной области техники, в виде смеси ДНК-липосом (смотрите, например, W09324640), ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные облегчающие трансфекцию агенты. Облегчающий трансфекцию агент представляет собой полианион, поликатион, включая поли-Ъ-глутамат (LGS), или липид. Концентрация трансфекционного агента в вакцине составляет менее 4 мг/мл, менее 2 мг/мл, менее 1 мг/мл, менее 0,750 мг/мл, менее 0,500 мг/мл, менее 0,250 мг/мл, менее 0,100 мг/мл, менее 0,050 мг/мл или менее 0,010 мг/мл.
[00333] Композиция может дополнительно содержать генетический вспомогательный агент.
[00334] Композиция может содержать ДНК в количестве от около 1 нанограмма до 100 миллиграммов; от около 1 микрограмма до около 10 миллиграммов; или предпочтительно от около 0,1 микрограмма до около 10 миллиграммов; или более предпочтительно от около 1 миллиграмма до около 2 миллиграммов. В некоторых предпочтительных вариантах реализации композиция в соответствии с настоящим изобретением содержит от около 5 нанограмм до около 1000 микрограмм ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах реализации композиция может содержать от около 10 нанограмм до около 8 00 микрограмм ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах реализации композиция может содержать от около 0,1 до около 500 микрограмм ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах реализации композиция может содержать от около 1 до около 350 микрограмм ДНК. В некоторых предпочтительных вариантах реализации композиция может содержать от около 25 до около 250 микрограмм, от около 100 до около 200 микрограмм, от около 1 нанограмма до 100 миллиграмм; от около 1 микрограмма до около 10 миллиграмм; от около 0,1 микрограмма до около 10 миллиграмм; от около 1 миллиграмма до около 2 миллиграмм, от около 5 нанограмм до около 1000 микрограмм, от около 10 нанограмм до около 800 микрограмм, от около 0,1 до около 500 микрограмм, от около 1 до около 350 микрограмм, от около 25 до около 250 микрограмм, от около 100 до около 2 00 микрограмм ДНК.
[00335] Композиция может быть приготовлена в соответствии с
применяемым режимом введения. Инъекционная фармацевтическая композиция может быть стерильной, апирогенной и не содержать частиц. Можно использовать изотонический состав или раствор. Добавки для придания изотоничности могут включать хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Композиция может содержать сосудосуживающий агент. Изотонические растворы могут включать фосфатно-солевой буфер. Композиция может дополнительно содержать стабилизаторы, включая желатин и альбумин. Стабилизаторы могут обеспечивать стабильность состава при комнатной температуре или температуре окружающей среды в течение длительных периодов времени, включая LGS или поликатионы или полианионы.
8. Способ получения синтетического антитела
[00336] Настоящее изобретение также относится к способу генерации синтетического антитела. Этот способ может включать введение нуждающемуся в этом субъекту композиции, применяя способ доставки, более подробно описанный ниже. Соответственно, синтетическое антитело генерируется в организме субъекта или in vivo после введения субъекту композиции.
[00337] Этот способ также может включать внесение композиции в одну или более клеток и, следовательно, синтетическое антитело может генерироваться или вырабатываться в одной или более клетках. Этот способ также может включать внесение композиции в одну или более тканей, например, но без ограничений, кожу и мышцы, и, следовательно, синтетическое антитело может генерироваться или вырабатываться в одной или более тканях.
9. Способ определения или скрининга антитела
[00338] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу определения или скрининга описанного выше антитела, которое вступает в реакцию или связывается с описанным выше антигеном. В способе определения или скрининга антитела можно использовать антиген с применением методик, известных специалистам в данной области техники, для определения или скрининга антитела. Такие методики включают, но не ограничиваются этим, выбор антитела из библиотеки (например, фагового дисплея) и иммунизацию животного с последующим
выделением и/или очисткой антитела. 10. Способ доставки композиции
[00339] Настоящее изобретение также относится к способу доставки композиции нуждающемуся в этом субъекту. Способ доставки может включать введение композиции субъекту. Введение может включать, но не ограничивается этим, инъекцию ДНК с in vivo электропорацией или без нее, опосредованную липосомами доставку и облегчаемую наночастицами доставку.
[00340] Млекопитающее, получающее доставку композиции, может представлять собой человека, примата, отличного от человека примата, корову, крупный рогатый скот, овцу, козу, антилопу, бизона, буйвола, бизона, быков, оленя, ежей, слонов, ламу, альпака, мышей, крыс и кур.
[00341] Композицию можно вводить разными путями, включая
пероральный, парентеральный, сублингвальный, трансдермальный,
ректальный, трансмукозальный, местный, ингаляционный,
буккальный, интраплевральный, внутривенный, внутриартериальный, внутрибрюшинный, подкожный, внутримышечный, интраназальный, интратекальный и внутрисуставной или их комбинацию. В случае ветеринарного применения композицию можно вводить в подходящем приемлемом составе в соответствии с общепринятой ветеринарной практикой. Ветеринар может без труда определить режим дозирования и путь введения, которые наиболее подходит для конкретного животного. Композицию можно вводить с помощью традиционных шприцов, безыгольных устройств для инъекций, "пушек для бомбардировки микрочастицами" или других физических способов, таких как электропорация ("ЭП"), "гидродинамический способ" или ультразвук.
а. Электропорация
[00342] Введение композиции посредством электропорации можно осуществлять, используя устройства для электропорации, которые могут быть выполнены с возможностью подачи в необходимые ткани млекопитающего импульса энергии, эффективного для стимуляции образования обратимых пор в клеточных мембранах, и предпочтительно импульс энергии представляет собой постоянный ток, аналогичный предварительно заданному пользователем входному
току. Устройство для электропорации может содержать электропорационный компонент и комплект электродов или комплект рукояток. Электропорационный компонент может содержать и включать один или более различных элементов устройств для электропорации, включая: контроллер, генератор формы тока, тестер импеданса, устройство регистрации формы сигнала, элемент ввода, элемент отчета о состоянии, порт связи, компонент памяти, источник питания и переключатель питания. Электропорацию можно осуществлять, используя устройство для in vivo электропорации, например, систему CELLECTRA ЕР (Inovio Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA) или электропоратор Elgen (Inovio Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA) , чтобы облегчить трансфекцию клеток плазмидой.
[00343] Электропорационный компонент может функционировать как один элемент устройств для электропорации, а другие элементы являются отдельными элементами (или компонентами), связанными с электропорационным компонентом. Электропорационный компонент может функционировать как более чем один элемент устройств для электропорации, который может быть связан с другими элементами устройств для электропорации, отдельными от электропорационного компонента. Элементы и устройства для электропорации, являющиеся частями одного электромеханического или механического устройства, могут не ограничиваться, так как эти элементы могут функционировать как одно устройство или как отдельные элементы, связанные друг с другом. Электропорационный компонент может подавать импульс энергии, который обеспечивает постоянный ток в необходимой ткани, и содержит механизм обратной связи. Комплект электродов может включать матрицу из электродов, содержащую некоторое количество пространственно упорядоченных электродов, при этом комплект электродов получает импульс энергии от электропорационного компонента и доставляет его в необходимую ткань через электроды. По меньшей мере один из некоторого количества электродов является нейтральным во время подачи импульса энергии и измеряет импеданс в необходимой ткани и передает значение импеданса на электропорационный компонент. Механизм обратной связи может получать измеренное значение
импеданса и может корректировать импульс энергии, подаваемый электропорационным компонентом, для поддержания постоянного тока.
[00344] Некоторое количество электродов могут подавать импульс энергии на децентрализованную схему. Некоторое количество электродов могут подавать импульс энергии на децентрализованную схему посредством управления электродами согласно программируемой последовательности, а программируемая последовательность вводится пользователем в электропорационный компонент. Программируемая последовательность может включать некоторое количество импульсов, подаваемых в последовательности, причем каждый импульс из некоторого количества импульсов подается по меньшей мере двумя активными электродами с одним нейтральным электродом, который измеряет импеданс, а следующий импульс из некоторого количества импульсов подается другим из по меньшей мере двух активных электродов с одним нейтральным электродом, который измеряет импеданс.
[00345] Механизм обратной связи может осуществляться аппаратным или программным обеспечением. Механизм обратной связи может осуществляться аналоговым замкнутым контуром. Обратная связь происходит каждые 50 мкс, 2 0 мкс, 10 мкс или 1 мкс, но предпочтительно представляет собой обратную связь в режиме реального времени или мгновенную (т. е. по существу мгновенную по определению доступными методами определения времени ответа). Нейтральный электрод может измерять значение импеданса в необходимой ткани и передавать значение импеданса на механизм обратной связи, а механизм обратной связи в ответ на значение импеданса корректирует импульс энергии для поддержания значения постоянного тока, аналогичного предварительно заданному току. Механизм обратной связи может поддерживать постоянный ток непрерывно и мгновенно во время подачи импульса энергии.
[0034 6] Примеры устройств для электропорации и способов электропорации, которые могут облегчить доставку композиции согласно настоящему изобретению, включают описанные в патенте США № 7245963 авторства Draghia-Akli, с соавт., публикации патента США 2005/0052630, поданной Smith, с соавт., содержание
которых в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки. Другие устройства для электропорации и способы электропорации, которые можно использовать для облегчения доставки композиции, включают предложенные в одновременно находящейся на рассмотрении заявке одних заявителей на патент США, серийный № 11/874072, поданной 17 октября 2007 г., которая заявляет приоритет согласно 35 USC 119(e) предварительных заявок США № 60/852,149, поданной 17 октября 2006 г., и 60/978,982, поданной 10 октября 2007 г., которые в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки.
[00347] В патенте США № 7245963 авторства Draghia-Akli, с соавт. описаны модульные системы электродов и их применение для облегчения внесения биомолекул в клетки выбранной ткани в организме или растении. Модульные системы электродов могут содержать некоторое количество игольчатых электродов; гиподермическую иглу; электрический соединитель, который обеспечивает проводящее соединение программируемого импульсного контроллера постоянного тока с некоторым количеством игольчатых электродов; и источник питания. Оператор может брать некоторое количество игольчатых электродов, которые находятся на опорной конструкции и плотно вставлять их в выбранную ткань в организме или растении. Затем происходит доставка биомолекул в выбранную ткань через гиподермическую иглу. Происходит активация программируемого импульсного контроллера постоянного тока и применение электрического импульса постоянного тока к некоторому количеству игольчатых электродов. Применяемый электрический импульс постоянного тока облегчает внесение биомолекулы в клетку между некоторым количеством электродов. Полное содержание патента США № 7245963 включено в данный документ посредством ссылки.
[00348] В публикации патента США 2005/0052630, поданной Smith, с соавт., описано устройство для электропорации, которое можно использовать, чтобы эффективным образом облегчать внесение биомолекул в клетки выбранной ткани в организме или растении. Устройство для электропорации содержит электрокинетическое устройство ("ЭКУ устройство") , чья работа определяется
программным или встроенным программным обеспечением. ЭКУ устройство создает ряд программируемых профилей импульсов постоянного тока между электродами в матрице под управлением пользователем и на основании введенных параметров импульсов и позволяет хранить и получать данные по форме тока. Устройство для электропорации также содержит сменный электродный диск, содержащий матрицу из игольчатых электродов, центральный инъекционный канал для инъекционной иглы и съемный направляющий диск. Полное содержание публикации патента США 2005/0052630 включено в данный документ посредством ссылки.
[0034 9] Электродные матрицы и способы, описанные в патенте США № 7245963 и публикации патента США 2005/0052630, можно адаптировать для глубокого проникновения не только в ткани, такие как мышцы, но также в другие ткани или органы. Вследствие конфигурации электродной матрицы инъекционная игла (для доставки биомолекулы по выбору) также полностью вставляется в целевой орган, а инъекция проводится перпендикулярно целевой ткани в области, которая заранее намечена электродами. Электроды, описанные в патенте США № 7245963 и публикации патента США 2005/005263, предпочтительно имеют длину 20 мм и калибр 21.
[00350] Кроме того, подразумевается, что в некоторых вариантах реализации, которые включают устройства для электропорации и их применение, используются устройства для электропорации, описанные в следующих патентах: патент США 5273525, выданный 28 декабря 1993 г., патенты США 6110161, выданный 2 9 августа 2000 г., 62 61281, выданный 17 июля 2 001 г., и 6958060, выданный 25 октября 2005 г., и патент США 6939862, выданный б сентября 2 0 05 г. Кроме того, в данном документе предусмотрено применение материалов из патентов, относящихся к предмету обсуждения, таких как патент США 6697 669, выданный 24 февраля 2004 г., который относится к доставке ДНК с помощью различных устройств, и патент США 7 328064, выданный 5 февраля 2 008, относящийся к способу инъекции ДНК. Вышеуказанные патенты в полном объеме включены посредством ссылки.
11. Способ лечения
[00351] Также в данном документе предложен способ лечения,
защиты от и/или предотвращения заболевания у нуждающегося в этом субъекта путем генерации синтетического антитела в организме субъекта. Способ может включать введение композиции субъекту. Введение композиции субъекту можно осуществлять, используя описанный выше способ доставки.
[00352] После генерации синтетического антитела в организме субъекта синтетическое антитело может связываться или вступать в реакцию с антигеном. Такое связывание может нейтрализовать антиген, блокировать распознавание антигена другой молекулой, например, белком или нуклеиновой кислотой, и вызывать или индуцировать иммунный ответ на антиген, осуществляя, таким образом, лечение, защиту от и/или предотвращение заболевания, связанного с антигеном, у субъекта.
[00353] Способ доставки вакцины или вакцинацию можно
осуществлять, чтобы индуцировать терапевтический и
профилактический иммунный ответ. Процесс вакцинации может вызывать у млекопитающего иммунный ответ против антигена. Вакцину можно доставлять индивиду для того, чтобы модулировать активность иммунной системы млекопитающего и усиливать иммунный ответ. Доставка вакцины может представлять собой трансфекцию консенсусного антигена в виде молекулы нуклеиновой кислоты, которая экспрессируется в клетке и доставляется на поверхность клетки, после чего иммунная система распознает ее и индуцирует клеточный, гуморальный или и клеточный и гуморальный ответ. Доставку вакцины можно использовать, чтобы индуцировать или вызывать у млекопитающих иммунный ответ против антигена путем введения млекопитающим обсуждаемой выше вакцины.
[00354] Доза композиции может составлять от 1 мкг до 10 мг активного компонента/кг массы тела/время и может составлять от 2 0 мкг до 10 мг компонента/кг массы тела/время. Композицию можно вводить каждые 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или 31 сутки. Число доз композиции для эффективного лечения может составлять 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10.
[00355] Композиция может содержать 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, б или более, 7 или
более, 8 или более, 9 или более или 10 или более ДНК-вакцин, кодирующих антиген. Композиция может содержать 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, б или более, 7 или более, 8 или более, 9 или более или 10 или более кодируемых ДНК синтетических антител или их фрагментов.
[00356] ДНК-вакцину и DMAb (синтетическое ДНК-антитело) можно вводить в одно и то же время или в разное время. В одном варианте реализации ДНК-вакцину и DMAb вводят одновременно. В одном варианте реализации ДНК-вакцину вводят до DMAb. В одном варианте реализации DMAb вводят до ДНК-вакцины.
[00357] В определенных вариантах реализации ДНК-вакцину вводят через 1 или более суток, 2 или более суток, 3 или более суток, 4 или более суток, 5 или более суток, б или более суток, 7 или более суток, 8 или более суток, 9 или более суток, 10 или более суток, 11 или более суток, 12 или более суток, 13 или более суток или 14 или более суток после введения DMAb. В определенных вариантах реализации ДНК-вакцину вводят через 1 или более недель, 2 или более недель, 3 или более недель, 4 или более недель, 5 или более недель, б или более недель, 7 или более недель, 8 или более недель, 9 или более недель или 10 или более недель после введения DMAb. В определенных вариантах реализации ДНК-вакцину вводят через 1 или более месяцев, 2 или более месяцев, 3 или более месяцев, 4 или более месяцев, 5 или более месяцев, б или более месяцев, 7 или более месяцев, 8 или более месяцев, 9 или более месяцев, 10 или более месяцев, 11 или более месяцев или 12 или более месяцев после введения DMAb.
[00358] В определенных вариантах реализации DMAb вводят через 1 или более суток, 2 или более суток, 3 или более суток, 4 или более суток, 5 или более суток, б или более суток, 7 или более суток, 8 или более суток, 9 или более суток, 10 или более суток, 11 или более суток, 12 или более суток, 13 или более суток или 14 или более суток после введения ДНК-вакцины. В определенных вариантах реализации DMAb вводят через 1 или более недель, 2 или более недель, 3 или более недель, 4 или более недель, 5 или более недель, б или более недель, 7 или более недель, 8 или более недель, 9 или более недель или 10 или более
[00359] В определенных вариантах реализации DMAb и ДНК-вакцину вводят один раз. В определенных вариантах реализации DMAb и/или ДНК-вакцину вводят более одного раза. В определенных вариантах реализации введение DMAb и ДНК-вакцины обеспечивает стойкий и системный иммунный ответ.
12. Применение в комбинации с антибиотиками
[00360] В настоящем изобретении также предложен способ лечения, защиты от и/или предотвращения заболевания у нуждающегося в этом субъекта путем введения комбинации синтетического антитела и терапевтического антибиотика.
[00361] Синтетическое антитело и антибиотик можно вводить, используя любой подходящий способ, так, чтобы обе составляющие комбинации синтетического антитела и антибиотика присутствовали в организме субъекта. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, и введение второй композиции, содержащей антибиотик, менее чем через 1, менее чем через 2, менее чем через 3, менее чем через 4, менее чем через 5, менее чем через б, менее чем через 7, менее чем через 8, менее чем через 9 или менее чем через 10 суток после введения синтетического антитела. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, и введение второй композиции, содержащей антибиотик, более чем через 1, более чем через 2, более чем через 3, более чем через 4, более чем через 5, более чем через б, более чем через 7, более чем через 8, более чем через 9 или более чем через 10 суток после введения синтетического антитела. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции,
содержащей антибиотик, и введение второй композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, менее чем через 1, менее чем через 2, менее чем через 3, менее чем через 4, менее чем через 5, менее чем через б, менее чем через 7, менее чем через 8, менее чем через 9 или менее чем через 10 суток после введения антибиотика. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции, содержащей антибиотик, и введение второй композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, более чем через 1, более чем через 2, более чем через 3, более чем через 4, более чем через 5, более чем через б, более чем через 7, более чем через 8, более чем через 9 или более чем через 10 суток после введения антибиотика. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, и введение второй композиции, содержащей антибиотик, одновременно. В одном варианте реализации способ может включать введение первой композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению, любым из способов, подробно описанных выше, и введение второй композиции, содержащей антибиотик, одновременно. В одном варианте реализации способ может включать введение одной композиции, содержащей синтетическое антитело согласно изобретению и антибиотик.
[00362] Неограничивающие примеры антибиотиков, которые можно использовать в комбинации с синтетическим антителом согласно изобретению, включают аминогликозиды (например, гентамицин, амикацин, тобрамицин), хинолоны (например, ципрофлоксацин, левофлоксацин), цефалоспорины (например, цефтазидим, цефепим, цефоперазон, цефпиром, цефтобипрол), антипсевдомонадные пенициллины: карбоксипенициллины (например, карбенициллин и тикарциллин) уреидопенициллины (например, мезлоциллин, азлоциллин и пиперациллин), карбапенемы (например, меропенем, имипенем, дорипенем), полимиксины (например, полимиксин В и колистин) и монобактамы (например, азтреонам).
[00363] Настоящее изобретение имеет множество аспектов,
проиллюстрированных следующими неограничивающими примерами. 13. Примеры
[00364] Настоящее изобретение дополнительно
проиллюстрировано в следующих примерах. Следует понимать, что эти примеры, хотя в них и указаны предпочтительные варианты реализации изобретения, приведены исключительно в иллюстративных целях. Из приведенного выше обсуждения и этих примеров специалист в данной области техники может установить важные характеристики этого изобретения и, не выходя за рамки его сущности и объема, может осуществлять различные изменения и модификации изобретения, чтобы адаптировать его под различные потребности и условия. Таким образом, различные модификации изобретения в дополнение к показанным и описанным в данном документе станут очевидны для специалистов в данной области техники из вышеприведенного описания. Также подразумевается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Example 1
Профилактика в виде быстрого и долгосрочного иммунитета, вызываемого кодируемым ДНК антителом, и ДНК-вакцинация против вируса чикунгунья
[00365] Известно, что вакцинация демонстрирует лаг-фазу перед генерацией иммунитета; следовательно, во время инфекции проходит некоторый отрезок времени перед проявлением иммунного ответа. Далее предложены специальные новые подходы, в которых используется преимущество вакцин и нативного иммунного ответа наряду с быстрой генерацией эффективного иммунитета с помощью синтетических ДНК-антител или dMab.
[00366] Разрабатывали вариант профилактики/терапии на основе антител, включающей опосредованную электропорацией доставку синтетических плазмид, кодирующих биологически активное mAb (обозначаемое dMAb) против оболочки вируса чикунгунья, и оценивали в отношении противовирусной эффективности, а также в отношении способности преодолевать недостатки, связанные с традиционной активной вакцинацией, посредством новой пассивной иммунной стратегии. Одна внутримышечная инъекция CHIKV-dMAb
приводила к in vivo выработке антител быстрее, чем активная вакцинация CHIKV-ДНК-вакциной. Это dMAb нейтрализовало разные клинические изоляты CHIKV и защищало мышей от стимуляции вирусом. Комбинации обоих методов позволяли получить быструю, а также долгосрочную защиту.
[00367] Представленные в данном документе результаты демонстрируют, что стратегия с применением dMAb на основе ДНК индуцирует быструю защиту против острой вирусной инфекции, которую можно скомбинировать с ДНК-вакцинацией, обеспечивая уникальную, как краткосрочную, так и долгосрочную защиту против этого острого инфекционного заболевания. Эти исследования имеют значение для лечения от патогенов и стратегий контроля.
МЕТОДЫ
Конструирование и экспрессия CHIKV-специфических dMAB [00368] Информацию по генной последовательности для стандартного aнти-Env-cпeцифичecкoгo CHIKV нейтрализующего человеческого mAb получали из базы данных Национального центра биотехнологической информации (Warter с соавт., 2011, J Immunol 186:3258-64). Клетки почек эмбриона человека 293Т и клетки Vero, применяемые для исследований, подтверждающих экспрессию, поддерживали так, как было описано ранее (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928). Сегменты вариабельной тяжелой (VH) и вариабельной легкой (VL) цепи для препарата CHIKV Env dMAb получали, используя синтетические олигонуклеотиды с несколькими модификациями и конструировали в виде полноразмерного иммуноглобулина G (IgG; обозначаемого "CVM1-IgG") или фрагмента Fab (обозначаемого "CVM1-Fab") (Muthumani с соавт., 2013, Hum Vaccin Immunother 9:2253-62). Для клонирования CVMl-IgG создавали одну открытую рамку считывания, содержащую гены тяжелой и легкой цепи, разделенные участком расщепления фурином, сопряженным с самопроцессирующейся пептидной последовательностью Р2А. Этот трансген клонировали в экспрессионный вектор pVaxl (Muthumani с соавт., 2013, Hum Vaccin Immunother 9:2253-62). VH и VL цепи CVMl-Fab клонировали в отдельные векторы pVaxl. Для трансфекции тканевой культуры использовали 100 мкг ДНК pVaxl, CVMl-IgG или CVMl-Fab (по 100
мкг каждой конструкции VH и VL) . Вакцину на основе ДНК CHIKV
Env, применяемую в исследовании, разрабатывали и
характеризовали, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2008, Vaccine 26:5128-34; Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928).
Количественная оценка и анализ связывания CHIKV-dMAb IgG [00369] Анализ ИФА проводили для сыворотки, собранной и измеренной в двух повторностях, от мышей, которым вводили CMV1-IgG или pVaxl, для оценки кинетики экспрессии и связывания с антигеном-мишенью. Эти измерения и анализ проводили, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2015, Sci transl Med 7:301ral32).
Вестерн-блоттинг и анализ иммунофлуоресценции для IgG, полученного с помощью dMAb
[00370] Для анализа экспрессии IgG методом вестерн-блоттинга инфицированные CHIKV (вирусный изолят РС0 8) клетки лизировали в течение двух дней после инфицирования и оценивали ранее опубликованными способами (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928; Muthumani с соавт., 2015, Sci transl Med 7:301ral32). Для анализа иммунофлуоресценции слайд-камеры (Nalgene Nunc, Penfield, New York) засевали клетками Vero (1 x 104) и инфицировали в течение 2 часов вирусным изолятом CHIKV РС08 при множественности заражения 1. Анализ иммунофлуоресценции проводили, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2 015, Sci transl Med 7:301га132), а слайды оценивали визуально с помощью конфокального микроскопа (LSM710; Carl Zeiss). Проводили полуколичественную оценку полученных в результате изображений, используя программное обеспечение Zen (Carl Zeiss).
Введение ДНК-плазмиды dMAb и in vivo анализ
[00371] Оценивали кинетику экспрессии и функциональность CVMl-Fab и CVMl-IgG у мышей Вб.Cg-Foxnlnu/J (Jackson Laboratory) после внутримышечной инъекции 100 мкг контрольного pVaxl, CVMl-IgG или 100 мкг каждой плазмидной цепи CVMl-Fab. В случае исследований, которые включали применение ДНК-вакцины, 3 раза с 2-недельными интервалами проводили инъекцию 2 5 мкг плазмиды
CHIKV Env. За всеми инъекциями незамедлительно следовала доставка ДНК-плазмиды CHIKV dMAb путем электропорации (Flingai с соавт., 2015, Sci Rep 5:12616; Muthumani с соавт., 2015, Sci transl Med 7:301ral32; Broderick с соавт., 2014, Methods Mol iol 1143:123-30).
Исследование стимуляции CHIKV
[00372] Мыши BALB/c получали одну (100 мкг) усиленную электропорацией внутримышечную инъекцию плазмид CVMl-IgG, CMV-Fab (VH и VL) или контрольного pVaxl. ДНК-вакцину CHIKV Env доставляли, как описано выше. Через двое или 35 суток после доставки ДНК мышей стимулировали 107 бляшкообразующими единицами
(25 мкл) вирусного изолята CHIKV Del-03 (JN578247) (Muruganandam с соавт., 2011, Can J Microbiol 57:1073-7) подкожно (в тыльную сторону каждой задней лапы) или интраназально (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928) . Отек лап у мышей
(высота на ширину) измеряли ежесуточно в течение до 14 суток после инфицирования. Кроме того, животных ежесуточно осматривали
(в течение до 2 0 суток после инфицирования) в отношении выживаемости и признаков инфекции (т. е. изменений в массе тела и летаргии). Животных, потерявших > 3 0% массы тела умерщвляли и брали образцы сыворотки для количественной оценки цитокинов и других видов иммунного анализа. Образцы крови брали из хвоста на 7-14 сутки после инфицирования и измеряли уровни вирусемии с помощью анализа бляшкообразования. Анализ нейтрализующих антител
[00373] Титры анти-CHIKV нейтрализующих антител у мышей, которым вводили CVMl-IgG, определяли ранее описанными способами (Wang с соавт., 2008, Vaccine 26:5030-9; Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928), используя клетки Vero, инфицированные следующими изолятами CHIKV: LR2 0 0 6-OPY1 (Indian Ocean Outbreak), IND-63WB1 и SL-CH1 (клада Asian), Ross (клада ECSA), и PC0 8 и DRDE-0 6 (клада ECSA). Нейтрализующие титры рассчитывали как величину, обратную наибольшему разведению, которое опосредует 100% снижение цитопатического действия в монослое клеток Vero. Получали данные и проводили статистический анализ, используя пакет программного обеспечения GraphPad Prism
5 (программное обеспечение GraphPad). Использовали нелинейную регрессионную аппроксимацию с сигмоидальной функцией доза-ответ для определения уровня антитела, опосредующего 50% ингибирование инфекции (IC50). Анализ выработки псевдотипа CHIKV Env и сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS) проводили, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2 013, PLoS One 8:е84234).
Количественный анализ цитокинов
[00374] Собирали сыворотку от мышей, которым инъецировали CVMl-Fab, CVMl-IgG и CHIKV-Env, а также мышей, которых стимулировали CHIKV (одна неделя после стимуляции). Сывороточные уровни цитокинов TNF-a, IЪ- 1 (3 и IL-б измеряли, используя набор для ИФА в соответствии с инструкциями производителя (R &D Systems).
Статистический анализ
[00375] Применяли t-критерий Стьюдента или
непараметрический критерий корреляции Спирмена, используя программное обеспечение GraphPad Prism (Prism Inc.). Корреляцию между переменными в контрольной и экспериментальной группах статистически оценивали, используя критерий ранговой корреляции Спирмена, при этом р-значения < 0,05 для всех испытаний считали статистически значимыми.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Конструкция анти-CHIKV dMAb и подтверждение экспрессии
[00376] В случае CHIKV попадание вируса в клетки-хозяев
опосредуется Env, против которого создается большинство
нейтрализующих антител (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS
Negl Trop Dis 5:e928; Sun с соавт., 2013, eLife 2:e00435). Таким
образом, конструировали ДНК-плазмиду (dMAb), экспрессирующую
легкую и тяжелую цепи иммуноглобулина нейтрализующего анти-CHIKV
mAb, распознающего белки Е1 и Е2 Env (Warter с соавт., 2011, J
Immunol 186:3258-64; Pal с соавт., 2013, PLoS Pathog
9:е1003312). Комплементарные ДНК для кодирующих
последовательностей VL и VH цепей иммуноглобулина для полноразмерного анти-CHIKV dMAb оптимизировали для повышения
экспрессии и клонировали в вектор pVaxl, используя ранее
описанные способы (Flingai с соавт., 2015, Sci Rep 5:12616;
Muthumani с соавт., 2013, Hum Vaccin Immunother 9:2253-62). В
случае конструкций, экспрессирующих анти-CHIKV-Fab, гены VH и VL
клонировали отдельно. Оптимизированные синтетические плазмиды,
сконструированные из aHTH-Env-cne4H(J)H4ecKoro CHIKV-
нейтрализующего mAb, были названы CVMl-IgG или CVMl-Fab, для антител на основе IgG и Fab соответственно. Человеческие клетки 293Т трансфицировали плазмидой CVMl-IgG или плазмидами CVMl-Fab (для VL, VH или объединенной плазмидой) для подтверждения экспрессии in vitro. Как указано на фигуре 1А и 1В, уровни анти-CHIKV антитела измеряли методом ИФА, используя рекомбинантный CHIKV Env в качестве связывающего антигена. Эти данные указывают на то, что CVMl-Fab и CVMl-IgG экспрессировали в мышечной ткани антитела, которые были надлежащим образом собраны и характеризовались биологической функциональностью in vitro.
In vivo экспрессия и количественная оценка CVMl-IgG и CVMl-Fab
[00377] После подтверждения in vitro экспрессии определяли способность CVMl-Fab или CVMl-IgG вырабатывать анти-CHIKV антитела in vivo. Мышам Вб.Cg-Foxnlnu/J возрастом 5-6 недель вводили 100 мкг CVMl-IgG (CVMl-IgG является 1 плазмидой), по 100 мкг каждой из CVM1 VH и VL (CVMl-Fab состоит из двух плазмид) или контрольный вектор путем одной внутримышечной опосредованной электропорацией инъекции. В указанные моменты времени собирали сыворотку и измеряли связывание антигена-мишени посредством количественной оценки IgG, используя ИФА. Хотя mAb, генерируемые из CVMl-Fab, появлялись быстрее (т. е. в течение 3 суток после инъекции), чем в случае CVMl-IgG, обе конструкции генерировали аналогичные уровни mAb на 15 сутки (средние сывороточные уровни [± СО], 1587, 23 ± 73, 23 нг/мл для CVMl-Fab и 1341, 29 ± 82,07 нг/мл для CVMl-IgG; фигура 1С). Мышам вводили CVMl-IgG или CVMl-Fab и оценивали сывороточные уровни антител с помощью анализа связывания ИФА. Сыворотка, собранная через 15 суток после инъекции CVMl-IgG и CVMl-Fab, демонстрировала связывание с
белком CHIKV Env, но не с неродственным контрольным антигеном,
Env вируса иммунодефицита человека 1 (фигура 1D) . Эти данные
указывают, что in vivo вырабатываемые анти-CHIKV антитела из
конструкций CVMl-IgG или CVMl-Fab имеют биологические
характеристики, аналогичные традиционно вырабатываемым
антигенспецифическим антителам.
In vivo специфичность и нейтрализующая активность широкого спектра в сыворотке от инъецированных CVMl-IgG
мышей
[00378] mAb, генерируемые анти-CHIKV dMAb, исследовали в отношении специфичности связывания и анти-CHIKV нейтрализующей активности. Сыворотку от мышей, которых инъецировали CVMl-IgG, испытывали против фиксированных CHIKV РС08-инфицированных клеток Vero с помощью анализа иммунофлуоресценции. Результаты указывают на связывание сывороточных антител с CHIKV-инфицированными клетками (фигура 2А). Подтверждение связывания сыворотки от инъецированных CVMl-IgG мышей с белками-мишенями исследовали с помощью анализа вестерн-блоттинга. Обнаружение экспрессии белка CHIKV Е2 (50 кДа) в общем клеточном лизате из CHIKV-инфицированных клеток указывает на специфичность экспрессии CVMl-IgG (фигура 2В). Специфичность вырабатываемого in vivo антитела CVMl-IgG была дополнительно продемонстрирована с помощью анализа FACS против клеток, инфицированных кодируемым зеленым флуоресцентным белком CHIKV (фигура 2С) . Кроме того, связывание CVMl-Fab, демонстрируемое иммуногистохимическим анализом и анализом FACS, было аналогичным со связыванием генерируемого полноразмерного CVMl-IgG (данные не показаны). Вместе эти данные указывают на сильную специфичность антитела, генерируемого из плазмиды CVMl-IgG.
[00379] Кроме того, анти-CHIKV нейтрализующую активность в сыворотке от мышей, которые получали CVMl-IgG, измеряли против б разных штаммов CHIKV: LR2006-OPY1 (Indian Ocean Outbreak), IND-63WB1 (клада Asian), Ross (клада ECSA), PC08 (клада ECSA), SL-CH1 (клада Asian) и DRDE-06 (клада ECSA) (Sziegler с соавт., 2007, Am J Trop Med Hyg 79:133-6) . Для каждого вирусного изолята определяли значения IC50. Сыворотка от мышей, инъецированных
CVMl-IgG, эффективно нейтрализовала все б изолятов CHIKV, демонстрируя, что одна инъекция может приводить к выработке существенных нейтрализующих уровней человеческого анти-CHIKV IgG у мышей (фигура 2D). Аналогичные результаты наблюдали для сыворотки от мышей, инъецированных CVMl-Fab (данные не показаны). Эти данные указывают на то, что антитела, вырабатываемые in vivo конструкциями CVMl-IgG, имеют релевантную биологическую активность (т. е. связывающую и нейтрализующую активность против CHIKV).
Инъекция CVMl-IgG защищает мышей от летальной стимуляции
CHIKV
[00380] Предыдущие исследования продемонстрировали, что ранний иммунитет против вирусов является ключевым фактором в контролировании инфекций (Barouch с соавт., 2014, Nat Rev Microbiol 12:765-71; Hudson с соавт., 2003, Nat Med 9:129-34; Smith с соавт., 2015, Chikungunya Virus 18:86-95) . Чтобы определить, обеспечивают ли антитела, генерируемые из CVMl-IgG или CVMl-Fab, защиту против раннего воздействия CHIKV, группам из 10 мышей один раз вводили pVaxl, CVMl-IgG или CVMl-Fab на сутки 0. После этого каждую группу подкожно стимулировали вирусом на 2 сутки для имитации природного инфицирования CHIKV
(фигура ЗА) . После этого в течение 2 0 суток записывали данные по выживаемости и изменениям массы животных. Все мыши, которых инъецировали контрольной плазмидой pVaxl, погибли в течение недели после вирусной стимуляции. В противоположность этому, для мышей, которым вводили CVMl-IgG или CVMl-Fab наблюдали 100% выживаемость по сравнению с 0% выживаемостью среди мышей, которые получали плазмиду pVaxl (^0,0033), что демонстрирует, что плазмиды CVMl-IgG и CVMl-Fab обеспечивали защитный иммунитет в течение 2 суток после доставки.
[00381] После этого оценивали длительность иммунной защиты. Вторую группу мышей (п=10) стимулировали CHIKV через 30 суток после одной инъекции CVMl-IgG, CVMl-Fab или pVaxl на сутки 0
(фигура ЗВ) . Осмотр мышей в отношении выживаемости проводили в течение следующих 2 0 суток. Мыши, которых инъецировали CVMl-Fab или CVMl-IgG, демонстрировали 70% и 90% выживаемость
соответственно по сравнению с отсутствием выживаемости среди pVaxl-инъецированных мышей (Р=0,0120), что указывает на то, что CVMl-IgG обеспечивает более длительную иммунную защиту (фигура ЗВ) .
[00382] Чтобы оценить способность плазмиды CVMl-IgG защищать от инфекции на поверхности слизистой оболочки, оценивали защитную эффективность CVMl-IgG при подкожной и интраназальной вирусной стимуляции, для которой ранее было продемонстрировано, что она вызывает видимый патогенез CHIKV, такой как слабость в мышцах конечностей, отек лап, летаргия и высокая смертность в течение 6-10 суток (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928; Couderc с соавт., 2008, PLoS Pathog 4:e29). Для упрощения исследования были сфокусированы на конструкции CVMl-IgG. Группам из 2 0 мышей один раз вводили pVaxl или CVMl-IgG, при этом половину (т. е. 10) стимулировали CHIKV подкожным или интраназальным путем через 2 суток после инъекции. CVMl-IgG защищала мышей как от подкожной вирусной стимуляции (^0,0024; фигура ЗС), так и от интраназальной вирусной стимуляции (^0,0073; фигура 3D), по сравнению с pVaxl-инъецированными мышами, демонстрируя, что она может обеспечивать защиту от системной и мукозальной инфекции.
[00383] Далее проводили исследование эффективности, сравнивая защитную эффективность введения CVMl-IgG и CHIKV Env-экспрессирующей ДНК-вакцины (CHIKV Env). Новая консенсусная ДНК-вакцина была разработана в нашей лаборатории и была способна обеспечивать защиту против стимуляции CHIKV у мышей. ДНК-вакцина также индуцировала измеримые клеточные иммунные ответы, а также ответы в виде эффективных нейтрализующих антител у макаков резус
[11, 12] . Группам мышей вводили одну инъекцию CVMl-IgG, CHIKV Env или pVaxl с последующей вирусной стимуляцией через 2 суток после инъекции. Мыши, которые получали одну иммунизацию CHIKV Env или pVaxl, погибали в течение б суток после вирусной стимуляции, тогда как одна иммунизация CVMl-IgG обеспечивала 100% защиту (фигура 4А) . CVMl-IgG несомненно обеспечивал защитный иммунитет быстрее, чем ДНК-вакцина CHIKV Env
(Р=0,0026).
Сравнение между in vivo защитным иммунитетом, обеспечиваемым введением CHIKV-IgG и ДНК-вакцинацией CHIKV-Env
[00384] Далее проводили исследования долгосрочной защиты при стимуляции CHIKV на 35 сутки после вакцинации ДНК-вакциной CHIKV Env или введения CVMl-IgG на сутки 0. Мультибустерная доставка ДНК-вакцины CHIKV Env обеспечивала 100% защиту (фигура 4В) , тогда как среди мышей, которым вводили CVMl-IgG, наблюдали 80% выживаемость (^0,0007). Кинетика индуцированных ответов антител измерялась в течение 2 суток после одной инъекции CVMl-IgG с достижением пиковых уровней на 15 сутки (приблизительно 1400 нг/мл) и выявляемыми уровнями mAb, которые держались в течение по меньшей мере 4 5 суток после инъекции (фигура 6А) . Несмотря на продолжение экспрессии эти уровни снижались по сравнению с пиковыми уровнями, что подтверждает частичную защиту, наблюдаемую в эксперименте (фигура 4В).
Совместная доставка CVMl-IgG и ДНК-вакцины CHIKV-Env позволяет получить системный гуморальный иммунитет, клеточноопосредованный иммунитет и защиту in vivo
[00385] Одна из потенциальных проблем комбинирования подходов доставки антител и вакцинации состоит в том, что антитела могут нейтрализовать многие традиционные вакцины (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928; Flingai с соавт., 2015, Sci Rep 5:12616; Muthumani с соавт., 2015, Sci transl Med 7:301ral32; Laddy с соавт., 2008, PLoS One 3:e2517), и, следовательно, являются несовместимыми платформами. Также оценивали действие совместного введения CVMl-IgG и CHIKV Env на выживаемость мышей в контексте стимуляции CHIKV. В этом эксперименте 2 0 мышам на 0 сутки вводили одну дозу CVMl-IgG и 3 дозы ДНК CHIKV Env, как описано выше. После этого половину животных стимулировали на 2 сутки, а другую половину - на 35 сутки. Изучали выживаемость в этих группах как функцию от времени. Что не оказалось неожиданным, обе стимулированные группы имели 100% долгосрочную выживаемость (фигура 4С). В частности, результаты эксперимента по стимуляции CHIKV на 2 сутки указывают на пригодность реагента CVMl-IgG в опосредовании защиты от инфекции, при этом процент выживаемости снижался
приблизительно до 3 0% за 4 суток после стимуляции у контрольных (pVaxl) животных. На фигуре 4D приведены уровни анти-CHIKV IgG по времени, генерируемого у мышей, которые получали CVMl-IgG и ДНК-вакцину CHIKV Env; анти-CHIKV человеческий IgG представляет антитело, вырабатываемое плазмидой CVMl-IgG, а анти-CHIKV мышиный IgG представляет антитело, индуцированное вакциной CHIKV Env. Регистрировали как человеческий IgG, так и мышиный IgG, которые демонстрировали разную кинетику экспрессии. Через 3 суток после исходной вакцинации ДНК CHIKV Env уровни мышиного анти-Env антитела были практически равны 0 (мышиный анти-CHIKV IgG) . В противоположность этому, через 3 суток после одной инъекции CVMl-IgG уровни человеческого анти-Env антитела были существенными (человеческий анти-CHIKV IgG). Эти данные подчеркивают важность CVMl-IgG в опосредовании быстрой защиты от инфекции и гибели после стимуляции CHIKV.
[00386] Кроме того, оценивали Т-клеточные ответы, индуцированные у животных, которых инъецировали CVMl-IgG, CHIKV Env или CVMl-IgG плюс CHIKV Env, методом количественного иммуноферментного спот-анализа, который позволяет измерять уровни IFN-y (фигура 6В) . CHIKV Env вызывал сильные Т-клеточные ответы вне зависимости от совместной доставки с CVMl-IgG, что указывает на отсутствие взаимных помех при применении этих подходов. В противоположность этому, у животных, которым вводили только CVMl-IgG, не развивались Т-клеточные ответы, как можно было ожидать. Эти данные демонстрируют, что CVMl-IgG и ДНК-вакцину CHIKV Env можно вводить одновременно без взаимных помех, обеспечивая немедленную и долгосрочную защиту посредством системного гуморального и клеточного иммунитета.
Введение CVMl-IgG снижает вирусную нагрузку CHIKV и уровни провоспалительных цитокинов
[00387] В предыдущих исследованиях выявили молекулярную корреляцию тяжести CHIKV-ассоциированного заболевания, включая вирусную нагрузку и уровни провоспалительных цитокинов (Ng с соавт., 2009, PLoS One 4:е42б1; Chaaitanya с соавт., 2011, Viral Immunol 24:265-71) . Следовательно, оценивали способность CVM1
IgG супрессировать связанные с заболеванием маркеры в ранние и поздние моменты времени после вирусной стимуляции. У мышей, иммунизированных CVM1 IgG, CVM1 Fab, CHIKV Env или CVM1 IgG плюс ДНК-вакцина CHIKV Env, вырабатывались mAb и существенно снижалась вирусная нагрузка (фигура 5А). Кроме снижения вирусной нагрузки у этих мышей не проявлялся отек лап по сравнению с иммунизированными контролем (pVaxl) мышами, и они стабильно набирали массу тела в течение 2 0-суточного экспериментального периода (фигура 5В и 5С). Также генерируемое CVMl-IgG mAb и ДНК-вакцина CHIKV Env демонстрировали существенное снижение уровней CHIKV-опосредованных провоспалительных цитокинов (т. е., TNF-a,
IL-6 и IL~P) по сравнению с pVaxl через 10 суток после вирусной стимуляции (фигура 7) . Эти данные позволяют предположить, что одна инъекция CVMl-IgG подавляет связанную с CHIKV патологию в степени, сравнимой с индуцируемой защитной вакцинацией (Mallilankaraman с соавт., 2011, PLoS Negl Trop Dis 5:e928) .
Опосредованная электропорацией доставка оптимизированных ДНК-плазмид для быстрой in vivo выработки биологически функциональных mAb.
[00388] Результаты демонстрируют, что мыши, которых инъецировали одной дозой CVM1 IgG, были полностью защищены от вирусной стимуляции через 2 суток после введения, тогда как ни одна из мышей не пережила инфицирование после однократной иммунизации ДНК-вакциной CHIKV Env, что предполагаемо связано с недостаточным временем для развития защитного иммунитета. Однако после применения схемы иммунизации с последующей стимуляцией в более поздние моменты времени наблюдали полную защиту для CHIKV Env. Аналогичный уровень защиты наблюдали у мышей, которым вводили одну дозу CVMl-IgG, хотя со временем защита снижалась до 80%. Следует отметить, что совместная доставка CVMl-IgG и CHIKV Env приводила к развитию быстрого и стойкого гуморального и клеточного иммунитета, демонстрируя, что комбинированный подход обеспечивает синергетическое, благоприятное действие. Что важно, при совместной доставке CVMl-IgG и CHIKV Env не были антагонистическими в контексте развития кратко- и долгосрочных
защитных иммунных ответов.
Пример 2 - Профилактика в виде быстрого и долгосрочного иммунитета, вызываемого кодируемым ДНК антителом, и ДНК-вакцинация против вируса Зика
[00389] Известно, что вакцинация демонстрирует лаг-фазу перед генерацией иммунитета; следовательно, во время инфекции проходит некоторый отрезок времени перед проявлением иммунного ответа. Далее предложены специальные новые подходы, в которых используется преимущество вакцин и нативного иммунного ответа наряду с быстрой генерацией эффективного иммунитета с помощью синтетических ДНК-антител или dMab.
[00390] Разрабатывали вариант профилактики/терапии на основе антител, включающей опосредованную электропорацией доставку синтетических плазмид, кодирующих биологически активное mAb (обозначаемое dMAb) против оболочки вируса Зика, и оценивали в отношении противовирусной эффективности, а также в отношении способности преодолевать недостатки, связанные с традиционной активной вакцинацией, посредством новой пассивной иммунной стратегии. Одна внутримышечная инъекция ZIKV-dMAb приводила к in vivo выработке антител быстрее, чем активная вакцинация ZIKV-ДНК-вакциной. Это dMAb нейтрализовало разные клинические изоляты ZIKV и защищало мышей от стимуляции вирусом. Комбинации обоих методов позволяли получить быструю, а также долгосрочную защиту.
[00391] Стратегия с применением dMAb на основе ДНК индуцирует быструю защиту против острой вирусной инфекции, что можно скомбинировать с ДНК-вакцинацией, обеспечивая уникальную, как краткосрочную, так и долгосрочную защиту против этого острого инфекционного заболевания. Эти исследования имеют значение для лечения от патогенов и стратегий контроля.
Количественная оценка и анализ связывания dMAb IgG
[00392] Анализ ИФА проводили для сыворотки от субъектов, которым вводили ZIKV-dMAb, для количественной оценки кинетики экспрессии и связывания с антигеном-мишенью. Анализ IgG, полученного с помощью dMAb
[00393] Экспрессию IgG для инфицированных ZIKV клеток анализируют методом вестерн-блоттинга. В случае анализа
иммунофлуоресценции инфицированные ZIKV клетки оценивают визуально с помощью конфокального микроскопа и проводят количественный или полуколичественный анализ.
Введение ДНК-плазмиды dMAb и in vivo анализ
[00394] Кинетику экспрессии и функциональность оценивали у субъектов после инъекции контроля или ZIKV-dMAb. В случае исследований, которые включают применение ДНК-вакцины, проводят введение плазмиды ZIKV-ДНК-вакцины.
Исследование стимуляции
[00395] Субъекты получают усиленную электропорацией инъекцию ZIKV-dMAb или контрольных плазмид. ZIKV-ДНК-вакцину доставляли, как описано выше. После доставки ДНК субъектов стимулируют ZIKV. Животных осматривают в отношении выживаемости и признаков инфекции. Собирают образцы сыворотки для количественной оценки цитокинов и других видов иммунного анализа. После инфицирования берут образцы крови и измеряют уровни вирусемии.
Анализ нейтрализующих антител
[00396] Определяют титры анти-ZIKV нейтрализующих антител от субъектов, которым вводили ZIKV-dMAb. Нейтрализующие титры можно рассчитать как величину, обратную наибольшему разведению, которое опосредует 100% снижение цитопатического действия в клетках.
Количественный анализ цитокинов
[00397] Собирают сыворотку от субъектов, которых инъецировали ZIKV-dMAb и ZIKV-ДНК-вакциной, а также от субъектов, которых стимулировали ZIKV. Проводят измерение сывороточных уровней цитокинов TNF-a, IL-ip и IL-6.
Конструкция анти-ZIKV dMAb и подтверждение экспрессии
[00398] Оптимизированные синтетические плазмиды,
сконструированные из анти-г1КУ-нейтрализующего mAb, были разработаны для антител на основе IgG и Fab. Клетки трансфицируют плазмидой ZIKV-IgG или плазмидами ZIKV-Fab (для VL, VH или объединенной плазмидой) для подтверждения экспрессии in vitro. ZIKV-Fab и ZIKV-IgG экспрессировали в мышечной ткани
антитела, которые были надлежащим образом собраны и характеризовались биологической функциональностью in vitro.
In vivo экспрессия и количественная оценка анти-ZIKV dMAb
[00399] После подтверждения in vitro экспрессии определяют
способность ZIKV-Fab или ZIKV-IgG вырабатывать анти-ZIKV
антитела in vivo. Обе конструкции генерируют mAb. Субъектам
вводят ZIKV-IgG или ZIKV-Fab и оценивают сывороточные уровни
антител с помощью анализа связывания ИФА. Сыворотка, собранная
после инъекции ZIKV-IgG и ZIKV-Fab, демонстрирует связывание с
белком ZIKV, но не с неродственным контрольным антигеном. Эти
данные указывают, что in vivo вырабатываемые анти-ZIKV антитела
из конструкций ZIKV-IgG или ZIKV-Fab имеют биологические
характеристики, аналогичные традиционно вырабатываемым
антигенспецифическим антителам.
In vivo специфичность и нейтрализующая активность широкого спектра в сыворотке от инъецированных анти-ZIKV dMAb субъектов
[00400] mAb, генерируемые анти-ZIKV dMAb, исследуют в отношении специфичности связывания и анти-ZIKV нейтрализующей активности. Сывороточные антитела связываются с ZIKV-инфицированными клетками. Антитело, генерируемое из плазмиды анти-ZIKV dMAb, имеет сильную специфичность.
[00401] Кроме того, измеряют анти-ZIKV нейтрализующую активность в сыворотке от субъектов, которые получали анти-ZIKV dMAb, против таковой для штаммов ZIKV. Сыворотка от субъектов, инъецированных анти-ZIKV dMAb, эффективно нейтрализует изоляты ZIKV, демонстрируя, что одна инъекция может приводить к выработке существенных нейтрализующих уровней человеческого анти-ZIKV IgG. Таким образом, антитела, вырабатываемые in vivo конструкциями анти-ZIKV dMAb, имеют релевантную биологическую активность (т. е. связывающую и нейтрализующую активность против ZIKV).
Инъекция анти-ZIKV dMAb защищает мышей от летальной стимуляции ZIKV
[00402] Чтобы определить, обеспечивают ли антитела, генерируемые из анти-ZIKV dMAb, защиту против раннего воздействия ZIKV, группам из 10 мышей вводят контроль или анти-
ZIKV dMAb на сутки 0. После этого каждую группу подкожно стимулируют вирусом для имитации природного инфицирования ZIKV. После этого записывают данные по выживаемости и изменениям массы субъектов. Плазмиды анти-ZIKV dMAb обеспечивают защитный иммунитет.
[00403] После этого оценивают длительность иммунной защиты. Вторую группу субъектов стимулируют ZIKV после инъекции анти-ZIKV dMAb или контрольной плазмиды на сутки 0. Субъектов осматривают в отношении выживаемости. Анти-ZIKV dMAb обеспечивает более длительную иммунную защиту.
[00404] Анти-ZIKV dMAb защищает субъектов как от подкожной вирусной стимуляции, так и от интраназальной вирусной стимуляции по сравнению с инъецированными контролем субъектами, демонстрируя, что анти-ZIKV dMAb могут обеспечивать защиту от системной и мукозальной инфекции.
[00405] Далее проводят исследование эффективности, сравнивая защитную эффективность введения анти-ZIKV dMAb по сравнению с ZIKV-ДНК-вакциной (ZIKV-ДНК). Новая консенсусная ДНК-вакцина была разработана в нашей лаборатории и способна обеспечивать защиту против стимуляции ZIKV. ДНК-вакцина также индуцировала измеримые клеточные иммунные ответы, а также ответы в виде эффективных нейтрализующих антител. Группам субъектов вводят одну инъекцию анти-ZIKV dMAb, ZIKV-ДНК или pVaxl с последующей вирусной стимуляцией. Анти-ZIKV dMAb обеспечивает защитный иммунитет быстрее, чем ZIKV-ДНК-вакцина.
Сравнение между in vivo защитным иммунитетом, обеспечиваемым введением анти-ZIKV dMAb и вакцинацией ZIKV-ДНК
[00406] Далее проводили исследования долгосрочной защиты при стимуляции ZIKV после вакцинации ZIKV-ДНК-вакциной или введения анти-ZIKV dMAb на сутки 0. ZIKV-ДНК обеспечивает более продолжительный защитный иммунитет, чем анти-ZIKV dMAb.
Совместная доставка анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК-вакцины позволяет получить системный гуморальный иммунитет, клеточноопосредованный иммунитет и защиту in vivo
[00407] Одна из потенциальных проблем комбинирования подходов доставки антител и вакцинации состоит в том, что
антитела могут нейтрализовать многие традиционные вакцины и, следовательно, являются несовместимыми платформами. Оценивают действие совместного введения анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК на выживаемость субъектов в контексте стимуляции ZIKV. Субъектам вводят анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК на сутки 0. После этого некоторых животных стимулируют ZIKV на 2 сутки, а других - на 35 сутки. Изучают выживаемость в этих группах как функцию от времени. Анти-ZIKV dMAb опосредует защиту от инфекции, при этом процент выживаемости снижается приблизительно до 30% за 4 суток после стимуляции у контрольных (pVaxl) животных. Выявляются оба IgG, индуцированные анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК-вакциной. Анти-ZIKV dMAb опосредует быструю защиту от инфекции и гибели после стимуляции ZIKV.
[00408] Кроме того, оценивают Т-клеточные ответы, индуцированные у субъектов, которых инъецировали анти-ZIKV dMAb, ZIKV-ДНК или анти-ZIKV dMAb плюс ZIKV-ДНК. ZIKV-ДНК вызывает сильные Т-клеточные ответы вне зависимости от совместной доставки с анти-ZIKV dMAb, что указывает на отсутствие взаимных помех при применении этих подходов. В противоположность этому, у животных, которым вводили только анти-ZIKV dMAb, не развивались Т-клеточные ответы. Как анти-ZIKV dMAb, так и ZIKV-ДНК-вакцину можно вводить одновременно без взаимных помех, обеспечивая немедленную и долгосрочную защиту посредством системного гуморального и клеточного иммунитета (фигура 8).
Опосредованная электропорацией доставка оптимизированных ДНК-плазмид для быстрой in vivo выработки биологически функциональных mAb
[00409] Субъекты, которым вводят анти-ZIKV dMAb, полностью защищены от вирусной стимуляции вскоре после введения, тогда как после однократной иммунизации ZIKV-ДНК-вакциной субъекты не выживают, что предполагаемо связано с недостаточным временем для развития защитного иммунитета. Однако ZIKV-ДНК обеспечивает полную защиту после применения схемы иммунизации с последующей стимуляцией в более поздние моменты времени. Аналогичный уровень защиты наблюдается у мышей, которым вводят одну дозу анти-ZIKV dMAb, хотя со временем защита снижается. Следует отметить, что
совместная доставка анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК приводит к развитию быстрого и стойкого гуморального и клеточного иммунитета, позволяя предположить, что комбинированный подход может иметь аддитивное или синергетическое действие. Что важно, при совместной доставке анти-ZIKV dMAb и ZIKV-ДНК не являются антагонистическими в контексте развития кратко- и долгосрочных защитных иммунных ответов.
Пример 3 - Профилактика в виде быстрого и долгосрочного иммунитета, вызываемого кодируемым ДНК антителом, и ДНК-вакцинация против вируса Эбола
[00410] Известно, что вакцинация демонстрирует лаг-фазу перед генерацией иммунитета; следовательно, во время инфекции проходит некоторый отрезок времени перед проявлением иммунного ответа. Далее предложены специальные новые подходы, в которых используется преимущество вакцин и нативного иммунного ответа наряду с быстрой генерацией эффективного иммунитета с помощью синтетических ДНК-антител или dMab.
