|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Среди прочего, настоящее изобретение предусматривает способы и композиции для лечения мышечной дистрофии, в частности мышечной дистрофии Дюшенна (DMD). В некоторых вариантах осуществления способ в соответствии с настоящим изобретением предусматривает введение индивидууму, страдающему DMD или с предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака DMD. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Среди прочего, настоящее изобретение предусматривает способы и композиции для лечения мышечной дистрофии, в частности мышечной дистрофии Дюшенна (DMD). В некоторых вариантах осуществления способ в соответствии с настоящим изобретением предусматривает введение индивидууму, страдающему DMD или с предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака DMD.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
(21) 201891990 (13) A1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2017.03.03
(51) Int. Cl.
C07K14/47 (2006.01) A61P 21/00 (2006.01) A61K 38/17 (2006.01) A61K38/22 (2006.01)
(54)
СЛИТЫЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИСТАТИНА И FC-ФРАГМЕНТА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ДЮШЕННА
(31) 62/303,954
(32) 2016.03.04
(33) US
(86) PCT/US2017/020723
(87) WO 2017/152090 2017.09.08
(88) 2017.10.19
(71) Заявитель:
ШАЙР ХЬЮМАН ДЖЕНЕТИК ТЕРАПИЗ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Искендерян Андреа, Нортон Ангела У., Шэнь Чуань, Пан Кларк (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Среди прочего, настоящее изобретение предусматривает способы и композиции для лечения мышечной дистрофии, в частности мышечной дистрофии Дюшенна (DMD). В некоторых вариантах осуществления способ в соответствии с настоящим изобретением предусматривает введение индивидууму, страдающему DMD или с предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фолли-статина, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака
DMD.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-552189RU/055 СЛИТЫЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИСТАТИНА И FC-ФРАГМЕНТА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ДЮШЕННА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает преимущество в соответствии с предварительной заявкой U.S.S.N. № 62/303954, поданной 4 марта 2016 года, которая в полном своем объеме включена в данный документ посредством ссылки.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Мышечная дистрофия Дюшенна (DMD) представляет собой сцепленное с Х-хромосомой рецессивное расстройство, предположительно поражающее 1:3600 новорожденных мужского пола, и по оценкам во всем мире насчитывается около 50000 пораженных индивидуумов. Расстройство характеризуется прогрессирующим истощением мышц, и пораженные дети становятся прикованными к инвалидным коляскам до достижения ими 13 лет. У пораженных индивидуумов симптомы обычно проявляются в возрасте 3 лет, при этом медиана выживаемости для таких индивидуумов составляет от 25 до 30 лет. Дыхательная недостаточность из-за диафрагмальной слабости и кардиомиопатии является распространенной причиной смерти.
[0003] DMD возникает в результате мутации в гене дистрофина. Ген дистрофина располагается в Х-хромосоме и кодирует белок дистрофии. Белок дистрофии отвечает за соединение механизма сокращения (комплекс актин-миозин) мышечного волокна с окружающим внеклеточным матриксом через дистрогликановый комплекс. Мутации в гене дистрофина приводят либо к изменению, либо к отсутствию белка дистрофина и аномальной мембранной функции сарколеммы. Несмотря на то, что мутацию в гене дистрофина могут нести и мужчины, и женщины, - женщины редко поражаются DMD.
[0004] Одним из характерных признаков DMD является ишемия пораженных тканей. Ишемия ограничивает или понижает подачу крови в ткани или органы, вызывая нехватку кислорода и питательных веществ для клеточного метаболизма. Ишемия обычно вызвана
сужением или обструкцией кровеносных сосудов, что приводит к повреждению или дисфункции ткани или органа. Лечение ишемии направлено на увеличение кровотока к пораженной ткани или органу.
[0005] В настоящее время лечение DMD отсутствует. Было исследовано несколько терапевтических подходов, включая генную терапию и введение кортикостероидов, однако все еще имеется потребность в альтернативах для пациентов с DMD.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Среди прочего, настоящее изобретение предусматривает улучшенные способы и композиции для лечения DMD, основанные на введении слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента. Настоящее изобретение охватывает, inter alia, неожиданное наблюдение того, что определенные аминокислотные модификации в полипептиде фоллистатина дают улучшенный белок фоллистатина, который специфически нацеливается на миостатин и активин А с высокой аффинностью и не связывается с нецелевыми BMP или гепарином с существенной аффинностью. Предполагается, что активация пути Smad2/3 миостатином и активином А приводит к ингибированию экспрессии миогенного белка, и в результате миобласты не дифференцируются в мышцу. Поэтому миостатин и активин являются подходящими мишенями для стимуляции мышечной регенерации. Однако антагонисты миостатина и активина, в том числе фоллистатин, могут связывать костные морфогенетические белки (BMP) вследствие определенных структурных подобий. BMP, особенно BMP-9 и ВМР-10, являются важными морфогенетическими сигналами, регулирующими структуру тканей по всему организму. Ингибирование таких BMP может вызывать нежелательные патологические состояния. Фоллистатин также связывается с гепарансульфатпротеогликанами клеточной поверхности через основную гепарин-связывающую последовательность (HBS) в первом из трех FS-доменов. Предполагается, что инактивация, снижение или модулирование связывания гепарина может усиливать in vivo воздействие и/или период полужизни фоллистатина. Таким образом, настоящее изобретение предусматривает улучшенный фоллистатин, который характеризуется более длительным периодом полужизни и
является более активным для эффективного лечения DMD.
[0007] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает рекомбинантные полипептиды фоллистатина, содержащие аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, при этом рекомбинантный белок фоллистатина содержит гепарин-связывающий домен (HBS), и при этом одна или более аминокислот в пределах HBS заменены аминокислотой, характеризующейся меньшим положительным зарядом по сравнению с замененной аминокислотой. В одном варианте осуществления одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся нейтральным зарядом. В одном варианте осуществления одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся отрицательным зарядом. В одном варианте осуществления одна или более предусматривает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10 аминокислот. В одном варианте осуществления одна или более предусматривает 3 аминокислоты. В одном варианте осуществления рекомбинантный полипептид характеризуется пониженной аффинностью связывания с гепарином по сравнению со встречающимся в природе фоллистатином. В одном варианте осуществления рекомбинантный белок фоллистатина не связывается с ВМР-9 или ВМР-10. В одном варианте осуществления рекомбинантный белок фоллистатина содержит последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную любой из SEQ ID N0: 12-40 или SEQ ID N0: 101-106.
[0008] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает рекомбинантные полипептиды фоллистатина, содержащие аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, и при этом аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными любой из SEQ ID N0:42-67 или SEQ ID N0:111-116. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность, соответствующая положениям 66-88 SEQ ID N0: 2, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, является идентичной любой из SEQ ID N0: 58-67 или SEQ ID NO: 111-113. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный
полипептид фоллистатина является мутантом гипергликозилирования.
В некоторых вариантах осуществления аминокислотная
последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 90% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 95% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 98% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на 100% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
[0009] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает рекомбинантные полипептиды фоллистатина, содержащие аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, и содержащим любую из аминокислотных вариаций, выбранных из группы, состоящей из C66S, С66А, G74N, К75Е, K75N, К76А, K76D, K76S, К76Е, C77S, С77Т, R78E, R78N, N80T, К81А, K81D, К82А, K82D, К81Е, К82Т, К82Е, К84Е, Р85Т, R86N, V88E и V88T или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 90% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 95% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на по меньшей мере 98% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность рекомбинантного полипептида фоллистатина на 100% идентична SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
[0010] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает рекомбинантные полипептиды фоллистатина, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из
группы, состоящей из SEQ N0:12, SEQ ID N0:17-30 и SEQ ID N0:32-40.
[ООН] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащие рекомбинантный полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG.
[0012] В одном аспекте настоящее изобретение
предусматривает слитые белки на основе рекомбинантного
фоллистатина, содержащие полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG
человека, при этом рекомбинантный полипептид фоллистатина
содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере
80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, и при
этом аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2,
SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными SEQ ID N0:41,
42, 43 или 58. В некоторых вариантах осуществления
рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную
последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична SEQ
ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах
осуществления рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит
аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере
95% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5. В
некоторых вариантах осуществления рекомбинантный полипептид
фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая
на по меньшей мере 98% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или
SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный
полипептид фоллистатина содержит аминокислотную
последовательность, которая на 100% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
[0013] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащие полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG, при этом полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой последовательности из группы, состоящей из SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13 и SEQ ID N0:15 -SEQ ID N0:40.
[0014] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен IgG
содержит аминокислотную замену, при этом аминокислотная замена выбрана из группы, состоящей из L234A, L235A, Н433К, N434F и их комбинаций, согласно нумерации EU.
[0015] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен IgG содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:6, и при этом аминокислотная последовательность содержит аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из L2 34A, L2 35A, Н4 33К, N4 34F и их комбинаций, согласно нумерации EU.
[0016] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен IgG содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:7 - SEQ ID N0:11. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен IgG представляет собой Fc-домен IgG человека. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен IgG представляет собой Fc-домен IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
[0017] В одном аспекте настоящее изобретение
предусматривает слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащие аминокислотную последовательность под любой из SEQ ID N0:73 - SEQ ID N0:100.
[0018] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина связывается с миостатином с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 1-100 пМ. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина связывается с активином А с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 1-100 пМ. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина не связывается с костным морфогенетическим белком-9 (BMP-9) и/или с костным морфогенетическим белком-10 (ВМР-10) в диапазоне от 0,2 нМ до 25 нМ. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина связывается с гепарином с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD), составляющей 0,1-200 нМ. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина связывается с Fc-рецептором с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 25-400 нМ.
[0019] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина ингибирует миостатин при IC50, составляющей 0,1-10 нМ. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина ингибирует активин при IC50, составляющей 0,1-10 нМ.
[0020] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции, содержащие слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и фармацевтически приемлемый носитель.
[0021] В одном аспекте настоящее изобретение
предусматривает полинуклеотид, содержащий нуклеотидную
последовательность, кодирующую рекомбинантный полипептид фоллистатина.
[0022] В одном аспекте настоящее изобретение
предусматривает полинуклеотид, содержащий нуклеотидную
последовательность, кодирующую слитый белок на основе
рекомбинантного фоллистатина. В некоторых вариантах
осуществления вектор экспрессии содержит полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин содержит полинуклеотид или вектор экспрессии.
[0023] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способ получения слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина, который специфически связывается с миостатином и активином А, путем культивирования клетки-хозяина.
[0024] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает клетку гибридомы, продуцирующую рекомбинантный полипептид фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина.
[0025] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способ лечения мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), при этом способ включает введение субъекту, страдающему DMD или с предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина или фармацевтической композиции, содержащей слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление
по меньшей мере одного симптома или признака DMD.
[0026] В некоторых вариантах осуществления способ
дополнительно предусматривает введение субъекту одного или более
дополнительных терапевтических средств. В некоторых вариантах
осуществления одно или более дополнительных терапевтических
средств выбраны из группы, состоящей из антитела к Flt-1 или его
фрагмента, эдасалонексента, памревлумаба, преднизона,
дефлазакорта, РНК-модулирующих терапевтических средств, экзон-пропускающих терапевтических средств и средств генной терапии.
[0027] В некоторых вариантах осуществления эффективное
количество слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина
вводят парентерально. В некоторых вариантах осуществления
парентеральное введение выбрано из группы, состоящей из
внутривенного, внутрикожного, интратекального, ингаляционного,
чрескожного (местного), внутриглазного, внутримышечного,
подкожного, трансмукозального введения или их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления парентеральное введение представляет собой внутривенное введение. В некоторых вариантах осуществления парентеральное введение представляет собой подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина вводят ежедневно, два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в месяц или раз в два месяца. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина вводят два раза в неделю.
[0028] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина доставляют в одну или более скелетных мышц, выбранных из таблицы 1. В некоторых вариантах осуществления введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит к увеличению массы мышцы относительно контроля. В некоторых вариантах осуществления мышца представляет собой одну или более скелетных мышц, выбранных из таблицы 1. В некоторых вариантах осуществления мышца выбрана из группы, состоящей из диафрагмы, triceps, soleus, tibialis anterior, gastrocnemius, extensor digitorum longus, rectus abdominus, quadriceps и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления мышца представляет собой Gastrocnemius. В некоторых вариантах
осуществления увеличение массы мышцы представляет собой увеличение на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200% или 500% относительно контроля.
[0029] В некоторых вариантах осуществления введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит в результате к мышечной регенерации, повышенной мышечной силе, повышенной гибкости, повышенной амплитуде движений, повышенной выносливости, пониженной утомляемости, повышенному кровотоку, улучшенным когнитивным функциям, улучшенной легочной функции, ингибированию воспаления, пониженному мышечному фиброзу и/или пониженному мышечному некрозу.
[0030] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один симптом или признак DMD выбран из группы, состоящей из мышечного истощения, мышечной слабости, мышечной хрупкости, мышечного некроза, мышечного фиброза, суставной контрактуры, скелетной деформации, кардиомиопатии, ухудшения глотания, ухудшения функции кишечника и мочевого пузыря, мышечной ишемии, нарушения когнитивных функций, поведенческой дисфункции, ухудшения социализации, сколиоза и нарушенной дыхательной функции.
[0031] В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способы ингибирования миостатина у субъекта, при этом способы включают введение в мышцу субъекта композиции, содержащей эффективное количество слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0032] Графические материалы приведены только в целях иллюстрации, а не для ограничения.
[0033] На фигурах 1А и 1В показаны типичные результаты, иллюстрирующие РК-профили в сыворотке крови у мышей CD-I, которым вводили типичные слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или FS315WT-hFc, белок сравнения.
[0034] На фигуре 2 представлен график, который показывает силу захвата передними конечностями у мышей mdx, обработанных PBS-несущей средой, FS315K(7 б,81,82)E-mFc при 10 мг/кг или ActRIIB-mFc при 3 мг/кг, по сравнению с силой захвата у мышей
дикого типа. Силу захвата передними конечностями измеряли через 11 недель после введения дозы. Данные показывают, что наблюдалось существенное повышение силы захвата передними конечностями у мышей mdx, обработанных FS315K(7б,81,82)E-mFc, по сравнению с силой захвата у животных, обработанных только несущей средой.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0035] В целях облегчения понимания настоящего изобретения ниже сперва определены некоторые термины. Дополнительные определения следующих терминов и прочих терминов изложены во всем настоящем описании.
[0036] Аффинность. Как известно из уровня техники, "аффинность" представляет собой меру прочности, с которой конкретный лиганд связывается со своим партнером. В некоторых вариантах осуществления лиганд или партнер представляет собой рекомбинантный полипептид фоллистатина. В некоторых вариантах осуществления лиганд или партнер представляет собой слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента. Значения аффинности могут быть измерены различными путями. В некоторых вариантах осуществления аффинность измеряют с помощью количественного анализа. В некоторых таких вариантах осуществления концентрация партнера по связыванию может быть зафиксирована так, чтобы она превышала концентрацию лиганда для имитации физиологических условий. В качестве альтернативы или дополнения, в некоторых вариантах осуществления концентрация партнера по связыванию и/или концентрация лиганда могут варьировать. В некоторых таких вариантах осуществления аффинность может сравниваться с эталоном при сравнимых условиях (например, концентрации).
[0037] Уменьшение интенсивности. Под используемым в данном документе термином "уменьшение интенсивности" подразумевается предупреждение, снижение интенсивности проявлений или ослабление состояния или улучшение состояния субъекта. Уменьшение интенсивности включает в себя, однако не требует этого, полное выздоровление от болезненного состояния или полное его предотвращение.
[0038] Животное. Используемый в данном документе термин "животное" относится к любому представителю царства животных. В некоторых вариантах осуществления "животное" относится к людям на любой стадии развития. В некоторых вариантах осуществления "животное" относится к нечеловекоподобным животным на любой стадии развития. В определенных вариантах осуществления нечеловекоподобное животное представляет собой млекопитающее {например, грызуна, мышь, крысу, кролика, обезьяну, собаку, кошку, овцу, крупный рогатый скот, примата и/или свинью). В некоторых вариантах осуществления животные включают без ограничения млекопитающих, птиц, рептилий, амфибий, рыб, насекомых и/или червей. В некоторых вариантах осуществления животное может представлять собой трансгенное животное, животное, полученное с помощью методов генной инженерии, и/или клон.
[0039] Примерно или приблизительно. Используемый в данном документе термин "примерно" или "приблизительно", применяемый в отношении одного или более значений, представляющих интерес, относится к значению, сходному с указанным эталонным значением. В определенных вариантах осуществления термин "примерно" или "приблизительно" относится к диапазону значений, находящихся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше в любую сторону (большую или меньшую) от указанного эталонного значения, если не указано иное или иное не очевидно из контекста (за исключением случаев, когда таковое число будет превышать 100% от возможного значения).
[0040] Ассоциированный с. Два события или объекта являются
"ассоциированными" друг с другом, согласно тому, как данный
термин используется в данном документе, если наличие, уровень
и/или форма одного коррелируют с таковыми у другого. Например,
конкретный объект (например, полипептид) считается
ассоциированным с конкретным заболеванием, расстройством или состоянием, если его наличие, уровень и/или форма коррелирует с частотой возникновения и/или предрасположенностью к заболеванию, расстройству или состоянию (например, для соответствующей
популяции). В некоторых вариантах осуществления два или больше
объектов являются физически "ассоциированными" друг с другом,
если они взаимодействуют, непосредственно или опосредованно,
так, что они находятся и остаются в физической близости друг с
другом. В некоторых вариантах осуществления два или больше
объектов, которые являются физически ассоциированными друг с
другом, являются ковалентно связанными друг с другом; в
некоторых вариантах осуществления два или больше объектов,
которые не являются физически ассоциированными друг с другом,
являются ковалентно связанными друг с другом, однако являются
нековалентно ассоциированными, например, посредством водородных
связей, ван-дер-ваальсового взаимодействия, гидрофобных
взаимодействий, магнетизма и их комбинаций.
[0041] Виодоступность. Используемый в данном документе термин "биодоступность" обычно относится к процентной доле введенной дозы, которая достигает кровотока субъекта.
[0042] Биологически активный. Используемая в данном документе фраза "биологически активный" относится к характеристике любого средства, обладающего активностью в биологической системе, и в частности в организме. Например, средство, которое при введении в организм проявляет биологический эффект в отношении этого организма, считается биологически активным. В конкретных вариантах осуществления, если пептид является биологически активным, то часть этого пептида, обладающая по меньшей мере одним видом биологической активности пептида, как правило, называется "биологически активной" частью.
[0043] Сердечная мышца Используемый в данном документе термин "сердечная мышца" относится к типу непроизвольно сокращающейся поперечнополосатой мышцы, находящейся в стенках сердца, и в частности миокарда.
[0044] Носитель или разбавитель. Используемые в данном документе термины "носитель" или "разбавитель" относятся к фармацевтически приемлемому (например, безопасному и нетоксичному при введении человеку) носителю или разбавляющему веществу, применимому для получения фармацевтического состава.
Приведенные в качестве примера разбавители включают стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор {например, забуференный фосфатом физиологический раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.
[0045] Лекарственная форма. Используемые в данном документе термины "лекарственная форма" и "единичная лекарственная форма" относятся к физически дискретной единице терапевтического белка {например, рекомбинантного полипептида фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента) для пациента, подлежащего лечению. Каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для получения требуемого терапевтического эффекта. Однако будет понятно, что решение в отношении общей дозы композиции будет приниматься лечащим врачом по результатам тщательной медицинской оценки.
[004 6] Фоллистатин или рекомбинантный фоллистатин.
Используемый в данном документе термин "фоллистатин (FS)" или "рекомбинантный фоллистатин" относится к любым белкам дикого типа или модифицированным белкам или полипептидам фоллистатина {например, к белкам фоллистатина с аминокислотными мутациями, делециями, вставками и/или к слитым белкам), которые сохраняют значительную биологическую активность фоллистатина, если не указано иное.
[0047] Fc-область. Используемый в данном документе термин "Fc-область" относится к димеру из двух "Fc-полипептидов", при этом каждый "Fc-полипептид" содержит константную область антитела, за исключением первого домена константной области иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления "Fc-область" включает в себя два Fc-полипептида, связанных одной или более дисульфидными связями, химическими линкерами или пептидными линкерами. "Fc-полипептид" относится к последним двум доменам константной области иммуноглобулина IgA, IgD и IgG и к последним трем доменам константной области иммуноглобулина IgE и IgM, а также может включать в себя часть или весь гибкий шарнирный N-конец к этим доменам. Для IgG "Fc-полипептид"
содержит домены иммуноглобулина Cgamma2 (Су2) и СдаттаЗ (СуЗ) и
нижнюю часть шарнира между Cgammal (Cyl) и Су2. Хотя границы Fc-полипептида могут варьировать, Fc-полипептид тяжелой цепи IgG человека обычно определяют как содержащий остатки, начиная с Т223, или С226, или Р230, до его карбокси-конца, при этом нумерация соответствует индексу EU, как у Rabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Services, Springfield, VA) . Для IgA "Fc-полипептид" содержит домены иммуноглобулина Calpha2 (Coc2) и Calpha3 (СаЗ) и нижнюю часть шарнира между Calphal (Cal) и Ca2. Fc-область может быть синтетической, рекомбинантной или созданной из природных источников, таких как IVIG.
