|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Настоящее изобретение относится к соединениям, композициям и способам предупреждения, лечения или исцеления от инфекции гепатита B (ВГВ) субъектов, являющихся человеком или другим животным-реципиентом. Предложены также фармацевтические композиции указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, пролекарств и других производных, и способы лечения, предупреждения или ликвидации инфекции ВГВ. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к соединениям, композициям и способам предупреждения, лечения или исцеления от инфекции гепатита B (ВГВ) субъектов, являющихся человеком или другим животным-реципиентом. Предложены также фармацевтические композиции указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, пролекарств и других производных, и способы лечения, предупреждения или ликвидации инфекции ВГВ.
Евразийское (21) 201892034 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2017.03.09
(51) Int. Cl.
C07D 207/34 (2006.01) C07D 249/04 (2006.01) C07D 401/12 (2006.01) C07D 403/12 (2006.01) A61K 31/4025 (2006.01) A61K 31/454 (2006.01) A61K 31/427 (2006.01)
A61K 31/4192 (2006.01)
A61P 31/20 (2006.01)
(54) ЭЛИМИНАЦИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА В ПРИ ПОМОЩИ ПРОТИВОВИРУСНЫХ АГЕНТОВ
(31) 62/305,865
(32) 2016.03.09
(33) US
(86) PCT/US2017/021551
(87) WO 2017/156255 2017.09.14
(71) Заявитель:
ЭМОРИ ЮНИВЕРСИТИ (US)
(72) Изобретатель:
Шинази Рэймонд Ф., Боукл Себастиен, Амблард Фрэнк, Сари Озкан, Бассит Леда (US)
(74) Представитель:
Строкова О.В. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к соединениям, композициям и способам предупреждения, лечения или исцеления от инфекции гепатита B (ВГВ) субъектов, являющихся человеком или другим животным-реципиентом. Предложены также фармацевтические композиции указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, пролекарств и других производных, и способы лечения, предупреждения или ликвидации инфекции ВГВ.
Мониторинг сборки капсида ВГВ с применением электронно-микроскопического анализа образования капсида
ВГВСр149 Содеинения в течении Индуцируют сборку
Ю мкм | часа При 4"с вгв
СГГГ^ГГГГ.Гф СГ:^ГТ7ГГГГ4Ч Ср149
+М)()мЛШаС1.4 С Капсид
ЭЛИМИНАЦИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА В ПРИ ПОМОЩИ ПРОТИВОВИРУСНИХ
АГЕНТОВ
Область техники
Настоящее изобретение направлено на соединения, способы и композиции для предотвращения, лечения и/или устранения инфекций вирусом гепатита В (ВГВ). Более конкретно, изобретение описывает специфически замещенные ароматические/ гетероароматические соединения, фармацевтически приемлемые соли или другие их производные, и их применение в лечении инфекций ВГВ
Уровень техники
Вирус гепатита В (ВГВ) вызывает серьезные проблемы со здоровьем человека и занимает второе место по причинам возникновения рака у человека, уступая только табаку. Механизм, посредством которого ВГВ вызывает рак, неизвестен. Постулируется, что он может напрямую запускать развитие опухоли, или запускать процесс развития опухоли непрямым образом, через хроническое воспаление, цирроз и регенерацию клеток, связанные с этой инфекцией.
После инкубационного периода от 2 до 6 месяцев, во время которого реципиент, как правило, не знает об инфекции, инфекция ВГВ может привести к острому гепатиту и повреждению печени, что вызывает боли в животе, желтуху и повышенные уровни в крови некоторых ферментов. ВГВ может вызывать фульминантный гепатит, быстро прогрессирующую, часто фатальную форму заболевания, при которой разрушаются большие участки печени.
Субъекты обычно восстанавливаются после острой фазы инфекции ВГВ. У некоторых пациентов, однако, вирус продолжает репликацию в течение длительного или неопределенного периода, вызывая хроническую инфекцию. Хроническая инфекция может приводить к хроническому персистентному гепатиту, Пациенты, инфицированные хронически персистирующим ВГВ, наиболее часто встречаются в развивающихся странах. К середине 1991 году было приблизительно 225 миллионов хронических носителей ВГВ только в Азии, и во всем мире было около 300 миллионов носителей. Хронический персистентный гепатит может вызывать утомление, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному, первичный рак печени.
В индустриализованных странах группа высокого риска инфекции ВГВ включает лиц, находящихся в контакте с носителями ВГВ или с образцами их крови. Эпидемиология ВГВ очень схожа с эпидемиологией ВИЧ/СПИД, что является причиной того, что инфекция
ВГВ распространена среди пациентов, инфицированных ВИЧ или страдающих от СПИДа. Однако ВГВ более контагиозен, чем ВИЧ.
ЗТС (ламивудин), интерферон альфа-2Ь, пэгинтерферон альфа-2а, гепсера (адефовир дипивоксил), бараклюд (энтекавир) и Tyzeka (Телбивудин) являются препаратами, утвержденными в настоящее время Агентством США по пищевым продуктам и лекарственным средствам для лечения инфекции ВГВ. Другой нуклеозид, тенофовир алафенамид фумарат (ТАФ) (ранее GS-7340), в настоящее время находится в фазе 3. Все эти препараты высокоэффективны в снижении вирусной нагрузки, однако ни один из этих препаратов не обеспечивает избавление от ВГВ. К тому же, их вклад может быть ограничен лекарственной резистентностью, низкой эффективностью и проблемами переносимости. Низкие уровни избавления от ВГВ относятся, по меньшей мере частично, к наличию и персистенции ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (кзкДНК) в ядре инфицированных гепатоцитов.
Соответственно, существует срочная потребность в новых препаратах против ВГВ, мощных, безопасных, которые бы действовали с помощью других механизмов, отличных от аналогов нуклеозидов, и могли снижать латентную форму ВГВ, известную как кзкДНК.
Преимуществом было бы предоставление новых противовирусных агентов, композиций, включающих эти агенты, и способов лечения, использующих эти агенты, для лечения ВГВ и предотвращения появления лекарственно-резистентного ВГВ. Настоящее изобретение предоставляет такие агенты, композиции и способы.
Раскрытие изобретения
В настоящем изобретении предложены соединения, способы и композиции для предупреждения, лечения и/или исцеления от инфекции ВГВ реципиента или снижения активности ВГВ у реципиента. Указанные способы включают введение терапевтически или профилактически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, описанного в настоящем документе, для лечения, исцеления или предупреждения инфекции ВГВ, или такого его количества, которое является достаточным для снижения биологической активности инфекции ВГВ.
Указанные соединения также можно использовать для лечения других вирусных инфекций, включая инфекции, вызванные флавивирусами, такими как вирус Западного Нила (ВЗН), вирус гепатита С (ВГС), вирус лихорадки Денге и вирус Зика.
Предложенные фармацевтические композиции содержат одно или более соединений, описанных в настоящем документе, в комбинации с фармацевтически
приемлемым носителем или вспомогательным веществом, для лечения реципиента, инфицированного ВГВ. Указанные соединения можно использовать в комбинации с нуклеозидными и ненуклеозидными ингибиторами ВГВ. Лекарственные формы могут дополнительно содержать по меньшей мере один другой терапевтический агент. Кроме того, настоящее изобретение включает способы получения таких соединений.
В одном варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(I)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где:
А является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
В является шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С5-14 бициклическим кольцом,
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом, галогеном (включая F, CI, Вг и I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C1-6 алкокси, Сi-6 галогеналкокси, С2-б алкенилом, циано, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбоксилом, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-6 гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, С2. 6 алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, С2-б алкенилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, гетероциклилалкилом, С2-б гидроксиалкилом или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, Ci-б алкокси, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они могут вместе образовывать Сз-б кольцо, необязательно содержащее гетероатом N, О или S;
группы R' могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном, Сi-б галогеналкилом, Ci-б гидроксиалкилом, гидроксилом, карбоксилом, ацилом, арилом, ацилокси, амином, амидом, карбоксильными производными, алкиламином, диалкиламином, ариламином, алкокси, алкоксиалкилом, арилокси, нитро, циано, сульфоновой кислотой, тиолом, имином, сульфонилом, сульфанилом, сульфинилом, сульфамоилом, сложным эфиром, карбоновой кислотой, амидом, фосфонилом, фосфинилом, фосфорилом, фосфином, сложным тиоэфиром, простым тиоэфиром, галогенангидридом кислоты, ангидридом, оксимом, гидразином, карбаматом, фосфоновой кислотой или фосфонатом, в незащищенной форме или, при необходимости, в защищенной форме, как известно специалистам в данной области техники, например, как описано в публикации Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, второе издание, 1991, включенной в настоящий документ посредством ссылки;
и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
R2 О О u
11 1 11 Н 1
N-S-^ Ro-S-N-j-
X является О или О
R3 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R2 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, алкиларилом, арилалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим, ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; циклоалкилом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
R2 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-6 алкокси, Ci-б галогеналкокси, циано, азид о, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбоксилом, С i-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Сь 6 гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
или
R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, 3-8-членное насыщенное кольцо или 5-членное ненасыщенное кольцо; указанные бициклические, мостиковые, насыщенные и ненасыщенные кольца необязательно содержат один или более дополнительных гетероатомов, каждый из которых независимо является О, S или N, и являются необязательно замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
Во втором варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(II)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
С является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим
один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкиларилом или алкилгетероарилом;
D является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С5-14 бициклическим кольцом,
R4 О О м
и I м Н I
N-S-p R5-S-N-^
R5 11 11
Y является О или О
R4 является Н или Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом;
в одном варианте воплощения R4 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом,
R5 является алкиларилом, арилалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; и шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; в одном варианте воплощения R5 является алкиларилом, арилалкилом, фенилом, пяти- или шестичленным гетероарилом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S;
R5 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Сi-6 алкокси, Ci-б галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, С i-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или С i-б гидроксиалкилом; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R\ Ci-e алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
причем, в одном варианте воплощения, если С является фенилом, D не является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, и в другом варианте воплощения, если С является фенилом, и D является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, то R5 не является алкиларилом, алкенилом или шестичленным мостиковым кольцом;
R4 О
V II ,
N-S-t-
или если Y является " О , то R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Си, алкокси, циано, азидо, С2.6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
В одном варианте воплощения D является R7 Вг, и R7 является Н, метилом, F или С1.
R , где R является Н, CI, F или
R4 О N~mT
В одном аспекте данного варианта воплощения, если Y является ^ О , то R5 не
является ^^^О, с *х> U JO ^az ^'
ОМе
или
В другом аспекте данного варианта воплощения, если R4 является этилом, то R5 не
является '
В третьем варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
{R1)u О ДЛ
(III)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I,
u и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
Е является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, каждый из которых независимо является N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
F является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
Z является
или
II П I
Rp-S-N-h
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R9 является С i-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или трехчленным кольцом;
R9 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-б галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, С i-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или С i-б гидроксиалкилом; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R\ Ci-e алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила; или
R8 и R9 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О,
S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
В четвертом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(IV)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где
G является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
Н является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным неароматическим кольцом, необязательно содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или С4-14 бициклическим кольцом;
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом, галогеном (включая F, CI, Вг и I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-e алкокси, циано, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или С i-б гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, Сь 6 алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, С2-6 алкинилом, С2-6 алкенилом, гетероциклилалкилом, Ci-б гидроксиалкилом или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С i-б алкокси, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они могут вместе образовывать Сз-б алкильное кольцо, необязательно содержащее N, О или S; при
этом группы R' могут быть замещены одним или более заместителями, описанными выше, например, Ci-б гидроксиалкил, аминоалкил и алкоксиалкил; и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R11 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом, арилалкилом, фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; трехчленным кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
где R11 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (включая F, О, Вг и I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-б галогеналкокси, С2-6 алкенила, циано, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-б гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы,
состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-
б алкокси, циано, азидо, C2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
или
R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый или насыщенный кольцевой фрагмент
необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
В пятом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(V)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
I является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, С4-14 бициклическим кольцом; алкилгетероарилом или алкиларилом;
J является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S,
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R является C2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, включая фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; алкиларилом, арилалкилом, С4-14 бициклическим кольцом; шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S,
R13 необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода, галогена (F, CI, Br, I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-e алкокси, Ci-e галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, циклоалкила, арилалкоксикарбонила, карбоксила, галогеналкила, гетероциклилалкила или Ci-б гидроксиалкила; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом и замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси,
N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-e алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-6
алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
или R12 и R13 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена (F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-б гидроксиалкила.
(VI)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I,
и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
В шестом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
К является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
L является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R15 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S;
R15 необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо
являются галогеном (F, CI, Br, I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-
б алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-6 гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
ИЛИ
R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О,
5 или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена (включая F, О, Вг и I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-
6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-6 гидроксиалкила.
В седьмом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
М является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом,
N является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или С4-14 бициклическим кольцом,
R16 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, таким как шестичленное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три атома азота, или пятичленное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; алкиларилом, арилалкилом, алкилгетероарилом или алкиларилом,
где R16 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (включая F, О, Вг и I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-б галогеналкокси, С2-6 алкенила, циано, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-6 гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-б алкокси, циано, азидо, C2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
Иллюстративные соединения, входящие в объем настоящего изобретения, включают следующие:
и их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства. Дополнительные соединения также включают
6\ &
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство.
В настоящем документе описаны также фармацевтические композиции, которые содержат одно или более соединений Формул I-VII и фармацевтически приемлемый носитель. Носитель может представлять собой, например, пероральную композицию, композицию для инъекций, трансдермальную композицию или композицию в форме наночастиц. Указанные композиции могут дополнительно содержать второй противовирусный агент, в частности, если указанный агент активен против инфекции ВГВ, и более конкретно, если второй противовирусный агент активен против инфекции ВГВ, действуя по механизму, отличному от соединений, описанных в настоящем документе.
Иллюстративные типы вторых противовирусных агентов включают ингибиторы полимеразы, ингибиторы попадания вируса в клетку, ингибиторы созревания вируса, модуляторы сборки капсида, ингибиторы инозин-монофосфат-дегидрогеназы (ИМФДГ), ингибиторы протеазы, иммунные терапевтические агенты, ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы толл-подобного рецептора (TLR) и агенты, действующие по
отдельному или неизвестному механизму. Можно использовать комбинации указанных агентов.
Соединения, описанные в настоящем документе, можно использовать для получения лекарственных средств для лечения инфекции ВГВ, предупреждения инфекции ВГВ или снижения биологической активности инфекции ВГВ. Лекарственные средства могут дополнительно содержать другой анти-ВГВ агент.
Предложенные соединения и композиции можно использовать в способах лечения реципиента, инфицированного ВГВ, предупреждения инфекции ВГВ и снижения биологической активности инфекции ВГВ у реципиента. Указанные способы могут также включать совместное введение другого анти-ВГВ агента, и совместное введение может быть одновременным или последовательным.
Разъяснение этих и других аспектов настоящего изобретения дополнительно представлено в следующем подробном описании.
Краткое описание фигур
Фигура 1 демонстрирует серию электронных микрофотографий результатов
инкубации ВГВ Ср149 в условиях, при которых в норме образуются капсиды, и где инкубация сопровождалась добавлением предполагаемого активного агента, где активный агент функционирует, по меньшей мере частично, путем ингибирования образования капсида. Там, где инкубация проводилась с одной несущей средой, электронные микрофотографии демонстрируют капсиды в виде полностью образованных полых сфер. При инкубации с GLS4 капсиды образуют неправильно собранные полые сферы, и с Соединением 7а капсиды образуют неполные полые сферы в относительно низком количестве.
Фигура 2 показывает серию электронных микрофотографий капсид ВГВ Ср149, обработанных средой (демонстрирующих капсиды в форме полностью образованных полых сфер), GLS4, демонстрирующих, что капсиды образовали неправильно собранные полые сферы и с Соединением 7а, демонстрирующие, что капсиды сформировали неполные полые сферы в относительно низком количестве.
Фигура 3 показывает серию электронных микрофотографий капсид, показанных на Фигуре 2, с повторением первых двух микрофотографий, и третью микрофотографию, увеличивающую часть второй микрофотографии для усиления обзора повреждения капсид.
Фигура 4 показывает серию электронных микрофотографий капсид, показанных на Фигуре 2 с повторением первой и третей микрофотографий в качестве первой и второй
микрофотографии. Показана третья микрофотография, увеличивающая часть второй микрофотографии для усиления обзора повреждения капсид.
Результаты показывают, что соединения эффективно нарушают формирование капсид ВГВ.
Подробное описание изобретения
Раскрыты соединения и композиции, полезные для лечения, предотвращения или
избавления от инфекции ВГВ. Также раскрыты способы лечения, предотвращения или избавления от инфекции ВГВ.
Описываемые здесь соединения демонстрируют ингибиторную активность против ВГВ в тестах, основанных на клетках. Поэтому соединения могут использоваться для лечения или предотвращения ВГВ у реципиента или снижения биологической активности вируса. Реципиентом может быть млекопитающее, и, в частности, человек, инфицированный ВГВ. Способы состоят из введения эффективного количества одного или более соединений, описанных здесь.
Также описываются фармацевтические составы, включающие одно или более соединений, описанных здесь, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным веществом. В одном варианте воплощения, составы включают по меньшей мере одно соединение, описанное здесь, и по меньшей мере один дальнейший терапевтический агент.
Настоящее изобретение будет лучше пониматься со ссылкой на следующие определения: I. Определения
Термин "независимо" в данном контексте означает, что указанная переменная, которую применяют независимо, варьируется независимо от одного применения к другому применению. Так, в соединении типа R"XYR", где R" "независимо является углеродом или азотом", оба R" могут представлять собой углерод, оба R" могут представлять собой азот, или один R" может представлять собой углерод, а другой R" - азот.
В данном контексте термин "энантиомерно чистая" относится к композиции соединения, которая содержит по меньшей мере примерно 95% и предпочтительно примерно 97, 98, 99 или 100% одного энантиомера указанного соединения.
В данном контексте термин "по существу не содержит" или "по существу в отсутствие" относится к композиции соединения, которая содержит по меньшей мере от 85 до 90 масс%, предпочтительно от 95 до 98 масс%, и еще более предпочтительно от 99 до 100 масс% указанного энантиомера данного соединения. В предпочтительном варианте
воплощения соединения, описанные в настоящем документе, по существу не содержат энантиомеров.
Аналогично, термин "выделенная" относится к композиции соединения, которая содержит по меньшей мере от 85 до 90 масс%, предпочтительно 95 до 98 масс%, и еще более предпочтительно от 99 до 100 масс% указанного соединения, а остальное составляют другие химические соединения или энантиомеры.
В данном контексте термин "алкил", если не указано иное, относится к насыщенным неразветвленным, разветвленным или циклическим, первичным, вторичным или третичным углеводородам, включая замещенные и незамещенные алкильные группы. Алкильная группа может быть необязательно замещена любым фрагментом, который в остальном не препятствует реакции, или который обеспечивает улучшение процесса, включая, но не ограничиваясь этим, галоген, галогеналкил, гидроксил, карбоксил, ацил, арил, ацилокси, амино, амидо, карбоксильные производные, алкиламино, диалкиламино, ариламино, алкокси, арилокси, нитро, циано, сульфоновую кислоту, тиол, имин, сульфонил, сульфанил, сульфинил, сульфамоил, сложный эфир, карбоновую кислоту, амид, фосфонил, фосфинил, фосфорил, фосфин, сложный тиоэфир, простой тиоэфир, галогенангидрид кислоты, ангидрид, оксим, гидразин, карбамат, фосфоновую кислоту, фосфонат, в незащищенной форме или, при необходимости, в защищенной форме, как известно специалистам в данной области техники, например, как описано в публикации Greene, et al, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, второе издание, 1991, включенной в настоящий документ посредством ссылки. В частности, включены CF3 и CH2CF3.
В этом тексте, при использовании термина С (алкильный диапазон), указанный термин независимо включает каждый член данного класса, как если бы он был указан специально и в отдельности. Термин "алкил" включает СЬ22 алкильные фрагменты, и термин "низший алкил" включает СЬ6 алкильные фрагменты. Специалистам в данной области техники понятно, что название соответствующего алкильного радикала образуется заменой суффикса "-ан" на суффикс "-ил".
В данном контексте "мостиковый алкил" относится к бицикло- или трициклоалкану, например, 2:1:1 бициклогексану.
В данном контексте "спироалкил" относится к двум кольцам, которые соединены у одного (четвертичного) атома углерода.
Термин "алкенил" относится к ненасыщенному линейному или разветвленному углеводородному радикалу, если он содержит одну или более двойных связей. Алкенильная группа, описанная в настоящем документе, может быть необязательно замещена любым
фрагментом, который не оказывает неблагоприятного влияния на ход реакции, включая, но не ограничиваясь этим, те, которые описаны для заместителей в алкильных фрагментах. Неограничивающие примеры алкенильных групп включают этилен, метилэтилен, изопропилиден, 1,2-этандиил, 1,1-этандиил, 1,3-пропандиил, 1,2-пропандиил, 1,3-бутандиил и 1,4-бутандиил.
Термин "алкинил" относится к ненасыщенному, ациклическому, линейному или разветвленному углеводородному радикалу, если он содержит одну или более тройных связей. Алкинильная группа может быть необязательно замещена любым фрагментом, который не оказывает неблагоприятного влияния на ход реакции, включая, но не ограничиваясь этим, те, которые описаны выше для алкильных фрагментов. Неограничивающие примеры подходящих алкинильных групп включают радикалы: этинил, пропинил, гидроксипропинил, бутин-1-ил, бутин-2-ил, пентин-1-ил, пентин-2-ил, 4-метоксипентин-2-ил, З-метилбутин-1-ил, гексин-1-ил, гексин-2-ил и гексин-3-ил, 3,3-диметилбутин-1-ил.
Термин "алкиламино" или "ариламино" относится к аминогруппе, которая содержит один или два алкильных или арильных заместителя, соответственно.
В данном контексте термин "защищенная", если не указано иное, относится к группе, которая присоединена к атому кислорода, азота или фосфора для предотвращения его дальнейшей реакции или для других целей. Специалистам в области органического синтеза известны многочисленные защитные группы для кислорода и азота, и они описаны, например, в публикации Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, supra.
Термин "арил", отдельно или в комбинации, означает карбоциклическую
ароматическую систему, содержащую одно, два или три кольца, причем указанные кольца
могут быть соединены друг с другом как подвешенные фрагменты, или могут быть
конденсированными. Неограничивающие примеры арила включают фенил, бифенил или
нафтил, или другие ароматические группы, которые остаются после удаления атома
водорода из ароматического кольца. Термин "арил" включает замещенные и незамещенные
фрагменты. Арильная группа может быть необязательно замещена любым фрагментом,
который не оказывает неблагоприятного влияния на ход реакции, включая, но не
ограничиваясь этим, те, которые описаны выше для алкильных фрагментов.
Неограничивающие примеры замещенного арила включают гетероариламино, N-apnjr-N-
алкиламино, М-гетероариламино-ГЧ-алкиламино, гетероаралкокси, ариламино,
аралкиламино, арилтио, моноариламидосульфонил, арилсульфонамидо,
диариламидосульфонил, моноариламидосульфонил, арилсульфинил, арилсульфонил, гетероарилтио, гетероарилсульфинил, гетероарилсульфонил, ароил, гетероароил,
аралканоил, гетероаралканоил, гидроксиаралкил, гидроксигетероаралкил, галогеналкоксиалкил, арил, аралкил, арилокси, аралкокси, арилоксиалкил, насыщенный гетероциклил, частично насыщенный гетероциклил, гетероарил, гетероарилокси, гетероарилоксиалкил, арилалкил, гетероарилалкил, арилалкенил и гетероарилалкенил, карбоаралкокси.
Термины "алкарил" или "алкиларил" относятся к алкильной группе с арильным заместителем. Термины "аралкил" или "арилалкил" относятся к арильной группе с алкильным заместителем.
Термин "галоген" в данном контексте включает хлор, бром, йод и фтор.
Термин "ацил" относится к сложному эфиру карбоновой кислоты, в котором некарбонильный фрагмент сложноэфирной группы выбран из группы, состоящей из неразветвленного, разветвленного или циклического алкила или низшего алкила, алкоксиалкила, включая, но не ограничиваясь этим, метоксиметил, аралкил, включая, но не ограничиваясь этим, бензил, арилоксиалкил, такой как феноксиметил, арил, включая, но не ограничиваясь этим, фенил, необязательно замещенный галогеном (F, С1, Вг или I), алкилом (включая, но не ограничиваясь этим, Сь С2, С3 и С4) или алкокси (включая, но не ограничиваясь этим, Сь С2, С3 и С4), сульфонатные сложные эфиры, такие как алкил- или аралкилсульфонил, включая, но не ограничиваясь этим, метансульфонил, моно-, ди- или трифосфатный сложный эфир, тритил или монометокситритил, замещенный бензил, триалкилсилил (например, диметил-трет-бутилсилил) и дифенилметилсилил. Оптимально, арильные группы в сложных эфирах содержат фенильную группу. Термин "низший ацил" относится к ацильной группе, в которой некарбонильный фрагмент является низшим алкилом.
Термины "алкокси" и "алкоксиалкил" включают линейные или разветвленные окси-содержащие радикалы, имеющие алкильные фрагменты, такие как метокси-радикал. Термин "алкоксиалкил" также включает алкильные радикалы, содержащие один или более алкокси-радикалов, присоединенных к алкильному радикалу, то есть с образованием моноалкоксиалкильных и диалкоксиалкильных радикалов. "Алкокси" радикалы могут быть дополнительно замещены одним или более атомами галогена, такими как фтор, хлор или бром, с образованием "галогеналкокси" радикалов. Примеры таких радикалов включают фторметокси, хлорметокси, трифторметокси, дифторметокси, трифторэтокси, фторэтокси, тетрафторэтокси, пентафторэтокси и фторпропокси.
Термин "алкиламино" означает "моноалкиламино" и "диалкиламино", содержащий один или два алкильных радикала, соответственно, присоединенных к амино-радикалу. Термин "ариламино" означает "моноариламино" и "диариламино", содержащий один или
два арильных радикала, соответственно, присоединенных к амино-радикалу. Термин "аралкиламино" включает аралкильные радикалы, присоединенные к амино-радикалу. Термин "аралкиламино" означает "моноаралкиламино" и "диаралкиламино", содержащий один или два аралкильных радикала, соответственно, присоединенных к амино-радикалу. Термин "аралкиламино" дополнительно означает "моноаралкил-моноалкиламино", содержащий один аралкильный радикал и один алкильный радикал, присоединенные к амино-радикалу.
В данном контексте термин "гетероатом" относится к атому кислорода, серы, азота и фосфора.
В данном контексте термины "гетероарил" или "гетероароматический" относятся к ароматической системе, которая содержит по меньшей мере один атом серы, кислорода, азота или фосфора в ароматическом кольце.
Термин "гетероциклический", "гетероциклил" и "циклогетероалкил" относится к неароматической циклической группе, в которой существует по меньшей мере один гетероатом, такой как кислород, сера, азот или фосфор, в указанном кольце.
