(57) Реферат / Формула:
В данном изобретении предложены соединения майтанзиноидов, производные таких соединений и образованные ими конъюгаты и способы лечения или профилактики пролиферативных заболеваний с использованием этих соединений.
Евразийское (21) 201800444 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2017.01.24
(51) Int. Cl.
C07D 498/18 (2006.01) A61K 31/535 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ МАЙТАНЗИНОИДА, ИХ КОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
(31) 62/286,858
(32) 2016.01.25
(33) US
(86) PCT/US2017/014782
(87) WO 2017/132173 2017.08.03
(71) Заявитель:
РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Ниттоли Томас, Маркотан Томас П.
(US)
(74) Представитель:
Безрукова О.М. (RU)
(57) В данном изобретении предложены соединения майтанзиноидов, производные таких соединений и образованные ими конъюгаты и способы лечения или профилактики пролиферативных заболеваний с использованием этих соединений.
ПРОИЗВОДНЫЕ МАЙТАНЗИНОИДА, ИХ КОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
[0001] В данной заявке испрашивается приоритет и преимущества согласно
предварительной заявке на патент США № 62/286,858, озаглавленной ПРОИЗВОДНЫЕ МАЙТАНЗИНОИДА, ИХ КОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИСПОЛЬЗОАНИЯ, поданной 25 января 2016 г. Содержание этой предварительной заявки на патент полностью и во всех отношениях включено в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Настоящее изобретение относится к соединениям майтанзиноидов,
производным таких соединений и образованным ими конъюгатам, и способам лечения или профилактики пролиферативных заболеваний с использованием этих соединений.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Пролиферативные заболевания, например, рак, характеризуются
неконтролируемым ростом аномальных клеток. Современные подходы к лечению пролиферативных заболеваний включают хирургическое вмешательство, лучевую терапию, химиотерапию, гормональную терапию и/или иммунотерапию. При некоторых из этих подходов, в частности, химиотерапии, используются антипролиферативные лекарственные средства, ограничивающие распространение аномальных клеток. Однако эти лекарственные средства, как правило, не обладают избирательной способностью при уничтожении клеток и поражают как здоровые, так и больные клетки. Для решения этой проблемы исследуются разнообразные подходы к направленной доставке лекарственного вещества, включая использование конъюгатов, образованных зондами с направленным действием (например, антителами или факторами роста) и токсинами, с целью избирательного поражения аномальных клеток. Конъюгаты антитела с лекарственным препаратом (КАЛ) - соединения, состоящие из антитела, связанного химическим линкером с цитотоксическим веществом. В таких соединениях для доставки цитотоксического вещества в аномальную клетку используется специфичность связывания антитела с соответствующей мишенью. Таким образом, существует потребность в антипролиферативных соединениях и образованных ими конъюгатах.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] В настоящем документе предложены соединения по формуле (I):
(I)
или их фармацевтически приемлемая соль, где:
А является ариленом или гетероариленом, необязательно замещенным, как описано в настоящем документе;
L представляет собой линкер, необязательно замещенный, как описано в настоящем документе;
ВА является связующим агентом; и
к представляет собой целое число от 1 до 30. Настоящим изобретением также
предусмотрены стереоизомеры соединений по формуле (I).
[0005] Также предложены соединения по формуле (II):
(И)
или их фармацевтически приемлемая соль, где А является ариленом или гетероариленом, необязательно замещенным, как описано в настоящем документе. В настоящем изобретении предложены также стереоизомеры соединений по формуле (И).
РР5:
или их соль, где А является ариленом или гетероариленом, необязательно замещенным, как описано в настоящем документе. В настоящем изобретении предложены также стереоизомеры соединений по формуле РР5.
[0007] Далее, предложены способы лечения пролиферативных заболеваний,
включающие введение описанных в настоящем изобретении соединений.
[0008] Далее, предложены способы лечения пролиферативных заболеваний,
включающие введение описанных в настоящем изобретении конъюгатов.
[0009] Далее, предложены способы получения соединения по формуле (I)
включающие приведение соединения по формуле Р1 в контакт со связующими
агентом,
[0010] Далее, в настоящем изобретении предложены способы получения f
соединения по формуле Р1, включающие приведение соединения по формуле (II) в
контакт с описанным в настоящем изобретении реакционноспособным линкером (RL). |
[ООН] Далее, в настоящем изобретении предложены способы получения {
соединения по формуле (II), включающие приведение соединения по формуле РР5 в | контакт с подходящим восстанавливающим агентом. |
Стр.3 |
[0012] Далее, в настоящем изобретении предложены способы получения
соединения по формуле РР5, включающие приведение майтанзинола в контакт с нитро-фенил-изоцианатом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0013] На Фиг. 1 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток OVCAR3 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0014] На Фиг. 2 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток SKBr3 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0015] На Фиг. 3 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток SKBr3 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0016] На Фиг. 4 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток SKBr3 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0017] На Фиг. 5 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток SKBr3 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0018] На Фиг. 6 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток С4-2 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0019] На Фиг. 7 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток С4-2 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0020] На Фиг. 8 представлен график зависимости выраженной в %
жизнеспособности клеток С4-2 от концентрации (Logio [М]) определенных соединений, протестированных в Примере 28.
[0021] На Фиг. 9 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 1.
[0022] На Фиг. 10 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 2.
[0023] На Фиг. 11 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 3.
[0024] На Фиг. 12 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 4.
[0025] На Фиг. 13 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 5.
[0026] На Фиг. 14 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 6.
[0027] На Фиг. 15 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 7.
[0028] На Фиг. 16 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 8.
[0029] На Фиг. 17 отражена схема реакции, упоминаемой в Примере 9.
[0030] На Фиг. 18 показан развернутый масс-спектр моноклонального антитела,
конъюгированного с MCC-DM1, из Примера 26.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ А. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0031] В настоящем изобретении термин "алкил" относится к одновалентному и
насыщенному углевородному радикальному фрагменту. Алкил является необязательно
замещенным фрагментом и может быть линейным, разветвленным или циклическим,
т.е., циклоалкилом. Алкил включает, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты,
содержащие от 1 до 20 атомов углерода, т.е., С1-20 алкил; от 1 до 12 атомов углерода,
т.е., См2 алкил; от 1 до 8 атомов углерода, т.е., Ci-s алкил; от 1 до 6 автомов углерода,
т.е., Ci-б алкил; и 1-3 атомов углерода, т.е., Ci-з алкил. Примеры алкильных
фрагментов включают, не ограничиваясь перечисленным, метил, этил, н-пропил, изо-
пропил, н-бутил, ewop-бутил, трет-бушп, шо-бутил, пентильный фрагмент,
гексильный фрагмент, циклопропил, циклобутил, циклопентил, и циклогексил.
[0032] В настоящем изобретении термин "галоачкил" относится к алкилу,
согласно вышеприведенному определению, где алкил включает, по меньшей мере,
один заместитель, выбираемый из галогенов, например, F, С1, Вг, или I.
[0033] В настоящем изобретении термин "алкенил" относится к
одновалентному углевородному радикальному фрагменту, содержащему не менее двух атомов углерода и одну или несколько неароматических углерод-углеродных двойных связей. Алкенил необязательно замещен, и может быть линейным, разветвленным или циклическим. Алкенил включает, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты, содержащие от 2 до 20 атомов углерода, т.е., С2-20 алкенил; от 2 до 12 атомов углерода, т.е., С2-12 алкенил; от 2 до 8 атомов углерода, т.е., С2-8 алкенил; от 2 до 6 атомов углерода, т.е., С2-6 алкенил; и от 2 до 4 атомов углерода, т.е., С2-4 алкенил. Примеры алкенильных фрагментов включают, не ограничиваясь перечисленным, винил,
пропенил, бутенил и циклогесенил.
[0034] В настоящем изобретении термин "алкинил" относится к
одновалентному углевородному радикальному фрагменту, содержащему не менее двух атомов углерода и одну или несколько углерод-углеродных тройных связей. Алкинил необязательно замещен, и может быть линейным, разветвленным или циклическим. Алкинил включает, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты, содержащие от 2 до 20 атомов углерода 2-20 атомов углерода, т.е., С2-20 алкинил; от 2 до 12 атомов углерода, т.е., С2-12 алкинил; от 2 до 8 атомов углерода, т.е., С2-8 алкинил; от 2 до 6 атомов углерода, т.е., С2-6 алкинил; и от 2 до 4 атомов углерода, т.е., С2-4 алкинил. Примеры алкинильных фрагментов включают, не ограничиваясь перечисленным, этинил, пропинил и бутинил.
[0035] В настоящем изобретении термин "алкокси" относится к
одновалентному и насыщенному углеводородному радикальному фрагменту, где
углеводород включает одну связь с атомом кислорода, и где радикал локализован на
атоме кислорода, например, СН3СН2-О в случае этокси-радикала. Алкокси-
заместители связаны с соединением, в котором они являются заместителями, через
этот атом кислорода алкокси-заместителя. Алкокси-радикал необязательно замещен и
может быть линейным, разветвленным или циклическим, т. е., циклоалкокси. Алкокси
включает, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты, содержащие от 1 до 20
атомов углерода, т.е., С1-20 алкокси; от 1 до 12 атомов углерода, т.е., С\.\г алкокси; от
1 до 8 атомов углерода, т.е., С1-8 алкокси; от 1 до 6 атомов углерода, т.е., Сив алкокси;
и от 1 до 3 атомов углерода, т.е., О-з алкокси. Примеры алкокси-фрагментов
включают, не ограничиваясь перечисленным, метокси, этокси, н-пропокси, изо-
пропокси, н-бутокси, ewo/7-бутокси, трет-бутокст, изо-бутокси, пентокси-фрагмент,
гексокси-фрагмент, циклопропокси, циклобутокси, циклопентокси, и циклогексокси.
[0036] В настоящем изобретении термин "галоалкокси" относится к алкокси-
фрагментам, согласно вышеприведенному определению, где алкокси включает, по
меньшей мере, один заместитель, выбираемый из галогенов, например, F, CI, Вг, или I.
[0037] В настоящем изобретении термин "арил" относится к одновалентному
фрагменту, являющемуся радикалом ароматического соединения, где кольцевые атомы представлены атомами углерода. Арил необязательно замещен, и может быть моноциклическим или полициклическим, например, бициклическим или трициклическим. Примеры арилов включают, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты, содержащие от 6 до 20 кольцевых атомов углерода, т.е., Сб-20 арил; от 6 до
15 кольцевых атомов углерода, т.е., Сб-is арил, и от 6 до 10 кольцевых атомов
углерода, т.е., Сб-io арил. Примеры арильных фрагментов включают, не ограничиваясь
перечисленным, фенил, нафтил, флуоренил, азуленил, антрил, фенантрил и пиренил.
[0038] В настоящем изобретении "арилен" относится к двухвалентному
фрагменту ароматического соединения, где кольцевые атомы представлены только атомами углерода. Арилен является необязательно замещенным, и может быть моноциклическим или полициклическим, например, бициклическим или трициклическим. Примеры арильных фрагментов включают, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты, содержащие от 6 до 20 кольцевых атомов углерода, т.е., Сб-го арилен; от 6 до 15 кольцевых атомов углерода, т.е., Сб-is арилен, и от 6 до 10 кольцевых атомов углерода, т.е., Сб-ю арилен.
[0039] В настоящем изобретении термин "алкарил" относится к арилу,
замещенному, по меньшей мере, одним алкилом. Алкарил является необязательно замещенным.
[0040] В настоящем изобретении термин "гетеро &теил" относится к алкилу, в
котором один или несколько атомов углерода замещены гетероатомами. В настоящем изобретении "гетероалкенил" относится к алкенилу, в котором один или несколько атомов углерода замещены гетероатомами. В настоящем изобретении "гетероалкинил" относится к алкенилу, в котором один или несколько атомов углерода замещены гетероатомами. Соответствующие гетероатомы включают, не ограничиваясь перечисленным, атомы азота, кислорода и серы. Гетероалкил является необязательно замещенным.
[0041] В настоящем изобретении термин "гетероарил" относится к
одновалентному фрагменту, являющемуся радикалом ароматического соединения,
отличающемуся тем, что в число кольцевых атомов входят атомы углерода и, по
меньшей мере, один атом кислорода, серы, азота или фосфора. Примеры
гетероарильных фрагментов включают, не ограничиваясь перечисленным, фрагменты,
содержащие от 5 до 20 кольцевых атомов, от 5 до 15 кольцевых атомов и от 5 до 10
кольцевых атомов. Гетероарил является необязательно замещенным.
[0042] В настоящем изобретении термин "гетероарилен" относится к арилену, в
котором один или несколько кольцевых атомов углерода в ароматическом кольце замещены атомом кислорода, серы, азота или фосфора. Гетероарилен является необязательно замещенным и может быть моноциклическим или полициклическим, например, бициклическим или трициклическим.
[0043] В настоящем изобретении термин "необязательно замещенный" при
использовании для описания радикального фрагмента, например, необязательно
замещенный алкил, означает, что такой фрагмент необязательно связан с одним или
несколькими заместителями. Примеры таких заместителей включают, не
ограничиваясь перечисленным, гало, циано, нитро, галоалкил, азидо, эпокси,
необязательно замещенный гетероарил, необязательно замещенный гетероциклоалкил,
ООО О
-^-0RA -jl-SRA -^-NRARB RA -\^- ORA -NRARB -^-NRC-^-RA
> > 5 " ) г >
N N R^
~\ NR RB -^-NRC--NRARB -^-S(0)-RA -^-S(0)2-RA , , , , , 11 , ИЛИ , 1ДС
RA, RB, и Rc, независимо в каждом случае, представляют собой атом водорода, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил или гетероциклоалкил, или RA и RB, вместе с атомами, с которыми они связаны, образуют насыщенное или ненасыщенное карбоциклическое кольцо, где кольцо является необязательно замещенным, и где один или несколько кольцевых атомов необязательно замещены гетероатомом. В некоторых вариантах осуществления изобретения RA, RB, и Rc не являются атомами водорода.
[0044] В настоящем изобретении термин "связующий агент" относится к
молекуле, способной к связыванию и обладающему специфичностью к определенному партнеру по связыванию.
[0045] В настоящем изобретении термин "линкер" относится к двухвалентному
фрагменту, который ковалентно присоединяет связующий агент к майтанзиноидам и их производным, описанным в настоящем документе.
[0046] В настоящем изобретении термин "условия синтеза амидов" относится к
условиям реакции, пригодной для того, чтобы приводить к образованию амида, например, посредством взаимодействия карбоновой кислоты, активированной карбоновой кислоты или ацилгалогенида с амином. В некоторых примерах термин "условия синтеза амидов" относятся к условиям реакции, пригодной для того чтобы приводить к образованию амидной связи между карбоновой кислотой и амином. В некоторых из этих примеров карбоновую кислоту перед взаимодействием с амином с образованием амида вначале подвергают преобразованию в активированную карбоновую кислоту. Подходящие условия для образования амида включают, не ограничиваясь перечисленным, использование реагентов с целью обеспечения
взаимодействия между карбоновой кислотой и амином, включая, в частности,
следующие реагенты: дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид
(DIC), (бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВОР),
(бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат (РуВОР), (7-
азабензотриазол-1 -илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат (РуАОР),
бромтрипирролидинофосфония гексафторфосфат (РуВгОР), 0-(бензотриазол-1-ил)-
Н,Ы,Ы',Ы'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU), 0-(бензотриазол-1-ил)-
N,N,N',N'-TeTpaMeTffirypoHHH тетрафторборат (TBTU), 1-[Бис(диметиламино)метилен]-
1Я-1,2,3-триазоло[4,5-6]пиридиния 3-оксид гексафторфосфат (HATU), 2-этокси-1-
этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (EEDQ), 1-этил-3-(3-
диметиламинопропил)карбодиимид (EDC), 2-хлор-1,3-диметилимидазолидиния гексафторфосфат (CIP), 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазин (CDMT), и карбонилдиимидазол (CDI). В некоторых примерах карбоновую кислоту перед взаимодействием с амином с образованием амидной связи вначале подвергают преобразованию в активированный эфир карбоновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления изобретения карбоновая кислота взаимодействует с реагентом. Реагент активирует карбоновую кислоту, депротонируя карбоновую кислоту и затем образуя комплекс с депротонированной карбоновой кислотой в результате нуклеофильной атаки депротонированной карбоновой кислоты на протонированном реагенте. В случае некоторых карбоновых кислот этот активированный сложный эфир впоследствии более чувствителен к нуклеофильной атаке амина, чем карбоновая кислота до превращения ее в активированный сложный эфир. Это приводит к образованию амидной связи. По существу, карбоновая кислота описывается, как активированная Примеры реагентов включают DCC и DIC.
[0047] В настоящем изобретении термин "терапевтически эффективное
количество" относится к количеству (соединения), достаточного для обеспечения
терапевтического эффект у пациента при применении для лечения или управления
заболеванием или нарушением либо для задержки или минимизации развития одного
или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием или нарушением.
[0048] В настоящем изобретении термин "кислота Льюиса" относится к
молекуле или йону, которые акцептируют неподеленную пару электронов. В описанных в настоящем изобретении способах используются кислоты Льюиса, не являющиеся протоном. Кислоты Льюиса включают, не ограничиваясь перечисленным, кислоты, образованные металлами, кислоты, образованные неметаллами, жксткие
кислоты Льюиса и мягкие кислоты Льюиса. Кислоты Льюиса включают, не ограничиваясь перечисленным, кислоты Льюиса, образованные алюминием, бором, железом, оловом, титаном, магнией, медью, сурьмой, фосфором, серебром, иттербием, скандием, никелем и цинком. Иллюстративные кислоты Льюиса включают включают, не ограничиваясь перечисленным, А1Вгз, А1С1з, ВС1з, бора трихлорид метилсульфид, BF3, бора трифторид метилэфират, бора трифторид метилсульфид, бора трифторид тетрагидрофуран, дициклогексилбора трифторметансульфонат, железа (III) бромид, железа (III) хлорид, олова (IV) хлорид, титана (IV) хлорид, титана (IV) изопропоксид, Cu(OTf)2, CuCh, CuBr2, цинка хлорид, алкилалюминия галогениды (RnAlX3-n, где R явялется гидрокарбилом), Zn(OTf)2, ZnCh, Yb(OTf)3, Sc(OTf)3, MgBr2, NiCl2, Sn(OTf)2, Ni(OTf)2, и Mg(OTf)2.
[0049] Некоторые группы, фрагменты, заместители и атомы показаны с
волнистой линией, пересекающей связь или связи, чтобы указать атом, посредством которого осуществляется связь групп, фрагментов, заместителей, атомов. Например, фенильная группа, замещенная пропильной группой и показанная следующим образом:
сн,
СН3
СН3
имеет следующую структуру: ~пз.
В настоящем документе иллюстрации, показывающие заместители, связанные с циклической группой (например, ароматической, гетероароматической, конденсированным кольцом и насыщенным или ненасыщенным циклоалкилом или гетероциклоалкилом) через связь между кольцевыми атомами, следует понимать, если не указано иное, что циклические группы могут быть замещены заместителем в любом положении кольца в циклической группе или в любом кольце группы конденсированных колец, в соответствии с изложенными в настоящем документами техническими приемами или приемами, известными в области техники, к которой
(R1)q
принадлежит настоящее изобретение. Например, группа * , где подстрочный индекс q представляет собой целое число от 0 до 4 и в которой положения заместителя
R1 описаны для общего случая, включает следующие группы, в которых положения
заместителя R1 описаны для конкретного случая:
которой положения заместителей, кроме R , связанных с циклической группой через
связь между кольцевыми атомами, описаны для общего случая, включает следующие j группы, в которых положения этих заместителей, кроме R1, описаны для конкретного
I i
случая: j
Также, например, группа ^ , в которой положения заместителей, кроме R1,
связанных с циклической группой через связь между кольцевыми атомами, описаны для общего случая, включает следующие группы, в которых положения этих заместителей, кроме R1, описаны для конкретного случая:
В каждой из этих структур, в которых положения заместителей, кроме R1, описаны для конкретного случая, заместитель R1 может быть связан с любым положением на кольце в циклической группе или на любом кольце в группе конденсированных колец, не занятом одним из этих заместителей, кроме R1. Показанные далее не имеющие ограничительного характера иллюстрации указывают на то, что циклическая группа может быть замещена указанным заместителем в любом положении кольца или на
[0050] Когда описанная в настоящем документе группа необязательно
замещена, связанный с группой заместитель незамещен, если не указано иное.
[0051] В настоящем изобретении фраза "реакционноспособный линкер", или
сокращение "RL" относится к одновалентной группе, которая включает
реакционноспособную группу и группу-спейсер, показанные, например, как *,
где RG представляет собой реакционноспособную группу и SP представляет собой
группу-спейсер. Как описано в настоящем документе, реакционноспособный линкер может содержать несколько реакционноспособных групп и несколько групп-спейсеров. Группой-спейсером является любой двухвалентный фрагмент, соединяющий реакционноспособную группу с другой группой, например, с полезной нагрузкой. Реакционноспособные линкеры (RL) вместе с полезной нагрузкой, с которой они связаны, обеспечивают промежуточные продукты ("линкер-полезная нагрузка"), которые используются в качестве синтезированных предшественников при получении описанных в настоящем документе конъюгатов с антителом. Реакционноспособный линкер содержит реакционноспособную группу ("RG"), которая является функциональной группой или фрагментом, способным взаимодействовать с реационноспособным фрагментом другой группы, например, антителом, модифицированным антителом или их антиген-связывающим фрагментом, либо с усиливающей эффект группой. Фрагмент, образующийся в результате реакции между реакционноспособной группой и антителом, модифицированным антителом или их антиген-связывающим фрагментом, вместе с линкерными группами включает фрагмент описанного в настоящем документе конъюгага, представляющиий собой "линкер связующего агента" ("BL"). В некоторых вариантах осуществления изобретения "реакционноспособной группой" является функциональная группа или фрагмент (например, сложный эфир малеимида или jV-гидроксисукцинимида (NHS)), который взаимодействует с остатком цистеина или лизина в молекуле антитела или его антиген-связывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления изобретения реакционноспособной группой" является функциональная группа или фрагмент, способные вступать в клик-химические реакции (см., например, клик-химия, Huisgen Proc. Chem. Soc. 1961, Wang et al. J. Am. Chem. Soc.2003, и Agard et al. J. Am. Chem. Soc. 2004). В некоторых вариантах такой клик-химической реакции реакционноспособной группой является алкилен, способный вступать в реакции 1,3-циклоприсоединения с азидом. Такие подходящие реакционноспособные группы включают, не ограничиваясь перечисленным, напряженные алкины, например, подходящие для активируемых напряжением реакций циклоприсоединения между алкином и азидом (SPAAC), циклоалкины, например, циклооктины, бензаннелированные алкины и алкины, способные вступать в реакции 1,3-циклоприсоединения с алкинами в отсутствие медных катализаторов. Подходящие алкины также включают, не ограничиваясь перечисленным, дибензоазациклооктин или
(DIBAC), дибензоциклооктин или
(DIBO),
НООС /
циклооктин или \-О
или
(BARAC), дифторированный .СООН
или
(DIFO), замещенные, например, фторированными алкинами, аза-
циклоалкинами, бицикло [6.1.0]нонином или N-/ (BCN, где R является
алкилом, алкокси или ацилом) и их производными. В частности, полезные алкины
включают ^-'J и N-/ ° . Фрагменты линкер-полезная
нагрузка, включающие такие реакционноспособные группы, используются для конъюгирования антител, функционализированных аридными группами. Такие функционал изированные антитела включают антитела, функционализированные азидо-полиэтиленгликольными группами. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие функционализированные антитела получают обработкой антитела, содержащего, по меньшей мере, один остаток глутамина, например, тяжелой цепи Gin 195, соединением, немущим азидную группу, в присутствии фермента трансглутаминазы.
[0052] В некоторых примерах реакционноспособной группой является алкин,
например,
=/, который может вступать в клик-химическую реакцию с азидом,
или ^ . В некоторых примерах группа взаимодействует с
азидом молекулы модифицированного антитела или его антиген-связывающем фрагмента. В некоторых примерах реакционноспособной группой является алкин,
например, , который может вступать в клик-химическую реакцию с
- -Л
азидом, например, ^ " с образованием клик-химического продукта, например,
. В некоторых примерах реакционноспособной группой является алкин,
например, , который может вступать в клик-химическую реакцию с азидом,
- -Л
например, N N-N ? с образованием клик-химического продукта, например,
1X1 или ^ . В некоторых примерах реакционноспособной группой
является функциональная группа, например, О , которая взаимодействует с остатком цистеина в молекуле антитела или его антиген-связывающего фрагмента с
Ab-s
образованием связи с ним, например, О 5 где АЬ относится к антителу или его антиген-связывающему фрагменту, и S представляет собой атом серы в остатке цистеина, через который функциональная группа связывается с АЬ. В некоторых
О , которая взаимодействует с остатком лизина в молекуле антитела или его
антиген-связывающего фрагмента с образованием связи с ним, например, ^ ,
где АЬ относится к антителу или его антиген-связывающему фрагменту и NH относится к атому NH на боковой цепи остатка лизина, через который функциональная группа связывается с АЬ.
В. КОНЪЮГАТЫ
[0053] В изобретении предложены соединения по формуле (I):
(I)
или их фармацевтически приемлемая соль, где:
А является ариленом или гетероариленом;
L представляет собой линкер;
В А является связующим агентом; и
к представляет собой целое число от 1 до 30.
1. Фрагменты "А"
[0054] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является
ариленом. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является гетероариленом. В некоторых вариантах осуществления изобретения арилен или гетероарилен замещен одной или несколькими электроноацепторными группами и/или
одной или несколькими электронодонорными группами.
[0055] В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет
собой двухвалентный радикал бензола, пиридина, нафталина или хинолона, которые являются необязательно замещенными.
[0056] В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет
собой двухвалентный радикал бензола, который необязательно замещен членом, выбираемым из группы, включающей амино, амидо, алкил, гало, галоалкил, алкокси, и галоалкокси.
[0057] В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет собой двухвалентный радикал бензола, который необязательно замещен членом, выбираемым из группы, включающей алкил, алкокси, галоалкил, и гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет собой двухвалентный радикал бензола, который необязательно замещен членом, выбираемым из группы, включающей метил, метокси, трифторметил, фтор, хлор и бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет собой двухвалентный радикал бензола, который необязательно замещен членом, выбираемым из группы, включающей гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, амино,
-!-ORA 4-S02RA
5 , г г , г , или азидо, где R представлен алкилом. [0058] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^ , * , ^ ^ , или R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил, гетероалкил,
-|-ORA 4-SCbRA -l-^-RA гетероциклоалкил, циано, нитро, амино, 5 , 2 ^ , г , или азидо,
где RA является алкилом;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5.
УС-> A
[0059] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является: ~, где:
R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-!-ORA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, амино, 5 , О
4-S02RA 4^-RA г 1 , 5 , или азидо,
где RA является алкилом; и
п представляет собой целое число от 0 до 4. В некоторых вариантах
осуществления изобретения п равен 0, 1, 2, или 3. В некоторых вариантах
осуществления изобретения п равен 0, 1, или 2. В некоторых вариантах осуществления
изобретения п равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения п
равен 1.
(R1)n
[0060] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является: ^ , где:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила; и
п представляет собой целое число от 0 до 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 0, 1, 2, или 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 0, 1, или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 1.
[0061] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
\=/ или R ,
где:
R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-?-ORA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, амино 5 , О
4-S02RA 4-U-RA г z , г , или азидо,
где RA является алкилом; п представляет собой целое число от 0 до 4; m представляет собой целое число от 0 до 3; р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро,
-\-ORA 4-S02RA -|-U-RA амино, 5 , 5 1 , г , азидо,
где RA является алкилом;
[0062] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в
каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила.
[0063] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является Ci-6
алкилом или Ci-б алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
является О алкилом. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является
Ci алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является гало. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является галоалкилом. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является гетероциклоалкилом. В
некоторых из этих вариантов R1 представляет собой метил, этил, метокси или этокси. В
некоторых из этих вариантов R1 является метилом. В некоторых из этих вариантов R1
является метокси. В некоторых из этих вариантов R1 является трифторметилом. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор, хлор,
или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 - фтор. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых из
этих вариантов R1 представляет собой пирролидинил. В некоторых из этих вариантов
R1 представляет собой морфолинил.
[0064] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является
независимо алкилом или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
является независимо О-6 алкилом, Ci-б галоалкилом или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является независимо гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой независимо фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0065] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является
независимо, алкилом, алкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является независимо Ci-б алкилом, Ci-б алкокси, Ci-б галоалкилом, Ci-6 галоалкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 является независимо гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой независимо фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой Ci алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой гало. В некоторых из этих вариантов R1 представляет собой метил. В некоторых из этих вариантов R1 представляет собой метокси. В некоторых из этих вариантов R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор, хлор, или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0.
[0066] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0067]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0068]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где n равен 0, 1,2, 3, или 4.
[0069] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где п равен 0, 1, или 2. В некоторых примерах п равен 0 или 1; и R1 является алкилом, алкокси, гало, галоалкилом, или галоалкокси. В некоторых примерах R1 является алкилом, алкокси, гало, галоалкилом или гетероциклоалкил ом. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, амино, "^"°RA5 ^ S02R ^ О
_|JL_rA
* , или азидо, где RA является алкилом.
[0070] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где п равен 0, 1, или 2. В некоторых примерах п равен 0 или 1; и R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, Ci-б галоалкил, Ci-б галоалкокси. В некоторых примерах R1 является гетероциклоалкилом. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, метокси, трифторметил, фтор, хлор или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых примерах R1 представляет собой пирролидинил. В некоторых примерах R1 представляет собой морфолинил.
[0071] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где n равен 0, 1, или 2. В некоторых примерах п равен 0 или 1; R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, О-бгалоалкил, Ci-б галоалкокси, или гетероциклоалкил; и
О н О N-(CH2)bJl-N^X
-Г-
L является нзс снз , где b - целое число от 2 до 8 и
представляет собой связь со связующим агентом.
[0072] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где п равен 0, 1,2, 3, или 4.
[0073] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, Ci-б галоалкил, Ci-б галоалкокси, или гетероциклоалкил. В определенных вариантах из числа вышеперечисленных R1 является метокси или метилом. В отдельных вариантах осуществления изобретения R1 является метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, метокси, трифторметил, фтор, хлор, или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых примерах R1 представляет собой пирролидинил. В некоторых примерах R1 представляет собой морфолинил. В некоторых примерах R1
представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро,
?A _iJJ_
s_ora -?-SO R - i R л
амино, ~> un , i ^ i s или азидо, где RA является алкилом.
[0074] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где:
R1 представляет собой гало, метил, метокси, или трифторметил; и п равен 0, 1 или 2.
[0075] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0076] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
X представляет собой атом водорода, гало, метил, метокси, или трифторметил.
[0077] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
X представляет собой атом водорода, гало, метил, метокси, или трифторметил; ^1
< - связь с атомом азота сложного аминоэфира, прямо связанным с молекулой
лекарственного вещества; и ^ - связь с атомом азота, связанным с линкером.
