|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Данное изобретение относится к высокоактивным циклическим динуклеотидным (CDN) иммунным стимуляторам, которые активируют DC через недавно обнаруженный цитоплазматический рецептор, известный как STING (Stimulator of Interferon Genes - стимулятор генов интерферона). В частности, CDN по данному изобретению представлены в виде композиции, содержащей один или несколько циклических пуриновых динуклеотидов, индуцирующих человеческий STING-зависимую продукцию интерферона I типа, где циклические динуклеотиды пурина, присутствующие в композиции, являются 2'-фторзамещенными, бис-3', 5' CDN и наиболее предпочтительно один или несколько 2', 2''- diF-Rp, Rp, бис-3', 5'CDN. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Данное изобретение относится к высокоактивным циклическим динуклеотидным (CDN) иммунным стимуляторам, которые активируют DC через недавно обнаруженный цитоплазматический рецептор, известный как STING (Stimulator of Interferon Genes - стимулятор генов интерферона). В частности, CDN по данному изобретению представлены в виде композиции, содержащей один или несколько циклических пуриновых динуклеотидов, индуцирующих человеческий STING-зависимую продукцию интерферона I типа, где циклические динуклеотиды пурина, присутствующие в композиции, являются 2'-фторзамещенными, бис-3', 5' CDN и наиболее предпочтительно один или несколько 2', 2''- diF-Rp, Rp, бис-3', 5'CDN.
Евразийское (21) 201791999 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2018.02.28
(22) Дата подачи заявки 2016.03.09
(51) Int. Cl.
A61K 39/12 (2006.01) A61K 39/39 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01)
(54) КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ АКТИВАЦИИ СИГНАЛИНГА, ЗАВИСИМОГО ОТ "ГЕНА СТИМУЛЯТОРА ИНТЕРФЕРОНА"
(31) 62/131,235
(32) 2015.03.10
(33) US
(86) PCT/US2016/021597
(87) WO 2016/145102 2016.09.15
(71) Заявитель:
АДУРО БАЙОТЕК, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Катибах Джордж Эдвин, Канн Дэвид, Сунг Леонард, Готье Келси, Гликман Лаура Хикс, Леонг Джастин, Макуэртер Сара М., Дубенски, мл.
Томас У. (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Данное изобретение относится к высокоактивным циклическим динуклеотидным (CDN) иммунным стимуляторам, которые активируют DC через недавно обнаруженный цитоплазматический рецептор, известный как STING (Stimulator of Interferon Genes - стимулятор генов интерферона). В частности, CDN по данному изобретению представлены в виде композиции, содержащей один или несколько циклических пуриновых динук-леотидов, индуцирующих человеческий STING-зависимую продукцию интерферона I типа, где циклические динуклеотиды пурина, присутствующие в композиции, являются 2'-фторзамещен-ными, бис-3', 5' CDN и наиболее предпочтительно один или несколько 2', 2''- diF-Rp, Rp, бис-3',
5'CDN.
_LJ_LL
LC условия: 2-50% ацетонитрил в 10 мМ ТЕАА - колонка 5 микрон
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-544569ЕА/072 КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ АКТИВАЦИИ СИГНАЛИНГА, ЗАВИСИМОГО ОТ
"ГЕНА СТИМУЛЯТОРА ИНТЕРФЕРОНА" [0001] Данная заявка испрашивает приоритет предварительной заявки Соединенных Штатов № 62/131,235, поданной 10 марта 2015 года, которая полностью включена в данное описание посредством ссылки.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Данная заявка содержит перечень последовательностей, который был представлен в формате ASCII через EFS-Web и полностью включен в данном документе посредством ссылки. Указанная копия ASCII, созданная 9 марта 2016, названа ANZ1004PCT_SeqListing.txt и составляет 22 килобайта по размеру. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Нижеследующее описание уровня техники по данному изобретению предоставляется исключительно для того, чтобы помочь читателю понять изобретение и не принято для описания или формирования предшествующего уровня техники данного изобретения.
[0004] Новое понимание механизмов, лежащих в основе иммунного ускользания, наряду с комбинированными схемами лечения, которые потенцируют эффективность терапевтической вакцинации - прямо или косвенно - путем комбинации с ингибиторами иммунной контрольной точки или другими видами терапии, послужило основой для разработки вакцин или иммунных модуляторов, которые могут вызывать или повышать эффективный адаптивный иммунный ответ, состоящий из опухолеспецифических СБ4+и СБ8+Т-клеток, специфичных к целевой злокачественной опухоли, что приводит к противоопухолевому ответу и клинической пользе. Как врожденная иммунная система, задействована целевыми лигандами, формирует развитие адаптивного ответа и поддается разработке вакцин и иммуномодуляторов (Reed et al., Trends Immunol., 30: 23-32, 2009; Dubensky and Reed, Semin. Immunol., 22: 155-61, 2010; Kastenmuller et al. , J. Clin. Invest., 121: 1782-1796, 2011; Coffman et al., Immunity, 33: 492-503, 2010).
[0005] Циклические динуклеотиды CDN циклический-ди-АМФ
(продуцируемые Listeria monocytogenes и другими бактериями) и
его аналоги циклический-ди-ГМФ и циклический-ГМФ-АМФ (цГАМФ)
распознаются клеткой-хозяином как патоген-ассоциированный
молекулярный паттерн (РАМР), которые связываются с рецептором
распознавания патогенов (PRR), известным как стимулятор генов
интерферона (STING). STING является адаптерным белком в
цитоплазме клеток-хозяев млекопитающих, который активирует TANK
связывающую киназу (ТВК1) -IRF3 и NF- к В, что приводит к
индукции IFN-р и других продуктов генов, которые выражено
активируют врожденный иммунитет. В данное время признано, что
STING является компонентом цитозольного контрольного пути
хозяина (Vance et al., 2009), который воспринимает инфекцию
внутриклеточными патогенами и в ответ индуцирует продуцирование
IFN-p, что приводит к развитию адаптивного защитного патоген-
специфического иммунного ответа, состоящего как из
антигенспецифических Т-клеток CD4 и CD8, так и патоген-
специфических антител. Примеры циклических пуриновых
динуклеотидов описаны, в частности, в: патентах США №№ 7709458 и
7592326; заявках на патент WO2007/054279, WO2014/093936 и
WO2014/189805; и Yan et al. , Bioorg. Med. Chem Lett. 18: 5631
(2008).
[0006] Сообщалось, что неохарактеризованный ген мыши со значительной структурной гомологией с каталитическим доменом олигоаденилат синтазы циклической ГМФ-АМФ-синтазы человека является ферментом, ответственным за продуцирование STING-связывающих CDN в клетках млекопитающих. Sun et al., Science 339(6121) : 786-91, 2013. Названная циклическая ГМФ-АМФ-синтаза (цГАС), этот фермент катализирует синтез цГАМФ из АТФ и ГТФ в присутствии ДНК. Этот цГАМФ затем функционирует как второй мессенджер, который связывается со STING и активирует его. Эти цГАС-продуцируемые CDN структурно отличались от продуцируемых бактериями CDN, поскольку они обладают необычной фосфодиэфирной связью. Таким образом, хотя продуцируемые бактериями CDN содержат бис-3', 5' связь между двумя нуклеотидами, CDN
млекопитающих содержат одну 2', 5' связь и одну 3', 5' связь или так называемую "смешанную связь" (ML) или неканонические CDN. Эти молекулы 2', 5'- 3', 5' связывают STING с нМ аффинностью, примерно в 300 раз лучше, чем бактериальный ц-ди-ГМФ.
[0007] Человеческий STING (hSTING) также имеет известные полиморфизмы, включая аллели, кодирующие гистидин в положении 232, которые являются рефракторными по отношению к бис-3', 5' (каноническим) CDN, но не 2', 5'-3', 5' (неканоническая, смешанная связь) CDN (Diner et al., Cell Reports 3, 1355-61, 2013; Jin et al., Genes and Immunity, 12: 263-9, 2011) . Сообщалось, что одинарные нуклеотидные полиморфизмы в гене hSTING влияют на чувствительность к каноническим CDN бактериального происхождения (Diner et al., 2013; Gao et al., Cell 154, 748-762, 2013; Conlon et al., J. Immunol. 190: 52165225, 2013). Сообщалось о пяти гаплотипах hSTING (WT, REF, HAQ, AQ и Q аллелях), которые различаются в положениях аминокислот 71, 230, 232 и 293 (Jin et al. , 2011; Yi et al. , PLOS One 8: E77846, 2013). Сообщалось, что клетки, экспрессирующие hSTING, плохо реагируют на стимуляцию бактериальными CDN цГАМФ, ц-ди-АМФ и ц-ди-ГМФ с бис- (3 ', 5') связями, но реагируют на эндогенно продуцируемый продукт цГАС, ML цГАМФ (Diner Et al., 2013). Таким образом, было высказано предположение, что молекулы 2', 5'-3', 5'представляют гораздо более сильные физиологические лиганды с точки зрения таргетирования hSTING (Zhang et al. , Mol. Cell. 51:226-35, 2013; Xiao and Fitzgerald, Mol. Cell 51: 135-39, 2013) .
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008] Целью данного изобретения является создание композиций и способов, которые модулируют иммунные реакции в ответ на заболевания. Еще одной целью изобретения является создание композиций и способов, которые обеспечивают циклические динуклеотидные аналоги пурина, которые проявляют улучшенные характеристики при использовании для активации STING млекопитающих, а предпочтительно человека. Еще одной
дополнительной целью изобретения является создание композиций и способов лечения рака.
[0009] В первом аспекте данное изобретение относится к композициям, содержащим:
один или несколько моно- или дифторзамещенных бис-3', 5'-циклические пуриновые динуклеотиды ("моно- или ди-F-CDN соединения") или пролекарства, фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или их фармацевтически приемлемые гидраты, которые связываются со стимулятором генов интерферона ("STING") и стимулируют STING-зависимую выработку интерферона I типа при концентрациях, по меньшей мере, в 10 раз ниже, чем один или более (и предпочтительно каждый из) из бис-3', 5' ц-ди-ГМФ (т.е. З'З '- (G) (G) ) , бис-3', 5' ц-ди-АМФ (т. е. З'З' - (А) (А) или CDA) или бис-3', 5' ц-ГМФ-АМФ (т.е. З'З '-
(G) (А) или цГАМФ) при измерении с использованием, по меньшей мере, одного человеческого аллеля STING. Предпочтительно, это измеряется с использованием аллеля hSTING (REF), описанного в Ishikawa, Н. and Barber, GN (2008). Nature 455, 614-618, белковой последовательностью которого является эталонная последовательность NCBI NP_938023 (SEQ ID NO: 1; Фиг. б) . Это наиболее предпочтительно измеряется in vitro с использованием клеточной линии млекопитающих (например, клеток НЕК2 93Т), которая не экспрессирует функциональный STING эндогенно, но была модифицирована, чтобы стабильно экспрессировать аллель hSTING
(REF), как описано ниже (например, см. Пример 12).
[0010] В связанном аспекте данное изобретение относится к композициям, содержащим:
одно или несколько моно- или ди-Г-СБЫ-соединений, которые связывают по меньшей мере один человеческий белковый продукт аллеля STING с аффинностью, по меньшей мере, в 10 раз выше, чем один или более из бис-3', 5' ц-ди-ГМФ (т.е. З'З '- (G) (G) ) , бис-3', 5' ц-ди-АМФ (т.е. З'З' - (А) (А) или CDA) или бис-3 ', 5' ц-ГМФ-АМФ (т.е. З'З '- (G) (А) или цГАМФ при измерении с использованием по меньшей мере одного человеческого белка STING. Предпочтительно, это измеряется с использованием выделенного
белка, кодируемого аллелем hSTING (REF), описанным {Ishikawa,
Н., and Barber, GN (2008). Nature 455, 614-618) , белковой
последовательностью которого является эталонная
последовательность NCBI NP_938023 с использованием такого метода, как дифференциальная флуориметрия сканирования, как описано ниже (например, см. Пример 11).
[ООН] Как описано ниже, замещение одного или обоих свободных 2'-гидроксилов фтором на бис-3', 5'-циклические пуриновые динуклеотиды по данному изобретению существенно улучшает их связывание с человеческим STING. Ряд 2'-фторзамещенных CDN находит применение в данном изобретении. Предпочтительные 2'-фторзамещенные CDN включают, но не ограничиваются ими, те, которые получены путем замещения одного или обоих 2'-гидроксилов на ц-ди-АМФ, ц-ди-ГМФ, ц-ди-ИМФ, ц-АМФ-ГМФ, ц-АМФ-ИМФ, ц-ГМФ-ИМФ и аналоги, или пролекарства, или их фармацевтически приемлемые соли. Этот список не предназначен для ограничения. Дополнительные аспекты и варианты реализации моно-или ди-Г-СБЫ-соединений описаны ниже.
[0012] Во втором аспекте данное изобретение относится к моно- или дифторзамещенному 3', 5'-3', 5'-циклическому пуриндинуклеотидному (моно- или ди-F-CDN) -соединению формулы I: R3
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где каждый R1 и R2 независимо представляют собой пурин; каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н, ОН
или F, при условии, что один или оба R3 и R4 представляют собой F; и каждый R5 и R6 независимо представляет собой ОН или SH.
[0013] В некоторых вариантах реализации второго аспекта каждый R5 и R6 представляет собой SH. В предпочтительных вариантах реализации, когда каждый R5 и R6 представляет собой SH, композиции содержат один или несколько практически простых стереоизомеров Sp,Sp, Rp,Rp, Sp,Rp или Rp,Sp. В некоторых вариантах реализации композиции содержат один или несколько практически простых стереоизомеров Rp,Rp.
[0014] Пурины R1 и R2, которые могут найти применение в описанных в данном документе соединениях, имеют следующие общие структуры:
где:
каждый R7 или R11 является независимо CR или N ; R8 является С (R) 2, О, или -NR ;
каждый R9, RIO, R12, R13 или R14 является независимо выбранным из группы, состоящей из водорода, галогена, CN, OR, SR, N(R)2, C(0)R, C02R, S(0)R, S(0)2R, C(0)N(R)2, S02N(R)2, 0C(0)R, N(R)C(0)R, N(R)N(R)2, C=N0R, N (R) С (0) N (R) 2, N (R) S02N (R) 2, N(R)S02R, 0C(0)N(R)2 или необязательно замещенным заместителем, выбранным из группы, состоящей из Ci i2 алифатического, фенильного, 3 7-членного насыщенного или частично ненасыщенного моноциклического карбоциклического кольца, 7 10-членного насыщенного или частично ненасыщенного бициклического карбоциклического кольца, 3 7-членного насыщенного или частично ненасыщенного гетероциклического кольца, имеющего 1 2 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, 7 10-членного насыщенного или частично ненасыщенного бициклического гетероциклического кольца, имеющего 1 3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы,
и 5 б членного гетероарильного кольца, имеющего 1 3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, где каждый R независимо представляет собой необязательно замещенный заместитель, выбранный из группы, состоящей из С i 12 алифатического, фенильного, 3 7-членного насыщенного или частично ненасыщенного моноциклического карбоциклического кольца, 7 10-членного насыщенного или частично ненасыщенного бициклического карбоциклического кольца, 3 7-членного насыщенного или частично ненасыщенного гетероциклического кольца, имеющего 1 2 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, 7 10-членного насыщенного или частично ненасыщенного бициклического гетероциклического кольца, имеющего 1 3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, и 5 б-членного гетероарильного кольца, имеющего 1 3 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы, или две R-группы на одном и том же азоте взяты вместе с их промежуточными атомами с образованием необязательно замещенного 3 7-членного насыщенного, частично ненасыщенного или гетероарильного кольца, имеющего 1 4 гетероатома, независимо выбранных из азота, кислорода или серы. Каждое С 1 12 алифатическое, фенильное, 3 7-членное насыщенное или частично ненасыщенное моноциклическое карбоциклическое кольцо, 7 10-членное насыщенное или частично ненасыщенное бициклическое карбоциклическое кольцо, 3 7-членное насыщенное или частично ненасыщенное гетероциклическое кольцо, 7 10-членное насыщенное или частично ненасыщенное бициклическое гетероциклическое кольцо и 5 б-членное гетероарильное кольцо или две R-группы на одном и том же атоме азота, взятые вместе для того, чтобы образовать 3 7-членное насыщенное, частично ненасыщенное или гетероарильное кольцо, необязательно замещено от 1 до 5, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2 или 1 независимо выбранными заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, CN, NO2, ОН,=0, NH2, Ci 6-алкил, Ci б алкокси, С 1 б- алкиламино и С i в ди алкиламино.
[0015] В некоторых вариантах реализации второго аспекта и их вариантов реализации каждый из R1 и R2 независимо выбран из группы, состоящей из аденина, гуанина, изогуанина, гипоксантина
и ксантина или его аналогов. В некоторых вариантах реализации каждый из R1 и R2 независимо представляет собой аденин или гуанин. В некоторых вариантах реализации один из R1 или R2 представляет собой аденин, а другой из R1 или R2 представляет собой гуанин; каждый из R1 и R2 представляет собой аденин; или каждый из R1 и R2 являются гуанинами или в каждом случае или их аналогами. В предпочтительном варианте реализации R1 и R2 независимо представляют собой аденин или гуанин, при условии, что R1 и R2 не являются как гуанином, так и его аналогами.
[0016] В некоторых вариантах реализации второго аспекта и их вариантов реализации каждый R5 и R6 представляет собой SH и R1 и R2 являются независимо:
R16
"1ST N" Г N
V Рибоза или 1' Рибоза / где R15 и
R16 независимо представляют собой Н или C(0)R ', где R' представляет собой С i_6 алкил или фенил. В некоторых вариантах реализации R15 представляет собой Н или С (О) -изопропил и R16 представляет собой Н или С (О) фенил.
[0017] В некоторых вариантах реализации второго аспекта и их вариантов реализации соединение формулы I выбрано из группы,
состоящей
из:
или пролекарства, фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или его фармацевтически приемлемого гидрата.
[0018] В предпочтительных вариантах реализации второго аспекта и их вариантов реализации каждый из R3 и R4 представляет собой F. Это упоминается в данном документе как 2', 2''- диБ или ди-2'F.
[0019] В некоторых вариантах реализации одно или несколько соединений представляют собой 2', 2" диБ Rp,Rp циклические пуриновые динуклеотиды (таким образом, в которых каждый R5 и R6 представляет собой SH) , включая, но без ограничения, 2', 2" диБ Rp,Rp ц ди АМФ (также называемый в данном документе 2', 2" диБ R,R CDA или 3'3'-RR (2'F A) (2'F А)), 2', 2" диБ Rp,Rp ц ди ГМФ (также называемый в данном документе 2', 2" диБ R,R CDG или 3'3'-RR (2'F G) (2'F G) ) , 2', 2" pyiF Rp,Rp ц ди ИМФ (также называемый в данном документе 2', 2" pyiF R,R CDI или 3'3'-RR (2'F I) (2'F I)), 2',2" pyiF Rp,Rp ц АМФ ГМФ (также называемый в данном документе 2', 2" pyiF R,R цГАМФ или З'З' RR (2'F G) (2'F А)), 2', 2" pyiF Rp,Rp ц АМФ ИМФ (также называемый в данном документе 2', 2" pyiF R,R цИАМФ или З'З'-RR (2'F I) (2'F А)), 2', 2" AHF Rp,Rp ц ГМФ ИМФ (также называемый в данном документе 2', 2" диГ R, R цГИМФ или 3'3'-RR (2'F G) (2'F I)) и их аналоги.
[0020] В предпочтительном варианте реализации второго аспекта и любых его вариантах соединение не является одним из следующих:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где:
R17 и R18 независимо представляют собой гуанин или аденин, связанный со структурой через положение N9, где б положение амина аденина необязательно замещено бензоильной группой и где 2 положение амина гуанина необязательно замещено изобутирильной группой;
R19 и R2 0 независимо представляют собой ОН или F, при условии, что по меньшей мере один из R19 и R2 0 представляет собой F.
[0022] В первом варианте реализации третьего аспекта соединение формулы II представляет собой соединение формулы На, соединение формулы lib или соединение формулы Не:
ИЛИ
или пролекарство, фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат, где R17, R18, R19 и R2 0 являются такими, как определено для формулы II.
[0023] Во втором варианте реализации третьего аспекта или его первого варианта реализации R17 и R18 независимо представляют собой аденин или гуанин. В некоторых вариантах реализации R17 и R18 независимо представляют собой аденин или гуанин, при условии, что R17 и R18 не являются гуанином. В некоторых вариантах реализации R17 и R18 оба являются аденинами. В некоторых вариантах реализации R17 и R18 оба являются гуанинами. В некоторых вариантах реализации один из R17 и R18 представляет собой аденин, а другой из R17 и R18 представляет собой гуанин.
[0024] В некоторых вариантах реализации третьеого и первого или второго их вариантов реализации один из R19 и R2 0 представляет собой F, а другой из R19 и R20 представляет собой ОН. В некоторых вариантах реализации R19 и R2 0 оба представляют
собой F. В некоторых вариантах реализации R19 и R2 0 оба представляют собой F, а соединение представляет собой соединение формулы На.
[0025] В некоторых вариантах реализации третьего аспекта моно- или ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или его фармацевтически приемлемого гидрата.
[0026] В некоторых вариантах реализации третьего аспекта моно- или ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
0 л О-
-N ° И N
или пролекарства, фармацевтически приемлемой соли,
фармацевтически приемлемого сольвата или его фармацевтически
приемлемого гидрата.
[0027] В четвертом аспекте данное изобретение относится к ди-Г-СБЫ-соединению формулы III:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где R21 и R22 независимо представляют собой гуанин или аденин, связанный со структурой через положение N9.
[0028] В первом варианте реализации четвертого аспекта соединение формулы III представляет собой соединение формулы II1а или соединение формулы IIlb:
ИЛИ
или пролекарство, его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или фармацевтически приемлемый гидрат, где R21 и R22 являются такими, как определено для формулы III.
[0029] Во втором варианте реализации четвертого аспекта или его первого варианта реализации R21 и R22 независимо представляют собой гуанин или аденин, при условии, что R21 и R22 оба не являются гуанинами. В некоторых вариантах реализации R21 и R22 оба являются аденинами. В некоторых вариантах реализации R21 представляет собой аденин и R22 представляет собой гуанин.
[0030] В некоторых вариантах реализации четвертого аспекта или в первом или втором вариантах реализации это соединение представляет собой соединение формулы Ша.
[0031] В некоторых вариантах реализации четвертого аспекта ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0032] В некоторых вариантах реализации четвертого аспекта ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0033] В некоторых вариантах реализации четвертого аспекта ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0034] В некоторых вариантах реализации четвертого аспекта ди-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0035] В пятом аспекте данное изобретение относится к F-CDN-соединению формулы IV:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где:
R2 3 и R2 4 независимо представляют собой гуанин или аденин, связанные со структурой через положение N9; а также
один из R25 и R2 6 представляет собой ОН, а другой из R25 и R2 6 представляет собой F
[0036] В первом варианте реализации пятого аспекта соединение формулы IV представляет собой соединение формулы IVa, соединение формулы IVb или соединение формулы IVc:
ИЛИ
ИЛИ
пролекарство,
фармацевтически
приемлемую
соль,
фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат, где R2 3, R2 4, R2 5 и R2 6 являются такими, как определено для формулы IV.
[0037] Во втором варианте реализации пятого аспекта или его первого варианта реализации R23 и R24 независимо представляют собой аденин или гуанин при условии, что R2 3 и R2 4 оба не являются гуанинами. В некоторых вариантах реализации R2 3 и R2 4 оба являются аденинами. В некоторых вариантах реализации один из R23 и R24 представляет собой аденин, а другой из R23 и R24 представляет собой гуанин.
[0038] В некоторых вариантах реализации пятого аспекта или в его первом или втором вариантах реализации это соединение представляет собой соединение формулы IVa.
[0039] В некоторых вариантах реализации пятого аспекта моно-F-CDN соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0040] В шестом аспекте данное изобретение относится к моно- или ди-Б-циклическому ди-аденин-соединению формулы V:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где:
R2 7 и R2 8 независимо представляют собой ОН или F, при условии, что по меньшей мере один из R27 и R28 представляет собой F; а
R2 9 и R3 0 независимо представляют собой Н или бензоил.
[0041] В первом варианте реализации шестого аспекта соединение формулы V представляет собой соединение формулы Va или соединение формулы Vb:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат, где R2 7, R2 8, R2 9 и R3 0 являются такими, как определено для формулы V.
[0042] Во втором варианте реализации шестого аспекта или его первого варианта реализации R29 и R30 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R29 и R30 оба представляют собой бензоил. В некоторых вариантах реализации один из R2 9 и R30 представляет собой бензоил, а другой из R29 и R30 представляет собой Н.
[0043] В некоторых вариантах реализации шестого аспекта и первого или второго его вариантов реализации R27 и R28 оба представляют собой F. В некоторых вариантах реализации один из R27 и R28 представляет собой F, а другой из R27 и R28 представляет собой ОН.
[0044] В некоторых вариантах реализации шестого аспекта R27 и R28 оба представляют собой F, a R29 и R30 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы Va, R27 и R28 оба представляют собой F, a R29 и R30 оба представляют собой Н.
[0045] В некоторых вариантах реализации шестого аспекта моно- или ди-F циклическое ди-аденин-соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0046] В некоторых вариантах реализации шестого аспекта моно- или ди-F циклическое ди-аденин-соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0047] В седьмом аспекте данное изобретение относится к моно- или ди-F циклическому ди-гуанин соединению формулы VI:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где:
R31 и R32 независимо представляют собой ОН или F, при условии, что по меньшей мере один из R31 и R32 представляет собой F;
R33 и R34 независимо представляют собой Н или бутирил.
[0048] В первом варианте реализации седьмого аспекта соединение формулы VI представляет собой соединение формулы Via или соединение формулы VIb:
или пролекарство, фармацевтически приемлемую соль,
фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически
приемлемый гидрат, где R31, R32, R33 и R34 являются такими, как
определено для формулы VI.
[0049] Во втором варианте реализации седьмого аспекта или его первого варианта реализации R33 и R34 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R33 и R34 оба представляют собой бутирил. В некоторых вариантах реализации один из R33 и R34 представляет собой бутирил, а другой из R33 и R34 представляет собой Н.
[0050] В некоторых вариантах реализации седьмого аспекта и первого или второго его вариантов реализации R31 и R32 оба представляют собой F. В некоторых вариантах реализации один из R31 и R32 представляет собой F, а другой из R31 и R32 представляет собой ОН.
[0051] В некоторых вариантах реализации шестого аспекта R31 и R32 оба представляют собой F, a R33 и R34 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы Via, R31 и R32 оба представляют собой F, a R33 и R34 оба представляют собой Н.
[0052] В некоторых вариантах реализации седьмого аспекта моно- или ди-F циклическое ди-гуанин-соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0053] В восьмом аспекте данное изобретение относится к моно- или ди-Б-циклическому гуанин и аденин-динуклеотидному соединению формулы VII:
или пролекарству, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемому сольвату или его фармацевтически приемлемому гидрату, где:
R35 и R3 6 независимо представляют собой ОН или F, при условии, что по меньшей мере один из R35 и R3 6 представляет
собой F;
R37 представляет собой Н или бензоил; а также
R3 8 представляет собой Н или бутирил.
[0054] В первом варианте реализации восьмого аспекта
соединение формулы VII представляет собой соединение формулы
ИЛИ
или пролекарство, фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат, где R35, R36, R37 и R38 являются такими, как определено для формулы VII.
[0055] Во втором варианте реализации восьмого аспекта или его первого варианта реализации R37 и R38 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R37 представляет собой бензоил, a R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R37 представляет собой Н и R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R37 представляет собой бензоил и R38 представляет собой Н.
[0056] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта и первого или второго его вариантов реализации R35 и R36 оба представляют собой F. В некоторых вариантах реализации один из R35 и R36 представляет собой F, а другой из R35 и R36 представляет собой ОН. В некоторых вариантах реализации R35 и R36 оба представляют собой F, а соединение представляет собой соединение формулы Vila.
[0057] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта и первого варианта реализации R35 и R36 оба представляют собой F,
a R37 и R38 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 и R36 оба представляют собой F, R37 представляет собой Н, a R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 и R36 оба представляют собой F, R37 представляет собой бензоил, a R38 представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 и R36 оба являются F, R37 представляет собой бензоил и R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 и R36 оба представляют собой F, R37 и R38 оба представляют собой Н, а соединение представляет собой соединение формулы Vila.
[0058] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта и его первого варианта реализации R35 представляет собой F, R36 представляет собой ОН, a R37 и R38 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой F, R3 6 представляет собой ОН, R37 представляет собой Н, a R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой F, R36 представляет собой ОН, R37 представляет собой бензоил, a R38 представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой F, R3 6 представляет собой ОН, R37 представляет собой бензоил и R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой F, R36 представляет собой ОН, R37 и R38 оба представляют собой Н, а соединение представляет собой соединение формулы Vila.
[0059] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта и его первого варианта реализации R35 представляет собой ОН, R36 представляет собой F, a R37 и R38 оба представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой ОН, R3 6 представляет собой F, R37 представляет собой Н, a R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой ОН, R36 представляет собой F, R37 представляет собой бензоил, a R38 представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой ОН, R3 6 представляет собой F, R37 представляет собой бензоил и R38 представляет собой бутирил. В некоторых вариантах реализации R35 представляет собой ОН, R36 представляет собой F, R37 и R38 оба
представляют собой Н, а соединение представляет собой соединение формулы Vila.
[0060] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта
моно- или ди-F циклическое гуанин и аденин-динуклеотидное
соединение выбрано из группы, состоящей из:
или пролекарства, фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или его фармацевтически приемлемого гидрата.
[0061] В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта моно- или ди-F циклическое гуанин и аденин-динуклеотидное соединение выбрано из группы, состоящей из:
-О""".
HS""1 ' УЛ.,
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
[0062] В девятом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR-(2'FA) (2'FA), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0063] В десятом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RS-(2'FA) (2'FA), имеющее структуру:
,.N
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0064] В одиннадцатом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-
RR- (2'FG) (2'FA), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0065] В двенадцатом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RS- (2'F-G) (2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0066] В тринадцатом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0067] В четырнадцатом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RS- (2'F-G) (2'F-G), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0068] В пятнадцатом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-BzA), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0069] В шестнадцатом аспекте предусмотрено соединение 3'3'- RS- (2'F-iBuG) (2'F-BzA), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0070] В семнадцатом аспекте предусмотрено соединение 3'3'- RR- (2'F-BzA) (2'F-BzA), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0071] В восемнадцатом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0072] В девятнадцатом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR-(A)(2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0073] В двадцатом аспекте предусмотрено соединение З'З'-RS-(А)(2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0074] В двадцать первом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR-(2'F-G)(А), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0075] В двадцать втором аспекте предусмотрено соединение 3'3'-SR-(2'F-G)(А), имеющее структуру:
Н21
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0076] В двадцать третьем аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR-(G)(2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0077] В двадцать четвертом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RS-(G)(2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0078] В двадцать пятом аспекте предусмотрено соединение З'З'-(2'F-G) (2'F-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0079] В двадцать шестом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RR- (2'PF-A) (2'PF-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0080] В двадцать седьмом аспекте предусмотрено соединение 3'3'-RS- (2'PF-A) (2'PF-A), имеющее структуру:
или пролекарство, его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
[0081] В любом из моно- или ди-F CDN соединений по любому из вышеуказанных аспектов и вариантов их реализации, структура предпочтительно представляет собой тиофосфат в каждом из фосфатных линкеров (например, R5 и R6 или формула I представляют собой SH), более предпочтительно, где стереохимическая структура каждого фосфора представляет собой R и соединение является практически чистым.
[0082] В некоторых вариантах реализации любого из вышеуказанных аспектов и вариантов реализации моно- или ди-F-CDN соединения включают пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты, включая фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты любых его пролекарств и включая любые фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты любых их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединения включают их фармацевтически приемлемые сольваты, фармацевтически приемлемые гидраты или фармацевтически приемлемые соли. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F CDN соединение представляет собой его фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемый сольват или фармацевтически приемлемый гидрат. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединение представляет собой его фармацевтически приемлемую соль.
[0083] В некоторых вариантах реализации любого из
вышеуказанных аспектов и вариантов реализации моно- или ди-F-CDN
соединения включают их фармацевтически приемлемые соли. В
некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемая соль
выбрана из группы, состоящей из натрия, калия, кальция, магния,
цинка, алюминия, аммония, диэтиламина, изопропиламина, оламина,
бензатина, бенатамина, трометамина (2-амино-2-
(гидроксиметил)пропан-1,3-диол), морфолина, эпоамина,
пиперидина, пиперазина, пиколина, дициклогексиламина, N,N'-
дибензилэтилендиамина, 2-гидроксиэтиламина, три-(2-
гидроксиэтил)амина, хлорпрокаина, холина, деанола, имидазола, диэтаноламина, этилендиамина, меглумина (N-метилглюкамин), прокаина, дибензилпиперидина, дегидроабиетиламина, глюкамина, коллидина, хинина, хинолона, эрбумина, лизина и соли аргинина.
[0084] В одном варианте реализации любого из вышеуказанных аспектов или их вариантов реализации моно- или ди-F-CDN соединения представлены в виде их динатриевой соли. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединения представлены в виде их динатриевой соли или их фармацевтически приемлемых сольватов или их фармацевтически приемлемых гидратов.
[0085] В некоторых вариантах реализации любого из вышеуказанных аспектов и их вариантов реализации соединение моно- или ди-F-CDN более активно в клеточном анализе, который
измеряет индукцию зависимой от STING продукции IFN-|3 человека по сравнению с одним или несколькими эталонными соединениями. В некоторых вариантах реализации одно или несколько эталонных соединений выбраны из группы, состоящей из 3'3'-(G)(G) (т.е. циклического [G (З',5')р G(3',5')p]), 3'3'-(А)(А) (т.е. циклического [А(3',5') р A(3',5')p]),3'3'-(G)(А) (т.е. циклического [G(3',5')p А(3',5')р]), З'З'-RR (А) (А) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [А (3',5') р А(3',5') р] ) , З'З' -RR- (G) (G) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [G(3',5')p G(3',5')p]) и 3' 3'-RR (G) (А) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [G (З',5')р А(3',5')р]). В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F CDN соединение представляет собой моно- или ди-F-RR-CDN соединение, а одно или несколько эталонных соединений выбраны из группы, состоящей из З'З ' RR (А) (А), 3'3 ' RR- (G) (G) и З'З ' RR (G), (А) . В некоторых вариантах эталонное соединение представляет собой ди-ОН-эталонное соединение. В некоторых вариантах реализации клеточный анализ представляет собой анализ hPBMC, например анализ, как описано в примере 13. В некоторых вариантах реализации клеточный анализ представляет собой анализ ТНР1, например анализ, как описано в примере 14. В предпочтительном
варианте реализации клеточный анализ проводят без добавления агента, который усиливает поглощение соединения моно- или ди-F-CDN или эталонного соединения с помощью анализирующих клеток, или агента, который усиливает проницаемость моно- или ди- F CDN или эталонного соединения к клеткам анализа. В некоторых вариантах реализации клеточный анализ представляет собой клеточный анализ ТНР1, выполненный без добавления агента, который усиливает поглощение моно- или ди-F-CDN соединения или эталонного соединения с помощью клеток для анализа, или агента, который усиливает проницаемость моно- - или ди-F-CDN соединения или контрольного соединения в аналитические клетки, в которых моно- или ди-F-CDN соединение имеет ЕС50 менее 40 мкМ, менее 30 мкМ, менее 2 0 мкМ, менее 15 мкМ или менее 10 мкМ. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединение имеет ЕС50 менее 4 0 мкМ, менее 3 0 мкМ, менее 2 0 мкМ, менее 15 мкМ или менее 10 мкМ в клеточном анализе, который измеряет индукцию зависимого от человеческого STING продуцирования IFN-|3, где клеточный анализ проводят без добавления агента, который усиливает поглощение соединения моно- или ди-F-CDN с помощью клеток для анализа, или агента, который усиливает проницаемость моно- или ди-F-CDN в аналитические клетки. В одном варианте реализации клеточный анализ представляет собой клеточный анализ ТНР1, как описано в примере 14, при этом анализ проводят без добавления дигитонина. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединение имеет ЕС50, который меньше ЕС50 одного или нескольких эталонных соединений, выбранных из группы, состоящей из З'З '- (G) (G) (т.е. циклический [G (3', 5' ) р G (3 ', 5') р]), З'З '- (А) (А) (т.е. циклический [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р]) , З'З '- (G) (А) (т.е. циклический [G (3', 5' ) рА (3 ', 5') р]), З'З' -RR (А) (А) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р] ) , 3' 3'-RR- (G) (G) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [G (3', 5' ) р G (3 ', 5') р]) и З'З'-RR (G) (А) (т.е. дитио ( Я р, Яр) -циклический [G (3', 5' ) рА (3 ', 5') р] ) в клеточном анализе, который измеряет индукцию зависимого от STING продуцирования IFN-|3 человека, предпочтительно, при этом
клеточный анализ проводят без добавления агента, который усиливает поглощение моно- или ди- F-CDN или эталонного соединения с помощью клеток для анализа, или агента, который усиливает проницаемость моно- или ди F CDN или эталонного соединения в клетки для анализа. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединение имеет ЕС50, которая меньше, чем ЕС50 ди-ОН-эталонного соединения в клеточном анализе ТНР1, как описано в примере 14, предпочтительно, при этом анализ проводят без добавления дигитонина. В некоторых вариантах реализации моно- или ди F CDN соединение имеет ЕС50, которая по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в б раз, по меньшей мере в 7 раз или по меньшей мере в 8 раз ниже чем ЕС50 контрольного соединения ди-ОН в клеточном анализе ТНР1, как описано в примере 14, при этом анализ проводят без добавления дигитонина.
[0086] Как описано ниже, циклическая пуриндинуклеотидная композиция в соответствии с настоящим изобретением, в которой одно или несколько соединений моно- или ди-F-CDN присутствуют в композиции, могут индуцировать STING-зависимое образование интерферона I типа по меньшей мере в 2 раза, и более предпочтительно в 5 раз, или 10 раз или более, при концентрациях, по меньшей мере, в 10 раз, в 50 раз или в 100 раз ниже, чем один или более из бис-3 ', 5' ц-ди-ГМФ (т.е. З'З (G)
(G) ) , бис-3 ', 5' ц-ди-АМФ (т.е. З'З '- (А) (А) или CDA) или бис-3', 5 'ц-ГМФ -АМФ (т.е. З'З '- (G) (А) или цГАМФ) (что означает отсутствие замены (замен) 2'-F). Как отмечено в данном документе, наиболее предпочтительно, чтобы STING представлял собой человеческий STING. В предпочтительных вариантах реализации композиция, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN в соответствии с настоящим изобретением, активирует человеческий STING, а соответствующий bis-3 ', 5' циклический пуриновый динуклеотид (имеющий одинаковые пурины и не имеющий 2'-F замену
(замены)) нет.
[0087] Как также описано ниже, предусмотрена композиция, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение в соответствии с
настоящим изобретением, где одно или несколько соединений моно-или ди-F-CDN, присутствующих в композиции, связывают STING с аффинностью не менее чем в10 раз, в 50 раз или в 100 раз выше одного или более из бис-3 ', 5' ц-ди-ГМФ (т.е. З'З '- (G) (G) ) , бис-3', 5 ' ц-ди-АМФ (т.е. З'З '- (А) (А) или CDA) или бис-3', 5 'ц-ГМФ-АМФ (т.е. З'З' - (G) (А) или цГАМФ) (что означает отсутствие замены (замен) 2'-F). Как отмечено в данном документе, наиболее предпочтительно, чтобы STING представлял собой человеческий STING. В предпочтительных вариантах реализации циклическая пуриндинуклеотидная композиция в соответствии с настоящим изобретением связывает STING с аффинностью, по меньшей мере, в 10 раз, в 50 раз или в 100 раз выше, чем соответствующий бис- (3 ', 5') циклический пуриновый динуклеотид ( имеющий одинаковые пурины и не содержащий 2'-F замену (замены)).
[0088] В некоторых вариантах реализации любого из вышеуказанных аспектов и их вариантов реализации моно- или ди-F-CDN соединение связывает по меньшей мере один человеческий белковый продукт аллеля STING (включая любой из WT, REF, HAQ, AQ и Q-аллелей) с большей афинностью, чем одно или более ссылочных соединений, выбранных из группы, состоящей из З'З '- (G) (G) (т.е. циклический [G (3', 5' ) р G (3 ', 5') р]), З'З '- (А) (А) (т.е. циклический [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р]) , З'З '- (G) (А) (т.е. циклический [G (3', 5' ) рА (3 ', 5') р]), З'З' -RR (А) (А) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р] ) , 3' 3'-RR- (G) (G) (т.е. дитио ( Яр, Яр) -циклический [G (3', 5' ) р G (3 ', 5') р]) и З'З'-RR (G) (А) (т.е. дитио ( Я р, Я р) -циклический [G (3', 5' ) р А (3 ', 5') р] ) при измерении с использованием по меньшей мере одного человеческого белка STING. В некоторых вариантах реализации любого из вышеуказанных аспектов и их вариантов реализации моно- или ди F CDN соединение связывает, по меньшей мере, один человеческий белковый продукт аллеля STING с аффинностью больше, чем контрольное соединение ди-ОН. Предпочтительно это измеряется с использованием выделенного белка, кодируемого аллелями hSTING (WT) , hSTING (HAQ) или hSTING (REF) {Ishikawa, H. , and Barber,
GN (2008). Nature 455, 614-618; Yi et al. , 2013, PLos One, Oct 21, 8 (10) : е7784б; белковая последовательность аллеля REF представляет собой эталонную последовательность NCBI NP_938023), используя метод, такой как дифференциальная сканирующая флуориметрия (DSF) , как описано ниже и в примере 11.
[0089] В двадцать восьмом аспекте данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений, как описано во втором -двадцать седьмом аспектах илюбых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты и носитель для доставки, который усиливает поглощение клеток и/или стабильность соединения. В некоторых вариантах реализации носитель для доставки содержит один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из адъювантов, липидов, липосом, мультиламеллярных липидных везикул со сшивками между липидными бислоями, биоразлагаемых наночастиц или микрочастиц на основе поли (D, L-молочно-ко-гликолевой кислоты) [PLGA] или на основе поли ангидрида, а также липидные бислои, нанесенные на нанопористые частицы.
[0090] В двадцать девятом аспекте данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько моно- или ди-Р-СБЫ-соединений, как описано во втором -двадцать седьмом аспектах илюбых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты и фармацевтически приемлемый наполнитель.
[0091] В первом варианте реализации двадцать девятого аспекта фармацевтическая композиция не включает агент, который усиливает клеточную проницаемость для одного или нескольких моно- или ди F-CDN соединений.
[0092] Во втором варианте реализации двадцать девятого аспекта фармацевтическая композиция не включает агент, который
усиливает клеточное поглощение одного или нескольких моно- или ди-Г-СБЫ-соединений.
[0093] В третьем варианте реализации двадцать девятого аспекта фармацевтическая композиция дополнительно содержит носитель для доставки, который усиливает поглощение клеток и/или стабильность соединения. В некоторых вариантах реализации носитель для доставки содержит один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из адъювантов, липидов, липосом, мультиламеллярных липидных везикул со сшивками между липидными бислоями, биоразлагаемых наночастиц или микрочастиц на основе поли (D, L-молочно-ко-гликолевой кислоты) [PLGA] или на основе поли ангидрида, а также липидные бислои, нанесенные на нанопористые частицы.
[0094] В некоторых вариантах реализации двадцать восьмого аспекта и его вариантов реализации или двадцать девятого аспекта и первого, второго или третьего вариантов реализации фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных фармацевтически активных компонентов, выбранных из группы, состоящей из ингибитора иммунной контрольной точки (например, CTLA-4, PD-1, Tim 3, Vista, BTLA, LAG-3 и антагонистов пути TIGIT; блокирующих агетов пути PD-1; ингибиторов PD-L1; включая без ограничения анти-PD-l антитела ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб; PD-1 ингибитор АМФ-224; антитело против CTLA-4 ипилимумаб; и антитела против PD-L1 BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 или авелумаб); агониста TLR
(например, CpG или монофосфориловый липид А) ; инактивированных или аттенуированных бактерий, которые вызывают врожденный иммунитет (например, инактивированные или ослабленные Listeria monocytogenes); композиции, которая опосредует врожденную иммунную активацию через Toll-подобные рецепторы (TLR), через
(NOD) подобные рецепторы (NLR), I-подобные рецепторы на основе
гена (RIG), индуцируемого ретиноиновой кислотой (RLR), через
рецепторы лектина С-типа (CLR) или через ассоциированные с
патогенами молекулярные структуры (РАМР); и
химиотерапевтического агента. В некоторых вариантах реализации ингибитор иммунной контрольной точки выбран из группы, состоящей
из антагониста пути CTLA-4, антагониста пути PD-1, антагониста пути Tim-З, антагониста пути Vista, антагониста пути BTLA, антагониста пути LAG 3 и антагониста пути TIGIT. В некоторых вариантах реализации ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой антитело против PD-1, антитело против PD-L1, антитело против CTLA-4, антитело против TIM-З, антитело против BTLA или антитело анти- LAG-3. В некоторых вариантах реализации ингибитор иммунной контрольной точки выбран из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, пидилизумаба, АМР-224, ипилимумаба, BMS 936559, MPDL3280A, MEDI4736 и авелумаба. В некоторых вариантах реализации агонист TLR представляет собой CpG или монофосфорильный липид А.
[0095] В некоторых вариантах реализации двадцать восьмого
аспекта или двадцать девятого аспекта и любого из вышеуказанных
их вариантов реализации фармацевтическая композиция
дополнительно содержит инактивированную опухолевую клетку, которая экспрессирует и секретирует один или несколько цитокинов, которые стимулируют индукцию, рекрутирование и/или созревание, или которая экспрессирует и секретирует один или несколько белков теплового шока, включая слитые белки gp96-Ig. В некоторых вариантах реализации один или более цитокинов выбраны из группы, состоящей из GM-CSF, CCL20, CCL3, IL-12p70 и FLT-3-лиганда. В некоторых вариантах реализации опухолевая клетка инактивируется путем обработки излучением. В некоторых вариантах реализации один или более цитокинов выбраны из группы, состоящей из GM-CSF, CCL20, CCL3, IL-12p70 и FLT-3-лиганда, а опухолевая клетка инактивируется путем обработки излучением. В некоторых вариантах реализации инактивированная опухолевая клетка экспрессирует и секретирует слитый белок gp96-Ig.
[0096] В некоторых вариантах реализации двадцать восьмого аспекта или двадцать девятого аспекта и любого из вышеуказанных вариантов реализации фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или несколько антигенов, выбранных для целей индуцирования иммунного ответа против указанного одного или более антигена (нов) , когда композиция вводится индивидууму. В некоторых вариантах реализации антиген представляет собой
рекомбинантный белковый антиген. В некоторых вариантах
реализации антиген представляет собой рекомбинантный белковый
антиген, связанный с инфекционным заболеванием,
злокачественностью или аллергеном. В некоторых вариантах реализации один или более антигенов является одним или несколькими антигенами в таблице 1.
[0097] В некоторых вариантах реализации двадцать восьмого аспекта или двадцать девятого аспекта и любого из вышеуказанных вариантов его реализации фармацевтические композиции формулируются в виде водных или масляно-водных эмульсий.
[0098] В тридцатом аспекте изобретение относится к способу
лечения индивидуума, страдающего от рака, причем способ включает
введение нуждающемуся в этом человеку эффективного количества
одного или нескольких моно- или ди-Б-СГ^-соединений, как описано
в втором по двадцать седьмой аспектах и любых их вариантах
реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их
фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые
сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или композиции,
как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах и
любых его вариантах реализации, как описано выше. В некоторых
вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN
соединений или их композицию вводят не парентерально, либо
парентерально. В некоторых вариантах реализации введение
представляет собой подкожное, внутримышечное, внутрикожное, в
слизистую, вагинальное, цервикальное, периопухолевое,
внутриопухолевое или непосредственно в дренирующий лимфоузел (узлы) около опухоли. В некоторых вариантах реализации введение представляет собой введение в слизистую оболочку, предпочтительно орально.
[0099] В первом варианте реализации тридцатого аспекта индивидуум, получающий такое лечение, может страдать от рака, выбранного из группы, состоящей из колоректального рака, воздушно-пищеварительного плоскоклеточного рака, рака легкого, рака мозга, рака печени, рак желудка, рак мочевого пузыря, рака щитовидной железы, рака надпочечников, рака желудочно-кишечного тракта, рака ротоглотки, рака пищевода, рака головы и шеи, рака
яичников, рака матки, рака шейки матки, рака эндометрия, рака молочной железы, меланомы, рака предстательной железы, карциномы поджелудочной железы, карциномы почек, саркомы, лейкемии, лимфомы и множественной миеломы.
[00100] Во втором варианте реализации тридцатого аспекта и
его первого варианта реализации способ лечения индивидуума,
страдающего от рака, дополнительно включает назначение одного
или нескольких дополнительных способов лечения рака. В некоторых
вариантах реализации один или несколько дополнительных методов
лечения рака включают лучевую терапию, хирургию, химиотерапию
или иммунотерапию (например, без ограничения, иммуномодулятор,
ингибитор иммунной контрольной точки, клеточную иммунотерапию
или противораковую вакцину). В некоторых вариантах реализации
один или несколько дополнительных методов лечения рака включают
инактивированную опухолевую клетку, которая экспрессирует и
секретирует один или несколько цитокинов или один или несколько
белков теплового шока. В некоторых вариантах реализации цитокин
выбран из группы, состоящей из GM-CSF, CCL20, CCL3, IL-12p70 и
FLT-3-лиганда. В некоторых вариантах реализации белок теплового
шока представляет собой др9б-1д-белок. В некоторых вариантах
реализации способ включает применение одного или нескольких
дополнительных методов лечения рака, выбранных из группы,
состоящей из химиотерапевтического агента; ингибитора иммунной
контрольной точки; агониста TLR; вакцины, выбранной для
стимуляции иммунного ответа на один или несколько антигенов
рака, терапевтического антитела, которое индуцирует
антителозависимую клеточную цитотоксичность; иммуномодулирующей клеточной линии; инактивированных или аттенуированных бактерий, которые индуцируют врожденный иммунитет; антигена, выбранного с целью индуцирования иммунного ответа, и композиции, которая опосредует врожденную иммунную активацию через Toll-подобные рецепторы (TLR) , (NOD)-подобные рецепторы (NLR), 1-подобные рецепторы на основе гена (RIG), индуцируемого ретиноиновой кислотой (RLR), лектиновые рецепторы С-типа (CLR) или связанные с патогенами молекулярные структуры ("РАМР"). В некоторых вариантах реализации ингибитор иммунной контрольной точки
представляет собой антитело против PD-1, антитело против PD-L1, антитело против CTLA-4, антитело против TIM-3, антитело против BTLA или антитело анти- LAG-3. В некоторых вариантах реализации изобретения агонист TLR является CpG или монофосфориллипидом А. В некоторых вариантах реализации терапевтическое антителом, которое индуцирует антитело-зависимую клеточную цитотоксичность является ритуксимаб, ибритумомаб, тозитумомаб, цетуксимаб, трастузумаб, брентуксимаб ведотин, алемтузумаб, онколим, ибилимумаб, витаксин или бевацизумаб.
[00101] В некоторых вариантах реализации тридцатого аспекта и первого и второго его вариантов реализации индивидуум страдает от рака, экспрессирующего раковый антиген, и способ лечения указанного индивидуума дополнительно включает введение индивидууму первичной терапии для удаления или уничтожения раковых клеток, экспрессирующих раковый антиген, при котором введение первичной терапии одновременно с или после введения моно- или ди-F-CDN соединения или его композиции. В некоторых вариантах реализации моно- или ди F CDN соединение или его композицию вводят в качестве неоадъювантной терапии к первичной терапии. В предпочтительных вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединение или его композицию вводят после первичной терапии. В некоторых вариантах реализации первичная терапия включает хирургическую операцию по удалению раковых клеток у млекопитающих, лучевую терапию для уничтожения раковых клеток у млекопитающих или как хирургическую, так и лучевую терапию.
