[RU]

Изобретение обеспечивает α-сложные аминоэфиры производных гидроксипропилтиазолидин карбоксамида формулы (I), (2S)-3-([1,1'-бифенил]-4-илсульфонил)-N-[(1S)-3-гидрокси-1-фенилпропил]-1,3-тиазолидин-2-карбоксамид, а также их соли и кристаллические полиморфы. Соединение ингибирует рецептор простагландина F (PGF2alpha) и полезно для лечения нарушений, таких как преждевременные роды, на ранней гестационной стадии, или дисменореи.

(57) Реферат / Формула:

Изобретение обеспечивает α-сложные аминоэфиры производных гидроксипропилтиазолидин карбоксамида формулы (I), (2S)-3-([1,1'-бифенил]-4-илсульфонил)-N-[(1S)-3-гидрокси-1-фенилпропил]-1,3-тиазолидин-2-карбоксамид, а также их соли и кристаллические полиморфы. Соединение ингибирует рецептор простагландина F (PGF2alpha) и полезно для лечения нарушений, таких как преждевременные роды, на ранней гестационной стадии, или дисменореи.

---

Евразийское (21) 201891095 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.01.31
(22) Дата подачи заявки 2017.01.04
(51) Int. Cl.
C07D 277/06 (2006.01) A61K 31/426 (2006.01) A61K 45/06 (2006.01) A61P15/00 (2006.01) A61P15/06 (2006.01)
(54) АЛЬФА-СЛОЖНЫЕ АМИНОЭФИРЫ ПРОИЗВОДНОГО
ГИДРОКСИПРОПИЛТИАЗОЛИДИН КАРБОКСАМИДА И ЕГО СОЛЕВАЯ ФОРМА, КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФ
(31) (32) (33)
(86) (87) (71)
(72)
(74)
14/987,586; 62/274,674; 62/395,664; 62/407,918
2016.01.04; 2016.01.04; 2016.09.16;
2016.10.13
PCT/EP2017/050101
WO 2017/118641 2017.07.13
Заявитель:
МЕРК СЕРОНО С.А. (CH)
Изобретатель:
Наксос Пейдж Патрик, Шварц Маттиас (CH), Жоран-Лебрён Кетрин (FR), Кваттропани Анна (CH), Помел Винсент (FR)
Представитель:
Нилова М.И. (RU) (57) Изобретение обеспечивает а-слож-ные аминоэфиры производных гидрок-сипропилтиазолидин карбоксамида формулы (I), (28)-3-([1,1'-бифенил]-4-илсульфонил)-К-[(1S)-3-
гидрокси-1-фенилпропил]-1,3-тиазоли-дин-2-карбоксамид, а также их соли и кристаллические полиморфы. Соединение ингибирует рецептор простагландина F (PGF2alpha) и полезно для лечения нарушений, таких как преждевременные роды, на ранней гестационной стадии, или дисменореи.
АЛЬФА-СЛОЖНЫЕ АМИНОЭФИРЫ ПРОИЗВОДНОГО ГИДРОКСШ1РОПИЛТИАЗОЛИДИН КАРБОКСАМИДА И ЕГО СОЛЕВАЯ ФОРМА,
КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФ
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к химическим композициям, таким как соединения, соли и кристаллические полиморфы, которые способны связываться и ингибировать активность рецептора простагландина F2a (PGF2a), а также к способам предотвращения преждевременных родов на ранней гестационной стадии путем введения этих композиций пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Предпосылки создания изобретения
Преждевременные роды являются основной причиной перинатальной смертности в развитых странах и они происходят около в 7% - 10% всех родов (Berkowitz и др., Epidemiol. Rev. 15:414-443 (1993)). У недоношенных новорожденных значительно чаще наблюдаются тяжелые заболевания, в особенности респираторный дистресс-синдром, внутрижелудочковое кровоизлияние, бронхолёгочная дисплазия, и некротизирующий энтероколит, по сравнению с доношенными новорожденными. Длительные нарушения, такие как центральный паралич, нарушение зрения и потеря слуха, также наиболее распространены у недоношенных детей. В настоящее время, преждевременные роды остаются основной причиной смертности и заболеваемости новорожденных в Соединенных Штатах Америки, где, несмотря на значительные улучшения родовспомогательной медицины, уровень смертности детей первого года жизни является более высоким, чем во многих других промышленно развитых странах, что вызывает затраты на интенсивную терапию новорожденных детей с чрезвычайно низкой массой тела, превышающие 5 миллиардов долларов в год. Действительные затраты, связанные с этой интенсивной терапией, еще выше, если принимать во внимание предоставление медицинских услуг для лечения заболеваний, связанных с
преждевременным рождением детей, таких как респираторный дистресс-синдром, сердечные патологии, центральный паралич, эпилепсия и тяжелые трудности обучения.
За последние 40 лет клинических исследований, и, несмотря на применение различных терапевтических средств, частота преждевременных родов значительно не снизилась. Предотвратить преждевременные роды очень сложно и, несмотря на то, что токолитическая терапия остается ключевым элементом сдерживания преждевременных родов, отсутствует универсальное соглашение относительно его значения для этого состояния. Доступные токолитические агенты сами по себе не пролонгируют роды более, чем на 48 часов, и у большинства из этих средств отсутствует селективность по отношению к матке и, следовательно, они могут вызвать потенциальные тяжелые побочные эффекты как для матери, так и для плода.
Фундаментально, роды в срок и преждевременные роды являются сходными процессами, поскольку у них общая физиологическая конечная точка, которая характеризуется маточными сокращениями, раскрытием шейки матки и активацией плодных оболочек. Различие состоит в гестационном возрасте, при котором происходят эти процессы, и механизмах, которые их активируют. Полагают, что роды в срок являются результатом физиологической активации терминального пути, в то время как преждевременные роды являются патологическим состоянием, которое характеризуется различными этиологиями, при котором одно или большее количество компонентов этого пути аббератно активированы.
Сократительная способность матки стимулируется или ингибируется различными рецепторами в клетках миометрия. Существует гипотеза, что активация миометрия является результатом координированной экспрессии белков, связанных с сокращениями (CAPs), включая актин, миозин, коннексин-43, и рецепторов для окситоцина и простагландинов. Как правило, рецепторы, которые вызывают вход кальция или высвобождение кальция из внутриклеточного пула, стимулируют сократительную способность. Однако, рецепторы, связанные с продукцией циклических нуклеотидов, таких как циклический аденозинмонофосфат (цАМФ), расслабляют матку. Например, рецепторы окситоцина и
простагландина F (FP) являются стимулирующими, в то время как Р2 адренорецепторы и рецепторы простагландина Е2, связанные с образованием цАМФ, являются ингибирующими.
В тканях матки, было показано, что простагландины Е2 (PGE2) и F2a (PGF2a) индуцируют изменения цервикального канала и вызывают сократительную способность матки, два ключевых события в физиологии родов и родоразрешения. Активация FP рецептора в миометрии человека с помощью PGF2a приводит к повышению внутриклеточной концентрации кальция, что, в свою очередь, приводит к сокращению гладкомышечных клеток матки (Abramovitz и др. J. Biol. Chem. 269:2632-2636 (1994) и Senior и др. Br. J. Pharmacol. 108:501-506 (1993)). FP рецепторы активированы в маточных тканях к сроду родов (Al-Matubsi и др. Biol. Reprod. 65:1029-1037 (2001)). Ингибиторы синтеза простагландина (такие как индометацин и нимесулид) проявляют некоторый токолитический эффект, но у них присутствуют побочные эффекты и их безлицензионное использование в клинической практике вызывает опасения с точки зрения безопасности плода (Norton и др. New Engl. J. Med. 329:1602-1067 (1993) и Peruzzi и др. New Engl. J. Med. 354:1615 (1999)). Сохраняется потребность в разработке лекарственных средств с селективностью по отношению к миометрию, которые позволят длительно ингибировать маточные сокращения, приводящие к родам, и пролонгировать беременность до стадии, на которой повышенное созревание плода увеличивает шансы на выживание.
Сущность изобретения
Изобретение охватывает альфа-сложные аминоэфиры производного гидроксипропилтиазолидин карбоксамида, а также их соли, которые способны нарушать взаимодействие между простагландином F2a (PGF2a) и рецептором простагландина F. Эти соединения могут вводиться субъекту, такому как беременная женщина, для лечения или предотвращения преждевременных родов. Изобретение дополнительно обеспечивает способы синтеза этих соединений, а также способы получения их кристаллических форм.
В первом аспекте, изобретение обеспечивает соединение формулы (I),
(38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации, соединение представлено формулой (III), (38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат гидрохлорид.
(Ш)
В некоторых вариантах реализации, соединение связывается с рецептором F2a простагландина человека с аффинностью около 1 нМ. Соединения согласно изобретению демонстрируют способность селективно связываться с рецепторами простагландина F, такими как простагландин F2a, по сравнению с другими подтипами рецепторов простагландина. Например, соединения согласно изобретению проявляют аффинность к рецептору простагландина F2a, которая около в 10 раз больше, чем наблюдаемая для
рецептора простагландина Е2. Дополнительно, соединения согласно изобретению проявляют
аффинность к рецептору простагландина F2a, которая около в 100 раз или выше (например,
от около в 100 раз до около 1000 раз, например, около в 100 раз, ПО раз, 120 раз, 130 раз, 140
раз, 150 раз, 160 раз, 170 раз, 180 раз, 190 раз, 200 раз, 210 раз, 220 раз, 230 раз, 240 раз, 250
раз, 260 раз, 270 раз, 280 раз, 290 раз, 300 раз, 310 раз, 320 раз, 330 раз, 340 раз, 350 раз, 360
раз, 370 раз, 380 раз, 390 раз, 400 раз, 410 раз, 420 раз, 430 раз, 440 раз, 450 раз, 460 раз, 470
раз, 480 раз, 490 раз, 500 раз, 510 раз, 520 раз, 530 раз, 540 раз, 550 раз, 560 раз, 570 раз, 580
раз, 590 раз, 600 раз, 610 раз, 620 раз, 630 раз, 640 раз, 650 раз, 660 раз, 670 раз, 680 раз, 690
раз, 700 раз, 710 раз, 720 раз, 730 раз, 740 раз, 750 раз, 760 раз, 770 раз, 780 раз, 790 раз, 800
раз, 810 раз, 820 раз, 830 раз, 840 раз, 850 раз, 860 раз, 870 раз, 880 раз, 890 раз, 900 раз, 910
раз, 920 раз, 930 раз, 940 раз, 950 раз, 960 раз, 970 раз, 980 раз, 990 раз, 1000 раз, или выше)
больше, чем для других подтипов рецепторов простагландина, таких как подтипа рецепторов
простагландина Е1, ЕЗ, Е4, Dl, D2, II, и 12. В некоторых вариантах реализации, соединение
растворимо в водном растворе при концентрации от около 300 мкг/мл до около 500 мкг/мл,
например, при концентрации около 380 мкг/мл.
В некоторых вариантах реализации, соединение ингибирует синтез инозитол
трифосфата в клетке, такой как клетка млекопитающего. В некоторых вариантах реализации,
клетка млекопитающего является клеткой человека, такой как клетка миометрия. В
некоторых вариантах реализации, клетка миометрия представляет собой маточный миоцит.
В некоторых вариантах реализации, соединение индуцирует уменьшение амплитуды
маточных сокращений у субъекта после введения соединения субъекту. Например,
соединение может индуцировать уменьшение от около 40% до около 50% относительно
измерения амплитуды маточных сокращений у субъекта, записанной перед введением. В
некоторых вариантах реализации, соединение проявляет период полувыведения у субъекта от
около 1 до около 4 часов после введения соединения субъекту. В некоторых вариантах
реализации, соединение достигает максимальной концентрации в плазме у субъекта в
течение от около 0,25 до около 2 часов после введения соединения субъекту.
В некоторых вариантах реализации, субъектом является млекопитающее. В
некоторых вариантах реализации, млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации, млекопитающее не является человеком, например, собака или крыса. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перорально. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту внутривенно. В другом аспекте, изобретение охватывает соединение формулы (Ш)
где соединение представлено в кристаллическом состоянии.
В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет характеристические пики порошковой рентгеновской дифракции около при 7,0° 29, около 8,1° 29, около 10,0° 29, около 20,1° 29, около 21,0° 29, и около 23,5° 29. В некоторых вариантах реализации, соединение дополнительно проявляет пики порошковой рентгеновской дифракции около при 12,0° 29, около 13,1° 29, около 14,1° 29, около 16,4° 29, около 18,4° 29, и около 29,5° 29. В некоторых вариантах реализации, соединение характеризуется спектром порошковой рентгеновской дифракции, по существу таким, как представлено на любой из Фиг. 19, 22, 29, 45-49, и 54. Например, в некоторых вариантах реализации, соединение характеризуется спектром порошковой рентгеновской дифракции, по существу таким, как изображено на Фиг. 49.
В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет пики *Н ядерного магнитного резонанса (ЯМР), центрированные около при 1,1 м.д., около 3,3 м.д., около 4,9 м.д., около 5,4 м.д., около 7,1 м.д., около 7,7 м.д., около 7,9 м.д., и около 8,0 м.д.. В некоторых вариантах реализации, соединение характеризуется *Н ЯМР спектром, по существу таким, как изображено на Фиг. 21.
В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет эндотерму при от около 145° С до около 147° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии. В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет дополнительную эндотерму около при 214° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии. В некоторых вариантах реализации, соединение характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу такой, как изображено на Фиг. 20. В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет дополнительную эндотерму около при 228° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии. В некоторых вариантах реализации, соединение характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу такой, как изображено на Фиг. 23.
В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет потерю веса от около 0,2% до около 0,6%, при нагревании от 25° С до 100° С, как измеряется с помощью термогравиметрического анализа. В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет потерю веса от около 2,5% до около 3,5%, при нагревании от 100° С до 160° С, как измеряется с помощью термогравиметрического анализа. В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет кривую термогравиметрического анализа, по существу такую, как изображено на Фиг. 24.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает фармацевтическую
композицию, содержащую соединение в соответствии с любым из вышеописанных аспектов.
Фармацевтическая композиция необязательно может содержать одно или большее
количество вспомогательных веществ. В некоторых вариантах реализации, соединение имеет
чистоту по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 99,9%,
например, как определено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
(ВЭЖХ) или ЯМР спектроскопии. В некоторых вариантах реализации, соединение и/или
фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения
субъекту. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет
собой таблетку, капсулу, желатиновую капсулу, порошок, жидкий раствор или жидкую
суспензию. В некоторых вариантах реализации, соединение и/или фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения субъекту.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит два или больше терапевтических средств, например, соединение согласно изобретению (например, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, например, соединение формулы (III)) и дополнительное терапевтическое средство. Например, фармацевтическая композиция может содержать два или больше терапевтических средств, смешанных друг с другом, для совместного введения пациенту, например, для лечения или предотвращения преждевременных родов. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может вводиться субъекту для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель). В некоторых вариантах реализации, у субъекта происходят преждевременные роды. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию вводят субъекту (например, субъекту-человеку) перед началом преждевременных родов. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для предотвращения родов перед родоразрешением путём кесарева сечения. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для лечения или предотвращения дисменореи. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может вводиться субъекту, например, беременной женщине, для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой дополнительное токолитическое средство.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное
токолитическое средство. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и дополнительное токолитическое средство.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой антагонист рецептора окситоцина, такой как атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, или один или большее количество их вариантов, составов, кристаллических форм или производных.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и атосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и атосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и вариант атосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 4504469 или 4402942, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и вариант атосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 4504469 или 4402942.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ретосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и ретосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и вариант ретосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; или US 2016/0074413, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (III) и вариант ретосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; или US 2016/0074413.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и барусибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (III) и барусибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и вариант барусибана, например, вариант, описанный в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; или US 2016/0175283, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и вариант барусибана, например, вариант, описанный в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; или US 2016/0175283.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и эпельсибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (III), и эпельсибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и вариант эпельсибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; или 8815856, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (III) и вариант эпельсибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; или 8815856.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит
соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ноласибан. В
некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение
формулы (III) и ноласибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая
композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и
вариант, препарат, или кристаллическую форму ноласибана, например, вариант, препарат,
или кристаллическую форму, описанные в патенте США № 7115754 или опубликованная
заявка на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; или 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (Ш) и вариант, препарат, или кристаллическую форму ноласибана, например, вариант, препарат, или кристаллическую форму, описанные в патенте США № 7115754 или опубликованная заявка на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; или 2016/0002160.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой бетамиметик, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин, или орципреналин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой блокатор кальциевых каналов, например, дигидропиридин. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой нифедипин. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой никардипин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой магниевую соль, например, сульфат магния.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой донор оксида азота, например, нитроглицерин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой антагонист рецептора окситоцина, такой как атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан, ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное, например, как описано в настоящей заявке.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его
фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для перорального
введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для
перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или
его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного
введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для
внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (Ш), приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III), приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (Ш), приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III), приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III), приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III),
приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой прогестерон или его вариант или производное, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроат.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для внутривагинального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для внутривагинального введения. В некоторых вариантах реализации, оба компонента, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлены в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для перорального введения.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит
соединение формулы (1П) и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат. В
некоторых вариантах реализации, соединение формулы (Ш), приготовлено (а) в виде
препарата для перорального введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат
приготовлен в виде препарата для внутривагинального введения. В некоторых вариантах
реализации, соединение формулы (Ш), приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного
введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата
для внутривагинального введения. В некоторых вариантах реализации, оба компонента,
соединение формулы (III) и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат
приготовлены в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах
реализации, соединение формулы (III), приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного
введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата
для перорального введения.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство
представляет собой кортикостероид. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой бетаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой дексаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой гидрокортизон. В некоторых вариантах реализации, соединение
формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата
для перорального введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или
гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых
вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль,
приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например,
бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для
внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (I),
или его фармацевтически приемлемая соль, приготовлено (а) в виде препарата для
перорального введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или
гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для перорального введения. В некоторых
вариантах реализации, соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль,
приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например,
бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для
перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (Ш),
приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения и кортикостероид (например,
бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для
внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III),
приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например,
бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (Ш), приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (III), приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для перорального введения.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ синтеза соединения формулы (I)
или его фармацевтически приемлемой соли путем взаимодействия предшественника формулы (IV)
(IV)
с предшественником формулы (V)
(V)
с образованием сложного аминоэфира, где X представляет собой защитную группу. В некоторых вариантах реализации, способ включает снятие защиты со сложного аминоэфира. В некоторых вариантах реализации, соединение представлено формулой (III).
(III)
В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие сложного аминоэфира с реагентом, способным снять защиту со сложного аминоэфира. В некоторых вариантах реализации, защитную группу выбирают из группы, включающей трет-бутоксикарбонил, тритил, 4-монометокситритил, 4-метилтритил, 3,5-диметоксифенилизопропоксикарбонил, 2-(4-бифенил)изопропоксикарбонил, 2-нитрофенилсульфенил, 9-флуоренилметоксикарбонил, 2-(4-
нитрофонеилсульфонил)этоксикарбонил, (1,1-диоксобензо[Ь]тиофен-2-ил)метоксикарбонил, 1 -(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогекс-1 -илиден)-3-метилбутил, 2,7-ди-йфети-бутил-9-флуоренилметоксикарбонил, 2-фтор-9-флуоренилметоксикарбонил, 2-моноизооктил-9-флуоренилметоксикарбонил, 2,7-диизооктил-9-флуоренилметоксикарбонил, тетрахлорфталоил, 2-[фенил(метил)сульфонио]этилоксикарбонил тетрафторборат, этансульфонилэтоксикарбонил, 2-(4-сульфофенилсульфонил)этоксикарбонил, бензилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, онитробензолсульфонил, 2,4-динитробензолсульфонил, бензотиазол-2-сульфонил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, дитиасукциноил, и-нитробензилоксикарбонил, а-азидокислота, пропаргилоксикарбонил, 9-(4-бромфенил)-9-флуоренил, азидометоксикарбонил, гексафторацетон, 2-хлорбензилоксикарбонил, трифторацетил, 2-(метилсульфонил)этоксикарбонил,
фенилдисульфанилэтилоксикарбонил, и 2-пиридилдисульфанилэтилоксикарбонил.
В некоторых вариантах реализации, реагент выбирают из группы, включающей метансульфоновую кислоту, хлористоводородную кислоту, трифторуксусную кислоту, уксусную кислоту, пиперидин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, морфолин, гексаметиленимин, аммоний, диэтиламин, пиперазин, трис(2-аминоэтил)амин, гидразин, 1-метилпирролидин, гидрокарбонат натрия, гидроксид натрия, гидроксид бария, карбонат натрия, молекулярный водород, бромистоводородную кислоту, трибромид бора, тетракис(трифенилфосфин)палладий, тиофенол, Р-меркаптоэтанол, 2-меркаптоуксусную кислоту, алюминиевый сплав, цинк, фосфорноватистую кислоту, борогидрид натрия, N-меркаптоацетамид, хлорид олова (II), триметилфосфин, трибутилфосфин, трифенилфосфин, бензилтриэтиламмоний тетратиомолибдат, ацетат палладия (II), фтористоводородную кислоту, триметилсилил хлорид, триметилсилил трифторметансульфонат, и трифторметансульфоновую кислоту.
В некоторых вариантах реализации, защитная группа представляет собой трет-бутоксикарбонил и реагент выбирают из группы, включающей метансульфоновую кислоту, хлористоводородную кислоту, и трифторуксусную кислоту, например, метансульфоновую кислоту.
В некоторых вариантах реализации, способ включает воздействие электромагнитного излучения на сложный аминоэфир. В некоторых вариантах реализации, защитную группу выбирают из группы, включающей онитробензилоксикарбонил, 4-
нитровератрилоксикарбонил, 2-(2-нитрофенил)пропилоксикарбонил, и 2-(3,4-метилендиокси-
6-нитрофенил)пропилоксикарбонил. В некоторых вариантах реализации, электромагнитное
излучение характеризуется длиной волны от около 300 до около 400 нм.
В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие
предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и диимидом. В
некоторых вариантах реализации, диимид выбирают из группы, включающей 1-этил-3-(3-
диметиламинопропил)карбодиимид, Л^Л^-диизопропилкарбодиимид, и NJST-
дициклогексилкарбодиимид. В некоторых вариантах реализации, диимид представляет
собой 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид. В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и производным бензотриазола, например, производным бензотриазола, выбранным из группы, включающей 1-гидроксибензотриазол, 6-хлор-1-гидроксибензотриазол, и 1-гидрокси-7-азабензотриазол. В некоторых вариантах реализации, производное бензотриазола представляет собой 1-гидроксибензотриазол.
В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и основанием, таким как Л^/У-диметиламинопиридин.
ОН (VI)
В некоторых вариантах реализации, способ включает синтезирование предшественника формулы (IV), путем взаимодействия предшественника формулы (VI)
с предшественником формулы (VII).
В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие предшественника формулы (VI), с предшественником формулы (VII) и одним или несколькими основаниями. В некоторых вариантах реализации, одно или большее количество оснований выбирают из группы, включающей диизопропилэтиламин, триэтиламин, и 7У,7У-диметиламинопиридин.
В некоторых вариантах реализации, способ включает взаимодействие предшественника формулы (VI), с предшественником формулы (VII), диизопропилэтиламином, и ТУ^/У-диметиламинопиридином.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает способ получения соединения
с хлористоводородной кислотой.
В некоторых вариантах реализации, хлористоводородная кислота представляет собой водную хлористоводородную кислоту. Водная хлористоводородная кислота может быть приготовлена, например, путем разведения хлористоводородной кислоты в воде, например, дистиллированной или деионизированной воде. В некоторых вариантах реализации, способ включает приготовление соединения формулы (III), в кристаллическом состоянии.
В некоторых вариантах реализации, способ включает растворение соединения формулы (I) в этаноле. В некоторых вариантах реализации, способ включает смешивание
хлористоводородной кислоты с этанолом. В некоторых вариантах реализации, способ включает смешивание хлористоводородной кислоты с этилацетатом. В некоторых вариантах реализации, способ включает добавление соединения формулы (I) к хлористоводородной кислоте в течение периода от около 20 до около 30 минут до образования смеси. В некоторых вариантах реализации, способ включает поддержание температуры смеси на уровне от около 15° С до около 25° С во время добавления. В некоторых вариантах реализации, способ включает уменьшение температуры смеси до около 5° С после добавления. В некоторых вариантах реализации, способ включает перемешивание смеси в течение от около 50 минут до около 70 минут при температуре от около 0° С до около 5° С после уменьшения.
В некоторых вариантах реализации, способ включает смешивание соединения формулы (I) и хлористоводородной кислоты в эквимолярных количествах.
В другом аспекте, изобретение охватывает соединение, полученное с помощью любого из вышеописанных способов.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения преждевременных родов у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает способ предотвращения преждевременных родов у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ предотвращения преждевременных родов перед родоразрешением путём кесарева сечения у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения
дисменореи у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества
соединения или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения эндометриоза у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению.
В некоторых вариантах реализации, субъект характеризуется гестационным возрастом от около 24 до около 34 недели. В некоторых вариантах реализации, субъект проявляет уменьшение амплитуды маточных сокращений после введения, например, уменьшение на от около 40% до около 50% (например, около 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, или 50%) относительно измерения амплитуды маточных сокращений у субъекта, записанных перед введением. В некоторых вариантах реализации, соединение проявляет период полувыведения от около 1 до около 4 часов у субъекта (например, около 1 час, 1,1 часа, 1,2 часов, 1,3 часов, 1,4 часов, 1,5 часов, 1,6 часов, 1,7 часов, 1,8 часов, 1,9 часов, 2,0 часов, 2,1 часов, 2,2 часов, 2,3 часов, 2,4 часов, 2,5 часов, 2,6 часов, 2,7 часов, 2,8 часов, 2,9 часов, 3,0 часов, 3,1 часов, 3,2 часов, 3,3 часов, 3,4 часов, 3,5 часов, 3,6 часов, 3,7 часов, 3,8 часов, 3,9 часов, или 4,0 часов). В некоторых вариантах реализации, соединение достигает максимальной концентрации в плазме у субъекта в течение от около 0,25 до около 2 часов введения (например, около 0,25 часа, 0,3 часов, 0,4 часов, 0,5 часов, 0,6 часов, 0,7 часов, 0,8 часов, 0,9 часов, 1,0 часов, 1,1 часа, 1,2 часов, 1,3 часов, 1,4 часов, 1,5 часов, 1,6 часов, 1,7 часов, 1,8 часов, 1,9 часов, или 2,0 часов). В некоторых вариантах реализации, субъектом является млекопитающее, например, человек.
В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение соединения или фармацевтической композиции субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение соединения или фармацевтической композиции субъекту.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с
дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах реализации,
соединение вводят субъекту в комбинации с дополнительным токолитическим средством.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с антагонистом рецептора окситоцина. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение антагониста рецептора окситоцина субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение антагониста рецептора окситоцина субъекту. Соединение может вводиться субъекту одновременно с введением антагониста рецептора окситоцина. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением антагониста рецептора окситоцина субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения антагониста рецептора окситоцина субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с антагонистом рецептора окситоцина, и эти агенты вводят субъекту одновременно. В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан, или ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой атосибан, или вариант атосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 4504469 или 4402942, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой ретосибан, или вариант ретосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; или US 2016/0074413, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой барусибан, или вариант барусибана, например, вариант, описанный в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; или US 2016/0175283, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет
собой эпельсибан, или вариант эпельсибана, например, вариант, описанный в патенте США
№ 7514437;8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; или 8815856, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой ноласибан, или вариант, препарат, или кристаллическую форму ноласибана, например, вариант, препарат, или кристаллическую форму, описанные в патенте США № 7115754 или опубликованная заявка на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; или 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с бетамиметиком, таким как, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин, или орципреналин. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение бетамиметика субъекту. Соединение может вводиться субъекту одновременно с введением бетамиметика. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с бетамиметиком, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с
блокатором кальциевых каналов, например, дигидропиридином. В некоторых вариантах
реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой нифедипин. В некоторых
вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой никардипин. В
некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение блокатора
кальциевых каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает
внутривенное введение блокатора кальциевых каналов субъекту. Соединение может
вводиться субъекту одновременно с введением блокатора кальциевых каналов. В некоторых
вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением блокатора кальциевых
каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после
введения блокатора кальциевых каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации,
соединение смешивают с блокатором кальциевых каналов, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с магниевой солью, например, сульфатом магния. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутримышечное введение магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение магниевой соли субъекту. Соединение может вводиться субъекту одновременно с введением магниевой соли. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с магниевой солью, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с донором оксида азота, например, нитроглицерином. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение донора оксида азота субъекту. Соединение может вводиться субъекту одновременно с введением донора оксида азота. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с донором оксида азота, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с прогестероном или его вариантом или производным, таким как, 17-а-гидроксипрогестерон капроат. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривагинальное введение прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. Соединение может вводиться субъекту
одновременно с введением прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с прогестероном или его вариантом или производным, таким как, 17-а-гидроксипрогестерон капроат (например, в частности, в пероральном препарате), и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту в комбинации с кортикостероидом. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой бетаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутримышечное введение кортикостероид субъекту. Соединение может вводиться субъекту одновременно с введением кортикостероида. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту перед введением кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводят субъекту после введения кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение смешивают с кортикостероидом (например, в частности, в пероральном препарате), и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, изобретение обеспечивает набор, содержащий
соединение или фармацевтическую композицию в соответствии с любым из вышеописанных
аспектов согласно изобретению, а также листок-вкладыш. В некоторых вариантах
реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно введения
соединения или фармацевтической композиции субъекту, у которого наступают
преждевременные роды или есть риск развития преждевременных родов, например, субъекту,
у которого имеются один или большее количество симптомов преждевременных родов,
описанных в настоящей заявке. В некоторых вариантах реализации, субъект характеризуется гестационным возрастом от около 24 до около 34 недели. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно смешивания соединения или фармацевтической композиции с водным раствором. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно перорального введения соединения субъекту. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно внутривенного введения соединения субъекту.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (II),
3-([1,Г-бифенил]-4-илсульфонил)-7У-[1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропил]-1,3-тиазолидин-2-карбоксамид. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II), и дополнительное терапевтическое средство. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II), и дополнительное токолитическое средство. Фармацевтическая композиция необязательно может содержать одно или большее количество вспомогательных веществ. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II) имеет чистоту по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 99,9%, например, как определено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или ЯМР спектроскопии. В некоторых вариантах реализации, соединение и/или фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения субъекту. В некоторых
вариантах реализации, соединение и/или фармацевтическая композиция представляет собой таблетку, капсулу, желатиновую капсулу, порошок, жидкий раствор или жидкую суспензию. В некоторых вариантах реализации, соединение и/или фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения субъекту.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит два или больше терапевтических средств, например, соединение формулы (П), и дополнительное терапевтическое средство. Например, фармацевтическая композиция может содержать два или больше терапевтических средств, смешанных друг с другом, для совместного введения пациенту, например, для лечения или предотвращения преждевременных родов. Фармацевтическая композиция может вводиться субъекту для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель). В некоторых вариантах реализации, у субъекта происходят преждевременные роды. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию вводят субъекту (например, субъекту-человеку) перед началом преждевременных родов. Фармацевтическая композиция может вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для предотвращения родов перед родоразрешением путём кесарева сечения. Фармацевтическая композиция может вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для лечения или предотвращения дисменореи. Фармацевтическая композиция может вводиться субъекту, например, беременной женщине, для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой дополнительное токолитическое средство.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство
представляет собой антагонист рецептора окситоцина, такой как атосибан, ретосибан,
барусибан, эпельсибан и ноласибан, или один или большее количество их вариантов,
составов, кристаллических форм или производных.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II) и атосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II) и вариант атосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 4504469 или 4402942, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II) и ретосибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (П) и вариант ретосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; или US 2016/0074413, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II) и барусибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (П) и вариант барусибана, например, вариант, описанный в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; или US 2016/0175283, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II) и эпельсибан. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (П) и вариант эпельсибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; или 8815856, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит
соединение формулы (II), и ноласибан. В некоторых вариантах реализации,
фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (П) и вариант, препарат, или
кристаллическую форму ноласибана, например, вариант, препарат, или кристаллическую
форму, описанные в патенте США № 7115754 или опубликованная заявка на патент США №
2015/0073032; 2015/0164859; или 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой бетамиметик, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин, или орципреналин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой блокатор кальциевых каналов, например, дигидропиридин. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой нифедипин. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой никардипин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой магниевую соль, например, сульфат магния.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой донор оксида азота, например, нитроглицерин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой антагонист рецептора окситоцина, такой как атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан, ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное, например, как описано в настоящей заявке.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде
препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство
приготовлено в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах
реализации, соединение формулы (П), приготовлено в виде препарата для внутривенного
введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для
внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II),
приготовлено в виде препарата для перорального введения, и дополнительное
токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутривенного введения. В
некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), приготовлено в виде препарата
для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в
виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для перорального введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для внутривенного введения, и дополнительное токолитическое средство приготовлено в виде препарата для внутримышечного введения.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой прогестерон или его вариант или производное, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроат.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержит соединение формулы (II), и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для перорального введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для внутривагинального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для внутривенного введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для внутривагинального введения. В некоторых вариантах реализации, оба компонента, соединение формулы (II), и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлены в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для внутривенного введения и прогестерон или 17-а-гидроксипрогестерон капроат приготовлен в виде препарата для перорального введения.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство
представляет собой кортикостероид. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой бетаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой дексаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид
представляет собой гидрокортизон. В некоторых вариантах реализации, соединение
формулы (II), приготовлено в виде препарата для перорального введения и кортикостероид
(например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), приготовлено в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для внутримышечного введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), приготовлено в виде препарата для перорального введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для перорального введения. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), приготовлено в виде препарата для внутривенного введения и кортикостероид (например, бетаметазон, дексаметазон, или гидрокортизон) приготовлен в виде препарата для перорального введения.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения преждевременных родов у субъекта путем обеспечения (например, введения) субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (П),
3-([ 1,1 '-бифенил]-4-илсульфонил)-7У-[ 1 -(4-фторфенил)-3-гидроксипропил] -1,3 -тиазолидин-2-карбоксамид, или фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (II) в соответствии с любым из вышеописанных аспектов изобретения.
