(57) Реферат / Формула:
Изобретение относится к водным фармацевтическим композициям адалимумаба, подходящим для длительного хранения адалимумаба, способам получения этих композиций, способам введения и содержащим их наборам.
Евразийское (21) 201791717 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2018.03.30
(22) Дата подачи заявки 2013.09.06
(51) Int. Cl.
A61K39/395 (2006.01) A61K 47/02 (2006.01) A61K 47/18 (2017.01) A61P35/00 (2006.01)
(54) СТАБИЛЬНЫЕ ВОДНЫЕ СОСТАВЫ АДАЛИМУМАБА
(31) 61/698,138; 61/769,581; 61/770,421
(32) 2012.09.07; 2013.02.26; 2013.02.28
(33) US
(62) 201590518; 2013.09.06
(71) Заявитель:
КОХЕРУС БАЙОСАЙЕНСИС, ИНК.
(US)
(72) Изобретатель:
Мэннинг Марк, Пэйн Роберт В. (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Изобретение относится к водным фармацевтическим композициям адалимумаба, подходящим для длительного хранения адалимумаба, способам получения этих композиций, способам введения и содержащим их наборам.
2420-544847ЕА/055 СТАБИЛЬНЫЕ ВОДНЫЕ СОСТАВЫ АДАЛИМУМАБА
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к водным фармацевтическим композициям, подходящим для длительного хранения адалимумаба (включая белки-антитела, рассматриваемые или предполагаемые в качестве "биоаналогичных" или "биологически улучшенных" вариантов коммерчески доступного адалимумаба) , к способам производства композиций, способам их введения и к содержащим их наборам.
Уровень техники, предшествующий изобретению
Фактор некроза опухоли альфа (TNFa) представляет собой природный цитокин млекопитающих, продуцируемый различными типами клеток, включая моноциты и макрофаги, в ответ на эндотоксин или другие стимулы. TNFa представляет собой основной медиатор воспалительных, иммунологических и патофизиологических реакций (Grell, М., et а1. (1995) Cell, 83: 793-802).
Растворимый TNFa образуется посредством расщепления трансмембранного белка-предшественника (Kriegler, et al. (1988) Cell 53: 45-53), и секретируемые полипептиды массой 17 кДа собираются в растворимые гомотримерные комплексы (Smith, et al. (1987), J. Biol. Chem. 262: 6951-6954; для обзора TNF, см. Butler, et al. (1986), Nature 320:584; Old (1986), Science 230: 630) . Затем эти комплексы связываются с рецепторами, находящимися на множестве клеток. Связывание обеспечивает ряд провоспалительных эффектов, включая (i) высвобождение других провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин (IL)-6, IL-8 и IL-1, (ii) высвобождение матриксных металлопротеиназ и (iii) усиление экспрессии эндотелиальных молекул адгезии, дополнительно усиливая воспалительные и иммунный каскад, привлекая лейкоциты во внесосудистые ткани.
Существует множество нарушений, ассоциированных с повышенными уровнями TNFa. Например, показано, что экспрессия TNFa повышается при ряде заболеваний человека, включая такие хронические заболевания, как ревматоидный артрит (RA),
воспалительные нарушения кишечника, включая болезнь Крона и язвенный колит, сепсис, застойную сердечную недостаточность,
бронхиальную астму и рассеянный склероз. TNFa также обозначают как провоспалительный цитокин.
Физиологически TNFa также ассоциирован с защитой от
конкретных инфекций (Cerami. et al. (1988), Immunol. Today
9:28) . TNFa высвобождают макрофаги, активированные
липополисахаридами грамотрицательных бактерий. По существу, TNFa по-видимому является очень важным эндогенным медиатором, вовлеченным в развитие и патогенез эндотоксического шока, ассоциированного с бактериальным сепсисом.
Адалимумаб (Хумира (Humira(r)), AbbVie, Inc.) представляет собой рекомбинантное моноклональное антитело IgGl человека, специфичное к TNF человека. Это антитело также известно как D2E7. Адалимумаб состоит из 1330 аминокислот, и его молекулярная масса составляет приблизительно 148 килодальтон. Адалимумаб описан и запатентован в патенте США № 6090382, описание которого, таким образом, включено в качестве ссылки полностью. Как правило, адалимумаб получают посредством технологии рекомбинантных ДНК в экспрессирующей системе с клетками млекопитающего, такими как, например, клетки китайского хомяка. Адалимумаб специфически связывается с TNFa и нейтрализует биологические функция TNF, блокируя его взаимодействие с рецепторами TNF р55 и р75 на клеточной поверхности.
В данной области известны различные составы адалимумаба. См., например, патенты США 8216583 и 8420081. Все еще остается необходимость в стабильных жидких составах адалимумаба, которые обеспечивают его длительное хранение без значительной потери эффективности.
Сущность изобретения
Изобретение относится к стабильным водным составам, содержащим адалимумаб, которые обеспечивают его длительное хранение.
В первом варианте осуществления изобретение относится к
стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб; стабилизатор, содержащий по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из полиола и поверхностно-активного вещества; и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанный буфер не содержит комбинации цитрата и фосфата и предпочтительно не содержит никакого цитратного буфера. В этом варианте осуществления стабилизатор предпочтительно содержит и полиол, и поверхностно-активное вещество.
Во втором варианте осуществления использования системы с
одним буфером, изобретение относится к стабильной водной
фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, полиол,
поверхностно-активное вещество и буферную систему, содержащую
одно буферное средство, где указанное одно буферное средство
выбрано из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата или
малеата, но не включает комбинаций указанного выше; где рН
состава составляет приблизительно от 4 до 8, и предпочтительно
приблизительно от 5 до приблизительно б. Для применения в
качестве единственных буферных средств особенно
предпочтительными являются гистидин и сукцинат. Как используют в настоящем описании, термин буфер, буферная система или буферное средство и подобная терминология предназначены для обозначения компонентов буфера, которые добавляют в состав буферной емкости в дополнение к любой буферной емкости, обуславливаемой самим белком, таким образом, термин "буфер" и т.п., не предназначен для включения в качестве самостоятельного буферного объекта самого белка.
В третьем варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, стабилизатор, содержащий по меньшей мере одно соединение, выбранное из полиола и поверхностно-активного вещества, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5
до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит буфера.
В четвертом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит поверхностно-активного вещества. Предпочтительно, композиция (i) не содержит буферной комбинации цитрата и фосфата; и (ii) буфер содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из гистидина и сукцината; и (iii) полиол выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
В пятом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, поверхностно-активное вещество и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит полиола. Предпочтительно, композиция (i) не содержит буферной комбинации цитрата и фосфата; и (ii) буфер содержит по меньшей мере одно соединение, выбранного из группы, состоящей из гистидина и сукцината, включая их сочетания.
В каждом из пяти вариантов осуществления, описанных выше, композиция необязательно может дополнительно содержать стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислоты, соли, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла. Аминокислотный стабилизатор можно выбирать из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина. Солевой стабилизатор можно выбирать из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия. Стабилизатор в виде иона металла можно выбирать из группы, состоящей из цинка, магния и кальция. Предпочтительно, составы адалимумаба, содержащие стабилизаторы,
указанные выше, также не содержат буферных систем, у которых в комбинации находятся фосфатный буфер и цитратный буфер, и, наиболее предпочтительно, содержат буферные системы, не содержащие или по существу не содержащие цитратного буфера. В особенно предпочтительных вариантах осуществления (i) необязательный дополнительный стабилизатор, присутствующий в этом варианте осуществления, не является хлоридом натрия или содержит хлорид натрия, присутствующий в количествах, не превосходящих приблизительно 100 мМ, и содержит по меньшей мере один из аргинина и глицина, включая комбинации этих двух аминокислот; (ii) буфер, когда присутствует, не содержит цитрата, или по меньшей мере комбинации цитрата и фосфата, но вместо этого содержит один из гистидина и сукцината, включая их сочетания; и (iii) стабилизатор, когда он содержит полиол, предпочтительно представляет собой маннит в количествах, превосходящих приблизительно 150 мМ.
В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к водной буферной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб и буфер, где (i) композиция не содержит или по существу не содержит комбинации буферов, которая содержит и цитратный буфер и фосфатный буфер; и (ii) композиция демонстрирует долговременную стабильность.
Другой вариант осуществления изобретения относится к водной буферной фармацевтической композиции, демонстрирующей долговременную стабильность, где указанная композиция, содержит: (i) адалимумаб; (ii) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, сукцинатного буфера и их сочетаний; (iii) полисорбатное или полоксамерное поверхностно-активное вещество или их сочетания; и (iv) один или оба из следующего: (а) стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина, метионина, ЭДТА, хлорида натрия, сульфата натрия, ионов металлов и их сочетаний; и (Ь) полиол, выбранный из сорбита, маннита и трегалозы или их сочетаний. Необязательно, состав также может содержать сахар, такой как сахароза.
В дополнительном варианте осуществления изобретение
представляет собой водную буферную фармацевтическую композицию, содержащую адалимумаб и буфер, где (i) композиция не содержит или по существу не содержит полиола; и (ii) композиция демонстрирует долговременную стабильность.
В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретение относится к водной буферной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб и буфер, где (i) композиция не содержит или по существу не содержит поверхностно-активного вещества; и (ii) композиция демонстрирует долговременную стабильность.
Другой вариант осуществления изобретения относится к водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, где: (i) композиция не содержит или по существу не содержит буфера; и (ii) композиция демонстрирует долговременную стабильность.
В другом варианте осуществления состав адалимумаба по настоящему изобретению содержит, состоит или по существу состоит из адалимумаба, гистидина буфер в качестве единственного буфера в составе, глицина (или аргинина или их сочетания) в качестве единственного стабилизатора из не являющихся поверхностно-активными веществами стабилизаторов, указанных ранее, и полисорбата 80. В этом составе количество адалимумаба составляет от 20 до 150 мг/мл; количество гистидинового буфера составляет приблизительно до 50 мМ; количество глицина составляет приблизительно до 300 мМ; и количество полисорбата 8 0 находится в диапазоне приблизительно от 0,01 до приблизительно 0,2% масс. Необязательно, этот состав может содержать приблизительно до 100 мМ NaCl. Настоящее изобретение также включает модификацию этого состава с комбинацией гистидинового буфера с одним или несколькими из цитратного, ацетатного, фосфатного, малеатного, тартратного буферов.
В еще одном варианте осуществления состав адалимумаба по настоящему изобретению содержит, состоит или по существу состоит из адалимумаба, гистидинового буфера в качестве единственного буфера, маннита (или сорбита или трегалозы) и полисорбата 80, и дополнительно не содержит или по существу не
содержит не являющихся поверхностно-активными веществами стабилизаторов (например, глицина, аргинина и т.д.), указанных выше. В этом составе количество адалимумаба составляет от 2 0 до 150 мг/мл; количество гистидинового буфера составляет приблизительно до 50 мМ; количество полиола составляет приблизительно до 300 мМ; и количество полисорбата 80 находится в диапазоне приблизительно от 0,01 до приблизительно 0,2% масс. Необязательно, этот состав может содержать приблизительно до 100 мМ NaCl. Настоящее изобретение также включает модификацию этого состава с комбинацией гистидинового буфера с одним или несколькими из цитратного, ацетатного, фосфатного, малеатного, тартратного буферов.
В методическом аспекте изобретение относится к способу увеличения долговременной стабильности в водном буферном составе адалимумаба, содержащем один или несколько этапов из:
(a) введения в состав гистидинового буфера, сукцинатного буфера
или их сочетания на основе эмпирических данных, указывающих на
то, что такие буферы вносят вклад в стабильность состава в
большей степени, чем другие буферы или комбинации буферов; или
(b) введения в состав глицина, аргинина или их сочетания в
качестве стабилизаторов, на основе эмпирических данных,
указывающих на то, что такой стабилизатор вносит вклад в
стабильность состава в большей степени, чем другие
стабилизаторы; или (с) по существу исключения присутствия
буфера или комбинации буферов, содержащих цитратный буфер
(особенно комбинации буферов, одновременно содержащей цитрат и фосфат) на основе эмпирических данных, указывающих на то, что такой буфер или комбинации буферов неэффективны в отношении стабилизации состава по сравнению с другими буферами. Способ дополнительно может включать выбор в качестве поверхностно-активного вещества PS 8 0 на основе эмпирических данных, указывающих на то, что PS 8 0 обеспечивает лучшую термостабильность составу адалимумаба, чем другие поверхностно-активные вещества, включая PS 20. Способ пригоден для получения состава адалимумаба, который демонстрирует долговременную стабильность, сравнимую или лучшую, чем у коммерчески доступных
составов адалимумаба, продаваемых под торговой маркой хумира(r).
В дополнительном методическом аспекте способа изобретение относится к способу лечения воспалительного состояния у индивидуума, который включает введение такому индивидууму любых вариантов осуществления составов адалимумаба, как описано в настоящем документе.
В указанных выше вариантах осуществления, где в составы
могут быть включены указанные выше стабилизаторы, дополнительно
обнаружено, что можно достигать удовлетворительной
стабилизации, когда такие стабилизаторы используют вместо
полиола и поверхностно-активного вещества и, таким образом,
стабилизированные составы по настоящему изобретению могут не
содержать или по существу не содержать полиола и поверхностно-
активного вещества. Таким образом, в шестом варианте
осуществления изобретение относится к стабильной водной
фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб,
необязательно буфер, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислоты, соли, ЭДТА и иона металла, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит полиола и поверхностно-активного вещества. Когда в этом варианте осуществления присутствует буфер, особенно предпочтительно, чтобы (i) буфер не содержал комбинации цитрата и фосфата; (ii) буфер был выбран из группы, состоящей из гистидина и сукцината и (iii) стабилизатор не содержал хлорида натрия, но вместо этого содержал по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из аргинина и глицина.
Важные аспекты настоящего изобретения в определенных вариантах осуществления включают то, что (i) обнаружено, что сорбит и трегалоза являются значительно лучшими стабилизаторами составов адалимумаба, чем маннит, за исключением случаев, когда маннит используют в концентрациях в избытке приблизительно 2 0 0300 мМ, в случае чего эти три вещества, как правило, эквивалентны; (ii) обнаружено, что аргинин и глицин (и комбинации) являются значительно лучшими стабилизаторами
составов адалимумаба, чем хлорид натрия; и (iii) когда в составе используют буферы, обнаружено, что комбинация цитрата и фосфата неожиданно значительно хуже стабилизировала адалимумаб, чем другие буферы, такие как сукцинат, гистидин, фосфат и тартрат. Относительно плохое действие комбинации буферов цитрата и фосфата является достаточно неожиданным, принимая во внимание очевидную важность, придаваемую использованию комбинированного цитратного/фосфатного буфера в патенте США 8216583. В противоположность этому авторы обнаружили, что комбинация фосфатного/цитратного буферов не является оптимальным выбором для получения стабилизированного состава адалимумаба, и фактически, одной из составляющих частей изобретения авторов настоящей заявки является открытие того, что этой комбинации вообще следует избегать в пользу других буферных систем.
Предпочтительно, полиол представляет собой сахарный спирт и даже более предпочтительно, сахарный спирт, выбранный из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы. Однако, как указано выше, в отношениях между маннитом и сорбитом, в изобретении выявлено явное преимущество в стабилизации при использовании сорбита или трегалозы вместо маннита, если только маннит не используют при концентрациях в избытке приблизительно 200 мМ, в случае чего маннит, сорбит и трегалоза, как правило, являются эквивалентными. При концентрациях ниже приблизительно 2 00 мМ, выявлено, что маннит в составе адалимумаба является более плохим стабилизатором, чем сорбит или трегалоза.
Предпочтительно, полисорбатное или полоксамерное
поверхностно-активное вещество представляет собой и даже более предпочтительно PS 80, PS 40, PS 20, Плюроник F-68 и комбинации. Авторы выявили явное и неожиданное преимущество в термостабильности при выборе PS 8 0 вместо PS 20.
Эти и другие аспекты будут понятны из приведенного ниже описания различных вариантов осуществления, хотя можно осуществлять их вариации и модификации без отклонения от сущности и объема новых принципов изобретения.
Следует понимать, что и указанное выше общее описание, и
приведенное ниже подробное описание являются исключительно иллюстративными и пояснительными и не ограничивают изобретения, как оно описано в формуле изобретения. Кроме того типичные варианты осуществления указаны в многочисленных исследованиях состава, описанных в подробном описании, также как и различные варианты осуществления, перечисленные в приложениях А, В и С, приложенных к нему и составляющих его часть. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 представляет собой гистограмму стабильности различных составов адалимумаба, как определено посредством эксклюзионной хроматографии (SEC).
Фиг. 2 представляет собой гистограмму стабильности различных составов адалимумаба, как определено посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой (ОФ).
Фиг. 3 представляет собой диаграмму модели частных наименьших квадратов (PLS) 1, демонстрирующую действие цитрата/фосфата на стабильность.
Фиг. 4 представляет собой диаграмму модели PLS 2, демонстрирующую действие цитрата/фосфата на стабильность.
Фиг. 5 представляет собой диаграмму модели PLS 1, демонстрирующую действие гистидина/глицина на стабильность.
Фиг. б представляет собой диаграмму модели PLS 1, демонстрирующую действие аргинина/сорбита на стабильность.
Фиг. 7 представляет собой диаграмму модели PLS 1, демонстрирующую действие рН/гистидина на стабильность.
Фиг. 8 представляет собой диаграмму модели PLS 2, демонстрирующую действие рН/гистидина на стабильность.
Фиг. 9 представляет собой диаграмму модели PLS 2, демонстрирующую действие трегалозы/РЭ80 на стабильность.
Фиг. 10 представляет собой диаграмму модели PLS 2, демонстрирующую действие маннита/РБ80 на стабильность.
Фиг. 11 представляет собой диаграмму модели PLS 1, демонстрирующую действие маннита/NaCl на стабильность.
Фиг. 12 представляет собой диаграмму модели PLS 1, демонстрирующую действие ЭДТА/метионина на стабильность.
Фиг. 13 представляет собой диаграмму модели PLS А, демонстрирующую действие цитрата и фосфата на стабильность.
Фиг. 14 представляет собой диаграмму модели PLS А, демонстрирующую действие рН и гистидинового буфера на стабильность.
Фиг. 15 представляет собой диаграмму модели PLS А, демонстрирующую действие глицина и аргинина на стабильность.
Фиг. 16 представляет собой диаграмму модели PLS А, демонстрирующую действие NaCl и полисорбата 8 0 (PS 80) на стабильность.
Фиг. 17 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие цитрата и фосфата на стабильность.
Фиг. 18 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие рН и гистидинового буфера на стабильность.
Фиг. 19 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие аргинина и глицина на стабильность.
Фиг. 2 0 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие PS80 и маннита на стабильность.
Фиг. 21 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие ЭДТА и NaCl на стабильность.
Фиг. 22 представляет собой диаграмму модели PLS В, демонстрирующую действие сукцинатного буфера и гистидинового буфера на стабильность.
Фиг. 23 представляет собой диаграмму модели PLS С, демонстрирующую действие цитрата и фосфата на стабильность.
Фиг. 24 представляет собой диаграмму модели PLS С, демонстрирующую действие рН и гистидинового буфера на стабильность.
Фиг. 25 представляет собой диаграмму модели PLS С, демонстрирующую действие аргинина и глицина на стабильность.
Фиг. 2 6 представляет собой диаграмму модели PLS С, демонстрирующую действие маннита и PS 8 0 на стабильность.
Фиг. 27 представляет собой диаграмму модели PLS С, демонстрирующую действие PS 80 и NaCl на стабильность.
Фиг. 2 8 представляет собой диаграмму модели PLS С,
демонстрирующую действие рН и концентрации белка на стабильность.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее подробно описаны различные варианты осуществления изобретения. Как используют в описании и на всем протяжении формулы изобретения, если из контекста явно не следует иначе, значение форм единственного числа включает указание на множественное число. Так же, как используют в описании и на всем протяжении формулы изобретения, если из контекста явно не следует иначе, значение "в" включает "в" и "на". Кроме того, ниже конкретно определены некоторые термины, используемые в описании.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Термины, используемые в настоящем описании, как правило, имеют их обычные для данной области значения в пределах контекста изобретения и в конкретном контекста, где используют каждый термин. Ниже, или в другом месте описания, определены некоторые термины, которые используют для описания изобретения, для предоставления практику дополнительного руководства в отношении описания изобретения. Приведены синонимы некоторых терминов. Изложение одного или нескольких синонимов не исключает использование других синонимов. Использование примеров в любом месте настоящего описания, включая примеры любых терминов, описываемых в настоящем документе, является исключительно иллюстративным и никоим образом не ограничивает объем и значение изобретения или любого иллюстрируемого объекта. Изобретение не ограничено различными вариантами осуществления, приведенными в настоящем описании.
Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимает специалист в области, к которой принадлежит изобретение. В случае конфликта руководствоваться следует настоящим документом, включая определения.
"Приблизительно", как правило, означает в пределах 20 процентов, в пределах 10 процентов, в пределах 5, 4, 3, 2 или 1
процента от приведенного значения или диапазона. Приведенные числовые значения являются приблизительными, что означает, что термин "приблизительно" можно получать, если он не указан явно.
Термин "адалимумаб" является синонимом активному фармацевтическому ингредиенту в хумире(r), а также белком, рассматриваемым или подразумеваемым его биоаналогичными или биоулучшенными вариантами. Адалимумаб представляет собой рекомбинантное моноклональное антитело IgGl человека, специфичное к TNF человека. Адалимумаб также известен как D2E7. Адалимумаб содержит две легкие цепи с молекулярной массой приблизительно 24 килодальтон (кДа) каждая и две IgGl тяжелые цепи с молекулярной массой приблизительно 4 9 кДа каждая. Каждая легкая цепь состоит из 214 аминокислотных остатков, а каждая тяжелая цепь состоит из 451 аминокислотного остатка. Таким образом, адалимумаб состоит из 1330 аминокислот и его общая молекулярная масса составляет приблизительно 14 8 кДа. Термин адалимумаб также предназначен для включения так называемых биоаналогичных или биоулучшенных вариантов белка адалимумаба, используемых в коммерчески доступной хумире(r). Например, вариант коммерческой хумиры(r) может быть приемлем для FDA, когда он оказывает по существу такое же фармакологическое действие, как коммерчески доступная хумира(r), даже если он может демонстрировать определенные физические свойства, такие как профиль гликозилирования, которые могут быть, если не идентичными хумире(r), то сходными с ними.
Для целей настоящей заявки, термин "адалимумаб" также
включает адалимумаб с незначительными модификациями в структуре
аминокислот (включая делеции, введения и/или замены
аминокислот) или в свойствах гликозилирования, которые значимо
не влияют на функцию полипептида. Термин "адалимумаб" включает
все формы и составы хумиры(r), включая в качестве
неограничивающих примеров, концентрированные составы,
инъецируемые готовые к применению составы; составы, восстанавливаемые водой, спиртом и/или другими ингредиентами, и другие.
Как используют в настоящем документе, термин "TNFa человека" (который можно сокращать как hTNFa или просто hTNF) предназначен для обозначения цитокина человек, который существует в виде секретируемой формы массой 17 кДа и мембраноассоциированной формы массой 2 6 кДа, биологически активная форма которого состоит из тримера нековалентно связанных молекул массой 17 кДа. Структура hTNFa дополнительно описана, например, в Pennica, D., et al. (1984) Nature 312:724729; Davis, J. M., et al. (1987) Biochemistry 26:1322-1326 и Jones, E. Y., et al. (1989) Nature 338:225-228. Термин TNFa человека предназначен для включения рекомбинантного TNFa человека (rhTNFa), который можно получать стандартными способами рекомбинантной экспрессии или приобретать коммерчески
(R &D Systems, каталожный № 210-ТА, Minneapolis, Minn.).