[0078] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
R1, независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси;
соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол,
фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил, или 1-пирролидинил. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0079] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гало, галоалкил, галоалкокси;
соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил, или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0080] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
независимо в каждом случае представляет собой атом водорода,
алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гало, галоалкил, или
галоалкокси; 5 и * соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой алкил или алкокси. В отдельных вариантах осуществления изобретения, R1 представляет собой пропиламино, дифтор-метокси, фенил, 2-фторфенил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород. В некоторых примерах R1 представляет собой пирролидинил. В некоторых примерах R1 представляет собой морфолинил.
[0081] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
соответствуют вышеприведенным определениям.
[0082]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0083] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0084] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0085] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0086] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
CF3.
5 и г соответствуют вышеприведенным определениям.
[0087] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
FX- ' ¦ а
W //
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0088] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0090]
< и * соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0091]
< и < соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0092]
г и г соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
i и г соответствуют вышеприведенным определениям.
[0093] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0094]
г и г соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
i и i соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0096]
5 и 5 соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0097]
i и i соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0098]
i и i соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0099]
* и г соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
i и i соответствуют вышеприведенным определениям. [00100] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
е и [0101]
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
< И
[0102]
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
СН3
i1 / \ ^2
[0103]
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
СН3
<Л / \ ^2
* И
[0104]
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
СН3
* И
[0105]
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
CI.
< и * соответствуют вышеприведенным определениям.
[0106] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
¦ 2
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0107] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
.1 СН3
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0108] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
СН3
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0109] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
^-У < , где X представляет собой F, CI, Br, CN, метокси, метил, трифторметил, диметиламино или циклопропил;
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
X , где X представляет собой F, CI, Br, CN, метокси, метил, трифторметил, диметиламино, 1-метил-этил-тио или циклопропил;
1 и i соответствуют вышеприведенным определениям.
[0110] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
R1 ,
где каждый R1 независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкил, или галоалкокси;
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород,
фтор, метил, трифторметил, или метокси. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 представляет собой фтор, хлор, бром или иод.
[0111] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
s1 / \ <,2
где ^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0112] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где каждый R1 независимо в каждом случае представляет атом водорода, алкил,
алкокси, гало, галоалкил, или галоалкокси; где ^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0113] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где ^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0114] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0116]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
V/=N (R1)q
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0117]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где < и < соответствуют вышеприведенным определениям.
[0118] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где i и < соответствуют вышеприведенным определениям.
[0119] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где ^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям
[0120] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где i и < соответствуют вышеприведенным определениям.
[0121] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
[0123] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0122] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где п равен 0, 1,2, или 3.
[0124] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где п равен 0, 1 2, или 3.
[0125] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n
где:
R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, Ci-б галоалкил, О-б галоалкокси, Ci-б гетероалкил, или гетероциклоалкил; и п равен 0, 1 2, 3 или 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой Ci-б алкил, С1-6 алкокси, гало, Ci-б галоалкил, О-6 галоалкокси, Ci-б гетероалкил, или гетероциклоалкил.
[0127]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0128]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил,
алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В
некоторых вариантах осуществления изобретения X независимо в каждом случае
представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления
изобретения X представляет собой фтор, хлор, бром, иод, диметиламино, метиламино,
метил, метокси, этокси, или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления
изобретения X представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления
изобретения X представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления
изобретения X представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах
осуществления изобретения X представляет собой фтор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения X представляет собой хлор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения X представляет собой бром. В некоторых вариантах
осуществления изобретения X представляет собой морфолинил. В некоторых
вариантах осуществления изобретения X представляет собой пирролидинил.
[0129] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
X х XX XXX
-*1/=Ч il/"x -%j "FU tw -rw
ук* /fc
, или
где:
X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил,
алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X независимо в каждом случае представляет собой фтор, хлор, бром, иод, диметиламино, метил, метиламино, метокси, этокси, трифторметил метокси, пирролидинил или морфолинил;
где 5 и 5 соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой морфолинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой пирролидинил.
[0130] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
, или
X X
где:
X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гагсо, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой фтор, хлор, бром, иод, диметиламино, метиламино, метил, метокси, этокси, или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X - метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой морфолинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой пирролидинил.
[0131] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
X независимо в каждом случае представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил, или гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X независимо в каждом случае представляет собой фтор, хлор, бром, иод, диметиламино, метил, метиламино, метокси,
где ^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой морфолинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения X представляет собой пирролидинил.
2. Линкеры
[0132] Линкерная часть конъюгатов, описанных в настоящем документе,
представляет собой двухвалентный фрагмент, который ковалентно связывает
связующий агент с описанными в настоящем документе майтанзиноидными
соединениями и их производными. К подходящим линкерам относятся такие из них,
которые высвобождают, по меньшей мере, часть майтанзиноида в присутствии
фермента или в определенном диапазоне или при определенном значении рН.
[0133] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер содержит
отщепляемый ферментом фрагмент. Иллюстративные отщепляемые ферментом
фрагменты включают, не ограничиваясь перечисленным, пептидные связи,
сложноэфирные связи, гидразона и дисульфидные связи. В некоторых вариантах
осуществления изобретения линкер содержит отщепляемый катепсином линкер.
[0134] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособный линкер содержит неотщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления изобретения неотщепляемым реакционноспособным
Лекарственное вещество
линкером является 0 или его остаток. В
некоторых вариантах осуществления изобретения неотщепляемым
V-^ о
реакционноспособным линкером является или его остаток.
[0135] К подходящим линкерам относятся также, не ограничиваясь
перечисленным, химически связанные с двумя остатками цистеина одной молекулы
связующего агента, например, антитела. Такие линкеры могут служить для имитации
дисульфидных связей антитела, которые разрушаются в процессе конъюгации.
[0136] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер содержит
одну или несколько аминокислот. Подходящие аминокислоты включают природные, неприродные, стандартные, нестандартные, протеиногенные, непротеиногенные и L-, или D-a-аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер содержит аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин, триптофан, фенилаланин, пролин, серии, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин, гистидин или цитруллин либо их производные.
[0137] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер содержит
валин и цитруллин.
[0138] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер является:
4SP-AA1-AA4-
где:
SP представляет собой спейсер;
-f-
одна или несколько связей со связующим агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0139] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
-f-SP-
где:
-Г-
SP представляет собой спейсер; и
представляет собой одну или несколько связей со связующим
[0140] В некоторых примерах спейсером является двухвалентный фрагмент,
который соединяетфрагмент АА'-АА2 со связующим агентом (ВА). Подходящими
спейсерами являются, не ограничиваясь перечисленным, спейсеры, содержащие
алкилен или полиэтиленгликоль. Концами спейсеров, т.е., участком спейсера, прямо
связанным со связующим агентом или АА1, могут быть фрагменты, полученные из
реакционноспособных фрагментов, которые используются в целях связывания
свободного антитела или АА1 со спейсером во время химического синтеза конъюгата.
В некоторых примерах концами спейсеров, т.е., участками спейсера, прямо
связанными со связующим агентом или АА1, могут быть остатки
реакционноспособных фрагментов, которые используются в целях связывания
свободного антитела или АА1 со спейсером во время химического синтеза конъюгата.
[0141] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсер содержит
алкилен. В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсер содержит С5-7 алкилен. В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
или
-г-
представлет собой связь со связующим агентом; и b представляет собой целое число от 2 до 8. В некоторых примерах b выбирают из 2, 3, 4, 5, 6, 7, или 8. В некоторых примерах b равен 2. В некоторых примерах b равен 3. В некоторых примерах b равен 4. В некоторых примерах b равен 5. В некоторых примерах b равен 6. В некоторых примерах b равен 7. В некоторых примерах b равен 8.
[0142] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
связь со связующим агентом.
где:
-f-
г - связь со связующим агентом.
[0144] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
.BA-S .BA-S J** RN RM
. о о -1-ч о н о -§-\ 0 У 9
^)-^0-(СН2)ь-1Ц- BA-s)^-N-(CH2)b-^i- ^-^-O^CHaJb-"-!-
^ , ^ , или *
где:
RN представляет собой атом водорода или алкил; RM представляет собой алкил;
BA-S
две связи, представленные < , являются связями с цистеинами связующего агента; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0145] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
а О О
где:
-Г-
представляет собой связь со связующим агентом; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0146] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
где:
¦Г-
представляет собой связь со связующим агентом; и g представляет собой целое число от 2 до 20. В некоторых вариантах осуществления изобретения g равен от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления
изобретения g равен 2, 4, 6, или 8.
[0147] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
7^ О
[0148] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
7~ о
[0149]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0150]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0151]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0152]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0153]
[0154]
о о .
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является: О S
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0155]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0156]
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0157]
X является N или О; R и R каждый независимо являются водородом или алкилом; и b представляет собой целое число от 1 до 8.
[0158]
В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляетсобой: валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, аспарагин-треонин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовую кислоту- аспарагин, аспарагин-глутаминовую кислоту, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, аспарагин-аланин, валин-аланин, аланин-валин, валин-глицин, или глицин-валин.
[0159] В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляетсобой: валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых вариантах
осуществления изобретения АА'-АА2 представляетсобой: валин-цитруллин.
[0160] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и
RAA2 представляет собой боковую цепь аминокислоты.
[0161] В настоящем изобретении термин "боковая цепь аминокислоты"
относится к одновалентному заместителю, не являющемуся водородом, связанному с а-углеродом а-аминокислоты, включающей природные и неприродные аминокислоты. Примеры боковой цепи аминокислоты включают, не ограничиваясь перечисленным, заместители по а-углероду в молекулах аланина, валина, лейцина, изолейцина, метионина, триптофана, фенилаланина, пролина, серина, треонина, цистеина, тирозина, аспарагина, глутамина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, лизина, аргинина, гистидина, и цитруллина.
[0162] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
* Н и -SP-N^N
I Н Н3С СН3
ОуМН2 NH
где:
-Г-
SP представляет собой спейсер; и
представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом.
[0163] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
OyNH2 NH
J о н О
^Ј/N-(CH2)b-iLNvAN 0 Н3С^СН3
где:
представляет собой связь со связующим агентом; и b представляет собой целое число от 2 до 8.
собой:
OyNHz NH
Л н s о
^-(CH^-N-LnJI^
Н3С СН3
где:
-Г-
представляет собой связь со связующим агентом; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0165] В некоторых вариантах осуществления изобретения ВА является
антителом, и линкер представляет собой:
две связи, представленные 5 , являются связями с цистеинами
антитела; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0166] В некоторых вариантах осуществления изобретения В А является
антителом, и линкер представляет собой:
O^NH2
n-o-(a"1Ji-HvAN
t BA-S
где:
НзС^^СНз
, BA-S
две связи, представленные 5 , являются связями с цистеинами
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0167] В некоторых вариантах осуществления изобретения ВА является
антителом, и линкер представляет собой:
Л5 0 RN4 RM
ОуМН2 NH
Н3С СН3
где:
RN представляет собой атом водорода или алкил; RM представляет собой алкил;
две связи, представленные
являются связями с цистеинами
антитела; и
[0168]
собой:
b представляет собой целое число от 2 до 8.
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
CyNH2 NH
где:
[0169]
собой:
-Г-
представляет собой связь со связующим агентом; и В представляет собой целое число от 2 до 8.
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
S Ж H3C CH3
где:
-f-
г представляет собой связь со связующим агентом; и g представляет собой целое число от 2 до 20. В некоторых вариантах осуществления изобретения g равен от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения g равен 2, 4, 6, или 8.
[0170] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
О Н Н 9
> - о Н3С сн3
[0171] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
[0172] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
собой:
,NH
[0173]
собой:
S О Н Л Н О
Н3С СН3
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
[0174]
собой:
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
.NH
о н О
Н3С СНз
[0175]
собой:
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
O^NH2 .NH
[0176]
собой:
0 Н 0 Г
N^AnA ь
Н3С СН3 Н о
Н3С СН3
В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
[0177]
собой:
3. Связующие агенты
[0178] Подходящие связующие агенты включают, не ограничиваясь
перечисленным, антитела, лимфокины, гормоны, факторы роста, рецепторы вирусов, интерлейкины или любые другие молекулы или вещества, связывающие клетки или пептиды.
[0179] В некоторых вариантах осуществления изобретения связующим агентом
является антитело. В некоторых вариантах осуществления изобретения антителом является моноклональное антитело, поликлональное антитело, фрагмент антитела (Fab, Fab', и F(ab)2, миниантитело, диатело, триотело и т.п.) или биспецифическое антитело. Описанные в настоящем документе антитела могут быть гуманизированы с использованием способов, описанных в патенте США № 6,596,541 и публикации США № 2012/0096572, каждый из которых включены во всей полноте в данный документ посредством ссылки.
[0180] В тех случаях, когда связующим агентом является антитело, оно связано
с антигеном-партнером по связыванию, являющимся полипептидом, и может быть трансмембранной молекулой (например, рецептором) или фактором роста, которая может быть гликозилированной или фосфорилированной. Иллюстративные антигены включают, не ограничиваясь перечисленным, молекулы, такие как ренин; гормон роста, включая гормон роста человека и гормон роста крупного рогатого скота;
соматотропин-рилизинг-фактор; паратиреоидный гормон; тиреотропный гормон; липопротеины; альфа1-антитрипсин; А-цепь инсулина, В-цепь инсулина; проинсулин; фолликулостимулирующий гормон; кальцитонин; лютеинизирующий гормон; глюкагон; факторы свертывания, такие как фактор vmc, фактор IX, тканевый фактор (TF), и фактор Виллебранда; противосвертывающие факторы, такие как протеин С; предсердный натрийуретический фактор; легочный сурфактант; активатор плазминогена, такой как урокиназа или активатор плазминогена урокиназного или тканевого типа (трет-РА); бомбезин; тромбин; геомпоэтический фактор роста; фактор некроза опухоли-альфа и -бета; энкефалиназа; RANTES (хемокин, выделяемый Т-клетками при активации); макрофагальный белок воспаления человека (MIP-1-альфа); сывороточный альбумин, например, сывороточный альбумин человека; ингибирующее вещество Мюллера; А-цепь релаксина; В-цепь релаксина; прорелаксин; мышиный гонадотропин-ассоциированный пептид; микробный белок, например, бета-лактамаза, ДНК-аза; 19Е; цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный белок (CTLA), такой как CTLA-4; ингибин; активин; фактор роста эндотелия сосудов (VEGF); рецепторы гормонов или факторов роста; протеин А или D; ревматоидные факторы; нейротропный фактор, такой как костный нейротрофический фактор (КНТФ), нейротрофин-3, -4, -5, или -6 (NTPET-3, NT4, NTPET-5, или NTPET-6), или нейроральный ростовой фактор, такой как NGF-P; тромбоцитарный ростовой фактор (ТРФ); фактор роста фибробластов, такой как aFGF и bFGF; рецептор фактора роста фибробластов 2 (FGFR2), эпидермальный фактор роста (EGF); трансформирующий фактор роста (TGF), такой как TGF-a и TGF-P, включая TGF-pl, TGF-|32, TGF- РЗ, TGF-P4, или TGF- Р5; инсулиноподобный фактор роста-I и -II (IGF-I и IGF-II); дес (1-3)-IGF-I (мозговой IGF-I), белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста, ЕрСАМ, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUC1, MUC16, STEAP, STEAP2, СБА, TENB2, рецепторы EphA, рецепторы EphB, рецептор фолата, FOLRI, мезотелин, крипто, альфа-V-бета-б, интегрины, VEGF, VEGFR, EGFR, рецептор трансферрина, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD-протеины, такие как CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD 137, CD 138, CD 152, или антитело,которое связывается с одним или несколькими опухолеассоциированными антигенами или рецепторами клеточной поверхности, предложенными в публикации США № 2008/0171040 или публикации США № 2008/0305044 и включенными во всей полноте в данный документ посредством
ссылки; эритропоэтин; остеоиндуктивные факторы; иммунотоксины; костный морфогенетический протеин (BMP); интерферон, такой как интерферон-альфа, -бета, и -гамма; клирующие факторы (CSF), например, M-CSF, GM-CSF, и G-CSF; интерлейкины (ИЛ), например, от ИЛ-1 до ИЛ-10; супероксиддисмутаза; рецепторы Т-лимофцитов; белки клеточной оболочки; стимулятор гемолиза; вирусный антиген, такой как, например, часть оболочки ВИЧ; транспортные белки; "хоминг"-рецепторы; аддрессины; регуляторные белки; интегрины, такие как CD Па, CD lib, CD 11 с, CD 18, ICAM, VLA-4 и VCAM; опухолеассоциированные антигены, такие как AFP, ALK, В7Н4, белки BAGE, Р-катехин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9 (карбоангидраза IX), каспаза-8, CD20, CD40, CD123, CDK4, CEA, CLEC12A, c-kit, cMET, CTLA4, циклин-Bl, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, эндоглин, Epcam, EphA2, ErbB2/Her2, ЕгЬВЗ/НегЗ, ErbB4/Her4, ЕТУ6-АМЛ, Fra-1, FOLR1, белки GAGE, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gplOO, Her2, HLA/B-raf, HLA/EBNA1, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, белки MAGE, MARTPET-1, мезотелин, МЛ-IAP, Mucl, Mucl6, CA-125, MUM1, NA17, NGEP, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESOl, OX40, pl5, p53, PAP, РАХЗ, PAX5, PCTA-1, PDGFR-a, PDGFR-p, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSCA, PSGR, PSMA (FOLH1), белки RAGE, Ras, RGS5, Rho, SARTPET-1, SARTPET-3, Steap-1, Steap-2, STn, сурвивин, TAG-72, TGF-P, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназа и уроплакин -3 и фрагменты любого из вышеперечисленных полипептидов. В некоторых примерах белки GAGE выбирают из GAGE-1 и GAGE-2. В некоторых примерах белки MAGE выбирают из MAGE-1,-2, -3,-4, -6, и-12
[0181] Иллюстративные антигены включают также, не ограничиваясь
перечисленным, ВСМА, SLAMF7, В7Н4, GPNMB, UPK3A, и LGR5. Иллюстративные антигены включают также, не ограничиваясь перечисленным, MUC16, PSMA, STEAP2, и HER2.
[0182] В некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают
рецептор пролактина (PRLR) или простатический специфический мембранный антиген (PSMA). В некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают MUC16. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают STEAP2. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают PSMA. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают HER2. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигеном является рецептор пролактина (PRLR) или простатический специфический мембранный антиген (PSMA).
В некоторых вариантах осуществления изобретения антигеном является MUC16. В
некоторых вариантах осуществления изобретения антигены включают PSMA. В
некоторых вариантах осуществления изобретения антигеном является HER2. В
некоторых вариантах осуществления изобретения антигеном является STEAP2.
[0183] Связующие агенты включают также, не ограничиваясь перечисленным,
белки с анкириновым повтором, интерфероны, лимфокины, такие как ИЛ -2 или ИЛ-3, гормоны, такие как инсулин, и глюкокортикоиды, факторы роста, такие как EGF, трансферрин и фибронектин III типа.
[0184] В некоторых вариантах осуществления изобретения связующие агенты
взаимодействуют с опухолевыми антигенами или связываются с ними, в том числе, с
антигенами, специфичными для типа опухоли, или антигенами, которые являются
перекрестно-реагирующими, сверхэкспрессируются или модифицированы у
определенного типа опухоли. Примеры включают, не ограничиваясь перечисленным:
альфа-актинин-4 и рак легкого, ARTC1 и меланому, BCR-ABL составной белок и
хронический миелоидный лейкоз, B-RAF, CLPP или Cdc27 и меланому, CASP-8 и
плоскоклеточную карциному, и hsp70-2 с почечноклеточной карциномой и также
следующие перекрестнореагирующие опухолеспецифичные антигены, например:
BAGE-1, GAGE, GnTV, KK-LC-1, MAGE-A2, NA88-A, TRP2-INT2.
[0185] В некоторых вариантах осуществления изобретения связующим агентом
является антитело. В некоторых вариантах осуществления изобретения связующим
агентом является моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления
изобретения связующим агентом является поликлональное антитело. В некоторых
вариантах осуществления изобретения антителом является антитело к PSMA, антитело
к MUC16, антитело к HER2 или антитело к EGFRvIII либо антитело к STEAP-2.
[0186] Линкеры могут быть связаны со связующим агентом, например,
антителом или антиген-связывающей молекулой, через присоединение к определенной аминокислоте антитела или антиген-связывающей молекулы. Иллюстративные аминокислотные присоединения, которые могут быть использованы в контексте данного аспекта изобретения, включают, например, лизин {см., например, патент США 5,208,020; патент США 2010/0129314; Hollander et al, Bioconjugate Оге/я.,2008, 19:358361; WO 2005/089808; US 5,714,586; US 2013/0101546; и US 2012/0585592), цистеин (см., например, патент США 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; патент США 2013/0101546; и патент США 7,750,116), селеноцистеин (см., например, WO 2008/122039; и Hofer et al, Proc.
Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 705:12451-12456), формилглицин (см., например, Carrico et
al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013,
770:46-51, и Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 70:1052-1067), неприродные
аминокислоты (см., например, WO 2013/068874, и WO 2012/166559), и кислые
аминокислоты (см., например, WO 2012/05982). Линкеры могут быть конъюгированы
через глутамин посредством катализируемой трансглутаминазой хемо-ферментативной
конъюгации (см., например, Dennler et al, Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569-578).
Линкеры тоже могут быть конъюгированы с антиген-связывающим белком через
присоединение к углеводам (см., например, патент США 2008/0305497, WO
2014/065661, и Ryan et al, Food & Agriculture Immunol, 2001, 75:127-130), и
дисульфидные линкеры (см., например, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO
2011/018611, WO 2014/197854, и Shaunak et al, Nat. Chem. Biol, 2006, 2:312-313).
[0187] В некоторых вариантах осуществления изобретения связующим агентом
является антитело, и антитело связано с линкером через остаток лизина. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело связано с линкером через остаток цистеина.
4. Иллюстративные варианты осуществления изобретения
[0188] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
(R1)n (R1)m ,R1^ y/=N(R1)q
A A ,^r4
. или где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-l-ORA 4-S02RA
гетероалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, циано, нитро, s ^ , 5 1 , О
5 , или азидо,
где RA представляет собой алкил; п представляет собой целое число от 0 до 4; m представляет собой целое число от 0 до 3; р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5; и
L является:
-^-SP-AA1-AA2-|-где:
SP представляет собой спейсер;
^~ представляет собой одну или несколько связей со связующим агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0189] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
(R1)n (R1)m
А А
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой Ci-б алкил, Ci-6
алкокси, С i-6 галоалкил,
Сi-6 галоалкокси, или гало;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5; и
L является:
-|-SP-AA1-AA4-
где:
SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или несколько связей со связующим агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0190] В некоторых вариантах осуществления изобретения
(R1)n (R1)m
А А
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-|-ORA -|-S02RA
гетероалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 , i z , О
г , или азидо,
где RA представляет собой алкил; m представляет собой целое число от 0 до 3; р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5; и L является:
4SP-AA1-AA2-|-
где:
, или
Л Н S
А? N-(CH2)b-N-4-
Л t О
где:
[0191]
где:
представляет собой связь со связующим агентом; и b представляет собой целое число от 2 до 8; и АА1 представляет собой аминокислоту; и АА2 представляет собой аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
п представляет собой целое число от 0 до 4; и L является:
-ij-SP-ZW-AA2-^-
где:
SP представляет собой спейсер;
41 представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0192] В некоторых вариантах осуществления изобретения
где:
А является:
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
п представляет собой целое число от 0 до 4; и L является:
где: j SP представляет собой спейсер; и I
-f- •
* представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом. \
[0193] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
Стр. 55 |
010-8693-4315/1/AMERICAS !
(R1)n
где
R1, независимо в каждом случае, представляет собой Ci-б алкил, Ci-б
алкокси, Сi-6 галоалкил, Ci-б галоалкокси, гало, или гетероциклоалкил; и п равен 0, 1, или 2; и
L является:
о RM2
= АД1 О
RAA1
где:
SP представляет собой спейсер;
-f-
* представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом;
[0194]
R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и
RAA2 представляет собой боковую цепь аминокислоты.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
или
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, ~^"окА5 ^ S02R ^ О
г , или азидо,
где RA представляет собой алкил; где п представляет собой целое число от 0 до 4; L является:
о R"2
RAA1 О
'- н Д *
где:
SP представляет собой спейсер; ^ представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом;
R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и RAA2 представляет собой боковую цепь аминокислоты.
[0195] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
(R1)n
где
R , независимо в каждом случае, является гало; и п равен 0, 1, или 2; и
L является:
ОуЖ2 NH
J о н О
АГ N-(CH2)B-JJ-N^4N
0 Н3С^СНз 0
где:
-Г-
представляет собой связь со связующим агентом; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0196] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
\=/ или R1
галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-l-ORA 4S02RA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 , i ' ,
_|JLRA
или азидо, где RA представляет собой алкил;
L является:
J о н о
AWN~(CH2)bJLN^N
0 Н3С^СН3
ОуМН2 NH
где:
[0197]
А является:
где
представляет собой связь со связующим агентом; где п представляет собой целое число от 0 до 4; и b представляет собой целое число от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, является гало; и п равен 0, 1, или 2; и
L является:
где 5 представляет собой связь со связующим агентом.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является: (R1)n
\==/ или
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-l-ORA 4-S02RA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 ^ , г ' , О
г , или азидо,
где RA представляет собой алкил; где п представляет собой целое число от 0 до 4; L является:
или
Н3С СН3
где < представляет собой связь со связующим агентом.
[0199] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
L является
или
Н3С СН3
[0200]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
R1 , независимо в каждом случае, представляет собой атом
водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкокси, или галоалкил; < представляет собой связь с атомом азота сложного аминоэфира, прямо связанным с с
молекулой лекарственного вещества; и ^ представляет собой связь с атомом азота,
связанным с линкером. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил,
пирролидинил, или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0201] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкил, галоалкокси;
< представляет собой связь с атомом азота сложного аминоэфира, прямо связанным
с с молекулой лекарственного вещества; и ^ представляет собой связь с атомом азота, связанным с линкером. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил, или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0202] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
\ /(Г // СНз СН3
\ /(Г //
CF3 CF3
ci . а'
ОГ , ИЛИ ВГ ; и
[0203]
А является:
Н3С СН3 иди В некоторых вариантах осуществления изобретения
/ :и
или Нзс снз
[0204] В некоторых вариантах осуществления изобретения
ВА представляет собой антитело,
f Л
где
R1, независимо в каждом случае, является гало; и п равен 0, 1, или 2; и
L является:
OyNH2
° Jk н 0
или нзс снз
-г-
где * представляет собой связь со связующим агентом. [0205] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
(R1)n
вышеприведенных, А является: * , где:
R1 независимо в каждом случае выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила,
и гетероциклоалкила; и
п представляет собой целое число от 0 до 4.
[0206] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
<1
i и г
соответствуют вышеприведенным определениям.
[0207] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
< и г соответствуют вышеприведенным определениям.
[0208] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
к1'
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0209] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
i и i соответствуют вышеприведенным определениям.
[0210] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
< и * соответствуют вышеприведенным определениям.
[0211] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
соответствуют вышеприведенным определениям.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
СНз
s1 / \ ..2
* и [0213]
соответствуют вышеприведенным определениям
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
CI.
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0214] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0215] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0216] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0217] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
^ и ^ соответствуют вышеприведенным определениям.
[0218] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
(R1)n
[0219] В некоторых вариантах осуществления изобретения, включая любой из
вышеприведенных, А является:
(R1)n
где п равен 0, 1,2, или 3.
[0220] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
где
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-|-ORa i-S02RA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 v , < г , О
5 , или азидо; и
q представляет собой целое число от 0 до 5; и
L является:
= Н Л
RAA2
RAA1 0
где:
SP представляет собой спейсер;
^ одна или несколько связей со связующим агентом;
R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и
RAA2 представляет собой боковую цепь аминокислоты.
[0221] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-I-ORA 4S02RA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, s , г *¦ , О
_|1L_RA
г , или азидо; где q представляет собой целое число от 0 до 5; L является:
о *"*
: Н Д
RAA1 0
где:
SP представляет собой спейсер;
¦г-
представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом;
R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и R^ представляет собой боковую цепь аминокислоты.
[0222] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
, или где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, ~^"0R , ^ ^02R ^ О
_U1_RA
< , или азидо; где q представляет собой целое число от 0 до 5; и L является:
A^N"(Ch2)bJL^^Ej
0 Н3С^СН3
где:
представляет собой связь со связующим агентом; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0223] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-\-ORA 4S02RA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 ^ , < 1 , О
-RA
, или азидо; и q представляет собой целое число от 0 до 5; и
или
° А " 0 Н3С СН3
где 5 представляет собой связь со связующим агентом.
[0224] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)q (R1)q
, ИЛИ
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероарил, гетероалкил,
-ii-ORA 4-S02RA -H-RA гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 , г г , 5 , или азидо;
где q представляет собой целое число от 0 до 5;
L является:
или
0 н 9
Н3С СН3
где г представляет собой связь со связующим агентом.
[0225] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
L является
или нзс снз
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по формуле I является:
н3с" \у v N ~Y ^осн 6 н3с ci
BA\L1-N'%"4) н н
н3с4" м/ у N -у -осн3 б н3с с,
L2_N'A^NA0
н н
k х t
где А является ариленом или гетероариленом, L1 и L2 представляют собой линкеры, В А является связующим агентом, к представляет собой целое число от 0 до 30, и t представляет собой целое число от 0 до 8. В некоторых из этих вариантов L1 представляет собой линкер, который связывается с В А через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс к отражает количество линкеров L1, связанных с В А через остатки лизина на В А. В некоторых из этих вариантов L2
представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс t отражает количество линкеров L2, связанных с ВА через остатки цистеина на ВА. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является монодентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является бидентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 4. В некоторых из этих примеров сумма k +1 равна 1-8.
[0226] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
где А является ариленом или гетероариленом, L1 и L2 представляют собой линкеры, и В А является связующим агентом. В некоторых из этих вариантов L1 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина.
[0227] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
(R1)n (R1)n
, ИЛИ
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероалкил, гетероарил,
или азидо,
¦ORA 4S02RA ~\-^-RA
гетероциклоалкил, циано, нитро,
m представляет собой целое число от 0 до 3; р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5; L является
где А является ариленом или гетероариленом, L1 и L2 представляют собой линкеры, ВА является связующим агентом, к представляет собой целое число от 0 до 30, и t представляет собой целое число от 0 до 8. В некоторых из этих вариантов L1 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс к отражает количество линкеров L1, связанных с В А через остатки лизина на В А. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс t отражает количество линкеров L2, связанных с ВА через остатки цистеина на ВА. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является монодентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является бидентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 4.
[0228] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
где А является ариленом или гетероариленом, L1 и L2 представляют собой линкеры, и В А является связующим агентом. В некоторых из этих вариантов L1 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина.
[0229] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
где А является ариленом или гетероариленом, L1 и L2 представляют собой линкеры, и В А является связующим агентом. В некоторых из этих вариантов L1 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина.