Неограничивающие примеры гетероарильных и гетероциклических групп включают фурил, фуранил, пиридил, пиримидил, тиенил, изотиазолил, имидазолил, тетразолил, пиразинил, бензофуранил, бензотиофенил, хинолил, изохинолил, бензотиенил, изобензофурил, пиразолил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, пуринил, карбазолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, изоксазолил, пирролил, хиназолил, циннолинил, фталазинил, ксантинил, гипоксантинил, тиофен, фуран, пиррол, изопиррол, пиразол, имидазол, 1,2,3-триазол, 1,2,4-триазол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, пиримидин или пиридазин и птеридинил, азиридины, тиазол, изотиазол, 1,2,3-оксадиазол, тиазин, пиридин, пиразин, пиперазин, пирролидин, оксазираны, феназин, фенотиазин, морфолинил, пиразолил, пиридазинил, пиразинил, хиноксалинил, ксантинил, гипоксантинил, птеридинил, 5-азацитидинл, 5-азаурацилил, триазолопиридинил,
имидазолопиридинил, пирролопиримидинил, пиразолопиримидинил, аденин, N^-
алкилпурины, N^-бензилпурин, N^-галогенпурин, N^-винилпурин, N^-ацетиленпурин, N^-
ацилпурин, N^-гидроксиалкилпурин, N^-тиоалкилпурин, тимин, цитозин, 6-азапиримидин,
2-меркаптопиримидин, урацил, N^-алкилпиримидины, N^-бензилпиримидины, N^-
галогенпиримидины, N^-винилпиримидин, N^-ацетиленпиримидин, N^-ацилпиримидин,
N^-гидроксиалкилпурин и N^-тиоалкилпурин, и изоксазолил. Гетероароматическая группа может быть необязательно замещена, как описано выше для арила. Гетероциклическая или
гетероароматическая группа может быть необязательно замещена одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, галогеналкила, алкила, алкокси, гидрокси, карбоксильных производных, амидо, амино, алкиламино и диалкиламино. Гетероароматическая система может быть частично или полностью гидрирована, при необходимости. В качестве неограничивающего примера, вместо пиридина можно использовать дигидропиридин. Функциональные кислородные и азотные группы в указанной гетероциклической или гетероарильной группе могут быть защищены, если это необходимо или желательно. Подходящие защитные группы хорошо известны специалистам в данной области техники и включают триметилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутилдиметилсилил и трет-бутилдифенилсилил, тритил или замещенный тритил, алкильные группы, ацильные группы, такие как ацетил и пропионил, метансульфонил и п-толуолсульфонил. Гетероциклическая или гетероароматическая группа может быть замещена любым фрагментом, который не оказывает неблагоприятного влияния на ход реакции, включая, но не ограничиваясь этим, те, которые описаны выше для арила.
Термин "реципиент" в данном контексте относится к одноклеточному или многоклеточному организму, в котором может реплицироваться вирус, включая, но не ограничиваясь этим, клеточные линии и животных, и, предпочтительно, людей. Альтернативно, реципиент может нести часть вирусного генома, репликацию или функцию которого можно изменять с помощью соединений согласно настоящему изобретению. Термин "реципиент", в частности, относится к инфицированным клеткам, к клеткам, трансфицированным полным вирусным геномом или частью вирусного генома, и к животным, в частности, приматам (включая, но не ограничиваясь этим, шимпанзе) и людям. В большинстве животных применений по данному изобретению реципиентом является человек. Однако для некоторых показаний в настоящем изобретении в явном виде предусмотрено ветеринарное применение (например, для применения при лечении шимпанзе).
Термин "пептид" относится к природному или синтетическому соединению, содержащему от двух до ста аминокислот, связанных через карбоксильную группу одной аминокислоты и аминогруппу другой аминокислоты.
Термин "фармацевтически приемлемая соль или пролекарство" в тексте настоящего документа использован для описания любой фармацевтически приемлемой формы (такой как сложный эфир) соединения, которая при введении пациенту обеспечивает данное соединение. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических или органических оснований и кислот. Подходящие соли включают соли, полученные из щелочных металлов, таких как калий и
натрий, щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний, из множества других кислот, хорошо известных в области фармацевтики.
Термин "фармацевтически приемлемая соль или пролекарство" в тексте настоящего описания использован для описания любой фармацевтически приемлемой формы (такой как сложный эфир) соединения, которая при введении пациенту обеспечивает данное соединение. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических или органических оснований и кислот. Подходящие соли включают соли, полученные из щелочных металлов, таких как калий и натрий, щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний, из множества других кислот, хорошо известных в области фармацевтики. Фармацевтически приемлемые пролекарства относятся к соединениям, которые метаболизируются, например, подвергаются гидролизу или окислению, в организме реципиента с образованием соединения согласно настоящему изобретению. Типичные примеры пролекарств включают соединения, которые содержат биологически подвижные защитные группы у функциональных фрагментов активного соединения. Пролекарства включают соединения, которые могут подвергаться окислению, восстановлению, аминированию, дезаминированию, гидроксилированию, дегидроксилированию, гидролизу, дегидролизу, алкилированию, деалкилированию, ацилированию, деацилированию, фосфорилированию или дефосфорилированию с образованием активного соединения. Пролекарственные формы соединений по данному изобретению могут обладать противовирусной активностью, могут метаболизироваться с образованием соединения, которое проявляет такую активность, или могут иметь место оба варианта.
П. Активные соединения
Вирус гепатита В (ВГВ) является оболочечныйм вирусом с частично
двухцепочечной ДНК (дцДНК) семейства гепаднавирусов (Hepadnaviridae). Его геном содержит 4 перекрывающиеся рамки считывания: прекоровый/коровый ген; ген полимеразы; гены L, М и S, которые кодируют 3 белка оболочки; и ген X.
При инфицировании геном частично двухцепочечной ДНК (релаксированной кольцевой ДНК; ркДНК) превращается в ковалентнонепрерывную кольцевую ДНК (кнкДНК) в ядре клетки реципиента, и происходит транскрипция вирусных мРНК. После инкапсидирования прегеномная РНК (пгРНК), которая также кодирует коровый белок и Pol, служит в качестве матрицы для обратной транскрипции, которая регенерирует геном частичной дцДНК (ркДНК) в нуклеокапсиде.
После инфекций гепатита В кнкДНК может сохраняться в клетках печени после клинического лечения, и может активироваться повторно. Относительное количество присутствующей кнкДНК является показателем лечения ВГВ (Bourne, et al., (January 2007). "Quantitative analysis of ВГВ кзкДНК from clinical specimens: correlation with clinical and virological response during antiviral therapy". Journal of Viral Hepatitis 14 (1): 56-63).
Капсид является белковой оболочкой вируса и содержит олигомерные структурные субъединицы, состоящие из белков, называемых протомерами. Наблюдаемые 3-мерные морфологические субъединицы, которые могут соответствовать или не соответствовать отдельным белкам, называют капсомерами. В капсидной оболочке содержится генетический материал вируса.
In vivo, капсиды ВГВ собираются вокруг комплекса РНК и обратной транскриптазы. Сборка капсид необходима для обратной транскрипции прегенома РНК в зрелую форму ДНК. В ВГВ доминантная форма капсида состоит из 120 копий димера капсидного белка. Даже незначительные мутации капсидного белка могут оказывать существенное влияние на жизнеспособность вирусного потомства.
Большинство соединений, описанных в настоящем документе, являются активными в качестве ингибиторов сборки капсида. Ингибирование сборки капсида может снижать содержание кнкДНК, главного источника ВГВ, и также может уменьшать содержание ДНК, HBeAg и HBsAg ВГВ.
В одном варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(I)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где А является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
В является шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным
кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом, галогеном (включая F, С1, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, С2-б алкенилом, циано, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, С2. 6 алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, С2-б алкенилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, гетероциклилалкилом, С2-б гидроксиалкилом или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, Ci-б алкилом, С i-б галогеналкилом, Ci-б алкокси, С2-б алкенилом, С2-б алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они могут вместе образовывать Сз-б кольцо, необязательно содержащее гетероатом N, О или S;
группы R' могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном, С i-б галогеналкилом, Ci-б гидроксиалкилом, гидроксилом, карбоксилом, ацилом, арилом, ацилокси, амино, амидо, карбоксильными производными, алкиламино, диалкиламино, ариламино, алкокси, алкоксиалкилом, арилокси, нитро, циано, сульфоновой кислотой, тиолом, имином, сульфонилом, сульфанилом, сульфинилом, сульфамоилом, сложным эфиром, карбоновой кислотой, амидом, фосфонилом, фосфинилом, фосфорилом, фосфином, сложным тиоэфиром, простым тиоэфиром, галогенангидридом кислоты, ангидридом, оксимом, гидразином, карбаматом, фосфоновой кислотой или фосфонатом, в незащищенной форме или, при необходимости, в защищенной форме, как известно специалистам в данной области техники, например, как описано в публикации Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, второе издание, 1991, включенной в настоящий документ посредством ссылки;
и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
R2 9, Ян,
N_ST R2-S-N-!-
X является ^ О или О
R3 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-б алкенилом или С2-б алкинилом, R2 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-б алкенилом, С2-б алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные
гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, алкиларилом, арилалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащее ноль, один или два гетероатома, которые независимо являютсяТЧ, О или S, семичленное мостиковое или спироконденсированное кольцо, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; циклоалкилом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
R2 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-6 гидроксиалкилом; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, 3-8-членное насыщенное кольцо или 5-членное ненасыщенное кольцо; указанные бициклические, мостиковые, насыщенные и ненасыщенные кольца необязательно содержат один или более дополнительных гетероатомов, каждый из которых независимо является О, S или N, и являются необязательно замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
Во втором варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
С является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкиларилом или алкилгетероарилом;
D является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
R4 О о ы
|| I м Н I
N-S-^ R5-S-N-
R5 ' "
Y является О или О
R4 является Н или Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом;
в одном варианте воплощения R4 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом,
причем, в одном варианте воплощения, если С является фенилом, D не является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, и в другом варианте воплощения, если С является фенилом, и D является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, то R5 не является алкиларилом, алкенилом или шестичленным мостиковым кольцом;
R5 является алкиларилом, арилалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; и шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; в одном варианте воплощения R5 является алкиларилом, арилалкилом, фенилом, пяти- или шестичленным
гетероарилом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S;
R5 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, С i-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или С i-б гидроксиалкилом; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
R4 О
v II I
N-S-r-
5 II 1
или если Y является О , то R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Си, алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
В одном варианте воплощения соединений Формулы IID является R7 R6 является Н, CI, F или Вг, и R7 является Н, метилом, F или С1.
, где
^ОМе
или
В одном варианте воплощения соединений Формулы II С является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкиларилом или алкилгетероарилом.
В одном варианте воплощения соединений Формулы II, D является С4-14 бициклическим кольцом.
В другом варианте воплощения соединений Формулы II, R5 является арилалкилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; и шестичленным спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S.
В третьем варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(ill)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
Е является шестичленным гетероароматическиме кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, каждый из которых независимо является N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
F является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
Z является
или
м Н I Rg-S-N-^
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R9 является С i-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или трехчленным кольцом;
R9 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, С i-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом, С i-б гидроксиалкил; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-e алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
R8 и R9 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
В четвертом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(IV)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где
G является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
Н является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным неароматическим кольцом, необязательно содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или С4-14 бициклическим кольцом;
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом,
галогеном (включая F, С1, Вг и I), CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2,
Ci-6 алкокси, циано, C2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-6 галогеналкилом, гетероциклилалкилом или С i-б гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, Сь 6 алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, С2-б алкинилом, С2-б алкенилом, гетероциклилалкилом, Ci-б гидроксиалкилом
или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С i-б алкокси, С2-б алкенилом, С2-б алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они могут вместе образовывать Сз-б алкильное кольцо, необязательно содержащее N, О или S; где группы R' могут быть замещены одним или более заместителями, описанными выше, например, Ci-б гидроксиалкил, аминоалкил и алкоксиалкил;
и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
W является
R является H, Ci-6 алкилом, Ci-6 галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R11 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом, арилалкилом, фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; трехчленным кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
где R11 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (включая F, О, Вг и I), SF5, СТз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, Ci-б галогеналкокси, С2-6 алкенила, циано, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-6 гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-б алкокси, циано, азидо, C2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и С i-б алкила; или
R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый или насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, О, Вг и I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-б алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-6 гидроксиалкилом.
В пятом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
I является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, С4-14 бициклическим кольцом; алкилгетероарилом или алкиларилом;
J является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S,
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R13 является С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, включая фенил, гетероарилом, включая шестичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три атома азота, и пятичленные гетероароматические кольца, содержащие один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; алкиларилом, арилалкилом, С4-14 бициклическим кольцом; шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S,
R необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода, галогена (F, CI, Br, I), СТз, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, циклоалкила, арилалкоксикарбонила, карбоксила, галогеналкила, гетероциклилалкила и С ь б гидроксиалкила; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, СТз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
или R12 и R13 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена (F, CI, Br, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-6 гидроксиалкила.
В шестом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(VI)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
К является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
L является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом,
содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
W является О
R14 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом,
R15 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S;
R15 необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном (F, CI, Br, I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-б алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом и Ci-6 гидроксиалкилом; или замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила, или
R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена (включая F, О, Вг и I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила,
арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-6 галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-6 гидроксиалкила.
В седьмом варианте воплощения предложенные соединения имеют следующую формулу:
(VII)
или их фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо являются 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
М является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом,
N является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, независимо выбранные из N, О и S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или С4-14 бициклическим кольцом,
V является О или О , и
R16 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, таким как фенил, гетероарилом, таким как шестичленное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три атома азота, или пятичленное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один
или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; алкиларилом, арилалкилом, алкилгетероарилом или алкиларилом, где R16 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (включая F, С1, Вг и I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, Ci-6 галогеналкокси, С2-б алкенила, циано, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-б гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2.6 алкинила, Сз-6 алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
Иллюстративные соединения, входящие в объем настоящего изобретения, включают следующие:
и их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства. Иллюстративные соединения также включают:
и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства. Особенно предпочтительные соединения включают:
или их фармацевтически приемлемую соль или пролекарство. Особенно предпочтительное соединение имеет формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль.
III Стереоизомерия и полиморфизм
Описываемые здесь соединения могут иметь ассиметрический центр и находиться в
виде рацематов, рацемических смесей, отдельных диастереомеров или энантиомеров с включением в настоящее изобретение всех изомерных форм. Соединения настоящего изобретения, имеющие хиральный центр, могут существовать и быть выделенными в оптически активной и в рацемической формах. Некоторые соединения могут проявлять полиморфизм. Настоящее изобретение охватывает рацемические, оптически активные, полиморфные или стереоизомерные формы, или их смеси, соединения изобретения, которые обладают полезными свойствами, описываемыми здесь. Оптически активные формы могут быть приготовлены путем, например, разделения рацемической формы путем техник рекристаллизации, путем синтеза из оптически активного сырья, путем хирального
синтеза или путем хроматографического разделения с использованием хиральной стационарной фазы или путем ферментного расщепления. Можно очистить соответствующее соединение, затем получить соединение с образованием описываемых здесь соединений или очистить сами соединения.
Оптически активные формы соединений могут быть приготовлены с использованием любого известного в области техники способа, включая, но не ограничиваясь, разделением рацемической формы путем техник рекристаллизации, синтезом из оптически активного сырья, хиральным синтезом или хроматографическим разделением с использованием хиральной стационарной фазы
Примеры способов получения оптически активных материалов включают по меньшей мере следующее.
i) физическое разделение кристаллов: техника, согласно которой макроскопические кристаллы отдельных энантиомеров разделяют вручную. Эта техника может быть использована, если существуют кристаллы отдельных энантиомеров, то есть, материал является конгломератом и кристаллы визуально обособлены;
ii) техника одновременной кристаллизации: техника, согласно которой отдельные энантиомеры раздельно кристаллизуются из раствора рацемата, возможна только если последний является конгломератом в твердом состоянии;
ш) ферментативные разделения: техника посредством частичного или полного разделения рацемата за счет различных скоростей реакции для энантиомеров с ферментом;
iv) ферментативный ассиметрический синтез: техника синтеза согласно которой, по меньшей мере один этап синтеза использует ферментативную реакцию для получения энантиометрически чистого или обогащенного синтетического предшественника искомого энантиомера;
v) химически ассиметрический синтез: техника синтеза, где искомый энантиомер синтезируется из ахирального предшественника в условиях, обеспечивающих ассиметрию {то есть, хиральность) в продукте, что может быть достигнуто при использовании хиральных катализаторов или хиральных вспомогательных веществ;
vi) диастереомерные разделения: техника, при которой рацемическое соединение реагирует с энантометрически чистым реагентом (хиральное вспомогательное вещество), которое конвертирует отдельные энантиомеры в
iv)
диастереомеры. Полученные в результате диастереомеры затем разделяются при помощи хроматографии или кристаллизации благодаря их теперь более отчетливым структурным отличиям, и позже хиральное вспомогательное вещество удаляется для получения искомого энантиомера; ассиметрические превращения первого и второго порядка: техника, согласно которой диастереомеры из рацемата уравновешиваются для получения перевеса в растворе диастереомера из искомого энантиомера или где предпочтительная кристаллизация диастереомера из искомого энантиомера нарушает равновесие таким образом, что в конечном итоге, в принципе, весь материал конвертируется в кристаллический диастереомер из искомого энантиомера. Искомый энантиомер затем выделяется из диастереомера; кинетические разделения: эта техника относится к частичному или полному разделению рацемата (или дальнейшему разделению частично разделенного соединения) при помощи неравных скоростей реакций энантиомеров с хиральным, не-рацемическим реагентом или катализатором в кинетических условиях;
энантиоспецифический синтез из не-рацемических предшественников: техника синтеза, где искомый энантиомер получают их нехирального исходного сырья и где на протяжении синтеза стереохимическая целостность не нарушена или нарушена только минимально;
хиральная жидкостная хроматография: техника, согласно которой энантиомеры рацемата разделяются в жидкой мобильной фазе при помощи своих различающихся взаимодействий со стационарной фазой (включая, но не ограничиваясь, посредством хиральной ВЭЖХ). Стационарная фаза может быть приготовлена из хирального материала или мобильная фаза может содержать дополнительный хиральный материал для того, чтобы вызывать различающиеся взаимодействия;
хиральная газовая хроматография: техника, согласно которой рацемат испаряется и энантиомеры разделяются при помощи своих различающихся взаимодействий в газовой мобильной фазе с колонкой, содержащей фиксированную не-рацемическую хиральную абсорбирующую фазу; экстракция хиральными растворителями: техника, при которой энантиомеры разделяются при помощи предпочтительного растворения одного энантиомера в конкретном хиральном растворителе;
xiii) транспорт через хиральные мембраны: техника, согласно которой рацемат размещается в контакте с тонким мембранным барьером. Барьер, как правило, разделяет две смешивающиеся жидкости, одна жидкость содержит рацемат, а движущая сила, такая, как разница концентраций или давления, вызывает предпочтительный транспорт через мембранный барьер. Разделение происходит в результате не-рацемической хиральной природы мембраны, что позволяет проходить только одному энантиомеру рацемата. В одном варианте воплощения используется хиральная хроматография, включая, но
не ограничиваясь хроматографией со псевдодвижущимся слоем. Широкий спектр
хиральных стационарных фаз коммерчески доступен.
IV. Солевые или пролекарственные составы
В случаях, когда соединения достаточно щелочные или кислые чтобы образовывать
стабильные нетоксические кислые или основные соли, может быть уместным введение соединения в качестве фармацевтически приемлемой соли. Примерами фармацевтически приемлемых солей являются органические кислоты, которые формируют физиологически приемлемый анион, например, тосилат, метансульфонат, ацетат, цитрат, малонат, тартрат, сукцинат, бензоат, аскорбат, а-кетоглютарат и а-глицерофосфат. Также могут образовываться подходящие неорганические соли, включая, но не ограничиваясь сульфатными, нитратными, бикарбонатными и карбонатными солями. Для определенных трансдермальных применений может быть предпочтительным использование солей жирных кислот соединений, описываемых здесь. Соли жирных кислот могут способствовать проникновению в роговой слой эпидермиса. Примеры подходящих солей включают соли соединения со стеариновой кислотой, олеиновой кислотой, линолеиновой кислотой, пальмитиновой кислотой, каприловой кислотой и каприновой кислотой.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с использованием стандартных методик, хорошо известных в области техники, например, посредством реакции достаточно щелочного соединения, такого, как амин, с подходящей кислотой, предоставляющей физиологически приемлемый анион. В тех случаях, когда соединение включает множественные аминогруппы, соли могут быть образованы с любым количеством аминогрупп. Также могут быть образованы соли щелочных металлов (например, натрия, калия или лития) или щелочноземельных металлов (например, кальция).
Пролекарство является фармакологической субстанцией, которая вводится в неактивной (или значительно менее активной) форме и впоследствии метаболизируется in vivo в активный метаболит. Доставка большего количества препарата к желаемой цели при
более низкой дозе часто является обоснованием, стоящим в основе применения пролекарства, и часто оно относится к лучшим свойствам абсорбции, распределения, метаболизма и/или экскреции (ADME). Пролекарства обычно разрабатываются с целью улучшить пероральную биодоступность, при этом слабая абсорбция из желудочно-кишечного тракта обычно является лимитирующим фактором. К тому же, применение стратегии пролекарства может увеличивать селективность препарата для своей намеченной цели, тем самым уменьшая потенциал нецелевых эффектов.
V. Изотопы
Описываемые здесь соединения включают соединения, меченные изотопами, идентичные тем, которые приведены в различных формулах и структурах, представленных здесь, кроме того факта, что один или более атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа, обычно встречающегося в природе. В других вариантах воплощения есть примеры изотопов, инкорпорированных в настоящие соединения, включая изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора и хлора, такие, как, например, соответственно, 2Н, 3Н, 13С, 14С, 15N, 180, 170, 35S, 18F, 36С1. Определенные соединения, меченные изотопами, описанные здесь, например те, в которые инкорпорированы радиоактивные изотопы, такие, как 2Н, пригодны для тестов распределения в тканях препарата и/или субстрата. Далее, в некоторых вариантах воплощения замена изотопами, такими, как дейтерий, то есть, 2Н, может придавать определенные терапевтические преимущества, проистекающие от большей метаболической стабильности, такие, как, например, повышенный период полу-жизни in vivo или сниженные потребности в дозе.
VI. Способы лечения
Описываемые здесь соединения могут быть использованы для предотвращения,
лечения и избавления от инфекций вирусом гепатита В (ВГВ) и инфекций вирусом Западного Нила.
Хозяева, включая, но не ограничиваясь людьми, страдающие от одного из этих раков или инфицированные одним из этих вирусов, таким, как ВГВ или их генным фрагментом, могут получать лечение путем введения пациенту эффективного количества активного соединения или фармацевтически приемлемого пролекарства или их соли в присутствии фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя. Активные материалы могут вводиться любым подходящим способом внедрения, например, перорально, парентерально, внутривенно, внутрикожно, трансдермально, подкожно или топически, в жидкой или в твердой форме.
Описываемые здесь соединения и композиции также могут быть использованы для лечения других вирусных заболеваний. Например, путем устранения, контролирования или элиминации ВГВ инфекция вирусом ВГД также может быть угнетена или элиминирована. Sheldon et al., "Does treatment of hepatitis В virus (HBV) infection reduce hepatitis delta virus (HDV) replication in HIV-HBV-HDV-coinfected patients?" Antivir Ther. 2008;13(1):97-102).
Вирус гепатита дельта (ВГД) имеет уникальный процесс репликации, требующей сочетанной инфекции вирусом гепатита В (ВГВ). В то время как лечение, как считается в настоящее время, ограничивается терапией интерфероном, пациенты, проходящие успешную анти-ВГВ терапию соединениями, описанными здесь, могут иметь непрямую пользу от угнетения репликации ВГД. Значительное и устойчивое снижение РНК ВГД в сыворотке может быть получено путем снижения ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (кзкДНК) ВГВ. кзкДНК у ВГВ образуется путем конверсии расслабленной кольцевой ДНК (ркДНК), связанной с капсид ом [Guo et al., "Characterization of the intracellular deproteinized relaxed circular DNA of hepatitis В virus: an intermediate of covalently closed circular DNA formation". J Virol. 81 (22): 12472-12484 (November 2007). Соответственно, ингибирование образования капсидов путем использования описываемых здесь соединений также может угнетать или элиминировать репликацию ВГД.
Далее, существует подгруппа пациентов с ВГС, которые ранее также могли быть инфицированы ВГВ, и ВГВ находится в спящем состоянии на время лечения ВГС. У некоторых из этих пациентов успешное лечение ВГС (например, при помощи Харвони/Совальди) может реактивировать спящую инфекцию ВГВ. Совместное введение описываемых здесь соединений наряду с лечением ВГС может предотвратить реактивацию спящей инфекции ВГВ или лечить реактивированную инфекцию ВГВ.
VII. Комбинация альтернационной терапии
В одном варианте воплощения соединения изобретения могут применяться вместе с
по меньшей мере одним другим противовирусным агентом, включая, но не ограничиваясь, ингибиторами полимеразы, анти-ВГВ нуклеозидами и их пролекарствами, ингибитором внедрения вируса, ингибитором созревания вируса, описанным в литературе модулятором сборки капсида, ингибиторами ИМФДГ, ингибиторами протеазы, терапевтическими агентами на иммунной основе, ингибитором обратной транскриптазы, агонистом TLR и агентами с отличным или неизвестным механизмом. Они также могут использоваться в комбинации с подходами CRISPR/CAS9, используя Аденоассоциированный вирус (AAV) в качестве вектора доставки у человека.
Например, при использовании для лечения или предотвращения инфекции ВГВ активное соединение или его пролекарство или фармацевтически приемлемая соль могут быть введены в комбинации или в чередовании с другим агентом против ВГВ, включая, но не ограничиваясь теми, что указанны в формуле выше. В целом, в комбинированной терапии эффективные дозы двух или более агентов вводятся вместе, в то время, как при альтернационной терапии эффективная доза каждого агента вводится серийно. Доза будет зависеть как от скорости абсорбции, инактивации или экскреции препарата, так и от других факторов, известных специалистам в области техники. Следует отметить, что значения дозы также варьируют в зависимости от тяжести состояния, которое следует облегчить. Далее будет понятно, что для любого конкретного субъекта конкретные режимы и схемы дозировки должны быть со временем откорректированы в зависимости от индивидуальной потребности и профессионального суждения лица, который вводит композиции или руководит введением композиций.
Неограничивающие примеры противовирусных агентов, которые могут быть использованы в комбинации с раскрываемыми здесь соединениями, включают агентов из таблиц ниже.
