[RU]

Настоящее изобретение в общем относится к соединению формулы (I), т.е. N,N-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5-с]хинолин-8-ил)-2-пиридил]окси]пропан-1-аминоксиду в качестве модулятора АТМ-киназы для лечения онкологических заболеваний.

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение в общем относится к соединению формулы (I), т.е. N,N-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5-с]хинолин-8-ил)-2-пиридил]окси]пропан-1-аминоксиду в качестве модулятора АТМ-киназы для лечения онкологических заболеваний.

---

Евразийское (21) 201891866 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07D 471/04 (2006.01)
201904 30 A61K 31/437 (2006.01)
A61P35/00 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2017.03.30
(54) ^^ДИМЕТИЛ-3-[[5-(3-МЕТИЛ-2-ОКСО-1-ТЕТРАГИДРОПИРАН-4-ИЛ-ИМИДАЗО[4,5-е]ХИНОЛИН-8-ИЛ)-2-ПИРИДИЛ]ОКСИ]ПРОПАН-1-АМИНОКСИД В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРА АТМ-КИНАЗЫ (МУТАЦИИ АТАКСИИ-ТЕЛЕАНГИЭКТАЗИИ) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
(31) 1605958.6
(32) 2016.04.07
(33) GB
(86) PCT/EP2017/057624
(87) WO 2017/174446 2017.10.12
(71) Заявитель: АСТРАЗЕНЕКА АБ (SE)
(72) Изобретатель:
Барлаам Бернард Кристоф, Пайк Курт Гордон (GB)
(74) Представитель:
Поликарпов А.В., Соколова М.В., Путинцев А.И., Черкас Д.А., Игнатьев А.В. (RU)
(57) Настоящее изобретение в общем относится к соединению формулы (I), т.е. К,К-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетра-гидропиран-4-ил-имидазо[4,5-с]хинолин-8-ил)-2-пиридил]окси]пропан-1-аминоксиду в качестве модулятора АТМ-киназы для лечения онкологических заболеваний.
ВД-ДИМЕТИЛ-3-[[5-(3-МЕТИЛ-2-ОКСО-1-ТЕТРАГИДРОПИРАН-4-ИЛ-ИМИДАЗО[4,5-С]ХИНОЛИН-8-ИЛ)-2-ПИРИДИЛ]ОКСИ]ПРОПАН-1-АМИНОКСИД В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРА АТМ-КИНАЗЫ (МУТАЦИИ АТАКСИИ-ТЕЛЕАНГИЭКТАЗИИ) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ Это раскрытие относится к Лг,Л^-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5 -с]хинолин-8-ил)-2-пирид ил] окси] пропан-1 -аминоксиду и его фармацевтически приемлемым солям. Это соединение селективно
10 модулирует киназу мутации атаксии-телеангиэктазии ("ATM"), и, таким образом, настоящее раскрытие также относится к применению Лг,/У-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1 -тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5 -с]хинолин-8-ил)-2-пиридил] окси] пропан-1 -аминоксиду и его фармацевтически приемлемым солям для лечения или предупреждения заболевания, обусловленного ATM, включая онкологические
15 заболевания. Это раскрытие далее относится к фармацевтическим композициям,
включающим в себя Лг,/У-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетрагидропиран-4-ил-
имидазо[4,5-с]хинолин-8-ил)-2-пиридил]окси]пропан-1 -аминоксид и его
фармацевтически приемлемые соли, и применению таких композиций в терапевтическом лечении; наборам, содержащим Лг,/У-диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-
20 тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5 -с]хинолин-8-ил)-2-пирид ил] окси] пропан-1 -
аминоксид и его фармацевтически приемлемые соли; и способам изготовления таких соединений и солей.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
25 АТМ-киназа является серин/треонин киназой, которая изначально была
идентифицирована как продукт гена, мутировавшего при атаксии-телеангиэктазии. Ген атаксии-телеангиэктазии расположен на хромосоме человека llq22-23 и кодирует крупный белок размером приблизительно 350 кДа, который характеризуется наличием домена фосфатидилинозитола ("РГ') 3-киназоподобной серин/треонин киназы,
30 фланкированного доменами FRAP-ATM-TRRAP и FATC, которые модулируют активность и функцию АТМ-киназы. Как выяснилось, АТМ-киназа играет основную роль в реакции на повреждение ДНК, вызванное двухнитевыми разрывами. Она в
основном действует в S/02/М-переходах клеточного цикла и при остановленной репликации ее действие разветвляется на инициирование контрольных точек клеточного цикла, модификацию хроматина, гомологическую рекомбинационную репарацию и сигнальные каскады, способствующие выживанию, с целью поддержания 5 целостности клетки после повреждения ДНК (Lavin, М. F.; Rev. Mol. Cell Biol. 2008, 759-769).
Сигнальную функцию АТМ-киназы можно в целом разделить на две категории: канонический путь, который обеспечивает передачу сигнала вместе с комплексом Mrel 1-Rad50-NBS1 при двухнитевых разрывах и активирует контрольную точку 10 повреждения ДНК, и несколько неканонических режимов активации, которые активируются другими формами клеточного стресса (Cremona et al, Oncogene 2013, 3351-3360).
АТМ-киназа быстро и энергично активируется в ответ на двунитевые разрывы, и сообщается, что она способна фосфорилировать свыше 800 субстратов (Matsuoka et al.,
15 Science 2007, 1160-1166), координируя многочисленные пути реагирования на стресс (Kurz and Lees Miller, DNA Repair 2004, 889-900). АТМ-киназа в основном находится в ядре клетки в неактивной гомодимерной форме, но она фосфорилирует сама себя по Serl981 при распознавании двунитевого разрыва ДНК (канонический путь), что ведет к диссоциации до мономера, обладающего полной активностью киназы (Bakkenist et al.,
20 Nature 2003, 499-506). Данное событие является критически важным событием активации и, таким образом, ATM фосфо-8ег1981 является как прямым фармакодинамическим параметром, так и биомаркером отбора пациентов с точки зрения зависимости сигнальных путей опухоли.
АТМ-киназа реагирует на прямые двухнитевые разрывы, вызванные обычными
25 противораковыми средствами терапии, такими как ионизирующее облучение и ингибиторы топоизомеразы-П (доксорубицин, этопозид), а также ингибиторы топоизомеразы-1 (например, иринотекан и топотекан), посредством преобразования однонитевого разрыва в двухнитевой разрыв в ходе репликации. Ингибирование АТМ-киназы может усилить действие любого из данных средств, поэтому ожидается, что
30 ингибиторы АТМ-киназы могут быть полезны в лечении онкологических заболеваний.
В WO2015/170081 раскрыты различные соединения, которые селективно ингибируют АТМ-киназу. Среди соединений, которые специально рассматриваются в
WO2015/170081, находится 8-[6-(3-диметиламинопропокси)пиридин-3-ил]-3-метил-1 -(оксан-4-ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-он - соединение со следующей структурой:
Было найдено, что при метаболизации 8-[6-(3-диметиламинопропокси)пиридин-3 -ил] -3 -метил-1 -(оксан-4-ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-она образуется /V-оксидный метаболит с Формулой (I):
О' ' О
(I)
Неожиданно было обнаружено, что этот /V-оксид также является селективным ингибитором АТМ-киназы, и как таковой предположительно может применяться в терапевтическом лечении, например в лечении онкологического заболевания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ В данном раскрытии, в частности, описано соединение Формулы (I),
или его фармацевтически приемлемая соль.
В данном раскрытии, в частности, также описано соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапевтическом лечении.
В данном раскрытии, в частности, также описано соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания.
В данном раскрытии, в частности, также описано применение соединения 5 Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения онкологического заболевания.
В данном раскрытии, в частности, также описан способ лечения онкологического заболевания у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному 10 терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В данном раскрытии, в частности, также описана фармацевтическая композиция,
которая содержит соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль
и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
15 В данном раскрытии, в частности, также описана фармацевтическая композиция,
которая включает в себя соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее, для использования в терапевтическом лечении.
В данном раскрытии, в частности, также описана фармацевтическая композиция, 20 которая включает в себя соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее, для применения в лечении онкологического заболевания.
ИЛЛЮСТРАТИВНЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
25 Многие варианты осуществления подробно раскрыты в данном раскрытии и
будут очевидны читателю-специалисту в данной области техники. Варианты осуществления не должны интерпретироваться как ограничительные.