[0230] В некоторых вариантах осуществления изобретения
А является:
(R1)n (R1)m ,R1V ^/=N(R1)q
I I м ^ > P "V4 VI
A A US
v^.^.x^f ,или
где:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероалкил, гетероарил,
-l-ORA 4-SO?RA -l-U-RA гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 ^ , < 1 , * , или азидо,
где RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5;
L является
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по формуле I является:
где А является ариленом или гетероариленом, L1, L2. и L3 представляют собой линкеры, ВА является связующим агентом, к представляет собой целое число от 0 до 30, t - целое число от 0 до 8, и g представляет собой целое число от 0 до 4. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс к отражает количество линкеров L1, связанных с ВА через остатки лизина на ВА. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс t отражает количество линкеров L2, связанных с ВА через остатки цистеина на ВА. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является монодентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда линкер L2 является бидентатным линкером, t представляет собой целое число от 0 до 4. В некоторых из этих примеров, сумма k + t равна 1-8. В некоторых из этих вариантов L3 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток глутамина. В некоторых из этих вариантов подстрочный индекс g отражает количество линкеров L3, связанных с В А через остатки глутамина на В А.
[0231] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
где А является ариленом или гетероариленом, L1, L2, и L3 представляют собой линкеры, и В А является связующим агентом. В некоторых из этих вариантов L1 представляет
Стр. 74
собой линкер, который связывается с ВА через остаток лизина. В некоторых из этих вариантов L2 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток цистеина. В некоторых из этих вариантов L3 представляет собой линкер, который связывается с ВА через остаток глутамина.
[0232] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n (R1)m ,R1v V7=N(R1)q
{ <^/ {^J/ iKj^i- ,или ^=> ).
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, галоалкокси, арил, алкарил,
арилалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 , О
4s02RA -^RA i 1 , < , или азидо,
где RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5.
[0233] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер является:
4SP-AA1-AA4-
где:
SP представляет собой спейсер;
4г представляет собой одну или несколько связей со связующим
агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0234] Спейсер является двухвалентным фрагментом, который соединяет
фрагмент АА'-АА2 со связующим агентом (ВА). Подходящие спейсеры включают, не ограничиваясь перечисленным, спейсеры, содержащие алкилен или полиэтиленгликоль. Концами спейсеров, т.е., участками спейсера, прямо связанными со связующим агентом или АА1, могут быть фрагменты, полученные из
Стр. 75
реакционноспособных фрагментов, которые используются в целях связывания
антитела или АА1 со спейсером во время химического синтеза конъюгата.
[0235] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсер содержит
алкилен. В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсер содержит С5-7 алкилен. В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является: О
или
А?Л-(СН2)Ь^Ц- О Л 1 А?(СН2)Ь^
где:
-Г-
где:
представляет собой связь со связующим агентом.
[0237] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
,BA-S ,BA-S jBA-S RN RM
- -N о о -|-х о н о о V о
aA!)-J1-0-(CH2)b-iL^ ВА-З/-^М-(СН2)ь-^^- BA^s^-O^C^Jb^-
^ , ^ , или <
где:
RN представляет собой атом водорода или алкил; RM представляет собой алкил;
. BA-S
две связи, представленные * , являются связями сцистеинами связующего агента; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0238] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
Д О О
^~ представляет собой связь со связующим агентом; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0239] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
Д ЛЛЛГ
или
U . I .или U
где:
-Г-
5 представляет собой связь со связующим агентом.
[0240] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
где:
4г представляет собой связь со связующим агентом; и
g представляет собой целое число от 2 до 20. В некоторых вариантах
осуществления изобретения g равен от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления
изобретения g равен 2, 4, 6, или 8.
[0241] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0242] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
¦у*, О
[0244] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0243] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0245] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0246] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0247] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0248] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
, BA-S
-|-л Q о
' Н3С СН3
[0249] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
°RVRM ч *л Л" _А
0 или снз
[0250] где < представляет собой связь со связующим агентом;
X является N или О; RN и RM каждый независимо являются водородом или алкилом; и b представляет собой целое число от 1 до 8.
[0251] В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляет собой: валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, аспарагин-треонин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовую кислоту- аспарагин, аспарагин-глутаминовую кислоту, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин,
аланин-аспарагин, аспарагин-аланин, валин-аланин, аланин-валин, валин-глицин, или глицин-валин.
[0252] В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляет собой валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых вариантах
осуществления изобретения АА'-АА2 представляет собой валин-цитруллин.
[0253] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
где X является N или О,
RN и RM каждый независимо являются водородом или арилом, b представляет собой целое число от 1 до 8, А представляет собой арил или гетероарил, и t представляет собой целое число от 1-8.
[0254] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле I является:
о И 9н> рсНз ?Нз
T o4
.NH
..(0"
9" НзС ci
S\ /^N'
Н н п s А
Н3С сн3
O^N 9н РСНз 9Нз
H3C CH3
о И 9и Р0Из 9Нз
Д ? H
s /\
H3C CH3
НонРСНз 9Н3
0-.NH2 Т
Т о.
.NH
Стр. 100
010-8693-4315/1/AMERICAS I
! I
где:
Ab - антитело;
-§- представляет собой связь с цистеином антитела;
--- представляет собой связь с лизином антитела;
к представляет собой целое число от 1 до 30; и t представляет собой целое число от 1 до 8. В некоторых примерах к представляет собой целое число от 1 до 8. В некоторых примерах t представляет собой целое число от 1 до 4. В некоторых примерах, когда -§- представляет собой связь с цистеином антитела, с антителом могут быть связаны до 8 предложенных в настоящем
изобретении конъюгатов. В некоторых примерах, когда -^- представляет собой связь с лизином антитела, с антителом могут быть связаны до 30 предложенных в настоящем изобретении конъюгатов.
[0255] В одном из вариантов осуществления изобретения к представляет собой
целое число от 1 до 30. В одном из вариантов осуществления изобретения к представляет собой целое число от 1 до 8. В одном из вариантов осуществления изобретения к представляет собой целое число от 1 до 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения к представляет собой целое число от 1 до 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения к представляет собой целое число от 1 до 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение лекарственное средство/антитело (Л/А; DAR) в конъюгате составляет от 1 до 30.
С. СОЕДИНЕНИЯ
[0256] В настоящем изобретении предложены соединения по формуле (II):
(И)
или их фармацевтически приемлемая соль, где А является ариленом или гетероариленом.
[0257] В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения
представляют собой полезную нагрузку в составе описанных внастоящем документе конъюгатов и высвобождаются, например, посредством ферментативного протеолиза с последующей интернализацией конъюгата клеткой. Предложенные в настоящем документе способы ключают способы лечения пролиферативного заболевания, например, рака, включающие введение пациенту в терапевтически эффективном количестве конъюгат, например, конъюгат антитело-лекарственное средство, из которого после интернализации указанного конъюгата клеткой такого пациента высвобождается соединение по формуле (И).
[0258] В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения
представляют собой метаболический продукт описанных в настоящем изобретении конъюгатов, например, продукт, образовавшийся в результате ферментативного протеолиза. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения представляют собой катаболический продукт описанных в настоящем изобретении конъюгатов. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения представляют собой клеточный продукт описанных в настоящем изобретении конъюгатов.
[0259] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является
двухвалентным радикалом бензола, пиридина, нафталина или хинолона, которые необязательно замещены.
[0260] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является арилен.
[0261] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил,
-l-ORA
гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, нитро, амино, 5 , О
4S02RA -IJLRA i г , г , или азидо,
где RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5.
[0262] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение, имеющее следующую формулу: [INSERT SCHEMES]
где R1 и п соответствуют определениям в настоящем документе.
[0263] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (ПА):
(НА)
где R1 и п соответствуют определениям в настоящем документе. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой алкил, алкокси,
галоалкил, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой метил, трифторметил, метокси, фтор, хлор, или бром. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R представляет собой хлор.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0264] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (ПВ):
(ИВ)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0265] В некоторых вариантах осуществления соединением по формуле (И)
является соединение по формуле (IIB2):
осн?
(R)q- _N н
(IIB2)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0266] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (ИВЗ):
(IIB3)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0267] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (ПС):
Н ОН РСНз ?Нз
°YN- '
(НС)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0268] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (HD):
T^V^N О Н3С CI -NAO
(IID)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0269] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (И) является соединение по формуле (НЕ):
РСН3 СН3
(НЕ)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0270] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (IIF):
(IIF)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0271] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (IIG):
(ПО)
где R1 и q соответствуют определениям в настоящем документе.
[0272] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо
представляет собой алкил или гало. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил, Ci-б галоалкил, или гало. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой
Сi-6 галоалкил или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
независимо представляет собой гало. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, иод, или
трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен
0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0
или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0273] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо
представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, Ci-б галоалкил, Ci-б галоалкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой О-6 алкил или О-6 алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо является алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой метокси, этокси, пропокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0274] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле (И) представляет собой соединение по формуле (НА):
(НА)
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало, метил, метокси,
или трифторметил; и п равен 0, 1, или 2. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 представляет собой алкил, алкокси, галоалкил, или гало. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, трифторметил,
метокси, фтор, хлор, или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения
R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой бром. В некоторых примерах R1 представляет собой
гетероциклоалкил. В некоторых примерах R1 - пирролидинил. В некоторых примерах
R1 представляет собой морфолинил.
[0275] Соединение по формуле НА 1-3:
(IIA1-3)
или их фармацевтически приемлемая соль, где:
(R1)N
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и
гетероциклоалкила; и п представляет собой целое число от 0 до 4.
[0276] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение
выбирают из соединения по формуле (IIA1), соединения по формуле (IIА2), и соединения по формуле (ПАЗ):
Н ОН РСНз СНз
Н3С° 4/7 N у -0СН3
о4 н3с ci
H2N~C3"~H
(R1)N
H2N
н он Яснз ?Нз
(ИА1)
(IIA2)
\=/ н
NH2
(ПАЗ).
[0277] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением
является соединение по любому из пунктов 31-32, где п равен 0, 1 или 2.
[0278] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением
является соединение по любому из пунктов 31-32, где R1 независимо в каждом случае
выбирают из Ci-б алкила, О-б алкокси, гало, Ci-б галоалкила и гетероциклоалкила.
[0279] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 в каждом случае
независимо выбирают из метила, метокси, фтора, хлора, брома, трифторметила, пирролидинила, и морфолинила.
[0280] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой метил.
[0281] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в
каждом случае, выбирают из фтора, хлора, и брома.
[0282] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой хлор.
[0283] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой трифторметил.
[0284] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой метокси.
[0285] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1, независимо в
каждом случае, выбирают из метила, морфолинил а и пирролидинил а.
[0286] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является соединение по формуле (ИВ):
(ИВ)
где:
R1 независимо в каждом случае является гало или трифторметилом; и q равен 0, 1, или 2.
[0287] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является:
[0288] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле (II) является:
[0289] В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения
представляют собой полезную нагрузку в составе описанных в настоящем документе конъюгатов и высвобождаются, например, посредством ферментативного протеолиза с последующей интернализацией конъюгата клеткой. Предложенные в настоящем документе способы ключают способы лечения пролиферативного заболевания, например, рака, включающие введение пациенту в терапевтически эффективном количестве конъюгат, например, конъюгат антитело-лекарственное средство, из которого после интернализации указанного конъюгата клеткой такого пациента высвобождается соединение по формуле (II).
[0290] В некоторых вариантах осуществления изобретения эти соединения
представляют собой метаболический продукт описанных в настоящем изобретении конъюгатов, например, продукт ферментативного протеолиза.
[0291] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является
двухвалентным радикалом бензола, пиридина, нафталина илихинолона, которые необязательно замещены.
[0292] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является
ариленом.
[0293] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n (R1)m ,RU ^/=N(R1)q
i\ A m ^A
* , ^ , , или ^ ,
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкарил, арилалкил, гало, галоалкокси, гетероарил, гетероциклоалкил,
-l-ORA 4S02RA 4-U-RA циано, нитро, 5 wrv , < z , г , или азидо,
где RA - алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5.
[0294] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле (И) является соединением по формуле (ПА):
(ПА)
где R1 независимо в каждом случае представляет собой метил, метокси, гало или
трифторметил; и п равен 0, 1, или 2. В некоторых вариантах осуществления
изобретения R1 представляет собой метил, трифторметил, метокси, фтор, хлор, или
бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0295] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле (II) является соединением по формуле (ИВ):
(ИВ)
где R1, независимо в каждом случае, представляет собой метокси, метил, гало или трифторметил; и q равен 0, 1, или 2.
[0296] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле (II) является соединением по формуле (IIB2):
(R\Y
(IIB2)
где R1 независимо в каждом случае представляет собой метокси, гало или трифторметил; и q равен 0, 1, или 2.
[0297] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле (II) является соединением по формуле (НВЗ):
н он ЯСНз ?Нз
[0298]
(ПВЗ)
где R1 независимо в каждом случае представляет собой метокси, гало или
трифторметил; и q равен 0, 1, или 2.В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой алкил или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил, Ci-б галоалкил, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б галоалкил или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо является гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо является фтором, хлором, бромом, иодом или трифторметилом. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0299] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо
представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, Ci-б галоалкил, Ci-б галоалкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил или Сi-6 алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо является алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой метокси, этокси, пропокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения п, ш, р, или q равен 0.
[0300] В некоторых вариантах предлоенное изобретение представляет собой
соединения, включающие любые описанные в настоящем документе соединения, ковалентно связанные с линкером и/или связующим агентом, как описано в настоящем документе. В некоторых представленных в настоящем документе примерах предложены любые соединения майтанзиноиды, описанные в настоящем документе, ковалентно связанные с линкером и/или связующим агентом, как описано в настоящем документе.
D. ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ
[0301] Соединения по формуле I могут быть синтезированы посредством
реакции сочетания между соединениями по формуле Р1 и связующим агентом, например, антителом в стандартных условиях конъюгации (см., например, публикацию
Doronina et al, Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778, которая включена в настоящий документ посредством ссылки). Когда связующим агентом является антитело, то антитело может соединено с соединением по формуле Р1 через один или несколько остатков цистеина или лизина в молекуле антитела. Соединения по формуле Р1 могут соединяться с остатками цистеина, например, посредством введения антитела во взаимодействие с восстанавливающим агентом, например, дитиотеритолом, для отщепления дисульфидных связей антитела, очистки восстанавленного антитела, например, путем гель-фильтраци, и последующего введения антитела во взваимодействие с соединением по формуле Р1, содеражщим реакционноспособный фрагмент, например, малемидо-группу. Подходящие растворители включают, не ограничиваясь перечисленным, воду, DMA, DMF, и DMSO. Соединения по формуле Р1, содержащие реакционноспособный фрагмент, например, активированную сложноэфирную или галоидангидридную группу, могут соединяться с остатками лизина. Подходящие растворители включают, не ограничиваясь перечисленным, воду, DMA, DMF, и DMSO. Соединения по формуле I могут быть очищена с использованием известных белковых методов, например, гель-фильтрационной хроматографии, диализа и ультрафильтрации/диафильтрации.
где RL представляет собой реакционноспособный линкер, А является ариленом или
гетероариленом, L представляет собой линкер, и ВА является связующим агентом.
[0302] В некоторых примерах в настоящем документе описаны способы
получения соединения по формуле (I), где способ включает приведение во взаимодействие соединения по формуле Р1 со связующим агентом. В некоторых из этих способов приведение во взаимодействие осуществляют в стандартных условиях конъюгирования с антителом. В некоторых из этих примеров, связующим агентом является антитело. В некоторых из этих примеров связующим агентом является фрагмент антитела. В некоторых описанных в настоящем документе примерах способы
включают приведение во взаимодействие соединения по формуле Р1 с одним или несколькими остатками цистеина или лизина в молекуле антитела. В некоторых примерах, способы включают приведение во взаимодействие соединения по формуле Р1 с одним или несколькими остатками цистеина или лизина в молекуле антитела в растворителе. В некоторых вариантах осуществления изобретения растворителем является одно соединение. В некоторых вариантах осуществления изобретения растворитлем является смесь двух или более соединений. В некоторых примерах способы включают приведение во взаимодействие соединения по формуле Р1 с одним или несколькими остатками цистеина или лизина в молекуле антитела в растворителе, выбранном из воды, DMA, DMF или DMSO.
[0303] В некоторых примерах в настоящем документе описаны способы
получения соединения по формуле Р1, где способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) и реакционноспособным линкером (RL), где RL представляет собой реакционноспособный линкер, предусмотренный и описанный в настоящем документе.
[0304] В некоторых примерах в настоящем документе предусмотрены способы
получения соединения по формуле Р1, где способы включают проведение реакции между соединением по формуле (И) и реакционноспособным линкером, описанным в настоящем документе. В некоторых примерах способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р1 и RL в присутствии растворителя. В некоторых примерах растворителем является DCM. В некоторых других примерах растворителем является метанол. В некоторых других примерах растворителем является безводный метанол. В определенных других примерах растворителем является комбинация DCM и метанола. В некоторых других примерах растворителем является комбинация DCM и безводного метанола.
[0305] В некоторых примерах RL выбирают из соединения по формуле РР7
, где SPR
представляет собой реакционноспособный спейсер;
R представляет собой боковую цепь аминокислоты; R представляет собой боковую цепь аминокислоты. В некоторых примерах R^1 и RAA2 независимо являются боковыми цепями природной или неприродной аминокислоты. В некоторых примерах способов получения соединения по формуле Р1 способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) с соединением по формуле РР7 в условиях синтеза амидов. В некоторых из этих примеров, соединение по формуле РР7 превращают в сложный эфир перед проведением реакции с соединением по формуле
(II). [0306]
В некоторых примерах способов получения соединения по формуле Р1,
способы включают приведение во взаимодействие соединения по формуле (II) с RL. В
некоторых из этих примеров способы включают приведение во взаимодействие
соединения по формуле (II) с RL в условиях синтеза амидов. В некоторых примерах RL
включает карбоксильную группу в одной концевой области соединения RL. Как видно
из формулы (II), соединение по формуле (II) включает, по меньшей мере, одну
аминогруппу в одной концевой области соединения. В некоторых примерах способы
включают превращение карбоксильной группы соединения RL в активированный
сложный эфир. В некоторых примерах способы дополнительно включают проведение
реакции между этим активированным сложным эфиром и аминогруппой соединения по
формуле (И). В некоторых описанных в настоящем документе примерах способы
превращения карбоксильной кислоты в активированный сложный эфир включают
приведение во взаимодействие карбоновой кислоты с реагентом. В некоторых
описанных в настоящем документе примерах способы превращения карбоксильной
группы соединения RL в активированный сложный эфир включают приведение во
взаимодействие RL с реагентом, выбранным из дициклогексилкарбодиимида (DCC),
диизопропилкарбодиимида (DIC), (бензотриазол-1-
илокси)трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфата (ВОР), (бензотриазол-1-
илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфата (РуВОР), (7-азабензотриазол-1-
илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфата (РуАОР),
бромтрипирролидинофосфония гексафторфосфата (РуВгОР), 0-(бензотриазол-1-ил)-
N,N,N',N'-TeTpaMeTHnypoHHH гексафторфосфата (HBTU), 0-(бензотриазол-1-ил)-
Н,М,Ы',Ы'-тетраметилурония тетрафторбората (TBTU), 1-[бис(диметиламино)метилен]-
1#-1,2,3-триазоло[4,5-6]пиридиния 3-оксид гексафторфосфата (HATU), 2-этокси-1-
этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина (EEDQ), 1-этил-3-(3-
диметиламинопропил)карбодиимида (EDC), 2-хлор-1,3-диметилимидазолидиния гексафторфосфата (CIP), 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазина (CDMT), или карбонилдиимидазола (CDI). В некоторых примерах способы включают превращение карбоксильной группы соединения RL в хлористый ацил. В некоторых примерах способы включают превращение карбоксильной группы соединения RL в хлористый ацил, например, посредством приведения во взаимодействие карбоксильной группы соединения RL с EEDQ. В некоторых описанных в настоящем документе примерах карбоновую кислоту соединения RL превращают в смешанный ангидрид, например, посредством приведения во взаимодействие карбоновой кислоты соединения RL с EEDQ. В некоторых описанных в настоящем документе примерах способы превращения карбоновой кислоты соединения RL в смешанный ангидрид включают приведение во взаимодействие карбоновой кислоты соединения RL с EEDQ в растворителе, выбранном из DCM.
[0307] В некоторых приведенных в настоящем документе примерах
предложены способы получения соединения по формуле Р1, где способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) с RL где RL - 6-малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллин. В некоторых примерах 6-малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллин активируют с образованием активированного сложного эфира перед проведением реакции с соединением по формуле (И). В некоторых примерах описанные в настоящем документе способы включают обеспечение 6-малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллина посредством проведения реакции между ВОС-защищенным Ь-валин-Ь-цитруллином и 2-(2-амино-3-метил-бутириламино)-5-уреидо-валериановой кислотой и 2,5-диоксо-пирролидин-1-иловым эфиром 6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-капроновой кислоты. В некоторых описанных в настоящем документе способах способы включают обеспечение б-малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллина посредством проведения реакции между ВОС-защищенным Ь-валин-Ь-цитруллином и 2-(2-амино-3-метил-бутириламино)-5-уреидо-валериановой кислотой и 2,5-диоксо-пирролидин-1-иловым эфиром 6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-капроновой кислоты в DMF. В некоторых описанных в настоящем документе способах способы включают
обеспечение 6-малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллина посредством
проведения реакции между ВОС-защищенным L-валин-Ь-цитруллином и 2-(2-амино-3-
метил-бутириламино)-5-уреидо-валериановой кислотой и 2,5-диоксо-пирролидин-1-
иловым эфиром 6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-пиррол-1-ил)-калроновой кислоты в DIEA.
[0308] В некоторых примерах способов получения соединения по формуле Р1
способы включают проведение реакции между соединением по формуле (И) и адипиновым ангидридом. В этих способах адипиновый ангидрид является активированным сложным эфиром. В некоторых из этих примеров способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) и адипиновым ангидридом и триэтиламином. В некоторых примерах способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) и адипиновым ангидридом и триэтиламином в тетрагидрофуране. В некоторых из этих примеров способы включают проведение реакции между соединением по формуле (II) и адипиновым ангидридом и триэтиламином в диметилформамиде. В некоторых из этих примеров способы включают проведение реакции между соединением по формуле (И) и адипиновым ангидридом и триэтиламином в тетрагидрофуране и диметилформамиде (DMF). В некоторых примерах эти способы дополнительно включают проведение реакции между N-гидроксисукцинимидом и продуктами вышеупомянутых способов. В некоторых других из этих примеров эти способы дополнительно включат проведение реакции между N-гидроксисукцинимидом и EDC гидрохлоридом и продуктами вышеупомянутых способов.
[0309] В некоторых приведенных в настоящем документе примерах
предложены способы получения соединения по формуле (И). В некоторых примерах эти способы включают проведение реакции между соединением по формуле РР5 и подходящим восстанавливающим агентом.
подходящий восстанавливающий агент включает металл, металлическую фольгу,
порошкообразный металл, металлическую пыль, амальгаму металла или металлические
опилки. В некоторых вариантах осуществления изобретения металл выбирают из
цинка, железа, алюминия, палладия или никелевого катализатора Ренея. В некоторых
из этих способов подходящим восстанвливающим агентом является цинковая фольга,
порошкообразный цинк, цинковая пыль, цинковая амальгама или цинковые опилки. В
некоторых из этих способов подходящим восстанвливающим агентом является
цинковая фольга. В некоторых из этих подходящим восстанвливающим агентом
является порошкообразный цинк. В некоторых из этих способов подходящим
восстанвливающим агентом является цинковая пыль. В некоторых из этих способов
подходящим восстанвливающим агентом является цинковая амальгама. В некоторых из
этих способов подходящим восстанвливающим агентом являются цинковые опилки. В
некоторых способах способы дополнительно включают восстанавливащее соединение
по формуле РР5 в присутствие растворителя. В некоторых примерах растворителем
является уксусная кислота. В некоторых примерах растворителем является
тетрагидрофуран. В некоторых примерах растворителем является комбинация
уксусной кислоты и тетрагидрофурана. В некоторых примерах растворителем является
ацетонитрил. В некоторых примерах растворителем является ацетонитрил и вода.
[0311] В некоторых представленных в настоящем документе примерах
предложены способы получения соединения по формуле РР5. В некоторых примерах эти способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 с соединением по формуле РР6.
В некоторых из этих примеров, А является ариленом или гетероариленом,
необязательно замещенным, как изложено в настоящем документе.
[0312] В некоторых примерах способов получения соединения по формуле РР5
способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 с соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса. В некоторых примерах соединением РР6 является пара-нитро-фенил-изоцианат. В
некоторых примерах соединением РР6 является мета-нитро-фенил-изоцианат. В некоторых примерах условия синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, включают использование кислоты Льюиса во время взаимодействия между соединением по формуле Р2 и соединением по формуле РР6. В некоторых примерах соединение по формуле Р2 взаимодействует с соединением по формуле РР6 в присутствии кислоты Льюиса. Подходящие кислоты Льюиса включают, не ограничиваясь перечисленным, А1Вгз, А1С1з, ВСЬ, бора трихлорид метилсульфид, BF3, бора трифторид метилэтерат, бора трифторид метилсульфид, бора трифторид тетрагидрофуран, дициклогексилбора трифторметансульфонат, железа (III) бромид, железа (III) хлорид, олова (IV) хлорид, титана (IV) хлорид, титана (IV) изопропоксид, Cu(OTf)2, CuCh, СиВгг, цинка хлорид, галиды алкилалюминия (RnAlX3-n, где R - гидрокарбил и п равен от 0 до 3), Zn(OTf)2, Yb(OTf)3, Sc(OTf)3, МгВг2, NiCh, Sn(OTf)2, Ni(OTf)2, или Mr(OTf)2. В некоторых примерах кислотой Льюиса является ZnCh. В некоторых примерах условия синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, включают использование кислоты Льюиса и органического растворителя во время проведения реакции между соединением по формуле Р2 и соединением по формуле РР6. В некоторых примерах соединение по формуле Р2 вступает в реакцию с соединением по формуле РР6 в присутствии кислоты Льюиса и органического растворителя. В некоторых примерах органическим растворителем является дихлорметан (DCM). В некоторых примерах соединение по формуле Р2 вступает в реакцию с соединением по формуле РР6 в присутствии ZnCh и DCM. В некоторых примерах соединение по формуле Р2 вступает в реакцию с соединением по формуле РР6 в присутствии ZnCh, DCM, и диэтилового эфира. В некоторых примерах соединение по формуле Р2 вступает в реакцию с соединением по формуле РР6 в присутствии DCM и также раствора ZnCh в диэтиловом эфире. В некоторых примерах соединение по формуле Р2 вступает в реакцию с соединением по формуле РР6 в присутствии DCM, где во время этой реакции добавляют ZnCh в виде раствора ZnCh в диэтиловом эфире. В некоторых примерах изложенные в настоящем документе способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 и соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в течение, по меньшей мере, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, или 24 часов. В некоторых примерах изложенные в настоящем документе способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 с соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в течение 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, или 24 часов. В некоторых примерах изложенные в настоящем документе
способы включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 с
соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в
течение 16 часов. В некоторых примерах изложенные в настоящем документе способы
включают проведение реакции между соединением по формуле Р2 с соединением по
формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в течение 18
часов. В некоторых примерах изложенные в настоящем документе способы включают
проведение реакции между соединением по формуле Р2 и соединением по формуле
РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в течение 20 часов. В
некоторых примерах изложенные в настоящем документе способы включают
проведение реакции между соединением по формуле Р2 и соединением по формуле
РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, в течение 24 часов.
[0313] В некоторых примерах после взаимодействия соединения по формуле Р2
с соединением по формуле РР6 продукт разбавляют водой и экстрагируют органическим растворителем однократно, двухкратно или трехкратно. В некоторых примерах органический растворитель, используемый для такой экстракции, выбирают из этилацетата (ЕЮАс).
[0314] В некоторых примерах после взаимодействия соединения по формуле Р2
с соединением по формуле РР6 продукт концентрируют досуха. В некоторых примерах после взаимодействия соединения по формуле Р2 с соединением по формуле РР6, продукт концентрируют досуха и очищают хроматографией.
[0315] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле Р1 включает А, где А является:
где п равен 0 или 1; и R1 представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, или галоалкил.
[0316] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
где п равен 0 или 1; и R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, Ci-6 галоалкокси, или Ci-б галоалкил.
формуле Р1 включает А, где А является:
[0317] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле Р1 включает А, где А является:
где п равен 0 или 1; R1 представляет собой Ci-б алкил, Ci-б алкокси, гало, О-б
галоалкокси, или О-б галоалкил; и RL является
где b представляет собой целое число
связующим агентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения R
представляет собой алкил, алкокси, галоалкил, или гало. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R1 представляет собой метил, трифторметил, метокси,
фтор, хлор, или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1
представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 -
метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0318] Реакционноспособный линкер - это фрагмент, в структуре которого
содержится участок, способный вступать в реакцию со связующим агентом (например, вступать в реакцию с антителом по месту цистеинового или лизинового остатка) с образованием соединения по формуле I. После конъюгации со связующим агентом реакционноспособный линкер становится линкерным фрагментом (L) соединения по формуле I. Иллюстративные реакционноспособные линкеры включают, не ограничиваясь перечисленными, линкеры, содержащие галоацетильный, изотиоцианатный участки, концевой первичный амин или малеимидный участок, которые способны вступать в реакцию со связующим агентом. Реакционноспособные участки включают также фрагменты, имеющие следующую структуру:
где X представляет собой -О- или -NH-, и LG - уходящая группа, например, Вг.
[0319] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
SPR-AA1-AA2-^-
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
[0320] Реакционноспособным спейсером является фрагмент, содержащий
вышеописанный реакционноспособный линкерный участок, который способен взаимодействовать со связующим агентом и присоединяет этот участок к АА1. Подходящие спейсеры включают, не ограничиваясь перечисленным, спейсеры, которые содержат алкилен или полиэтиленгликоль, присоединяющие к АА1 к участку, способному взаимодействовать со связующим агентом (например, галоацетильному, изотиоцианатному или малеимидному).
[0321] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным спейсером является:
О О
V(CH2)b-4
N-(CH2)b-N-M-
О или О
осуществления
изобретения
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0322] В некоторых вариантах
реакционноспособным спейсером является:
О О
[0323]
О или О
В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является
[0324] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является
О , или О , где g представляет собой целое
число от 1 до 24.
[0325] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным спейсером является:
где b представляет собой целое число от 2 до 8 и g представляет собой целое число от 2 до 20.
[0326] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным спейсером является:
[0327] В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляет собой валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин,
фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, серин-
аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-
аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-
аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота- аспарагин, аспарагин-
глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин,
аспарагин-аланин, валин-аланин, аланин-валин, валин-глицин, или глицин-валин.
[0328] В некоторых вариантах осуществления изобретения АА'-АА2
представляет собой валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых вариантах
осуществления изобретения АА'-АА2 представляет собой валин-цитруллин.
[0329] В некоторых вариантах осуществления изобретения
о RAA2 = н Д
iAA1
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; и RAA2 представляет собой боковую цепь аминокислоты.
[0330] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
^сн3
н,с
изобретения
где:
SP представляет собой реакционноспособный спейсер.
[0331] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
OyNH2 NH
О н О N-(CH2)b-LN^X
Н3С СН3
осуществления изобретения
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0332] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
^ Н3С СН3
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0333] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления
изобретения
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0334] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является: осуществления изобретения
H3C CH3
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0335] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
изобретения
O^NH2 ^NH
H3C CH3
где b представляет собой целое число от 2 до 8, RN представляет собой атом водорода или алкил, и RM представляет собой алкил.