[00102] В тридцать первом аспекте изобретение относится к способу лечения заболевания у индивидуума, включающему введение индивидууму, нуждающемуся в этом, i) эффективного количества одного или нескольких моно- или ди-F CDN соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и любых их вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах и любых их вариантах реализации, как описано выше; и ii) эффективного количества одного или нескольких
терапевтических антител, которые индуцируют антителозависимую
клеточную цитотоксичность, при этом заболевание выбрано из
группы, состоящей из рака, острого отторжения трансплантата
органа, сахарного диабета I типа, ревматоидного артрита,
псориаза, болезни Крона, рестеноза и аллергической астмы. В
некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей
из лимфомы (например, В-клеточной лимфомы), рака молочной
железы, хронического лимфоцитарного лейкоза, колоректального
рака, меланомы, немелкоклеточной карциномы легкого,
мелкоклеточного рака легкого, рака мочевого пузыря, рака
предстательной железы и других солидных опухолей. В некоторых
вариантах реализации терапевтическое антитело выбрано из группы,
состоящей из муромонаба-СБЗ, инфликсимаба, даклизумаба,
омализумаба, абциксимаба, ритуксимаба, ибритумомаба,
тозитумомаба, цетуксимаба, трастузумаба, брентуксимаба ведотина, алемтузумаба, онколима, ибилимумаба, витаксина и бевацизумаба.
[00103] В тридцать втором аспекте данное изобретение относится к способу лечения расстройств, в которых сдвиг Thl-Th2 иммунитета дает клиническую пользу, при этом способ включает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, одного или нескольких моно- или ди F CDN соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и любых их вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах и любых их вариантах реализации, как описано выше. Клеточно-опосредованный иммунитет (CMI) связан с ТН1 СБ4+Т-лимфоцитами, продуцирующими цитокины IL-2, интерферон (IFN) -у и фактор некроза опухоли (TNF) -а. Напротив, гуморальный иммунитет связан с ТН2 СБ4+Т-лимфоцитами, продуцирующими IL-4, IL-б и IL-10. Иммунное отклонение по отношению к ответам ТН1 обычно приводит к активации цитотоксических Т-клеточных лимфоцитов (CTL), клеток натуральных киллеров (NK), макрофагов и моноцитов. Как правило, ответы ТЫ более эффективны против внутриклеточных патогенов (вирусов и
бактерий, находящихся внутри клеток-хозяев) и опухолей, тогда как ответы Тп2 более эффективны против внеклеточных бактерий, паразитов, включая гельминты и токсины. Кроме того ожидается, что активация врожденного иммунитета нормализует баланс Т-хелпера 1 и 2 типа (Thl/Th2) в иммунной системе и подавляет чрезмерную реакцию ответов Т-хелперов типа Тп2, которые вызывают иммуноглобулин (Ig) Е-зависимые аллергические реакции и астматические аллергические реакции.
[00104] Соединения моно- или ди-F-CDN, как описано во втором
по двадцать седьмой аспектах, и любых его вариантах реализации,
как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически
приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или
фармацевтически приемлемые гидраты или его композиции, как
описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах, и любых
его вариантах реализации, как описано выше, могут вводиться
нуждающимуся в них индивидууму, как описано в способах
тридцатого по тридцать второй аспектов и любых его вариантах
реализации, как описано выше, с помощью множества парентеральных
и непарентеральных путей в композициях, содержащих
фармацевтически приемлемые наполнители (например, преносчики,
адъюванты, носители и тому подобное). Предпочтительные
непарентеральные пути включают пути введения в слизистые
оболочки (например, оральный, вагинальный, назальный,
цервикальный и т.д.). Предпочтительные парентеральные пути
включают, но не ограничиваются ими, одно или несколько
подкожных, внутривенных, внутримышечных, внутриартериальных,
внутрикожных, интратекальных и эпидуральных введений.
Предпочтительно введение осуществляют подкожным,
внутриопухолевым или периопухолевым путями, более
предпочтительно подкожным введением.
[00105] Соединения моно- или ди-F-CDN, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах, и любых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом
аспектах, и любых его вариантах реализации, описанных в данном документе, могут вводиться одновременно нуждающимися в ней лицами, как описано в способах тридцатого по тридцать второй аспектах илюбых его вариантах реализации, как описано выше, с одним или несколькими дополнительными фармацевтически активными компонентами, такими как адъюванты, липиды, мультиламеллярные липидные везикулы со сшивками между липидными бислоями, биоразлагаемые наночастицы или микрочастицы на основе поли (D, L-молочно-когликолевой кислоты) [PLGA] или на основе полиангидрида, и липидные бислои, нанесенные на нанопористые частицы, ингибиторы иммунной контрольной точки (например, антагонисты путей CTLA-4, PD-1, Tim-3, Vista, BTLA, LAG-3 и TIGIT; блокирующие агенты пути PD-1; ингибиторы PD-L1; включая без ограничения анти-PD-l антитела ниволумаб, пембролизумаб или пидилизумаб; PD-1 ингибитор АМР-224; антитело против CTLA-4 ипилимумаб; и антитело против PD-L1 BMS-936559, MPDL3280A, MEDI473 6 или авелумаб), инактивированные или ослабленные бактерии, которые индуцируют врожденный иммунитет (например, инактивированные или ослабленные Listeria monocytogenes ), композиции, которые опосредуют врожденную иммунную активацию через Toll-подобные рецепторы (TLR), (NOD)-подобные рецепторы (NLR), I-подобные рецепторы на основе гена (RIG), индуцируемого ретиноиновой кислотой (RLR), лектиновые рецепторы С-типа (CLR) или связанные с патогенами молекулярные структуры ("РАМР") или химиотерапевтические агенты.
[00106] В тридцать третьем аспекте данное изобретение
предусматривает одно или несколько моно- или ди-F-CDN
соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и
любых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые
пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли,
фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах, и любых его вариантах реализации, описанных выше, для использования в качестве адъювантов в комбинации с терапевтической или профилактической вакциной. В некоторых вариантах реализации вакцина выбрана для
стимуляции иммунного ответа на один или несколько заранее определенных антигена. В некоторых вариантах реализации вакцина содержит один или несколько антигенов, включая рекомбинантный белковый антиген, связанный с инфекционным заболеванием, злокачественностью или аллергеном. В некоторых вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений или их композицию используют одновременно с вакциной или после нее. В некоторых вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений или их композицию составлены в той же композиции, что и вакцина.
[00107] В первом варианте реализации тридцать третьего аспекта вакцина содержит инактивированные или аттенуированные бактерии или вирус, содержащие один или несколько представляющих интерес антигенов, один или несколько очищенных антигенов, живых вирусных или бактериальных векторов доставки, рекомбинантно сконструированных для экспрессии и/или секреции одного или нескольких антигенов, антигенпредставляющих клеток (АРС) векторов, содержащих клетки, которые загружаются одним или несколькими антигенами или трансфицированы композицией, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую один или несколько антигенов, липосомные средства доставки антигена или голые нуклеиновые кислотные векторы кодирования одного или нескольких антигенов. В некоторых вариантах реализации вакцина представляет собой антибактериальную, противовирусную или противоопухолевую терапевтическую или профилактическую вакцину. В некоторых вариантах реализации один или несколько антигенов представляют собой один или более антигенов, выбранных из группы, состоящей из вирусного антигена, бактериального антигена и ракового антигена.
[00108] В некоторых вариантах реализации тридцать третьего аспекта и первого варианта реализации вакцина содержит инактивированную опухолевую клетку, которая экспрессирует и секретирует один или несколько цитокинов. В некоторых вариантах реализации цитокин выбран из группы, состоящей из GM-CSF, CCL2 0, CCL3, IL-12p70 и FLT-3-лиганда.
[00109] В некоторых вариантах реализации тридцать третьего аспекта и его первого варианта реализации вакцина содержит инактивированную опухолевую клетку, которая экспрессирует и секретирует один или несколько белков теплового шока. В некоторых вариантах реализации белок теплового шока представляет собой gp96-Ig слитый белок.
[00110] В тридцать четвертом аспекте данное изобретение относится к способу лечения индивидуума, страдающего от хронического инфекционного заболевания, причем способ включает введение нуждающемуся в этом человеку эффективного количества одного или нескольких моно- или ди-Р-СБЫ-соединений, как описано в втором по двадцать седьмой аспектах и любых их вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах и любых его вариантах реализации, как описано выше. В некоторых вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений или их композицию вводят в комбинации с другим агентом для использования в лечении хронического инфекционного заболевания. В некоторых вариантах реализации хроническое инфекционное заболевание выбрано из группы, состоящей из инфекции HBV, инфекции HCV, инфекции HPV, инфекции HSV и гепатоцеллюлярного рака.
[00111] В тридцать пятом аспекте данное изобретение
предусматривает одно или несколько моно- или ди-F-CDN
соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и
любых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые
пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли,
фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах, и любых его вариантах реализации, описанных выше, для использования в качестве лечения заболевания или такого показания, как указано выше в любом из тринадцатого по тридцать четвертый аспекты и любых вариантах их реализации как описано выше в данном документе. В
предпочтительном варианте реализации одно или несколько моно-
или ди-F-CDN соединений предназначены для лечения рака. В
некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей
из колоректального рака, воздушно-пищеварительного
плоскоклеточного рака, рака легкого, рака мозга, рака печени, рак желудка, рак мочевого пузыря, рака щитовидной железы, рака надпочечников, рака желудочно-кишечного тракта, рака ротоглотки, рака пищевода, рака головы и шеи, рака яичников, рака матки, рака шейки матки, рака эндометрия, рака молочной железы, меланомы, рака предстательной железы, карциномы поджелудочной железы, карциномы почек, саркомы, лейкемии, лимфомы и множественной миеломы.
[00112] В тридцать шестом аспекте данное изобретение
предусматривает одно или несколько моно- или ди-F-CDN
соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и
любых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые
пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли,
фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах, и любых его вариантах реализации, описанных выше, для использования в качестве препарата или медикамента для лечения заболевания или показания, такого как описано в любом из тринадцатого по тридцать четвертый аспекты и любых вариантах их реализации как описано выше в данном документе. В предпочтительном варианте реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений предназначены для использования в качестве препарата или медикамента для лечения рака. В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, воздушно-пищеварительного плоскоклеточного рака, рака легкого, рака мозга, рака печени, рак желудка, рак мочевого пузыря, рака щитовидной железы, рака надпочечников, рака желудочно-кишечного тракта, рака ротоглотки, рака пищевода, рака головы и шеи, рака яичников, рака матки, рака шейки матки, рака эндометрия, рака молочной железы, меланомы, рака предстательной железы, карциномы поджелудочной
железы, карциномы почек, саркомы, лейкемии, лимфомы и множественной миеломы.
[00113] В тридцать седьмом аспекте данное изобретение предусматривает набор, который включает одно или несколько моно-или ди-F-CDN соединений, как описано во втором по двадцать седьмой аспектах и любых его вариантах реализации, как описано выше, включая любые пролекарства, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты или фармацевтически приемлемые гидраты или их композиции, как описано в двадцать восьмом и двадцать девятом аспектах, и любых его варианты реализации, описанных выше. В некоторых вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-Р-СБЫ-соединений или их композиций упаковывают, например, во флакон, бутылку или аналогичный контейнер, который может быть дополнительно упакован, например, в коробке, конверте или подобном контейнере. В некоторых вариантах реализации одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений или их композиции одобрены Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США или аналогичным регулирующим органом для введения млекопитающему, например человеку. В одном варианте реализации такой набор включает письменные инструкции для использования и/или другое указание на то, что одно или несколько моно- или ди-F-CDN соединений или их композиции пригодны или одобрены для введения млекопитающему, например человеку, для лечения подходящего заболевания или состояния. В некоторых вариантах реализации соединение или композицию упаковывают в виде единичной дозы или однократной дозы, например одноразовые таблетки, капсулы или тому подобное.
[00114] В некоторых вариантах реализации фармацевтических композиций двадцать восьмого и двадцать девятого аспектов и любых их вариантов реализации, как описано выше, и способов лечения заболеваний или показаний, описанных в любом из тринадцать по тридцать четвертый аспектах и любых вариантах их реализации, как описано выше, и соединений для использования при лечении заболеваний, описанных в тридцать пятом аспекте, или для использования при получении лекарственного средства, как описано в тридцать шестом аспекте, как описано выше, соединение
или пролекарства, его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[00115] На фиг.1А-В показаны аналитические данные ЯМР (1А) и LC (1В) для 3'3'-RR (2'F-G) (2'F-A) (дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р]).
[00116] На фиг.2 показано связывание моно- или ди-F CDN с человеческим STING REF белком.
[00117] На фиг.3 показано связывание моно- или ди-F CDN с человеческим STING WT белком.
[00118] На фиг.4 показана последовательность белка hSTING (REF) .
[00119] На фиг. 5А-В показана кратная индукция IFN|3-люциферазного репортера с помощью hSTING (WT) в клетках НЕК2 93Т в диапазоне доз (5А) и при 6,2 5 мкМ CDN (5В).
[00120] На фиг. 6А-В показана кратная индукция IFN|3-люциферазного репортера с помощью hSTING (REF) в клетках НЕК2 93Т в диапазоне доз (6А) и при 6,2 5 мкМ CDN (6В) .
[00121] На фиг. 7А-В показана относительная экспрессия IFN|3 с помощью STING WT/WT hPBMC в диапазоне доз (7А) и при 6,25 мкМ CDN (7В) .
[00122] На фиг. 8А-В показана относительная экспрессия IFN|3 с помощью STING REF/REF hPBMC в диапазоне доз (8А) и при 6,25 мкМ CDN (8В) .
[00123] На фиг. 9А-В показана нормализованная экспрессия IFN|3 в hPBMC с hSTING (WT) (9А) или REF hSTING (REF) (9B) обработанных CDN.
[00124] На фиг.10А-В показана нормализованная экспрессия TNFa в hPBMC с hSTING (WT) (10А) или REF hSTING (REF) (10B) обработанных CDN.
[00125] На фиг.11А-В показана нормализованная экспрессия IL-6 hPBMC с hSTING (WT) (НА) или REF hSTING (REF) (11В) обработанных CDN.
[00126] На фиг.12А-В показана нормализованная экспрессия IFNy в hPBMC с hSTING (WT) (12А) или REF hSTING (REF) (12В) обработанных CDN.
[00127] На фиг.13А-В показана нормализованная экспрессия IL-12р40 hPBMC с hSTING (WT) (13А) или REF hSTING (REF) (13В) обработанных CDN.
[00128] На фиг.14А-В показан объем опухоли (14А) и процент SIY+CD8+T клеток (14В) в модели мышиной меланомы B16-SIY после внутриопухолевой инъекции CDN.
[00129] На фиг.15А-В показан объем опухоли в модели мышиной меланомы В16 (15А) или карциномы толстой кишки МС3 8 (15В) после внутриопухолевой инъекции CDN.
[00130] На фиг.16А-В показан С04+Т-клеточный ответ специфический к антигену HIVgag р55 (15А) или С08+Т-клеточный ответ (15В) у мышей, которым вводили CDN и белок HIVgag р55.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00131] Данное изобретение относится к производству и использованию моно- или дифторзамещенных бис-3 ', 5'-циклических динуклеотидных (моно- или ди-F-CDN) иммунных стимуляторов, которые активируют DC через цитоплазматический рецептор, известный как STING (стимулятор генов интерферона) . В частности, CDN по данному изобретению представлены в виде композиции, содержащей один или несколько моно- или ди-F-CDN и наиболее предпочтительно один или несколько дитио Rp,Rp ди-F-CDN.
[00132] Консервативные микробные структуры, известные как связанные с патогеном молекулярные структуры (РАМР), распознаются рецепторами распознавания структур клеток-хозяев (PRR с зародышевой кодированной специфичностью), вызывая каскад сигнальной передачи по ходу транскрипции, приводящий к индукции цитокинов и хемокинов, и инициирование специфического адаптивного иммунного ответа (Iwasaki and Medzhitov, Science 327, 291-5, 2010) . Как врожденная иммунная система вовлеченная с помощью РАМР, представленых от инфекционного агента, формирует развитие адаптивного ответа, подходящего для борьбы с заражающим патогеном от возникновения болезни.
[00133] Одной из целей при разработке иммуномодуляторов и адъювантов является выбор определенных РАМР или синтетических молекул, которые активируют обозначенные PRR и инициируют требуемый ответ. Адъюванты, такие как монофосфориллипид A (MPL) и CpG представляют собой РАМР, полученные из микробов, распознаваемые Toll-подобными рецепторами (TLR), класс PRR, которые сигнализируют через MyD8 8 и TRIF-адаптивные молекулы и опосредуют индукцию NF-kB-зависимых провоспалительных цитокинов (Pandey et al. , Cold Spring Harb Perspect Biol 2015, 7: a016246 ). MPL (агонист TLR-4) и CpG (агонист TLR-9) являются наиболее клинически продвинутыми адъювантами и являются компонентами вакцин, одобренных или ожидающих утверждения по FDA (Einstein et al. , Human Vaccines, 5: 705-19, 2009; Ahmed et al. , Nature Immunol. 12: 509-17, 2011). В то время как TLR, присутствующие на поверхности клетки (например, TLR-4) и эндосомы (например, TLR-9), чувствительны к внеклеточным и вакуолярным патогенам, в цитозоле происходит цикл продуктивного роста нескольких
патогенов, включая вирусы и внутриклеточные бактерии. Компартментализация внеклеточного, вакуолярного и цитозольного PRR привело к гипотезе о том, что врожденная иммунная система может воспринимать продуктивную репликацию патогенных микробов путем мониторинга цитозоля (Vance et al. Cell Host & Microbe 6: 10-21, 2009). Это обеспечивает обоснование использования агонистов, которые активируют PRR, включающие цитозольный путь наблюдения, и могут быть эффективной стратегией для разработки эффективных вакцин для выявления клеточного иммунитета, иммунного коррелята защиты от внутриклеточных патогенов и терапевтического преимущества при раке.
[00134] Интерфероны I типа (IFN-a, IFN-P) являются
сигнатурными цитокинами, индуцированными двумя различными TLR-
независимыми цитозольными сигнальными путями. В первом пути
различные формы одноцепочечной и двухцепочечной (ds) РНК
узнаются РНК-геликазами, включая индуцируемый ретиновой кислотой
ген I (RIG-I) и связанный с дифференцировкой меланомы ген 5
(MDA-5) , и через IFN-р промотор-стимулятор 1 (IPS-1) адаптерный
белок опосредуют фосфорилирование фактора транскрипции IRF-3,
что приводит к индукции IFN-p (Ireton and Gale, Viruses 3: 906-
19, 2011) . IPS-1 дефицитные мыши повышают восприимчивость к
инфицированию РНК-вирусами. Датчики, которые сигнализируют по
пути IPS-1, непосредственно нацелены на инактивацию различными
вирусными белками, демонстрируя потребность в этом пути защиты
цитозольного хозяина для контроля продуктивной вирусной
инфекции. Синтетическая дцРНК, такая как полиинозиновая:
полицитидиловая кислота (поли (I: С) и поли-ICLC, аналог,
который составлен с полилинией L-лизина для защиты от
расщепления РНКазой, является агонистом как для путей TLR3, так
и для MDA5, является мощным индуктором IFN ~Р, ив данное время
оценивается в нескольких различных клинических условиях (Caskey
et al., J. Exp. Med. 208: 2357-77, 2011).
[00135] STING (Стимулятор генов интерферона) является центральным медиатором второго цитозольного пути, который запускает интерферон типа 1 в ответ на распознавание цитозольной
двухцепочечной ДНК от инфекционных патогенов или аберрантных клеток-хозяев (Danger Associated Molecular Patterns, DAMPS) (Barber, Immunol. Rev 243: 99-108, 2011). Известно, что TMEM173, MITA, ERIS и MPYS, STING был обнаружен с использованием методов клонирования экспрессии кДНК в качестве независимого от MyD8 8 фактора защиты клетки-хозяина, выраженного в макрофагах, дендритных клетках (DC) и фибробластах, индуцирующих экспрессию IFN-р и NF-кВ-зависимых провоспалительных цитокинов в ответ на чувствительную цитоплазматическую ДНК, в ответ на заражение вирусом простого герпеса (Ishikawa and Barber, Nature 455: 67479, 2008) .
[00136] Циклические динуклеотиды (CDN) изучались как вездесущие маленькие молекулы вторичных мессенджеров, синтезируемые бактериями, которые регулируют различные процессы, включая подвижность и образование биопленок (Romling et al. , Micrb. Mol. Biol. Rev., 77: 1-52, 2013). CDN также представляют собой лиганд для STING (Burdette et al., Nature 478: 515-18, 2011) . В ответ на связывание CDN STING активирует сигнализацию через ось TBK-1/IRF-3 и NF- к В и индуцирует экспрессию IFN-р и других совместно регулируемых генов (Burdette and Vance, Nat Immunol. 14: 19-26, 2013; McWhirter et al. , J. Exp. Med. 206: 1899-1911, 2009). Циклический (ц) -ди-АМФ секретируется эффлюксными насосами с множественной лекарственной устойчивостью из внутриклеточных бактерий Listeria monocytogenes в цитозоль инфицированных клеток-хозяев антигена, и коррелирует с опосредованной CD4+H С08+Т-клеточной защитой в модели листериоза мыши (Woodward et al. , Science 328, 1703-05, 2010; Crimmins et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 10191-10196, 2008). Индукция IFN-р в Lm-инфицированных макрофагах зависит от активации сигнального пути STING, а уровень IFN типа I, индуцированного с помощью ц-ди-АМФ в макрофагах из MyD8 8 Trif или C57BL/6 родительских мышей неразличимы (Leber et al. , PLoS Pathog 4 (1): еб. doi: 10.1371, 2008; Witte et al. , mBio 4: e00282-13, 2012). Напротив, IFN-р не индуцируется CDN в макрофагах, полученных из мышей goldenticket (gt) , кодирующих
нефункциональный мутантный белок STING (Sauer et al., Infect. Immun. 79: 688-94, 2011). Внеклеточная бактерия Vibrio cholera продуцирует гибридную молекулу ц-ГМФ-АМФ (цГАМФ), которая также индуцирует путь STING (Davies et al. , Cell 149: 358-70, 2012). Активация врожденного иммунитета этими вездесущими вторичными мессенджерами предполагает, что распознавание CDN может быть неотъемлемой частью защиты организма от бактериальной инфекции.
[00137] Хотя STING был обнаружен как критический датчик для
индукции продуцирования IFN-|3 в ответ на заражение вирусом
простого герпеса, ДНК из этого вирусного патогена была
обнаружена в цитоплазме, изначально оставалась неуловимой. Эта
головоломка была решена с открытием циклической ГМФ-АМФ-синтазы
(цГАС), нуклеотидилтрансферазы клеток-хозяев, которая
непосредственно связывает дцДНК, и в ответ синтезирует вторичный мессенджер, циклический ГМФ-АМФ (цГАМФ), который активирует путь
STING и индуцирует экспрессию IFN-|3 (Sun et al. , Science 339:
786-91, 2013; Wu et al. , Science 339: 826-30, 2013). Клетки без
функциональной цГАС не могут экспрессировать IFN-|3 в ответ на
стимуляцию цитозольной ДНК. Позднее было показано, что клетки,
экспрессирующие специфический аллель STING, не реагируют на
стимуляцию CDN, но реагируют на стимуляцию дцДНК в зависимом от
цГАС и TLR9 (MyD88) -независимом пути (Diner et al. , 2013). Это
наблюдение несовместимо с механизмом, определяемым цГАС синтезом
STING активирующихся CDN лигандов в ответ на распознавание
цитозольной дцДНК. Этот очевидный парадокс был разрешен
несколькими независимыми исследователями, которые
продемонстрировали, что цГАС продуцирует неканонический CDN (ц-ГМФ-АМФ, цГАМФ), который активирует аллели STING, которые не реагируют на канонические CDN (Civril et al. , Nature 498: 33237, 2013, Diner et al., 2013, Gao et al., 2013, Ablasser et al., Nature 498: 380-84, 2013, Kranzusch et al., Cell Reports 3: 1362-68, 2013, Zhang et al., Mol. Cell. 51: 226-35, 2013). цГАМФ, таким образом, функционирует как вторичный мессенджер, который связывается со STING и активирует его. В отличие от вторичных мессенджеров CDN, продуцируемых бактериями, в которых
два пуриновых нуклеозида соединены фосфатным мостиком с бис-(3',5') связями, межнуклеотидный фосфатный мостик в циклическом ГМФ-АМФ, синтезированном цГАС, соединен неканоническими 2 ', 5' и 3 ', 5' связями (альтернативно называемые "смешанными" связями или ML), представленные в виде с [G (2 ', 5') рА (3 ', 5') р] . Эти молекулы 2', 5'- 3', 5' связывают STING с нМ аффинностью, примерно в 300 раз лучше, чем бактериальный ц-ди-ГМФ. Таким образом, было высказано предположение, что молекулы 2', 5'- 3', 5' представляют гораздо более сильные физиологические лиганды с точки зрения таргетирования STING. Zhang et al. , 2013; смотрите также, Xiao and Fitzgerald, Mol. Cell 51: 135-39, 2013. Различия в структурах межнуклеотидных фосфатных мостиков между CDN, продуцируемыми бактериями [канонические бис- (3 ', 5') связи] и цГАС клеток-хозяев (неканонические 2 ', 5' и 3 ', 5' связи), указывают на то, что рецептор STING развился, чтобы различать CDN, продуцируемые бактериями, или цГАС клетки-хозяина.
[00138] Человеческий STING имеет известные полиморфизмы, включая аллели, кодирующие гистидин в положении 2 32, которые являются рефракторными по отношению к каноническим CDN, но не к неканоническим CDN (Diner et al. , 2 013, Jin et al. , 2011) . Было показано, что одинарные нуклеотидные полиморфизмы в гене hSTING влияют на чувствительность к каноническим CDN бактериального происхождения (Diner et al. , 2013; Gao et al. , 2013; Conlon et. al. , 2013) . Были определены пять гаплотипов hSTING (WT, REF, HAQ, AQ и Q аллелях), которые различаются в положениях аминокислот 71, 230, 232 и 293 (Jin et al. , 2011; Yi et al. , 2013) . Клетки, экспрессирующие hSTING, плохо реагируют на стимуляцию бактериальными CDN цГАМФ, ц-ди-АМФ и ц-ди-ГМФ с бис-(3 ', 5') связями, но реагируют на эндогенно продуцируемый продукт цГАС, ML цГАМФ (Diner Et al., 2013) . Удивительно, что моно- или дифторзамещенные бис-3 ', 5' связанные CDN по данному изобретению, в частности ди-F-CDN, стимулируют аллель hSTING REF по сравнению с эндогенно продуцируемым ML цГАМФ. Примеры циклических пуриновых динуклеотидов описаны более подробно, например, в патентах США 7709458 и 7592326; WO2007/054279,
WO2014/093936 и WO2014/189805; и Yan et al. , Bioorg. Med. Chem Lett. 18: 5631 (2008) .
[00139] Нативные молекулы CDN чувствительны к деградации фосфодиэстеразами, которые присутствуют в клетках-хозяевах, например, в антигенпредставляющих клетках, которые принимают препараты вакцин, которые содержат указанные нативные молекулы CDN. Эффективность определенного адъюванта может уменьшаться при такой деградации, так как адъювант не сможет связывать и активировать определенную целевую группу PRR. Более низкую адъювантную активность можно было бы измерить, например, при меньшем количестве индуцированной экспрессии молекулы, характерной для врожденного иммунитета (например, IFN-|3) , коррелированной с более слабой активностью вакцины, как определено величиной измеренного антигенспецифического иммунного ответа.
[00140] В данном изобретении предусмотрены практически
чистые моно- или дифторсодержащие CDN и особенно
дитиодифосфатные производные моно- или дифторсодержащих CDN.
Процесс синтеза указанных дитиодифосфатных производных молекул
ц-ди-АМФ, ц-ГАМФ и ц-ди-ГМФ приводит к получению смеси
диастереомеров, включая молекулы Rp, Rp, Sp, Sp, SpRp и Rp, Sp
дитио- дифосфатов. Эти отдельные виды могут быть разделены и
проявлять существенные различия в их фармацевтических
характеристиках, где Rp,Rp диастереомер является
предпочтительным.
Определения
[00141] "Введение" как используется в данном документе в
отношении человека, млекопитающего, субъекта млекопитающего,
животного, ветеринарного субъекта, субъекта плацебо, субъекта
исследования, экспериментального субъекта, клетки, ткани, органа
или биологической жидкости, относится, без ограничения, к
контакту экзогенного лиганда, реагента, плацебо, малой молекулы,
фармацевтического агента, терапевтического агента,
диагностического агента или композиции с субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью и тому подобное.
"Введение" может относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским, плацебо и экспериментальным методам. Обработка клетки охватывает контакт реагента с клеткой, а также контакт реагента с жидкостью, при этом жидкость находится в контакте с клеткой. "Введение" также охватывает обработку клетки in vitro и ex vivo, например, реагентом, диагностической, связывающей композицией или другой клеткой. Под "вводимым вместе" или "совместно вводимым" подразумевается, что два или более агента вводят в виде единой композиции. Хотя введение в качестве единственной композиции рассматривается в данном изобретении, такие агенты могут доставляться одному субъекту в виде отдельных назначений, которые могут быть в одно и то же или разное время и которые могут быть одним и тем же путем или разными путями введения. Под "одновременным введением" подразумевается, что два или более агентов вводят практически в одно и то же время, но не обязательно вводят в виде единой композиции или по тому же пути введения.
[00142] "Агонист", относящийся к лиганду и рецептору, содержит молекулу, комбинацию молекул, комплекс или комбинацию реагентов, стимулирующих рецептор. Например, агонист рецептора гранулоцит макрофагального колониестимулирующего фактора (GM CSF) может включать GM CSF, мутеин или производное GM CSF, пептидный миметик GM CSF, небольшую молекулу, которая имитирует биологическую функцию GM CSF или антитело, которое стимулирует GM CSF- рецептор.
[00143] "Антагонист", поскольку он относится к лиганду и рецептору, содержит молекулу, комбинацию молекул или комплекс, который ингибирует, противодействует, подавляет регуляцию и/или дезактивирует рецептор. "Антагонист" охватывает любой реагент, который ингибирует конститутивную активность рецептора. Конститутивная активность - это та, которая проявляется в отсутствии взаимодействия лиганд/рецептор. "Антагонист" также охватывает любой реагент, который ингибирует или предотвращает стимулированную (или регулируемую) активность рецептора. В качестве примера, антагонист GM CSF-рецептора включает, без
каких-либо ограничений, антитело, которое связывается с лигандом (GM CSF) и предотвращает его связывание с рецептором, или антитело, которое связывается с рецептором и препятствует связыванию лиганда с рецептором, или когда антитело блокирует рецептор в неактивной конформации.
[00144] Используемый в данном документе термин "антитело"
относится к пептиду или полипептиду, полученному из,
смоделированному или практически кодируемому геном
иммуноглобулина или генами иммуноглобулина или его фрагментами,
способными специфически связывать антиген или эпитоп. См.,
например Fundamental Immunology, 3rd Edition, W.E. Paul, ed.,
Raven Press, N.Y. (1993); Wilson (1994; J. Immunol. Methods
175:267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25:85-
97. Термин антитело включает антигенсвязывающие части, то есть
"сайты связывания антигена" (например, фрагменты,
подпоследовательности, области определения комплементарности (CDR)), которые сохраняют способность связывать антиген, включая (i) фрагмент Fab, моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CHI; (ii) фрагмент F (ab ') 2, двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab-фрагмента, соединенных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CHI; (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, (v) фрагмент dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), который состоит из домена VH ; и (vi) изолированную область определения комплементарности (CDR). Одноцепочечные антитела также включены путем ссылки в термин "антитело".
[00145] Термин "ди ОН эталонное соединение", как используется в данном документе, относится к известному соединению CDN, в котором отсутствует какой-либо 2' - и/или 2' -фтор-заместитель моно- или ди-F-CDN соединениям, как описано в данном документе, с заместителем ОН в этих положениях. Предпочтительно, известное ди-ОН-эталонное соединение для моно или ди F соединений CDN, как описано в данном документе, имеют те же основания, что и моно- или ди-F-CDN соединение, и имеют ту же фосфодиэфирную связь (например, фосфодиэфир или аналог
тиофосфата). Например, di ОН эталонное соединение для 3'3'-RR (2'F A) (2'F А), З'З'-RR (2'F А) (А), З'З' -RR (A) (2'F А) и 3'3'-RR (2'|3F A) (2'PF А) представляет собой З'З'-RR (А) (А); ди ОН эталонное соединение для З'З'- RR (G), (2'F А), З'З'-RR (2'F G) , (2'F А), а З'З'-RR (2'F G) (А) представляет собой З'З'-RR (G) , (А); и ди ОН эталонное соединение для З'З'- RR (2'F-G) (2'F G) представляет собой З'З'-RR (G)(G). Ди-ОН эталонные соединения З'З'-RR- (А) (А), З'З'-RR- (G) (А) и З'З'-RR (G) (G) описаны, например, в публикации РСТ W0 2014/093936.
[0014 6] Термин "агент, который усиливает проницаемость" или "агент, который усиливает поглощение", используемый в данном документе, поскольку он относится к проницаемости клеток или поглощению соединения клетками, является агентом, который усиливает проницаемость клетки к соединению или усиливает поглощение соединение клеткой либо in vitro, либо in vivo. Моно-или ди-F CDN соединения, как описано в данном документе, или ди ОН эталонное соединение можно сравнить в анализе на основе клеток in vitro, где анализ может проводиться с или без агента, такого как дигитонин, который позволяет поглощать соединение клеткой. Моно- или ди-F CDN соединения, как описано в данном документе, являются неожиданно активными в таких клеточных анализах без необходимости в таком агенте, который повышает проницаемость клетки или усиливает поглощение соединения клеткой, например, в анализе клеток ТНР-1, как описано в данном документе. Композиции, содержащие моно- или ди-F CDN соединения, как описано в данном документе, могут быть составлены без агента, который усиливает проницаемость клетки или усиливает поглощение соединения клеткой, например без носителя, который усиливает проницаемость клетки или усиливает клеточное поглощение. Такие добавки или носители для доставки включают, без ограничения, липидные или липидоподобные адъюванты, липосомы, мультиламеллярные липидные везикулы со сшивками между липидными бислоями, наноносители, наночастицы и тому подобное, такие как наночастицы, содержащие поли (молочную кислоту) (PLA), поли (гликолевую кислоту) (PGA) и/или их сополимеры, такие как
биоразлагаемые поли (D, L-молочно-со-гликолевая кислота) на основе [PLGA] или полиангидридные наночастицы или микрочастицы.
[00147] Под "практически очищенным" в отношении CDN согласно изобретению подразумевается, что определенный вид составляет по меньшей мере 50%, чаще всего составляет не менее 60%, как правило, составляет по меньшей мере 70%, более типично составляет по меньшей мере 75%, как правило, составляет не менее 80%, как правило, составляет не менее 85%, как правило, составляет не менее 90%, как правило, обычно составляет не менее 95% и обычно составляет не менее 98% по массе или выше, активности CDN, присутствующей в композиции. В определении чистоты обычно не используются значения веса воды, буферов, солей, детергентов, восстановителей, ингибиторов протеазы, стабилизаторов (включая добавленный белок, такой как альбумин) и эксципиентов.
[00148] "Специфически" или "избирательно" связывается,
когда речь идет о лиганде/рецепторе, нуклеиновой
кислоте/комплементарной нуклеиновой кислоте, антителе/антигене
или другой связывающей паре (например, цитокине к рецептору
цитокинов) (каждый обычно упоминается в данном документе как
"целевая биомолекула" или "мишень"), указывает на реакцию
связывания, которая связана с присутствием мишени в гетерогенной
популяции белков и других биологических веществ. Специфическое
связывание может означать, например, что связывающее соединение,
лиганд нуклеиновой кислоты, антитело или связывающая композиция,
полученная из антигенсвязывающего сайта антитела,
рассматриваемого способа связывается с его мишенью с аффинностью, которая часто составляет по меньшей мере на 25% больше, чаще по меньшей мере на 50% больше, чаще всего по меньшей мере на 100% (2 кратно) больше, обычно по меньшей мере в десять раз больше, более обычно по меньшей мере в 20 раз больше и наиболее обычно по меньшей мере в 100 раз больше, чем сродство с молекулой, не являющейся мишенью.
[0014 9] "Лиганд" относится к небольшой молекуле, нуклеиновой кислоте, пептиду, полипептиду, сахариду, полисахариду, гликану, гликопротеину, гликолипиду или их
комбинациям, который связывается с целевой биомолекулой. Хотя
такие лиганды могут быть агонистами или антагонистами рецептора,
лиганд также охватывает связующий агент, который не является
агонистом или антагонистом и не обладает свойствами агониста или
антагониста. Специфическое связывание лиганда с его родственной
мишенью часто выражается в терминах "близости". В
предпочтительных вариантах лиганды данного изобретения связывают
с аффинностью от около 10 4 М _1 до около 10 8 М _1. Аффинность
вычисляется как К d=k 0ff/k 0n (k Qff - константа скорости
диссоциации, К оп константа скорости ассоциации, К d -
константа равновесия).
[00150] Аффинность может быть определена в равновесии путем измерения связанной фракции (г) меченого лиганда в различных концентрациях (с) . Данные показаны на графике с использованием уравнения Скатчарда: г/с=К (п-г): где г=моли связанного лиганда/моль рецептора в равновесии; с=концентрация свободного лиганда в равновесии; К=константа ассоциации равновесия; и п=количество сайтов связывания лигандов на молекулу рецептора. По графическому анализу г/с строится по оси Y по сравнению с г на оси X, что таким образом позволяет получить график Скатчарда. Измерение аффинности методом Скатчарда хорошо известно в данной области. См., например, van Erp et al. , J. Immunoassay 12: 42543, 1991; Nelson and Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988. В альтернативном случае аффинность можно измерить с помощью изотермической титровальной калориметрии (ITC). В типичном эксперименте ITC раствор лиганда титруют в раствор его родственной мишени. Теплота, выделяемая при их взаимодействии (АН), отслеживается с течением времени. Поскольку последующие количества лиганда титруют в ячейку ITC, количество тепла, поглощаемого или высвобождаемого, прямо пропорционально количеству связывания. По мере того, как система достигает насыщения, тепловой сигнал уменьшается до тех пор, пока не будет наблюдаться теплота только разведения. Затем кривую связывания получают из графика теплоты каждой инъекции относительно отношения лиганда и связывающего партнера в ячейке. Кривую
связывания анализируют с помощью соответствующей модели связывания для определения К в, п и АН. Заметим, что К B=l/K d-
[00151] Используемый в данном документе термин
"пролекарство" относится к модификации предполагаемых
соединений, где модифицированное соединение обладает меньшей
фармакологической активностью (по сравнению с модифицированным
соединением) и где модифицированное соединение превращается в
пределах организма (например, в клетке-мишени или целевом
органе) обратно в немодифицированную форму посредством
ферментативных или неферментативных реакций. В некоторых
вариантах реализации гидроксил на одной рибозе содержит
пролекарственную замещаемую группу. Пролекарства могут
модифицировать физико-химические, биофармацевтические и
фармакокинетические свойства лекарств. Традиционные пролекарства классифицируются как препараты, которые активируются путем трансформации in vivo с образованием активного лекарственного средства. Причинами развития пролекарства являются, как правило, плохая водная растворимость, химическая нестабильность, низкая биодоступность полости рта, отсутствие проникновения через гематоэнцефалитический барьер и высокий метаболизм первого прохода, связанный с исходным лекарственным средством. Подходящие пролекарственные фрагменты описаны, например, в "Prodrugs and Targeted Delivery," J. Rautico, Ed., John Wiley & Sons, 2011. Примеры включают, но не ограничиваются ими, замещаемые группы, удаленные клеточными эстеразами, сложный эфир жирной кислоты с Сб по С18, мирилоиловый эфир, пентаноиловый эфир, гексаноиловый эфир и гептаноиловый эфир. Например, соединения моно-2'F-CDN, как описано в данном документе, могут включать замену на оставшемся 2'-гидроксиле с образованием таких сложных эфиров.
[00152] Используемый в данном документе термин "субъект" или "индивидуум" относится к человеческому или нечеловеческому организму. Таким образом, описанные в данном документе способы и композиции применимы как к заболеваниям людей, так и к ветеринарии. В некоторых вариантах реализации субъектами
являются "пациенты", то есть живые люди, которые получают медицинскую помощь для лечения заболевания или состояния. Сюда входят лица, не имеющие определенного заболевания, которых исследуют на признаки патологии. Предпочтительными являются субъекты, у которых есть существующий диагноз конкретного рака, который таргетируется композициями и способами данного изобретения. Предпочтительные виды рака для лечения композициями, описанными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, рак предстательной железы, карциному почек, меланому, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, рак яичников, рак толстой кишки, рак головы и шеи, рак легких и рак молочной железы.
[00153] "Терапевтически эффективное количество"
определяется как количество реагента или фармацевтической композиции, которое является достаточным для проявления пользы для пациента, т.е. для уменьшения, профилактики или улучшения симптомов состояния, подлежащего лечению. Когда агент или фармацевтическая композиция содержит диагностический агент, "диагностически эффективное количество" определяется как количество, которое является достаточным для получения сигнала, изображения или другого диагностического параметра. Эффективные количества фармацевтической композиции будут варьировать в зависимости от таких факторов, как степень восприимчивости человека, возраст, пол и вес человека, а также индивидуальные ответы индивидуума. "Эффективное количество" включает, без ограничений, количество, которое может улучшить, обратить вспять, смягчить, предотвратить или диагностировать симптом или признак состояния здоровья или расстройства или их причинного процесса. Если не указано иначе, явно или по контексту, "эффективное количество" не ограничивается минимальным количеством, достаточным для улучшения состояния.
[00154] "Лечение" или "терапия" (в отношении состояния или заболевания) представляет собой подход для получения полезных или желаемых результатов, включая и предпочтительно клинические результаты. Для целей данного изобретения полезные или желаемые результаты в отношении заболевания включают (но не
ограничиваются ими) одно или несколько из следующего: предотвращение заболевания, улучшение состояния, связанного с заболеванием, лечение болезни, уменьшение тяжести, задержка прогрессирования заболевания, облегчение одного или нескольких симптомов, связанных с заболеванием, повышение качества жизни больного страдающего от заболевания и/или продление выживания. Аналогично, для целей данного изобретения полезные или желаемые результаты в отношении состояния включают (но не ограничиваются ими) одно или несколько из следующего: предотвращение состояния, улучшение состояния, излечивание состояния, уменьшение тяжести состояния, задержка прогрессирования состояния, облегчение одного или нескольких симптомов, связанных с состоянием, повышение качества жизни человека, страдающего от состояния, и/или продление жизни. Например, в вариантах реализации, где композиции, описанные в данном документе, используются для лечения рака, полезные или желаемые результаты, включают (но не ограничиваясь ими) одно или несколько из следующего: снижение пролиферации (или разрушение) неопластических или раковых клеток, снижение метастазов неопластических клеток, обнаруженных при раках, уменьшение размера опухоли, уменьшение симптомов, вызванных раком, повышение качества жизни людей, страдающих от рака, снижение дозы других лекарств, необходимых для лечения болезни, задержка прогрессирования рака и/или продление выживания пациентов, страдающих раком. В зависимости от контекста "лечение" субъекта может означать, что субъект нуждается в лечении, например, в ситуации, когда субъект включает расстройство, которое, как ожидается, будет улучшено путем введения реагента.
[00155] "Вакцина" охватывает профилактические вакцины. Вакцина также охватывает терапевтические вакцины, например вакцину, вводимую млекопитающему, которое включает состояние или расстройство, связанное с антигеном или эпитопом, предусмотреным вакциной.
[00156] Циклические пуриновые динуклеотиды
[00157] Прокариотические, а также эукариотические клетки используют различные малые молекулы для клеточной передачи
сигналов и внутри- и межклеточной коммуникации. Известно, что циклические нуклеотиды, такие как цГМФ, цАМФ и т.д., имеют регуляторную и инициирующую активность в про- и эукариотических клетках. В отличие от эукариотических клеток, прокариотические клетки также используют циклические пуриновые динуклеотиды в качестве регуляторных молекул. В прокариотах конденсация двух молекул ГТФ катализируется ферментом дигуанилатциклазой (DGC) с получением ц-диГМФ, который представляет собой важный регулятор в бактериях.
[00158] Недавняя работа предполагает, что циклические диГМФ
или их аналоги могут также стимулировать или усиливать иммунный
или воспалительный ответ у пациента или могут усиливать иммунный
ответ на вакцину, выступая в качестве адъюванта у млекопитающих.
Цитозольное обнаружение ДНК, полученной из патогена, требует
передачи сигналов через TANK-связывающую киназу 1 (ТВК1) и ее
транскрипционный фактор по ходу транскрипции, IFN-регуляторный
фактор 3 (IRF3). Трансмембранный белок, называемый STING
(стимулятор генов IFN, также известный как MITA, ERIS, MPYS и
ТМЕМ173), функционирует как сигнальный рецептор для этих
циклических пуриновых динуклеотидов, вызывая стимуляцию
сигнальной оси TBK1-IRF3 и ответа интерферона I типа зависимого
от STING. См., например, Фиг.1. Burdette et al., Nature 478:
515-18, 2011 демонстрирует, что STING связывается
непосредственно с циклическим дигуанилатмонофосфатом, но не с другими неродственными нуклеотидами или нуклеиновыми кислотами.
[00159] Циклические пуриновые динуклеотиды для
использования в качестве предшественников для получения CDN по данному изобретению описаны более подробно, например, в Gao et al., Cell (2013) 153: doi: 10,1016\j.cell.2013.04.046 ; патентах США №№ 7709458 и 7592326; WO2007/054279, W02014/093936 и WO2014/189805; и Yan et al. , Bioorg. Med. Chem Lett. 18: 5631 (2 008) . Эти CDN могут быть модифицированы с использованием стандартных методов органической химии для получения CDN по данному изобретению.
[00160] Моно или ди F CDN соединения по данному изобретению, как описано в данном документе, являются сильными
агонистами STING и демонстрируют неожиданное улучшение по сравнению с известными неферрозамещенными CDN соединениями, такими как RR- (А) (А) или эндогенно цГАС продуцируемый продукт ML цГАМФ. Моно или ди F-CDN соединения по данному изобретению сравнивают с известными соединениями, которые отличаются замещением в положении 2 'и 2' ', например, ди ОН эталонным соединением, такое как З'З ' (А) (А), З'З ' (G) (А), З'З ' RR (А) (А) или З'З ' RR (G) , (А). Свойства моно- или ди F-CDN соединений продемонстрированы в примерах 11-17 ниже, причем соединения демонстрируют улучшение по сравнению с эталонным соединением ди-ОН как имеющее один или несколько из i) более высокого сдвига Т m в анализе DSF, как описано в примере 11, для одного или более hSTING (WT), hSTING (HAQ) или hSTING (REF); ii) более высокой относительной экспрессии транскрипта IFN-|3 в анализе hPBMC, как описано в примере 13, для одного или нескольких hSTING (WT), hSTING (HAQ) или hSTING (REF); или iii) более низкой EC50 в анализе клеток ТНР1, как описано в примере 14, где предпочтительно анализ ТНР1 проводят в отсутствие дигитонина. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN демонстрирует улучшение по сравнению с эталонным соединением ди-ОН как имеющее два или более из i) более высокого сдвига Т m в анализе DSF, как описано в примере 14, для одного или более hSTING (WT) , hSTING (HAQ) или hSTING (REF); ii) более высокой
относительной экспрессии транскрипта I FN-J3 в анализе hPBMC, как описано в примере 13, для одного или нескольких hSTING (WT) , hSTING (HAQ) или hSTING (REF) ; или iii) более низкой EC50 в анализе клеток ТНР1, как описано в примере 14, где предпочтительно анализ ТНР1 проводят в отсутствие дигитонина. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN демонстрирует улучшение по сравнению с эталонным соединением ди-ОН как имеющее каждое из i) более высокого сдвига Т m в анализе DSF, как описано в примере 11, для одного или более hSTING (WT), hSTING (HAQ) или hSTING (REF); ii) более высокой относительной экспрессии транскрипта IFN-|3 в анализе hPBMC, как описано в примере 13, для одного или нескольких hSTING (WT), hSTING (HAQ)
или hSTING (REF); или iii) более низкой ЕС50 в анализе клеток ТНР1, как описано в примере 14, где предпочтительно анализ ТНР1 проводят в отсутствие дигитонина. В некоторых вариантах реализации моно- или ди F-CDN соединений, как описано в данном документе, моно- или ди F-CDN соединение имеет по меньшей мере 2-кратное, по меньшей мере, 5-кратное, по меньшей мере, 10-кратное, по меньшей мере, 50-кратное, по меньшей мере, 100-кратное, по меньшей мере, 500-кратное или, по меньшей мере, в 1000-кратное повышение относительной экспрессии транскрипта IFN-|3 в анализе hPBMC, как описано в примере 13, для hSTING REF-аллеля по сравнению с З'З'-RR- (А) (А). В некоторых вариантах реализации моно- или ди F-CDN соединение имеет ЕС50 в анализе ТНР1, описанном в примере 14, без добавления дигитонина, которая по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в б раз, по меньшей мере в 7 раз или, по меньшей мере, в 8 раз ниже, чем ЕС50 ди-ОН-эталонного соединения. В некоторых вариантах реализации моно- или ди F-CDN соединение имеет ЕС50 в анализе клеток ТНР1 без добавления агента, который усиливает проницаемость соединения к клетке или агенту, который усиливает поглощение соединения клеткой, которая составляет менее 4 0 мкМ, менее 3 0 мкМ, менее 2 0 мкМ, менее 15 мкМ или менее 10 мкМ. В некоторых вариантах реализации моно- или ди F-CDN соединение имеет ЕС50 в анализе ТНР1, описанном в примере 14, без добавления дигитонина, которая составляет менее 40 мкМ, менее 30 мкМ, менее 2 0 мкМ, менее 15 мкМ или менее 10 мкМ.
[00161] Предпочтительными циклическими пуриновыми
динуклеотидами являются аналоги фосфоротиоата, называемые в данном документе "тиофосфатами". Фосфоротиоаты представляют собой вариант нормальных нуклеотидов, в которых один из немодифицированных оксигенов заменяется серой. Сульфуризация межнуклеотидной связи резко снижает действие эндо- и экзонуклеаз, в том числе от 5 'до 3' и 3 'до 5' ДНК-экзонуклеаз POL1, нуклеаз S1 и Р1, РНКаз, сывороточных нуклеаз и
фосфодиэстераз змеиных ядов. Кроме того, увеличивается вероятность пересечения липидного бислоя.
[00162] Фосфоротиоатная связь по своей сути является хиральной. Специалисту в данной области будет понятно, что фосфаты в этой структуре могут существовать в форме R или S. Таким образом, возможны формы Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Rp и Rp, Sp для соединений формулы I и всех ее подформул. Как отмечено выше, циклические пуриновые динуклеотиды по данному изобретению содержат 2'-F замещенные формы CDN и, в частности, тиофосфаты CDN. Таким образом, могут быть получены также 2'-F замещенные Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Rp и Rp, Sp формы. Предпочтительные пурины включают, но не ограничиваются ими, аденин, гуанин, инозин, гипоксантин, ксантин, изогуанин и т.д. Моно- или ди-F-CDN по данному изобретению предпочтительно представляют собой аналоги фосфоротиоатов, включая практически чистые Sp, Sp, Rp, Rp, SpRp или Rp, Sp стереоизомеры и наиболее предпочтительно практически чистые Rp, Rp стереоизомеры.
[00163] Используемый в данном документе термин "алкил" относится к насыщенному прямому или разветвленному углеводородному радикалу, содержащему до двадцати четырех атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, без ограничения, метил, этил, пропил, бутил, изопропил, н-гексил, октил, децил, додецил и тому подобное. Алкильные группы обычно включают от 1 до 24 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до 12 атомов углерода, причем от 1 до около б атомов углерода являются более предпочтительными. Используемый в данном документе термин "низший алкил" включает от 1 до б атомов углерода. Алкильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать одну или несколько дополнительных заместительных групп.
[00164] Используемый в данном документе термин "алкенил" относится к линейному или разветвленному углеводородному цепному радикалу, содержащему до двадцати четырех атомов углерода и имеющему по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Примеры алкенильных групп включают, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, диены, такие как 1,3-бутадиен и тому подобное. Алкенильные группы обычно включают от
2 до 24 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 12 атомов углерода, причем от 2 до около б атомов углерода являются более предпочтительными. Алкенильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать одну или несколько дополнительных групп заместителей.