Как используют в настоящем документе, термин "антитело" относится к молекулам иммуноглобулином, состоящим из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (Н) цепей и двух легких (L) цепей, соединенных между собой внутренними дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращаемой в настоящем документе как HCVR или VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, CHI, СН2 и СНЗ. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи
(сокращаемой в настоящем документе как LCVR или VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Области VH и VL можно дополнительно разделять на области гипервариабельности, обозначаемые определяющими комплементарность областями (CDR), чередуемые областями, которые являются более консервативными, называемые каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенными от N-конца к С-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 . В одном из вариантов осуществления изобретения состав содержит антитело с последовательностями CDR1, CDR2 и CDR3, подобными тем, что описаны в патентах США №№ 6090382; 6258562 и 8216583.
Антитело или его антигенсвязывающая часть может являться частью более крупной молекулы иммуноадгезии, формируемой ковалентными или нековалентными ассоциациями антитела или части антитела с одним или несколькими другими белками или пептидами. Примеры таких молекул иммуноадгезии включают использование области сердцевины стрептавидина с получением тетрамерной молекулы scFv (Kipriyanov, S. М., et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) и использование остатка цистеина, маркерного пептида и С-концевой полигистидиновой метки с получением бивалетных и биотинилированных молекул scFv (Kipriyanov, S. М., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Из целых антител общепринятыми способами, такими как расщепление папаином или пепсином, можно получать части антител, такие как фрагменты Fab и F(ab')2 целых антител, соответственно. Кроме того, антитела, части антител и молекулы иммуноадгезии можно получать стандартными технологиями рекомбинантных ДНК, как описано в настоящем документе.
Как используют в настоящем документе, термин "выделенное антитело" относится к антителу, которое по существу не содержит других антител с другими антигенными специфичностями (например,
выделенное антитело, которое специфически связывается с hTNFa, по существу не содержит антител, которые специфически связываются с антигенами, отличными от hTNFa). Однако
выделенное антитело, которое специфически связывается с hTNFa может обладать перекрестной реактивностью с другими антигенами, такими как молекулы TNFa других видов. Кроме того, выделенное антитело может по существу не содержать других клеточных материалов и/или химических веществ.
Термин "глицин" относится к аминокислоте, кодонами для которой являются GGT, GGC, GGA и GGG.
Термин "аргинин" относится к a-аминокислоте, кодонами для которой являются CCU, ССС, ССА и CCG.
Термин "аланин" относится к аминокислоте, кодонами для которой являются GCT, GCC, GCA и GCG.
Термин "метионин" относится к аминокислоте, кодоном для
которой является ATG.
Термин "глутамат" относится к аминокислоте, кодонами для которой являются GAA и GAG.
Термин "сахар" относится к моносахаридам, дисахариды и полисахариды. Примеры Сахаров в качестве неограничивающих примеров включают сахарозу, глюкозу, декстрозу и другие.
Термин "полиол" относится к спирту, содержащему несколько гидроксильных групп. Примеры полиолов в качестве неограничивающих примеров включают маннит, сорбит и другие.
Термин "ион металла" относится к атому металла с общим положительным или отрицательным электрическим зарядом. Для целей настоящей заявки термин "ион металла" также включает источники ионов металлов, включая в качестве неограничивающих примеров соли металлов.
Термин "длительное хранение" или "долговременная стабильность" следует понимать, как обозначение того, что фармацевтическая композиция может храниться в течение трех месяцев или более, в течение шести месяцев или более и предпочтительно в течение одного года или более, наиболее предпочтительно, с минимальным сроком хранения в стабильном состоянии по меньшей мере два года. В общем, термины "длительное хранение" и "долговременная стабильность" дополнительно включают продолжительности хранения в стабильном состоянии, которые по меньшей мере сравнимы или лучше, чем срок хранение в стабильном состоянии, как правило, необходимый для доступных в настоящее время коммерческих составов адалимумаба без потерь в стабильности, которые могут сделать состав непригодным для определенного для него фармацевтического применения. Длительное хранение также следует понимать, как обозначение того, что фармацевтическую композицию хранят или в виде жидкости при 2-8°С, или замораживают, например, при -20°С или более. Также предусмотрено, что композицию можно замораживать и размораживать более одного раза.
Термин "стабильное состояние" в отношении длительного хранения следует понимать, как означающий, что адалимумаб, содержащийся в фармацевтических композициях, теряет не более
20%, или более предпочтительно 15%, или даже более предпочтительно 10%, а наиболее предпочтительно 5% своей активности относительно активности композиции на начало хранения.
Термин "по существу не содержит" означает, что вещество или не присутствует, или присутствуют только минимальные, следовые количества вещества, которые не оказывают никакого существенного влияния свойства композиции. Если сделано оказание на отсутствие какого-либо количества вещества, это следует понимать как "отсутствие детектируемого количества".
Термин "млекопитающее" в качестве неограничивающих примеров включает человека.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к нетоксическому твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему веществу, вспомогательному для состава средству или эксципиенту любого общепринятого типа. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксическим для реципиента в применяемых дозах и концентрациях и совместим с другими ингредиентами состава.
Термин "композиция" относится к смеси, которая, как правило, содержит носитель, такой как фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, который общепринят в данной области и подходит для введения индивидууму с терапевтическими, диагностическими или профилактическими целями. Он может включать культуру клеток, в которой в клетках или в среде для культивирования присутствует полипептид или полинуклеотид. Например, композиции для перорального введения могут формировать растворы, суспензии, таблетки, пилюли, капсулы, составы с длительным высвобождением, средства для полоскания рта или порошки.
Термины "фармацевтическая композиция" и "состав" используют взаимозаменяемо.
Термин "лечение" относится к любому введению или применению лекарственных средств при заболевании у млекопитающего и включает подавление заболевания, задержку его развития, смягчение заболевания, например, вызывая ремиссию или
восстанавливая или исправляя потерянную, недостающую или
дефектную функцию; или стимулируя неэффективный процесс. Термин
включает получение желаемого фармакологического и/или
физиологического действия, включая любое лечение
патологического состояния или нарушения у млекопитающего. Действие может быть профилактическим в терминах полного или частичного предотвращения нарушения или его симптомов и/или может быть терапевтическим в терминах частичного или полного лечения нарушения и/или побочного действия, свойственного нарушению. Оно включает (1) предотвращение проявления или рецидива нарушения у индивидуума, который может быть предрасположен к нарушению, но у которого еще нет симптомов, (2) подавление нарушения, такое как задержка его развития, (3) остановка или прекращение нарушения или по меньшей мере ассоциированных с ним симптомов так, что хозяин больше не страдает от нарушения или его симптомов, например, вызывая ремиссию нарушения или его симптомов, например, восстанавливая или исправляя потерянную, недостающую или дефектную функцию или стимулируя неэффективный процесс, или (4) смягчение, облегчение или улучшение состояния при нарушении или ассоциированных с ним симптомах, когда улучшение состояния используют в широком смысле для обозначения по меньшей мере уменьшения величины параметра, такого как воспаление, боль и/или размер опухоли.
Термин "заболевание" относится к любому состоянию, инфекции, нарушению или синдрому, которые требуют медицинского вмешательства или для которых медицинское вмешательство желательно. Такое медицинское вмешательство может включать лечение, диагностику и/или профилактику.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству, при введении которого живому существу достигается желаемое действие на живое существо. Например, эффективное количество полипептида по изобретению для введения живому существу представляет собой количество, которое предотвращает
и/или лечит опосредуемое интегрином av(33 заболевание. Точное количество зависит от цели лечения и его известными способами
определяет специалист в данной области. Как известно в данной области, могут понадобиться поправки на системное введение по сравнению с локальной доставкой, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, взаимодействие лекарственных средств и тяжесть состояния, и их определяют специалисты в данной области посредством общепринятого экспериментирования.
Варианты осуществления изобретения
Когда фармацевтические композиции, содержащие адалимумаб (хумиру(r)), включая водные и лиофилизированные составы адалимумаба, хранят на долговременной основе, активность адалимумаба может быть потеряна или снижаться вследствие агрегации и/или разрушения. Таким образом, настоящее изобретение относится к водным составам адалимумаба, которые обеспечивают длительное хранение адалимумаба в стабильном состоянии так, что адалимумаб стабилен в течение хранения в жидком или замороженном состояниях. Предоставляемые составы не требуют никаких дополнительных этапов, таких как разведение.
Ниже более подробно описаны многочисленные варианты осуществления настоящего изобретения.
Адалимумаб
Все композиции по настоящему изобретению содержат адалимумаб. Как описано в разделе "Уровень техники, предшествующий изобретению" настоящей заявки, адалимумаб представляет собой рекомбинантное моноклональное антитело IgGl человека, специфичное к фактору некроза опухоли (TNF) человека. Это антитело также известно как D2E7. Адалимумаб состоит из 1330 аминокислот, и его молекулярная масса составляет приблизительно 14 8 килодальтон. Адалимумаб описан и запатентован в патенте США № 6090382. Термин "адалимумаб" также предназначен для обозначения так называемых "биоаналогичных" и "биоулучшенных" версий активного белка адалимумаба, представленного в коммерчески доступной хумире(r).
Адалимумаб, подходящий для хранения в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, можно получать стандартными известными в данной области способами. Например, в
патентах США 6090382 и 8216583 описаны различные способы, которые может использовать специалист в данной области для получения белка адалимумаба для применения в составах по настоящему изобретению. Эти способы включены в настоящий документ в качестве ссылки. Например, адалимумаб можно получать посредством рекомбинантной экспрессии генов легких и тяжелых цепей иммуноглобулина в клетке-хозяине.
Очистку экспрессированного адалимумаба можно проводить любым стандартным способом. Когда адалимумаб получают внутриклеточно, дебрис из макрочастиц удаляют, например, посредством центрифугирования или ультрафильтрации. Когда адалимумаб секретируют в среду, супернатанты из таких экспрессирующих систем сначала можно концентрировать с использованием стандартных фильтров для концентрации полипептидов. Также можно добавлять ингибиторы протеаз для ингибирования протеолиза и можно включать антибиотики для предотвращения роста микроорганизмов.
Адалимумаб можно очищать, например, с использованием хроматографии на гидроксиапатите, электрофореза в геле, диализа и аффинной хроматографии и любой комбинации известных или еще неоткрытых способов, включая в качестве неограничивающих примеров хроматографию с белком А, фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматографию на диоксиде кремния, хроматографию на гепарине SEPHAROSET(r), хроматографию на анионной или катионообменной смоле (такой как колонка с полиаспарагиновой кислотой), хроматофокусирование, SDS-PAGE и осаждение сульфатом аммония.
I. Составы адалимумаба с полиолом и/или поверхностно-активным веществом, но без цитратного/фосфатного буферов
В первом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб; стабилизатор, содержащий по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из полиола и поверхностно-активного вещества; и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и
малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанный буфер не содержит комбинации цитрата и фосфата. В этом варианте осуществления стабилизатор предпочтительно содержит и полиол, и поверхностно-активное вещество. Фармацевтическая композиция может содержать один или любую комбинацию двух или более буферов при условии, что они не содержат цитрат и фосфат. Поверхностно-активное вещество может представлять собой любое фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество, предпочтительно полисорбаты (например, полисорбат 80) или полоксамеры (например, плюроник F-68).
11. Составы адалимумаба с использованием одной буферной системы
Во втором варианте осуществления, использования одной буферной системы, изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, полиол, поверхностно-активное вещество и буферную систему, содержащую одно буферное средство, где указанное одно буферное средство выбрано из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата или малеата, но не включает комбинации указанного выше; где рН состава составляет приблизительно от 4 до 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б. Для применения в качестве единственного буферного средства особенно предпочтительными являются гистидин и сукцинат. Неожиданно обнаружено, что композиции адалимумаба, которые содержат только один буфер (в противоположность двум или более буферам), являются более стабильными, чем композиции адалимумаба, содержащие цитратный буфер и фосфатный буфер. В варианте осуществления с одним буфером адалимумаб может присутствовать в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, более предпочтительно приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл и даже более предпочтительно приблизительно от 30 до приблизительно 50 мг/мл. Буфер присутствует в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ. рН композиций составляет приблизительно от 5 и приблизительно б. Композиции с
одним буфером по изобретению могут дополнительно содержать стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла. Аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина, наиболее предпочтительно глицина, аргинина и метионина. Соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия. Ион металла выбран из группы, состоящей из цинка, магния и кальция. Композиции по изобретению могут дополнительно содержать поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество представляет собой поверхностно-активное вещество, являющееся полисорбатом, или поверхностно-активное вещество, являющееся полоксамером. Поверхностно-активные вещества, являющиеся полисорбатами, включают полисорбат 80, полисорбат 4 0 и полисорбат 20. Предпочтительное поверхностно-активное вещество, являющееся полисорбатом, представляет собой полисорбат 80. Поверхностно-активные вещества, являющиеся полоксамерами, включают полоксамер 188 (также доступный коммерчески как плюроник F-68). Наиболее предпочтительно, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. Единственная буферная композиция может дополнительно содержать полиол. Предпочтительно, полиол представляет собой сахарный спирт и, даже более предпочтительно, сахарный спирт представляет собой маннит, сорбит или трегалозу. Композиция адалимумаба с одним буфером также может содержать сахар, предпочтительно сахарозу, глюкозу или декстрозу.
В одном из вариантов осуществления состава адалимумаба с одним буфером изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и сукцинат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
В другом варианте осуществления состава адалимумаба с
одним буфером изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и гистидин в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
В дополнительном варианте осуществления состава адалимумаба с одним буфером изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и любой из тартрата, малеата или ацетата в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
III. Составы адалимумаба, не содержащие буфера
В третьем варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, стабилизатор, содержащий по меньшей мере одно соединение, выбранного из полиола и поверхностно-активного вещества, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит буфера. Следует понимать, что термин "не содержит буфера" допускает включение свойственного самому белку буферирующего эффекта. В не содержащем буфера составе также могут присутствовать стабилизаторы, указанные выше (например, глицин, аргинин и их сочетания).
IV. Составы адалимумаба, не содержащие поверхностно-активного вещества
В четвертом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из
цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит поверхностно-активного вещества. Предпочтительно, композиция (i) не содержит комбинации буферов цитрата и фосфата; и (ii) буфер содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из гистидина и сукцината; и (iii) полиол не является маннитом в концентрации менее чем приблизительно 150 мМ, но вместо этого выбран из группы, состоящей из маннита в концентрации, превышающей приблизительно 150 мМ, сорбита и трегалозы.
V. Составы адалимумаба, не содержащие полиола В пятом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, поверхностно-активное вещество и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит полиола. Предпочтительно, композиция (i) не содержит комбинации буферов цитрата и фосфата; и (ii) буфер содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из гистидина и сукцината.
Дополнительные стабилизаторы, пригодные в вариантах осуществления I-V. Необязательно, в каждом из пяти вариантов осуществления приведенных выше, композиция может дополнительно содержать стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла. Аминокислотный стабилизатор можно выбирать из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина. Солевой стабилизатор можно выбирать из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия. Стабилизатор-ион металла можно выбирать из группы, состоящей из цинка, магния и кальция. Предпочтительно, составы адалимумаба, содержащие стабилизаторы, указанные выше, также не содержат буферных
систем, в которых фосфатный буфер и цитратный буфер присутствуют в комбинации. Наиболее предпочтительно (i) необязательный дополнительный стабилизатор, присутствующий в этом варианте осуществления, не является хлоридом натрия и содержит по меньшей мере один или оба из аргинина и глицина; (ii) буфер, когда присутствует, не содержит комбинации цитрата и фосфата, но вместо этого представляет собой по меньшей мере один из гистидина и сукцината; и (iii) стабилизатор, когда он содержит полиол, не является маннитом, за исключением количеств, больших чем приблизительно 150 мМ, а также может включать трегалозу и сорбит. Предпочтительно количество маннита является большим, чем приблизительно 150 мМ, а наиболее предпочтительно, большим чем приблизительно 2 00 мМ.
VI. Составы адалимумаба с заменой поверхностно-активного вещества и полиола на другие стабилизаторы
Кроме того выявлено, что удовлетворительной стабилизации можно достигать, когда вместо полиола и поверхностно-активного вещества используют стабилизаторы, указанные выше, таким образом, в шестом варианте осуществления изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб, необязательно буфер, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, ЭДТА и иона металла, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 4 до приблизительно 8 и предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит полиола и поверхностно-активного вещества. Когда в этом варианте осуществления присутствует буфер особенно предпочтительно, чтобы (i) буфер не содержал комбинации цитрата и фосфата; (ii) буфер был выбран из группы, состоящей из гистидина и сукцината; и (iii) стабилизатор не содержал хлорида натрия, но вместо этого содержал по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из аргинина и глицина. Также предпочтительно, чтобы буфер не содержал или по существу не содержал цитратного буфера, так как авторы обнаружили, что, как правило, он является более слабым в отношении вклада в стабильность, чем другие буферы, такие как
гистидин и сукцинат.
В каждом из вариантов осуществления, указанных выше, необязательно может присутствовать по меньшей мере одно из следующих предпочтительных условий (если не указано как необходимое): (i) буфер предпочтительно не содержит комбинации цитрата и фосфата или не содержит или по существу не содержит цитратного буфера; (ii) буфер предпочтительно содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из гистидина и сукцината; и (iii) стабилизатор предпочтительно не содержит хлорида натрия или если присутствует, его присутствие поддерживают на уровнях менее чем приблизительно 100 мМ; (iv) стабилизатор содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из аргинина и глицина, включая их сочетания; и (v) полиол предпочтительно не является маннитом (за исключением случаев, когда маннит присутствует в количествах, больших чем приблизительно 150 мМ и предпочтительно больших чем приблизительно 2 00 мМ), но может содержать сорбит и трегалозу. При использовании для стабилизации полиолов в настоящей работе выявлено, что маннит является дестабилизирующим по сравнению с сорбитом и трегалозой, за исключением случаев, когда маннит присутствует в количествах, как правило, превышающих приблизительно количества от 150 до 200 мМ. При использовании других стабилизаторов в настоящей работе выявлено, что хлорид натрия является дестабилизирующим по сравнению с аргинином или глицином, но авторы наблюдали некоторую стабилизацию, когда уровни хлорида натрия поддерживают на уровнях менее чем приблизительно 100 мМ и предпочтительно менее чем приблизительно 7 5 мМ.
Предпочтительно, адалимумаб присутствует в композиции по настоящему изобретению в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, более предпочтительно приблизительно от 20 до приблизительно 100 мг/мл и даже более предпочтительно приблизительно от 30 до приблизительно 50 мг/мл.
Буфер, если присутствует, присутствует в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
Поверхностно-активное вещество, если присутствует,
предпочтительно представляет собой полисорбат (PS). Даже в более предпочтительном варианте осуществления полисорбат представляет собой полисорбат 8 0 (PS 80) . Также подходят поверхностно-активные вещества, являющиеся полоксамерами, (например, плюроник(r) F-68).
Полиол, если присутствует, представляет собой сахарный спирт. Даже в более предпочтительном варианте осуществления сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы, а наиболее предпочтительно - сорбита и трегалозы.
Предпочтительно, полиол находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10%, более предпочтительно, приблизительно от 2 до приблизительно б% и даже более предпочтительно приблизительно от 3 до 5%, где указанные значения представляют собой массу от объема (масс./об.) общей композиции.
Стабилизатор, когда присутствует, можно выбирать из
группы, состоящей из аминокислот, солей,
этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла. Аминокислоту можно выбирать из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина. Соль можно выбирать из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия. Ион металла можно выбирать из группы, состоящей из цинка, магния и кальция. Особенно предпочтительными стабилизаторами являются глицин и аргинин.
Цинк, магний и кальций, когда присутствуют для стабилизации, могут находиться в концентрации приблизительно от 1 мМ до приблизительно 100 мМ, а более предпочтительно приблизительно от 1 до приблизительно 10 мМ.
Глицин или аргинин или их сочетания, если присутствует для стабилизации, находятся в общей концентрации приблизительно до 300 мМ, а предпочтительно приблизительно - от 150 до 300 мМ.
Метионин, если присутствует для стабилизации, присутствует в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл, более предпочтительно приблизительно от 1 мг/мл до приблизительно 5 мг/мл.
Хлорид натрия, если присутствует для стабилизации,
находятся в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, более предпочтительно - приблизительно от 20 до приблизительно 140 мМ, и даже более предпочтительно - менее чем приблизительно 100 мМ.
Сульфат натрия, если присутствует для стабилизации, находятся в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, более предпочтительно - приблизительно от 20 до приблизительно 12 0 мМ, и даже более предпочтительно приблизительно от 60 до приблизительно 100 мМ.
ЭДТА, если присутствует для стабилизации, присутствует в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,05%, более предпочтительно - приблизительно от 0,05% до приблизительно 0,25%, и даже более предпочтительно приблизительно от 0,08% до приблизительно 0,2%.
Предпочтительно, рН композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5; и даже более предпочтительно составляет приблизительно от 5,2 до 5,4.
В примере вариантов осуществления I и II, приведенных выше, изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, сорбит или трегалозу в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и предоставляемая указанная композиция не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов. Кроме того, авторы оценили цитрат как худший из буферов, и предпочтительно избегают его, хотя он все еще находится в объеме изобретения для формулирования стабильных составов адалимумаба, которые содержат цитратный буфер, если отсутствует их сочетание с фосфатом.
В примере варианта осуществления IV изобретение относится
к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, сорбит или трегалозу в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит поверхностно-активного вещества и, необязательно и предпочтительно, не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В примере варианта осуществления VI изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, глицин в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 2 00 мМ, и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит полиол; предпочтительно, но необязательно присутствует поверхностно-активное вещество (например, PS8); и композиция, необязательно и предпочтительно, не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В дополнительном примере варианта осуществления VI изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, аргинин или глицин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мМ и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола. Предпочтительно, но необязательно присутствует поверхностно
активное вещество (например, PS80), и композиция, необязательно и предпочтительно, не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В дополнительном примере варианта осуществления VI изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит полиола. Предпочтительно, но необязательно присутствует поверхностно-активное вещество (например, PS80); и композиция, необязательно и предпочтительно, не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В примере варианта осуществления V изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитратного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция не содержит или по существу не содержит полиола и, необязательно, и предпочтительно, не содержит или по существу не содержит цитратного/фосфатного буферов.
В примере вариантов осуществления I и II с дополнительной стабилизацией, изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, сорбит или трегалозу в концентрации
приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об., ЭДТА в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,5% и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитрата в качестве единственного буфера в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где композиция не содержит или по существу не содержит комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В дополнительном примере вариантов осуществления I и II с дополнительной стабилизацией, изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, сорбит или трегалозу в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об., метионин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл и по меньшей мере один из сукцината, гистидина, фосфата, тартрата, малеата или цитрата в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, где композиция не содержит или по существу не содержит никакой комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В дополнительном примере вариантов осуществления I и II с дополнительной стабилизацией аминокислотами, изобретение относится к стабильной водной фармацевтической композиции, содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, маннит, сорбит или трегалозу (предпочтительно сорбит) в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об. и аминокислоту, которая предпочтительно представляет собой одну, но не обе из (а) аргинина в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мг/мл и (Ь) глицина в концентрации приблизительно от 2 0 до 2 00 мг/мл и гистидиновый буфер или сукцинатный буфер в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет
приблизительно от 5 до приблизительно 5,5; и где композиция не содержит или по существу не содержит никакой комбинации цитратного/фосфатного буферов.
В дополнительном примере варианта осуществления IV с
дополнительной стабилизацией аминокислотами, изобретение
относится к стабильной водной фармацевтической композиции,
содержащей адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до
приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации
приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, аргинин в
концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мг/мл,
глицин в концентрации приблизительно от 2 0 до 2 00 мг/мл и
гистидиновый буфер или сукцинатный буфер в концентрации
приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН
указанной композиции составляет приблизительно от 5 до
приблизительно 5,5, и она не содержит или по существу не
содержит полиола; и, необязательно, где композиция
предпочтительно не содержит никакой комбинации
цитратного/фосфатного буферов.