Терапии гепатита В
СЕМЕИСТВО/НАЗВ АНИЕ ПРЕПАРАТА
МЕХАНИЗМ
КОМПАНИЯ/ ; СТАТУС
И м му н о м одул ятор
Утверждено Genenteeh,
-South San Francisco, С A Утверждено
Gl ax о S m i. th Kline, Philadelphia, PA Утверждено Gilead
Интрип А (Интерферон альфа-2Ь)
Пегасис
(Пэгинтерферон альфа-Иммуномодулятор
Эпивир-ВГВ
(Ламивудик)
Гепсера
(Адефовир Дипивоксил)
Бараклюд
(Знтекавир)
Tyzeka (Телбивудин)
Виреад (Тенофовир)
2а)
вирусную
Foster City, CA
.И н ги б и ру ет в и ру с н у ю 'ДНК- пол и меразу
Ингибирует
ДН К- пол и меразу
Утверждено
Bristol-Myers
ДН К- пол и меразу
И н ги б и ру ет в и ру с н у ю, ДНК- пол и меразу
Ингибирует ДН К- п ол и м еразу
Ингиоиоует вирусную" . ч,, 1 - Princeton, Ы}
{Утверждено
jNoyarti'S, :
Швейцария утверждено Gilead
Ингиоирует вирусную..-,
1' ' roster City, к..А
(Утверждено
Кливудин (L-FMAU)
Bukwang,
South Korea Ингибирует вирусную Eisai, Japan ДНК-полимеразу Утверждено
К). Корея 2006 (Левовир)
Тенофовир •алафенамид (ТАФ)
L ,,, , Gilead Sciences,
jlгоолеьарство 1 енофовира ' А ". , . ,,, '
1 v F v Foster City, С А Фаза Ш
•CMX157
ContraVir Pharmaceuticals, Пролекарство Тенофовира fEdison, NJ
(Фаза II
AGX-1009
Мирклудекс В
Agenix, Австралия
!ФазаЛ, Китай
Hepatera, Russia with Myr-i
(Ингибитор проникновения [GmbH, Германия Фаза II
j (для ВГВ и ВГД
ARC 520
NVR 3-778
Морфотиадин месилат (GLS4) (Выключатель гена [интерференции РНК
(Ингибитор капсида Ингибитор капсида
Research,
Airovvhead
Pasadena, СА !Фаза Н/1И
(Novira Therapeutics, [Doylestown, PA [Фаза Па
[Sunshine Lake Pharma of 'НЕС, Китай •Фаза II
ISIS-HBVRx
jlSIS Pharma (w/ GSK), Антисмысловой препарат (Carlsbad, С A
|Фаза II
.SB 9200 ВГВ
Низкомолекулярные ;Spi ing Bank Pharma,
гибриды н у к л e 11 н о в ы \ • M i 1 ford, MA
кислот или "SMNH" [Фаза II
Rep2139-Ca
Ингибитор высвобождения '. HBsAg
Inc.,
Bay 41-4109
Ингибитор капсида
'AiCuris, Germany [Фаза I
ТКМ-ВГВ
Выключатель интерференции РНК
iTekmira, гена' .
[Канада
Фа и I
Alinia (Nitazoxanide) алая молекула
[Rom ark Tampa, FL Доклинические
Labs,
CpAMS
I (Assembly Biosciences, NY,
(Белок сердцевины ВГВ |NY J (Доклинические
ALN-ВГВ
... LAlnvlam,
{Выключатель re паи . , . , .
, ,.,". K. ambndue, MA
интерференции РНК u - '
i Доклинические
CPI-431-32 Hepbarna
Ингибитор циклофилина
Выключатель гена интерференции РНК
Ciclofilin Pharma, San Diego, CA Докл 11 нические Веш tec, Австралия Доклинические
OCB-030
lArbutus Biopharma (ранее Ингибитор циклофипина Доклинические
GS-%20
TLR7 агонист
Gilead Sciences, Foster City, CA Фаза II
RG7795 (ранее ANA773)
TLR7 агонист
Roche, Швейцария Фаза II
CYT107
(Интерлейкин-7)
Им м у f 1 о м ОДУЛ я юр
Cytheris, Франция Фаза I/IIa
NCT01641536
ilchor Medical Systems Лечебная вакцина j(w/Janssen), San Diego, С A
(Фаза I
TG 1050
Иммунотерапевтический агент
Tiansgene, Шанхай Фаза I
CYT-003
TLR9 агонист
Arbutus Biopharma (ранее Tekmira), Канада Доклинические
ARB 1467
ткм-вгв
Arbutus Biopharma (ранее Tekmira), Canada Preclinical
ARB-1468
ГКМ-BI В
Arbutus Biopharma (ранее Tekmira), Canada Preclinical
Дополнительные анти-ВГВ лечения, которые могут быть использованы в комбинации или в чередовании
В дополнение к описываемым здесь соединениям, которые могут функционировать путем ингибирования кзкДНК, и комбинированных терапий, описанных выше, которые комбинируют соединения, описываемые здесь с утвержденным препаратами против ВГВ, такими, как ТАФ, могут также использоваться такие подходы, как соединения малой интерферирующей РНК (siRNA), малой РНК, образующей шпильки (shRNA), Talens, Crisper/Cas9 и mir (микроРНК).
Терапия при помощи малой интерферирующей РНК и малой РНК, образующей шпильки.
Терапия при помощи малой интерферирующей РНК для лечения ВГВ описана, например, в Chen and Mahato, "siRNA Pool Targeting Different Sites of Human Hepatitis В Surface Antigen Efficiently Inhibits ВГВ Infection;" J Drug Target. 2008 Feb; 16(2): 140-148 и в Morrissey et al., "Potent and persistent in vivo anti-ВГВ activity of chemically modified siRNAs," Nature Biotechnology 23, 1002 - 1007 (2005).
РНК-и (РНК-интерференция) - это специфический для последовательностей, посттранскрипционный механизм выключения генов, который запускается двунитчатой синтетической малой интерферирующей РНК или малой РНК, образующей шпильки, которая экспрессируется внутриклеточно из вектора. Репликация и экспрессия ВГВ могут быть ингибированы путем введения синтетических малых интерферирующих РНК или экспрессируемых эндогенно малых РНК, образующих шпильки. См., например, Giladi et al., "Small interfering RNA inhibits hepatitis В virus replication in mice," Mol Ther. 2003; 8(5):769-76; McCaffrey et al., "Inhibition of hepatitis В virus in mice by RNA interference," Nat Biotechnol. 2003;21(6):639-44; и Shlomai and Shaul, "Inhibition of hepatitis В virus expression and replication by RNA interference," Hepatology. 2003 ;37(4):764-70). Выключение генов ВГВ может зависеть, например, от дозы малой интерферирующей РНК или последовательностей, и мишени для выключения генов включают, например, ингибирование репликации вируса и подавление экспрессии HBsAg.
В одном варианте воплощения используется комбинация нескольких малых интерферирующих РНК и/или малых РНК, образующих шпильки, направленная на два или более генов ВГВ - S, С, Р и X. Таким образом, могут быть достигнуты множественные мишени для ингибирования репликации ВГВ и экспрессии генов.
Как только будет определена соответствующая мишень, например, поверхностный антиген вируса гепатита В человека (HBsAg) (Gene Bank Accession# NM_U95551), малые интерферирующие РНК могут быть спроектированы в соответсвии с указаниями, представленными в Ambion (http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html) и Invitrogen (https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/design.do). Специфичность последовательности малой интерферирующей РНК может быть проверена путем проведения поиска BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov).
Как только будут идентифицированы последовательности малой интерферирующей РНК, они могут быть конвертированы в малую РНК, образующую шпильки. Для экспрессии малой РНК, образующей шпильки, могут быть сконструированы контрольные векторы, например, путем использования psiSTRIKE(tm), который является линеаризованной плазмидой и содержит промотор U6 РНК-полимеразы. Эти малые РНК, образующие шпильки, содержат два комплементарных нуклеотида, которые могут быть
гибридизированы с образованием двунитчатой ДНК для лигирования в соответствующие участки вектора psiSTRIKE(tm) с подходящим промотором, таким, как промотор U6, используя подходящие лигазы, такие как ДНК лигаза Т4. Плазмиды могут быть очищены, например, путем использования QIAGEN(r) Plasmid Mini Kit (QIAGEN, Valencia, CA).
Talens/CRISPR
Как обсуждалось выше, хронические вирусные инфекции ВГВ часто персистируют благодаря наличию долгоживущих форм вирусной ДНК в инфицированных клетках. Современные терапии могут угнетать репликацию вируса, однако не обладают воздействием или имеют очень слабое воздействие на долгоживущие формы ДНК, так что как только прекращается лечение репликация вируса возобновляется.
В дополнение к таргетингу долгоживущих форм ДНК путем применения ингибиторов капсид, описываемых здесь, могут быть использованы системы, направленные на эндонуклеазы, такие, как хоуминг эндонуклеазы, нуклеазы с цинковыми пальцами (zinc-finger nuclease - ZFN), нуклеазы эффектора, подобному активатора транскрипции (transcription activator-like effector nucleases -TALENs) и CRISPR (короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами). Использование TALENS против ВГВ описано, например, в Weber et al., "TALENs Targeting ВГВ: Designer Endonuclease Therapies for Viral Infections," Molecular Therapy (2013); 21 10, 1819-1820; http://www.nature.eom/mt/j ournal/v21/n 10/full/mt2013208a.html
Эти нуклеазы функционируют путем специфического распознавания и расщепления избранных последовательностей ДНК, что приводит к разрушению генов при неточной репарации ДНК. Таргетинг при помощи TALENs генома вируса гепатита В (ВГВ) может приводить к мутациям, индуцированным TALEN, в ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (кзкДНК) долгоживущей ДНК ВГВ. Мутация и/или разрушение кзкДНК предотвращает репликацию вируса путем блокирования экспрессии функциональных вирусных белков.
CRISPR
CRISPR, или короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами - это другой способ мутировать ДНК ВГВ, путем обеспечения целевого редактирования генома. В дополнение к программируемым инструментам редактирования, таким, как нуклеазы с цинковыми пальцами и нуклеазы эффектора, подобного активатору транскрипции (TALENs), описанным выше, технология CRISPR (регулярно расположенные группами, короткие палиндромные повторы)/Са89 также позволяет
проводить редактирование генома и позволяет проводить геномный таргетинг, специфичный для сайтов в ВГВ.
Система типа II CRISPR/Cas является системой прокариотического адаптивного иммунного ответа, которая использует некодирующие РНК для направления нуклеазы Cas9 для индукции специфического для сайта расщепления ДНК. Это повреждение ДНК репарируется клеточными механизмами репарации ДНК через путь репарации ДНК негомологичного соединения концов (non-homologous end joining - NHEJ) либо путем гомологичной направленной репарации (homology directed repair - HDR).
Система CRISPR/Cas9 обеспечивает простой способ с программированием РНК для генерации нокаутов генов (через вставку/делецию) или путем нокинга (через HDR) и позволяет проводить геномный таргетинг, специфичный для сайтов, в ВГВ. Система типа II CRISPR/Cas является системой прокариотического адаптивного иммунного ответа, которая использует некодирующие РНК для направления нуклеазы Cas9 для индукции специфического для сайта расщепления ДНК.
Для вызова разрушений генов генерируется направляющая РНК (single guide RNA -sgRNA) для направления нуклеазы Cas9 к специфической геномной локализации. Двунитчатые разрывы, индуцированные Cas9, репарируются через путь репарации ДНК -NHEJ . Эта репарация склонна к ошибкам, и таким образом могут быть введены вставки и делеции (insertions and deletions -INDELs), которые могут нарушать функционирование генов.
Таким образом, таргетинг кзкДНК вируса гепатита В с использованием нуклеазы CRISPR/Cas9 может эффективно подавлять вирусную репликацию.
Mir/МикроРНК
МикроРНК (миРНК) представляют собой малые некодирующие РНК, которые регулируют экспрессию генов, в первую очередь, на пост-транскрипционном уровне путем связывания с мРНК. миРНК вносят вклад в разнообразные физиологические и патологические процессы. Было показано, что ряд миРНК играют ключевую роль во взаимодействии реципиент-ВГВ. Инфекция ВГВ может изменить характеристики экспрессии клеточной миРНК, и различные стадии заболевания, ассоциированного с ВГВ, демонстрируют различные профили миРНК. Экспрессируемые различным образом миРНК участвуют в прогрессировании заболевания, ассоциированного с ВГВ. Например, некоторые миРНК участвуют в образовании опухолей в печени и в метастазировании опухолей. миРНК, циркулирующие в сыворотке или плазме, могут быть очень полезными биомаркерами для диагностики и прогноза заболеваний, связанных с ВГВ. К тому же,
терапия на основе миРНК может использоваться для лечения, предотвращения или устранения заболеваний, связанных с ВГВ. См., например, , Ying-Feng Wei, "MicroRNAs may solve the mystery of chronic hepatitis В virus infection," World J Gastroenterol. 2013 Aug 14; 19(30): 4867-4876. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3740416/
Во взаимодействии между вирусом и реципиентом миРНК можно разделить на клеточные миРНК и вирусные миРНК. Изменение профилей экспрессии клеточной миРНК на стадии инфицирования и аномальные миРНК часто тесно связаны с жизненным циклом вируса, а также с нарушением у реципиента. Вирусные миРНК могут эволюционировать до регулирования экспрессии генов как вируса, так и клетки.
Иногда вирусы используют клеточные миРНК для содействия некоторым этапам своего жизненного цикла. Например, miR-122 выполняет противовирусную роль в жизненном цикле ВГВ. Сверхэкспрессия MiR-122 ингибирует экспрессию ВГВ, в то время, как удаление эндогенной miR-122 приводит к увеличенной продукции ВГВ в трансфицированных клетках. Ингибиторы MiR-122 вызывают повышение клеточной гем-оксидазы-1, которая может снижать уровни ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (кзкДНК) ВГВ путем снижения стабильности белка сердцевины ВГВ. Экспрессия MiR-122 в печени может быть значительно снижена у пациентов с инфекцией ВГВ по сравнению со здоровым контролем. MiR-122 значительно активирован у пациентов, инфицированных ВГВ, и может ингибировать репликацию ВГВ в клетках Huh7 и HepG2. Циклин G1 является мишенью miR-122, которая специфически взаимодействует с р53, что приводит к специфическому связыванию р53 с энхансерными элементами ВГВ и одновременному устранению ингибирования транскрипции ВГВ, опосредованной р53.
ВГВ - это не-цитопатический вирус, который реплицируется преимущественно в гепатоцитах. кзкДНК служит матрицей для транскрипции всей вирусной РНК, которая синтезируется после того, как ДНК ВГВ внедряется в ядро гепатоцита. Геном ВГВ имеет длину 3,2 т.н. и содержит четыре перекрывающиеся рамки свободного считывания. Он может транскрибировать вирусную прегеномную РНК, которая производит обратную транскрипцию для синтеза вирусной ДНК генома и кодирует поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), белок сердцевины вируса гепатита В, вирусную обратную ДНК полимеразу (Pol) и X белок.
Hsa-miR-125a-5p интерферирует с трансляцией ВГВ и снижает экспрессию поверхностного антигена ВГВ. Соответственно, клеточная миРНК может изменять экспрессию ВГВ путем целенаправленного воздействия на ВГВ транскрипты.
Клеточные миРНК могут повреждать трансляцию вируса и изменять репликацию вируса. В дополнение к примеру ингибирования репликации ВГВ при помощи miR-122,
существуют другие примеры, где миРНК реципиента изменяет репликацию ВГВ. MiR-141 угнетает репликацию ВГВ путем снижения активностей промотора ВГВ, уменьшения количества альфа рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. Гиперметилирование ДНК может быть тесно связано с угнетением транскрипции кзкДНК ВГВ, и miR-152 может быть фактором, участвующим в регулировании метилирования кзкДНК ВГВ.
Соответственно, миРНК могут прямо или непрямо изменять репликацию вируса ВГВ. Тесная связь между миРНК и заболеваниями, связанными с ВГВ, дает возможность использовать миРНК или антагомир в комбинированных терапиях для лечения, устранения или предотвращения ВГВ.
VIII. Фармацевтические композиции
Хозяева, включая, но не ограничиваясь людьми, инфицированные ВГВ, могут
лечиться путем введения пациентам эффективного количества активного соединения или фармацевтически приемлемого пролекарства или их соли в присутствии фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя. Активные материалы могут вводиться любым приемлемым способом, например, перорально, парентерально, внутривенно, внутрикожно, трансдермально, подкожно или топически, в жидкой или в твердой форме.
Предпочтительная доза соединения будет в диапазоне между, приблизительно, 0,01 и приблизительно 10 мг/кг, в более общем случае, между, приблизительно, 0,1 и 0,5 мг/кг, и, предпочтительно, между, приблизительно, 0,5 и, приблизительно, 2 мг/кг веса тела реципиента на день. Эффективный диапазон доз фармацевтически приемлемых солей и пролекарств может быть рассчитан на основе веса родительского соединения, которое следует доставить. Если соль или пролекарство сами по себе проявляют активность, эффективную дозу можно оценить как указано выше, используя вес соли или пролекарства, или любыми другими средствами, известными специалистам в данной области техники.
Соединение удобно вводится в единице любой подходящей лекарственной формы, включая, но не ограничиваясь, лекарственной формой, содержащей от 7 до 600 мг, предпочтительно, от 70 до 600 мг активного ингредиента на единицу лекарственной формы. Обычно удобной является пероральная доза 1-400 мг.
Концентрация активного соединения в лекарственной композиции будет зависеть как от скоростей абсорбции, инактивации и экскреции препарата, так и от других факторов, известных специалистам в данной области техники. Следует отметить, что значения дозы также будут варьировать в зависимости от тяжести состояния, которое следует облегчить. Далее будет понятно, что для любого конкретного субъекта конкретные режимы и схемы
дозировки должны быть со временем откорректированы в зависимости от индивидуальной потребности и профессионального суждения лица, которое вводит композиции или руководит введением композиций, и что диапазоны концентраций, изложенные здесь, являются только примерными и не предназначены для ограничения объема или практики заявленной композиции. Активный ингредиент может быть введен сразу, или может быть разделен на ряд меньших доз для введения через различные интервалы времени.
Предпочтительным способом введения активного соединения является пероральный, хотя для определенных пациентов стерильная инъекционная форма может вводиться подкожно, интраперитонеально или внутривенно. Пероральные композиции в общем будут включать инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или сжаты в таблетки. Для целей перорального терапевтического введения активное соединение может быть заключено с вспомогательными веществами и использовано в форме таблеток, троше или капсул. Как часть композиции могут быть включены фармацевтически приемлемые связывающие агенты и/или вспомогательные материалы.
Таблетки, драже, капсулы, троше и подобное могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединений подобной природы: связующее вещество, такое, как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; вспомогательное вещество, такое, как крахмал или лактоза, разрыхлитель, такой, как альгиновая кислота, Примогель или кукурузный крахмал; любрикант, такой как магния стеарит или Sterotes; глидант, такой, как коллоидная двуокись кремния; подсластитель, такой, как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метил салицилат или апельсиновый ароматизатор. Когда единичная дозированная форма является капсулой, она может содержать, в дополнение к материалу вышеуказанного типа, жидкий носитель, такой, как жирное масло. В дополнение, единичная дозированная форма может содержать различные другие материалы, которые модифицируют физическую форму единицы дозирования, например, оболочки из сахара, шеллака или других кишечнорастворимых агентов.
Соединение может вводиться как компонент эликсира, суспензии, сиропа, воды, жевательной резинки или подобного. Сироп может содержать, в дополнение к активному(ым) соединению(ям) сахарозу как подсластитель и определенные консерванты, пигменты, красители и ароматизаторы.
Соединение или фармацевтически приемлемое пролекарство или их соли также могут быть смешаны с другими активными материалами, которые не нарушают целевое действие, или с материалами, которые дополняют целевое действие, такими, как антибиотики, противогрибковые агенты, противовоспалительные агенты, или с другими
противовирусными соединениями. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного, подкожного или топического применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой, как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтилен гликоли, глицерин, пропилен гликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие, как бензиловый спирт или метил парабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелирующие агенты, такие, как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие, как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для доведения тоничности, такие, как натрия хлорид или декстроза. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или многодозовые флаконы, выполненные из стекла или пластика.
При внутривенном введении предпочтительными носителями являются физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS).
Трансдермальные составы
В некоторых вариантах воплощения композиции присутствуют в форме трансдермальных составов, таких, как те, что используются в утвержденном FDA ( Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) агонисте ротигитин трансдермальный (Neupro patch). Другой подходящий состав описан в U. S. Publication No. 20080050424 под названием "Transdermal Therapeutic System for Treating Parkinsonism." Этот состав включает силикон или адгезив на основе акрилата и может включать аддитив, имеющий повышенную растворимость для активного вещества в количестве, эффективном для увеличения способности к растворению матрицы для активного вещества.
Трансдермальные составы могут быть однофазными матрицами, которые включают опорный слой, самоклеющуюся матрицу, содержащую активное вещество, и защитную пленку, которая удаляется перед употреблением. Более сложные варианты воплощения содержат многослойные матрицы, которые также могут содержать неадгезивные слои и контрольные мембраны. Если используется полиакрилатный адгезив, он может быть поперечно сшитым при помощи поливалентных ионов металлов, таких, как ионы цинка, кальция, алюминия или титана, такие, как алюминия ацетилацетонат и титана ацетилацетонат.
Когда используются силиконовые адгезивы, они, как правило, являются пол ид иметил сил океанами. Однако, в принципе, вместо метальных групп могут присутствовать другие органические остатки, такие, как, например, этиловые группы или
фениловые группы. Поскольку активные соединения являются аминами, может иметь преимущество использование амино-резистентных адгезивов. Репрезентативные амино-резистентные адгезивы описаны, например, в ЕР 0 180 377.
Репрезентативные полимерные адгезивы на основе акрилата включают акриловую кислоту, акриламид, гексилакрилат, 2-этилгексилакрилат, гидроксилэтилакрилат, октилакрилат, бутилакрилат, метилакрилат, глицидилакрилат, метакриловую кислоту, метакриламид, гексилметакрилат, 2-этилгексилметакрилат, октилметакрилат, метилметакрилат, глицидилметакрилат, винилацетат, винилпироллидон и их комбинации.
Адгезив должен иметь подходящую растворяющую способность для активного вещества, и активное вещество должно быть способно продвигаться в матриксе и проходить через контактную поверхность к коже. Специалисты в данной области техники могут быстро составить трансдермальный состав с соответствующим трансдермальным транспортом активного вещества.
Определенные фармацевтически приемлемые соли, как правило, более предпочтительны для использования в трансдермальных составах, поскольку они могут способствовать прохождению активного вещества через барьер рогового слоя эпидермиса. Примеры включают соли жирных кислот, такие, как соли стеариновой кислоты и соли олеиновой кислоты. Олеатные и стеаратные соли относительно липофильные, и могут даже действовать как усилитель проникновения в кожу.
Также могут быть использованы усилители проникновения. Репрезентативные усилители проникновения включают жирные спирты, жирные соли, сложные эфиры жирных кислот, амиды жирных кислот, глицерин или его сложные эфиры жирных кислот, N-метилпироллидон, терпены, такие, как лимонен, альфа-пинен, альфа-терпинеол, карвон, карвеол, лимонен оксид, пинен оксид и 1,8-эукалиптол.
В основном, пластыри могут быть изготовлены путем растворения или суспендирования активного агента в этаноле или в ином подходящем органическом растворителе, затем добавлением адгезивного раствора при помешивании. Дополнительные вспомогательные вещества могут быть добавлены в раствор адгезива, в раствор активного вещества или в раствор адгезива, содержащий активное вещество. Раствором затем можно покрыть подходящий лист, растворители удаляются, опорный слой затем впрессовывается в матричный слой, и пластыри выштамповываются из сплошного слоистого материала.
Композиции, состоящие из наночастиц
Соединения, описываемые здесь, также могут вводиться в форме композиций, состоящих из наночастиц.
В одном варианте воплощения составы, состоящие из наночастиц с контролируемым высвобождением, включают активный агент, состоящий из наночастиц, который вводится, и полимер, контролирующий скорость, который функционирует для продления высвобождения агента после введения. В этом варианте воплощения композиции могут высвобождать активный агент после введения в течение периода времени в диапазоне от, приблизительно, 2 до, приблизительно, 24 часов или до 30 дней или более. Описываются репрезентативные составы с контролируемым высвобождением, включающие форму активного агента, состоящего из наночастиц, например, в Патенте США № 8,293,277.
Композиции, состоящие из наночастиц, включают частицы активных агентов, описываемые здесь, имеющие стабилизатор з не-поперечносшитой поверхностью, абсорбированные в них или связанный с их поверхностью.
Средний размер наночастиц часто менее, приблизительно, 800 нм, более часто менее, приблизительно, 600 нм, все еще более часто менее, приблизительно, 400 нм, менее, приблизительно, 300 нм, менее, приблизительно, 250 нм, менее, приблизительно, 100 нм, или менее, приблизительно, 50 нм. В одном аспекте данного изобретения, как минимум 50% частиц активного агента имеют средний размер менее чем, приблизительно, 800, 600, 400, 300, 250, 100 или 50 нм, соответственно, при измерении светорассеивающими способами.
С композициями, состоящими из наночастиц, используется, как правило, множество
поверхностных стабилизаторов для предотвращения слипания или агрегации частиц.
Репрезентативные поверхностные стабилизаторы включают, но не ограничиваются,
желатином, лецитином, декстраном, аравийской камедью, холестерином, трагакантом,
стеариновой кислотой, бензалкония хлоридом, кальция стеаратом, глицерина
моностеаратом, цетостеариловым спиртом, эмульгирующим воском с цетомакроголом,
сложными эфирами сорбитана, полиоксиэтиленовыми сложными алкиловыми эфирами,
производными полиоксиэтиленового касторового масла, жирнокислотными сложными
эфирами полиоксиэтиленового сорбитана, полиэтиленовыми гликолями,
полиоксиэтиленовыми стеаратами, коллоидной двуокисью кремния, фосфатами, натрия
додецилсульфатом, карбоксиметилцелюлозы кальцием, карбоксиметилцеллюлозы
натрием, метилцеллюлозой, гидроксиэтилцеллюлозой, гидроксипропилцеллюлозой,
гидроксипропилметил-целлюлозы фталатом, некристаллической целлюлозой, магния
алюминия силикатом, триэтаноламином, поливиниловым спиртом,
поливинилпироллидоном, тилоксаполом, полоксамерами, полоксаминами, полоксамином 908, диалкиловыми сложными эфирами натрия сульфосукциниловой кислоты, натрия
лаурил сульфатом, алкиловым ариловым полиэфирсульфонатом, смесью сахарозы стеарата
и сахарозы дистеарата, р-изононилфеноксиполи-(глицидол)ом, SA90HCO, деканоил-N-
метилглюкамидом, п-децил-П)-глюкопиранозидом, п-децил-П)-мальтопиранозидом, п-
додецил-П)-глюкопиранозидом, п-додецил-О-мальтозидом, гептаноил-N-
метилглюкамидом, п-гептил-О-глюкопиранозидом, п-гептил-О-тиоглюкозидом, п-гексил-D- глюкопиранозидом, нонаноил-М-метилглюкамидом, п-нонил-О-глюкопиранозидом, октаноил-М-метилглюкамидом, п-октил-О-глюкопиранозидом и октил-D-тиоглюкопиранозидом. Также могут использоваться лизосомы в качестве поверхностных стабилизаторов для композиций, состоящих из наночастиц. Известно, что определенные наночастицы, такие как наночастицы поли(молочная-ко-гликолевая кислота) (PLGA) при внутривенном (ВВ) или подкожном (ПК) введении воздействуют на печень.
Поскольку ВГВ вызывает повреждение печени и присутствует в ней, в одном варианте воплощения наночастицы или другие транспортные средства доставки препарата нацелены на печень. Один такой тип нацеленной на печень транспортной системы доставки препарата описан в Park, et al., Mol Imaging. Feb 2011; 10(l):69-77, и использует Glypican-3 (GPC3) в качестве молекулярной мишени. Park сообщал о применении этой мишени для гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), первичного рака печени, который часто вызывается хроническим персистентным гепатитом.