В дополнительном аспекте, изобретение обеспечивает способ предотвращения преждевременных родов у субъекта путем обеспечения (например, введения) субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (П), или фармацевтической
композиции, содержащей соединение формулы (II), в соответствии с любым из вышеописанных аспектов изобретения.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ предотвращения преждевременных родов перед родоразрешением путём кесарева сечения у субъекта путем обеспечения (например, введения) субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (II), или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (II), в соответствии с любым из вышеописанных аспектов изобретения.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения дисменореи у субъекта путем обеспечения (например, введения) субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (II), или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (II), в соответствии с любым из вышеописанных аспектов изобретения.
В другом аспекте, изобретение обеспечивает способ лечения или предотвращения эндометриоза у субъекта путем обеспечения (например, введения) субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (II), или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (II), в соответствии с любым из вышеописанных аспектов изобретения.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту в комбинации с дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах реализации, соединение вводится субъекту в комбинации с дополнительным токолитическим средством. В некоторых вариантах реализации, соединение вводится субъекту путем введения соединения субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение вводится субъекту путем введения субъекту пролекарства, которое метаболизируется in vivo с образованием соединения формулы (П).
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту в
комбинации с антагонистом рецептора окситоцина. В некоторых вариантах реализации,
способ включает пероральное введение антагониста рецептора окситоцина субъекту. В
некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение антагониста
рецептора окситоцина субъекту. Соединение формулы (П), может вводиться субъекту одновременно с введением антагониста рецептора окситоцина. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту перед введением антагониста рецептора окситоцина субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения антагониста рецептора окситоцина субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П) или его пролекарство смешивают с антагонистом рецептора окситоцина, и эти агенты вводят субъекту одновременно. В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан, или ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой атосибан, или вариант атосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 4504469 или 4402942, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой ретосибан, или вариант ретосибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; или US 2016/0074413, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой барусибан, или вариант барусибана, например, вариант, описанный в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; или US 2016/0175283, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет собой эпельсибан, или вариант эпельсибана, например, вариант, описанный в патенте США № 7514437;8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; или 8815856, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, антагонист рецептора окситоцина представляет
собой ноласибан, или вариант, препарат, или кристаллическую форму ноласибана, например,
вариант, препарат, или кристаллическую форму, описанные в патенте США № 7115754 или опубликованная заявка на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; или 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту в комбинации с бетамиметиком, таким как, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин, или орципреналин. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение бетамиметика субъекту. Соединение формулы (П), может вводиться субъекту одновременно с введением бетамиметика. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту перед введением бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения бетамиметика субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II) или его пролекарство смешивают с бетамиметиком, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту в комбинации с блокатором кальциевых каналов, например, дигидропиридином. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой нифедипин. В некоторых вариантах реализации, блокатор кальциевых каналов представляет собой никардипин. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение блокатора кальциевых каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение блокатора кальциевых каналов субъекту. Соединение формулы (II), может вводиться субъекту одновременно с введением блокатора кальциевых каналов. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту перед введением блокатора кальциевых каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения блокатора кальциевых каналов субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), или его пролекарство смешивают с блокатором кальциевых каналов, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту в комбинации с магниевой солью, например, сульфатом магния. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутримышечное введение магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение магниевой соли субъекту. Соединение формулы (П), может вводиться субъекту одновременно с введением магниевой соли. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту перед введением магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения магниевой соли субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П) или его пролекарство смешивают с магниевой солью, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту в комбинации с донором оксида азота, например, нитроглицерином. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение донора оксида азота субъекту. Соединение формулы (П), может вводиться субъекту одновременно с введением донора оксида азота. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту перед введением донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения донора оксида азота субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), или его пролекарство смешивают с донором оксида азота, и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту в комбинации с прогестероном или его вариантом или производным, таким как, 17-а-гидроксипрогестерон капроат. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ
включает внутривагинальное введение прогестерона или его варианта или производного,
например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. Соединение формулы (II), может вводиться субъекту одновременно с введением прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту перед введением прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту после введения прогестерона или его варианта или производного, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроата, субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II) или его пролекарство смешивают с прогестероном или его вариантом или производным, таким как, 17-а-гидроксипрогестерон капроат (например, в частности, в пероральном препарате), и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту в комбинации с кортикостероидом. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой бетаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутримышечное введение кортикостероид субъекту. Соединение формулы (П), может вводиться субъекту одновременно с введением кортикостероида. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), вводится субъекту перед введением кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (П), вводится субъекту после введения кортикостероида субъекту. В некоторых вариантах реализации, соединение формулы (II), или его пролекарство смешивают с кортикостероидом (например, в частности, в пероральном препарате), и эти агенты вводят субъекту одновременно.
В некоторых вариантах реализации, субъект характеризуется гестационным возрастом
от около 24 до около 34 недели. В некоторых вариантах реализации, субъект проявляет
уменьшение амплитуды маточных сокращений после введения, например, уменьшение на от
около 40% до около 50% (например, около 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%,
49%, или 50%) относительно измерения амплитуды маточных сокращений у субъекта, записанных перед введением. В некоторых вариантах реализации, субъектом является млекопитающее, например, человек.
В некоторых вариантах реализации, способ включает пероральное введение соединения или фармацевтической композиции субъекту. В некоторых вариантах реализации, способ включает внутривенное введение соединения или фармацевтической композиции субъекту.
В некоторых вариантах реализации, изобретение обеспечивает набор, содержащий соединение или фармацевтическую композицию в соответствии с любым из вышеописанных аспектов согласно изобретению, а также листок-вкладыш. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно введения соединения или фармацевтической композиции субъекту, у которого наступают преждевременные роды или есть риск развития преждевременных родов, например, субъекту, у которого имеются один или большее количество симптомов преждевременных родов, описанных в настоящей заявке. В некоторых вариантах реализации, субъект характеризуется гестационным возрастом от около 24 до около 34 недели. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно смешивания соединения или фармацевтической композиции с водным раствором. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно перорального введения соединения субъекту. В некоторых вариантах реализации, листок-вкладыш инструктирует пользователя набора относительно внутривенного введения соединения субъекту.
Определения
Как используется в настоящей заявке, термин "около" относится к значению, которое находится в пределах 10% выше или ниже указанного значения.
Как используется в настоящей заявке, термин "аффинность" относится к силе
связывающего взаимодействия между двумя молекулами, например, лигандом и рецептором.
Термин "Ki", как используется в настоящей заявке, относится к константе ингибирования
антагониста для конкретной молекулы, представляющей интерес, и выражается в виде молярной концентрации (М). Ki значения взаимодействий антагонист-мишень могут быть определены, например, используя методы, существующие в данной области техники. Методы, которые можно использовать для определения Ki антагониста для молекулярной мишени, включают эксперименты конкурентного связывания, например, исследования конкурентного связывания радиоактивного лиганда, например, как описано в US 8,415,480. Термин "Kd", как используется в настоящей заявке, относится к константе диссоциации, которая может быть получена, например, из соотношения константы скорости диссоциации двух молекул (kd) к константе скорости ассоциации двух молекул (ка) и выражается в виде молярной концентрации (М). Kd значения для взаимодействий рецептор-лиганд могут быть определены, например, используя методы, существующие в данной области техники. Методы, которые можно использовать для определения Kd взаимодействия рецептор-лиганд, включают поверхностный плазмонный резонанс, например, путем применения биосенсорной системы, такой как система BIACORE(r).
Как используется в настоящей заявке, термин "кортикостероид" относится к любому из стероидных гормонов, продуцируемых корой надпочечников, или их синтетическим аналогам. Типичные кортикостероиды включают, в частности, бетаметазон, дексаметазон, и гидрокортизон, а также их варианты. Кортикостероиды для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, включают те, которые способны индуцировать созревание легких плода, например, для предотвращения развития респираторного дистресс-синдрома у недоношенных новорожденных. Типичные кортикостероиды для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, включают те, которые описаны в Jobe и др. Am. J. Obstet. Gynecol. 190:878881 (2004) и Miracle и др. J. Perinat. Med. 36:191-196 (2008), раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
Как используется в настоящей заявке, термин "кристаллический" или
"кристаллическая форма" обозначает, что соединение имеет физическое состояние, которое
представляет собой регулярную пространственную решетку атомов, ионов, молекул или
молекулярных агрегатов. Кристаллические формы имеют решетчатые структуры структурных элементов, называемых ассиметричными единицами, которые расположены в определенном порядке в соответствии четко выраженной симметрией в единичных ячейках, которые повторяются в трех измерениях. В отличие от этого, термин "аморфный" или "аморфная форма" относится к неорганизованной (неупорядоченной) структуре. Физическое состояние терапевтического соединения может быть определено с помощью типичных методик, таких как рентгеноструктурный анализ, микроскопия в поляризованном свете и/или дифференциальная сканирующая калориметрия.
Как используется в настоящей заявке, термин "эндогенный" описывает молекулу (например, полипептид, нуклеиновую кислоту или кофактор), которая обнаружена в естественных условиях в конкретном организме (например, человеке) или в конкретной локализации в организме (например, органе, ткани, или клетке, такой как клетка человека).
Как используется в настоящей заявке, термин "экзогенный" описывает молекулу (например, полипептид, нуклеиновую кислоту или кофактор), которая не обнаружена в естественных условиях в конкретном организме (например, человеке) или в конкретной локализации в организме (например, органе, ткани, или клетке, такой как клетка человека). Экзогенные материалы включают те, которые обеспечиваются из внешнего источника для организма или культивируемый материал, экстрагируемый из них.
Как используется в настоящей заявке, термин "гестационный возраст" описывает, как
долго продолжается конкретная беременность, и измеряется от первого дня последнего
менструального цикла беременной особи женского пола до настоящей даты. Как
используется в настоящей заявке, термин "роды" (который также может обозначаться как
рождение) относится к изгнанию плода и плаценты из матки беременной особи женского
пола. Для нормальной беременности, роды могут происходить в гестационном возрасте около
40 недель. "Преждевременные роды", как используется в настоящей заявке, относится к
состоянию, при котором роды наступают ранее, чем за три недели до полного гестационного
периода, который обычно составляет около 40 недель. Таким образом, преждевременные
роды происходят на любой стадии перед, например, 38 неделей гестации. Преждевременные
роды обычно приводят к наступлению родов или физиологических изменений, связанных с родами у беременной особи женского пола, если не проводить лечение. Преждевременные роды могут быть ассоциированы или не ассоциированы с вагинальным кровотечением или разрывом маточных мембран. Преждевременные роды также могут обозначаться как преждевременное окончание беременности. Предотвращение преждевременных родов у субъекта будет пролонгировать термин беременности и, следовательно, может избежать преждевременного родоразрешения, уменьшая, таким образом, риск неонатальной смертности и заболеваемости.
Как используется в настоящей заявке, термин "IC50" относится к концентрации вещества (антагониста), которая уменьшает эффективность сравнительного агониста или конститутивную активность биологической мишени на 50%, например, как измеряют в конкурентном анализе связывания с лигандом. Типичные конкурентные анализы связывания с лигандом включают, в частности, конкурентные анализы связывания с радиоактивно-меченным лигандом, конкурентные твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA), и анализы на основе анизотропии флуоресценции, известные в данной области техники.
Как используется в настоящей заявке в контексте обеспечения или введения двух или больше терапевтических средств субъекту, фраза "в комбинации с" относится к доставке двух или больше терапевтических средств субъекту (например, субъекту-млекопитающему, например, человеку), например, либо одновременно или в различное время. Например, одно терапевтическое средство может вводиться субъекту в комбинации с другим путем введения обоих агентов субъекту одновременно, например, в одной фармацевтической композиции или в отдельных композициях, которые вводятся субъекту одновременно (например, с помощью различных путей введения). В другом примере, одно терапевтическое средство может вводиться субъекту в комбинации с другим путем первого введения субъекту одного терапевтического средства и последующего введения другого терапевтического средства, либо таким же путем введения или другим путем введения.
Как используется в настоящей заявке, термин "ноласибан" относится к (3Z,5S)-5-(гидроксиметил)-1-[(2'-метил-1,Г-бифенил-4-ил)карбонил]пирролидин-3-он О-метилоксиму, который представлен следующей структурной формулой:
Варианты, составы, и кристаллическая форма ноласибана описаны, например, в патенте США № 7115754 и опубликованной заявке на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; и 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
Как используется в настоящей заявке, термин "пероральная биодоступность" относится к фракции вводимого соединения субъекту, например, млекопитающему (например, человеку), которая достигает системного кровотока у субъекта, и которая не депонируется в нецелевом органе или экскретируется без абсорбции через желудочно-кишечный тракт. Термин относится к концентрации в плазме крови, которая интегрирована во времени и типично выражается в виде процента перорально введенной дозы.
Как используется в настоящей заявке, термин "антагонист рецептора окситоцина" или "антагонист окситоцина" относится к соединению, способному ингибировать взаимодействие между окситоцином и рецептором окситоцина, например, таким образом, что активность одной или нескольких нижерасположенных сигнальных молекул в каскаде передачи сигналов окситоцина ингибируется. Антагонисты окситоцина для применения в композициях и способах, описанных в настоящей заявке, включают соединения, которые связывают и ингибируют рецептор окситоцина, например, в частности, атосибан, ретосибан, барусибан,
эпельсибан и ноласибан, а также их варианты, составы, кристаллические формы и производные, включая те, которые описаны в настоящей заявке.
Как используется в настоящей заявке, термин "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или дозированным формам, которые пригодны для контактирования с тканями субъекта, например, млекопитающего (например, человека) без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и других проблемных осложнений, соразмерных с приемлемым соотношением польза /риск.
Как используется в настоящей заявке, термин "фармацевтическая композиция" обозначает смесь, содержащую терапевтическое соединение для введения субъекту, например, млекопитающему, например, человеку, для предотвращения, лечения или контроля конкретного заболевания или состояния, поражающего млекопитающее, например, в особенности, преждевременных родов или дисменореи, например, как описано в настоящей заявке.
Как используется в настоящей заявке, термин "защитная группа" относится к
химическому компоненту, который, при связывании с функциональной группой, придает
функциональной группе инертность к одной или нескольким химическим реакциям. Такие
реакции могут модифицировать один или большее количество заместителей в соединении и,
при отсутствии защитной группы, будут приводить к нежелательной химической
модификации (например, электроноакцепторное добавление, сольволиз, окисление,
восстановление, или взаимное превращение функциональных групп) компонента,
представляющего интерес (например, амино, гидроксильного, карбоксильного или
карбоксамидного компонента). Защитные группы могут, в подходящие момент времени,
химически реагировать таким образом, что восстанавливается исходная функциональная
группа. Идентичность защитной группы может быть выбрана таким образом, чтобы быть
совместимой с остальной частью молекулы, например, таким образом, что защитная группа
не удаляется при последующих стадиях синтеза или модификации молекулы, и
необязательно, таким образом, что реакционные условия, используемые для эффективного
удаления защитной группы, не приводят к удалению других защитных групп, расположенных
на других заместителях в молекуле. Типичные защитные группы включают те группы,
которые могут быть ковалентно связаны, например, с амино заместителем, например,
аминогруппой а-сложного аминоэфира. Последующее удаление защитной группы,
обозначаемое в настоящей заявке как "снятие защиты" с химического компонента, можно
осуществлять, используя реагенты и условия, известные в данной области техники. Примеры
защитных групп включают, в частности, но не ограничиваясь только ими, бензил, ацетил,
оксиацетил, карбоксибензил, 9-флуоренилоксикарбонил, 2-хлор-1-инданилметокси-карбонил,
бенз [f] инден-3-метоксикарбонил, 2-(ш/?ети-бутилсульфонил)-2-пропенилоксикарбонил,
бензотиофен сульфон-2-метилкарбонил, й^ети-бутоксикарбонил, й^ети-амилоксикарбонил, В-
триметилсилилэтилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, 1-
метилциклобутилоксикарбонил, 2-(п-бифенилил)пропил-2-оксикарбонил, 2-(п-
фенилазофенил)пропил-2- оксикарбонил, 2-2-диметил-3,5- диметилоксибензилоксикарбонил,
2-фенилпропил-2-оксикарбонил, бензилоксикарбонил, п- толуолсульфониламинокарбонил, о-
нитрофенилсульфенил, дитиасукциноил, фталоил, пиперидинооксикарбонил, формил,
трифторацетил, 2,4,6-триметоксибензил, 2,3,6-триметил-4 метоксибензолсульфонил, трет-
бутоксиметил, пентаметилхромансульфонил, адамантли, В-триметилсилилэтил, В-
триметилилилэтилоксикарбонил, mpem-ftyimi, и^ети-бутилбензил, циклопентил,
трифенилметил, бензилоксикарбонил, формил, и трифторацетил. Защитные группы могут
быть подходящими для конкретного химического заместителя. Например, примеры
гидроксильных защитных групп включают, но не ограничиваясь только ими, бензил, п-
метоксибензил, и-нитробензил, аллил, тритил, диалкилсилиловые простые эфиры, например,
диметилсилиловый простой эфир, и триалкилсилиловые простые эфиры, такие как
тримети л си лиловый простой эфир, триэтилсилиловый простой эфир, и трет-
бутилдиметилсилиловый простой эфир; сложные эфиры, такие как бензоил, ацетил,
фенилацетил, формил, моно-, ди-, и тригалоацетил, такой как хлорацетил, дихлорацетил,
трихлорацетил, трифторацетил; и карбонаты, такие как метил, этил, 2,2,2-трихлорэтил, аллил,
бензил, и и-нитрофенил. Дополнительные примеры защитных групп можно найти, например,
в Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2-ое изд., 1991, John Wiley & Sons, a
также в McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, 1975, Plenum Press, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Другие примеры защитных групп описаны, например, в патентах США №№ 3835175; 4508657; 3839396; 4581167; 4460501; и 4108846, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
Как используется в настоящей заявке в контексте терапевтического лечения, термины "вводится" и "вводиться" относятся к доставке терапевтического средства субъекту (например, субъекту-млекопитающему, например, человеку) нуждающемуся в лечении, например, субъекту, подверженному или имеющему риск развития преждевременных родов. Терапевтическое средство может вводиться субъекту, который в этом нуждается, например, путем непосредственного введения терапевтического средства субъекту, или путем введения пролекарства, которое превращается in vivo в терапевтическое средство при введении пролекарства субъекту. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваясь только ими, сложные эфиры, фосфаты и другие химические функциональные группы, чувствительные к гидролизу при введении субъекту. Пролекарства включают те, которые известны в данной области техники, например, те, которые описаны, например, в Vig и др., Adv. Drug Deliv. Rev. 65:1370-1385 (2013), и Huttunen и др., Pharmacol. Rev. 63:750-771 (2011), раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
Как используется в настоящей заявке, термин "образец" относится к пробе (например, крови, компонента крови (например, сыворотке или плазме), моче, слюне, амниотической жидкости, спинно-мозговой жидкости, ткани (например, плаценты или кожи), панкреатического сока, проб ворсин хориона, и клеток), выделенных из субъекта.
Как используется в настоящей заявке, фразы "специфически связывается" и
"связывается" относится к реакции связывания, которая является определяющей присутствия
конкретного белка в гетерогенной популяции белков и других биологических молекул,
которые распознаются, например, лигандом со специфичностью. Лиганд (например, белок,
протеогликан, или гликозаминогликан), который специфически связывается с белком, будет
связываться с белком, например, с KD меньше, чем 100 нМ. Например, лиганд, который
специфически связывается с белком, может связываться с белком с KD ВПЛОТЬ ДО 100 нМ (например, в диапазоне от 1 пМ до 100 нМ). Лиганд, который не проявляет специфического связывания с белком или его доменом, будет проявлять KD больше, чем 100 нМ (например, больше, чем 200 нМ, 300 нМ, 400 нМ, 500 нМ, 600 нМ, 700 нМ, 800 нМ, 900 нМ, 1 мкМ, 100 мкМ, 500 мкМ, или 1 мМ) для этого конкретного белка или его домена. Различные форматы анализов могут использоваться для определения аффинности лиганда к специфическому белку. Например, твердофазные ELISA анализы общепринято используются для идентификации лигандов, которые специфически связываются с целевым белком. См., например, Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1988) и Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1999), относительно описания форматов анализов и условий, которые можно использовать для определения специфического связывания белков.
Как используется в настоящей заявке, термины "субъект" и "пациент" являются взаимозаменяемыми и относятся к организму, который получает лечения от конкретного заболевания или состояния, как описано в настоящей заявке (такие как преждевременные роды или дисменорея) или у которого диагностировано наличие заболевания или состояния в соответствии со способами, описанными в настоящей заявке. Примеры субъектов и пациентов включают млекопитающих, например, людей, получавших лечения от заболеваний или состояний, например, преждевременных родов на раннем гестационном возрасте (например, 24-34 недели).
Соединение, солевая форма, кристаллический полиморф, терапевтическое средство
или другая композиция, как описанные в настоящей заявке, могут обозначаться как такие,
которые характеризуются графическими данными "по существу, как представлено на"
фигуре. Такие данные могут включать, но не ограничиваясь только ими, например,
порошковые рентгеновские дифрактограммы, ЯМР спектры, кривые дифференциальной
сканирующей калориметрии, и кривые термогравиметрического анализа. Как известно в
данной области техники, такие графические данные могут обеспечивать дополнительную
техническую информацию для дальнейшего определения соединения, солевой формы,
кристаллического полиморфа, терапевтического средства или другой композиции. Как
подразумевается квалифицированным специалистом в данной области техники, такие
графические представления данных могут подвергаться небольшим вариациям, например,
для относительных интенсивностей пиков и положений пиков вследствие таких факторов,
как вариации в характеристиках приборов и вариациях для концентрации и чистоты
образцов. Тем не менее, квалифицированный специалист в данной области техники легко
сможет сравнить графические данные на фигурах в настоящей заявке с графическими
данными, генерированными для соединения, солевой формы, кристаллического полиморфа,
терапевтического средства или другой композиции и подтвердить, будут ли два набора
графических данных характеризовать один и тот же материал или два различных материала.
Например, кристаллическая форма (38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-
тиазолидин-2-ил]карбонил} -амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат гидрохлорида
обозначается в данной заявке как такая, которая характеризуется графическими данными "по
существу, как представлено на" фигуре, следовательно, будет пониматься как включающая
любую кристаллическую форму (38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-
ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат гидрохлорида, которая
характеризуется графическими данными, необязательно имеющими одно или большее
количество небольших вариаций, например, одно или большее количество вариаций,
описанных выше или известных специалисту в данной области техники.
Как используется в настоящей заявке, термины "лечить" или "лечение" относится к
терапевтическому лечению, при котором у объекта предотвращают или замедляют
(уменьшают) нежелательное физиологическое изменение или нарушение, например,
прогрессирование преждевременных родов в раннем гестационном возрасте (например, 24-34
недели). Благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не
ограничиваясь только ими, ослабление симптомов, таких как вагинальное кровотечение или
разрушение мембраны, и задержка или замедление родов. Те особи, которые нуждаются в
лечении, включают, например, беременные особи женского пола, у которых уже начинаются
преждевременные роды, а также те, которые предрасположены к развитию этого состояния.
Как используется в настоящей заявке, термин "токолитическое средство" относится к веществу, способному замедлять начало родов у субъекта (например, субъекта-млекопитающего, например, человека). Токолитические средства могут действовать путем подавления сократительной способности матки, например, путем повышения цитоплазматических уровней цАМФ и ингибирования мобилизации внутриклеточного Са2+. Типичные токолитические средства описаны, например, в Haas и др. Int. J. Womens Health. 6:343-349 (2014), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки. Токолитические средства для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, включают, но не ограничиваясь только ими, вещества, перечисленные в Таблице 1, ниже.
Соли магния
Сульфат магния
Mercer и др. Obstet. Gynecol. 114:650-668 (2009)
Антагонисты рецептора окситоцина
атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан, ноласибан
Papatsonis и др. Cochrane Database Syst. Rev. 3:CD004452 (2005)
Доноры оксида азота
Нитроглицерин
Duckitt и др. Cochrane Database Syst. Rev. 3:CD002860 (2002)
Краткое описание фигур
Фигура 1 представляет собой график, на котором продемонстрировано влияние соединения II и соединения III на самопроизвольную сократительную способность матки у беременных крыс на поздних сроках после внутривенного введения.
Фигура 2 представляет собой график, на котором показано дозозависимое и обратимое влияние соединения I на самопроизвольное сокращение матки у беременных крыс на поздних сроках.
Фигура 3 представляет собой график, на котором продемонстрировано влияние соединения II и соединения III на самопроизвольную сократительную способность матки у беременных крыс на поздних сроках после перорального введения.
Фигура 4 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные различных способов, используемых для получения свободного основания соединения I, а также наблюдений относительно физических характеристик и ЯМР спектров соединения I, как получено с помощью каждого способа.
Фигура 5 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные различных способов, используемых для получения солей соединения I, а также наблюдений относительно физических характеристик и ЯМР спектров этих солей, как получено с помощью каждого способа.
Фигура 6 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные физических характеристик, а также спектров порошковой рентгеновской дифракции (XRPD) различных солей соединения I.
Фигура 7 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные способов, используемых для получения кристаллических форм различных солей соединения I, а также наблюдений относительно физических характеристик и XRPD спектров каждой кристаллической формы.
Фигура 8 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные растворимости различных солей соединения I в водном растворе.
Фигура 9 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные стабильности кристаллических форм различных солей соединения I при указанной относительной влажности (ОВ).
Фигура 10 представляет собой таблицу, в которой обобщены различные характеристики соединения III, как определено с помощью порошковой рентгеновской дифракции (XRPD), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), термогравиметрического (TG) анализа, сорбции/десорбции влаги (MB), и ^ ядерного магнитного резонанса (ЯМР).
Фигура 11 представляет собой таблицу, в которой обобщены различные характеристики гидросульфатной соли соединения I, как определено с помощью порошковой рентгеновской дифракции (XRPD), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), термогравиметрического (TG) анализа, и JH ядерного магнитного резонанса (ЯМР).
Фигура 12 показывает XRPD спектр мезилатной соли соединения I.
Фигура 13 показывает JH ЯМР спектр мезилатной соли соединения I.
Фигура 14 показывает XRPD спектр свободного основания соединения I.
Фигура 15 показывает *H ЯМР спектр свободного основания соединения I.
Фигура 16 показывает рамановский инфракрасный спектр свободного основания соединения I.
Фигура 17 показывает Н ЯМР спектр мезилатной соли соединения I. Мезилатную соль приготавливали путем добавления метансульфоновой кислоты к раствору свободного основания соединения I в простом диэтиловом эфире.
Фигура 18 показывает серии JH ЯМР спектра свободного основания соединения I, записанные с использованием гомоядерных экспериментов разъединения.
Фигура 19 показывает серии XRPD спектра хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой взвеси (вверху), при упаривании из смеси метиленхлорид:этиловый простой эфир (вторая сверху), и при медленном упаривании смеси 1:1 ацетон:толуол (вторая снизу и нижняя).
Фигура 20 показывает перекрытие кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (в диапазоне от около -0,5 до около 1,3 Вт/г) и кривой термогравиметрического анализа (в диапазоне от около 0% до около 100% по весу), записанной для хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой взвеси.
Фигура 21 показывает *H ЯМР спектр хлоридной соли соединения I, как получено из смеси 1:1 ацетон: толуол.
Фигура 22 показывает серии XRPD спектров хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой взвеси (вверху) и после высушивания в вакууме около при 50° С в течение 1 дня (внизу).
Фигура 23 показывает перекрытие кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (в диапазоне от около -1,0 до около 0,2 Вт/г) и кривой термогравиметрического анализа (в диапазоне от около 30% до около 100% по весу), записанной для хлоридной соли соединения I в вакууме около при 50° С в течение 1 дня.
Фигура 24 показывает перекрытие кривых термогравиметрического анализа хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой взвеси (вверху) и после высушивания в вакууме около при 50° С в течение 1 дня (внизу).
Фигура 25 показывает перекрытие кривых дифференциальной сканирующей
калориметрии, записанной для хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой
взвеси (вверху) и после высушивания в вакууме около при 50° С в течение 1 дня (внизу).
Фигура 26 показывает кривые сорбции/десорбции влаги, записанной для хлоридной соли соединения I. Значения на оси Y показывают процент изменения веса хлоридной соли в зависимости от относительной влажности (ОВ) в атмосфере, окружающей соль.
Фигура 27 представляет собой таблицу, в которой представленные данные, полученные при экспериментах сорбции/десорбции влаги, которые осуществляли с хлоридной солью соединения I.
Фигура 28 показывает кривую сорбции/десорбции влаги, записанную для хлоридной соли соединения I. Значения на оси Y показывают процент изменения веса хлоридной соли в зависимости от времени, в течение которого изменяется относительная влажность в атмосфере, окружающей соль.
Фигура 29 показывает перекрытия XRPD спектров хлоридной соли соединения I после (вверху) и перед осуществлением экспериментов (внизу) сорбции/десорбции влаги.
Фигура 30 показывает перекрытие XRPD спектра фумаратной соли соединения I, полученного путем медленного упаривания смеси 1:1 метанол:толуол (вверху) и XRPD фумаровой кислоты (внизу).
Фигура 31 показывает перекрытие XRPD спектра дигидрофосфатной соли соединения I (вверху) и XRPD гидросульфатной соли соединения I (внизу).
Фигура 32 показывает перекрытие кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (в диапазоне от около -1,9 до около 0 Вт/г) и кривой термогравиметрического анализа (в диапазоне от около 25% до около 95% по весу), записанной для гидросульфатной соли соединения I.
Фигура 33 показывает *H ЯМР спектр гидросульфатной соли соединения I. Фигура 34 показывает *H ЯМР спектр сульфатной соли соединения I. Фигура 35 показывает XRPD спектр мезилатной соли соединения I. Фигура 36 показывает XRPD спектр цитратной соли соединения I. Фигура 37 показывает XRPD спектр эдизилатной соли соединения I. Фигура 38 показывает XRPD спектр гидросульфатной соли соединения I.
Фигура 39 показывает XRPD спектр цитратной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:2 метанол:толуол.
Фигура 40 показывает XRPD спектр гидросульфатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 6:1 этилацетат:гептан.
Фигура 41 показывает XRPD спектр гидросульфатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси этилацетат.
Фигура 42 показывает XRPD спектр дигидрофосфатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:2 метанол:ацетонитрил.
Фигура 43 показывает XRPD спектр дигидрофосфатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:1 метил этил кетон:н-бутил ацетат.
Фигура 44 показывает XRPD спектр, записанный из дублирующего XRPD эксперимента дигидрофосфатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:1 метил этил кетон:н-бутил ацетат.
Фигура 45 показывает XRPD спектр хлоридной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:1 ацетон:толуол.
Фигура 46 показывает XRPD спектр, записанный из дублирующего XRPD эксперимента хлоридной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:1 ацетон: толуол.
Фигура 47 показывает XRPD спектр хлоридной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси простой диэтиловый эфир:метиленхлорид.
Фигура 48 показывает XRPD спектр хлоридной соли соединения I, как получено из ацетоновой взвеси.
Фигура 49 показывает XRPD спектр хлоридной соли соединения I после вакуумной
сушки.
Фигура 50 показывает XRPD спектр фумаратной соли соединения I, как получено
путем медленного упаривания смеси 1:1 метанол:толуол.
Фигура 51 показывает XRPD спектр фумаратной соли соединения I, как получено
путем медленного упаривания смеси 1:1 метанол:этилацетат.
Фигура 52 показывает XRPD спектр фумаратной соли соединения I, как получено путем вакуумной сушки смеси 1:1 метанол: толуол.
Фигура 53 показывает XRPD спектр эдизилатной соли соединения I, как получено путем медленного упаривания смеси 1:1:1 метанол:метил этил кетон:толуол.
Фигура 54 показывает перекрытия XRPD спектров хлоридной соли соединения I перед (внизу) и после (вверху) хранения при 40° С и 75% относительной влажности.
Фигура 55 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные стабильности мезилатной соли соединения I и соединение II в буфере, используемом для экспериментов проникновения Сасо-2: сбалансированный буферный солевой раствор Хенкса (HBSS), 2% конечная концентрация ДМСО.
Фигура 56а представляет собой таблицу, в которой описанные данные, полученные
при анализе способности мезилатной соли соединения I проходить из апикального в
базолатеральный компартмент transwell, покрытых монослоем Сасо-2 клеток.
Культивируемые Сасо-2 клетки инкубировали с указанной концентрацией мезилатной соли
соединения I в апикальном компартменте transwell, и отбирали аликвоты из базолатерального
компартмента в указанные промежутки времени отбора проб для определения присутствия
соединения I или соединения П. Данные описывают концентрацию соединения II в
базолатеральном компартменте в процентах от указанной исходной концентрации
мезилатной соли соединения I. Фигура 56Ь представляет собой таблицу, в которой
описанные данные, полученные при анализе способности мезилатной соли соединения I
проходить из базолатерального в апикальный компартмент transwell, покрытых монослоем
Сасо-2 клеток. Культивируемые Сасо-2 клетки инкубировали с указанной концентрацией
мезилатной соли соединения I в базолатеральном компартменте transwell, и отбирали
аликвоты из апикального компартмента в указанные промежутки времени отбора проб для
определения присутствия соединения I или соединения П. Данные описывают концентрацию
соединения II в базолатеральном компартменте в процентах от указанной исходной
концентрации мезилатной соли соединения I. Фигура 56с представляет собой график, на
котором показано относительную концентрацию соединения II в базолатеральном
компартменте в процентах от исходной концентрации мезилатной соли соединения I в
апикальном компартменте. Фигура 56d представляет собой график, на котором показано
относительную концентрацию соединения II в апикальном компартменте в процентах от
исходной концентрации мезилатной соли соединения I в базолатеральном компартменте.
Соединение I не было обнаружено в базолатеральном компартменте после инкубирования в
течение 60 или 120 минут в апикальном компартменте. Дополнительно, соединение I не
было обнаружено в апикальном компартменте после инкубирования в течение 60 или 120
минут в базолатеральном компартменте. В отличие от этого, соединение II было обнаружено
в каждом случае. Фигура 56е представляет собой таблицу, в которой показано
восстановление соединения I в апикальном компартменте после инкубирования в течение 120
минут. Исходное соединение преимущественно восстанавливалось в форме
деэстерифицированного варианта, соединения П.