[00165] Используемый в данном документе термин "алкинил" относится к линейному или разветвленному углеводородному радикалу, содержащему до двадцати четырех атомов углерода и имеющему по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод. Примеры алкинильных групп включают, без ограничения, этинил, 1-пропинил, 1-бутинил и тому подобное. Алкинильные группы обычно включают от 2 до 24 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 12 атомов углерода, причем от 2 до около б атомов углерода являются более предпочтительными. Алкинильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать одну или несколько дополнительных групп заместителей.
[00166] Используемый в данном документе термин "ацил" относится к радикалу, образованному удалением гидроксильной группы из органической кислоты и имеет общую формулу -С (О) -X, где X обычно является алифатическим, алициклическим или ароматическим. Примеры включают алифатические карбонилы, ароматические карбонилы, алифатические сульфонилы, ароматические сульфинилы, алифатические сульфинилы, ароматические фосфаты, алифатические фосфаты и тому подобное. Ацильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00167] Термин "алициклический" относится к циклической кольцевой системе, в которой кольцо является алифатическим. Кольцевая система может содержать одно или несколько колец, в которых по меньшей мере одно кольцо является алифатическим. Предпочтительные алициклики включают кольца, имеющие от около 5 до около 9 атомов углерода в кольце. Алициклические соединения, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00168] Используемый в данном документе термин "алифатический" относится к линейному или разветвленному
углеводородному радикалу, содержащему до двадцати четырех атомов углерода, где насыщение между любыми двумя атомами углерода представляет собой одинарную двойную или тройную связь. Алифатическая группа предпочтительно содержит от 1 до 2 4 атомов углерода, более типично от 1 до 12 атомов углерода, причем более предпочтительно от 1 до около б атомов углерода. Прямая или разветвленная цепь алифатической группы может быть прервана одним или несколькими гетероатомами, которые включают азот, кислород, серу и фосфор. Такие алифатические группы, прерванные гетероатомами, включают, без ограничения, полиалкоксиды, такие как полиалкиленгликоли, полиамины и полиимины. Алифатические группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00169] Используемый в данном документе термин "алкокси" относится к радикалу, образованному между алкильной группой и атомом кислорода, где атом кислорода используется для присоединения алкоксигруппы к исходной молекуле. Примеры алкоксигрупп включают, без ограничения, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, неопентилокси, н-гексокси и тому подобное. Используемые в данном документе алкоксигруппы могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00170] Используемый в данном документе термин "аминоалкил" относится к аминозамещенному С\-Сп алкильному радикалу. Алкильная часть радикала образует ковалентную связь с родительской молекулой. Аминогруппа может быть расположена в любом положении, и аминоалкильная группа может быть замещена дополнительной группой заместителей в алкильных и/или амино-частях.
[00171] Используемые в данном документе термины "аралкил" и "арилалкил" относятся к ароматической группе, которая ковалентно связана с алкильным радикалом С\-Сп. Алкильная радикальная часть образующейся аралкильной (или арилалкильной) группы образует ковалентную связь с исходной молекулой. Примеры включают, без ограничения, бензил, фенэтил и тому подобное. Аралкильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно
включать дополнительные группы заместителей, присоединенные к алкилу, арилу или обеим группам, которые образуют радикальную группу.
[00172] Используемые в данном документе термины "арил" и "ароматический" относятся к моно- или полициклическим радикалам карбоциклической кольцевой системы, имеющим одно или несколько ароматических колец. Примеры арильных групп включают, без ограничения, фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, иденил и тому подобное. Предпочтительные арильные кольцевые системы имеют от около 5 до около 2 0 атомов углерода в одном или нескольких кольцах. Арильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00173] Термины "гало" и "галоген", используемые в данном документе, относятся к атому, выбранному из фтора, хлора, брома и йода.
[00174] Термины "гетероарил" и "гетероароматический", используемые в данном документе, относятся к радикалу, содержащему моно- или полициклическое ароматическое кольцо, кольцевую систему или конденсированную кольцевую систему, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим и включает один или несколько гетероатомов. Гетероарил также включает конденсированные кольцевые системы, в том числе системы, в которых одно или несколько конденсированных колец не содержат гетероатомов. Гетероарильные группы обычно включают один кольцевой атом, выбранный из серы, азота или кислорода. Примеры гетероарильных групп включают, без ограничения, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, оксазолил, изооксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тиофенил, фуранил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, хиноксалинил и тому подобное. Гетероарильные радикалы могут быть присоединены к исходной молекуле непосредственно или через связывающий фрагмент, такой как алифатическая группа или гетероатом. Гетероарильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей.
[00175] Используемый в данном документе термин "гетероарилалкил" относится к гетероарильной группе, как определено ранее, которая дополнительно включает ковалентно присоединенный С i -С ц алкильный радикал. Алкильная радикальная часть образующейся гетероарилалкильной группы способна образовывать ковалентную связь с исходной молекулой. Примеры включают, без ограничения, пиридинилметил, пиримидинилэтил, нафтиринилпропил и тому подобное. Гетероарилалкильные группы, используемые в данном документе, могут необязательно включать дополнительные группы заместителей на одну или обе гетероарильные или алкильные части.
[00176] Как отмечено выше, моно- или ди-F CDN соединения также включают пролекарственные формы CDN и, в частности, CDN-тиофосфаты. Пролекарства могут модифицировать физико-химические, биофармацевтические и фармакокинетические свойства лекарств. Традиционные пролекарства классифицируются как препараты, которые активируются путем трансформации in vivo с образованием активного лекарственного средства. Причинами развития пролекарства являются, как правило, плохая водная растворимость, химическая нестабильность, низкая биодоступность полости рта, отсутствие проникновения через гематоэнцефалитический барьер и высокий метаболизм первого прохода, связанный с исходным лекарственным средством. Подходящие пролекарственные фрагменты описаны, например, в "Prodrugs and Targeted Delivery," J. Rautico, Ed., John Wiley & Sons, 2011.
[00177] Термин "практически чистый", используемый в данном документе в отношении дитиодифосфатных циклических пуриновых динуклеотидов, относится к форме Rp, Rp или Rp, Sp, которая по меньшей мере на 7 5% чистая по сравнению с другими возможными стереохимическими структурами в хиральных центрах фосфора, указанных в моно - или ди-F-RR-CDN соединениях, как описано в данном документе, таких как соединения формулы II. В качестве примера, "практически чистый З'З' RR- (2'F-A) (2'F-A)" будет по меньшей мере на 75% чистым по отношению к формам Rp, Sp и Sp, Sp, т.е. по отношению к З'З ' RS- (2'F-A) (2'F-A) и З'З ' SS
(2'F-A) (2'F-A). В предпочтительных вариантах реализации практически чистый циклический пуриновый динуклеотид является по меньшей мере на 85% чистотым, по меньшей мере на 90% чистым, по меньшей мере на 95% чистым, по меньшей мере на 97% чистым и по меньшей мере на 99% чистым. Хотя по существу чистый циклический пуриновый динуклеотидный препарат по изобретению является "стереохимически чистым", это не означает, что все CDN в препарате, имеющем конкретную стереохимическую структуру в этих хиральных центрах, в остальном идентичны. Например, практически чистый циклический пуриновый динуклеотидный препарат может содержать комбинацию З'З ' RR- (2'F-A) (2'F-A) и З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-A) и по-прежнему представлять собой практически чистый циклический пуриновый динуклеотидный препарат. Такой препарат может также включать другие компоненты, как описано ниже, которые являются предпочтительными для лечения пациентов, при условии, что все CDN в препарате имеют определенную стереохимическую структуру в этих хиральных центрах.
[00178] Моно- или ди-F-CDN соединения и их композиции, описанные в данном документе, могут быть введены хозяину либо отдельно, либо в комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом в количестве, достаточном для индукции, модификации или стимуляции соответствующего иммунного ответа. Иммунный ответ может включать, без ограничения, специфический иммунный ответ, неспецифический иммунный ответ, как специфический, так и неспецифический ответ, врожденный ответ, первичный иммунный ответ, адаптивный иммунитет, вторичный иммунный ответ, иммунный ответ памяти, активацию иммунных клеток, иммунную клеточной пролиферации, дифференцировку иммунных клеток и экспрессию цитокинов. В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединения и их композиции, описанные в данном документе, вводят в сочетании с одной или несколькими дополнительными композициями, включая вакцины, предназначенные для стимуляции иммунного ответа на один или несколько заранее определенных антигенов; вспомогательные вещества; CTLA-4 и PD-1 антагонисты пути, липиды, липосомы, химиотерапевтические агенты, иммуномодулирующие клеточные линии и т.д.
[00179] Моно- или ди-F-CDN соединения и их композиции,
описанные в данном документе, могут вводиться до, после и/или
одновременно с дополнительной терапевтической или
профилактической композицией или способом. К ним относятся, без
ограничения, костимуляторная молекула В7, интерлейкин-2,
интерферон-у, GM-CSF, CTLA-4 антагонисты, лиганд ОХ-40/ОХ-40,
лиганд CD4 0/CD4 0, саррагостим, левамизол, вирус вакцинации,
Bacille Calmette -Guerin (BCG), липосомы, квасцы, полный или
неполный адъювант Фрейнда, детоксифицированные эндотоксины,
минеральные масла, поверхностно-активные вещества, такие как
липолецитин, плюронические полиолы, полианионы, пептиды и
масляные или углеводородные эмульсии. Предпочтительны носители
для индуцирования Т-клеточного иммунного ответа, которые
предпочтительно стимулируют реакцию цитолитической Т-клетки по
сравнению с ответом антитела, хотя могут быть использованы и те,
которые стимулируют оба типа ответа. В тех случаях, когда агент
представляет собой полипептид, можно вводить сам полипептид или
полинуклеотид, кодирующий полипептид. Носитель может
представлять собой клетку, такую как антигенпредставляющая клетка (АРС) или дендритная клетка. К клеткам, представляющим антиген, относятся такие типы клеток, как макрофаги, дендритные клетки и В-клетки. Другие профессиональные антигенпредставляющие клетки включают моноциты, клетки Купфера маргинальной зоны, микроглию, клетки Лангерганса, междигитирующие дендритные клетки, фолликулярные дендритные клетки и Т-клетки. Также можно использовать факультативные антигенпредставляющие клетки. Примеры факультативных антигенпредставляющих клеток включают астроциты, фолликулярные клетки, эндотелий и фибробласты. Носителем может быть бактериальная клетка, которая трансформируется для экспрессии полипептида или доставки полинуклеотида, который затем экспрессируется в клетках вакцинированного индивидуума. Адъюванты, такие как гидроксид алюминия или фосфат алюминия, могут быть добавлены для повышения способности вакцины запускать, усиливать или продлевать иммунный ответ. Дополнительные материалы, такие как цитокины, хемокины и
последовательности бактериальных нуклеиновых кислот, такие как CpG, агонист толл-подобного рецептора (TLR) 9, а также дополнительные агонисты TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, включая липопротеин, LPS, монофосфорилпирид А, липотейхоевую кислоту, имиквимод, ресиквимод и, кроме того, агонисты, индуцируемые ретиноевой кислотой, I (RIG-I), такие как поли 1:С, используемые отдельно или в комбинации с описанными композициями, также потенциальных адъювантов. Другие типичные примеры адъювантов включают синтетический адъювант QS-21, содержащий гомогенный сапонин, очищенный от коры Quillaja saponaria и Corynebacterium parvum (McCune et al., Cancer, 1979, 43: 1619) . Понятно, что адъювант подвергается оптимизации. Другими словами, квалифицированный специалист может участвовать в обычных экспериментах, чтобы определить лучший адъювант для использования.
[00180] Способы совместного введения с дополнительным терапевтическим агентом хорошо известны в данной области
(Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo
(eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA) . Как правило, совместное введение или введение вместе указывает на лечение субъекта двумя или более агентами, при этом агенты могут вводиться одновременно или в разное время. Например, агенты могут быть доставлены одному субъекту в виде отдельных введений, которые могут быть, по существу, в одно и то же время или в разное время и которые могут быть одним и тем же путем или разными путями введения. Такие агенты могут быть доставлены одному субъекту в одном и том же введении (например, в том же составе) , так что их вводят одновременно одним и тем же способом введения.
[00181] Из-за адъювантных свойств соединений по данному изобретению их применение может также сочетаться с другими
терапевтическими модальностями, включая другие вакцины, адъюванты, антиген, антитела и иммуномодуляторы. Примеры приведены ниже. Адъюванты
[00182] В дополнение к моно- или ди-F-CDN соединениям и их композициям, описанным в данном документе, композиции или способы по данному изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько дополнительных веществ, которые по своей природе могут действовать, чтобы стимулировать или иным образом использовать иммунный системы для реагирования на раковые антигены, присутствующие в целевой опухолевой клетке (клетках). Такие адъюванты включают, но не ограничиваются ими, липиды, липосомы, инактивированные бактерии, которые индуцируют врожденный иммунитет (например, инактивированный или ослабленный Listeria monocytogenes ) , композиции, которые опосредуют врожденную иммунную активацию через Toll-подобные рецепторы (TLR), (NOD)-подобные рецепторы (NLR), I-подобные рецепторы на основе гена (RIG), индуцируемого ретиноиновой кислотой (RLR) , лектиновые рецепторы С-типа (CLR) и/или связанные с патогенами молекулярные структуры ("PAMPS"). Примеры РАМР включают липопротеины, липополипептиды, пептидогликаны, зимозан, липополисахарид, порин нейсерии, флагеллин, профиллин, галактоцерамид, мурамилдипептид. Пептидогликаны, липопротеины и липотейхоевые кислоты являются компонентами клеточной стенки грамположительных бактерий. Липополисахариды экспрессируются большинством бактерий, причем одним из примеров является MPL. Флагеллин относится к структурному компоненту бактериальных жгутиков, который секретируется патогенными и комменсальными бактериями, а-галактосилцерамид (a-GalCer) является активатором натуральных киллеров Т (NKT). Мурамиловый дипептид является биоактивным пептидогликановым мотивом, общим для всех бактерий. Этот список не предназначен для ограничения. Предпочтительные адъювантные композиции описаны ниже.
Ингибиторы иммунной контрольной точки
[00183] Моно- или ди-F CDN соединения, как описано в данном документе, могут быть использованы в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки, таким как ингибитор иммунной контрольной точки, выбранный из группы, состоящей из антагониста пути CTLA-4, антагониста пути PD-1, антагониста пути Tim-3, антагониста пути Vista, антагониста пути BTLA, антагониста пути LAG-3 или антагониста пути TIGIT. В некоторых вариантах реализации ингибитор иммунной контрольной точки выбирают из группы, состоящей из антитела против CTLA-4, антитела против PD-1, антитела против Tim-З, антитела против Vista, антитела против BTLA, антитела против LAG-3 или антитела против TIGIT.
[00184] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с антагонистами пути CTLA-4. В некоторых вариантах реализации комбинация используется для лечения солидной опухоли или гематологической злокачественной опухоли. CTLA-4 считается важным отрицательным регулятором адаптивного иммунного ответа. Активированные Т-клетки активируют CTLA-4, который связывает CD8 0 и CD8 6 с антигенпредставляющими клетками с более высоким сродством, чем CD2 8, тем самым ингибируя стимуляцию Т-клеток, экспрессию гена IL-2 и пролиферацию Т-клеток. Противоопухолевые эффекты блокады CTLA4 наблюдались в мышиных моделях рака толстой кишки, метастатического рака предстательной железы и метастатической меланомы. В некоторых вариантах реализации антагонист пути CTLA-4 представляет собой молекулу антитела против CTLA-4, выбранную из группы, состоящей из тремелимумаба и ипилимумаба. В некоторых вариантах реализации антитело против CTLA-4 представляет собой антитело против CTLA-4, как описано, например, в патенте США № 5811097.
[00185] Ипилимумаб (Yervoy (tm), антитело CTLA-4, также известное как MDX-010, CAS № 477202-00-9) и тремлимумаб (моноклональное антитело IgG2, доступное от Pfizer, ранее известное как тицилимумаб, СР-б75,20б), представляют собой гуманизированные моноклональные антитела которые связываются с человеческим CTLA4 и препятствуют его взаимодействию с CD8 0 и CD8 6. Исследования фазы I и II с использованием ипилимумаба и
тремлимумаба продемонстрировали клиническую активность у больных раком. Другими отрицательными иммунными регуляторами, которые могут быть нацелены аналогичной стратегией, являются аттенюатор запрограммированной клеточной смерти 1 (PD-1), В и Т-лимфоцитов, трансформирующий фактор роста бета (3, интерлейкин-10 и фактор роста эндотелия сосудов.
[00186] В некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединения, как описано в данном документе, могут быть использованы в комбинации с антителом против CTLA-4 и анти- PD 1. В одном варианте реализации комбинация включает молекулу антитела против PD-1, например, как описано в данном документе, и антитело против CTLA-4, например, ипилимумаба. Типичные дозы, которые могут быть использованы, включают дозу молекулы антитела против PD-1 около от 1 до 10 мг/кг, например 3 мг/кг, и дозу антитела против CTLA-4, например, ипилимумаба, около 3 мг/кг.
[00187] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном
документе, могут быть использованы в комбинации с антагонистами
пути PD-1. В некоторых вариантах реализации комбинация
используется для лечения солидной опухоли или гематологической
злокачественной опухоли. PD-1 является еще одним отрицательным
регулятором адаптивного иммунного ответа, который
экспрессируется на активированных Т-клетках. PD-1 связывается с В7-Н1 и B7-DC, а включение PD-1 подавляет активацию Т-клеток. Противоопухолевые эффекты были продемонстрированы с помощью блокады PD-1. В литературе сообщалось, что молекулы антител против PD-1 (например, ниволумаб (Opdivo(tm)) , пембролизумаб (Keytruda(tm)) и пидилизумаб) и АМР-224 являются примерами блокаторов путей PD-1, которые могут найти применение в данное изобретение. В некоторых вариантах реализации антагонист пути PD-1 представляет собой молекулу антитела против PD-1, выбранную из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба или пидилизумаба.
[00188] В некоторых вариантах реализации антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб. Альтернативные названия для ниволумаба включают MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538 или BMS
936558. В некоторых вариантах реализации антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб (CAS регистрационный номер: 94641494-4) . Ниволумаб является полностью человеческим IgG4 моноклональным антителом, которое специфически блокирует PD1. Ниволумаб (клон 5С4) и другие человеческие моноклональные антитела, которые специфически связываются с PD1, описаны в патенте США 8 008 449 и WO2006/121168. В одном варианте реализации ингибитор PD-1 представляет собой ниволумаб и имеющий описанную в данном документе последовательность (или последовательность, практически идентичную или сходную с ней, например, последовательность по меньшей мере на 85%, 90%, 95% или более идентичную определенной последовательности).
[00189] Аминокислотная последовательность тяжелой цепи
ниволумаба выглядит следующим образом:
QVQLVESGGGWQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSV KGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTK TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW VDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 2)
[00190] Аминокислотная последовательность легкой цепи
ниволумаба выглядит следующим образом:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSG SGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID N0: 3)
[00191] В некоторых вариантах реализации антитело против PD-1 представляет собой пембролизумаб. Пембролизумаб (также называемый лабролизумаб, МК-3475, МК03475, SCH-90 04 7 5 или KEYTRUDA(r), Merck) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG4, которое связывается с PD-1. Пембролизумаб и другие гуманизированные анти-PD-l антитела описаны в Hamid, О. et al. (2013) New England Journal of
Medicine 369 (2) : 134-44, США 8354509 и WO2009/114335. В одном
варианте реализации ингибитор PD-1 представляет собой
пембролизумаб и имеющий описанную в данном документе
последовательность (или последовательность, практически
идентичную или сходную с ней, например, последовательность по меньшей мере на 85%, 90%, 95% или более идентичную определенной последовательности).
[00192] Аминокислотные последовательности тяжелой цепи пембролизумаба выглядят следующим образом:
QVQLVQSGVE
VKKPGASVKV
SCKASGYTFT
NYYMYWVRQA
PGQGLEWMGG
INPSNGGTNF
NEKFKNRVTL
TTDSSTTTAY
MELKSLQFDD
TAVYYCARRD
100
YRFDMGFDYW
GQGTTVTVSS
ASTKGPSVFP
LAPCSRSTSE
STAALGCLVK
150
DYFPEPVTVS
WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS
GLYSLSSWT
VPSSSLGTKT
200
YTCNVDHKPS
NTKVDKRVES
KYGPPCPPCP
APEFLGGPSV
FLFPPKPKDT
250
LMISRTPEVT
CVWDVSQED
PEVQFNWYVD
GVEVHNAKTK
PREEQFNSTY
300
RWSVLTVLH
QDWLNGKEYK
CKVSNKGLPS
SIEKTISKAK
GQPREPQVYT
350
LPPSQEEMTK
NQVSLTCLVK
GFYPSDIAVE
WESNGQPENN
YKTTPPVLDS
400
DGSFFLYSRL
TVDKSRWQEG
NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS
LSLSLGK
447
(SEQ ID NO: 4)
[00194] В некоторых вариантах реализации антитело против PD-1 представляет собой пидилизумаб. Пидилизумаб (СТ-011; Cure Tech) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgGlk, которое связывается с PD 1. Пидилизумаб и другие гуманизированные анти-PD-l моноклональные антитела описаны в WO2009/101611.
[00195] В некоторых вариантах реализации антитело против PD-1 представляет собой AMP 514 (Amplimmune) или антитело против
PD-1, как описано в в патенте США № 8609, 089, в патенте США № 2010028330 и/или в патенте США № 20120114649.
[00196] В некоторых вариантах реализации антагонист пути PD-1 представляет собой молекулу антитела против PD-1, раскрытую в в патенте США № 2015/0210769, опубликованном 30 июля 2015 года, озаглавленном "Молекулы антител к PD-1 и их использование".
[00197] В одном варианте реализации молекула антитела
против PD-1 содержит по меньшей мере один или два вариабельных
домена тяжелой цепи (необязательно включающие константную
область), по меньшей мере один или два вариабельного домена
легкой цепи (необязательно включающий константную область) или
оба, включая аминокислотную последовательность ВАР049-С1опе-А,
BAP049-Clone-B, ВАР049-Clone-C, ВАР049-Clone-D или ВАР049-С1опе-
Е; или как описано в таблице 1 в патенте США № 2015/0210769, или
кодируется нуклеотидной последовательностью в таблице 1 там же;
или последовательностью, практически идентичную ( например, по
меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99%
идентичности или выше) любой из вышеуказанных
последовательностей. Молекула антитела анти PD 1, необязательно,
содержит лидерную последовательность из тяжелой цепи, легкой
цепи или того и другого, как показано в таблице 4 в патенте США
№ 2015/0210769; или последовательность, практически идентичную
ей. Раскрытие изобретения в патенте США № 2015/0210769 включено
сюда посредством ссылки, поскольку оно относится к
аминокислотным последовательностям и нуклеотидным
последовательностям в таблице 4 в нем.
[00198] В еще одном варианте реализации молекула антитела против PD-1 содержит по меньшей мере одну, две или три области комплементарности (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи антитела, описанной в петенте США № 2015/0210769, например, антитело, выбранное из любого из BAP049-hum01, ВАР049-hum02, ВАР049-hum03, ВАР049-hum04, BAP049-hum05, BAP049-hum06, BAP049-hum07, BAP049-humO8, BAP049-hum09, BAP049-huml0, BAP049-huml1, BAP049-huml2, BAP049-huml3, BAP049-huml4, BAP049-huml5, BAP049-huml6, BAP049-Clone-A, BAP049-Clone-B, BAP049-Clone-C, BAP049-Clone-D или BAP049-Clone-E; или как описано в таблице 1 в нем, или кодируется нуклеотидной последовательностью в таблице 1 в нем; или последовательностью, практически идентичной (например, по
меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% идентичной или выше) любой из вышеуказанных последовательностей.
[00199] В еще одном варианте реализации молекула антитела против PD-1 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка тяжелой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблице 1 в патенте США № 2015/0210769 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем.
[00200] В еще одном варианте реализации молекула антитела против PD-1 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка легкой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблице 1 в патенте США № 2015/0210769 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В некоторых вариантах реализации молекула антитела против PD-1 включает замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи. В одном варианте реализации молекула антитела против PD-1 включает замену в CDR3 легкой цепи в положении 102 области вариабельного участка, например замена цистеина на тирозин или цистеина на сериновый остаток, в положении 102 области вариабельного участка в соответствии с Таблицей 1 (например, SEQ ID NO: 16 или 24 для мышиных или химерных, немодифицированных; или любой из SEQ ID NO: 34, 42, 46, 54, 58, 62, 66, 70, 74 или 78 для модифицированной последовательности).
[00201] В другом варианте реализации молекула антитела
против PD-1 содержит по меньшей мере один, два, три, четыре,
пять или шесть CDR (или все вместе CDR) из вариабельной области
тяжелой и легкой цепи, содержащей аминокислотную
последовательность, показанную в Таблице 1 из патента США № 2015/0210769 или кодируется нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем.
[00202] В одним варианте реализации молекула антитела
против PD-1 содержит: (а) вариабельный участок тяжелой цепи
(VH) , содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ
ID N0: 4, аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID N0:
5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID N0: 3; и
вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную
последовательность VLCDR1 из SEQ ID N0: 13, аминокислотную
последовательность VLCDR2 из SEQ ID N0: 14 и аминокислотную
последовательность VLCDR3 из SEQ ID N0: 33, каждая из которых
раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0210769; (b) VH,
содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную
из SEQ ID N0: 1; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ
ID N0: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID
N0: 3; и VL, содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1
из SEQ ID N0: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 из
SEQ ID N0: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ
ID N0: 32, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США №
2015/0210769; (с) VH, содержащий аминокислотную
последовательность VHCDR1 из SEQ ID N0: 224, аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID N0: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID N0: 3; и VL, содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID N0: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID N0: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID N0: 33, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0210769; или (d) VH, содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID N0: 224; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID N0: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID N0: 3; и VL, содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID N0: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID N0: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID N0: 32,
каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0210769.
[00203] В другом варианте реализации молекула антитела против PD-1 содержит (i) вариабельный участок тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 224; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 5; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0210769.
[00204] В некоторых вариантах реализации антагонист пути PD-1 представляет собой иммуноадгезин (например, иммуноадгезин, содержащий внеклеточную или PD-1 связывающая часть PD-L1 или PD-L2) слит с константным участком (например, Fc-область последовательности иммуноглобулина). В некоторых вариантах реализации ингибитор PD-1 представляет собой АМР-224 (B7-DCIg, Amplimmune, например, раскрытый в WO 02010/027827 и WO2011/066342) представляет собой растворимый в плазме рецептор PD-L2 Fc, который блокирует взаимодействие между PD-1 и В7-Н1.
[00205] В некоторых вариантах реализации антагонист пути
PD-1 представляет собой ингибитор PD-L1 или PD-L2. В некоторых
вариантах реализации ингибитор PD-L1 или PD-L2 представляет
собой антитело против PD-L1 или антитело против PD-L2. В
некоторых вариантах реализации ингибитор против PD-L1 выбирают
из YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C или MDX-
1105. В некоторых вариантах реализации ингибитор PD-L1
представляет собой антитело против PD-L1 MSB0010718C.
MSB0010718C (также называемый А09-246-2, Merck Serono)
представляет собой моноклональное антитело, которое связывается
с PD-L1. MSB0010718C и другие гуманизированные антитела против
PD-L1 раскрыты в WO 2013/079174 и имеют описанную в нем
последовательность (или последовательность, практически
идентичную или сходную с ней, например, последовательность по
меньшей мере 85%, 90%, 95% идентичную указанной
последовательности или выше).
[00206] Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (SEQ
ID N0: 24, как описано в WO2013/079174) из MSB0010718C содержит,
по меньшей мере, следующее:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N0: б)
[00207] Аминокислотная последовательность легкой цепи (SEQ
ID N0: 25, как описано в WO2013/079174) из MSB0010718C содержит,
по меньшей мере, следующее:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRF SGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID N0: 7)
[00208] В одном варианте реализации ингибитор PD-L1
представляет собой YW243.55.S70. Антитело YW243.55.S70
представляет собой антитело против PD-L1, как описано в W0
2010/077634 (последовательности вариабельной области тяжелой и
легкой цепей, показанные в SEQ ID N0: 20 и 21 соответственно) и
имеющее последовательность, раскрытую там ( или
последовательность, практически идентичную или сходную с ней, например, последовательность, по меньшей мере, на 85%, 90%, 95% идентичную указанной последовательности или выше).
[00209] В одном варианте реализации ингибитор PD-L1 представляет собой MDX-1105. MDX-1105, также известен как BMS-936559, представляет собой антитело против PD-L1, раскрытое в W0 2007/005874 и с описанной в нем последовательностью (или последовательностью, практически идентичной или сходной с ней, например, последовательностью по меньшей мере на 85%, 90%, 95% или выше идентичной указанной последовательности).
[00210] В одном варианте реализации ингибитор PD-L1
представляет собой MDPL3280A (Genentech/Roche) . MDPL32 8 OA
представляет собой человеческое Fc-оптимизированное
моноклональное антитело IgGl, которое связывается с PD-L1. MDPL32 8 0A и другие человеческие моноклональные антитела к PD-L1 раскрыты в патенте США №: 7943743 и публикации на патент №: 20120039906.
[00211] В других вариантах реализации ингибитор PD-L2 представляет собой АМР-224. АМР-224 представляет собой Fc слитый растворимый в плазме рецептор PD-L2, который блокирует взаимодействие между PD1 и В7-Н1 (B7-DCIg, Amplimmune, например, как описано в W0 2010/027827 и WO2011/066342
[00212] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с антагонистами пути TIM-3. В некоторых вариантах реализации комбинация используется для лечения солидной опухоли или гематологической злокачественной опухоли. В некоторых вариантах реализации антагонист пути TIM-3 представляет собой антитела антитела к-TIM-3. В некоторых вариантах молекулы антитела против TIM-3, раскрыты в патенте США № 2015/0218274, опубликованном б августа 2015 года, озаглавленном "Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof".
[00213] В одном варианте реализации молекула антитела
против TIM-3 содержит по меньшей мере один или два вариабельных
домена тяжелой цепи (необязательно включающие константную
область), по меньшей мере один или два вариабельного домена
легкой цепи (необязательно включающий константную область) или
оба, включая аминокислотную последовательность ABTIM3, ABTIM3-
humOl, ABTIM3-hum02, ABTIM3-hum03, ABTIM3-hum04, ABTIM3-hum05,
ABTIM3-hum06, ABTIM3-hum07, ABTIM3-hum08, ABTIM3-hum09, ABTIM3-
humlO, ABTIM3-humll, ABTIM3-huml2, ABTIM3-huml3, ABTIM3-huml4,
ABTIM3-huml5, ABTIM3-huml6, ABTIM3-huml7, ABTIM3-huml8, ABTIM3-
huml9, ABTIM3-hum20, ABTIM3-hum21, ABTIM3-hum22, ABTIM3-hum2 3;
или как описано в таблице 1-4 в патенте США № 2015/0218274, или
кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1-4 там
же; или последовательностью, практически идентичной (например,
по меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или
выше идентичности) любой из вышеуказанных последовательностей.
Молекула антитела против TIM-3, необязательно, содержит лидерную
последовательность из тяжелой цепи, легкой цепи или того и
другого, как показано в патенте США № 2015/0218274; или
последовательность, практически идентичную ей. Раскрытие
изобретения в патенте США № 2015/0218274 включено в данном
документе посредством ссылки, поскольку оно относится к
аминокислотным последовательностям и нуклеотидным
последовательностям в таблицах 1-4 в нем.
[00214] В еще одном варианте реализации молекула антитела против TIM-3 содержит по меньшей мере одну, две или три области комплементарности (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи антитела, описанной в петенте США № 2015/0218274, например, антитело, выбранное из любого из АВТГМЗ-humOl, ABTIM3-hum02, ABTIM3-hum03, ABTIM3
hum04, ABTIM3-hum05, ABTIM3-hum06, ABTIM3-hum07, ABTIM3-hum08,
ABTIM3-hum09, ABTIM3-huml0, ABTIM3-humll, ABTIM3-huml2, ABTIM3-
huml3, ABTIM3-huml4, ABTIM3-huml5, ABTIM3-huml6, ABTIM3-huml7,
ABTIM3-huml8, ABTIM3-huml9, ABTIM3-hum20, ABTIM3-hum21, ABTIM3-
hum22, ABTIM3-hum2 3; или как описано в таблицах 1-4 в патенте
США 2015/0218274; или кодируется нуклеотидной
последовательностью в таблице 1-4 в нем; или последовательностью, практически идентичной (например, по меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% идентичной или выше) любой из вышеуказанных последовательностей.
[00215] В еще одном варианте реализации молекула антитела против TIM-3 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка тяжелой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблицах 1-4 в патенте США № 2015/0218274 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1-4 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1-4 в нем.
[00216] В еще одном варианте реализации молекула антитела против TIM-3 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка легкой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблицах 1-4 в патенте США № 2015/0218274 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1-4 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблицах 1-4 в нем. В некоторых вариантах реализации молекула антитела против TIM-3 включает замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи.
[00217] В другом варианте реализации молекула антитела против TIM-3 содержит по меньшей мере один, два, три, четыре, пять или шесть CDR (или все вместе CDR) из вариабельной области
тяжелой и легкой цепи, содержащей аминокислотную
последовательность, показанную в Таблицах 1-4 из патента США № 2015/0218274 или кодируется нуклеотидной последовательностью, показанной в таблицах 1-4 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблицах 1-4, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблицах 1-4 в нем.
[00218] В одним варианте реализации молекула антитела против TIM-3 содержит: (а) вариабельный участок тяжелой цепи
(VH) , содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1,
выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность
VHCDR2 из SEQ ID NO: 10; и аминокислотную последовательность
VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и вариабельный участок легкой цепи (VL),
содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID
NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO:
13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 14,
каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США №
2015/0218274; (b) VH, содержащий аминокислотную
последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 4; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: б, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США № 2015/0218274;
(с) VH, содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 25; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США № 2015/0218274; (d) VH, содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 24; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: б,
аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США № 2015/0218274; (е) VH, содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 9; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 31; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и VL, содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 12, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 14, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США № 2015/0218274; (f) VH, содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 3; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 30; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 5; и VL, содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: б, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 8, каждая из которых раскрыта в таблицах 1-4 патента США № 2015/0218274.
[00219] В некоторых вариантах реализации антагонист пути TIM-3 представляет собой антитела антитела раскрытые в патенте США № 8552156, WO 2011/155607, ЕР 2581113 или публикации патента США №: 2014/044728.
[00220] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с антагонистами пути LAG-3. В некоторых вариантах реализации комбинация используется для лечения солидной опухоли или гематологической злокачественной опухоли. В некоторых вариантах реализации антагонист пути LAG-3 представляет собой антитела антитела к-LAG-3. В некоторых вариантах молекулы антитела против LAG-3, раскрыты в патенте США № 2015/0259420, поданном 13 марта 2015 года, озаглавленном "Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof".
[00221] В одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит по меньшей мере один или два вариабельных домена тяжелой цепи (необязательно включающие константную область), по меньшей мере один или два вариабельного домена легкой цепи (необязательно включающий константную область) или оба, включая аминокислотную последовательность любой из ВАР050-humOl, BAP050-hum02, BAP050-hum20,hum03, BAP050-hum04, BAP050
hum05, BAP050-hum06, BAP050-hum07, BAP050-hum08, BAP050-hum09,
BAP050-humlO, BAP050-huml1, BAP050-huml2, BAP050-huml3, BAP050-
huml4, BAP050-huml5, BAP050-huml6, BAP050-huml7, BAP050-huml8,
BAP050-huml9, BAP050-hum20, BAP050 - huBAP050(Ser) (например,
BAP050-hum01-Ser, BAP050-hum02-Ser, BAP050-hum03-Ser, BAP050-
hum04-Ser, BAP050-hum05-Ser, BAP050-hum0б-Ser, BAP050-hum07-Ser,
BAP050-hum08-Ser, BAP050-hum09-Ser, BAP050-huml0-Ser, BAP050-
humll-Ser, BAP050-huml2-Ser, BAP050-huml3-Ser, BAP050-huml4-Ser,
BAP050-huml5-Ser, BAP050-huml8-Ser, BAP050-huml9-Ser или BAP050-
hum20-Ser), BAP050-Clone-F, BAP050-Clone-G, BAP050-Clone-H,
BAP050-Clone-I или BAP050-Clone-J; или как описано в таблице 1 в
патенте США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной
последовательностью из таблицы 1 там же; или
последовательностью, практически идентичной (например, по меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или выше идентичности) любой из вышеуказанных последовательностей. Раскрытие изобретения в патенте США № 2015/0259420 включено сюда посредством ссылки, поскольку оно относится к аминокислотным последовательностям и нуклеотидным последовательностям в таблице 1 в нем.
[00222] В еще одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит по меньшей мере одну, две или три области комплементарности (CDR) из вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи антитела, описанной в данном документе, например, антитело выбрано из любого из BAP050-hum01, BAP050-hum02, BAP050-hum20,hum03, BAP050-hum04, BAP050-hum05, BAP050-hum06, BAP050-hum07, BAP050-hum08, BAP050-hum09, BAP050-humlO, BAP050-huml1, BAP050-huml2, BAP050-huml3, BAP050-huml4, BAP050-huml5, BAP050-huml6, BAP050-huml7, BAP050-huml8, BAP050-huml9, BAP050-hum20, BAP050 - huBAP050(Ser) (например, BAP050-hum01-Ser, BAP050-hum02-Ser, BAP050-hum03-Ser, BAP050-hum04-Ser, BAP050-hum05-Ser, BAP050-humO6-Ser, BAP050-hum07-Ser, BAP050-hum08-Ser, BAP050-hum09-Ser, BAP050-huml0-Ser, BAP050-humll-Ser, BAP050-huml2-Ser, BAP050-huml3-Ser, BAP050-huml4-Ser, BAP050-huml5-Ser, BAP050-huml8-Ser, BAP050-huml9-Ser или BAP050-hum20-Ser), BAP050-Clone-F, BAP050-Clone-G, BAP050-Clone-H, BAP050-Clone-I или BAP050-Clone-J; или как описано в таблице 1 в патенте США № 2015/0259420, или кодируется нуклеотидной последовательностью из таблицы 1 там же; или последовательностью, практически идентичной (например, по
меньшей мере, на 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% или выше идентичности) любой из вышеуказанных последовательностей.
[00223] В еще одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка тяжелой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблице 1 в патенте США № 2015/0259420 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем.
[00224] В еще одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит по меньшей мере один, два или три CDR (или все CDR вместе) из вариабельного участка легкой цепи, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в таблице 1 в патенте США № 2015/0259420 или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем. В некоторых вариантах реализации молекула антитела против PD-L1 включает замену в CDR легкой цепи, например, одну или несколько замен в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи.
[00225] В другом варианте реализации молекула антитела
против LAG-3 содержит по меньшей мере один, два, три, четыре,
пять или шесть CDR (или все вместе CDR) из вариабельной области
тяжелой и легкой цепи, содержащей аминокислотную
последовательность, показанную в Таблице 1 из патента США № 2015/0259420 или кодируется нуклеотидной последовательностью, показанной в таблице 1 в нем. В одном варианте реализации один или несколько CDR (или все CDR вместе) имеют одну, две, три, четыре, пять, шесть или более замен, например аминокислотные замены или делеции, относительно указанной аминокислотной последовательности в таблице 1, или кодируется нуклеотидной последовательностью, указанной в таблице 1 в нем.
[00226] В одним варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит: (i) вариабельный участок тяжелой цепи
(VH) , содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID N0: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 2 8 6; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 2; и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0259420; и (ii) вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 10, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID N0: 12, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0259420.
[00227] В другом варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит: (i) вариабельный участок тяжелой цепи
(VH) , содержащий аминокислотную последовательность VHCDR1, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 28 6; аминокислотную последовательность VHCDR2 из SEQ ID NO: 5 и аминокислотную последовательность VHCDR3 из SEQ ID NO: 3, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0259420; и
(ii) вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность VLCDR1 из SEQ ID NO: 13, аминокислотную последовательность VLCDR2 из SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность VLCDR3 из SEQ ID NO: 15, каждая из которых раскрыта в таблице 1 патента США № 2015/0259420.
[00228] В одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 1 как раскрыто в таблице 1 патента США № 2015/0259420. В другом варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 4 как раскрыто в таблице 1 патента США № 2015/0259420. В еще одном варианте реализации молекула антитела против LAG-3 содержит аминокислотную последовательность VHCDR1 из SEQ ID NO: 28 6 как раскрыто в таблице 1 патента США № 2015/0259420.
[00229] В некоторых вариантах реализации антитело против LAG-3 представляет собой BMS-986016. BMS-986016 (также называемый BMS98 6016, Bristol-Myers Squibb) представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с LAG-3. BMS-98 6016
и другие гуманизированные антитела против LAG-3 раскрыты в петенте США 2011/0150892, WO2010/019570 и WO2014/008218. Агонисты рецепторов Т-клеток
[00230] Соединения моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, могут быть использованы в комбинации с агонистом рецептора Т-клеток, таким как агонист CD28, агонист ОХ40, агонист GITR, агонист CD137, агонист CD27 или агонист HVEM.
[00231] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с агонистом CD27. Типичные агонисты CD27 включают анти-С027-агонистическое антитело, например, как описано в публикации РСТ № W0 2012/004367.
[00232] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с агонистом GITR. В некоторых вариантах реализации комбинация используется для лечения солидной опухоли или гематологической злокачественной опухоли. Типичные агонисты GITR включают, например, слитые белки GITR и антитела против GITR (например, двухвалентные антитела анти-GITR), такие как гибридный белок GITR, описанный в патенте США №. 6111090, Европейском патенте №: 0920505В1, патенте США №: 8 586 023, РСТ публикации №: WO 2010/003118 и 2011/090754 или антитело против GITR, описанное, например, в патенте США №: 7025962, Европейском патенте №: 1947183В1, патенте США №: 7 812 135, патенте США №: 8 388 967, патенте США №: 8 591 886, Европейском патенте №: ЕР 1866339, РСТ публикации №: WO 2011/028683, патенте США №: 8 709 424, РСТ публикации №: WO 2013/039954, международной публикации №: WO2013/039954, публикации США №: US2014/0072566,международной публикации №: WO2015/026684, РСТ публикации №: WO2005/007190, РСТ публикации №: WO 2007/133822, РСТ публикации №: WO2005/055808, РСТ публикации №: WO 99/40196, РСТ публикации №: WO 2001/03720, РСТ публикации №: WO99/20758, публикации США №: 6 68 9 607, РСТ публикации №: W02006/083289, РСТ публикации №: WO 2005/115451, патенте США №: 7 618 632, РСТ публикации №: WO 2011/051726, Международной публикации №: WO2004060319 и Международной публикации №: W02014012479.
[00233] В одном варианте реализации соединения моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используют в комбинации с агонистом GITR, используемым в комбинации с ингибитором PD-1, например, как описано в WO 2015/026684.
[00234] В другом варианте реализации соединения моно- или ди-F CDN, как описано в данном документе, используют в комбинации с агонистом GITR, используемым в комбинации с агонистом TLR например, как описано в WO2004060319 и Международной публикации №: W02014012479.
[00235] TLR агонисты
[00236] Соединения моно- или ди-F CDN, как описано в данном документе, могут быть использованы в комбинации с агонистом Toll-подобного рецептора. Термин "Toll-подобный рецептор" (или "TLR"), используемый в данном документе, относится к члену семейства белков Toll-подобных рецепторов или его фрагменту, который воспринимает микробный продукт и/или инициирует адаптивный иммунный ответ. В одном варианте реализации TLR активирует дендритную клетку (DC) . Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой семейство рецепторов распознавания образов, которые первоначально были идентифицированы как сенсоры врожденной иммунной системы, которые распознают микробные патогены. TLR содержат семейство консервативных мембранных молекул, содержащих эктодомен богатых лейцином повторов, трансмембранного домена и внутриклеточного домена TIR (Toll/IL-1R). TLR распознают различные структуры в микробах, часто называемые "РАМР" (связанные с патогенами молекулярные структуры). Связывание лиганда с TLR вызывает каскад внутриклеточных сигнальных путей, которые индуцируют продукцию факторов, связанных с воспалением и иммунитетом.
[00237] У людей было определено десять TLR. TLR, которые
экспрессируются на поверхности клеток, включают TLR-1, -2, -4, -
5 и -б, тогда как TLR-3, -7/8 и -9 экспрессируются в ER
компартменте. Подмножества человеческих дендритных клеток могут
быть идентифицированы на основе различных паттернов экспрессии
TLR. В качестве примера миелоидное или "обычное" подмножество DC
(mDC) экспрессирует TLR 1-8 при стимуляции и производятся каскад
маркеров активации (например, CD80, CD86, МНС класса I и II,
CCR7), провоспалительных цитокинов и хемокинов. Результатом этой
стимуляции и результирующей экспрессии является
антигенспецифическое праймирование CD4+H С08+Т-клеток. Эти DC приобретают повышенную способность принимать антигены и представлять их в соответствующей форме Т-клеткам. Напротив, плазмоцитоидное подмножество DC (pDC) экспрессирует только TLR7 и TLR9 при активации, с последующей активацией NK-клеток, а
также Т-клеток. Поскольку умирающие опухолевые клетки могут неблагоприятно влиять на функцию DC, было высказано предположение, что активация DC с агонистами TLR может быть полезна для праймирования противоопухолевого иммунитета в подходе иммунотерапии к лечению рака. Также было высказано предположение, что для успешного лечения рака молочной железы с использованием радиации и химиотерапии требуется активация TLR4.
[00238] Агонисты TLR, известные в данной области, и открытие в данном изобретении включает, но не ограничивается ими, следующее:
Pam3Cys, агонист TLR-1/2;
CFA, агонист TLR-2;
MALP2, агонист TLR-2;
Pam2Cys, агонист TLR-2;
FSL-1, агонист TLR-2;
Hib-OMPC, агонист TLR-2;
полирибозиновую: полирибоцитидную кислоту (поли I: С), агонист TLR-3;
полиаденозин-полиуридиловую кислоту (поли AU) , агонист TLR-
Полиинозино-полицитидиловую кислоту, стабилизированную поли-Ь-лизином и карбоксиметилцеллюлозой (Хилтоол(r)) , агонист TLR-3;
монофосфориловый липид A (MPL), агонист TLR-4; LPS, агонист TLR-4;
бактериальный флагеллин, агонист TLR-5;
сиалил-Tn (STn), углевод, связанный с муцином MUC1 ряда раковых клеток человека и агонист TLR-4; имиквимод, агонист TLR-7; резиквимод, агонист TLR-7/8; локсорибин, агонист TLR-7/8; а также
неметилированный CpG-динуклеотид (CpG-ODN), агонист TLR-9.
[00239] Из-за их адъювантных свойств агонисты TLR предпочтительно используют в комбинации с другими вакцинами, адъювантами и/или иммуномодуляторами и могут быть объединены в различных комбинациях. Таким образом, в некоторых вариантах реализации моно- или ди-F-CDN соединения, которые связываются со STING и индуцируют зависимую от STING активацию ТВК1 и инактивированную опухолевую клетку, которая экспрессирует и секретирует один или несколько цитокинов, которые стимулируют
индукцию, рекрутирование и/созревание, как описано в данном документе, можно вводить вместе с одним или несколькими агонистами TLR для терапевтических целей.
[00240] Терапевтические средства на основе антител
[00241] Соединения моно- или ди-F-CDN, описанные в данном документе, могут быть использованы в комбинации с терапевтическими антителами. В некоторых вариантах реализации механизм действия терапевтического антитела представляет собой антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC). ADCC является механизмом опосредованной клетками иммунной защиты, при которой эффекторная клетка иммунной системы активно лизирует клетку-мишень, чьи мембранно-поверхностные антигены связаны специфическими антителами. Это один из механизмов, посредством которых антитела, как часть гуморального иммунного ответа, могут действовать, чтобы ограничить и сдерживать инфекцию. Классический ADCC опосредуется клетками натуральными киллерами (NK); макрофаги, нейтрофилы и эозинофилы также могут опосредовать ADCC. ADCC является важным механизмом действия терапевтических моноклональных антител, включая трастузумаб и ритуксимаб, против опухолей. Соединения по данному изобретению могут действовать для усиления ADCC.
[00242] Ниже приведен примерный список антител, которые могут быть использованы вместе с моно- или ди-F-CDN соединениями данного изобретения.
[00243] Муромонаб-СОЗ: Используется для предотвращения острого отторжения органа, например, почек, трансплантатов. Гуманизированные версии демонстрируют перспективу в борьбе с аутоиммунным нарушением бета-клеток при сахарном диабете 1-го типа.
[00244] Инфликсимаб (Remicade(r)) и адалимумаб (Humira(r)) : Связывается с фактором некроза опухоли-альфа (TNF-oc) . Используется при некоторых воспалительных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит, псориаз, болезнь Крона.
[00245] Омализумаб (Xolair(r)) . Связывается с IgE, таким образом предотвращая связывание IgE с тучными клетками. Используется против аллергической астмы.
[00246] Даклизумаб (Zenapax(r)) . Связывается с частью рецептора IL-2, экспонированного на поверхности активированных Т-клеток. Используется для предотвращения острого отторжения трансплантированных почек.
[00247] Ритуксимаб (торговое Ha3Bamie=Rituxan(r)) .
Связывается с молекулой CD2 0, обнаруженной на большинстве В-клеток, и используется для лечения В-клеточных лимфом.
[00248] Ибритумомаб (торговое Ha3Bamie=Zevalin(r)) . Это моноклональное антитело против молекулы CD2 0 на В-клетках (и лимфомах), конъюгированных с изотопами. Предоставляется пациенту с лимфомой, с дополнением ритуксаном.
[00249] Тоситумомаб (Веххаг(r)) . Это конъюгат моноклонального антитела против CD20 и радиоактивного изотопа йод-131 (1311) .
[00250] Цетуксимаб (Erbitux(r)) . Блокирует HER1, рецептор эпидермального фактора роста (EGF), который обнаружен на некоторых опухолевых клетках (некоторые раковые опухоли молочной железы, лимфомы).
[00251] Трастузумаб (Герцептин(r)) . Блокирует HER2, рецептор фактора роста, чрезмерно экспрессирующийся в примерно 2 0% случаев рака молочной железы.
[00252] Adcetris(r). Конъюгат моноклонального антитела, который связывает CD3 0, молекулу клеточной поверхности, экспрессируемую клетками некоторых лимфом, но не обнаруженную на нормальных стволовых клетках, необходимых для репопуляции костного мозга.
[00253] Алемтузумаб (Campath-1H(r)). Связывается с CD52, молекулой, обнаруженной на лимфоцитах, и истощает как Т-клетки, так и В-клетки. Производит полную ремиссию хронического лимфоцитарного лейкоза и демонстрирует перспективу предотвратить отторжение трансплантатов почки.
[00254] Lym-1 (Oncolym(r)) . Связывается с антигеном гистосовместимости, кодируемомым HLA-DR, который может быть экспрессирован на высоких уровнях на клетках лимфомы.
[00255] Ипилимумаб (Yervoy(r)) , который действует для усиления собственного иммунного ответа организма на опухоли.
[00256] Витаксин. Связывается с сосудистым интегрином (альфа^/бета-З) , обнаруженным на кровеносных сосудах опухолей, но не на кровеносных сосудах, снабжающих нормальные ткани. В клинических испытаниях II фазы, Витаксин продемонстрировал некоторые перспективы в сокращении твердых опухолей без вредных побочных эффектов.
[00257] Бевацизумаб (Авастин(r)) . Связывается с сосудистым эндотелиальным фактором роста (VEGF), препятствующим его
связыванию с его рецептором. Используется для лечения колоректального рака.
[00258] Абциксимаб (ReoPro(r)) . Ингибирует сгущение тромбоцитов путем связывания рецепторов на их поверхности, которые обычно связаны фибриногеном. Помогает в предотвращении повторного лечения коронарных артерий у пациентов, перенесших ангиопластику.