[00411] Разрабатывали вариант профилактики/терапии на основе антител, включающей опосредованную электропорацией доставку синтетических плазмид, кодирующих биологически активное mAb (обозначаемое dMAb) против оболочки вируса Эбола, и оценивали в отношении противовирусной эффективности, а также в отношении способности преодолевать недостатки, связанные с традиционной активной вакцинацией, посредством новой пассивной иммунной стратегии. Одна внутримышечная инъекция EBOV-dMAb приводила к in vivo выработке антител быстрее, чем активная вакцинация EBOV-ДНК-вакциной. Это dMAb нейтрализовало разные клинические изоляты EB0V и защищало мышей от стимуляции вирусом. Комбинации обоих методов позволяли получить быструю, а также долгосрочную защиту.
[00412] Стратегия с применением dMAb на основе ДНК индуцирует быструю защиту против острой вирусной инфекции, что можно скомбинировать с ДНК-вакцинацией, обеспечивая уникальную, как краткосрочную, так и долгосрочную защиту против этого острого инфекционного заболевания. Эти исследования имеют значение для лечения от патогенов и стратегий контроля.
Количественная оценка и анализ связывания dMAb IgG
[00413] Анализ ИФА проводят для сыворотки от субъектов,
которым вводили EBOV-dMAb, для количественной оценки кинетики
экспрессии и связывания с антигеном-мишенью. Анализ IgG, полученного с помощью dMAb
[00414] Экспрессию IgG для инфицированных EBOV клеток анализируют методом вестерн-блоттинга. В случае анализа иммунофлуоресценции инфицированные EBOV клетки оценивают визуально с помощью конфокального микроскопа и проводят количественный или полуколичественный анализ.
Введение ДНК-плазмиды dMAb и in vivo анализ
[00415] Кинетику экспрессии и функциональность оценивали у субъектов после инъекции контроля или EBOV-dMAb. В случае исследований, которые включают применение ДНК-вакцины, проводят введение плазмиды EBOV-ДНК-вакцины.
Исследование стимуляции
[00416] Субъекты получают усиленную электропорацией инъекцию EBOV-dMAb или контрольных плазмид. EBOV-ДНК-вакцину доставляли, как описано выше. После доставки ДНК субъектов стимулируют EBOV. Животных осматривают в отношении выживаемости и признаков инфекции. Собирают образцы сыворотки для количественной оценки цитокинов и других видов иммунного анализа. После инфицирования берут образцы крови и измеряют уровни вирусемии.
Анализ нейтрализующих антител
[00417] Определяют титры анти-EBOV нейтрализующих антител от субъектов, которым вводили EBOV-dMAb. Нейтрализующие титры можно рассчитать как величину, обратную наибольшему разведению, которое опосредует 100% снижение цитопатического действия в клетках.
Количественный анализ цитокинов
[00418] Собирают сыворотку от субъектов, которых инъецировали EBOV-dMAb и EBOV-ДНК-вакциной, а также от субъектов, которых стимулировали EBOV. Проводят измерение сывороточных уровней цитокинов TNF-a, IL-ip и IL-6.
Конструкция анти-EBOV dMAb и подтверждение экспрессии
[00419] Оптимизированные синтетические плазмиды,
сконструированные из анти-ЕВОУ-нейтрализующего mAb, были разработаны для антител на основе IgG и Fab. Клетки трансфицируют плазмидой EBOV-IgG или плазмидами EBOV-Fab (для VL, VH или объединенной плазмидой) для подтверждения экспрессии in vitro. EBOV-Fab и EBOV-IgG экспрессировали в мышечной ткани антитела, которые были надлежащим образом собраны и характеризовались биологической функциональностью in vitro.
In vivo экспрессия и количественная оценка анти-EBOV dMAb
[00420] После подтверждения in vitro экспрессии определяют
способность EBOV-Fab или EBOV-IgG вырабатывать анти-EBOV
антитела in vivo. Обе конструкции генерируют mAb. Субъектам
вводят EBOV-IgG или EBOV-Fab и оценивают сывороточные уровни
антител с помощью анализа связывания ИФА. Сыворотка, собранная
после инъекции EBOV-IgG и EBOV-Fab, демонстрирует связывание с
белком EBOV, но не с неродственным контрольным антигеном. Эти
данные указывают, что in vivo вырабатываемые анти-EBOV антитела
из конструкций EBOV-IgG или EBOV-Fab имеют биологические
характеристики, аналогичные традиционно вырабатываемым
антигенспецифическим антителам.
In vivo специфичность и нейтрализующая активность широкого спектра в сыворотке от инъецированных анти-EBOV dMAb субъектов
[00421] mAb, генерируемые анти-EBOV dMAb, исследуют в отношении специфичности связывания и анти-EBOV нейтрализующей активности. Сывороточные антитела связываются с EB0V-инфицированными клетками. Антитело, генерируемое из плазмиды анти-EBOV dMAb, имеет сильную специфичность.
[00422] Кроме того, измеряют анти-EBOV нейтрализующую активность в сыворотке от субъектов, которые получали анти-EBOV dMAb, против таковой для штаммов EBOV. Сыворотка от субъектов, инъецированных анти-EBOV dMAb, эффективно нейтрализует изоляты EBOV, демонстрируя, что одна инъекция может приводить к выработке существенных нейтрализующих уровней человеческого анти-EBOV IgG. Таким образом, антитела, вырабатываемые in vivo конструкциями анти-EBOV dMAb, имеют релевантную биологическую
активность (т. е. связывающую и нейтрализующую активность против EBOV).
Инъекция анти-EBOV dMAb защищает мышей от летальной стимуляции EBOV
[00423] Чтобы определить, обеспечивают ли антитела, генерируемые из анти-EBOV dMAb, защиту против раннего воздействия EBOV, группам из 10 мышей вводят контроль или анти-EBOV dMAb на сутки 0. После этого каждую группу подкожно стимулируют вирусом для имитации природного инфицирования EBOV. После этого записывают данные по выживаемости и изменениям массы субъектов. Плазмиды анти-EBOV dMAb обеспечивают защитный иммунитет.
[00424] После этого оценивают длительность иммунной защиты. Вторую группу субъектов стимулируют EBOV после инъекции анти-EBOV dMAb или контрольной плазмиды на сутки 0. Субъектов осматривают в отношении выживаемости. Анти-EBOV dMAb обеспечивает более длительную иммунную защиту.
[00425] Анти-EBOV dMAb защищает субъектов как от подкожной вирусной стимуляции, так и от интраназальной вирусной стимуляции по сравнению с инъецированными контролем субъектами, демонстрируя, что анти-EBOV dMAb могут обеспечивать защиту от системной и мукозальной инфекции.
[00426] Далее проводят исследование эффективности, сравнивая защитную эффективность введения анти-EBOV dMAb по сравнению с EBOV-ДНК-вакциной (EBOV-ДНК). Новая консенсусная ДНК-вакцина была разработана в нашей лаборатории и способна обеспечивать защиту против стимуляции EBOV. ДНК-вакцина также индуцировала измеримые клеточные иммунные ответы, а также ответы в виде эффективных нейтрализующих антител. Группам субъектов вводят одну инъекцию анти-EBOV dMAb, EBOV-ДНК или pVaxl с последующей вирусной стимуляцией. Анти-EBOV dMAb обеспечивает защитный иммунитет быстрее, чем EBOV-ДНК-вакцина.
Сравнение между in vivo защитным иммунитетом, обеспечиваемым введением анти-EBOV dMAb и вакцинацией EBOV-ДНК
[00427] Далее проводили исследования долгосрочной защиты при стимуляции EBOV после вакцинации EBOV-ДНК-вакциной или
введения анти-EBOV dMAb на сутки 0. EBOV-ДНК обеспечивает более продолжительный защитный иммунитет, чем анти-EBOV dMAb.
Совместная доставка анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК-вакцины позволяет получить системный гуморальный иммунитет, клеточноопосредованный иммунитет и защиту in vivo
[00428] Одна из потенциальных проблем комбинирования подходов доставки антител и вакцинации состоит в том, что антитела могут нейтрализовать многие традиционные вакцины и, следовательно, являются несовместимыми платформами. Оценивают действие совместного введения анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК на выживаемость субъектов в контексте стимуляции EBOV. Субъектам вводят анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК на сутки 0. После этого некоторых животных стимулируют EBOV на 2 сутки, а других - на 35 сутки. Изучают выживаемость в этих группах как функцию от времени. Анти-EBOV dMAb опосредует защиту от инфекции, при этом процент выживаемости снижается приблизительно до 30% за 4 суток после стимуляции у контрольных (pVaxl) животных. Выявляются оба IgG, индуцированные анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК-вакциной. Анти-EBOV dMAb опосредует быструю защиту от инфекции и гибели после стимуляции EBOV.
[00429] Кроме того, оценивают Т-клеточные ответы, индуцированные у субъектов, которых инъецировали анти-EBOV dMAb, EBOV-ДНК или анти-EBOV dMAb плюс EBOV-ДНК. EBOV-ДНК вызывает сильные Т-клеточные ответы вне зависимости от совместной доставки с анти-EBOV dMAb, что указывает на отсутствие взаимных помех при применении этих подходов. В противоположность этому, у животных, которым вводили только анти-EBOV dMAb, не развивались Т-клеточные ответы. Как анти-EBOV dMAb, так и EBOV-ДНК-вакцину можно вводить одновременно без взаимных помех, обеспечивая немедленную и долгосрочную защиту посредством системного гуморального и клеточного иммунитета.
Опосредованная электропорацией доставка оптимизированных ДНК-плазмид для быстрой in vivo выработки биологически функциональных mAb
[00430] Субъекты, которым вводят анти-EBOV dMAb, полностью защищены от вирусной стимуляции вскоре после введения, тогда как
после однократной иммунизации EBOV-ДНК-вакциной субъекты не выживают, что предполагаемо связано с недостаточным временем для развития защитного иммунитета. Однако EBOV-ДНК обеспечивает полную защиту после применения схемы иммунизации с последующей стимуляцией в более поздние моменты времени. Аналогичный уровень защиты наблюдается у мышей, которым вводят одну дозу анти-EBOV dMAb, хотя со временем защита снижается. Следует отметить, что совместная доставка анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК приводит к развитию быстрого и стойкого гуморального и клеточного иммунитета, позволяя предположить, что комбинированный подход может иметь аддитивное или синергетическое действие. Что важно, при совместной доставке анти-EBOV dMAb и EBOV-ДНК не являются антагонистическими в контексте развития кратко- и долгосрочных защитных иммунных ответов.
Пример 4 - Профилактика в виде быстрого и долгосрочного иммунитета, вызываемого кодируемым ДНК антителом, и ДНК-вакцинация против вируса Марбург
[00431] Известно, что вакцинация демонстрирует лаг-фазу перед генерацией иммунитета; следовательно, во время инфекции проходит некоторый отрезок времени перед проявлением иммунного ответа. Далее предложены специальные новые подходы, в которых используется преимущество вакцин и нативного иммунного ответа наряду с быстрой генерацией эффективного иммунитета с помощью синтетических ДНК-антител или dMab.
[00432] Разрабатывали вариант профилактики/терапии на основе антител, включающей опосредованную электропорацией доставку синтетических плазмид, кодирующих биологически активное mAb (обозначаемое dMAb) против оболочки вируса Марбург, и оценивали в отношении противовирусной эффективности, а также в отношении способности преодолевать недостатки, связанные с традиционной активной вакцинацией, посредством новой пассивной иммунной стратегии. Одна внутримышечная инъекция MARV-dMAb приводила к in vivo выработке антител быстрее, чем активная вакцинация MARV-ДНК-вакциной. Это dMAb нейтрализовало разные клинические изоляты MARV и защищало мышей от стимуляции вирусом. Комбинации обоих методов позволяли получить быструю, а также
долгосрочную защиту.
[00433] Стратегия с применением dMAb на основе ДНК индуцирует быструю защиту против острой вирусной инфекции, что можно скомбинировать с ДНК-вакцинацией, обеспечивая уникальную, как краткосрочную, так и долгосрочную защиту против этого острого инфекционного заболевания. Эти исследования имеют значение для лечения от патогенов и стратегий контроля.
Количественная оценка и анализ связывания dMAb IgG
[00434] Анализ ИФА проводят для сыворотки от субъектов, которым вводили MARV-dMAb, для количественной оценки кинетики экспрессии и связывания с антигеном-мишенью.
Анализ IgG, полученного с помощью dMAb
[00435] Экспрессию IgG для инфицированных MARV клеток анализируют методом вестерн-блоттинга. В случае анализа иммунофлуоресценции инфицированные MARV клетки оценивают визуально с помощью конфокального микроскопа и проводят количественный или полуколичественный анализ.
Введение ДНК-плазмиды dMAb и in vivo анализ
[00436] Кинетику экспрессии и функциональность оценивали у субъектов после инъекции контроля или MARV-dMAb. В случае исследований, которые включают применение ДНК-вакцины, проводят введение плазмиды MARV-ДНК-вакцины.
Исследование стимуляции
[00437] Субъекты получают усиленную электропорацией инъекцию MARV-dMAb или контрольных плазмид. MARV-ДНК-вакцину доставляли, как описано выше. После доставки ДНК субъектов стимулируют MARV. Животных осматривают в отношении выживаемости и признаков инфекции. Собирают образцы сыворотки для количественной оценки цитокинов и других видов иммунного анализа. После инфицирования берут образцы крови и измеряют уровни вирусемии.
Анализ нейтрализующих антител
[00438] Определяют титры анти-MARV нейтрализующих антител от субъектов, которым вводили MARV-dMAb. Нейтрализующие титры можно рассчитать как величину, обратную наибольшему разведению, которое опосредует 100% снижение цитопатического действия в
клетках.
Количественный анализ цитокинов
[00439] Собирают сыворотку от субъектов, которых инъецировали MARV-dMAb и MARV-ДНК-вакциной, а также от субъектов, которых стимулировали MARV. Проводят измерение сывороточных уровней цитокинов TNF-a, IL-ip и IL-6.
Конструкция анти-MARV dMAb и подтверждение экспрессии
[00440] Оптимизированные синтетические плазмиды,
сконструированные из анти-MARV-нeйтpализyющeгo mAb, были разработаны для антител на основе IgG и Fab. Клетки трансфицируют плазмидой MARV-IgG или плазмидами MARV-Fab (для VL, VH или объединенной плазмидой) для подтверждения экспрессии in vitro. MARV-Fab и MARV-IgG экспрессировали в мышечной ткани антитела, которые были надлежащим образом собраны и характеризовались биологической функциональностью in vitro.
In vivo экспрессия и количественная оценка анти-MARV dMAb
[00441] После подтверждения in vitro экспрессии определяют
способность MARV-Fab или MARV-IgG вырабатывать анти-MARV
антитела in vivo. Обе конструкции генерируют mAb. Субъектам
вводят MARV-IgG или MARV-Fab и оценивают сывороточные уровни
антител с помощью анализа связывания ИФА. Сыворотка, собранная
после инъекции MARV-IgG и MARV-Fab, демонстрирует связывание с
белком MARV, но не с неродственным контрольным антигеном. Эти
данные указывают, что in vivo вырабатываемые анти-MARV антитела
из конструкций MARV-IgG или MARV-Fab имеют биологические
характеристики, аналогичные традиционно вырабатываемым
антигенспецифическим антителам.
In vivo специфичность и нейтрализующая активность широкого спектра в сыворотке от инъецированных анти-MARV dMAb субъектов
[00442] mAb, генерируемые анти-MARV dMAb, исследуют в отношении специфичности связывания и анти-MARV нейтрализующей активности. Сывороточные антитела связываются с MARV-инфицированными клетками. Антитело, генерируемое из плазмиды анти-MARV dMAb, имеет сильную специфичность.
[00443] Кроме того, измеряют анти-MARV нейтрализующую
активность в сыворотке от субъектов, которые получали анти-MARV dMAb, против таковой для штаммов MARV. Сыворотка от субъектов, инъецированных анти-MARV dMAb, эффективно нейтрализует изоляты MARV, демонстрируя, что одна инъекция может приводить к выработке существенных нейтрализующих уровней человеческого анти-MARV IgG. Таким образом, антитела, вырабатываемые in vivo конструкциями анти-MARV dMAb, имеют релевантную биологическую активность (т. е. связывающую и нейтрализующую активность против MARV).
Инъекция анти-MARV dMAb защищает мышей от летальной стимуляции MARV
[00444] Чтобы определить, обеспечивают ли антитела, генерируемые из анти-MARV dMAb, защиту против раннего воздействия MARV, группам из 10 мышей вводят контроль или анти-MARV dMAb на сутки 0. После этого каждую группу подкожно стимулируют вирусом для имитации природного инфицирования MARV. После этого записывают данные по выживаемости и изменениям массы субъектов. Плазмиды анти-MARV dMAb обеспечивают защитный иммунитет.
[00445] После этого оценивают длительность иммунной защиты. Вторую группу субъектов стимулировали MARV после инъекции анти-MARV dMAb или контрольной плазмиды на сутки 0. Субъектов осматривают в отношении выживаемости. Анти-MARV dMAb обеспечивает более длительную иммунную защиту.
[0044 6] Анти-MARV dMAb защищает субъектов как от подкожной вирусной стимуляции, так и от интраназальной вирусной стимуляции по сравнению с инъецированными контролем субъектами, демонстрируя, что анти-MARV dMAb могут обеспечивать защиту от системной и мукозальной инфекции.
[00447] Далее проводят исследование эффективности, сравнивая защитную эффективность введения анти-MARV dMAb по сравнению с MARV-ДНК-вакциной (MARV-ДНК). Новая консенсусная ДНК-вакцина была разработана в нашей лаборатории и способна обеспечивать защиту против стимуляции MARV. ДНК-вакцина также индуцировала измеримые клеточные иммунные ответы, а также ответы в виде эффективных нейтрализующих антител. Группам субъектов
вводят одну инъекцию анти-MARV dMAb, MARV-ДНК или pVaxl с последующей вирусной стимуляцией. Анти-MARV dMAb обеспечивает защитный иммунитет быстрее, чем MARV-ДНК-вакцина.
Сравнение между in vivo защитным иммунитетом, обеспечиваемым введением анти-MARV dMAb и вакцинацией MARV-ДНК
[00448] Далее проводили исследования долгосрочной защиты при стимуляции MARV после вакцинации MARV-ДНК-вакциной или введения анти-MARV dMAb на сутки 0. MARV-ДНК обеспечивает более продолжительный защитный иммунитет, чем анти-MARV dMAb.
Совместная доставка анти-MARV dMAb и MARV-ДНК-вакцины позволяет получить системный гуморальный иммунитет, клеточноопосредованный иммунитет и защиту in vivo
[0044 9] Одна из потенциальных проблем комбинирования подходов доставки антител и вакцинации состоит в том, что антитела могут нейтрализовать многие традиционные вакцины и, следовательно, являются несовместимыми платформами. Оценивают действие совместного введения анти-MARV dMAb и MARV-ДНК на выживаемость субъектов в контексте стимуляции MARV. Субъектам вводят анти-MARV dMAb и MARV-ДНК на сутки 0. После этого некоторых животных стимулируют MARV на 2 сутки, а других - на 35 сутки. Изучают выживаемость в этих группах как функцию от времени. Анти-MARV dMAb опосредует защиту от инфекции, при этом процент выживаемости снижается приблизительно до 30% за 4 суток после стимуляции у контрольных (pVaxl) животных. Выявляются оба IgG, индуцированные анти-MARV dMAb и MARV-ДНК-вакциной. Анти-MARV dMAb опосредует быструю защиту от инфекции и гибели после стимуляции MARV.
[00450] Кроме того, оценивают Т-клеточные ответы, индуцированные у субъектов, которых инъецировали анти-MARV dMAb, MARV-ДНК или анти-MARV dMAb плюс MARV-ДНК. MARV-ДНК вызывает сильные Т-клеточные ответы вне зависимости от совместной доставки с анти-MARV dMAb, что указывает на отсутствие взаимных помех при применении этих подходов. В противоположность этому, у животных, которым вводили только анти-MARV dMAb, не развивались Т-клеточные ответы. Как анти-MARV dMAb, так и MARV-ДНК-вакцину можно вводить одновременно без взаимных помех, обеспечивая
немедленную и долгосрочную защиту посредством системного гуморального и клеточного иммунитета.
Опосредованная электропорацией доставка оптимизированных ДНК-плазмид для быстрой in vivo выработки биологически функциональных mAb
[00451] Субъекты, которым вводят анти-MARV dMAb, полностью защищены от вирусной стимуляции вскоре после введения, тогда как после однократной иммунизации MARV-ДНК-вакциной субъекты не выживают, что предполагаемо связано с недостаточным временем для развития защитного иммунитета. Однако MARV-ДНК обеспечивает полную защиту после применения схемы иммунизации с последующей стимуляцией в более поздние моменты времени. Аналогичный уровень защиты наблюдается у мышей, которым вводят одну дозу анти-MARV dMAb, хотя со временем защита снижается. Следует отметить, что совместная доставка анти-MARV dMAb и MARV-ДНК приводит к развитию быстрого и стойкого гуморального и клеточного иммунитета, позволяя предположить, что комбинированный подход может иметь аддитивное или синергетическое действие. Что важно, при совместной доставке анти-MARV dMAb и MARV-ДНК не являются антагонистическими в контексте развития кратко- и долгосрочных защитных иммунных ответов.
Пример 5 - Профилактика в виде быстрого и долгосрочного иммунитета, вызываемого кодируемым ДНК антителом, и ДНК-вакцинация против гриппа
[00452] Известно, что вакцинация демонстрирует лаг-фазу перед генерацией иммунитета; следовательно, во время инфекции проходит некоторый отрезок времени перед проявлением иммунного ответа. Далее предложены специальные новые подходы, в которых используется преимущество вакцин и нативного иммунного ответа наряду с быстрой генерацией эффективного иммунитета с помощью синтетических ДНК-антител или dMab.
[00453] Разрабатывали вариант профилактики/терапии на основе антител, включающей опосредованную электропорацией доставку синтетических плазмид, кодирующих биологически активное mAb (обозначаемое dMAb) против вируса гриппа (Flu), и оценивали в отношении противовирусной эффективности, а также в отношении
способности преодолевать недостатки, связанные с традиционной активной вакцинацией, посредством новой пассивной иммунной стратегии. Одна внутримышечная инъекция Flu-dMAb приводила к in vivo выработке антител быстрее, чем активная вакцинация Flu-ДНК-вакциной. Это dMAb нейтрализовало разные клинические изоляты Flu и защищало мышей от стимуляции вирусом. Комбинации обоих методов позволяли получить быструю, а также долгосрочную защиту.
[00454] Стратегия с применением dMAb на основе ДНК индуцирует быструю защиту против острой вирусной инфекции, что можно скомбинировать с ДНК-вакцинацией, обеспечивая уникальную, как краткосрочную, так и долгосрочную защиту против этого острого инфекционного заболевания. Эти исследования имеют значение для лечения от патогенов и стратегий контроля.
Количественная оценка и анализ связывания dMAb IgG
[00455] Анализ ИФА проводят для сыворотки от субъектов, которым вводили Flu-dMAb, для количественной оценки кинетики экспрессии и связывания с антигеном-мишенью.
Анализ IgG, полученного с помощью dMAb
[00456] Экспрессию IgG для инфицированных Flu клеток анализируют методом вестерн-блоттинга. В случае анализа иммунофлуоресценции инфицированные Flu клетки оценивают визуально с помощью конфокального микроскопа и проводят количественный или полуколичественный анализ.
Введение ДНК-плазмиды dMAb и in vivo анализ
[00457] Кинетику экспрессии и функциональность оценивали у субъектов после инъекции контроля или Flu-dMAb. В случае исследований, которые включают применение ДНК-вакцины, проводят введение плазмиды Flu-ДНК-вакцины.
Исследование стимуляции
[00458] Субъекты получают усиленную электропорацией инъекцию Flu-dMAb или контрольных плазмид. Flu-ДНК-вакцину доставляли, как описано выше. После доставки ДНК субъектов стимулируют Flu. Животных осматривают в отношении выживаемости и признаков инфекции. Собирают образцы сыворотки для количественной оценки цитокинов и других видов иммунного анализа. После инфицирования берут образцы крови и измеряют
уровни вирусемии.
Анализ нейтрализующих антител
[00459] Определяют титры анти-Flu нейтрализующих антител от субъектов, которым вводили Flu-dMAb. Нейтрализующие титры можно рассчитать как величину, обратную наибольшему разведению, которое опосредует 100% снижение цитопатического действия в клетках.
Количественный анализ цитокинов
[004 60] Собирают сыворотку от субъектов, которых инъецировали Flu-dMAb и Flu-ДНК-вакциной, а также от субъектов, которых стимулировали Flu. Проводят измерение сывороточных уровней цитокинов TNF-a, IЪ- 1 (3 и IL-6.
Конструкция анти-Flu dMAb и подтверждение экспрессии
[004 61] Оптимизированные синтетические плазмиды,
сконструированные из анти-Flu-нейтрализующего mAb, были разработаны для антител на основе IgG и Fab. Клетки трансфицируют плазмидой Flu-IgG или плазмидами Flu-Fab (для VL, VH или объединенной плазмидой) для подтверждения экспрессии in vitro. Flu-Fab и Flu-IgG экспрессировали в мышечной ткани антитела, которые были надлежащим образом собраны и характеризовались биологической функциональностью in vitro.
In vivo экспрессия и количественная оценка анти-Flu dMAb
[00462] После подтверждения in vitro экспрессии определяют
способность Flu-Fab или Flu-IgG вырабатывать анти-Flu антитела
in vivo. Обе конструкции генерируют mAb. Субъектам вводят Flu-
IgG или Flu-Fab и оценивают сывороточные уровни антител с
помощью анализа связывания ИФА. Сыворотка, собранная после
инъекции Flu-IgG и Flu-Fab, демонстрирует связывание с белком
Flu, но не с неродственным контрольным антигеном. Эти данные
указывают, что in vivo вырабатываемые анти-Flu антитела из
конструкций Flu-IgG или Flu-Fab имеют биологические
характеристики, аналогичные традиционно вырабатываемым
антигенспецифическим антителам.
In vivo специфичность и нейтрализующая активность широкого спектра в сыворотке от инъецированных анти-Flu dMAb субъектов
[00463] mAb, генерируемые анти-Flu dMAb, исследуют в отношении специфичности связывания и анти-Flu нейтрализующей активности. Сывороточные антитела связываются с Flu-инфицированными клетками. Антитело, генерируемое из плазмиды анти-Flu dMAb, имеет сильную специфичность.
[004 64] Кроме того, измеряют анти-Flu нейтрализующую активность в сыворотке от субъектов, которые получали анти-Flu dMAb, против активности штаммов Flu. Сыворотка от субъектов, инъецированных анти-Flu dMAb, эффективно нейтрализует изоляты Flu, демонстрируя, что одна инъекция может приводить к выработке существенных нейтрализующих уровней человеческого анти-Flu IgG. Таким образом, антитела, вырабатываемые in vivo конструкциями анти-Flu dMAb, имеют релевантную биологическую активность (т. е. связывающую и нейтрализующую активность против Flu).
Инъекция анти-Flu dMAb защищает мышей от летальной стимуляции Flu
[00465] Чтобы определить, обеспечивают ли антитела, генерируемые из анти-Flu dMAb, защиту против раннего воздействия Flu, группам из 10 мышей вводят контроль или анти-Flu dMAb на сутки 0. После этого каждую группу подкожно стимулируют вирусом для имитации природного инфицирования Flu. После этого записывают данные по выживаемости и изменениям массы субъектов. Плазмиды анти-Flu dMAb обеспечивают защитный иммунитет.
[004 66] После этого оценивают длительность иммунной защиты. Вторую группу субъектов стимулировали Flu после инъекции анти-Flu dMAb или контрольной плазмиды на сутки 0. Субъектов осматривают в отношении выживаемости. Анти-Flu dMAb обеспечивает более длительную иммунную защиту.
[00467] Анти-Flu dMAb защищает субъектов как от подкожной вирусной стимуляции, так и от интраназальной вирусной стимуляции по сравнению с инъецированными контролем субъектами, демонстрируя, что анти-Flu dMAb могут обеспечивать защиту от системной и мукозальной инфекции.
[00468] Далее проводят исследование эффективности, сравнивая защитную эффективность введения анти-Flu dMAb по сравнению с Flu-ДНК-вакциной (Flu-ДНК). Новая консенсусная ДНК
вакцина была разработана в нашей лаборатории и способна обеспечивать защиту против стимуляции Flu. ДНК-вакцина также индуцировала измеримые клеточные иммунные ответы, а также ответы в виде эффективных нейтрализующих антител. Группам субъектов вводят одну инъекцию анти-Flu dMAb, Flu-ДНК или pVaxl с последующей вирусной стимуляцией. Анти-Flu dMAb обеспечивает защитный иммунитет быстрее, чем Flu-ДНК-вакцина.
Сравнение между in vivo защитным иммунитетом, обеспечиваемым введением анти-Flu dMAb и вакцинацией Flu-ДНК
[004 69] Далее проводили исследования долгосрочной защиты при стимуляции Flu после вакцинации Flu-ДНК-вакциной или введения анти-Flu dMAb на сутки 0. Flu-ДНК обеспечивает более продолжительный защитный иммунитет, чем анти-Flu dMAb.
Совместная доставка анти-Flu dMAb и Flu-ДНК-вакцины
позволяет получить системный гуморальный иммунитет,
клеточноопосредованный иммунитет и защиту in vivo
[00470] Одна из потенциальных проблем комбинирования подходов доставки антител и вакцинации состоит в том, что антитела могут нейтрализовать многие традиционные вакцины и, следовательно, являются несовместимыми платформами. Оценивают действие совместного введения анти-Flu dMAb и Flu-ДНК на выживаемость субъектов в контексте стимуляции Flu. Субъектам вводят анти-Flu dMAb и Flu-ДНК на сутки 0. После этого некоторых животных стимулируют Flu на 2 сутки, а других - на 35 сутки. Изучают выживаемость в этих группах как функцию от времени. Анти-Flu dMAb опосредует защиту от инфекции, при этом процент выживаемости снижается приблизительно до 30% за 4 суток после стимуляции у контрольных (pVaxl) животных. Выявляются оба IgG, индуцированные анти-Flu dMAb и Flu-ДНК-вакциной. Анти-Flu dMAb опосредует быструю защиту от инфекции и гибели после стимуляции Flu.
[00471] Кроме того, оценивают Т-клеточные ответы, индуцированные у субъектов, которых инъецировали анти-Flu dMAb, Flu-ДНК или анти-Flu dMAb плюс Flu-ДНК. Flu-ДНК вызывает сильные Т-клеточные ответы вне зависимости от совместной доставки с анти-Flu dMAb, что указывает на отсутствие взаимных помех при
применении этих подходов. В противоположность этому, у животных, которым вводили только анти-Flu dMAb, не развивались Т-клеточные ответы. Как анти-Flu dMAb, так и Flu-ДНК-вакцину можно вводить одновременно без взаимных помех, обеспечивая немедленную и долгосрочную защиту посредством системного гуморального и клеточного иммунитета.
Опосредованная электропорацией доставка оптимизированных ДНК-плазмид для быстрой in vivo выработки биологически функциональных mAb
[00472] Субъекты, которым вводят анти-Flu dMAb, полностью защищены от вирусной стимуляции вскоре после введения, тогда как после однократной иммунизации Flu-ДНК-вакциной субъекты не выживают, что предполагаемо связано с недостаточным временем для развития защитного иммунитета. Однако Flu-ДНК обеспечивает полную защиту после применения схемы иммунизации с последующей стимуляцией в более поздние моменты времени. Аналогичный уровень защиты наблюдается у мышей, которым вводят одну дозу анти-Flu dMAb, хотя со временем защита снижается. Следует отметить, что совместная доставка анти-Flu dMAb и Flu-ДНК приводит к развитию быстрого и стойкого гуморального и клеточного иммунитета, позволяя предположить, что комбинированный подход может иметь аддитивное или синергетическое действие. Что важно, при совместной доставке анти-Flu dMAb и Flu-ДНК не являются антагонистическими в контексте развития кратко- и долгосрочных защитных иммунных ответов.
Пример 5 - Функциональные "ДНК-моноклональные антитела" (DMAb) против вируса Зика
[00473] Представленные в данном документе исследования
демонстрируют генерацию функциональных "ДНК-моноклональных
антител" (DMAb) против вируса Зика посредством внутримышечной
электропорации плазмидной ДНК. Кодон-оптимизированные
последовательности ДНК вариабельной области из моноклональных антител против вируса Зика синтезировали в константном домене человеческого IgGl. Плазмидную ДНК, кодирующую антитело, доставляли мышам СЗН. Это исследование подтверждает, что DMAb является альтернативой существующим вариантам биологической
терапии.
[00474] Белок ZIKV-Env (ZIKV-E) представляет собой 505-
аминокислотный белок, имеющий петлю слияния (фигура 9) . Антитела
против белка ZIKV-E экспрессируются in vivo посредством ДНК-
моноклональных антител (dMAB), которые экспрессируют тяжелую и
легкую цепь (фигура 10) . Каждое из специфических в отношении
ZIKV-Env моноклональных антител, 1С2А6, 1D4G7, 2B7D7, 3F12E9,
4D6E8, 5E6D9, 6F9D1, 9D10F4, 8A9F9 и 9F7E1, связывает ZIKV-Env
in vitro (фигура 11 и фигура 12). Моноклональные антитела
демонстрируют разную степень гомологии последовательностей среди
цепей VH и VL (фигуры 13-15) . Большую VH CDR3 из 1D4G7 четко
видно, как и несколько других различий в складке в других CDR и
в каркасных областях. Несмотря на отличие в последовательности
3F12E9, оно все равно ближе по общей последовательности и
конформации к 1С2А6, 8D10F4 и 8A9F9, чем к 1D4G7. (Фигура 15). В
1D4G7 отсутствует углубление между доменами VH и VL из-за
большого размера петли CDR3. Сходство в последовательностях
транслируется в сходство в структуре, поэтому общая конформация
CDR и форма молекул являются консервативными в соответствии с
ранее продемонстрированным кластерным анализом. (Фигура 16).
1С2А6 содержит свободный остаток CYS вдали от CDR, находящийся
на поверхности. Другое потенциально релевантное отличие
находится в области VH FR2. Этот остаток напрямую не связан с
конформацией CDR, но влияет на локальную упаковку остатков. В
пределах определенных по IMGT областей CDR существует два
изменения. Изменения VL (F, F, S) напрямую влияют на поверхность
раздела VL-VH. (Фигура 17). Свободный CYS оставляет сильно
поддающуюся модификациям химическую группу на поверхности
молекулы. (Фигура 18) . Самый высокий индекс разворачиваемости
имеет 1D4G7, очень вероятно из-за длинной петли CDR3, которая
содержит некоторое количество неполярных остатков. При этом, на
основании прошлого опыта, одно это не составляет проблему
(фигура 19). Учитывая наибольшую степень сходства, 1С2А6, 8D10F4
и 8A9F9 вероятно связывают один и тот же эпитоп одинаковым
базовым образом. Небольшие различия между тремя
последовательностями включают открытый свободный остаток CYS на
1С2А6 и сниженное число прогнозируемых пи-взаимодействий на поверхности раздела VH-VL в 8D10F4. 3F12E9 имеет сходство с 1С2А6, 8D10F4 и 8A9F9 в областях CDR, но также и несколько важных различий. mAb 1D4G7 вероятно связывается отличным образом или с полностью отличным эпитопом, чем остальные mAb, упомянутые выше.
Пример 6 - In vivo защита от инфекции и патогенеза ZIKV посредством пассивного переноса антител и активной иммунизации ДНК-вакциной prMEnv
[00475] В этом исследовании создавали новую, синтетическую ДНК-вакцину, нацеленную на премембранные+оболочечные белки (prMEnv) ZIKV, и оценивали в отношении in vivo эффективности. После начальной in vitro разработки и оценочных исследований плазмидной конструкции мышей и отличных от человека приматов иммунизировали этим ДНК-иммуногеном prMEnv с помощью опосредованной и усиленной электропорацией доставки ДНК. Было обнаружено, что у вакцинированных животных генерируется антигенспецифический клеточный и гуморальный иммунитет и нейтрализующая активность. У мышей с отсутствие рецепторов интерферона (IFN)-oc/P (обозначаемых IFNAR_/~) иммунизация этой ДНК-вакциной индуцировала, после in vivo вирусной стимуляции, 100% защиту от связанной с инфекцией потери массы или гибели в дополнение к предотвращению вирусной патологии в ткани головного мозга. Кроме того, пассивный перенос анти-ZIKV иммунной сыворотки отличных от человека приматов защищал мышей IFNAR_/" от последующей вирусной стимуляции. Это начальное исследование вакцины против ZIKV на патогенной мышиной модели подтверждает важность иммунных ответов, нацеленных на ргМЕ, при инфекции ZIKV и позволяет предположить, что дополнительное изучение подхода с применением этой вакцины может иметь релевантность для контроля ZIKV у людей.
Клетки, вирусы и животные
[00476] Клетки почек эмбриона человека 293Т (Американская коллекция типовых культур (АТСС) #CRL-N268, Manassas, VA, USA) и Vero CCL-81 (АТСС #CCL-81) поддерживали в DMEM (среда Игла,
модифицированная по способу Дульбекко; Gibco- Q3 Invitrogen), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС) и 1% пенициллина и стрептомицина и пассировали до конфлюэнтности. Оба штамма вируса ZIKV, MR7 6 6 (любезный подарок от доктора Susan Weiss) и PR209 (Bioqual, MD) амплифицировали в клетках Vero и титровали исходный материал с помощью стандартного анализа бляшкообразования на клетках Vero. Самок мышей C57BL/6 (The Jackson Laboratory) и IFNAR_/~ (репозитарий MMRRC-The Jackson Laboratory) возрастом от пяти до шести недель содержали и обрабатывали/вакцинировали в помещении с контролем температуры и световым циклом в соответствии с руководствами Национального института здоровья, Вистар (Wistar) и IACUC (Институционального комитета по уходу за животными и их использованию) Агентства здравоохранения Канады.
[00477] MP (макака-резус) содержали и
обрабатывали/вакцинировали в Bioqual, MD, USA. Это исследование проводили в строгом согласии с рекомендациями, описанными в Руководстве по содержанию и использованию лабораторных животных НИЗ, Офиса защиты прав животных и Департамента сельского хозяйства США. Вся работа по иммунизации животных была одобрена комитетом по уходу за животными и их использованию Bioqual (IACUC). Bioqual аккредитован Американской ассоциацией по аккредитации и уходу за лабораторными животными. Все процедуры проводились под анестезией кетамином обученным персоналом под руководством служащих-ветеринаров и прилагались все усилия для защиты прав животных и для минимизации страданий животных в соответствии с рекомендациями "доклада Weatherall по использованию отличных от человека приматов". Животных содержали в примыкающих друг к другу отдельных клетках для приматов, которые допускали социальные взаимодействия, в контролируемых условиях влажности, температуры и света (циклы 12 ч света/12 ч темноты). Пища и вода были доступны ad libitum. Осмотр животных дважды в сутки и кормление дважды в сутки коммерческим кормом для обезьян, лакомствами и фруктами осуществлялись обученным персоналом.
Конструкция ДНК-вакцины ZIKV-prME
[00478] Синтезировали плазмидную ДНК-конструкцию ZIKV-prME, которая кодирует полноразмерного предшественника мембраны (ргМ) плюс оболочечный (Е) и капсидный белки. Использовали консенсусную стратегию, а консенсусные последовательности определяли посредством выравнивания текущих последовательностей белка ZIKV ргМЕ. Вакцинную вставку генетически оптимизировали (т. е. проводили оптимизацию кодонов и РНК) для повышения экспрессии у людей, и добавляли лидерную последовательность IgE для облегчения экспрессии. Конструкция была синтезирована коммерчески (Genscript, NJ, USA), а затем субклонирована в модифицированный экспрессионный вектор pVaxl под управлением немедленно-раннего промотора цитомегаловируса, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32). Конечная конструкция называется вакциной ZIKV-prME, а контрольный плазмидный каркас представлен pVaxl. Кроме того, также конструировали большое число других совпадающих по ДНК конструкций, кодирующих гены ргМ и Е из MR7 66 (DQ859059.1) из приведшего к вспышке в 2016 г. штамма Brazilin (АМА12084.1) для дополнительной оценки. Крупномасштабную амплификацию ДНК-конструкций проводили в Inovio Pharmaceuticals Inc. (Plymouth Meeting, PA, USA), а очищенную плазмидную ДНК готовили в воде для проведения иммунизации. Размер ДНК-вставок подтверждали с помощью агарозного гель-электрофореза. Филогенетический анализ проводили путем множественного выравнивания с помощью ClustalW, используя программное обеспечение MEGA, версия 5 (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32).
[00479] Иммунизация ДНК и усиление опосредованной электропорацией доставки
[00480] Самок мышей C57BL/6 (возрастом 6-8 недель) и мышей IFNAR_/" (возрастом 5-6 недель) иммунизировали 2 5 мкг ДНК в общем объеме 2 0 или 3 0 мкл воды, доставляемой в переднюю большеберцовую мышцу путем доставки с помощью in vivo электропорации. In vivo электропорацию осуществляли с помощью адаптивного устройства для электропорации с постоянным током
CELLECTRA (Inovio Pharmaceuticals) в том же месте, непосредственно после инъекции ДНК. Трехкомпонентное CELLECTRA минимально инвазивное устройство вставляли на ~ 2 мм в мышцу. Прямоугольные импульсы подавали посредством треугольной трехэлектродной матрицы, состоящей из выполненных из твердой нержавеющей стали электродов 2 6 калибра, а два импульса постоянного тока по 0,1 А подавали в течение 52 мкс/импульс с разделением в 1 с. Дополнительные протоколы по применению электропорации были подробно описаны ранее (Flingai с соавт., 2015, Sci Rep 5:12616) . Мышей иммунизировали три раза с 2-недельными интервалами и умерщвляли через 1 неделю после конечной иммунизации. Кровь брали после каждой иммунизации для анализа клеточного и гуморального иммунного ответа (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32). Исследования иммуногенности на макаках резус: пятерых макаков резус интрадермально иммунизировали в двух участках два раза с 5-недельными интервалами 2 мг вакцины ZIKV-prME. Электропорацию осуществляли незамедлительно, используя то же устройство, которое было описано для иммунизации мышей. Анализ методом вестерн-блоттинга
[00481] В случае исследований in vitro экспрессии трансфекцию проводили, используя реагент GeneJammer, следуя протоколам производителя (Agilent). Вкратце, клетки выращивали до 50% конфлюэнтности в 35 мм чашке и трансфицировали 1 мкг вакцины ZIKV-prME. Клетки собирали через 2 суток после трансфекции, дважды промывали ФСБ и лизировали буфером для лизиса клеток (Cell Signaling Technology). Вестерн-блоттинг использовали для подтверждения экспрессии белка ZIKV-prME из собранного клеточного лизата и иммунной специфичности сыворотки мышей и MP, применяя сыворотку против флавивируса или иммунную сыворотку от мышей, вакцинированных ZIKV-prME, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32). Вкратце, 3-12% гели Bis-Tris NuPAGE (Life Technologies) загружали с 5 мкг или 1 мкг рекомбинантного оболочечного белка ZIKV (rZIKV-E); трансфицированными клеточными лизатами или супернатантом и белковыми маркерами молекулярной массы Odyssey
(продукт # 92 8-40000). Гели проводили при 2 00 В в течение 50 мин в буфере MOPS. Белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны, используя устройство для переноса iBlot 2 Gel Transfer Device
(Life Technologies). Мембраны блокировали в блокирующем буфере ФСБ Odyssey (LI-COR Biosciences) в течение 1 ч при комнатной температуре. Для выявления экспрессии вакцины антитело против антигена группы флавивируса (МАВ1021б-Clone D1-4G2-4-15) разводили 1:500, а иммунную сыворотку от мышей и MP разводили 1:50 в блокирующем буфере Odyssey с 0,2% Твин 20 (Bio-Rad) и инкубировали с мембранами в течение ночи при 4 °С. Мембраны промывали ФСБТ, а затем инкубировали с соответствующим вторичным антителом (козье, против мышиного IRDye680CW; LI-COR Biosciences) в случае мышиной сыворотки и антитела к флавивирусу; и козьим, против человеческого IRDye800CW (LI-COR Biosciences), в случае сыворотки MP при 1:15 000 разведении для мышиной сыворотки в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывки мембраны визуализировали на инфракрасном визуализаторе Odyssey (LI-COR Biosciences).
Анализ иммунофлуоресценции
[00482] Для анализа иммунофлуоресценции клетки выращивали на покровных стеклах и трансфицировали 5 мкг вакцины ZIKV-prME. Через 2 суток после трансфекции клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин. Затем блокировали неспецифическое связывание нормальной козьей сывороткой, разведенной в ФСБ, при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем стекла промывали в ФСБ в течение 5 мин, а после этого инкубировали с сывороткой от иммунизированных мышей или MP при 1:100 разведении в течение ночи при 4 °С. Стекла промывали, как описано выше, и инкубировали с подходящим вторичным антителом (козье, против мышиного IgGAF488; в случае мышиной сыворотки, и козьим, против человеческого IgG-AF488, в случае сыворотки MP; Sigma) при 1:200 разведении при комнатной температуре в течение 1 ч. После промывки добавляли заливочную среду Flouroshield с DAPI (Abeam) для окрашивания ядер клеток. После этого проводили заливку покровных стекол и наблюдение слайдов под микроскопом
(EVOS Cell Imaging Systems; Life Technologies) (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32). Кроме того, клетки Vero, SK-N-SH или U87-MB выращивали на четырехкамерных обработанных стеклянных слайдах для тканевого культивирования и инфицировали при МЗ (множественность заражения) 0,01 ZIKV-MR7 6 6 или PR2 09, которые предварительно инкубировали с иммунной сывороткой MP (1:200) или без нее, и окрашивали через 4 суток после инфицирования ZIKV, используя антитело против пан-флавивируса, как описано (Rossi с соавт., 2016, J Rop Med Hyg 94:1362-9).
Гистопатологический анализ
[00483] Для гистопатологии из фиксированной в формалине, залитой в парафин ткани головного мозга готовили сагиттальные срезы толщиной 5 мкм, помещали на слайды для микроскопа Superfrost microscope (Fisher Scientific) и нагревали при 37°С в течение ночи. Срезы распарафинировали, используя две смены ксилена и регидратировали путем погружения в 100%, 90% и затем 7 0% этанол. Срезы окрашивали в отношении ядерных структур, используя гематоксилин Гарриса (Surgipath) в течение 2 мин с последующим просветлением окрашенного среза в 1% кислом спирте (Surgipath) и обработкой водой Скотта в течение 2 мин. После этого проводили контрокрашивание срезов в отношении цитоплазматических структур, используя эозин (Surgipath) в течение 2 мин. Слайды дегидратировали 70%, 90% и 100% этанолом, просветляли в ксилене и заливали, используя Permount (Fisher Scientific).
Выделение спленоцитов и МКПК
[00484] Готовили суспензии из одиночных спленоцитов от всех мышей. Вкратце, по отдельности собирали селезенки мышей в 5 мл RPMI 1640, дополненной 10% ФБС (R10), затем обрабатывали с помощью лопастной мешалки Stomacher 80 (A.J. Seward and Co. Ltd.) в течение 3 0 с на высокой скорости. Обработанные селезеночные образцы фильтровали через 4 5 мм нейлоновые фильтры, а затем центрифугировали при 1500 g в течение 10 мин при 4 °С. Клеточный осадок ресуспендировали в 5 мл лизисного буфера АСК
(аммоний-хлорид-калий) (Life Technologies) в течение 5 мин при комнатной температуре и затем добавляли ФСБ, чтобы остановить реакцию. Образцы снова центрифугировали при 1500 g в течение 10 мин при 4 °С. Клеточный осадок ресуспендировали в R10 и затем пропускали через 45 мм нейлоновый фильтр перед использованием в анализе ELISpot и анализе методом проточной цитометрии
(Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32). В случае MP кровь (20 мл для каждого момента времени) собирали в пробирки с ЭДТК и выделяли МКПК, используя стандартную процедуру фиколл-гипак с пробирками Accuspin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) . Также для каждого момента времени собирали по пять миллилитров крови в пробирки для сыворотки для выделения сыворотки.
Анализ методом проточной цитометрии и внутриклеточное окрашивание цитокинов
[00485] Спленоциты добавляли в 9б-луночный планшет (2 х 106/лунка) и стимулировали объединенными пептидами ZIKV-prME в течение 5 ч при 37 °С/5% С02 в присутствии коктейля из ингибиторов транспорта белков (брефелдин А и монензин; eBioscience). Коктейль для стимуляции клеток (плюс ингибиторы транспорта белков; РМА (форбол 12-миристат 13-ацетат), иономицин, брефелдин А и монензин; eBioscience) использовали в качестве положительного контроля, а среду R10 - в качестве отрицательного контроля. Затем все клетки окрашивали в отношении поверхностных и внутриклеточных белков согласно описанию в инструкциях производителя (BD Biosciences, San Diego, СА, USA) . Вкратце, клетки промывали в буфере FACS (ФСБ, содержащий 0,1% азида натрия и 1% ФБС) перед поверхностным окрашиванием антителами, конъюгированными с флуорохромом. Клетки промывали в буфере FACS, фиксировали и пермеабилизировали, используя BD Cytofix/Ctyoperm ТМ (BD Biosciences) в соответствии с протоколом производителя, с последующим внутриклеточным окрашиванием. Для поверхностного окрашивания использовали следующие антитела: Набор для окрашивания LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell
(Invitrogen), CD19 (V450; клон 1D3; BD Biosciences) CD4 (FITC; клон RM4-5; eBioscience), CD8 (APC-Cy7; клон 53-6.7; BD
Biosciences); CD44 (BV711; клон IM7; BioLegend). Для внутриклеточного окрашивания использовали следующие антитела: IFN-y (АРС; клон XMG1.2; BioLegend), TNF-a (РЕ; клон МР6-ХТ22; eBioscience), CD3 (РегСР/Су5.5; клон 145-2С11; BioLegend); IL-2 (РеСу7; клон JES6-SH4; eBioscience). Все данные получали, используя проточный цитометр LSRII (BD Biosciences), и анализировали, используя программное обеспечение FlowJo (Tree Star, Ashland, OR, USA). Анализ ELISpot
[00486] Вкратце, 9б-луночные ELISpot планшеты (Millipore) покрывали захватывающим Ab против мышиного IFN-y (R &D Systems) и инкубировали в течение ночи при 4 °С. На следующие сутки планшеты промывали ФСБ и блокировали в течение 2 ч ФСБТ+1% БСА. В каждую лунку добавляли по двести тысяч спленоцитов от иммунизированных мышей и инкубировали в течение ночи при 37°С в 5% С02 в присутствии одной среды (отрицательный контроль), среды с РМА/иономицином (положительный контроль) или среды с пептидными пулами (1 мкг/мл), состоящими из 15-меров, перекрывающихся по девяти аминокислотам и охватывающими длину белка ZIKV ргМЕ
(Genscript). Через 2 4 ч клетки промывали и затем инкубировали в течение ночи при 4°С с биотинилированным АЬ против мышиного IFN-y
(R &D Systems). После промывки в каждую лунку добавляли стрептавидин-щелочную фосфатазу (R &D Systems) и затем инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшет промывали и затем добавляли соль 5-бром-4-хлор-3'-индолилфосфат п-толуидина и хлорид нитросинего тетразолия (хромогеновый цветной реагент; R &D Systems). В конце планшеты промывали дистиллированной водой, сушили при комнатной температуре и проводили количественную оценку СОЕ с помощью автоматического ридера ELISpot (CTL Limited), а исходные значения нормализовали к СОЕ на миллион спленоцитов. В случае образцов MP использовали набор ELISP0TPR0 для обезьяньего IFN-y (МАВТЕСН) согласно описанию производителя; стимулировали двести тысяч МКПК пептидными пулами; а планшеты промывали с образованием бляшек, которые подсчитывали, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2016,
Sci Transl Med 7:301ral32).
Гуморальный иммунный ответ: анализ связывания антител ИФА [00487] ИФА использовали для определения титров сыворотки мышей и MP, как было описано ранее (Muthumani с соавт., 2016, Sci Transl Med 7:301ral32) . Вкратце, 1 мкг очищенного белка rZIKV-E использовали для покрытия 9б-луночных микротитровальных планшетов (Nalgene Nunc International, Naperville, IL, USA) при 4°C в течение ночи. После блокирования 10% ФБС в ФСБ в течение по меньшей мере часа планшеты четыре раза промывали 0,05% ФСБТ
(Твин 2 0 в ФСБ) . Образцы сыворотки от иммунизированных мышей и MP серийно разводили в 1% ФБС, добавляли в планшеты, затем инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты снова четыре раза промывали 0,05% ФСБТ, затем инкубировали с конъюгированным с HRP (пероксидазой хрена) анти-мышиным IgG
(Sigma) при 1:35 000 разведении для мышиной сыворотки в течение 1 ч при комнатной температуре. Для сыворотки MP использовали анти-обезьяний IgG HRP (Southern Biotech) при 1:5000 разведении в течение 1 ч при комнатной температуре. Связанный фермент выявляли путем добавления раствора субстрата SIGMAFAST OPD (о-фенилендиамин дигидрохлорид) в соответствии с инструкциями производителя (Sigma-Aldrich). Реакцию останавливали через 15 мин путем добавления 1 N H2S04. оптическую плотность на 450 нм считывали на планшет-ридере Synergy. Анализ всех образцов сыворотки мышей и MP проводили в двух повторностях. Конечные титры определяли, используя ранее описанный способ (Frey с соавт., 1998, J Immunol Methods 21:35-41). Анализ нейтрализации (PRNT50)
[00488] Анализ PRNT, включающий применение клеток MR7 6 6 и Vero, был описан ранее (Sun с соавт., 2006, J Infect Dis 193:1658-65). Вкратце, инактивированную нагреванием сыворотку мышей или MP серийно разводили в бессывороточной DMEM (1:10 к 1: 1280) и инкубировали с эквивалентным объемом ZIKV MR7 6 6 (100 БОЕ) при 37°С в течение 2 ч. Смеси добавляли к конфлюэнтным слоям клеток Vero и оставляли при 37°С для адсорбции в течение 2 ч. Дополнительный слой из среды 2 х DMEM:мягкого агара (1:1)
добавляли поверх клеток и инкубировали планшет в течение 5 суток при 37 °С. Дополнительный слой агара удаляли и фиксировали клетки 4% параформальдегидом, промывали 1 х ФСБ, окрашивали раствором кристаллического фиолетового, промывали 1 х ФСБ и оставляли планшеты сохнуть. Бляшки в анализе, проводимом в 24-луночных планшетах, сканировали на автоматическом ридере Immunospot (CTL Limited), а бляшки в лунках с образцами и в лунках с отрицательным контролем (только DMEM) и положительным контролем (только 100 БОЕ MR766 вируса ZIKV) подсчитывали, используя автоматическое программное обеспечение, поставляемое с ридером ELISpot. Процент снижения количества бляшек рассчитывали следующим образом: % снижения=100 х {1 - (среднее число бляшек для каждого разведения/среднее число бляшек в лунках с положительным контролем)}. Программное обеспечение GraphPad Prism использовали для проведения нелинейного регрессионного анализа % снижения количества бляшек в зависимости от логарифма преобразования каждого отдельного сывороточного разведения для облегчения линейной интерполяции действительных 50% титров PRNT при пиковом ответе после вакцинации. Медианы и межквартильные диапазоны при 50% нейтрализации рассчитывали для каждой мишени нейтрализации в целом и по группе обработки вакциной; также рассчитывали средние геометрические титры. Титры представляют величину, обратную наибольшему разведению, приводящему в 50% снижению числа бляшек.
Исследования стимуляции ZIKV у мышей IFNAR_/~
[00489] Для исследований симуляции ZIKA мышей IFNAR_/" (п=10/группа) один раз или два раза иммунизировали вакциной ZIKA-prME или pVaxl. Мыши получали 1 х 106 БОЕ или 2 х 106 БОЕ вируса ZIKV-PR209 на 15 сутки (одна группа иммунизации) или на 21 сутки через одну неделю после второй иммунизации (две группы иммунизации). Также проводили иммунизацию дополнительных групп мышей IFNAR_/" (п=10/группа) один раз и стимулировали 2х106 БОЕ вируса ZIKV-PR2 0 9 на 15 сутки. После стимуляции животных ежедневно взвешивали и измеряли температуру тела с помощью размещенного под кожей температурного чипа. Кроме того, дважды в
сутки их осматривали в отношении клинических признаков заболевания (снижение подвижности; сгорбленная поза; хождение на задних конечностях с опорой на костяшки пальцев (частичный паралич); паралич одной задней конечности или обеих задних конечностей) и брали кровь для определения вирусной нагрузки. Критерии для умерщвления по соображениям гуманности состояли из 2 0% снижения массы или паралича одной или обеих задних лап.