Множество вариантов осуществления составов адалимумаба по настоящему изобретению получали в восьми раздельных блоках экспериментов, указываемых в настоящем документе как блоки от "блока А" до "блока Н" . Каждый блок содержит от 12 до 16 различных составов, которые подвергали форсированным условиям хранения, 1 неделя при 40°С и 2 недели при 25°С. Для каждого момента времени измеряли химическую и физическую стабильность белка адалимумаба посредством SEC, ОФ, УФ-излучения, рН, CE-IEF и CE-SDS.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Оборудование, используемое в исследованиях составов
Оборудование
Производитель
Модель
Серийный номер
Весы
Sartorius
CPA12 4S
23350022
рН-метр
Denver Instrument
Model 250
Е25006В100
Источник УФ-излучения
Сагу
Bio 100
EL07103025
вэжх
Dionex 3
Ultimate 3000 UPLC
8047439
вэжх
Dionex 2
Ultimate 3000 UPLC
8036991
СЕ Beckman
Beckman
P/ACE
455436
СЕ Agilent
Agilent
3DCE 1600A
3546G00736
Встряхиватель-качалка
Labnet
Orbit P4
8091840
2. Химические вещества и материалы, используемые в
исследованиях составов
Химические вещества/материалы
Производитель
Чистота
Номер партии:
Цитрат
Mallinckrodt
ACS
H28475
Фосфат
Fisher
FCC
103372
Fisher
ACS
113670
Сукцинат
Spectrum
Реагент
ZM0462
Гистидин
Spectrum
USP
XV02 3 9
Spectrum
USP
ZG0216
Тартрат
Spectrum
FCC
1BC0152
Малеат
TCI
> 99%
206-738-1
Маннит
BDH
USP
57910
Глицин
Spectrum
FCC
YM3312
Spectrum
FCC
1BJ0243
Fisher
Чистота для применения в тканях
070082
Аргинин
Spectrum
USP
2AK023 8
Spectrum
USP
1CB0771
Хлорид натрия
Mallinckrodt
ACS
J52619
Macron
USP
26434
Полисорбат 8 0
Sigma-Aldrich
Низший пероксид
028K5309
Сорбит
Spectrum
1AH0521
Трегалоза
Spectrum
N/A
1AE0739
Ацетат
Mallinckrodt
FCC
H31613
ЭДТА
Sigma
98, 5%
057K00071
Метионин
Spectrum
USP
ZF0377
F-68
Sigma
Культура клеток
057K00331
Полисорбат 2 0
Spectrum
1AE0882
Додецилсульфат натрия
Fluka
ACS
1344034
Tris основание
Fisher
ACS
S61374
2-меркаптоэтанол
Fisher
Электрофорез
107667
Материалы/Реагенты
Номер партии
Поставщик
Slide-A-Lyzer с порогом 7К
66373
Thermo
Блоки для минидиализа
69550
Thermo
Фильтр Millex(r)-GV 0,22 мкм
SLGV004SL
Millipore
Флаконы 1 мл
4500050375
SCHOTT
Раствор полимеров для геля cIEF
477497
Beckman Coulter
Набор маркеров pi
A5 8 4 81
Beckman Coulter
Амфолит Pharmalyte 3-10
17-0456-01
Healthcare
Капилляр из плавленого кварца (внутренний диаметр 5 0 мкм)
TSP050375
Polymicro
Буфер для геля SDS-MW
A10663
Beckman
Внутренний стандарт 10 кДа
A26487
Beckman
3. Колонки ВЭЖХ, используемые в исследованиях составов
Колонка
Компания
Номер партии
Партия
Poroshell 300SB-C8,2,1x75 мм, 5 мкм
Agilent
660750-906
USZW003083
Poroshell 300SB-C8,2,1x75 мм, 5 мкм
Agilent
660750-906
USZW003073
ACQUITY UPLC BEH200 SEC, колонка 1,7 мкм, 4,6x150 мм
Waters
186005225
138123331
ACQUITY UPLC BEH200 SEC, колонка 1,7 мкм, 4,6x150 мм
Waters
186005225
01471130951
Обработка хумиры(r). В экспериментах блока А использовали адалимумаб, присутствующий в коммерчески доступной хумире(r). Материал хумиры(r) подвергали диализу следующим образом: 100 мкл хумиры(r) помещали в блоки для минидиализа с MWC0 3,5 и
подвергали диализу в 1 л буфера состава в течение 24 часов при температурах от 4 до 8°С. У нескольких образцов наблюдали небольшое увеличение объема вследствие диализа, но никогда до такой степени, чтобы концентрация полисорбата 8 0 падала ниже CMC (критической концентрации мицеллообразования).
Концентрацию белка в каждом составе измеряли посредством спектроскопии оптической плотности в УФ-излучении с использованием рассчитанной экспериментальной молярного удельного поглощения на основе опубликованной концентрации хумиры(r), 50 мг/мл. Для ряда составов концентрацию белка корректировали с использованием центрифужного концентратора. Образец помещали в центрифужный концентратор и центрифугировали при 14000 об/мин в течение периода от 30 до 60 секунд. Затем проверяли концентрацию белка с использованием УФ-излучения. После достижения планируемой концентрации приблизительно 50 мг/мл образцы фильтровали через 0,22 мкМ стерильный фильтр в стерильные флаконы в биобезопасном вытяжном шкафу. Затем образцы помещали для определения стабильности при 4 0°С на одну и две недели.
Обработка собственного белка адалимумаба. В исследованиях составов, описываемых в настоящем документе, использовали собственный биоаналогичный адалимумабу белок, не содержащий полисорбата 80. Вещества подвергали диализу с использованием Slide-A-Lyzer с MWCO 7000 в различных буферах составов в течение 24 часов в диапазоне температур от 4 до 8°С. После диализа измеряли концентрацию белка посредством УФ-излучения и измеряли рН образцов. Планируемая концентрация образцов составляла 50±2,5 мг/мл, которую корректировали, если концентрация образца выходила за пределы указанного выше диапазона. У некоторых образцов наблюдали увеличение объема образца вследствие разбавления, что требовало увеличение концентрации белка. Для этих образцов концентрацию белка увеличивали с использованием центрифужных концентраторов, как правило, при 14000 об/мин в течение периода от 30 до 60 секунд. В ряде образцов доводили рН с использованием 1М NaOH или 1М НС1 с достижением планируемого рН 5,2.
После определения того, что представляющая интерес концентрация белка и рН образцов находятся в пределах экспериментальных параметров, образцы фильтровали через 0,22 мкМ стерильный фильтр в стерильные флаконы в биобезопасном вытяжном шкафу. Затем образцы помещали для определения стабильности при 40°С на одну неделю и 25°С на две недели.
Условия замораживания-размораживания: Замороженные и размороженные образцы получали на сутки анализа для соответствия t=0. Образцы замораживали при -80°С на срок от 3 до 7 минут. Затем замороженный образец размораживали при комнатной температуре до размораживания всего льда. Цикл замораживания и размораживания повторяли 5 раз для каждого образца.
Исследования перемешиванием. Образцы агрегировали при 150 об/мин в течение 24 часов при 4°С на встряхивателе-качалке. Для каждого образца, который подвергали перемешиванию, получали контроль и затем помещали на встряхиватель-качалку.
Измерения рН. рН каждого образца измеряли с использованием микро-рН-зонда. Перед началом анализа рН-зонд калибровали с тремя упорядоченными стандартами рН из Fisher. Значения рН образцов с определяемой стабильностью измеряли посредством перенесения 60 мкл каждого образца с определяемой стабильностью в 100 мкл пробирку для ПЦР. Затем в образец погружали микро-рН-зонд и записывали значение после его стабилизации.
Спектроскопия оптической плотности в УФ-излучении. Для измерения концентрации белка в образцах использовали УФ-спектроскопию. Молярный коэффициент экстинкции при 280 нм для вещества в объеме составлял 1,6355 мг/мл, что определяли экспериментально. Концентрации белков всех составов для LB-140 измеряли с использованием длины пути в ячейке 0,0096 см. Ниже представлены параметры анализа, используемые для LB-140.
Диапазон сканирования: от 4 00 до 2 00 нм
Среднее время (мин): 0,1
Интервал получения данных (нм): 1
Скорость сканирования (нм/мин): 600
Число циклов: 5
Способ эксклюзионной хроматографии (SEC). Способ SEC, используемый для анализа образцов LB-140 с определяемой стабильностью, разработан в Legacy BioDesign. Ниже приведено краткое описание параметров способа SEC, используемых для анализа образцов LB-140.
Параметры способа
Информация о колонке: ACQUITY UPLC ВЕН200 SEC, колонка 1,7 мкм, 4,6x150 мм
Буфер для анализа: 50 мМ фосфат, 250 мМ NaCl, рН 6,8 Скорость потока: 0,3 мл/мин Температура колонки: 30°С Детекция: 280 нм Объем впрыска: 2 мкл
Температура образца: приблизительно 5°С
Способ ВЭЖХ с ОФ. Выявлено, что способ ВЭЖХ с ОФ является индикатором стабильности и его использовали для анализа образцов LB-140 с определяемой стабильностью. Ниже кратко описаны параметры способа с ОФ, используемые для анализа LB-140.
Параметры способа
Информация о колонке: Poroshell 300SB-C8,2,1x75 мм, 5 мкм Подвижная фаза А: 98% (об./об.) Н20/2% (об./об.) IРА/0,1% (об./об.) TFA
Подвижная фаза В: 10% (об./об.) Н2О/70% (об./об.) 1РА/20% (об./об.) ACN /0,1% (об./об.) TFA Скорость потока: 0,25 мл/мин Температура колонки: 8 0°С Детекция: 225 нм Объем впрыска: 1 мкл
Температура образца: приблизительно 5°С Время пробега: 15 минут Градиент:
Время
% А
% В
100
10, 1
100
100
Анализ CE-IEF. Изоэлектрофокусирование в капилляре (cIEF) проводили, как описано в РА 8 00 и в руководстве по применению, опубликованном Beckman Coulter. Более подробное описание можно найти в научной статье, опубликованной Mack et al1. Все анализы проводили с использованием системы Beckman Coulter Р/АСЕ MDQ (Beckman Coulter, Inc.; Brea, CA) , эксплуатируемой при температуре окружающей среды с нейтральным капилляром с общей длиной 3 0 см (20 см эффективной). Нейтральный капилляр получали посредством иммобилизации поли(акриламида) на стенке капилляра способом, описанным Gao et al.2 Образцы для cIEF получали, смешивая представляющий интерес белок с 0,25 мг/мл со смесью ЗМ мочевины-геля для cIEF, содержащего амфолит, катодный стабилизатор, анодный стабилизатор и маркеры pi. Образец под давлением 65,5 кПа инжектировали в капилляр в течение 4,1 мин, после чего его фокусировали, прилагая между анализируемым веществом и катодной жидкостью напряжение 25 кВ в течение 15 мин. После этого этапа проводили химическую мобилизацию при 3 0 кВ между анализируемым веществом и химическим мобилизатором в течение 3 0 мин. Маркеры pi и представляющий интерес белок детектировали с использованием оптической плотности при 280 нм в течение этапа мобилизации, pi белка рассчитывали на основе полученного уравнения регрессии pi в зависимости от момента первого пика, получаемых с использованием стандартов pi.
Анализ CE-SDS. Анализ посредством CE-SDS проводили в
восстановительных условиях способом, адаптированным из SOP,
опубликованном Beckman-Coulter для определения
чистоты/гетерогенности IgG. В кратком изложении, антитело разбавляли водой DDI до б мг/мл, денатурировали, добавляя буфер образца (0,1 М Tris/1,0% SDS, рН 8,0), и восстанавливали посредством введения 2-меркаптоэтанола; конечная концентрация антитела составляла 1,2 мг/мл. Денатурацию и восстановление облегчали, нагревая образец при 70°С в течение 10 мин. Перед анализом образец охлаждали в течение 10 мин при комнатной
температуре. До нагревания образца и непосредственно после его охлаждения применяли этап центрифугирования (ЗООд, 5 мин) . Анализ СЕ проводили с использованием системы Beckman Coulter Р/АСЕ MDQ, эксплуатируемой при температуре окружающей среды с капилляром с общей длиной 3 0 см (20 см эффективной, внутренний диаметр 50 мкм) . Перед введением образца, капилляр последовательно промывали 0,1 М NaOH, 0,1М HCL, водой DDI и раствором буфера SDS-геля. Образец электрокинетически инжектировали при 5 кВ в течение 3 0 сек с последующим разделением при 3 0 кВ в течение 3 0 мин. При инжектировании и разделении устройство эксплуатировали в режиме обращенной полярности. Фрагменты антител детектировали с использованием оптической плотности при 214 нм (получение данных при 4 Гц) и для измеряемых пиков регистрировали нормализованные по времени области.
ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА А
В исследованиях блока А исследовали различные буферные системы и использовали материал коммерчески доступного адалимумаба, который перерабатывали для этих исследований. Авторы отмечают, что в патенте США 8216583 указана стабильность состава адалимумаба по отношению к использованию системы цитратного/фосфатного буферов при рН 5,2, и, фактически, патент требует использования такой буферной комбинации. Проведенная авторами работа, отраженная в настоящем документе, демонстрирует, что цитрат/фосфат фактически является скорее плохим выбором буфера по сравнению с другими, такими как гистидин и сукцинат. В исследованиях блока А ниже, поддерживали постоянный рН 5,2. Концентрации маннита и полисорбата 8 0 также поддерживали постоянными. Образцы выдерживали при 40 °С в течение двух недель. Схема исследования приведена в таблице ниже.
ТАБЛИЦА А
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ БЛОКА А
API
Цитрат (мМ)
Фосфат (мМ)
Сукцинат (мМ)
Гистидин (мМ)
Тартрат (мМ)
Малеат (мМ)
Маннит (мМ)
PS 80 (%)
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Хумира(r)
0,1
Анализ SEC продемонстрировал, что состав только с цитратом действовал хуже, чем буферная комбинация (таблица А), что продемонстрировало, что в этой комбинации фосфат являлся первичным стабилизатором. Это было удивительно и неожиданно, так как этот рН находится вне номинального диапазона буферной емкости фосфата, но хорошо попадает в пределы буферного диапазона цитрата. Кроме того, сукцинат, гистидин и тартрат действовали также хорошо или лучше, чем комбинация цитрата/фосфата, что продемонстрировало, что другие буферные системы могут обеспечивать равную или лучшую стабильность адалимумаба. Таким образом, настоящее изобретение в одном из своих вариантов осуществления относится к составам адалимумаба, демонстрирующим долговременную стабильность, где избегают комбинации цитратного и фосфатного буферов в пользу по меньшей мере одного буфера, выбранного из группы, состоящей из гистидина, фосфата, сукцината и тартрата. Также подходящей заменой для комбинации цитратного и фосфатного буферов является ацетат.
Чистоту этих хранимых образцов проверяли с использованием ВЭЖХ с ОФ (фигура 2) . Как и в SEC состав с цитратом демонстрировал наихудшую стабильность, тогда как все другие буферы действовали также хорошо или лучше, чем буферная комбинация, присутствующая в коммерчески доступном адалимумабе (хумире(r)). Эти результаты демонстрируют открытие авторов, заключающееся в том, что замена буфера (т.е. устранение
комбинации цитратного/фосфатного буферов коммерческого адалимумаба) может улучшать профиль стабильности адалимумаба. ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА В
Второе исследование ("блок В") проводили, изучая только изменения компонентов буфера, где рН (5,2) не изменяли, как приведено в таблице ниже, озаглавленной "Схема исследования блока В". В этом случае коммерчески доступный состав хумиры(r) использовали в качестве контроля, тогда как во всех других составах использовали собственный биоаналогичный адалимумабу белок. В таблице В-1, ниже, приведен процент мономеров для составов блока В (а также количество в процентах определенных примесей, являющихся фрагментами белка адалимумаба).
ТАБЛИЦА В
хранения в течение двух недель при 4 0°С содержание мономеров снижается более чем на 1% для всех образцов в блоке В, за исключением одного буфера, содержащего гистидин (His) (таблица В-1) . На основе этого исследования авторы выявили, что вероятность того, что His может быть лучшей буферной системой для адалимумаба. (Авторы отмечают, что уровень фрагментов, измеряемый посредством SEC, приводимый для состава 2, по-видимому, является некорректным, так как все другие исходные уровни фрагментов составляют менее 0,1%.) ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА С
В исследованиях, проводимых в блоке С, проводили широкомасштабный скрининг составов (см. таблицу С, ниже). Образцы хранили в течение одной недели при 40°С (далее в настоящем документе обозначаемое как "tl") или двух недель при 25 С (далее в настоящем документе обозначаемое как "t2"). Эти условия использовали на всем протяжении оставшихся исследований авторов так, что эта терминология использована на всем протяжении настоящего подробного описания. Блок С разработан
для расширения оценки буферов, проводимой в блоке В. Кроме того, в нем анализировали глицин (Gly) и/или аргинин (Arg) в качестве возможных стабилизаторов вместо маннита и/или NaCl (таблица С) . Следует отметить, что в буферной системе, используемой в продукте хумира(r), используют буфер с 8 мМ цитратом/18 мМ фосфатом, который представляет собой композицию состава 1 блока С. В этом случае, для состава 1 блока С вместо белка адалимумаба, полученного из коммерчески доступной хумиры(r), использовали собственный биоаналогичный адалимумабу белок.
ТАБЛИЦА С
Биоаналог адалимумаба
130
Биоаналог адалимумаба
130
Биоаналог адалимумаба
130
Биоаналог адалимумаба
130
ТАБЛИЦА С-1
Измеренный рН для составов блока С в tO и tl (одна неделя, 40°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сукцинат
гистидин
глицин
аргинин
маннит
NaCl
рН Ь2
100
5, 51
5, 57
100
5,46
5,43
100
5,28
5,27
100
5,27
5,24
100
5, 43
5,44
100
5,29
5,29
100
5,28
5, 32
100
5,22
5, 17
100
5, 19
5,16
100
5,28
5,30
100
5,26
5,29
130
5,24
5,24
130
5, 18
5,16
130
5,28
5, 35
130
5, 31
5,31
130
5, 36
5,40
ТАБЛИЦА С-2
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке С в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
100
98,75
97, 90
98,06
100
99,26
98,22
98,80
100
99,28
98, 32
98,78
100
99,36
98,45
99, 03
100
99,25
98,20
98,77
100
99, 42
98, 68
99,10
100
99,39
98,59
99, 13
100
99,41
98,51
99, 04
100
99,36
98, 52
98,96
100
99,41
98, 66
99, 15
100
99, 37
98,70
99, 15
130
99,41
98, 66
99, 14
130
99, 42
98,71
99, 17
130
99,40
98,75
99,26
130
99, 32
98, 53
99, 05
130
99,40
98, 66
99,19
ТАБЛИЦА С-3
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке С в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
100
98, 04
97, 92
98,10
100
97, 94
97, 83
98, 03
100
98, 03
97, 92
98,00
100
97, 94
97, 75
97, 98
100
97, 98
97, 69
97, 95
100
97, 89
97, 72
97, 92
100
97, 80
97, 70
97, 91
100
97, 98
97, 77
98,01
100
97, 98
97, 73
97, 94
100
97, 98
97, 76
98,00
100
97, 87
97, 78
97, 97
130
97, 88
97, 71
97, 95
130
97, 95
97, 62
97, 93
130
97, 98
97, 72
98, 04
130
97, 91
97, 72
97, 96
130
98,00
97, 79
97, 78
ТАБЛИЦА С-4
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке С в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
№ состава
8,59
1,94
1,97
1,82
8,43
11,76
11,30
12,49
8,27
58,29
49,88
51,54
8,20
7,18
7,59
8, 05
21,49
22, 38
19,79
7,86
6, 53
5, 35
4, 66
8, 60
1,96
1,84
8,44
12, 08
10,89
8,29
51,70
47, 63
8,22
9,74
12,32
8,09
16,29
18,25
7,91
3,50
3, 64
8, 60
1,83
1, 82
1, 12
8,43
11,58
9, 67
10,40
8,27
45,80
32, 99
44, 04
8,20
12, 44
22,27
18, 68
8,01
17, 57
16,21
14,40
7,86
4,39
3, 61
8, 57
2,31
2, 04
2, 13
8,41
12, 94
11,51
12, 62
8,25
33, 37
59,98
61, 97
8,20
23, 03
8, 02
15,21
18, 33
16, 07
7,88
3,45
5, 32
3,70
8,58
2,40
2,00
2,30
8,41
13, 01
11, 02
12,34
8,25
42, 09
46, 32
37,30
8,21
15, 58
10, 65
15, 80
8, 03
18,48
20,58
16,80
7,86
3,74
6, 13
4,83
8, 57
2,83
8,38
13, 17
13,23
8,23
32, 66
31,18
8,18
17, 52
18,54
8, 02
17, 48
13, 82
7,91
5,30
5,83
8,58
2,08
2,41
2, 64
8,44
13, 42
12, 64
12, 63
8,27
56,79
52, 48
54,76
8,16
5,36
6, 16
6, 38
8, 04
16, 91
20,09
18,45
7, 94
5,44
4, 12
5, 15
8, 57
1,76
2, 37
1, 55
8,44
14, 41
12, 13
11, 61
8,29
60, 01
48,87
52, 94
8,19
7, 07
10, 66
8,10
16,22
16, 55
17,10
7, 95
7, 61
5, 02
4, 55
8,58
2,19
2,06
0,99
8,41
11, 69
10, 64
12,73
8,26
50, 07
44,21
60,33
8,19
10, 66
10,39
8,01
15, 62
21,51
17,79
7,87
4, 67
5, 37
8,16
8, 57
1,78
2, 64
1, 62
8,41
10, 55
10, 95
8,11
8,25
43, 82
42, 93
36,11
8,21
15, 96
15,24
17, 66
8, 02
14, 63
14, 58
14,22
7,88
3, 82
4,21
3, 95
8,58
1,59
1,81
1,89
8,41
12, 98
11,58
12, 86
8,23
62, 74
29, 63
12, 00
8,19
22, 86
34,77
8, 02
17, 15
19, 52
17, 06
7,87
5, 54
5,56
4,77
8, 61
0, 35
1, 57
1,47
8, 35
13,24
13, 41
8,83
8,19
43,18
60, 12
26,52
8, 15
15, 43
20,46
25, 60
7,98
16, 74
17,38
7,88
4,96
4,44
4,99
8,58
1,71
1, 67
8,41
11, 63
10,01
8,26
49,19
42, 65
8,20
14,25
16, 64
8, 03
17, 35
18,12
7,86
4,28
4,18
8,56
1, 64
1,79
1,73
8,39
13, 17
10,45
10,96
8,25
58, 68
46, Об
45, 60
8,21
11, 03
13,34
8, 07
14, 10
20,24
14,50
7, 92
2,10
5, 13
4,28
8, 57
1,74
1,22
1, 60
8,41
10,49
15,21
10,78
8,25
46, Об
55, 05
44,98
8,20
14, 46
13,79
8,02
13, 90
20,31
10,79
7,89
4,23
4,90
3,43
8,56
1,96
1,08
8,40
9,25
12,23
12,58
8,24
38,08
31, 03
58, 61
8,20
19, 02
22, 08
21,50
8,03
12, 00
13,24
7,31
7,89
4,73
4, 82
ТАБЛИЦА С-5
Процентное содержание полос легких цепей (LC), тяжелых цепей (НС), негликозилированных НС и других молекул для составов в блоке С в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при
25°С)
№ состава
Момент времени
ngHC
Другие
35, 87
63,20
0,51
0, 42
29,71
63, 08
0, 37
6, 84
31,01
67, 83
0, 54
0, 61
29,50
69, 57
0,56
0, 37
30,51
67,28
0,56
1, 65
32, 32
65, 51
0,56
1, 61
32, 53
66, 45
0, 54
0,47
33, 04
65, 34
0, 55
1, 07
31, 94
66, 60
0, 57
0,90
33, 40
64, 90
0,46
1,24
30,96
67, 16
0, 52
1,36
32, 08
65, 84
0,56
1, 52
34, 17
63, 89
0,49
1,45
В отношении таблицы С-1 выше, проводили измерение рН и выявили, что он является относительно стабильным для всех составов. Однако исходные значения рН для составов цитрат/фосфат были немного выше. Наименее стабильный состав по анализу SEC оказался состав 1, в котором использовали буферную систему хумиры(r). Посредством сравнения авторы выявили, что
составы с использованием в качестве буфера His и/или составы, содержащие Gly или Arg, демонстрировали наибольшую стабильность (см. таблицу С-2). Сходные тенденции наблюдают при рассмотрении анализа чистоты посредством ВЭЖХ с ОФ (см. таблицу С-3) . По-видимому, SEC может быть более хорошим указывающим на стабильность способом, чем ВЭЖХ с ОФ, хотя, в целом способ ВЭЖХ с ОФ по-видимому действительно является индикатором стабильности. На основе данных блока С, кратко изложенных выше, авторы выявили, что гистидин подходит в качестве предпочтительного буфера в отношении стабильности состава, и что глицин или аргинин или их сочетания также являются увеличивающими стабильность компонентами при включении в состав адалимумаба.
