(57) Реферат / Формула:
Описывается специфическая кристаллическая солевая форма мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата и его применение в медицине (формула (I)).
Евразийское (21) 201792122 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2018.03.30
(22) Дата подачи заявки 2016.04.22
(51) Int. Cl.
C07D 471/04 (2006.01) A61K 31/437 (2006.01) A61P 29/00 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01) A61P 37/00 (2006.01)
(54) КРИСТАЛЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ КАК ИНГИБИТОР ФЕРМЕНТА СЕМИКАРБАЗИДЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ АМИНОКСИДАЗЫ (SSAO)
(31) (32)
1507036.0 2015.04.24
(33) GB
(вв) PCT/GB2016/051120
(87) WO 2016/170352 2016.10.27
(71)
(72) (74) (57) Описывается специфическая кристаллическая солевая форма мези-лат (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопро-пил-1,4,6,7-тетрагидро-5И-
имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата и его применение в медицине (формула (I)).
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-544786ЕА/055 КРИСТАЛЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ КАК ИНГИБИТОР ФЕРМЕНТА СЕМИКАРБАЗИДЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ АМИНОКСИДАЗЫ (SSAO)
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к кристаллической солевой
форме мезилату (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-
1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, способам его получения и выделения, к фармацевтическим композициям, которые включают это соединение и фармацевтически приемлемый носитель, и к фармацевтическим способам лечения. Предпосылки создания изобретения
Активность семикарбазидчувствительной аминоксидазы (SSAO) является ферментативной активностью, выражаемой белком сосудистой адгезии-1 (VAP-1) или медьсодержащей аминоксидазой 3 (АОСЗ), принадлежащей к семейству ферментов медьсодержащих аминоксидаз (ЕС.1.4.3.б). Поэтому ингибиторы фермента SSAO могут также модулировать биологические функции белка VAP-1.
Активность SSAO обнаружена в различных тканях, включая ткань сосудистых и несосудистых гладких мышц, эндотелий и жировую ткань [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res., 1984, 17, 223-256; Nakos & Gossrau, Folia Histochem. Cytobiol., 1994, 32, 3-10; Yu et al., Biochem. Pharmacol., 1994, 47, 1055-1059; Castillo et al., Neurochem. Int., 1998, 33, 415-423; Lyles & Pino, J. Neural. Transm. Suppl., 1998, 52, 239-250; Jaakkola et al., Am. J. Pathol., 1999, 155, 1953-1965; Morin et al. , J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 297, 563-572; Salmi & Jalkanen, Trends Immunol., 2001, 22, 211-216]. Кроме того, белок SSAO обнаружен в плазме крови, и оказывается, что такая растворимая форма имеет свойства, схожие с формой, связанной с тканью [Yu et al. , Biochem. Pharmacol., 1994, 47, 1055-1059; Kurkijarvi et al., J. Immunol., 1998, 161, 1549-1557].
Точная физиологическая роль этого распространенного фермента пока не определена полностью, но оказывается, что SSAO и продукты ее взаимодействия могут иметь некоторые функции в регуляции и передаче сигнала клеткой. Например, последние
исследования предполагают, что SSAO играет роль как в опосредуемом GLUT4 поглощении глюкозы [Enrique-Tarancon et al. , J. Biol. Спет., 1998, 273, 8025-8032; Morin et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. r 2001, 297, 563-572], так и в дифференцировке адипоцитов [Fontana et al., Biochem. J.r 2001, 356, 169-111; Mercier et al. , Biochem. J., 2001, 358, 335-342]. Кроме того, показано, что SSAO вовлекается в воспалительные процессы, где она действует как адгезивный белок для лейкоцитов
[Salmi & Jalkanen, Trends Immunol., 2001, 22, 211-216; Salmi & Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition" K. Ley
(Ed.), 2007, pp. 237-251], и также может играть роль в развитии и сохранении матрикса соединительной ткани [Langford et al., Cardiovasc. Toxicol., 2002, 2 (2), 141-150; Gokturk et al. , Am. J. Pathol., 2003, 163 (5), 1921-1928]. Более того, недавно обнаружена связь между SSAO и ангиогенезом [Noda et al. , FASEB J., 2008, 22(8), 2928-2935], и на основании этой связи ожидается, что ингибиторы SSAO имеют антиангиогенное действие.
Некоторые исследования на людях показали, что активность SSAO в плазме крови повышается при состояниях, таких как застойная сердечная недостаточность, сахарный диабет, болезнь Альцгеймера и воспаление [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res., 1984, 17, 223-256; Boomsma et al. , Cardiovasc. Res., 1997, 33, 387-391; Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Kurkijarvi et al., J. Immunol., 1998, 161, 1549-1557; Boomsma et al. , Diabetologia, 1999, 42, 233-237; Meszaros et al. , Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1999, 24, 299-302; Yu et al. , Biochim. Biophys. Acta, 2003, 1647(1-2), 193-199; Matyus et al., Curr. Med. Chem., 2004, 11(10), 1285-1298; O'Sullivan et al., Neurotoxicology, 2004, 25(1-2), 303-315; del Mar Hernandez et al., Neurosci. lett., 2005, 384(1-2), 183-187]. Предполагается, что реакционноспособные альдегиды и пероксид водорода, выработанные эндогенными аминоксидазами, вносят вклад в развитие сердечнососудистых заболеваний, диабетических осложнений и болезни Альцгеймера [Callingham et al. , Prog. Brain Res., 1995, 106, 305-321; Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Yu et
al., Biochim. Biophys. Acta, 2003, 1647(1-2), 193-199; Jiang et al., Neuropathol Appl Neurobiol., 2008, 34(2), 194-204]. Кроме того, ферментативная активность SSAO вовлекается в процесс экстравазации лейкоцитов в местах воспаления, где, как показано, SSAO в значительной степени экспрессируется на эндотелии сосудов [Salmi et al., Immunity, 2001, 14(3), 265-276; Salmi & Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition", K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251]. Соответственно, предполагается, что ингибирование SSAO имеет терапевтическую ценность при предупреждении диабетических осложнений и при воспалительных заболеваниях [Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Salmi et al., Immunity, 2001, 14 (3), 265-276; Salter-Cid et al. , J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315(2), 553-562].
В WO 2007/146188 утверждается, что блокада активности SSAO ингибирует рекрутмент лейкоцитов, ослабляет воспалительную реакцию и ожидается, будет благоприятной при предупреждении и лечении пароксизмов, например, при эпилепсии.
