EA201790986A1 20171031 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/201790986 Полный текст описания [**] EA201790986 20151119 Регистрационный номер и дата заявки US62/083,056 20141121 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2015/061639 Номер международной заявки (PCT) WO2016/081748 20160526 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21710 Номер бюллетеня [**] АНТИТЕЛА К CD73 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Название документа [8] C07K 16/28, [8] C07K 16/40, [8] C07K 16/30, [8] A61K 39/395, [8] A61P 35/00 Индексы МПК [US] Лонберг Нилс, [US] Корман Алан Дж., [US] Барнхарт Брайан С., [US] Ямнюк Аарон П., [US] Сринивасан Мохан, [US] Хеннинг Карла А., [US] Лэй Мин, [US] Сега Эмануэла, [US] Гудинаф Анджела, [US] Джуре-Кункел Мариа Н., [US] Чэнь Годун, [US] Сэк Джон, [US] Хуанг Ричард, [US] Корбетт Мартин Дж., [US] Майерс Джозеф Е., [CN] Швайцер Лианг, [US] Хэтчер Сандра В., [US] Хуан Хайчун, [US] Чжан Пинпин Сведения об авторах [US] БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201790986a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Настоящим изобретением предполагаются выделенные моноклональные антитела, в частности человеческие антитела, которые связываются с человеческим кластером дифференцировки 73 (CD73) с высокой аффинностью, и ингибируют активность CD73, и необязательно опосредуют зависимую от антитела интернализацию CD73. Также предполагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела согласно настоящему изобретению, векторы экспрессии, клетки-хозяева и способы экспрессии антител согласно настоящему изобретению. Также предполагаются иммуноконъюгаты, биспецифичные молекулы и фармацевтические композиции, содержащие антитела согласно настоящему изобретению. Настоящим изобретением также предполагаются способы ингибирования роста опухолевой клетки, экспрессирующей CD73, с применением антител согласно настоящему изобретению, в том числе способы лечения различных злокачественных опухолей.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Настоящим изобретением предполагаются выделенные моноклональные антитела, в частности человеческие антитела, которые связываются с человеческим кластером дифференцировки 73 (CD73) с высокой аффинностью, и ингибируют активность CD73, и необязательно опосредуют зависимую от антитела интернализацию CD73. Также предполагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела согласно настоящему изобретению, векторы экспрессии, клетки-хозяева и способы экспрессии антител согласно настоящему изобретению. Также предполагаются иммуноконъюгаты, биспецифичные молекулы и фармацевтические композиции, содержащие антитела согласно настоящему изобретению. Настоящим изобретением также предполагаются способы ингибирования роста опухолевой клетки, экспрессирующей CD73, с применением антител согласно настоящему изобретению, в том числе способы лечения различных злокачественных опухолей.


Евразийское (21) 201790986 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.10.31
(22) Дата подачи заявки 2015.11.19
(51) Int. Cl.
C07K16/28 (2006.01) C07K16/40 (2006.01) C07K16/30 (2006.01) A61K39/395 (2006.01) A61P35/00 (2006.01)
(54) АНТИТЕЛА К CD73 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
(31) 62/083,056
(32) 2014.11.21
(33) US
(86) PCT/US2015/061639
(87) WO 2016/081748 2016.05.26
(88) 2016.09.15
(71) Заявитель: БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72) Изобретатель:
Лонберг Нилс, Корман Алан Дж., Барнхарт Брайан С., Ямнюк Аарон П., Сринивасан Мохан, Хеннинг Карла А., Лэй Мин, Сега Эмануэла, Гудинаф Анджела, Джуре-Кункел Мариа Н., Чэнь Годун, Сэк Джон, Хуанг Ричард, Корбетт Мартин Дж., Майерс Джозеф Е. (US), Швайцер Лианг (CN), Хэтчер Сандра В., Хуан Хайчун, Чжан Пинпин (US)
(74) Представитель:
Угрюмов В.М., Лыу Т.Н., Гизатуллина Е.М., Карпенко О.Ю., Строкова О.В., Глухарёва А.О., Дементьев В.Н. (RU)
(57) Настоящим изобретением предполагаются выделенные моноклональные антитела, в частности человеческие антитела, которые связываются с человеческим кластером дифференцировки 73 (CD73) с высокой аффинностью, и ингибируют активность CD73, и необязательно опосредуют зависимую от антитела интернализацию CD73. Также предполагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела согласно настоящему изобретению, векторы экспрессии, клетки-хозяева и способы экспрессии антител согласно настоящему изобретению. Также предполагаются иммуноконъ-югаты, биспецифичные молекулы и фармацевтические композиции, содержащие антитела согласно настоящему изобретению. Настоящим изобретением также предполагаются способы ингибирования роста опухолевой клетки, экспрессирующей CD73, с применением антител согласно настоящему изобретению, в том числе способы лечения различных злокачественных опухолей.
АНТИТЕЛА К CD73 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ОПИСАНИЕ
Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке на выдачу патента США № 62/083056 под названием "Антитела к CD73 и их применения", поданной 21 ноября 2014 года, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Кластер дифференцировки 73 (CD73), также известный как экто-5'-нуклеотидаза (экто-5'NT, ЕС 3.1.3.5), представляет собой связанный с гликозил-фосфатидилинозитолом (GPI) фермент на клеточной поверхности, обнаруживающийся в большинстве тканей, но прежде всего экспрессирующийся в эндотелиальных клетках и субпопуляциях гемопоэтических клеток (Resta et al., Immunol Rev 1998;161:95-109; и Colgan et al., Prinergic Signal 2006;2:351-60). Известно, что CD73 катализирует дефосфорилирование внеклеточных нуклеозидмонофосфатов в нуклеозиды, такие как аденозин. Аденозин представляет собой широко исследуемую сигнальную молекулу, которая опосредует свои биологические эффекты через несколько рецепторов, в том числе Al, А2А, А2В и A3. Было показано, что аденозин регулирует пролиферацию и миграцию у многих злокачественных опухолей и обладает иммунодепрессивным эффектом за счет регуляции противоопухолевых Т-клеток (Zhang et al., Cancer Res 2010;70:6407-11).
Сообщалось, что CD73 экспрессируется на многих злокачественных опухолях, в том числе злокачественных опухолях ободочной кишки, легкого, поджелудочной железы, яичника, мочевого пузыря, при лейкозе, глиоме, глиобластоме, меланоме, злокачественных опухолях щитовидной железы, пищевода, предстательной железы и молочной железы (Jin et al., Cancer Res 2010;70:2245-55; и Stagg et al., PNAS 2010; 107:154752). Более того, экспрессию CD73 в злокачественной опухоли связывали с повышенной пролиферацией, миграцией, неоваскуляризацией, инвазионной способностью, метастазированием и меньшим сроком дожития у пациентов. Активность CD73 также была предложена в качестве прогностического маркера при папиллярных карциномах
щитовидной железы. Хотя было показано, что CD73 регулирует взаимодействия клетка-клетка и клетка-матрикс на опухолевых клетках, экспрессию и активность CD73 связывали с ослабленными Т-клеточными реакциями и считали их связанными с устойчивостью к лекарственным средствам (Spychala et al., Pharmacol Ther 3000;87:161-73). Таким образом, CD73 может регулировать развитие злокачественной опухоли как непосредственно, так и опосредовано, что привлекает внимание к его потенциалу в качестве новой терапевтической мишени.
С учетом постоянной потребности в улучшенных стратегиях для целенаправленного воздействия на заболевания, такие как злокачественные заболевания, очень желательными являются способы регулирования развития опухоли посредством нескольких механизмов, а также способы регулирования активности CD73 и соответствующие терапевтические средства.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
В данном документе представлены выделенные антитела, такие как моноклональные антитела (их антигенсвязывающие части), в частности, человеческие моноклональные антитела, которые специфично связываются с CD73 и характеризуются желательными функциональными свойствами. Эти свойства включают в себя связывание с высокой аффинностью с человеческим CD73, связывание обезьяньим CD73 (например, с CD73 яванского макака) и способность к ингибированию ферментативной активности CD73. Антитела, описанные в данном документе, могут быть применены для ингибирования опухолевого роста, снижения продукции аденозина, стимуляции иммунной реакции и выявления белка CD73 в образце.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 проявляют по меньшей мере одно из следующих свойств:
(a) ингибирование ферментативной активности CD73;
(b) связывание с CD73 яванского макака;
(c) опосредованная антителом интернализация CD73 в клетки, например,
опухолевые клетки; и
(d) связывание с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83 и
157-172 в человеческом CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части связываются с человеческим CD73 (мономерным и/или димерным CD73) с KD, составляющей приблизительно от 10 нМ до 0,1 нМ или менее при измерении, например, с помощью анализа SPR методом BIACORE(r), и интернализируются в опухолевые клетки с Тш, составляющим не более 10 мин. при измерении, например, с помощью анализа вытеснения метки, и как описано в разделе Примеры.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части связываются с участками FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ ID N0: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ГО N0: 97) в человеческом CD73, например, причем эпитоп охватывает или перекрывается с FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ ГО NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ГО NO: 97) в человеческом CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части связываются с эпитопом на человеческом CD73 (SEQ ГО N0: 1), который включает в себя все или часть аминокислотных остатков FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ ГО NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ГО NO: 97). В соответствии с определенными вариантами осуществления эпитоп, связываемый антителами к CD73 или их антигенсвязывающими частями, определен, например, с помощью HDX-MS и/или кристаллографии.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат три CDR вариабельной тяжелой цепи и три CDR вариабельной легкой цепи, которые находятся в парах из вариабельной тяжелой цепи и вариабельной легкой цепи антител к CD73, описанных в данном документе, таких как цепи в таблице 35, например, SEQ ГО N0: 4 и 8; SEQ ГО N0: 4 и 12; SEQ ГО N0: 16 и 20; SEQ ГО N0: 16 и 24; SEQ ГО N0: 16 и 28; SEQ ГО N0: 32 и 36; SEQ ГО N0: 40 и 44; SEQ ГО N0: 40 и 48; SEQ ГО N0: 52 и 56; SEQ ГО N0: 60 и 64; SEQ ГО N0: 68 и 72; SEQ ГО N0: 68 и 76; SEQ ГО N0: 80 и 84; SEQ ГО N0: 88 и 92; SEQ ГО N0: 135 и 8 или SEQ ГО N0: 135 и 12. Например, антитела к CD73 содержат:
(а) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 9, 10 и 11, соответственно;
(b) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно;
(c) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 21, 22 и 23, соответственно;
(d) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 25, 26 и 27, соответственно;
(e) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 29, 30 и 31, соответственно;
(f) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 33, 34 и 35, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 37, 38 и 39, соответственно;
(g) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 45, 46 и 47, соответственно;
(h) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 49, 50 и 51, соответственно;
(i) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш
N0: 53, 54 и 55, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой
цепи, содержащие SEQ Ш N0: 57, 58 и 59, соответственно;
(j) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 61, 62 и 63, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 65, 66 и 67, соответственно;
(к) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 73, 74 и 75, соответственно;
(1) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 77, 78 и 79, соответственно;
(т) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 81, 82 и 83, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 85, 86 и 87, соответственно; или
(п) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 89, 90 и 91, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 93, 94 и 95, соответственно.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, SEQ Ш N0: 9, 10 и 11, соответственно.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, имеющие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 80% идентичны, например, по меньшей мере 85% идентичны, по меньшей мере 90% идентичны, по меньшей мере 95% идентичны, по меньшей мере 96% идентичны, по меньшей мере 97% идентичны, по меньшей мере 98% идентичны или по меньшей мере на 99% или более идентичны аминокислотным последовательностям вариабельного участка тяжелой цепи антител к CD73, описанных в данном документе, например, содержащих аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 170-177, и/или вариабельного участка легкой цепи антител к CD73, описанных в данном документе, например, содержащих аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID N0: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84 или 92.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат последовательности вариабельного участка тяжелой
цепи и легкой цепи, которые по меньшей мере на 80% идентичны, например, по меньшей мере на 85% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны, по меньшей мере на 95% идентичны, по меньшей мере на 96% идентичны, по меньшей мере на 97% идентичны, по меньшей мере на 98% идентичны или по меньшей мере на 99% или более идентичны (например, на 100%) аминокислотным последовательностям: SEQ Ш N0: 135 и 8; SEQ Ш NO: 135 и 12; SEQ ID NO: 4 и 8; SEQ ГО NO: 4 и 12; SEQ ГО NO: 16 и 20; SEQ ГО NO: 16 и 24; SEQ ГО NO: 16 и 28; SEQ ГО NO: 32 и 36; SEQ ГО NO: 40 и 44; SEQ ГО NO: 40 и 48; SEQ ГО NO: 52 и 56; SEQ ГО NO: 60 и 64; SEQ ГО NO: 68 и 72; SEQ ГО NO: 68 и 76; SEQ ГО NO: 80 и 84; SEQ ГО NO: 88 и 92; SEQ ГО NO: 170 и любой из SEQ ГО NO: 20, 24 и 28; любой из SEQ ГО NO: 171-176 и SEQ ГО NO: 8 или 12 или SEQ ГО NO: 177 и 36.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, выбранные из группы, состоящей из: SEQ ГО NO: 135 и 8; SEQ ID NO: 135 и 12; SEQ ГО NO: 4 и 8; SEQ ГО NO: 4 и 12; SEQ ГО NO: 16 и 20; SEQ ГО NO: 16 и 24; SEQ ГО NO: 16 и 28; SEQ ГО NO: 32 и 36; SEQ ГО NO: 40 и 44; SEQ ГО NO: 40 и 48; SEQ ГО NO: 52 и 56; SEQ ГО NO: SEQ ГО NO: 60 и 64; SEQ ГО NO: 68 и 72; SEQ ГО NO: 68 и 76; SEQ ГО NO: 80 и 84; SEQ ГО NO: 88 и 92; SEQ ГО NO: 170 и любой из SEQ ГО NO: 20, 24 и 28; любой из SEQ ID NO: 171-176 и SEQ ID NO: 8 или 12 или SEQ ID NO: 177 и 36.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть содержит вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО NO: 135, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО NO: 8 или SEQ ГО NO: 12.
В данном документе представлены антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части, соответственно, имеющие последовательности полноразмерных тяжелой цепи и легкой цепи, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 99% или 100% идентичные аминокислотным последовательностям любого антитела к CD73, описанного в данном документе, например, SEQ ГО NO: 100 и 101; SEQ ГО NO: 100 и 102; SEQ ГО NO: 103 и 104; SEQ ГО NO: 103 и 105; SEQ ГО NO: 103 и 106; SEQ ГО NO: 107 и 108; SEQ ГО NO: 109 и ПО; SEQ ГО NO: 109 и 111; SEQ ГО NO: 112 и 113; SEQ ГО NO: 114 и 115; SEQ ГО NO: 116 и 117; SEQ ГО NO: 116 и 118; SEQ ГО NO: 119 и 120; SEQ ГО NO: 121 и 122;
SEQ Ш NO: 133 или 189 (без С-концевого лизина) и 101; SEQ ID N0: 133 или 189 и 102; SEQ ГО N0: 189 и 101; SEQ ГО N0: 189 и 102; любая из SEQ ГО N0: 184-186 и любая из SEQ ГО N0: 104-106; любая из SEQ ГО N0: 187-207 и SEQ ГО N0: 101 или 102 или любая из SEQ ГО N0: 208-210 и SEQ ГО N0: 108.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть содержат участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 133 или 189, и участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 101 или SEQ roNO: 102.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части представляют собой антитела IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 или их варианты. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части связываются с тем же эпитопом на CD73, что и антитела, имеющие вышеизложенные последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей (например, антитела CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11).
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат модифицированный константный участок тяжелой цепи, который включает в себя, например, человеческий СН1 домен, человеческий шарнирный домен, человеческий СН2 домен и человеческий СНЗ домен в порядке от N- к С-концу, причем по меньшей мере 2 домена относятся к отличающемуся изотипу (например, изотипы IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4). Например, в соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок содержит шарнир человеческого IgG2, и по меньшей мере один из CHI, СН2 и СНЗ доменов не относится к изотипу IgG2. В соответствии с определенными вариантами осуществления СН1 представляет собой СН1 домен человеческого IgG2, например, имеющий аминокислотную последовательность
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (SEQ ГО N0: 124). Модифицированный константный участок может включать в себя шарнирный домен человеческого IgG2, например, шарнирный домен человеческого IgG2, который снижает
неоднородность в образовании связей с участием цистеина, например, шарнирный домен
человеческого IgG2, имеющий аминокислотную замену в С219, например, C219S, по
сравнению с шарнирным доменом человеческого IgG2 дикого типа (SEQ N0 136),
например, шарнирным доменом человеческого IgG2, имеющим аминокислотную
последовательность ERKSCVECPPCPAPPVAG (SEQ ID N0: 123). Модифицированный
константный участок может включать в себя СН2 домен человеческого IgGl, которые
ослабляет или устраняет эффекторные функции, например, СН2 домен человеческого
IgGl, имеющий аминокислотные замены A330S и P331S, по сравнению с СН2 доменом
человеческого IgGl дикого типа (SEQ ГО N0: 137), например, СН2 домен человеческого
IgGl содержит аминокислотную последовательность
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAK (SEQ ГО N0: 125). Модифицированный константный участок может включать в себя СНЗ домен человеческого IgGl дикого типа, например, имеющий аминокислотную последовательность
GQPREPQ VYTLPP SREEMTKNQ VSLTCL VKGF YP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLD S DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ГО N0: 128).
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит модифицированный участок тяжелой цепи, например, содержащий (i) шарнир IgG2 или (ii) шарнир IgG2 и СН1 домен IgG, при условии, что антитело не представляет собой антитело IgG2, например, антитело не содержит константный участок тяжелой цепи IgG2 дикого типа.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат любые из константных участков, описанных в данном документе, например, константные участки, содержащие аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ГО N0: 126, 127, 129, 130, 162-169, 180-183, 267282 и 300-347.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит VH и VL домены 11F11 или CD73.4 и константный участок тяжелой цепи, содержащий шарнир IgG2, или константный участок тяжелой цепи, содержащий шарнир
IgG2 и CHI домен IgG2. Константный участок тяжелой цепи может представлять собой IgG2CS-IgGl.lf (SEQ Ш NO: 169) или IgG2CS-IgGlf (SEQ Ш NO: 165), где "CS" относится к "C219S".
В данном документе представлены биспецифичные молекулы, содержащие антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части, которые связаны с молекулой, характеризующейся второй специфичностью связывания, а также иммуноконъюгаты, содержащие антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части, связанные со средством.
Также предполагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие последовательности вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи антител к CD73, а также векторы экспрессии, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, и клетки, трансформированные с использованием векторов экспрессии.
Также предполагаются композиции и наборы, содержащие антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части.
В данном документе представлен способ получения антител к CD73, предусматривающий экспрессию антитела к CD73, раскрытого в данном документе, в клетке и выделение антитела из клетки.
Также предполагаются способы применения антител к CD73, раскрытых в данном документе, например, способы снижения уровней аденозина, например, в опухоли или около нее, например, в опухолевой клетке, экспрессирующей CD73, способы стимуляции антигенспецифической Т-клеточной реакции, способы стимуляции иммунной реакции у субъекта, способы ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, способы лечения злокачественной опухоли, например, с помощью иммунотерапии. В соответствии с определенными вариантами осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль мочевого пузыря, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль матки/шейки матки, злокачественную опухоль яичника, злокачественную опухоль предстательной железы, злокачественную опухоль яичка, злокачественную опухоль пищевода, злокачественную опухоль желудочно-кишечного тракта, злокачественную опухоль поджелудочной железы, злокачественную опухоль ободочной и прямой кишки, злокачественную опухоль ободочной кишки, злокачественную опухоль почки, злокачественную опухоль головы и шеи, злокачественную опухоль легкого, злокачественную опухоль желудка, герминогенную
злокачественную опухоль, злокачественную опухоль кости, злокачественную опухоль печени, злокачественную опухоль щитовидной железы, злокачественную опухоль кожи, злокачественные новообразования центральной нервной системы, лимфому, лейкоз, миелому, саркому и злокачественную опухоль, связанную с вирусом. Злокачественная опухоль может представлять собой метастаз ирующую злокачественную опухоль, невосприимчивую к лечению злокачественную опухоль или рецидивирующую злокачественную опухоль.
В соответствии с определенными вариантами осуществления способы, описанные в данном документе, дополнительно предусматривают введение одного или нескольких дополнительных терапевтических средств, например, терапевтического средства, которое стимулирует иммунную систему, например, антагониста PD-1, антагониста CTLA-4, антагониста LAG-3, антагониста GITR и/или антитела к CD39, антитела к A2AR или химического ингибитора A2AR.
Другие признаки и преимущества настоящего раскрытия будут очевидны из нижеследующего подробного описания и примеров, которые не следует истолковывать как ограничивающие.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 237) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 135) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела CD73.4-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 5), CDR2 (SEQ Ш N0: 6) и CDR3 (SEQ Ш N0: 7) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 1В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 140) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 8) вариабельного участка легкой цепи (VK1) человеческого моноклонального антитела CD73.4-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 9), CDR2 (SEQ Ш N0: 10) и CDR3 (SEQ Ш N0: 11) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 2А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 237) и аминокислотная последовательность (SEQ ID N0: 135) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела CD73.4-2. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 5),
CDR2 (SEQ Ш NO: 6) и CDR3 (SEQ Ш NO: 7) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 2В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 141) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 12) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела CD73.4-2. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 13), CDR2 (SEQ ID N0: 14) и CDR3 (SEQ ГО N0: 15) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. ЗА приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 139) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 4) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 11F11-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 5), CDR2 (SEQ ГО N0: 6) и CDR3 (SEQ ГО N0: 7) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. ЗВ приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 140) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 8) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 11F11-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 9), CDR2 (SEQ ГО N0: 10) и CDR3 (SEQ ГО N0: 11) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 4А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 139) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 4) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 11F11-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 5), CDR2 (SEQ ГО N0: 6) и CDR3 (SEQ ГО N0: 7) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 4В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 141) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 12) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 11F11-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 13), CDR2 (SEQ ГО N0: 14) и CDR3 (SEQ ГО N0: 15) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 5А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 142) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 16) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 17),
CDR2 (SEQ Ш NO: 18) и CDR3 (SEQ Ш NO: 19) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 5В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 143) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 20) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 21), CDR2 (SEQ ID N0: 22) и CDR3 (SEQ ГО N0: 23) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 6А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 142) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 16) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 17), CDR2 (SEQ ГО N0: 18) и CDR3 (SEQ ГО N0: 19) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 6В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 144) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 24) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 25), CDR2 (SEQ ГО N0: 26) и CDR3 (SEQ ГО N0: 27) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 7А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 142) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 16) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-3. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 17), CDR2 (SEQ ГО N0: 18) и CDR3 (SEQ ГО N0: 19) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 7В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 145) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 28) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 4СЗ-3. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 29), CDR2 (SEQ ГО N0: 30) и CDR3 (SEQ ГО N0: 31) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 8А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 146) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 32) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 4D4-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 33),
CDR2 (SEQ Ш NO: 34) и CDR3 (SEQ Ш NO: 35) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 8В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 147) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 36) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 4D4-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 37), CDR2 (SEQ Ш N0: 38) и CDR3 (SEQ Ш N0: 39) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 9А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 148) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 40) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 10D2-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 41), CDR2 (SEQ ID N0: 42) и CDR3 (SEQ ГО N0: 43) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 9В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 149) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 44) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 10D2-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 45), CDR2 (SEQ ГО N0: 46) и CDR3 (SEQ ГО N0: 47) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 10А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 148) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 40) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 10D2-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 41), CDR2 (SEQ ГО N0: 42) и CDR3 (SEQ ГО N0: 43) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 10В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ГО N0: 150) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 48) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 10D2-2. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 49), CDR2 (SEQ ГО N0: 50) и CDR3 (SEQ ГО N0: 51) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. ПА приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 151) и аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 52) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 11А6-1. Участки CDR1 (SEQ ГО N0: 53),
CDR2 (SEQ Ш NO: 54) и CDR3 (SEQ Ш NO: 55) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 11В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 152) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 56) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 11А6-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 57), CDR2 (SEQ Ш N0: 58) и CDR3 (SEQ Ш N0: 59) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 12А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 153) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 60) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 24Н2-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 61), CDR2 (SEQ Ш N0: 62) и CDR3 (SEQ Ш N0: 63) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 12В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 154) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 64) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 24Н2-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 65), CDR2 (SEQ Ш N0: 66) и CDR3 (SEQ Ш N0: 67) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 13А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 155) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 68) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 69), CDR2 (SEQ Ш N0: 70) и CDR3 (SEQ Ш N0: 71) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 13В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 156) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 72) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 73), CDR2 (SEQ Ш N0: 74) и CDR3 (SEQ Ш N0: 75) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 14А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 155) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 68) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-2. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 69),
CDR2 (SEQ Ш NO: 70) и CDR3 (SEQ Ш NO: 71) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 14В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 157) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 76) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-2. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 77), CDR2 (SEQ Ш N0: 78) и CDR3 (SEQ Ш N0: 79) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 15А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 155) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 68) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-3. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 69), CDR2 (SEQ Ш N0: 70) и CDR3 (SEQ Ш N0: 71) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 15В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 242) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 238) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 5F8-3. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 239), CDR2 (SEQ ID N0: 240) и CDR3 (SEQ Ш N0: 241) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 16А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 158) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 80) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 6Е11-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 81), CDR2 (SEQ Ш N0: 82) и CDR3 (SEQ Ш N0: 83) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 16В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 159) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 84) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 6Е11-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 85), CDR2 (SEQ Ш N0: 86) и CDR3 (SEQ Ш N0: 87) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 17А приведена нуклеотидная последовательность (SEQ ID N0: 160) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 88) вариабельного участка тяжелой цепи человеческого моноклонального антитела 7А11-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 89),
CDR2 (SEQ Ш NO: 90) и CDR3 (SEQ Ш NO: 91) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 17В приведена нуклеотидная последовательность (SEQ Ш N0: 161) и аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0: 92) вариабельного участка легкой цепи человеческого моноклонального антитела 7А11-1. Участки CDR1 (SEQ Ш N0: 93), CDR2 (SEQ ID N0: 94) и CDR3 (SEQ ГО N0: 95) выделены, а также указаны полученные элементы V, D и J зародышевой линии.
На фиг. 18 показана аминокислотная последовательность (SEQ ГО N0: 189) тяжелой цепи антитела к CD73 CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf и его вариабельный участок, CDR 1, 2 и 3, СН1, шарнирный, СН2 и СНЗ домены.
На фиг. 19 показаны данные с SPR сенсограммы для связывания 600, 200, 66,7, 22,2, 7,4 и 2,5 нМ CD73-his человека (толстые линии) или CD73-his макака-крабоеда (тонкие линии) с CD73.4- IgG2-C219S-IgGl.lf, захваченным на поверхности с иммобилизированным белком А при 25°С.
На фиг. 20А1 и 20А2 показано связывание антител 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи с положительными по человеческому CD73 Calu6 клетками (линия клеток аденокарциномы легкого человека).
На фиг. 20В1 и 20В2 показано связывание антител 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи с отрицательными по человеческому CD73 DMS114 клетками (линия клеток мелкоклеточной карциномы легкого).
На фиг. 20С1 и 20С2 показано связывание антител 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи с положительными по CD73 макака-крабоеда СНО клетками.
На фиг. 20D1 и 20D2 показано связывание антител 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи с отрицательными по CD73 макака-крабоеда СНО-К1 клетками.
На фиг. 20Е показано связывание указанных антител с Т-клетками от доноров Din
D2.
На фиг. 20F показано связывание указанных антител с Т-клетками от доноров Din
D2.
На фиг. 21А1 и 21А2 показано ингибирование ферментативной активности связанного с гранулами человеческого CD73 антителами к CD73 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи. Все антитела ингибировали ферментативную активность человеческого CD73.
На фиг. 21В1 и 21В2 показано ингибирование ферментативной активности связанного с гранулами CD73 макака-крабоеда антителами к CD73 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи. Все антитела ингибировали ферментативную активность CD73 макака-крабоеда.
На фиг. 22А1 и 22А2 показано ингибирование ферментативной активности CD73 в положительных по CD73 человека Calu6 клетках антителами 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи. Все антитела ингибировали ферментативную активность CD73 в этих клетках.
На фиг. 22В1 и 22В2 показано ингибирование ферментативной активности CD73 в отрицательных по CD73 человека DMS-114 клетках антителами 11F11, CD73.4 и CD73.10 с указанными константными участками тяжелой цепи.
На фиг. 22С показаны значения ЕС50 и Ymax для ингибирования активности эндогенного CD73 11F11 и F(ab'^-фрагментами 11F11, которые определены в анализе сАМР с использованием Calu-б и HEK/A2R клеток. На фиг. 22С также показаны значения ЕС50 и Ymax для 11F11 и F(ab'^-фрагментов 11F11 в анализе интернализации в Calu-б. На фигуре показано, что Fab фрагмент 11F11 является неактивным в этих двух анализах.
На фиг. 22D показана динамика продуцирования аденозина из Calu6 клеток, обработанных антителом 11F11 или 4СЗ, которое измеряли с помощью LC/MS/MS, указывающая на то, что ингибирование ферментативной активности CD73 антителом 11F11 происходит быстрее, чем антителом 4СЗ.
На фиг. 23А показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 под действием следующих антител: антитела 11F11, 4СЗ, 6D11, CD73.3-IgGl.lf с легкой цепью 4C3Vkl ("3-Vh-hHC-IgGl.lf/4C3Vkl"), CD73.4-IgG2CS с легкой цепью 11F11 Vk2 ("4-Vh-hHC-IgG2-C219S/l 1F11-Vk2"), CD73.10-IgG2CS ("CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S"), CD73.10-IgG2C S-IgGl. 1 f ("CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf") и CD73.10-IgGl.lf ("CD73.10-Vh-hHC-IgGl.lf") в H2228 клетках. Антитела 11F11 (которое относится к изотипу IgG2), CD73.4-IgG2CS, CD73.10-IgG2CS и
CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf интернализируются быстрее и в большей степени, чем остальные исследуемые антитела, которые относятся к изотипу IgGl.
На фиг. 23В показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 для тех же антител, что показаны на фиг. 23 А, в НСС15 клетках (линия клеток немелкоклеточной карциномы легкого), показывающие результаты, подобные полученным в Н2228 клетках (линия клеток немелкоклеточной карциномы легкого).
На фиг. 23С показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 для тех же антител, что показаны на фиг. 23А и 23В, а также для CD73.11-IgG2CS ("1 l-Vh-hVC-IgG2-C219S") в Calu6 клетках, показывающие результаты, подобные полученным в Н2228 и НСС15 клетках.
На фиг. 23D показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 для тех же антител, что показаны на фиг. 23С, в NCI-2030 клетках (линия клеток немелкоклеточной карциномы легкого), показывающие результаты, подобные полученным в Н2228, НСС15 и Calu6 клетках.
На фиг. 23Е показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 для указанных антител в Calu6 клетках, которые измерены с помощью проточной цитометрии.
На фиг. 23F показаны кинетические характеристики опосредованной антителом интернализации CD73 для указанных антител в NCI-H292 клетках (линии клеток мукоэпидермоидной карциномы легкого), которые измерены с помощью проточной цитометрии, но в этом случае антитела не отмывали после первого инкубирования клеток с антителами.
На фиг. 23G показано процентное содержание CD73, интернализированного в Calu6 клетки, обработанные указанными антителами, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в Calu6 клетки со временем.
На фиг. 23Н показано процентное содержание CD73, интернализированного в NCI-Н292 клетки, обработанные указанными антителами со временем, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в NCI-H292 клетки со временем.
На фиг. 231 показано процентное содержание CD73, интернализированного в SNU-С1 клетки (линия клеток карциномы ободочной кишки), обработанные указанными антителами со временем, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в SNU-C1 клетки со временем.
На фиг. 23J показано процентное содержание CD73, интернализированного в NCI-HI 43 7 клетки (линия клеток немелкоклеточной карциномы легкого), обработанные указанными антителами со временем, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в NCI-H1437 клетки со временем.
На фиг. 23К показано процентное содержание CD73, интернализированного в Calu6 клетки, обработанные указанными антителами со временем, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в Calu6 клетки со временем.
На фиг. 23L показано процентное содержание CD73, интернализированного в NCI-Н292 клетки, обработанные указанными антителами со временем, показывающее опосредованную антителом интернализацию CD73 под действием указанных антител в Calu6 клетки со временем.
На фиг. 23М показан уровень CD73 на поверхности Calu6 клеток, которые обрабатывали указанными антителами в концентрации 5 мкг/мл в течение 0, 5, 15 или 30 минут.
На фиг. 24А показаны срезы ксенотрансплантатов опухолей из животных, которые собирали через 4 суток после обработки животных контрольным антителом и окрашивали в отношении ферментативной активности CD73. Срезы показывают интенсивный коричневый цвет, указывающий на ферментативную активность CD73.
На фиг. 24В показаны срезы ксенотрансплантатов опухолей из животных, которые собирали через 1 сутки после обработки животных антителом 11F11 и окрашивали в отношении ферментативной активности CD73. Срезы имели значительно менее интенсивный коричневый цвет по сравнению со срезами контрольных опухолей, показанными на фиг. 24А, что указывает ингибирование ферментативной активности CD73 in vivo CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf уже спустя 1 сутки после начала обработки.
На фиг. 24С показаны срезы ксенотрансплантатов опухолей из животных, которые собирали через 2 суток после обработки животных CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf и окрашивали в отношении ферментативной активности CD73. Срезы имели значительно менее интенсивный коричневый цвет по сравнению со срезами контрольных опухолей, показанными на фиг. 24А, и по сравнению со срезами опухолей спустя 1 сутки обработки животных CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf, что указывает ингибирование ферментативной активности CD73 in vivo CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf спустя по меньшей мере 2 суток после начала обработки.
На фиг. 24D показаны срезы ксенотрансплантатов опухолей из животных, которые собирали через 3 суток после обработки животных CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf и окрашивали в отношении ферментативной активности CD73. Срезы имели значительно менее интенсивный коричневый цвет по сравнению со срезами контрольных опухолей, показанными на фиг. 24А, что указывает ингибирование ферментативной активности CD73 in vivo CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf спустя по меньшей мере 3 суток после начала обработки.
На фиг. 24Е показаны срезы ксенотрансплантатов опухолей из животных, которые собирали через 7 суток после обработки животных CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf и окрашивали в отношении ферментативной активности CD73. Срезы имели значительно менее интенсивный коричневый цвет по сравнению со срезами контрольных опухолей, показанными на фиг. 24А, что указывает ингибирование ферментативной активности CD73 in vivo CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf спустя по меньшей мере 7 суток после начала обработки.
На фиг. 24F показана динамика для ферментативной активности человеческого CD73 в опухолях SNUC1 у мышей с ксенотрансплантатами, обработанных контрольным антителом (не к CD73) или CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf в дозе 1 мг/кг, 3 мг/кг или 10 мг/кг, показывающая, что антитело к CD73 эффективно снижает ферментативную активность CD73 в опухолях у мышей с ксенотрансплантатами.
На фиг. 25А показаны уровни ферментативной активности мышиного CD73 на срезах контрольных опухолей из Balb/c мышей, несущих изогенные опухоли 4Т1 и получавших контрольный mlgG.
На фиг. 25В показаны срезы опухолей (4Т1, 1-7 сутки) у Balb/c мышей, несущих изогенные опухоли 4Т1, которых обрабатывали посредством подкожного введения антитела к мышиному CD73 TY23, показывающие, что TY23 подавляет ингибирование ферментативной активности CD73 in vivo.
На фиг. 26А показан уровень перекрестного блокирования 4СЗ антителами к CD73 4СЗ, 7А11, 6Е11, 5F8, 4СЗ, 11F11 и 11А6, который определяли с помощью проточной цитометрии.
На фиг. 26В показан уровень перекрестного блокирования 11F11 антителами к CD73 4СЗ, 7А11, 6Е11, 5F8, 4СЗ, 11F11 и 11А6, который определяли с помощью проточной цитометрии.
На фиг. 27А приведена аминокислотная последовательность (SEQ Ш N0 : 283) человеческого CD73 и участки взаимодействия с CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf, которые представлены более темным серым цветом. Чем сильнее взаимодействие, тем темнее серый цвет.
На фиг. 27В показана модель взаимодействия между димерным белком человеческого CD73 и CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf.
На фиг. 28А показана кристаллографическая модель взаимодействия между человеческим CD73 и Fab'-фрагментом 11F11.
На фиг. 28В показана модель сложной структуры двух комплексов человеческого CD73 с 11F11.
На фиг. 28С показана модель взаимодействия между человеческим CD73 и антителом 1 IF 11.
На фиг. 28D показана модель взаимодействия между 11F11 и человеческим CD73.
На фиг. 29А показаны данные SEC-MALS для комплексов человеческого CD73 и антитела. "С073.4-гибрид" относится к CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf.
На фиг. 29В показаны данные DLS для комплексов человеческого CD73 и антитела.
На фиг. ЗОА показаны данные с SEC хроматограммы для комплексов hCD73-his с антителом CD73.4, содержащим отличающиеся константные участки, показывающие эффект шарнира и СН1 домена IgG2 в отношении размера комплексов антител о/антиген.
На фиг. ЗОВ показаны данные DLS для комплексов hCD73-his с антителом CD73.4, содержащим отличающиеся константные участки, показывающие эффект шарнира и СН1 домена IgG2 в отношении размера комплексов антител о/антиген.
На фиг. ЗОС показаны данные MALS для комплексов hCD73-his с антителом CD73.4, содержащим отличающиеся константные участки, показывающие эффект шарнира и СН1 домена IgG2 в отношении размера комплексов антител о/антиген.
На фиг. 30D показана схематическая модель комплексов hCD73-his/mAb, полученная на основании определенных с помощью MALS масс на фиг. ЗОС.
На фиг. ЗОЕ показано, что на образование комплексов более высокого порядка оказывает воздействие СН1 участок. Гистограммы показывают % площади под пиками 1 и 2, показанными на графике, для каждого конструкта.
На фиг. 31 показан процент опосредованной антителом интернализации CD73 через 1, 4 или 21 час после добавления каждого из показанных антител. Столбики для каждого антитела показаны в порядке от 21 часа (слева), 4 часов (посередине) и 1 часа (справа).
На фиг. 32А показано наложение данных SEC-хроматограммы для комплексов в молярном соотношении 1:1 hCD73-his с 16 разными антителами CD73.4, содержащими разные последовательности константного участка.
На фиг. 32В показана детализация данных хроматограммы с 11 по 19,5 минуты на хроматограмме с фиг. 32А с указанными 4 отличающимися элюируемыми частицами.
На фиг. 32С показано процентное отношение площади сигнала на UV-хроматограмме для пика 2 с фиг. 32В, нанесенное на график для 16 разных комплексов антитело/СВ73-шз. Данные отсортированы слева направо в порядке возрастания площади пика.
На фиг. 33 показано связывание антитела с FcyR-his белками, захваченными на Fab к his. Данные отклика на связывание наносят на график в виде процента от теоретического Rmax из расчета стехиометрического соотношения mAb:FcyR 1:1 для реакции связывания. Столбики для каждого антитела показаны в порядке, представленном цветовой легендой внизу слайда.
На фиг. 34 показано связывание антитела с FcgR-his белками, захваченными на Fab к his. Данные отклика на связывание наносят на график в виде процента от теоретического Rmax из расчета стехиометрического соотношения mAb:FcyR 1:1 для реакции связывания.
Столбики для каждого антитела показаны в порядке, представленном цветовой легендой внизу слайда.
На фиг. 35 показано выравнивание последовательностей VH и VL у различных антител к CD73. Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH и VL выделены жирным шрифтом.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
В данном документе описаны выделенные антитела, в особенности, моноклональные антитела, например, человеческие моноклональные антитела, которые специфично связываются с CD73 и тем самым снижают активность CD73 ("антагонистические антитела к CD73"). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела, описанные в данном документе, получены из конкретных последовательностей зародышевой линии для тяжелой и легкой цепей и/или содержат конкретные структурные признаки, такие как CDR участки, содержащие конкретные аминокислотные последовательности. В данном документе представлены выделенные антитела, способы получения таких антител, иммуноконъюгаты и биспецифичные молекулы, содержащие такие антитела, а также фармацевтические композиции, составленные таким образом, чтобы они содержали антитела. Также в данном документе представлены способы применения антител самих по себе или в комбинации с другими терапевтическими средствами (например, антителами) для снижения опухолевого роста и/или в качестве терапевтических средств для лечения злокачественной опухоли. Соответственно, антитела к CD73, описанные в данном документе, могут быть применены в лечении в широком спектре терапевтических применений, в том числе, например, для ингибирования опухолевого роста, ингибирования метастазирования и усиления иммунной реакции в отношении опухоли.
Определения
Для того чтобы настоящее описание можно было легче понять, в первую очередь определены некоторые термины. Дополнительные определения изложены в подробном описании.
Используемые в данном документе термины "кластер дифференцировки 73" или "CD73" относятся к ферменту (нуклеотидазе), способному к превращению внеклеточных нуклеозид-5'-монофосфатов в нуклеозиды, а именно аденозинмонофосфата (AMP) в аденозин. CD73 обычно обнаруживается в виде димера, заякоренного в клеточной мембране посредством гликозилфосфатидилинозитольного (GPI) мостика, обладает экзоферментной активностью и играет роль в передаче сигнала. Главной функцией CD73 является превращение им внеклеточных нуклеотидов (например, 5'-AMP) в аденозин, сильную иммунодепрессивную молекулу. Таким образом, экто-5'-нуклеотидаза катализирует дефосфорилирование пуриновых и пиримидиновых рибо- и дезоксирибонуклеозидмонофосфатов в соответствующий нуклеозид. Хотя CD73 характеризуется широкой субстратной специфичностью, он предпочитает пуриновые рибонуклеозиды.
CD73 также называется экто-5'нуклеазой (экто-5'NT, ЕС 3.1.3.5). Термин "CD73" включает в себя любые варианты или изоформы CD73, которые экспрессируются клетками в естественных условиях. Соответственно, антитела, описанные в данном документе, могут давать перекрестную реакцию с CD73 из вида, отличного от человека (например, CD73 яванского макака). В качестве альтернативы антитела могут быть специфичными в отношении человеческого CD73 и могут не проявлять какой-либо перекрестной реактивности с другими видами. CD73 или любые его варианты и изоформы можно либо выделить из клеток или тканей, которые экспрессируют их в естественных условиях, или их можно получить с помощью методов на основе рекомбинации с использованием методик, хорошо известных из уровня техники и/или описанных в данном документе.
Были идентифицированы две изоформы человеческого CD73, обе из которых имеют одинаковые N-концевую и С-концевую части. Изоформа 1 (номер доступа NP_002517.1; SEQ Ш NO: 1) представляет собой наиболее длинный белок, состоящий из 574 аминокислот и 9 экзонов. Изоформа 2 (номер доступа NP_001191742.1; SEQ Ш NO: 2) кодирует более короткий белок, состоящий из 524 аминокислот, у которого отсутствуют аминокислоты 404-453. У изоформы 2 отсутствует альтернативный экзон в рамке считывания, что дает в результате транскрипт только с 8 экзонами, но с одинаковыми N- и С-концевыми последовательностями.
Последовательность белка CD73 яванского макака (макака-крабоеда) представлена в виде SEQ Ш N0: 3. Оба из терминов "яванский макак" и "макак-крабоед" относятся к виду Масаса fascicularis и применяются в данном описании взаимозаменяемо.
Используемый в данном документе термин "антитело" может включать в себя целые антитела и любые их антигенсвязывающие фрагменты {т.е. "антигенсвязывающие части") или их отдельные цепи. В соответствии с одним вариантом осуществления "антитело" относится к гликопротеину, содержащему по меньшей мере две тяжелых (Н) цепи и две легких (L) цепи, соединенные дисульфидными связями, или к его антигенсвязывающей части. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи (обозначаемого в данном документе сокращением VH) и константного участка тяжелой цепи. В определенных встречающихся в естественных условиях антителах IgG, IgD и IgA константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов, CHI, СН2 и СНЗ. В определенных встречающихся в естественных условиях антителах каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи (обозначаемого в данном документе сокращением VL) И константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена, CL. VH И VL участки можно дополнительно подразделить на участки с гипервариабельностью, называемые гипервариабельными участками (CDR), чередующиеся с участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками (FR). Каждый VH И VL СОСТОИТ ИЗ трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные участки антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, в том числе с различными клетками иммунной системы {например, эффекторными клетками) и первым компонентом (Clq) классической системы комплемента.
Тяжелая цепь антитела может содержать или не содержать концевой лизин (К) или концевые глицин и лизин (GK). Таким образом, любая из последовательностей тяжелой цепи и последовательностей константного участка тяжелой цепи, представленных в данном документе, может заканчиваться либо GK или G, либо у нее могут отсутствовать К или GK независимо от того, что обеспечивает последняя аминокислота в
последовательности. Это обусловлено тем, что концевой лизин и иногда глицин и лизин отщепляются в ходе экспрессии антитела.
Антитела, как правило, специфично связываются со своим когнатным антигеном с высокой аффинностью, что отражается константой диссоциации (KD), составляющей 10"7-10"11 М или менее. Любая KD, большая чем приблизительно 10"6 М, как обычно считается, указывает на неспецифическое связывание. Как используется в данном документе, антитело, которое "специфично связывается" с антигеном, относится к антителу, которое связывается с антигеном и практически идентичными антигенами с высокой аффинностью, это означает, что оно характеризуется KD, составляющей 10"7 М или менее, предпочтительно 10"8 М или менее, еще более предпочтительно 5 х 10"9 М или менее и наиболее предпочтительно от 10"8М до 10"10М или менее, но не связывается с высокой аффинностью с неродственными антигенами. Антиген является "практически идентичным" заданному антигену, если он проявляет высокий уровень идентичности последовательности с заданным антигеном, например, если его последовательность по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97% или по меньшей мере на 99% или более идентична последовательности заданного антигена. Например, антитело, которое специфично связывается с человеческим CD73, также может давать перекрестные реакции с CD73 из определенных видов приматов, отличных от человека (например, яванского макака), но могут не давать перекрестные реакции с CD73 из других видов или с антигеном, отличающимся от CD73.
Иммуноглобулин может происходить из любого из общеизвестных изотипов, в том числе без ограничения IgA, секреторного IgA, IgG и IgM. Изотип IgG делится на подклассы у определенных видов: IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4 у людей и IgGl, IgG2a, IgG2b и IgG3 у мышей. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, относятся к подтипу человеческого IgGl или IgG2. Иммуноглобулины, например, человеческий IgGl, существуют в виде нескольких аллотипов, которые отличаются друг от друга не более чем несколькими аминокислотами. Например, "антитело" может включать в себя как встречающиеся в естественных условиях, так и не встречающиеся в естественных условиях антитела; моноклональные и поликлональные антитела; химерные и гуманизированные антитела; человеческие антитела и антитела, отличные от человеческих; полностью синтетические антитела и
одноцепочечные антитела.
Используемый в данном документе термин "антигенсвязывающая часть" антитела относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность к специфичному связыванию с антигеном {например, человеческим CD73). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может выполняться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемые термином "антигенсвязывающая часть" антитела, например, антитела к CD73, описанного в данном документе, включают в себя (i) Fab-фрагмент, моновалентный фрагмент, состоящий из VL, VH, CL И CHI доменов; (ii) Р(аЬ')2-фрагмент, бивалентный фрагмент, содержащий два Fab-фрагмента, связанные дисульфидным мостиком в шарнирном участке; (ш) Fd-фрагмент, состоящий из VH И СН1 доменов; (iv) Fv-фрагмент, состоящий из VL И VH доменов одного плеча антитела, (v) dAb-фрагмент (Ward et al, (1989) Nature 341:544-546), который состоит из VH домена; и (vi) выделенный гипервариабельный участок (CDR) или (vii) комбинацию двух или более выделенных CDR, которые необязательно могут быть соединены синтетическим линкером. Более того, хотя два домена в Fv-фрагменте, VL И VH, кодируются отдельными генами, их можно соединить синтетическим линкером с использованием методов на основе рекомбинации, что обеспечивает возможность их получения в виде одной белковой цепи, в которой VL И VH участки спариваются с образованием моновалентных молекул, известных как одноцепочечный Fv (scFv); см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Предполагается, что такие одноцепочечные антитела также охватываются термином "антигенсвязывающая часть" антитела. Эти и другие возможные конструкты описаны в Chan & Carter (2010) Nat. Rev. Immunol. 10:301. Эти фрагменты антитела получают с использованием традиционных методик, известных специалисту в данной области техники, и фрагменты подвергают скринингу в отношении полезности таким же образом, что и интактные антитела. Антигенсвязывающие части можно получить с помощью методик с использованием рекомбинантной ДНК или путем ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов.
"Биспецифичное" или "бифункциональное антитело" представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две отличающиеся пары тяжелых/легких
цепей, что приводит к образованию двух сайтов связывания антигена со специфичностью в отношении отличающихся антигенов. Биспецифичные антитела можно получить с помощью ряда способов, в том числе слияния гибридом или связывания Fab'-фрагментов. См., например, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al.,J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992).
Используемый в данном документе термин "моноклональное антитело" относится к антителу, которое проявляет одну специфичность связывания и аффинность в отношении конкретного эпитопа, или к композиции антител, в которой все антитела проявляют одну специфичность связывания и аффинность в отношении конкретного эпитопа. Как правило, такие моноклональные антитела будут происходить из одной клетки или нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, и они будут передаваться по наследству без намеренного внесения каких-либо изменений в последовательность. Соответственно, термин "человеческое моноклональное антитело" относится к моноклональному антителу, которое имеет вариабельные и необязательные константные участки, происходящие из последовательностей зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов. В соответствии с одним вариантом осуществления человеческие моноклональные антитела получают с помощью гибридомы, например, полученной путем слияния В-клетки, полученной из трансгенного или трансхромосомного отличного от человека животного (например, трансгенной мыши, имеющей геном, содержащий трансген человеческой тяжелой цепи и трансген легкой цепи) с иммортализированной клеткой.
Используемый в данном документе термин "рекомбинантное человеческое антитело" включает в себя все человеческие антитела, которые получены, экспрессируются, созданы или выделены с помощью рекомбинантных средств, такие как (а) антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным по отношению к генам человеческих иммуноглобулинов, или из гибридомы, полученной из него, (Ь) антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела, например, из трансфектомы, (с) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител, и (d) антитела, полученные, экспрессируемые, созданные или выделенные с помощью любых других средств, которые затрагивают сплайсинг последовательностей гена человеческого иммуноглобулина в другие последовательности ДНК. Такие рекомбинантные
человеческие антитела содержат вариабельные и константные участки, в которых используются конкретные последовательности зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов, и которые кодируются генами зародышевой линии, но включают последующие перегруппировки и мутации, которые происходят, например, в ходе созревания антитела. Как известно из уровня техники (см., например, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125), вариабельный участок содержит антигенсвязывающий домен, кодируемый различными генами, которые перегруппировываются с образованием антитела, специфичного к чужеродному антигену. Помимо перегруппировки, вариабельный участок может дополнительно модифицироваться за счет многочисленных изменений отдельных аминокислот (называемых соматической мутацией или гипермутацией), повышая аффинность антитела к чужеродному антигену. Константный участок будет меняться при дальнейшем ответе на антиген (т.е. переключение изотипа). Таким образом, подвергшиеся перегруппировке и соматической мутации последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептиды легкой цепи и тяжелой цепи иммуноглобулина в ответ на антиген, могут быть не идентичными исходным последовательностям зародышевого типа, но вместо этого они будут практически идентичными или подобными (т.е. идентичными по меньшей мере на 80%).
"Человеческое" антитело (HuMAb) относится к антителу, имеющему вариабельные участки, в которых как каркасные участки, так и CDR участки происходят из последовательностей зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов. Более того, если антитело содержит константный участок, константный участок также происходит из последовательностей зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов. Антитела, описанные в данном документе, могут включать в себя аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов (например, мутации, вводимые посредством неспецифического или сайт-специфического мутагенеза in vitro или при соматической мутации in vivo). Тем не менее, не предполагается, что термин "человеческое антитело", используемый в данном документе, включает антитела, в которых последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии другого вида млекопитающих, такого как мышь, были пересажены на человеческие каркасные последовательности. Термины "человеческие" антитела и "полностью человеческие" антитела используются синонимично.
"Гуманизированное" антитело относится к антителу, в котором некоторые, большинство или все из аминокислот за пределами CDR доменов антитела, не являющегося человеческим, заменены соответствующими аминокислотами, происходящими из человеческих иммуноглобулинов. В соответствии с одним вариантом осуществления гуманизированной формы антитела некоторые, большинство или все из аминокислот за пределами CDR доменов были заменены аминокислотами из человеческих иммуноглобулинов, тогда как некоторые, большинство или все аминокислоты в пределах одного или нескольких CDR участков являются неизменными. Небольшие добавления, делеции, вставки, замены или модификации аминокислот являются допустимыми при условии, что они не нарушают способность антитела к связыванию с конкретным антигеном. "Гуманизированное" антитело сохраняет антигенную специфичность, подобную специфичности исходного антитела.
"Химерное антитело" относится к антителу, в котором вариабельные участки происходят из одного вида, а константные участки происходят из другого вида, такому как антитело, в котором вариабельные участки происходят из мышиного антитела, а константные участки происходят из человеческого антитела.
"Модифицированный константный участок тяжелой цепи" относится к константному участку тяжелой цепи, содержащему константные домены СН1, шарнирный, СН2 и СНЗ, причем один или несколько из константных доменов происходят из отличающегося изотипа (например, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4). В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок включает в себя СН1 домен человеческого IgG2 и шарнир человеческого IgG2, слитый с СН2 доменом человеческого IgGl и СНЗ доменом человеческого IgGl. В соответствии с определенными вариантами осуществления такие модифицированные константные участки также включают в себя модификации аминокислот в пределах одного или нескольких из доменов по сравнению с аминокислотной последовательностью дикого типа.
Упоминание в данном документе антитела как "CD73.3" или "CD73.4" без указания идентификационной информации о константном участке, если не указано иное, относится к антителам, имеющим вариабельные участки CD73.3 или CD73.4, соответственно, с любым константным участком, описанным в данном документе.
Используемый в данном документе "изотип" относится к классу антител (например, антителу IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD и IgE ), который кодируется генами константного участка тяжелой цепи.
"Аллотип" относится к встречающимся в естественных условиях вариантам в пределах группы с конкретным изотипом, причем данные варианты отличаются несколькими аминокислотами (см., например, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1). Антитела, описанные в данном документе, могут относиться к любому аллотипу.
Если иное не определено в данном документе, номера всех аминокислот соответствуют нумерации аминокислот в антителе EU согласно системе Kabat (Kabat, Е. A., etal. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, MH Publication No. 91-3242).
Фразы "антитело, распознающее антиген" и "антитело, специфичное в отношении антигена" используются в данном документе взаимозаменяемо с термином "антитело, которое специфично связывается с антигеном".
Используемый в данном документе термин "выделенное антитело", как предполагается, относится к антителу, которое практически не содержит других антител с отличающимися антигенными специфичностями (например, выделенное антитело, которое специфично связывается с CD73, практически не содержит антител, которые специфично связываются с антигенами, отличными от CD73). Выделенное антитело, которое специфично связывается с эпитопом CD73, тем не менее, может характеризоваться перекрестной реактивностью с другими белками CD73 из отличающихся видов.
Как используется в данном документе, антитело, которое "ингибирует CD73" относится к антителу, которое ингибирует биологическую и/или ферментную функцию CD73. Эти функции включают в себя, например, способность антитела ингибировать ферментативную активность CD73, например, регулируемое CD73 продуцирование аденозина или снижение продуцирования сАМР.
Как используется в данном документе, антитело, которое "интернализируется", относится к антителу, которое пересекает клеточную мембрану после связывания с антигеном клеточной поверхности. Интернализация включает в себя опосредованную антителом интернализацию рецептора, например, CD73. В соответствии с некоторыми
вариантами осуществления антитело "интернализируется" в клетки, экспрессирующие CD73, с показателем Тш, равным приблизительно 10 мин. или менее.
"Эффекторная функция" относится ко взаимодействию Fc-участка антитела с Fc-рецептором или лигандом или к биохимическому явлению, которое является результатом такого взаимодействия. Иллюстративные "эффекторные функции" включают в себя связывание Clq, комплементзависимую цитотоксичность (CDC), связывание с Fc-рецептором, FcyR-опосредованные эффекторные функции, такие как ADCC и антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP) и снижение количества рецептора на клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора; BCR). Такие эффекторные функции обычно требуют объединения Fc-участка со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела).
"Fc-рецептор" или "FcR" представляет собой рецептор, который связывается с Fc-участком в иммуноглобулине. FcR, которые связываются с антителом IgG, включают в себя рецепторы семейства FcyR, в том числе аллельные варианты и полученные в ходе альтернативного сплайсинга формы этих рецепторов. Семейство FcyR состоит из трех активирующих (FcyRI, FcyRIII и FcyRIV у мышей; FcyRIA, FcyRIIA и FcyRIIIA у людей) и одного ингибирующего (FcyRIIB) рецептора. Различные свойства человеческих FcyR приведены в таблице 1. У большинства характерных типов эффекторных клеток коэкспрессируются один или несколько активирующих FcyR и ингибирующий FcyRIIB, тогда как клетки-натуральные киллеры (NK) селективно экспрессируют один активирующий Fc-рецептор (FcyRIII у мышей и FcyRIIIA у людей), а не ингибирующий FcyRIIB у мышей и людей. Человеческий IgGl связывается с большинством Fc-рецепторов человека и считается эквивалентным мышиному IgG2a относительно типов активирующих Fc-рецепторов, с которыми он связывается.
Fey
Аллельные варианты
Аффинность в
отношении человеческого IgG
Предпочтение к изотипу
Распространение в клетках
средняя
макрофаги, эозинофилы, дендритные клетки, тромбоциты
R131
Низкая
IgGl> 3> 4> 2
FcyRIIIA
V158
Средняя
IgGl=3"4> 2
NK-клетки, моноциты, макрофаги, тучные клетки, эозинофилы, дендритные клетки?
F158
Низкая
IgGl=3"4> 2
FcyRIIB
1232
Низкая
IgGl=3=4> 2
В-клетки, моноциты, макрофаги, дендритные клетки, тучные клетки
T232
Низкая
IgGl=3=4> 2
"Шарнир", "шарнирный домен", или "шарнирный участок", или "шарнирный участок антитела" относится к домену в константном участке тяжелой цепи, который соединяет СН1 домен с СН2 доменом и включает в себя верхнюю, среднюю и нижнюю части шарнира (Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083). Шарнир обеспечивает изменяющиеся уровни гибкости между связывающими и эффекторными участками антитела, а также обеспечивает сайты для образования межмолекулярных дисульфидных связей между константными участками двух тяжелых цепей. Как используется в данном документе, шарнир начинается в Glu216 и заканчивается в Gly237 для всех изотипов IgG (Roux et al., 1998 J Immunol 161:4083). Последовательности шарниров дикого типа IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4 приведены в таблицах 2 и 31.
Таблица 2. Аминокислоты шарнирного участка
Тип Ig
С-концевой Сн1* (SEQ ID NO)
Верхний шарнир (SEQ ID NO)
Средний шарнир (SEQ Ш N0)
Нижний шарнир (SEQ ID NO)
IgGl IgG2
IgG3 (17-15-15-15) IgG3 (17-15-15) IgG3 (17-15) IgG3 (15-15-15)
IgG3 (15) IgG4
VDKRV (284) VDKTV (285) VDKRV (284) VDKRV (284) VDKRV (284) VDKRV (284)
VDKRV (284) VDKRV (284)
EPKSCDKTHT (286) ERK
ELKTRLGDTTHT (287) ELKTRLGDTTHT (287) ELKTRLGDTTHT (287) EPKS (288)
EPKS (288) ESKYGPP (289)
CPPCP (290) APELLGG (298)
CCVECPPCP (291) APPVAG (299)
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)3 (292) APELLGG (298)
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)2 (293) APELLGG (298)
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)i (294) APELLGG (298)
CDTPPPCPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)2 APELLGG (298)
(295)
CDTPPPCPRCP (296) APELLGG (298)
CPSCP (297) APEFLGG (298)
* С-концевые аминокислотные последовательности CHI доменов.
Термин "шарнир" включает в себя шарниры дикого типа (такие как изложенные в таблицах 2 и 31), а также их варианты (например, шарниры, не встречающиеся в естественных условиях, или модифицированные шарниры). Например, термин "шарнир IgG2" включает в себя шарнир дикого типа IgG2, который приведен в таблице 2, и варианты, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 1-3, 1-5, 3-5 мутаций и/или не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 мутацию, например, замены, делеции или добавления. Иллюстративные варианты шарнира IgG2 включают в себя шарниры IgG2, в которых 1,2,3 или все 4 цистеина (С219, С220, С226 и С229) заменены на другую аминокислоту. В конкретном варианте осуществления IgG2 содержит замену C219S. Шарнир IgG2 также может содержать замену в С220 или замены в обеих из С219 и С220. Шарнир IgG2 может содержать замену, которая отдельно или вместе с одной или несколькими заменами в других участках тяжелой или легкой цепи будет приводить к тому, что антитело будет принимать форму А или В (см., например, Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755). В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир представляет собой гибридный шарнир, который содержит последовательности от по меньшей мере двух изотипов. Например, шарнир может содержать верхний, средний или нижний шарнир от одного изотипа, а остальную часть шарнира от одного или нескольких других изотипов. Например, шарнир может представлять собой шарнир IgG2/IgGl и может содержать, например, верхний и средний шарниры IgG2 и нижний шарнир IgGl. Шарнир может обладать эффекторной функцией или может быть лишен эффекторной функции. Например, нижний шарнир IgGl дикого типа обеспечивает эффекторную функцию.
Термин "СН1 домен" относится к константному участку тяжелой цепи, связывающему вариабельный домен с шарниром в константном домене тяжелой цепи. Как используется в данном документе, СН1 домен начинается в А118 и заканчивается в V215. Термин "СН1 домен" включает в себя СН1 домены дикого типа (такие как имеющие SEQ Ш N0: 98 для IgGl и SEQ Ш N0: 124 для IgG2), а также их варианты (например, СН1 домены, не встречающиеся в естественных условиях, или модифицированные СН1 домены). Например, термин "СН1 домен" включает в себя СН1 домены дикого типа и их варианты, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 1-3, 1-5, 3-5 мутаций и/или не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 мутацию, например, замены, делеции или добавления. Иллюстративные СН1 домены включают в себя СН1 домены с мутациями, которые модифицируют биологическую
активность антитела, такую как ADCC, CDC или период полувыведения. В данном документе предполагается модификации в СН1 домене, которые оказывают воздействие на биологическую активность антитела. СН1 домен может содержать замену C131S, причем данная замена может привести к тому, что антитело IgG2 или антитело, содержащее по меньшей мере часть антитела IgG2, такую как шарнир и/или шарнир и СН1, принимает В-форму в противоположность А-форме антитела.
Термин "СН2 домен" относится к константному участку тяжелой цепи, связывающему шарнир с СНЗ доменом в константном домене тяжелой цепи. Как используется в данном документе, СН2 домен начинается в Р238 и заканчивается в К340. Термин "СН2 домен" включает в себя СН2 домены дикого типа (такие как имеющие SEQ Ш N0: 137 для IgGl; таблица 35), а также их варианты (например, СН2 домены, не встречающиеся в естественных условиях, или модифицированные СН2 домены). Например, термин "СН2 домен" включает в себя СН2 домены дикого типа и их варианты, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 1-3, 1-5, 3-5 мутаций и/или не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 мутацию, например, замены, делеции или добавления. Иллюстративные СН2 домены включают в себя СН2 домены с мутациями, которые модифицируют биологическую активность антитела, такую как ADCC, CDC или период полувыведения. В соответствии с определенными вариантами осуществления СН2 домен содержит замены A330S/P331S, которые снижают эффекторную функцию. В данном документе предполагается другие модификации в СН2 домене, которые оказывают воздействие на биологическую активность антитела.
Термин "СНЗ домен" относится к константному участку тяжелой цепи, который является С-концевым относительно СН2 домена в константном домене тяжелой цепи. Как используется в данном документе, СНЗ домен начинается в G341 и заканчивается в К447. Термин "СНЗ домен" включает в себя СНЗ домены дикого типа (такие как имеющие SEQ Ш N0: 138 для IgGl; таблица 35), а также их варианты (например, СНЗ домены, не встречающиеся в естественных условиях, или модифицированные СНЗ домены). Например, термин "СНЗ домен" включает в себя СНЗ домены дикого типа и их варианты, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 1-3, 1-5, 3-5 мутаций и/или не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 мутацию, например, замены, делеции или добавления. Иллюстративные СНЗ домены включают в себя СНЗ домены с мутациями, которые модифицируют биологическую активность
антитела, такую как ADCC, CDC или период полувыведения. В данном документе предполагается модификации в СНЗ домене, которые оказывают воздействие на биологическую активность антитела.
"CL домен" относится к константному домену легкой цепи. Термин "CL домен" включает в себя домены CL дикого типа и их варианты, например, варианты, содержащие C214S.
"Fc-участок с нативной последовательностью" или "Fc с нативной последовательностью" содержит аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности Fc-участка, обнаруживаемого в природе. Человеческие Fc-участки с нативной последовательностью включают в себя Fc-участок с нативной последовательностью человеческого IgGl; Fc-участок с нативной последовательностью человеческого IgG2; Fc-участок с нативной последовательностью человеческого IgG3 и Fc-участок с нативной последовательностью человеческого IgG4, а также их варианты, встречающиеся в естественных условиях. Fc с нативной последовательностью включает в себя различные аллотипы Fc (см., например, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1).
Термин "эпитоп" или "антигенная детерминанта" относится к сайту на антигене (например, CD73), с которым специфично связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы в антигенах белков могут быть образованы как из смежных аминокислот (обычно линейный эпитоп), так и из несмежных аминокислот, располагающихся рядом при свертывании белка в третичную структуру (обычно конформационный эпитоп). Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, как правило, но не всегда сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные при свертывании в третичную структуру, как правило, теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп, как правило, включает в себя по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения того, какие эпитопы связываются заданным антителом (т.е. картирования эпитопов), являются хорошо известными в уровне техники и включают, например, анализы с использованием иммуноблоттинга и иммунопреципитации, в которых перекрывающиеся или смежные пептиды (например, из CD73) исследуют в отношении способности реагировать с заданным антителом (например,
антителом к CD73). Способы определения пространственной конформации эпитопов включают в себя методики из уровня техники, а также методики, описанные в данном документе, например, рентгеноструктурную кристаллографию, 2-мерный ядерный магнитный резонанс и HDX-MS (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)).
Термин "картирование эпитопов" относится к процессу идентификации молекулярных детерминант на антигене, вовлеченных в распознавание антигена антителом.
Термин "связываются с одним и тем же эпитопом" в отношении двух или более антител означает, что антитела связываются с одним и тем же сегментом из аминокислотных остатков при определении помощью заданного метода. Методики определения того, связываются ли антитела с "тем же эпитопом на CD73", что и антитела, описанные в данном документе, включают в себя, например, методы картирования эпитопов, такие как рентгеноструктурные анализы кристаллов комплексов антиген-антитело, обеспечивающие разрешение эпитопа в атомном масштабе, и масс-спектрометрии с использованием водородно/дейтериевого обмена (HDX-MS). В других способах отслеживается связывание антитела с фрагментами антигена (например, фрагментами, полученными в результате протеолиза) или мутированными вариантами антигена, причем потерю связывания вследствие модификации аминокислотного остатка в последовательности антигена часто считают указанием на компонент эпитопа (например, сканирующий аланином мутагенез - Cunningham & Wells (1985) Science 244:1081). Кроме того, для картирования эпитопов также можно применять вычислительные комбинаторные методы. Эти методы основываются на способности антитела, представляющего интерес, выделять на основе аффинности специфичные короткие пептиды из комбинаторных пептидных библиотек с использованием фагового дисплея.
