(57) Реферат / Формула:
Настоящее изобретение относится к применению отрицательных аллостерических модуляторов (negative allosteric modulators, NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) в лечении зрелого повреждения головного мозга, такого как повреждение после инсульта.
Евразийское (21) 201891948 (13) Al
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2016.03.30
(51) Int. Cl.
A61K31/4427 (2006.01) A61K31/403 (2006.01)
A61K 31/4162 (2006.01) A61K 31/4166 (2006.01)
A61K31/4365 (2006.01) A61K31/438 (2006.01) A61K31/4439 (2006.01) A61K31/4545 (2006.01) A61K31/4965 (2006.01) A61K31/5025 (2006.01) A61K31/513 (2006.01) A61K31/55 (2006.01) A61P25/00 (2006.01)
(54)
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ АЛЛОСТЕРИЧЕСКИЕ МОДУЛЯТОРЫ МЕТАБОТРОПНОГО ГЛУТАМАТНОГО РЕЦЕПТОРА 5 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ЛЕЧЕНИИ ЗРЕЛЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА
(86) PCT/SE2016/050264
(87) WO 2017/171594 2017.10.05
(71) Заявитель: СИННТАКСИС АБ (SE)
(72) Изобретатель:
Вилох Тадеуш, Сьёлунд Карин, Бейруп Керстин, Рушер Карстен, Олссон Роджер (SE)
(74) Представитель:
Поликарпов А.В., Соколова М.В., Путинцев А.И., Черкас Д.А., Игнатьев А.В. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к применению отрицательных аллостерических модуляторов (negative allosteric modulators, NAM) метаботроп-ного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) в лечении зрелого повреждения головного мозга, такого как повреждение после инсульта.
PCT/SE2016/050264 МПК: А61К31/4427 (2006.01)
А61К31/403 (2006.01) А61К31/4162 (2006.01) А61К31/4166 (2006.01) А61К31/4365 (2006.01) А61К31/438 (2006.01) А61К31/4439 (2006.01) А61К31/4545 (2006.01) А61К31/4965 (2006.01) А61К31/5025 (2006.01) А61К31/513 (2006.01) А61К31/55 (2006.01) А61Р25/00 (2006.01)
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ АЛЛОСТЕРИЧЕСКИЕ МОДУЛЯТОРЫ МЕТАБОТРОПНОГО ГЛУТАМАТНОГО РЕЦЕПТОРА 5 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ЛЕЧЕНИИ ЗРЕЛЫХ
ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к применению отрицательных аллостерических модуляторов (negative allosteric modulators, NAM) метаботропного глутаматного рецептора подтипа 5 (mGluR5) в лечении зрелых повреждений головного мозга.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Глутамат, являющийся нейромедиатором в центральной нервной системе млекопитающих, взаимодействует с различными глутаматными рецепторами. Некоторые из этих рецепторов являются метаботропными глутаматными рецепторами (mGluR), у которых выделяют восемь различных подтипов, которые делят на три группы. Группа I включает, среди прочих, подтип 5, mGluR5.
Аллостерический модулятор представляет собой вещество, которое опосредованно модулирует эффекты другого вещества (обычно лиганда, который может быть агонистом или антагонистом, в данном случае глутамата) на белок-мишень, такой как рецептор, в данном конкретном случае метаботропный глутаматный рецептор подтипа 5. Аллостерические модуляторы связываются с рецептором в сайте, отличном от ортостерического сайта (сайтов) связывания, являющегося (являющихся) сайтом (сайтами) связывания лиганда с рецептором для агонистов или антагонистов. Во многих случаях аллостерический модулятор индуцирует конформационное изменение в структуре белка. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) ослабляет, а положительный аллостерический модулятор (РАМ) усиливает эффекты другого вещества, действующего через ортостерический(е) сайт (сайты). NAM mGluR5 модулирует связывание глутамата с
глутаматным рецептором подтипа 5. Таким образом, NAM mGluR5 не эквивалентен антагонисту метаботропного глутаматного рецептора подтипа 5.
Ранее в экспериментальных исследованиях было показано, что по меньшей мере некоторые NAM mGluR5, такие как 2-метил-6-фенилэтинилпиридин (МРЕР), оказывают нейропротективное действие при введении вскоре после повреждения мозга. Тем не менее, согласно этим ранним исследованиям, лечение должно быть начато почти сразу после повреждения, во временном промежутке от нескольких минут до 4 часов после повреждения. Кроме того, данные противоречивы, при этом некоторые данные демонстрируют протективное действие антагонистов mGluR5 и NAM mGluR5 на головной мозг, в то время как другие демонстрируют противоположный эффект или протективное действие агонистов mGluR5. Поэтому временное терапевтическое окно нейропротективного действия NAM mGluR5 узкое и, предположительно, отражает ингибирование острой эксайтотоксичности во время инсульта.
Содержание всех документов, процитированных в данной заявке, включено сюда посредством ссылки.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к отрицательному аллостерическому модулятору (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) для применения в лечении зрелого повреждения головного мозга.
Настоящее изобретение также относится к применению отрицательного аллостерического модулятора (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) в изготовлении фармацевтической композиции для лечения зрелого повреждения головного мозга.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения зрелого повреждения головного мозга у пациента, где указанному пациенту вводят терапевтически эффективное количество отрицательного аллостерического модулятора (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Как указано выше, настоящее изобретение относится к применению отрицательных аллостерических модуляторов (NAM) метаботропного глутаматного рецептора подтипа 5 (mGluR5) в лечении зрелого повреждения головного мозга. Специалисту в данной области известно, что существует несколько различных NAM mGluR5. Примеры отрицательных аллостерических модуляторов (NAM) метаботропного глутаматного рецептора подтипа 5 (mGluR5), которые были описаны ранее и могут быть использованы согласно настоящему
где значения Ri и R2, соответственно, указаны в Таблице 1.