Сохраненные образцы дополнительно анализировали
посредством cIEF при tl и t2 (таблица С-4 выше) . Вещество собственного адалимумаба демонстрирует четыре-пять пиков с общей интенсивностью более 1% или приблизительно с этим. В целом, после хранения наблюдали некоторое небольшое снижение интенсивности основного пика. Как правило, эти потери являются большими при tl, чем при t2. По-прежнему, не наблюдают новых значимых пиков, что свидетельствует о том, что химическая деградация, которая бы приводила к изменениям общего заряда белка, минимальна. Разброс данных означает, что этот способ, несмотря на пригодность для характеристики, по-видимому, не является индикатором стабильности.
Последним аналитическим способом, используемым для оценки стабильности состава адалимумаба, является CE-SDS, который по существу представляет собой версию СЕ SDS-PAGE в слоях гелей. Этот способ демонстрирует, что относительные площади пиков LC при хранении при повышенных температурах уменьшаются (таблица С-5) , хотя количество новых пиков (суммарно называемых "Другие") увеличивается. Взятые вместе, эти изменения, как правило, составляют менее 2% для любых составов. Присутствуют образцы, где процентное содержание "Других" находится в диапазоне 4-6%, но вероятнее всего они представляют собой артефакты.
ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА D
Другой набор составов анализировали как "Блок D". Разработано шестнадцать составов для анализа других стабилизаторов, таких как сорбит и трегалоза, в качестве альтернатив манниту (см. таблицу D). Блок D также анализировали с использованием маннита или NaCl в качестве единственного средства придания тоничности вместо использования смеси двух эксципиентов. Стабильность рН составов была достаточно хорошей, хотя для некоторых составов фактические исходные значения рН были немного ниже, чем заданные значения (таблица D-1).
ТАБЛИЦА D
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
Биоаналог адалимумаба
150
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
Биоаналог адалимумаба
150
ТАБЛИЦА D-l
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
5,45
5, 35
5, 33
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
5,44
5, 32
5,31
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
5,30
5,25
5,23
Биоаналог адалимумаба
150
5,39
5,20
5,18
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
5, 35
5,30
5,22
Биоаналог адалимумаба
150
5,41
5, 33
5,28
ТАБЛИЦА D-2
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке D в tO,
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
97, 93
98, 54
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
99, 32
98, 65
99, 00
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
99,32
98, 53
98, 96
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
99, 29
98, 12
98, 84
Биоаналог адалимумаба
150
99, 28
98, 28
98, 90
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
99, 26
97, 99
98, 83
Биоаналог адалимумаба
150
99, 20
97, 76
98, 62
ТАБЛИЦА D-3
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке D в tO,
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
98, 13
97, 82
98, 08
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
98, 10
97, 90
98, Об
Биоаналог адалимумаба
240
0,1
98, 13
97, 95
98, 14
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
98, 07
97, 79
98, 02
Биоаналог адалимумаба
150
98, 13
97, 78
98, 14
Биоаналог адалимумаба
150
0,1
98, 17
97, 80
98, 10
Биоаналог адалимумаба
150
98, 14
97, 79
98, Об
ТАБЛИЦА D-4
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке D в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
№ состава
8,56
2,26
1,81
8,41
13, 84
12, 88
11,73
8,25
62, 27
59, 80
56, 15
8, 14
6,48
8, 04
15,71
22, 93
13, 73
7, 99
5, 92
4,39
4,13
8, 55
2, 08
1,58
8,40
12, 89
12,58
8,24
60, 15
53, 24
8, 14
5, 98
6, 69
8, 03
11, 92
9, 72
7, 98
3, 65
5, 67
8, 57
1,58
2, 10
1,89
8,41
11, 87
11, 83
11, 99
8,26
54, 93
54, 45
54, 51
8,16
9, 10
6, 31
8,24
8, 05
9,21
11,16
10, 22
7, 91
7, 60
4,16
5,26
8, 57
3, 57
1, 82
1,05
8,40
11, 12
10, 66
10, 83
8,24
49, 37
47, 85
42,34
8, 14
3, 01
1, 83
3, 68
8, 03
10, 11
10, 06
17, 12
7, 90
2,78
4,72
3,84
8, 55
2,30
2, 18
2,13
8,40
7, 63
8,86
8, 63
8,25
33, 90
14,41
16, 64
8,20
23,41
33, 90
33, 75
8, 03
10, 14
20,39
19, 42
7, 99
6,76
5, 42
4, 63
8,59
1, 87
1,39
8,42
11,25
11, 18
11, 89
8,27
50, 07
61,72
64, 17
8,20
12,43
22, 08
19, 18
8, 03
10,20
7, 91
2,70
5, 01
3,38
8, 55
8,40
8,25
8,20
8, 03
7, 99
8,59
1,46
2, 64
1,16
8,39
13, 52
13, 62
7,37
8,22
60,79
50, 83
55, 40
8, 08
5,21
11,28
9,78
8, 02
15, 24
8, 55
11, 94
7, 91
3,79
3, 02
5,18
8, 53
2, 64
3,25
1, 94
8,38
13, 83
12,72
11, 67
8,25
64, 97
51, 32
54, 14
8, 17
8,33
11,21
8, 61
8, 06
11,75
9, 98
9, 03
8, 01
5,79
4, 80
7,31
8, 54
1,78
3,26
8,38
13, 04
11, 19
8,21
60, 53
44, 83
8, 15
19, 60
10, 95
7, 99
9,41
7, 90
5, 05
4,27
8, 52
1, 95
2, 11
1,89
8,36
11,24
12,43
12,43
8,21
48, 64
54, 10
59, 90
8, 13
11, 69
6, 31
8, 00
10,30
21, 14
11, 14
8, 01
5, 27
5, 64
8, 32
8,51
1, 85
8,29
11,31
11,38
8, 18
63, 11
45, 14
8, 14
2, 54
8, 05
16,16
22, 03
7, 94
5, 03
6, 88
8, 62
3,51
3,05
8,44
12,44
12,30
8,29
65, 10
51,44
8,21
12, 18
8, 06
15, 37
17,25
7, 91
3,58
3,77
8, 61
2,74
1,73
8,43
10, 60
12, 19
8,27
46, 23
41, 11
8,21
13, 97
10,49
8, 05
18,56
17, 52
7, 91
5, 15
8, 62
8,35
12,40
10, 91
8,34
8,21
31, 87
30, 32
36, 39
8,20
41, 14
25, 57
30, 62
8, 02
12,42
13,72
18,26
7, 89
2, 18
5, 44
3,86
8, 61
8,48
12, 96
12,86
13, 19
8,34
34,40
31,45
39, 25
8,31
27,74
20,29
18, 81
8, 05
22,76
19, 35
7, 89
8, 17
7, 69
4,83
Процентное содержание полос легкой цепи (LC), тяжелой цепи (НС), негликозилированной НС и других молекул для составов в блоке D в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
Момент времени
ngHC
Другие
34, 11
62, 58
0,58
2,73
33, 19
64, 28
0, 60
1, 92
30,25
66, 81
0, 64
2,31
30, 61
65, 79
0, 54
3, 07
29, 22
67, 04
0, 64
3, 10
27,48
68,51
0,59
3,42
30, 84
67, 27
0, 54
1,35
30,30
68, 13
0,58
0, 99
30, 88
68,33
0, 60
0, 19
29,76
68, 32
0, 57
1,34
31,49
66, 95
0, 55
1, 01
33,77
64, 50
0,56
1, 17
31,59
66, 54
0, 52
1,34
29, 19
69, 16
0,59
1, 06
30, 90
68, 08
0,56
0,47
29, 32
69, 88
0, 54
0,26
31, 08
67, 58
0, 54
0,79
30,41
68, 60
0,56
0,43
30, 87
66, 95
0, 55
1, 63
30, 14
68,28
0, 55
1, 03
31, 68
67, 41
0, 60
0,31
29, 62
68, 12
0,51
1,75
29,46
68, 10
0, 61
1, 83
29, 80
67, 99
0,58
1, 64
Стабильность рН этих составов была достаточно хорошей (таблица D-1). В качестве контроля снова использовали коммерческий состав адалимумаба (хумиры(r)) (но с использованием в качестве API собственного биоаналогичного адалимумабу белка). Коммерческий состав снова продемонстрировал худшую стабильность при SEC, чем составы с использованием единственных буферов, таких как фосфат и His (см. таблицу D-2) . Из двух буферов, использованных в хумире(r) авторы к настоящему времени установили, что лучшим стабилизатором является фосфат. Это является неожиданным, так как фосфат фактически не обладает буферной емкостью при рН 5,2, тогда как цитратные буферы обладают буферной емкостью при этом рН. Это позволяют предположить, что различия в профиле стабильности могут являться следствием
прямого взаимодействия буфера с белком, явления, которое по убеждению авторов в случае коммерческого состава хумиры(r), авторы ранее не изучали или не принимали во внимание. Таким образом, сравнительное преимущество выбора фосфата в качестве буфера в составе адалимумаба вследствие превосходной стабильности в составе в отличие от выбора комбинации цитрата/фосфата составляет один из важных аспектов изобретения авторов.
И сорбит, и трегалоза при использовании в качестве единственного средства придания тоничности в этих составах демонстрируют лучшие профили стабильности, чем маннит. Также выявлено, что удаление полисорбата 8 0 (PS 80) в определенной степени снижает стабильность. Выявлено, что лучшим профилем стабильности при SEC обладают составы 10 и 11, которые вместо маннита/NaCl содержат высокие концентрации сорбита или трегалозы
(таблица D-2) . Эти результаты демонстрируют, что удаление NaCl из состава или ограничение его концентрации ниже определенных заданных уровней (например, менее чем приблизительно 100 мМ) является благоприятным для стабильности. (Авторы замечают, что маннит по-видимому не является стабилизирующим ингредиентом, но на уровнях предпочтительно выше 150, и наиболее предпочтительно
Данные ОФ демонстрируют, что цитрат или фосфат обеспечивают лучшую стабильность, чем комбинация, используемая в хумире(r)
(таблица D-3) . Снова, исключение комбинации цитрата/фосфата представляет важную характеристику изобретения авторов. Возможно не было известно или спрогнозировано, что цитрат отдельно или фосфат отдельно смогут обеспечить лучшую стабильность состава, чем коммерческая буферная система, содержащая комбинацию цитрата и фосфата.
Для образцов блока D проводили анализы cIEF (таблица D-4 выше) . Как и ранее наблюдают определенное снижение интенсивности основного пика, но новых пиков не наблюдают. В некоторых случаях наблюдают определенное небольшое повышение интенсивности более кислотных пиков. Наблюдают большее уменьшение основного пика при tl, чем при t2, что позволяет предполагать, что разрушение при 5°С является почти незаметным. Также, в общем, похоже, что разрушается менее 5% (а вероятно намного менее 5%) как измеряют
в cIEF (таблица D-4) . Подобным образом наблюдали незначительное разрушение в CE-SDS (таблица D-5) . Наблюдают самое большое от 2 до 4% разрушения, но вариабельность способа делает трудным определение существенности этих изменений. По-видимому, в составах 1 и 2 и 10-14 присутствуют более высокие уровни загрязнений (другие).
ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА Е
Этот блок составов разработан для исследования стабильности составов при различных уровнях рН. Если буфер не указан, использовали ацетатный буфер (10 мМ) (таблица Е). Вторичной задачей являлось исследование Gly и Arg при более высоких концентрациях и в комбинации в качестве альтернативных манниту и NaCl стабилизаторов.
Биоаналог адалимумаба
5,2
100
100
Биоаналог адалимумаба
3,5
150
ТАБЛИЦА Е-1
Измеренный рН для составов блока Е при tO и tl (одна неделя, 40°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сорбит
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS 80
5,2
100
0,1
5, 15
5,11
5,21
3,5
100
0,1
3,36
3,49
3,50
5,2
100
0,1
5, 13
5,24
5,24
3,5
100
0,1
3,31
3,43
3, 45
3,5
100
0,1
3,30
3,48
3, 42
3,5
130
0,1
3,24
3,52
3, 42
3,5
130
3,27
3,59
3, 48
3,5
240
3,27
3, 33
3,39
5,2
240
5, 05
5,25
5,20
3,5
100
100
3,30
3,45
3, 41
5,2
100
100
5,20
5,38
5,39
3,5
150
3,24
3,38
3, 37
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке Е в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сорбит
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS 80
5, 2
100
0, 1
99, 23
98,20
98, 85
3,5
100
0,1
98, 82
44, 15
86, 37
5, 2
100
0,1
99, 30
98,37
99, 02
3,5
100
0,1
95, 85
33,51
76,21
3,5
100
0,1
97, 37
26,21
77, 80
3,5
130
0,1
97, 79
35, 67
65, 83
3,5
130
99, 00
55, 51
90, 60
3,5
240
99, 24
75, 60
98,24
5, 2
240
99, 08
98, 63
99, 18
3,5
100
100
99,28
51, 03
91, 66
5, 2
100
100
99, 32
98, 54
99, 09
3,5
150
99,29
45, 86
93, 06
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке Е в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
сорбит
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS 80
5, 2
100
0, 1
98,58
96, 88
96, 91
3,5
100
0,1
98,51
90,29
95, 99
5, 2
100
0,1
98,50
96, 90
96, 83
3,5
100
0,1
98,56
91, 18
95, 55
3,5
100
0,1
98,45
90, 96
95, 71
3,5
130
0,1
98,71
93, 28
95, 38
3,5
130
98,40
90, 65
96, 54
3,5
240
98, 03
93, 94
96, 82
5, 2
240
98,23
97, 19
97, 12
3,5
100
100
98, 13
91, 10
96, 67
5, 2
100
100
98, 13
97, 17
97, 12
3,5
150
98, 07
93, 40
96,48
Процентное содержание полос легкой цепи (LC), тяжелой цепи (НС), негликозилированной НС и других молекул для составов в блоке Е в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при
24, 96
58, 61
0,33
16, 10
33,44
66, 03
0, 53
0, 00
29, 75
69, 08
0, 60
0, 57
27, 67
70, 83
0, 61
0, 89
28, 81
69, 86
0,59
0,73
30,23
49, 07
0,26
20,44
28, 14
70, 11
0,58
1, 18
29, 75
69, 08
0, 60
0, 57
ТАБЛИЦА E-5
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке Е в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2
(две недели при 25°С
№ состава
8,56
8,37
12, 52
12, 65
8,23
51,77
50, 04
8, 14
8, 03
21, 54
12,40
7, 93
14, 17
16,26
1, 88
1,49
8,37
10, 07
17, 66
14, 15
8,21
37, 52
32, 26
33, 88
8, 13
19, 03
9, 96
8, 01
16, 57
28,70
7, 93
4, 12
7,45
8, 54
1, 04
2, 67
8,38
10,50
9, 32
8,21
68,34
31, 91
8, 13
28, 52
8, 02
16, 55
10, 05
7, 88
3, 57
8, 67
8, 60
1,40
2, 60
3,26
8,43
10, 04
12,33
12, 03
8,26
62, 39
63, 19
63, 89
8, 14
8, 03
15, 00
16, 95
16, 57
7, 88
7, 08
4, 93
4,25
Стабильность рН являлась умеренной с возрастанием рН, происходившим для многих составов в tl, особенно составов с ацетатным буфером при низком рН (таблица Е-1 выше). Два образца (составы б и 12) в tl загустевали.
У образцов при рН 3,5 наблюдали стабильное снижение содержания мономеров (таблица Е-3), тогда как при рН 5,2 образцы демонстрировали стабильность, сравнимую с той, которую наблюдали в предыдущих блоках. Также стало понятным, что при 40°С разрушение было более заметным, чем при 25°С, несмотря на вдвое более длительное хранение. Фактически, у состава 8 утрачивалось менее 1% мономеров при t2 (таблица Е-2). Все составы с Gly и Arg продемонстрировали хорошую стабильность при условии, что поддерживали рН 5,2. Данные в этом блоке исследований подтвердили открытие авторов, что глицин или аргинин или их смесь являются хорошими стабилизаторами в составе адалимумаба.
Данные ВЭЖХ с ОФ демонстрируют значительное уменьшение чистоты, хотя далеко не такое больше как для снижения содержания мономеров при SEC (таблица Е-3) . Это позволяют предположить, что химическая нестабильность является меньшей, чем физическая нестабильность. Как и для результатов SEC, потеря стабильности при tl более заметна, чем при t2.
Результаты CE-SDS демонстрируют большое увеличение числа новых пиков, где категория "Другие" для образцов с низким рН в tl возрастала до 15-20% (таблица Е-4). Наиболее стабильным составом при CE-SDS оказался состав 11, который в качестве регуляторов тоничности/стабилизаторов содержит Gly и Arg.
Результаты исследований для блока Е
Авторы испытали сложности с проведением cIEF для многих образцов блока Е. Однако, принимая во внимание явно худшую стабильность при рН 3,5, маловероятно, что cIEF мог бы предоставить какую-либо новую информацию относительно этих профилей стабильности. Например, состав 4 (рН 3,5) демонстрирует расщепление основного пика в tl.
ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА F
Исследования блока F предназначены изучения стабильности содержащих His составов с использованием в качестве единственного регулятора тоничности маннита, Gly или Arg (таблица F ниже). Они также служат в качестве благоприятной возможности для оценки добавок, таких как ЭДТА и метионин (Met), которые могут быть эффективными для замедления окисления. Кроме того, исследовали один состав с высокой концентрацией цитрата и один состав с высокой концентрацией фосфата.
ТАБЛИЦА F-2
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке F в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS 80
ЭДТА
Met
100
0,1
97, 69
94, 75
96, 06
100
0,1
0,5
99, 25
98, 14
98, 92
150
0,1
99, 30
98, 54
99, 16
150
0,5
99,28
98,31
99, 14
240
99, 17
98, 64
99, 14
240
99, 07
98,50
99, 07
240
99,29
98, 92
99, 24
240
99,28
98,40
99, 04
240
99, 30
98,50
99, 08
240
99, 31
98, 60
99, 23
120
0,1
99, 27
98, 64
99, 16
120
0,1
99,29
98,51
99, 17
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке F в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при 25°С)
№ состава
цитрат
фосфат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS 80
ЭДТА
Met
100
0,1
97, 47
96, 89
97, 98
100
0,1
0,5
97, 33
97, 02
97, 99
150
0,1
97, 64
97, 14
98, 04
150
0,5
97, 59
97, 00
97, 97
240
97, 11
97, 30
98, 03
240
97, 61
97, 27
98, 03
240
97, 55
97, 37
98, 08
240
97, 48
97, 51
98, 05
240
97, 64
97, 58
98, 03
240
97, 68
97, 41
98, 06
120
0,1
97, 67
97, 18
98, 03
120
0,1
97, 68
97, 33
98, 02
Процентное содержание полос легкой цепи (LC), тяжелой цепи (НС), негликозилированной НС и других молекул для составов в блоке F в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели при
27, 81
71,27
0,51
0,40
29, 59
68,46
0, 53
1,43
31,25
67, 89
0,50
0,36
27,33
70, 80
0, 61
1,26
26, 54
71, 00
0, 64
1, 82
29,46
69, 85
0, 69
0, 00
24, 18
71,21
4, 61
28, 95
68, 98
0,59
1,46
ТАБЛИЦА F-5
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке F в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2
(две недели при 25°С
№ состава
8, 65
2, 11
8,31
13, 07
11,43
34, 17
8,24
64, 66
67, 99
28, 67
8, 14
2,29
8, 08
16, 13
17,73
15, 98
7, 95
6, 14
4, 80
8, 60
1,56
1, 93
1, 12
8,48
12, 95
11,26
11, 12
8,24
58, 99
55, 85
60, 37
8, 13
20, 98
22,43
18,77
7, 93
3,56
6,41
6, 09
8, 60
1,56
1, 93
1, 12
8,56
1,56
1, 69
8,34
10, 88
12, 85
10, 83
8, 18
66, 93
55, 35
62, 00
8, 02
17,28
19, 04
20, 13
7, 89
4, 91
11,21
5, 35
8,58
1,86
1, 68
8,45
13,79
10, 61
12, 84
8,27
65, 06
51, 89
61, 94
8, Об
19,29
18, 85
25, 22
7, 96
6,28
4, 91
8, 60
1,35
1,78
1,45
8,45
12,35
13, 63
8,59
8,27
60, 12
55, 07
64, 28
8, 07
20,50
20,35
19, 73
7, 94
5, 69
9, 17
5, 95
8, 55
1,30
1,30
1, 08
8,43
13,29
13,26
13, 23
8,24
54, 83
56, 88
61, 67
8, 08
20,76
19,79
17, 19
7, 96
9, 82
8,76
6, 84
8, 57
1,28
1,41
2,40
8,44
12, 08
12, 63
13, 05
8,27
61,50
55, 33
60,70
8, 08
17, 55
19,48
17,43
7, 94
5, 93
8, 92
4,25
8, 55
1, 32
0, 90
8,43
11,51
12,47
10, 09
8,24
62, 99
54, 09
63, 81
8, 05
15, 43
22,71
20, 91
7, 90
8,75
9, 83
5, 19
8,59
1,35
1, 63
8,45
11,59
13, 67
11,40
8,28
63, 60
52, 70
63, 11
8, 06
17, 98
24, 08
18, 57
7, 94
2,28
7, 05
5,29
8, 57
1,56
2,50
2, 08
8,45
13,22
11, 93
12, 90
8,28
61,86
55, 12
61, 87
8, 08
17, 87
20, 99
18,74
7, 97
5, 50
4,71
4,41
8,59
1,43
1, 19
В этом блоке составов значения рН были немного меньшими, чем заданное значение рН 5,2 (таблица F-1) . Кроме того, рН у большинства составов при измерении в tl изменялся приблизительно на 0,1 единицу. Эти различия учитывали при построении математических моделей данных, как описано ниже.
Выявлено, что добавление ЭДТА увеличивает стабильность наихудшего состава (состав 1) . На основе данных SEC было менее ясно, увеличивает ли она стабильность в общем случае (таблица F-2) . После хранения все составы, содержащие высокие концентрации Arg или Gly, демонстрировали достаточно хорошие характеристики (таблица F-2).
Исходная чистота при использовании ВЭЖХ с ОФ была везде ниже, чем ожидалось для этих составов (таблица F-3). После хранения при tl и t2, наблюдали определенные небольшие различия, где составы на основе Gly и Arg демонстрировали наилучшую стабильность. На основе данных ВЭЖХ с ОФ не выявлено, что ЭДТА является значимым стабилизатором (таблица F-3). Подобным образом действие Met на стабильность по измерениям посредством ВЭЖХ с ОФ или SEC является минимальным, за исключением содержания мономеров при наибольшей концентрации Met (таблица F-2, состав 7) .
Анализ посредством CE-SDS демонстрирует, что после хранения происходит очень небольшое разрушение (как правило, менее 1% увеличения "Других") (таблица F-4) . Однако существуют некоторые составы, которые начинаются с наибольшего содержания "Других"
(например, составы 4-7). Во всех этих составах использовали высокую концентрацию маннита (24 0 мМ) . По-видимому, это же верно для составов, содержащих 120 мМ маннит.