В одном аспекте данного изобретения указанное транспортное средство доставки препарата также используется для направленной доставки терапевтических средств при лечении вирусных инфекций. Далее, поскольку описываемые здесь соединения имеют непрямые применения при раке, этот тип системы может направлять соединения в печень и лечить раки печени или вызывать реверс рака. GPC3 представляет собой протеогликан гепаран сульфат, который не экспрессируется в нормальных тканях у взрослых, однако значительно сверэхкспрессирован в до 80% ГЦК у человека. GPC3 может служить мишенью, например, путем применения опосредованного антителами таргетинга, и связывания (См. Hsu, et al., Cancer Res. 1997; 57:5179-84).
Другой тип системы доставки препарата для целевого введения в печень описан в патенте США № 7,304,045. Патент '045 раскрывает систему таргетинга опухоли или рака с двумя наночастицами, которая включает первую целевую наночастицу, опосредованную лигандом, конъюгированную с галактозамином, при этом лиганд находится на целевой клетке. Первая наночастица включает блок-сополимеры поли(у-глютамиловая кислота)/поли(лактид) и противовирусное соединение п, которое в данном случае является соединением, описываемым здесь, а в патенте '045 - было ганцикловиром. Вторая наночастица включает блок-сополимеры поли(у-глютамиловая кислота)/поли(лактид),
специфический для эндотелиальных клеток промотор и генную сконструированную плазмиду (вирус-простого-герпеса)-(тимидин киназа) и обеспечивает улучшенную проницаемость и таргетинг, обусловленный удержанием. Первая и указанная вторая наночастицы смешиваются в растворе, сконфигурированном для доставки в печень. Когда нарушением, подлежащим лечению, является опухоль или рак печени, доставка может производиться прямо к опухоли или раку печени или в прилегающий участок.
Репрезентативные полимеры, контролирующие скорость, внутри которых могут быть заключены наночастицы, включают хитозан, полиэтилен оксид (ПЭО), поливинил ацетат фталат, аравийскую камедь, агар, гуаровую камедь, злаковые камеди, декстран, казеин, желатин, пектин, каррагенан, воски, шеллак, гидрогенированные растительные масла, поливинилпироллидон, гидроксипропил целлюлозу (ГПЦ), гидроксиэтил целлюлозу (ГЭЦ), гидроксипропил метилцеллюлозу (ГПМЦ), натрия карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ), поли(этилен) оксид, алкил целлюлозу, этил целлюлозу, метил целлюлозу, карбоксиметил целлюлозу, гидрофильные производные целлюлозы, полиэтиленгликоль, поливинилпироллидон, ацетат целлюлозы, ацетат бутират целлюлозы, ацетат фталат целлюлозы, ацетат триметилла целлюлозы, поливинил ацетат фталат, гидроксипропилметил целлюлозы фталат, гидроксипропилметил целлюлозы ацетат сукцинат, поливинил ацетатдиэтиламино ацетат, поли(акрилметакрилат), поли(винил ацетат), полимеры производные от акриловой или метакриловой кислоты и их соответствующие сложные эфиры и сополимеры производные от акриловой или метакриловой кислоты и их соответствующие сложные эфиры.
Методы приготовления композиций, состоящих из наночастиц, описаны, например, в Патентах США №№ 5,518,187 и 5,862,999, оба "Method of Grinding Pharmaceutical Substances;" Патенте США № 5,718,388 "Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances;" и Патенте США № 5,510,118 "Process of Preparing Therapeutic Compositions Containing Nanoparticles."
Композиции, состоящие из наночастиц, также описаны, например, в Патенте США № 5,298,262 "Use of Ionic Cloud Point Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization;", Патенте США № 5,302,401 "Method to Reduce Particle Size Growth During Lyophilization;" Патенте США № 5,318,767 "X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging;" Патенте США № 5,326,552 "Novel Formulation For Nanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular Weight Non-ionic Surfactants;" Патенте США № 5,328,404 "Method of X-Ray Imaging Using Iodinated Aromatic Propanedioates;" Патенте США № 5,336,507 "Use of Charged Phospholipids to Reduce Nanoparticle Aggregation;" Патенте США № 5,340,564 "Formulations Comprising Olin 10-G to Prevent Particle Aggregation and
Increase Stability;" Патенте США № 5,346,702 "Use of Non-Ionic Cloud Point Modifiers to Minimize Nanoparticulate Aggregation During Sterilization;" Патенте США № 5,349,957 "Preparation and Magnetic Properties of Very Small Magnetic-Dextran Particles;" Патенте США № 5,352,459 "Use of Purified Surface Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization;" Патентах США №№ 5,399,363 и 5,494,683, оба "Surface Modified Anticancer Nanoparticles;" Патенте США № 5,401,492 "Water Insoluble Non-Magnetic Manganese Particles as Magnetic Resonance Enhancement Agents;" Патенте США 5,429,824 "Use of Tyloxapolasa Nanoparticulate Stabilizer;" Патенте США № 5,447,710 "Method for Making Nanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular Weight Non-ionic Surfactants;" Патенте США № 5,451,393 "X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging;" Патенте США № 5,466,440 "Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents in Combination with Pharmaceutically Acceptable Clays;" Патенте США № 5,470,583 "Method of Preparing Nanoparticle Compositions Containing Charged Phospholipids to Reduce Aggregation;" Патенте США № 5,472,683 "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbamic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Патенте США № 5,500,204 "Nanoparticulate Diagnostic Dimers as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Патенте США № 5,518,738 "Nanoparticulate NSAID Formulations;" Патенте США № 5,521,218 "Nanoparticulate Iododipamide Derivatives for Use as X-Ray Contrast Agents;" Патенте США № 5,525,328 "Nanoparticulate Diagnostic Diatrizoxy Ester X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Патенте США № 5,543,133 "Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions Containing Nanoparticles;" Патенте США № 5,552,160 "Surface Modified NSAID Nanoparticles;" Патенте США № 5,560,931 "Formulations of Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or Fatty Acids;" Патенте США № 5,565,188 "Polyalkylene Block Copolymers as Surface Modifiers for Nanoparticles;" Патенте США № 5,569,448 "Sulfated Non-ionic Block Copolymer Surfactant as Stabilizer Coatings for Nanoparticle Compositions;" Патенте США № 5,571,536 "Formulations of Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or Fatty Acids;" Патенте США № 5,573,749 "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carboxylic Anydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Патенте США № 5,573,750 "Diagnostic Imaging X-Ray Contrast Agents;" Патенте США № 5,573,783 "Redispersible Nanoparticulate Film Matrices With Protective Overcoats;" Патенте США № 5,580,579 "Site-specific Adhesion Within the GI Tract Using Nanoparticles Stabilized by High Molecular Weight, Linear Poly(ethylene Oxide) Polymers;" Патенте США № 5,585,108 "Formulations of Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents in Combination with Pharmaceutically Acceptable Clays;" Патенте США № 5,587,143 "Butylene Oxide-Ethyl en e Oxide Block Copolymers Surfactants as
Stabilizer Coatings for Nanoparticulate Compositions;" Патенте США № 5,591,456 "Milled Naproxen with Hydroxypropyl Cellulose as Dispersion Stabilizer;" Патенте США № 5,593,657 "Novel Barium Salt Formulations Stabilized by Non-ionic and Anionic Stabilizers;" Патенте США № 5,622,938 "Sugar Based Surfactant for Nanocrystals;" Патенте США № 5,628,981 "Improved Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents and Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents;" Патенте США № 5,643,552 "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbonic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Патенте США № 5,718,388 "Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances;" Патенте США № 5,718,919 "Nanoparticles Containing the R(-)Enantiomer of Ibuprofen;" Патенте США № 5,747,001 "Aerosols Containing Beclomethasone Nanoparticle Dispersions;" Патенте США № 5,834,025 "Reduction of Intravenously Administered Nanoparticulate Formulation Induced Adverse Physiological Reactions;" Патенте США № 6,045,829 "Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers;" Патенте США № 6,068,858 "Methods of Making Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers;" Патенте США № 6,153,225 "Injectable Formulations of Nanoparticulate Naproxen;" Патенте США № 6,165,506 "New Solid Dose Form of Nanoparticulate Naproxen;" Патенте США № 6,221,400 "Methods of Treating Mammals Using Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors;" Патенте США № 6,264,922 "Nebulized Aerosols Containing Nanoparticle Dispersions;" Патенте США № 6,267,989 "Methods for Preventing Crystal Growth and Particle Aggregation in Nanoparticle Compositions;" Патенте США № 6,270,806 "Use of PEG-Derivatized Lipids as Surface Stabilizers for Nanoparticulate Compositions;" Патенте США № 6,316,029 "Rapidly Disintegrating Solid Oral Dosage Form," Патенте США № 6,375,986 "Solid Dose Nanoparticulate Compositions Comprising a Synergistic Combination of a Polymeric Surface Stabilizer and Dioctyl Sodium Sulfosuccinate;" Патенте США № 6,428,814 "Bioadhesive nanoparticulate compositions having cationic surface stabilizers;" Патенте США № 6,431,478 "Small Scale Mill" и Патенте США № 6,432,381 "Methods for targeting drug delivery to the upper and/or lower gastrointestinal tract," все из которых специфически включены путем ссылки. В дополнение Заявка на Патент США № 20020012675 А1, опубликованная 31 января 2002 года "Controlled Release Nanoparticulate Compositions," описывает композиции, состоящие из наночастиц, и специфически включена путем ссылки.
Составы, состоящие из наночастиц, включая соединения, описываемые здесь, и также в форме пролекарства или соли, могут использоваться для лечения или предотвращения инфекций вирусом гепатита В.
Описаны композиции из аморфных малых частиц, например, в Патенте США № 4,783,484 "Particulate Composition and Use Thereof as Antimicrobial Agent;" Патенте США № 4,826,689 "Method for Making Uniformly Sized Particles from Water-Insoluble Organic Compounds;" Патенте США № 4,997,454 "Method for Making Uniformly-Sized Particles From Insoluble Compounds;" Патенте США № 5,741,522 "Ultrasmall, Non-aggregated Porous Particles of Uniform Size for Entrapping Gas Bubbles Within and Methods" и Патенте США № 5,776,496 "Ultrasmall Porous Particles for Enhancing Ultrasound Back Scatter."
Составы с контролируемым высвобождением
В предпочтительном варианте воплощения активные соединения приготовляются с носителями, которые защитят соединение от быстрого удаления из организма, такими, как составы с контролируемым высвобождением, включающие, но не ограниченные имплантатами и микроинкапсулированными системами доставки. Могут применяться биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие, как этилен винил ацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полиакриловая кислота. Например, могут применяться соединения, покрытые кишечнорастворимой оболочкой для защиты от расщепления кислотой желудка. Способы приготовления таких составов будут понятны для специалистов в данной области техники. Подходящие материалы, при этом, доступны коммерчески.
Липосомальные суспензии (включая, но не ограничиваясь липосомами, нацеленными на инфицированные клетки, с моноклональными антителами к вирусным антигенам) также являются предпочтительными в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Они могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными специалистам в области техники, например, как описано в Патенте США № 4,522,811 (включено путем ссылки). Например, липосомальные составы могут быть приготовлены путем растворения соответствующего(их) липида(ов) (таких, как стеароил фосфатидил этаноламин, стеароил фосфатидил холин, арахноидил фосфатидил холин и холестерин) в неорганических растворителях, которые затем выпаривают, оставляя тонкую пленку высушенного липида на поверхности контейнера. Затем в контейнер вводится водный раствор активного соединения. Затем контейнер взбалтывают вручную для высвобождения липидного материала со стенок контейнера и диспергирования липидных агрегатов, тем самым создавая липосомальную суспензию.
Термины, используемые в описании изобретения, являются общепринятыми и известны специалистам в данной области техники. В контексте данного документа следующие сокращения имеют указанные значения:
ACN Ацетонитрил
B0C2O Ди-даерда-бутил бикарбонат
CDI карбонилдиимидазол
ДДК 7У,7У'-дициклогексилкарбодиимид
ДХМ дихлорометан
ДИПЕА диизопропилэтиламин (основание Хинига) ДМАП 4-Диметиламинопиридин ДМФА 7У,7У-диметилформамид ДМС О д иметил сул ьф оксид
EDC 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид
EtO Ацэтилацетат ч час
HATU 1-[Бис(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-Ь]пиридиниум-3-
оксид гексафторофосфат
М молярный
мин минута
кт или КТ комнатная температура
ТФК трифторуксусная кислота
ТГФ тетрагидрофуран
ДМА Диметилацетамид
IX. Общие способы получения активных соединений
Способы практичного получения активных соединений известны в данной области
техники и являются результатом выборочной комбинации известных способов. Соединения, описанные в настоящем документе, можно получать так, как подробно описано ниже, или другими способами, известными специалистам в данной области техники. Специалистам в данной области техники понятно, что можно осуществлять различные изменения в деталях, без отступления от сущности и без ограничения объема настоящего изобретения.
Различные схемы реакций обобщены ниже.
На Схеме 1 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения А.
На Схеме 2 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, альтернативный синтетический подход к получению соединения В.
На Схеме 3 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения С.
На Схеме 4 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения D.
На Схеме 5 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения Е.
На Схеме 6 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения F и G.
На Схеме 7 представлен неограничивающий пример синтеза активных соединений согласно настоящему изобретению и, в частности, синтетический подход к получению соединения Н.
Схема 1. Синтетический подход к получению соединения А
Соединения формулы А можно получать с помощью первой селективной реакции анилинового производного с хлорангидридом карбоновой кислоты общей формулы I в присутствии органического основания, такого как Et3N или ДИПЕА. Затем промежуточное соединение III приводят во взаимодействие с амином общей формулы IV, например, в органическом растворителе, таком как СШСЬ, в присутствии органического основания, такого как Et3N.
Соединения формулы В можно получать с помощью первой селективной реакции аминного производного с хлорангидридом карбоновой кислоты общей формулы V в присутствии органического основания, такого как Et3N или ДИПЕА. Затем промежуточное соединение VI приводят во взаимодействие с амином общей формулы IV, например, в органическом растворителе типа CH2CI2, в присутствии органического основания, такого как E13N.
О H2N4^jft)A!> о
с,-ШАон - - с,4^Ам- <^
о X(R1)U о*%\" (R)u
V VI
NH Q
R3 6 X?Ri, (R > "
R's 'V R2. и ^xA^XjlHetJAf
(R1)u
Схема 2. Синтетический подход к получению соединения В
Синтез соединений общей формулы С можно осуществлять так, как показано на Схеме 3. Атом N карбоновой кислоты общей формулы VII можно защитить, например, посредством обработки В0С2О в присутствии основания, такого как NaHCCb. Промежуточное соединение VIII связать с амином общей формулы II с помощью конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, EDC, в присутствии органического аминного основания, такого как ДМАП. Затем с полученного соединения общей формулы IX можно снять защиту, например, в присутствии ТФК в случае использования Вое в качестве защитной группы, с последующим взаимодействием с сульфонилхлоридом общей формулы X в присутствии органического аминного основания, такого как Et3N.
О О H;N PC \> '-
Н,м4" <\> Н защита HNjf^^AQH II _~R'
V. \ VII VIII -
PG Н CR L г> "
(R1_ ... R-S-C!
л ^? "~г^- 1 г снятие защиты и Х'^с-, J. /|Не!)АО
S-CI к о |R > -¦
о х с
Схема 3. Синтетический подход к получению соединения С
Синтез соединений общей формулы D можно осуществлять так, как показано на Схеме 4. Сложный эфир общей формулы XI можно приводить во взаимодействие с моноалкиловым сложным эфиром оксалилхлорида общей формулы XII в присутствии кислоты Льюиса, такой как, например, А1СЬ, с получением промежуточного соединения XIII. Селективный гидролиз с неорганическим основанием, таким как, например, NaOH, с последующим связыванием полученной альфа-кетокислоты XIV с амином общей формулы IV в присутствии конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, CDI, приводит к получению соединений общей формулы XV. Гидролиз сложноэфирного фрагмента с неорганическим основанием, таким как, например, NaOH, с последующим связыванием полученной карбоновой кислоты с амином общей формулы II в присутствии конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, HATU, в присутствии органического аминного основания, такого как ДИПЕА, приводит к получению соединений общей формулы D.
XIV
R'3 IV
R3 О
ОН"
R3 \jL \
2N4 X(F R2 О
XVI
H2N QHet^Ar) 0 ^ И Xf^d
,N4 X(R1)U
о D
Схема 4. Синтетический подход к получению соединения D
Синтез соединений общей формулы Е можно осуществлять так, как показано на Схеме 5. Карбоновую кислоту формулы XVII можно связывать с амином общей формулы II с использованием конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, HATU, в присутствии органического аминного основания, такого как ДИПЕА. Промежуточное соединение XVIII можно приводить во взаимодействие с моноалкиловым сложным эфиром оксалилхлорида общей формулы XII в присутствии
кислоты Льюиса, такой как, например, А1СЬ, с получением промежуточного соединения XIX. Селективный гидролиз с неорганическим основанием, таким как, например, NaOH, с последующим связыванием полученной альфа-кетокислоты XX со спиртом общей формулы XXI в присутствии конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, ДНК, в присутствии органического аминного основания, такого как ДМАП, приводит к получению соединений общей формулы Е.
Схема 5. Синтетический подход к получению соединения Е
Синтез соединений общей формулы F и G можно осуществлять так, как показано на Схеме 6. Карбоновую кислоту формулы XXII можно связывать с амином общей формулы II с использованием конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, HATU, в присутствии органического аминного основания, такого как ДИПЕА. Восстановление соединений XXIII с применением, например, Zn в присутствии муравьиной кислоты, приводит к получению аминопроизводных общей формулы XXIV, которые можно приводить во взаимодействие либо с производным оксоуксусной кислоты общей формулы XXV в присутствии конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, ДЦК, либо с сульфонилхлоридом общей формулы X в присутствии органического аминного основания, такого как Et3N, с получением, соответственно, соединений общей Формулы F и G.
Схема 6. Синтетический подход к получению соединений F и G
Синтез соединений общей формулы Н можно осуществлять так, как показано на Схеме 7. Бромсодержащее производное общей формулы XXVI можно подвергать литий-галогенному обмену с использованием литийорганического реагента, такого как, например, и-BuLi, и приводить во взаимодействие с диалкилоксалатом, таким как, например, диэтилоксалат. Затем полученное соединение можно подвергать гидролизу с получением карбоновой кислоты общей формулы XXVIII, которую можно связывать с амином общей формулы II с помощью конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, HATU, в присутствии органического аминного основания, такого как ДИПЕА. Гидролиз соединения ХХГХ с неорганическим основанием, таким как, например, NaOH, с последующим связыванием полученной альфа-кетокислоты XXX с амином общей формулы IV в присутствии конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как, например, CDI, в присутствии органического аминного основания, такого как ДИПЕА, приводит к получению соединений общей формулы Н.
Схема 7. Синтетический подход к получению соединений Н
Конкретные примеры
Конкретные соединения, которые иллюстрируют настоящее изобретение, получали в соответствии со следующими примерами и реакционными последовательностями; примеры и схемы, иллюстрирующие реакционные последовательности, приведены для иллюстрации, для облегчения понимания настоящего изобретения, и их не следует толковать как какое-либо ограничение настоящего изобретения, изложенного далее в прилагаемой формуле изобретения. Предложенные соединения также можно использовать в качестве промежуточных соединений в последующих примерах для получения дополнительных соединений согласно настоящему изобретению. Не было предпринято никаких попыток оптимизировать выход, полученный в любой из реакций. Специалистам в данной области техники известны способы повышения выхода реакции посредством обычного изменения времени реакции, температуры, растворителей и/или реагентов.
Безводные растворители приобретали у компании Aldrich Chemical Company, Inc. (Милуоки, штат Висконсин) и EMD Chemicals Inc. (Гиббстаун, штат Нью-Джерси). Реагенты приобретали из коммерческих источников. Если не указано иное, то материалы, использованные в примерах, приобретали у доступных коммерческих поставщиков или синтезировали стандартными способами, известными специалистам в области химического синтеза. Спектры ХН и 13С ЯМР записывали на спектрометре Bruker Ascend(tm) 400 МГц с Фурье-преобразованием при комнатной температуре и выражали сдвиги в м.д. в сторону слабого поля относительно внутреннего стандарта тетраметилсилана. Проводили
дейтерообмен, эксперименты развязки или записывали гомоядерные двумерные спектры модельного соединения (2D-COSY) для подтверждения отнесения протонов. Мультиплетность сигналов описывали как с (синглет), д (дублет), дд (дублет дублетов), т (триплет), к (квадруплет), ш (широкий), шс (широкий синглет), м (мультиплет). Все значения J выражены в Гц. Масс-спектры записывали на спектрометре Micromass Platform LC, используя технологию электрораспыления. Аналитическую ТСХ проводили на силикагелевых пластинах (25 мкм) на алюминиевой подложке Sigma-Aldrich(r). Колоночную хроматографию проводили на силикагеле или посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Реагенты и условия: a) Mel, КОН, ДМСО; b) CICOCOOEt, AlCh, СН2СЬ; с) NaOH 5%, МеОН, комн. т-ра, 10 мин.; d) CDI, HCCCH2NH2, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; e)NaOH 5%, МеОН, 16 ч., комн. т-ра; f) 3,4-дифторанилин, НАШ, ДИПЕА, ДМФА, 16 ч., комн. т-ра; или SOCh, З-циано-4-фторанилин, DMA, кипяч. с обр. холод.; g) i) бромциклопропан, NaN3, Н20, 120 °С, микроволн., 30 мин.; ii) CuS04, аскорбат№, ACN, 80 °С, микроволн., 30 мин.
Этил-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоксилат (2)
Этил-3,5-диметилпиррол-2-карбоксилат (100,0 г, 0,59 моль) добавляли к раствору гидроксида калия (100,6 г, 1,79 моль) в диметилсульфоксиде (1 л) и перемешивали в течение 30 минут в атмосфере азота при 0 °С. Затем добавляли метилиодид (55,9 мл, 0,89 моль) и
оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры, и перемешивали в течение 4 часов. Затем реакционную смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3 х 1 л) и окончательно промывали объединенный органический слой водой (2 х 150 мл), сушили над Na2S04 и концентрировали in vacuo. Остаток медленно кристаллизовали с получением этил-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоксилата 2 (102,4 г, 0,56 моль, 94%) в виде желтоватого твердого вещества. *НЯМР (400 МГц, CDCh) 5: 1,32 (т, ЗН), 2,20 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН), 3,75 (с, ЗН), 4,22 (к, 2Н), 5,75 (с, Ш). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C9Hi4N02: 182,2, обнаружено: 182,3.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-1 Н-пиррол-2-карбоновая кислота (6)
К раствору этил-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоксилата (10,0 г, 55,2 ммоль) в CH2CI2 (250 мл) при 0 °С по каплям добавляли раствор этил-2-хлор-2-оксоацетата (9,3 мл, 82,8 ммоль) в CH2CI2 (100 мл), затем по частям добавляли А1СЬ (22,1 г, 165,7 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем гасили льдом. После добавления воды (300 мл) смесь фильтровали на целите и экстрагировали CH2CI2 (3 х 100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором карбоната натрия (250 мл) и насыщенным раствором хлорида аммония (250 мл), сушили над Na2S04 и концентрировали in vacuo. К полученному маслянистому веществу добавляли метанол (100 мл) и 5% раствор гидроксида натрия (100 мл), и перемешивали смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. После удаления метанола под вакуумом смесь промывали этилацетатом (2 х 100 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и экстрагировали этилацетатом (3 х 100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (100 мл) и гексанами (100 мл) с получением 2-(5-этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-3-ил)-2-оксоуксусной кислоты 4 (8,1 г, 32,0 ммоль, 58%) в виде грязновато-белого порошка. К раствору 2-(5-этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-3-ил)-2-оксоуксусной кислоты 4 (2,0 г, 7,9 ммоль) в ДМФА (15 мл) и CH2CI2 (10 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (1,92 г, 11,8 ммоль) и пропаргиламин (0,607 мл, 9,5 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре, реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали CH2CI2 (3 х 100 мл).
Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали
in vacuo с получением 5 в виде желтоватого маслянистого вещества. К неочищенному этил-
4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил] -1,3,5 -триметилпиррол-2-карбоксилату 5,
растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, водный раствор промывали этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (1,8 г, 6,9 ммоль, 87%) в виде белого порошка. ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-аб) 5 12,77 (с, Ш), 9,14 (т, J= 5,7 Гц, Ш), 3,99 (дд, J= 5,7, 2,6 Гц, 2Н), 3,75 (с, ЗН), 3,18 (т, J= 2,4 Гц, Ш), 2,37 (с, 6Н). 13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) 5 188,0, 167,2, 163,0, 142,8, 129,7, 121,8, 117,5, 80,5, 73,8, 33,3, 28,1, 12,3, 12,0. МСВР (ПЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C13H15N2O4: 263,1032, обнаружено: 263,1025.
4-[Щропаргиламино)(оксо)ацетил] -N-(3,4-дифторфенил)-1,3,5 -триметил-1Н-пиррол-2-карбоксамид (7а).
К раствору 4- [2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил] -1,3,5 -триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (750 мг, 2,7 ммоль), 3,4-дифторанилина (410 мг, 3,2 ммоль) и ДИПЕА (746 мкл, 4,3 ммоль) в ДМФА (15 мл) добавляли HATU (1,63 г, 4,3 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 50 °С в течение 3 часов. Для завершения реакции добавляли дополнительное количество 3,4-дифторанилина (410 мг, 3,2 ммоль) и дополнительно перемешивали смесь в течение ночи при 65 °С. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл).
Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 7а в виде белого порошка (47%, 503 мг, 1,4 ммоль). *Н ЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 9,49 (с, Ш), 8,22 - 8,07 (м, Ш), 8,07 - 7,95 (м, Ш), 7,59 - 7,43 (м, Ш), 7,33 (к, J= 9,4 Гц, Ш), 4,21 - 4,07 (м, 2Н), 3,69 (с, ЗН), 2,73 (с, Ш), 2,43 (с, ЗН), 2,29 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон) 5 188,9, 167,9, 162,1, 152,7, 152,6, 150,3, 150,2, 149,3, 149,2, 146,9, 146,8, 142,8, 137,9, 137,9, 128,5, 124,6, 119,1, 118,9, 118,8, 117,5, 117,5, 117,4, 117,4, 110,7, 110,5, 81,4, 73,2, 33,2, 29,7, 12,8, 12,7. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-с!6) 5 -139,8 - -140,0 (м), -147,1 - -147,2 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H18F2N3O3: 374,1316, обнаружено: 374,1309.