изобретению, приведены в Таблице 1 ниже. В Таблице 1 различные NAM сгруппированы в два хемотипа: одни соединения принадлежат к алкиновому ряду, то есть соединения на основе ацетиленовой структуры, а другие - к неалкиновому ряду, то есть соединения на основе неацетиленовой структуры. Все соединения, принадлежащие к алкиновому ряду, имеют общую структуру
(Dipraglurant) SIN008
85:440 (2014)
GRN-529
((4-д ифторметокси-3 -(пиридин-2-илэтинил)фенил)5Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин-6(7Н)-илметанон)
US 2010-0273772
MFZ 10-7
3 -фтор-5 - [(6-метилпирид ин-2-ил)этинил]бензонитрил
Keck ТМ et al, ACS Med Chem Lett 3:544 (2012)
MRZ-8676
6,6-диметил-2-фенилэтинил-7,8-дигидро-6Н-хинолин-5 -онэтинил] бензонитрил
Dekundy et al., Neurotransmission Neurotransmission 118:1716 (2011) Biol. 19:195 (2012)
Неалкиновые лиганды
Торговое название (названия)
Химическое название
Ссылка на предшествующий уровень техники, где раскрыто данное соединение
Химическая структура
Фенобам
(Fenobam)
SIN010
N-(3 -хлорфенил)-М)-(4,5 -дигидро-1 -метил-4-оксо-1Н-имидазол-2-ил)мочевина
Porter RH, J Pharmacol Exp Ther 315:711 (2005)
1 -(5 -хлор-3 -тиенил)-3 -(1 -метил-
4-оксо-2-имидазолин-2-
ил)мочевина)
Jaeschke G et al Bioorg, Med Chem Lett 17:1307 (2007)
(6-метилпиридин-2-ил)-амид 2-оксо-2,3-дигидробензоксазол-4-карбоновая кислота
Cecarelli et al. Bioorg Med Chem Lett 17, 1302 (2007)
AZD-6538 SIN015
3 -фтор-5 -(3 -(5 -фторпиридин-2-ил)-1,2,4-оксадиазол-5-
Raboisson P et al., Bioorg, Med Chem
ил)бензонитрил
Lett 22:6974 (2012)
AZD-9272
6-[5-(3-циано-5-фторфенил)-
1,2,4-оксадиазол-3-ил]пиридин-
3-карбонитрил
Raboisson Р et al., Bioorg, Med Chem Lett 22:6974 (2012)
3 -фтор-5 -(2-(пиридин-2-ил)-7,8-
дигидро-4Н-оксазоло[4,5-
c] азепин-5 (6Н)-ил)бензонитрил
Burdi et al., J Med Chem. 53, 7107 (2010)
VU0431316
4-хлор-М-(6-(пиримидин-5-
илокси)пиразин-2-
ил)пиколинамид
Bates BS et al., Bioorg Med Chem 24:3307 (2014)
VU0366058
2-[( 1,3 -бензоксазол-2-ил)амино]-4-(4-фторфенил)пиримид ин-5 -карбонитрил
Mueller R et al. Chem Med Chem 7:406 (2012)
(lR,2R)-N-(4-(6-изопропилпиридин-2-ил)-3 -(2-метил-2Н-инд азол-5 -ил)изотиазол-5-ил)-2-метилциклопропанкарбоксамид
Hou J et al., Bioorg Med Chem Lett 23:1249 (2013)
WO 2007/072095 Nogradi К et al., Bioorg Med Chem Lett 24:3845 (2014)
Weiss JM et al, Bioorg, Med Chem Lett 21:4891 (2011)
6-бромпиразоло[ 1,5-
a] пиримидин-2-ил-( 1 -метил-3,4-
дигидро-1 Н-изохинолин-2-ил)-
метанон
WO 2011/064237
Panka С et al., Bioorg Med Chem Lett 20:184 (2010)
GSK2210875
[(lR)-l-(6-Memn-
[ 1,3 ]тиазол o[2,3 -e] [ 1,2,4]триазол-
5-ил)этил]-ГЧ-фенилкарбамат
Pilla М et al., Bioorg Med Chem Lett 20:7521 (2010)
[3-(3-
фторбензоиламино)адамантан-1 -ил]-амид 5-метилпиразин-2-карбоновой кислоты а также 6 его производных
WO 2010/011570 Al
Специалисту в данной области также знакомы аналитические методы, которые могут быть использованы для определения того, является ли определенное соединение NAM mGluR5. Примерами таких аналитических методов (Vranesic et al, (2014) Bioorg. Med. Chem, 22:5790-5803) являются анализы вытеснения радиолиганда (Gasparini et al, (2002) Bioorg Med Chem Lett, 12:407-409), ингибирования клеточной мобилизации Ca2+ (Widler et al, (2010) J. Med. Chem, 53:2250-2263) и ингибирования гидролиза инозитолфосфата (Litschig et al., (1999) Mol. Pharm, 55:453-461).
В некоторых воплощениях настоящего изобретения используемый NAM выбран из группы, состоящей из следующих соединений:
обозначенное как SIN010 в Примерах, приведенных ниже.
В некоторых воплощениях используемый NAM представляет собой:
обозначенное как SIN014 в Примерах, приведенных ниже, и являющееся близким аналогом соединения, обозначенного как SIN013 в Примерах, приведенных ниже. В некоторых воплощениях используемый NAM представляет собой:
обозначенное как SIN011 в Примерах, приведенных ниже.
В некоторых воплощениях используемый NAM представляет собой:
обозначенное как SIN008 в Примерах, приведенных ниже.
В некоторых воплощениях используемый NAM представляет собой:
обозначенное как SIN015 в Примерах, приведенных ниже.
В некоторых воплощениях используемый NAM выбран из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых солей и сольватов любых из 20 конкретных соединений, указанных выше.
В данном контексте фармацевтически приемлемая соль обозначает соль NAM по изобретению, не вызывающую существенного раздражения у пациента, которому ее вводят, и не приводящую к потере биологической активности и свойств соединения.
Сольваты соединений, описанных здесь, могут быть использованы с целью изменения химических и физических свойств, таких как температура плавления, химическая активность, кажущаяся растворимость, скорость растворения, оптические и электрические свойства, давление пара и плотность. Если включенным растворителем является вода, сольваты обычно также называют гидратами.
В некоторых воплощениях возможно использование соединения, которое при введении человеку метаболизируется до любого из NAM, указанных выше. В таком случае NAM по изобретению используют опосредованно.
Поскольку эти соединения уже известны, специалист в данной области знает, как их синтезировать.
Согласно настоящему изобретению NAM mGluR5 используют в лечении зрелого повреждения головного мозга.
В контексте настоящего изобретения термин "зрелое повреждение головного мозга" относится к любому повреждению головного мозга или поражению головного мозга, которое уже сформировалось и, таким образом, более не прогрессирует. Это происходит по завершении гибели клеток в головном мозге. Повреждение головного мозга, или поражение головного мозга, относится к разрушению или дистрофии клеток головного мозга и может быть вызвано рядом различных состояний, заболеваний и/или травм, и в контексте настоящего изобретения термин "повреждение головного мозга" включает как ятрогенные, так и неятрогенные повреждения головного мозга.
