(57) Реферат / Формула:
Изобретение относится к медицине, клинической лабораторной диагностике. Сущность способа заключается в определении у пациента генотипа полиморфизма C677T (Ala222Val) гена MTHFR, и при наличии генотипа CT прогнозируют высокую вероятность развития лекарственного поражения печени.
Евразийское (21) 201800061 (13) Al
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61B10/00 (2006.01)
2019.06.28 C12Q 1/6827 (2018.01)
(22) Дата подачи заявки 2017.12.04
(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВЕРОЯТНОСТИ РАЗВИТИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
(96) 2017/EA/0095 (BY) 2017.12.04
(71) Заявитель:
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ
"ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ"; КУРБАТ МИХАИЛ НИКОЛАЕВИЧ
(BY)
(72) Изобретатель:
Курбат Михаил Николаевич, Цыркунов Владимир Максимович
(BY)
(57) Изобретение относится к медицине, клинической лабораторной диагностике. Сущность способа заключается в определении у пациента генотипа полиморфизма C677T (Ala222Val) гена MTHFR, и при наличии генотипа CT прогнозируют высокую вероятность развития лекарственного поражения печени.
МПК А 61В 10/00, С 12Q 1/68 Способ прогнозирования вероятности развития лекарственного поражения печени при проведении антиретровирусной терапии ВИЧ-инфекции
Изобретение относится к медицине, клинической лабораторной диагностике и может быть использовано для прогнозирования лекарственного поражения печени (ЛПП) при терапии ВИЧ-инфекции.
В настоящее время активно изучается роль генетических факторов, влияющих на эффективность фармакотерапии и развитие побочных эффектов. По имеющимся в литературе сведениям ЛПП встречаются в общей медицинской практике с частотой, как минимум, 1 случай на 1000 пролеченных пациентов, что составляет 10% всех побочных реакций лекарственных средств (ЛС) [1, 2]. Поиск критериев прогнозирования развития ЛПП позволит существенно снизить затраты на терапию и повысить качество жизни пациентов, находящейся на ней.
Известен способ диагностики токсического поражения печени, состоящий в гистологическом исследовании биоптата печени [3].
Недостатками аналога являются: диагностика не лекарственного, а алкогольного поражения печени, инвазивность (травматичность); наличие противопоказаний для выполнения; сложность и многоэтапность технического исполнения, субъективность трактовки; использование многих реактивов; не обеспечивает прогноз развития ЛПП.
Также известен способ ранней диагностики токсических поражений печени путем определения активности аланиновой (АЛТ) и аспарагиновой (ACT) трансаминаз сыворотки крови, отличающийся тем, что при возрастании их уровня в сравнении с нормой на 50% и более судят о наиболее ранних признаках токсического поражения печени [4].
Недостатками этого аналога являются: диагностическая, а не прогностическая направленность способа; диагностическая неточность в связи с изменениями вышеуказанных показателей и при других поражениях печени.
Известен способ прогнозирования развития токсического гепатита при химиотерапии множественной миеломы, который заключается в выделении ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной экстракции, проведении генотипирования полиморфизма промоторной области гена CYP1A1 в сайте - Не 462 Val методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующей рестрикцией. При выявлении генотипа Не-Val прогнозируют высокий риск развития токсического лекарственного гепатита [5].
Ключевым недостатком данного способа является то, что он не позволяет диагностировать поражения гепатоцитов, не связанные с нарушением трансформации ксенобио
тиков с помощью системы микросомального окисления, одним из ферментов которого является цитохром Р450 1А1, и не может использоваться для оценки риска ЛПП при APT.
Из просмотра доступной литературы нам не удалось обнаружить источник, который может быть выбран в качестве прототипа.
Задача изобретения - разработка способа прогнозирования риска развития ЛПП у ВИЧ-инфицированных пациентов, находящихся на длительной антиретровирусной терапии.
Поставленная задача решается путем определения у пациента, находящегося на APT, генотипа полиморфизма С677Т (Ala222Val) гена MTHFR, и при наличии генотипа СТ, прогнозируют высокую вероятность развития лекарственного поражения печени.
Способ осуществляют следующим образом. У пациента с ВИЧ-инфекцией выделяют из лейкоцитов цельной крови ДНК. С образцом выделенной ДНК параллельно проводят две реакции амплификации - с двумя парами аллель-специфичных праймеров для гена MTHFR, ответственного за синтез фермента метилентетрагидрофолатредуктазы, полиморфизм С677Т (Ala222Val) и последующим методом детекции продуктов амплификации (флуоресцентной схемой детекции продуктов в режиме реального времени (Real Time) либо с электрофоретической схемой детекции). При наличии генотипа СТ, прогнозируют высокую вероятность развития лекарственного поражения печени.
Данные генетические показатели выбраны на основании проведенных клинических исследований на 91 пациенте с диагнозом ВИЧ-инфекции, подтвержденным стандартными лабораторными методами (ИФА, иммунный блотинг, ПЦР), находящихся на APT, согласно клиническим протоколам лечения [6].