Анализ ОТ-ПЦР в режиме реального времени для измерения нагрузки ZIKV
[004 90] Ткани головного мозга обработанных мышей погружали в RNAlater (Ambion) при 4°С на 1 неделю, затем хранили при -80 °С. Затем ткань головного мозга взвешивали и гомогенизировали в 600 мкл буфера RLT в 2 мл криофлаконе, используя TissueLyser (Qiagen) с шариком из нержавеющей стали в течение б мин при 30 циклах/с. Вирусную РНК также выделяли из крови с помощью мини-набора RNeasy Plus (Qiagen). ZIKV-специфический анализ ОТ-ПЦР в режиме реального времени использовали для выявления вирусной РНК от подопытных животных. Проводили обратную транскрипцию РНК и амплифицировали, используя праймеры ZIKV 835 и ZIKV 911с и зонд ZIKV 8 60FAM с мастер-миксом TaqMan Fast Virus 1-Step (Applied Biosystems). Стандартную кривую получали параллельно с каждым планшетом и использовали для количественной оценки числа копий вирусного генома. Программное обеспечение StepOnePlus для системы ПЦР в режиме реального времени (ABI), версия 2.3, использовали для расчета пороговых значений цикла (Ct), а значение Ct < 38 для по меньшей мере одной повторности считали позитивным, как было описано ранее (Lanciotti с соавт., 2008, Emerg Infect Dis 14:1232-9). Образцы крови до иммунизации служили в этом анализе отрицательным контролем. Статистический анализ
[004 91] Сравнение разницы в кратности повышения титров антител проводили с помощью анализа Манна-Уитни. Статистический анализ проводили, используя Graphpad, Prism 4 (программное обеспечение Graphpad, Inc. San Diego, СА, USA). Для всех испытаний Р < 0,05 считали статистически значимым.
Преобразование 1одю применяли к конечным титрам связывания ИФА и титрам цельного вируса PRNT50.
Конструкция консенсусной ДНК-вакцины ZIKV-prME [00492] Консенсусную последовательность генов ZIKV ргМ (предшественник мембраны) и Env (оболочка) (ZIKV-prME) создавали, используя последовательности ргМ и Env из различных ZIKV, выделенных в период между 1952 и 2015 гг., которые вызывали инфекцию у людей. Консенсусную последовательность ZIKV-prME клонировали в вектор pVaxl после проведения дополнительных модификаций и оптимизаций для улучшения in vivo экспрессии, включая добавление высокоэффективной лидерной пептидной последовательности иммуноглобулина Е (IgE) (фигура 20А) . Оптимальное выравнивание последовательностей ZIKV-оболочки проводили, используя модели гомологии и визуализацию с помощью Discovery Studio 4.5. Эталонные модели включали PDB 5JHM и PDB 5IZ7. В целях визуализации в моделях метили выровненные остатки, соответствующие конкретным областям антигена ргМЕ (фигура 2 0В) . Оптимизированные отобранные последовательности вакцины в общем случае являются консервативными или полуконсервативными по отношению к множеству штаммов ZIKV, анализируемых в этом исследовании. Структурные исследования EDE-специфических нейтрализующих антител выявили, что эти детерминанты распознавания можно обнаружить в инвариантном по серотипу участке на поверхности раздела оболочка-димер, который включает открытую основную цепь петли слияния и две консервативные цепи гликанов (N67- и Ы153-связанных гликанов) (Rouvinski с соавт., 2015, Nature 520:109-13). Эти два участка гликозилирования не являются высококонсервативными в других флавивирусах. Более того, ZIKV не содержит Ы67-связанный участок гликозилирования, а Ы154-связанный участок гликозилирования (эквивалентный N153-связанному участку гликозилирования в денге) отсутствует в некоторых из выделенных штаммов ZIKV. Следовательно, в качестве части консенсусной разработки, конструкцию разрабатывали так, чтобы в ней был пропущен этот участок гликозилирования. Отсутствие гликозилирования в этом участке коррелировало с улучшением связывания нейтрализующих антител широкого спектра
действия типа EDE1 (bnAb) с белком оболочки ZIKV (Rouvinski с соавт., 2015, Nature 520:109-13).
[004 93] После конструирования подтверждали экспрессию белка ZIKV-prME из плазмиды методом вестерн-блоттинга и непрямого анализа иммунофлуоресценции. Белковые экстракты, приготовленные из клеток, временно трансфицированных ZIKV-prME, анализировали в отношении экспрессии методом вестерн-блоттинга, используя антитело против пан-флавивируса (фигура 20С) и сыворотку, полученную от иммунизированных ZIKV-prME мышей (фигура 2 0D) . Экспрессию ZIKV-prME дополнительно выявляли методом ИФА путем окрашивания клеток 2 93Т, трансфицированных плазмидой ZIKV-prME, через 4 8 ч после трансфекции анти-ZIKV-prME специфическими антителами (фигура 2 0Е).
[004 94] ДНК-вакцина ZIKV-prMEnv индуцирует антиген-специфические Т-клетки у мышей C57BL/6.
[004 95] Оценивали способность вакцины на основе плазмиды ZIKV-prMEnv индуцировать клеточные иммунные ответы. Группы из четырех самок мышей C57BL/6 иммунизировали контрольным плазмидным каркасом (pVaxl) или вакциной на основе плазмиды ZIKV-prME три раза с 2-недельными интервалами путем внутримышечной (В/М) инъекции с последующей электропорацией в участке доставки (фигура 21А). Животных умерщвляли через 1 неделю после третьей инъекции, а общие спленоциты, собранные от каждого животного, оценивали в анализе ELISpot в отношении их способности секретировать интерферон-у (IFN-y) после ex vivo воздействия пептидных пулов, включающих ZIKV-prME. Результаты анализа показывают, что спленоциты от мышей, иммунизированных ZIKV-prME, демонстрировали клеточный иммунный ответ после стимуляции многосоставными пептидными пулами ZIKV-E (фигура 21В). Области ZIKVEnv, которые вызывали наибольший клеточный ответ, оценивали методом анализа ELISpot в матричном формате, используя 22 пептидных пула, состоящих из 15-меров (перекрывающихся по 11 аминокислотам), охватывающих весь белок ZIKV-prME. Несколько пулов продемонстрировали повышенные Т-клеточные ответы, при этом пептидный пул 15 демонстрировал
наибольшее число бляшкообразующих единиц (БОЕ) (фигура 21С). Анализ картирования для этой матрицы позволил выявить доминантный эпитоп prME "IRCIGVSNRD FVE GM (SEQ ID N0:17)" (ак 167-181). С помощью анализа с применением аналитического инструмента базы данных по иммунным эпитопам было подтверждено, что этот пептид содержит H2-Db ограниченный эпитоп, что подтверждает, что при этом гаплотипе происходит эффективный процессинг антигена.
[00496] Дополнительная оценка клеточной иммуногенности
вакцины ZIKV-prMEnv включала определение полифункциональных
свойств Т-клеток CD8+, собранных через 1 неделю после последней
иммунизации. Результаты показывают, что вакцинация ZIKV-prMEnv
повышала количественное соотношении бифункциональных
специфических в отношении вакцины Т-клеток, экспрессирующих TNF-ос (фактор некроза опухолей а) и IFN-y. Что важно, вакцинация ZIKV-prMEnv продемонстрировала сильную способность к расширению функциональности Т-клеток (фигура 21D).
[004 97] Кроме того, проводили сравнительные иммунные исследования с оптимизированными плазмидами, кодирующими последовательность prMEnv недавно выявленного Бразильского штамма ZIKV или оригинального штамма MR7 6 6 ZIKV. Индукцию клеточных иммунных ответов у мышей, иммунизированных любой из плазмид, измеряли через 1 неделю после третьей вакцинации с помощью анализа ELISpot для IFN-y после стимуляции спленоцитов пептидными пулами ZIKV-prMEnv. Результаты иллюстрируют, что Т-клеточные ответы, индуцированные консенсусной конструкцией ДНК-вакцины ZIKVprME постоянно были выше, чем генерируемые любой из этих двух неконсенсусных плазмидных вакцин (фигуры 2 7А и 2 7В) . Подробный анализ картирования клеточных ответов, индуцированных вакцинами ргМЕ против Бразильского штамма или MR7 66, выявил, что обе вакцины индуцировали существенный клеточный ответ против доминантного Env-специфического CTL эпитопа, как указано фигуре 21В и фигуре 21С, для консенсусной плазмиды ZIKV-prMEnv (данные не показаны). Консенсусный иммуноген постоянно индуцировал более сильные ответы в этих анализах Т-клеток при такой же дозе, и его
дополнительно оценивали в дополнительном анализе.
Получение рекомбинантного оболочечного белка ZIKV
[00498] В начале этих исследований не существовало
доступных коммерческих реагентов для оценки специфических анти-
ZIKV иммунных ответов. Следовательно, по необходимости создавали
рекомбинантный оболочечный белок ZIKV (rZIKV-E) для
осуществления анализа, проводимого в этом исследовании. Для
получения этого реагента консенсусную последовательность
оболочки ZIKV на основании консенсусного антигена вакцины ZIKV-
prME клонировали в экспрессионный вектор а рЕТЗОа Escherichia
coli (фигура 28А). Антиген rZIKV-E получали в культурах Е. coli,
очищали с помощью колоночной хроматографии на никеле и
анализировали с помощью ДСН-ПААГ, который показал
сверхэкспрессию белков прогнозируемого размера в лизате из
трансфицированных rZIKV-E бактерий, которые можно было выявить с
помощью анализа вестерн-блоттинга с применение антитела против
метки His (фигура 28В) . Сыворотка от мышей, иммунизированных
вакциной ZIKV-prME, связывалась с гZIKV-Env, который
использовали в качестве захватывающего антигена в анализе ИФА
(ферментный иммуносорбентный анализ; фигура 2 8С) . Коммерческое
антитело (обозначаемое как панфлавивирусное) , которое вступает в
реакцию с оболочечным белком множества флавивирусов, также
связывалось с rZIKV-E. Анализ вестерн-блоттинга
продемонстрировал, что иммунная сыворотка от иммунизированных ZIKV-prMEnv мышей специфически распознавала rZIKV-E (фигура 28D) . Эти данные указывают на то, что созданный rZIKV-E специфически реагирует с иммунной сывороткой от вакцинированных ZIKV-prMEnv мышей, следовательно, этот рекомбинантный белок использовали для дополнительных исследований иммуногенности.
Индукция функциональных гуморальных ответов у мышей C57BL/6 ДНК-вакциной ZIKV-prME
[004 99] Оценивали способность консенсусной вакцины ZIKV-prMEnv индуцировать гуморальные иммунные ответы у мышей. Группы из четырех мышей C57BL/6 три раза с 2-недельными интервалами внутримышечно (В/М) иммунизировали с помощью опосредованной электропорацией доставки 2 5 мкг плазмид пустой контрольной pVaxl
или консенсусной вакцины ZIKV-prMEnv. От каждой иммунизированной мыши получали сыворотку и исследовали методом ИФА в отношении ZIKV-специфических ответов IgG, используя иммобилизованный rZIKV-E в качестве захватывающего антигена. Существенное повышение количества анти-г1КУ-специфического IgG наблюдали на 21 сутки с дополнительным повышением сывороточных уровней IgG на 35 сутки (фигура 22А) . На 60 сутки сыворотка от вакцинированных животных показывала, что повышенные ответы ZIKV-специфического антитела сохранялись в течение длительного времени после последней инъекции. Что наиболее важно, сыворотка от вакцинированных животных содержала очень высокие уровни rZIKV-E-специфических антител, на что указывают конечные титры (фигура 22В) . Дополнительную оценку специфичности индуцированных вакциной антител проводили посредством скрининга объединенной сыворотки от мышей, инокулированных плазмидой ZIKVprMEnv, в отношении ее способности к выявлению rZIKV-E (оболочка) методом вестерн-блоттинга (фигура 22С) и окрашиванию ZIKV (штамм MR766)-инфицированных клеток методом анализа иммунофлуоресценции
(фигура 22D). Результаты по обоим видам анализа подтвердили специфичность индуцированных вакциной гуморальных ответов.
[00500] Кроме того, ответы ZIKV-специфического связывающего антитела также оценивали у мышей, иммунизированных плазмидами, кодирующими последовательности prMEnv из Бразильского штамма и штамма MR7 66, описанных выше. На 35 сутки (1 неделя после третьей иммунизации) сыворотку от мышей, иммунизированных pVaxl-и обеими неконсенсусными вакцинами, анализировали методом ИФА в отношении связывания с rZIKV-E. Этот анализ указывает, что плазмиды вакцин против MR7 6 6 и Бразильского штамма индуцировали существенное связывание антител, а иммунизация консенсусной ДНК-вакциной ZIKV-prME генерирует эффективный гуморальный ответ против rZIKV-E (фигура 27С и фигура 27D).
[00501] Анализ реакции нейтрализации бляшкообразования
(PRNT) проводили на 35 сутки для объединенной сыворотки от мышей, иммунизированных (3 х) контрольной плазмидой pVaxl, консенсусной вакциной на основе плазмиды ZIKV-prMEnv или
консенсусной вакциной на основе плазмиды ZIKV-C (капсид). В анализе PRNT использовали способ, адаптированный из ранее описанного метода анализа вируса Денге, вируса Западного Нила и других флавивирусов (Davis с соавт., 2001, J Virol 75:4040-7). Как показано на фигуре 22Е, вакцинация ZIKV-prME приводила к существенному нейтрализующему ответу с обратными титрами разведения PRNT50 для анти-ZIKV (значение, обратное сывороточному разведению, при котором ингибируется 50% контрольной инфекции ZIKV) 456 ± 5, тогда как мыши, вакцинированные ДНК-вакциной ZIKV-Сар демонстрировали титры (33 ± 6), которые всего лишь минимально превышали значения для вакцинированных контрольной плазмидой pVaxl мышей (титр=15 ± 2) .
Иммунные ответы и защита против ZIKV у мышей с отсутствием рецептора интерферона типа I (IFNAR_/~) после иммунизации ДНК-вакциной ZIKV-prME
[00502] Механизмы индуцированного ZIKV заболевания и иммунитета изучены плохо, а защитная природа в сравнении с гипотетической патогенной природой иммунного ответа на инфекцию ZIKV до сих пор не ясна (Rossi с соавт., 2016, J Rop Med Hyg 94:1362-9). Большинство штаммов мышей устойчивы к инфекции ZIKV,
однако было обнаружено, что мыши с отсутствием рецептора IFN-a/p (IFNAR_/~) восприимчивы к инфекции и заболеванию, при этом большинство из них погибает в течение 6-7 суток после стимуляции (Lazear с соавт., 2016, Cell Host Microbe 19:720-30). Исследовали способность консенсусной вакцины на основе плазмиды ZIKV-prME индуцировать клеточные и гуморальные иммунные ответы в этом мышином штамме. Самок мышей IFNAR_/" (п=4) возрастом от пяти до шести недель три раза с 2-недельными интервалами В/М иммунизировали с применением опосредованной электропорацией доставки контрольной плазмидой pVaxl или вакциной на основе плазмиды ZIKV ргМЕ. Сыворотку от иммунизированных мышей собирали на сутки 0, 14, 21 и 35, а спленоциты получали от мышей через 1 неделю после последней иммунизации (сутки 35) . Спленоциты от иммунизированных вакциной мышей демонстрировали четкий клеточный иммунный ответ, на что указывали уровни СОЕ на 106 клеток в
анализе ELISpot (фигура 29А) . Результаты анализа ИФА с применением rZIKV-E в качестве захватывающего антигена показывают выявляемое наличие анти-ZIKV сывороточного IgG на 14 сутки (титры ~ 1:1000), и эти уровни были повышены при последующих вакцинациях, причем титры связывающего антитела достигали по меньшей мере 1:100 000 (фигуры 2 9В и 2 9С) . Для сравнения, титр PRNT50 для образцов на 35 сутки после иммунизации составлял 1:60. Результаты указывают на то, что мыши IFNAR_/~, иммунизированные консенсусной вакциной ZIKV-prMEnv, способны генерировать анти-ZIKV клеточные и гуморальные иммунные ответы, подтверждая целесообразность дополнительного исследования на этой модели предполагаемого действия вакцины при патогенной стимуляции.
ZIKV-специфические клеточные и гуморальные иммунные ответы, вызываемые ДНК-вакциной ZIKV-prMEnv у отличных от человека приматов
[00503] Иммунизацию ОЧП проводили путем интрадермальной
иммунизации с применением интрадермальной электропорации на
основании недавних исследований, продемонстрировавших
эффективные иммунные ответы в интрадермальном формате с применением более низкого напряжения (Hutnick с соавт., 2012, Hum gene Ther 23:943-50; Broderick с соавт., Mol Ther Nucleic Acids l:ell) . Макакам резус (MP; п=5/группа) интрадермально с применением электропорации вводили 2,0 мг плазмидной вакцины, при этом каждое животное вакцинировали дважды с перерывом 4 недели. Сыворотку и мононуклеарные клетки периферической крови
(МКПК) собирали на 0 сутки (до иммунизации) и на б неделю (2 недели после второй иммунизации). Анализ ELISpot МКПК до иммунизации и через б недель, которые ex vivo стимулировали пептидными пулами ZIKV-prMEnv, показал, что иммунизация ZIKV-prMEnv индуцировала сильные анти-ZIKV Т-клеточные ответы у MP
(фигура 2ЗА).
[00504] Ответы специфического анти-ZIKV антитела в сыворотке от вакцинированных MP оценивали методом ИФА. На б неделю rZIKV-Env-специфические связывающие антитела выявлялись у
животных, вакцинированных ZIKV-prMEnv (фигура 2 3В). Конечные титры определяли для каждого животного на 2 неделю (после 1 иммунизации) и б неделю (после 2 иммунизации; фигура 2 3С) . Результаты ИФА подтверждали методом вестерн-блоттинга, используя сыворотку MP от отдельных вакцинированных животных (фигура 23D). Нейтрализующую активность антител, вырабатываемых у MP на б неделю, оценивали методом анализа PRNT50. Все вакцинированные обезьяны демонстрировали существенную нейтрализующую активность с обратными титрами разведения PRNT50 для анти-ZIKV в диапазоне от 161 до 1380 (среднее 501 ± 224 стандартная погрешность среднего; фигура 2 3Е) . Титры PRNT не коррелируют напрямую с титром ИФА (данные не показаны).
[00505] Способность иммунной сыворотки от вакцинированных ОЧП блокировать инфекцию ZIKV клеток Vero, клеток нейробластомы (SK-N-SH) или нейральных клеток-предшественниц (U-87MG) in vitro исследовали методом ИФА. Штаммы ZIKV Q2 (MR7 6 6 или PR2 09) предварительно инкубировали в сыворотке или разведенной иммунной сыворотке ОЧП и добавляли к монослоям каждого типа клеток. Через четверо суток после инфекции ZIKV-положительные клетки определяли методом ИФА, используя антитело против пан-флавивирусов (фигуры 3 0А-3 0С) , и проводили количественную оценку ZIKV-положительных клеток (фигуры 3 0B-3 0D). Сыворотка от вакцинированных ZIKA-prME MP ингибировала инфекцию ZIKV в каждом типе клеток.
Защита против инфекции и заболевания ZIKV у мышей IFNAR_/" после иммунизации ZIKV-prME
[00506] В пробных исследованиях мышей IFNAR("/_) (п=10) возрастом 5-6 недель стимулировали 1 х106 бляшкообразующих единиц (БОЕ) изолята ZIKV-PR209, который вводили подкожным (П/К); внутрибрюшинным (В/Б); внутричерепным; или внутривенным (В/В) путями. После стимуляции животных осматривали в отношении клинических признаков инфекции, что включало обычное измерение массы тела, а также оценку других признаков предсмертного состояния, таких как слабость или паралич задних конечностей. Во время первых 4 суток после инокуляции не наблюдали никаких
изменений во внешнем виде мышей. Однако после четвертых суток мыши в каждой группе демонстрировали уменьшение общей активности, снижение подвижности и сгорбленную позу, часто сопровождающиеся слабостью в задних конечностях, сокращением приема воды и очевидной потерей массы. Животные погибали от инфекции в период между б сутками и 8 сутками вне зависимости от пути вирусной стимуляции (фигура 31А-35Е). На основании этих данных в последующих исследованиях для оценки опосредованной ZIKV-prME защиты в этой модели использовали П/К путь для стимуляции.
[00507] Далее оценивали защитную эффективность вакцины ZIKV-prMEnv в этой мышиной модели IFNAR_/~. Две группы мышей
(п=10) иммунизировали вакциной ZIKV-prME (25 мкг вакцины) В/М путем с помощью опосредованной электропорацией доставки. Также две группы из 10 мышей иммунизировали контрольным вектором pVaxl В/М путем с помощью опосредованной электропорацией доставки. Иммунизацию проводили два раза с двухнедельным перерывом и стимулировали всех животных на 21 сутки (1 неделя после второй иммунизации). Одна подгруппа контрольных и вакцинированных мышей получала 1 х 106 БОЕ ZIKV-PR2 0 9 П/К путем, а другую подгруппу из каждой группы стимулировали общим количеством 2 х 106 БОЕ ZIKV-PR209 П/К путем. Через 3 недели после стимуляции выжило 100% из всех вакцинированных ZIKV-prME животных, тогда как только 30% из стимулированных одной дозой или 10% из стимулированных двойной дозой контрольных животных выжило (фигуры 2 4А и 2 4В) . При всех вариантах стимуляции у вакцинированных животных отсутствовали признаки заболевания, включая отсутствие признаков потери массы
(фигуры 24С и 24D) . Инфицирование контрольных мышей вирусом ZIKV-PR2 0 9 приводило к заметному снижению массы тела наряду со снижением подвижности, сгорбленной позой, хождением на задних лапах с опорой на костяшки пальцев и/или параличом одной или обеих задних конечностей (фигуры 24Е и 24F).
[00508] Оценивали потенциальную способность однократной иммунизации ДНК-вакциной ZIKVprME защищать мышей IFNAR_/" от стимуляции ZIKV. Группы из 10 мышей один раз В/М иммунизировали
с применением электропорации контрольной плазмидой или вакциной
ZIKV-prME и стимулировали через 2 недели с введением двойной
общей дозы 2х106 БОЕ ZIKV-PR209. Через три недели после
стимуляции выжило 10 0% вакцинированных ZIKV-prME животных, тогда
как из контрольных животных выжило только 10% (фигура 25А) .
Чтобы определить глобальные гистопатологические изменения,
получали сагиттальные срезы ткани головного мозга толщиной 5
мкм, окрашивали их в отношении ядерных структур и
контрокрашивали в отношении цитоплазматических структур,
используя эозин (фигура 2 5В) . Мышей умерщвляли на 7 или 8 сутки
после стимуляции для анализа гистологии и вирусной нагрузки.
Инфекция ZIKV приводила к тяжелой патологии головного мозга у
мышей. Срезы ткани головного мозга невакцинированных контрольных
(pVaxl) мышей демонстрировали наличие ядерных фрагментов в
нейтрофилах (фигура 2 5В); периваскулярную инфильтрацию сосудов в
коре, лимфоцитарную инфильтрацию и дегенеративные клетки в коре
головного мозга (фигура 2 5В) и дегенеративные нейроны в
гиппокампе (фигура 2 5В). В противоположность этому у
вакцинированных ZIKV ргМЕ животных наблюдалась нормальная
гистопатология тканей головного мозга (фигура 25В), что
подтверждает, что защитные антитела, индуцированные иммунизацией
синтетической вакциной ZIKA-prME, могут ограничивать
индуцированное вирусом заболевание в головном мозге. Это наблюдение демонстрирует потенциал вакцинации в отношении защиты головного мозга в этой модели. В соответствии с уменьшением потерь массы тела и нарушений подвижности у вакцинированных мышей после стимуляции ZIKV наблюдалась существенно меньшая вирусная нагрузка в крови (фигура 2 5С) и головном мозге (фигура 2 5D) вакцинированных ZIKV-prME животных по сравнению со стимулированными вирусом вакцинированными pVaxl животными в группах стимуляции высокими дозами (2 х 106 БОЕ) . Вместе эти данные демонстрируют, что опосредованные ДНК-вакциной ZIKV-prME иммунные ответы могут защищать мышей против стимуляции ZIKV.
Пассивный перенос анти-ZIKV иммунной сыворотки защищает мышей от инфекции ZIKV
[00509] Далее проверяли, будет ли перенос иммунной сыворотки от вакцинированных ZIKV-prMEnv MP предотвращать ZIKV-опосредованный патогенез у мышей IFNAR_/~. С этой целью 150 мкг эквивалентного IgG (PRNT50~1/160) от MP на б неделе адоптивно переносили мышам IFNAR_/~ через 1 сутки после стимуляции вирусом ZIKV. Было включено две группы контрольных мышей, одна группа получало доиммунную сыворотку от MP, а другая группа получала фосфатно-солевой буфер (ФСБ). Мыши, которые получали ФСБ или контрольную сыворотку, теряли от 15 до 2 5% исходной массы тела в течение инфекции и все погибали через 6-8 дней после инфицирования. Когда вакцинную иммунную сыворотку от MP переносили восприимчивым к инфекции мышам, животные теряли массу на 3 и 4 сутки, но впоследствии восстанавливали ее, начиная с 5 суток, и в конечном итоге 8 0% выжило после инфекционной стимуляции (фигура 2 6А), демонстрируя способность переноса сыворотки ОЧП обеспечивать защиту от клинических проявлений инфекции ZIKV после вирусной стимуляции (фигура 2 6В) . В повторных экспериментах, проводимых для оценки эффективности переноса иммунной сыворотки в защите против стимуляции ZIKV, выживаемость среди реципиентов иммунной сыворотки ZIKV-prME находилась в диапазоне от 80 до 100%. Эти исследования показывают, что иммунная сыворотка, полученная после применения анти-ZIKV вакцины, имела способность обеспечивать существенную защиту от инфекции ZIKV в отсутствие приобретенного адаптивного анти-ZIKV иммунного ответа.
Вакцинация консенсусной конструкцией ZIKV-prME [00510] Недавнее распространение ZIKV и связанного с ним патогенеза среди людей вызвало серьезную озабоченность. На сегодняшний день не существует лицензированных вакцин или терапевтических средств для этого острого инфекционного агента. Совсем недавно было показано, что коллекция экспериментальных вакцин против ZIKV снижает вирусную нагрузку после стимуляции в непатогенных животных моделях инфекции (Larocca с соавт., 2 016, Nature 536:474-8; Abbink с соавт., 2016, Science 353:1192-32) Эти данные являются очень обнадеживающими. В этой связи важно
исследовать дополнительные подходы на основе новых вакцин, нацеленных на ZIKA, в дополнительных моделях. В данном случае оценивали синтетическую ДНК-вакцину, сконструированную для экспрессии нового консенсусного антигена ZIKV-prM и Е в отношении иммуногенности после усиленной электропорацией иммунизации у мышей и отличных от человека приматов. Согласно наблюдениям вакцинация ДНК ZIKV-prME была иммуногенной и приводила к генерации антиген-специфических Т-клеток и связывающих и нейтрализующих антител как у мышей, так и у ОЧП. Что уникально, ОЧП иммунизировали ZIKV-prME посредством электропорации интрадермальным путем, при котором применяется меньшее напряжение и меньшая площадь трансфекции, чем в случае В/М электропорации, как недавно было описано (Trimble с соавт., 2016, Lancet 386:2078-88) Дополнительное исследование таких подходов может обеспечить преимущества в клинических условиях.
[00511] Консенсусная конструкция ZIKV-prME включает
запланированное изменение потенциального мотива NXS/T, который
удаляет предполагаемый участок гликозилирования. Удаление
гликозилирования в этом участке коррелировало с улучшением
связывания ЬпАЬ (нейтрализующих антител широкого спектра
действия) типа EDE1 с белком ZIKV-E (Muthumani с соавт., 2016,
Sci Transl Med 7:301ral32). Ответы антител, индуцированные
консенсусной ZIKV-prME оказались сильными или, в некоторых
случаях, превосходили по значению ответы, вызываемые
разработанными аналогичным образом вакцинами ZIKV-prME-MR76 6 и
ZIKV-prME-Бразилия. Эти конструкции совпадали по
последовательности с исходным изолятом ZIKV-MR7 66 или недавно циркулирующим штаммом ZIKV из Бразилии соответственно. Хотя они и являются второстепенными, эти исследования обеспечат большее понимание действия таких включенных конструктивных изменений на индуцированные иммунные ответы.
[00512] Так как для ZIKV существует несколько моделей патогенной стимуляции, сравнивали предполагаемую защитную природу иммунных ответов вакцины ZIKV-prME у мышей C57BL/6 и IFNAR_/". Оба штамма мышей демонстрировали сильный гуморальный
иммунный ответ при иммунизации ZIKV-prME. Также индуцировались Т-клеточные ответы, но они оказались более сильными у C57BL/6 дикого типа по сравнению с индуцированными у животных IFNAR_/~, что подтверждает наличие частичного дефекта в переходе от врожденного к адаптивному иммунитету, как и ожидалось в связи с обусловленным нокаутом фенотипом у мышей. Однако, учитывая индукцию антиген-специфического иммунитета, эта модель была полезна для оценки влияния вакцины как на инфекцию, так и на патогенез. Однократная вакцинация ZIKV-prME мышей IFNAR_/~ защищала от заболевания и гибели в этой модели, включая защиту от нейропатогенеза. Считается, что нейтрализующие флавивирусы антитела, направленные против антигена Env, играют ключевую роль в защите против заболевания; эта идея прямо подтверждается экспериментами по пассивному переносу антител в животных моделях и непрямо - эпидемиологическими данными проспективных исследований в географических районах, в которых распространены переносимые москитами вирусные инфекции (Weaver с соавт., 2016, Antiviral Res 130:69-80; Roa с соавт., 2016, Lancet 387:843; Samarasekera с соавт., 2016, Lancet 387:521-4). Хотя иммунизация мышей IFNAR_/" ДНК-вакциной ZIKV-prME, а также перенос сыворотки от иммунизированных ОЧП обеспечивали защиту в этой мышиной модели, вакцинированные IFNAR_/~ в отличие от мышей, которым переносили сыворотку, демонстрировали улучшенный контроль потери массы, что служит свидетельством контроля патогенеза. Хотя необходимы дополнительные исследования, этот результат потенциально позволяет предположить роль Т-клеточного ответа в этом аспекте защиты в этой модели. Кроме того, наблюдали, что контрольные мыши IFNAR_/", которые восстановились после стимуляции, оставались положительными в отношении вируса согласно данным ПЦР в течение по меньшей мере нескольких недель, что позволяет предположить наличие дополнительной пользы от вакцинации. Это исследование подтверждает потенциал вакцинации и, в данном случае, вакцинации синтетической ДНК, в отношении влияния на предотвращение заболевания у восприимчивых хозяев.
[00513] Понятно, что вышеприведенное подробное описание и
сопроводительные примеры являются всего лишь иллюстративными, и их не следует воспринимать как ограничение объема изобретения, который определяется исключительно прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.
Для специалистов в данной области техники очевидно существование различных изменений и модификаций описанных вариантов реализации. Такие изменения и модификации, включая, без ограничения, относящиеся к химическим структурам, заместителям, производным, промежуточным соединениям, синтезу, композициям, составам или способам применения изобретения, можно осуществлять, не отступая от его сущности и объема.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> WEINER, David
MUTHUMANI, Karupiah Flingai, Seleeke SARDESAI, Niranjan Elliott, Sarah Yan, Jian Patel, Ami
<120> ДНК-КОНСТРУКЦИИ АНТИТЕЛ И СПОСОБ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ <130> 206108-0033-30-WO.606194 <150> US 62/311,316
<151> 2016-03-21
<150> US 62/396,750
<151> 19.09.2016
<150> US 62/417,093 <151> 03.11.2016
<150> US 62/417,093 <151> 03.11.2016
<150> US 62/332,381 <151> 04.05.2016
<150> US 62/376,162 <151> 17.08.2016
<150> US 62/429,454 <151> 02.12.2016
<150> US 62/429,473 <151> 02.12.2016
<160> 171
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1 <211> 738
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 1
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe
35 40 45
Ser Thr Tyr Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Val Ile Pro Leu Leu Thr Ile Thr Asn Tyr Ala
65 70 75 80
Pro Arg Phe Gln Gly Arg Ile Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Thr Gly Trp Gly Trp Leu Gly Lys
115 120 125
Pro Ile Gly Ala Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys
465 470 475 480
Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
485 490 495
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val
500 505 510
Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Glu Ile Val
515 520 525
Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Gln Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
530 535 540
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Asn Asn Lys Leu Ala
545 550 555 560
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly
565 570 575
Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ala Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
580 585 590
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp
595 600 605
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Gln Ser Leu Ser Thr Phe
610 615 620
Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
625 630 635 640
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
645 650 655
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
660 665 670
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
675 680 685
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
690 695 700
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
705 710 715 720
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
725 730 735
Gly Glu
<210> 2
<211> 768
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 2
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Phe Leu
20 25 30
Arg Gly Val Gln Cys Gln Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
35 40 45
Gln Pro Gly Ser Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp
50 55 60
Phe Ser Arg Gln Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
65 70 75 80
Leu Glu Trp Val Ala Phe Ile Lys Tyr Asp Gly Ser Glu Lys Tyr His
85 90 95
Ala Asp Ser Val Trp Gly Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
100 105 110
Asp Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala
115 120 125
Thr Tyr Phe Cys Val Arg Glu Ala Gly Gly Pro Asp Tyr Arg Asn Gly
130 135 140
Tyr Asn Tyr Tyr Asp Phe Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asn Tyr His Tyr Met
145 150 155 160
Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
165 170 175
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
180 185 190
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
195 200 205
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
210 215 220
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
225 230 235 240
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
245 250 255
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
260 265 270
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser
500 505 510
Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu
515 520 525
Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu Leu Thr
530 535 540
Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala
545 550 555 560
Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Asn Gly
565 570 575
Thr Ser Asn Asp Val Gly Gly Tyr Glu Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln
580 585 590
His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg
595 600 605
Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr
610 615 620
Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Gly Asp Tyr
625 630 635 640
Tyr Cys Lys Ser Leu Thr Ser Thr Arg Arg Arg Val Phe Gly Thr Gly
645 650 655
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr
660 665 670
Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu
675 680 685
Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp
690 695 700
Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro
705 710 715 720
Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu
725 730 735
Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr
740 745 750
His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
755 760 765
<210> 3
<211> 792
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь (VH-CH1) ВИЧ-1
120
180
240 300 360 420 480
540
600 660
720 780 792
Env Fab <400> 3
aagcttgccg ccaccatgga gactgataca ctgctgctgt gggtgctgct gctgtgggtg ccagggtcaa ccggagatgg ggctcaggtc cagctggtcc agagcggcgg acagatgaag aaacccggcg agagcatgag gatctcctgc agagcatctg gatacgagtt catcgactgt accctgaact ggattaggct ggctcctgga aagagaccag agtggatggg gtggctgaaa ccacgagggg gagcagtgaa ttacgcccgg cccctgcagg gacgagtgac catgaccagg gacgtgtaca gcgataccgc cttcctggag ctgcggtccc tgacagtgga cgatactgct gtctacttct gcacacgcgg aaagaactgt gactataatt gggattttga acactggggc cggggaacac ccgtgatcgt cagctccccc agtactaagg gaccttcagt gtttccactg gccccctcta gtaaatccac ctctggaggg acagccgctc tgggatgcct ggtgaaagat tatttccccg aacctgtgac cgtcagttgg aactcagggg ctctgacttc tggcgtgcac acctttcctg cagtcctgca gtcaagcggg ctgtacagtc tgtcctctgt ggtcactgtg cctagttcaa gcctgggcac tcagacctat atttgtaacg tgaatcataa gccatccaat acaaaagtgg acaaaaaagc cgaacccaaa tcctgttacc cttatgatgt gcccgactac gcctgactcg ag
<210> 4 <211> 756
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая цепь (VL-CL) ВИЧ-1 Env Fab
<400> 4
aagcttgccg ccaccatgga aaccgataca ctgctgctgt gggtgctgct gctgtgggtg 60
ccaggaagta ccggggatgg ggctcaggtc cagattgtgc tgactcagtc ccctgggacc 120
ctgtctctga gtccaggcga gacagctatc atttcatgcc gaactagcca gtacggcagc 180
ctggcttggt atcagcagcg accaggacag gcaccacgac tggtcatcta ctcaggcagc 240
acaagggccg ctggcatccc cgacaggttc tccggcagca ggtgggggcc tgattacaac 300
ctgactatct ctaatctgga gagtggggac tttggcgtgt actattgcca gcagtatgag 360
ttcttcggcc agggaactaa ggtgcaggtg gacatcaaaa gaaccgtggc agccccatcc 420
gtcttcattt ttcccccttc tgatgagcag ctgaagtcag gcaccgccag cgtggtctgt 480
ctgctgaaca atttctaccc ccgggaagcc aaggtgcagt ggaaagtgga caacgctctg 540
cagagtggaa attcacagga gagcgtgacc gaacaggact ccaaggattc tacatatagt 600
ctgagcagca ccctgaccct gagtaaagca gattacgaga agcacaaagt gtatgcctgt 660
gaagtcacac atcagggcct gaggagcccc gtgactaaaa gtttcaaccg aggagagtgc
720
tacccttatg atgtgcccga ctacgcctaa ctcgag 756
<210> 5
<211> 731
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VRC01 IgG
<400> 5
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro
20 25 30
Gly Glu Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile
35 40 45
Asp Cys Thr Leu Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu
50 55 60
Trp Met Gly Trp Leu Lys Pro Arg Gly Gly Ala Val Asn Tyr Ala Arg
65 70 75 80
Pro Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Val Tyr Ser Asp Thr
85 90 95
Ala Phe Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Phe Cys Thr Arg Gly Lys Asn Cys Asp Tyr Asn Trp Asp Phe Glu His
115 120 125
Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser Pro Ser Thr Lys Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
180 185 190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Pro Lys
225 230 235 240
Ser Cys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg
465 470 475 480
Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
485 490 495
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu
500 505 510
Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser
515 520 525
Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys
530 535 540
Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly
545 550 555 560
Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Ala Ala Gly
565 570 575
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu
580 585 590
Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln
595 600 605
Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys
610 615 620
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
625 630 635 640
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
645 650 655
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
660 665 670
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
675 680 685
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
690 695 700
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser
705 710 715 720
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 6
<211> 819
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Оптимизированная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь IgG
<400> 6
ggatccgcca ccatggaaac cgacactctg ctgctgtggg tgctgctgct gtgggtgccc 60
ggctcaacag gcgacggcgc tcaggtccag ctggtccagt ctggagctgt gatcaagacc 120
cctggcagct ccgtcaaaat ttcttgcaga gcaagtggct acaacttccg ggactatagc 180
atccactggg tgcggctgat tcctgataag ggatttgagt ggatcggctg gatcaagcca 240
ctgtggggcg ctgtgtccta cgcaaggcag ctgcaggggc gcgtctccat gacacgacag 300
ctgtctcagg acccagacga tcccgattgg ggggtggcct acatggagtt cagtggactg 360
actcccgcag acaccgccga atatttttgc gtgcggagag gctcctgcga ctactgtggg 420
gatttcccat ggcagtattg gtgtcaggga actgtggtcg tggtctctag tgcatcaacc 480
aagggcccca gcgtgtttcc tctggcccca tcaagcaaaa gtacatcagg aggaactgca 540
gctctgggat gtctggtgaa ggattacttc cccgagcctg tgaccgtcag ctggaactcc 600
ggagcactga cctccggagt gcacacattt cccgctgtcc tgcagtcctc tgggctgtac 660
tctctgagtt cagtggtcac agtgcctagc tcctctctgg gcacccagac atatatctgc 720
aacgtcaatc ataagccaag taatactaaa gtggacaaga aagtcgaacc caaatcatgt 780
tacccctatg acgtgcctga ttatgcttga taactcgag 819
<210> 7
<211> 753
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Оптимизированная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь IgG
<400> 7
ggatccgcca ccatggagac tgatacactg ctgctgtggg tgctgctgct gtgggtgcct 60
ggctcaaccg gcgacggggc tcaggtccag attgtgctga cccagagccc tggcatcctg 120
tcactgagcc caggagagac cgcaacactg ttctgcaagg cctcccaggg cgggaacgct 180
atgacatggt accagaaacg gagaggacag gtgccccgac tgctgatcta tgacacttca 240
aggcgagcaa gcggagtgcc tgatcgattt gtcggcagcg gctctgggac agacttcttt 300
ctgactatta ataagctgga cagagaggat ttcgctgtgt actattgcca gcagtttgaa 360
ttctttggac tgggcagcga gctggaagtg cacaggaccg tcgccgctcc aagtgtgttc 420
atttttcccc ctagcgatga gcagctgaaa tccgggacag cctctgtggt ctgtctgctg 480
aacaatttct acccccgcga agcaaaggtg cagtggaaag tcgacaacgc cctgcagagt 540
ggcaattcac aggagagcgt gaccgaacag gactccaagg attctacata tagtctgagc 600
tccactctga ccctgtctaa agctgattac gagaagcaca aagtgtatgc atgcgaagtc 660
actcatcagg gcctgtctag tcctgtgacc aagagcttta accgagggga gtgttaccca 720
tatgacgtcc ccgattacgc ctgataactc gag 753
<210> 8
<211> 18
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> IgE1 Сигнальный пептид VRC-1 IgG
<400> 8
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
<210> 9
<211> 126
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная тяжелая область VRC01 IgG
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile Asp Cys
20 25 30
Thr Leu Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Lys Pro Arg Gly Gly Ala Val Asn Tyr Ala Arg Pro Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Val Tyr Ser Asp Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Lys Asn Cys Asp Tyr Asn Trp Asp Phe Glu His Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser Pro Ser Thr Lys Gly
115 120 125
<210> 10
<211> 98
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 1 (CH1) VRC01 IgG
<400> 10
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
1 5 10 15
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
20 25 30
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
35 40 45
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
50 55 60
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
65 70 75 80
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Pro Lys
85 90 95
Ser Cys
<210> 11
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Шарнирная область VRC01 IgG
<400> 11
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 12
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 2 (CH2) VRC01 IgG
<400> 12
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 3 (CH3) VRC01 IgG
<400> 13
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 14
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Furin Cleavage Site of VRC01 IgG
<400> 14
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
<210> 15
<211> 22
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> GSG Linker and P2A Peptide of VRC01 IgG
<400> 15
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro <20>
<210> 16
<211> 104
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная тяжелая область VRC01 IgG
<400> 16
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser
35 40 45
Gly Ser Thr Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg
50 55 60
Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp
65 70 75 80
Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr
85 90 95
Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg
<100>
<210> 17
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная легкая область (CL, каппа) VRC01 IgG
<400> 17
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105
<210> 18
<211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<223> Сигнальный пептид тяжелой цепи человеческого IgG ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 18
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala
<210> 19
<211> 154
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная тяжелая область ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 19
Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Phe Leu Arg Gly Val
1 5 10 15
Gln Cys Gln Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly
20 25 30
Ser Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg
35 40 45
Gln Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
50 55 60
Val Ala Phe Ile Lys Tyr Asp Gly Ser Glu Lys Tyr His Ala Asp Ser
65 70 75 80
Val Trp Gly Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asp Thr Leu
85 90 95
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
100 105 110
Cys Val Arg Glu Ala Gly Gly Pro Asp Tyr Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr
115 120 125
Tyr Asp Phe Tyr Asp Gly Tyr Tyr Asn Tyr His Tyr Met Asp Val Trp
130 135 140
Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 145 150
<210> 20
<211> 98
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 1 (CH1) ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val
<210> 21
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Шарнирная область ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 21
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 22
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 2 (CH2) ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 22
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 3 (CH3) ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 23
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 24
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Участок расщепления фурином ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 24
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser 1 5
<210> 25
<211> 22
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер GSG и пептид P2A ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 25
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20
<210> 26
<211> 20
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Сигнальный пептид человеческой лямбда легкой цепи ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 26
Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu Leu Thr Cys Cys Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Asn Ser 20
<210> <211> <212> <213>
27 110
Белок
Искусственная последовательность
<220> <223>
Вариабельная легкая область (VL) ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 27
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Asn Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Glu Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Val Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Arg Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 28
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная легкая область (CL, лямбда) ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 28
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105
<210> 29 <211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Сигнальный пептид человеческой тяжелой цепи ВИЧ-1 Env-4E10 Ig <400> 29
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala
<210> 30
<211> 127
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная тяжелая область ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Val Ile Pro Leu Leu Thr Ile Thr Asn Tyr Ala Pro Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ile Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Thr Thr Gly Trp Gly Trp Leu Gly Lys Pro Ile Gly
100 105 110
Ala Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 98
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 1 (CH1) ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 31
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 32
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Шарнирная область ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 32
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 33
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 2 (CH2) ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 33
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная тяжелая область 3 (CH3) ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 34
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 35
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Участок расщепления фурином ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 35
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser 1 5
<210> 36
<211> 22
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер GSG и пептид P2A ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 36
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20
<210> <211> <212> <213>
Белок
Искусственная последовательность
<220>
<223> Сигнальный пептид человеческой каппа легкой цепи ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 37
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly 20
<210> 38
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная легкая область (VL) ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 38
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Gln Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Asn Asn
20 25 30
Lys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ala Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Gln Ser Leu
85 90 95
Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 100 105
<210> 39
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Константная легкая область (CL, каппа) ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 39
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
1 5 10 15
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
20 25 30
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
35 40 45
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
50 55 60
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
65 70 75 80
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
85 90 95
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 100 105
<210> 40
<211> 744
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая VH-CH1 анти-Her^ Fab
<400> 40
ggatccgcca ccatggactg gacatggatt ctgtttctgg tcgccgccgc tacaagagtg 60
cattccgaag tgcagctggt cgagagtgga gggggactgg tgcagcccgg cggatctctg 120
cgactgagtt gcgccgcttc aggcttcacc tttacagact acaccatgga ttgggtgaga 180
caggcacctg gcaagggact ggagtgggtg gctgatgtca acccaaatag tgggggctca 240
atctacaacc agaggttcaa gggcaggttc accctgagcg tggacaggtc caaaaacact 300
ctgtatctgc agatgaattc tctgcgggct gaagataccg cagtctacta ttgcgcccgc 360
aatctgggcc caagcttcta ctttgactat tgggggcagg gcacactggt gactgtcagc 420
tccgcttcta caaagggacc aagcgtgttc ccactggcac cctctagtaa atccacctct 480
ggagggacag cagccctggg ctgtctggtg aaagactatt tccccgagcc tgtgactgtc 540
agctggaact ccggagcact gactagcgga gtgcacacct ttccagccgt cctgcagtca 600
agcggcctgt actccctgtc ctctgtggtc acagtgccta gttcaagcct gggaactcag 660
acctatattt gtaatgtgaa ccataaacca agcaatacaa aggtggacaa gaaggtggaa 720
ccaaaatcct gctgataact cgag 744
<210> 41
<211> 240
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность VH-CH1 анти-Her^ Fab
<400> 41
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
20 25 30
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
35 40 45
Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln
65 70 75 80
Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr
85 90 95
Leu Tyr Leu
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
<210> 42 <211> 720 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая VL-CL анти-Her^ Fab
<400> 42
ggatccgcca ccatggattg gacttggatt ctgttcctgg tcgccgccgc tacccgcgtg 60
cattccgata ttcagatgac tcagagcccc tcctcactgt cagccagcgt gggcgaccga 120
gtcaccatca catgcaaagc ttctcaggat gtgagtattg gggtcgcatg gtaccagcag 180
aagccaggca aagcacccaa gctgctgatc tattccgcct cttacaggta tacaggagtg 240
cccagcagat tcagtggctc aggaagcggg actgacttta ctctgaccat cagctccctg 300