Фигура 57а представляет собой таблицу, в которой описанные данные, полученные
при анализе способности соединения II проходить из апикального в базолатеральный
компартмент transwell, покрытых монослоем Сасо-2 клеток. Культивируемые Сасо-2 клетки
инкубировали с указанной концентрацией соединения II в апикальном компартменте
transwell, и отбирали аликвоты из базолатерального компартмента в указанные промежутки
времени отбора проб для определения присутствия соединения П. Данные описывают
концентрацию соединения II в базолатеральном компартменте в процентах от указанной
исходной концентрации соединения П. Фигура 57Ь представляет собой таблицу, в которой
описанные данные, полученные при анализе способности соединения II проходить из
базолатерального в апикальный компартмент transwell, покрытых монослоем Сасо-2 клеток.
Культивируемые Сасо-2 клетки инкубировали с указанной концентрацией соединения II в
базолатеральном компартменте transwell, и отбирали аликвоты из апикального компартмента
в указанные промежутки времени отбора проб для определения присутствия соединения П.
Данные описывают концентрацию соединения II в базолатеральном компартменте в
процентах от указанной исходной концентрации соединения П. Фигура 57с представляет
собой таблицу, в которой показано восстановление соединения II в апикальном компартменте
после инкубирования в течение 60 и 120 минут в базолатеральном компартменте, а также скорость проницаемости соединения II через монослой Сасо-2 клеток. Фигура 57d представляет собой график, на котором показано относительную концентрацию соединения II в базолатеральном компартменте в процентах от исходной концентрации соединения II в апикальном компартменте. Фигура 57е представляет собой график, на котором показано относительную концентрацию соединения II в апикальном компартменте в процентах от исходной концентрации соединения II в базолатеральном компартменте.
Фигура 58а представляет собой таблицу, в которой описанные данные, полученные при анализе способности мезилатной соли соединения I проходить из апикального в базолатеральный компартмент transwell, покрытых монослоем Сасо-2 клеток. Культивируемые Сасо-2 клетки инкубировали с указанной концентрацией мезилатной соли соединения I в апикальном компартменте transwell, и отбирали аликвоты из базолатерального компартмента в указанные промежутки времени отбора проб для определения присутствия соединения I или соединения П. Данные описывают концентрацию соединения II в базолатеральном компартменте в процентах от указанной исходной концентрации мезилатной соли соединения I. Соединение I не было обнаружено в базолатеральном компартменте после инкубирования в течение 60 или 120 минут в апикальном компартменте. Фигура 58Ь представляет собой график, на котором показано относительную концентрацию соединения II в базолатеральном компартменте в процентах от исходной концентрации мезилатной соли соединения I в апикальном компартменте. Фигура 58с представляет собой таблицу, в которой показано восстановление соединения I в апикальном компартменте после инкубирования в течение 120 минут. Исходное соединение преимущественно восстанавливалось в форме деэстерифицированного варианта соединения, соединения П.
Фигура 59 представляет собой таблицу, в которой обобщены данные параметров хроматографии и масс-спектрометрии, используемых для анализа концентрации соединения I и соединения II в экспериментах проникновения через Сасо-2 клетки, описанные в настоящей заявке.
Фигура 60а представляет собой график, иллюстрирующий фракционную жизнеспособность потомства CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или липополисахарида (LPS) в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус стандартная погрешность среднего. Звездочка обозначает р значение р <0,05. Статистический анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни относительно соответствующей группы. Фигура 60Ь представляет собой график, иллюстрирующий количество жизнеспособного и нежизнеспособного потомства CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 61а представляет собой график, иллюстрирующий время от индукции до рождения первого плода для CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус стандартная погрешность среднего. Фигуры 61Ь и 61с представляют собой графики, иллюстрирующие время от индукции до завершения родов среди CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения вдоль оси Y обозначают пропорцию CD-I мышей, у которых завершились роды. На каждой фигуре, звездочка обозначает р значение р <0,05. Статистический анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни или логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы.
Фигура 62а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно) и нифедипина (5 мг/кг, вводимого
перорально) на фракционную жизнеспособность потомков CD-I мышей, леченных с
помощью RU486 или липополисахарида (LPS) в гестационном возрасте 17 дней таким
образом, чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение
плюс/минус стандартная погрешность среднего. Звездочка обозначает р значение р <0,05;
"нд" обозначает р значение р> 0,05. Статистический анализ осуществляли, используя тест
Манна-Уитни или непарный двусторонний t-критерий Стьюдента по сравнению с соответствующей группой с наполнителем. Фигура 62Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно) и нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально) на количество жизнеспособного и нежизнеспособного потомства CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 63а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния соединения III (10 мг/кг, 30 мг/кг, и 100 мг/кг, вводимого перорально) на фракционную жизнеспособность потомков CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05. Статистический анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни по сравнению с соответствующей группой с наполнителем. Фигура 63Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния соединения III (10 мг/кг, 30 мг/кг, и 100 мг/кг, вводимого перорально) на количество жизнеспособного и нежизнеспособного потомства CD-I мышей, леченных с помощью RU486 или LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 64а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на фракционную жизнеспособность потомков CD-I мышей,
леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем. Статистический анализ осуществляли, используя
тест Манна-Уитни по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес.
Фигура 64Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на количество жизнеспособного и нежизнеспособного
потомства CD-I мышей, леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким
образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 65а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на время от индукции до рождения первого плода для CD-I
мышей, леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего. Три звездочки обозначают р значение р <0,001
относительно соответствующей группы; две звездочки обозначают р значение р <0,01
относительно соответствующей группы. Нифедипин, соединение III, и их комбинация
проявляют р значения р=0,0576, р=0,0601, и р <0,001 (обозначенные символом "$$$"),
соответственно, по сравнению с группой, которую лечили наполнителем отдельно.
Статистический анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни или непарный
двусторонний t-критерий Стьюдента по сравнению с соответствующей группой,
представляющей интерес. Фигура 65Ь представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III
(100 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинации на время от индукции до завершения
родов среди CD-I мышей, леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней
таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения вдоль оси Y обозначают пропорцию
CD-I мышей, у которых завершились роды. Фигура 65с представляет собой график, на
котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для наполнителя и их
комбинации, представленной на Фигуре 65Ь. Три звездочки обозначают р значение р <0,001
относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя
логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой,
представляющей интерес. Фигура 65d представляет собой график, на котором показано
время от индукции до завершения рождения плодов для соединения III и их комбинации,
представленной на Фигуре 65Ь. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 относительно
соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 65е представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для нифедипина и их комбинации, представленной на Фигуре 65Ь. Две звездочки обозначают р значение р <0,01 относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес.
Фигура 66а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинации на фракционную жизнеспособность потомков CD-I мышей, леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с соответствующей группой с наполнителем. Статистический анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 66Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинации на количество жизнеспособного и нежизнеспособного потомства CD-I мышей, леченный с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 67а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на время от индукции до рождения первого плода для CD-I
мышей, леченных с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем. Атосибан, соединение III, и их комбинация
проявляют р значения р> 0,05, р=0,0601, и р> 0,05, соответственно, по сравнению с группой с
наполнителем. Статистический анализ осуществляли, используя непарный двусторонний t-
критерий Стьюдента по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес.
Фигура 67Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния атосибана
(300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого перорально), и
их комбинации на время от индукции до завершения родов среди CD-1 мышей, леченных с
помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Значения вдоль оси Y обозначают пропорцию CD-I мышей, у которых завершились роды.
Фигура 67с представляет собой график, на котором показано время от индукции до
завершения рождения плодов для наполнителя и их комбинации, представленной на Фигуре
67Ь. "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно соответствующей группы.
Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по
сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 67d представляет
собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для
соединения Ш и их комбинации, представленной на Фигуре 67Ь. Их комбинация проявляет р
значение р=0,0832 относительно комбинации с соединением III. Статистический анализ
осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с
соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 67е представляет собой
график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для
атосибана и их комбинации, представленной на Фигуре 67Ь. "нд" обозначает р значение
р> 0,05 относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли,
используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой,
представляющей интерес.
Фигура 68а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (10 мг/кг, 30 мг/кг, и 100 мг/кг,
вводимого перорально), и их комбинаций на фракционную жизнеспособность потомков CD-I
мышей, леченных с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем. Группа с нифедипином проявляет р значение
р=0,0859 по сравнению с группой, которую лечили наполнителем отдельно. Статистический
анализ осуществляли, используя тест Манна-Уитни или непарный двусторонний t-критерий
Стьюдента по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура
68Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния нифедипина (5
мг/кг, вводимого перорально), соединения III (10 мг/кг, 30 мг/кг, и 100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинаций на количество жизнеспособного и нежизнеспособного
потомства CD-I мышей, леченный с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким
образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 69а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (10 мг/кг, 30 мг/кг, и 100 мг/кг,
вводимого перорально), и их комбинаций на время от индукции до рождения первого плода
для CD-I мышей, леченный с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом,
чтобы индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего. Две звездочки обозначают р значение р <0,01
относительно соответствующей группы, как оценивали с помощью теста Манна-Уитни
относительно соответствующей группы; "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы, как оценивали с помощью теста Манна-Уитни относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем, как оценивали с помощью непарного
двустороннего t-критерия Стьюдента относительно соответствующей группы; "без
тестирования" обозначает, что для указанной пары не проводили статистического
тестирования. Фигура 69Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано
влияния нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III (10 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинаций на время от индукции до завершения родов среди CD-I
мышей, леченных с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Фигура 69с представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III
(30 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинаций на время от индукции до завершения
родов среди CD-I мышей, леченных с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким
образом, чтобы индуцировать роды. Фигура 69d представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния нифедипина (5 мг/кг, вводимого перорально), соединения III
(100 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинаций на время от индукции до завершения
родов среди CD-I мышей, леченных с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким
образом, чтобы индуцировать роды. Фигура 69е представляет собой график, на котором
показано время от индукции до завершения рождения плодов для наполнителя и их
комбинации, представленной на Фигуре 69Ь. "нд" обозначает р значение р> 0,05
относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя
логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы. Фигура 69f
представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения
плодов для соединения III и их комбинации, представленной на Фигуре 69Ь. Две звездочки
обозначают р значение р <0,01 относительно соответствующей группы. Статистический
анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с
соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 69g представляет собой
график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для
нифедипина и их комбинации, представленной на Фигуре 69Ь. "нд" обозначает р значение
р> 0,05 относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли,
используя логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы.
Фигура 69h представляет собой график, на котором показано время от индукции до
завершения рождения плодов для наполнителя и их комбинации, представленной на Фигуре
69с. "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно соответствующей группы.
Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий
относительно соответствующей группы. Фигура 69i представляет собой график, на котором
показано время от индукции до завершения рождения плодов для соединения Ш и их
комбинации, представленной на Фигуре 69с. "нд" обозначает р значение р> 0,05
относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя
логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы. Фигура 69j
представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения
плодов для нифедипина и их комбинации, представленной на Фигуре 69с. "нд" обозначает р
значение р> 0,05 относительно соответствующей группы. Статистический анализ
осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий относительно
соответствующей группы. Фигура 69k представляет собой график, на котором показано
время от индукции до завершения рождения плодов для наполнителя и их комбинации,
представленной на Фигуре 69d. "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя
логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы. Фигура 691
представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения
плодов для соединения III и их комбинации, представленной на Фигуре 69d. "нд" обозначает
р значение р> 0,05 относительно соответствующей группы. Статистический анализ
осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий относительно
соответствующей группы. Фигура 69т представляет собой график, на котором показано
время от индукции до завершения рождения плодов для нифедипина и их комбинации,
представленной на Фигуре 69d. "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя
логарифмический ранговый критерий относительно соответствующей группы.
Фигура 70а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на фракционную жизнеспособность потомков CD-I мышей,
леченных с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем. Статистический анализ осуществляли, используя
тест Манна-Уитни или непарный двусторонний t-критерий Стьюдента по сравнению с
соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 70Ь представляет собой
график, на котором продемонстрировано влияния атосибана (300 мг/кг, который вводили
подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого перорально), и их комбинации на
количество жизнеспособного и нежизнеспособного потомства CD-I мышей, леченный с
помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 71а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
атосибана (300 мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого
перорально), и их комбинации на время от индукции до рождения первого плода для CD-I
мышей, леченный с помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы
индуцировать роды. Значения представляют собой среднее значение плюс/минус
стандартная погрешность среднего, "нд" обозначает р значение р> 0,05 относительно
соответствующей группы; "НД" обозначает р значение р> 0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем; "$" обозначает р значение р <0,05 по сравнению с
соответствующей группой с наполнителем. Их комбинация проявляет р значение р=0,0909
по сравнению с группой, леченной атосибаном отдельно. Статистический анализ
осуществляли, используя тест Манна-Уитни или непарный двусторонний t-критерий
Стьюдента по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура
71Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния атосибана (300
мг/кг, который вводили подкожно), соединения III (100 мг/кг, вводимого перорально), и их
комбинации на время от индукции до завершения родов среди CD-I мышей, леченных с
помощью LPS в гестационном возрасте 17 дней таким образом, чтобы индуцировать роды.
Фигура 71с представляет собой график, на котором показано время от индукции до
завершения рождения плодов для наполнителя и их комбинации, представленной на Фигуре
71Ь. Две звездочки обозначают р значение р <0,01 относительно соответствующей группы.
Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 71d представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для соединения III и их комбинации, представленной на Фигуре 71Ь. Их комбинация проявляет р значение р=0,0964 относительно комбинации с соединением III. Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес. Фигура 71е представляет собой график, на котором показано время от индукции до завершения рождения плодов для атосибана и их комбинации, представленной на Фигуре 71Ь. Звездочка обозначает р значение р <0,05 относительно соответствующей группы. Статистический анализ осуществляли, используя логарифмический ранговый критерий по сравнению с соответствующей группой, представляющей интерес.
Фигура 72а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на частоту PGF2a-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня частоты самопроизвольных сокращений. Измерения частоты самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на частоту сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на частоту сокращений в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ,"
"PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. "#" символ обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Фигура 72Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC") РСР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на сокращение. Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на работу, выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на работу, выполненную на сокращение в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой работу, выполненную на сокращение, в процентах от работы, выполненной на сокращение, для самопроизвольных исходных сокращений. "#" символ обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Фигура 72с представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на амплитуду пика PGF2a-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде
родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем
кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня амплитуды пика самопроизвольных
сокращений. Измерения амплитуды пика самопроизвольных сокращений представлены на
оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый
образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на
амплитуду пика сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта
временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на
амплитуду пика сокращений в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия
на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ)
через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в
виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси
Y представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика
самопроизвольных исходных сокращений. "#" символ обозначает р значение р <0,05 по
сравнению с ДМСО контролем. Фигура 72d представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ,
и 6000 нМ) на продолжительность РСР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6
биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин,
подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли,
используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе
Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных
сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности
самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли
ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях
и влияния контроля или соединения II на продолжительность сокращений измеряли в течение
последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде
"Соединение П." Влияния соединения II на продолжительность сокращений в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 72е представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на общую работу, выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для РСР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии PGF2a, впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в процентах от общей работы,
выполненной самопроизвольными исходными сокращениями. "#" символ обозначает р
значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем.
Фигура 73а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на частоту
индуцированных окситоцином (ОТ) сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в
первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых
родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT
Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с
программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по
меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня частоты
самопроизвольных сокращений. Измерения частоты самопроизвольных сокращений
представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение
II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или
соединения II на частоту сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного
периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния
соединения II на частоту сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем
воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и
100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на
оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y
представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных
исходных сокращений. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО
контролем. Фигура 73Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано
влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на работу,
выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC") ОТ-индуцированных
сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок,
отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения.
Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в
оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После
установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали
измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на сокращение.
Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в
виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый образец
миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на работу,
выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта
временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на
работу, выполненную на сокращение в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем
воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и
100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на
оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y
представляют собой работу, выполненную на сокращение, в процентах от работы,
выполненной на сокращение, для самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 73с
представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных
концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на амплитуду пика ОТ-
индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде
родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем
кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня амплитуды пика самопроизвольных
сокращений. Измерения амплитуды пика самопроизвольных сокращений представлены на
оси X в виде "Самопр." Затем добавляли ДМСО контроль или соединение II в каждый
образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или соединения II на
амплитуду пика сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта
временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на
амплитуду пика сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на
образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через
последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде
"ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y
представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика
самопроизвольных исходных сокращений. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по
сравнению с ДМСО контролем. Фигура 73d представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ,
и 6000 нМ) на продолжительность ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6
биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин,
подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли,
используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе
Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных
сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности
самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли
ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях
и влияния контроля или соединения II на продолжительность сокращений измеряли в течение
последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде
"Соединение П." Влияния соединения II на продолжительность сокращений в присутствии
ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих
концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти
временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ,"
соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений
в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 73е
представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных
концентраций соединения II (6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 6000 нМ) на общую работу,
выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для
ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом
периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению
путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех
самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех
самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." Затем добавляли
ДМСО контроль или соединение II в каждый образец миометрия в указанных концентрациях
и влияния контроля или соединения II на общую работу, выполненную для всех
последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта
временная точка представлена на оси X в виде "Соединение П." Влияния соединения II на
общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии ОТ впоследствии измеряли
путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10
нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки
представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно.
Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в
процентах от общей работы, выполненной самопроизвольными исходными сокращениями.
Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем.
Фигура 74а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на частоту PGF2a-
индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде
родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем
кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня частоты самопроизвольных сокращений.
Измерения частоты самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр."
ДМСО контроль или атосибан ("Ato") затем добавляли в каждый образец миометрия в
указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на частоту сокращений
измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на частоту сокращений в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Фигура 74Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC") РСР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на сокращение. Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на работу, выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на работу, выполненную на сокращение в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой работу, выполненную на сокращение, в процентах от работы, выполненной на
сокращение, для самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 74с представляет собой
график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ,
60 нМ, и 600 нМ) на амплитуду пика РСР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у
N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин,
подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли,
используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе
Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных
сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
амплитуды пика самопроизвольных сокращений. Измерения амплитуды пика
самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль
или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и
влияния контроля или атосибана на амплитуду пика сокращений измеряли в течение
последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде
"Ato." Влияния атосибана на амплитуду пика сокращений в присутствии PGF2a
впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих
концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы.
Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и
"PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой амплитуду пика
сокращений в процентах от амплитуды пика самопроизвольных исходных сокращений.
Фигура 74d представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных
концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на продолжительность PGF2a-
индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде
родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем
кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня продолжительности самопроизвольных
сокращений. Измерения продолжительности самопроизвольных сокращений представлены
на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец
миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на продолжительность сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на продолжительность сокращений в присутствии PGF2a впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и "PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 74е представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на общую работу, выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для РОР2а-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии PGF2a, впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGF2a (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGF2a 1 нМ," "PGF2a 10 нМ," и
"PGF2a 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу,
выполненную сокращениями, в процентах от общей работы, выполненной
самопроизвольными исходными сокращениями. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по
сравнению с ДМСО контролем.
Фигура 75а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния
различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на частоту PGE2-
индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде
родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем
кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня частоты самопроизвольных сокращений.
Измерения частоты самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр."
ДМСО контроль или атосибан ("Ato") затем добавляли в каждый образец миометрия в
указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на частоту сокращений
измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена
на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на частоту сокращений в присутствии PGE2
впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих
концентраций PGE2 (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы.
Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGE2 1 нМ," "PGE2 10 нМ," и "PGE2
100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в
процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. Три звездочки обозначают
р значение р <0,001 по сравнению с ДМСО контролем. Фигура 75Ь представляет собой
график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ,
60 нМ, и 600 нМ) на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC")
РОЕ2-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом
периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению
путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS
(ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением
ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20
минут, записывали измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на
сокращение. Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение,
представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в
каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на
работу, выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного
периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на
работу, выполненную на сокращение в присутствии PGE2 впоследствии измеряли путем
воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGE2 (1 нМ, 10 нМ, и
100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на
оси X в виде "PGE2 1 нМ," "PGE2 10 нМ," и "PGE2 100 нМ," соответственно. Значения
вдоль оси Y представляют собой работу, выполненную на сокращение, в процентах от
работы, выполненной на сокращение, для самопроизвольных исходных сокращений. Фигура
75с представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных
концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на амплитуду пика РОЕ2-индуцированных
сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок,
отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения.
Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в
оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После
установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали
измерения исходного уровня амплитуды пика самопроизвольных сокращений. Измерения
амплитуды пика самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр."
ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных
концентрациях и влияния контроля или атосибана на амплитуду пика сокращений измеряли в
течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в
виде "Ato." Влияния атосибана на амплитуду пика сокращений в присутствии PGE2
впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих
концентраций PGE2 (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы.
Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGE2 1 нМ," "PGE2 10 нМ," и "PGE2 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика самопроизвольных исходных сокращений. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Фигура 75d представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на продолжительность PGE2-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на продолжительность сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на продолжительность сокращений в присутствии PGE2 впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGE2 (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGE2 1 нМ," "PGE2 10 нМ," и "PGE2 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 75е представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций атосибана (6 нМ, 60 нМ, и 600 нМ) на общую работу, выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для РОЕ2-индуцированных сокращений гладких мышц у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты
осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или атосибана на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Ato." Влияния атосибана на общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии PGE2 впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций PGE2 (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "PGE2 1 нМ," "PGE2 10 нМ," и "PGE2 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в процентах от общей работы, выполненной самопроизвольными исходными сокращениями. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 по сравнению с ДМСО контролем.
Фигура 76а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), атосибан (6 нМ), и комбинаций соединения II и атосибана на частоту ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=3 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня частоты самопроизвольных сокращений. Измерения частоты самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или атосибан
затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния
контроля, соединения II, и/или атосибана на частоту сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или атосибана на частоту сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 76Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), атосибан (6 нМ), и комбинаций соединения II и атосибана на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC") ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=3 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на сокращение. Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или атосибана на работу, выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или атосибана на работу, выполненную на сокращение в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой работу, выполненную на
сокращение, в процентах от работы, выполненной на сокращение, для самопроизвольных
исходных сокращений. Фигура 76с представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), атосибан (6 нМ), и комбинаций соединения II и атосибана на амплитуду пика ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=3 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня амплитуды пика самопроизвольных сокращений. Измерения амплитуды пика самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или атосибана на амплитуду пика сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или атосибана на амплитуду пика сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 76d представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), атосибан (6 нМ), и комбинаций соединения II и атосибана на продолжительность ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=3 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных
сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения П, и/или атосибана на продолжительность сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или атосибана на продолжительность сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 76е представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), атосибан (6 нМ), и комбинаций соединения II и атосибана на общую работу, выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=3 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или атосибан затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения П, и/или атосибана на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния
соединения II и/или атосибана на общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии
ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в процентах от общей работы, выполненной самопроизвольными исходными сокращениями. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 по сравнению с ДМСО контролем. Два символа "#" обозначают р значение р <0,01 по сравнению с лечением атосибаном при концентрации 6 нМ.
Фигура 77а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций нифедипина (1 нМ, 6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 10 мкМ) на частоту ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=2 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня частоты самопроизвольных сокращений. Измерения частоты самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или нифедипина на частоту сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Nif." Влияния нифедипина на частоту сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 77Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций нифедипина (1 нМ, 6 нМ, 60
нМ, 600 нМ, и 10 мкМ) на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или
"AUC") ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=2 биопсий эндометрия в
первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых
родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT
Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с
программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по
меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
самопроизвольной работы, выполненной на сокращение. Измерения самопроизвольной
работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО
контроль или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных
концентрациях и влияния контроля или нифедипина на работу, выполненную на сокращение,
измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена
на оси X в виде "Nif." Влияния нифедипина на работу, выполненную на сокращение в
присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия
возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные
интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и
"ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой работу,
выполненную на сокращение, в процентах от работы, выполненной на сокращение, для
самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 77с представляет собой график, на
котором продемонстрировано влияния различных концентраций нифедипина (1 нМ, 6 нМ, 60
нМ, 600 нМ, и 10 мкМ) на амплитуду пика ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у
N=2 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин,
подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли,
используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе
Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных
сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
амплитуды пика самопроизвольных сокращений. Измерения амплитуды пика
самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль
или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и
влияния контроля или нифедипина на амплитуду пика сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Nif." Влияния нифедипина на амплитуду пика сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 77d представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций нифедипина (1 нМ, 6 нМ, 60 нМ, 600 нМ, и 10 мкМ) на продолжительность ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=2 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или нифедипина на продолжительность сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Nif." Влияния нифедипина на продолжительность сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 77е представляет собой график, на котором
продемонстрировано влияния различных концентраций нифедипина (1 нМ, 6 нМ, 60 нМ, 600
нМ, и 10 мкМ) на общую работу, выполненную при всех сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=2 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений. Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля или нифедипина на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "Nif." Влияния нифедипина на общую работу, выполненную сокращениями, в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в процентах от общей работы, выполненной самопроизвольными исходными сокращениями.
Фигура 78а представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), нифедипина (6 нМ), и комбинаций соединения II и нифедипина на частоту ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=5 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
частоты самопроизвольных сокращений. Измерения частоты самопроизвольных сокращений
представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или нифедипина на частоту сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или нифедипина на частоту сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой частоту сокращений в процентах от частоты самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 78Ь представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), нифедипина (6 нМ), и комбинаций соединения II и нифедипина на работу, выполненную на сокращение (площадь под кривой, или "AUC") ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=5 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня самопроизвольной работы, выполненной на сокращение. Измерения самопроизвольной работы, выполненной на сокращение, представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или нифедипина на работу, выполненную на сокращение, измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или нифедипина на работу, выполненную на сокращение в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти
временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ,"
соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой работу, выполненную на сокращение, в процентах от работы, выполненной на сокращение, для самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 78с представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния различных концентраций соединения II (60 нМ и 600 нМ), нифедипина (6 нМ), и комбинаций соединения II и нифедипина на амплитуду пика ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=5 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня амплитуды пика самопроизвольных сокращений. Измерения амплитуды пика самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или нифедипина на амплитуду пика сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или нифедипина на амплитуду пика сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y представляют собой амплитуду пика сокращений в процентах от амплитуды пика самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 78d представляет собой график, на котором продемонстрировано влияния соединения II (60 нМ и 600 нМ), нифедипина (6 нМ), и комбинаций соединения II и нифедипина на продолжительность ОТ-индуцированных сокращений гладких мышц у N=5 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Эксперименты осуществляли, используя DMT
Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в оксигенированном растворе Кребса с
программным обеспечением ADI Powerlab. После установления регулярных сокращений по
меньшей мере в течение 20 минут, записывали измерения исходного уровня
продолжительности самопроизвольных сокращений. Измерения продолжительности
самопроизвольных сокращений представлены на оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль,
соединение II, и/или нифедипин затем добавляли в каждый образец миометрия в указанных
концентрациях и влияния контроля, соединения II, и/или нифедипина на продолжительность
сокращений измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка
представлена на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или нифедипина на
продолжительность сокращений в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем
воздействия на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и
100 нМ) через последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на
оси X в виде "ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y
представляют собой продолжительность сокращений в процентах от продолжительности
самопроизвольных исходных сокращений. Фигура 78е представляет собой график, на
котором продемонстрировано влияния соединения II (60 нМ и 600 нМ), нифедипина (6 нМ), и
комбинаций соединения П и нифедипина на общую работу, выполненную при всех
сокращениях (сумма площади под кривой для всех сокращений) для ОТ-индуцированных
сокращений гладких мышц у N=5 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок,
отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения.
Эксперименты осуществляли, используя DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в
оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab. После
установления регулярных сокращений по меньшей мере в течение 20 минут, записывали
измерения исходного уровня работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений.
Измерения работы, выполненной для всех самопроизвольных сокращений, представлены на
оси X в виде "Самопр." ДМСО контроль, соединение II, и/или нифедипин затем добавляли в
каждый образец миометрия в указанных концентрациях и влияния контроля, соединения II,
и/или нифедипина на общую работу, выполненную для всех последующих сокращений,
измеряли в течение последующего 10-минутного периода. Эта временная точка представлена
на оси X в виде "ANT." Влияния соединения II и/или нифедипина на общую работу,
выполненную сокращениями, в присутствии ОТ впоследствии измеряли путем воздействия
на образцы ткани миометрия возрастающих концентраций ОТ (1 нМ, 10 нМ, и 100 нМ) через
последующие 10-минутные интервалы. Эти временные точки представлены на оси X в виде
"ОТ 1 нМ," "ОТ 10 нМ," и "ОТ 100 нМ," соответственно. Значения вдоль оси Y
представляют собой общую работу, выполненную сокращениями, в процентах от общей
работы, выполненной самопроизвольными исходными сокращениями. Звездочка обозначает
р значение р <0,05 по сравнению с ДМСО контролем. Две звездочки обозначают р значение
р <0,01 по сравнению с ДМСО контролем. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 по
сравнению с ДМСО контролем. Три "+" символа обозначают р значение р <0,001 по
сравнению с лечением соединением II при концентрации 60 нМ.
Фигура 79а представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий эффекты
окситоцина, ноласибана и их комбинации на экспрессию фосфорилированной р65 (р-р65),
фосфорилированной р38 (р-р38), и фосфорилированной киназы, регулируемой
внеклеточными сигналами (p-ERK) у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в
срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево
сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью
окситоцина ("ОТ"), леченным с применением ноласибана при концентрации 1 мкМ, или
леченные обоими препаратами, окситоцином и ноласибаном, при концентрации 1 мкМ для
указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура
79Ь представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий эффекты окситоцина и/или
различных концентраций соединения II, необязательно в комбинации с ноласибаном, на
экспрессию р-р65, р-р38, и p-ERK у N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок,
отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения.
Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью
окситоцина ("ОТ"), леченным с применением соединения II при концентрации 3 мкМ, или
леченные обоими препаратами, окситоцином и соединением II при различных концентрациях
соединения II, оба в присутствии и отсутствии ноласибана при концентрации 1 мкМ для
указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура
79с представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий эффекты окситоцина, ноласибана
и их комбинации на экспрессию провоспалительных генов циклооксигеназы 2 (СОХ-2) и
фосфорилированной кальций-зависимой фосфолипазы А2 (p-cPLA2) у N=6 биопсий
эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых
родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"),
стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченные с применением ноласибана при
концентрации 1 мкМ, или леченные обоими препаратами, окситоцином и ноласибаном при
концентрации 1 мкМ для указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в
качестве контроля. Фигура 79d представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий
влияния окситоцина и/или различных концентраций соединения II, необязательно в
комбинации с ноласибаном, на экспрессию провоспалительных генов СОХ-2 и p-cPLA2 у
N=6 биопсий эндометрия в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин,
подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо
нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченным с
применением соединения II при концентрации 3 мкМ, или леченные обоими препаратами,
окситоцином и соединением II при различных концентрациях соединения II, оба в
присутствии и отсутствии ноласибана при концентрации 1 мкМ для указанных периодов
времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура 79е представляет
собой график количественного анализа экспрессии р-р65, показанной на Фигурах 79а и 79Ь.
Фигура 79f представляет собой график количественного анализа экспрессии р-р38,
показанной на Фигурах 79а и 79Ь. Фигура 79g представляет собой график количественного
анализа экспрессии p-ERK, показанной на Фигурах 79а и 79Ь. Фигура 79h представляет
собой график количественного анализа экспрессии СОХ-2, показанной на Фигурах 79с и 79d.
Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с нестимулированными ("НС")
образцами. Две звездочки обозначают р значение р <0,01 по сравнению с
нестимулированными образцами. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 по
сравнению с нестимулированными образцами. Три "#" символа обозначают р значение
р <0,001 по сравнению с образцами, леченными окситоцином (ОТ). Фигура 79i представляет собой график количественного анализа экспрессии p-cPLA2, показанной на Фигурах 79с и 79d. Звездочка обозначает р значение р <0,05 по сравнению с нестимулированными ("НС") образцами. Три звездочки обозначают р значение р <0,001 по сравнению с нестимулированными образцами.
Фигура 80а представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий эффекты окситоцина, ноласибана и их комбинации на экспрессию р-р65, р-р38, и p-ERK у N=3 биопсий амнионов в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченные с применением ноласибана при концентрации 1 мкМ, или леченные обоими препаратами, окситоцином и ноласибаном при концентрации 1 мкМ для указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура 80Ь представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий влияния окситоцина и/или различных концентраций соединения II, необязательно в комбинации с ноласибаном, на экспрессию р-р65, р-р38, и р-ERK у N=3 биопсий амнионов в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченным с применением соединения II при концентрации 3 мкМ, или леченные обоими препаратами, окситоцином и соединением II при различных концентрациях соединения II, оба в присутствии и отсутствии ноласибана при концентрации 1 мкМ для указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура 80с представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий эффекты окситоцина, ноласибана и их комбинации на экспрессию провоспалительных генов СОХ-2 и p-cPLA2 у N=3 биопсий амнионов в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченные с применением ноласибана при
концентрации 1 мкМ, или леченные обоими препаратами, окситоцином и ноласибаном при
концентрации 1 мкМ для указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля. Фигура 80d представляет собой вестерн-блоттинг, показывающий влияния окситоцина и/или различных концентраций соединения II, необязательно в комбинации с ноласибаном, на экспрессию провоспалительных генов СОХ-2 и p-cPLA2 у N=3 биопсий амнионов в первом периоде родов в срок, отобранных у субъектов-женщин, подвергнутых родоразрешению путем кесарево сечения. Образцы были либо нестимулированными ("НС"), стимулированными с помощью окситоцина ("ОТ"), леченным с применением соединения II при концентрации 3 мкМ, или леченные обоими препаратами, окситоцином и соединением II при различных концентрациях соединения II, оба в присутствии и отсутствии ноласибана при концентрации 1 мкМ для указанных периодов времени. Блот к Р-актину осуществляли в качестве контроля.