O'Rourke et al. (J. Neural. Transm., 2007; 114(6): 845-9) проверяли потенциальные ингибиторы SSAO при неврологических заболеваниях, причем предварительно показали эффективность ингибирования SSAO на крысиной модели удара. Ингибитор SSAO проверяли на рецидивирующем-ремиттирующем экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (ЕАЕ), мышиная модель которого разделят многие характеристики рассеянного склероза человека. Результаты показывают возможное клиническое благоприятное действие терапии низкомолекулярными веществами против SSAO на такой модели и, следовательно, при лечении рассеянного склероза человека.
Нокаутированные для SSAO животные фенотипично явно нормальные, но проявляют заметное ослабление воспалительных реакций, вызванных в ответ на различные воспалительные раздражители [Stolen et al., Immunity, 2005, 22(1), 105-115]. Кроме того, показано с использованием антител и/или небольших молекул, что противодействие ее функции у животных дикого типа на многих животных моделях болезни человека (например,
вызванного каррагинаном воспаления конечностей, вызванного
оксазоолоном колита, вызванного липополисахаридом воспаления
легких, вызванного коллагеном артрита, вызванного эндотоксином
увеита) является защитным при снижении инфильтрации лейкоцитов,
уменьшении тяжести фенотипа заболевания и снижении уровней
воспалительных цитокинов и хемокинов [Kirton et al. , Eur. J.
Immunol., 2005, 35 (11), 3119-3130; Salter-Cid et al. , J.
Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315 (2), 553-562; McDonald et al. ,
Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2007, 42, 229-243; Salmi
& Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition", K.
Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251; Noda et al., FASEB J., 2008 22(4),
1094-1103; Noda et al. , FASEB J., 2008, 22 (8), 2928-2935].
Оказывается, что такая противовоспалительная защита
предоставляется в широком ряду моделей воспаления у всех
независимо от причинных механизмов, а не ограничивается одним
определенным заболеванием или моделью заболевания. Это позволяет
предположить, что SSAO может являться ключевой центральной
точкой для регуляции воспалительной реакции, и следовательно
вероятно, что ингибиторы SSAO будут эффективными
противовоспалительными лекарственными средствами при широком ряде заболеваний человека. VAP-1 также вовлечен в развитие и поддержание фиброзных заболеваний, включая болезни печени и легких. Weston and Adams (J. Neural. Transm., 2011, 118(7), 1055-64) суммировали экспериментальные данные о вовлечении VAP-1 в фиброз печени, и Weston et al. (EASL Poster, 2010) сообщают, что блокада VAP-1 ускоряет рассасывание фиброза, вызванного четыреххлористым углеродом. Кроме того, VAP-1 вовлекается в воспаление легких (например, см. Singh et al., 2003, Virchows Arch., 442: 491-495), что предполагает, что блокаторы VAP-1 могут ослаблять воспаление легких и таким образом благоприятны для лечения мусковисцидоза путем лечения как профиброзного, так и провоспалительного аспектов заболевания.
SSAO (VAP-1) апрегулируется при раке желудка и иденифицирована в сосудистой сети опухоли меланомы, гепатомы и опухолях головы и шеи человека (Yoong KF, McNab G., Hubscher SG,
Adams DH (1998), J. Immunol., 160, 3978-88; Irjala H., Salmi M., Alanen K., Gre'nman R., Jalkanen S (2001), Immunol., 166, 69376943; Forster-Horvath C, Dome В., Paku S. et al. (2004), Melanoma Res., 14, 135-40). В одном сообщении (Marttila-Ichihara F., Castermans K., Auvinen K., Oude Egbrink MG, Jalkanen S., Griffioen AW, Salmi M. (2010), J. Immunol., 184, 3164-3173) показано, что у мышей с ферментативно неактивным VAP-1 меланомы растут медленнее, и у них уменьшенные число и диаметр кровеносных сосудов опухоли. Уменьшенный рост таких опухолей также отражается в меньшей (на 60-7 0%) инфильтрации миелоидных супрессорных клеток. Обнадеживает, что дефицит VAP-1 не влияет на образование сосудов или лимфососудов в нормальной ткани.
В силу указанных выше доводов ожидается, что ингибирование SSAO будет снижать уровни продуктов провоспалительных ферментов (альдегидов, пероксида водорода и аммиака), и причем в то же время уменьшается адгезивная способность иммунных клеток и соответственно их активация и конечная экстравазация. Заболевания, при которых ожидается, что такая активность является терапевтически благоприятной, включают все заболевания, где иммунные клетки играют заметную роль в инициации, поддержании или рассасывании патологии таких воспалительных заболеваний и иммунных/аутоиммунных заболеваний. Примеры таких заболеваний включают рассеянный склероз, артрит и васкулит.
Существует неудовлетворенная потребность в новых и улучшенных ингибиторах SSAO. В W02010/031789 (включенной в настоящее описание в качестве ссылки) раскрывается перспективный класс соединений ингибиторов SSAO, причем особенно перспективным является соединение примера 16, которое представляет собой свободное основание (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и имеет следующую структуру:
Свободное основание (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-
изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-
карбоксилат представляет собой гигроскопичное аморфное
стеклообразное/смолистое вещество. Существует необходимость в
получении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-
тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата в чистой и кристаллической форме для возможности полученя композиций, удовлетворяющих существующим фармацевтическим требованиям и спецификациям. Желательно, чтобы активный ингредиент получался в форме, которая была бы улучшенной для крупномасштабного производства. Желательно, чтобы продукт был в форме, которая легко поддается фильтрованию и легко сушится. Также желательно, чтобы продукт был устойчив в течение продолжительных периодов времени без необходимости специальных условиях хранения.
Сущность изобретения
Заявитель открыл кристаллическую форму соли мезилата (3S)-
тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-
имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, неожиданно имеющую
улучшенные свойства по сравнению со свободным основанием. Улучшенные свойства включают высокую теплостойкость, легкость фильтрации, легкость сушки и сниженную гигроскопичность.
Порошковой рентгенографией (XRPD) и поляризационной
микроскопией (PLM) показано, что соль мезилат (т.е., соль
метансульфоновой кислоты) (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-
изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-
карбоксилата имеет высокую степень кристалличности. Улучшенная
теплостойкость демонстрируется высокой температурой плавления
18 9°С. Сниженная гигроскопичность демонстрируется устойчивостью
кристаллической соли на протяжении до 3 суток хранения при
температуре 42°С в среде, имеющей относительную влажность 75%.