cagcctgagg atttcgctac ctactattgc cagcagtact atatctaccc atataccttt 360
ggccagggaa caaaagtgga gatcaagcgg accgtggccg ctccctccgt cttcattttt 420
cccccttctg acgaacagct gaagagcgga acagcaagcg tggtctgtct gctgaacaat 480
ttctaccctc gcgaggccaa agtgcagtgg aaggtcgata acgctctgca gtccgggaat 540
tctcaggaga gtgtgactga acaggactca aaagatagca cctattccct gtctagtaca 600
ctgactctga gcaaggcaga ctacgaaaag cacaaagtgt atgcctgtga ggtcacccac 660
caggggctgt caagtcccgt caccaagtcc ttcaatagag gcgaatgctg ataactcgag
720
<210> 43
<211> 232
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность VL-CL анти-Her^ Fab
<400> 43
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
20 25 30
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser
35 40 45
Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
85 90 95
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr
100 105 110
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230
<210> 44 <211> 2241 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая анти-DENV человеческий
IgG
<400> 44
ggatccgcca ccatggactg gacttggagg attctgtttc tggtcgccgc cgctactggg 60
actcacgctc aggcacatct ggtcgaatct ggaggaggag tggtccagcc tggccgatcc 120
ctgcgactgt cttgcgcagc tagcgccttc aacttcagca caaacgcaat gcactgggtg 180
cgacaggcac caggcaaggg actggagtgg gtcgctgtga tctcatacga cggaagccat 240
aagtactatg cagattctgt gaaaggccgg ttcaccattt ccagggacaa ttctaagaac 300
accctgtatc tgcagatgaa tagcctgcgc gcagccgata ccgcagtgta ctattgcgca 360
actgtcggcg tgctgacctg gccagtgaac gccgaatact ttcaccattg gggacagggc 420
agtctggtct cagtgagctc cgcaagtact aagggaccat cagtgttccc actggcaccc 480
tctagtaaat ctactagtgg cgggaccgct gcactgggat gtctggtgaa ggactatttc 540
cccgagcctg tcaccgtgag ctggaattcc ggagccctga caagcggcgt ccacactttt 600
cccgctgtgc tgcagtcaag cggactgtac tccctgtcct ctgtggtcac tgtgcctagt 660
tcaagcctgg gcactcagac ctatatctgc aatgtgaacc acaagccctc taacaccaaa 720
gtcgacaaga aagtggaacc taagagctgt gataaaacac atacttgccc accttgtcca 780
gcaccagagc tgctgggagg accaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacaca 840
ctgatgatta gccggacacc tgaagtcact tgcgtggtcg tggacgtgtc ccacgaggac 900
cccgaagtca agtttaattg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataacgc caagaccaaa 960
ccccgggagg aacagtacaa tagcacatat agagtcgtgt ccgtcctgac tgtgctgcat 1020
caggattggc tgaatgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ctaacaaggc tctgcctgca 1080
ccaatcgaga aaaccattag caaggctaaa ggccagccta gggaaccaca ggtgtacaca 1140
ctgcctccaa gtcgcgacga gctgaccaag aatcaggtct ccctgacatg tctggtgaaa 1200
ggcttctatc catcagatat cgccgtggag tgggaaagca acgggcagcc cgaaaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggactct gatggcagtt tctttctgta ttctaagctg 1320
accgtggaca aaagtagatg gcagcagggg aatgtctttt catgtagcgt gatgcacgag 1380
gccctgcaca accattacac acagaagtcc ctgtctctga gtcccggaaa gaggggccgc 1440
aaacggagat cagggagcgg agctactaat ttcagcctgc tgaaacaggc aggggatgtg 1500
gaggaaaacc ccggacctat ggcttggacc ccactgttcc tgtttctgct gacatgctgt 1560
cccgggggca gcaattctca gagtgtcctg acacagccac catcagtgag cggagcacca 1620
ggacagaggg tgaccatctc ctgcacaggc agcagcagca acattggcgc cgggtacgac 1680
gtgcattggt atcagcagct gcccggcacc gctcctaagc tgctgatctg tggcaacaat 1740
aaccgcccat ctggggtgcc cgatcgattc tccggctcta aaagtgggac ttcagccagc 1800
ctggctatta ccggcctgca ggccgaggac gaagctgatt actattgcca gagctacgac 1860
tcaagcctga ccggagtcgt gttcggagga ggaaccaagc tgacagtcct gggacagcct 1920
aaagccgctc caagcgtgac actgtttcct ccatcctctg aggaactgca ggcaaacaag 1980
gccaccctgg tgtgcctgat ttccgacttc taccccgggg cagtcactgt ggcttggaag 2040
gcagatagtt cacctgtcaa agccggagtg gagactacca caccatcaaa gcagagcaat 2100
aacaaatacg cagccagctc ctatctgtcc ctgacccctg agcagtggaa gtctcacaaa 2160
tcctattctt gccaggtcac tcacgaagga agcactgtgg agaaaactgt cgcaccaacc 2220
gaatgtagtt gataactcga g 2241
<210> 45
<211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность анти-DENV человеческого IgG
<400> 45
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Ala His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Phe Asn Phe
35 40 45
Ser Thr Asn Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Val Gly Val Leu Thr Trp Pro Val Asn Ala Glu
115 120 125
Tyr Phe His His Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Ser Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340
345
350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu
500 505 510
Leu Thr Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln
515 520 525
Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys
530 535 540
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr
545 550 555 560
Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Cys Gly Asn Asn
565 570 575
Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
580 585 590
Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
595
600
605
Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Thr Gly Val Val Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
645 650 655
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
660 665 670
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
675 680 685
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
690 695 700
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys
705 710 715 720
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
725 730 735
Glu Cys Ser
<210> 46
<211> 265
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь IgG
<400> 46
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala
20 25 30
Val Ile Lys Thr Pro Gly Ser Ser Val Lys Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gly Tyr Asn Phe Arg Asp Tyr Ser Ile His Trp Val Arg Leu Ile Pro
50 55 60
Asp Lys Gly Phe Glu Trp Ile Gly Trp Ile Lys Pro Leu Trp Gly Ala
65 70 75 80
Val Ser Tyr Ala Arg Gln Leu Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Gln
85 90 95
Leu Ser Gln Asp Pro Asp Asp Pro Asp Trp Gly Val Ala Tyr Met Glu
100 105 110
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Ala Asp Thr Ala Glu Tyr Phe Cys Val Arg
115 120 125
Arg Gly Ser Cys Asp Tyr Cys Gly Asp Phe Pro Trp Gln Tyr Trp Cys
130 135 140
Gln Gly Thr Val Val Val Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
165 170 175
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
180 185 190
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
195 200 205
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
210 215 220
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
225 230 235 240
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
245 250 255
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 260 265
<210> 47
<211> 243
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая цепь IgG
<400> 47
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Val Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser
20 25 30
Pro Gly Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Thr Ala Thr Leu Phe Cys
35 40 45
Lys Ala Ser Gln Gly Gly Asn Ala Met Thr Trp Tyr Gln Lys Arg Arg
50 55 60
Gly Gln Val Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Arg Arg Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Val Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Phe
85 90 95
Leu Thr Ile Asn Lys Leu Asp Arg Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Phe Glu Phe Phe Gly Leu Gly Ser Glu Leu Glu Val His Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro
225 230 235 240
Asp Tyr Ala
<210> 48
<211> <212> <213>
256
Белок
Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (VH-CH1) ВИЧ-1 Env Fab
<400> 48
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly
20 25 30
Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gly Tyr Glu Phe Ile Asp Cys Thr Leu Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro
50 55 60
Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met Gly Trp Leu Lys Pro Arg Gly Gly Ala
65 70 75 80
Val Asn Tyr Ala Arg Pro Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp
85 90 95
Val Tyr Ser Asp Thr Ala Phe Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Val Asp
100 105 110
Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg Gly Lys Asn Cys Asp Tyr Asn
115 120 125
Trp Asp Phe Glu His Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Ala Glu Pro Lys Ser Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
245 250 255
<210> 49
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи (VL-CL) ВИЧ-1 Env Fab
<400> 49
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Val Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser
20 25 30
Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys
35 40 45
Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly
50 55 60
Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Ala Ala Gly
65 70 75 80
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln
100 105 110
Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys
115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
130 135 140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180
185
190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Tyr Pro Tyr Asp Val
225 230 235 240
Pro Asp Tyr Ala <210> 50
<211> 1536 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая ВИЧ-1 PG9 Fab
<400> 50
ggatccgcca ccatggcaag acccctgtgc accctgctgc tgctgatggc aaccctggcc 60
ggagccctgg cacagagcgc cctgacccag cccgcaagcg tctccggctc accaggccag 120
agcatcacta ttagttgcaa cgggactagc aacgacgtgg gaggctatga gagtgtcagc 180
tggtaccagc agcatcccgg aaaagcacca aaagtggtca tctacgatgt cagtaaaagg 240
ccaagtgggg tctcaaatag gttctcaggg agtaaatctg ggaatacagc atctctgacc 300
atctccggac tgggcgcaga agatgaaggc gactactatt gcaaaagcct gacctcaacc 360
agacggcgag tctttgggac aggcaccaag ctgacagtcc tgacagtcgc tgccccctcc 420
gtcttcattt ttccaccttc agatgagcag ctgaaatctg gcactgcatc tgtggtctgc 480
ctgctgaaca acttctatcc acgagaggcc aaggtgcagt ggaaagtgga taacgcactg 540
cagtccggca atagtcagga aagcgtgact gagcaggatt ccaaggacag tacctatagc 600
ctgtccagta cactgaccct gtccaaggct gactacgaaa aacataaggt gtatgcatgt 660
gaagtgactc accagggact gaggtcacca gtcactaagt cttttaacag gggagagtgc 720
ggcgggggag gatctggagg cggcggctct ggagggggag gctcaggggg cggaggaagc 780
ggcggaggag ggtccggagg aggaggcagt cagagactgg tcgaaagcgg gggaggagtg 840
gtgcagcctg ggtcctcact gagactgtca tgcgctgcca gtggctttga tttttcacga 900
cagggaatgc attgggtcag gcaggcaccc ggacagggcc tggaatgggt cgccttcatt 960
aagtacgacg gaagcgagaa gtaccatgcc gactcagtgt ggggaaggct gagcatctca 1020
agggacaact caaaggacac cctgtacctg cagatgaata gcctgagagt ggaagatacc 1080
gctacttatt tctgcgtgcg agaggccgga gggccagatt accggaacgg gtacaattac 1140
tatgatttct acgacggcta ctacaattac cattatatgg atgtctgggg caaaggaact 1200
acagtcaccg tgagctccgc aagtactaag ggaccttccg tgtttcctct ggctcccagt 1260
tccaaaagta catccggagg aacagccgct ctgggatgtc tggtcaagga ctattttccc 1320
gagcccgtga ctgtctcctg gaacagcggg gctctgacaa gcggggtgca cacctttcct 1380
gccgtgctgc agtccagtgg gctgtacagt ctgtctagtg tcgtcactgt gccaagctca 1440
agtctgggga cccagacata catttgtaat gtgaaccata aaccctcaaa caccaaagtg 1500
gacaagaaag tggaacctaa aagctgataa ctcgag 1536
<210> 51
<211> 504
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность ВИЧ-1 PG9 Fab
<400> 51
Met Ala Arg Pro Leu Cys Thr Leu Leu Leu Leu Met Ala Thr Leu Ala
1 5 10 15
Gly Ala Leu Ala Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly
20 25 30
Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Asn Gly Thr Ser Asn Asp
35 40 45
Val Gly Gly Tyr Glu Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Val Val Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val
65 70 75 80
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Gly Leu Gly Ala Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser
100 105 110
Leu Thr Ser Thr Arg Arg Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145
150
155
160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Arg Leu Val Glu Ser
260 265 270
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Ser Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
275 280 285
Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Gln Gly Met His Trp Val Arg Gln
290 295 300
Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Ala Phe Ile Lys Tyr Asp Gly
305 310 315 320
Ser Glu Lys Tyr His Ala Asp Ser Val Trp Gly Arg Leu Ser Ile Ser
325 330 335
Arg Asp Asn Ser Lys Asp Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
340 345 350
Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Val Arg Glu Ala Gly Gly Pro
355 360 365
Asp Tyr Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Tyr Asp Phe Tyr Asp Gly Tyr Tyr
370 375 380
Asn Tyr His Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
385 390 395 400
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
405 410 415
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
420 425 430
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
435 440 445
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
450 455 460
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
465 470 475 480
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
485 490 495
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
500
<210> 52 <211> 1503 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая ВИЧ-1 4E10 Fab
<400> 52
ggatccgcca ccatggcaag acctctgtgc actctgctgc tgctgatggc tactctggcc 60
ggggctctgg ctgagattgt cctgacccag tcccctggca ctcagtcact gtcccccggc 120
gagcgcgcaa ctctgtcctg cagagcaagc cagtccgtcg ggaacaacaa gctggcatgg 180
taccagcagc gcccaggaca ggcacccagg ctgctgatct acggagcaag ctcccggcct 240
agcggagtcg ctgatagatt ctccggaagc ggctccggga ccgatttcac tctgaccatc 300
tccaggctgg aacctgagga ttttgccgtg tattactgtc agcagtacgg gcagagcctg 360
tcaactttcg gccagggaac taaagtcgaa aagagaaccg tggccgcacc aagcgtcttt 420
atttttcccc ctagcgatga acagctgaaa tccgggactg cttccgtggt ctgcctgctg 480
aataacttct atccaagaga ggcaaaggtg cagtggaaag tggacaacgc cctgcagagc 540
ggaaactcac aggaatctgt gacagagcag gactccaagg atagcacata cagtctgtcc 600
tcaactctga ccctgtccaa agctgactat gagaagcata aagtctacgc atgtgaggtg 660
acccaccagg gactgaggtc ccccgtcact aagtccttca atagaggcga gtgcgggggc 720
gggggcagtg gcggaggggg aagtgggggc ggagggagtg gcggcggcgg gagtggcggc 780
ggcggctcag ggggcggcgg ctcccaggtc cagctggtcc agagcggagc cgaggtcaag 840
agaccaggct cttcagtcac cgtgagctgc aaagccagcg gaggctcctt tagcacttac 900
gccctgtcat gggtgcggca ggccccaggc cgaggcctgg agtggatggg cggcgtgatc 960
cccctgctga ccattactaa ctatgcccct agatttggag gccggatcac catcacagct 1020
gacagatcca catccacagc ttacctggag ctgaacagtc tgaggcccga ggacactgca 1080
gtctactact gtgcacgaga aggcaccact ggatgggggt ggctggggaa gcccatcggg 1140
gcttttgcac attggggcgg agggacactg gtgactgtga gctctgccag cactaaaggg 1200
cccagtgtct tccctctggc cccaagttcc aagagtacat cagggggcac cgccgcactg 1260
gggtgtctgg tgaaggatta cttcccagag cccgtgacag tcagttggaa cagcggcgct 1320
ctgaccagtg gggtgcacac tttcccagcc gtgctgcaga gttcagggct gtactccctg 1380
tcctcagtgg tgactgtgcc ctcaagcagt ctggggactc agacttacat ttgtaatgtg 1440
aaccataaac cctcaaatac taaagtggac aaaaaagtgg aaccaaagag ctgataactc 1500
gag 1503
<210> 53
<211> 493
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность ВИЧ-1 4E10 Fab
<400> 53
Met Ala Arg Pro Leu Cys Thr Leu Leu Leu Leu Met Ala Thr Leu Ala
1 5 10 15
Gly Ala Leu Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Gln Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Gly Asn Asn Lys Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala
50 55 60
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ala
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
100 105 110
Gly Gln Ser
Leu Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Lys Arg
115
120
125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
260 265 270
Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala
275 280 285
Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala
290 295 300
Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Val Ile Pro Leu Leu Thr
305 310 315 320
Ile Thr Asn Tyr Ala Pro Arg Phe Gly Gly Arg Ile Thr Ile Thr Ala
325 330 335
Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Pro
340 345 350
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Thr Gly Trp
355 360 365
Gly Trp Leu Gly Lys Pro Ile Gly Ala Phe Ala His Trp Gly Gly Gly
370 375 380
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
385 390 395 400
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
405 410 415
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
420 425 430
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
435 440 445
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
450 455 460
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
465 470 475 480
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
485 490
<210> 54
<211> 1446
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь ВИЧ-1
VRC01 IgG1
(VH/CH1/шарнир/CH2/CH3)
<400> 54
ggatccgcca ccatggattg gacatggatt ctgttcctgg tcgccgccgc aactagagtg 60
cattcacagg tgcagctggt gcagtcaggc gggcagatga agaaacccgg cgagagtatg 120
cgaatctcat gccgggctag cgggtacgaa ttcatcgact gtaccctgaa ctggattaga 180
ctggcacctg ggaagaggcc agagtggatg ggatggctga aacctagagg cggggcagtg 240
aattacgcca gaccactgca gggcagggtc actatgaccc gcgacgtgta ttctgatacc 300
gcattcctgg agctgcgaag tctgacagtc gacgatactg ccgtgtactt ctgcacacgg 360
ggcaagaact gtgactataa ttgggatttt gaacactggg gcagggggac acctgtcatt 420
gtgagctccc caagtactaa gggaccctca gtgtttcccc tggccccttc tagtaaaagt 480
acctcaggag gcacagccgc tctgggatgc ctggtgaagg attacttccc tgagccagtc 540
accgtgagtt ggaactcagg cgccctgaca agcggggtcc atacttttcc agctgtgctg 600
cagtcaagcg ggctgtactc cctgtcctct gtggtcacag tgcccagttc aagcctggga
660
acacagactt atatctgtaa cgtcaatcac aagcctagca atactaaagt ggacaagaaa 720
gccgagccta agagctgcga accaaagtcc tgtgataaaa cccatacatg ccctccctgt 780
ccagctcctg aactgctggg cggcccatcc gtgttcctgt ttccacccaa gcccaaagac 840
accctgatga ttagcaggac tcctgaggtc acctgcgtgg tcgtggacgt gtcccacgag 900
gaccccgaag tcaagtttaa ctggtacgtg gatggcgtcg aagtgcataa tgccaagaca 960
aaaccccggg aggaacagta caactctacc tatagagtcg tgagtgtcct gacagtgctg 1020
caccaggact ggctgaacgg gaaggagtat aagtgcaaag tgtctaataa ggccctgcca 1080
gctcccatcg agaaaacaat ttccaaggca aaaggccagc caagggaacc ccaggtgtac 1140
actctgcctc catcccgcga cgagctgact aagaaccagg tctctctgac ctgtctggtg 1200
aaaggattct atccaagcga tatcgccgtg gagtgggaat ccaatggcca gcccgagaac 1260
aattacaaga ccacaccccc tgtgctggac agcgatggct ccttctttct gtattcaaag 1320
ctgaccgtgg ataaaagccg ctggcagcag gggaacgtct ttagctgctc cgtgatgcac 1380
gaagctctgc acaatcatta cacccagaag tctctgagtc tgtcacctgg caagtgataa 1440
ctcgag 1446
<210> 55
<211> 474
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи ВИЧ-1 VRC01 IgG1
(VH/CH1/CH2/CH3) <400> 55
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro
20 25 30
Gly Glu Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile
35 40 45
Asp Cys Thr Leu Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu
50 55 60
Trp Met Gly Trp Leu Lys Pro Arg Gly Gly Ala Val Asn Tyr Ala Arg
65 70 75 80
Pro Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Val Tyr Ser Asp Thr
85 90 95
Ala Phe Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Phe Cys Thr Arg Gly Lys Asn Cys Asp Tyr Asn Trp Asp Phe Glu His
115 120 125
Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser Pro Ser Thr Lys Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
180 185 190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Pro Lys
225 230 235 240
Ser Cys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 56 <211> 708
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь ВИЧ-1
VRC01 IgG
(VL/CL)
<400> 56
ggatccgcca ccatggattg gacttggatt ctgttcctgg tggcagccgc taccagagtc 60
cattccgaaa ttgtgctgac ccagtctccc ggaacactgt ctctgagtcc tggcgagaca 120
gccatcattt cctgtaggac ttctcagtac gggagtctgg catggtatca gcagcgacca 180
ggacaggctc ctcgactggt catctactca ggaagcactc gggcagccgg cattcccgac 240
cgattctccg ggtctcggtg gggacctgat tacaacctga ccatctcaaa tctggaaagc 300
ggagactttg gcgtgtacta ttgccagcag tatgagttct ttgggcaggg aaccaaggtc 360
caggtggaca tcaaacgcac agtcgctgca ccaagcgtgt tcatctttcc accctcagat 420
gaacagctga agtccggcac cgcctctgtg gtgtgcctgc tgaacaattt ctacccccgg 480
gaggcaaagg tccagtggaa agtggacaac gccctgcagt ctggcaatag tcaggagtca 540
gtgactgaac aggacagcaa ggattccacc tattctctgt cctctactct gaccctgagc 600
aaagctgatt acgagaagca caaagtgtat gcatgtgagg tcacccacca gggactgcgg 660
tcacccgtca ccaagagctt caatcgcgga gagtgttgat aactcgag
708
<210> 57
<211> 228
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи ВИЧ-1 VRC01 IgG (VL/CL)
<400> 57
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser
35 40 45
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile
50 55 60
Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
65 70 75 80
Ser Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser
85 90 95
Gly Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
115 120 125
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
130 135 140
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
145 150 155 160
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
165 170 175
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
180 185 190
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
195 200 205
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Arg Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
210 215 220
Arg Gly Glu Cys 225
<210> 58
<211> 744
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь (VH-CH1)
CHIKV-Env-Fab
<400> 58
ggatccgcca
ccatggattg
gacatggagg
attctgtttc
tggtcgccgc
cgctactgga
actcacgctc
aggtgcagct
ggtgcagtca
gggtccgaac
tgaagaaacc
aggggcatct
120
gtgaaggtca
gttgcaaagc
ctcaggctac
accctgacac
ggtatgccat
gacttgggtg
180
cgccaggctc
ctggacaggg
actggagtgg
atgggctgga
tcaacactta
caccggaaat
240
ccaacttatg
tgcaggggtt
caccggccga
ttcgtgtttt
ctctggacac
ttccgtctct
300
accgcctttc
tgcacattac
aagtctgaag
gcagaggaca
ctgccgtgta
cttctgcgct
360
agggaaggcg
gagcaagagg
ctttgattat
tggggccagg
gaaccctggt
gacagtcagc
420
tccgccagca
caaagggacc
ctccgtgttc
ccactggctc
cctctagtaa
aagtacatca
480
gggggcactg
ccgctctggg
atgtctggtc
aaagattact
tccccgaacc
tgtgaccgtc
540
agctggaact
ccggagctct
gaccagcggg
gtgcatacat
ttcccgcagt
cctgcagtca
600
agcggactgt
actccctgtc
ctctgtggtc
acagtgccta
gttcaagcct
ggggacacag
660
acttatatct
gtaatgtgaa
ccataagcca
agcaacacca
aagtggacaa
aaaagtggaa
720
cctaagagct
gctgataact
cgag
744
<210> 59 <211> 240
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (VH-CH1)
CHIKV-Env-Fab <400> 59
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu
35 40 45
Thr Arg Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Val
65 70 75 80
Gln Gly Phe Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser
85 90 95
Thr Ala Phe Leu His Ile Thr Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Gly Gly Ala Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
<400>
ggatccgcca ccatggcatg gaccccactg ttcctgttcc tgctgacttg ttgtcctggc 60
gggagcaatt cacagagcgt cctgacccag cccccttctg tgtccggagc accaggacag 120
cgagtcacaa tctcttgcac tggaagctcc tctaacattg gggccagcca cgacgtgcat 180
tggtaccagc agctgccagg gaccgctccc acactgctga tctatgtgaa ctctaatagg 240
cctagtggcg tcccagatag attttcaggg agcaagtccg gcacctctgc tagtctggca 300
attacaggac tgcaggctga ggacgaagca gattactatt gccagagtta cgactcaaac 360
ctgtcaggca gcgcagtgtt cggaggagga actaagctga ccgtcctggg acagcccaaa 420
gccgctcctt ctgtgaccct gtttccccct agttcagagg aactgcaggc caacaaggct 480
actctggtgt gtctgatctc cgacttctac cctggagcag tgaccgtcgc atggaaggcc 540
gatagctccc cagtgaaagc tggggtcgag accacaactc ccagcaagca gtccaacaac 600
aagtacgcag cctctagtta tctgtcactg acacctgaac agtggaagag ccacaaatcc 660
tattcttgcc aagtgactca tgagggcagt accgtggaaa agacagtcgc cccaactgag 720
tgttcctgat aactcgag 738
<210> 61 <211> 238
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи (VL-CL)
CHIKV-Env-Fab <400> 61
Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu Leu Thr Cys Cys Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Asn Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly
20 25 30
Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn
35 40 45
Ile Gly Ala Ser His Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr
50 55 60
Ala Pro Thr Leu Leu Ile Tyr Val Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
85 90 95
Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser
100 105 110
Tyr Asp Ser Asn Leu Ser Gly Ser Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys
145 150 155 160
Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala
165 170 175
Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys
180 185 190
Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro
195 200 205
Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu
210 215 220
Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
225 230 235
<210> 62 <211> 2238 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая ВИЧ-1 Env-4E10 Ig
<400> 62
ggatccgcca ccatggattg gacatggagg attctgtttc tggtcgccgc cgctacagga 60
actcacgccc aggtgcagct ggtgcagtca ggagccgaag tgaagcgacc aggcagctcc 120
gtcactgtgt cctgcaaagc atctggcgga tcattcagca cctacgccct gagctgggtg 180
agacaggctc ctggacgagg actggaatgg atgggaggcg tcatcccact gctgacaatt 240
actaactacg ccccccgatt tcagggcagg atcaccatta cagcagaccg ctccacttct 300
accgcctatc tggagctgaa tagcctgaga ccagaagata ccgcagtgta ctattgcgcc 360
cgggagggaa ccacaggatg gggatggctg ggaaagccca tcggggcttt cgcacactgg 420
ggccagggaa ccctggtcac agtgtctagt gccagcacaa agggcccctc cgtgtttccc 480
ctggctcctt caagcaaaag tacttcagga gggaccgccg ctctgggatg tctggtgaag 540
gactacttcc ctgagccagt caccgtgtcc tggaactctg gcgctctgac ctccggagtg 600
catacatttc ccgcagtcct gcagtcctct gggctgtact ctctgagttc agtggtcact 660
gtgcctagct cctctctggg cacacagact tatatctgca acgtgaatca caagccctcc 720
aataccaaag tcgacaagaa agtggaacct aagtcttgtg ataaaaccca tacatgccca 780
ccttgtccag cacctgagct gctgggcgga ccttccgtgt tcctgtttcc acccaagcca 840
aaagacacac tgatgattag ccggacacct gaagtgactt gtgtggtcgt ggacgtcagc 900
cacgaggacc ccgaagtgaa gttcaactgg tacgtggatg gcgtcgaggt gcataatgcc 9 60
aagaccaaac ccagggagga acagtacaac tctacttata gggtcgtgag tgtcctgacc 1020
gtgctgcacc aggactggct gaacgggaag gagtataagt gcaaagtgtc caataaggcc 1080
ctgccagctc ccatcgagaa aacaatttct aaggctaaag gccagccacg cgaaccccag 1140
gtgtacactc tgcctcccag cagggacgag ctgaccaaga accaggtgag tctgacatgt 1200
ctggtcaaag gcttctatcc aagcgatatc gccgtggagt gggaatccaa tggacagccc 1260
gaaaacaatt acaagactac cccccctgtg ctggacagtg atggatcatt ctttctgtat 1320
tccaagctga ccgtggacaa atctcgctgg cagcagggga acgtctttag ctgctccgtg 1380
atgcacgagg ccctgcacaa tcattacaca cagaagtctc tgagtctgtc accaggcaag 1440
cggggacgca aaaggagaag cgggtccggc gctactaact tcagcctgct gaaacaggca 1500
ggggatgtgg aggaaaatcc tggcccaatg gtcctgcaga cccaggtgtt tatctcactg 1560
ctgctgtgga ttagcggggc ttatggcgaa atcgtgctga ctcagagccc cggaacccag 1620
tctctgagtc ctggggagcg cgctacactg agctgtcgag catcacagag cgtggggaac 1680
aataagctgg catggtacca gcagaggcct ggccaggctc caagactgct gatctatggc 1740
gcaagttcac ggcctagcgg agtggcagac cgcttctccg gatctgggag tggcaccgat 1800
tttactctga ccattagcag gctggagcca gaagacttcg ctgtgtacta ttgccagcag 1860
tacggccagt cactgagcac atttggacag gggactaagg tcgaaaaaag aaccgtggca 1920
gccccaagtg tcttcatttt tccaccctca gacgagcagc tgaagagtgg aacagcctca 1980
gtcgtgtgtc tgctgaacaa tttctacccc agggaggcca aggtccagtg gaaagtggat 2040
aacgctctgc agagcggcaa ttcccaggag tctgtgacag aacaggacag taaggattca 2100
acttatagcc tgagctccac actgactctg tccaaagcag attacgagaa gcacaaagtg 2160
tatgcctgcg aagtcaccca tcagggactg tctagtcctg tgacaaagtc ttttaacaga 2220
ggggagtgat aactcgag 2238
<210> 63 <211> 2328 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая ВИЧ-1 Env-PG9 Ig
<400> 63
ggatccgcca ccatggactg gacttggagg attctgtttc tggtcgccgc cgcaactgga 60
actcacgctg aatttggact gtcatgggtc tttctggtgg cctttctgcg aggggtccag 120
tgccagaggc tggtggagtc cggaggagga gtggtccagc caggcagctc cctgcgactg 180
agttgtgccg cttcagggtt cgacttttct agacagggca tgcactgggt gcggcaggca 240
ccaggacagg gactggagtg ggtggctttc atcaagtacg acggaagtga aaaatatcat 300
gccgattcag tgtgggggcg gctgtcaatt agccgcgaca actccaagga taccctgtac 360
ctgcagatga attctctgag ggtcgaggac acagctactt atttctgcgt gagggaagca 420
ggcggacctg attacagaaa cgggtataat tactatgact tttacgatgg ctactataac 480
taccactata tggacgtgtg gggcaaggga accacagtca cagtgtctag tgcatcaact 540
aaaggcccaa gcgtgtttcc cctggcccct tcaagcaagt ccacttctgg aggaaccgca 600
gcactgggat gtctggtgaa ggattacttc cctgagccag tcaccgtgag ttggaactca 660
ggcgccctga ctagcggagt ccataccttt cctgctgtgc tgcagtcctc tgggctgtac 720
agcctgagtt cagtggtcac agtgccaagc tcctctctgg gcacccagac atatatctgc 780
aacgtgaatc acaagcctag caatactaag gtcgacaaaa gagtggaacc aaagagctgt 840
gataaaactc atacctgccc accttgtcca gcacctgagc tgctgggagg gccttccgtg 900
ttcctgtttc cacccaagcc aaaagacacc ctgatgatta gccggacacc agaagtcact 960
tgcgtggtcg tggacgtgag ccacgaggac cccgaagtca agtttaactg gtacgtggat 1020
ggcgtcgagg tgcataatgc taagacaaaa ccacgggagg aacagtacaa ctccacatat 1080
cgcgtcgtgt ctgtcctgac tgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtataag 1140
tgcaaagtgt ccaataaggc actgccagcc cccatcgaga aaaccatttc taaggccaaa 1200
ggccagccac gagaacccca ggtgtacaca ctgcctccaa gtagggacga gctgactaag 1260
aaccaggtct ctctgacctg tctggtgaaa ggcttctatc cctctgatat cgctgtggag 1320
tgggaaagta atggacagcc tgaaaacaat tacaagacta ccccccctgt gctggacagc 1380
gatggcagct tcttcctgta tagcaagctg accgtggaca aatccagatg gcagcagggg 1440
aacgtcttta gttgctcagt gatgcacgag gcactgcaca atcattacac ccagaaaagc 1500
ctgtccctgt ctcctggcaa gaggggaaga aaaaggagaa gtgggtcagg cgcaacaaac 1560
ttcagcctgc tgaagcaggc cggagatgtg gaggaaaatc ctgggccaat ggcttggacc 1620
cccctgttcc tgtttctgct gacatgctgt cctggcggaa gcaactccca gtctgcactg 1680
acacagccag caagtgtgtc agggagccca ggacagagca tcaccatttc ctgtaacggc 1740
acaagcaatg acgtcggggg ctacgagtcc gtgtcttggt atcagcagca tcctggaaag 1800
gccccaaaag tcgtgatcta cgatgtcagc aaacgcccct ctggggtgag taaccgattc 1860
agtggatcaa agagcgggaa taccgcttct ctgacaatta gtggcctgca ggcagaggac 1920
gaaggagatt actattgcaa atcactgaca agcactcggc gccgagtctt cggaaccggg 1980
acaaagctga ctgtgctggg ccagcccaaa gctgcaccta gcgtgaccct gtttccaccc 2040
agttcagagg aactgcaggc taataaggca acactggtgt gtctgatctc cgacttctac 2100
cctggcgctg tcactgtggc ctggaaggct gatagctccc cagtcaaagc aggagtggaa 2160
acaactaccc cctccaagca gtctaacaac aagtacgccg cttctagtta tctgtcactg 2220
actcccgagc agtggaagag ccacaaatcc tattcttgcc aggtgaccca tgagggctcc 2280
actgtcgaaa agaccgtggc ccctacagag tgttcttgat aactcgag 2328
<210> 64 <211> 2217
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая VRC01 IgG
<400> 64
ggatccgcca ccatggattg gacatggatt ctgttcctgg tcgccgccgc aactagagtg 60
cattcacagg tgcagctggt gcagtcaggc gggcagatga agaaacccgg cgagagtatg 120
cgaatctcat gccgggctag cgggtacgaa ttcatcgact gtaccctgaa ctggattaga 180
ctggcacctg ggaagaggcc agagtggatg ggatggctga aacctagagg cggggcagtg 240
aattacgcca gaccactgca gggcagggtc actatgaccc gcgacgtgta ttctgatacc 300
gcattcctgg agctgcgaag tctgacagtc gacgatactg ccgtgtactt ctgcacacgg 360
ggcaagaact gtgactataa ttgggatttt gaacactggg gcagggggac acctgtcatt 420
gtgagctccc caagtactaa gggaccctca gtgtttcccc tggccccttc tagtaaaagt 480
acctcaggag gcacagccgc tctgggatgc ctggtgaagg attacttccc tgagccagtc 540
accgtgagtt ggaactcagg cgccctgaca agcggggtcc atacttttcc agctgtgctg 600
cagtcaagcg ggctgtactc cctgtcctct gtggtcacag tgcccagttc aagcctggga 660
acacagactt atatctgtaa cgtcaatcac aagcctagca atactaaagt ggacaagaaa 720
gccgagccta agagctgcga accaaagtcc tgtgataaaa cccatacatg ccctccctgt 780
ccagctcctg aactgctggg cggcccatcc gtgttcctgt ttccacccaa gcccaaagac 840
accctgatga ttagcaggac tcctgaggtc acctgcgtgg tcgtggacgt gtcccacgag 900
gaccccgaag tcaagtttaa ctggtacgtg gatggcgtcg aagtgcataa tgccaagaca 960
aaaccccggg aggaacagta caactctacc tatagagtcg tgagtgtcct gacagtgctg 1020
caccaggact ggctgaacgg gaaggagtat aagtgcaaag tgtctaataa ggccctgcca 1080
gctcccatcg agaaaacaat ttccaaggca aaaggccagc caagggaacc ccaggtgtac 1140
actctgcctc catcccgcga cgagctgact aagaaccagg tctctctgac ctgtctggtg 1200
aaaggattct atccaagcga tatcgccgtg gagtgggaat ccaatggcca gcccgagaac 1260
aattacaaga ccacaccccc tgtgctggac agcgatggct ccttctttct gtattcaaag 1320
ctgaccgtgg ataaaagccg ctggcagcag gggaacgtct ttagctgctc cgtgatgcac 1380
gaagctctgc acaatcatta cacccagaag tctctgagtc tgtcacctgg caagagggga 1440
cgaaaacgga gaagcggcag cggagctaca aacttcagcc tgctgaaaca ggcaggcgac 1500
gtggaggaaa atcctgggcc aatggattgg acttggattc tgttcctggt ggcagccgct 1560
accagagtcc attccgaaat tgtgctgacc cagtctcccg gaacactgtc tctgagtcct 1620
ggcgagacag ccatcatttc ctgtaggact tctcagtacg ggagtctggc atggtatcag 1680
cagcgaccag gacaggctcc tcgactggtc atctactcag gaagcactcg ggcagccggc 1740
attcccgacc gattctccgg gtctcggtgg ggacctgatt acaacctgac catctcaaat 1800
ctggaaagcg gagactttgg cgtgtactat tgccagcagt atgagttctt tgggcaggga 1860
accaaggtcc aggtggacat caaacgcaca gtcgctgcac caagcgtgtt catctttcca 1920
ccctcagatg aacagctgaa gtccggcacc gcctctgtgg tgtgcctgct gaacaatttc 1980
tacccccggg aggcaaaggt ccagtggaaa gtggacaacg ccctgcagtc tggcaatagt 2040
caggagtcag tgactgaaca ggacagcaag gattccacct attctctgtc ctctactctg 2100
accctgagca aagctgatta cgagaagcac aaagtgtatg catgtgaggt cacccaccag 2160
ggactgcggt cacccgtcac caagagcttc aatcgcggag agtgttgata actcgag 2217
<210> 65 <211> 2223 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты CHIKV snapi
<400> 65
ggatccgcca ccatggactg gacttggatt ctgtttctgg tcgccgccgc tacccgagtg 60
cattcacagg tgcagctgca gcagcctggg gccgctctgg tgaagccagg agctagcgca 120
atgatgtcct gcaaagcctc tggctacact ttcacctcct attggatcac ctgggtgaag 180
cagcgacctg gacagggact ggagtggatc ggcgacatct acccaggcac cgggagaaca 240
atctacaagg aaaaattcaa gacaaaagcc acactgactg tggacaccag ctcctctaca 300
gcttttatgc agctgaacag cctgacttcc gaggatagcg ccgtgtacta ttgcgcaaga 360
ggatacggct ctccttacta tgccctggac tattgggggc agggaactag cgtcaccgtg 420
agttcagcat ctaccaaggg accaagcgtg ttcccactgg cacctagctc caaatccact 480
tctggcggga ccgccgctct gggatgtctg gtgaaggatt acttccctga gccagtcaca 540
gtgagttgga actcaggggc tctgaccagc ggagtccaca catttcctgc agtgctgcag 600
tctagtggac tgtactccct gtcaagcgtg gtcactgtcc catcctctag tctgggcacc 660
cagacatata tctgcaacgt gaatcacaag ccatccaata ccaaagtcga taagaaagtg 720
gagcccaagt cttgtgacaa aactcatacc tgccctccct gtccagcacc tgaactgctg 780
ggaggcccaa gcgtgttcct gtttccaccc aagcctaaag acaccctgat gattagcagg 840
acaccagagg tcacttgcgt ggtcgtggac gtgagccacg aagaccccga ggtcaagttc 900
aactggtacg tggatggcgt cgaagtgcat aatgccaaga caaaaccccg ggaggaacag 960
tacaactcaa cctatcgggt cgtgagcgtc ctgacagtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020
ggaaaggagt acaagtgcaa agtgtctaat aaggccctgc cagctcccat cgaaaaaacc 1080
attagcaagg ctaaaggcca gccaagagag ccccaggtgt acacactgcc tccatcaagg 1140
gacgaactga caaagaacca ggtcagcctg acttgtctgg tgaaaggctt ctatcccagc 1200
gatatcgcag tggaatggga gtccaatggg cagcctgaga acaattacaa gaccacaccc 1260
cctgtgctgg acagcgatgg gtccttcttt ctgtattcca agctgacagt ggataaatct 1320
cggtggcagc agggaaacgt ctttagttgc tcagtgatgc acgaagccct gcacaatcat 1380
tacactcaga agagcctgtc cctgtctccc ggaaagaggg gccgcaaacg gagaagtggc 1440
tcaggggcaa ccaacttctc tctgctgaaa caggccggcg atgtggagga aaatcctggg 1500
ccaatggact ggacatggat tctgttcctg gtggcagccg ctacaagggt ccattccgac 1560
attgtgctga ctcagtctcc tgcaagtctg gccgtgtctc agggacagcg agcaaccatc 1620
agttgtaagg ctagccagtc cgtcgactac gatggggaca gttacgtgaa ctggtatcag 1680
cagaagcctg gacagtcccc aaaactgctg atctatgatg ctagtaatct ggagtcaggc 1740
attcccgcac gattctctgg aagtggctca gggacagact tcaccctgaa cattcaccct 1800
gtcgaggaag aggacgtggc tacctactat tgccaggaaa gcaatgagga cccccgcact 1860
ttcgggggag gcaccaagct ggagatcaaa cgaactgtcg cagcccccag cgtgttcatc 1920
tttccaccct cagacgaaca gctgaagagc ggaaccgcat ccgtggtgtg cctgctgaac 1980
aacttctacc cccgcgaggc caaggtccag tggaaagtgg ataacgctct gcagtcaggc 2040
aatagccagg aatccgtgac tgagcaggat tctaaggaca gtacctattc actgtcaagc 2100
acactgactc tgagcaaagc agactacgaa aagcataaag tgtatgcctg cgaagtcacc 2160
caccaggggc tgaggtctcc agtcactaag tctttcaaca gaggggaatg ctgataactc 2220
gag 2223
<210> 66 <211> 2241 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-1 WT
<400> 66
ggatccgcca ccatggactg gacttggagg attctgtttc tggtcgccgc cgctactggg 60
actcacgctc aggcacatct ggtcgaatct ggaggaggag tggtccagcc tggccgatcc 120
ctgcgactgt cttgcgcagc tagcgccttc aacttcagca caaacgcaat gcactgggtg 180
cgacaggcac caggcaaggg actggagtgg gtcgctgtga tctcatacga cggaagccat 240
aagtactatg cagattctgt gaaaggccgg ttcaccattt ccagggacaa ttctaagaac 300
accctgtatc tgcagatgaa tagcctgcgc gcagccgata ccgcagtgta ctattgcgca 360
actgtcggcg tgctgacctg gccagtgaac gccgaatact ttcaccattg gggacagggc 420
agtctggtct cagtgagctc cgcaagtact aagggaccat cagtgttccc actggcaccc 480
tctagtaaat ctactagtgg cgggaccgct gcactgggat gtctggtgaa ggactatttc 540
cccgagcctg tcaccgtgag ctggaattcc ggagccctga caagcggcgt ccacactttt 600
cccgctgtgc tgcagtcaag cggactgtac tccctgtcct ctgtggtcac tgtgcctagt 660
tcaagcctgg gcactcagac ctatatctgc aatgtgaacc acaagccctc taacaccaaa 720
gtcgacaaga aagtggaacc taagagctgt gataaaacac atacttgccc accttgtcca 780
gcaccagagc tgctgggagg accaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacaca 840
ctgatgatta gccggacacc tgaagtcact tgcgtggtcg tggacgtgtc ccacgaggac 900
cccgaagtca agtttaattg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataacgc caagaccaaa 960
ccccgggagg aacagtacaa tagcacatat agagtcgtgt ccgtcctgac tgtgctgcat 1020
caggattggc tgaatgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ctaacaaggc tctgcctgca 1080
ccaatcgaga aaaccattag caaggctaaa ggccagccta gggaaccaca ggtgtacaca 1140
ctgcctccaa gtcgcgacga gctgaccaag aatcaggtct ccctgacatg tctggtgaaa 1200
ggcttctatc catcagatat cgccgtggag tgggaaagca acgggcagcc cgaaaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggactct gatggcagtt tctttctgta ttctaagctg 1320
accgtggaca aaagtagatg gcagcagggg aatgtctttt catgtagcgt gatgcacgag 1380
gccctgcaca accattacac acagaagtcc ctgtctctga gtcccggaaa gaggggccgc 1440
aaacggagat cagggagcgg agctactaat ttcagcctgc tgaaacaggc aggggatgtg 1500
gaggaaaacc ccggacctat ggcttggacc ccactgttcc tgtttctgct gacatgctgt 1560
cccgggggca gcaattctca gagtgtcctg acacagccac catcagtgag cggagcacca 1620
ggacagaggg tgaccatctc ctgcacaggc agcagcagca acattggcgc cgggtacgac 1680
gtgcattggt atcagcagct gcccggcacc gctcctaagc tgctgatctg tggcaacaat 1740
aaccgcccat ctggggtgcc cgatcgattc tccggctcta aaagtgggac ttcagccagc 1800
ctggctatta ccggcctgca ggccgaggac gaagctgatt actattgcca gagctacgac 1860
tcaagcctga ccggagtcgt gttcggagga ggaaccaagc tgacagtcct gggacagcct 1920
aaagccgctc caagcgtgac actgtttcct ccatcctctg aggaactgca ggcaaacaag 1980
gccaccctgg tgtgcctgat ttccgacttc taccccgggg cagtcactgt ggcttggaag 2040
gcagatagtt cacctgtcaa agccggagtg gagactacca caccatcaaa gcagagcaat 2100
aacaaatacg cagccagctc ctatctgtcc ctgacccctg agcagtggaa gtctcacaaa 2160
tcctattctt gccaggtcac tcacgaagga agcactgtgg agaaaactgt cgcaccaacc 2220
gaatgtagtt gataactcga g 2241
<210> 67
<211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DVSF-1 WT
<400> 67
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Ala His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Phe Asn Phe
35 40 45
Ser Thr Asn Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Val Gly Val Leu Thr Trp Pro Val Asn Ala Glu
115 120 125
Tyr Phe His His Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Ser Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu
500 505 510
Leu Thr Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln
515 520 525
Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys
530 535 540
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr
545 550 555 560
Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Cys Gly Asn Asn
565 570 575
Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
580 585 590
Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
595 600 605
Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Thr Gly Val Val Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
645 650 655
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
660 665 670
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
675 680 685
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
690 695 700
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys
705 710 715 720
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
725 730 735
Glu Cys Ser
<210> 68
<211> 2241 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-1 LALA
<400> 68
ggatccgcca ccatggactg gacttggagg attctgtttc tggtcgccgc cgctactggg 60
actcacgctc aggcacatct ggtcgaatct ggaggaggag tggtccagcc tggccgatcc 120
ctgcgactgt cttgcgcagc tagcgccttc aacttcagca caaacgcaat gcactgggtg 180
cgacaggcac caggcaaggg actggagtgg gtcgctgtga tctcatacga cggaagccat 240
aagtactatg cagattctgt gaaaggccgg ttcaccattt ccagggacaa ttctaagaac 300
accctgtatc tgcagatgaa tagcctgcgc gcagccgata ccgcagtgta ctattgcgca 360
actgtcggcg tgctgacctg gccagtgaac gccgaatact ttcaccattg gggacagggc 420
agtctggtct cagtgagctc cgcaagtact aagggaccat cagtgttccc actggcaccc 480
tctagtaaat ctactagtgg cgggaccgct gcactgggat gtctggtgaa ggactatttc 540
cccgagcctg tcaccgtgag ctggaattcc ggagccctga caagcggcgt ccacactttt 600
cccgctgtgc tgcagtcaag cggactgtac tccctgtcct ctgtggtcac tgtgcctagt 660
tcaagcctgg gcactcagac ctatatctgc aatgtgaacc acaagccctc taacaccaaa 720
gtcgacaaga aagtggaacc taagagctgt gataaaacac atacttgccc accttgtcca 780
gcaccagagg cagctggagg accaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacaca 840
ctgatgatta gccggacacc tgaagtcact tgcgtggtcg tggacgtgtc ccacgaggac 900
cccgaagtca agtttaattg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataacgc caagaccaaa 960
ccccgggagg aacagtacaa tagcacatat agagtcgtgt ccgtcctgac tgtgctgcat 1020
caggattggc tgaatgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ctaacaaggc tctgcctgca 1080
ccaatcgaga aaaccattag caaggctaaa ggccagccta gggaaccaca ggtgtacaca 1140
ctgcctccaa gtcgcgacga gctgaccaag aatcaggtct ccctgacatg tctggtgaaa 1200
ggcttctatc catcagatat cgccgtggag tgggaaagca acgggcagcc cgaaaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggactct gatggcagtt tctttctgta ttctaagctg 1320
accgtggaca aaagtagatg gcagcagggg aatgtctttt catgtagcgt gatgcacgag 1380
gccctgcaca accattacac acagaagtcc ctgtctctga gtcccggaaa gaggggccgc 1440
aaacggagat cagggagcgg agctactaat ttcagcctgc tgaaacaggc aggggatgtg 1500
gaggaaaacc ccggacctat ggcttggacc ccactgttcc tgtttctgct gacatgctgt 1560
cccgggggca gcaattctca gagtgtcctg acacagccac catcagtgag cggagcacca 1620
ggacagaggg tgaccatctc ctgcacaggc agcagcagca acattggcgc cgggtacgac 1680
gtgcattggt atcagcagct gcccggcacc gctcctaagc tgctgatctg tggcaacaat 1740
aaccgcccat ctggggtgcc cgatcgattc tccggctcta aaagtgggac ttcagccagc 1800
ctggctatta ccggcctgca ggccgaggac gaagctgatt actattgcca gagctacgac 1860
tcaagcctga ccggagtcgt gttcggagga ggaaccaagc tgacagtcct gggacagcct 1920
aaagccgctc caagcgtgac actgtttcct ccatcctctg aggaactgca ggcaaacaag 1980
gccaccctgg tgtgcctgat ttccgacttc taccccgggg cagtcactgt ggcttggaag 2040
gcagatagtt cacctgtcaa agccggagtg gagactacca caccatcaaa gcagagcaat 2100
aacaaatacg cagccagctc ctatctgtcc ctgacccctg agcagtggaa gtctcacaaa 2160
tcctattctt gccaggtcac tcacgaagga agcactgtgg agaaaactgt cgcaccaacc 2220
gaatgtagtt gataactcga g 2241
<210> 69 <211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DVSF-1 LALA
<400> 69
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Ala His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Phe Asn Phe
35 40 45
Ser Thr Asn Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Val Gly Val Leu Thr Trp Pro Val Asn Ala Glu
115 120 125
Tyr Phe His His Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Ser Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu Phe Leu Phe Leu
500 505 510
Leu Thr Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln
515 520 525
Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys
530 535 540
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr
545 550 555 560
Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Cys Gly Asn Asn
565 570 575
Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
580 585 590
Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
595 600 605
Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Thr Gly Val Val Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
645 650 655
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
660 665 670
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
675 680 685
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
690 695 700
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys
705 710 715 720
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
725 730 735
Glu Cys Ser
<210> 70
<211> 2241
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-2 WT
<400> 70
ggatccgcca ccatggactg gacatggaga atcctgttcc tggtcgccgc cgcaaccggg 60
acacacgccg aagtgcagct ggtggaatct ggagggggat gggtgcagcc aggagggtcc 120
ctgcgactgt cttgcgccgc tagtggcttc actttttcca gatacgacat gcactgggtc 180
aggcaggtga ccggaaaggg cctggaatgg gtgagcgcaa tcaccacagc cggagacaca 240
tactatcccg attctgtgaa gggccggttc accattagtc gggagaacgc caaaagctcc 300
ctgtatctgc agatgaacaa tctgagagct ggcgacaccg cactgtacta ttgcgctagg 360
ggccccccta cagattgctc tagtggacga tgtctgggag tcggagtggg actggaccca 420
tgggggcagg gaacactggt cactgtgtca agcgcctcca caaagggacc ctctgtgttc 480
cctctggctc catcctctaa aagtacttca ggaggaaccg cagcactggg atgtctggtg 540
aaggattact tcccagagcc cgtcaccgtg agctggaact ccggagctct gactagcggc 600
gtccatacct ttcctgcagt gctgcagagt tcaggcctgt acagcctgag ctccgtggtc 660
accgtgccat ctagttcact ggggacccag acatatatct gcaacgtgaa tcacaagcca 720
tctaatacaa aagtcgacaa gaaagtggaa cccaagagtt gtgataaaac tcatacctgc 780
ccaccatgtc ctgcaccaga gctgctggga ggaccatccg tgttcctgtt tcctccaaag 840
cccaaagaca cactgatgat tagcaggaca cccgaagtca cttgcgtggt cgtggacgtg 900
agccacgagg accccgaagt caagtttaac tggtacgtgg atggcgtcga ggtgcataat 9 60
gccaagacca aaccccggga ggaacagtac aacagtacct atagagtcgt gtcagtcctg 1020
acagtgctgc accaggactg gctgaacggg aaagagtata agtgcaaagt gtccaataag 1080
gcactgcccg cccctatcga gaaaaccatt tctaaggcca aaggacagcc ccgagaacct 1140
caggtgtaca cactgccccc tagccgcgac gagctgacaa agaaccaggt ctccctgact 1200
tgtctggtga aagggttcta tccttcagat atcgccgtgg agtgggaaag caatggacag 1260
ccagaaaaca attacaagac taccccaccc gtgctggact ctgatggcag tttctttctg 1320
tatagcaagc tgaccgtgga caaatcccgc tggcagcagg ggaacgtctt tagctgctcc 1380
gtgatgcatg aggccctgca caatcattac actcagaagt ctctgagtct gtcacctgga 1440
aagaggggac gaaaacgaag aagcggctcc ggagcaacca acttcagcct gctgaaacag 1500
gccggggatg tggaggaaaa tccaggaccc atggcatgga ctcctctgtt cctgtttctg 1560
ctgacctgct gtccaggcgg gagcaacagc tcctacgagg tgacccagcc tccatctgtc 1620
agtgtgtcac ccggccagac cgcttcaatc acatgtagcg gggacaagct gggaaagaaa 1680
tacacaagtt ggtatcagca gaaaccagga cagtcacccc tgctggtcat ctaccaggat 1740
actaagcgcc ctagcggcat tccagaacgg ttcagcggct ccaactctgg gaatacagct 1800
actctgacca tctccggcac ccaggccatg gacgaggctg attactattg ccaggcatgg 1860
gattctacaa ctcacgtcat tttcggaggc gggaccaagc tgacagtgct ggggcagccc 1920
aaagctgcac ctagcgtcac cctgtttccc ccttctagtg aggaactgca ggctaataag 1980
gcaacactgg tgtgtctgat ttccgacttc tacccaggag cagtcactgt ggcatggaag 2040
gctgattcaa gccccgtcaa agccggagtg gaaaccacaa ctccttcaaa gcagagcaac 2100
aacaagtacg ccgcttcctc ttatctgtcc ctgactcccg agcagtggaa gtctcacaaa 2160
agttattcat gccaggtgac ccatgagggc tccactgtcg aaaagaccgt ggcccctaca 2220 gagtgttctt gataactcga g 2241
<210> 71
<211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DVSF-2 WT
<400> 71
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gln Val Thr Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Ser Ser
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Leu Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Pro Thr Asp Cys Ser Ser Gly Arg Cys Leu
115 120 125
Gly Val Gly Val Gly Leu Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg
465 470 475 480
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
485 490 495
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu
500 505 510
Phe Leu Phe Leu Leu Thr Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Ser Tyr
515 520 525
Glu Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala
530 535 540
Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Lys Lys Tyr Thr Ser Trp
545 550 555 560
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp
565 570 575
Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
580 585 590
Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu
595 600 605
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Thr Thr His Val Ile Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
645 650 655
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
660 665 670
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
675 680 685
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
690 695 700
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys
705 710 715 720
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
725 730 735
Glu Cys Ser
<210> 72 <211> 2241
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-2 LALA
<400> 72
ggatccgcca ccatggactg gacatggaga atcctgttcc tggtcgccgc cgctactggg 60
actcacgccg aagtgcagct ggtcgagagt ggagggggat gggtgcagcc cggcggcagc 120
ctgaggctgt cttgcgccgc tagtggcttc actttttcta gatacgacat gcactgggtc 180
cggcaggtga ccgggaaggg actggaatgg gtgagcgcca tcaccacagc aggggacaca 240
tactatcccg attctgtgaa gggcaggttc accattagta gggagaacgc aaaaagctcc 300
ctgtatctgc agatgaacaa tctgagagcc ggcgacaccg ctctgtacta ttgcgccagg 360
ggccctccca cagattgctc tagtggacgc tgtctgggag tcggagtggg actggaccca 420
tggggacagg ggacactggt caccgtgagc agcgcctcca ctaagggacc aagcgtgttc 480
cctctggcac catcctctaa aagtacttca gggggcaccg cagccctggg atgtctggtg 540
aaggattact tcccagagcc cgtcacagtg agctggaact ccggggccct gacttccgga 600
gtccacacct ttcctgctgt gctgcagagt tcaggcctgt actctctgag ctccgtggtc 660
acagtgccat ctagttcact gggaacccag acatatatct gcaacgtgaa tcacaagcca 720
agtaatacta aagtcgacaa gaaagtggaa cccaagtctt gtgataaaac tcatacctgc 780
ccaccctgtc ctgcaccaga ggctgcagga gggccatccg tgttcctgtt tcctccaaag 840
cccaaagaca ccctgatgat tagccggaca cccgaagtca cttgcgtggt cgtggacgtg 900
tcccacgagg accccgaagt caagtttaac tggtacgtgg atggcgtcga ggtgcataat 960
gccaagacaa aacccaggga ggaacagtac aacagtacct atagagtcgt gtcagtcctg 1020
acagtgctgc accaggactg gctgaacgga aaggagtata agtgcaaagt gtctaataag 1080
gctctgcccg cacctatcga gaaaaccatt agcaaggcca aagggcagcc ccgagaacct 1140
caggtgtaca cactgccccc ttcccgcgac gagctgacaa agaaccaggt ctctctgact 1200
tgtctggtga aaggattcta tccttcagat atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag 1260
ccagaaaaca attacaagac taccccaccc gtgctggact ctgatggcag tttctttctg 1320
tatagcaagc tgaccgtgga caaatcccgc tggcagcagg gaaacgtctt tagctgctcc 1380
gtgatgcatg aggccctgca caatcattac acccagaagt ctctgagtct gtcacctggg 1440
aagcgaggac gaaaaaggag aagcggctcc ggagctacaa acttctccct gctgaaacag 1500
gcaggagatg tggaggaaaa tccagggccc atggcctgga ctcctctgtt cctgtttctg 1560
ctgacctgct gtccaggcgg aagcaacagc tcctacgagg tgacccagcc tccaagcgtg 1620
agcgtgagcc caggccagac cgcttcaatc acatgtagcg gagacaagct ggggaagaaa 1680
tacactagtt ggtatcagca gaaaccaggg cagtcacccc tgctggtcat ctaccaggat 1740
accaagcgcc ctagcggcat tccagaacga ttcagcggct ccaactctgg aaatacagcc 1800
actctgacca tcagcggcac ccaggcaatg gacgaggccg attactattg ccaggcttgg 1860
gattccacaa ctcacgtcat tttcgggggc ggaaccaagc tgacagtgct gggacagccc 1920
aaagccgctc cttccgtcac cctgtttccc ccttctagtg aggaactgca ggccaataag 1980
gccaccctgg tgtgcctgat tagcgacttc taccccggag ctgtcactgt ggcatggaag 2040
gccgattcaa gccccgtcaa agcaggggtg gaaaccacaa ctccttcaaa gcagagcaac 2100
aacaagtacg cagcctcctc ttatctgtcc ctgacccctg agcagtggaa gtctcataaa 2160