Антитела, которые "конкурируют с другим антителом за связывание с мишенью", относятся к антителам, которые ингибируют (частично или полностью) связывание другого антитела с мишенью. Конкурируют ли два антитела друг с другом за связывание с мишенью, т.е. ингибирует ли одно антитело связывание другого антитела с мишенью, и в какой мере оно это связывание ингибирует, можно определить с использованием известных конкурентных экспериментов, например, таких как эксперименты, описанные в
разделе Примеры. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело конкурирует с другим антителом и ингибирует его связывание с мишенью по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%. Уровень ингибирования или конкуренции может отличаться в зависимости от того, какое антитело является "блокирующим антителом" (т.е. "холодным" антителом, которое вначале инкубируют с мишенью). Конкурентные анализы можно проводить, как описано, например, в Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 или в главе 11 в "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999. Конкурирующие антитела связываются с тем же эпитопом, перекрывающимся эпитопом или со смежными эпитопами (например, что подтверждается стерическим несоответствием).
Другие конкурентные анализы связывания включают в себя: прямой или непрямой твердофазный радиоиммунологический анализ (RIA), прямой или непрямой твердофазный иммуноферментный анализ (EIA), конкурентный сэндвич-анализ (см., Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)); прямой твердофазный EIA с использованием пары биотин-авидин (см. Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)); твердофазный анализ с прямым мечением, твердофазный сэндвич-анализ с прямым мечением (см., Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); твердофазный RIA анализ с прямым мечением, с использованием метки 1-125 (см., Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); прямой твердофазный EIA с использованием пары биотин-авидин (Cheung et al., Virology 176:546 (1990)) и RIA с прямым мечением. (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)).
Используемые в данном документе термины "специфическое связывание", "селективное связывание", "селективно связывается" и "специфично связывается" относятся к связыванию антитела с эпитопом на предварительно определенном антигене, но не с другими антигенами. Как правило, антитело (i) связывается с равновесной константой диссоциации (KD), составляющей примерно менее чем 10"7 М, как например, примерно менее чем 10"8 М, 10"9 М или 10"10 М или еще ниже при определении, например, с помощью технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) на инструменте для измерения поверхностного плазмонного резонанса BIACORE(r) 2000 с использованием предварительно определенного антигена, например, рекомбинантного человеческого
CD73, в качестве анализируемого вещества, а антитела в качестве лиганда, или с помощью анализа связывания антитела с антиген-положительными клетками по Скэтчарду, и (ii) связывается с предварительно определенным антигеном с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза больше, чем его аффинность для связывания с неспецифическим антигеном (например, BSA, казеин), отличающимся от предварительно определенного или близкородственного антигена. Соответственно, если не указано иное, антитело, которое "специфично связывается с человеческим CD73", относится к антителу, которое связывается с растворимым или связанным с клеткой человеческим CD73 с KD, составляющей 10"7 М или менее, как например, примерно менее чем 10"8 М, 10"9 М или 10" 10 М или еще ниже. Антитело, которое "дает перекрестную реакцию с CD73 яванского макака", относится к антителу, которое связывается с CD73 яванского макака с KD, составляющей 10"7 М или менее, как например, менее чем 10 -8 М, 10"9 М или 10"10 М или еще ниже. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела, которые не дают перекрестных реакций с CD73 из отличного от человека вида, проявляют такое связывание с этими белками, которое практически невозможно выявить в стандартных анализах связывания.
Термины "кассоциации" или "ка", используемые в данном документе, как предполагается, относятся к константе скорости ассоциации при взаимодействии конкретных антитела и антигена, тогда как предполагается, что термины "кдиссоциации" или "kd", используемые в данном документе, относятся к константе скорости диссоциации при взаимодействии конкретных антитела и антигена. Предполагается, что используемый в данном документе термин "KD" ОТНОСИТСЯ К равновесной константе диссоциации, которую получают из отношения kd к ка (т.е. kd/ka) и которая выражена в виде молярной концентрации (М). Величины KD ДЛЯ антител можно определить с использованием методов, общепринятых в данной области техники. Предпочтительным методом для определения KD антитела является применение поверхностного плазмонного резонанса, предпочтительно с использованием биосенсорной системы, такой как система измерения поверхностного плазмонного резонанса Biacore(r), или проточной цитометрии и анализа по Скэтчарду.
Термин "ЕС50" в контексте in vitro или in vivo анализа с использованием антитела или его антигенсвязывающего фрагмента относится к концентрации антитела или его
антигенсвязывающей части, которая индуцирует реакцию, которая составляет 50% от максимальной реакции, т.е. находится посередине между максимальной реакцией и фоновым уровнем.
"Скорость интернализации" антитела или рецептора, например, CD73, которая опосредуется антителом, например, антителом к CD73, может быть представлена, например, Тш для интернализации, например, как показано в разделе Примеры. Скорость интернализации антитела к CD73 может быть повышена или увеличена по меньшей мере на 10%), 30%), 50%), 75%), 2-кратно, 3-кратно, 5-кратно или более, приводя в результате к сокращению Тш по меньшей мере на 10%, 30%, 50%, 75%, 2-кратно, 3-кратно, 5-кратно или более при изменении константного участка тяжелой цепи антитела в модифицированный константный участок тяжелой цепи, например, константный участок тяжелой цепи, который содержит шарнир IgG2 и СН1 домен IgG2. Например, вместо имеющегося Тш, составляющего 10 минут, модифицированный константный участок тяжелой цепи может повышать скорость интернализации и тем самым сокращать Тш до 5 минут (т.е. двукратное повышение скорости интернализации или двукратное снижение Тш). "Тш" определен как время, за которое половина достигается половина от максимальной интернализации, которое измеряется с момента времени, когда антитело добавляют к клеткам. Максимальный уровень интернализации может представлять собой уровень интернализации при плато на графике, представляющем зависимость интернализации от концентраций антитела. Модифицированный константный участок тяжелой цепи может повышать максимальный уровень интернализации антитела по меньшей мере на 10%, 30%, 50%, 75%, 2-кратно, 3-кратно, 5-кратно или более. Другой способ сравнения эффективностей интернализации у разных антител, таких как антитело с модифицированным константным участком тяжелой цепи и такое же антитело без него, заключается в сравнении уровня их интернализации при заданной концентрации антитела (например, 100 нМ) или в течение заданного времени (например, 2 минуты, 5 минут, 10 минут или 30 минут). Сравнение уровней интернализации также можно выполнить путем сравнения уровней ЕС50 для интернализации. Можно определить уровень интернализации одного антитела по сравнению с уровнем интернализации у заданного (эталонного) антитела, например, антитела, описанного в данном документе, например, 11F11, или CD73.4-IgG2CS-IgGl, или CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf, и его можно указать в виде процента от
величины, полученной с заданным (эталонным) антителом. Степень интернализации может быть повышена по меньшей мере на 10%, 30%, 50%, 75%, 2-кратно, 3-кратно, 5-кратно или более, что можно сравнить с помощью любого из этих способов.
Используемый в данном документе термин "встречающийся в естественных условиях" применительно к объекту относится к тому факту, что объект может обнаруживаться в природе. Например, встречающейся в естественных условиях является последовательность полипептида или полинуклеотида, которая присутствует в организме (включая вирусы), которая может быть выделена из природного источника и которая не была намеренно модифицирована человеком в лаборатории.
"Полипептид" относится к цепи, содержащей по меньшей мере два последовательно связанных аминокислотных остатка при отсутствии верхнего предела в отношении длины цепи. Один или несколько аминокислотных остатков в белке могут содержать модификацию, такую как без ограничения гликозилирование, фосфорилирование или дисульфидная связь. "Белок" может содержать один или несколько полипептидов.
Используемый в данном документе термин "молекула нуклеиновой кислоты", как предполагается, включает молекулы ДНК и молекулы РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть однонитевой или двунитевой и может представлять собой кДНК.
Также предполагаются "консервативные модификации последовательности" для последовательностей, изложенных в SEQ Ш N0, описанных в данном документе, т.е. модификации нуклеотидной и аминокислотной последовательности, которые не нарушают связывание антитела, кодируемого нуклеотидной последовательностью или содержащего аминокислотную последовательность, с антигеном. Такие консервативные модификации последовательности включают консервативные нуклеотидные и аминокислотные замены, а также добавления и делеции нуклеотидов и аминокислот. Например, модификации могут быть введены в SEQ Ш N0, описанные в данном документе, с помощью стандартных методик, известных в уровне техники, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Консервативные модификации последовательности включают в себя консервативные аминокислотные замены, при которых аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток с подобной боковой цепью. Семейства аминокислотных остатков с подобными боковыми цепями были определены в уровне техники. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями
(например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серии, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, прогнозируемый несущественный аминокислотный остаток в антителе к CD73 предпочтительно заменен на другой аминокислотный остаток из того же семейства боковой цепи. Способы идентификации консервативных нуклеотидных и аминокислотных замен, которые не исключают связывание с антигеном, являются хорошо известными в уровне техники (см., например, Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); и Burks etal. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)).
В качестве альтернативы, в соответствии с другим вариантом осуществления мутации можно вводить произвольно по всей кодирующей последовательности антитела к CD73 или ее части, как например, с помощью насыщающего мутагенеза, и полученные в результате антитела к CD73 можно подвергать скринингу в отношении улучшенной активности связывания.
Применительно к нуклеиновым кислотам термин "значительная гомология" указывает на то, что две нуклеиновые кислоты или их определенные последовательности при оптимальном выравнивании и сравнении являются идентичными, при соответствующих нуклеотидных вставках или делециях, по меньшей мере приблизительно на 80% нуклеотидов, обычно по меньшей мере приблизительно на 90-95% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 98-99,5% нуклеотидов. В качестве альтернативы, практическая гомология существует, когда сегменты будут гибридизироваться при условиях селективной гибридизации с последовательностью, комплементарной их нити.
Применительно к полипептидам термин "значительная гомология" указывает на то, что два полипептида или их определенные последовательности при оптимальном выравнивании и сравнении являются идентичными, при соответствующих аминокислотных вставках или делециях, по меньшей мере приблизительно на 80%
аминокислот, обычно по меньшей мере приблизительно на 90-95% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 98-99,5% аминокислот.
Процентная идентичность двух последовательностей зависит от числа идентичных положений, которые есть в обеих последовательностях в случае, когда последовательности подвергаются оптимальному выравниванию (т.е. % гомологии = число идентичных положений/общее число положений х 100), причем при определении с помощью оптимального выравниванию принимают во внимание число гэпов и длину каждого гэпа, которые следует ввести для оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процентной идентичности двух последовательностей можно выполнить с использованием математического алгоритма, как описано в неограничивающих примерах ниже.
Процентную идентичность двух нуклеотидных последовательностей можно определить с помощью программы GAP в пакете программного обеспечения GCG (доступен на сайте http://www.gcg.com) при использовании матрицы NWSgapdna.CMP, и штрафа за открытие гэпа 40, 50, 60, 70 или 80, и штрафа за продолжение гэпа 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Процентную идентичность двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей также можно определить с помощью алгоритма по Е. Meyers and W. Miller (CABIOS, 4:11-17 (1989)), который был включен в программу ALIGN (версия 2.0), при использовании таблицы веса остатков РАМ 120, штрафа за продолжение гэпа 12 и штрафа за открытие гэпа 4. Кроме того, процентную идентичность двух аминокислотных последовательностей можно определить с помощью алгоритма по Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)), который бы включен в программу GAP в пакете программного обеспечения GCG (доступен на сайте http://www.gcg.com), при использованием либо матрицы Blossum 62, либо матрицы РАМ250, и штрафа за открытие гэпа 16, 14, 12, 10, 8, 6 или 4, и штрафа за продолжение гэпа 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
Описанные в данном документе последовательности нуклеиновой кислоты и белка также можно использовать в качестве "последовательности запроса" для проведения поиска в базах данных общего пользования, например, для идентификации родственных последовательностей. Такие поиски можно проводить с использованием программ NBLAST и XBLAST (версия 2.0) из Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10. Поиски нуклеотидов с помощью BLAST можно проводить с использованием программы NBLAST,
вес = 100, длина слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных молекулам нуклеиновой кислоты, описанным в данном документе. Поиски белков с помощью BLAST можно проводить с использованием программы XBLAST, вес = 50, длина слова = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных белковым молекулам, описанным в данном документе. Для получения выравниваний с гэпами с целью сравнения можно использовать Gapped BLAST, как описано в Altschul et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402. При использовании программ BLAST и Gapped BLAST можно использовать параметры по умолчанию в соответствующих программах (например, XBLAST и NBLAST). См., www.ncbi.nlm.nih.gov.
Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточном лизате или в частично очищенном или практически чистом виде. Нуклеиновая кислота является "выделенной" или "сделанной практически чистой", если она очищена от других клеточных компонентов или других загрязняющих примесей, например, других клеточных нуклеиновых кислот (например, других частей хромосомы) или белков, с помощью стандартных методик, в том числе щелочной обработки/обработки SDS (додецилсульфат натрия), центрифугирования в градиенте плотности CsCl, колоночной хроматографии, электрофореза в агарозном геле и других методик, широко известных в уровне техники. См., F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987).
Нуклеиновые кислоты, например, кДНК, могут быть подвергнуты мутации в соответствии со стандартными методиками с обеспечением генных последовательностей. В случае кодирующих последовательностей эти мутации могут воздействовать на аминокислотную последовательность, если это необходимо. В частности, предполагаются последовательности ДНК, практически гомологичные или происходящие из нативных V, D, J, константных, переключающих и других таких последовательностей, описанных в данном документе.
Предполагается, что используемый в данном документе термин "вектор" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она была связана. Одним типов вектора является "плазмида", которая относится к петле кольцевой двунитевой ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. Другим типом вектора является вирусный вектор, в
котором дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Определенные векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они введены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальную точку начала репликации и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, векторы млекопитающих, не относящиеся к эписомальным) могут интегрироваться в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяина и вследствие этого реплицируются вместе с геномом хозяина. Более того, определенные векторы способны управлять экспрессией генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются в данном документе "рекомбинантными векторами экспрессии" (или просто "векторами экспрессии"). В целом, векторы экспрессии, применимые в методиках с использованием рекомбинантной ДНК, часто имеют форму плазмид. В настоящем описании "плазмида" и "вектор" могут использоваться взаимозаменяемо, поскольку плазмида является наиболее широко используемой формой вектора. Тем не менее, также включены все остальные формы векторов экспрессии, такие как вирусные векторы (например, ретровирусы с дефектной репликацией, аденовирусы и аденоасоциированные вирусы), которые служат эквивалентным функциям.
Предполагается что используемый в данном документе термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин") относится к клетке, которая содержит нуклеиновую кислоту, которая в естественных условиях присутствует в клетке, и, возможно, клетку, в которую был введен рекомбинантный вектор экспрессии. Следует понимать, что такие термины, как предполагается, относятся не только к конкретной клетке субъекта, но также к потомству такой клетки. Поскольку определенные модификации могут происходить в последующих поколениях либо вследствие мутации, либо из-за воздействий окружающей среды, такое потомство, на самом деле, может не быть идентичным родительской клетке, но при этом все еще включено в объем используемого в данном документе термина "клетка-хозяин".
Используемый в данном документе термин "антиген" относится к любому натуральному или синтетическому иммуногенному веществу, такому как белок, пептид или гаптен. Антиген может представлять собой CD73 или его фрагмент.
"Иммунная реакция" относится к биологической реакции внутри позвоночного на чужеродные агенты, причем данная реакция защищает организм от этих агентов и
вызываемых ими заболеваний. Иммунная реакция опосредуется действием клетки иммунной системы (например, Т-лимфоцита, В-лимфоцита, клетки-натурального киллера (NK), макрофага, эозинофила, тучной клетки, дендритной клетки или нейтрофила) и растворимых макромолекул, продуцируемых любой из этих клеток или печенью (в том числе антитела, цитокины и компоненты комплемента), что приводит в результате к селективному нацеливанию, связыванию, повреждению, разрушению и/или удалению из организма позвоночного проникших патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, злокачественных или других ненормальных клеток, или, в случаях аутоиммунных реакций или патологического воспаления, нормальных человеческих клеток или тканей. Иммунный ответ или реакция включает в себя, например, активацию или ингибирование Т-клетки, например, эффекторной Т-клетки или Th-клетки, такой как CD4+ или CD8+ Т-клетка, или ингибирование Treg клетки.
"Иммуномодулятор" или "иммунорегулятор" относится к средству, например, компоненту пути передачи сигнала, которое может быть задействовано в модуляции, регуляции или модификации иммунной реакции. "Модуляция", "регуляция" или "модификация" иммунной реакции относится к любому изменению в клетке иммунной системы или изменению активности такой клетки (например, эффекторной Т-клетки). Такая модуляция включает в себя стимуляцию или подавление иммунной системы, которые могут проявляться как повышение или снижение числа различных типов клеток, повышение или снижение активности этих клеток или любые другие изменения, которые могут происходить в иммунной системе. Были идентифицированы как ингибирующие, так и стимулирующие иммуномодуляторы, некоторые из которых усиленно функционируют в опухолевом микроокружении. Иммуномодулятор может быть расположен на поверхности Т-клетки. "Иммуномодулирующая мишень" или "иммунорегуляторная мишень" представляет собой иммуномодулятор, на который оказывает целенаправленное воздействие связывание вещества, средства, фрагмента, соединения или молекулы, и чья активность изменяется при таком связывании. Иммуномодулирующие мишени включают в себя, например, рецепторы на поверхности клетки ("иммуномодулирующие рецепторы") и лиганды рецепторов ("иммуномодирующие лиганды").
Повышенная способность к стимуляции иммунной реакции или иммунной системы может являться результатом усиленной агонистической активности костимулирующих Т
клеточных рецепторов и/или усиленной антагонистической активности ингибирующих рецепторов. Повышенная способность к стимуляции иммунной реакции или иммунной системы может отражаться в кратном повышении ЕС50 или максимального уровня активности в анализе, в котором измеряют иммунную реакцию, например, в анализе, в котором измеряют изменения высвобождения цитокинов или хемокинов, цитолитическую активность (определяемую непосредственно на клетках-мишенях или опосредованно через выявление CD 107а или гранзимов) и пролиферацию. Способность к стимуляции иммунной реакции или активности иммунной системы может быть усилена по меньшей мере на 10%, 30%, 50%), 75%), 2-кратно, 3-кратно, 5-кратно или более.
"Иммунотерапия" относится к лечению субъекта, пораженного заболеванием, или имеющего риск заражения, или страдающего от рецидива заболевания, с помощью способа, предусматривающего индукцию, усиление, подавление или иную модификацию иммунной реакции.
"Иммуностимулирующая терапия" или "иммуностимуляторная терапия" относится к терапии, результатом которой является повышение (индукция или усиление) иммунной реакции у субъекта, например, для лечения злокачественной опухоли.
"Усиление эндогенной иммунной реакции" означает повышение эффективности или силы существующей иммунной реакции у субъекта. Это повышение эффективности и силы может быть достигнуто, например, посредством преодоления механизмов, которые подавляют эндогенную иммунную реакцию хозяина, или посредством стимуляции механизмов, которые усиливают эндогенную иммунную реакцию хозяина.
"Эффекторные Т-клетки" ("Теа") относятся к Т-клеткам (например, CD4+ и CD8+ Т-клеткам) с цитолитическими активностями, а также к Т-хелперным (Th) клеткам, которые секретируют цитокины, а также активируют другие иммунные клетки и управляют ими, но не включают регуляторные Т-клетки (Treg клетки).
Используемый в данном документе термин "связанный" относится к ассоциации двух или более молекул. Связь может быть ковалентной или нековалентной. Связь также может быть генетической (т.е. полученной путем слияния с использованием методов на основе рекомбинации). Такие связи можно получать с использованием широкого спектра методик, принятых в данной области техники, таких как химическая конъюгация и получение рекомбинантных белков.
Как используется в данном документе, "введение" относится к физическому введению субъекту композиции, содержащей терапевтическое средство, с использованием любого из различных способов и систем доставки, известных специалистам в данной области техники. Предпочтительные пути введения для антител, описанных в данном документе, включают внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например, путем инъекции или инфузии. Используемая в данном документе фраза "парентеральное введение" означает способы введения, за исключением энтерального и местного введения, обычно путем инъекции и включает в себя без ограничения внутривенную, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интралимфатическую, внутриочаговую, интракапсулярную, интраорбительную, внутрисердечную, интрадермальную, транстрахеальную, подкожную, внутрикожную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и интрастернальную инъекцию и инфузию, а также in vivo электропорацию. В качестве альтернативы, описанное в данном документе антитело можно вводить посредством непарентерального пути, такого как местный, эпидермальный или мукозальный путь введения, например, интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или местно. Введение также можно осуществлять, например, однократно, множество раз и/или в течение одного или нескольких длительных периодов.
Используемый в данном документе термин "опосредованная Т-клетками реакция" относится к реакции, опосредованной Т-клетками, в том числе эффекторными Т-клетками (например, CD8+ клетками) и хелперными Т-клетками (например, CD4+ клетками). Опосредованные Т-клетками реакции включают, например, Т-клеточную цитотоксичность и пролиферацию.
Используемый в данном документе термин "реакция цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL)" относится к иммунной реакции, индуцируемой цитотоксическими Т-клетками. CTL-реакции преимущественно опосредуются CD8+ Т-клетками.
Используемые в данном документе термины "ингибирует" или "блокирует" (например, в отношении ингибирования/блокирования связывания или активности CD73) используются взаимозаменяемо и охватывают как частичное, так и полное ингибирование/блокирование.
Используемый в данном документе термин "злокачественная опухоль" относится к обширной группе заболеваний, характеризующихся неконтролируемым ростом ненормальных клеток в организме. Нерегулируемое деление клеток приводить в результате к образованию злокачественных опухолей или клеток, которые внедряются в прилегающие ткани и могут метастазировать в удаленные части организма через лимфатическую систему или кровоток.
Используемые в данном документе термины "лечить", "осуществлять лечение" и "лечение" относятся к любому типу вмешательства или процессу, осуществляемому с субъектом, или к введению субъекту активного средства с целью обеспечения регрессии, облегчения, ослабления, ингибирования, или замедления, или предупреждения прогрессирования, развития, тяжести или повторного проявления симптома, осложнения, состояния или биохимических признаков, связанных с заболеванием. Профилактика относится к введению субъекту, который не имеет заболевания, для предупреждения возникновения заболевания или сведения к минимуму его воздействий, если оно возникло.
"Гематологическая злокачественная опухоль" включает в себя лимфому, лейкоз, миелому или злокачественную опухоль из лимфоидной ткани, а также злокачественную опухоль селезенки и лимфатических узлов. Иллюстративные лимфомы включают как В-клеточные лимфомы, так и Т-клеточные лимфомы. В-клеточные лимфомы включают как лимфомы Ходжкина, так и большинство неходжкинских лимфом. Неограничивающие примеры В-клеточных лимфом включают в себя диффузную В-крупноклеточную лимфому, фолликулярную лимфому, лимфому ассоциированной со слизистой лимфоидной ткани, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (перекликается с хроническим лимфоцитарным лейкозом), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), лимфому Беркитта, средостенную В-крупноклеточную лимфому, макроглобулинемию Вальденстрема, узловую В-клеточную лимфому из клеток краевой зоны, селезеночную лимфому из клеток краевой зоны, внутрисосудистую В-крупноклеточную лимфому, первичную выпотную лимфому, лимфоидный гранулематоз. Неограничивающие примеры Т-клеточных лимфом включают в себя внеузловую Т-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому кожи, анапластическую крупноклеточную лимфому и ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому. Гематологические злокачественные опухоли также включают в себя лейкоз, такой как, без ограничения, вторичный лейкоз, хронический лимфоцитарный
лейкоз, острый миелоидный лейкоз, хронический миелолейкоз и острый лимфобластный лейкоз. Гематологические злокачественные опухоли дополнительно включают в себя миеломы, такие как, без ограничения, множественная миелома и вялотекущая множественная миелома. Термином "гематологическая злокачественная опухоль" охватываются другие гематологические злокачественные опухоли и/или ассоциированные с В-клетками или Т-клетками злокачественные опухоли.
Термин "эффективная доза" или "эффективная дозировка" определяется как количество, достаточное для достижения или по меньшей мере частичного достижения желаемого эффекта. "Терапевтически эффективное количество" или "терапевтически эффективная доза" лекарственного или терапевтического средства представляет собой любое количество лекарственного средства, которое при применении отдельно или в комбинации с другим терапевтическим средством способствует регрессии заболевания, подтверждаемой снижением тяжести симптомов заболевания, повышением частоты и длительности бессимптомных периодов заболевания или предупреждением ухудшения или инвалидизации, обусловленных поражением заболеванием. "Профилактически эффективное количество" или "профилактически эффективная доза" лекарственного средства представляет собой количество лекарственного средства, которое при введении отдельно или в комбинации с другим терапевтическим средством субъекту, имеющему риск развития заболевания или риск подвергнуться рецидиву заболевания, ингибирует развитие или появление рецидива заболевания. Способность терапевтического или профилактического средства содействовать регрессии заболевания или ингибировать развитие или появление рецидива заболевания можно оценить с использованием ряда способов, известных практикующему специалисту в данной области техники, как например, в ходе клинических испытаний на субъектах-людях, в модельных системах на животных, прогнозирующих эффективность у людей, или путем анализа активности средства в in vitro анализах.
Например, противораковое средство представляет собой лекарственное средство, которое замедляет развитие злокачественной опухоли или способствует регрессии злокачественной опухоли у субъекта. В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления терапевтически эффективное количество лекарственного средства способствует регрессии злокачественной опухоли до момента ликвидации
злокачественной опухоли. "Способствует регрессии злокачественной опухоли" означает, что введение эффективного количества лекарственного средства самого по себе или в комбинации с противоопухолевым средством приводит в результате к уменьшению опухолевого роста или размера опухоли, некрозу опухоли, снижению тяжести по меньшей мере одного симптома заболевания, повышению частоты и длительности бессимптомных периодов заболевания, предупреждению ухудшения или инвалидизации, обусловленных поражением заболеванием, или иному ослаблению симптомов заболевания у пациента. Фармакологическая эффективность относится к способности лекарственного средства способствовать регрессии злокачественной опухоли у пациента. Физиологическая безопасность относится к приемлемо низкому уровню токсичности или других неблагоприятных физиологических эффектов на клеточном уровне, на уровне органа и/или организма (неблагоприятные эффекты), являющихся результатом введения лекарственного средства.
В качестве примера для лечения опухолей терапевтически эффективное количество или дозировка лекарственного средства предпочтительно ингибирует рост клеток или опухолевый рост по меньшей мере приблизительно на 20%, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 40%, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 60% и даже более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 80% в сравнении с субъектами, не получавшими лечение. В соответствии с наиболее предпочтительными вариантами осуществления терапевтически эффективное количество или дозировка лекарственного средства полностью ингибирует рост клеток или опухолевый рост, т.е. предпочтительно ингибирует рост клеток или опухолевый рост на 100%. Способность соединения к ингибированию опухолевого роста можно оценить с помощью анализов, описанных ниже. В качестве альтернативы, это свойство композиции можно оценить путем исследования способности соединения к ингибированию роста клеток, такое ингибирование можно измерить in vitro с помощью анализов, известных практикующему специалисту в данной области техники. В соответствии с другими предпочтительными вариантами осуществления, описанными в данном документе, можно наблюдать регрессию опухоли, и она может длится в течение периода по меньшей мере приблизительно 20 суток, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 40 суток или еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 60 суток.
Термины "пациент" и "субъект" относятся к любому человеку или животному, отличному от человека, которое получает либо профилактическое, либо терапевтическое лечение. Например, способы и композиции, описанные в данном документе, можно применять для лечения субъекта, имеющего злокачественную опухоль. Термин "животное, отличное от человека," включает в себя всех позвоночных, например, млекопитающих и позвоночных, не относящихся к млекопитающим, как например, приматов, за исключением человека, овцу, собаку, корову, кур, амфибий, рептилий и т.д.
Описанные в данном документе различные аспекты описаны более подробно в следующих подразделах.
I. Антитела к CD73
В данном документе описаны антитела, например, полностью человеческие антитела, которые характеризуются конкретными функциональными признаками или свойствами. Например, антитела специфично связываются с человеческим CD73. Кроме того, антитела могут давать перекрестную реакцию с CD73 из одного или нескольких приматов, за исключением человека, таким как CD73 яванского макака.
Помимо специфичного связывания с растворимым и/или мембраносвязанным человеческим CD73, описанные в данном документе антитела проявляют одно или несколько из следующих функциональных свойств:
(a) ингибирование ферментативной активности CD73, приводящее в результате к уменьшению количества продуцируемого аденозина;
(b) связывание с CD73 макака-крабоеда;
(c) опосредованная антителом интернализация CD73 в клетки, например, опухолевые клетки; и
(d) связывание с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83 и 157-172 в человеческом CD73.
Предпочтительно, антитела к CD73 связываются с человеческим CD73 (мономерным или димерным; изоформой 1 или 2) с высокой аффинностью, например, с KD, составляющей 10"7 М или менее, 10"8 М или менее, 10"9 М или менее, 10"10 М или менее, 10" 11 М или менее, 10"12 М или менее, от 10"12 М до 10"7 М, от 10"11 М до 10"7 М, от 10"10 М до 10"7М, от 10"9М до 10"7М или от 10"10М до 10"8М. В соответствии с определенными
вариантами осуществления антитело к CD73 связывается с растворимым человеческим CD73, например, при определении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r), с KD, составляющей 10"7М или менее, 10"8М или менее, 10"9М (1 нМ) или менее, 10"10М или менее, от 10"12 М до 10"7 М, от 10"11 М до 10"7 М, от 10"10 М до 10"7 М, от 10"9 М до 10"7 М, от 10"8 М до 10"7 М или от 10"10 М до 10"8 М. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 связывается со связанным (например, связанным с клеточной мембраной, например, Calu6 клеток) человеческим CD73, например, при определении, которое описано далее в данном документе, с ЕС50, составляющей менее 1 нМ. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 связывается со связанным человеческим CD73, например, со связанным с клеточной мембраной человеческим CD73, например, при определении с помощью проточной цитометрии и по графику Скэтчарда, с KD, составляющей 10"7 М или менее, 10"8 М или менее, 10"9 М (1 нМ) или менее, 10"10 М или менее, от 10"12 М до 10"7 М, от 10"11 М до 10" 8 М, от 10"10 М до 10"8 М, от 10"9 М до 10"8 М, от 10"11 М до 10"9 М, от 10"10 М до 10"8 М или от 10"10М до 10"9М. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 связывается с растворимым человеческим CD73 с KD, составляющей 10" 7 М или менее, 10"8 М или менее, 10"9 М (1 нМ) или менее, 10"10 М или менее, от 10"12 М до 10"7 М, от 10"11 М до 10"7 М, от 10"10 М до 10"7 М, от 10"9 М до 10"7 М, от 10"10 М до 10"8 М или от 10"8М до 10"7М, и со связанным человеческим CD73, например, со связанным с клеточной мембраной человеческим CD73, с KD ИЛИ ЕС50, составляющими 10"7М или менее, 10"8 М или менее, 10"9 М (1 нМ) или менее, 10"10 М или менее, от 10"12 М до 10"7 М, от 10"11 М до 10"8 М, от 10"10 М до 10"8 М, от 10"9 М до 10"8 М, от 10"11 М до 10"9 М или от 10"10Мдо 10"9 М.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 связывается с CD73 макака-крабоеда с высокой аффинностью, например, оно связывается с СНО клеткой, экспрессирующей CD73 макака-крабоеда с ЕС50, составляющей от 0,1 нМ до 10 нМ, как например, с ЕС50, составляющей менее чем 1 нМ при определении, например, как описано далее в данном документе.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, также связываются с CD73 яванского макака, например, связываются с мембраносвязанным CD73 яванского макака, например, с СНО клеткой,
экспрессирующей CD73 макака-крабоеда, с ЕС50, составляющей 100 нМ или менее, 10 нМ или менее, 1 нМ или менее, от 100 нМ до 0,01 нМ, от 100 нМ до 0,1 нМ, от 100 нМ до 1 нМ или от 10 нМ до 0,1 нМ, как измерено, например, в разделе Примеры.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 является мономерным по меньшей мере на 90%, 95%, 98% или 99%, что определено, например, с помощью SEC (гель-хроматография). Антитела к CD73 также могут обладать биофизическими характеристиками, которые подобны характеристикам антител, описанных в данном документе, или находятся в пределах диапазона характеристик антител, описанных в данном документе.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 ингибируют ферментативную активность человеческого CD73 и/или CD73 макака-крабоеда, например, что определено в анализах со связанным с гранулами CD73, или что определено в клетках, например, Calu6, SKMEL24 или Н292 клетках, или что определено в анализе in vivo, например, на модели ксенотрансплантата опухоли, например, как описано далее в разделе Примеры. Антитела к CD73 могут характеризоваться ингибирующими активностями, которые являются по меньшей мере подобными активностям антител, описанных в данном документе, или находятся в пределах диапазона активностей антител, описанных в данном документе. Например, антитела к CD73 могут ингибировать ферментативную активность (продуцирование аденозина) человеческого CD73 (например, связанного с твердой подложкой CD73) с ЕС50, составляющей менее чем 10 нМ или менее чем 5 нМ или находящейся в диапазоне 1-10 нМ или 5-10 нМ. Антитела к CD73 могут ингибировать активность человеческого CD73 на клетках, например, Calu6 клетках, с ЕС50, составляющей менее чем 10 нМ или менее чем 1 нМ или находящейся в диапазоне 0,110 нМ, 0,1-1 нМ или 0,1-0,5 нМ.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 интернализируются (и опосредуют интернализацию CD73) клеткой, с которой они связываются, что определено, например, в анализе интернализации при высоком содержании или с помощью метода FACS или проточной цитометрии, как описано далее в разделе Примеры. Антитела к CD73 могут обладать характеристиками интернализации (ЕС50, Тш и Ymax) и характеризоваться временем до достижения плато, которые являются по меньшей мере подобными таковым у антител, описанных в разделе Примеры,
или находятся в пределах диапазона таковых у антител, описанных в разделе Примеры. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 характеризуется Тш интернализации, который составляет менее чем 1 час, как например, менее чем 30 минут, менее чем 15 минут, менее чем 12 минут, менее чем 10 минут, менее чем 7 минут или даже менее чем 5 минут, в одной или нескольких клеточных линиях, например, клеточных линиях упомянутых в разделе Примеры, при определении, например, в анализе интернализации при высоком содержании (описанном в примере 6А). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 достигает максимальной опосредованной антителом к CD73 интернализации в течение 10 часов или менее, 6 часов или менее, 5 часов или менее, 4 часов или менее, 3 часов или менее, 2 часов или менее, 1 часа или менее, например, в диапазоне от 10 минут до 10 часов, от 10 минут до 6 часов, от 1 часа до 10 часов или от 1 часа до 6 часов, при определении, например, с использованием анализа интернализации при высоком содержании, как описано, например, в примере 6А, или с использованием проточной цитометрии, как описано, например, в примере 6В. Максимальный уровень опосредованной антителом к CD73 интернализации CD73 может составлять по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более в зависимости от типа клетки. Например, ЕС50 для опосредованной антителом к CD73 интернализации CD73 в Calu6 клетки при измерении в анализе интернализации при высоком содержании, описанном в разделе Примеры, может составлять менее чем 10 нМ, например, 0,1-10 нМ, или 1-10 нМ, или 1-5 нМ, и Ymax может составлять по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95%.
Антитела к CD73, например, антитела, имеющие шарнир IgG2, CHI домен IgG2 или шарнир IgG2 и СН1 домен IgG2, могут опосредовать следующие характеристики интернализации CD73, которые измерены в анализе интернализации при высоком содержании, например, как описано в примере 6А:
ЕС50, составляющая 10 нМ или менее, 5 нМ или менее, 1 нМ или менее или 0,1-10 нМ или 0,1-1 нМ; Ymax (максимальный процент интернализации), составляющий по меньшей мере 90%, 95% или 98% в Calu6 клетках, и Тш, составляющий менее чем 30 минут или менее чем 10 минут в Calu6 клетках;
Ti/2, составляющий менее чем 30 минут или менее чем 10 минут в человеческих клетках, например, Calu6 клетках, НСС44 клетках, Н2030 клетках, Н2228 клетках, НСС15 клетках, SKLU1 клетках, SKMES1 клетках или SW900 клетках.
Антитела к CD73, например, антитела, имеющие шарнир IgG2, CHI домен IgG2 или шарнир IgG2 и СН1 домен IgG2, могут опосредовать следующие характеристики интернализации CD73, которые измерены с помощью проточной цитомтерии, например, как описано в примере 6В:
Т1/2, составляющий 1 час или менее, и Ymax, составляющий по меньшей мере 70% в Calu6 клетках;
Т1/2, составляющий 30 минут или менее, и Ymax, составляющий по меньшей мере 70% в NCI-H292 клетках;
Т1/2, составляющий 2 часа или менее, и Ymax, составляющий по меньшей мере 30% в SNUC1 клетках; и/или
Т1/2, составляющий 30 минут или менее, и Ymax, составляющий по меньшей мере 60% в NCI-H1437 клетках.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 представляет собой антитело из группы 1, т.е. оно конкурирует за связывание с человеческим CD73 с 11F11, но не с 4СЗ.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются с эпитопом, например, конформационным эпитопом в N-концевой части человеческого CD73, например, эпитопом, располагающимся в пределах аминокислот 6583 в человеческом CD73 (SEQ Ш N0:96), что определено, например, с помощью HDX-MS, как описано далее в разделе Примеры. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются с аминокислотами 157-172 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 97) или с эпитопом, располагающимся в пределах аминокислот 157-172 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 97), что определено, например, с помощью HDX-MS. В качестве альтернативы, антитела к CD73 связываются с эпитопом, например, прерывающимся эпитопом в N-концевой части человеческого CD73, что определено, например, с помощью HDX-MS.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются с аминокислотами 65-83 и аминокислотами 157-172 в человеческом CD73
или с эпитопом в пределах аминокислот 65-83 и аминокислот 157-172 изоформы 1 или 2 человеческого CD73, т.е. с аминокислотными последовательностями FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш NO: 97), что определено, например, с помощью FTDX-MS. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются со всеми или частью аминокислот 65-83 и аминокислот 157-172 в человеческом CD73, что определено, например, с помощью FTDX-MS. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются как с гликозилированным, так и негликозилированным человеческим CD73. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 связываются только с гликозилированным CD73, а не с негликозилированным CD73.
Антитела к CD73 могут конкурировать за связывание с CD73 с антителами (или ингибировать связывание антител) к CD73, содержащими CDR или вариабельные участки, описанные в данном документе, например, CDR или вариабельные участки из антител CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 ингибируют связывание CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11 и/или 7А11 с человеческим CD73 по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или на 100%. В соответствии с определенными вариантами осуществления CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 ингибируют связывание антител к CD73 с человеческим CD73 по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или на 100%. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 ингибируют связывание CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 с человеческим CD73 по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или на 100%, и CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 ингибируют связывание антител к CD73 с человеческим CD73 по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или на 100% (например, конкурируют в обоих направлениях). Конкурентные
эксперименты можно проводить, например, как описано далее в данном документе, например, в разделе Примеры.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 ингибируют ферментативную активность CD73 и/или are интернализируются в клетки, не требуя перекрестного сшивания с образованием мультивалентных структур, что определено, например, по отсутствию необходимости связывания с FcR.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 характеризуются 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 из признаков, перечисленных в таблице 3.
Таблица 3. Потенциальные признаки антител к CD73
(1) связывание с человеческим CD73, например, с изоформой 1 и 2 мономерного человеческого и димерного человеческого CD73, связанного с гранулами, например, с KD, составляющей 10 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ), например, при измерении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r);
(2) связывание с мембраносвязанным человеческим CD73, например, с ЕС50, составляющей 1 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 1 нМ);
(3) связывание с CD73 яванского макака, например, связывание с мембраносвязанным CD73 яванского макака, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ);
(4) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(5) ингибирование ферментативной активности CD73 макака-крабоеда, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(6) ингибирование ферментативной активности эндогенного (клеточного) человеческого CD73 в Calu6 клетках с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(7) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73 in vivo;
(8) интернализация, например, опосредуемая антителом (или зависимая от антитела) интернализация CD73 в клетки, например, с Тш, составляющим менее 1 часа, 30 минут или 10 минут, и/или Ymax, составляющим по меньшей мере 70%, 80% или 90%;
(1)
(9) связывание с конформационным эпитопом на человеческом CD73, например, прерывающимся эпитопом с аминокислотной последовательностью (SEQ Ш NO: 1), который включает в себя все или часть аминокислотных остатков FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш N0: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ID NO: 97);
(10) конкуренция в любом из направлений или в обоих направлениях с CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 за связывание с человеческим CD73; и
(11) взаимодействие с человеческим CD73 по схеме, подобной CD73.4, что определено с помощью рентгеновской кристаллографии.
Будет понятно, что активность антитела, которое проявляет одно или несколько из этих функциональных свойств (например, биохимическую, иммунохимическую, клеточную, физиологическую или другие биологические активности или подобное) при определении в соответствии с методиками, известными в уровне техники и описанными в данном документе, связана со статистически значимым различием в конкретной активности, по сравнению с такой активностью, наблюдаемой в отсутствие антитела (например, или при наличии контрольного антитела с несоответствующей специфичностью). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73, раскрытое в данном документе, снижает измеряемый параметр (например, объем опухоли, метастазирование опухоли, уровни аденозина, уровни сАМР) по меньшей мере на 10% от измеряемого параметра, более предпочтительно по меньшей мере на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90%, и в соответствии с определенными предпочтительными вариантами осуществления более чем на 92%, 94%, 95%, 97%, 98% или 99%. И наоборот, антитело к CD73, раскрытое в данном документе, повышает измеряемый параметр по меньшей мере на 10%, как например, по меньшей мере на 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% (т.е. 2-кратно), 3-кратно, 5-кратно или 10-кратно.
Стандартные анализы для оценки связывающей способности антител в отношении CD73 у различных видов известны в уровне техники, в том числе, например, ELISA, вестерн-блоттинг и RIA. Подходящие анализы подробно описаны в разделе Примеры.
Кинетические характеристики связывания (например, аффинность связывания) для антител также можно оценить с помощью стандартных анализов, известных в уровне техники, как например, с помощью анализа SPR методом BIACORE(r). Анализы для оценки эффектов антител в отношении функциональных свойств CD73 (например, продуцирование аденозина, опухолевый рост и метастазирование, ингибирование Т-клеток) более подробно описаны ниже и в разделе Примеры.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 не являются нативными антителами или не являются антителами, встречающимися в естественных условиях. Например, антитела к CD73 имеют посттрансляционные модификации, которые отличаются от таких модификаций у антител, встречающихся в естественных условиях, как например, они имеют больше, меньше посттрансляционных модификаций или посттрансляционные модификации отличного типа.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 стимулируют функцию Teff (эффекторных Т-клеток) и/или ослабляют функцию Treg, например, за счет удаления CD73 с поверхности Т-клеток и/или за счет ингибирования его ферментативной активности.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD3 содержат по меньшей мере шарнир IgG2 и необязательно также СН1 домен IgG2 или фрагмент или производное шарнира и/или СН1 домена, и антитело принимает форму А (см., например, Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD3 содержат по меньшей мере шарнир IgG2 и необязательно также СН1 домен IgG2 или фрагмент или производное шарнира и/или СН1 домена, и антитело приняло форму В (см., например, Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755). В соответствии с определенными вариантами осуществления композиция содержит смесь антител к CD73 в форме А и антитела к CD73 в форме В.
В данном документе представлены антитела к человеческому CD73, которые (i) содержат вариабельный участок, который связывается с участком на человеческом CD73, подобным участку, с которым связывается 11F11, но не связывается с участком, подобным участку, с которым связывается 4СЗ (т.е. представляет собой антитело из группы 1); (ii) связываются с мономерным и димерным человеческим CD73 с Kd, составляющей 10 нМ или менее; (ш) ингибируют ферментативную активность (превращение AMP в аденозин)
человеческого CD73, например, на клетках, например, Calu6 клетках, с ЕС50, составляющей менее чем 10 нМ; и (iv) опосредуют зависимую от антитела интернализацию CD73 в клетки, например, с Тш, составляющим 1 час или менее (или 30 минут или менее или 10 минут или менее), Ymax, составляющим 50% или более (или 60% или более, 70% или более, 80% или более или 90% или более) в человеческих клетках, например, Calu6 клетках Н2228 клетках, НСС15 клетках, Н2030 клетках, SNUC1 клетках. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела содержат шарнир IgG2 или шарнир IgG2 и СН1 домен IgG2. В данном документе представлены антитела к человеческому CD73, которые (i) содержат вариабельный участок, который связывается с участком на человеческом CD73, подобным участку, с которым связывается 11F11, но не связывается с участком, подобным участку, с которым связывается 4СЗ (т.е. представляет собой антитело из группы 1); (ii) связываются с мономерным и димерным человеческим CD73 с Kd, составляющей 10 нМ или менее при определении с помощью метода SPR (Biacore); (iii) ингибируют ферментативную активность (превращение AMP в аденозин) человеческого CD73, например, на клетках, например, Calu6 клетках, с ЕС50, составляющей менее чем 10 нМ; и (iv) опосредуют зависимую от антитела интернализацию CD73 в клетки, например, с Тш, составляющим 30 минут или менее, Ymax, составляющим 80% или более в человеческих Calu6, Н2228, НСС15 или Н2030 клетках при определении с использованием анализа интернализации при высоком содержании, описанного в примере 6А.
В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления антитело к CD73, описанное в данном документе, не является значительно токсичным. Например, антитело к CD73 не является значительно токсичным в отношении органа человека, например, одного или нескольких из печени, почки, головного мозга, легких и сердца, что определено, например, в клинических испытаниях. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 не запускает в значительной степени нежелательную иммунную реакцию, например, аутоиммунную реакцию или воспаление.
П. Иллюстративные антитела к CD73
Вариабельные участки антител к CD73
Конкретные антитела, описанные в данном документе, представляют собой антитела, например, моноклональное антитела, имеющие последовательности CDR и/или вариабельного участка антител 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11, 7А11, CD73.3-1, -2 или -3, CD73.4-1 и -2, CD73.4-2, CD73.5-1 и -2, CD73.6-1 и -2, CD73.7-1 и -2, CD73.8-1 и -2, CD73.9-1 и -2, CD73.10-1 и -2 и CD73.11, а также антитела, по меньшей мере на 80% идентичные (например, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичные) их последовательностям вариабельного участка или CDR. В таблице 4 изложены SEQ Ш N0 для CDR VH и VL участков у каждого антитела, а также для VH и VL участков. Как описано далее в разделе Примеры, определенные тяжелые цепи могут существовать с более чем одной легкой цепью, и SEQ Ш N0 для альтернативных легких цепей также представлены в таблице ниже.
73.8-1
174
73.8-2
174
73.9-1
175
73.9-2
175
73.10-1
176
73.10-2
176
73,11
177
В данном документе представлены выделенные антитела или их антигенсвязывающая часть, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш NO: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135 и 170-177.
Также предполагаются выделенные антитела или их антигенсвязывающие части, содержащие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92 и 238.
В данном документе предполагаются выделенные антитела или их антигенсвязывающая часть, содержащие:
(a) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ID NO: 135 и 8, соответственно;
(b) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 135 и 12, соответственно;
(c) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 4 и 8, соответственно;
(d) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 4 и 12, соответственно;
(e) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 16 и 20, соответственно;
(f) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 16 и 24, соответственно;
(g) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ГО NO: 16 и 28, соответственно;
(a)
(h) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей,
содержащие SEQ Ш N0: 32 и 36, соответственно;
(i) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей,
содержащие SEQ Ш N0: 40 и 44, соответственно;
(j) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 40 и 48, соответственно;
(к) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 52 и 56, соответственно;
(1) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 60 и 64, соответственно;
(т) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 68 и 72, соответственно;
(п) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 68 и 76, соответственно;
(о) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 68 и 238, соответственно;
(р) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 80 и 84, соответственно;
(q) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 88 и 92, соответственно;
(г) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 170 и 20, соответственно;
(s) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 170 и 24, соответственно;
(t) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 170 и 28, соответственно;
(и) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 171 и 8, соответственно;
(v) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 171 и 12, соответственно;
(w) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 172 и 8, соответственно;
(х) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 172 и 12, соответственно;
(у) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 173 и 8, соответственно;
(z) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 173 и 12, соответственно;
(а2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 174 и 8, соответственно;
(Ь2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 174 и 12, соответственно;
(с2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 175 и 8, соответственно;
(d2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 175 и 12, соответственно;
(е2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 176 и 8, соответственно;
(f2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 176 и 12, соответственно; или
(g2) последовательности вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ Ш N0: 177 и 36, соответственно.
Антитела к CD73 могут содержать CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой и легкой цепей антител к CD73, описанных в данном документе, например, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 11F11, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 5F8-3, 6Е11 и 7А11, или их комбинации.
При условии, что каждое из этих антител связывается с CD73, и что специфичность связывания антигена обеспечивается преимущественно CDR1, 2 и 3 участками, последовательности CDR1, 2 и 3 VH И последовательности CDR1, 2 и 3 VL могут быть "смешанными и подобранными" (т.е. CDR из разных антител можно смешивать и подбирать, хотя каждое антитело должно содержать CDR1, 2 и 3 VH и CDR1, 2 и 3 VL) ДЛЯ
создания других связывающихся с GITR молекул антител, описанных в данном документе.
Связывание с CD73 у таких "смешанных и подобранных" антител можно исследовать с
использованием анализов связывания, описанных выше и в разделе Примеры (например,
ELISA). Предпочтительно, если последовательности CDR VH смешивают и подбирают,
последовательность CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VH
заменяют подобной(подобными) в плане структуры
последовательностью(последовательностями) CDR. Аналогично, если последовательности CDR VL смешивают и подбирают, последовательность CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VL предпочтительно заменяют подобной(подобными) в плане структуры последовательностью(последовательностями) CDR. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что новые последовательности VH И VL МОЖНО создать, заменяя одну или несколько последовательностей CDR участка VH И/ИЛИ VL подобными в плане структуры последовательностями из последовательностей CDR, раскрытых в данном документе для моноклональных антител CD73.4-1, CD73.4-2, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11. "Смешанные и подобранные" антитела, характеризующиеся аффинностью связывания, биологической активностью и/или другими свойствами, эквивалентными или превосходящими конкретные антитела, раскрытые в данном документе, можно выбрать для применения в способах согласно настоящему изобретению.
В данном документе предполагаются выделенные антитела или их антигенсвязывающая часть, содержащие:
(a) CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 5, 17, 33, 41, 53, 61,
69, 81 и 89;
(b) CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62,
70, 82 и 90;
(c) CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 7, 19, 35, 43, 55, 63,
71, 83 и91;
71,
(d) CDR1 вариабельного участка легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 9, 13, 21, 25, 29, 37,
45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93;
(e) CDR2 вариабельного участка легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38,
46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94; и
(f) CDR3 вариабельного участка легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 11, 15, 23, 27, 31, 39,
47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95;
причем антитело специфично связывается с человеческим CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит
вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем CDR1, CDR2 и CDR3 участки
вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ ID NO: 5-7; 17-19; 33-35; 41-43; 53-55;
61-63; 69-71; 81-83 или 89-91;
причем антитело специфично связывается с человеческим CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит
вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем CDR1, CDR2 и CDR3 участки
вариабельного участка легкой цепи содержат:
(a) SEQ ID N0: 9-11; 13-15; 21-23; 25-27; 29-31; 37-39; 45-47; 49-51; 57-59; 65-67; 7375; 77-79; 85-87 или 93-95;
причем антитело специфично связывается с человеческим CD73. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, в которых:
(a) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ ГО N0: 5-7, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ ГО N0: 9-11, соответственно;
(b) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ ГО N0: 5-7, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ ГО N0: 13-15, соответственно;
(a)
(c) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 21-23, соответственно;
(d) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 25-27, соответственно;
(e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 29-31, соответственно;
(f) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 33-35, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 37-39, соответственно;
(g) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 41-43, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 45-47, соответственно;
(h) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 41-43, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 49-51, соответственно;
(i) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш
N0: 53-55, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи
содержат SEQ Ш N0: 57-59, соответственно;
(j) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 61-63, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 65-67, соответственно;
(k) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 69-71, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 73-75, соответственно;
(1) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 69-71, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 77-79, соответственно;
(m) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 81-83, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 85-87, соответственно; или
(n) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержат SEQ Ш N0: 89-91, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержат SEQ Ш N0: 93-95, соответственно;
причем антитело специфично связывается с человеческим CD73 и необязательно обладает одной или несколькими из характеристик, перечисленных в таблице 3, например, способностью к ингибированию дефосфорилирования AMP и опосредованию зависимо от рецептора интернализации CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, в которых:
(a) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 5-7, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 9-11, соответственно;
(b) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 5-7, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 13-15, соответственно;
(c) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 21-23, соответственно;
(d) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 25-27, соответственно;
(e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 17-19, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 29-31, соответственно;
(f) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 33-35, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 37-39, соответственно;
(a)
(g) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 41-43, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 45-47, соответственно;
(h) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 41-43, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 49-51, соответственно;
(i) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш
N0: 53-55, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи
состоят из SEQ Ш N0: 57-59, соответственно;
0 CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 61-63, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 65-67, соответственно;
(k) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 69-71, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 73-75, соответственно;
(1) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 69-71, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 77-79, соответственно;
(m) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 81-83, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 85-87, соответственно; или
(n) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи состоят из SEQ Ш N0: 89-91, соответственно, a CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи состоят из SEQ Ш N0: 93-95, соответственно;
причем антитело специфично связывается с человеческим CD73 и необязательно обладает одной или несколькими из характеристик, перечисленных в таблице 3, например, способностью к ингибированию дефосфорилирования AMP и опосредованию зависимо от рецептора интернализации CD73.
Константные домены тяжелой цепи у антител к CD 73
Константный участок тяжелой цепи у антител к CD73, описанных в данном документе, может относиться к любому изотипу, например, IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4, или их комбинациям и/или их модификациям. Антитело к CD73 может обладать эффекторной функцией, или может обладать ослабленной эффекторной функцией, или не обладать ею. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, содержат модифицированный константный участок тяжелой цепи, который предоставляет антителу улучшенные свойства. Как показано в разделе Примеры, антитела к CD73, имеющие шарнир IgG2 и необязательно СН1 домен IgG2, такие как имеющие вариабельные участки антитела 11F11, интернализируются лучше и быстрее по сравнению с антителами, имеющими такой же вариабельный участок, но с шарниром или СН1, не относящимися к IgG2, например, по сравнению с антителами, имеющими шарнир IgGl или шарнир IgGl и CHI IgGl. Например, антитело, содержащее вариабельные участки антитела 11F11 и содержащее шарнир IgG2 и необязательно СН1 домен IgG2 и СН2 домен IgGl и СНЗ домен IgGl, а также либо обладающее эффекторной функцией, либо не обладающее ею, более эффективно интернализируется в клетки после связывания с CD73 на клеточной мембране по сравнению с таким же антителом, но с шарниром IgGl или шарниром IgGl и СН1 доменом IgGl. Как показано далее в данном документе, антитело к CD73, имеющее шарнир IgG2, а остальную часть от антитела изотипа IgGl, интернализируется более эффективно, чем такое же антитело, в котором шарнир относится к изотипу IgGl. Антитело, имеющее, помимо шарнира IgG2, CHI домен IgG2, интернализируется еще более эффективно, чем такое же антитело, в котором СН1 домен представляет собой СН1 домен IgGl. Как показано ниже в данном документе, антитела к CD73 с шарниром IgG2 и необязательно с CHI IgG2 также могут образовывать большие комплексы антител о/антиген, чем антитела, имеющие шарнир IgGl или шарнир IgGl и CHI IgGl. Повышенная интернализация, как оказывается, коррелирует с увеличенным размером комплекса антител о/антиген. Как дополнительно описано в разделе Примеры, считается, что повышенная интернализация связана с более высокой или более низкой аффинностью антитела. Соответственно, в данном документе представлены антитела к CD73, имеющие модифицированный константный участок тяжелой цепи, который опосредует опосредованную антителом интернализацию CD73, и при этом антитело с
модифицированным константным участком тяжелой цепи связывается с CD73 с аффинностью, подобной аффинности у такого же антитела, но с отличающимся константным участком тяжелой цепи.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит шарнир изотипа IgG2 ("шарнир IgG2") и CHI, СН2 и СНЗ домен. В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит шарнир IgG2 и CHI, СН2 и СНЗ домен, причем по меньшей мере один CHI, СН2 и СНЗ доменов не относится к изотипу IgG2. В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит шарнир изотипа IgG2, CHI изотипа IgG2, причем по меньшей мере один из доменов СН2 и СНЗ не относится к изотипу IgG2. Шарнир IgG2 может представлять собой шарнир IgG2 дикого типа, например, шарнир человеческого IgG2 дикого типа (например, имеющий SEQ Ш N0:136) или его вариант, при условии, что шарнир IgG2 сохраняет способность к приданию антителу усиленной активности (например, повышенной интернализации клеткой; повышенного ингибирования ферментативной активности; повышенной антагонистической или блокирующей активности; способности к образованию больших перекрестно-сшитых комплексов антитело/антиген; повышенной способности к стимуляции или усилению иммунной реакции и/или повышенного антипролиферативного или противоопухолевого эффекта) по сравнению с активностью у такого же антитела, которое содержит шарнир, не относящийся к IgG2, и необязательно СН1 домен, не относящийся к IgG2. В соответствии с определенными вариантами осуществления вариант шарнира IgG2 сохраняет жесткость или негибкость, подобные таковым у шарнира IgG2 дикого типа. Жесткость шарнира или антитела можно определить, например, с помощью компьютерного моделирования, электронной микроскопии, спектроскопии, такой как ядерный магнитный резонанс (NMR), рентгеноструктурной кристаллографии (В-факторы) или по скорости седиментации при аналитическом ультрацентрифугировании (AUC) для измерения или сравнения радиуса инерции у антител, содержащих шарнир. Шарнир или антитело может характеризоваться подобной или более высокой жесткостью в сравнении с другим шарниром, если содержащее шарнир антитело характеризуется значением, полученным в одном из
анализов, описанных в предыдущем предложении, которое отличается от значения для такого же антитела с отличающимся шарниром, например, шарниром IgGl, менее чем на 5%, 10%, 25%, 50%, 75% или 100%. Специалист в данной области техники будет способен определить на основании анализов, характеризуются ли шарнир или антитело жесткостью, по меньшей мере подобной жесткости другого шарнира или антитела, соответственно, интерпретируя результаты этих анализов. Иллюстративный вариант шарнира человеческого IgG2 представляет собой шарнир IgG2, который содержит замену одного или нескольких из четырех цистеиновых остатков (т.е. С219, С220, С226 и С229) на другую аминокислоту. Цистеин может быть заменен серином. Иллюстративный шарнир IgG2 представляет собой шарнир человеческого IgG2, содержащий мутацию С219Х или мутацию С220Х, где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением серина. В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир IgG2 не содержит обе из замен С219Х и С220Х. В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир IgG2 содержит C219S или C220S, но не обе из C219S и C220S. Другие варианты шарнира IgG2, которые можно применять, включают в себя шарниры человеческого IgG2, содержащие замену С220, С226 и/или С229, например, мутацию C220S, C226S или C229S (которую можно комбинировать с мутацией C219S). Шарнир IgG2 также может представлять собой шарнир IgG2, в котором часть шарнира относится к другому изотипу (т.е. он представляет собой химерный или гибридный шарнир) при условии, что жесткость химерного шарнира является по меньшей мере подобной жесткости шарнира IgG2 дикого типа. Например, шарнир IgG2 может представлять собой шарнир IgG2, в котором нижний шарнир (который определен в таблице 2) относится к изотипу IgGl и представляет собой, например, нижний шарнир IgGl дикого типа.
"Гибридный" или "химерный" шарнир считается относящимся к конкретному изотипу, если более половины последовательных аминокислот в шарнире происходят из этого изотипа. Например, шарнир, имеющий верхний и средний шарнир из IgG2 и нижний шарнир из IgGl считают гибридным шарниром IgG2.
В соответствии с определенными вариантами осуществления CD73 антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит шарнир IgG2, содержащий один из следующих шарниров:
ERKCCVECPPCPAPPVAG (SEQ ГО N0: 348);
ERKSCVECPPCPAPPVAG (SEQ Ш NO: 349); ERKCSVECPPCPAPPVAG (SEQ Ш NO: 350); ERKXCVECPPCPAPPVAG (SEQ Ш NO: 351); ERKCXVECPPCPAPPVAG (SEQ Ш NO: 352); ERKCCVECPPCPAPPVAGX (SEQ Ш NO: 353); ERKSCVECPPCPAPPVAGX (SEQ Ш NO: 354); ERKCSVECPPCPAPPVAGX (SEQ Ш NO: 355); ERKXCVECPPCPAPPVAGX (SEQ Ш NO: 356); ERKCXVECPPCPAPPVAGX (SEQ Ш NO: 357); ERKCCVECPPCPAPELLGG (SEQ Ш NO: 358); ERKSCVECPPCPAPELLGG (SEQ Ш NO: 359); ERKCCSVECPPCPAPELLGG (SEQ Ш NO: 360); ERKXCVECPPCPAPELLGG (SEQ Ш NO: 361); ERKCXVECPPCPAPELLGG (SEQ Ш NO: 362); ERKCCVECPPCPAPELLG (SEQ Ш NO: 363); ERKSCVECPPCPAPELLG (SEQ Ш NO: 364); ERKCCSVECPPCP APELLG (SEQ Ш NO: 365); ERKXCVECPPCP APELLG (SEQ Ш NO: 366); ERKCXVECPPCP APELLG (SEQ Ш NO: 367); ERKCCVECPPCPAP (SEQ Ш NO: 368); ERKSCVECPPCPAP (SEQ Ш NO: 369); ERKCSVECPPCPAP (SEQ Ш NO: 370); ERKXCVECPPCP AP (SEQ Ш NO: 371) или ERKCXVECPPCP AP (SEQ Ш NO: 372),
где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением цистеина, или любую из вышеуказанных последовательностей, в которых 1-5, 1-3, 1-2 или 1 аминокислота вставлена между аминокислотными остатками CVE и СРР. В соответствии с определенными вариантами осуществления вставлены ТНТ или GGG.
В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир содержит SEQ ГО N0: 348, 349, 350, 351 или 352, в которых 1, 2, 3 или все 4 аминокислоты Р233, V234, А235 и G237 (соответствующие 4 С-концевым аминокислотам "PVAG" (SEQ ГО NO: 373)
удалены или заменены на другую аминокислоту, например, аминокислоты на С-конце шарнира IgGl (ELLG (SEQ ГО NO: 374) или ELLGG (SEQ ГО NO: 375). В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир содержит SEQ ГО N0: 348, 349, 350, 351 или 352, в которых V234, А235 и G237 удалены или заменены на другую аминокислоту. В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир содержит SEQ ГО N0: 348, 349, 350, 351 или 352, в которых А235 и G237 удалены или заменены на другую аминокислоту. В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир содержит SEQ ГО N0: 348, 349, 350, 351 или 352, в которых G237 удалены или заменены на другую аминокислоту. В соответствии с определенными вариантами осуществления шарнир содержит SEQ ГО N0: 348, 349, 350, 351 или 352, в которых V234 и А235 удалены или заменены на другую аминокислоту. Замена PVAG (SEQ ГО N0: 373) в IgG2 на соответствующие аминокислоты шарнира IgGl, т.е. (ELLG (SEQ ID NO: 374) или ELLGG (SEQ ГО NO: 375)) с получением гибридного шарнира, например, показанного выше, дает шарнир, обладающий преимуществами шарнира IgG2 и эффекторной функцией шарниров IgGl.
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит шарнир, который состоит из или состоит, по существу, из одной из последовательностей, приведенных выше, например, любой из SEQ ГО N0: 348-372, и, например, не содержит дополнительные аминокислотные остатки в шарнире.
В соответствии с определенными вариантами осуществления 1 или 1-2 или 1-3 аминокислоты вставлены между шарниром и СН2 доменом, например, может быть добавлен дополнительный глицин.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, содержащий константный участок IgGl или IgG2, в котором шарнир содержит делецию 1-10 аминокислот. Как показано в разделе Примеры, антитело IgGl, у которого отсутствуют аминокислотные остатки SCDKTHT (S219, С220, D221, К222, Т223, Н224 и Т225; SEQ ГО N0: 376), обеспечивало опосредованную антителом интернализацию CD73 более эффективно, чем такое же антитело, имеющее константный участок IgGl дикого типа. Аналогично, в случае антитела IgG2 антитело IgG2, у которого отсутствуют
аминокислотные остатки CCVE (С219, С220, V222 и Е224; SEQ ID N0: 377), обеспечивало опосредованную антителом интернализацию CD73 более эффективно, чем такое же антитело, имеющее константный участок IgGl дикого типа. Соответственно, в данном документе представлен модифицированный константный участок тяжелой цепи, в котором шарнир содержит делецию 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 аминокислотных остатков, выбранных из остатков S219, С220, D221, К222, Т223, Н224 и Т225 для антитела IgGl и остатков С219, С220, V222 и Е224 для антитела IgG2.
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит СН1 домен, который представляет собой СН1 домен дикого типа из изотипа IgGl или IgG2 ("СН1 домен IgGl" или "СН1 домен IgG2", соответственно). Также можно применять СН1 домены из изотипов IgG3 и IgG4 ("СН1 домен IgG3" и "СН1 домен IgG2", соответственно). СН1 домен также может представлять собой вариант СН1 домена дикого типа, например, вариант СН1 домена IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 дикого типа. Иллюстративные варианты СН1 доменов включают в себя А114С, Т173С и/или С131, например, C131S.
СН1 домен, например, СН1 домен IgG2, может содержать замену C131S, причем данная замена придает антителу IgG2 или антителу, имеющему СН1 и шарнир IgG2, В-форму (или конформацию).
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит СН1 домен, который относится к изотипу IgG2. В соответствии с определенными вариантами осуществления СН1 домен представляет собой СН1 домен IgG2 дикого типа, например, имеющий аминокислотную последовательность:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSMlGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (SEQ ID NO: 378). В соответствии с определенными вариантами осуществления СН1 домен представляет собой вариант SEQ ГО N0: 378 и содержит 1-10, 1-5, 1-2 или 1 аминокислотную замену или делецию по сравнению с SEQ ГО N0: 378. Как дополнительно описано в разделе Примеры, в данном документе было показано, что СН1 домен IgG2 или его варианты придают антителам к CD73 свойства улучшенной или измененной интернализации по сравнению с антителами IgGl и еще более улучшенную или измененную интернализацию, когда
антитела также содержат шарнир IgG2. В соответствии с определенными вариантами осуществления варианты CHI IgG2 не содержат аминокислотную замену или делецию по одному или нескольким из следующих аминокислотных остатков: С131, R133, Е137 и S138, причем данные аминокислотные остатки выделены жирным шрифтом и подчеркиванием в SEQ Ш N0: 378, приведенной выше. Например, модифицированный константный участок тяжелой цепи может содержать СН1 домен IgG2, в котором ни одна изЯ133, Е137 и S138 не заменена на другую аминокислоту или удалена, или в котором ни одна из С131, R133, Е137 и S138 не заменена на другую аминокислоту или удалена. В соответствии с определенными вариантами осуществления С131 заменена на другую аминокислоту, например, C131S, причем данная замена запускает принятие антителом конформации В. Антитела как в конформации А, так и в конформации В, имеющие модифицированные константные участки тяжелой цепи, как было показано в данном документе, характеризуются повышенными активностями по сравнению с таким же антителом с константным участком IgGl.
В соответствии с определенными вариантами осуществления N192 и/или F193 (показаны в виде выделенных курсивом и подчеркиванием остатков в SEQ Ш N0: 378, приведенной выше) заменены на другие аминокислоты, например, соответствующие аминокислоты в IgGl, т.е. N192S и/или F193L.