В первом варианте осуществления предусмотрены соединение Формулы (I),
или его фармацевтически приемлемая соль.
Термин "фармацевтически приемлемый" применяется для указания на то, что 5 объект (например, соль, лекарственная форма или формообразующее) подходит для применения пациентами. Иллюстративный перечень фармацевтически приемлемых солей можно найти в Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl and C. G. Wermuth, editors, Weinheim/zurich:Wiley-VCH/VHCA, 2002. Подходящей фармацевтически приемлемой солью соединения Формулы (I) является,
10 например, соль присоединения кислоты. Соль присоединения кислоты соединения Формулы (I) может быть образована путем приведения в контакт соединения с подходящей неорганической или органической кислотой в условиях, известных специалисту. Например, соль присоединения кислоты может быть образована с применением неорганической кислоты, выбранной из хлористоводородной кислоты,
15 бромистоводородной кислоты, серной кислоты и фосфорной кислоты. Соль присоединения кислоты также может быть образована с применением органической кислоты, выбранной из трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, щавелевой кислоты, уксусной кислоты, муравьиной кислоты, бензойной кислоты, фумаровой кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты, молочной кислоты,
20 пировиноградной кислоты, метансульфокислоты, бензолсульфокислоты и пара-толу ол сул ьф окисл оты.
Поэтому в одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты,
25 серной кислоты, фосфорной кислоты, трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, щавелевой кислоты, уксусной кислоты, муравьиной кислоты, бензойной кислоты, фумаровой кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты, молочной
кислоты, пировиноградной кислоты, метансульфокислоты, бензолсульфокислоты или газра-толуолсульфокислоты. В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль метансульфоновой кислоты. В одном 5 варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой моносоль метансульфоновой кислоты, т. е. стехиометрическое соотношение соединения Формулы (I) и метансульфоновой кислоты составляет 1:1 в соединении.
10 Соединения и соли, описанные в настоящем раскрытии, могут существовать в
сольватированных формах и несольватированных формах. Например, сольватированная форма может представлять собой гидратированную форму, такую как полугидрат, моногидрат, дигидрат, тригидрат, или другую степень гидратирования. Настоящее изобретение охватывает все такие сольватированные и несольватированные формы
15 соединений Формулы (I), в частности, в той степени, в которой такие формы обладают ингибирующей АТМ-киназу активностью, например, измеренной с применением описанных в данном документе тестов.
Атомы соединений и солей, описываемых в этом раскрытии, могут существовать в виде их изотопов. Изобретение охватывает все соединения Формулы
20 (I), где любой атом замещен одним или несколькими своими изотопами (например, соединение Формулы (I), где один или несколько атомов углерода представляют собой
11 13
изотоп углерода С или С, или где один или несколько атомов водорода представляют собой изотоп 2Н или 3Н).
Соединения и соли, описанные в настоящем раскрытии, могут существовать в 25 виде смеси таутомеров. "Таутомеры" представляют собой структурные изомеры, которые находятся в состоянии равновесия в результате миграции атома водорода. Настоящее изобретение включает все таутомеры соединений Формулы (I), в частности, в той степени, в которой такие таутомеры обладают ингибирующей АТМ-киназу активностью.
30 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль, где соединение находится в выделенной форме.
Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль в
"выделенной форме" представляют собой соединение или его соль, по сути не
содержащие примесей других компонентов, например, органических компонентов,
которые можно найти в живых организмах.
5 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль, где соединение получено ex-vivo.
"Ex-vivo" означает вне живого организма, например, пациента-человека, проходящего лечение против онкологического заболевания.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его 10 фармацевтически приемлемая соль, где соединение получено с помощью органического синтеза.
Под "органическим синтезом" понимают выполнение синтетических реакций в лаборатории или в условиях производства с целью получения продукта.
Предполагается, что соединение Формулы (I) и его фармацевтически 15 приемлемые соли будут пригодны в терапевтическом лечении благодаря своей ингибирующей АТМ-киназу активности, например, в лечении заболеваний или медицинских состояний, по меньшей мере частично обусловленных АТМ-киназой, включая онкологическое заболевание.
Если упоминается "онкологическое заболевание" или "рак", то данный термин 20 включает в себя как неметастатический рак, так и метастатический рак, поэтому лечение рака подразумевает лечение как первичных опухолей, так и метастазов опухоли.
"Ингибирующая АТМ-киназу активность" относится к снижению активности АТМ-киназы вследствие прямого или опосредованного ответа на присутствие
25 соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с активностью АТМ-киназы в отсутствие соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Такое снижение активности может происходить благодаря прямому взаимодействию соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с АТМ-киназой или благодаря воздействию соединения Формулы (I)
30 или его фармацевтически приемлемой соли на один или несколько других факторов, которые, в свою очередь, влияют на активность АТМ-киназы. Например, соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль могут снижать уровень ATM
киназы путем непосредственного связывания с АТМ-киназой, путем влияния (прямого
или опосредованного) на другой фактор со снижением активности АТМ-киназы или
путем (прямого или опосредованного) снижения количества АТМ-киназы,
присутствующей в клетке или организме.
5 Термин "терапевтическое лечение" или "терапия" предназначен для обозначения
своего обычного значения, когда он касается заболевания, для полного или частичного ослабления одного, нескольких или всех его симптомов или для устранения или купирования лежащей в основе патологии. Термин "терапевтическое лечение" или "терапия" также включает "профилактику", если определенно не указано иное.
10 Термины "терапевтический" и "терапевтически" должны интерпретироваться соответствующим образом.
Термин "профилактика" предназначен для обозначения своего обычного значения и включает первичную профилактику для предупреждения развития заболевания и вторичную профилактику, при которой заболевание уже развилось, и
15 пациента временно или постоянно защищают от обострения или усугубления заболевания или развития новых симптомов, ассоциированных с заболеванием.
Термин "лечение" применяют синонимично с "терапией". Подобным образом термин "лечить" можно рассматривать в качестве "применения терапии", где "терапия" определена в данном документе.
20 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в терапевтическом лечении.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного препарата.
25 В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы
(I) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного препарата, где лекарственный препарат изготавливают ex-vivo.
В любом варианте осуществления, где изготовление лекарственного препарата упоминается в общем смысле, существует дополнительный вариант осуществления, где
30 лекарственный препарат изготавливают ex-vivo.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания, обусловленного АТМ-киназой.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его 5 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания, обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой, представляет собой онкологическое заболевание.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания, 10 обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой, представляет собой колоректальный рак, глиобластому, рак желудка, рак яичника, диффузную В-крупноклеточную лимфому, хронический лимфолейкоз, острый миелоидный лейкоз, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак молочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, мелкоклеточный рак легкого или немелкоклеточный 15 рак легкого.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания,
обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой,
представляет собой колоректальный рак.
20 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении колоректального рака, 25 глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его 30 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении колоректального рака.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении болезни Гентингтона.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве нейропротекторного средства.
"Нейропротекторное средство" представляет собой средство, которое сохраняет 5 нейронную структуру и/или функцию.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения заболевания, обусловленного АТМ-киназой.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы 10 (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения заболевания, обусловленного АТМ-киназой, где лекарственный препарат изготавливают ex-vivo.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного 15 препарата для лечения заболевания, обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой, представляет собой онкологическое заболевание.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного
20 препарата для лечения заболевания, обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой, представляет собой колоректальный рак, глиобластому, рак желудка, рак яичника, диффузную В-крупноклеточную лимфому, хронический лимфолейкоз, острый миелоидный лейкоз, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак молочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, мелкоклеточный рак
25 легкого и немелкоклеточный рак легкого.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения заболевания, обусловленного АТМ-киназой, при этом заболевание, обусловленное АТМ-киназой, представляет собой колоректальный рак.
30 В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы
(I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения онкологического заболевания.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения онкологического заболевания, где лекарственный препарат изготавливают ex-vivo.
5 В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы
(I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной
10 железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения колоректального рака.
15 В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы
(I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного препарата для лечения болезни Гентингтона.