Подробное описание
Изобретение обеспечивает а-сложные аминоэфиры тиазолидин карбоксамида,
например, (38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-
3-(4-фторфенил)пропил L-валинат, а также его солевые формы и кристаллические
полиморфы. Эти соединения способны ингибировать активность белков семейства рецептора
простагландина F (FP-R), например, рецептора простагландина F2a (PGF2a). Соединения,
соли, и кристаллические полиморфы, описанные в настоящей заявке, могут использоваться
для ингибирования активности рецептора простагландина F in vitro и in vivo, и представляют
собой эффективные терапевтические композиции для лечения преждевременных родов.
Соединения, соли, и кристаллические полиморфы, описанные в настоящей заявке, могут
вводиться субъекту (например, субъекту-млекопитающему, например, человеку), у которого
происходят или есть риск развития родов в раннем гестационном возрасте, например, до 38
недели (например, от около 20 до около 37 недель, например, гестационный возраст около 20
недель, 21 неделя, 22 недели, 23 недели, 24 недели, 25 недель, 26 недель, 27 недель, 28
недель, 29 недель, 30 недель, 31 неделя, 32 недели, 33 недели, 34 недели, 35 недель, 36
недель, или 37 недель, предпочтительно от около 24 до около 34 недели, например,
гестационный возраст около 24 недели, 25 недель, 26 недель, 27 недель, 28 недель, 29 недель, 30 недель, 31 неделя, 32 недели, 33 недели, или 34 недели). Изобретение дополнительно обеспечивает способы синтеза (38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валината, а также способы получения его солевых форм и кристаллических полиморфов. Изобретение дополнительно охватывает способы лечения преждевременных родов у субъекта путем введения альфа-сложного аминоэфира согласно изобретению субъекту, нуждающемуся в лечении, например, субъекту, у которого происходят преждевременные роды, или субъекту, у которого есть риск развития преждевременных родов, необязательно в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами, как описано в настоящей заявке.
Дополнительно к описанному выше, изобретение охватывает композиции и способы, относящиеся к 3-([1,Г-бифенил]-4-илсульфонил)-7У-[1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропил]-1,3-тиазолидин-2-карбоксамиду. Как описано в настоящей заявке, это соединение может вводиться субъекту (например, субъекту-млекопитающему, например, человек), у которого происходят или есть риск развития родов в раннем гестационном возрасте, например, до 38 недели (например, от около 20 до около 37 недель, например, гестационный возраст около 20 недель, 21 неделя, 22 недели, 23 недели, 24 недели, 25 недель, 26 недель, 27 недель, 28 недель, 29 недель, 30 недель, 31 неделя, 32 недели, 33 недели, 34 недели, 35 недель, 36 недель, или 37 недель, предпочтительно от около 24 до около 34 недели, например, гестационный возраст около 24 недели, 25 недель, 26 недель, 27 недель, 28 недель, 29 недель, 30 недель, 31 неделя, 32 недели, 33 недели, или 34 недели), необязательно в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами как описано в настоящей заявке.
(38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат (Соединение I)
Изобретение основывается на открытии того, что соединение I ((3S)-3-({[(2S)-3-
(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-
валинат, представленное формулой I, ниже) и его соли превращаются in vivo в 3-([1,Г-бифенил] -4-илсульфонил)-7У-[ 1 -(4-фторфенил)-3 -ги дроксипропил] -1,3 -тиазолидин-2-карбоксамид (представленное формулой II, ниже). Соединение II, ранее описанное в US 8415480, представляет собой антагонист рецептора простагландина F, так как это соединение проявляет константу ингибирования (Ki) 6 нМ для FP-R человека, что определяется с помощью конкурентных анализов связывания с радиоактивно меченным лигандом (экспериментальные детали конкурентных анализов связывания с радиоактивно меченным лигандом, пригодные для определения значений Ki, описаны, например, в US 8415480, Пример 51). Было обнаружено, что после введения субъекту, соединение I деэстерифицируется in vivo таким образом, что образуется соединение II вследствие активности эндогенных эстераз, например, тех, которые присутствуют в желудочно-кишечном тракте.
(I) (П)
Было открыто, что соединение I представляет собой ингибитор рецептора простагландина F, поскольку соединение I ингибирует FP-R человека с Ki 1 нМ. Соединение I проявляет улучшения в некоторых физико-химических характеристиках по отношению к соединению II, включая растворимость в воде, а также в средах, которые моделируют содержание тонкого кишечника в сытом (FeSSIF) и голодном (FaSSIF) состояниях. Эти данные обобщены в Таблице 2, ниже.
Дополнительно к проявлению повышенной волной растворимости, соединение I и его соли проявляют неожиданный и благоприятный механизм абсорбции. Как описано в Примерах ниже, соединение I деэстерифицируется эстеразами окружающей среды в тонком кишечнике и затем пассивно проходит через эпителий тонкого кишечника. Неожиданно, соединение I и его соли не являются субстратами для белка-переносчика Peptl, протон-сопряжённого со-переносчика, который опосредует абсорбцию пептидных питательных веществ. Это открытие представляет неожиданное и фармакологически благоприятное свойство. Известно, что Peptl опосредует абсорбцию различных сложных эфиров валината, как описано, например, в Vig и др., Adv. Drug Deliv. Rev. 65:1370-1385 (2013), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки. Peptl проявляет широкий спектр субстратной специфичности, что подтверждается структурным разнообразием соединений, которые переносятся этим белком через кишечный эпителий. Несмотря на присутствие функциональной группы сложного эфира валината, соединение I и его соли не зависят от этого переносчика для абсорбции через эпителий тонкого кишечника. Это является благоприятным свойством, поскольку соединение I и его соли (например, соединение III) таким образом не конкурирует с природными субстратами Peptl, например, пептидными питательными веществами, за связывание и транспорт с помощью этого белка. Напротив, соединение I и его соли превращаются in vivo в форму, которая легко абсорбируется способом, независимым от энергии и локального протонного градиента. Это неожиданное свойство, связанное с высокой водной растворимостью соединения I и его солей,
собирательно обеспечивает благоприятный фармакокинетический профиль, благодаря
которому соединения согласно изобретению легко растворяются в водной среде и, в свою очередь, превращаются в форму, способную к абсорбции, независимой от переносчика.
(38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат гидрохлорид (Соединение III)
Было открыто, что хлоридная соль соединения I ((38)-3-({[(28)-3-(бифенил-4-илсульфонил)-1,3-тиазолидин-2-ил]карбонил}-амино)-3-(4-фторфенил)пропил L-валинат гидрохлорид, обозначенного как III ниже) легко кристаллизуется, используя большее количество различных экспериментальных методик, как описано в Примерах ниже. Соединение III принимает единственную, воспроизводимую кристаллическую форму при кристаллизации из различных сред и в различных условиях окружающей среды. Кроме того, эта кристаллическая форма соединения Ш проявляет увеличенную стабильность в условиях окружающей среды и в присутствии повышенной относительной влажности. Как описано более подробно в Примерах, представленных ниже, соединение III проявляет низкую гигроскопичность и, следовательно, не проявляет склонности абсорбировать влагу из местной атмосферы. Таким образом, соединение III проявляет устойчивость к химическим изменениям, например, гидролизу, а также устойчивость к включению примесей. Например, примеси, связанные с атмосферной водой, нелегко интегрируются в кристаллическую форму соединения III. Соединение III может вводиться субъекту, например, беременной женщине, для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель). Соединение III может вводиться субъекту, например, беременной женщине, для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
(Ш)
Соединение I, или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III, могут вводиться отдельно или в комбинации с одним или более дополнительными средствами, например, дополнительным терапевтическим средством. Типичные дополнительные терапевтические средства включают дополнительные токолитические средства, например, антагонист рецептора окситоцина, описанный в настоящей заявке, включая, например, атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, который представляет собой (3Z, 58)-5-(гидроксиметил)-1-[(2'-метил-1,Г-бифенил-4-ил)карбонил]пирролидин-3-он О-метил оксим, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное. Путем подавления передачи сигнала окситоцином, антагонисты рецептора окситоцина могут действовать синергически с антагонистами рецептора простагландина F2a, описанными в настоящей заявке, замедляя или останавливая маточные сокращения, например, у пациента, у которого происходят или есть риск развития (например, присутствуют один или большее количество симптомов) преждевременных родов. Типичные дополнительные токолитические средства включают бетамиметики, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин и орципреналин, которые могут действовать путем инактивации киназы легких цепей миозина и/или путем истощения резервов Са2+ в миометрии путем повышенной регуляции цАМФ, подавляя, таким образом, сократительную способность матки. Блокаторы кальциевых каналов, например, дигидропиридины (например, нифедипин и никардипин), могут дополнительно или
альтернативно вводиться в сочетании с соединением согласно изобретению, например, для модуляции [Са2+] в миометрии и подавлении Са2+-опосредованной активации миозиновых филаментов, что приводит к сокращению миометрия. Соли магния, например, сульфат магния, могут дополнительно или альтернативно вводиться в сочетании с соединением согласно изобретению, например, для гиперполяризации плазматической мембраны и/или для конкуренции с Са2+ за связывание с легкой цепью миозина. Дополнительно или альтернативно, доноры оксида азота, например, нитроглицерин, могут вводиться в сочетании с соединением, описанным в настоящей заявке, например, для увеличения уровней циклического гуанозинмонофосфата в миометрии, инактивирования, таким образом, легких цепей миозиновых филаментов.
Соединение согласно изобретению, например, соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III, дополнительно или альтернативно может вводиться в сочетании с прогестероном или его вариантом или производным, например, 17-а-гидроксипрогестероном, для подавления сократительной способности матки у субъекта, у которого развиваются или есть риск развития (например, присутствуют один или большее количество симптомов) преждевременных родов.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению может вводиться в сочетании с кортикостероидом, описанным в настоящей заявке, или известном в данной области техники, например, для способствования созревания легких плода, таким образом, что предотвращается развитие респираторного дистресс-синдрома, среди других нарушений у новорожденных.
Дополнительно, соединение III может быть приготовлено в виде фармацевтической композиции, например, фармацевтической композиции, приготовленной, как описано ниже.
Способы лечения
Соединение I, а также его соли, являются эффективными ингибиторами рецептора
простагландина F и могут использоваться для вызывания антагонизма взаимодействия между
представителями семейства простагландина F, например, простагландина F2a, с
соответствующим рецептором простагландина F in vivo для ослабления маточных
сокращений. Соединение I и его соли могут вводиться субъекту, такому как беременная
женщина, для лечения или предотвращения преждевременных родов. Эндогенный
простагландин F2a синтезируется и высвобождается маточными эпителиальными клетками в
ответ на каскады передачи сигналов, инициируемые окситоцином. При связывании PGF2a с
PGF2a-R на внеклеточной поверхности маточного миоцита, фосфолипаза С расщепляет
фосфатидилинозитол -4,5-бифосфат (PIP2) с образованием диацилглицерина (DAG) и
инозитол-1,4,5-трифосфата (1Рз). 1Рз, в свою очередь, потенцирует высвобождение
внутриклеточного кальция (Са2+) саркоплазматическим ретикулумом. Неожиданное
повышение хранилищ кальция в конечном итоге приводит к сокращениям маточных мышц и
некрозу эндотелиальных клеток желтого тела, структуры, синтезирующим прогестерон,
которые поддерживает развитие плода. Аберрантное инициирование маточных сокращений и
деградация желтого тела, вызываемая нарушением регуляции секреции PGF2a, может
приводить к преждевременным родам. Соединение I и его соли, например, соединение III,
может ослаблять опосредованное фосфолипазой С образование 1Рз, и последующую
мобилизацию внутриклеточных хранилищ кальция, путем ингибирования ассоциации PGF2a
с PGF2aR. Соединение I или его соль, например, соединение III, следовательно, может
вводиться субъектам, например, беременным женщинам, для задержки начала родов у
субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около
16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23,
24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16
недель). Например, соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться
субъекту для предотвращения родов перед родоразрешением путём кесарева сечения.
Дополнительно, соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться
субъекту для профилактики и/или лечения дисменореи. Соединение I или его соль,
например, соединение III, также может вводиться субъекту, например, беременной женщине,
для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как
вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
100
Дополнительно, соединения согласно изобретению могут вводиться для лечения эндометриоза у пациента (например, пациента-человека). Сверхэкспрессия рецептора простагландина F2a коррелирует с аберрантным ростом эндометрия. В качестве антагонистов активности рецептора простагландина F2a, соединения согласно изобретению (например, соединение (I) или его соль, например, соединение (III)) могут вводиться пациенту, страдающему от эндометриоза, для лечения этого показания. Соединения согласно изобретению также могут вводиться пациенту для ослабления одного или нескольких симптомов эндометриоза, таких болевых симптомов, включая дисменорею, диспареунию, хроническую тазовую боль, дизурию, и дисхезию во время и/или после менструации. Об успешном лечении эндометриоза путем введения соединения согласно изобретению пациенту можно судить, например, по уменьшению роста ткани эндометрия, и/или уменьшению болевых симптомов во время и/или независимо от менструации.
Дополнительно к описанному выше, настоящее изобретение обеспечивает способы
терапевтического лечения путем обеспечения соединения II субъекту, нуждающемуся в
лечении, для состояний, описанных в настоящей заявке. Например, соединение II может
вводиться субъекту, такому как беременная женщина, для лечения или предотвращения
преждевременных родов. Соединение II является компетентным антагонистом PGF2a
рецептора и, следовательно, может ингибировать ассоциацию этого рецептора с PGF2a.
Следовательно, соединение II может вводиться субъектам, например, беременным
женщинам, для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или
недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,
12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель). Например, соединение II может вводиться
субъекту для предотвращения родов перед родоразрешением путём кесарева сечения.
Дополнительно, соединение II может вводиться субъекту для профилактики и/или лечения
дисменореи. Соединение II также может вводиться субъекту, например, беременной
женщине, для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как
вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
101
Дополнительно, соединение II может вводиться субъекту для лечения эндометриоза у пациента (например, пациента-человека). В качестве антагониста рецептора PGF2a, соединение II может вводиться пациенту, страдающему от эндометриоза, для лечения этого показания. Соединение II может вводиться пациенту для ослабления одного или нескольких симптомов эндометриоза, таких как болевые симптомы, включая дисменорею, диспареунию, хроническую тазовую боль, дизурию, и дисхезию во время и/или после менструации. Об успешном лечении эндометриоза путем обеспечения соединение II субъекту может свидетельствовать, например, уменьшение роста ткани эндометрия, и/или уменьшение болевых симптомов во время и/или независимо от менструации.
Комбинированная терапия
Несмотря на то, что процессы, вовлеченные в начало родов до сих пор полностью четко не определены, существует возрастающее количество доказательств, подтверждающих значимость воспаления как для родов в срок, так и для преждевременных родов. При начале родовой деятельности, имеет место системное повышение количества провоспалительных факторов, включая простагландины, цитокины, и дисмутазы пероксида марганца. Дополнительно, воспаление существенно вовлечено в преждевременные роды, запускаемые инфекцией.
Полагают, что окситоцин инициирует роды путем вызывания двух различных
эффектов: непосредственного индуцирования сокращения маточного миометрия, и усиления
синтеза и высвобождения сократительных простагландинов из маточного
эндометрия/децидуальной оболочки. Путем ингибирования передачи сигнала окситоцина,
можно достичь прямого (сократительного) и непрямого (усиления синтеза простагландинов)
эффектов окситоцина на матку. Дополнительно, лечение децидуальной оболочки человека с
помощью окситоцина приводит к стимуляции продукции простагландина F2a. Это
подтверждает существование комплементарной роли передачи сигналов окситоцином в
тканях матки, с помощью которых окситоцин может взаимодействовать не только
непосредственно на миометрий, стимулируя маточные сокращения, но также и
102
опосредованно, путем образования простагландинов в других тканях.
В последнее время получены доказательства корреляции активности сократительного рецептора простагландина F с началом родов и во время прогрессирования родовой деятельности. Последние отчеты исследований также указывают на то, что окситоцин индуцирует продукцию простагландинов в клетках миометрия человека путем потенцирования циклооксигеназы 2 (СОХ-2). Такой механизм может объяснять замедленное высвобождение простагландинов в ткани матки, что стимулирует родовую деятельность. Таким образом, комбинированная терапия, включающая антагонист рецептора простагландина F2a, например, соединение I или его соль (например, соединение III) и антагонист рецептора окситоцина может использоваться для лечения и/или предотвращения или преждевременных родов. Дополнительно, комбинация антагониста рецептора окситоцина и антагониста рецептора простагландина F2a может быть более эффективна для лечения преждевременных родов, чем существующие в настоящее время терапевтические схемы. Могут наблюдаться синергетические эффекты и они описаны в настоящей заявке, для предотвращения как сократительных, так и воспалительных процессов, которые лежат в основе преждевременных родов, так как доза (ы) антагониста рецептора окситоцина, вводимые пациенту, могут быть ниже при введении в комбинации с антагонистом рецептора простагландина F относительно дозы, которые могут вводиться пациенту, получающему антагонист рецептора окситоцина отдельно.
Соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться с одним или
несколькими дополнительными средствами, например, антагонистом рецептора окситоцина,
для уменьшения частоты маточных сокращений и для задержки начала родов. Например,
соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться одновременно с, в
смеси с, или вводиться отдельно от антагониста рецептора окситоцина. Типичные
антагонисты рецептора окситоцина для применения в сочетании с композициями и
способами согласно изобретению включают атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и
ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное. Например,
соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или
103
одновременно с ноласибаном, или его вариантом, препаратом, кристаллической формой, или производным, для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например, соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с бетамиметиком. Бетамиметики, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин и орципреналин, могут действовать путем истощения внутриклеточных уровней Са2+ (например, внутриклеточных миометральных уровней Са2+) путем потенцирования В-2 адренергических рецепторов, таким образом повышенно регулируя цАМФ и истощая внутриклеточные резервы Са2+, которые при иных обстоятельствах способны стимулировать сократительную способность матки. Типичные бетамиметики для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, а также примеры способов для введения бетамиметиков в сочетании с композициями и способами, раскрытыми в настоящей заявке, описаны, например, в Gyetvai и др. Obstet. Gynecol. 94:869-877 (1999), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например,
соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может
вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются
один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с блокатором
кальциевых каналов, например, блокатором кальциевых каналов L-типа. Блокаторы
кальциевых каналов, включая дигидропиридины, например, нифедипин и никардипин, могут
действовать путем подавления высвобождения Са2+ из саркоплазматического ретикулума,
таким образом предотвращая мобилизацию Са2+, что стимулирует сокращение мышц матки.
104
Примеры блокаторов кальциевых каналов для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, а также примеры способов для введения блокаторов кальциевых каналов в сочетании с композициями и способами, раскрытыми в настоящей заявке, описаны, например, в Wojcieszek и др. Cochrane Database Syst. Rev. 6:CD002255 (2014), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например, соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с магниевой солью, например, сульфатом магния. Соли магния, например, сульфат магния, могут модулировать сократительную способность матки посредством различных механизмов, например, путем индуцирования гиперполяризации плазматической мембраны и/или путем конкуренции с Са2+ за связывание с легкими цепями миозина, таким образом подавляя сокращения миозиновых филаментов в маточных миоцитах.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например,
соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может
вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются
один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с донором
оксида азота. Оксид азота, сосудорасширяющее средство, который необходим для
поддержания нормального тонуса гладких мышц, продуцируется различными клетками.
Оксид азота синтезируется при окислении L-аргинина до L-цитруллина. Эта реакция
катализируется синтазой оксида азота, которая существует в нескольких формах. Обе формы
синтазы оксида азота, как индуцибельная (тип 2), так и головного мозга (тип 1)
экспрессируются в клетках миометрия и эндотелиальных клетках кровеносных сосудов, в то
время как эндотелиальная синтаза оксида азота (тип 3) экспрессируется исключительно в
эндотелиальных клетках кровеносных сосудов. Взаимодействие между оксидом азота и
растворимой гуанилилциклазой, которая присутствует в близкорасположенных эффекторных
клетках, представляет собой широко распространенный механизм передачи сигналов,
105
который связывает различные внеклеточные стимулы образования оксида азота с синтезом циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) в клетках-мишенях. Повышение содержания цГМФ в гладкомышечных клетках, например, маточных миоцитах, инактивирует киназы легких цепей миозина, что приводит к расслаблению гладких мышц. Токолитические эффекты доноров оксида азота, например, нитроглицерина, описаны, например, в Simhan и др. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например, соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с прогестероном или его вариантом, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроатом. Прогестерон представляет собой стероидный гормон, секретируемый желтым телом и плацентой около с 8 недели гестации. Прогестерон и его варианты, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроат, могут регулировать состояние покоя матки путем непосредственного модулирования синтеза [Са2+] в миометрии и простагландина, как описано, например, в Muglia и др. New Engl. J. Med. 362:529-535 (2010); Simhan и др. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007); Smith и др. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 142:3-11 (2009); Bernal. Sem. Cell Dev. Biol. 18:340-347 (2007); и Hubinontn др. J. Pregnancy. 941057 (2011), раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение согласно изобретению (например,
соединение I или его фармацевтически приемлемая соль, например, соединение III) может
вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются
один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с
кортикостероидом. Антенатальные кортикостероиды, например, бетаметазон, дексаметазон,
и гидрокортизон, представляют собой класс терапевтических средств, которые могут
вводиться субъекту, например, беременной особи женского пола во время преждевременных
родов или субъекту с риском развития преждеврем енн ых родов (например, субъекту, у
106
которого проявляется один или большее количество симптомов преждевременных родов,
таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран) для ускорения созревания
легких плода. Лечение с применением антенатальных кортикостероидов связано с
суммарным уменьшением неонагальной смертности, респираторного дистресс-синдрома,
внутрижелудочкового кровоизлияния, некротизирующего энтероколита, вспомогательной
искусственной вентиляции лёгких, необходимости случаев реанимации и интенсивной
терапии, и системных инфекций в течение первых 48 часов жизни. Дополнительно, лечение с
применением антенатальных кортикостероидов эффективно у женщин с преждевременным
отхождением околоплодных вод (PROM) и гипертоническими синдромами, связанными с
беременностью. Существуют доказательства, подтверждающие преимущества для широкого
диапазона гестационного возраста, например, в частности, от около 26 до около 34 недели
(Miracle и др. J. Perinat. Med. 36:191-196 (2008), раскрытие которой включено в настоящую
заявку путем ссылки).
Дополнительно к описанному выше, в соответствии со способами, описанными в
настоящей заявке, соединение II может вводиться (например, путем непосредственного
введения или путем введения его пролекарства) субъекту, нуждающемуся в лечении,
(например, субъекту-человеку, у которого наступают или есть риск развития
преждевременных родов, или субъекту-человеку, страдающему от дисменореи или
эндометриоза) с одним или несколькими дополнительными средствами, например,
антагонистом рецептора окситоцина, например, для уменьшения частоты маточных
сокращений и для задержки начала родов. Например, соединение II может вводиться
одновременно с, в смеси с, или вводиться отдельно от антагониста рецептора окситоцина.
Типичные антагонисты рецептора окситоцина для применения в сочетании с композициями и
способами согласно изобретению включают атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и
ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное. Например,
соединение II может вводиться перед, после, или одновременно с ноласибаном, или его
вариантом, препаратом, кристаллической формой, или производным, для задержки начала
родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня
107
до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с бетамиметиком. Как описано выше, бетамиметики, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин, альбутерол, фенотерол, нилидрин и орципреналин, могут действовать путем истощения внутриклеточных уровней Са2+ (например, внутриклеточных миометральных уровней Са2+) путем потенцирования В-2 адренергических рецепторов, таким образом повышенно регулируя цАМФ и истощая внутриклеточные резервы Са2+, которые при иных обстоятельствах способны стимулировать сократительную способность матки. Типичные бетамиметики для применения в сочетании с композициями и методами, описанными в настоящей заявке, а также примеры способов для введения бетамиметиков в сочетании с композициями и способами, раскрытыми в настоящей заявке, описаны, например, в Gyetvai и др. Obstet. Gynecol. 94:869-877 (1999), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у
которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее
количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с блокатором кальциевых
каналов, например, блокатором кальциевых каналов L-типа. Как описано выше, Блокаторы
кальциевых каналов, включая дигидропиридины, например, нифедипин и никардипин, могут
действовать путем подавления высвобождения Са2+ из саркоплазматического ретикулума,
таким образом предотвращая мобилизацию Са2+, что стимулирует сокращение мышц матки.
Примеры блокаторов кальциевых каналов для применения в сочетании с композициями и
методами, описанными в настоящей заявке, а также примеры способов для введения
блокаторов кальциевых каналов в сочетании с композициями и способами, раскрытыми в
настоящей заявке, описаны, например, в Wojcieszek и др. Cochrane Database Syst. Rev.
6:CD002255 (2014), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
108
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с магниевой солью, например, сульфатом магния. Как описано выше, соли магния, например, сульфат магния, могут модулировать сократительную способность матки посредством различных механизмов, например, путем индуцирования гиперполяризации плазматической мембраны и/или путем конкуренции с Са2+ за связывание с легкими цепями миозина, таким образом подавляя сокращения миозиновых филаментов в маточных миоцитах.
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с донором оксида азота. Как описано выше, оксид азота, сосудорасширяющее средство, который необходим для поддержания нормального тонуса гладких мышц, продуцируется различными клетками, и индуцированное оксидом азота повышение содержания цГМФ в гладкомышечных клетках, например, маточных миоцитах, приводит к расслаблению гладких мышц. Токолитические эффекты доноров оксида азота, например, нитроглицерина, описаны, например, в Simhan и др. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у
которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее
количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с прогестероном или его
вариантом, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроатом. Как описано выше, прогестерон
и его варианты, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроат, могут регулировать состояние
покоя матки путем непосредственного модулирования синтеза [Са2+] в миометрии и
простагландина, как описано, например, в Muglia и др. New Engl. J. Med. 362:529-535 (2010);
Simhan и др. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007); Smith и др. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod.
Biol. 142:3-11 (2009); Bernal. Sem. Cell Dev. Biol. 18:340-347 (2007); и Hubinont и др. J.
Pregnancy. 941057 (2011), раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в
109
качестве ссылки.
Дополнительно или альтернативно, соединение II может вводиться пациенту, у которого происходят или есть риск развития (например, проявляются один или большее количество симптомов) преждевременных родов в сочетании с кортикостероидом. Как описано выше, антенатальные кортикостероиды, например, бетаметазон, дексаметазон, и гидрокортизон, представляют собой класс терапевтических средств, которые могут вводиться субъекту, например, беременной особи женского пола во время преждевременных родов или субъекту с риском развития преждевременных родов (например, субъекту, у которого проявляется один или большее количество симптомов преждевременных родов, таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран) для ускорения созревания легких плода, и лечение с применением антенатальных кортикостероидов связано с суммарным уменьшением иеонатальнон смертности, респираторного дистресс-синдрома, в н утр i t жел у до ч ко в о го кровоизлияния, и екроти зирующего энтероколита, вспомогательной искусственной вентиляции лёгких, необходимости случаев реанимации и интенсивной терапии, и системных инфекций в течение первых 48 часов жизни.
Фармацевтические композиции
Соединение I или его соль, например, соединение III, может быть приготовлено в виде фармацевтической композиции для введения субъекту, например, беременной женщине, в биологически совместимой форме, подходящей для введения in vivo. Таким образом, в одном аспекте, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение I или его соль, например, соединение III, в смеси с подходящим разбавителем, носителем или наполнителем. Соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться, например, перорально или путем внутривенной инъекции.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает фармацевтические композиции,
содержащие соединение П. Такие композиции могут включать соединение II в смеси с
подходящим разбавителем, носителем или наполнителем.
В обычных условиях хранения и применения, фармацевтическая композиция может
110
содержать консервант, например, для предотвращения роста микроорганизмов. Обычные процедуры и ингредиенты для выбора и приготовления подходящих препаратов описаны, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2012, 22-ое изд.) и в The United States Pharmacopeia: The National Formulary (2015, USP 38 NF 33).
Фармацевтические композиции могут включать стерильные водные растворы, дисперсии или порошки, например, для экстемпорального приготовления стерильных растворов или дисперсий. Во всех случаях, форма может стерилизоваться с использованием техник, известных в данной области и может быть превращена в жидкость до такой степени, чтобы могла легко вводиться субъекту, нуждающемуся в лечении.
Фармацевтическая композиция может вводиться субъекту, например, субъекту-человеку, отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями, как указано в настоящей заявке, пропорция которых может быть определена на основании растворимости и/или химической природы соединения, выбранного пути введения и стандартной фармацевтической практики.
Композиции для комбинированной терапии
Соединение I или его соль, например, соединение III, может применяться отдельно
или в комбинации с одним или более дополнительными средствами, пригодными для
ингибирования маточных сокращений и/или лютеолиза, например, такими как атосибан,
ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическая
форма, или производное, наряду с другими терапевтическими средствами (например,
токолитическими средствами), описанными в настоящей заявке. Соединение I или его соль,
например, соединение III, может быть смешано с дополнительным активным средством,
например, антагонистом рецептора окситоцина, бетамиметиком, блокатором кальциевых
каналов, магниевой солью, донором оксида азота, прогестероном или его вариантом, или
кортикостероидом, описанными в настоящей заявке, и вводиться пациенту в одной
композиции, или соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться
пациенту отдельно от дополнительного активного средства. Например, соединение I или его
111
соль, например, соединение III, и дополнительное активное средство могут раздельно вводиться пациенту.
Дополнительно к описанному выше, соединение II может вводиться субъекту отдельно или в комбинации с одним или более дополнительными средствами, пригодными для ингибирования маточных сокращений и/или лютеолиза, например, такими как атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, или его вариант, препарат, кристаллическую форму, или производное, наряду с другими терапевтическими средствами (например, токолитическими средствами), описанными в настоящей заявке. Соединение II может быть смешано с дополнительным активным средством, например, антагонистом рецептора окситоцина, бетамиметиком, блокатором кальциевых каналов, магниевой солью, донором оксида азота, прогестероном или его вариантов, или кортикостероидом, описанными в настоящей заявке, и вводиться пациенту в одной композиции, или соединение II может вводиться пациенту отдельно от дополнительного активного средства. Например, соединение II и дополнительное активное средство могут последовательно вводиться пациенту, например, путем обеспечения соединения II пациенту с последующим введением дополнительного активного агента пациенту.
Композиция для комбинированной терапии, описанная в настоящей заявке, например,
фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, может вводиться субъекту для
задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель,
например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,
14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6,
7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель). В некоторых вариантах реализации, у субъекта
происходят преждевременные роды. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую
композицию вводят субъекту (например, субъекту-человеку) перед началом
преждевременных родов. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может
вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для предотвращения родов перед
родоразрешением путём кесарева сечения. Фармацевтическая композиция согласно
изобретению может вводиться субъекту (например, субъекту-человеку) для лечения или
112
предотвращения дисменореи. Фармацевтическая композиция согласно изобретению может вводиться субъекту, например, беременной женщине, для ослабления одного или нескольких симптомов, связанных с родами, таких как вагинальное кровотечение и разрыв маточных мембран.
Дополнительное терапевтическое средство, присутствующее в композиции для комбинированной терапии, может представлять собой, например, другое токолитическое средство. Дополнительное токолитическое средство может представлять собой, например, антагонист рецептора окситоцина, такой как атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, а также один или большее количество их вариантов, составов, кристаллических форм или производных. Например, атосибан и его варианты описаны, например, в патенте США № 4504469 и 4402942, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Ретосибан и его варианты описаны, например, в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 8071594; 8357685; 8937179; и US 2016/0074413, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Барусибан и его варианты описаны, например, в патенте США № 6143722; 7091314; 7816489; и US 2016/0175283, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Эпельсибан и его варианты описаны, например, в патенте США № 7514437; 8367673; 8541579; 7550462; 7919492; 8202864; 8742099; 9408851; 8716286; и 8815856, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки. Ноласибан и варианты, составы, и их кристаллические формы описаны, например, в патенте США № 7115754 и опубликованная заявка на патент США № 2015/0073032; 2015/0164859; и 2016/0002160, раскрытие каждого из которых включено в настоящую заявку в качестве ссылки.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство
представляет собой бетамиметик, например, тербуталин, ритодрин, гексопреналин,
альбутерол, фенотерол, нилидрин, или орципреналин. В некоторых вариантах реализации,
дополнительное токолитическое средство представляет собой блокатор кальциевых каналов,
например, дигидропиридин, например, нифедипин или никардипин. В некоторых вариантах
реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой магниевую соль,
113
например, сульфат магния. В некоторых вариантах реализации, дополнительное токолитическое средство представляет собой донор оксида азота, например, нитроглицерин.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой прогестерон или его вариант или производное, например, 17-а-гидроксипрогестерон капроат.
В некоторых вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство представляет собой кортикостероид. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой бетаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых вариантах реализации, кортикостероид представляет собой гидрокортизон.
В комбинированных лечениях, дозировки одного или нескольких терапевтических соединений могут уменьшаться относительно стандартных дозировок при введении отдельно. Например, дозы могут определяться эмпирически из комбинаций и перестановок лекарственных средств или могут быть выведены квалифицированным специалистом в данной области техники.
Примеры
Следующие примеры приведены для обеспечения квалифицированных специалистов в данной области техники описанием, как композиции и способы, раскрытые в настоящей заявке, могут использоваться, приготавливаться и оцениваться, и являются исключительно примерами реализации изобретения и не предназначены для ограничения объема изобретения, заявленного изобретателями.
Пример 1. Приготовление соединения I и П1
Соединение I, и его хлоридную соль (соединение III), приготавливали в соответствии со Схемой 1, представленной ниже. Этот пример будет описан для каждой из стадий, осуществляемых для синтеза соединения I, обозначенных как стадии 1-6.
Схема 1. Приготовление соединения I и его хлоридной соли
Л'" ~ - V',' .?." f
j ft i и ио'"Л-1 J. и _/С ' I ' < г
"С?
I ч r*iriv
Стадия
LDU МЛ- ,Я1"Г
ДМФЛ 'и | %> i л Стадия 4
1 Лс-'- О'" -у
Стадия 3
• ¦",! *0| н,ч сн г ? I [
- - "v''r° 1 I* С > ' ,гч,е.з. ни
.- не г ин н.л. I г. д Кл li?.1-u
Стадия 5 6 .'"{""""-
~* Л.
Стадия 1: Приготовление ти^ети-бутилового эфира 2-[1 -(4-фторфенил)-3-гидроксипропилкарбамоил]тиазолидин-3-карбоновой кислоты
В колбу подходящего размера (сосуд А), добавляли 3-(бутоксикарбонил)-1,3-тиазолидин-(25)-карбоновой кислоты (1 мае), затем добавляли тетрагидрофуран и после этого компоненты колбы охлаждали до -35° С около до -45° С. После этого в колбу добавляли iV-метилморфолин (1,18 об.), при этом температуру поддерживали в диапазоне от -30° С до -40° С. После этого в колбу добавляли изобутил хлорформиат (0,58 об.), при этом температуру поддерживали в диапазоне от -30° С до -40° С.