В соответствии с определенными вариантами осуществления один или несколько аминокислотных остатков в СН1 домене IgG2 заменены на соответствующие аминокислотные остатки в IgG4. Например, N192 может представлять собой N192S; F193 может представлять собой F193L; С131 может представлять собой С131К; и/или Т214 может представлять собой T214R.
Антитело может содержать модифицированный константный участок тяжелой цепи, содержащий СН1 домен IgG2 или его вариант и шарнир IgG2 или его вариант. Шарнир и СН1 домен могут представлять собой комбинацию любого шарнира IgG2 и СН1 домена IgG2, описанных в данном документе. В соответствии с определенными вариантами осуществления СН1 и шарнир IgG2 содержат следующую аминокислотную последовательность
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GL YSLS S VVT W S SMlGTQT YTCNVD
Ш NO: 379) или аминокислотную последовательность, которая отличается от нее не более чем 1-10 аминокислотами. Варианты аминокислот являются такими, как описано для шарнира и СН1 доменов выше.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела содержат по меньшей мере шарнир IgG2 и необязательно также СН1 домен IgG2 или фрагмент или производное шарнира и/или СН1 домена, и антитело приняло форму (конформации) А (см., например, Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат по меньшей мере шарнир IgG2 и необязательно также СН1 домен IgG2 или фрагмент или производное шарнира и/или СН1 домена, и антитело приняло форму В (см., например, Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755).
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит СН2 домен, который представляет собой СН2 домен дикого типа из изотипа IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 ("СН2 домен IgGl", "СН2 домен IgG2", "СН2 домен IgG3" или "СН2 домен IgG4", соответственно). СН2 домен также может представлять собой вариант СН2 домена дикого типа, например, вариант СН2 домена IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 дикого типа. Иллюстративные варианты СН2 доменов включают варианты, которые модулируют биологическую активность Fc-участка антитела, такую как ADCC или CDC, или модулируют период полувыведения антитела или его стабильность. В соответствии с одним вариантом осуществления СН2 домен представляет собой СН2 домен человеческого IgGl с мутацией A330S и P331S, причем СН2 домен обладает пониженной эффекторной функцией в сравнении с таким же СН2 доменом без мутаций. СН2 домен может обладать усиленной эффекторной функцией. СН2 домены могут содержать одну или несколько из следующих мутаций: SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SEFF и GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), и/или одну или несколько мутаций по следующим аминокислотам: Е233, G237, Р238, Н268, Р271, L328 и А330. Другие мутации дополнительно изложены в других местах в данном документе.
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит СНЗ домен, который представляет собой СНЗ домен дикого типа из изотипа IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 ("СНЗ домен IgGl", "СНЗ
домен IgG2", "СНЗ домен IgG3" или "СНЗ домен IgG4", соответственно). СНЗ домен также может представлять собой вариант СНЗ домена дикого типа, например, вариант СНЗ домена IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 дикого типа. Иллюстративные варианты СНЗ доменов включают варианты, которые модулируют биологическую активность Fc-участка антитела, такую как ADCC или CDC, или модулируют период полувыведения антитела или его стабильность.
В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит шарнир изотипа IgG2 и СН1 участок изотипа IgG2. Шарнир и CHI IgG2 могут представлять собой шарнир и CHI IgG2 дикого типа или их варианты при условии, что они обладают желаемой биологической активностью. В соответствии с определенными вариантами осуществления модифицированный константный участок тяжелой цепи содержит шарнир IgG2, содержащий мутацию C219S, и CHI IgG2, которые могут относиться к дикому типу или содержать не более 1-10, 1-5, 13, 1-2 или 1 аминокислотную замену, делецию или добавление. Модифицированный константный участок тяжелой цепи может дополнительно содержать СН2 и СНЗ домены дикого типа или мутированные СН2 и СНЗ домены. Например, антитело к CD73 может содержать константный домен тяжелой цепи, содержащий СН1 домен IgG2, шарнир IgG2, который может содержать C219S, и СН2 и СНЗ домены IgGl, причем у СН2 и СНЗ домена может отсутствовать эффекторная функция, как например, содержащие мутации A330S и P331S.
В целом, варианты СН1, шарнира, СН2 или СНЗ доменов могут содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более мутаций, и/или не более чем 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 мутацию, или 1-10 или 1-5 мутаций, или могут содержать аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности дикого типа соответствующего домена (СН1, шарнира, СН2, или СНЗ домена, соответственно) при условии, что константный участок тяжелой цепи, содержащий конкретный вариант, сохраняет необходимую биологическую активность.
В таблице 5 изложены иллюстративные константные участки тяжелой цепи человека, содержащие человеческие СН1, шарнир, СН2 и/или СНЗ домены, причем каждый домен представляет собой либо домен дикого типа, либо его вариант, который предоставляет
желаемую биологическую активность константному участку тяжелой цепи. Незаполненная ячейка в таблице 5 указывает на то, что домен присутствует или не присутствует, и если он присутствует, то может относиться к любому изотипу, например, IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4. Например, антитело, содержащее константный участок тяжелой цепи, представленный в таблице 5 под номером 1, представляет собой антитело, которое содержит константный участок тяжелой цепи, содержащий по меньшей мере шарнир IgG2, и которое также может содержать CHI, СН2 и/или СНЗ домен, и если он присутствует, данный CHI, СН2 и/или СНЗ домен относится к изотипу IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4. В качестве еще одного примера для понимания таблицы 5, антитело, содержащее константный участок тяжелой цепи, представленный под номером 8, представляет собой антитело, которое содержит константный участок тяжелой цепи, содержащий СН1 домен IgGl, шарнир IgG2 и СН2 домен IgGl, и которое также может содержать или не содержать СНЗ домен, который, если он присутствует, может относиться к изотипу IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело, содержащее константный участок тяжелой цепи, приведенный в таблице 5, характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с таким же антителом, содержащим константный участок тяжелой цепи, который не содержит такой конкретный константный участок тяжелой цепи, или по сравнению с таким же антителом, которое содержит константный участок IgGl.
В соответствии с определенными вариантами осуществления способ улучшения биологической активности антитела к CD73, которое содержит шарнир, не относящийся к IgG2, и/или СН1 домен, не относящийся к IgG2, предусматривает обеспечение антитела к CD73, которое содержит шарнир, не относящийся к IgG2, и/или СН1 домен, не относящийся к IgG2, и замену шарнира, не относящегося к IgG2, и СН1 домена, не относящегося к IgG2, на шарнир IgG2 и СН1 домен IgG2, соответственно. Способ улучшения биологической активности антитела к CD73, которое не содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, может предусматривать обеспечение антитела к CD73, которое не содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, и замену его константного участка тяжелой цепи на модифицированный константный участок тяжелой цепи.
Иллюстративные модифицированные константные участки тяжелой цепи, которые могут быть связаны с вариабельными участками антитела к CD73, например, описанными
в данном документе, приведены в таблице 6, в которой изложена идентификационная информация для каждого из доменов.
IgGl-IgG2CS-IgGl.lf
IgGl дикого типа SEQ ID N0:98
IgG2 C219S SEQ ID N0:123
IgGl A330S/P331S SEQ ID NO: 125
IgGl дикого типа SEQ ID N0:138
SEQ ID N0:167
IgG2-IgGl.lf
IgG2 дикого типа SEQ ID N0:124
IgG2 дикого типа SEQ ID N0:136
IgGl A330S/P331S SEQ ID NO: 125
IgGl дикого типа SEQ ID N0:138
SEQ ID N0:168
IgG2CS-IgGl.lf
IgG2 дикого типа SEQ ID N0:124
IgG2 C219S SEQ ID N0:123
IgGl A330S/P331S SEQ ID NO: 125
IgGl дикого типа SEQ ID N0:138
SEQ ID NO: 169
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит шарнир IgG2, содержащий SEQ Ш N0: 123, 136, 178, 179 или 348-372, или его вариант, такой как шарнир IgG2, содержащий аминокислотную последовательность, которая (i) отличается от SEQ Ш N0: 123, 136, 178, 179 или 348-372 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ Ш N0: 123, 136, 178, 179 или 348372 не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ ГО N0: 123, 136, 178, 179 или 348-372 1-5, 1-3, 1-2, 2-5 или 3-5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной SEQ ГО N0: 123, 136, 178, 179 или 348-372, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену; и при этом модифицированный константный участок тяжелой цепи характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с активностью другого константного участка тяжелой цепи, например, константного участка тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или по сравнению с таким же модифицированным константным участком тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2. Например, шарнир может относиться к дикому типу или содержать замены C219S, C220S или C219S и C220S.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит СН1 домен
IgGl, содержащий SEQ Ш NO: 98, или CHI домен IgG2, содержащий SEQ Ш NO: 124 или вариант SEQ Ш NO: 98 или 124, причем данный вариант (i) отличается от SEQ Ш N0: 98 или 124 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ Ш N0: 98 или 124 не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ Ш N0: 98 или 124 1-5, 1-3, 12, 2-5 или 3-5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной SEQ Ш N0: 98 или 124, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену; и при этом модифицированный константный участок тяжелой цепи характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с активностью другого константного участка тяжелой цепи, например, константного участка тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или шарнир и СН1 домен, не относящиеся к IgG2, и по сравнению с таким же модифицированным константным участком тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или шарнир и СН1 домен, не относящиеся к IgG2. CHI домен IgG2 может содержать C131S или другие мутации, которые вызывают принятие антителом, содержащим шарнир и CHI IgG2, либо А-, либо В-форму.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит СН2 домен IgGl, содержащий SEQ Ш N0: 137 или 125 или вариант SEQ Ш N0: 137 или 125, причем данный вариант (i) отличается от SEQ Ш N0: 137 или 125 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ Ш N0: 137 или 125 не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ Ш N0: 137 или 125 1-5, 1-3, 1-2, 2-5 или 3-5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной SEQ ГО N0: 137 или 125, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену;
и при этом модифицированный константный участок тяжелой цепи характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с активностью другого константного участка тяжелой цепи, например, константного участка тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или по сравнению с таким же модифицированным константным участком тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, который содержит СНЗ домен IgGl, содержащий SEQ Ш N0: 138 или вариант SEQ Ш N0: 138, причем данный вариант (i) отличается от SEQ Ш N0: 138 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ Ш N0: 138 не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ Ш N0: 138 1-5, 1-3, 1-2, 2-5 или 3-5 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной SEQ Ш N0: 138, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену; и при этом модифицированный константный участок тяжелой цепи характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с активностью другого константного участка тяжелой цепи, например, константного участка тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или по сравнению с таким же модифицированным константным участком тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2.
Модифицированные константные участки тяжелой цепи также могут содержать комбинацию СН1, шарнира, СН2 и СНЗ доменов, описанных выше.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, содержащий любую из SEQ ГО N0: 162-169, 180-183, 267-282 и 300-347 или вариант любой из SEQ ГО N0: 162169, 180-183, 267-282 и 300-347, причем данный вариант (i) отличается от SEQ ГО N0: 162169, 180-183, 267-282 и 300-347 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ ГО N0: 162-169, 180-183,
267-282 и 300-347 не более чем 10, 9, 8, 7, 6,5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ Ш N0: 162-169, 180-183, 267-282 и 300-347 1-5, 1-3, 1-2, 2-5, 3-5, 1-10 или 5-10 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной любой из SEQ ГО NO: 162-169, 180-183, 267-282 и 300-347, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену; и при этом модифицированный константный участок тяжелой цепи характеризуется повышенной биологической активностью по сравнению с активностью другого константного участка тяжелой цепи, например, константного участка тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, или СН1 домен, не относящийся к IgG2, и по сравнению с таким же модифицированным константным участком тяжелой цепи, который содержит шарнир, не относящийся к IgG2, и/или СН1 домен, не относящийся к IgG2.
Модифицированные константные участки тяжелой цепи могут обладать (i) подобной, ослабленной или усиленной эффекторной функцией (например, связыванием с FcyR, например, FcyRIIB) по сравнению с константным участком тяжелой цепи дикого типа и/или (ii) подобным, пониженным или повышенным периодом полувыведения (или связыванием с FcRn-рецептором) по сравнению с константным участком тяжелой цепи дикого типа.
VH домен антитела к CD73, описанного в данном документе, может быть связан с константным участком тяжелой цепи, описанным в данном документе. Например, на фигуре 18 показана аминокислотная последовательность антитела CD73.4, связанного с константным участком тяжелой цепи IgG2CS-IgGl.lf (SEQ ГО N0:133 или 169). В данном документе также охватываются антитела, которые содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности CD73.4-IgG2CS-IgGl .lf (SEQ ID N0:133 или 189) не более чем 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2 или 1 аминокислотой (за счет замены, добавления или делеции), и/или которые являются по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичными аминокислотной последовательности тяжелой цепи CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf (SEQ ГО N0:133 или 189). Например, в данном документе охватываются антитела, содержащие
тяжелую цепь CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf (SEQ Ш NO: 133 или 189), и в которых С-концевые К, или GK, или PGK удалены или присутствуют. Другие варианты CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf (SEQ Ш N0:133 или 189) включают в себя варианты, имеющие тяжелую цепь, которая относится к отличающемуся аллотипу, и в которых, например, аминокислоты 356 и 358 представляют собой D и L, соответственно. Варианты включают в себя варианты, имеющие дополнительный цистеин, введенный с помощью мутации в шарнир IgG2, например, С220 (или имеет C220S вместо C219S), и варианты, которые не имеют мутаций A330S и/или P331S. Варианты CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf (SEQ ГО N0:133 или 189) предпочтительно характеризуются по меньшей мере подобными биохимическими свойствами и/или биологическими активностями, например, эффективностью интернализации, ингибированием ферментативной активности CD73, аффинностью в отношении человеческого CD73 и связыванием с тем же или подобным эпитопом, по сравнению с CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf (SEQ ГО N0:133 или 189).
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части содержат любые из константных участков, описанных в данном документе, например, константные участки, содержащие аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ГО N0: 126, 127, 129, 130, 162-169, 180-183, 267282 и 300-347.
Легкая цепь антитела к CD73 может содержать константный участок легкой цепи, содержащий SEQ ГО N0: 131 или вариант SEQ ГО N0: 131, причем данный вариант (i) отличается от SEQ ГО N0: 131 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислотными заменами, добавлениями или делециями; (ii) отличается от SEQ ГО N0: 131 не более чем 10, 9, 8, 7, 6,5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотной заменой, добавлением или делецией; (ш) отличается от SEQ ГО N0: 131 1-5, 1-3, 1-2, 2-5, 3-5, 1-10 или 5-10 аминокислотными заменами, добавлениями или делециями и/или (iv) содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере приблизительно на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной SEQ ГО N0: 131, причем при любом из (i)-(iv) аминокислотная замена может представлять собой консервативную аминокислотную замену или неконсервативную аминокислотную замену. Иллюстративная мутация CL включает в себя C124S.
Тяжелые и легкие цепи, содержащие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% или 70% идентична любой из тяжелых или легких цепей, изложенных в таблице 35, которые подробно описаны в данном документе (или их вариабельные участки), могут быть применены для образования антител к человеческому CD73, обладающих желаемыми характеристиками, например, характеристиками, описанными далее в данном документе. Иллюстративные варианты представляют собой варианты, содержащие аллотипическую вариацию, например, в константном домене. Тяжелые и легкие цепи, содержащие аминокислотную последовательность, которая отличается не более чем 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2 или 1 аминокислотой (за счет замены, добавления или делеции) от любой из тяжелых или легких цепей, изложенных в таблице 35, как описано в данном документе, (или их вариабельных участков), могут быть применены для образования антител к человеческому CD73, обладающих желаемыми характеристиками, например, таких антител, описанных далее в данном документе.
В соответствии с различными вариантами осуществления антитела, описанные выше, проявляют одно или несколько, два или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, десять или все из функциональных свойств, приведенных в таблице 3.
Такие антитела включают в себя, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела.
В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в данном документе антитела к CD73 связываются как с гликозилированным (например, N-связанное или О-связанное гликозилирование), так и с негликозилированным человеческим CD73. Определенные антитела к CD73 могут связываться с гликозилированным, но не с негликозилированным CD73, или с негликозилированным, но не с гликозилированным CD73.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, связываются с конформационным эпитопом.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, связываются с аминокислотными остатками в пределах следующего участка в человеческом CD73:
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96),
соответствующего аминокислотным остаткам 65-83 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2), что определено, например, с помощью FfDX-MS.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, связываются со всеми или частью из следующих аминокислотных остатков в человеческом CD73: FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ ID NO: 96), которые соответствуют аминокислотным остаткам 65-83 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2), что определено, например, с помощью FfDX-MS.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к CD73, описанное в данном документе, связывается с аминокислотными остатками в пределах следующего участка в человеческом CD73:
LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш N0: 97), соответствующего аминокислотным остаткам 157-172 в человеческом CD73 (SEQ Ш N0: 1 или 2), что определено, например, с помощью FfDX-MS.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к CD73, описанное в данном документе, связывается со всеми или частью из следующих аминокислотных остатков в пределах человеческого CD73: LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш N0: 97), которые соответствуют аминокислотным остаткам 157-172 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2), что определено, например, с помощью FfDX-MS.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к CD73, описанное в данном документе, связывается с перемежающимися аминокислотными остатками в пределах следующих участков в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2):
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш N0: 96) и LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш N0: 97).
В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к CD73, описанное в данном документе, связывается со всеми или частью перемежающихся аминокислотных остатков в пределах следующих участков в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2): FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш N0: 96) и LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш N0: 97),
которые соответствуют аминокислотным остаткам 65-83 и 157-172 в человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1 или 2), что определено, например, с помощью HDX-MS.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 характеризуются взаимодействиями с человеческим CD73, которые соответствуют таковым, приведенным в таблице 30, что определено с помощью рентгеновской кристаллографии. Антитело может характеризоваться по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% одинаковых взаимодействий с человеческим CD73, которые приведены в таблице 30.
III. Антитела, имеющие конкретные последовательности зародышевой линии
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит вариабельный участок тяжелой цепи из конкретного гена зародышевой линии тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельный участок легкой цепи из конкретного гена зародышевой линии легкой цепи иммуноглобулина.
Как продемонстрировано в данном документе, были получены человеческие антитела, специфичные в отношении CD73, которые содержат вариабельный участок тяжелой цепи, который является продуктом гена или происходит из гена VH 3-33, гена VH 3-10, гена VH 3-15, VH 3-16, гена Ш6Ь, гена VH 6-19, гена VH 4-34 и/или гена ШЗЬ человеческой зародышевой линии. Соответственно, в данном документе предполагаются выделенные моноклональные антитела, специфичные в отношении человеческого CD73, или их антигенсвязывающие части, содержащие вариабельный участок тяжелой цепи, который является продуктом или происходит из гена VH человеческой зародышевой линии, выбранного из группы, состоящей из: VH 3-33, VH 3-10, VH 3-15, VH 3-16, VH 6-19 и VH4-34.
Были получены человеческие антитела, специфичные в отношении CD73, которые содержат вариабельный участок легкой цепи, который является продуктом гена или происходит из гена VK L6, гена VK L18, гена VK L15, гена VK L20, гена VK А27, гена Ж5, гена JK4, гена JK2 и гена JK1 человеческой зародышевой линии. Соответственно, в данном документе предполагаются выделенные моноклональные антитела, специфичные в отношении человеческого CD73, или их антигенсвязывающие части, содержащие вариабельный участок легкой цепи, который является продуктом или происходит из гена
VK человеческой зародышевой линии, выбранного из группы, состоящей из: VK L6, VK L18, VK L15, VK L20 и VK А27.
Предпочтительными антителами, описанными в данном документе, являются антитела, содержащие вариабельный участок тяжелой цепи, который является продуктом или происходит из одного из вышеперечисленных генов VH человеческой зародышевой линии, а также содержащие вариабельный участок легкой цепи, который является продуктом или происходит из одного из вышеперечисленных генов VK человеческой зародышевой линии.
Как используется в данном документе, человеческое антитело содержит вариабельные участки тяжелой или легкой цепи, которые "являются продуктом" или "происходят из" конкретной последовательности зародышевой линии, если вариабельные участки антитела получены из системы, в которой используются гены зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов. Такие системы включают иммунизацию трансгенной мыши, несущей гены человеческих иммуноглобулинов, антигеном, представляющим интерес, или скрининг библиотеки генов человеческих иммуноглобулинов, отображаемых на фаге, с использованием антигена, представляющего интерес. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "происходит из" последовательности зародышевой линии человеческого иммуноглобулина, можно идентифицировать как таковое путем сравнения аминокислотной последовательности человеческого антитела с аминокислотными последовательностями зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов и выбора последовательности зародышевой линии человеческого иммуноглобулина, которая является наиболее близкой в плане последовательности (т.е. характеризуется наибольшей % идентичностью) к последовательности человеческого антитела. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "происходит из" последовательности зародышевой линии человеческого иммуноглобулина, может содержать отличающиеся аминокислоты по сравнению с последовательностью зародышевой линии, например, вследствие встречающихся в естественных условиях соматических мутаций или намеренного введения сайт-направленной мутации. Тем не менее, последовательность аминокислот выбранного человеческого антитела, как правило, по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов, и содержит аминокислотные
остатки, которые идентифицируют антитело как человеческое антитело при сравнении с аминокислотными последовательностями зародышевой линии человеческих иммуноглобулинов из других видов (например, мышиными последовательностями зародышевой линии). В определенных случаях аминокислотная последовательность человеческого антитела может быть по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96%, 97%, 98% или 99% идентичной аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии иммуноглобулина. Как правило, человеческое антитело, происходящее из конкретной последовательности человеческой зародышевой линии будет проявлять не более чем 10 аминокислот, отличающихся от аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии иммуноглобулина. В определенных случаях человеческое антитело может проявлять не более чем 5 или даже не более чем 4, 3, 2 или 1 аминокислоту, отличающуюся от аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии иммуноглобулина.
IV. Гомологичные антитела
В данном документе охватываются антитела, имеющие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, которые являются гомологичными аминокислотным последовательностям предпочтительных антител, описанных в данном документе, и при этом антитела сохраняют желаемые функциональные свойства антител к CD73, описанных в данном документе.
Например, выделенное антитело к CD73 или его антигенсвязывающая часть могут содержать вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, причем:
(а) вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135 и 170-177, или содержит 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 13, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25 или 1-50 изменений аминокислот (т.е. аминокислотных замен, добавлений или делеций) в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135 и 170177, соответственно;
(b) вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92 и 138, или содержит 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25 или 1-50 изменений аминокислот (т.е. аминокислотных замен, добавлений или делеций) в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92 и 238, соответственно;
(c) антитело специфично связывается с CD73, и
(d) антитело проявляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или все из функциональных свойств, приведенных в таблице 3.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, и необязательно CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, и необязательно CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95 и 241, и необязательно CDR1 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93 и 239, и необязательно CDR2 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность,
выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94 и 240.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, и необязательно CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, и необязательно CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90, и при этом CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95 и 241, и необязательно CDR1 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93 и 239, и необязательно CDR2 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94 и 240.
В соответствии с различными вариантами осуществления антитело может представлять собой, например, человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
Выделенное антитело к CD73 или его антигенсвязывающая часть могут содержать тяжелую цепь и легкую цепь, причем:
(а) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 100, 103, 107, 109, 112, 114, 116, 119, 121, 133, 184-210, или содержит 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25 или 1-50 изменений аминокислот (т.е. аминокислотных замен, добавлений или делеций) в сравнении с аминокислотной последовательностью,
выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0: 100, 103, 107, 109, 112, 114, 116, 119, 121, 133 и 184-210, соответственно;
(b) легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 101, 102, 104, 105, 106, 108, ПО, 111, 113, 115, 117, 118, 120 и 122, или содержит 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25 или 1-50 изменений аминокислот (т.е. аминокислотных замен, добавлений или делеций) в сравнении с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 101, 102, 104, 105, 106, 108, ПО, 111, 113, 115, 117, 118, 120 и 122, соответственно;
(c) антитело специфично связывается с CD73, и
(d) антитело проявляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или все из функциональных свойств, приведенных в таблице 3.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат тяжелые и легкие цепи со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, и необязательно CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, и необязательно CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат тяжелые и легкие цепи со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95 и 241, и необязательно CDR1 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93 и 239, и необязательно CDR2 вариабельного
участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94 и 240.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 содержат тяжелые и легкие цепи со значениями процентной идентичности и/или изменениями аминокислот и функциями, обсуждаемыми выше (т.е. (a)-(d)), причем CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, и необязательно CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, и необязательно CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90, и при этом CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95 и 241, и необязательно CDR1 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93 и 239, и необязательно CDR2 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94 и 240.
Также предполагаются антитела к CD73, содержащие VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VLCDR1, VLCDR2 и/или VLCDR3, которые отличаются от соответствующих CDR в CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 изменениями 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 аминокислот (т.е. аминокислотными заменами, добавлениями или делециями). В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит 1-5 изменений аминокислот в каждом из 1, 2, 3, 4, 5 или 6 из CDR по сравнению с соответствующими последовательностями в CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 11F11, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит в сумме 1-5 изменений аминокислот во всех CDR по сравнению с CDR в CD73.4
1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 и/или 7A11.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит CDR VH и VL, состоящие из CDR в CD73.4-1 или CD73.4-2, причем одна или несколько из аминокислот в одном или нескольких CDR представляют собой аминокислоты из одного из других антител к CD73, раскрытых в данном документе.
Мутации (например, замены, добавления, делеции), которые можно произвести в последовательностях вариабельного участка у антител к CD73, могут быть определены, исходя из следующего: (i) мутации, которые были введены в антитела, как описано в разделе Примеры; и (ii) сравнение аминокислотных остатков в каждом положении в вариабельных доменах антител к CD73, описанных в данном документе (см. таблицу 35 и фигуру 35): отличающаяся аминокислота в определенном положении в антителах к CD73 может указывать на то, что аминокислотный остаток в этом положении может быть изменен на другой аминокислотный остаток без существенного воздействия на активности антитела; при этом, если такой же аминокислотный остаток находится в том же положении в нескольких или во всех антителах к CD73, это может указывать на то, что эта конкретная аминокислота должна быть сохранена и не должна быть изменена на другой остаток. Иллюстративные варианты осуществления приведены ниже.
В соответствии с определенными вариантами осуществления замену каркасного остатка можно ввести в положение 25 (.. RLSCATSGFTF... в 11F11) в вариабельный участок тяжелой цепи (например, консервативную замену, например, на S или А) антител к CD73, описанных в данном документе. Например, если аминокислота в этом положении представляет собой Т, может быть введена замена на А или S; если аминокислота в этом положении представляет собой А, может быть введена замена на S или Т; и, если аминокислота в этом положении представляет собой S, может быть введена замена на Т или А. Антитела 24Н2, 4D4, 10D2, 6Е11, 7А11, 11А6 и 4СЗ имеют А в этом положении, 11F11 имеет Т в этом положении, и 73.5, 73.7 и 73.9 имеют S в этом положении.
Аналогично, в соответствии с определенными вариантами осуществления замену каркасного остатка можно вводить в положение аминокислоты 94 (... AEDTAVYYCAR... в 11F11) вариабельного участка тяжелой цепи (например, V на L или L на V). Например,
антитела 11F11, 73.3-73.10, 24Н2, 4D4, 5F8 и 10D2 имеют V в этом положении, и 6Е11, 7А11, 11А6 и 4СЗ имеют L в этом положении.
В соответствии с определенными вариантами осуществления аминокислотные замены могут быть произведены в CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи антител к CD73, раскрытых в данном документе. Например, аминокислота в положении 52 (...WVAVILYDGSN... в 11F11) может быть заменена на W, или, если аминокислота в этом положении представляет собой W, то аминокислота может быть заменена на L (антитела 11F11 и 73.4-73.7 имеют L в этом положении, и антитела 73.8-73.10, 24Н2 и 4D4 имеют W в этом положении).
Аналогично, в соответствии с определенными вариантами осуществления аминокислота в положении 54 (... VILYDGSNKYY... в 11F11) может быть заменена на S или Е, или, если аминокислота в этом положении представляет собой S, то аминокислота может быть заменена на Е. Антитела 11F11, 73.4, 73.5, 24Н2, 10D2 и 5F8 имеют G в этом положении, антитела 73.6-73.9, 6Е11, 7А11, 4СЗ и 73.3 имеют S в этом положении, и антитела 73.10 и 4D4 имеют Е в этом положении.
Другие допустимые замены в вариабельном участке могут быть определены на основании выравнивания последовательностей вариабельного участка тяжелой и легкой цепей на фигуре 35 с использованием принципа, подобного описанному выше.
Антитела, имеющие последовательности, гомологичные последовательностям CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10, CD73.11, 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11 и/или 7А11, например, VH и VL участки с SEQ ГО N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 170-177 и с SEQ ГО NO: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92, соответственно, или тяжелые и легкие цепи с SEQ ГО NO: 100, 103, 107, 109,
112, 114, 116, 119, 121, 133 и 184-210 и с SEQ ID NO: 101, 102, 104, 105, 106, 108, ПО, 111,
113, 115, 117, 118, 120 и 122, соответственно, или CDR можно получить посредством мутагенеза (например, сайт-направленного или ПЦР-опосредованного мутагенеза) молекул нуклеиновой кислоты, например, SEQ ГО NO: 139, 142, 146, 148, 151, 153, 155,
158, 160, 237, и/или SEQ ГО NO: 140, 141, 143, 144, 145, 147, 149, 150, 152, 154, 156, 157,
159, 161, или SEQ ГО NO: 134, 243, 246, 250, 252, 255, 257, 259, 262, 264, и/или SEQ ГО NO: 244, 245, 247, 248, 249, 251, 253, 254, 256, 258, 260, 261, 263, 265, 266, с последующим
158,
исследованием кодируемых измененных антител в отношении сохраненной функции с использованием функциональных анализов, описанных в данном документе.
V. Антитела с консервативными модификациями
Антитела к CD73 могут содержать вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, причем одна или несколько из этих последовательностей CDR содержат определенные аминокислотные последовательности на основе предпочтительных антител, описанных в данном документе, например, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11, или их консервативные модификации, и при этом антитела сохраняют желаемые функциональные свойства антител к CD73, описанных в данном документе. Соответственно, выделенное антитело к CD73 или его антигенсвязывающая часть могут содержать вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, причем:
(a) последовательность CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш N0: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен;
(b) последовательность CDR3 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш N0: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен;
(c) антитело специфично связывается с CD73, и
(d) антитело проявляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или все из функциональных свойств, приведенных в таблице 3.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления последовательность CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен; и последовательность CDR2 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш NO: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен. В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления последовательность CDR1 вариабельного участка тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш NO: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен; и последовательность CDR1 вариабельного участка легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ Ш NO: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93, и ее консервативные модификации, например, 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5 консервативных аминокислотных замен.
В соответствии с различными вариантами осуществления антитела может представлять собой, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела.
Консервативные аминокислотные замены также можно производить в частях антител, отличных от CDR, или дополнительно к заменам в CDR. Например, консервативные модификации аминокислот могут быть произведены в каркасном участке или в константном участке, например, Fc-участке. Любая из замен, описанных в данном документе, может представлять собой консервативную замену. Вариабельный участок или тяжелая или легкая цепь могут содержать 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 125 или 1-50 консервативных аминокислотных замен по сравнению с последовательностями антител к CD73, представленных в данном документе. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 содержит комбинацию консервативных и неконсервативных модификаций аминокислот.
VI. Антитела, которые связываются с тем же эпитопом на CD73, что и антитела, описанные в данном документе, или конкурируют с ними за связывание с CD73
Также предполагаются антитела, которые конкурируют за связывание с CD73 с конкретными антителами к CD73, описанными в данном документе (например, антитела CD73.4, CD73.3, 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11 и 7А11). Такие конкурирующие антитела можно идентифицировать на основании их способности к конкурентному ингибированию связывания с CD73 одного или нескольких из моноклональных антител 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11, 7А11 и/или CD73.3 или CD73.4 (с любыми константными участками и легкими цепями, описанными в данном документе для этих антител) в стандартных анализах связывания CD73. Например, можно применять стандартные анализы ELISA или конкурентные анализы ELISA, в которых рекомбинантный белок человеческого CD73 иммобилизируют на планшете, добавляют различные концентрации не содержащего метки первого антитела, планшет промывают, добавляют меченое второе антитело, промывают и измеряют количество связавшейся метки. Если повышенная концентрация не содержащего метки (первого) антитела (также называемого "блокирующим антителом") ингибирует связывание меченого (второго) антитела, считается, что первое антитело ингибирует связывание второго антитела с мишенью на планшете, или считается, что оно конкурирует со связыванием второго антитела. В качестве дополнения или альтернативы, анализ SPR методом BIACORE(r) можно применять для оценки способности антител к конкуренции. Способность исследуемого антитела к ингибированию связывания антитела к CD73, описанного в данном документе, с CD73 демонстрирует, что исследуемое антитело может конкурировать с антителом за связывание с CD73.
В данном документе также представлены антитела к CD73, которые ингибируют связывание антитела к CD73, описанных в данном документе, с CD73 на клетках, например, на опухолевых клетках, по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, и/или чье связывание с CD73 на клетках, например, на опухолевых клетках, ингибируется по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, например, при
измерении с помощью метода ELISA или FACS, как например, при использовании анализа, описанного в предыдущем абзаце.
Антитела, которые конкурируют за связывание с антителами к CD73, описанными в данном документе, можно идентифицировать с использованием методов, известных в уровне техники. Например, можно иммунизировать мышей человеческим CD73, как описано в данном документе, получить гибридомы, а полученные в результате моноклональные антитела подвергнуть скринингу в отношении способности конкурировать с антителом, описанным в данном документе, за связывание с CD73. Мышей также можно иммунизировать меньшим фрагментом CD73, содержащим эпитоп, с которым связывается антитело. Эпитоп или участок, содержащий эпитоп, можно идентифицировать, например, посредством скрининга в отношении связывания с рядом перекрывающихся пептидов, охватывающим CD73. В качестве альтернативы, можно применять метод по Jespers et al., Biotechnology 12:899, 1994; для управления селекцией антител, имеющих такой же эпитоп, что и описанное в данном документе антитело к CD73, и, следовательно, подобные ему свойства. При использовании фагового дисплея вначале тяжелую цепь антитела к CD73 спаривают с репертуаром легких цепей (предпочтительно человеческих) для селекции связывающегося с CD73 антитела, а затем новую легкую цепь спаривают с репертуаром тяжелых цепей (предпочтительно человеческих) для селекции связывающегося с CD73 антитела (предпочтительно человеческого), имеющего такой же эпитоп или участок с эпитопом, что и антитело к CD73, описанное в данном документе. В качестве альтернативы, варианты антитела, описанного в данном документе, можно получить посредством мутагенеза кДНК, кодирующей тяжелую и легкую цепи антитела.
Методики определения того, что антитела связываются с "тем же эпитопом на CD73", что и антитела, описанные в данном документе, включают в себя, например, методы картирования эпитопов, такие как рентгеноструктурные анализы кристаллов комплексов антиген-антитело, обеспечивающие разрешение эпитопов в атомном масштабе. В других методах отслеживается связывание антитела с фрагментами антигена или мутированными вариантами антигена, причем потерю связывания вследствие модификации аминокислотного остатка в последовательности антигена часто считают показателем компонента эпитопа. Кроме того, для картирования эпитопов также можно
применять вычислительные комбинаторные методы. Методы также могут основываться на способности антитела, представляющего интерес, выделять на основе аффинности специфичные короткие пептиды из комбинаторных пептидных библиотек с использованием фагового дисплея. Пептиды затем рассматривают как ключи к определению эпитопов, соответствующих антителу, используемому для скрининга пептидной библиотеки. Для картирования эпитопов также были разработаны вычислительные алгоритмы, с помощью которых, как было показано, картируют конформационные прерывающиеся эпитопы.
Сканирующий аланином мутагенез, который описан в Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085; или некоторые другие формы точечного мутагенеза аминокислотных остатков в CD73 также можно использовать для определения функционального эпитопа для антитела к CD73. Тем не менее, исследования с использованием мутагенеза также могут выявить аминокислотные остатки, которые являются ключевыми для общей трехмерной структуры CD73, но которые не задействованы непосредственно в контактах антитело-антиген, и, следовательно, могут быть необходимы другие методы для подтверждения функционального эпитопа, определенного при помощи этого метода.
Эпитоп или участок с эпитопом ("участок с эпитопом" представляет собой участок, содержащий эпитоп или перекрывающийся с эпитопом), связываемый специфичным антителом, также можно определить, оценивая связывание антитела с пептидами, содержащими фрагменты CD73, например, неденатурированные или денатурированные фрагменты. Ряд перекрывающихся пептидов, охватывающий последовательность CD73 (например, человеческого CD73) можно синтезировать и подвергнуть скринингу в отношении связывания, например, в прямом анализе методом ELISA, конкурентом анализе методом ELISA (при котором пептиды оценивают в отношении их способности к предотвращению связывания антитела с CD73, связанным с лункой микротитровального планшета) или на чипе. Такие методы скрининга пептидов могут быть неспособны к выявлению некоторых прерывающихся функциональных эпитопов, т.е. функциональных эпитопов, которые включают аминокислотные остатки, которые не являются смежными по линии первичной последовательности полипептидной цепи CD73.
Эпитоп также можно идентифицировать с помощью метода определения структуры белков на основе MS, такого как масс-спектрометрия с использованием водородно/дейтериевого обмена (HDX-MS) и быстрого фотохимического окисления белков (FPOP). HDX-MS можно осуществлять, например, как описано далее в разделе Примеры и в Wei et al. (2014) Drug Discovery Today 19:95; причем методы из данного источника специально включены в данный документ посредством ссылки. FPOP можно осуществлять, как описано, например, в Hambley and Gross (2005) J. American Soc. Mass Spectrometry 16:2057, причем методы из данного источника специально включены в данный документ посредством ссылки.
Эпитоп, связываемый антителами к CD73, также можно определить с помощью структурных методов, таких как рентгенографическое определение структуры кристалла (например, международная заявка WO 2005/044853), молекулярное моделирование и спектроскопия ядерного магнитного резонанса (NMR), в том числе определение с помощью NMR скоростей обмена H-D лабильных водородов в амидных группах в CD73, когда он является несвязанным, и когда он связан в комплекс с антителом, представляющим интерес (Zinn-Justin et al. (1992) Biochemistry 31, 11335-11347; Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32, 6884-6891).
Что касается рентгеноструктурной кристаллографии, кристаллизацию можно проводить с использованием любого из методов, известных в уровне техники (например, Giege et al. (1994) Acta Crystallogr. D50:339-350; McPherson (1990) Eur. J. Biochem. 189:123), в том числе метод "microbatch" (например, Chayen (1997) Structure 5:1269-1274), метод диффузии паров из "висящей капли" (например, McPherson (1976) J. Biol. Chem. 251:63006303), затравливания и диализа. Желательно применение препарата белка с концентрацией, составляющей по меньшей мере приблизительно 1 мг/мл и предпочтительно от приблизительно 10 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Кристаллизация может лучше всего осуществляться в растворе осадителя, содержащем полиэтиленгликоль 1000-20000 (PEG; со средним молекулярным весом в диапазоне от приблизительно 1000 до приблизительно 20000 Да, предпочтительно от приблизительно 5000 до приблизительно 7000 Да, более предпочтительно приблизительно 6000 Да) в концентрациях в диапазоне от приблизительно 10% до приблизительно 30% (вес/объем). Также желательно, чтобы он включал стабилизирующее белок средство, например,
глицерин в концентрации в диапазоне от приблизительно 0,5% до приблизительно 20%. Подходящая соль, такая как хлорид натрия, хлорид лития или цитрат натрия, также может быть желательна в растворе осадителя, предпочтительно в концентрации в диапазоне от приблизительно 1 мМ до приблизительно 1000 мМ. Осадитель предпочтительно стабилизирован буфером при рН от приблизительно 3,0 до приблизительно 5,0, предпочтительно приблизительно 4,0. Конкретные буферы, пригодные в растворе осадителя, могут изменяться и являются широко известными в уровне техники (Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Third ed., (1994) Springer-Verlag, New York). Примеры пригодных буферов включают в себя HEPES, Tris, MES и ацетатный буфер, но не ограничиваются ими. Кристаллы можно выращивать при широком диапазоне температур, в том числе 2°С, 4°С, 8°С и 26°С.
Кристаллы антитело-антиген можно изучать с использованием широко известных рентгенодифрационных методик и можно уточнить с использованием компьютерного программного обеспечения, такого как X-PLOR (Yale University, 1992, реализуется Molecular Simulations, Inc.; см., например, Blundell & Johnson (1985) Meth. Enzymol. 114 & 115, H. W. Wyckoff et al., eds., Academic Press; публикацию заявки на патент США № 2004/0014194) и BUSTER (Bricogne (1993) Acta Cryst. D49:37-60; Bricogne (1997) Meth. Enzymol. 276A:361-423, Carter & Sweet, eds.; Roversi et al. (2000) Acta Cryst. D56T313-1323), раскрытия которых тем самым включены посредством ссылки во всей своей полноте.
Антитела к CD73 могут связываться с тем же эпитопом, что и любое из антител к CD73, имеющих аминокислотные последовательности, описанные в данном документе, что определяется с помощью методики картирования эпитопов, такой как методика, описанная в данном документе. Антитела к CD73 также могут характеризоваться подобными взаимодействиями с человеческим CD73, например, они могут характеризоваться по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или большим процентом взаимодействий, приведенных в таблице 30, что определено с помощью рентгеноструктурной кристаллографии.
VII. Сконструированные и модифицированные антитела
VH и VL участки
Также предполагаются сконструированные и модифицированные антитела, которые можно получить с использованием антитела, имеющего одну или несколько из последовательностей VH И/ИЛИ VL, раскрытых в данном документе, в качестве исходного материала для конструирования модифицированного антитела, причем модифицированный антитело может иметь модифицированные свойства по сравнению с исходным антителом. Антитело можно конструировать, модифицируя один или несколько остатков в пределах одного или обоих вариабельных участках (т.е. VH И/ИЛИ VL), например, в пределах одного или нескольких CDR участков и/или в пределах одного или нескольких каркасных участков. В качестве дополнения или альтернативы, антитело можно конструировать, модифицируя остатки в пределах константного участка(участков), например, для изменения эффекторной функции(функций) антитела.
Одним типом конструирования вариабельного участка, который можно осуществлять, является CDR-прививка. Антитела взаимодействуют с антигенами-мишенями преимущественно через аминокислотные остатки, которые расположены в шести гипервариабельных участках (CDR) тяжелой и легкой цепей. По этой причине аминокислотные последовательности в пределах CDR являются более различными у отдельных антител, чем последовательности за пределами CDR. Поскольку последовательности CDR являются ответственными за большинство взаимодействий антитело-антиген, представляется возможным обеспечение экспрессии рекомбинантных антител, которые имитируют свойства конкретных эталонных антител, путем конструирования векторов экспрессии, которые включают в себя последовательности CDR из конкретного эталонного антитела, привитые на каркасные последовательности из отличающегося антитела с отличающимися свойствами (см., например, Riechmann, L. et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones, P. et al. (\9Щ Nature 321:522-525; Queen, C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033; патент США № 5225539 за авторством Winter и патенты США №№ 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 за авторством Queen et al.)
Соответственно, другой вариант осуществления, описанный в данном документе, относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающей части, содержащим вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит последовательности
CDR1, CDR2 и CDR3, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, SEQ ГО N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90 и SEQ ГО N0: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93, SEQ ГО N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94 и SEQ ГО N0:11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95, соответственно. Таким образом, такие антитела содержат последовательности CDR VH И VL моноклональных антител CD73.4-1, CD73.4-2, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и7А11, причем они могут содержать отличающиеся каркасные последовательности из этих антител.
Такие каркасные последовательности можно получить из баз данных ДНК общего пользования или опубликованных источников, которые включают последовательности генов зародышевой линии антител. Например, последовательности ДНК зародышевой линии для генов вариабельных участков тяжелой и легкой цепей человека можно найти в базе данных человеческих последовательностей зародышевой линии "VBase" (доступна в сети Интернет по адресу www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), а также в Kabat, Е. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776-798: и Cox, J. P. L. et al. (1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol. 24:827836; причем содержание каждого из данных источников специально включено в данный документ посредством ссылки.
Предпочтительными каркасными последовательностями для применения в антителах, описанных в данном документе, являются такие последовательности, которые подобны в плане структуры каркасным последовательностям, применяемым в антителах, описанных в данном документе. Последовательности CDR1, 2 и 3 VH И последовательности CDR1, 2 и 3 VL МОЖНО привить на каркасные участки, которые имеют последовательность, идентичную обнаруживаемой в гене зародышевой линии
иммуноглобулина, из которого происходит каркасная последовательность, или последовательности CDR можно привить на каркасные участки, которые содержат до 20, предпочтительно консервативных, аминокислотных замен в сравнении с последовательностями зародышевой линии. Например, было выявлено, что в определенных случаях выгодно подвергнуть мутации остатки в пределах каркасных участков для сохранения или усиления способности к связыванию антигена у антитела (см., например, патенты США №№ 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 за авторством Queen et al).
Сконструированные антитела, описанные в данном документе, включают в себя те антитела, в которых были произведены модификации каркасных остатков в пределах VH и/или VL, например, для улучшения свойств антитела. Как правило, такие модификации каркаса производят для снижения иммуногенности антитела. Например, один подход заключается в "мутировании к первоначальному виду" одного или нескольких каркасных остатков в соответствующую последовательность зародышевой линии. Более конкретно, антитело, которое подверглось соматической мутации, может содержать каркасные остатки, которые отличаются от последовательности зародышевой линии, из которой происходит антитело. Такие остатки можно идентифицировать посредством сравнения каркасных последовательностей антитела с последовательностями зародышевой линии, из которых происходит антитело. Для возвращения последовательностей каркасных участков в их конфигурацию зародышевой линии, соматические мутации можно "мутировать к первоначальному виду" в последовательности зародышевой линии, например, с помощью сайт-направленного мутагенеза или ПЦР-опосредованного мутагенеза. Также предполагается охват таких антител, подвергшихся "мутированию к первоначальному виду".
Другой тип модификации каркаса включает мутирование одного или нескольких остатков в пределах каркасного участка или даже в пределах одного или нескольких CDR участков с удалением Т-клеточных эпитопов, чтобы таким образом снизить потенциальную иммуногенность антитела. Этот подход также называется "деиммунизацией" и более подробно описан в публикации заявки на патент США № 20030153043 за авторством Carr et al.
Другим типом модификации вариабельного участка является мутирование аминокислотных остатков в пределах CDR участков для улучшения одного или нескольких свойств связывания (например, аффинности) у антитела, представляющего интерес. Сайт-направленный мутагенез или ПЦР-опосредованный мутагенез можно осуществлять для введения мутации(мутаций), и эффект в отношении связывания антитела или другого функционального свойства, представляющего интерес, можно оценить в in vitro или in vivo анализах, которые описаны в данном документе и приведены в разделе Примеры. Предпочтительно вводят консервативные модификации (которые обсуждаются выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные добавления, делеции или, предпочтительно, замены. Более того, изменениям подвергаются, как правило, не более одного, двух, трех, четырех или пяти остатков в пределах CDR участка.
Соответственно, также предполагаются выделенные моноклональное антитела к CD73 или их антигенсвязывающие части, содержащие вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий: (a) CDR1 участок VH, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 5, 17, 33, 41, 53, 61,
69, 81 и 89, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ Ш N0: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89; (b) CDR2 участок VH, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62,
70, 82 и 90, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ Ш N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90; (с) CDR3 участок VH, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0:7, 19, 35, 43, 55, 63,
71, 83 и 91, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ Ш N0: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91; (d) CDR1 участок VL, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ ГО N0: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93; (е) CDR2 участок VL, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы,
69,
состоящей из SEQ ID N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ ГО N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94; и (f) CDR3 участок VL, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95, или аминокислотную последовательность с одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами, делециями или добавлениями в сравнении с SEQ ГО NO: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95.
Метиониновые остатки в CDR антител могут окисляться, приводя в результате к потенциальной химической деградации и последующему снижению активности антитела. Соответственно, также предполагаются антитела к CD73, у которых один или несколько метиониновых остатков в CDR тяжелой и/или легкой цепей заменены на аминокислотные остатки, которые не подвергаются окислительной деградации.
Аналогично, из антител к CD73, в особенности, из CDR, могут быть удалены сайты дезамидирования.
Потенциальные сайты гликозилирования в антигенсвязывающем домене предпочтительно устраняют для предотвращения гликозилирования, что может препятствовать связыванию с антигеном. См., например, патент США № 5714350.
Целенаправленное связывание с антигеном
В соответствии с различными вариантами осуществления антитело согласно настоящему изобретению модифицируют для селективного блокирования связывания с антигеном в тканях и средах, где связывание с антигеном будет вредным, но для обеспечения связывания с антигеном там, где оно будет полезным. В соответствии с одним вариантом осуществления создают "маску" из блокирующего пептида, которая специфично связывается с антигенсвязывающей поверхностью антитела и препятствует связыванию с антигеном, причем данная маска связана с каждым из участвующих в связывании плечей антитела с помощью расщепляемого пептидазой линкера. См., например, патент США № 8518404, выданный CytomX. Такие конструкты являются полезными для лечения злокачественных опухолей, у которых уровни протеазы в
опухолевом микроокружении являются значительно повышенными по сравнению с тканями, не относящимися к опухоли. Селективное расщепление расщепляемого линкера в опухолевом микроокружении позволяет отщеплять маскирующий/блокирующий пептид, обеспечивая возможность селективного связывания с антигеном в опухоли, а не в периферических тканях, в которых связывание с антигеном может вызвать нежелательные побочные эффекты.
В качестве альтернативы, в соответствии со связанным вариантом осуществления разработано бивалентное связывающее соединение ("маскирующий лиганд"), содержащие два антигенсвязывающих домена, которое связывается с обеими антигенсвязывающими поверхностями (бивалентного) антитела и препятствует связыванию с антигеном, причем в данном связывающем соединении две маски для связывающих доменов связаны друг с другом (но не с антителом) с помощью расщепляемого линкера, например, расщепляемого пептидазой. См., например, публикацию международной заявки № WO 2010/077643, поданной Tegopharm Corp. Маскирующие лиганды могут содержать антиген, с которым, как предполагается, связывается антитело, или могут быть получены из такого антигена, или могут быть созданы независимо. Такие маскирующие лиганды являются полезными для лечения злокачественных опухолей, у которых уровни протеазы в опухолевом микроокружении являются значительно повышенными по сравнению с тканями, не относящимися к опухоли. Селективное расщепление расщепляемого линкера в опухолевом микроокружении позволяет отщепление двух связывающих доменов друг от друга, снижая авидность в отношении антигенсвязывающих поверхностей антитела. Являющееся результатом отщепление маскирующего лиганда от антитела обеспечивает возможность селективного связывания с антигеном в опухоли, а не в периферических тканях, в которых связывание с антигеном может вызвать нежелательные побочные эффекты.
Fc и модифицированные Fc
В дополнение к активности терапевтического антитела, обусловленной связыванием антигенсвязывающего домена с антигеном (например, блокирование когнатного лиганда или белка-рецептора в случае антагонистических антител или индукция передачи сигнала в случае агонистических антител), Fc-часть антитела обычно сложным образом
взаимодействует с иммунной системой, вызывая любое количество биологических эффектов. Эффекторные функции, как например, у Fc-участка иммуноглобулина, отвечающего за многие важные функции антитела, такие как антигензависимая клеточная цитотоксичность (ADCC), комплементзависимая цитотоксичность (CDC) и антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP), приводят в результате к цитолизу клеток-мишеней, хотя и за счет разных механизмов.
Антитела к CD73 могут содержать вариабельные домены антител, описанных в данном документе, с константными доменами, содержащими разные Fc-участки, которые выбраны, исходя из биологических активностей (если они присутствуют) антитела для предполагаемого применения. Salfeld (2007) Nat. Biotechnol. 25:1369. Человеческие IgG, например, можно подразделить на четыре подкласса, IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4, и каждый из них содержит Fc-участок, характеризующийся уникальным профилем для связывания с одним или несколькими из Fey рецепторов (активирующие рецепторы FcyRI (CD64), FcyRIIA, FcyRIIC (CD32); FcyRIIIA и FcyRIHB (CD 16) и ингибирующий рецептор FcyRIIB) и для первого компонента комплемента (Clq). Человеческие IgGl и IgG3 связываются со всеми Fey рецепторами; IgG2 связывается с FcyRIIAHm и с более низкой аффинностью с FcyRIIARi3i, FcyRIIIAviss; IgG4 связывается с FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIC и FcyRIIIAviss; и ингибирующий рецептор FcyRIIB характеризуется более низкой аффинностью в отношении IgGl, IgG2 и IgG3, чем все другие Fey рецепторы. Bruhns et al. (2009) Blood 113:3716. Исследования показали, что FcyRI не связывается с IgG2, и FcyRIIIB не связывается с IgG2 или IgG4. Id. В целом, по активности ADCC человеческий IgGl IgG3 " IgG4 IgG2. Как следствие, например, константный домен IgGl, а не IgG2 или IgG4, может быть выбран для применения в лекарственном средстве в случае, когда желаемой является ADCC; IgG3 может быть выбран в случае активации экспрессирующих FcyRIIIA NK-клеток, моноцитов или макрофагов; и IgG4 может быть выбран, если антитело должно применяться для десенсибилизации при аллергии у пациентов. IgG4 также может быть выбран, если желательно, чтобы у антитела полностью отсутствовала эффекторная функция.
Соответственно, вариабельные участки антител к CD73, описанные в данном документе, могут быть связаны (например, ковалентно связаны или слиты) с Fc, например, Fc IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4, который может относиться к любому аллотипу или
изоаллотипу, например, для IgGl: Glm, Glml(a), Glm2(x), Glm3(f), Glml7(z); для IgG2: G2m, G2m23(n); для IgG3: G3m, G3m21(gl), G3m28(g5), G3mll(b0), G3m5(bl), G3ml3(b3), G3ml4(b4), G3ml0(b5), G3ml5(s), G3ml6(t), G3m6(c3), G3m24(c5), G3m26(u), G3m27(v). См., например, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1). На выбор аллотипа могут оказывать влияние проблемы потенциальной иммуногенности, например, для сведения к минимуму образования антител к лекарственному средству.
Вариабельные участки, описанные в данном документе, могут быть связаны с Fc, содержащим одну или несколько модификаций, как правило, для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела, таких как период полувыведения из сыворотки крови, фиксация комплемента, связывание с Fc-рецептором и/или антигензависимая клеточная цитотоксичность. Более того, антитело, описанное в данном документе, можно химически модифицировать (например, один или несколько химических фрагментов могут быть прикреплены к антителу), или его можно модифицировать с изменением его гликозилирования для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела. Каждый из этих вариантов осуществления более подробно описан ниже. Нумерация остатков в Fc-участке соответствует нумерации аминокислот в антителе EU согласно Kabat. Варианты последовательности, раскрытые в данном документе, представлены с упоминанием номера остатка, за которым следует аминокислота, которая заменяет встречающуюся в естественных условиях аминокислоту, и перед которым необязательно находится встречающийся в естественных условиях остаток в этом положении. В случае, когда в заданном положении могут присутствовать несколько аминокислот, например, если последовательности различаются у встречающихся в естественных условиях изотипов, или если в данном положении могут быть заменены несколько мутаций, их разделяют символами косой черты (например, "X/Y/Z").
Например, можно производить модификации в Fc-участке с целью получения варианта Fc с (а) повышенной или пониженной антител озависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью (ADCC), (b) повышенной или пониженной комплементзависимой цитотоксичностью (СDC), (с) повышенной или пониженной аффинностью в отношении Clq и/или (d) повышенной или пониженной аффинностью в отношении Fc-рецептора по сравнению с исходным Fc. Такие варианты Fc-участка обычно
будут содержать по меньшей мере одну модификацию аминокислоты в Fc-участке. Полагают, что комбинирование модификаций аминокислот будет особенно желательным. Например, вариантный Fc-участок может включать в себя две, три, четыре, пять замен и т.д., например, в конкретных положениях в Fc-участке, идентифицированных в данном документе. Иллюстративные варианты последовательности Fc раскрыты в данном документе, а также представлены в патентах США №№ 5624821; 6277375; 6737056; 6194551; 7317091; 8101720; РСТ публикации международных заявок WO 00/42072; WO 01/58957; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WC) 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 и WO 06/020114.
Ослабление эффекторной функции
Активность ADCC можно снизить путем модификации Fc-участка. В соответствии с определенными вариантами осуществления можно удалить сайты, которые воздействуют на связывание с Fc-рецепторами, предпочтительно, сайты за исключением сайтов связывания рецептора реутилизации. В соответствии с другими вариантами осуществления Fc-участок можно модифицировать с удалением сайта ADCC. Сайты ADCC являются известными в уровне техники; см., например, Sarmay et al. (1992J Molec. Immunol. 29 (5): 633-9, применительно к сайтам ADCC в IgGl. В соответствии с одним вариантом осуществления вариант человеческого IgGl с G236R и L328R эффективно устраняет связывание с FcyR. Horton et al. (2011) J. Immunol. 186:4223; и Chu et al. (2008) Mol. Immunol. 45:3926. В соответствии с другими вариантами осуществления Fc, характеризующийся пониженным связыванием с FcyR, содержал аминокислотные замены L234A, L235E и G237A. Gross et al. (2001) Immunity 15:289.
Активность CDC также можно снизить путем модификации Fc-участка. Мутации в IgGl в положениях D270, К322, Р329 и Р331, в частности, аланиновые мутации D270A, К322А, Р329А и Р331А, значительно снижают способность соответствующего антитела к связыванию Clq и активации комплемента. Idusogie et al. (2000) J. Immunol. 164:4178; международная заявка WO 99/51642. Было показано, что модификация в положении 331 в IgGl (например, P331S) снижает связывание комплемента. Tao et al. (1993) J. Exp. Med. 178:661; и Canfield & Morrison (199 L1 J. Exp. Med. 173:1483. В другом примере один или
несколько аминокислотных остатков в положениях аминокислот 231-239 изменяют, чтобы посредством этого снизить способность антитела фиксировать комплемент. WO 94/29351.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления Fc с пониженной фиксацией комплемента имеет аминокислотные замены A330S и P331S. Gross et al. (2001) Immunity 15:289.
Для тех применений, когда эффекторная функция должна быть полностью исключена, например, когда только связывание с антигеном является достаточным для создания желаемого терапевтического благоприятного воздействия, а эффекторная функция приводит только к нежелательным побочным эффектам (или повышает их риск), можно применять антитела IgG4, или могут быть разработаны антитела или фрагменты, у которых отсутствует Fc-участок или значительная его часть, или Fc может быть мутирован для полного исключения гликозилирования (например, N297А). В качестве альтернативы, был создан гибридный конструкт человеческого IgG2 (Сн1 домен и шарнирный участок) и человеческого IgG4 (Сн2 и СнЗ домены), который лишен эффекторной функции, лишен способности к связыванию с FcyR (подобно IgG2) и неспособен к активации комплемента (подобно IgG4). Rother et al. (2007) Nat. Biotechnol. 25:1256. См. также Mueller et al. (1991) Mol. Immunol. 34:441; Labrijn et al. (2008) Curr. Op. Immunol. 20:479 (обсуждаются модификации Fc для ослабления эффекторной функции в целом).
В соответствии с другими вариантами осуществления Fc-участок изменяют посредством замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка на отличающийся аминокислотный остаток для ослабления эффекторной функции (всех эффекторных функций) антитела. Например, одну или несколько аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 и 322, можно заменить отличающимся аминокислотным остатком так, чтобы антитело характеризовалось пониженной аффинностью в отношении эффекторного лиганда, но сохраняло способность к связыванию антигена, как у исходного антитела. Эффекторный лиганд, аффинность в отношении которого изменяют, может представлять собой, например, Fc рецептор (остатки 234, 235, 236, 237, 297) или С1 компонент комплемента (остатки 297, 318, 320, 322). Патенты США № 5624821 и № 5648260, оба за авторством Winter et al.
В международной заявке WO 88/007089 предлагались модификации в Fc-участке IgG для снижения связывания с FcyRI с целью снижения ADCC (234А; 235Е; 236А; G237A)
или для блокирования связывания с Clq компонентом комплемента с целью исключения CDC (Е318А или V/K320A и K322A/Q). См. также Duncan & Winter (1988) Nature 332:563; Chappel etal. (1991) Proc. Nat'lAcad. Sci. (USA) 88:9036; и Sondermann et al. (2000) Nature 406:267 (обсуждаются эффекты этих мутаций в отношении связывания с FcyRIII).
Модификации Fc, ослабляющие эффекторную функцию, также включают в себя замены, вставки и делении в положениях 234, 235, 236, 237, 267, 269, 325 и 328, как например, 234G, 235G, 236R, 237К, 267R, 269R, 325L и 328R. Вариант Fc может содержать 236R/328R. Другие модификации для снижения взаимодействий с FcyR и комплементом включают в себя замены 297А. 234А, 235А, 237А, 318А, 228Р, 236Е, 268Q, 309L, 330S, 331 S, 220S, 226S, 229S, 238S, 233Р и 234V. Эти и другие модификации рассматриваются в Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. Эффекторные функции (как ADCC, так и активация комплемента) могут быть ослаблены при сохранении связывания неонатального FcR (сохранение периода полувыведения) посредством мутирования остатков IgG в одном или нескольких из положений 233-236 и 327-331, как например, Е233Р, L234V, L235A, необязательно G236A, A327G, A330S и P331S в IgGl; Е233Р, F234V, L235A, необязательно G236A в IgG4; и A330S и P331S в IgG2. См. Armour et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29:2613; международная заявка WO 99/58572. Другие мутации, которые ослабляют эффекторную функцию, включают в себя L234A и L235A в IgGl (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537); V234A и G237A в IgG2 (Cole et al. (1997) J. Immunol. 159:3613; см. также патент США № 5834597); и S228P и L235E для IgG4 (Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164:1925). Другая комбинация мутаций для ослабления эффекторной функции у человеческого IgGl, включают в себя L234F, L235E и P331S. Oganesyan et al. (2008) Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 64:700. См., в целом, Labrijn et gal. (2008) Curr. Op. Immunol. 20:479. Дополнительными мутациями, которые, как было выявлено, ослабляют эффекторную функцию в случае слитого белка с Fc (IgGl) (абатацепт), являются C226S, C229S и P238S (нумерация остатков как в антителе EU). Davis etal. (2007) J. Immunol. 34:2204.
Другие варианты Fc, характеризующиеся пониженной ADCC и/или CDC, раскрыты в Glaesner et al. (2010) Diabetes Metab. Res. Rev. 26:287 (F234A и L235A для снижения ADCC и ADCP в IgG4); Hutchins etal. (1995) Proc. Nat'lAcad. Sci. (USA) 92:11980 (F234A, G237A и E318A в IgG4); An et al. (2009) MAbs 1:572; и публикация заявки на патент США
2007/0148167 (H268Q, V309L, A330S и P331S в IgG2); McEarchern et al. (2007) Blood 109:1185 (C226S, C229S, E233P, L234V, L235A в IgGl); Vafa et al. (2014) Methods 65:114 (V234V, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S в IgG2).
В соответствии с определенными вариантами осуществления выбран Fc, у которого, по сути, отсутствует эффекторная функция, т.е. Он характеризуется пониженным связыванием с FcyR и пониженной фиксацией комплемента. Иллюстративный Fc, например, Fc IgGl, у которого отсутствует эффекторная функция, содержит следующие пять мутаций: L234A, L235E, G237A, A330S и P331S. Gross et al. (2001) Immunity 15:289. Иллюстративные тяжелые цепи, содержащие эти мутации, изложены в перечне последовательностей, который подробно изложен в таблице 35. Эти пять замен также можно объединить с N297A для исключения гликозилирования.
Усиление эффекторной функции
В качестве альтернативы, активность ADCC можно повысить путем модификации Fc-участка. По активности ADCC человеческий IgG 1 IgG3 " IgG4 IgG2, следовательно, константный домен IgGl, а не IgG2 или IgG4, можно выбрать для применения в лекарственном средстве в случае, когда ADCC является желательной. В качестве альтернативы, Fc-участок можно модифицировать для повышения ант ител озав ис и мой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или для повышения аффинности в отношении Fcy-рецептора путем модификации одной или нескольких аминокислот в следующих положениях: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435, 436, 437, 438 или 439. См. м ежд у и а р од н у ю заявку WO 2012/142515; см. также международную заявку WO 00/42072. Иллюстративные замены включают в себя 236А, 239D, 239Е, 268D, 267Е, 268Е, 268F, 324 Г, 332D и 332Е. Иллюстративные варианты включают в себя 239D/332E, 236Л/332Е, 236A/239D/332E, 268F/324T, 267E/268F, 267Е/324Т и 267E/268F/324T. Например, Fc человеческого IgGl, содержащие вариант с G236A, который необязательно можно объединить с I332E, как было показано, повышают аффинность связывания FcyllA/FcyllB
примерно в 15 раз. Richards et al. (2008) Mol. Cancer The rap. 7:25 17; Moore et al. (2010) mAbs 2:181. Другие модификации для усиления взаимодействий с FcyR и комплементом включают в себя замены 298А, ЗЗЗА, 334А, 326А, 2471, 339D, 339Q, 280Н, 290S, 298D, 298V, 243L, 292Р, 300L, 396L, 3051 и 396L, но не ограничиваются ими. Эти и другие модификации рассматриваются в Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. В частности, как ADCC, так и CDC могут быть повышены за счет изменений в положении ЕЗЗЗ в IgGl, например, ЕЗЗЗА. Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591. Применение мутаций P247I и A339D/Q для усиления эффекторной функции у IgGl раскрыто в международной заявке WO 2006/020114, а применение D280H, K290S ± S298D/V раскрыто в международной заявке WO 2004/074455. Варианты K326A/W и E333A/S, как было показано, усиливают эффекторную функцию у человеческого IgGl, a E333S - у IgG2. Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166:2571.
В частности, сайты связывания для FcyRI, FcyRII, FcyRIII и FcRn на человеческом IgGl были нанесены на карту, а также были описаны варианты с улучшенным связыванием. Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604. Было показано, что конкретные мутации в положениях 256, 290, 298, 333, 334 и 339 улучшают связывание с FcyRIII, в том числе у мутантов с комбинациями T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A и S298A/E333A/K334A (характеризующихся повышенным связыванием с FcyRIIIa и активностью ADCC). Были идентифицированы другие варианты IgGl с сильно повышенным связыванием с FcyRIIIa, в том числе варианты с мутациями S239D/I332E и S239D/I332E/A330L, у которых было показано наибольшее повышение аффинности в отношении FcyRIIIa, понижение связывания FcyRIIb и сильная цитотоксическая активность у особей яванского макака. Lazar et al. (2006) Proc. Nat'I Acad Sci. (USA) 103:4005; Awan et al. (2010) Blood 115:1204; Desjarlais & Lazar (2011) Exp. Cell Res. 317:1278. Введение тройных мутаций в антитела, такие как алемтузумаб (CD52-специфичное), трастузумаб (HER2/neu-cпeцифичнoe), ритуксимаб (СО20-специфичное) и цетуксимаб (EGFR-специфичное), обуславливало значительно усиленную активность ADCC in vitro, а вариант с S239D/I332E проявлял усиленную способность к сокращению количества В-клеток у обезьян. Lazar et а/.(2006) Proc. Nat'l Acad Sci. (USA) 103:4005. Кроме того, были идентифицированы мутанты IgGl, содержащие мутации L235V, F243L, R292P, Y300L и P396L, которые проявляли усиленное связывание с FcyRIIIa и
одновременно усиленную активность ADCC у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий FcyRIIIa, в моделях В-клеточных злокачественных новообразований и злокачественной опухоли молочной железы. Stavenhagen etal. (2007) Cancer Res. 67:8882; патент США № 8652466; Nordstrom et al. (2011) Breast Cancer Res. 13:R123.