[00259] Дополнительные терапевтические антитела, которые могут быть использованы в сочетании с моно- или ди-F-CDN соединениями, как описано в данном документе, включают ингибитор пролактинового рецептора (PRLR), например, как описано в патенте США № 7 8 67493, ингибитор HER3, например, как описано в РСТ публикации № W0 2012/022814, ингибитор EGFR2 и/или EGFR4, например, как описано в РСТ публикации № W0 2014/160160, ингибитор M-CSF, например, как описано в РСТ публикации № WO 2004/045532, антитело против APRIL, например, как описано в патенте США 8895705, или анти-SIRPa или анти-С047-антитело, например, как описано в патенте США № 8728476 и патенте США №8562997.
[00260] В одном варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-Р-СБЫ-соединений, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором пролактинового рецептора (PRLR), молекулой моноклонального антитела человека (соединение А2 6), как описано в патенте США 7867493), для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор PRLR представляет собой человеческое моноклональное антитело (соединение А26), раскрытое в патенте США 7867493. В одном варианте реализации, моно- или ди-F-CDN соединение используют в комбинации с молекулой человеческого моноклонального антитела (соединение А26), описанного в патенте США 7867493 для лечения расстройства, такого как, рак, рак предстательной железы или рак молочной железы.
[00261] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором HER3, соединением А31 или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2012/022814, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор HER3 представляет собой соединение
А31 или соединение, раскрытое в РСТ публикации W0 2012/022814. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением А31 или соединением, раскрытым в РСТ публикации WO 2012/022814, для лечения расстройства, такого как рак желудка, рак пищевода, рак головы и шеи, плоскоклеточный рак, рак желудка, рак молочной железы ( например, метастатический рак молочной железы) или рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта. В некоторых вариантах реализации соединение А31 представляет собой молекулу человеческого моноклонального антитела. В одном варианте реализации ингибитор HER3 или соединение А31 вводят в дозе около 3, 10, 2 0 или 4 0 мг/кг, например, один раз в неделю (QW) . В одном варианте реализации соединение вводят в дозе около 3-10, 10-20 или 20-40 мг/кг.
[00262] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-Р-СБЫ-соединений, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитора FGFR2 и/или FGFR4, соединения А32 или соединения, раскрытого в РСТ публикации № WO 2014/160160 ( например, конъюгат с молекулой антитела против FGFR2 и/или FGFR4, например mAb 12425, как описано в нем) для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор FGFR2 и/или FGFR4 представляет собой соединение А32 или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2014/160160. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением А32 или в дополнительной комбинации с соединением, как описано в таблице 2, для лечения расстройства, такого как рак, рак желудка, рак молочной железы, рабдомиосаркома, рак печени, рак надпочечников, рак легких, рак пищевода, рак толстой кишки или рак эндометрия. В некоторых вариантах реализации соединение А32 представляет собой конъюгат лекарственного средства молекулы антитела против FGFR2 и/или FGFR4, например mAb 12 42 5.
[00263] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором М CSF соединением АЗЗ или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2004/045532 (например, молекулой антитела или Fab фрагмента против M-CSF), для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном
варианте реализации ингибитор М-КСФ представляет собой соединение АЗЗ или соединение, раскрытое в РСТ публикации № W0 2004/045532. В одном варианте реализации, моно- или ди-F-CDN соединение используют в комбинации с соединением АЗЗ или соединением, раскрытым в РСТ публикации WO 2004/045532, для лечения расстройства, такого как рак, рак предстательной железы, рак молочной железы, пигментный виллезонодулярный синовит (PVNS). В вариантах реализации соединение АЗЗ представляет собой молекулу моноклонального антитела против M-CSF или фрагмент ( например, Fab-фрагмент). В вариантах реализации ингибитор M-CSF или соединение АЗЗ вводят в средней дозе около 10 мг/кг. Агенты доставки
[00264] Липосомы являются везикулами, образованными из одного ("однослойного") или более ("многослойного") слоя фосфолипида. Из-за амфипатического характера строительных блоков фосфолипидов липосомы обычно содержат гидрофильный слой, представляющий собой гидрофильную внешнюю поверхность и вмещают гидрофильное ядро. Универсальность липосом при включении гидрофильных/гидрофобных компонентов, их нетоксичная природа, биоразлагаемость, биосовместимость, адъювантность, индукция клеточного иммунитета, свойство пролонгированного высвобождения и быстрое поглощение макрофагами делают их привлекательными кандидатами для доставки антигенов.
[00265] WO 2010/104833, описывает подходящие липосомальные
препараты. Такие липосомальные составы, называемые в данном
документе VesiVax(r) (Molecular Express, Inc.), без нашего
"иммуногенного полипептида (ов) или углевода (ов)", упомянутого
выше, могут содержать один или несколько дополнительных
компонентов, таких как пептидогликан, липопептид,
липополисахарид, монофосфориловый липид А, липотейхоевая
кислота, резиквомод, имиквимод, флагеллин, олигонуклеотиды,
содержащие неметилированные CpG-мотивы, бета-галактозилцерамид,
мурамилдипептид, полностью транс-ретиноевую кислоту,
двухцепочечную вирусную РНК, белки теплового шока,
диоктаддецилдиметиламмонийбромид, катионные поверхностно-
активные вещества, агонисты сходных рецепторов,
димиристоидтриметиламмонийпропан и агонисты с кислым рецептором. Преимущественно эти липосомальные композиции могут быть использованы для доставки одного или нескольких соединений моно
или ди-F-CDN и их композиций, описанных в данном документе в соответствии с настоящим изобретением.
[00266] Более того, хотя описанные выше липосомальные композиции используют "производное стероидов" в качестве якоря для прикрепления иммуногенного полипептида или углевода к липосоме, стероид можно просто предоставить в виде неконъюгированного стероида, такого как холестерин.
[00267] Подходящие способы получения липосом из липидных смесей хорошо известны в данной области. См., напр., Basu & Basu, Liposome Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology), Humana Press, 2002; Gregoriadis, Liposome Technology, 3rd Edition, Informa Healthcare, 2006. Предпочтительные способы включают способы экструзии, гомогенизации и обработки ультразвуком, описанные в нем. Примерный способ получения липосом для использования в данном изобретении, который включает высушивание липидной смеси с последующей гидратацией в водном носителе и обработку ультразвуком с образованием липосом, описан в W0 20110/104833.
[00268] В некоторых вариантах реализации липосомы предусмотрены в пределах определенного среднего диапазона размеров. Размер липосомы может быть выбран, например, путем экструзии водного носителя, содержащего липосомы, через мембраны, имеющие предварительно выбранный размер пор и собирающий материал, протекающий через мембрану. В предпочтительных вариантах реализации липосомы выбирают, по существу, от 50 до 500 нм в диаметре, более предпочтительно, по существу, от 50 до 200 нм в диаметре и наиболее предпочтительно, по существу, от 50 до 150 нм в диаметре. Используемый в данном документе термин "по существу" означает, что по меньшей мере 75%, более предпочтительно 80% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% липосом находятся в пределах указанного диапазона.
[00269] Другие липидные и липидоподобные адъюванты, которые могут найти применение в данном изобретении, включают эмульсии масло-в-воде (o/w) (см., например, Muderhwa et al., J. Pharmaceut. Sci. 88: 1332-9, 1999)), VesiVax(r) TLR (Molecular Express, Inc.), дигитонин (см., например, патент США 5698432) и глюкопиранозил липиды (см., например, заявку на патент США 20100310602).
[00270] Наночастицы также представляют собой системы доставки лекарств, подходящие для большинства путей введения. На протяжении многих лет были изучены различные природные и синтетические полимеры для получения наночастиц, из которых Поли (молочная кислота) (PLA), Поли (гликолевая кислота) (PGA) и их сополимеры (PLGA) были широко исследованы из-за их биосовместимости и биоразлагаемости. Наночастицы и другие наноносители действуют как потенциальные носители для нескольких классов лекарств, таких как противораковые агенты, антигипертензивные средства, иммуномодуляторы и гормоны; и макромолекулы, такие как нуклеиновые кислоты, белки, пептиды и антитела. См., напр., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 21:387-422, 2004; Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine 1:22-30, 2005.
Химиотерапевтические агенты
[00271] В дополнительных вариантах реализации описанных в
данном документе способов соединения моно- или ди-F-CDN, как
описано в данном документе, используются в комбинации с
химиотерапевтическими агентами (например, с небольшими
молекулами фармацевтических соединений). Таким образом, способы
дополнительно включают введение субъекту эффективного количества
одного или нескольких химиотерапевтических агентов в качестве
дополнительного лечения или комбинированного лечения. В
некоторых вариантах реализации один или несколько
химиотерапевтических агентов выбирают из группы, состоящей из
абаратерона ацетата, алтретамина, ангидровавинбластина,
ауристатина, бексаротина, бикалютамида, BMS 184476, 2,3,4,5,6-
пентафтор-N- (3-фтор -4-метоксифенил) бензолсульфонамида,
блеомицина, N, Ы-диметил-Ь-валил-Ь-валил-Ы-метил-Ь-валил-Ь-
проли-1-Ъпролин-трет-бутиламида, кахектина, семадотина,
хлорамбуцила, циклофосфамида, 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-8'-
норвин-калейкобластина, доцетамола, доксетаксела,
циклофосфамида, карбоплатина, кармустина, цисплатина,
криптофицина, циклофосфамида, цитарабина, дакарбазина (DTIC) ,
дактиномицина, даунорубицина, децитабин доластатина,
доксорубицина (адриамицин), этопозида, 5-фторурацила,
финастерида, флутамида, гидроксимочевины и гидроксиуретананов,
ифосфамида, лиарозола, лонидамина, ломустина (CCNU),
энзалутамида, мехлорэтамина (азотная горчица), мелфалана, миобулин изетионата, ризоксина, сертена, стрептозоцина,
митомицина, метотрексата, таксанов, нилутамида, онапристона, паклитаксела, преднимустина, прокарбазина, RPR109881, страмустин фосфата, тамоксифена, тазеринмина, таксола, третиноина, винбластина, винкристина, виндезин сульфата и винфлунина.
[00272] В дополнительных вариантах реализации описанные в
данном документе способы, моно- или ди-F-CDN соединения, как
описано в данном документе, используются в комбинации с
химиотерапевтическими агентами и/или дополнительными агентами
для лечения показаний, описанных в приведенных в данном
документе методах. В некоторых вариантах реализации моно- или
ди-F-CDN соединения, как описано в данном документе,
используются в комбинации с одним или несколькими агентами,
выбранными из группы, состоящей из сострастаурина, нилотиниба,
5- (2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил) - Ы-этил-4- (4-
(морфолинометил) фенил) изоксазол-3-карбоксамида, дактолисиба, 8- (б-метокси-пиридин-3-ил) -3-метил-1- (4-пиперазин-1-ил -3-трифторметилфенил) -1,3-дигидроимидазо [4,5-с] хинолин-2-она, 3-
(2,б-дихлор-3,5-диметоксифенил) -1- (б- ( (4- (4-этилпиперазин-
1-ил) фенил) амино) пиримидин-4-ил) -1-метилмочевины,
бупарасилиса, 8- (2,б-дифтор-3,5-диметоксифенил) -N- (4-
(диметиламино)метил)-1Н-имидазол-2-ил)хиноксалин-5-карбоксамид,
(S)-N1-(4-метил-5-(2-(1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил)пиридин-4-ил) тиазол-2-ил) пирролидин-1,2-дикарбоксамида, (S) -1- (4-хлорфенил) -7-изопропокси-б-метокси-2- (4- метил (((lr, 4S) -4-
(4-метил-3-оксопиперазин-1-ил) циклогексил) метил) амино) фенил) -1,2-дигидроизохинолин-З (4Н) -она, деферазирокса, летрозола,
(4S, 5R) -3- (2'-амино-2-морфолино-4' - (трифлуорометил)- [4,5'-бипиримидин]-б-ил)-4-(гидроксиметил)-5-метилоксазолидин-2-она,
(S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо 1,2-дигидропиридин-З-ил) -б- (4-хлорфенил) -2- (2,4-диметоксипиримидин-5-ил) -1-изопропил-5,б-дигидропирроло [3,4-d] имидазол -4 (1Н) -она, 4 - ( (2 - (((1R, 2R) -2-гидроксициклогексил) амино) бензо [d] тиазол-б-ил) окси) -N-метилпиколинамида, иматиниб мезилата, 2- фтор-Ы-метил-4- (7-
(хинолин-б-илметил) имидазо [1,2-Ь] [1,2,4] триазин-2-ил) бензамида, руксилитиниба, панобиностат, осилодростат, (S) -N -
((S) -1-циклогексил-2 - ((S) -2- (4- (4-фторбензоил) тиазол-2-ил) пирролидин-1-ил) -2-оксоэтил) -2- ( метиламино) пропанамида,
(S) -N - ((S) -1-циклогексил-2 - ((S) -2- (4- (4-фторбензоил) тиазол-2-ил) пирролидин-1-ил) -2 -оксиэтил) -2- (метиламино) пропанамида, фосфат сонидегиба, церитиниба, 7-циклопентил-Ы, N
диметил-2 - ((5- (пиперазин-1-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-
пирроло [2,З-d] пиримидин-б-карбоксамид a, N- (4 - ((1R, 3S, 5S)
-З-амино-5-метилциклогексил) пиридин-3-ил) -б- (2,6-
дифторфенил) -5-фторпиколинамида, 2- (2 ', 3-диметил- [2,4' бипиридин] -5-ил) -N- (5- (пиразин-2-ил) пиридин-2-ил) ацетамида, энкорафениба, 7-циклопентил-Ы, N-диметил-2 - ((5
((1R, 6S) -9-метил-4-оксо-3,9-диазабицикло [4.2.1] нонан-3-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,З-d] пиримидин-б карбоксамида, биниметиниба, мидодостарина, эверолимуса, 1-метил-5 - ((2- (5- (трифторметил) -1Н-имидазол-2-ил) пиридин-4-ил) окси) -N- (4- (трифторметил) ) фенил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-амина, пасиреотидный диаспартата, довитиниба, (R, Е) -N- (7-хлор-1- (1- (4- (диметиламино) бут-2-еноил ) азепан-3-ил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-ил) -2-метилизоникотинамида, N 6 - (2-изопропокси-5-метил-4- (1-метилпиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (2-
(изопропилсульфонил) фенил) -1Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин-4,6-диамина, 3- (4- (4 - ((5-хлор-4 - ((5 -метил-1Н-пиразол-3-ил) амино) пиримидин-2-ил) амино) -5-фтор-2-метилфенил) пиперидин-1-ил) тиетан 1,1-диоксид, 5-хлор-Ы 2 - (2-фтор-5-метил-4- (1-
(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил) пиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамин, 5-хлор-Ы2- (4- (1-этилпиперидин- 4-ил) -2-фтор-5-метилфенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамина, валсподара и сутаминат ваталаниба.
[00273] В одном варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором РКС, сотрастаурином (соединением А1) или
соединением, раскрытым в РСТ публикации № W0 2005/039549, для
лечения расстройства, например, расстройства, описанного в
данном документе. В одном варианте реализации ингибитор РКС
представляет собой сотрастаурин (соединение А1) или соединение,
раскрытое в РСТ публикации № WO 2005/039549. В одном варианте
реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации
со Сострастаурином (соединение А1) или соединением, как описано
в публикации РСТ № WO 2005/039549, для лечения расстройства,
такого как рак, меланома, неходжкинская лимфома, воспалительное
заболевание кишечника, отторжение трансплантата,
офтальмологическое расстройство или псориаз. В некоторых вариантах реализации Сотрастаурин (соединение А1) вводят в дозе
примерно от 20 до 600 мг, например, от примерно 2 00 до примерно 60 0 мг, от примерно 50 мг до примерно 4 50 мг, от примерно 100 до примерно 4 00 мг, от примерно 150 до примерно 350 мг мг, или примерно от 2 00 до 300 мг, например, около 50 мг, 100 мг, 150 мг, 2 00 мг, 300 мг, 4 00 мг, 50 0 мг или 60 0 мг. График дозирования может варьировать, например, каждый день, ежедневно, два или три раза в день.
[00274] В одном варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором BCR-ABL, TASIGNA (соединением А2 нилотиниб) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2004/0052 81, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор BCR-ABL представляет собой TASIGNA, или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2004/005281. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с TASIGNA
(соединение А2) или соединение, как описано в РСТ публикации № WO 2004/005281, для лечения расстройства, такого как лимфоцитарный лейкоз, болезнь Паркинсона, неврологический рак, меланома, рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, миелоидный лейкоз, рак головы и шеи или легочная гипертензия. В одном варианте реализации ингибитор BCR-ABL или TASIGNA вводят в дозе около 300 мг ( например, два раза в день, например, для вновь диагностированного Ph+CML-CP) или примерно 4 00 мг, например, два раза в день, например, для устойчивых или непереносимых Ph+CML-CP и CML-AP). Ингибитор BCR-ABL или соединение А2 вводят в дозе около 300-400 мг.
[00275] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором HSP90, таким как 5- (2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил ) -Ы-этил-4- (4- (морфолинометил) фенил) изоксазол-3-карбоксамид
(соединение A3) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2010/060937 или WO 2004/072051, для лечения расстройства, например, расстройство, описанное в данном документе. В одном из вариантов ингибитор HSP90 представляет собой 5- (2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил) -Ы-этил-4- (4- (морфолинометил) фенил) изоксазол-3-карбоксамид (соединение A3) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2010/060937 или WO 2004/072051.
В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 5- (2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил) -Ы-этил-4- (4- (морфолинометил) фенил) изоксазол-3 -карбоксамидом
(соединение A3) или соединение, как описано в публикации РСТ № W0 2010/060937 или WO 2004/072051, для лечения расстройства, такого как рак, множественная миелома, немелкоклеточный рак легкого, лимфома, рак желудка, рак молочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, солидная опухоль или расстройство гемопоэза.
[00276] В другом варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором PI3K и/или mTOR, Дактолисиб (соединение А4) или 8- (
б-метокси-пиридин-3-ил) -З-метил-1- (4-пиперазин-1-ил-3-
трифторметил-фенил) -1,3-дигидро-имидазо [4,5-с] хинолин-2 -он
(соединение А41) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2006/122806, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор PI3K и/или mTOR представляет собой Дактолисиб
(соединение А4), 8- (б-метоксипиридин-3-ил) -З-метил-1- (4-
пиперазин-1-ил-З-трифторметил -фенил) -1,3-дигидроимидазо [4,5-
с] хинолин-2-он (соединение А41) или соединение, раскрытое в
публикации РСТ № WO 2006/122806. В одном варианте реализации
соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с
Дактолисибом (соединение А4), 8- (б-метоксипиридин-3-ил) -3-
метил-1- (4-пиперазин- 1-ил-З-трифторметилфенил) -1,3-
дигидроимидазо [4,5-с] хинолин-2-оном (соединение А41) или соединением, описанным в публикации РСТ № WO 2006/122806, для лечения такого расстройства, как рак, рак предстательной железы, лейкемия ( например, лимфоцитарная лейкемия), рак молочной железы, рак мозга, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак почки, солидная опухоли или рак печени.
[00277] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором FGFR, 3- (2,б-дихлор-3,5-диметоксифенил ) -1- (6 -
((4- (4-этилпиперазин-1-ил) фенил) амино) пиримидин-4-ил) -1-метилмочевиной (соединение А5) или соединением, раскрытым в патенте США 855002, для лечения, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации
ингибитор FGFR представляет собой 3- (2,б-дихлор-3,5-диметоксифенил) -1- (б - ((4- (4-этилпиперазин-1-ил) фенил) амино) пиримидин-4- ил) -1-метилмочевину (соединение А5) или соединение, раскрытое в патенте США 8552002. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением А5 или соединением, описанным в патенте США 8552002, для лечения расстройства, такого как рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта, гематологический рак или солидная опухоль. В одном варианте реализации ингибитор FGFR или 3- (2, б-дихлор-3, 5-диметоксифенил) -1- (б - ((4- (4-этилпиперазин-1-ил) фенил) амино) пиримидин-4- ил) -1-метилмочевину (соединение А5) вводят в дозе около 100-125 мг ( например, в день), например, около 100 мг или около 12 5 мг.
[00278] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором PI3K, Бурапсилибом (соединением Аб) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2007/084786, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор PI3K представляет собой Бурапсилиб (соединение Аб) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2007/084786. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с Бупарлисибом (соединение Аб) или соединением, раскрытым в РСТ публикации WO 2007/084786, для лечения расстройства, такого как рак предстательной железы, немелкоклеточный рак легкого, рак эндокринной системы, лейкоз, рак яичника, меланома, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак женской репродуктивной системы, рак пищеварительной системы/желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, мультиформная глиобластома, солидная опухоль, неходжкинская лимфома, расстройство гематопоэза или рак головы и шеи. В одном варианте реализации ингибитор PI3K или Бупарлисиб (соединение Аб) вводят в дозе около 100 мг (например, в день).
[00279] В другом варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором FGFR, 8- (2,б-дифтор-3,5-диметоксифенил ) -N- (4 -
((диметиламино) метил) -1Н-имидазол-2-ил) хиноксалин-5-
карбоксамидом (соединение А7) или соединением, раскрытым в
публикации РСТ № WO 2009/141386, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор FGFR представляет собой 8- (2,6-дифтор-3,5-диметоксифенил) -N- (4 - ( (диметиламино) метил) -1Н-имидазол-2-ил) хиноксалин-5-карбоксамид ( Соединение А7) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 200 9/141386. В одном варианте реализации ингибитор FGFR представляет собой 8- (2,6-дифтор-3,5-диметоксифенил) -N- (4 - ( (диметиламино) метил) -1Н-имидазол-2-ил) хиноксалин-5-карбоксамид ( Соединение А7) . В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 8- (2,б-дифтор-3,5-диметоксифенил) -N-(4 - ((диметиламино) метил) -1Н-имидазолом -2-ил) хиноксалин-5-карбоксамидом (соединение А7) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2009/141386, для лечения расстройства, такого как рак, характеризующийся ангиогенезом. В одном варианте реализации ингибитор FGFR или 8- (2,б-дифтор-3,5-диметоксифенил) -N- (4 - ((диметиламино) метил) -1Н-имидазол-2-ил) хиноксалин-5-карбоксамид ( Соединение А7) вводят в дозе, например, от около 3 мг до около 5 г, более предпочтительно от около 10 мг до около 1,5 г на человека в день, необязательно разделяемой на 1 до 3 разовых доз, которые могут, например, быть одной величины.
[00280] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором PI3K, (S) -N1- (4-метил-5- (2) - (1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил) пиридин-4-ил) тиазол-2-ил) пирролидин-1,2-дикарбоксамидом (соединение А8) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2010/029082, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализациии нгибитор PI3K представляет собой (S) -N1- (4-метил-5- (2- (1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил) пиридин-4-ил) тиазол-2 -ил) пирролидин-1,2-дикарбоксамид (соединение А8) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2010/029082. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (S) -N1- (4-метил-5- (2- (1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2- ил) пиридин-4-ил) тиазол-2-ил) пирролидин-1,2-дикарбоксамидом (соединение А8) или соединением, раскрытым в РСТ публикации WO 2010/029082, для лечения расстройства, такого как рак желудка, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта, солидная опухоль и
рак головы и шеи. В одном варианте реализации ингибитор PI3K или (S) -N1- (4-метил-5- (2- (1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил)
пиридин-4-ил) тиазол-2 -ил) пирролидин-1,2-дикарбоксамид
(соединение А8) вводят в дозе около 150-300, 200-300, 200-400
или 300-400 мг ( например, в день), например, около 200, 300 или
4 00 мг.
[00281] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором цитохрома Р450 (например, ингибитором CYP17) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2010/149755, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор цитохрома Р450 ( например, ингибитор CYP17) представляет собой соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2010/149755. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2010/149755, для лечения рака предстательной железы.
[00282] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором HDM2, (S) -1- (4-хлорфенил) -7- изопропокси-б-метокси-2- (4- (метил (((1R, 4S) -4- (4-метил-3-оксо-1-ил) циклогексил) метил) амино) фенил) -1,2-дигидроизохинолин -3 (4Н) -он (соединение А10) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2011/076786, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе). В одном варианте реализации ингибитор HDM2 представляет собой (S) -1- (4-хлорфенил) -7-изопропокси-б-метокси-2- (4- (метил ((lr, 4S) -4-
(4-метил- З-оксопиперазин-1-ил) циклогексил) метил) амино) фенил) -1,2-дигидроизохинолин-З (4Н) -он (соединение А10) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2011/076786. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (S) -1- (4-хлорфенил) -7-изопропокси-б-метокси-2-
(4- (метил (((lr, 4S) -4- (4-метил-3-оксопиперазин-1-ил) циклогексил) метил) амино) фенил) -1,2-дигидроизохинолин-З (4Н) -он (соединение А10) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2011/076786, для лечения расстройства, такого как солидная опухоль. В одном варианте реализации ингибитор HDM2 или (S) -1-
(4-хлорфенил) -7-изопропокси-б-метокси-2- (4- (метил ((lr, 4S)
4- (4-метил- З-оксопиперазин-1-ил) циклогексил) метил) амино) фенил) -1,2-дигидроизохинолин-З (4Н) -он (соединение А10) вводят в дозе примерно от 4 00 до 7 00 мг, например, вводят три раза еженедельно, 2 недели и одну неделю. В некоторых вариантах реализации доза составляет около 400, 500, 600 или 700 мг; около 400-500, 500-600 или 600-700 мг, например, три раза в неделю.
[00283] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с агентом, хелатирующим железо, деферазироксом (также известным как EXJADE, соединение АН) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 1997/049395, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации агентом, хелатирующим железо, является деферазирокс или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 1997/049395. В одном варианте реализации агентом, хелатирующим железо, является деферазирокс (соединение АН) . В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с деферазироксом ( соединение АН) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 1997/049395, для лечения перенасыщения железом, гемохроматоза или миелодисплазии.
[00284] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором ароматазы, летрозолом (также известным как FEMARA, соединение А12) или соединением, описанным в патенте США 4978672, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор ароматазы представляет собой Летрозол (соединение А12) или соединение, раскрытое в патенте США № 4978672. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с летрозолом (соединение А12) или соединением, раскрытым в патенте США № 4 97 8 672, для лечения расстройства, такого как рак, лейомиосаркома, рак эндометрия, рак молочной железы, рак женской репродуктивной системы или гормональный дефицит.
[00285] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором PI3K, например, ингибитором пан-Р13К (4S, 5R) -3
(2'-амино-2-морфолино-4 '- (трифторметил) - [ 4,5'-бипиримидин] -б-ил) -4- (гидроксиметил) -5-метилоксазолидин-2-оном (соединение А13 ) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2013/124826, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор PI3K представляет собой (4S, 5R) -3- (2'-амино-2-морфолино-4 '- (трифторметил) - [ 4,5'-бипиримидин] -б-ил) -4- ( гидроксиметил) -5-метилоксазолидин-2-он (соединение А13) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № W02013/12482б. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (4S, 5R) -3- (2'-амино-2-морфолино-4 '-
(трифторметил) - [4,5'- бипиримидин] -б-ил) -4- (гидроксиметил) -5-метилоксазолидин-2-оном (соединение А13) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № W02013/12482 б, для лечения расстройства, такого как рак или развинутая солидная опухоль.
[00286] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором взаимодействия р53 и/или p53/Mdm2, (S) -5 - (5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-З-ил) -б- (4-хлорфенил) -2-
(2,4-диметоксипиримидин-5-ил) -1-изопропил -5,б-дигидропирроло
[3,4-d] имидазол-4 (1Н) -оном (соединение А14) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2013/111105, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор взаимодействия р53 и/или p53/Mdm2 представляет собой (S) -5- (5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-З-ил) -б- (4 хлорфенил) -2- (2,4-диметоксипиримидин-5-ил) -1-изопропил-5,б-дигидропирроло [3,4-d] имидазол-4 (1Н) -он (соединение А14) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO2013/111105. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (S) -5-
(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-З-ил) -б - (4-
хлорфенил) -2- (2,4-диметоксипиримидин-5-ил) -1-изопропил-5,б-дигидропирроло [3,4-d] имидазол-4 (1Н) -оном (соединение А14), или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2013/111105, для лечения расстройства, такого как рак или саркома мягких тканей.
[00287] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором тирозинкиназы CSF-1R, 4 - ( (2 - ( ( (1R, 2R) -2
гидроксициклогексил) амино) бензо [d] тиазол-б-ил) окси) -N-метилпиколинамидом (соединение А15) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2005/073224, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор тирозинкиназы CSF-1R представляет собой 4 - ( (2 - ((1R, 2R) -2-гидроксициклогексил) амино) бензо
[d] тиазол-б-ил) окси) -N-метилпиколинамид (соединение А15) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2005/073224. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 4 - ( (2 - ((1R, 2R) -2-гидроксициклогексил) амино) бензо [d] тиазол-б-ил) окси ) -N-метилпиколинамидом (соединение А15) или соединением, раскрытым в публикации РСТ № WO 2005/073224, для лечения расстройства, такого как рак.
[00288] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с индуктором апоптоза и/или ингибитором ангиогенеза, таким как мезилат иматиниба (также известный как GLEEVEC, соединение А1б) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO1999/003854, для лечения расстройства, например описанного расстройства. В одном варианте реализации индуктор апоптоза и/или ингибитор ангиогенеза представляет собой мезилат иматиниба ( соединение А1б) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO1999/003854. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в сочетании с мезилатом иматиниба (соединение А1б) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO1999/003854, для лечения расстройства, такого как рак, множественная миелома, рак предстательной железы, немелкоклеточный рак легкого, лимфома, рак желудка, меланома, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, мультиформная глиобластома, рак печени, рак головы и шеи, астма, рассеянный склероз, аллергия, слабоумие Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз или ревматоидный артрит. В некоторых вариантах реализации мезилат иматиниба
(соединение А1б) вводят в дозе от около 100 до 1000 мг, например, от около 200 до 800 мг, от около 300 до около 700 мг или от около 4 00 до около 60 0 мг, например, около 2 00 мг, 300 мг, 4 00 мг, 50 0 мг, 60 0 мг или 7 00 мг. График дозирования может варьировать, например, каждый день, ежедневно, два или три раза в день. В одном варианте реализации мезилат иматиниба вводят при
пероральной дозе от около 100 мг до 600 мг в день, например, около 100 мг, 2 00 мг, 2 60 мг, 300 мг, 4 00 мг или 60 0 мг в день.
[00289] В другом варианте реализации комбинация, например
комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором JAK, 2-фтор-Ы-мет,ил-4- (7- ( хинолин-б-илметил)
имидазо [1,2-Ь] [1,2,4] триазин-2-ил) бензамидом (соединение
А17) или его дихлористоводородной солью или соединением,
раскрытым в РСТ публикации № WO 2007/070514, для лечения
расстройства, например, расстройства, описанного в данном
документе. В одном варианте реализации ингибитор JAK
представляет собой 2-фтор-Ы-мет,ил-4- (7- (хинолин-б-илметил)
имидазо [1,2-Ь] [1,2,4] триазин-2-ил) бензамид (Соединение А17)
или его дихлористоводородную соль или соединение, раскрытое в
РСТ публикации № WO 2007/070514. В одном варианте реализации
соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 2-фтор-
N-MeTrai-4- (7- (хинолин-б-илметил) имидазо [1,2-b] [1, 2,4]
триазин-2-ил) бензамидом (соединение А17) или его
дихлористоводородной солью или соединением, раскрытым в РСТ
публикации WO 2007/070514, для лечения расстройства, такого как
колоректальный рак, миелоидный лейкоз, гематологический рак,
аутоиммунное заболевание, неходжкинская лимфома или
тромбоцитемия. В одном варианте реализации ингибитор JAK или 2-
фтор-^метил-4- (7- (хинолин-б-илметил) имидазо [1,2-Ь] [1,2,4]
триазин-2-ил) бензамид (соединение А17) или его
дихлористоводородную соль вводят в дозе около 400-600 мг
(например, в день), например, около 400, 50 0 или 60 0 мг или около 400-500 или 500-600 мг,
[00290] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором JAK, фосфат руксолитинибом (также известным как JAKAFI, соединение А18) или соединением, раскрытом в РСТ публикации № WO 2007/070514 для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор JAK представляет собой фосфат руксолитиниб
( соединение А18) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2007/070514. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в сочетании с фосфат руксолитинибом
(соединение А18) или соединением, раскрытым в РСТ публикации WO
2007/070514, для лечения расстройства, такого как рак
предстательной железы, лимфоцитарный лейкоз, множественная
миелома, лимфома, рак легких, лейкемия, кахексия, рак молочной
железы, рак поджелудочной железы, ревматоидный артрит, псориаз,
колоректальный рак, миелоидный лейкоз, гематологический рак,
аутоиммунное заболевание, неходжкинской лимфомы или
тромбоцитемии. В одном варианте реализации ингибитор JAK или фосфат руксолитиниб (соединение А18) вводят в дозе около 15-25 мг, например, два раза в день. В некоторых вариантах реализации доза составляет около 15, 20 или 25 мг или около 15-20 или 20-25 мг.
[00291] В другом варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором гистондезацетилазы (HDAC). В некоторых вариантах
реализации ингибитор HDAC выбирают из группы, состоящей из
панобиностата, вориностата, ромадипсина, хидамида, вальпроевой
кислоты, белиностата, пироксамида, моцитиностата, абэксиностата,
энтиностата, прациностата, ресминостата, гивиностата,
квизиностата, риколиностата, CUDC-101, AR -42, CHR-2845, CHR-
3996, 4SC-202 и CG200745. В некоторых вариантах реализации
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором гистондезацетилазы (HDAC), панобиностатом
(соединение А19) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2014/072493, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор HDAC представляет собой панобиностат
(соединение А19) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2014/072493. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с панобиностатом (соединение А19) , соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2014/072493, для лечения расстройства, такого как мелкоклеточный рак легкого, респираторный/грудной рак, рак предстательной железы, множественная миелома, миелодиспластический синдром, рак кости, немелкоклеточный рак легкого, эндокринный рак, лимфома, неврологический рак, лейкемия, ВИЧ/СПИД, нарушение иммунитета, отторжение трансплантата, рак желудка, меланома, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, множественная форма глиобластомы, миелоидный лейкоз,
гематологический рак, рак почки, неходжкинская лимфома, рак головы и шеи, расстройства кроветворения или рак печени. В одном варианте реализации ингибитор HDAC или панобиностат (соединение А19) вводят в дозе около 2 0 мг ( например, в день).
[00292] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором одного или нескольких из цитохрома Р450 ( например, 11В2), альдостерона или ангиогенеза, озилодростата (соединение А2 0) или соединения, раскрытого в РСТ публикации № WO2007/024945, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор одного или более цитохрома Р450 ( например, 11В2), альдостерона или ангиогенеза представляет собой озилодростат
(соединение А2 0) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO2007/024945. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с озилодростатом (соединение А2 0) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2007/024945, для лечения расстройства, такого как синдром Кушинга, гипертония или терапия сердечной недостаточности.
[00293] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором IAP, (S) -N - ((S) -1-циклогексил -2 - ((S) -2- (4-
(4-фторбензоил) тиазол-2-ил) пирролидин-1-ил) -2-оксоэтил) -2-
(метиламино) пропанамидом (соединение А21) или соединением, раскрытом в патенте США 8552003, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте ингибитор IAP представляет собой (S) -N - ((S) -1-циклогексил-2 - ((S) -2- (4- (4-фторбензоил) тиазол-2-ил) пирролидин-1- ил) -2-оксоэтил) -2- (метиламино) пропанамид
(соединение А21) или соединение, раскрытое в патенте США 8552003. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (S) -N - ((S) -1-циклогексил-2 -
((S) -2- (4- (4-фторбензоил ) тиазол-2-ил) пирролидин-1-ил) -2-оксоэтил) -2- (метиламино) пропанамидом (соединение А21) или соединением, раскрытом в патенте США 8552003, для лечения расстройства, такого как множественная миелома, рак молочной железы, рак яичников, рак поджелудочной железы или расстройство гемопоэза. В одном варианте реализации ингибитор IAP или (S) -N
- ((S) -1-циклогексил-2 - ((S) -2- (4- (4-фторбензоил) тиазол-2-ил) пирролидин-1- ил) -2-оксоэтил) -2- (метиламино) пропанамид (соединение А21) или соединение, раскрытое в патенте США 8552003, вводят в дозе около 1800 мг, например, один раз в неделю.
[00294] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитора Smoothened (SMO), фосфата Sonidegib ( соединение А22), (R) -2 -
(5- (4- (б-бензил-4,5-диметилпиридазин-З-ил) -2-метилпиперазин-1-ил) пиразин-2-ил) пропан-2-ола (соединение А25) или соединения, раскрытого в публикации РСТ № WO 2007/131201 или WO 2010/007120, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор SMO представляет собой фосфат Sonidegib ( соединение А22), (R) -2- (5- (4- (б-бензил-4, 5-диметилпиридазин-З-ил) -2-метилпиперазин-1-ил ) пиразин-2-ил) пропан-2-ол (соединение А25) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2007/131201 или WO 2010/007120. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в сочетании с фосфатом Sonidegib ( соединение А22), (R) -2- (5- (4- (б-бензил-4,5-диметилпиридазин-3 -ил) -2-метилпиперазин-1-ил) пиразин-2-ил) пропан-2-ола
(соединение А2 5) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2007/131201 или WO 2010/007120 для лечения расстройства таких как рак, медуллобластома, мелкоклеточный рак легкого, рак предстательной железы, карцинома базальных клеток, рак поджелудочной железы или воспаление. В некоторых вариантах реализации фосфат Sonidegib (соединение А22) вводят в дозе около от 20 до 500 мг, например, от около 40 до 400 мг, от около 50 до около 300 мг или от около 100 до около 2 00 мг, например, около 50 мг, 100 мг, 150 мг, 2 00 мг, 2 50 мг или 300 мг. График дозирования может варьировать, например, каждый день, ежедневно, два или три раза в день.
[00295] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором Alk, церитинибом (также известным как ZYKADIA; Соединение А2 3) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2007/131201, для лечения расстройства, например нарушения, описанного в данном документе. В одном варианте реализации
ингибитор Alk представляет собой церитиниб (соединение А23) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № W0 2007/131201. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с церитинибом (соединение А2 3) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2007/131201, для лечения расстройства, такого как немелкоклеточный рак легкого или солидные опухоли. В одном варианте реализации ингибитор Alk или церитиниб (соединение А23) вводят в дозе около 750 мг, например, один раз в день.
[00296] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором JAK и/или CDK4/6, 7-циклопентил-Ы, N- диметил-2
((5- (пиперазин-1-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-б-карбоксамидом (соединение А2 4) или соединением, раскрытым в патенте США 8 415 355 или патенте США 8685980 для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте ингибитор JAK и/или CDK4/6 представляет собой 7-циклопентил-Ы, N-диметил-2 - ((5-
(пиперазин-1-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [ 2,3-d] пиримидин-б-карбоксамид (соединение А2 4) или соединение, раскрытое в патенте США № 8415355 или патенте США 8685980. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 7-циклопентил-Ы, N-диметил-2 - ((5-
(пиперазин-1-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-б-карбоксамидом (соединение А2 4) или соединением, раскрытым в патенте США 8 415 355 или в патенте США 8685980, для лечения расстройства, такого как лимфома, неврологический рак, меланома, рака молочной железы или солидная опухоль. В одном варианте реализации ингибитор JAK и/или CDK4/6 или 7-циклопентил-N, Ы-диметил-2 - ((5- (пиперазин-1-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [ 2,З-d] пиримидин-б-карбоксамида (соединение А24) вводят в дозе около 200-600 мг, например, в день. В одном варианте реализации соединение вводят в дозе около 200, 300, 400, 500 или 600 мг или около 200-300, 300-400, 400-500 или 50060 0 мг.
[00297] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором PIM-киназы, N- (4 - ((1R, 3S, 5S) -З-амино-5
метилциклогексил) пиридин-3-ил) -6- (2,б-дифторфенил) -5-
фторпиколинамидом (соединение А2 7) или соединением, раскрытым в
публикации РСТ № W0 2010/026124, для лечения например,
расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте
реализации ингибитор PIM-киназы представляет собой N- (4 - ((1R,
3S, 5S) -З-амино-5-метилциклогексил) пиридин-3-ил) -6- (2,6-
дифторфенил) -5- фторпиколинамид (соединение А27) или
соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2010/026124. В одном
варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в
комбинации с N- (4 - ((1R, 3S, 5S) -З-амино-5-метилциклогексил)
пиридин-3-ил) -6- (2,б-дифторфенил) -5-фторпиколинамидом
(соединение А2 7) или соединением, раскрытым в публикации РСТ № WO 2010/026124, для лечения расстройства, такого как множественная миелома, миелодиспластический синдром, миелоидный лейкоз или неходжкинская лимфома.
[00298] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитора сигналинга Wnt, 2- (2 ', 3-диметил- [2, 4'-бипиперидин-5-ил)-N-
(5- (пиразин-2-ил) пиридин-2-ил) ацетамида (соединение А2 8) или соединения, раскрытого в РСТ публикации № WO 2010/101849, для лечения, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор сигналинга Wnt представляет собой 2- (2 ', 3-диметил- [2,4'-бипиридин] -5-ил) -N- (5- (пиразин-2-ил) пиридин-2-ил ) ацетамид (соединение А2 8) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2010/101849. В одном варианте реализации ингибитор сигналинга Wnt представляет собой 2- (2 ', 3-диметил- [2,4'-бипиридин] -5-ил) -N- (5-
(пиразин-2-ил) пиридин-2-ил ) ацетамид (соединение А28) . В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 2- (2 ', 3-диметил- [2,4'-бипиридин] -5-ил) -N- (5-
(пиразин) -2-ил) пиридин-2-ил) ацетамида (соединение А2 8) или соединения, раскрытого в публикации РСТ № WO 2010/101849, для лечения расстройства, такого как солидная опухоль ( например, рак головы и шеи, плоскоклеточная карцинома, рак молочной железы, рак поджелудочной железы или рак толстой кишки). В некоторых вариантах реализации 2- (2 ', 3-диметил- [2,4'-бипиридин] -5-ил) -N- (5- (пиразин-2-ил) пиридин-2-ил) ацетамид
(соединение А28 ) вводят в дозе от около 1 до 50 мг, например, от 2 до 45 мг, от около 3 до около 40 мг, от около 5 мг до 35
мг, от 5 мг до 10 мг или от около 10 мг до 3 0 мг, например, около 2 мг, 5 мг, 10 мг, 2 0 мг, 3 0 мг или 4 0 мг. График дозирования может варьировать, например, каждый день, ежедневно, два или три раза в день.
[00299] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором BRAF, энкорафенибом (соединение А2 9) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2011/025927, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор BRAF представляет собой энкорафениб (соединение А29) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2011/025927. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с энкорафенибом (соединение А2 9) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2011/025927, для лечения расстройства, такого как немелкоклеточный рак легкого, меланома или колоректальный рак. В одном варианте реализации ингибитор BRAF или энкорафениб (соединение А29) вводят в дозе около 200-300, 200-400 или 300-400 мг, например, в день. В одном варианте реализации соединение вводят в дозе около 200, около 300 или около 4 00 мг.
[00300] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитора CDK4/6, 7-циклопентил-Ы, N-диметил-2- ( (5 - ((1R, 6S) -9-метил-4-оксо-З,9-диазабицикло [4.2.1] нонан-3-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,3 -d] пиримидин-б-карбоксамида (соединение АЗО) или соединения, раскрытого в РСТ публикации № WO 2011/101409, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор CDK4/6 представляет собой 7-циклопентил-Ы, N-диметил-2 - ((5 - ((1R, 6S) -9-метил-4-оксо-3,9-диазабицикло [4.2.1 ] нонан-3-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,З-d] пиримидин-б-карбоксамид (соединение АЗО) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2011/101409. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 7-циклопентил-Ы, Ы-диметил-2 ((5 - ((1R, 6S) -9-метил-4-оксо- 3,9-диазабицикло [4.2.1] нонан-3-ил) пиридин-2-ил) амино) -7Н-пирроло [2,З-d] пиримидин-б-карбоксамидом (соединение АЗО) или соединением, раскрытым в
РСТ публикации № WO 2011/101409, для лечения расстройства, такого как рак, лимфома мантийных клеток, липосаркома, немелкоклеточный рак легкого, меланома, плоскоклеточный рак пищевода или рак молочной железы.
[00301] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором МЕК, бинимиметином (соединение A34) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2003/077914, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор МЕК представляет собой биниминбиб (соединение А34) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2003/077914. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с биниметинибом (соединение A3 4) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2003/077914, для лечения расстройства, такого как немелкоклеточный рак легкого, мультисистемное генетическое расстройство, меланома, рак яичников, рак пищеварительного/желудочно-кишечного тракта, ревматоидный артрит или колоректальный рак. В одном варианте реализации ингибитор МЕК или биниметиниб (соединение А34) вводят в дозе около 45 мг, например, два раза в день.
[00302] В другом варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором одного или нескольких c-KIT, высвобождения
гистамина, Flt3 ( например, FLK2/STK1) или РКС, мидостаурином
(соединение A35) или соединением, раскрытым в РСТ публикации №
WO 2003/037347, для лечения расстройства, например расстройства,
описанного в данном документе. В одном варианте реализации
ингибитор представляет собой Мидостаурин (соединение А35) или
соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2003/037347. В одном
варианте реализации ингибитор одного или нескольких с-К1Т,
высвобождения гистамина, Flt3 ( например, FLK2/STK1) или РКС
представляет собой Мидостаурин. В одном варианте реализации
соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с
Мидостаурином (соединение A35) или соединением, раскрытым в РСТ
публикации № WO 2003/037347, для лечения расстройства, такого
как рак, колоректальный рак, миелоидный лейкоз,
миелодиспластический синдром, возрастную сочетанную деградацию, диабетическое осложнение или дерматологическое расстройство.
[00303] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором TOR (например, ингибитором mTOR), эверолимусом
(также известный как AFINIT0R; соединение A3 б) или соединением, раскрытое в РСТ публикации № W0 2014/08 5318, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе). В одном варианте ингибитор TOR представляет собой эверолимус (соединение A3 б) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2014/085318. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с эверолимусом (соединение A3 б) для лечения расстройства, такого как интерстициальное заболевание легких, мелкоклеточный рак легкого, респираторный/грудной рак, рак предстательной железы, множественная миелома, саркома, возрастная дегенерация желтого пятна, рак кости, клубневой склероз, немелкоклеточный рак легкого, эндокринный рак, лимфома, неврологические расстройства, астроцитома, рак шейки матки, неврологический рак, лейкемия, иммунные расстройства, отторжения трансплантата, рак желудка, меланома, эпилепсия, рак молочной железы или рак мочевого пузыря. В одном варианте реализации ингибитор TOR или Эверолимус
(соединение АЗб) вводят в дозе около 2,5-20 мг/день. В одном варианте реализации соединение вводят в дозе около 2,5, 5, 10 или 20 мг/день, например, около 2,5-5, 5-10 или 10-20 мг/день.
[00304] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитора одной или нескольких VEGFR-2, PDGFRbeta, KIT или Raf киназы С, 1-метил-5 - ((2- (5- (трифторметил) -1Н-имидазол-2-ил) пиридин-4-ил) окси) -N- (4- (трифторметил) фенил) -1Н-бензо [d ] имидазол-2-амина (соединение А37) или соединения, раскрытого в РСТ публикации № WO 2007/030377, для лечения расстройства, например нарушения, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор одной или более VEGFR-2, PDGFRbeta, KIT или Raf киназы С представляет собой 1-метил-5 -
((2- (5- (трифторметил) -1Н-имидазол-2-ил) пиридин- 4-ил) окси) -N- (4- (трифторметил) фенил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-амин
(соединение A37) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO
2007/030377. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 1-метил-5 - ((2- (5-(трифторметил) -1Н-имидазол-2-ил) пиридин-4-ил) окси) -N- (4-(трифторметил) фенил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-амин (соединение A37) или соединение, раскрытое в РСТ публикации WO 2007/030377, для лечения расстройства, такого как рак, меланома или солидная опухоль.
[00305] В другом варианте реализации комбинация, например,
комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как
описано в данном документе, используется в комбинации с
агонистом соматостатина и/или ингибитором высвобождения гормона
роста, диаспартатом пасиреотида (также известный как SIGNIFOR;
Соединение A3 8) или соединением, раскрытым в РСТ публикации №
WO2002/010192 или в патенте США № 7473761, для лечения
расстройства, например расстройства, описанного в данном
документе. В одном из вариантов реализации агонист соматостатина
и/или ингибитор высвобождения гормона роста представляет собой
диаспартат пасиреотида (соединение A38) или соединение,
раскрытое в РСТ публикации № W02002/010192 или в патенте США №
7473761. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-
CDN используют в комбинации с диаспартатом пасиреотида (
соединение A38) или соединением, раскрытым в РСТ публикации
WO2002/010192 или в патенте США № 7473761, для лечения
расстройства, такого как как рак предстательной железы, рак
эндокринной системы, нуврологический рак, рак кожи ( например,
меланома), рак поджелудочной железы, рак печени, синдром
Кушинга, желудочно-кишечное расстройство, акромегалия,
расстройство печени и желчных путей или цирроз печени.
[00306] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации модулятор сигнальной трансдукции и/или ингибитор ангиогенеза, Довитиниб (соединение A39) или соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO 2009/115562, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации модулятор сигнальной трансдукции и/или ингибитор ангиогенеза представляет собой Довитиниб (соединение А39) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2009/115562. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с Довитинибом (соединение A39) или соединением, раскрытым в РСТ
публикации № WO 2009/115562, для лечения расстройства, такого
как рак, рак респираторной системы/торакальный рак,
множественная миелома, рак предстательной железы,
немелкоклеточный рак легкого, эндокринный рак или неврологическое генетическое расстройство.
[00307] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором EGFR (R, Е) -N- (7-хлор-1 - (1- (4- (диметиламино) бут-2-еноил) азепан-3-ил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-ил) -2-метилизоникотинамидом (соединение А4 0) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № W0 2013/184757, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор EGFR представляет собой (R, Е) -N- (7-хлор-1- (1- (4- (диметиламино) но-2-еноил) азепан-3-ил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-ил) -2-метилизоникотинамид (соединение А4 0) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2013/184757. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с (R, Е) -N- (7-хлор-1- (1- (4- (диметиламино) но-2-еноил) азепаном -3-ил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-ил) -2-метилизоникотинамида (соединение А4 0) или соединением, раскрытым в публикации РСТ № WO 2013/184757, для лечения расстройства, такого как рак, например, солидная опухоль. В одном варианте реализации ингибитор EGFR или (R, Е) -N- (7-хлор-1- (1- (4- (диметиламино) но-2-еноил) азепан-
3- ил) -1Н-бензо [d] имидазол-2-ил) -2-метилизоникотинамида (соединение А40) вводят в дозе 150-250 мг, например, в день. В одном варианте реализации соединение вводят в дозе около 150, 200 или 250 мг или около 150-200 или 200-250 мг.
[00308] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором ALK, N6-(2-изопропокси-5-метил-4- (1-метилпиперидин-
4- ил) фенил) -N4-(2- (изопропилсульфонил) фенил) -1Н-пиразоло
[3,4-d] пиримидин-4,б-диамина (соединение А42) или соединением,
раскрытым в РСТ публикации № WO 2008/073687, для лечения
расстройства, например, расстройства, описанного в данном
документе. В одном варианте ингибитор ALK представляет собой N6-
(2-изопропокси-5-метил-4-(1-метилпиперидин-4-ил) фенил)-N4- (2-
(изопропилсульфонил) фенил)-1Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин-4,б-
диамин (соединение А42) или соединение, раскрытое в публикации РСТ № W0 2008/073687. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с N 6 - (2-изопропокси-5-метил-4- (1-метилпиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (2 -
(изопропилсульфонил) фенил) -1Н-пиразоло [3,4-d] пиримидин-4,6-диамином (соединение А42) или соединением, раскрытым в публикации РСТ № WO 2008/073687, для лечения расстройства, такого как рак, анапластическая крупноклеточная лимфома (ALCL), немелкоклеточная карцинома легкого (НМРЛ) или нейробластома.