Настоящее изобретение включает композицию, включающую соль
мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-
тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Ожидается, что кристаллическая соль мезилат (3S)
тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата применима при лечении воспаления, воспалительного заболевания, иммунного или аутоиммунного расстройства или ингибировании роста опухолей. В одном воплощении воспаление или воспалительное заболевание или иммунное или аутоиммунное расстройство представляет собой артрит
(включая ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит,
остеоартрит и псориатический артрит), синовит, васкулит, болезнь
Шегрена, состояние, связанное в воспалением кишечника (включая
болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, воспалительное
заболевание кишечника и синдром раздраженной толстой кишки),
атеросклероз, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера,
сосудистую деменцию, болезнь Паркинсона, церебральную амилоидную
ангиопатию, церебральную аутосомно-доминатную артериопатию с
субкортикальными инфарктами и лейкоэнцефалопатией,
воспалительное заболевание легких (включая астму, хроническую обструктивную болезнь легких и острый респираторный дистресс-синдром) , фиброзное заболевание (включая идиопатический фиброз легких, кардиальный фиброз, фиброз печени и системный склероз
(склеродерму)) , воспалительное заболевание кожи (включая
контактный дерматит, атопический дерматит и псориаз) ,
воспалительное заболевание глаз (включая возрастную дегенерацию
желтого пятна, увеит и диабетическую ретинопатию), синдром
системной воспалительной реакции, сепсис, воспаление и/или
аутоиммунное состояние печени (включая аутоиммунный гепатит,
первичный билиарный цирроз, алкогольную болезнь печени,
склерозирующий холангит и аутоиммунный холангит), диабет (типа I
или II) и/или его осложнения, хроническую сердечную
недостаточность, застойную сердечную недостаточность,
ишемическую болезнь (включая удар и ишемически-реперфузионное повреждение) или инфаркт миокарда и/или его осложнения или эпилепсию.
Настоящее изобретение относится к применению
кристаллической соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата при изготовлении лекарственного средства для
лечения или предупреждения вышеуказанных состоянии и заболеваний. Изобретение также относится к способам лечения или предупреждения таких состояний и заболеваний, включающим введение млекопитающему, включая человека, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения, указанного выше. Краткое описание чертежей
Фигура 1 показывает XRPD свободного основания (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата.
Фигура 2 показывает XRPD кристаллической соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата.
Подробное описание изобретения
Определения
"Лечение" при использовании в настоящем описании включает профилактику названного расстройства или состояния или облегчение или устранение расстройства как только оно установлено.
Термин "эффективное количество" относится к количеству соединения, которое дает терапевтический эффект субъекту, которого лечат. Терапевтический эффект может быть объективным (т.е., который можно измерить с помощью некоторого теста или маркера) или субъективным (т.е., субъект показывает или ощущает действие).
"Фармацевтически приемлемый" означает применимость при получении фармацевтической композиции, которая вообще безопасна, нетоксична и ни биологически, ни как-то иначе не является нежелательной, и включает применимость для применения в ветеринарии, а также фармацевтическое применение человеком.
Если не указано иное, термин " (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-
(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат" в связи с кристаллической формой соли, описанной в настоящем описании, включает смесь энантиомеров (3S,4S) и
(3R,4R). В одном воплощении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и его соли имеют абсолютную чистоту > 95%,
предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%. В одном воплощении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат обозначает (3S,4S) энантиомер, имеющий энантиомерную чистоту > 95%, предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%. В одном воплощении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат имеет диастереоизомерную чистоту > 95%, предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%. Композиции
Для клинического применения кристаллическое соединение по
изобретению вводят в фармацевтические композиции для различных
способов введения. Следует иметь в виду, что соединение по
изобретению можно вводить вместе с физиологически приемлемым
носителем, эксципиентом или разбавителем. Фармацевтические
композиции по изобретению можно вводить любым подходящим путем,
предпочтительно пероральным, ректальным, назальным, топическим
(включая трансбуккальное и сублингвальное), сублингвальным,
трансдермальным, интратекальным, трансмукозальным или
парентеральным (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и интрадермальное) введением.
Иначе, композиции обычно могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например, таблеток и капсул с пролонгированным высвобождением, и в липосомах, и могут быть получены любыми методами, хорошо известными в области фармации. Фармацевтические композиции обычно получают путем смешивания активного вещества или его фармацевтически приемлемой соли с обычными фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. Примерами эксципиентов являются вода, желатин, аравийская камедь, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, натрия крахмал гликолят, гидрофосфат кальция, стеарат магния, тальк, коллоидный диоксид кремния и т.п.. Такие композиции также могут содержать другие фармакологически активные средства и обычные добавки, такие как стабилизаторы, смачивающие вещества, эмульгаторы, корригенты, буферы и т.п.. Как правило, количество активных соединений
составляет в препарате 0,1-95 мас.%, предпочтительно, 0,2-20 мас.% в препаратах для парентерального применения и, предпочтительнее, 1-50 мас.% в препаратах для перорального введения.
Композиции также можно получить известными способами, такими как грануляция, прессование, микроинкапсулирование, нанесение покрытия распылением и т.д. Композиции можно получить традиционными способами в лекарственной форме таблеток, капсул, гранул, порошков, сиропов, суспензий, суппозиториев или инъекций. Жидкие композиции можно получать растворением или суспендированием активного вещества в воде или других подходящих средах. На таблетки или гранулы можно нанести покрытия обычным способом. Для поддержания терапевтически эффективных концентраций в плазме в течение длительных периодов времени соединения по изобретению могут быть включены в композиции с постепенным высвобождением.
Уровень дозы и частота дозирования конкретного соединения
будут изменяться в зависимости от ряда факторов, включая
эффективность конкретного используемого соединения,
метаболическую устойчивость и длительность действия такого соединения, возраст, массу тела, состояние здоровья, пол, питание пациента, тип и время введения, скорость экскреции, комбинацию лекарств, тяжесть состояния, от которого лечат, и терапию, которой подвергают пациента. Суточная дозировка может, например, колебаться от примерно 0,001 мг до примерно 100 мг на килограмм массы тела, вводимая в одной или нескольких дозах, например, от примерно 0,01 мг до примерно 25 мг каждая. Типичная суточная дозировка для человека составляет 1-2000 мг/сутки, предпочтительно от 200 до 2000 мг/сутки, предпочтительнее от 500 до 2000 мг/сутки. Обычно такая дозировка дается перорально, но также можно выбрать парентеральное введение.