В некоторых воплощениях зрелое повреждение головного мозга может быть вызвано инсультом. Инсульт может быть выбран из группы, состоящей из ишемического
инсульта, геморрагического инсульта и транзиторной ишемической атаки. В случае геморрагического инсульта, он может быть вызван гипертензией или разрывом ослабленного кровеносного сосуда, включая аневризмы и артериовенозные мальформации.
Зрелое повреждение головного мозга, вызванное инсультом, может прогрессировать в одно или более чем одно состояние или расстройство, выбранное из группы, состоящей из когнитивного расстройства, сенсомоторной дисфункции, депрессии или усталости. Когнитивное расстройство может включать дефицит внимания, памяти и рабочей памяти, способности к рассуждению и оценке, логическому мышлению и "вычислениям", решению задач и принятию решений, а также к пониманию и построению речи, и оно может включать одно или более чем одно состояние, выбранное из группы, состоящей из афазии, дисфункции памяти и одностороннего пространственного игнорирования.
В некоторых воплощениях зрелое повреждение головного мозга вызвано остановкой сердца, острым поражением головного мозга, черепно-мозговой травмой (ЧМТ), хирургическим вмешательством, облучением, сосудистой деменцией, эпилептическим припадком, спазмами сосудов головного мозга и/или гипоксией головного мозга в результате остановки сердца или состояния, близкого к утоплению (near drowning).
Введение NAM mGluR5 по изобретению пациенту, страдающему от зрелого повреждения головного мозга, будет приводить к улучшенному восстановлению функции головного мозга пациента, по сравнению с тем, как ситуация развивалась бы без введения NAM. Лечение по настоящему изобретению следует начинать, когда зрелое повреждение головного мозга уже сформировалось, повреждение головного мозга или поражение головного мозга более не прогрессирует, гибель клеток в головном мозге завершилась и нейропротективная терапия более не эффективна. Таким образом, лечение по настоящему изобретению следует начинать, когда нейропротективная терапия более не оказывает никакого значимого эффекта на повреждение. В некоторых воплощениях лечение следует поэтому начинать не ранее чем через по меньшей мере 4 часа после острого повреждения головного мозга. В некоторых воплощениях лечение начинают не ранее чем через 5 часов после острого повреждения головного мозга. В некоторых воплощениях лечение начинают не ранее чем через 6 часов после острого повреждения головного мозга. В некоторых воплощениях лечение начинают не ранее чем через 8 часов после острого повреждения головного мозга. Когда острое повреждение головного мозга, такое как
острый инсульт, лечат тромболитическим агентом, то есть с применением фибринолитической терапии, или механическим устранением окклюзии, препятствующей току крови в артериях головного мозга, время начала лечения по изобретению может совпадать с окончанием фибринолитической терапии или механического устранения окклюзии. В случае применения реканализации, фармакологической или хирургической, лечение по изобретению можно начинать во время реканализации или сразу после нее.
Чем раньше будет начато лечение, тем лучше. Тем не менее, лечение может также быть начато намного позднее острого повреждения головного мозга, то есть через значительный промежуток времени после исходного повреждения головного мозга или поражения головного мозга, которое привело к зрелому повреждению головного мозга. Лечение может быть начато через несколько суток, недель, месяцев или даже лет после формирования зрелого повреждения головного мозга. Такое позднее начало лечения по изобретению сходно с теми случаями, в которых возможность проведения обычной физиотерапии можно рассматривать даже на поздних стадиях зрелого повреждения головного мозга.
Лечение по изобретению может быть пожизненным. Альтернативно, лечение можно продолжать в течение 2-7 суток, в течение 2-4 недель, в течение 2-4 месяцев или в течение одного года или нескольких лет.
Лечение по изобретению можно сочетать с одной или более чем одной другой терапией. Например, его можно сочетать с транскраниальной магнитной стимуляцией (Pollock et al, (2014) Interventions for improving upper limb limb function after stroke (review), Chocrane Database Sys Rev, 12:11). Альтернативно, лечение по изобретению можно сочетать с электростимуляцией головного мозга (Pollock et al, 2014), такая электростимуляция может быть анодной или катодной. Лечение по изобретению можно также сочетать с физиотерапией, реабилитационной тренировкой, включая компьютеризированную виртуальную реальность, или роботизированной тренировкой или терапией (Laffont et al. Annals of Physical and Rehabilitation Medicine (2014) 57:543551). Такая физиотерапия может представлять собой ограничительную терапию (constraint induced therapy). Это описано более подробно в Примере 2.
Используемый здесь термин "лечение" относится к лечению с целью излечения или уменьшения степени выраженности заболевания или состояния.
При использовании здесь термин "пациент" относится к любому млекопитающему, являющемуся или не являющемуся человеком, нуждающемуся в лечении по изобретению.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству, которое приведет к желаемому терапевтическому эффекту, то есть к полезному эффекту на зрелое повреждение головного мозга, подлежащее лечению.
NAM по изобретению или используемый по изобретению может быть включен в фармацевтическую композицию или препарат. Такая композиция может содержать фармацевтические эксципиенты и/или вспомогательные вещества, включая разбавители и носители. Фармацевтическая композиция облегчает введение NAM по изобретению пациенту. Фармацевтическая композиция может быть изготовлена способом, который, сам по себе, известен, например, традиционными методиками смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсуляции, захвата или таблетирования.
Введение NAM или фармацевтической композиции по изобретению может быть проведено любым традиционным способом. Подходящие пути введения могут, например, включать пероральное, ректальное, трансмукозальное, местное или внутрикишечное введение; парентеральную доставку, включая внутримышечные, подкожные, внутривенные, интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, прямые интравентрикулярные, внутрибрюшинные, интраназальные или внутриглазные инъекции. Для продолжительного введения соединения могут быть введены в лекарственных формах с длительным или контролируемым высвобождением.
В одном аспекте изобретения предложен отрицательный аллостерический модулятор (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) для применения в лечении зрелого повреждения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта лечение приводит к улучшению восстановления функции головного мозга пациента, страдающего от зрелого повреждения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта указанный NAM выбран из группы, состоящей
из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
В одном воплощении этого аспекта указанный NAM выбран из группы, состоящей
из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
В одном воплощении этого аспекта указанный NAM представляет собой
и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
В одном воплощении этого аспекта указанное зрелое повреждение головного мозга вызвано состоянием, выбранным из группы, состоящей из инсульта, черепно-мозговой травмы, остановки сердца и острого поражения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта указанное повреждение головного мозга вызвано инсультом, который привел к постинсультному расстройству, выбранному из группы, состоящей из когнитивного расстройства, депрессии, усталости и сенсомоторной дисфункции.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать, когда нейропротективная терапия более не эффективна.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать после завершения нейропротективной терапии.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать не ранее чем через 4 часа после исходного острого повреждения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта лечение сочетают с транскраниальной магнитной стимуляцией, электростимуляцией и/или физио- и поведенческой терапией.