[0048] Функциональный эквивалент или производное.
Используемый в данном документе термин "функциональный
эквивалент" или "функциональное производное" означает, в
контексте функционального производного аминокислотной
последовательности, молекулу, которая сохраняет биологическую
активность (либо функциональную, либо структурную), которая
является практически аналогичной таковой у исходной
последовательности. Функциональное производное или эквивалент
может представлять собой природное производное или быть
полученным синтетическим путем. Приведенные в качестве примера
функциональные производные содержат аминокислотные
последовательности, содержащие замены, делеции или добавления одной или более аминокислот, при условии, что биологическая активность белка сохраняется. Требуется, чтобы заменяющая аминокислота характеризовалась физико-химическими свойствами, которые аналогичны таковым у замененной аминокислоты. Требуемые аналогичные физико-химические свойства включают сходство заряда, объема, гидрофобности, гидрофильности и т. п.
[004 9] Слитый белок. Используемый в данном документе термин "слитый белок" или "химерный белок" относится к белку, полученному посредством объединения двух или больше изначально отдельных белков или их частей. В некоторых вариантах осуществления между каждыми двумя следующими друг за другом
белками находится линкер или спейсер. Неограничивающим примером слитого белка является Fc-слитый белок. Неограничивающим примером слитого белка является слитый белок на основе фоллистатина и Fc-фрагмента.
[0050] Период полужизни. Используемый в данном документе термин "период полужизни" означает период времени, требуемый для того, чтобы величина, такая как концентрация или активность белка, уменьшилась наполовину от своего значения, измеренного в начале данного периода времени.
[0051] Гипертрофия: Используемый в данном документе термин "гипертрофия" относится к повышению объема органа или ткани вследствие роста составляющих их клеток.
[0052] Улучшать, увеличивать или снижать. Используемые в данном документе термины "улучшать", "увеличивать" или "снижать" или их грамматические эквиваленты указывают на значения относительно измерения исходного уровня, такого как измерение у того же индивидуума до начала лечения, описанного в данном документе, или измерение у контрольного субъекта (или у нескольких контрольных субъектов) в отсутствие лечения, описанного в данном документе. "Контрольный субъект" представляет собой субъект, пораженный той же формой заболевания, что и субъект, подвергаемый лечению, который имеет приблизительно такой же возраст, что и субъект, подвергаемый лечению.
[0053] Ингибирование. Используемые в данном документе термины "ингибирование", "ингибировать" и "ингибирующий" относятся к процессам или способам понижения или уменьшения активности и/или экспрессии белка или гена, представляющего интерес. Как правило, ингибирование белка или гена относится к уменьшению экспрессии или соответствующей активности белка или гена на по меньшей мере 10% или больше, например, 20%, 30%, 40% или 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше, или к понижению экспрессии или соответствующей активности более чем в 1 раз, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 10 раз, 50 раз, 100 раз или больше, как измерено с помощью одного или более способов, описываемых в данном документе или известных из уровня техники.
[0054] In vitro. Используемый в данном документе термин "in vitro" относится к явлениям, которые происходят в искусственной среде, например, в тестовой пробирке или реакционном сосуде, в культуре клеток и т. д., а не в многоклеточном организме.
[0055] In vivo. Используемый в данном документе термин "in vivo" относится к явлениям, которые происходят в многоклеточном организме, таком как человек и нечеловекоподобное животное. В контексте клеточных систем, данный термин может использоваться в отношении явлений, которые происходят в живой клетке (например, в отличие от систем in vitro) .
[0056] KD. Как используется в данном документе, используемый в данном документе термин "KD" относится к константе диссоциации, которую получают из отношения Ко! к Ка (т. е. Kd/Ka) и выражают в виде молярной концентрации (М) . Значения KD для лиганда могут быть определены с использованием способов, хорошо известных из уровня техники. Предпочтительный способ определения KD лиганда предусматривает использование поверхностного плазмонного резонанса, предпочтительно с использованием биосенсорной системы, такой как система BIAcore(r).
[0057] Линкер. Используемый в данном документе термин "линкер" относится к аминокислотной последовательности в слитом белке, отличной от присутствующей в конкретном положении в природном белке и обычно предназначенной для того, чтобы быть гибкой, или для внедрения в структуру, такую как а-спираль, между двумя белковыми компонентами. Линкер также называется спейсером. Как правило, линкер или спейсер сам по себе не имеет биологической функции.
[0058] Фармацевтически приемлемый. Используемый в данном документе термин "фармацевтически приемлемый" относится к веществам, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, в соответствии с разумным соотношением польза/риск.
[0059] Полипептид. Используемый в данном документе термин
"полипептид" относится к последовательной цепи из аминокислот, связанных вместе посредством пептидных связей. Данный термин используется по отношению к цепи из аминокислот любой длины, однако специалисту средней квалификации в данной области техники будет понятно, что термин не ограничен длинными цепями и может относиться к наименьшей цепи, содержащей две аминокислоты, связанные вместе посредством пептидной связи. Как известно специалистам в данной области техники, полипептиды могут быть подвержены обработке и/или модифицированы. Используемые в данном документе термины "полипептид" и "пептид" используются взаимозаменяемо.
[0060] Предупреждать. Используемый в данном документе термин "предупреждать" или "предупреждение", при использовании в отношении возникновения заболевания, нарушения и/или состояния, относится к снижению риска развития заболевания, нарушения и/или состояния. См. определение для "риск".
[0061] Белок. Используемый в данном документе термин "белок" относится к одному или более полипептидам, которые функционируют как дискретная единица. Если отдельный полипептид представляет собой дискретную функционирующую единицу и ему не требуется длительная или временная физическая ассоциация с другими полипептидами для образования дискретной функционирующей единицы, то термины "полипептид" и "белок" могут использоваться взаимозаменяемо. Если дискретная функционирующая единица содержит несколько полипептидов, физически ассоциированных друг с другом, то термин "белок" относится к нескольким полипептидам, физически соединенным и функционирующим вместе в качестве дискретной единицы.
[0062] Риск. Как будет понятно из контекста, "риск" возникновения заболевания, нарушения и/или состояния включает вероятность того, что у конкретного индивидуума разовьется заболевание, нарушение и/или состояние {например, мышечная дистрофия). В некоторых вариантах осуществления риск выражен в виде процентного значения. В некоторых вариантах осуществления риск составляет от 0, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 и до 100%. В некоторых вариантах
осуществления риск выражен в виде риска относительно риска, связанного с эталонным образцом или группой эталонных образцов. В некоторых вариантах осуществления эталонный образец или группа эталонных образцов характеризуются известной степенью риска возникновения заболевания, нарушения, состояния и/или явления {например, мышечной дистрофии). В некоторых вариантах осуществления эталонный образец или группа эталонных образцов получены от индивидуумов, сравнимых с конкретным индивидуумом. В некоторых вариантах осуществления относительный риск составляет О, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10 или больше.
[0063] Поперечнополосатая мышца. Используемый в данном документе термин "поперечнополосатая мышца" относится к многоядерной мышечной ткани с регулярным расположением ее внутриклеточных сократимых единиц, саркомеров, что приводит к тому, что она выглядит как исчерченная при использовании микроскопии и при произвольном контроле. Как правило, поперечнополосатой мышцей может являться сердечная мышца, скелетная мышца и бранхиомерная мускулатура.
[0064] Гладкая мышца. Используемый в данном документе термин "гладкая мышца" относится к непроизвольно контролируемой, не являющейся поперечнополосатой мышце, в том числе к унитарной и многоединичной мышце.
[0065] Субъект. Используемый в данном документе термин "субъект" относится к человеку или любому нечеловекоподобному животному {например, к мыши, крысе, кролику, собаке, кошке, крупному рогатому скоту, свинье, овце, лошади или примату). В случае человека термин включает пре- и постнатальные формы. Во многих вариантах осуществления субъект является человеком. Субъект может являться пациентом, что относится к человеку, поступившему в медицинскую организацию для постановки диагноза или лечения заболевания. Термин "субъект" используется в данном документе взаимозаменяемо с терминами "индивидуум" или "пациент". Субъект может страдать заболеванием или нарушением или быть предрасположенным к нему, однако у него могут проявляться или не проявляться симптомы заболевания или нарушения.
[0066] Практически. Используемый в данном документе термин "практически" относится к качественному состоянию, при котором характеристика или свойство, представляющие интерес, демонстрируются в полном или почти полном объеме или степени. Специалисту средней квалификации в биологических областях будет понятно, что биологические и химические явления редко, если они вообще происходят, происходят до конца и/или продолжаются до завершенности или достижения или во избежание абсолютного результата. Таким образом, термин "практически" используется в данном документе для охвата потенциального отсутствия завершенности, присущей многим биологическим и химическим явлениям.
[0067] Практически гомологичный. Фраза "практически гомологичный" используется в данном документе в отношении сравнения между аминокислотными последовательностями или последовательностями нуклеиновых кислот. Как будет понятно специалисту средней квалификации в данной области техники, две последовательности обычно считаются "практически гомологичными", если они содержат гомологичные остатки в соответствующих положениях. Гомологичные остатки могут являться идентичными остатками. В качестве альтернативы, гомологичные остатки могут являться неидентичными остатками, обладающими соответствующими сходными структурными и/или функциональными характеристиками. Например, как хорошо известно специалисту средней квалификации в данной области техники, определенные аминокислоты обычно классифицируются как "гидрофобные" или "гидрофильные" аминокислоты и/или как имеющие "полярные" или "неполярные" боковые цепи. Замена одной аминокислоты на другую того же типа часто может считаться "гомологичной" заменой.
[0068] Как хорошо известно из уровня техники,
аминокислотные последовательности или последовательности
нуклеиновых кислот могут сравниваться с помощью любого из ряда
алгоритмов, в том числе доступных в коммерческом программном
обеспечении, таком как BLASTN для нуклеотидных
последовательностей и BLASTP, BLAST с гэпами и PSI-BLAST для аминокислотных последовательностей. Такие приведенные в качестве
примера программы описаны в Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs)), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; и Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. В дополнение к идентификации гомологичных последовательностей, вышеупомянутые программы, как правило, дают представление о степени гомологии. В некоторых вариантах осуществления две последовательности считаются практически гомологичными, если по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше их соответствующих остатков являются гомологичными на протяжении существенного фрагмента из остатков. В некоторых вариантах осуществления существенный фрагмент представляет собой полную последовательность. В некоторых вариантах осуществления существенный фрагмент содержит по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 или больше остатков.
[0069] Практически идентичный. Фраза "практически
идентичный" используется в данном документе в отношении
сравнения между аминокислотными последовательностями или
последовательностями нуклеиновых кислот. Как будет понятно
специалисту средней квалификации в данной области техники, две
последовательности обычно считаются "практически идентичными",
если они содержат идентичные остатки в соответствующих
положениях. Как хорошо известно из уровня техники,
аминокислотные последовательности или последовательности
нуклеиновых кислот могут сравниваться с помощью любого из ряда
алгоритмов, в том числе доступных в коммерческом программном
обеспечении, таком как BLASTN для нуклеотидных
последовательностей и BLASTP, BLAST с гэпами и PSI-BLAST для аминокислотных последовательностей. Такие приведенные в качестве
примера программы описаны в Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis et al. , Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; и Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. В дополнение к идентификации идентичных последовательностей, вышеупомянутое программное обеспечение, как правило, дает представление о степени идентичности. В некоторых вариантах осуществления две последовательности считаются практически идентичными, если по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше их соответствующих остатков являются идентичными на протяжении существенного фрагмента из остатков. В некоторых вариантах осуществления существенный фрагмент представляет собой полную последовательность. В некоторых вариантах осуществления существенный фрагмент содержит по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 или больше остатков.
[0070] Термин поверхностный плазмонный резонанс, используемый в данном документе, относится к оптическому явлению, которое обеспечивает анализ специфических связывающих взаимодействий в режиме реального времени, например, посредством выявления изменений в концентрациях белка в биосенсорной матрице, как например, с использованием системы BIAcore(r)
(Pharmacia Biosensor АВ, Uppsala, Sweden and Piscataway, Нью-Джерси) . Дополнительные описания см. у Jonsson, U., et al.
(1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, В., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8: 125-131; и Johnnson, В., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
[0071] Страдающий. У индивидуума, "страдающего" заболеванием, нарушением и/или состоянием, были диагностированы
или проявляются один или более симптомов заболевания, нарушения и/или состояния.
[0072] С предрасположенностью. У индивидуума "с предрасположенностью к" заболеванию, нарушению и/или состоянию, не было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние. В некоторых вариантах осуществления индивидуум с предрасположенностью к заболеванию, нарушению и/или состоянию, может не проявлять симптомы заболевания, нарушения и/или состояния. В некоторых вариантах осуществления индивидуум с предрасположенностью к заболеванию, нарушению, состоянию или явлению (например, DMD), может характеризоваться одним или более из следующего: (1) генетической мутацией, ассоциированной с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (2) генетическим полиморфизмом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (3) увеличенной и/или пониженной экспрессией и/или активностью белка, ассоциированного с заболеванием, нарушением и/или состоянием; (4) привычками и/или образом жизни, ассоциированными с развитием заболевания, нарушения, состояния и/или явления; (5) проведенной, запланированной или требуемой трансплантацией. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума с предрасположенностью к заболеванию, нарушению и/или состоянию развивается заболевание, нарушение и/или состояние. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума с предрасположенностью к заболеванию, нарушению и/или состоянию не развивается заболевание, нарушение и/или состояние.
[0073] Целевые ткани. Используемый в данном документе термин "целевые ткани" относится к любой ткани, которая поражается заболеванием, подлежащим лечению, таким как мышечная дистрофия Дюшенна (DMD). В некоторых вариантах осуществления целевые ткани включают такие ткани, которые демонстрируют ассоциированную с заболеванием патологию, симптом или признак, в том числе без ограничения мышечное истощение, скелетную деформацию, кардиомиопатию и нарушенную дыхательную функцию.
[0074] Терапевтически эффективное количество. Используемый в данном документе термин "терапевтически эффективное
количество" терапевтического средства означает количество,
которое является достаточным при введении субъекту, страдающему
заболеванием, нарушением и/или состоянием или с
предрасположенностью к нему, для лечения, диагностики, предупреждения и/или задержки начала проявления симптома(-ов) заболевания, нарушения и/или состояния. Специалисту средней квалификации в данной области техники будет понятно, что терапевтически эффективное количество, как правило, вводят с соблюдением режима дозирования, предусматривающего по меньшей мере одну разовую дозу.
[0075] Лечение. Используемые в данном документе термины
"лечить", "лечение" или "осуществление лечения" относятся к
любому способу, применяемому для частичного или полного
облегчения, уменьшения интенсивности, ослабления, ингибирования,
предупреждения, задержки начала проявления, понижения степени
тяжести и/или понижения частоты возникновения одного или более
симптомов или характерных особенностей конкретного заболевания,
нарушения и/или состояния. Средство для лечения может быть
введено субъекту, который не проявляет признаков заболевания
и/или проявляет только ранние признаки заболевания, с целью
понижения риска развития патологического процесса,
ассоциированного с заболеванием.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ОПРЕДЕЛЕННЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0076] Среди прочего, настоящее изобретение предусматривает
способы и композиции для лечения мышечной дистрофии, в том числе
мышечной дистрофии Дюшенна (DMD) и/или мышечной дистрофии
Беккера, на основе фоллистатина в качестве белкового
терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления
настоящее изобретение предусматривает способы лечения DMD,
включающие введение индивидууму, страдающему DMD или с
предрасположенностью к DMD, эффективного количества
рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака DMD.
[0077] Различные аспекты настоящего изобретения подробно
описаны в нижеследующих разделах. Использование разделов не подразумевает ограничение настоящего изобретения. Каждый раздел может использоваться в отношении любого аспекта настоящего изобретения. В данной заявке использование "или" означает "и/или", если не указано иное.
Мышечная дистрофия Дюшенна (DMD)
[0078] DMD представляет собой заболевание,
характеризующееся прогрессирующим истощением мышц и утратой связанных с мышцами функций по всему организму. Предполагается, что настоящее изобретение предусматривает способы и композиции для регенерации мышцы и лечения фиброза, воспаления и других симптомов или признаков, ассоциированных с DMD и другими мышечными дистрофиями в различных мышечных тканях. В некоторых вариантах осуществления применение предусматриваемых способов и композиций у субъекта приводит к понижению проявления фиброза и/или некроза у данного субъекта.
Мьшечные ткани
[0079] Имеется два основных типа мышечной ткани у животных
поперечнополосатая мышца и гладкая мышца. Используемый в
данном документе термин "поперечнополосатая мышца" относится к
мышечным тканям, содержащим повторяющиеся саркомеры. Как
правило, поперечнополосатая мышца находится под произвольным
контролем и прикрепляется к скелету, хотя существуют несколько
исключений, таких как сердечная мышца, которая обладает
некоторыми свойствами поперечнополосатой мышцы, однако не
подчиняется произвольному контролю. Как правило,
поперечнополосатая мышца обеспечивает произвольное движение организма и включает в себя основные мышечные группы, в том числе quadriceps, gastrocnemius, biceps, triceps, trapezius, deltoids и многие другие. Как правило, поперечнополосатая мышца имеет склонность быть очень длинной, и многие поперечнополосатые мышцы способны функционировать независимо. Однако, некоторые поперечнополосатые мышцы не прикреплены к скелету, в том числе мышцы рта, ануса, сердца и верхней части пищевода.
[0080] С другой стороны, гладкая мышца имеет совершенно другую структуру. Гладкая мускулатура, в отличие от серий
длинных мышц с отдельным прикреплением к скелету, как правило, организована в сплошные слои с механическими связями между гладкомышечными клетками. Гладкая мускулатура зачастую располагается в стенках полых органов и обычно не находится под произвольным контролем. Гладкие мышцы, выстилающие какой-либо орган, должны нести одну и ту же нагрузку и сокращаться одновременно. Гладкие мышцы функционируют, по меньшей мере частично, с осуществлением изменений в нагрузке на полые органы, вызванных движением и/или изменением положения или давления. Такая двойная роль означает, что гладкая мускулатура должна не только сокращаться, как поперечнополосатая мускулатура, но также и то, что она должна быть способна тонически сокращаться, чтобы поддерживать размеры органов при длительных нагрузках. Примерами гладких мышц являются мышцы, выстилающие кровеносные сосуды, мочевой пузырь, желудочно-кишечный тракт, как например прямую кишку.
[0081] Сила мышцы зависит от числа и размеров мышечных клеток и от их анатомического расположения. Увеличение диаметра мышечного волокна либо за счет увеличения размера имеющихся миофибрилл (гипертрофия), и/или образования большего количества мышечных клеток (гиперплазия) будет увеличивать силогенерирующую способность мышцы.
[0082] Мышцы также могут быть сгруппированы по расположению или функции. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина нацелен на одну или более мышц лица, одну или более мышц для жевания, одну или более мышц языка и шеи, одну или более мышц грудной клетки, одну или более мышц плечевого пояса и передних конечностей, одну или более мышц передней конечности и плеча, одну или более вентральных и дорсальных мышц предплечья, одну или более мышц руки, одну или более мышц, выпрямляющих позвоночник, одну или более мышц пояса нижней конечности и ног и/или одну или более мышц передней ноги и стопы.
[0083] В некоторых вариантах осуществления мышцы лица включают без ограничения внутриглазные мышцы, такие как ciliary, iris dilator, iris sphincter; мышцы уха, такие как auriculares,
temporoparietalis, stapedius, tensor tympani; мышцы носа, такие как procerus, nasalis, dilator naris, depressor septi nasi, levator labii superioris alaeque nasi; мышцы рта, такие как levator anguli oris, depressor anguli oris, orbicularis oris, Buccinator, Zygomaticus Major и Minor, Platysma, Levator Labii Superioris, Depressor Labii Inferioris, Risorius, Mentalis и/или Corrugator Supercilii.
[0084] В некоторых вариантах осуществления жевательные
мышцы включают без ограничения Masseter, Temporalis, Medial
Pterygoid, Lateral Pterygoid. В некоторых вариантах
осуществления мышцы языка и шеи включают без ограничения
Genioglossus, Styloglossus, Palatoglossus, Hyoglossus,
Digastric, Stylohyoid, Mylohyoid, Geniohyoid, Omohyoid, Sternohyoid, Sternothyroid, Thyrohyoid, Sternocleidomastoid, Anterior Scalene, Middle Scalene и/или Posterior Scalene.
[0085] В некоторых вариантах осуществления мышцы грудной
клетки, плечевого пояса и передних конечностей включают без
ограничения Subclavius Pectoralis major, Pectoralis minor,
Rectus abdominis, External abdominal oblique, Internal abdominal
oblique, Transversus Abdominis, диафрагма, External
Intercostals, Internal Intercostals, Serratus Anterior, Trapezius, Levator Scapulae, Rhomboideus Major, Rhomboideus Minor, Latissimus dorsi, Deltoid, subscapularis, supraspinatus, infraspinatus, Teres major, Teres minor и/или Coracobrachialis.