[00309] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором IGF-1R, 3- (4- (4 - ((5-хлор) -4 - ((5-метил-1Н-пиразол-3-ил) амино) пиримидин-2-ил) амино) -5-фтор-2-метилфенил) пиперидин-1-ил) титан 1,1-диоксид (соединение А43), 5-хлор^ 2 - (2-фтор-5-метил-4- (1- (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил) пиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (5- метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамин (соединение А44) или 5-хлор-Ы2- (4- (1-этилпиперидин-4-ил) -2-фтор-5-метилфенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамином (соединение А45) или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO 2010/002655, для лечения расстройства, например, описаного расстройства. В одном из вариантов ингибитор ИФР-IR представляет собой 3- (4- (4
((5-хлор-4 - ( (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) амино) пиримидин-2-ил) амино) -5-фтор-2-метилфенил) пиперидин-1-ил) тиатан 1,1-диоксид
(соединение А43), 5-хлор-Ы 2 - (2-фтор-5-метил-4- (1-
(тетрагидро- 2Н-пиран-4-ил) пиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамин (соединение А44), 5-хлор-^ - (4- (1-этилпиперидин-4-ил) -2-фтор-5-метилфенил) -N 4 -
(5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамин (соединение А45) , или соединение, раскрытое в публикации РСТ № WO 2010/002655. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с 3- (4- (4 - ((5-хлор-4 - ( (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) амино ) пиримидин-2-ил) амино) -5-фтор-2-метилфенил) пиперидин-1-ил) тиетана 1,1-диоксид (соединение А43), 5-хлор^ 2 - (2-фтор-5-метил -4- (1- (тетрагидро-2Н-пиран-4-ил) пиперидин-4-ил) фенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин-2,4-диамина (Соединение А44), 5-хлор^2- (4- (1-этилпиперидин-4-ил) -2-фтор-5-метилфенил) -N 4 - (5-метил-1Н-пиразол-3-ил) пиримидин- 2,4-диамином (соединение А45) или
соединением, раскрытым в РСТ публикации № W0 2010/002655, для лечения расстройства, такого как рак или саркома.
[00310] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации ингибитор Р-гликопротеина 1, вальсподар (также известный как AMDRAY, соединение А46) или соединение, раскрытое в ЕР 296122, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор Р-гликопротеина 1 представляет собой вальсподар (соединение А46) или соединение, раскрытое в ЕР 296122. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с вальсподаром (соединение А4 6) или соединением, раскрытым в ЕР 296122, для лечения расстройства, такого как рак или лекарственно-устойчивая опухоль.
[00311] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации одного или нескольких ингибиторов VEGFR, сукцината ваталаниба (соединение А47) или соединения, раскрытого в W0 98/35958, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитором VEGFR является сукцинат ваталаниб (соединение А47) или соединение, раскрытое в W0 98/35958. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с сукцинатом ваталаниба (соединение А4 7) или соединением, описанным в ЕР 296122, для лечения рака.
[00312] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором IDH или соединением, раскрытым в W0 2014/141104, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор IDH представляет собой соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO2014/141104. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением, описанным в W0 2014/141104, для лечения расстройства, такого как рак.
[00313] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с
ингибитором BCL-ABL или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2013/171639, WO2013/171640, W02013/171641 или W02013/171642 , для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном из вариантов реализации ингибитор BCL-ABL представляет собой соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO2013/171639, W0 2013/171640, WO 2013/171641 или WO 2013/171642. В одном из вариантов реализации соединение моно-или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2013/171639, WO2013/171640, W02013/171641 или WO2013/171642, для лечения расстройства, такого как рак.
[00314] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая моно- или ди-F-CDN соединение, как описано в данном документе, используется в комбинации с ингибитором с RAF или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2014/151616, для лечения расстройства, например расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации ингибитор c-RAF представляет собой соединение А50 или соединение, раскрытое в РСТ публикации № W02014/15161 б. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2014/151616 для лечения расстройства, такого как рак.
[00315] В другом варианте реализации комбинация, например, комбинация, содержащая соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, используется в комбинации с конкурентным ингибитором АТФ ERK1/2 или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2015/066188, для лечения расстройства, например, расстройства, описанного в данном документе. В одном варианте реализации конкурентный ингибитор АТФ ERK1/2 представляет собой соединение, раскрытое в РСТ публикации № WO2015/066188. В одном варианте реализации соединение моно- или ди-F-CDN используют в комбинации с соединением А51 или соединением, раскрытым в РСТ публикации № WO2015/066188, для лечения расстройства, такого как рак. В некоторых вариантах реализации комбинация, например, комбинация, содержащая описанное в данном документе соединение моно- или ди-F-CDN, и соединение А51 или соединение, раскрытое в РСТ публикации WO 2015/066188, вводят в комбинации с одним или несколькими агентами, выбранными из соединения А8, соединения А17, соединения А2 3, соединения А2 4, соединения А2 7, соединения А2 9 и соединения АЗЗ.
[00316] В некоторых вариантах реализации комбинацию, например, комбинацию, содержащую соединение моно- или ди-F-CDN, как описано в данном документе, вводят в комбинации с противораковым средством, имеющим известную активность в анализе иммунной клетки, например, в одном или несколькоких из анализа huMLR, анализа пролиферации Т-клеток и анализа пролиферации В-клеток, где такие анализы известны в данной области и могут быть использованы для демонстрации соединений, не будут ингибировать иммунный ответ (т.е. демонстрируют мало или никакого ингибирования в таких анализах). IC50 в таких анализах может быть определен для соединений, которые будут использоваться в комбинации с моно- или ди-F-CDN соединением. В вариантах реализации противораковый агент имеет IC50, например,> 1 мкМ, 14 мкМ или более 4 мкМ, например 4-10 мкМ или 4-2 0 мкМ или более 2 0 мкМ. В вариантах реализации второй терапевтический агент выбирают из одного или нескольких из: соединения А9, соединения А1б, соединения А17, соединения А21, соединения А22, соединения А2 5, соединения А2 8, соединения А4 8 и соединения А4 9.
[00317] В некоторых вариантах реализации соединение А28
(или соединение, связанное с соединением А28) вводят в дозе около 5-10 или 10-30 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А22 (или соединение, связанное с соединением А22) вводят в дозе около 200 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А17 (или соединение, связанное с соединением А17) вводят в дозе около 400-600 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А16 (или соединение, связанное с соединением А16) вводят в дозе около 400-600 мг РО qDay. В некоторых вариантах реализации соединение А2 9 (или соединение, связанное с соединением А29) вводят в дозе около 200-400 или 300-400 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А2 4 (или соединение, связанное с соединением А24) вводят в дозе около 200-600 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А23 (церитиниб) (или соединение, связанное с церитинибом) вводят в дозе около 750 мг один раз в день. В некоторых вариантах реализации соединение А8
(или соединение, связанное с соединением А8) вводят в дозе около 200-400 или 300-400 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А5 (или соединение, связанное с соединением А5) вводят в дозе около 100-125 мг. В некоторых вариантах реализации соединение Аб (или соединение, связанное с соединением Аб) вводят в дозе около 100 мг. В некоторых вариантах реализации
соединение Al (или соединение, связанное с соединением А1) вводят в дозе около 200-300 или 200-600 мг. В некоторых вариантах реализации соединение А40 (или соединение, связанное с соединением А40) вводят в дозе около 150-250 мг. В вариантах реализации соединение А10 (или соединение, связанное с соединением А10) вводят в дозе около от 4 00 до 7 00 мг, например, вводят три раза в неделю, 2 недели и одну неделю. В вариантах реализации ингибитор BCR-ABL вводят в дозе около 20 мг bid-80 mg bid.
[00318] Таблица 2. Терапевтические агенты, которые можно
вводить в комбинации с моно- или ди-Е-СБЫ-соединениями, как
описано в данном документе. Обозначение
соединения/
Патент/Ссылка Структура соединения
Название дженерика
ЕР 1682103 US
2007/142401 WO
Сотрастаурин
2005/039549
СН3
Моногидрат нилотиниба НС1 TASIGNA(r)
WO 2004/005281 US 7169791
НС1
-,^сн3
US 8552002
CH,
Бупарлисиб
WO 2007/084786
CF,
if ^N
Ингибитор CYP17
WO 2010/149755 US 8263635 B2 ЕР 2445903 Bl
А10
WO 2011/076786
All
деферазирокс WO 1997/049395 EXJADE(r)
A12
летрозол FEMARA(r)
US 4 978 672
A13
WO 2013/124826 US 2013/0225574 • 9
F4^F N^N --°H H2N N O'
WO 2013/111105
А16
Иматиниб
WO 1999/003854
мезилат
GLEEVEC(r)
мезилат
н3с
А17
дихлористоводородная соль
Фосфат
руксолитиниб JAKAFI(r)
WO 2007/070514 ЕР 2474545 US 7 598 257 WO 2014/018632
H,P04
А19
панобиностат
А2 0
озилодростат
WO 2007/024945
А21
А22
Фосфат Sonidegib
А2 3
церитиниб ZYKADIA(tm)
A2 4
US 8415355 8685980
HN^N^-N N-CH3
A2 5
WO 2010/007120
A2 6
A2 7
US 7 867 493
WO 2010/026124 EP 2344474 US 2010/0056576 WO2008/106692
Моноклональное человека к PRLR
антитело
WO 2010/101849
WO 2011/025927
WO 2011/101409
н,с
антитело
Моноклональное человека к HER3
WO 2012/022814 ЕР 2606070 US 8 735 551 WO 2014/160160 антитело: 12425 (см. Таблицу 1, параграф [00191]) .
Линкер: SMCC (см. Конъюгат лекарственного Параграф [00117] средства для антител (АЦП) Полезная нагрузка: DM1 (см. Параграф [00111] См. Также п. 29
АЗЗ
WO 2004/045532
Моноклональное антитело или Fab фрагмент к M-CSF.
A3 4
биниметиниб
WO 2003/077914
A3 5
Мидостаурин
WO 2003/037347
ЕР 1441737
US 2012/252785
ОТ*
A3 б
Эверолимус AFINITOR(r)
WO 2014/085318
HN' H3C-N^N
A3 7
WO 2007/030377 US 7482367
HN I
A3 8
диаспартат
пасиреотида SIGNIFOR(r)
WO2002/010192 7473761
HN_ HNy°
A3 9
Довитиниб
A4 0
WO 2013/184757
H,C.
H,C
WO 2006/122806
WO 2008/073687 US 8372858
WO 2010/002655 US 8 519 129
WO 2010/002655 US 8 519 129
А4 5
W0 2010/002655
А4 6
вальсподар AMDRAY(tm)
А4 7
сукцинат ваталаниб
ЕР 296122
WO 98/35958
А4 8
А4 9
А50 А51
WO2014/141104 WO2013/171639 WO2013/171640 WO2013/171641 WO2013/171642 WO2014/151616
WO2015/066188
Ингибитор IDH
Ингибитор BCR-ABL
Ингибитор cRAF конкурентный ERK1/2 АТР
ингибитор
Иммуномодулирующие клеточные линии
[00319] Под "инактивированной опухолевой клеткой" подразумевается опухолевая клетка (либо "аутологичная", либо "аллогенная" по отношению к пациенту), которого лечили, чтобы предотвратить деление клеток. Для целей данного изобретения
такие клетки сохраняют свою иммуногенность и метаболическую активность. Такие опухолевые клетки генетически модифицированы для экспрессии трансгена, который экспрессируется у пациента как часть терапии рака. Таким образом, композиция или вакцина по изобретению включает неопластические (например, опухолевые) клетки, которые являются аутологичными или аллогенными для пациента, проходящего курс лечения, и наиболее предпочтительно представляют собой один и тот же общий тип опухолевой клетки, который поражает пациента. Например, пациенту, страдающему от меланомы, обычно назначают генетически модифицированную клетку, полученную из меланомы. Способы инактивации опухолевых клеток для использования в данном изобретении, такие как использование облучения, хорошо известны в данной области.
[00320] В некоторых вариантах реализации инактивированные опухолевые клетки по данному изобретению модифицированы для экспрессии и секреции одного или нескольких белков теплового шока. Например, слитые белки gp96-Ig могут экспрессироваться и секретироваться, чтобы стимулировать иммунный ответ (Yamazaki et al., The Journal of Immunology, 1999, 163: 5178-5182; Strbo et al. , Immunol Res. 2013 Dec;57(1-3) :311-25) . В некоторых вариантах реализации инактивированные опухолевые клетки модифицируют для экспрессии и секреции слитого белка gp96-Ig.
[00321] Инактивированные опухолевые клетки по данному изобретению вводят пациенту вместе с одной или несколькими костимулирующими молекулами или агентами. Предпочтительный костимулирующий агент включает один или несколько цитокинов, которые стимулируют индукцию дендритных клеток, рекрутирование и/или созревание. Методы оценки таких костимулирующих агентов хорошо известны в литературе. Индукцию и созревание DC обычно оценивают путем повышенной экспрессии некоторых мембранных молекул, таких как CD8 0 и CD8 6, и/или секреции провоспалительных цитокинов, таких как интерфероны IL-12 и I типа после стимуляции.
[00322] В предпочтительных вариантах реализации сами инактивированные опухолевые клетки модифицируют для экспрессии и секреции одного или нескольких цитокинов, которые стимулируют индукцию дендритных клеток, рекрутирование и/или созревание. Данное изобретение описано в типичных терминах в отношении использования GM-CSF. Таким образом, в качестве примера, опухолевая клетка может экспрессировать трансген, кодирующий GM-
CSF, как описано в патенте США № № 5637483, 5904920, 6277368 и 6350445, так же как и в патентной публикации № 20100150946. Форма GM-CSF-экспрессирующих генетически модифицированных раковых клеток или "цитокин-экспрессирующих клеточных вакцин" для лечения рака поджелудочной железы описана в патенте США № №№ 6 033 674 и 5 985 290.
[00323] Другие подходящие цитокины, которые могут быть экспрессированы такими инактивированными опухолевыми клетками и/или клетками с неканоническим фенотипом вместо или вместе с GM-CSF, включают, но не ограничиваются ими, один или несколько лигандов CD40, FLT-3, IL-12, CCL3, CCL20 и CCL21. Этот список не предназначен для ограничения.
[00324] Хотя предпочтительно, чтобы инактивированные
опухолевые клетки, вводимые субъекту, экспрессировали один или
несколько цитокинов, представляющих интерес, линия опухолевых
клеток может сопровождаться инактивированной пробойной клеточной
линией, которая экспрессирует и секретирует один или более
цитокинов, которые стимулируют индукцию дендритных клеток,
рекрутирование и/или созревание. Линия клеток с неканоническим
фенотипом может обеспечивать все цитокины, которые стимулируют
индукцию дендритных клеток, рекрутирование и/или созревание, или
могут дополнять цитокины, которые стимулируют индукцию
дендритных клеток, рекрутирование и/или созревание,
экспрессируемую и секретируемую инактивированными опухолевыми клетками. В качестве примера, иммуномодулирующие цитокины, экспрессирующие проспективные клеточные линии, раскрыты в патенте США № № 6464973 и 8012469, Dessureault et al. , Ann. Surg. Oncol. 14: 869-84, 2007, and Eager and Nemunaitis, Mol. Ther. 12: 18-27, 2005.
[00325] Термин "гранулоцитарно-макрофагальный
колониестимулирующий фактор (GM-CSF)" означает цитокин или его фрагмент, обладающий иммуномодулирующей активностью и имеющий по меньшей мере примерно 8 5% идентичности аминокислотной последовательности с номером доступа GenBank ААА52122.1.
Вакцины
[00326] В некоторых вариантах реализации композиции CDN вводят в сочетании с одной или несколькими вакцинами, предназначенными для стимуляции иммунного ответа на один или несколько заранее определенных антигенов. Примеры целевых антигенов, которые могут найти применение в изобретении,
перечислены в следующей таблице. Целевой антиген может также
представлять собой фрагмент или слитый полипептид, содержащий
иммунологически активную часть антигенов, перечисленных в
таблице. Этот список не предназначен для ограничения. Таблица 1. Анитигены
Антиген
Ссылка
Опухолевые антигены
Мезотелин
Номер доступа GenBank NM_00582 3; U40434; NM_013404; ВС003512 (см. также, например, Hassan, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:39373942; Muminova, et al. (2004) BMC Cancer 4:19; Iacobuzio-Donahue, et al. (2003) Cancer Res. 63:86148622).
Опухоль Вильмса 1
ассоциированный белок (Wt 1), включая изоформу А; изоформу В; изоформу С; изоформу D.
WT 1 изоформа А (номера доступа GenBank NM_000378; NP_000369) . WT 1 В (номера доступа GenBank NM_02 4 42 4; NP_077742). WT 1 С (номера доступа GenBank NM_024425; NP_077743). WT 1 D (номера доступа GenBank NM_02 4 42 6; NP 077744) .
Химотриптический рогового слояэпидермиса (SCCE) и его варианты.
Номер доступа GenBank NM_0 0504 6; NM139277; AF332583. См. также, например, Bondurant, et al. (2005) Clin. Cancer Res. 11:344 6-3454; Santin, et al. (2004) Gynecol. Oncol. 94:283-288; Shigemasa, et al. (2001) Int. J. Gynecol. Cancer 11:454-461; Sepehr, et al. (2001) Oncogene 20:7368-7374.
Связанный с цепью МНС класса I белок A (MICA); связанный с цепью МНС
См., например, Groh, et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. США 102:646164 66; номера доступа GenBank
Антиген
Ссылка
класса I белок В (MICB).
NM 000247; ВС 016929; AY750850; NM 005931.
Гастрин и пептиды, полученные из гастрина; гастрин/ССК-2 (также известного как ССК Б).
Harris, et al. (2004) Cancer Res. 64:5624-5631; Gilliam, et al. (2004) Eur. J. Surg. Oncol. 30:536-543;
Laheru and Jaffee (2005) Nature Reviews Cancer 5:459-467.
Глипикан 3 (антиген, например, гепатоцеллюлярной карциномы и меланомы).
Номер доступа GenBank NM 004484. Nakatsura, et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 306:16-25; Capurro, et al. (2003) Gasteroenterol. 125:89-97; Nakatsura, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:6612-6621).
Коактозин подобный белок.
Nakatsura, et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:826-836; Laheru and Jaffee (2005) Nature Reviews Cancer 5:459-467.
Prostate stem cell antigen (PSCA).
Номер доступа GenBank AF043498; AR026974; AR302232 (см. также, например, Argani, et al. (2001) Cancer Res. 61:4320-4324; Christiansen, et al. (2003) Prostate 55:9 19; Fuessel, et al. (2003) 23:221-228).
Простатическая кислая фосфатаза (PAP); предстательной железы специфический антиген (PSA); PSM; PSMA.
Small, et al. (2000) J. Clin. Oncol. 18:3894-3903; Altwein and Luboldt (1999) Urol. Int. 63:62-71; Chan, et al. (1999) Prostate 41:99-109; Ito, et al. (2005) Cancer 103:242-250;
Антиген
Ссылка
Schmittgen, et al. (2003) Int. J. Cancer 107:323-329; Millon, et al. (1999) Eur. Urol. 36:278-285.
Шесть трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы (STEAP).
См., напр., Machlenkin, et al. (2005) Cancer Res. 65:6435-6442; номер доступа GenBank NM 018234; NM 001008410; NM 182915; NM 024636; NM 012449; BC011802.
Опухолевый антиген карциномы простаты 1 (РСТА 1).
См., напр., Machlenkin, et al. (2005) Cancer Res. 65:6435-6442; номер доступа GenBank L78132.
Ген, индуцирующий рак простаты 1 (PTI-1).
См., напр., Machlenkin, et al. (2005) Cancer Res. 65:6435-6442).
Специфический ген предстательной железы с гомологией к G-белок связанному рецептору.
См., напр., Machlenkin, et al. (2005) Cancer Res. 65:6435-6442).
Простаза (антигенная регуляторная сериновая протеаза).
См., напр., Machlenkin, et al. (2005) Cancer Res. 65:6435-6442; номер доступа GenBank BC096178; BC096176; BC096175.
Протеиназа 3.
Номер доступа GenBank X55668.
Антигены рака яичек, например, NY-ESO-1; SCP-1; SSX-1; SSX 2; SSX-4; GAGE, СТ7; СТ8; СТ10; MAGE 1; MAGE 2; MAGE 3 ; MAGE 4; MAGE 6; LAGE 1.
Номер доступа GenBank NM 001327 (NY-ESO-1) (см. также, например, Li, et al. (2005) Clin. Cancer Res. 11:1809-1814; Chen, et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101 (25) :9363-9368; Kubuschok, et al. (2004) Int. J. Cancer. 109:568-575; Scanlan, et al. (2004) Cancer Immun. 4:1; Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62:4041-4047; Scanlan, et al.
Антиген
Ссылка
(2000) Cancer Lett. 150:155-164; Dalerba, et al. (2001) Int. J. Cancer 93:85-90; Ries, et al. (2005) Int. J. Oncol. 26:817-824.
MAGE Al, MAGE А2; MAGE A3; MAGE A4; MAGE A6; MAGE A9; MAGE A10; MAGE A12; GAGE 3/6; NT SAR 35; BAGE; CA125.
Otte, et al. (2001) Cancer Res. 61:6682-6687; Lee, et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:26512656; Sarcevic, et al. (2003) Oncology 64:443-449; Lin, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:57085716.
GAGE 1; GAGE 2; GAGE 3; GAGE 4; GAGE 5; GAGE 6; GAGE 7; GAGE 8; GAGE 65; GAGE 11; GAGE 13; GAGE 7B.
De Backer, et al. (1999) Cancer Res. 59:3157-3165; Scarcella, et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5:335-341.
HIP1R; LMNA; KIAA1416; Seb4D; KNSL6; TRIP4; MBD2; HCAC5; MAGEA3.
Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62 : 4041-4047.
Семейство генов DAM, например, DAM 1; DAM 6.
Fleishhauer, et al. (1998) Cancer Res. 58:2969-2972.
RCAS1 .
Enjoji, et al. (2004) Dig. Dis. Sci. 49:1654-1656.
RU2 .
Van Den Eynde, et al. (1999) J. Exp. Med. 190:1793-1800.
CAMEL.
Slager, et al. (2004) J. Immunol. 172:5095-5102; Slager, et al. (2004) Cancer Gene Ther. 11:227-236.
Антиген
Ссылка
Антигены,
ассоциированные с раком толстой кишки, например, NY СО 8; NY СО 9; NY СО 13; NY СО 16; NY СО 20; NY СО 38; NY СО 45; NY СО 9/HDAC 5; NY СО 41/MBD2; NY СО 42/TRIP4; NY СО 95/KIAA1416; KNSL6; seb4D.
Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62 : 4041-4047.
Ацетилглюкозаминилтрансф ераза V (GnT В).
Dosaka-Akita, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:1773-1779.
Фактор елонгации 2 мутированный (ELF2M).
Renkvist, et al. (2001) Cancer Immunol Immunother. 50:3-15.
НОМ MEL 40/SSX2
Neumann, et al. (2004) Int. J. Cancer 112:661-668; Scanlan, et al. (2000) Cancer Lett. 150:155-164.
BRDT .
Scanlan, et al. (2000) Cancer Lett. 150:155-164 .
SAGE; HAGE.
Sasaki, et al. (2003) Eur. J. Surg. Oncol. 29:900-903.
RAGE .
См., например, Li, et al. (2004) Am. J. Pathol. 164:1389-1397; Shirasawa, et al. (2004) Genes to Cells 9:165174 .
MUM 1 (меланома повсеместно
мутированная); MUM 2; MUM 2 Arg-Gly мутация;
Gueguen, et al. (1998) J. Immunol. 160:6188-6194; Hirose, et al. (2005) Int. J. Hematol. 81:48-57; Baurain, et al. (2000) J. Immunol. 164:6057-
Антиген
Ссылка
мим 3.
6066; Chiari, et al. (1999) Cancer Res. 59:5785-5792.
LDLR/FUT слитый белок-антиген меланомы.
Wang, et al. (1999) J. Exp. Med. 189:1659-1667.
NY REN серии антигенов почечного рака.
Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62:4041-4047; Scanlan, et al. (1999) Cancer Res. 83:456-464.
NY BR серии антигенов рака молочной железы, например, NY BR 62; NY-BR 75; NY BR 85; NY BR 62; NY BR 85.
Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62:4041-4047; Scanlan, et al. (2001) Cancer Immunity 1:4.
BRCA 1; BRCA 2.
Stolier, et al. (2004) Breast J. 10:475-480; Nicoletto, et al. (2001) Cancer Treat Rev. 27:295-304.
DEK/CAN слитый белок.
Von Lindern, et al. (1992) Mol. Cell. Biol. 12:1687-1697.
Ras, например, ras дикого типа, ras с мутациями в кодоне 12, 13, 59 или 61, например мутации G12C; G12D; G12R; G12S; G12V; G13D; А59Т; Q61H. К RAS; Н RAS; N RAS.
Номера доступа GenBank P01112; P01116; M54969; M54968; P01111; P01112; K00654. См. также, например, номера доступа GenBank М2 62 61; М34904; К01519; К01520; ВС006499; NM 006270; NM 002890; NM 004985; NM 033360; NM 176795; NM 005343.
BRAF (изоформа RAF).
Tannapfel, et al. (2005) Am. J. Clin. Pathol. 123:256-2601; Tsao and Sober (2005) Dermatol. Clin. 23:323333 .
Антиген
Ссылка
Меланомные антигены, включая HST 2 клеточные антигены меланомы.
Номер доступа GenBank NM 206956; NM 206955; NM 206954; NM 206953; NM 006115; NM 005367; NM 004988; AY148486; U10340; U10339; M77481. См., например, Suzuki, et al. (1999) J. Immunol. 163:2783-2791.
Сурвивин
Номер доступа GenBank AB02 8 8 69; U7 52 8 5 (см. также, например, Tsuruma, et al. (2004) J. Translational Med. 2:19 (11 pages); Pisarev, et al. (2003) Clin. Cancer Res. 9:6523-6533; Siegel, et al. (2003) Br. J. Haematol. 122:911-914; Andersen, et al. (2002) Histol. Histopathol. 17:669-675).
MDM 2
NM 002392; NM 006878 (см. также, например, Mayo, et al. (1997) Cancer Res. 57:5013-5016; Demidenko and Blagosklonny (2004) Cancer Res. 64:3653-3660).
Метил CpG связывающей белки (МеСР2, MBD2).
Muller, et al. (2003) Br. J. Cancer 89:1934-1939; Fang, et al. (2004) World J. Gastreenterol. 10:33943398 .
NA8 8 А.
Moreau-Aubry, et al. (2000) J. Exp. Med. 191:1617-1624.
Гистондеацетилазы (HDAC), например, HDAC5.
Waltregny, et al. (2004) Eur. J. Histochem. 48:273-290; Scanlan, et al. (2002) Cancer Res. 62:4041-4047.
Циклофилин В (Сур Б).
Tamura, et al. (2001) Jpn. J. Cancer Res. 92:762-767.
Антиген
Ссылка
СА 15 3; СА 2 7.29.
Clinton, et al. (2003) Biomed. Sci. Instrum. 39:408-414.
Белки теплового шока Hsp70.
Faure, et al. (2004) Int. J. Cancer 108:863-870.
Семейство GAGE/PAGE, например. , PAGE 1; PAGE 2; PAGE 3; PAGE 4; XAGE 1; XAGE-2; XAGE 3.
Brinkmann, et al. (1999) Cancer Res. 59:1445-1448.
MAGE А, В, С и D семейства. MAGE B5; MAGE В6; MAGE C2; MAGE C3; MAGE 3; MAGE 6.
Lucas, et al. (2000) Int. J. Cancer 87:55-60; Scanlan, et al. (2001) Cancer Immun. 1:4.
Кинесин 2; Модификационный фактор элемента TATA 1 ; опухолевый белок D53; NY
Scanlan, et al. (2001) Cancer Immun. 30:1-4 .
Альфа фетопротеин (AFP)
Grimm, et al. (2000) Gastroenterol. 119:1104-1112.
SART1; SART 2; SART 3; ART 4 .
Kumamuru, et al. (2004) Int. J. Cancer 108:686-695; Sasatomi, et al. (2002) Cancer 94:163 6-1641; Matsumoto, et al. (1998) Jpn. J. Cancer Res. 89:1292-1295; Tanaka, et al. (2000) Jpn. J. Cancer Res. 91:1177-1184.
Предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME).
Matsushita, et al. (2003) Leuk. Lymphoma 44:439-444; Oberthuer, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:4307-4313.
Карциноэмбриональный антиген (СЕА), САР1 6D энхансерный агонист пептид.
Номер доступа GenBank M2 954 0; E03352; X98311; M17303 (см. также, например, Zaremba (1997) Cancer Res. 57:4570-4577; Sarobe, et al. (2004)
Антиген
Ссылка
Curr. Мишени противораковых лекарственных средств 4: 443-454; Tsang и др. (1997) Clin. Cancer Res. 3:2439-2449; Fong, et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:88098814) .
HER 2/neu.
Disis, et al. (2004) J. Clin. Immunol. 24:571-578; Disis and Cheever (1997) Adv. Cancer Res. 71:343-371.
Cdk4; CDK6; р16 (INK4); Rb белок.
Ghazizadeh, et al. (2005) Respiration 72:68-73; Ericson, et al. (2003) Mol. Cancer Res. 1:654664 .
TEL; AML1; TEL/AML1.
Stams, et al. (2005) Clin. Cancer Res. 11:2974-2980.
Теломераза (TERT).
Nair, et al. (2000) Nat. Med. 6:1011-1017 .
707 АР.
Takahashi, et al. (1997) Clin. Cancer Res. 3:1363-1370.
Аннексии, например, Аннексии II.
Zimmerman, et al. (2004) Virchows Arch. 445:368-374.
BCR/ABL; BCR/ABL р210; BCR/ABL р190; CML 66; CML 2 8.
Cobaldda, et al. (2000) Blood 95:1007-1013; Hakansson, et al. (2004) Leukemia 18:538-547; Schwartz, et al. (2003) Semin. Hematol. 40:87-96; Lim, et al. (1999) Int. J. Mol. Med. 4:665-667.
BCL2; BLC6; CD10 белок.
Iqbal, et al. (2004) Am. J. Pathol. 165:159-166.
CDC27 (this is а melanoma antigen).
Wang, et al. (1999) Science 284 : 1351-1354.
Антиген
Ссылка
Белок спермы 17 (SP17); 14 3 3 дзета; MEMD; KIAA0471; ТС21.
Arora, et al. (2005) Mol. Carcinog. 42:97-108.
Тирозиназа родственные белки 1 и 2 (TRP 1 и TRP 2) .
Номер доступа GenBank NM 001922. (см. также, например, Bronte, et al. (2000) Cancer Res. 60:253-258) .
GplOO/pmel 17.
Номера доступа GenBank AH003567; U31798; U31799;U31807; U31799 (см. также, например, Bronte, et al. (2000) Cancer Res. 60:253-258).
TARP.
См., например, Clifton, et al.
(2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA
101:10166-10171; Virok, et al.
(2005) Infection Immunity 73:1939-
1946.
Тирозиназа родственные белки 1 и 2 (TRP 1 и TRP 2) .
Номер доступа GenBank NM 001922. (см. также, например, Bronte, et al. (2000) Cancer Res. 60:253-258) .
Меланокортин 1 рецептор (MC1R); MAGE 3; gplOO; тирозиназа; допахром таутомераза (ГТО 2); MART 1.
Salazar-Onfray, et al. (1997) Cancer Res. 57:4348-4355; Reynolds, et al. (1998) J. Immunol. 161:697 0-697 6; Chang, et al. (2002) Clin. Cancer Res. 8:1021-1032.
MUC-1; MUC 2.
См., например,, Davies, et al. (1994) Cancer Lett. 82:179-184; Gambus, et al. (1995) Int. J. Cancer 60:146-148; McCool, et al. (1999) Biochem. J. 341:593-600.
Spas 1.
U.S. Published Pat. Appl. No. 20020150588 of Allison, et al.
CASP 8; FLICE; МАСН.
Mandruzzato, et al. (1997) J. Exp. Med. 186:785-793.
Антиген
Ссылка
СЕАСАМб; САР 1.
Duxbury, et al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Commun. 317:837-843; Morse, et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5:1331-1338.
HMGB1 (ДНК-связывающий белок и цитокин).
Brezniceanu, et al. (2003) FASEB J. 17:1295-1297.
ETV6/AML1.
Codrington, et al. (2000) Br. J. Haematol. 111:1071-1079.
Мутантные и дикие типы аденоматозных полипозных коли (АРС); бета катенин; с met; р53; Е кадгерин;
циклооксигеназа 2 (СОХ 2) .
Clements, et al. (2003) Clin. Colorectal Cancer 3:113-120; Gulmann, et al. (2003) Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 11:230-237; Jungck, et al. (2004) Int. J. Colorectal. Dis. 19:438-445; Wang, et al. (2004) J. Surg. Res. 120:242-248; Abutaily, et al. (2003) J. Pathol. 201:355-362; Liang, et al. (2004) Br. J. Surg. 91:355-361; Shirakawa, et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:4342-4348.
Антиген, карциномы клеток почек, связанный с mAB G250.
Mulders, et al. (2003) Urol. Clin. North Am. 30:455-465; Steffens, et al. (1999) Anticancer Res. 19:11971200 .
ЕрпА2
См., например, патентную публикацию США № 2005/0281783 Al; номер доступа GenBank NM 004431 (человек); номер доступа GenBank NM 010139 (мышь); номер доступа GenBank АВ038986 (курица, частична последовательность); номера доступа GenBank NP 004422, ААН37166, и ААА53375 (человек); номера доступа
Антиген
Ссылка
GenBank NP 034269 (мышь), ААН06954 (мышь), ХР 345597 (крыса), и ВАВ63910 (курица).
EGFRvIII
См., например, WO/2012/068360
Анитигены Francisella tularensis
Francisella tularensis А и В.
Полный геном подвида Schu S4 (номер доступа GenBank AJ749949); подвида Schu 4 (номер доступа GenBank NC 0 0 6570) . Белок наружной мембраны (43 кДа) Bevanger и др. (1988) J. Clin. Microbiol. 27:922-926; Porsch-Ozcurumez, et al. (2004) Clin. Diagnostic. Lab. Immunol. 11:10081015). Антигенные компоненты F. tularensis включают, например, 8 0 антигенов, включая шаперонины 10 кДа и 60 кДа (Havlasova et al. (2002) Proteomics 2: 857-86), нуклеозиддифосфатилканазу, изоцитратдегидрогеназу, РНК связывающий белок Hfq, шаперон ClpB (Havlasova, et al. (2005) Proteomics 5:2090-2103). См. также, например, Oyston and Quarry (2005) Antonie Van Leeuwenhoek 87:277-281; Isherwood, et al. (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 57:1403-1414; Biagini, et al. (2005) Anal. Bioanal. Chem. 382:1027-1034.
Малярные антигены
Белок спорозоита (CSP); SSP2; НЕ Р17; Exp 1 ортологи, обнаруженные у P. falciparum; и LSA 1.
См., например, Haddad, et al. (2004) Infection Immunity 72:1594-1602; Hoffman, et al. (1997) Vaccine 15:842-845; Oliveira Ferreira and
Антиген
Daniel Ribeiro (2001) Mem. Inst. Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro 96:221-
227. CSP (см.,
доступа GenBank (см., например, GenBank AF249739; например, номер Z30319).
например, номер АВ121024). SSP2 номер доступа LSA 1 (см., доступа GenBank
Поверхностный белок
кольцевого-
инфицированного
эритроцита (RESA);
поверхностный белок
мерозоита 2 (MSP2);
Spf6 6; поверхностный
белок мерозоита 1
(MSP1); 195А; BVp42.
См., например, Stirnadel, et al.
(2000) Int. J. Epidemiol. 29:579586; Krzych, et al. (1995) J. Immunol. 155:4072-4077. Смотрите также, Good, et al. (2004) Immunol. Rev. 201:254-267; Good, et al.
(2004) Ann. Rev. Immunol. 23:69-99. MSP2 (см., например, номер доступа GenBank Х96399; Х96397). MSP1 (см., например, номер доступа GenBank Х03371) . RESA (см., например, номер доступа GenBank Х05181; Х05182).
Apical membrane antigen 1 (AMA1).
См., например, Gupta, et al. (2005) Protein Expr. Purif. 41:186-198. AMAl (см., например, номер доступа GenBank А"13; AJ494905; AJ490565).
Вирусы и вирусные антигены
Гепатит А
Номера доступа GenBank, например, NC_001489; AY644670; Х83302; К02990; М14707.
Гепатит В
Полный геном (см., например, номера
доступа GenBank АВ214516; NC_003977;
АВ205192; АВ205191; АВ205190;
AJ748098; АВ198079; АВ198078;
АВ198076; АВ074756).
Антиген
Ссылка
Гепатит С
Полный геном (см., например, номера доступа GenBank NC 004102; AJ238800; AJ238799; AJ132997; AJ132996; AJ000009; D84263).
Гепатит D
Номера доступа GenBank, например, NC 001653; АВ118847; AY261457.
Папилломавирус человека, включая все 200 + подтипов
(классифицированных в 16 группах), таких как подтипы высокого риска 16, 18, 30, 31, 33, 45.
См., например, Trimble, et al.
(2003) Vaccine 21:4036-4042; Kim, et al. (2004) Gene Ther. 11:1011-1018; Simon, et al. (2003) Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 109:219-223; Jung, et al. (2004) J. Microbiol. 42:255-266; Damasus-Awatai and Freeman-Wang (2003) Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 15:473-477; Jansen and Shaw (2 004) Annu. Rev. Med. 55:319-331; Roden and Wu (2003) Expert Rev. Vaccines 2:495-516; de Villiers, et al. (2004) Virology 324:17-24; Hussain and Paterson
(2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:577-586; Molijn, et al. (2005) J. Clin. Virol. 32 (Suppl. 1) S43-S51. Номера доступа GenBank AY68 6584; AY686583; AY686582; NC 006169; NC 006168; NC 006164; NC 001355; NC 001349; NC 005351; NC 001596).
Лимфотропный Т клеточный вирус человека (HTLV) I и II, включая подтипы типа HTLV I типа космополитный, центрально африканский и
См., например, Capdepont, et al. (2005) AIDS Res. Hum. Retrovirus 21:28-42; Bhigjee, et al. (1999) AIDS Res. Hum. Restrovirus 15:12291233; Vandamme, et al. (1998) J. Virol. 72:4327-4340; Vallejo, et al.
Антиген
Ссылка
южно-малазийский и подтипы HTLV типа II Iia, lib, lie и lid.
(1996) J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retrovirol. 13:384-391. HTLV типа I (см., например, номера доступа GenBank AY563954; AY563953. HTLV типа II (см., например, номера доступа GenBank L03561; Y13051; AF139382).
Coronaviridae, включая коронавирусы, такие как SARS-коронавирус (SARS-CoV) и торовирусы.
См. , например, Brian and Baric (2005) Curr. Top. Microbiol.
Immunol. 287:1-30; Gonzalez, et al. (2003) Arch. Virol. 148:2207-2235;
Smits, et al. (2003) J. Virol.
77:9567-9577; Jamieson, et al. (1998) J. Infect. Dis. 178:1263-1269 (номера доступа GenBank AY348314;
NC 004718; AY394850).
Вирус краснухи.
Номера доступа GenBank NC 001545; AF435866.
Вирус свинки, включая генотипы А, С, D, G, Н и I.
См., например, Orvell, eta 1. (2002) J. Gen. Virol. 83:2489-2496. См.,
например, номера доступа GenBank AY681495; NC 002200; AY685921; AF201473.
Вирус Коксаки А, включающий серотипы 1, 11, 13, 15, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 24 (также известные как энтеровирус человека С; HEV С).
См., например, Brown, et al. (2003) J. Virol. 77:8973-8984. Номера доступа GenBank AY421768; AY790926: X67706.
Вирус Коксаки В, включая подтипы 1 б.
См., например, Ahn, et al. (2005) J. Med. Virol. 75:290-294; Patel, et al. (2004) J. Virol. Methods
Антиген
Ссылка
120:167-172; Rezig, et al. (2004) J. Med. Virol. 72:268-274. Номер доступа GenBank X05690.
Человеческие
энтеровирусы, включая, например, человеческий энтеровирус A (HEV А, CAV2 - CAV8, CAV10, CAV12, CAV14, CAV16 и EV71), а также включая HEV В (CAV9, CBV1-CBV6, Е1-Е7, Е9, Е11-Е21, Е24-Е27, Е29-ЕЗЗ и EV69 и Е73), а также HEV.
См., например, Oberste, et al. (2004) J. Virol. 78:855-867.
Энтеровирус человека А (номера доступа GenBank NC 001612); энтеровирус человека В (NC 001472); энтеровирус человека С (NC 001428); энтеровирус человека D (NC 001430) . Симианский энтеровирус А (номер доступа GenBank NC 003988) .
Полиовирусы, включая PV1, PV2 и PV3.
См., например, Не, et al. (2003) J. Virol. 77:4827-4835; Hahsido, et al. (1999) Microbiol. Immunol. 43:73-77.
Номер доступа GenBank AJ132961 (тип 1); AY278550 (тип 2); X04468 (тип 3) .
Инфекционные
энцефалитные вирусы, включая энцефалит лошадей, венесуэльский энцефалит лошадей (VEE)
(включая подтипы IA, IB, 1С, ID, IIIC, HID) , восточный энцефалит лошадей (ЕЕЕ), западный энцефалит лошадей (WEE), энцефалит Сент-Луиса, энцефалит Долины Мюррей
(австралийский),
См., например, Hoke (2005) Mil. Med. 170:92-105; Estrada Franco, et al.
(2004) Emerg. Infect. Dis. 10:21132121; Das, et al. (2004) Antiviral Res. 64:85-92; Aguilar, et al.
(2004) Emerg. Infect. Dis. 10:880888; Weaver, et al. (2004) Arch. Virol. Suppl. 18:43-64; Weaver, et al. (2004) Annu. Rev. Entomol. 49:141-174. Восточный энцефалит лошадей (GenBank Асе No. No. NC 003899; AY722102); Западный энцефалит лошадей (NC 003908).
Антиген
японский энцефалит клещевой энцефалит.
Человеческие
герпесвирусы, включая
цитомегаловирус (ЦМВ),
Эпштейна-Барра (EBV),
вирус герпеса человека 1 (HHV 1) , HHV 2, HHV 3, HHV 4, HHV 5, HHV 6, HHV
7, HHV 8, вирус герпеса
8, вирусы простого
герпеса 1 и 2 (ВПГ 1,
ВПГ 2) и вирус ветряной
оспы (VZV).
.герпесвирус [герпесвирус
См., например, Studahl, et al.
(2000) Scand. J. Infect. Dis.
32:237-248; Padilla, et al. (2003)
J. Med. Virol. 70 (Suppl. 1) S103-
S110; Jainkittivong and Langlais
(1998) Oral Surg. Oral Med. 85:399-
403. GenBank Nos. NC_001806
(герпесвирус 1); NC_001798
(герпесвирус 2); X04370 и NC 001348
3) ; NC_001345
4) ; NC_001347
(герпесвирус 5) ; X83413 и NC_000898
(герпесвирус 6); NC_001716
(герпесвирус 7).
Человеческие герпесвирусы типа б и 7 (HHV б; HHV 7) раскрыты, например, al. (2003) J. Med. Virol. 70 (Suppl. 1)S103-S110. Вирус герпеса человека 8 (HHV 8), включая подтипы А Е, описаны, например, в Treurnicht и др. (2002) J. Med. Virul. 66:235-240.
ВИЧ 1, включая группу М (включая подтипы A-J) и
группу О (включая любые
различимые подтипы) (ВИЧ-2, включая подтипы
А Е.
GenBank AY968312; DQ01117 8; AY58 8 97 0; AY970950; Х61240;
DQ054367; DQ011180; DQ011177; AY781127; AY97 0 94 9; AJ00 62 87;
NC_0018 02; DQ01117 9; AY58 8 971; AY7 8112 6; AY97 0 94 8; AJ508597; и
Антиген
AJ508596.
Вирус Эпштейна-Барра (EBV), включая подтипы А и В.
См., например, Pen, et al. (2002) Pathology 34:446-450. Штамм вируса Эпштейна-Барра В95-8 (номер доступа GenBank V01555).
Реовирус, включая серотипы и штаммы 1, 2 и 3, тип 1 Lang, тип 2 Jones и тип 3 Dearing.
См., например, Barthold, et al. (1993) Lab. Anim. Sci. 43:425-430; Roner, et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:12362-12366; Kedl, et al. (1995) J. Virol. 69:552-559. Номер доступа GenBank K02739 (sigma 3 ген поверхностного белка).
Подтипы цитомегаловируса (CMV) включают подтипы I-VII CMV.
См., например, Chern, et al. (1998) J. Infect. Dis. 178:1149-1153; Vilas Boas, et al. (2003) J. Med. Virol. 71:404-407; Trincado, et al. (2000) J. Med. Virol. 61:481-487. Номер доступа GenBank X17403.
Риновирус, включая все серотипы.
Риновирус человека 2 (номер доступа
GenBank Х02316); Риновирус человека
В (номер доступа GenBank NC_0014 90);
Риновирус человека 8 9 (номер доступа
GenBank NC_001617); Риновирус
человека 39 (номер доступа GenBank AY751783).
Аденовирус, включая все серотипы.
AY803294; NC_004001;
АС_000018; АС_000017;
АС_000008; АС_000007;
АС_000005;
AY7377 97;NC_0032 66;
AY594256; AY594254;
AJ854486; AY163756;
АС_000019 АС_000015 АС_00000 6 AY737798 NC_002067 AY875648 AY594255;
Антиген
Ссылка
AY594253; NC 001460; NC 001405; AY598970; AY458656; AY487947; NC 001454; AF534906; AY45969; AY128640; L19443; AY339865; AF532578.
Филовирусы, включая вирус Марбург и вирус Эбола, и штаммы, такие как Эбола Судан (ЕВО S), Эбола Заир (ЕВО Z) и Эбола Рестон (ЕВО Р) .
См., например, Geisbert and Jahrling (1995) Virus Res. 39:129-150;
Hutchinson, et al. (2001) J. Med.
Virol. 65:561-566. Вирус Марбург (см., например, номер доступа
GenBank NC 001608) . Вирус Эбола (см., например,
Номера доступа GenBank NC 006432; AY769362; NC 002549; AF272001; AF086833).
Аренавирусы, включая вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCM), вирус Lassa, вирус Junin и вирус Machupo.
Вирус Junin, сегмент S (номер доступа GenBank NC 005081); Junin, сегмент L (номер доступа GenBank NC 005080) .
Вирус бешенства.
См., например, номера доступа GenBank NC 001542; AY956319; AY705373; AF499686; АВ128149; АВ085828; АВ009663.
Арбовирусы, включая вирус Западного Нила, вирусы денге от 1 до 4, клещевой вирус лихорадки Колорадо, вирус Синдбиса, Togaviraidae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae,
Вирус денге типа 1 (см., например, номер доступа GenBank АВ195 67 3; AY762084) . Вирус денге типа 2 (см., например, номера доступа GenBank NC 001474; AY702040; AY702039; AY7 02 037) . Вирус денге типа 3 (см., например, номер доступа GenBank AY923865; АТ858043). Вирус денге типа 4 (см., например, номера
Антиген
Ссылка
Rhabdoviridae, Orthomyxoviridae и т.п.
доступа GenBank AY947539; AY947539; AF326573). Вирус Sindbis (см., например, номера доступа GenBank NC 001547; AF429428; J02363; AF10372 8). Вирус Западного Нила (см., например, номера доступа GenBank NC 001563; AY603654).
Поксвирус, включая ортопоксвирус (вирус натуральной оспы, вирус оспы, вирус коровьей оспы, вирус коровьей оспы), ятапоксвирус (вирус танапокса, вирус опухоли обезьян Ябы), парапоксвирус и моллюскипоксвирус.
Viriola вирус (см., например, номера доступа GenBank NC 001611; Y16780; Х72086; Х69198) .
Желтая лихорадка.
См. , например, номер доступа GenBank NC 002031; AY640589; Х03700.
Хантавирусы, включая серотипы Хантаан (HTN), Сеул (SEO), Добрава (DOB), Син Номбре (SN) , Пууамала (PUU) и Добрава подобный Сааремаа(SAAV).
См., например, Elgh, et al. (1997) J. Clin. Microbiol. 35:1122-1130; Sjolander, et al. (2002) Epidemiol. Infect. 128:99-103; Zeier, et al. (2005) Virus Genes 30:157-180. Номер доступа GenBank NC 005222 и NC 005219 (Hantavirus). См. также, например, номера доступа GenBank NC 005218; NC 005222; NC 005219.
Флавивирусы, включая вирус лихорадки денге, вирус японского энцефалита, вирус Западного Нила и вирус
См., например, Mukhopadhyay, et al. (2005) Nature Rev. Microbiol. 3:1322. Номера доступа GenBank NC 001474 и AY7 02 04 0 (Dengue). Номера доступа GenBank NC 001563 и AY603654.
Антиген
Ссылка
желтой лихорадки.
Вирус кори.
См., например, номера доступа GenBank АВ040874 и AY486084.
Вирусы парагриппа человека (ВПЧ), включая типы HPV 1 56.
Вирус парагриппа человека 2 (см., например, номера доступа GenBank АВ176531; NC003443). Вирус парагриппа человека 3 (см., например, номер доступа GenBank NC 0017 96).
Вирус гриппа, включая типы вирусов гриппа А, В и С.
Нуклеокапсид гриппа (см., например, номер доступа GenBank AY626145) . Гемагглютинин гриппа (см., например, номер доступа GenBank AY627885, AY555153). Нейраминидаза гриппа
(см., например, номер доступа GenBank AY555151, AY577316). Матричный белок 2 гриппа (см., например, номер доступа GenBank AY626144 (. Основной белок гриппа 1
(см., например, номер доступа GenBank AY627897). Белок кислотной полимеразы гриппа (см., например, номер доступа GenBank AY627 8 96). Нуклеопротеин гриппа (см., например, номер доступа GenBank AY627895).
Подтипы вируса гриппа А, например вирусы свиней (SIV) : Вирус гриппа H1N1 и вируса гриппа свиней.
Гемагглютинин H1N1 (номер доступа GenBank S6722 0). Матричный белок вируса гриппа А (номер доступа GenBank AY70 0216). Вирус гриппа А Н5Н1 нуклеопротеин (номер доступа GenBank AY646426). H1N1 гемагглютинин (номер доступа GenBank D00837). Смотрите также, номера
Антиген
Ссылка
доступа GenBank BD006058; BD006055; BD006052. См. также, например, Wentworth, et al. (1994) J. Virol. 68:2051-2058; Wells, et al. (1991) J.A.M.A. 265:478-481.
Респираторный синцитиальный вирус (RSV), включая подгруппу А и подгруппу В.
Респираторный синцитиальный вирус (RSV) (см., например, номер доступа GenBank AY353550; NC 001803; NC001781) .
Ротавирусы, в том числе ротавирусы человека А-Е, ротавирус вируса крупного рогатого скота, ротавирус макаки-резуса и реассортации человеческого RW.
Ротавирус человека С сегмент 8 (номер доступа GenBank AJ549087); Наружный капсидный белок ротавируса человека G9 (см., например, номер доступа GenBank DQ056300); ротавирус человека В-штамм неструктурного белка 4 (см., например, номер доступа GenBank AY548957); основной крупный внутренний капсидный белок человеческого ротавируса штамма А (см., например, номер доступа GenBank AY601554).
Полиомавирус, включая вирус обезьяны 4 0 (SV40), вирус JC (JCV) и ВК (BKV).
См., например, Engels, et al. (2004) J. Infect. Dis. 190:2065-2069; Vilchez and Butel (2004) Clin. Microbiol. Rev. 17:495-508; Shivapurkar, et al. (2004) Cancer Res. 64:3757-3760; Carbone, et al. (2003) Oncogene 2:5173-5180; Barbanti-Brodano, et al. (2004) Virology 318:1-9) (SV40 полный геном в, например, номера доступа GenBank NC 001669; AF168994; AY271817; AY271816; AY120890; AF345344;
Антиген
AF332562'
Кальцивирусы, в том числе генные группы Норуолк, группа Снежной Горы (SMA) и Саапоро.
Вирус Снежной горы (см., например, номер доступа GenBank AY134748).
Parvoviridae, включая депендовирус, парвовирус (включая парвовирус В19) и эритровирус.
См., например, Brown (2 004) Dev. Biol. (Basel) 118:71-77; Alvarez-Lafuente, et al. (2005) Ann. Rheum. Dis. 64:780-782; Ziyaeyan, et al. (2005) Jpn. J. Infect. Dis. 58:9597; Kaufman, et al. (2005) Virology 332:189-198.