[0336] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0337] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0338] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
где b представляет собой целое число от 2 до 8; R - атом водорода или алкил; и RM представляет собой алкил.
[0339] В некоторых вариантах осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
ОуМН2
f \ ° 0 Н 0
Н3С СНз
где b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0340] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
изобретения
где g представляет собой целое число от 2 до 8.
[0341] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления изобретения
[0342] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления изобретения
реакционноспособным линкером является:
[0344] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
ОуМН2 .NH
изобретения
S н 9 (
/\ п о Н3С СН3
[0345] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления изобретения
[0346] В некоторых вариантах осуществления
реакционноспособным линкером является:
ОуМН2 ^NH
изобретения
[0347] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления
изобретения
ОуМН2 .NH
[0348] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления
изобретения
[0349] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления изобретения
[0350] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления изобретения
ОуМН2 .NH
О м о (
Л Н Г
Н3С СН3
[0351] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
осуществления
изобретения
[0352] В некоторых вариантах
реакционноспособным линкером является:
Н3С СН3
осуществления
изобретения
(R1)n (R1)m
А А
(RU y/=N (R1)q
, ИЛИ f
где:
R представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, циано, нитро,
, или азидо, где RA представляет
собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5; SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; АА1 представляет собой аминокислоту; и АА2 представляет собой аминокислоту.
[0354] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1А является соединение, включающее А, где А является:
(R1)N
где п равен 0 или 1; и R1 представляет собой алкокси, алкил, гало, галоалкокси, или галоалкил.
[0355] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1А является соединение, включающее А, где А является:
(R1)N
где п равен 0 или 1; и R1 представляет собой Ci-б алкокси, О-б алкил, гало, Ci-б галоалкокси, или Ci-б галоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой алкил, алкокси, галоалкил, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, трифторметил, метокси, фтор, хлор, или бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0356] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1А является соединение, включающее А, где А является:
где q - целое число от 0 до 5; и R1 представляет собой Ci-б алкокси, Ci-б алкил, гало, Ci-e галоалкокси, или Ci-б галоалкил.
[0357] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1А является соединение, включающее А, где А является:
(R1)q
где q представляет собой целое число от 0 до 5; и R1 представляет собой Ci-б алкокси, Ci-б алкил, гало, Ci-б галоалкокси, или Ci-б галоалкил.
[0358] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1А1-3:
н он Рснз ?Нз
H3CT\l/V м-^^оснз о4 н3с ci
RL-N N Н Н
(Р1А1-3)
где:
А является:
(R')n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
п представляет собой целое число от 0 до 4; и RL - реакционноспособный линкер.
[0359] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1А1-3 является соединение по формуле Р2А1-3:
O^NH2 T
T o4
NH I СИ n
(P2A1-3)
о. Я 3 /Я
где:
А выбирают из:
(R1)n
,и ;и
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер.
[0360] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по
формуле Р1А1-3 выбирают из соединения по формуле Р1.Н1, соединения по формуле РШ, соединения по формуле P1V1, соединения по формуле P1W1, соединения по формуле Р1К1, соединения по формуле P1TG1, соединения по формуле P1ZZ1, и соединения по формуле P1ZZ2, где b представляет собой целое число от 2 до 8:
осн,
(Р1Н1)
(Р1К1)
н он Рснз ?Нз
1 о.
н3с° v у N y "осн3 о н3с ci
N "О
(P1TG1)
Н ОН РСНз ?Нз
(СН2)Ь
(P1ZZ1)
с н3с ci
[0361]
(P1ZZ2)
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1В:
А является:
(R1)n (R1)m
А А
где:
или
R1 представляет собой гало, галоалкокси, галоалкил, алкил, алкенил,
-ORA i-so2RA
алкинил, алкокси, арил, алкарил, арилалкил, гетероалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, циано, нитро,
[0362]
, или азидо, где RA представляет собой алкил; п представляет собой целое число от 0 до 4; m представляет собой целое число от 0 до 3; р представляет собой целое число от 0 до 6; и q представляет собой целое число от 0 до 5; и SPR представляет собой реакционноспособный спейсер. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1С:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; АА1 представляет собой аминокислоту; АА2 представляет собой аминокислоту;
R1 независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и п равен 0, 1, или 2.
[0363] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1D:
P1D
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; АА1 представляет собой аминокислоту; АА2 представляет собой аминокислота;
R1 независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и п равен 0, 1, или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 2.
[0364] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1D, где R1 представляет собой алкокси, алкил, гало, галоалкокси, или галоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой Ci-б алкокси, Ci-б алкил, гало, Ci-б галоалкокси, или Сьб галоалкил. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 2.
[0365] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по формуле Р1 является соединение по формуле P1D, где R1 представляет собой Ci-б алкокси, О-б алкил, гало, О-б галоалкокси, или О-б галоалкил; и SP^AA'-AA2 является
O^NH2
, где b представляет собой целое число от 2 до 8 и
5 - связь со связующим агентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения
п равен 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 1. В некоторых
вариантах осуществления изобретения п равен 2. В некоторых вариантах
осуществления изобретения b равен 2. В некоторых вариантах осуществления
изобретения b равен 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения b равен 4. В
некоторых вариантах осуществления изобретения b равен 5. В некоторых вариантах
осуществления изобретения b равен 6. В некоторых вариантах осуществления
изобретения b равен 7. В некоторых вариантах осуществления изобретения b равен 8.
[0366] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1Е:
Р1Е
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты; ?АА2 представляет собой боковую цепь аминокислоты; R1 независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и
п равен О, 1, или 2.
[0367] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1F:
г, н, он.
O^NH2 у
NH рн3 U
H^xj/V N-
н3с CI
осн.
P1F
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; R1 независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и п равен 0, 1, или 2.
[0368] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1G:
PIG
где:
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; и R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0369] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1Н:
^-(сн2)ь^й
0 Н3С "СН3
Н3С TV N -у ^ОСНз
б н3с ci
N ^0 Н
R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0370] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р11:
нонРСНз СНз
O^NH2 Т
NH I - PrWU Г ||
чосн,
V N' б Н3С ci
где:
R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси,
галоалкил, или трифторметил; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0371] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1J:
Вг-ч О
нонРснз ?Нз
°YNH2 ft о
H3C°NKV N Y ^оснз о н3с ci
где:
R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил; и
b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0372] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1К:
о н3с ci
Р1К
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0373] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1L:
I л н
Н3С СН3
н он Рсн= ?Нз I Cv
(5 н3с ci
P1L
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0374] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1М:
нонЯснз ?Нз
O^NH2°YN-
NH У о.рНз-
Н3С°\1/ V N -у ^ОСН3 б Н3С i.
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0375] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1N:
Вг-\ О О u О
^Jl_o-(CH2)bJLH^AN
н он Рснз ?Нз
Н3С СН3
P1N
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
или трифторметил, и b - целое число от 2 до 8.
[0376] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле РЮ:
н он Рсн> ?Нз
0VNH?YN^'
NH V рпз
H3C°'VN/~ N' ^ ^ОСН3
Н 0 I ^ 6 НзС CI
Н3С СН3 R1 РЮ
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0377] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1Р:
Вг-^ О Вг
Н3С ту N ^ ^осн3 о н3с ci
Н3С СН3
Р1Р
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
или трифторметил, и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0378] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1Q:
P1Q
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
или трифторметил, и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0379] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1R:
P1R
где R представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил.
[0380] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1S:
P1S
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
или трифторметил.
[0381] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле PIT:
PIT
где RN представляет собой атом водорода или алкил, RM представляет собой алкил, R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0382] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле РШ:
где RN представляет собой атом водорода или алкил, RM представляет собой алкил, R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0383] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1V:
Н3С СН3
н он Рсн= ?Нз
0VNH2°YN^^^
I о.
P1V
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил,
или трифторметил, и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0384] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1W:
Н ОН РСНз СНз O^N.
ОуМН2 Т
NH 0Ч[^ РНз^Р
N~0^o)yV^N
НзС^'Ч^У N' у -ОСН3
О I Р Н3С ci
P1W
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, или трифторметил, g представляет собой целое число от 2 до 20; и b представляет собой целое число от 2 до 8.
[0385] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле Р1Х:
Н ОН РСНз ?Нз
где:
R представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси; и b представляет собой целое число от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, этил, метокси, или этокси. В некоторых из этих вариантов R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил, или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R' представляет собой водород.
[0386] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1Y:
P1Y
где R1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил, этил, метокси, или этокси. В некоторых из этих вариантов R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0387] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле Р1 является соединение по формуле P1Z:
P1Z,
где Rc выбирают из алкила или галоалкила и где алкил или галоалкил является линейным, разветвленным или циклическим. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по формуле Р1 является соединение, имеющее одну из следующих структур:
0 А
Н3С СНз
Н ОН РСНз ?Нз
0^/NH2 Y
NH ^ ^u и
Ha^' XJ/V N- у -0CH3
б н3с ci
0 A
H3C CH3
H ОН РСНз СНз
O^NH2 Y
T o,
HjC'TV N" у -0CH3 oN H3C ci
H ОН РСНз ?Нз
0^/NH2 Y
3-^7
H3Cl'M/Y V V- -ОСН3 б Н3С ci
0 А
Н3С СНз
Н ОН РСНз ?Нз
O^NH2 Y Т 0"
N' у "OCH3 6 H3C ci
s A H H3C CH3
H3C° \K N
d н3с ci
H3C CH3
н3с°
о' н3с ci й-^-Ло
Д z н s /\
Н3С СН3
Н ОН РСНз ?Нз O^N. O^NH2 Y
1 о,
s A
H3C CH3
о " . Н3С СНз
O^.NH2 Т Т
I си Р
H3Cv,'\l/S/ N'
б н3с ci
N "О
CF3
чосн3
О , " Н3С сн3
НонРСНз ?Нз
O^.NH2 Т
-NH То.
H3C^NK> / N'
б н3с ci
0 МВг Н
о , ^ Н3С СНз
нонРСНз СНз
O^N, ¦ O^NH2T
NH Т q РНз
ч- N' "оснз
б н3с ci
0 в/
о , ^ Н3С СНз
°YNh21
NH 10.
H3CV,'\J/~V N' у -0СН3 ос H3C ci
о^йонРСНз "3
°YNH2 V он /О NH Т0 РНз
Нг,С°'Ч^У N'"y^0CH3
б н3с ci
ОуМН2Т
J Н2
( б Н3С ci
1 Н КД,
О А н о у
о " ^ Н3С сн3
°YNH2VCH о
NH То < /-Ч
Н3С°'N' ^ "ОСН3
Fv О Н3С ci
о Мр Н
У%"
н0нРснз ?Нз
/-f о
W " о
О уК " о Н3С СНз
Н3СХ м/ Y N ^ ЧЭСН3
R б Н3С ci
о , ^ Н3С СН3
O^.NH2
' Н пн оснз ?Нз
NH СуЙ '
Br Br
-Сч
CH,
нонРснз ?Нз
O^NH2 Y
I О*
Н3СИ TV N -у -0CH3
о4 н3с ci
N О Н
H3C СНз
Br Br
CHa
Н3С СН3
-О.
CH3
Н3С СНз
O^NH2 Y
NH Jo -СНз
Н3(Г'"\!^/" N' у -0CH3 О H3C ci
H ОН РСНз ?Нз
O^NH2 Y Т
HjC1^/ N' у "OCH3
б н3с ci
.KHQ-ЛО
н3с сн3
н он ЯСНз ?Нз
VH < IT 0
Н3С" W N" Y ~ОСН3
б н3с ci
ayv-Ло
F3C
Вг Вг
Н3С СН3
Н ОН РСНз ?Нз 0VNH°YN'
1 о"
Н3С" М/ V N у -осн3 о н3с ci
Н3С сн3
н3с сн3
нонЯснз СНз
б н3с ci
O^NH2
Л Н Г X \1 I 3 С|
Н3С СН3 ^^^N-^0
0YNH2 НОНРСНз ?Нз NH °yN "
Н0НРСН3 ?Нз NH O^N^ •
НОНРСНз ?Нз
0-.NH2 Y Т Сч
О ^
N' у ХЮН3
<5 н3с ci
нонЯснз СНз
0^1МН2 Y
Т р
Н3С4' TV N "у -0СН3 б н3с ci
и-0~н °
0 А
Н3С СНз
нонЯснз ?Нз
0-.NH2 Т
Т о,
чосн3
б н3с ci
п НонРСНз ?Нз O^NH2 Y
Т о,
о н3с ci
0 НОН.РСНз ?Нз
VH2°cC о
,NH "LJ
CI , или
[0389] Соединения по формуле (II) могут быть синтезированы посредством
приведения соединений по формуле РР5 во взаимодействие с подходящим восстанавливающим агентом:
РР5,
где А является ариленом или гетероариленом.
[0390] В некоторых вариантах осуществления изобретения подходящий
восстанавливающий агент включает металл, металлическую фольгу, порошкообразный металл, металлическую пыль, амальгаму металла или металлические опилки. В некоторых вариантах осуществления изобретения металл выбирают из цинка, железа, алюминия, палладия или никелевого катализатора Ренея.
[0391] Например, в некоторых вариантах осуществления изобретения
применяются следующие восстанавливающие условия. Например, в отношении количества соединения РР5, в некоторых описанных в настоящем документе способах объединяли приблизительно двадцать (20) эквивалентов цинковой пыли и сорок (40) эквивалентов уксусной кислоты. В некоторых примерах реакция восстановления проводилась при комнатной температуре в течение приблизительно 1-24 часов. В некоторых из этих примеров вышеуказанную уксусную кислоту заменяют другой подходящей слабой кислотой или донором протона. Примеры подходящим слабых
кислот или доноров протона включают, не ограничиваясь перечисленным, муравьиную
кислоту, pTsOH, и NH4CI. В некоторых из этих примеров восстанавливающий металл
заменяют подходящим восстанавливающим агентом, который выбирают из железа,
алюминия, палладия или никелевого катализатора Ренея. В некоторых из этих
примеров подходящие растворители включают растворители, содержащие 10-50 %
воды (по объему) в смешиваемом с водой органическом растворителе. Примеры
смешиваемых с водой органических растворителей включают, не ограничиваясь
перечисленным, THF, диоксан и диэтиловый эфир. В некоторых примерах описанные в
настоящем документе реакции восстановления проводятся при температурах реакции
от 0 до 50°С. В некоторых примерах описанные в настоящем документе реакции
восстановления проводятся при продолжительности реакции от 1 до 40 часов.
[0392] Подходящие кислоты включают, не ограничиваясь перечисленным,
уксусную кислоту.
[0393] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
(R1)n (R1)m (R1) ^N(R1)q
г? , г* , V^\Ј^ , или ^
где:
R независимо в каждом случае представляет собой алкил, алкенил, алкинил,
арил, алкарил, арилалкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил,
-|-ORA 4-S02RA -1-U-RA гетероарил, гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 ^ , i г , г , или
азидо,
где RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4;
m представляет собой целое число от 0 до 3;
р представляет собой целое число от 0 до 6; и
q представляет собой целое число от 0 до 5.
[0394] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение по формуле РР5А:
РР5А,
где R1 и п соответствуют определениям в настоящем документе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением РР5 является соединение по формуле РР5А1:
НзСГ'М/у N-^V^OCH,
н он Яснз ?Нз
где:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила; и п представляет собой целое число от 0 до 4.
[0395] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо
представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой Ci-б алкил, О-б алкокси, О-б галоалкил, О-б галоалкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой О-б алкил или О-б алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо является алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой метокси, этокси, или пропокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0396] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение по формуле РР5А:
РР5А,
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало или трифторметил; и
п равен 0, 1, или 2.
[0397] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение по формуле РР5А2:
РР5А2,
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало или трифторметил; и
q представляет собой целое число от 0 до 5
[0398] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение по формуле РР5АЗ:
РР5АЗ,
где:
R1 независимо в каждом случае представляет собой гало или трифторметил; и q представляет собой целое число от 0 до 5. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0399] Соединения по формуле РР5 могут быть синтезированы посредством
приведения соединений по формуле Р2 во взаимодействие с соединениями по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса:
[0400] Подходящие соединения по формуле РР6 включают, не ограничиваясь
перечисленным, 4-изоцианато-2-метил-1 -нитробензол, 1 -изоцианато-2-метил-4
нитробензол, 2-бром-4-изоцианато-1 -нитробензол, 2-хлор-1 -изоцианато-4-нитробензол,
3 -хлор-1 -изоцианато-4-нитробензол, 2-фтор-1 -изоцианато-4-нитробензол,
2-бром-1 -изоцианато-4-нитробензол, 4-изоцианато-2-метокси-1 -нитробензол,
1 -изоцианато-2-метокси-4-нитробензол, 4-изоцианато-1 -нитро-2-трифторметилбензол, или 1 -изоцианато-4-нитро-2-трифторметилбензол.
[0401] Подходящие соединения по формуле РР6 включают соединения по одной
из следующих формул:
где R1 независимо в каждом случае представляет собой О-б алкил, О-б алкокси, гало,
О-б галоалкил, или О-б галоалкокси, где п равен 0, 1,2, 3, или 4. В некоторых из этих
вариантов осуществления изобретения R1 представляет собой метокси или метил. В
отдельных вариантах осуществления изобретения, R1 представляет собой метокси,
метил, фтор, хлор, бром или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления
изобретения п равен 1 или 2. В некоторых из этих вариантов п равен 1. В некоторых
вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор, хлор, бром или
иод. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил.
В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В
некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой
хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0402] В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет
собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил, или 1-пирролидинил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах
осуществления изобретения R представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой водород.
[0403] В некоторых вариантах осуществления изобретения в настоящем
документе предусмотрены соединения по формуле РР5:
РР5,
где А является ариленом или гетероариленом.
[0404] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение, выбранное из
[0405] В некоторых вариантах осуществления изобретения соединением по
формуле РР5 является соединение, выбранное из
[0406] В некоторых примерах в настоящем документе предусмотрены способы
получения соединения по формуле РР5. В некоторых примерах эти способы включают приведение во взаимодействие соединения по формуле Р2 с соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса:
02N С
A-N
РР6.
[0407] В некоторых из описанных в настоящем документе способов приведение
соединения по формуле Р2 во взаимодействие с соединением по формуле РР6 осуществляется в присутствии кислоты Льюиса и апротонного растворителя на данной стадии взаимодействия. В некоторых примерах килоту Льюиса выбирают из АШгз, А1С1з, ВСЬ, бора трихлорид метилсульфида, BF3, бора трифторид метилэтерата, бора трифторид метилсульфида, бора трифторид тетрагидрофурана, дициклогексилбора трифторметансульфоната, железа (III) бромида, железа (III) хлорида, олова (IV) хлорида, титана (IV) хлорида, титана (IV) изопропоксида, Cu(OTf)2, CuCh, CuBr2, цинка хлорида, галидов алкилалюминия (RnAlX3-n, где R представляет собой гидрокарбил), Zn(OTf)2, Yb(OTf)3, Sc(OTf)3, МгВг2, N1CI2, Sn(OTf)2, Ni(OTf)2, или Mr(OTf)2. В некоторых примерах кислотой Льюиса является цинка хлорид. В некоторых примерах апротонный растворитель выбирают из перфторгексана (CF3(CF2)4CF3), а,а,а-трифторолуола, пентана, гексана, циклогексана, метилциклогексана, диоксана, четыреххлористого углерода, фреона-11 (CFCb), бензола, толуола, триэтиламина, сероуглерода, диизопропилового эфира, диэтилового эфира, трет-бутилметилового эфира, хлороформ, этилацетата, 1,2-диметоксиэтана (глима), 2-метоксиэтилового эфира (диглима), тетрагидрофурана, дихлорметана (хлористого метилена), пиридина, 2-бутанона (МЕК), ацетона, гексаметилфосффорамида, N-метилпирролидинона, нитрометана, диметилформамида, ацетонитрила, сульфолана, диметилсульфоксида или пропиленкарбоната. В некоторых примерах апротонным растворителем является дихлорметан. В некоторых описанных в настоящем документе способах приведение соединения по формуле Р2 вовзаимодействие с соединением по формуле РР6 включает приведение цинка хлорида и дихлорметана во взаимодействие с с соединением по формуле Р2 и соединением по формуле РР6.
[0408] В некоторых из этих способов соединение по формуле РР5 имеет
формулу РР5А:
РР5А,
где R1 и п соответствуют определениям в настоящем документе.
[0409] В некоторых из этих способов R1 независимо представляет собой алкил,
алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой О-б алкил, О-б алкокси, О-б галоалкил, О-б галоалкокси, или гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой О-б алкил или О-б алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой гало. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой алкокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 независимо представляет собой метокси, этокси, или пропокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R! представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, ш, р, или q равен 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения n, т, р, или q равен 0.
[0410] В некоторых из этих способов соединение по формуле РР5 имеет
формулу РР5А:
РР5А,
где:
R1 независимо представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, или галоалкокси; и п равен 0, 1, или 2.
[0411] В некоторых вариантах осуществления изобретения предложенные в
настоящем документе способы включают соединение РР6, которое выбирают из 4-изоцианато-2-метил-1 -нитробензола, 1 -изоцианато-2-метил-4-нитробензола, 2-бром-4-изоцианато-1 -нитробензола, 2-хлор-1 -изоцианато-4-нитробензола, 3 -хлор-1 -изоцианато-4-нитробензола, 2-фтор-1 -изоцианато-4-нитробензола, 2-бром-1 -изоцианато-4-нитробензола, 4-изоцианато-2-метокси-1 -нитробензола, 1 -изоцианато-2-метокси-4-нитробензола, 4-изоцианато-1 -нитро-2-трифторметилбензола, или 1-изоцианато-4-нитро-2-трифторметилбензола.
[0412] В некоторых вариантах осуществления изобретения предложенные в
настоящем документе способы включают соединение РР6 по одной из следующих формул:
где R1 независимо в каждом случае представляет собой О-б алкил, О-б алкокси, гало, О-б галоалкил, или О-б галоалкокси, и где п равен 0, 1, 2, 3, или 4. В некоторых из этих вариантов R1 - метокси или метил. В отдельных вариантах осуществления изобретения,
R1 представляет собой метокси, метил, фтор, хлор, бром или трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения п равен 1 или 2. В некоторых из этих вариантов п равен 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор, хлор, бром или иод. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой метокси. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой трифторметил. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой фтор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой хлор. В некоторых вариантах осуществления изобретения R1 представляет собой бром.
[0413] В некоторых вариантах осуществления изобретения предложенный в
настоящем изобретении способ дополнительно включает восстановление соединения по формуле РР5 посредством приведения во взаимодействие соединения по формуле РР5 с подходящим восстанавливающим агентом:
РР5,
где А является ариленом или гетероариленом.
[0414] В некоторых из этих способов подходящие восстанавливающие агенты
включают металл, металлическую фольгу, порошкообразный металл, металлическую пыль, амальгаму металла или металлические опилки. В некоторых вариантах осуществления изобретения металл выбирают из цинка, железа, алюминия, палладия или никелевого катализатора Ренея. В некоторых из этих способов подходящим восстанавливающим агентом является цинк. В некоторых из этих способов подходящим восстанавливающим агентом является цинк в уксусной кислоте. В некоторых из этих способов подходящим восстанавливающим агентом является цинковая пыль в уксусной кислоте.
[0415] В некоторых вариантах осуществления изобретения предложенные в
настоящем изобретении способы дополнительно включают восстановление соединения
по формуле РР5 посредством приведения во взаимодействие соединения по формуле
РР5 с подходящим восстанавливающим агентом в определенных условиях
использования восстанавливающего агента. В некоторых примерах способы включают
восстановление соединения по формуле РР5 восстанавливающим агентом, выбранным
из цинковой пыли, железа, алюминия, палладия или никелевого катализатора Ренея. В
некоторых примерах способы включают восстановление соединения по формуле РР5
цинковой пылью. В некоторых примерах способы включают восстановление
соединения по формуле РР5 цинковой пылью и растворителем, который выбирают из
уксусной кислоты, муравьиной кислоты, pTsOH или NHUC1. В некоторых примерах
способы включают восстановление соединения по формуле РР5 цинковой пылью и
уксусной кислотой. В некоторых примерах способы включают восстановление
соединения по формуле РР5 приблизительно двадцатью (20) эквивалентами цинковой
пыли и сорока (40) эквивалентами уксусной кислоты. В некоторых примерах
восстановление проводится при температуре между 0 и 70 °С. В некоторых примерах
восстановление проводится при температуре 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,
16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40,
41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65,
66, 67, 68, 69, или 70 °С. В некоторых примерах восстановление проводится в течение
от 1 до 40 часов. В некоторых примерах восстановление проводится в течение 1, 2, 3, 4,
5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30,
31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 часов. В некоторых примерах восстановление
проводится в течение 24 часов. В некоторых примерах восстановление проводится при
комнатной температуре в течение приблизительно от 1 до 24 часов.
[0416] В некоторых примерах стадии вышеописанного способа осуществляются
или проводятся в растворителе, содержащем 10-50 % воды (по объему) в смешивающемся с водой органическом растворителе. В некоторых примерах смешивающимися с водой органическими растворителями являются THF, диоксан или диэтиловый эфир.
[0417] Соединения по формуле III:
\ Ё н Д н \ 0AA1 о
III
могут быть синтезированы посредством приведения соединений по формуле РР1:
SP1
i н " н
пдд1 VJ
РР1
во взаимодействие со связующим агентом в условиях конъюгирования, где:
В А является связующим агентом; SP представляет собой спейсер;
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты;
RAA2
представляет собой боковую цепь аминокислоты;
А является ариленом или гетероариленом; и
к представляет собой целое число от 1 до 30.
[0418] Соединения по формуле РР1 могут быть получены посредством
приведения соединения по формуле (II) во взаимодействие с соединением по формуле РР7:
о RAA2
РР7
" RAM "3V- ^ 7
ы О | о
где:
РР1
SPR представляет собой реакционноспособный спейсер; R^1 представляет собой боковую цепь аминокислоты;
R^ представляет собой боковую цепь аминокислоты; и
А является ариленом или гетероариленом.
[0419] Соединения по формуле РР7 могут быть получены посредством
приведения соединения по формуле РР9 во взаимодействие с бифункциональным спейсером:
о rAA2 i н Д
бифункциональный спейсер
о RAA2 = н Я
РР9
РР7
[0420] Иллюстративные бифункциональные спейсеры включают, не
ограничиваясь перечисленным:
О /-N=0=8
О и О
[0421] Соединения по формуле РР1 могут быть получены посредством
О ?
I н Д
приведения активированной формы соединения по формуле РР10 во взаимодействие с соединением по формуле (II):
RLHN
Q Ч 0 RAA2
RLHNV
РР10
RLHN
н Д
; н Д
RLHN
РР1
(II)
где Y представляет собой фрагмент, придающий электрофильность карбоксильной группе, к которой этот фрагмент присоединяется. Соединение по формуле РР10 можно получить, выполняя на первом этапе реакцию сочетания соответствующих аминокислот с использованием стандартных приемов сочетания аминокислот, включая, например, образование активного сложног эфира с использованием HATU, BOP/HOBt, или EDC/N-гидроксисукцинамида в присутствии DIEA, DBU, EEDG или трибутиламина. После этого соединение по формуле РР10 может быть получено путем
присоединения RL при использовании стандартных приемов сочетания, включая, например, образование активного сложног эфира с использованием HATU, BOP/HOBt, или EDC/N-гидроксисукцинамида в присутствии DIEA, DBU, EEDG или трибутиламина.
[0422] Бифункциональные спейсеры - это соединения, которые
взаимодействуют с соединением по формуле РР9, чтобы присоединить фрагмент SPR, присутствующий в соединении по формуле РР7. Иллюстративные бифункциональные спейсеры включают, не ограничиваясь перечисленным:
Е. СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ
КОМПОЗИЦИИ
[0423] Настоящее изобретение включает способы лечения или профилактики
заболеваний, состояний илинарушений, например, пролиферативных заболеваний, таких как рак, включающие введение в терапевтически эффективном количестве одного или нескольких предложенных в настоящем документе соединений, например,
одного или нескольких соединений по формуле (I) или (II). Заболевания, нарушения и/или состояния включают, не ограничиваясь перечисленным, те из них, которые ассоциированы с перечисленными в настоящем документе антигенами. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигеном является PSMA, MUC16, STEAP2, или EGFRvIII.
[0424] Предложенные в настоящем изобретении соединения могут быть
использованы для лечения первичных и/или метастатических опухолей, возникающих
в головном мозге и оболочках головного мозга, ротоглотке, легких и бронхиальном
дереве, желудочно-кишечном факте, мужских и женских половых путях, мышцах,
костях, коже и придатках кожи, соединительной ткани, селезенке, иммунной системе,
кроветворных клетках и костном мозге, печени и мочевых путях, и органах чувств,
таких как глаз. В некоторых вариантах осуществления изобретения предложенные в
настоящем изобретении соединения используются для лечения одного или нескольких
следующих типов рака: почечноклеточной карциномы, карциномы поджелудочной
железы, рака головы и шеи, рака предстательной железы, злокачественных глиом,
остеосаркомы, рака толстой кишки, рака желудка (например, рака желудка с
амплификацией МЕТ), злокачественной мезотелиомы, плазмоцитомы, рака яичников,
мелкоклеточного рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, синовиальной
саркомы, рака щитовидной железы,рака молочной железы или меланомы. В некоторых
вариантах осуществления изобретения раком является рак молочной железы.
[0425] Описанные в настоящем документе соединения могут быть введены
отдельно или вместе с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами. Один или несколько дополнительных терапевтических агентов могут быть введены непосредственно перед, одновременно или вскоре после введения описанных в настоящем документе соединений. Настоящее изобретение включает также фармацевтические композиции, содержащие любое из описанных в настоящем документе соединений в комбинации с одним или несколькими несколькими дополнительными терапевтическими агентами, и способы лечения, включающие введение таких комбинаций нуждающимся в них пациентам.