[0086] В некоторых вариантах осуществления мышцы передней конечности и плеча включают без ограничения длинную головку двуглавой мышцы плеча, короткую головку двуглавой мышцы плеча, длинную головку трехглавой мышцы плеча, латеральную головку трехглавой мышцы плеча, медиальную головку трехглавой мышцы плеча, Anconeus, Pronator teres, Supinator и/или Brachialis.
[0087] В некоторых вариантах осуществления мышцы передней и задней стороны предплечья включают без ограничения Brachioradialis, Flexor carpi radialis, Flexor carpi ulnaris, Palmaris longus, Extensor carpi ulnaris, Extensor carpi radialis longus, Extensor carpi radialis brevis, Extensor digitorum, Extensor digiti minimi.
[0088] В некоторых вариантах осуществления мышцы руки включают без ограничения собственные мышцы руки, такие как thenar, abductor pollicis brevis, flexor pollicis brevis, opponens pollicis, hypothenar, abductor digiti minimi, flexor digiti minimi brevis, opponens digiti minimi, palmar interossei, dorsal interossei и/или lumbrical.
[0089] В некоторых вариантах осуществления мышцы, выпрямляющие позвоночник, включают без ограничения cervicalis, spinalis, longissimus и/или iliocostalis.
[0090] В некоторых вариантах осуществления мышцы пояса нижней конечности и ног включают без ограничения Psoas Major, Iliacus, quadratus femoris, Adductor longus, Adductor brevis, Adductor magnus, Gracilis, Sartorius, Quadriceps femoris, такие как rectus femoris, vastus lateralis, vastus medialis, vastus intermedius, Gastrocnemius, Fibularis (Peroneus) Longus, Soleus, Gluteus maximus, Gluteus medius, Gluteus minimus, мышцы задней поверхности бедра: Biceps Femoris: длинная головка, мышцы задней поверхности бедра: Biceps Femoris: короткая головка, мышцы задней поверхности бедра: Semitendinosus, мышцы задней поверхности бедра: Semimembranosus, Tensor fasciae latae, Pectineus и/или Tibialis anterior.
[0091] В некоторых вариантах осуществления мышцы передней ноги и стопы включают без ограничения Extensor digitorum longus, Extensor hallucis longus, peroneus brevis, plantaris, Tibialis posterior, Flexor hallucis longus, extensor digitorum brevis, extensor hallucis brevis, Abductor hallucis, flexor hallucis brevis, Abductor digiti minimi, flexor digiti minimi, opponens digiti minimi, extensor digitorum brevis, червеобразные мышцы стопы, Quadratus plantae или flexor accessorius, flexor digitorum brevis, dorsal interossei и/или plantar interossei.
[0092] Типичные целевые мышцы кратко описаны в таблице 1.
Таблица 1. Целевые мышцы
ORBICULARIS OCULI
Внутриглазные: ciliary, iris dilator, iris sphincter
Ухо: auriculares, temporoparietalis, stapedius, tensor tympani
Hoc: procerus, nasalis, dilator naris, depressor septi nasi, levator labii superioris alaeque nasi
POT: levator anguli oris, depressor anguli oris, orbicularis
oris
Buccinator
Zygomaticus Major и Minor
Platysma
Levator Labii Superioris
Depressor Labii Inferioris
Risorius
Mentalis
Corrugator Supercilii
Anconeus
Pronator teres
Supinator
Brachialis
ЖЕВАТЕЛЬНЫЕ МЫШЦЫ
Masseter
Temporalis
Medial Pterygoid
Lateral Pterygoid
МЫШЦЫ ЯЗЫКА И ШЕИ
Genioglossus
Styloglossus
Palatoglossus
Hyoglossus
Digastric
Stylohyoid
Mylohyoid
Geniohyoid
Omohyoid
Sternohyoid
Sternothyroid
Thyrohyoid
Sternocleidomas toid
Anterior Scalene
Middle Scalene
Posterior Scalene
мышцы ГРУДНОЙ КЛЕТКИ, ПЛЕЧЕВОГО ПОЯСА И ПЕРЕДНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ
Subclavius
Pectoralis ma j or
Pectoralis minor
Rectus abdominis
External abdominal oblique
Internal abdominal oblique
Transversus Abdominis
Диафрагма
External Intercostals
Internal Intercostals
Serratus Anterior
Trapezius
Levator Scapulae
Rhomboideus Ma j or
Rhomboideus Minor
Latissimus dorsi
Deltoid
subscapularis
supraspinatus
infraspinatus
Teres major
Teres minor
Coracobrachial is
ПЕРЕДНЯЯ КОНЕЧНОСТЬ И ПЛЕЧО
Длинная головка двуглавой мышцы плеча
Короткая головка двуглавой мышцы плеча
Длинная головка трехглавой мышцы плеча
Латеральная
головка трехглавой мышцы плеча
Медиальная
головка трехглавой мышцы плеча
Anconeus
Pronator teres
Supinator
Brachialis
МЫШЦЫ ПРЕДПЛЕЧЬЯ: Ventral и Dorsal
Brachioradialis
Flexor carpi radialis
Flexor carpi ulnaris
Palmaris longus
Extensor carpi ulnaris
Extensor carpi radialis longus
Extensor carpi radialis brevis
Extensor digitorum
Extensor digiti minimi
erector spinae: cervicalis
erector spinae: spinalis
erector spinae: longissimus
erector spinae: iliocostalis
Собственные мышцы руки: thenar, abductor pollicis brevis, flexor pollicis brevis и opponens pollicis
Собственные мышцы руки: hypothenar, abductor digiti minimi, the flexor digiti minimi brevis и opponens digiti minimi
Собственные мышцы руки: palmar interossei, dorsal interossei и
lumbricals
МЫШЦЫ ПОЯСА НИЖНЕЙ
КОНЕЧНОСТИ И НОГ
Iliopsoas: Psoas Major
Iliopsoas: Iliacus
quadratus femoris
Adductor longus
Adductor brevis
Adductor magnus
Gracilis
Sartorius
Quadriceps femoris: rectus femoris
Quadriceps femoris: vastus lateralis
Quadriceps femoris: vastus medialis
Quadriceps femoris: vastus intermedius
Gastrocnemius
Fibularis (Peroneus) Longus
Soleus
Gluteus maximus
Мышцы задней
Мышцы задней
поверхности
поверхности
Gluteus medius
Gluteus minimus
бедра: Biceps Femoris:
бедра: Biceps Femoris:
Длинная
Короткая
головка
головка
Мышцы задней поверхности бедра: Semitendinosus
Мышцы задней поверхности бедра: Semimembranosu s
Tensor fasciae latae
Pectineus
Tibialis
anterior
МЫШЦЫ ПЕРЕДНЕЙ
НОГИ и стопы
Extensor digitorum longus
Extensor hallucis longus
peroneus brevis
plantaris
Tibialis
Flexor hallucis
extensor digitorum
extensor hallucis
[0093] Мышечные дистрофии представляют собой группу наследственных расстройств, которые вызывают дегенерацию мышцы, приводя к ослаблению и ухудшенным движениям. Основным признаком мышечных дистрофий является то, что они по своей природе являются прогрессирующими. Мышечные дистрофии включают без ограничения: мышечную дистрофию Дюшенна (DMD), мышечную дистрофию Беккера, мышечную дистрофию Эмери-Дрейфуса, плече-лопаточно-лицевую мышечную дистрофию, тазово-плечевые мышечные дистрофии и миотоническую дистрофию 1 и 2 типов, в том числе врожденную форму миотонической дистрофии 1 типа. Симптомы типа мышечной дистрофии могут варьировать, при этом поражаются некоторые или все мышцы. Типичные симптомы мышечных дистрофий включают замедление развития мышечных моторных навыков, затруднение в использовании одной или более мышечных групп, затруднение в глотании, говорении или принятии пищи, слюнотечение, опущение века, частое падение, утрату силы мышцы или группы мышц во взрослом возрасте, утрату размера мышцы, проблемы хождения вследствие ослабления или измененной биомеханики организма, мышечную гипертрофию, мышечную псевдогипертрофию, жировую инфильтрацию мышцы, замещение мышцы несокращающейся тканью (например, мышечный фиброз), мышечный некроз и/или когнитивное или поведенческое ухудшение/уметвенную отсталость.
[0094] Хотя известных способов лечения мышечных дистрофий
не существует, применяются несколько вспомогательных методов
лечения, которые включают терапевтические методы, модифицирующие
как симптомы, так и заболевание. При мышечных дистрофиях обычно
применяют кортикостероиды, физическую терапию, ортопедические
устройства, инвалидные коляски или другие вспомогательные
медицинские устройства для ADL и легочной функции. Для
предотвращения внезапной смерти от сердечной аритмии при
миотонической дистрофии применяют кардиостимуляторы.
Противомиотонические средства, которые улучшают симптомы миотонии (неспособность к расслаблению), включают мексилитин и в некоторых случаях фанотоин, прокаинамид и хинин.
Мьшечная дистрофия Дкшенна
[0095] Мышечная дистрофия Дюшенна (DMD) представляет собой рецессивную форму мышечной дистрофии, сцепленную с Х-хромосомой, которая приводит к мышечной дегенерации и, возможно, к смерти. DMD характеризуется ослаблением проксимальных мышц, аномальной походкой, псевдогипертрофией мышц Gastrocnemius (икроножная) и повышенным содержанием креатининкиназы (СК) . У многих пациентов DMD диагностируют приблизительно в возрасте 5 лет, когда симптомы/признаки, как правило, становятся более очевидными. Как правило, пораженные индивидуумы прекращают ходить приблизительно в возрасте 10-13 лет и умирают в 20 лет или ближе к 30 годам вследствие кардиореспираторной дисфункции.
[0096] Расстройство DMD представляет собой результат мутации в расположенном на Х-хромосоме человека гене дистрофина, который кодирует белок дистрофина, - важный структурный компонент в мышечной ткани, который обеспечивает структурную стабильность дистрогликанового комплекса (DGC) клеточной мембраны. Дистрофии связывает внутреннюю цитоплазматическую сеть актиновых филаментов и внеклеточный матрикс, обеспечивая физическую силу мышечных волокон. Соответственно, изменение или отсутствие дистрофина приводит к аномальному разрыву сарколеммальной мембраны и некрозу мышечных волокон. Хотя носителями данной мутации могут быть оба пола, у женщин редко проявляются тяжелые признаки заболевания.
[0097] Первичным симптомом DMD является мышечная слабость, связанная с мышечным истощением, при этом, как правило, первыми поражаются произвольные мышцы, особенно поражаются мышцы тазобедренной области, паховой области, бедер, плечей и икроножные мышцы. Мышечная слабость также возникает в передних конечностях, шее и в других участках. Икроножные мышцы часто увеличиваются. Признаки и симптомы обычно проявляются до достижения возраста б лет, но могут проявиться уже в младенчестве. Другие физические симптомы включают без ограничения задержку способности самостоятельно ходить, прогрессирующее затруднение при ходьбе, шагании или беге и возможную утрату способности ходить (обычно к возрасту 15 лет) ; частые падения; усталость; затруднение с двигательными навыками
(бег, скачки, прыжки); увеличенный поясничный лордоз, приводящий
к сокращению мышц-сгибателей бедра; контрактуры ахиллова
сухожилия и подколенных сухожилий, ухудшающие функциональность,
поскольку происходит укорачивание мышечных волокон и фиброз в
соединительной ткани; деформации мышечных волокон;
псевдогипертрофию (увеличение) мышц языка и икроножных мышц,
вызванную замещением мышечной ткани жировой и соединительной
тканью; более высокий риск возникновения нейроповеденческих
расстройств (например, ADHD), расстройств обучаемости
(дислексию) и непрогрессирующее ослабление специфических когнитивных навыков (в частности, краткосрочной вербальной памяти); скелетные деформации (в том числе сколиоз, в некоторых случаях).
Рекомбинантные белки фоллистатина
[0098] Как используется в данном документе, рекомбинантные белки фоллистатина, подходящие для настоящего изобретения, включают любые белки фоллистатина дикого типа и модифицированные белки фоллистатина {например, белки фоллистатина с аминокислотными мутациями, делециями, вставками и/или слитые белки), которые сохраняют значительную биологическую активность фоллистатина. Как правило, рекомбинантный белок фоллистатина получают с использованием рекомбинантной технологии. Однако белки фоллистатина (дикого типа или модифицированные), очищенные
из природных источников или синтезированные химически, могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением. Как правило, подходящий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина имеет in vivo период полужизни, равный или превышающий приблизительно 12 часов, 18 часов, 24 часа, 36 часов, 2 сутки, 2,5 сутки, 3 сутки, 3,5 сутки, 4 сутки, 4,5 сутки, 5 суток, 5,5 суток, б суток, 6,5 суток, 7 суток, 7,5 суток, 8 суток, 8,5 суток, 9 суток, 9,5 суток или 10 суток. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина имеет in vivo период полужизни, составляющий от 0,5 до 10 суток, от 1 суток до 10 суток, от 1 суток до 9 суток, от 1 суток до 8 суток, от 1 суток до 7 суток, от 1 суток до б суток, от 1 суток до 5 суток, от 1 суток до 4 суток, от 1 суток до 3 суток, от 2 суток до 10 суток, от 2 суток до 9 суток, от 2 суток до 8 суток, от 2 суток до 7 суток, от 2 суток до б суток, от 2 суток до 5 суток, от 2 суток до 4 суток, от 2 суток до 3 суток, от 2,5 суток до 10 суток, от 2,5 суток до 9 суток, от 2,5 суток до 8 суток, от 2,5 суток до 7 суток, от 2,5 суток до б суток, от 2,5 суток до 5 суток, от 2,5 суток до 4 суток, от 3 суток до 10 суток, от 3 суток до 9 суток, от 3 суток до 8 суток, от 3 суток до 7 суток, от 3 суток до б суток, от 3 суток до 5 суток, от 3 суток до 4 суток, от 3,5 суток до 10 суток, от 3,5 суток до 9 суток, от 3,5 суток до 8 суток, от 3,5 суток до 7 суток, от 3,5 суток до б суток, от 3,5 суток до 5 суток, от 3,5 суток до 4 суток, от 4 суток до 10 суток, от 4 суток до 9 суток, от 4 суток до 8 суток, от 4 суток до 7 суток, от 4 суток до б суток, от 4 суток до 5 суток, от 4,5 суток до 10 суток, от 4,5 суток до 9 суток, от 4,5 суток до 8 суток, от 4,5 суток до 7 суток, от 4,5 суток до б суток, от 4,5 суток до 5 суток, от 5 суток до 10 суток, от 5 суток до 9 суток, от 5 суток до 8 суток, от 5 суток до 7 суток, от 5 суток до б суток, от 5,5 суток до 10 суток, от 5,5 суток до 9 суток, от 5,5 суток до 8 суток, от 5,5 суток до 7 суток, от 5,5 суток до б суток, от б суток до 10 суток, от 7 суток до 10 суток, от 8 суток до 10 суток, от 9 суток до 10 суток.
[0099] Фоллистатин (FS) первоначально был выделен из
фолликулярной жидкости как белковый фактор, способный подавлять секрецию фолликулостимулирующего гормона (FSH) питуицитами. FS оказывает свое влияние на FSH, по меньшей мере частично, посредством связывания и нейтрализации активина.
[00100] Существуют по меньшей мере три изоформы FS: FS288, FS303 и FS315 (таблица 3). Непроцессированный белок FS315 содержит кислотный С-концевой хвост из 2 6 остатков, кодируемый экзоном б (SEQ ID N0:2, С-концевой хвост подчеркнут одной линией). В некоторых случаях изоформа FS315 может содержать сигнальную последовательность (SEQ ID N0:1, сигнальная последовательность обозначена жирным шрифтом и курсивом). Изоформа FS2 8 8 продуцируется посредством альтернативного сплайсинга на С-конце и, таким образом, на концах с экзоном 5
(SEQ ID N0:5). Белки фоллистатина имеют отличающуюся структуру, состоящую из N-концевой области из 63 аминокислот, содержащих гидрофобные остатки, важные для связывания активина, при этом основная часть белка (остатки 64-288, например, как показано в SEQ ID N0:2) содержит три FS-домена из 10 цистеинов, приблизительно по 73-75 аминокислот каждый. Эти домены из 10 цистеинов, от N-конца к С-концу, называют соответственно доменом 1, доменом 2 и доменом 3 (т. е. FSD1, FSD2 и FSD3). Как правило, FS2 8 8 связывается с тканью вследствие наличия домена связывания с гепарином, тогда как FS315, как правило, проявляет тенденцию иметь циркулирующую форму, поскольку гепарин-связывающий домен маскируется расширенным С-концом. Как полагают, FS303 (SEQ ID N0:4) продуцируется протеолитическим отщеплением С-концевого домена от FS315. В некоторых случаях изоформа FS303 может содержать сигнальную последовательность (SEQ ID N0:3, сигнальная последовательность обозначена жирным шрифтом и курсивом). FS303 характеризуется промежуточным уровнем связывания с клеточной поверхностью между FS288 и FS315.
[00101] Гепарин-связывающий домен или последовательность
{например, HBS) содержит аминокислоты, соответствующие остаткам 75-86 из FS315, и находится в пределах FSD1, как показано например в SEQ ID N0:2. HBS обозначают двойным подчеркиванием. Белки FS303 и FS288 также содержат HBS на соответствующих
аминокислотах (также обозначенных двойным подчеркиванием). Мутация, делеция или замена аминокислот в пределах этой области может снижать или отменять связывание с гепарином, и таким образом снижать клиренс и улучшать период полужизни терапевтических слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента.
[00102] В некоторых вариантах осуществления замена по
меньшей мере одной или более аминокислот в HBS на аминокислоту,
которая имеет меньший положительный заряд, приводит к тому, что
рекомбинантный белок фоллистатина характеризуется пониженной
аффинностью связывания с гепарином. В некоторых вариантах
осуществления замена по меньшей мере одной или более аминокислот
в HBS на аминокислоту, которая имеет более нейтральный или
отрицательный заряд, приводит к тому, что рекомбинантный белок
фоллистатина характеризуется пониженной аффинностью связывания с
гепарином. В некоторых вариантах осуществления замена на
аминокислоту, которая имеет пониженный заряд по сравнению с
оригинальной аминокислотой, приводит к тому, что рекомбинантный
белок фоллистатина характеризуется пониженной аффинностью
связывания с гепарином. В некоторых вариантах осуществления 1,
2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10 замен аминокислот, присутствующих
в HBS, на аминокислоты, которые имеют меньший положительный
заряд, нейтральный заряд, больший отрицательный заряд или
пониженный заряд, приводят к тому, что рекомбинантный белок
фоллистатина характеризуется пониженной аффинностью связывания с
гепарином. В некоторых вариантах осуществления 1, 2 или 3 замены
аминокислот, присутствующих в HBS, на аминокислоты, которые
имеют меньший положительный заряд, нейтральный заряд, больший
отрицательный заряд или пониженный заряд, приводят к тому, что
рекомбинантный белок фоллистатина характеризуется пониженной
аффинностью связывания с гепарином. В некоторых вариантах
осуществления замена более чем одной аминокислоты в HBS на менее
положительно заряженные аминокислоты, нейтральные
аминокислотами, отрицательно заряженные аминокислоты или аминокислоты с пониженным зарядом, приводит к постепенному уменьшению связывания с гепарином, соответственно количеству
осуществленных аминокислотных замен. Например, замена 3 аминокислот в HBS на аминокислоты, которые имеют меньший положительный заряд, нейтральный заряд, больший отрицательный заряд или пониженный заряд, приводит к меньшему связыванию с гепарином рекомбинантного белка фоллистатина по сравнению с заменой только 2 аминокислот в HBS на аминокислоты, которые имеют меньший положительный заряд, нейтральный заряд, больший отрицательный заряд, или аминокислоту с пониженным зарядом. В качестве другого примера, замена 2 аминокислот в HBS на аминокислоты, которые имеют меньший положительный заряд, нейтральный заряд, больший отрицательный заряд или пониженный заряд, приводит к меньшему связыванию с гепарином рекомбинантного белка фоллистатина по сравнению с заменой только 1 аминокислоты в HBS на аминокислоту, которая имеет меньший положительный заряд, нейтральный заряд, больший отрицательный заряд, или аминокислоту с пониженным зарядом.