В отдельный сосуд (сосуд В), добавляли (35)-амино-3-(4-фторфенил)пропан-1-ол (0,76 мае.) и ТГФ и сосуд перемешивали до тех пор, пока не растворялись крупные твердые вещества.
Раствор (35)-амино-3-(4-фторфенил)пропан-1-ола из сосуда В затем добавляли в реакционный сосуд А, при этом температуру поддерживали в диапазоне от -30° С до -40° С. Затем содержимому колбу позволяли нагреться до 15° С - 25° С в течение периода 1 ч - 24 ч. Реакционную смесь перемешивали при 15° С - 25° С до завершения реакции. Реакционную смесь концентрировали насухо, и затем к остатку добавляли этилацетат, после этого насыщенный водный хлорид аммония. Органическую фазу отделяли и промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония. После этого органическую фазу отделяли и промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия. Затем органическую фазу высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, и фильтрат концентрировали при 35° С - 40° С, до тех пор, пока содержание этилацетата не составляло < 10% по весу (мас./мас), получая й^е/и-бутиловый эфир 2-[1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропилкарбамоил]тиазолидин-
В колбу подходящего размера (сосуд А), добавляли и^ети-бутиловый эфир 2-[1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропилкарбамоил]тиазолидин-3-карбоновой кислоты (1 мае), после этого добавляли дихлорметан. После этого компоненты колбы охлаждали до -15° С - -20° С. Затем в колбу добавляли соляную кислоту (3,3 об.), при этом температуру поддерживали в диапазоне -15° С и -20° С до завершения реакции. После этого реакционную смесь охлаждали до -35° С - -40° С и к смеси добавляли тетрагидрофуран, при этом температуру поддерживали в диапазоне -30° С и -40° С. Затем к смеси добавляли N,N-диизопропилэтиламин (8,16 об.), при этом температуру поддерживали в диапазоне -15° С и -45° С. Затем в сосуд добавляли 4-диметиламинопиридин (0,032 мае), при этом температуру поддерживали в диапазоне -15° С и -45° С.
В отдельный сосуд (сосуд В), добавляли 4-бифенилсульфонил хлорид (0,85 мае), после этого ТГФ.
Раствор 4-бифенилсульфонилхлорида из сосуда В добавляли в реакционный сосуд А, при этом температуру поддерживали в диапазоне -15° С и -45° С. Затем компонентам реакционной смеси позволяли нагреться до 15° С - 25° С в течение периода времени от 1 ч до 24 ч. После этого в колбу добавляли этилацетат, затем насыщенный водный раствор хлорида
аммония. Органическую фазу отделяли и промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, после этого насыщенным водным раствором гидрокарбоната. Затем органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при 35° С - 40° С до получения твердого остатка. Затем к остатку добавляли дихлорметан и смешивали при 30° С - 35° С. После упаривания, затем к остатку добавляли этилацетат, и взвесь переносили в подходящий сосуд. После этого перемешиваемую взвесь нагревали в колбе с обратным холодильником, и затем охлаждали до 0° С - 5° С. Осажденное твердое вещество собирали путем фильтрации. Фильтровальный осадок промывали этилацетатом, затем й^ети-бутилметиловым эфиром и фильтровальный осадок откачивали насухо в течение 1 ч - 24 ч в атмосфере азота, получая [1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропил]-амид 3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбоновой кислоты.
Стадия ЗА: Приготовление 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил)-3-пропилового эфира 2-йфети-бутоксикарбониламино-З-метилмасляной кислоты
В колбу подходящего размера (сосуд А), добавляли Boc-L-валин (0,48 мае), дихлорметан, и ЛуУ-диметилформамид и смесь затем перемешивали в атмосфере азота 15° С -25° С. После этого в сосуд добавляли 1-гидроксибензотриазол (HOBt, 0,3 мае.) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлорид (EDC1, 0,42 мае), при этом температуру поддерживали при 15° С - 25° С. Затем смесь перемешивали при 15° С - 25° С
до тех пор, пока все твердые вещества не растворялись, получая раствор А.
В отдельный сосуд (сосуд В), добавляли [1-(4-фторфенил)-3-гидроксипропил]амид 3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбоновой кислоты (1,0 мае), дихлорметан, nNJV-диметилформамид, и затем смесь перемешивали при 15° С - 25° С в атмосфере азота. Затем в сосуд добавляли 4-диметиламинопиридин (0,27 мае), при этом температуру поддерживали в диапазоне 15° С - 25° С. Смесь перемешивали при этой температуре, до тех пор пока все твердые вещества не растворялись (обычно 5-15 минут), получая раствор В.
Раствор А затем добавляли к раствору В, при этом температуру поддерживали в диапазоне 15° С - 30° С. Смесь перемешивали при этой температуре до завершения реакции. Реакционную смесь концентрировали для удаления летучих растворителей. Затем в колбу добавляли этилацетат, после этого 10% мае/мае водный раствор лимонной кислоты. Водную фазу отделяли и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали смесью 10% мае/мае водного раствора лимонной кислоты и добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия, затем насыщенный водный раствор хлорида аммония, насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и насыщенный водный раствор хлорида натрия. Затем органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали, и фильтровальный осадок промывали этилацетатом. Фильтраты концентрировали до тех пор, пока не получали твердый остаток, получая неочищенный 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил)-3-пропиловый эфир 2-йфети-бутоксикарбониламино-З-метилмасляной кислоты.
Стадия ЗВ: Очистка 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-
Для очистки 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил)-3-пропилового эфира 2-йфеш-бутоксикарбониламино-З-метилмасляной кислоты, неочищенный продукт (1 мае.) и дихлорметан смешивали в сосуде до тех пор, пока все твердые вещества не растворялись. Затем раствор загружали на диоксид кремния, после этого добавляли дихлорметан. Продукт элюировали с помощью этилацетат:гептаны. Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали насухо в вакууме при температуре водной бани 35° С - 40° С, получая очищенный 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил)-3-пропиловый эфир 2-трет-бутоксикарбониламино-3-метилмасляной кислоты.
Стадия 4: Приготовление метансульфоната 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) пропилового эфира 2-амино-З-метилмасляной кислоты
В колбу подходящего размера, добавляли 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил)-3-пропиловый эфир 2-йфети-бутоксикарбониламино-З-метилмасляной кислоты (1 мае), после этого добавляли 1,4-диоксан и смесь перемешивали в атмосфере азота. После этого добавляли метансульфоновую кислоту (0,18 мае), и содержимое колбы нагревали до 68° С - 73° С. Реакцию перемешивали при этой температуре до завершения реакции с помощью ХН ЯМР анализа. После этого реакционную смесь охлаждали до 35° С - 40° С и концентрировали насухо при этой температуре. Затем остаток растворяли в ТГФ и концентрировали насухо при 35° С - 40° С. Это цикл азео-высушивания повторяли до тех пор, пока содержание 1,4-диокеана не составляли меньше, чем 1,0% мае/мае, получая метансульфонат 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) пропилового эфира 2-амино-З-метилмасляной кислоты.
Стадия 5: Приготовление 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) пропилового эфира 2-амино-З-метилмасляной кислоты (Соединение I)
В колбу подходящего размера, добавляли метансульфонат пропилового эфира 2-амино-3-метилмасляной кислоты 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) (1 мае), затем добавляли дихлорметан. После этого компоненты колбы охлаждали до 5° С - 15° С. К смеси добавляли водный раствор гидрокарбоната натрия, при этом температуру поддерживали в диапазоне 5° С и 25° С. После
этого фазы разделяли, и органическую фазу повторно добавляли в сосуд, затем добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, при этом температуру поддерживали при 5° С - 25° С. После этого водный и органические слои разделяли, и органическую фазу высушивали над сульфатом магния, фильтровали, и фильтровальный осадок промывали дихлорметаном. Затем объединенные органические слои концентрировали насухо при 40° С - 45° С до тех пор, пока содержимое дихлорметана не составляло < 2% мас./мас, получая пропиловый эфир 2-амино-З-метилмасляной кислоты 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) (соединение I).
Стадия 6: Приготовление гидрохлорида пропилового эфира 2-амино-З-метилмасляной кислоты 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) (Соединение Ш)
В колбу подходящего размера, добавляли воду (1,66 об.), затем добавляли соляную кислоту (0,18 об.), и температуру смеси доводили до 15° С - 25° С. Затем раствор фильтровали, и фильтровальный раствор добавляли в колбу подходящего размера (сосуд А), затем добавляли этанол и этилацетат. Полученную смесь перемешивали в атмосфере азота при 15° С - 25° С по меньшей мере в течение 5 минут.
В сосуд подходящего размера (сосуд В), добавляли пропиловый эфир 2-амино-З-метилмасляной кислоты 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) (1 мае), затем добавляли этанол. После этого содержимое колбы перемешивали
для растворения всех твердых веществ и получения прозрачного раствора.
Раствор из сосуда В затем добавляли в сосуд А, при этом температуру поддерживали при 15° С - 25° С. Перемешиваемую смесь охлаждали до 0° С - 5° С и перемешивали при этой температуре в течение 50 - 70 минут. Твердое вещество собирали путем фильтрации и фильтровальный осадок откачивали насухо в атмосфере азота по меньшей мере в течение 12 часов, получая неочищенный гидрохлорид 3-{[3-(бифенил-4-сульфонил)тиазолидин-2-карбонил]амино}-3-(4-фторфенил) пропилового эфира 2-амино-З-метилмасляной кислоты.
Пример 2. Фармакодинамические свойства соединения I и его солей
Неклиническая фармакология
Соединение I и его соли быстро превращаются в соединение II после введения в желудочно-кишечный тракт. Соединение II является конкурентным и обратимым антагонистом рецептора простагландина F2a (FP2a рецептор человека Ki=6 нМ), которое находится в процессе разработки для контроля преждевременных родов путем ингибирования преждевременных маточных сокращений. Эффективная фармакология (токолитический эффект) была показана на модели спонтанной маточной активности у беременных крыс на поздней стадии беременности. Фармакология in vitro
Эффективность ингибирования соединения I и соединения II на рецептор простагландина F2a оценивали путем анализа аффинности этих соединений для рекомбинантного FP рецептора, экспрессируемого в клетках HEK293-EBNA. Результаты показали высокую аффинность связывания соединения I и соединения II с рецептором человека (см. Таблицу 2).
Селективность соединения II тестировали по отношению ко всем восьми подтипам
рецепторов простагландина. Селективность была около 10 раз относительно рецептора 2
простагландина Е (ЕР2) и больше, чем в 100 раз по отношению к другим рецепторам.
Тестирование эффекта 1 мкМ соединения II относительно панели сайтов связывания 50
рецепторов, каналов и ферментов показало высокую селективность для FP.
123
Функциональную характеристику соединения II на FP человека осуществляли в трансфектированных HEK293-EBNA клетках. Соединение II также способно дозо-зависимым образом ингибировать синтез IP3 с IC50 значением 60 нМ. При добавлении отдельнл к FP/HEK293-EBNA клеткам, соединение II, тестируемое вплоть до 10 мкМ, не индуцирует какого-либо синтеза IP3, что указывает на отсутствие у соединения активности агониста.
Фармакология in vivo
Токолитические эффекты соединения I и соединения II исследовали на модели самопроизвольной маточной активности на поздних терминах (19-21 дней гестации) анестезированных беременных крыс (Kawarabayashi и др. Am. J. Obstet. Gynecol. 175:13481355 (1996) и Shinkai и др. J. Pharm. Pharmacol. 52:1417-1423 (2000)). Вкратце, беременных на поздней стадии крыс анестезировали уретаном. Один рог беременной матки освобождали и полиэтиленовый катетер, несущий на конце латексную камеру, заполненную солевым раствором, вставляли в полость матки. Катетер присоединяли к амплифицирующей /записывающей системе с помощью пневмодатчика. Возрастающие дозы соединения I (в виде мезилатной соли) или соединения II перорально вводили или инъецировали путем 10-ти минутной в/в инфузии. Для в/в введения, сократительную активность матки количественно определяли путем расчета AUC на протяжении 10-ти минутного периода инъецирования.
Вариации в процентах значений AUC относительно самопроизвольного маточного
ответа, наблюдаемого после введения каждого соединения, рассчитывали путем сравнения со
значением, записанным перед введением первой дозы (исходный уровень). Влияние
соединения I или соединения II оценивали путем сравнения значения давления в полости
матке перед и после лечения. Для перорального введения, применяли аналогичный
вычислительный метод обработки данных в различные временные точки после лечения.
Статистические различия между леченными группами в каждую временную точку
определяли с использованием однофакторного ANOVA с последующим критерием Тьюки.
Оба соединения, которые вводили внутривенно или перорально, способны заметно
уменьшать самопроизвольные маточные сокращения около на 40-50% (максимальный
124
эффект, полученный при введении дозы 30 мг/кг внутривенным путем и 60 мг/кг пероральным путем). Внутривенная активность была сопоставимой или незначительно выше, чем такая у токолитического средства атосибана, лицензированного в Европейском Союзе.
Ингибирующий эффект после перорального введения имеет быстрое начало (5-15 минут после введения) и оставался на поддерживаемом уровне вплоть до конца периода наблюдения 3 часа. (Фигура 3)
С помощью однократной пероральной дозы, существенное ингибирование маточных сокращений достигают в дозе 30 мг/кг.
Таким образом, с помощью фармакологических исследований in vitro было показана высокая аффинность соединения I и соединения II для рецептора FP человека. При введении внутривенным или пероральным путем, эти соединения способны существенно уменьшать самопроизвольные маточные сокращения около на 40-50% при исследовании на модели самопроизвольной маточной активности на поздней стадии беременности (19-21 дней гестации) анестезированных беременных крыс.
Пример 3. Кристаллические решетки солей соединения I
В этом примере описаны эксперименты создания и характеристики кристаллических солевых форм соединения I.
Сущность
Было определено, что мезилатная соль соединения I является аморфной согласно
XRPD. Попытки кристаллизовать материал были неуспешными. Свободное основание
синтезировали из мезилатной соли и использовали для приготовления различных солей.
Кристаллическую гидросульфатную соль получали непосредственно из синтезированной
соли. Три соли кристаллизовали, используя смеси различных растворителей и методики
кристаллизации: гидрохлорид, фумарат и дигидрофосфат. Полагают, что гидрохлоридная
соль проявляет низкую гигроскопичность, увеличенную стабильность при повышенной
относительной влажности (ОВ), и представляет собой единичную кристаллическую форму
125
при кристаллизации из различных отличающихся экспериментальных условиях.
Кристаллическую НС1 соль получали в двух экспериментах упаривания и с суспензией. В каждом случае наблюдали одинаковую картину XRPD. На основании термических данных, материал имел некоторое количество остаточного растворителя, а возможная точка плавления составляла около 146-147°С. Вероятно, при плавлении происходит частичное разложение. Гидрохлоридная соль была негигроскопичной на основании данных баланса влаги.
Кристаллическая гидросульфатная соль, вероятно, сольватируется и разлагается выше около 100°С. Материал был стабильным при относительных влажностях вплоть до около 65%.
Кристаллическая дигидрофосфатная и фумаратная соль были гигроскопичными при около 65% ОВ. Попытки промышленного получения солей были неуспешными вследствие высокой лабораторной влажности. Таким образом, только частичная характеристика доступна для этих солей.
Гидрохлоридная, гидросульфатная и фумаратная соль проявляют сравнимые растворимости в воде (ниже 1 мг/мл, см. Фигуру 8).
Экспериментальная часть
Анализы с помощью порошковой рентгеновской дифракции, описанные в настоящей заявке, осуществляли на Shimadzu XRD-6000 порошковом рентгеновском дифрактометре, используя Си Ка излучение. Прибор оборудован длинной тонкофокусной рентгеновской трубкой. Напряжение и силу тока на трубке устанавливали на 40 кВ и 40 мА, соответственно. Дивергенцию и щели рассеивания устанавливали на 1 ° и приемную щель устанавливали на 0,15 мм. Дифрагированные лучи определяли с помощью Nal сцинтилляционного детектора. Использовали тета-два тета непрерывное сканирование при 3 °/мин (0,4 с/0,02° шаг) до 2,5 -40 °29. Кремниевый стандарт анализировали каждый день для контроля настроек прибора. Образцы анализировали с помощью кремниевого держателя образцов.
Анализы порошковой рентгеновской дифракции, описанные в настоящей заявке, также осуществляли на Inel XRG-3000 дифрактометре, оборудованном изогнутым позиционно-чувствительным детектором с диапазоном 29 120°. Данные в реальном времени собирали, используя Си Ка излучения, начиная около при 4 °29 при разрешении 0,03 °29. Напряжение и силу тока на трубке устанавливали на 40 кВ и 30 мА, соответственно. Щель монохроматора устанавливали 5 мм путем 160 мкм. Диаграммы представляли от 2,5 до 40 °29. Образцы приготавливали для анализа путем упаковывания их в тонкостенные стеклянные капилляры. Каждый капилляр устанавливали на гониометрическую головку, которая переводилась в двигательный режим для возможности вращения капилляра при измерении и записи параметров. Образцы анализировали в течение 5 или 10 минут. Калибровку прибора осуществляли ежедневно с помощью силиконового сравнительного стандарта.
ДСК анализы, описанные в настоящей заявке, осуществляли на ТА Instruments дифференциальном сканирующем калориметре 2920. Прибор калибровали, используя индий в качестве эталонного материала. Образцы помещали в стандартный алюминиевый ДСК тигель, тигель зажимали и вес точно записывали. Образцы уравновешивали при 25 °С и нагревали при продувании азотом при скорости 10 °С/мин вплоть до 350 °С. Метал индия использовали в качестве калибровочного стандарта.
TG анализы, описанные в настоящей заявке, осуществляли термогравиметрическом анализаторе ТА Instruments 2950. Стандарты для калибровки представляли собой никель и ALUMEL(tm). Образцы помещали в алюминиевую кювету для образцов и вставляли в TG термошкаф. Образцы сначала уравновешивали при 25 °С, затем нагревали под поток азота при скорости нагревания 10°С/минуту вплоть до 350 °С.
Спектры растворов *Н ядерного магнитного резонанса (ЯМР), описанных в настоящем
изобретении, записывали при температуре окружающей среды с помощью спектрометра
Varian UNITYINOVA-400 при ХН ларморовской частоте 399,8 МГц. Образцы растворяли в
метанолч/4, метиленхлоридч/2, или хлороформч/3. Спектры получали с ХН шириной
импульсов 7,8 или 8,6 мкс, временем экспозиции 2,50 секунды, 5-ти секундной задержкой
127
между сканированиями, шириной спектра 4095 или 6400 Гц с 20474 или 32000 данными наблюдений, и 16 или 40 совместно-объединенными сканированиями. Сигнал свободной индукции (FID) осуществляли, используя программное обеспечение Varian VNMR 6.1С с 65536 точками и экспоненциальным фактором уширения линий 0,2 Гц для улучшения отношения сигнал/шум. Спектры сравнивали с внутренним стандартно тетраметилсиланом (TMS) при 0,0 м.д. или пиком остаточного растворителя.
FT-рамановский спектр, описанный в настоящей заявке, записывали на FT-Raman 960 или 860 спектрометре (Thermo Nicolet). В этом спектрометре используют длину волн возбуждения 1064 нм. Около 0,5-0,7 Вт Nd:YV04 лазерного порошка использовали для облучения образцов. Спектры Рамана измеряли с помощью детектора индий-галлий-арсенид (InGaAs). Образцы приготавливали для анализа путем помещения материала в стеклянный капилляр и затем в покрытый золотом капиллярный держатель во вспомогательном устройстве. В целом 256 сканирований образцов собирали от 3600 до 100 см"1 при спектральном разрешении 4 см"1, используя аподизацию Хаппа-Гензеля. Калибровку по длинам волн осуществляли, используя серу и циклогексан.
Данные поглощения/десорбции влаги (MB) собирали на VTI SGA-100 Vapor Sorption Analyzer. Данные сорбции и десорбции собирали в диапазоне от 5% до 95% относительной влажности (ОВ) при 10% ОВ интервалах при продувке азотом. Образцы не высушивали перед анализом. Критериями равновесия, используемыми для анализа, была менее 0,0100% изменений веса за 5 минут, с максимальным временем уравновешивания 3 часа, если весовой критерий не соблюдался. Данные не корректировали относительно начального содержания влаги в образцах. NaCl и PVP использовали в качестве стандартов для калибровки.
Приготовление соединения I
Многочисленные попытки были предприняты для получения свободного основания
соединения I из мезилатной соли, результаты этого описаны на Фигуре 4. Изначально, один
эквивалент гидроксида натрия использовали на эквивалент соли. Протонный ЯМР указывал
на наличие пиков метансульфоновой кислоты. Полную реакцию получали, если мезилатную
128
соль в метиленхлориде и растворе NaOH в воде смешивали при соотношении 1:2 соль: основание. Органический слой отделяли после нескольких промывок и упаривали. Полученный пастообразный или вязкий маслянистый материал высушивали в вакууме, получая аморфное твердое вещество. Свободное основание анализировали путем ХН ЯМР и спектроскопии Рамана (Фигура 15 и Фигура 16, соответственно). В последующих исследованиях скрининга солей использовали свободное основание в качестве исходного вещества (обобщенные результаты представлены на Фигурах 5-7).
Отбор солей соединения I
Приготавливали двенадцать солей соединения I. Кристаллическая гидросульфатная соль осаждалась путем добавления около 25 молярного избытка серной кислоты к раствору свободного основания в ацетоне. Полагают, что другие соли со стадии синтеза не способны к двойному лучепреломлению путем микроскопии или аморфные согласно XRPD (Фигуры 57). Бензолсульфонатные, цитратные, этансульфонатные, гидрохлоридные, гидросульфатные и сульфатные соли анализировали с помощью протонного ЯМР.
Эксперименты по кристаллизации на солях соединения I обобщены на Фигурах 5-7. Кристаллизовали следующие соли: гидрохлорид, фумарат, и дигидрофосфат.
Хлоридную соль кристаллизовали из 1:1 смеси ацетон: толуол, смеси метиленхлорид: этиловый простой эфир, и ацетоновой суспензии. Аналогичную картину XRPD наблюдали во всех экспериментах и обозначали как форма А (Фигура 7). Кристаллическую фумаратную соль получали путем медленного упаривания из 1:1 раствора метанол: толуол. Рентгеновская дифракционная картина обозначена как картина В. Гидросульфатная и дигидрофосфатная соль проявляют очень сходные картины XRPD (обозначены как картина X). Противоионы HSO4 и Н2РО4 сходны по размерам и небольшие по сравнению с молекулой свободного основания, таким образом, сходные кристаллические структуры вполне вероятны для гидросульфатной и дигидрофосфатной соли. При попытках кристаллизовать мезилатную соль получали вязкие или стеклообразные твердые материалы.
Характеристики свободного основания и мезилатной соли соединения I
Протонный ЯМР спектр свободного основания проявил два дублета около при 1 м.д., что соответствует метальным группам валинового фрагмента. Метальные группы находятся на хиральном углеродном центре и, следовательно, не являются эквивалентами в протонном ЯМР. Два дублета для метальных групп наблюдаются для следующих солей соединения I: бесилат, цитрат, эсилат, гидросульфат (более перекрывающий) и сульфат (более перекрывающий). В ^ЯМР спектре мезилатной соли и хлоридной соли, дублет при ~ 1 м.д. соответствует шести атомам водорода, что возникает при полном перекрытии двух дублетов метальных групп (Фигура 13 и Фигура 21).
Эксперимент гомоядерного разъединения *Н ЯМР на свободное основание подтвердил метин (СН) водород мультиплет около при 2 м.д. (Фигура 18). ^ЯМР спектр свободного основания, записанный при отсутствии предварительного облучения любой метильной группы представлено внизу на Фигуре 18. Облучение каждой метильной группы (сверху, посредине) приводит к упрощенному метановому мультиплету с таким же количеством линий (5). Если два дублета соответствуют различным диастереоизомерам, то будут наблюдать два типа мультиплетов, исходный и упрощенный.
Характеристика хлоридной соли соединения I (соединение III)
Кристаллическую хлоридную соль анализировали путем термических техник, *Н ЯМР
и автоматизированный анализ сорбции/десорбции влаги. Эндотерма около при 147 °С в ДСК
проявляется более широко, чем она типично наблюдается для эндотермы плавления. Потерю
веса около 4% наблюдали от 25 до 160 °С (анализ образца ацетоновой взвеси, Фигура 20). ХН
ЯМР хлоридной соли соответствовал структуре (Фигура 21). Тем не менее, данные не могут
коррелировать с потерей веса в термических анализах, поскольку анализировали различные
образцы (медленное упаривание 1:1 смеси ацетон: толуол). Хлоридную соль из ацетоновой
взвеси высушивали в вакууме около при 50 °С в течение 1 дня. Полученный образец был
сходным с исходной солью согласно XRPD (Фигура 22). Термические данные представлены
на Фигуре 23. На основании сравнения термических данных, высушенный материал имел
130
более низкие потери в диапазоне от 25 до 100 °С (0,2% отн. 0,6% для исходной хлоридной соли) и 100 и 160°С (2,5% отн. 3,5%) (Фигура 24). Это указывало на то, что некоторая часть растворителя была удалена при вакуумной сушке. Тем не менее, эндотерма около при 146147 °С в ДСК все еще была широкой (Фигура 25). Частичное разложение возможно происходит при плавлении (примечание: исходное разложение и соответствующая потеря веса в TG).
Хлоридная соль соединения I не переходит в жидкое состояние через 2 дня около при 95% ОВ. Данные сорбции/десорбции влаги обобщены на Фигуре 27 и представлены на Фигурах 26 и 28. Минимальную потерю веса наблюдали при уравновешивании при 5% ОВ. Около 0,9% увеличение веса происходило при сорбции от 5 до 95% относительной влажности. Образец проявлял около 0,7% потеря веса при десорбции. XRPD анализ на пост-МВ образце проявлял рентгеновскую дифрактограмму, сходную с таковой для исходного вещества (Фигура 29).
Характеристика гидросулъфатной и сульфатной соли соединения I
Приготавливали обе соли: гидросульфатную и сульфатную соль соединения I.
Гидросульфатная соль осаждалась из раствора ацетона свободного основания путем
добавления около 25 молярного избытка серной кислоты. Было обнаружено, что осадок
является кристаллическим согласно XRPD (Фигура 38). Термические данные для
гидросульфатной соли представлены на Фигуре 32. Широкая эндотерма около при 68 °С
соответствует потере веса около 1% и, вероятно, обусловлена десольватацией
(дегидратацией). Разложение происходит при более высоких температурах. Она переходит в
жидкое состояние через 3 дня около при 65% ОВ (Фигура 32). Сульфатную соль
приготавливали, используя два эквивалента свободного основания на один эквивалент
кислоты. Попытки кристаллизовать сульфатную соль соединения I были неуспешными
(Фигуры 5-7). Гидросульфатную и сульфатную соль анализировали с помощью протонного
ЯМР (Фигура 33 и Фигура 34). На ЯМР спектрах различий не наблюдали. Например,
полагают, что метальные группы валинового фрагмента имеют различное связывание.
131
Харкетристика дигидрофосфатной соли соединения I
Дигидрофосфатную соль кристаллизовали из смеси 1:1 метилэтилкетон: н-бутилацетат (Фигуры 5-7). Она проявляет рентгеновскую дифрактограмму, сходную к таковой гидросульфатной соли (Фигура 43). Характеристика дигидрофосфатной соли ограничена XRPD вследствие потери образца при анализе. Попытки приготовить дополнительные количества кристаллической соли были неуспешными. Низкокристаллический материал получали при первой попытке (Фигуры 5-7). При перекристаллизации низкокристаллической соли получали вязкое твердое вещество. Материал оставался вязким после высушивания в вакууме. Лабораторная влажность составляла около 62% ОВ при кристаллизации в промышленном масштабе и, вероятно, повреждает материал благодаря его гигроскопичности. Дополнительных попыток кристаллизации дигидрофосфатной соли не предпринимали.
Характеристика фумаратной соль соединения I
Небольшое количество фумаратной соли кристаллизовали из смеси метанол: толуол 1:1 (Фигуры 5-7). Попытки получить в промышленном масштабе кристаллическую соль осуществляли при лабораторной влажности около 62% ОВ и были неуспешными. Получали большинство маслянистых материалов, хотя присутствовало некоторое количество кристаллического твердого вещества путем микроскопии. При высушивании вязкого твердого вещества в вакууме получали практически аморфный материал. Первоначально приготовленную кристаллическую соль использовали для затравочных экспериментов. Тем не менее, не получали кристаллических материалов. Гигроскопическую природу фумаратной соли подтверждали в исследованиях относительной влажности.
Полагают, что фумаратная соль более чувствительна к влаге. Кристаллическая соль была стабильной около при 43 и 53% относительной влажности, и начинала переходить в жидкое состояние в течение первого дня около при 65% ОВ. Желтое масло образовывалось через 3 дня при 65% ОВ (около 4% увеличения влажности).
Выводы
Было обнаружено, что мезилатная соль соединения I является аморфной согласно XRPD. Попытки кристаллизовать материал были неуспешными.
Свободное основание соединения I синтезировали из мезилатной соли и использовали для приготовления 12 солей. Кристаллическую гидросульфатную соль получали непосредственно из синтезируемой соли. Три соли кристаллизовали, используя смеси различных растворителей и методики кристаллизации: гидрохлорид, фумарат и дигидрофосфат. Полагают, что хлоридная соль является наилучшим кандидатом для дальнейшей разработки. Кристаллическая гидросульфатная соль, вероятно, сольватируется и разлагается выше около 100°С. Материал был стабильным при относительных влажностях вплоть до около 65%. Кристаллическую НС1 соль получали в двух экспериментах упаривания и эксперимента с суспензией. Наблюдали аналогичную картину XRPD. На основании термических данных, материал имел некоторое количество остаточного растворителя; а возможная точка плавления составляла около 146-147°С. Вероятно, при плавлении происходит частичное разложение. Хлоридная соль была негигроскопичной на основании данных баланса влаги. Кристаллическая дигидрофосфатная и фумаратная соль были гигроскопичными около при 65% ОВ. Попытки промышленного получения солей были неуспешными вследствие высокой лабораторной влажности. Таким образом, только частичная характеристика доступна для этих солей.
Пример 4. Мониторинг проницаемости в Сасо-2 клетки мезилатной соли соединения I
Биодоступность перорально вводимых лекарственных средств главным образом
зависит от способности проникать через кишечные барьеры. Сасо-2 клетки, имеющие
происхождение из аденокарциномы ободочной кишки человека, адаптированные J. Fogh для
их способности достигать высокой степени дифференциации энтероцитов, могут
использоваться в качестве модели in vitro для исследования транспорта лекарственных
средств через кишечный эпителий. Эти клетки образуют монослой поляризованных
эпителиальных клеток при выращивании на покрытой коллагеном поликарбонатной
133
мембране. Монослой дифференциированных клеток представляет собой релевантную модель для эпителия тонкого кишечника. Процесс дифференциации, начинающийся при слиянии клеток, приводит к образованию кисточковой каймы с хорошо развитыми микроворсинками, тесными апикальными соединениями, и поляризованным распределением мембранных компонентов, включая ферменты, рецепторы, транспортные системы, ионные каналы и липидные молекулы.
Целью исследования являлось на первом этапе оценка неспецифического связывания соединений I в тестируемой системе на основании Сасо-2 клеток (без клеток) и, на втором этапе, оценка превращения соединения I в соединение II и определение того факта, опосредуется ли транспорт соединения I через монослои Сасо-2 клеток PepTl транспортным белком.
Материалы
Клеточную линию Сасо-2 (клетки аденокарциномы ободочной кишки человека) получали из контролируемых клеточных банков (Biosearch S.p.A, Джеренцано -Италия). Модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (DMEM), эмбриональную телячью сыворотку, раствор заменимых аминокислот, L-Глутамин 200 мМ, Раствор Пенициллин/Стрептомицин, раствор Трипсин-EDTA без кальция и магния получали от Celbio (Милан, Италия). HEPES, сбалансированный солевой раствор Хенкса (HBSS), фосфатно-солевой буфер Дульбекко (PBS), Диметилсульфоксид (ДМСО), Глицин-Саркозин (Gly-Sar) получали от Sigma (Милан, Италия).
Экспериментальная часть
Клетки Сасо-2 культивировали в DMEM, дополненной 10% эмбриональной телячьей сывороткой, 2% L-Глутамином 200 мМ и 1% раствором заменимых аминокислот.
Клетки хранили замороженными в криопробирках в жидком азоте, в виде клеточной
суспензии объемом 1 мл в эмбриональной телячьей сыворотке, содержащей 10% ДМСО.
Клетки, используемые для экспериментов, выдерживали в культуре не больше одного месяца.
134
При необходимости, замороженные флаконы Сасо-2 клеток быстро размораживали при 37°С на водяной бане путем острожного завихрения вплоть до полузавершенного оттаивания. После этого клеточную суспензию добавляли по каплям к 10 мл среды для культивирования клеток. После этого клеточную суспензию центрифугировали в течение 7 минут при 900-1000 об./мин, супернатант удаляли и осадок клеток после центрифугирования восстанавливали в среде и распределяли в колбы, содержащие среду объемом 75 см2. Колбы инкубировали при 37°С в атмосфере 5 % СО2. Клетки серийно субкультивировали до получения почти сплошных монослоев. Среду из каждой колбы удаляли и монослой промывали с помощью 10-15 мл забуференной фосфатом среды Дульбекко (PBS).
Раствор трипсин-EDTA раствор добавляли к клеточному монослою, инкубировали при 37° С и нарезали аккуратно через интервалы для сдвигания клеток. Полностью отсоединенный и дезагрегированный клеточный монослой подтверждали путем исследования под микроскопом. Затем клетки ресуспендировали в 10 мл полной среды и центрифугировали в течение 7 минут при 900-1000 об./мин. Супернатант отбрасывали; клетки ресуспендировали в культуральной среде и высевали при 2,5х105 клеток/мл в колбы 175 см2.