В одном аспекте изобретения предложен способ лечения или уменьшения степени выраженности зрелого повреждения головного мозга, включающий введение терапевтически эффективного количества отрицательного аллостерического модулятора (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) пациенту, нуждающемуся в этом.
В одном воплощении этого аспекта лечение приводит к улучшению восстановления функции головного мозга пациента, страдающего от зрелого повреждения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта указанный NAM выбран из группы, состоящей
из:
и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
В одном воплощении этого аспекта указанное зрелое повреждение головного мозга вызвано состоянием, выбранным из группы, состоящей из инсульта, черепно-мозговой травмы, остановки сердца и острого поражения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта указанное повреждение головного мозга вызвано инсультом, который привел к постинсультному расстройству, выбранному из группы, состоящей из когнитивного расстройства, депрессии, усталости и сенсомоторной дисфункции.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать, когда нейропротективная терапия более не эффективна.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать после завершения нейропротективной терапии.
В одном воплощении этого аспекта указанное лечение следует начинать не ранее чем через 4 часа после исходного острого повреждения головного мозга.
В одном воплощении этого аспекта лечение сочетают с транскраниальной магнитной стимуляцией, электростимуляцией и/или физио- и поведенческой терапией. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
В приведенных ниже примерах даны ссылки на приложенные графические материалы, описанные ниже.
На Фиг. 1A-D показан эффект прототипного отрицательного аллостерического модулятора mGluR5 на основе ацетиленовой структуры SIN007; 3((2-метил-1,3-тиазол-4-ил)этинил)пиридин; МТЕР, на функциональное восстановление после инсульта у крыс, в сравнении с введением носителя (Vh). Фиг. 1А: функциональное восстановление после 12 суток лечения, начатого через 2 суток после инсульта. Фиг. 1В: размер зоны инфаркта после инсульта. Фиг. 1С: динамика функционального восстановления. SIN007 (S); носитель (V). Фиг. 1D: сохранение восстановления после лечения SIN007 в течение 5 суток.
На Фиг. 2A-F показан эффект лечения прототипным отрицательным аллостерическим модулятором mGluR5 SIN007 на функциональное восстановление после инсульта у мышей, в сравнении с введением носителя (Vh). Фиг. 2А: функциональное восстановление после 5 суток лечения. Фиг. 2В: размер зоны инфаркта после инсульта. Фиг. 2С: лечение на протяжении пяти суток, начиная через 2 суток (2d) или 10 суток (10d) после инсульта. Фиг. 2D: предварительное введение положительного аллостерического модулятора mGluR5 SIN006; (гидрохлорид /У-циклобутил-6-[2-(3-фторфенил)этинил]-3-пиридинкарбоксамида); VU0360172, за один час до последующего лечения SIN007 в течение 6 суток. Фиг. 2Е и 2F: содержание мышей в обогащенной среде (ЕЕ) в течение 5 суток после инсульта усиливает восстановление функции головного мозга, этот эффект исчезает при сопутствующем введении SrN006 (Фиг. 2Е), но еще более выражен при сопутствующем введении SIN007 (Фиг. 2F), соответственно.
На Фиг. 3A-D показан эффект ацетиленовых NAM mGluR5, вводимых перорально, на функциональное восстановление после инсульта. Фиг. ЗА: Эффект SIN008 [6-фтор-2-[4-(пиридин-2-ил)-3-бутинил]имидазо[1,2-а]пиридин, ADX 70084] на функциональное восстановление у крыс. Фиг. ЗВ: Эффекты SIN011 ([3aS,5S,7aR]-Memji-5-rHflpoKCH-5-(;w-толилэтинил)-октагидро-1Н-индол-1-карбоксилат, мавоглурант) на функциональное восстановление у мышей. Фиг. ЗС: эффект двух доз SIN013 ([2-хлор-4-((2,5-диметил-1-(4-(трифторметокси)фенил))-1 Н-имидазол-4-ил)этинил)пиридин, СТЕР) на функциональное восстановление у мышей. 1 - низкая доза; h - высокая доза. Фиг. 3D: эффект SIN013 на функциональное восстановление у крыс дикого типа и крыс, нокаутных по mGluR5 (КО). Фиг. ЗЕ: эффект SFN014 ([2,5-диметил-1-[4-фторфенил]имидазол-4-ил]этинил]пиридин, (RG7090, басимглурант)) на функциональное восстановление после инсульта у мышей. 1 -низкая доза; h - высокая доза. Фиг. 3F: Эффект SIN017 (3-фтор-5-(5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)пиридин-2-ил)бензонитрил, STX107) на функциональное восстановление у мышей.
Фиг. 4А: эффект SIN010 (1-(3-хлорфенил)-3-(3-метил-5-оксо-4Н-имидазол-2-ил)мочевина, фенобам) на функциональное восстановление у крыс через 1 неделю (lw) и 2 недели (2w) после инсульта.
Фиг. 4В: аддитивный эффект лечения SIN010 на усиление восстановления при содержании крыс в обогащенной среде (ЕЕ). STD - стандартная среда.
Фиг. 4С: эффект SIN015 (3-фтор-5-(3-(5-фторпиридин-2-ил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил)бензонитрил) на функциональное восстановление после инсульта у крыс.
ПРИМЕРЫ
Приведенные ниже примеры даны с целью пояснения изобретения и, в частности, его конкретных воплощений.
Пример 1: Эффекты прототипного ал кино во го NAM mGluR5, SIN007, на функциональное восстановление после инсульта у крыс Методика эксперимента
Животные. Проведение всех экспериментов было одобрено экспертным советом Мальме-Лунда по работе с животными и соответствовало руководствам ARRIVE. Животных содержали в условиях инвертированного светового цикла, проводя тесты в периоды темноты, когда крысы активны. Для экспериментов использовали самцов крыс линии Sprague-Dawley (возраст 11 недель, Charles River, Scanbur A/S, Карлслунде, Дания). Исследования были рандомизированными и слепыми для исследователей, проводивших хирургические вмешательства и оценку поведения.
Материалы. 3-[(2-Метил-1,3-тиазол-4-ил)этинил] пиридин (МТЕР) был синтезирован Beijing Honghui Meditech Co., Ltd (Пекин, Китай) и его структура была подтверждена посредством Н^ЯМР. Его растворяли в 0,3%-м Tween 80 в физиологическом растворе.