[0426] Подходящие дополнительные терапевтические агенты включают, не
ограничиваясь перечисленным: антагонист EGFR (например, антитело к EGFR [например, цетуксимаб или панитумумаб] или низкомолекулярный ингибитор EGFR [например, гефитиниб или эрлотиниб]), антагонист другого представителя семейства EGFR, такого как Her2/ErbB2, ЕгЬВЗ или ЕгЬВ4 (например, антитело к ЕгЬВ2
[например, трастсузумабили TPET-DM1 {KADCYLA(r)}], антитело к ЕгЬВЗ или антитело к ЕгЬВ4, или низкомолекулярный ингибитор активности ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ или ЕгЬВ4), антагонист EGFRvIII (например, антитело, специфично связывающее EGFRvIII), антагонист сМЕТ (например, антитело к сМЕТ), антагонист IGF1R (например, антитело к IGF1R), ингибитор B-raf (например, вемурафениб, сорафениб, GDC-0879, PLX-4720), ингибитор PDGFR-a (например, антитело к PDGFR-a), ингибитор к PDGFR-P (например, антитело к PDGFR-P или низкомолекулярный ингибитор киназы, такой как, например, иматиниба месилат или сунитиниба малат), ингибитор лиганда PDGF (например, антитело к PDGF-A, -В, -С, или -D, аптамер, миРНК и т.д.), антагонист VEGF (например, ловушка VEGF, такой как афлиберцепт, см., например, патент US 7,087,411 (называемый также в настоящем документе "химерным белком, подавляющим VEGF"), антитело к VEGF (например, бевацизумаб), низкмолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF (например, сунитиниб, сорафениб или пазопаниб)), антагонист DLL4 (например, антитело к DLL4, предложенное в патенте US 2009/0142354, как REGN421), антагонист Ang2 (например, антитело к Ang2, предложенное в US 2011/0027286, такое как Н1Н685Р), антагонист FOLH1 (например, антитело к FOLH1), антагонист STEAP1 или STEAP2 (например, антитело к STEAP1 или антитело к STEAP2), антагонист TMPRSS2 (например, антитело к TMPRSS2), антагонист MCLN (например, антитело к MCLN), антагонист СА9 (например, антитело к СА9), антагонист уроплакина (например, антитело к уроплакину [например, антителок к UPK3A]), антагонист MUC16 (например, антитело к MUC16), антагонист Тп (например, антитело к Тп), антагонист CLEC12A (например, антитело к CLEC12A), антагонист TNFRSF17 (например, антитело к TNFRSF17), антагонист LGR5 (например, антитело к LGR5), одновалентный антагонист CD20 (например, одновалентное антитело к CD20, такое как ритуксимаб) и т.д. Другие агенты, которые могут оказать благоприятное воздействие при введении в комбинации с соединениями по данному изобретению, включают, например, тамоксифен, ингибитора ароматазы и ингибиторы цитокинов, включая низкомолекулярные ингибиторы цитокинов и антитела, которые связываются с цитокинами, такими как ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-9, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-17, ИЛ-18, или с соответствующими рецепторами.
[0427] Подходящие терапевтические агенты включают также, не ограничиваясь
перечисленным, химиотерапевтические агенты, включая алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклозфосфамид (Цитоксан(tm)); алкилсульфонаты, таке как бусульфан,
импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодофа, карбоквон, метуредофа и уредофа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилен тиофосфаорамид и тримети лол омел амин; мустаргены, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, меклоретамин, меклоретамина оксид гидрохлорид, мелфалан, новемибичин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитромочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломутин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, отрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, докорубицин, эпирубицин, эсорубицин, идарубицин, марселломицин, митомицины, микофеноловая кислота, ногалимицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналог пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон,. дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; соединения, угнетающие функцию надпочечников, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; соединения, восполняющие дефицит фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамида гликозид; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демекольцин; диазиквон; эльфорнитин; эллиптиния ацетат; этоглюцид; галлия тритрат; гидроксимочевина; лентинин; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; модипамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK(tm); разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2"-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ара-С"); циклофосфамид; тиотепа; таксаны, например паклитаксел (Таксол(tm), Бристо-Майерс Сквибб Онколоджи, Принстон, Нью-Джерси) и доцетаксел (Таксотер(tm); Авентин Энтони, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16);
ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин, винорельбин, навельбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТРЕТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленных соединений. Это определение включает также антигормональные агенты, действие которых основано на регуляции или подавлении гормонального воздействия на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, 4(5)-имидазолы, ингибирующие ароматазу, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, коексифен, LY 117018, онапристон и торамифен (Фарестон)); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленных соединений.
[0428] Описанные в настоящем документе соединения могут быть также
введены и/или приготовлены в комбинации с противовирусными,
антибактериальными, аналгезирующими соединениями, кортикостероидами,
стероидами, кислородом, антиоксидантами, ингибиторами ЦОГ, кардиозащитными
соединениями, металлохелаторами, интерфероном-гамма, и/или НПВС.
[0429] В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в
настоящем документе, пациенту могут быть многократно введены дозы описанного в настоящем документе соединения (или фармацевтической композиции, содержащей описанное в настоящем документе соединение в комбинации с любыми дополнительными терапевтическими агентами, упоминаемыми в настоящем документе) в течение определенного периода времени. Способы согласно данной особенностью изобретения включают последовательное введение пациенту повторных доз описанного в настоящем документе соединения. В настоящем изобретении "последовательное введение" означает, что каждую дозу соединения вводят пациенту в разные моменты времени, например, в разные дни, разделенные предопределенным интервалом (например, выраженным в часах, днях, неделях или месяцах). Настоящее изобретение включает способы, предусматривающие последовательное введение пацинету однократной начальной дозы соединения, описанного в настоящем документе, с последующим введением одной или нескольких дополнительных доз соединения второй очереди и необязательно одной ли нескольких доз соединения третьей очереди.
[0430] Термины "начальная доза", "дозы второй очереди" и "дозы третьей
очереди" относятся в временной последовательности введения описанных в настоящем
документе соединений. Таким образом, "начальная доза" - это доза, которую вводят в
начале схемы лечения (называется также "исходной дозой"); "дозы второй очереди" -
это дозы, которые вводят после начальной дозы; и "дозы третьей очереди" - это дозы,
которые вводят после доз второй очереди. Начальная дозы, дозы второй и третьей
очереди могут содержать одинаковое количество описанного в настоящем документе
соединения, но, как правило, могут отличаться друг от друга по частоте введения. В
некоторых вариантах осуществления изобретения количества соединения,
содержащегося в начальной дозе, дозах второй очереди и дозах третьей очереди
различаются (например, скорректированы в направлении повышения или снижения, в
зависимости от ситуации) во время курса лечения. В некоторых вариантах
осуществления изобретения в начале схемы лечения пациенту вводят две или более
(например, 2, 3, 4, или 5) дозы в качестве "насыщающих доз", и затем последующие
дозы вводят с более низкой частотой (например, "поддерживающие дозы").
[0431] В определенных примерах осуществления настоящего изобретения
каждая доза второй очереди и/или доза третьей очереди вводится через 1-26 (например, 1, VA, 2, 2Уг, 3, 3'/2, 4, АУг, 5, 5У2, 6, 6У2, 7, Т/2, 8, 8!/2, 9, 9У2, 10, Ю'/2, 11, \\У2, 12, \2У2, 13, 13!/2, 14, WA, 15, \5У2, 16, 16!4 17, \1У2, 18, 18'/2, 19, 19'/2, 20, 20'/2, 21, 2Р/2, 22, 22'/2, 23, 23У2, 24, 24У2, 25, 2ЬУг, 26, 26/4, или более) недель после непосредственно предшествовавшая доза" означает, в последовательно многократного введения доз, дозу соединения, которая была введена пациенту перед введением следующей дозы в последовательности, при отсутствии промежуточных доз.
[0432] Способы согласно данной особенности изобретения могут включать
введение пациенту любого количества доз соединения второй очереди и/или третьей очереди. Например, в некоторых вариантах осуществления изобретения пациенту вводят дозу второй очереди лишь однократно. В других вариантах осуществления изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) доз второй очереди. Аналогично, в некоторых вариантах осуществления изобретения пациенту вводят дозу третьей очереди лишь однократно. В других вариантах осуществления изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) доз третьей очереди. Схема введения может применяться в течение неопределенного времени на протяжении жизни определенного пациента, или до тех пор, пока такое лечение не перестанет быть терапевтически необходимым или выгодным.
(0433] В вариантах осуществления изобретения с многократным введением доз
второй очереди, каждая доза второй очереди может быть введена с такой же частотой, как и другие дозы второй очереди. Например, каждая доза второй очереди может быть введена пациенту через 1-2 недели или 1-2 месяца после непосредственно предшествовавшей дозы. Аналогично, в вариантах осуществления изобретения с многократным введением доз третьей очереди, каждая доза третьей очереди может быть введена пациенту с такой же частотой, как и другие дозы третьей очереди. Например, каждая доза третьей очереди может быть введена пациенту через 2-12 недель после непосредственно предшествовавшей дозы. В определенных вариантах осуществления изобретения частота введения доз второй и/или третьей очереди пациенту может варьировать в схеме лечения. Во время курса лечения врач может также корректировать частоту введения доз после клинического обследования в зависимости от потребностей конкретного пациента.
[0434] Настоящее изобретение включает схемы введения, согласно которым
пациенту вводят от 2 до 6 насыщающих доз с первой частотой (например, один раз в
неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз в месяц,
один раз каждые два месяца и т.д.) с последующим введением двух или более
поддерживающих доз с меньшей частотой. Например, в соответствии с данной
особенностью изобретения, если насыщыющие дозы вводят с частотой один раз в
месяц, то поддерживающие дозы могут быть введены пациенту один раз каждые шесть
недель, один раз каждые два месяца, один раз каждые три месяца, и т.д.
[0435] Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции,
содержащие описанные в настоящем документе соединения и/или конъюгаты, например, соединения по формуле (I) и (И), например, композиции, содержащие описанные в настоящем документе соединение, его соль, стереоизомер, полиморф, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или вспомогательное вещество. Примеры подходящих носителей, разбавителей и вспомогательных веществ включают, не ограничиваясь перечисленным: буферы для поддержания надлежащего рН композиции (например, цитратные буферы, сукцинатные буферы, ацетатные буферы, фосфатные буферы, лактатные буферы, оксалатные буферы и т.п.), белки-переносчики (например, человеческий сывороточный альбумин), солевые растворы, полиолы (например, трегалозу, сахарозу, ксилит, сорбит и т.п.), поверхностно-активные вещества (например, полисорбат 20, полисорбат 80, полиоксалат, и т.п.), противомикробные соединения и антиоксид анты.
ПРИМЕРЫ
[0436] Спектры протонного ЯМР линкеров были получены на приборе Varian
300 МГц, тогда как спектры полезной нагрузки и полезной нагрузки-линкеров были
получены на приборе Varian 500 МГц instrument. Для регистрации масс-спектров
использовали приборы для ЖХ МС Agilent, основанные на использовании ионизации
электрораспылением и либо масс-спектрометра с ионной ловушкой, либо
одноквадрупольного масс-спектрометра. Для всех примеров представлены только
преобладающие изотопы, полученные методом масс-спектрометрии. Все исходные
материалы были приобретены из коммерческих источников и применялись без
предварительной очистки, если не указано иное, тогда как растворители были
приобретены из коммерческих источников и при необходимости высушены с
использованием методов, известных специалистам в данной области техники. Ниже
перечислены использованные в Примерах сокращения, в скобках показаны полные
химические назначения веществ: Ahx (6-аминокапроновая кислота), Вое (N-mpem-
бутоксикарбонил), Сар (капроил), CDCb (хлороформ-сО, CD3OD (метанол-с/4), Cit (L-
цитруллин), DCM (дихлорметан), DIEA (Л^-диизопропилэтиламин), DMF (N.N-
диметилформамид), EDC (Л^-(З-диметиламинопропил)-Т^'-этилкарбодиимид
гидрохлорид), EEDQ (2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин), ЕЮ Ас
(этилацетат), Fmoc (9-флуоренилметоксикарбонил), НАШ (1-
[бис( диметиламино)метилен] -1Н-1,2,3 -триазоло [4,5 -Ь] пиридиния 3 -оксид
гексафторфосфат), НС1 (водный раствор соляной кислоты), НОАс (ледяная уксусная
кислота), НО AT (1-гидрокси-7-азабензотриазол), ВЭЖХ (высокоэффективная
жидкостная хроматография), ЖХ-МС (тандемная ВЭЖХ и масс-спектрометрия), Mai
(малеимид), MeCN (ацетонитрил), МеОН (метанол), МС (масс-спектрометрия низкого
разрешения), ИаНСОз (натрия бикарбонат), Na2S04 (безводный натрия сульфат), NH4CI
(аммония хлорид), NHS (jV-гидроксисукцинимид), ЯМР (ядерная магнитно-резонансная
спектроскопия), OSu (сложный эфир янтарной кислоты), TEA (триэтиламин), TFA
(трифторуксусная кислота), THF (тетрагидрофуран), ТСХ
(тонкослойнаяхроматография), Val (L-валин), ZnCh (цинка хлорид).
ПРИМЕР 1
[0437] Пример 1 относится к соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 9.
Майтан-З-О-карбомоил-М-фент-п-(амино-Цит-Вал-Кап-Мал) (9)
[0438] В круглодонную колбу вместимостью 50 мл, оснащенную магнитной
мешалкой и азотподводящей трубкой, вносили Вос-Ь-валин-Ь-цитруллин (1, 0.5 г; 1.3 ммоль), ацетонитрил (10 мл) и воду (10 мл). Добавляли водный раствор 1 М НС1 (13 мл; 13 ммоль) и этот раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов (ч). Раствор замораживали и лиофилизировали до получения белого втердого вещества. Твердое вещество экстрагировали 10% МеОН в DCM, органический слой сушили над Na2S04, отфильтровывали и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение (0.4 г, выход 98%) в виде бесцветного прозрачного масла. МС (ИЭР, полож. и отр. ионы): рассчитано для C11H22N4O4, 274.2; полученные значения 275.2 (М+Н), 273.2 (М-Н).
Стадия В: 6-Малеимидил-капроамидш-Ь-валин-Ь-иитруллин (4):
[0439] В круглодонную колбу вместимостью 25 мл оснащенную магнитной
мешалкой и азотподводящей трубкой, вносили Ь-валин-Ь-цитруллин (2, 0.4 г; 1.3 ммоль), сукцинатный эфир 6-малеимидо-капроновой кислоты (3, 0.6 г; 2.0 ммоль) в DMF (3 мл) и затем DIEA (0.4 мл; 2.0 ммоль). Раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 часов, разбавляли водой (2 мл) и наносили на колонку С18 column с последующим элюированием 5-95% MeCN в воде (содержащей 0.05% НОАс). Содержащие продукт фракции объединяли, замораживали и лиофилизировали получая указанное в заголовке соединение (0.3 г, выход 47%) в виде белого твердого вещества. МС (ИЭР, полож.и отр. ионы): рассчитано для C21H33N5O7, 467.2; полученные значения 468.4 (М+Н), 466.4 (М-Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-нитробензол) (7):
[0440] В сухой круглодонной колбе взвешивали майтанзинол (6) (полученный,
как было описано в предыдущем уровне техники, 114 мг, 0.202 ммоль) и р-нитрофенил изоцианат (5, 73 мг, 0.445 ммоль). Смесь растворяли в сухом DCM (10 мл) и добавляли по каплям 1.0 М раствор цинка хлорида в диэтиловом эфире (0.50 мл, 0.50 ммоль). Колбу герметично запечатывали резиновой мембраной, продували через иглу аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 ч. ЖХ-МС продемонстрировала полную юконверсию майтанзинола. Реакционную смесь разбавляли водой и трехкратно экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCOn и соли, сушили над Na2S04,
и отфильтровывали. Выпаренный продукт не очень хорошо растворялся в смеси MeCN/вода, поэтому его повторно концентрировали досуха под вакуумом, растворяли в смеси EtOAc/DCM, и отфильтровывали над ЫагБСч. Затем фильтра очищали методом флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 50 - 100% ЕЮ Ас в гексанах) и содержащие продукт фракции объединяли, концентрировали, и сушили под вакуумом чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (50 мг, 34%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H41N4O11CI, 728.3; полученные значения 729.2 (М+Н).
Стадия D: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-аминобензол) (8):
[0441] Продукт, полученный на предыдущей стадии (7, 49 мг, 0.067 ммоль) и
цинкуовую пыль (85 мг, 1.30 ммоль) взвешивали в круглодонной колбе и обрабатывали THF (4 мл), водой (1 мл), и НО Ас (0.100 мл, 1.75 ммоль). Колбу герметично запечатывали резиновой мембраной, продували через колбу аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 ч. Реакционную смесь отфильтровывали над Целитом, твердое вещество промывали ацетонитрилом (MeCN, 3x5 мл), и фильтрат концентрировали под вакуумом до получения масла янтарного цвета. Это масло подвергали очистке на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05%) уксусной кислоты, в течение 12 мин). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде, и лиофилизировали в течение 3 суток, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества кремового цвета (32 мг, 63%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для Сз5Н4з^Ос> С1,698.3; полученные значения 699.2 (М+Н).
Стадия Е: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-п-(амино- Цит-Вал-Кап-Мал) (9):
[0442] Продукт, полученный на предыдущей стадии (8, 16 мг, 0.021 ммоль), 6-
малеимидил-капроамидил-Ь-валин-Ь-цитруллин (4, 16 мг, 0.034 ммоль), and EEDQ (15 мг, 0.061 ммоль) взвешивали в круглодонной колбе и растворяли в сухом DCM (2 мл) и безводном метаноле (1 мл). Колбу герметично запечатывалирезиновой мембраной, продували через нее аргон и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в смеси MeCN/вода и очищали непосредственно на колонке С18 Aq RediSep Gold с использованием системы ISCO (градиентное элюирование: 20
80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты, в течение 12 мин). Хорошего разделения продукта достичь было сложно, поэтому фракции продукта с примесями лиофилизировали и подвергали повторной двухкратной очистке методом препаративной ВЭЖХ на колонке Phenomenex Gemini 5u, 30x150 мм С18 (вначале 40 - 80%, затем 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.1 % НОАс, в течение 20 мин, 30 мл/мин). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде, и лиофилизировали в течение ночи чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (5 мг, 21%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C56H74N9O15CI, 1147.5; полученные значения 1148.5 (М+Н), 1130.4 (М-Н20+Н), 1170.5 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, метанол-^) 6: 7.48 - 7.42 (m, 2Н), 7.40 (t, J = 8.3 Гц, 2Н), 7.07 (s, Ш), 7.02 (d, J = 1.8 Гц, 1Н), 6.69 (d, J = 4.7 Гц, Ш), 6.49 (dd, J = 15.4, 11.1 Гц, Ш), 6.14 (d, J = 8.9 Гц, 1Н), 5.33 (dd, J = 15.4, 8.7 Гц, 1Н), 4.47 (dd, J = 11.9, 2.9 Гц, Ш), 4.40 (dd, J = 8.9, 5.2 Гц, Ш), 4.25 - 4.14 (т, 1Н), 4.07 (dd, J = 12.0, 7.6 Гц, Ш), 3.88 (s, ЗН), 3.50 (d, J = 12.7 Гц, Ш), 3.43 (d, J = 8.9 Гц, 1Н), 3.38 (t, J = 7.1 Гц, 2Н), 3.18 - 3.13 (т, 2Н), 3.11 (s, 4Н), 3.09 - 2.97 (т, 2Н), 2.90 (dd, J = 9.8, 3.7 Гц, Ш), 2.58 - 2.47 (т, 1Н), 2.18 (t, J = 7.5 Гц, 2Н), 2.14 - 2.04 (т, 2Н), 2.00 - 1.92 (т, 1Н), 1.87 (d, J = 4.9 Гц, Ш), 1.80 (dd, J = 10.0, 4.8 Гц, Ш), 1.67 (dd, J = 13.7, 2.1 Гц, 2Н), 1.63 (s, 4Н), 1.59 - 1.41 (т, 8Н), 1.41-1.33 (т, 2Н), 1.25 - 1.17 (т, 4Н), 1.17 - 1.09 (т, 4Н), 1.04 (d, J = 6.5 Гц, Ш), 0.94 (dd, J = 11.7, 6.7 Гц, 1Н), 0.87 (dt, J = 7.9, 4.0 Гц, 6Н), 0.77 (s, ЗН).
ПРИМЕР 2
[0443] Пример 2 ОТНОСИТСЯ К соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 10.
Сукиинатный эфир майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-аминоадипиновой кислоты (10)
Стадия А: Майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-аминоадипиновая кислота:
[0444] Продукт, полученный в Примере 1, стадия D (8, 20 мг, 0.0263 ммоль) и
адипиновый ангидрид (называемый также оксепан-2,7-дионом, 20 мг, 0.156 ммоль) взвешивали в круглодонной колбе, растворяли в THF (2.0 мл), и обрабатывали триэтиламином (0.010 мл, 0.0717 ммоль). Твердые компоненты не растворялись, поэтому добавляли DMF (1.0 мл), колбу запечатывалирезиновой мембраной, продували через нее аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечении 18 ч ЖХ-МС продемонстрировала полную конверсию соединения 2, поэтому реакционную смесь концентрировали до образования масла под вакуумом,
растворяли в смеси MeCN/вода и очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05%) уксусной кислоты). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде и лиофилизировали в течение 18ч чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (19 мг, 86%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C41H51CIN4O12, 826.3; полученные значения 827.3 (М+Н), 849.3 (M+Na).
Стадия В: Сукцинатный эфир майтан-З-О-карбомоил-М-фенил-п-аминоадипиновой кислоты (10):
[0445] Продукт, полученный на предыдущей стадии (18 мг, 0.0218 ммоль), N-
гидроксисукцинимид (19 мг, 0.165 ммоль), и EDC гидрохлорид (34 мг, 0.177 ммоль) взвешивали в круглодонной колбе, растворяли в DCM (3 мл), колбу запечатывали резиновой мембраной, продували через нее аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечени 20 ч реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в MeCN, добавляли 2 капли 10%) водной уксусной кислоты и очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 30 - 90% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде, и лиофилизировали в течение 18 ч чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (10 мг, 50%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C45H54N5O14CI, 923.3; полученные значения 924.3 (М+Н), 946.3 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, CDCb) 5: 7.62 (s, 1Н), 7.54 (d, 2Н, J = 9 Гц), 7.39 (d, 2Н, J =9 Гц), 6.84 (d, Ш, J = 2 Гц), 6.69 (d, 1Н, J = 2 Гц), 6.58 (s, Ш), 6.47 (dd, 1H,J = 16 Гц, И Гц), 6.18 (s, 1Н), 6.10 (d, Ш, J= 11 Гц), 5.37 (dd, Ш, J = 16 Гц, 9 Гц), 4.81 (dd, Ш, J = 12 Гц, 2 Гц), 4.32 (t, Ш, J = 10 Гц), 4.00 (s, ЗН), 3.50 (d, Ш, J = 14 Гц), 3.47 (d, 1Н, J = 9 Гц), 3.31 (s, ЗН), 3.27 (d, Ш, J = 13 Гц), 3.20 (s, ЗН), 2.89 (m, 6Н), 2.68 (m, 2Н), 2.51 (dd, Ш, J = 14 Гц, 12 Гц), 2.43 (т, 2Н), 2.26 (dd, \H,J= 14 Гц, 2 Гц), 1.89 (т, 5Н), 1.71 (s, ЗН), 1.29 (т, 5Н), 0.91 (s, ЗН).
ПРИМЕР 3
Пример 3 ОТНОСИТСЯ к соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 11.
Сукцинатный эфир майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-амино-Цит-Вал-адипиновой кислоты (14):
Стадия А: Майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-амино-Цит-Вал-Ртос (12):
[0446] Проводилась реакция сочетания между продуктом, полученным в
Примере 1, на стадии D (8, 54 мг, 0.071 ммоль), и Ршос-Ь-валин-Ь-цитруллином (11, 151 мг, 0.304 ммоль) с использованием способа, описанного в Примере 1, стадия Е, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (51 мг, 61%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C61H73CIN8O14, 1176.5; полученные значения 1178.1 (М+Н), 1200.1 (M+Na).
Стадия В: Майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-амино-Цит-Вал (13):
[0447] Продукт, полученный на предыдущей стадии (12, 49 мг, 0.042 ммоль),
растворяли в 5% (отношение объемов) растворе пиперидина в DMF (2.0 мл), и смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечени 20 ч реакционную смесь подкисляли несколькими каплями 10% водной уксусной кислоты, разбавляли MeCN и водой (прибл. по 1 мл каждого), и очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05%) уксусной кислоты). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде, и лиофилизировали в течение 18 ч чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества кремового цвета (34 мг, 81%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C46H63CIN8O12, 954.5; полученные значения 955.9 (М+Н), 977.9 (M+Na).
Стадия С: Майтан-З-О-карбомоил-Ы-фенил-п-амино-Цит-Вал-адипиновая кислота:
[0448] Продукт, полученный на предыдущей стадии (13, 49 мг, 0.042 ммоль) и
адипиновый ангидрид (называемый также оксепан-2,7-дионом, 20 мг, 0.156 ммоль) взвешивали в круглодонной колбе, растворяли в пиридине (2 мл), колбу герметично запечатывали резиновой мембраной, продували через нее аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечении 18 ч реакционную смесь концентрировали досуха под высоким выкуумом, подкисляли несколькими каплями of 10% водного раствора уксусной кислоты, растворяли в MeCN и очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80%" MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали
в сухом льде, и лиофилизировали в течение 3 суток, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (14 мг, 40%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C52H71CIN8O15, 1082.5; полученные значения 1084.0 (М+Н), 1106.1 (M+Na).
Стадия D: Сукцинатный эфир майтан-З-О-карбомоил-И-фенил-п-амино-Цит-Вал-адипиновой кислоты (14):
[0449] При использовании способа, описанного в Примере 2, стадия В, из
продукта, полученного на предыдущей стадии (13 мг, 0.012 ммоль), получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (7 мг, 50%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C56H74CIN9O17, 1179.5; полученные значения 1182.1 (М+Н), 1203.2 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, DMSO-Ж) 5: 9 91 (s, 1Н), 8.48 (s, Ш), 8.08 (d, J = 7.6 Гц, 1Н), 7.84 (d, J = 8.6 Гц, Ш), 7.54 (d, J = 8.8 Гц, 2Н), 7.44 (d, J = 8.5 Гц, 2Н), 7.26 (s, Ш), 7.19 (s, Ш), 6.77 (s, Ш), 6.59 - 6.46 (m, Ш), 6.36 (s, Ш), 5.98 (s, 1Н), 5.53 (s, 1Н), 5.40 (s, 2Н), 5.30 (dd, J = 15.1, 9.1 Гц, 1Н), 4.44 - 4.31 (т, 2Н), 4.27 - 4.18 (т, 1Н), 4.14 (t, J = 11.2 Гц, Ш), 3.94 (s, ЗН), 3.63 (d, J = 12.0 Гц, Ш), 3.42 (d, J = 9.1 Гц, Ш), 3.18 (s, 4Н), 3.10 (s, ЗН), 3.06 - 2.98 (т, 1Н), 2.98 - 2.91 (т, Ш), 2.89 (d, J = 9.7 Гц, Ш), 2.81 (s, 4Н), 2.73 -2.65 (т, 2Н), 2.30-2.22 (т, Ш), 2.21-2.14 (т, Ш), 2.06 (d, J = 13.2 Гц, Ш), 1.97 (dd, J = 12.5, 5.6 Гц, Ш), 1.66 (s, ЗН), 1.60 (d, J = 5.5 Гц, 5Н), 1.53 -1.30 (т, 6Н), 1.23 (s, Ш), 1.11 (d, J = 6.3 Гц, ЗН), 0.85 (dd, J = 15.2, 6.7 Гц, 6Н), 0.75 (s, ЗН).
ПРИМЕР 4
[0450] Пример 4 ОТНОСИТСЯ К соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 12.
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-Кап-Мал) (19)
Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-хлор-4-нитро)бензол (16):
[0451] В сухой круглодонной колбе взвешивали 2-хлор-4-нитрофенил изоцианат
(15, 525 мг, 2.64 ммоль) и майтанзинол (6, 503 мг, 0.890 ммоль). Смесь растворяли в сухом DCM (10 мл) и добавляли по каплям 1.0 М раствор цинка хлорида в диэтиловом эфире (1.20 мл, 1.20 ммоль). Колбу запечатывалирезиновой мембраной, продували через иглу аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечении 18ч ЖХ-МС показала, что реакция не завершена, поэтому сверху устанавливали конденсатор с водным охлаждением, и реакционную смесь нагревали до
50°С. По истечении 6 ч большая часть майтанзинола была израсходована, как показала ЖХ-МС, поэтому реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение ночи. По истечении следующих 18 h реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворяли в смеси MeCN/DCM, и очищали методом флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 10 - 50% MeCN in DCM). Поздние фракции продукта объединяли, концентрировали, и сушили под вакуумом в течение 3 суток, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде оранжевого твердого вещества (396 мг, 58%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H40CI2N4O11, 762.2; полученные значения 763.1 (М+Н).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-хлор-4-амино)бензол (17):
[0452] Указанное в заголовке соединение получали из продукта, полученного на
предыдущей стадии (16, 388 мг, 0.509 ммоль), в виде белого твердого вещества (301 мг, 75%) при использовании способа, описанного в Примере 1, стадия D, за исключением того, что вместо THF использовали MeCN и реакционную смесь перемешивали в течение всего лишь 2 ч. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H42CI2N4O9, 732.2; полученные значения 733.1 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-йО б: 7.83 (d, J = 8.8 Гц, Ш), 6.85 (s, 2Н), 6.79 (s, Ш), 6.74 (d, J = 2.6 Гц, 1Н): 6.60 (dd, J = 8.8, 2.6 Гц, Ш), 6.42 (dd, J= 15.4, 11.0 Гц, Ш), 6.30 (d,J= 10.8 Гц, Ш), 6.20-6.13 (m, Ш), 5.23 (dd, J = 15.3,9.0 Гц, 1Н), 4.80 (dd, J= 11.8, 2.5 Гц, 1Н), 4.37 (ddd, J= 12.4, 10.5, 2.0 Гц, Ш), 4.00 (s, ЗН), 3.56 (d, J= 13.0 Гц, 1Н), 3.43 (d, J= 9.0 Гц, Ш), 3.26 (s, 4Н), 3.20 (s, ЗН), 3.04 (d, У = 9.8Гц, Ш), 2.85-2.73 (m, Ш), 2.49 (dd, J= 13.7, 11.8 Гц, 1Н), 2.23 (dd,J= 13.7,2.5 Гц, Ш), 1.78 (d, J = 13.5 Гц, 1Н), 1.69 (s, ЗН), 1.54 - 1.43 (т, 2Н), 1.31 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 1.23 (t, J= 12.6 Гц, Ш), 0.88 (s, ЗН).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-^-2-хлор-4-(аминофенил-Цит-Вал-?тос)\
[0453] Указанное в заголовке соединение получали из продукта, полученного на
предыдущей стадии (17, 150 мг, 0.189 ммоль), при использовании способа, описанного в Примере 3, стадия А, в виде белого твердого вещества (174 мг, 76%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C6iH72Cl2NgOi4, 1210.5; полученные значения 1213.2 (М+Н), 1235.3 (M+Na).
Стадия D: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-2-хлор-4-{аминофенил-Цит-Вал) (18):
[0454] Указанное в заголовке соединение получали из продукта, полученного на
предыдущей стадии (172 мг, 0.142 ммоль), при использовании способа, описанного в Примере 3, стадия В) в виде белого твердого вещества (51 мг, 34%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C46H62CI2N8O12, 988.4; полученные значения 989.3 (М+Н), 1011.3 (M+Na).