Клетки из колб почты сплошных культур отсоединяли и дезагрегировали путем обработки трипсином, как описано выше. Клетки ресуспендировали в культуральной середе и подсчитывали количество клеток. Клеточную суспензию разводили средой до получения около 1x106 клеток/мл и 300 мкл клеточной суспензии помещали на апикальный компартмент Transwell (диаметр 6,5 мм, размер пор 0,4 мкм). 600 мкл клеточной среды помещали в базолатеральный компартмент. Планшеты инкубировали при 37° С в увлажненной атмосфере 5 % С02 на воздухе в течение 15-21 дней, заменяя среду каждый 48-72 часов.
Целостность каждого монослоя Сасо-2 клеток оценивали с помощью
трансэпительального электрического сопротивления (TEER), как перед началом
эксперимента, так и после окончания времени инкубирования. TEER, выраженный в виде Ом
х см2, измеряли в Transwells, используя Millicell-ERS (Millipore). Монослой считали
дифференцированным, если значение TEER было больше, чем 800 Ом х см2.
135
Целостность каждого монослоя Сасо-2 клеток оценивали после окончания времени инкубирования с помощью люцифера жёлтого. После эксперимента Transwells промывали два раза транспортирующим буфером. 200 мкл люцифера жёлтого при концентрации 100 мкМ в HBSS распределяли в апикальный компартмент, в то время как 400 мкл HBSS добавляли в базолатеральный компартмент. Transwells инкубировали при 37° С в течение 1 часа. Количество люцифера жёлтого определяли в базолатеральном компартменте при длине волны 535 нм относительно стандартной кривой люцифера жёлтого в таком же солевом растворе, используя спектрофотометр для анализа микропланшет (EG & G WALLAC). Монослой считали неповрежденным, если обнаруживали <1% Люцифера жёлтого в базолатеральном компартменте.
Оценка неспецифического связывания в бесклеточном transwell
Неспецифическое связывание и восстановление оценивали в бесклеточном. Соединение I тестировали при 1,5, 3 и 6 мкМ в двух повторах в бесклеточном transwell. Тестирование осуществляли в рН градиенте между апикальным и базолатеральным компартментом. Апикальный компартмент (донор) имел буфер с 6,5, в то время как базолатеральный компартмент (получатель) имел буфер с рН 7,4. Пробы отбирали в следующее время: 60 и 120 минут для базолатерального компартмента (получатель) и 120 минут для апикального компартмента (донор). Полученные образцы анализировали с помощью ЖХ-МС, оба компонента, соединение I и соединение II мониторили для оценки процента восстановления.
Оценку стабильности соединения I и соединения II
Стабильность обоих компонентов, соединения I и соединения II оценивали при
проведении теста. Эти соединения растворяли в HBSS буфере (конечная концентрация 1%
ДМСО) при концентрациях 1,5, 3 и 6 мкМ. Аликвоты каждого раствора отбирали в момент
времени ноль (t=0) для оценки исходных концентраций соединений. Растворы инкубировали
при 37°С для продолжительного эксперимента транспорта. Аликвоту каждого раствора
136
отбирали при окончании эксперимента (t=120) для оценки конечных концентраций соединения I и соединения П. Пробы анализировали путем ЖХ-МС.
Оценка двунаправленной проницаемости соединения I
Соединение I растворяли в HBSS буфер (1% ДМСО конечная концентрация) при концентрациях 1,5, 3 и 6 мкМ. Каждую концентрацию /время отбора образца прогоняли в лунках в двух повторах. Тестирование осуществляли в градиенте рН: апикальный компартмент (слизистый) осуществляли при рН 6,5, базолатеральный компартмент (серозный) осуществляли при рН 7,4.
Транспорт с апикального в базолатеральном направлении (А-> В, слизистый в серозный): 200 мкл каждой концентрации соединения I добавляли в апикальный компартмент и 400 мкл HBSS добавляли в базолатеральный компартмент. Планшеты инкубировали при 37°С. Аликвоту базолатерального компартмента отбирали через 60 и 120 минут (t=60 и t=120). Аликвоту апикального компартмента отбирали в начальное время (t=0) и через 120 минут. (t=120).
Транспорт с базолатерального в апикальном направлении (В-> А, серозный в слизистый): 400 мкл каждой концентрации соединения I добавляли в базолатеральный компартмент и 200 мкл HBSS добавляли в апикальный компартмент. Планшеты инкубировали при 37°С. Аликвоту апикального компартмента отбирали через 60 и 120 минут (t=60 и t=120). Аликвоту базолатерального компартмента отбирали в начальное время (t=0) и через 120 минут. (t=120). Все образцы анализировали с помощью ЖХ-МС, контролируя оба компонента, соединение I и появление соединения П.
Оценка двунаправленной проницаемости соединения II
Соединение II растворяли в HBSS буфер (1%ДМСО конечная концентрация) при концентрациях 1,5, 3 и 6 мкМ. Каждую концентрацию /время отбора образца прогоняли в лунках в двух повторах. Тестирование осуществляли в градиенте рН: апикальный
компартмент (слизистый) осуществляли при рН 6,5, базолатеральный компартмент (серозный) осуществляли при рН 7,4.
Транспорт с апикального в базолатеральном направлении (А-> В, слизистый в серозный): 200 мкл каждой концентрации соединения II добавляли в апикальный компартмент и 400 мкл HBSS добавляли в базолатеральный компартмент. Планшеты инкубировали при 37°С. Аликвоту базолатерального компартмента отбирали через 60 и 120 минут (t=60 и t=120). Аликвоту апикального компартмента отбирали в начальное время (t=0) и через 120 минут. (t=120).
Транспорт с базолатерального в апикальном направлении (В-> А, серозный в слизистый): 400 мкл каждой концентрации соединения II добавляли в базолатеральный компартмент и 200 мкл HBSS добавляли в апикальный компартмент. Планшеты инкубировали при 37°С. Аликвоту апикального компартмента отбирали через 60 и 120 минут (t=60 и t=120). Аликвоту базолатерального компартмента отбирали в начальное время (t=0) и через 120 минут. (t=120). Все образцы анализировали с помощью ЖХ-МС, контролируя соединение П.
Ингибирование транспорта слизистый^ серозный соединения I с помощью PepTl субстрата (Gly-Sar)
Дифференцированные клетки предварительно обрабатывали в течение 30 минут с помощью 10 мМ Gly-Sar для блокирования активного транспортёра PepTl.
Соединение I растворяли в HBSS буфер (1%ДМСО конечная концентрация) при концентрациях 1,5, 3 и 6 мкМ. Каждую концентрацию /время отбора образца прогоняли в лунках в двух повторах. Тестирование осуществляли в градиенте рН: апикальный компартмент (слизистый) осуществляли при рН 6,5, базолатеральный компартмент (серозный) осуществляли при рН 7,4.
Транспорт с апикального в базолатеральном направлении (А-> В, слизистый в
серозный): 200 мкл каждой концентрации соединения I добавляли в апикальный компартмент
и 400 мкл HBSS добавляли в базолатеральный компартмент. Планшеты инкубировали при
138
37°С. Аликвоту базолатерального компартмента отбирали через 60 и 120 минут (t=60 и t=120). Аликвоту апикального компартмента отбирали в начальное время (t=0) и через 120 минут. (t=120). Все образцы анализировали с помощью ЖХ-МС, контролируя оба компонента, соединение I и появление соединения П.
Аналитические определения
Концентрации соединения II и соединения I в образцах после инкубирования определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии /масс-спектрометрии (ЖХ/МС), описанном в приложениях (раздел 7.1) без какого-либо дополнительного разведения.
Результаты
Значения предварительных экспериментов TEER монослоев Сасо-2 клеток
использовались в диапазоне от 850 до 1160 Qx см2, что указывает на конфлюентный
монослой с плотными контактами. После окончания экспериментов, значения TEER
снижалась в среднем на 170 Q х см2 (от 680 до 990 Q х см2) без влияния на целостность
монослоя клеток. Тест с Люцифером жёлтым подтвердил целостность всех монослоев после
экспериментов, фактически, обнаруживаемое количество люцифера жёлтого в
базолатеральных компартментах после экспериментов всегда было <1% во всех лунках. На
Фигуре 55 описаны данные, полученные в тесте на неспецифическое связывание для
соединения I. В тестируемых условиях соединение I доказано восстанавливается в
апикальном компартменте при всех тестируемых дозах. Соединение I не обнаруживается в
базолатеральном компартменте при любой тестируемой дозе. Неспецифическое связывание
соединения I исключено. Соединение II не обнаруживается в любом компартменте. На
Фигуре 55 описаны данные, получены в исследовании стабильности для соединения I и
соединения П. Оба соединения доказано являются стабильными в тестируемых условиях:
HBSS буфер (2% ДМСО конечная концентрация) при 37°С в течение 60 и 120 минут. На
Фигурах 56а-56е представлены данные, полученные в исследовании двунаправленной
139
проницаемости для соединения I. Это соединение не проходит через монослой клеток. В исследовании транспорта с апикального в базолатеральном направлении соединение I не обнаруживается в получающем компартменте как через 60 минут, так и через 120 минут, в то время как возрастающие концентрации соединения II были обнаружены после окончания эксперимента в базолатеральный компартменте. Процентные значения прохождения соединения II описаны в таблице. После окончания эксперимента транспорта с апикального в базолатеральном направлении, в апикальном компартменте наблюдали низкий перенос соединения I, в то время как были обнаружены повышенные концентрации соединения II (высокий перенос). Возрастающие концентрации соединения II через 120 минут в апикальном компартменте могут быть объяснены присутствием вне- и внутриклеточных эстераз в Сасо-2 клетках, способных деэстерифицировать соединения (Kern и др. J. Agric. Food Chem. 51: 7884-7891 (2003)). При исследовании транспорта с базолатерального в апикальном направлении соединение I не обнаружено в получающем компартменте, в то время как были обнаружены низкие соединения П. Таким образом, соединение I, вероятно, переносится и транспортируется в виде соединения II через Сасо-2 монослой. На Фигурах 57а-57е представлены данные, полученные в исследовании двунаправленной проницаемости для соединения П. Это соединение проявило высокое процентное соотношение прохождения с апикального в базолатеральном направлении и низкую скорость проницаемости с базолатерального в апикальный компартмент. Рассчитывали Рарр, поскольку концентрация в донорных компартментах была известна. Соединение II имеет хорошее пассивное прохождение через Сасо-2 монослой. Утечки не обнаруживали. На Фигурах 58а-58с представлены данные, полученные в исследовании ингибирования, в котором монослой Сасо-2 клеток предварительно обрабатывали с помощью 10 мМ Gly-Sar (для насыщения PepTl переносчик). Соединение I не было обнаружено в получающем компартменте, в то время как наблюдали прохождение соединения П. Процентные значения прохождения не являются линейными в этом эксперименте.
Обсуждение
В этом исследовании оценивали и исключали неспецифическое связывание соединения I в тестируемой системе Сасо-2 клеток (без клеток). Соединение I было стабильным в тестируемых условиях. Превращение соединения I в соединение II оценивали и подтверждали в исследовании двунаправленной проницаемости. Соединение I не проходит через монослой клеток в тестируемых условиях. Таким образом, вероятно, соединение I переносится и транспортируется в виде деэстерифицированного соединения II через монослой Сасо-2 клеток.
В исследовании двунаправленной проницаемости соединение II проявило хорошее пассивное прохождение через монослой Сасо-2 клеток. Не было обнаружено подтверждений того, что соединение II может быть субстратом для эффлюксного переносчика.
Тестирование с предварительной обработкой с помощью Gly-Sar (для насыщения PepTl переносчика) показало отсутствие прохождения соединения I и норму прохождения соединения П. Вероятно, транспорт соединения I через монослои Сасо-2 клеток не опосредуется PepTl.
Эти эксперименты указывают на то, что абсорбция соединения I и его солей в
кишечнике не опосредуется белковым Peptl переносчиком. Вместо этого, вышеприведенные
результаты свидетельствует о том, что соединение I деэстерифицируется с помощью
окружающих эстераз в тонком кишечнике и впоследствии пассивно проникает через
эпителий тонкого кишечника. Это соединение I и его соли не являются субстратами для
Peptl, что является неожиданным и фармакологически благоприятным свойством. Peptl
является рН-независимым со-переносчиком, для которого известно опосредование абсорбции
различных сложных эфиров валината, как описано, например, в Vig и др., Adv. Drug Deliv.
Rev. 65:1370-1385 (2013), раскрытие которой включено в настоящую заявку путем ссылки.
Peptl проявляет широкую субстратную специфичность, что подтверждается структурным
разнообразием соединений, которые транспортируются через кишечный эпителий с
помощью этого белка. Неожиданно, несмотря на присутствие функциональных групп
сложного эфира валината, соединение I и его соли не зависят от этого переносчика для
141
абсорбции через эпителий тонкого кишечника. Это является благоприятным свойством, так как Соединение I и его соли таким образом не конкурируют с природными субстратами Peptl, например, пептидными питательными веществами, за связывание и транспорт с помощью этого белка. Предпочтительно, соединение I и его соли превращаются in vivo в форму, которая легко абсорбируется способом, независимым от энергии и локального протонного градиента. Это является неожиданным свойством, связанным с высокой водной растворимостью соединения I и его солей, что совместно обеспечивает благоприятный фармакокинетический профиль, благодаря которому эти терапевтические средства легко растворяются в водной окружающей среде и, в свою очередь, превращаются в форму, способную к независимой от переносчика абсорбции.
Пример 5. Комбинированная терапия, включающая дополнительное токолитическое средство
Соединение I или его соль, например, соединение III, могут вводиться субъекту, например, человеку, в комбинации с одним или более дополнительными средствами, например, антагонистом рецептора окситоцина, бетамиметиком, блокатором кальциевых каналов, магниевой солью, или донором оксида азота, например, для уменьшения частоты маточных сокращений и для задержки начала родов.
Квалифицированный специалист в данной области техники может вводить соединение
I или его соль, например, соединение III, одновременно с, в виде смеси с, или отдельно от
антагониста рецептора окситоцина. Типичные антагонисты рецептора окситоцина для
применения в сочетании с композициями и способами согласно изобретению включают
атосибан, ретосибан, барусибан, эпельсибан и ноласибан, или его вариант, препарат,
кристаллическую форму, или производное. Например, соединение I или его соль, например,
соединение III, может вводиться перед, после, или одновременно с ноласибаном, или его
вариантом, препаратом, кристаллической формой, или производным, для задержки начала
родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня
до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,
142
22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, квалифицированный специалист в данной области техники может вводить соединение I или его соль, например, соединение III, одновременно с, в виде смеси с, или отдельно от бетамиметика, например, бетамиметиком, описанным в настоящей заявке. Например, соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или одновременно с бетамиметиком, описанным в настоящей заявке или известным в данной области для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, квалифицированный специалист в данной области техники может вводить соединение I или его соль, например, соединение III, одновременно с, в виде смеси с, или отдельно от блокатора кальциевых каналов, например, блокатором кальциевых каналов, описанным в настоящей заявке. Например, соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или одновременно с блокатором кальциевых каналов, описанным в настоящей заявке или известным в данной области для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, квалифицированный специалист в данной области
техники может вводить соединение I или его соль, например, соединение III, одновременно с,
в виде смеси с, или отдельно от магниевой соли, например, сульфатом магния. Например,
соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или
одновременно с сульфатом магния для задержки начала родов у субъекта, например, на один
или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30
143
дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, квалифицированный специалист в данной области техники может вводить соединение I или его соль, например, соединение III, одновременно с, в виде смеси с, или отдельно от донора оксида азота, например, нитроглицерина. Например, соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или одновременно с нитроглицерином для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Дополнительно или альтернативно, квалифицированный специалист в данной области техники может вводить соединение I или его соль, например, соединение III, одновременно с, в виде смеси с, или отдельно от прогестерона или его производного или варианта, например, производным или вариантом, описанным в настоящей заявке или известным в данной области техники. Например, соединение I или его соль, например, соединение III, может вводиться перед, после, или одновременно с прогестероном или его вариантом или производным, описанным в настоящей заявке или известным в данной области для задержки начала родов у субъекта, например, на один или больше дней или недель, например, от около 1 дня до около 16 недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, или 30 дней, или около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, или 16 недель).
Пример 6. Токолитические эффекты соединения I и их фармацевтически приемлемых солей в комбинации с нифедипином и атосибаном на моделях преждевременных родов у мышей
Для исследования терапевтических эффектов соединения I в комбинации с
блокатором кальциевых каналов или антагонистом рецептора окситоцина на животных
моделях преждевременных родов, первобеременных мышей CD-I лечили с помощью
установленных индукторов родов в раннем гестационном возрасте 17 дней и после этого
144
вводили различные дозы хлоридной соли соединения I (соединение III; 10 мг/кг, 30 мг/кг, или
100 мг/кг, каждое вводили перорально) отдельно или в комбинации с нифедипином (5 мг/кг,
вводимым перорально) или атосибаном (300 мг/кг, вводимым подкожно). Токолитические
эффекты оценивали путем измерения времени от индукции до рождения первого малыша для
каждой мыши в леченной и контрольных группах, времени от времени индукции до
завершения родов для всех мышей в каждой группе, и жизнеспособность потомков среди
мышей в каждой группе. Индукторами преждевременных родов, используемых в этом
исследовании, были RU486 (также обозначаемый как мифепристон), стероидный
антипрогестин, который способствует раскрытию шейки матки и стимулирует усиление
сократительной способности матки и чувствительность к простагландинам, и
липополисахарид (LPS), медиатор воспаления.
Для индукции родов в раннем гестационном возрасте, единичную дозу RU486 вводили
каждой мыши подкожно в количестве 2,5 мг/кг (t=0). Мыши, леченные с помощью LPS,
получали единичную внутри брюшинную инъекцию LPS в количестве 2 мг/кг (t=0). Атосибан
вводили CD-I мышам путем подкожной инъекции в дозе 300 мг/кг в два различных сайта.
Эти инъекции осуществляли в 5 часов (t=5) и 29 часов (t=29) после лечения с применением
индуцирующего агента RU486 или LPS. Нифедипин вводили CD-I мышам перорально в дозе
5 мг/кг через 5 часов (t=5), 19 часов (t=19), 29 часов (t=29), и 43 часов (t=43) после лечения с
применением индуцирующего агента RU486 или LPS. Соединение III вводили CD-I мышам
перорально в дозе либо 10 мг/кг, 30 мг/кг, или 100 мг/кг через 5 часов (t=5), 19 часов (t=19),
29 часов (t=29), и 43 часов (t=43) после лечения с применением индуцирующего агента
RU486 или LPS. После индукции с применением RU486 или LPS и последующего введения
атосибана, нифедипина и/или соединения III, группы мышей подвергали непрерывному
визуальному контролю для оценки времени, прошедшего между индукцией и рождения
первого малыша для каждой мыши, а также пропорции мышей в каждой группе, в которых
наступали роды в зависимости от времени. Жизнеспособность рожденных плодов в каждой
группе оценивали с помощью гидростатической легочной жизненной пробы.
Способность RU486 и LPS индуцировать преждевременные роды была подтверждена,
145
так как лечение CD-I мышей с помощью RU486 в гестационном возрасте 17 дней приводило к среднему времени родов около 21 часов после индукции (t=21; рассчитанное среднее значение=21 ± 1,00 час), в то время как CD-I мыши, леченные с помощью LPS, в гестационном возрасте 17 дней проявляли среднее время родов около 26 часов после индукции (t=26; рассчитанное среднее значение=26 ± 2,34 часов). В отличие от этого, роды в срок у CD-I мышей происходят в гестационном возрасте от около 19 дней до около 21 дней, более чем через 50 часов после 17 дня гестации. Среди мышат, рожденных от мышей, получавших RU486, 96% родились живыми, и 48% мышат, рожденных от мышей, леченных с помощью LPS, родились живыми (Фигуры 60 и 61). 3% мышей, леченных с помощью RU486, были исключены из этого исследования вследствие смерти или умерщвления во время исследования; 34% мышей, леченных с помощью LPS, были исключены из этого исследования вследствие смерти или умерщвления во время исследования.
Во время исследования, было показано, что лечение с применением нифедипина отдельно индуцирует существенное повышение среднего времени до родов по сравнению с наполнителем (23,53 ± 0,99 часов относительно 21,19 ± 1,00 часа; Фигура 65) у мышей, леченных с помощью RU486. Лечение с применением нифедипина отдельно дополнительно способствует повышению среднего времени до родов и существенно повышает фракционную жизнеспособность потомков у мышей, леченных с помощью LPS, по сравнению с наполнителем (90,39% ± 5,34% относительно 48,20% ± 16,45%; Фигуры 68 и 69). Введение атосибана сходно приводит к повышению среднего времени до родов у мышей, леченных с помощью LPS (Фигура 70).
Было обнаружено, что соединение III способствует повышению среднего времени до
родов по сравнению с наполнителем у мышей, леченных с помощью RU486 (Фигуры 65 и
67). В особенности, мыши, леченные с помощью RU486, которым вводили соединение III
перорально в дозе 30 мг/кг и 100 мг/кг, проявляли повышение время до родов по сравнению с
наполнителем (р=0,0871 и р=0,0601, соответственно). Дополнительно, введение соединения
III мышам, леченным с помощью LPS, приводит к дозозависимому повышению
фракционированной жизнеспособности потомков (69,41% ± 15,76% жизнеспособности,
146
наблюдаемой в ответ на введение 100 мг/кг соединения III относительно 48,20% ± 16,45% наблюдаемой в ответ на введение наполнителя; Фигура 68).
Комбинация нифедипина и соединения III приводила к особенно выраженному токолитическому эффекту (Фигуры 65 и 69). Пероральное введение нифедипина (5 мг/кг) и соединения III (100 мг/кг) мышам, леченным с помощью RU486, приводила к очевидному синергетическому эффекту, так как эта комбинация индуцирует существенное повышение среднего времени до родов по сравнению с наполнителем (27,91 ± 0,35 часов относительно 21,19 ± 1,00 часов), такая же дозировка нифедипина отдельно (27,91 ± 0,35 часов относительно 23,53 ± 0,99 часов), и такая же дозировка соединения III отдельно (27,91 ± 0,35 часов относительно 23,70 ± 0,60 часов). Дополнительно, пероральное введение нифедипина (5 мг/кг) и соединения III (10 мг/кг) мышам, леченным с помощью LPS, приводила к существенному повышению среднего времени до родов относительно группы, леченной с применением 10 мг/кг соединения III отдельно (31,01 ± 1,89 часов относительно 23,98 ± 0,66 часов). Пероральное введение 10 мг/кг соединения III в комбинации с 5 мг/кг нифедипина также способствует повышению жизнеспособности рожденных плодов у мышей, леченных с помощью LPS, по сравнению с мышами, которым вводили такую же дозировку соединения III отдельно (94,23% ± 3,68% относительно 57,90% ± 14,89%) и относительно мышей, которым вводили наполнитель отдельно (94,23% ± 3,68% относительно 48,20% ± 16,45%; Фигура 68).
Комбинация атосибана и соединения III дополнительно потенцирует токолитический эффект каждого соединения, используемого отдельно. Подкожное введение атосибана (300 мг/кг) и пероральное введение соединения III (100 мг/кг) мышам, леченным с помощью LPS, индуцирует существенное повышение среднего времени до родов относительно мышей, которым вводили наполнитель отдельно (33,23 ± 2,95 часов относительно 26,17 ± 1,98 часов) и относительно мышей, которым вводили такую же дозировку атосибана отдельно (33,23 ± 2,95 часов относительно 28,41 ± 2,99 часов; Фигура 71). Эта комбинация также проявляет свойство повышать фракционную жизнеспособность потомков по сравнению с мышами,
которых лечили наполнителем отдельно, такой же дозировкой атосибана отдельно, или такой же дозировкой соединения III отдельно (Фигура 70).
Это исследование дополнительно иллюстрирует токолитический эффект соли FP антагониста соединения I на двух различных животных моделях преждевременных родов и подтверждает применение соединения I и его соли для лечения и предотвращения преждевременных родов независимо от биохимической этиологии, лежащей в их основе. Это исследование дополнительно поддерживает применение FP антагонистов, например, соединения I и его солей (например, соединения III) в комбинации по отдельности с антагонистом кальциевых каналов и антагонистом рецептора окситоцина для предотвращения преждевременных родов. Применение соединения III в комбинации по отдельности с нифедипином и атосибаном существенно превышает терапевтические эффекты индивидуальных компонентов, и демонстрирует, что соединение I и его соли, например, соединение III, может синергизировать с дополнительными токолитическими средствами.
Пример 7. Токолитические эффекты соединения П в комбинации с нифедипином, атосибаном и ноласибаном на образцах ткани человека
Для исследования терапевтических эффектов соединений II, активного метаболита
соединения I и его солей (таких как соединение III), в комбинации с антагонистами рецептора
окситоцина и блокаторами кальциевых каналов, биопсии эндометрия получали от родивших
в срок, преждевременно родивших женщин, которых родоразрешали путем кесарево сечения.
Одной из целей этого исследования было охарактеризовать эффекты соединения II, отдельно
и в комбинации с дополнительными токолитическими средствами, на частоту, амплитуду
пика и продолжительность сокращений миометрия, а также на роботу, выполненную на
сокращение, и общую работу, выполненную при всех сокращениях. Для этого, эксперименты
осуществляли с использованием DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTS(tm)) в
оксигенированном растворе Кребса с программным обеспечением ADI Powerlab, которое
облегчает одновременное измерение многих препаратов мышц параллельно.
Эксперименты на биопсиях эндометрия инициировали путем предоставления
148
возможности сокращений гладким мышцах для установления исходных значений в течение
по меньшей мере 20 минут. После этого периода времени, записывали исходные измерения
частоты самопроизвольных сокращений, амплитуды пика, продолжительности, работу,
выполненную на сокращение, и общую работу, выполненную при всех сокращениях. После
этого, образцы биопсии эндометрия обрабатывали с помощью ДМСО контроля, соединения
II, атосибана, нифедипина, комбинации соединения II и атосибана, или комбинации
соединения II и нифедипина. После этого измеряли эффекты этих агентов на частоту,
амплитуду, и продолжительность, а также на роботу, выполненную при сокращении
миометрия, в течение последующего 10-ти минутного периода. Затем образцы миометрия
загружали путем добавления возрастающих концентраций вещества, стимулирующего
сокращения, например, окситоцина, PGF2a, или PGE2, в течение последовательных 10-ти
минутных интервалов, и измеряли частоту сокращений, амплитуду пика, продолжительность,
работу, выполненную на сокращение, и общую работу, выполненную при всех сокращениях,
соответственно. Окситоцин, PGF2a, и PGE каждый представляет собой различные
модуляторы сократительной способности матки и преждевременных родов. Окситоцин
непосредственно индуцирует сокращение маточного миометрия и повышает синтез и
высвобождение сократительных простагландинов из маточного эндометрия и децидуальной
оболочки. Окситоцин также вовлечен в способствование продукции простагландинов в
клетках миометрия посредством потенцирования циклооксигеназы 2 (СОХ-2). Было
показано, что простагландины PGF2a и PGE2 индуцируют измерения цервикального канала и
возбуждают сократительную способность матки, два ключевых события в физиологии родов
и родоразрешения. Активация FP рецептора в миометрии человека с помощью PGF2a
приводит к повышению внутриклеточной концентрации кальция, что, в свою очередь,
приводит к сокращению гладкомышечных клеток матки. Таким образом, другой целью
исследования было оценить способность соединения II ослаблять сократительную активность
матки, индуцированную тремя различными биохимическими средствами.
Результаты этих экспериментов свидетельствуют о том, что соединение II отдельно
способно подавлять, как РСР2а-индуцированную, так и ОТ-индуцированную
149
сократительную способность миометрия в зависимости от дозы (Фигуры 72 и 73). Кроме того, в данном случае было открыто, что соединение II проявляет неожиданный синергетический эффект на уменьшение сократительной способности миометрия при использовании в комбинации с антагонистом рецептора окситоцина атосибаном (Фигура 76) и блокатором кальциевых каналов нифедипином (Фигура 78). Неожиданно, дозы соединения II, которые проявляют более низкую эффективность для уменьшения сократительной способности миометрия, при использовании при отсутствии дополнительного токолитического средства (такие как 60 нМ, Фигуры 72 и 73) проявляют сильное повышение ингибирующей активности при комбинировании с атосибаном (Фигура 76) и нифедипином (Фигура 78). Аналогичным образом, было обнаружено, что дозы атосибана (6 нМ, Фигуры 74 и 75) и нифедипина (6 нМ, Фигура 77) являются субоптимальными для уменьшения сократительной способности миометрия при использовании при отсутствии соединения II, проявляют неожиданное повышение протисократительной эффективности при комбинировании с соединением II (Фигуры 76 и 78). Эти данные свидетельствуют о том, что соединение II способно синергизировать с дополнительными токолитическими средствами, например, антагонистами рецептора окситоцина и блокаторами кальциевых каналов, для подавления сократительной активности матки, что может приводить к преждевременным родам.
Дополнительно к подавлению сократительной способности миометрия,
токолитические эффекты соединения II также подтверждают способность этого средства
ослаблять экспрессию нижерасположенных провоспалительных генов в биопсиях эндометрия
и амиона человека (Фигуры 79 и 80). Вестерн-блоты осуществляли для характеристики
способности соединения II, отдельно и в комбинации с дополнительными токолитическими
средствами, модулировать экспрессию различных белков в образцах миометрия и амниона,
выделенных из родивших в срок, преждевременно родивших женщин, которых
родоразрешали путем кесарево сечения. Результаты этих исследований свидетельствуют о
том, что соединение II способно уменьшать экспрессию различных провоспалительных
белков, и проявляет неожиданный синергизм при использовании в комбинации с
150
ноласибаном относительно уменьшения экспрессии СОХ-2.
В совокупности, данные, полученные из этих экспериментов, свидетельствуют о том, что соединение II способно подавлять активность гладких мышц, которая может приводить к преждевременным родам, что индуцируется различными модуляторами сократительной способности матки. Кроме того, соединение II проявляет неожиданный синергетический эффект по отношению к ослаблению маточных сокращений при использовании в комбинации с антагонистами рецептора окситоцина и блокаторами кальциевых каналов. Этот синергизм проявляется как на уровне активности гладких мышц, таких и на уровне уменьшения экспрессии провоспалительного гена в биопсиях миометрия и амниона, и проявляют различные преимущества, обеспечения соединения II в комбинации с одним или несколькими дополнительными токолитическими средствами субъекту, нуждающемуся в лечении, например, субъекту, у которого начинаются или есть риск развития преждевременных родов.
Другие варианты реализации
Все публикации, патенты и патентные заявки, указанные в настоящей заявке, включены в нее в качестве ссылки таким образом, если бы каждая независимая публикация или патентная заявка была специфически и индивидуально включена в качестве ссылки.
Несмотря на то, что изобретение было описано с использованием его специфических вариантов реализации, подразумевается, что возможны дальнейшие модификации и настоящее описание предназначено для того, чтобы охватывать любые вариации, применения или адаптации изобретения, следуя, в целом, принципам изобретения и включая такие отклонения от изобретения, которые подпадают под известную или общепринятую практику в области, к которой относится изобретение, и могут применяться в существенным характерным признакам, изложенным ранее в настоящей заявке, и в дальнейшем, охватываются объемом пунктов формулы изобретения.
Другие варианты реализации охватываются пунктами формулы изобретения.
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что указанное соединение представлено формулой (Ш).
3. Соединение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что указанное соединение связывается с рецептором F2a простагландина человека с аффинностью около 1 нМ.
4. Соединение по любому из пп. 1-3, отличающееся тем, что указанное соединение растворимо в водном растворе при концентрации от около 300 мкг/мл до около 500 мкг/мл.
5. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что указанное соединение растворимо в водном растворе при концентрации около 380 мкг/мл.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что указанное соединение ингибирует синтез инозитол трифосфата в клетке.
7. Соединение по п. 6, отличающееся тем, что указанная клетка представляет собой клетку млекопитающего.
8. Соединение по п. 7, отличающееся тем, что указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку человека.
9. Соединение по п. 8, отличающееся тем, что указанная клетка человека представляет собой клетку миометрия.
10. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что указанная клетка миометрия представляет собой маточный миоцит.
11. Соединение по любому из пп. 1-10, отличающееся тем, что указанное соединение уменьшает амплитуду маточных сокращений у субъекта после введения указанного соединения указанному субъекту.
12. Соединение по п. 11, отличающееся тем, что указанное уменьшение составляет от около 40% до около 50% относительно измерения амплитуды маточных сокращений в указанного субъекта, записанных перед указанным введением.
13. Соединение по любому из пп. 1-12, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет период полувыведения от около 1 часа до около 4 часов в указанного субъекта.
4.
14. Соединение по любому из пп. 1-13, отличающееся тем, что указанное соединение достигает максимальной концентрации в плазме в указанного субъекта в течение от около 0,25 часа до около 2 часов после указанного введения указанному субъекту.
15. Соединение по любому из пп. 11-14, отличающееся тем, что указанным субъектом является млекопитающее.
16. Соединение по п. 15, отличающееся тем, что указанным млекопитающим является человек.
17. Соединение по п. 15, отличающееся тем, что указанным млекопитающим является собака.
18. Соединение по п. 15, отличающееся тем, что указанным млекопитающим является крыса.
19. Соединение по любому из пп. 11-18, отличающееся тем, что указанное введение является пероральным.
20. Соединение по любому из пп. 11-18, отличающееся тем, что указанное введение является внутривенным.
21. Соединение формулы (III)
где указанное соединение находится в кристаллической форме.
22. Соединение по п. 21, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет характеристические пики порошковой рентгеновской дифракции при около 7,0° 29, около 8,1° 29, около 10,0° 29, около 20,1° 29, около 21,0° 29 и около 23,5° 29.
23. Соединение по п. 22, отличающееся тем, что указанное соединение дополнительно проявляет пики порошковой рентгеновской дифракции при около 12,0° 29, около 13,1° 29, около 14,1° 29, около 16,4° 29, около 18,4° 29, и около 29,5° 29.
24. Соединение по любому из пп. 21-23, отличающееся тем, что указанное соединение характеризуется спектром порошковой рентгеновской дифракции, по существу таким, как изображено на любой из Фиг. 19, 22, 29, 45-49 и 54.
25. Соединение по п. 24, отличающееся тем, что указанное соединение характеризуется спектром порошковой рентгеновской дифракции, по существу таким, как изображено на Фиг. 49.
26. Соединение по любому из пп. 21-25, отличающееся тем, что что указанное соединение проявляет пики *H ядерного магнитного резонанса (ЯМР), центрированные при около 1,1 м.д., около 3,3 м.д., около 4,9 м.д., около 5,4 м.д., около 7,1 м.д., около 7.7 м.д., около 7,9 м.д. и около 8,0 м.д..