Как и для анализа посредством cIEF, наблюдают небольшое изменение относительных интенсивностей основного пика, по меньшей мере систематическое, которое может позволить выявить динамику стабильности (таблица F-5) . В целом, изменения в t2 являются меньшими, чем в tl.
ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА G
В исследованиях составов блока G изучали ряд составов с комбинациями Gly и Arg в качестве первичных стабилизаторов (таблица XXXIV). Кроме того, в дополнение к PS 8 0 оценивали два других поверхностно-активных вещества (плюроник F-68 и полисорбат 20, PS 20) . Наконец, оценивали диапазон концентраций PS 80.
ТАБЛИЦА G-2
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке G в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
F68
PS20
PS80
100
0,1
99, 17
97, 45
98, 09
100
0,1
99, 11
97, 78
98, 09
100
0,1
98, 99
97, 74
97, 92
120
120
0,1
99, 12
98, 67
98, 68
120
120
0, 05
99, 05
98, 57
98, 53
120
120
0, 01
99, 05
98, 66
98,70
120
120
0, 05
99, 04
98, 63
98,50
120
120
0,1
99, 11
98, 64
98, 55
120
120
0, 05
99, 12
98,56
98, 98
150
100
0, 05
99, 10
98,49
98, 88
150
100
0, 01
99, 07
98,76
98,45
120
120
0, 01
99, 11
98,48
ТАБЛИЦА G-3
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке G в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две
недели при 25°С
состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
F68
PS20
PS80
100
0,1
99, 74
99, 66
98, 93
100
0,1
99, 59
99, 66
98, 97
100
0,1
99, 58
99, 60
99, 22
120
120
0,1
99, 62
99, 62
98, 99
120
120
0, 05
99,70
99, 61
99, 01
120
120
0, 01
99, 60
99, 66
99, 00
120
120
0, 05
99,71
99, 65
98, 99
120
120
0,1
99,70
99, 61
99, 03
120
120
0, 05
99,71
99, 60
99, 03
150
100
0, 05
99, 72
99, 60
99, 02
150
100
0, 01
99, 72
99, 61
99, 05
120
120
0, 01
99, 61
99, 04
34, 97
63, 14
0,54
1,36
34,26
64, 16
0, 52
1, 05
34, 90
63, 35
0,56
1,19
ТАБЛИЦА G-5
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке G в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели
при 25°С
№ формы
8, 53
1,24
1,21
8,36
14, 30
12, 69
13, 67
8,24
64, 03
53, 50
60, 30
8, 14
8, 01
15, 77
9, 32
19, 12
7, 86
3, 73
3, 35
4, 48
8, 52
1, 06
1, 37
0, 88
8, 35
13, 10
13, 30
12, 53
8, 16
66, 28
59, 68
57, 99
7, 97
17, 14
19, 60
21,55
7, 83
2, 42
4,78
4, 92
8,51
0, 65
0, 65
1, 03
8, 34
13, 31
14, 00
15, 31
8, 16
65, 13
59,04
60, 70
8, 14
7, 98
17, 26
18, 90
17, 56
7, 82
2, 89
5, 68
4, 16
8,36
1, 87
2,43
1, 00
8, 19
7,74
10, 89
11, 69
7, 99
61, 91
54,27
59,10
7, 82
20, 94
22, 72
19, 81
7, 66
6, 35
7, 98
6, 92
8, 44
1,79
0, 95
071
8,26
13, 33
12, 85
10, 43
8, 06
61, 67
59, 94
60, 12
7, 88
17, 49
21,08
20,82
7, 69
4, 02
4,50
6, 50
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке G в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели
при 25°С
№ формы
8,36
1,71
4,76
8,21
12, 37
12, 93
10, 95
8, 04
62, 53
54,16
56,48
7, 87
19, 24
26,08
17, 97
7, 64
4, 15
2, 07
6, 50
8,54
0, 77
1,19
0,79
8, 34
7, 15
12, 32
13, 15
8, 17
54, 73
42, 64
60, 58
8, 02
22, 18
29, 90
17, 28
7, 83
7, 12
11, 47
4, 77
7, 69
1, 41
2,48
2, 11
8, 55
1,04
2, 11
8,39
7,28
10, 69
14, 82
8, 23
64, 01
57, 42
55, 68
8, 05
20, 81
23, 86
23, 76
7, 96
6,79
5, 37
5,74
8,54
8, 48
10, 99
7, 91
8, 31
53, 85
61, 43
8, 17
31,58
23, 83
7, 99
8,82
7, 85
3,58
3,27
8,50
0, 95
2,16
8,36
9, 10
10, 65
15, 79
8, 18
59, 02
55, 35
58,56
8, 02
23,76
24,79
25, 66
7, 87
5, 63
7, 05
8,58
2,08
1, 68
8, 40
9, 74
10, 05
9, 67
8,21
62, 70
56, 96
57, 36
8, 05
21,39
24,14
25, 18
7, 99
5,24
6,77
6, 11
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке G в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели
при 25°С
№ формы
8,54
1, 67
8, 37
15, 99
8, 22
63, 18
8, 02
15, 41
7, 82
3, 75
Содержание мономеров при SEC для выбранных составов в блоке G, которые не обрабатывали (Q, покой), подвергали 5 циклам F/T или подвергали перемешиванию в течение 24 часов
состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
F68
PS20
PS80
F/T
Перемеш.
100
0,1
99, 15
99, 03
99, 14
120
120
0,1
99,21
99, 11
99, 18
120
120
0,1
99, 18
99, 14
99, 17
150
100
0, 01
99, 16
99, 09
99, 13
120
120
0, 01
99, 10
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для выбранных составов в блоке G, которые не обрабатывали (Q, покой), подвергали 5 циклам F/T или подвергали перемешиванию в течение 24 часов
состава
цитрат
фосфат
сукцинат
His
Gly
Arg
маннит
NaCl
F68
PS20
PS80
F/T
Перемеш.
100
0,1
99, 60
99, 72
99,76
120
120
0,1
99, 56
99,70
99, 59
120
120
0,1
99, 58
99, 57
99, 73
150
100
0, 01
99, 72
99, 59
99, 65
120
120
0, 01
99, 75
99, 56
Результаты для блока G
Все значения рН были близки к заданным значениям (таблица G-1) с относительно небольшими изменениями, происходящими после хранения. По измерениям SEC выявлено определенное предпочтение полисорбатов над F-68 в отношении стабильности (таблица G-2) . Однако различия являются относительно небольшими. Установлено, что составы с сукцинатом (составы 9 и 10) хранились достаточно хорошо, поскольку сохранялось содержание мономеров.
Все данные ВЭЖХ с ОФ были очень близки, делая определение любых различий в стабильности практически невозможным (таблица G-3). Эти данные интерпретируемы только при исследовании в большем масштабе всех блоков отборочных исследований.
Результаты CE-SDS позволяет предположить, что PS 2 0 для состава хумиры(r) является лучшим стабилизатором при концентрации 0,1% (составы 1-3) (таблица G-4) . В остальных случаях различия являются слишком малыми и вариабельными для составления общего заключения.
Как продемонстрировано ранее, результаты для данных cIEF являются достаточно вариабельными, чтобы сделать интерпретацию затруднительной (таблица G-5). Установлено, что изменения у составов с Gly/Arg являются меньшими, чем для составов с использованием других стабилизаторов, таких как маннит. Однако, в целом, выявлено, что стабильность при cIEF является достаточно хорошей для множества составов в этом исследовании.
Исследования блока G (F/T и перемешивание)
Для жидкого состава важно оценить чувствительность к межфазным воздействиям. Выбирали исследования двух типов воздействий. Первое представляет собой перемешивание при 150 об/мин на орбитальной мешалке в течение 24 часов при 2-8°С. Второе представляет собой пять последовательных циклов замораживания и оттаивания (F/T), поскольку этот цикл должен приводить к появлению увеличивающихся количеств поврежденного белка, если белок чувствителен к межфазному повреждению. Для оценки из блока G выбирали четыре состава, и они в таблице G-6 выделены синим полужирным шрифтом.
После повторных циклов F/T для всех тестируемых составов
наблюдали очень небольшое снижение содержания мономеров (таблица G-7) . Таким образом, по-видимому вследствие этого воздействия существует небольшая межфазная чувствительность, и что присутствие PS 8 0 не критично для защиты. Как и для перемешиваемых образцов потери являются даже меньшими. Тенденции в данных ВЭЖХ с ОФ по существу являются такими же (таблица G-7). Существуют небольшие, если вообще существуют, потери чистоты после воздействия межфазного натяжения. ИССЛЕДОВАНИЯ СОСТАВОВ БЛОКА Н
Составы блока Н сфокусированы на трех аспектах составов адалимумаба: (1) повышенные концентрации белков, (2) составы с отсутствием буферов (отличных от белка) и (3) использование различных комбинаций буферов кроме цитрата-фосфата (см. таблицу Н) .
Содержание мономеров при SEC для составов в блоке Н в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
состава
белок
Цитрат
Фосфат
Сукцинат
Гистидин
ацетат
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS80
100
100
0,1
99, 25
98, 36
98, 42
100
120
120
0,1
99, 19
98, 88
98, 47
100
0,1
99, Об
98, 81
98, 74
120
120
0,1
99, 19
99, 06
98, 99
120
120
99,26
99, 03
98, 96
100
0,1
99,26
98, 92
98, 86
100
0,1
99, 14
98, 98
98, 93
100
0,1
99, 11
98, 93
98, 66
100
0,1
99, 16
98, 79
98, 63
100
0,1
99, 10
98, 79
98, 49
100
0,1
99, 21
98, 93
98, 18
120
100
0,1
99, 30
99, 22
98, 65
Процент чистоты при ВЭЖХ с ОФ для составов в блоке F в tO, tl (одна неделя при 40°С) и
t2 (две недели при 25°С)
состава
белок
цитрат
фосфат
сукцинат
гистидин
ацетат
Gly
Arg
маннит
NaCl
PS80
100
100
0,1
99, 36
99, 64
99, 64
100
120
120
0,1
99, 37
99, 68
99, 74
100
0,1
99, 45
99, 47
99, 70
120
120
0,1
99, 50
99, 69
99, 59
120
120
99, 47
99, 71
99, 56
100
0,1
99, 48
99,56
99, 72
100
0,1
99, 43
99, 45
99, 72
100
0,1
99, 43
99, 51
99, 72
100
0,1
99, 47
99, 55
99, 72
100
0,1
99, 48
99, 53
99, 67
100
0,1
99, 45
99, 69
99, 60
120
100
0,1
99, 44
99, 54
99, 72
38,58
59,26
0,52
1, 64
29, 48
68, 55
0,58
1, 40
29, 53
68, 68
0,58
1, 40
30, 64
68, 20
0,70
0, 46
ТАБЛИЦА H-5
Процентное содержание основных полос, наблюдаемых в профиле cIEF составов в блоке Н в tO, tl (одна неделя при 40°С) и t2 (две недели
при 25°С)
№ формы
8, 55
1,20
1, 17
1,21
8,39
9, 57
5,57
8, 23
8, 23
46, 84
38, 18
39, 78
7, 99
13, 67
12, 64
11, 62
7, 81
6, 93
4, 61
3,70
8, 43
1, 17
1,06
1, 38
8,26
8, 97
8, 15
8, 38
8, 09
45, 46
40,27
39, 95
7, 87
13, 37
16,45
6, 77
7, 72
5, 47
5,39
9, 55
7,56
1, 64
1,52
3, 33
8,36
0, 80
0,74
0, 61
8, 16
6, 02
6, 03
7, 30
7, 98
35, 60
35, 58
37, 24
7, 83
11, 75
14, 10
13, 15
7, 64
2, 17
4,78
2, 00
7,51
1, 23
1,81
8, 40
0, 82
0,74
0, 30
8, 22
7, 87
7,38
6,29
8, 04
42, 46
34, 42
35, 89
7, 89
14, 44
13, 71
11, 34
7,71
3, 18
3,31
2, 69
7,56
0, 98
0, 95
8, 42
0, 82
1, 02
8, 25
7, 22
5, 09
8, 07
34, 68
28, 99
7, 91
2, 67
3, 63
Стабильность рН этих составов была приемлемой ( <0,1 единицы) за исключением составов 4 и 5. Они представляют собой составы без буфера с использованием в качестве стабилизаторов Gly и Arg (таблица Н-1). Также наблюдали небольшое повышение рН для состава 1 (состав хумиры(r) при концентрации белка 100 мг/мл).
Стабильность составов блока Н определяли с использованием SEC и ВЭЖХ с ОФ. Наблюдают небольшое снижение содержания мономеров, где наименее стабильным при использовании SEC являлся состав 1 (таблица Н-2). При 100 мг/мл API биоаналога адалимумаба достаточно стабильным являлся состав с гистидиновым буфером, содержащий Gly и Arg. В целом, лучшей комбинацией буферов является His-сукцинат (составы 7 и 12). Составы без буфера с Gly и Arg также демонстрируют приемлемую стабильность (таблица Н-2). Данные ВЭЖХ с ОФ показывают, что составы без буфера (4 и 5)
могут не являются абсолютно такими, как продемонстрировано посредством SEC (таблица Н-3), с измеримым снижением чистоты, но полагают, что этого достаточно для получения состава с долговременной стабильностью.
Данные CE-SDS выявили по меньшей мере изменение в составе 12, который представляет собой состав с His-сукцинатом (таблица Н-4) . Наибольшее изменение в tl происходит в составе 7, который также представляет собой состав с His-сукцинатом, но с использованием в качестве регуляторов тоничности маннита и NaCl.
Моделирование PLS
Способ PLS
Данные для составов адалимумаба в блоках А-Н анализировали совместно с использованием хемометрического способа, называемого частные наименьшие квадраты (PLS).
Опубликованы подробные описания моделирования PLS. См., например, Katz, М.Н. Multivariate Analysis: A Practice Guide for Clinicians. Cambridge University Press, New York, pp. 158-162 (1999); Stahle, L., Wold, K., Multivariate data analysis and experimental design in biomedical research. Prog. Med. Chem. 1988, 25: 291-338; Wold S. PLS-regression: a basic tool of chemometrics. Chemom. Intell. Lab. Syst. 2001, 58: 109-130; and Martens, H.; Martens, M. Multivariate Analysis of Quality: An Introduction, Wiley and Sons, Chichester, UK (2001) .
Для любой большой матрицы значений, где существует приемлемое количество образцов (совместно формирующих так называемую матрицу X) , можно конструировать математические модели, которые описывают наибольшую величину дисперсии соответствующей зависимой переменной(ых) (матрица Y) . Наилучшее отдельное описание зависимости между дисперсией в матрице X и конечном состоянии (матрица Y) называют первой главной компонентой, РС1. Следующую важную (в отношении описания дисперсии в матрице Y) компоненту называют второй главной компонентой, РС2, и так далее. Достаточно часто, для объяснения большей части дисперсии в матрице Y необходимы только одна или две PC. Каждая из этих PC содержит определенный вклад от каждой из переменных из матрицы X. Если переменная в матрице X вносит
большой вклад в конструкцию данной PC, тогда ее ранжируют как значимую. Фактически, для данной модели, где модель является комплексом определенного количества PC, для получения адекватного описания матрицы Y для каждой переменной в матрице X можно рассчитать коэффициенты регрессии. В итоге, PLS берет информацию из матрицы X, рассчитывает желаемое количество PC и конструирует подходящую модель. Модель, включающую все образцы, называют калибровочной моделью [1,2]. Общий коэффициент детерминации (г2) означает качество модели. Все расчеты PLS проводили с использованием программного обеспечения Unscrambler(r) (САМО, Corvallis, OR). Анализ PLS, проводимый с одной переменной в матрице Y называют анализом PLS1. Построение модели, которая аппроксимирует несколько переменных в матрице Y, называют анализом PLS2.
На всех калибровочных моделях стандартными способами проводили полную перекрестную проверку. В кратком изложении, за один раз удаляют по одному образцу, набор данных перекалибровывают и конструируют новую модель. Этот процесс повторяют до тех пор, пока не удалят все калибровочные образцы и представляют как валидационную модель. Таким образом, первый набор, содержащий все образцы, обозначают как калибровочный набор, а другой после перекрестной проверки, как валидационный набор. Для определения статистической значимости любого фактора, используемого в конструировании моделей PLS, описанных выше, использовали алгоритм складного ножа (см., Martens et al).
МОДЕЛИРОВАНИЕ PLS СОСТАВОВ АДАЛИМУМАБА
(БЛОКИ В, С и D)
(см. фигуры 3-12)
Примечание: поверхности диаграмм PLS, изображенные на фигурах 3-12, основаны на данных, полученных из блоков В, С и D. Далее приведено обсуждение результатов, отображенных на графиках поверхностей PLS, представленных на фигурах 3-12.
Модель PLS 1 - фигура 3
Фигура 3 содержит изображение содержания мономеров в tl (модель 1) как функцию концентраций цитрата и фосфата. рН фиксировали на 5,2. Модель демонстрирует, что фосфат и цитрат
самостоятельно являлись слабыми дестабилизаторами (не достигая статистической значимости), наряду с тартратом и малеатом. В сравнении с ними, сукцинат, который структурно сходен с цитратом, тартратом и малеатом, являлся слабым стабилизатором. Выявлено, что единственным буфером, являющимся значимым стабилизатором, являлся гистидин. Ни один из этих результатов невозможно предсказать на основе литературы или исследования химической структуры каждого буфера. Модель также демонстрирует, что когда вместе используют цитратный и фосфатный буфер, состав является наименее стабильным. Стабильность возрастает, если используют только один буфер, особенно фосфат. Это является неожиданным, так как фосфат обладает небольшой или не обладает буферной емкостью при рН 5,2, тогда как цитратный буфер обладает. Ни одну из этих характеристик невозможно предсказать на основе того, что было известно в данной области. Модель PLS 2 - фигура 4
Фигура 4 содержит изображение содержания мономеров в t2 (модель 2). Подобным образом, модель конструировали с использованием содержание мономеров при SEC в t2 в качестве конечной точки. Эта модель также продемонстрировала, что когда цитрат и фосфат используют вместе, стабильность является наименьшей. Наименьшая стабильность выявлена, когда концентрация цитрата составляет более 10 мМ и концентрация фосфата составляет от 5 до 15 мМ. Стабильность улучшается, когда уменьшают концентрацию цитрата и/или уменьшают или поднимают концентрацию фосфата. Эти результаты позволяет предположить, что предпочтительной является композиция с одним буфером. Наблюдается такая же тенденция в стабилизации буферов, как и с моделью PLS 1, где цитрат и фосфат являются слабыми стабилизаторами (статистически не значимо), тогда как гистидин является сильным стабилизатором (статистически значимо).
Модель PLS 1 - фигура 5
Фигура 5 представляет собой модель PLS 1, демонстрирующую действие гистидина и глицина на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в tl (модель 1) . Эта модель демонстрирует, что комбинация гистидина и глицин
обеспечивала очень хорошие результаты в отношении стабильности. Определено, что гистидин (His) и глицин (Gly) являются стабилизаторами. Наименьшую стабильность на характеристической поверхности (представленной синим) наблюдают, когда присутствует наименьшая концентрация His и Gly. Действие His на стабильность является более значительным, где 2 0 мМ His обеспечивают стабилизацию, сравнимую со 12 0 мМ Gly (см. противоположные вершины диаграммы). Модель демонстрирует, что при использовании обоих эксципиентов существует дополнительный выигрыш в стабильности, где наибольшую стабильность наблюдают, когда концентрация His составляет 20 мМ, а концентрация Gly составляет 120 мМ.
Модель PLS 1 - фигура б
Фигура б представляет собой модель PLS 1, демонстрирующую действие аргинина и сорбита на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в tl (модель 1) . Эта модель показала, что аргинин являлся хорошим стабилизатором, тогда как сорбит являлся плохим стабилизатором. Подобным образом, аргинин (Arg) обеспечивает степень стабилизации, которая сходна со степенью стабилизации, выявленной для Gly. Как продемонстрировано этой моделью, наихудшую стабильность наблюдают, когда концентрация Arg является низкой и концентрация сорбита является низкой (синяя область диаграммы). По мере увеличения концентраций каждого эксципиента, возрастает содержание мономеров в tl. Действие сорбита приблизительно линейно зависит от концентрации, тогда как действие Arg по-видимому возрастает более быстро после превышения концентрации 60 мМ. Несмотря на то, что определено, что сорбит увеличивает стабильность адалимумаба в отношении поддерживаемого содержания мономеров, его способность увеличивать стабильность является меньшей, чем выявлено для Gly и Arg (на основе молярности).
Модель PLS 1 - фигура 7
Фигура 7 представляет собой модель PLS 1, демонстрирующую действие рН и гистидина на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в tl (модель 1) . Эта модель демонстрирует, что гистидин по-видимому является наилучшим
буфером, тогда как рН для лучшей стабильности предпочтительно должен составлять 5 или выше. Модель PLS 2 - фигура 8
Фигура 8 представляет собой модель PLS 2, демонстрирующую действие рН и гистидина на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в t2 (модель 2) . Эта модель демонстрирует, что гистидин по-видимому является лучшим буфером, тогда как рН для лучшей стабильности предпочтительно должен составлять 5 или выше. Результаты демонстрируют, что оптимальный рН находится около 5,2. Из всех буферов, которые исследовали, гистидин обеспечивает наибольшую степень стабилизации. Эта характеристическая поверхность иллюстрирует два важных момента. Первое, стабильность по-видимому является максимальной около рН 5,2, снижаясь при более высоком и более низком рН. Второе, показано, что гистидин обеспечивает значимое увеличение стабильности. Когда гистидин используют при 2 0 мМ, он обеспечивает заметное увеличение стабильности по сравнению с меньшими концентрациями буфера. Фактически, действие по-видимому является нелинейным, с большей стабилизацией наблюдаемой при концентрациях от 10 до 20 мМ, чем от 0 до 10 мМ. Кроме того, потеря стабильности является более резкой при более высоком рН, чем при более низком рН.
Модель PLS 2 - фигура 9
Фигура 9 представляет собой модель PLS 2, демонстрирующую действие трегалозы и PS80 на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в t2. Эта модель демонстрирует, что трегалоза по-видимому является слабым стабилизатором, тогда как PS80 улучшает термостабильность. Характеристическая поверхность, представленная на фигуре 9, демонстрирует, что PS 8 0 является мощным стабилизатором для защиты адалимумаба от термического стресса, где максимальную стабильность обеспечивает концентрация 0,1%. Концентрацию PS 8 0 не варьировали иначе как 0 и 0,1%. Посредством сравнения эта модель демонстрирует, что стабилизирующее действие трегалозы является очень небольшим, безусловно менее, чем то, что наблюдают для сорбита.
Фигура 10 представляет собой модель PLS 2, демонстрирующую действие маннита и PS80 на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в t2 (модель 2) . Эта модель демонстрирует, что маннит по-видимому является дестабилизатором, тогда как PS80 улучшает термостабильность. Модель PLS с использованием содержания мономеров при SEC в t2 позволяет исследовать относительное действие любых факторов, включаемых в модель. По мере возрастания концентрации маннита, общая стабильность снижается. При сравнении влияние PS8 0 на стабильность является достаточно небольшим.
Модель PLS 1 - фигура 11
Фигура 11 представляет собой модель PLS 1, демонстрирующую действие маннита и NaCl на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в tl (модель 1) . Эта модель демонстрирует, что маннит и NaCl по-видимому являются дестабилизаторами. Стабильность, как демонстрирует содержание мономеров в tl, является наименьшей, когда концентрация маннита приблизительно составляет менее 150 мМ. Подобным образом, добавление NaCl также уменьшает стабильность адалимумаба.
Модель PLS 1 - фигура 12
Фигура 12 представляет собой модель PLS 1, демонстрирующую действие ЭДТА и метионин на стабильность составов. Она содержит изображение содержания мономеров в tl. В случае ЭДТА по мере увеличения концентрации этой добавки стабильность немного снижается. В отличие от этого, наблюдали, что добавление Met увеличивает стабильность.