4-(2-((( 1 -циклопропил-\Н-1,2,3 -триазол-4-ил)метил)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)- 1,3,5-триметил-Ш-пиррол-2-карбоксамид (8)
Раствор бромциклопропана (0,4 мл, 3,3 ммоль) и азида натрия (430 мг, 6,6 ммоль) в воде (1 мл) нагревали под микроволновым излучением в течение 30 минут при 120 °С. Затем добавляли раствор соединения 7 (0,05 г, 0,1 ммоль) в ацетонитриле (1 мл), затем аскорбат натрия (10 мг, 0,05 ммоль) и сульфат меди (20 мг, 0,12 ммоль). Смесь нагревали в течение 30 минут при 80 °С под микроволновым излучением, а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл). После экстрагирования этилацетатом (3 х 50 мл) объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученную смесь очищали флэш-хроматографией (гексаны/этилацетат = 6:4 об./об.) с получением соединения 8 в виде белого порошка (61%, 31 мг, 0,06 ммоль). *Н ЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 9,50 (с, Ш), 8,29 - 8,18 (м, Ш), 8,06 - 7,94 (м, Ш), 7,87 (с, Ш), 7,57 - 7,48 (м, Ш), 7,39 - 7,28 (м, Ш), 6,16 - 5,98 (м, Ш), 5,31 - 5,20 (м, Ш), 5,09 - 5,00 (м, 2Н), 4,58 (д, J= 5,9 Гц, 2Н), 3,67 (д, J= 1,4 Гц, ЗН), 2,38 (д, J= 1,3 Гц, ЗН), 2,24 (д, J= 1,3 Гц, ЗН). 13СЯМР (101 МГц, ацетон) 5 187,4, 166,3, 160,3, 150,9, 150,8, 148,5, 148,4, 147,5, 147,4, 145,1, 144,9, 144,4, 144,4, 140,9, 136,2, 136,1, 136,1, 136,0, 132,7, 126,6, 122,9, 122,5, 118,3, 117,3, 117,1, 117,1, 115,7, 115,7, 115,7, 115,7, 108,9, 108,7,51,9,34,4,31,4, 11,1, 11,0. 19БЯМР (377 МГц, ацетонч &) 5 -139,8 - -140,1 (м), -147,0 - -147,2 (м). МСВР (ПЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C22H23F2N6O3: 457,1800, обнаружено: 457,1790.
/У-(3 -циано-4-фторфенил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (7Ь).
К раствору 4- [2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил] -1,3,5 -триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (0,1 г, 0,38 ммоль) в толуоле (5 мл) добавляли 0,1 мл SOCb при комнатной температуре и кипятили смесь с обратным холодильником в течение 1,5 часа. После удаления SOCb in vacuo, остаточное маслянистое вещество солюбилизировали в DMA (5 мл) и добавляли З-циано-4-фторанилин (0,1 г, 0,7 ммоль). Смесь перемешивали при 100 °С в течение 3 часов, а затем охлаждали до комнатной температуры. Затем раствор выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали ЕЮ Ас (3 х 25 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo.
Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны/ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением 7У-(3 -циано-4-фторфенил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамида 7Ь (48%, 0,7 г, 0,2 ммоль). ХНЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 9,61 (с, Ш), 8,37 - 8,27 (м, Ш), 8,15 (с, Ш), 8,13 - 8,04 (м, Ш), 7,45 (т, 7 = 9,1 Гц, Ш), 4,21 - 4,06 (м, 2Н), 3,70 (с, ЗН), 2,77 - 2,70 (м, Ш), 2,43 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ацетонч &)5 188,9, 167,8, 162,3, 160,7 (д, 7 = 252,7 Гц) 143,0, 138,0 (д, 7= 3,1 Гц), 128,4 (д, 7= 8,1 Гц), 128,2, 125,5, 125,0, 118,9, 118,6 (д, 7 = 20,9 Гц), 115,3, 102,6 (д, 7 = 16,5 Гц), 81,4, 73,3,33,3,29,7, 12,9, 12,8. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5-115,9 (дд, 7= 9,6, 4,7 Гц). ЖХМС (ПЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H19FN4O3: 381,1, обнаружено: 381,3.
Реагенты и условия: a) HSO3CI, 0 °С, 1 ч. b) i) SOCb, 80 °С, 1,5 ч.; ii) 3,4-дифторанилин, толуол, 100 °С, 4 ч.; с) пропаргиламин, R3N, ДМФА, комн. т-ра, в течение ночи; d) i) бромциклопропан, NaN3, Н2О, 120 °С, микроволн., 30 мин.; ii) СиБСч, аскорбат натрия, CH3CN, 80 °С, микроволн., 30 мин.
5-(N-(( 1 -Циклопропил- Ш-1,2,3 -триазол-4-ил)метил)сульфамоил)-/У-(3 А-
дифторфенил)-2-фторбензамид (13)
2-Фторбензойную кислоту 9 (10,0 г, 71,4 ммоль) добавляли к хлорсульфоновой кислоте (50 мл) при 0 °С и перемешивали смесь при 0 °С в течение 1 часа. Затем
реакционную смесь медленно выливали на лед. Образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали водой (3 х 100 мл) и сушили под вакуумом в течение ночи с получением 5-(хлорсульфонил)-2-фторбензойной кислоты 10 в виде коричневатого твердого вещества (10,5 г, 44,0 ммоль). 5-(Хлорсульфонил)-2-фторбензойную кислоту 10 (10,0 г, 41,9 ммоль) добавляли к 60 мл SOCb при комнатной температуре и кипятили смесь с обратным холодильником в течение 1,5 часа. После удаления SOCb/'w vacuo, остаточное маслянистое вещество солюбилизировали в толуоле (150 мл) и добавляли 3,4-дифторанилин (6,5 г, 50,3 ммоль). Смесь перемешивали при 100 °С в течение 4 часов, а затем охлаждали до комнатной температуры. Затем раствор выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (200 мл) и экстрагировали EtOAc (3 х 200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны/ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением 3-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-4-фторбензол-1-сульфонилхлорида 11 (92%, 13,51 г, 38,6 ммоль). К раствору 3-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-4-фторбензол-1-сульфонилхлорида 11 (10,0 г, 28,6 ммоль) в СНгСЬ (200 мл) при 0 °С добавляли пропаргиламина гидрохлорид (3,1 г, 34,3 ммоль) и Et3N (7,8 мл, 57,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (250 мл). После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 100 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и окончательно концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 7У-(3,4-дифторфенил)-2-фтор-5-(М-(проп-2-ин-1-ил)сульфамоил)бензамида 12 (74%, 7,8 г, 21,1 ммоль) в виде белого порошка. Раствор бромциклопропана (0,6 мл, 4,9 ммоль) и азида натрия (483 мг, 7,4 ммоль) в воде (1 мл) нагревали под микроволновым излучением в течение 30 минут при 120 °С. К указанному раствору добавляли раствор соединения 12 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ацетонитриле (1 мл), аскорбат натрия (10 мг, 0,05 ммоль) и сульфат меди (20 мг, 0,12 ммоль).
Затем реакционную смесь нагревали в течение 30 минут при 80 °С под микроволновым излучением, затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл). После экстрагирования с ЕЮ Ас (3x50 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 13 в виде белого порошка (19%, 23 мг, 0,05 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-с!6) 5 9,92 (с, Ш), 8,25 (дд, 7 = 6,6, 2,5 Гц, Ш), 8,06 - 7,95 (м, 2Н), 7,77 (с, Ш), 7,58 - 7,52 (м, Ш), 7,48 (дд, 7 = 10,1, 8,7 Гц, Ш), 7,37 (дт, 7= 10,6, 9,0 Гц, Ш), 7,21 (шс, Ш), 6,11-5,94 (м, Ш), 5,32-5,16 (м, Ш), 4,99 (дт, 7= 6,0, 1,5 Гц, 2Н), 4,32 (с, 2Н). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон-^б) 5 188,9, 167,9, 162,1,
150,2, 149,2 (д, J= 12,9 Гц), 146,8 (д, J= 13,0 Гц), 142,8, 137,9 (д, J= 5,9 Гц), 128,5, 124,6, 120,4 - 118,2 (м), 117,5 (дд, J= 6,0, 3,6 Гц), 110,6 (д, J= 22,1 Гц), 81,5, 73,3, 33,2, 29,7, 12,8 (д, J= 9,6 Гц). 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-с!6) 5 -110,6 (с), -139,6 - - 139,7 (м), -146,1 - -146,3 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H17F3N5O3S: 452,1004, обнаружено: 452,0999.
Реагенты и условия: a) HSO3CI, 0 °С, 1 ч.; b) i) SOCb, 100 °С, 1,5 ч.; ii) 3,4-дифторанилин, толуол, комн. т-ра, 48 ч.; с) пропаргиламин, ДИПЕА, ДМФА, комн. т-ра, в течение ночи.
N-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-4-(Тч|-(проп-2-ин-1 -ил)сульфамоил)-1 Н-пиррол-2-карбоксамид (17)
1-Метил-Ш-пиррол-2-карбоновую кислоту (10,0 г, 80 ммоль) добавляли к хлорсульфоновой кислоте (50 мл) при 0 °С и перемешивали полученный раствор при 0 °С в течение 1 часа. Затем реакционную смесь медленно выливали на лед. Затем отфильтровывали образовавшийся осадок, промывали водой (3 х 100 мл) и сушили под вакуумом в течение ночи с получением 4-(хлорсульфонил)-1-метил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты 15 в виде коричневатого твердого вещества (10,7 г, 47,8 ммоль). 4-(Хлорсульфонил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоновую кислоту 15 (1,0 г, 4,4 ммоль) добавляли к SOCb при комнатной температуре и нагревали смесь при 100 °С в течение 1,5 часа. После удаления тионилхлорида in vacuo, остаточное маслянистое вещество солюбилизировали в толуоле (50 мл) и добавляли 3,4-дифторанилин (650 мг, 5,0 ммоль).
Раствор перемешивали в течение 48 часов при комнатной температуре, затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл). Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл) и сушили объединенные органические слои над сульфатом натрия. После концентрирования in vacuo, полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением 5-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-1 -метил-Ш-пиррол-З-сульфонилхлорида 16 (775 мг, 2,3 ммоль).
К раствору 5-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-1-метил-1Н-пиррол-3-сульфонилхлорида 16 (100 мг, 0,3 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли пропаргиламина гидрохлорид (33 мг, 0,4 ммоль) и ДИПЕА (78 мкл, 0,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo.
Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением N-{3,4-дифторфенил)-1 -метил-4-(/У-(проп-2-ин-1 -ил)сульфамоил)- Ш-пиррол-2-карбоксамида 17 (77%, 81 мг, 0,2 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^б) 5 9,56 (с,
Ш), 8,05 - 7,87 (м, Ш), 7,62 - 7,48 (м, 2Н), 7,38 - 7,25 (м, Ш), 7,22 (д, J= 1,9 Гц, Ш), 6,57 (с, Ш), 4,03 (с, ЗН), 3,79 (с, 2Н), 2,70 (т, J= 2,5 Гц, Ш). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон-^) 5 160,9, 152,6 (д, J= 13,0 Гц), 150,1 (д, J= 13,2 Гц), 149,1 (д, J= 12,7 Гц), 146,7 (д, J= 12,8 Гц), 137,9 (дд, 7=9,1, 3,0 Гц), 132,2, 128,4, 123,7, 119,7-118,4 (м), 117,8 (дд, J= 5,9, 3,5 Гц), 114,0, 110,8 (д, J= 22,1 Гц), 80,8, 74,5, 38,5, 34,2. 19F ЯМР (377 МГц, ацетонч &) 5 -138,4 - -138,7 (м), -145,4 - -146,1 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C15H14F2N3O3S: 354,0724, обнаружено: 354,0717.
Реагенты и условия: a) HSO3CI, 0 °С - комн. т-ра, 4 ч.; b) HCCCH2NH2, Et3N, ДМФА, комн. т-ра, 2 ч.; с) NaOH 5%, МеОН, 16 ч., комн. т-ра - 60 °С, 18 ч.; d) 3,4-дифторанилин, НАШ, ДИПЕА, ДМФА, 50 °С, 16 ч.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-1 Н-пиррол-2-карбоновая кислота(20)
Этил-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоксилат 2 (2,0 г, 11,0 ммоль) добавляли к хлорсульфоновой кислоте (10 мл) при 0 °С и перемешивали смесь при 0 °С в течение 1 часа, затем в течение 3 часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь медленно выливали на лед. Смесь подщелачивали 5% раствором гидроксида натрия (рН > 7) и экстрагировали этилацетатом (3 х 100 мл). Органические слои объединяли, сушили над Na2S04 и концентрировали in vacuo с получением неочищенного 18 в виде темно-коричневого твердого вещества (69%, 2,1 г, 7,5 ммоль). К неочищенному этил-4-(хлорсульфонил)-1,3,5 -триметил- 1//-пиррол-2-карбоксилатному промежуточному соединению 18, солюбилизированному в ДМФА (10 мл), добавляли пропаргиламин (0,72 мл, 11,3 ммоль) и триэтиламин (3,1 мл, 22,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл). После экстрагирования с ЕЮ Ас (3x50 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное маслянистое вещество разбавляли в метаноле (5 мл) и добавляли 5% раствор гидроксида натрия (15 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при 60 °С. После удаления метанола in vacuo, смесь промывали этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (20 мл) и гексанами (20 мл) с получением 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 20 (28%, 0,8 г, 0,3 ммоль) в виде грязновато-белого порошка. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-^6) 5 12,70 (с, Ш), 7,64 (т, 7 = 5,9 Гц, Ш), 3,73 (с, ЗН), 3,58 (дд, 7= 6,0, 2,6 Гц, 2Н), 3,04 (т, 7= 2,5 Гц, Ш), 2,43 (с, ЗН), 2,41 (с, ЗН). 13СЯМР(101 МГц, ДМСОч &) 5 163,0, 138,9, 127,6, 120,8, 118,1, 80,1,74,3,33,4, 31,8, 12,0,11,5.
7У-ГЗ ,4-д ифторфенил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (21)
К раствору 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 20 (0,1 г, 0,3 ммоль), 3,4-дифторанилина (96 мг, 7,4 ммоль) и ДИПЕА (746 мкл, 1,1 ммоль) в ДМФА (15 мл) добавляли HATU (0,211 г, 0,5 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 50 °С в течение ночи. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 21 ввиде белого порошка (36%, 51 мг, 0,1 ммоль).ХНЯМР
(400 МГц, ацетонч &) 5 9,44 (с, Ш), 8,24 - 7,80 (м, Ш), 7,74 - 7,44 (м, Ш), 7,40 - 7,22 (м, Ш), 6,51 (д, J= 6,3 Гц, Ш), 3,77 - 3,70 (м, 2Н), 3,68 (с, ЗН), 2,68 - 2,60 (м, Ш), 2,51 (с, ЗН), 2,37 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон-d) 5 160,2, 150,9 (д, J= 13,1 Гц), 148,4 (д, J= 13,0 Гц), 147,5 (д, J= 12,9 Гц), 145,1 (д, J= 12,6 Гц), 137,1, 126,1, 120,7, 117,2 (д, J= 18,1 Гц), 117,0, 115,8 (д, J= 3,9 Гц), 108,9 (д, J= 22,2 Гц), 79,1, 72,3, 31,7, 10,4 (д, J= 32,3 Гц). 19F ЯМР (377 МГц, ацетонч &) 5-139,8--139,9 (м), -147,0--147,1 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C17H18F2N3O3S: 382,1037, обнаружено: 382,1027.
Реагенты и условия: a) HATU, 3,4-дифторанилин, ДИПЕА, ДМФА, 65 °С, в течение ночи; Ь) этилхлороксоацетат, А1СЬ, CH2CI2, 0 °С - комн. т-ра, в течение ночи; с) i) NaOH 5%, МеОН, комн. т-ра, 15 мин.; ii) 1 н. НС1; d) CDI, R*R2NH, ДМФА, СН2С12, комн. т-ра, 2 ч.
2-(5 -((3,4-дифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусная кислота(24)
К раствору 1-метил-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты (4 г, 32 ммоль), 3,4-дифторанилина (6,2 г, 48 ммоль) и ДИПЕА (13 мл, 96 ммоль) в ДМФА (150 мл) добавляли HATU (18,2 г, 48 ммоль) при комнатной температуре. Смесь нагревали при 65 °С в течение ночи и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования этилацетатом (3 х 50 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученную смесь очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 22 в виде белого порошка (82%, 6,2 г, 26,2 ммоль).
К раствору /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоксамида 22 (3 г, 12,7 ммоль) в CH2CI2 (150 мл) по каплям, при 0 °С добавляли раствор этил-2-хлор-2-оксоацетата (2,12 мл, 19,1 ммоль) в CH2CI2 (20 мл), затем по частям добавляли А1С1з (5,1 г, 38,1 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем
выливали на дробленый лед. После добавления воды (300 мл) смесь фильтровали на целите и экстрагировали водный слой с CH2CI2 (3 х 100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором карбоната натрия (100 мл), насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл), сушили над Na2S04 и концентрировали in vacuo. Полученное маслянистое вещество разбавляли в метаноле/ТГФ (об./об. = 1/2, 30 мл) и добавляли 5% раствор гидроксида натрия (30 мл). После перемешивания в течение 15 минут при комнатной температуре смесь концентрировали in vacuo. Смесь промывали этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (20 мл) и гексанами (20 мл) с получением 2-(5-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-1-метил-1//-пиррол-3-ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (3,48 г, 11,3 ммоль) в виде грязновато-белого порошка. ХН ЯМР (400 МГц, ДМСОч &) 5 10,28 (с, Ш), 8,02 (д, 7= 1,9 Гц, Ш), 7,94 - 7,81 (м, Ш), 7,60 (д, 7 = 1,9 Гц, Ш), 7,56 - 7,47 (м, Ш), 7,44 - 7,24 (м, Ш), 3,96 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ДМСО-ск) 5 181,1, 165,3, 159,5, 150,5 (д, 7= 13,1 Гц), 148,0 (д, 7= 13,1 Гц), 147,0 (д, 7= 12,5 Гц), 144,6 (д, 7= 12,6 Гц), 136,6, 136,4 (дд, 7= 9,2, 2,8 Гц), 127,9, 119,0, 117,7 (д, 7= 17,7 Гц), 116,8 (дд, 7= 5,8, 3,2 Гц), 114,9, 109,4 (д, 7= 21,7 Гц), 37,7. 19F ЯМР (377 МГц, ДМСОч &) 5 -138,0 - -138,2 (м), -145,5 - -145,6 (м).
и \\
NH О
4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-А^-(3,4-дифторфенил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоксамид (25)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и аллиламин (29 мкл, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением 4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-\Н-пиррол-2-карбоксамида 25 в виде грязновато-белого порошка (81%, 91 мг, 0,2 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 9,60 (с, Ш), 8,23 (с, Ш), 8,14 (с, Ш), 8,04 - 7,90 (м, Ш), 7,58 (с, Ш), 7,57 - 7,49 (м, Ш), 7,30 (к, 7= 9,6 Гц, Ш), 6,25 - 5,68 (м, Ш), 5,22 (д, 7= 16,8 Гц,
Ш), 5,11 (дт,7= 10,3, 1,4 Гц, Ш), 4,06 (с, ЗН), 3,99-3,92 (м, 2Н). С ЯМР (101 МГц, ацетон- 146.7 (д, 7= 12,9 Гц), 138,9, 137,9, 136,2, 129,0, 120,9, 118,8 (д, 7= 18,0 Гц), 117,9 - 117,4 (м), 117,0, 116,6, 110,7 (д, 7= 22,1 Гц), 42,9,38,7. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5-138,5 - -
138.7 (м), -145,9 - -146,2 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C17H16F2N3O3: 348,1260, обнаружено: 348,1158.
/У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (26)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и тиазол-2-амин (33 мг, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоксамида 26 в виде коричневатого порошка (79%, 101
мг, 0,2 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ДМСО-d) 5 12,74 (с, Ш), 10,33 (с, Ш), 8,20 (с, Ш), 7,94
4-(2-((циклопентилокси)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-\Н-пиррол-2-карбоксамид (27)
- 7,83 (м, Ш), 7,69 (с, Ш), 7,60 (д, 7= 3,6 Гц, Ш), 7,56 - 7,49 (м, Ш), 7,48 - 7,38 (м, Ш), 3,98 (с, ЗН). 13СЯМР(101 МГц, ДМСОч &) 5 180,6, 162,5, 159,5, 150,5 (д,7= 12,9 Гц), 148,1 (д, 7= 12,5 Гц), 138,6, 137,2, 136,4 (д, 7= 12,0 Гц), 127,9, 118,7, 117,8 (д, 7= 17,6 Гц), 116,8, 109,5 (д, 7= 21,7 Гц), 60,2, 37,8, 17,9 (д, 7= 672,1 Гц). 19F ЯМР (377 МГц, ДМСОч &) 5 -137,3
- -137,4 (м), -144,5 - -144,7 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C17H13F2N4O3S: 391,0676, обнаружено: 391,0669.
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и СШСЪ (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и О-циклопентилгидроксиламина гидрохлорид (44 мг, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с СШСЬ (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексан:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением 4-(2-((циклопентилокси)амино)-2-оксоацетил)-Л^-(3,4-дифторфенил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоксамида 27 в виде коричневатого порошка (26%, 33 мг, 0,1 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 10,83 (с, Ш), 9,63 (с, Ш), 8,14 (д, J= 1,7 Гц, Ш), 8,03 - 7,90 (м, Ш), 7,65 - 7,46 (м, 2Н), 7,40 - 7,20 (м, Ш), 4,69 - 4,57 (м, Ш), 4,06 (с, ЗН), 1,95 - 1,85 (м, 2Н), 1,79 - 1,65 (м, 4Н), 1,57 (с, 2Н). 13С ЯМР (101 МГц, ацетонч &) 5 181,0, 161,2 (д, J= 178,9 Гц), 159,7, 159,3, 150,8 (д, J= 13,2 Гц), 148,3 (д, J= 13,2 Гц), 147,3 (д, J= 12,8 Гц), 144,9 (д, J= 12,7 Гц), 136,8, 136,2 (дд, 7 = 9,1, 3,0 Гц), 127,4, 119,2, 117,0 (д, J= 18,0 Гц), 116,5 - 115,7 (м), 114,5, 109,1 (д, J= 22,2 Гц), 87,4, 87,0, 37,0, 30,9, 23,4.19БЯМР(377 МГц, ацетон-^б) 5-138,6 --138,7 (м), -146,0 --146,1 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H20F2N3O4: 392,1422, обнаружено: 392,1415.
Q-NH
/У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (28)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и анилин (35 мкл, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамида 28 в виде белого порошка (32%, 40 мг, 0,1 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетон-d) 5 9,79 (с, Ш), 9,64 (с, Ш), 8,30 (с, Ш), 8,04 - 7,94 (м, Ш), 7,93 (с, Ш), 7,91 (с, Ш), 7,63 (д, J= 1,8 Гц, Ш), 7,60 - 7,52 (м, Ш), 7,44 - 7,37 (м, 2Н), 7,36 - 7,27 (м, Ш), 7,22-7,14 (м, Ш), 4,10 (с, ЗН). 13СЯМР(101 МГц, ацетон-d) 5 182,4, 162,0, 161,1, 152,6 (д,
J= 13,0 Гц), 150,2 (д, J= 13,2 Гц), 149,1 (д, J= 12,5 Гц), 146,7 (д, J= 12,8 Гц), 139,7, 139,1, 138,0 (дд, 7=9,2, 2,9 Гц), 130,6, 129,2, 126,3, 121,8, 120,5, 118,9 (д, J= 17,9 Гц), 117,8 (дд, J = 5,9, 3,5 Гц), 116,7, 110,9 (д, J= 22,3 Гц), 38,8. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5 -138,6 - -138,9 (м), -146,1 - -146,2 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H16F2N3O3: 384,116, обнаружено: 384,1153.
/У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (29)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и бензиламин (42 мкл, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексан:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамида 29 в виде белого порошка (99%, 126 мг, 0,2 ммоль). 13С ЯМР (101 МГц,
ацетон-^6) 5 182,7, 163,9, 161,1, 159,9, 152,6 (д, J= 13,0 Гц), 150,1 (д, J= 13,3 Гц), 149,1 (д, J= 12,7 Гц), 146,7 (д, J= 12,8 Гц), 142,8, 140,7, 139,0, 138,0 (д, J= 12,1 Гц), 130,2, 130,0, 129,4, 129,0, 128,9, 128,4, 120,9, 118,8 (д,7= 18,3 Гц), 118,3 - 117,5 (м), 116,7, 110,8 (д,7 = 22,2 Гц), 45,3, 44,3, 38,8.19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5 -138,7 - -138,8 (м), -146,1 - -146,4 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C21H18F2N3O3: 398,1316, обнаружено: 398,1312.
4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоксамид (30)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г
карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и 2-аминоацетонитрила гидрохлорид (36 мг, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением 4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил- Ш-пиррол-2-карбоксамида 30 в виде коричневатого порошка (30%, 34 мг, 0,1 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,43 (с, Ш), 8,07 (с, Ш), 8,06 - 7,71 (м, Ш), 7,54 - 7,40 (м, Ш), 7,37 - 7,12 (м, Ш), 6,93 (с, Ш), 6,88 - 6,84 (м, Ш), 3,93 (с, ЗН), 3,66 - 3,43 (м, Ш), 1,99 - 1,93 (м, ЗН), 1,79 - 1,68 (м, 2Н), 1,67 - 1,55 (м, 2Н). 13С ЯМР (101 МГц, ацетонч &) 5 181,1, 164,1, 161,1, 139,0, 129,3, 120,5, 118,9 (д, 7= 17,6 Гц), 118,0, 117,8 (дд, 7= 6,0, 3,2 Гц), 116,6, 110,9 (д, 7= 22,1 Гц), 38,8, 28,8. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5 -138,7 - -138,8 (м), -145,9 - -146,2 (м). МСВР (ИЭР) : m/z [М+Н]+ расч. для C17H20F2N3O3S : 384,1193, обнаружено: 384,1186.
N-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (31)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и CH2CI2 (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и морфолин (34 мкл, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с CH2CI2 (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамида 31 в виде белого порошка (80%, 97 мг, 0,2 ммоль). *Н ЯМР (400
МГц, ДМСОч &) 5 10,28 (с, Ш), 8,19 - 7,80 (м, 2Н), 7,57 - 7,47 (м, 2Н), 7,46 - 7,36 (м, Ш), 3,95 (с, ЗН), 3,81 - 3,67 (м, 2Н), 3,64 - 3,59 (м, 2Н), 3,58 - 3,49 (м, 2Н), 3,34 - 3,25 (м, 2Н). 13С ЯМР (101 МГц, ДМСОч &) 5 185,9, 165,8, 159,5, 150,5 (д, 7= 13,1 Гц), 148,1 (д, 7= 13,2 Гц), 147,1 (д,7= 12,8 Гц), 144,7 (д, 7= 12,8 Гц), 136,4 (дд, 7= 9,1, 3,0 Гц), 135,9, 128,1, 119,8,
117,8 (д, J= 17,7 Гц), 117,2 - 116,3 (м), 114,0, 109,5 (д, J= 21,7 Гц), 66,5 (д, J= 30,5 Гц), 46,3, 41,5, 37,8. 19F ЯМР (377 МГц, ДМСОч &) 5 -137,2 - -137,4 (м), -144,5 - -144,6 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+расч. для CigHigFzNsCU: 378,1265, обнаружено: 378,1257.