У разных изотипов IgG также проявляется различающаяся активность CDC (IgG3> IgGl"IgG2~IgG4). Dangl et al. (1988) EMBO J. 7:1989. Для применений, при которых желательной является повышенная CDC, также является возможным введение мутаций, которые повышают связывание с Clq. Способность к привлечению комплемента (CDC) может быть повышена за счет мутаций в КЗ26 и/или ЕЗЗЗ в IgG2, таких как K326W (которая снижает активность ADCC) и ЕЗЗЗS, для повышения связывания с Clq, первым компонентом каскада реакций комплемента. Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166:2571. Введение S267E / H268F / S324T (по отдельности или в любой комбинации) в человеческий IgGl усиливает связывание с Clq. Moore et al. (2010) mAbs 2:181. Fc-участок антитела "113F" гибридного изотипа IgGl/IgG3 из Natsume et al. (2008) Cancer Res. 68:3863 (фигура 1 в данном источнике); также придает повышенную CDC. См. также Michaelsen et al. (2009) Scand. J. Immunol. 70:553; и Redpath et al. (1998) Immunology 93:595.
Дополнительные мутации, которые могут усиливать или ослаблять эффекторную функцию, раскрыты в Dall'Acqua et al. (2006) J. Immunol. 177:1129. См. также Carter (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:343; Presta (2008) Curr. Op. Immunol. 20:460.
Также можно применять варианты Fc, которые повышают аффинность в отношении ингибирующего рецептора FcyRI lb, например, для повышения апоптоз-индуцирующей или адъювантной активности. Li & Ravetch (201 1) Science 333:1030; Li & Ravetch (2012) Proc. Nat'I Acad. Sci (USA) 109:10966; публикация заявки на патент СШ А 2014/0010812. Такие варианты могут предполагать антитело с иммуномодулирующими активностями в отношении FcyR!lb ' клеток, в том числе, например, В-клеток и моноцитов. В соответствии с одним вариантом осуществления варианты Fc обеспечивают селективно повышенную аффинност ь к FcyRI lb в сравнении с одним или несколькими активирующими рецепторами. Модификации для изменения связывания с FcyRI lb включают в себя одну или несколько модификаций в положении, выбранном из группы, состоящей из 234, 235, 236, 237, 239, 266, 267, 268, 325, 326, 327, 328 и 332 в соответствии с нумерацией аминокислот в антителе EU. И л л юстрат и в и ые замены для усиления аффинности к FcyRI lb
включают в себя 234D, 234Е, 234F, 234W, 235D, 235F, 235R, 235Y, 236D, 236N, 237D, 237N, 239D, 239Е, 266М, 267D, 267Е, 268D, 268Е, 327D, 327Е, 328F, 328W, 328Y и 332Е, но не ограничиваются ими. Иллюстративные замены включают в себя 23 5Y, 236D, 239D, 266М, 267Е, 268D, 268Е, 328F, 328W и 328Y. Другие варианты Fc для усиления связывания с FcyRllb включают 235Y/267E, 236D/267E, 239D/268D, 239D/267E, 267E/268D, 267Е/268Е и 267E/328F. В частности, варианты человеческого IgGl с мутациями S267E, G236D, S239D, L328F и I332E, в том числе вариант с двойной мутацией S267E + L328F, являются особенно ценными при специфичном повышении аффинности в отношении ингибирующего FcyRllb рецептора. Chu et al. (2008) Mol. Immunol. 45:3926; публикация заявки на патент США 2006/024298; международная заявка WO 2012/087928. Повышенная специфичность в отношении FcyRllb (в отличие от FcyRIIaR131) может быть получена путем добавления замены P238D. Mimoto et al. (2013) Protein. Eng. Des. & Selection 26:589; международная заявка WO 2012/115241.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело модифицируют для повышения его периода полувыведения из организма. Возможны различные подходы. Например, это может быть выполнено путем повышения аффинности связывания Fc-участка в отношении FcRn. В соответствии с одним вариантом осуществления антитело изменено в пределах СН1 или CL участка таким образом, чтобы он содержал эпитоп, связывающийся с рецептором реутилизации, заимствованный из двух петель СН2 домена в Fc-участке IgG, как описано в патентах США № 5869046 и № 6121022 за авторством Presta et al. Другие иллюстративные варианты Fc, которые повышают связывание с FcRn и/или улучшают ф а р м а к о к и н ет и ч ее к и е свойства, включают в себя замены в положениях 259, 308 и 434, в том числе, например, 2591, 308F, 428L, 428М, 434S, 434Н, 434F, 434Y и 434М. Другие варианты, которые повышают связывание Fc с FcRn, включают в себя: 250Е, 250Q, 428L, 428F, 250Q/428L (Hinton et al., 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356), 256A, 272A, 305A, 307A, 31 1A, 312A, 378Q, 380A, 382A, 434A (Shields et ai, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604), 252F, 252Y, 252W, 254T, 256Q, 256E, 256D, 433R, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H (Bail Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524). См. патент США № 8367805.
Модификация определенных консервативных остатков в Fc IgG
(I253/H310/Q311/H433/N434), как например, вариант N434A (Yeung et al (2009) ./. Immunol. 182:7663), предлагалась в качестве способа повышения аффинности в отношении FcRn, тем самым повышая период пол у вы ведения антитела из кровотока. WO 98/023289. Было показано, что комбинированный вариант Fc, содержащий M428L и N434S, повышает связывание с FcRn и повышает период полувыведения из сыворотки до пятикратного значения. Zalevsky et al. (2010) Nat. Biotechnol. 28:157. Комбинированный вариант Fc, содержащий модификации Т307А, Е380А и N434A, также увеличивает период полувыведения антител IgGl. Petkova et al. (2006j Int. Immunol. 18:1759. Кроме того, было также показано, что комбинированные варианты Fc, содержащие M252Y/M428L, M428L/N434H, M428L/N434F, M428L/N434Y, M428L/N434A, M428L/N434M и M428L/N434S, увеличивают период полувыведения. WO 2009/086320.
Кроме того, ко м б и и и ро ва и н ы и вариант Fc, содержащий M252Y, S254T и Т256Е, увеличивает период полувыведения почти в 4 раза. Dall'Acqua et al. (2006) ,/. Biol. Chem. 281:23514. Родственная модификация IgGl, обеспечивающая повышенную аффинность в отношении FcRn, но уменьшенную зависимость от рН (M252Y / S254T / Т256Е / Н433К / N434F), была применена для создания конструкта IgGl ("MST-HN Abdeg") для применения в качестве конкурента для предотвращения связывания других антител с FcRn, что приводило к в результате к повышенному клиренсу указанного другого антитела, либо эндогенного IgG (например, в условиях аутоиммунного процесса), либо другого экзогенного (терапевтического) mAb. Vaccaro et al. (2005) Nat. Biotechnol. 23:1283; международная заявка WO 2006/130834.
Другие модификации для повышения связывания с FcRn описаны в Yeung et al. (2010) J. Immunol. 182:7663-7671; 6277375; 6821505; в международных заявках WO 97/34631; WO 2002/060919.
В соответствии с определенными вариантами осуществления гибридные нзотипы IgG можно применять для повышения связывания с FcRn и потенциально возможного увеличения периода полувыведения. Например, гибридный вариант IgGl/IgG3 можно сконструировать, заменяя соответствующие IgG 1 положения в СН2- и/или С ИЗ-участках аминокислотами из IgG3 в положениях, по которым два изотипа различаются. Следовательно, можно сконструировать гибридный вариант антитела IgG, который
содержит одну или несколько замен, например, 274Q, 276К, 300F, 339Т, 356Е, 358М, 384S, 392N, 397М, 4221, 435R и 436F. В соответствии с другими вариантами осуществления, описанными в данном документе, гибридный вариант IgG 1, IgG2 можно с к о н стр у и р о в ат ь, заменяя соответствующие IgG2 положения в СН2 и/ил и СНЗ участках на аминокислоты из IgG 1 в положениях, по которым два изотипа различаются. Следовательно, можно сконструировать г ибридный вариант антитела IgG, который содержит одну или несколько замен, например, одну или несколько из следующих аминокислотных замен: 233Е, 234L, 235L, -236G (относится к вставке глицина в положении 236) и 327А. См. патент США № 8629113. Были получены поеледовател ьноетт i гибрида IgGl/IgG2/IgG4, которые предположительно повышают период полувыведения из сыворотки и улучшают экспрессию. Патент США № 7867491 (последовательность номер 18 в указанном источнике).
Период полувыведения из сыворотки у антител согласно настоящему изобретению также можно увеличить посредством пегилирования. Антитело можно пегилировать, например, для повышения периода полувыведения антитела из организма (например, из сыворотки). Для пегилирования антитела, как правило, осуществляют реакцию антитела или его фрагмента с полиэтиленгликолевым (PEG) реактивом, таким как реакционноспособное сложноэфирное или альдегидное производное PEG, в условиях, при которых одна или несколько групп PEG становятся прикрепленными к антителу или фрагменту антитела. Предпочтительно пегилирование выполняют посредством реакции ацилирования или реакции алкилирования с использованием реакционноспособной молекулы PEG (или аналогичного реакционноспособного водорастворимого полимера). Предполагается, что используемый в данном документе термин "полиэтиленгликоль" охватывает любую из форм PEG, которые использовались для получения производных других белков, как например, моно(С 1 -С 10)алкокси- или арилокси-полиэтиленгликоль или полиэтиленгликоль-малеимид. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело, подлежащее пегилированию, представляет собой агликозилированное антитело. Методы пегилирования белков известны в уровне техники, и их можно применять к антителам, описанным в данном документе. См., например, европейский патент ЕР 0154316 за авторством Nishimura et al. и европейский патент ЕР 0401384 за авторством Ishikawa et al.
В качестве альтернативы, в некоторых обстоятельствах желательным может быть уменьшение периода полувыведения антитела согласно настоящему изобретению, а не его увеличение. Модификации, такие как 1253A (Hornick et al. (2000) J. Nucl. Med. 41:355) и H435A/R I253A или НЗ10A (Kim et al. (2000) Eur. J. Immunol. 29:2819), в Fc человеческого IgGl могут снижать связывание с FcRn, тем самым снижая период полувыведения (повышая клиренс) для применений в ситуациях, когда предпочтительным является быстрый клиренс, как например, при медицинской визуализации. См. также Kenanova et al. (2005) Cancer Res. 65:622. Другие средства для повышения клиренса включают в себя смену формата антигенсвязывающих доменов согласно настоящему изобретению для создания фрагментов антитела, лишенных способности к связыванию с FcRn, таких как Fab фрагменты. Такая модификация может снижать период полувыведения из кровотока у антитела с пары недель до периода порядка нескольких часов. Селективное пегилирование фрагментов антитела можно затем использовать для тонкой настройки (повышения) периода полувыведения фрагментов антитела, если необходимо. Chapman et al. (1999) Nat. Biotechnol. 17:780. Фрагменты антитела также могут быть слиты с человеческим сывороточным альбумином, например, в конструкте слитого белка, для повышения периода полувыведения. Yeh et al. (1992) Proc. Nat'I Acad. Sci. 89:1904. В качестве альтернативы, можно сконструировать биспецифичное антитело с первым антигенсвязывающим доменом согласно настоящему изобретению и вторым антигенсвязывающим доменом, который связывается с человеческим сывороточным альбумином (HSA). См. публикацию международной заявки WO 2009/127691 и ссылки на патентные документы, упоминаемые в ней. В качестве альтернативы, для повышения периода полувыведения к фрагментам антител могут быть добавлены специализированные полипетидные последовательности, например, полипетидные последовательности "XTEN". Schellenberger et al. (2009) Nat. Biotechnol. 27:1186; публикация международной заявки WO 2010/091122.
Дополнительные варианты Fc
При применении константного домена IgG4 предпочтительным обычно является включение замены S228P, которая имитирует последовательность шарнира в IgGl и тем самым стабилизирует молекулы IgG4, например, снижая обмен Fab-областями между
терапевтическим антителом и эндогенным IgG4 у пациента, получающего лечение. Labrijn etal. (2009)Nat. Biotechnol. 27:767; Reddy etal. (2000) J. Immunol. 164:1925.
Потенциальный сайт расщепления протеазой в шарнире конструктов IgGl можно устранить с помощью модификаций D221G и K222S, что повышает стабильность антитела. WO 2014/043344.
Показатели аффинности и свойства связывания у Fc-варианта в отношении его лигандов (Fc-рецепторы) можно определить с помощью ряда методов in vitro анализа (биохимические или иммунологические анализы), известных в уровне техники, в том числе без ограничения методы оценки в равновесном состоянии (например, твердофазный иммуноферментныи анализ (ELISA) или радиоиммунологический анализ (RIA)) или методы оценки кинетических характеристик (например, анализ SPR методом BIACORE(r)), а также другие методы, такие как непрямые анализы связывания, анализы конкурентного ингибирования, резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET), электрофорез в геле и хроматографию (например, гель-фильтрацию). В этих и других методах может использоваться метка на одном или нескольких из оцениваемых компонентов, и/или в них может использоваться ряд методов выявления, включающих без ограничения хромогенные, флуоресцентные, люминеецентные или изотопные метки. Подробное описание аффинностеи связывания и кинетических характеристик связывания можно найти в Paul, W. Е., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), в которой делается упор на взаимодействие антитело-иммуноген.
В соответствии с другими вариантами осуществления гликозилирование антитела модифицируют с целью усиления или ослабления эффекторной функции. Например, агликозилированное антитело, у которого отсутствуют все эффекторные функции, можно получить посредством мутирования консервативного аспарагинового остатка в положении 297 (например, N297A), тем самым нарушая связывание с комплементом и FcyRI. Bolt et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:403. См. также Tao & Morrison (1989) J. Immunol. 143:2595 (где использовали N297Q в IgGl для исключения гликозилирования в положении 297).
Хотя агликозилированные антитела обычно лишены эффекторной функции, для восстановления этой функции могут быть введены мутации. Агликозилированные антитела, например, антитела, полученные в результате мутаций N297A/C/D/njni Н или полученные в системах (например, Е. coli), которые не гликозилируют белки, можно
дополнительно мутировать для восстановления связывания с FcyR, например, S298G и/или Т299А/0/или Н (WO 2009/079242), или E382V и M428I (Jung et al. (2010) Proc. Nat'lAcad. Sci (USA) 107:604).
Кроме того, антитело с повышенной ADCC может быть получено посредством изменения гликозилирования. Например, было показано, что удаление фукозы из олигосахаридов, связанных с остатком Asn297 в тяжелой цепи, повышает ADCC, что обусловлено улучшенным связыванием с FcyRIIIa. Shields et al. (2002) JBC 277:26733; Niwa et al. (2005) J. Immunol. Methods 306: 151; Cardarelli et al. (2009) Clin. Cancer Res. 15:3376 (MDX-1401); Cardarelli et al. (2010) Cancer Immunol. Immunotherap. 59:257 (MDX-1342). Такие антитела с низким содержанием фукозы можно получать, например, в нокаутных клетках яичника китайского хомячка (СНО), лишенных фукозилтрансферазы (FUT8) (Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol. Bioeng. 87:614), или в других клетках, в которых образуются афукозилированные антитела. См., например, Zhang et al. (2011) mAbs 3:289; и Li et al. (2006) Nat. Biotechnol. 24:210 (в обеих описывается получение антител в подвергнутом воздействию методов гликоинженерии Pichia pastoris); Mossner et al. (2010) Blood 115:4393; Shields etal. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733; Shinkawa etal. (2003) J. Biol. Chem. 278:3466; европейский патент ЕР 1176195B1. ADCC также можно повысить, как описано в РСТ публикации международной заявки WO 03/035835, в которой раскрыто применение варианта клеточной линии СНО, Lecl3, с уменьшенной способностью к прикреплению фукозы к Азп(297)-связанным углеводам, что также приводит в результате к гипофукозилированию антител, экспрессирующихся в такой клетке-хозяине (см. также, Shields, R.L. etal. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740). В качестве альтернативы, аналоги фукозы можно добавлять в среду культивирования в ходе получения антитела для ингибирования включения фукозы в углевод на антителе. WO 2009/135181.
Повышение содержания структур с дополнительным остатком GlcNAc в точке ветвления в олигосахаридах, связанных с антителом, также повышает ADCC. В РСТ публикации международной заявки WO 99/54342 за авторством Umana et al. описываются клеточные линии, сконструированные для экспрессии гликопротеин-модифицирующих гликозилтрансфераз (например, бета(1,4)-Гч[-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII)), таким образом, такие антитела, экспрессирующиеся в сконструированных клеточных линиях, проявляют повышенное содержание структур с дополнительным остатком GlcNAc
в точке ветвления, что приводит в результате к повышенной активности ADCC у антител (см. также, Vmmaetal. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180).
Были разработаны дополнительные варианты гликозилирования, которые лишены остатков галактозы, сиаловой кислоты, фукозы и ксилозы (так называемые GNGN гликоформы), которые проявляют повышенную ADCC и ADCP, но у которых понижена CDC, а также другие, которые лишены сиаловой кислоты, фукозы и ксилозы (так называемые G1/G2 гликоформы), которые проявляют повышенную ADCC, ADCP и CDC. Публикация заявки на патент США № 2013/0149300. Антитела с такими профилями гликозилирования необязательно получают в генетически модифицированных растениях N. benthamiana, в которых эндогенные гены ксилозил- и фукозилтрансферазы подверглись нокауту.
Методы гликоинженерии также можно применять для модификации противовоспалительных свойств конструкта IgG посредством изменения содержания а2,6-сиалила в углеводных цепях, прикрепленных к Asn297 в Fc-участках, причем повышенная доля а2,6-сиалилированных форм приводит в результате к повышенным противовоспалительным эффектам. См. Nimmerjahn etal. (2008) Ann. Rev. Immunol. 26:513. Напротив, снижение доли антител с а2,6-сиалилированными углеводами может быть полезным в случаях, когда противовоспалительные свойства не требуются. Способы модификации степени а2,6-сиалилирования антител, например, посредством селективной очистки а2,6-сиалилированных форм или посредством модификации с помощью фермента, представлены в публикации заявки на патент США № 2008/0206246. В соответствии с другими вариантами осуществления аминокислотная последовательность Fc-участка может быть модифицирована с целью имитации эффекта а2,6-сиалилирования, например, посредством включения модификации F241A. WO 2013/095966.
VIII. Физические свойства антитела
Антитела, описанные в данном документе, могут содержать один или несколько сайтов гликозилирования в вариабельном участке либо легкой, либо тяжелой цепи. Такие сайты гликозилирования могут приводить в результате к повышенной иммуногенности антитела или к изменению рК антитела вследствие измененного связывания с антигеном (Marshall et al (1972) Аппи Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J. Immunol
172:5489-94; Wallick et al (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Gfycobiology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706). Известно, что гликозилирование происходит в мотивах, содержащих последовательность N-X-S/T. В некоторых случаях было бы предпочтительно иметь антитело к CD73, которое не содержит гликозилирование в вариабельном участке. Этого можно достичь либо посредством селекции антител, которые не содержат мотив гликозилирования в вариабельном участке, либо посредством мутирования остатков в пределах участка гликозилирования.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела, описанные в данном документе, не содержат сайты изомеризации аспарагина. Дезамидирование аспарагина может происходить в последовательностях N-G или D-G, и оно может приводить в результате к образованию остатка изоаспарагиновой кислоты, который может вносить изгиб в полипептидную цепь и может снижать ее стабильность (эффект изоаспарагиновой кислоты). Например, если аминокислотная последовательность Asp-Gly присутствует в последовательностях CDR тяжелой и/или легкой цепей антитела, последовательность заменена на аминокислотную последовательность, которая не подвергается изомеризации. В соответствии с одним вариантом осуществления антитело содержит последовательность CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи, изложенную в SEQ Ш NO: 6, но при этом Asp или Gly в последовательности Asp-Gly (VILYDGSNKYYPDSVKG; SEQ ГО NO: 6) заменен на аминокислотную последовательность, которая не подвергается изомеризации, например, последовательность Asp-Ser или Ser-Gly.
Каждое антитело будет характеризоваться уникальной изоэлектрической точкой (pi), которая обычно попадает в диапазон значений рН от 6 до 9,5. pi для антитела IgGl, как правило, попадает в пределы диапазона значений рН 7-9,5, и pi для антитела IgG4, как правило, попадает в пределы диапазона значений рН 6-8. Существует предположение, что антитела с pi за пределами нормального диапазона могут характеризоваться некоторым развертыванием и нестабильностью в условиях in vivo. Следовательно, предпочтительно иметь антитело к CD73, которое имеет значение pi, попадающее в нормальный диапазон. Этого можно достичь либо посредством селекции антител с pi в нормальном диапазоне, либо посредством мутирования заряженных поверхностных остатков.
Каждое антитело будет иметь характерную температуру плавления, причем более высокая температура плавления указывает на более высокую общую стабильность in vivo (Krishnamurthy R and Manning M С (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71). В целом, предпочтительно, чтобы TMI (температура начала развертывания) была больше чем 60°С, предпочтительно больше чем 65°С, еще более предпочтительно больше чем 70°С. Температуру плавления антитела можно измерить с использованием дифференциальной сканирующей калориметрии (Chen et al (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol Lett 68:47-52) или кругового дихроизма (Murray et al. (2002) J. Chromatogr Sci 40:343-9).
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления выбирают антитела, которые не разрушаются быстро. Разрушение антитела можно измерить с помощью капиллярного электрофореза (СЕ) и MALDI-MS (Alexander A J and Hughes D E (1995) Anal Chem 67:3626-32).
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления выбирают антитела, которые характеризуются минимальными эффектами агрегации, которые могут приводить к запуску нежелательной иммунной реакции и/или к измененным или неблагоприятным фармакокинетическим свойствам. Обычно приемлемыми являются антитела с агрегацией, составляющей 25% или менее, предпочтительно 20% или менее, еще более предпочтительно 15% или менее, еще более предпочтительно 10% или менее и еще более предпочтительно 5% или менее. Агрегацию можно измерить с помощью нескольких методик, в том числе с помощью колоночной гель-хроматографии (SEC), высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) и рассеяния света.
IX. Способы конструирования антител
Как обсуждалось выше, антитела к CD73, имеющие последовательности VH И VL, раскрытые в данном документе, можно применять для создания новых антител к CD73 путем модификации последовательностей VH и/или VL или константного участка(участков), прикрепленного(прикрепленных) к ним. Таким образом, в соответствии с другим аспектом, описанным в данном документе, структурные признаки антитела к CD73, описанного в данном документе, например, CD73.4, 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11 и/или 7А11, применяют для создания структурно родственных антител к
CD73, которые сохраняют по меньшей мере одно функциональное свойство антител, описанных в данном документе, такое как связывание с человеческим CD73 и CD73 яванского макака. Например, один или несколько CDR участков в 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11 и/или 7А11 или их мутантных вариантов можно объединить с известными каркасными участками и/или другими CDR с использованием методов на основе рекомбинации для создания дополнительных сконструированных с помощью методов на основе рекомбинации антител к CD73, описанный в данном документе, как обсуждалось выше. Другие типы модификаций включают в себя описанные в предыдущем разделе. Исходным материалом для способа конструирования являются одна или несколько из последовательностей VH И/ИЛИ VL, представленных в данном документе, или один или несколько их CDR участков. Для создания сконструированного антитела не нужно фактически получать (т.е. экспрессировать в виде белка) антитело, имеющее одну или несколько из последовательностей VH И/ИЛИ VL, представленных в данном документе, или один или несколько их CDR участков. Предпочтительнее, информацию, содержащуюся в последовательности(последовательностях) используют в качестве исходного материала для создания последовательности(последовательностей) "второго поколения", происходящих из исходной последовательности(последовательностей), а затем последовательность(последовательности) "второго поколения" получают и экспрессируют в виде белка.
Соответственно, в данном документе предполагаются способы получения антитела к CD73, предусматривающие:
(а) обеспечение: (i) последовательности вариабельного участка тяжелой цепи антитела, содержащей последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81 и 89, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82 и 90, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83 и 91; и (ii) последовательности вариабельного участка легкой цепи антитела, содержащей последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85 и 93, последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ГО N0: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86 и 94, и/или
последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87 и 95;
(b) изменение по меньшей мере одного аминокислотного остатка в пределах последовательности вариабельного участка тяжелой цепи антитела и/или последовательности вариабельного участка легкой цепи антитела с созданием по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и
(c) экспрессию измененной последовательности антитела в виде белка.
Для получения и экспрессии измененной последовательности антитела можно применять стандартные методики молекулярной биологии.
Предпочтительно, антитело, кодируемое измененной
последовательностью(последовательностями) антитела, представляет собой антитело, которое сохраняет одно, некоторые или все из функциональных свойств антител к CD73, описанных в данном документе, которые включают в себя свойства, приведенные в таблице 3.
Измененное антитело может проявлять одно или более, два или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, десять или все из функциональных свойств при использовании функциональных анализов, описанных в данном документе. Функциональные свойства измененных антител можно оценить с помощью стандартных анализов, доступных в уровне техники и/или описанных в данном документе, как например, анализов, изложенных в разделе Примеры (например, ELISA, FACS).
В соответствии с определенными вариантами осуществления способов конструирования антител, описанных в данном документе, мутации можно вводить произвольно или селективно по всей кодирующей последовательности антитела к CD73 или ее части и полученные в результате модифицированные антитела к CD73 можно подвергнуть скринингу в отношении активности связывания и/или других функциональных свойств, которые описаны в данном документе. Способы введения мутаций были описаны в уровне техники. Например, в РСТ публикации международной заявки WO 02/092780 за авторством Short описываются способы создания и скрининга мутаций в антителе с использованием насыщающего мутагенеза, сборки с лигированием синтетических фрагментов или их комбинации. В качестве альтернативы, в РСТ
публикации международной заявки WO 03/074679 за авторством Lazar et al. описываются способы с использованием компьютерных методов скрининга для оптимизации физико-химических свойств антител.
X. Молекулы нуклеиновой кислоты
Другой аспект, описанный в данном документе, относится к молекула нуклеиновой кислоты, которые кодируют антитела, описанные в данном документе. Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточном лизате или в частично очищенном или практически чистом виде. Нуклеиновая кислота является "выделенной" или "сделанной практически чистой", если она очищена от других клеточных компонентов или других загрязняющих примесей, например, других клеточных нуклеиновых кислот (например, другой хромосомной ДНК, например, хромосомной ДНК, которая связана с выделенной ДНК в природе) или белков, с помощью стандартных методик, в том числе щелочной обработки/обработки SDS, центрифугирования в градиенте плотности CsCl, воздействия рестрикционных ферментов, колоночной хроматографии, электрофореза в агарозном геле и других методик, широко известных в уровне техники. См., F. Ausubel, et al, ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York. Нуклеиновая кислота, описанная в данном документе, может представлять собой, например, ДНК или РНК и может содержать или не содержать интронные последовательности. В соответствии с определенными вариантами осуществления нуклеиновая кислота представляет собой молекулу к ДНК.
Нуклеиновые кислоты, описанные в данном документе, можно получить с использованием стандартных методик молекулярной биологии. В случае антител, экспрессируемых гибридомами (например, гибридомами, полученными из трансгенных мышей, несущих гены человеческого иммуноглобулина, как дополнительно описано ниже), кДНК, кодирующие легкие и тяжелые цепи антитела, производимого гибридомой, можно получить можно получить с помощью стандартных методик ПНР-амплификации или клонирования кДНК. В случае антител, получаемых из библиотеки генов иммуноглобулинов (например, с использованием методик фагового дисплея), нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, можно выделить из библиотеки.
Предпочтительными молекулами нуклеиновых кислот, описанными в данном документе, являются молекулы, кодирующие последовательности VH и VL у антител к CD73, описанных в данном документе, например, моноклональных антител CD73.4 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11, 7А11, CD73.3 и/или CD73.4. Последовательности ДНК, кодирующие последовательности VH CD73.4 (CD73.4-1 и CD73.4-2) 11F11 (11F11-1 и 11F11-2), 4СЗ (4СЗ-1, 4СЗ-2 и 4СЗ-3), 4D4, 10D2 (10D2-1 и 10D2-2), 11А6, 24Н2, 5F8 (5F8-1 и 5F8-2), 6Е11, 7А11, CD73.3 и CD73.4, изложены в SEQ ГО N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135 и 170, соответственно. Последовательности ДНК, кодирующие последовательности VL 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 7А11, CD73.3 и/или CD73.4, изложены в SEQ ГО NO: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84 и 92, соответственно.
После получения фрагментов ДНК, кодирующих VH и VL сегменты, эти фрагменты ДНК можно подвергнуть дополнительной манипуляции с помощью стандартных методик рекомбинантной ДНК, например, для превращения генов вариабельного участка в гены полноразмерной цепи антитела, в гены Fab-фрагмента или в ген scFv. При этих манипуляциях фрагмент ДНК, кодирующий VL или VH, является функционально связанным с другим фрагментом ДНК, кодирующим другой белок, такой как константный участок антитела или гибкий линкер. Предполагается, что термин "функционально связанный" при использовании в данном контексте означает, что два фрагмента ДНК соединены таким образом, что аминокислотные последовательности, кодируемые двумя фрагментами ДНК, остаются в одной рамке считывания.
Выделенную ДНК, кодирующую VH участок, можно превратить в ген полноразмерной тяжелой цепи, обеспечив функциональную связь ДНК, кодирующей VH, с другой молекулой ДНК, кодирующей константные участки тяжелой цепи (шарнир, СН1, СН2 и/или СНЗ). Последовательности генов константного участка тяжелой цепи человека известны в уровне техники (см., например, Kabat, Е. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NTH Publication No. 91-3242), и фрагменты ДНК, охватывающие эти участки, можно получить с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константный участок тяжелой цепи может представлять собой константный участок IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или IgD,
например, участок IgGl. В случае гена Fab-фрагмента тяжелой цепи ДНК, кодирующая VH, может быть функционально связана с другой молекулой ДНК, кодирующей только СН1 в константном участке тяжелой цепи.
Выделенную ДНК, кодирующую VL участок, можно превратить в ген полноразмерной легкой цепи (также как и ген легкой цепи Fab), обеспечив функциональную связь ДНК, кодирующей VL, с другой молекулой ДНК, кодирующей константный участок легкой цепи, CL. Последовательности генов константного участка легкой цепи человека известны в уровне техники (см., например, Kabat, Е. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242), и фрагменты ДНК, охватывающие эти участки, можно получить с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константный участок легкой цепи может представлять собой константный участок каппа- или лямбда-цепи.
Для создания гена scFv обеспечивают функциональную связь фрагментов ДНК, кодирующих VH и VL, с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например, кодирующим аминокислотную последовательность (Gly4 -Serb, в результате чего последовательности VH и VL могут экспрессироваться в виде непрерывного одноцепочечного белка с VL и VH участками, соединенными гибким линкером (см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty etal, (1990)Nature 348:552-554).
Также в данном документе представлены молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие последовательности VH и VL или полноразмерные тяжелые и легкие цепи, которые являются гомологичными таким последовательностям у антител, описанных в данном документе, например, моноклональных антител 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 7А11, CD73.3 и/или CD73.4. Иллюстративные молекулы нуклеиновой кислоты кодируют последовательности VH и VL, которые по меньшей мере на 70% идентичны, например, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичны молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим последовательности VH и VL или полноразмерные тяжелые и легкие цепи моноклональных антител 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2,
11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 7А11, CD73.3 и/или CD73.4, например, последовательностям, изложенным в таблице 35. Например, в данном документе представлены антитела к CD73, содержащие VH цепь и VL цепь, которые кодируются нуклеотидными последовательностями, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичными SEQ ГО N0: 139 и SEQ ГО NO: 140 или 141; SEQ ГО NO: 237 и SEQ ГО NO: 140 или 141; SEQ ГО NO: 142 и SEQ ГО NO: 143, 144 или 145; SEQ ГО NO: 146 и SEQ ГО NO: 147; SEQ ГО NO: 148 и SEQ ГО N0:149 или 150; SEQ ГО NO: 151 и SEQ ГО NO: 152; SEQ ГО NO: 153 и SEQ ГО NO: 154; SEQ ГО NO: 155 и SEQ ГО NO: 156, или 157, или 242; SEQ ГО NO: 158 и SEQ ГО NO: 159; SEQ ГО NO: 160 и SEQ ГО NO: 161. Также предполагаются антитела к CD73, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, которые кодируются нуклеотидными последовательностями, по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичными SEQ ГО NO: 134, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 243, 266 (тяжелая цепь) и SEQ ID NO: 244 или 245 (легкая цепь); SEQ ГО NO: 211, 212, 213 или 246 и SEQ ГО NO: 247, 248 или 249; SEQ ГО NO: 235, 236 или 250 и 251; SEQ ГО NO: 252 и SEQ ГО NO: 253 или 254; SEQ ГО NO: 255 и SEQ ГО NO: 256; SEQ ГО NO: 257 и SEQ ГО NO: 258; SEQ ГО NO: 259 и SEQ ГО NO: 260 или 261; SEQ ГО NO: 262 и SEQ ГО NO: 263; SEQ ID NO: 264 и SEQ ID NO: 265. В данном документе также предполагаются молекулы нуклеиновой кислоты с молчащими мутациями (т.е. изменениями оснований, которые не изменяют образующуюся в результате аминокислотную последовательность после трансляции молекулы нуклеиновой кислоты), например, для оптимизации кодонов.
XI. Получение антитела
Различные антитела согласно настоящему изобретению, например, антитела, которые конкурируют с антителами к человеческому CD73 или связываются с тем же эпитопом, что и антитела к человеческому CD73, раскрытые в данном документе, могут быть получены с применением ряда известных методик, таких как стандартная методика гибридизации соматических клеток, описанная Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975). Несмотря на что что предпочтительными являются процедуры гибридизации соматических клеток, в принципе, для получения моноклональных антител также можно использовать другие методики, например, вирусную или онкогенную трансформацию В
лимфоцитов, методики фагового дисплея с использованием библиотек генов человеческих антител.
Предпочтительной животной системой для получения гибридом является мышиная система. Получение гибридом у мыши является хорошо отлаженной процедурой. Протоколы иммунизации и методики выделения иммунизированных спленоцитов для слияния известны в уровне техники. Также известны клетки-партнеры для слияния (например, клетки миеломы мыши) и процедуры слияния.
Химерные или гуманизированные антитела, описанные в данном документе, можно получить на основе последовательности мышиного моноклонального антитела, полученного, как описано выше. ДНК, кодирующие иммуноглобулины с тяжелой и легкой цепями можно получить из представляющей интерес мышиной гибридомы, и их можно сконструировать таким образом, чтобы они содержали последовательности иммуноглобулина, не являющиеся мышиными (например, человеческие), с использованием стандартных методик молекулярной биологии. Например, для создания химерного антитела мышиные вариабельные участки можно связать с человеческими константными участками с помощью методов, известных в уровне техники (см., например, патент США № 4816567 за авторством Cabilly et al). Для создания гуманизированного антитела мышиные CDR участки можно вставить в человеческий каркас с использованием методов, известных в уровне техники (см., например, патент США № 5225539 за авторством Winter, и патенты США №№ 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 за авторством Queen et al).
В соответствии с одним вариантом осуществления антитела, описанные в данном документе, представляют собой человеческие моноклональные антитела. Такие человеческие моноклональные антитела, направленные против CD73, можно получать с использованием трансгенных или трансхромосомных мышей, несущих части человеческой иммунной системы вместо мышиной системы. Эти трансгенные и трансхромосомные мыши включают мышей, называемых в данном документе HuMAb-мышами и КМ-мышами, соответственно, и которые собирательно называются в данном документе "мыши с человеческим Ig".
Мышь HuMAb(r) (Medarex, Inc.) содержит минилокусы с генами человеческого иммуноглобулина, которые кодируют не подвергшиеся перегруппировке
последовательности тяжелой (ц и у) и к-легкой цепей человеческого иммуноглобулина, вместе с целенаправленными мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы ц- и к-цепей (см., например, Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859). Соответственно, мыши проявляют пониженную экспрессию мышиного IgM или к, и в ответ на иммунизацию введенные трансгены человеческих тяжелой и легкой цепей подвергаются переключению класса и соматической мутации с образованием высокоаффинных моноклональных человеческих IgGK (Lonberg, N. et al. (1994), выше; обсуждается в Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, и в Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. NY. Acad. Sci. 764:536-546). Получение и применение HuMab-мышей и геномных модификаций, которые несут такие мыши, дополнительно описано в Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al. (1993) International Immunology 5: 647656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; и Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851, причем содержание каждого из данных источников специально включено в данный документ посредством ссылки во всей полноте. См., кроме того, патенты США №№ 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429, все за авторством Lonberg и Кау; патент США № 5545807 за авторством Surani et al; РСТ публикации международных заявок №№ WO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97/13852, WO 98/24884 и WO 99/45962, все за авторством Lonberg и Кау; и РСТ публикацию международной заявки № WO 01/14424 за авторством Korman et al.
В соответствии с определенными вариантами осуществления выработку антител, описанных в данном документе, индуцируют с использованием мыши, которая несет последовательности человеческого иммуноглобулина в трансгенах и трансхромосомах, такой как мышь, которая несет трансген человеческой тяжелой цепи и трансхромосому человеческой легкой цепи. Такие мыши, называемые в данном документе "КМ-мышами", подробно описаны в РСТ публикации международной заявки WO 02/43478 за авторством Ishida et al.
Кроме того, в уровне техники доступны альтернативные системы на основе трансгенных животных, экспрессирующих гены человеческих иммуноглобулинов, и их можно использовать для индукции выработки антител к CD73, описанных в данном документе. Например, можно использовать альтернативную трансгенную систему, называемую Xenomouse (Abgenix, Inc.); такие мыши описаны, например, в патентах США №№ 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963 за авторством Kucherlapati etal.
Более того, в уровне техники доступны альтернативные системы на основе трансхромосомных животных, экспрессирующих гены человеческих иммуноглобулинов, и их можно использовать для индукции выработки антител к CD73, описанных в данном документе. Например, можно использовать мышей, несущих как трансхромосому с человеческой тяжелой цепью, так и трансхромосому с человеческой легкой цепью, называемых "ТС-мышами"; такие мыши описаны в Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727. Более того, в уровне техники были описаны коровы, несущие трансхромосомы с человеческими тяжелой и легкой цепями (Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20:889-894), и их можно использовать для индукции выработки антител к CD73, описанных в данном документе.
Дополнительные описанные в уровне техники мышиные системы для индукции выработки человеческих антител, например, человеческих антител к CD73, включают в себя (i) мышь Veloclmmune(r) (Regeneron Pharmaceuticals, Inc.), у которой эндогенные мышиные вариабельные участки тяжелой и легкой цепей были заменены посредством гомологичной рекомбинации на человеческие вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, функционально связанные с эндогенными мышиными константными участками, в результате чего у мышей индуцируется выработка химерных антител (человеческий V/мышиный С), а затем их превращают в полностью человеческие антитела с помощью стандартных методик с использованием рекомбинантной ДНК; и (ii) мышь МеМо(r) (Merus Biopharmaceuticals, Inc.), где мышь содержит не подвергшиеся перегруппировке вариабельные участки тяжелой цепи человека, но также подвергшийся перегруппировке обычный человеческий вариабельный участок легкой цепи. Такие мыши и их применение для индукции выработки антител описаны, например, в патентных заявках WO 2009/15777, US 2010/0069614, WO 2011/072204, WO 2011/097603, WO 2011/163311, WO 2011/163314, WO 2012/148873, US 2012/0070861 и US 2012/0073004.
Человеческие моноклональные антитела, описанные в данном документе, также можно получить с использованием методов фагового дисплея для скрининга библиотек генов человеческих иммуноглобулинов. Такие методы фагового дисплея для выделения человеческих антител являются общепринятыми в данной области техники. См., например: патенты США №№ 5223409; 5403484 и 5571698 за авторством Ladner et al; патенты США № 5427908 и № 5580717 за авторством Dower et al; патенты США № 5969108 и № 6172197 за авторством McCafferty et al. и патенты США №№ 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081 за авторством Griffiths etal.
Человеческие моноклональные антитела, описанные в данном документе, также можно получить с использованием SCID-мышей, в которых были воссозданы человеческие иммунные клетки, в результате чего в ответ на иммунизацию могут продуцироваться человеческие антитела. Такие мыши описаны, например, в патентах США № 5476996 и № 5698767 за авторством Wilson et al.
Процедуры иммунизации
Для получения полностью человеческих антител к CD73 трансгенных или трансхромосомных мышей, содержащих гены человеческих иммуноглобулинов (например, НСо12, НСо7 или КМ-мышей), можно иммунизировать очищенным или обогащенным препаратом антигена CD73 и/или клетками, экспрессирующими CD73, как описано для других антигенов, например, в Lonberg etal. (1994)Nature 368(6474): 856-859; Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851; и в международной заявке WO 98/24884. В качестве альтернативы, мышей можно иммунизировать ДНК, кодирующей человеческий CD73. Предпочтительно, при первой инфузии мыши будут иметь возраст 616 недель. Например, очищенный или обогащенный препарат (5-50 мкг) рекомбинантного антигена CD73 можно использовать для внутрибрюшинной иммунизации HuMAb-мышей. В том случае, если иммунизации с использованием очищенного или обогащенного препарата антигена CD73 не приводят в результате к образованию антител, мышей также можно иммунизировать клетками, экспрессирующими CD73, например, из клеточной линии, для стимуляции иммунных реакций. Иллюстративные клеточные линии включают в себя сверхэкспрессирующие CD73 стабильные клеточные линии СНО и Raji.
Накопленный опыт с использованием различных антигенов показал, что трансгенные мыши HuMAb реагируют наилучшим образом, когда первоначально их иммунизируют внутрибрюшинно (IP) или подкожно (SC) антигеном с адъювантом Райби с последующими IP/SC иммунизациями раз в две недели (в общей сложности до 10) антигеном в адъюванте Райби. Иммунные реакции можно отслеживать в ходе выполнения протокола иммунизации с использованием образцов плазмы, полученных из крови, забранной из ретроорбитального синуса. Плазму можно подвергать скринингу с помощью методов ELISA и FACS (как описано ниже), и мышей с достаточными титрами иммуноглобулина человеческого антитела к CD73 можно использовать для слияний. Мышей можно подвергнуть бустер-иммунизации антигеном внутривенно за 3 суток до умерщвления и удаления селезенки и лимфатических узлов. Ожидается, что может быть необходимо осуществление 2-3 слияний для каждой иммунизации. Каждым антигеном иммунизируют, как правило, от 6 до 24 мышей. Обычно используют линии НСо7, НСо12 и КМ. Кроме того, оба трансгена НСо7 и НСо12 можно ввести посредством скрещивания в одну мышь, имеющую два разных трансгена человеческой тяжелой цепи (НСо7/НСо12).
Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к CD73 Для получения гибридом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела, описанные в данном документе, спленоциты и/или клетки лимфатических узлов из иммунизированных мышей можно выделить и подвергнуть слиянию с соответствующей линией иммортализированных клеток, такой как линия клеток миеломы мыши. Полученные в результате гибридомы можно подвергнуть скринингу в отношении продуцирования антигенспецифичных антител. Например, суспензии отдельных клеток лимфоцитов селезенки из иммунизированных мышей можно подвергнуть слиянию с Sp2/0 клетками несекретирующей миеломы мыши (АТСС, CRL 1581) с использованием 50% PEG. Клетки высаживали в количестве примерно 2 х 105 в плоскодонный микротитровальный планшет с последующим двухнедельным инкубированием в селективной среде, содержащей 10% фетальной сыворотки (fetal Clone Serum), 18% кондиционированной среды "653", 5% реактива origen (IGEN), 4 мМ L-глутамин, 1 мМ пируват натрия, 5 мМ HEPES, 0,055 мМ 2-меркаптоэтанола, 50 единиц/мл пенициллина, 50 мг/мл стрептомицина, 50 мг/мл гентамицина и IX HAT (Sigma). Примерно через две
недели клетки можно культивировать в среде, в которой HAT заменен на НТ. Затем отдельные лунки можно подвергнуть скринингу в отношении человеческих моноклональных антител IgM и IgG с помощью метода ELISA. Если имеет место существенный рост гибридомы, среду можно подвергнуть наблюдению через 10-14 суток. Гибридомы, секретирующие антитело, можно пересадить, вновь подвергнуть скринингу, и если они все еще являются положительными в отношении человеческого IgG, моноклональные антитела можно субклонировать по меньшей мере дважды при использовании метода серийных разведений. Стабильные субклоны можно затем культивировать in vitro с получением небольших количеств антитела для характеристики в среде для тканевой культуры.
Чтобы очистить человеческие моноклональные антитела, отобранные гибридомы можно выращивать в двухлитровых вращающихся колбах для очистки моноклональных антител. Супернатанты можно профильтровать и концентрировать перед проведением аффинной хроматографии с использованием иммобилизированного на сефарозе белка А (Pharmacia, Пискатауэй, Нью-Джерси). Элюированный IgG можно подвергнуть проверке с помощью электрофореза в геле и высокоэффективной жидкостной хроматографии, чтобы гарантировать чистоту. Буферный раствор можно заменить на PBS, и концентрацию можно определить по OD280 (оптической плотности при длине волны 280 нм) с использованием коэффициента экстинкции 1,43. Моноклональные антитела можно разделить на аликвоты и хранить при -80°С.
XII. Получение антитела
Получение трансфертом, продуцирующих моноклональные антитела к CD73 Антитела согласно настоящему изобретению, в том числе как специфичные антитела, последовательности для которых последовательности представлены, так и другие родственные антитела к CD73, могут вырабатываться в трансфектоме на основе клетки-хозяина, например, с помощью комбинации методик с использованием рекомбинантной ДНК и методов трансфекции генов, которые широко известны в уровне техники (Morrison, S. (1985) Science 229:1202).
Например, для экспрессии антител или фрагментов данных антител ДНК, кодирующие часть легкой и тяжелой цепей или полноразмерные легкую и тяжелую цепи,
можно получить с помощью стандартных методик молекулярной биологии (например, 1ТЦР-амплификации или клонирования кДНК с использованием гибридомы, которая экспрессирует антитело, представляющее интерес) и ДНК можно встроить в векторы экспрессии таким образом, чтобы гены были функционально связаны с последовательностями контроля транскрипции и трансляции. В данном контексте термин "функционально связанный", как предполагается, означает, что ген антитела лигирован в вектор таким образом, что последовательности контроля транскрипции и трансляции в векторе выполняют свою целевую функцию, заключающуюся в регуляции транскрипции и трансляции гена антитела. Вектор экспрессии и последовательности контроля экспрессии выбирают таким образом, чтобы они были совместимы с используемой для экспрессии клеткой-хозяином. Ген легкой цепи антитело и ген тяжелой цепи антитела могут быть встроены в отдельные векторы или оба гена встроены в один и тот же вектор экспрессии. Гены антитела встраивают в вектор(векторы) экспрессии с помощью стандартных методов (например, лигирования комплементарных сайтов рестрикции в фрагмент гена антитела и вектор или лигирования тупых концов, если сайты рестрикции отсутствуют). Вариабельные участки легкой и тяжелой цепи в антителах, описанных в данном документе, можно применять для создания генов полноразмерного антитела для антител любого изотипа посредством встраивания этих вариабельных участков в векторы экспрессии, уже кодирующие константные участки тяжелой цепи и константные участки легкой цепи желаемого изотипа, в результате чего VH сегмент является функционально связанным с Сн сегментом(сегментами) в векторе, a VL сегмент является функционально связанным с CL сегментом в векторе. В качестве дополнения или альтернативы, рекомбинантный вектор экспрессии может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела из клетки-хозяина. Ген цепи антитела можно клонировать в вектор таким образом, чтобы сигнальный пептид был связан в одной рамке считывания с амино-концом в гене цепи антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (т.е. сигнальный пептид из белка, не являющегося иммуноглобулином).
Помимо генов цепей антитела, рекомбинантные векторы экспрессии могут нести регуляторные последовательности, которые контролируют экспрессию генов цепей антитела в клетке-хозяине. Предполагается, что термин "регуляторная
последовательность" включает в себя промоторы, энхансеры и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепей антитела. Такие регуляторные последовательности описаны, например, в Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)). Специалисту в данной области техники будет понятно, что построение вектора экспрессии, в том числе выбор регуляторных последовательностей, может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина, подлежащей трансформации, уровень экспрессии желаемого белка и т.д. Предпочтительные регуляторные последовательности для экспрессии в клетке-хозяине из млекопитающего животного включают в себя вирусные элементы, которые приводят к высоким уровням экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, происходящие из цитомегаловируса (CMV), вируса обезьян 40 (SV40), аденовируса (например, большой поздний промотор аденовируса (AdMLP)) и вируса полиомы. В качестве альтернативы, можно использовать невирусные регуляторные последовательности, такие как убиквитиновый промотор или [3-глобиновый промотор. Кроме того, регуляторные элементы, состоящие из последовательностей из разных источников, такие как промоторная система SRa, которая содержит последовательности из раннего промотора SV40 и длинный концевой повтор из вируса Т-клеточного лейкоза человека типа 1 (Takebe, Y. etal. (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472).
Помимо генов цепей антитела и регуляторных последовательностей, рекомбинантные векторы экспрессии могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, точки начала репликации) и гены селектируемых маркеров. Ген селектируемого маркера облегчает селекцию клеток-хозяев, в которые был введен вектор (см., например, патенты США №№ 4399216, 4634665 и 5179017, все за авторством Axel et al). Например, как правило, ген селектируемого маркера придает клетке-хозяину, в которую был введен вектор, устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Предпочтительные гены селектируемых маркеров включают в себя ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для использования в dhfr- клетках-хозяевах с селекцией/увеличением численности с использованием метотрексата) и ген пео (для селекции с использованием G418).
Для экспрессии легких и тяжелых цепей вектор(векторы) экспрессии, кодирующие тяжелую и легкую цепи, трансфицируют в клетку-хозяина с помощью стандартных методик. Различные формы термина "трансфекция", как предполагается, охватывают широкий спектр методик, обычно используемых для введения экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяин, например, электропорацию, осаждение с фосфатом кальция, трансфекцию с использованием DEAE-декстрана (диэтиламиноэтилдекстран) и т.п. Несмотря на то что теоретически возможно экспрессировать антитела, описанные в данном документе в любой из прокариотических или эукариотических клеток-хозяев, экспрессия антител в эукариотических клетках и, наиболее предпочтительно, в клетках-хозяевах из млекопитающего животного является наиболее предпочтительной, поскольку сборка и секреция свернутого надлежащим образом и иммунологически активного антитела в таких эукариотических клетках и, в частности, в клетках млекопитающего более вероятна, чем в прокариотических клетках. Прокариотическая экспрессия генов антитела, как сообщалось, является неэффективной для получения высоких выходов активного антитела (Boss, М. A. And Wood, С. R. (1985) Immunology Today 6:12-13). Антитела согласно настоящему изобретению также могут вырабатываться в подвергнутых воздействию методов гликоинженерии штаммах дрожжей Pichiapastoris. Li etal. (2006)Nat. Biotechnol. 24:210.
Предпочтительные клетки-хозяева из млекопитающего животного для экспрессии рекомбинантных антител, описанных в данном документе, включают клетки яичника китайского хомячка (СНО клетки) (в том числе dhfir- СНО клетки, описанные в Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, используемые с селектируемым маркером DHFR, например, как описано в R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 759:601-621), миеломные NSO клетки, COS клетки и SP2 клетки. В частности, для применения с миеломными NSO клетками другой предпочтительной системой экспрессии является GS система экспрессии генов, раскрытая в патентных документах WO 87/04462, WO 89/01036 и ЕР 338841. Если рекомбинантные векторы экспрессии, кодирующие гены антитела вводят в клетки-хозяева из млекопитающего животного, антитела продуцируются при культивировании клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для обеспечения возможности экспрессии антитела клетках-хозяевах или, более предпочтительно, для секреции антитела в среду культивирования, в которой
выращиваются клетки-хозяева. Антитела можно выделять из среды культивирования с использованием стандартных методов очистки белков.
N- и С-концы полипептидных цепей антитела согласно настоящему изобретению могут отличаться от ожидаемой последовательности вследствие обычно наблюдаемых посттрансляционных модификаций. Например, С-концевые лизиновые остатки часто удаляются из тяжелых цепей антитела. Dick et al. (2008) Biotechnol. Bioeng. 100:1132. N-концевые глутаминовые остатки и в меньшей степени глутаматные остатки часто превращаются в пироглутаматные остатки как в легкой, так и тяжелой цепях терапевтических антител. Dick etal. (2007) Biotechnol. Bioeng. 97:544; Liu etal. (2011) JSC 28611211; Liu etal. (2011) J. Biol. Chem. 286:11211.
XIII. Анализы
Антитела, описанные в данном документе, можно исследовать в отношении связывания с CD73, например, с помощью стандартного метода ELISA. Вкратце, микротитровальные планшеты покрывают очищенным CD73 в концентрации 1-2 мкг/мл в PBS, а затем блокируют 5% бычьим сывороточным альбумином в PBS. Разведенные пробы антитела (например, разведенные пробы плазмы из иммунизированных CD73 мышей) добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 1-2 часов при 37°С. Планшеты промывают PBS/Tween, а затем инкубируют со вторичным реактивом (например, в случае человеческих антител, с Fc-специфичным поликлональным реактивом на основе козьего антитела к человеческому IgG), конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 часа при 37°С. После промывания планшеты проявляют с использованием субстрата ABTS (Moss Inc, продукт: ABTS-1000) и анализируют с помощью спектрофотометра при OD 415-495. Образцы сыворотки из иммунизированных мышей затем подвергают дополнительному скринингу с помощью проточной цитометрии в отношении связывания с клеточной линией, экспрессирующей человеческий CD73, а не с контрольной клеточной линией, которая не экспрессирует CD73. Вкратце, связывание антител к CD73 оценивают путем инкубирования экспрессирующих CD73 СНО клеток с антителом к CD73 при разведении 1:20. Клетки промывают и связывание выявляют с использованием меченого РЕ АЬ к человеческому IgG. Проточно-цитометрические анализы осуществляют с использованием проточного цитометра FACScan (Becton
Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния). Предпочтительно, мышей, у которых проявляются наиболее высокие титры, будут использовать для слияний.
Анализ ELISA, который описан выше, можно использовать для скрининга в отношении антител и, следовательно, гибридом, которые продуцируют антитела, проявляющие положительную реактивность с иммуногеном CD73. Гимбридомы, продуцирующие антитела, которые связываются, предпочтительно с высокой аффинностью, с CD73, можно затем субклонировать и дополнительно охарактеризовать. Затем можно выбрать один клон от каждой гибридомы, который сохраняет реактивность родительских клеток (с помощью ELISA), для создания банка клеток и для очистки антитела.
Для очистки антител к CD73 отобранные гибридомы можно выращивать в двухлитровых вращающихся колбах для очистки моноклональных антител. Супернатанты можно профильтровать и концентрировать перед проведением аффинной хроматографии с использованием иммобилизированного на сефарозе белка A (Pharmacia, Пискатауэй, Нью-Джерси). Элюированный IgG можно подвергнуть проверке с помощью электрофореза в геле и высокоэффективной жидкостной хроматографии, чтобы гарантировать чистоту. Буферный раствор можно заменить на PBS, и концентрацию можно определить по OD280 с использованием коэффициента экстинкции 1,43. Моноклональные антитела можно разделить на аликвоты и хранить при -80°С.
Для того чтобы определить, связываются ли отобранные моноклональные антитела к CD73 с уникальными эпитопами, каждое антитело можно биотинилировать с использованием коммерчески доступных реактивов (Pierce, Рокфорд, Иллинойс). Связывание биотинилированных mAb можно выявить с использованием меченого стрептавидином зонда. Исследования конкуренции с использованием немеченых моноклональных антител и биотинилированных моноклональных антител можно осуществлять с использованием покрытых CD73 планшетов для ELISA, как описано выше.
Для определения изотипа очищенных антител можно провести ELISA анализы на изотип с использованием реактивов, специфичных в отношении антител конкретного изотипа. Например, для определения изотипа человеческого моноклонального антитела лунки микротитровальных планшетов можно покрыть антителом к человеческому иммуноглобулину в концентрации 1 мкг/мл в течение ночи при 4°С. После блокирования
1% BSA в планшетах осуществляют реакцию с исследуемыми моноклональными антителами или очищенными изотопическими контролями в концентрации 1 мкг/мл или менее при температуре окружающей среды в течение одного-двух часов. В лунках затем можно осуществлять реакцию со специфичными либо к человеческому IgGl, либо к человеческому IgM зондами, конъюгированными со щелочной фосфатазой. Планшеты проявляют и анализируют, как описано выше.
Для исследования связывания моноклональных антител с живыми клетками, экспрессирующими CD73, можно использовать проточную цитометрию, как описано в разделе Примеры. Вкратце, клеточные линии, экспрессирующие мембраносвязанный CD73 (выращиваемые при стандартных условиях роста), смешивают с различными концентрациями моноклональных антител в PBS, содержащем 0,1% BSA, при 4°С в течение 1 часа. После промывания осуществляют реакцию клеток с меченым флуоресцеином антителом к IgG в тех же условиях, что и окрашивание первичным антителом. Образцы можно анализировать с помощью инструмента F AC Scan с использованием свойств переднего и бокового светорассеяния для установки гейта на отдельные клетки, и определяют связывание меченых антител. Можно использовать альтернативный анализ с помощью флуоресцентной микроскопии (в дополнение к проточно-цитометрическому анализу или вместо него). Клетки можно окрашивать точно так же, как описано выше, и оценивать с помощью флуоресцентной микроскопии. Этот метод обеспечивает возможность визуализации отдельных клеток, но может иметь уменьшенную чувствительность в зависимости от плотности антигена.
Антитела к CD73 можно дополнительно исследовать в отношении способности реагировать с антигеном CD73 с помощью вестерн-блоттинга. Вкратце, можно получить клеточные экстракты из клеток, экспрессирующих CD73, и подвергнуть их электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. После электрофореза разделенные антигены перенесут на нитроцеллюлозные мембраны, будут блокировать 20% мышиной сывороткой и пометят моноклональным антителом, подлежащим анализу. Связывание с IgG можно выявить с использованием щелочной фосфатазы, пришитой к антителу к IgG, и проявить с использованием таблеток с субстратом BCIP/NBT (Sigma Chem. Co., Сент-Луис, Миссури).
Методы анализа аффинности связывания, перекрестной реактивности и кинетических характеристик связывания у различных антител к CD73 включают в себя стандартные анализы, известные в уровне техники, например, анализ поверхностного плазмонного резонанса (SPR) методом BIACORE(r) с использованием инструмента BIACORE(r) 2000 SPR (Biacore АВ, Уппсала, Швеция).
XIV. Иммуноконъюгаты и производные антител
Антитела, описанные в данном документе, можно применять для диагностических целей, в том числе для анализа образцов и in vivo визуализации, и для этого антитело (или его связывающий фрагмент) можно конъюгировать с соответствующим выявляемым средством с образованием иммуноконъюгата. В случае диагностических целей соответствующими средствами являются выявляемые метки, которые включают в себя радиоактивные изотопы для визуализации всего тела и радиоактивные изотопы, ферменты, флуоресцентные метки и другие подходящие маркирующие антитело элементы для анализа образцов.
Выявляемые метки могут относиться к различным типам, используемым в настоящее время в области in vitro диагностики, включая метки на основе частиц, в том числе золи металлов, такие как коллоидное золото, изотопы, такие как I125 или Тс", присутствующие, например, с пептидным хелатирующим средством типа N2S2, N3S или N4, хромофоры, в том числе флуоресцентные маркеры, биотин, люминесцентные маркеры, фосфоресцирующие маркеры и т.п., а также ферментные метки, которые превращают заданный субстрат в выявляемый маркер, и полинуклеотидные метки, которые выявляются после амплификации, такой как полимеразная цепная реакция. Биотинилированное антитело затем будет выявляться по связыванию с авидином или стрептавидином. Подходящий ферментные метки включают в себя пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу и т.п. Например, метка может представлять собой фермент щелочную фосфатазу, выявляемую посредством измерения наличия или появления хемилюминесценции после превращения 1,2-диоксетановых субстратов, таких как адамантил-метокси-фосфорилокси-фенилдиоксетан (AMPPD), динатрия 3-(4-(метоксиспиро{1,2-диоксетан-3,2'-(5'-хлор)трицикло{3.3.1.1 3,7}декан}-4-ил)фенилфосфат (CSPD), а также CDP и CDP-star(r) или других люминесцентных субстратов, хорошо
известных специалистам в данной области техники, например, хелатов подходящих лантаноидов, таких как тербий(Ш) и европий(Ш). Средства для выявления определяются выбранной меткой. Появление метки или продуктов ее реакции можно оценить невооруженным глазом в случае, когда метка представляет собой материал в виде частиц и накапливается на соответствующих уровнях, или с использованием инструментов, таких как спектрофотометр, люминометр, флуориметр и т.п., причем все они соответствуют стандартной практике.
Предпочтительно, методы конъюгации приводят в результате к связям, которые являются практически (или почти) неиммуногенными, например, пептидные- (т.е. амидные-), сульфидные-, (стерически затрудненные), дисульфидные-, гидразоновые- и эфирные связи. Эти связи являются почти неиммуногенными и проявляют приемлемую стабильность в сыворотке (см., например, Senter, P. D., Curr. Opin. Chem. Biol. 13 (2009) 235-244; международные заявки WO 2009/059278; WO 95/17886).
В зависимости от химической природы фрагмента и антитела можно использовать разные стратегии конъюгирования. В случае, если фрагмент представляет собой встречающийся в естественных условиях или рекомбинантный полипетид длиной 50-500 аминокислот, существуют стандартные процедуры в пособиях, описывающих химические особенности синтеза белковых конъюгатов, которым легко может следовать специалист в данной области техники (см., например, Hackenberger, С. P. R., and Schwarzer, D., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 47 (2008) 10030-10074). В соответствии с одним вариантом осуществления используется реакция малеинимидо-фрагмента с цистеиновым остатком в антителе или фрагменте. Она является особенно подходящим связывающим химическим процессом в случае использования, например, Fab или Fab'-фрагмента антитела. В качестве альтернативы, в соответствии с одним вариантом осуществления выполняют связывание с С-концом антитела или фрагмента. С-концевую модификацию белка, например, Fab-фрагмента, можно выполнить, как описано в источнике (Sunbul, М. and Yin, J., Org. Biomol. Chem. 7 (2009) 3361-3371).
В целом, сайт-специфичная реакция и ковалентное связывание основываются на превращении природной аминокислоты в аминокислоту с реакционной способностью, которая является нетипичной для реакционной способности других присутствующих функциональных групп. Например, конкретный цистеин в редком контексте
последовательности может подвергаться ферментативному превращению в альдегид (см. Frese, М. А., и Dierks, Т., ChemBioChem. 10 (2009) 425-427). Также возможно получить желательную модификацию аминокислоты при использовании специфичной ферментативной активности определенных ферментов в отношении реакции с природной аминокислотой в заданном контексте последовательности (см., например, Taki, М. et al., Prot. Eng. Des. Sel. 17 (2004) 119-126; Gautier, A. et al. Chem. Biol. 15 (2008) 128-136. Катализируемое протеазой образование C--N связей описано в Bordusa, F., Highlights in Bioorganic Chemistry (2004) 389-403.
Сайт-специфичной реакции и ковалентного связывания также можно достичь с помощью селективной реакции концевых аминокислот с соответствующими модифицирующими реактивами. Способность N-концевого цистеина к реакции с бензонитрилами (см., Ren, Н. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48 (2009) 9658-9662) можно использовать для достижения сайт-специфичного ковалентного связывания. Простое химическое лигирование также основывается на С-концевых цистеиновых остатках (Taylor, Е. Vogel; Imperiali, В, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96). В европейском патенте ЕР 1074563 описывается метод конъюгирования, который основывается на более быстрой реакции цистеина в пределах отрезка из отрицательно заряженных аминокислот, чем цистеина, расположенного в отрезке из положительно заряженных аминокислот.
Фрагмент также может представлять собой синтетический пептид или пептидомиметик. В случае, если полипептид является химически синтезированным, аминокислоты с нетипичной химической реакционной способностью могут быть включены в ходе синтеза (см., например, de Graaf, A. J. et al., Bioconjug. Chem. 20 (2009) 1281-1295). Поскольку речь идет о широком спектре нетипичных функциональных групп, и их можно ввести в синтетический пептид, конъюгирование такого пептида с линкером является стандартной химической процедурой.
Для получения меченого одной меткой полипептида конъюгат со стехиометрическим соотношением 1:1 можно отделить от других побочных продуктов с помощью хроматографии. Эту процедуру может облегчить использование меченого красителем связывающего элемента в составе пары и заряженного линкера. При использовании данного вида меченого и имеющего сильный отрицательный заряд связывающего
элемента в составе пары конъюгированные с одной меткой полипептиды легко отделяются от немеченых полипептидов и полипептидов, которые несут боле чем один линкер, поскольку различие в заряде и молекулярном весе можно использовать для разделения. Флуоресцентный краситель может быть полезен для очистки комплекса от несвязавшихся компонентов, таких как меченый моновалентный связывающий элемент.
В соответствии с одним вариантом осуществления фрагмент, прикрепленный к антителу к CD73, выбран из группы, состоящей из связывающего фрагмента, метящего фрагмента и биологически активного фрагмента.
Антитела, описанные в данном документе, также можно конъюгировать с терапевтическим средством с образованием иммуноконъюгата, такого как конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC). Подходящие терапевтические средства включают в себя антиметаболиты, алкилирующие средства, средства, связывающиеся с малой бороздкой ДНК, ДНК-интеркаляторы, ДНК-сшивающие средства, ингибиторы гистондеацетилазы, ингибиторы ядерного экспорта, ингибиторы протеасомы, ингибиторы топоизомеразы I или II, ингибиторы белков теплового шока, ингибиторы тирозинкиназы, антибиотики и антимитотические средства. В ADC антитело и терапевтическое средство предпочтительно конъюгированы посредством расщепляемого линкера, такого как пептидильный, дисульфидный или гидразоновый линкер. Более предпочтительно, линкер представляет собой пептидильный линкер, такой как Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Pro-Val-Gly-Val-Val (SEQ Ш NO: 219), Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala-Asn, Cit-Cit, Val-Lys, Lys, Cit, Ser или Glu. ADC можно получать, как описано в патентах США №№ 7087600; 6989452 и 7129261; РСТ публикациях международных заявок WO 02/096910; WO 07/038658; WO 07/051081; WO 07/059404; WO 08/083312 и WO 08/103693; публикациях заявок на патент США 20060024317; 20060004081 и 20060247295; раскрытия которых включены в данный документе посредством ссылки.
Другие применения антител к CD73, например, в качестве средств для монотерапии, представлены в других местах в данном документе, например, в разделе, относящемся к методам комплексного лечения.
Более конкретно, в ADC антитело конъюгировано с лекарственным средством, причем антитело функционирует в качестве нацеливающего средства для направления ADC к целевой клетке, экспрессирующей свой антиген, такой как клетка злокачественной
опухоли. Предпочтительно, антиген представляет собой опухолеассоциированный антиген, т.е., антиген, который экспрессируется или сверхэкспрессируется исключительно клеткой злокачественной опухоли. Попав туда, лекарственное средство высвобождается либо внутри целевой клетки, либо вблизи нее, действуя как терапевтическое средство. Для обзора механизма действия и применения ADC в терапии злокачественных опухолей, см. Schrama et al, Nature Rev. Drug Disc. 2006, 5, 147.
В случае лечения от злокачественных опухолей лекарственное средство предпочтительно представляет собой цитотоксическое лекарственное средство, которое вызывает гибель подвергшейся целенаправленному воздействию клетки злокачественной опухоли. Цитотоксические лекарственные средства, которые можно применять в ADC, включают в себя следующие типы соединений, а также их аналоги и производные:
(a) енедиины, такие как калихеамицин (см., например, Lee et al, J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3464 и 3466) и унциаламицин (см., например, Davies et al., WO 2007/038868 A2 (2007), и Chowdari etal, US 8709431 B2 (2012));
(b) тубулизины (см., например, Domling et al, US 7778814 B2 (2010); Cheng et al, US 8394922 B2 (2013); и Cong etal, US 2014/0227295 Al;
(c) CC-1065 и дуокармицин (см., например, Boger, US 65458530 Bl (2003); Sufi etal.,US 8461117 B2 (2013); и Zhang et al., US 2012/0301490 Al (2012));
(d) эпотилоны (см., например, Vite et al, US 2007/0275904 Al (2007) и US RE42930E(2011));
(e) ауристатины (см., например, Senter et al, US 6,844,869 B2 (2005), и Doronina et al, US 7498298 B2 (2009));
(f) димеры пирролобензодиазепина (PBD) (см., например, Howard et al, US 2013/0059800 Al(2013); US 2013/0028919 Al (2013) и WO 2013/041606 Al (2013)) и
(g) майтансиноиды, такие как DM1 и DM4 (см., например, Chari et al, US 5208020 (1993), и Amphlett etal, US 7374762 B2 (2008)).