Моделирование составов адалимумаба посредством PLS для блоков B-G
(см. фигуры 13-28)
Первая модель PLS ("модель PLS А)
В первой модели PLS (модели PLS А) в качестве конечного критерия использовали различие содержания мономеров в tl. В модели использовали три PC, и ее коэффициент корреляции для калибровочного набора составлял 0,83, а значение г для валидационного набора составляло 0,67. Она представляла собой квадратичную модель, включающую элементы взаимодействия рН-буфер
и буфер-буфер.
ТАБЛИЦА J
КОЭФФИЦИЕНТЫ "МОДЕЛИ PLS А"
Примечание: общие коэффициенты корреляции для каждого линейного фактора включают в первую модель PLS (модель PLS А) с использованием в качестве конечного критерия различий в содержании мономеров при SEC в tl. Факторы, признаваемые статистически значимыми, выделены полужирным шрифтом.
Фактор
Значение г
рН to
0, 041
белок
-0,025
цитрат
+0,123
фосфат
+0,267
сукцинат
-0,089
гистидин
-0,174
ацетат
-0,053
глицин
-0,190
аргинин
-0,128
сорбит
-0,003
трегалоза
+0,020
маннит
-0,104
NaCl
+0,250
F68
+0,018
PS 20
+0,021
PS 80
-0,152
ЭДТА
+0,112
Met
-0,062
Принимая во внимание коэффициенты корреляции калибровочного и валидационного наборов качество модели является приемлемым. Общие коэффициенты корреляции для различных факторов, включенных в модель, представлены в таблице J. Следует отметить, что квадратичные и характеризующие взаимодействие члены здесь не приведены. В качестве конечного критерия принимают различие в содержании мономеров, стремясь минимизировать это значение. Таким образом, стабилизаторы демонстрируют отрицательные
коэффициенты корреляции, тогда как дестабилизаторы демонстрируют положительные значения г. Из стабилизаторов самыми мощными являются His, Gly, Arg и PS 80, хотя маннит и сукцинат также обладают стабилизирующим действием (таблица J) . В то же время, существуют определенные значимые дестабилизаторы, такие как NaCl, цитрат и фосфат. Учитывая, что эти модели являются комбинацией всех данных по стабильности, полученных в различных блоках составов, А-Н, и индивидуальные составы могут отличаться от модели. Хотя таблица коэффициентов корреляция полезна для оценки действия различных факторов, они не отражают нелинейных эффектов и эффектов взаимодействия, таким образом, она полезна для рассмотрения характеристических поверхностей для исследования действия различных параметров более подробно, как представлено характеристическими поверхностями, которые приведены на фигурах 13-28.
Обсуждение модели PLS А - фигуры 13 и 14
В патенте 8216583, выданном Krause, описана цитрат-фосфатная буферная система, как являющаяся общей для обеспечения стабильности. Исследования авторов демонстрируют, что это неверно. Когда эти два буфера использовали в комбинации наблюдали наихудшую стабильность и эффект мог усугубляться по мере увеличения концентраций буфера по этой модели (фигура 13[1]). Характеристическая поверхность демонстрирует, что фосфат и цитрат являются одинаково дестабилизирующими в отличие от некоторых более ранних наблюдений, но количественную характеристику этих поверхностей необходимо рассматривать с определенной осторожностью, так как они включают данные всех составов из блоков В-Н.
На фигуре 14 представлено действие рН и His. Она демонстрирует, что His при низком рН, когда он явно находится за пределами буферной емкости His, является дестабилизирующим. И снова этот результат является функцией всех наблюдений рН в этом исследовании, не только тех, которые включают His (хотя это могло быть сделано) . В соответствии с этой характеристической поверхностью оптимальный рН может находиться ближе к 5,4, чем к 5,2, хотя поверхность в этой области является относительно
плоской, что означает пологую характеристическую поверхность от рН 5 до 5,4 (фигура 14).
Обсуждение модели PLS А - фигура 15
На фигуре 15 приведена характеристическая поверхность для Gly и Arg. Исследования повторно демонстрируют, что эти две аминокислоты могут являться мощными стабилизаторами адалимумаба. Следует отметить, что минимальное различие в содержании мономеров (т.е. синяя часть поверхности) достигалось при 100 мМ Arg, но при 200 мМ Gly, что позволяет предполагать, что Arg может являться лучшим стабилизатором для адалимумаба при рН 5,2.
Обсуждение модели PLS А - фигура 16
Конечная характеристическая поверхность, представленная для модели PLS А, приведена для демонстрации действия NaCl и PS 8 0 (фигура 16). Она демонстрирует, что стабильность адалимумаба при добавлении NaCl снижается, особенно выше 100 мМ. В то же время PS 20 при использовании в количестве более 0,04% обеспечивает значимую стабильность.
Вторая модель PLS (модель PLS В)
Во второй модели PLS (модель PLS В) в качестве конечного критерия использовали содержание мономеров в tl и в t2. В модели использовали четыре PC, и ее коэффициент корреляции для калибровочного набора составлял 0,82, а значение г для валидационного набора составляло 0,67. Она представляла собой квадратичную модель, включающую элементы взаимодействия рН-буфер и буфер-буфер. В отношении качества модели, она является сравнимой с первой моделью PLS А, описанной выше.
ТАБЛИЦА К (L)
КОЭФФИЦИЕНТЫ КОРРЕЛЯЦИИ "МОДЕЛИ PLS В"
Фактор
Значение х
-0,086
белок
+0,030
цитрат
-0,079
фосфат
-0,157
сукцинат
+0,060
гистидин
+0,185
ацетат
+0,063
глицин
+0,126
аргинин
+0,150
сорбит
+0,025
трегалоза
+0,006
маннит
+0,014
NaCl
-0,215
F68
-0,044
PS 20
-0,028
PS 80
+0,227
ЭДТА
-0,097
Met
+0,096
Конечными критериями для модели PLS В являются общее содержание мономеров в tl и t2. Таким образом, стремятся максимизировать эти значения. Это означает, что стабилизаторы обладают положительными коэффициентами корреляции, а дестабилизаторы демонстрируют отрицательные значения г (таблица К) . Как и в предыдущей модели, цитрат, фосфат и NaCl являются значимыми дестабилизаторами. С другой стороны, His, Gly, Arg и PS 2 0 являются мощными стабилизаторами. В этой модели трегалоза, сорбит и маннит демонстрируют очень небольшое действие. Основными различия является то, что рН в этой модели является значимым фактором и ЭДТА является значимым дестабилизатором, хотя по-видимому Met также является стабилизатором.
Обсуждение модели PLS В - фигура 17
Эта модель позволяют предположить, что добавление цитрата обладает незначительным действием на стабильность, если отсутствует фосфат (см. черный край характеристической поверхности фигуры 5) . С другой стороны, добавляемый фосфат снижает содержание мономеров (см. правый край), а комбинация является даже более стабилизирующей (фигура 5) . Таким образом, комбинация буферов цитрат-фосфат не является эффективной для стабилизации адалимумаба в отличие от того, что указано в патенте 8216583. По этой модели дестабилизирующее действие фосфата приблизительно в три раза больше, чем цитрата.
Обсуждение модели PLS В - фигура 18
Использование His при низком рН обладает небольшим или вредным действием (фигура 18 [б\) . Однако при использовании при
рН 5,2 или выше, His обеспечивает значимое увеличение стабильности (как измеряли по содержанию мономеров при SEC). Обсуждение модели PLS В - фигура 19
На фигуре 19 представлена характеристическая поверхность для Gly и Arg. Добавление обоих стабилизаторов при высоких концентрациях могло быть благоприятным для стабильности, но непрактичным в отношении тоничности. В этой модели Arg по-видимому является более мощным стабилизатором по сравнению с Gly, так как концентрация 75 мМ Arg обладает таким же действием, как "120 мМ Gly. Модель демонстрирует что хорошо функционирует любой один из них, или что также эффективной является комбинация.
Обсуждение модели PLS В - фигура 2 0
Модель PLS В демонстрирует незначительное влияние маннита на стабильность, тогда как PS 80 является эффективным стабилизатором при концентрациях, превышающих приблизительно 0,05% (фигура 20) . Таким образом, из этих данных можно сделать заключение, что стабильный состав при рН 5,2 может содержать 240 мМ маннит и 0,1% PS 80.
Обсуждение модели PLS В - фигура 21
Во всем проекте выявлено, что NaCl является дестабилизатором адалимумаба, особенно когда его концентрация достигает 100 мМ или более, как показано на этой характеристической поверхности (фигура 21). Хотя тестировали только небольшое количество составов, содержащих ЭДТА, по-видимому этот эксципиент являлся дестабилизирующим, если концентрация не составляла "0,1%. Авторы также отмечают, что действие Met было благоприятным в отношении стабильности, но не доказано, что это являлось достоверным действием, вероятно ввиду относительно небольшого количества анализируемых примеров.
Обсуждение модели PLS В - фигура 22
Последняя характеристическая поверхность для модели PLS В для рассмотрения представляет собой действие сукцината и His (фигура 22) . Модель включает все значимые взаимодействия буфер-буфер. Эта поверхность демонстрирует, что сукцинат сам по себе обладает небольшим или даже вредным действием (см. передний край
диаграммы). Однако подтверждено, что в сочетании с His он увеличивает общую стабильность (например, см. задний край поверхности). Таким образом, по-видимому, буферная система His-сукцинат является наиболее подходящей из всех тестируемых до настоящего времени комбинаций буферов. Третья модель PLS (модель PLS С)
В третьей модели PLS С в качестве конечного критерия использовали различия в проценте чистоты при ВЭЖХ с ОФ в tl. В модели использовали две PC, и ее коэффициент корреляции для калибровочного набора составлял 0,86, а значение г для валидационного набора составляло 0,67. Она представляла собой квадратичную модель, включающую элементы взаимодействия рН-буфер и буфер-буфер. В отношении качества модели, она является очень сходной с предыдущей моделью.
ТАБЛИЦА L
КОЭФФИЦИЕНТЫ КОРРЕЛЯЦИИ "МОДЕЛИ PLS С"
Фактор
Значение х
-0,115
белок
-0,139
цитрат
+0,014
фосфат
+0,084
сукцинат
-0,051
гистидин
-0,075
ацетат
+0,159
глицин
-0,096
аргинин
-0,045
сорбит
+0,029
трегалоза
+0,020
маннит
-0,060
NaCl
+0,068
F68
-0,047
PS 20
-0,067
PS 80
-0,028
ЭДТА
+0,099
Met
-0,015
Модель PLS С демонстрирует, что ВЭЖХ индикатором стабильности, даже несмотря чувствительность может быть меньше, чем для
с ОФ является на то, что SEC. В модели
выявлено, что и фосфат, и цитрат являются дестабилизирующими, где действие фосфата является статистически значимым (таблица LI) . Подобным образом, ацетат является сильным дестабилизатором, как и ЭДТА. Продемонстрировано, что Gly и Arg являются стабилизаторами, но это действие не признано статистически значимым. Выявлено, что только His является значимым стабилизатором (вместе с концентрацией белка). Обсуждение модели PLS С - фигура 2 3
На фигуре 23 [11] приведена характеристическая поверхность для цитрата и фосфата при рН 5,2. Оба буфера являются дестабилизирующими (в соответствии с передним и левым краями диаграммы). При концентрациях выше "10 мМ комбинация становится в достаточной степени дестабилизирующей. В целом, рассчитано, что в этой модели фосфат является более дестабилизирующим (фигура 11).
Обсуждение модели PLS С - фигура 2 4
Как видно в предыдущей модели, стабильность адалимумаба при снижении рН менее 5,0 уменьшается (фигура 12) . В этой модели стабилизирующее действие His наблюдают для всех значений рН, но более отчетливо, когда рН является меньшим.
Обсуждение модели PLS С - фигура 2 5
На фигуре 25 представлено действие Gly и Arg. Оба эксципиента снижают потерю чистоты по мере роста концентрации и теоретически рассчитано, что они являются приблизительно равносильными, как оценивали по наклону вдоль краев характеристической поверхности. В остальном для достижения оптимальной потери чистоты (синяя область диаграммы) по-видимому необходимо брать меньше Arg (75 мМ), чем Gly ("200 мМ).
Обсуждение модели PLS С - фигура 2 6
На характеристической поверхности на фигуре 26 [14] представлено действие маннита и PS 80. Понятно, что при добавлении PS 8 0 значительно увеличивается химическая стабильность, особенно при концентрациях более 0,04%. В то же время маннит также является стабилизирующим, но даже 24 0 мМ маннит обладает меньшим действием, чем небольшое количество поверхностно-активного вещества.
Обсуждение модели PLS С - фигура 2 7
Хотя полагают, что маннит в составе хумиры(r) является стабилизатором, NaCl очевидно является дестабилизатором и в этой модели (см. фигура 27 [15]), и в предыдущих моделях PLS. Действие существенно, когда концентрация NaCl превосходит 75 мМ или приблизительно.
Обсуждение модели PLS С - фигура 2 8
На фигуре 28[16], описывающей действие рН и концентрации белка, представлена последняя характеристическая поверхность для модели PLS С. Как можно было видеть ранее, стабильность является лучшей, когда рН превосходит 4,8 или 5,0. В отношении действия белка эта модель прогнозирует, что стабильность на основе ВЭЖХ с ОФ является лучшей при более высоких концентрациях белков. Сходную тенденцию, хотя и достаточно слабую, наблюдали для данных SEC (содержание мономеров при tl и t2) . Таким образом, при концентрациях 100 мг/мл можно достигать профили стабильности сходные, с теми, которые можно получать при 50 мг/мл.
ОБОБЩЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ДЛЯ БЛОКОВ А-Н
В исследованиях составов в блоках А-Н оценивали составы адалимумаба, хранимые при повышенных температурах и содержащиеся в течение одной недели при 4 0°С или в течение двух недель при 25°С. Стабильность проверяли с использованием SEC, ВЭЖХ с ОФ, cIEF и CE-SDS.
Оптимальным рН по-видимому является 5,2±0,2. Из всех протестированных буферных композиций комбинация цитрат-фосфат является хуже почти любой другой анализируемой буферной системы, таким образом, важным аспектом настоящего изобретения является полный отказ от этой комбинированной буферной системы. Наилучшим единственным буфером по-видимому является His, хотя буфер His-сукцинат также обеспечивает очень хорошую стабильность. Даже не содержащие буфера системы, которые основаны на способности белка буферировать состав, по-видимому обладают приемлемыми профилями стабильности в условиях форсированной нагрузки.
Из всех анализируемых стабилизаторов/регуляторов
тоничности, очень хорошую стабилизацию адалимумаба демонстрируют Arg и Gly. Оба они функционируют лучше маннита. Маннит по
видимому является стабилизатором, однако авторы выявили, что если его использовать, он должен присутствовать в наибольшей возможной концентрации, но в любом случае, превосходящей приблизительно 150 мМ, а наиболее предпочтительно приблизительно 200 мМ или более. При сравнении NaCl явно является дестабилизатором, особенно когда концентрации превосходят 75-100 мМ; таким образом, NaCl, если присутствует, следует регулировать до уровней, ниже приблизительно 7 5 мМ. Другие полиолы, такие как сорбит и трегалоза, по-видимому, функционируют приблизительно также, как и маннит и, таким образом, ими при желании можно заменять маннит.
Неожиданно полисорбат 8 0 (PS 80) обеспечивает значимую защиту против термического стресса. Хотя механизм стабилизации неизвестен, выявлено, что другие тестируемые поверхностно-активные вещества (PS 2 0 и F-68), не являются приблизительно такими же эффективными, как PS 80. Таким образом, выбор PS80 вместо PS 2 0 является предпочтительным признаком настоящего изобретения. Составы по настоящему изобретению предпочтительно содержат по меньшей мере 0,04% (масс./об.) PS 80.
На основе изысканий в исследованиях составов блоков А-Н далее представлены особенно предпочтительные составы адалимумаба по настоящему изобретению.
ТАБЛИЦА М
5,2
240
0,1
5,2
160
0,1
5,2
100
0,1
5,2
120
0,1
5,4
120
0,1
5,2
120
0,01
5,2
240
0, 02
Дополнительные компоненты предоставляемых фармацевтических композиций
Составы по изобретению также могут содержать другие буферы (если они конкретно не исключены в описании конкретных вариантов осуществления изобретения) , регуляторы тоничности, эксципиенты, фармацевтически приемлемые носители и другие общепринятые неактивные ингредиенты фармацевтических композиций.
Регулятор тоничности представляет собой молекулу, которая вносит вклад в осмоляльность раствора. Осмоляльность фармацевтической композиции предпочтительно регулируют для максимизации стабильности активного ингредиента и/или для минимизации дискомфорта пациента при введении. Как правило, предпочтительно, чтобы фармацевтическая композиция являлась изотоничной с сывороткой, т.е. имела такую же или сходную осмоляльность, которую достигают добавлением регулятора тоничности.
В предпочтительном варианте осуществления осмоляльность предоставляемых составов составляет приблизительно от 180 до приблизительно 42 0 мОсм. Однако следует понимать, что осмоляльность может быть выше или ниже в зависимости от требований конкретных условий.
Примеры регуляторов тоничности, подходящих для регуляции осмоляльности, в качестве неограничивающих примеров включают аминокислоты (исключая аргинин) (например, цистеин, гистидин и глицин), соли (например, хлорид натрия или хлорид калия) и/или сахара/полиолы (например, сахарозу, сорбит, мальтозу и лактозу).
В предпочтительном варианте осуществления концентрация регулятора тоничности в составе предпочтительно составляет приблизительно от 1 мМ до приблизительно 1 М, более
предпочтительно приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 00 мМ. Регуляторы тоничности хорошо известны в данной области и их производят известными способами, и они доступны у коммерческих поставщиков.
В композициях по изобретению могут присутствовать подходящие регуляторы тоничности, если они конкретно не исключены в описании конкретных вариантов осуществления изобретения.
Также в фармацевтическую композицию можно добавлять эксципиенты, также обозначаемые как химические добавки, совместно растворяющиеся вещества или сорастворители, которые стабилизируют полипептид в растворе (а также в сухой или замороженной формах). Эксципиенты хорошо известны в данной области, и их производят известными способами, и они доступны у коммерческих поставщиков.
Примеры подходящих эксципиентов в качестве неограничивающих
примеров включают сахара/полиолы, такие как: сахароза, лактоза,
глицерин, ксилит, сорбит, маннит, мальтоза, инозитол, трегалоза,
глюкоза; полимеры, такие как: сывороточный альбумин (бычий
сывороточный альбумин (BSA), SA человека или рекомбинантный НА),
декстран, PVA, гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС),
полиэтиленимин, желатин, поливинилпирролидон (PVP),
гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС); неводные растворители, такие как: многоатомные спирты, (например, PEG, этиленгликоль и глицерин), диметилсульфоксид (DMSO) и диметилформамид (DMF); аминокислоты, такие как: пролин, L-серин, глутамат натрия, аланин, глицин, гидрохлорид лизина, саркозин и гамма-аминомасляная кислота; поверхностно-активные вещества, такие как: Tween(r)-80 (полисорбат 80), Tween(r)-20 (полисорбат 20), SDS, полисорбаты, полоксамеры и различные эксципиенты, такие как: фосфат калия, ацетат натрия, сульфат аммония, сульфат магния, сульфат натрия, N-оксид триметиламина, бетаин, CHAPS, монолаурат, 2-О-бета-манноглицерат или любую комбинацию из указанного выше.
В композициях по изобретению могут присутствовать подходящие эксципиенты, если они конкретно не исключены в описании конкретных вариантов осуществления изобретения.
Концентрация одного или нескольких эксципиентов в составе по изобретению предпочтительно составляет приблизительно от 0,001 до 5 массовых процентов, более предпочтительно приблизительно от 0,1 до 2 массовых процентов.
В другом варианте осуществления изобретение относится к
способу лечения млекопитающего, включающему введение
млекопитающему терапевтически эффективного количества
фармацевтических композиций по изобретению, где у млекопитающего может присутствовать заболевание или нарушение, которые можно эффективно лечить адалимумабом.
В предпочтительном варианте осуществления млекопитающее представляет собой человека.
Заболевания или нарушения, которые можно лечить предоставляемыми композициями, в качестве неограничивающих примеров включают ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит, болезнь (гранулематоз) Вегенера, болезнь Крона (или воспалительное заболевание кишечника), хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), гепатит С, эндометриоз, астму, кахексию, псориаз и атопический дерматит. Дополнительные заболевания или нарушения, которые можно лечить композициями по настоящему изобретению, включают заболевания, описанные в патентах США №№ 6090382 и 8216583, соответствующие части которых включены в настоящий документ в качестве ссылки.
Предоставляемые фармацевтические композиции можно вводить нуждающемуся в лечении индивидууму посредством системной инъекции, например, посредством внутривенной инъекции; или посредством инъекции или нанесения на соответствующий участок, например, посредством прямой инъекции или прямого нанесения на участок, когда участок доступен при хирургическом вмешательстве; или посредством местного применения.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к способу лечения и/или профилактики ревматоидного артрита, включающему введение нуждающемуся в этом млекопитающему терапевтически эффективного количества одной из предоставляемых композиций адалимумаба.
Способы лечения
Терапевтически эффективное количество адалимумаба в предоставляемых композициях зависит от состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, предшествующей терапии и истории болезни пациента и реакции на терапевтическое средство. Подходящую дозу можно регулировать по решению лечащего врача так, что ее можно вводить пациенту один раз или посредством нескольких введений.
В одном из вариантов осуществления эффективное количество адалимумаба на дозу для взрослого составляет приблизительно от 1-500 мг/м2, или приблизительно 1-200 мг/м2, или приблизительно 1-40 мг/м2 или приблизительно 5-25 мг/м2.
Альтернативно, можно вводить постоянную дозу, количество которой может находиться в диапазоне 2-500 мг/дозу, 2-100 мг/дозу или приблизительно 10-80 мг/дозу.
Если дозу следует вводить более одного раза в неделю, иллюстративный диапазон доз является таким же, как указанные выше диапазоны доз или менее, и ее предпочтительно вводят два или более раз в неделю с диапазоном доз 25-100 мг/дозу.
В другом варианте осуществления приемлемая доза для введения посредством инъекции содержит 80-100 мг/дозу или, альтернативно, содержит 80 мг на дозу.
Дозу можно вводить раз в неделю, раз в две недели или разделять несколькими неделями (например, от 2 до 8).
В одном из вариантов осуществления адалимумаб вводят в дозе
4 0 мг посредством одной подкожной (п/к) инъекции.
В некоторых случаях улучшения состояния пациента можно добиться посредством введения дозы фармацевтической композиции приблизительно до 100 мг от одного до трех раз в неделю в течение периода по меньшей мере трех недель. Для достижения желаемой степени улучшения может быть необходимым лечение в течение более длительных периодов. Для неизлечимых хронических состояний схему лечения можно продолжать бессрочно. Для пациентов детского возраста (возраст 4-17 лет) подходящая схема лечения может включать введение дозы адалимумаба от 0,4 мг/кг до
5 мг/кг один или несколько раз в неделю.
изобретению можно получать в виде нерасфасованного состава, и по существу, компоненты фармацевтической композиции присутствуют в количествах выше, чем может требоваться для введения, и их соответствующим образом разбавляют до введения.
Фармацевтические композиции можно вводить в виде одного терапевтического средства или в комбинации с дополнительными терапевтическими средствами по мере необходимости. Таким образом, в одном из вариантов осуществления предоставляемые способы лечения и/или профилактика используют в комбинации с введением терапевтически эффективного количества другого активного средства. Другое активное средство можно вводить до, в течение или после введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению. Другое активное средство можно вводить как часть предоставляемой композиции или, альтернативно, в виде отдельного состава.