Введение соединения. Соединение вводили инъекцией в болюсной дозе 1 мл/кг в нижний квадрант живота.
Экспериментальный инсульт. Животных анестезировали изофлураном (приблизительно 2% в Ог при спонтанной вентиляции) и помещали в стереотаксическую рамку. Во время хирургического вмешательства проводили мониторинг температуры с использованием ректального термометра и поддерживали температуру 37,0-37,5 плюс/минус 0,2°С посредством грелки с регулятором, работающим по принципу обратной связи. Делали сагиттальный разрез кожи, удаляли подкожную соединительную ткань и сушили череп. Затем проводили инфузию фотосенсибилизирующего красителя бенгальского розового (0,5 мл, 10 мг/мл) в хвостовую вену. Через две минуты после инъекции череп освещали холодным светом (Schott, KL 1500 LCD) в области размерами 8 на 4,5 мм в течение 15 мин (от 4 мм спереди до 4 мм сзади и от 0,5 до 5 мм слева от брегмы). Затем разрезы на хвосте и коже головы зашивали и крыс помещали в те клетки, в которых они находились до операции. Функциональный дефицит оценивали через 2 ч после начала инсульта с применением теста возврата конечностей на опору (limb placement test) и для исследования использовали только животных с результатом "0" как
для передней, так и для задней конечности на стороне, противоположной поврежденному полушарию головного мозга.
Оценка неврологической функции. Тест возврата лап на опору (paw placement test). Повреждение коры головного мозга в результате фототромбоза приводит к дефициту из-за уменьшения количества нейронов в сенсомоторной области и угнетению функций нейронных сетей вблизи очага повреждения. Отражением этого дефицита является ослабление ответа в тесте возврата лап на опору. Этот тест позволяет получить информацию о тактильном/проприоцептивном ответе на стимуляцию конечностей. Животных располагали на столе так, что все 4 лапы были на столе, а тестируемые лапы располагались у его края. Крыс перемещали по столу таким образом, что тестируемые лапы теряли контакт с поверхностью стола. Оценивали способность животных возвращать конечность на поверхность стола при их перемещении к краю стола. Важно, что голову удерживали под углом 45°, что не позволяло животным видеть перемещение стола и исключало возможность стимуляции усов/морды. Быстрый возврат конечности на стол оценивали как 1. Неполный возврат конечности оценивали как 0,5, а полное выпрямление конечности и лапы оценивали как 0. Для получения групп со сходным функциональным дефицитом до введения животным лекарственных средств или носителя, проводили отбор на 2 сутки после экспериментального инсульта, то есть во время восстановления, когда развитие инфаркта завершалось. Таким образом, в исследованиях использовали только животных с тяжелым дефицитом в тесте возврата лап на опору (результат "0").
Получение образцов тканей. Животным проводили глубокую анестезию (изофлуран) и перфузионную фиксацию 4%-м раствором параформальдегида (PFA). Головной мозг извлекали и погружали в 4%-й раствор PFA на 4 ч, затем переносили в 25%-й раствор сахарозы в фосфатном буфере (0,1 М NaH2P04, 0,1 М Na2HP04) и хранили при 4°С. Затем получали срезы головного мозга толщиной 30 мкм с использованием микротома, оставляя по одному срезу на каждый 1 мм для измерения зоны инфаркта. Оставшиеся срезы сохраняли для иммуногистохимии и иммунофлуоресценции. Все срезы хранили в незамерзающем растворе (30%-й этиленгликоль, 30%-й глицерин, 0,01 М NaH2P04, 0,03 М Na2HP04) при -20°С.
Иммуногистохимия. Свободно плавающие срезы головного мозга промывали три раза в PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) и гасили в 3%-й Н202 и 10%-м MetOH в течение 15 минут. После промывки в PBS срезы блокировали блокирующим раствором (5%-я нормальная ослиная сыворотка, Jackson ImmunoResearch, Великобритания и 0,25%-й Triton Х-100 в PBS) в течение одного часа при комнатной
температуре. Срезы инкубировали в течение ночи при 4°С с моноклональным мышиным антителом против NeuN (А60/МАВ377, Millipore) в разведении 1:1500. После трех промывок в 1%-й нормальной ослиной сыворотке и 0,25%-м Triton Х-100 в PBS срезы инкубировали с соответствующими вторичными биотинилированными антителами (ослиными противокроличьими/противомышиными, Vector Laboratories, США) в разведении 1:400 в блокирующем растворе в течение 90 минут при комнатной температуре (RT). Визуализацию проводили набором Vectorstain ABC (Vector) с использованием тетрагидрохлорида 3,3-диаминобензидина (DabSafe, Saveen Werner, Швеция), 8% MCI и 3% H202.
Измерение зоны инфаркта. С использованием микроскопа Olympus ВХ60 (Solna, Швеция) получали изображения в светлом поле. Сканировали двенадцать срезов с шагом 1 мм, выделяли непораженные области инфарктного полушария и непораженное противоположное полушарие и измеряли их площадь с использованием программного обеспечения ImageJ (National Institute of Health, США). Объем инфаркта (мм3) определяли, вычитая площадь непораженной области рассматриваемого полушария из площади непораженной области интактного противоположного полушария и проводя расчеты с применением волюмометрической интеграции для каждого животного.
Результаты
Эффект ежедневного введения SIN007 (5 мг/кг, внутрибрюшинно) или носителя (0,3%-й Tween 80 в физиологическом растворе) в течение 5 суток, начатого через 2 суток после инсульта, на результаты теста возврата лап на опору, проведенного через 14 суток после инсульта, показан на Фиг. 1А. В группе введения SIN007 (п равно 7) функция возврата лап на опору была почти полностью восстановлена, по сравнению с группой носителя (п равно 5) (р меньше 0,001, критерий Манна-Уитни). На Фиг. 1В показан средний размер зоны инфаркта у животных, включенных в Фиг. 1А. Размер зоны инфаркта составлял 18,8 плюс/минус 2,5 мм3 у животных, которым вводили носитель, и 19,5 плюс/минус 4,6 мм3 у животных, которым вводили SIN007. Различий по размеру зоны инфаркта между группами носителя и SIN007 не было. На Фиг. 1С показана динамика восстановления функции. Для получения эффекта от введения SIN007 необходимо по меньшей мере 4 суток, а для максимального эффекта - 14 суток (SIN007, s2-s7, п равно 11; Vh, v2-7, п равно 11; SIN007, sl4, п равно 7; Vh, vl4, n равно 5). Ha Фиг. ID показан эффект введения SIN007 (n равно 4) в течение 5 суток с последующим периодом восстановления без введения SIN007 (SIN007/off). Восстановление функции, обеспеченное введением SIN007 в течение 5 суток, сохраняется по меньшей мере 7 суток
после прекращения введения. Вместе взятые, эти данные демонстрируют, что ежедневное введение NAM mGluR5, начатое через 2 суток после инсульта, в течение по меньшей мере
4 суток и, предпочтительно, 14 суток обеспечивает стойкое восстановление функции головного мозга, не оказывая защитного эффекта на головной мозг. Таким образом, SIN007 обеспечивает восстановление функции нейронных сетей головного мозга, угнетенных, но не поврежденных в результате инсульта.