Экспериментальные методы
Аналитические методы
Порошковая рентгенография (XRPD)
Порошковые рентгенограммы получают на дифрактометре Bruker
AXS C2 GADDS с использованием излучения Си Кос (40 кВ, 40 мА) , автоматизированной стадии XYZ, лазерного видеомикроскопа для автоматической установки образца и 2-мерного поверхностного детектора HiStar. Рентгеновская оптика состоит из одного многослойного зеркала Gobel, соединенного с точечным коллиматором 0,3 мм. Осуществляют еженедельный контроль технических характеристик с использованием сертифицированного корундового стандарта NIST 1976 (плоская пластина). Расходимость пучка, т.е., эффективный размер рентгеновского пучка на образце, составляет приблизительно 4 мм. Используют режим 9-9 непрерывного сканирования с расстоянием от образца до детектора 20 см, что дает эффективный диапазон 29 3,2°-29,7°. Типично образец может подвергаться воздействию рентгеновского пучка в течение 120 секунд. Программа, используемая для сбора данных, GADDS для WNT 4.1.16, и данные анализируют и представляют с использованием Diffrac Plus EVA, v. 9.0.0.2 или v. 13.0.0.2. Образцы, испытываемые в условиях окружающей среды, получают в виде образцов плоских пластин с использованием порошка, как он получен, без измельчения. Приблизительно 1-2 мг образца слегка спрессовывают на предметном стекле для получения плоской поверхности. Образцы, испытываемые не во внешних условиях, располагают на кремниевой пластине с теплопроводящим соединением. Затем образец нагревают до соответствующей температуры прибл. при 10°С/мин и затем выдерживают в изотермических условиях в течение прибл. 1 мин перед тем, как начинают сбор данных.
С другой стороны, порошковые рентгенограммы получают на дифрактометре Bruker D8 с использованием излучения Си Кос (40 кВ, 4 0 мА) , гониометра 9-29 и расходимости V4 и принимающих щелей, Ge-монохроматора и детектора Lynxeye. Технические характеристики прибора проверяют с использованием сертифицированного корундового стандарта (NIST 1976). Программой, используемой для сбора данных, является Diffrac Plus XRD Commander, v2.5.0GADDS, и данные анализируют и представляют с использованием Diffrac Plus EVA, v. 11.0.0.2 или v. 13.0.0.2. Образцы испытывают в
условиях окружающей среды в виде образцов плоских пластин с использованием порошка, как он получен. Приблизительно 2 0 мг образца осторожно помещают в полость, вырезанную в полированной кремниевой пластине с нулевым фоном (510) . Образец во время анализа вращается в своей собственной плоскости. Подробности для получения данных: диапазон углов 2-42° 29; размер шага 0,05° 29; время сбора 0,5 с/шаг.
Ядерный магнитный резонанс (ЯМР)
Спектры гЕ ЯМР получают на приборе Bruker, 400 МГц,
снабженном автоматическим пробоотборником, и управляемом пультом
DRX400. Автоматизированные эксперименты выполняют с
использованием ICONNMR v4.0.4 (форма 1), выполняемой с помощью Topspin v 1.3 (уровень исправлений 10), с использованием стандартных опытов загрузки Bruker. В случае нестандартной спектроскопии результатов добиваются с использованием только Topspin. Образцы получают в d^-ДМСО, если не указано иное. Автономный анализ осуществляют с использованием ACD SpecManager v 12.00 (форма 29094). С другой стороны, спектры гН ЯМР получают на приборе Bruker Avance III, 400 МГц, QNP Ultrashield Plus Cryo.
Жидкостная хроматография - масс-спектрометрия (ЖХМС) Аналитическую ЖХМС выполняют на системе ВЭЖХ Agilent 1100 с масс-спектрометром Waters ZQ с использованием колонки Phenomenex Synergi (RP-Hydro, 150x4,6 мм, 4 мкм, 1,5 мл/мин, 30°С, градиент 5-100% MeCN ( + 0, 085% ТФК) в воде ( + 0,1% ТФК) в течение 7 мин -выдержка в течение 0,5 мин, 200-300 нм) .
Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) Данные по ДСК собирают на приборах ТА Q2000, снабженных 50-позиционным автоматическим пробоотборником. Калибровку для теплоемкости выполняют с использованием сапфира, и калибровку для энергии и температуры выполняют с использованием сертифицированного индия. Типично 0,5-3 мг каждого образца в алюминиевом тигле с отверстием нагревают по 10°С/мин от 25°С до 350°С. Над образцом поддерживают продувку сухим азотом при 50 мл/мин. ДСК с модуляцией по температуре выполняют с
использованием основной скорости 2°С/мин и параметров модуляции+1,2 7°С/мин и 60 секунд. Программой управляющей прибором, является Advantage for Q Series v2.8.0.392 и Thermal Advantage v4.8.3, и результаты анализируют с использованием Universal Analysis v4.3A.
Термогравиметрический анализ (ТГА)
Данные по ТГА собирают на приборах ТА Q50 0 TGA, снабженных 1б-позиционным автоматическим пробоотборником. Прибор калибруют по температуре с использованием сертифицированного алюмеля и никеля. Типично 5-30 мг каждого образца загружают в предварительно тарированный платиновый тигель и алюминиевый тигель для ДСК и нагревают по 10°С/мин от температуры окружающей среды до 350°С. Над образцом поддерживают продувку азотом при 60 мл/мин. Программой управляющей прибором, является Advantage for Q Series v2.8.0.392 и Thermal Advantage v4.8.3.
Микроскопия в поляризованном свете (PLM)
Образцы исследуют на поляризационном микроскопе Lieca LM/DM с цифровой видеокамерой для представления изображения. Небольшое количество каждого образца помещают на предметное стекло, закрепляют в иммерсионном масле и накрывают предметным стеклом, причем отдельные частицы разделяют насколько возможно. Образец рассматривают при соответствующем увеличении и в частично поляризованном свете в сочетании с лямбда-ложным светофильтром.