Введение предоставляемых фармацевтических композиций можно
проводить различными способами, включая парентеральное,
пероральное, буккальное, назальное, ректальное,
интраперитонеальное, интрадермальное, трансдермальное,
подкожное, внутривенное, внутриартериальное, внутрисердечное,
внутрижелудочковое, внутричерепное, внутритрахеальное,
интратекальное введение, внутримышечную инъекцию,
внутривитреальную инъекцию и местное введение.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению особенно пригодны для парентерального введения, т.е. подкожно, внутримышечно, внутривенно, интраперитонеально, в спинной мозг, в суставы, интрасиновиально и/или интратекально. Парентеральное введение можно проводить посредством болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Фармацевтические композиции для инъекций могут находиться в стандартной лекарственной форме, например, в ампулах или в контейнерах с несколькими дозами с добавленным консервантом. Кроме того, разработан ряд недавних подходов к доставке лекарственного средства и, фармацевтические композиции по настоящему изобретению подходят для введения этими новыми способами, например, Inject-ease(r), Genject(r), ручки-инжекторы, такие как GenPen(r), и безыгольные устройства, такие как
MediJector(r) и BioJector(r). Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению также можно адаптировать для еще не открытых способов введения. Также см. Langer, 1990, Science, 249:1527-1533.
Предоставляемые фармацевтические композиции также можно формулировать в качестве депо-препарата. Такие длительно действующие составы можно вводить посредством имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или посредством внутримышечной инъекции. Таким образом, например, составы можно модифицировать с использованием подходящих полимерных или гидрофобных материалов (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменных смол, или в виде умеренно растворимых производных, например, в виде умеренно растворимой соли.
Фармацевтические композиции при желании можно предоставлять во флаконе, упаковке или в устройстве-распределителе, которые могут содержать одну или несколько стандартных лекарственных форм, содержащих активный ингредиент. В одном из вариантов осуществления устройство-распределитель может содержать шприц, содержащий однократную дозу жидкого состава, готового к инъекции. Шприц может сопровождаться инструкцией по введению.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к набору или контейнеру, содержащим водную фармацевтическую композицию по изобретению. Концентрация полипептида в водной фармацевтической композиции может варьировать в широком диапазоне, но, ка правило, в пределах диапазона приблизительно от 0,05 до приблизительно 20000 микрограмм на миллилитр (мкг/мл) водного состава. Набор также может сопровождаться инструкциями по применению.
В дополнение к составам, указанным в исследованиях составов блоков А-Н, предоставлены приведенные ниже дополнительные примеры в качестве дополнительных вариантов осуществления изобретения, а также типичные варианты осуществления, которые включены в приложения А-С, которые следует понимать как часть описания.
ПРИМЕР 1
Стабилизированный состав адалимумаба (единственный буфер),
содержащий полиол; без поверхностно-активного вещества
Стабильную водную фармацевтическую композицию, содержащую адалимумаб и по существу не содержащую поверхностно-активного вещества с использованием единственного буфера можно получать следующим образом:
Каждый твердый компонент состава можно навешивать до количества, требуемого для данного объема буфера состава. Затем эти компоненты можно комбинировать в стакан или колбу, в которых можно переносить и измерять данный объем буфера состава. В стакан можно добавлять объем деионизированной воды, равный приблизительно Ч планируемого данного буфера состава, и компоненты можно растворять с использованием магнитной мешалки. рН буфера можно доводить до планируемого рН состава с использованием 1 молярного гидроксида натрия и/или 1 молярной соляной кислоты. Затем можно доводить объем до конечного объема буфера состава посредством добавления деионизированной воды. Затем после конечного добавления воды раствор можно перемешивать магнитной мешалкой. Затем раствор адалимумаба можно помещать в устройство для диализа (такое как Thermo Scientific Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Unit 10000 MWCO), которое затем можно помещать в контакт с желаемым буфером состава на срок 12 часов при 4°С. Отношение объема буфера состава к объему раствора белка должно составлять не менее 1000:1. Затем устройство для диализа и раствор белка, который оно содержит, можно помещать во второй буфер состава равного объема на дополнительные 12 часов при 4°С.
Затем полученный раствор адалимумаба можно забирать из устройства для диализа и затем можно определять концентрацию адалимумаба с использованием спектроскопии в ультрафиолетовом свете. Затем концентрацию адалимумаба можно доводить до желаемого уровня с использованием центрифугирования (например, Amicon Ultra 10,000 MWCO Centrifugal Concentrators) и/или разбавляя буфером состава.
В таблице 1 ниже представлен образец композиции по изобретению:
Таблица 1
Ингредиент
концентрация
Адалимумаб (активный ингредиент)
50 мг/мл
Маннит (неактивный ингредиент)
Цитрат (рН 5,2) (единственный буфер)
15 мМ
Композиция, описанная в таблице 1, не содержит комбинации цитратного и фосфатного буферов. Она также не требует присутствия поверхностно-активного вещества.
ПРИМЕР 2
Стабилизированный состав адалимумаба (единственный буфер) без полиола или поверхностно-активного вещества
Стабилизированный состав адалимумаба (единственный буфер), содержащий полиол без поверхностно-активного вещества
Ингредиент
концентрация
Адалимумаб (активный ингредиент)
50 мг/мл
Маннит (неактивный ингредиент)
Цитрат (рН 5,2)
15 мМ
Композиции из примеров 2 и 3 обладают долговременной стабильностью и не содержат комбинации цитратного и фосфатного буферов, и не требуют присутствия поверхностно-активного вещества.
ПРИМЕР 4
Стабилизированный состав адалимумаба (единственный буфер), содержащий поверхностно-активное вещество; без полиола
Ингредиент
концентрация
Адалимумаб (активный ингредиент)
50 мг/мл
(Без ингредиента полиола)
Сукцинатный буфер (рН 5,2) (единственный буфер)
20 мМ
Глицин (стабилизатор)
120 мМ
Аргинин (стабилизатор)
100 мМ
Полисорбат 8 0
0,1 (% масс.) (масс./об.)
Ингредиент
концентрация
Адалимумаб (активный ингредиент)
50 мг/мл
(Без ингредиента полиола)
Сукцинатный буфер (рН 5,2) (единственный буфер)
10 мМ
Глицин (стабилизатор)
50 мМ
Аргинин (стабилизатор)
130 мМ
Полисорбат 8 0
0,1 (% масс.) (масс./об.)
Композиции, описанные в примерах 4(a)-4(f) выше
обеспечивают стабильность без необходимости в полиоле и без
необходимости в комбинированной буферной системе. Поскольку в
настоящем изобретении выявлено, что комбинация
цитратного/фосфатного буферов, необходимая в патенте США 8216583 не требуется для стабилизации составов адалимумаба по настоящему изобретению, специалисты в данной области при практическом осуществлении примеров 4(a)-4(f) могут понять, что в комбинации с гистидиновым и сукцинатным буферами, описываемыми в настоящем документе, можно использовать дополнительные буферы (например, ацетатный, цитратный, малеатный, тартратный и фосфатный буферы); при условии, что в составе не будет использована комбинация цитратного и фосфатного буферов.
ПРИМЕР 5
Стабилизированный состав адалимумаба (единственный буфер), содержащий поверхностно-активное вещество и полиол
Указанное выше описание иллюстративных вариантов осуществления изобретения в исследованиях блоков А-Н, в примерах выше и в приложениях А-С предоставлено только с целью иллюстрации и описания и не предназначено для полного охвата или ограничения изобретения определенными описанными формами. Учитывая приведенные выше указания возможно множество модификаций и вариаций.
Специалистам в данной области на основании обсуждения описания и практического осуществления описываемого в настоящем документе изобретения очевидны другие варианты осуществления изобретения. Следует понимать, что описание и примеры следует рассматривать исключительно как иллюстративные с точным объемом и сущностью изобретения, указанными в приведенной ниже формуле изобретения.
Приложение А
Дополнительные типичные варианты осуществления (Описаны в приоритетной заявке USSN 61/698138)
A. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол, поверхностно-активное вещество и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанный буфер не содержит цитрата и фосфата.
B. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и поверхностно-активное вещество, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит буфера.
C. Композиция по любому из вариантов осуществления А-В, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
D. Композиция по любому из вариантов осуществления А-С, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
E. Композиция по любому из вариантов осуществления A-D, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 30 до приблизительно 50 мг/мл.
F. Композиция по любому из вариантов осуществления А-Е, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
G. Композиция по любому из вариантов осуществления A-F, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
H. Композиция по любому из вариантов осуществления A-G, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
I. Композиция по любому из вариантов осуществления A-G, где
указанное поверхностно-активное вещество представляет собой
полисорбат.
J. Композиция по варианту осуществления I, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
К. Композиция по любому из вариантов осуществления A-J, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
L. Композиция по варианту осуществления К, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
М. Композиция по варианту осуществления L, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
N. Композиция по любому из вариантов осуществления L-M, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до б% масс./об. общей композиции.
О. Композиция по любому из вариантов осуществления L-N, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до 5% масс./об. общей композиции.
Р. Композиция по любому из вариантов осуществления А-О, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
Q. Композиция по варианту осуществления Р, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
R. Композиция по варианту осуществления Р, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
S. Композиция по варианту осуществления Р, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
Т. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит фосфата.
U. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно
от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит поверхностно-активного вещества.
V. Композиция по варианту осуществления U, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
W. Композиция по любому из вариантов осуществления U-V, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
X. Композиция по любому из вариантов осуществления U-V, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
Y. Композиция по любому из вариантов осуществления U-Y, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
Z. Композиция по любому из вариантов осуществления U-Y, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
АА. Композиция по любому из вариантов осуществления U-Z, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
ВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления U-AA, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
СС. Композиция по варианту осуществления ВВ, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
DD. Композиция по варианту осуществления СС, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
ЕЕ. Композиция по любому из вариантов осуществления CC-DD, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от
2 до б% масс./об. общей композиции.
FF. Композиция по любому из вариантов осуществления СС-ЕЕ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от
3 до 5% масс./об. общей композиции.
GG. Композиция по любому из вариантов осуществления CC-FF, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы,
состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
НН. Композиция по варианту осуществления GG, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
II. Композиция по варианту осуществления GG, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
JJ. Композиция по варианту осуществления GG, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
КК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. и цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит поверхностно-активного вещества.
LL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, буфер, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
ММ. Композиция по варианту осуществления LL, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
NN. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-MM, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
00. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-NN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
PP. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-00, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
QQ. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-PP, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
RR. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-QQ, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
SS. Композиция по варианту осуществления LL, где указанный стабилизатор выбран из группы, состоящей из аминокислот, солей, ЭДТА и иона металла.
ТТ. Композиция по варианту осуществления SS, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина и аргинина.
варианту осуществления ТТ, где указанный концентрации приблизительно от 2 0 до
варианту осуществления W, где указанный концентрации приблизительно от 5 0 до
варианту осуществления SS, где указанный концентрации приблизительно от 1 до
варианту осуществления XX, где указанный концентрации приблизительно от 2 0 до
варианту осуществления YY, где указанный концентрации приблизительно от 2 0 до
UU. Композиция по варианту осуществления SS, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
W. Композиция по глицин находится в приблизительно 2 00 мМ.
WW. Композиция по глицин находится в приблизительно 2 00 мМ.
XX. Композиция по аргинин находится в приблизительно 250 мМ.
YY. Композиция по аргинин находится в приблизительно 2 00 мМ.
ZZ. Композиция по аргинин находится в приблизительно 100 мМ.
AAA. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ.
ВВВ. Композиция по варианту осуществления AAA, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 14 0 мМ.
ССС. Композиция по варианту осуществления ВВВ, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 75 до приблизительно 125 мМ.
DDD. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный сульфат натрия находится в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ.
ЕЕЕ. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 12 0 мМ.
FFF. Композиция по варианту осуществления ЕЕЕ, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 60 до приблизительно 100 мМ.
GGG. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-FF, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
ННН. Композиция по варианту осуществления GGG, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
III. Композиция по варианту осуществления ННН, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
JJJ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, глицин в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 2 00 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
ККК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, аргинин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
LLL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации
приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
МММ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
NNN. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол, поверхностно-активное вещество, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла, и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрат и малеат, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 6.
ООО. Композиция по варианту осуществления NNN, где буфер не содержит комбинации цитрата и фосфата.
РРР. Композиция по варианту осуществления NNN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
QQQ. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-РРР, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
RRR. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-QQQ, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
SSS. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-RRR, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
SSS, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
UUU. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-ТТТ, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
VW. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-UUU, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
WWW. Композиция по варианту осуществления VW, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
XXX. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-WWW, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
YYY. Композиция по варианту осуществления XXX, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
ZZZ. Композиция по варианту осуществления XXX, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
7А7А7А7А. Композиция по любому из вариантов осуществления XXX-ZZZ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до б% масс./об. общей композиции.
ВВВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления YYY-7А7А7А7А, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до 5% масс./об. общей композиции.
СССС. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-ВВВВ, где указанный стабилизатор представляет собой ЭДТА.
DDDD. Композиция по варианту осуществления СССС, где указанный ЭДТА находится в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,5%.
ЕЕЕЕ. Композиция по варианту осуществления DDDD, где указанный ЭДТА находится в концентрации приблизительно от 0,05% до приблизительно 0,25%.
FFFF. Композиция по варианту осуществления ЕЕЕЕ, где указанный ЭДТА находится в концентрации приблизительно от 0,08% до приблизительно 0,2%.
ВВВВ, где указанный стабилизатор представляет собой метионин.
НННН. Композиция по варианту осуществления GGGG, где указанный метионин находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл.
IIII. Композиция по варианту осуществления GGGG, где указанный метионин находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 5 мг/мл.
JJJJ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., ЭДТА в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,5%, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5.
КККК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., метионин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5.
LLLL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно 3,5.
ММММ. Композиция по варианту осуществления LLLL, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
NNNN. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-ММММ, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
NNNN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
РРРР. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-ОООО, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
QQQQ- Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-РРРР, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
RRRR. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-QQQQ/ где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
SSSS. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-RRRR, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
ТТТТ. Композиция по варианту осуществления SSSS, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
UUUU. Композиция по варианту осуществления ТТТТ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об. общей композиции.
WW. Композиция по любому из вариантов осуществления ТТТТ-UUUU, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до приблизительно б% масс./об. общей композиции.
WWWW. Композиция по любому из вариантов осуществления ТТТТ-WW, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до приблизительно 5% масс./об. общей композиции.
ХХХХ. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-
WWWW, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из
группы, состоящей из аминокислот, солей,
этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
YYYY. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
ZZZZ. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и
сульфата натрия.
ААААА. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
ВВВВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления ТТТТ-ААААА, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
ССССС. Композиция по варианту осуществления ВВВВВ, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
DDDDD. Композиция по варианту осуществления ССССС, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80. Приложение В
Дополнительные типичные варианты осуществления (Описаны в приоритетной заявке USSN 61/770421)
A. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол, поверхностно-активное вещество и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанный буфер не содержит цитрата и фосфата.
B. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и поверхностно-активное вещество, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит буфера.
C. Композиция по любому из вариантов осуществления А-В, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
D. Композиция по любому из вариантов осуществления А-С, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
E. Композиция по любому из вариантов осуществления A-D, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 30 до приблизительно 50 мг/мл.
F. Композиция по любому из вариантов осуществления А-Е, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ
C.
до приблизительно 50 мМ.
G. Композиция по любому из вариантов осуществления A-F, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
H. Композиция по любому из вариантов осуществления A-G, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
I. Композиция по любому из вариантов осуществления А-Н, где
указанное поверхностно-активное вещество представляет собой
полисорбат.
J. Композиция по варианту осуществления I, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
К. Композиция по любому из вариантов осуществления A-J, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
L. Композиция по варианту осуществления К, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
М. Композиция по варианту осуществления L, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
N. Композиция по любому из вариантов осуществления L-M, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до б% масс./об. общей композиции.
О. Композиция по любому из вариантов осуществления L-N, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до 5% масс./об. общей композиции.
Р. Композиция по любому из вариантов осуществления А-О, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
Q. Композиция по варианту осуществления Р, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
R. Композиция по варианту осуществления Р, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
S. Композиция по варианту осуществления Р, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
Т. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., полисорбат 8 0 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ и цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит фосфата.
U. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, гистидина, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит поверхностно-активного вещества.
V. Композиция по варианту осуществления U, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
W. Композиция по любому из вариантов осуществления U-V, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
X. Композиция по любому из вариантов осуществления U-W, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
Y. Композиция по любому из вариантов осуществления U-X, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
Z. Композиция по любому из вариантов осуществления U-Y, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
АА. Композиция по любому из вариантов осуществления U-Z, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
ВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления U-AA, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
СС. Композиция по варианту осуществления ВВ, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
DD. Композиция по варианту осуществления СС, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
ЕЕ. Композиция по любому из вариантов осуществления CC-DD, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от
2 до б% масс./об. общей композиции.
FF. Композиция по любому из вариантов осуществления СС-ЕЕ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от
3 до 5% масс./об. общей композиции.
GG. Композиция по любому из вариантов осуществления U-FF, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
НН. Композиция по варианту осуществления GG, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
II. Композиция по варианту осуществления GG, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
JJ. Композиция по варианту осуществления GG, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
КК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. и цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит поверхностно-активного вещества.
LL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, буфер, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла, и где рН указанной композиции
составляет приблизительно от 5 до приблизительно б, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
ММ. Композиция по варианту осуществления LL, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
NN. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-MM, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
00. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-NN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
PP. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-00, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
QQ. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-PP, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
RR. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-QQ, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
SS. Композиция по варианту осуществления LL, где указанный стабилизатор выбран из группы, состоящей из аминокислот, солей, ЭДТА и иона металла.
ТТ. Композиция по варианту осуществления ТТ, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина и аргинина.
UU. Композиция по варианту осуществления ТТ, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
W. Композиция по варианту осуществления ТТ, где указанный глицин находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 2 00 мМ.
WW. Композиция по варианту осуществления W, где указанный глицин находится в концентрации приблизительно от 5 0 до приблизительно 2 00 мМ.
XX. Композиция по варианту осуществления ТТ, где указанный
аргинин находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мМ.
YY. Композиция по варианту осуществления XX, где указанный аргинин находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 2 00 мМ.
ZZ. Композиция по варианту осуществления YY, где указанный аргинин находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мМ.
AAA. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ.
ВВВ. Композиция по варианту осуществления AAA, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 14 0 мМ.
ССС. Композиция по варианту осуществления AAA, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 75 до приблизительно 125 мМ.
DDD. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный сульфат натрия находится в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ.
ЕЕЕ. Композиция по варианту осуществления UU, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 12 0 мМ.
FFF. Композиция по варианту осуществления ЕЕЕ, где указанный хлорид натрия находится в концентрации приблизительно от 60 до приблизительно 100 мМ.
GGG. Композиция по любому из вариантов осуществления LL-FF, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
ННН. Композиция по варианту осуществления GGG, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
III. Композиция по варианту осуществления ННН, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
JJJ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, глицин в концентрации приблизительно
от 2 0 до приблизительно 2 00 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
ККК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, аргинин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
LLL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
МММ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, хлорид натрия в концентрации приблизительно от 5 до приблизительно 150 мМ, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до 50 мкМ, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит полиола.
NNN. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол, поверхностно-активное вещество, стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла, и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 6.
содержит комбинации цитрата и фосфата.
РРР. Композиция по варианту осуществления NNN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
QQQ. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-РРР, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
RRR. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-QQQ, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
SSS. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-RRR, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
ТТТ. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-SSS, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
UUU. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-ТТТ, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
VW. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-UUU, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
WWW. Композиция по варианту осуществления VW, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
XXX. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-WWW, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
YYY. Композиция по варианту осуществления XXX, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
ZZZ. Композиция по варианту осуществления YYY, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об. общей композиции.
7А7А7А7А. Композиция по любому из вариантов осуществления YYY-ZZZ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до б% масс./об. общей композиции.
АААА, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до 5% масс./об. общей композиции.
СССС. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-ВВВВ, где указанный стабилизатор представляет собой ЭДТА.
DDDD. Композиция по варианту осуществления СССС, где указанный ЭДТА находятся в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,5%.
ЕЕЕЕ. Композиция по варианту осуществления DDDD, где указанный ЭДТА находится в концентрации приблизительно от 0,05% до приблизительно 0,2 5%.
FFFF. Композиция по варианту осуществления ЕЕЕЕ, где указанный ЭДТА находится в концентрации приблизительно от 0,08% до приблизительно 0,2%.
GGGG. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-ВВВВ, где указанный стабилизатор представляет собой метионин.
НННН. Композиция по варианту осуществления GGGG, где указанный метионин находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл.
IIII. Композиция по варианту осуществления GGGG, где указанный метионин находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 5 мг/мл.
JJJJ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., ЭДТА в концентрации приблизительно от 0,01% до приблизительно 0,5%, цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5.
КККК. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, маннит в концентрации приблизительно от 1 до 10% масс./об., метионин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/мл,
цитрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5.
LLLL. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб, полиол и буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрата и малеата, где рН указанной композиции составляет приблизительно 3,5.
ММММ. Композиция по варианту осуществления LLLL, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл.
NNNN. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-ММММ, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 100 мг/мл.
ОООО. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-NNNN, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 4 0 мг/мл.
РРРР. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-0000, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
QQQQ- Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-РРРР, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
RRRR. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-QQQQ/ где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 10 мМ до приблизительно 2 0 мМ.
SSSS. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-RRRR, где указанный полиол представляет собой сахарный спирт.
ТТТТ. Композиция по варианту осуществления SSSS, где указанный сахарный спирт выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и трегалозы.
UUUU. Композиция по варианту осуществления ТТТТ, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об. общей композиции.
WW. Композиция по любому из вариантов осуществления ТТТТ-UUUU, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 2 до приблизительно б% масс./об. общей
композиции.
WWWW. Композиция по любому из вариантов осуществления ТТТТ-WW, где указанный маннит находится в концентрации приблизительно от 3 до приблизительно 5% масс./об. общей композиции.
ХХХХ. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-
WWWW, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из
группы, состоящей из аминокислот, солей,
этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
YYYY. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
ZZZZ. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия и сульфата натрия.
ААААА. Композиция по варианту осуществления ХХХХ, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
ВВВВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-AAAAA, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
ССССС. Композиция по варианту осуществления ВВВВВ, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
DDDDD. Композиция по варианту осуществления ССССС, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
ЕЕЕЕЕ. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ; полиол, выбранный из сорбита, маннита или трегалоза в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 10% масс./об., и по меньшей мере один аминокислотный стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из (а) аргинина в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мг/мл и (Ь) глицина в концентрации приблизительно от 2 0 до 2 00 мг/мл, и гистидиновый буфер или сукцинатный буфер в концентрации приблизительно от 5 мМ до
приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5.
FFFFF. Композиция по варианту осуществления ЕЕЕЕЕ, где полиол представляет собой сорбит, и композиция не содержит или по существу не содержит никакой комбинации цитратного/фосфатного буферов, и состав содержит аргинин или глицин, но не оба.
GGGGG. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 50 мкМ, аргинин в концентрации приблизительно от 1 до приблизительно 250 мг/мл, глицин в концентрации приблизительно от 2 0 до 2 00 мг/мл и гистидиновый буфер или сукцинатный буфер в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, и где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и указанная композиция не содержит или по существу не содержит полиола.
ННННН. Композиция по варианту осуществления GGGGG, где композиция не содержит или по существу не содержит никакой комбинации цитратного/фосфатного буферов.
Приложение С
Дополнительные типичные варианты осуществления (Описаны в приоритетной заявке USSN 61/769581)
A. Стабильная водная фармацевтическая композиция,
содержащая адалимумаб и единственный буфер.
B. Композиция по варианту осуществления А, где указанный
единственный буфер выбран из группы, состоящей из сукцината,
гистидина, цитрата, фосфата, тартрата и малеата.
C. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 6.
D. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, где указанный адалимумаб, содержащийся в указанных фармацевтических композициях теряет не более 2 0% своей активности относительно активности композиции в начале хранения.
C.
осуществления, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.
F. Композиция по варианту осуществления Е, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
G. Композиция по варианту осуществления F, где указанный полисорбат представляет собой полисорбат 80.
H. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, дополнительно содержащая полиол.