Пример 2. Эффект прототипного алкинового NAM mGluR5, SIN007, на функциональное восстановление после инсульта у мышей Методика эксперимента Животные. Проведение всех экспериментов было одобрено экспертным советом Мальме-Лунда по работе с животными и соответствовало руководствам ARRIVE. Для экспериментов использовали самцов мышей линии C57/BL6 (возраст 8 недель, Charles River, Scanbur A/S, Карлслунде, Дания). Исследования были рандомизированными и слепыми для исследователей, проводивших хирургические вмешательства и оценку поведения.
Материалы были такими же, как в Примере 1, и введение лекарственного средства проводили так же, как в Примере 1. Кроме того, положительным аллостерическим модулятором (РАМ) рецептора mGluR5 был SIN006 (гидрохлорид 7У-циклобутил-6-[2-(3-фторфенил)этинил]-3-пиридинкарбоксамида; VU0360172).
Индукция инсульта у мышей. Мышей подвергали одностороннему фототромботическому (РТ) кортикальному инфаркту в области левой сенсомоторной коры. Во время хирургического вмешательства у животных поддерживали температуру тела 37°С с использованием саморегулирующейся грелки. Животных анестезировали с использованием 1,5-2,5%-го изофлурана (Sigma) в 100%-м 02. Делали разрез кожи сверху черепа; волоконный световод с диаметром апертуры 2,5 мм соединяли с источником холодного света (CL 1500ECO, Zeiss, Германия) и настраивали на стереотаксические координаты сенсомоторной коры, на 0,5 мм спереди от брегмы и на 1,5 мм латеральнее срединной линии. Одну внутрибрюшинную инъекцию 0,25 мл бенгальского розового (10 мг/мл в 0,9%-м физиологическом растворе; Sigma-Aldrich, Германия) проводили за
5 мин до включения света на 20 минут. Принимали меры для того, чтобы температура на поверхности черепа под волоконным световодом не превышала 38°С. После хирургического вмешательства животным давали проснуться после анестезии, находясь на грелке, и возвращали в клетки со свободным доступом к сухому корму и воде.
Содержание в обогащенной среде. Хорошо известно, что содержание грызунов в обогащенной среде стимулирует различные сенсомоторные системы головного мозга, способствуя восстановлению после экспериментального инсульта. Содержание в обогащенной среде осуществляли следующим образом. После отбора на 2 сутки после инсульта мышей случайным образом распределяли в стандартные STD, 17 см X 16 см X 34,5 см) или обогащенные клетки (ЕЕ, 30 см X 27 см X 43 см). Многоуровневые обогащенные клетки были снабжены различными окрашенными объектами, такими как пластиковые тоннели, маленькие домики, горки и колеса активности для грызунов; расположение объектов меняли каждые два дня. Мышей содержали в стандартных (по 2 животных на клетку) или обогащенных клетках (по 6-8 животных на клетку) в течение 12 суток. За исключением размещения в разных клетках, все остальные условия содержания животных были сходными.
Тест возврата лап на опору. Мышей в ростро-каудальной ориентации располагали вдоль края стола с легким нажимом на передние и задние лапы на стороне поражения. Возврат каждой лапы фиксировали при перемещении мышей к краю. Сенсомоторную дисфункцию оценивали по шкале 1, 0,5и0:(1) - лапа сразу возвращается на поверхность стола; (0,5) - конечность вытянута, но есть некоторые движения и попытки вернуть лапу на поверхность стола; (0) - лапа полностью парализована, свисает без движения. Для получения групп со сходным функциональным дефицитом до введения животным лекарственных средств или носителя, проводили отбор на 2 сутки после экспериментального инсульта, то есть во время восстановления, когда развитие инфаркта завершалось. Таким образом, в исследованиях использовали только животных с тяжелым дефицитом в тесте возврата лап на опору (результат "0").
Перфузию, иммунное окрашивание и оценку размера зоны инфаркта проводили так же, как в Примере 1.
Результаты
Эффект ежедневного введения SIN007 (5 мг/кг, внутрибрюшинно) мышам в течение 5 суток, начатого через 2 суток после инсульта, показан на Фиг. 2А. У животных, которым вводили SIN007 (п равно 6), восстановление выражено намного лучше, чем у животных, которым вводили носитель (п равно 9) (р меньше 0,01, критерий Манна-Уитни). Восстановление не было связано с защитным эффектом в отношении головного мозга, поскольку средний размер зоны инфаркта в двух группах был одинаковым. Инфаркт занимал 7,9 плюс/минус 1,5 мм3 в группе носителя и 8,9 плюс/минус 0,9 мм3 в группе введения SIN007, Фиг. 2В. При задержке введения с его началом через 10 суток
после инсульта (п равно 5) восстановление функции идентично лечению, начатому через 2 суток после инсульта (п равно 4), Фиг. 2С, (Vh, п равно 8) (**р меньше 0,01, критерий Краскела-Уоллиса). Для демонстрации того, что эффект лучшего восстановления при введении SIN007 опосредован ингибированием рецептора mGluR5, мышам ежедневно вводили положительный аллостерический модулятор mGluR5, SIN006 (30 мг/кг, перорально), начиная введение через двое суток после инсульта, за 1 час до введения SIN007 (5 мг/кг, внутрибрюшинно) (*р меньше 0,05, **р меньше 0,01, критерий Краскела-Уоллиса), Фиг. 2D. Тест возврата лап на опору проводили после 5 суток введения. У животных, которым вводили SIN007 (п равно 5), функция лап была восстановлена в большей степени, чем у животных, которым вводили носитель (п равно 6), как также показано на Фиг. 2А. Тем не менее, у животных, которым вводили SIN006 (п равно 5) перед SIN007, функция не восстанавливалась. Важность ингибирования рецептора mGluR5 для восстановления функции головного мозга после инсульта также показана в экспериментальных условиях, при которых функцию мозга усиливали физическими средствами, помещая животных в обогащенную среду. Усиленное восстановление функции, очевидное у животных, которых в течение 5 суток после инсульта содержали в обогащенной среде (п равно 7), по сравнению с животными, которых содержали в стандартных условиях (п равно 3), Фиг. 2Е, было полностью заблокировано сопутствующим введением агониста mGluR5, SIN006 (30 мг/кг, перорально (п равно 4)). Это еще раз демонстрирует роль рецепторов mGluR5 в восстановлении функции головного мозга после инсульта (п равно 4) (*р меньше 0,05, критерий Краскела-Уоллиса). Кроме того, введение SIN007 (1 мг/кг, внутрибрюшинно, каждый день в течение 3 суток, п равно 5) умеренно усиливает восстановление функции, почти в той же степени, что и содержание мышей в обогащенной среде (ЕЕ) (п равно 7). Сочетание введения SIN007 (1 мг/кг, внутрибрюшинно, в течение 3 суток, п равно 5) и содержания в обогащенной среде существенно улучшает восстановление, демонстрируя аддитивный эффект NAM mGluR5 и сенсомоторной тренировки.