Другие организмы, для которых известны подходящие антигены, включают, но не ограничиваются ими, Chlamydia trachomatis, Streptococcus pyogenes (группа A Strep), Streptococcus agalactia (группа В Strep), пневмония Streptococcus, Staphylococcus aureusr Escherichia colir Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidisr Neisseria gonorrheaer Vibrio choleraer виды Salmonella ( в том числе typhi,. Typhimurium) r брюшной тиф ( в том числе Helicobacter pylori, Shigella flexneri и других видов шигеллы группы D) , Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Klebsiella пневмонии, виды Clostridium (включая С.difficile, ), Vibrio parahaemolyticus и V. vulnificus. Этот
список не предназначен для ограничения.
[00327] Фармацевтические композиции
[00328] Используемый в данном документе термин "фармацевтический препарат" относится к химическому веществу, предназначенному для использования в устранении, лечении или профилактике заболевания и которое подлежит утверждению Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (или его неамериканским эквивалентом) как рецепт или безрецептурный лекарственный препарат. Подробная информация о методах приготовления и введения таких композиций может быть найдена в Remington, Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition (Mack Publishing Co., Easton, PA) и Nielloud and Marti-Mestres, Pharmaceutical Emulsions and Suspensions: 2nd Edition (Marcel Dekker, Inc, New York).
[00329] Для целей данного раскрытия фармацевтические композиции могут вводиться различными способами, включая не парентеральный, парентеральный, путем ингаляционного спрея, местно или ректально в композициях, содержащих фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и транспортные средства. "Непарентеральное введение" охватывает оральный, буккальный, сублингвальный, местный, трансдермальный, офтальмологический, ушной, назальный, ректальный, шейный, легочный, слизистый и вагинальный. Используемый в данном документе термин "парентеральный" включает, но не ограничивается, подкожные, внутривенные, внутримышечные, внутриартериальные, внутрикожные, интратекальные и эпидуральные инъекции с использованием различных методов инфузии. Внутриартериальная и внутривенная инъекция, как используется в данном документе, включает введение через катетеры. Также предполагается введение через внутрикоронарные стенты и внутрикоронарные резервуары. Внутриопухолевые (непосредственно в опухолевую массу) или периопухолевые (вокруг опухолевой массы) введение соединений по данному изобретению могут непосредственно активировать локальный инфильтрационный DC, непосредственно способствовать апоптозу опухолевых клеток или сенсибилизировать опухолевые клетки к цитотоксическим агентам. Термин "пероральный", используемый в
данном документе, включает, но не ограничивается, пероральное проглатывание, или доставку сублингвальным или буккальным путем. Пероральное введение включает жидкие напитки, энергетические батончики, а также таблетки.
[00330] Фармацевтические композиции могут быть в любой форме, подходящей для предполагаемого способа введения. При использовании для перорального применения, например, могут быть приготовлены таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть получены в соответствии с любым способом, известным в данной области для изготовления фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько агентов, включая подслащивающие агенты, ароматизаторы, красители и консерванты, чтобы обеспечить приемлемые подготовка. Приемлемы таблетки, содержащие лекарственное соединение в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым наполнителем, которые пригодны для изготовления таблеток. Этими наполнителями могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, кальций или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие агенты, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; и смазочные вещества; такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми или могут быть покрыты известными способами, включая энтеросолюбильное покрытие, коллоидное покрытие или микрокапсулирование, чтобы замедлить дезинтеграцию и адсорбцию в желудочно-кишечном тракте и/или обеспечить продолжительное действие в течение более длительного периода. Например, можно использовать материал с временной задержкой, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, или с воском.
[00331] Препараты для перорального применения также могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, где лекарственное соединение смешивают с инертным твердым разбавителем, например фосфатом кальция или каолином, или в виде
мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с водой или масляной средой, таких как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.
[00332] Фармацевтические композиции могут быть приготовлены
в виде водных суспензий в смеси с наполнителями, подходящими для
изготовления водных суспензий. Такие наполнители включают
суспендирующий агент, такой как натрийкарбоксиметилцеллюлоза,
метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия,
поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь, а
также диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природный
фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксид с
жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат) , продукт
конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим
спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт
конденсации этиленоксида с неполным эфиром, полученным из жирной
кислоты и ангидрида гексита (например, моноолеат
полиоксиэтиленсорбитана). Водная суспензия также может содержать один или несколько консервантов, таких как этил или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
[00333] Масляные суспензии могут быть приготовлены путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло или минеральное масло, такое как жидкий парафин. Оральные суспензии могут содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители, такие как указанные выше, и ароматизаторы могут быть добавлены для обеспечения приемлемого перорального препарата. Эти композиции могут быть сохранены добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.
[00334] Дисперсные порошки и гранулы раскрытия, подходящие для приготовления водной суспензии добавлением воды, обеспечивают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Подходящими диспергирующими или
смачивающими агентами и суспендирующими агентами являются
примеры, описанные выше. Могут также присутствовать
дополнительные наполнители, например подсластители,
ароматизаторы и красители.
[00335] Фармацевтические композиции по изобретению также могут быть в виде эмульсий типа масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, такое как жидкий парафин или их смесь. Подходящие эмульгаторы включают природные смолы, такие как аравийская камедь и трагантовая камедь, встречающиеся в природе фосфатиды, такие как лецитин сои, сложные эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как моноолеат сорбитана, и продукты конденсации этих неполных эфиров с этиленоксидом, таким как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсия может также содержать подслащивающие средства и ароматизаторы.
[00336] Сиропы и эликсиры могут быть приготовлены с подсластителями, такими как глицерин, сорбит или сахароза. Такие составы могут также содержать средство для снижения уровня, консервант, ароматизатор или краситель.
[00337] Фармацевтические композиции по изобретению могут быть в виде стерильного инъекционного препарата, такого как стерильная инъекционная водная или масляная суспензия. Эта суспензия может быть приготовлена в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые были упомянуты выше. Стерильный препарат для инъекций может также представлять собой стерильный раствор для инъекций или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, таком как раствор в 1,3-бутандиоле, или полученный в виде лиофилизированного порошка. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные фиксированные масла обычно можно использовать в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое мягкое фиксированное масло, включая
синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, могут также использоваться при приготовлении инъекционных препаратов.
[00338] Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с материалом-носителем для получения разовой лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от хозяина, подвергающегося лечению и конкретного способа введения. Например, композиция с временным высвобождением, предназначенная для перорального введения людям, может содержать приблизительно от 20 до 500 мг активного вещества, смешанного с подходящим и удобным количеством материала-носителя, который может варьировать от около 5 до около 95% от общего количества композиций. Предпочтительно, чтобы была приготовлена фармацевтическая композиция, которая обеспечивает легко измеряемые количества для введения. Как правило, эффективное количество, которое должно вводиться системно, составляет от около 0,1 мг/кг до около 100 мг/кг и зависит от ряда факторов, включая, например, возраст и массу субъекта (например, млекопитающего, такого как человек), точное состояние, требующее лечения и его серьезность, путь введения, и в конечном итоге будет по усмотрению сопутствующего врача или ветеринара. Однако следует понимать, что конкретный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, включая активность конкретного используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион человека, которого лечат; время и путь введения; скорость выделения; другие препараты, которые ранее вводились; и степень тяжести конкретного состояния, подвергаемого терапии, что хорошо понятно специалистам в данной области.
[00339] Как отмечено выше, композиции раскрытия, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде отдельных единиц, таких как капсулы, облатки или таблетки, каждая из которых содержит заданное количество активного ингредиента в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле.
Фармацевтические композиции также можно вводить в виде болюса, электуария или пасты.
[00340] Таблетка может быть изготовлена путем прессования
или формования, необязательно с одним или несколькими
вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть
получены путем прессования в подходящей машине активного
ингредиента в свободно текучей форме, такой как порошок или
гранулы, необязательно смешанный со связующим веществом
(например, повидон, желатин, гидроксипропилэтилцеллюлоза),
смазывающее вещество, инертный разбавитель, консервант,
разрыхлитель (например, гликолят крахмала натрия, поперечно-
сшытый повидон, поперечно-сшитая натрийкарбоксиметилцеллюлоза)
поверхностно-активный или диспергирующий агент. Формированные
таблетки могут быть изготовлены на подходящей машине с
использованием смеси порошкообразного соединения, смоченного
инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно
покрыты или забиты и могут быть составлены таким образом, чтобы
обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного
ингредиента в нем, используя, например,
гидроксипропилметилцеллюлозу в различных пропорциях для обеспечения желаемого профиля высвобождения. Таблетки могут быть необязательно снабжены тонкокишечный или тостокишечным покрытием, чтобы обеспечить высвобождение в частях кишечника, отличных от желудка. Это особенно выгодно для моно- или ди-F-CDN-соединений, как описано в данном документе, когда такие соединения подвержены кислотному гидролизу.
[00341] Препараты, подходящие для местного введения во рту, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в ароматизированном основании, обычно сахарозу и аравийскую камедь или трагакант; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и аравийская камедь; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
[00342] Препараты для ректального введения могут быть представлены в виде суппозитория с подходящим основанием, включающим, например, масло какао или салицилат.
[00343] Препараты, подходящие для введения во влагалище, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозольных составов, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны в данной области техники.
[00344] Препараты, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают композицию изотоничной с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители. Препараты могут быть представлены в однодозовых или многодозовых герметичных контейнерах, например ампулах и флаконах, и могут храниться в лиофилизированном состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекции, непосредственно перед использованием. Растворы для инъекций и суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток, описанных ранее.
[00345] Когда раскрытое соединение или его соль названа или
изображается структурой, то следует понимать, что соединение или
соль, включая сольваты (в частности, гидраты), могут
существовать в кристаллических формах, некристаллических формах
или их смесях. Соединение или соль или сольваты (в частности, их
гидраты) также могут проявлять полиморфизм (т.е. способность
проявляться в разных кристаллических формах). Эти различные
кристаллические формы обычно известны как "полиморфы". Следует
понимать, что при названии или изображении по структуре
раскрытое соединение или сольваты (в частности, их гидраты)
также включают все их полиморфы. Полиморфы имеют тот же
химический состав, но отличаются упаковкой, геометрическим
расположением и другими описательными свойствами
кристаллического твердого состояния. Полиморфы могут иметь разные физические свойства, такие как плотность, форма, твердость, стабильность и растворительные свойства. Полиморфы обычно имеют различные точки плавления, ИК-спектры и
рентгеновские порошковые дифрактограммы, которые могут быть использованы для идентификации. Специалисту в данной области техники будет понятно, что могут быть получены различные полиморфы, например, путем изменения или регулирования условий, используемых во время кристаллизации или перекристаллизации соединения.
[00346] Для сольватов соединений по данному изобретению или их солей, которые находятся в кристаллической форме, квалифицированный специалист поймет, что могут быть получены фармацевтически приемлемые сольваты, в которых молекулы растворителя включены в кристаллическую решетку во время кристаллизации. Сольваты могут включать неводные растворители, такие как этанол, изопропанол, диметилсульфоксид, уксусную кислоту, этаноламин и этилацетат, или они могут включать воду в качестве растворителя, который включен в кристаллическую решетку. Сольваты, в которых вода является растворителем, который включен в кристаллическую решетку, обычно называют "гидратами". Гидраты включают стехиометрические гидраты, а также композиции, содержащие различные количества воды. Изобретение включает все такие сольваты.
[00347] Из-за их потенциального использования в медицине соли соединений по данному изобретению предпочтительно являются фармацевтически приемлемыми. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают соединения, описанные P. Heinrich Stahl и Camille G. Wermuth в Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, 2nd ed. (Wiley-VCH: 2011) and
also Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990) а также Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995) . Соль, охватываемая термином "фармацевтически приемлемые соли", относится к нетоксичным солям соединений в этом изобретении.
[00348] Соли соединений данного изобретения, содержащие основной амин или другую основную функциональную группу, могут быть получены любым подходящим способом, известным в данной
области, включая обработку свободных оснований неорганической
кислотой, такой как хлористоводородная кислота,
бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота,
фосфорная кислота и тому подобное, или с органической кислотой,
такой как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, малеиновая
кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая
кислота, малоновая кислота, муравьиная кислота, альгиновая
кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая
кислота, салициловая кислота, пиранозилдиловая кислота, такая
как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота,
альфагидроксикислота, такая как лимонная кислота или винная
кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или
глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная
кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как п-
толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота,
этансульфоновая кислота или тому подобное. Примеры
фармацевтически приемлемых солей включают сульфаты,
пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты,
хлориды, бромиды, иодиды, ацетаты, пропионаты, деканоаты,
каприлаты, акрилаты, формиаты, изобутираты, капроаты,
гептаноаты, пропиолаты, оксалаты, малонаты сукцинаты, себакаты,
фумараты, малеаты, бутин-1,4-диоаты, гексин-1,б-диоаты,
бензоаты, хлорбензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты,
гидроксибензоаты, метоксибензоаты, фталаты, фенилацетаты, фенилпропионаты, фенилбутраты, цитраты, лактаты, гликолят, лактаты, камсилаты, тартраты, манделаты и сульфонаты, такие как ксилолсульфонаты, метансульфонаты, пропансульфонаты, нафталин-1-сульфонаты и нафталин-2-сульфонаты.
[00349] Соли соединений данного изобретения, содержащие сложный диэфир фосфата, сложный фосфортиоат или другую кислотную функциональную группу, могут быть получены путем взаимодействия с подходящим основанием. Фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются ими: ацетат, пиридин, аммоний, пиперазин, диэтиламин, никотинамид, муравьиную кислоту, мочевину, натрий, калий, кальций, магний, цинк, литий, коричный, метиламино, метансульфоновый, пикриновый, винный, триэтиламино,
диметиламино и трис (гидсоксиметил) аминометан. Специалистам в данной области известны дополнительные фармацевтически приемлемые соли.
[00350] Такую фармацевтически приемлемую соль можно
получить с основанием, которое дает фармацевтически приемлемый
катион, который включает соли щелочных металлов (особенно натрий
и калий), соли щелочноземельных металлов (особенно кальция и
магния), соли алюминия и соли аммония, цинк, а также соли,
полученные из физиологически приемлемых органических оснований,
таких как диэтиламин, изопропиламин, оламин, бензатин,
бенатамин, трометамин (2-амино-2- (гидроксиметил) пропан-1,3-
диол), морфолин, эполамин, пиперидин, пиперазин, пиколин,
дициклогексиламин, N, N'-дибензилэтилендиамин, 2-
гидроксиэтиламин, три- (2-гидроксиэтил) амин, хлорпрокаин,
холин, деанол, имидазол, диэтаноламин, этилендиамин, меглумин
(N-метилглюкамин), прокаин, дибензилпиперидин,
дегидроабетиламин, коллидин, хинин, хинолон, эрбумин и основные аминокислоты, такие как лизин и аргинин.
[00351] Моно или ди F CDN соединения, как описано в данном
документе, которые включают их соли, могут быть описаны
структурами, в которых SH или ОН в фосфатной или тиофосфатной
связи (например, R5 или R6 соединения формулы I, как описано в
данном документе) представлены в виде S " или О " с
соответствующим катионом с образованием солей соединений, как
описано в данном документе. Например, соль соединения формулы II
третьего аспекта, как описано в данном документе, может быть
представлена следующими структурами:
R19
где Ау+ представляет собой катион
моно- или поливалентной соли,
пит являются наименьшим
возможным целым числом для данного у. Например, когда А у+является моновалентным, т.е. когда у является 1, например, Na +, К +, NH 4 +, ТЕАН+или тому подобное, п является 1 и m является 2; когда у является 2, например, Са 2+, Мд 2+ и тому подобное, п
является 1 и m является 1; когда у является 3, например А1
или
тому подобное, п является 3 и m является 2. Например, соли одновалентного или двухвалентного солевого катиона могут быть представлены как
-i , соответственно, или в случаях, когда п=1, они могут быть представлены без скобок,
R19
например, как
или
Альтернативно, одновалентные соли могут быть изображены с А+' смежным с каждым из S или О Например, натриевая соль моно или ди F RR CDN-соединения формулы II, как описано в данном
документе,
могут
быть
представлена
как
УЛ \\ XS
0\r
I V р I /""4it0-~~- r\
П / N
или
[00352] В некоторых случаях соединения могут включать также соли 2'ОН-группы, например тристриэтиламмониевые соли соединения формулы II, например, где R19 представляет собой F и R2 0
представляет собой ОН, может иметь структуру, представленную как
ИЛИ
[00353] Могут быть использованы другие не фармацевтически приемлемые соли, например трифторацетат или триэтиламмоний, например, при выделении соединений по изобретению и включены в объем данного изобретения.
[00354] Изобретение включает в свой объем все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединений по данному изобретению.
[00355] Если соединение по данному изобретению, содержащее основной амин или другую основную функциональную группу, выделяют в виде соли, соответствующая форма свободного основания этого соединения может быть получена любым подходящим способом, известным в данной области, включая обработку соли неорганическим или органическим основанием, подходящим образом неорганическим или органическим основанием, имеющим более высокий рК &i чем форма свободного основания соединения. Аналогично, если соединение по данному изобретению, содержащее сложный диэфир фосфата, сложный дифосфор фосфоротиоат или другую кислотную функциональную группу, выделяют в виде соли, соответствующая свободная кислотная форма этого соединения может быть получена любым подходящим способом, известным в данной области, включая обработку соли с неорганической или органической кислотой, подходящей неорганической или органической кислотой, имеющей более низкую рК &i чем свободная кислотная форма соединения.
[00356] Эффективное количество моно- или ди-F-CDN-соединения или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или его фармацевтически
приемлемого гидрата, как описано в данном документе, для пациента может варьировать в зависимости от таких факторов, как состояние, общее состояние здоровья пациента, путь и доза введения и тяжесть побочных эффектов. Имеется руководство по методам лечения и диагностики (см., например, Maynard, et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FL; Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK).
[00357] Эффективное количество может быть дано в разовой дозе, но не ограничивается одной дозой. Таким образом, введение может состоять из двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десятилетних, двенадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати, пятнадцати, шестнадцати, семнадцати, восемнадцати, девятнадцати, двадцати или более введений фармацевтической композиции, содержащей соединение моно- или ди-F-CDN или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат, как описано в данном документе. В тех случаях, когда в настоящих способах имеется более одного введения фармацевтической композиции, введение может быть разнесено интервалами времени в одну минуту, две минуты, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более минут, с интервалом около одного часа, два часа, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 часа и т.д. В контексте часов термин "около" означает плюс или минус любой временной интервал в течение 3 0 минут. Введения могут быть также разделены интервалами времени от одного интервала в один день, два дня, три дня, четыре дня, пять дней, шесть дней, семь дней, восемь дней, девять дней, десять дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 2 0 дней, 21 дня и их комбинацией. Изобретение не ограничивается интервалами дозирования, которые распределены одинаково во времени, но включают дозы при не- равных интервалах.
[00358] График дозирования, например, один раз в неделю, два раза в неделю, три раза в неделю, четыре раза в неделю, пять
раз в неделю, шесть раз в неделю, семь раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в четыре недели, раз в пять недель и тому подобное, доступно для изобретения. Графики дозирования включают дозирование на общий период времени, например, одну неделю, две недели, три недели, четыре недели, пять недель, шесть недель, два месяца, три месяца, четыре месяца, пять месяцев, шесть месяцев, семь месяцы, восемь месяцев, девять месяцев, десять месяцев, одиннадцать месяцев и двенадцать месяцев.
[00359] Предусмотрены циклы вышеуказанных графиков дозирования. Цикл можно повторять, например, каждые семь дней; каждые 14 дней; каждые 21 день; каждые 28 дней; каждые 35 дней; 42 дня; каждые 4 9 дней; каждые 5 6 дней; каждые 63 дня; каждые 7 0 дней; и тому подобное. Между циклом может быть интервал без дозирования, где интервал может быть примерно, например, семь дней; 14 дней; 21 день; 2 8 дней; 35 дней; 42 дня; 4 9 дней; 5 6 дней; 63 дня; 70 дней; и тому подобное. В этом контексте термин "около" означает плюс или минус один день, плюс или минус два дня, плюс или минус три дня, плюс плюс минус четыре дня, плюс минус пять дней, плюс минус шесть дней или плюс или минус семь дней.
[00360] Способы совместного введения с дополнительным терапевтическим агентом хорошо известны в данной области
(Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo
(eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA) . Как правило, совместное введение или введение вместе указывает на лечение субъекта двумя или более агентами, при этом агенты могут вводиться одновременно или в разное время. Например, агенты могут быть доставлены одному субъекту в виде отдельных введений, которые могут быть, по существу, в одно и то же время или в разное время и которые
могут быть одним и тем же путем или разными путями введения. Такие агенты могут быть доставлены одному субъекту в одном и том же введении (например, в том же составе) , так что их вводят одновременно одним и тем же способом введения.
[00361] Как отмечено, композиции по данному изобретению предпочтительно составлены в виде фармацевтических композиций для парентеральной или энтеральной доставки. Типичная фармацевтическая композиция для введения субъекту животному включает фармацевтически приемлемый носитель, такой как водные растворы, нетоксичные эксципиенты, включая соли, консерванты, буферы и тому подобное. См., например,, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Easton ed., Mack Publishing Co., pp 1405-1412 and 1461- 1487 (1975); The National Formulary XIV, 14th Ed., /American Pharmaceutical Association, Washington, DC (1975). Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла и инъекционные органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, солевые растворы, парентеральные носители, такие как хлорид натрия, декстрозу Рингера и т.д. Внутривенные носители включают жидкие и питательные вещества. Консерванты включают противомикробные агенты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы. РН и точная концентрация различных компонентов фармацевтической композиции регулируются в соответствии с обычными навыками в данной области.
[00362] Повторные введения конкретной вакцины (гомологичная стимуляция) оказались эффективными для усиления гуморальных реакций. Такой подход не может быть эффективным для повышения клеточного иммунитета, поскольку предыдущий иммунитет к вектору имеет тенденцию ухудшать представление надежного антигена и генерирование соответствующих воспалительных сигналов. Одним из способов обхода этой проблемы было последовательное введение вакцин, которые используют разные системы доставки антигенов (гетерологичное усиление). В гетерологичном режиме стимуляции по меньшей мере одна первичная или импульсная доставка включает доставку инактивированной опухолевой клетки/моно- или ди-F-CDN
соединения или их композиций, описанных в данном документе. Гетерологичный рычаг схемы может включать доставку антигена с использованием одной или нескольких из следующих стратегий:
инактивированные или аттенуированные бактерии или вирусы, содержащие представляющий интерес антиген, которые являются частицами, которые были обработаны с некоторым денатурирующим состоянием, чтобы сделать их неэффективными или неэффективными при установлении патогенной инвазии;
очищенные антигены, которые обычно представляют собой природные антигены, очищенные от клеточной культуры патогена или образец ткани, содержащий патоген, или его рекомбинантный вариант;
живые вирусные или бактериальные векторы доставки, рекомбинантно сконструированные для экспрессии и/или секретирования антигенов в клетках-хозяевах субъекта. Эти стратегии полагаются на ослаблении (например, посредством генной инженерии) вирусных или бактериальных векторов, чтобы они не были патогенными и токсичными;
векторах антигенпредставляющих клеток (АРС), такие как вектор дендритной клетки (DC), которые содержат клетки, загруженые антигеном или трансфицированные композицией, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген (например, Provenge(r) (Dendreon Corporation) для лечение метастатического кастрат-резистентного рака предстательной железы);
липосомных средствах доставки антигена; а также
голых ДНК-векторах и голых РНК-векторах, которые могут
вводиться геном-пистолетом, электропорацией, бактериальными
призраками, микросферами, микрочастицами, липосомами,
поликатионными наночастицами и тому подобное.
[00363] Первичную вакцину и вакцину-стимулятор можно вводить любым способом или комбинацией следующих путей. В одном аспекте основную вакцину и вакцину-стимулятор эффективности вводят по тому же пути. В другом аспекте первичную вакцину и вакцину-стимулятор вводят различными путями. Термин "разные пути" охватывает, но не ограничивается ими, различные участки на
теле, например участок, который представляет собой оральный,
неинвазивный, энтеральный, парентеральный, ректальный,
интранодный (лимфатический узел), внутривенный, артериальный, подкожный, внутримышечный, перитуморальный, внутриутробный, инфузионный, слизистый, назальный, в спинномозговом пространстве или цереброспинальной жидкости и т. д., а также в разных режимах, например, оральном, внутривенном и внутримышечном.
[00364] Эффективное количество первичной или стимулирующей вакцины может быть назначено в одной дозе, но не ограничивается одной дозой. Таким образом, введение может быть введением двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати, пятнадцати, шестнадцати, семнадцати, восемнадцати, девятнадцати, двадцати или более вакцины. В тех случаях, когда имеется более одного введения вакцины, введения могут быть разнесены с интервалами в одну минуту, две минуты, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более минут с интервалом около одного час, два часа, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, и так далее. В контексте часов термин "около" означает плюс или минус любой временной интервал в течение 3 0 минут. Введения могут быть также разделены интервалами времени от одного интервала в один день, два дня, три дня, четыре дня, пять дней, шесть дней, семь дней, восемь дней, девять дней, десять дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 2 0 дней, 21 дня и их комбинацией. Изобретение не ограничивается интервалами дозирования, которые распределены одинаково во времени, но включают дозы в неравные интервалы, такие как график прайминга, состоящий из введения через 1 день, 4 дня, 7 дней и 25 дней, только чтобы обеспечить не ограничивающий пример.
ПРИМЕРЫ
[00365] Следующие примеры служат для иллюстрации данного изобретения. Эти примеры никоим образом не предназначены для ограничения объема изобретения.
Общие способы
[00366] Безводные растворители и реагенты, подходящие для
синтеза олигонуклеотидов в фазе раствора, были приобретены у
коммерческих поставщиков (Aldrich, ChemGenes Corporation,
Wilmington, MA, USA) и обработаны в сухом аргоне или азоте с
использованием безводного метода. Реакции взаимодействия
фосфорамидитов и циклизацию Н-фосфонатов проводили в безводном
ацетонитриле или пиридине в сухом аргоне или азоте. Исходные
вещества для всех реакций в сухом пиридине сушат путем
концентрирования (три раза) из пиридина, если не указано иное.
Условия хроматографии были следующими, если в приведенном ниже
примере не указано иное. Препаративную флеш-хроматографию на
силикагеле проводили при хроматографии среднего давления (MPLC)
с использованием колонок диоксида кремния RedisSep Rf (Teledyne
Isco, Lincoln, NE) на Combiflash Rf+UV-Vis (Teledyne Isco) с
использованием градиентов метанола в дихлорметане. Обращенно-
фазовую препаративную хроматографию проводили в условиях MPLC с
использованием колонок RediSep Rf С18 Aq (Teledyne Isco) на
Combiflash Rf+UV-Vis с использованием градиентов ацетонитрила в
водном 10 мМ растворе ТЕАА. Аналитическая жидкостная
хроматография высокого давления (ВЭЖХ) проводилась на системе
высокоэффективной жидкостной хроматографии Shimadzu Prominence с
двумя насосами LC-2 0AD и детектором фотодиодных матриц SPD-M3 0A
при 2 54 нм. Градиенты 10 мМ ТЕАА в ацетонитриле или 2 0 мМ NH 4
ОАс в ацетонитриле использовали с 5-микронной колонкой (Thermo
Scientific Acclaim 120) С-18 (4,6 х 250 мм) или 10-микронной
(Thermo Scientific Hypersil) С-18 колонкой (4,0x250 мм) при
комнатной температуре. Препаративную ВЭЖХ проводили на
препаративной жидкостной хроматографической системе LC2 0-AP с
использованием Shimadzu, оснащенной детектором
ультрафиолетового/ультрафиолетового излучения SPD-20A на 254 нм на колонке Varian Microsorb 60-8 С-18 41,6x250 мм с использованием градиентов 10 мМ ТЕАА и ацетонитрила со скоростью потока 50 мл/мин. Экстракция твердой фазы с использованием С-18 Sep-Pak (Waters) проводилась при нагрузках 3% (мае./мае.). Аналитические LCMS регистрировали с использованием системы LCMS
Shimadzu, включающей высокоэффективную жидкостную хроматографию Prominence, соединенную с одиночным квадрупольным масс-спектрометром Shimadzu LCMS-2 02 0 с использованием источника электрораспылительной ионизации (ESI).
[00367] 1 Н ЯМР, 19 F ЯМР, 31 Р ЯМР и 13 С ЯМР-спектры регистрировали в CDC1 3, d б -DMSO, CD 3 OD или D 2 О в качестве растворителя. Рабочая частота для 1Н составляла 400 МГц, 19 F -376 МГц, 31 р _ 1б2 Мгц, а 13 С - 100 МГц. Все спектры регистрировались при температуре окружающей среды (2 0-2 5 ° С) , если не указано иное. Температуру для экспериментов с переменной температурой калибровали ежемесячно или раз в два месяца с использованием метода этиленгликоля, описанного в С. Amman, Р. Meier and А. Е. Merbach, J. Мадп. Reson. 1982, 46, 319-321.
[00368] Конечные соединения могут существовать в виде соли триэтиламмония (ТЕАН+или Et 3 NH+), которая может быть преобразована в другие формы соли (включая, но не ограничиваясь ими, натрий (Na+) или аммоний (NH 4+)) с использованием стандартного ионного обмена методов или других хорошо известных методов.
[00369] Определения стереохимической структуры на фосфоре были проведены аналогично литературным методам (Zhao et al. Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acid 289:352-378, 2009) или, как описано в примерах ниже.
[00370] Названия соединений были сгенерированы с использованием программного обеспечения ChemBioDraw Ultra V 14.0, доступного от CambridgeSoft Corporation, 100 CambridgePark Drive, Cambridge, MA 02140 USA (http://www.cambridgesoft.com). Сокращенные названия соединений или ссылочных соединений, используемых в примерах, также представлены в следующей таблице 3. Исходные соединения З'З'-RR- (G) (А), З'З'-RR- (G) (G) и З'З'-RR- (А) (А) получали в соответствии со способами, описанными выше в публикации РСТ № W02014/09393б, включенной в качестве ссылки в отношении таких синтезов. Структуры в примерах также могут быть представлены в виде солей, например О " А+или -S А +, где А+- катион соли.
[00371] Таблица 3: Сокращу
соединений.
Номер примера и сокращенные
названия соединений
Пример 1 соединение б
З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A) ;
дитио (Я р, Я р) циклический [2'F
А (3', 5') р 2'F А (3', 5' ) р]
(2 Я, 3 Я, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9,
Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -2,9-
бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил)
3,10-дифтор-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Я, Я 1
дифтор [3,2-d: 3', 2 'J]
[1,3,7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин 5,12-диоксид
Пример 1 Соединение ба
3'3'-RS- (2'F-A) (2'F-A) ;
дитио (Я р, S р) циклический [2'F
А (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р]
(2 Я, 3 Я, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9,
Я 10, Я 10а, 12 14а R) -2,9-
бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил )-
3,10-дифтор-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Яr Н 1
дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J]
[1,3,7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин 5,12-диоксид
названия и структуры
Структура
Номер примера и сокращенные названия соединений Пример 2 соединение 14 З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-A) ; дитио (Я р, Я р) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 1 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил)-1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он Пример 2 Соединение 14а 3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-A) ; дитио ( Яр, S р) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5') р]
2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, Я
5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, 12
Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-
ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто-
5,12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -
дифтор [3,2 - о!: 3', 2'-JJ [1,3,
7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2-ил)-1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он
названия соединений Пример 3 соединение 17 З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G) ; дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F G (3', 5'
) р] ^ 1
9,9'- ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я ./j' F
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я
14а) -3,10- дифтор-5,12-
димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Er Н 7
дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J]
[1,3, 7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2,9-
диил)бис(2-амино-1,9-дигидро- 6Н-
пурин-б-он
Пример 3 Соединение 17а 3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-G) ; дитио ( Яр, S р) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F G (3', 5'
N^/NH2
) р] li
9,9'- ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я F
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, S 12, Я X^NV^4 \ ^sh
14а) -3,10- дифтор-5,12- 0
димеркапто-5,12-
диоксидооктагидро-2 Er Н 7 HS*"\
о ^
дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9-диил)бис(2-амино-1,9-дигидро- 6Н-пурин-б-он
Номер примера и сокращенные названия соединений Пример 7 соединение 2 5 З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-BzA) ; дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F iBuG(3', 5' ) р 2'F BzA (3', 5' ) р]
ЛЬ (9 - ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я
14а) -3,10-дифтор-9- (2-
изобутирамидо-6-оксо-1г 6-дигидро-9Н пурин -9-ил)-5, 12-димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9Я-пурин-б-ил)бензамид. Пример 7 Соединение 2 5а 3'3'-RS- (2'F-iBuG) (2'F-BzA); дитио ( Яр, S р) циклический [2'F iBuG(3', 5' ) р 2'F BzA (3', 5' ) р]
ЛЬ (9 - ( (R 2, Я 3, Я За, S 5, Я
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я
14а) -3,10-дифтор-9- (2-
изобутирамидо-6-оксо-1г 6-дигидро-9Н пурин -9-ил)-5, 12-димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9Я-пурин-б-ил)бензамид.
Номер примера и сокращенные названия соединений Пример 8 соединение 2 6 З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-A) ; дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F iBuG(3', 5' ) р 2'FA (3', 5' ) р]
ЛЬ (9 - ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я
14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-
ил)-3,10-дифтор-5,12-димеркапто-
5,12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -
дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J]
[1,3, 7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2-ил)-б-оксо-
6,9-дигидро -1Я- пурин-2-
ил)изобутирамид. Пример 9 соединение 2 7 З'З'-RR- (2'F-BzA) (2'F-BzA) ; дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F BzA (3', 5' ) р 2'F BzA (3', 5' ) р]
N,N1-{((R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я
14а) -3,10- дифтор-5,12-
димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Er Н 7
дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J]
[1,3, 7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2,9-
диил)бис(9Я- пурин-9,6-
диил))дибензамид
Номер примера и сокращенные названия соединений Пример 4 соединение 22 З'З'-RR- (A) (2'F-A) ;
дитио ( R р, R р) циклический [А (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] (2 Я, 3 Я, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9,
Я 10, S 10а, Я 12, Я 14а) -2,9-
бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) -3-
фтор-10-гидрокси-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Я, Я 7 -
дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8 ]
дифосфациклододецин 5,12-диоксид
Пример 4 Соединение 22а
3'3'-RS- (A) (2'F-A) ;
дитио ( R р, R р) циклический [А (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] (2 Я, 3 Я, Я За, S 5, Я 7а, Я 9,
Я 10, S 10а, Я 12, Я 14а) -2,9-
бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) -3-
фтор-10-гидрокси-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Я, Я 7 -
дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8 ]
дифосфациклододецин 5,12-диоксид
Пример 5 соединение 2 3
З'З'-RR- (2'F-G) (А)
дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) р А (3', 5' ) р] 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, S 10а, Я 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) - - -3-фтор-10-гидрокси-5,12-димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -
дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J]
[1,3, 7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-
дигидро- 6Н- пурин-б-он
Пример 5 Соединение 2 3а 3'3'-SR- (2'F-G) (А)
дитио ( S р, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) р А (3', 5' ) р] 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, S 5, Я 7а, Я 9, Я 10, S 10а, Я 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) - - -3-фтор-10-гидрокси-5,12-димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он Пример б соединение 2 4 З'З'-RR- (G) (2'F-A)
дитио ( R р, R р) циклический [G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, S За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) -10 - -З-фтор-З-гидрокси-5,12-димеркапто-5, 12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9
Номер примера и сокращенные названия соединений дигидро- 6Н- пурин-б-он Пример б Соединение 2 4а 3'3'-RS- (G) (2'F-A)
дитио ( R р, S р) циклический [G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] 2-амино-9 - ((R 2, R 3, S За, R 5, R 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, S 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) -10 - -фтор-З-гидрокси-5,12-димеркапто-5, 12-
диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он Пример 10 соединение 3 0 З'З'- (2'F-G) (2'F-A) ;
циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р]
2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, 14а R) -9-
(6-амино-9Н-пурин-9-ил) - 3,10-дифтор-5,12-дигидрокси-5,12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J]
[1,3,7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он
Номер примера и сокращенные названия соединений Пример 1 соединение 7 З'З'-RR-(2'PF-A) (2'PF-A) дитио ( Яр, Яр) циклический [2'pF А (3' , 5' ) р 2'pF А (3' , 5' ) р]
(2 Я, 3 Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, S 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -2,9-бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) 3,10-дифтор-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8 ] дифосфациклододецин 5,12-диоксид Пример 1 Соединение 7а 3'3'-RS-(2'pF-A) (2'PF-A) дитио ( Яр, S р) циклический [2'pF А (3' , 5' ) р 2'pF А (3' , 5' ) р]
(2 Я, 3 Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, S 10, Я 10а, S 12, Я 14а) -2,9-бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) 3,10-дифтор-5,12-
димеркаптооктагидро-2 Я, Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8 ] дифосфациклододецин 5,12-диоксид
CDA
З'З'- (А) (А)
циклический [А(3', 5' 5' ) р]
[G(3\ 5
RR-CDA
З'З' RR- (А) (А)
дитио ( R р, R р) - циклический [А (3' , 5') р А (3', 5')р]
цГАМФ З'З'- (G) (А) циклический (3\5') р]
RR-CDG
З'З'-RR- (G) (G)
дитио ( R p, R p) - циклический [G (3', 5' ) p G (3', 5' ) p]
NH2
°н/ > Ч "H
RR-цГТАМФ З'З'-RR- (G) (А) дитио ( R р, R р!
:з\ 5
циклический
р А (3', 5'
ML-цГАМФ 2'3'- (G) (А) ;
циклический-[G(2', 5' 5' ) р]
[00372] Аббревиатуры и Акронимы. За1РС1=Салицилхлорфосфит
(2-хлор- 4Н- бензо [ о! ] [1,3,2] диоксафосфинин-4-он) .
БСА=дихлоруксусная кислота. DDTT=3 - ((N, N - диметил-
аминометилидин) амино) -ЗН - 1,2,4-дитиазол-5-тиона.
БАЗТ=диэтиламиносульфтрифторид. NaHCO 3=бикарбонат натрия. DCM=CH
2 С1 2=Дихлорметан. EtOH=этaнoл. EtOAc=этилaцeтaт. КОАс=ацетат
калия. МеСЫ=ацетонитрил. МеОН=метанол. NH 4 ОАс=ацетат аммония.
DMAP=N, Ы-диметилпиридин-4-амин. БМОСР=2-хлор-5,5-диметил-1,3,2-
диоксафосфорин-2-оксид. DMTC1=4,4'-диметокситритилхлорид.
DMT=4,4-диметокситритил. Ы-фенилтрифламид=1,1,1-трифтор-Ы-фенил-
N - ((трифторметил) сульфонил) метансульфонамид. ТВАЕ=фторид
тетрабутиламмония. ТВБ=трет- бутилдиметилсилил. ТЕАА=ацетат
триэтиламмония. ТЕА=триметиламин. ТЕАН +=триэтиламмоний.
ТЕАВ=бикарбонат третиламмония. ТТА=трифторуксусная кислота.
ТМЗС1=триметилсилилхлорид. НЕ=фтористоводородная кислота.
ТНЕ=тетрагидрофуран. 6=Гуанин. G 1Ь=изобутирил гуанин. А=аденин. А В2=бензоил аденин. АМА=гидроксид аммония/40% раствор метиламина в воде.
Пример 1: Синтез З'З ' RR- (2'F-A) (2'F-A) (6) и З'З ' RS-
[00373] (2 R, 3 R, R 3a, R 5, R 7a, R 9, R 10, R 10a, R 12, Я 14a) -2,9-бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) -3,10-дифтор-5,12-димеркаптооктагидро-2 Er Е 1 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 ' J]
[1,3,7,9] тетраокс [2,8 ] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 6 ), также называемый З'З ' RR (2'F A) (2'F-A) или дитио ( Я р, Я р) циклический [2'F А (3', 5' ) p2'FA (3', 5' ) р], и (2 Я, 3 Я, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, 12 S, 14а R) -2,9-бис ( 6-амино-9Н-пурин-9-ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркаптооктагидро-2 Ег Н 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2'-JJ [1, 3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 6а ), З'З ' RS- (2'F-A) (2'F-А) или дитио ( Яр, S р) циклический [2'F А (3', 5' ) р 2'FA (3
', 5') р] , были получены по следующей схеме 1.
[00374] Этап 1: Получение (R 2, Я 3, Я 4, 5 я; -5- (6-
бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -4-фтор-2- (гидроксиметил)
тетрагидрофуран-3-ил гидрофосфоната ( 2 ) : К раствору N- (9 - ( ( 2R, 3R, 4R, 5R ) -5 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -З-фтор-4-гидрокситетрагидрофуран- 2-ил) -9 Н-пурин-6-ил) бензамида (1, 2,0 г, 3,0 ммоль, ChemGenes) в 1,4-диоксане (25 мл) и пиридин (8 мл) добавляли раствор SalPCl (0,84 г, 4,1 ммоль) в 1,4-диоксане (12 мл) . Через 30 мин к перемешиваемой реакционной смеси при комнатной температуре вводили воду (4 мл) и полученную смесь выливали в 1 н. водный раствор NaHCO 3 (100 мл) . Эту водную смесь экстрагировали EtOAc (3 х 100 мл) и слои распределяли. Экстракты EtOAc объединяли и концентрировали досуха в вакууме в виде бесцветной пены. Бесцветную пену растворяли в СН 2 С1 2 (30 мл), получая бесцветный раствор. К этому раствору добавляли воду (0,5 мл) и б% (об./Об.) Раствор DCA в СН 2 С1 2 (30 мл). После 10 мин перемешивания при комнатной
температуре к красному раствору загружали пиридин (3,5 мл). Полученную белую смесь концентрировали в вакууме и воду удаляли в виде азеотропа после концентрирования с MeCN (30 мл) . Этот азеотропный процесс повторяли еще два раза с MeCN (30 мл) . При последнем выпаривании полученную белую суспензию соединения 2 оставляли в MeCN (15 мл).
[00375] Этап 2: Получение (2 Я, 3 Я, 4 Я, 5 R) -5- (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((((((2R, 3R, 4R, 5 R) -5- (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтортетрагидрофуран-З-ил) окси) ( 2-цианоэтокси) фосфоротиоил) окси) метил) -4-фтортетрагидрофуран-3-илгидрофосфоната ( 4 ): К раствору (R 2, Я 3, Я 4, 5 R) -5 (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) - 2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтортетрагидрофуран-З-ил (2-цианоэтил) диизопропилфосфорамидит (3, 2,5 г, 2,9 ммоль, ChemGenes) в MeCN (20 мл) сушили путем концентрации в вакууме. Этот процесс повторяли еще два раза, чтобы удалить воду как азеотроп. На последнем азеотропе к раствору соединения 3 в MeCN (7 мл) вводили ЗА молекулярных сита и раствор хранили в атмосфере азота. К перемешиваемой смеси соединения 2 с остаточным дихлорацетатом пиридин-1-има в MeCN (15 мл) добавляли раствор соединения 3 в MeCN (7 мл) . Через 5 мин к перемешиваемой смеси добавляли ДДТТ (650 мг, 3,2 ммоль) . Через 30 минут желтую смесь концентрировали в вакууме, получая соединение 4 в виде желтого масла.
[00376] Этап 3: Получение N, N- (((2R, 3R, За Я, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -5- (2-цианоэтокси) -3,10- дифтор-12-меркапто-12-оксидо-5-сульфидооктагидро-2 Er Я 7 -дифтор [3,2 -о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8 ] дифосфациклододецин-2, 9-диил) бис (9 Я пурин-9, б-диил) ) дибензамид (5): К раствору соединения 4 в СН 2 С1 2 (60 мл) добавляли воду (0,35 мл) и 6% (об./Об.) Раствор DCA в СН 2 С1 2 (60 мл) . Через 10 мин при комнатной температуре к красному раствору вводили пиридин (20 мл) . Полученную желтую смесь концентрировали в вакууме до тех пор, пока не осталось примерно 2 0 мл желтой смеси. К желтой
смеси вводили пиридин (20 мл) и смесь концентрировали в вакууме до тех пор, пока не осталось примерно 2 0 мл желтой смеси. К желтой смеси добавляли пиридин (30 мл) и смесь концентрировали в вакууме до тех пор, пока не оставалось приблизительно 30 мл желтой смеси. К перемешиваемой желтой смеси в пиридине (30 мл) добавляли DMOCP (1,6 г, 8,4 ммоль). Через семь минут к темно-оранжевому раствору добавляли воду (1,4 мл), затем сразу же добавляли 3 Я -1,2-бензодитил-З-он (0,71 мг, 4,2 ммоль). Через пять минут темно-оранжевый раствор выливали в 1 н. водный раствор NaHCO 3 (400 мл) . Через десять мин двухфазную смесь экстрагировали EtOAc (200 мл) и диэтиловым эфиром (200 мл) . После отделения водный слой снова экстрагировали EtOAc (200 мл) и диэтиловым эфиром (200 мл) . Органические экстракты объединяли и концентрировали в вакууме. К концентрированному желтому маслу добавляли толуол (75 мл) и смесь выпаривали в вакууме для удаления остаточного пиридина. Эту процедуру дважды повторяли с толуолом (75 мл) . Полученное масло очищали хроматографией на силикагеле (от 0 до 10% МеОН в СН 2 С1 2) / получая соединение 5 (выход 67 мг, 2,5%) в виде оранжевого масла.
[00377] Этап 4: Получение З'З ' RR- (2'F-A) (2'F-A) (6) и З'З ' RS- (2'F-A) (2'F-A) (ба) : К перемешиваемому раствору соединения 5 (65 мг, 0,07 ммоль) в МеОН (0,9 мл) добавляли водный раствор гидроксида аммония (0,9 мл) и оранжевую суспензию нагревали при 50°С. Через два часа оранжевому раствору дают остыть и концентрируют в вакууме. Оранжевый остаток очищали хроматографией на силикагеле с обращенной фазой (от 0 до 30% MeCN в 10 мМ водной ТЕАА) с получением соединения 6 (18 мг, выход 38%) в виде белой монотриэтиламмониевой соли после лиофилизации. LCMS-ESI: 693,25 [М-Н] " (рассчитано для С 20 Н 22 F 2 N ю О 8 Р 2 S 2- 694.305); Rt: 16, 698 мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%); R t: 20, 026 мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 20%); гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 44 (s, 2Н) , 8,24 (s, 2Н) , 6,52 (d, J=16,4 Гц, 2Н) , 5,80 (d, J=3,6 Гц, 1Н) , 5,67 (d, J=4,0 Гц, 1H) , 5, 37-5, 26 (m, 2H) , 4, 77-4, 65 (m, 4H) , 4,22 (dd, J=ll,4 Гц, 6,0 Гц, 2H) , 3,34 (q, J=l, 0 Гц, 6H) ,
1,43 (t, J=7,0 Гц, 9H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 74 до 200, 98 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 46. Стереохимическая структура этого соединения, как показано на схеме 1, была подтверждена сокристаллической структурой, связанной с белком STING дикого типа.
[00378] Также была приготовлена натриевая соль соединения 6. На небольшой микроколонке (емкость 1 мл) от Bio-Rad (Bio-Spin, Cat # 732-6008) была загружена смола Bio-Rad AG(r) 50W-X2
(каталог 143-5241, степень биотехнологии, 100-200 меш, Водородная форма, CAS 69011-20-7) до маркера 0,2 на микроколонке. Смолу вымачивали пять раз с мельноподобной фильтрованной водой (0,5 мл), и полученную в результате промывку водой пропускали под действием силы тяжести. Моющие средства были отброшены. Смолу обрабатывали 2 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия. Затем конденсированную смолу промывали шесть раз с 2 мл воды, фильтрированной миллипором. Соль ТЕАН+соединения 6 (5 мг) растворяли в 2 мл воды, фильтрированной миллипором и загружали на смолу. Смолу промывали шесть раз 2 мл воды, фильтрированной миллипором и целевой продукт собирали из фракций элюирования и лиофилизировали в течение ночи для получения натриевой соли соединения 6 (3 мг).
[00379] Изомер Rp, Sp также выделяли после очистки на стадии обращенной фазовой хроматографии, чтобы получить соединение 6а (9,0 мг, 99%) в виде соли бис-триэтиламмония после лиофилизации. LCMS-ESI: 693,30 [М-Н] " (рассчитано для С 2о Н 22 F 2 N ю О 8 Р 2 S 2: 694, 05); Rt 13, 830' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%) . Rt 15, 032' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 20%). гЯ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 65 (s, 1Н) , 8,50
(s, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 8,26 (s, 1H) , 6,58 (dd, J=16,4, 2,8 Гц, 2H) , 6,00 (dd, J=51,2, 3,6 Гц, 1H) , 5,69 (dd, J=51,2, 3,8 Гц, 1H) , 5,32-5,15 (m, 2H) , 4, 77-4, 67 (m, 3H) , 4,61 (d, J=12,4 Гц, 1H) , 4,25 (dd, J=ll,8, 4,2 Гц, 2H) , 3,33 (q, J=l, 2 Гц, 12H) , 1,43 (t, J=7,2 Гц, 18H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 75 до 201,31 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 69, 54, 64.
[00380] Соединения (2 R, 3 S, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, 10 Я 10а, Я 12, Я 14а) -2,9-бис (6-амино-9Н-пурин-9 ил) -3,10-дифтор-5, 12-димеркаптооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 ' J] [1,3,7,9] тетраокс [2, 8] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 7 ), также называемый З'З ' RR (2'PF-A) (2'PF-A) или дитио ( Я р, Я р) циклический [2 ' Р F А (3', 5' ) р2 ' Р F А (3', 5' ) р] и (2 Я, 3 S, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, 10 S, Я 10а, 12 S, 14а R) -2,9-бис (б -амино-9Н-пурин-9-ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркаптооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 'J] [1,3, 7, 9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 7а ) , также называемый З'З ' RS- (2'PF-A) (2'PF-A) или дитио (Яр, S р) циклический [2'PF
А (3' , 5')р 2' pF А (3',5')р],
также
способу схемы 1, где N - (9 -
метоксифенил) (фенил) метокси) метил) - З-фтор-4-
гидрокситетрагидрофурана-2-ил) -9 Н-пурин-6-ил) бензамида (0,4
г, 0,6 ммоль, Glen Research, Sterling, Virginia) использовали
вместо соединения 1 на стадии 1, и ( 2 Я, 3 Я, 4 5R) -5- (б-
бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4- фтортетрагидрофуран-3-ил (2-цианоэтил) диизопропилфосфорамидит (0,5 г, 0,6 ммоль, исследование Глена)
использовали вместо соединения 3 на стадии 2. Соединение 7 (6,4 мг, чистота 97%) и соединение 7а (5,0 мг, чистота 93%) получали в виде солей бис-триэтиламмония после очистки с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизацией.
[00381] Соединение 7: LCMS-ESI: 695,75 [М+Н]+(рассчитано для С го Н 22 F 2 N 10 О 8 Р 2 S 2: 694, 05); Rt 16, 779' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 7,616' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЕ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 65 (s, 2Н) , 8,49 (s, 2Н) , 6,79 (dd, J=14,4, 4,2 Гц, 2Н) , 5,86 (br s, 1Н) , 5,74 (br s, 1H) , 5, 52-5, 44 (m, 2H) , 4,59
(br s, 2H) , 4,51-4,40 (m, 4H) , 3,39 (q, J=l, 2 Гц, 12H) , 1,48 (t, J=7,2 Гц, 18H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -196, 47 до 196,70
(m) .
[00382] Соединение 7a: LCMS-ESI: 695,75 [M+H]+(рассчитано для С го H 22 F 2 N ю О 8 P 2 S 2: 694, 05); Rt 14,216' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 8,106' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЕ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 65 (s, 1Н) , 8,61 (s, 1H) , 8,44 (s, 2H) , 6,73 (d, J=14,8 Гц, 2H) , 5, 88-5, 64 (m, 2H) , 5,48-5,41 (m, 2H) , 4,57 (br s, 2H) , 4, 46-4, 35 (m, 4H) , 3,34 (q, J=7, 2 Гц, 12H) , 1,43 (t, J=7,2 Гц, 18H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -196, 98 до 197,61
(m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 57, 28, 55, 16, 55.09.