I. Композиция по варианту осуществления Н, где указанный
полиол представляет собой сахарный спирт.
J. Композиция по варианту осуществления I, где указанный сахарный спирт представляет собой сорбит.
К. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, дополнительно содержащая сахар.
L. Композиция по варианту осуществления К, где указанный сахар выбран из группы, состоящей из сахарозы и трегалозы.
М. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, где указанный адалимумаб находится в концентрации приблизительно от 20 до приблизительно 150 мг/мл.
N. Композиция по любому из предшествующих вариантов осуществления, где указанный буфер находится в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ.
О. Композиция по любому из вариантов осуществления A-N, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, солей, этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и иона металла.
Р. Композиция по варианту осуществления О, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, глутамата, аргинина и метионина.
Q. Композиция по варианту осуществления О, где указанный ион металла выбран из цинка, магния и кальция.
R. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 0,01% масс./об. до 0,5% масс./об. по массе всего состава и сукцинат в концентрации приблизительно от 5 мМ
до приблизительно 5 0 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
S. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 0,01% масс./об. до 0,5% масс./об. по массе всего состава и гистидин в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 50 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
Т. Стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая адалимумаб в концентрации приблизительно от 2 0 до приблизительно 150 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации приблизительно от 0,01% масс./об. до 0,5% масс./об. по массе всего состава и тартрат в концентрации приблизительно от 5 мМ до приблизительно 5 0 мМ, где рН указанной композиции составляет приблизительно от 5 до приблизительно 5,5, и где указанная композиция по существу не содержит никаких других буферов.
U. Способ лечения млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества композиции по любому из предшествующих вариантов осуществления, где указанное млекопитающее страдает заболеванием или нарушением, которое можно эффективно лечить адалимумабом.
V. Способ по варианту осуществления U, где указанное
заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из
ревматоидного артрита, псориатического артрита, анкилозирующего
спондилита, болезни (гранулематоза) Вегенера, болезни Крона (или
воспалительного заболевания кишечника), хронического
обструктивного заболевания легких (COPD), гепатита С, эндометриоза, астмы, кахексия, псориаза и атопического дерматита.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Водная фармацевтическая композиция содержащая:
(i) адалимумаб; и
(ii) ионный эксципиент;
Где композиция не содержит буфер, имеет рН от приблизительно 5 до приблизительно б, и является стабильной в течении одной недели при 4 0° С или двух недель при 2 5° С.
2. Композиция по п. 1 которая (1) не содержит полиол; или (2) не содержит поверхностно-активное вещество; или (3) не содержит полиол и не содержит поверхностно-активное вещество.
3. Композиция по п.1, где ионный эксципиент содержит стабилизатор.
4. Композиция по п.1, где ионный эксципиент содержит аминокислоту.
5. Композиция по п. 4, где аминокислота выбрана из глицина, аланина, глутамина, аргинина, метионина, серина, лизина, пролина и их комбинаций.
6. Композиция по п. 4, где аминокислота представляет собой глицин, аргинин или их комбинацию.
7. Композиция по п.1, где ионный эксципиент содержит соль.
8. Композиция по п. 7, где соль выбрана из натрия хлорида натрия сульфата.
9. Композиция по п.1, где композиция имеет осмоляльность от приблизительно 180 до 42 0 мОсм; композиция подходит для введения субъекту в виде одной дозы; композиция имеет концентрацию адалимумаба в интервале от 30 до приблизительно 50 мг/мл; доза содержит приблизительно от 10 до 8 0 мг адалимумаба.
10. Композиция по п.9, где ионный эксципиент содержит соль.
11. Композиция по п.9, где ионный эксципиент содержит аминокислоту.
12. Композиция по п.9, где ионный эксципиент представляет собой аргинин и натрия хлорид.
13. Композиция по п. 9, где ионный эксципиент представляет собой глицин и натрия хлорид.
14. Композиция по п. 9, не содержит поверхностно-активное вещество и полиол.
15. Композиция по п.9, где доза составляет приблизительно 4 0 мг и обеспечивает уменьшение боли при введении субъекту по сравнению с композицией адалимумаба, имеющей буфер, содержащий цитрат.
10.
16. Композиция по п.9, где концентрация адалимумаба составляет приблизительно 50 мг/мл, и доза составляет приблизительно 4 0 мг адалимумаба.
17. Композиция по п. 7, где композиция содержит аминокислоту.
18. Композиция по п.17, где композиция (1) не содержит полиол; или (2) не содержит поверхностно-активное вещество; или (3) не содержит полиол и не содержит поверхностно-активное вещество.
19. Композиция по п.17, где композиция имеет осмоляльность от приблизительно 180 до 42 0 мОсм; композиция подходит для введения субъекту в виде одной дозы; композиция имеет концентрацию адалимумаба в интервале от 30 до приблизительно 50 мг/мл; доза содержит приблизительно от 10 до 8 0 мг адалимумаба.
20. Композиция по п.19, где концентрация адалимумаба составляет приблизительно 50 мг/мл и доза составляет приблизительно 4 0 мг адалимумаба.
По доверенности
О ш
ш о
CL Ф
I о
99.0 i
98.83
98.84
99.19
98.95
98.91
98.49
zr о
98.5
98.37
98.0 4-цитрат/фосфат
"i 1 ' г ' ' 1 ' ' г " •;" г" ¦" "' ,к 1"
цитрат фосфат сукцинат гистидин тартрат малеат
96.19
96.24 96.23
96.21
CL ГО
н о
сЗ 1Г
96.0
96.12
95.91
95.5
95.0
цитрат/фосфат
цитрат фосфат сукцинат гистидин тартрат малеат
Действие цитрата/фосфата (модель PLS 1)
5.285 98_302 98.319 98.336 98.353 98370
Характеристическая поверхность
Ц 10 и
'15
~ -'--.-.-.-• " "
10 о
Результат8, PC: 1, Y-переменная t1 SEC, (Х-переменная = значение):
рН tO = 5 2000, сукцинат= 0.0000,(tm)стидин= 0.0000, тартрат= 0.0000, малеат = 0 0000, ацетат
Действие цитрата/фосфата (модель PLS 2)
98.882
98.902 . 98.92Т
98.941
98.960
!.980
Характеристическая поверхность
О 4
т ¦ '10 Р
15 \
20 "\
LB-140 БЛОКИ В.., PC: 1, рН Ю = 5.2000, сукцинат = 0.0000, гистидин= 0.0000, ацетат= 0.0000, глицин = 0.ОООС
У-переменная^2 SEC, (Х-переменная)
•4?
щ у
20 "Д^±^РР?^^: .-^х
fJO°0,
*°-000n ^ °°
> e> r.
Дейс
¦ 6
ФИГ
ИТдЫ
По ~ Юн -\
ФИГ. 7
Действие pH/His (модель PLS 1)
98.198 98J70 98.341 98.413 98.484 98.556
ЮМИВИМИВИВИИВИНИВ^^
Характеристическая поверхность
LB-140 блок ВС., PC: 1, Переменная Yt1 SEC, (Х-переменная = значение):
тартрат
цитрат - 0.0000, фосфат = 0.0000, сукцинат = 0.0000, = 0.0000, малеата 0.0000
ФИГ. 8
Действие pH/His (модель PLS 2)
98.833 98 872 . 91911 'Jo951 ч,;,ч90 ¦ 99,029
Характеристическая поверхность
и. 1(1
..35
5.40
5.45
0 5.10
5.15
5.20
LB-140 SEC t2 М..., PC: 1, Переменная Y t2 SEC, (Х-переменная = значение):
фосфат
цитрат= 0.0000, = 0.0000, сукцинат= 0.0000, глицин= 0.0000, аргинин = 0
98.879
ФИГ. 9
№.927
PLS 2)
98.943
ФИГ. 10
Действие маннита/РЭвО (модель PLS 1)
98 681 98 744 9,:,,:,iҐ, ч,: ц,-, 93; 98 995
¦ПИПППИППИПР^^ . шшттшшшшшт
Характеристическая поверхность
LB-140 блок В PC 1 Переменная Y t2 SEC, (Х-переменная = значение):
' ' фосфат
рН Ю = 5.2000, цитрат = 0.0000, = 0.0000, сукцинат = 0.0000, гистидин = 0.0000
ФИГ. 11
Действие маннита/NaCI (модель PLS 1)
98.213 98.254 98.295 98.335 98.376 98.417
мини"!""
Характеристическая поверхность
200
150 а 50
Результат 8, PC: 1, Переменная Y t1 SEC, (Х-переменная = значение):
фосфат
рНЮ = 5.2000, цитрат= 0.0000, =0
сукцинат= 0.0000,гистидин = 0.0000, тартрат= 0
ФИГ. 12 Действие ЭДТАШ (модель PLS 1)
98.287
98.380
98.473
Характеристическая поверхность U' &L
753
50.
40 ~~Х
" ЗП ""х .
е 20 \
' 10
p^(tm)^utw ^
п ььс, (Х-переменга^Т^^уг-
РН Ю = 5.2000, Цитрат, 0 00пп фосФат.
иww, =0.0000, сУЩтнат= Q 0000
гистидин: 0.0000, тартрат-о
ФИГ. 13
Действие цитрата и фосфата в соответствии с моделью PLS А с использованием в качестве конечного критерия различия содержания мономеров в t1. рН фиксирован на значении 5,2, а белок на 50 мг/мл.
0.713 1_008 1.302 1.597 1.892 2Д86
Характеристическая поверхность
Результат 2, PC: 3, Переменная Y Различие при SEC (Переменная X = Значение):
рН Ю = 5.2000, белок = 50.0000, сукцинат = 0.0000, гистидин= 0.0000, ацетат= 0.0000, глицин
ФИГ. 14
Действие рН и His в соответствии с моделью PLS А с использованием в качестве конечного критерия различия содержания мономеров в t1. Концентрация белка фиксирована на значении 50 мг/мл.
0.481 0.736 . 0.991" ' 1.246 1.502. ¦ 1.757
HIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIH ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦'~~~~-4mmmmmsmmi
Характеристическая поверхность
30 \ 25"
и Л с
5 "'x\^r^S^r^-----^ 5.0
" ¦ ^¦v> -^ <-- 4.8
(Г1*"" -4.6 е 1
0 Н Р
5.2
Результат2, PC: 3, Переменная Y Различие при SEC (Переменная X = Значение):
фосфат
белок = 50.0000, цитрат^ 0.0000, =0.0000, сукцинат= 0.0000, ацетат^ 0.0000, глицин
ФИГ. 15
Действие Gly и Arg в соответствии с моделью PLS А с использованием в качестве конечного критерия различия содержания мономеров в t1. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
0.190 0J95 0.399 0.504 0.608 0.713
Характеристическая поверхность
;" ¦
50 ¦ ' > \, -•"••,• . .
а --"-t- X X-.x^S ¦ ^ юо
Р ¦ -" <.> 4i^N/. ¦
¦ 2 ¦ 1 пп ~-- ' ' 150 ¦ н
¦ н. . .200
" 150~" ' г
Результат 2, PC: 3, Переменная Y Различие при SEC (Переменная X = Значение):
фосфат
рН ffl = 5.2000, белок = 50.0000, цитрат= 0.0000 = 0.0000, сукцинат= 0.0000,гистидин:
ФИГ. 16
Действие NaCl и полисорбата 80 (PS 80) в соответствии с моделью PLS А с использованием в качестве конечного критерия различия содержания мономеров в t1. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
0.445 0.563 0.680 0.797 0.915 1.032
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII МИНИ ППППЩППГППППЩЩГТТТГТГПТПТТГ- '"' шидшииииш
Характеристическая поверхность
150
С гн-
Результат 2, PC: 3, Переменная Y Различие при SEC (Переменная X = Значение):
фосфат
рНЮ = 5.2000, белок^ 50.0000, Цитрат^ 0.0000, = 0.0000, сукцинат^ 0.0000, гистидик
ФИГ. 17
Действие цитрата и фосфата в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в И и в t2. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
97.533 97 695 97 ..5р % Oil ч| 110 98.341
Характеристическая поверхность
1" > - ^ Ш
0 20 ---^ ХХУ 20 а m
0 25 ¦ ' • v; " 25 р
а 30 30 т
LB-140 PLS2 SEC..., PC: 4, Переменная Yt1 SEC, (ПеременнаяX = значение):
гистидин
рН Ю = 5.2000, белок = 50.0000, сукцинат= 0.0000, = 0.0000, ацетат = 0.С
ФИГ. 18
Действие рН и His в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в И и в t2. Концентрация белка фиксирована на 50 мг/мл.
98.154 98.264 98 374 98 485 98 595 98.705
Характеристическая поверхность
и 20 \ ¦ '";;'Яч
. т
15 х 10
а \ . --г-^-' 5.4
" (- -~~\ --"5.3
п .5.1 t °
0 5.0 Н 6
' . 5.5
LB-140 PLS2 SEC..., PC: 4, Переменная Y t1 SEC, (Переменная X = значение):
цитрат фосфат белок = 50,0000, = 0.0000, = 0.0000, сукцинат = 0,0000, ацетат = Q.00C
ФИГ. 19
Действие Arg и Gly в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в И и в t2. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
98.341 98.425 98 510 98 5'М 9-. 573 98.762
Характеристическая поверхность
150 _ - --^ - " . -. -
. Р
<ЛЛ ' <' "b~L Ч. - -----
1ии ^ хЗ <Х ^;> г ч"-'ч^-,-^. > :
Ч^Х^Хг^^Х^ ^- " 200
и ЮО ¦ . и
¦ н '~ч -" '"" .50 и
00 . а , Л
LB-140 PLS2 SEC PC 4 Переменная Y t1 SEC, (Переменная X = значение):
, цитрат фосфат
рН ffl = 5.2000, белок = 50.0000. = 0.0000, = 0.0000, сукцинат = 0 0(щ
ФИГ. 20
Действие PS 80 и маннита в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в И и в t2. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
98.339 98.436 98.534 98.632 ' '98.730 98.827
Характеристическая поверхность
0.10 Х" ¦ э 0.08 ^\ S 0.06
Villi
0 04" X X-'VVXVV^V^^^' 150 т
0.02 X X \ V^-~ < н
о ¦ ¦ "Х--- 50
о м
LB-140 PLS2 SEC PC 4 Переменная Y t1 SEC, (Переменная X = значение):
цитрат фосфат
рН Ю = 5.2000, белок = 50.0000, = 0.0000, = 0.0000, сукцинат = 0.0000,
ФИГ. 21
Действие ЭДТА и NaCl в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в t1 и в t2. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
97.729 97.852 97.974 98.096 98.219 98.341
Характеристическая поверхность
.. • ' . 0
н I
и2 ¦ Г""""оз" ¦ ' ^> г> х ^ с ''
¦ т. 0 5 150 N
LB-140 PLS2 SEC..., PC: 4, Переменная Y t1 SEC, (Переменная X = значение;
цитрат фосфат
рН ffl = 5.2000, белок = 50.0000, = 0.0000, = 0.0000, сукцинат, 0.0000,
ФИГ. 22
Действие сукцината и His в соответствии с моделью PLS В с использованием в качестве конечных критериев содержания мономеров в И и в t2. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
i.283
98.359 90435
98511
% 587
i.663
Характеристическая поверхность
30 . '"> , 25
15 т
LB-140 PLS2 SEC PC' 4 Переменная Y t1 SEC, (Переменная X = значение):
"' ' фосфат
рНЮ = 5.2000, белок = 50.0000, Цитрат= 0.0000, =0.0000, ацетату
ФИГ. 23
Действие фосфата и цитрата в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ОФ. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
0.172 0_204 ¦ 0.236- 0.267 0 299 ' 0 331
Характеристическая поверхность
Результат! 4, PC: 2, Переменная Y t1 Различие при ОФ (Переменная X = значение)
рН ffl = 5.2000, белок = 50.0000, сукцинат = 0 QQOO, ГИСТИДИН= 0 0(Щ ацетат = Q.0000, ГЛИЧИН
ФИГ. 24
Действие рН и His в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ВЭЖХ с ОФ. Концентрация белка фиксирована на 50 мг/мл.
0.163
0.275 0 Зоб
0 49о
и 610
1.721
Характеристическая поверхность
4.6
4.8
Р Н
Результат 14, PC: 2, Переменная Y t1 Различие при ОФ (Переменная X = значение)
цитрат фосфат
белок - 50.0000, = 0.0000, = 0.0000, сукцинат - 0.0000, ачетат - 0.0000, гличин
ФИГ. 25
Действие Arg и Gly в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ВЭЖХ с ОФ. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
-1.1988-03 3_351е-02 6.822е-02 0.103 0.138 0472
1|||||||||||||||||||||||1||||||||!|||№ЖЖЖЖЖШШШШ;, шшшшшшшш/шш
Характеристическая поверхность
а N1 Р
2 и
. н
Результат 14, PC: 2, Переменная Y t1 Различие при ОФ (Переменная X = значение)
цитрат фосфат
рН tO = 5.2000, белок= 50.0000, =0.0000, = 0.0000, сукцинат= 0.0000, гистидин
ФИГ. 26
Действие маннита и PS 80 в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ВЭЖХ с ОФ. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
-2.780е-03 3.225е-02 6.728е-02 0.102' ¦ 0.137 0472
Характеристическая поверхность
Результат 14, PC: 2, Переменная Y t1 Различие при ОФ (Переменная X = значение)
цитрат фосфат
рН tO = 5.2000, БЕЛОК= 50.0000, = 0.0000, = 0.0000, сукцинат= Q.0000. гистидин
ФИГ. 27
Действие PS 80 и NaCl в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ВЭЖХ с ОФ. рН фиксирован на значении 5,2, а концентрация белка на 50 мг/мл.
0.109 0.140 0.172 0.204 0.236 .0.267
¦пмппиппмиииишм^^ : шштШшшшшшша
Характеристическая поверхность
ФИГ. 28
Действие рН и концентрации белка в соответствии с моделью PLS С с использованием в качестве конечного критерия чистоты в t1 при ВЭЖХ с ОФ.
-0.328 -0166 -3.836е-03 0.158 0.320 0482
Характеристическая поверхность
50.
4.6
1TJ0 5,4 '¦ н р
Результат 7, PC: 2, Переменная Y t1 Различие при ОФ (Переменная X = значение)
фосфат гистидин
цитрат ~ 0.0000, = 0.0000,сукцинат = Q.0000, = 0.0000, ацетатz 0.0000, глицин
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ:
А61К 39/395 А61К 47/02 А61К 47/18 А61Р 35/00
(2006.01) (2006.01) (2017.01) (2006.01)
Согласно Международной патентной классификации (МПК) или национальной классификации и МПК
Б. ОБЛАСТЬ ПОИСКА:
Минимум просмотренной документации (система классификации и индексы МПК)
А61К 39/00, 39/395,47/00,47/02, 47/18, А61Р 35/00
Другая проверенная документация в той мере, в какой она включена в область поиска:
В. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
US 2009/0291062 Al (WILFGANG FRAUNHOFER et al.) 26.11.2009, реферат, [ООП], [0015], [0018], [0027]-[0028], [0160]-[0161], [0164], [0182], [0234]-[0258], [0265], [0596], [0599]-[0601], [0745]-[0759]
WARNE Nicholas W. Development of high concentration protein biopharmaceuticals: The use platform approaches in formulation development. European Journal of Pharmaceuticals and Biopharmaceutics 78 (2011) 208-212. реферат, таблица 1
1-20
1,2, 7, 8, 10, 14, 16, 18-20
последующие документы указаны в продолжении графы В бсобые категории ссылочных документов: "А" документ, определяющий общий уровень техники "Е" более ранний документ, но опубликованный на дату
подачи евразийской заявки или после нее "О" документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
"Р" документ, опубликованный до даты подачи евразийской
заявки, но после даты испрашиваемого приоритета "D" документ, приведенный в евразийской заявке
I I данные о патентах-аналогах указаны в приложении
''Т более поздний документ, опубликованный после даты
приоритета и приведенный для понимания изобретения "X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету
поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень,
взятый в отдельности
"Y" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету
поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с
другими документами той же категории
" &" документ, являющийся патентом-аналогом
"L" документ, приведенный в ДРУГИХ целях
Дата действительного завершения патентного поиска: 12 декабря 2017 (12.12.2017)
Наименование и адрес Международного поискового органа: Федеральный институт промышленной собственности
РФ, 125993,Москва, Г-59, ГСП-3, Бережковская наб., д. 30-1.Факс: (499) 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
(19)
(19)
(19)
(19)
(19)
ТАБЛИЦА D-5
ТАБЛИЦА Е
ТАБЛИЦА Е-2
ТАБЛИЦА Е-2
ТАБЛИЦА Е-3
ТАБЛИЦА Е-3
ТАБЛИЦА Е-4
ТАБЛИЦА Е-4
ТАБЛИЦА F
ТАБЛИЦА F
ТАБЛИЦА F-l
ТАБЛИЦА F-l
ТАБЛИЦА F-3
ТАБЛИЦА F-3
ТАБЛИЦА F-4
ТАБЛИЦА F-4
ТАБЛИЦА G
ТАБЛИЦА G
ТАБЛИЦА G-l
ТАБЛИЦА G-l
ТАБЛИЦА G-4
ТАБЛИЦА G-5
ТАБЛИЦА G-5
ТАБЛИЦА G-6
ТАБЛИЦА G-6
ТАБЛИЦА G-7
ТАБЛИЦА G-7
ТАБЛИЦА Н
ТАБЛИЦА Н
ТАБЛИЦА H-l
ТАБЛИЦА H-l
ТАБЛИЦА Н-2
ТАБЛИЦА Н-2
100
ТАБЛИЦА Н-3
100
ТАБЛИЦА Н-3
101
ТАБЛИЦА Н-4
101
ТАБЛИЦА Н-4
102
102
107
108
Модель PLS 2 - фигура 10
110
110
121
122
В другом варианте осуществления фармацевтические составы по
124
124
136
136
ТТТ. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-
ТТТ. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-
137
137
GGGG. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-
GGGG. Композиция по любому из вариантов осуществления NNN-
138
138
ОООО. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-
ОООО. Композиция по любому из вариантов осуществления LLLL-
139
139
146
146
ООО. Композиция по варианту осуществления NNN, где буфер не
ООО. Композиция по варианту осуществления NNN, где буфер не
147
147
ВВВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления YYY-
ВВВВ. Композиция по любому из вариантов осуществления YYY-
148
148
151
150
E. Композиция по любому из предшествующих вариантов
153
153
1/ 28
ФИГ. 1
1/ 28
ФИГ. 1
1/ 28
ФИГ. 1
1/ 28
ФИГ. 1
1/ 28
ФИГ. 1
1/ 28
ФИГ. 1
2/ 28
ФИГ. 2
2/ 28
ФИГ. 2
2/ 28
ФИГ. 2
2/ 28
ФИГ. 2
2/ 28
ФИГ. 2
2/ 28
ФИГ. 2
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
3/ 28
ФИГ. 3
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
4/28
ФИГ. 4
*/28
*/28
*/28
*/28
*/28
*/28
7/ 28
7/ 28
7/ 28
7/ 28
7/ 28
7/ 28
8/28
8/28
8/28
8/28
8/28
8/28
8/28
8/28
9/28
9/28
9/28
9/28
10/28
11/ 28
10/28
11/ 28
10/28
11/ 28
10/28
11/ 28
12/28
11/ 28
12/28
11/ 28
12/28
11/ 28
12/28
11/ 28
12/28
11/ 28
12/28
13/ 28
14/28
13/ 28
14/28
13/ 28
14/28
15/ 28
14/28
15/ 28
16/28
15/ 28
16/28
15/ 28
18/28
17/ 28
18/28
17/ 28
18/28
17/ 28
18/28
17/ 28
18/28
19/ 28
18/28
19/ 28
18/28
19/ 28
22/ 28
22/ 28
22/ 28
22/ 28
22/ 28
22/ 28
24/28
23/ 28
24/28
23/ 28
24/28
23/ 28
24/28
23/ 28
24/28
23/ 28
24/28
25/ 28
24/28
25/ 28