Высокотемпературная микроскопия (HSM) [температура
плавления]
Высокотемпературную микроскопию осуществляют с
использованием поляризационного микроскопа Lieca LM/DM в комбинации с высокотемпературным Metter-Toledo MTFP82HT и цифровой видеокамерой для представления изображения. Небольшое количество каждого образца помещают на предметное стекло с отдельными частицами, разделенными насколько возможно. Образец рассматривают при соответствующем увеличении и в частично поляризованном свете в сочетании с лямбда-ложным светофильтром, причем в это время его нагревают от температуры окружающей среды типично со скоростью 10-2 0°С/мин.
Определение химической чистоты методом ВЭЖХ
Анализ на чистоту выполняют на системе Agilent серии НР1100, снабженной диодно-матричным детектором, и с использованием программы ChemStation vB.02.01-SR1, используя метод, подробно описанный ниже.
Определение хиральной чистоты методом хиральной ВЭЖХ Хиральную ВЭЖХ выполняют на системе Agilent 1200 с использованием колонки Astec Chirobiotic Т, 100x4,6 мм, 5 мкм, полярная обращенная фаза, 150x4,6 мм, 5 мкм, изократное элюирование 85% МеОН, 15% 20 мМ ацетата аммония в течение 10 мин, 1,0 мл/мин, 220 нм.
Определение воды титрованием по Карлу Фишеру (KF) Содержание воды в каждом образце измеряют на кулонометре Mettler Toledo DL39 с использованием реагента Hydranal Coulomat AG и продувки аргоном. Взвешенные твердые образцы вводят в сосуд на платиновом тигле для ТГА, который соединен с subaseal для того, чтобы избежать попадания воды. Приблизит. 10 мг образца используют на титрование, и определение проводят при двукратном повторе.
Определение сорбции паров гравиметрическим методом (GVS)
Изотермы сорбции получают с использованием анализатора
действительной сорбции влаги SMS DVS, управляемого программой
DVS Intrinsic Control vl.0.0.30. Поддерживают температуру
образца 2 5°С приборным регулированием. Влажность регулируют,
смешивая потоки сухого и влажного азота при общей скорости 200
мл/мин. Относительную влажность измеряют калиброванным зондом
Rotronic (динамический диапазон 1,0-100% RH) , размещенным вблизи
образца. Изменение массы (релаксацию массы) образца как функции
% RH контролируют непрерывно по микробалансу (точность±0,005 мг).
Типично 5-2 0 мг образца помещают в затаренную сетку из
нержавеющей стали в условиях окружающей среды. Образец загружают
и выгружают при 4 0% RH и 2 5°С (типичные комнатные условия).
Изотерму сорбции влаги получают как описано ниже (причем 2
сканирования дают 1 полный цикл). Стандартную изотерму получают
при 25°С с интервалами 10% RH в диапазоне 0,5-90% RH. Анализ
результатов проводят в Microsoft Excel с использованием DVS
Analysis Suite v6.0.0.7. Параметры метода для экспериментов с
SMS DVS: просмотр адсорбции 1 40-90; просмотр
десорбции/адсорбции 2 90-0, 0-40; интервалы (%RH) 10; число просмотров 4; скорость потока (мл/мин) 200; температура (°С) 25; устойчивость (°С/мин) 0,2; время сорбции (час) тайм-аут б час. После получения изотермы образец извлекают и повторно анализируют XRPD.
Ионная хроматография (ИХ)
Результаты получают на Metrohm 7 61 Compact 1С (для катионов) и Metrohm 8 61 Advanced Compact 1С (для анионов) с использованием программы 1С Net v2.3. Точно взвешенные образцы подготавливают в виде исходных растворов в соответствующем растворяющем растворе и разбавляют 1:9 перед испытанием. Количественное определение осуществляют путем сравнения со стандартными растворами известной концентрации анализируемого иона. Параметры метода ИХ для анионной хроматографии: тип метода анионный обмен; колонка Metrosep A Supp 5-250 (4,0x250 мм); температура колонки (°С) как у окружающей среды; впрыск (мкл) 20; детекция - детектор проводимости; скорость потока (мл/мин) 0,7; элюент 3,2 мМ раствор карбоната натрия, 1,0 мМ раствор гидрокарбоната натрия в 5% водном ацетоне.
Результаты
Выделена кристаллическая соль мезилат и охарактеризована с использованием некоторых или всех методов анализа XRPD, гН ЯМР,
Устойчивость/Гигроскопичность при длительном хранении Кристаллический мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата также оценивают на устойчивость и гигроскопичность, когда 3-г аликвоты распределяют в мешки-вкладыши LDPE, герметично закрывают кабельной стяжкой и помещают с пакетиком с осушителем в мешок из фольги, который затем запаивают. Затем мешок из фольги помещают в бочонок HDPE с крышкой HDPE. Такие условия отражают типичные условия хранения по GMP. Устойчивость оценивают ВЭЖХ, и гигроскопичность оценивают титрованием по Карлу Фишеру (KF) . Кристаллический мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата разрушается только на 0,1% с поглощением только 0,1% воды после 3 лет при 25°C/60%RH и только на 0,1% с поглощением только 0,1% воды после б месяцев при 40°C/75%RH.
Рентгенография монокристаллов (SXRPD)
Данные собирают на дифрактометре Oxford Diffraction Supernova Dual Source, Си при нуле, Atlas CCD, снабженном охлаждающим устройством Oxford Cryosystems Cobra. Данные собирают с использованием излучения CuKa. Структуры типично определяют с использованием программ SHELXS или SHELXD и уточняют с помощью программы SHELXL как части пакета программ Bruker AXS SHELXTL. Если не указано иное, атомы водорода, присоединенные к углероду, размещают геометрически и уточняют с помощью параметра изотропного смещения в модели "наездника". Атомы водорода, присоединенные к гетероатому, размещают в разностном синтезе Фурье и уточняют свободно с помощью изотропного фактора смещения.
Определение структуры монокристалла
Монокристалл мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата выращивают из смеси этилацетат/метанол постепенным выпариванием.
Решение структуры получают прямыми методами, полноматричным уточнением методом наименьших квадратов на F2 с взвешиванием vr 1=а2 (F02 ) + (0,0490 Р)2+(0,3000 Р) , где Р= {F02+2Fc2)/3, параметры анизотропного смещения. Эмпирическую коррекцию абсорбции с использованием сферических гармоническх функций выполняют по алгоритму масштабирования SCALE3 ABSPACK.