[00103] Специалисту в данной области техники будет понятно, что определенные аминокислоты являются менее положительно заряженными, являются нейтральными, являются отрицательно заряженными или имеют пониженный заряд по сравнению с другими аминокислотами. Аминокислоты могут быть разделены на основании суммарного заряда, как показано с помощью изоэлектрической точки аминокислоты. Изоэлектрическая точка представляет собой значение рН, при котором средний суммарный заряд молекулы аминокислоты равняется нулю. Если рН > pi, то аминокислота имеет суммарный отрицательный заряд, а если рН < pi, то аминокислота имеет суммарный положительный заряд. В некоторых вариантах осуществления измеренное значение pi для рекомбинантного белка фоллистатина составляет от приблизительно 3 до 9 (например, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, и 9) и любые значения между указанными. В некоторых вариантах осуществления измеренное значение pi для рекомбинантного белка фоллистатина составляет от приблизительно 4 до 7 (например, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0) и любые значения между указанными. Типичные изоэлектрические точки аминокислот показаны в таблице 2 ниже. Как правило, аминокислоты
с боковыми цепями с положительными электрическими зарядами включают, например, аргинин (R), гистидин (Н) и лизин (К). Аминокислоты с боковыми цепями с отрицательными электрическими зарядами включают, например, аспарагиновую кислоту (D) и глутаминовую кислоту (Е) . Аминокислоты с полярными свойствами включают, например, серии (S), треонин (Т), аспарагин (N), глутамин (Q) и цистеин (С), тирозин (Y) и триптофан (W). Неполярные аминокислоты включают, например, аланин (А) , валин
(V) , изолейцин (I), лейцин (L) , метионин (М) , фенилаланин (F), глицин (G) и пролин (Р).
[00104] В некоторых вариантах осуществления точковые мутации в HBS включают в себя одну или более замен одного или более остатков (К) лизина в HBS. Например, один или более
(например, 1, 2, 3, 4, 5) остатков лизина заменяют на другую аминокислоту в HBS полипептида фоллистатина. HBS содержит аминокислоты, соответствующие остаткам 75-8 6 в FS315, а именно, остаткам KKCRMNKKNKPR. В некоторых вариантах осуществления замена на одну или более отрицательно заряженных аминокислот, например глутаминовую кислоту (Е) и/или аспарагиновую кислоту
(D) , аминокислоты лизин (К) приводит к изменению общего заряда рекомбинантного полипептида фоллистатина, что известно как сдвиг pi. В некоторых вариантах осуществления изменение общего заряда молекулы фоллистатина улучшает in-vivo клиренс и период полужизни. В одном варианте осуществления изменение общего заряда рекомбинантного полипептида фоллистатина замедляет in vivo клиренс. В некоторых вариантах осуществления замена на одну или более отрицательно заряженных аминокислот, например глутаминовую кислоту (Е) и/или аспарагиновую кислоту (D) , одной или более аминокислот лизина (К) приводит к изменению общего заряда молекулы рекомбинантного фоллистатина. В некоторых вариантах осуществления замена на одну или более отрицательно заряженных аминокислот, например глутаминовую кислоту (Е) и/или аспарагиновую кислоту (D) , одной или более аминокислот лизина
(К) приводит к понижению количеств высокомолекулярных частиц в ходе экспрессии рекомбинантного полипептида фоллистатина. В некоторых вариантах осуществления замена на одну или более
отрицательно заряженных аминокислот, например глутаминовую кислоту (Е) и/или аспарагиновую кислоту (D) , одной или более аминокислот лизина (К) приводит к усиленной экспрессии рекомбинантного полипептида фоллистатина.
Таблица 2. Изоэлектрические точки аминокислот
Аминокислота
Однобуквенное сокращение
pi (изоэлектрическая точка)
Алании
6, 0
Аргинин
10,76
Аспарагин
5,41
Аспарагиновая кислота
2,77
Цистеин
5, 07
Глутаминовая кислота
3,22
Глутамин
5, 65
Глицин
5, 97
Гистидин
7,59
Изолейцин
6, 02
Лейцин
5, 98
Лизин
9, 74
Метионин
5, 74
Фенилаланин
5,48
Пролин
6, 30
Серии
5, 58
Треонин
5, 60
Триптофан
5, 89
Тирозин
5, 66
Валин
5, 96
[00105] Было показано, что FS ингибирует как миостатин, так
и активин in vitro, и что такое ингибирование может приводить к
мышечной гипертрофии in vivo у мышей (Lee et al., Regulation of
Muscle Mass by Follistatin and Activins, (2010), Mol.
Endocrinol., 24(10): 1998-2008; Gilson et al. , Follistatin
Induces Muscle Hypertrophy Through Satellite Cell Proliferation
and Inhibition of Both Myostatin and Activin, (2009), J.
Physiol. Endocrinol., 297(1):E157-E164). Без углубления в какую-
либо конкретную теорию, такой наблюдаемый эффект может быть, по
меньшей мере частично, обусловлен FS, предотвращающим активацию
пути Smad2/3 миостатином и активином. Как было показано,
активация пути Smad2/3 приводит к негативной регуляции мышечного
роста (Zhu et al., Follistatin Improves Skeletal Muscle Healing
After Injury and Disease Through an Interaction with Muscle
Regeneration, Angiogenesisr and Fibrosis, (2011),
Musculoskeletal Pathology, 179 (2) :915-930) .
[00106] Аминокислотные последовательности типичных
человеческих белков дикого типа или встречающихся в природе человеческих белков FS315, FS303 и FS288 показаны в таблице 3.
Таблица 3. Типичные изоформы фоллистатина человека
Изоформа
Последовательность изоформы фоллистатина
FS315 с сигнальной последовате льностью
MVRARHQPGGLCLLLLLLCQFMEDRSAQAGNCWLRQAKNGRCQVLYKTEL SKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDC GPGKKCRMNKKNKPRCVCAPD С SNITWKGPVCGLDGKTYRNE CALLKARC KEQPELEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPA S SE QYLCGNDGVTYS SACHLRKATCLLGRSIGLAYE GKCIKAKSCEDIQC TGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDEPVCASDNATYASECAMKEA ACSSGVLLEVKHSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW (SEQ ID N0:1)
FS315
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLFKWM IFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNKPRCVCAPDCSNITWKG PVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTC WDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGR SIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKS
рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего
изобретения, представляет собой FS315 человека (SEQ ID N0:1 или
SEQ ID N0:2) . Как раскрыто в данном документе, SEQ ID N0:2
представляет собой каноническую аминокислотную
последовательность для белка фоллистатина человека. В некоторых вариантах осуществления белок фоллистатина может иметь сплайсированную изоформу или протеолитический вариант, такой как FS303 (SEQ ID N0:3 или SEQ ID N0:4). В некоторых вариантах осуществления белок фоллистатина может иметь сплайсированную изоформу, такую как FS288 (SEQ ID N0:5). В некоторых вариантах осуществления подходящим рекомбинантным белком фоллистатина может быть гомолог или аналог белка дикого типа или встречающегося в природе белка. Например, гомолог или аналог белка фоллистатина дикого типа или встречающегося в природе белка фоллистатина человека может содержать одну или более аминокислотных или доменных замен, делеций и/или вставок по сравнению с белком фоллистатина дикого типа или встречающимся в природе белком фоллистатина {например, SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5), с сохранением при этом существенной активности белка фоллистатина {например, ингибирование миостатина или активина). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени гомологичным белку фоллистатина FS315 человека (SEQ ID N0:1). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную SEQ ID N0:1. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени идентичным белку фоллистатина FS315 человека (SEQ ID N0:1). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную SEQ ID N0:1.
[00108] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения,
является в значительной степени гомологичным белку фоллистатина FS315 человека (SEQ ID N0:2). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную SEQ ID N0:2. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени идентичным белку фоллистатина FS315 человека (SEQ ID N0:2). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную SEQ ID N0:2.
[00109] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени гомологичным белку фоллистатина FS303 человека (SEQ ID N0:3). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную SEQ ID N0:3. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени идентичным белку фоллистатина FS303 человека (SEQ ID N0:3). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную SEQ ID N0:3.
[00110] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени гомологичным белку фоллистатина FS303 человека (SEQ ID N0:4). В некоторых вариантах
осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную SEQ ID N0:4. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени идентичным белку фоллистатина FS303 человека (SEQ ID N0:4). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную SEQ ID N0:4.
[00111] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени гомологичным белку фоллистатина FS2 8 8 человека (SEQ ID N0:5). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную SEQ ID N0:5. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, является в значительной степени идентичным белку фоллистатина FS2 8 8 человека (SEQ ID N0:5). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичную SEQ ID N0:5.
[00112] Гомологи или аналоги белков фоллистатина человека могут быть получены в соответствии со способами изменения полипептидной последовательности, известными специалисту средней квалификации в данной области техники, такими как обнаруживаемые в источниках, в которых собраны такие способы. Как будет понятно специалисту средней квалификации в данной области техники, две
последовательности обычно считаются "практически гомологичными",
если они содержат гомологичные остатки в соответствующих
положениях. Гомологичные остатки могут представлять собой
идентичные остатки. В качестве альтернативы, гомологичные
остатки могут представлять собой неидентичные остатки,
обладающие соответствующими сходными структурными и/или
функциональными характеристиками. Например, как хорошо известно
специалисту средней квалификации в данной области техники,
определенные аминокислоты, как правило, классифицируют как
"гидрофобные" или "гидрофильные" аминокислоты и/или как имеющие
"полярные" или "неполярные" боковые цепи, при этом замена одной
аминокислоты на другую того же типа часто может считаться
"гомологичной" заменой. В некоторых вариантах осуществления
консервативные замены аминокислот включают замены,
осуществляемые среди аминокислот в следующих группах: (а) М, I, L, V; (b) F, Y, W; (с) К, R, Н; (d) A, G; (е) S, Т; (f) Q, N; и (g) Е, D. В некоторых вариантах осуществления "консервативная аминокислотная замена" относится к аминокислотной замене, которая не изменяет такие характеристики, как относительный заряд или размер белка, в котором осуществляют аминокислотную замену.
[00113] Как хорошо известно из уровня техники,
аминокислотные последовательности или последовательности
нуклеиновых кислот могут сравниваться с помощью любого из ряда
алгоритмов, в том числе доступных в коммерческом программном
обеспечении, таком как BLASTN для нуклеотидных
последовательностей и BLASTP, BLAST с гэпами и PSI-BLAST для аминокислотных последовательностей. Такие приведенные в качестве примера программы описаны в Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs)), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; и Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in
Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. В дополнение к идентификации гомологичных последовательностей, вышеупомянутые программы, как правило, дают представление о степени гомологии.
[00114] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, содержит одну или более аминокислотных делеций, вставок или замен по сравнению с человеческим белком фоллистатина дикого типа. Например, подходящий рекомбинантный белок фоллистатина может содержать аминокислотные делеций, вставки и/или замены, как представлено в таблице 4. Типичные аминокислотные делеций, вставки и/или замены показаны в качестве примера в FS315, соответствующем SEQ ID N0:2. В некоторых вариантах осуществления идентичные делеций, вставки или замены могут присутствовать, в соответствующих положениях, в FS315, содержащем сигнальную последовательность (например, SEQ ID N0:1), FS303 (например, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4) или FS288 (например, SEQ ID N0:5).
(К(76, 81, 82) А)
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKACRMNAANKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO:17
(K82E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKENKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:18 (K(75,76)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGEECRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:19 (K(76,82)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKENKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:20 (K (81, 82) E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNEENKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:21
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
(К(76,81,82)Е)
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEENKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:22
(К(76,81,82)E/V8 8Е)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEENKPRCECAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:23
(K84E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:24 (K(76,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKKNEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:25 (K (82, 84) E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKENEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:26
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
(R78E/K84E)
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKKNEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:27 (К(76,82,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKENEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:28 (R78E/K82E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKENKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:29 (R78E/K(82,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKENEPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:30 К(76,81)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
N0:31(К82Т)#
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKTNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO:32
(P85T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNKTRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:33
(R78N/N80T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCNMTKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:34
(R86N/V88T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNKPNCTCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:35
(K75N/C77T/ K82T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGNKTRMNKTNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:36
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
(G74N/K76S)#
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKSCRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:37 (G74N/K76T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKTCRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:38 (G74N/K76T/
P85T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKTCRMNKKNKTRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:39
(C66S/K75N/ C77T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETSENVDCGPGNKTRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0:40 (C66A/K75N/
C77T)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETAENVDCGPGNKTRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID N0: 101
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
(K75N/C77S/ К82Т)#
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGNKSRMNKTNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO: 102 (C66S/K75N/ C77S)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETSENVDCGPGNKSRMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO: 103 (C6 6A/K7 5N/ C77S)#
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMI FNGGAPNCIPCKETAENVDCGPGNKS.RMNKKNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO: 104 К(81,82)D
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNDDNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO: 105 К(76,81,82)D
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKDCRMNDDNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
SEQ ID NO: 106
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVNDNTLF
К(76,82)D
KWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKDCRMNKDNKPRCVCAPDCS NITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPELEVQYQGRCKKTCRD VFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICPEPASSEQYLCGNDGVTYSSA CHLRKATCLLGRSIGLAYEGKCIKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGR GRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC S S GVL LEVK HSGSCNSISEDTEEEEEDEDQDYSFPISSILEW
* Нумерация аминокислот соответствует последовательности FS315 {например, SEQ ID N0:2); изменения аминокислот по сравнению с последовательностью FS315 дикого типа подчеркнуты.
** Замена QSCWDQTGS была опубликована в J Pharmacol Exp Ther (2015) 354(2) : 238. Она использовалась в качестве экспериментального контроля.
# вариант гипергликозилирования.
[00115] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, включает в себя мутантов гипергликозилирования HBS-области, содержащей консенсусную последовательность N-X-T/S. Консенсус N-X-T/S представляет собой мотив консенсусной последовательности гликозилирования, где X может представлять собой любую аминокислоту за исключением пролина между Asn (N) и Thr (Т) или между Asn (N) и Ser (S) . В некоторых вариантах осуществления добавление консенсусной последовательности гликозилирования маскирует, ослабляет или предотвращает связывание с гепарином. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, содержит аминокислотные последовательности, представленные в таблице 5, соответствующие положениям 66-88 человеческих белков фоллистатина дикого типа FS315, FS303 и FS288 {например, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5). В некоторых вариантах осуществления варианты гипергликозилирования характеризуются улучшенными РК-параметрами. В некоторых вариантах осуществления варианты гипергликозилирования не имеют чистого изменения в заряде, как показано с помощью pi (изоэлектрической точки).
[00116] В некоторых вариантах осуществления делеция, вставка или замена аминокислот в полипептиде фоллистатина находятся в пределах HBS. В некоторых вариантах осуществления
делеция, вставка или замена аминокислот находятся рядом или по соседству с HBS, например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, б, 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоты по отношению к N-концевой или С-концевой аминокислоте в HBS. Без углубления в теорию, предполагается, что изменения в пределах, рядом или по соседству с HBS уменьшают связывание с гепарином. Как предполагают, уменьшенное связывание с гепарином улучшает фармакокинетические параметры рекомбинантного белка, такие как, например, in vivo период полужизни в сыворотке крови. Без углубления в теорию, также предполагают, что изменения в пределах, рядом или по соседству с HBS могут уменьшать иммуногенность и/или усиливать экспрессию рекомбинантного белка. В некоторых вариантах осуществления усиленная экспрессия рекомбинантного фоллистатина обеспечена одной или более из мутаций K75D, К75Е, K76D, К7 6Е, K81D, К81Е, K81D или К82Е в HBS. В некоторых вариантах осуществления усиленная экспрессия рекомбинантного фоллистатина обеспечена мутацией К82Е в HBS. В некоторых вариантах осуществления замена по меньшей мере одного аминокислотного остатка (например 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10) в HBS по меньшей мере одним аминокислотным остатком, имеющим менее положительный заряд, может снижать связывание с гепарином рекомбинантного белка фоллистатина.
[00117] В некоторых вариантах осуществления аминокислотные замены в полипептиде фоллистатина вводят сайты консенсусного гликозилирования в область связывания с гепарином {например, К82Т, Р85Т, R78N/N80T, R86N/V88T, K75N/C77T/K82T, G74N/K76S, G74N/K76T, G74N/K76T/P85T, C66S/K75N/C77T, C66A/K75N/C77T K75N/C77S/K82T, C66S/K75N/C77S, C66A/K7 5N/C77S). Предполагают, что последующее гликозилирование аминокислоты(аминокислот) маскирует гепарин-связывающий домен и, таким образом, уменьшает связывание рекомбинантного белка с гепарином. Наличие гликана, как также предполагают, маскирует замененную аминокислоту(-ы) с модулированием тем самым любого потенциального усиления иммуногенности, обеспечиваемой рекомбинантным белком. Также ожидается, что гипергликозилирование улучшает растворимость и/или период полужизни рекомбинантного белка. Типичные варианты
гипергликозилирования показаны, как указано, в таблицах 4, 5 и 9.
SEQ ID N0:50
(K84E)
CENVDCGPGKKCRMNKKNEPRCV
SEQ ID N0:51 (K(76,84)E)
CENVDCGPGKECRMNKKNEPRCV
SEQ ID N0:52 (K (82, 84) E)
CENVDCGPGKKCRMNKENEPRCV
SEQ ID N0:53
(R78E/K84E)
CENVDCGPGKKCEMNKKNEPRCV
SEQ ID N0:54 (K(76,82,84)E)
CENVDCGPGKECRMNKENEPRCV
SEQ ID N0:55
(R78E/K82E)
CENVDCGPGKKCEMNKENKPRCV
SEQ ID N0:56 (R78E/K(82,84)E)
CENVDCGPGKKCEMNKENEPRCV
SEQ ID N0:57 (K(76,81)E)
CENVDCGPGKECRMNEKNKPRCV
SEQ ID N0:58
(K82T)#
CENVDCGPGKKCRMNKTNKPRCV
SEQ ID N0:59
(P85T)#
CENVDCGPGKKCRMNKKNKTRCV
SEQ ID N0:60
(R78N/N80T)#
CENVDCGPGKKCNMTKKNKPRCV
SEQ ID N0:61
(R86N/V88T)#
CENVDCGPGKKCRMNKKNKPNCT
SEQ ID N0:62
(K75N/C77T/K82T)#
CENVDCGPGNKTRMNKTNKPRCV
SEQ ID N0:63
CENVDCGPNKSCRMNKKNKPRCV
FS315 {например, SEQ ID N0:2); изменения аминокислот подчеркнуты.
**3амена QSCWDQTGS была опубликована в J Pharmacol Exp Ther (2015) 354(2) : 238. Она использовалась в качестве экспериментального контроля.
# вариант гипергликозилирования.
Слитые белки фоллистатина
[00118] Предполагается, что подходящий рекомбинантный белок фоллистатина может иметь конфигурацию слитого белка. Например, рекомбинантный белок фоллистатина, подходящий для настоящего изобретения, может представлять собой слитый белок домена фоллистатина и другого домена или фрагмента, который, как правило, может облегчать терапевтический эффект фоллистатина, например, усиливая или повышая стабильность, активность и/или доставку белка фоллистатина, или снижая, или устраняя иммуногенность или клиренс. Такие подходящие домены или фрагменты для слитого белка фоллистатина включают без ограничения Fc-домен, XTEN-домен или слияния альбумина человека.
Fc-домен
[00119] В некоторых вариантах осуществления подходящий рекомбинантный белок фоллистатина содержит Fc-домен или его часть, которые связываются с FcRn-рецептором. В качестве неограничивающего примера подходящий Fc-домен может быть получен из иммуноглобулинов такого подкласса, как IgG. В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен получен из IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен получен из IgM, IgA, IgD или IgE. Особенно подходящие Fc-домены включают домены, полученные из антител человека или гуманизированных антител. В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен представляет собой модифицированную часть Fc-домена, такую как модифицированная часть Fc-домена человека.
[00120] В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, представленную в таблице 6.
Таблица б. Типичные Fc-домены
ID №
последовательности (описание)
Fc-домен*
SEQ ID N0:6 (человеческий Fc IgGl дикого типа)
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV WDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
LALA и NHance подчеркнуты.
[00121] В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc
домен содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную или идентичную SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:10 или SEQ ID N0:11.
[00122] Предполагается, что улучшение связывания между Fc-доменом и FcRn-рецептором приводит к продлению периода полужизни в сыворотке крови рекомбинантного белка. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен содержит одну или более мутаций аминокислот, которые приводят к улучшению связывания с FcRn. Различные мутации в Fc-домене, которые влияют на улучшение связывания с FcRn, известны из уровня техники, и их можно приспособить для практической реализации настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен содержит одну или более мутаций в одном или более положениях, соответствующих Thr 250, Met 252, Ser 254, Thr 256, Thr 307, Glu 380, Met 428, His 433 и/или Asn 434 IgGl человека, согласно нумерации EU.
[00123] В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен содержит одну или более мутаций в одном или более положениях, соответствующих L234, L235, Н433 и N434 IgGl человека, согласно нумерации EU.
[00124] Fc-часть рекомбинантного слитого белка может приводить к нацеливанию на клетки, которые экспрессируют Fc-рецепторы, приводящие к провоспалительным эффектам. Некоторые мутации в Fc-домене уменьшают связывание рекомбинантного белка с Fc-гамма-рецептором и ингибируют тем самым эффекторные функции. В одном варианте осуществления эффекторная функция представляет собой антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC). Например, подходящий Fc-домен может содержать мутации L234A (Leu234Ala) и/или L235A (Leu235Ala) (нумерация EU). В некоторых вариантах осуществления мутации L234A и L235A также называются мутациями LALA. В качестве неограничивающего примера подходящий Fc-домен может содержать мутации L2 34A и L2 35A (нумерация EU) . Типичные последовательности Fc-домена, содержащие мутации L234A и L235A, показаны как SEQ ID N0:7 в
таблице 6.