XV. Биспецифичные молекулы
Антитела, описанные в данном документе, можно применять для образования биспецифичных молекул. Из антитела к CD73 или его антигенсвязывающих частей можно получить производные или их можно связать с другой функциональной молекулой,
например, другим пептидом или белком (например, другим антителом или лигандом для рецептора) с образованием биспецифичной молекулы, которая связывается по меньшей мере с двумя различными сайтами связывания или молекулами-мишенями. В действительности, описанное в данном документе антитело можно дериватизировать или связать более чем с одной другой функциональной молекулой с образованием мультиспецифичных молекул, которые связываются с более чем двумя разными сайтами связывания и/или молекулами-мишенями; также предполагается, что такие мультиспецифичные молекулы охватываются термином "биспецифичная молекула", используемым в данном документе. Для создания биспецифичной молекулы, описанной в данном документе, можно обеспечить функциональную связь (например, посредством химического связывания, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) антитела, описанного в данном документе, с одной или несколькими другими связывающими молекулами, такими как другое антитело, фрагмент антитела, пептид или связывающий миметик, таким образом, чтобы в результате образовалась биспецифичная молекула.
Соответственно, в данном документе предполагаются биспецифичные молекулы, содержащие по меньшей мере одну первую составляющую со специфичностью связывания в отношении CD73 и вторую составляющую со специфичностью связывания в отношении второго эпитопа-мишени. В соответствии с вариантом осуществления, описанным в данном документе, в котором биспецифичная молекула является мультиспецифичной, молекула может дополнительно включать третью составляющую со специфичностью связывания.
В соответствии с одним вариантом осуществления биспецифичные молекулы, описанные в данном документе, содержат в качестве составляющей со специфичностью связывания по меньшей мере одно антитело или фрагмент такого антитела, в том числе, например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или одноцепочечный Fv. Антитело может представлять собой димер легкой цепи или тяжелой цепи или любой его минимальный фрагмент, такой как Fv или одноцепочечный конструкт, который описан в Ladner et al. в патенте США № 4946778, содержание которого специально включено посредством ссылки.
Связывание биспецифичных молекул с их специфическими мишенями можно подтвердить с использованием методов, принятых в данной области техники, таких как
твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), радиоиммунологический анализ (RIA), анализ методом FACS, биологический анализ (например, ингибирование роста) или вестерн-блоттинг анализ. В каждом из этих анализов обычно выявляют наличие комплексов белок-антитело, представляющих интерес в данном случае, при использовании меченого реактива (например, антитела), специфичного в отношении комплекса, представляющего интерес.
XVI. Композиции
Также предполагаются композиции, например, фармацевтические композиции, содержащие одно антитело к CD73 или комбинацию антител к CD73 или их антигенсвязывающую(антигенсвязывающие) часть(части), описанные в данном документе, составленные вместе фармацевтически приемлемым носителем. Такие композиции могут включать в себя одно антитело, или иммуноконъюгат, или биспецифичную молекулу, описанные в данном документе, или комбинацию (например, двух или более различных) антител, или иммуноконъюгатов, или биспецифичных молекул, описанных в данном документе. Например, фармацевтическая композиция, описанная в данном документе, может содержать комбинацию антител (или иммуноконъюгатов или биспецифичных молекул), которые связываются с разными эпитопами на антигене-мишени или которые характеризуются взаимодополняющими активностями.
В соответствии с определенными вариантами осуществления композиция содержит антитело к CD73 в концентрации, составляющей по меньшей мере 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 50 мг/мл, 100 мг/мл, 150 мг/мл, 200 мг/мл, 1-300 мг/мл или 100-300 мг/мл.
Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, также можно вводить в рамках комплексной терапии, т.е. комбинировать с другими средствами. Например, комплексная терапия может включать в себя антитело к CD73, описанное в данном документе, комбинируемое по меньшей мере с одним другим противораковым средством и/или средством, стимулирующим (например, активирующим) Т-клетки. Примеры терапевтических средств, которые можно применять в комплексной терапии, более подробно описаны ниже в разделе, посвященном применениям антител, описанных в данном документе.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтические
композиции, раскрытые в данном документе, могут включать другие соединения, лекарственные средства и/или средства, применяемые для лечения злокачественной опухоли. Такие соединения, лекарственные средства и/или средства могут включать в себя, например, химиотерапевтические лекарственные средства, лекарственные средства на основе малых молекул или антитела, которые стимулируют иммунную реакцию в отношении заданной злокачественной опухоли. В некоторых случаях терапевтические композиции могут включать в себя, например, одно или несколько из средств, приведенных в разделе о методах комплексной терапии.
Как используется в данном документе, "фармацевтически приемлемый носитель" включает в себя любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотоничные средства и средства, задерживающие абсорбцию, и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Предпочтительно, носитель является подходящим для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, посредством инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения активное соединение, т.е. антитело, иммуноконъюгат или биспецифичную молекулу можно обеспечить покрытием из материала для защиты соединения от действия кислот и других естественных условий, которые могут инактивировать соединение.
Фармацевтические соединения, описанные в данном документе, могут включать в себя одну или несколько фармацевтически приемлемых солей. "Фармацевтически приемлемая соль" относится к соли, которая сохраняет желаемую биологическую активность исходного соединения и не придает каких-либо нежелательных токсических эффектов (см., например, Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19). Примеры таких солей включают в себя соли присоединения кислоты и соли присоединения основания. Соли присоединения кислоты включают в себя соли, полученные с нетоксичными неорганическими кислотами, такими как соляная, азотная, фосфорная, серная, бромистоводородная, йодистоводородная, фосфористая и т.п., а также с нетоксичными органическими кислотами, такими как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и т.п. Соли присоединения основания включают в себя соли, полученные с щелочноземельными
металлами, такими как натрий, калий, магний, кальций и т.п., а также с нетоксичными органическими аминами, такими как М,№-дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и т.п.
Фармацевтическая композиция, описанная в данном документе, также может включать в себя фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают в себя: (1) водорастворимые антиоксид анты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т.п.; (2) растворимые в масле антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВНА), бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т.п. и (3) средства, хелатирующие металлы, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п.
Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно использовать в фармацевтических композициях, описанных в данном документе, включают в себя воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные сложные эфиры органических кислот, такие как этилолеат. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, за счет использования материалов покрытия, таких как лецитин, за счет поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий и за счет использования поверхностно-активных веществ.
Эти композиции также могут содержать вспомогательные вещества, такие как консерванты, смачивающие средства, эмульгирующие средства и диспергирующие средства. Предотвращение присутствия микроорганизмов может обеспечиваться как за счет процедур стерилизации, supra, так и за счет включения различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и т.п. Также может быть желательным включение в композиции изотоничных средств, таких как сахара, хлорид натрия и т.п. Кроме того, пролонгированная абсорбция инъекционной фармацевтической формы может быть обусловлена включением средств, которые задерживают абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин.
Фармацевтически приемлемые носители включают в себя стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсии непосредственно перед приемом. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных субстратов известно в уровне техники. За исключением тех случаев, когда любая общепринятая среда или средство являются несовместимыми с активным соединением, предполагается их применение в фармацевтических композициях, описанных в данном документе. В композиции также могут быть включены дополнительные активные соединения.
Терапевтические композиции, как правило, должны быть стерильными и стабильными при условиях производства и хранения. Композицию можно составить в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, за счет использования покрытия, такого как лецитин, за счет поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и за счет использования поверхностно-активных веществ. Во многих случаях предпочтительным является включение в композицию изотоничных средств, например, Сахаров, многоатомных спиртов, таких как маннит, сорбит, или хлорида натрия. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может быть обусловлена включением в композицию средства, которое задерживают абсорбцию, например, моностеаратных солей и желатина.
Стерильные инъекционные растворы можно приготовить путем включения активного соединения в требуемом количестве в соответствующий растворитель с одним из вышеперечисленных ингредиентов или их комбинацией, если это необходимо, с последующей стерилизацией с помощью микрофильтрации. Обычно дисперсии готовят путем включения активного соединения в стерильную среду, которая содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из числа перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и сублимационная сушка (лиофилизация), которые дают порошок активного ингредиента, а также любого
дополнительного желаемого ингредиента из их раствора, ранее подвергнутого стерилизации фильтрованием.
Количество активного ингредиента, который можно объединить с материалом-носителем с получением лекарственной формы для однократного введения, будет изменяться в зависимости от субъекта, подлежащего лечению, и конкретного способа введения. Количество активного ингредиента, который можно объединить с материалом-носителем с получением лекарственной формы для однократного введения, обычно будет являться таким количеством композиции, которое обеспечивает терапевтический эффект. В целом, из общего количества в виде ста процентов это количество будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,01 процента до приблизительно девяносто девяти процентов активного ингредиента, предпочтительно от приблизительно 0,1 процента до приблизительно 70 процентов, наиболее предпочтительно от приблизительно 1 процента до приблизительно 30 процентов активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
Схемы дозирования корректируют для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Например, можно вводить одну разовую дозу, несколько разделенных доз можно вводить в течение некоторого времени или дозу можно пропорционально снижать или повышать, на что указывают потребности терапевтической ситуации. Особенно преимущественным является составление парентеральных композиций в единичной лекарственной форме для упрощения введения и равномерности дозирования. Единичная лекарственная форма, используемая в данном документе, относится к физически раздельным единицам, подходящих в качестве единичных доз для субъектов, подлежащих лечению; причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного соединения, рассчитанное для обеспечения желательного терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Требования в отношении единичных лекарственных форм, описанных в данном документе, диктуются (а) индивидуальными характеристиками активного соединения и конкретным терапевтическим эффектом, который необходимо достичь, и (Ь) ограничениями в области получения составов, характерными для получения составов с таким активным соединением из соображений чувствительности у индивидов, и напрямую зависят от них.
В случае введения антитела доза находится в диапазоне от приблизительно 0,0001 до 100 мг/кг и, как правило, от 0,01 до 5 мг/кг массы тела пациента. Например, дозы могут составлять 0,3 мг/кг массы тела, 1 мг/кг массы тела, 3 мг/кг массы тела, 5 мг/кг массы тела или 10 мг/кг массы тела или в пределах диапазона 1-10 мг/кг. Иллюстративная схема дозирования предусматривает введение раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в четыре недели, раз в месяц, раз в три 3 месяца или раз в три-шесть месяцев.
В соответствии с некоторыми способами два или более моноклональных антител с разными специфичностями связывания вводят одновременно, в этом случае доза каждого вводимого антитела попадает в указанные диапазоны. Антитело обычно вводят несколько раз. Интервалы между отдельными дозами могут быть, например, недельными, месячными, трехмесячными или годичными. Интервалы также могут быть неодинаковыми, на что указывает измерение уровней антитела к антигену-мишени в крови пациента. В соответствии с некоторыми способами дозу корректируют для достижения концентрации антитела в плазме, составляющей приблизительно 1-1000 мкг/мл и в соответствии с некоторыми способами приблизительно 25-300 мкг/мл.
Антитело можно вводить в виде состава с замедленным высвобождением, причем в этом случае требуется менее частое введение. Дозировка и частота изменяются в зависимости от периода полувыведения антитела у пациента. Обычно наибольший период полувыведения проявляют человеческие антитела, за ними следуют гуманизированные антитела, химерные антитела и антитела, не являющиеся человеческими. Дозировка и частота введения могут изменяться в зависимости от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. При профилактических применениях относительно низкую дозу вводят с относительно длинными интервалами в течение длительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают получать лечение до конца своей жизни. При терапевтических применениях относительно высокая доза с относительно короткими интервалами иногда требуются до тех пор, пока развитие заболевания ограничится или прекратится, и предпочтительно до тех пор, пока у пациента не проявится частичное или полное ослабление симптомов заболевания. После этого, введение пациенту можно осуществлять по профилактической схеме.
Фактические уровни дозы активных ингредиентов в фармацевтических композициях, описанных в данном документе, можно изменять с тем, чтобы получить количество
активного ингредиента, которое является эффективным для достижения желаемого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения, при этом не являясь токсичным для пациента. Выбранный уровень дозы будет зависеть от ряда фармакокинетических факторов, в том числе от активности конкретных используемых композиций, описанных в данном документе, или их сложноэфирной, солевой или амидной формы, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, длительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, используемых в комбинации с конкретными используемыми композициями, возраста, пола, веса, состояния, общего состояния здоровья и анамнеза пациента, получающего лечение, и подобных факторов, известных в области медицины.
"Терапевтически эффективная доза" антитела к CD73, описанного в данном документе, предпочтительно приводит в результате к снижению тяжести симптомов заболевания, повышению частоты и длительности бессимптомных периодов заболевания или предупреждению ухудшения или инвалидизации, обусловленных поражением заболеванием. В случае злокачественной опухоли терапевтически эффективная доза предпочтительно предотвращает дальнейшее ухудшение физических симптомов, связанных со злокачественной опухолью. Симптомы поражения злокачественной опухолью являются широко известными в уровне техники и включают, например, необычные признаки родинки, изменение внешнего вида родинки, в том числе асимметрии, границ, цвета и/или диаметра, новообразованная пигментированная область кожи, ненормальную родинку, затемненную область под ногтем, уплотнения в молочной железе, изменения соска, кисты в молочной железе, боль в молочной железе, смерть, потерю массы, слабость, переутомление, затруднения с приемом пищи, потерю аппетита, хронический кашель, ухудшенную одышку, харкание кровью, кровь в моче, кровь в кале, тошноту, рвоту, печеночные метастазы, легочные метастазы, метастазы в кости, ощущение переполнения желудка, вздутие, жидкость в брюшной полости, вагинальное кровотечение, констипацию, вздутие живота, перфорацию толстой кишки, острый перитонит (инфекция, лихорадка, боль), боль, рвота с кровью, сильное потоотделение, лихорадку, высокое кровяное давление, анемию, диарею, разлитие желчи, головокружение, озноб, мышечные спазмы, метастазы в толстую кишку, легочные метастазы, метастазы в мочевой пузырь,
печеночные метастазы, метастазы в кости, почечные метастазы и метастазы в поджелудочную железу, затрудненной глотание и т.п.
Терапевтически эффективная доза может предупредить или замедлить появление злокачественной опухоли, что может быть желательно, когда присутствуют ранние или предварительные признаки заболевания. Лабораторные анализы, используемые в диагностике злокачественных опухолей, включают в себя химические анализы (в том числе измерение уровней CD73), гематологические, серологические и радиологические анализы. Соответственно, любой клинический или биохимический анализ, с помощью которого отслеживается любой из вышеизложенных показателей, можно использовать для определения того, присутствует ли конкретное лечебное средство в терапевтически эффективной дозе для лечения злокачественной опухоли. Специалист в данной области техники будет способен определить такие количества, исходя из таких факторов, как размеры субъекта, тяжесть симптомов у субъекта и конкретные выбранные композиция или путь введения.
Композицию, описанную в данном документе, можно вводить посредством одного или нескольких путей введения с использованием одного или нескольких из ряда способов, известных в уровне техники. Как будет понятно специалисту в данной области техники, путь и/или способ введения будет изменяться в зависимости от желаемых результатов. Предпочтительные пути введения для антител, описанных в данном документе, включают внутривенный, внутримышечный, интрадермальный, внутрибрюшинный, подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например, путем инъекции или инфузии. Используемая в данном документе фраза "парентеральное введение" означает способы введения, за исключением энтерального и местного введения, обычно путем инъекции и включает в себя без ограничения внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, интраорбительную, внутрисердечную, интрадермальную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, внутрикожную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и интрастернальную инъекцию и инфузию.
В качестве альтернативы, описанное в данном документе антитело можно вводить посредством не-парентерального пути, такого как местный, эпидермальный или
мукозальный путь введения, например, интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или местно.
Активные соединения можно приготовить с носителями, которые будут защищать соединение от быстрого высвобождения, как например, состав с контролируемым высвобождением, в том числе имплантаты, трансдермальные пластыри и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые биосовместимые полимеры, такие как этилен-винилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы получения таких составов защищены патентами или являются общеизвестными специалистам в данной области техники. См., например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, JR. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Терапевтические композиции можно вводить с использованием медицинских устройств, известных в уровне техники. Например, в соответствии с предпочтительным вариантом осуществления терапевтическую композицию, описанную в данном документе, можно вводить с использованием безыгольного устройства для подкожной инъекции, такого как устройства, раскрытые в патентах США №№ 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556. Примеры широко известных имплантатов и модулей для применения с антителами к CD73, описанными в данном документе, включают в себя: патент США № 4487603, в котором раскрыт имплантируемый инфузионный микронасос для дозирования лекарственного препарата с контролируемой скоростью; патент США № 4486194, в котором раскрыто терапевтическое устройство для введения лекарственных препаратов через кожу; патент США № 4447233, в котором раскрыт инфузионный насос для лекарственного препарата для доставки лекарственного препарата с точной скоростью инфузии; патент США № 4447224, в котором раскрыт имплантируемый инфузионный аппарат, обеспечивающий переменную скорость течения жидкости для непрерывной доставки лекарственного средства; патент США № 4439196, в котором раскрыта осмотическая система доставки лекарственного средства с многокамерными отсеками; и патент США № 4475196, в котором раскрыта осмотическая система доставки лекарственного средства. Эти патенты включены в данный документ посредством ссылки. Специалистам в данной области техники известны многие другие такие имплантаты, системы доставки и модули.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73, описанные в данном документе, могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить надлежащее распространение in vivo. Например, гематоэнцефалический барьер (ВВВ) исключает многие высокогидрофильные соединения. Для обеспечения пересечения терапевтическими соединениями, описанными в данном документе, ВВВ (если это желательно) их можно составить, например, в липосомах. По поводу способов получения липосом, см., например, патенты США №№ 4522811; 5374548 и 5399331. Липосомы могут содержать один или несколько фрагментов, которые селективно транспортируются в конкретные клетки или органы, тем самым повышая целенаправленную доставку лекарственного средства (см., например, V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685). Иллюстративные нацеливающие фрагменты включают в себя фолат или биотин (см., например, патент США № 5416016 за авторством Low et al); маннозиды (Umezawa et al, (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038); антитела (P.G. Bloeman etal. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180); рецептор поверхностно-активного белка A (Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134); pl20 (Schreier etal. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090); см. также К. Keinanen; M L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994J Immunomethods 4:273.
XVII. Применения и способы
Антитела, композиции антител и способы, описанные в данном документе, имеют многочисленные применения in vitro и in vivo, например, ингибирование опухолевого роста, ингибирование метастазирования опухоли, усиление иммунной реакции, например, посредством снижения передачи сигнала с участием аденозина, или выявление CD73. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления антитела, описанные в данном документе, представляют собой человеческие антитела. Например, антитела к CD73, описанные в данном документе, можно вводить в клетки в культуре, in vitro или ex vivo, или субъектам-людям, например, in vivo, для ингибирования пролиферации опухолевых клеток. Соответственно, в данном документе представлены способы модификации опухолевого роста у субъекта, предусматривающие введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части, описанных в данном документе, в результате чего снижается опухолевый рост у субъекта.
В соответствии с конкретным вариантом осуществления способы являются особенно подходящими для лечения злокачественной опухоли in vivo. Для достижения антигенспецифичного ингибирования опухолевого роста антитела к CD73, описанные в данном документе, можно вводить вместе с антигеном, представляющим интерес, или антиген может уже присутствовать у субъекта, подлежащего лечению (например, субъекта-носителя опухоли). Если антитела к CD73 вводят вместе с другим средством, их можно вводить раздельно или одновременно.
Также охватываются способы выявления наличия антигена человеческого CD73 в образце или измерения количества антигена человеческого CD73, предусматривающие приведение образца и контрольного образца в контакт с человеческим моноклональным антителом или его антигенсвязывающей частью, которые специфично связываются с человеческим CD73, в условиях, которые обеспечивают возможность образования комплекса между антителом или его частью и человеческим CD73. Затем выявляют образование комплекса, причем различие в образовании комплекса между образцом по сравнению с контрольным образцом указывает на наличие антигена человеческого CD73 в образце. Более того, антитела к CD73, описанные в данном документе, можно применять для очистки человеческого CD73 посредством иммуноаффинной очистки.
Также охватываются способы стимуляции иммунной реакции (например, антигенспецифичной Т-клеточной реакции) у субъекта, предусматривающие введение субъекту антитела к CD73, описанного в данном документе, в результате чего у субъекта стимулируется иммунная реакция (например, антигенспецифичная Т-клеточная реакция). В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления субъект является субъектом-носителем опухоли, а стимулируется иммунная реакция в отношении опухоли. Опухоль может представлять собой солидную опухоль или опухолевые заболевания кроветворной и лимфоидной ткани, например, гематологическую злокачественную опухоль. В соответствии с определенными вариантами осуществления опухоль представляет собой иммуногенную опухоль. В соответствии с определенными вариантами осуществления опухоль является неиммуногенной.
Эти и другие способы, описанные в данном документе, более подробно обсуждаются
ниже.
Злокачественная опухоль
Ингибирование CD73 антителами к CD73 может снижать опухолевый рост и метастазирование у пациента. Ингибирование CD73 антителами к CD73 может также усиливать иммунную реакцию в отношении клеток злокачественной опухоли у пациента. В данном документе представлены способы лечения субъекта, имеющего злокачественную опухоль, предусматривающие введение субъекту антитела к CD73, описанного в данном документе, в результате чего осуществляется лечение субъекта, например, ингибируется или замедляется рост злокачественных опухолей и/или достигается регрессия опухолей. Антитело к CD73 можно применять само по себе для ингибирования роста злокачественных опухолей. В качестве альтернативы, антитело к CD73 можно применять в сочетании с другим средством, например, другими иммуногенными средствами, стандартными средствами для лечения злокачественной опухоли или другими антителами, как описано ниже.
Соответственно, в данном документе предполагаются способы лечения злокачественной опухоли, например, посредством ингибирования роста опухолевых клеток, у субъекта, предусматривающие введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела к CD73, описанного в данном документе или его антигенсвязывающей части. Антитело может представлять собой человеческое антитело к CD73 (такое как любое из человеческих антител к CD73 человека, описанных в данном документе). В качестве дополнения или альтернативы, антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело к CD73, например, химерное или гуманизированное антитело к CD73, содержащее антитело к CD73, описанное в данном документе, или его антигенсвязывающую часть.
Злокачественные опухоли, чей рост можно ингибировать с применением антител согласно настоящему изобретению, включают в себя злокачественные опухоли, как правило, восприимчивые к иммунотерапии. Неограничивающие примеры злокачественных опухолей для лечения включают в себя плоскоклеточную карциному, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, ороговевающий немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), не-NSCLC, глиому, злокачественную опухоль желудочно-кишечного тракта, злокачественную опухоль почки (например, светлоклеточную карциному), злокачественную опухоль яичника, злокачественную
опухоль печени, злокачественную опухоль толстой и прямой кишки, злокачественную опухоль эндометрия, злокачественную опухоль почки (например, почечноклеточную карциному (RCC)), злокачественную опухоль предстательной железы (например, гормонорефрактерную аденокарциному предстательной железы), злокачественную опухоль щитовидной железы, нейробластому, злокачественную опухоль поджелудочной железы, глиобластому (мультиформную глиобластому), злокачественную опухоль шейки матки, злокачественную опухоль желудка, злокачественную опухоль мочевого пузыря, гепатому, злокачественную опухоль молочной железы, карциному толстой кишки и злокачественную опухоль (или карциному) головы и шеи, злокачественную опухоль желудка, герминогенную злокачественную опухоль, детскую саркому, синоназальную злокачественную опухоль из клеток-натуральных киллеров, меланому (например, метастатическую злокачественную меланому, такую как злокачественная меланома кожи или внутриглазная злокачественная меланома), злокачественную опухоль кости, злокачественную опухоль кожи, злокачественную опухоль матки, злокачественную опухоль заднепроходной области, злокачественную опухоль яичка, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, злокачественную опухоль пищевода, злокачественную опухоль тонкого кишечника, злокачественную опухоль эндокринной системы, злокачественную опухоль паращитовидной железы, злокачественную опухоль надпочечника, саркому мягких тканей, злокачественную опухоль мочеиспускательного канала, злокачественную опухоль полового члена, солидные опухоли детского возраста, злокачественную опухоль мочеточника, карциному почечной лоханки, злокачественное новообразование центральной нервной системы (ЦНС), первичную лимфому ЦНС, опухолевый ангиогенез, опухоль позвоночника, глиому ствола головного мозга, аденому гипофиза, саркому Капоши, эпидермоидную злокачественную опухоль, плоскоклеточный рак, Т-клеточную лимфому, злокачественные опухоли, вызванные факторами окружающей среды, в том числе вызванные асбестом злокачественные опухоли, злокачественные опухоли, связанные с вирусом, (например, опухоль, связанная с вирусом папилломы человека (HPV) и гематологические злокачественные опухоли, происходящие из любой из двух основных линий клеток крови, т.е. миелоидной клеточной линии (которая дает гранулоциты, эритроциты, тромбоциты, макрофаги и тучные клетки) или лимфоидной
клеточной линии (которая дает В, Т, NK и плазматические клетки), такие как все типы лейкозов, лимфом и миелом, например, острые, хронические, лимфоцитарные и/или миелогенные лейкозы, такие как острый лейкоз (ALL), острый миелогенный лейкоз (AML), хронический лимфолейкоз (CLL) и хронический миелолейкоз (CML), недифференцированный AML (МО), миелобластный лейкоз (Ml), миелобластный лейкоз (М2; с созреванием клеток), промиелоцитарный лейкоз (МЗ или вариант МЗ [M3V]), миеломоноцитарный лейкоз (М4 или вариант М4 с эозинофилией [М4Е]), моноцитарный лейкоз (М5), эритролейкоз (Мб), мегакариобластный лейкоз (М7), выделенная гранулоцитарная саркома и хлорома; лимфомы, такие как лимфома Ходжкина (HL), неходжкинская лимфома (NHL), В-клеточные лимфомы, Т-клеточные лимфомы, лимфоплазмоцитоидную лимфому, моноцитоидную В-клеточную лимфому, лимфому из лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками (MALT), анапластическую (например, Ki 1+) крупноклеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз/лимфому взрослых, лимфому из клеток мантийной зоны, ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому, лимфангиому, Т-клеточную лимфому тонкой кишки, первичную медиастинальную В-клеточную лимфому, Т-лимфобластную лимфому из клеток-предшественников, Т-лимф областную лимфому/ Т-лимфобластный лейкоз (T-Lbly/T-ALL), периферическую Т-клеточную лимфому, лимфобластную лимфому, посттрансплантационное лимфопролиферативное заболевание, истинную гистиоцитарную лимфому, первичную лимфому центральной нервной системы, первичную выпотную лимфому, лимфобластную лимфому (LBL), гемобластозы из лимфоидной линии, острый лимфобластный лейкоз, диффузную В-крупноклеточную лимфому, лимфому Беркитта, фолликулярную лимфому, диффузную гистиоцитарную лимфому (DHL), иммунобластную крупноклеточную лимфому, В-лимфобластную лимфому из клеток предшественников, кожную Т-клеточную лимфому (CTLC) (также называемую микозом грибовидным или синдром Сезари) и лимфоплазмацитоидную лимфому (LPL) с макроглобулинемией Вальденстрема; миеломы, такие как IgG-миелома, миелома легких цепей, несекреторная миелома, тлеющая миелома (также называемая вялотекущей миеломой), единичная плазмоцитома и множественные миеломы, хронический лимфолейкоз (CLL), волосатоклеточную лимфому; гемобластозы из клеток миелоидной линии, опухоли мезенхимального происхождения, в том числе фибросаркому и рабдомиосаркому;
семиному, тератокарциному, опухоли центральной и периферической нервной системы, в том числе астроцитому, шванномы; опухоли мезенхимального происхождения, в том числе фибросаркому, рабдомиосаркому и остеосаркому; а также другие опухоли, в том числе меланому, пигментную ксеродерму, кератоакантому, семиному, фолликулярную злокачественную опухоль щитовидной железы и тератокарциному, гемобластозы из клеток лимфоидной линии, например, Т-клеточные и В-клеточные опухоли, в том числе без ограничения Т-клеточные нарушения, такие как Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (T-PLL), в том числе мелкоклеточного и мозговидного типа; лейкоз из больших гранулярных лимфоцитов (LGL), предпочтительно Т-клеточного типа; a/d T-NHL печеночно-селезеночную лимфому; периферическую Т-клеточную лимфому/ Т-клеточную лимфому из клеток, вышедших за пределы тимуса (плеоморфный и иммунобластный подтипы); Т-клеточную лимфангиому (назальную); злокачественную опухоль головы и шеи, злокачественную опухоль шеи, злокачественную опухоль прямой кишки, злокачественную опухоль щитовидной железы; острую миелоидную лимфому, а также любые комбинации указанных злокачественных опухолей. Способы, описанные в данном документе, также можно применять для лечения метастазирующих злокачественных опухолей, невосприимчивых к лечению злокачественных опухолей (например, злокачественных опухолей, невосприимчивых к проводимой ранее иммунотерапии, например, с использованием блокирующего антитела к CTLA-4, или к PD-1, или к PD-L1) и рецидивирующих злокачественных опухолей.
Способы можно применять для лечения опухолей или злокачественных опухолей, которые являются положительными по CD73 или которые экспрессируют высокие уровни CD73. Способ может предусматривать вначале определение уровня CD73 на опухолях или опухолевых клетках и обработку антителом к CD73, например, описанным в данном документе, если опухоли или клетки экспрессируют CD73, например, высокие уровни CD73.
Антитело к CD73 можно назначать в качестве монотерапии или только в качестве иммуностимулирующей терапии. Антитела к CD73, например, антитела к CD73, описанные в данном документе, также можно комбинировать с иммуногенным средством, таким как клетки злокачественных опухолей, очищенные опухолевые антигены (в том числе рекомбинантные белки, пептиды и углеводные молекулы), клетки и клетки,
трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (Не et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Неограничивающие примеры противоопухолевых вакцин, которые можно использовать, включают в себя пептиды из антигенов меланомы, такие как пептиды gplOO, антигены MAGE, Trp-2, MART1 и/или тирозиназы, или опухолевые клетки, трансфицированные для экспрессии цитокина GM-CSF (дополнительно обсуждаются ниже).
Было показано, что у людей некоторые опухоли являются иммуногенными, как например, меланомы. Снижая порог активации Т-клеток посредством ингибирования CD73, можно активировать реакцию на опухоль у хозяина, что обеспечивает возможность лечения неиммуногенных опухолей или опухолей с ограниченной иммуногенностью.
Антитело к CD73, например, антитело к CD73, описанное в данном документе, можно сочетать с протоколом вакцинации. Было разработано много экспериментальных стратегий по вакцинации (см. Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; см. также Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition). В соответствии с одной из этих стратегий вакцину получают с использованием аутологичных или аллогенных опухолевых клеток. Было показано, что эти клеточные вакцины являются наиболее эффективными, когда опухолевые клетки трансдуцируют для экспрессии GM-CSF. GM-CSF, как было показано, является сильным активатором презентирования антигенов при противоопухолевой вакцинации (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43).
Изучение экспрессии генов и паттернов экспрессии большого количества генов в различных опухолях привело к определению так называемых опухолеспецифичных антигенов (Rosenberg, S А (1999) Immunity 10: 281-7). Во многих случаях эти опухолеспецифичные антигены представляют собой дифференцировочные антигены, экспрессирующиеся в опухолях и в клетке, из которой возникает опухоль, например, меланоцитарные антигены gplOO, антигены MAGE и Тгр-2. Что более важно, многие из этих антигенов, как было показано, являются мишенями опухолеспецифичных Т-клеток, обнаруживаемых у хозяина. Ингибирование CD73 можно использовать в сочетании с
набором рекомбинантных белков и/или пептидов, экспрессирующихся в опухоли, для того, чтобы вызвать иммунную реакцию на эти белки. Эти белки в норме воспринимаются иммунной системой как аутоантигены, и, следовательно, она проявляет к ним толерантность. Опухолевый антиген может включать белок теломеразы, который необходим для синтеза теломер хромосом и который экспрессируется более чем в 85% злокачественных опухолей человека и лишь в ограниченном количестве соматических тканей (Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013). Опухолевый антиген также может представлять собой "неоантигены", экспрессирующиеся в клетках злокачественной опухоли вследствие соматических мутаций, которые изменяют последовательность белка или создают слитые белки из двух неродственных последовательностей (т.е. bcr-abl в филадельфийской хромосоме) или идиотип из В-клеточных опухолей.
Другие противоопухолевые вакцины могут включать в себя белки из вирусов, связанных со злокачественными опухолями человека, таких как вирусы папилломы человека (HPV), вирусы гепатита (HBV и HCV) и вирус герпеса, ассоциированный с саркомой Капоши (KHSV). Другой формой опухолеспецифичного антигена, который можно использовать в сочетании с ингибированием CD73 являются очищенные белки теплового шока (HSP), выделенные из самой опухолевой ткани. Эти белки теплового шока содержат фрагменты белков из опухолевых клеток, и эти HSP являются высокоэффективными при доставке к антигенпрезентирующим клеткам для того, чтобы вызвать иммунитет к опухоли (Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120).
Дендритные клетки (DC) являются высокоактивными антигенпрезентирующими клетками, которые можно использовать для примирования с целью вызвать антигенспецифичные реакции. DC можно получать ex vivo и нагружать различными белковыми и пептидными антигенами, а также экстрактами опухолевых клеток (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DC также можно трансдуцировать с использованием генетических средств для экспрессии этих опухолевых антигенов. Также можно осуществлять непосредственное слияние DC с опухолевыми клетками с целью иммунизации (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). В качестве метода вакцинации иммунизацию DC можно эффективно комбинировать с ингибированием CD73 для того, чтобы активировать более сильные противоопухолевые реакции.
Ингибирование CD73 также можно сочетать со стандартными методами лечения злокачественной опухоли (например, хирургическим вмешательством, радиационным облучением и химиотерапией). Ингибирование CD73 эффективно комбинировать со схемами химиотерапии. В некоторых случаях представляется возможным снижение дозы вводимого химиотерапевтического реагента (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 53015304). Примером такой комбинации является антитело к CD73 в комбинации с декарбазином для лечения меланомы. Другим примером таких комбинаций является антитело к CD73 в комбинации с интерлейкином-2 (IL-2) для лечения меланомы. Научным обоснованием комбинированного применения ингибирования CD73 и химиотерапии является то, что гибель клеток, которая является следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна приводить в результате к повышенным уровням опухолевого антигена в рамках пути презентирования антигена. Другими методами комплексной терапии, которые могут приводить в результате к синергии с ингибированием CD73 вследствие гибели клеток, являются радиационное облучение, хирургическое вмешательство и выключение эндокринной функции. При каждом из этих протоколов создается источник опухолевого антигена у хозяина. Также с ингибированием CD73 можно комбинировать ингибиторы ангиогенеза. Ингибирование ангиогенеза ведет к гибели опухолевых клеток, что может поставлять опухолевый антиген в пути презентирования антигена у хозяина.
Еще один пример такой комбинации представляет собой антитело к CD73 в комбинации с антителом к CD39, антителом к A2AR или химическим ингибитором или с антителом к A2BR или химическим ингибитором. Научным обоснованием комбинированного применения ингибирования CD73 и ингибирования CD39, A2AR или A2BR является то, что эти белки также связаны с биологической функцией CD73 и передачей сигнала с его участием. В частности, CD39 катализирует превращение АТР или ADP в AMP, таким образом обеспечивая субстрат (AMP) для ферментативной активности CD73 (т.е. превращения AMP в аденозин). Более того, аденозин является лигандом для четырех известных рецепторов, в том числе AIR, A2AR, A2BR и A3. Было показано, что A2AR и A2BR регулируют пролиферацию, рост, миграцию и метастазирование опухолевых клеток, а также активацию Т-клеток в опухолевом окружении посредством передачи сигнала с участием сАМР.
Антитела к CD73, описанные в данном документе, также можно применять в комбинации с биспецифичными антителами, которые целенаправленно воздействуют на экспрессирующие Fca- или Fcy-рецептор эффекторные клетки среди опухолевых клеток (см., например, патенты США № 5922845 и № 5837243). Биспецифичные антитела можно применять для целенаправленного воздействия на два отдельных антигена. Например, биспецифичные антитела к Fc-рецептору/опухолевому антигену (например, Her-2/neu) применялись для направления макрофагов к сайтам опухоли. Такое целенаправленное воздействие может более эффективно активировать опухолеспецифичные реакции. В качестве альтернативы, антиген можно доставлять непосредственно в DC при использовании биспецифичных антител, которые связываются с опухолевым антигеном и маркером клеточной поверхности, специфичным для дендритных клеток.
Опухоли ускользают от иммунологического надзора хозяина посредством обширного ряда механизмов. Многие из этих механизмов можно преодолеть путем инактивации белков, которые экспрессируются опухолями и которые являются иммунодепрессивными. Они включают в себя, среди прочих, TGF-P (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200), и Fas лиганд (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Антитела к каждой из этих молекул можно применять в комбинации с антителами к CD73 для противодействия эффектам иммунодепрессивного средства и поддержки иммунным реакциям против опухоли у хозяина.
Другие антитела, которые активируют иммунологическую реактивность у хозяина можно применять в комбинации с антителами к CD73. Они включают в себя молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют функцию DC и презентирование антигена. Антитела к CD40 способны эффективно заменять хелперную активность Т-клеток (Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478), и их можно применять в сочетании с антителами к CD73. Активирующие антитела к костимулирующим молекулам для Т-клеток, таким как ОХ-40 (Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997) и ICOS (Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262266) также могут обеспечивать повышенные уровни активации Т-клеток. Ингибиторы PD1, PD-L1 или CTLA-4 (например, патент США № 5811097) также можно применять в сочетании с антителом к CD73.
Другие способы, описанные в данном документе, применяют для лечения пациентов, которые подверглись действию конкретных токсинов или патогенов. Соответственно, в соответствии с еще одним аспектом, описанным в данном документе, предполагается способ лечения инфекционного заболевания у субъекта, предусматривающий введение субъекту антитела к CD73 или его антигенсвязывающей части, в результате чего осуществляется лечение инфекционного заболевания у субъекта. В качестве дополнения или альтернативы, антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело.
Во всех из вышеуказанных способов ингибирования CD73 можно комбинировать с другими формами иммунотерапии, такими как лечение цитокинами (например, интерферонами, GM-CSF, G-CSF, IL-2), или терапия биспецифичными антителами, которая обеспечивает усиленное презентирование опухолевых антигенов (см., например, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123).
Методы комплексной терапии
В дополнение к представленным выше методам комплексной терапии антитела к CD73, описанные в данном документе, также можно применять в комплексной терапии, например, для лечения злокачественной опухоли, как описано ниже.
В данном документе дополнительно представлены способы комплексной терапии, при которых антитело к CD73 вводят совместно с одним или несколькими дополнительными средствами, например, антителами, которые являются эффективными при стимуляции иммунных реакций, таким образом дополнительно усиливая, стимулируя или повышая иммунные реакции у субъекта.
Обычно, антитело к CD73, описанное в данном документе, можно комбинировать с (i) агонистом костимулирующего рецептора и/или (ii) антагонистом ингибирующего сигнала на Т-клетках, оба из которых приводят в результате к усилению антигенспецифических Т-клеточных реакций (регуляторы иммунных контрольных точек). Большинство из костимулирующих и коингибирующих молекул являются членами суперсемейства иммуноглобулинов (IgSF), и антитела к CD73, описанные в данном документе, можно вводить со средством, которое целенаправленно воздействует на член семейства IgSF, повышая иммунную реакцию. Одним важным семейством
мембраносвязанных лигандов, которые связываются с костимулирующими или коингибирующими рецепторами, является семейство В7, которое включает в себя В7-1, В7-2, В7-Н1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), В7-Н2 (ICOS-L), В7-НЗ, В7-Н4, В7-Н5 (VISTA) и В7-Н6. Другим семейством мембраносвязанных лигандов, которые связываются с костимулирующими или коингибирующими рецепторами, является семейство молекул TNF, связывающихся с когнатными членами семейства TNF рецепторов, которые включают в себя CD40 и CD40L, ОХ-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137, GITR, TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn 14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, В CM A, LTpR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, лимфотоксин a/TNFp, TNFR2, TNFa, LTpR, лимфотоксин a lp2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR (см., например, Tansey (2009) Drug Discovery Today 00:1). Активация Т-клеток также регулируется растворимыми цитокинами. Таким образом, антитела к CD73 можно применять в комбинации с (i) антагонистами (или ингибиторами или блокирующими средствами) белков семейства IgSF, или семейства В7, или семейства TNF, которые ингибируют активацию Т-клеток, или антагонистами цитокинов, которые ингибируют активацию Т-клеток (например, IL-6, IL-10, TGF-B, VEGF; "иммунодепрессивные цитокины"), и/или (ii) агонистами стимулирующих рецепторов семейства IgSF, семейства В7 или семейства TNF или цитокинов, которые стимулируют активацию Т-клеток, для стимуляции иммунной реакции, например, для лечения пролиферативных заболеваний, таких как злокачественная опухоль.
Например, Т-клеточные реакции можно стимулировать с помощью комбинации антител к CD73, описанный в данном документе, например, CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf, и одного или нескольких из следующих средств:
(1) антагонист (ингибитор или блокирующее средство) белка, который
ингибирует активацию Т-клеток (например, ингибиторы иммунологических контрольных точек), такого как CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2 и LAG-3, как описано выше, и один из следующих белков: TFM-3, галектин-9, СЕАСАМ-1, BTLA, CD69, галектин-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2В4, CD48, GARP, CD73, PD1H, LAIR1, ТГМ-1,ТГМ-4, CD39.
(2) Агонист белка, который стимулирует активацию Т-клеток, такого как В7-
1, В7-2, CD28, 4-1ВВ (CD137), 4-1BBL, GITR, GITRL, ICOS, ICOS-L, ОХ40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 и CD28H. Иллюстративные средства, которые модулируют один из вышеуказанных белков и которые можно комбинировать с антагонистическими антителами к CD73, например, описанными в данном документе, для лечения злокачественной опухоли, включают в себя: Yervoy(tm) (иплимумаб) или тремелимумаб (для CTLA-4), галиксимаб (для В7.1), BMS-
0 (для PD-1), СТ-011 (для PD-1), МК-3475 (для PD-1), АМР224 (для B7DC), BMS-
1 (для В7-Н1), MPDL3280A (для В7-Н1), MEDI-570 (для ICOS), AMG557 (для В7Н2), MGA271 (для В7НЗ), ГМР321 (для LAG-3), BMS-663513 (для CD137), PF-05082566 (для CD137), CDX-1127 (для CD27), антитело к ОХ40 (Providence Health Services), huMAbOX40L (для OX40L), атацицепт (для TACI), СР-870893 (для CD40), лукатумумаб (для CD40), дацетузумаб (для CD40), муромонаб-СБЗ (для CD3), ипилумумаб (для CTLA-4).
Другие молекулы, которые можно комбинировать с антагонистическими антителами к CD73 для лечения злокачественной опухоли, включают в себя антагонисты ингибирующих рецепторов на NK-клетках или агонисты активирующих рецепторов на NK-клетках. Например, антагонистические антитела к CD73 можно комбинировать с антагонистами КЖ (например, лирилумабом).
Активация Т-клеток также регулируется растворимыми цитокинами, и антитела к CD73 можно вводить субъекту, например, имеющему злокачественную опухоль, с антагонистами цитокинов, которые ингибируют активацию Т-клеток, или агонистами цитокинов, которые стимулируют активацию Т-клеток.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитела к CD73 можно применять в комбинации с (i) антагонистами (или ингибиторами или блокирующими средствами) белков семейства IgSF, или семейства В7, или семейства TNF, которые ингибируют активацию Т-клеток, или антагонистами цитокинов, которые ингибируют активацию Т-клеток (например, IL-6, IL-10, TGF-B, VEGF; "иммунодепрессивные цитокины"), и/или (ii) агонистами стимулирующих рецепторов семейства IgSF, семейства В7 или семейства TNF или цитокинов, которые стимулируют активацию Т-клеток, для
стимуляции иммунной реакции, например, для лечения пролиферативных заболеваний, таких как злокачественная опухоль.
Другие дополнительные средства для методов комплексной терапии включают в себя средства, которые ингибируют или сокращают количество макрофагов или моноцитов, в том числе без ограничения антагонисты CSF-1R, такие как антагонистические антитела к CSF-1R, в том числе RG7155 (W011/70024, W011/107553, W011/131407, W013/87699, W013/119716, WO13/132044) или FPA-008 (W011/140249; W013169264; WO14/036357).
Антитела к CD73 также можно вводить со средствами, которые ингибируют передачу сигнала с участием TGF-p.
Дополнительные средства, которые можно комбинировать с антителом к CD73, включают в себя средства, которые усиливают презентирование опухолевых антигенов, например, вакцины на основе дендритных клеток, секретирующие GM-CSF клеточные вакцины, CpG-олигонуклеотиды и имиквимод, или терапевтические средства, которые усиливают иммуногенность опухолевых клеток (например, антрациклины).
Кроме того, другие терапевтические средства, которые можно комбинировать с антителом к CD73, включают в себя терапевтические средства, которые сокращают количество Treg клеток или блокируют их, например, средство, которое специфично связывается с CD25.
Еще одним терапевтическим средством, которое можно комбинировать с антителом к CD73, является терапевтическое средство, которое ингибирует метаболический фермент, такой как индоламиндиоксигеназа (ГГЮ), диоксигеназа, аргиназа или синтетаза оксида азота.
Другой класс средств, которые можно применять с антителом к CD73, включает в себя средства, которые ингибируют образование аденозина или ингибируют аденозиновый А2А-рецептор.
Другими терапевтическими средствами, которые можно комбинировать с антителом к CD73 для лечения злокачественной опухоли, включают в себя терапевтические средства, которые обращают/пред отвращают анергию или истощение Т-клеток, и терапевтические средства, которые запускают активацию врожденного иммунитета и/или воспаления в сайте опухоли.
Антитело к CD73 можно комбинировать более чем с одним иммуноонкологическим средством и, например, можно комбинировать с комбинаторным подходом, при котором целенаправленно воздействуют на многие элементы в пути развития иммунной реакции, как например, одно или несколько из следующих: терапевтическое средство, которое усиливает презентирование опухолевых антигенов (например, вакцина на основе дендритных клеток, секретирующие GM-CSF клеточные вакцины, CpG-олигонуклеотиды, имиквимод); терапевтическое средство, которое ингибирует отрицательную иммунную регуляцию, например, посредством ингибирования пути CTLA-4 и/или PD1/PD-L1/PD-L2 и/или сокращения количества или блокирования Treg или других иммуносупрессорных клеток; терапевтическое средство, которое стимулирует положительную иммунную регуляцию, например, с использование агонистов, которые стимулируют путь CD-13 7, ОХ-40 и/или GITR и/или стимулируют эффекторную функцию Т-клеток; терапевтическое средство, которое системно повышает встречаемость противоопухолевых Т-клеток; терапевтическое средство, которое сокращает количество Treg или ингибирует их, таких как Treg в опухоли, например, с использованием антагониста CD25 (например, даклизумаба) или путем сокращения количества ex vivo с использованием гранул со связанным антителом к CD25; терапевтическое средство, которое воздействует на функционирование супрессорных миелоидных клеток в опухоли; терапевтическое средство, которое усиливает иммуногенность опухолевых клеток (например, антрациклины); адоптивный перенос Т-клеток или NK-клеток, в том числе генетически модифицированных клеток, например, клеток, модифицированных химерными антигенными рецепторами (CAR-T терапия); терапевтическое средство, которое ингибирует метаболический фермент, такой как индоламиндиоксигеназу (ПЮ), диоксигеназу, аргиназу или синтетазу оксида азота; терапевтическое средство, которое обращает/пред отвращает анергию или истощение Т-клеток; терапевтическое средство, которое запускает активацию врожденного иммунитета и/или воспаления в сайте опухоли; введение иммуностимулирующих цитокинов; или блокирование иммунодепрессивных цитокинов.
Обычно антитела к CD73, описанные в данном документе, можно применять вместе с одним или несколькими из агонистических средств, которые связываются в качестве лиганда с положительно действующими костимулирующими рецепторами, блокирующих
средств, которые ослабляют передачу сигнала через ингибирующие рецепторы, антагонистов и одного или нескольких средств, которые системно повышают встречаемость противоопухолевых Т-клеток, средств, которые ослабляют определенные иммунодепрессивные пути в опухолевом микроокружении (например, блокируют захват ингибирующего рецептора (например, взаимодействия PD-L1/PD-1), сокращают количество Treg или ингибируют их (например, с использованием моноклонального антитела к CD25 (например, даклизумаба) или путем сокращения количества ex vivo с использованием гранул со связанным антителом к CD25), ингибируют метаболические ферменты, такте как ШО, или обращают/пред отвращают анергию или истощение Т-клеток), и средств, которые запускают активацию врожденного иммунитета и/или воспаления в сайтах опухолей. Повышенная интернализация ингибирующих рецепторов может обуславливать более низкий уровень потенциального ингибитора (при условии, что передача сигнала не происходит).
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят субъекту вместе с ингибитором BRAF, если субъект является положительным по мутации BRAF V600.
В данном документе представлены способы стимуляции иммунной реакции у субъекта, предусматривающие введение субъекту антагонистической молекулы по отношению к CD73, например, антитела, и одного или нескольких дополнительных иммуностимулирующих антител, таких как антагонист по отношению к PD-1, например, антагонистическое антитело, антагонист по отношению к PD-L1, например, антагонистическое антитело, антагонист по отношению к CTLA-4, например, антагонистическое антитело, и/или антагонист по отношению к LAG3, например, антагонистическое антитело, в результате чего стимулируется иммунная реакция у субъекта, например, для ингибирования опухолевого роста или для стимуляции противовирусной реакции. В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту вводят антагонистическое антитело к CD73 и антагонистическое антитело к PD-1. В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту вводят антагонистическое антитело к CD73 и антагонистическое антитело к PD-L1. В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту вводят антагонистическое антитело к CD73 и антагонистическое антитело к CTLA-4. В соответствии с одним вариантом осуществления
антитело к CD73 представляет собой человеческое антитело, такое как антитело, описанное в данном документе. В качестве альтернативы, антитело к CD73 может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из мышиного mAb к CD73), такое как антитела, дополнительно описанные в данном документе. В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело (например, антагонистическое антитело к PD-1, антагонистическое антитело к PD-L1, антагонистическое антитело к CTLA-4 и/или антагонистическое антитело к LAG3) представляет собой человеческое антитело. В качестве альтернативы, по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из мышиного антитела к PD-1, антитела к PD-L1, антитела к CTLA-4 и/или антитела к LAG3).
В данном документе предполагаются способы лечения гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли), предусматривающие введение субъекту антагонистического антитела к CD73 и антагонистического антитела к PD-1. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят в субтерапевтической дозе, антитело к PD-1 вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. Также в данном документе предполагаются способы изменения неблагоприятного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания с использованием иммуностимулирующего средства, предусматривающий введение субъекту антитела к CD73 и субтерапевтической дозы антитела к PD-1. В соответствии с определенными вариантами осуществления субъект представляет собой человека. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD-1 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, и антитело к CD73 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как антитело, содержащее CDR или вариабельные участки 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11, 7А11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 или CD73.11, описанных в данном документе, или другое антагонистическое антитело к CD73, описанное в данном документе.
Подходящие антагонисты PD-1 для применения в способах, описанных в данном документе, включают в себя без ограничения лиганды, антитела (например, моноклональные антитела и биспецифичные антитела) и мультивалентные средства. В соответствии с одним вариантом осуществления антагонист PD-1 представляет собой слитый белок, например, Fc-слитый белок, такой как AMP-244. В соответствии с одним вариантом осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело к PD-1 или антитело к PD-L1.
Иллюстративным антителом к PD-1 является ниволумаб (BMS-936558) или антитело, которое содержит CDR или вариабельные участки из одного из антител 17D8, 2D3, 4Н1, 5С4, 7D3, 5F4 и 4А11, описанных в международной заявке WO 2006/121168. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD1 представляет собой МК-3475 (ламбролизумаб), описанное в международной заявке WO 2012/145493; АМР-514, описанное в международной заявке WO 2012/145493; и СТ-011 (пидилизумаб; ранее известный как CT-AcTibody или ВАТ; см., например, Rosenblatt et al. (2011) J. Immunotherapy 34:409). Дополнительные известные антитела к PD-1 и другие ингибиторы PD-1 включают в себя описанные в международных заявках WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, патентах США № 7635757 и № 8217149 и публикации заявки на патент США № 2009/0317368. Можно применять любое из антител к PD-1, раскрытых в международной заявке WO2013/173223. Антитело к PD-1, которое конкурирует за связывание с одним из этих антител и/или связывается с тем же эпитопом на PD-1, что и одно из этих антител, также можно применять в методах комплексного лечения.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD-1 связывается с человеческим PD-1 с KD, составляющей 5> <10~8М или менее, связывается с человеческим PD-1 с KD, составляющей 1> <10~8М или менее, связывается с человеческим PD-1 с KD, составляющей 5> <10~9М или менее, или связывается с человеческим PD-1 с KD, составляющей от 1 х 10~8 М до 1 х 10"10 М или менее.
В данном документе предполагаются способы лечения гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли), предусматривающие введение субъекту антагонистического антитела к CD73 и антагонистического антитела к PD-L1. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят в
субтерапевтической дозе, антитело к PD-L1 вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В данном документе представлены способы изменения неблагоприятного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания с использованием иммуностимулирующего средства, предусматривающие введение субъекту антитела к CD73 и субтерапевтической дозы антитела к PD-L1. В соответствии с определенными вариантами осуществления субъект представляет собой человека. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD-L1 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, и антитело к CD73 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как антитело, содержащее CDR или вариабельные участки 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11, 7А11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 или CD73.11, описанных в данном документе, или другое антагонистическое антитело к CD73, описанное в данном документе.
В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к PD-L1 представляет собой BMS-936559 (называемое 12А4 в международной заявке WO 2007/005874 и патенте США № 7943743) или антитело, которое содержит CDR или вариабельные участки 3G10, 12А4, 10А5, 5F8, 10Н10, 1В12, 7Н1, 11Е6, 12В7 и 13G4, которые описаны в РСТ публикации международной заявки WO 07/005874 и патенте США № 7943743. В соответствии с определенным вариантом осуществления антитело к PD-L1 представляет собой MEDI4736 (также известное как антитело к В7-Н1) или MPDL3280A (также известное как RG7446). Также можно применять любое из антител к PD-L1, раскрытых в международных заявках WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, патентах США № 7635757 и № 8217149 и публикации заявки на патент США № 2009/145493. Антитела к PD-L1, которые конкурируют с любым из этих антител и/или связываются с тем же эпитопом, что и любое из этих антител, также можно применять в методах комплексного лечения.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD-L1 связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 5> <10~8М или менее, связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей 1> <10~8М или менее, связывается с человеческим
PD-L1 с KD, составляющей 5> <10~9M или менее, или связывается с человеческим PD-L1 с KD, составляющей от 1 х 10~8 М до 1х 10~10 М или менее.
В данном документе представлены способы лечения гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли), предусматривающие введение субъекту антитела к CD73, описанного в данном документе, и антагонистического антитела к CTLA-4. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят в субтерапевтической дозе, антитело к CTLA-4 вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В данном документе представлены способы изменения неблагоприятного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания с использованием иммуностимулирующего средства, предусматривающие введение субъекту антитела к CD73 и субтерапевтической дозы антитела к CTLA-4. В соответствии с определенными вариантами осуществления субъект представляет собой человека. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CTLA-4 представляет собой антитело, выбранное из группы: Yervoy(tm) (ипилимумаб или антитело 10D1, описанное в РСТ публикации международной заявки WO 01/14424), тремелимумаб (ранее трицилимумаб, СР-675,206), моноклональное антитело или антитело к CTLA-4, описанное в любой из следующих публикаций: международные заявки WO 98/42752; WO 00/37504; патент США № 6207156; Hurwitz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(17):10067-10071; Camacho et al. (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505 (антитело CP-675206); и Mokyr et al. (1998) Cancer Res. 58:5301-5304. Можно применять любое из антител к CTLA-4, раскрытых в международной заявке WO2013/173223.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CTLA-4 связывается с человеческим CTLA-4 с KD, составляющей 5> <10~8М или менее, связывается с человеческим CTLA-4 с KD, составляющей 1> <10~8М или менее, связывается с человеческим CTLA-4 с KD, составляющей 5> <10~9М или менее, или связывается с человеческим CTLA-4 с KD, составляющей от 1> <10~8М до 1> <10~10М или менее.
В данном документе представлены способы лечения гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли), предусматривающие введение субъекту антитела к CD73 и антитела к LAG-3. В соответствии с дополнительными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят в субтерапевтической дозе, антитело к
LAG-3 вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В данном документе представлены способы изменения неблагоприятного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания с использованием иммуностимулирующего средства, предусматривающие введение субъекту антитела к CD73 и субтерапевтической дозы антитела к LAG-3. В соответствии с определенными вариантами осуществления субъект представляет собой человека. В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к PD-1 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, и антитело к CD73 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как антитело, содержащее CDR или вариабельные участки 11F11, 4СЗ, 4D4, 10D2, 11А6, 24Н2, 5F8, 6Е11, 7А11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 или CD73.11, или другое антагонистическое антитело к CD73, описанное в данном документе. Примеры антител к LAG3 включают в себя антитела, содержащие CDR или вариабельные участки из антител 25F7, 26Н10, 25ЕЗ, 8В7, 11F2 или 17Е5, которые описаны в публикации заявки на патент США № 2011/0150892 и в международной заявке WO2014/008218. В соответствии с одним вариантом осуществления антитело к LAG-3 представляет собой BMS-986016. Другие принятые в уровне техники антитела к LAG-3, которые можно применять, включают в себя EVIP731, описанные в заявке на патент США № 2011/007023. Так можно использовать IMP-321. Антитела к LAG-3, которые конкурируют с любым из этих антител и/или связываются с тем же эпитопом, что и любое из этих антител, также можно применять в методах комплексного лечения.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к LAG-3 связывается с человеческим LAG-3 с KD, составляющей 5x10~8 М или менее, связывается с человеческим LAG-3 с KD, составляющей 1хЮ~8М или менее, связывается с человеческим LAG-3 с KD, составляющей 5хЮ~9М или менее, или связывается с человеческим LAG-3 с KD, составляющей от 1 х Ю~8 М до 1х 10~10 М или менее.
В соответствии с определенными вариантами осуществления антитело к CD73 вводят вместе с агонистическим антителом к GITR, например, антителом, имеющим последовательности CDR из 6С8, например, гуманизированным антителом, имеющим CDR из 6С8, как описано, например, в международной заявке WO2006/105021; антителом, содержащим CDR из антитела к GITR, описанного в международной заявке
WO2011/028683; антителом, содержащим CDR из антитела к GITR, описанного в японской патентной заявке JP2008278814; или антителом, содержащим CDR из антитела к GITR, описанного патентном документе PCT/US2015/03 3991.
Введение антител к CD73, описанных в данном документе, и антагонистов, например, антагонистических антител, одного или нескольких вторых антигенов-мишеней, таких как LAG-3, и/или CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, может усилить иммунную реакцию в отношении злокачественных клеток у пациента. Злокачественные опухоли, чей рост можно ингибировать с применением антител согласно настоящему раскрытию, включают в себя злокачественные опухоли, как правило, восприимчивые к иммунотерапии. Типичные примеры злокачественных опухолей для лечения с использованием комплексной терапии в соответствии с настоящим раскрытием включают в себя те злокачественные опухоли, которые специально перечислены выше при обсуждении монотерапии антителами к CD73.
В соответствии с определенными вариантами осуществления комбинацию терапевтических антител, обсуждаемых в данном документе, можно вводить одновременно в виде одной композиции в фармацевтически приемлемом носителе или одновременно в виде отдельных композиций с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе. В соответствии с другим вариантом осуществления комбинацию терапевтических антител можно вводить последовательно. Например, антитело к CTLA-4 и антитело к CD73 можно вводить последовательно, как например, антитело к CTLA-4 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, или антитело к CD73 вводят первым, а антитело к CTLA-4 - вторым. В качестве дополнения или альтернативы, антитело к PD-1 и антитело к CD73 можно вводить последовательно, как например, антитело к PD-1 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, или антитело к CD73 вводят первым, а антитело к PD-1 - вторым. В качестве дополнения или альтернативы, антитело к PD-L1 и антитело к CD73 можно вводить последовательно, как например, антитело к PD-L1 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, или антитело к CD73 вводят первым, а антитело к PD-L1 -вторым. В качестве дополнения или альтернативы, антитело к LAG-3 и антитело к CD73 можно вводить последовательно, как например, антитело к LAG-3 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, или антитело к CD73 вводят первым, а антитело к LAG-3 -вторым.
Более того, если более чем одну дозу в ходе комплексной терапии вводят последовательно, порядок последовательного введения можно сменить на обратный или же сохранять тот же порядок при каждом моменте введения, последовательные введения можно комбинировать с одновременными введениями или любой их комбинацией. Например, первое введение комбинации антитела к CTLA-4 и антитела к CD73 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причем антитело к CTLA-4 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, и третье введение может быть последовательным, примем антитело к CD73 вводят первым, а антитело к CTLA-4 -вторым, и т.д. В качестве дополнения или альтернативы, первое введение комбинации антитела к PD-1 и антитела к CD73 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причем антитело к PD-1 вводят первым, а антитело к CD73 -вторым, и третье введение может быть последовательным, причем антитело к CD73 вводят первым, а антитело к PD-1 - вторым, и т.д. В качестве дополнения или альтернативы, первое введение комбинации антитела к PD-L1 и антитела к CD73 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причем антитело к PD-L1 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, и третье введение может быть последовательным, причем антитело к CD73 вводят первым, а антитело к PD-L1 - вторым, и т.д. В качестве дополнения или альтернативы, первое введение комбинации антитела к LAG-3 и антитела к CD73 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причем антитело к LAG-3 вводят первым, а антитело к CD73 - вторым, и третье введение может быть последовательным, причем антитело CD73 вводят первым, а антитело к LAG-3 - вторым, и т.д. Другой типичный режим дозирования может включать первое введение, которое является последовательным, причем антитело к CD73 вводят первым, а антитело к CTLA-4 (и/или антитело к PD-1, и/или антитело к PD-L1, и/или антитело к LAG-3) - вторым, а последующие введения могут быть одновременными.
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой агонист CD 137 (4-1ВВ), такой как
агонистическое антитело к CD 137. Подходящие антитела к CD137 включают в себя, например, урелумаб или PF-05082566 (W012/32433).
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой агонист ОХ40, такой как агонистическое антитело к ОХ40. Подходящие антитела к ОХ40 включают в себя, например, MEDI-6383, MEDI-6469 или MOXR0916 (RG7888; WO06/029879).
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой агонист CD40, такой как агонистическое антитело к CD40. В соответствии с определенными вариантами осуществления иммуноонкологическое средство представляет собой антагонист CD40, такой как антагонистическое антитело к CD40. Подходящие антитела к CD40 включают в себя, например, лукатумумаб (HCD122), дацетузумаб (SGN-40), СР-870,893 или Chi Lob 7/4.
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой агонист CD27, такой как агонистическое антитело к CD27. Подходящие антитела к CD27 включают в себя, например, варлилумаб (CDX-1127).
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой MGA271 (для В7НЗ) (W011/109400).
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой антагонист КЖ, такой как лирилумаб.
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой антагонист ШО. Подходящие антагонисты ШО включают в себя, например, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), индоксимод, NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, W011/56652, W012/142237) или F001287.
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой агонист Toll-подобного рецептора, например, агонист TLR2/4 (например, бацилла Кальмета-Герена); агонист TLR7 (например, хилтонол или имиквимод); агонист TLR7/8 (например, резиквимод) или агонист TLR9 (например, CpG7909).
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, имеющий заболевание, на которое может оказывать благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы, например, злокачественную опухоль или инфекционное заболевание, получает лечение путем введения субъекту иммуноонкологического средства и антитела к CD73, причем иммуноонкологическое средство представляет собой ингибитор TGF-P, например, GC1008, LY2157299, TEW7197 или ГМС-TRl.
В соответствии с одним аспектом антитело к CD73 вводят последовательно перед введением второго средства, например, иммуноонкологического средства. В соответствии с одним аспектом антитело к CD73 вводят одновременно со вторым средством, например,
иммуноонкологическим средством. В соответствии с еще одним аспектом антитело к CD73 вводят последовательно после введения второго средства. Введение двух средств может начинаться в моменты времени, которые разделены, например, 30 минутами, 60 минутами, 90 минутами, 120 минутами, 3 часами, 6 часами, 12 часами, 24 часами, 36 часами, 48 часами, 3 сутками, 5 сутками, 7 сутками или одной или несколькими неделями, или введение второго средства может начинаться, например, через 30 минут, 60 минут, 90 минут, 120 минут, 3 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 36 часов, 48 часов, 3 суток, 5 суток, 7 суток или одну или несколько недель после того, как было введено первое средство.
В соответствии с определенными аспектами антитело к CD73 и второе средство, например, иммуноонкологическое средство, вводят пациенту одновременно, например, вводят одновременно посредством инфузии, например, в течение периода, составляющего 30 или 60 минут. Антитело к CD73 можно составить совместно со вторым средством, например, иммуноонкологическим средством.
Необязательно, антитело к CD73 в виде отдельного иммунотерапевтического средства или комбинации антитела к CD73 и одного или нескольких дополнительных иммунотерапевтических антител (например, блокада антитела к CTLA-4, и/или антитела к PD-1, и/или антитела к PD-L1, и/или антитела к LAG-3) можно дополнительно комбинировать с иммуногенным средством, таким как злокачественные клетки, очищенные опухолевые антигены (в том числе рекомбинантные белки, пептиды и углеводные молекулы), клетки и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (Не et al. (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Неограничивающие примеры противоопухолевых вакцин, которые можно использовать, включают в себя пептиды из антигенов меланомы, такие как пептиды gplOO, антигены MAGE, Trp-2, MART1 и/или тирозиназы, или опухолевые клетки, трансфицированные для экспрессии цитокина GM-CSF (дополнительно обсуждаются ниже). Ингибирование CD73 в комбинации с одним или несколькими дополнительными антителами (например, блокада CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3) можно дополнительно комбинировать со стандартными методами лечения злокачественных опухолей. Например, ингибирование CD73 в комбинации с одним или несколькими дополнительными антителами (например, блокада CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3) можно эффективно комбинировать с химиотерапевтическими схемами. В этих случаях представляется
возможным снижение дозы другого химиотерапевтического реагента, вводимого с комбинацией согласно настоящему раскрытию (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Примером такой комбинации является комбинация антагонистического антитела к CD73 с дополнительным антителом или без дополнительного антитела, такого как антитела к CTLA-4, и/или антитела к PD-1, и/или антитела к PD-L1, и/или антитела к LAG-3, и дополнительного декарбазина для лечения меланомы. Другим примером является комбинация антитела к CD73 с антителами к CTLA-4, и/или антителами к PD-1, и/или антителами к PD-L1, и/или антителами к LAG-3 или без них и дополнительного интерлейкина-2 (IL-2) для лечения меланомы. Научным обоснованием комбинированного применения ингибирования CD73 и блокады CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3 с химиотерапией является то, что гибель клеток, которая является следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна приводить в результате к повышенным уровням опухолевого антигена в рамках пути презентирования антигена. Другие методы комплексной терапии, которые могут приводить в результате к синергизму с ингибированием CD73 в комбинации с блокадой CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3 или без такой блокады вследствие гибели клеток, включают в себя радиационное облучение, хирургическое вмешательство или выключение эндокринной функции. При каждом из этих протоколов создается источник опухолевого антигена у хозяина. Ингибиторы ангиогенеза также можно комбинировать с ингибированием CD73 в комбинации с блокадой CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3. Ингибирование ангиогенеза ведет к гибели опухолевых клеток, которые могут быть источником направления опухолевого антигена в пути презентирования антигена у хозяина.