Параметр абсолютной структуры=0,002(13). Конечное
wR2={l [w{F02-Fc2) 2] /Е [w{F02) 2] 1/2 } = 0, 0657 для всех данных, обычный Я!=0, 024 на величинах F 2651 отражений с F0 > 4а (F0) , S=l, 007 для всех данных и 234 параметров. Конечное А/а(max) 0,000, А/а(среднее) 0,000.
Конечная разностная карта между +0,24 и -0,288 е А"3.
S1 -0,953688 -0,131935 -0,071370
1 -0,020659 -0,149398 -0,484602
2 -0,234768 -0,155566 -0,365860
3 -0,474652 -0,066100 -0,365092
4 -0,912055 -0,134194 -0,140238
5 -1,110792 -0,173740 -0,060477
6 -0,844708 -0,208722 -0,032208 N1 -0,412770 -0,253710 -0,303870 N2 -0,617297 -0,224842 -0,147335 Н2А -0,722228 -0,196131 -0,146105 N3 -0,392648 -0,259773 -0,107928 НЗА -0,324241 -0,261543 -0,081273 С1 0,073273 -0,055487 -0,449929 Н1А 0,096656 0,026304 -0,476759 Н1В 0,170449 -0,099983 -0,437205 С2 -0,017615 -0,014548 -0,390676 Н2В -0,004410 0,084643 -0,381074 Н2С 0,014557 -0,068772 -0,352479 СЗ -0,183226 -0,046385 -0,408629 НЗВ -0,249376 0,037232 -0,405075 С4 -0,171565 -0,096071 -0,477738 Н4В -0,248192 -0,168773 -0,486334 Н4С -0,188739 -0,019057 -0,508271 С5 -0,383218 -0,150898 -0,346637 С6 -0,560166 -0,254872 -0,270030 Н6В -0,616936 -0,169106 -0,281832 С7 -0,521333 -0,248342 -0,198878 С8 -0,536619 -0,232888 -0,092882
Н8А -0,575742 -0,221293 -0,050370 С9 -0,379700 -0,269963 -0,174418 СЮ -0,240769 -0,305362 -0,212417 Н10А -0,184330 -0,381585 -0,191434 Н10В -0,172218 -0,224586 -0,215739 СИ -0,296381 -0,348962 -0,279498 Н11А -0,208892 -0,350915 -0,309809 НИВ -0,339647 -0,443040 -0,277151 С12 -0,659963 -0,380274 -0,288449 Н12А -0,612652 -0,464685 -0,269297 С13 -0,664766 -0,397753 -0,361667 Н13А -0,560447 -0,406134 -0,378360 Н13В -0,714279 -0,317374 -0,381222 Н13С -0,722663 -0,480993 -0,372510 С14 -0,821261 -0,366359 -0,261740 Н14А -0,816850 -0,355260 -0,214661 Н14В -0,880046 -0,449226 -0,272353 Н14С -0,870697 -0,285637 -0,281016 С15 -0,939731 0,041434 -0,046714 Н15А -0,966523 0,048834 -0,000821 Н15С -1,009980 0,097844 -0,072401 Н15В -0,834933 0,074003 -0,053214 Порошковая рентгенография
Поршковые рентгенограммы соли мезилата (3S)-
тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата имеют пики при 8,549 9,851, 10,899, 12,295, 13,198, 13,393, 14,083, 15,897, 16,280 17,097, 17,744, 18,289, 19,694, 20,180, 20,443, 20,597, 20,886 21,948, 22,112, 22,444, 23,194, 23,653, 24,144, 24,714, 25,292 25, 590, 25, 810, 26, 526, 26, 765, 27, 084, 27, 283, 27, 662, 28, 159 28,996, 29,135, 29,912 и 30,868 градусах 29. Принимая в расчет нормальные экспериментальные вариации, пики, идентифицированные выше, следует рассматривать как имеющие точность до +/- 0,2 градуса 29, такую как +/- 0,1, +/- 0,05, +/- 0,01, +/- 0,005 и +/- 0,001. Относительные интенсивности таких пиков приводятся ниже (таблица 4).
Угол (2-тета *)
Интенсивность
(%)
8, 549
3,7
Угол (2-тета *)
Интенсивность
(%)
22,112
22,5
23,444
4,5
23,194
14,5
23,653
21, 9
24,144
11, 8
24,714
3,3
25,292
4,1
25,590
5, 3
25,810
4,3
26, 526
4,0
26, 765
4,0
27,084
17,2
27,283
10,5
27,662
3,4
28,159
9,8
28,996
5, 3
29,136
4,1
29,912
10,5
30,868
5, 0
Aq DCM DIPEA ее ES* EtOAc час ВЭЖХ MCBP ЖХМС М
МеОН [МН+] мин
Используют следующие аббревиатуры: водный,
дихлорме тан, диизопропилэтиламин, энантиомерный избыток, электрораспыление, этилацетат, час(ы),
высокоэффективная жидкостная хроматография, масс-спектрометрия высокого разрешения, жидкостная хроматография/масс-спектрометрия, молярный, метанол,
протонированный молекулярный ион, минуты,
ОФ - обращенная фаза,
МС - масс-спектрометрия,
RT - время удерживания,
насыщ. - насыщенный,
ТГФ - тетрагидрофуран,
ТФК - трифторуксусная кислота.
Экспериментальные методы
Все реагенты технической чистоты и используются как
получены без дополнительной очистки, если не указано иное. Во всех случаях используют растворители химически чистые.
Аналитическую ЖХМС выполняют на масс-спектрометре Waters ZQ, соединенным с системой ВЭЖХ Agilent 1100. Аналитическую ВЭЖХ выполняют на системе Agilent 1100. Масс-спектры высокого разрешения (МСВР) получают на Agilent MSD-TOF, соединенном с системой ВЭЖХ Agilent 1100. Во время анализов калибровку проверяют с помощью двух масс и при необходимости автоматически корректируют. Спектры получают положительной ионизацией электрораспылением. Полученный диапазон массы составляет m/z 100-1100. Используют детекцию по профилю пиков масс-спектра. Флэш-хроматографию выполняют или на системе CombiFlash Companion, снабженной колонками с диоксидом кремния RediSep, или на системе Flash Master Personal, снабженной гигатрубками (gigatubes) с диоксидом кремния Strata SI-1. ВЭЖХ с обращенной фазой выполняют на системе Gilson (насос Gilson 322 с насосом Gilson 321 для уравновешивания и автоматическим пробоотборником Gilson 215), снабженной колонками Phenomenex Synergi Hydro RP, 150x10 мм, YMC ODS-A 100/150x20 мм или Chirobiotic T 250x10 мм. Колоночную хроматографию с обращенной фазой выполняют на системе Reverse Gilson (насос Gilson 321 и сборник фракций Gilson FC204), снабженной колонками с диоксидом кремния Merck LiChroprep(r) RP-18 (40-63 мкм) . Соединения называют автоматически с использованием ACD 6.0. Все соединения сушат в вакууме в течение ночи.