[00125] В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен может содержать мутации Н433К (His433Lys) и/или N434F
(Asn434Phe) (нумерация EU). В качестве неограничивающего примера подходящий Fc-домен может содержать мутации Н433К и N434F
(нумерация EU). В некоторых вариантах осуществления мутации Н433К и N434F также называются мутациями NHance. Типичные последовательности Fc-домена, включающие мутации Н433К и N434F, показаны как SEQ ID N0:8 в таблице 6.
[00126] В некоторых вариантах осуществления подходящий Fc-домен может содержать мутации L234A (Leu234Ala), L235A
(Leu235Ala), Н433К (His433Lys) и/или N434F (Asn434Phe)
(нумерация EU) . В качестве неограничивающего примера подходящий Fc-домен может содержать мутации L234A, L235A, Н433К и N434F
(нумерация EU) . Типичные последовательности Fc-домена, включающие мутации L234A, L235A, Н433К и N434F, показаны как SEQ ID N0:9 в таблице 6.
[00127] Дополнительные аминокислотные замены, которые может включать в себя Fc-домен, включают замены, описанные, например, в патентах США №№ 6277375; 8012476 и 8163881, которые включены в данный документ посредством ссылки. Линкер или спейсер
[00128] Домен фоллистатина может быть непосредственно или опосредованно связан с Fc-доменом. В некоторых вариантах осуществления подходящий рекомбинантный белок фоллистатина содержит линкер или спейсер, который соединяет домен фоллистатина и Fc-домен. Аминокислотный линкер или спейсер обычно предназначен для того, чтобы быть гибким, или для внедрения в структуру, такую как альфа-спираль, между двумя белковыми компонентами. Линкер или спейсер может являться относительно коротким или может быть длиннее. Как правило, длина линкера или спейсера составляет, например, 3-100 (например, 5100, 10-100, 20-100, 30-100, 40-100, 50-100, 60-100, 70-100, 80100, 90-100, 5-55, 10-50, 10-45, 10-40, 10-35, 10-30, 10-25, 1020) аминокислот. В некоторых вариантах осуществления линкер или спейсер имеет длину, равную или превышающую 2, 3, 4, 5, б, 7, 8,
9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80,
85, 90, 95 или 100 аминокислот. Как правило, более длинный линкер может понижать стерическое несоответствие. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит смесь остатков глицина и серина. В некоторых вариантах осуществления линкер может дополнительно содержать остатки треонина, пролина и/или аланина. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления линкер содержит 10-100, 10-90, 10-80, 10-70, 10-60, 10-50, 10-40, 1030, 10-20, 10-15 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 или 95 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления линкер не является линкером, состоящим из ALEVLFQGP (SEQ ID N0:68).
[00129] В качестве неограничивающих примеров линкеры или спейсеры, подходящие для настоящего изобретения, включают без ограничения:
GGG (SEQ ID N0:69);
GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP (линкер GAG, SEQ ID N0:70); GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP (линкер GAG2, SEQ ID N0:71) и GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP (линкер GAG3, SEQ ID N0:72).
[00130] Подходящие линкеры или спейсеры также включают таковые, которые имеют аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше гомологичную или идентичную приведенным выше в качестве примера линкерам, например, линкеру GAG (SEQ ID N0:70), линкеру GAG 2 (SEQ ID N0:71) или линкеру GAG3 (SEQ ID N0:72). Дополнительные линкеры, подходящие для применения в некоторых вариантах осуществления, могут быть найдены в US20120232021, поданной 2 марта 2012 года, раскрытие которой в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления представлен линкер, который связывает полипептид фоллистатина с Fc-доменом без оказания существенного влияния на способность полипептида
фоллистатина связываться с любым из его когнатных лигандов {например, активином А, миостатином, гепарином т. д.) . В некоторых вариантах осуществления представлен такой линкер, с которым связывание пептида фоллистатина с гепарином не изменяется по сравнению с полипептидом фоллистатина отдельно. Типичные слитые белки фоллистатина
[00131] В конкретных вариантах осуществления подходящий слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина включает в себя полипептид фоллистатина и Fc-домен, при этом полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную человеческому белку FS315 дикого типа (SEQ ID N0:1 или SEQ ID N0:2), белку FS303 (SEQ ID N0:3 или SEQ ID N0:4) или FS288 (SEQ ID N0:5). В конкретных вариантах осуществления подходящий слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина включает в себя полипептид фоллистатина, Fc-домен и линкер, который связывает полипептид фоллистатина с Fc-доменом, при этом полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную человеческому белку FS315 дикого типа (SEQ ID N0:1) или белку FS315 (SEQ ID N0:2). Как правило, подходящий слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина способен связываться с активином А и миостатином. В некоторых вариантах осуществления подходящий слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина имеет in vivo период полужизни, варьирующий от приблизительно 0,5 до б суток (например, приблизительно 0,5-5,5 суток, приблизительно 0,5-5 суток, приблизительно 1-5 суток, приблизительно 1,5-5 суток, приблизительно 1,5-4,5 суток, приблизительно 1,5-4,0 суток, приблизительно 1,5-3,5 суток, приблизительно 1,5-3 суток, приблизительно 1,5-2,5 суток, приблизительно 2-6 суток, приблизительно 2-5,5 суток, приблизительно 2-5 суток, приблизительно 2-4,5 суток, приблизительно 2-4 суток, приблизительно 2-3,5 суток, приблизительно 2-3 суток). В некоторых вариантах осуществления
подходящий слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина имеет in vivo период полужизни, варьирующий от приблизительно 2 до 10 суток (например, варьирующий от приблизительно 2,5 до 10 суток, от приблизительно 3 до 10 суток, от приблизительно 3,5 до 10 суток, от приблизительно 4 до 10 суток, от приблизительно 4,5 до 10 суток, от приблизительно 5 до 10 суток, от приблизительно 3 до 8 суток, от приблизительно 3,5 до 8 суток, от приблизительно 4 до 8 суток, от приблизительно 4,5 до 8 суток, от приблизительно 5 до 8 суток, от приблизительно 3 до б суток, от приблизительно 3,5 до б суток, от приблизительно 4 до б суток, от приблизительно 4,5 до б суток, от приблизительно 5 до б суток).
[00132] В качестве неограничивающих примеров подходящие слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента могут иметь аминокислотную последовательность, показанную в таблице 7.
QSCWDQTGS (SEQ ID N0:14)**
PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF ЪЕРРКРКВТШХЗРТРЕУТСУУУОУБШВРЕУКЕШУУОСУЕ VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:75 (K (81, 82) A)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNAANK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF ЪЕРРКРКВТШХБРТРЕУТСУУУОУЗШВРЕУКЕТШУУОСУЕ VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:76 (K(76,81,82)A)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKACRMNAANK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC
LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:77
(K82E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKENK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:78 (K(75,76)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGEECRMNKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:79 (K(76,82)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKENK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT
EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:80 (К (81, 82) E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNEENK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:81 (K(76,81,82)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEENK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:82 (K(76,81,82)Е/ V88E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEENK PRCECAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE
LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:83 (K84E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:84 (K(76,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKKNE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:85 (K (82, 84) E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKENE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:86 (R78E/K84E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKKNE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:87 (K(76,82,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNKENE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF
LFPPKPKDTIM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:88 (R78E/K82E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKENK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:89 (R78E/K(82,84)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCEMNKENE PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:90 К(76,81)E)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKECRMNEKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP
EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:91
(K82T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKTNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:92
(P85T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNK TRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:93
(R78N/N80T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCNMTKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:94
(R86N/V88T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNKKNK PNCTCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:95
(K75N/C77T/K82T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGNKTRMNKTNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE
VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:96 (G74N/K76S)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKSCRMNKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:97 (G74N/K76T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKTCRMNKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:98 (G74N/K76T/P85T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPNKTCRMNKKNK TRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC
IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:99
(C66S/K75N/C77T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETSENVDCGPGNKTRMNKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID N0:100 (C66A/K75N/C77T)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETAENVDCGPGNKTRMNKKNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 117
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN
(К(76,82)D)
DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKDCRMNKDNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 120 (K (81, 82) D)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKKCRMNDDNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 118 (K(76,81,82)D)
GNCWLRQAKNGRCQVLYKTELSKEECCSTGRLSTSWTEEDVN DNTLFKWMIFNGGAPNCIPCKETCENVDCGPGKDCRMNDDNK PRCVCAPDCSNITWKGPVCGLDGKTYRNECALLKARCKEQPE LEVQYQGRCKKTCRDVFCPGSSTCWDQTNNAYCVTCNRICP EPASSEQYLCGNDGVTYSSACHLRKATCLLGRSIGLAYEGKC IKAKSCEDIQCTGGKKCLWDFKVGRGRCSLCDELCPDSKSDE PVCAS DNAT YAS E САМКЕAAC SSGVLLEVKHSGSCNSISEDT EEEEEDEDQDYS FPIS SILEWDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVF LFPPKPKDTШISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSL TC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
* Нумерация аминокислот FS соответствует последовательности FS315 {например, SEQ ID N0:2).
** Замена QSCWDQTGS была опубликована в J Pharmacol Exp Ther (2015) 354(2) : 238. Она использовалась в качестве экспериментального контроля.
# последовательность, выделенная жирным шрифтом и курсивом, соответствует IgGlFc человека, содержащему мутации LALA в положениях 234 и 235 (подчеркнуты и соответствуют нумерации EU) (SEQ ID N0:7).
[00133] В некоторых вариантах осуществления слитые белки на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента могут быть
обозначены как FS 315К(81,82)A-hFcLALA, FS315К(81,82)A-GGG-
hFcLALA, FS315K(76, 81, 82)A-hFcLALA, FS3 ОЗК(76, 81, 82)A-hFcLALA,
FS315K(7 6,81,82)A-GGG-hFcLALA, FS3ОЗК(76,81,82)A-GGG-hFcLALA,
FS315K82T-hFcLALA, FS303K82T-hFcLALA, FS315K82T-GGG-hFcLALA,
FS303K82T-GGG-hFcLALA, FS315K(76,81)E-hFcLALA,
FS315K(7 6, 81, 82)E/V88E-hFcLALA, FS 315WT-hFcLALA, FS315K(75, 76)E-
hFcLALA, FS315K(7 6, 82)E-hFcLALA, FS315K(76, 82)D-hFcLALA,
FS315R8 6N/V8 8T-hFcLALA, FS315K7 5N/C7 7T/K82T-hFcLALA,
FS315K75N/C77S/K82T-hFcLALA, FS315 del75-8 6-hFcLALA,
FS315K(81,82)E-hFcLALA, FS 315K(81,82)D-hFcLALA FS315K82E-
hFcLALA, FS315K(76, 81, 82)E-hFcLALA, FS 315K(76, 81, 82)D-hFcLALA,
FS315R78N/N80T-hFcLALA, FS315P85T-hFcLALA, FS315K(76,81)E-
hFcLALA или FS315K75N/C77N/K82T-hFcLALA.
[00134] Предполагается, что слитый белок на основе фоллистатина и Fc-фрагмента может быть получен в различных конфигурациях, в том числе гомодимерных или мономерных конфигурациях. Например, может быть сконструирована подходящая гомодимерная конфигурация, в которой С-конец партнера по слиянию {например, полипептид фоллистатина плюс линкер) присоединен к N-концу обеих нитей Fc-полипептида. Может быть сконструирована подходящая мономерная конфигурация, в которой С-конец партнера по слиянию {например, полипептид фоллистатина плюс линкер) слит
с одним Fc-димером или с одним Fc-мономером. Мономерная конфигурация может понижать стерическое несоответствие.
[00135] Как используется в данном документе, "процент (%)
идентичности аминокислотных последовательностей" в отношении
эталонной последовательности белка {например, эталонной
последовательности белка фоллистатина), идентифицированного в
данном документе, определяют как процентное отношение
аминокислотных остатков в кандидатной последовательности,
которые являются идентичными аминокислотным остаткам в эталонной
последовательности после выравнивания последовательностей и
введения гэпов, при необходимости, для достижения максимального
процента идентичности последовательностей и без учета каких-либо
консервативных замен как части идентичности последовательностей.
Выравнивание для определения процента идентичности
аминокислотных последовательностей может быть достигнуто
различными путями, которые известны специалистам в данной
области техники, например, с использованием общедоступного
компьютерного программного обеспечения, такого как программное
обеспечения BLAST, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в
данной области техники смогут определить соответствующие
параметры для измерения выравнивания, в том числе любые
алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания
по всей длине сравниваемых последовательностей. Предпочтительно
использование программного обеспечения WU-BLAST-2 для
определения идентичности аминокислотных последовательностей
(Altschul et al., Methods in Enzvmoloqy 266, 460-480 (1996);
http://blast.wustl/edu/blast/README.html). В WU-BLAST-2
используются некоторые параметры поиска, большинство из которых имеют значения по умолчанию. Регулируемые параметры задаются со следующими значениями: длина перекрывания =1, доля перекрывания = 0,125, порог области (Т) =11. Балл HSP (S) и параметры HSP S2 представляют собой динамические значения и устанавливаются самой программой в зависимости от конкретной последовательности, однако минимальные значения могут быть настроены и установлены, как указано выше.
[00136] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента ингибирует связывание и/или активность миостатина. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента характеризуется KD, составляющим более чем приблизительно 0,1 пМ, более чем приблизительно 0,5 пМ, более чем приблизительно 1 пМ, более чем приблизительно 5 пМ, более чем приблизительно 10 пМ, более чем приблизительно 50 пМ, более чем приблизительно 100 пМ, более чем приблизительно 50 0 пМ или более чем приблизительно 1000 пМ при связывании с миостатином. Аффинность слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента может быть измерена, например, в анализе поверхностного плазмонного резонанса, таком как анализ BIAcore.
[00137] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента ингибирует связывание и/или активность активина А. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента характеризуется KD, составляющим более чем приблизительно 0,1 пМ, более чем приблизительно 0,5 пМ, более чем приблизительно 1 пМ, более чем приблизительно 5 пМ, более чем приблизительно 10 пМ, более чем приблизительно 50 пМ, более чем приблизительно 100 пМ, более чем приблизительно 50 0 пМ или более чем приблизительно 1000 пМ при связывании с активином А. Аффинность слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента может быть измерена, например, в анализе поверхностного плазмонного резонанса, таком как анализ BIAcore.
[00138] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
характеризуется пониженной аффинностью связывания по отношению к гепарину по сравнению с аффинностью связывания белка фоллистатина дикого типа и Fc-фрагмента по отношению к гепарину. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента характеризуется KD, составляющим более чем приблизительно 0,01 нМ, более чем приблизительно 0,05 нМ, более чем приблизительно 0,1 нМ, более
чем приблизительно 0,5 нМ, более чем приблизительно 1 нМ, более чем приблизительно 5 нМ, более чем приблизительно 10 нМ, более чем приблизительно 50 нМ, более чем приблизительно 100 нМ, более чем приблизительно 150 нМ, более чем приблизительно 200 нМ, более чем приблизительно 250 нМ или более чем приблизительно 500 нМ при связывании с гепарином.
[00139] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
характеризуется KD, составляющим более чем приблизительно 1 нМ, более чем приблизительно 5 нМ, более чем приблизительно 10 нМ, более чем приблизительно 50 нМ, более чем приблизительно 100 нМ, более чем приблизительно 500 нМ или более чем приблизительно 1000 нМ при связывании с Fc-рецептором. В некоторых вариантах осуществления Fc-рецептор представляет собой Fcy-рецептор. В некоторых вариантах осуществления Fcy-рецептор представляет собой FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA или FcyRIIIB.
[00140] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
характеризуется минимальным или не поддающимся оценке связыванием с ВМР-9. В некоторых вариантах осуществления слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента характеризуется минимальным или не поддающимся оценке связыванием с ВМР-10. В некоторых вариантах осуществления минимальное или не поддающееся оценке связывание определено в диапазоне от 190 пМ до 25000 пМ.
[00141] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
характеризуется IC50, составляющим ниже приблизительно 2 0 нМ, ниже приблизительно 15 нМ, ниже приблизительно 10 нМ, ниже приблизительно 5 нМ, ниже приблизительно 4 нМ, ниже приблизительно 3 нМ, ниже приблизительно 2 нМ, ниже приблизительно 1 нМ, ниже приблизительно 0,5 нМ, ниже приблизительно 0,2 5 нМ, ниже приблизительно 0,1 нМ, ниже приблизительно 0,05 нМ или ниже приблизительно 0,01 нМ в анализе стимуляции миостатина.
[00142] В некоторых вариантах осуществления слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
характеризуется IC50, составляющим ниже приблизительно 2 0 нМ, ниже приблизительно 15 нМ, ниже приблизительно 10 нМ, ниже приблизительно 5 нМ, ниже приблизительно 4 нМ, ниже приблизительно 3 нМ, ниже приблизительно 2 нМ, ниже приблизительно 1 нМ, ниже приблизительно 0,5 нМ, ниже приблизительно 0,2 5 нМ, ниже приблизительно 0,1 нМ, ниже приблизительно 0,05 нМ или ниже приблизительно 0,01 нМ в анализе стимуляции активина А.
[00143] В некоторых вариантах осуществления введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента in vivo приводит к увеличению массы мышцы относительно контроля. В некоторых вариантах осуществления масса мышцы представляет собой, например, вес мышцы. В некоторых вариантах осуществления мышца представляет собой одну или более скелетных мышц, например представленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления мышца выбрана из группы, состоящей из диафрагмы, triceps, soleus, tibialis anterior, gastrocnemius, extensor digitorum longus, rectus abdominus, quadriceps и их комбинаций.
Получение рекомбинантного фоллистатина или слитых белков на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента
[00144] Рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, подходящий для настоящего изобретения, может быть получен с помощью любых доступных средств. Например, рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента может быть получен рекомбинантным путем с использованием системы клетки-хозяина, сконструированной для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента. В качестве альтернативы или дополнения, рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента может быть получен путем активации эндогенных генов. В качестве альтернативы или дополнения, рекомбинантный белок фоллистатина
или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента может быть частично или полностью получен путем химического синтеза.
[00145] Если белки получают рекомбинантным путем, то может применяться любая система экспрессии. В качестве нескольких примеров, известные системы экспрессии включают, например, Е. coli, яйцеклетку, бакуловирус, растение, дрожжи или клетки млекопитающих, например нижеописанные клетки СНО и/или другие клетки млекопитающих.
[0014 6] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные
белки фоллистатина или слитые белки на основе рекомбинантного
фоллистатина и Fc-фрагмента, подходящие для настоящего
изобретения, продуцируют в клетках млекопитающих.
Неограничивающие примеры клеток млекопитающих, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, включают линию клеток миеломы мышей BALB/c (NS0/1, ЕСАСС № 85110503); ретинобласты человека (PER.C6, CruCell, Лейден, Нидерланды); линию клеток почки обезьяны CV1, трансформированных с помощью SV40 (C0S-7, АТСС CRL 1651); линию клеток эмбриональной почки человека (клетки НЕК2 93 или 2 93, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham et al. , J. Gen Virol., 36:59,1977); линию клеток фибросаркомы человека (например, НТ1080); клетки почки новорожденного хомяка (ВНК21, АТСС CCL 10); клетки яичника китайского хомяка +/-DHFR (СНО, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216, 1980); клетки Сертоли мыши (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251, 1980); клетки почки обезьяны (CV1 АТСС CCL 70); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76, АТСС CRL-1 587); клетки карциномы шейки матки человека (HeLa, АТСС CCL 2); клетки почки собаки (MDCK, АТСС CCL 34); клетки печени крысы линии Buffalo (BRL ЗА, АТСС CRL 1442); клетки легкого человека (W138, АТСС CCL 75); клетки печени человека (Hep G2, НВ 8065); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562, АТСС CCL51); клетки TRI (Mather et al. , Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982); клетки MRC 5; клетки FS4 и линию клеток гепатомы человека (Hep G2).
[00147] В некоторых вариантах осуществления настоящее
изобретение относится к рекомбинантным белкам фоллистатина или слитым белкам на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, полученным из клеток, отличных от человеческих, или из человеческих клеток. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантным белкам фоллистатина или слитым белкам на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, полученным из клеток СНО или клеток НТ1080.
[00148] Как правило, клетки, которые являются сконструированными для экспрессии рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, могут содержать трансген, который кодирует рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе. Следует учитывать, что нуклеиновые кислоты, кодирующие рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, могут содержать регуляторные последовательности, последовательности генного контроля, промоторы, некодирующие последовательности и/или другие соответствующие последовательности для экспрессии рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента. Как правило, кодирующая область функционально связана с одним или более их таких компонентов нуклеиновой кислоты.
[00149] Кодирующая область трансгена может включать в себя одну или более молчащих мутаций для оптимизации частоты использования кодона для конкретного типа клеток. Например, кодоны гена фоллистатина могут быть оптимизированы в отношении экспрессии в клетке позвоночного. В некоторых вариантах осуществления кодоны гена фоллистатина могут быть оптимизированы в отношении экспрессии в клетке млекопитающего, например в клетке СНО. В некоторых вариантах осуществления кодоны гена фоллистатина могут быть оптимизированы в отношении экспрессии в клетке человека.