У всех пациентов общепринятыми методами на автоматическом биохимическом анализаторе в плазме крови определяли уровень общего билирубина, активность аланина-минотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), гамма-глутамилтранспептидазы (ГТТП) и щелочной фосфатазы (ЩФ).
Диагностика ЛПП у пациентов проведена в соответствие с международными критериями гепатотоксичности Национального института изучения рака (National Cancer Institute Cancer Therapy Evaluation Program: Common Toxicity Criteria. Veers. 2.0. 1999) [7].
При превышении верхней границы нормы хотя бы одного из вышеуказанных показателей, у пациента диагностировали гепатотоксичность. В соответствии с наличием или отсутствием признаков ЛПП пациенты были разделены на две группы: первая - без ЛПП (без признаков гепатотоксичности) и вторая - с ЛПП (наличием гепатотоксичности).
Для проведения аллельной дискриминации указанного маркера применяли систему реагентов производства "Синтол". Амплификацию ДНК проводили на ампфлификаторе Rotor Gene-Q ("Qiagen", Германия).
Анализ исследуемых полиморфных вариантов изучаемых генов метилентетрагид-рофолатредуктазы в исследуемой выборке (рассчитанный с помощью он-лайн калькулятора http://www.oege.org/s()ftware/hwe-mr-calc.shtml) показал соответствие наблюдаемого распределения генотипов для всех изученных вариантов гена ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (х2=0,13, р> 0,05). Такое равновесие указывало на то, что на генетическую структуру популяции по изучаемым полиморфизмам не оказывали влияния различные воздействия (не действует отбор, не идет мутационный процесс, отсутствует обмен особями с другими популяциями, не происходит дрейф генов, все скрещивания случайны).
Полученные наблюдаемые частоты генотипов MTHFR, полиморфизм С677Т (Ala222Val) приведены в таблице 1.
APT.
Затем для генотипа СТ рассчитали отношение шансов развития гепатотоксичности в сравниваемых 1 и 2 группах (с 95% доверительным интервалом). Результаты кросс-
табуляции для генотипа СТ представлены во 2 таблице.
Показатели сопряженности генотипа СТ
Исхода нет
Всего
Сведения, представленные в таблице 2, позволили рассчитать относительный шанс развития ЛПП в изучаемых группах (таблица 3).
Таблица 3.
Расчет шансов развития ЛПП
Статистический показатель
Значение
Шанс найти фактор риска в основной группе
1,000
Шанс найти фактор риска в контрольной группе
0,278
Отношение шансов (OR)
3,600
Стандартная ошибка отношения шансов (S)
0,561
Нижняя граница 95% ДИ (CI)
1,200
Верхняя граница 95% ДИ (CI)
10,804
Как видно из таблицы 3, при наличии у пациентов генотипа СТ гена MTHFR С677Т (Ala222Val), относительный шанс развития ЛПП составляет 3,6 (95% ДИ 1,20-10,80).
Соответственно, носительство генотипа СТ MTHFR С677Т (Ala222Val) является прогностически неблагоприятным в плане развития ЛПП при APT ВИЧ-инфекции.
В качестве иллюстрации приводим примеры конкретных клинических наблюдений.
Пример 1. Пациент Ю. 1986 г.р. Год постановки на учет по поводу ВИЧ-инфекции - декабрь 2014 года. Диагноз: ВИЧ инфекция, 2 клиническая стадия (CD4 - 393 кл/мкл). ПГЛ. Потеря массы тела до 10%. (преСПИД). С 08.12.14 назначена APT (зидо-вудин/ламивудин+эфавир). 14.04.15 смена схемы APT на тенофовир/эмтрицитабин 300/200 мг по 1 табл. 1 раз в сутки; эфавир в связи с плохой переносимостью заменен на невирапин 200 мг по 1 табл. 1 раз в сутки (2 недели), затем по 1 табл. 2 раза в сутки. Биохимический анализ крови при назначении APT (08.12.2014): общий билирубин - 12,9 мкмоль/л, активность АсАТ 34 Ед/л, АлАТ 28 Ед/л, ЩФ 99 Ед/л, ГГТП 27 Ед/л; ИФА HBsAg, antiHCV - отриц. Биохимический анализ крови (19.03.2015): общий билирубин -14,6 мкмоль/л, активность АсАТ 29,4 Ед/л, АлАТ 56,8 Ед/л, ЩФ 149,8 Ед/л, ГГТП 32,9 Ед/л.
Определен генотип MTHFR С677Т (Ala222Val) - СТ. Прогнозировался высокий риск ЛПП. В настоящее время - хроническое ЛПП 1 степени.