4-(2-(3 3 -дифторазетидин-1 -ил)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил- Ш-пиррол-2-карбоксамид (32)
К раствору 2-(5 -((3,4-д ифторфенил)карбамоил)-1 -метил- Ш-пиррол-3 -ил)-2-оксоуксусной кислоты 24 (0,1 г, 0,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) и СШСЬ (5 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (79 мг, 0,05 ммоль) и 3,3-дифторазетидина гидрохлорид (50 мг, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. После экстрагирования с СШСЬ (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением 4-(2-(3,3-дифторазетидин-1-ил)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-Ш-пиррол-2-карбоксамида 32 в виде белого порошка (48%,
60 мг, 0,1 ммоль). *Н ЯМР (400 МГц, ацетон-d) 5 9,60 (с, Ш), 8,06 (д, J= 1,7 Гц, Ш), 8,01 - 7,86 (м, Ш), 7,70 - 7,47 (м, 2Н), 7,34 - 7,26 (м, Ш), 4,98 - 4,79 (м, 2Н), 4,65 - 4,31 (м, 2Н), 4,05 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон-^) 5 182,6, 163,7, 161,1, 152,6 (д, J= 13,1 Гц), 150,2 (д, J= 13,6 Гц), 149,1 (д, J= 12,8 Гц), 146,7 (д, J= 13,1 Гц), 138,4, 138,2 - 137,6 (м), 129,2, 121,4, 121,0, 118,9 (д, 7=17,9 Гц), 118,3, 118,0 - 117,5 (м), 116,2, 115,6, 110,8 (д, J= 22,2 Гц), 65,8 (т, J= 28,6 Гц), 61,9 (т, J= 28,7 Гц), 38,8. 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5 -102,1 (п, J = 12,3 Гц), -138,7 - -138,8 (м), -146,0 - -146,2 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C17H14F4N3O3: 384,0971, обнаружено: 384,0964.
37 = сус циклопентил
Реагенты и условия: a) HN03, Ас20, -25 °С - комн. т-ра, 2 ч.; b) НАШ, ДИПЕА, 3,4-дифторанилин, ДМФА, 50 °С, в течение ночи; с) Zn, НСООН, МеОН, комн. т-ра, 10 мин.; d) RSO2CI, Et3N, ДМФА, комн. т-ра, в течение ночи.
7У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-(фенилсульфонамидо)-Ш-пиррол-2-карбоксамид
06}
К раствору 1-метил-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 14 (4 г, 32 ммоль) в уксусном ангидриде (40 мл) добавляли 70% азотную кислоту 70% (3,2 мл) при минус 25 °С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. После добавления воды (200 мл) при минус 25 °С смесь экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл).
Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором карбоната натрия (3 х 100 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 4:6 об./об.) с получением соединения 33 в виде темного маслянистого вещества (14%, 770 мг, 4,5 ммоль). К раствору 1-метил-4-нитро-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 33 (0,77 г, 4,5 ммоль), 3,4-дифторанилина (1,16 г, 9,0 ммоль) и ДИПЕА (1,85 мл, 13,6 ммоль) в ДМФА (20 мл) добавляли НАШ (1,89 г, 5,0 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 50 °С в течение ночи, а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл). После экстрагирования с этилацетатом (3 х 50 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 7:3 об./об.) с получением /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-нитро-Ш-пиррол-2-карбоксамида 34 (64%, 820 мг, 2,9 ммоль). К суспензии /У-(3,4-дифторфенил)-1-метил-4-нитро-1//-пиррол-2-карбоксамида 34 (250 мг, 0,9 ммоль) в метаноле (20 мл) и муравьиной кислоте (0,5 мл, 13,3 ммоль) добавляли Zn порошок (250 мг, 3,8 ммоль). Смесь перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре и фильтровали на целите. Раствор экстрагировали 1 н. НС1 (3 х 50 мл) и промывали этилацетатом (2 х 50 мл). Затем
водный слой подщелачивали, используя 5% раствор гидроксида натрия (рН > 8), и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл).
Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo с получением 4-амино-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-Ш-пиррол-2-карбоксамида 35 в виде желтовато-коричневого твердого вещества (68%, 153 мг, 0,6 ммоль). К раствору 4-амино-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил- 1//-пиррол-2-карбоксамида 35 (25 мг, 0,1 ммоль) в ДМФА (3 мл) добавляли бензолсульфонилхлорид (14 мкл, 0,1 ммоль) и Et3N (20 мкл, 0,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (20 мл). После экстракции с EtOAc (3 х 20 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс =1:1 об./об.) с получением соединения 36 (51%, 20 мг, 0,05 ммоль). ХНЯМР (400 МГц, ацетонов) 5 9,37 (с, Ш), 8,53 (с, Ш), 8,05 - 7,85 (м, Ш), 7,81 - 7,71 (м, 2Н), 7,68 - 7,58 (м, Ш), 7,58
- 7,51 (м, 2Н), 7,45 - 7,41 (м, Ш), 7,35 - 7,17 (м, Ш), 6,77 (д, J= 2,0 Гц, Ш), 6,72 (д, J= 2,0 Гц, Ш), 3,86 (с, ЗН). 13С ЯМР (101 МГц, ацетон-^б) 5 161,3, 141,9, 134,3, 130,6, 128,8, 125,6, 124,2, 121,9, 118,7 (д,7 = 17,9 Гц), 118,1 - 117,4 (м), 110,7 (д, 7=22,1 Гц), 110,2, 38,0. 19F ЯМР (377 МГц, ацетонч &) 5 -140,2 - -140,4 (м), -147,9 - -148,1 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C18H16F2N3O3S: 392,0880, обнаружено: 392,0872.
4-(циклопентансульфонамидо)-УУ-(3,4-дифторфенил)-1 -метил- Ш-пиррол-2-карбоксамид (37)
К раствору 4-амино-/У-(3,4-дифторфенил)-1 -метил-Ш-пиррол-2-карбоксамида 35 (50 мг, 0,2 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли циклопентилсульфонилхлорид (51 мкл, 0,4 ммоль) и Et3N (40 мкл, 0,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (30 мл). После экстрагирования с ЕЮ Ас (3x30 мл), объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс =1:1 об./об.) с получением соединения 37 (56%, 43 мг, 0,1 ммоль). ХНЯМР (400 МГц, ацетонч &) 5 9,43 (с, Ш), 8,07 (с, Ш), 8,06 - 7,71 (м, Ш), 7,54 - 7,40 (м, Ш), 7,37
- 7,12 (м, Ш), 6,93 (с, Ш), 6,88 - 6,84 (м, Ш), 3,93 (с, ЗН), 3,66 - 3,43 (м, Ш), 1,99 - 1,93 (м, ЗН), 1,79 - 1,68 (м, 2Н), 1,67 - 1,55 (м, 2Н). 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^б) 5 -140,2 - -140,4 (м), -148,0 - -148,1 (м). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C17H20F2N3O3S: 384,1193, обнаружено: 384,1186.
4-(2-(((Ш-1,2,3-триазол-4-ил)метил)амино)-2-оксоацетил)-7У-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид (38)
К раствору 7а в смеси ACN/H2O (2 мл, 1:1) добавляли азид натрия (26 мг, 0,4 ммоль), CUSO4.5H2O (5 мг) и аскорбат натрия (12 мг). Реакционную смесь нагревали при 150 °С под микроволновым излучением в течение 1 часа. Раствор разбавляли ЕЮ Ас и промывали водой. Органический слой сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя ДХМ/МеОН (95:5), с получением 38 с выходом 41% (23 мг). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H19F2N6O3: 417,1487, обнаружено: 417,1476.
Реагенты и условия: a) Mel, КОН, ДМСО; b) NaOH, ЕЮН, 100 °С, 6 ч.; с) 3,4-дифторанилин, НАШ, ДИПЕА, ДМФА, 60 °С; d) этилоксалилхлорид, А1С13, ДХМ, 0 °С
комн. т-ра, 16 ч.; е) NaOH, ЕЮН, комн. т-ра, 1 ч.; f) амин, CDI, ДМФА, ДХМ, комн. т-ра, 1 ч.
1,3,5-триметил-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота (39)
К раствору 2 (3 г, 72 ммоль) в ЕЮН (100 мл) добавляли 20% NaOH (70 мл). Реакционную смесь нагревали при 100 °С в течение 6 часов. ЕЮН выпаривали под вакуумом и промывали смесь ДХМ (3x30 мл). Водный слой осторожно подкисляли до рН 3-4 с помощью 1 М НС1. Смесь экстрагировали ДХМ (3 х 30 мл). Объединенные органические слои сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали холодным Et20 с получением 39 с выходом 61% (6,7 г) в виде розового твердого вещества. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) 5 11,88 (с, Ш), 5,75 (с, Ш), 3,68 (с, ЗН), 2,19 (с, ЗН), 2,15 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C8Hi2N02: 154,1, обнаружено: 154,5.
№(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-1Н-пиррол-2-карбоксамид (40) К раствору 39 (2,9 г, 18,9 ммоль) в ДМФА (20 мл) добавляли 3,4-дифторанилин (4,5 мл, 22,7 ммоль), HATU (8,6 г, 22,7 ммоль) и ДИПЕА (6,6 мл, 37,8 ммоль) при 0 °С. Смесь нагревали при 60 °С в течение 2 дней. Затем реакционную смесь разбавляли EtOAC и промывали 1 М НС1, водой и насыщенным солевым раствором. Органические слои сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя гексаны/ЕЮАс (8:2), с получением 40 с выходом 37% (1,85 г). ХН ЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 7,76 - 7,65 (м, Ш), 7,19 - 7,07 (м, 2Н), 5,80 (с, Ш), 3,77 (с, ЗН), 2,38 (с, ЗН), 2,24 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C14H14F2N2O: 264,1, обнаружено: 265,5.
2-(5-((3,4-дифторфенил)карбамоил)-1,2,4-триметил-1Н-пиррол-3-ил)-2-оксоуксусной кислоты (42)
К раствору 40 (860 мг, 3,26 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавляли этилоксалилхлорид (980 мкл, 8,80ммоль) и А1СЬ (1,08 г, 8,15 ммоль) при 0 °С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и выливали в дробленый лед. Смесь экстрагировали ДХМ и фильтровали объединенные органические слои на целите. Фильтрат концентрировали, а полученный остаток использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. К раствору неочищенного 41 в ЕЮН добавляли 10% NaOH (25 мл). Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. ЕЮН выпаривали под вакуумом и экстрагировали смесь ЕЮ Ас (3x10 мл). Водный слой подкисляли 1 М НС1. Смесь экстрагировали ЕЮ Ас (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили
над MgS04 и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали Et20 с получением 42 с выходом 59% (646 мг) за две стадии. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСОч/б) 5 14,13 (с, Ш), 10,46 (с, Ш), 8,04 - 7,71 (м, Ш), 7,59 - 7,28 (м, 2Н), 3,60 (с, ЗН), 2,46 (с, ЗН), 2,26 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C16H15F2N2O4: 337,1, обнаружено: 337,5.
Общий способ синтеза 43-48
К раствору 42 (40 мг, 0,119 ммоль) в смеси ДМФА/ДХМ (2 мл, 1:1) добавляли CDI (29 мг, 0,178 ммоль) при комнатной температуре. Через 15 минут добавляли амин (0,178 ммоль) и перемешивали смесь в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли ЕЮ Ас и промывали Н2О (3x5 мл). Органический слой сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя ДХМ/МеОН (98:2), с получением соединений 43-48.
К-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(пиридин-2-иламино)ацетил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид (43)
Выход: 69%. *НЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 9,33 (с, Ш), 8,45 - 8,38 (м, Ш), 8,30 (д, J= 8,3 Гц, Ш), 7,85 - 7,67 (м, 2Н), 7,49 (с, Ш), 7,22 - 7,12 (м, ЗН), 3,75 (с, ЗН), 2,45 (с, ЗН), 2,44 (с, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C21H19F2N4O3: 413,1425, обнаружено: 413,1416.
К-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-оксоацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (44)
Выход: 74%. *НЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 8,98 (с, Ш), 7,80 - 7,69 (м, Ш), 7,43 - 7,32 (м, Ш), 7,13 (дт, J= 10,0, 8,8 Гц, Ш), 3,72 - 3,67 (м, 2Н), 3,66 (с, ЗН), 3,32 (дд, J = 5,9, 4,1 Гц, 2Н), 2,46 (т, J= 5,2 Гц, 2Н), 2,42 (с, ЗН), 2,35 (т, J= 5,1 Гц, 2Н), 2,31 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+расч. для C21H25F2N4O3: 419,1895, обнаружено: 419,1886.
' )
4-(2-(диэтиламино)-2-оксоацетил)-К-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-1Н-пиррол-2-карбоксамид (45)
Выход: 71%. *НЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 9,07 (с, Ш), 7,87 - 7,73 (м, Ш), 7,45 - 7,36 (м, Ш), 7,13 (дт, 7 = 10,0, 8,8 Гц, Ш), 3,66 (с, ЗН), 3,48 (к, 7= 7,1 Гц, 2Н), 3,22 (к, 7 = 7,0Гц, 2Н), 2,42 (с, ЗН), 2,31 (с, ЗН), 1,21 (т, 7= 7,1 Гц, ЗН), 1,14 (т, 7= 7,0 Гц, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H24F2N3O3: 392,1786, обнаружено: 392,1776.
NH /> -NH
4-(2-((1Н-бензо[с11имидазол-2-ил)амино)-2-оксоацетил)-К-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид (46)
Выход: 46%. *НЯМР (400 МГц, ДМСО-^е) 5 12,42 (с, 2Н), 10,45 (с, Ш), 8,03 - 7,76 (м, Ш), 7,56 - 7,38 (м, 4Н), 7,18 (дд, 7= 5,9, 3,2 Гц, 2Н), 3,61 (с, ЗН), 2,45 (с, ЗН), 2,27 (с, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C23H20F2N5O3: 452,1534, обнаружено: 452,1525.
К-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-((пиридин-2-илметил)амино)ацетил)-1 Н-пиррол-2-карбоксамид (47)
Выход: 55%. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-^е) 5 10,42 (с, Ш), 9,28 (т, 7= 6,1 Гц, Ш), 8,53 (д, 7= 4,8 Гц, Ш), 7,94 - 7,77 (м, 2Н), 7,46 - 7,41 (м, 2Н), 7,38 (д, 7= 8,0 Гц, Ш), 7,34 - 7,26 (м, Ш), 4,50 (д, 7= 5,9 Гц, 2Н), 3,59 (с, ЗН), 2,38 (с, ЗН), 2,21 (с, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C22H21F2N4O3: 427,1582, обнаружено: 427,1572.
N-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-(((1 -метил-1 Н-имидазол-2-ил)метил)амино)-2-оксоацетил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид (48)
Выход: 63%. *НЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 8,48 (с, 2Н), 7,77 - 7,66 (м, Ш), 7,26 - 7,20 (м, Ш), 7,13 (дт, J= 9,9, 8,7 Гц, Ш), 6,93 (д, J= 1,3 Гц, Ш), 6,85 (д, J= 1,3 Гц, Ш), 4,53 (д, J= 5,7 Гц, 2Н), 3,72 (с, ЗН), 3,64 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН), 2,24 (с, ЗН). МСВР (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C21H22F2N5O3: 430,1691, обнаружено: 430,1681.
53 R= F-(\ /У\-N-^
а) анилин, НАШ, ДИПЕА, ДМФА, 60 °С, 16 ч.; Ь) этилоксалилхлорид, А1С13, ДХМ, 0 °С - комн. т-ра, 16 ч.; с) NaOH, ЕЮН, комн. т-ра, 1 ч.; d) амин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, комн. т-ра, 2 ч.
1,3,5-триметил-М-фенил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид (49)
К раствору 39 (2,0 г, 13 ммоль) в ДМФА (50 мл) добавляли анилин (2,4 мл, 26 ммоль), HATU (5,93 г, 15,6 ммоль) и ДИПЕА (4,5 мл, 26 ммоль) при 0 °С. Смесь нагревали при 60 °С в течение 2 дней. Затем реакционную смесь разбавляли ЕЮ Ас и промывали 1 М НС1, водой и насыщенным солевым раствором. Органические слои сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя гексаны/ЕЮАс (8:2), с получением 49 с выходом 58% (1,72 г). ЧТЯМР (400 МГц,
ДМСО-Ое) 5 9.60 (с, Ш), 7,68 (д, J= 8,0 Гц, 2Н), 7,31 (т, J= 7,7 Гц, 2Н), 7,04 (т, J= 7,4 Гц, Ш), 5,73 (с, Ш), 3,57 (с, ЗН), 2,17 (с, 6Н). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C14H17N2O: 229,1, обнаружено: 229,5.
2-оксо-2-(1,2,4-триметил-5-(фенилкарбамоил)-Ш-пиррол-3-ил )уксусная кислота
К раствору 49 (695 мг, 3,05 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавляли этилоксалилхлорид (916 мкл, 8,23 ммоль) и А1СЬ (1,01 г, 7,62 ммоль) при 0 °С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и выливали в дробленый лед. Смесь экстрагировали ДХМ и фильтровали объединенные органические слои на целите. Фильтрат концентрировали, и полученный остаток использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. К раствору неочищенного 50 в ЕЮН добавляли 10% NaOH (30 мл). Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. ЕЮН выпаривали под вакуумом и промывали смесь ЕЮ Ас (3x10 мл). Водный слой подкисляли с помощью 1 М НС1. Смесь экстрагировали ЕЮ Ас (3 х 10 мл). Объединенные органические слои сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали Et20 с получением 51 с выходом 70% (642 мг) за две стадии. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-^б)
5 14,18 (с, Ш), 10,26 (с, Ш), 7,71 (д,7 = 8,0 Гц, 2Н), 7,35 (r,J = 7,8 Гц, 2Н), 7,10 (тд,7 = 7,4, 1,1 Гц, Ш), 3,61 (с, ЗН), 2,46 (с, ЗН), 2,26 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C16H17N2O4: 301,1, обнаружено: 301,5.
Общий способ синтеза соединений 52 и 53
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(пиридин-2-иламино)ацетил)-^фенил- Ш-пиррол-2-карбоксамид (52)
К раствору of 51 (50 мг, 0,17 ммоль) в ДМФА (2 мл) добавляли амин (0,25 ммоль), HATU (76 мг, 0,20 ммоль) и ДИПЕА (58 мкл, 0,33 ммоль) при 0 °С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем раствор разбавляли EtOAc и промывали водой и насыщенным солевым раствором. Органические слои сушили над MgS04 и концентрировали in vacuo. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя ДХМ/МеОН (98:2), с получением требуемых соединений 52 и 53.
Выход: 75%. *НЯМР (400 МГц, хлороформ-йО 5 9,47 (с, Ш), 8,43 - 8,35 (м, Ш), 8,30 (д, J= 8,3 Гц, Ш), 7,86 - 7,74 (м, Ш), 7,68 - 7,57 (м, ЗН), 7,46 - 7,34 (м, Ш), 7,22 - 7,10 (м, 2Н), 3,73 (с, ЗН), 2,44 (с, ЗН), 2,43 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C21H21N4O3: 377,2, обнаружено: 377,4.
N==/ NH О
4-(2-((5 -фторпиридин-2-ил)амино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-М-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид (53)
Выход: 68%. *НЯМР (400 МГц, ДМСО-^е) 5 11,16 (с, Ш), 10,26 (с, Ш), 8,61 - 8,47 (м, Ш), 8,40 - 8,19 (м, Ш), 7,76 - 7,66 (м, 2Н), 7,34 (дд, 7= 8,5, 7,4 Гц, 2Н), 7,25 (дд, 7 = 8,8, 3,2 Гц, Ш), 7,15 - 7,04 (м, Ш), 3,62 (с, ЗН), 2,44 (с, ЗН), 2,26 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C21H20FN4O3: 395,2, обнаружено: 395,5.
Реагенты и условия: а) амин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, 16 ч., комн. т-ра; или i) SOCb, толуол, ПО °С, 1 ч., ii) амин, DMA, 0 °С, 2 ч.
1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1-иламино)ацетил)-К-(4-(трифторметокси)фенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид (54)
К раствору 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (250 мг, 1,0 ммоль), 4-(трифторметокси)анилина (227 мг, 1,3 ммоль) и ДИПЕА (330 мкл, 2,0 ммоль) в пиридине (10 мл) добавляли HATU (0,65 г, 1,8 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали
этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 54 в виде белого порошка (35%, 141 мг, 0,3 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,51 (с, Ш), 8,17 (с, Ш), 7,95 (д, J= 9,1 Гц, 2Н), 7,36 (д, J = 8,1 Гц, 2Н), 4,17 (дд, J= 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 3,70 (с, ЗН), 2,75 (т, J= 2,5 Гц, Ш), 2,45 (с, ЗН), 2,31 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H19F3N3O4: 422,4, обнаружено: 422,4.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-М-(3 -(трифторметокси)фенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид (55)
К раствору 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (250 мг, 1,0 ммоль), 3-(трифторметокси)анилина (227 мг, 1,3 ммоль) и ДИПЕА (330 мкл, 2,0 ммоль) в пиридине (10 мл) добавляли HATU (0,65 г, 1,8 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 55 в виде белого порошка (34%, 135 мг, 0,3 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,57 (с, Ш), 8,18 (с, Ш), 8,02 (с, Ш), 7,81 - 7,67 (м, Ш), 7,50 (т, J= 8,2 Гц, Ш), 7,16 - 7,06 (м, Ш), 4,17 (дд, J= 5,8, 2,6 Гц, 2Н), 3,71 (с, ЗН), 2,75 (т, J= 2,5 Гц, Ш), 2,45 (с, ЗН), 2,32 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H19F3N3O4: 422,4, обнаружено: 422,4.
N-(2-(3,4-дифторфенил)пропан-2-ил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (56)
I О
К раствору 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль), 2-(3,4-дифторфенил)пропан-2-амина (65 мг, 0,4 ммоль) и ДИПЕА (132 мкл, 0,8 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли НАШ (0,218 г, 0,6 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 56 (38%, 61 мг, 0,1 ммоль). ХНЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 8,11 (с, Ш), 7,59 (с, Ш), 7,47 - 7,38 (м, Ш), 7,37 - 7,31 (м, Ш), 7,26 (дт, 7 = 10,5, 8,5 Гц, Ш), 4,14 (дд, 7 = 5,8, 2,5 Гц, 2Н), 3,53 (с, ЗН), 2,72 (т, 7 = 2,6 Гц, Ш), 2,37 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН), 1,77 (с, 6Н). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C22H24F2N3O3: 416,4, обнаружено: 416,5.
I О
N-( 1 -(3,4-дифторфенил)циклопропил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (57)
К раствору 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (75 мг, 0,3 ммоль), 1-(3,4-дифторфенил)циклопропанамина (50 мг, 0,3 ммоль) и ДИПЕА (100 мкл, 0,6 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли НАШ (0,163 г, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 57 (46%, 55 мг, 0,1 ммоль). ХНЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 8,11 (с, Ш), 8,06 (с, Ш), 7,35 - 7,28 (м, Ш), 7,27 - 7,17 (м, 2Н), 4,13 (дд, 7= 5,8, 2,5 Гц, 2Н), 3,60 (с, ЗН), 2,72 (т, 7= 2,6 Гц, Ш), 2,38 (с, ЗН), 2,23 (с, ЗН), 1,41 -1,30 (м, 4Н). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C22H22F2N3O3: 414,4, обнаружено: 414,5.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-/У-фенил- 1//-пиррол-2-карбоксамид (58)
К раствору 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль), анилина (53 мг, 0,6 ммоль) и ДИПЕА (100 мкл, 0,6 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли HATU (0,163 г, 0,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (ДХМ:МеОН = 98:2 об./об.) с получением соединения 58 в виде желтоватого порошка (66%, 82 мг, 0,2 ммоль). ЧТЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,32 (с, Ш), 8,18 (с, Ш), 7,88 - 7,79 (м, 2Н), 7,44 - 7,32 (м, Ш), 7,20 - 7,08 (м, Ш), 4,16 (дд, J= 5,9, 2,5 Гц, 2Н), 3,69 (с, ЗН), 2,75 (т, J= 2,5 Гц, Ш), 2,44 (с, ЗН), 2,31 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H20N3O3: 338,4, обнаружено: 338,5.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-/У-(4-(пентафторсульф анил)фенил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (5 9)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 4-пентафторсульфаниланилина (167 мг, 0,8 ммоль) в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в 1 н. раствор хлористоводородной кислоты (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл).
Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 59 в виде белого порошка (47%, 83 мг, 0,2 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетон-Ое) 5 9,72 (с, Ш), 8,19 (с, Ш), 8,03 (д, J= 8,8 Гц, 2Н), 7,88 (д, J= 9,3 Гц, 2Н), 4,16 (дд, 7= 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 3,71 (с, ЗН), 2,75 (т, J= 2,5 Гц, Ш), 2,45 (с, ЗН), 2,32 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H19F3N3O4: 464,4, обнаружено: 464,4.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-/У-(3 -(пентафторсульф анил)фенил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (60)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 3-пентафторсульфаниланилина (167 мг, 0,8 ммоль) в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в 1 н. раствор хлористоводородной кислоты (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 60 в виде белого порошка (40%, 71 мг, 0,1 ммоль). ХН ЯМР (400
МГц, ацетон-^) 5 9,68 (с, Ш), 8,54 (с, Ш), 8,20 (с, Ш), 8,00 (м, Ш), 7,63 (м, Ш), 4,16 (дд, J = 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 3,71 (с, ЗН), 2,75 (т, J =2,5 Гц, Ш), 2,45 (с, ЗН), 2,33 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H19F5N3O3S: 464,4, обнаружено: 464,4.
УУ-(6-фторпирид ин-3 -ил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоксамид (61)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в 7У,7У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 6-фторпиридин-3-амина (85 мг, 0,8 ммоль) в 7У,7У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 61 в виде белого порошка (68%, 92 мг, 0,2 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,56 (с, Ш), 8,62 (с, Ш), 8,47-8,36 (м, Ш), 8,18 (с, Ш), 7,14 (дд, J= 8,9, 3,4 Гц, Ш), 4,24-4,15 (м, 2Н), 3,72 (с, ЗН), 2,78 - 2,74 (м, Ш), 2,46 (с, ЗН), 2,34 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C18H18FN4O3: 357,4, обнаружено: 357,4.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-/У-(пиримидин-5-ил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (62)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору пиримидин-5-амина (73 мг, 0,8 ммоль) в/У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 62 в виде белого порошка (31%, 40 мг, 0,1 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,61 (с, Ш), 9,21 (с, 2Н), 8,93 (с, Ш), 8,19 (с, Ш), 4,19 (дд, 7= 5,8, 2,6 Гц, 2Н), 3,75 (с, ЗН), 2,77 (т, J= 2,6 Гц, Ш),
2,47 (с, ЗН), 2,37 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для CnHisNsCb: 340,4, обнаружено: 340,5.
1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)-/У-(пирид ин-4-ил)-\Н-пиррол-2-карбоксамид (63)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в 7У,7У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 4-аминопиридина (53 мг, 0,6 ммоль) в/У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (ДХМ:МеОН = 98:2 об./об.) с получением соединения 63 (71%, 92 мг, 0,3
ммоль). *Н ЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,60 (с, Ш), 8,49 (д, J= 6,5 Гц, 2Н), 8,19 (с, Ш), 7,75 (д, J= 6,5 Гц, 2Н), 4,15 (дд, J= 5,7, 2,5 Гц, 2Н), 3,70 (с, ЗН), 2,74 (т, J= 2,6 Гц, Ш), 2,44 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C18H19N4O3: 339,4, обнаружено:
339,5.