Фармацевтическая композиция и введение
[00150] Кроме того, настоящее изобретение дополнительно
предусматривает фармацевтические композиции, содержащие
терапевтически активные ингредиенты в соответствии с настоящим
изобретением {например, рекомбинантный белок фоллистатина или
слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-
фрагмента) вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми
носителями или вспомогательными веществами. Такие
фармацевтические композиции необязательно могут содержать одно или более дополнительных терапевтически активных веществ.
[00151] Хотя описания фармацевтических композиций, представленных в данном документе, в основном направлены на фармацевтические композиции, которые подходят для этического введения людям, специалисту в данной области техники будет понятно, что такие композиции, как правило, подходят для введения животным всех видов. Модификация фармацевтических композиций, подходящих для введения людям, с целью обеспечения композиций, подходящих для введения различным животным, хорошо известна, и ветеринарный фармаколог обычной квалификации сможет разработать и/или осуществить такую модификацию с помощью простого эксперимента, при необходимости.
[00152] Составы фармацевтических композиций, описываемых в данном документе, могут быть получены любым способом, известным или разработанным в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения предусматривают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с разбавителем или другим вспомогательным веществом или носителем и/или с одним или более другими вспомогательными ингредиентами, а затем, при необходимости и/или желании, формования и/или упаковки продукта в требуемую одно- или многодозовую единицу.
[00153] Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть получена, упакована и/или продана не расфасованной, в виде однократной единичной дозы и/или в виде многих однократных единичных доз. Как используется в данном документе, "единичная доза" представляет собой дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Как правило, количество активного ингредиента равняется дозировке
активного ингредиента, которая подлежит ведению субъекту, и/или удобную часть такой дозировки, такую как, например, половина или одна третья от такой дозировки.
[00154] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества или носителя и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением будут варьировать в зависимости от идентичности, размера и/или состояния субъекта, подлежащего лечению, и, кроме того, в зависимости от пути введения композиции, подлежащей введению. В качестве примера, композиция может содержать от 0,1% до 100% (вес/вес) активного ингредиента.
[00155] Фармацевтические составы могут дополнительно содержать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель, которые, как используется в данном документе, включают в себя любое и все из растворителей, дисперсионных сред, разбавителей или других жидких несущих сред, дисперсионных или суспензионных добавок, поверхностно-активных средств, изотонических средств, загустителей или эмульгирующих средств, консервантов, твердых связующих, смазывающих средств и т. п., подходящих для конкретной требуемой лекарственной формы. В Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включенной в данный документ посредством ссылки) раскрыты различные вспомогательные вещества, используемые в составлении фармацевтических композиций, а также известные методы их получения. За исключением случаев, когда любые удобная вспомогательная среда или носитель несовместимы с веществом или его производным, как например из-за обеспечения какого-либо нежелательного биологического эффекта или иного вредного взаимодействия с каким-либо другим(-и) компонентом(-ами) фармацевтической композиции, предполагается, что их применение охватывается объемом настоящего изобретения.
[00156] В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель является на по
меньшей мере 95%, на по меньшей мере 9 6%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или на 100% чистым. В некоторых вариантах осуществления вспомогательное вещество или носитель одобрены для применения для людей и для ветеринарного применения. В некоторых вариантах осуществления вспомогательное вещество или носитель одобрены Управлением по контролю за продуктами питания и лекарствами США. В некоторых вариантах осуществления вспомогательное вещество или носитель характеризуются фармацевтической степенью чистоты. В некоторых вариантах осуществления вспомогательное вещество или носитель отвечают стандартам Фармакопеи Соединенных Штатов Америки (USP), Европейской фармакопеи (ЕР), Фармакопеи Британии и/или Международной фармакопеи.
[00157] Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества или носители, используемые в изготовлении фармацевтических композиций, включают в себя без ограничения инертные разбавители, диспергирующие и/или гранулирующие средства, поверхностно-активные средства и/или эмульгаторы, диспергирующие средства, связующие средства, консерванты, буферные средства, смазывающие средства и/или масла. Такие вспомогательные вещества или носители необязательно могут быть включены в фармацевтические составы. Вспомогательные вещества или носители, такие как масло какао и суппозиторные воски, красители, покрывающие средства, подсластители, ароматизаторы и/или отдушки, могут присутствовать в композиции в соответствии с решением составителя.
[00158] Подходящие фармацевтически приемлемые
вспомогательные вещества или носители включают без ограничения воду, солевые растворы {например, NaCl), физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, спирты, глицерин, этанол, аравийскую камедь, растительные масла, бензиловые спирты, полиэтиленгликоли, желатин, углеводы, такие как лактоза, амилоза или крахмал, сахара, такие как маннит, сахароза или другие, декстрозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, парфюмерное масло, сложные эфиры жирных кислот, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т. д., а также их
комбинации. Если требуется, фармацевтические препараты могут быть смешаны со вспомогательными средствами {например, смазывающими веществами, консервантами, стабилизаторами, смачивающими средствами, эмульгаторами, солями для оказания влияния на осмотическое давление, буферами, красящими, вкусовыми и/или ароматными веществами и т. п.), которые не вступают в разрушительную реакцию с активными соединениями или не нарушают их активность. В предпочтительном варианте осуществления применяют водорастворимый носитель, подходящий для внутривенного введения.
[00159] Подходящая фармацевтическая композиция или лекарственный препарат, если требуется, может также содержать незначительные количества смачивающих или эмульгирующих средств или рН-буферных средств. Композиция может представлять собой жидкий раствор, суспензию, эмульсию, таблетку, пилюлю, капсулу, состав с замедленным высвобождением или порошок. Композиция также может быть составлена в виде суппозитория с традиционными связывающими веществами и носителями, такими как триглицериды. Составы для перорального применения могут содержать стандартные носители, такие как маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, поливинилпирролидон, сахаринат натрия, целлюлоза, карбонат магния ит. д. фармацевтических степеней чистоты.
[00160] Фармацевтическая композиция или лекарственный препарат могут быть составлены в соответствии с обычными процедурами в виде фармацевтической композиции, приспособленной для введения людям. Например, в некоторых вариантах осуществления композиция для внутривенного введения обычно представляет собой раствор в стерильном изотоническом водном буфере. Если необходимо, композиция также может содержать солюбилизирующее средство и анестезирующее средство местного действия для облегчения боли в месте инъекции. Обычно ингредиенты предоставляются либо по отдельности, либо смешанными друг с другом в единичной лекарственной форме, например в виде сухого лиофилизированного порошка или обезвоженного концентрата в герметично запечатанном контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества действующего средства. Если композиция
предназначена для введения посредством инфузии, то она может быть распределена в инфузионную бутылку, содержащую стерильную воду, физиологический раствор или смесь декстроза/вода фармацевтической степени чистоты. Если композицию вводят посредством инъекции, то может быть предусмотрена ампула со стерильной водой для инъекций или физиологическим раствором, с тем чтобы ингредиенты можно было смешать перед введением.
[00161] Рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе, может быть составлен в виде нейтральных или солевых форм. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные свободными аминогруппами, такие как соли, полученные из хлористоводородной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т. д., и соли, образованные свободными карбоксильными группами, такие как соли, полученные из гидроксидов натрия, калия, аммония, кальция, железа, из изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т. д.
[00162] Общие соображения в отношении составления и/или изготовления фармацевтических средств могут быть найдены, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed. , Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (включенном в данный документ путем ссылки).
Пути введения
[00163] Рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок
на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный
в данном документе (или композиция или медикамент, содержащие
рекомбинантный белок фоллистатина, описанный в данном
документе) , вводят любым подходящим путем. В некоторых вариантах
осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, слитый белок на
основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или
содержащую его фармацевтическую композицию вводят системно.
Системное введение может представлять собой внутривенное,
внутрикожное, ингаляционное, чрескожное (местное),
внутриглазное, внутримышечное, подкожное, внутримышечное, пероральное и/или чресслизистое введение. В некоторых вариантах
осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или содержащую его фармацевтическую композицию вводят подкожно. Используемый в данном документе термин "подкожная ткань" означает слой рыхлой неоформленной соединительной ткани непосредственно под кожей. Например, подкожное введение может быть осуществлено посредством инъекции композиции в участки, включающие без ограничения область бедра, абдоминальную область, ягодичную область или лопаточную область. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или содержащую его фармацевтическую композицию вводят внутривенно. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или содержащую его фармацевтическую композицию вводят перорально. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина, слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента или содержащую его фармацевтическую композицию вводят внутримышечно. Например, внутримышечное введение может быть осуществлено путем инъекции композиции у участки, в том числе без ограничения в мышцу области бедра, абдоминальную область, ягодичную область, лопаточную область или в любую мышцу, описанную в таблице 1. Если требуется, то может применяться более одного пути одновременно.
[00164] В некоторых вариантах осуществления введение приводит лишь к локальному эффекту у индивидуума, в то время как в других вариантах осуществления введение приводит к эффектам во всех частях тела индивидуума, например к системным эффектам. Как правило, введение приводит к доставке рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента в одну или более целевых тканей. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента доставляют в одну или более целевых тканей, в том числе без ограничения в сердце, головной мозг,
спинной мозг, поперечнополосатую мышцу {например, скелетную мышцу), гладкую мышцу, почку, печень, легкое и/или селезенку. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента доставляют в сердце. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента доставляют в поперечнополосатую мышцу, в частности скелетную мышцу. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента доставляют в triceps, tibialis anterior, soleus, gastrocnemius, biceps, trapezius, deltoids, quadriceps и/или диафрагму. Лекарственные формы и режим дозирования
[00165] В некоторых вариантах осуществления композицию вводят в терапевтически эффективном количестве и/или в соответствии с режимом введения дозы, который коррелирует с конкретным требуемым исходом {например, с лечением или снижением риска возникновения мышечной дистрофии, такой как мышечная дистрофия Дюшенна).
[00166] Конкретные дозы или количества, предназначенные для введения в соответствии с настоящим изобретением, можно варьировать, например, в зависимости от природы и/или степени выраженности требуемого исхода, от особенностей пути и/или сроков введения и/или от одной или более характеристик {например, массы тела, возраста, анамнеза, генетической характеристики, параметров образа жизни, степени тяжести порока сердца и/или уровня риска возникновения порока сердца и т. д. или их комбинаций). Такие дозы или количества могут быть определены специалистами в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления подходящую дозу или количество определяют в соответствии со стандартными клиническими методиками. В качестве альтернативы или дополнительно, в некоторых вариантах осуществления подходящую дозу или количество определяют посредством применения одного или более анализов in vitro или in vivo, содействующих идентификации требуемых или
оптимальных диапазонов доз или количеств, предназначенных для введения.
[00167] В различных вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина вводят в терапевтически эффективном количестве. Обычно терапевтически эффективное количество является достаточным для достижения значимого положительного эффекта у субъекта {например, лечения, модулирования, излечения, предупреждения и/или уменьшения интенсивности лежащего в основе заболевания или состояния). В некоторых конкретных вариантах осуществления подходящие дозы или количества, предназначенные для введения, могут быть экстраполированы из кривых зависимости доза-эффект, полученных в тест-системах in vitro или тест-системах на основе животных моделей.
[00168] В некоторых вариантах осуществления представленную композицию обеспечивают в виде фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав представляет собой или содержит количество единичной дозы для введения в соответствии с режимом введения дозы, который коррелирует с достижением снижения частоты возникновения или риска возникновения мышечной дистрофии, такой как мышечная дистрофия Дюшенна.
[00169] В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе, вводят в виде однократной дозы. В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе, вводят с регулярными интервалами. Введение с "интервалом", как используется в данном документе, указывает на то, что терапевтически эффективное количество вводят периодически (в отличие от одноразовой дозы). Интервал может быть определен посредством стандартных клинических методик. В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе,
вводят раз в два месяца, один раз в месяц, два раза в месяц, раз в три недели, раз в две недели, один раз в неделю, два раза в неделю, три раза в неделю, ежедневно, дважды в день или каждые шесть часов. Нет потребности в том, чтобы интервал введения для отдельного индивидуума представлял собой постоянный интервал, однако его можно варьировать с течением времени в зависимости от потребностей индивидуума.
[00170] Используемый в данном документе термин "раз в два месяца" означает введение один раз за два месяца (т. е. один разкаждые два месяца); термин "один раз в месяц" означает введение один раз за месяц; термин "раз в три недели" означает введение один раз за три недели (т. е. один разраз каждые три недели); термин "раз в две недели" означает введение один раз за две недели (т. е. один разкаждые две недели); термин "один раз в неделю" означает введение один раз за неделю; и термин "ежедневно" означает введение один раз за сутки.
[00171] В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе, вводят с регулярными интервалами неограниченно. В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента, описанный в данном документе, вводят с регулярными интервалами на протяжении определенного периода.
[00172] Описанный в данном документе термин "терапевтически эффективное количество" в широком смысле определяется как общее количество терапевтического средства, содержащегося в фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Терапевтически эффективное количество обычно вводят согласно режиму дозирования, который может предусматривать несколько разовых доз. Для любой конкретной композиции терапевтически эффективное количество (и/или соответствующую разовую дозу в пределах эффективного режима дозирования) можно варьировать, например, в зависимости от пути введения или от комбинации с другими фармацевтическими средствами.
[00173] В некоторых вариантах осуществления введение рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента снижает интенсивность, тяжесть или частоту или замедляет проявление по меньшей мере одного признака или симптома DMD. В некоторых вариантах осуществления введение рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента снижает интенсивность, тяжесть или частоту или замедляет проявление по меньшей мере одного признака или симптома DMD, выбранного из группы, состоящей из мышечного истощения, скелетной деформации, кардиомиопатии, мышечной ишемии, нарушения когнитивных функций и нарушенной дыхательной функции.
[00174] В некоторых вариантах осуществления введение рекомбинантного белка фоллистатина или слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента улучшает клинический исход, измеряемый с помощью б-минутного теста с ходьбой, теста количественного измерения силы мышц, теста двигательной деятельности на время. Шкал Брука и Вигноса функции верхних конечностей, теста легочной функции (форсированная жизненная емкость, объема форсированного выдоха за 1 секунду, пиковой скорости выдоха, максимального давления при вдохе и выдохе), связанного со здоровьем качества жизни, сгибателей коленного и локтевого сустава, разгибателей локтевого сустава, абдукции плеча, силы захвата, времени подъема из положения лежа на спине, амбулаторной оценки North Star, прохождения/пробегания 10 метров на время, шкалы Egen-Klassification, оценочной шкалы Gowers, теста двигательной способности Hammersmith, ручного миометра, диапазона движения, гониометрии, гиперкапнии, шкал развития младенцев Бейли и/или шкалы по уходу в домашних условиях.
Комбинированная терапия
[00175] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный
белок фоллистатина вводят в комбинации с одним или более
терапевтическими средствами (например, кортикостероидами),
используемыми в настоящее время для лечения мышечной дистрофии.
В некоторых вариантах осуществления известное(-ые)
терапевтическое(-ие) средство(-а) вводят в соответствии с его(их) стандартными или одобренными режимом и/или схемой дозирования. В некоторых вариантах осуществления известное(-ые) терапевтическое(-ие) средство(-а) вводят в соответствии с режимом, измененным в сравнении с его(их) стандартными или одобренными режимом и/или схемой дозирования. В некоторых вариантах осуществления такой измененный режим отличается от стандартного или одобренного режима дозирования тем, что изменено количество одной или более разовых доз (например, снижено или увеличено) и/или тем, что изменена частота введения доз (например тем, что один или более интервалов между разовыми дозами увеличены, что приводит к более низкой частоте, или уменьшены, что приводит к более высокой частоте).
[00176] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок фоллистатина или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента вводят в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими средствами. В одном варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой кортикостероид, например преднизон. В другом варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой глюкокортикоид, например дефлазакорт. В другом варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитело к Flt-1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В другом варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой РНК-модулирующее терапевтическое средство. РНК-модулирующее терапевтическое средство может представлять собой экзон-пропускающее терапевтическое средство или генную терапию. РНК-модулирующее терапевтическое средство может представлять собой, например, дрисперсен, САТ-1004, FG3019, PRO044, PRO045, этеплирсен (AVI-4658), SRP-4053, SRP-4045, SRP-4050, SRP-4044, SRP-4052, SRP-4055 или SRP-4008. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство в настоящее время используется для лечения мышечной дистрофии. В других вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство также может использоваться для лечения других
заболеваний или расстройств. В некоторых вариантах осуществления известное(-ые) терапевтическое(-ие) средство(-а) вводят в соответствии с его(их) стандартными или одобренными режимом и/или схемой дозирования. В некоторых вариантах осуществления известное(-ые) терапевтическое(-ие) средство(-а) вводят в соответствии с режимом, измененным в сравнении с его(их) стандартными или одобренными режимом и/или схемой дозирования. В некоторых вариантах осуществления такой измененный режим отличается от стандартного или одобренного режима дозирования тем, что изменено количество одной или более разовых доз {например, снижено или увеличено) и/или тем, что изменена частота введения доз {например тем, что один или более интервалов между разовыми дозами увеличены, что приводит к более низкой частоте, или уменьшены, что приводит к более высокой частоте).
Примеры
Пример 1. Слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента, нацеливающиеся на миостатин
[00177] Данный пример иллюстрирует слитый белок на основе фоллистатина и Fc-фрагмента, связывающийся с целевыми и нецелевыми лигандами. Без углубления в теорию предполагают, что активация пути Smad2/3 миостатином и активином А ведет к ингибированию экспрессии миогенного белка, и в результате миобласты не дифференцируются в мышцу. Поэтому миостатин и активин А считают подходящими целями для стимуляции мышечной регенерации. Однако многие антагонисты миостатина и активина А, такие как растворимый активиновый рецептор типа IIB (sActRIIB), также связывают костные морфогенетические белки (BMP) вследствие некоторых структурных подобий. BMP, особенно BMP-9 и ВМР-10, считаются важными морфогенетическими сигналами, организующими тканевую структуру по всему организму. Ингибирование таких BMP может вызывать нежелательные патологические состояния. Фоллистатин также связывается с гепарансульфатпротеогликанами клеточной поверхности через основную гепарин-связывающую последовательность (HBS) в первом из трех FS-доменов. Без углубления в теорию, инактивация, снижение или модулирование
связывания с гепарином, например путем мутации или делеций HBS, может повышать in vivo воздействие и/или период полужизни фоллистатина и/или слитых белков фоллистатина. Как подробно описано ниже, экспериментальные данные, описанные в данном примере, подтверждают, что слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента специфически нацеливаются на миостатин с высокой аффинностью и не связываются с нецелевым BMP или гепарином с существенной аффинностью.
[00178] В частности, аффинность связывания (KD) и кинетические показатели слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента по отношению к миостатину, активину А, гепарину, ВМР-9 и ВМР-10 оценивали с использованием анализов BIAcore(r) и нижеописанных стандартных способов.
[00179] Для определения аффинности связывания и кинетических показателей для миостатина, антитело к Fc человека (№ по каталогу GEBR-1008-39) иммобилизовали на чипе СМ5 с двумя проточными ячейками в течение 42 0 секунд при скорости потока 10 мкл/мин. Подвижным буфером служил HBS-EP+. Все образцы и контроли разбавляли до 10 мкг/мл с использованием подвижного буфера. Миостатин (0,1 мг/мл в 4 мМ НС1) (R &D Systems, № по каталогу 788-G8-010/CF) разбавляли до 0,3125, 0,625, 1,25, 2,5 и 5 нМ в расчете на молекулярную массу 2 5 кДа. Анализ выполняли с настройкой захвата 8 секунд при скорости потока 50 мкл/мин., ассоциацией в течение 300 секунд при скорости потока 50 мкл/мин. и диссоциацией в течение 1200 секунд при скорости потока 50 мкл/мин. с последующей регенерацией с использованием 3 М МдС1г в течение 30 секунд при скорости потока 60 мкл/мин.
[00180] Для определения аффинности связывания и кинетических показателей для активина А, антитело к Fc человека (№ по каталогу GEBR-1008-39) иммобилизовали на чипе СМ5 с двумя проточными ячейками в течение 42 0 секунд при скорости потока 10 мкл/мин. Подвижным буфером служил HBS-EP+. Все образцы и контроли разбавляли до 10 мкг/мл с использованием подвижного буфера. Активин А (0,1 мг/мл в 4 мМ НС1) (R &D Systems, № по каталогу 338-AC-050/CF) разбавляли до 0,156, 0,3125, 0,625, 1,25
и 2,5 нМ в расчете на молекулярную массу 2 6 кДа.
[00181] Для определения аффинности связывания и кинетических показателей для гепарина, биотинилированный гепарин получали в день анализа при 1 мг/мл, затем разбавляли до 100 мкг/мл в HBS+N. Проточные ячейки стрептавидинового чипа получали путем иммобилизации в течение 5 минут при 5 мкл/мин. и 100 мкг/мл с использованием буфера HBS+N. Образцы разбавляли в HBS+EP до концентрации, составляющей от 0,31 нМ до 25 нМ. Анализ выполняли с использованием времени ассоциации 300 секунд при скорости потока 3 0 мкл/мин. и временем диссоциации 300 секунд с последующей регенерацией 4 М NaCl в течение 3 0 секунд с немедленной последующей второй регенерацией с 4 М NaCl в течение 3 0 секунд.