Данные аналитической ВЭЖХ и ЖХМС получают с помощью
системы A: Phenomenex Synergi Hydro RP (C18, 30x4,6 мм, 4
мкм), градиент 5-100% CH3CN (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% TFA), 1,5 мл/мин, со временем градиента 1,75 мин, 200 нм, 30°С; или
системы В: Phenomenex Synergi Hydro RP (C18, 150x4,6 мм, 4 мкм), градиент 5-100% CH3CN (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% TFA), 1,5 мл/мин со временем градиента 7 мин, 200 нм, 30°С.
Данные хиральной ВЭЖХ получают с помощью
системы С: Chirobiotic V полярно-ионного типа (150x4,6 мм), 70% МеОН в 10 мМ водн. аммонийформиатном буфере, 1,0 мл/мин в течение 10 мин, 200 нм, 30°С.
ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 1
Гидрохлорид 4-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидаЗо[4,5-с]пиридина
Гидрохлорид гистамина (61,9 г, 336 ммоль) растворяют в растворе NaOH (33,6 г. 841 ммоль) в воде (125 мл) и МеОН (500 мл), и добавляют изобутиральдегид (61,4 мл, 672 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при 8 0°С в течение 24 час, охлаждают до комнатной температуры, рН доводят до 7 1 М водн. раствором НС1 (250 мл), и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в теплом МеОН (300 мл), оставляют на 1 час, фильтруют, и растворители удаляют в вакууме. Остаток перемешивают в МеОН (50 мл) и ацетоне (400 мл) в течение 2 час и охлаждают до 4°С в течение 2 час. Полученное выпавшее в осадок вещество промывают ацетоном (100 мл), и получают гидрохлорид 4-изопропил-4,5,б,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридина (33,0 г, 48,7%) в виде белого твердого вещества.
Аналитическая ЖХМС: чистота > 90% (система A, RT=0,51 мин), ES+: 166,4 [МН] + .
ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 2
4-Нитрофенил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидаЗо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат
Промежуточное соединение 1 (2,78 г, 8,28 ммоль, чистота 60%) и DIPEA (5,27 мл, 30,3 ммоль) растворяют в DCM (100 мл). Реакционную смесь охлаждают до 0°С, и добавляют 4-нитрофенилхлорформиат (4,07 г, 20,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 час. Реакционную смесь промывают насыщ. водн. раствором NaHC03 (5x10 0 мл) , сушат (MgSO,}) , и растворители удаляют в вакууме, и получают 4-нитрофенил-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (5,28 г, неочищенный) в виде желтой смолы.
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 41% (система В, RT=4,70 мин) . Аналитическая ЖХМС: чистота 86% (система A, RT=1,70 мин), ES+: 331,0 [МН]+.
(3S)-Тетрагидрофуран-З-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидаЗо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат
NaH (0,40 г, 10,0 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) суспендируют в безводном ТГФ (20 мл), охлаждают до 0°С, и добавляют (S)-3-гидрокситетрагидрофуран (0,88 г, 0,68 мл, 10,0 ммоль) . Суспензию перемешивают при 0°С в течение 30 мин, затем добавляют к раствору промежуточного соединения 2 (3,30 г, 10,0 ммоль, чистота 70%) в ТГФ (60 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Добавляют еще две дополнительные порции NaH и (S)-3-гидрокситетрагидрофурана в ТГФ через 5 и 29 час соответственно. Через 2 суток реакцию гасят водой (10 мл), и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в EtOAc (100 мл), промывают 1 М водн. раствором Na2C03 (4x100 мл), сушат (MgS04) , и растворители удаляют в вакууме.
Остаток очищают колоночной хроматографией (нормальная фаза, 2 0 г Strata Si-1, гигатрубка с диоксидом кремния, DCM (200 мл), затем 2%, 4% и 5% МеОН в DCM (каждый раз 200 мл) ) и ВЭЖХ с обращенной фазой (YMC ODS-A 100x20 мм, 5 мкм, 25 мл/мин, градиент 30% - 60% (в течение 7 мин), затем 100% (3 мин) МеОН в смеси 10% МеОН/вода), и получают (3S)-тетрагидрофуран-З-ил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (34,8 мг, 1,1%) в виде белого твердого вещества.
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, RT=3,63 мин) . Аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, RT=4,01 мин), ES+: 280, 1 [МН] + .
(3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-
5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (39,91 мг) растворяют в
10 мМ аммонийформиатном буфере и МеОН (2 мл, 1:1) и дважды
очищают хиральной ВЭЖХ с обращенной фазой (Chirobiotic Т, 250x10
мм, 3 мл/мин, изократное элюирование 7 0% МеОН в 10 мМ
аммонийформиатном буфере (40 мин), рН 7,4), и получают отдельный
диастереоизомер (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-
1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (6,90 мг, ее 99%).
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, RT=3,63 мин); хиральная ВЭЖХ: чистота 99,5% (система С, RT=2,22 мин); аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, RT=3,90 мин), ES+: 2 8 0, 1 [МН]+; МСВР вычислено для C14H21N3O3 279, 1583, найдено 279,1571.
Соль метансульфоновой кислоты (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидаЗо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата
Свободное
основание
(3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-
изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5
карбоксилат (460 мг, 1,65 ммоль) растворяют в EtOAc (10 мл) при
комнатной температуре, и получают прозрачный бесцветный раствор.