Стадия Е: Майтан-3-0-карбомоил-Н-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-Кап-Мал) (19):
[0455] Продукт, полученный на предыдущей стадии (18, 14 мг, 0.013 ммоль) и
сукцинатный эфир 6-малеимидил-капроновой кислоты (3, 20 мг, 0.065 ммоль) растворяли в MeCN (2.0 мл) и воде (0.5 мл), добавляли одну каплю насыщенного водного раствора NaHCCb, колбу запечатывалирезиновой мембраной, продували через нее аргон, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. По истечени 20 ч реакционную смесь подкисляли несколькими каплями 10% водного раствора уксусной кислоты, растворяли в MeCN (са. 2 мл), и очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 30 - 90% MeCN в воде, в обоих случаях содержащей 0.05% уксусной кислоты). Содержащие продукт фракции объединяли, частично концентрировали под вакуумом, замораживали в сухом льде, и лиофилизировали в течение 4 суток чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (10 мг, 63%). МС (ИЭР. полож. ион): рассчитано для C56H73CI2N9O15, 1181.5; полученные значения 1183.1 (М+Н), 1204.1 (M+Na). *Н ЯМР (500 МГц, DMSO-afe) б: 10.16 (s, 1Н), 8.14 (d, J = 7.3 Гц, Ш), 7.93 (dd, J = 15.2, 2.3 Гц, 1Н), 7.81 (d,J=9.1 Гц, 2Н), 7.71-7.59 (m, Ш), 7.46 (dd, J = 8.8, 2.4 Гц, 1Н), 7.21 (d,J =
1.7 Гц, Ш), 7.07 (s, 1Н), 6.99 (d, J = 11.8 Гц, 2Н), 6.90 (d, J = 8.2 Гц, Ш), 6.57 (dd, J = 15.1, 11.2 Гц, 1Н), 6.45 (d,J= 10.6 Гц, 1Н), 5.98 (d, J = 6.2 Гц, Ш), 5.91 - 5.84 (т, Ш), 5.47 - 5.34 (т, ЗН), 4.45 (dd, J = 12.0, 2.6 Гц, 1Н), 4.40 - 4.29 (т, Ш), 4.19 (dd, J = 8.6,
6.7 Гц, 1Н), 4.13 (t, J= 11.1 Гц, 1Н),3.94 (s, ЗН), 3.57 (d,7= 12.4 Гц, 1Н), 3.48 (d,J=9.\ Гц, 1Н), 3.21 (d, J = 3.7 Гц, 4Н), 3.07 (s, ЗН), 3.05 - 2.98 (т, Ш), 2.98 - 2.88 (т, 1Н), 2.78 (d, J = 9.8 Гц, Ш), 2.43 (t, J = 13.1 Гц, 1Н), 2.24 - 2.05 (т, 2Н), 2.01 (d,J= 13.8 Гц, Ш), 1.98-1.91 (т, 1Н), 1.69 (d, J = 7.9 Гц, Ш), 1.65 (s, ЗН), 1.61 (dd, J = 9.2, 4.9 Гц, Ш), 1.54 - 1.40 (т, 8Н), 1.40 - 1.30 (т, Ш), 1.19 (td, J = 15.8, 14.8, 8.2 Гц, ЗН), 1.11 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 0.88 (d, J = 6.7 Гц, 1Н), 0.84 (dd, J = 17.0, 6.8 Гц, 6Н), 0.81 (s, 2Н).
ПРИМЕР 5
[0456] Пример 5 ОТНОСИТСЯ К соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 13.
Сукцинатный эфир майтан-3-0-карбомоил-Н-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-адипиновой кислоты) (20):
Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-адипиновая кислота):
[0457] Указаанное в заголовке соединение было получено из продукта,
полученного в Примере 4, стадия D (18, 19 мг, 0.018 ммоль), в соответствии с описанием в Примере 3, стадия С, в виде белого твердого вещества (11 мг, 55%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C52H70CI2N8O15, 1116.4; полученные значения 1119.2 (М+Н), 1139.2 (M+Na).
Стадия В: Сукцинатный эфир майтан-3-0-карбомоил-И-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-адипиновой кислоты) (20):
[0458] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 2, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (11 мг, 0.010 ммоль), в виде белого твердого вещества (4 мг, 33%"). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C56H73CI2N9O17, 1213.5; полученные значения 1216.2 (М+Н), 1236.3 (M+Na). *Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 6: 10.16 (s, Ш), 8.16 (d, J = 7.3 Гц, 1H), 7.91 (d, J = 2.4 Гц, 1H), 7.84 (d, J = 8.7 Гц, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.7 Гц, 1H), 7.45 (dd, J= 8.7, 2.4 Гц, 1H), 7.21 (d, J= 1.8 Гц, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.64-6.50 (m, 1H),6.44 (d,J= 11.0 Гц, 1H), 5.97 (d, J-6.2 Гц, 1H), 5.87 (d,J= 1.3 Гц, 1H),5.41 (q, J = 7.6, 6.4 Гц, ЗН), 4.50 - 4.39 (m, 1H), 4.34 (d, J = 7.0 Гц, 1H), 4.28 - 4.17 (m, 1H), 4.13 (t, J = 11.6 Гц, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.56 (d, J = 13.9 Гц, 1H), 3.52 - 3.42 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 3.03 (dt, J = 13.1, 6.7 Гц, 2H), 2.98 - 2.90 (m, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 5H), 2.69 - 2.64 (m, 2H), 2.24 (d, J = 9.9 Гц, 1H), 2.21 - 2.13 (m: 1H), 2.00 (d, J = 13.3 Гц, 1H), 1.98 - 1.93 (m, 1H), 1.64 (s, 3H), 1.60 (d,J=6.5 Гц, 5H), 1.51 (d, J = 13.1 Гц, 1H), 1.471.40 (m, 3H), 1.39 (d, J = 6.5 Гц, 1H), 1.11 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 0.85 (dd, J = 16.2, 6.8 Гц, 6H), 0.80 (s, 3H).
ПРИМЕР 6
[0459] Пример 6 относится к соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 14.
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-6-Акх) (22): Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-(амино-Цит-Вал-6-АЬх-
Fmoc):
[0460] Проводилась реакция сочетания между продуктом, полученным в
Примере 4 на стадии D (18, 40 мг, 0.040 ммоль), и сукцинатным эфиром Fmoc-6-аминокапроновой кислоты (21, 92 мг, 0.204 ммоль) в соответствии со способом, описанным в Примере 4, стадия Е, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (31 мг, 57%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C67H83CI2N9O15, 1323.5; полученные значения 1326.5 (М+Н), 1346.6 (M+Na).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомот^-2-хлор-4-(аминофенш-Цит-Вал-6-АЬх)
(22}:
[0461] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного для Примера 3, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (30 мг, 0.023 ммоль) в виде белого твердого вещества (9 мг, 35%) после повторной очистки методом препаративной ВЭЖХ на колонке Phenomenex Gemini 5u, 30x150мм С18 (10 - 90% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% НОАс, в течение 22 мин при скорости потока 40 мл/мин). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C52H73CI2N9O13, 1101.5; полученные значения 1102.8 (М+Н). *Н ЯМР (500 МГц, DMSO-^б) 5: 7.93 - 7.85 (m, Ш), 7.65 (d, J = 8.7 Гц, Ш), 7.49 (d, J = 10.2 Гц, 1Н),7.21 (d, J= 1.8 Гц, 1Н),7.06 (s, 1Н), 6.57 (dd, J= 15.1, 11.1 Гц, Ш), 6.44 (d, J= 11.2 Гц, Ш), 6.05 (s, 1Н), 5.50 - 5.32 (т, 2Н), 4.49 - 4.39 (т, Ш), 4.34 (s, 1Н), 4.23 - 4.06 (т, Ш), 3.94 (s, 2Н), 3.21 (s, ЗН), 3.07 (s, ЗН), 3.03 - 2.92 (т, ЗН), 2.78 (d, J = 9.8 Гц, Ш), 2.41 (d, J = 12.7 Гц, Ш), 2.30 - 2.23 (т, Ш), 2.18 (q, J= 6.7 Гц, 2Н), 2.05 - 1.93 (т, ЗН), 1.81 (s, 2Н), 1.75 - 1.67 (т, 1Н), 1.65 (s, ЗН), 1.54-1.41 (т, 7Н), 1.41 -1.32 (т, 4Н), 1.30 - 1.17 (т, 5Н), 1.11 (d, У =6.3 Гц, ЗН), 0.85 (dd, J= 11.5, 6.7 Гц, 6Н), 0.80 (s, 2Н).
ПРИМЕР 7
[0462] Пример 7 ОТНОСИТСЯ К соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 15.
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-{амино-Кап-Мал) (24):
[0463] Проводилась реакция сочетания между продуктом, полученным в
Примере 4, на стадии В (17, 20 мг, 0.025 ммоль), и 6-малеимидил-капроновой кислотой (23, 28 мг, 0.133 ммоль), в соответствии со способом, описанным в Примере 1, стадия Е, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (21 мг, 91%) после второй очистки в системе ISCO. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C45H53CI2N5O12, 925.3; полученные значения 926.2 (М+Н), 948.2 (M+Na). 'Н ЯМР
(500 МГц, DMSO-^e) 5: 9.96 (s, Ш), 7.90 (d, J = 2.4 Гц, 1H), 7.65 (d, J = 8.8 Гц, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.43 (dd, J = 8.8, 2.4 Гц, 1H), 7.21 (d, J = 1.8 Гц, 1H), 7.04 (d, J = 1.8 Гц, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.72 (s, 1H), 6.58 (dd, J= 15.2, 11.1 Гц, 1H), 6.42 (d, J= 11.0 Гц, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.43 (dd, J= 15.3,9.1 Гц, 1H), 4.51 (dd, J= 11.9, 2.6 Гц, 1H), 4.18 (ddd, J= 12.4, 10.4,2.3 Гц, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.57 (d, J = 12.4 Гц, 1H), 3.50 (d, J = 9.1 Гц, 1H), 3.42 (t, J = 7.0 Гц, 2H), 3.09 (s, 4H), 2.79 (d, ./=9.8 Гц, 1H), 2.45 (dd, J= 13.8, 11.9 Гц, 1H), 2.31 (t, J=7.4 Гц, 2H), 2.09- 1.98 (m, 1H), 1.88 (s, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.65- 1.57 (m, 2H), 1.55 (q,J=7.2 Гц, ЗН), 1.46 (d, J = 12.7 Гц, 2H), 1.34 - 1.21 (m, 2H), 1.14 (d, J = 6.3 Гц, ЗН), 0.83 (s, ЗН).
ПРИМЕР 8
[0464] Пример 8 относится к соединениям, проиллюстрированным на Фиг. 16.
Сукцинатный эфир майтан-3-0~карбомоил-Я-фенил-2-хлор-4-
(аминоадипиновой кислоты) (26):
Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Н-фенил-2-хлор-4-(аминоадипиновая кислота):
[0465] Проводилась реакция сочетания между продуктом, полученным в
Примере 4, на стадии В (17, 17 мг, 0.021 ммоль) и адипиновой кислотой(25, 18 мг, 0.123 ммоль) в соответствии со способом, описанным в Примере 1, стадия Е, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (11 мг, 59%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C41H50CI2N4O12, 860.3; полученные значения 861 (М+Н), 883 (M+Na).
Стадия В: Сукцинатный эфир майтан-3-0-карбомоил-Ы-фенил-2-хлор-4-(аминоадипиновой кислоты) (26):
[0466] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 2, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (10 мг, 0.012 ммоль) в виде белого твердого вещества (11 мг, 100%"). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C45H53CI2N5O14, 957.3; полученные значения 958.0 (М+Н), 980.0 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-;/) 5: 8.18 (d, J = 2.4 Гц, Ш), 8.06 (d, J = 8.9 Гц, 1Н), 7.78 (s, 1Н), 7.08 - 6.93 (m, 2Н), 6.85 (d, J= 1.8 Гц, 1Н), 6.81 (d, J = 1.8 Гц, 1Н), 6.40 (dd, J = 15.0, 10.9 Гц, Ш), 6.33 (d, J = 11.0 Гц, Ш), 6.14 (d, J = 1.4 Гц, Ш), 6.04 (s, 1Н), 5.19 (dd, J= 15.1, 9.0 Гц, Ш), 4.81 (dd,7= 11.8, 2.6 Гц, Ш), 4.39-4.28 (т,
Ш), 4.00 (s, ЗН), 3.74 - 3.65 (m, ЗН), 3.55 (d, J = 13.0 Гц, 1H), 3.41 (d, J = 8.8 Гц, 1H), 3.28 - 3.21 (m, 4H), 3.19 (s, 3H), 3.05 (d, J = 9.8 Гц, 1H), 2.93 - 2.87 (m, 6H), 2.86 (s, 6H), 2.82 (d, J = 5.4 Гц, 8H), 2.68 (d, J = 6.9 Гц, 2H), 2.51 (dd, J = 13.9, 11.9 Гц, 1H), 2.42 (t, J = 7.2 Гц, 2H),2.23 (dd,J = 13.8,2.6 Гц, 1H), 1.88 ( &,J=5ATm, 5H), 1.74 (d,J = 13.7 Гц, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.52 (s, 1H), 1.30 (d, У =6.4 Гц, ЗН), 1.25 ~1.18(m, 1H),0.87 (s, ЗН).
ПРИМЕР 9
[0467] Примеры 9-25 относятся к соединениям, проиллюстрированным на
Фиг. 17, и отражают общую схему получения полезных нагрузок 30a-q.
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(3-хлор-4-амино)бензол (30а)
Стадия А:1-изоцианато-3-хлор-4-нитробензол (28а):
[0468] В соответствии с методикой, описанной Cai et al. (Org. Lett. 2012, 14,
3332-35), трифосген (301 мг, 1.01 ммоль) растворяли в 2 мл сухого ЕЮАс, реакционную смесь охлаждали до 0 °С в атмосфере аргона. По каплям в течение 20 мин добавляли раствор Et3N (15 мкл, 0.11 ммоль) и З-хлор-4-нитроанилина (27а, 173 мг, 1.00 ммоль) в 3 мл сухого ЕЮ Ас. Колбу с реакционной смесью нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 1 ч, затем устанавливали сверху сверху конденсатор с водным охлаждением и нагревали до 80 °С втечение 18 ч. Растворитель выпаривали под вакуумом, и остаток промывали смесью Е1гО/гексан 1:1 (3 х 10 мл) на пористом фильтре. Фильтрат выпаривали и сушили под вакуумом, получая указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (177 мг, 89%). 'Н ЯМР (300 МГц, CDC13) 5: 7.29 (d, J = 2.3 Гц, Ш), 7.14 (d, J = 2.3 Гц, Ш), 7.11 (d, J = 2.3 Гц, Ш).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(3-хлор-4-нитро)бензол (29а):
[0469] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 1, стадия С, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28а, 87 мг, 0.438 ммоль), и майтанзинола (6, 103 мг, 0.182 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества (78 мг, 56%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H40CI2N4O11, 762.2; полученные значения 763.1 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомош-Ы-(3-хлор-4-амино)бензол (30а):
[0470] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей
стадии (29а, 77 мг, 0.101 ммоль), в виде белого твердого вещества (59 мг, 74%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H42CI2N4O9, 732.2; полученные значения 733.1 (М+Н). *Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5: 7.43 (s, Ш), 7.13 (d, J = 8.4 Гц, Ш), 6.83 (d, J = 1.8 Гц, Ш), 6.76 (s, Ш), 6.70 (s, Ш), 6.46 (dd, J = 15.4, 11.1 Гц, 2Н), 6.22 (s, Ш), 6.07 (d, J = 10.9 Гц, 1Н), 5.38 (dd, J = 15.4, 8.7 Гц, Ш), 4.78 (d, J = 11.5 Гц, 1Н), 4.34 (t, J = 11.5 Гц, Ш), 3.99 (s, ЗН), 3.98 (s, Ш), 3.53 - 3.44 (m, 2Н), 3.32 (s, ЗН), 3.26 (d, J = 14.5 Гц, Ш), 3.21 (s, ЗН), 2.98 (s, Ш), 2.90 (d, J = 9.1 Гц, 1Н), 2.50 (t, J = 12.8 Гц, 1Н), 2.26 (d, J= 13.9 Гц, Ш), 1.87 (d,J= 13.6 Гц, 1Н), 1.70 (s, ЗН), 1.50 (dd, J= 10.8, 4.4 Гц, 2Н), 1.30 (d, J = 6.3 Гц, ЗН), 1.24 (t, J= 12.7 Гц, Ш), 0.90 (s, ЗН).
ПРИМЕР 10
Майтан-3-0-карбомоил-И-(4-хлор-2-амино)бензол (ЗОЬ)
Стадия А:1-изоцианато-4-хлор-2-нитробензол (28Ь):
[0471] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 4-хлор-2-нитроанилина (27Ь, 172 мг, 0.997 ммоль) в виде желтого твердого вещества (198 мг, 100%). 'Н ЯМР (300 МГц, [хлороформ-с/) 5: 8.14 (d, J = 2.5 Гц, 1Н), 7.57 (dd, J = 8.6, 2.5 Гц, Ш), 7.21 (d, J = 8.6 Гц, Ш).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-хлор-2-нитро)бензол (29Ь):
[0472] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28Ь, 98 мг, 0.493 ммоль), и майтанзинола (6, 54 мг, 0.096 ммоль) в виде оранжевого твердого вещества (46 мг, 63%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H40CI2N4O11, 762.2; полученные значения 763.5 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-хлор-2-амино)бензол (ЗОЬ):
[0473] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29Ь, 44 мг, 0.058 ммоль), в виде белого твердого вещества (34 мг, 74%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СзбШгСЬ^О, 732.2; полученные значения 733.5 (М+Н). •Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5: 7.43 (s, Ш), 7.13 (d, J = 8.4 Гц, Ш), 6.83 (d, J = 1.8 Гц, 1Н), 6.76 (s, Ш), 6.70 (s, Ш), 6.46 (dd, J = 15.4, 11.1 Гц, 2Н), 6.22 (s, 1Н), 6.07 (d, J = 10.9 Гц, Ш), 5.38 (dd, J = 15.4, 8.7 Гц, 1Н), 4.78 (d, J = 11.5 Гц, 1Н), 4.34 (t, J
= 11.5 Гц, 1Н),3.99 (s, ЗН), 3.98 (s, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 2H),3.32(s, 3H), 3.26 (d,J= 14.5 Гц, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.98 (s, 1H), 2.90 (d, J = 9.1 Гц, 1H), 2.50 (t, J = 12.8 Гц, 1H), 2.26 (d,y= 13.9 Гц, 1H), 1.87 (d, J= 13.6 Гц, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.50 (dd, J= 10.8, 4.4 Гц, 2H), 1.30 (d, J= 6.3 Гц, ЗН), 1.24 (t, J = 12 J Гц, 1H), 0.90 (s, 3H).
ПРИМЕР 11
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-метил-4-амино)бензол (30c)
Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-метил-4-нитро)бензол (29c):
[0474] Указанное в заголовке вещество было получено из 2-метил-4-нитрофенил
изоцианата (28с, 41мг, 0.230 ммоль) и майтанзинола (6, 53 мг, 0.094 ммоль) в виде желтого твердого вещества (10 мг, 14%) при использовании способа, описанного в Примере 4, стадия А, за исключением того, чтобы была выполнена очистка на колонке С18 Aq RediSep Gold с использованием системы очистки Teledyne ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СзбШзСПЧЮп, 742.3; полученные значения 743.2 (М+Н).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-метил-4-амино)бензол (30с):
[0475] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29с, 10 мг, 0.014 ммоль), в виде твердого вещества кремового цвета (6 мг, 60%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H42CI2N4O9, 712.3; полученные значения 713.2 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-с/) 5: 7.33 - 7.30 (m, 1Н), 6.84 (d, J = 1.8 Гц, Ш), 6.79 (s, Ш), 6.55 (d, J = 2.6 Гц, Ш), 6.52 (dd, J = 8.4, 2.7 Гц, 1Н), 6.47 (dd, J= 15.5, 10.9 Гц, 1Н),6.24 (S, 1Н), 6.22-6.15 (т, 1Н), 6.10 (d,J= 10.9 Гц, Ш), 5.46 (dd, J= 15.5,8.9 Гц, Ш), 4.80 (dd, J = 11.7, 2.4 Гц, Ш), 4.42-4.29 (т, 1Н), 4.00 (s, ЗН), 3.53 -3.41 (т, 2Н), 3.32 (s, ЗН), 3.24 (d, J= 13.0 Гц, lH),3.19(s, 3H),3.14(s, Ш), 2.89 (d,J = 9.8 Гц, 1H), 2.49 (dd, J = 13.7, 11.7 Гц, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.22 (d, J = 2.4 Гц, 1H), 1.94 (d, J= 13.6 Гц, 1H), 1.70 (s,3H), 1.51-1.45 (m, 1H), 1.34-1.21 (m, 5H), 0.91 (s, 3H).
ПРИМЕР 12
Майтан-3-0-карбомоил-М-(2-метил-3-амино)бензол (30d)
[0476] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 2-метил-З-нитроанилина (27d, 153 мг, 1.01 ммоль) в виде бледно-желтого твердого вещества (178 мг, 99%). 1Н ЯМР (300 МГц, хлороформч/) 6: 7.68 (dd, J = 7.5, 1.8 Гц, 1Н), 7.43 - 7.26 (m, 2Н), 2.49 (s, ЗН).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-метил-3-нитро)бензол (29d):
[0477] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28d, 70 мг, 0.393 ммоль) и майтанзинола (6, 73 мг, 0.129 ммоль) в виде желтого твердого вещества (41 мг, 43%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СзбШзСПЧЮп, 742.3; полученные значения 743.5 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(2-метил-3-амино)бензол (30d):
[0478] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, за исключением того, что была выполнена повторная очистка методом препаративной ВЭЖХ на колонке Phenomenex Gemini 5u, 30x150мм С18 (20 - 80% MeCN в воде, в обоих случаях содерожащей 0.05% НОАс, в течение 15 мин при скорости потока 50 мл/мин), из продукта, полученного на предыдущей стадии (29d, 44 мг, 0.058 ммоль) в виде белого твердого вещества (12 мг, 29%> ). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O9, 712.3; полученные значения 713.5 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, DMSO- ПРИМЕР 13
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(6-метил-3-амино)бензол (ЗОе)
Стадия А: 1 -изоиианато-6-метил-З-нитробензол (28е):
[0479] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 6-метил-З-нитроанилина (27е, 1.00
ммоль) в виде желтого твердого вещества (100 мг, 56% yield). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-af) 5: 7.98 (d, Ш, J = 2.5 Гц), 7.95 (dd, 1Н, J = 2.5, 8.5 Гц), 7.36 (d, Ш, J = 8.5 Гц).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(6-метил-3-нитро)бензол (29е):
[0480] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 1, стадия С, за исключением того, что была выполнена очистка на колонке а С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, 0 содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты), из продукта, полученного на предыдущей стадии (28е, 0.422 ммоль) и майтанзинола (6, 100 мг, 0.176 ммоль) в виде желтого твердого вещества (21 мг, выход 16%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СзбШзСПЧЮп, 742.3; полученные значения 725.2 (М+Н-Н20), 765.2 (M+Na).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(б-метил-3-амино)бензол (ЗОе):
[0481] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29е, 21 мг, 0.028 ммоль) в виде белого твердого вещества (6.0 мг, выход 29%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O9, 712.3, полученные значения 713.3 (М+Н), 695.3 (М+Н-Н20). !Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 6 7.25-7.22 (m, 1Н), 6.96 (d,
IH, J= 7.5 Гц), 6.84 (s, Ш), 6.77 (s, 1H), 6.45-6.40 (m, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.10 (d, 1H, J =
II. 0 Гц), 5.35 (dd, 1H, J= 8.5, 11.7 Гц), 4.77 (dd, 1H, J = 2.5, 11.7 Гц), 4.37 (dd, 1H, J =
10.5, 10.5 Гц), 3.99 (s, 3H), 3.48 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 3.45 (d, 1H, J = 9.0 Гц), 3.28 (s, 3H),
3.24 (d, 1H,J= 13.5Гц), 3.19 (s, ЗН), 2.97 (d, 1H, J= 10.0 Гц), 2.50 (dd, 1H, J= 11.5, 11.5
Гц), 2.28-2.22 (m, 4H), 1.86 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 1.70 (s, 3H), 1.53-1.49 (m, 1H), 1.31 (s,
3H), 1.27-1.22 (m, 1H), 0.89 (s, 3H).
ПРИМЕР 14
Майтан-3-0-карбомоил-М-(6-метил-2-амино)бензол (30f)
Стадия А:1-изоиианато-б-метил-2-нитробензол (28f):
[0482] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 6-метил-2-нитроанилина (27f, 1.00 ммоль) в виде желтого твердого вещества (135 мг, 76% yield). 'Н ЯМР (500 МГц,
CDCb): 5 7.92 (d, 1H, J = 8.5 Гц), 7.49 (d, 1H, J = 8.5 Гц), 7.22 (dd, 1H, J = 8.5, 8.5 Гц), 2.43 (s, 3H).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(6-метил-2-иитро)бензол (29f):
[0483] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 13, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28f, 0.422 ммоль) и майтанзинола (6, 100 мг, 0.176 ммоль) в виде желтого твердого вещества (33 мг, выход 25%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H43CIN4O11, 742.3; полученные значения 743.2 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(6-метил-2-амино)бензол (30f):
[0484] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29f, 33 мг, 0.044 ммоль) в виде желтого твердого вещества (15.0 мг, выход 53%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O9, 712.3, полученные значения 713.30 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 6 7.01- 6.98 (m, 1Н), 6.83 (s, Ш), 6.78 (s, 1Н), 6.67-6.62 (m, 2Н), 6.50-6.45 (т, 1Н), 6.35 (bs, 1Н), 6.16 (d, 1Н, J = 11.0 Гц), 5.98 (s, 1Н), 5.63 (dd, 1Н, J = 8.5, 14.7 Гц), 4.96 (d, 1Н, J = 11.5 Гц), 4.28 (dd, Ш, J = 10.5, 10.5 Гц), 3.98 (s, ЗН), 3.50-3.45 (т, 2Н), 3.32 (s, ЗН), 3.21 (d, 1Н, J = 13.5 Гц), 3.18 (s, ЗН), 2.81 (d, 1Н, J = 10.0 Гц), 2.54 (dd, 1Н, J = 13.5, 13.5 Гц), 2.25-2.23 (т, 4Н), 1.90 (d, Ш, J= 12.5 Гц), 1.70 (s, ЗН), 1.52-1.48 (т, 1Н), 1.35-1.27 (т, 4Н), 0.92 (s, ЗН).
ПРИМЕР 15
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-('4-фтор-2-амино)бензол (30%)
Стадия А: 1-изоцианато-4-фтор-2-нитробензол (28g):
[0485] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 4-фтор-2-нитроанилина (27g, 1.00 ммоль) в виде оранжевого твердого вещества (223 мг, выход 81%). 'Н ЯМР (300 МГц, CDCb): 6 7.88 (dd, Ш, J = 3.0, 7.5 Гц), 7.33 (dd, Ш, J = 3.0, 7.5 Гц), 7.25 (dd, 1Н, J = 4.0, 9.0 Гц).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-фтор-2-нитро)бензол (29g):
[0486] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 13, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28g, 0.422 ммоль) и майтанзинола (6, 10 мг, 0.176 ммоль) в виде желтого твердого вещества (16 мг, выход 12%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H40CIFN4O11, 746.2; полученные значения 747.2 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-фтор-2-амино)бензол (30g):
[0487] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29g, 16 мг, 0.021 ммоль) в виде желтого твердого вещества (4.0 мг, выход 26%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СззШгСПТ^Сч 716.3; полученные значения 717.2 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 5 7.25-7.21 (m, Ш), 6.83 (s, 1Н), 6.73 (bs, 1Н), 6.52 (dd, Ш, J = 2.5, 8.5 Гц), 6.50-6.48 (2Н, т), 6.39 (s, Ш), 6.27 (s, 1Н), 6.11 (1Н, bs), 5.52 (dd, Ш, ./=8.5, 15.7 Гц), 4.87 (dd, Ш, J = 2.5, 11.5 Гц), 4.27 (dd, 1H,J= 11.5, 11.5 Гц), 3.99 (s, ЗН), 3.49 (d, 1H, J = 8.5 Гц), 3.45 (bs, 1H), 3.34 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.18 (bs, 1H), 2.84-2.83 (m, 1H), 2.52 (dd, 1H, J = 11.5, 13.5 Гц), 2.28 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 1.86 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 1.68 (s, 3H), 1.51-1.45 (m, 1H), 1.27 (d, 3H, J = 6.5 Гц), 1.27-1.23 (m, 1H), 0.89 (s, 3H).
ПРИМЕР 16
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-фтор-5-амино)бензол (ЗОЮ
Стадия А: 1-изоцианато-2-фтор-5'-нитробензол (28h):
[0488] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 2-фтор-5-нитроанилина (27h, 155 мг, 0.99 ммоль) в виде оранжевого твердого вещества (168 мг, выход 93%). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-сО 5: 8.10 (dd, J = 8.7, 4.1 Гц, Ш), 8.01 (dd, J = 6.7, 2.8 Гц, Ш), 7.31 (t, J= 8.8 Гц, 1Н).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-М-(2-фтор-5-нитро)бензол (29h):
[0489] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 13, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28h, 61 мг, 0.335 ммоль) и майтанзинола (6, 67 мг, 0.119 ммоль) в виде оранжевого твердого вещества (21 мг, выход 24%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H40CIFN4O11, 746.2; полученные значения 747.5 (М+Н).
[0490] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29h, 20 мг, 0.027 ммоль) в виде белого твердого вещества (6 мг, выход 29%) после второй очистки на колонке с обращенной фазой в системе ISCO (градиентное элюирование: 30 - 90% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H42CIFN4O9, 716.3; полученные значения 717.5 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, DMSO- ПРИМЕР 17
Майтан-3-0-карбомоил-И-(4-метокси-2-амино)бензол (30i)
Стадия А: 1-изоиианато-4-метокси-2-нитробензол (28i):
[0491] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 4-метокси-2-нитроанилина (27i, 1.00 ммоль) в виде желтого твердого вещества (100 мг, 51%) yield). 'Н ЯМР (300 МГц, CDCb): 5 8.10 (dd, Ш, J = 3.0, 8.7 Гц), 7.90 (d, 1H, J = 3.0 Гц), 6.96 (d, 1H, J = 8.7 Гц), 4.06 (s, 3H).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-метокси-2-нитро)бензол (29i):
[0492] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 13, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28i, 0.422 ммоль) и майтанзинола (6, 100 мг, 0.176 ммоль) в виде желтого твердого вещества (25 мг, выход 19%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H43CIN4O12, 758.3; полученные значения 759.2 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-метокси-2-амино)бензол (30D:
[0493] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29i, 25 мг, 0.033 ммоль) в виде желтого твердого вещества (2.0 мг, выход 9%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O10, 728.3; полученные значения 729.2 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, CDCb): 6 7.14 (d, 1Н, J= 8.5 Гц), 6.83 (s, 1H), 6.49-6.38 (m, 2H), 6.30 (s, 1H), 6.20 (bs, 1H), 5.55-5.51 (m, 1H), 4.89 (d, 1H, J= 11 Гц), 4.30 (dd, 1H, J = 11.0, 11.0 Гц), 3.99 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.49-3.48 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.20-3.17 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.84 (m, 1H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.25 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 1.90 (d, 1H, J = 13.5 Гц), 1.69 (s, 3H), 1.69-1.57 (m, 2H), 1.29 (s, 3H), 0.91 (s, 3H).