Антагонистическое антитело к CD73 в качестве отдельного иммунотерапевтического средства или комбинацию антагонистических в отношении CD73 и блокирующих CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3 антител можно применять в комбинации с биспецифичными антителами, которые нацеливают экспрессирующие Fca- или Fcy-рецептор эффекторные клетки на опухолевые клетки (см., например, патенты США № 5922845 и № 5837243). Биспецифичные антитела можно применять для целенаправленного воздействия на два отдельных антигена. Т-клеточное звено в этих реакциях будет
дополняться применением комбинированного ингибирования CD73 и блокады CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3.
В другом примере антагонистическое антитело к CD73 в виде отдельного иммунотерапевтического средства или комбинацию антитела к CD73 и дополнительного иммуностимулирующего средства, например, антитела к CTLA-4, и/или антитела к PD-1, и/или антитела к PD-L1, и/или средства, воздействующего на LAG-3, например, антитела, можно применять в сочетании с антителом к злокачественным новообразованиям, таким как Rituxan(r) (ритуксимаб), Herceptin(r) (трастузумаб), Веххаг(r) (тоситумомаб), Zevalin(r) (ибритумомаб), Campath(r) (алемтузумаб), Lymphocide(r) (эпртузумаб), Avastin(r) (бевацизумаб) и Tarceva(r) (эрлотиниб) и т.п. В качестве примера, и не вдаваясь в теорию, лечение использованием антитела к злокачественной опухоли или антитела к злокачественной опухоли, конъюгированного с токсином, может вести к гибели клеток злокачественной опухоли (например, опухолевых клеток), которая будет усиливать иммунную реакцию, опосредованную иммуностимулирующим средством, например, средством, воздействующим на CD73, CTLA-4, PD-1, PD-L1 или LAG-3, например, антителом. В соответствии с иллюстративным вариантом осуществления лечение гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли) может включать в себя противораковое средство, например, антитело, в комбинации с антителом к CD73 и необязательно дополнительное иммуностимулирующее средство, например, средство, противодействующее CTLA-4, и/или противодействующее PD-1, и/или противодействующее PD-L1, и/или противодействующее LAG-3, например, антитело, одновременно или последовательно или любую их комбинацию, которая может усиливать противоопухолевые иммунные реакции у хозяина.
Опухоли ускользают от иммунологического надзора хозяина посредством обширного ряда механизмов. Многие из этих механизмов можно преодолеть путем инактивации белков, которые экспрессируются опухолями и которые являются иммунодепрессивными. Они включают в себя, среди прочих, TGF-P (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200), и Fas лиганд (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Антитела к каждой из этих молекул можно дополнительно комбинировать с антителом к CD73 с дополнительным иммуностимулирующим средством или без дополнительного иммуностимулирующего
средства, например, средства, противодействующего CTLA-4, и/или противодействующего PD-1, и/или противодействующего PD-L1, и/или противодействующего LAG-3, такого как антитело, для противодействия эффектам иммунодепрессивных средств и поддержки иммунным реакциям против опухоли у хозяина.
Другие средства, например, антитела, которые можно применять для активации иммунологической реактивности у хозяина можно также применять в комбинации с антителом к CD73 с дополнительным иммуностимулирующим средством или без дополнительного иммуностимулирующего средства, такого как антитело к CTLA-4, и/или антитело к PD-1, и/или антитело к PD-L1, и/или антитело к LAG-3. Они включают в себя молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют функцию DC и презентирование антигена. Антитела к CD40 (Ridge et al., выше) можно применять в сочетании с антителом к CD73 и необязательно с дополнительным иммуностимулирующим средством, например, средством, противодействующим CTLA-4, и/или противодействующим PD-1, и/или противодействующим PD-L1, и/или противодействующим LAG-3, например, антителом. Другие активирующие антитела к костимулирующим молекулам Т-клеток, Weinberg et al., выше, Melero et al. выше, Hutloff et al., выше, также можно обеспечивать для повышенных уровней активации Т-клеток.
Как обсуждалось выше, в настоящее время трансплантацию костного мозга применяют для лечения ряда опухолей гемопоэтического происхождения. Иммунотерапию антителом к CD73 самим по себе или в комбинации с блокадой CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3 можно применять для повышения эффективности пересаженных от донора опухолеспецифичных Т-клеток.
Несколько экспериментальных лечебных протоколов, которые включают ex vivo активацию и разращивание антигенспецифичных Т-клеток и адоптивный перенос этих клеток реципиентам для получения антигенспецифичных Т-клеток против опухоли (Greenberg & Riddell, выше). Эти способы также можно применять для активации Т-клеточных реакций в отношении инфекционных агентов, таких как CMV. Можно ожидать, что ex vivo активация в присутствии антитела к CD73 с дополнительным иммуностимулирующим терапевтическим средством или без дополнительного терапевтического иммуностимулирующего средства, например, антител к CTLA-4, и/или
антител к PD-1, и/или антител к PD-L1, и/или антител к LAG-3, повышает встречаемость и активность подвергнутых адоптивному переносу Т-клеток.
В данном документе предполагаются способы изменения неблагоприятного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания (например, злокачественной опухоли) с использованием иммуностимулирующего средства, предусматривающий введение субъекту антитела к CD73 с субтерапевтической дозой средства, противодействующего CTLA-4, и/или противодействующего PD-1, и/или противодействующего PD-L1, и/или противодействующего LAG-3, например, антитела, или без нее. Например, способы, описанные в данном документе, предполагают способ снижения частоты возникновения колита или диареи, вызванных иммуностимулирующим терапевтическим антителом, посредством введения пациенту непоглощаемого стероида. Как используется в данном документе, "непоглощаемый стероид" представляет собой глюкокортикоид, для которого проявляется значительный пресистемный метаболизм таким образом, что после метаболизма в печени биодоступность стероида является низкой, т.е. составляет менее приблизительно 20%. В соответствии с одним вариантом осуществления, описанным в данном документе, непоглощаемый стероид представляет собой будесонид. Будесонид является локально действующим глюкокортикостероидом, который значительно метаболизируется, преимущественно печенью, после перорального введения. ENTOCORT ЕС(r) (Astra-Zeneca) представляет собой рН-зависимый и зависимый от времени пероральный состав будесонида, разработанный для оптимизации доставки лекарственного средства в подвздошную кишку и по толстой кишке. ENTOCORT ЕС(r) одобрен в США для лечения болезни Крона со степенью тяжести от легкой до умеренной, затрагивающей подвздошную кишку и/или восходящую ободочную кишку. Обычная пероральная доза ENTOCORT ЕС(r) для лечения болезни Крона составляет 6-9 мг/сутки. ENTOCORT ЕС(r) высвобождается в кишечнике до поглощения и удерживается в слизистой кишки. После того как он проходит через являющуюся мишенью ткань слизистой кишки, ENTOCORT ЕС(r) значительно метаболизируется системой цитохрома Р450 в печени в метаболиты с пренебрежимо малой глюкокортикоид ной активностью. Вследствие этого биодоступность является низкой (приблизительно 10%). Низкая биодоступность будесонида приводит в результате к улучшенному терапевтическому индексу по сравнению с другими глюкокортикоидами с менее значительным
пресистемным метаболизмом. Будесонид приводит в результате к меньшим неблагоприятным эффектам, в том числе меньшему подавлению гипоталамо-гипофизарной системы, чем системно действующие кортикостероиды. Тем не менее, хроническое введение ENTOCORT ЕС(r) может приводить в результате к системным эффектам глюкокортикоидов, таким как гиперкортицизм и адренальная супрессия. См. PDR 58thed. 2004; 608-610.
В соответствии с дополнительными вариантами осуществления ингибирование CD73 с блокадой или без блокады CTLA-4, и/или PD-1, и/или PD-L1, и/или LAG-3 (т.е. иммуностимулирующими терапевтическими антителами к CD73 и необязательно антителами к CTLA-4, и/или антителами к PD-1, и/или антителами к PD-L1, и/или антителами к LAG-3) в сочетании с непоглощаемым стероидом можно дополнительно комбинировать с салицилатом. Салицилаты включают в себя 5-ASA средства, такие как, например: сульфасалазин (AZULFroiNE(r), Pharmacia & Up John); олсалазин (DIPENTUM(r), Pharmacia & UpJohn); балсалазид (COLAZAL(r), Salix Pharmaceuticals, Inc.); и месаламин (ASACOL(r), Procter & Gamble Pharmaceuticals; PENTASA(r), Shire US; С ANAS A(r), Axcan Scandipharm, Inc.; ROWASA(r), Solvay).
В соответствии со способами, описанными в данном документе, введение салицилата в комбинации с антителом к CD73 с антителами к CTLA-4, и/или антителами к PD-1, и/или антителами к PD-L1, и/или антителами к LAG-3 и непоглощаемым стероидом или без них может включать в себя любое накладывающееся или последовательное введение салицилата и непоглощаемого стероида с целью снижения частоты возникновения колита, вызванного иммуностимулирующими антителами. Таким образом, например, способы снижения частоты возникновения колита, вызванного иммуностимулирующими антителами, описанными в данном документе, охватывают введение салицилата и непоглощаемого стероида одновременно, или последовательно (например, салицилат вводят через 6 часов после непоглощаемого стероида), или в любой их комбинации. Кроме того, салицилат и непоглощаемый стероид можно вводить тем же путем (например, оба вводят перорально) или разными путями (например, салицилат вводят перорально, а непоглощаемый стероид вводят ректально), которые могут отличаться от пути(путей), используемого для введения антитела к CD73 и антител к CTLA-4, и/или антител к PD-1, и/или антител к PD-L1, и/или антител к LAG-3.
Антитела к CD73 и комбинацию терапевтических средств на основе антител, описанных в данном документе, также можно применять в сочетании с другими широко известными терапевтическими средствами, которые выбирают, исходя из их конкретной применимости в отношении показания для лечения (например, злокачественной опухоли). Комбинации антител к CD73, описанных в данном документе, можно применять последовательно с известными фармацевтически приемлемым средством(средствами).
Например, антитела к CD73 и комбинацию терапевтических средств на основе антител, описанных в данном документе, можно применять в комбинации (например, одновременно или раздельно) с дополнительным методом лечения, таким как облучение, химиотерапия (например, с использованием кампотецина (СРТ-11), 5-фторурацила (5-FU), цисплатина, доксорубицина, иринотекана, паклитаксела, гемцитабина, цисплатина, паклитаксела, карбоплатина-паклитаксела (Taxol), доксорубицина, 5-fu или кампотецина + apo21/TRAIL (6-кратное комбинированное применение)), один или несколько ингибиторов протеасомы (например, бортезомиб или MG132), один или несколько ингибиторов Вс1-2 (например, BH3I-2' (bcl-xl ингибитор), ингибитор индоламиндиоксигеназы-1 (Ш01) (например, LNCB24360), АТ-101 (Я-(-)-госсипольное производное), АВТ-263 (малая молекула), GX-15-070 (обатоклакс) или антагонисты MCL-1 (белок дифференцировки клетки миелолейкоза 1)), антагонисты iAP (ингибитор белков апоптоза) (например, smac7, smac4, малая молекула-миметик smac, синтетические пептиды smac (см. Fulda et al., Nat Med 2002;8:808-15), ISIS23722 (LY2181308), или AEG-35156 (GEM-640)), ингибиторы HDAC (гистондеацетилазы), антитела к CD20 (например, ритуксимаб), ингибиторы ангиогенеза (например, бевацизумаб), антиангиогенные средства, целенаправленно воздействующие на VEGF и VEGFR (например, авастин), синтетические тритерпеноиды (см. Hyer et al, Cancer Research 2005;65:4799-808), модуляторы c-FLIP (клеточный белок-ингибитор FLICE) (например, натуральные и синтетические лиганды PPARy (у рецептор, активируемый пролифератором пероксисом), 5809354 или 5569100), ингибиторы киназ (например, сорафениб), трастузумаб, цетуксимаб, темсиролимус, ингибиторы mTOR, такие как рапамицин и темсиролимус, бортезомиб, ингибиторы JAK2, ингибиторы HSP90, ингибиторы PI3K-AKT, леналидомид, ингибиторы GSK3P, ингибиторы LAP и/или генотоксичные лекарственные средства.
Антитела к CD73 и комбинацию терапевтических средств на основе антител, описанных в данном документе, можно дополнительно применять в комбинации с одним или несколькими антипролиферативными цитотоксическими средствами. Классы соединений, которые можно применять в качестве антипролиферативных цитотоксических средств, включают в себя без ограничения следующие.
Алкилирующие средства (в том числе без ограничения азотистые иприты, этилениминовые производные, алкилсульфонаты, нитрозомочевины и триазены): урамустин, хлорметин, циклофосфамид (CYTOXAN(tm)) фосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, пипоброман, триэтиленмеламин, триэтилентиофосфорамин, бусульфан, кармустин, ломустин, стрептозоцин, дакарбазин и темозоломид.
Антиметаболиты (в том числе без ограничения антагонисты фолиевой кислоты, пиримидиновые аналоги, пуриновые аналоги и ингибиторы аденозиндезаминазы): метотрексат, 5-фторурацил, флоксуридин, цитарабин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, флударабин фосфат, пентостатин и гемцитабин.
Подходящие антипролиферативные средства для комбинирования с антагонистическими антителами к CD73, описанными в данном документе, включают в себя без ограничения таксаны, паклитаксел (паклитаксел коммерчески доступен как TAXOL(tm)), доцетаксел, дискодермолид (DDM), диктиостатин (DCT), пелорусид А, эпотилоны, эпотилон А, эпотилон В, эпотилон С, эпотилон D, эпотилон Е, эпотилон F, фураноэпотилон D, дезоксиэпотилон В1, [17]-дегидродезоксиэпотилон В, [18]дегидродезоксиэпотилоны В, С12,13-циклопропил-эпотилон А, С6-С8-мостиковый эпотилон А, транс-9,10-дегидроэпотилон D, цис-9,10-дегидроэпотилон D, 16-дезметилэпотилон В, эпотилон В10, дискодермолид, патупилон (ЕРО-906), KOS-862, KOS-1584, ZK-EPO, ABJ-789, ХАА296А (дискодермолид), TZT-1027 (соблидотин), ILX-651 (тасидотин гидрохлорид), халихондрин В, эрибулин мезилат (Е-7389), гемиастерлин (HTI-286), Е-7974, криптофицины, LY-355703, иммуноконъюгаты с майтанзиноидом (DM-1), МКС-1, АВТ-751, Tl-38067, Т-900607, SB-715992 (испинесиб), SB-743921, МК-0731, STA-5312, элеутеробин, 17-бета-ацетокси-2-этокси-6-оксо-В-гомо-эстра-1,3,5(10)-триен-3-ол, циклостерпин, изолаулималид, лаулималид, 4-эпи-7-дегидрокси-14,16-дидеметил-(+)-дискодермолиды и криптотилон 1 в дополнение к другим средствам, стабилизирующим микротрубочки, известным в уровне техники.
В случаях, когда желательно сделать аберрантно пролиферирующие клетки неактивными совместно с лечением с использованием антител к CD73, описанных в данном документе, или перед ним, гормоны и стероиды (в том числе синтетические аналоги), такие как 17а-этинилэстрадиол, диэтилстильбестрол, тестостерон, преднизон, флуоксиместрон, дромостанолон пропионат, тестолактон, мегестролацетат, метилпреднизолон, метилтестостерон, преднизолон, триамцинолон, хлортрианизен, гидроксипрогестерон, аминоглютетимид, эстрамустин, медроксипрогестеронацетат, леупролид, флутамид, торемифен, ZOLADEX(tm), также можно вводить пациенту. При использовании способов или композиций, описанных в данном документе, в случае необходимости также можно вводить другие средства, применяемые в модулировании роста или метастазирования опухоли в клинических условиях, такие как антимиметики.
Способы безопасного и эффективного введения химиотерапевтических средств известны специалистам в данной области техники. Кроме того, их введение описано в стандартной литературе. Например, введение многих из химиотерапевтических средств описано в Настольном справочнике врача (Physicians' Desk Reference (PDR)), например, редакции 1996 года (Medical Economics Company, Montvale, N.J. 07645-1742, USA); раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки на него.
Химиотерапевтическое средство(средства) и/или лучевая терапия можно назначать в соответствии с терапевтическими протоколами, широко известными в уровне техники. Специалистам в данной области техники будет очевидно, что назначение химиотерапевтического средства(средств) и/или лучевой терапии может изменяться в зависимости от заболевания, подлежащего лечению, и от известных эффектов химиотерапевтического средства(средств) и/или лучевой терапии в отношении данного заболевания. В соответствии со знаниями клинического врача терапевтические протоколы (например, величины дозы и время введения) также можно изменять, принимая во внимание наблюдаемые воздействия вводимых терапевтических средств на пациента и принимая во внимание наблюдаемые реакции заболевания на вводимые терапевтические средства.
Иллюстративные варианты осуществления
1. Выделенное человеческое антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим кластером дифференцировки 73 (CD73) и проявляют одно или несколько из следующих свойств:
(a) ингибируют ферментативную активность CD73;
(b) интернализируются в опухолевые клетки или
(c) связываются с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83 и 157-172 в человеческом CD73.
2. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 1, причем антитело интернализируется в опухолевые клетки с Тш, составляющим не более чем 10 мин. при измерении с помощью анализа вытеснения метки.
3. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 1 или 2, причем антитело связывается с растворимым человеческим CD73 с KD, составляющей приблизительно 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r).
4. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, причем антитело связывается с человеческим CD73 с ЕС50, составляющей 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью метода FACS.
5. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, причем антитело связывается с CD73 яванского макака с ЕС50, составляющей 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью метода FACS.
6. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, причем антитело связывается с эпитопом на человеческом CD73 (SEQ ID NO: 1), который включает в себя аминокислотные остатки FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш NO: 97).
7. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 6, причем эпитоп охватывает или перекрывается с аминокислотными остатками FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ID NO: 97).
2.
8. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, причем антитело выбрано из группы, состоящей из IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 или его варианта.
9. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат три CDR вариабельного участка тяжелой цепи и три CDR вариабельного участка легкой цепи, которые находятся соответственно в парах из вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, выбранных из группы, состоящей из:
(a) SEQ ID N0: 4 и 8
(b) SEQ IDNO: 4 и 12;
(c) SEQ ГО N0: 16 и 20;
(d) SEQ ГО NO: 16 и 24;
(e) SEQ ГО N0: 16 и 28;
(f) SEQ ГО N0: 32 и 36;
(g) SEQ IDNO: 40 и 44;
(h) SEQ ГО NO: 40 и 48;
(i) SEQ ID NO: 52 и 56;
G) SEQ ID NO: 60 и 64;
(k) SEQ ID NO: 68 и 72;
(1) SEQ ID NO: 68 и 76;
(m) SEQ ID NO: 80 и 84;
(n) SEQ ID NO: 88 и 92;
(о) SEQ IDNO: 135 и 8 и
(p) SEQ IDNO: 135 и 12.
10. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73, содержащим:
(а) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 9, 10 и 11, соответственно;
(b) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно;
(c) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 21, 22 и 23, соответственно;
(d) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 25, 26 и 27, соответственно;
(e) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 29, 30 и 31, соответственно;
(f) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 33, 34 и 35, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 37, 38 и 39, соответственно;
(g) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 45, 46 и 47, соответственно;
(h) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 49, 50 и 51, соответственно;
(i) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш
N0: 53, 54 и 55, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой
цепи, содержащие SEQ Ш N0: 57, 58 и 59, соответственно;
(j) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 61, 62 и 63, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 65, 66 и 67, соответственно;
(к) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 73, 74 и 75, соответственно;
(1) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 77, 78 и 79, соответственно;
(т) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 81, 82 и 83, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 85, 86 и 87, соответственно; или
(п) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 89, 90 и 91, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 93, 94 и 95, соответственно.
11. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 10, причем антитело содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ ID NO: 9, 10 и 11, соответственно.
12. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 11, причем антитело содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно.
13. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88 и 135.
14. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84 и 92.
11.
15. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, которые по меньшей мере на 85% идентичны аминокислотным последовательностям вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из:
(a) SEQ ID N0: 4 и 8
(b) SEQ IDNO: 4 и 12;
(c) SEQ ГО N0: 16 и 20;
(d) SEQ ГО NO: 16 и 24;
(e) SEQ ГО N0: 16 и 28;
(f) SEQ ГО NO: 32 и 36;
(g) SEQ ГО NO: 40 и 44;
(h) SEQ ГО NO: 40 и 48;
(i) SEQ ID NO: 52 и 56;
(j) SEQ ID NO: 60 и 64;
(k) SEQ ID NO: 68 и 72;
(1) SEQ ID NO: 68 и 76;
(m) SEQ ID NO: 80 и 84;
(n) SEQ ID NO: 88 и 92;
(о) SEQ IDNO: 135 и 8 и
(p) SEQ IDNO: 135 и 12.
16. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 15, причем вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную вариабельным участкам тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из (а)-(р).
17. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 16, причем вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную вариабельным участкам тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из (а)-(р).
16.
18. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 17, в котором вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранные из группы, состоящей из (а)-(р).
19. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 18, причем антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 135, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 8.
20. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 18, причем антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 135, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID N0: 12.
21. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с тем же эпитопом на CD73, что и антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-20.
22. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 9-21, причем антитело проявляет любое из следующих свойств:
(1) связывание с растворимым человеческим CD73, например, с KD, составляющей 10 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ), например, при измерении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r);
(2) связывание с мембраносвязанным человеческим CD73, например, с ЕС50, составляющей 1 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 1 нМ);
(3) связывание с CD73 яванского макака, например, связывание с
мембраносвязанным CD73 яванского макака, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или
менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ);
(4) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73, например, с ЕС 5 0, составляющей 10 нМ или менее;
(5) ингибирование ферментативной активности CD73 макака-крабоеда, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(4)
(6) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73 in vivo; индукция или усиление активации Т-клеток без необходимости перекрестного
сшивания с образованием мультивалентных структур;
(7) интернализация в клетки, например, с Тш, составляющим менее чем 10 минут;
(8) связывание с конформационным эпитопом на человеческом CD73, например, прерывающимся эпитопом с аминокислотной последовательностью (SEQ Ш NO: 1), который включает в себя аминокислотные остатки FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ ID NO: 97);
(9) связывание с гликозилированным, но не с негликозилированным человеческим
CD73; и
(10) конкуренция в любом из направлений или в обоих направлениях с CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 за связывание с человеческим CD73.
23. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с CD73 и содержат последовательности тяжелой цепи и легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны аминокислотным последовательностям тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из:
(a) SEQ Ш NO: 100 и 101, соответственно;
(b) SEQ Ш NO: 100 и 102, соответственно;
(c) SEQ Ш NO: 103 и 104, соответственно;
(d) SEQ Ш NO: 103 и 105, соответственно;
(e) SEQ Ш NO: 103 и 106, соответственно;
(f) SEQ Ш NO: 107 и 108, соответственно;
(g) SEQ IDNO: 109 и ПО, соответственно;
(h) SEQ Ш NO: 109 и 111, соответственно;
(i) SEQ Ш NO: 112 и 113, соответственно;
(j) SEQ Ш NO: 114 и 115, соответственно;
(k) SEQ Ш NO: 116 и 117, соответственно;
(1) SEQ Ш NO: 116 и 118, соответственно;
(m) SEQ Ш NO: 119 и 120, соответственно;
(n) SEQ Ш NO: 121 и 122, соответственно; (о) SEQ IDNO: 133 и 101, соответственно; и (р) SEQ IDNO: 133 и 102, соответственно;
24. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 23, причем тяжелая и легкая цепи содержат тяжелые и легкие цепи, выбранные из группы, состоящей из (а)-(р).
25. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 24, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 135, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 101.
26. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 24, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш NO: 135, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш NO: 102.
27. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 23-26, причем антитело проявляет любое из следующих свойств:
(a) ингибирует ферментативную активность CD73;
(b) интернализируется в опухолевые клетки или
(c) связывается с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83 и 157-172 в человеческом CD73.
28. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, причем антитело связывается с CD73 яванского макака.
29. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантами осуществления 10-22, причем антитело содержит Fc с отсутствующей эффекторной функцией.
30. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантами осуществления 1-7 и 9-22, причем антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, содержащий человеческий СН1 домен, человеческий шарнирный домен, человеческий СН2 домен и человеческий СНЗ домен в порядке от N- к С-концу.
28.
31. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 30, причем модифицированный константный участок содержит по меньшей мере 2 домена отличающихся изотипов, выбранных из группы изотипов, состоящей из IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4.
32. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 30 или 31, причем модифицированный константный участок содержит СН1 домен человеческого IgG2 и по меньшей мере один из СН2, СНЗ и шарнирного доменов не представляет собой изотип IgG2.
33. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 32, причем СН1 домен IgG2 содержит аминокислотную последовательность
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (SEQ ID N0: 124).
34. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 30-33, причем модифицированный константный участок содержит шарнирный домен человеческого IgG2, который снижает неоднородность в образовании связей с участием цистеина.
35. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 34, причем шарнирный домен содержит аминокислотную замену С219 по сравнению с шарнирным доменом человеческого IgG2 дикого типа (SEQ NO 136).
36. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 35, причем шарнирный домен содержит аминокислотную последовательность ERKSCVECPPCPAPPVAG (SEQ ГО NO: 123).
37. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 30-36, причем модифицированный константный участок содержит СН2 домен человеческого IgGl, который ослабляет или устраняет эффекторные функции.
38. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 37, причем СН2 домен содержит аминокислотные замены A330S и P331S по сравнению с СН2 доменом человеческого IgGl дикого типа (SEQ ID NO: 137).
34.
39. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 38, причем СН2 домен содержит аминокислотную последовательность APPVAGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAK (SEQ ID N0: 125).
40. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 30-39, причем модифицированный константный участок содержит СНЗ домен человеческого IgGl.
41. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантом осуществления 40, причем СНЗ домен содержит аминокислотную последовательность
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ГО NO: 128).
42. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с любым из вариантов осуществления 9-29, причем антитело или его антигенсвязывающая часть представляют собой человеческое или гуманизированное антитело.
43. Антитело или его антигенсвязывающая часть в соответствии с вариантами осуществления 1-8, причем метиониновые остатки в CDR участках заменены на аминокислотные остатки, которые не подвергаются окислению.
44. Биспецифичная молекула, содержащая антитело в соответствии с любым из предыдущих вариантов осуществления, связанное с молекулой, характеризующейся второй специфичностью связывания.
45. Иммуноконъюгат, содержащий антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-43, связанное со вторым отличающимся средством.
46. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельный участок тяжелой и/или легкой цепи антитела или его антигенсвязывающей части в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-43.
47. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с вариантом осуществления 46.
48. Клетка, трансформированная вектором экспрессии в соответствии с вариантом осуществления 47.
42.
49. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающую часть, биспецифичную молекулу или иммуноконъюгат в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45 и носитель.
50. Набор, содержащий антитело или его антигенсвязывающую часть, или биспецифичную молекулу, или иммуноконъюгат в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45 и инструкции к применению.
51. Способ получения антитела к CD73 или его антигенсвязывающей части, предусматривающий экспрессию антитела или его антигенсвязывающей части в клетке в соответствии с вариантом осуществления 48 и выделение антитела или его антигенсвязывающей части из клетки.
52. Способ снижения уровней аденозина в опухолевой клетке, экспрессирующей CD73, предусматривающий приведение клетки в контакт с антителом, его антигенсвязывающей частью, биспецифичной молекулой или иммуноконъюгатом в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45, в результате чего уровни аденозина снижаются.
53. Способ стимуляции Т-клеточной реакции в отношении опухолевой клетки, экспрессирующей CD73, у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата в соответствии с любым из вариантов осуществления 145, в результате чего стимулируется Т-клеточная реакция в отношении опухолевой клетки.
54. Способ стимуляции иммунной реакции у субъекта, предусматривающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45, в результате чего у субъекта стимулируется иммунная реакция.
55. Способ в соответствии с вариантом осуществления 54, при котором субъект имеет опухолевую клетку, экспрессирующую CD73, и стимулируется иммунная реакция в отношении опухолевой клетки.
56. Способ ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих CD73, у субъекта, предусматривающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45, в результате чего ингибируется рост опухоли у субъекта.
42.
57. Способ лечения злокачественной опухоли, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45 для лечения злокачественной опухоли.
58. Способ в соответствии с вариантом осуществления 57, при котором злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из: злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли матки/шейки матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичка, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудочно-кишечного тракта, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли ободочной и прямой кишки, злокачественной опухоли ободочной кишки, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли легкого, злокачественной опухоли желудка, герминогенной злокачественной опухоли, злокачественной опухоли кости, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли щитовидной железы, злокачественной опухоли кожи, новообразований центральной нервной системы, лимфомы, лейкоза, миеломы, саркомы и злокачественной опухоли, связанной с вирусом.
59. Способ в соответствии с вариантом осуществления 57 или 58, при котором злокачественная опухоль представляет собой метастазирующую злокачественную опухоль, невосприимчивую к лечению злокачественную опухоль или рецидивирующую злокачественную опухоль.
60. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 53-59, дополнительно предусматривающий введение одного или нескольких дополнительных терапевтических средств.
61. Способ в соответствии с вариантом осуществления 60, причем дополнительное терапевтическое средство представляет собой иммунопотенциирующую молекулу (например, антагонист PD-1, антагонист CTLA-4, антагонист LAG-3), антитело к CD39 или антитело к A2AR.
42.
62. Способ выявления наличия человеческого CD73 в образце предусматривающий приведение образца в контакт с антителом или его антигенсвязывающей частью в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-45 при условиях, которые обеспечивают возможность образования комплекса между антителом или его антигенсвязывающей частью и CD73, и выявление образования комплекса.
Настоящее раскрытие дополнительно иллюстрируется следующими примерами, которые не следует толковать как дополнительное ограничение. Содержание всех фигур и всех источников, последовательности из Genbank, патенты и опубликованные патентные заявки, цитируемые в данной заявке специально включены в данный документ посредством ссылки. В частности, раскрытия РСТ публикаций международных заявок WO 09/045957, WO 09/073533, WO 09/073546, WO 09/054863 и PCT/US2013/072918 и публикация заявки на патент США № 2011/0150892 специально включены в данный документ посредством ссылки.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Получение антител к человеческому CD73
Человеческие моноклональные антитела к человеческому CD73 получали в линиях Нсо7, Нсо27, Нсо20, Нсо12, Нсо17 и Нс2 трансгенных мышей HuMAb(r) ("НиМАЬ" является торговым названием Medarex, Inc., Принстон, Нью-Джерси) и КМ-мышей (линия KM Mouse(r) содержит трансхромосому SC20, которая описана в РСТ публикации международной заявки WO 02/43478). Мышей НС2/КСо27 HuMAb и КМ-мышей получали, как описано в патентах США № 5770429 и 5545806, полные раскрытия которых тем самым включены в данный документ посредством ссылки.
Мышей, в том числе различные генотипы трансгенных мышей (такие как КМ, Нсо7, Нсо27, Нсо20, Нсо12, Нсо17 и Нс2), иммунизировали в соответствии с разными стратегиями иммунизации (разный антиген, разные дозы, длительность, пути введения (в подушечку стопы (fp), внутрибрюшинно (ip) и подкожно (sc)) и адъювант (CFA/IFA, Райби и антитело) и т.д.). Проводили слияния клеток из мышей, и подвергали слитые клетки скринингу, и идентифицировали антитела из этих слитых клеток. Дополнительная
характеристика приводила к выделению антител, представляющих особый интерес, в том числе антител, обозначенных 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4-1, 10D2-1, 10D2-2, 11А6-1, 24Н2-1, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11-1 и 7А11-1. В таблице 7 (ниже) представлены изотип IgG и аллотип тяжелых цепей, а также тип легкой цепи для каждого антитела. Антитела, которые отличаются только легкой цепью, представлены отличающейся цифрой после тире. Например, 11F11-1 имеет такую же тяжелую цепь, что и 11F11-2, a 11F11-1 имеет легкую цепь VK1, тогда как 11F11-2 имеет легкую цепь VK2. Если не определено иное, рекомбинантные антитела, основанные на VH участках антител в таблице, получали с преобладающей легкой цепью.
Аминокислотные и нуклеотидные последовательности для полноразмерной последовательности тяжелой и легкой цепей, VH и VL доменов и CDR каждого антитела представлены в перечне последовательностей и в таблице 35. Аминокислотные последовательности VH и VL также представлены на фиг. 1А-17В, и выравнивание аминокислотных последовательностей VH и VL для различных антител представлена на фиг. 35 (последовательности CDR выделены жирным шрифтом).
Пример 2. Аминокислотные замены в вариабельных участках и изотипические
варианты
Каркасный участок VH участка антитела 11F11 подвергали мутации посредством введения одной или нескольких из мутаций по следующим аминокислотным остаткам
(показаны окружающие аминокислоты, а мутированная аминокислота подчеркнута): Т25 (мутация в каркасном участке; ... RLSCATSGFTF...), L52 (мутация в CDR2; ...WVAVILYDGSN...), G54 (мутация в CDR2; ...VILYDGSNKYY...) и V94 (мутация в каркасном участке; ...AEDTAVYYCAR...). Названия конструктов и замены в каждом из них изложены в таблице 8.
Константный участок антител 11F11 и 4D4 также был модифицирован посредством "переключения" его на константный участок IgG2 (CHI, шарнир, СН2 и СНЗ) с заменой C219S ("IgG2CS"; SEQ Ш N0:267), константный участок IgGl с отсутствующей эффекторной функцией с заменами L234A, L235E, G237A, A330S и P331S ("IgGl.lf"; SEQ Ш N0:268) или гибридный константный участок IgGl/IgG2 с отсутствующей эффекторной функцией, который содержит СН1 и шарнир из IgG2 (с C219S) и СН2 и СНЗ из IgGl (с A330S/P331S) ("IgG2CS-IgGl.lf" или "IgG2C219S-IgGl.lf"; SEQ Ш N0:169). Конструкты, которые были получены, приведены в таблице 9.
Аминокислотная последовательность CD73.4-IgG2CS IgGl.If показана на фиг. 18 (SEQ ГО NO: 189).
Ab CD73.3-CD73.il получали следующим образом. VK2 легкой цепи (SEQ ГО N0: 102) использовали для антител, полученных из 11F11 (CD73.4, CD73.6, CD73.8 и CD73.10). Тяжелые и легкие цепи экспрессировали в НЕК293-6Е клетках и среду культивирования собирали через 5 суток после трансфекции.
Связывание конструктов с человеческими FcyR измеряли посредством SPR. Данные связывания с hCD64 и hCD32a-H131 для молекул IgGl. 1 и IgG2 согласовались с ожидаемыми величинами для разных Fc. IgGl.If является наиболее инертным Fc. IgG2 и IgG2-C219S показывали типичное связывание с FcR для IgG2. Как ожидалось, данные для IgG2-C219S-Gl.lf говорят о значительно более слабом связывании, чем у IgGl или IgG2 дикого типа, но повышенном связывании в сравнении с IgGl.If IgG2-C219S-Gl.lf характеризовался слабым связыванием с hCD32a-H131 (KD составляет 2,3 мкМ), и аффинность связывания со всеми остальными FcyR составляла менее чем 5 мкМ. Аффинность связывания IgG2-C219S-Gl.lf с FcyR макака-крабоеда составляла более чем 5 мкМ. SPR анализ связывания IgG2-C219S-Gl.lf с человеческим FcRn показывал рН-зависимое связывание (сильное при рН 6 и слабое связывание с быстрой диссоциацией при рН7,4).
Оказалось, что у рекомбинантных препаратов часто отсутствовал С-концевой Lys в тяжелой цепи. Например, у 97% тяжелых цепей Ab CD73.4.IgG2-C219S-Gl.lf отсутствовал С-концевой лизин. Определенные препараты имели пиро-Q на N-концевом Q (глутамин) в тяжелой цепи. Например, 94% N-концевого глутамина в тяжелой цепи Ab CD73.4.IgG2-C219S-Gl.lf представляли собой пиро-Q.
Пример 3. Характеристики связывания у антител к CD73
А. Поверхностный плазмонный резонанс (SPR)
Кинетические характеристики и аффинность связывания с CD73 исследовали с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) при использовании инструмента Biacore Т100 (GE Healthcare) при 25°С.
В одном формате эксперимента исследовали связывание N-концевого домена hCD73 (состоящий из остатков 26-336 в человеческом CD73; названный N-hCD73) с антителами,
которые были захвачены на поверхностях с иммобилизированным белком А. Для этих экспериментов белок A (Pierce) иммобилизировали до плотности 3000-4000 RU (относительные единицы) на поверхности проточных кювет 1-4 сенсорного чипа СМ5 (GE Healthcare) с использованием стандартного химического процесса на основе этил(диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) / N-гидроксисукцинилимида (NHS) при блокировании этаноламином в подвижном буфере с 0,01 М HEPES с рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% об./об. tween 20. Кинетические эксперименты проводили, вначале захватывая антитела (5-10 мкг/мл) на поверхностях с белком А с использованием времени контактирования 30 с при скорости потока 10 мкл/мин., причем связывание осуществляли с 600, 200, 66,7, 22,2, 7,4 и 2,5 нМ N-hCD73-his при использовании времени ассоциации 180 с и времени диссоциации 360 с при скорости потока 30 мкл/мин. Подвижный буфер для кинетических экспериментов представлял собой 10 мМ фосфат натрия, 130 мМ хлорид натрия, 0,05% tween 20, рН 7,1. Поверхности регенерировали после каждого цикла с использованием двух 30 с импульсных введений 10 мМ глицина с рН 1,5 при скорости потока 30 мкл/мин. Данные сенсограммы сравнивали с двумя совокупностями, а затем подгоняли к модели связывания 1:1 Ленгмюра с использованием программного обеспечения для оценки Biacore Т100 версии 2.0.4 для определения константы скорости ассоциации (ка), константы скорости диссоциации (kd) и равновесной константы диссоциации (KD).
Результаты представлены в таблице 10. В таблице собраны данные из разных экспериментов. В случае антител, для которых показаны два или более наборов чисел, каждый набор соответствует данным, полученным в отдельном эксперименте.
10D2
IgG4
6,1 E+05
9,5 E-04
1,6
11А6
IgGl
5,5 E+04
7,6 E-03
140
1Н9
IgGl
3,3 E+05
9,3 E-04
2,8
24Н2
IgG4
2,3 E+05
3,2 E-03
5F8
IgGl
1,5 E+05
6,0 E-03
6Е11
IgGl
5,7 E+04
1,4 E-03
7А11
IgGl
8,8 E+05
3,8 E-04
0,43
CD73.4
IgGl. If
4,2 E+05
3,9 E-04
0,92
CD73.4
IgG2-C219S
2,9 E+05
1,6 E-04
0,55
2,8 E+05
3,3 E-04
1,2
2,9 E+05
3,7 E-04
1,3
3,5 E+05
4,4 E-04
1,2
CD73.4
IgG2-C219S-IgGl.lf
3,1 E+05
3,5 E-04
3,3 E+05
1,4 E-04
0,43
3,1 E+05
1,3 E-04
0,42
3,2 E+05
1,5 E-04
0,47
3,1 E+05
4,1 E-04
1,4
2,7 E+05
3,8 E-04
1,4
3,0 E+05
4,1 E-04
1,4
3,1 E+05
4,2 E-04
1,3
3,2 E+05
4,3 E-04
1,3
2,9 E+05
4,0 E-04
1,4
CD73.10
IgGl. If
2,7 E+05
1,3 E-03
4,7
CD73.10
IgG2-C219S
2,2 E+05
1,4 E-03
6,2
2,2 E+05
1,8 E-03
8,3
CD73.10
IgG2-C219S-IgGl.lf
2,4 E+05
1,4 E-03
5,7
2,3 E+05
l,60E-03
6,8
CD73.3
IgGl. If
1,6 E+04
3,6 E-03
220
CD73.11
IgG2-C219S
8,0 E+04
2,8 E-04
3,5
7,9 E+04
5,1 E-04
6,5
CD73.6
IgGl. If
3,7 E+05
2,5 E-04
0,68
CD73.6
IgG2-C219S-IgGl.lf
3,0 E+05
2,2 E-04
0,72
KD В таблице представляет собой KD ДЛЯ моновалентного связывания, т.е. KD ДЛЯ связывания антител с N-концевой частью человеческого CD73, которое является моновалентным.
Мутация G54S переносится и, как оказывается, немного повышает аффинность, в то же время удаляя спрогнозированный сайт изомеризации DG. Оказывается, что мутация L52W вызывает снижение аффинности примерно в 10 раз. Варианты 4D4 имеют уникальные последовательности CDR3 и отличающиеся кинетические характеристики (более медленная ассоциация в сравнении с молекулами 11F11).
Средняя KD ИЗ 10 экспериментов для CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf составляет 1,1 ± 0,4 нМ. Мутация Т25А в отношении 11F11 не оказывает воздействие на аффинность.
Результаты показывают, что все антитела к CD73 связываются с человеческим CD73 с хорошей аффинностью и характеризуются меньшей скоростью диссоциации.
Результаты исследований связывания указывают на то, что активность связывания сохранялась после введения мутаций в 11F11, 4СЗ или 4D4 или "переключения" изотипа, хотя некоторые антитела характеризуются пониженной аффинностью по сравнению с исходным антителом (т.е. 11F11, 4СЗ или 4D4). В частности, CD73.10 (Т25А, L52W, G54E) характеризуется большей скоростью диссоциации, чем у CD73.4 (Т25А) или CD73.11 (4D4). Сравнение всех молекул IgG2 указывает на то, что 11F11 и CD73.4 (11F11-T25A) характеризуются наивысшей аффинностью моновалентного связывания с CD73 (KD = 1,1 нМ ± 0,4 нМ). CD73.10 (11F11-T25A, L52W, G54E) характеризуется аффинностью в отношении CD73, которая ~10-кратно ниже, чем у 11F11 или CD73.4. Это говорит о том, что любая из мутаций L52W или G54E, или обе мутации снижают аффинность CD73 в случае, когда они находятся в комбинации с другими последовательностями 11F11. 4D4 и CD73.11 характеризуются аффинностью, сравнимой с CD73.10 (KD ~5 нМ), но имеют отличающиеся кинетические характеристики. Полагают, что эпитоп 4СЗ включает в себя участки N- и С-доменов CD73 вследствие того, что измеренная KD для связывания с выделенным N-доменом является небольшой (KD = 100-200 нМ).
Также исследовалось связывание CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf с CD73 макака-крабоеда. Специфичность CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf для связывания с CD73 яванского макака сравнивали со специфичностью связывания с человеческим CD73 с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) с использованием инструмента Biacore Т100 (GE Healthcare) при 25°С. Полноразмерный внеклеточный домен либо человеческого CD73 (состоящий из остатков 27-547 в человеческом CD73, связанных с His-меткой, названный hCD73-his), либо CD73 яванского макака (состоящий из остатков 27-547 в CD73 яванского
макака, связанных с His-меткой, названный cy-CD73-his) исследовали в отношении связывания с антителами, которые были захвачены на поверхностях с иммобилизированным белком А. Для этих экспериментов белок A (Pierce) иммобилизировали до плотности 3000-4000 RU (относительные единицы) на поверхности проточных кювет 1-4 сенсорного чипа СМ5 (GE Healthcare) с использованием стандартного химического процесса на основе этил(диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) / N-гидроксисукцинилимида (NHS) при блокировании этаноламином в подвижном буфере с 0,01 М HEPES с рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% об./об. tween 20. Эксперименты проводили, вначале захватывая антитела (5-10 мкг/мл) на поверхностях с белком А с использованием времени контактирования 30 с при скорости потока 10 мкл/мин., причем связывание осуществляли с 600, 200, 66,7, 22,2, 7,4 и 2,5 нМ hCD73-his или cyno-CD73-his при использовании времени ассоциации 180 с и времени диссоциации 360 с при скорости потока 30 мкл/мин. Подвижный буфер для этих экспериментов представлял собой 10 мМ фосфат натрия, 130 мМ хлорид натрия, 0,05% tween 20, рН 7,1. Поверхности регенерировали после каждого цикла с использованием двух 30 с импульсных введений 10 мМ глицина с рН 1,5 при скорости потока 30 мкл/мин.
Результаты, которые показаны на фиг. 19, указывают на то, что CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf связывается с CD73 макака-крабоеда и человеческим CD73 с подобной аффинностью и кинетическими характеристиками. CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf связывается с полноразмерным димером человеческого CD73 и CD73 макака-крабоеда с KD, составляющей менее чем 1 нМ. Не наблюдалось существенной перекрестной реактивности CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf с мышиным или крысиным CD73.
Кинетические характеристики и аффинность выделенного Fab-фрагмента от антитела 11F11 также оценивали с помощью SPR. В этих экспериментах Fab-домен из мышиного антитела к метке из 6xHis иммобилизировали на сенсорном чипе СМ5 с использованием EDC/NHS до плотности -3000 RU. Полноразмерный hCD73-his захватывали до значения плотности 10 RU (условные единицы) на Fc2 (1 мкг/мл hCD73-his), значения плотности 40 RU на Fc3 (5 мкг/мл hCD73-his) и значения плотности 160 RU на Fc4 (20 мкг/мл hCD73-his) с использованием времени контактирования 30 с при 10 мкл/мин. Затем Fab-фрагмент 11F11 (очищенный от расщепленного пепсином антитела 11F11 с уменьшенным содержанием L-цистеина) исследовали в отношении связывания в концентрациях 400, 135,
44,4, 14,8, 4,9, 1,7, 0,55 нМ с использованием времени ассоциации 180 с, времени диссоциации 600 с при 30 мкл/мин. в подвижном буфере с 10 мМ фосфатом натрия, 130 мМ хлоридом натрия, 0,05% tween 20, рН 7,1. Поверхности регенерировали после каждого цикла с использованием двух 15 с импульсных введений 10 мМ глицина с рН 2,0 при скорости потока 30 мкл/мин. Данные сенсограммы сравнивали с двумя совокупностями, а затем подгоняли к модели связывания 1:1 Ленгмюра с использованием программного обеспечения для оценки Biacore Т100 версии 2.0.4 для определения константы скорости ассоциации (ка), константы скорости диссоциации (kd) и равновесной константы диссоциации (KD). Результаты представлены в таблице 11 ниже.
Таким образом, результаты показывают, что Fab-фрагмент 11F11 характеризуется высокой аффинностью в отношении hCD73 (KD -0,74 нМ).
В. Связывание антитела к CD73 с положительными по CD73 клетками
Кривые титрования для связывания получали с антителами к CD73 на Calu6 (клетки, эндогенно экспрессирующие CD73; линия клеток аденокарциномы легкого человека), DMS114 (отрицательные по CD73; линия клеток мелкоклеточного рака легкого человека), CHO-cynoCD73 (трансфицированные CD73 макака-крабоеда) и СНО-К1 (отрицательные по CD73 макака-крабоеда) клетках с использованием вторичного козьего антитела к человеческому IgG (H+L), конъюгированного с Alexa Fluor(r) 647, № в каталоге Invitrogen А-21445, с использованием следующего способа:
100000 клеток высевали в 100 мкл PBS+2% FBS на лунку и блокировали в течение 20 мин. С использованием 96-луночного планшета с глубокими U-образными лунками объемы антитела и PBS+2% FBS объединяли, как указано в таблице 12 ниже.
Клон
[Маточный раствор] (мг/мл)
[Краситель] (мг/мл)
Объем АЬ (мкл)
Объем ТМ (мкл)
11F11
3,70
0,020
2,92
537,1
CD73.10-IgGl.lf
1,3
0,020
8,31
531,7
CD73.10-IgG2
0,020
10,80
529,2
CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf
0,020
1-/80
529,2
CD73.4-IgG2
2,3
0,020
4,70
535,3
CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf
0,020
5,40
534,6
CD73.4-IgGl.lf
2,3
0,020
4,70
535,3
Серийное разведение с 8 разными концентрациями получали посредством разведения шестой части объема (90 мкл) в 450 мкл PBS+2% FBS. Планшет с клетками осаждали центрифугированием в течение 5 минут при 1500об./мин. Добавляли 100 мкл разведенного антитела на лунку планшета. 100 мкл PBS+2% FBS добавляли во все остальные лунки. Планшеты подвергали окрашиванию на льду в течение 45 мин., осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 5 мин. и промывали дважды в 200 мкл PBS + 2% FBS на лунку. Содержимое лунок, в которые добавляли неконъюгированное антитело, а также одной лунки без окрашивания на клеточную линию ресуспендировали в 100 мкл вторичного АРС-антитела к человеческому антителу (20 мкг/мл). 100 мкл PBS+2% FBS добавляли во все остальные лунки и проводили окрашивание на льду в течение 45 мин. Планшеты осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 5 мин. и промывали в 200 мкл PBS + 2% FBS на лунку. Планшеты промывали снова, их содержимое ресуспендировали в 200 мкл 2% FBS в PBS на лунку и образцы прогоняли.
Результаты, которые показаны на фиг. 20А1, 20А2, 20В1, 20В2, 20С1, 20С2, 20D1, 20D2 и в таблице 13, указывают на то, что все антитела к CD73 связываются с клетками, которые в естественных условиях экспрессируют CD73 (Calu6 клетки), и СНО клетками, трансфицированными для экспрессии CD73 макака-крабоеда, но что антитела не связываются с клетками, которые не экспрессируют CD73 (DMS114 и СНО-К1). Значения ЕС50 для связывания, полученные для каждого антитела, показаны в таблице 13.
Антитело
EC50, нМ Calu6
EC50, нМ CHO-cynoCD73
11F11
0,78
0,58
CD73.10-IgGl.lf
0,64
0,67
CD73.10-IgG2
0,85
1,24
CD73.10-IgG2CS-IgGl.lf
0,85
1,27
CD73.4-IgG2
0,49
0,34
CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf
0,53
0,51
CD73.4-IgGl.lf
0,43
0,45
EC50 для связывания CD73.4-IgG2-IgGl.lf с линиями человеческих опухолевых клеток составляла 0,5 нМ (диапазон 0,3-0,67 нМ). ЕС50 для связывания CD73.4-IgG2-IgGl.lf с СНО клетками, трансфицированными CD73 макака-крабоеда, составляла 0,3 нМ (диапазон 0,1-0,5 нМ).
Также определяли связывание антитела CD73.4 с человеческими В- и Т-клетками. Человеческую кровь от двух доноров, D316 и D329, получали от Immunsciences, BMS. Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли с использованием среды для разделения клеток в градиенте плотности Lympholyte-H. РВМС инкубировали с серийно разведенными мечеными FITC антителамиС073.4-Т§02, CD73.4-IgG2-IgGl.lf или CD73.4-IgGl.lf, и Т-клетки и В-клетки идентифицировали с использованием меченых флуорохромом антител к CD3 и CD20. Клетки от обоих доноров собирали для неокрашенных контрольных образцов и контрольных образцов для FMO (флуоресценция образцов с комбинацией антител без одного). Результаты, которые показаны на фиг. 20Е и F и в таблице 14, указывают на то, что антитела специфично связываются с человеческими В- и Т-клетками.
Пример 4. Биофизические характеристики антител к CD73
A. Гель-хроматография в сочетании с подключенным к системе детектором многоуглового рассеяния света (SEC-MALS)
Олигомерное строение mAb к CD73 оценивали с помощью гель-хроматографии в сочетании с подключенным к системе детектором многоуглового рассеяния света (SEC-MALS). Изократические разделения проводили на колонке Shodex PROTEIN KW-803, соединенной с прибором Prominence Shimadzu UFLC, в буфере содержащем 200 мМ К2НРО4, 150 мМ NaCl, рН 6,8, содержащем 0,02% азида Na (отфильтрованный через фильтр с размером ячейки 0,1 мкм), который прогоняли со скоростью потока 0,5 мл/мин. Образцы впрыскивали на колонку с использованием автоматического дозатора SIL-20AC Prominence Shimadzu и получали данные от трех детекторов, работающих в реальном масштабе времени и соединенных последовательно: спектрофотометр Prominence SPD-20AD с диодной матрицей для измерения в УФ/видимой областях спектра, за которым следовал детектор многоуглового рассеяния света Wyatt miniDAWN(tm) TREOS, а затем рефрактометрический детектор Wyatt Optilab T-rEX. Данные (которые показаны в таблице 15 ниже) собирали и анализировали с использованием программного обеспечения Astra (Wyatt) и Labsolutions (Shimadzu). Результаты представлены в таблице 15.
B. Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)
Термическую стабильность mAb к CD73 определяли с использованием капиллярного инструмента для DSC MicroCal (GE Healthcare). Антитела анализировали в концентрациях 0,5-0,75 мг/мл в PBS с рН 7,1. Для стабилизации фонового уровня у DSC инструмента и получения соответствующей термической истории несколько термограмм для буфера самого по себе как в ячейке для образца, так и в эталонной ячейке записывали перед
анализом образца. Термограммы для образцов, содержащих mAb в ячейке для образца и PBS с рН 7,1 в эталонной ячейке. Все термограммы получали при температуре 10-110°С и при скорости сканирования 60°/час с использованием 5 минутного периода термостатирования перед циклом и при отсутствии периода термостатирования после цикла. Данные (которые показаны в таблице 15 ниже) анализировали с использованием программного обеспечения для анализа MicroCal Origin Cap DSC. Соответствующие значения с термограмм для холостых проб буфер-буфер вычитали из данных для образец-буфер и значения температуры в средней точке перехода (Тт) определяли посредством аппроксимации данных к модели "поп-2-state". Результаты представлены в таблице 15. Tml, Tm2 и ТтЗ представляют собой значения Тт для разных доменов в антителах.
CD73.11
IgG2-C219S
73,4
77,9
CD73.6
IgGl. If
0,2
99,7
0,0
142,0
64,2
79,7
CD73.6
IgG2-C219S-IgGl.lf
0,3
99,7
142,3
70,1
77,4
84,6
Результаты показывают, что все антитела преимущественно являются мономерными и являются стабильными.
Пример 5. Ингибирование ферментативной активности с участием АЬ к CD73
А. Ингибирование ферментативной активности связанного с гранулами CD 73 Для оценки ингибирования антителами к CD73 активности фермента CD73, связанного с гранулами, использовали следующие материалы и методы. Материалы
ТМ буфер: 25 мМ Tris, 5 мМ MgCh в воде 0,5 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 8,0
Промывочный буфер (10 мл 0,5 мМ фосфат натрия, рН 8,0; 10 мл 5 М NaCl; 34 мл воды; 10 мкл Tween-20)
Динатриевая соль аденозин-5'-монофосфата, Sigma, кат. № 01930-%G, 300 мМ в ТМ буфере
Гидрат динатриевой соли ад енозин-5'-трифосфата, Sigma, кат. № A6419-1G, 100 мМ в ТМ буфере
rhCD73, 0,781 мг/мл
CD73 макака-крабоеда, Sino Biological Inc, кат. № 90192-С08Н Магнитные гранулы с his-меткой, Invitrogen, кат. № 10103D
Набор для люминесцентного анализа клеточной жизнеспособности CellTiter-Glo(r), Promega, кат. № G7572
mAbO, неродственное антитело, которое не связывается с CD73 Методы
Серийное разведение с 6 концентрациями антител к CD73 приведено в таблице 16 (максимальная концентрация 10 мкг/мл) выполняли посредством объединения объемов,
как предписано в таблице 16, и 3-кратного разведения (перенося 225 мкл в 450 мкл ТМ буфера). Все антитела с шарниром IgG2 содержали мутацию C219S.
Магнитные гранулы (2 мкл гранул на образец) промывали в 1 мл натрий-фосфатного буфера в микроцентрифужной пробирке. Гранулы опускали на дно с использованием магнита и ресуспендировали в 400 мкл ТМ буфера. Для каждого вида CD73: В отдельной пробирке CD73 (75 нг на образец) объединяли с ТМ для доведения объема до 400 мкл. Третью пробирку подготавливали для холостой пробы с гранулами (без CD73). Суспензию гранул объединяли с раствором rhCD73 и смешивали на шейкере в течение 5 мин. при комнатной температуре. Гранулы опускали на дно с использованием магнита и гранулы промывали в 1 мл промывочного буфера. Гранулы опускали на дно с использованием магнита и ресуспендировали в ТМ буфере (40 мкл на образец). Гранулы переносили в 96-луночные планшеты для П1 IP (40 мкл на лунку). В планшеты добавляли серийно разведенные HuMab к CD73 в количестве 200 мкл на лунку и хорошо перемешивали. Планшеты инкубировали в течение 30 мин. при комнатной температуре. Готовили 700 мкл каждого из 400 мкМ ATP (8Х) и 1,2 мМ AMP (8Х). 650 мкл каждого из них объединяли с получением 4Х маточной смеси АМР/АТР. Гранулы опускали на дно и промывали дважды с использованием 200 мкл ТМ буфера на лунку. Гранулы снова опускали на дно с использованием магнита и ресуспендировали в 30 мкл ТМ буфера. 30 мкл гранул переносили в 96-луночные черные планшеты. 10 мкл 4х маточного раствора АМР/АТР (конечная концентрация 150 мкМ АМР/50 мкМ АТР) добавляли и смешивали. Добавляли в
контрольные лунки (конечная концентрация 150 мкМ AMP и/или 50 мкМ АТР) в объеме 40 мкл. Планшеты инкубировали в течение 15 мин. при 37°С.
Результаты показаны на фиг. 21А1, 21А2, 21В1 и 21В2 и в таблице 17.
Результаты ингибирования ферментативной активности CD73 макака-крабоеда изложены в таблице 18.
Результаты показывают, что антитела дозозависимым образом ингибируют ферментативную активность человеческого CD73. CD73.4.IgG2-C219S-IgGl.lf характеризуется ЕС50, составляющей 2,97 (диапазон 2,9-3,1 нМ) в анализе ингибирования
рекомбинантного человеческого фермента CD73. CD73.4.IgG2-C219S-IgGl.lf характеризуется ЕС50, составляющей 3,7 (диапазон 1,6-12,6 нМ) в анализе ингибирования рекомбинантного фермента CD73 макака-крабоеда. Таким образом, все исследуемые антитела к CD73 ингибируют ферментативную активность связанного с гранулами человеческого CD73 и CD73 макака-крабоеда.
В. Ингибирование ферментативной активности CD73 в Са1иб клетках
В этом примере описывается оценка Calu6 (CD73-положительных) и DMS-114
(CD73-отрицательных) клеток в отношении дефосфорилирования AMP CD73 после
обработки антителами к CD73. Материалы
Антитела к CD73; см. таблицу ниже Контрольное антитело МаЬО, 5,38 мг/мл ТМ буфер: 25 мМ Tris, 5 мМ MgCh в воде
Динатриевая соль ад енозин-5'-монофосфата, Sigma, кат. № 0193 0-5 G, 300 мМ в ТМ буфере
Гидрат динатриевой соли ад енозин-5'-трифосфата, Sigma, кат. № A6419-1G, 100 мМ в ТМ буфере
rhCD73, 0,781 мг/мл
Набор для люминесцентного анализа клеточной жизнеспособности CellTiter-Glo(r), Promega, кат. № G7572 Методы
Антитела подвергали серийному разведению посредством объединения объемов очищенных антител и PBS, как предписывается в таблице 19 ниже, в 96-луночном планшете с U-образными лунками. Выполняли серийные разведения с 6 концентрациями антител (максимальная концентрация 25 мкг/мл, 300 мкл), а также 5-кратные разведения, перенося 60 мкл в 240 мкл PBS. Все антитела с шарниром IgG2 содержали мутацию C219S.
Клон
Конц. (мг/мл)
Объем Ab (мкл)
Объем PBS (мкл)
mAbO
5,38
1,39
298,6
F3713.11F11.F3.A4
3,70
2,03
298,0
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgGl. IF
1,3
5,77
294,2
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2
7,50
292,5
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-IgGl. If
7,50
292,5
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2
2,3
3,26
296,7
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-IgGl. If
3,75
296,3
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgGl. If
2,3
3,26
296,7
Клетки собирали с использованием раствора версена и подсчитывали. Планшеты засевали, клетки осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 5 мин. и ресуспендировали в 100 мкл серийно разведенного антитела. Содержимое всех остальных лунок ресуспендировали в 100 мкл PBS. Инкубирование проходило при 37°С в течение 20 мин. 15 мл 180 мкМ маточного раствора AMP готовили в ТМ буфере.
Содержимое планшетов осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 5 мин. и планшеты однократно промывали 200 мкл PBS/лунку. Содержимое планшетов снова осаждали центрифугированием и ресуспендировали в 100 мкл AMP. Содержимое всех остальных лунок ресуспендировали в 100 мкл ТМ буфера. Клетки инкубировали с AMP в течение 60 мин. при 37°С. Готовили 7,5 мл 60 мкМ маточного раствора АТР в ТМ буфере. Содержимое планшетов осаждали центрифугированием при 1500 об./мин. в течение 5 мин. и 50 мкл супернатанта переносили в черные 96-луночные планшеты. Добавляли 50 мкл ATP. rhCD73 добавляли в определенные лунки в количестве 75 нг на лунку в качестве положительного контроля. Лунки, в которые не вносили rhCD73, доводили до 100 мкл ТМ буфером. Конечная концентрация составляла 90 мкМ AMP: 30 мкМ АТР. Инкубирование проводили при 37°С в течение 15 мин. Для анализа CellTiterGlo (в котором выявляют АТР) добавляли 100 мкл реактива на лунку и производили считывание планшета.
Результаты, которые показаны на фиг. 22А1, 22А2, 22В1, 22В2 и в таблице 20, указывают на то, что антитела к CD73 ингибируют дефосфорилирование AMP (или снижают переработку AMP) в положительных по человеческому CD73 Calu6 клетках, но не оказывают воздействие в отрицательных по CD73 DMS114 клетках. ЕС50 для блокады эндогенного клеточного CD73 в линии человеческих опухолевых клеток Calu6 антителом
CD73.4-IgG2S-IgGl.lf составляет 0,39 нМ (диапазон 0,31-0,48 нМ). Эти эксперименты повторяли в NCI-H292 (линия клеток мукоэпидермоидной карциномы) и SK-MEL-24 (линия клеток меланомы человека) клетках, и результаты были аналогичными (таблица 20).
1 Определение связывания с помощью титрования на Calu6 клетках с эндогенной экспрессией CD73. Антитела исследовали в 2-6 независимых экспериментах, и указано среднее значение.
2 Данные из раздела А в этом примере. Антитела исследовали в 1-5 независимых экспериментах, и указано среднее значение.
3 Ингибирование активности клеточного CD73 в указанной клеточной линии. Антитела исследовали в 2-4 независимых экспериментах, и указано среднее значение.
С. Ингибирование ферментативной активности CD73 в анализе сАМР с двумя клеточными линиями
Гомогенный анализ флуоресценции с A MP с временным разрешением (HTRF)
Получали серийные разведения антител к CD73 PBS буфером, содержащим 0,2% BSA, и их переносили в количестве 5 мкл/лунку в 384-луночный планшет proxiplate с белым дном (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс). Calu-б клетки собирали и ресуспендировали в PBS, содержащем 0,2% BSA, затем 5 мкл клеток (300 клеток/лунку) добавляли в планшет. Клетки инкубировали с антителами в течение 10 минут при 37°С с 5% СО2 и 95% влажности с последующим добавлением 5 мкл/лунку 80 мМ AMP. Клетки дополнительно инкубировали с AMP в течение 30 минут при 37°С. В течение этого времени HEK293/A2AR клетки собирали, и их разводили до количества 0,4 миллиона/мл в PBS, содержащем 0,2% BSA. Их добавляли в планшет для анализа в количестве 5 мкл/лунку и продолжали инкубировать при 37°С в течение 1 часа. Анализы HRTF осуществляли с использованием набора для выявления гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) HiRange сАМР detection kit (Cisbio, Бедфорд, Массачусетс) посредством добавления d2, конъюгированного с сАМР, в количестве 10 мкл/лунку и крипата европия, конъюгированного с антителом к сАМР, в количестве 10 мкл/лунку в лизирующем буфере в соответствии с инструкциями производителя. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут и сигналы резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) (665 и 615 нМ) считывали с использованием планшет-ридера EnVision (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс). Сигнал FRET рассчитывали в виде соотношения сигнала от каналов с длиной волны 665 нм (акцептор) и 615 нм (донор) и умножали на 10000. Измеряли IC50 и Ymax. Ymax определяли посредством сравнения с 100 нМ дозой 11F11 в качестве внутреннего максимума. Все расчетные значения определяли в виде процента ингибирования в сравнении с этим контролем, который принимали за 100%.
Результаты, которые показаны в таблице 21, указывают на то, что mAb к CD73 демонстрировали разные значения эффективности и активности в этом анализе сАМР с
использованием системы для совместного культивирования клеточных линий. Все АЬ показывали некоторое снижение выработки аденозина и степень ингибирования была подобной для большинства подвергшихся скринингу АЬ. Наибольшее ингибирование наблюдали для 11F11, 11А6, 4СЗ и 5F8.
Анализы ингибирования ферментативной активности также проводили с Fab и F(ab')2 11F11. Результаты, которые показаны на фиг. 22С, указывают на то, что ингибирование ферментативной активности происходило с F(ab'^-фрагментом, а не с Fab-фрагментом. Таким образом, Fc участок не требуется для ингибирования 11F11 ферментативной активности, но требуется бивалентность.
Ингибирование ферментативной активности в Calu6 клетках также определяли для антител CD73.4, содержащих различные константные участки тяжелой цепи, которые показаны в таблице 26, с использованием анализа сАМР описанного выше. Результаты, выраженные в виде ЕС50 и уровней ингибирования относительно фона ("S:B"), представлены в двух последних столбцах в таблице 28. Результаты указывают на то, что все антитела CD73.4 ингибируют ферментативную активность человеческого CD73 в Calu6 клетках.
D. Динамика ингибирования ферментативной активности CD73 Ингибирование ферментативной активности также оценивали в динамике посредством оценки образования аденозина с помощью LC/MS/MS. Calu6 клетки инкубировали с 11F11 или 4СЗ в течение 30 минут, 2 часов или 4 часов с последующим
добавлением 50 мкМ AMP и оценкой выработки аденозина с помощью LC/MS/MS с использованием стандартных методов.
Условия масс-спектрометрии (Xevo TQ-S)
Инструмент: Xevo TQ-S (с Waters 2777С)
Настройки = CD73 adenosine MRM tune2.ipr
Ионизация: (+) ESI
Температура десольватации (°С): 500
Напряжение на капилляре (кВ): 0,9
Поток газа для десольватации (л/час): 1000
Напряжение на конусе (В): см. ниже
Поток газа через конус (л/час): 150
Расстояние до источника V): 50
Давление на небулайзере (бар): 7,0
LM разрешение 1: 2,81
НМ разрешение 1: 15,00
LM разрешение 2: 2,93
НМ разрешение 2: 15,00
Энергия иона 1: 0,4
Энергия иона 2: 0,9
Поток газа при столкновении (мл/мин.): 0,15
Столкновение: см. ниже
Образец направляли в отходы в течение первых 0,5 мин.
Waters Xevo TQ-S
Серийный номер: WAA021
Результаты, которые показаны на фиг. 22D, указывают на то, что время инкубирования оказывает влияние в момент времени 30 мин., и что ингибирование под действием 11F11 происходит быстрее, чем под действием 4СЗ. Хотя оба антитела обеспечивали равное ингибирование в более поздние моменты времени, антитело 11F11 быстрее ингибирует ферментативную активность CD73 в клетках.
Пример 6. Опосредованная антителом интернализация CD73
Опосредованную антителом к CD73 интернализация CD73 измеряли в двух разных анализах.