Добавляют по частям метансульфоновую кислоту (107 мкл) при
слабом нагревании. Раствор охлаждают до комнатной температуры в
течение ночи. Полученные кристаллы собирают фильтрацией,
промывают EtOAc (2x10 мл) и сушат в течение ночи при 4 0°С в
вакууме. Соль мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-
изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата получают с выходом 99% (615 мг) в виде белого кристаллического твердого вещества. ВЭЖХ: время удерживания 2,2 7 мин, чистота 99,5%. Температура плавления 189°С. ЖХМС: время удерживания 4,19 мин, ES+ 280,0 [МН]+, чистота 100%. Хиральная ВЭЖХ: время удерживания 3,70 мин, de > 99,5%. гЯ ЯМР (400 МГц, CDC13) : 5Н 8,72 (1Н, м, NHCHNH+) , 5,29 (1Н, м, ОСН.) , 5,05 (0,5Н, д, J 8,4 Гц, CCHN), 4,89 (0,5Н, д, J 7,6 Гц, CCHN), 4,59 (0,5Н, м, ЫСНдСНв) , 4,39 (0,5Н, м, ЫСНдСНв) , 3, 97-3, 85 (4Н, м, СН2ОСН2), 3,20 (1Н, м, NCHACHB) , 2,89 (ЗН, с, CH3S03") , 2, 89-2, 72 (2Н, м, CCH2CH2N) , 2, 23-2, 07 (ЗН, м, СН(СН3)2, ОСН2СН2), 1,16 (ЗН, д, J 6,4 Гц, СН3) и 1, 06-0, 96 (ЗН, м, СН3) .
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Кристаллическая соль мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, имеющая пространственную группу Р2 (1)2 (1)2(1) и по существу следующие размеры элементарной ячейки:
карбоксилата, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующую величину 29, измеренную с использованием излучения СиКа: 21,948.
3. Соль по п. 2, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующие величины 29, измеренные с использованием излучения СиКа: 17,744 и 21,94 8.
4. Соль по п.2 или п.З, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующие величины 29, измеренные с использованием излучения СиКа: 17,744, 20,886 и 21,94 8.
5. Соль по любому из пп. 2-4, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующие величины 29, измеренные с использованием излучения СиКа: 17,744, 20,886, 21,948 и 9,851.
6. Соль по любому из пп. 2-5, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующие величины 29, измеренные с использованием излучения СиКа: 17,744, 20,886, 21,948, 9,851 и 16,280.
7. Соль по любому из пп. 2-6, имеющая рентгенограмму XRPD, содержащую следующие величины 29, измеренные с использованием излучения СиКа: 9,851, 16,280, 17,097, 17,744, 19,694, 20,443, 20,886, 21,948, 22,112, 23,194, 23,653, 24,144, 27,084, 27,283 и 29,912.
8. Соль по любому из пп. 2-7, имеющая рентгенограмму XRPD, представленную в таблице 4 и/или на фигуре 2.
9. Соль по любому из пп. 1-8, имеющая чистоту выше 95%.
10. Соль по любому из пп. 1-8, имеющая чистоту выше 99%.
11. Соль по любому из пп. 1-8, имеющая чистоту выше 99,5%.
10.
12 .
Соль по
любому
пп. 1-
11,
имеющая
энантиомерную
чистоту
выше 95%.
13.
Соль по
любому
пп. 1-
11,
имеющая
энантиомерную
чистоту
выше 99%.
14 .
Соль по
любому
пп. 1-
11,
имеющая
энантиомерную
чистоту
выше 99,5%.
15.
Фармацевтическая
композиция,
включающая
соль по любому
из пп. 1-14 и один или несколько подходящих эксципиентов.
16. Соль по любому из пп. 1-14 или фармацевтическая композиция по п. 15 для применения при лечении или при изготовлении лекарственного средства для лечения воспаления, воспалительного заболевания, иммунного или аутоиммунного расстройства или ингибирования роста опухоли.
17. Способ лечения воспаления, воспалительного заболевания, иммунного или аутоиммунного расстройства или ингибирования роста опухоли, который включает введение субъекту, страдающему от такого заболевания, эффективного количества соли по любому из пп. 1-14 или фармацевтической композиции по п.15.
18. Соль по п. 16 или способ по п. 17, где воспаление или
воспалительное заболевание или иммунное или аутоиммунное
расстройство представляет собой артрит (включая ревматоидный
артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит и
псориатический артрит), синовит, васкулит, болезнь Шегрена,
состояние, связанное в воспалением кишечника (включая болезнь
Крона, неспецифический язвенный колит, воспалительное
заболевание кишечника и синдром раздраженной толстой кишки),
атеросклероз, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера,
сосудистую деменцию, болезнь Паркинсона, церебральную амилоидную
ангиопатию, церебральную аутосомно-доминатную артериопатию с
субкортикальными инфарктами и лейкоэнцефалопатией,
воспалительное заболевание легких (включая астму, хроническую
обструктивную болезнь легких и острый респираторный дистресс-
синдром) , фиброзное заболевание (включая идиопатический фиброз
легких, кардиальный фиброз, фиброз печени и системный склероз
(склеродерму)) , воспалительное заболевание кожи (включая
контактный дерматит, атопический дерматит и псориаз) ,
16.
воспалительное заболевание глаз (включая возрастную дегенерацию
желтого пятна, увеит и диабетическую ретинопатию), синдром
системной воспалительной реакции, сепсис, воспаление и/или
аутоиммунное состояние печени (включая аутоиммунный гепатит,
первичный билиарный цирроз, алкогольную болезнь печени,
склерозирующий холангит и аутоиммунный холангит), диабет (типа I
или II) и/или его осложнения, хроническую сердечную
недостаточность, застойную сердечную недостаточность,
ишемическую болезнь (включая удар и ишемически-реперфузионное повреждение) или инфаркт миокарда и/или его осложнения или эпилепсию.
19. Соль по п. 16 или способ по п. 17 для лечения заболевания, выбранного из ревматоидного артрита, остеоартрита, фиброза печени, хронической обструктивной болезни легких, рассеянного склероза, болезни Шегрена, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, воспалительного заболевания кишечника или сосудистой деменции.
20. Способ получения кристаллической соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,б,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата путем образования соли мезилата из свободного основания (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата.
21. Способ по п.20, где соль мезилат получают путем добавления к свободному основанию метансульфоновой кислоты.
22. Кристаллический мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, полученный способом по п.2 0 или п.21.
По доверенности
544786
1/1
ШКАЛА 2-ТЕТА
ШКАЛА 2-ТЕТА
ФИГ.2
(19)
(19)
(19)