ПРИМЕР 18
Майтан-3-0-карбомоил-И-(3-метокси-4-амино)бензол (30j)
Стадия A: 1-изоцианато-З-метокси-4-нитробензол (28j):
[0494] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из З-метокси-4-нитроанилина (27j, 169 мг, 1.00 ммоль) в виде желтого твердого вещества (102 мг, выход 52%). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-аГ) 5: 8.01 - 7.81 (m, Ш), 6.85 - 6.65 (т, 2Н), 3.96 (s, 4Н).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(3-метокси-4-нитро)бензол (29j):
[0495] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28j, 100 мг, 0.515 ммоль) и майтанзинола (6, 71 мг, 0.126 ммоль) в виде желтого твердого вещества (64 мг, 67%), за исключением того, что реакционную смесь поддерживали при температуре окружающей среды в течение 18 ч. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H43CIN4O12, 758.3; полученные значения 759.5 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(3-метокси-4-амино)бензол (30j):
[0496] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29j, 63 мг, 0.083 ммоль) в виде белого твердого вещества (37 мг, 57%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O10, 728.3; полученные значения 729.5 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 8: 6.84 (d, J = 1.8 Гц, Ш), 6.71 (s, 1Н), 6.66 (d, J = 8.2 Гц, Ш), 6.56 (dd, J = 8.2, 2.3 Гц, Ш), 6.52 - 6.38 (m, 2Н), 6.22 (s, Ш), 6.13 (d,J =
10.9 Гц, 1Н), 5.41 (dd,y= 15.5,8.6 Гц, 1H), 4.78 (d,J= 11.3 Гц, 1H), 4.33 (t, J = 11.2 Гц, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.55 - 3.39 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.27 (d, J = 13.3 Гц, 1H), 3.19 (s, 3H), 2.90 (d, J=9.8 Гц, 1H), 2.49 (dd, J= 13.9, 11.6 Гц, 1H), 2.25 (d, J= 14.0 Гц, 1H), 2.11 (s, 2H), 1.87 (d,J= 13.4 Гц, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.30 (d,J= 6.2 Гц, ЗН), 1.25 (dd, J = 15.1, 10.5 Гц, 1H), 0.90 (s, 3H).
ПРИМЕР 19
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-{2-метокси-4-амино)бензол (30k)
Стадия А: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-метокси-4-нитро)бензол (29k):
[0497] Указанное в заголовке соединение было получено из 1-изоцианато-2-
метокси-4-нитробензола (28k, 62 мг, 0.319 ммоль) и майтанзинола (6, 53 мг, 0.094 ммоль) при использовании способа, описанного в Примере 4, стадия А, за исключением того, что реакционную смесь очищали на колонке С18 Aq RediSep Gold в системе ISCO (градиентное элюирование: 20 - 80% MeCN в воде, содержащей в обоих случаях 0.05% уксусной кислоты), в виде бледно-желтого твердого вещества (25 мг, 35%)),. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H43CIN4O12, 758.3; полученные значения 759.5 (М+Н).
Стадия В: Майтан-З-О-карбомоил-N-(2-метокси-4-амино)бензол (30k):
[0498] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29k, 24 мг, 0.032 ммоль) в виде белого твердого вещества (9 мг, 36%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H45CIN4O10, 728.3; полученные значения 729.5 (М+Н), 751.5 (M+Na). > Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-^) 8: 7.83 (d, J = 8.3 Гц, 1Н), 6.90 (s, 1Н), 6.86 (d, J = 1.9 Гц, Ш), 6.82 (d, J = 1.8 Гц, Ш), 6.42 (dd, J = 15.1, 10.9 Гц, Ш), 6.36 - 6.24 (m, 2Н), 6.15 (s, Ш), 5.31 (dd, J = 15.1, 9.1 Гц, Ш), 4.79 (dd, J = 11.8, 2.4 Гц, 1Н), 4.41 - 4.29 (т, Ш), 4.00 (s, ЗН), 3.94 (s, ЗН), 3.52 (d, J = 12.9 Гц, Ш), 3.41 (d, J = 9.1 Гц, Ш), 3.29 (d, J = 12.7 Гц, Ш), 3.25 (s, ЗН), 3.19 (s, ЗН), 3.02 (d, J = 9.9 Гц, 1Н), 2.73 (s, Ш), 2.47 (dd, J = 13.8, 11.8 Гц, Ш), 2.22 (dd, J = 13.7, 2.4 Гц, Ш), 2.13 (s, 2Н), 1.78 (d, J = 13.6 Гц, 1Н), 1.70 (s, ЗН), 1.50 (dd, J = 10.2, 6.4 Гц, 1Н), 1.30 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 1.20 (t, J = 12.9 Гц, Ш), 0.86 (s, ЗН).
ПРИМЕР 20
Майтан-3-0-карбомоил-М-(3-трифторметил-4-амино)бензол (301)
[0499] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из З-трифторметил-4-нитроанилина (271, 103 мг, 0.500 ммоль) в виде маслянистого желтого твердого вещества (63 мг, выход 54%). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-^ 5: 7.95 (d, J = 8.7 Гц, Ш), 7.53 (dt, J = 2.4, 0.5 Гц, 1Н), 7.41 (ddd, J = 8.7, 2.3, 0.5 Гц, Ш).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-М-(3-трифторметил-4-нитро)бензол (291):
[0500] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 19 стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (281, 59 мг, 0.254 ммоль) и майтанзинола (6, 57 мг, 0.101 ммоль) в виде желтого твердого вещества (27 мг, 34%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H40CIF3N4O11, 796.2; полученные значения 797.4 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(3-трифторметил-4-амино)бензол (301):
[0501] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (291, 25 мг, 0.031 ммоль) в виде белого твердого вещества (16 мг, 62%) после второй очистки на колонке с обращенной фазой в системем ISCO. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H42CIF3N4O9, 766.3; полученные значения 767.5 (М+Н). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-;/) 6: 7.47 (dd, J = 8.7, 2.6 Гц, 1Н), 7.40 (d, J = 2.5 Гц, Ш), 6.84 (d, J = 1.9 Гц, 1Н), 6.73 (d, J = 8.7 Гц, 1Н), 6.71 - 6.61 (m, 1Н), 6.50 (d, J = 2.3 Гц, Ш), 6.49 - 6.42 (т, Ш), 6.22 (s, Ш), 6.06 (d, J = 10.9 Гц, Ш), 5.37 (dd, J = 15.5, 8.5 Гц, 1Н), 4.79 (dd, J= 11.5,2.2 Гц, Ш), 4.32 (ddd, J= 12.2, 10.5, 1.9 Гц, Ш), 4.11 (s, 2Н), 3.99 (s, ЗН), 3.54 - 3.44 (т, 2Н), 3.32 (s, ЗН), 3.26 (d, J = 13.5 Гц, Ш), 3.20 (s, ЗН), 2.97 (s, 1Н), 2.88 (d, J = 9.8 Гц, Ш), 2.50 (dd, J = 14.0, 11.6 Гц, 1Н), 2.27 (dd, J = 14.0, 2.3 Гц, Ш), 1.86 (d, J = 13.5 Гц, Ш), 1.71 (s, ЗН), 1.50 (td, J =10.2, 6.3 Гц, 1Н), 1.29 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 1.25 (t,J= 12.6 Гц, 1Н), 0.90 (s, ЗН).
ПРИМЕР 21
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-бром-4-амино)бензол (30т)
Стадия А: 1-изоиианато-2-бром-4-нитробензол (28т):
[0502] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 2-бром-4-нитроанилина (27т, 108 мг, 0.498 ммоль) в виде желтого твердого вещества (109 мг, выход 90%). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-;/) 5: 8.49 (d, J = 2.5 Гц, Ш), 8.16 (dd, J = 8.8, 2.6 Гц, Ш), 7.28 (dd, J = 8.8, 0.3 Гц, Ш).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-И-(2-бром-4-нитро)бензол (29т):
[0503] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 19, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28т, 55 мг, 0.226 ммоль) и майтанзинола (6, 46 мг, 0.081 ммоль) в виде желтого твердого вещества (30 мг, 45%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СззШоВгСШЮп, 806.2; полученные значения 809.0 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-бром-4-амино)бензол (30т):
[0504] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29т, 28 мг, 0.035 ммоль) в виде белого твердого вещества (10 мг, 34%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для СззШгВгСПЧЮд, 776.2; полученные значения 779.0 (М+Н). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-;/) 5: 7.79 (d, J = 8.7 Гц, Ш), 6.94 (d, J = 1.8 Гц, 1Н), 6.90 (d, J = 2.5 Гц, 1Н), 6.85 (d, J= 1.8 Гц, Ш), 6.77 (s, Ш), 6.64 (dd, J= 8.8, 2.6 Гц, 1Н), 6.50-6.29 (m, 2Н), 6.19 (s, 1Н), 5.22 (dd, J = 14.6, 9.0 Гц, 1Н), 4.79 (dd,J= 11.8,2.6 Гц, Ш), 4.38 (t, У = 11.1 Гц, Ш), 4.00 (s, ЗН), 3.69 (s, 1Н), 3.60 (d, J= 12.9 Гц, 1Н), 3.43 (d, J = 9.0 Гц, 1Н), 3.26 (s, 4Н), 3.20 (s, 4Н), 3.05 (d, J = 9.8 Гц, Ш), 2.89 (s, Ш), 2.49 (dd, J = 13.7, 11.9 Гц, Ш), 2.22 (dd, J = 13.7, 2.6 Гц, Ш), 1.79 (d, J = 13.5 Гц, Ш), 1.69 (s, 4Н), 1.49 (dd, J = 10.3, 6.2 Гц, 1Н), 1.31 (d, J = 6.3 Гц, ЗН), 1.28 - 1.16 (m, 2Н), 0.87 (s, ЗН).
ПРИМЕР 22
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-трифторметокси-2-амино)бензол (ЗОп)
Стадия А:1-изощанато-4-трифторметокси-2-нитуобензол (28п):
[0505] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 4-трифторметокси-2-нитроанилина (27п, 223 мг, 1.00 ммоль) в виде маслянистого оранжевого твердого вещества (228 мг, выход 92%). *Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-;/) 5: 8.03 (d, J = 2.8 Гц, Ш), 7.52 - 7.44 (ш,
Стадия В: Майтан-3-0-карбомош-Ы-(4-трифторметокси-2-нитро)бензол
(29n):
[0506] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28п, 215 мг, 0.867 ммоль), и майтанзинола (6, 84 мг, 0.149 ммоль) в виде желтого твердого вещества (87 мг, 72%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H40CIF3N4O12, 812.2; полученные значения 813.5 (М+Н), 835.4 (M+Na).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-трифторметокси-2-амино)бензол
(ЗОп):
[0507] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29п, 85 мг, 0.105 ммоль) в виде белого твердого вещества (59 мг, 67%) после второй очистки на колонке с обращенной фазой в системем ISCO. МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C36H42CIF3N4O10, 782.3; полученные значения 783.5 (М+Н), 805.5 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-;/) 5: 7.31 (d, J= 8.8 Гц, Ш), 6.81 (s, Ш), 6.70 (s, 1Н), 6.63 (m, 2Н), 6.43 (dd, J = 15.4, 10.9 Гц, Ш), 6.09 (s, Ш), 5.58 (dd, J = 15.4, 8.8 Гц, 1Н), 4.88 - 4.77 (т, 1Н), 4.28 (t, J = 11.2 Гц, Ш), 3.96 (s, ЗН), 3.44 (d, J = 8.7 Гц, 2Н), 3.39 (p,J= 1.7 Гц, 2Н),3.33 (s, 3H),3.19(s, ЗН), 3.15 (d, J = 13.1 Гц, 1Н),2.84 (d,J=9.6 Гц, Ш), 2.57 - 2.47 (т, Ш), 2.28 - 2.22 (т, Ш), 1.84 (d, J = 13.7 Гц, 1Н), 1.65 (s, ЗН), 1.54- 1.43 (т, Ш), 1.30 (d,J= 12.6 Гц, Ш), 1.26 (d,J=6.2r4, ЗН), 0.87 (s, ЗН).
ПРИМЕР 23
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-фтор-5-хлор-2-амино)бензол (ЗОо)
Стадия А:1-изоцианато-4-фтор-5-хлор-2-нитробензол (28о):
[0508] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 9, стадия А, из 4-фтор-5-хлор-2-нитроанилина (27о, 70 мг, 0.367 ммоль) в виде желтого масла (72 мг, выход 91%). 'Н ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) 5: 8.01 (d,J = 8.3 Гц, Ш), 7.35 (d, J= 6.5 Гц, Ш).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-фтор-5-хлор-2-нитро)бензол (29о):
[0509] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28о, 70 мг, 0.323 ммоль), и майтанзинола (6, 48 мг, 0.085 ммоль) в виде желтого твердого вещества (35 мг, выход 53%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H39CI2FN4O11, 780.2; полученные значения 781.4 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-фтор-5-хлор-2-амино)бензол (ЗОо):
[0510] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29о, 34 мг, 0.044 ммоль) в виде белого твердого вещества (21 мг, выход 60%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C35H41CI2FN4O9, 750.2; полученные значения 751.5 (М+Н); 'Н ЯМР (500 МГц, DMSO- ПРИМЕР 24
Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-амино-2-метил-5-морфолин~4-ил)бензол (ЗОр)
Стадия А: (4-нитро-2-метил-5-морфолин-4-ил)фенил изоцианат (28р):
[0511] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
методики, описанной в Примере 9, стадия А, из 2-метил-5-морфолин-4-ил-4-нитрофениламина (237 мг, 1.00 ммоль) в виде ярко-оранжевого твердого вещества (230 мг, выход 87%). 'Н ЯМР (500 МГц, CDC13): 6 7.72 (s, 1Н), 6.79 (s, 1Н), 3.84 (t, 4Н, J = 5 Гц), 3.01 (t, 4Н, J = 5 Гц), 2.31 (s, ЗН).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-нитро-2-метил-5-морфолин-4-ил)бензол (29р):
[0512] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 19, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28р, 56 мг, 0.21 ммоль), и майтанзинола (6, 50 мг, 0.09 ммоль) в виде серовато-желтоватого твердого вещества (8 мг, 11%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C40H50CIN5O12, 827.3; полученные значения 828.2 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-амино-2-метил-5-морфолин-4-ил)бензол (ЗОр):
[0513] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии (29р, 8 мг, 0.01 ммоль) в виде белого твердого вещества (3.2 мг, 42%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C4oH52ClNsOio,797.3; полученные значения 798.2 (М+Н), 820.2 (M+Na). 1И ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5: 7.54 (s, Ш), 7.17 (s, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.62 - 6.52 (m, 2H), 6.51 (s, 1H), 5.69 - 5.51 (m, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.45 (dd, J = 12.0, 2.7 Гц, 1H), 4.16 (t, J = 10.9 Гц, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.73 (t, J = 4.8 Гц, 4H), 3.64 (d, J = 12.3 Гц, 1H), 3.53 - 3.44 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.14 (d, J = 12.2 Гц, 1H), 3.05 (s, 3H), 2.77 (q, J = 4.2, 3.2 Гц, 4H), 2.69 (d, J = 9.6 Гц, 1H):, 2.40 (d, J = 12.7 Гц, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.97 (d, J = 13.4 Гц, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.56 (d, J = 13.6 Гц, 1H), 1.42 (t, J = 12.9 Гц, 2H), 1.09 (d, J = 6.4 Гц, ЗН), 0.78 (s, ЗН).
ПРИМЕР 25
Майтан-3-0-карбомоил-М-(4-амино-2-метш-5-пирролидин-1-ил)бензол (30q)
Стадия А: (4-нитро-2-метил-5-пирролидин-1-ил)фенил изоиианат (28q):
[0514] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
методики, описанной в Примере 9, стадия А, из 2-метия-4-нитро-5-пирролидин-1-ил-фениламина (221 мг, 1.00 ммоль) в виде ярко-оранжевого твердого вещества (210 мг, выход 85%). 'Н-ЯМР (300 МГц, CDCb): 5 7.65 (s, Ш), 6.59 (s, 1H), 3.25-3.14 (m, 4H), 2.00-1.94 (m, 4H).
Стадия В: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-нитро-2-метил-5-пирролидин-1-ил)фенил (29q):
[0515] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
способа, описанного в Примере 19, стадия А, из продукта, полученного на предыдущей стадии (28q, 53 мг, 0.21 ммоль) и майтанзинола (6, 50 мг, 0.09 ммоль) в виде серовато-желтоватого твердого вещества (28 мг, 39%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C40H50CIN5O11, 811.3; полученные значения 812.2 (М+Н).
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Н-(4-амино-2-метил-5-пирролидин-1-ил)бензол (30q):
[0516] Указанное в заголовке соединение было получено при использовании
методики, описанной в Примере 4, стадия В, из продукта, полученного на предыдущей стадии стадии (29q, 28 мг, 0.03 ммоль) в виде белого твердого вещества (8.6 мг, 32%). МС (ИЭР, полож. ион): рассчитано для C4oH52ClNs09,781.3; полученные значения 782.2 (М+Н), 804.2 (M+Na). 'Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 6: 7.53 (s, Ш), 7.19 (s, 2Н), 6.93 -6.86 (m, Ш), 6.83 (s, 1H), 6.66 - 6.50 (m, 2H), 6.49 (s, 1H), 5.62 (dd, J = 14.6, 9.2 Гц, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.47 (dd, J = 12.0, 2.7 Гц, 1H), 4.17 (t, J = 11.1 Гц, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.65 (d, J = 12.2 Гц, 1H), 3.55 - 3.45 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.15 (d, J = 12.2 Гц, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.93 (d, J = 6.7 Гц, 4H), 2.70 (d, J = 9.7 Гц, Ш), 2.41 (d, J = 12.9 Гц, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.98 (d, J = 13.2 Гц, 1H), 1.89 - 1.76 (m, 4H), 1.66 (s, 3H), 1.58 (d, J = 13.5 Гц, 1H), 1.43 (t,J = 12.9 Гц, 2H), 1.10 (d, J =6.4 Гц, ЗН), 0.79 (s, ЗН).
ПРИМЕР 26
Получение и определение характеристик конъюгатов
[0517] При использовании описанной ниже методики были получены
конъюгаты пяти антител с соединениями, представляющими собой линкер-полезную
нагрузку. В этих экспериментах использовали четыре антитела с направленным
воздействием: (1) антитело к PSMA с вариабельными доменами в тяжелой и легкой
цепях, принадлежащие к клону AB-PG1-XG1-006, описанное в Международной заявке
на патент № WO2007/002222 А2, озаглавленной КОНЪЮГАТЫ, ОБРАЗОВАННЫЕ
АНТИТЕЛОМ К PSMA И ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВОМ, (2) антитело к MUC16,
имеющее вариабельные области, полученное из клона ЗА5 и описанное в
Международной заявке на патент № WO2007001851, озаглаленной КОМПОЗИЦИИ И
СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОПУХОЛИ, (3) антитело к HER2, имеющее
вариабельные области, полученное из humAb4D5-8 и описанное в публикации Carter et
al, PNAS 199289 4285, и (4) антитело к STEAP2. Эти заявки на патент и ссылки на
публикации в научных журналах полностью и во всех отношениях включены в
настоящую заявку посредством ссылки. Все моноклональные антитела были
экспрессированы в клетках СНО и очищенные с использованием Белка А. Также в
качестве контроля использовали несвязывающий изотип (5), полученный из
иммунологического антигена, не имеющего отношения к онкологии.
[0518] Способ А: Антитело (10 мг/мл) в растворе, содержащем 50 мМ HEPES,
150 мМ NaCl, рН 7.5, was обрабатывали 1 мМ дитиотреитолом при 37°С в течение 30 мин. После гель-фильтрации (G-25, рН 4.5, натрия ацетат) производное,
представляющее собой малеимидо-линкер-полезную нагрузку (для линкера-полезной нагрузки" 9, 19, или эквивалентов/SH-rpynn 24; 1.2) в DMSO (10мг/мл) добавляли к восстановленнному антителу, и рН смеси корректировали до рН 7.0, используя 1 М HEPES (рН 7.4). Реакцию конъюгации необязательно останавливали N-этил малеимидом (NEM). Конъюгаты очищали с помощью эксклюзионной хроматографии и стерилизующего фильтрования. Для определения концентраций белков и соотношения полезная нагрузка/антитело использовали спектральный анализ в УФ-области в соответствии с методикой Hamblett et al (Американская ассоциация научных исследований в области раковых заболеваний. 2004 Oct 15:10(20):7063-70) или анализ разности масс нативного и конъюгированного антитела. Результаты эксклюзионнной ВЭЖХ показали, что все использованные конъюгаты являлись мономерами более чем на 95%, и ВЭЖХ с обращенной фазой показала, что содержание неконъюгированных продуктов линкер-полезная нагрузка составляло <0.5%. Выход и соотношение полезная нагрузка/антитело показаны в Таблице 1.
[0519] Способ В: Проводилась конъюгация антител (в концентрации 10-20
мг/мл) в растворе, содержащем 50 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, рН 8.0, и 10-15%
(отношение объемов) DMA с содержащимися в 5-6-кратном избытке соединениями 10,
14, 20, 22, или 26 в течение 2 часов (ч) при температуре окружающей среды. Для
очистки конъюгатов использовали эксклюзионную хроматографию или экстенсивную
ультрафильтрацию с последующим стерилизующим фильтрованием. Концентрации
белков определяли методом спектрального анализа в УФ-области. Результаты
эксклюзионнной ВЭЖХ показали, что все конъюгаты являлись мономерными на > 90%,
и ВЭЖХ с обращенной фазой показала, что содержание неконъюгированных
продуктов линкер-полезная нагрузка составило <1%. Для всех конъюгированных
антител был проведен анализ разности масс нативного и конъюгированного антитела.
Соотношение полезная нагрузка/антитело показаны в Таблице 1.
[0520] Способ С - Конъюгация бактериальнойтрансглутаминазы:
негликозилированные, дегликозилированные или меченые глутамином антитела могут быть конъюгированы при концентрации 1-10 мг/мл в PBS рН 7.4. Можно добавить к антителу продукт линкер-полезная нагрузка 22 в 10-25-кратном молярном избытке и инициировать ферментативную реакцию добавлением 1-5 единиц бактериальной трансглутаминазы (Zedira, Т1001) из расчета на 1 мг антитела с последующей инкубацией на качале при 37°С в течение 4-16 часов. Конъюгаты могут быть очищены методом эксклюзионной хроматографии и стерилизующего фильтрования. Для
определения концентраций белка и продукта линкер-полезная нагрузка может применяться спектральный анализ в УФ-области. С помощьюэксклюзионной ВЭЖХ можно установиьт, что полученные конъюгаты более чем на 95% представлены мономерами. Для определения соотношения полезная нагрузка/антитело может быть проведен анализ всех конъюгированных антител методом спектрального анализа в УФ области в соответствии с методикой Hamblett et al, Cancer Res 2004 10 7063. Дополнительно, для анализа конъюгатов с целью определения соотношения линкер-полезная нагрузка/антитело может применяться метод ИЭР-МС с использованием масс-спектрометрии на приборе Waters Synapt G2-Si QTOF, сопряженной со свехпроизводительной ЖХ на оборудовании Acquity. Для хроматографического разделения может применяться колонка С4 (Waters protein ВЕН С4, 50 мМ X 1 мМ, 1.7 мкм) в условиях 25-минутного градиента (минута:процент подвижной фазы В; 0:20%, 1:20%, 18:40%, 18.1:90, 20:95%, 20.8:95%, 20.9:20% 25:20%). В качестве подвижной фазы А может применяться 0.1% раствор муравьиной кислоты в воде, и вкачестве подвижной фазы В - раствор 0.1% муравьиной кислоты в ацетонитриле. Скорость потока может быть установлена на уровне 100 мкл/мин. Времяпролетный детектор может быть установлен, начиная с m/z 700-5000 в течение 25 минут, со следующими основными параметрами (Напряжение на капилляре 3.2 кВ; Пробоотборный конус 150; Смещение источника 80; Температура источника 120 °С; Температура десольватации 500 °С; Прерывание энергии столкновений 30; Перенос энергии при столкновениях - Off; Регулирвоание расхода газа OFF; Уровень разрешения квадруполь: LM 4.7). Для деконволюции спектров, объединяющих множество пиков, может применяться функция MaxEnt, являющаяся частью программного обеспечения MassLynx.
Определение соотношения PAR (Л/А) в конъюгатах, полученных по Способу А
[0521] Для того чтобы определить нагрузку (антителом) на линкер-полезную
нагрузку (конъюгирование через цистеин), было проведено дегликозилирование,
восстановление конъюгатов с последующим анализом конъюгатов методом ЖХ-МС.
[0522] Для анализа 50 мкг конъюгата разбавляли водой качества Milli-Q до
конечной концентрации 1 мг/мл. 10 мкл раствора ПНГ-азы F [для приготовления раствора ПНГ-азы F к разбавленному раствору конъюгата добавляли 150 мкл концентрированного раствора ПНГ-азы F (New England Biolabs, № по каталогу P0704L) и 850 мкл воды Milli-Q и тщательно перемешивали полученную смесь] с последующей
инкубацией при 37°С в течение ночи. К образцудобавляли 2.4 мкл 0.5 М ТСЕР, чтобы конечная концентрация ТСЕР в полученном материале составляла 20 мМ, и затем этот материал инкубировали при 50°С в течение 30 минут. В систему ЖХ-МС (Waters Synat G2-Si) вводили пробы каждого образца объемом 10 мкл и проводили элюцию в течение 25 минут при скорости потока 0.1 мл/мин в градиенте подвижной фазы с содержанием Подвижной фазы В 20-40% (Подвижная фаза А: 0.1% (отношение объемов) FA в НгО; Подвижная фаза В: 0.1% (отношение объемов) FA в апетонитриле). Для разделения методом ЖЗ использовали колонку Waters Acquity ВЕН С18 (1.0 X 50 мМ, 1.7 мкМ мкМ).
[0523] Выполняли деконволюцию масс-спектров, и по идентифицированным
пикам легкой и тяжелой цепей значения, полученные для легкой цепи (L) с линкером-полезной нагрузкой, составили 0 и 1, значения, полученные для тяжелой цепи (Н) слинкером-полезной нагрузкой, составили 0, 1, 2, и 3. Соотношение лекарственное средство/антитело (Л/А; DAR) рассчитывали исходя из значений интенсивности, полученных для каждого образца и используя представленное ниже уравнение 1 для гомодимерного конъюгированного антитела. Уравнение 1:
L1 Н1 + 2*Н2 + 3*НЗ
DAR = 2*
L0 + L1 Н0 + Н1 + Н2 + НЗ
Определение соотношения PAR в конъюгатах, полученных по способу В
[0524] Для того чтобы определить соотношение линкер-полезная
нагрузка/антитело (конъюгирование через лизин), проводилсь дегликозилирование конъюгатов с последующим анализом методом ЖХ-МС.
[0525] Для этого анализа 50 мкг конъюгата разбавляли водой Milli-Q до
конечной концентрации 1 мг/мл. 10 мкл раствора ПНГ-азы F [для приготовления раствора ПНГ-азы F к разбавленному раствору конъюгата добавляли 150 мкл концентрированного раствора ПНГ-азы F (Нью Инглиш Биолабз, № по каталогу P0704L) и 850 мкл воды Milli-Q и тщательно перемешивали полученную смесь] с последующей инкубацией при 37°С в течение ночи. В систему ЖХ-МС (Waters Synat G2-Si) вводили пробы каждого образца объемом 5 мкл и проводили элюцию в течение 25 минут при скорости потока 0.1 мл/мин в градиенте подвижной фазы с содержанием Подвижной фазы В 20-50% (Подвижная фаза А: 0.1% (отношение объемов) FA в НгО; Подвижная фаза В: 0.1% (отношение объемов) FA в ацетонитриле). Для разделения
методом ЖЗ использовали колонку Waters Acquity ВЕН С4 (1.0 X 50 мМ, 1.7 мкМ) при 80°С.
[0526] Для деконволюции масс-спектров использовали программное
обеспечение Masslynx; для расчета соотношения лекарственное средство/антитело (DAR) использовали следующие уравнения. См. ФИГ. 18.
1. Относительное содержание (%) лекарственного средства (Dn), определенное по распределению интенсивности пиков (PI):
a. Dn% = Pin /S(PI0+PI1+PI2 +PIi)x 100
b. (n= 0,1,2,3,..
2. Расчет среднего отношения DAR:
a. DAR=S(1 xDl%+2xD2%+3*D3%+ +i> Антитело
е252 нм (см1 М-1)
?280 нм (см'1 М-1)
PSMA
77652
224320
MUC16
85888
247360
HER2
81847
215388
STEAP2
Контрольный изотип
75113
218360
Конъюгат с антителом
Полезная нагрузка : Антитело (УФ)
Выход %
PSMA-9
1.3
MUC16-9
1.4
HER2
1.5
Контрольный изотип -9
1.5
Конъюгат с антителом
Полезная нагрузка : Антитело (ИЭР-МС)
Выход %
STEAP2-14
2.7
STEAP2-20
1.2
STEAP2-24
3.0
HER2-10
2.3
HER2-20
0.7
HER2-24
3.3
Контрольный изотип -10
2.4
Контрольный изотип -14
1.3
Контрольный изотип -20
1.0
Контрольный изотип -24
3.6
ПРИМЕР 27
Ферментативные анализы продукта линкер-полезная нагрузка в бесклеточной системе in vitro Инкубация с катепсином В
[0527] Использовали метод ферментативного анализа в бесклеточной системе in
vitro, описанный в публикации Dubowchik, et al. Bioconjugate Chem. 2002 13 855, содержание которой полностью и во всех отношениях включено в настоящую заявку
посредством ссылки. Продукт линкер-полезная нагрузка 9 с конечной концентрацией 100 мкг/мл в растворе, содержащем 25 мМ натрий-ацетатный буфер, 1 мМ EDTA, рН 5.0, подвергали преинкубации при 37°С. Катепсин В (Sigma # С8571) активировали в течение 15 минут при комнатной температуре, для этого к 2 эквивалентам концентрированного катепсина В добавляли 1 эквивалент 30 мМ DTT и 15 мМ EDTA. Раствор активированного катепсина В добавляли к растворам субстратов в молярном отношении 1:20 (в контрольный образец вместо активированного катепсина В добавляли очищенную НгО). Образцы инкубировали при 37°С в течение ночи и для анализа полученные в итоге образцов использовали метод ЖХ-МС с детекцией в режиме Q1 Scan. Детекция методом ЖХ-МС
[0528] Образцы центрифугировали при 12 000 g в течение 5 мин. Собирали
надосадочную жидкости и выполняли ее анализ методом жидкостной хроматографии, сопряженной с масс-спектрометрией (Waters Xevo TQ-S), осуществляя объединенную инфузию надосадочной жидкости со скоростью 20 мкл/мин подвижной фазой В:А (30:70) (Подвижная фаза A: 0.1%FA в НгО; Подвижная фаза В: 0.1% FA в ацетонитриле) при скорости потока подвижной фазы 0.3 мл/мин. Параметры МС1 устанавлиют в надлежащем диапазоне для детекции молекулярного иона продукта линкер-полезная нагрузка или полезная нагрузка. Надосадочная жидкость содержала прогнозируемую полезную нагрузку, майтан-3-0-карбомоил-Ы-(4-аминобензол) (8), с массой 720.9 (M+Na) (рассчитанная моноизотопная масса C35H43N4O9CI, 698.3), и контрольные образцы, в которых отсутствовал катепсин В, содержали соединение 9 с массой 1170.4 (M+Na) (рассчитанная моноизотопная масса C6oH8oClN90i6, 1147.50). В контрольных образцах молекулярный ион, соответствующий прогнозируемой полезной нагрузке, не обнаружен.
[0529] Полученные в этом Примере результаты имеют частичную значимость,
поскольку протеолиз соединения 9 под действием катепсина В должен происходить только после интернализации конъюгата антитело-лекарственное средство (КАЛ) в клетке, в которой присутствует фермент. Побочные эффекты должны быть менее выраженными, поскольку антитело доставляет цитотокичную полезную нагрузку прямо в клетки-мишени.