А. Анализ интернализации при высоком содержании (анализ с 2-часовым фиксированным периодом времени)
Антитела к CD73 использовали для исследования зависимой от антитела к CD73 интернализации CD73 в Calu6 клетках посредством оценки экспрессии клетками после 2 часов инкубирования с антителом. Клетки (2000 клеток/лунка) в 20 мкл полной среды (среда RPMI 1640 Gibco с 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки) высевали в 384-луночный планшет BD Falcon и выращивали в течение ночи
при 37°С с 5% СО2 и 95% влажности. Антитела к CD73 серийно разводили PBS буфером, содержащим 0,2% BSA, и добавляли в количестве 5 мкл/лунку в планшет с клетками. Клетки инкубировали с антителами в течение 2 часов при 37°С с 5% СО2 и 95% влажности с последующим однократным промыванием PBS буфером. Формальдегид (конечная концентрация 4% в PBS) затем добавляли в планшет с клетками в количестве 20 мкл/лунка и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут. После этого всю жидкость отсасывали и клетки однократно промывали 30 мкл PBS. Выявляющее антитело (2,5 мкг/лунка антитела Ab CD73.10.IgG2C219S к CD73) добавляли в количестве 15 мкг/лунка в планшет с зафиксированными клетками. Клетки инкубировали при 4°С в течение ночи. На следующий день планшет дважды промывали PBS буфером с последующим добавлением вторичного антитела, содержащего козье антитело к человеческому антителу, конъюгированное с А1еха-488, и DAPI, окрашивание проводили в течение 1 часа при комнатной температуре. После 3 промываний в PBS буфере визуализацию планшета осуществляли на Arrayscan Vti (Cellomics, Питтсбург, Пенсильвания). Измеряли IC50 и Ymax. Ymax определяли посредством сравнения с 100 нМ дозой 11F11 в качестве внутреннего максимума. Все расчетные значения определяли в виде процента интернализации в сравнении с этим контролем, который принимали за 100%.
Результаты представлены в таблице 22.
NA = не применялось
Таким образом, результаты указывают на то, что ЕС 50 для интернализации CD73, опосредованной CD73.4.IgG2-C219S-IgGl.lf в линии клеток Сашб, экспрессирующих человеческий CD73, составляла 1,2 нМ, и что максимальный уровень интернализации у клеточной линии составлял 97,5%.
Анализы интернализации также проводили с Fab и F(ab')2 11F11. Результаты, которые показаны на фиг. 22С, указывают на то, что интернализация происходила с F(ab'^-фрагментом, но не с Fab-фрагментом. Таким образом, Fc участок не требуется для интернализации 11F11.
Исследования кинетических характеристик интернализации проводили для оценки скорости интернализации. Клетки (2000 клеток/лунка) в 20 мкл полной среды (среда RPMI 1640 Gibco с 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки) высевали в 384-луночный планшет BD Falcon и выращивали в течение ночи при 37°С с 5% СОг и 95% влажности. Антитела к CD73 разводили PBS буфером, содержащим 0,2% BSA, до концентрации 10 мкг/мл и добавляли в количестве 5 мкл/лунку в планшет с клетками. Клетки инкубировали с антителами в течение периода времени от 0 до 2 часов при 37°С с последующим однократным промыванием PBS буфером. Клетки затем фиксировали с использованием формальдегида (конечная концентрация 4% в PBS) при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем однократно промывали 30 мкл PBS. Выявляющее антитело (2,5 мкг/лунка антитела Abs CD73.10.IgG2C219S к CD73) разводили PBS буфером, содержащим 0,2% BSA, и добавляли в количестве 15 мкл/лунка в планшет с зафиксированными клетками. Планшет инкубировали при 4°С в течение ночи. На следующий день после 3 промываний в PBS буфере добавляли вторичное козье антитело к человеческому антителу, конъюгированное с А1еха-488, с DAPI. Клетки окрашивали в течение 60 минут при комнатной температуре, после 3 промываний получали изображения с использованием Arrayscan Vti (Cellomics, Питтсбург, Пенсильвания). Результаты представлены на фиг. 23A-23D и в таблицах 23 и 24. Значения в таблице 24 получены на основе данных, показанных на фиг. 1A-J.
Клеточная линия
Тип клеток
HFll(IgG2) Тш (мин.)
6Е11 1 Тш (мин.)
CD73.10.IgGl.If
Tl/2
(мин.)
Calu6
Аденокарцинома легкого человека
3,9
60,9
14,4
НСС44
Немелкоклеточная карцинома легкого
3,3
27,9
23,5
Н2030
Немелкоклеточная карцинома легкого
3,3
40,3
18,3
Н647
Немелкоклеточная карцинома легкого
45,7
Нет данных
Нет данных
Н2228
Немелкоклеточная карцинома легкого
10,9
36,5
35,7
НСС15
Немелкоклеточная карцинома легкого
2,2
84,4
37,9
SKLU1
Аденокарцинома легкого
6,8
18,0
17,2
SKMES1
Меланома
2,2
62,8
32,3
SW900
Плоскоклеточная карцинома легкого
10,3
94,9
43,4
CD73.4-IgG2CS
13,8
6,5
3,7
CD73.10-IgGl.lf
35,7
37,9
14,4
18,3
CD73.3-IgGl.lf
16,5
-47
> 240
111,4
> 120
11F11
10,9
2,2
3,9
3,3
4C3
7,6
-48
141,5
0,6
> 120
-34
6E11
36,5
84,4
107,4
40,32
Результаты указывают на то, что антитела группы 1 (11F11 и его производные CD73.4 и CD73.10), показывают хорошую ЕС50 для интернализации и максимальные значения интернализации (97,5%), хотя некоторые антитела интернализировались больше, чем остальные. 11F11 было наиболее активным и интернализировалось за минуты, достигая плато за 30 минут, тогда как 6Е11 (также антитело группы 1, IgGl) интернализировалось более медленно, достигая плато приблизительно приблизительно за 1 час (фиг. 23A-D). Антитела группы 2 (5F8 и 4СЗ) не интернализировалось в значительной степени. Кроме того, наличие шарнира и СН1 домена IgG2 повышали скорость и степень интернализации. Эту тенденцию наблюдали в нескольких клеточных линиях (фиг. 23 A-D и таблица 24).
В. Интернализация, измеренная с помощью проточной цитометрии Опосредованную антителом к CD73 интернализацию CD73 также исследовали с помощью проточной цитометрии. Указанные клетки инкубировали с указанным антителом в концентрации 10 мкг/мл в течение 30 минут на льду, промывали несколько раз и переносили в среду температурой 37°С в течение указанного времени. Клетки собирали одновременно после указанного времени инкубирования. Клетки вновь окрашивали первичным антителом (тем же антителом, используемым для первоначального инкубирования) с последующим окрашиванием вторичным антителом к человеческому антителу. Клетки затем анализировали в отношении экспрессии CD73 с помощью проточной цитометрии.
Результаты, которые показаны на фиг. 23Е и в таблице 25, согласуются с полученными в анализах интернализации, описанных выше, и указывают на то, что все антитела с шарниром и CHI IgG2, индуцировали быструю и полную интернализацию. Уровни CD73 оставались низкими спустя 22 часа после отмывки, указывая на то, что интернализация является длительной.
Подобные результаты, показанные на фиг. 23F и в таблице 25, получали в клеточной линии NCI-H292, в которой антитело сохранялось в культуре в течение времени инкубирования (без отмывки). Опять-таки, эти данные указывают на быструю и значительную интернализацию и сохранение понижающей регуляции эндогенного CD73.
Анализы интернализации также проводили с использованием человеческих SNU-C1 (линия клеток злокачественной опухоли толстой кишки) и NCI-H1437 (линия клеток немелкоклеточной карциномы легкого) клеток. Результаты, которые показаны на фиг. 231 и J и в таблице 25, также указывают на быструю интернализацию, причем максимальный уровень достигался за 5 часов, а максимальный уровень интернализации составлял приблизительно 50% для CD73.4.IgG2-C219S-IgGl.lf в SNU-C1 и 60% в NCI-H1437 клетках. На фиг. 23G и Н показаны подобные кинетические характеристики интернализации для CD73.4.IgG2-C219S-IgGl.lf в Calu6 и NCI-H292 клетках. Для графиков, на которых показан % интернализированного CD73, эта величина была получена следующим образом:
% интернализированного CD73 = 100 - (MFIt=x MFI$0H х ЮО ),
где для каждого антитела, MFIt=x представляет собой MFT (средняя интенсивность флуоресценции) в заданный момент времени, и MFL=o представляет собой максимальную флуоресценцию при t=0, и МИфон представляет собой MFT только вторичного АЬ.
Дополнительные анализы интернализации проводили на Calu6 и Н292 клетках для того, чтобы дополнительно выделить роль изотипа при интернализации. Анализы интернализации проводили, как описано выше (протокол без стадии отмывки от антител), и антитела различных гибридных изотипов, показанные в таблице 26, поддерживали в культуре в концентрации 10 мкг/мл в течение времени инкубирования. В случае экспериментов с проточной цитометрией способ из примера 6В адаптировали к анализу с высокой пропускной способностью в 96-луночных планшетах (в отличие от 48-луночных планшетов) и с 50000 клетками на лунку.
IgG2.5Gl-KH
279
CHI, верхний шарнир и нижний шарнир/верхний СН2 от IgG2.5, все остальное от IgGlf
IgG2.3Gl-AY
269
CHI и верхний шарнир от IgG2.3, все остальное от IgGlf
IgG2.5Gl-AY
278
CHI и верхний шарнир от IgG2.5, все остальное от IgGlf
IgGl-G2.3Gl-KH
282
CHI от IgGl, верхний шарнир и нижний шарнир/верхний СН2 от IgG2.3, все остальное от IgGlf
IgGl-G2.3Gl-AY
281
CHI от IgGl, верхний шарнир от IgG2.3, все остальное от IgGlf
IgG2.3Gl.lf-KH
273
CHI, верхний шарнир и нижний шарнир/верхний СН2 от IgG2.3, все остальное от IgGl.If
IgG2.5Gl.lf-KH
277
CHI, верхний шарнир и нижний шарнир/верхний СН2 от IgG2.5, все остальное от IgGl.If
IgGl-deltaTHT
274
IgGl с удаленной из шарнира последовательностью
тнт
IgG2.3-plusTHT
275
IgG2.3 с добавленной в шарнир последовательностью ТНТ (из IgGl)
IgG2.5-plusTHT
280
IgG2.5 с добавленной в шарнир последовательностью ТНТ (из IgGl)
IgG2.3-plusGGG
276
IgG2.3 с добавленной в шарнир гибкой последовательностью GGG
Было показано, что связывание с FcyR являлось таким, как ожидалось для каждого конструкта, т.е. связывание FcyR обусловлено нижним шарниром/СН2 участком.
Результаты показаны на фиг. 23К, L, М и в таблицах 27 и 28. Данные, приведенные в таблице 27, получали с использованием того же протокола, что описан в примере 6В. Данные, приведенные в таблице 28, получали с использованием того же протокола, что описан в примере 6А.
Таблица 27. Ymax и Тш для опосредованной антителом интернализации CD73 в
№ Клоны mAb к CD73 Интернализация Ингибирование
CD73
CD73.4-Vh-hHC-IgGl. lf+K/LC
U."II 2
CD73.4-Vh-hHC-IgG2C219S-IgGl.lf
++++
++++
I.2S 12
Фиг. 23K, L и M и таблицы 27 и 28 указывают на то, что антитела, имеющие шарнир и СН1 домен изотипа IgG2, являются наиболее эффективными в возбуждении интернализации CD73, тогда как антитела, которые имеют шарнир и СН1 домен IgGl, соответствуют более низким кривым на фигуре, т.е. более низкой степени интернализации. Кроме того, антитела только с шарниром от IgG2 характеризуются повышенной интернализацией в сравнении с шарниром человеческого IgGl. Следовательно, антитела, имеющие шарнир и СН1 домен изотипа IgG2, обладают лучшими характеристиками интернализации по сравнению с антителами с изотипом IgGl.
Таким образом, антитело к CD73 mAb-CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf индуцировало быструю интернализацию, зависящую от исследуемой клеточной линии. Значение Тш для интернализации варьировало от от нескольких минут до периода менее часа. Большинство исследуемых клеточных линий имели Тш менее 10 минут. Практически полная интернализация индуцировалась для некоторых клеточных линий, и у всех исследуемых клеток присутствовало по меньшей мере 50% снижение экспрессии CD73 на поверхности, которое, как правило, достигало максимальных уровней к 5 часам, а в некоторых случаях гораздо раньше.
Данные SEC-MALS и DLS демонстрируют, что комплексы большего размера образуются между hCD73-his и mAb, содержащими шарнир и СН1 участок IgG2 (IgG2-C219S или IgG2-C219S-IgGl.lf), в сравнении с содержащими шарнир и СН1 участок IgGl (IgGl. If).
Пример 7. Ингибирование ферментативной активности CD73 в опухолях в модели ксенотрансплантата у животного
Мышей, несущих подкожные опухоли из человеческих Calu6 клеток, обрабатывали CD73.10-IgGl.l, CD73.10-IgG2CS или CD73.10-IgG2CS-IgGl.l после 7 суток роста. Антитела вводили ГР в дозе 10 мг/кг. Опухоли собирали через 1, 2, 3 и 7 суток после введения антитела, заливали в ОСТ и быстро замораживали в охлажденном изопентане. Залитые в ОСТ опухоли нарезали на 5-6 мкм срезы и позволяли им высохнуть в течение ночи при RT. Срезы опухолей фиксировали в течение 2,5 мин. с использованием смеси
холодного 10% формалина, стабилизированного фосфатным буфером, и ацетона в соотношении 1:1, затем их подвергали предварительному инкубированию в течение 1 часа при RT в 50 мМ Tris-малеатном буфере с рН 7,4, содержащем 2 мМ СаС12 и 0,25 М сахарозу. После 1 часа предварительного инкубирования буфер удаляли и заменяли на такой же буфер, дополненный 5 мМ МпСЬ, 2 мМ Pb(N03)2, 2,5% декстраном Т200, 2,5 мМ левамизолом и 1 мМ AMP. Ферментативную реакцию проводили в течение 1 часа при 37°С. После промывания DI водой срезы инкубировали в течение точного периода 1 мин. с 1% (NH4)2S, за которым следовало быстрое промывание DI водой. Проводили контр-окрашивание срезов гематоксилином, их обезвоживали и монтировали с использованием заливочной среды на основе ксилола. Коричневый цвет указывает на присутствие активного CD73, тогда как отсутствие коричневого цвета указывает на то, что ферментативная активность CD73 ингибируется антителом.
Результаты указывают на то, что CD73.10-IgGl.l, CD73.10-IgG2CS и CD73.10-IgG2CS-IgGl.l ингибируют ферментативную активность CD73 in vivo. Типичные окрашенные срезы опухолей из мышей, обработанных антителом CD73.10-IgG2CS-IgGl.l, показаны на фиг. 24 А-Е. Окрашенные срезы опухолей из мышей, обработанных остальными двумя антителами, были подобными. Степень ингибирования CD73 коррелировала с уровнями антитела в сыворотке. Таким образом, немного более высокий уровень активности CD73, наблюдаемый в образце, полученном в День 3, коррелировал с более низким уровнем антитела в сыворотке, чем в образце, полученном в День 7.
Эксперимент, подобный описанному выше, проводили на мышах, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухолей из SNUC1 клеток, которые получены из линии клеток карциномы ободочной кишки человека, и обрабатывали антителом к CD73 CD73.4IgG2CS-IgGl.lf. Мышей с опухолями SNUC1 обрабатывали CD73.4IgG2CS-IgGl.lf в IP дозе 1, 3 и 10 мг/кг в День 0. Опухоли собирали через 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов и 168 часов после введения дозы. Анализ ингибирования ферментативной активности CD73 проводили, как описано выше. Количественное определение интенсивности коричневого окрашивания проводили с использованием программного обеспечения Image Pro Premier (Media Cybernetics).
Результаты, которые представлены на графике на фиг. 24F, показывали, что активность CD73 существенно снижается у животных, которым вводили дозу антитела к
CD73, по сравнению с мышами, которых обрабатывали контрольным антителом, указывая на сильное ингибирование фермента CD73 антителом во всех трех концентрациях. Таким образом, антитело к CD73 CD73.4CS-IgGl.lf эффективно ингибирует ферментативную активность CD73 in vivo. Кинетические характеристики ингибирования CD73 антителами к CD73 также определяли в модели на основе изогенной опухоли 4Т1. TY/23 (крысиное антитело к мышиному антителу к CD73) или контроль из IgG (10 мг/кг) вводили инъекцией на 7 сутки после инъекции опухолевых клеток 4Т1. Опухоль, селезенку, цельную кровь и сыворотку собирали на 1, 2, 3, 6 и 7 сутки после обработки АЬ. Ингибирование активности CD73 измеряли, как описано выше, в срезах, полученных в указанный день. Типичные срезы опухолей показаны на фиг. 25 А и В. Данные указывают на то, что TY/23 ингибирует активность CD73 in vivo.
Пример 8. Сортировка эпитопов и перекрестное блокирование на основе проточной цитометрии
Исследования сортировки эпитопов осуществляли с помощью интерферометрии в биослое (ВЫ) с использованием инструмента Octet RED (Pall Fortebio) при 25°C. Для этих исследований 20-30 мкг/мл hCD73-his захватывали на сенсорах с антителами к пентагистидиновым последовательностям с использованием фазы загрузки длительностью 90-180 с. Конкуренцию антитела оценивали, обеспечивая связывание заданного антитела (mAbl) с поверхностями с hCD73-his в течение 180 с, за этим следовало непосредственное воздействие раствора второго антитела (тАЬ2) в течение 180 с. Сигнал от связывания для тАЬ2 после предварительного связывания mAbl сравнивали с тАЬ2 в отсутствие конкуренции для определения того, конкурируют ли mAbl и тАЬ2 за связывание с поверхностями с hCD73-his. Эти эксперименты осуществляли для многочисленных пар mAb в обоих порядках (mAbl, затем тАЬ2; и тАЬ2, затем mAbl) для получения профилей конкуренции и группы эпитопов (кратко изложены в таблице 29 ниже).
Как показано в таблице 29, анализ сортировки эпитопов выявил 2 группы эпитопов.
Антитело
Группа 1
Группа 2
7А11
6Е11
11F11
5F8
4СЗ
11А6
Антитела также подвергались перекрестному блокированию на основе проточной цитометрии. Эксперимент проводили следующим образом с использованием одного набора антител, меченых флуоресцентной меткой, и второго набора немеченых антител: Высевали 100000 NCI-H292 клеток на лунку. Содержимое планшета осаждали центрифугированием и клетки ресуспендировали в 100 мкл 2% FBS в PBS на лунку. Клетки блокировали на льду в течение 20 мин. Немеченое антитело, которое указано, в 2% FBS в PBS добавляли в каждую лунку. Содержимое планшета осаждали центрифугированием и клетки ресуспендировали в 100 мкл на лунку разведенного меченого антитела (10 мкг/мл), т.е. либо 4СЗ, либо 11F11, конъюгированного с FITC. 6 лунок с клетками инкубировали без антитела и ресуспендировали в 100 мкл только 2% FBS в PBS (для контролей). Клетки затем инкубировали на льду в течение 30 мин. Клетки промывали дважды 2% FBS в PBS и образцы ресуспендировали в 140 мкл 2% FBS в PBS и анализировали на проточном цитометре FacsCalibur (Becton Dickinson).
Результаты перекрестного блокирования на основе проточной цитометрии, которые показаны на фиг. 26А и В, подтверждают данные сортировки эпитопов с помощью SPR, изложенные выше. Например, 7А11 конкурирует с 11F11, а 4СЗ - нет.
Пример 9. Картирование эпитопов с помощью HDX
В этом примере описывается применение HDX-MS для идентификации эпитопа на человеческом CD73, с которым связывается CD73.4-IgG2CS-IgGl.lf.
С помощью метода масс-спектрометрии с использованием водородно/дейтериевого обмена (HDX-MS) исследуют конформацию белка и динамику конформационных
превращений в растворе посредством мониторинга скорости и степени дейтериевого обмена для атомов водорода в амидных группах остова белка (за исключением пролина). Уровень обмена при HDX зависит от доступности белка для растворителя и водородных связей, и рост массы белка при HDX можно точно измерить с помощью MS. Когда эту методику применяют в паре с ферментативным расщеплением, можно выяснить структурные особенности на уровне пептида, создавая возможность для разграничения обращенных к поверхности пептидов и пептидов, свернутых внутрь. При экспериментах по картированию эпитопов проводят эксперименты с мечением дейтерием и последующим гашением параллельно для антигена и комплекса антиген/mAb, за этим следует расщепление пепсином, разделение пептидов и MS-анализ в реальном масштабе времени.
Перед картированием эпитопов для CD73.4-IgG2-CS-IgGl.lf на CD73 с помощью HDX-MS проводили эксперименты с недейтерированными молекулами для получения перечня пептидов, обычно получаемых в результате расщепления, для рекомбинантного человеческого полноразмерного ECD димерного CD73 (12 мкМ) и белкового комплекса рекомбинантного человеческого CD73 и mAb к CD73 (молярное отношение 1:1, 12 мкМ для mAb к CD73), обеспечивающего 88% охват последовательности для полноразмерного ECD CD73. В эксперименте с HDX-MS 5 мкл CD73 (SEQ ID N0: 99) или CD73 с mAb CD73.4-IgG2-CS-IgGl.lf разводили в 55 мкл буфера с D2O (10 мМ фосфатный буфер, D2O, pD 7,0) для того, чтобы начать реакции мечения при комнатной температуре. Используемый белок CD73 представлял собой гликозилированный полноразмерный димерный hCD73, имеющий SEQ ГО N0: 99, также показана ниже). Реакции осуществляли в течение разных периодов времени: 20 секунд, 1 мин., 10 мин. и 240 мин. По окончании периода каждой реакции мечения реакцию гасили посредством добавления гасящего буфера (100 мМ фосфатный буфер с 4 М GdnCl и 0,4 М ТСЕР, рН 2,5, 1:1, об./об.) и 50 мкл гашеного образца впрыскивали в систему Waters HDX-MS для анализа. Уровни поглощения дейтерия для пептидов, обычно получаемых в результате расщепления, отслеживали в отсутствие/в присутствии mAb к CD73.
Используемый белок CD73 имел аминокислотную последовательность, имеющую SEQ ГО NO: 99.
Измерения HDX-MS на mAb к CD73 в CD73 указывают на то, что mAb CD73.4-IgG2-CS-IgGl.lf распознает прерывающийся эпитоп, состоящий из двух пептидных участков в N-концевом участке CD73:
Пептидный участок 1 (65-83): FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) Пептидный участок 2 (157-172): LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш NO: 97) Трехмерное изображение взаимодействия (фиг. 27В) показывает, что эти два участка геометрически близкими. Подробная карта взаимодействия показана на фиг. 27А.
Пример 10. Кристаллическая структура 11F11, связывающегося с CD73
В этом примере описана кристаллическая структура Fab' 11F11, связанного с CD73(26-336)His.
CD73(26-336)His очищали от временно трансфицированных НЕК-293 Е клеток с использованием стандартных протоколов, и использовали без дополнительной обработки или подвергали дегликозилированию посредством обработки PNGase F, и концентрировали до концентрации 1,2 мг/мл. Fab' антитела 11F11 получали посредством расщепления пепсином 11F11 с использованием стандартных протоколов и концентрировали до концентрации 1,1 мг/мл.
Комплекс образовывался при инкубировании равных объемов дегликозилированного hCD73(26-336)His и Fab' 11F11 в течение ночи при 4°С, очищали с использованием колонки GE Superdex 200 26/60 и концентрировали до концентрации 9,5 мг/мл с использованием центрифужного концентратора с MWCO (граница отсечки по молекулярному весу задерживаемых компонентов) 10 кДа.
Кристаллы выращивали в сидячих каплях, в экспериментах с диффузией пара каплю, которая составляла 0,25 мкл белка, смешивали с 0,25 мкл резервуарного раствора. Проводили более 7100 экспериментов по кристаллизации. Исходные зерна кристаллов имели небольшой размер приблизительно 10 мкм. Оптимизированные кристаллы имели размер 200-300 мкм. Оптимизация кристаллизации включала скрининг добавок, детергентов, осадителей, рН, температуры и типа буфера. Условия, которые обеспечивали возможность образования кристаллов, были следующими: резервуарный раствор, состоял из 34% пропиленгликоль Р400, 0,1 М Na/K Р04 рН 6,5 и 15 мкМ CYMAL-7; эксперименты с кристаллизацией проводили при комнатной температуре, а затем помещали в условия с
температурой 4°С для инкубирования; и инкубировали при 4°С в течение 7 суток. Образование кристаллов наблюдали только с гликозилированным белком CD73.
Кристаллы собирали напрямую из кристаллизационной капли и помещали непосредственно в жидкий N2. Более 100 кристаллов подвергали скринингу в отношении дифракции в собственной лаборатории.
Данные собирали с использованием меленького пучка, очень слабой аттенюации и спирального сбора данных по каналу 22Ш SER-CAT с высокоскоростным CCD детектором Rayonix MX-33HS. Наборы данных собирали при 4,1 А, 3,8 А, 3,5 А и в конце при 3,05 А. Данные, обработанные и нормированные с использованием стандартного HKL2000 (Otwinowski Z., Minor W., Methods in Enzymology 276, 307-326 (1997)), до 96% получали с разрешением 3,04 А.
Поиск BLAST (Altschul et al. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410) использовали для поиска наиболее близкой модели для N-концевого домена CD73 и Fc- и Fv-доменов в базе данных для белков RCSB для применения в поиске методом молекулярного замещения: модель для CD73 происходила из записи 4H1S в базе данных PDB (Heuts et al. Chembiochem. 2012 Nov 5;13(16):2384-91).
Ее использовали в качестве начальной модели для поиска PHASER (McCoy et al. J. Appl. Cryst. (2007). 40, 658-674) методом молекулярного замещения. В поиске CD73 обнаружили 5 молекул в асимметричной единице. Сохраняя CD73 фиксированным, в поиске с использованием поисковой модели тяжелой цепи было обнаружено 2 молекулы в асимметричной единице. Сохраняя CD73 и тяжелые цепи фиксированными, в третьем поиске методом PHASER для легкой цепи также было обнаружено 2 молекулы в асимметричной единице. Сложную модель для пяти полных комплексов получали из результатов с частичным разрешением посредством наложения данных для пяти CD73 и сочетания тяжелых и легких цепей. Ее использовали в качестве начальной модели для уточнения с использованием BUSTER (Bricogne et al. (2011) BUSTER version 2.11.6. Cambridge, United Kingdom: Global Phasing Ltd).
Была повторно подобрана модель, и аминокислоты в ней изменяли, чтобы отразить последовательности 11F11. Модель подвергалась существенной коррекции в ручном режиме для построения и уточнения модели. В общей сложности пять циклов уточнения
BUSTER проводили для завершения уточнения. Окончательный R-фактор составлял 20,59% (R-free фактор = 24,58%) для 27484 атомов в белке и 24 молекул растворителя.
Изображения кристаллической структуры комплекса изложены на фиг. 28A-D.
Кристаллическая структура показывает, что все, кроме одного из взаимодействий, происходят из остатков в CDR участках, и что большинство из взаимодействий происходят из VH домена с двумя дополнительными взаимодействиями из VL домена (фиг. 28А). Взаимодействующие остатки в человеческом CD73 и Fab' 11F11 приведены в таблице 30.
VDW
Tyr-52A
3,2
Trp-99
3,8
Leu-164
VDW
Tyr-52A
3,6
Pro-165
VDW
Asn-31
3,2
Tyr-52A
3,6
Ser-97
3,5
Gly-167
Н-связь
Asn-31
2,7
VDW
Tyr-32
3,7
Asp-168
Н-связь
Thr-28
2,9
VDW
Asn-31
3,3
Phe-27
3,4
Glu-169
Н-связь
Asn-31
2,9
Val-170
VDW
Asn-31
3,5
Ser-319
Н-связь
Ser-67
2,7
Gly-68
3,0
VDW
Ser-30
3,8
Ser-67
3,8
Ile-320
VDW
Ser-30
4,0
Модель, основывающая на сложной структуре двух комплексов CD73(NDT)/11F11, наложенной на димер CD73 (PDB Entry 4H1S), говорит о том, что 11F11 связывается с поверхностью на CD73 вдали от поверхности взаимодействия в димере, это говорит о том, что Fab не препятствует образованию димера.
Сравнение результатов картирования с помощью HDX-MS и рентгеноструктурного анализа комплекса CD73/11F11 показывает, что они в основном согласовались, показывая подобный эпитоп на CD73 (65-83 и 157-172). Тем не менее, рентгеновская структура показывает дополнительные взаимодействия (менее чем 6 А) в участке от Met-105 до Asp
111 (в том числе Н-связи в Arg-109 и Туг-ПО), от Lys-135 до Рго-139 и от Asp-317 до Ile-320 (в том числе Н-связи в Ser-319).
Пример 11. Воздействие разных шарниров/Fc на размер комплексов антитело/СР73
Как показано в вышеизложенных примерах, антитела к CD73 с шарниром и СН1 IgG2 являются лучшими ингибиторами ферментативной активности CD73 на клетках и интернализируются лучше, чем такие же антитела с шарниром IgGl. Исходя из этого наблюдения и того факта, что шарнир IgG2 является более жестким, чем шарнир IgGl, выдвинули гипотезу, что большие комплексы образуются между антигеном и антителами, имеющими шарнир IgG2, по сравнению с антителами, имеющими шарнир IgGl. Следующий эксперимент проводили для анализа этой гипотезы.
Структуру и олигомерное строение комплексов С073/антитело в растворе оценивали с помощью SEC-MALS и DLS. Для этих исследований антитела, содержащие константный участок либо IgGl, либо IgG2, смешивали в изменяющихся молярных отношениях с рекомбинантными белками, содержащими либо полноразмерный внеклеточный домен человеческого CD73, содержащий С-концевую полигистидиновую метку (аминокислотные остатки 26-546 в человеческом CD73, называемый "hCD73-his"), либо фрагмент, соответствующий N-концевому домену человеческого CD73 (аминокислотные остатки 26336, называемый "N-hCD73-his").
Олигомерное строение комплексов С073/антитело оценивали с помощью гель-хроматографии в сочетании с подключенным к системе детектором многоуглового рассеяния света (SEC-MALS). Изократические разделения проводили на колонке Shodex PROTEIN KW-803, соединенной с прибором Prominence Shimadzu UFLC, в буфере содержащем 200 мМ К2НРО4, 150 мМ NaCl, рН 6,8, содержащем 0,02% азида Na (отфильтрованный через фильтр с размером ячейки 0,1 мкм), который прогоняли со скоростью потока 0,5 мл/мин. Образцы впрыскивали на колонку с использованием автоматического дозатора SIL-20AC Prominence Shimadzu и получали данные от трех детекторов, работающих в реальном масштабе времени и соединенных последовательно: спектрофотометр Prominence SPD-20AD с диодной матрицей для измерения в УФ/видимой областях спектра, за которым следовал детектор многоуглового рассеяния света Wyatt
miniDAWN(tm) TREOS, а затем рефрактометрический детектор Wyatt Optilab T-rEX. Данные собирали и анализировали с использованием программного обеспечения Astra (Wyatt) и Labsolutions (Shimadzu).
Исследования динамического рассеяния света (DLS) проводили на планшет-ридере Wyatt DynaPro в 384-луночных планшетах при 25°С. Параметры эксперимента предусматривали 20 сборов данных по 5 с каждый на измерение, и измерения записывали в четырех повторностях, причем приводили среднее значение и стандартное отклонение. Автокорреляционные функции для интенсивности подбирали с использованием алгоритма "регуляризации" в программном обеспечении Dynamics (Wyatt Technologies).
Краткое изложение результатов SEC-MALS и DLS представлено на фиг. 29А и В. Анализ антитела отдельно показал значения времени удержания (приблизительно 16-17 мин.), массы (140-150 кДа) и гидродинамические радиусы (5,0-5,4 нм) для каждого антитела, что является типичным для мономерного моноклонального антитела. Данные для белка hCD73-his согласовались с тем, что белок принимает ожидаемую димерную структуру в растворе, в частности, масса, определенная на основе данных SEC-MALS (120 кДа), соответствовала ожидаемой для димера CD73-his (117 кДа) и не соответствовала той, которая ожидалась бы для мономера hCD73-his (58,5 кДа). Данные для N-hCD73 соответствовали рекомбинантному белку N-домена, который является мономерным в растворе (измеренная с помощью SEC-MALS масса = 38 кДа в сравнении с ожидаемой массой в мономерной форме = 35,0 кДа), что ожидалось, поскольку участок внеклеточного домена полноразмерного CD73, который отвечает за димеризацию белка, содержится в С-концевом домене без вклада остатков в N-домене.
Было выявлено, что эквимолярные смеси заданного антитела с N-hCD73-his элюируются в виде единой частицы в SEC с меньшим временем удержания, чем антитело или N-hCD73-his по отдельности, о том же говорили и большие гидродинамические радиусы (Rh), измеренные с помощью DLS, которые соответствовали образованию комплексов. Данные MALS указывают массы для этих комплексов, составляющие примерно 210 кДа. Это согласуется с тем, что одна молекула N-hCD73-his связывается с каждым из двух Fab доменов заданного антитела с образованием комплекса 1:2 антитело :N-hCD73 -hi s.
Данные SEC-MALS для смесей антител к CD73 с димером hCD73-his показывают, что смесь элюируется раньше, чем любое из hCD73-his или антитела отдельно, это говорит о том, что образуются комплексы. Сравнение данных для mAb, которые содержат одинаковый вариабельный участок, но разные константные домены, показывает, что значения времени элюирования для комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константные домены IgG2 (IgG2-C219S, IgG2-C219S-IgGl.lf), меньше, чем для комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константный домен IgGl.If. Кроме того, определенные с помощью MALS значения массы для комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константный домен IgG2, являются большими, чем для комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константный домен IgGl. Данные DLS дополнительно показывают, что гидродинамический радиус у комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константный домен IgG2, является большим, чем у комплексов hCD73-his с mAb, содержащими константный домен IgGl. Например, данные SEC-MALS и DLS для CD73.4 с тремя разными константными участками (IgG2-C219S, IgG2-C219S-IgGl.lf или IgGl.If) показаны на фиг. 30. На ней можно увидеть, что комплекс hCD73-his с CD73.4, содержащим константный домен IgG2, характеризуется меньшими значениями времени удержания (фиг. 30А), большими гидродинамическими радиусами (фиг. ЗОВ) и большими значениями массы, определенными с использованием MALS (фиг. ЗОС), в сравнении с комплексами hCD73-his с CD73.4-IgGl.lf. Основанная на значениях массы, полученных с использованием MALS, схематическая модель для структуры и стехиометрического состава комплексов между hCD73-his и антителами показана на фиг. 30D, причем комплексы, содержащие CD73.4-IgGl.lf, преимущественно образуют меньшие 2:2 (пик 1 = -550 кДа) или 4:4 mAb/CD73 димерные комплексы (пик 2 = -1300 кДа), тогда как CD73.4-IgG2-C219S или CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf образуют намного большие комплексы (> 3000 кДа) с hCD73-his, для которых невозможно уверенно смоделировать точную структуру и стехиометрический состав.
Антитела CD73.4, имеющие константные участки тяжелой цепи, которые изложены в таблице 26, также исследовали в отношении размера образованных комплексов. Как показано на фиг. 30D, результаты указывают на то, что комплексы более высокого порядка образуются с антителами, имеющими СН1 домен IgG2, по сравнению с антителами, имеющими СН1 домен IgGl.
В совокупности данные SEC-MALS и DLS демонстрируют, что комплексы большего размера образуются между hCD73-his и mAb, содержащими шарнир и СН1 участок IgG2 (IgG2-C219S или IgG2-C219S-IgGl.lf), в сравнении с содержащими шарнир и СН1 участок IgGl (IgGl.If). Кроме того, антитела, имеющие СН1 домен IgG2, образуют большие комплексы, чем антитела, имеющие СН1 домен IgGl.
Пример 12. Значимость определенных аминокислотных остатков в СН1 и шарнире IgG2 в улучшении опосредованной антителом интернализации CD73
Антитела к CD73 (CD73.4) с константными участками тяжелой цепи, приведенными в таблице 31, получали и исследовали, как описано выше, в анализах опосредованной антителом интернализации CD73.
G2.5-G1-G2-G2-KH
324
Укороченные варианты шарнира
IgGl-delta-шарнир
325
IgG2-delta-iiiapHHp
326
IgG2.5-delta-mapHHp
327
IgGl - deltaG237
328
IgG2-plusG237
329
Другие
IgG2.4
330
IgG2.3/4
331
Результаты, которые показаны на фиг. 31, обеспечивают следующую информацию в отношении интернализации CD73.
• Оказывается, что СН2 домен не оказывает воздействие, на что указывает следующие факты:
о а) наблюдалось очень небольшое различие в способности к интернализации у антител, содержащих модифицированный константный участок тяжелой цепи с форматом "AY" (имеющий шарнир IgG2 ERKCС VECPPCP APPVAG (SEQ Ш N0: 8), по сравнению с участком с форматом "КН" (ERKCCVECPPCPAPELLGG (SEQ ГО NO: 22) (набор 5, 6 и 7);
о Ь) участки с замененным СН2 сравнимы с G1 или G2 дикого типа (наборы 5 и 6); и
о с) остаток 237 не оказывает влияние на интернализацию: ни добавление остатка "G" к шарниру IgG2, ни удаление С-концевого "G" в шарнире IgGl не оказывали воздействие на интернализацию (набор 9).
Это говорит о том, что СН2 домен не оказывает воздействие на интернализацию (т.е. СН2 домен может происходить от IgGl или IgG2);
• Замена СН1 участков, указанная в наборе 3 (KRGEGSSNLF; KRGEGS; SNLF; ITNDRTPR и SNLFPR), в IgGl на СН1 участки из IgG2 обеспечивает незначительное преимущество, т.е. интернализация остается подобной интернализации IgGl; см. набор 3);
• Замена СН1 участков, указанных в наборе 4 (RKEGSGNSFL; RKEGSG; NSFL; TIDNTRRP и NSFLRP), в IgG2 на СН1 участки из IgGl оказывала различное воздействие: изменение NSFL не оказывало воздействие, тогда как другие 2 участка (RKEGSG и RP) были задействованы (см. набор 4). На основании результатов для наборов 3 и 4, оказывается, что существует взаимодействие между СН1 участком и
шарниром, причем RKEGSG и RP участки являются более важными, чем NSFL участок;
• Шарнирный участок оказывает воздействие на интернализацию, т.е. шарнир IgG2 обеспечивает лучшую интернализацию по сравнению с шарниром IgGl (см. наборы 7 и 8). Кроме того, IgGl с делецией (G1-delta-шарнир) улучшает интернализацию в сравнении с IgGl. IgG2 с делецией (G2-delta-uiapHHp) обеспечивает подобный уровень интернализации по сравнению с уровнем интернализации для шарнира IgG2. Это говорит о том, что шарнирный участок оказывает влияние на интернализацию, причем данный эффект усиливается CHI IgG2 (G2-G1-G2-G2-AY является сравнимым G1-G2-G1-G1-AY);
• IgG2.4 (C220S) характеризуется подобной или пониженной интернализацией в сравнении с IgG2.3 (C219S). IgG2.3/4 (C219S/C220S) характеризуется значительно пониженной интернализацией в сравнении с IgG2.3 или IgG2.4 самими по себе (см. набор 10). Это говорит о том, что интернализация антитела с шарниром IgG2 и C219S является приблизительно такой же, что и у антитела с шарниром IgG2 с C220S, причем в обоих случаях результат значительно лучше, чем у антитела с шарниром IgG2 с обеими из C219S и C220S;
• IgG2.5 (мутация C131S) характеризовался пониженной интернализацией в сравнении с конструктами с С131 (см. наборы 1, 6 и 7).
Таким образом, эти результаты указывают на то, что как СН1 домен, так и шарнир являются значимыми в опосредованной антителом интернализации CD73, и что антитело, имеющее последовательности IgG2 из этих доменов, интернализируется с большей эффективностью по сравнению с антителом, имеющим эти участки из IgGl.
Пример 13. Антитела, имеющие шарнир и/или СН1 домен IgG2, образуют высокомолекулярные комплексы
Антитела CD73.4, имеющие константные участки тяжелой цепи, изложенные в таблице 26, также исследовали в отношении образования высокомолекулярных комплексов с помощью экспериментов SEC-MALS и DLS, как описано в примере 11.
Три из 16 антител в этом исследовании исследовались ранее: CD73.4-IgGl.lf, CD73.4-IgG2-C219S (также называемое CD73.4-IgG2.3) и CD73.4-IgG2-C219S-IgGl.lf
(также называемое CD73.4-IgG2.3Gl.lf-KH). Данные SEC-MALS и DLS для антител самих по себе показывали значения времени удержания, массы и гидродинамические радиусы для каждого антитела, которые являются типичными для мономерного моноклонального антитела. Эквимолярные комплексы каждого антитела (5,5 мкМ) с hCD73-his (5,5 мкМ) показывали большие значения времени удержания для всех комплексов в сравнении с антителом или hCD73-his самим по себе, что указывает на образование комплексов. Наложение данных с SEC хроматограммы для каждого из 16 комплексов, показано на фиг. 32А. Данные с хроматограммы можно поделить на 4 отдельных пика, которые показаны на фиг. 32В. Пик 1 содержит наиболее крупные частицы, причем определенные с использованием MALS значения массы предполагают комплексы с эквивалентной массой, большей, чем комплексы 4:4 hCD73-his:mAb. Пик 2 содержит частицы с определенными с использованием MALS значениями массы, которые предполагают комплексы, примерно соответствующие комплексам 2:2 hCD73-his:mAb. Пик 3 представляет собой меньшие частицы с низким уровнем сигнала и определенными с использованием MALS значениями массы, которые предполагают комплексы, примерно соответствующие комплексам 1:1 hCD73-his:mAb. Пик 4 соответствует элюированию отдельных mAb, причем определенные с использованием MALS значения массы соответствуют несвязанному антителу. Для количественного определения относительных количеств каждой из частиц, 4 пика с каждой хроматограммы интегрировали в виде пика 1 ( <12,9 мин.), пика 2 (12,9-15,1 мин.), пика 3 (15,1-16,7 мин.), пика 4 (16,7-19,3 мин.). Интегрирование также включало дополнительный интегрированный диапазон, называемый пиком 5 (> 19,3 мин.), чтобы учесть любые низкомолекулярные частицы, которыми, как оказалось, можно пренебречь ( <3,5% для всех комплексов). Процентное содержание каждого вида частиц из этого интегрирования приведено в таблице 32. Все комплексы содержали малый процент пика 3 (приблизительно 6-9%), но переменные количества других пиков. Наиболее примечательным является то, что все комплексы между hCD73-his и антителами, содержащими СН1 домен из hlgGl, имели значительно большее процентное содержание комплексов меньшего размера (пик 2), тогда как комплексы, содержащие СН1 домен из hIgG2, имели большее процентное содержание комплексов большего размера (пик 1) (таблица 32 и фиг. 32С). Это говорит о важной роли не только шарнирного участка, но также и СН1 домена в образовании комплексов более высокого порядка.
Пример 14. Связывание с Fc рецептором для антител со сконструированными константными доменами
В этом примере демонстрируется, что антитела, имеющие модифицированные константные участки тяжелой цепи, которые содержат СН1 и шарнир IgG2, связываются с FcyR, когда они содержат СН2 и СНЗ домены IgGl.
В дополнение к связыванию антигена вариабельными доменами антитела могут захватывать Fc-гамма рецепторы (FcgR) посредством взаимодействия с константными доменами. Эти взаимодействия опосредуют эффекторные функции, такие как антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC) и
антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP). Активность эффекторной функции является высокой в случае изотипа IgGl, но является очень низкой или отсутствует в случае IgG2 и IgG4 вследствие того, что эти изотипы характеризуются более низкой аффинностью в отношении FcgR. Кроме того, эффекторная функция IgGl может быть модифицирована посредством мутации аминокислотных остатков в константных участках для изменения аффинности и селективности в отношении FcgR.
Связывание антител с Fc-гамма рецепторами (FcyR или FcgR) исследовали с использованием технологий на основе биосенсоров, в том числе метода измерения поверхностного плазмонного резонанса (SPR) Biacore и метода интерферометрии в биослое (ВЫ) Fortebio. Исследования SPR проводили на инструменте Biacore Т100 (GE Healthcare) при 25°С. Fab-фрагмент из мышиного антитела к метке из 6xHis иммобилизировали на сенсорном чипе СМ5 с использованием EDC/NHS до плотности -3000 RU. Различные his-меченые FcgR (7 мкг/мл) захватывали посредством С-концевой his-метки с использованием времени контактирования 30 с при скорости потока 10 мкл/мин. и связывание антитела в концентрации 1,0 мкМ оценивали в подвижном буфере с 10 мМ NaP04, 130 мМ NaCl, 0,05% р20 (PBS-T) и с рН 7,1. FcgR, используемые для этих экспериментов, включали в себя CD64 (FcgRI), CD32a-H131 (FcgRIIa-H131), CD32a-R131 (FcgRIIa-R131), CD32b (FcgRIIb), CD16a-V158 (FcgRIIIa-V158), CD16b-NAl (FcgRIIIb-NAl) и CD16B-NA2 (FcgRIIIb-NA2). Эксперименты ВЫ проводили на инструменте Fortebio Octet RED (Pall, Fortebio) при 25°C в 10 мМ NaP04, 130 мМ NaCl, 0,05% p20 (PBS-T) и с рН 7,1. Антитела захватывали из неразбавленных супернатантов экспрессионной среды на покрытые белком А сенсоры с последующим связыванием аналитов hCD32a-H131, hCD32a-R131, hCD32b, hCD16a-V158 в концентрации 1 мкМ или hCD64 в концентрации 0,1 мкМ.
Вначале получали антитела, которые содержат модифицированные Fc домены IgGl, в том числе замены S267E (SE) и S267E/L328F (SELF), а также различные комбинации мутаций P238D, P271G, H268D, A330R, G237D, E233D, называемые V4, V7, V8, V9 и V12. Связывание этих антител исследовали с помощью Biacore SPR в сравнении с антителами IgGlf, IgG2.3 (IgG2-C219S) и IgG4.1 (IgG4-S228P), а также антителом IgGl.If, которое было подвергнуто воздействию методов генной инженерии для снижения связывания со всеми FcgR. Результаты, которые показаны на фиг. 33, демонстрируют ожидаемые
свойства связывания с FcgR для IgGlf, IgG2.3 и IgG4.1 и мутантных антител IgGl, в том числе повышенное связывание с CD32a-H131, CD32a-R131 и CD32b для SE и SELF, а также повышенную селективность мутантов V4, V7, V8, V9 и V12 в отношении CD32b в сравнении с CD32a-H131 и CD32a-R131, фиг. 33.
Следующий набор конструктов использовали для обеспечения с помощью методов генной инженерии эффекторной функцией изотипа IgG2, у которого в ином случае эффекторная функция отсутствует. Для этого исследования мутации, описанные выше, вводили в контекст константного участка IgG2.3 или гибрида IgG2.3/IgGlf, названного IgG2.3Gl-AY (таблица 33). Антитела экспрессировали в малом масштабе в виде супернатантов и исследовали в отношении связывания с FcgR с использованием технологии на основе биосенсора для интерферометрии в биослое методом Fortebio Octet. Поскольку антитела присутствовали в супернатантах в низкой концентрации, эксперимент проводили, захватывая антитела из супернатантов с использованием сенсоров, покрытых белком А, с последующим связыванием с аналитами FcgR в растворе. Контроль с очищенным IgGlf и IgGlf из супернатанта, в том числе с антителами IgGl дикого типа, SE, P238D, V4 и VI2, также включали для сравнения, и каждое из этих контрольных антител демонстрировало ожидаемые свойства связывания с FcgR (фиг. 34). Антитело IgG2.3 также демонстрировало ожидаемый профиль связывания с заметным связыванием только с CD32a-H131. Тем не менее, все мутации для введения мутаций S267E, L328F, P238D, P271G, H268D, A330R, G237D или E233D в IgG2.3 оказались неспособны рекапитулировать аффинность в отношении FcgR у соответствующих сконструированных mAb IgGl (фиг. 34). В отличие от этого, конструкт IgG2.3Gl-AY был способен полностью сохранить свойства связывания с FcgR у IgGl дикого типа при сохранении СН1 и шарнирного участков IgG2.3. Кроме того, все мутанты IgG2.3Gl-AY, содержащие S267E, L328F, P238D, P271G, H268D, A330R, G237D и E233D демонстрировали свойства связывания с FcgR, сравнимые с вариантами mAb IgGl, содержащими те же мутации (фиг. 34). Это демонстрирует успешное конструирование антител с СН1 и шарнирным участками IgG2, сочетающимися с эффекторной функцией IgGl дикого типа или мутантного IgGl.
Эту стратегию конструирования дополнительно изучали путем конструирования других антител в формате IgG2.3Gl-AY, IgG2.3Gl-AY-S267E (IgG2.3Gl-AY-V27), а также вариантов в В-форме IgG2 (IgG2.5Gl-AY и IgG2.5Gl-AY-V27) и других гибридных антител, содержащих разные комбинации константных доменов IgGl и IgG2 и исследования связывания этих антител с his-мечеными FcgR, захваченными на Fab к his, с использованием технологии SPR Biacore. В соответствии с данными Octet для супернатанта данные SPR показывали, что антитела IgG2.3Gl-AY и IgG2.3Gl-AY-V27 характеризовались свойствами связывания с FcgR, сравнимыми с IgGlf и IgGlf-S267E,
FcgR-his белками, захваченными на Fab к his.
соответственно, несмотря на содержание СН1 и шарнирного участков у антитела IgG2 в А-форме (IgG2.3) (таблица 34). Подобные данные также получали при использовании антител IgG2.5Gl-AY и IgG2.5Gl-AY-V27, они демонстрировали успешное конструирование антител IgG2 в В-форме (содержащих мутацию C131S, называемых IgG2.5), имеющих эффекторные функции, подобные IgGlf или модифицированному IgGlf. Данные для нескольких других антител с константными участками IgG2.3Gl-AY, IgG2.3Gl-AY-V27, IgG2.5Gl-AY или IgG2.5Gl-AY-V27, но отличающимися вариабельными участками показывали, что эта стратегия конструирования является широко применимой к другим антителам независимо от вариабельных доменов (таблица 34). Другие конструкты, которые демонстрируют свойства связывания с FcgR, подобные IgGlf, включают в себя IgGl-G2.3Gl-AY и IgGldeltaTHT, тогда как несколько из конструктов с модифицированными константными участками были неспособны сохранять свойства связывания с FcgR, подобные IgGlf, в том числе конструкты IgG2.3Gl-KH, IgG2.5Gl-KH, IgG2.3plusTHT, IgG2.5plusTHT и IgG2.3plusGGG (таблица 34).
mAb4-IgG2.5
46%
mAb5-IgG2.5
89%
26%
mAbl2-IgG2.5
36%
mAbl3-IgG2.5
-2%
39%
-2%
-2%
mAb8-IgG2.3Gl-AY
77%
61%
38%
10%
38%
13%
mAblO-IgG2.3Gl-AY
67%
23%
14%
24%
CD73.4-IgG2.3Gl-AY
65%
38%
20%
38%
14%
mAb7-IgG2.5Gl-AY
80%
73%
45%
12%
47%
19%
mAb8-IgG2.5Gl-AY
77%
70%
45%
17%
48%
22%
CD73.4-IgG2.5Gl-AY
65%
43%
24%
40%
16%
CD73.4-IgG2.3Gl-KH
15%
CD73.4-IgG2.5Gl-KH
17%
CD73.4-IgG2.3Gl.lf-KH
10%
CD73.4-IgG2.5Gl.lf-KH
mAb7-IgG2.3Gl-AY-V27
84%
68%
92%
76%
26%
mAb8-IgG2.3Gl-AY-V27
78%
67%
80%
67%
24%
mAblO-IgG2.3Gl-AY-V27
69%
24%
57%
40%
12%
mAb7-IgG2.5Gl-AY-V27
81%
74%
89%
84%
32%
mAb8-IgG2.5Gl-AY-V27
77%
76%
79%
77%
33%
10%
CD73.4-IgGl-G2.3Gl-AY
66%
50%
31%
10%
48%
23%
CD73.4-IgGl-G2.3Gl-KH
18%
CD73.4-IgGldeltaTHT
65%
43%
23%
42%
17%
CD73.4-IgG2.3plusTHT
42%
CD73.4-IgG2.5plusTHT
34%
CD73.4-IgG2.3plusGGG
43%
В своей совокупности эти данные показывают, что последовательность в IgGl, находящаяся непосредственно со стороны С-конца от консервативного мотива СРРСРАР (SEQ Ш N0: 38) в шарнирном участке, придает опосредованную FcgR эффекторную функцию, тогда как СН1 и верхние части шарнира антитела могут быть заменены на последовательности IgG2 или модифицированного IgG2, чтобы потенциально объединить эффекторные функции IgGl и модифицированного IgGl с лучшими свойствами интернализации или передачи сигнала у антител, содержащих СН1 и/или шарнирного участков IgG2.