В одном варианте осуществления предложено применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного
20 препарата для применения в качестве нейропротекторного средства.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное воздействие, у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества
25 соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения Формулы (I), описанного в любом из вариантов осуществления в данном документе, которое эффективно обеспечивает "терапевтическое лечение" субъекта или "лечение" заболевания или нарушения у субъекта. В случае онкологического
30 заболевания терапевтически эффективное количество может вызывать любые изменения, наблюдаемые или измеряемые у субъекта, как описано выше в определениях "терапевтического лечения", "терапии", "лечения" и "профилактики".
Например, эффективное количество может снижать количество раковых или опухолевых клеток; снижать общий размер опухоли; подавлять или останавливать инфильтрацию опухолевых клеток в периферические органы, включая, например, мягкую ткань и кость; подавлять и останавливать метастазы опухолей; подавлять и 5 останавливать рост опухолей; ослаблять до некоторой степени один или несколько симптомов, ассоциированных с раком; снижать тяжесть заболевания и смертность; улучшать качество жизни или обеспечивать комбинацию таких эффектов. Эффективное количество может представлять собой количество, достаточное для уменьшения симптомов заболевания, чувствительного к ингибированию активности АТМ-киназы.
10 Для терапии рака эффективность in-vivo можно измерять, например, с помощью оценки продолжительности выживания, периода времени до прогрессирования заболевания (ТТР), оценки частоты ответа (RR), продолжительности ответа и/или качества жизни. Как признано специалистами в данной области техники, эффективные количества могут изменяться в зависимости от пути введения, применения формообразующего и
15 совместного применения других средств. Например, если применяют комбинированную терапию, то количество соединения Формулы (I) или фармацевтически приемлемой соли, описанных в настоящем раскрытии, и количество другого(других) фармацевтически активного(активных) средства(средств) при их объединении, вместе эффективны для лечения нарушения, на которое они направлены,
20 у пациента-животного. В данном контексте объединенные количества представляют собой "терапевтически эффективное количество", если при объединении их достаточно для снижения интенсивности симптомов заболевания, чувствительного к ингибированию активности АТМ-киназы, как описано выше. Как правило, такие количества могут быть определены специалистом в данной области техники, например,
25 исходя из диапазона доз, описанного в настоящем описании для соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и утвержденного(утвержденных) или иного(иных) опубликованного(опубликованных) диапазона(диапазонов) доз другого(других) фармацевтически активного(активных) соединения(соединений). "Теплокровные животные" включают, например, людей.
30 В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при
котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное воздействие, у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает прямое
введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Под "прямым введением" понимают то, что соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль напрямую дозируют пациенту, а не вводят 5 молекулу-предшественник, что является непрямым дозированием. В любом варианте осуществления, где в общем смысле упоминается введение соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли теплокровному животному, предложен дополнительный вариант осуществления, где указанное соединение или соль вводят напрямую.
10 В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при
котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и при этом заболевание, при
15 котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, представляет собой онкологическое заболевание.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному
20 теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и при этом заболевание, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, представляет собой колоректальный рак, глиобластому, рак желудка, рак яичника, диффузную В-крупноклеточную лимфому, хронический лимфолейкоз, острый миелоидный лейкоз,
25 плоскоклеточный рак головы и шеи, рак молочной железы, гепатоцеллюлярную карциному, мелкоклеточный рак легкого или немелкоклеточный рак легкого.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному
30 теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и при этом заболевание, при
котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, представляет собой колоректальный рак.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения заболевания, при
котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, у теплокровного
5 животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному
теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения
Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и при этом заболевание, при
котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, представляет
собой болезнь Гентингтона.
10 В одном варианте осуществления предложен способ лечения онкологического
заболевания у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
15 В одном варианте осуществления предложен способ лечения колоректального
рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого у
20 теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения колоректального рака у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает
25 введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения болезни Гентингтона у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически
30 эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном варианте осуществления предложен способ нейропротекторного воздействия на организм теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически 5 приемлемой соли.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения онкологического заболевания у теплокровного животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически
10 приемлемой соли. В одном варианте осуществления указанное онкологическое заболевание выбрано из колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого и
15 немелкоклеточного рака легкого. В одном варианте осуществления, указанное онкологическое заболевание выбрано из колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи и рака легкого. В одном варианте осуществления указанный рак представляет собой колоректальный рак.
20 В любом варианте осуществления, где онкологическое заболевание упоминается
в общем смысле, указанное онкологическое заболевание может быть выбрано из колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной железы,
25 гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого и немелкоклеточного рака легкого.
К любому варианту осуществления, где "онкологическое заболевание" упоминается в общем смысле, могут быть применимы следующие варианты осуществления:
30 В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой колоректальный рак.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой глиобластому.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой рак желудка.
5 В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой рак пищевода.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой рак яичника.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет 10 собой рак эндометрия.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой рак шейки матки.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.
15 В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой хроническую лимфоцитарную лейкемию.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет 20 собой плоскоклеточный рак головы и шеи.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой рак молочной железы. В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой рак молочной железы с тройным негативным фенотипом.
25 "Рак молочной железы с тройным негативным фенотипом" представляет собой
любой тип рака молочной железы, при котором тест на рецептор эстрогена, рецептор прогестерона и Her2/neu не дает положительного результата. Способы определения положительного результата теста на каждый из этих рецепторов хорошо известны в уровне техники.
30 В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой гепатоцеллюлярную карциному.
В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой рак легкого. В одном варианте осуществления рак легкого представляет собой
мелкоклеточный рак легкого. В одном варианте осуществления рак легкого
представляет собой немелкоклеточный рак легкого.
5 В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет
собой метастатический рак. В одном варианте осуществления метастатический рак включает в себя метастазы центральной нервной системы. В одном варианте осуществления метастазы центральной нервной системы включают в себя метастазы в головном мозге. В одном варианте осуществления метастазы центральной нервной
10 системы включают в себя лептоменингеальные метастазы.
"Лептоменингеальные метастазы" встречаются при распространении раковой опухоли на мозговые оболочки, слои ткани, покрывающие головной мозг и спинной мозг. Метастазы могут распространяться в мозговые оболочки через кровь или они могут перемещаться из метастазов головного мозга, переносимых спинномозговой
15 жидкостью (СМЖ), которая протекает через мозговые оболочки. В одном из вариантов осуществления онкологическое заболевание представляет собой неметастатический рак.
Противораковое лечение, описанное в настоящем раскрытии, может быть пригодным в виде монотерапии или может включать, в дополнение к введению
20 соединения Формулы (I), традиционные хирургическое вмешательство, лучевую терапию или химиотерапию или комбинацию таких дополнительных средств терапии. Такие традиционные методы, как хирургическое вмешательство, лучевая терапия или химиотерапия, могут применяться одновременно, последовательно или отдельно от лечения соединением Формулы (I).