ПРИМЕР 28
Анализ цитотоксичности in vitro
[0530] В этом Примере выполнена in vitro оценка способности различных
конъюгатов, образованных антителом и лекарственным веществом, и отдельно лекарственных веществ вызывать гибель экспрессирующих антигены опухолевых клеток in vitro.
[0531] Клетками Ovcar3 (Mucl6+), помещенными в полные ростовые среды,
засевали 96-луночные планшеты по 3000 клеток в лунку, и выращивали клетки в течение ночи. Для построения кривых жизнеспособности клеток к клеткам добавляли серийные разведения конъюгатов или полезную нагрузку без антитела в конечных концентрациях от 100 нМ до 5 пМ с последующей инкубацией клеток в течение 3 суток. Для измерения жизнеспособности клетки инкубировали вместе с ССК8 (Dojindo) втечение последних 2 часов и измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм (OD450) на приборе Victor (Perkin Elmer). Из значений OD450, полученных для всех лунок, вычитали фоновые значения, определенные для клеток, обработанных дигитонином (40 нМ), и выражали жизнеспособность в процентах от значений, полученных для необработанного контроля. Для определения значений IC50 (концентрации полумаксимального ингибирования) использовали основанное на 4 параметрах логистическое уравнение и характеристическую кривую, построенную по 10 точкам (GraphPad Prism). Значение IC50 для КАЛ MUC16-9 составило +++, из чего следует, что значение IC50 (нМ) было > 0.1 и < 1.0. Во все кривые и значения IC50 была внесена поправка на эквиваленты полезной нагрузки. График зависимости жизнеспособности клеток (в %) от Log 10 [М] лекарственного средства показан на ФИГ. 1. Значения IC50 для неконъюгированной полезной нагрузки и выраженная в процентах гибель клеток показаны в Таблице 2.
[0532] Клетками SKBR3 (Нег2+), помещенными в полные ростовые среды,
засевали 96-луночные планшеты по 8000 клеток в лунку, и выращивали клетки в течение ночи. Для построения кривых жизнеспособности клеток к клеткам добавляли серийные разведения конъюгатов или полезную нагрузку без антитела в конечных концентрациях от 100 нМ до 5 пМ с последующей инкубацией клеток в течение 3 суток. Для измерения жизнеспособности клетки инкубировали вместе с ССК8 (Dojindo) в течение последних 2 часов и измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм (OD450) на приборе Victor (Perkin Elmer). Из значений OD450, полученных для всех лунок, вычитали фоновые значения, определенные для клеток, обработанных
дигитонином (40 нМ), и выражали жизнеспособность в процентах от значений, полученных для необработанного контроля. Для определения значений IC50 использовали основанное на 4 параметрах логистическое уравнение и характеристическую кривую, построеннуюпо 10 точкам (GraphPad Prism). Значения 1С5о для КАЛ HER2-9, 10, 20, и 24 КАЛ составили +++, +++, +++, и +++, соответственно, где +++ указывает на значение IC50 (нМ) > 0.1 и < 1.0. Во все кривые и значения IC50 была внесена поправка на эквиваленты полезной нагрузки. График зависимости жизнеспособности клеток (в %) от Log 10 [М] лекарственного средства показан на ФИГ. 2-5. Значения IC50 для неконъюгированной полезной нагрузки и выраженная в процентах гибель клеток показаны в Таблице 2.
[0533] Клетками С4-2 (STEAP2+), помещенными в полные ростовые среды,
засевали 96-луночные планшеты по 4000 клеток в лунку, и выращивали клетки в течение ночи. Для построения кривых жизнеспособности клеток к клеткам добавляли серийные разведения конъюгатов или полезную нагрузку без антитела в конечных концентрациях от 100 нМ до 5 пМ с последующей инкубацией клеток в течение 5 суток. Для измерения жизнеспособности клетки инкубировали вместе с реагентами CellTiter-Glo в течениеи 5 минут и измеряли люминесценцию на планшетном спектрофотометре Victor (Perkin Elmer). Для определения значений IC50 использовали основанное на 4 параметрах логистическое уравнение и характеристическую кривую, построеннуюпо 10 точкам (GraphPad Prism). Значения ICso для КАЛ STEAP2-14, 20, и 24 КАЛ составили ++, +++, + нМ, соответственно. Значение +++ указывает на IC50 (нМ) > 0.1 и < 1.0; ++ указывает на IC50 (нМпМ) > 1.0 и < 10; и значение + указывает на IC50 (нМ)> 10.
[0534] Все значения IC50S выражены, как концентрация в нМ, для самой
высокой дозы показан % гибели клеток. Во все кривые и значения IC50 была внесена поправка на эквиваленты полезной нагрузки. График зависимости жизнеспособности клеток (в %) от LoglO [М] лекарственного средства показан на ФИГ. 6-8. Значения IC50 для неконъюгированной полезной нагрузки и выраженная в процентах гибель клеток показаны в Таблице 2.
[0535] Описанные в настоящем документе варианты осуществления
изобретения и примеры предназначены лишь для иллюстративных целях и не являются ограничивающими. Специалисты в данной области техники будут осознавать или смогут установить с использованием не более чем рутинных экспериментов, многочисленные эквиваленты конкретных соединений материалов и процедур. Все
такие эквиваленты входят в объем данного изобретения, и на них распространяется представленная в Приложении формула изобретения. Таблица 2
***** указывает на % погибших клеток > 99; **** указывает на % погибших клеток > 95 и < 99; *** указывает на % погибших клеток > 90 и < 95; ** указывает на % погибших клеток > 85 и < 90; и * указывает на % погибших клеток < 85.
[0536] Вышеописанные варианты осуществления изобретения и примеры
предназначены лишь для иллюстративных целей и не являются ограничивающими. Специалисты в данной области техники будут осознавать или смогут установить с использованием не более чем рутинных экспериментов, многочисленные эквиваленты конкретных соединений материалов и процедур. Все такие эквиваленты входят в объем данного изобретения, и на них распространяется представленная формула изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение по формуле (I):
BA\L-N-A-N'
Н 'к
(I)
или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер, где:
А является ариленом или гетероариленом;
L представляет собой линкер;
ВА является связующим агентом; и
к представляет собой целое число от 1 до 30.
2. Соединение по п. 1, где
А представляет собой:
(R1)N
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро, s ^ , 5 2 , < , и азидо;
RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4; и
каждый и ^ является связью от А к -NH-.
3. Соединение по п. 2, где
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила.
4. Соединение по любому из пунктов 2 или 3, где:
А выбирают из:
п равен 0,1,2, или 3.
5. Соединение по любому из пунктов 2-4, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из метила, метокси, фтора, хлора, брома, трифторметила, пирролидинила, и морфолинила.
6. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1 представляет собой метил.
7. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из фтора, хлора и брома.
8. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1 представляет собой хлор.
9. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1 представляет собой трифторметил.
10. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1 представляет собой метокси.
11. Соединение по любому из пунктов 2-5, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из метила, морфолинила и пирролидинила.
12. Соединение по любому из пунктов 2-11, где А является
13. Соединение по любому из пунктов 2-11, где А является ^
14. Соединение по любому из пунктов 2-11, где А является
15. Соединение по любому из пунктов 1-14, где L является:
4SP-AA1-AA2-;
где:
SP представляет собой спейсер;
i является одной или несколькими связями со связующим агентом;
является связью от А к -NH-; АА1 является аминокислотой; и А А2 является аминокислотой. 16. Соединение по любому из пунктов 1-14, где L является:
-f-sp-i
где:
-Г-
SP представляет собой спейсер;
является одной или несколькими связями со связующим агентом; и
является связью от А к -NH-.
о RAA2 i н Я
17. Соединение по п. 15, где АА'-АА2 представляет собой: валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, аспарагин-треонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, аспарагин-аланин, валин-аланин, аланин-валин, валин-глицин, или глицин-валин.
18. Соединение по любому из пунктов 1-15, где L является:
RAA1 0
где:
SP представляет собой спейсер; * является одной или несколькими связями со связующим агентом;
является связью от А к -NH-; R^1 является боковой цепью аминокислоты; и RAA2 является боковой цепью аминокислоты. 19. Соединение по п. 18, где L является:
v Н 0
i Н Н3С СН3
где:
SP представляет собой спейсер; и
^~ является одной или несколькими связями со связующим агентом; и
является связью от А к -NH-.
20. Соединение по любому из пунктов 15-19, где SP содержит С5-7 алкилен.
21. Соединение по любому из пунктов 15-20, где SP выбирают из:
АГ^М-(СН2)Ь-Ц-|- АГ^Ы-(СН2)ь-Й-11-|- О, 0
где:
Ь, независимо в каждом случае, представляет собой целое число от 2 до 8;
i является одной или несколькими связями со связующим агентом; и
является связью от А к -NH-. 22. Соединение по любому из пунктов 1-15 и 17-21, где L выбирают из
л^~(СНг)ь^^й^- ^N~(CH2)b~R^^N
0 НзС^СНз ° 0 Н3С^СН3 °
о н о
A HN-(CH2)b--U-N^lN
Ж Н Н3С СН3
b представляет собой целое число от 2 до 8;
где:
является одной или несколькими связями со связующим агентом; и является связью от А к -NH-.
23. Соединение по п. 22, где L выбирают из
где г является связью со связующим агентом и 5 является связью от А к -NH-.
24. Соединение по любому из пунктов 1-14, 16, и 20-21 где L выбирают из
о , где г является связью со связующим агентом и является связью от
о , и
s А
Н3С СНз
Н ОН Рснз СНз
O^NH2 у
Т 0"
s А н
Н3С СН3
о - <
s А
Н3С сн3
О Н ОН Рснз СНз
°YNh2 Т
'Ш °ТоРНз Р
H3CV,'\JA/
ОСН3
0 А
Н3С СНз о M н
0 А
Н3С СН3
л н он Рснз
O^NH2Y 1 О NH
H3Ci,> y N'^/-OCH3
F\ б H3C ci
N" > Й-/Л-М-Ч
H f \=fH
H ОН РСНз ?Нз 0VNH2°YN^'
1 o,
rNH i o^M^_ \: 11
J Н3СГ'
n н 0 Г б н3с ci
Л н о w H
H3C CH3
АЬ представляет собой антитело;
-§- представляет собой связь с цистеином в молекуле антитела; -Ы- представляет собой связь с лизином в молекуле антитела; к представляет собой целое число от 1 до 30; и t представляет собой целое число от 1 до 8. 26. Соединение по п. 25, где соединение является:
где АЬ представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент.
27. Соединение по любому из пунктов 1-24, где соединение имеет следующую формулу: / нонЯснз ?Нз
осн.
НзС1' \к v N -у "°сн
н3сг \j/ -у N -у -оси б н3с i,
BA\L1-N'A^N^O \ н н
где:
А является:
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
-^-ORA -^-S02RA ~^RA
, и
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро азидо;
RA представляет собой алкил;
п представляет собой целое число от 0 до 4; L1, L2, и L3 представляют собой линкеры, где:
L1 связан с остатком лизина в В А,
L2 связан с остатком цистеина в В А,
L3 связан с остатком глутамина в ВА, ВА является связующим агентом, к представляет собой целое число от 0 до 30, t представляет собой целое число от 0 до 8, и g представляет собой целое число от 0 до 4.
или его фармацевтически приемлемая соль либо стереоизомер, где А является ариленом или гетероариленом.
32. Соединение по п. 31,
где:
А является:
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил,
28. Соединение по любому из пунктов 1 или 25-27, где к или t равен 1.
29. Соединение по любому из пунктов 1-24 или 27, где ВА представляет собой антитело.
30. Соединение по любому из пунктов 1-24, 26, 28, или 29 где антителом является антитело к MUC16, антитело к PSMA, антитело к STEAP2 или антитело к HER2.
31. Соединение по формуле И:
28.
-i|-ORA -!-SO?RA -^RA гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 , г 2 , г , или азидо; и
п представляет собой целое число от 0 до 4.
33. Соединение по п. 32, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
34. Соединение по любому из пунктов 31-33, где соединение по формуле (II) выбирают из соединения по формуле (ПА1), соединения по формуле (IIА2), и соединения по формуле (НАЗ):
35. Соединение по любому из пунктов 32-34, где п равен 0, 1,2, или 3.
36. Соединение по любому из пунктов 32-35, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из Сi-6 алкил, Ci-б алкокси, гало, Ci-б галоалкил, и гетероциклоалкила.
37. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из метила, метокси, фтора, хлора, брома, трифторметила, пирролидинила, и морфолинила.
38. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1 является метилом.
39. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1, независимо в каждом случае,
Стр.23 из 54
выбирают из фтора, хлора, брома.
40. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1 является хлором.
41. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1 является трифторметилом.
42. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1 является метокси.
43. Соединение по любому из пунктов 32-36, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из метила, морфолинила, и пирролидинила.
44. Соединение по п. 31, где соединение выбирают из:
45. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пунктов 1-44 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
46. Способ лечения пролиферативного заболевания, включающий введение пациенту с таким нарушением терапевтически эффективного количества соединения по любому из пунктов 1-44 или композиции по п. 45.
47. Соединение по формуле Р1:
45.
(Р1)
где А является ариленом или гетероариленом; и RL представляет собой реакционноспособный линкер.
48. Соединение по п. 47, где:
А является:
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
-Ј-ORA A-SO RA -1-^- RA
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро, 5 ^ , < 2 , г , и азидо;
RA является алкилом; и
п представляет собой целое число от 0 до 4.
49. Соединение по п. 48, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
50. Соединение по любому из пунктов 47-49, где соединением по формуле Р1 является соединение по формуле Р2А1-3:
9 н"р Г осн3
N-A-N-^n 01
0 Н Н о
O^NH2 Т * ~ Т NH
У N > i-N А-N^V.
Н3С сн3
(Р2А1-3) Стр.28 из 54
где:
А выбирают из:
(P1V1)
SP представляет собой группу, реагирующую со спейсером. 51. Соединение по п. 47-49, где соединение по формуле Р1 выбирают из соединения по формуле Р1Н1, соединения по формуле РШ, соединения по формуле P1V1, соединения по формуле P1W1, соединения по формуле Р1К1, соединения по формуле P1TG1, соединения по формуле P1ZZ1, и соединения по формуле P1ZZ2:
s Ж н о
Н3С СН3
(P1W1)
0 А
Н3С СНз
(Р1К1)
H2N-(CH2)b-^N> vAN
i н
Н3С СНз нонЯснз ?Нз
O^NH2 Y Т О,
H3CV
б Н3С ci
(P1TG1) п Н0нРСНз СНз
н3сч
(P1ZZ1)
(P1ZZ2)
52. Соединение по п. 47, где соединение выбирают из:
Н ОН РСНз ?Нз 0 <^NH2 Y "
NH T рн3 -u
K-^Q-NA
б H3C ci
0 A
H3C CH3
0 A
H3C CH3
Н0НРСН3 ?НЗ
NH °Whm°
H3CX'\PV N- у ^осн3 _ б Н3С ci
о *Ч н
н0нРснз ?Нз
O^.NH2 У Т Сч NH
w -к 0
о Н0НРСНз ?Нз O^NH2 Y
Т о,
\_ 9 НзС С1
-N-^b-N^O
Стр.37 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS !
НзС'ТУ N^-у^осНз 6 H3C ci
02N-A-N^O H
(PPII)
где А является ариленом или гетероариленом. 54. Соединение по п. 53, где: А является:
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
^-ORA is02RA -j^-R^
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро,
и азидо;
R представляет собой алкил; п представляет собой целое число от 0 до 4. 55. Соединение по п. 54, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила;
56. Соединение по любому из пунктов 53-55, где соединением по формуле РРП является соединение по формуле РР5А1:
Н ОН РСНз СНз
CbN
где:
(R )п н
(РР5А1)
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало,
галоалкила и гетероциклоалкила; и п представляет собой целое число от 0 до 4. 57. Соединение по любому из пунктов 53-55, где соединение выбирают из:
о н3с ci
02N-^Q-N^O
м н
СН3
Н3С4' M^V N "у^оснз б Н3С ci
RL-N'A*N"4) Н Н
(Р1)
в контакт со связующим агентом в условиях, обеспечивающих конъюгацию,
где:
А является ариленом или гетероариленом;
L представляет собой линкер;
В А является связующим агентом;
к представляет собой целое число от 1 до 10; и
RL является реакционноспособным линкером.
59. Способ по п. 58, где:
А является:
(R1)n А
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
_|_QDA -|-so RA - 1"^-RA
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро, 5 w , < г и
азидо;
RA является алкилом; и
п представляет собой целое число от 0 до 4.
60. Способ по п. 59, где:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и
гетероциклоалкила; и п представляет собой целое число от 0 до 4.
61. Способ по п. 58, где
61.
соединение по формуле Р1 получают приведением соединения по
формуле II в контакт с RL,
RL является реакционноспособным линкером; и
соединение по формуле II получают приведением соединения по формуле РР5А в контакт с подходящим восстановителем:
где:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
-ORA 4S02RA -!^-RA
гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро, и азидо;
R является алкилом; п представляет собой целое число от 0 до 4; и
подходящий восстановитель выбирают из металла, металлической фольги,
порошкообразного металла, металлической пыли, амальгамы металла или металлических опилков.
62. Способ получения соединения по формуле II:
НзС1 м-у^оснз б н3с ci
H2N-A-N^S)
i2i
(И),
где:
А является ариленом или гетероариленом,
включающий:
(а) приведение соединения по формуле Р2
нон РСНз ?Нз
в контакт с соединением по формуле РР6:
02N А N
РР6 \5
в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса, с образованием соединения РРИ:
02N-A-N^O
н ; и
(РРИ)
(Ь) восстановление соединения по формуле PPII посредством приведения соединения по формуле РРП в контакт с восстановителем с образованием соединения по формуле II.
63. Способ по п. 62:
где:
А является:
(R1)n
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
Л_ORA -^-SO RA -RA гетероарила, гетероциклоалкила, циано, нитро, 5 , 5 2 , < , и
азидо;
RA является алкилом;
п представляет собой целое число от 0 до 4.
64. Способ по п. 62, где R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и гетероциклоалкила.
65. Получение соединения по формуле РРИ, включающее приведение соединения по формуле Р2 в контакт с соединением по формуле РР6 в условиях синтеза, катализируемого кислотой Льюиса:
РР6;
где:
А является ариленом или гетероариленом. 66. Способ по п. 65, где: А является
R , независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкенила, алкинил а, алкокси, арила, алкарила, арилалкила, гало, галоалкила, галоалкокси, гетероалкила,
? QDA -|-sOoRA -RA гетероарил а, гетероциклоалкила, циано, нитро, 5 , * 2 , 5 ,
и азидо;
RA является алкилом;
п представляет собой целое число от 0 до 4.
67. Способ по п. 65, где:
R1, независимо в каждом случае, выбирают из алкила, алкокси, гало, галоалкила, и
гетероциклоалкила.
? PSMA-9 О MUC16-9 • 8
0| 11114-TTwr-i ниц 11и^1Щ^пщ
-12 -11 -10 -0 -8 -7 -6
Log M
ФИГ. 1
Стр. 1
100-
80-
60-
40*
•ШЬ IsotypeControHO ¦в- HER2-10 •Ч- HER2 ¦В- 8
-ТГП1ИЧ-ггпичгт' НЩ шц шиц-птяц
2 -11 -10 -9 -8 -7 -6
Концентрация (Log М)
ФИГ.З
12010080" 604020
-Ш- Isotype Control-24 -О- HER2-24
HER2 -В- 17
-12
-11 -10 -9 -8 -7 -6
Концентрация (Log M)
ФИГ. 5
•Ш" Isotype ControI-20 -9- STEAP2-20 ¦Ч- STEAP2 -В- 17
Концентрация (Log М)
100 80604020-
0 J IIHI i штпящр i rrtHf-ггящ
-12 -11 -10 -9 -8 -7 -6
Концентрация (Log M)
Isotype Control-24 -в- STEAP2-24 -9- STEAP2 -В- 17
ФИГ. 8
1. \-/ , пиридин
2, NHS, EOC. DCM
н b
ФИГ. 11
Рт ос
1) 18, NaHCOj, MeCN/HjO
2) пиперидин, QMF
О Q > -i
NH О Ь
ФИГ. 14
PI, D2
ЧЕМЭ*
Oft = ADC где *n" содержание лекарственного средства
Rn = Интенсивность пика при On пике
S121*
vim
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
(1)
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
(19)
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
(19)
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
(19)
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
(19)
Стр. 2
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 1
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 2
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 3
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0006]
В настоящем изобретении предложены также соединения по формуле
[0006]
В настоящем изобретении предложены также соединения по формуле
010-8693-4315/1/AMERICAS |
010-8693-4315/1/AMERICAS |
Стр.4
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.4
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 5
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 5
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 7
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 6
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1 /AMERICAS
010-8693-4315/1 /AMERICAS
010-8693-4315/1 /AMERICAS
010-8693-4315/1 /AMERICAS
y <=N(R1)q
y <=N(R1)q
Стр. 12
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 12
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 13
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 13
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1/AMERICAS
например, N-N-14 ; с образованием клик-химического продукта, например,
например, N-N-14 ; с образованием клик-химического продукта, например,
Стр. 15
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 15
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 16
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 16
010-8693-4315/1 /AMERICAS
(R1)n
Стр. 17
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 18
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 20
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 20
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 20
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 20
010-8693-4315/1/AMERICAS
(R1)n
(R1)n
Стр. 21
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 21
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 23
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 24
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 25
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 24
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 25
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 24
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 25
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 24
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 26
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 26
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0089] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0089] В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
Стр. 27
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 27
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0095]
[0095]
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0095]
[0095]
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0095]
[0095]
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 28
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 29
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 29
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 30
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 30
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0115]
Стр. 31
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 32
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0115]
Стр. 31
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 32
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0115]
Стр. 33
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 32
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
[0126]
В некоторых вариантах осуществления изобретения А является:
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 34
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 35
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 35
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 35
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 35
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 36
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 36
010-8693-4315/1 /AMERICAS
этокси, трифторметил метокси, пирролидинил, или морфолинил;
этокси, трифторметил метокси, пирролидинил, или морфолинил;
Стр. 37
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 37
010-8693-4315/1 /AMERICAS
^Д^°"^^'Чч^Лекарственное i
^Д^°"^^'Чч^Лекарственное i
Стр. 38
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 38
010-8693-4315/1 /AMERICAS
^Д^°"^^'Чч^Лекарственное i
^Д^°"^^'Чч^Лекарственное i
Стр. 38
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 38
010-8693-4315/1 /AMERICAS
агентом.
агентом.
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
агентом.
агентом.
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
агентом.
агентом.
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
агентом.
агентом.
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 39
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0143] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
[0143] В некоторых вариантах осуществления изобретения спейсером является:
Стр. 40
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 40
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.41
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 42
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 43
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0164] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
[0164] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
Стр. 44
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 44
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0164] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
[0164] В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер представляет
Стр. 44
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 44
010-8693-4315/1/AMERICAS
антитела; и
антитела; и
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
антитела; и
антитела; и
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
антитела; и
антитела; и
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
антитела; и
антитела; и
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
антитела; и
антитела; и
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 45
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 46
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 46
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 47
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 49
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 48
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 49
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 48
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 53
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 52
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 53
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 52
010-8693-4315/1 /AMERICAS
= N (R1)q
А является:
= N (R1)q
А является:
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
= N (R1)q
А является:
= N (R1)q
А является:
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
= N (R1)q
А является:
= N (R1)q
А является:
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
= N (R1)q
А является:
= N (R1)q
А является:
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 54
010-8693-4315/1 /AMERICAS
(R1)n
(R1)n
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 56
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 57
010-8693-4315/1 /AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
R1, независимо в каждом случае, представляет собой гало, галоалкокси,
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 58
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
[0198]
[0198]
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 59
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 60
010-8693-4316/1 /AMERICAS
Стр. 60
010-8693-4316/1 /AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
(R1)n
Стр. 61
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 62
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0212]
[0212]
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0212]
[0212]
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
[0212]
[0212]
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 64
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 65
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 65
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 67
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 68
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 69
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 70
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 70
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 70
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 70
010-8693-4315/1 /AMERICAS
где RA представляет собой алкил;
где RA представляет собой алкил;
Стр. 71
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 71
010-8693-4315/1/AMERICAS
В некоторых из этих примеров, сумма k +1 равна 1-8.
В некоторых из этих примеров, сумма k +1 равна 1-8.
Стр. 72
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 72
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 73
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 73
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 76
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 76
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
где:
Стр. 77
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 77
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 78
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 78
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 81
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 81
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 82
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 82
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 84
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 85
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 87
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 86
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 88
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 88
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 89
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 89
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 91
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 91
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 97
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 97
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 102
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 102
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 104
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 104
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 107
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 106
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 109
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 110
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 112
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 112
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 113
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 113
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 116
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 116
010-8693-4315/1/AMERICAS
OCI-Ц СН3
OCI-Ц СН3
Стр. 117
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 117
010-8693-4315/1 /AMERICAS
OCI-Ц СН3
OCI-Ц СН3
Стр. 117
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 117
010-8693-4315/1 /AMERICAS
С-СНз ?н3
С-СНз ?н3
Стр. 118
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 118
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.119
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.119
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
Стр. 121
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 120
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
Стр. 121
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 120
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
Стр. 121
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 120
010-8693-4315/1/AMERICAS
А является:
Стр. 121
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 120
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 123
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 123
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 124
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 124
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 125
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 125
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 133
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 134
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 133
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 134
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 133
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 134
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 136
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 136
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 139
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 138
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 141
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 142
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 142
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 142
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 142
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 144
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 144
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 144
010-8693-4315/1 /AMERICAS
реакционноспособным линкером является:
Стр. 143
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 144
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 145
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 145
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 146
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 146
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 146
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 146
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 146
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 148
010-8693-4315/1/AMERICAS
осуществления изобретения
[0343] В некоторых вариантах
Стр. 147
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 148
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 149
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 150
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 150
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 152
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 153
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 153
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 154
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
где:
Стр. 155
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.156
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 158
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 158
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 158
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 158
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 158
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 160
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 159
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 160
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 161
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 162
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 161
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 162
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 161
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 162
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 161
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 162
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 164
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 164
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 165
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 165
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 165
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 165
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 167
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 166
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 167
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 168
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 169
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 168
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 169
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 168
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 169
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 168
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 169
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 168
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 169
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 170
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 171
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 171
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 172
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 172
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 173
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 174
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 173
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 174
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 173
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 174
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 176
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 176
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 179
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 179
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 181
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 182
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 182
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 183
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 183
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 185
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 185
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 187
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 188
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 191
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 190
010-8693-4315/1/AMERICAS
Н0НРСНз ?Нз
Н0НРСНз ?Нз
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Н0НРСНз ?Нз
Н0НРСНз ?Нз
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Н0НРСНз ?Нз
Н0НРСНз ?Нз
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Н0НРСНз ?Нз
Н0НРСНз ?Нз
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 193
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 194
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 195
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 196
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 195
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 196
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 195
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 196
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 195
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 196
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 195
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 196
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 198
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 198
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 201
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 202
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 202
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 205
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 206
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 206
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 209
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 208
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.211
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 212
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 212
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 213
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.217
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.216
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.217
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.218
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.217
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.218
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 219
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 219
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 220
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 220
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 224
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 224
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 227
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 228
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 227
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 228
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 231
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 232
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 231
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 232
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 234
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 234
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 236
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 236
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 239
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 238
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 242
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 242
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 244
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 244
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 246
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 246
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стадия А: Ь-валин-Ь-цитруллин (2):
Стр. 247
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 248
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стадия А: Ь-валин-Ь-цитруллин (2):
Стр. 247
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 248
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 251
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 250
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 253
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 253
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 256
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 256
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 258
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 258
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 259
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 260
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стадия A:l-изоиианато-2-метил-З'-нитробензол (28d):
Стадия A:l-изоиианато-2-метил-З'-нитробензол (28d):
Стр. 262
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 262
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 263
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 263
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 264
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 264
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-фтор-5-амино)бензол (ЗОЮ:
Стадия С: Майтан-3-0-карбомоил-Ы-(2-фтор-5-амино)бензол (ЗОЮ:
Стр. 266
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 266
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 267
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 267
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 268
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 268
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стадия А:1-изоцианато-3-трифторметш-4-нитробензол (281):
Стадия А:1-изоцианато-3-трифторметш-4-нитробензол (281):
Стр. 269
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 269
010-8693-4315/1/AMERICAS
Ш), 7.32 (dt, J = 9.0, 0.6 Гц, 1H).
Стр. 271
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 270
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 273
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 273
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 274
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 274
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 275
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 276
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 278
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 278
010-8693-4315/1/AMERICAS
Таблица 1
Таблица 1
Стр. 279
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 279
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 280
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 280
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 281
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 281
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 283
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 283
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 284
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 284
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.1 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.2 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.1 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.2 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.1 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.2 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.3 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.2 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.3 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.2 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.4 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.5 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.6 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.6 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.7 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.7 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.8 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.8 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.10 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.11 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.16 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.17 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.17 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.19 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.19 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.21 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.22 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.25 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.25 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.26 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.26 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.27 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.30 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.31 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.32 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.32 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.32 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.32 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.32 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.33 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.34 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.35 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.35 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.36 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.36 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.38 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.39 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.39 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.44 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.44 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.44 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.46 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.46 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.46 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.45 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.46 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.47 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.47 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
включающий приведение соединения Р1:
Стр.49 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.50 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.52 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.52 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.52 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.52 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.54 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
Стр.54 из 54
010-8695-1143/2/AMERICAS
120i
1/18
120i
1/18
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
120i
1/18
120i
1/18
010-8693-4315/1/AMERICAS
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.2
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр.2
010-8693-4315/1/AMERICAS
120"
3/18
120"
3/18
Стр. 3
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 3
010-8693-4315/1 /AMERICAS
4/18
4/18
Стр. 4
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 4
010-8693-4315/1 /AMERICAS
5/18
5/18
Стр. 5
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 5
010-8693-4315/1 /AMERICAS
5/18
5/18
Стр. 5
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 5
010-8693-4315/1 /AMERICAS
6/18
6/18
Стр.6
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.6
010-8693-4315/1 /AMERICAS
120-1
7/18
120-1
7/18
Стр.7
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.7
010-8693-4315/1 /AMERICAS
120-1
7/18
120-1
7/18
Стр.7
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр.7
010-8693-4315/1 /AMERICAS
8/18
120-1
8/18
120-1
Стр. 8
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 8
010-8693-4315/1 /AMERICAS
8/18
120-1
8/18
120-1
Стр. 8
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 8
010-8693-4315/1 /AMERICAS
9/18
9/18
10/18
10/18
Стр. 10
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 10
010-8693-4315/1/AMERICAS
11/18
11/18
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
11/18
11/18
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
11/18
11/18
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
11/18
11/18
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 11
010-8693-4315/1 /AMERICAS
13/18
12/18
Стр. 13
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 12
010-8693-4315/1 /AMERICAS
13/18
12/18
Стр. 13
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 12
010-8693-4315/1 /AMERICAS
13/18
14/18
Стр. 13
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1 /AMERICAS
13/18
14/18
Стр. 13
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1 /AMERICAS
15/18
14/18
Стр. 15
010-8693-4315/1/AMERICAS
Стр. 14
010-8693-4315/1 /AMERICAS
17/18
17/18
Стр. 17
010-8693-4315/1 /AMERICAS
Стр. 17
010-8693-4315/1 /AMERICAS
18/18
18/18
Стр. 18
Стр. 18
18/18
18/18
Стр. 18
Стр. 18