agttattcat gtcaggtcac ccatgagggc agcacagtgg aaaaaaccgt ggcaccaaca 2220
gaatgtagct gataactcga g 2241
<210> 73 <211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DVSF-2 LALA
<400> 73
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gln Val Thr Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Ser Ser
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Leu Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Pro Thr Asp Cys Ser Ser Gly Arg Cys Leu
115 120 125
Gly Val Gly Val Gly Leu Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg
465 470 475 480
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
485 490 495
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Trp Thr Pro Leu
500 505 510
Phe Leu Phe Leu Leu Thr Cys Cys Pro Gly Gly Ser Asn Ser Ser Tyr
515 520 525
Glu Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala
530 535 540
Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Lys Lys Tyr Thr Ser Trp
545 550 555 560
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp
565 570 575
Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
580 585 590
Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu
595 600 605
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Thr Thr His Val Ile Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys
645 650 655
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr
660 665 670
Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr
675 680 685
Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr
690 695 700
Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys
705 710 715 720
Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr
725 730 735
Glu Cys Ser
<210> 74
<211> 2229
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-3 WT
<400> 74
ggatccgcca ccatggactg gacatggaga atcctgttcc tggtcgccgc cgcaaccggg 60
acacacgccg aagtgcagct ggtggaatca gggggagggc tggtgcagcc tggaagaagt 120
ctgaggctgt catgcgccgc tagcggcttc acctttgacg attacgccat gttctgggtg 180
aggcaggctc caggcaaggg actggaatgg atcagcggca tttcctggaa ctctgcaact 240
atcgggtatg ccgactccgt gaaaggacgg tttaccattt caagagacaa cgccaagaaa 300
agcctggatc tgcagatgaa ttccctgcgg cccgacgata ccgctctgta ctattgcgca 360
aagggaggac ctagaggcct gcagctgctg agctcctggg tggactactg gggacagggc 420
actctggtca ccgtgtctag tgcttccaca aagggacctt ctgtgttccc actggcaccc 480
tcaagcaaat caacaagcgg aggaactgca gcactgggat gtctggtgaa ggattatttc 540
cccgagcctg tcaccgtgag ttggaactca ggagcactga cttccggagt ccacaccttt 600
ccagcagtgc tgcagtcctc tggactgtac agcctgagtt cagtggtcac agtgcctagc 660
tcctctctgg gcacacagac ttatatctgc aacgtgaatc acaagcctag caatactaaa 720
gtcgacaaga aagtggaacc aaagtcctgt gataaaaccc atacatgccc accttgtcca 780
gcaccagagc tgctgggggg accaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc caaagacaca 840
ctgatgattt ctcggacccc tgaagtcaca tgtgtggtcg tggacgtgag ccacgaggac 900
cccgaagtca agttcaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc taagaccaaa 9 60
ccccgagagg aacagtacaa cagcacttat cgggtcgtgt ccgtcctgac cgtgctgcac 1020
caggactggc tgaacgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ccaataaggc cctgcctgct 1080
ccaatcgaga aaacaatttc taaggcaaaa ggacagcctc gcgaaccaca ggtgtacact 1140
ctgcctccat cccgagacga gctgaccaag aaccaggtct ctctgacatg tctggtgaaa 1200
ggcttctatc caagtgatat cgctgtggag tgggaaagca atgggcagcc cgaaaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggacagc gatggctcct tctttctgta ttctaagctg 1320
accgtggata aaagtagatg gcagcagggg aacgtctttt cctgctctgt gatgcatgag 1380
gccctgcaca atcattacac acagaagagt ctgtcactga gcccagggaa gcgaggacgg 1440
aaacggagat ccgggtctgg agcaaccaac ttctccctgc tgaaacaggc aggcgacgtg 1500
gaggaaaatc caggacctat ggtcctgcag acccaggtgt ttatctctct gctgctgtgg 1560
attagtggcg cctacgggga tatccagatg acacagtccc ccagttcact gagtgcctca 1620
gtcggcgaca gggtgactat cacctgtcgc gctagccagg atattaggcg ctacctgaac 1680
tggtatcagc agcgaccagg acgagtgcct cagctgctga tctacactac ctccaccctg 1740
cagtctggag tcccaagtag gttcagcggc tccgggtctg tgacagactt tacactgact 1800
attagctccc tgcagcccga agatttcggc acttactatt gccagcagag ttattcacca 1860
ccccacacat ttggacaggg cactaagctg gaaatcaaaa ctgtcgctgc accctcagtg 1920
ttcatttttc ctccatctga cgagcagctg aagtcaggca ccgccagcgt cgtgtgtctg 1980
ctgaacaatt tctaccctcg cgaggctaag gtccagtgga aagtggataa cgcactgcag 2040
tctgggaata gtcaggagtc agtgacagaa caggacagca aggattccac ttattctctg 2100
tctagtaccc tgacactgag caaagccgac tacgagaagc acaaagtcta tgcttgcgaa 2160
gtgacccatc aggggctgag aagtcccgtg acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 2220
taactcgag 2229
<210> 75
<211> 735
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DVSF-3 WT
<400> 75
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Asp Asp Tyr Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Ala Thr Ile Gly Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys
85 90 95
Ser Leu Asp Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Leu
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Gly Pro Arg Gly Leu Gln Leu Leu Ser Ser
115 120 125
Trp Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser
500 505 510
Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln
515 520 525
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
530 535 540
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Arg Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
545 550 555 560
Arg Pro Gly Arg Val Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Thr Ser Thr Leu
565 570 575
Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp
580 585 590
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr
595 600 605
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr
610 615 620
Lys Leu Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
625 630 635 640
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
645 650 655
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
660 665 670
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
675 680 685
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
690 695 700
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
705 710 715 720
Gly Leu Arg Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
725 730 735
<210> 76 <211> 2229
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты DVSF-3 LALA
<400> 76
ggatccgcca ccatggactg gacttggaga atcctgtttc tggtcgccgc cgcaactgga 60
acccacgccg aggtgcagct ggtcgaatca gggggaggcc tggtgcagcc tgggagaagt 120
ctgcggctgt catgcgccgc tagcggcttc acctttgacg attacgcaat gttctgggtg 180
aggcaggcac caggcaaggg actggaatgg atcagcggca tttcctggaa ctctgctacc 240
atcggatatg cagacagcgt gaaagggagg tttacaattt ctagagacaa cgccaagaaa 300
agtctggatc tgcagatgaa ttcactgcgc cccgacgata ccgccctgta ctattgcgct 360
aagggcggac ccaggggcct gcagctgctg agctcctggg tggactactg ggggcagggc 420
actctggtca ccgtgtctag tgcctccaca aagggcccta gcgtgttccc actggctccc 480
tcaagcaaat caacaagcgg gggcactgca gccctgggat gtctggtgaa ggattatttc 540
cccgagcctg tcaccgtgag ttggaactca ggggctctga ctagcggcgt ccacaccttt 600
cccgcagtgc tgcagtcctc tggcctgtac agcctgagtt cagtggtcac tgtccctagc 660
tcctctctgg gaacacagac ttatatctgc aacgtgaatc acaagccttc caataccaaa 720
gtcgacaaga aagtggaacc aaagtcttgt gataaaaccc atacatgccc tccctgtcca 780
gcaccagagg ctgcaggagg gccaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc caaagacaca 840
ctgatgatta gccggacccc tgaagtcaca tgcgtggtcg tggacgtgag ccacgaggac 900
cccgaagtca agtttaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc taagaccaaa 960
ccccgagagg aacagtacaa cagtacttat agggtcgtgt cagtcctgac cgtgctgcac 1020
caggactggc tgaacgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ccaataaggc actgcctgcc 1080
ccaatcgaga aaactatttc taaggctaaa ggccagccta gagaaccaca ggtgtacacc 1140
ctgcctccaa gccgggacga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacatg tctggtgaaa 1200
ggattctatc catccgatat cgcagtggag tgggaatcta atgggcagcc cgaaaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggacagc gatggcagct tcttcctgta tagcaagctg 1320
accgtggata aatcccgctg gcagcagggg aacgtctttt cctgctctgt gatgcatgag 1380
gccctgcaca atcattacac acagaagagt ctgtcactga gcccaggaaa gcgagggagg 1440
aaaaggagat ccggatctgg ggctactaac ttctccctgc tgaagcaggc aggcgacgtg 1500
gaggaaaatc ccggacctat ggtcctgcag acacaggtgt ttatcagcct gctgctgtgg 1560
atttccggcg cttacggaga tatccagatg actcagtccc ccagttcact gagtgcatca 1620
gtcggcgacc gggtgactat cacctgtcgc gcctctcagg atattcggcg ctacctgaat 1680
tggtatcagc agcgaccagg acgagtgcct cagctgctga tctacactac ctccacactg 1740
cagtctggcg tcccaagtag gttcagcggc tccggatctg tgactgactt tacactgact 1800
attagctccc tgcagcccga ggatttcggc acctactatt gccagcagag ttattcacca 1860
ccccacacat ttgggcaggg cactaagctg gaaatcaaaa ccgtcgccgc tcccagcgtg 1920
ttcatctttc ctccaagtga cgagcagctg aagtcaggaa cagccagcgt ggtgtgcctg 1980
ctgaacaatt tctaccctag agaagccaag gtccagtgga aagtggataa cgctctgcag 2040
tctgggaata gtcaggagtc agtgacagaa caggacagca aggattccac ttattctctg 2100
tctagtaccc tgacactgag caaagcagac tacgagaagc ataaagtgta tgcctgcgaa 2160
gtcacccacc aggggctgcg gtcaccagtc acaaaatcct ttaacagagg cgaatgctga 2220
taactcgag 2229
<210> 77
<211> 735
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность DSVF-3 LALA
<400> 77
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Asp Asp Tyr Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Ala Thr Ile Gly Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys
85 90 95
Ser Leu Asp Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Leu
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Gly Pro Arg Gly Leu Gln Leu Leu Ser Ser
115 120 125
Trp Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser
500 505 510
Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln
515 520 525
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
530 535 540
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Arg Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
545 550 555 560
Arg Pro Gly Arg Val Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Thr Ser Thr Leu
565 570 575
Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp
580 585 590
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr
595 600 605
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr
610 615 620
Lys Leu Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
625 630 635 640
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
645 650 655
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
660 665 670
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
675 680 685
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
690 695 700
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
705 710 715 720
Gly Leu Arg Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
725 730 735
<210> 78 <211> 2217 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты анти-PSMA
<400> 78
ggatccgcca ccatggattg gacatggagg attctgtttc tggtcgccgc cgccacagga 60
acccacgccg aagtgcagct ggtgcagtca ggagccgagg tgaagaaacc aggcgaaagt 120
ctgaaaatct catgcaaagg aagtgggtac tcattcacta gcaactggat tggatgggtg 180
cggcagatgc caggcaaggg actggagtgg atgggaatca tctaccccgg ggactccgat 240
acacgctata gtccttcatt tcagggccag gtgacaatct ctgccgacaa aagcatttcc 300
actgcttatc tgcagtggag ctccctgaag gcttccgata ccgcaatgta ctattgcgcc 360
aggcagacag gcttcctgtg gtctagtgac ctgtggggga gaggcaccct ggtcacagtg 420
tcaagcgcct ctaccaaagg accaagcgtg ttcccactgg ctccttcctc taagtctact 480
agtggcggaa ccgccgctct gggatgtctg gtgaaggatt acttccctga gccagtcaca 540
gtgtcctgga actctggcgc tctgaccagc ggagtccaca catttcccgc agtgctgcag 600
agttcaggcc tgtactccct gagctccgtg gtcacagtcc cttctagttc actgggaact 660
cagacctata tctgcaacgt gaatcacaaa ccttccaata ctaaggtcga caagaaagtg 720
gaaccaaaat cttgtgataa gacacatact tgccctccct gtccagcacc tgagctgctg 780
ggcggcccaa gcgtgttcct gtttccaccc aagcccaaag ataccctgat gattagcagg 840
acaccagaag tcacttgcgt ggtcgtggac gtgtcccacg aggaccccga agtcaagttc 900
aactggtacg tggacggcgt cgaggtgcat aatgctaaga ccaaaccaag agaggaacag 960
tacaactcaa cctatcgggt cgtgagcgtc ctgacagtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020
ggaaaggagt ataagtgcaa agtgtctaac aaggccctgc cagctcccat cgagaagact 1080
attagcaagg ctaaagggca gccacgcgaa ccccaggtgt acaccctgcc tccatcacga 1140
gatgagctga caaaaaacca ggtctctctg acttgtctgg tgaagggatt ctatccctct 1200
gacatcgcag tggagtggga aagtaatggg cagcctgaaa acaattacaa gaccacaccc 1260
cctgtgctgg acagtgatgg atcattcttt ctgtatagta aactgaccgt ggataagtca 1320
agatggcagc aggggaacgt cttttcatgc agcgtgatgc atgaggccct gcacaatcat 1380
tacacccaga agtccctgtc tctgagtcct ggcaaacggg gacgcaagag gagatcagga 1440
agcggggcta caaacttctc cctgctgaag caggcagggg acgtggagga aaatcctggc 1500
ccaatggtcc tgcagaccca ggtgtttatc tccctgctgc tgtggatttc tggggcatac 1560
ggcgccatcc agctgacaca gtctcccagc tccctgtccg catctgtcgg cgaccgagtg 1620
accatcacat gtagggccag ccaggatatt tctagtgctc tggcatggta ccagcagaag 1680
cctgggaaag caccaaagct gctgatctat gatgcctcaa gcctggaatc cggagtgcct 1740
agccggttct ccggatacgg aagtgggaca gactttactc tgaccattaa cagcctgcag 1800
cctgaggatt tcgccactta ctattgccag cagttcaata gctatccact gacttttgga 1860
gggggcacca aagtggaaat caagcgaact gtcgcagccc ctagcgtgtt catttttcca 1920
ccctccgatg agcagctgaa gagcggcacc gcttccgtgg tgtgcctgct gaacaacttc 1980
tacccacgcg aggccaaagt ccagtggaag gtggacaacg ctctgcagtc tggaaatagt 2040
caggagtcag tgactgaaca ggacagcaaa gattccacct attctctgtc ctctacactg 2100
actctgagca aggcagacta cgagaagcat aaagtgtatg cctgcgaagt cacccaccag 2160
gggctgtcct caccagtcac taaatctttc aatcggggag aatgttgata actcgag 2217
<210> 79 <211> 731
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность анти-PSMA
<400> 79
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ser Asn Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser
65 70 75 80
Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Gly Phe Leu Trp Ser Ser Asp Leu Trp
115 120 125
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
225 230 235 240
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr
465 470 475 480
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
485 490 495
Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile
500 505 510
Ser Gly Ala Tyr Gly Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
515 520 525
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
530 535 540
Asp Ile Ser Ser Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
545 550 555 560
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro
565 570 575
Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
580 585 590
Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
595 600 605
Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
610 615 620
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
625 630 635 640
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
645 650 655
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
660 665 670
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
675 680 685
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
690 695 700
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
705 710 715 720
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 80
<211> 733
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность CHIKV-snapi
<400> 80
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Ala Leu Val Lys Pro
20 25 30
Gly Ala Ser Ala Met Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
35 40 45
Ser Tyr Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Arg Thr Ile Tyr Lys Glu
65 70 75 80
Lys Phe Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr
85 90 95
Ala Phe Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Ser Pro Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
225 230 235 240
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr
465 470 475 480
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
485 490 495
Pro Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg
500 505 510
Val His Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val
515 520 525
Ser Gln Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val
530 535 540
Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
545 550 555 560
Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly
565 570 575
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
580 585 590
Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
595 600 605
Glu Ser Asn Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
610 615 620
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
625 630 635 640
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
645 650 655
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
660 665 670
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
675 680 685
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
690 695 700
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
705 710 715 720
Arg Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 81
<211> 457
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E1
<400> 81
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Tyr Glu His Val Thr Val Ile Pro Asn Thr Val Gly Val Pro
20 25 30
Tyr Lys Thr Leu Val Asn Arg Pro Gly Tyr Ser Pro Met Val Leu Glu
35 40 45
Met Glu Leu Leu Ser Val Thr Leu Glu Pro Thr Leu Ser Leu Asp Tyr
50 55 60
Ile Thr Cys Glu Tyr Lys Thr Val Ile Pro Ser Pro Tyr Val Lys Cys
65 70 75 80
Cys Gly Thr Ala Glu Cys Lys Asp Lys Asn Leu Pro Asp Tyr Ser Cys
85 90 95
Lys Val Phe Thr Gly Val Tyr Pro Phe Met Trp Gly Gly Ala Tyr Cys
100 105 110
Phe Cys Asp Ala Glu Asn Thr Gln Leu Ser Glu Ala His Val Glu Lys
115 120 125
Ser Glu Ser Cys Lys Thr Glu Phe Ala Ser Ala Tyr Arg Ala His Thr
130 135 140
Ala Ser Ala Ser Ala Lys Leu Arg Val Leu Tyr Gln Gly Asn Asn Ile
145 150 155 160
Thr Val Thr Ala Tyr Ala Asn Gly Asp His Ala Val Thr Val Lys Asp
165 170 175
Ala Lys Phe Ile Val Gly Pro Met Ser Ser Ala Trp Thr Pro Phe Asp
180 185 190
Asn Lys Ile Val Val Tyr Lys Gly Asp Val Tyr Asn Met Asp Tyr Pro
195 200 205
Pro Phe Gly Ala Gly Arg Pro Gly Gln Phe Gly Asp Ile Gln Ser Arg
210 215 220
Thr Pro Glu Ser Lys Asp Val Tyr Ala Asn Thr Gln Leu Val Leu Gln
225 230 235 240
Arg Pro Ala Val Gly Thr Val His Val Pro Tyr Ser Gln Ala Pro Ser
245 250 255
Gly Phe Lys Tyr Trp Leu Lys Glu Arg Gly Ala Ser Leu Gln His Thr
260 265 270
Ala Pro Phe Gly Cys Gln Ile Ala Thr Asn Pro Val Arg Ala Val Asn
275 280 285
Cys Ala Val Gly Asn Met Pro Ile Ser Ile Asp Ile Pro Glu Ala Ala
290 295 300
Phe Thr Arg Val Val Asp Ala Pro Ser Leu Thr Asp Met Ser Cys Glu
305 310 315 320
Val Pro Ala Cys Thr His Ser Ser Asp Phe Gly Gly Val Ala Ile Ile
325 330 335
Lys Tyr Ala Ala Ser Lys Lys Gly Lys Cys Ala Val His Ser Met Thr
340 345 350
Asn Ala Val Thr Ile Arg Glu Ala Glu Ile Glu Val Glu Gly Asn Ser
355 360 365
Gln Leu Gln Ile Ser Phe Ser Thr Ala Leu Ala Ser Ala Glu Phe Arg
370 375 380
Val Gln Val Cys Ser Thr Gln Val His Cys Ala Ala Glu Cys His Pro
385 390 395 400
Pro Lys Asp His Ile Val Asn Tyr Pro Ala Ser His Thr Thr Leu Gly
405 410 415
Val Gln Asp Ile Ser Ala Thr Ala Met Ser Trp Val Gln Lys Ile Thr
420 425 430
Gly Gly Val Gly Leu Val Val Ala Val Ala Ala Leu Ile Leu Ile Val
435 440 445
Val Leu Cys Val Ser Phe Ser Arg His 450 455
<210> 82
<211> 441
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E2
<400> 82
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Thr Lys Asp Asn Phe Asn Val Tyr Lys Ala Thr Arg Pro
20 25 30
Tyr Leu Ala His Cys Pro Asp Cys Gly Glu Gly His Ser Cys His Ser
35 40 45
Pro Val Ala Leu Glu Arg Ile Arg Asn Glu Ala Thr Asp Gly Thr Leu
50 55 60
Lys Ile Gln Val Ser Leu Gln Ile Gly Ile Lys Thr Asp Asp Ser His
65 70 75 80
Asp Trp Thr Lys Leu Arg Tyr Met Asp Asn His Met Pro Ala Asp Ala
85 90 95
Glu Arg Ala Gly Leu Phe Val Arg Thr Ser Ala Pro Cys Thr Ile Thr
100 105 110
Gly Thr Met Gly His Phe Ile Leu Ala Arg Cys Pro Lys Gly Glu Thr
115 120 125
Leu Thr Val Gly Phe Thr Asp Ser Arg Lys Ile Ser His Ser Cys Thr
130 135 140
His Pro Phe His His Asp Pro Pro Val Ile Gly Arg Glu Lys Phe His
145 150 155 160
Ser Arg Pro Gln His Gly Lys Glu Leu Pro Cys Ser Thr Tyr Val Gln
165 170 175
Ser Thr Ala Ala Thr Thr Glu Glu Ile Glu Val His Met Pro Pro Asp
180 185 190
Thr Pro Asp Arg Thr Leu Met Ser Gln Gln Ser Gly Asn Val Lys Ile
195 200 205
Thr Val Asn Gly Gln Thr Val Arg Tyr Lys Cys Asn Cys Gly Gly Ser
210 215 220
Asn Glu Gly Leu Thr Thr Thr Asp Lys Val Ile Asn Asn Cys Lys Val
225 230 235 240
Asp Gln Cys His Ala Ala Val Thr Asn His Lys Lys Trp Gln Tyr Asn
245 250 255
Ser Pro Leu Val Pro Arg Asn Ala Glu Leu Gly Asp Arg Lys Gly Lys
260 265 270
Ile His Ile Pro Phe Pro Leu Ala Asn Val Thr Cys Arg Val Pro Lys
275 280 285
Ala Arg Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Lys Asn Gln Val Ile Met Leu
290 295 300
Leu Tyr Pro Asp His Pro Thr Leu Leu Ser Tyr Arg Asn Met Gly Glu
305 310 315 320
Glu Pro Asn Tyr Gln Glu Glu Trp Val Met His Lys Lys Glu Val Val
325 330 335
Leu Thr Val Pro Thr Glu Gly Leu Glu Val Thr Trp Gly Asn Asn Glu
340 345 350
Pro Tyr Lys Tyr Trp Pro Gln Leu Ser Thr Asn Gly Thr Ala His Gly
355 360 365
His Pro His Glu Ile Ile Leu Tyr Tyr Tyr Glu Leu Tyr Pro Thr Met
370 375 380
Thr Val Val Val Val Ser Val Ala Thr Phe Ile Leu Leu Ser Met Val
385 390 395 400
Gly Met Ala Ala Gly Met Cys Met Cys Ala Arg Arg Arg Cys Ile Thr
405 410 415
Pro Tyr Glu Leu Thr Pro Gly Ala Thr Val Pro Phe Leu Leu Ser Leu
420 425 430
Ile Cys Cys Ile Arg Thr Ala Lys Ala 435 440
<210> 83
<211> 279
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность капсида CHIKV
<400> 83
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Met Glu Phe Ile Pro Thr Gln Thr Phe Tyr Asn Arg Arg Tyr
20 25 30
Gln Pro Arg Pro Trp Thr Pro Arg Pro Thr Ile Gln Val Ile Arg Pro
35 40 45
Arg Pro Arg Pro Gln Arg Gln Ala Gly Gln Leu Ala Gln Leu Ile Ser
50 55 60
Ala Val Asn Lys Leu Thr Met Arg Ala Val Pro Gln Gln Lys Pro Arg
65 70 75 80
Arg Asn Arg Lys Asn Lys Lys Gln Lys Gln Lys Gln Gln Ala Pro Gln
85 90 95
Asn Asn Thr Asn Gln Lys Lys Gln Pro Pro Lys Lys Lys Pro Ala Gln
100 105 110
Lys Lys Lys Lys Pro Gly Arg Arg Glu Arg Met Cys Met Lys Ile Glu
115 120 125
Asn Asp Cys Ile Phe Glu Val Lys His Glu Gly Lys Val Thr Gly Tyr
130 135 140
Ala Cys Leu Val Gly Asp Lys Val Met Lys Pro Ala His Val Lys Gly
145 150 155 160
Thr Ile Asp Asn Ala Asp Leu Ala Lys Leu Ala Phe Lys Arg Ser Ser
165 170 175
Lys Tyr Asp Leu Glu Cys Ala Gln Ile Pro Val His Met Lys Ser Asp
180 185 190
Ala Ser Lys Phe Thr His Glu Lys Pro Glu Gly Tyr Tyr Asn Trp His
195 200 205
His Gly Ala Val Gln Tyr Ser Gly Gly Arg Phe Thr Ile Pro Thr Gly
210 215 220
Ala Gly Lys Pro Gly Asp Ser Gly Arg Pro Ile Phe Asp Asn Lys Gly
225 230 235 240
Arg Val Val Ala Ile Val Leu Gly Gly Ala Asn Glu Gly Ala Arg Thr
245 250 255
Ala Leu Ser Val Val Thr Trp Asn Lys Asp Ile Val Thr Lys Ile Thr
260 265 270
Pro Glu Gly Ala Glu Glu Trp 275
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E1 <400> 84
Tyr Glu His Val Thr Val Ile Pro Asn Thr Val Gly Val Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Thr Leu Val Asn Arg Pro Gly Tyr Ser Pro Met Val Leu Glu Met Glu
20 25 30
Leu Leu Ser Val Thr Leu Glu Pro Thr Leu Ser Leu Asp Tyr Ile Thr
35 40 45
Cys Glu Tyr Lys Thr Val Ile Pro Ser Pro Tyr Val Lys Cys Cys Gly
50 55 60
Thr Ala Glu Cys Lys Asp Lys Asn Leu Pro Asp Tyr Ser Cys Lys Val
65 70 75 80
Phe Thr Gly Val Tyr Pro Phe Met Trp Gly Gly Ala Tyr Cys Phe Cys
85 90 95
Asp Ala Glu Asn Thr Gln Leu Ser Glu Ala His Val Glu Lys Ser Glu
100 105 110
Ser Cys Lys Thr Glu Phe Ala Ser Ala Tyr Arg Ala His Thr Ala Ser
115 120 125
Ala Ser Ala Lys Leu Arg Val Leu Tyr Gln Gly Asn Asn Ile Thr Val
130 135 140
Thr Ala Tyr Ala Asn Gly Asp His Ala Val Thr Val Lys Asp Ala Lys
145 150 155 160
Phe Ile Val Gly Pro Met Ser Ser Ala Trp Thr Pro Phe Asp Asn Lys
165 170 175
Ile Val Val Tyr Lys Gly Asp Val Tyr Asn Met Asp Tyr Pro Pro Phe
180 185 190
Gly Ala Gly Arg Pro Gly Gln Phe Gly Asp Ile Gln Ser Arg Thr Pro
195 200 205
Glu Ser Lys Asp Val Tyr Ala Asn Thr Gln Leu Val Leu Gln Arg Pro
210 215 220
Ala Val Gly Thr Val His Val Pro Tyr Ser Gln Ala Pro Ser Gly Phe
225 230 235 240
Lys Tyr Trp Leu Lys Glu Arg Gly Ala Ser Leu Gln His Thr Ala Pro
245 250 255
Phe Gly Cys Gln Ile Ala Thr Asn Pro Val Arg Ala Val Asn Cys Ala
260 265 270
Val Gly Asn Met Pro Ile Ser Ile Asp Ile Pro Glu Ala Ala Phe Thr
275 280 285
Arg Val Val Asp Ala Pro Ser Leu Thr Asp Met Ser Cys Glu Val Pro
290 295 300
Ala Cys Thr His Ser Ser Asp Phe Gly Gly Val Ala Ile Ile Lys Tyr
305 310 315 320
Ala Ala Ser Lys Lys Gly Lys Cys Ala Val His Ser Met Thr Asn Ala
325 330 335
Val Thr Ile Arg Glu Ala Glu Ile Glu Val Glu Gly Asn Ser Gln Leu
340 345 350
Gln Ile Ser Phe Ser Thr Ala Leu Ala Ser Ala Glu Phe Arg Val Gln
355 360 365
Val Cys Ser Thr Gln Val His Cys Ala Ala Glu Cys His Pro Pro Lys
370 375 380
Asp His Ile Val Asn Tyr Pro Ala Ser His Thr Thr Leu Gly Val Gln
385 390 395 400
Asp Ile Ser Ala Thr Ala Met Ser Trp Val Gln Lys Ile Thr Gly Gly
405 410 415
Val Gly Leu Val Val Ala Val Ala Ala Leu Ile Leu Ile Val Val Leu
420 425 430
Cys Val Ser Phe Ser Arg His 435
<210> 85
<211> 423
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E2
<400>
Ser Thr Lys Asp Asn Phe Asn Val Tyr Lys Ala Thr Arg Pro Tyr Leu
1 5 10 15
Ala His Cys Pro Asp Cys Gly Glu Gly His Ser Cys His Ser Pro Val
20 25 30
Ala Leu Glu Arg Ile Arg Asn Glu Ala Thr Asp Gly Thr Leu Lys Ile
35 40 45
Gln Val Ser Leu Gln Ile Gly Ile Lys Thr Asp Asp Ser His Asp Trp
50 55 60
Thr Lys Leu Arg Tyr Met Asp Asn His Met Pro Ala Asp Ala Glu Arg
65 70 75 80
Ala Gly Leu Phe Val Arg Thr Ser Ala Pro Cys Thr Ile Thr Gly Thr
85 90 95
Met Gly His Phe Ile Leu Ala Arg Cys Pro Lys Gly Glu Thr Leu Thr
100 105 110
Val Gly Phe Thr Asp Ser Arg Lys Ile Ser His Ser Cys Thr His Pro
115 120 125
Phe His His Asp Pro Pro Val Ile Gly Arg Glu Lys Phe His Ser Arg
130 135 140
Pro Gln His Gly Lys Glu Leu Pro Cys Ser Thr Tyr Val Gln Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Thr Thr Glu Glu Ile Glu Val His Met Pro Pro Asp Thr Pro
165 170 175
Asp Arg Thr Leu Met Ser Gln Gln Ser Gly Asn Val Lys Ile Thr Val
180 185 190
Asn Gly Gln Thr Val Arg Tyr Lys Cys Asn Cys Gly Gly Ser Asn Glu
195 200 205
Gly Leu Thr Thr Thr Asp Lys Val Ile Asn Asn Cys Lys Val Asp Gln
210 215 220
Cys His Ala Ala Val Thr Asn His Lys Lys Trp Gln Tyr Asn Ser Pro
225 230 235 240
Leu Val Pro Arg Asn Ala Glu Leu Gly Asp Arg Lys Gly Lys Ile His
245 250 255
Ile Pro Phe Pro Leu Ala Asn Val Thr Cys Arg Val Pro Lys Ala Arg
260 265 270
Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Lys Asn Gln Val Ile Met Leu Leu Tyr
275 280 285
Pro Asp His Pro Thr Leu Leu Ser Tyr Arg Asn Met Gly Glu Glu Pro
290 295 300
Asn Tyr Gln Glu Glu Trp Val Met His Lys Lys Glu Val Val Leu Thr
305 310 315 320
Val Pro Thr Glu Gly Leu Glu Val Thr Trp Gly Asn Asn Glu Pro Tyr
325 330 335
Lys Tyr Trp Pro Gln Leu Ser Thr Asn Gly Thr Ala His Gly His Pro
340 345 350
His Glu Ile Ile Leu Tyr Tyr Tyr Glu Leu Tyr Pro Thr Met Thr Val
355 360 365
Val Val Val Ser Val Ala Thr Phe Ile Leu Leu Ser Met Val Gly Met
370 375 380
Ala Ala Gly Met Cys Met Cys Ala Arg Arg Arg Cys Ile Thr Pro Tyr
385 390 395 400
Glu Leu Thr Pro Gly Ala Thr Val Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ile Cys
405 410 415
Cys Ile Arg Thr Ala Lys Ala 420
<210> 86
<211> 261
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность капсида CHIKV
<400> 86
Met Glu Phe Ile Pro Thr Gln Thr Phe Tyr Asn Arg Arg Tyr Gln Pro
1 5 10 15
Arg Pro Trp Thr Pro Arg Pro Thr Ile Gln Val Ile Arg Pro Arg Pro
20 25 30
Arg Pro Gln Arg Gln Ala Gly Gln Leu Ala Gln Leu Ile Ser Ala Val
35 40 45
Asn Lys Leu Thr Met Arg Ala Val Pro Gln Gln Lys Pro Arg Arg Asn
50 55 60
Arg Lys Asn Lys Lys Gln Lys Gln Lys Gln Gln Ala Pro Gln Asn Asn
65 70 75 80
Thr Asn Gln Lys Lys Gln Pro Pro Lys Lys Lys Pro Ala Gln Lys Lys
85 90 95
Lys Lys Pro Gly Arg Arg Glu Arg Met Cys Met Lys Ile Glu Asn Asp
100 105 110
Cys Ile Phe Glu Val Lys His Glu Gly Lys Val Thr Gly Tyr Ala Cys
115 120 125
Leu Val Gly Asp Lys Val Met Lys Pro Ala His Val Lys Gly Thr Ile
130 135 140
Asp Asn Ala Asp Leu Ala Lys Leu Ala Phe Lys Arg Ser Ser Lys Tyr
145 150 155 160
Asp Leu Glu Cys Ala Gln Ile Pro Val His Met Lys Ser Asp Ala Ser
165 170 175
Lys Phe Thr His Glu Lys Pro Glu Gly Tyr Tyr Asn Trp His His Gly
180 185 190
Ala Val Gln Tyr Ser Gly Gly Arg Phe Thr Ile Pro Thr Gly Ala Gly
195 200 205
Lys Pro Gly Asp Ser Gly Arg Pro Ile Phe Asp Asn Lys Gly Arg Val
210 215 220
Val Ala Ile Val Leu Gly Gly Ala Asn Glu Gly Ala Arg Thr Ala Leu
225 230 235 240
Ser Val Val Thr Trp Asn Lys Asp Ile Val Thr Lys Ile Thr Pro Glu
245 250 255
Gly Ala Glu Glu Trp 260
<210> 87
<211> 998
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV Env
<400> 87
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Leu Ala Ile Pro Val Met Cys Leu Leu Ala Asn Thr Thr
20 25 30
Phe Pro Cys Ser Gln Pro Pro Cys Thr Pro Cys Cys Tyr Glu Lys Glu
35 40 45
Pro Glu Glu Thr Leu Arg Met Leu Glu Asp Asn Val Met Arg Pro Gly
50 55 60
Tyr Tyr Gln Leu Leu Gln Ala Ser Leu Thr Cys Ser Pro His Arg Gln
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Thr Met Asp Trp Thr Trp
85 90 95
Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Ser Thr Lys
100 105 110
Asp Asn Phe Asn Val Tyr Lys Ala Thr Arg Pro Tyr Leu Ala His Cys
115 120 125
Pro Asp Cys Gly Glu Gly His Ser Cys His Ser Pro Val Ala Leu Glu
130 135 140
Arg Ile Arg Asn Glu Ala Thr Asp Gly Thr Leu Lys Ile Gln Val Ser
145 150 155 160
Leu Gln Ile Gly Ile Lys Thr Asp Asp Ser His Asp Trp Thr Lys Leu
165 170 175
Arg Tyr Met Asp Asn His Met Pro Ala Asp Ala Glu Arg Ala Gly Leu
180 185 190
Phe Val Arg Thr Ser Ala Pro Cys Thr Ile Thr Gly Thr Met Gly His
195 200 205
Phe Ile Leu Ala Arg Cys Pro Lys Gly Glu Thr Leu Thr Val Gly Phe
210 215 220
Thr Asp Ser Arg Lys Ile Ser His Ser Cys Thr His Pro Phe His His
225 230 235 240
Asp Pro Pro Val Ile Gly Arg Glu Lys Phe His Ser Arg Pro Gln His
245 250 255
Gly Lys Glu Leu Pro Cys Ser Thr Tyr Val Gln Ser Thr Ala Ala Thr
260 265 270
Thr Glu Glu Ile Glu Val His Met Pro Pro Asp Thr Pro Asp Arg Thr
275 280 285
Leu Met Ser Gln Gln Ser Gly Asn Val Lys Ile Thr Val Asn Gly Gln
290 295 300
Thr Val Arg Tyr Lys Cys Asn Cys Gly Gly Ser Asn Glu Gly Leu Thr
305 310 315 320
Thr Thr Asp Lys Val Ile Asn Asn Cys Lys Val Asp Gln Cys His Ala
325 330 335
Ala Val Thr Asn His Lys Lys Trp Gln Tyr Asn Ser Pro Leu Val Pro
340 345 350
Arg Asn Ala Glu Leu Gly Asp Arg Lys Gly Lys Ile His Ile Pro Phe
355 360 365
Pro Leu Ala Asn Val Thr Cys Arg Val Pro Lys Ala Arg Asn Pro Thr
370 375 380
Val Thr Tyr Gly Lys Asn Gln Val Ile Met Leu Leu Tyr Pro Asp His
385 390 395 400
Pro Thr Leu Leu Ser Tyr Arg Asn Met Gly Glu Glu Pro Asn Tyr Gln
405 410 415
Glu Glu Trp Val Met His Lys Lys Glu Val Val Leu Thr Val Pro Thr
420 425 430
Glu Gly Leu Glu Val Thr Trp Gly Asn Asn Glu Pro Tyr Lys Tyr Trp
435 440 445
Pro Gln Leu Ser Thr Asn Gly Thr Ala His Gly His Pro His Glu Ile
450 455 460
Ile Leu Tyr Tyr Tyr Glu Leu Tyr Pro Thr Met Thr Val Val Val Val
465 470 475 480
Ser Val Ala Thr Phe Ile Leu Leu Ser Met Val Gly Met Ala Ala Gly
485 490 495
Met Cys Met Cys Ala Arg Arg Arg Cys Ile Thr Pro Tyr Glu Leu Thr
500 505 510
Pro Gly Ala Thr Val Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ile Cys Cys Ile Arg
515 520 525
Thr Ala Lys Ala Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Thr Met Asp Trp
530 535 540
Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Tyr
545 550 555 560
Glu His Val Thr Val Ile Pro Asn Thr Val Gly Val Pro Tyr Lys Thr
565 570 575
Leu Val Asn Arg Pro Gly Tyr Ser Pro Met Val Leu Glu Met Glu Leu
580 585 590
Leu Ser Val Thr Leu Glu Pro Thr Leu Ser Leu Asp Tyr Ile Thr Cys
595 600 605
Glu Tyr Lys Thr Val Ile Pro Ser Pro Tyr Val Lys Cys Cys Gly Thr
610 615 620
Ala Glu Cys Lys Asp Lys Asn Leu Pro Asp Tyr Ser Cys Lys Val Phe
625 630 635 640
Thr Gly Val Tyr Pro Phe Met Trp Gly Gly Ala Tyr Cys Phe Cys Asp
645 650 655
Ala Glu Asn Thr Gln Leu Ser Glu Ala His Val Glu Lys Ser Glu Ser
660 665 670
Cys Lys Thr Glu Phe Ala Ser Ala Tyr Arg Ala His Thr Ala Ser Ala
675 680 685
Ser Ala Lys Leu Arg Val Leu Tyr Gln Gly Asn Asn Ile Thr Val Thr
690 695 700
Ala Tyr Ala Asn Gly Asp His Ala Val Thr Val Lys Asp Ala Lys Phe
705 710 715 720
Ile Val Gly Pro Met Ser Ser Ala Trp Thr Pro Phe Asp Asn Lys Ile
725 730 735
Val Val Tyr Lys Gly Asp Val Tyr Asn Met Asp Tyr Pro Pro Phe Gly
740 745 750
Ala Gly Arg Pro Gly Gln Phe Gly Asp Ile Gln Ser Arg Thr Pro Glu
755 760 765
Ser Lys Asp Val Tyr Ala Asn Thr Gln Leu Val Leu Gln Arg Pro Ala
770 775 780
Val Gly Thr Val His Val Pro Tyr Ser Gln Ala Pro Ser Gly Phe Lys
785 790 795 800
Tyr Trp Leu Lys Glu Arg Gly Ala Ser Leu Gln His Thr Ala Pro Phe
805 810 815
Gly Cys Gln Ile Ala Thr Asn Pro Val Arg Ala Val Asn Cys Ala Val
820 825 830
Gly Asn Met Pro Ile Ser Ile Asp Ile Pro Glu Ala Ala Phe Thr Arg
835 840 845
Val Val Asp Ala Pro Ser Leu Thr Asp Met Ser Cys Glu Val Pro Ala
850 855 860
Cys Thr His Ser Ser Asp Phe Gly Gly Val Ala Ile Ile Lys Tyr Ala
865 870 875 880
Ala Ser Lys Lys Gly Lys Cys Ala Val His Ser Met Thr Asn Ala Val
885 890 895
Thr Ile Arg Glu Ala Glu Ile Glu Val Glu Gly Asn Ser Gln Leu Gln
900 905 910
Ile Ser Phe Ser Thr Ala Leu Ala Ser Ala Glu Phe Arg Val Gln Val
915 920 925
Cys Ser Thr Gln Val His Cys Ala Ala Glu Cys His Pro Pro Lys Asp
930 935 940
His Ile Val Asn Tyr Pro Ala Ser His Thr Thr Leu Gly Val Gln Asp
945 950 955 960
Ile Ser Ala Thr Ala Met Ser Trp Val Gln Lys Ile Thr Gly Gly Val
965 970 975
Gly Leu Val Val Ala Val Ala Ala Leu Ile Leu Ile Val Val Leu Cys
980 985 990
Val Ser Phe Ser Arg His 995
<210> 88
<211> 980
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV Env
<400> 88
Ser Leu Ala Ile Pro Val Met Cys Leu Leu Ala Asn Thr Thr Phe Pro
1 5 10 15
Cys Ser Gln Pro Pro Cys Thr Pro Cys Cys Tyr Glu Lys Glu Pro Glu
20 25 30
Glu Thr Leu Arg Met Leu Glu Asp Asn Val Met Arg Pro Gly Tyr Tyr
35 40 45
Gln Leu Leu Gln Ala Ser Leu Thr Cys Ser Pro His Arg Gln Arg Arg
50 55 60
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Thr Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu
65 70 75 80
Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Ser Thr Lys Asp Asn
85 90 95
Phe Asn Val Tyr Lys Ala Thr Arg Pro Tyr Leu Ala His Cys Pro Asp
100 105 110
Cys Gly Glu Gly His Ser Cys His Ser Pro Val Ala Leu Glu Arg Ile
115 120 125
Arg Asn Glu Ala Thr Asp Gly Thr Leu Lys Ile Gln Val Ser Leu Gln
130 135 140
Ile Gly Ile Lys Thr Asp Asp Ser His Asp Trp Thr Lys Leu Arg Tyr
145 150 155 160
Met Asp Asn His Met Pro Ala Asp Ala Glu Arg Ala Gly Leu Phe Val
165 170 175
Arg Thr Ser Ala Pro Cys Thr Ile Thr Gly Thr Met Gly His Phe Ile
180 185 190
Leu Ala Arg Cys Pro Lys Gly Glu Thr Leu Thr Val Gly Phe Thr Asp
195 200 205
Ser Arg Lys Ile Ser His Ser Cys Thr His Pro Phe His His Asp Pro
210 215 220
Pro Val Ile Gly Arg Glu Lys Phe His Ser Arg Pro Gln His Gly Lys
225 230 235 240
Glu Leu Pro Cys Ser Thr Tyr Val Gln Ser Thr Ala Ala Thr Thr Glu
245 250 255
Glu Ile Glu Val His Met Pro Pro Asp Thr Pro Asp Arg Thr Leu Met
260 265 270
Ser Gln Gln Ser Gly Asn Val Lys Ile Thr Val Asn Gly Gln Thr Val
275 280 285
Arg Tyr Lys Cys Asn Cys Gly Gly Ser Asn Glu Gly Leu Thr Thr Thr
290 295 300
Asp Lys Val Ile Asn Asn Cys Lys Val Asp Gln Cys His Ala Ala Val
305 310 315 320
Thr Asn His Lys Lys Trp Gln Tyr Asn Ser Pro Leu Val Pro Arg Asn
325 330 335
Ala Glu Leu Gly Asp Arg Lys Gly Lys Ile His Ile Pro Phe Pro Leu
340 345 350
Ala Asn Val Thr Cys Arg Val Pro Lys Ala Arg Asn Pro Thr Val Thr
355 360 365
Tyr Gly Lys Asn Gln Val Ile Met Leu Leu Tyr Pro Asp His Pro Thr
370 375 380
Leu Leu Ser Tyr Arg Asn Met Gly Glu Glu Pro Asn Tyr Gln Glu Glu
385 390 395 400
Trp Val Met His Lys Lys Glu Val Val Leu Thr Val Pro Thr Glu Gly
405 410 415
Leu Glu Val Thr Trp Gly Asn Asn Glu Pro Tyr Lys Tyr Trp Pro Gln
420 425 430
Leu Ser Thr Asn Gly Thr Ala His Gly His Pro His Glu Ile Ile Leu
435 440 445
Tyr Tyr Tyr Glu Leu Tyr Pro Thr Met Thr Val Val Val Val Ser Val
450 455 460
Ala Thr Phe Ile Leu Leu Ser Met Val Gly Met Ala Ala Gly Met Cys
465 470 475 480
Met Cys Ala Arg Arg Arg Cys Ile Thr Pro Tyr Glu Leu Thr Pro Gly
485 490 495
Ala Thr Val Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ile Cys Cys Ile Arg Thr Ala
500 505 510
Lys Ala Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Thr Met Asp Trp Thr Trp
515 520 525
Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His Ser Tyr Glu His
530 535 540
Val Thr Val Ile Pro Asn Thr Val Gly Val Pro Tyr Lys Thr Leu Val
545 550 555 560
Asn Arg Pro Gly Tyr Ser Pro Met Val Leu Glu Met Glu Leu Leu Ser
565 570 575
Val Thr Leu Glu Pro Thr Leu Ser Leu Asp Tyr Ile Thr Cys Glu Tyr
580 585 590
Lys Thr Val Ile Pro Ser Pro Tyr Val Lys Cys Cys Gly Thr Ala Glu
595 600 605
Cys Lys Asp Lys Asn Leu Pro Asp Tyr Ser Cys Lys Val Phe Thr Gly
610 615 620
Val Tyr Pro Phe Met Trp Gly Gly Ala Tyr Cys Phe Cys Asp Ala Glu
625 630 635 640
Asn Thr Gln Leu Ser Glu Ala His Val Glu Lys Ser Glu Ser Cys Lys
645 650 655
Thr Glu Phe Ala Ser Ala Tyr Arg Ala His Thr Ala Ser Ala Ser Ala
660 665 670
Lys Leu Arg Val Leu Tyr Gln Gly Asn Asn Ile Thr Val Thr Ala Tyr
675 680 685
Ala Asn Gly Asp His Ala Val Thr Val Lys Asp Ala Lys Phe Ile Val
690 695 700
Gly Pro Met Ser Ser Ala Trp Thr Pro Phe Asp Asn Lys Ile Val Val
705 710 715 720
Tyr Lys Gly Asp Val Tyr Asn Met Asp Tyr Pro Pro Phe Gly Ala Gly
725 730 735
Arg Pro Gly Gln Phe Gly Asp Ile Gln Ser Arg Thr Pro Glu Ser Lys
740 745 750
Asp Val Tyr Ala Asn Thr Gln Leu Val Leu Gln Arg Pro Ala Val Gly
755 760 765
Thr Val His Val Pro Tyr Ser Gln Ala Pro Ser Gly Phe Lys Tyr Trp
770 775 780
Leu Lys Glu Arg Gly Ala Ser Leu Gln His Thr Ala Pro Phe Gly Cys
785 790 795 800
Gln Ile Ala Thr Asn Pro Val Arg Ala Val Asn Cys Ala Val Gly Asn
805 810 815
Met Pro Ile Ser Ile Asp Ile Pro Glu Ala Ala Phe Thr Arg Val Val
820 825 830
Asp Ala Pro Ser Leu Thr Asp Met Ser Cys Glu Val Pro Ala Cys Thr
835 840 845
His Ser Ser Asp Phe Gly Gly Val Ala Ile Ile Lys Tyr Ala Ala Ser
850 855 860
Lys Lys Gly Lys Cys Ala Val His Ser Met Thr Asn Ala Val Thr Ile
865 870 875 880
Arg Glu Ala Glu Ile Glu Val Glu Gly Asn Ser Gln Leu Gln Ile Ser
885 890 895
Phe Ser Thr Ala Leu Ala Ser Ala Glu Phe Arg Val Gln Val Cys Ser
900 905 910
Thr Gln Val His Cys Ala Ala Glu Cys His Pro Pro Lys Asp His Ile
915 920 925
Val Asn Tyr Pro Ala Ser His Thr Thr Leu Gly Val Gln Asp Ile Ser
930 935 940
Ala Thr Ala Met Ser Trp Val Gln Lys Ile Thr Gly Gly Val Gly Leu
945 950 955 960
Val Val Ala Val Ala Ala Leu Ile Leu Ile Val Val Leu Cys Val Ser
965 970 975
Phe Ser Arg His 980
<210> 89 <211> 1374
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E1
<400> 89
atggactgga cctggatcct gtttctggtc gctgctgcca cccgggtgca cagctacgag 60
cacgtgaccg tgatccccaa caccgtgggc gtgccctaca agaccctggt gaacaggccc 120
ggctacagcc ccatggtgct ggaaatggaa ctgctgtccg tgaccctgga acccaccctg 180
agcctggact acatcacctg cgagtacaag acagtgatcc ccagccccta cgtgaagtgc 240
tgcggcaccg ccgagtgcaa ggacaagaac ctgcccgact acagctgcaa ggtgttcacc 300
ggcgtgtacc ccttcatgtg gggcggagcc tactgcttct gcgacgccga gaacacccag 360
ctgtccgagg cccacgtgga gaagagcgag agctgcaaga ccgagttcgc cagcgcctac 420
cgggcccaca cagccagcgc cagcgccaag ctgcgggtgc tgtaccaggg caacaacatc 480
accgtgaccg cctacgccaa cggcgaccac gccgtgacag tgaaggacgc caagttcatc 540
gtgggcccca tgagcagcgc ctggaccccc ttcgacaaca agatcgtggt gtacaagggc 600
gacgtgtaca acatggacta cccccccttc ggagccggca gacccggcca gttcggcgac 660
atccagagcc ggacccccga gagcaaggac gtgtacgcca atacccagct ggtgctgcag 720
agacccgccg tgggcaccgt gcacgtgcct tacagccagg cccccagcgg cttcaagtac 780
tggctgaaag agaggggcgc cagcctgcag cacaccgccc ccttcggctg ccagatcgcc 840
accaaccccg tgcgggccgt gaattgtgcc gtgggcaaca tgcccatcag catcgacatc 900
cccgaggccg ccttcaccag ggtggtggac gcccccagcc tgaccgacat gagctgcgag 960
gtgcccgcct gcacccacag cagcgacttc ggcggcgtgg ccatcatcaa gtacgccgcc 1020
agcaagaaag gcaagtgcgc cgtgcacagc atgaccaatg ccgtgaccat ccgggaggcc 1080
gagatcgagg tggagggcaa cagccagctg cagatcagct tcagcaccgc cctggccagc 1140
gccgagttcc gggtgcaggt ctgcagcacc caggtgcact gtgccgccga gtgtcacccc 1200
cccaaggacc acatcgtgaa ctaccccgcc agccacacca ccctgggcgt gcaggacatc 1260
agcgccaccg ccatgagctg ggtgcagaag atcacaggcg gcgtcggcct ggtggtggcc 1320
gtggccgccc tgatcctgat cgtggtgctg tgcgtgagct tcagccggca ctga 1374
<210> 90
<211> 1326
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E2 <400> 90
atggactgga cctggatcct gttcctggtc gctgctgcca caagagtgca cagcagcacc 60
aaggacaact tcaacgtgta caaggccacc cggccctacc tggcccactg ccccgattgc 120
ggcgagggcc acagctgcca cagccccgtg gccctggaac ggatccggaa cgaggccacc 180
gacggcaccc tgaagatcca ggtgtccctg cagatcggca tcaagaccga cgacagccac 240
gactggacca agctgcggta catggacaac cacatgcccg ccgacgccga gagagccggc 300
ctgttcgtcc ggaccagcgc cccctgcacc atcaccggca ccatgggcca cttcatcctg 360
gcccggtgcc ccaagggcga gacactgacc gtgggcttca ccgacagccg gaagatcagc 420
cactcctgca cccacccctt ccaccacgac ccccccgtga tcggccggga gaagttccac 480
agcaggcccc agcacggcaa agagctgccc tgcagcacct acgtgcagag caccgccgcc 540
acaaccgagg aaatcgaggt gcacatgccc cccgataccc ccgaccggac cctgatgagc 600
cagcagagcg gcaacgtgaa gatcaccgtg aacggccaga ccgtgcggta caagtgcaac 660
tgcggcggca gcaacgaggg cctgaccacc accgacaagg tgatcaacaa ctgcaaggtg 720
gaccagtgcc acgccgccgt gaccaaccac aagaagtggc agtacaacag ccccctggtg 780
ccccggaatg ccgagctggg cgaccggaag ggcaagatcc acatcccctt ccccctggcc 840
aacgtgacct gccgggtgcc caaggcccgg aaccccaccg tgacctacgg caagaaccag 900
gtgatcatgc tgctgtaccc cgaccacccc accctgctgt cctaccggaa catgggcgag 960
gaacccaact accaagagga gtgggtcatg cacaagaaag aagtggtgct gaccgtcccc 1020
accgagggcc tggaagtgac ctggggcaac aacgagccct acaagtactg gccccagctg 1080
tccaccaacg gcaccgccca cggccacccc cacgagatca tcctgtacta ctacgagctg 1140
taccctacca tgaccgtggt ggtggtgtcc gtggccacct ttatcctgct gtccatggtc 1200
ggcatggccg ctggcatgtg catgtgcgcc aggaggcgct gtatcacccc ctacgagctg 1260
acacctggcg ccaccgtgcc ctttctgctg tccctgatct gctgcatccg gaccgccaag 1320
gcctga 1326
<210> 91
<211> 840
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность капсида CHIKV
<400> 91
atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca cccgggtgca cagcatggaa 60
ttcatcccca cccagacctt ctacaaccgg cgctaccagc ccagaccctg gacccccagg 120
cccaccatcc aggtgatccg gcccaggccc agaccccaga ggcaggccgg gcagctggca 180
cagctgatca gcgccgtgaa caagctgacc atgagagccg tgccccagca gaagcccagg 240
cggaaccgga agaacaagaa gcagaagcag aaacagcagg ccccccagaa caacaccaac 300
cagaagaagc agccccccaa gaagaagcct gcccagaaga agaagaaacc cggcaggcgg 360
gagcggatgt gcatgaagat cgagaacgac tgcatcttcg aggtgaagca cgagggcaag 420
gtgaccggct acgcctgcct ggtcggcgac aaagtgatga agcccgccca cgtgaagggc 480
accatcgaca acgccgacct ggccaagctg gccttcaagc ggagcagcaa gtacgacctg 540
gaatgcgccc agatccccgt gcacatgaag agcgacgcca gcaagttcac ccacgagaag 600
cccgagggct actacaactg gcaccacgga gccgtgcagt acagcggcgg caggttcacc 660
atccccacag gcgccggaaa gcccggcgac agcggcaggc ccatcttcga caacaagggc 720
cgggtggtgg ccatcgtgct gggcggagcc aacgagggcg ccaggaccgc cctgagcgtg 780
gtgacctgga acaaggacat cgtgaccaag atcacccccg agggcgccga agagtggtga 840
<210> 92 <211> 1320 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E1
<400> 92
tacgagcacg tgaccgtgat ccccaacacc gtgggcgtgc cctacaagac cctggtgaac 60
aggcccggct acagccccat ggtgctggaa atggaactgc tgtccgtgac cctggaaccc 120
accctgagcc tggactacat cacctgcgag tacaagacag tgatccccag cccctacgtg 180
aagtgctgcg gcaccgccga gtgcaaggac aagaacctgc ccgactacag ctgcaaggtg 240
ttcaccggcg tgtacccctt catgtggggc ggagcctact gcttctgcga cgccgagaac 300
acccagctgt ccgaggccca cgtggagaag agcgagagct gcaagaccga gttcgccagc 360
gcctaccggg cccacacagc cagcgccagc gccaagctgc gggtgctgta ccagggcaac 420
aacatcaccg tgaccgccta cgccaacggc gaccacgccg tgacagtgaa ggacgccaag 480
ttcatcgtgg gccccatgag cagcgcctgg acccccttcg acaacaagat cgtggtgtac 540
aagggcgacg tgtacaacat ggactacccc cccttcggag ccggcagacc cggccagttc 600
ggcgacatcc agagccggac ccccgagagc aaggacgtgt acgccaatac ccagctggtg 660
ctgcagagac ccgccgtggg caccgtgcac gtgccttaca gccaggcccc cagcggcttc 720
aagtactggc tgaaagagag gggcgccagc ctgcagcaca ccgccccctt cggctgccag 780
atcgccacca accccgtgcg ggccgtgaat tgtgccgtgg gcaacatgcc catcagcatc 840
gacatccccg aggccgcctt caccagggtg gtggacgccc ccagcctgac cgacatgagc 900
tgcgaggtgc ccgcctgcac ccacagcagc gacttcggcg gcgtggccat catcaagtac 960
gccgccagca agaaaggcaa gtgcgccgtg cacagcatga ccaatgccgt gaccatccgg 1020
gaggccgaga tcgaggtgga gggcaacagc cagctgcaga tcagcttcag caccgccctg 1080
gccagcgccg agttccgggt gcaggtctgc agcacccagg tgcactgtgc cgccgagtgt 1140
caccccccca aggaccacat cgtgaactac cccgccagcc acaccaccct gggcgtgcag 1200
gacatcagcg ccaccgccat gagctgggtg cagaagatca caggcggcgt cggcctggtg 1260
gtggccgtgg ccgccctgat cctgatcgtg gtgctgtgcg tgagcttcag ccggcactga 1320
<210> 93 <211> 1273 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV E1
<400> 93
cagcaccaag gacaacttca acgtgtacaa ggccacccgg ccctacctgg cccactgccc 60
cgattgcggc gagggccaca gctgccacag ccccgtggcc ctggaacgga tccggaacga 120
ggccaccgac ggcaccctga agatccaggt gtccctgcag atcggcatca agaccgacga 180
cagccacgac tggaccaagc tgcggtacat ggacaaccac atgcccgccg acgccgagag 240
agccggcctg ttcgtccgga ccagcgcccc ctgcaccatc accggcacca tgggccactt 300
catcctggcc cggtgcccca agggcgagac actgaccgtg ggcttcaccg acagccggaa 360
gatcagccac tcctgcaccc accccttcca ccacgacccc cccgtgatcg gccgggagaa 420
gttccacagc aggccccagc acggcaaaga gctgccctgc agcacctacg tgcagagcac 480
cgccgccaca accgaggaaa tcgaggtgca catgcccccc gatacccccg accggaccct 540
gatgagccag cagagcggca acgtgaagat caccgtgaac ggccagaccg tgcggtacaa 600
gtgcaactgc ggcggcagca acgagggcct gaccaccacc gacaaggtga tcaacaactg 660
caaggtggac cagtgccacg ccgccgtgac caaccacaag aagtggcagt acaacagccc 720
cctggtgccc cggaatgccg agctgggcga ccggaagggc aagatccaca tccccttccc 780
cctggccaac gtgacctgcc gggtgcccaa ggcccggaac cccaccgtga cctacggcaa 840
gaaccaggtg atcatgctgc tgtaccccga ccaccccacc ctgctgtcct accggaacat 900
gggcgaggaa cccaactacc aagaggagtg ggtcatgcac aagaaagaag tggtgctgac 960
cgtccccacc gagggcctgg aagtgacctg gggcaacaac gagccctaca agtactggcc 1020
ccagctgtcc accaacggca ccgcccacgg ccacccccac gagatcatcc tgtactacta 1080
cgagctgtac cctaccatga ccgtggtggt ggtgtccgtg gccaccttta tcctgctgtc 1140
catggtcggc atggccgctg gcatgtgcat gtgcgccagg aggcgctgta tcacccccta 1200
cgagctgaca cctggcgcca ccgtgccctt tctgctgtcc ctgatctgct gcatccggac 1260
cgccaaggcc tga 1273
<210> 94
<211> 786
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность капсида CHIKV
<400> 94
atggaattca tccccaccca gaccttctac aaccggcgct accagcccag accctggacc 60
cccaggccca ccatccaggt gatccggccc aggcccagac cccagaggca ggccgggcag 120
ctggcacagc tgatcagcgc cgtgaacaag ctgaccatga gagccgtgcc ccagcagaag 180
cccaggcgga accggaagaa caagaagcag aagcagaaac agcaggcccc ccagaacaac 240
accaaccaga agaagcagcc ccccaagaag aagcctgccc agaagaagaa gaaacccggc 300
aggcgggagc ggatgtgcat gaagatcgag aacgactgca tcttcgaggt gaagcacgag 360
ggcaaggtga ccggctacgc ctgcctggtc ggcgacaaag tgatgaagcc cgcccacgtg 420
aagggcacca tcgacaacgc cgacctggcc aagctggcct tcaagcggag cagcaagtac 480
gacctggaat gcgcccagat ccccgtgcac atgaagagcg acgccagcaa gttcacccac 540
gagaagcccg agggctacta caactggcac cacggagccg tgcagtacag cggcggcagg 600
ttcaccatcc ccacaggcgc cggaaagccc ggcgacagcg gcaggcccat cttcgacaac 660
aagggccggg tggtggccat cgtgctgggc ggagccaacg agggcgccag gaccgccctg 720
agcgtggtga cctggaacaa ggacatcgtg accaagatca cccccgaggg cgccgaagag 780
tggtga 786
<210> 95
<211> 3008
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV Env
<400> 95
atggactgga cctggatcct gttcctggtg gctgctgcca cccgcgtgca cagcagcctg 60
gccatccccg tgatgtgcct gctggccaac accaccttcc cttgcagcca gcccccctgc 120
accccctgct gctacgagaa agagcccgag gaaaccctgc ggatgctgga agataacgtg 180
atgaggcccg gctactacca gctgctccag gccagcctga cctgctcccc ccaccggcag 240
cggcggcgcg ggcgcaaacg ccgctctgcc accatggact ggacctggat cctgttcctg 300
gtcgctgctg ccacaagagt gcacagcagc accaaggaca acttcaacgt gtacaaggcc 360
acccggccct acctggccca ctgccccgat tgcggcgagg gccacagctg ccacagcccc 420
gtggccctgg aacggatccg gaacgaggcc accgacggca ccctgaagat ccaggtgtcc 480
ctgcagatcg gcatcaagac cgacgacagc cacgactgga ccaagctgcg gtacatggac 540
aaccacatgc ccgccgacgc cgagagagcc ggcctgttcg tccggaccag cgccccctgc 600
accatcaccg gcaccatggg ccacttcatc ctggcccggt gccccaaggg cgagacactg 660
accgtgggct tcaccgacag ccggaagatc agccactcct gcacccaccc cttccaccac 720
gacccccccg tgatcggccg ggagaagttc cacagcaggc cccagcacgg caaagagctg 780
ccctgcagca cctacgtgca gagcaccgcc gccacaaccg aggaaatcga ggtgcacatg 840
ccccccgata cccccgaccg gaccctgatg agccagcaga gcggcaacgt gaagatcacc 900
gtgaacggcc agaccgtgcg gtacaagtgc aactgcggcg gcagcaacga gggcctgacc 960
accaccgaca aggtgatcaa caactgcaag gtggaccagt gccacgccgc cgtgaccaac 1020
cacaagaagt ggcagtacaa cagccccctg gtgccccgga atgccgagct gggcgaccgg 1080
aagggcaaga tccacatccc cttccccctg gccaacgtga cctgccgggt gcccaaggcc 1140
cggaacccca ccgtgaccta cggcaagaac caggtgatca tgctgctgta ccccgaccac 1200
cccaccctgc tgtcctaccg gaacatgggc gaggaaccca actaccaaga ggagtgggtc 1260
atgcacaaga aagaagtggt gctgaccgtc cccaccgagg gcctggaagt gacctggggc 1320
aacaacgagc cctacaagta ctggccccag ctgtccacca acggcaccgc ccacggccac 1380
ccccacgaga tcatcctgta ctactacgag ctgtacccta ccatgaccgt ggtggtggtg 1440
tccgtggcca cctttatcct gctgtccatg gtcggcatgg ccgctggcat gtgcatgtgc 1500
gccaggaggc gctgtatcac cccctacgag ctgacacctg gcgccaccgt gccctttctg 1560
ctgtccctga tctgctgcat ccggaccgcc aaggcccgcg ggcgcaaacg ccgctctgcc 1620
accatggact ggacctggat cctgtttctg gtcgctgctg ccacccgggt gcacagctac 1680
gagcacgtga ccgtgatccc caacaccgtg ggcgtgccct acaagaccct ggtgaacagg 1740
cccggctaca gccccatggt gctggaaatg gaactgctgt ccgtgaccct ggaacccacc 1800
ctgagcctgg actacatcac ctgcgagtac aagacagtga tccccagccc ctacgtgaag 1860
tgctgcggca ccgccgagtg caaggacaag aacctgcccg actacagctg caaggtgttc 1920
accggcgtgt accccttcat gtggggcgga gcctactgct tctgcgacgc cgagaacacc 1980
cagctgtccg aggcccacgt ggagaagagc gagagctgca agaccgagtt cgccagcgcc 2040
taccgggccc acacagccag cgccagcgcc aagctgcggg tgctgtacca gggcaacaac 2100
atcaccgtga ccgcctacgc caacggcgac cacgccgtga cagtgaagga cgccaagttc 2160
atcgtgggcc ccatgagcag cgcctggacc cccttcgaca acaagatcgt ggtgtacaag 2220
ggcgacgtgt acaacatgga ctaccccccc ttcggagccg gcagacccgg ccagttcggc 2280
gacatccaga gccggacccc cgagagcaag gacgtgtacg ccaataccca gctggtgctg 2340
cagagacccg ccgtgggcac cgtgcacgtg ccttacagcc aggcccccag cggcttcaag 2400
tactggctga aagagagggg cgccagcctg cagcacaccg cccccttcgg ctgccagatc 2460
gccaccaacc ccgtgcgggc cgtgaattgt gccgtgggca acatgcccat cagcatcgac 2520
atccccgagg ccgccttcac cagggtggtg gacgccccca gcctgaccga catgagctgc 2580
gaggtgcccg cctgcaccca cagcagcgac ttcggcggcg tggccatcat caagtacgcc 2640
gccagcaaga aaggcaagtg cgccgtgcac agcatgacca atgccgtgac catccgggag 2700
gccgagatcg aggtggaggg caacagccag ctgcagatca gcttcagcac cgccctggcc 2760
agcgccgagt tccgggtgca ggtctgcagc acccaggtgc actgtgccgc cgagtgtcac 2820
ccccccaagg accacatcgt gaactacccc gccagccaca ccaccctggg cgtgcaggac 2880
atcagcgcca ccgccatgag ctgggtgcag aagatcacag gcggcgtcgg cctggtggtg 2940
gccgtggccg ccctgatcct gatcgtggtg ctgtgcgtga gcttcagccg gcactgatga 3000
gcggccgc 3008
<210> 96 <211> 2954 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусный белок CHIKV Env
<400> 96
agcctggcca tccccgtgat gtgcctgctg gccaacacca ccttcccttg cagccagccc 60
ccctgcaccc cctgctgcta cgagaaagag cccgaggaaa ccctgcggat gctggaagat 120
aacgtgatga ggcccggcta ctaccagctg ctccaggcca gcctgacctg ctccccccac 180
cggcagcggc ggcgcgggcg caaacgccgc tctgccacca tggactggac ctggatcctg 240
ttcctggtcg ctgctgccac aagagtgcac agcagcacca aggacaactt caacgtgtac 300
aaggccaccc ggccctacct ggcccactgc cccgattgcg gcgagggcca cagctgccac 360
agccccgtgg ccctggaacg gatccggaac gaggccaccg acggcaccct gaagatccag 420
gtgtccctgc agatcggcat caagaccgac gacagccacg actggaccaa gctgcggtac 480