25 Лучевая терапия может включать одну или несколько из следующих категорий
терапии:
i. наружную лучевую терапию, при которой используется
электромагнитное излучение, и интраоперационную лучевую терапию, при которой
используется электромагнитное излучение;
30 ii. внутреннюю лучевую терапию или брахитерапию, включающую
внутритканевую лучевую терапию или внутрипросветную лучевую терапию;
iii. системную лучевую терапию, включающую терапию йодом 131 и стронцием 89; или
iv. протонную терапию.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его 5 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
10 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении глиобластомы, рака легкого (например, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого), рака молочной железы (например, рака молочной железы с тройным негативным фенотипом), плоскоклеточного рака головы и шеи, рака пищевода, рака
15 шейки матки или рака эндометрия, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
20 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении глиобластомы, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
25 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении метастатического рака, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в
30 пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении метастазов центральной
нервной системы, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически
приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте
осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой
терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
5 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении лептоменингеальных метастазов, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с лучевой терапией. В одном варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии,
10 перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с лучевой терапией. В одном варианте
15 осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложен способ лечения онкологического заболевания у теплокровного животного, которое нуждается в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному соединения Формулы (I)
20 или его фармацевтически приемлемой соли и лучевую терапию, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и лучевая терапия при совместном воздействии эффективно обеспечивают противораковый эффект. В одном варианте осуществления онкологическое заболевание выбрано из глиобластомы, рака легкого (например, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака
25 легкого), рака молочной железы (например, рака молочной железы с тройным негативным фенотипом), плоскоклеточного рака головы и шеи, рака пищевода, рака шейки матки и рака эндометрия. В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой глиобластому. В одном варианте осуществления онкологическое заболевание представляет собой метастатический рак. В одном
30 варианте осуществления метастатический рак включает в себя метастазы центральной нервной системы. В одном варианте осуществления метастазы центральной нервной системы включают в себя метастазы в головном мозге. В одном варианте
осуществления метастазы центральной нервной системы включают в себя лептоменингеальные метастазы. В любом варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
5 В одном варианте осуществления представлен способ лечения рака у
теплокровного животного, которое нуждается в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и одновременное, раздельное или последовательное применение лучевой терапии, при этом соединение Формулы (I) или его
10 фармацевтически приемлемая соль и лучевая терапия при совместном воздействии являются эффективными в обеспечении противоракового эффекта. В одном варианте осуществления рак представляет собой глиобластому. В одном варианте осуществления рак представляет собой метастатический рак. В одном варианте осуществления метастатический рак включает в себя метастазы центральной нервной системы. В
15 одном варианте осуществления метастазы центральной нервной системы включают в себя метастазы в головном мозге. В одном варианте осуществления метастазы центральной нервной системы включают в себя лептоменингеальные метастазы. В любом варианте осуществления лучевая терапия выбрана из одной или нескольких категорий лучевой терапии, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
20 Химиотерапия может включать одну или несколько из следующих категорий
противоопухолевых веществ:
i. Антибластомные средства и их комбинации, такие как алкилирующие ДНК препараты (например, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин, циклофосфамид, азотистые иприты, такие как ифосфамид, бендамустин, мелфалан, хлорамбуцил,
25 бусульфан, темозоломид, и нитрозомочевины, такие как кармустин); антиметаболиты (например, гемцитабин и антифолаты, такие как фторпиримидины, как например, 5-фторурацил и тегафур, ралтитрексед, метотрексат, цитозин-арабинозид и гидроксимочевина); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как адриамицин, блеомицин, доксорубицин, липосомный доксорубицин, пирарубицин,
30 дауномицин, вальрубицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин, амрубицин и митрамицин); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка, как например, винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин, а также
таксоиды, такие как таксол и таксотер, и ингибиторы полокиназы); и ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, такие как этопозид и тенипозид, амсакрин, иринотекан, топотекан и камптотецин); ингибиторы механизмов репарации Д НК, такие как киназа СНК; ингибиторы Д НК-зависимой протеинкиназы; ингибиторы 5 поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (ингибиторы PARP, в том числе олапариб); и ингибиторы Hsp90, такие как танеспимицин и ретаспимицин, ингибиторы ATR киназы (такие как AZD6738); и ингибиторы WEE1 киназы (такие как AZD1775/MK-1775);
ii. Антиангиогенные средства, такие как антиангиогенные средства,
ингибирующие воздействие фактора роста эндотелия сосудов, например антитело к
10 фактору роста клеток эндотелия сосудов бевацизумаб, и, например, ингибитор рецепторной тирозинкиназы VEGF, такой как вандетаниб (ZD6474), сорафениб, ваталаниб (РТК787), сунитиниб (SU11248), акситиниб (AG-013736), пазопаниб (GW 786034) и цедираниб (AZD2171), соединения, такие как соединения, раскрытые в международных патентных заявках WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 и
15 WO 98/13354, и соединения с другими механизмами действия (например, линомид, ингибиторы функции интегрина av(33 и ангиостатин), или игибиторы ангиопоэтинов и их рецепторов (Tie-1 и Tie-2), ингибиторы PLGF, ингибиторы дельта-подобных лигандов (DLL-4);
iii. Подходы к иммунотерапии, включая, например, подходы ex-vivo и in-vivo
20 для повышения иммуногенности опухолевых клеток пациента, такие как трансфекция
цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор; подходы для снижения Т-клеточной анергии или функции регуляторных Т-клеток; подходы, которые обеспечивают усиление ответных реакций Т-клеток на опухоли, например, блокирующие антитела к
25 CTLA4 (например, ипилимумаб и тремелимумаб), В7Н1, PD-1 (например, BMS-936558 или АМР-514), PD-L1 (например, MEDI4736) и антитела-агонисты к CD137; подходы с применением трансфицированных иммунных клеток, таких как цитокин-трансфицированные дендритные клетки; подходы с применением цитокин-трансфицированных опухолевых клеточных линий, подходы с применением антител к
30 антигенам, ассоциированным с опухолями, и антител, которые обеспечивают уменьшение количества типов целевых клеток (например, неконъюгированных антител к CD20, таких как ритуксимаб, меченых радиоактивным изотопом антител к CD20,
бекксар и зевалин, и антитела к CD54, кампат); подходы с применением антиидиотипических антител; подходы, которые обеспечивают усиление функции естественной клетки-киллера, и подходы, в которых используют конъюгаты антитело-токсин (например, антитело к CD33, милотарг); иммунотоксины, такие как 5 моксетумумаб пасудотокс; агонисты toll-подобного рецептора 7 или toll-подобного рецептора 9;
iv. Усилители эффективности действия, такие как лейковорин. В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака, при этом
10 соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом. В одном варианте осуществления применяют одно дополнительное противоопухолевое вещество. В одном варианте осуществления применяют два дополнительных противоопухолевых вещества. В одном варианте осуществления
15 применяют три или более дополнительных противоопухолевых вещества. В любом варианте осуществления дополнительное противоопухолевое вещество выбрано из одного или нескольких противоопухолевых веществ, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
20 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака, при этом
соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят
одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним
дополнительным противоопухолевым веществом. В одном варианте осуществления
применяют одно дополнительное противоопухолевое вещество. В одном варианте
25 осуществления применяют два дополнительных противоопухолевых вещества. В одном
варианте осуществления применяют три или более дополнительных
противоопухолевых вещества. В любом варианте осуществления дополнительное
противоопухолевое вещество выбрано из одного или нескольких противоопухолевых
веществ, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
30 В одном варианте осуществления представлен способ лечения онкологического
заболевания у теплокровного животного, которое нуждается в таком лечении, который включает введение указанному теплокровному животному соединения Формулы (I)
или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одного дополнительного противоопухолевого вещества, при этом количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного противоопухолевого вещества при совместном воздействии эффективно обеспечивают 5 противораковый эффект. В любом варианте осуществления дополнительное противоопухолевое вещество выбрано из одного или нескольких противоопухолевых веществ, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления представлен способ лечения рака у теплокровного животного, которое нуждается в таком лечении, который включает
10 введение указанному теплокровному животному соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и одновременное, раздельное или последовательное введение по меньшей мере одного дополнительного противоопухолевого вещества указанному теплокровному животному, при этом количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного противоопухолевого
15 вещества при совместном воздействии являются эффективными в обеспечении противоракового эффекта. В любом варианте осуществления дополнительное противоопухолевое вещество выбрано из одного или нескольких противоопухолевых веществ, перечисленных в пунктах (i) - (iv) выше.
В одном варианте осуществления предложены соединение Формулы (I) или его
20 фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере одно антибластомное средство для применения в лечении онкологического заболевания. В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, где соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в
25 комбинации с по меньшей мере одним антибластомным средством. В одном варианте осуществления антибластомное средство выбрано из перечня антибластомных средств в пункте (i) выше.
В одном варианте осуществления предложены соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере одно антибластомное средство 30 для применения при одновременном, раздельном или последовательном лечении онкологического заболевания. В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в
лечении онкологического заболевания, где соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним антибластомным средством. В одном варианте осуществления антибластомное средство выбрано из перечня антибластомных 5 средств в пункте (i) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним
10 дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина, валрубицина, идарубицина, доксорубицина, пирарубицина, иринотекана, топотекана, амрубицина, эпирубицина, этопозида, митомицина, бендамустина, хлорамбуцила, циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана, блеомицина, олапариба, MEDI4736, AZD1775 и AZD6738.
15 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из цисплатина,
20 оксалиплатина, карбоплатина, доксорубицина, пирарубицина, иринотекана, топотекана, амрубицина, эпирубицина, этопозида, митомицина, бендамустина, хлорамбуцила, циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана, блеомицина, олапариба, AZD1775 и AZD6738.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
25 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, иринотекана, топотекана, этопозида, митомицина, бендамустина, хлорамбуцила,
30 циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана, блеомицина и олапариба.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического
заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, иринотекана, топотекана, этопозида, митомицина, бендамустина, хлорамбуцила, 5 циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана и блеомицина.