/У-(4-фтор-3 -метилфенил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоксамид (64)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0.4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в 7У,7У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 4-фтор-З-метиланилина (71 мг, 0,6 ммоль) в 7У,7У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 64 в виде белого твердого вещества (67%, 95 мг, 0,2 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетонч/б) 5 9,25 (с, Ш), 8,14 (с, Ш), 7,72 (дд, J= 6,9, 2,5 Гц, Ш), 7,68 - 7,59 (м, Ш), 7,05 (т, J= 9,2 Гц, Ш), 4,15 (дд, 7= 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 3,68 (с, ЗН), 2,73 (т, J= 2,6 Гц, Ш), 2,42 (с, ЗН), 2,28 (с, ЗН), 2,27 (д, J = 2,0 Гц, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H21FN3O3: 370,4, обнаружено: 370,5.
УУ-(3 -циано-4-фторфенил)-1,3,5 -триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1 -иламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоксамид (65)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 5-амино-2-фторбензонитрила (78 мг, 0,6 ммоль) в/У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 65 в виде белого твердого вещества (42%, 61 мг, 0,2 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,61 (с, Ш), 8,32 (дд, 7= 5,7, 2,7 Гц, Ш), 8,16 (с, Ш), 8,13
8,07 (м, Ш), 7,46 (т, 7 = 9,1 Гц, Ш), 4,15 (дд, 7 = 5,8, 2,5 Гц, 2Н), 3,70 (с, ЗН), 2,74 (т, 7 = 2,5 Гц, Ш), 2,44 (с, ЗН), 2,30 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H18FN4O3: 381,4, обнаружено: 381,3.
/У-(3-хлор-4-фторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(проп-2-ин-1-иламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоксамид (66)
Раствор 4-[2-(пропаргиламино)-2-оксоацетил]-1,3,5-триметилпиррол-2-карбоновой кислоты 6 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору З-хлор-4-фторанилина (83 мг, 0,6 ммоль) в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 66 в виде белого твердого вещества (20%, 30 мг, 0,1 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетонч/б) 5
9,45 (с, Ш), 8,29 - 8,03 (м, 2Н), 7,84 - 7,64 (м, Ш), 7,32 (т, 7 = 9,0 Гц, Ш), 4,15 (дд, 7= 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 3,69 (с, ЗН), 2,73 (с, Ш), 2,43 (с, ЗН), 2,29 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H18CIFN3O3: 390,8, обнаружено: 390,4.
Реагенты и условия: a) CDI, анилин, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; b) NaOH 5%, МеОН, 16 ч., комн. т-ра; с) 3,4-дифторанилин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, 16 ч., комн. т-ра.
1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновая кислота
{68}
К раствору 2-(5-этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-З -ил)-2-оксо-уксусной кислоты 4 (2,5 г, 9,9 ммоль) в ДМФА (15 мл) и СШСЬ (10 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (2,4 г, 11,8 ммоль) и анилин (1,35 мл, 9,5 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали СШСЬ (3 х 100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo с получением 67 в виде белого твердого вещества. К неочищенному этил-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)- 1//-пиррол-2-карбоксилату 67, растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, промывали водный раствор этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и снова экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 68 (1,8 г, 6,0 ммоль, 62%). ЧТЯМР (400 МГц, ДМСО-^е) 5 10,79 (с, Ш), 7,75 - 7,67 (м, 2Н), 7,37 (т, J= 7,9 Гц, 2Н), 7,20 - 7,11 (м, Ш), 3,77 (с, ЗН), 2,41 (с, 6Н). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C16H17N2O4: 301,3, обнаружено: 301,4.
7У-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)-Ш-пиррол-2-карбоксамид (69)
К раствору 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(фениламино)ацетил)- Ш-пиррол-2-карбоновой кислоты 68 (200 мг, 0,7 ммоль), 3,4-дифторанилина (129 мг, 1,0 ммоль) и ДИПЕА (231 мкл, 4,3 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли НАШ (304 мг, 0,8 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 50 °С в течение 3 часов. Для полного протекания реакции добавляли дополнительное количество 3,4-дифторанилина (65 мг, 0,5 ммоль) и дополнительно перемешивали смесь в течение ночи при 65 °С. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 69 в виде белого порошка (35%, 110 мг, 0,3 ммоль).
*НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,73 (с, Ш), 9,52 (с, Ш), 8,02 - 7,94 (м, Ш), 7,87 - 7,80 (м, 2Н), 7,56 - 7,48 (м, Ш), 7,43 - 7,36 (м, 2Н), 7,32 (дт, J= 10,6, 9,0 Гц, Ш), 7,20 - 7,13 (м, Ш), 3,70 (с, ЗН), 2,46 (с, ЗН), 2,31 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C22H20F2N3O3: 412,4, обнаружено: 412,5.
Реагенты и условия: a) CDI, морфолин, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; b) NaOH 5%, МеОН, 16ч., комн. т-ра; d) 3,4-дифторанилин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, 16ч., комн. т-ра.
1,3,5-триметил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)-1//-пиррол-2-карбоновая кислота
К раствору 2-(5 -этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-З -ил)-2-оксоуксусной кислоты 4 (0,5 г, 2,0 ммоль) в ДМФА (15 мл) и СШСЬ (10 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (0,53 г, 3,2 ммоль) и морфолин (0,25 мл, 3,2 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали СШСЬ (3 х 100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo с получением 70 в виде желтоватого маслянистого вещества. К неочищенному этил-1,3,5-триметил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)-1//-пиррол-2-карбоксилату 70, растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, промывали водный раствор этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1(рН = 1) и снова экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 1,3,5-триметил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)-1#-пиррол-2-карбоновой кислоты 71 (0,41 г, 1,3 ммоль, 70%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-
ck) 5 12,86 (с, Ш), 3,75 (с, ЗН), 3,71 - 3,63 (м, 2Н), 3,59 - 3,51 (м, 4Н), 3,33 - 3,25 (м, 2Н), 2,44 (с, ЗН), 2,42 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C14H19N2O5: 295,3, обнаружено:
295,4.
N-0,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)- Ш-пиррол-2-карбоксамид (72)
Раствор 1,3,5-триметил-4-(2-морфолино-2-оксоацетил)-Ш-пиррол-2-карбоновой кислоты 71 (100 мг, 0,3 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 3,4-дифторанилина (66 мг, 0,5 ммоль) в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С.
Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (ДХМ:МеОН = 98:2 об./об.) с получением соединения 72 в виде коричневатого твердого вещества (29%, 40 мг, 0,1 ммоль). ЧТЯМР (400 МГц, ацетон-й^) 5 9,53 (с, Ш), 8,03 - 7,93 (м, Ш), 7,58 - 7,44 (м, Ш), 7,33 (дт, J= 10,6, 9,0 Гц, Ш), 3,74 - 3,67 (м, 6Н), 3,66 - 3,61 (м, ЗН), 3,39 (т, J= 4,8 Гц, 2Н), 2,51 (с, ЗН), 2,33 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C20H22F2N3O4: 406,4, обнаружено: 406,5.
I О I О
Реагенты и условия: a) CDI, аллиламин, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; b) NaOH 5%, МеОН, 16 ч, комн. т-ра;
с) 3,4-дифторанилин, НАШ, ДИПЕА, ДМФА, 16ч., комн. т-ра.
4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоновая кислота
К раствору 2-(5 -этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-З -ил)-2-оксоуксусной
кислоты 4 (0,5 г, 2,0 ммоль) в ДМФА (15 мл) и CH2CI2 (10 мл) добавляли 1,Г-
карбонилдиимидазол (0,53 г, 3,2 ммоль) и аллиламин (0,18, 3,2 ммоль). После
перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь
выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали CH2CI2 (3 х 100 мл).
Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in
vacuo с получением 73 в виде белого твердого вещества. К неочищенному этил-4-(2-
(аллиламино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил- 1//-пиррол-2-карбоксилату 73,
растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, промывали водный раствор этилацетатом (2
х 50 мл), подкисляли 1 и. раствором НС1 (рН = 1) и снова экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-Ш-пиррол-2-карбоновой кислоты 74 (270 мг, 1,0 ммоль, 51%). ХН ЯМР (400
МГц, ДМСО-Ое) 5 12,74 (с, Ш), 8,86 (т, J= 5,8 Гц, Ш), 5,99 - 5,66 (м, Ш), 5,36 - 5,05 (м, 2Н), 3,85 - 3,80 (м, 2Н), 3,75 (с, ЗН), 2,36 (с, 6Н). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C13H17N2O4: 265,3, обнаружено: 265,4.
4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1,3,5 -триметил- 1//-пиррол-2-карбоксамид (75)
Раствор 4-(2-(аллиламино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 74 (100 мг, 0,4 ммоль) и тионилхлорида (210 мкл, 2,7 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученный раствор концентрировали in vacuo, солюбилизировали в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) и добавляли к раствору 3,4-дифторанилина (73 мг, 0,6 ммоль) в /У,/У-диметилацетамиде (5 мл) при 0 °С. Смесь перемешивали при 0 °С в течение 2 часов, выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 75 в виде белого твердого вещества (18%, 25 мг, 0,1 ммоль). *Н ЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,48 (с, Ш),
8,09 - 7,94 (м, Ш), 7,89 (с, Ш), 7,59 - 7,48 (м, Ш), 7,32 (дт, J= 10,2, 9,0 Гц, Ш), 6,02 - 5,86 (м, Ш), 5,28 (дд, J= 17,2, 1,6 Гц, Ш), 5,12 (дд, J= 10,2, 1,4 Гц, Ш), 3,99 - 3,94 (м, 2Н), 3,68 (с, ЗН), 2,42 (с, ЗН), 2,28 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H20F2N3O3: 376,4, обнаружено: 376,4.
Реагенты и условия: a) CDI, 2-аминотиазол, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; b) NaOH 5%, МеОН, 16 ч., комн. т-ра; с) 3,4-дифторанилин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, 16 ч., комн. т-ра.
ЬЗ,5-триметил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновая кислота(77)
К раствору 2-(5 -этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-З -ил)-2-оксоуксусной кислоты 4 (2,0 г, 7,9 ммоль) в ДМФА (15 мл) и СШСЬ (10 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (1,92 г, 11,8 ммоль) и 2-аминотиазол (0,95 г, 9,5 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, фильтровали через пористый фильтр, сушили под вакуумом с получением 76 в виде желтого твердого вещества. К неочищенному этил-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоксилату 76, растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, промывали водный слой этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и снова экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 77 (1,9 г, 6,1 ммоль, 78%) в виде
желтого твердого вещества. *Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Об) 5 12,96 (с, Ш), 7,58 (с, Ш), 7,38 (с, Ш), 3,77 (с, ЗН), 2,37 (с, ЗН), 2,33 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C13H14N3O4: 308,3, обнаружено: 308,4.
N-0,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)- IH-пиррол-2-карбоксамид (78)
К раствору 1,3,5-триметил-4-(2-оксо-2-(тиазол-2-иламино)ацетил)-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 77 (250 мг, 0,8 ммоль), 3,4-дифторанилина (158 мг, 1,2 ммоль) и ДИПЕА (283 мкл, 1,6 ммоль) в ДМФА (15 мл) добавляли НАШ (0,37 г, 1,0 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 50 °С в течение 3 часов. Для полного протекания реакции добавляли дополнительное количество 3,4-дифторанилина (80 мг, 0,6 ммоль) и дополнительно перемешивали смесь в течение ночи при 65 °С. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (ДХМ:МеОН = 98:2 об./об.) с получением соединения 78 в виде желтоватого порошка (55%, 187 мг, 0,4 ммоль). *НЯМР (400 МГц, ДМСО-Ое) 5 13,01 (с, Ш), 10,47 (с, Ш), 7,88 (дд, J= 13,3, 7,5 Гц, Ш), 7,58 (д, J= 3,6 Гц, Ш), 7,54 - 7,35 (м, ЗН), 3,62 (с, ЗН), 2,41 (с, ЗН), 2,19 (с, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C19H18F2N3O3: 419,4, обнаружено: 419,4.
Реагенты и условия: a) CDI, аминоацетонитрила гидрохлорид, Et3N, ДМФА, 3 ч., комн. т-ра; b) NaOH 5%, МеОН, 16 ч., комн. т-ра; с) 3,4-дифторанилин, HATU, ДИПЕА, ДМФА, 16 ч., комн. т-ра; d)NaN3, ZnBr2, /РгОН, ПО °С, микроволн., 20 мин.
4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-1,3,5 -триметил- 1//-пиррол-2-карбоновая кислота(80)
К раствору 2-(5 -этоксикарбонил-1,3,5-триметилпиррол-З -ил)-2-оксоуксусной кислоты 4 (3,0 г, 11,8 ммоль) в ДМФА (20 мл) и СШСЬ (20 мл) добавляли 1,Г-карбонилдиимидазол (2,3 г, 14,2 ммоль) и 2-аминоацетонитрила гидрохлорид (1,63 г, 17,8 ммоль) и диизопропилэтиламин (4,12 мл, 23,7 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали СШСЬ (3 х 100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo с получением 79 в виде твердого вещества. К неочищенному этил-4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоксилату 79, растворенному в метаноле (10 мл) и ТГФ (10 мл), добавляли 5% раствор гидроксида натрия (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и, после выпаривания метанола и ТГФ in vacuo, промывали водный слой этилацетатом (2 х 50 мл), подкисляли 1 н. раствором НС1 (рН = 1) и снова экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученное твердое вещество промывали
диэтиловым эфиром (50 мл) и гексанами (50 мл) с получением 4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоновой кислоты 80 (0,41 г, 15,5 ммоль, 13%). *НЯМР (400 МГц, ДМСО-Ое) 5 12,79 (с, Ш), 9,46 (с, Ш), 4,32 (д, J= 5,7 Гц, 2Н), 3,76 (с, ЗН), 2,37 (с, ЗН), 2,36 (с, ЗН), МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C12H14N3O4: 264,3, обнаружено: 264,4.
4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоксамид (81)
К 4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-1,3,5-триметил-1//-пиррол-2-карбоновой кислоте 80 (2 г, 7,6 ммоль), 3,4-дифторанилину (1,47 г, 11,4 ммоль) и ДИПЕА (1,98 мл, 11,4 ммоль) в ДМФА (30 мл) добавляли HATU (3,18 г, 8,3 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 65 °С в течение 18 часов. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3 х 150 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Остаток очищали флэш-хроматографией (гексаны:ЕЮАс = 6:4 об./об.) с получением соединения 81 в виде белого порошка (30%, 840 мг, 2,2 ммоль). ХН ЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,52 (с, Ш), 8,52 (с, Ш), 8,09 - 7,90 (м, Ш), 7,58 - 7,45 (м, Ш), 7,40 -7,23 (м, Ш), 4,49 - 4,36 (м, 2Н), 3,74 - 3,65 (м, ЗН), 2,46 - 2,40 (м, ЗН), 2,34 - 2,25 (м, ЗН). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C18H17F2N4O3: 375,3, обнаружено: 375,4.
4-(2-(((2Я-тетразол-5 -ил)метил)амино)-2-оксоацетил)-/У-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил- 1//-пиррол-2-карбоксамид (82)
Азид натрия (26 мг, 0,4 ммоль) и бромид цинка (90 мг, 0,4 ммоль) добавляли к суспензии 4-(2-((цианометил)амино)-2-оксоацетил)-Л^-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил
1//-пиррол-2-карбоксамида 81 (50 мг, 0,1 ммоль) в изопропаноле (2 мл). Смесь нагревали до 110 °С в течение 20 минут под микроволновым излучением. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор карбоната натрия (50 мл) и промывали этилацетатом (3 х 20 мл). Затем водную фазу подкисляли до рН ~ 1 и экстрагировали этилацетатом (3 х 50 мл). Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией (ДХМ/МеОН = 95:5 об./об.) с получением соединения 82 в виде белого порошка (48%, 27 мг, 0,1 ммоль). ЧТЯМР (400 МГц, ДМСО-Ое) 5 10,41 (с, Ш), 9,46 (т, J= 5,8 Гц, Ш), 7,92 - 7,83 (м, Ш), 7,50 - 7,37 (м, 2Н), 4,69 (д, J = 5,7 Гц, 2Н), 3,58 (с, ЗН), 2,33 (с, ЗН), 2,17 (с, ЗН). ЖХМС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C18H18F2N7O3: 418,4, обнаружено: 418,4.
Реагенты и условия: а) 2-бром-1-метил-/#-имидазол, Et3N, ДМФА, Cul, бис(трифенилфосфин)палладия дихлорид, 70 °С, микроволн., 20 мин.
7V-(3,4-дифторфенил)-1,3,5-триметил-4-(2-((3 -(1 -метил- Ш-имидазол-2-ил)проп-2-ин-1-ил)амино)-2-оксоацетил)-1//-пиррол-2-карбоксамид (83)
Соединение 7а (100 мг, 268 мкмоль), 2-бром-1-метил-7//-имидазол (65 мг, 402 мкмоль), триэтиламин (73 мкл, 541 мкмоль) и диметилформамид (2 мл) объединяли в закрытой пробирке. Смесь продували азотом в течение 2 минут и добавляли бис(трифенилфосфин)палладия дихлорид (19 мг, 27 мкмоль), затем йодид меди (10 мг, 53 мкмоль). Смесь снова продували азотом и перемешивали в течение 20 минут при 70 °С под микроволновым излучением. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл), промывали насыщенным раствором хлорида аммония (50 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (ДХМ/МеОН: 96/4) с получением соединения 83 (62 мг, 137 мкмоль, 51%). *НЯМР (400 МГц, ацетон-^) 5 9,51 (с, Ш), 8,35 (с, Ш), 7,99 (ддд, J= 13,2, 7,4, 2,6 Гц, Ш), 7,57 - 7,48 (м, Ш), 7,34 (дт, J= 10,5, 9,0 Гц, Ш), 7,14 (д, J= 1,2 Гц, Ш), 6,92 (д, J= 1,2 Гц, Ш), 4,46 (д, J= 5,8 Гц, 2Н), 3,75 (с, ЗН), 3,70 (с, ЗН), 2,46 (с, ЗН), 2,32
(с, ЗН). 19F ЯМР (377 МГц, ацетон-^) 5 -139,91 - -140,01 (дт, J= 22,1, 11,6 Гц), -147,12 - -147,23 (дт, J = 20,5, 10,4 Гц). МС (ИЭР): m/z [М+Н]+ расч. для C23H22F2N5O3: 454,4, обнаружено: 454,4.
Пример 2
Цитотоксические тесты
Токсичность соединений оценивали на клетках Vero, мононуклеарных клетках периферической крови человека (РВМ), СЕМ (лимфобластоидные клетки человека) МТ-2 и HepG2, как описано ранее (см. Schinazi R.F., Sommadossi J.-P., Saalmann V., Cannon D.L., Xie M.-Y., Hart G.C., Smith G.A. & Hahn E.F. Antimicrob. Agents Chemother. 1990, 34, 106167). В качестве положительного цитотоксического контроля был включен циклогексимид, и необработанные клетки, экспонированные к растворителю, были включены в качестве негативных контролей. IC50 цитотоксичности была получена от кривой концентрация-ответ
с применением медианного эффективного метода, описанного ранее (см. Chou Т.-С. & Talalay P. Adv. EnzymeRegul. 1984, 22, 27-55; Belen'kii M.S. & Schinazi R.F. Antiviral Res. 1994, 25, 1-11). Результаты показаны в Таблице 1 ниже:
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
> 100
Пример 3
Тест митохондриальной токсичности на клетках HepG2:
г) Влияние соединений на клеточный рост и продукцию молочной кислоты: Влияние на рост клеток HepG2 определяли путем инкубации клеток в присутствии 0 мкМ, 0,1 мкМ, 1мкМ, ЮмкМ и 100 мкМ препарата. Клетки (5x104 на лунку) помещались в 12-луночные кассеты для культуры клеток в минимальную поддерживающую среду с заменимыми аминокислотами с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, 1 % натрия пирувата и 1 % пенициллина /стрептомицина и инкубировали в течение 4 дней при температуре 37°С. В конце инкубационного периода определяли число клеток с помощью гемоцитометра. Также указано в Pan-Zhou X-R, Cui L, Zhou X-J, Sommadossi J-P, Darley-Usmer VM. "Differential effects of antiretroviral nucleoside analogs on mitochondrial function in HepG2 cells," Antimicrob. Agents Chemother. 2000; 44:496-503.
Для измерения воздействия соединений на продукцию молочной кислоты клетки HepG2 из исходной культуры разводили и высевали на 12-луночные культуральные
планшеты по 2,5x10^ клеток на лунку. Добавляли различные концентрации соединения (0 мкМ, 0,1 мкМ, 1мкМ, ЮмкМ и 100 мкМ), и культуры инкубировали при 37°С во влажной атмосфере с 5% С02а в течение 4 дней. В день 4 определяли количество клеток в каждой
лунке и собирали культуральную среду. Культуральную среду затем фильтровали и определяли содержание молочной кислоты в среде с применением колориметрического анализа молочной кислоты (Sigma-Aldrich). Поскольку продукт молочная кислота может рассматриваться как маркер нарушения функции митохондрий, повышенные уровни продукции молочной кислоты, выявленные при росте клеток в присутствии испытуемых соединений, будут означать цитотоксический эффект, индуцированный препаратом.
и) Воздействие соединений на ДНК синтез в митохондриях: Был разработан
тест ПЦР в режиме реального времени для точного количественного
определения содержания митохондриальной ДНК (см. Stuyver LJ, Lostia S,
Adams M, Mathew JS, Pai BS, Grier J, Tharnish PM, Choi Y, ChongY, Choo H,
Chu CK, Otto MJ, Schinazi RF. Antiviral activities and cellular toxicities of
modified 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydrocytidine analogs. Antimicrob. Agents
Chemother. 2002; 46: 3854-60). Этот тест был использован во всех
исследованиях, описанных в данной заявке, которые определяют воздействие
соединений на содержание митохондриальной ДНК. В этом тесте клетки
HepG2, прошедшие небольшое количество пассажей, высевали по 5000
клеток/лунку в 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном. В среду
добавляли исследуемые соединения для получения конечных концентраций
0 мкМ, 0,1 мкМ, 1мкМ, ЮмкМ и 100 мкМ. В день 7 культивирования
готовили клеточные нуклеиновые кислоты с применением коммерчески
доступных колонок (RNeasy96kit; Qiagen). Эти наборы очищают РНК и ДНК
вместе и поэтому из колонок элюируется общее количество нуклеиновых
кислот. Ген субъединицы II митохондриального цитохрома с (СОХИ) и ген В-
актина или рРНК были амплифицированы из 5 мкл элюированных
нуклеиновых кислот с использованием мультиплексного протокола
количественной ПЦР с подходящими праймерами и зондами как для целевой,
так и для референтной амплификаций. Для СОХИ были использованы
следующие смысловые, зондовые и антисмысловые праймеры:
соответственно, 5'-TGCCCGCCATCATCCTA-3', 5'-tetrachloro-6-
carboxyfluorescein-TCCTCATCGCCCTCCCATCCC-TAMRA-З' и 5'-
CGTCTGTTATGTAAAGGATGCGT-3'. Для экзона 3 гена В-актина (GenBank
accession number E01094) этими смысловыми, зондовыми и антисмысловыми
праймерами были, соответственно, 5'-GCGCGGCTACAGCTTCA-3', 5'-6-
F АМС АСС ACGGCCGAGCGGGATAMRA-3' и 5'-
TCTCCTTAATGTCACGCACGAT-3'. Праймеры и зонды для гена рРНК
коммерчески доступны от Applied Biosystems. Поскольку для всех генов были получены равные эффективности амплификации, был использован сравнительный СТ-метод для исследования потенциального ингибирования синтеза митохондриальной ДНК. Сравнительный СТ-метод использует арифметические формулы, в которых количество мишени (ген СОХИ) нормализуется по отношению к количеству эндогенного стандарта (ген В-актина или рРНК), и оно является относительным по отношению к калибратору (контроль с отсутствием препарата на день 7). Арифметическая формула для такого подхода дается по 2-ААСТ, где ААСТ равно (СТ для среднего целевого исследуемого образца - СТ для контроля целевого образца) - (СТ для среднего стандартного исследуемого образца - СТ для контроля стандартного образца) (см.Johnson MR, К Wang, JB Smith, MJ Heslin, RB Diasio. Quantitation of dihydropyrimidine dehydrogenase expression by real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Anal. Biochem. 2000; 278:175-184). Снижение количества митохондриальной ДНК в клетках, растущих в присутствии препарата, указывает на митохондриальную токсичность.
Воздействие соединений 7 и 9 на уровни митохондриальной и ядерной ДНК и на
продукцию молочной кислоты оценивалось на клетках HepG2 (14-дневный тест), и данные табулированы ниже в Таблице 2:
Данные показывают, что соединение 7а, как описывается здесь, является нетоксичным вплоть до 25 мкМП, и очень низкая токсичность, подобная негативному контролю ЗТС, наблюдалась даже при 50 мкМ.
Пример 4
Тесты митохондриальной токсичности на клетках Neurol А
Для оценки потенциала соединений данного изобретения вызывать нейрональную токсичность в качестве модельной системы могут быть использованы мышиные клетки Neuro2A (American Type Culture Collection 131) (см. Ray AS, Hernandez-Santiago В I, Mathew JS, Murakami E, Bozeman C, Xie MY, Dutschman GE, Gullen E, Yang Z, Hurwitz S, Cheng YC, Chu CK, McClure H, Schinazi RF, Anderson KS. Mechanism of anti-human immunodeficiency virus activity of beta-D-6-cyclopropylamino-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxyguanosine. Antimicrob. Agents Chemother. 2005, 49, 1994-2001). Концентрации, необходимые для угнетения роста клеток на 50 % (CCso), можно измерить с использованием теста, основанном на красителе 3-(4,5-диметил-тиазол-2-ил)-2,5- дифенилтетразолия бромида, как описано. Нарушения уровней клеточной молочной кислоты и митохондриальной ДНК при определенных концентрациях препарата могут быть выполнены как описано выше. В качестве контрольных аналогов нуклеозидов могут использоваться ddC и AZT.
Пример 5
Тест костномозговой цитотоксичности
Первичные мононуклеарные клетки костного мозга человека можно получить коммерческим путем от Cambrex Bioscience (Walkersville, MD). Тесты CFU-GM проводятся с применением двухслойного мягкого агара в присутствии 50 единиц/мл человеческого рекомбинантного гранулоцитарно/макрофагального колоние-стимулирующего фактора, в то время, как тесты BFU-E используют этилцеллюлозный матрикс, содержащий 1 единицу/мл эритропоэтина (см. Sommadossi JP, Carlisle R. Toxicity of 3'-azido-3'-deoxythymidine and 9-(l,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guanine for normal human hepatopoietic progenitor cells in vitro. Antimicrob. Agents Chemother. 1987; 31:452-454; Sommadossi, JP, Schinazi, RF, Chu, CK, and Xie, MY. Comparison of cytotoxicity of the (-) and (+) enantiomer of 2',3'-dideoxy-3'-thiacytidine in normal human bone marrow progenitor cells. Biochem. Pharmacol. 1992; 44:1921- 1925). Каждый эксперимент может быть проведен в двух повторах на клетках от трех разных доноров. В качестве положительного контроля используется AZT. Клетки могут быть инкубированы в присутствии соединения в течение 14-18 дней при 37°С с 5 % С02, и колонии размером более 50 клеток могут быть подсчитаны с применением инвертированного микроскопа для определения IC50- 50% ингибиторная
концентрация (1С50) может быть получена методом линейного регрессионного анализа с наименьшими квадратами логарифма концентрации препарата по сравнению с жизнеспособными фракциями BFU-E. Статистический анализ может быть проведен при помощи теста Стьюдента для независимых непарных образцов.