atggacaacc acatgcccgc cgacgccgag agagccggcc tgttcgtccg gaccagcgcc 540
ccctgcacca tcaccggcac catgggccac ttcatcctgg cccggtgccc caagggcgag 600
acactgaccg tgggcttcac cgacagccgg aagatcagcc actcctgcac ccaccccttc 660
caccacgacc cccccgtgat cggccgggag aagttccaca gcaggcccca gcacggcaaa 720
gagctgccct gcagcaccta cgtgcagagc accgccgcca caaccgagga aatcgaggtg 780
cacatgcccc ccgatacccc cgaccggacc ctgatgagcc agcagagcgg caacgtgaag 840
atcaccgtga acggccagac cgtgcggtac aagtgcaact gcggcggcag caacgagggc 900
ctgaccacca ccgacaaggt gatcaacaac tgcaaggtgg accagtgcca cgccgccgtg 9 60
accaaccaca agaagtggca gtacaacagc cccctggtgc cccggaatgc cgagctgggc 1020
gaccggaagg gcaagatcca catccccttc cccctggcca acgtgacctg ccgggtgccc 1080
aaggcccgga accccaccgt gacctacggc aagaaccagg tgatcatgct gctgtacccc 1140
gaccacccca ccctgctgtc ctaccggaac atgggcgagg aacccaacta ccaagaggag 1200
tgggtcatgc acaagaaaga agtggtgctg accgtcccca ccgagggcct ggaagtgacc 1260
tggggcaaca acgagcccta caagtactgg ccccagctgt ccaccaacgg caccgcccac 1320
ggccaccccc acgagatcat cctgtactac tacgagctgt accctaccat gaccgtggtg 1380
gtggtgtccg tggccacctt tatcctgctg tccatggtcg gcatggccgc tggcatgtgc 1440
atgtgcgcca ggaggcgctg tatcaccccc tacgagctga cacctggcgc caccgtgccc 1500
tttctgctgt ccctgatctg ctgcatccgg accgccaagg cccgcgggcg caaacgccgc 1560
tctgccacca tggactggac ctggatcctg tttctggtcg ctgctgccac ccgggtgcac 1620
agctacgagc acgtgaccgt gatccccaac accgtgggcg tgccctacaa gaccctggtg 1680
aacaggcccg gctacagccc catggtgctg gaaatggaac tgctgtccgt gaccctggaa 1740
cccaccctga gcctggacta catcacctgc gagtacaaga cagtgatccc cagcccctac 1800
gtgaagtgct gcggcaccgc cgagtgcaag gacaagaacc tgcccgacta cagctgcaag 1860
gtgttcaccg gcgtgtaccc cttcatgtgg ggcggagcct actgcttctg cgacgccgag 1920
aacacccagc tgtccgaggc ccacgtggag aagagcgaga gctgcaagac cgagttcgcc 1980
agcgcctacc gggcccacac agccagcgcc agcgccaagc tgcgggtgct gtaccagggc 2040
aacaacatca ccgtgaccgc ctacgccaac ggcgaccacg ccgtgacagt gaaggacgcc 2100
aagttcatcg tgggccccat gagcagcgcc tggaccccct tcgacaacaa gatcgtggtg 2160
tacaagggcg acgtgtacaa catggactac ccccccttcg gagccggcag acccggccag 2220
ttcggcgaca tccagagccg gacccccgag agcaaggacg tgtacgccaa tacccagctg 2280
gtgctgcaga gacccgccgt gggcaccgtg cacgtgcctt acagccaggc ccccagcggc 2340
ttcaagtact ggctgaaaga gaggggcgcc agcctgcagc acaccgcccc cttcggctgc 2400
cagatcgcca ccaaccccgt gcgggccgtg aattgtgccg tgggcaacat gcccatcagc 2460
atcgacatcc ccgaggccgc cttcaccagg gtggtggacg cccccagcct gaccgacatg 2520
agctgcgagg tgcccgcctg cacccacagc agcgacttcg gcggcgtggc catcatcaag 2580
tacgccgcca gcaagaaagg caagtgcgcc gtgcacagca tgaccaatgc cgtgaccatc 2640
cgggaggccg agatcgaggt ggagggcaac agccagctgc agatcagctt cagcaccgcc 2700
ctggccagcg ccgagttccg ggtgcaggtc tgcagcaccc aggtgcactg tgccgccgag 2760
tgtcaccccc ccaaggacca catcgtgaac taccccgcca gccacaccac cctgggcgtg 2820
caggacatca gcgccaccgc catgagctgg gtgcagaaga tcacaggcgg cgtcggcctg 2880
gtggtggccg tggccgccct gatcctgatc gtggtgctgt gcgtgagctt cagccggcac 2940
tgatgagcgg ccgc 2 9 54
<210> 97
<211> 2223
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CHIKV1-IgG
<400> 97
ggatccgcca ccatggactg gacttggatt ctgtttctgg tcgccgccgc tacccgagtg 60
cattcacagg tgcagctgca gcagcctggg gccgctctgg tgaagccagg agctagcgca 120
atgatgtcct gcaaagcctc tggctacact ttcacctcct attggatcac ctgggtgaag 180
cagcgacctg gacagggact ggagtggatc ggcgacatct acccaggcac cgggagaaca 240
atctacaagg aaaaattcaa gacaaaagcc acactgactg tggacaccag ctcctctaca 300
gcttttatgc agctgaacag cctgacttcc gaggatagcg ccgtgtacta ttgcgcaaga 360
ggatacggct ctccttacta tgccctggac tattgggggc agggaactag cgtcaccgtg 420
agttcagcat ctaccaaggg accaagcgtg ttcccactgg cacctagctc caaatccact 480
tctggcggga ccgccgctct gggatgtctg gtgaaggatt acttccctga gccagtcaca 540
gtgagttgga actcaggggc tctgaccagc ggagtccaca catttcctgc agtgctgcag 600
tctagtggac tgtactccct gtcaagcgtg gtcactgtcc catcctctag tctgggcacc 660
cagacatata tctgcaacgt gaatcacaag ccatccaata ccaaagtcga taagaaagtg 720
gagcccaagt cttgtgacaa aactcatacc tgccctccct gtccagcacc tgaactgctg 780
ggaggcccaa gcgtgttcct gtttccaccc aagcctaaag acaccctgat gattagcagg 840
acaccagagg tcacttgcgt ggtcgtggac gtgagccacg aagaccccga ggtcaagttc 900
aactggtacg tggatggcgt cgaagtgcat aatgccaaga caaaaccccg ggaggaacag 960
tacaactcaa cctatcgggt cgtgagcgtc ctgacagtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020
ggaaaggagt acaagtgcaa agtgtctaat aaggccctgc cagctcccat cgaaaaaacc 1080
attagcaagg ctaaaggcca gccaagagag ccccaggtgt acacactgcc tccatcaagg 1140
gacgaactga caaagaacca ggtcagcctg acttgtctgg tgaaaggctt ctatcccagc 1200
gatatcgcag tggaatggga gtccaatggg cagcctgaga acaattacaa gaccacaccc 1260
cctgtgctgg acagcgatgg gtccttcttt ctgtattcca agctgacagt ggataaatct 1320
cggtggcagc agggaaacgt ctttagttgc tcagtgatgc acgaagccct gcacaatcat 1380
tacactcaga agagcctgtc cctgtctccc ggaaagaggg gccgcaaacg gagaagtggc 1440
tcaggggcaa ccaacttctc tctgctgaaa caggccggcg atgtggagga aaatcctggg 1500
ccaatggact ggacatggat tctgttcctg gtggcagccg ctacaagggt ccattccgac 1560
attgtgctga ctcagtctcc tgcaagtctg gccgtgtctc agggacagcg agcaaccatc 1620
agttgtaagg ctagccagtc cgtcgactac gatggggaca gttacgtgaa ctggtatcag 1680
cagaagcctg gacagtcccc aaaactgctg atctatgatg ctagtaatct ggagtcaggc 1740
attcccgcac gattctctgg aagtggctca gggacagact tcaccctgaa cattcaccct 1800
gtcgaggaag aggacgtggc tacctactat tgccaggaaa gcaatgagga cccccgcact 1860
ttcgggggag gcaccaagct ggagatcaaa cgaactgtcg cagcccccag cgtgttcatc 1920
tttccaccct cagacgaaca gctgaagagc ggaaccgcat ccgtggtgtg cctgctgaac 1980
aacttctacc cccgcgaggc caaggtccag tggaaagtgg ataacgctct gcagtcaggc 2040
aatagccagg aatccgtgac tgagcaggat tctaaggaca gtacctattc actgtcaagc 2100
acactgactc tgagcaaagc agactacgaa aagcataaag tgtatgcctg cgaagtcacc 2160
caccaggggc tgaggtctcc agtcactaag tctttcaaca gaggggaatg ctgataactc 2220
gag 2223
<210> 98 <211> 2217 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CHIKV2-IgG
<400> 98
ggatccgcca ccatggattg gacatggatt ctgtttctgg tcgccgccgc cacaagggtc 60
cactctcagg tgcagctggt gcagtcaggc tccgaactga agaaacccgg agcttctgtc 120
aaggtgagtt gcaaagcatc agggtacact ctgaccagat atgcaatgac ctgggtgcgg 180
caggcacctg gacagggact ggagtggatg ggctggatca acacatacac tggaaatcca 240
acttatgtgc agggcttcac cggacggttc gtcttttctc tggacacaag cgtgtccact 300
gcctttctgc acattacaag cctgaaggca gaggacactg ccgtgtactt ctgcgcccga 360
gaaggcggag ctaggggctt tgattattgg gggcagggca cactggtcac tgtgagctcc 420
gcttctacaa agggacctag cgtgttccca ctggcaccct ctagtaaatc taccagtggg 480
ggcacagccg ctctgggatg tctggtgaag gattacttcc ccgagcctgt caccgtgtca 540
tggaacagcg gggcactgac ctccggagtc catacatttc ccgccgtgct gcagtcaagc 600
ggactgtaca gcctgtcctc tgtggtcact gtgcctagtt caagcctggg gacccagaca 660
tatatctgca acgtgaatca caagccttct aataccaagg tcgacaaaag ggtggaacca 720
aagagctgtg ataaaactca tacctgccct ccctgtccag ctccagagct gctgggaggg 780
ccatccgtgt tcctgtttcc acccaagcct aaagacacac tgatgatttc cagaactcca 840
gaagtcacct gcgtggtcgt ggacgtgtct cacgaggacc ccgaagtcaa gttcaactgg 900
tacgtggatg gcgtcgaggt gcataatgcc aagaccaaac ccagggagga acagtacaac 960
tcaacatata gagtcgtgag cgtcctgact gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 1020
gagtataagt gcaaagtgag caataaggcc ctgcctgctc caatcgagaa aacaatttcc 1080
aaggctaaag gccagcctcg ggaaccacag gtgtacactc tgcctccaag tcgcgacgag 1140
ctgaccaaga accaggtctc tctgacatgt ctggtgaaag gcttttatcc cagtgatatc 1200
gccgtggagt gggaatcaaa tggacagcct gaaaacaatt acaagaccac accccctgtg 1260
ctggactccg atggatcttt ctttctgtat tccaagctga cagtggataa atctcgctgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa tcattacact 1380
cagaagtccc tgtctctgag tcctgggaag cggggccgca aaaggagatc aggaagcggg 1440
gccaccaact ttagcctgct gaaacaggct ggggacgtgg aggaaaatcc cggccctatg 1500
gactggacct ggattctgtt cctggtggca gccgctaccc gagtccattc ccagtctgtg 1560
ctgacacagc cacccagtgt ctcaggagca ccaggacagc gagtgacaat cagctgtact 1620
ggcagcagca gcaacattgg ggcctcccac gacgtgcatt ggtaccagca gctgcccggc 1680
accgctccta cactgctgat ctatgtcaac agcaatcgcc catccggagt gcccgatcga 1740
ttcagcggct ccaagtctgg aactagtgca tcactggcca ttaccggcct gcaggctgag 1800
gacgaagcag attactattg ccagagttac gactcaaacc tgagcgggtc cgccgtcttc 1860
ggcggaggga ctaagctgac cgtgctgggc cagcctaaag cagccccatc cgtgaccctg 1920
tttcctccat caagcgagga actgcaggct aataaggcca ccctggtgtg cctgatcagc 1980
gacttctacc caggagcagt caccgtggca tggaaggctg attcctctcc agtcaaagcc 2040
ggcgtggaaa ctaccacacc cagcaagcag tccaacaaca agtacgctgc aagttcatat 2100
ctgtccctga cccccgagca gtggaagtct cacaaatctt atagttgcca ggtgacccat 2160
gaaggctcaa ctgtggaaaa aactgtcgct cctactgaat gctcatgata actcgag 2217
<210> 99 <211> 2220 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CHIKV3-IgG
<400> 99
ggatccgcca ccatggattg gacatggatt ctgtttctgg tcgctgctgc cacacgggtg 60
cattctcagg tccagctgca ggagtcaggg ccagggctgg tcaagccttc cgaaaccctg 120
tctctgacat gcaccgtgag cggcgacagt atcagctcct actcatggag ctggattcgg 180
cagccccctg gcaaaggact ggagtggatc ggctacattc actatacagg aagcactaac 240
tataatccat cactgaagag ccgcctgacc atcagtgtgg acgcctcaaa aaaccagttc 300
tccctgaagc tgtctagtgt cactgccgct gacaccgccg tgtactattg cgcacgggat 360
tggggcggat actcaagctc ctggacatat gggatggacg tgtgggggca gggcaccaca 420
gtcacagtgt ctagtgcaag cactaaaggc ccctccgtgt ttccactggc cccctcaagc 480
aagtccacat ctgggggcac tgcagccctg ggatgtctgg tgaaggatta cttccccgag 540
cctgtcaccg tgtcctggaa ctctggagcc ctgacttccg gggtccatac ctttcccgct 600
gtgctgcagt cctctgggct gtactctctg agttcagtgg tcacagtgcc tagctcctct 660
ctgggcaccc agacatatat ctgcaacgtg aatcacaagc ctagcaatac taaggtcgac 720
aaaagggtgg aaccaaaaag ctgtgataag actcatacct gcccaccctg tccagcacca 780
gagctgctgg gagggccaag cgtgttcctg tttcctccaa agcccaaaga caccctgatg 840
atttccagaa ccccagaagt cacatgcgtg gtcgtggacg tgtctcacga ggaccccgaa 900
gtcaagttca actggtacgt ggatggcgtc gaggtgcata atgctaagac aaaaccacgc 960
gaggaacagt acaattctac atatcgagtc gtgagtgtcc tgactgtgct gcaccaggac 1020
tggctgaacg gaaaggagta caagtgcaaa gtgagcaaca aggccctgcc tgccccaatc 1080
gagaagacaa ttagcaaggc taaagggcag cctagggaac cacaggtgta cactctgccc 1140
ccttccagag acgagctgac caaaaaccag gtctctctga catgtctggt gaagggcttc 1200
tatcccagcg atatcgcagt ggagtgggaa agcaatggac agcctgaaaa caattacaag 1260
actaccccac ccgtgctgga cagtgatggc tcattctttc tgtattcaaa actgaccgtg 1320
gataagagcc ggtggcagca gggaaacgtc tttagttgct cagtgatgca cgaggccctg 1380
cacaatcatt acacacagaa aagcctgtcc ctgtctcctg ggaaacgggg ccgcaagagg 1440
agaagtggat caggggccac taacttcagc ctgctgaagc aggctgggga cgtggaggaa 1500
aatcccggcc ctatggattg gacctggatt ctgttcctgg tcgctgcagc cactcgcgtg 1560
cattccgaca ttcagatgac ccagtctccc agttcactga gcgcctccgt cggagatcga 1620
gtgacaatca cttgtagggc aagccagggg atttctaaca gtctggcctg gtaccagcag 1680
aagcccggaa aagctcctaa gctgctgctg tatgctgcaa gcagactgga atccggggtg 1740
ccttctcggt tctcaggcag cggcagcgga accgactaca ccctgacaat tagctccctg 1800
cagcctgagg atttcgccac atactattgc cagcagtact attccacccc atatacattt 1860
ggccagggaa ctaaactgga aatcaagcga accgtcgccg ctccaagcgt gttcatcttt 1920
cctccatctg acgagcagct gaagagtgga accgcttcag tggtgtgcct gctgaacaac 1980
ttctaccccc gcgaggcaaa agtccagtgg aaggtggata acgccctgca gagcggcaat 2040
tcccaggagt ctgtgaccga acaggacagt aaagattcaa catatagcct gtctagtact 2100
ctgaccctga gcaaggctga ctacgagaag cacaaagtgt atgcatgcga agtgacccac 2160
caggggctga gttctccagt gactaaatct ttcaacagag gcgaatgttg ataactcgag 2220
<210> 100 <211> 2208 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CHIKV4-IgG
<400> 100
ggatccgcca ccatggactg gacatggatt ctgttcctgg tcgctgctgc tactcgggtg 60
catagcgaag tgaggctggt cgaaagtggg ggcgggctgg agcagcccgg cggcagcctg 120
aagctgtctt gcgccgctag tggcttcacc tttagcgact acttcatgta ttgggtcaga 180
cagacacctg agaagcggct ggaatgggtg gcctacatca gcaacggcgg aatttcaaca 240
ttctatagcg acgccgtgaa aggccggttt accatctccc gagataacgc taggaataca 300
ctgtacctgc agatgtcccg gctgaagtct gaagacacag caatctacta ttgcgtccgc 360
caggtgtatg ggcagggcta cttcgattat tggggacagg ggaccacact ggctgtcagc 420
tccgcaagca ctaagggacc ctccgtgttt cccctggccc cttctagtaa aagtacctca 480
ggagggacag cagccctggg gtgtctggtg aaggactact tccctgagcc agtcaccgtg 540
tcatggaaca gcggagctct gacatccggg gtccacactt ttcctgcagt gctgcagtca 600
agcggactgt actctctgtc ctctgtggtc accgtgccaa gttcaagcct ggggacacag 660
acttatatct gcaacgtgaa tcacaagcca tccaatacaa aagtcgacaa gaaagtggaa 720
cccaagtctt gtgataaaac ccatacatgc cctccctgtc cagctcctga gctgctgggc 780
ggaccatccg tgttcctgtt tccacccaag cctaaagaca cactgatgat tagccggact 840
cccgaagtca cctgcgtggt cgtggacgtg tcccacgagg accccgaagt caagttcaac 900
tggtacgtgg atggcgtcga ggtgcataat gccaagacca aacctcgcga ggaacagtac 960
aactctactt atcgagtcgt gagtgtcctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1020
aaggagtata agtgcaaagt gtctaataag gcactgccag cccccatcga gaaaactatt 1080
agcaaggcta aaggacagcc aagggaaccc caggtgtaca ccctgcctcc atctagagac 1140
gagctgacca agaaccaggt cagcctgaca tgtctggtga aagggttcta tccttctgat 1200
atcgcagtgg agtgggaaag taatggccag ccagaaaaca attacaagac tacccctccc 1260
gtgctggact ccgatgggtc tttctttctg tattcaaagc tgaccgtgga taaaagccgc 1320
tggcagcagg gcaacgtctt tagctgctcc gtgatgcatg aggccctgca caatcattac 1380
actcagaaat ctctgagtct gtcaccaggg aagcgaggac gaaaaaggag aagcggctcc 1440
ggagctacca acttcagcct gctgaagcag gcaggcgacg tggaggaaaa tcctggacca 1500
atggattgga cttggattct gttcctggtg gctgcagcca cccgagtcca ctcccagatc 1560
gtgctgattc agtctccagc cattatgtct gctagtctgg gcgagcgcgt cactatgacc 1620
tgtacagcca gcagcagcgt gagcagcagc tacctgcatt ggtatcagca gaagcctggc 1680
tctagtccaa aactgtggat ctactcaagc ttcagtctgg catcaggagt gccagcaagg 1740
ttttcaggga gcggctccgg aacatcttac agtctgacaa ttagcactat ggaggctgaa 1800
gacgctgcaa cttactattg ccaccagtat ctgagaagcc catggacctt cggcggcggc 1860
agcaagctgg aaatcaaaac tgtcgccgct cccagcgtgt tcatctttcc accctcagac 1920
gagcagctga agagtgggac cgcctcagtg gtgtgcctgc tgaacaactt ctaccctaga 1980
gaagccaagg tccagtggaa agtggataac gctctgcaga gcggaaattc ccaggagtct 2040
gtgacagaac aggacagtaa ggattcaact tatagcctgt cctctactct gaccctgtcc 2100
aaagcagatt acgagaagca taaagtgtat gcctgcgagg tcacccacca ggggctgcgg 2160
tctcccgtca caaagagctt caacaggggc gaatgttgat aactcgag 2208
<210> 101
<211> 133
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-3F12E9-VH
<400> 101
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Gly Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala 130
<210> 102
<211> 132
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-3F12E9-VL
<400> 102
Met Met Ser Pro Ala Gln Phe Leu Phe Leu Leu Val Leu Trp Ile Arg
1 5 10 15
Glu Thr Asn Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser
20 25 30
Val Thr Ile Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Ile Lys
130
<210> 103
<211> 134
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-8A9F9-VH
<400> 103
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser 130
<210> 104
<211> 131
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-8A9F9-VL
<400> 104
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala
1 5 10 15
Ser Arg Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ile Pro Leu Ser Leu Pro Val
20 25 30
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
35 40 45
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys
100 105 110
Phe Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys 130
<210> 105
<211> 82
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-8D10F4-VH
<400> 105
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Lys Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr
<210> 106
<211> 131
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-8D10F4-VL
<400> 106
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val
20 25 30
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
35 40 45
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala 100
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro 115 120
Glu Ile Lys 130
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> ZIKV-IC2A6-VH <400> 107
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile 1 5
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val 20
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser
35 40
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val 50 55
Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys 105 110
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 125
Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly
10 15
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 25 30
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 45
Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser 130
<210> 108
<211> 131
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-IC2A6-VH
<400> 108
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val
20 25 30
Cys Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
35 40 45
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys
100 105 110
Phe Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys 130
<210> 109 <211> 146
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-ID4G7-VH
<400> 109
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ala Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Ile Ser Lys Ile Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser
115 120 125
Tyr Glu Asn Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser 145
<210> 110
<211> 131
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ZIKV-ID4G7-VL
<400> 110
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Ser Phe Gly Asn Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Asn Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys 130
<210> 111 <211> 728
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG4 против Зика (3F12E9): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 111
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Gly Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Ser Pro Asn Met Val Pro His Ala His
225 230 235 240
His Ala Gln Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
275 280 285
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
355 360 365
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Arg Gly Arg Lys
450 455 460
Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
465 470 475 480
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val
485 490 495
Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Val Val
500 505 510
Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly Gln Pro Ala
515 520 525
Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys
530 535 540
Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg
545 550 555 560
Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
565 570 575
Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
580 585 590
Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe
595 600 605
Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val
610 615 620
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
625 630 635 640
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
645 650 655
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
660 665 670
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
675 680 685
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
690 695 700
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
705 710 715 720
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725
<210> 112
<211> 731
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Сигнальный пептид тяжелой цепи человеческого IgG-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный
Участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи-VL-CL (каппа)
<400> 112
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Gly Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
225 230 235 240
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
275 280 285
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305
310
315
320
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
340 345 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
355 360 365
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385 390 395 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
420 425 430
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg
450 455 460
Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
465 470 475 480
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln
485 490 495
Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly
500 505 510
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
515 520 525
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
530 535 540
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
545 550 555 560
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
565
570
575
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
580 585 590
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
595 600 605
Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
610 615 620
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
625 630 635 640
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
645 650 655
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
660 665 670
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
675 680 685
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
690 695 700
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
705 710 715 720
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 113 <211> 729
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Сигнальный пептид тяжелой цепи человеческого IgG-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный
Участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи-VL-CL (каппа)
<400> 113
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Ser Pro Asn Met Val Pro His Ala
225 230 235 240
His His Ala Gln Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Arg Gly Arg
450 455 460
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
465 470 475 480
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln
485 490 495
Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Val
500 505 510
Val Met Thr Gln Ile Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln
515 520 525
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly
530 535 540
Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
545 550 555 560
Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg
565 570 575
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
580 585 590
Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Ser Thr His
595 600 605
Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
610 615 620
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
625 630 635 640
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
645 650 655
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
660 665 670
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
675 680 685
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
690 695 700
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
705 710 715 720
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725
<210> 114 <211> 732
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (8A9F9): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 114
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
465 470 475 480
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu
485 490 495
Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr
500 505 510
Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ile Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
515 520 525
Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His
530 535 540
Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
545 550 555 560
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
565 570 575
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
580 585 590
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln
595 600 605
Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
610 615 620
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
625 630 635 640
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
645 650 655
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
660 665 670
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
675 680 685
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
690 695 700
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
705 710 715 720
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 115 <211> 728
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG4 против Зика (8D10F4): Сигнальный пептид тяжелой цепи человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа легкой цепи
-VL-CL (каппа )
<400> 115
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Ser Pro Asn Met Val Pro His Ala
225
230
235
240
His His Ala Gln Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Arg Gly Arg
450 455 460
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
465 470 475 480
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln
485
490
495
Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Val
500 505 510
Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln
515 520 525
Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly
530 535 540
Asn Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
545 550 555 560
Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg
565 570 575
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg
580 585 590
Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His
595 600 605
Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Val
610 615 620
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
625 630 635 640
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
645 650 655
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
660 665 670
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
675 680 685
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
690 695 700
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
705 710 715 720
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725
<210> 116
<211> <212> <213>
732
Белок
Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (8D10F4): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 116
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
465 470 475 480
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu
485 490 495
Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr
500 505 510
Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
515 520 525
Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His
530 535 540
Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
545 550 555 560
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
565 570 575
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
580 585 590
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln
595 600 605
Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
610 615 620
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
625 630 635 640
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
645 650 655
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
660 665 670
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
675 680 685
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
690 695 700
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
705 710 715 720
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 117
<211> 740
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG4 против Зика (1D4G7): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 117
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Ile Ser Lys Ile Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser
115 120 125
Tyr Glu Asn Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
145 150 155 160
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Arg Val Ser Pro Asn Met Val Pro His Ala His His Ala Gln
245 250 255
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser
500 505 510
Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Leu Thr Gln
515 520 525
Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser
530 535 540
Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe Gly Asn Ser Phe Met His
545 550 555 560
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu
565 570 575
Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
580 585 590
Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp
595 600 605
Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe
610 615 620
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
625 630 635 640
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
645 650 655
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
660 665 670
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
675 680 685
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
690 695 700
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
705 710 715 720
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
725 730 735
Arg Gly Glu Cys 740
<210> 118 <211> 743
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (1D4G7): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 118
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Ile Ser Lys Ile Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser
115 120 125
Tyr Glu Asn Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys
465 470 475 480
Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
485 490 495
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val
500 505 510
Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val
515 520 525
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala
530 535 540
Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe Gly Asn Ser
545 550 555 560
Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
565 570 575
Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
580 585 590
Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu
595 600 605
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Tyr Pro
610 615 620
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
625 630 635 640
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
645 650 655
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
660 665 670
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
675 680 685
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
690 695 700
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
705 710 715 720
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
725 730 735
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 740
<210> 119 <211> 732
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (8A9F9): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
VH-CH1-шарнирная область-ОТ2 (с вариантом LALA в 4-ом и 5-ом остатке)-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и
пептид P2A
-сигнальный пептид человеческой каппа легкой цепи-VL-CL (каппа)
<400> 119
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
130 135 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340
345
350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
465 470 475 480
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu
485 490 495
Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr
500 505 510
Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ile Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
515 520 525
Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His
530 535 540
Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
545 550 555 560
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
565 570 575
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
580 585 590
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln
595 600 605
Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
610 615 620
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
625 630 635 640
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
645 650 655
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
660 665 670
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
675 680 685
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
690 695 700
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
705 710 715 720
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 120 <211> 731
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (3F12E9): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
VH-CH1-шарнирная область-ОТ2 (с вариантом LALA в 4-ом и 5-ом остатке)-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и
пептид P2A
-сигнальный пептид человеческой каппа легкой цепи-VL-CL (каппа)
<400> 120
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Gly Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
225 230 235 240
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
275 280 285
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305 310 315 320
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
340 345 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
355 360 365
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385 390 395 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
420 425 430
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg
450 455 460
Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
465 470 475 480
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln
485 490 495
Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly
500 505 510
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
515 520 525
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
530 535 540
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
545 550 555 560
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
565 570 575
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
580 585 590
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
595 600 605
Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
610 615 620
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
625 630 635 640
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
645 650 655
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
660 665 670
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
675 680 685
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
690 695 700
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
705 710 715 720
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 121 <211> 780
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG4 против Зика (IC2A6): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 121
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu
145 150 155 160
Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp
165 170 175
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
180 185 190
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
195 200 205
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
210 215 220
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
225 230 235 240
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
245 250 255
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
260 265 270
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Ser Pro Asn Met
275 280 285
Val Pro His Ala His His Ala Gln Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
290 295 300
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
305 310 315 320
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
325 330 335
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
340 345 350
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
355 360 365
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
370 375 380
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
385 390 395 400
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
405 410 415
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
420 425 430
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
435 440 445
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
450 455 460
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
465 470 475 480
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
485 490 495
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
500 505 510
Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
515 520 525
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val
530 535 540
Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala
545 550 555 560
Tyr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Cys
565 570 575
Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val
580 585 590
His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly
595 600 605
Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly
610 615 620
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
625 630 635 640
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe
645 650 655
Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
660 665 670
Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
675 680 685
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
690 695 700
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
705 710 715 720
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
725 730 735
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
740 745 750
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
755 760 765
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
770 775 780
<210> <211> <212> 122 784
Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1 против Зика (IC2A6): Сигнальный пептид тяжелой цепи
человеческого IgG
-VH-CH1-шарнирная область-CH2-CH3-специальный участок расщепления фурином-линкер 'GSG' и пептид P2A-сигнальный пептид человеческой каппа
легкой цепи
-VL-CL ( каппа )
<400> 122
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Ser Val Thr Val Ser Ser Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu
145 150 155 160
Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser His Trp
165 170 175
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
180 185 190
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
195 200 205
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
210 215 220
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
225 230 235 240
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
245 250 255
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
260 265 270
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
275 280 285
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
290 295 300
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
305 310 315 320
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
325 330 335
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
340 345 350
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
355 360 365
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
370 375 380
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
385 390 395 400
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
405 410 415
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
420 425 430
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
435 440 445
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
450 455 460
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
465 470 475 480
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
485 490 495
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
500 505 510
Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr
515 520 525
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
530 535 540
Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile
545 550 555 560
Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu
565 570 575
Pro Val Cys Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
580 585 590
Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln
595 600 605
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg
610 615 620
Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
625 630 635 640
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr
645 650 655
Phe Cys Phe Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr
660 665 670
Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
675 680 685
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
690 695 700
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
705 710 715 720
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
725 730 735
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
740 745 750
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
755 760 765
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
770 775 780
<210> 123
<211> 702
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-prME
<400> 123
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ile Ile Gly Leu Leu Leu Thr Thr Ala Met Ala Ala Glu
20 25 30
Ile Thr Arg Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Met Tyr Leu Asp Arg Asn Asp
35 40 45
Ala Gly Glu Ala Ile Ser Phe Pro Thr Thr Leu Gly Met Asn Lys Cys
50 55 60
Tyr Ile Gln Ile Met Asp Leu Gly His Met Cys Asp Ala Thr Met Ser
65 70 75 80
Tyr Glu Cys Pro Met Leu Asp Glu Gly Val Glu Pro Asp Asp Val Asp
85 90 95
Cys Trp Cys Asn Thr Thr Ser Thr Trp Val Val Tyr Gly Thr Cys His
100 105 110
His Lys Lys Gly Glu Ala Arg Arg Ser Arg Arg Ala Val Thr Leu Pro
115 120 125
Ser His Ser Thr Arg Lys Leu Gln Thr Arg Ser Gln Thr Trp Leu Glu
130 135 140
Ser Arg Glu Tyr Thr Lys His Leu Ile Arg Val Glu Asn Trp Ile Phe
145 150 155 160
Arg Asn Pro Gly Phe Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ile Ala Trp Leu Leu
165 170 175
Gly Ser Ser Thr Ser Gln Lys Val Ile Tyr Leu Val Met Ile Leu Leu
180 185 190
Ile Ala Pro Ala Tyr Ser Ile Arg Cys Ile Gly Val Ser Asn Arg Asp
195 200 205
Phe Val Glu Gly Met Ser Gly Gly Thr Trp Val Asp Val Val Leu Glu
210 215 220
His Gly Gly Cys Val Thr Val Met Ala Gln Asp Lys Pro Thr Val Asp
225 230 235 240
Ile Glu Leu Val Thr Thr Thr Val Ser Asn Met Ala Glu Val Arg Ser
245 250 255
Tyr Cys Tyr Glu Ala Ser Ile Ser Asp Met Ala Ser Asp Ser Arg Cys
260 265 270
Pro Thr Gln Gly Glu Ala Tyr Leu Asp Lys Gln Ser Asp Thr Gln Tyr
275 280 285
Val Cys Lys Arg Thr Leu Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly
290 295 300
Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys Ala Lys Phe Thr Cys Ser
305 310 315 320
Lys Lys Met Thr Gly Lys Ser Ile Gln Pro Glu Asn Leu Glu Tyr Arg
325 330 335
Ile Met Leu Ser Val His Gly Ser Gln His Ser Gly Met Ile Val Asn
340 345 350
Asp Ile Gly His Glu Thr Asp Glu Asn Arg Ala Lys Val Glu Val Thr
355 360 365
Pro Asn Ser Pro Arg Ala Glu Ala Thr Leu Gly Gly Phe Gly Ser Leu
370 375 380
Gly Leu Asp Cys Glu Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Ser Asp Leu Tyr
385 390 395 400
Tyr Leu Thr Met Asn Asn Lys His Trp Leu Val His Lys Glu Trp Phe
405 410 415
His Asp Ile Pro Leu Pro Trp His Ala Gly Ala Asp Thr Gly Thr Pro
420 425 430
His Trp Asn Asn Lys Glu Ala Leu Val Glu Phe Lys Asp Ala His Ala
435 440 445
Lys Arg Gln Thr Val Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Val His
450 455 460
Thr Ala Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ala Glu Met Asp Gly Ala Lys Gly
465 470 475 480
Arg Leu Phe Ser Gly His Leu Lys Cys Arg Leu Lys Met Asp Lys Leu
485 490 495
Arg Leu Lys Gly Val Ser Tyr Ser Leu Cys Thr Ala Ala Phe Thr Phe
500 505 510
Thr Lys Val Pro Ala Glu Thr Leu His Gly Thr Val Thr Val Glu Val
515 520 525
Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys Val Pro Ala Gln Met Ala
530 535 540
Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn
545 550 555 560
Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser Lys Met Met Leu Glu Leu
565 570 575
Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Lys
580 585 590
Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser Gly Ser Thr Ile Gly Lys Ala
595 600 605
Phe Glu Ala Thr Val Arg Gly Ala Lys Arg Met Ala Val Leu Gly Asp
610 615 620
Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly Gly Val Phe Asn Ser Leu Gly
625 630 635 640
Lys Gly Ile His Gln Ile Phe Gly Ala Ala Phe Lys Ser Leu Phe Gly
645 650 655
Gly Met Ser Trp Phe Ser Gln Ile Leu Ile Gly Thr Leu Leu Val Trp
660 665 670
Leu Gly Leu Asn Thr Lys Asn Gly Ser Ile Ser Leu Thr Cys Leu Ala
675 680 685
Leu Gly Gly Val Met Ile Phe Leu Ser Thr Ala Val Ser Ala
690 695 700
<210> 124
<211> 2112
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-prME (конструкция 1)
<400> 124
atggactgga cctggattct gtttctggtc gctgctgcta caagagtgca ttctgggatt 60
attggactgc tgctgactac tgccatggca gcagagatca ccaggagagg cagcgcctac 120
tatatgtacc tggaccggtc tgatgccggc aaggccatca gctttgccac cacactgggc 180
gtgaataagt gccacgtgca gatcatggac ctgggccaca tgtgcgatgc caccatgtcc 240
tacgagtgtc caatgctgga cgagggcgtg gagcccgacg atgtggattg ctggtgtaac 300
accacatcta catgggtggt gtatggcacc tgtcaccaca agaagggaga ggcacggcgc 360
agcaggagag cagtgacact gccctctcac agcaccagga agctgcagac aagaagccag 420
acctggctgg agtcccggga gtatacaaag cacctgatca aggtggagaa ctggatcttt 480
cgcaatccag gattcgcact ggtggcagtg gcaatcgcat ggctgctggg cagctccacc 540
tcccagaaag tgatctacct ggtcatgatc ctgctgatcg cccctgccta ttccatcagg 600
tgcatcggcg tgtctaatag agacttcgtg gagggcatgt ctggcggcac ctgggtggat 660
gtggtgctgg agcacggcgg atgcgtgaca gtgatggccc aggacaagcc aaccgtggat 720
atcgagctgg tgaccacaac cgtgagcaac atggccgagg tgaggtccta ctgctatgag 780
gcctccatct ctgacatggc cagcgattcc agatgtccca cccagggcga ggcctacctg 840
gacaagcagt ccgatacaca gtacgtgtgc aagcggaccc tggtggacag gggatgggga 900
aatggatgtg gcctgtttgg caagggctct ctggtgacat gcgccaagtt cacctgttct 960
aagaagatga ccggcaagag catccagccc gagaacctgg agtacaggat catgctgagc 1020
gtgcacggca gccagcactc cggcatgaca gtgaacgaca tcggctatga gaccgatgag 1080
aatagggcca aggtggaggt gacacctaac agcccaagag ccgaggccac cctgggcggc 1140
tttggctccc tgggactgga ctgcgagcct agaacaggcc tggacttctc cgatctgtac 1200
tatctgacca tgaacaataa gcactggctg gtgcacaagg agtggtttca cgacatccca 1260
ctgccatggc acgcaggagc agatacagga accccacact ggaacaataa ggaggccctg 1320
gtggagttca aggatgccca cgccaagcgc cagacagtgg tggtgctggg cagccaggag 1380
ggagcagtgc acaccgccct ggcaggcgcc ctggaggccg agatggacgg cgccaagggc 1440
aagctgtttt ccggccacct gaagtgccgg ctgaagatgg ataagctgcg cctgaagggc 1500
gtgtcttaca gcctgtgcac agccgccttc accttcacca aggtgcctgc cgagaccctg 1560
cacggcacag tgaccgtgga ggtgcagtat gccggcacag acggcccctg taagatccct 1620
gtgcagatgg ccgtggatat gcagacactg acccctgtgg gccggctgat caccgcaaat 1680
ccagtgatca cagagtccac cgagaactct aagatgatgc tggagctgga ccctcccttc 1740
ggcgacagct acatcgtgat cggcgtgggc gacaagaaga tcacacacca ctggcaccgc 1800
tccggctcta caatcggcaa ggccttcgag gcaaccgtgc ggggcgccaa gaggatggcc 1860
gtgctgggcg acaccgcatg ggattttggc tccgtgggcg gcgtgttcaa ctctctgggc 1920
aagggcatcc accagatctt cggcgccgcc tttaagtctc tgttcggcgg aatgtcttgg 1980
ttcagccaga tcctgatcgg cacactgctg gtgtggctgg gcctgaacac caagaatggc 2040
agcatctctc tgacttgtct ggccctggga ggcgtgatga ttttcctgtc cactgccgtg 2100
tctgcctgat aa 2112
<210> 125
<211> 702
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-prME (конструкция 1)
<400> 125
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ile Ile Gly Leu Leu Leu Thr Thr Ala Met Ala Ala Glu
20 25 30
Ile Thr Arg Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Met Tyr Leu Asp Arg Ser Asp
35 40 45
Ala Gly Lys Ala Ile Ser Phe Ala Thr Thr Leu Gly Val Asn Lys Cys
50 55 60
His Val Gln Ile Met Asp Leu Gly His Met Cys Asp Ala Thr Met Ser
65 70 75 80
Tyr Glu Cys Pro Met Leu Asp Glu Gly Val Glu Pro Asp Asp Val Asp
85 90 95
Cys Trp Cys Asn Thr Thr Ser Thr Trp Val Val Tyr Gly Thr Cys His
100 105 110
His Lys Lys Gly Glu Ala Arg Arg Ser Arg Arg Ala Val Thr Leu Pro
115 120 125
Ser His Ser Thr Arg Lys Leu Gln Thr Arg Ser Gln Thr Trp Leu Glu
130 135 140
Ser Arg Glu Tyr Thr Lys His Leu Ile Lys Val Glu Asn Trp Ile Phe
145 150 155 160
Arg Asn Pro Gly Phe Ala Leu Val Ala Val Ala Ile Ala Trp Leu Leu
165 170 175
Gly Ser Ser Thr Ser Gln Lys Val Ile Tyr Leu Val Met Ile Leu Leu
180 185 190
Ile Ala Pro Ala Tyr Ser Ile Arg Cys Ile Gly Val Ser Asn Arg Asp
195 200 205
Phe Val Glu Gly Met Ser Gly Gly Thr Trp Val Asp Val Val Leu Glu
210 215 220
His Gly Gly Cys Val Thr Val Met Ala Gln Asp Lys Pro Thr Val Asp
225 230 235 240
Ile Glu Leu Val Thr Thr Thr Val Ser Asn Met Ala Glu Val Arg Ser
245 250 255
Tyr Cys Tyr Glu Ala Ser Ile Ser Asp Met Ala Ser Asp Ser Arg Cys
260 265 270
Pro Thr Gln Gly Glu Ala Tyr Leu Asp Lys Gln Ser Asp Thr Gln Tyr
275 280 285
Val Cys Lys Arg Thr Leu Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly
290 295 300
Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys Ala Lys Phe Thr Cys Ser
305 310 315 320
Lys Lys Met Thr Gly Lys Ser Ile Gln Pro Glu Asn Leu Glu Tyr Arg
325 330 335
Ile Met Leu Ser Val His Gly Ser Gln His Ser Gly Met Thr Val Asn
340 345 350
Asp Ile Gly Tyr Glu Thr Asp Glu Asn Arg Ala Lys Val Glu Val Thr
355 360 365
Pro Asn Ser Pro Arg Ala Glu Ala Thr Leu Gly Gly Phe Gly Ser Leu
370 375 380
Gly Leu Asp Cys Glu Pro Arg Thr Gly Leu Asp Phe Ser Asp Leu Tyr
385 390 395 400
Tyr Leu Thr Met Asn Asn Lys His Trp Leu Val His Lys Glu Trp Phe
405 410 415
His Asp Ile Pro Leu Pro Trp His Ala Gly Ala Asp Thr Gly Thr Pro
420 425 430
His Trp Asn Asn Lys Glu Ala Leu Val Glu Phe Lys Asp Ala His Ala
435 440 445
Lys Arg Gln Thr Val Val Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Val His
450 455 460
Thr Ala Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ala Glu Met Asp Gly Ala Lys Gly
465 470 475 480
Lys Leu Phe Ser Gly His Leu Lys Cys Arg Leu Lys Met Asp Lys Leu
485 490 495
Arg Leu Lys Gly Val Ser Tyr Ser Leu Cys Thr Ala Ala Phe Thr Phe
500 505 510
Thr Lys Val Pro Ala Glu Thr Leu His Gly Thr Val Thr Val Glu Val
515 520 525
Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys Ile Pro Val Gln Met Ala
530 535 540
Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn
545 550 555 560
Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser Lys Met Met Leu Glu Leu
565 570 575
Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Asp Lys
580 585 590
Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser Gly Ser Thr Ile Gly Lys Ala
595 600 605
Phe Glu Ala Thr Val Arg Gly Ala Lys Arg Met Ala Val Leu Gly Asp
610 615 620
Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly Gly Val Phe Asn Ser Leu Gly
625 630 635 640
Lys Gly Ile His Gln Ile Phe Gly Ala Ala Phe Lys Ser Leu Phe Gly
645 650 655
Gly Met Ser Trp Phe Ser Gln Ile Leu Ile Gly Thr Leu Leu Val Trp
660 665 670
Leu Gly Leu Asn Thr Lys Asn Gly Ser Ile Ser Leu Thr Cys Leu Ala
675 680 685
Leu Gly Gly Val Met Ile Phe Leu Ser Thr Ala Val Ser Ala
690 695 700
<210> 126 <211> 1119 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-NS!
<400> 126
atggactgga cttggattct gttcctggtg gctgccgcta caagagtgca tagcgtggga 60
tgcagcgtgg acttcagcaa gaaggagacc cgctgcggaa caggcgtgtt cgtgtacaac 120
gacgtggagg cttggagaga ccggtacaag taccaccccg atagccctag aagactggcc 180
gcagccgtga aacaggcttg ggaagaggga atttgcggca tcagcagcgt gtcccggatg 240
gagaacatca tgtggaagag cgtggagggc gagctgaacg ctatcctgga ggagaacggc 300
gtgcagctga cagtggtcgt gggatcagtg aagaacccca tgtggagagg ccctcagagg 360
ctgccagtgc cagtgaacga actgcctcac ggttggaagg cttggggcaa gagctacttc 420
gtgagggccg ccaagaccaa caacagcttc gtggtggacg gcgataccct caaggagtgt 480
cctctgaagc accgggcttg gaacagcttc ctggtggaag accacggctt tggcgtgttc 540
cacacaagcg tctggctgaa ggtccgcgaa gactacagcc tggagtgcga tccagcagtg 600
atcggcacag ccgtgaaggg aaaagaggcc gctcacagcg acctgggcta ttggatcgag 660
agcgagaaga acgacacttg gaggctgaag cgggcccacc tgatcgagat gaagacttgc 720
gagtggccca agagccacac tctgtggaca gacggcgtgg aagagagcga cctgatcatc 780
cctaagagcc tggccggacc tctgtctcat cacaacacca gggagggcta cagaacccag 840
gtgaagggac cttggcacag cgaagagctg gagatccgct tcgaggagtg tccaggaacc 900
aaggtgcacg tggaggagac ttgcggaacc agaggcccta gcctgagaag cacaacagcc 960
agcggacgcg tgatcgagga gtggtgttgt agggagtgca ccatgcctcc tctgagcttc 1020
agggccaagg acggttgttg gtacggcatg gagatcaggc ccagaaagga gccagagagc 1080
aacctcgtgc ggtctatggt gacagccgga agctgataa 1119
<210> 127
<211> 371
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-NS!