В одном варианте осуществления предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним
10 дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, пирарубицина, амрубицина и эпирубицина.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении острого миелоидного лейкоза, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль
15 вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, пирарубицина, амрубицина и эпирубицина.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака молочной железы,
20 при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, пирарубицина, амрубицина и эпирубицина.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
25 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака молочной железы с тройным негативным фенотипом, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, пирарубицина, амрубицина и эпирубицина.
30 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении гепатоцеллюлярной карциномы, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую
соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из доксорубицина, пирарубицина, амрубицина и эпирубицина.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его 5 фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с иринотеканом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении колоректального рака, 10 при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с иринотеканом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении колоректального рака, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят 15 одновременно, раздельно или последовательно с FOLFIRI.
FOLFIRI представляет собой режим дозирования, в котором применяют комбинацию лейковорина, 5-фторурацила и иринотекана.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака, при этом 20 соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с олапарибом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака желудка, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят 25 одновременно, раздельно или последовательно с олапарибом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического
заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую
соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с топотеканом.
30 В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его
фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака легкого, при этом
соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с топотеканом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении мелкоклеточного рака 5 легкого, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с топотеканом.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую 10 соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с иммунотерапией. В одном варианте осуществления иммунотерапия представляет собой одно или несколько из средств, перечисленных в пункте (iii) выше.
В одном варианте осуществления предложено соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении онкологического 15 заболевания, при этом соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно с антителом к PD-L1 (например, MEDI4736).
В соответствии с дополнительным вариантом осуществления предложен набор, содержащий:
20 а) соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в первой
стандартной лекарственной форме;
b) еще одно дополнительное противоопухолевое вещество в дополнительной
стандартной лекарственной форме;
c) средства-контейнеры для содержания указанных первой и дополнительной
25 стандартных лекарственных форм и необязательно
d) инструкции по применению. В одном варианте осуществления
противоопухолевое вещество содержит антибластомное средство.
В любом варианте осуществления, где упоминается антибластомное средство, антибластомное средство представляет собой одно или несколько средств, 30 перечисленных в пункте (i) выше.
Соединения Формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли можно вводить в виде фармацевтических композиций, содержащих одно или несколько фармацевтически приемлемых формообразующих.
Поэтому в одном варианте осуществления предложена фармацевтическая 5 композиция, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
Выбор формообразующего(их) для включения в определенную композицию будет зависеть от таких факторов, как способ введения и форма предоставленной
10 композиции. Пригодные фармацевтически приемлемые формообразующие хорошо известны специалистам в данной области техники и описаны, например, в Handbook of Pharmaceutical Excipients, Sixth edition, Pharmaceutical Press, edited by Rowe, Ray C; Sheskey, Paul J; Quinn, Marian. Фармацевтически приемлемые формообразующие могут действовать, например, как вспомогательные средства, разбавители, носители,
15 стабилизаторы, вкусовые добавки, красящие вещества, наполнители, связующие, разрыхлители, смазки, вещества, улучшающие скольжение, загустители и средства для оболочек. Как будет понятно специалистам в данной области, некоторые фармацевтически приемлемые формообразующие могут выполнять более одной функции и могут выполнять альтернативные функции в зависимости от количества
20 формообразующего в композиции и от того, какие еще формообразующие присутствуют в композиции.
Фармацевтические композиции могут находиться в форме, подходящей для перорального применения (например, в виде таблеток, пастилок, твердых или мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или
25 гранул, сиропов или настоек), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей, или водных или масляных растворов, или суспензий), для введения путем ингаляции (например, в виде тонкодисперсного порошка или жидкого аэрозоля), для введения путем инсуффляции (например, в виде тонкодисперсного порошка), или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного
30 раствора для внутривенного, подкожного, внутримышечного или внутримышечного введения доз), или в виде суппозитория - для ректального введения доз. Композиции можно получать с помощью традиционных процедур, хорошо известных из уровня
техники. Композиции, предназначенные для перорального применения, могут содержать дополнительные компоненты, например, одно или несколько красящих, подслащивающих, вкусовых и/или консервирующих средств.
Соединение Формулы (I) обычно будут вводить теплокровному животному в 5 стандартной дозе в диапазоне 2,5-5000 мг/м2 площади поверхности тела животного или примерно 0,05-100 мг/кг, и данное количество обычно обеспечивает терапевтически эффективную дозу. Стандартная лекарственная форма, такая как таблетка или капсула, будет, как правило, содержать, например, 0,1-250 мг активного ингредиента. Суточная доза в обязательном порядке будет варьироваться в зависимости от получающего
10 лечение субъекта, конкретного пути введения, каких-либо совместно вводимых терапевтических средств и тяжести болезни, подлежащей лечению. Поэтому, практикующий врач, который проводит лечение какого-либо конкретного пациента, может определить оптимальную дозу.
Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, содержат
15 соединения Формулы (I) или их фармацевтически приемлемую соль и, таким образом, ожидается, что они будут пригодны для терапевтического лечения.
По сути, в одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое
20 формообразующее для использования в терапевтическом лечении.
В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее, для применения в лечении заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное
25 действие.
В одном варианте осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция,
содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по
меньшей мере один фармацевтически приемлемое формообразующее, для применения
в лечении онкологического заболевания.
30 В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция,
содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее, для применения
в лечении онкологического заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие.
В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по 5 меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее, для применения в лечении колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного 10 рака легкого.
В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция для применения в терапевтическом лечении, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
15 В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция
для применения в лечении заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
20 В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция
для применения в лечении онкологического заболевания, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция
25 для применения в лечении онкологического заболевания, при котором ингибирование АТМ-киназы имеет благоприятное действие, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
В одном варианте осуществления предложена фармацевтическая композиция
30 для применения в лечении колоректального рака, глиобластомы, рака желудка, рака яичника, диффузной В-крупноклеточной лимфомы, хронического лимфолейкоза, острого миелоидного лейкоза, плоскоклеточной карциномы головы и шеи, рака
молочной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мелкоклеточного рака легкого или немелкоклеточного рака легкого, содержащая соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
ПРИМЕРЫ
В ходе следующих описанных экспериментов, если не указано иное, то:
i. Выпаривания осуществляли путем ротационного выпаривания или с использованием оборудования Genevac in vacuo, а процедуры по выделению продукта
10 реакции осуществляли после удаления остаточных твердых веществ путем фильтрации;
ii. Очистки с помощью флэш-хроматографии выполняли на автоматизированном Armen Glider Flash: Spot II Ultimate (Armen Instrument, Saint-Ave, Франция) или на автоматизированном Presearch CombiFlash Companions, используя заранее упакованные нормальной фазой Si60 диоксида кремния картриджи
15 производства Merck (гранулометрия : 15-40 или 40-63 мкм), полученные от Merck, Darmstad, Германия, картриджи с диоксидом кремния silicycle или картриджи с диоксидом кремния graceresolv;
iii. Выходы, при наличии, не обязательно были максимально достижимыми.