27. Соединение по любому из пп. 21-26, отличающееся тем, что указанное соединение характеризуется *H ЯМР спектром, по существу таким, как изображено на Фиг. 21.
28. Соединение по любому из пп. 21-27, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет эндотерму при от около 145° С до около 147° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии.
22.
29. Соединение по п. 28, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет дополнительную эндотерму при около 214° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии.
30. Соединение по п. 29, отличающееся тем, что указанное соединение характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу такой, как изображено на Фиг. 30.
31. Соединение по п. 28, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет дополнительную эндотерму при около 228° С, как измеряется с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии.
32. Соединение по п. 31, отличающееся тем, что указанное соединение характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу такой, как изображено на Фиг. 33.
33. Соединение по любому из пп. 21-32, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет потерю веса при около 0,2% до около 0,6% при нагревании от 25° С до 100° С, как измеряется с помощью термогравиметрического анализа.
34. Соединение по любому из пп. 21-33, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет потерю веса при около 2,5% до около 3,5% при нагревании от 100° С до 160° С, как измеряется с помощью термогравиметрического анализа.
35. Соединение по любому из пп. 21-34, отличающееся тем, что указанное соединение проявляет кривую термогравиметрического анализа, по существу такую, как изображено на Фиг. 24.
36. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп. 1-35.
37. Фармацевтическая композиция по п. 36, отличающаяся тем, что указанная фармацевтическая композиция содержит одно или более вспомогательных веществ.
156
38. Фармацевтическая композиция по п. 36 или 37, отличающаяся тем, что указанное соединение имеет чистоту по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 99,9%.
39. Фармацевтическая композиция по п. 38, отличающаяся тем, что указанную чистоту определяют путем высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
40. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 36-39, отличающаяся тем, что указанное соединение или фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для перорального введения субъекту.
41. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 36-40, отличающаяся тем, что указанное соединение или фармацевтическая композиция представляет собой таблетку, капсулу, желатиновую капсулу, порошок, жидкий раствор или жидкую суспензию.
42. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 36-39, отличающаяся тем, что указанное соединение или фармацевтическая композиция приготовлено (а) в виде препарата для внутривенного введения субъекту.
43. Способ синтеза соединения формулы (I)
38.
или его фармацевтически приемлемой соли, где указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV)
с предшественником формулы (V)
с образованием сложного аминоэфира, где X представляет собой защитную группу, и где указанный способ дополнительно включает снятие защиты со сложного аминоэфира.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что указанное соединение представлено формулой (Ш).
(Ш)
45. Способ по п. 43 или 44, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие указанного аминоэфира с реагентом, способным снять защиту со сложного эфира.
46. Способ по любому из пп. 43-45, отличающийся тем, что указанную защитную группу выбирают из группы, включающей й^ети-бутоксикарбонил, тритил, 4-монометокситритил, 4-метилтритил, 3,5-диметоксифенилизопропоксикарбонил, 2-(4-бифенил)изопропоксикарбонил, 2-нитрофенилсульфенил, 9-флуоренилметоксикарбонил, 2-(4-нитрофонеилсульфонил)этоксикарбонил, (1,1-диоксобензо[Ь]тиофен-2-ил)метоксикарбонил, 1 -(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогекс-1 -илиден)-3-метилбутил, 2,7-ди-йфети-бутил-9-флуоренилметоксикарбонил, 2-фтор-9-флуоренилметоксикарбонил, 2-моноизооктил-9-флуоренилметоксикарбонил, 2,7-диизооктил-9-флуоренилметоксикарбонил, тетрахлорфталоил, 2-[фенил(метил)сульфонио]этилоксикарбонил тетрафторборат, этансульфонилэтоксикарбонил, 2-(4-сульфофенилсульфонил)этоксикарбонил, бензилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, о-нитробензолсульфонил, 2,4-динитробензолсульфонил, бензотиазол-2-сульфонил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, дитиасукциноил, и-нитробензилоксикарбонил, а-азидокислота, пропаргилоксикарбонил, 9-(4-бромфенил)-9-флуоренил, азидометоксикарбонил, гексафторацетон, 2-хлорбензилоксикарбонил, трифторацетил, 2-(метилсульфонил)этоксикарбонил, фенилдисульфанилэтилоксикарбонил и 2-пиридилдисульфанилэтилоксикарбонил.
47. Способ по п. 45 или 46, отличающийся тем, что указанный реагент выбирают из
группы, включающей метансульфоновую кислоту, хлористоводородную кислоту,
трифторуксусную кислоту, уксусную кислоту, пиперидин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-
ен, морфолин, гексаметиленимин, аммоний, диэтиламин, пиперазин, трис(2-аминоэтил)амин,
гидразин, 1 -метилпирролидин, гидрокарбонат натрия, гидроксид натрия, гидроксид бария,
карбонат натрия, молекулярный водород, бромистоводородную кислоту, трибромид бора,
тетракис(трифенилфосфин)палладий, тиофенол, Р-меркаптоэтанол, 2-меркаптоуксусную
кислоту, алюминиевый сплав, цинк, фосфорноватистую кислоту, борогидрид натрия, N-
159
меркаптоацетамид, хлорид олова (II), триметилфосфин, трибутилфосфин, трифенилфосфин, бензилтриэтиламмоний тетратиомолибдат, ацетат палладия (II), фтористоводородную кислоту, триметилсилил хлорид, триметилсилил трифторметансульфонат и трифторметансульфоновую кислоту.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанная защитная группа представляет собой ттфети-бутоксикарбонил и указанный реагент выбирают из группы, включающей метансульфоновую кислоту, хлористоводородную кислоту и трифторуксусную кислоту.
49. Способ по п. 48, отличающийся тем, что указанный реагент представляет собой метансульфоновую кислоту.
50. Способ по п. 43 или 44, отличающийся тем, что указанный способ включает воздействие электромагнитного излучения на сложный аминоэфир.
51. Способ по любому из пп. 43, 44 и 50, отличающийся тем, что указанную защитную группу выбирают из группы, включающей о-нитробензилоксикарбонил, 4-нитровератрилоксикарбонил, 2-(2-нитрофенил)пропилоксикарбонил и 2-(3,4-метилендиокси-6-нитрофенил)пропилоксикарбонил.
52. Способ по п. 50 или 51, отличающийся тем, что указанное электромагнитное излучение характеризуется длиной волны от около 300 до около 400 нм.
53. Способ по любому из пп. 43-52, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и диимидом.
54. Способ по п. 53, отличающийся тем, что указанный диимид выбирают из группы, включающей 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид и NJV-диизопропилкарбодиимид.
48.
ОН (VI)
55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что указанный диимид представляет собой 1-этил-3 -(3 - диметиламинопропил)карбодиимид.
56. Способ по любому из пп. 43-55, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и производным бензотриазола
57. Способ по п. 56, отличающийся тем, что указанное производное бензотриазола выбирают из группы, включающей 1-гидроксибензотриазол, 6-хлор-1-гидроксибензотриазол и 1-гидрокси-7-азабензотриазол.
58. Способ по п. 57, отличающийся тем, что указанное производное бензотриазола представляет собой 1 -гидроксибензотриазол.
59. Способ по любому из пп. 43-58, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (IV) с предшественником формулы (V) и основанием.
60. Способ по п. 59, отличающийся тем, что указанное основание представляет собой ЛуУ-диметиламинопиридин.
61. Способ по любому из пп. 43-60, отличающийся тем, что указанный способ включает синтез предшественника формулы (IV), путем взаимодействия предшественника формулы (VI)
с предшественником формулы (VII).
62. Способ по п. 61, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (VI) с предшественником формулы (VII) и одним или большим количеством оснований.
63. Способ по п. 62, отличающийся тем, что указанное одно или большее количество оснований выбирают из группы, включающей диизопропилэтиламин, триэтиламин и NJV-диметиламинопиридин.
64. Способ по п. 63, отличающийся тем, что указанный способ включает взаимодействие предшественника формулы (VI), с предшественником формулы (VII), диизопропилэтиламином и 7У,Л^-диметиламинопиридином.
65. Способ получения соединения формулы (III),
(Ш)
где указанный способ включает смешивание соединения формулы (I)
с хлористоводородной кислотой.
66. Способ по п. 65, отличающийся тем, что указанная хлористоводородная кислота представляет собой водную хлористоводородную кислоту.
67. Способ по п. 65 или 66, отличающийся тем, что указанный способ включает получение указанного соединения формулы (III) в кристаллическом состоянии.
68. Способ по любому из пп. 65-67, отличающийся тем, что указанный способ включает растворение указанного соединения формулы (I) в этаноле.
69. Способ по любому из пп. 65-68, отличающийся тем, что указанный способ включает смешивание указанной хлористоводородной кислоты с этанолом.
70. Способ по п. 69, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает смешивание указанной хлористоводородной кислоты с этилацетатом.
71. Способ по любому из пп. 65-70, отличающийся тем, что указанный способ включает добавление указанного соединения формулы (I) к указанной хлористоводородной кислоте в течение периода от около 20 до около 30 минут с образованием смеси.
66.
72. Способ по п. 71, отличающийся тем, что указанный способ включает поддержание температуры указанной смеси на уровне от около 15° С до около 25° С во время указанного добавления.
73. Способ по п. 72, отличающийся тем, что указанный способ включает уменьшение температуры указанной смеси до около 5° С после указанного добавления.
74. Способ по п. 73, отличающийся тем, что указанный способ включает перемешивание указанной смеси в течение от около 50 минут до около 70 минут при температуре от около 0° С до около 5° С после указанного уменьшения.
75. Способ по любому из пп. 65-74, отличающийся тем, что указанное соединение формулы (I) и указанную хлористоводородную кислоту смешивают в эквимолярных количествах.
76. Соединение, полученное с помощью способа по любому из пп. 43-75.
77. Способ лечения или предотвращения преждевременных родов у субъекта, отличающийся тем, что указанный способ включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-35 или фармацевтической композиции по любому из пп. 36-42.
78. Способ предотвращения преждевременных родов перед родоразрешением путём кесарева сечения у субъекта, отличающийся тем, что указанный способ включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-35 или фармацевтической композиции по любому из пп. 36-42.
79. Способ лечения или предотвращения дисменореи у субъекта, отличающийся тем, что указанный способ включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-35 или фармацевтической композиции по любому из пп. 36-42.
66.
80. Способ по любому из пп. 77-79, отличающийся тем, что указанный субъект характеризуется гестационным возрастом от около 24 недель до около 34 недель.
81. Способ по любому из пп. 77-80, отличающийся тем, что у субъекта проявляется уменьшение амплитуды маточных сокращений после указанного введения.
82. Способ по п. 81, отличающийся тем, что указанное уменьшение составляет от около 40% до около 50% относительно измерения амплитуды маточных сокращений в указанного субъекта, записанных перед указанным введением.
83. Способ по любому из пп. 77-82, отличающийся тем, что указанное соединение проявляет период полувыведения от около 1 часа до около 4 часов в указанного субъекта.
84. Способ по любому из пп. 77-83, отличающийся тем, что указанное соединение достигает максимальной концентрации в плазме в указанного субъекта в течение от около 0,25 часа до около 2 часов после указанного введения.
85. Способ по любому из пп. 77-84, отличающийся тем, что указанным субъектом является млекопитающее.
86. Способ по п. 85, отличающийся тем, что указанным млекопитающим является человек.
87. Способ по любому из пп. 77-86, отличающийся тем, что указанный способ включает пероральное введение указанного соединения или фармацевтической композиции указанному субъекту.
88. Способ по любому из пп. 77-86, отличающийся тем, что указанный способ включает внутривенное введение указанного соединения или фармацевтической композиции указанному субъекту.
66.
89. Набор, включающий соединение по любому из пп. 1-35 или фармацевтическую композицию по любому из пп. 36-42 и листок-вкладыш.
90. Набор по п. 89, отличающийся тем, что указанный листок-вкладыш инструктирует пользователя указанного набора относительно введения указанного соединения или фармацевтической композиции субъекту, подверженному или имеющему риск развития преждевременных родов.
91. Набор по п. 90, отличающийся тем, что указанный субъект характеризуется гестационным возрастом от около 24 недель до около 34 недель.
92. Набор по любому из пп. 89-91, отличающийся тем, что указанный листок-вкладыш инструктирует пользователя указанного набора относительно смешивания указанного соединения или фармацевтической композиции с водным раствором.
93. Набор по любому из пп. 89-92, отличающийся тем, что указанный листок-вкладыш инструктирует пользователя указанного набора относительно перорального введения указанного соединения или фармацевтической композиции указанному субъекту.
94. Набор по любому из пп. 89-92, отличающийся тем, что указанный листок-вкладыш инструктирует пользователя указанного набора относительно внутривенного введения указанного соединения или фармацевтической композиции указанному субъекту.
66.
Фиг. 1
m О
100 -
80 -
60 - г-
исходное 0.3 1
иг/кг/мин х 10 мин. в виде в/в инфузи"
р 0 01
'. о оо: относительно группы, которой вводили наполнитель
*.р":0.05
**: рхО.01 относительно группы, которой вводили наполнитель
Метод
Hiid.no.тения
Ром.тыш ы ЯМР
Добавление раствора NaOH (Н,0) к раствору соли (СН,С1,)
Ротационное выпаривание насухо, высушивание в вакуумной печи
присутствует пик мстасульфоновой
кислоты
Добавление раствора NaOH (Н,0) к раствору соли (СН,С1,)
Желтая паста, высушивание в вакуумной печи
присутствует пик
мстасульфоновой кислоты
К раствору СН,С1, добавляли
воду
Взбалтывали вручную. Удаляли водный CH.CI. слой,
упаривали.
Твердые вещества осаждались в водном слое
Добавляли NaOH (в воде) к водной слою. Добавляли СПХ'1,, збалтывали вручную.
Клейкое твердое вещество, высушивание в вакуумной печи
Удаляли CH,С1, слой, упаривали
Паста, высушивание в вакуумной печи.
присутствует пик метаеульфоновой
кислоты
Добавление раствора NaOH (EtOH) к раствору соли (ЕЮН)
Незначительное образование осадка, белого, помещали в холодильник. Ротационное
выпаривание, высушивание в вакуумной печи.
присутствует пик мстасульфоновой кислоты
Добавление раствора NaOH
(EtOH) к раствору соли (ЕЮН) 2:1. Упаривали
Паста, высушивание в вакуумной печи.
свободное основание
Добавление раствора NaOH (ЕЮН) к раствору соли (ЕЮН) 2:1. Упаривали
Высушивание в вакуумной печи.
свободное основание
Добавление раствора NaOH (EtOH) к раствору соли (ЕЮН) 2:1. Упаривали.
Паста, высушивание в вакуумной печи.
свободное основание
Добавление водного раствора NaOH к раствору соли в СН,С1, (2:1). Упаривали.
Паста, высушивание в вакуумной печи.
свободное основание
4/127
Соль
Метод
Наблюдения
Результат ЯМР
Беенлат
Добавляли раствор кислоты к отфильтрованному раствору основания, EtOH
Прозрачный раствор, упаривали. Прозрачное стеклообразное твердое вещество, суспендированное в простом эфире. Белые, стеклообразные твердые вещества.
Бензол-сульфо-натная соль
Раствор свободного основания добавляли
к кислотной взвеси (CH2CI2)
11розрачный раствор-заморожеиный Помещали в холодильник.
Раствор кислоты добавляли к раствору основания (Ацетон)
Слегка мутный, желтоватый раствор. Очень небольшое количество твердого вещества, замороженный
Цитрат
Раствор свободного основания добавляли к кислотной взвеси (ЕЮ Ас)
Белый осадок. Суспендированное, твердое вещество становлосъ пастообразным.
Упаривали.
Раствор свободно! о основания добавляли к кислотной взвеси
(ЕЮАс)
Белый осадок, пастообразный. Помещали на орбитальный птейкер, при 50 °С, Прозрачный раствор, замороженный,
Раствор свободного основания добавляли к кислотной взвеси (ЕЮАс)
Пастообразный осадок. Раствор слегка мутный, перемешиваемый. Прозрачный раствор, белая паста. Помещали в вакуумную печь.
Белое твердое вещество, неизвестной морфологил/прозрачная стеклообразная пленка в отдельных местах. Без двойного лучепреломления
Цитратная соль
Эдисилат
Раствор свободного основания добавляли к кислотной взвеси (Ди-оксан)
Прозрачный раствор. Замороженный. Раствор отвердевал, доводили до КТ, прозрачный раствор, упаривали
Раствор кислоты (мутный-Диоксан) добавляли к раствору основания (ЕЮАс)
Без осадка. Прозрачный желтоватый раствор, замораживали. Медленно упаривали - бесцветное масло. Высушивали в вакууме при окружающей
НС1
НО в Et,0 добавляли к раствору основания в Et,0
Белый осадок, суспензию перемешивали в течение - 30 минут, ва-куумно фильтровали. Твердое вещество неизвестной морфологии, без двойного лучепреломления
НО соль
НО в Et.O добавляли к раствору основания в CH,CI,/ Et.O
Белый осадок, суспензию хранили в течение ~ 15 минут, вакуумно фильтровали Вязкообразное твердое вещество.
Добавляли ацетон, суспендировали в
течение 2 дней
НО соль
Соль
Метод
Наблюдения
Результат ЯМР
Эсилат
Добавляли кнс.нт к 1нф|1.1ыр <)1!ын11()м\ paci вор\ осноианнн. СП.О.
Прозрачный раствор, упаривали. Прозрачное стеклообразное твердое вещество, суспендированное в простом эфире. Белая пленка, похожая на твердое вещество, не имела четкой структуры, без двоимого лучепреломления.
Этансульфонатмая соль
.loftiiB.HI.in кисти Kpacitti> p\
основания, EtOAc
Сразу не образовывался осадок. Очень небольшое количество твердых веществ при перемешивании. Замораживали.
Фумарат
Paiiuop I'BIXHI шиш оснонаппя .inn;lli. llf i; t'Wlli il'.nil кис.шпл
(ацетон)
Очень небольшое количество осадка при перемешивании. Частично упаривали. Замораживали.
Глутамат
I'uciii'ip kiK.шил (11 (> ) iiniii in.in к расiвор\ основании (11.0 ЕЮН)
Вкрапления маслянистого вещества, растворитель отбрасывали, масло высушивали в атмосферной вакуумной печи.
I'ncmup кис IDILI (II О) шбав.Ея.ш к раепюр\ основания (а не юн)
Желтоватый маслянистый осадок, мутный белый раствор. Обрабатывали ультразвуком, замораживали.
Малеат
Расiвор свобо шиш основания
IllfllllL!Я. Ill К C\CIUH 11111 кис.нны
(анегоп)
Прозрачный раствор. Замораживали
Лобавля.ш кислот} красшор}
основания, ЕЮАс
С pan образовывался осадок, превращался в расiвир при перемешивании. Малое К11.ШЧСС11И1 оси IK;I. {аморажниа.ш
Мсзилат
Добавлял" кислоiy к расiвору основания в EtOH
Сра л образовывался бе ibiii осадок, перемешивали прнбл. в юченнсЗО мин Вакуумно филыровати вя жое 1вердос вещесто, промывали нроешм к]шро\!, высушивали в ваку}мс в окружающей среде Сгск гообрашый. ост
двойного лучепреломления
Мезилатная соль
Кисло у (11,0) избавляли к рас гкору основания (му гный) EtOIf
Нсзначпгсл! но \iy шый раствор Упаривали. Мелюиернисгае белое iвердое 1 ВСЩСС1В0 - вымораживали. Блше CICK.IO. aipciaiы пен шестой морфо-ioiпя, | белые Не проявляю! двпГшшо светопреломления - хранили. !
Фосфат
Добавляли кислоту к раствору основания (ацетон)
Бс> осадка. Замораживали Свсттч-жс.пос масло, высушивали в вакууме в j
окружающей среде. J
Сульфат
Кислоту (Н,0) добавляли к раствору основания в смеси Et,0 и СН,С1,
Ierepuiсиная реакция. Свепыи осадок, шпенсивио перемешивали ирибч. в течение 30 мин. белая суспензия, оаавлялн для упаривания
Сульфатная соль
Соль
Метод
Наблюдения
Pcsyu.iai Я Ml'
Гндроеуд! фат (нсполыова ш ~ 25 молярный избыток H,SO()
Кислоту (Н.О) добавляли к
раствору основания (мутный) ЕЮН
Белый осадок, суспендированный на рога юре. Прозрачный рас i нор. Смороженный. bc.iF.rii, молочный patiвор - 1ам(фажива1с.н> . Ьелые тертые пениста, к-капiпровали, помешали в вьияжной шкаф 1.гл лнарывании - 1 пёр (ыс нсшесша шкпм оорашм в ociавшннея раствор, м ро ip ичп s.iii. 15ыс\ц|ива.|ц в как-}\ме. Твердые веннеша осушались пас i ооГфашычн. Гнч двойною лучепреломления - хранили.
Кислоту (НО) отбавляли к о 1 фи ль 1 рока ином} рае гвор> основания (лшч он)
VI -. и,|) рас шор. шчорожснный. Помешали в !ачоражива!е. н> . Еве'р u,ie вещее i ва скорее все! о. вс. ie ic i пне во на в рае i воры кие.ни ы, чае i ично \ марина, in. ( .швали оставшийся paciBopine.ii,, белое iBCp тое иентсепш. Очень ме. гкие ш о. м.ча i ые крнс ia.I. на. еферо.ш i ы, двойное . 1> ченре. ига. icniie. Высмнива.ш в нак\\че. Коричневая iiaeia- хранили.
Кислоту (Н.О) добавляли к отфильтрованному раствору основания (ацетон)
Белый осадок, вязкий. Обрабатывали ультразвуком, прибл. 30 минут. Белое рыхлое твердое вещество, паста на дне сосуда. Замораживали. Рыхлые твердые вещества, мелкие игольчатые кристаллы.
Гидросульфатная соль
Тозилат
Раствор кислоты добавляли к раствору основания (мутный).
ЕЮН
Небольшое количество твердых веществ. Замороженный. Мелкие белые твердые частицы - замораживатс.ть.
Раствор кислоты добавляли к раствору основания, ЕЮАс
Без осадка. Замороженный. Медленно упаривали - бесцветное масло. Высушивали в вакууме при окружащей
Соль
Наблюдения
XRPD Результат
Ьссилат
светло-желтое твердое вещество, стеклообразное, без двойного лучепреломления
Цитрат
стеклообразное, без двойного лучепреломления
аморфный
стеклообразное, без двойного лучепреломления
неизвестной морфологии, прозрачная стеклообразная пленка без двойного лучепреломления
Эдисилат
стеклообразное, без двойного лучепреломления
аморфный
розовое стеклообразное твердое вещество, без двойного лучепреломления
Эсилат
белое стеклообразное твердое вещество, без двойного лучепреломления
Фумарат
оранжевое стеклообразное твердое вещество, без двойного лучепреломления
Глутамат
стеклообразное, без двойного лучепреломления
Малеат
белое стеклообразное твердое вещество, без двойного лучепреломления
Фосфат
белое твердое вещество, неизвестной морфологии, без двойного лучепреломления
Гидро сульфат
рыхлое твердое вещество, игольчатые кристаллы
кристаллическое X
светло-желтое масло
светло-желтое масло
Сульфат
белое твердое вещество, неизвестной морфологии, без двойного лучепреломления
(tm)
Тозилат
стеклообразное, без двойного лучепреломления
стеклообразное, без двойного лучепреломления
НС1
белое твердое вещество неизвестной морфологии, без двойного лучепреломления
Соль/ Ш
Растворитель
Мею i'
Паб )юлсния
\RIM) Pci> .ib-
образца
litl
метанол: толуол 1:2
ни юобр ыюс, чиешмип ummiov ьчиЕре юм iUfne
аморфное
ацетон: ию-пропанол 1:2
С (Ck tOOOpJ .HOC IV . [KOHHOEO IV ЧСПрС IOM icHIIM
метанол: тпш ацетат 1:2
с [(.к нюбра -нос net июшюю IS ченре юм кипя
ацетон; этил ацетат: гашш
сicк ипюрл-аюе- nei EiioHisofu ченре юм юиия
Цитрат
2:3:1
пистон: толуол
\ D
cICK lonupd > НОС a1! ЩОИНИП |\'UIJX.xniiCHII!!
этил аист a t : гептан 6:1
час ИНЕЮ с ich. )ui5U|XS iEioc 'Muii'iiiO нюннос нчепре-
ЛОМЛСИ11С i
аморфное
этил ацетат
ачюрфлое
fидросульфат
МЕЖ: и-бутил ацетат 1:1
очень ья ihvc мае к"
lil ICMHUniOL
нс СОРССМ 6c юс ibep юс вен к. ссPO CICK ккюрллюе
lie mOEIHOI\f l\4clipO ЮМ 1СПИЯ
ацеюи то i\o i 2 !
с ics ииюра> мос 6v. , iBouuoi о i\ ченре IO\I книл
( Ч !h(j Л
Mt rV H-f> \ Hi 1 iLlUdl 1 i
UCK ЧХк'рЛШОс ОС iOL 1 Ьср ЮС НС1ЦСС I КО ОС \ IKOHHOIO
i\ Чепре юм Miiiji
ML ЫНО J in no 1 2 i
cici. tooopa нос 6e ценною rysuipc ЮМ ielHM
MCI шо t )nt i anei n 1 2
ua юобрашос бе* luoniiuto is чепре юм ICIIJIH
\iuano.i. аииошприл 1.2
I iaiu!bi\i *.бра> ом на moopa ,noc с ICE sa июшюе i \ чс i ipe io4i iUEtsc
аморфное
метало: с толуол 1 2
HCIt a.ccJHOfl ЧЮрфо Ю! 1Ш Ou U-SOHHOIO !\ЧеПрСЮЧ!
ШИШ 1
Д и гидрофосфат
бе юс икр toe ЁКШСС 1во нсн ascc шон морфо км ни
Н'ОШЮе ЕЧЧСПрС ЮМ 1СШ1С
крииа I in к.скос \
боло", ipep юс вс ПК с! но ai юмерпришнные и > ас i ИНКИ шошюе 1}чепре юм кпне
нп'ко kpncia ! ш-
чеекчте X
1 ьер юе не тсс то
мстил этил ксшн: н-бутнл
высушен HOC
1'Я'МН. еьи ю л,е нос 1 вер юс ! ешеси'о
ацетат
!:!
в вакууме
Глутамат
ми i ацсии lejiiju i 1
cicb июбрашое ix i циннии о лчепрч. юм icnin
МСЫНО I IO 1\0 1 1 1
с rcк юобринос 6с > Д1АИШОЕО 14 ченре юм ILIUM
\iei лю i io i%o i i 2
с кк шопрлшос бег доимкою i\ к про юм юнпя
аиенщ iHo-jipoiunw i 1 2
с ictv (очорааюс ое-, томною i\ ченре юм ICUIIH
\ t 1К\ jO|U> ! ! 2
S| С ICK JOOOp IvIIOC ПО IKOIJIUKO I\ ЧСИрС юм киня
ни i ацеки и бч 1ил uieiar:
\ n
С Ick ЮООр J .НОе 00. !BOIJIEOt(i IS ЧсЕЕрС !(iM tclillH
То?улат
Е'смтан
MUll ! НИ I КС (OH 1С!) I II!
е!С(ч КНЧррЫЮС ОСч И.ОШЕОЕО IS ЧсЕЕрС !0M IcIiHH
aiicioii: юлуол 1:1
С Kb HH)6paiH0C OL > тонною 1\ ЧСНрч. ЮМ ICIUM
...
НС!
> ш i aneiai" iciniiH 5 !
чаинчЕкккк кнн'рытс бе IPOIHKHO i\4enpefo^i
ЛСМИЯ i
бi. IOC ISicpKiC HUUccJBO IICH {HCelliOH Мирфо IOI Itll
крнс 1 a i шческос \
lHOEiHiK 1\ЧС!^К ЮМ icEfJlC
IK Юе I licp EOe Kclllcc JBO Hell tlli.c EH01I МОрфо IOI 111!
крис i а г шческос Ч
ацетон: толуол 1:1
lEioitnne i4 ченре !ом Есние
Еф: CH?CI,
I i
ai iOMt.piib! HI о loiaib \ i^piicia i юк шопние i\4ciipc-
kpncia 1 ШЧССЕЧО^ Ч
лом.тсние s
ацетон
Ei fSCCb 2 i
VK. KK pi.!\ IOC IKi.p bei.Ht.UEiO lOiikllt Hi о 1ьчан 1С
крии ! s ш донное 1\чепре юм 'енне
крис 1 а 1 IJHICCWK Ч
высушенное в вакууме нр
hpnua ! HI4i.cKOe Ч
a, $Е -\"c;uiennoe упаршшние, FE -быстрое упаршмпне ЧЕ \ic i юшик о\ iaA Есиие С i. -че юришое оч i IA icinic
b. исходный образец
Соль/ ID PaciBopiue н>
образца i
Мег ОД1
НУ 5 по 1СНИЯ
\КН) 1\ч\дь-таг
челлно! ы lus i 1 2
S1- чек ккн1ра жос бе, n> ounoiи i\ чепре io\i юнпн
ансгон Hio npoiiaiio t 1 2
41 CICK юобрашос бел тонною i\ чепре iu\i юннч
MI к п-б\ iii I anoiai I 1
SE m жооир.няое juepjoe нешеиьо
(11 С \ и-u\ HJ i амски I 1 HI tl I lO\c I 1 О
Ч- вя копира IHOC ]вер юе нипеоко
Si CICK юобрашос бе% тонною i> чепре юм гения
и 'о-пропн i aueiai MCiaiio i
1 30:1
) сшан Ml К илно s ft I 2
St. i прозрачный раствор
IF стек lotnipa шое бе* mom ют о i\ ченре юм юннч
...
IX 1 прозрачный раствор
Si прозрачное t ICK юобрашос а вер юе вещее! во
SL 1 прозрачный раствор
И стек юобрашос. бе> 1м> и?юн> i\чепре юмдеинч
I t прозрачный рае iнор
sir прозрачное cich тобрдшое тер юе пешее mo
анион Ml HI 1.2
SI стек юобрашос бе. зьотют i\чепре юм кшш
Mc3HJiaf ,шчон innoi 1 2
11 с 1ск юобра мюс. бе 4 и опт" и i\чепре юм юння
luo-upouaiii) i to no г Я 1
i I 1Ь
Si ? t
SE SE SI
eiei- тоб pa зное бе двошют i\чепре юм 1сннч
яю-проиано i ii'o-iipoiiii Ю-
i вы и эфир .1:1
С II < \ ьиia 1 I
пргьрапное еiек юобрашос тер юе вешеыво
про чрачнын рай нор
ней шее тая морфоюшя бездной HOI о i\ чепре-
ломдения
it> o дрони itmi.in > фнр С II Г\ МеОП 2и*-2
прозрачный рае i ич> р CICK 1 о обра 5 нос. бе то и HOI О i) ченре юм !ения eicK юобрашос бе> тошнн о i\ченре юм (ення
Фумара! ацетон н-6\ <и i aueiai I 1
С И С 1, и т-иропано t 1 I
с 1ек юобра шое бе, цлншою i\ченре юм юння
меьшо 1 го 5)и i 1 1
чае шчно LICK июбра люе. не шачше плюс пли шое i\ чепре юм ICHIK
крне ia ! шчеекос
ме ыно! tint иплм ai 1 1
час шчно с ich юобра т ос час тчиое шошюе пче-преломденис
аморфное
метанол : толуол 1:1
частично мае IHIIHCIOC. чае тчиое дтшное луче-про юм юн не (нолокна)
светло-жел з ое масло
высушенное в вакууме
с не/ ю-же лое i нердое net нее то. нем шеелной морфо loi ни. iBoiinoc лучепреломление
аморфный - ник
меыно |. ю 1\о 1 4 1
CICK юобра пик. без двойного лучепреломления
a. SB =медлснное упаривание, FE =быстрос упаривание, SC =ме i кнное оч ил анис, СС =ускорсннос охлаждение
b. исходный образец
Соль/ ID
Растворитель
Метод3
Наблюдения
XRPD результа-
образца
МсОП: н-бутил ацетат 1:1
l iOK lOOopjiHOC. ОС* U'OMIIOlО IVICIipe-
лошщщщ
Эсилат
ацетон: толуол 1:1
L J Civ ftHHlpaiilUC, ОС 1 1 ПОЛНОЮ i\ ЧСНрС-
ломления
этил а нета г: гептан 4:1
CICK ню6р.н||оо uwmioio очепре-
ЛОМДСНИЯ
ацетон: толуол 1:1
LICU KHlOp.S .HOC. ОС . iLOIMHMO I\ ЧСИрс ЛОМЛСНИЯ
Беемдат
СН,Сц- юо-пропжюл 1:1
CICK И> оор,1,|ЮС ОС, IBOIIHofO f\ ЧСНрс-
ломления
ME К : н-бутил ацетат 1:1
CJCK HHiopjiuuc, ilvs ii OIIIIOIO i\ чсирс
ЛОМЛСНИЯ
ацекш: н-бчлнл ацекн 1:1
SI-
CICK lOOnpaiNOO, OCt lКОШКИ О 1> чсирс-ЛОМЛСНЙЯ
Эдиенлат
МеОИ МЫч кпии 1-1 1
SI-
чаиичмо LICK KnsupaiiRK, часшчнп
ir-OIIHUC l\ MCiipC IO"U 1СНИС
аморфное
Мал ea r
МсОН: н-бутил ацетат 1:1
CICK ЮООр.ЪМОС, OC* ШО1ШО10 l\4ClipC ЛОМЛСНИЯ
ацетон; изо-пронанол 1:2
CICK Ktuopjtmsc ос . и очною i> чсирс
ломления
a SI- мед ICHHOO \ парнпапне, 1 S- -быстрое ) партии шс, St \ie i leimoi. o\ И АДОНИС L С и'шреттие o\ иы iciine b, iiexo iНЫ н обра ,ец
Соль
Растворимость (мг/мл)*
гидросульфит
<1
фумарат
< 0,5 (становится вязким)
мсзилат
<46
а. Растворимости рассчитаны еа основании общего растворителя, используемого для получения раствора; реальные растворимости могут быть больше, поскольку исполняется объем частей растворителя или медленной скорости растворения. Растворимости описаны приближенно к мг/мл.