Пример 3. Эффект алкиновых NAM mGluR5 SIN008, SIN011, SIN013, SIN014 и SIN017, вводимых перорально, на функциональное восстановление после инсульта
Методика эксперимента Животные. Крысы были, как в Примере 1, а мыши - как в Примере 2. Крысы, нокаутные по mGluR5, с инактивированным геном mGluR5 были от SAGE, Research Labs, Бойертаун, штат Пенсильвания, США.
Материалы. SIN008 (6-фтор-2-[4-(пиридин-2-ил)-3-бутинил]имидазо[1,2-а]пиридин
(ADX49621, дипраглурант)), SIN013 (2-хлор-4-[2-[2,5-диметил-1-[4-
(трифторметокси)фенил]имидазол-4-ил]этинил]пиридин (СТЕР)), SIN014 ([2,5-диметил-1-
[4-фторфенил]имидазол-4-ил]этинил]пиридин, (RG7090, басимглурант)), SIN017 (3-фтор-
5 -(5 -((2-метилтиазол-4-ил)этинил)пиридин-2-ил)бензонитрил (STX107)) были
синтезированы Beijing Honghui Meditech Co., Ltd (Пекин, Китай). SIN011 (метиловый эфир (ЗаК,48,7аК)-октагидро-4-гидрокси-4-[2-(3-метилфенил)этинил]-1Н-индол-1-карбоновой кислоты (AFQ056, мавоглурант)) был от SV ChemBioTech, Эдмонтон, Канада. Структуры всех соединений были подтверждены посредством Н-ЯМР, и степень их чистоты составляла более 97%. SIN011 суспендировали в 0,5%-й гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) в дистиллированной воде, SIN008 - в 20%-м 2-гидроксипропилциклодекстрине в дистиллированной воде, a SIN017, SIN013 и SIN014 -в 0,3%-м Tween 80 в физиологическом растворе. Соединения, суспендированные в носителе, обрабатывали ультразвуком в течение 15 минут для получения стабильной суспензии.
Введение соединений. Соединения вводили перорально через катетер, введенный в желудок. Объем растворов составлял 0,2 мл на одну крысу и 0,1 мл на одну мышь.
Индукцию инсульта у крыс проводили, как в Примере 1, а у мышей - как в Примере 2. Оценку неврологической функции у крыс проводили, как в Примере 1, а у мышей - как в Примере 2. Перфузию, иммунное окрашивание и оценку размера зоны инфаркта проводили так же, как в Примере 1.
Результаты
Введение SIN008 (ADX48621, дипраглурант, 30 мг/кг, перорально, в 20%-м растворе 2-гидроксипропилциклодекстрина; п равно 4)) или носителя (п равно 7) в течение 5 суток существенно улучшало неврологическую функцию у крыс, когда введение начинали через 2 суток после инсульта, Фиг. ЗА.
Эффект ежедневного введения SIN011 (мавоглурант) (30 мг/кг, перорально) или носителя (0,5%-я НРМС) мышам на функцию возврата лап на опору после инсульта показан на Фиг. ЗВ. Введение начинали через 2 суток после инсульта и продолжали в течение 5 суток. В группе носителя (п равно 5) восстановления отмечено не было, в то время как в группе введения SIN011 (п равно 5) наблюдали существенное восстановление функции лап (р меньше 0,01, критерий Манна-Уитни).
На Фиг. ЗС показан эффект введения SIN013 (СТЕР) (2 мг/кг каждые 48 ч (SIN013(1)) (п равно 5) или 2 мг/кг ежедневно (SIN013(h)) (п равно 7)) или носителя (п
равно 4). Введение начинали через 2 суток после инсульта и продолжали в течение 5 суток. В то время как в группе введения носителя улучшения функции лап отмечено не было, введение SIN013 в обеих дозах обеспечивало усиление функции, которое при введении в дозе 2 мг/кг ежедневно было значимым (р меньше 0,05, критерий Краскела-Уоллиса). Усиление восстановления после инсульта под действием SIN013, отмеченное у мышей, Фиг. ЗС, было подтверждено в модели инсульта у крыс, Фиг. 3D. Введение SIN013 (2 мг/кг/сутки, перорально, в 0.3%-м Tween 80 в физиологическом растворе, п равно 8) в течение 5 суток существенно улучшало функцию возврата лап на опору, по сравнению с группой носителя (п равно 11). Введение начинали через 2 суток после инсульта и продолжали в течение 5 суток. У крыс, нокаутных по mGluR5 (п равно 3), восстановления, стимулированного введением SIN013, отмечено не было, а наблюдавшийся у них дефицит был сходен с дефицитом у крыс дикого типа, которым вводили носитель. Это подтверждает данные (Фиг. 2D), согласно которым стимулирующий эффект NAM mGluR5 на восстановление утраченной функции головного мозга после инсульта опосредован рецептором mGluR5.
Лечение мышей SJN014 (басимглурант, RG7090; (1) 5 мг/кг перорально и (h) 10 мг/кг перорально в 0,3%-м Tween в физиологическом растворе) в течение 5 суток улучшало функциональное восстановление при более высокой дозе (10 мг/кг), Фиг. ЗЕ.
Ежедневное введение SJN017 (3 мг/кг в 0,5%-й НРМС, перорально (п равно 3)) (STX107) в течение 5 суток также усиливало восстановление утраченной функции у мышей, по сравнению с группой носителя (п равно 4), Фиг. 3F. Введение SJN017 начинали через 2 суток после инсульта.
Пример 4. Эффект неалкиновых NAM mGluR5 SIN010 и SIN015 на функциональное
восстановление после инсульта Методика эксперимента
Животные были такими же, как в Примерах 1 и 2.