iv. Структуры конечных продуктов Формулы (I) подтверждали с помощью
20 спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР), измеряя величины химического
сдвига ЯМР по дельта шкале. Спектры протонного магнитного резонанса определяли с использованием прибора Bruker Advance 700 (700 МГц), Bruker Avance 500 (500 МГц), Bruker 400 (400 МГц) или Bruker 300 (300 МГц); 19F ЯМР определяли при 282 МГц или
376 МГц; С ЯМР определяли при 75 МГц или 100 МГц; измерения проводили при 25 температуре приблизительно 20-30°С, если не указано иное; использовали следующие сокращения: s, синглет; d, дублет; t, триплет; q, квартет; т, мультиплет; dd, дублет дублетов; ddd, дублет дублета дублетов; dt, дублет триплетов; br s, широкий сигнал;
v. Конечные продукты, соответствующие Формуле (I), были также
охарактеризованы с использованием масс-спектрометрии, а затем - жидкостной
30 хроматографии (LCMS или ЖХ-МС); LCMS проводили, используя Waters Alliance НТ (2790 & 2795), оснащенный масс-спектрометром Waters ZQ ESCi или ZMD ESCi и колонкой X Bridge 5мкм С-18 (2,1 х 50 мм) с расходом 2,4 мл/мин, используя систему
растворителей, содержащую от 95% А + 5% С до 95% В + 5% С за 4 минуты, где А = вода, В = метанол, С = 1:1 метанол:вода (содержащая 0,2% карбоната аммония); или используя Shimadzu UFLC или UHPLC в сочетании с детектором DAD, детектором ELSD и масс-спектрометром 2020 EV (или эквивалентным ему), оснащенным колонкой 5 Phenomenex Gemini-NX С18 3,0 х 50 мм, 3,0 мкМ или эквивалентной ей (основные условия), или колонкой Shim pack XR - ODS 3,0 x 50 мм, 2,2 мкМ, или колонкой Waters ВЕН С18 2,1 х 50 мм, 1,7 мкМ, или эквивалентной ей, используя систему растворителей, содержащую от 95% D + 5% Е до 95% Е + 5% D за 4 минуты, где D = вода (содержащая 0,05% TFA), Е = ацетонитрил (содержащий 0,05% TFA) (кислотные
10 условия), или систему растворителей, содержащую от 90% F + 10% G до 95% G + 5% F за 4 минуты, где F = вода (содержащая 6,5 мМ гидрокарбоната аммония с рН, доведенным до 10 добавлением аммиака), G = ацетонитрил (основные условия);
vi. Использовали следующие сокращения: KRED = (Кеторедуктаза)-Р1-Н10; BVMO = (Baeyer Villiger Монооксигеназа)-Р1-О08 и
15 vii. При этом названия по IUPAC получали с использованием либо ELN -
фирменной программы, либо "Canvas" или "IBIS" - фирменные программы AstraZeneca.
Пример 1
Л/,Л/-Диметил-3-[[5-(3-метил-2-оксо-1-тетрагидропиран-4-ил-имидазо[4,5-20 с]хинолин-8-ил)-2-пиридил]окси]пропан-1-аминоксид
В 100 миллилитровую емкость с рубашкой вносили 8-[6-(3-диметиламинопропокси)пиридин-3-ил]-3-метил-1-(оксан-4-ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-он (1,22 г, 2,64 ммоль). Готовили раствор двухосновного фосфата калия (1,74 г, 9,99 25 ммоль) в воде (100 мл) и рН доводили до рН 9,0, добавляя по каплям 2М соляную кислоту. В емкость загружали 28 мл раствора фосфатного буфера, приготовленного, как описано ранее, а затем - 2-пропанол (4,8 мл), бета-динатриевую соль никотинамидадениндинуклеотидфосфата (0,016 г, 0,020321 ммоль), Codexis KRED (32
мг) и Codexis BVMO (292 мг). Реакционную смесь интенсивно перемешивали (400 об/мин) при 32°С (температура рубашки) при постоянном барботировании воздуха через иглу, присоединенную к источнику сжатого воздуха. Через 17 часов дополнительно добавляли 2-пропанол (4,8 мл), а также воду (5,0 мл) для восполнения 5 растворителя, испарившегося вследствие барботирования емкости. Реакционную смесь перемешивали еще 24 часа до того, как ВЭЖХ анализ показал на отсутствие продолжения реакции (конверсия -54%). В емкость с рубашкой вносили ацетонитрил (61,0 мл), суспензию перемешивали 5 минут и реакционную смесь отфильтровывали через разъемную воронку Бюхнера диаметром 7 см. Фильтрат концентрировали при
10 пониженном давлении с получением водного остатка объемом ~ 30 мл. Измеряли рН этого водного раствора, доводили до рН 11, используя 5М гидроксид натрия, и дважды экстрагировали дихлорметаном (2 х 24 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении с получением непрореагировавшего 8-[6-(3-диметиламинопропокси)пиридин-3-ил]-3-метил-1 -(оксан-
15 4-ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-она в виде грязно-белого твердого вещества (0,479 г). К водному слою добавляли хлорид натрия (~6,0 г) до достижения насыщения, затем водный слой дважды экстрагировали 1-бутанолом (2x37 мл). 1-Бутанольные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества (1,31 г). Твердое вещество растворяли в
20 хлороформе (5 мл) и фильтровали, чтобы удалить неорганические примеси. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением смеси 4:1 требуемого материала с непрореагировавшим 8-[6-(3-диметиламинопропокси)пиридин-3-ил]-3-метил-1 -(оксан-4-ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-оном в виде белого твердого вещества (0,711 г). Белое твердое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя с
25 100:10:1 DCM:MeOH:cNH3, получая требуемый материал в виде белого твердого вещества (0,487 г, 39%). Спектр ЯМР: 1Я ЯМР (400 МГц, CDC13) 5 1,95 (2Н, ш), 2,51 (2Н, т), 2,97 (2Н, т), 3,28 (6Н, s), 3,53 (2Н, т), 3,62 (5Н, т), 4,26 (2Н, dd), 4,54 (2Н, t), 5,11 (Ш, br s), 6,90 (Ш, d), 7,82 (Ш, dd), 7,97 (Ш, т), 8,24 (Ш, d), 8,42 (Ш, br s), 8,52 (Ш, d), 8,73 (Ш, s). Масс-спектр: масса/заряд (ES+)[M+H]+ = 478.
3 0 8-[6-(3 -Диметиламинопропокси)пиридин-3 -ил]-3 -метил-1 -(оксан-4-
ил)имидазо[5,4-с]хинолин-2-он можно получать, как описано в WO2015/170081 (см. Пример 1, стр. 53 описания). Содержание WO2015/170081 тем самым включено во всей
своей полноте в данный документ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ Следующие анализы применяли для измерения эффектов от соединений по 5 настоящему изобретению: а) анализ клеточной активности ATM; b) анализ клеточной активности PI3K; с) анализ клеточной активности mTOR; d) анализ клеточной активности ATR. При описании анализов, как правило, применяли следующее.
i. Использовали следующие сокращения: 4NQO = 4-нитрохинолина N-оксид; АЬ = антитело; BSA = бычий сывороточный альбумин; СОг = диоксид углерода;
10 DMEM = модифицированная по способу Дульбекко среда Игла; DMSO =диметилсульфоксид; EDTA = этилендиаминтетрауксусная кислота; EGTA = этиленгликоль тетрауксусной кислоты; ELISA = твердофазный иммуноферментный анализ; ЕМЕМ = минимальная питательная среда Игла; FBS = эмбриональная бычья сыворотка; h = час(ы); HRP = пероксидаза хрена; i.p. = внутрибрюшинно; PBS =
15 забуференный фосфатом физиологический раствор; PBST = забуференный фосфатом физиологический раствор / Tween; TRIS = трис(гидроксиметил)аминометан; реагент MTS: [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолий, внутренняя соль, и образующий электронную пару реагент (феназинметосульфат) PMS; s. с. подкожно.
20 ii. Значения IC50 рассчитывали, используя интеллектуальную
аппроксимирующую модель (smart fitting model) в Genedata. Значение 1С50 представляло собой концентрацию тестируемого соединения, которая обеспечивала ингибирование биологической активности на 50%. Анализ а): клеточная активность ATM
25 Обоснование
Облучение клеток вызывает двухнитевые разрывы ДНК и быстрое межмолекулярное аутофосфорилирование серина 1981, что вызывает диссоциацию димера и инициирует активность клеточной АТМ-киназы. Большинство молекул ATM в клетке быстро фосфорилируются по данному сайту после таких низких доз
30 облучения, как 0,5 Гр, и связывание фосфоспецифичного антитела становится обнаруживаемым после обеспечения лишь нескольких двухнитевых разрывов ДНК в клетке.
Анализ рАТМ основан на выявлении ингибиторов ATM в клетках. Клетки НТ29 инкубируют с исследуемыми соединениями в течение 1 часа до рентгеновского облучения. Через 1 ч. клетки фиксируют и окрашивают для определения рАТМ (Serl981). Флуоресценцию считывают с использованием платформы обработки 5 изображений ArrayScan.
Подробности метода
Клетки НТ29 (ЕСАСС № 85061109) высевали в 384-луночные аналитические планшеты (Costar № 3712) с плотностью 3500 клеток/лунка в 40 мкл среды ЕМЕМ, содержащей 1% L-глутамина и 10% FBS и обеспечивали прикрепление в течение ночи.