<400> 127
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Val Gly Cys Ser Val Asp Phe Ser Lys Lys Glu Thr Arg Cys
20 25 30
Gly Thr Gly Val Phe Val Tyr Asn Asp Val Glu Ala Trp Arg Asp Arg
35 40 45
Tyr Lys Tyr His Pro Asp Ser Pro Arg Arg Leu Ala Ala Ala Val Lys
50 55 60
Gln Ala Trp Glu Glu Gly Ile Cys Gly Ile Ser Ser Val Ser Arg Met
65 70 75 80
Glu Asn Ile Met Trp Lys Ser Val Glu Gly Glu Leu Asn Ala Ile Leu
85 90 95
Glu Glu Asn Gly Val Gln Leu Thr Val Val Val Gly Ser Val Lys Asn
100 105 110
Pro Met Trp Arg Gly Pro Gln Arg Leu Pro Val Pro Val Asn Glu Leu
115 120 125
Pro His Gly Trp Lys Ala Trp Gly Lys Ser Tyr Phe Val Arg Ala Ala
130 135 140
Lys Thr Asn Asn Ser Phe Val Val Asp Gly Asp Thr Leu Lys Glu Cys
145 150 155 160
Pro Leu Lys His Arg Ala Trp Asn Ser Phe Leu Val Glu Asp His Gly
165 170 175
Phe Gly Val Phe His Thr Ser Val Trp Leu Lys Val Arg Glu Asp Tyr
180 185 190
Ser Leu Glu Cys Asp Pro Ala Val Ile Gly Thr Ala Val Lys Gly Lys
195 200 205
Glu Ala Ala His Ser Asp Leu Gly Tyr Trp Ile Glu Ser Glu Lys Asn
210 215 220
Asp Thr Trp Arg Leu Lys Arg Ala His Leu Ile Glu Met Lys Thr Cys
225 230 235 240
Glu Trp Pro Lys Ser His Thr Leu Trp Thr Asp Gly Val Glu Glu Ser
245 250 255
Asp Leu Ile Ile Pro Lys Ser Leu Ala Gly Pro Leu Ser His His Asn
260 265 270
Thr Arg Glu Gly Tyr Arg Thr Gln Val Lys Gly Pro Trp His Ser Glu
275 280 285
Glu Leu Glu Ile Arg Phe Glu Glu Cys Pro Gly Thr Lys Val His Val
290 295 300
Glu Glu Thr Cys Gly Thr Arg Gly Pro Ser Leu Arg Ser Thr Thr Ala
305 310 315 320
Ser Gly Arg Val Ile Glu Glu Trp Cys Cys Arg Glu Cys Thr Met Pro
325 330 335
Pro Leu Ser Phe Arg Ala Lys Asp Gly Cys Trp Tyr Gly Met Glu Ile
340 345 350
Arg Pro Arg Lys Glu Pro Glu Ser Asn Leu Val Arg Ser Met Val Thr
355 360 365
Ala Gly Ser 370
<210> 128
<211> 438
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-капсид
<400> 128
atggactgga cttggatcct gtttctggtg gccgccgcca caagagtgca tagcaagaac 60
cccaagaaga agagcggcgg cttcaggatc gtgaacatgc tgaagcgggg cgtggctaga 120
gtgaaccctc tgggaggcgg actgaagaga ctgccagcag gactgctcct gggacacgga 180
cctattcgca tggtgctggc catcctggct ttcctgaggt tcaccgccat caagcccagc 240
ctgggactga tcaaccgctg gggttcagtc ggcaagaagg aggccatgga gatcatcaag 300
aagttcaaga aggacctggc cgccatgctg aggatcatca acgcccggaa ggagcggaag 3 60
agaagaggag ccgacaccag catcggcatc atcggactgc tgctgacaac cgccatggct 42 0
gccgagatct gatgatga 438
<210> 129
<211> 143
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Zika IgE лидер-капсид
<400> 129
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Lys Asn Pro Lys Lys Lys Ser Gly Gly Phe Arg Ile Val Asn
20 25 30
Met Leu Lys Arg Gly Val Ala Arg Val Asn Pro Leu Gly Gly Gly Leu
35 40 45
Lys Arg Leu Pro Ala Gly Leu Leu Leu Gly His Gly Pro Ile Arg Met
50 55 60
Val Leu Ala Ile Leu Ala Phe Leu Arg Phe Thr Ala Ile Lys Pro Ser
65 70 75 80
Leu Gly Leu Ile Asn Arg Trp Gly Ser Val Gly Lys Lys Glu Ala Met
85 90 95
Glu Ile Ile Lys Lys Phe Lys Lys Asp Leu Ala Ala Met Leu Arg Ile
100 105 110
Ile Asn Ala Arg Lys Glu Arg Lys Arg Arg Gly Ala Asp Thr Ser Ile
115 120 125
Gly Ile Ile Gly Leu Leu Leu Thr Thr Ala Met Ala Ala Glu Ile
130 135 140
<210> 130
<211> 2130
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Zika IgE лидер-prME MR766
<400> 130
atggactgga cttggattct gttcctggtg gctgccgcta caagagtgca ttcaggagcc 60
gacacctcta tcggcatcgt gggactgctg ctgaccacag ccatggccgc cgaaattacc 120
aggaggggca gcgcctacta catgtacctg gacagaagcg acgccggaaa agccatcagc 180
ttcgccacaa ccctgggcgt caacaagtgc cacgtgcaga tcatggacct gggccacatg 240
tgcgacgcca caatgagcta cgagtgccct atgctggacg agggagtgga accagacgac 300
gtcgactgtt ggtgcaacac cacctccact tgggtcgtgt acggcacttg ccaccacaag 360
aagggcgagg ccagaagaag cagaagagcc gtgaccctgc ctagccacag caccagaaag 420
ctgcagacca ggagccagac ttggctggaa agccgcgagt acaccaagca cctgatcaag 480
gtggagaatt ggatcttccg gaaccccggc ttcacactgg tggccgtggc aatcgcttgg 540
ctgctgggat ctagcaccag ccagaaagtg atctacctgg tcatgatcct gctgatcgcc 600
ccagcctaca gcatccgctg tatcggagtg agcaaccggg acttcgtgga gggaatgagc 660
ggaggaactt gggtggacgt ggtgctggaa cacggaggtt gcgtgacagt gatggctcag 720
gacaagccca ccgtggatat cgagctggtg accaccaccg tgtccaacat ggccgaagtg 780
cgcagctact gctacgaggc cagtatctcc gacatggcca gcgatagccg ctgtcctaca 840
cagggagagg cctatctgga caagcagagc gacacccagt acgtctgcaa gaggaccctc 900
gtggatagag gctggggaaa cggttgcgga ctgttcggaa agggcagcct cgtgacttgc 9 60
gccaagttca cttgcagcaa gaagatgacc ggcaagtcta tccagcccga gaacctggag 1020
taccggatca tgctgagcgt gcacggaagc cagcacagcg gcatgatcgt gaacgacgag 1080
ggatacgaga ccgacgagaa cagggccaag gtggaagtga cccctaacag ccctagagcc 1140
gaagccacac tgggaggatt tggcagcctg ggactggatt gcgagcctag aacaggcctg 1200
gacttcagcg acctgtacta cctgaccatg aacaacaagc attggctggt gcacaaggag 1260
tggttccacg acatccctct gccttggcac gcaggagccg atacaggcac acctcattgg 1320
aacaacaagg aggccctggt ggagttcaag gacgctcacg ccaagagaca gacagtggtg 1380
gtgctgggaa gccaggaagg agcagtgcat acagccctgg caggagctct ggaagcagaa 1440
atggacggcg ctaagggcag actgttcagc ggacacctca agtgccggct gaagatggac 1500
aagctgcggc tgaagggcgt gtcttacagc ctctgcaccg cagccttcac cttcaccaag 1560
gtgccagcag agacactgca cggaacagtg accgtggaag tgcagtacgc cggaacagac 1620
ggaccttgca aagtgccagc ccagatggca gtggacatgc agacactgac cccagtggga 1680
aggctgatca ccgctaaccc cgtcatcacc gagagcaccg agaacagcaa gatgatgctg 1740
gagctggacc cccccttcgg cgatagctac atcgtgatcg gcgtgggcga caagaagatc 1800
acccaccatt ggcacagaag cggcagcaca atcggcaagg ctttcgaggc caccgtgaga 1860
ggagctaaga gaatggccgt gctgggagac accgcttggg attttggcag cgtgggagga 1920
gtgttcaaca gcctgggcaa gggcatccac cagatcttcg gagccgcctt caagagcctg 1980
ttcggcggca tgtcttggtt cagccagatc ctgatcggaa cactcctcgt ctggctggga 2040 ctgaacacca agaacggcag catcagcctg acttgtctgg ccctgggagg cgtgatgatc 2100 ttcctgagca ccgccgtgtc cgcttgataa 2130
<210> 131
<211> 708
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Zika IgE лидер-prME MR766
<400> 131
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ala Asp Thr Ser Ile Gly Ile Val Gly Leu Leu Leu Thr
20 25 30
Thr Ala Met Ala Ala Glu Ile Thr Arg Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Met
35 40 45
Tyr Leu Asp Arg Ser Asp Ala Gly Lys Ala Ile Ser Phe Ala Thr Thr
50 55 60
Leu Gly Val Asn Lys Cys His Val Gln Ile Met Asp Leu Gly His Met
65 70 75 80
Cys Asp Ala Thr Met Ser Tyr Glu Cys Pro Met Leu Asp Glu Gly Val
85 90 95
Glu Pro Asp Asp Val Asp Cys Trp Cys Asn Thr Thr Ser Thr Trp Val
100 105 110
Val Tyr Gly Thr Cys His His Lys Lys Gly Glu Ala Arg Arg Ser Arg
115 120 125
Arg Ala Val Thr Leu Pro Ser His Ser Thr Arg Lys Leu Gln Thr Arg
130 135 140
Ser Gln Thr Trp Leu Glu Ser Arg Glu Tyr Thr Lys His Leu Ile Lys
145 150 155 160
Val Glu Asn Trp Ile Phe Arg Asn Pro Gly Phe Thr Leu Val Ala Val
165 170 175
Ala Ile Ala Trp Leu Leu Gly Ser Ser Thr Ser Gln Lys Val Ile Tyr
180 185 190
Leu Val Met Ile Leu Leu Ile Ala Pro Ala Tyr Ser Ile Arg Cys Ile
195 200 205
Gly Val Ser Asn Arg Asp Phe Val Glu Gly Met Ser Gly Gly Thr Trp
210 215 220
Val Asp Val Val Leu Glu His Gly Gly Cys Val Thr Val Met Ala Gln
225 230 235 240
Asp Lys Pro Thr Val Asp Ile Glu Leu Val Thr Thr Thr Val Ser Asn
245 250 255
Met Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Glu Ala Ser Ile Ser Asp Met
260 265 270
Ala Ser Asp Ser Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala Tyr Leu Asp Lys
275 280 285
Gln Ser Asp Thr Gln Tyr Val Cys Lys Arg Thr Leu Val Asp Arg Gly
290 295 300
Trp Gly Asn Gly Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys
305 310 315 320
Ala Lys Phe Thr Cys Ser Lys Lys Met Thr Gly Lys Ser Ile Gln Pro
325 330 335
Glu Asn Leu Glu Tyr Arg Ile Met Leu Ser Val His Gly Ser Gln His
340 345 350
Ser Gly Met Ile Val Asn Asp Glu Gly Tyr Glu Thr Asp Glu Asn Arg
355 360 365
Ala Lys Val Glu Val Thr Pro Asn Ser Pro Arg Ala Glu Ala Thr Leu
370 375 380
Gly Gly Phe Gly Ser Leu Gly Leu Asp Cys Glu Pro Arg Thr Gly Leu
385 390 395 400
Asp Phe Ser Asp Leu Tyr Tyr Leu Thr Met Asn Asn Lys His Trp Leu
405 410 415
Val His Lys Glu Trp Phe His Asp Ile Pro Leu Pro Trp His Ala Gly
420 425 430
Ala Asp Thr Gly Thr Pro His Trp Asn Asn Lys Glu Ala Leu Val Glu
435 440 445
Phe Lys Asp Ala His Ala Lys Arg Gln Thr Val Val Val Leu Gly Ser
450 455 460
Gln Glu Gly Ala Val His Thr Ala Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ala Glu
465 470 475 480
Met Asp Gly Ala Lys Gly Arg Leu Phe Ser Gly His Leu Lys Cys Arg
485 490 495
Leu Lys Met Asp Lys Leu Arg Leu Lys Gly Val Ser Tyr Ser Leu Cys
500 505 510
Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Val Pro Ala Glu Thr Leu His Gly
515 520 525
Thr Val Thr Val Glu Val Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys
530 535 540
Val Pro Ala Gln Met Ala Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly
545 550 555 560
Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser
565 570 575
Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val
580 585 590
Ile Gly Val Gly Asp Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser Gly
595 600 605
Ser Thr Ile Gly Lys Ala Phe Glu Ala Thr Val Arg Gly Ala Lys Arg
610 615 620
Met Ala Val Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly Gly
625 630 635 640
Val Phe Asn Ser Leu Gly Lys Gly Ile His Gln Ile Phe Gly Ala Ala
645 650 655
Phe Lys Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Phe Ser Gln Ile Leu Ile
660 665 670
Gly Thr Leu Leu Val Trp Leu Gly Leu Asn Thr Lys Asn Gly Ser Ile
675 680 685
Ser Leu Thr Cys Leu Ala Leu Gly Gly Val Met Ile Phe Leu Ser Thr
690 695 700
Ala Val Ser Ala 705
<210> 132 <211> 2130 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Zika IgE лидер-prME Бразилия
<400> 132
atggactgga cttggattct gttcctggtg gctgccgcta caagagtgca ttcaggagcc 60
gacacatcag tgggcatcgt gggactgctg ctgacaacag ctatggccgc cgaagtgacc 120
agaagaggca gcgcctacta catgtacctg gaccggaacg acgccggaga ggccattagc 180
tttcctacca ccctgggcat gaacaagtgc tacatccaga tcatggacct gggccacatg 240
tgcgacgcta caatgagcta cgagtgcccc atgctggacg aaggagtgga gccagacgac 300
gtggattgtt ggtgcaacac cacctccact tgggtcgtgt acggcacctg tcaccacaaa 360
aagggcgaag ccaggagaag cagaagagcc gtgaccctgc ctagccactc taccaggaag 420
ctgcagacca ggagccagac ttggctggag agcagggagt acaccaagca cctgatccgc 480
gtggagaatt ggatcttcag aaaccccggc ttcgccctgg cagccgcagc aattgcttgg 540
ctgctgggat ctagcaccag ccagaaggtc atctacctgg tcatgatcct gctgatcgcc 600
cccgcttaca gcatccgctg tatcggcgtg tccaacaggg acttcgtgga gggcatgagc 660
ggaggaactt gggtggacgt ggtgctggaa cacggaggtt gtgtgaccgt gatggctcag 720
gacaagccta ccgtggacat cgagctggtg accacaaccg tgtccaacat ggccgaggtc 780
cgcagctatt gctacgaggc cagcatcagc gatatggcca gcgatagcag gtgtcccacc 840
cagggtgaag cttacctgga caagcagagc gacacccagt acgtgtgcaa gcggacactg 900
gtggatagag gctggggaaa cggttgcggc ctgtttggca agggaagcct ggtgacctgc 960
gccaagttcg catgcagcaa gaagatgacc ggcaagagca tccagcccga gaacctggag 1020
taccggatca tgctgagcgt gcacggatct cagcatagcg gaatgatcgt gaacgacacc 1080
ggccacgaga ccgacgaaaa cagggccaag gtggaaatca cccccaactc tcctagagcc 1140
gaggccacac tgggaggttt tggaagcctg ggcctggatt gcgagcctag aacaggcctg 1200
gacttcagcg acctgtacta cctgaccatg aacaacaagc attggctggt gcacaaggag 1260
tggttccacg acatccctct gccttggcac gcaggagcag atacaggaac cccccattgg 1320
aacaacaagg aggccctggt ggagttcaag gacgctcacg ccaagagaca gacagtggtg 1380
gtgctgggaa gccaggaagg agcagtgcac acagctctgg caggagctct ggaagccgaa 1440
atggacggag ccaagggcag actgtcctcc ggacacctca agtgccggct gaagatggac 1500
aagctgcggc tgaagggcgt gtcttatagc ctctgcacag ccgctttcac cttcaccaag 1560
atccccgcag agaccctgca cggaacagtg accgtggaag tgcagtacgc cggaacagac 1620
ggaccttgca aggtgccagc tcagatggca gtggacatgc agaccctgac cccagtggga 1680
agactgatca ccgctaaccc cgtcatcacc gagagcaccg agaacagcaa gatgatgctg 1740
gagctggacc cccccttcgg cgatagctac atcgtgatcg gcgtgggcga gaaaaagatc 1800
acccaccatt ggcacaggag cggcagcaca atcggcaagg cctttgaggc caccgtgaga 1860
ggagccaaga gaatggccgt gctgggagat accgcttggg atttcggcag cgtgggaggc 1920
gccctgaaca gcctgggcaa gggcattcac cagatcttcg gagccgcctt caagagcctg 1980
ttcggcggca tgtcttggtt cagccagatc ctgatcggca cactgctcat gtggctgggc 2040
ctgaacacca agaacggcag catcagcctg atgtgtctgg ctctgggagg cgtgctgatc 2100
ttcctgagca ccgctgtgtc cgcttgataa 2130
<210> 133
<211> 708
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Zika IgE лидер-prME Бразилия
<400> 133
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ala Asp Thr Ser Val Gly Ile Val Gly Leu Leu Leu Thr
20 25 30
Thr Ala Met Ala Ala Glu Val Thr Arg Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Met
35 40 45
Tyr Leu Asp Arg Asn Asp Ala Gly Glu Ala Ile Ser Phe Pro Thr Thr
50 55 60
Leu Gly Met Asn Lys Cys Tyr Ile Gln Ile Met Asp Leu Gly His Met
65 70 75 80
Cys Asp Ala Thr Met Ser Tyr Glu Cys Pro Met Leu Asp Glu Gly Val
85 90 95
Glu Pro Asp
Asp Val Asp Cys Trp Cys Asn Thr Thr Ser Thr Trp Val
100 105 110
Val Tyr Gly Thr Cys His His Lys Lys Gly Glu Ala Arg Arg Ser Arg
115 120 125
Arg Ala Val Thr Leu Pro Ser His Ser Thr Arg Lys Leu Gln Thr Arg
130 135 140
Ser Gln Thr Trp Leu Glu Ser Arg Glu Tyr Thr Lys His Leu Ile Arg
145 150 155 160
Val Glu Asn Trp Ile Phe Arg Asn Pro Gly Phe Ala Leu Ala Ala Ala
165 170 175
Ala Ile Ala Trp Leu Leu Gly Ser Ser Thr Ser Gln Lys Val Ile Tyr
180 185 190
Leu Val Met Ile Leu Leu Ile Ala Pro Ala Tyr Ser Ile Arg Cys Ile
195 200 205
Gly Val Ser Asn Arg Asp Phe Val Glu Gly Met Ser Gly Gly Thr Trp
210 215 220
Val Asp Val Val Leu Glu His Gly Gly Cys Val Thr Val Met Ala Gln
225 230 235 240
Asp Lys Pro Thr Val Asp Ile Glu Leu Val Thr Thr Thr Val Ser Asn
245 250 255
Met Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Glu Ala Ser Ile Ser Asp Met
260 265 270
Ala Ser Asp Ser Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala Tyr Leu Asp Lys
275 280 285
Gln Ser Asp Thr Gln Tyr Val Cys Lys Arg Thr Leu Val Asp Arg Gly
290 295 300
Trp Gly Asn Gly Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys
305 310 315 320
Ala Lys Phe Ala Cys Ser Lys Lys Met Thr Gly Lys Ser Ile Gln Pro
325 330 335
Glu Asn Leu Glu Tyr Arg Ile Met Leu Ser Val His Gly Ser Gln His
340 345 350
Ser Gly Met Ile Val Asn Asp Thr Gly His Glu Thr Asp Glu Asn Arg
355 360 365
Ala Lys Val Glu Ile Thr Pro Asn Ser Pro Arg Ala Glu Ala Thr Leu
370 375 380
Gly Gly Phe Gly Ser Leu Gly Leu Asp Cys Glu Pro Arg Thr Gly Leu
385 390 395 400
Asp Phe Ser Asp Leu Tyr Tyr Leu Thr Met Asn Asn Lys His Trp Leu
405 410 415
Val His Lys Glu Trp Phe His Asp Ile Pro Leu Pro Trp His Ala Gly
420 425 430
Ala Asp Thr Gly Thr Pro His Trp Asn Asn Lys Glu Ala Leu Val Glu
435 440 445
Phe Lys Asp Ala His Ala Lys Arg Gln Thr Val Val Val Leu Gly Ser
450 455 460
Gln Glu Gly Ala Val His Thr Ala Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ala Glu
465 470 475 480
Met Asp Gly Ala Lys Gly Arg Leu Ser Ser Gly His Leu Lys Cys Arg
485 490 495
Leu Lys Met Asp Lys Leu Arg Leu Lys Gly Val Ser Tyr Ser Leu Cys
500 505 510
Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Ile Pro Ala Glu Thr Leu His Gly
515 520 525
Thr Val Thr Val Glu Val Gln Tyr Ala Gly Thr Asp Gly Pro Cys Lys
530 535 540
Val Pro Ala Gln Met Ala Val Asp Met Gln Thr Leu Thr Pro Val Gly
545 550 555 560
Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Ser Thr Glu Asn Ser
565 570 575
Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Val
580 585 590
Ile Gly Val Gly Glu Lys Lys Ile Thr His His Trp His Arg Ser Gly
595 600 605
Ser Thr Ile Gly Lys Ala Phe Glu Ala Thr Val Arg Gly Ala Lys Arg
610 615 620
Met Ala Val Leu Gly Asp Thr Ala Trp Asp Phe Gly Ser Val Gly Gly
625 630 635 640
Ala Leu Asn Ser Leu Gly Lys Gly Ile His Gln Ile Phe Gly Ala Ala
645 650 655
Phe Lys Ser Leu Phe Gly Gly Met Ser Trp Phe Ser Gln Ile Leu Ile
660 665 670
Gly Thr Leu Leu Met Trp Leu Gly Leu Asn Thr Lys Asn Gly Ser Ile
675 680 685
Ser Leu Met Cys Leu Ala Leu Gly Gly Val Leu Ile Phe Leu Ser Thr
690 695 700
Ala Val Ser Ala 705
<210> 134
<211> 18
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Лидерная последовательность IgE
<400> 134
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
<210> 135
<211> 732
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb-2G4
<400> 135
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Met Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asn Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Arg Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly Asn Gly Asn Tyr Arg Ala Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly
465 470 475 480
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
485 490 495
Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu
500 505 510
Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala
515 520 525
Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Glu Thr Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala
530 535 540
Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly
545 550 555 560
Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Ser Ala Thr Ile Leu Ala Asp Gly
565 570 575
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu
580 585 590
Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln
595 600 605
His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
610 615 620
Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
625 630 635 640
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
645 650 655
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
660 665 670
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
675 680 685
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
690 695 700
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
705 710 715 720
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 136 <211> 2202
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PGX9226, DMAb-2G4
<400> 136
atggattgga catggaggat tctgtttctg gtcgccgccg caactggaac ccacgctgaa 60
gtgcagctgc aggagtcagg aggaggactg atgcagcccg gcggaagcat gaagctgtcc 12 0
tgcgtggcat ctggcttcac ctttagtaac tactggatga attgggtccg ccagtcacct 180
gagaagggac tggaatgggt ggctgagatc cgactgaaaa gcaacaatta cgccacccac 240
tatgctgagt cagtgaaggg gcgattcaca attagcaggg acgattctaa aagaagtgtg 300
tatctgcaga tgaacactct gagagccgaa gacaccggaa tctactattg cacacggggc 360
aacggaaatt accgcgctat ggattattgg gggcagggca cttccgtcac cgtgagctcc 420
gcaagcacaa agggaccctc cgtgtttccc ctggcccctt ctagtaaaag cacctccgga 480
ggaacagcag ctctgggatg tctggtgaag gactacttcc ctgagccagt caccgtgtca 540
tggaacagcg gagccctgac ctctggggtc catacatttc ctgctgtgct gcagtcaagc 600
gggctgtact ccctgtcctc tgtggtcact gtgccaagtt caagcctggg cactcagacc 660
tatatctgca acgtgaatca caagcccagc aataccaaag tcgacaagaa agtggagcct 720
aagtcctgtg ataaaacaca tacttgccca ccttgtccag cacctgaact gctgggagga 780
cctagcgtgt tcctgtttcc acccaagcca aaagacacac tgatgatttc ccgcactcct 840
gaggtcacct gtgtggtcgt ggacgtgtct cacgaggacc ccgaagtcaa gttcaactgg 900
tacgtggatg gcgtcgaagt gcataatgcc aagaccaaac ccagggagga acagtacaac 960
tctacctata gggtcgtgag tgtcctgaca gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 1020
gagtataagt gcaaagtgag caataaggct ctgccagcac ccatcgaaaa aactatttcc 1080
aaggccaaag gacagccaag agagccccag gtgtacaccc tgcctccatc tcgggacgaa 1140
ctgacaaaga accaggtcag tctgacttgt ctggtgaaag gcttctatcc atccgatatc 1200
gctgtggagt gggaatctaa tggacagccc gagaacaatt acaagaccac accccctgtg 1260
ctggactccg atgggtcttt ctttctgtat agtaagctga ccgtggataa atcacggtgg 1320
cagcagggca acgtcttttc ttgcagtgtg atgcatgaag ccctgcacaa tcattacaca 1380
cagaagtcac tgagcctgtc cccaggcaag cgaggacgaa aaaggagatc tggaagtggg 1440
gctactaact tcagcctgct gaaacaggca ggcgacgtgg aggaaaatcc tggaccaatg 1500
gtcctgcaga cccaggtgtt tatctcactg ctgctgtgga ttagcggggc ttacggcgat 1560
attcagatga cacagtcccc agcatcactg agcgtctccg tgggagaaac agtgtccatc 1620
acttgtcgcg cctctgagaa catctacagc agcctggctt ggtatcagca gaagcaggga 1680
aaaagccccc agctgctggt ctactccgca acaatcctgg ccgacggggt gccttctagg 1740
ttctctggca gtggatcagg gacacagtat agcctgaaga ttaatagtct gcagtcagag 1800
gattttggga cttactattg ccagcacttc tggggcacac catacacttt tggcggaggg 1860
actaagctgg agatcaaaac cgtcgcagcc ccctctgtgt tcatttttcc acccagtgac 1920
gaacagctga agagtggcac cgcctcagtc gtgtgtctgc tgaacaattt ctaccctaga 1980
gaggcaaagg tccagtggaa agtggataac gccctgcaga gcggcaattc ccaggaatct 2040
gtgactgagc aggacagtaa ggattcaacc tatagcctgt ccaacaccct gacactgagc 2100
aaagctgact acgaaaagca caaagtctat gcatgcgagg tgacacatca gggactgagt 2160
tcaccagtga ctaagtcctt taatcggggg gagtgttgat aa 2202
<210> 137
<211> 711
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb-4G7
<400> 137
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Met Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Phe
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Thr Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Gly Ser Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
450 455 460
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val
465 470 475 480
Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala
485 490 495
Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser
500 505 510
Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr
515 520 525
Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu
530 535 540
Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ile Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe
545 550 555 560
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu
565 570 575
Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Phe Cys Gln His His Phe Gly Thr
580 585 590
Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys Thr Val Ala
595 600 605
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
610 615 620
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
625 630 635 640
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
645 650 655
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
660 665 670
Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
675 680 685
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
690 695 700
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 705 710
<210> 138 <211> 2196
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9229, DMAb-4G7
<400> 138
atggattgga catggaggat tctgtttctg gtcgccgccg ccactggaac ccacgcccag 60
gtgcagctgc agcagtcagg gcctgagctg gaaatgcctg gcgcttctgt gaaaatcagt 120
tgcaaggcat caggaagctc cttcacaggg tttagcatga actgggtgaa acagagcaat 180
gggaagtccc tggagtggat cggcaacatt gacacctact atggcggaac cacatacaat 240
cagaagttca aaggcaaggc tacactgact gtggacaaat ctagttcaac cgcatatatg 300
cagctgaaga gcctgacatc cgaggattct gcagtgtact attgcgctag atcagcatac 360
tatggcagca ctttcgccta ctggggccag ggaaccctgg tcacagtgag ctccgcctcc 420
accaaaggac catctgtgtt tcccctggct ccttctagta agagtacatc aggaggaact 480
gcagctctgg gatgtctggt gaaggattat ttccctgagc cagtcaccgt gagttggaac 540
tcaggcgcac tgacttctgg agtccacacc tttcctgccg tgctgcagtc aagcggcctg 600
tacagcctgt cctctgtggt caccgtgcca agttcaagcc tgggaaccca gacatatatc 660
tgcaacgtga atcacaaacc ctctaataca aaggtcgaca agaaagtgga acctaaaagc 720
tgtgataaga ctcatacctg cccaccttgt ccagcacctg agctgctggg agggccttcc 780
gtgttcctgt ttccacccaa accaaaggac acactgatga ttagcagaac ccctgaagtc 840
acatgtgtgg tcgtggacgt gtcccacgag gaccccgaag tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gatggcgtcg aggtgcataa tgctaaaacc aagccccgag aggaacagta caactctact 960
tatagggtcg tgagtgtcct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtat 1020
aaatgcaagg tgtctaacaa ggccctgcca gctcccatcg agaagacaat tagcaaagct 1080
aagggacagc caagagaacc ccaggtgtac actctgcctc catctcggga cgagctgacc 1140
aaaaaccagg tcagtctgac atgtctggtg aagggattct atccaagcga tatcgcagtg 1200
gagtgggaat ccaatgggca gcccgaaaac aattacaaga ctaccccccc tgtgctggac 1260
agcgatggca gcttcttcct gtattccaaa ctgacagtgg ataagtctcg gtggcagcag 1320
gggaacgtct ttagctgctc cgtgatgcat gaggccctgc acaatcatta cactcagaag 1380
tctctgagtc tgtcaccagg caaacgagga cgaaagagga gaagcgggtc cggagcaacc 1440
aacttctccc tgctgaagca ggctggagac gtggaggaaa atcctgggcc aatggtcctg 1500
cagacacagg tgtttatctc actgctgctg tggattagcg gggcctacgg cgatattcag 1560
atgactcaga gccccgcatc tctgagtgcc tcagtcggcg agacagtgac tatcacctgt 1620
cgcgcaagtg aaaacatcta ctcatatctg gcctggtacc agcagaaaca ggggaagagc 1680
ccccagctgc tggtctataa tgctaaaacc ctgatcgaag gagtgccttc ccgattcagc 1740
ggcagcgggt ctggcacaca gtttagcctg aagattaact ccctgcagcc agaggacttc 1800
ggcagctact tttgccagca ccatttcgga actcccttca cctttggcag cgggacagag 1860
ctggaaatca aaactgtcgc agcccccagt gtgttcattt ttccaccctc agacgaacag 1920
ctgaagtctg ggaccgccag tgtcgtgtgt ctgctgaaca atttttaccc tcgggaggct 1980
aaagtccagt ggaaggtgga taacgcactg cagtctggaa atagtcagga gtcagtgaca 2040
gaacaggaca gcaaagattc cacttatagt ctgtcaaaca cactgactct gtctaaggcc 2100
gactacgaga aacacaaggt ctatgcttgc gaagtgactc atcaggggct gtcctctcct 2160
gtgaccaaga gcttcaatcg cggcgagtgt tgataa 2196
<210> 139
<211> 733
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAB4
<400> 139
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Leu Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Ser Thr Ser Gly Val Gly Val Gly Trp Phe Arg Gln Pro Ser Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala Leu Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Gln Leu Ser Ile Ser Lys Asp Phe Ser Arg
85 90 95
Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Ser Asn Val Asp Ile Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Pro Phe Gly Tyr Asp Asn Ala Met
115 120 125
Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser
465 470 475 480
Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu
485 490 495
Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu
500 505 510
Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln
515 520 525
Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Leu Thr Cys Lys
530 535 540
Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
545 550 555 560
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
565 570 575
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
580 585 590
Leu Thr Ile Ser Asn Met Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys
595 600 605
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
610 615 620
Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
625 630 635 640
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
645 650 655
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
660 665 670
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
675 680 685
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
690 695 700
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
705 710 715 720
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725 730
<210> 140 <211> 2226
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9230, DMAb4
<400> 140
ggatccgccg ccaccatgga ctggacttgg agaattctgt tcctggtcgc agcagccact 60
gggacacacg cacaggtgac actgaaagag agcggacccg gaatcctgaa accaagccag 12 0
actctgtccc tgacctgcag cctgtccggc ttctctctga gtacctcagg agtcggagtg 180
ggatggtttc gacagccaag cggaaaggga ctggagtggc tggccctgat ctggtgggac 240
gatgacaagt actataaccc ttcactgaaa agccagctga gcatttccaa ggatttctct 300
cgcaaccagg tctttctgaa gatcagtaat gtggatattg ccgacactgc tacctactat 360
tgcgctagga gagatccatt cggctacgac aatgcaatgg gatattgggg ccagggaacc 420
tccgtcacag tgagctccgc atccacaaaa gggccctctg tgtttcccct ggccccttct 480
agtaagtcta caagtggcgg aactgccgct ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccct 540
gagccagtca ccgtgtcctg gaactctgga gccctgactt ctggggtcca cacctttcct 600
gctgtgctgc agtcaagcgg actgtacagc ctgtcctctg tggtcaccgt gccaagttca 660
agcctgggga cacagactta tatctgcaac gtgaatcaca agccatctaa tacaaaagtc 720
gataagaaag tggaacccaa gagctgtgac aaaacccata catgcccacc ttgtccagca 780
cctgagctgc tgggaggacc aagcgtgttc ctgtttccac ccaagcctaa agatacactg 840
atgatttcca ggacccccga agtgacatgt gtggtcgtgg atgtgtctca cgaggaccct 900
gaagtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtcgaggtgc ataatgctaa gaccaaacct 960
cgcgaggaac agtacaacag tacatatcga gtcgtgtcag tgctgaccgt cctgcaccag 1020
gactggctga acggaaagga gtataagtgc aaagtgagca acaaggcact gccagccccc 1080
atcgagaaga ctatttccaa ggcaaaaggg cagccaaggg aaccccaggt gtacaccctg 1140
cctccaagca gagatgagct gactaaaaac caggtctccc tgacctgtct ggtgaagggg 1200
ttctatccta gtgacatcgc tgtggagtgg gaatcaaatg gccagccaga aaacaattac 1260
aagaccacac cccctgtgct ggatagtgac ggctcattct ttctgtattc aaagctgacc 1320
gtggataaaa gcagatggca gcagggaaac gtcttctcat gcagcgtgat gcatgaggcc 1380
ctgcacaatc attacactca gaaatccctg tctctgagtc ccggcaagcg aggaaggaaa 1440
cggcgctcag ggagcggcgc tacaaacttt tccctgctga agcaggcagg ggacgtggag 1500
gaaaatcctg gcccaatggt cctgcagacc caggtgttca tcagcctgct gctgtggatt 1560
tccggggcct acggcgatat tgtgatgacc cagagccaga agttcatgtc cacatctgtc 1620
ggcgaccggg tgtctctgac ctgtaaggcc agtcagaacg tcggaactgc tgtggcatgg 1680
tatcagcaga agcctgggca gtccccaaaa ctgctgatct acagtgcttc aaacagatat 1740
accggcgtgc ctgatcggtt caccggaagc gggtccggca cagactttac tctgaccatt 1800
tctaatatgc agagtgaaga tctggctgac tacttctgcc agcagtactc ctcttatcca 1860
ctgacatttg gagcagggac taagctggaa atcaaaacag tcgcagcccc ctccgtgttc 1920
atttttccac cctctgatga gcagctgaag tcaggcactg ccagcgtcgt gtgtctgctg 1980
aacaatttct accccaggga ggccaaggtc cagtggaaag tggacaacgc tctgcagagc 2040
ggaaattccc aggagtctgt gactgaacag gatagtaaag actcaaccta ttctctgagt 2100
aacacactga ctctgtccaa ggcagactac gagaagcaca aagtctatgc ctgcgaagtg 2160
acccatcagg gcctgagttc accagtgaca aagtctttta atcgcggaga gtgttgataa 2220
ctcgag 2226
<210> 141 <211> 729
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb-10 <400> 141
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Arg Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Val Arg Phe Gly Asp Thr Ala Val Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn
465 470 475 480
Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
485 490 495
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
500 505 510
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
515 520 525
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser
530 535 540
Ile Ser Ser Phe Leu Asn Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
545 550 555 560
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
565 570 575
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
580 585 590
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
595 600 605
Ile Ser Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Thr
610 615 620
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
625 630 635 640
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
645 650 655
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
660 665 670
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
675 680 685
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
690 695 700
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
705 710 715 720
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 725
<210> 142
<211> 2214
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9244, DMAb-10
<400> 142
ggatccgccg ccaccatgga ctggacttgg agaatcctgt tcctggtcgc cgccgctact 60
gggactcatg ccgaggtgca gctggtcgaa tctggagggg gcctggtgca gcctggcggc 120
agcctgaggc tgtcctgcgc agcatctggc ttcaccttta ggagctacga catgcactgg 180
gtgcgccagg caacaggcaa gggactggag tgggtgtctg ccatcggaac cgcaggcgat 240
acatactatc caggctccgt gaagggcagg ttcaccatct cccgcgagaa cgccaagaat 300
tctctgtacc tgcagatgaa cagcctgaga gccgaggaca ccgccgtgta ctattgcgcc 360
agggtgcgct tcggcgacac agcagtggat tattggggcc agggcaccct ggtgacagtg 420
agctccgcct ccaccaaggg accaagcgtg ttcccactgg caccttctag caagtccacc 480
tctggcggca cagccgccct gggctgtctg gtgaaggatt acttccctga gccagtgaca 540
gtgtcctgga actctggcgc cctgaccagc ggagtgcaca catttcctgc cgtgctgcag 600
tcctctggcc tgtactccct gagctccgtg gtgaccgtgc catctagctc cctgggcacc 660
cagacatata tctgcaacgt gaatcacaag cctagcaata caaaggtgga caagaaggtg 720
gagccaaagt cctgtgataa gacccacaca tgccctccct gtccagcacc tgagctgctg 780
ggcggcccaa gcgtgttcct gtttccaccc aagcccaagg acaccctgat gatcagccgg 840
accccagagg tgacatgcgt ggtggtggac gtgtcccacg aggaccccga ggtgaagttt 900
aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcac aatgccaaga ccaagccccg ggaggagcag 960
tacaacagca cctatagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020
ggcaaggagt ataagtgcaa ggtgagcaat aaggccctgc cagcccccat cgagaagacc 1080
atctccaagg caaagggaca gccaagggag ccacaggtgt acacactgcc tccatcccgc 1140
gacgagctga ccaagaacca ggtgtctctg acatgtctgg tgaagggctt ctatccctct 1200
gatatcgccg tggagtggga gagcaatggc cagcctgaga acaattacaa gaccacaccc 1260
cctgtgctgg acagcgatgg ctccttcttt ctgtattcca agctgaccgt ggacaagtct 1320
cggtggcagc agggcaacgt gtttagctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaatcac 1380
tacacccaga agtctctgag cctgtcccca ggcaagaggg gaagaaagcg gagatctggc 1440
agcggcgcca caaacttcag cctgctgaag caggccggcg atgtggagga gaatcctggc 1500
ccaatggtgc tgcagaccca ggtgtttatc tctctgctgc tgtggatcag cggcgcctat 1560
ggcgacatcc agatgacaca gtccccttct agcctgtccg cctctgtggg cgatcgggtg 1620
accatcacat gtagagccag ccagtccatc tcctctttcc tgaactggca ccagcagaag 1680
cctggcaagg ccccaaagct gctgatctac gcagccagct ccctgcagag cggagtgccc 1740
tccaggttct ctggcagcgg ctccggaacc gactttaccc tgacaatctc tagcctgcag 1800
cctgaggatt ttgccatcta ctattgccag cagtcttata tcagcccctt cacctttggc 1860
cctggcacaa aggtggacat caagaccgtg gccgccccaa gcgtgttcat ctttccaccc 1920
tccgatgagc agctgaagtc tggcacagcc agcgtggtgt gcctgctgaa caatttctac 1980
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caattctcag 2040
gagagcgtga ccgagcagga ctccaaggat tctacatatt ctctgagctc taccctgaca 2100
ctgagcaagg ccgattacga gaagcacaag gtgtatgcct gcgaggtcac ccaccagggg 2160
ctgtcaagtc cagtcactaa gtccttcaat cggggcgaat gctgataact cgag 2214
<210> 143
<211> 739
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb-11
<400> 143
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Val
35 40 45
Arg Ser Asn Tyr Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Leu Thr Ala Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Val Ala Ser Ser Ala Gly Thr Phe Tyr Tyr Gly Met
115 120 125
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser
465 470 475 480
Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu
485 490 495
Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu
500 505 510
Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
515 520 525
Arg Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg
530 535 540
Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp
545 550 555 560
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly
565 570 575
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
580 585 590
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val
595 600 605
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Ser Trp Thr Phe
610 615 620
Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
625 630 635 640
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
645 650 655
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
660 665 670
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
675 680 685
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
690 695 700
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
705 710 715 720
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
725 730 735
Gly Glu Cys
<210> 144 <211> 2244
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9256, DMAb-11
<400> 144
ggatccgccg ccaccatgga ctggacctgg agaatcctgt tcctggtggc agcagcaacc 60
ggaacacacg cagaggtgca gctggtggag agcggcggcg gcctgatcca gccaggcggc 12 0
agcctgaggc tgtcctgcgc agcatctgga tttgccgtga ggagcaacta cctgtcctgg 180
gtgagacagg caccaggcaa gggactggag tgggtgtctc tgatctacag cggcggcctg 240
accgcatatg cagacagcgt ggagggcagg ttcaccatct ccagagataa ctctaagaat 300
acactgtatc tgcagatgaa ttccctgcgg gtggaggaca ccgccctgta ctattgcgcc 360
cgcgtggcca gctccgccgg cacattctac tatggcatgg acgtgtgggg ccagggcacc 420
acagtgaccg tgtctagcgc ctccacaaag ggaccaagcg tgttcccact ggcaccttcc 480
tctaagtcca cctctggcgg cacagccgcc ctgggctgtc tggtgaagga ttacttccct 540
gagccagtga ccgtgtcttg gaacagcggc gccctgacca gcggagtgca cacatttcct 600
gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc ctgtctagcg tggtgaccgt gccatcctct 660
agcctgggca cccagacata tatctgcaac gtgaatcaca agcctagcaa tacaaaggtg 720
gacaagaagg tggagccaaa gtcctgtgat aagacccaca catgccctcc ctgtccagca 780
cctgagctgc tgggcggccc aagcgtgttc ctgtttccac ccaagcccaa ggacacactg 840
atgatctcta ggaccccaga ggtgacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaggacccc 900
gaggtgaagt ttaactggta cgtggatggc gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagcca 960
agggaggagc agtacaacag cacctataga gtggtgtccg tgctgacagt gctgcaccag 1020
gactggctga acggcaagga gtataagtgc aaggtgtcca ataaggccct gccagccccc 1080
atcgagaaga ccatctctaa ggcaaaggga cagccaaggg agccacaggt gtacacactg 1140
cctccatcca gagacgagct gaccaagaac caggtgtctc tgacatgtct ggtgaagggc 1200
ttctatccct ctgatatcgc cgtggagtgg gagagcaatg gccagcctga gaacaattac 1260
aagaccacac cccctgtgct ggactccgat ggctctttct ttctgtattc caagctgacc 1320
gtggataagt ctcggtggca gcagggcaac gtgtttagct gctccgtgat gcacgaggcc 1380
ctgcacaatc actacaccca gaagtctctg agcctgtccc ctggcaagag gggaaggaag 1440
aggagatctg gcagcggcgc cacaaacttc agcctgctga agcaggcagg cgacgtggag 1500
gagaatcctg gaccaatggt gctgcagacc caggtgttta tctctctgct gctgtggatc 1560
agcggcgcct acggcgatat cgtgatgacc cagtcccctc gctccctgtc tgtgacacct 1620
ggcgagccag ccagcatctc ctgtcggtcc tctcagtctc tgctgcaccg caacggctac 1680
aattatctgg actggtacct gcagaagccc ggccagtccc ctcagctgct gatctatctg 1740
ggcagcaaca gggcatccgg agtgccagac cgcttctctg gcagcggctc cggaaccgac 1800
ttcaccctga agatcagcag ggtggaggcc gaggatgtgg gcgtgtacta ttgcatgcag 1860
gccctgcaga ccccctcctg gacattcggc cagggcacca aggtggagat caagacagtg 1920
gccgccccta gcgtgttcat ctttccaccc tccgacgagc agctgaagtc tggcaccgcc 1980
agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac cccagagagg ccaaggtgca gtggaaggtg 2040
gataacgccc tgcagagcgg caattcccag gagtctgtga ccgagcagga cagcaaggat 2100
tccacatatt ctctgagctc caccctgaca ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag 2160
gtgtatgcct gcgaggtgac ccaccagggc ctgtctagcc ctgtgacaaa gtccttcaac 2220
agaggcgagt gttgataact cgag 2244
<210> 145
<211> 741
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb12
<400> 145
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ala Thr Phe
35 40 45
Gly Ser Asp Thr Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala
65 70 75 80
Gln Arg Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn
85 90 95
Thr Ala Tyr
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Gln Ile Asn Glu Met Ala Thr Phe Gly Glu Ile
115 120 125
His Tyr Tyr Thr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg
465 470 475 480
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
485 490 495
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln
500 505 510
Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Gly Ser
515 520 525
Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val
530 535 540
Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Ser Trp
545 550 555 560
Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln Ala Pro Val Leu Val Phe Tyr Gly Lys
565 570 575
Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser
580 585 590
Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
595 600 605
Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Ser Asn His Leu Val
610 615 620
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Thr Val Ala Ala Pro
625 630 635 640
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
645 650 655
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
660 665 670
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
675 680 685
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn
690 695 700
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
705 710 715 720
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
725 730 735
Asn Arg Gly Glu Cys 740
<210> 146
<211> 2232
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9260, DMAb12
<400> 146
catggactgg acctggagaa tcctgttcct ggtggcagca gcaaccggaa cacacgcaca 60
ggtgcagctg gtgcagagcg gagcagaggt gaagaagcca ggcagctccg tgaaggtgtc 120
ctgcaaggca tctggagcca ccttcggctc cgataccgtg acatgggtgc gccaggcacc 180
aggacaggga ctggagtgga tgggcggcat catccctttc tttggcgagg ccaactacgc 240
ccagcggttt cagggcagag tgaccatcac agccgacaag tccaccaata cagcctacat 300
ggagctgtct agcctgcggt ctgaggatac cgccgtgtat ttctgcgcca gacagatcaa 360
cgagatggcc acctttggcg agatccacta ctatacatac atggacgtgt ggggacaggg 420
caccctggtg acagtgtcct ctgcctccac caagggacct agcgtgttcc cactggcacc 480
tagctccaag tctaccagcg gcggcacagc cgccctggga tgtctggtga aggattattt 540
ccctgagcca gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg accagcggag tgcacacatt 600
tcccgccgtg ctgcagtcta gcggcctgta ctccctgtcc tctgtggtga ccgtgcctag 660
ctcctctctg ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagcctt ctaatacaaa 720
ggtggacaag aaggtggagc caaagagctg tgataagacc cacacatgcc ctccctgtcc 780
agcacctgag ctgctgggcg gcccaagcgt gttcctgttt ccacccaagc ccaaggacac 840
cctgatgatc agcaggaccc ctgaggtgac atgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga 900
ccccgaggtg aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa 960
gccccgggag gagcagtaca acagcaccta tagagtggtg tccgtgctga cagtgctgca 1020
ccaggactgg ctgaacggca aggagtataa gtgcaaggtg tctaataagg ccctgccagc 1080
ccccatcgag aagaccatct ccaaggcaaa gggacagcca agggagccac aggtgtacac 1140
actgcctcca agccgcgacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgacat gtctggtgaa 1200
gggcttctat ccatccgata tcgccgtgga gtgggagtct aatggccagc ccgagaacaa 1260
ttacaagacc acaccccctg tgctggacag cgatggctcc ttctttctgt attccaagct 1320
gaccgtggac aagtctcggt ggcagcaggg caacgtgttt tcctgctctg tgatgcacga 1380
ggccctgcac aatcactaca cccagaagag cctgtccctg tctcctggca agaggggaag 1440
gaagcggaga agcggctccg gagccacaaa cttcagcctg ctgaagcagg ccggcgatgt 1500
ggaggagaat cctggcccaa tggtgctgca gacccaggtg tttatctctc tgctgctgtg 1560
gatcagcgga gcatacggcg gctccgagct gacacaggac ccagccgtga gcgtggccct 1620
gggacagacc gtgaggatca catgtcaggg cgatagcctg cgcaactact atgcctcctg 1680
gtaccagcag aagcctcggc aggccccagt gctggtgttc tatggcaaga acaataggcc 1740
ctctggcatc cctgaccgct ttagcggcag ctcctctggc aataccgcaa gcctgacaat 1800
ctccggagca caggcagagg acgaggcaga ttactattgc aacagcagag atagctcctc 1860
taatcacctg gtgttcggcg gcggaaccaa gctgacagtg ctgtctaccg tggccgcccc 1920
aagcgtgttc atctttccac cctccgacga gcagctgaag tctggcacag ccagcgtggt 1980
gtgcctgctg aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggataacgc 2040
cctgcagtct ggcaatagcc aggagtccgt gaccgagcag gactctaagg atagcacata 2100
ttctctgagc aacaccctga cactgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtatgc 2160
atgcgaggtg acccaccagg gactgagctc cccagtgaca aagtccttca atagaggcga 2220
gtgttgataa ct 2232
<210> 147 <211> 735
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb13
<400> 147
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Val Ser Gly Leu Thr Phe
35 40 45
Ser Asn Phe Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Phe Ile Arg Phe Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Val Tyr Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Gly Arg Val Leu Tyr Gly Ala Ala Ala Asp Phe Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn
465 470 475 480
Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
485 490 495
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
500 505 510
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
515 520 525
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Thr Ser Ser His Ser
530 535 540
Leu Leu Tyr Ser Ser Asp Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln
545 550 555 560
Lys Ala Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg
565 570 575
Gln Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu
580 585 590
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr
595 600 605
Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Lys Ser Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr
610 615 620
Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
625 630 635 640
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
645 650 655
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
660 665 670
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
675 680 685
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys
690 695 700
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
705 710 715 720
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
725 730 735
<210> 148
<211> 2214
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> pGX9261, DMAb13 <400> 148
catggactgg acctggagaa tcctgttcct ggtggcagca gcaaccggaa cacacgcaca 60
ggtgcagctg gtggagagcg gcggcggcgt ggtgcagcct ggcggctctc tgagactgag 120
ctgcgaggtg tccggcctga ccttcagcaa ctttggaatg cagtgggtga ggcaggcacc 180
aggcaaggga ctggagtggg tggccttcat ccgctttgac ggctctaata agtactatgc 240
cgatagcgtg aagggccggt tcaccatctc tagagacaac agcaagaata cagtgtacct 300
gcagatgggc agcctgaggg cagaggacac cgccgtgtac ttctgcggac gcgtgctgta 360
tggagcagca gcagattttt ggggacaggg caccctggtg acagtgagct ccgcctctac 420
aaagggacca agcgtgtttc cactggcacc ctctagcaag tccacctctg gcggcacagc 480
cgccctgggc tgtctggtga aggattactt ccccgagcct gtgaccgtga gctggaactc 540
cggcgccctg acctccggag tgcacacatt tccagccgtg ctgcagtcct ctggcctgta 600
cagcctgagc tccgtggtga ccgtgccctc tagctccctg ggcacccaga catatatctg 660
caacgtgaat cacaagccaa gcaatacaaa ggtggacaag aaggtggagc ccaagtcctg 720
tgataagacc cacacatgcc ctccctgtcc agcaccagag ctgctgggcg gcccaagcgt 780
gttcctgttt ccacccaagc ctaaggacac cctgatgatc tctagaaccc ccgaggtgac 840
atgcgtggtg gtggacgtga gccacgagga ccccgaggtg aagttcaact ggtacgtgga 900
tggcgtggag gtgcacaatg ccaagacaaa gcctcgggag gagcagtaca actccaccta 960
tagagtggtg tctgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtataa 1020
gtgcaaggtg tccaataagg ccctgcctgc cccaatcgag aagaccatct ctaaggcaaa 1080
gggacagcct cgggagccac aggtgtacac actgcctcca tccagagacg agctgaccaa 1140
gaaccaggtg tctctgacat gtctggtgaa gggcttctat ccttctgata tcgccgtgga 1200
gtgggagagc aatggccagc cagagaacaa ttacaagacc acaccccctg tgctggactc 1260
tgatggcagc ttctttctgt attccaagct gaccgtggac aagtctcggt ggcagcaggg 1320
caacgtgttt agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aatcactaca cccagaagtc 1380
tctgagcctg tccccaggca agaggggaag gaagcggaga tctggcagcg gagccacaaa 1440
cttctccctg ctgaagcagg caggcgatgt ggaggagaat ccaggaccta tggtgctgca 1500
gacccaggtg tttatcagcc tgctgctgtg gatctccggc gcctatggcg acatcgtgat 1560
gacacagtcc ccagattctc tggccgtgtc cctgggagag agggcaacca tcaactgtac 1620
atctagccac agcctgctgt actcctctga caacaagaat tacctgacct ggtatcagca 1680
gaaggccggc cagccaccca agctgctgat ctattgggca tccaccaggc agtctggagt 1740
gccagaccgc ttctccggct ctggcagcgg cacagagttt accctgacaa tcagctccct 1800
gcaggccgag gatgtggccg tgtactattg ccagcagtac tataccaaga gcttcacatt 1860
tggccagggc accaaggtgg agatcaagac agtggccgcc cccagcgtgt tcatctttcc 1920
tccatccgac gagcagctga agagcggaac cgcatccgtg gtgtgcctgc tgaacaattt 1980
ctaccctagg gaggccaagg tgcagtggaa ggtggataac gccctgcaga gcggcaattc 2040
ccaggagtct gtgaccgagc aggacagcaa ggattccaca tattccctgt ctaacaccct 2100
gacactgtcc aaggccgatt acgagaagca caaggtgtat gcctgcgagg tgacccacca 2160
gggcctgtct agccctgtga caaagagctt taatcgcggc gagtgttgat aact 2214
<210> 149 <211> 2067 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP1
<400> 149
ggatccgcca ccatgaagac cacatgcctg ttcatcagcc tgatcctgat ccagggcgtg 60
aagaccctgc caatcctgga gatcgcctcc aacaatcagc cccagaacgt ggacagcgtg 120
tgctctggca ccctgcagaa gacagaggat gtgcacctga tgggcttcac actgagcgga 180
cagaaggtgg cagactcccc actggaggcc tctaagaggt gggcctttag aaccggcgtg 240
ccccctaaga acgtggagta caccgagggc gaggaggcca agacatgcta taatatctcc 300
gtgaccgatc ccagcggcaa gtccctgctg ctggacccac ccacaaacat cagggattac 360
cctaagtgta agaccatcca ccacatccag ggccagaatc cacacgcaca gggaatcgcc 420
ctgcacctgt ggggcgcctt ctttctgtac gacaggatcg ccagcaccac aatgtataga 480
ggcaaggtgt tcacagaggg caacatcgcc gccatgatcg tgaataagac cgtgcacaag 540
atgatctttt ctaggcaggg ccagggctac agacacatga acctgacaag caccaataag 600
tattggacaa gctccaacgg cacacagacc aatgacaccg gatgcttcgg cgccctgcag 660
gagtacaact ccaccaagaa tcagacatgt gccccatcta agatccctct gccactgcca 720
acagcaaggc cagaggtgaa gctgacatct accagcacag acgccaccaa gctgaacacc 780
acagacccca attccgacga tgaggatctg accacatccg gctctggcag cggagagcag 840
gagccttata ccacatctga tgccgccacc aagcagggcc tgtctagcac catgcctcca 900
acacctagcc cacagccctc cacacctcag caggagggca acaataccaa ccactctcag 960
ggagcagtga ccgagcctgg caagacaaac accacagccc agccaagcat gccccctcac 1020
aataccacag ccatcagcac caacaataca tccaagcaca acttttctac ccctagcgtg 1080
ccactgcaga atgccaccaa ctacaataca cagtccaccg ccacagagaa cgagcagaca 1140
tccgccccct ctaagaccac actgccaccc accgagaacc ctaccacagc caagagcacc 1200
aattccacaa agtctccaac cacaaccgtg cccaacacaa ccaataagca ctccacctct 1260
cctagcccaa cccccaaccc tacagcccag cacctggtgt atttcaggag aaagcggaat 1320
atcctgtggc gcgagggcga catgttcccc tttctggatg gcctgatcaa cgcccctatc 1380
gacttcgatc cagtgcccaa taccaagaca atctttgacg agtcctctag ctccggagca 1440
agcgccgagg aggatcagca cgcctctcct aacatcagcc tgacactgtc ctactttcca 1500
aagatcaacg agaataccgc ctattccggc gagaacgaga atgactgcga tgccgagctg 1560
aggatctgga gcgtgcagga ggacgatctg gcagcaggac tgtcctggat tcccttcttc 1620
ggacctggaa tcgagggact gtacaccgca ggactgatca agaaccagaa caacctggtg 1680
tgcagactgc ggcgcctggc caatcagaca gccaagtccc tggagctgct gctgcgggtg 1740
acaaccgagg agcgcacctt ctctctgatc aaccggcacg ccatcgactt tctgctggca 1800
agatggggcg gcacctgcaa ggtgctggga ccagactgct gtatcggcat cgaggatctg 1860
tctcggaata tcagcgagca gatcgaccag atcaagaagg atgagcagaa ggagggaacc 1920
ggatggggac tgggcggcaa gtggtggaca agcgattggg gcgtgctgac caacctgggc 1980
atcctgctgc tgctgtctat cgccgtgctg atcgccctga gctgcatctg tcgcatcttc 2040
accaagtata tcggctgata actcgag 2067
<210> 150
<211> 681
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP1
<400> 150
Met Lys Thr Thr Cys Leu Phe Ile Ser Leu Ile Leu Ile Gln Gly Val
1 5 10 15
Lys Thr Leu Pro Ile Leu Glu Ile Ala Ser Asn Asn Gln Pro Gln Asn
20 25 30
Val Asp Ser Val Cys Ser Gly Thr Leu Gln Lys Thr Glu Asp Val His
35 40 45
Leu Met Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Lys Val Ala Asp Ser Pro Leu
50 55 60
Glu Ala Ser Lys Arg Trp Ala Phe Arg Thr Gly Val Pro Pro Lys Asn
65 70 75 80
Val Glu Tyr Thr Glu Gly Glu Glu Ala Lys Thr Cys Tyr Asn Ile Ser
85 90 95
Val Thr Asp Pro Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Asp Pro Pro Thr Asn
100 105 110
Ile Arg Asp Tyr Pro Lys Cys Lys Thr Ile His His Ile Gln Gly Gln
115 120 125
Asn Pro His Ala Gln Gly Ile Ala Leu His Leu Trp Gly Ala Phe Phe
130 135 140
Leu Tyr Asp Arg Ile Ala Ser Thr Thr Met Tyr Arg Gly Lys Val Phe
145 150 155 160
Thr Glu Gly Asn Ile Ala Ala Met Ile Val Asn Lys Thr Val His Lys
165 170 175
Met Ile Phe Ser Arg Gln Gly Gln Gly Tyr Arg His Met Asn Leu Thr
180 185 190
Ser Thr Asn Lys Tyr Trp Thr Ser Ser Asn Gly Thr Gln Thr Asn Asp
195 200 205
Thr Gly Cys Phe Gly Ala Leu Gln Glu Tyr Asn Ser Thr Lys Asn Gln
210 215 220
Thr Cys Ala Pro Ser Lys Ile Pro Leu Pro Leu Pro Thr Ala Arg Pro
225 230 235 240
Glu Val Lys Leu Thr Ser Thr Ser Thr Asp Ala Thr Lys Leu Asn Thr
245 250 255
Thr Asp Pro Asn Ser Asp Asp Glu Asp Leu Thr Thr Ser Gly Ser Gly
260 265 270
Ser Gly Glu Gln Glu Pro Tyr Thr Thr Ser Asp Ala Ala Thr Lys Gln
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Thr Met Pro Pro Thr Pro Ser Pro Gln Pro Ser Thr
290 295 300
Pro Gln Gln Glu Gly Asn Asn Thr Asn His Ser Gln Gly Ala Val Thr
305 310 315 320
Glu Pro Gly Lys Thr Asn Thr Thr Ala Gln Pro Ser Met Pro Pro His
325 330 335
Asn Thr Thr Ala Ile Ser Thr Asn Asn Thr Ser Lys His Asn Phe Ser
340 345 350
Thr Pro Ser Val Pro Leu Gln Asn Ala Thr Asn Tyr Asn Thr Gln Ser
355 360 365
Thr Ala Thr Glu Asn Glu Gln Thr Ser Ala Pro Ser Lys Thr Thr Leu
370 375 380
Pro Pro Thr Glu Asn Pro Thr Thr Ala Lys Ser Thr Asn Ser Thr Lys
385 390 395 400
Ser Pro Thr Thr Thr Val Pro Asn Thr Thr Asn Lys His Ser Thr Ser
405 410 415
Pro Ser Pro Thr Pro Asn Pro Thr Ala Gln His Leu Val Tyr Phe Arg
420 425 430
Arg Lys Arg Asn Ile Leu Trp Arg Glu Gly Asp Met Phe Pro Phe Leu
435 440 445
Asp Gly Leu Ile Asn Ala Pro Ile Asp Phe Asp Pro Val Pro Asn Thr
450 455 460
Lys Thr Ile Phe Asp Glu Ser Ser Ser Ser Gly Ala Ser Ala Glu Glu
465 470 475 480
Asp Gln His Ala Ser Pro Asn Ile Ser Leu Thr Leu Ser Tyr Phe Pro
485 490 495
Lys Ile Asn Glu Asn Thr Ala Tyr Ser Gly Glu Asn Glu Asn Asp Cys
500 505 510
Asp Ala Glu Leu Arg Ile Trp Ser Val Gln Glu Asp Asp Leu Ala Ala
515 520 525
Gly Leu Ser Trp Ile Pro Phe Phe Gly Pro Gly Ile Glu Gly Leu Tyr
530 535 540
Thr Ala Gly Leu Ile Lys Asn Gln Asn Asn Leu Val Cys Arg Leu Arg
545 550 555 560
Arg Leu Ala Asn Gln Thr Ala Lys Ser Leu Glu Leu Leu Leu Arg Val
565 570 575
Thr Thr Glu Glu Arg Thr Phe Ser Leu Ile Asn Arg His Ala Ile Asp
580 585 590
Phe Leu Leu Ala Arg Trp Gly Gly Thr Cys Lys Val Leu Gly Pro Asp
595 600 605
Cys Cys Ile Gly Ile Glu Asp Leu Ser Arg Asn Ile Ser Glu Gln Ile
610 615 620
Asp Gln Ile Lys Lys Asp Glu Gln Lys Glu Gly Thr Gly Trp Gly Leu
625 630 635 640
Gly Gly Lys Trp Trp Thr Ser Asp Trp Gly Val Leu Thr Asn Leu Gly
645 650 655
Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ile Ala Val Leu Ile Ala Leu Ser Cys Ile