Пример 2. Пациент Я. 1981 г.р. ВИЧ-инфекция, 2 клиническая стадия (CD4 - 1369 кл/мкл). ПГЛ. Рецидивирующая герпетическая инфекция. Новообразования на левом плече и бедре. Саркома Калоши? (преСПИД). Постановка на учет по поводу ВИЧ-инфекции
2003 г. Дата назначения APT (зидовудин /ламивудин 300 мг/150мг по 1 табл. 2 раза в сутки, абакавир 300 мг 1 табл. 2 раза в сутки): 03.06.2006. Отмечается высокая приверженность к APT. Объективный осмотр: Жалоб нет. Объективно: пониженного питания. На левом плече выступающее над поверхностью кожи образование, размером 1,5*2 см, с нечеткими контурами, неоднородного коричнево-синего цвета, при пальпации плотное, безболезненное. Аналогичное образование 1*1,5 см на задней поверхности левого бедра, над коленом. Пальпируются углочелюстные и заднешейные лимфоузлы. Дыхание в легких везикулярное. Сердечные тоны ритмичные, ясные. Живот мягкий безболезненный. Печень не увеличена. Биохимический анализ крови: общий билирубин - 9,7 мкмоль/л, активность ACT 20 Ед/л, АЛТ 12 Ед/л, ЩФ 65 Ед/л, ГГТП 14 Ед/л; HBsAg, anti-HCV - отриц. Выявлен генотип СС MTHFR С677Т (Ala222Val), соответственно ЛПП не прогнозируется. Заключение: несмотря на прием APT более 10 лет, признаки ЛПП отсутствуют.
Преимуществом заявляемого способа прогнозирования ЛПП заключаются в наличии высокой специфичности, ускорении выполнения способа и незначительных материальных затратах, в связи с возможностью проведения исследования во всех районных стационарах обеспеченных в настоящее время ПЦР-лабораториями для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний.
Литература:
1. Хазанов, А.И. Особенности лекарственных и вирусно-лекарственных поражений печени / А.И.Хазанов [и др.] // Кремлевская медицина. - 2000. - № 1. - С. 44-47.
2. Identification of metabolites, clinical chemistry markers and transcripts associated with hepatotoxicity / A. Buness [et al.] // PLoSOne. - 2014. - Vol. 16, N. 9(5). - e97249.
3. Шерлок, Ш. Заболевания печени и желчных путей / Ш.Шерлок, Дж. Дули -М.: ГЭОТАР, 1999-Стр. 40.
4. Галимова, С.Ф. Лекарственные поражения печени. Часть 1 / С.Ф. Галимова // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2012 . - №3 . - С. 45.
5. Патент RU № 2283494, опубл. 10.09.2006.
6. Метод оптимизации обследования и проведения антиретровирусной терапии у взрослых и подростков/ И.А.Карпов [и др.] // Инструкция по применению Министерства здравоохранения Республики Беларусь. - Минск, 2012. - С.13-35.
7. Бабанина, Н.В. Опыт применения гепатопротектора "Гептор" (Адеметеонин) у онкологических пациентов, получающих противоопухолевое лечение / Н.В. Бабанина // Медиаль. -2013.-№2.-С. 59-61.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ прогнозирования вероятности развития лекарственного поражения печени при проведении антиретровирусной терапии ВИЧ-инфекции, заключающийся в том, что у пациента определяют генотип полиморфизма С677Т (Ala222Val) гена MTHFR, и при наличии генотипа СТ, прогнозируют высокую вероятность развития лекарственного поражения печени.
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ:
Л61В10/00 (2006.01) C12Q1/6827 (2018.01)
Согласно международной патентной классификации (МПК)
Б. ОБЛАСТЬ ПОИСКА:
Минимум просмотренной документации (система классификации и индексы МПК)
А61В 10/00, C12Q 1/6827
Другая проверенная документация в той мере, в какой она включена в область поиска:
В. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
Y Y
RU 2426492 С2 (ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "АСТРАХАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ") 20.08.2011, формула
US 2007/0134709 Al (XIPING XU et al.) 14.06.2007, формула
US 2017/0159107 Al (TRUE HEALTH IP LLC) 08.06.2017*, формула
I последующие документы указаны в продолжении графы В
данные о патентах-аналогах указаны в приложении
* Особые категории ссылочных документов:
"А" документ, определяющий общий уровень техники
"Е" более ранний документ, но опубликованный на дату
подачи евразийской заявки или после нее "О" документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
"Р" документ, опубликованный до даты подачи евразийской
заявки, но после даты испрашиваемого приоритета D" документ, приведенный в евразийской заявке
"Т" более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания изобретения
"X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень, взятый в отдельности "Y" документ, имеющий наиболее близкое on
поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с
другими документами той же категории
" &" документ, являющийся патентом-аналогом
"L" документ, приведенный в других целях
Дата действительного завершения патентного поиска:
27 июня 2018(27.06.2018)
Наименование и адрес Международного поискового органа: Федеральный институт промышленной собственности
РФ, 125993,Москва, Г-59, ГСП-3, Бережковская наб., 30-1.
Факс: 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