[00182] Для определения аффинности связывания и кинетических показателей для BMP-9 и/или ВМР-10, антитело к Fc человека соединяли с FC3 и FC4 при приблизительно 6000-9000 RU на чипе СМ5. Белок ActRIIB-Fc использовали в качестве положительного контроля (R &D Systems, № по каталогу 339-RBB-100) для связывания с ВМР-9 и ВМР-10. Для анализа связывания ВМР-9 все образцы разбавляли до 2,5 мкг/мл, и при этом подвижным буфером служил HBS+EP. Для анализа связывания ВМР-10 все образцы разбавляли до 5 мкг/мл, и подвижным буфером служил HBS+EP+0,5 мг/мл BSA. Условия анализа предусматривали время контакта 180 секунд, время диссоциации 300 секунд и скорость потока 30 мкл/мин. ВМР-9 (R &D Systems, № по каталогу 3209-BP-010CF) и ВМР-10 (R &D Systems, № по каталогу 2926-BP-025CF) разбавляли путем трехкратных серийных разбавлений от 25 нМ до 0,19 нМ. Типичные результаты представлены в таблице 8.
связывани
связывание
е в
FS315WT-hFc
6-10
1-2
0,3
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
FS315WT-hFcLALA
20,2
тестировали
0,16
тестировали
тестирова ли
тестировали
ActRIIB-Fc
не тестировали
тестирова ли
0, 44
0, 9
связывани
связывание
е в
FS315K(81, 82) A-hFcLALA
11, 9
тестировали
1,50
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
FS315K(81, 82) A-GGG-hFcLALA
10, 7
тестировали
1,30
тестировали
тестирова ли
связывани
связывание
е в
FS315K(76,81, 82)A-hFcLALA
11, 3
тестировали
9,40
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
связывани
связывание
е в
FS303K(76,81, 82)A-hFcLALA
12, 7
тестировали
0,57
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
FS315K(76,81,
тестировали
тестировали
82)A-GGG-hFcLALA
10, 9
3,70
тестирова ли
FS303K(76,81,
тестировали
тестировали
82)A-GGG-hFcLALA
11, 6
0,51
тестирова ли
связывани
связывание
е в
FS315K82T-hFcLALA
15, 0
тестировали
1,40
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
FS303K82T-hFcLALA
9,7
тестировали
0, 33
связывание в
связывани е в
тестируемом
диапазоне отсутствует
тестируем ом
диапазоне отсутству ет
FS315K82T-GGG-hFcLALA
13, 0
тестировали
1,30
тестировали
тестирова ли
FS303K82T-GGG-hFcLALA
9, 6
тестировали
0,18
тестировали
тестирова ли
FS315K82E-hFcLALA
11, 90
тестировали
1,50
тестировали
тестирова ли
FS315K(75,76) E-hFcLALA
11,70
тестировали
1,10
тестировали
тестирова ли
FS315K(76,81) E-hFcLALA
тестировали
тестировали
тестирова ли
FS315K(76,82) E-hFcLALA
10,50
тестировали
тестировали
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K(81,82) E-hFcLALA
9, 87
тестировали
тестировали
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K(81,82) D-hFcLALA
7, 09
0, 47
20, 6
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K(76,81, 82)E-hFcLALA
2-6
1-2
> 25
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K(76,81, 82)D-hFcLALA
5, 92
0,76
> 25
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне
отсутству ет
FS315K(76,81, 82)E/V88E-hFcLALA
4,5
тестировали
> 25
тестировали
тестирова ли
FS315(del75-8 6)-hFcLALA
57, 10
тестировали
> 25
тестировали
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315R86N/V88 T-hFcLALA
12, 70
тестировали
1,30-1,7
тестировали
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K75N/C77 T/K82T-hFcLALA
40, 30
тестировали
1 4
тестировали
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315R78N/N80 T-hFcLALA
13, 00
тестировали
0,85
тестировали
тестирова ли
FS315P85T-hFcLALA
12, 40
тестировали
0, 37
тестировали
тестирова ли
FS315C66A/K75 N/C77T-hFcLALA
24,4
тестировали
В 3 раза меньше,
чем FS315wt-
hFc
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315C66S/K75 N/C77T-hFcLALA
6, 4
тестировали
В 3 раза меньше,
чем FS315wt-
hFc
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
FS315K(76,81, 82)E-mFc
14, 8
тестировали
> 25
тестировали
тестирова ли
ОДНОВАЛЕНТНЫЕ МОЛЕКУЛЫ:
monoFS315wt-hFcLALA
2, 89
тестировали
29, 2
тестировали
тестирова
monoFS315AHBS -hFcLALA
3,3
тестировали
> 25
тестировали
тестирова ли
monoFS315K(76 ,81,82)E-hFcLALA
<4
тестировали
> 25
связывание в
тестируемом
диапазоне отсутствует
связывани
е в тестируем
диапазоне отсутству ет
[00183] Как показано в таблице 8, слитые белки фоллистатина связывают миостатин с высокой аффинностью, но не связывают ВМР-9 и/или ВМР-10. В исследованиях с тестированием связывания слитого белка на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с ВМР-10 не определяли кинетические константы в тестируемом диапазоне (от 25000 до 190 пМ). Получали аффинность связывания, приблизительно в 430 раз превышающую самое слабое связывание с миостатином KD. В исследованиях с тестированием связывания слитого белка на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с ВМР-9 не определяли кинетические константы в тестируемом диапазоне (от 25000 до 190 пМ) . Получали аффинность связывания, приблизительно в 14 00 раз превышающую самое слабое связывание с миостатином KD.
Пример 2. Связывание слитого белка на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с FcRn-рецептором
[00184] Некоторые мутации в Fc-домене приводят к снижению связывания с FcRn-рецептором и тем самым уменьшают in vivo период полужизни в сыворотке крови. Аффинность связывания слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с FcRn-рецептором оценивали с использованием стандартных способов. Типичные результаты представлены в таблице 9.
FS315K(81,82)D-hFcLALA
24,7
FS315K(7 6,81,82)E-hFcLALA
96-131
FS315K(76,81,82)D-hFcLALA
59, 9
FS 315AHBS-hFcLALA
372, 0
FS315(del75-86)-hFcLALA
126, 0
FS315K82T-hFcLALA
44, 8
FS3 03K82T-hFcLALA
27, 6
FS315R8 6N/V8 8T-hFcLALA
69, 5
FS315K7 5N/C7 7T/K82T-hFcLALA
126, 0
FS315C6 6A/K7 5N/C7 7T-hFcLALA
28, 0
FS315C6 6S/K7 5N/C7 7T-hFcLALA
83, 0
monoFS315K(76,81,82)E-hFcLALA
40, 6
monoFS 315-hFcLALA
12, 8
monoFS315AHBS-hFcLALA
36, 7
[00185] Некоторые мутации в Fc-домене приводят к снижению связывания с рецептором Fc-гамма IA и тем самым снижают эффекторную функцию. Аффинность связывания слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с рецептором Fc-гамма IA оценивали с использованием стандартных способов. Аффинность связывания слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента с рецептором Fc-гамма IA оценивали с использованием стандартных способов.
[00186] Для определения аффинностей связывания для рецептора Fc-гамма IA, белки фоллистатин-Fc разбавляли в ацетате натрия, рН 5,0, до 2,5 мкг/мл и иммобилизовали на чипе СМ5 при -150 RU. Рецептор Fc-гамма RIA приобретали в виде лиофилизированного материала у компании R &D Systems, № по каталогу 1257-FC-050. Для анализа рецептора Fc-гамма IA подвижным буфером служил HBS-P+. Условия анализа предусматривали время контакта 180 секунд, время диссоциации 600 секунд и скорость потока 3 0 мкл/мин. Условия регенерации предусматривали 10 мМ фосфат натрия, рН 2,5, 500 мМ NaCl в течение 10 секунд при 30 мкл/мин. с 30-сек. стабильностью. Рецептор Fc-гамма IA разбавляли до 62,5 нМ - 0,49 нМ. Типичные результаты представлены в таблице 10.
Пример 3. Слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента характеризуются продленным периодом полужизни в сыворотке крови
[00187] Как сообщалось, фоллистатин характеризуются коротким периодом полужизни в сыворотке крови. Например, типичный коммерческий белок FS315 характеризуются периодом полужизни в сыворотке крови приблизительно один час. В данном примере определяли, что in vivo период полужизни слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента, содержащих различные мутации, как показано на фигуре 1А, фигуре 1В и в таблице 11, существенно удлиняется по сравнению с белком сравнения.
[00188] В частности, мышам CD-I вводили отдельные слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента внутривенно в дозах, указанных в таблице 11. После введения определяли содержание слитого белка на основе фоллистатина и Fc-фрагмента в сыворотке крови в разные моменты времени (фигура 1А и фигура 1В) . Период полужизни в сыворотке крови слитых белков на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента варьировал от 45,7 до 194 часов.
[00189] Способность слитых белков на основе фоллистатина и
Fc-фрагмента ингибировать активность миостатина и активина А
тестировали с использованием анализа по гену-репортеру
люциферазы. Клетки А204 рабдомиосаркомы стабильно
трансфицировали плазмидой pGL3(CAGA)12-Luc, которая содержит БтасВ-селективный элемент отклика перед геном люциферазы светляка. Использовали 1,2 нМ миостатина или активина А для стимуляции передачи сигнала Smad3. Перед добавлением в клетки слитые белки инкубировали либо с миостатином, либо с активином А в течение 3 0 минут при комнатной температуре, а затем после 2 4 часов инкубации при 37°С измеряли активность люциферазы. Концентрация миостатина или активина А, используемого для анализа передачи сигнала, составляла 1,2 нМ. Как показано в таблице 14, слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента ингибировали миостатин в анализе стимуляции с 1С50, варьирующими от менее 0,5 нМ до более 1,5 нМ. Как показано в таблице 12, слитые белки на основе фоллистатина и Fc-фрагмента ингибировали активин А в анализе стимуляции с 1С50, варьирующими от менее 0,5 нМ до более 1,5 нМ.
Таблица 12. IC50 для миостатина и активина А согласно
фоллистатина и Fc-фрагмента при системном введении
[00190] Данный пример демонстрирует, что системное введение слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента {например,
FS315K(76,81,82)E-hFcLALA, FS315K(76,81,82)E-mFc) мышам дикого типа и мышиной mdx модели мышечной дистрофии Дюшенна приводило к тенденции повышения мышечной массы in vivo при дозе 10 мг/кг, вводимой либо внутривенно, либо подкожно.
[00191] В частности, в одном исследовании самцам C57BL/6
(мыши дикого типа) вводили несущую среду (т. е. PBS) или FS315K(7 б,81,82)E-hFcLALA путем внутривенной инъекции при дозе 10 мг/кг или подкожной инъекции при дозе 2 0 мг/кг два раза в неделю в течение 4 недель. Во втором исследовании самцам мышей mdx вводили несущую среду (т. е. PBS) или FS315K(7б,81,82)E-mFc путем подкожной инъекции при дозе 10 мг/кг или слияния мышиного растворимого активинового рецептора типа IIB с химерным Fc
(ActRIIB-mFc) путем подкожной инъекции при дозе 3 мг/кг два раза в неделю в течение 12 недель. Через двадцать четыре часа после последней обработки мышей умерщвляли, собирали и взвешивали gastrocnemius и quadriceps. Типичные данные в таблице 13 показывают, что наблюдалось существенное повышение массы gastrocnemius и quadriceps как у мышей mdx, так и у мышей C57BL/6 по сравнению с gastrocnemius или quadriceps, обработанных только несущей средой. Таким образом, это четко указывает на то, что слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента повышают мышечную массу при системном введении дозы у мышей дикого типа и у животной модели DMD. В исследовании с мышами mdx измеряли силу захвата передними конечностями после 11 недель введения дозы. Типичные данные на фигуре 2 показывают, что наблюдалось существенное повышение силы захвата передними конечностями у мышей mdx, обработанных FS315K(7 б,81,82)E-mFc, по сравнению с силой захвата животных, обработанных только несущей средой. Величина силы захвата для животных, обработанных FS315K (7б,81,82)E-mFc, была больше, чем у животных, обработанных положительным контролем ActRIIB-mFc, а также больше, чем у животных C57BL/1OScSnJ дикого типа.
Таблица 13. Данные мышечной массы (% изменения относительно несущей среды) от мыши C57BL/6 и мыши mdx
% изменения относительно несущей среды
[00192] Данный пример демонстрирует, что системное введение слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента {например, FS315K(76,81,82)E-hFcLALA, FS315К(76,81,82)E-mFc) мышам дикого типа и мышиной mdx модели мышечной дистрофии Дюшенна приводило к тенденции повышения мышечной массы in vivo при дозе 10 мг/кг, вводимой либо внутривенно, либо подкожно.
[00193] Изменения pi также оценивали для слитых белков на основе фоллистатина и Fc-фрагмента. В таблице 14 ниже показан сдвиг до более кислотного значения pi при мутациях Е и D в HBS, а также при вариантах гипергликозилирования. Сдвиг pi коррелирует с пониженным связыванием с гепарином и повышенным in vivo воздействием.
[00194] Определяли профиль cIEF (диапазон pi) с использованием устройства NanoPro (ProteinSimple). Конечная тестируемая концентрация белков составляла 0,0025 мг/мл, при загрузке 12 мкл в лунку. Используемым буфером для разбавления был DPBS и Urea/Chaps (10 М/0,6%). Дополнительные используемые реагенты включали смесь G2: 4-9 (ProteinSimple 040-969), стандартный лэддер 1 pi (ProteinSimple 040-644), первичное антитело: антитело кролика рАВ к FS (Abeam, № ab4 7 941) при разбавлении 1:100, вторичное антитело: конъюгат антитела кролика
к IgG с HRP (Promega, № 4011) при разбавлении 1:100 и субстрат: Luminol/Peroxide XDR.
MonoFS315K(76,81,82)E-hFcLALA
4,7-5,3
MonoFS 315WT-hFcLALA
4,7-5,67
MonoFS315AHBS-hFcLALA
4,83-5,9
[00195] Вкратце, представленные вше примеры демонстрируют, что слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента являются высокоэффективными в индуцировании мышечной гипертрофии у модели DMD, например при системном введении. Мышечная гипертрофия на мышиной модели mdx приводила к функциональному улучшению, заключающемуся в силе захвата передними конечностями. Таким образом, слитые белки на основе рекомбинантного фоллистатина и Fc-фрагмента могут служить эффективными белковыми терапевтическими средствами для лечения DMD.
Эквиваленты и объем изобретения
[00196] Специалист в данной области техники поймет или сможет определить с применением не более чем обычных экспериментов много эквивалентов конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, описанных в данном документе. Объем настоящего изобретения не предполагается как ограниченный вышеприведенным описанием, а скорее соответствует изложенному в нижеследующей формуле изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ШАЙР ХЬЮМАН ДЖЕНЕТИК ТЕРАПИЗ, ИНК.
<120> СЛИТЫЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИСТАТИНА И FC-ФРАГМЕНТА И ИХ
ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ
МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ДЮШЕННА
<130> SHR-1238WO
<140> PCT/US2017/020723 <141> 03-03-2017
<150> 62/303,954 <151> 04-03-2016
<160> 121
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1 <211> 344 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Val Arg Ala Arg His Gln Pro Gly Gly Leu Cys Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Gln Phe Met Glu Asp Arg Ser Ala Gln Ala Gly Asn Cys
20 25 30
Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu Tyr Lys Thr
35 40 45
Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu Ser Thr Ser
50 55 60
Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys Trp Met Ile
65 70 75 80
Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu Thr Cys Glu
85 90 95
Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys Lys Asn
100 105 110
Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys
115 120 125
Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala
130 135 140
Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr
145 150 155 160
Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser
165 170 175
Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys
180 185 190
Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly
195 200 205
Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg Lys Ala Thr
210 215 220
Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile
225 230 235 240
Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys
245 250 255
Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu
260 265 270
Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn
275 280 285
Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser
290 295 300
Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn Ser Ile Ser
305 310 315 320
Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp Tyr Ser Phe
325 330 335
Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp 340
<210> 2 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 3 <211> 332 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Val Arg Ala Arg His Gln Pro Gly Gly Leu Cys Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Gln Phe Met Glu Asp Arg Ser Ala Gln Ala Gly Asn Cys
20 25 30
Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu Tyr Lys Thr
35 40 45
Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu Ser Thr Ser
50 55 60
Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys Trp Met Ile
65 70 75 80
Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu Thr Cys Glu
85 90 95
Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys Lys Asn
100 105 110
Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys
115 120 125
Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala
130 135 140
Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr
145 150 155 160
Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser
165 170 175
Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys
180 185 190
Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly
195 200 205
Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg Lys Ala Thr
210 215 220
Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile
225 230 235 240
Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys
245 250 255
Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu
260 265 270
Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn
275 280 285
Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser
290 295 300
Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn Ser Ile Ser
305 310 315 320
Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln 325 330
<210> 4 <211> 303 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 4
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln
290 295 300
<210> 5 <211> 288 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 5
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
<210> б
<211> 227
<212> БЕЛОК
<400> б
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<213> Homo sapiens
Glu Leu Leu Gly 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 б0
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 1б0
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
1б5 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 7 <211> 227 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 7
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 б0
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
б5 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 1б0
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
1б5 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 8 <211> 227 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 8
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 б0
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
б5 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 1б0
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
1б5 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu Lys Phe His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 9 <211> 227 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 9
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 б0
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
б5 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 1б0
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
1б5 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu Lys Phe His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 10 <211> 232 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 10
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 б0
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
б5 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 1б0
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
1б5 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 11 <211> 22б <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 11
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
1 5 10 15
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
20 25 30
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
35 40 45
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
50 55 б0
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
б5 70 75 80
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
100 105 110
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
115 120 125
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
130 135 140
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
145 150 155 1б0
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
1б5 170 175
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
180 185 190
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
195 200 205
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
Gly Lys
225
<210> 12 <211> 303 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 12
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 б0
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Cys Val Cys Ala Pro Asp
65 70 75 80
Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys
85 90 95
Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln
100 105 110
Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg
115 120 125
Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn
130 135 140
Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala
165 170 175
Cys His Leu Arg Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu
180 185 190
Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln
195 200 205
Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly
210 215 220
Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu
225 230 235 240
Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met
245 250 255
Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser
260 265 270
Gly Ser Cys Asn Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp
275 280 285
Glu Asp Gln Asp Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
290 295 300
<210> 13 <211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 13
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Gln Ser Cys Val Val Asp
65 70 75 80
Gln Thr Gly Ser Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 14 <211> 10 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 14
Gln Ser Cys Val Val Asp Gln Thr Gly Ser
1 5 10
<210> 15 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 15
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Ala Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305
310
315
<210> <211>
16 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 16
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Ala Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Ala Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 17 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 17
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 18 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 18
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Glu Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 19
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 19
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 20 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 20
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
21 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 21
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 22 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 22
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Glu Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
23 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 23
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 24
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 24
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 25 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 25
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys 1 5
Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 26 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 26
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 27 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 27
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290
295
300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 28
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 29
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 29
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 30 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 30
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 31 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 31
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 32 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 32
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
33 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 33
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Asn Met Thr
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 34
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 34
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Asn Cys Thr Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
35 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 35
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 36 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 36
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Ser Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 37 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 37
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 38 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 38
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 39
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 39
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ser Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275
280
285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
40 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 40
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ala Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 41 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 41
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Gln Ser Cys Val Val Asp Gln
1 5 10 15
Thr Gly Ser Pro Arg Cys Val 20
<210> 42 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 42
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Ala
1 5 10 15
Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 43 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 43
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Ala Cys Arg Met Asn Ala
1 5 10 15
Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 44 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 44
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val 20
<210> 45 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 45
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Glu Glu Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 46 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 46
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val 20
<210> 47 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 47
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Glu
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val 20
<210> 48 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 48
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Glu
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val 20
<210> 49 <211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 49
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Glu
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Glu 20
<210> 50 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 50
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 51 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 51
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 52 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 52
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 53 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 53
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 54 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 54
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 55 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 55
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 56
<211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 56
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn Lys
1 5 10 15
Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val 20
<210> 57
<211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 57
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn Glu
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 58
<211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 58
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 59
<211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 59
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val
<210> 60 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 60
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Asn Met Thr Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 61 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 61
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Asn Cys Thr
<210> 62 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 62
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 63 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 63
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Ser Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 64 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 64
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 65 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 65
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val
<210> 66 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 66
Ser Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 67 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 67
Ala Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 68 <211> 9 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 68
Ala Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro
1 5
<210> 69 <211> 3 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 69 Gly Gly Gly 1
<210> 70 <211> 21 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 70
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro 20
<210> 71 <211> 39 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 71
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro 35
<210> 72 <211> 57 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 72
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala
35 40 45
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro 50 55
<210> <211>
73 530
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 73
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Cys Val Cys Ala Pro Asp
65 70 75 80
Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys
85 90 95
Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln
100 105 110
Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg
115 120 125
Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn
130 135 140
Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala
165 170 175
Cys His Leu Arg Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu
180 185 190
Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln
195 200 205
Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly
210 215 220
Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu
225 230 235 240
Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met
245 250 255
Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser
260 265 270
Gly Ser Cys Asn Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp
275 280 285
Glu Asp Gln Asp Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp
290 295 300
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
305 310 315 320
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
325 330 335
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
340 345 350
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
355 360 365
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
370 375 380
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
405 410 415
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
420 425 430
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
435 440 445
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
450 455 460
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
465 470 475 480
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
485 490 495
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
500 505 510
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
515 520 525
Gly Lys
530
<210> 74
<211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 74
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Gln Ser Cys Val Val Asp
65 70 75 80
Gln Thr Gly Ser Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 75 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 75
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Ala Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275
280
285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530
535
540
<210> <211>
76 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 76
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Ala Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Ala Ala Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 77
<211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 77
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 78 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 78
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Glu Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 79
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225
230
235
240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485
490
495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> <211>
80 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 80
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 81 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 81
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 82 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 82
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Glu Asn Lys Pro Arg Cys Glu Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 83
<211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 83
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180
185
190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 84 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 84
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 85 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 85
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> <211>
86 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 86
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 87 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 87
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385
390
395
400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 88 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 88
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 89 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 89
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Glu Met Asn
65 70 75 80
Lys Glu Asn Glu Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> <211>
90 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 90
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Glu Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Glu Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 91 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 91
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340
345
350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 92 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 92
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> <211>
93 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 93
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Asn Met Thr
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 94 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 94
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Asn Cys Thr Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 95 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 95
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 96
<211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 96
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Ser Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 97 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 97
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 98 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 98
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Asn Lys Thr Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Thr Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 99 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 99
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ser Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500
505
510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 100 <211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 100
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ala Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Thr Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 101 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 101
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 102 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание=" Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 102
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ser Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 103 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность <220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 103
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Ala Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 104 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 104
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Asp Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> <211>
105 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 105
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Asp Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 106 <211> 315 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 106
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp
305 310 315
<210> 107 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 107
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 108 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 108
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Ser Thr Cys Val Val Asp Gln
1 5 10 15
Thr Asn Asn Ala Tyr Cys Val 20
<210> 109 <211> 11 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 109
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Cys Val
1 5 10
<210> 110
<400> 110 000
<210> 111 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 111
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Thr Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 112
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 112
Ser Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 113 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 113
Ala Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Asn Lys Ser Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 114 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 114
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Asp
1 5 10 15
Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 115 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 115
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn Asp
1 5 10 15
Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 116 <211> 23 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический пептид"
<400> 116
Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn Lys
1 5 10 15
Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val
<210> 117 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 117
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305
310
315
320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 118 <211> 542
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 118
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Asp Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Asp Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 119 <211> 317 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 119
Met Val Arg Ala Arg His Gln Pro Gly Gly Leu Cys Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Gln Phe Met Glu Asp Arg Ser Ala Gln Ala Gly Asn Cys
20 25 30
Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu Tyr Lys Thr
35 40 45
Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu Ser Thr Ser
50 55 60
Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys Trp Met Ile
65 70 75 80
Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu Thr Cys Glu
85 90 95
Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys Lys Asn
100 105 110
Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys
115 120 125
Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala
130 135 140
Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr
145 150 155 160
Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser
165 170 175
Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys
180 185 190
Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly
195 200 205
Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg Lys Ala Thr
210 215 220
Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile
225 230 235 240
Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys
245 250 255
Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu
260 265 270
Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn
275 280 285
Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser
290 295 300
Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
305 310 315
<210> 120 <211> 542 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность <220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид"
<400> 120
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
Asp Asp Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Ser Ile Ser Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp
290 295 300
Tyr Ser Phe Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp Asp Lys Thr His Thr
305 310 315 320
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
325 330 335
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
340 345 350
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
355 360 365
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
370 375 380
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
385 390 395 400
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
405 410 415
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
420 425 430
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
435 440 445
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
450 455 460
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
465 470 475 480
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
485 490 495
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
500 505 510
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
515 520 525
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
530 535 540
<210> 121 <211> 12 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 121
Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys Lys Asn Lys Pro Arg
1 5 10
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Рекомбинантный полипептид фоллистатина, содержащий
аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 8 0%
идентичную SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:
4 или SEQ ID NO: 5, где рекомбинантный белок фоллистатина
содержит гепарин-связывающую последовательность (HBS), и где
одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой,
характеризующейся меньшим положительным зарядом по сравнению с
замененной аминокислотой.
2. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 1, где одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся нейтральным зарядом.
3. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 1, где одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся отрицательным зарядом.
4. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-3, где одна или более предусматривает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10 аминокислот.
5. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 4, где одна или более предусматривает 3 аминокислоты.
6. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-5, где рекомбинантный полипептид характеризуется пониженной аффинностью связывания с гепарином по сравнению со встречающимся в природе фоллистатином.
7. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-6, где рекомбинантный белок фоллистатина не связывается с ВМР-9 или ВМР-10.
8. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 1, где рекомбинантный белок фоллистатина содержит последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную любой из SEQ ID NO: 12-4 0 или SEQ ID NO: 101-106.
9. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-8, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, и
где аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными любой из
SEQ ID N0:42-67 или SEQ ID N0:111-116.
10. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 9, где аминокислотная последовательность, соответствующая положениям 66-88 SEQ ID N0: 2, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, является идентичной любой из SEQ ID NO: 58-67 или SEQ ID NO: 111-113.
11. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 10, где рекомбинантный полипептид фоллистатина является мутантом гипергликозилирования.
12. Рекомбинантный полипептид фоллистатина, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, и
содержащий любую из аминокислотных вариаций, выбранных из группы, состоящей из C66S, С66А, G74N, К75Е, K75N, К76А, K76D, K76S, К76Е, C77S, С77Т, R78E, R78N, N80T, К81А, K81D, К82А, K82D, К81Е, К82Т, К82Е, К84Е, Р85Т, R86N, V88E и V88T или их комбинаций.
13. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 9 или п. 12, где аминокислотная последовательность является на по меньшей мере 90% идентичной SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
14. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 9 или п. 12, где аминокислотная последовательность является на по меньшей мере 95% идентичной SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
15. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 9 или п. 12, где аминокислотная последовательность является на по меньшей мере 98% идентичной SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
16. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. 9 или п. 12, где аминокислотная последовательность является на 100% идентичной SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
17. Рекомбинантный полипептид фоллистатина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ N0:12, SEQ ID N0:17-30 и SEQ ID N0:32-40.
18. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащий полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-17 и Fc-домен IgG.
19. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащий полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG человека,
13.
где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, и
где аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными SEQ ID N0:41, 42, 43 или 58.
20. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по п. 19, где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
21. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по п. 19, где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
22. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по п. 19, где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 98% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
23. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по п. 19, где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая на 100% идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
24. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащий полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG,
где полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой последовательности из группы, состоящей из SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13 и SEQ ID N0:15 -SEQ ID N0:40.
25. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-24, где Fc-домен IgG содержит аминокислотную замену; и
где аминокислотная замена выбрана из группы, состоящей из L234A, L235A, Н433К, N434F и их комбинаций, согласно нумерации EU.
26. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-24, где Fc-домен IgG содержит аминокислотную
26.
последовательность под SEQ ID N0:6, и
где аминокислотная последовательность содержит
аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из L2 34A, L235A, Н433К, N434F и их комбинаций, согласно нумерации EU.
27. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-24, где Fc-домен IgG содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:7 - SEQ ID N0:11.
28. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-25, где Fc-домен IgG представляет собой Fc-домен IgG человека.
29. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-25, где Fc-домен IgG представляет собой Fc-домен IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
30. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащий аминокислотную последовательность под любой из SEQ ID N0:73 - SEQ ID N0:100, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
31. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок связывается с миостатином с характеризующей аффинность константной диссоциации (KD), составляющей 1-100 пМ.
32. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок связывается с активином А с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 1-100 пМ.
33. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по
любому из пп. 18-30, где белок не связывается с костным
морфогенетическим белком-9 (ВМР-9) и/или костным
морфогенетическим белком-10 (ВМР-10) в диапазоне от 0,2 нМ до 25
нМ.
34. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок связывается с гепарином с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей от 0,1 до > 25 нМ.
35. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок связывается с FcRn-рецептором с
27.
характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 25-400 нМ.
36. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок ингибирует миостатин при IC50, составляющей 0,1-10 нМ.
37. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30, где белок ингибирует активин А при IC50, составляющей 0,1-10 нМ.
38. Фармацевтическая композиция, содержащая слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-37 и фармацевтически приемлемый носитель.
39. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную
последовательность, кодирующую рекомбинантный полипептид
фоллистатина по любому из пп. 1-17.
40. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную
последовательность, кодирующую слитый белок на основе
рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30.
41. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 39 или п. 4 0.
42. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п. 39 или п. 40 или вектор экспрессии по п. 30.
43. Способ получения слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина, который специфически связывается с миостатином, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п. 42 .
44. Клетка гибридомы, продуцирующая рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-17 или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-30.
45. Способ лечения мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), при
этом способ предусматривает:
введение субъекту, страдающему DMD или с
предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-37 или фармацевтической композиции по п. 38, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака DMD.
46. Способ по п. 45, где способ дополнительно
предусматривает введение субъекту одного или более
дополнительных терапевтических средств.
47. Способ по п. 4 6, где одно или более дополнительных терапевтических средств выбраны из группы, состоящей из антитела к Flt-1 или его фрагмента, эдасалонексента, памревлумаба, преднизона, дефлазакорта, РНК-модулирующих терапевтических средств, экзон-пропускающих терапевтических средств и средств генной терапии.
48. Способ по любому из пп. 45-47, где эффективное количество слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина вводят парентерально.
49. Способ по п. 48, где парентеральное введение выбрано из
группы, состоящей из внутривенного, внутрикожного,
интратекального, ингаляционного, чрескожного (местного),
внутриглазного, внутримышечного, подкожного, трансмукозального
введения или их комбинаций.
50. Способ по п. 49, где парентеральное введение представляет собой внутривенное введение.
51. Способ по п. 49, где парентеральное введение представляет собой подкожное введение.
52. Способ по любому из пп. 45-51, где слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина вводят ежедневно, два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в месяц или один раз в два месяца.
53. Способ по п. 52, где слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина вводят два раза в неделю.
54. Способ по любому из пп. 45-53, где слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина доставляют в одну или более скелетных мышц, выбранных из таблицы 1.
55. Способ по любому из пп. 45-54, где введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит к увеличению массы мышцы относительно контроля.
56. Способ по п. 55, где мышца представляет собой одну или более скелетных мышц, выбранных из таблицы 1.
57. Способ по п. 56, где мышца выбрана из группы, состоящей
47.
из диафрагмы, triceps, soleus, tibialis anterior, gastrocnemius, extensor digitorum longus, rectus abdominus, quadriceps и их комбинаций.
58. Способ по п. 57, где мышца представляет собой мышцу gastrocnemius.
59. Способ по любому из пп. 55-58, где увеличение массы мышцы представляет собой увеличение на по меньшей мере 10%, 2 0%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200% или 500% относительно контроля.
60. Способ по любому из пп. 45-59, где введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит к мышечной регенерации, повышенной мышечной силе, повышенной гибкости, повышенной амплитуде движений, повышенной выносливости, пониженной утомляемости, повышенному кровотоку, улучшенным когнитивным функциям, улучшенной легочной функции, ингибированию воспаления, пониженному мышечному фиброзу и/или пониженному мышечному некрозу.
61. Способ по любому из пп. 45-59, где по меньшей мере один симптом или признак DMD выбран из группы, состоящей из мышечного истощения, мышечной слабости, мышечной хрупкости, мышечного некроза, мышечного фиброза, суставной контрактуры, скелетной деформации, кардиомиопатии, ухудшения глотания, ухудшения функции кишечника и мочевого пузыря, мышечной ишемии, нарушения когнитивных функций, поведенческой дисфункции, ухудшения социализации, сколиоза и нарушенной дыхательной функции.
62. Способ ингибирования миостатина у субъекта, при этом способ предусматривает
введение в мышцу субъекта композиции, содержащей эффективное количество слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 18-3 0.
По доверенности
ИЗМЕНЕННАЯ ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ, ПРЕДЛОЖЕННАЯ ЗАЯВИТЕЛЕМ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ
1. Рекомбинантный полипептид фоллистатина, содержащий
(i) аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, где рекомбинантный белок фоллистатина содержит гепарин-связывающую последовательность (HBS), и где одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся меньшим положительным зарядом по сравнению с замененной аминокислотой;
(ii) аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, и
содержащий любую из аминокислотных вариаций, выбранных из группы, состоящей из C66S, С66А, G74N, К75Е, K75N, К76А, K76D, K76S, К76Е, C77S, С77Т, R78E, R78N, N80T, К81А, K81D, К82А, K82D, К81Е, К82Т, К82Е, К84Е, Р85Т, R86N, V88E и V88T или их комбинаций; или
(iii) аминокислотную последовательность, выбранную из
группы, состоящей из SEQ N0:12, SEQ ID N0:17-30 и SEQ ID N0:32-
40.
2. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. l(i), где:
(i) одна или более аминокислот в HBS заменены аминокислотой, характеризующейся нейтральным зарядом или отрицательным зарядом;
(ii) одна или более предусматривает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9 или 10 аминокислот, необязательно где одна или более предусматривает 3 аминокислоты.
(iii) рекомбинантный полипептид характеризуется пониженной аффинностью связывания с гепарином по сравнению со встречающимся в природе фоллистатином;
(iv) рекомбинантный белок фоллистатина не связывается с ВМР-9 или ВМР-10; и/или
(v) рекомбинантный белок фоллистатина содержит
последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную любой из
SEQ ID N0: 12-40 или SEQ ID N0: 101-106.
3. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. l(i) или 2,
содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, и
где аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными любой из SEQ ID N0:42-67 или SEQ ID N0:111-116, необязательно где аминокислотная последовательность, соответствующая положениям 66-88 SEQ ID N0: 2, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, является идентичной любой из SEQ ID NO: 58-67 или SEQ ID NO: 111-113, в частности, где рекомбинантный полипептид фоллистатина является мутантом гипергликозилирования.
4. Рекомбинантный полипептид фоллистатина по п. l(ii) или 3, где аминокислотная последовательность является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или на 100% идентичной SEQ ID N0:2, SEQ N0:4 или SEQ ID N0:5.
5. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина, содержащий:
(i) полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-4 и Fc-домен
IgG;
(ii) полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG человека,
где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 8 0% идентичную SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, и
где аминокислоты, соответствующие положениям 6 6-88 SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5, являются идентичными SEQ ID N0:41, 42, 43 или 58;
(iii) полипептид фоллистатина и Fc-домен IgG,
где полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой последовательности из группы, состоящей из SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13 и SEQ ID N0:15 -SEQ ID N0:40; или
(iv) аминокислотную последовательность под любой из SEQ ID N0:73 - SEQ ID N0:100, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
6. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по п. 5(ii), где рекомбинантный полипептид фоллистатина содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или на 100%
6.
идентична SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4 или SEQ ID N0:5.
7. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5(i)-(iii) и б, где Fc-домен IgG содержит:
(i) аминокислотную замену; и
где аминокислотная замена выбрана из группы, состоящей из L234A, L235A, Н433К, N434F и их комбинаций, согласно нумерации EU;
(ii) аминокислотную последовательность под SEQ ID N0:6, и
где аминокислотная последовательность содержит
аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из L2 34A, L235A, Н433К, N434F и их комбинаций, согласно нумерации EU; или
(iii) аминокислотную последовательность, выбранную из
группы, состоящей из SEQ ID N0:7 - SEQ ID N0:11.
8. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5(i)-(iii), б и 7(i), где Fc-домен IgG:
(i) представляет собой Fc-домен IgG человека; или
(ii) представляет собой Fc-домен IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
9. Слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5-8, где белок:
(i) связывается с миостатином с характеризующей аффинность константной диссоциации (KD) , составляющей 1-100 пМ;
(ii) связывается с активином А с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 1-100 пМ;
(iii) не связывается с костным морфогенетическим белком-9
(ВМР-9) и/или костным морфогенетическим белком-10 (ВМР-10) в
диапазоне от 0,2 нМ до 25 нМ;
(iv) связывается с гепарином с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей от 0,1 до > 25 нМ;
(v) связывается с FcRn-рецептором с характеризующей аффинность константой диссоциации (KD) , составляющей 25-400 нМ;
(vi) ингибирует миостатин при IC50, составляющей 0,1-10 нМ;
или
(vii) ингибирует активин А при IC50, составляющей 0,1-10 нМ.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
10.
11. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную
последовательность, кодирующую:
(i) рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп.
1-4; или
(ii) слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по
любому из пп. 5-8.
12. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 11.
13. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п. 11 или вектор экспрессии по п. 12.
14. Способ получения слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина, который специфически связывается с миостатином, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п. 13.
15. Клетка гибридомы, продуцирующая рекомбинантный полипептид фоллистатина по любому из пп. 1-4 или слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5-8.
16. Способ лечения мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), при этом способ предусматривает:
введение субъекту, страдающему DMD или с
предрасположенностью к DMD, эффективного количества слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 59 или фармацевтической композиции по п. 10, за счет чего снижается интенсивность, тяжесть или частота или отсрочивается проявление по меньшей мере одного симптома или признака DMD.
17. Способ по п. 16, где:
(i) способ дополнительно предусматривает введение субъекту
одного или более дополнительных терапевтических средств,
необязательно где указанные одно или более дополнительных
терапевтических средств выбраны из группы, состоящей из антитела
к Flt-1 или его фрагмента, эдасалонексента, памревлумаба,
преднизона, дефлазакорта, РНК-модулирующих терапевтических
средств, экзон-пропускающих терапевтических средств и средств
генной терапии;
(ii) эффективное количество слитого белка на основе
рекомбинантного фоллистатина вводят парентерально, необязательно
где парентеральное введение выбрано из группы, состоящей из
внутривенного, внутрикожного, интратекального, ингаляционного, чрескожного (местного), внутриглазного, внутримышечного, подкожного, трансмукозального введения или их комбинаций, например, где парентеральное введение представляет собой внутривенное введение или подкожное введение;
(iii) слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина
вводят ежедневно, два раза в неделю, один раз в неделю, один раз
в месяц или один раз в два месяца, необязательно где слитый
белок на основе рекомбинантного фоллистатина вводят два раза в
неделю;
(iv) слитый белок на основе рекомбинантного фоллистатина доставляют в одну или более скелетных мышц, выбранных из таблицы 1;
(v) введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит к увеличению массы мышцы относительно контроля, необязательно где:
(a) мышца представляет собой одну или более скелетных
мышц, выбранных из таблицы 1, например, где мышца выбрана из
группы, состоящей из диафрагмы, triceps, soleus, tibialis
anterior, gastrocnemius, extensor digitorum longus, rectus
abdominus, quadriceps и их комбинаций, в частности, где
мышца представляет собой мышцу gastrocnemius; или
(b) увеличение массы мышцы представляет собой
увеличение на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%,
70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200% или 500% относительно
контроля;
(vi) введение слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина приводит к мышечной регенерации, повышенной мышечной силе, повышенной гибкости, повышенной амплитуде движений, повышенной выносливости, пониженной утомляемости, повышенному кровотоку, улучшенным когнитивным функциям, улучшенной легочной функции, ингибированию воспаления, пониженному мышечному фиброзу и/или пониженному мышечному некрозу; и/или
(vii) по меньшей мере один симптом или признак DMD выбран из группы, состоящей из мышечного истощения, мышечной слабости,
(vi)
мышечной хрупкости, мышечного некроза, мышечного фиброза, суставной контрактуры, скелетной деформации, кардиомиопатии, ухудшения глотания, ухудшения функции кишечника и мочевого пузыря, мышечной ишемии, нарушения когнитивных функций, поведенческой дисфункции, ухудшения социализации, сколиоза и нарушенной дыхательной функции.
18. Способ ингибирования миостатина у субъекта, при этом способ предусматривает
введение в мышцу субъекта композиции, содержащей эффективное количество слитого белка на основе рекомбинантного фоллистатина по любому из пп. 5-8.
По доверенности
ч-'
СТВ
1Q0000
10000 #¦
'"'I'- 100
-т- 150 -I
260
FS315i'-75N/C7?T/K82T-hFcLALA FS315Н76,Б 1,82jD-hFcLALA FS315K(76,ei,82jE-hFcLALA FS315WT-nFc
Время (ч.)
ФИГ. 1А
X X О
со I-и а га
5Й 0J
с; к
га а I-х
О) X
о ас га со I-и
et ai а.
•гооооо
юоса
РК-исследование на мышах CD-1 при 1 мг/кг IV
Время (ч.)
F5 315-7 5 №С 7"ТЛ ;82T-tFcLALA F5315-^7B,G I B2;D-hFcLnLA FS 315^(76,81 B2',E r.Fc_4LA FSVFI i7fi,R;,fi?)A-hFrl,A A F5 315-(8l,G:iE-iFcLALA l-bdlbUfcUh-lT-cLALA Ff31№^T~hFr
ФИГ. IB
<220>
<220>
<220>
109
109
1/3
1/3
1/3
1/3
2/3
2/3
3/3
3/3
|