Пример 2: Синтез З'З ' RR- (2'F-G) (2'F-A) (14) и З'З ' RS-
(2'FG) (2'F-A) (14a)
[00383] 2-АМИНО-9 - ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -9- (6-амино-9Н пурин -9-ил) -3, 10-дифтор-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 -о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он ( 14 ) , также называемый З'З'-RR- (2 ' F-G) (2'F-A) или дитио (Яр, Яр) циклические [2'F G
(3', 5' ) р 2'F А (3 ', 5') р] и 2-амино-9 - (( 2R, 3R, За Я, 5R, 7а Я, 9 Я, 10 Я, 10а Я, 12 S, 14а Я ) -9- (6-амино-9Н-пурин-9-ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - о!: 3 ', 2'- j ] [1,3,7,9] тетраокса [2,8]
дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро-6Н-пурин-6-он ( 14а ),
также упоминаемый З'З'-RS- (2'F-G) (2'F-A) или дитио (Яр, S р)
циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'FA (3 ', 5') р], были получены
в соответствии со следующей схемой 2.
Step2
DCA, H20, CH2CI2
[00384] Этап 1: Подготовка ( 2R, 3R, 4R, 5R ) -2 - ((бис
(4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтор-5- (2-
изобутирамидо-б-оксо-1,б дигидро-9 Н-пурин-9-ил)
тетрагидрофуран-3-ил гидрофосфоната (9) : К раствору ( 2R, 3R, 4R, 5R ) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтор-5- (2-изобутирамидо-б-оксо -1, б-дигидро-9 Н-пурин-9-ил) тетрагидрофуран-3-ил (2-цианоэтил) диизопропилфосфорамидит (8, 1 г, ChemGenes) в ацетонитриле (5 мл) и воду (36 мкл) добавляли пиридиний трифторацетата (2 32 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 мин с последующим добавлением трет-бутиламина (5 мл). Реакцию продолжали в течение 10 мин и концентрировали под вакуумом и совместно выпаривали в вакууме с ацетонитрилом (2 х 10 мл), получая смесь соединений 9 и 10 ~ (4: 1) . Смесь растворяли в безводном 1,4-диоксане (9 мл) с последующим добавлением безводного пиридина (3 мл) и раствора SalPCl (210 мг) в 1,4-диоксане (4,5 мл) . После перемешивания в
течение 15 мин реакционную смесь гасили водой (1,5 мл) с последующим добавлением насыщенного раствора NaHCO з (60 мл) . Смесь экстрагировали 3 х 60 мл EtOAc и объединенные органические слои концентрировали под вакуумом с получением 1,7 г неочищенной смеси, состоящей в основном из соединения 9 (6: 1).
[00385] Этап 2: Получение (R 2, Я 3, Я 4, Я 5) -4-фтор-2-
(гидроксиметил) -5- (2-изобутирамидо-6-оксо-1г 6-дигидро-9Н-
пурин-9- ил) тетрагидрофуран-3-илгидрофосфоната (11): К раствору соединения 9 (1,7 г) и DCM (12 мл) добавляли воду (0,18 мл), а затем раствор 6% -ного раствора DCA в DCM (12 мл) . Через 10 мин реакционную смесь гасили пиридином (1,4 мл) и затем концентрировали в вакууме. Неочищенный материал совместно
выпаривали в вакууме с Зхб, б мл безводного ацетонитрила, оставляя 1,4 мл соединения 11.
[00386] Этап 3: Получение (2 Я, 3 Я, 4 Я, 5 R) -2 -
((((((2R, 3R, 4Rr 5R) -5- (б-бензамидо-9 Н-пурин-9 ил) -2 -
((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-
фтортетрагидрофуран-3-ил) окси) (2-цианоэтокси) фосфоротиоил) окси) метил) -4-фтор-5- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Н-пурин-9-ил) фосфоната тетрагидрофуран-3-ила водорода (12) : Добавляли раствор соединения 3 (совместно выпаривали в вакууме Зхб, б мл с безводным ацетонитрилом, оставляя 4 мл) в 4 мл безводного ацетонитрила и 1,4 мл раствора соединения 11 и реакционную смесь перемешивали в течение 2 мин. Добавляли DDTT (0, 226 г) и реакцию протекали в течение 30 мин, затем концентрировали в вакууме досуха, получая 3,б г соединения 12.
[00387] Этап 4: Получение N - (9 - (( 2R, 3R, За Я, 5 Я, 7а Я, 9 Я, 10 Я, 10а Я, 12 Я, 14а Я ) -5- (2-цианоэтокси) -3, 10-дифтор-9- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Н-пурин-9-ил) 12-меркапто-12-оксидо-5-сульфооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 -о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9 Н-пурин-6-ил) бензамида (13): К раствору соединения 12 (1,8 г) в DCM (12 мл) добавляли воду (60 мкл) , а затем б% -ный раствор DCA в DCM (12 мл). Через 10 мин реакционную смесь гасили пиридином (5 мл) и концентрировали в вакууме для удаления DCM.
Добавляли дополнительное количество пиридина (15 мл) и смесь концентрировали под вакуумом до 10 мл. Добавляли DMOCP (2 92 мг) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 мин с последующим добавлением воды (266 мкл), а затем 3- Я -1,З-бензодитиол-З-она
(130 мг). Через 5 мин реакцию гасили насыщенным раствором NaHCO 3
(75 мл) и экстрагировали смесью этилового эфира и EtOAc в соотношении 1: 1. Водный слой дополнительно экстрагировали еще 2 5 мл смеси этилового эфира и EtOAc в соотношении 1: 1. Объединенные органические слои концентрировали в вакууме с получением 1,2 г неочищенного соединения 13. Очистка на основе силикагеля с нормальной фазой (100% DCM до 90 DCM: 10 МеОН) давала 50 мг соединения 13 в виде белого твердого вещества
(обогащенного R р R р_ диастереомером) и 20 мг N (9 ((R 2, Я 3, Я
За, 5 S, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -5- (2-
цианоэтокси) -3,10-дифтор-9- ( 2-изобутирамидо-6-оксо-1,6-
дигидро-9 Н-пурин-9-ил) -12-меркапто-12-оксидо-5-
сульфидооктагидро-2 Ег Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9 Н-пурин-6-ил) бензамида (13а), обогащенный R Р S р диастереомер.
[00388] Этап 5: Получение RR- (2'F-G) (2'F-A) (14) и З'З'-RS- (2'F-G) (2'F-A) ( 14а ): Раствор обогащенного R р R р соединения 13 (50 мг) в АМА (0,84 мл) и EtOH (0,36 мм) нагревали до 50 ° С в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и барботировали аргоном в течение 10 мин, затем концентрировали в вакууме. Очистка с помощью обращенной фазы С18 MPLC и препаративная ВЭЖХ дает 9 мг соединения 14 в виде тристриэтиламмониевой соли. LCMS-ESI: 711,30 [МН]
(рассчитано для С 20 Н 22 F2N10O9P2S2'
710.05); Rt: 12,7
мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 20 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 53 (s, 1Н) , 8,35 (s, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 5,72 (dd, J=14,0, 4,4 Гц, 1H) , 5,58 (dd, J=14,0, 4,0 Гц, 1H), 5,31-5,22 (m, 2H), 4,70-4,59 (m, 2H), 4,244,19 (m) , 3,26 (q, J=l, 2 Гц, 21H), 2,05 (s, 1,7H), 1,40 (t, J=7,2 Гц, 32H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 199, 2 (td, J=56,
24 Гц), 200, 1 (td, J=56, 24, 20 Гц), 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 91; 54,65. См. ФИГ.1.
[00389] RS- (2'F-G) (2'F-A) (14a) получали аналогичным образом и очищали из соединения 13а, обогащенного R р S р диастереомером. Раствор соединения 13а (20 мг) в АМА (0,42 мл) и EtOH (0,18 мл) нагревали до 50 ° С в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и барботировали аргоном в течение 10 мин, затем концентрировали в вакууме. Очистка с помощью обращенной фазы С18 MPLC и препаративная ВЭЖХ дает 6,9 мг соединения 14а в виде тетратриэтиламмониевой соли. LCMS-ESI: 711,25 [М+Н] " (рассчитано для С 2о Н 22 F 2 N 10 О 9 Р 2 S 2: 710,05); Rt: 8,7 мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 20 мин,
1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЕ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 53 (s, 1Н) , 8,37 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H) , 6,62 (d, J=17,6 Гц, 1H) , 6,42 (d, J=17,6 Гц, 1H) , 5,97 (dd, J=51,6, 4 Гц, 1H) , 5,64 (dd, J=51,6, 4 Гц, 1H) , 5, 27-5, 25 (m, 2H) , 4, 64-4, 52 (m, 2H) , 4,24 (td, J=10,8 Гц, 3,2 Гц, 2H) , 3,27 (q, J=l, 2 Гц, 24H) , 2,05 (s, 2H) , 1,40 (t, J=7,2 Гц, 36H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -199,8 (td, J=53, 18 Гц), -200, 9-201, 1 (m) , 31P NMR (45 °C, D20) 5 55,3; 54, 62.
Пример 3: Синтез З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G) (17) и З'З '- RS-(2'F--G) (2'F--G) (17a)
[00390] 9,9' - ( (R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто- 5,12-диоксидооктагидро-
2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9-диил ) бис (2-амино-1,9-дигидро- 6Н-пурин-б-он) ( 17 ), также называемый З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G) или дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) p2'FG (3 ', 5') р] и 9,9 '- (( 2R, 3R, За Я, 5R, 7а Я, 9 Я, 10 Я, 10а Я, 12 S, 14а Я ) - 3,10-дифтор-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9-диил) бис (2-амино-1,9-дигидро-бН-пурин-б-он) ( 17а ), также называемый З'З ' RS (2'F G) , (2'F G) или дитио (Яр, S р) циклический [2'F G (3', 5' ) р 2'F G (3 ', 5') р] , были получены в соответствии со следующей схемой 3.
6 F
н*р'
a) residual pyridinium-dichloroacetate, MeCN
b) DDTT, MeCN
DMTO
О H
но-Р\-н
DMTO
o"'\
Step 2
Step 3
a) AMA, 50 °C
b) HPLC
O^.N^NH2
[00391] Этап 1: Получение ( 2R, 3R, 4R, 5R ) -2 - ((((((2 R, 3 R, 4 R, 5 R ) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтор-5- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Н-пурин-9-ил) тетрагидрофуран-3-ил) окси) (2-цианоэтокси) фосфоротиоил) окси) метил) -4-фтор-5- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9Н
пурин-9-ил) тетрагидрофуран-3-илгидрофосфоната ( 15 ) : Раствор соединения 8 (ChemGenes, объеденный 3 х 13 мл с безводным MeCN) в 8 мл безводного MeCN добавляли к соединению 11 (в 3 мл MeCN, полученном по схеме 2 из 3,4 г соединения 9 ), и реакцию перемешивали в течение 2 мин. Добавляли DDTT (0,4 52 г) и реакцию протекали в течение 30 мин, затем концентрировали досуха в вакууме, получая 8,14 г соединения 15.
[00392] Этап 2: Получение N, N'"- ( ( (2 Я 3, R За, R, R 5, R
7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, 14а R) -5- (2-цианоэтокси) -3, 10-
дифтор-12-меркапто-12-оксидо-5-сульфидооктагидро-2 Я r Я 1
дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [ 2,8]
дифосфациклододецин-2, 9-диил) бис ( б-оксо-б,9-дигидро- 1Н-
пурин-9,2-диил) ) бис (2-метилпропанамида) ( 16 ) : К раствору
неочищенного соединения 15 (8,4 г) в DCM (48 мл) добавляли воду
(240 мкл) , а затем 6% -ный раствор DCA в DCM (48 мл) . Через 10
мин реакционную смесь гасили пиридином (20 мл) и концентрировали
в вакууме для удаления DCM. Добавляли дополнительное количество
пиридина (60 мл) и смесь концентрировали под вакуумом до 2 0 мл.
Добавляли DM0CP (1,2 г) и реакционную смесь перемешивали в
течение 3 минут с последующим добавлением воды (1 мл), а затем
3- Я -1,З-бензодитиол-З-он (520 мг) . Через 5 мин реакцию гасили
насыщенным раствором NaHCO 3 (300 мл) и экстрагировали смесью
этилового эфира и EtOAc в соотношении 1: 1. Водный слой
дополнительно экстрагировали DCM. Объединенные органические слои
концентрировали в вакууме с получением неочищенного соединения
16. Очистка диоксида силикагеля с нормальной фазой (100% DCM до
90 DCM: 10 МеОН) давала 150 мг 16 в виде белого твердого
вещества (обогащенного R р R р_ диастереомером) и 2 60 мг N, N ' -
( ( (2 Я, 3 Я, Я За, 5 S, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, Я 14а) -5-
(2-цианоэтокси) -3,10-дифтор-12-меркапто-12-оксидо- 5-
сульфидооктагидро-2 Ег Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9-диил) бис (б-оксо-б,9-дигидро- 1Н- пурин-9,2-диил)) бис (2-метилпропанамид) ( 16а ), обогащенного R р S р диастереомером.
[00393] Этап 3: Получение З'З'-RR-(2'F-G) (2'F-G) (17): Раствор соединения 16 (75 мг) в АМА (1,3 мл) и EtOH (0,54 мл) нагревали до 50 о С в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и барботировали аргоном в течение 10 мин, затем концентрировали в вакууме. Очистка с помощью обращенной фазы С18 MPLC и препаративной ВЭЖХ дает 19 мг соединения 17 в виде бис-триэтиламмониевой соли. LCMS-ESI: 725,25 [М-Н]
(рассчитано для С 20 Н 22 F 2 N 10 О 10 Р 2 S 2: 726, 04); Rt: 10,44 мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 20 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 15 (s, 2Н) , 6,40
(d, J=18,8 Гц, 2Н) , 5,67 (d, J=52,0 Гц, 2Н) , 5, 34-5, 26 (m, 2Н) , 4,66-4,61 (m, 4Н) , 4,22-4,18 (m, 2Н) , 3,36 (q, J=l, 2 Гц, ЮН), 1,43 (t, J=7,2 Гц, 15Н) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -199, 2 --199,4 (m) , 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 7.
[00394] Аналогичным образом получали 3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-G) (17a). Раствор соединения 16a (160 мг) в АМА (1,3 мл) и EtOH
(0,54 мл) нагревали до 50 о С в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и барботировали аргоном в течение 10 мин, затем концентрировали в вакууме. Очистка с помощью обращенной фазы С18 MPLC и препаративной ВЭЖХ дает 6,5 мг соединения 17а в виде соли аммония. LCMS-ESI: 725,25 [М-Н]
(рассчитано для С 20 Н 22 F 2 N 10 О 10 Р 2 S 2: 726, 04); Rt: 9,17 мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 20 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гН NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 33 (s, 1Н) , 8,15
(s, 1H) , 6,40 (dd. J=17,6, 7,6 Гц, 2H) , 6,02 (dd, J=51,6, 3,2 Гц, 1H) , 5,72 (dd, J=51,2, 3,2 Гц, 1H) , 5, 39-5, 29 (m, 2H) , 4,664,52 (m, 4H), 4,25-4,17 (m, 2H), 2,15 (s, 1,4H).
Пример 4: Синтез З'З -RR-(A) (2 ' F-A) (2'F-A) (22) и З'З ' RS- (A) (2'F-A) (22a)
[00395] (2 R, 3 R, R 3a, R 5, R 7a, R 9, R 10, lOaS, 12 R, 14a R) -2,9-бис (6-амино-9Н-пурин-9-ил) -З-фтор-10-гидрокси-5, 12-димеркаптооктагидро-2 Er H 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 ' J]
[1,3,7,9] тетраокса [2, 8] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 22 ), также называемый З'З ' RR (A) (2'F-A) или дитио (Яр, Яр) циклический [А (3', 5' ) р 2'FA (3', 5' ) р], и (2 Я, 3 Я, Я
За, 5S, 7а Rr Я 9, R 10, lOaS, 12 R, 14a R) -2,9-бис (б- амино-9Н-пурин-9-ил) -3-фтор-10-гидрокси-5,12-димеркаптооктагидро- 2Н, 1 Н -дифтор [3,2 - о!: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин 5,12-диоксид ( 22а ), также называемый З'З ' RS (A) (2'F-A) или дитио ( Яр, Яр) циклический [А (3', 5' ) р 2'F А (3 ', 5') р], были получены по следующей схеме 4.
Step 1
DMTO Q ^Bz
О OTBS
a) i. pyridinium trifluoroacetate,
MeCN, H20 ii. fe/Y-butylamine
b) DCA, H20, CH2CI2
HO'P*0
'OTBS 19
Step 2
a) residual pyridinium-dichloroacetate, MeCN
b) DDTT, MeCN
DMTO
HCp-H
ABz
DMTO.
Step 3
a) DCA, H20, CH2CI2
b) DMOCP, pyridine
c) 3H-1,2-benzodithiol-3-one
Step 4
a) NH4OH, MeOH, 50 °C
b) TEA-3HF, 40 °C
NH,
[00396] Этап 1: Получение бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -4 (2 Я, Я 3, Я 4, 5 я; -5- (6-
((трет - бутилдиметилсилил) окси)
-2- (гидроксиметил) тетрагидрофурана -3-илгидрофосфоната ( 19 ) : К раствору (R 2, R 3, Я 4, 5 R) -5- (б-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4 - (( трет- бутилдиметилсилил) окси) тетрагидрофуран-3-ил (2-цианоэтил) диизопропилфосфорамидита ( 18, 2,0 г, 2,0 ммоль, ChemGenes) в MeCN (10 мл) добавляли воду (0,07 мл), а затем пиридинийтрифторацетат (0,47 г, 2,4 ммоль, 1,2 экв., Aldrich). После перемешивания в течение восьми минут к бесцветной реакции вводили трет- бутиламин (10 мл, 95 ммоль, 47 экв., Aldrich). Через десять минут бесцветный раствор концентрировали в вакууме и воду удаляли в виде азеотропа после концентрирования три раза с MeCN (30 мл) с получением бесцветной пены. Бесцветную пену растворяли в СН 2 С1 2 (25 мл) , что приводило к бесцветному раствору. К этому бесцветному раствору добавляли воду (0,36 мл) и 6% (об./Об.) раствор DCA в СН 2 CI 2 (24 мл), что превращало бесцветный раствор в ярко-красный раствор. После 10 минут перемешивания при комнатной температуре к красному раствору вводили пиридин (3 мл). Полученную белую смесь концентрировали в вакууме и воду удаляли в виде азеотропа после концентрирования с MeCN (30 мл). Этот азеотропный процесс повторяли три раза с MeCN
(30 мл). При последнем выпаривании полученную белую суспензию соединения 19 выдерживали в MeCN (15 мл).
[00397] Этап 2: Получение (2 Я, 3 Я, 4 Я, 5 R) -5- (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((((((2R, 3R, 4R, 5 R) -5- (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтортетрагидрофуран-З-ил) окси) ( 2-цианоэтокси) фосфоротиоил) окси) метил) -4 - ( ( трет-бутилдиметилсилил) окси) тетрагидрофуран-3-илгидрофосфоната ( 20 ) : В растворе соединения 3 (1,8 г, 2,0 ммоль, ChemGenes) в MeCN
(20 мл) сушат концентрированием в вакууме. Этот процесс повторяли еще два раза с MeCN (20 мл) для удаления воды в виде азеотропа. На последнем азеотропе к раствору соединения 3 в MeCN
(б мл) добавляли шесть молекулярных сит ЗА и раствор хранили в атмосфере азота. К перемешанной смеси соединения 19 с остаточным дихлорацетатом пиридин-1-иум в MeCN (15 мл) вводили раствор соединения 3 в MeCN (б мл) . Через 10 минут к перемешиваемой
смеси добавляли ДДТТ (4 60 мг, 2,2 ммоль) . Через 30 минут желтую смесь концентрировали в вакууме, получая соединение 20 в виде желтого масла.
[00398] Этап 3: Получение N, N '- ((( 2R, 3R, За R, 5 R, 7а
R, 9 R, 10 R, 10а R, 12 R, 14а R ) -3- ( (трет-бутилдиметилсилил) окси ) -12- (2-цианоэтокси) -10-фтор-5-меркапто-5-оксидо-12-сульфидооктагидро-2Н, 7Н-дифуро [3,2- о!: 3 ', 2'- j ] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9-диил) бис (9 Я пурин-9,6-диил)) дибензамид (21) и N, N ' - ( ( (2 R, 3 R, R За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, 12S, 14а R) -3 - ( (трет-бутилдиметилсилил) окси) -12- (2-цианоэтокси) -10-фтор-5 меркапто-5-оксидо-12-сульфидооктагидро-2 Ег Я 7 -дифтор [3,2 - о!: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин- 2,9-диил) бис (9Н-пурин-9,б-диил)) дибензамида ( 21а ) : К светло-желтому раствору соединения 20 в СН 2 CI 2 (50 мл) вводили воду (0,24 мл) и 6% (об./Об.) Раствор DCA в СН 2 CI 2 (50 мл), в результате чего получали красный решение. После перемешивания в течение десяти минут при комнатной температуре к красному раствору добавляли пиридин (15 мл). Полученную желтую смесь концентрировали в вакууме до тех пор, пока не осталось примерно 25 мл желтой смеси. К желтой смеси добавляли пиридин (50 мл) и смесь концентрировали в вакууме до тех пор, пока не осталось примерно 30 мл желтой смеси. Этот процесс повторяли еще один раз с пиридином (50 мл) до тех пор, пока не осталось 30 мл желтой смеси. К перемешиваемой желтой смеси в пиридине (30 мл) вводили DMOCP (1,1 г, 6,0 ммоль, 3 экв., Aldrich) . После пяти минут перемешивания к темно-оранжевому раствору добавляли воду (1,0 мл), затем сразу добавляли 3 Я -1,2-бензодитил-З-он (0,5 г, 3,0 ммоль, 1,5 экв., Aldrich). После пяти минут перемешивания темно-оранжевый раствор выливают в 1 н. водный раствор NaHCO 3 (4 00 мл). После 10-минутного перемешивания двухфазную смесь экстрагировали EtOAc (200 мл) и СН 2 С1 2 (200 мл) . После разделения слоев водный слой снова экстрагировали два раза СН 2 С1 2 (400 мл) . Органические экстракты объединяли и концентрировали в вакууме. К концентрированному желтому маслу вводили толуол (100 мл) и остаточный пиридин удаляли в вакууме.
Эту процедуру повторяли еще один раз с толуолом (100 мл) . Полученное желтое масло очищали хроматографией на силикагеле (от 0 до 10% МеОН в СН 2 С1 2 ) с получением соединения 21 (270 мг, 13%) в виде желтого твердого вещества и соединения 21а (120 мг).
[00399] Этап 4: Получение З'З ' RR (A) (2'F-A) ( 22 ) и 3' 3 ' RS (A) (2'F А) ( 22а ) : К перемешиваемому раствору соединения 21 (150 мг), обогащенного Rp, Rp диастереомером, в МеОН (2,0 мл) вводили 3 0% водный раствор гидроксида аммония (2,0 мл) и желтую суспензию нагревали при 50 ° С. Через два часа желтому раствору дают остыть до комнатной температуры и желтый раствор концентрируют в вакууме. К остаточному твердому веществу добавляли тригидроксид триэтиламина (1,2 мл, Aldrich) и желтый
раствор нагревали до 40 ° С. Через два часа желтому раствору давали остыть до комнатной температуры. Этот желтый раствор медленно вводили в охлажденный раствор 1 М ТЕАВ (б мл) и TEA
(1,0 мл) в бане с ледяной водой. Полученную желтую смесь перемешивали в течение 3 0 минут. Желтую смесь очищали хроматографией с обращенной фазой на колонке С18 (от 0% до 20% MeCN в 10 мМ водной ТЕАА) с получением соединения 22 (24 мг, 23%) с чистотой 96% в виде белой тристриэтиламмониевой соли после лиофилизации, LCMS-ESI: 693,25 [М+Н]+(рассчитано для С 2о Н 23 FN ю О 9 Р 2 S 2- 692, 06); Rt 12, 339' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 7, 625' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 20%). гН NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 65 (s, 1Н) , 8,56
(s, 1H) , 8,37 (s, 1H) , 8,27 (s, 1H) , 6,58 (d, J=16,8 Гц, 1H) , 6,33 (s, 1H) , 5,69 (dd, J=51,6, 3,6 Гц, 1H) , 5, 36-5, 27 (m, 1H) , 5,21 (d, J=4,4 Гц, 1H) , 5,11-5,05 (m, 1H) , 4, 76-4, 65 (m, 3H) , 4,60 (d, J=12,4 Гц, 1H) , 4,25 (dd, J=ll,8, 4,4 Гц, 2H) , 3,24 (q, J=7,2 Гц, 18H) , 1,37 (t, J=7,2 Гц, 27H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 73 до 200, 93 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 79.
[00400] Соединение 21a, обогащенное R p S p диастереомером, подвергали аналогичному взаимодействию с получением соединения 22а (29 мг, 34%) с чистотой 95% в виде белой пентакис-триэтиламмониевой соли после очистки с помощью хроматографии с обращенной фазой и лиофилизации. LCMS-ESI: 691,25 [М-Н]
(рассчитано для С 20 Н 23 F Ni0 09 Р 2 S 2: 692, 06); Rt 10, 399' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 10, 236' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 20%). гЕ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 74 (s, 1Н) , 8,69 (s, 1H) , 8,37 (s, 1H) , 8,33 (s, 1H) , 6,62 (d, J=16,4 Гц, 1H) , 6,36 (s, 1H) , 5,93 (dd, J=51,6, 2,8 Гц, 1H) , 5,31-5,23 (m, 1H) , 5,19 (d, J=4, 4 Гц, 1H) , 5,135,07 (m, 1H) , 4, 77-4, 65 (m, H) , 4, 62-4, 59 (m, 2H) , 4, 29-4, 25 (m, 2H) , 3,34 (q, J=7,2 Гц, ЗОН), 1,43 (t, J=7,2 Гц, 45H) . 19F NMR
(400 МГц, 45 °C, D20) 5 -201, 58 до 201, 78 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 55,00.
Пример 5: Синтез З'З'-RR- (2'F-G) (A) (23) и 3'3'-SR- (2'F-G) (A) (23a)
[00401] 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, Я 5, Я 7а, Я 9, Я 10, 10aS, 12 Я, Я 14а) -9- (6-амино-9 Я -пурин- 9-ил) -З-фтор-10-гидрокси-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Ег Я 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 'J] [1, 3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он (23 ), также называемый З'З'-RR- (2 'F-G) (А) или дитио (Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) рА (3 ', 5') р] и 2 амино-9 - ((R 2, Я 3, Я За, 5S, 7а Я, Я 9, Я 10, 10aS, 12 Я, Я 14а) -9- (6-амино-9Н-пурин-9-ил ) -3-фтор-10-гидрокси-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2Н, 7Н-дифуро [3,2- d: 3 ', 2'- j ] [1,3,7,9 ] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н-пурин-б-он ( 23а ), также называемый З'З'- SR- (2'F-G) (А ) или дитио ( S р, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) рА (3', 5' ) р]
а также
получали в соответствии со способами примера 4, схема 4. На стадии 1 использовали соединение 18 (2,0 г, 2,0 ммоль, ChemGenes), вместо соединения 3 на стадии 2 использовали соединение 8 (2,0 г, 2,3 ммоль, ChemGenes), а на стадии 4 водный раствор гидроксида аммония заменяли на той же пропорции АМА, чтобы получить соединение 23 (чистота 33 мг, 99%) в виде соли бис-триэтиламмония и соединения 23а (50 мг, чистота 98%) в виде трис-триэтиламмониевой соли после очистки с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизацией,
[00402] Соединение 23: LCMS-ESI: 707,80 [М-Н]+(рассчитано для С го Н 23 FN ю О ю Р 2 S 2: 708, 05); Rt 14,310' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%) . Rt 7, 274' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЯ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 56 (s, 1Н) , 8,35 (s, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 6,39 (d, J=18,4 Гц, 1H) , 6,31 (s, 1H) , 5,69 (dd, J=51,6, 4,2 Гц, 1H) , 5, 38-5, 30 (m, 1H) , 5,19-5,14 (m, 1H) , 4,91 (d, J=4, 4 Гц, 1H) , 4, 65-4, 63 (m, 4H) , 4,23-4,18 (m, 2H) , 3,34 (q, J=l, 2 Гц, 12H) , 1,41 (t, J=7,2 Гц, 18H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -199, 47 до 199, 72 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 70, 54, 52.
[00403] Соединение 23a: LCMS-ESI: 709,80 [M+H]+(рассчитано для С го H 23 FN ю О ю P 2 S 2: 708, 05); Rt 17, 348' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 6,354' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЯ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 74 (s, 1Н) , 8,36 (s, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 6,41 (d, J=19,2 Гц, 1H) , 6,33 (s, 1H) , 5,98 (dd, J=51,6, 4,4 Гц, 1H) , 5,41-5,29 (m, 1H) , 5,19-5,13 (m, 1H) , 4,89 (d, J=4, 4 Гц, 1H) , 4,63 (d, J=9,2 Гц,
ЗН) , 4,57 (d, J=12,0 Гц, 1H) , 4,28-4,18 (m, 2H) , 3,34 (q, J=7, 2 Гц, 18H) , 1,42 (t, J=7,2 Гц, 27H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 11 до 200, 36 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 55, 32, 55, 25, 54, 66.
Пример 6: Синтез З'З'-RR- (G) (2'F-A) (24) и 3'3'-RS- (G) (2'F-A) (24a)
[00404] 2-амино-9 - ( (R 2, R 3, 3aS, 5 R, R 7a, R 9, R 10, R 10a, R 12, R 14a) -9- (6-амино-9 H -purin- 9-ил) -10-фтор-З-гидрокси-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2 - d: 3', 2 'J] [1, 3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он (24 ), также называемый З'З'-RR- (G ) (2'F-A) или дитио ( Яр, Яр) циклический [G (3', 5' ) р 2'F-A (3', 5' ) р], и 2-амино-9 - ((R 2, Я 3, 3aS, 5 Я, Я 7а, Я 9, Я 10, Я 10а, 12S, 14а R) -9- (6-амино-9Н-пурин-9-ил) -10-фтор-3-гидрокси-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er Н 7 -дифтор [3,2- d: 3 ', 2'- j ] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро-бН-пурин-б-он ( 24а ), также называемый З'З'- RS G) (2'F-A) или дитио ( Яр, S р) циклический [G (3', 5' ) р 2'F-A
(3', 5' ) р]
получали в соответствии со способами примера 4, схема 4. Соединение 3 ( 2,1 г, 2,4 ммоль, ChemGenes ) использовали вместо соединения 18 на стадии 1 и (2 Я, 3 Я, 4 Я, 5 Я ) -2 - ((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4 - ((трет бутилдиметилсилил) окси) -5- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,6-дигидро-9 Н-пурин-9-ил) тетрагидрофуран-3-ил (2- цианоэтил) диизопропилфосфорамидита ( 1,6 г, 1,6 ммоль, ChemGenes ) использовали вместо соединения 3 на стадии 2 с получением соединения 24 ( 10 мг, чистота 94% ) и соединения 24а ( 50 мг, 9 6% чистоты ) в виде пентакис- триэтиламмониевых солей после очистки методом ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизацией.
[00405] Соединение 24: LCMS-ESI: 708,00 [М-Н]+(рассчитано для С го Н 23 FN ю О ю Р 2 S 2: 708, 05); Rt 14, 878' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 7,381' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЯ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 52 (s, 1Н) , 8,34 (s, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 6,60 (d, J=16,8 Гц, 1H) , 6,13 (d, J=l,2 Гц, 1H) , 5,68 (dd, J=51,6, 4,2 Гц, 1H) , 5,39-5,25 (m, 1H) , 5,21-5,15 (m, 1H) , 4,90 (d, J=2, 8 Гц, 1H) , 4,70-4,63 (m, 2H) , 4,61-4,57 (m, 2H) , 4, 23-4, 20 (m, 2H) , 3,34 (q, J=l, 2 Гц, ЗОН), 1,43 (t, J=7,2 Гц, 45H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 12 до 200, 31 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 54, 9, 54, 4.
[00406] Соединение 24a: LCMS-ESI: 710,10 [M+H]+(рассчитано для С 2o H 23 FN ю О ю P 2 S 2: 708, 05); Rt 12, 633' мин в условиях ВЭЖХ (10 мМ ТЕАА, от 2% до 20%). Rt 8, 662' мин в условиях LCMS (20 мМ NH4OAc, от 2% до 50%). гЯ NMR. (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 63 (s, 1Н) , 8,47 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 6,72 (d, J=17,2 Гц, 1H) , 6,23 (d, J=2,0 Гц, 1H) , 6,05 (dd, J=51,6, 4,4 Гц, 1H) , 5,47-5,32 (m, 1H) , 5,31-5,24 (m, 1H) , 4, 98-4, 90 (m, 1H) , 4, 87-4, 85 (m, 1H) , 4, 84-4, 78 (m, 1H) , 4, 69-4, 65 (m, 1H) , 4, 63-4, 56 (m, 1H) , 4, 38-4, 28 (m, 2H) , 3,34 (q, J=l, 2 Гц, ЗОН), 1,47 (t, J=7,2 Гц, 45H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, D20) 5 -200, 91 до 201,11 (m) . 31P NMR (45 °C, D20) 5 55, 6, 55, 5, 54, 5.
Пример 7: Синтез З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-BzA) (25) и З'З '- RS- (2'F iBuG) (2'F-BzA) (25a)
[00407] N - (9 - ( (2R, ЗЯ, ЗаЯ, 5R, laR, 9R, 10Я, ЮаЯ, 12Я, 14аЯ) -3,10-дифтор-9- (2-изобутирамидо -б-оксо-1,б-дигидро-9 Я-пурин-9-ил) -5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Я r Я 7 дифтор [3,2 - о!: 3', 2'- J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] diphosphacyclododecin-2-ил) -9 Н-пурин-6-ил) бензамида (25) , называемый также З'З'- RR- (2'F-iBuG) (2'F-BzA) или дитио ( Я р, Я р) циклический [2'F iBuG (3', 5' ) р 2'F BzA(3', 5' ) р] , и N - (9 - ((R 2, Я 3, Я За, 5S, 7а Я, Я 9, Я 10, Я 10а, Я 12, 14а R) -3, 10-дифтор-9- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Я-пурин-9-ил) -5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Я, Я 7 -дифуро [3,2- о!: 3 ', 2'- j ] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9Н-пурин-б-ил) бензамида ( 25а ), также называемый 3'3'-RS- (2'F-iBuG) (2'F-BzA), или дитио ( Я р, S р) циклический [2'F iBuG (3', 5' ) р 2'F BzA (3 ', 5') р] , получали в соответствии со следующей схемой 5.
13'
[00408] К раствору соединения 13 1 (155 мг, 0,17 ммоль, 1 экв. Смесь диастереомеров 13 и 13а, см. Пример 2) в MeCN (0,83 мл) добавляли трет-бутиламин (0,82 мл, 7,8 ммоль, 47 экв.),, Реакцию продолжали в течение 10 мин и концентрировали в вакууме. Очистка обращенной фазой С18 MPLC дает 57 мг соединения 25а в виде соли триэтил аммония и 41 мг соединения 25 в виде соли триэтиламмония.
[00409] Соединение 25: LCMS-ESI: 883,35 [М-Н] " (рассчитано для С si Н 32 F 2 N ю О и Р 2 S 2- 884, 11); Rt: 5,42 мин (20-100% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 10 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8.85 (s, 1Н) , 8.80 (s, 1H) , 8.31 (s, 1H) , 8.13 (d, J=7.6 Гц, 2H) , 7.82 (t, J=7.2 Гц, 1H) , 7.73 (t, J=7.6 Гц, 2H), 6.74 (d, J=16.8 Гц, 1H), 6.50 (s, J=19.2 Гц, 1H) , 5.84 (dd, J=6.4, 4.8 Гц, 1H) , 5.7 (dd, J=7.6, 4,0 Гц, 1H) , 5.36-5.21 (m, 2H) , 4.64-4.62 (m, 2H) , 4.23 (td, J=12, 4.8 Гц, 2H) , 3.35 (q, J=l .2 Гц, 12H) , 2.78-2.72 (m, 1H) , 2.05 (s, 0.2H), 1.40 (t, J=7.2 Гц, 18H), 1.19 (dd, J=6.8 Гц, 2.4 Гц, 6H).
[00410] Соединение 25а: LCMS-ESI: 883,30 [М-Н] " (рассчитано для С si Н 32 F 2 N ю О и Р 2 S 2- 884, 11); Rt: 5,16 мин (20-100% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 10 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8.91 (s, 1Н) , 8.85 (s, 1H) , 8.36 (s, 1H) , 8.14 (d, J=7.6 Гц, 2H) , 7.83 (t, J=7 . 6 Гц, 1H) , 7.72 (t, J=8.0 Гц, 2H), 6.75 (d, J=16.8 Гц, 1H), 6.50 (d, J=20.4 Гц, 1H) , 6.05 (dd, J=50.8 Гц, 3.6 Гц, 1H) , 5.9 (dd, J=52.0 Гц, 4.4 Гц, 1H), 5.41-5.20 (m, 2H), 4.81-4.76 (m, 2H), 4.63-4.42 (m, 2H) , 4.30-4.22 (m,2H), 3.35 (q, J=l .2 Гц, 9H) , 2.52-2.43 (m, 1H) , 2.05 (s, 0.5H), 1.40 (t, J=7.2 Гц, 12H) , 1.19 (dd, J=59.2 Гц, 6.8 Гц, 6H) .
Пример 8: Синтез З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-A) (26)
[00411] N - (9 - ( (2R, ЗЯ, ЗаЯ, 5Я, 7аЯ, 9Я, 10Я, ЮаЯ, 12Я, 14аЯ) -9- (б-амино-9 Я -пурин- 9-ил) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто-5,12-диоксидооктагидро-2 Er 1Н -дифтор [3,2 - d: 3', 2' - J] [1,3, 7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -6-оксо-б,9-дигидро- 1Н- пурин-2-ил) изобутирамида ( 26 ) , также называемого RR- (2 ' F-iBuG) (2'F-A) или дитио (Яр, Яр)
[00412] К раствору 25 (20 мг, пример 7, схема 5) в MeCN (0,83 мл) добавляли концентрированный NH 4 ОН (0,35 мл) и МеОН (0,35 мл) . Реакционную смесь продолжали в течение 3 ч при комнатной температуре и концентрировали в вакууме. Очистка обращенной фазой С18 MPLC дает 6,1 мг соединения 26. LCMS-ESI:
779, 90 [М-Н] - (рассчитано для С 24 Н 28 F 2 N 10 О ю Р 2 S 2:
780, 09); Rt: 9,01 мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 10 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120) . гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8.48 (s, 1Н), 8.24 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.36 (d, 16.4 Гц, 1H), 6.23 (d, J=17.6 Гц. 1H) 5.60 (d, J=51.6 Гц, 1H) , 5.20 (d, J=52.0 Гц, 1H) , 5.18-5.08 (m, 2H) , 4.61-4.30 (m, 4H) , 4.00 (s, 3H) , 3.17 (q, J=6.0 Гц, 16H), 2.74-2.73 (m, 1H), 2.05 (s, 0.3H), 1.30 (t, J=6.8 Гц, 24H), 1.18 (t, J=7.6 Гц, 6H).
Пример 9: Синтез З'З'-RR- (2'F-BzA) (2'F-BzA) (27) [00413] N, N'"- ( ( (2R, 3R, 3a R, 5R, laR, 9R, 10R, ЮаЯ, 12Я, 14аЯ) -3,10-дифтор-5,12-димеркапто -5,12-диоксидооктагидро-2 Er IE -дифтор [3,2 - d: 3', 2 'J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2,9- диил) бис (9 Я пурин-9,б-диил)) дибензамид (27), также упоминается как З'З'-RR- (2'F-B3a) (2'F-Бза) или дитио (Яр, Яр) циклические [2'F Бза (3', 5' ) р 2'F
[00414] К раствору соединения 5 (400 мг, 0,418 ммоль, 1 экв, см., Например, пример 1, схема 1, выделенная после стадии 3) в MeCN (2,5 мл) добавляли трет- бутиламин (2,18 мл, 50 экв.). Смесь закрывали и перемешивали в течение 45 минут. Смесь концентрировали в вакууме с получением 282,1 мг неочищенного соединения 27. Реакцию очищали с использованием готовой ВЭЖХ-С18 (75% 10 мМ ТЕАА до 55% ацетонитрила/10 мМ ТЕАА) с получением 4,9 мг соединения 27 (> 95% чистоты) в виде соли триэтил аммония. LCMS-ESI: 903, 9 [МН] + (рассчитано для С 34 Н 3о F 2 N 10 О 10 Р 2 S 2: 902,10); Rt: 6,79 мин (2-80% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 10 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120) . гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, MeOD) 5 8.76 (s, 2Н) , 8.70 (d, J=12 Гц, 2Н) , 8.03 (t, J=10 Гц, 4Н) , 7.60 (d, J=6.8 Гц, 2Н) , 7.52 (d, J=6.4 Гц, 4Н) , 6.53 (t, J=8 . 8 Гц, 2Н) , 5.59-5.46 (d, J=52.4 Гц, 1Н) , 5.17-5.11 (m, 1H) , 4.514.36 (m, 2H) , 4.03 (d, J=9.2 Гц, 2H) . 19F NMR (400 МГц, 45 °C, MeOD) 5 201, 54 - -201, 74, 31P NMR (45 °C, MeOD) 5 55, 68. Пример 10: Синтез З'З'-(2'F-G) (2'F-A) (30)
[00415] 2-амино-9 - ((2R, ЗЯ, ЗаЯ, 7аЯ, 9Я, 10Я, ЮаЯ, 14а R) -9- (6-амино-9Н-пурин-9-ил) - 3,10-дифтор-5,12-дигидрокси-5, 12-диоксидооктагидро-2 Er 1Н -дифтор [3,2 - d: 3', 2 ' J] [1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -1,9-дигидро- 6Н- пурин-б-он, также называемый З'З '- (2'F-G) (2'F-A)
или циклический [2'F G (3', 5' ) p2'FA (3 ', 5') p] получали в
соответствии со следующей схемой 8.
|| INn и
" DMTCv Ql[
Stepl
a) pyridinium-TFA, H20 О F DCA, H20, CH2CI2
b) tert-butyl amine
о* ^OH 9
Step 3
a) residual pyridinium-dichloroacetate, MeCN
b) t-BuOOH
О ii
HO-PN-H О
DMTO-
О F O^OH 11
DMTO
у 0
ii-.*
[00416] Этап 1: Подготовка ( 2R, 3R, 4R, 5R ) -2 -
(4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-фтор-5-
изобутирамидо-б-оксо-1,б дигидро-9 Н-пурин-9-ил)
тетрагидрофуран-3-ил гидрофосфоната (9) : К раствору соединения 8 (10 г, 10 ммоль, ChemGenes, см. Пример 2) в MeCN (50 мл) и воде (360 мкл) добавляли трифторацетат пиридиния (2,32 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 мин с последующим добавлением трет-бутиламина (50 мл) . Реакцию продолжали в течение 10 мин и концентрировали в вакууме и перемешивали с
ацетонитрилом (2 х 100 мл) в вакууме с получением смеси соединения 9 и 10 ~ (4: 1, см. Пример 1).
[00417] Этап 2: Получение (2R, ЗЯ, 4Я, 5Я) -4-фтор-2-
(гидроксиметил) -5- (2-изобутирамидо-6-оксо-1г 6-дигидро-9Н-
пурин-9- ил) тетрагидрофуран-3-илгидрофосфоната ( 11 ) : К раствору неочищенной смеси соединения 9 и 10 (~ 8,5 г, 5 ммоль) и DCM (60 мл) добавляли воду (0,09 мл), а затем раствор 6% -ного раствора DCA в DCM (60 мл) . Через 10 мин реакционную смесь гасили пиридином (7,0 мл) и затем концентрировали под вакуумом. Неочищенную смесь перемешивали с 3x35 мл безводного MeCN, оставляя 7,0 мл неочищенного соединения 11.
[00418] Этап 3: Подготовка (2 Я, 3 Я 4 Я 5 R) -2 -
((((((2R, 3R, 4R, 5R) -5- (6-бензамидо-9 Н-пурин-9-ил ) -2 -
((бис (4-метоксифенил) (фенил) метокси) метил) -4-
фтортетрагидрофуран-3-ил) окси) (2-цианоэтокси) фосфорил) окси) метил) -4-фтор-5- (2 -изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Я-пурин-9-ил) фосфоната тетрагидрофуран-3-ил водорода (28): Раствор соединения 3 перемешивали 3 х 35 мл безводным MeCN, оставляя 2 0 мл безводного MeCN и добавляли к неочищенному раствору соединения 11 и реакционную смесь перемешивали в течение 2 мин. t-BuOOH (2,73 мл 5,5 М раствора в декане) и реакцию продолжали в течение 3 0 мин. Добавляли водный раствор бисульфита натрия (1,25 г в 2,5 мл воды) и смесь перемешивали в течение 5 мин. Затем его концентрировали досуха в вакууме с получением 22 г соединения 28.
[00419] Этап 4: Получение N - (9 - ((2R, ЗЯ, ЗаЯ, 7аЯ, 9Я, 10Я, ЮаЯ, 14а R) -5- (2-цианоэтокси) -3, Ю-дифтор-12- гидрокси-9- (2-изобутирамидо-б-оксо-1,б-дигидро-9 Р-пурин-9-ил) -5,12-диоксидооктагидро-2 Я, 7 Я -дифтор [3,2 - о!: 3 ', 2'- j ]
[1,3,7,9] тетраокса [2,8] дифосфациклододецин-2-ил) -9Н-пурин-б-ил) бензамида ( 29 ): К раствору соединения 28 (22 г) в DCM (120 мл) добавляли воду (600 мкл) , а затем 6% -ный раствор DCA в DCM
(12 0 мл) . Через 10 мин реакционную смесь гасили пиридином (50 мл) и концентрировали в вакууме для удаления ДХМ. Добавляли дополнительное количество пиридина (150 мл) и смесь
концентрировали под вакуумом до 100 мл. Добавляли DM0CP (2,92 г) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 мин с последующим добавлением воды (3,2 мл) и затем йодом (1,65 г) . Через 5 мин реакцию гасили раствором бисульфита натрия (1 г NaHSO 3 в 700 мл воды) и экстрагировали смесью этилового эфира 1: 1 и EtOAc (800 мл). Водный слой дополнительно экстрагировали дополнительным 200 мл ДХМ. Объединенные органические слои концентрировали под вакуумом с получением 7 г неочищенного соединения 29.
[00420] Этап 5: Получение З'З '- (2'F-G) (2'F-A) ( 30 ) : Раствор соединения 30 (3,15 г) в АМА (22 мл) и EtOH (9,45 мл) нагревали до 50 ° С в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и барботировали аргоном в течение 10 мин. Очистка с помощью обращенной фазы С18 MPLC и препаративная ВЭЖХ дает 22 мг соединения 30. LCMS-ESI: 677,30
[М-Н] + (рассчитано для С 2о Н 22 F 2 N 10 О Ц Р 2: 678, 09); Rt: 8,73 мин (2-50% MeCN/NH 4 ОАс (20 мМ) буфера, 20 мин, 1 мл/мин, 5 мкм Acclaim 120). гЯ NMR (400 МГц, 45 °С, D20) 5 8, 52 (s, 1Н) , 8,33
(s, 1H) , 8,13 (s, 1H) , 6,60 (d, J=17,2 Гц, 1H) , 6,40 (d, J=18,4 Гц, 1H) , 5,75 (d, J=4,0 Гц, 1H) , 5,62 (d, J=3,6 Гц, 1H) , 5,185,10 (m, 2H) , 4, 66-4, 52 (m, 3H) , 4,31-4,25 (m, 2H) , 3,35 (q, J=7,2 Гц, 26H), 2,05 (s, 6,45H), 1,43 (t, J=7,2 Гц, 39H).
Пример 11: Анализ связывания in vitro моно- или ди-F-CDN с очищенным белком STING
[00421] ДНК-кодирующие аминокислоты 140-379 (нумерация
аминокислот, соответствующая Swiss Prot Q86WV6) амплифицировали
из плазмид, содержащих полноразмерную последовательность
человеческих STING-аллелей, с помощью полимеразной цепной
реакции со следующими праймерами: вперед
TACTTCCAATCCAATGCAGCCCCAGCTGAGATCTCTG (SEQ ID N0: 8) и обратный
Т Т AT С С АС Т Т С С ААТ GTTATTATTAT С AAGAGAAAT С С G Т G С G GAG (SEQ ID NO: 9) .
Варианты аллелей STING были назначены в соответствии с Yi, et
al, (2013), PLoS One, 8 (10), e77846 (DOI:
10.1371/journal.pone.0077846. ПЦР-продукты клонировали в бактериальный экспрессионный вектор, кодирующий N-концевую гексагистидиновую аффинную метку (6xHIS), а затем небольшую
последовательность растворимости в виде убиквитина (SUMO) ( Butt, et al. , 2005) Экспрессия и очистка белка 43,1, 1 -9) и сайт расщепления протеазой вируса травянистой травы (TEV) с использованием лигирующего независимого клонирования (Aslanidis, et al., (1990) Nucleic acid research, 18.20, 6069-6074).
[00422] Плазмиды, кодирующие 6xHIS-SUMO-TEV-STING
аминокислоты 140-379, трансформировали в клетки Rosetta2 (DE3) Е. coli (EMD Millipore) для экспрессии белка. Клетки выращивали в лизогениальном бульоне при 37 ° С до достижения оптической плотности 600 нМ 0,6. Клетки затем переносили до 18 ° С и экспрессию белка индуцировали в течение ночи добавлением изопропил(3-В-1-тиогалактопиранозида к среде при концентрации 0,25 мМ. Клетки собирали центрифугированием при 6000 раз гравитации в течение 10 минут. Клеточные гранулы повторно суспендировали на льду в буфере, содержащем 50 мМ Трис гидрохлорид (Трис-HCl), рН 7,5, 500 мМ хлорид натрия (NaCl), 20 мМ имидазол, 10% глицерин, 1 мМ трис (2-карбоксиэтил) фосфин гидрохлорид (ТСЕР) и таблетку ингибитора протеазы (Pierce) (буфер А). Клетки лизировали с использованием Э-450Б-сонаполнителя (Emmerson industrial) на льду. Клеточный лизат центрифугировали при 15000 раз гравитации в течение 3 0 минут при 4 ° С. Растворимый материал наносили на никель-нитрилотриуксусную кислоту (Ni-NTA), связанную с Sepharose CL-6B (Qiagen) в течение 1 часа с нежным качанием при
4 ° С. После переноса в колонну полипропилена гравитационного
потока (Bio-Rad) смолу интенсивно промывали в буфере А. Белок
элюировали из колонки в буфере, содержащем 2 0 мМ Трис-HCl, рН
7,5, 150 мМ NaCl, 300 мМ имидазола, 10% глицерина и 0,5 мМ ТСЕР.
Для удаления тестера 6xHIS-SUMO элюированный белок смешивали с
протеазой TEV (Sigma) в соотношении 1: 250 (w: w) и диализовали
в течение ночи против буфера, содержащего 2 0 мМ Трис-HCl, рН
7,5, 150 мМ NaCl, 5 мМ имидазола, 10% глицерина и 0,5 мМ ТСЕР.
Протеины TEV и теги 6xHIS-SUMO были истощены добавлением Ni-NTA-
смолы (Qiagen) к образцу, очищенные аминокислоты STING 140-379
собирали удалением смолы с использованием колонны
полипрепаратов. STING АА140-379 концентрировали
концентрированным центрифужным концентратором (EMD Millipore) с концентрацией 10000 Далтон до конечной концентрации приблизительно 10 мг/мл. Белок подвергали аликвоте, замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° С до использования.
[00423] По данным дифференциальной сканирующей флюометрия (DSF) представляет собой метод, который измеряет способность лигандов связываться и стабилизировать очищенные белки (Niesen, и др, (2007) Природа протоколы 2.9, 2212-2221) . Белок нагревают в присутствии красителя, который связывается и флуоресцирует в гидрофобных средах. Белок термически денатурируется нагреванием, что приводит к увеличению связывания красителя с разложенным белком и флуоресценцией. Температурная средняя точка (Т m ) денатурации белков устанавливается путем вычисления половины максимального значения кривой денатурации. Среднее значение температуры белка в присутствии лиганда непосредственно связано с аффинностью лиганда для белка и, следовательно, его способностью стабилизировать белок при более высоких температурах.