10 На следующее утро в аналитические планшеты с помощью акустического введения доз добавляли соединения Формулы (I) в 100% DMSO. Через 1 ч. инкубирования при 37°С и 5% СОг планшеты облучали (вплоть до 6 за один раз) с использованием прибора X-RAD 320 (PXi), что эквивалентно -600 сГр. Планшеты возвращали в инкубатор еще на 1 ч. Затем клетки фиксировали путем добавления 20 мкл 3,7% формальдегида в
15 растворе PBS с инкубированием в течение 20 минут при к. т. перед промывкой с помощью 50 мкл/лунка PBS с использованием устройства для промывки планшетов Biotek EL405. Затем добавляли 20 мкл 0,1% Triton Х100 в PBS и инкубировали 20 минут при к. т., чтобы сделать клетки проницаемыми. Затем планшеты один раз промывали, используя 50 мкл / лунку PBS, с помощью устройства для промывки
20 планшетов Biotek EL405.
Антитело фосфо-АТМ Serl981 (Millipore № МАВ3806) разбавляли в 10000 раз в PBS, содержащем 0,05% полисорбат/Tween и 3% BSA, и 20 мкл добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение ночи при к. т. На следующее утро планшеты промывали три раза с помощью 50 мкл/лунка PBS с использованием устройства для
25 промывки планшетов Biotek EL405, а затем добавляли 20 мкл раствора вторичного АЬ, содержащего разбавленное в 500 раз антитело козы к IgG кролика, меченное Alexa Fluor(r) 488 (Life Technologies, A11001), и 0,002 мг/мл красителя Хехст (Life technologies №Н-3570) в PBS, содержащем 0,05% полисорбат/Tween и 3% BSA. Через 1ч. инкубирования при к. т. планшеты промывали три раза с помощью 50 мкл/лунка PBS с
30 использованием устройства для промывки планшетов Biotek EL405 и планшеты герметично закрывали и хранили в PBS при 4°С до проведения считывания. Считывание планшетов проводили с использованием прибора ArrayScan VTI, применяя
фильтр XF53 с объективом 10Х. Окрашивание ядер красителем Хехст (405 нм) и окрашивание вторичного антитела pSerl981 (488 нм) анализировали с помощью установки с двумя лазерами.
Анализ Ь): Клеточная активность ATR 5 Обоснование
ATR представляет собой киназу, родственную PI 3-киназе, которая фосфорилирует разнообразные субстраты по остаткам серина или треонина в ответ на повреждение ДНК во время или в блоках репликации. Chkl, протеинкиназа ATR ниже по каскаду, играет ключевую роль в регулировании контрольных точек повреждения 10 ДНК. Активация Chkl включает фосфорилирование Ser317 и Ser345 (последний рассматривается как предпочтительная мишень для фосфорилирования/активации посредством ATR). Это был клеточный анализ для измерения ингибирования ATR-киназы путем измерения уменьшения фосфорилирования Chkl (Ser 345) в клетках НТ29 после обработки соединением Формулы (I) и УФ-миметиком 4NQO (Sigma 15 #N8141).
Подробности метода
Клетки НТ29 (ЕСАСС № 85061109) высевали в 384-луночные аналитические планшеты (Costar № 3712) с плотностью 6000 клеток/лунка в 40 мкл среды ЕМЕМ, содержащей 1% L-глутамина и 10% FBS и обеспечивали прикрепление в течение ночи.
20 На следующее утро в аналитические планшеты с помощью акустического введения доз добавляли соединение Формулы (I) в 100% DMSO. Через 1 ч. инкубирования при 37°С и 5% С02 во все лунки добавляли 40 нл 3 мМ 4NQO в 100%. DMSO путем акустического введения доз, за исключением лунок минимального контроля, которые оставляли необработанными 4NQO для создания контрольных образцов с нулевым
25 ответом. Планшеты возвращали в инкубатор еще на 1 ч. Затем клетки фиксировали путем добавления 20 мкл 3,7% формальдегида в растворе PBS с инкубированием в течение 20 минут при к. т. Затем добавляли 20 мкл 0,1% Triton Х100 в PBS и инкубировали 10 минут при к. т., чтобы сделать клетки проницаемыми. Затем планшеты один раз промывали, используя 50 мкл / лунку PBS, с помощью устройства
30 для промывки планшетов Biotek EL405.
Антитело фосфо-Chkl Ser 345 (Cell Signalling Technology № 2348) разбавляли в 150 раз в PBS, содержащем 0,05% полисорбат/Tween, и 15 мкл добавляли в каждую
лунку и инкубировали в течение ночи при к. т. На следующее утро планшеты промывали три раза с помощью 50 мкл/лунка PBS с использованием устройства для промывки планшетов Biotek EL405, а затем добавляли 20 мкл раствора вторичного АЬ, содержащего разбавленное в 500 раз антитело козы к IgG кролика, меченное Alexa 5 Fluor 488 (Molecular Probes №A-11008) и 0,002 мг/мл красителя Хехст (Molecular Probes № Н-3570) в PBST. Через 2 ч. инкубирования при к. т. планшеты промывали три раза с помощью 50 мкл/лунка PBS с использованием устройства для промывки планшетов Biotek EL405 и затем планшеты закрывали герметичными черными планшетными крышками до проведения считывания. Считывание планшетов 10 проводили с использованием прибора ArrayScan VTI, применяя фильтр XF53 с объективом 10Х. Окрашивание ядер красителем Хехст (405 нм) и окрашивание вторичного антитела pChkl (488 нм) анализировали с помощью установки с двумя лазерами.
Анализ с): Клеточная активность PI3K 15 Обоснование
Данный анализ применяли для измерения ингибирования Р13К-а в клетках. PDK1 известна в качестве киназы петли активации протеинкиназы В (Aktl) выше по каскаду, которая необходима для активации РКВ. Активация липидкиназы, фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), является ключевым элементом активации РКВ 20 посредством PDK1.
После стимулирования лигандом рецепторных тирозинкиназ активируется PI3K,
которая обеспечивает превращение PIP2 в PIP3, который связывается РН-доменом
PDK1, что вызывает перенос PDK1 в цитоплазматическую мембрану, где она
фосфорилирует АКТ по Thr308 в петле активации.
25 Целью данного клеточного анализа механизма действия является выявление
соединений, которые ингибируют активность PDK или перенос PDK1 в мембрану, путем ингибирования активности PI3K. Фосфорилирование фосфо-Akt (Т308) в клетках ВТ474с после обработки с помощью соединений в течение 2 ч. является прямым параметром измерения активности PDK1 и непрямым параметром измерения 30 активности PI3K.
Подробности метода
Клетки BT474 (карцинома протоков молочной железы человека, АТСС НТВ-20)
засевали в 384-луночные черные планшеты (Costar № 3712) с плотностью 5600 клеток
на лунку в среду DMEM, содержащую 10% FBS и 1% глутамина, и давали
прикрепиться в течение ночи.
5 На следующее утро соединения в 100% DMSO добавляли в аналитические
планшеты с помощью акустического введения доз. Через 2 ч инкубирования при 37°С и 5% СОг среду отсасывали и клетки лизировали буфером, содержащим 25 мМ Tris, 3 мМ EDTA, 3 мМ EGTA, 50 мМ фторида натрия, 2 мМ ортованадата натрия, 0,27 М сахарозы, 10 мМ Р-глицерофосфата, 5 мМ пирофосфата натрия, 0,5% Triton Х-100 и
10 таблетки полной смеси ингибиторов протеаз (Roche № 04 693 116 001, использовали 1 таблетку на 50 мл лизисного буфера).
Через 20 минут лизаты клеток переносили в планшеты для ELISA (Greiner № 781077), на которые предварительно наносили покрытие из антитела к общему-АКТ в PBS буфере, и неспецифическое связывание блокировали с помощью 1% BSA в PBS,
15 содержащем 0,05% Tween 20. Планшеты инкубировали при 4°С в течение ночи. На следующий день планшеты промывали PBS-буфером, содержащим 0,05% Tween 20, и инкубировали дополнительно с моноклональным антителом мыши к фосфо-АКТ Т308 в течение 2 ч. Планшеты снова промывали, как описано выше, перед добавлением вторичного антитела лошади к Ig мыши, конъюгированного с HRP. Через 2 ч
20 инкубирования при к. т., планшеты промывали и в каждую лунку вносили рабочий раствор субстрата QuantaBlu (Thermo Scientific № 15169, приготовленный согласно инструкции производителя). Через 60 минут останавливали реакцию сформированного флуоресцентного продукта путем добавления в лунки стоп-раствора. Данные с планшетов считывали, используя устройство для считывания Tecan Safire с длинами
25 волн возбуждения при 325 нм и испускания при 420 нм, соответственно. Если не указано иное, в данном анализе ELISA применяли реагенты, содержащиеся в сэндвич-наборе ELISA Path Scan Phospho АКТ (Thr308) от Cell Signalling (№ 7144). Анализ d): клеточная активность mTOR Обоснование
30 Клеточный анализ фосфо-АКТзег473 выполняли на клеточной линии MDA-MB-
468 - нулевой по PTEN клеточной линии аденокарциномы молочной железы человека.