Соль
Примечания
Относительная влажность, %
Время
Наблюдения
Изменение веса, %
~ 2 дня
ВНСШИИЙ ВП t бе'ШОДНЬШ
Вакуумная сушка
95%
-2 дня
внешний вид безводный
~6а
43%
~20 часов
RIICiHHUii ВИД ОС!ВОДНЫЙ
53%
~ 3 часа
внешний вид бс людный
- 1 день
внешний вид GeiEO uibiii
Гидросульфат
65%
~ 3 дня
внешний вид бс!водный
43%
~ 20 часов
внешний вид еклво шый
53%
~ 3 часа
внешний вид бешодны"
~ 1 день
внешний вид чаешчно чаедянпешй
Фумарат
65%
~ 3 шя
Же нос мае ю с
ПСООЛЫШП! КОПИЧСО ВОМ
1вердою материа ia
Источник образца
Технология
Анализ/Результат
Из ацетоновой взвеси
XRPD
кристаллический [
Dse
эндо 147,228 (раздож.)
TG"
0,55 @ 25-100
4,10 @ 25-160
MB1
ЧГЯМР'1
0,3 % мае. потеря при 5% ОВ
0,9 % мае. увеличение от 5-95% ОВ
0,7 % мае. потеря от 95-5% ОВ согласуйся со cipyKiypoii
Высушенный в вакууме
XRPD
кристаллический I
.ISC'
эндо 146
TGb
0,21 @ 25-100
2,53 @ 100-160
a. эндо= эндотерма, указанные температуры (°С) представляют собой максимумы переходов. Температуры округлены до ближайшего градуса.
b. потеря веса (%) при определенной температуре (°С); изменения веса (%) округлены до 2 десятичных знаков; температуры округлены до ближайшего градуса.
Технология
Лнали )'Резулыгн
XRPD
крисгал шческий I
DSC"
плечевой т да 188. 206, 272
0,0 <и 25-165
TGb
6,7 @ 165-220
¦няма
0,12 молярный % EtOH
a. эндо= эндотерма, указанные температуры ("С) представляют собой максимумы переходов. Температуры округлены до ближайшего градуса.
b. потеря веса (%) при определенной температуре ("С); изменения веса (%) округлены до 2 десятичных знаков; температуры округлены до ближайшего
Фиг. 12
0.25 г
0.75
5 10 15 . 20 , 25 30 __ 35 40
е-2в (град.)
Фиг. 13
л. i
-ГТГ-i-i-г-
МЛ-
Фиг. 14
! 1
0.75
Э > -
0.5
0.25
0-29 {град.)
Фиг. 15
-о м,д.
Фиг. 16
5,5' 5.0 4.5' 4.0 3.5
2.5
2.01.8. 1.0 0.5-
ЗИП
10Q0
Смещение за счёт рамановского рассеяния (см1)
Фиг. 17
3.S
5".'""
2.5
-t-
2.0
*3i.is so*.и l.je
Ш.бЭ Ш4*$7 L"J.17
l.S
o.s
М.Д.
Фиг. 18
JUL
2.4 2.2 2.0 1.6 1,6
' 4 • ' " I ' •1 • I • ' • 1 I ' 1 " I ' •' ' I ' • "11 ' " ¦ I '
1.4 1.2 1,0 0.8
М.Д.
9-2 8 (град.)
JliVJL
-r-p-
м.д.
1 , , , г--т 1 1 1 Г 1
2.5 2.0 1.5
1.0
0,5
-0.0
м.д.
МО.оо
rrrrrrirTfrif
угтгггтт'''НГ1^
5.5 5.4
5.2
5.0
4.8
4.6 4.4
4.2
4.0
3.8
3.6 3.4
5.2 М.Д.
9-26 (град.)
0.7С0
0.600
0.500
0.400
i 0.300
ш 0.200 S
* 0.100
а о.ооо
"0.100 -0.200
-азоо
-О.4С0
six
36^
6(.0
-о- Адсорбция Десорбция
8С.0
1С) О
%ов
Прош. время мин
0.1 185.6 369.1 552.6 738.2 923.7 1109.2 1294.8 1480.7 1656.2 1851.8 2037.8 2223.3 2410.8 2593.3 2783.9 2969.4 3154.9 3338.4 3521.5
Вес
4.894 4.880 4.881 4.885 4.888 4.892 4.897 4.902 4.908 4.915 4.923 4.920 4.915 4.910 4.904 4.899 4.893 4.887 4.882 4.888
Вес % изм. 0.000 -0279
-0.255 -0.192 -0.123 -0.029 0.058 0,170 0.291 0,435 0.602 0.528 0.428
U. At I
0.214 0 101
-0.020 43.131 -0.236 -0.114
Темп. обр. °С
25.06 25.07
25.06 25.06
25.06 25.05 25 05 25.06 25.05 25.04 25.04
25.03
25.03 25.03 25.04 25.03 25.06 25.02 25.04
ОВ обр. %
4.67 4.95 14.98 25.17
34.94 44.85
64.87 74.97 84.82 94.94 84.97 74.96 65.01 55.07 45.13 34.89 25.04
I - л- "3
33.97
0.700
0.600 0.500 0.400
i 0.300
I 0.200
? 0.100
a! .-.
-0.100 -0.200 -0.300 -0.400
-о- Адсорбция .. - Десорбция
m
3^ 50
).0 /Ш
0.0 15C
0.0
0.0 25C
0.0 30C
e.o за
0.0 40(
" r
* "
Прошедшее время
5 10 15 J 20 _ 25 30' 35 40
8-20 (град.)
е-29 (град.)
5_ 10 15 20 _ 25 30 __ 35 40
е-2 0 (град.)
Фиг. 33
JJl
.J. .i
-гттт-
-о м д.
960-
1280-
960-
"40-
3204
4000
3000
2000
1000
10 20
Шкала 29
Соединение (I) Соединение (1!)
Время отбора образца
Концентрация мкМ
Концентрация мкМ
О МИН
1.48
3.08
5.96
1.54
2.9?
6.0?
120 мин
1.43
2.86
5.85
1.48
3.04
5.74
Восстановление
§7%
93%
95%
96%
102%
95%
Апикальное в базолатеральное: обнаруженное Соединение (II)
1,5 мкМ
3 мкМ
бмкМ
% прохождения
% прохождения
% прохождения
Время отбора образца
Среднее ± СО
Среднее ± СО
Среднее ± СО
60 мин
5.39 ± 0.46
2.27 ± 0.38
120 мин
20.22 ± 1.47
4.11 ± 0.73
7.54 ± 0.99
Фиг. 56В
Базолатеральное в апикальное: обнаруженное Соединение (II)
1.5 мкМ
3 мкМ
6 мкМ
% прохождения
% прохождения
% прохождения
Время отбора образца
Среднее ± СО
Среднее ± СО
Среднее ± СО
60 мин
5.81 ± 0.95
1.04 ± 0.34
0.42 ± 0. Г:
120 мин
5.25 ± 0.92
1.06 ± 0.25
0.60 ± 0.01
Фиг. 56С
1.5 3 6
Концентрация мкМ
Восстановление в апикальном комиаргмеше при окончании лечения (120 мин)
Апикальное в базолатеральное: % прохождения Обнаруженное в виде Соединения (I)
Базолатеральное в апикальное: % прохождения Обнаруженное в виде Соединения (I)
ос 20 s
I 15
§ 10 с
О 60 мин 120 мин
1.5
Концентрация мкМ
Восстановление в апикальном компартменте при окончании лечения (120 мин)
Фиг. 56Е
Соединение (I) Соединение (II)
1.5 мкМ
3 мкМ
6 мкМ
0.6%
3.1%
349%
217%
302%
64/127
Апикальное в базолатеральное
1.5 мкМ
3 мкМ
6 мкМ
% прохождения
% прохождения
% прохождения
Время отбора образца
Среднее ± СО
Среднее ± СО
Среднее ± СО
60 МИН
Н.О. ± и.о.
17.83 ± 1.19
18.48 х 4.76
120 мин
Н.О. ± Н.О.
33.08 * 1.12
23.37 * 4.60
Фиг. 57В
Базолатеральное в апикальное
1.5 мкМ
3 мкМ
8 мкМ
% прохождения
% прохождения
% прохождения
Время отбора образца
Среднее - СО
Среднее ± СО
Среднее 1 СО
60 мин
н.о. ± и.о.
2.56 i 1.11
120 мин
Н.О. ± н.о.
I 78 + 0.07
0 68
Фиг. 57С
60 мин
120 мин
Суммарное среднее (% среднего ± СО)
1.84% * 1.18
4.36% * 3.62
Рарр (х10-б)нм/с
0.58
2,79
Ф 25-
S-0
п 60 мин ? 120 мин
1.5 3 6
Концентрация мкМ
Фиг. 57Е
Базолатеральное в апикальное: % прохождения Соединение (II)
35 30 25 2D
?60 мин ? 120
1.5 3
Концентрация мкМ
Апикальное в базолатеральное; обнаруженное Соединение (II)
1.5 мкМ
3 мкМ
6 мкМ
% прохождения
% прохождения
% прохождения
Время отбора образца
Среднее ± СО
Среднее ± СО
Среднее ± СО
60 мин
25.11 * 2.82
11.72 ± 5.34
3.25 ± 0.50
120 мин
14.47 ± 5.15
13.26 ± 5.66
5.46 ± 1.72
Фиг. 58В
Апикальное в базолатеральное: % прохождения Обнаруженное в виде Соединения {1}
I 20 I
| 15 о
I "О
О60 мин ш 120 мин
1.5 3
Концентрация мкМ
Восстановление в апикальном компартменте при окончании лечения {120 мин)
Фиг. 58С
Соединение (I) Соединение (II)
1,5 мкМ
3 мкМ
6 мкМ
0.8%
1.8%
0.3%
87.1%
39/1%
156.3%
Фиг 59
Аналитическое оборудование
вэжх
Surveyor Binar Pump
автодозатор
СТС, Pal
Детектор
Масс-спектрометр Thermo Finnigan, DECA XP Plus
Система данных
Программное обеспечение Excalibur
МС интерфейс
ESI
Тип сканирования
MRM
Полярность
Положительная
Наблюдаемый ион Соединение (I)
501,2 m/z (исходный ион 484,1 - 501,9 - 349,9 m/z)
Наблюдаемый ион Соединение (II)
502,1 m/z (исходный ион 349,5 m/z)
Хроматографические и масс-спектрометрические условия
Аналитическая колонка
Xterra 5 мкМ C1S (2), 2.0 x 30 мм, Waters
Температура колонки
22 °C
Подвижная фаза А
РОА0,1%вводе
Подвижная фаза В
CH3CN
Скорость потока
400 MKл/мин
Инъецируемый объем
10 мкл
Градиент
Время Подвижная фаза Подвижная фаза
(мин) % А % В
0 85 15
2,0 5 95
3,0 5 95
3,1 85 15
5,6 85 15
68Л27
RU486 LPS
Фиг. 60В
СИ Среднее
RU48S LPS
Мертвые потомки
RU48S LPS
100-,
RU485
LPS
17 7"Г 21 23 25 2? 29 31 33 35 37 Время после инъекции RU486 или LPS (часы)
нд нд
RU486
LPS
Наполнитель (n=8 RU486, п=7 LPS) Атосибан 300 мг/кг (n=11 RU486, n=5 LPS) Нифедипин 5 мг/кг (n=10 RU486, n=7 LPS)
г. 62В
CZZJ Всего
RU486 LPS
100
нд нд
RU486
LPS
# # J* #
# # ##
С0 О0 ссГ
Ж ^' ^ Р _Ф _Ф ^Ч
veT
RU486 LPS
¦¦I Наполнитель (п=8)
| | Нифедипин 5 мг/кг (п=10)
?ИВ Соединение III 100 мг/кг (п=7)
CZ23 Комбинация (п=6)
ш р
C.......J Всего
¦¦И Мертвые потомки
с/ /
Наполнитель (in =8) LIZ] Нифедипин 5 мг/кг (п=Ш) взэв Соединение III 100 мг/кг (п=7)
LZZI Комбинация (п=6)
"- Наполнитель ^_ Нифедипин + Соединение III
***
1? 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 Время после инъекции RU486 (часы)
Фиг. 65D
100 л
75-
50-
25-
Соединение III {100 мг/кг) Нифедипин+ Соединение III
¦***
17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 Время после инъекции RU486 (часы)
, /ТГ иг. 65Е
100-1
-о- Нифедипин
Нифедипин + Соединение III
19 21 23 25 2? 29 31 33 35 37 Время после инъекции RU486 (часы)
ШШШ Наполнитель (п=8)
< 1 Атосибан (п=11)
EBB Соединение III 100 мг/кг (п=7)
ПЗЗ Комбинация (п=7)
18п
Всего
Мертвые потомки
15-
g 12-1
с; О
U 3-
Фиг, 67А
ЯШ Атосибан (n=11)
m Соединение III 100 мг/кг (п=7)
¦¦ Комбинация (п=7)
EZZ Наполнитель (п=8)
-*¦ Наиолни> ель
Атосибан + ~*г Соединение II
Фиг. 67D
1СЗ-
Соединение I (100 мг/кг) Атосибан I Соединение I
0.0832
17 50 21 23 25 27 20 31 33 35 37 35
Время после инъекции RU486 (часы)
Фиг. 67Е
Атосибан Атосибан + Соединение I
-А- Наполнитель
Наполнитель -О- Нифедипин (5 мг/кг)
Фиг. 69D
-А(tm) Наполнитель -О Нифедипин (5 мг/кг) -*- Соединение Ш (ТОО мг/кг) А 11ифедипин + СоединениеШ
Фиг. 69 Е
130 л
Наполнитель
Нифедипин+
Соединение III
с? 25-I
17 IS 21 23 25 27 25 31 33 35 Время после инъекции LPS (часы)
37 39
Фиг. 69F
130 л
i -
Нифедипин ! Соединение III Соединение III (10 мг/кг)
17 IS 21 23 25 27 23 31 33 3i Время после инъекции LPS (часы)
37 39
Фиг. 69Н
100-1
CI J
Q. I
9? '"'I.
I (яполнитель
Нифедипин+
Соединение III
4 4
13 21 23 26 27 20 31 33 Время после инъекции LPS (часы)
Соединение III
(30 мг/кг) Нифедипин + Соединение 111
17 19 21 23 25 27 23 31 33 35 37 Время после инъекции LPS (часы)
Фиг.69J
100-г
Нифедипин
Нифедипин+
Соединение III
га-
Г/ 19 21 23 26 27 29 31 33 35 Время после инъекции LPS (часы)
100 n
о 75 4
Наполнитель
Нифедипин+
Соединение III
17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 3? Время после инъекции LPS (часы)
Фиг. 69L
75-
50-
Соединение II (100 мг/кг) Нифедипин+ Соединение III
1? 19 21 23 26 27 29 31 33 35 Время после инъекции LPS (часы)
37 39
92/127
ШШ Наполнитель (п=7)
CZTJ Атосибан (п=6)
- Соед и нен ие 111100 мг/кг (п=б) гжж Комбинация (п=7)
Наполнитель (п=7)
Атосибан (п=7)
Соединение III 100 мг/кг (п=8) ШЖ Комбинация (п=7)
Время после инъекции LPS (часы)
Фиг.
10071D
Соединение I
(100 мг/кг) Атосибан + Соединение I
О GyG4
Г г
21 23 25 27 29 31 33 35 Время после инъекции LPS (часы)
37 39
Фиг. 71Е
-О- Атосибан
А , Атосибан+ Соединение III
1? 19
Время после инъекции LPS (часы)
вол
200-
150-
о и
готы
.НОС
100-
50-
Коэффициент сокращения
дмсо
Соединение II 6 нМ Соединение II 60 нМ Соединение II 600 нМ # Соединение II 6000 нМ #
г Пик х
§ Коэффициент сокращения
ДМСО
Соединение II6 нМ Соединение II60 нМ Соединение II600 нМ
Соединение II6000 нМ
m m
3 s
о I
ДМСО * Соединение II б нМ
-*"•- Соединение II 60 нМ -¦ Соединение II600 нМ •*¦¦ Соединение II6000 нМ #
X ?
% 5
О S
с х
с; о;
ГО О О. со
о о. с
U 150
100'
Продолжительность
-¦ ДМСО " Соединение II6 нМ -" Соединение II 60 нМ -* Соединение II600 нМ Соединение II6000 нМ
S XI
50-
О о С х
0# ^ # # # ^сР Время
ДМСО
Соединение II6 нМ Соединение II 60 нМ Соединение II600 нМ Соединение II6000 нМ #
102/127
•> 3
ш о 5 о-
и U
<
25?Ь
200-
150-
100-
ДМСО Ato 6 нМ Ato 60 нМ Ato 600 нМ
50-
Время
I 20СН
150-
О X
ДМСО Ato 6 нМ
Ato 60 нМ Ato 600 нМ
ДМСО Ato 6 нМ Ato 60 нМ Ato 600 нМ
50-
-х-
Общая работа
Фиг. 75В
106/127
Общая работа
С!- SS
с х
к с с Z
> s а
чэ с
3 о
Ф н
400-1
300-
200-
100-
-*~ ДМСО Ato 6 нМ * Ato 60 нМ ***
~- Ato600 нМ***
Время
Коэффициент сокращения
ш 3
<ъ _
о. с * о
о и
2 ь о I-
о-5004003002001000-
ДМСО Ato 6 нМ
Соединение И 60 нМ Соединение II 600 нМ Соединение I! 60 нМ + Ato б нМ
Соединение II6000 нМ + Ato 6 нМ
m S
о а. с о
5 X
ф 3
1С > .
U 2
< с; # |
и О
1_ О 300
200-
100-
AUC
ДМСО Ato 6 нМ
Соединение II60 нМ Соединение II 600 нМ Соединение II 60 нМ )• Ato 6 нМ
Соединение II6000 нМ + Ato 6 нМ
0 <Я ^ ^ # #
° о ^ & ?4
Время О
Фиг, 76С
X X
с; О
ш го
Q. С
О X
л е;
О X
200т
150-
дмсо
Ato б нМ
Соединение II60 нМ Соединение II600 нМ Соединение II60 нМ + Ato 6 нМ
Соединение II6000 нМ + Ato б нМ
/ # # ^
Время w
Фиг. 76D
= 3
га о
О. ш
* m
О S
и О
5 Q-
u О X .0 С!
S О
200т 15010050-1
Продолжительность
ДМСО Ato 6 нМ
Соединение II 60 нМ Соединение II 600 нМ Соединение II 60 нМ + Ato 6 нМ
Соединение II 6000 нМ +
Ato 6 нМ
Время
-*- ДМСО -*- Ato 6 нМ
Соединение II 60 нМ Соединение II 600 нМ *** "*** Соединение II 60 нМ + Ato 6 нМ ~*~ Соединение II 6000 нМ + Ato б нМ
Время
Коэффициент сокращения
800-1
400300200100-
^ ^ #
¦° <*
Время u
ДМСО Nif 1 нМ Nif б нМ Nif 60 нМ Nif 600 нМ Nif ЮмкМ
ДМСО Nif 1 нМ Nif 6 нМ Nif 60 нМ Nif 600 нМ Nif ЮмкМ
Ф иг. 77Е
Общая работа
с О
s с:
щ СУ
" I о- SS
л ш
ДМСО Nif 1 нМ Nif б нМ Nif 60 нМ Nif 600 нМ Nif ЮмкМ
# # # #
Время
Коэффициент сокращения
50?Н 400-
зооч
2001004
ДМСО
Соединение II 60 нМ Соединение II600 нМ Nif 6 нМ
Соединение I! 60 нМ + Nif 6 нМ
Соединение II6000 нМ + Nif 6 нМ
су с> , Время
Фиг. 78В
л С
400-1
|Ще
о а. г-
300-
(tm)
Q, St
MOI
та и
200-
<
100-
р----I Г~~~~""|г
СУ А%
Время ° СУ
ДМСО
Соединение II 60 нМ Соединение II 600 нМ Nif б нМ
Соединение II60 нМ + Nif 6 нМ
Соединение II6000 нМ + Nif6";M
ДМСО
Соединение II60 нМ Соединение II600 нМ Nif 6 нМ
Соединение II60 нМ + Nif 6 нМ
Соединение II6000 нМ + Nif 6 нМ
S+\ -7 л Г-
Фиг. 78E
X ¦О
к О
X X
с; О
Q_ со
о о. с
ф ? о о
-.о X 800
(3>
Общая работа
/ ^ с/ Время u
ДМСО
Соединение II60 нМ *
Соединение II600 нМ ** Nif б нМ ***
Соединение II 60 нМ + Nif 6 нМ *** + + + Соединение II6000 нМ + Nif 6 нМ ***
р-р65
р-р38
p-ERK
В-актин
Ноласибан
Ноласибан 1 мкМ
ОТ 1 мкМ + ОТ
нс S мин 15 мин 30 мин 5 мин 15 мин 30 мин 5 мин 15 мин 30 мт
¦¦И
Ноласибан
p-ERK
Р ДК1 Ин
Ноласибан
Ноласибан
Ноласибан Ноласибан 1 мкМ 1 мкМ + ОТ
р-актин
¦¦И
Фиг. 79D
Соединение II Соединение II Соединение II Соединение II
Соединение II 0.1 мкМ 0,3 мкМ 1 шМ ЗмкМ
ОТ ЗмкМ +ОТ +0Т +ОТ +OT
НС 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч бч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч
СОХ-2
p-cPLAj
В-актин
Ноласибан
Ноласибан
Ноласибан
Фиг. 79Е
рр65
?" с
DC ЛЗ I XI
0.5'
с; Ф
и о
0.0
2.0'
1.5-
1,0-
ill
I и
XX I
X S
X S
МИН
МИН
О го
(_ О
(tm)* Si 3" У и и g (13 пз чес
0 3 3
1 I X
X х
<••-> г 2 о
* ~_
U"!
'Г-
^ ~т~
m 2
Ф 2
^ t--
г".
3- О о
ш ~:
х -
5 Ф
Ct S
Ф X
О Ф
и и X
сз;
иг. 79F
pERK
lit
XXX
s s s
5 S S
1Л ul о
^ "- m
03 X I
Ю П5 ТО
S "Э VD
U S S
го и и
с; го пз
О ^ с;
X X
S x x , О s s + + +
* a: S S 5
''Г
*:*
1Г>
ю |_
2 \х
5 :?
i/-V та frj s *° ю ю
га и
Т3 "J
(_ р.
О О
и s S
" У У
Г Ф №
X X
У ГС
го го
5 5
О О
Фиг. 79Н
СОХ-2
1 О
0S-
III
ООО
S 5 5 + + +
11 ilii
я я я i S S
\0 Ю Ю 5 ^_ ^_
и и U *Z X X
S S S " ю ю
о о о" s s
Я! г г
| О О
S S S
ГО ГО ГО
Ш Ф ш
X - л,
ХХХххХФфХфф
Sl|x^l||l||
5 о о
О О
= = _ = =ФФШ
ГО ГО ГО ^ г(tm) г(tm) ^ ГО ГО го го
S S
ф ш
- - - Q Q _^ (НГ - - - - °-!
ф ф
XXX
III
S S
1ХХ|ХХФ*"Ф$*
s^s~|ll|ll?ssss?
=5 5 5 ^ 5 Й
x x
X X
III + + + + + + 555SS1 r- r- ^ i S 5
ж i x ,_ <- ^ *- <-
!!!HU!l!!!!lu
Iff s s s * s s sf|§||
XXX goo ooox^^x11
иг. 791
P-CPLA2
Ноласибан Ноласибан 1мкМ
ОТ 1мкМ +ОТ
НС 5 мин 15 мн ЗЭмиг- 5 '-мн 15 V,IH 33 ган 5 VI-H 1 5 мин ЗС vm
р-рб5
р-р38
p-ERK
6-актин '
Фиг. 80В
Соединение II Соединение II Соединение II Соединение II
Соединение! 01 мкМ 0,3 мкМ 1 мкМ ЗмкМ
ОТ 3мкМ +ОТ +0Т +0Т +ОТ
НС 5 мин 15 мин У:ж 5 т 15 мин ЗОмин 5 мин 15 ж 30 мин 5 мин 15 ж 39 мин 5 мин 15 мин 30 мин 5 мн 15 мин 30 ж
Ноласибан
В-актин ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^В
I^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^Bfl Ноласибан
Соединение[I СоединениеII СоединениеII Соединение!
Соединение II 0,1 мкМ 0,3 мкМ 1 мкМ ЗмкМ
ЗмкМ +ОТ +0Т +0Т +ОТ
СОХ-2
p-cPLAj
(J-актин
НС 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч 6ч 2ч 4ч бч 2ч 4ч бч
Ноласибан
Ноласибан
Ноласибан
(19)
(19)
(19)
114
114
115
116
115
116
118
118
126
129
132
137
140
147
151
151
153
154
(Ш)
157
157
158
158
158
161
162
164
164
Фиг. 4
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 5
5/127
5/127
Фиг. 5
(продолж.)
Фиг. 5
(продолж.)
Фиг. 5 (продолж.)
Фиг. 5 (продолж.)
Фиг. 6
Фиг. 6
8/127
8/127
Фиг. 7
Фиг. 7
9/127
9/127
Фиг. 7 (продолж.)
Фиг. 7 (продолж.)
10/127
10/127
Фиг. 8
Фиг. 8
Фиг. 9
Фиг. 9
Фиг. 10
Фиг. 10
Фиг. 11
Фиг. 11
16/127
16/127
17/127
17/127
17/127
17/127
17/127
17/127
18/127
18/127
18/127
18/127
18/127
18/127
19/127
19/127
22/127
22/127
22/127
22/127
22/127
22/127
23/127
23/127
Фиг. 21
Фиг. 21
25/127
25/127
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 21 (продолж.)
Фиг. 22
Фиг. 22
29/127
29/127
Фиг. 23
Фиг. 23
Фиг. 26
Фиг. 26
Фиг. 27
Фиг. 27
34/127
34/127
Фиг. 28
Фиг. 28
Фиг. 29
Фиг. 29
36/127
36/127
Фиг, 30
Фиг, 30
37/127
37/127
Фиг. 32
38/127
Фиг. 32
38/127
Фиг. 32
40/127
Фиг. 32
40/127
Фиг. 34
Фиг. 34
41/127
41/127
Фиг. 34
Фиг. 34
41/127
41/127
Фиг. 35
Фиг. 35
Фиг. 37
Фиг. 37
5 Ш 15 20 25 30 35 40
8-26 (град)
5 Ш 15 20 25 30 35 40
8-26 (град)
Фиг. 38
Фиг. 38
5 10 15 20 23 30 35 40
0 (град)
5 10 15 20 23 30 35 40
0 (град)
Фиг. 40
Фиг. 40
Фиг. 41
Фиг. 41
5 10 15 20 25 30 35 40
0-29 (град)
5 10 15 20 25 30 35 40
0-29 (град)
Фиг. 42
Фиг. 42
Фиг. 43
Фиг. 43
5 10 15 20 25 30 35 40
е-20 (град)
5 10 15 20 25 30 35 40
е-20 (град)
Фиг. 44
Фиг. 44
Фиг. 45
Фиг. 45
9-29 (град)
9-29 (град)
Фиг. 46
Фиг. 46
9-29 (град)
9-29 (град)
Фиг. 47
Фиг. 47
Фиг. 50
Фиг. 50
9-29 (град)
9-29 (град)
Фиг. 51
Фиг. 51
9-29 (град)
9-29 (град)
Фиг. 52
Фиг. 52
5 10 15 20 25 30 35 40
e-2G (град)
5 10 15 20 25 30 35 40
e-2G (град)
Фиг. 53
Фиг. 53
0-20 (град)
0-20 (град)
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 54
Фиг. 55
Фиг. 55
62/127
62/127
Фиг. 56А
Фиг. 56А
63/127
63/127
Фиг. 56D
Фиг. 56D
Фиг. 56D
Фиг. 56D
Фиг. 56D
Фиг. 56D
Фиг. 57А
Фиг. 57А
65/127
65/127
Фиг. 57D
Фиг. 57D
66/127
66/127
Фиг. 58А
Фиг. 58А
67/127
67/127
Фиг. 58А
Фиг. 58А
67/127
67/127
Фиг. 58А
Фиг. 58А
67/127
67/127
Фиг. 58А
Фиг. 58А
67/127
67/127
Фиг. 60А
Фиг. 60А
69/127
69/127
Фиг. 61А
Фиг. 61А
70/127
70/127
Фиг. 61С
Фиг. 61С
71/127
71/127
Фиг. 61С
Фиг. 61С
71/127
71/127
Фиг. 61С
Фиг. 61С
71/127
71/127
Фиг. 62А
Фиг. 62А
72/127
72/127
Фиг. 62А
Фиг. 62А
72/127
72/127
Фиг. 62А
Фиг. 62А
72/127
72/127
Фиг. 62А
Фиг. 62А
72/127
72/127
Фиг. 63А
73/127
74/127
Фиг. 63А
73/127
74/127
Фиг. 63А
73/127
74/127
Фиг. 63А
73/127
74/127
Фиг. 63А
73/127
74/127
Фиг. 63А
75/127
74/127
76/127
76/127
Фиг. 64В
Фиг. 64В
77/127
77/127
Фиг. 64В
Фиг. 64В
77/127
77/127
Фиг. 65А
Фиг. 65А
Время после инъекции RU486 (часы)
78/127
Время после инъекции RU486 (часы)
78/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
Фиг. 65С
Фиг. 65С
79/127
79/127
80/127
80/127
80/127
80/127
81/127
81/127
Фиг. 66В
Фиг. 66В
82/127
82/127
Фиг. 66В
Фиг. 66В
82/127
82/127
Фиг. 66В
Фиг. 66В
82/127
82/127
Фиг. 66В
Фиг. 66В
82/127
82/127
Фиг. 66В
Фиг. 66В
82/127
82/127
Время после инъекции RU486 (часы)
83/127
Время после инъекции RU486 (часы)
83/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 67С
Фиг. 67С
84/127
84/127
Фиг. 68А
Фиг. 68А
Фиг. 69А
Фиг. 69А
Время после инъекции LPS (часы)
86/127
Время после инъекции LPS (часы)
86/127
Фиг. 69А
Фиг. 69А
Время после инъекции LPS (часы)
86/127
Время после инъекции LPS (часы)
86/127
Фиг. 69С
Фиг. 69С
87/127
87/127
Фиг. 69С
Фиг. 69С
87/127
87/127
Фиг. 69С
Фиг. 69С
87/127
87/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
88/127
Фиг. 69G
Фиг. 69G
89/127
89/127
Фиг. 69G
Фиг. 69G
89/127
89/127
Фиг. 691
Фиг. 691
90/127
90/127
Фиг. 691
Фиг. 691
90/127
90/127
Фиг. 691
Фиг. 691
90/127
90/127
Фиг. 691
Фиг. 691
90/127
90/127
Фиг. 691
Фиг. 691
90/127
90/127
Фиг. 69К
Фиг. 69К
91/127
91/127
Фиг. 69К
Фиг. 69К
91/127
91/127
Фиг. 69К
Фиг. 69К
91/127
91/127
Фиг. 69К
Фиг. 69К
91/127
91/127
Фиг. 69К
Фиг. 69К
91/127
91/127
Фиг. 69М
Фиг. 69М
93/127
93/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
94/127
Фиг. 71С
95/127
96/127
Фиг. 71С
95/127
96/127
Фиг. 71С
95/127
96/127
Фиг. 71С
95/127
96/127
Фиг. 72А
Фиг. 72А
97/127
97/127
Фиг. 72С
Фиг. 72С
98/127
98/127
Фиг. 72Е
Фиг. 72Е
99/127
99/127
Фиг. 73А
Фиг. 73А
100/127
100/127
Фиг. 73А
Фиг. 73А
100/127
100/127
Фиг. 73С
Фиг. 73С
10V127
10V127
Фиг. 73С
Фиг. 73С
10V127
10V127
Фиг. 73С
Фиг. 73С
10V127
10V127
Фиг. 73Е
Фиг. 73Е
Фиг. 73Е
Фиг. 73Е
Фиг. 74А
Фиг. 74А
103/127
103/127
Фиг. 74А
Фиг. 74А
103/127
103/127
Пик
Фиг. 74С
Пик
Фиг. 74С
Время
104/127
Время
104/127
Пик
Фиг. 74С
Пик
Фиг. 74С
Время
104/127
Время
104/127
Пик
Фиг. 74С
Пик
Фиг. 74С
Время
104/127
Время
104/127
Пик
Фиг. 74С
Пик
Фиг. 74С
Время
104/127
Время
104/127
Пик
Фиг. 74С
Пик
Фиг. 74С
Время
104/127
Время
104/127
Фиг. 74Е
Фиг. 74Е
105/127
105/127
Пик
Фиг. 75С
Пик
Фиг. 75С
107/127
107/127
Фиг. 75Е
Фиг. 75Е
108/127
108/127
Фиг. 75Е
Фиг. 75Е
108/127
108/127
Фиг. 76А
Фиг. 76А
109/127
109/127
Пик
Пик
110/127
110/127
Пик
Пик
110/127
110/127
Пик
Пик
110/127
110/127
Пик
Пик
110/127
110/127
Фиг, 76Е
Фиг, 76Е
111/127
111/127
Фиг, 76Е
Фиг, 76Е
111/127
111/127
Фиг. 77А
Фиг. 77А
112/127
112/127
Фиг. 77А
Фиг. 77А
112/127
112/127
Фиг. 77А
Фиг. 77А
112/127
112/127
Пик
Фиг. 77С
Пик
Фиг. 77С
113/127
113/127
Пик
Фиг. 77С
Пик
Фиг. 77С
113/127
113/127
114/127
114/127
114/127
114/127
114/127
114/127
Фиг. 78А
Фиг. 78А
115/127
115/127
Фиг. 78А
Фиг. 78А
115/127
115/127
Фиг. 78А
Фиг. 78А
115/127
115/127
Фиг. 78А
Фиг. 78А
115/127
115/127
Пик
Фиг. 78С
Пик
Фиг. 78С
116/127
116/127
Пик
Фиг. 78С
Пик
Фиг. 78С
116/127
116/127
117/127
117/127
Фиг. 79А
Фиг. 79А
118/127
118/127
Фиг. 79В
Фиг. 79В
119/127
119/127
Фиг. 79В
Фиг. 79В
119/127
119/127
Фиг. 79В
Фиг. 79В
119/127
119/127
Фиг. 79С
Фиг. 79С
120/127
120/127
Фиг. 79С
Фиг. 79С
120/127
120/127
Фиг. 79С
Фиг. 79С
120/127
120/127
Фиг. 79С
Фиг. 79С
120/127
120/127
Фиг. 80А
Фиг. 80А
126/127
126/127
Фиг. 80С
Фиг. 80С
127/127
127/127
Фиг. 80С
Фиг. 80С
127/127
127/127
Фиг. 80С
Фиг. 80С
127/127
127/127