660 665 670
Cys Arg Ile Phe Thr Lys Tyr Ile Gly 675 680
<210> 151 <211> 2067 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP2
<400> 151
ggatccgcca ccatgcggac cacatgcttc tttatcagcc tgatcctgat ccagggcatc 60
aagaccctgc caatcctgga gatcgcctcc aacgaccagc cccagaatgt ggatagcgtg 120
tgctccggca ccctgcagaa gacagaggac gtgcacctga tgggcttcac actgtctggc 180
cagaaggtgg ccgatagccc cctggaggcc tctaagaggt gggcctttag aaccggcgtg 240
ccccctaaga acgtggagta caccgagggc gaggaggcca agacatgcta taatatcagc 300
gtgaccgacc cttctggcaa gagcctgctg ctggacccac ccacaaacgt gcgcgattac 360
cctaagtgta agaccatcca ccacatccag ggccagaatc cacacgcaca gggaatcgcc 420
ctgcacctgt ggggcgcctt ctttctgtac gataggatcg cctccaccac aatgtataga 480
ggcaaggtgt tcacagaggg caacatcgcc gccatgatcg tgaataagac cgtgcacaag 540
atgatctttt ccaggcaggg ccagggctac agacacatga acctgacatc taccaataag 600
tattggacca gctccaacgg cacacagacc aatgacaccg gctgcttcgg cacactgcag 660
gagtacaact ccaccaagaa tcagacatgt gccccttcta agacccctcc accccctcca 720
acagcaaggc cagagatcaa gcctacaagc accccaacag acgccaccag actgaacacc 780
acaaacccca attccgacga tgaggatctg accacaagcg gctccggctc tggagagcag 840
gagccttata ccacatccga cgccgtgacc aagcagggcc tgtctagcac catgccccct 900
acaccttccc cacagccagg aacacctcag cagggcggca acaataccaa ccactctcag 960
gacgccacca cagagctgga taacacaaat accacagccc agccacccat gccaagccac 1020
aataccacaa ccatcagcac caacaataca tccaagcaca acctgtccac cctgtctgag 1080
cctccacaga atacaaccaa cccaaatacc cagagcatgg tgacagagaa cgagaagacc 1140
agcgcccctc ccaaggccac cctgccaccc acagagaatc ccacaaccga gaagtctacc 1200
aacaatacaa agagccctac aaccctggag ccaaacaaga caaatggcca cttcaccagc 1260
ccctcctcta cacctaactc cacaacccag cacctgatct actttaggag aaagcggtcc 1320
atcctgtggc gcgagggcga catgttcccc tttctggatg gcctgatcaa cgcccctatc 1380
gacttcgatc ctgtgccaaa taccaagaca atctttgacg agagctcctc tagcggagca 1440
agcgccgagg aggatcagca cgcctcctct aacatcagcc tgaccctgtc ctacctgcca 1500
cacacctccg agaatacagc ctattctggc gagaacgaga atgactgcga tgccgagctg 1560
cggatctggt ctgtgcagga ggacgatctg gcagcaggac tgagctggat tcccctgttc 1620
ggaccaggaa tcgagggact gtataccgcc ggcctgatca agaaccagaa caacctggtg 1680
tgcaggctgc ggcgcctggc aaatcagaca gccaagtctc tggagctgct gctgcgggtg 1740
acaaccgagg agcgcacctt cagcctgatc aaccggcacg ccatcgactt tctgctgacc 1800
cgctggggcg gcacatgcaa ggtgctggga ccagactgct gtatcggcat cgaggatctg 1860
tctaggaaca tcagcgagca gatcgaccag atcaagaagg atgagcagaa ggagggaacc 1920
ggatggggac tgggcggcaa gtggtggaca agcgattggg gcgtgctgac caacctgggc 1980
atcctgctgc tgctgtctat cgccgtgctg atcgccctga gctgcatctg tagaatcttt 2040
accaagtata tcggctgata actcgag 2067
<210> 152 <211> 681
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP2
<400> 152
Met Arg Thr Thr Cys Phe Phe Ile Ser Leu Ile Leu Ile Gln Gly Ile
1 5 10 15
Lys Thr Leu Pro Ile Leu Glu Ile Ala Ser Asn Asp Gln Pro Gln Asn
20 25 30
Val Asp Ser Val Cys Ser Gly Thr Leu Gln Lys Thr Glu Asp Val His
35 40 45
Leu Met Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Lys Val Ala Asp Ser Pro Leu
50 55 60
Glu Ala Ser Lys Arg Trp Ala Phe Arg Thr Gly Val Pro Pro Lys Asn
65 70 75 80
Val Glu Tyr Thr Glu Gly Glu Glu Ala Lys Thr Cys Tyr Asn Ile Ser
85 90 95
Val Thr Asp Pro Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Asp Pro Pro Thr Asn
100 105 110
Val Arg Asp Tyr Pro Lys Cys Lys Thr Ile His His Ile Gln Gly Gln
115 120 125
Asn Pro His Ala Gln Gly Ile Ala Leu His Leu Trp Gly Ala Phe Phe
130 135 140
Leu Tyr Asp Arg Ile Ala Ser Thr Thr Met Tyr Arg Gly Lys Val Phe
145 150 155 160
Thr Glu Gly Asn Ile Ala Ala Met Ile Val Asn Lys Thr Val His Lys
165 170 175
Met Ile Phe Ser Arg Gln Gly Gln Gly Tyr Arg His Met Asn Leu Thr
180 185 190
Ser Thr Asn Lys Tyr Trp Thr Ser Ser Asn Gly Thr Gln Thr Asn Asp
195 200 205
Thr Gly Cys Phe Gly Thr Leu Gln Glu Tyr Asn Ser Thr Lys Asn Gln
210 215 220
Thr Cys Ala Pro Ser Lys Thr Pro Pro Pro Pro Pro Thr Ala Arg Pro
225 230 235 240
Glu Ile Lys Pro Thr Ser Thr Pro Thr Asp Ala Thr Arg Leu Asn Thr
245 250 255
Thr Asn Pro Asn Ser Asp Asp Glu Asp Leu Thr Thr Ser Gly Ser Gly
260 265 270
Ser Gly Glu Gln Glu Pro Tyr Thr Thr Ser Asp Ala Val Thr Lys Gln
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Thr Met Pro Pro Thr Pro Ser Pro Gln Pro Gly Thr
290 295 300
Pro Gln Gln Gly Gly Asn Asn Thr Asn His Ser Gln Asp Ala Thr Thr
305 310 315 320
Glu Leu Asp Asn Thr Asn Thr Thr Ala Gln Pro Pro Met Pro Ser His
325 330 335
Asn Thr Thr Thr Ile Ser Thr Asn Asn Thr Ser Lys His Asn Leu Ser
340 345 350
Thr Leu Ser Glu Pro Pro Gln Asn Thr Thr Asn Pro Asn Thr Gln Ser
355 360 365
Met Val Thr Glu Asn Glu Lys Thr Ser Ala Pro Pro Lys Ala Thr Leu
370 375 380
Pro Pro Thr Glu Asn Pro Thr Thr Glu Lys Ser Thr Asn Asn Thr Lys
385 390 395 400
Ser Pro Thr Thr Leu Glu Pro Asn Lys Thr Asn Gly His Phe Thr Ser
405 410 415
Pro Ser Ser Thr Pro Asn Ser Thr Thr Gln His Leu Ile Tyr Phe Arg
420 425 430
Arg Lys Arg Ser Ile Leu Trp Arg Glu Gly Asp Met Phe Pro Phe Leu
435 440 445
Asp Gly Leu Ile Asn Ala Pro Ile Asp Phe Asp Pro Val Pro Asn Thr
450 455 460
Lys Thr Ile Phe Asp Glu Ser Ser Ser Ser Gly Ala Ser Ala Glu Glu
465 470 475 480
Asp Gln His Ala Ser Ser Asn Ile Ser Leu Thr Leu Ser Tyr Leu Pro
485 490 495
His Thr Ser Glu Asn Thr Ala Tyr Ser Gly Glu Asn Glu Asn Asp Cys
500 505 510
Asp Ala Glu Leu Arg Ile Trp Ser Val Gln Glu Asp Asp Leu Ala Ala
515 520 525
Gly Leu Ser Trp Ile Pro Leu Phe Gly Pro Gly Ile Glu Gly Leu Tyr
530 535 540
Thr Ala Gly Leu Ile Lys Asn Gln Asn Asn Leu Val Cys Arg Leu Arg
545 550 555 560
Arg Leu Ala Asn Gln Thr Ala Lys Ser Leu Glu Leu Leu Leu Arg Val
565 570 575
Thr Thr Glu Glu Arg Thr Phe Ser Leu Ile Asn Arg His Ala Ile Asp
580 585 590
Phe Leu Leu Thr Arg Trp Gly Gly Thr Cys Lys Val Leu Gly Pro Asp
595 600 605
Cys Cys Ile Gly Ile Glu Asp Leu Ser Arg Asn Ile Ser Glu Gln Ile
610 615 620
Asp Gln Ile Lys Lys Asp Glu Gln Lys Glu Gly Thr Gly Trp Gly Leu
625 630 635 640
Gly Gly Lys Trp Trp Thr Ser Asp Trp Gly Val Leu Thr Asn Leu Gly
645 650 655
Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ile Ala Val Leu Ile Ala Leu Ser Cys Ile
660 665 670
Cys Arg Ile Phe Thr Lys Tyr Ile Gly 675 680
<210> 153 <211> 2067
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP3
<400> 153
ggatccgcca ccatgaagac aatctacttc ctgatctctc tgatcctgat ccagagcatc 60
aagaccctgc cagtgctgga gatcgcctcc aactctcagc cccaggacgt ggatagcgtg 120
tgctctggca ccctgcagaa gacagaggac gtgcacctga tgggcttcac actgtccggc 180
cagaaggtgg ccgattcccc tctggaggcc tctaagaggt gggcctttag aaccggcgtg 240
ccccctaaga acgtggagta caccgagggc gaggaggcca agacatgcta taatatctcc 300
gtgaccgacc caagcggcaa gtccctgctg ctggacccac cctctaacat cagggattac 360
cccaagtgta agaccgtgca ccacatccag ggccagaatc ctcacgcaca gggaatcgcc 420
ctgcacctgt ggggcgcctt ctttctgtac gatcgggtgg ccagcaccac aatgtatcgc 480
ggcaaggtgt tcacagaggg caacatcgcc gccatgatcg tgaataagac cgtgcaccgg 540
atgatctttt ctcgccaggg ccagggctac aggcacatga acctgaccag cacaaataag 600
tattggacaa gctccaacga gacccagaga aatgacacag gctgctttgg catcctgcag 660
gagtataact ccaccaacaa tcagacatgt cctccaagcc tgaagccccc ttccctgcct 720
accgtgacac catctatcca cagcaccaac acacagatca ataccgccaa gagcggcaca 780
atgaaccctt ctagcgacga tgaggacctg atgatcagcg gctccggctc tggagagcag 840
ggaccacaca ccacactgaa tgtggtgacc gagcagaagc agtcctctac catcctgtcc 900
acaccatctc tgcacctgag cacatcccag cacgagcaga actctaccaa tcccagccgg 960
cacgcagtga ccgagcacaa cggcacagac cccaccacac agcctgccac cctgctgaac 1020
aatacaaata ccacacctac ctacaacaca ctgaagtata atctgagcac accatcccca 1080
cccaccagga acatcacaaa caatgatacc cagagagagc tggccgagtc cgagcagacc 1140
aacgcccagc tgaataccac actggaccca acagagaacc ccaccacagg ccaggatacc 1200
aactctacca caaatatcat catgaccaca tccgacatca cctctaagca cccaacaaat 1260
agctcccctg attctagccc aaccacacgc cctccaatct acttcaggaa gaagaggagc 1320
atcttttgga aggagggcga catcttcccc tttctggatg gcctgatcag caccgagatc 1380
gacttcgatc caatccccaa caccgagaca atcttcgacg agtctcccag ctttaacacc 1440
tccacaaatg aggagcagca cacaccccct aacatcagcc tgaccttctc ctactttcct 1500
gacaagaatg gcgataccgc ctatagcggc gagaacgaga atgactgcga tgccgagctg 1560
cggatctgga gcgtgcagga ggacgatctg gcagcaggac tgtcctggat tcccttcttc 1620
ggccctggca tcgagggcct gtataccgcc ggcctgatca agaaccagaa caacctggtg 1680
tgccgcctga ggagactggc caatcagaca gccaagagcc tggagctgct gctgagggtg 1740
accacagagg agagaacctt ctccctgatc aaccggcacg ccatcgactt tctgctgacc 1800
cgctggggcg gcacatgcaa ggtgctggga ccagactgct gtatcggcat cgaggatctg 1860
tctaagaata tcagcgagca gatcgacaag atcaggaagg atgagcagaa ggaggagacc 1920
ggatggggac tgggcggcaa gtggtggaca agcgattggg gcgtgctgac caacctgggc 1980
atcctgctgc tgctgtccat cgccgtgctg atcgccctgt cttgcatctg tagaatcttc 2040
accaagtaca tcggctgata actcgag 2067
<210> 154 <211> 681
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность Марбург GP3
<400> 154
Met Lys Thr Ile Tyr Phe Leu Ile Ser Leu Ile Leu Ile Gln Ser Ile
1 5 10 15
Lys Thr Leu Pro Val Leu Glu Ile Ala Ser Asn Ser Gln Pro Gln Asp
20 25 30
Val Asp Ser Val Cys Ser Gly Thr Leu Gln Lys Thr Glu Asp Val His
35 40 45
Leu Met Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Lys Val Ala Asp Ser Pro Leu
50 55 60
Glu Ala Ser Lys Arg Trp Ala Phe Arg Thr Gly Val Pro Pro Lys Asn
65 70 75 80
Val Glu Tyr Thr Glu Gly Glu Glu Ala Lys Thr Cys Tyr Asn Ile Ser
85 90 95
Val Thr Asp Pro Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Asp Pro Pro Ser Asn
100 105 110
Ile Arg Asp Tyr Pro Lys Cys Lys Thr Val His His Ile Gln Gly Gln
115 120 125
Asn Pro His Ala Gln Gly Ile Ala Leu His Leu Trp Gly Ala Phe Phe
130 135 140
Leu Tyr Asp Arg Val Ala Ser Thr Thr Met Tyr Arg Gly Lys Val Phe
145 150 155 160
Thr Glu Gly Asn Ile Ala Ala Met Ile Val Asn Lys Thr Val His Arg
165 170 175
Met Ile Phe Ser Arg Gln Gly Gln Gly Tyr Arg His Met Asn Leu Thr
180 185 190
Ser Thr Asn Lys Tyr Trp Thr Ser Ser Asn Glu Thr Gln Arg Asn Asp
195 200 205
Thr Gly Cys Phe Gly Ile Leu Gln Glu Tyr Asn Ser Thr Asn Asn Gln
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Ser Leu Lys Pro Pro Ser Leu Pro Thr Val Thr Pro
225 230 235 240
Ser Ile His Ser Thr Asn Thr Gln Ile Asn Thr Ala Lys Ser Gly Thr
245 250 255
Met Asn Pro Ser Ser Asp Asp Glu Asp Leu Met Ile Ser Gly Ser Gly
260 265 270
Ser Gly Glu Gln Gly Pro His Thr Thr Leu Asn Val Val Thr Glu Gln
275 280 285
Lys Gln Ser Ser Thr Ile Leu Ser Thr Pro Ser Leu His Leu Ser Thr
290 295 300
Ser Gln His Glu Gln Asn Ser Thr Asn Pro Ser Arg His Ala Val Thr
305 310 315 320
Glu His Asn Gly Thr Asp Pro Thr Thr Gln Pro Ala Thr Leu Leu Asn
325 330 335
Asn Thr Asn Thr Thr Pro Thr Tyr Asn Thr Leu Lys Tyr Asn Leu Ser
340 345 350
Thr Pro Ser Pro Pro Thr Arg Asn Ile Thr Asn Asn Asp Thr Gln Arg
355 360 365
Glu Leu Ala Glu Ser Glu Gln Thr Asn Ala Gln Leu Asn Thr Thr Leu
370 375 380
Asp Pro Thr Glu Asn Pro Thr Thr Gly Gln Asp Thr Asn Ser Thr Thr
385 390 395 400
Asn Ile Ile Met Thr Thr Ser Asp Ile Thr Ser Lys His Pro Thr Asn
405 410 415
Ser Ser Pro Asp Ser Ser Pro Thr Thr Arg Pro Pro Ile Tyr Phe Arg
420 425 430
Lys Lys Arg Ser Ile Phe Trp Lys Glu Gly Asp Ile Phe Pro Phe Leu
435 440 445
Asp Gly Leu Ile Ser Thr Glu Ile Asp Phe Asp Pro Ile Pro Asn Thr
450 455 460
Glu Thr Ile Phe Asp Glu Ser Pro Ser Phe Asn Thr Ser Thr Asn Glu
465 470 475 480
Glu Gln His Thr Pro Pro Asn Ile Ser Leu Thr Phe Ser Tyr Phe Pro
485 490 495
Asp Lys Asn Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gly Glu Asn Glu Asn Asp Cys
500 505 510
Asp Ala Glu Leu Arg Ile Trp Ser Val Gln Glu Asp Asp Leu Ala Ala
515 520 525
Gly Leu Ser Trp Ile Pro Phe Phe Gly Pro Gly Ile Glu Gly Leu Tyr
530 535 540
Thr Ala Gly Leu Ile Lys Asn Gln Asn Asn Leu Val Cys Arg Leu Arg
545 550 555 560
Arg Leu Ala Asn Gln Thr Ala Lys Ser Leu Glu Leu Leu Leu Arg Val
565 570 575
Thr Thr Glu Glu Arg Thr Phe Ser Leu Ile Asn Arg His Ala Ile Asp
580 585 590
Phe Leu Leu Thr Arg Trp Gly Gly Thr Cys Lys Val Leu Gly Pro Asp
595 600 605
Cys Cys Ile Gly Ile Glu Asp Leu Ser Lys Asn Ile Ser Glu Gln Ile
610 615 620
Asp Lys Ile Arg Lys Asp Glu Gln Lys Glu Glu Thr Gly Trp Gly Leu
625 630 635 640
Gly Gly Lys Trp Trp Thr Ser Asp Trp Gly Val Leu Thr Asn Leu Gly
645 650 655
Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ile Ala Val Leu Ile Ala Leu Ser Cys Ile
660 665 670
Cys Arg Ile Phe Thr Lys Tyr Ile Gly 675 680
<210> 155
<211> 735
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 155
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val
35 40 45
Ser Ser Asn Asn Ala Val Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
65 70 75 80
Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr
85 90 95
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly His Ile Thr Val Phe Gly
115 120 125
Val Asn Val Asp Ala Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg
465 470 475 480
Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
485 490 495
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln
500 505 510
Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile
515 520 525
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
530 535 540
Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr Leu His
545 550 555 560
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
565 570 575
Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
580 585 590
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
595 600 605
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr
610 615 620
Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
625 630 635 640
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
645 650 655
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
660 665 670
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
675 680 685
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys
690 695 700
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
705 710 715 720
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
725 730 735
<210> 156
<211> 745
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа B
<400> 156
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe
35 40 45
Leu Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Asn Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp
65 70 75 80
Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Asp Gly Pro Tyr Ser Asp Asp Phe Arg
115 120 125
Ser Gly Tyr Ala Ala Arg Tyr Arg Tyr Phe Gly Met Asp Val Trp Gly
130 135 140
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
165 170 175
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
180 185 190
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
195 200 205
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
210 215 220
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
225 230 235 240
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
245 250 255
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
260 265 270
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
275 280 285
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
290 295 300
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
305 310 315 320
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
325 330 335
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
340 345 350
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
355 360 365
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
370 375 380
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
385 390 395 400
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
405 410 415
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
420 425 430
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
435 440 445
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
450 455 460
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
465 470 475 480
Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn
485 490 495
Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
500 505 510
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
515 520 525
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser
530 535 540
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
545 550 555 560
Ile Ser Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
565 570 575
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
580 585 590
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
595 600 605
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn
610 615 620
Ser Phe Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr
625 630 635 640
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
645 650 655
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
660 665 670
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
675 680 685
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
690 695 700
Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
705 710 715 720
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
725 730 735
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 740 745
<210> 157
<211> 736
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 157
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Asp Ile Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Lys
65 70 75 80
Pro Ser Leu Glu Ser Arg Leu Gly Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Phe Val Ser Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg His Val Arg Ser Gly Tyr Pro Asp Thr Ala Tyr
115 120 125
Tyr Phe Asp Lys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser
465 470 475 480
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser
500 505 510
Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Ser Tyr Val Leu Thr Gln
515 520 525
Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Glu Thr Ala Arg Ile Ser Cys
530 535 540
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Thr Lys Val Leu His Trp Tyr Gln Gln Thr
545 550 555 560
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro
565 570 575
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
580 585 590
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
595 600 605
Cys Gln Val Trp Asp Ile Ser Thr Asp Gln Ala Val Phe Gly Gly Gly
610 615 620
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr
625 630 635 640
Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 645
Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 660
Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
675 680
Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
690 695
Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 705 710
His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 725
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu 650 655
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp 665 670
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro 685
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr
715 720
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
730 735
<210> 158 <211> 744
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 158
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Ala Asn Tyr Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser Gln Leu Arg Ser Leu Leu Tyr Phe Glu
115 120 125
Trp Leu Ser Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
130 135 140
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
145 150 155 160
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
165 170 175
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
210 215 220
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
225 230 235 240
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
245 250 255
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
260 265 270
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
290 295 300
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
305 310 315 320
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
325 330 335
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
340 345 350
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
355 360 365
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
370 375 380
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
385 390 395 400
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
405 410 415
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
435 440 445
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
450 455 460
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Gly
465 470 475 480
Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
485 490 495
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Leu Gln Thr
500 505 510
Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asp
515 520 525
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu
530 535 540
Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Phe Asn Tyr
545 550 555 560
Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys
565 570 575
Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg
580 585 590
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
595 600 605
Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Arg
610 615 620
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val
625 630 635 640
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
645 650 655
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
660 665 670
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
675 680 685
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
690 695 700
Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
705 710 715 720
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
725 730 735
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 740
<210> 159
<211> 477
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 159
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val
35 40 45
Ser Ser Asn Asn Ala Val Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
65 70 75 80
Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr
85 90 95
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly His Ile Thr Val Phe Gly
115 120 125
Val Asn Val Asp Ala Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 160
<211> 229
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 160
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
100 105 110
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys 225
<210> 161
<211> 477
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 161
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr His Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val
35 40 45
Ser Ser Asn Asn Ala Val Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
65 70 75 80
Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr
85 90 95
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp
100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly His Ile Thr Val Phe Gly
115 120 125
Val Asn Val Asp Ala Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 162
<211> 229
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 162
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
100 105 110
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Asn
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys 225
<210> 163 <211> 2211
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A
<400> 163
atggattgga cttggaggat tctgtttctg gtcgccgccg ctactggaac tcacgctcag 60
gtgcagctgc agcagtctgg acccggactg gtgaagcctt cacagactct gagcctgacc 120
tgcgccatct ccggcgactc tgtgagctcc aacaatgctg tctggaactg gattagacag 180
tccccatctc gggggctgga atggctggga cgaacatact ataggagcaa atggtacaat 240
gactatgctg agagtgtgaa gtcacgaatc acaattaacc cagatactag caagaatcag 300
ttctccctgc agctgaactc tgtgacaccc gaggatactg cagtctacta ttgcgcacgc 360
tccggacaca tcaccgtgtt cggagtcaat gtggacgcct ttgatatgtg gggacagggg 420
accacagtca cagtgtctag tgcaagtact aaaggcccat cagtgtttcc cctggcccct 480
tcaagcaaga gtacctcagg cggaacagcc gctctgggat gtctggtgaa ggactacttc 540
cctgagccag tcaccgtgag ctggaactcc ggagctctga ccagcggggt gcatacattt 600
cctgcagtcc tgcagtcctc tggcctgtac agcctgagtt cagtggtcac cgtgccaagc 660
tcctctctgg gaacacagac ttatatctgc aacgtgaatc acaaaccatc caatacaaag 720
gtcgacaaga aagtggaacc caaatcttgt gataagaccc atacatgccc tccctgtcca 780
gcacctgagc tgctgggcgg cccatccgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacaca 840
ctgatgatta gccggactcc cgaagtgacc tgcgtggtcg tggacgtgag ccacgaggac 900
cccgaagtga agttcaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc caagaccaaa 960
cctagggagg aacagtacaa cagcacttat agagtcgtgt ccgtcctgac cgtgctgcac 1020
caggattggc tgaacgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ccaacaaggc cctgccagct 1080
cccatcgaga agaccatttc taaggccaaa ggccagccac gggaacccca ggtgtacaca 1140
ctgcctccaa gccgcgacga gctgaccaaa aaccaggtga gcctgacatg tctggtcaag 1200
ggattctatc ctagtgatat cgctgtggag tgggaatcta atgggcagcc agaaaacaat 1260
tacaagacta cccctcccgt gctggactct gatggaagtt tctttctgta ttcaaaactg 1320
accgtggaca agagccgctg gcagcagggg aacgtcttta gctgctccgt gatgcacgag 1380
gccctgcaca atcattacac tcagaaatct ctgagtctgt cacccggaaa acgaggacga 1440
aagaggagaa gcggctccgg agctaccaac ttctccctgc tgaagcaggc aggggatgtg 1500
gaggaaaatc ctggcccaat ggtcctgcag acacaggtgt ttatctctct gctgctgtgg 1560
attagtggcg cttacggaga catccagatg actcagtctc ctagttcact gtctgcaagt 1620
gtcggcgatc gcgtgactat tacctgtcga acctcacaga gcctgagctc ctacctgcat 1680
tggtatcagc agaagcctgg gaaagcacca aagctgctga tctatgcagc ctctagtctg 1740
cagtccggcg tgccctctag gttctccggg tctggcagtg gaactgactt tacactgact 1800
atttcaagcc tgcagcctga ggatttcgct acctactatt gccagcagag cagaactttt 1860
gggcagggca ccaaagtcga aatcaagaca gtggctgcac catccgtctt catttttcca 1920
ccctctgacg agcagctgaa gagtggaact gcctcagtgg tgtgcctgct gaacaatttc 1980
tacccccggg aagccaaagt ccagtggaag gtggataacg ctctgcagtc aggcaatagc 2040
caggagtccg tgacagaaca ggactctaaa gatagtactt attcactgag caacaccctg 2100
acactgagca aggcagacta cgagaagcac aaagtgtatg cctgcgaagt gacccaccag 2160
gggctgagca gtccagtgac caaatctttc aacaggggag aatgttgata a 2211
<210> 164 <211> 2241 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа B
<400> 164
atggactgga cttggaggat tctgtttctg gtggccgccg caactggcac tcatgccgag 60
gtgcagctgg tggaatcagg gggaggactg gtgaagcctg gcggatcact gcgactgagc 120
tgcgcagctt ccggactgac cttcctgaac gcttggatga gctgggtgcg acaggcacca 180
gggaaaggcc tggaatgggt cgggcgcatc aagagcaata cagacggcgg aaccacagat 240
tacgcagccc ccgtgaaagg caggttcacc atttctcggg acgatagtaa gaacacactg 300
tatctgcaga tgagctccct gaaaaccgag gacacagccg tgtactattg cactaccgat 360
ggcccctaca gcgacgattt ccgctccgga tatgctgcac ggtaccgcta ttttgggatg 420
gacgtgtggg gacaggggac aactgtcaca gtgtctagtg catctactaa gggacctagc 480
gtgttcccac tggccccctc aagcaaatca actagcggag ggaccgccgc tctgggatgt 540
ctggtgaagg attacttccc cgagcctgtc accgtgagct ggaactccgg ggccctgacc 600
tccggagtgc acacatttcc tgctgtcctg cagtcctctg ggctgtactc tctgagttca 660
gtggtcacag tgccaagctc ctctctgggc actcagacct atatctgcaa cgtgaatcac 720
aaacctagca atactaaggt cgacaagaaa gtggaaccaa aaagctgtga taagacacat 780
acttgccctc cctgtccagc tccagagctg ctgggcggac catccgtgtt cctgtttcca 840
cccaagccca aagacaccct gatgatttcc cggacaccag aagtgacttg cgtggtcgtg 900
gacgtgagcc acgaggaccc cgaagtgaag ttcaactggt acgtggatgg cgtcgaggtg 960
cataatgcca agacaaaacc cagggaggaa cagtacaact caacttatag agtcgtgagc 1020
gtcctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtataagtg caaagtgagc 1080
aacaaggccc tgcctgctcc aatcgagaag actattagca aggctaaagg acagcctcgg 1140
gaaccacagg tgtacaccct gcctccatcc cgcgacgagc tgaccaaaaa ccaggtgtct 1200
ctgacatgtc tggtcaaggg cttctatccc tctgatatcg ccgtggagtg ggaaagtaat 1260
ggacagcctg aaaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagtttc 1320
tttctgtata gtaaactgac cgtggacaag tcaagatggc agcagggaaa cgtgttttcc 1380
tgctctgtca tgcatgaggc cctgcacaat cattacaccc agaagagtct gtcactgagc 1440
ccaggaaaac gagggaggaa gaggagatcc ggctctggag ccacaaactt ctccctgctg 1500
aagcaggctg gagacgtgga ggaaaatccc gggcctatgg tgctgcagac ccaggtcttt 1560
atctccctgc tgctgtggat ttctggcgct tacggagata tccagatgac acagtctccc 1620
agttcagtca gtgcatcagt gggcgaccgc gtcaccatca catgtcgagc atcacaggat 1680
attagcacct ggctggcctg gtaccagcag aagcccggaa aagctcctaa gctgctgatc 1740
tatgcagcca gctccctgca gtccggagtg ccctctaggt tcagcgggtc cggctctgga 1800
acagacttta ctctgaccat ttctagtctg cagcctgagg atttcgcaac ttactattgc 1860
cagcaggcca acagcttccc acccactttt gggcagggca ccaaactgga aatcaagact 1920
gtggctgcac ctagcgtctt catttttcct ccatccgacg agcagctgaa gagtggcacc 1980
gcctcagtgg tgtgcctgct gaacaacttc tacccaagag aagcaaaagt gcagtggaag 2040
gtcgataacg ccctgcagtc aggcaatagc caggagtccg tgacagaaca ggactctaag 2100
gatagtactt atagtctgtc aaatacactg actctgagca aagctgacta cgagaagcat 2160
aaagtgtatg catgcgaggt cactcaccag ggactgtctt cacccgtcac caaatctttc 2220
aatagaggag aatgctgata a 2241
<210> 165 <211> 2214 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 165
atggactgga catggagaat cctgttcctg gtcgccgccg ctactgggac tcacgcagaa 60
gtgcagctgg tcgaatcagg gcctgggctg gtgaagccct cagacatcct gagcctgacc 120
tgcgccgtgt ctggctacag tatcagctcc aactactatt ggggatggat tcggcagccc 180
cctggcaagg gactggaatg gatcgggtcc atctaccact caggcagcac ctactataaa 240
ccttcactgg agagccgcct gggaatttcc gtggacacat ctaagaatca gttcagcctg 300
aaactgtcct ttgtctctgc cgctgatact gcagtgtact attgcgcccg acatgtcagg 360
tccggctacc cagacaccgc ttactatttt gataagtggg ggcagggcac cctggtcaca 420
gtgtctagtg ctagcaccaa gggcccctcc gtgttccctc tggcaccatc aagcaaatcc 480
acatctggcg gaactgcagc cctgggatgt ctggtgaagg attacttccc agagcccgtc 540
acagtgagtt ggaactcagg cgcactgact tctggagtcc acacctttcc cgccgtgctg 600
cagtcctctg gcctgtacag cctgagttca gtggtcacag tgcctagctc ctctctggga 660
actcagacct atatctgcaa cgtgaatcac aagccctcaa atactaaagt cgacaagaaa 720
gtggaaccta agtcttgtga taaaacacat acttgcccac catgtcctgc accagagctg 780
ctgggaggac caagcgtgtt cctgtttcct ccaaagccca aagacaccct gatgatctcc 840
agaacccctg aagtgacatg tgtggtcgtg gacgtctctc acgaggaccc cgaagtcaag 900
tttaactggt acgtggatgg cgtcgaggtg cataatgcta agacaaaacc ccgcgaggaa 9 60
cagtacaact caacctatcg agtcgtgagc gtcctgacag tgctgcacca ggactggctg 1020
aacggaaagg agtataagtg caaagtgagc aataaggcac tgcccgcccc tatcgagaaa 1080
actatttcca aggctaaagg gcagcccagg gaacctcagg tgtacaccct gcccccttct 1140
agagacgagc tgacaaagaa ccaggtcagt ctgacttgtc tggtgaaagg attttatcca 1200
agtgatatcg cagtggagtg ggaatcaaat gggcagcccg aaaacaatta caagaccaca 1260
ccacccgtgc tggacagcga tggcagcttc ttcctgtatt ccaagctgac cgtggacaaa 1320
tctcggtggc agcaggggaa cgtcttcagt tgctcagtga tgcacgaggc cctgcacaat 1380
cattacaccc agaagagcct gtccctgtct ccaggcaagc ggggacgcaa aaggagaagt 1440
ggatcagggg ccacaaactt ttccctgctg aaacaggctg gagatgtgga ggaaaatcca 1500
gggcccatgg tcctgcagac tcaggtgttc atcagcctgc tgctgtggat ttctggggcc 1560
tacggcagtt atgtgctgac acagcctcca agcgtctccg tggctcctgg cgaaactgca 1620
cgaatctcct gtggagggaa caatattggg actaaggtgc tgcattggta ccagcagacc 1680
ccaggacagg ctccagtgct ggtcgtgtat gacgatagtg acagaccttc aggcatcccc 1740
gagcggttct ctggaagtaa ctcagggaat accgccacac tgactatttc ccgcgtcgaa 1800
gtgggcgacg aagctgatta ctattgccaa gtgtgggaca tctctaccga tcaggccgtc 1860
ttcggcggag ggactaagct gaccgtgctg ggccagccca aagctgcacc ttccgtgaca 1920
ctgtttcccc ctagttcaga ggaactgcag gctaacaagg caaccctggt gtgtctgatt 1980
agcgacttct acccaggagc agtcacagtg gcatggaagg ctgatagctc ccctgtcaaa 2040
gccggcgtgg aaactaccac accatctaag cagagtaaca acaagtacgc cgcttctagt 2100
tatctgagcc tgacacctga gcagtggaag tcccacagga gctattcctg ccaagtgact 2160
catgagggca gtactgtcga aaaaaccgtg gccccaacag agtgtagctg ataa 2214
<210> 166 <211> 2238
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 166
atggactgga cttggaggat tctgtttctg gtcgccgccg ctactgggac acacgctcag 60
gtgcagctgg tcgagagtgg ggggggagtg gtccagccag ggcgatctct gaggctgagt 120
tgcgccgctt caggcttcac cttcagcact tacgcaatgc actgggtgcg gcaggctcca 180
ggaaagggac tggagtgggt cgccgtgatc tcttacgacg ctaactataa gtactatgca 240
gatagtgtga aaggcagatt caccattagc cgggacaact ccaagaatac actgtacctg 300
cagatgaatt ccctgcgagc agaagacacc gccgtgtact attgcgccaa agattctcag 360
ctgcgcagtc tgctgtattt cgagtggctg tctcaggggt actttgacta ttggggccag 420
ggaaccctgg tcacagtgag ctccgccagt accaagggcc catcagtgtt tcctctggct 480
ccatctagta aatctacaag tggcggaact gcagccctgg gctgtctggt gaaggattac 540
ttcccagagc ccgtcacagt gtcctggaac tctggagctc tgacttccgg ggtgcatacc 600
tttcctgcag tcctgcagtc aagcgggctg tactctctgt cctctgtggt caccgtgcca 660
agttcaagcc tgggcactca gacctatatc tgcaacgtga atcacaagcc ttccaataca 720
aaagtcgaca agaaagtgga accaaagtct tgtgataaaa cacatacttg ccccccttgt 780
cctgctccag agctgctggg aggaccaagc gtgttcctgt ttccacccaa gcccaaagac 840
accctgatga ttagcaggac cccagaagtg acatgtgtgg tcgtggacgt cagccacgag 900
gaccccgaag tgaagttcaa ctggtacgtg gatggcgtcg aggtgcataa tgccaagaca 960
aaacctaggg aggaacagta caacagcact tatagagtcg tgtccgtcct gaccgtgctg 1020
caccaggact ggctgaacgg aaaggagtat aagtgcaaag tgtccaataa ggccctgccc 1080
gctcctatcg agaaaaccat ttctaaggct aaagggcagc cccgggaacc tcaggtgtac 1140
acactgcctc caagccgcga cgagctgacc aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtc 1200
aaaggcttct atcccagtga tatcgccgtg gagtgggaat caaatggaca gcctgaaaac 1260
aattacaaga ccacaccccc tgtgctggac agtgatggct cattctttct gtattcaaag 1320
ctgaccgtgg acaaaagccg gtggcagcag ggaaacgtct tttcatgcag cgtgatgcat 1380
gaggctctgc acaatcatta cactcagaag tccctgtctc tgagtcccgg caagcgggga 1440
cgcaaaagga gatcagggag cggcgctaca aacttctccc tgctgaagca ggcaggcgat 1500
gtggaggaaa atccaggacc catggtcctg cagacacagg tgtttatctc tctgctgctg 1560
tggattagtg gggcctatgg cgacatcgtg atgactcaga gccctgattc cctggcagtg 1620
agcctgggag agcgagcaac aattaactgt aagtcctctc agagcgtgac tttcaactac 1680
aaaaattatc tggcatggta ccagcagaag cccggacagc cacccaaact gctgatctat 1740
tgggcctcaa ctcgcgaaag cggggtgcct gaccgattct ccggatctgg gagtggcacc 1800
gattttaccc tgacaattag ttcactgcag gctgaggacg tcgcagtgta ctattgccag 1860
cagcactaca ggactcctcc aaccttcgga caggggacaa aggtcgaaat caaaactgtg 1920
gctgcacctt ccgtcttcat ttttccccct tctgacgagc agctgaagtc cggcaccgcc 1980
tctgtcgtgt gtctgctgaa caatttttac ccaagagaag ccaaggtcca gtggaaagtg 2040
gataacgctc tgcagtctgg aaatagtcag gagtcagtga cagaacagga cagcaaggat 2100
tccacttatt cactgagcaa cactctgacc ctgagcaaag cagattacga gaagcacaaa 2160
gtgtatgcct gcgaagtcac tcatcaggga ctgagctccc ccgtgaccaa gagctttaat 2220
agaggggagt gttgataa 2238
<210> 167 <211> 1437 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 167
atggattgga cttggaggat tctgtttctg gtcgccgccg ctactggaac tcacgctcag 60
gtgcagctgc agcagtctgg acccggactg gtgaagcctt cacagactct gagcctgacc 120
tgcgccatct ccggcgactc tgtgagctcc aacaatgctg tctggaactg gattagacag 180
tccccatctc gggggctgga atggctggga cgaacatact ataggagcaa atggtacaat 240
gactatgctg agagtgtgaa gtcacgaatc acaattaacc cagatactag caagaatcag 300
ttctccctgc agctgaactc tgtgacaccc gaggatactg cagtctacta ttgcgcacgc 360
tccggacaca tcaccgtgtt cggagtcaat gtggacgcct ttgatatgtg gggacagggg 420
accacagtca cagtgtctag tgcaagtact aaaggcccat cagtgtttcc cctggcccct 480
tcaagcaaga gtacctcagg cggaacagcc gctctgggat gtctggtgaa ggactacttc 540
cctgagccag tcaccgtgag ctggaactcc ggagctctga ccagcggggt gcatacattt 600
cctgcagtcc tgcagtcctc tggcctgtac agcctgagtt cagtggtcac cgtgccaagc 660
tcctctctgg gaacacagac ttatatctgc aacgtgaatc acaaaccatc caatacaaag 720
gtcgacaaga aagtggaacc caaatcttgt gataagaccc atacatgccc tccctgtcca 780
gcacctgagc tgctgggcgg cccatccgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacaca 840
ctgatgatta gccggactcc cgaagtgacc tgcgtggtcg tggacgtgag ccacgaggac 900
cccgaagtga agttcaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc caagaccaaa 960
cctagggagg aacagtacaa cagcacttat agagtcgtgt ccgtcctgac cgtgctgcac 1020
caggattggc tgaacgggaa ggagtataag tgcaaagtgt ccaacaaggc cctgccagct 1080
cccatcgaga agaccatttc taaggccaaa ggccagccac gggaacccca ggtgtacaca 1140
ctgcctccaa gccgcgacga gctgaccaaa aaccaggtga gcctgacatg tctggtcaag 1200
ggattctatc ctagtgatat cgctgtggag tgggaatcta atgggcagcc agaaaacaat 1260
tacaagacta cccctcccgt gctggactct gatggaagtt tctttctgta ttcaaaactg 1320
accgtggaca agagccgctg gcagcagggg aacgtcttta gctgctccgt gatgcacgag 1380
gccctgcaca atcattacac tcagaaatct ctgagtctgt cacccggaaa atgataa 1437
<210> 168
<211> 693
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 168
atggtcctgc agacacaggt gtttatctct ctgctgctgt ggattagtgg cgcttacgga 60
gacatccaga tgactcagtc tcctagttca ctgtctgcaa gtgtcggcga tcgcgtgact 120
attacctgtc gaacctcaca gagcctgagc tcctacctgc attggtatca gcagaagcct 180
gggaaagcac caaagctgct gatctatgca gcctctagtc tgcagtccgg cgtgccctct 240
aggttctccg ggtctggcag tggaactgac tttacactga ctatttcaag cctgcagcct 300
gaggatttcg ctacctacta ttgccagcag agcagaactt ttgggcaggg caccaaagtc 360
gaaatcaaga cagtggctgc accatccgtc ttcatttttc caccctctga cgagcagctg 420
aagagtggaa ctgcctcagt ggtgtgcctg ctgaacaatt tctacccccg ggaagccaaa 480
gtccagtgga aggtggataa cgctctgcag tcaggcaata gccaggagtc cgtgacagaa 540
caggactcta aagatagtac ttattcactg agcaacaccc tgacactgag caaggcagac 600
tacgagaagc acaaagtgta tgcctgcgaa gtgacccacc aggggctgag cagtccagtg 660
accaaatctt tcaacagggg agaatgttga taa 693
<210> 169
<211> 1437
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 169
atggattgga catggaggat tctgtttctg gtcgccgccg caactggaac tcacgctcag 60 gtgcagctgc agcagtcagg gcctggcctg gtgaagccca gccagaccct gtccctgaca 120 tgcgccatct ccggcgactc tgtgagctcc aacaatgccg tgtggaactg gatcaggcag 180 tccccttctc gcggcctgga gtggctggga aggacctact atagaagcaa gtggtacaat 240
gactatgccg agagcgtgaa gtccaggatc accatcaacc cagatacatc taagaatcag 300
ttcagcctgc agctgaactc cgtgaccccc gaggatacag ccgtgtacta ttgcgccaga 360
tccggccaca tcaccgtgtt cggcgtgaat gtggacgcct ttgatatgtg gggccagggc 420
accacagtga ccgtgtctag cgcctctaca aagggcccaa gcgtgtttcc actggcaccc 480
tcctctaaga gcacctccgg cggcacagcc gccctgggct gtctggtgaa ggactacttc 540
ccagagcccg tgaccgtgtc ttggaacagc ggcgccctga ccagcggagt gcacacattt 600
cctgccgtgc tgcagagctc cggcctgtac tccctgtcta gcgtggtgac cgtgccatcc 660
tctagcctgg gcacccagac atatatctgc aacgtgaatc acaagccaag caatacaaag 720
gtggacaaga aggtggagcc caagtcctgt gataagaccc acacatgccc tccctgtcct 780
gcaccagagc tgctgggcgg cccaagcgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaggacacc 840
ctgatgatct ctcggacccc cgaggtgaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac 900
cccgaggtga agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcacaatgc caagacaaag 960
cctagggagg agcagtacaa ctccacctat agagtggtgt ctgtgctgac agtgctgcac 1020
caggattggc tgaacggcaa ggagtataag tgcaaggtgt ccaataaggc cctgcccgcc 1080
cctatcgaga agaccatctc taaggcaaag ggacagcctc gggagccaca ggtgtacaca 1140
ctgcctccat cccgcgacga gctgaccaag aaccaggtgt ctctgacatg tctggtgaag 1200
ggcttctatc cttctgatat cgccgtggag tgggagagca atggccagcc agagaacaat 1260
tacaagacca caccccctgt gctggactcc gatggctctt tctttctgta tagcaagctg 1320
accgtggaca agtcccgctg gcagcagggc aacgtgtttt cttgtagcgt gatgcacgaa 1380
gcactgcaca accattacac ccagaagtca ctgtcactgt ccccaggaaa atgataa 1437
<210> 170 <211> 693
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> DMAb гриппа A <400> 170
atggtgctgc agacccaggt gtttatttcc ctgctgctgt ggattagcgg cgcatacggc 60
gacattcaga tgactcagag cccttcaagc ctgtccgcct ctgtgggcga cagggtgacc 120
atcacatgca gaaccagcca gtccctgagc tcctacctgc actggtatca gcagaagcca 180
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgca gcctctagcc tgcagagcgg cgtgccttcc 240
cggttctctg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatctcctc tctgcagcca 300
gaggatttcg ccacatacta ttgccagcag tcccgcacct ttggccaggg cacaaaggtg 360
gagatcaaga ccgtggccgc cccctccgtg ttcatctttc ccccttctga cgagcagctg 420
aagtctggca cagccagcgt ggtgtgcctg ctgaacaatt tctaccctag ggaggccaag 480
gtgcagtgga aggtggataa cgccctgcag tccggcaatt ctcaggagag cgtgaccgag 540
caggactcca aggattctac atattctctg agcaacaccc tgacactgag caaggccgat 600
tacgagaagc acaaggtgta tgcctgtgag gtcactcacc aggggctgtc atcacccgtc 660
accaaatcct ttaatagggg agaatgttga taa 693
<210> 171
<211> 47
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> пептид (X-Y) амилоида бета
<400> 171
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile
35 40 45
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция, содержащая:
a) первую последовательность нуклеиновой кислоты, причем
последовательность нуклеиновой кислоты кодирует антиген; и
b) вторую последовательность нуклеиновой кислоты,
кодирующую одно или более антител или их фрагментов.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что антитело содержит полипептид тяжелой цепи или его фрагмент и полипептид легкой цепи или его фрагмент.
3. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что полипептид тяжелой цепи или его фрагмент кодируется третьей последовательностью нуклеиновой кислоты, а полипептид легкой цепи или его фрагмент кодируется четвертой последовательностью нуклеиновой кислоты.
4. Композиция по п. 3, отличающаяся тем, что вторая
последовательность нуклеиновой кислоты содержит третью
последовательность нуклеиновой кислоты и четвертую
последовательность нуклеиновой кислоты.
5. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что вторая последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно содержит промотор для экспрессии третей последовательности нуклеиновой кислоты и четвертой последовательности нуклеиновой кислоты в виде одного транскрипта.
6. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что промотор представляет собой промотор цитомегаловируса (ЦМВ).
7. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что вторая
последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно содержит
пятую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую участок
расщепления протеазой, причем пятая последовательность
нуклеиновой кислоты расположена между третьей
последовательностью нуклеиновой кислоты и четвертой
последовательностью нуклеиновой кислоты.
8. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что протеаза субъекта распознает и расщепляет участок расщепления протеазой.
9. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что полипептид тяжелой цепи содержит вариабельную тяжелую область и константную
2.
тяжелую область 1.
10. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что полипептид тяжелой цепи содержит вариабельную тяжелую область, константную тяжелую область 1, шарнирную область, константную тяжелую область 2 и константную тяжелую область 3.
11. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что полипептид легкой цепи содержит вариабельную легкую область и константную легкую область.
12. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что вторая последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность Козак.
13. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что четвертая последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно содержит сигнальный пептид иммуноглобулина (Ig).
14. Композиция по п. 13, отличающаяся тем, что сигнальный пептид Ig включает сигнальный пептид IgE или IgG.
15. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что антитело является специфическим в отношении антигена.
16. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что антиген представляет собой чужеродный антиген.
17. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что чужеродный антиген выбран из группы, состоящей из вирусного антигена, бактериального антигена и паразитарного антигена.
18. Композиция по п. 17, отличающаяся тем, что вирусный антиген выбран из группы, состоящей из антигена ВИЧ, антигена Чикунгунья, антигена Денге, антигена гепатита, антигена ВПЧ, антигена РСВ, антигена гриппа и антигена Эбола.
19. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что вирусный антиген представляет собой антиген Чикунгунья.
20. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что первая
последовательность нуклеиновой кислоты кодирует антиген, имеющий
аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около
95% идентичности по всей длине аминокислотной
последовательности, приведенной в любой из SEQ ID NO: 81-88.
21. Композиция по п. 20, отличающаяся тем, что первая
последовательность нуклеиновой кислоты содержит
10.
последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере около 95% идентичности по всей длине последовательности нуклеиновой кислоты, приведенной в любой из SEQ ID N0: 8 9-96.
22. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что вторая
последовательность нуклеиновой кислоты содержит
последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей
мере одну аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей
мере около 95% идентичности по всей длине аминокислотной
последовательности, приведенной в любой из SEQ ID N0: 59 или 61.
23. Композиция по п. 22, отличающаяся тем, что вторая
последовательность нуклеиновой кислоты содержит
последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере
около 95% идентичности по всей длине последовательности
нуклеиновой кислоты, приведенной в любой из SEQ ID N0: 58 или
60 .
24. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что антиген представляет собой собственный антиген.
25. Способ индукции иммунного ответа, включающий введение индивиду композиции по любому из пп. 1-24 в количестве, эффективном для индукции иммунного ответа у указанного индивида.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что иммунный ответ является постоянным.
27. Способ по п. 25, отличающийся тем, что иммунный ответ является системным.
28. Способ лечения индивида, у которого было
диагностировано заболевание или расстройство, включающий
введение индивиду терапевтически эффективного количества
композиции по любому из пп. 1-24.
По доверенности
А о-в
0.4
0.2
0.0
I I pVaxl П CVM1-VL j ! CVM1-VH Hi CVMl-Fab
0 24 48 Время после трансфекции {ч)
I I pVaxl
CVfvTI-lgG
0.5
0.4 0.3 0.2 0-1
0.0
О 24 48
Время после трансфекции (ч)
3 5 7 15 21 35 42 Время после введения ДНК (сутки)
Обратное сывороточное разведение
- - --> ЗФБ
Сутки 0 2
20 -*
Сутки 0
30 50
CVM1-lЈt СУМ-1-Fab лпл o'va*"
f- Анализ выживаемости
CVMl-IgG CVM-1-Fab лл*1 у.-'г ¦'
Анализ выживаемости
'¦-'•/WW;
| 60-1 3
I 40 о
Р 20-
ЮО-рВ-Q-O-fl 80-
CX?J>
-о- pVaj;1 -с- CVM-1-Fab -й- СУМ 1-IgG -I-I-I-I h-
0 5 10 15 2GQ0 34 3S 42 46 50 * Сутки
100
80-ra
I 601 40 I
-O- p-Vax 1 и(--рэназдгьно CV\l1-lqG. ннгрэнмагьно
-г-i 1 1 r-т 1
8 10 12 14 16 18 20 Сутки
t !
Сутки о 2
- gG лпл '-Env лгл
о7а- <1
Анализ выживаемости
СуткиО
CVMI-gG Л-.А t CHkV-Ет.' лгл I
Анализ выживаемости
!00--ШКК> - гйгСг
Р = ,0026
-О- pVasI
*1 CHIKV-Env :1xj
-й- CVMl-IgG :1*>
;оо емким-*,.
8060-40-I 20
Р-,
.0007
-О- рУзг:1
- ¦ CHIKV-Env Ш1
-й- СУШ-lgG Пх)
т г-
0 2 4
-1 и-- -| т 1 1 1 1
6 8 Ш 12 14 16 18 20
Сутки
6т г-
43 й7
Сутки
Анализ выживаемости
Р-- .0001
-О- pVaxl
..-v CHIKV-Env-CVMI-fgG
J-I-i-i-i-1-i-i-i-г-1
С 2 4 Б 8 10\2 141B1820 3537394143454749515355
f Сутш *
- Человеческий анти-CHiKV-lgG Мьшиньй аити-CHIKV-lgG
Время после инъекции ('сутки:
J z
-г-1-i-i-i-i-i-i-i-i-i-i-r-
2 4 6 8 10 11 12 13 14 15 16 1820
Время после стимуляции (сутки)
о 1 0-| 0.5
С 2.0т? 1.54
О pVaxl Д CVMl-IgG
О CHIKV-Env • CHIKV-Env+CVMUgG
046810 946810 046810 046510 Время после стимуляции {сутки}
Пул 1 ЙуЗ Пул
Пул - -л Л
f ч
о о
3 *
О ж
После стимуляции (сутки)
< х
D < г"
7/31
ZIKV-DMAb -¦-ZIKV-prME
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
После иммунизации ДНК
(Сутки)
петля слияния (98-109)
ДН <-пл:Г,м,'да кодирующая мси-окгюнагьное ai--§^-e~o IgG
?Л\% огМ~.-ЛЧ <-Ба?:ш:на
Лолучение
последовательностей
- Промотор Тяжелая цель |^ Легкая цепь
Выделение фракции ^¦нонухясзокьх клеток и
юе~ащение сешетяругаи^о
- Траисфекция в кленах 293Т
- ИФА; количественная оценка и связывание
yiVo экспрессия
ПЦР-змппнфикацй? варипбепьнь:' < областей
тяжелей ii легкой цеп** Секвенирс-закие
- Иммунизация мыи &й
- Сбор сь-во ротки (сутщ 0, 2. 5. 7 14. 21 1 меся1, месяце. 3 месяца]
- ИФА: количественная оценка и связывание
- Вестерн-слот
- сравнение конструкций
ИФА для связывания
100 1000 10000 Разведение
1С2А6
1D4G/
2B7D7
3F12E9
4D6E8
5Е""Ю9
6F9D1
8D10F-
8A9F9
9F7E1
Фигура 17
¦HEfl
1IP11-I. ? ' L V
! SQ*. 3 s.
Примечания i цветам
VL CDR Ш VH CDR
Фигура 13
Идентичность VH
Идентичность VL
Модель RMSD
ftMSD
&U10F4
1С1дб
SA9f9
8O10F4
1C2A6
0.302
227
г is |
шШШШж--- -1
M"Jf 9
0 3S5
f 0.347
ШШШж 2;li |
3F12F9
?яз
0.757
* i •
1D4G7
1 -> "¦'
L. 2 "i:.
ЧЭ Ш 03
I ro
о о и
<^^D CD CD
RMSD i &i
Цепи VH и VL Б 1C2A6, CD10F4 л SA9F9 идентична! или практически идентичны.
1С2А6, 8D10F4 л SA9F9 вероятно связывают одш- и тот же эпитоп одина. <овы? образом. Может присутствовать разница в аффинности, как и в случае л-ссых изменений антител
1D4G7 и 3F12E9 гредсаапяют более разнообразные Fv. чем 1С2А5, 8DI0F4 и 8A9FS.
2F12E9 имеет согьше сходства с набором из трех mAb. указанных выше, ^ем с 1D4G7. Оно vo/кет демонстрировать аналогичное связывание. Каркасный вариант в соответствии с измерением RMSD демонстрирует такой же профиль, что и идентичность последовательности.
Все модели Fv получены наложением в ленточном формате, чтобы подчеркнуть общую укладку.
Большую VH CDR3 из 1D4G7 четко видно, как и несколько других различий в складке в других CDR и в каркасных областях.
Несмотря на отличие в последовательности 3F12E9. оно все равно ближе по общей последовательности и конформации к 1С2А6, 8D10F4 и 8A9F9. чем к 1D4G7.
а 15
8D10F4
1D467 3F12E9
бласть CDR
В 1D4G7 отсутствует углубление между доменами VH и VL из-за большого размера петли
CDR3.
Сходство в последовательностях транслируется в сходство в структуре, поэтому общая конформация CDR и форма молекул являются консервативными в соответствии с ранее продемонстрированной группировке.
it г.
.§ к /" ш
х SDi:"
¦яг
1С2А6 содержит свободный остаток CYS вдали от CDR, находящийся на поверхности (желтая стрелка)
Другое потенциально релевантное отличие находится в области VH FR2 (оранжевая стрелка! Этот остаток напрямую не связан с конформацией CDR. но влияет на локальную упаковку остатков
В пределах определенных по 1MGT областей CDR существует два изменения (красные стрелки). Изменения VL (F. F. S) напрямую влияют на поверхность раздела VL-VH.
Свободный CYS оставляет сильно поддающуюся модификациям химическую группу на поверхности молекулы.
Так как это mAb практически идентично с двумя другими (CYS является уникальным для 1С2Д6), если другие два mAb демонстрируют аналогичную нейтрализующую активность, может быть лучше продолжить с mAb, которое не содержит свободный CYS.
Самый высокий индекс разворачиваемое(tm) имеет 1D4G7. очень вероятно из-за длинной петли CDR3: которая содержит некоторое количество неполярных остатков. На основании прошлого опыта, одно это не составляет проблему.
вариация F^S на поверхности разделa/CDR области BD10F4 отвечает за снижение числа прогнозируемых пи-взаимодействий по сравнению с 1С2А6 и 8A9F9.
Можно провести оценку дополнительных характеристик, таких как потенциальные посттрансляционные модификации. Они могут быть менее релевантными, но их можно исследовать.
pVax" или ZIKV-prME
Иммунный анализ
1000
800
О гп
Ч. 4UC
200
Пул 6 Пул 5 Пул 4 ПУЛ 3 Пул 2 Пул 1 г, 6С("
3 4С"1
3 200
pVa-1
ZIKV-prME
1 2 3 4 5 6 7 8 ?'
Матриксные > -уль
о о
о ео + о а
t *
о 2
1 5 •
1 О
IFN-y
г I TFf-4-а
г, .
г--
4 2 H
IFN-v/TFM-a
pVa.!
KV-prME
pVavT
ZIKV-prME
pVa> 1
ZIKV-prME
ZIKV-pfME r <2!
Сутки f
¦f-1
Г r f ? 5^r=
Фигура 24A - Фигура 24F
oVaxI
ZIKV-pfME
X20
хго
x?c
Oi GO
Сутки
после инфицирования
ФСБ * " контрольная сь еоро-ка ZIKV-prME положительная сыворотка
ФСБ * контрольная сь воро-ка ZIKV-prME положительная сыворотка
110
я ш
100
п=5
т-(-I-г-1-г(tm)г-г-г~т-т"-г-1-I
9 12 34 56 7 8910111213
После стимуляции iсутки:
100
ш 80 4 т.
g 60 Л
m Я
8 40 Л
Ъ 20 *
п=5
¦т 2
4 б В 10 Посне с~имуляиии > Су~Ш)
Фигура 26А - Фигура 26В
500-
400'
300 ¦
200 ¦
100-
,1
pVaxl
Is(tm),
ZiKV-prME MR766
500-
0 400: I
1 300-
1 2001
| 100 • о ¦
pVaxt
ZIKV-prME Бразилия
r> 600
400
•_ 200
ШшШШШк,
Пул 4 П/-3 Луг 2 Луг 1
pVaxl
"'" 8-
О :
tU С
м ь-
1 1
п %.
• 1 4-
\ \
'J 2-
¦... 4W- %.
0 0-
10' 106
10'
:, * л
10(
оста
"с еле Hvy7K!23u;'H
С /тк." О
С,-*и 14 С> - <и21 Су-'" 35 ~ :> :.-¦= имм,'-/?зиии
Фи-уpa ЗЭА - Фигуга 3GD
В:Ч
После стимуляции iсуткиj
в/м ~- В/В
В/Е П/К
(19)
(19)
(19)
79.
<220>
<220>
<220>
<220>
<220>
171
171
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 1А - Фигура 10
Фигура 2А - Фигура 2D
Фигура 2А - Фигура 2D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура ЗА - Фигура 3D
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 4А - Фигура 4С)
Фигура 5А - Фигура 5С
Фигура 5А - Фигура 5С
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 6А - Фигура 6В
Фигура 8
Фигура 8
Фигура 9
Фигура 9
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 10
Фигура 11
Фигура 11
Фигура 14
Фигура 14
Фигура 14
Фигура 14
Фигура 14
Фигура 14
Фигура 16
Фигура 17
Фигура 17
Фигура 17
Фигура 17
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 21 А - Фигура 21D
Фигура 22A - Фигура 22E
Фигура 22A - Фигура 22E
Фигура 23А - Фигура 23Е
Фигура 23А - Фигура 23Е
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 25А
- Фигура 25D
Фигура 27А - Фигура 270
Фигура 27А - Фигура 270
Фигура 28А - Фигура 28D
Фигура 28А - Фигура 28D
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 29А - Фигура 29С
Фигура 31А - Фигура 31Е
Фигура 31А - Фигура 31Е
Фигура 31А - Фигура 31Е
Фигура 31А - Фигура 31Е
|