Вследствие отсутствия PTEN конститутивно активируется рАКТ, что устраняет необходимость в стимулировании для начала фосфорилирования. Подробности метода
Клетки MDA-MB-468 культивировали в среде для культивирования клеток, 5 состоящей из DMEM (среды Игла в модификации Дульбекко № D6546), 10% (об./об.) фетальной телячьей сыворотки и 1% (об./об.) L-глутамина. После сбора клетки распределяли в черные 384-луночные планшеты Costar (№ 3712, Corning) с получением 1500 клеток на лунку в общем объеме 40 мкл среды для культивирования клеток и инкубировали в течение ночи при 37°С, 90% относительной влажности и 5% С02 в 10 ротационном инкубаторе. Соединения затем исследовали по одному из двух протоколов А или В анализа: Протокол А:
Планшеты с клетками инкубировали в течение 2 часов при 37°С перед фиксацией путем добавления 20 мкл 3,7% формальдегида в PBS/A (конечная
15 концентрация 1,2%) с последующим инкубированием в течение 40 минут при комнатной температуре, а затем промывали 2х с использованием 150 мкл PBS/A (фосфатно-солевого буферного раствора) с помощью устройства для промывки планшетов BioTek ELx406. Клетки делали проницаемыми и фиксировали 20 мкл буфера для анализа (0,5% Tween 20 в PBS/A + 1% порошкового молока) в течение 1 ч
20 при комнатной температуре, а затем промывали один раз, используя 50 мкл PBS/A. Первичное моноклональное кроличье антитело фосфо-АКТ (Ser473) 736Е11 (№ 3787, Cell Signaling Technology) разводили в соотношении 1:500 в буфере для анализа, добавляя 20 мкл в каждую лунку, и планшеты инкубировали при 4°С в течение ночи. Планшеты с клетками промывали 3 раза с использованием 200 мкл PBS/T (фосфатно-
25 солевого буферного раствора, содержащего 0,05% Tween-20), затем в каждую лунку добавляли по 20 мкл конъюгированного с Alexa Fluor(r) 488 вторичного антитела козы к IgG кролика (№ А11008, Molecular Probes, Life Technologies) в разведении 1:1000 в аналитическом буфере с красителем Хехст 33342 в разведении 1:5000. После 2-часового инкубирования при комнатной температуре планшеты промывали Зх с
30 использованием 200 мкл PBS/T, и в каждую лунку добавляли по 40 мкл PBS/A.
Планшеты с окрашенными клетками накрывали черными герметичными крышками и затем данные считывали на спектрофотометре для прочтения планшетов
Acumen (TTP Labtech). Первичный канал (зеленая флуоресценция, 488 нм) используется для установки интенсивности для отбрасывания макс/мин показаний для поправки на недельный разброс окрашивания и 'АКТ+: Данные по числу объектов (No)', используемые для анализа. Данные анализировали и рассчитывали IC50, 5 используя программное обеспечение Genedata Screener(r). Протокол В:
Клеточные планшеты инкубировали в течение 2 часов при 37°С перед фиксацией добавлением 20 мкл 3,7% формальдегида в PBS/A (1,2% конечная концентрация), с последующим инкубированием в течение 30 минут при к. т., а затем
10 промывали дважды, используя 150 мкл PBS/A, с помощью устройства для промывки планшетов BioTek ELx406. Клетки делали проницаемыми и фиксировали с помощью 20 мкл буфера для анализа (0,1% Triton Х-100 в PBS/A +1% BSA) в течение 1 ч при к. т., а затем промывали один раз, используя 50 мкл PBS/A. Первичное моноклональное кроличье антитело фосфо-АКТ (Ser473) D9E ХР(r) (№ 4060, Cell Signaling Technology)
15 разводили в соотношении 1:200 в буфере для анализа, добавляя 20 мкл в каждую лунку, и планшеты инкубировали при 4°С в течение ночи. Клеточные планшеты трижды промывали, используя 200 мкл PBS/T, затем в каждую лунку вносили 20 мкл разведенного в соотношении 1:750 буфером для анализа конъюгированного с Alexa Fluor(r) 488 вторичного козьего антитела к IgG кролика (№ А11008, Molecular Probes,
20 Life Technologies) с разведенным в соотношении 1:5000 Хехст-красителем 33342. Через 1 час инкубирования при к. т. планшеты трижды промывали, используя 200 мкл PBS/T, и в каждую лунку вносили по 40 мкл PBS без Са, Mg и Na бикарб. (Gibco № 14190-094).
Окрашенные клеточные планшеты закрывали герметичными черными крышками и затем считывали, используя платформу обработки изображений Cell
25 Insight (Thermo Scientific), с Юх объективом. Первичный канал (голубая флуоресценция Хехст при 405 нм, BGRFR 386 23) используется для аутофокусировки и подсчета числа событий (это дает информацию о цитотоксичности исследуемых соединений). С помощью вторичного канала (Зеленый 488 нм, BGRFR 485 20) измеряют окрашивание рАКТ. Данные анализировали и рассчитывали IC50, используя программное
30 обеспечение Genedata Screener(r).
5 или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль согласно п. 1, где соединение находится в выделенной форме.
3. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль согласно п. 1, где соединение получено ex-vivo.
10 4. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
согласно п. 3, где соединение получено с помощью органического синтеза.
5. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
согласно любому одному из пп. 1-4 для применения в терапевтическом лечении.
6. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
15 согласно любому одному из пп. 1-4 для применения в лечении онкологического
заболевания.
7. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для
применения в лечении онкологического заболевания согласно п. 6, где соединение
Формулы (I) вводят одновременно, раздельно или последовательно с лучевой терапией.
20 8. Соединение Формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для
применения в лечении онкологического заболевания по п. 6, где соединение Формулы (I) вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина, валрубицина, идарубицина, доксорубицина,
25 пирарубицина, иринотекана, топотекана, амрубицина, эпирубицина, этопозида, митомицина, бендамустина, хлорамбуцила, циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана, блеомицина, олапариба, MEDI4736, AZD1775 и AZD6738.
9. Применение соединения Формулы (I) или его фармацевтически
приемлемой соли согласно любому одному из пп. 1-3 для изготовления лекарственного
препарата для лечения онкологического заболевания.
10. Способ лечения онкологического заболевания у теплокровного
5 животного, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному
теплокровному животному терапевтически эффективного количества соединения Формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли согласно любому одному из пп. 1-3.
11. Фармацевтическая композиция, которая содержит соединение Формулы
10 (I) или его фармацевтически приемлемую соль согласно любому одному из пп. 1-4 и по
меньшей мере одно фармацевтически приемлемое формообразующее.
12. Фармацевтическая композиция согласно п. 11 для применения в
терапевтическом лечении.
13. Фармацевтическая композиция согласно п. 11 для применения в лечении
15 онкологического заболевания.
14. Фармацевтическая композиция для применения в лечении
онкологического заболевания согласно п. 13, где фармацевтическую композицию
вводят одновременно, раздельно или последовательно с лучевой терапией.
15. Фармацевтическая композиция для применения в лечении
20 онкологического заболевания согласно п. 13, где фармацевтическую композицию
вводят одновременно, раздельно или последовательно с по меньшей мере одним дополнительным противоопухолевым веществом, выбранным из цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина, валрубицина, идарубицина, доксорубицина, пирарубицина, иринотекана, топотекана, амрубицина, эпирубицина, этопозида, 25 митомицина, бендамустина, хлорамбуцила, циклофосфамида, ифосфамида, кармустина, мелфалана, блеомицина, олапариба, MEDI4736, AZD1775 и AZD6738.
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
(19)
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446 41 PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446 41 PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446 41 PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624
WO 2017/174446
PCT/EP2017/057624