SIN010 (1 -(3-хлорфенил)-3-(3-метил-5-оксо-4Н-имидазол-2-ил)мочевина, фенобам) и SIN015 (3-фтор-5-(3-(5-фторпиридин-2-ил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил)бензонитрил) были синтезированы Beijing Honghui Meditech Co., Ltd (Пекин, Китай). Все структуры были подтверждены посредством Н-ЯМР, и степень чистоты составляла более 97%. SJN010 суспендировали в 20% 2-гидроксициклодекстрине, a SJN015 - в 0,5%-й НРМС. Соединения, суспендированные в носителе, обрабатывали ультразвуком в течение 15 минут для получения стабильной суспензии.
Введение соединений проводили, как в Примере 3.
Индукцию инсульта, оценку неврологической функции, перфузию у животных, иммунное окрашивание и оценку размера зоны инфаркта проводили так же, как в Примере 1.
Результаты
SIN010 (фенобам), вводимый ежедневно перорально (10 мг/кг перорально, п равно 12) в течение 5 суток (SINOlO(lw), п равно 8) или в течение 12 суток (SIN010(2w), п равно 4) (Vh, п равно 4) улучшает восстановление функции после инсульта у крыс, Фиг. 4А. Введение начинали через 2 суток после инсульта. Было отмечено зависимое от времени улучшение функции, которые было значимым, по сравнению с носителем, через 12 суток введения. Сходное улучшение наблюдали при введении SIN010 мышам, которое начинали через двое суток после инсульта, Фиг. 4В. Кроме того, сочетание содержания в обогащенной среде (п равно 5) с ежедневным введением SIN010 мышам, которое начинали через 2 суток после инсульта, приводит к дополнительному улучшению восстановления по сравнению с Vh (п равно 5), обогащенной средой самой по себе (п равно 7) или введением SIN010 (п равно 5) самого по себе, Фиг. 4В. (а) р меньше 0,05, Vh против введения SIN010; (Ь) введение SIN010 + ЕЕ против Vh; (с) введение SIN010 + ЕЕ против SIN010 самого по себе. Этот результат сходен с данными, полученными у мышей, которым вводили SIN007 в сочетании с содержанием в обогащенной среде, Фиг. 2F, что явно указывает на аддитивный эффект комбинированной терапии. SIN015, 3-фтор-5-(3-(5-фторпиридин-2-ил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил)бензонитрил, в дозе 3 мг/кг (п равно 4), введение которого начинали через 2 суток после инсульта и продолжали в течение 5 суток, улучшал восстановление функции, Фиг. 4С.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Отрицательный аллостерический модулятор (negative allosteric modulator, NAM)
метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) для применения в лечении зрелого
повреждения головного мозга.
2. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) метаботропного
глутаматного рецептора 5 (mGluR5) для применения по п. 1, где лечение приводит к
улучшению восстановления функции головного мозга пациента, страдающего от зрелого
повреждения головного мозга.
3. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по п. 1 или
2, где указанный NAM выбран из группы, состоящей из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
4. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по п. 1 или 2, где указанный NAM выбран из группы, состоящей из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
5. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по п. 1 или 2, где указанный NAM представляет собой
и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
6. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по любому из п.п. 1-5, где указанное зрелое повреждение головного мозга вызвано состоянием, выбранным из группы, состоящей из инсульта, черепно-мозговой травмы, остановки сердца и острого поражения головного мозга.
7. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по п. 6, где указанное повреждение головного мозга вызвано инсультом, который привел к постинсультному расстройству, выбранному из группы, состоящей из когнитивного расстройства, депрессии, усталости и сенсомоторной дисфункции.
8. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по любому из п.п. 1-7, где указанное лечение следует начинать, когда нейропротективная терапия более не эффективна.
6.
9. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по п. 8, где указанное лечение следует начинать после завершения нейропротективной терапии.
10. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по любому из п.п. 1-8, где указанное лечение следует начинать не ранее чем через 4 часа после исходного острого повреждения головного мозга.
11. Отрицательный аллостерический модулятор (NAM) для применения по любому из п.п. 1-10, где лечение сочетают с транскраниальной магнитной стимуляцией, электростимуляцией и/или физио- и поведенческой терапией.
12. Способ лечения или уменьшения степени выраженности зрелого повреждения головного мозга, включающий введение терапевтически эффективного количества отрицательного аллостерического модулятора (NAM) метаботропного глутаматного рецептора 5 (mGluR5) пациенту, нуждающемуся в этом.
13. Способ по п. 12, где лечение приводит к улучшению восстановления функции головного мозга пациента, страдающего от зрелого повреждения головного мозга.
14. Способ по п. 12 или 13, где указанный NAM выбран из группы, состоящей из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
15. Способ по п. 12 или 13, где указанный NAM выбран из группы, состоящей из:
и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
16. Способ по п. 12 или 13, где указанный NAM представляет собой
и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
17. Способ по любому из п.п. 12-16, где указанное зрелое повреждение головного мозга вызвано состоянием, выбранным из группы, состоящей из инсульта, черепно-мозговой травмы, остановки сердца и острого поражения головного мозга.
18. Способ по п. 17, где указанное повреждение головного мозга вызвано инсультом, который привел к постинсультному расстройству, выбранному из группы, состоящей из когнитивного расстройства, депрессии, усталости и сенсомоторной дисфункции.
19. Способ по любому из п.п. 12-18, где указанное лечение следует начинать, когда нейропротективная терапия более не эффективна.
20. Способ по п. 19, где указанное лечение следует начинать после завершения нейропротективной терапии.
21. Способ по любому из п.п. 12-20, где указанное лечение следует начинать не ранее чем через 4 часа после исходного острого повреждения головного мозга.
22. Способ по любому из п.п. 12-21, где лечение сочетают с транскраниальной магнитной стимуляцией, электростимуляцией и/или физио- и поведенческой терапией.
18.
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Фиг. 2Е
Фиг. 2F
2,9*
1,5* 1,0"
0,5*
0,0*
$iN0O7
ЕЕ SINGG7+EE
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Фиг. ЗА
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Фиг. 3F
Фиг. ЗЕ
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
Фиг. 4А
р <0,0256
-Q Он
Он О
1=1 о
1=1 ч
ЭТ О М cd Н О 0)
2,0т 1,51,00,5-
0,0-
I I
р <0,0575
Vh(1w) SIN010(1w) Vh(2w) SIN010(2w)
Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропного глутаматного рецептора 5 для применения в лечении зрелых повреждений головного мозга