[00424] DSF проводили в 20 мкл реакции, содержащей 20 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 150 мМ NaCl, 1: 500 разведение SYPRO Orange
(Life Technologies), 1 мг/мл очищенного белка STING АА140-379 и лиганда в концентрации 1 мМ. Образцы помещали в пластину PCR с твердой оболочкой (Bio-Rad). Флуоресценция в зависимости от температуры регистрировалась в CFX 9 6 в режиме реального времени ПЦР-машина (Bio-Rad), показанная на канале HEX, возбуждение 450490, излучение 560-580 нм. Градиент температуры составлял от 15 до 80 ° С, равный 0,5 ° С за 15 секунд и регистрирующий каждые 0,5 ° С. После вычитания фонового сигнала из образца без белка и лиганда. Средняя температура (Тт) рассчитывалась путем подгонки кривых флуоресценции в зависимости от температуры к сигмоидальной функции Больцмана (Graph Pad Prism). Изменение термической стабильности STING АА140-379 в присутствии лиганда
(Т m Shift) рассчитывали путем вычитания Т m (белка и лиганда) от Т m (только белок).
[00425] CDN-соединения циклические [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р] (CDA, З'З '- (А) (А )), дитио (Яр, Яр) -циклический [А
(3', 5' ) рА (3 ', 5') р] ( З'З'-RR- (А) (А) ), дитио ( Я р, Я р) циклический [2'F А (3', 5' ) р 2'F А (3', 5' ) р] (3'3'-RR-
(2'F A) (2'F А)), циклический [G (3', 5' ) рА (3 ', 5') р]
(cGAMP, З'З '- (G) (А) ), циклический - [G (2', 5 ') рА (3', 5
') р] (ML с GAMP, 2'3 '- (G) (А) ) и дитио (Яр, Яр) циклический [2'F G (3', 5' ) p2'FA (3', 5' ) р] (З'З' RR (2'F G) (2'F А)) оценивали на их способность связываться с очищенными белками STING с помощью DSF.
[00426] ФИГ. 2 и 3 демонстрируют, что замещенные фтором CDN-соединения З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F-G) (2'F-А) показал увеличенный сдвиг Т m над не фторзамещенными соединениями З'З '- (А) (А ), З'З'-RR- (А) (А), З'З '- (G) (А) и эндогенный клеточный лиганд 2'3' - (G) (А). Увеличение Т m сдвига замещенных фтором соединений З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR
(2'F G) (2'F А) продемонстрировали, что они повышают термическую стабильность как белков hSTING (REF) (рис.2), так и hSTING (WT)
(фиг.З), что указывает на усиленное связывание между hSTING
(WT) , hSTING (REF) и фторзамещенных CDN-соединений. На фиг. 2 дополнительно продемонстрировано, что CDN, содержащие (3 ', 5') р (3 ', 5') р -интронуклеотид-фосфатные связи с заместителями 2
', 2' '- дифтордитио- (Rp, Rp) , могут сильно связываться к варианту, который еженедельно связывается с немодифицированными CDN, содержащими (3 ', 5') р (3 ', 5') р внутринуклеотидные фосфатные связи.
[00427] Каждый из типов hSTING, HAQ аллеля hSTING и REF был также использован с каждым из эталонных соединений и соединений по изобретению, как указано в следующей таблице 4. Эти результаты демонстрируют улучшенное связывание при З'З ' RR (2'F A) (2'F А), З'З ' RR (2'F G) , (2'F G) и З'З ' RR (2'F G) , (2'F А) относительно каждого из их опорных сигналов ОН, т.е. З'З ' RR
(А) (А) , З'З ' RR (G) (G) и З'З ' RR (G) (А), соответственно, во всех трех hSTING, с З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F G),
(2'F А), демонстрируя улучшенное связывание над естественно продуцируемым 2'3 '- (G) (А). Соединения З'З ' RR (2'F BzA) (2'F
BzA), З'З ' RR (2'F iBuG) (2'F BzA) и З'З ' RR (2'F iBuG) (2'F A) , имеющий защитную группу на одной из основных аминогрупп, также показал улучшенное связывание относительно З'З ' RR (А) (А) или З'З ' RR (G) (А) при измерении с помощью REF-аллеля. Моно F-производные З'З ' RR (2'F G) (А) и 3' 3 ' RR (G) , (2'F А) также продемонстрировали улучшенное связывание относительно 0Н-ссылки З'З ' RR (G) (А) во всех трех hSTING.
[00428] Таблица 4: Т m сдвигается в hSTING WT, аллеле HAQ и REF-аллеле.
hSTING Tm сдвиг (°С)
Пример/Соединение Название соединения
hSTING Tm сдвиг (°с;
WT HAQ REF
Ссылка 2'3'-(G)(A) 16, 1 26, 8 7,0
З'З'-RR-(2'F-G) (2'F-A) 19, 3 34, 2 12,5
3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-A) * * *
З'З'-RR- (2'F-G) (A) 14, 7 25, 9 9,5
3'3'-SR-(2'F-G) (A) 10,6 16,5 7,8
З'З'-RR-(G) (2'F-A) 15, 9 28, 8 9,7
3'3'-RS-(G) (2'F-A) 9,3 15,3 7,0
З'З'-(2'F-G) (2'F-A) 14, 3 27, 7 7,8
10,6 14,7 8,6
6, 8 8, 9 5,4
Ссылка 3'3'-(G)(A) 2 10,5 2,5
Ссылка З'З'-RR (G) (А) 11,1 21,0 7,2
Пример 2 соединение 14
Пример 2 Соединение 14а
Пример 5 соединение 2 3
Пример 5 Соединение 23а
Пример б соединение 2 4
Пример б Соединение 24а
Пример 10 соединение 3 0
Пример 7 З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-
соединение 25 BzA)
Пример 7 3'3'-RS- (2'F-iBuG) (2'F-
Соединение 25a BzA)
Пример 8 соединение 2 6
З'З'-RR-(2'F-iBuG) (2'F-A) 13,3 18,4 10,5
* Соединение не было совместимо с анализом.
Пример 12: З'З'-ди-F- CDN-молекулы активации передачи сигналов STING человека в клетках НЕК293Т
[00429] Для оценки пропускной способности двух известных вариантов человеческого STING, hSTING (WT) и hSTING (REF), в ответ на нативные и фторзамещенные CDN-соединения, мы измерили активность IFN- |3 -репортер в клеточных линиях эмбриональной почки человека (НЕК) 293Т, которые стабильно выражают hSTING (WT) или hSTING (REF). Была описана последовательность аллеля hSTING (REF) {Ishikawa, Н. , and Barber, GN (2008). Nature 455, 614-618) и имеет эталонную последовательность NCBI NP 938023
(Фиг. б) . Последовательности вариантов аллелей h STING (WT) и hSTING (REF) были также описаны в Yi , et al. , 2013, PLoS One, 8
(10), ell846 (DOI: 10. 1311/'journal .pone. 0011846.
[00430] Родительская клеточная линия HEK293T не экспрессирует эндогенный функциональный STING, поэтому чувствительность экзогенно экспрессируемых аллелей STING к различным CDN-соединениям может быть оценена с использованием стабильных линий экспрессии НЕК2 93Т STING. Эти линии были получены с помощью ретровирусных плазмид MSCV2.2, которые содержат полноразмерную кДНК STING с с-концевой меткой эпитопа НА, клонированной выше IRES в рамке с зеленым флуоресцентным белком (GFP) . Ретровирусные векторы трансфицировали в амфотропную клеточную линию Phoenix, используя липофектамин
(Invitrogen). Через два дня вирусные супернатанты собирали и использовали для трансдукции клеток НЕК293Т.
[00431] GFP-положительные клетки сортировали с
использованием сортировщика клеток Mo Flo в Исследовательской лаборатории проточной цитометрической лаборатории в Калифорнийском университете в Беркли. 10 4 клетки НЕК2 93Т STING высевали в 9б-луночные планшеты и временно трансфицировали
(используя Lipofectamine 2000) с 50 нг репортерной плазмиды IFN-р человека (pLuc-IFN-P) , экспрессирующей промотор IFN-р человека выше по потоку от люциферазы светлячков репортерный ген ( Fitzgerald et al. , 2003, Nature Immunology, 4 (5): 491-496 ) и 10 нг плазмиды, экспрессирующей конституционально активный тимидинкиназу (ТК) Renilla reniformis luciferase reporter gene
(Promega) для нормализации. Через 2 4 часа клетки стимулировали нативные и синтетические молекулы CDN-производных, используя пермеабилизацию дигитонина, чтобы обеспечить равномерное поглощение. Каждую линию клеток STING стимулировали в 25 мкл дигитонинового буфера (50 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 3 мМ МдС12, 0,1 мМ DTT, 85 мМ Сахарозы, 0,2% BSA, 1 мМ АТФ, 0,1 мМ GTP, 10 мкг/мл дигитонина) с 2-кратным разведением от 0,1 мкМ до 100 мкМ каждого из следующих CDN-соединений: циклический [А (3', 5' ) р А (3 ', 5') р] (CDA, З'З '- (А) (А)), дитио- (Яр, Яр) -циклический - [А (3', 5 ') рА (3 ', 5') р] (З'З'-RR- (А) (А)), дитио ( Яр, Яр) циклический [2'F А (3', 5' ) p2'FA (3', 5' ) р] (З'З'-RR- (2'F A) (2'F А)), циклический [G (3', 5' ) рА (3
', 5') р] (З'З ' (G) (А)), циклический [G (2', 5' ) р А (3 ',
5') р] (2'3 ' (G) (А)) и дитио ( Яр, Яр) циклические [2'F G (3', 5' ) p2'FA (3 ', 5') р] ( З'З'-RR- (2'FG) (2'F А)).
[00432] Через 2 0 мин удаляли стимулирующие смеси и добавляли 200 мкл среды DMEM с добавлением 10% (объем/объем) эмбриональной бычьей сыворотки, 1% L-глутамина и 1% пенициллина/стрептомицина. Клетки инкубировали еще б ч (37 ° С, 5% СО 2 )г а затем были получены клеточные лизаты и активность репортерного гена, измеренная на люминометре Spectramax МЗ, с использованием системы анализа ДНК люциферазы Dual-Glo (Promega, каталог # Е2920), как описано производителем. IFN |3 Активность репортерного гена люциферазы светляка была нормализована к активности гена рецептора люциферазы ТК и нанесена как временная индукция по активности в нестимулированных клетках (средняя +/-s.е.т.).
[00433] Как показано на фиг. 5А (курс дозы) и 5В (6,25 мкМ CDN) , замещенное фтором CDN-соединение З'З ' RR (2'F A) (2'F А) индуцировали более высокие уровни репортерной активности IFN|3 с помощью hSTING (WT), чем нефторзамещенные соединения З'З '- (А)
(А) и производное дитио- (Rp, Rp) ОН, З'З ' RR- (А) (А), при испытанных дозах. З'З'-RR- (2'F A) (2'F А) также стимулировали более высокие уровни репортерной активности IFN|3 посредством hSTING (WT) по сравнению с эндогенным клеточным лигандом 2'3 '-
(G) (А). Фторзамещенное соединение CDN З'З ' RR (2'F G) (2'F А) также сильно индуцирует репортерную активность IFN|3 посредством hSTING (WT) , а в более низких дозах З'З'-RR- (2'F G) (2'F А) более сильно индуцирует репортерную активность IFN|3 посредством hSTING ( WT) , чем соединение З'З '- (G) (А). Как показано в 6А
(курс дозы) и 6В (6,25 мкМ CDN) , клетки НЕК 293Т, экспрессирующие hSTING (REF), плохо реагировали на стимуляцию З'З '- (А) (А), З'З'-RR (А) (А) и 3'3 '- (G) (А), все из которых содержат канонические (3', 5 ') р (3', 5 ') р внутринуклеотидные фосфатные связи. Напротив, замещенные фтором CDN-соединения З'З
' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F G) (2'F А) сильно индуцированный IFN |3 репортерной активности до уровня, подобного эндогенному клеточному лиганду 2'3 '- (G) (А), который имеет
(2', 5 ') р (3 ', 5') р внутринуклеотидных фосфатных связей. Эти результаты показали, что CDN-соединения, содержащие канонические
(3 ', 5') р (3 ', 5') р внутринуклеотидных фосфатных связей с 2
', 2' '- дифтордитио- (Rp, Rp) заменами сильно активированного hSTING (REF), аллель, который обычно является резистентным к
стимуляции CDN, содержащим канонические (3 ', 5') р (3 ', 5') р внутринуклеотидных фосфатных связей.
[00434] Взятые вместе данные на фиг. 5А, В и 6А, В демонстрируют, что замещенные фтором CDN, З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F G) (2'F А), способны интенсивно активировать hSTING (REF) и hSTING (WT) и, следовательно, позволяют сигнализировать STING человека в широком диапазоне человеческой популяции, которые выражают разные варианты STING. Пример 13: Индукция интерферона I типа CDN
[00435] Индукцию интерферона типа I измеряли в
мононуклеарных клетках первичной крови человека (hPBMC) для
оценки активности моно- или ди-Р-СБЫ-соединений, как описано в
данном документе. Были использованы hPBMCs из двух уникальных
доноров: один донор был гомозиготным по дикого типа (WT) , STING
аллель (STINGWT/WT), а другой донор был гомозиготным по так
называемой ссылки (REF) STING аллель (STINGREF/REF) . Генотип STING
этих доноров определяли с помощью ПЦР-амплификации и
секвенирования: геномную ДНК выделяли из 10 4 hPBMC с
использованием экстракционного экстракта для быстрой экстракции
ДНК(Epicenter) и использовали для амплификации областей экзона
3, б и 7 человеческого STING-гена, Праймеры для амплификации и
секвенирования были следующими: hSTING exon3F
GCTGAGACAGGAGCTTTGG
(SEQ
NO:
10) ,
hSTING
3K30H3R
AG С СAGAGAG G T T СAAG GA
(SEQ
NO:
11) ,
hSTING
экзонбГ
GGCCAATGACCTGGGTCTCA
(SEQ
NO:
12) ,
hSTING
3K30H6R
СAC С СAGAATAG CAT С СAG С
(SEQ
NO:
13) ,
hSTING
3K30H7F
T СAGAG TTGGGTAT СAGAG G С
(SEQ
NO:
14) ,
hSTING
3K30H7R
ATCTGGTGTGCTGGGAAGAGG (SEQ ID NO: 15). Варианты аллелей STING были определены в соответствии с Yi, et al. , 2013, PLoS One, 8
(10), e77846 (DOI: 10.1371/journal.pone.0077846).
[00436] Криоконсервированные hPBMC оттаивали и 10 6 клеток либо не обрабатывали, либо обрабатывали эталонными соединениями З'З'-RR- (А) (А), З'З'-RR- (G) (G) , 2'3 ' (G) (А), З'З ' (G) (А) или З'З'-RR- (G) (А) или моно- или ди-Г-соединения З'З'-RR-
(2'F-A) (2'F-A), З'З -RR- (2'F-A) (А), З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G), З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-A), 3 3' -RR- (2'FG) (А) и З'З'-RR- (G)
(2'F-A) в среде RMPI с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% L-глутамина и 1% пенициллин/стрептомицин. Клетки инкубировали при 37 ° С, 5% СО 2 с концентрацией в диапазоне от 100 мкМ до 0,1 мкМ каждого CDN. Через 2 часа (фиг. 7 и 8) или 2
часа и б часов (фиг. 9-13), клетки собирали центрифугированием и один раз промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором. Клеточную РНК выделяли с использованием набора Aurum Total RNA 96 Kit, и кДНК синтезировали с использованием набора для синтеза кДНК iScript. Экспрессию целевого и эталонного генов оценивали с помощью qRT-PCR в реальном времени с использованием анализатора PrimePCR и циклического гена CFX96 (все реагенты и оборудование от BioRad) . Нормализованная экспрессия IFN|3 была выражена относительно необработанных клеток. Целевые гены включали интерферон типа I (IFN|3), Thl-ассоциированные цитокины ( IFNy, IL-12p40) и зависимые от NF-kB воспалительные цитокины
(TNFa, IL-6). Контрольные гены включали только GUSB (ФИГ. 7 и 8) или GUSB и HSP90AB1 (фиг. 9-13).
[00437] На фиг.7А и 8А (курс дозы) и 7В и 8В (6,25 мкМ CDN) продемонстрирована относительная нормализованная экспрессия IFN|3 hPBMC, гомозиготная по аллелю WT STING (фиг.7А, 7В) или для аллеля REF STING (фиг.8А, 8В) . Что касается STING WT/WT hPBMCs, то З'З'-RR- (А) (А) и З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A) индуцировали подобные уровни IFN|3; однако обе эти производные индуцировали более высокие уровни транскрипта IFN|3 по сравнению с соединением З'З '- (А) (А), которое было наименее мощным агонистом WT STING в этом примере. Во всех дозах З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A) стимулировал более высокие уровни транскрипта IFN|3 по STING WT/WT hPBMCs по сравнению с неканоническими 2'3 ' (G) (А), естественно продуцируемого клетками млекопитающих. Кроме того, З'З'-RR-
(2'F-G) (2'F-A) был самым мощным индуктором интерферона I типа в hpBMC STING WT/WT, вызывая в 10-100 раз более высокие уровни IFN|3 по сравнению с родительское соединение cGAMP в тестируемом диапазоне доз. Что касается STING REF/REF hPBMCs, З'З '- (А) (А), З'З'-RR- (А) (А) и З'З' - (G) (А) не стимулировали производство заметных Уровни транскрипции IFN|3 при тестируемых дозах. Напротив, 2'3 ' (G) (А), З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A) и З'З'-RR-
(2'F-G) (2'F-A) стимулировали дозозависимое продуцирование IFN|3 транскрипция STING REF/REF hPBMCs.
[00438] В диапазоне доз, испытанном на фиг. 7 и 8, оба З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A) и З'З ' RR (2'F-G) (2'F-A) были более мощными индукторами транскрипта IFN|3 STING REF/REF hPBMCs, чем 2'3
' (G) , (А). З'З' RR (2'F-G) (2'F-A) был чрезвычайно мощным стимулятором аллеля REF STING, поскольку уровни транскрипта IFN|3 были в 12-7 0 раз выше, когда клетки стимулировали З'З ' RR (2'F-
G) (2'F-A) по сравнению с клетками, аналогично дозированными 2'3 ' (G) , (А) . Эти результаты показали, что 2 ', 2' '- diF-RR производные CDA и cGAMP являются более мощными стимуляторами человеческих клеток, гомозиготных по WT или REF STING, чем их соответствующие исходные соединения или природные неканонические 2'3' (G) , (А) . Эти результаты также показали, что соединения, содержащие канонические R (3 ', 5') pR (3 ', 5') р внутринуклеотидные фосфатные связи с модификациями 2 ', 2' '-дифтордитио- ( Яр, Яр) может стимулировать продуцирование IFN|3 клетками человека, гомозиготными по аллелю REF STING, который обычно не поддается стимуляции CDN, содержащим канонические связи.
[00439] Результаты для моно- или ди-F CDN З'З'-RR- (2'F G) (А), З'З'-RR- (G) (2'F А) и З'З'-RR- (2 'F G) (2'F А) с З'З' (G) (А) и З'З'-RR- (G) (А) в качестве эталона; З'З'-RR- (2'F А) (А) и З'З ' RR (2'F A) (2'F А) с З'З'-RR (А) (А) в качестве эталона; и З'З ' RR (2'F G) (2'F G) с З'З'-RR (G) (G) в качестве эталона показаны на фиг. 9А (IFN|3, WT/WT), фиг. 9В (IFN|3, REF/REF), фиг. 1 OA ( TNFa, WT/WT), фиг.10В ( TNFa, REF/REF), фиг.НА (IL-6, WT/WT), фиг. 1 IB (IL-6, REF/REF), фиг.12А ( IFNy, WT/WT), фиг.12В ( IFNy, REF/REF), фиг. 1 ЗА (IL 12p40, WT/WT) и фигЛЗВ (IL-12p40, REF/REF). Что касается STING WT/WT hPBMCs, за исключением З'З'-RR-(G) (G), все испытуемые соединения выявили сильные, зависимые от дозы ответы цитокинов. В зависимости от цитокинов ответы в STING WT/WT hPBMC были самыми высокими при стимуляции через 2 часа (IFN|3, TNFa) или 6 часов (IFNy) . Ответы IL-6 и IL-12p40 были одинаковыми в STING WT/WT hPBMC в оба момента времени. Что касается STING REF/REF hPBMC, естественно произведенное соединение млекопитающих 2'3 '- (G) (А) индуцировало устойчивые дозозависимые ответы для всех цитокинов, которые достигли пика в течение б часов стимуляции. По сравнению с З'З ' (G) (А) и З'З'-RR- (G) (А), З'З'-RR- (2'F-G) (А), З'З'-RR- (G) (2'F-A) и З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-A) индуцировали более надежные дозозависимые ответы каждого из тестируемых цитокинов. Наличие 2'F-замещений на аденине и гуанине давало наиболее надежные ответы, а замещение моно-2'F на адениновой основе вызывало более сильные реакции, чем замещение моно 2'F на гуаниновой основе. По сравнению с З'З'-RR (А) (А), ди-F, замещенный З'З ' RR (2'F А) (2'F А) индуцировали более надежные ответы всех тестируемых цитокинов, причем ответы IFNP и TNFa достигали пика после 2
часовой стимуляции. Хотя он менее устойчив, чем соединение ди-F, моно-F замещенный З'З ' RR (2'F А) (А) также способно вызывать реакции цитокинов при стимуляции через б часов 100 мкМ соединения. Соединения моно- и ди-F-CDN обычно показывают устойчивый ответ цитокинов в hPBMC, в частности З'З ' RR (2'F А)
(2'F А) и З'З ' RR (2'F G) (2'F А), демонстрируя более надежный ответ, чем их ссылочное соединение ОН в STING REF/REF, с ответами, аналогичными или в некоторых случаях более надежными, чем природные 2'3 ' (G), (А).
Пример 14: Активация передачи сигналов STING человека в клетках ТНР1 с помощью моно и ди-F CDN-соединение
[00440] Чтобы определить относительный уровень интерферона типа I, индуцированного в клетках человека каждым из моно- или ди-F CDN в качестве сигнатуры адъювантной потенции, 100 000 ТНР1 Двойные клетки (клеточная линия человеческого моноцита, содержащая аллель hSTING HAQ, трансфецированный IRF-3-индуцибельным секретируемым репортерным геном люциферазы
(Invivogen), который экспрессирует секретированную люциферазу под контролем промотора, состоящего из пяти IFN-стимулированных элементов ответа) активировали 30 нг/мл форбол 12-миристат 13 ацетата в течение ночи в 9б-луночном планшете. Клетки промывали свежей средой и инкубировали в течение 30 мин при 37 ° С с 51 СО 2 с соединениями в 3-кратной стадии титрования от 2000 до 0,0388 мкМ в РВ-буфере (50 мМ 4- (2-гидроксиэтил) -1-пиперазинэтансульфокислоту, 100 мМ КС1, 3 мМ МдС12, 0,1 мМ дитиотреитола, 85 мМ сахарозы, 1 мМ АТФ, 0,1 мМ ГТФ и 0,2% бычьего сывороточного альбумина). Через 3 0 минут клетки промывали и добавляли свежие среды RPMI, содержащие 10% FBS, и клетки инкубировали при 37°С с 5% СО 2. Супернатанты клеточной культуры из каждого образца собирали после инкубации в течение ночи и добавляли 10 мкл супернатантов клеточной культуры к 50 мкл реагента QUANTI-Luc (Invivogen). Активацию интерферона типа I определяли путем измерения секретируемых уровней люциферазы на спектрофотометре SpectraMax МЗ (Molecular Devices). Значение ЕС50 определяли по кривой доза-реакция для 10 концентраций из серийного разведения эталонных соединений и соединений по изобретению, проверенных в этом анализе, как указано в таблице 5. Эти результаты демонстрируют улучшенную активность для соединений diF З'З ' RR (2'F A) (2'F А), З'З ' RS (2'F A) (2'F А), З'З ' RR (2'F G) , (2'F G) , З'З ' RR (2'F G) , (2'F А), З'З '
RS (2'F G), (2'F А) и З'З ' RR (2'F iBuG) (2'F А) по отношению к каждому из их эталонных соединений ОН. Моно F-производные З'З ' RR (2'F G) (А) и З'З ' RR (G) , (2'F А) также продемонстрировали улучшенную активность относительно ОН-эталона З'З ' RR (G) , (А) .
[00441] Таблица 5 [аллель HAQ) .
Пример/Соединение
Ссылка Пример 1 соединение б Пример 1 Соединение ба
Пример 4 соединение 22
Пример 4 Соединение 22а
Пример 9 соединение 27
Пример 1 соединение 7 Пример 1 Соединение 7а Ссылка Пример 3 соединение 17
Пример 3 Соединение 17а Ссылка Ссылка Пример 2 соединение 14
Пример 2 Соединение 14а
Пример 5 соединение 23
Пример 5 Соединение 23а
EC50 (мкМ)
25 19
ЕС50 без дигитонина в клетках ТНР1
Название соединения
З'З'-RR- (А) (А) З'З'-RR- (2'F-A) (2'F-A)
> 150 284 > 150 75
3'3'-RS- (2'F-A) (2'F-A)
З'З'-RR- (A) (2'F-A)
3'3'-RS- (A) (2'F-A)
З'З'-RR- (2'F-BzA) (2'F-BzA)
З'З'-RR-(2'pF-A) (2'PF-A)
3'3'-RS-(2'pF-A) (2'PF-A)
З'З'-RR- (G) (G)
> 150
242 28
З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-G)
3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-G)
2'3'- (G) (A) З'З'-RR (G) (A)
З'З'-RR- (2'F-G) (2'F-A) 3'3'-RS- (2'F-G) (2'F-A) З'З'-RR- (2'F-G) (A) 3'3'-SR- (2'F-G) (A)
Пример/Соединение Название соединения ЕС50 (мкМ)
Пример б соединение
З'З'-RR- (G) (2'F-A) 13
Пример б Соединение
3'3'-RS- (G) (2'F-A) 89
24а
Пример 10 соединение
З'З'- (2'F-G) (2'F-A) 10
Пример 7 соединение З'З'-RR- (2'F-iBuG) (2'F-
25 BzA) Пример 7 Соединение 3'3'-RS- (2'F-iBuG) (2'F-
> 150
25a BzA) Пример 8 соединение
З'З'-RR-(2'F-iBuG) (2'F-A) 23
Пример 15: Производные ди-F-CDN индуцируют опосредованный Т-клетками противоопухолевый иммунитет
[00442] Для определения того, обладают ли молекулы-производные противоопухолевым иммунитетом, мышей линии C57BL/6 6-8 недель (8 мышей на группу) имплантировали клетки B16.SIY ( 5 х 10 5 клеток в 100 мкл PBS) . Мышей обрабатывали эталонным соединением З'З ' RR (А) (А) и ди-Г-соединением З'З ' RR (2'F А)
(2'F А) (5, 50, 100 мкг в общем объеме 40 мкл HBSS) или HBSS. Лечение началось, когда опухоли достигли объема приблизительно 100 мм 3, на 9-й день после имплантации опухоли. Соединения CDN вводили подкожной инъекцией в центр опухоли (IT) с использованием иглы 27 калибра. У мышей брали кровь на 16-й день после имплантации опухоли и РВМС были выделены градиентом Ficoll
(Miltenyi Biotech). 1 х 10 5 РВМС предварительно инкубировали с моноклональным антителом против CD16/32 для блокирования потенциального неспецифического связывания и помечены пентамером РЕ-МНС класса I (Proimmune), состоящим из мышиного Н-2КЬ, комплексованного с SIYRYYGL (SIY, SEQ ID NO: 16) пептид, анти-TCR Р -AF700 (Н57-597), aHTH-CD8-Pacific Blue (53-6,7), анти-CD4-Pacific Orange (RM4-5) (все антитела от BioLegend) и Fixable Viability Dye eFluor 450 (eBioscience) . Окрашенные клетки анализировали с использованием цитометра FACS Versa с программным обеспечением FACSDiva (BD). Анализ данных проводился с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star).
[00443] Как показано на фиг.14А, в отличие от ОН-эталона З'З'-RR- (А) (А) соединение, все мыши, обработанные соединением З'З'-RR- (2'F A) (2'F А), подавляло рост установленных меланом B16-SIY во всех дозах. Чтобы продемонстрировать, что эффект опосредуется адаптивными Т-клеточными иммунными ответами, 7 дней после ИТ-инъекции РВМС оценивали на процент специфичных к SIY СБ8+Т-клеток с помощью проточной цитометрии. Как продемонстрировано на фиг.14В, РВМС, выделенные из мышей, обработанных 5 мкг либо эталонным соединением ОН З'З'-RR- (А) (А), либо ди-Г-соединением З'З ' RR (2'F A) (2'F А) выявили значительные SIY-специфичные СБ8+Т-клетки по сравнению с контрольной группой, обработанной HBSS (** Р <0,01, t-критерий Стьюдента). Эти данные демонстрируют способность производного ди-F производного З'З ' RR (2'F A) (2'F А), чтобы вызывать опосредованную Т-клетками противоопухолевую иммунитет антиген-специфическим образом.
Пример 16: Ди-F CDN Производные вызывают мощную противоопухолевую эффективность в различных моделях опухолей мьшги.
[00444] Чтобы оценить способность фторированных производных соединений повышать противоопухолевый иммунитет в различных моделях опухолей мыши, опухолевые клетки имплантировали (в 100 мкл PBS) подкожно на нижней части спины б-8-недельных мышей C57BL/6 самки. Лечение началось, когда опухоли достигли объема приблизительно 100 мм 3, примерно на 14 день после имплантации опухоли (см. Таблицу ниже для типа опухоли, количества клеток и дня инъекции ИТ) . Соединения CDN вводили 1Т-инъекцией (10 или 100 мкг в общем объеме 4 0 мкл HBSS) и повторяли каждые три дня в общей сложности тремя инъекциями. Соединения З'З'-RR- (2'F А) (2'F А) и З'З'-RR- (2'F G) (2'F А) и контрольные мыши, которым давали только носитель (40 мкл HBSS), были дозированы. Опухоли
измеряли два раза в неделю.
Тип # Имплантированные
Описание Дни CDN IT
опухоли клетки
B16.F10 В16 Меланома 5х104 14, 17, 22
Карцинома
МС38 1х105 10, 14, 18
толстой кишки
[00445] Как продемонстрировано на фиг.15А, в агрессивной
модели меланомы B16.F10 З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F
G) , (2'F А) индуцировали значительное ингибирование опухоли по сравнению с HBSS с З'З ' RR (2'F A) (2'F А), вызывая полную регрессию опухоли при дозе 100 мкг. В модели карциномы толстой кишки МС38, как показано на фиг.15В, оба соединения вызывали полную регрессию опухоли при всех проверенных дозах по сравнению с контролем HBSS. Эти данные демонстрируют широкие противоопухолевые эффекты фторированных производных по различным опухолевым моделям.
Пример 17 : Сравнительная иммуногенность ди-F-CDN-
производных
[0044 6] Чтобы определить, могут ли фторированные производные вызвать ВИЧ-специфичные ответы СБ4+и СБ8+Т-клеток, мышей BALB/c (п=4) иммунизировали подкожно 0 мкг (без CDN), 1 мкг или 5 мкг CDN, 2% squalene-and-water (AddaVax, Invivogen) с 5 мкг белка HIVgag р55. Через семь дней после вакцинации селезенки собирали у мышей и получали спленоциты. 2 х 10 5 спленоцитов стимулировали в течение ночи в IFN у Анализ ELISPOT с использованием только одного носителя (нестимулированный) или с 1 мкМ специфических пептидов HIVgag р55 CD4+ и CD8+. IFNy ELISPOT были разработаны и количественно определены с помощью планшетного ридера CTL и программного обеспечения ImmunoSpot. З'З' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F G), (2'F А) оценивали на предмет их способности индуцировать иммунные ответы, специфичные для ВИЧ-инфекции.
[00447] Как показано на фигЛбА, оба З'З ' RR (2'F A) (2'F А) и З'З ' RR (2'F G) , (2'F А) молекулы способны вызывать значительные С04+Т-клеточные ответы против HIVgag р55 по сравнению с группой контроля белков CDN AddaVax+( * Р <0,05, ** Р <0,01, t- критерий Стьюдента). Как продемонстрировано на фиг.1бВ, З'З ' RR (2'F G), (2'F А) также выявили значительные С08+Т-клеточные ответы против HIVgag р55 по сравнению с отсутствующей контрольной группой CDN (* Р <0,05, t- критерий Стьюдента). Эти данные демонстрируют способность фторированных соединений действовать как мощные адъюванты в установке вакцины против соответствующего иммуногена.
Пример 18: Связывание моно- и ди-F-CDN с hSTING WT
[00448] Связывание моно- и ди-F CDN-соединений оценивали с использованием Surface Plasmon Resononce для определения константы связывания. Была подготовлена экспрессирующая
конструкция E.coli (человеческий STING [E149-S379] H232R), содержащая последовательность белка:
MSGLNDIFEAQKIEWHEEKGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVS QRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVL EYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSF SLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGSLKTSAVPSTSTMSQEPELLISGMEKPLPLRTDFSLEHHHHHH (SEQ ID N0: 17)
Экспрессию человеческого-STING [E149-S379] H232R в E.coli индуцировали при 18 ° С и затем белок очищали, используя как аффинную хроматографию на никеле, так и хроматографию с исключением размеров. Аликвоты готовили и хранили при -8 0 ° С в 30 мМ Tris рН 7,5/100 мМ NaCl/10% глицерина.
[00449] N-концевой avi-маркированный человеческий-STING
(E149-S379) H232R-бeлoк был иммобилизован (~ 2500 RU) на чипе стрептавидина при 15 ° С в Biacore Т200 (GE Healthcare). Титрование циклических динуклеотидов (CDN, как указано в таблице б) в 30 мМ Tris рН 7,5/50 мМ NaCl/0, 005% Tween 20/1 мМ DTT/2% ДМСО профилировали (30 мкл/мин, 180 секунд для контакта с образцом/120 секунд для диссоциации) против hSTING при 15 ° С. Кинетический анализ данных проводился с использованием программного обеспечения Biacore Т200 Evaluation. Устойчивый анализ данных выполнялся с использованием программного обеспечения Graphpad Prism 6.0 с использованием одного алгоритма привязки к конкретному сайту (уравнение Y=Bmax * X/(Kd+X)). Kd
(единицы микромолара) приведены в следующей таблице б.
[00450] Таблица б: Kd для моно- и ди-F CDN, измеренных
Пример/Соединение Название соединения Kd (мкМ)
Пример б Соединение 24а 3'3'-RS-(G) (2'F-A) 0,684
[00451] Специалист в данной области легко понимает, что
данное изобретение хорошо адаптировано для реализации объектов и
получения упомянутых результатов и преимуществ, а также присущих
им. Приведенные в данном документе примеры являются типичными
предпочтительными вариантами реализации, являются
иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения.
[00452] Следует понимать, что изобретение не ограничено в применении к деталям конструкции и устройствам компонентов, изложенным в нижеследующем описании или показанном на фигурах. Изобретение способно воплощать в дополнение к описанным и практическим методам и осуществляется различными способами. Кроме того, следует понимать, что используемая в данном документе фразеология и терминология, а также реферат предназначены для описания и не должны рассматриваться как ограничивающие.
[00453] Таким образом, специалисты в данной области поймут, что концепция, на которой основано это раскрытие, может быть легко использована в качестве основы для проектирования других структур, способов и систем для реализации нескольких целей данного изобретения. Поэтому важно, чтобы эти заявления рассматривались как включающие такие эквивалентные конструкции, поскольку они не отступают от сущности и объема данного изобретения.
[00454] Хотя изобретение было описано и приведено в качестве примера для специалистов в данной области техники, чтобы сделать и использовать его, различные варианты, модификации и улучшения должны быть очевидными без отклонения от сущности и объема изобретения. Приведенные в данном документе примеры являются типичными предпочтительными вариантами реализации, являются иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения. Модификации в этом и другие применения будут иметь место для специалистов в данной области
техники. Эти модификации охватываются сущностью изобретения и определяются объемом формулы изобретения.
[00455] Специалисту в данной области техники будет очевидно, что различные изменения и модификации могут быть внесены в раскрытое в данном документе изобретение без отхода от объема и сущности изобретения.
[00456] Все патенты и публикации, упомянутые в описании, указывают на уровень специалистов в данной области техники, к которым относится изобретение. Все патенты и публикации включены в данное описание посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация была конкретно и индивидуально указана для включения в качестве ссылки.
[00457] Изобретение, иллюстративно описанное в данном документе, подходящим образом может быть осуществлено на практике в отсутствие любого элемента или элементов, ограничений или ограничений, которые конкретно не описаны в данном документе. Таким образом, например, в каждом случае в данном документе любой из терминов "содержащий", "состоящий в основном из" и "состоящий из", может быть заменен любым из двух других терминов. Используемые термины и выражения используются как термины описания, а не ограничения, и нет намерения в том, что при использовании таких терминов и выражений исключения любых эквивалентов показанных и описанных признаков или их частей, но это указывает на то, что возможны различные модификации в объеме заявленного изобретения. Таким образом, следует понимать, что, хотя данное изобретение было конкретно раскрыто в предпочтительных вариантах реализации и необязательных функциях, модификация и изменение раскрытых в данном документе понятий могут быть применены специалистами в данной области и что такие модификации и вариации рассматриваются входят в объем данного изобретения, как определено прилагаемой формулой изобретения.
[00458] Другие варианты реализации изложены в следующей формуле изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ADURO BIOTECH, INC.
KATIBAH, George Edwin KANNE, David
SUNG, Leonard GAUTHIER, Kelsey
GLICKMAN, Laura Hix
LEONG, Justin MCWHIRTER, Sarah M.
DUBENSKY, Jr., Thomas W.
<12 0> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ АКТИВАЦИИ СИГНАЛИНГА ЗАВИСИМОГО ОТ "ГЕНА СТИМУЛЯТОРА ИНТЕРФЕРОНА"
<130> ANZ-1004-PCT
<150> US 62/131,235
<151> 2015-03-10
<160> 17
<170> PatentIn версии 3.5
<210> 1
<211> 379
<212> белок
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 2
<211> <212> <213>
440
белок
искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность тяжелой цепи ниволумаба
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 3
<211> 214
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность легкой цепи ниволумаба
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 4 <211> 447
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность тяжелых цепей пембролизумаба
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 5
<211> 218
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность легких цепей
пембролизумаба
<400> 5
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215
<210> 6
<211> 118
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность тяжелой цепи
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 7
<211> 110
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: аминокислотная последовательность легкой цепи
<400> 7
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 8
<211> 37
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: прямой праймер
<400> 8
tacttccaat ccaatgcagc cccagctgag atctctg
<210> 9
<211> 46
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: обратный праймер
<400> 9
ttatccactt ccaatgttat tattatcaag agaaatccgt gcggag
<210> 10
<211> 19
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон3F
<400> 10
gctgagacag gagctttgg 19
<210> 11
<211> 19
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон3R
<400> 11
agccagagag gttcaagga 19
<210> 12
<211> 20
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон6F
<400> 12
ggccaatgac ctgggtctca
<210> 13
<211> 20
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон6R
<400> 13
cacccagaat agcatccagc
<210> 14
<211> 21
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон7F
<400> 14
tcagagttgg gtatcagagg c
<210> 15
<211> 21
<212> ДНК
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический: hSTING экзон7R
<400> 15
atctggtgtg ctgggaagag g
<210> 16
<211> 8
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 16
Ser Ile Tyr Arg Tyr Tyr Gly Leu 1 5
<210> 17
<211> 256
<212> белок
<213> искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: экспрессионная конструкция E.coli
<400> 17
Met Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His
1 5 10 15
Glu Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile
35 40 45
Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser
50 55 60
Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn
65 70 75 80
Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln
85 90 95
Gln Thr Gly Asp Arg Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser
100 105 110
Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu
115 120 125
Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser
130 135 140
Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe
145 150 155 160
Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn
165 170 175
Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe
180 185 190
Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu
195 200 205
Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr Ser
210 215 220
Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys Pro
225 230 235 240
Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Leu Glu His His His His His His
245 250 255
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы III:
R21 i О
или его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или фармацевтически приемлемый гидрат, где R21 и R22 независимо представляют собой гуанин или аденин, связанный со структурой через положение N9, при условии, что. R21 и R22 не являются оба гуанином.
2. Соединение по п.1, где соединение выбрано из группы, состоящей из:
или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого сольвата или фармацевтически приемлемого гидрата.
3. Соединение по п.1, имеющее структуру формулы Ша:
или его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или фармацевтически приемлемый гидрат, где R21 и R22 являются такими, как определено в п.1.
4. Соединение по п.З, где R21 и R22 оба представляют собой аденин.
5. Соединение по п.З, где R21 представляет собой аденин и R22 представляет собой гуанин.
6. Соединение З'З'-RR-(2'F-A) (2'F-A), имеющее структуру:
или его пролекарство, фармацевтически приемлемая соль,
фармацевтически
приемлемый
сольват
или
фармацевтически
приемлемый гидрат.
7. Соединение З'З'-RR-(2'F-G) (2'F-A), имеющее структуру:
или его пролекарство, фармацевтически приемлемая соль, фармацевтически приемлемый сольват или его фармацевтически приемлемый гидрат.
8. Соединение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что
соединение представляет собой натрий, калий, кальций, магний,
цинк, алюминий, аммоний, диэтиламин, оламин, бензатин,
бенетамин, трометамин (2-амино-2- (гидроксиметил)пропан-1,3-
диол), морфолин, эполамин, пиперидин, пиколин,
дициклогексиламин, N, N'-дибензилэтилендиамин, 2-
гидроксиэтиламин, три-(2-гидроксиэтил)амин, хлорпрокаин, холин, деанол, имидазол, диэтаноламин, этилендиамин, меглумин (Заметил г люкамин) , прокаин, дибензилпиперидин, дегидроабиетиламин, глюкамин, коллидин, хинин, хинолон, эрбумин, его лизиновую или аргининовую соль.
9. Соединение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что
соединение представляет собой его натриевую соль.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая одно или несколько соединений по любому из пп.1-9, и фармацевтически приемлемый наполнитель.
11. Фармацевтическая композиция, содержащая одно или несколько соединений по любому из пп.1-9, другое терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый наполнитель.
12. Способ лечения индивидуума, страдающего от рака, включающий:
непарентеральное или парентеральное введение индивидууму эффективного количества соединения по любому из пп.1-9 или композиции по п.10 или 11.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что способ дополнительно включает назначение индивидууму одной или нескольких дополнительных терапий для лечения рака, при этом одна или несколько дополнительных терапий для лечения рака выбраны из группы, состоящей из лучевой терапии, хирургии, химиотерапии или иммунотерапии.
14. Способ лечения заболевания у индивидуума, включающий: введение нуждающемуся в этом индивидууму; i) эффективного количества соединения по любому из пп.1-9 или композиции по п.10 или 11; и ii) эффективного количества одного или нескольких терапевтических антител, которые индуцируют антителозависимую клеточную цитотоксичность, при этом заболевание выбирают из группы, состоящей из рака, острого отторжения трансплантата органа, сахарного диабета I типа, ревматоидного артрита, псориаза, болезни Крона, рестеноза и аллергической астмы.
15. Соединение по любому из пп.1-9 для использования при лечении рака.
16. Соединение по любому из пп.1-9 для использования при лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из рака, острого отторжения трансплантата органа, сахарного диабета I типа, ревматоидного артрита, псориаза, болезни Крона, рестеноза и аллергической астмы.
По доверенности
J_J_
JULjul/Ji
Е? Сено
200-|
2:: <
мин
Фиг. 3
1 mphsslhpsi pcprghgaqk aalvllsacl vtlwglgepp ehtlrylvlh laslqlglll 61 ngvcslaeel rhihsryrgs ywrtvraclg cplrrgalll lsiyfyyslp navgppftwm 121 lallglsqal nillglkgla paeisavcek gnfnvahgla wsyyigylrl ilpelqarir 181 tynqhynnll rgavsqrlyi llpldcgvpd nlsmadpnir fldklpqqtg dhagikdrvy 241 snsiyellen gqragtcvle yatplqtlfa msqysqagfs redrleqakl fcrtledila 301 dapesqnncr liayqepadd ssfslsqevl rhlrqeekee vtvgslktsa vpststmsqe 361 pellisgmek plplrtdfs (SEQ ID NO: 1)
100-1
Й 80-
со. "
о о
а в
Я И
" о а к
о к н о
о и
(D Н
к о о и н О
М л> О? # А* $ # с? с?
-в- 3'3'-(А)(А)
-В- 3'3'-RR-(A)(A)
•Д- yy-RR-iTF-WF-A)
-9- 3'3'-(G)(A)
О- S'S'-RR-IZ'F-GJIZ'F-A)
-О- 2'3'-(G)(A)
ФИГ. 7В
со.
" К о о
а в
и и
" о а к
а о к н о
о и
(D Н
к о о и н О
^ г# "^ г#
уь -/ь
3'3'-(А)(А) 3'3'-RR-(A)(A) 3'3'^-(2Т-А)(2Т-А) 3'3'-(G)(A)
3'3'^-(2'Р-6)(2Т-А) 2'3'-(G)(A)
CO.
В о о
а в > я о в
" о а
10е
10 <
103
в в
" о а в
S а о в н о
о в
(D Н
в о о в н О
10]
10°
X <г "г
> я о
я о
104 103
101 10°
¦ 2Н 100 мкМ
2Н 10 мкМ
6Н 100 мкМ
? 6Н 10 мкМ
' 10 5 104 103 102
101 10°
¦ю-1
REF/REF STING -IFNp
¦ in I"
I 2Н 100 мкМ
2Н 10 мкМ 6Н 100 мкМ j 6Н 10 мкМ
# = нет амплификации
# <# ,# л &
.лУч "Iх _о*х Л /X? Ж <*гч Л Ж -оЛ ^
" о в в
" О
в в
" о а в
§ -
S ° I " 102
103
10е
2H 100 мкМ
2Н 10 мкМ
6Н100 мкМ
6Н10 мкМ
" о
" в
В S3
о "
о о
а s
в R
8 §>
нп В
еЗ н
В (D
§ 2
0 в
а ^
а ч
Й Р
к в
S °
1 н
101
10°
ft и" ¦
REF/REF STING - TNFa
i i
т 1 Г"
2H 100 цМ мкМ
2H 10 М мкМ
6Н 100 цМ мкМ
6Н10 М мкМ
" ' ION
о "
102
101
2 10°
2H 100 мкМ
2Н10 мкМ
6Н 100 мкМ
6Н10 мкМ
ФИГ. 11В
103i 104
101
REF/REF STING - IL-6
¦ 2H 100 мкМ
2H10 мкМ
6H 100 мкМ
? 6H 10 mkM
О 10°'
i I
103
io2i ю1
2Н 100 мкМ
2Н10 мкМ 6Н 100 мкМ 6Н10 мкМ
I 10° ё 10 1
-I 1 1 г
^ ^ ^
* л
ФИГ. 12В
g 103i
10 101]
loo
REF/REF STING - IFNy
2H 100 мкМ
2Н10 мкМ
6Н 100 мкМ
6Н 10 мкМ
s' s ю-1'
О1 r# f# ^ ^ # ^
io2i
101!
10°
¦ 2H 100 мкМ
2H 10 мкМ
ft I 6H 100 мкМ
? 6H 10 мкМ
-i 1 1 i
т 1 1 I
1 <^# <# tf*
ФИГ. 13B
'g 102i
REF/REF STING - IL-12p40
2H 100 мкМ
2H10 мкМ
6H 100 мкМ
6H10 mkM
" io°
Urtr-i(tm)
I 8 10 1J-r
о # ^ f# ,# ^ # # ^ f# ^
& ъъ jy ^
Фиг. 14А
Рост опухоли Меланомы B16-SIY
1500-,
HBSS
-0- 3'3'-RR-(A)(A) 5 -Д- 3'3'-RR-(A)(A) 50 -О- 3'3'-RR-(A)(A) 100 -¦- 3'3'-RR-(2'F-A)(2'F-A) 5
3'3'-RR-(2'F-A)(2'F-A) 50 и"- 3'3'-RR-(2'F-A)(2'F-A) 100
Фиг. 14В
SIY+ CD8+ Т
клетки
Ю-,
w 8
? 6-I
Q 4-
наивные & ^ ^ v
0х-
Фиг. 15А
Рост опухоли Меланомы В16
5001
-•- HBSS
-Д- 3'3'-RR-(2'F-A)(2'F-A) 10
3'3'-RR-(2'F-A)(2'F-A) 100 -И- 3'3'-RR-(2'F-G)(2'F-A) 10 -О 3'3'-RR-(2'F-G)(2'F-A) 100
к ч о
ю О
ь 1 t и
ш см
100-
- <3Sh
-QBT-
ь 1 t и
ш ш сч
LL (О
250 -, 20015010050-
0 ' СШ) | ШШ ОВт
4 ^ I
Л <$° $S $ 16/16 ' ^
^ ^ ^ А
#х #х #
У? уь уь уь
ъ ъ ъ ъ
1 4^ ^ ^ > ^ ^ <^
(19)
(19)
(19)
R19
R19
R19
R21
R25
R25
R23
R23
R23
R23
R23
R23
R29
R29
109
112
112
146
146
146
146
146
146
146
146
147
148
147
148
147
148
147
148
147
148
147
148
147
148
147
148
149
148
149
148
149
148
149
148
149
148
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
150
А18
151
151
151
151
151
151
151
151
152
152
152
152
153
153
153
153
153
153
153
153
154
154
154
154
154
154
154
154
154
154
155
155
156
156
156
156
159
159
159
159
159
159
159
159
160
Таблица 1. Анитигены
160
Таблица 1. Анитигены
161
Таблица 1. Анитигены
161
Таблица 1. Анитигены
163
Таблица 1. Анитигены
162
Таблица 1. Анитигены
165
Таблица 1. Анитигены
165
Таблица 1. Анитигены
171
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
170
Таблица 1. Анитигены
171
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
170
Таблица 1. Анитигены
171
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
170
Таблица 1. Анитигены
171
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
170
Таблица 1. Анитигены
173
Таблица 1. Анитигены
173
Таблица 1. Анитигены
174
Таблица 1. Анитигены
174
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
175
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
176
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
176
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
176
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
176
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
177
Таблица 1. Анитигены
178
Таблица 1. Анитигены
181
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
181
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
181
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
181
Ссылка
Таблица 1. Анитигены
182
182
191
191
191
191
R19
193
192
R19
193
192
R19
193
192
R19
193
192
R19
193
192
R19
193
194
R19
193
194
195
195
203
Структура
204
Номер примера и сокращенные
Структура
206
Структура
206
Структура
207
Структура
208
Структура
Номер примера и сокращенные названия соединений
207
Структура
208
Структура
Номер примера и сокращенные названия соединений
209
Структура
208
Структура
Номер примера и сокращенные названия соединений
210
Структура
210
Структура
211
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
211
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
211
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
211
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
212
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
212
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
212
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
212
сокращенные
Структура
Номер примера и названия соединений
213
(2'F-A) (2'F-A) (6a)
213
(2'F-A) (2'F-A) (6a)
214
214
218
218
218
218
220
220
221
221
225
Step 1
224
225
Step 1
224
225
Step 1
224
227
227
228
228
228
228
228
228
228
228
228
228
228
228
228
228
236
236
237
237
240
240
240
240
240
240
240
240
<400> 3
<400> 3
<220>
<220>
<400> 6
<400> 6
261
261
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
1/16
ФИГ. 1
2/16
2/16
3/16
3/16
4/16
ФИГ. 4
4/16
ФИГ. 4
5/16
ФИГ. 5А
5/16
ФИГ. 5А
6/16
ФИГ. 6А
6/16
ФИГ. 6А
7/16
ФИГ. 7А
7/16
ФИГ. 7А
7/16
ФИГ. 7А
7/16
ФИГ. 7А
7/16
ФИГ. 7А
7/16
ФИГ. 7А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
8/16
ФИГ. 8А
ФИГ. 9А
9/16
WT/WT STING - IFNp
ФИГ. 9А
9/16
WT/WT STING - IFNp
ФИГ. 10А
10/16
WT/WT STING - TNFa
ФИГ. 10А
10/16
WT/WT STING - TNFa
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. ПА
11/16
WT/WT STING - IL-6
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 12А
12/16
WT/WT STING - IFNy
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
ФИГ. 13А
13/16
WT/WT STING - IL-12p40
14/16
14/16
14/16
14/16
14/16
14/16
14/16
14/16
15/16
15/16
15/16
15/16
15/16
15/16
15/16
15/16
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
16/16
Фиг. 16А
|