Пример 6
Тест анти-ВГВ
Анти-ВГВ активность соединений определялась путем обработки клеточной линии AD-38, несущей ВГВ дикого типа под контролем тетрациклина (см. Ladner S.K., Otto M.J., Barker C.S., Zaifert К., Wang G.H., Guo J.T., Seeger C. & King R.W. Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41, 1715-20). Удаление тетрациклина из среды [Tet (-)] приводит к продуцированию ВГВ. Уровни ВГВ в культуральной надосадочной жидкости от клеток, обработанных соединениями, сравнивали с необработанными контролями. Также поддерживались контрольные культуры с тетрациклином [Tet (+)] для определения базовых уровней экспрессии ВГВ. ЗТС была включена как положительный контроль.
Диапазоны медианных эффективных концентраций (ЕС50) нескольких соединений, описываемых здесь в отношении ВГВ, показаны в Таблице 3:
А=1-9 мкМ
В=0,1-0,9 мкМ
С=0,01-0,09 мкМ
D = 0,001-0,009 мкМ
Е = 0,0001-0,0009 мкМ
зтс
Пример 7
В клетках HepAD38 продукция секретируемого HBeAg, в основном, зависит от кзкДНК и поэтому может служить в качестве модельного маркера для (Ladner, S.K., Otto, M.J., Barker, C.S., Zaifert, К., Wang, G.H., Guo, J.T., Seeger, C, King, R.W. Antimicrob Agents Chemother 1997, 41, 1715-1720; Zhou T, Guo H, Guo JT, Cuconati A, Mehta A, Block TM. Antiviral Res. 2006; 72 (2): 116-24.). Воздействие на уровни образования кзкДНК оценивалось с использованием теста, основанного на клетках, который измеряет ВГВ е антиген (HBeAg) в качестве маркера, зависимого от кзкДНК в системе HepAD38. Клетки HepAD38 высевали по 50000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном, со средой DMEM/F12 (Life Technologies) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, инактивированной нагреванием. Клетки по потребности обрабатывали 0,3 мкг/мл тетрациклина. Исследуемые соединения и контроли добавляли к клеткам до конечной концентрации 10 мкМ или дозозависимым образом в диапазоне от
0,001 до 10 мкМ. В культуре каждые 5 дней меняли среду и пополняли исследуемыми соединениями. Супернатанты собирали на день 14, осветляли центрифугированием при 5000 об./мин. в течение 5 мин. и хранили при минус 70°С до употребления. ELISA -Культуральную среду разводили 1:15 в DMEM/F12 и уровни HBeAg, секритируемого в культуральную среду, измеряли при помощи набора HBeAg ELISA (BioChain Institute Inc. Hayward, CA) в соответствии с протоколом производителя. Концентрацию соединения, которая снижала уровни секретируемого HBeAg на 50% (ECso) определяли при помощи линейной регрессии.
Пример 8
Примечательно, что некоторые соединения, которые были синтезированы и продемонстрировали активность против ВГВ in vitro, также неожиданно оказались активными против вируса Западного Нила (ВЗН). ВЗН- это передаваемый комарами зоонозный арбовирус, принадлежащий к роду Flavivirus семейства Flaviviridae. Генетический материал ВЗН шредставляет собой положительно-полярную однонитчатую РНК длиной между 11000 и 12000 нуклеотидов; эти гены кодируют семь неструктурных белков и три структурные белка. Нить РНК содержится в нуклеокапсиде, сформированном из блоков 12-кДа белка; капсид содержится внутри мембраны, происходящей от реципиента, измененной при помощи двух вирусных гликопротеинов.
Противовирусный скрининг с использованием люциферазного репортерного репликона вируса Западного Нила (ВЗН).
Для высокоэффективного скрининга использовали клетки почки новорожденного хомячка (ВНК), содержащие люциферазный репортерный репликон ВЗН (См. Shi PY, Tilgner М, Lo МК. Virology. 2002; 296 (2): 219-33). Гены люциферазы Renilla и резистентности к бластицидину в качестве селектируемого маркерного гена были сконструированы в репликоне для замены вирусных структурных белков. Активности люциферазы измеряли через 48 часов инкубации с применением системы Renilla Luciferase Assay (Promega).
Чувствительность вируса Западного Нила к соединениям, описываемым здесь, также может быть оценена при помощи теста, ранее описанного в: Song, G.Y., Paul, V.,
Choo, H., Morrey, J., Sidwell, R.W., Schinazi, R.F., Chu, CK. Enantiomeric synthesis of D- and L-cyclopentenyl nucleosides and their antiviral activity against HIV and West Nile virus. J. Med. Chem.200\, 44, 3985-3993,
Пример 9
Чувствительность желтой лихорадки к соединениям, описываемым здесь, также может быть протестирована таким образом, как было описано ранее в: Julander, J.G., Furuta, Y., Shafer, К., Sidwell, R.W. Activity of T-1106 in a Hamster Model of Yellow Fever Virus Infection. Antimicrob. Agents Chemother. 2007, 51, 1962-1966.
Пример 10
Чувствительность Денге к соединениям, описываемым здесь, может быть оценена с применением высокоэффективного теста, раскрываемого Lim et al., A scintillation proximity assay for dengue virus NS5 2'-0-methyltransferase-kinetic and inhibition analyses, Antiviral Research, Volume 80, Issue 3, December 2008, Pages 360-369.
Вирус Денге (Dengue virus - DENV) NS5 обладает метилтрансферазной (MTase) активностью на его N-терминальной аминокислотной последовательности и отвечает за образование кэповой структуры 1 типа, m7GpppAm2'-0, в РНК вирусного генома. Оптимальные условия in vitro для активности DENV2 2'-0-MTase могут быть охарактеризованы при использовании очищенного рекомбинантного белка и короткой биотинилированной ГТФ-кэпированной РНК матрицы. Для тестирования соединений могут быть использованы стационарные кинетические параметры, полученные из первоначальных скоростей для установления надежного сцинтилляционного анализа сближения. Исследования предварительной инкубации Lim et al., Antiviral Research, Volume 80, Issue 3, December 2008, Pages 360-369, показали, что комплексы MTase-AdoMet и MTase-PHK были одинаково каталитически компетентны и фермент поддерживает механизм случайного выбора кинетики по принципу "пинг-понг". Lim подтвердил правильность теста при помощи агентов конкурентного ингибирования - S-аденозил-гомоцистеина и двух гомологов - синефунгина и дегидросинефунгина. Ранее было постулировано, что ГТФ-связывающий карман, присутствующий на N-терминальном конце MTase DENV2, является участком связывания кэпа. Этот тест позволяет проводить быстрое и очень чувствительное выявление активности 2'-0-MTase и может быть легко адаптирован для высокоэффективного скрининга ингибиторных соединений. Он также подходит для определения ферментных активностей широкого разнообразия метилтрансфераз, кеппирующих РНК.
Пример 11
Анти-норовирусная активность
Соединения могут проявлять активность против норовируса путем ингибирования норовирусной полимеразы и/или хеликазы, путем ингибирования других ферментов, необходимых для репликационного цикла, или другими путями.
В настоящее время не существует утвержденного лечения инфекции Норовирусом и это, по меньшей мере частично, может быть связано с отсутствием в наличии системы культуры клеток. Недавно была разработана система репликона для оригинального штамма Norwalk G-I (Chang, К. О., et al. (2006) Virology 353:463-473).
Как репликоны Норовируса, так и репликоны Гепатита С для своей функциональности нуждаются в вирусной хеликазе, протеазе и полимеразе для осуществления репликации репликона. Совсем недавно появилось сообщение о тесте на инфицирующую способность в клеточной культуре in vitro с применением инокулята Норовируса геногруппы I и II (Straub, Т. М. et al. (2007) Emerg. Infect. Dis. 13(3):396-403). Этот тест проводится в биореакторе с вращающимися стенками с применением эпителиальных клеток тонкого кишечника на гранулах-микроносителях. Тест на инфицирующую способность может использоваться для скрининга ингибиторов проникновения в клетку.
Пример 12
Активность против Чикунгунъи
Активность против Чикунгуньи может быть оценена согласно изложенному в "Anti-Chikungunya Viral Activities of Aplysiatoxin-Related Compounds from the Marine Cyanobacterium Trichodesmium erythraeum" Gupta, D. K.; Kaur, P.; Leong, S. Т.; Tan, L. Т.; Prinsep, M. R.; Chu, J J. H. Mar Drugs. Jan 2014; 12(1): 115-127; 10.3390/mdl2010115 и цитируемым в нем ссылкам.
Пример 13
Анти-BYC активность
Анти-ВГС активность соединений, описываемых здесь, может быть измерена, например, путем использования анализа репликона ВГС как описано, например, в Stuyver L et al., Ribonucleoside analogue that blocks replication or bovine viral diarrhea and hepatitis С viruses in culture. Antimicrob. Agents Chemother. 2003, 47, 244-254.
В этом тесте клон В клеток Huh 7, содержащий РНК репликона ВГС, может быть высеян в 96-луночный планшет по 5000 клеток/лунку, и соединения исследуются при 10 мкМ в тройном повторе сразу после посева. После инкубации в течение 5 дней (37°С, 5%
С02) общая клеточная РНК может быть выделена путем использования набора для очистки РНК versaGene от Gentra. РНК репликона и внутренний контроль (контрольные реагенты TaqMan рРНК, Applied Biosystems) могут быть амплифицированы в одноэтапном мультиплексном тесте полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой RT-PCR в реальном времени. Противовирусную эффективность соединения можно рассчитать, вычитая пороговый цикл RT-PCR тестируемого соединения из порогового цикла RT-PCR, не содержащего препарат (ACt ВГС). ACt, составляющий 3,3, равен снижению на 1 логарифм (равно уменьшению исходного материала на 90%) в уровнях РНК Репликона. Цитотоксичность соединений также можно рассчитать, применяя значения ACt рРНК. В качестве положительного контроля может быть использован 2'-С-Ме-С. Для определения значений ЕСэо и IC50, ACt: значения сначала следует конвертировать в фракцию исходного материала и затем использовать для расчета процента ингибирования.
Чтобы конкретно посмотреть, ингибируют ли соединения ВГС NS5B, можно использовать тест, описанный в "A complex network of interactions between S282 and G283 of HCV NS5B and the template strand affect susceptibility to Sofosbuvir and Ribavirin," Kulkarni et al., Antimicrob Agents Chemother. 2016 Jan 11. pii: AAC.02436-15.
Пример 14
Анализ образования капсида для использования в мониторинге сборки капсида ВГВ В отсутствие соединений, нарушающих образование капсида, С-терминально усеченный белок сердцевины вируса гепатита В (ВГВ Ср149, белок, выделенный при помощи описанных методов [Zlotnick, A et al;Biochem\996, 35, 7412-7421] в норме собирается в капсид ВГВ Ср149. Целью этого примера было определить, будут ли предполагаемые активные агенты нарушать сборку капсида и, таким образом, быть активными в качестве анти-ВГВ агентов. Предполагаемые активные агенты были инкубированы в концентрации 25 мкМ в течение 1 часа при 4°С с ВГВ Ср149 в концентрации 10 мкМ. Сборка капсида затем продвигалась путем добавления 300 мМ NaCl и хранения смеси в течение ночи при 4°. Затем были получены электронные микрофотографии методом негативного контрастирования с использованием электронного микроскопа JEOL JEM-1400 120 kV с применением уранил ацетата в качестве контрастного агента. Эти изображения показали, образовывались ли капсиды и, если они действительно образовывались, формировали ли они полностью сформированные полые сферы или деформированные (то есть, например, неправильно собранные или неполные) сферы.
При обработке несущей средой образование капсида происходит согласно ожидаемому, с образованием полностью сформированных полых сфер с диаметром,
приблизительно, 40 нм. При добавлении соединения GLS4 образование капсида было нарушено, как продемонстрировано образованием относительно больших (около 80-100 нм) неправильно собранных полых сфер. При добавлении Соединения 7а образование капсида было нарушено, как было продемонстрировано образованием относительно небольших (менее, чем, около 40 нм) и плотно упакованных неполных полых сфер. Результаты показаны на Фигуре 1.
Следующим вопросом было, могут ли эти соединения разрушать уже сформированные капсиды. Соответственно, капсиды были сформированы так, как обсуждалось выше (инкубация выделенного ВГВ Ср 149 с 300 MMNaCl, хранение в течение ночи при 4°). Затем капсиды были инкубированы с предполагаемым соединением (в течение ночи при 4°) и были получены электронные микрофотографии. Фигура 2 демонстрирует электронные микрофотографии капсид, инкубированные с несущей средой, с 25 мкМ GLS4 и с 25 мкМ Соединения 7а. Фигура 3 демонстрирует результаты с GLS4, где капсиды были нарушены. Эти микрофотографии показывают, что капсиды были разрушены как разбитая скорлупа яиц. Фигура 4 демонстрирует результаты с Соединением 7а, где концентрация капсидов была четко и значительно снижена, и оставшиеся капсиды были относительно небольшими и плотно упакованными.
В заключение следует подчеркнуть, что в данном документе цитируются различные публикации, раскрытие которых включено путем ссылки во всей их полноте для всех целей.
Настоящее изобретение не должно ограничиваться в объеме конкретными вариантами воплощения, описанными здесь. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к описанным станут очевидными для специалистов в области техники из предшествующего описания и сопровождающих фигур. Такие модификации предназначены для того, чтобы подпадать под действие прилагаемой формулы изобретения.
(I)
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где:
А выбран из группы, состоящей из фенила, шестичленного гетероароматического кольца, содержащего один, два или три атома азота, пятичленного гетероароматического кольца, содержащего один, два или три атома азота, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклического кольца, алкилгетероарила и алкиларила;
В является шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом,
галогеном, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-e алкокси, Ci-e
галогеналкокси, С2-б алкенилом, циано, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом,
алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом,
арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, С2-б алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, С2-б алкенилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, гетероциклилалкилом, С2-б гидроксиалкилом или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, Ci-б алкилом, С i-б галогеналкилом, Ci-б алкокси, С2-б алкенилом, С2-б алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они
могут вместе образовывать Сз-б кольцо, необязательно содержащее гетероатом N, О или S;
группы R' могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном, Ci-б галогеналкилом, Ci-б гидроксиалкилом, гидроксилом, карбоксилом, ацилом, арилом, ацилокси, амино, амидо, карбоксильными производными, алкиламино, диалкиламино, ариламино, алкокси, алкоксиалкилом, арилокси, нитро, циано, сульфоновой кислотой, тиолом, имином, сульфонилом, сульфанилом, сульфинилом, сульфамоилом, сложным эфиром, карбоновой кислотой, амидом, фосфонилом, фосфинилом, фосфорилом, фосфином, сложным тиоэфиром, простым тиоэфиром, галогенангидридом кислоты, ангидридом, оксимом, гидразином, карбаматом, фосфорной кислотой или фосфонатом;
и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
R2 О 9
N-S-i- R2-S-N-!-
м |
X является ^ О или О
R3 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, Сг-б алкенилом или С2-6 алкинилом,
R2 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6
алкинилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом, арилалкилом, шестичленным
кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом,
содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О
или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом,
содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О
или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые
независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один
или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; циклоалкилом,
алкилгетероарилом или алкиларилом;
R2 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо
является галогеном, CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6
алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом,
алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом,
арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3,
гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, C2.
6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-6
алкила, и
R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, 3-8-членное насыщенное кольцо или 5-членное ненасыщенное кольцо; указанные бициклические, мостиковые, насыщенные и ненасыщенные кольца необязательно содержат один или более дополнительных гетероатомов, каждый из которых независимо является О, S или N, и являются необязательно замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном (включая F, CI, Br, I), СРз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
2. Соединение следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
С является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкиларилом или алкилгетероарилом;
D является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
Y является
R4 является H, Ci-6 алкилом, Ci-6 галогеналкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом;
R5 является алкиларилом, арилалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S;
R5 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, С i-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-6 алкила,
причем, если С является фенилом, D не является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, или если С является фенилом, и D является фенилом или 5-членным кольцевым гетероарилом, то R5 не является алкиларилом, алкенилом или шестичленным мостиковым кольцом;
R4 О \ и
N-S-
5 II ¦
или если Y является О , то R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они
присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, СТз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Сье алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что D является R R , где R является
Н, CI, F или Вг, и R7 является Н, метилом, F или О.
4. Соединение следующей формулы:
(III)
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими,
как определено в отношении Формулы I, и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
Е является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, каждый из которых независимо является N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
F является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
R8 О О
II I м Н I
N-S-г Rg-S-N-f
и |
? 9
Z является О или О
R8 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R9 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или трехчленным кольцом;
R9 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, С i-б галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила
и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2. 6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-6 алкила, и
R8 и R9 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, СТз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С i-б алкокси, циано, азидо, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
5. Соединение следующей формулы:
(IV)
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где
G является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
Н является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным неароматическим кольцом, необязательно содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или С4-14 бициклическим кольцом;
если R1 и R1 присоединены к атому углерода, они независимо являются водородом, галогеном, CF3, гидрокси, SF5, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Си, алкокси, циано, С2-б алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-6 галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом;
если R1 и R1 присоединены к атому азота, они независимо являются водородом, Ci-6 алкокси, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, карбонилалкилом, карбониларилом, Ci-б алкилом, С2-6 алкинилом, С2-6 алкенилом, гетероциклилалкилом, Ci-б гидроксиалкилом или S(0)2R';
каждый R' независимо является Н, Ci-б алкилом, С i-б галогеналкилом, Ci-б алкокси, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, Сз-б циклоалкилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом или арилалкилом, или если два R' расположены у одного и того же атома азота, они могут вместе образовывать Сз-б алкильное кольцо, необязательно содержащее N, О или S; где группы R' могут быть замещены одним или более Ci-6 гидроксиалкильными, аминоалкильными или алкоксиалкильными заместителями;
и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R11 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом, арилалкилом, фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; трехчленным кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом; где R11 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, Ci-6 галогеналкокси, C2-6 алкенила, циано, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-6 гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила
выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила;
R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый или насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, СТз, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
6. Соединение следующей формулы:
о 1'v
(V)
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
I является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, С4-14 бициклическим кольцом; алкилгетероарилом или алкиларилом;
J является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; или четырехчленным
W является U ,
R12 является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R13 является С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом, алкиларилом, арилалкилом, С4-14 бициклическим кольцом; или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, R13 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, СТз, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Си, алкокси, Ci-6 галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, циклоалкила, арилалкоксикарбонила, карбоксила, галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-б гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из
галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6
алкокси, циано, азидо, C2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила, или
R12 и R13 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-4-членное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена (F, О, Вг, I), CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-e алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-6 алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-б гидроксиалкила.
7. Соединение следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
К является шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S; С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом;
L является пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О или S, шести- или семичленным кольцом, или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, или С4-14 бициклическим кольцом,
W является
R является Н, Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-6 алкенилом или С2-6 алкинилом, R15 является С i-б алкилом, С i-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О или S, семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se;
R15 необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо являются
галогеном, CF3, SF5, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, Ci-6
галогеналкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, С i-б алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом; или необязательно замещен арилом, замещенным арилом, гетероарилом или замещенным гетероарилом, где заместители у замещенного арила
и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2. 6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-6 алкила, или
R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать 6-10-членное бициклическое или мостиковое кольцо, или 3-8-членное насыщенное кольцо; указанный бициклический, мостиковый и насыщенный кольцевой фрагмент необязательно содержит один или более дополнительных гетероатомов, которые независимо являются О, S или N, и необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R\ S(0)2N(R')2, Си, алкокси, циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-6 галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-б гидроксиалкила.
8. Соединение следующей формулы:
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где R1 и R1 являются такими, как определено в отношении Формулы I, и и v независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
М является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se, С4-14 бициклическим кольцом, алкилгетероарилом или алкиларилом,
N является фенилом, шестичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три атома азота, пятичленным гетероароматическим кольцом, содержащим один, два или три гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, О, S и Se, шести- или семичленным кольцом или шести- или семичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S
или Se; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se; или С4-14 бициклическим кольцом,
V является О или О ; и
R16 является Ci-б алкилом, Ci-б галогеналкилом, С2-8 алкоксиалкилом, С2-6 алкенилом, С2-6 алкинилом, арилом, гетероарилом, шестичленным кольцом или шестичленным мостиковым или спироконденсированным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se, пятичленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se; четырехчленным кольцом, содержащим ноль, один или два гетероатома, которые независимо являются N, О, S или Se; алкиларилом, арилалкилом, алкилгетероарилом или алкиларилом,
где R16 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, Ci-6 галогеналкокси, C2-6 алкенила, циано, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила, Ci-6 гидроксиалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, где заместители у замещенного арила и замещенного гетероарила выбраны из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила и Ci-б алкила.
9. Соединение по п. 6, отличающееся тем, что R12 является С2-6 алкинилом.
10. Соединение по п. 7, отличающееся тем, что R14 является С2-6 алкинилом.
11. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства. Соединение, выбранное из группы, состоящей из
и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.
Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R2 необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R\ S(0)2R', S(0)2N(R')2, С1-6 алкокси, циано, азидо, С2-6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-б алкилом,
арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-6 галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
15. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что R5 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Сье алкокси, циано, азидо, С2.6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом или гетероциклилалкилом.
16.
Соединение по п. 15, отличающееся тем, что D является
, где R6
является Н, CI, F или Вг, и R является Н, метилом, F или О.
17. Соединение по п. 3, отличающееся тем, что R9 необязательно замещен одним или более заместителями, каждый из которых независимо является галогеном, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Сье алкокси, циано, азидо, С2.6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
18. Соединение по п. 5, отличающееся тем, что R11 необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Ci-6 алкокси, С2-б алкенила, циано, С2. 6 алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-6 алкила, арилалкоксикарбонила, карбокси, Ci-б галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-б гидроксиалкила.
19. Соединение по п. 6, отличающееся тем, что R13 необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из водорода,
галогена, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, C(0)R', Ci-6 алкокси,
циано, азидо, С2-б алкинила, Сз-б алкоксиалкила, алкоксикарбонила, алкоксикарбонилалкила, Ci-б алкила, циклоалкила, арилалкоксикарбонила, карбоксила, галогеналкила, гетероциклилалкила и Ci-б гидроксиалкила. 20. Соединение по п. 7, отличающееся тем, что R15 необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо являются галогеном (F, CI, Br, I), SF5, CF3, гидрокси, N(R')S(0)2R', S(0)2R', S(0)2N(R')2, Сье алкокси, циано, азидо, С2.6 алкинилом, Сз-б алкоксиалкилом, алкоксикарбонилом, алкоксикарбонилалкилом, Ci-6 алкилом, циклоалкилом, арилалкоксикарбонилом, карбокси, Ci-б галогеналкилом, гетероциклилалкилом или Ci-б гидроксиалкилом.
21. Соединение по п. 8, отличающееся тем, что R является незамещенным.
22. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп. 1-21 и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Композиция по п. 22, отличающаяся тем, что указанная композиция является трансдермальной композицией или композицией в форме наночастиц.
24. Фармацевтическая композиция по п. 22, отличающаяся тем, что дополнительно содержит второй противовирусный агент.
25. Фармацевтическая композиция по п. 24, отличающаяся тем, что второй противовирусный агент выбран из группы, состоящей из ингибиторов полимеразы, ингибиторов попадания вируса в клетку, ингибиторов созревания вируса, описанных в литературе модуляторов сборки капсида, ингибиторов инозин-монофосфат-дегидрогеназы (ИМФДГ), ингибиторов протеазы, иммунных терапевтических агентов, ингибиторов обратной транскриптазы, агонистов толл-подобного рецептора (TLR), миРНК, кшРНК, эффекторных нуклеаз, подобных активаторам транскрипции (Talen), Crisper/Cas9, mir (микроРНК), агентов явного или неизвестного механизма, и их комбинаций.
26. Применение соединения по любому из пп. 1-21 при получении лекарственного средства для лечения инфекции ВГВ, предупреждения инфекции ВГВ или снижения биологической активности инфекции ВГВ.
27. Способ лечения реципиента, инфицированного ВГВ, предупреждения инфекции ВГВ, исцеления от инфекции ВГВ или снижения биологической активности инфекции ВГВ у реципиента, включающий введение эффективного количества соединения по любому из пп. 1-21 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
28. Способ по п. 27, отличающееся тем, что дополнительно включает введение другого агента против вируса ВГВ в комбинации или поочередно с соединением по любому из пп. 1-21.
29. Применение соединения по любому из пп. 1-21 при получении лекарственного средства для лечения инфекции вируса Западного Нила, предупреждения инфекции вируса Западного Нила или снижения биологической активности инфекции вируса Западного Нила.
30. Способ лечения реципиента, инфицированного вирусом Западного Нила, предупреждения инфекции вируса Западного Нила или снижения биологической активности инфекции вируса Западного Нила у реципиента, включающий введение эффективного количества соединения по любому из пп. 1-21 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
21.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что дополнительно включает введение соединения по любому из пп. 1-21 в комбинации или поочередно с другим агентом против вируса Западного Нила.
32. Способ лечения реципиента, инфицированного флавивирусами, предупреждения инфекции, вызванной одним из указанных вирусов, или снижения биологической активности инфекции, вызванной одним из указанных вирусов, у реципиента, включающий введение эффективного количества соединения по любому из пп. 1-21 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что дополнительно включает введение соединения по любому из пп. 1-21 в комбинации или поочередно с другим агентом против флавивирусов.
34. Способ по п. 32, отличающийся тем, что указанный вирус выбирают из группы, состоящей из вируса гепатита С (ВГС), лихорадки Денге, вируса Зика и желтой лихорадки.
35. Способ по п. 27, отличающийся тем, что лечение реципиента, инфицированного ВГВ, предупреждение инфекции ВГВ или исцеление от инфекции ВГВ обеспечивает подавление инфекции ВГД.
36. Способ лечения ВГС у пациента с латентной инфекцией ВГВ, включающий введение одного или более анти-ВГС терапевтических средств с одновременным введением соединения по любому из пп. 1-21, причем совместное введение соединения по любому из пп. 1-21 обеспечивает предупреждение рецидива латентной инфекции ВГВ.
21.
Мониторинг сборки капсида ВГВ с применением электронно-микроскопического анализа образования капсида
ВГВ Ср149 10 мкм
Инкубация с 25 мкм Содеинения в течении 1 часа при 4°С
Индуцируют сборку
500 мМ NaCl. 4°С
в течение ночи
ВГВ
Ср149 Капсид
Носитель
-Полностью сформированные полые сферы
-Лиамсто - 30-40 нм
GLS4
-Полые сферы с нарушенной сборкой -Диаметр - 80-100 нм
Неполные полые сферы
-Малое относительное содержание
-Диаметр < 20 нм
I loci I к- и.
(.1 s I
К. .^¦JM-
100 нм
100 нм
ФИГУРА 1
100 нм
Hov.iiк м. , >
(ll SI
,'HE?JI i
¦ииииииш
ФИГУРА 2
(19)
(19)
(19)
(II)
(II)
109
Ill
Ill
112
112
129
129
129
129
135
136
(VI)
137
136
(VI)
137
136
(VI)
138
138
140
140
13.
13.
142
142
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
1/2
|