Эквиваленты
Специалист в данной области техники поймет или будет способен определить многие эквиваленты описанных в данном документе конкретных вариантов осуществления с использованием не более, чем стандартного экспериментирования. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются следующими пунктами формулы изобретения.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
SEQID
Описание
Последовательность
Изоформа 1 человеческого CD73
MCPRAARAPA TLLLALGAVL WPAAGAWELT ILHTNDVHSR LEQTSEDSSK CVNASRCMGG VARLFTKVQQ IRRAEPNVLL LDAGDQYQGT IWFTVYKGAE VAHFMNALRY DAMALGNHEFDNGVEGLIEP LLKEAKFPIL SANIKAKGPL ASQISGLYLP YKVLPVGDEV VGIVGYTSKE TPFLSNPGTN LVFEDEITAL QPEVDKLKTL NVNKIIALGH SGFEMDKLIA QKVRGVDVVV GGHSNTFLYT GNPPSKEVPA GKYPFIVTSD DGRKVPVVQA YAFGKYLGYL KIEFDERGNVISSHGNPILL NSSIPEDPSI KADINKWRIK LDNYSTQELG KTIVYLDGSS QSCRFRECNM GNLICDAMIN NNLRHTDEMF WNHVSMCILN GGGIRSPIDE RNNGTITWEN LAAVLPFGGT FDLVQLKGST LKKAFEHSVH RYGQSTGEFL QVGGIHVVYD LSRKPGDRVV KLDVLCTKCRVPSYDPLKMD EVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDS GDQDINVVST YISKMKVIYP AVEGRIKFST GSHCHGSFSL IFLSLWAVIF VLYQ
Изоформа 2 человеческого CD73
MCPRAARAPA TLLLALGAVL WPAAGAWELT ILHTNDVHSR LEQTSEDSSK CVNASRCMGGVARLFTKVQQ IRRAEPNVLL LDAGDQYQGT IWFTVYKGAE VAHFMNALRY DAMALGNHEFDNGVEGLIEP LLKEAKFPIL SANIKAKGPL ASQISGLYLP YKVLPVGDEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTN LVFEDEITAL QPEVDKLKTL NVNKIIALGH SGFEMDKLIA QKVRGVDVVVGGHSNTFLYT GNPPSKEVPA GKYPFIVTSD DGRKVPVVQA YAFGKYLGYL KIEFDERGNVISSHGNPILL NSSIPEDPSI KADINKWRIK LDNYSTQELG KTIVYLDGSS QSCRFRECNMGNLICDAMIN NNLRHTDEMF WNHVSMCILN GGGIRSPIDE RNNGIHVVYD LSRKPGDRWKLDVLCTKCR VPSYDPLKMD EVYKVILPNF LANGGDGFQM IKDELLRHDS GDQDINVVSTYISKMKVIYP AVEGRIKFST GSHCHGSFSL IFLSLWAVIF VLYQ
CD73 яванского макака
MCPRAARAPA TLLLAVGALL WSAAGAWELT ILHTNDVHSR LEQTSEDSSK CVNASRCMGGVARLFTKVQQ IRRAEPNVLL LDAGDQYQGT IWFTVYKGAE VAHFMNALRY DAMALGNHEFDNGVEGLIEP LLKEAKFPIL SANIKAKGPL ASQISGLYLP YKVLPVGDEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTN LVFEDEITAL QPEVDKLKTL NVNKIIALGH SGFETDKLIA QKVRGVDVVVGGHSNTFLYT GNPPSKEVPA GKYPFIVTSD DGRKVPVVQA YAFGKYLGYL KIEFDERGNVISSHGNPILL NSSIPEDPSI KADINKWRIK LDNYSTQELG KTIVYLDGSS QSCRFRECNMGNLICDAMIN NNLRHADEMF WNHVSMCILN GGGIRSPIDE RNNGTITWEN LAAVLPFGGTFDLVQLKGST LKKAFEHSVH RYGQSTGEFL QVGGIHVVYD LSRKPGDRVV KLDVLCTKCRVPSYDPLKMD EIYKVILPNF LANGGDGFQM IKDELLRHDS GDQDINVVST YISKMKVIYPAVEGRIKFST GSHCHGSFSL IFLSFCAVIF VLYQ
VH 11F11
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCATSGFTFSNYGMH WVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSSW YPDSFDIWGQGTMVTVSS
CDR1 VH 11F11
NYGMH
CDR2 VH 11F11
VILYDGSNKYYPDSVKG
CDR3 VH 11F11
GGSSWYPDSFDI
VK1 11F11
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGVSSYLAWY QQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGPGTDFT LTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWHLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 11F11
RASQGVSSYLA
CDR2 VK1 11F11
DASNRAT
CDR3 VK1 11F11
QQRSNWHLT
VK2 11F11
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK2 11F11
RASQGISSWLA
CDR2 VK2 11F11
AASSLQS
CDR3 VK2 11F11
QQYNSYPLT
VH4C3
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM HWVRQAPGKGLEWVSGISWKSGSIGYADSVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCVKGYYVI LTGLDYWGQGTLVTVS S
CDR1 VH 4C3
DYAMH
CDR2 VH 4C3
GISWKSGSIGYADSVKG
CDR3 VH 4C3
GYYVILTGLDY
VK14C3
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWY QQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFT LTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 4C3
RASQSVSSYLAW
CDR2 VK1 4C3
ASSRATG
CDR3 VK1 4C3
QYGSSPLT
VK24C3
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCRASQGISSWLAW YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGQGTKVEIK
CDR1 VK2 4C3
RASQGISSWLA
CDR2 VK2 4C3
AASSLQS
CDR3 VK2 4C3
QQYNSYPPT
VK3 4C3
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCRASQGISSWLAW YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGQGTKVEIK
CDR1 VK3 4C3
RASQGISSWLA
CDR2 VK3 4C3
AASSLQS
CDR3 VK3 4C3
QQYNSYPPT
VH4D4
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYADSVKGR FTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARGYNS RWYPDAFDIWGQGTMVT VSS
CDR1 VH 4D4
NYGMH
CDR2 VH 4D4
VIWYDESNKYY AD SVKG
CDR3 VH 4D4
GYNSRWYPDAFDI
VK14D4
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 4D4
RASQGISSWLA
CDR2 VK1 4D4
AASSLQS
CDR3 VK1 4D4
QQYNSYPLT
VH1 10D2
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGLH WVRQAPGKGLEWVAVIRYDGSNKYYADSVKGRF TISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGGSSW YPDGLDVWGQGTTVTV SS
CDR1 VH1 10D2
NYGLH
CDR2 VH1 10D2
VIRYD GSNKYY AD SVKG
CDR3 VH1 10D2
GGSSWYPDGLDV
VK1 10D2
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWY QQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 10D2
RASQGISSALA
CDR2 VK1 10D2
DASSLES
CDR3 VK1 10D2
QQFNSYPT
VK2 10D2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK2 10D2
RASQGISSWLA
CDR2 VK2 10D2
AASSLQS
CDR3 VK2 10D2
QQYNSYPLT
VH 11A6
EVQLVESGGNLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM HWVRQAPGKGLEWVSGISWNNNDIGYADSVKGRF IISRDNAKNSLYLQMNSLRPEDTALYYCVKGYYVI LTGLDYWGQGTPVTVS S
CDR1 VH 11A6
DYAMH
CDR2 VH 11A6
GISWNNNDIGYADSVKG
CDR3 VH 11A6
GYYVILTGLDY
VK1 11A6
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 11A6
RASQGISSWLA
CDR2 VK1 11A6
AASSLQS
CDR3 VK1 11A6
QQYNSYPLT
VH24H2
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGGNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARGGS SWYPDAFDIWGQGTMVTV SS
CDR1 VH 24H2
NYGMH
CDR2 VH 24H2
VIWYD GGNKYY AD SVKG
CDR3 VH 24H2
GGSSWYPDAFDI
VK1 24H2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK
CDR1 VK1 24H2
RASQGISSWLA
CDR2 VK1 24H2
AASSLQS
CDR3 VK1 24H2
QQYNSYPLT
VH5F8
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMH WVRQAPGKGLVWVSRIISDGSSTGYADSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREFSSGW YFDYWGQGTLVTVSS
CDR1 VH 5F8
SYWMH
CDR2 VH 5F8
RIISDGS STGYAD SVKG
CDR3 VH 5F8
EFSSGWYFDY
VK1 5F8
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWY QQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFT LTIS SLQPEDF ATYYCQQF S S YPRTFGQGTKVEIK
CDR1 VK1 5F8
RASQGISSALA
CDR2 VK1 5F8
DASSLES
CDR3 VK1 5F8
QQFSSYPRT
VK2 5F8
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTGFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGQGTKVEIK
CDR1 VK2 5F8
RASQGISSWLA
CDR2 VK2 5F8
AASSLQS
CDR3 VK2 5F8
QQYNSYPRT
VH6E11
EVQLVESGGALVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM HWVRQAPGKGLEWVSGITWNSGGIGYADSVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRYY SSWLLFDNWGQGILVTV SS
CDR1 VH6E11
DYAMH
CDR2 VH6E11
GIT WNS GGIGY AD SVKG
CDR3 VH6E11
DRY YSS WLLFDN
VK1 6E11
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAW YQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFTFGPGTKVDIK
CDR1 VK1 6E11
RASQSVSSSYLA
CDR2 VK1 6E11
GASSRAT
CDR3 VK1 6E11
QHYGSSFT
VH7A11
EVQLVESGGGLVQTGRSLRLSCAASGFTFDDYAM HWVRQAPGKGLEWVSDISWNSDIIGYADSVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIYGS GSSFFDYWGQGILVTV SS
CDR1 VH7A11
DYAMH
CDR2 VH 7All
DISWNSDIIGYADSVKG
CDR3 VH 7All
DIYGSGS SFFDY
VK1 7A11
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQYISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYHSYPPTFGQGTRLEIK
CDR1 VK1 7A11
RASQYISSWLA
CDR2 VK1 7A11
AASSLQS
CDR3 VK1 7A11
QQYHSYPPT
Эпитоп №1 11F11
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA
Эпитоп №2 11F11
LYLPYKVLPVGDEWG
CHI IgGl дикого типа
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGT AALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
His-меченый CD73
MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHT
NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV
QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVA
HFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAK
FPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGI
VGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKT
LNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHS
NTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQ
AYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPE
DPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQS
CRFRECNMGNLICDAMINNNLRHADETFWNHVSM
CILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFD
LVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHV
VYDL SRKPGDRVVKLD VLCTKCRVP S YDPLKMDE
VYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDIN
VVSTYISKMKVIYPAVEGRIKHHHHHH
100
11F11 (полноразмерная тяжелая цепь)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCATSGFTFSNYGMH
WVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRFT
ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSSW
YPDSFDIWGOGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST
SESTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTF
PAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTOTYTCNVDHK
PSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPP
KPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVOFNWYV
DGVEVHNAKTKPREEOFNSTFRVVSVLTVVHODW
LNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGOPREPOV
YTLPPSREEMTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES
NGOPENNYKTTPPMLD SD GSFFLY SKLT VDKSRW
OOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
101
11F11 (полноразмерная легкая цепь 1)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQGVSSYLAWY
QQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGPGTDFT
LTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWHLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
102
11F11 (полноразмерная легкая цепь 2)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
103
4СЗ (полноразмерная тяжелая цепь)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSGISWKSGSIGYADSVKGRF
TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCVKGYYVI
LTGLD Y WGOGTL VT VS S ASTKGP S VFPL APS SKSTS
GGTAALGCLVKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFP
AVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHKPS
NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF
PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY
VDGVEVHNAKTKPREEOYNSTYRVVSVLTVLHOD
WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGOPREPO
VYTLPP SRDELTKNO VSLTCL VKGFYP SDIAVEWES
NGOPENNYKTTPP VLD SD GSFFLY SKLT VDKSRWO
OGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
104
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 1)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWY
QQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFT
LTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
105
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 2)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCRASQGISSWLAW
YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF
TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGQGTKVEIK
RTVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASWCLLNNFYPRE
АК VO WKVDNALO SGNSOES VTEOD SKD STYSLS S
TLTLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRG
106
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 3)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCRASQGISSWLAW
YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF
TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGQGTKVEIK
RTVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASWCLLNNFYPRE
AKVO WKVDNALO SGNSOES VTEOD SKD STYSLS S
TLTLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRG
107
4D4 (полноразмерная тяжелая цепь)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM
HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYADSVKGR
FTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARGYNS
RWYPDAFDIWGOGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCS
RSTSESTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGV
HTFP A VLO S S GL Y SL S SWT VP S SNFGTOT YTCN VD
HKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVOFNW
YVDGVEVHNAKTKPREEOFNSTFRWSVLTWHO
DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGOPREP
OWTLPPSREEMTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEW
ESNGOPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSR
WOOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
108
4D4 (полноразмерная легкая цепь 1)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKWACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
109
10D2 (полноразмерная тяжелая цепь)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGLH
WVRQAPGKGLEWVAVIRYDGSNKYYADSVKGRF
TISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGGSSW
YPDGLDVWGOGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRS
TSESTAALGCLVKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHT
FPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHK
PSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSOEDPEVOFNWYV
DGVEVHNAKTKPREEOFNSTYRVVSVLTVLHODW
LNGKEYKCKVSNKGLP S SIEKTISKAKGOPREPOVY
TLPPSOEEMmNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWOE
GNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSLGK
10D2 (полноразмерная легкая цепь 1)
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWY
QQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPTFGGGTKVEIKRT
VAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREAK
VOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTLT
LSKAD YEKHK VY ACEVTHOGL S SP VTKSFNRGEC
111
10D2 (полноразмерная легкая цепь 2)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
112
11А6 (полноразмерная тяжелая цепь)
EVQLVESGGNLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSGISWNNNDIGYADSVKGRF
IISRDNAKNSLYLQMNSLRPEDTALYYCVKGYYVI
LTGLD Y WGOGTP VT VS S ASTKGP S VFPL APS SKST S
GGTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFP
AVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHKPS
NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF
PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY
VDGVEVHNAKTKPREEOYNSTYRVVSVLTVLHOD
WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGOPREPO
VYTLPP SRDELTKNO VSLTCL VKGFYP SDIAVEWES
NGOPENNYKTTPP VLD SD GSFFLY SKLT VDKSRWO
OGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
113
11А6 (полноразмерная легкая цепь 1)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
114
24Н2 (полноразмерная тяжелая цепь)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM
HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGGNKYYADSVKG
RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARGGS
SWYPDAFDIWGOGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCS
RSTSESTAALGCLVKD YFPEP VTVSWNSGALTSGV
HTFP A VLO S S GL Y SL S SWT VP S S SLGTKT YTCN VD
HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSOEDPEVOFNW
YVDGVEVHNAKTKPREEOFNSTYRVVSVLTVLHO
DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGOPREP
OWTLPPSOEEMmNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEW
ESNGOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR
WOEGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSLGK
115
24Н2 (полноразмерная легкая цепь 1)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKWACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
116
5F8 (полноразмерная тяжелая цепь)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMH
WVRQAPGKGLVWVSRIISDGSSTGYADSVKGRFTI
SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAWYCAREFSSGW
YFDYWGOGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG
GTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHKPSN
TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV
DGVEVHNAKTKPREEOYNSTYRVVSVLTVLHODW
LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGOPREPOV
YTLPPSRDELTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWOO
GNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
117
5F8 (полноразмерная легкая цепь 1)
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWY QQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFT LTIS SLQPEDF ATYYCQQF S S YPRTFGQGTKVEIKRT VAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREAK VOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTLT LSKAD YEKHK W ACEVTHOGL S SP VTKSFNRGEC
118
5F8 (полноразмерная легкая цепь 2)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTGFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGQGTKVEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKWACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
119
6Е11 (полноразмерная тяжелая цепь)
EVQLVESGGALVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSGITWNSGGIGYADSVKGRF
TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRYY
SSWLLFDNWGOGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS
TSGGTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHT
FPAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHK
PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF
LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEOYNSTYRVVSVLTVLH
ODWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGOPRE
POVYTLPPSRDELTKNOVSLTCLVKGFYPSDIAVE
WESNGOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS
RWOOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
120
6Е11 (полноразмерная легкая цепь 1)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAW
YQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDF
TLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFTFGPGTKVDIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
121
7А11 (полноразмерная тяжелая цепь)
EVQLVESGGGLVQTGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSDISWNSDIIGYADSVKGRF
TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIYGS
GSSFFDYWGOGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST
SGGTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTF
PAVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTOTYICNVNHKP
SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW
YVDGVEVHNAKTKPREEOYNSTYRVVSVLTVLHO
DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGOPREP
0 VYTLPP SRDELTKNO VSLTCL VKGF YP SDI AVE W
ESNGOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR
WOOGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
122
7А11 (полноразмерная легкая цепь 1)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQYISSWLAWY
QQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYHSYPPTFGQGTRLEIKR
TVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASVVCLLNNFYPREA
KVOWKVDNALOSGNSOESVTEODSKDSTYSLSSTL
TLSKADYEKHKVYACEVTHOGLSSPVTKSFNRGEC
123
Шарнир с C219S
ERKSCVECPPCP APPVAG
124
CHI IgG2 (дикого типа)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV
125
СН2 IgGl + A330SHP331S
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT VLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPS SIEKTISKAK
126
Константный участок человеческого IgGl
ASTKGP S VFPL АР S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT
HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE
EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ
VSLTCL VKGFYP SDI AVE WESNGQPENNYKTTPP V
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGK
127
Константный участок человеческого IgGl (аллотипический вариант)
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT
HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE
EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ
VSLTCL VKGFYP SDI AVE WESNGQPENNYKTTPP V
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGK
128
СНЗ IgGl +Е356 иМ358
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
129
Константный участок IgGl
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT
HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE
EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ
VSLTCL VKGFYP SDI AVE WESNGQPENNYKTTPP V
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGK
130
Константный участок IgG2
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECP PCPAPPVAG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STFRVVSVLT VVHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPM LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
131
Легкая каппа-цепь (CL) человеческого IgGl
RTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
132
С-конец тяжелой цепи
LSPGK
133
CD73.4-IgG2CS-IgGl.If, аминокислотная последовательность
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM
HWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGR
FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS
WYPDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSR
STSESTAALGCLVKD YFPEP VTVSWNSGALTSGVH
TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDH
KPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV
DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDW
LNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVY
TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
134
CD73.4-IgG2CS-IgGl.If, нуклеотидная последовательность
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtcc ctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactg ggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatga tggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccaga gacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgagga cacggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttg atatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcc catcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcg gccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg aactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcct caggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggca cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggac aagacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacct gtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg atctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga ccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaa gacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtc ctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggt ctccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaag ggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagat gaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcga catcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacc acgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgt ggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatg aggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
135
VHCD73.4 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPD SFDIWGQGTMVT VS S
136
Шарнир IgG2 дикого типа
ERKCCVECPPCP APPVAG
137
СН2 IgGl дикого типа
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
138
СНЗ IgGl дикого типа
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
139
VH 11F11 - нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAACGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATTGTATGATGGAAGT
AATAAATACTATCCAGACTCCGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGC
TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGG
ACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGCA
GCAGCTGGTACCCTGATTCTTTTGATATCTGGGG
CCAAGGAACAATGGTCACCGTCTC ТТСА
140
VK1 11F11 - нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGGGTGTTAGCAGCTACTTAGCC
TGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGG
CTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTG
GCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGCCTG
GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGA
GCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAG
CGTAGCAACTGGCATCTCACTTTCGGCGG
AGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
141
VK2 11F11 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGG
AGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
142
VH 4СЗ - нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTG
GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAAGAGTGG
TAGCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCC
CTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAG
GACACGGCCTTGTATTACTGTGTAAAAGGGTATT
ACGTTATTTTGACTGGCCTTGACTACTGGGGCCA
GGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTC А
143
VK1 4СЗ - нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCC
TGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGG
CTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTG
GCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTG
GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGA
GCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG
TATGGTAGCTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAA
144
VK2 4СЗ - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCTTCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCCAACGTTCGGCCA
GGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
145
VK3 4СЗ - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCTTCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCCAACGTTCGGCCA
AGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
146
VH 4D4 - нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGAAAG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGGGTATA
ACAGCAGGTGGTACCCTGATGCTTTTGATATCTG
GGGCCAAGGGACAATGGTCACCGT СТСТТСА
147
VK1 4D4 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAA
148
VH1 10D2 - нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCCT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATACGGTATGATGGAAG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTATCTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGGGGGGC
AGCAGCTGGTACCCGGACGGTTTGGACGTCTGG
GGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTC СТСА
149
VK1 10D2 - нуклеотидная последовательность
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
CCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAG
CTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAG
TTTAATAGTTACCCCACTTTCGGCGGAGGGACCA
AGGTGGAGATCAAA
150
VK2 10D2 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAA
151
VH 11А6 - нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAAACTTG
GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAATAAT
GACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGA
TTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCC
TGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGACCTGAGG
ACACGGCCTTGTATTATTGTGTAAAAGGTTATTA
CGTTATTTTGACTGGTCTTGACTACTGGGGCCAG
GGAACCCCGGTCACCGTCTCCTC А
152
VK1 11А6 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAA
153
VH 24Н2 - нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAGG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAA
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGC
AGCAGCTGGTACCCTGATGCTTTTGATATCTGGG
GCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTC ТТСА
154
VK1 24H2 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAA
155
VH 5F8 - нуклеотидная последовательность
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTA
GTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACTGGAT
GCACTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCT
GGTGTGGGTCTCACGTATTATTAGTGATGGGAGT
AGCACAGGTTACGCGGATTCCGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACG
CTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGAGTTTA
GCAGTGGCTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGG
AACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
156
VK1 5F8 - нуклеотидная последовательность
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
CCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAG
CTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAG
TTTAGTAGTTACCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAA
157
VK2 5F8 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGGTTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAA
158
VH 6Е11 - нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGCCTTG
GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTACTTGGAATAGTGGT
GGCATAGGCTACGCGGACTCTGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCC
TGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGG
ACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATAGGTA
TTACAGCAGTTGGCTCCTCTTTGACAACTGGGGC
CAGGGAATTCTGGTCACCGTCTC CTCA
159
VK1 6E11 - нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTT
AGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCC
CAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCC
ACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGG
TCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGAC
TGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCA
GCATTATGGTAGCTCATTCACTTTCGGCCCTGGG
ACCAAAGTGGATATCAAA
160
VH 7All - нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTG
GTACAGACTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGATATTAGTTGGAATAGTGAT
ATTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGAT
TCACCATCTCTAGAGACAACGCCAAGAACTCCCT
GTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGA
CACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATTTAT
AGGGAATCCTGGTCACCGTCTC CTCA
161
VK1 7А11 - нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGTATATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATCATAGTTACCCTCCCACCTTCGGCCA
AGGGACACGACTGGAGATTAAA
162
IgGl-IgG2-IgGlf2 (MHCCR)
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKCCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
163
IgGl-IgG2CS-IgGlf2 (MHCCR)
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKSCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
164
IgG2-IgGlf2 (MHCCR)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
165
IgG2CS-IgGlf2 (MHCCR)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
166
IgGl-IgG2-IgGl. If (MHCCR)
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKCCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPS
SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
167
IgGl-IgG2CS-IgGl. If (MHCCR)
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKSCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPS
SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
168
IgG2-IgGl.If (MHCCR)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPS
SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
169
IgG2CS-IgGl. If (MHCCR)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVEC
PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPS
SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
170
VHCD73.3 (а.к.)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM HWVRQAPGKGLEWVSGISWKSGSIGYADSVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTVLYYCVKGYYVI LTGLD Y WGQGTL VT VS S
171
VHCD73.5 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCASSGFTFSNYGMH WVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSSW YPD SFDI WGQGTMVT VS S
172
VHCD73.6 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HW VRQ APGKGLEW VAVILYD S SNKYYPD S VKGRF TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPD SFDI WGQGTMVTVS S
173
VHCD73.7 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCASSGFTFSNYGMH WVRQAPGKGLEWVAVILYDSSNKYYPDSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSSW YPDSFDIWGQGTMVTVSS
174
VHCD73.8 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM H W VRQ APGKGLEW V AVI W YD S SNKYYPD S VKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPD SFDI WGQGTMVTVS S
175
VHCD73.9 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCASSGFTFSNYGMH WVRQ APGKGLE WVAVIWYD S SNKYYPD S VKGRF TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPD SFDI WGQGTMVT VS S
176
VHCD73.10(a.K.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYPDSVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPD SFDI WGQGTMVT VS S
177
VHCD73.11 (а.к.)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYADSVKGR FTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARGYNS RWYPDAFDI WGQGTMVT VS S
178
Гибридный шарнир IgG2/IgGl
ERKCCVECPPCP APELLGG
179
Гибридный шарнир IgG2 C219S/IgGl
ERKSCVECPPCP APELLGG
180
IgGl-IgG2-IgGlf
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKCCVEC
PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
181
IgGl-IgG2CS-IgGlf
ASTKGP S VFPL AP S SKSTSGGTAALGCLVKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTOTYICNVNHKPSNTKVDKKVERKSCVEC
PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
182
IgG2-IgGlf
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC
PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
183
IgG2CS-IgGlf
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSNFGTOTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVEC
PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY
NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
184
mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgGl. If
EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAASGFTFD DYAMHWVRQA PGKGLEWVSGISWKSGSIGY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAKGYYVILTGLDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAEGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRWSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
185
mAb-CD73.3 -Vh-hHC-IgG2-C219S
EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAASGFTFD DYAMHWVRQA PGKGLEWVSGISWKSGSIGY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAKGY YVILTGLDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KSCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG
186
mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAASGFTFD DYAMHWVRQA PGKGLEWVSG ISWKSGSIGY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAKGY YVILTGLDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KSCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG
187
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAVILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAWYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QWTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
188
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAWYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP
SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
189
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
(идентичный SEQ ID NO: 133, за исключением отсутствия С-концевого лизина)
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
190
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
191
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
192
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDGSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED
TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
193
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
194
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
195
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG
NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
196
mAb-CD73.7-Vh-hHC4gGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
197
mAb-CD73.7-Vh-hHC4gG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
198
mAb-CD73.7-Vh-hHC4gG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV ILYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
199
mAb-CD73.8-Vh-hHC4gGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV
SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
200
mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
201
mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
202
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QWTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
203
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAWYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMWVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV
KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
204
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCASSGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDSSNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
205
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAEG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPSSIEKTI SKAKGQPREP QWTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
206
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAWYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMWVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KD YFPEP WV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEW CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NWSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
207
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARGG SSWYPDSFDI WGQGTMVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSNFGTQ TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKSCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG
208
mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgGl. If
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCARGY NSRWYPDAFD IWGQGTMVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCL VKD YFPEP VT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKRV EPKSCDKTHT CPPCPAPEAE GAPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPSSIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL TCLVKGFYP S DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSPG
209
mAb-CD73.1 l-Vh-hHC-IgG2-C219S
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCARGY NSRWYPDAFD IWGQGTMVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCL VKD YFPEP VT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKSCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG
210
mAb-CD73.1 l-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS NYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDESNKYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCARGY NSRWYPDAFD IWGQGTMVTV SSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCL VKD YFPEP VT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTK VDKTV ERKSCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPP VLD SDGSFFLY SK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG
211
mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgGl. If
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggcaggtccct gagactctcctgtgcagcctctggattcacctttgatgattatgccatgcactgggt ccggcaagctccagggaagggcctggagtgggtctcaggtattagttggaaga gtggtagcataggctatgcggactctgtgaagggccgattcaccatctccagag acaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagctgaggaca cggccttgtattactgtgccaaagggtattacgttattttgactggccttgactactg gggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcgtcgaccaagggcccctccg tgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgctctggg ctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctggc gccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcggcctgt actccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccagaccta catctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcgggtg gaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcctgaa gctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacaccctg atgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgag gacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgc caagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgtccg tgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaag gtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggctaag ggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaagaga tgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctccga tatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaagacca cccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgacagt ggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgcacga ggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
212
mAb-CD73.3 -Vh-hHC-IgG2-C219S
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggcaggtccct gagactctcctgtgcagcctctggattcacctttgatgattatgccatgcactgggt ccggcaagctccagggaagggcctggagtgggtctcaggtattagttggaaga gtggtagcataggctatgcggactctgtgaagggccgattcaccatctccagag acaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagctgaggaca cggccttgtattactgtgccaaagggtattacgttattttgactggccttgactactg gggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcgtcgaccaagggcccctctg tgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctgggct gcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctggcg ctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcctgta ctctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacctaca cctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtggaa cggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggccctt ccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccggaccc ccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtgcag ttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcccag agaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggtgca ccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggc ctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagccccgcg agcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaacca ggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaat gggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccccccatgct ggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcccgg tggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcacaac cactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaa
213
mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggcaggtccct gagactctcctgtgcagcctctggattcacctttgatgattatgccatgcactgggt ccggcaagctccagggaagggcctggagtgggtctcaggtattagttggaaga gtggtagcataggctatgcggactctgtgaagggccgattcaccatctccagag acaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagctgaggaca cggccttgtattactgtgccaaagggtattacgttattttgactggccttgactactg gggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcgtcgaccaagggcccatcg gtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccct gggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactc aggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcagg actctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcaccca gacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaag acagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtg gcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatct cccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac aaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctc accgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctc caacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaaggg cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatga ccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgaca tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac gcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtgg acaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgag gctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
214
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc ctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgct ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaact ctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcgg cctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccag acctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcg ggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcc tgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacac cctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccac gaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaa cgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgt ccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgc aaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggct aagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaag agatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctc cgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaaga ccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgac agtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgca cgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
215
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag
acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac
acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga
tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctg
ggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctg
gcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcct
gtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacct
acacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtg
gaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggc
ccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgga
cccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtg
cagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc
cagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggt
gcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag
ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc
gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg
gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca
tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc
cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac
aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
216
mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc atcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcgg ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctc aggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca agacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctg tggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgat ctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagacc ctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcct caccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtct ccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaagg gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatg accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgac atcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
217
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc ctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgct
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaact
ctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcgg
cctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccag
acctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcg
ggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcc
tgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacac
cctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccac
gaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaa
cgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgt
ccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgc
aaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggct
aagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaag
agatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctc
cgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaaga
ccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgac
agtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgca
cgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
218
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc ctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctg ggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctg gcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcct gtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacct acacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtg gaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggc ccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgga cccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtg cagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc cagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggt gcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
219
mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccc tgagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactgg gtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgat ggaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagag acaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggac acggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttga tatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc atcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcgg ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctc aggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctg
tggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgat
ctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagacc
ctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcct
caccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtct
ccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaagg
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatg
accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgac
atcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg
gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
220
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgGl. If
ggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcag
ttatattgtatgattccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattca
ccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctga
gagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtac
cctgattcttttgatatctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcg
accaagggcccctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcg
gaacagccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccg
tgtcctggaactctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctg
cagtctagcggcctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctct
gggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaagg
tggacaagcgggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccc
tgccctgctcctgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagc
ccaaggacaccctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtgg
atgtgtcccacgaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtgg
aagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctac
cgggtggtgtccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaaga
gtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccat
ctccaaggctaagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccat
cccgggaagagatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggc
ttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaac
aactacaagaccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtaca
gcaagctgacagtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgct
ccgtgatgcacgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtc
ccctggc
221
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgattc
cagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagac
aattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgata
tctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcccct
ctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctgg
gctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctgg
cgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcctg
tactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagaccta
cacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtgg
aacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggccc
ttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccggacc
cccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtgca
gttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagccca
gagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggtgc
accaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg
cctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagccccgc
gagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaacc
aggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtgga
atgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccccccatg
ctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtccc
ggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcaca
accactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
222
mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgattc
cagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagac
aattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgata
tctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcccat
cggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggcc
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctca
ggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacc
cagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaa
gacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgt
ggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatc
tcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc
tgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac
aaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctc
accgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctc
caacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaaggg
cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatga
ccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac
gcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtgg
acaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgag
gctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
223
mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgattc
cagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagac
aattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgata
tctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcccct
ccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgctct
gggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactct
ggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcggc
ctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccaga
cctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcgg
gtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcct
gaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacacc
ctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacg
aggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaac
gccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgtc
cgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgca
aggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggcta
agggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaaga
gatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctcc
gatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaagac
cacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgaca
gtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgcac gaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
224
mAb-CD73.7-Vh-hHC4gG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgattc
cagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagac
aattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgata
tctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcccct
ctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctgg
gctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctgg
cgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcctg
tactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagaccta
cacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtgg
aacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggccc
ttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccggacc
cccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtgca
gttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagccca
gagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggtgc
accaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggg
cctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagccccgc
gagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaacc
aggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtgga
atgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccaccccccccatg
ctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtccc
ggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcaca
accactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
225
mAb-CD73.7-Vh-hHC4gG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgattc
cagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagac
aattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgata
tctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcccat
cggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggcc
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctca
ggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacc
cagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaa
gacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgt
ggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatc
tcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc
tgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac
aaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctc
accgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctc
caacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaaggg
cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatga
ccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac
gcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtgg
acaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgag
gctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
226
mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgct
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaact
ctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcgg
cctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccag
acctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcg
ggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcc
tgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacac
cctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccac
gaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaa
cgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgt
ccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgc
aaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggct
aagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaag
agatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctc
cgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaaga
ccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgac
agtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgca
cgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
227
mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctg
ggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctg
gcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcct
gtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacct
acacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtg
gaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggc
ccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgga
cccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtg
cagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc
cagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggt
gcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag
ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc
gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg
gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca
tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc
cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac
aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
228
mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
atcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcgg
ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga
actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctc
aggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac
ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctg
tggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgat
ctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagacc
ctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcct
caccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtct
ccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaagg
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatg
accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgac
atcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg
gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
229
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgct
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaact
ctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcgg
cctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccag
acctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcg
ggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcc
tgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacac
cctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccac
gaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaa
cgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgt
ccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgc
aaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggct
aagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaag
agatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctc
cgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaaga
ccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgac
agtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgca
cgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
230
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctg
ggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctg
gcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcct
gtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacct
acacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtg
gaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggc
ccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgga
cccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtg
cagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc
cagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggt
gcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag
ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc
gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg
gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca
tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc
cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac
aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
231
mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcaagctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatt
ccagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
atcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcgg
ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga
actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctc
aggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac
ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctg
tggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgat
ctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagacc
ctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcct
caccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtct
ccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaagg
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatg
accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgac
atcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg
gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
232
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatg
agagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgct
ctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaact
ctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcgg
cctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcacccag
acctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagcg
ggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctcc
tgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggacac
cctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccac gaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaa cgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggtgt ccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgc aaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaaggct aagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccgggaag agatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacccctc cgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactacaaga ccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagctgac agtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtgatgca cgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctggc
233
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatg
agagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
ctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctctg
ggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactctg
gcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggcct
gtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagacct
acacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccgtg
gaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctggc
ccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgga
cccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggtg
cagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcc
cagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtggt
gcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag
ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc
gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg
gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca
tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc
cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac
aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
234
mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgGl.lf
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatg
agagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggccc
atcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcgg
ccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga
actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctc
aggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac
ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatcctgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctg
tggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgat
ctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagacc
ctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcct
caccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtct
ccaacaaagccctcccaagcagcatcgagaaaaccatctccaaagccaaagg
gcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatg
accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgac
atcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg
gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtaaa
235
mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgGl. If
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatg
aaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtttctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattattgtgcgagagggtataacagcaggtggtaccctgatgcttttg
atatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcc
cctccgtgtttcctctggccccttccagcaagtccacctctggcggaacagccgc
tctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaac
tctggcgccctgacatctggcgtgcacaccttccctgctgtgctgcagtctagcg
gcctgtactccctgtcctccgtcgtgacagtgccctccagctctctgggcaccca
gacctacatctgcaacgtgaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagc
gggtggaacccaagtcctgcgacaagacccatacctgccctccctgccctgctc
ctgaagctgaaggcgcccctagcgtgttcctgttccctccaaagcccaaggaca
ccctgatgatctcccggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtccca
cgaggacccagaagtgaagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcaca
acgccaagaccaagcctagagaggaacagtacaactccacctaccgggtggt
gtccgtgctgaccgtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagt
gcaaggtgtccaacaaggccctgcctagctccatcgaaaagaccatctccaag
gctaagggccagccccgcgagccccaggtgtacacactgcctccatcccggg
aagagatgaccaagaaccaggtgtccctgacttgcctcgtgaagggcttctacc
cctccgatatcgccgtggaatgggagtccaacggccagcctgagaacaactac
aagaccacccctcccgtgctggactccgacggctcattcttcctgtacagcaagc
tgacagtggataagtcccggtggcagcaggggaacgtgttctcctgctccgtga
tgcacgaggctctgcacaaccactacacacagaagtccctgtctctgtcccctgg
236
mAb-CD73.1 l-Vh-hHC-IgG2-C219S
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcgtctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatggtatgatg
aaagtaataaatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtttctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacac
ggctgtgtattattgtgcgagagggtataacagcaggtggtaccctgatgcttttg
atatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcagcgtcgaccaagggcc
cctctgtgtttcctctggccccttgctcccggtccacctctgagtctaccgctgctct
gggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcctggaactct
ggcgctctgacctccggcgtgcacacctttccagccgtgctgcagtcctccggc
ctgtactctctgtcctccgtcgtgaccgtgccctcctccaacttcggcacccagac
ctacacctgtaacgtggaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaccg
tggaacggaagtcctgcgtggaatgccctccttgccctgcacctcctgtggctgg
cccttccgtgttcctgttccccccaaagcccaaggacaccctgatgatctcccgg
acccccgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccacgaggaccccgaggt
gcagttcaattggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagc
ccagagaggaacagttcaactccaccttccgggtggtgtccgtgctgaccgtgg
tgcaccaggactggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaag
ggcctgcctgcccccatcgaaaagaccatctccaagacaaagggccagcccc
gcgagcctcaggtgtacacactgcctcccagccgggaagagatgaccaagaa
ccaggtgtccctgacctgtctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg
gaatgggagtccaacggccagcccgagaacaactacaagaccacccccccca
tgctggactccgacggctcattcttcctgtactccaagctgacagtggacaagtcc cggtggcagcagggcaacgtgttctcctgctctgtgatgcacgaggccctgcac aaccactacacccagaagtccctgtccctgagccccggcaaa
237
CD73.4 (VH) - нуклеотидная последовательность
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccct
gagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaactatggcatgcactggg
tccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatattgtatgatg
gaagtaataaatactatccagactccgtgaagggccgattcaccatctccagaga
caattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggaca
cggctgtgtattactgtgcgagagggggcagcagctggtaccctgattcttttgat
atctggggccaaggaacaatggtcaccgtctcttca
238
VK3 5F8
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWY QQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFT LTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWWTFGQGTKVEIK
239
CDR1 VK3 5F8
RASQSVSSYLA
240
CDR2 VK3 5F8
DASNRAT
241
CDR3 VK3 5F8
QQRSNWWT
242
VK3 5F8 - нуклеотидная последовательность
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTA
GTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACTGGAT
GCACTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCT
GGTGTGGGTCTCACGTATTATTAGTGATGGGAGT
AGCACAGGTTACGCGGATTCCGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACG
CTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGAGTTTA
GCAGTGGCTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGG
AACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
243
11F11 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAACGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATTGTATGATGGAAGT
AATAAATACTATCCAGACTCCGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGC
TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGG
ACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGCA
GCAGCTGGTACCCTGATTCTTTTGATATCTGGGG
CCAAGGAACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCC
ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCT
GCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCC
TGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACC
GGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACC
AGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGT
CCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGAC
CGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTAC
ACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACC
AAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGT
GTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGG
CAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACC
CAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAG
GTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAA
GACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGAC
GGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCA
CGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTG
GTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGC
TGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA
ACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCA
TCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC
AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGA
TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGT
CAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGA
GTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTA
CAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACA
AGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCAT
GCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTA
CACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
244
11F11 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGGGTGTTAGCAGCTACTTAGCC
TGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGG
CTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTG
GCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGCCTG
GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGA
GCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAG
CGTAGCAACTGGCATCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
245
11F11 (полноразмерная легкая цепь 2) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
246
4СЗ (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTG GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAAGAGTGG
TAGCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCC
CTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAG
GACACGGCCTTGTATTACTGTGTAAAAGGGTATT
ACGTTATTTTGACTGGCCTTGACTACTGGGGCCA
GGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAA
GGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACC
TCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC
TTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTG
ACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCA
GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC
AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAG
CCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCT
TGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAA
CTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCA
AGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCG
TGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCA
ACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA
AGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTC
AGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAG
GAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCC
ATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA
ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGAC
CAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTA
TCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCC
GGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA
CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAG
CAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCT
GTCTCCGGGTAAA
247
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCC
TGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGG
CTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTG
GCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTG
GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGA
GCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG
TATGGTAGCTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
248
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 2) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCTTCACTTG TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCCAACGTTCGGCCAGGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
249
4СЗ (полноразмерная легкая цепь 3) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCTTCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCCAACGTTCGGCCAAGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
250
4D4 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGAAAG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGGGTATA
ACAGCAGGTGGTACCCTGATGCTTTTGATATCTG
GGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCC
TCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGC
CCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGG
CCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGA
ACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTG
ACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTAC
AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACC
TACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAAC
ACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGT
TGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTG
TGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAA
ACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT
GAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC
GAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTG
GACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAG
CCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGT
GTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACT
GGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCT
CCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAA
CCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAAC
CACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGG
AGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGT
GGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACA
ACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGA
CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTG
GACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTC
TCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACC
ACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGG
ТААА
251
4D4 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
252
10D2 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCCT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATACGGTATGATGGAAG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTATCTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGGGGGGC
AGCAGCTGGTACCCGGACGGTTTGGACGTCTGG
GGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTT
CCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCC
CTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGC
CCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAA
CCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTG
ACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAC
AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGT
GACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGAC
CTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAA
CACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATA
TGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAG
TTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCC
CAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGAC
CCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAG
CCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTA
CGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC
AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTA
CCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG
GACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAG
GTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGA
AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAG
AGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGA
GGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTG
CCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCC
GTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAAC
AACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCG
ACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGT
GGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTT
CTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAAC
CACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGG
GTAAA
253
10D2 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
CCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAG
CTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAG
TTTAATAGTTACCCCACTTTCGGCGGAGGGACCA
AGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCAT
CTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTT
GAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTG
AATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAG
TGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAAC
TCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAG
GACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACG
CTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTC
TACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCT
CGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT
254
10D2 (полноразмерная легкая цепь 2) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
255
11А6 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAAACTTG
GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAATAAT
GACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGA
TTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCC
TGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGACCTGAGG
ACACGGCCTTGTATTATTGTGTAAAAGGTTATTA
CGTTATTTTGACTGGTCTTGACTACTGGGGCCAG
GGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAG
GGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCT
CTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACT
TCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGA
CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAG
GACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCA
GCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGC
CCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTT
GTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAC
TCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAA
GGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGT
GGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAA
CTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAA
GCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCA
GCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGG
AGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA
TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAA
CCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACC
AAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTAT
CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCC
GGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA
CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAG
CAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA
TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCT
GTCTCCGGGTAAA
256
11А6 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
257
24Н2 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
CAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTG
GTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGGCAT
GCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCT
GGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAGG
TAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCG
ATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACG
CTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAA
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGC
AGCAGCTGGTACCCTGATGCTTTTGATATCTGGG
GCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCTTC
CACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCC
TGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCC
CTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAAC
CGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGA
CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACA
GTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTG
ACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCT
ACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACA
CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATG
GTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTT
CCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCA
AAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCC
CTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCC
AGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACG
TGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA
AGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACC
GTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGA
CTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGT
CTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAA
ACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAG
CCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGG
AGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC
TGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGT
GGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACA
ACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA
CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTG
GACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTC
TCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACC
ACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGG
ТААА
258
24Н2 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGA
CCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
259
5F8 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTA
GTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACTGGAT
GCACTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCT
GGTGTGGGTCTCACGTATTATTAGTGATGGGAGT
AGCACAGGTTACGCGGATTCCGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACG
CTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAG
GACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGAGTTTA
GCAGTGGCTGGTACTTTGACTACTGGGGCCAGGG
AACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGC
CCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG
GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCC
CCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCA
GCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACT
CTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG
GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGC
AACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAC
AAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTG
GGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC
ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTG
GTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGG
TACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC
GCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGT
CCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTA
CAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGA
GAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC
AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGA
ACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCA
GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAG
AACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC
TCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG
TGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAG
GCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCT
CCGGGTAAA
260
5F8 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
CCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAG
CTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAG
TTTAGTAGTTACCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
261
5F8 (полноразмерная легкая цепь 2) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGGTTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATAATAGTTACCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGA
CCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
262
6Е11 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGCCTTG
GTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGGTATTACTTGGAATAGTGGT
GGCATAGGCTACGCGGACTCTGTGAAGGGCCGA
TTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCC
TGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGG
ACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATAGGTA
TTACAGCAGTTGGCTCCTCTTTGACAACTGGGGC
CAGGGAATTCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACC
AAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC
ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGAC
TACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCC
CTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCT
CAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCA
GCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACA
AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAA
TCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCT
GAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAC
CCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACAT
GCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGT
ТСAACTGGTAC GTGGAC GGC GTGGAGGTGCATAATGC СAAGА
CAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTG
GTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGC
AAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCC
CCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGA
GAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTG
ACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC
TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAG
CCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC
GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAG
AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATG
CATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCC
CTGTCTCCGGGTAAA
263
6Е11 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGT
CTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTG
CAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTT
AGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCC
CAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCC
ACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGG
TCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGAC
TGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCA
GCATTATGGTAGCTCATTCACTTTCGGCCCTGGG
ACCAAAGTGGATATCAAACGAACTGTGGCTGCA
CCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGC
AGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCT
GCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGT
ACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGG
TAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAG
CAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCT
GACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAA
AGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTG
AGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA
GAGTGT
264
7А11 (полноразмерная тяжелая цепь) -нуклеотидная последовательность
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTG
GTACAGACTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG
CAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCAT
GCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCT
GGAGTGGGTCTCAGATATTAGTTGGAATAGTGAT
ATTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGAT
TCACCATCTCTAGAGACAACGCCAAGAACTCCCT
GTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGA
CACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATATTTAT
AGGGAATCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCA
AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA
CCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT
ACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCC
TGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC
AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG
CAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAA
GCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAAT
CTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG
AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACC
CAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG
CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTT
CAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC
AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGG
TCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA
AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCC
CCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGA
GAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTG
ACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC
TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAG
CCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC
GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAG
AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATG
CATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCC
CTGTCTCCGGGTAAA
265
7А11 (полноразмерная легкая цепь 1) -нуклеотидная последовательность
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGT
CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTG
TCGGGCGAGTCAGTATATTAGCAGCTGGTTAGCC
TGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAG
TCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTG
GGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTG
GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA
GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG
TATCATAGTTACCCTCCCACCTTCGGCCAAGGGA
CACGACTGGAGATTAAACGAACTGTGGCTGCAC
CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCA
GTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTG
CTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC
AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTA
ACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA
AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA
CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG
TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAG
CTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA
GTGT
266
CD73.4.IgG2C219SIgGl.lf-альтернативная нуклеотидная последовательность
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc
ccagcaccac ttcctcttcc ctcatgatct tgcgtggtgg cctgaggtca ggcgtggagg ccgcgggagg cgtgtggtca caggactggc tgcaaggtct agcatcgaga gggcagcccc ctgcccccat aaccaggtca ggcttctatc tgggagagca tacaagacca gacggctcct accgtggaca aacgtcttct gctctgcaca ctctccctgt ctgtggcagg ccccaaaacc cccggacccc tggacgtgag agttcaactg tgcataatgc agcagtacaa gcgtcctcac tgaatggcaa ccaacaaagc aaaccatctc gagaaccaca cccgggagga gcctgacctg ccagcgacat atgggcagcc cgcctcccgt tcttcctcta agagcaggtg catgctccgt accactacac ccccgggttg accgtcagtc caaggacacc tgaggtcaca ccacgaagac gtacgtggac caagacaaag cagcacgtac cgtcctgcac ggagtacaag cctcccaagc caaagccaaa ggtgtacacc gatgaccaag cctggtcaaa cgccgtggag ggagaacaac gctggactcc tagcaagctc gcagcagggg gatgcatgag gcagaagagc a
267
IgGlf
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
268
IgG2.3
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTIS KTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
269
IgG2.3Gl-AY
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP С PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTC WV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
270
IgG2.3Gl-KH
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP
SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
271
IgG2.5
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTIS KTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
272
IgGl. If
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT СPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
273
IgG2.3Gl.lf-KH
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
274
IgGl-deltaTHT
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
275
IgG2.3-plusTHT
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVETHT CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS
TFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK
276
IgG2.3-plusGGG
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVEGGG CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS TFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK
277
IgG2.5Gl.lf-KH
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
278
IgG2.5Gl-AY
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
279
IgG2.5Gl-KH
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
280
IgG2.5-plusTHT
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVETHT CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS TFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK
281
IgGl-G2.3Gl-AY
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVERKSCVECPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK
282
IgGl-G2.3Gl-KH
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVERKSCVECPP CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK
283
CD73 с фигуры 27A
XCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHTND VHSRLEQTSEDSS КСVNAS RCMGGVARL FT KVQQIR RAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHFMNAL RYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFPILSANI KAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEWGIVGYTSKE TPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNVNKII ALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVWGGHSNTFLYTGN PPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAYAFGKYLG YLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSIKADI NKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFRECNM GNLICDAMINNNLRHADETFWNHVSMCILNGGGIRS PIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKGSTLK KAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRKPGDR VVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANG GDGFQMIKDELLRHDSGDQDINWSTYISKMKVIYP AVEGRIKHHHHHH
284
Аминокислоты шарнирного участка
VDKRV
285
Аминокислоты шарнирного участка
VDKTV
286
Аминокислоты шарнирного участка
EPKSCDKTHT
287
Аминокислоты шарнирного участка
ELKTPLGDTTHT
288
Аминокислоты шарнирного участка
EPKS
289
Аминокислоты шарнирного участка
ESKYGPP
290
Аминокислоты шарнирного участка
CPPCP
291
Аминокислоты шарнирного участка
CCVECPPCP
292
Аминокислоты шарнирного участка
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)з
293
Аминокислоты шарнирного участка
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)2
294
Аминокислоты шарнирного участка
CPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)i
295
Аминокислоты шарнирного участка
CDTPPPCPRCP (EPKSCDTPPPCPRCP)2
296
Аминокислоты шарнирного участка
CDTPPPCPRCP
297
Аминокислоты шарнирного участка
CPSCP
298
Аминокислоты шарнирного участка
APELLGG
299
Аминокислоты шарнирного участка
APPVAG
300
G2-G1-G1-G1
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
301
G2.5-G1-G1-G1
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
302
G1-G2.3-G2-G2
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
303
Gl -KRGEGSSNLF
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
304
G1-KRGEGS
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
305
Gl-SNLF
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
306
IgG 1 -ITNDRTPR
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
307
Gl-SNLFPR
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPG
308
G2-RKEGSGNSFL
ASTKGPSVFPLAPCSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
309
G2-RKEGSG
ASTKGPSVFPLAPCSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP
IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
310
G2-NSFL
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
311
IgG2-TIDNTRRP
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
312
G2-NSFLRP
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVEPKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
313
G1-G1-G2-G1-AY
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPR EEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
314
G1-G1-G2-G1-KH
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGL
PAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
315
G2-G2.3-G1-G2-KH
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
316
G2.5-G2.3-G1-G2-KH
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
317
G2-G2.3-G1-G2-AY
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG
318
G2.5-G2.3-G1-G2-AY
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGK
319
G1-G2.3-G1-G1-KH
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
320
G2-G1-G2-G2-AY
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPR EEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPM LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
321
G2.5-G1-G2-G2-AY
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPR EEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPM LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
322
G1-G2-G1-G1-AY
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCVE CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGK
323
G2-G1-G2-G2-KH
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPML DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPG
324
G2.5-G1-G2-G2-KH
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCDK THTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPML
DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
325
IgG 1 -delta-шарнир
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK SLSLSPGK
326
IgG2-delta-шарнир
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCPPC PAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTF RVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKT ISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPGK
327
IgG2.5-delta-mapHHp
ASTKGPSVFPLAPSSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCPPC PAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTF RVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKT ISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPGK
328
IgGl-deltaG237
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPG
329
IgG2-plusG237
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVE CPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPA PIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK
330
IgG2.4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCSVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
331
IgG2.3/4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSSVE CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVS HE DPEVQ FNWYVDGVEVHNAKT KPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP IEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
332
IgG2.3-V13
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH КP SNT KVDKTVERKS СVECPPCPAPPV AGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVSHEDPEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
333
IgG2.3-V14
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWVDVSHEDGEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
334
IgG2.3-V15
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSDEDGEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
335
IgG2.3-V16
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CWVDVSHEDGEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPRPIEKTISKTKGQPREPQVY
TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
336
IgG2.3-V17
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVSDEDGEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPRPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
337
IgG2.3-V18
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVEHEDPEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
338
IgG2.3-V19
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPPV AGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVEHEDPEV Q FNWYVD GVE VHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTWHQ DWLNGKEYKCKVSNKGFPAPIEKTISKTKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
339
IgG2.3Gl-AY-V20
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQS S GL YS L S SWT VP SSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE CPPCPAPEL LGGDSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
340
IgG2.3Gl-AY-V21
A S T К G P S V F P LA P С S R S T S E S T AAL G С L VK Г) Y F P E P VT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP S SNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE С P P С PАР E L LGGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
341
IgG2.3Gl-AY-V22
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPEL LGGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSDEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
342
IgG2.3Gl-AY-V23
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPEL LGGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPRPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
343
IgG2.3Gl-AY-V24
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPEL LGGDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSDEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPRPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
344
IgG2.3Gl-AY-V25
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GT QT YT CNVDH К P S NT KVD KTVE RK S СVE С P P С PАР E L LGDDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVSDEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPRPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
345
IgG2.3Gl-AY-V26
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GT QT YT CNVDH К P SNTKVDKTVERKSСVEС P P С PAPDL LGDDSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVSDEDGE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPRPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
346
IgG2.3Gl-AY-V27
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVEHEDPE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
347
IgG2.3Gl-AY-V28
A S T К G P S V F P LA P С S R S T S E STAALGCLVKDYFPEPVT VS WN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNF GT QT YT CNVDH К P S NTKVDKTVERKS СVEС P P С PАР EL LGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVT CVWDVEHEDPE VK FNWYVD GVE VHNAKT KP RE EQ YN STYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
348
Альтернативный шарнир
ERKCCVECPPCP APPVAG
349
Альтернативный шарнир
ERKSCVECPPCP APPVAG
350
Альтернативный шарнир
ERKCSVECPPCP APPVAG
351
Альтернативный шарнир
ERKXCVECPPCP APPVAG
352
Альтернативный шарнир
ERKCXVECPPCP APPVAG
353
Альтернативный шарнир
ERKCCVECPPCP APPVAGX
354
Альтернативный шарнир
ERKSCVECPPCP APPVAGX
355
Альтернативный шарнир
ERKCSVECPPCP APPVAGX
356
Альтернативный шарнир
ERKXCVECPPCP APPVAGX
357
Альтернативный шарнир
ERKCXVECPPCP APPVAGX
358
Альтернативный шарнир
ERKCCVECPPCP APELLGG
359
Альтернативный шарнир
ERKSCVECPPCP APELLGG
360
Альтернативный шарнир
ERKCCSVECPPCP APELLGG
361
Альтернативный шарнир
ERKXCVECPPCP APELLGG
362
Альтернативный шарнир
ERKCXVECPPCP APELLGG
363
Альтернативный шарнир
ERKCCVECPPCP APELLG
364
Альтернативный шарнир
ERKSCVECPPCP APELLG
365
Альтернативный шарнир
ERKCCSVECPPCP APELLG
366
Альтернативный шарнир
ERKXCVECPPCP APELLG
367
Альтернативный шарнир
ERKCXVECPPCP APELLG
368
Альтернативный шарнир
ERKCCVECPPCP AP
369
Альтернативный шарнир
ERKSCVECPPCP AP
370
Альтернативный шарнир
ERKCSVECPPCP AP
371
Альтернативный шарнир
ERKXCVECPPCP AP
372
Альтернативный шарнир
ERKCXVECPPCP AP
373
Часть шарнира
PVAG
374
Часть шарнира
ELLG
375
Часть шарнира
ELLGG
376
Часть шарнира
SCDKTHT
377
Часть шарнира
CCVE
378
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
СН1 домен IgG2 wt
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PS SMiGTQTYTCNVDHKPSNTK VDKTV
379
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKD YFPEP
CHI и шарнир IgG2
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV PS SMIGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC PPCP APPVAG
380
Часть шарнира
CPPCPAP
В перечне последовательностей представлены последовательности зрелых вариабельных участков тяжелой и легкой цепей (т.е. последовательности не включают в себя сигнальные пептиды).
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY LONBERG, Nils KORMAN, Alan J.
BARNHART, Bryan C. YAMNIUK, Aaron P. SRINIVASAN, Mohan HENNING, Karla A. LEI, Ming SEGA, Emanuela GOODENOUGH, Angela JURE-KUNKEL, Maria N.
CHEN, Guodong
SACK, John S. HUANG, Richard CORBETT, Martin
MYERS, Joseph E., JR.
SCHWEIZER, Liang HATCHER, Sandra V.
<12 0> ANTIBODIES AGAINST CD73 AND USES THEREOF
<130> MXI-538PC
<140> PCT/US2015/061639 <141> 2015-11-19
<150> US 62/083,056 <151> 2014-11-21
<160> 380
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 574
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(574)
<223> Human CD73 isoform 1
<400> 1
Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala 1 5
Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu
10 15
Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
20 25 30
His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser
35 40 45
Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu
50 55 60
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala
100 105 110
Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile
115 120 125
Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile
130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val
180 185 190
Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly
260 265 270
Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly
275 280 285
Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His
290 295 300
Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile
305 310 315 320
Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr
325 330 335
Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser
340 345 350
Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met
355 360 365
Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Thr Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val
370 375 380
Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
385 390 395 400
Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro
405 410 415
Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys
420 425 430
Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu
435 440 445
Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys
450 455 460
Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg
465 470 475 480
Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile
485 490 495
Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys
500 505 510
Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val
515 520 525
Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly
530 535 540
Arg Ile Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu
545 550 555 560
Ile Phe Leu Ser Leu Trp Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 565 570
<210> 2
<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(524)
<223> Human CD73 isoform 2
<400> 2
Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
20 25 30
His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser
35 40 45
Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu
50 55 60
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala
100 105 110
Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile
115 120 125
Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile
130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val
180 185 190
Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly
260 265 270
Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly
275 280 285
Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His
290 295 300
Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile
305 310 315 320
Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr
325 330 335
Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser
340 345 350
Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met
355 360 365
Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Thr Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val
370 375 380
Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
385 390 395 400
Arg Asn Asn Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys Pro Gly
405 410 415
Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg Val Pro
420 425 430
Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile Leu Pro
435 440 445
Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys Asp Glu
450 455 460
Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val Ser Thr
465 470 475 480
Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly Arg Ile
485 490 495
Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu Ile Phe
500 505 510
Leu Ser Leu Trp Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 515 520
<210> 3
<211> 574
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(574)
<223> Cynomolgus CD73
<400> 3
Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Val
1 5 10 15
Gly Ala Leu Leu Trp Ser Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
20 25 30
His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser
35 40 45
Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu
50 55 60
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala
100 105 110
Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile
115 120 125
Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile
130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val
180 185 190
Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Thr Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly
260 265 270
Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly
275 280 285
Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His
290 295 300
Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile
305 310 315 320
Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr
325 330 335
Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser
340 345 350
Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met
355 360 365
Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val
370 375 380
Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
385 390 395 400
Arg Asn Asn Gly Thr lie Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro
405 410 415
Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys
420 425 430
Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu
435 440 445
Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys
450 455 460
Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg
465 470 475 480
Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Ile Tyr Lys Val Ile
485 490 495
Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys
500 505 510
Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val
515 520 525
Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly
530 535 540
Arg Ile Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu
545 550 555 560
Ile Phe Leu Ser Phe Cys Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 565 570
<210> 4
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VH
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VH CDR1
<400> 5
Asn Tyr Gly Met His 1 5
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VH CDR2
<400> 6
Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 7
Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK1
<400> 8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR1
<400> 9
Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR2
<400> 10
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR3 <400> 11
Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu Thr 1 5
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK2
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR1
<400> 13
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR2 <400> 14
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR3 <400> 15
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 16
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VH
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VH CDR1
<400> 17
Asp Tyr Ala Met His 1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VH CDR2
<400> 18
Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VH CDR3
<400> 19
Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 20 <211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK1 <400> 20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR1
<400> 21
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR2
<400> 22
Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly 1 5
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR3
<400> 23
Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK2
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR1 <400> 25
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR2
<400> 26
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR3 <400> 27
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5
<210> 28
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK3
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR1
<400> 29
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR2
<400> 30
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR3
<400> 31
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5
<210> 32
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VH
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VH CDR1
<400> 33
Asn Tyr Gly Met His 1 5
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VH CDR2
<400> 34
Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 35
Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VK1
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR1
<400> 37
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR2
<400> 38
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR3
<400> 39
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 40
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VH1
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR1 <400> 41
Asn Tyr Gly Leu His 1 5
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR2
<400> 42
Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR3
<400> 43
Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val
1 5 10
<210> 44
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK1
<400> 44
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR1
<400> 45
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR2 <400> 46
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5
<210> 47
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR3 <400> 47
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr 1 5
<210> 48 <211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK2 <400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR1
<400> 49
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR2 <400> 50
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR3 <400> 51
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 52
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VH
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 53
Asp Tyr Ala Met His 1 5
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VH CDR2
<400> 54
Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VH CDR3
<400> 55
Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 56
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VK1
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR1
<400> 57
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR2 <400> 58
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR3 <400> 59
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 60
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH CDR1
<400> 61
Asn Tyr Gly Met His 1 5
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH CDR2
<400> 62
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH CDR3
<400> 63
Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VK1
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR1 <400> 65
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR2 <400> 66
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR3 <400> 67
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5
<210> 68
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VH
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> <211>
69 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VH CDR1
<400> 69
Ser Tyr Trp Met His
<210> <211>
70 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VH CDR2
<400> 70
Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> <211>
71 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VH CDR3
<400> 71
Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR1
<400> 73
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR2
<400> 74
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 75
Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK2
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR1
<400> 77
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 78
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR2
<400> 78
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR3 <400> 79
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5
<210> 80
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VH
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VH CDR1 <400> 81
Asp Tyr Ala Met His 1 5
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VH CDR2
<400> 82
Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VH CDR3
<400> 83
Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 84
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VK1
<400> 84
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR1
<400> 85
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR2 <400> 86
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR3 <400> 87
Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe Thr 1 5
<210> 88 <211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH <400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR1
<400> 89
Asp Tyr Ala Met His 1 5
<210> 90
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR3
<400> 91
Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VK1
<400> 92
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR1 <400> 93
Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR2
<400> 94
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR3
<400> 95
Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5
<210> 96
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 epitope #1
<400> 96
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
1 5 10 15
Leu Asp Ala
<210> 97
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 97
Leu Tyr Leu Pro Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly
1 5 10 15
<210> 98 <211> 98 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(98)
<223> Wildtype IgG1 CH1
<400> 98
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 99
<211> 553
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: His-tagged CD73
<400> 99
Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
20 25 30
His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser
35 40 45
Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu
50 55 60
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala
100 105 110
Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile
115 120 125
Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile
130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val
180 185 190
Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly
260 265 270
Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly
275 280 285
Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His
290 295 300
Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile
305 310 315 320
Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr
325 330 335
Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser
340 345 350
Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met
355 360 365
Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Thr Phe Trp Asn His Val
370 375 380
Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
385 390 395 400
Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro
405 410 415
Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys
420 425 430
Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu
435 440 445
Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys
450 455 460
Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg
465 470 475 480
Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile
485 490 495
Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys
500 505 510
Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val
515 520 525
Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly
530 535 540
Arg Ile Lys His His His His His His 545 550
<210> 100
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length heavy chain)
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195
200
205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
<210> 101
<211> <212> <213>
214 PRT
Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 1) <400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 102
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 2)
<400> 102
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
<210> 103
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length heavy chain)
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
<210> 104
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 1)
<400> 104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
<210> 105
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 2)
<400> 105
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 106
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 3)
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195
200
205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 107
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 (full length heavy chain)
<400> 107
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 108
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 (full length light chain 1)
<400> 108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
<210> 109
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length heavy chain)
<400> 109
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 1) <400> 110
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<211> <212> <213>
214
PRT
Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 2) <400> 111
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<210> 112
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 (full length heavy chain)
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<211> <212> <213>
214 PRT
Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 (full length light chain 1) <400> 113
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<210> 114
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 (full length heavy chain)
<400> 114
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210
215
220
Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 115
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 24H2 (full length light chain 1)
<400> 115
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<220>
<223> Synthetic: 5F8 (full length heavy chain)
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225
230
235
240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 117 <211> 214 <212> PRT
<223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 1)
<400> 117
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<220>
<223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 2) <400> 118
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<211> <212> <213>
451
PRT
Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 (full length heavy chain)
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<220>
<223> Synthetic: 6E11 (full length light chain 1) <400> 120
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 (full length heavy chain)
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<220>
<223> Synthetic: 7A11 (full length light chain 1) <400> 122
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hinge C219S
<400> 123
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 124
<211> 98
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(98)
<223> IgG2 CH1 (wildtype)
<400> 124
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val
<210> 125
<211> 103
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: IgGl CH2 + A330S and P331S
<400> 125
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1 5 10 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
20 25 30
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
35 40 45
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
50 55 60
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
85 90 95
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100
<210> 126
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(330)
<223> Human IgG1 constant region
<400> 126
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
<210> 127
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(330)
<223> Human IgG1 constant region (allotype variant)
<400> 127
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1 CH3 + E356 and M358
<400> 128
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 129
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1 constant region
<400> 129
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 130
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2 constant region
<400> 130
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Trp Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
85 90 95
Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Asp Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325
<210> 131
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(107)
<223> Human IgG1 kappa light chain (CL)
<400> 131
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105
<210> 132
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Heavy chain C-terminus
<400> 132
Leu Ser Pro Gly Lys 1 5
<210> 133
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f, AA sequence
<400> 133
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 134
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f, NT sequence
<400> 134
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 135 <211> 121 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.4 VH (a.a.) <400> 135
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 136 <211> 18 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<223> Wildtype IgG2 hinge
<400> 136
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 137
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(103)
<223> Wildtype IgG1 CH2
<400> 137
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
1 5 10 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
20 25 30
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
35 40 45
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
50 55 60
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
85 90 95
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100
<210> 138 <211> 107 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(107)
<223> Wildtype IgG1 CH3
<400> 138
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VH - Nucleotide Sequence <400> 139
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 140
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 140
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 141
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 VK2 - Nucleotide Sequence <400> 141
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 142 <211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VH - Nucleotide Sequence
<400> 142
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgt aaaagggtat 300
tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 143
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK1 - Nucleotide Sequence
<400> 143
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccagca gggccactgg catcccagac 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240
gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagct caccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 144
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK2 - Nucleotide Sequence
<400> 144
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 145
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 VK3 - Nucleotide Sequence
<400> 145
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 146
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VH - Nucleotide Sequence <400> 146
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300
aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttca 366
<210> 147
<211> 321 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 147
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 148
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VH1 - Nucleotide Sequence <400> 148
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggcc tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atacggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga gcagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggggggc 300
agcagctggt acccggacgg tttggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 149
<211> 318 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 149
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accccacttt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 150
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 VK2 - Nucleotide Sequence
<400> 150
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 151
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VH - Nucleotide Sequence
<400> 151
gaagtgcagc tggtggaatc tgggggaaac ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga ataataatga cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttgt attattgtgt aaaaggttat 300
tacgttattt tgactggtct tgactactgg ggccagggaa ccccggtcac cgtctcctca 360
<210> 152
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VK1 - Nucleotide Sequence
<400> 152
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 153
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH - Nucleotide Sequence
<400> 153
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaggtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 154
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 154
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 155
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VH - Nucleotide Sequence
<400> 155
gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180
gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300
agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 156
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1 - Nucleotide Sequence
<400> 156
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttagtagtt accctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 157
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK2 - Nucleotide Sequence
<400> 157
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacaggt ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 158
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VH - Nucleotide Sequence
<400> 158
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attacttgga atagtggtgg cataggctac 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatagg 300
tattacagca gttggctcct ctttgacaac tggggccagg gaattctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 159
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 VK1 - Nucleotide Sequence
<400> 159
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cattatggta gctcattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 160
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH - Nucleotide Sequence
<400> 160
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagat attagttgga atagtgatat tataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tctagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatatt 300
tatggttcgg ggagttcttt ttttgactac tggggccagg gaatcctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 161
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VK1 - Nucleotide Sequence
<400> 161
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gtatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatcatagtt accctcccac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a
321
<210> 162
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1f2 (MHCCR)
<400> 162
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 163
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1f2 (MHCCR)
<400> 163
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 164
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2-IgG1f2 (MHCCR)
<400> 164
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 165
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2CS-IgG1f2 (MHCCR)
<400> 165
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 166
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1.1f (MHCCR)
<400> 166
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 167
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1.1f (MHCCR)
<400> 167
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 168
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 169
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2CS-IgG1.1f (MHCCR)
<400> 169
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 170
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.3 VH (a.a)
<400> 170
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Val Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 171
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.5 VH (a.a)
<400> 171
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 172
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.6 VH (a.a)
<400> 172
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 173
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.7 VH (a.a)
<400> 173
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 174
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.8 VH (a.a)
<400> 174
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 175
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.9 VH (a.a)
<400> 175
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 176
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.10 VH (a.a)
<400> 176
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 177
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.11 VH (a.a)
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala 35 40
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser 50 55
Lys Gly Arg Phe 65
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala 85
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp 100
Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 10 15
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 178
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2/IgG1 hybrid hinge
<400> 178
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 179
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2 C219S/IgG1 hybrid hinge
<400> 179
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 180
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1f
<400> 180
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 181
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1f
<400> 181
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 182
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2-IgG1f
<400> 182
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 183
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2CS-IgG1f
<400> 183
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 184
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 184
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 185
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 185
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 186
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 186
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 187
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<210> 188
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 189
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f (identical to
SEQ ID NO: 133, except lacks C-terminal lysine)
<400> 189
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 190
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 190
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195
200
205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
<210> 191
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 192
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225
230
235
240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 193
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG1.1f
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<210> 194
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260
265
270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 195
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh.-h.HC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 195
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 196
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305
310
315
320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<210> 197
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 197
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 198
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340
345
350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 199
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<210> 200
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 200
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115
120
125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 201
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 202
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420
425
430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<210> 203
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 204
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195
200
205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly
225 230 235 240
Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly 450
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 206
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225
230
235
240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 207
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 208
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-h.HC-IgG1.1f
<400> 208
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu
225 230 235 240
Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275
280
285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly 450
<210> 209
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 209
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 210
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 210
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 211 <211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 211
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300
tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gcgtcgacca agggcccctc cgtgtttcct ctggcccctt ccagcaagtc cacctctggc 420
ggaacagccg ctctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gcgccctgac atctggcgtg cacaccttcc ctgctgtgct gcagtctagc 540
ggcctgtact ccctgtcctc cgtcgtgaca gtgccctcca gctctctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660
aagtcctgcg acaagaccca tacctgccct ccctgccctg ctcctgaagc tgaaggcgcc 720
cctagcgtgt tcctgttccc tccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtcc cacgaggacc cagaagtgaa gttcaattgg 840
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ctagagagga acagtacaac 900
tccacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa 960
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctagct ccatcgaaaa gaccatctcc 1020
aaggctaagg gccagccccg cgagccccag gtgtacacac tgcctccatc ccgggaagag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctgacttgc ctcgtgaagg gcttctaccc ctccgatatc 1140
gccgtggaat gggagtccaa cggccagcct gagaacaact acaagaccac ccctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcatt cttcctgtac agcaagctga cagtggataa gtcccggtgg 1260
cagcagggga acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ctctgcacaa ccactacaca 1320
cagaagtccc tgtctctgtc ccctggc 1347
<210> 212 <211> 1337 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 212
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300
tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gcgtcgacca agggcccctc tgtgtttcct ctggcccctt gctcccggtc cacctctgag 420
tctaccgctg ctctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gcgctctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540
ggcctgtact ctctgtcctc cgtcgtgacc gtgccctcct ccaacttcgg cacccagacc 600
tacacctgta acgtggacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagac cgtggaacgg 660
aagtcctgcg tggaatgccc tccttgccct gcacctcctg tggctggccc ttccgtgttc 720
ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtccca cgaggacccc gaggtgcagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggaac agttcaactc caccttccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt ggtgcaccag gactggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaagggcct gcctgccccc atcgaaaaga ccatctccaa gacaaagggc 1020
cagccccgcg agcctcaggt gtacacactg cctcccagcc gggaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgtct ggtcaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccatgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tccctgagcc ccggcaa 1337
<210> 213 <211> 1338 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 213
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300
tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660
aaatcctgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccaagcagc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtccc cgggtaaa 1338
<210> 214 <211> 1350 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 214
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 215 <211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 215
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 216
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 216
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 217
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 217
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 218 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 218
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 219 <211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 219
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 220 <211> 1254 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 220
ggcatgcact gggtccgcca ggctccaggc aaggggctgg agtgggtggc agttatattg 60
tatgattcca gtaataaata ctatccagac tccgtgaagg gccgattcac catctccaga 120
gacaattcca agaacacgct gtatctgcaa atgaacagcc tgagagccga ggacacggct 180
gtgtattact gtgcgagagg gggcagcagc tggtaccctg attcttttga tatctggggc 240
caaggaacaa tggtcaccgt ctcttcagcg tcgaccaagg gcccctccgt gtttcctctg 300
gccccttcca gcaagtccac ctctggcgga acagccgctc tgggctgcct ggtcaaggac 360
tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg aactctggcg ccctgacatc tggcgtgcac 420
accttccctg ctgtgctgca gtctagcggc ctgtactccc tgtcctccgt cgtgacagtg 480
ccctccagct ctctgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac 540
accaaggtgg acaagcgggt ggaacccaag tcctgcgaca agacccatac ctgccctccc 600
tgccctgctc ctgaagctga aggcgcccct agcgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag 660
gacaccctga tgatctcccg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac 720
gaggacccag aagtgaagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 780
accaagccta gagaggaaca gtacaactcc acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg 840
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg 900
cctagctcca tcgaaaagac catctccaag gctaagggcc agccccgcga gccccaggtg 960
tacacactgc ctccatcccg ggaagagatg accaagaacc aggtgtccct gacttgcctc 1020
gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag 1080
aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg gactccgacg gctcattctt cctgtacagc 1140
aagctgacag tggataagtc ccggtggcag caggggaacg tgttctcctg ctccgtgatg 1200
cacgaggctc tgcacaacca ctacacacag aagtccctgt ctctgtcccc tggc 1254
<210> 221 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 221
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 222 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 222
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG1.1f
<400> 223
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 9 60
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 224
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 224
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 225 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 225
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 226 <211> 1350 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 226
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 227 <211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 227
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 228 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 228
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 229 <211> 1350 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 229
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 230 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 230
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f
<400> 231
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 232
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 232
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420
ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540
agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260
tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320
acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350
<210> 233 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 233
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420
gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540
tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600
acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660
cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200
gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgtccctga gccccggcaa a 1341
<210> 234 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 234
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggtaa a 1341
<210> 235 <211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 235
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300
aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttcagcgt cgaccaaggg cccctccgtg tttcctctgg ccccttccag caagtccacc 420
tctggcggaa cagccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcctgtgacc 480
gtgtcctgga actctggcgc cctgacatct ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540
tctagcggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgacagtgc cctccagctc tctgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660
gaacccaagt cctgcgacaa gacccatacc tgccctccct gccctgctcc tgaagctgaa 720
ggcgccccta gcgtgttcct gttccctcca aagcccaagg acaccctgat gatctcccgg 780
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccacg aggacccaga agtgaagttc 840
aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 900
tacaactcca cctaccgggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ttggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaggccctgc ctagctccat cgaaaagacc 1020
atctccaagg ctaagggcca gccccgcgag ccccaggtgt acacactgcc tccatcccgg 1080
gaagagatga ccaagaacca ggtgtccctg acttgcctcg tgaagggctt ctacccctcc 1140
gatatcgccg tggaatggga gtccaacggc cagcctgaga acaactacaa gaccacccct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctcattcttc ctgtacagca agctgacagt ggataagtcc 1260
cggtggcagc aggggaacgt gttctcctgc tccgtgatgc acgaggctct gcacaaccac 1320
tacacacaga agtccctgtc tctgtcccct ggc 1353
<210> 236 <211> 1344 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S
<400> 236
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300
aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttcagcgt cgaccaaggg cccctctgtg tttcctctgg ccccttgctc ccggtccacc 420
tctgagtcta ccgctgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcctgtgacc 480
gtgtcctgga actctggcgc tctgacctcc ggcgtgcaca cctttccagc cgtgctgcag 540
tcctccggcc tgtactctct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctccaa cttcggcacc 600
cagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagaccgtg 660
gaacggaagt cctgcgtgga atgccctcct tgccctgcac ctcctgtggc tggcccttcc 720
gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac accctgatga tctcccggac ccccgaagtg 780
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccacgag gaccccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 840
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggaacagtt caactccacc 900
ttccgggtgg tgtccgtgct gaccgtggtg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct gcccccatcg aaaagaccat ctccaagaca 1020
aagggccagc cccgcgagcc tcaggtgtac acactgcctc ccagccggga agagatgacc 1080
aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 1140
gaatgggagt ccaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc catgctggac 1200
tccgacggct cattcttcct gtactccaag ctgacagtgg acaagtcccg gtggcagcag 1260
ggcaacgtgt tctcctgctc tgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320
tccctgtccc tgagccccgg caaa 1344
<210> 237 <211> 363 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.4 (VH) Nucleotide sequence <400> 237
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 238
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK3
<400> 238
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 239
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR1
<400> 239
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 240
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR2 <400> 240
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5
<210> 241
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR3 <400> 241
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr 1 5
<210> 242
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK3 Nucleotide sequence
gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180
gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300
agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 243 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length heavy chain) NT Seq <400> 243
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 9 60
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 244
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 244
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 245
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 2) NT Seq <400> 245
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 246 <211> 1350 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length heavy chain) NT Seq <400> 246
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgt aaaagggtat 300
tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<213> Artificial Sequence <220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 1) NT Seq <400> 247
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccagca gggccactgg catcccagac 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240
gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagct caccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 248 <211> 642 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 2) NT Seq <400> 248
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<220>
<223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 3) NT Seq
<400> 249
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 250 <211> 1344 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 (full length heavy chain) NT Seq <400> 250
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300
aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420
tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 600
cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 660
gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 720
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 900
ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1020
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320
agcctctccc tgtctccggg taaa 1344
<210> 251 <211> 642 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4D4 (full length light chain 1) NT Seq <400> 251
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 252
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length heavy chain) NT Seq
<400> 252
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggcc tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atacggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga gcagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggggggc 300
agcagctggt acccggacgg tttggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tcagcttcca ccaagggccc atccgtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca 720
gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840
gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020
aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260
gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320
agcctctccc tgtctctggg taaa 1344
<210> 253 <211> 639 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 1) NT Seq <400> 253
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accccacttt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 63 9
<210> 254
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 2) NT Seq <400> 254
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 255
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 (full length heavy chain) NT Seq <400> 255
gaagtgcagc tggtggaatc tgggggaaac ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga ataataatga cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttgt attattgtgt aaaaggttat 300
tacgttattt tgactggtct tgactactgg ggccagggaa ccccggtcac cgtctcctca 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 256 <211> 642 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 11A6 (full length light chain 1) NT Seq <400> 256
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 257 <211> 1344 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 24H2 (full length heavy chain) NT Seq <400> 257
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaggtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360
tcagcttcca ccaagggccc atccgtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660
tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca 720
gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780
acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840
gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960
aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020
aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200
tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260
gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320
agcctctccc tgtctctggg taaa 1344
<213> Artificial Sequence <220>
<223> Synthetic: 24H2 (full length light chain 1) NT Seq <400> 258
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 259 <211> 1347 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 (full length heavy chain) NT Seq <400> 259
gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180
gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300
agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 260 <211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 1) NT Seq <400> 260
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttagtagtt accctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 261
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 2) NT Seq
<400> 261
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacaggt ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 262 <211> 1353 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 (full length heavy chain) NT Seq
<400> 262
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attacttgga atagtggtgg cataggctac 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatagg 300
tattacagca gttggctcct ctttgacaac tggggccagg gaattctggt caccgtctcc 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 263
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6E11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 263
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cattatggta gctcattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 264
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 (full length heavy chain) NT Seq <400> 264
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagat attagttgga atagtgatat tataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tctagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatatt 300
tatggttcgg ggagttcttt ttttgactac tggggccagg gaatcctggt caccgtctcc 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 9 60
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 265 <211> 642 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 7A11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 265
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gtatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatcatagtt accctcccac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 266 <211> 1341 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73.4.IgG2C219SIgG1.1f Alternative NT Seq
<400> 266
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180
ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300
agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360
tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ccccgggttg a 1341
<220>
<223> Synthetic: IgG1f <400> 267
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 268
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3
<400> 268
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 269
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY
<400> 269
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 270
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-KH
<400> 270
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 271
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5
<400> 271
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 272
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1.1f
<400> 272
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 273
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1.1f-KH
<400> 273
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 274
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-deltaTHT
<400> 274
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 275
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-plusTHT
<400> 275
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 276
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-plusGGG
<400> 276
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Gly Gly Gly Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 277
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5G1.1f-KH
<400> 277
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 278
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5G1-AY
<400> 278
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 279
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5G1-KH
<400> 279
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
<210> 280
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5-plusTHT
<400> 280
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 281
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-G2.3G1-AY
<400> 281
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-G2.3G1-KH
<400> 282
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 283
<211> 553
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD73 from Figure 27A
<220>
<221> misc_feature
<222>
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 283
Xaa Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
20 25 30
His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser
35 40 45
Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu
50 55 60
Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala
100 105 110
Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile
115 120 125
Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile
130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val
180 185 190
Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly
260 265 270
Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly
275 280 285
Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His
290 295 300
Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile
305 310 315 320
Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr
325 330 335
Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser
340 345 350
Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met
355 360 365
Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Thr Phe Trp Asn His Val
370 375 380
Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
385 390 395 400
Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro
405 410 415
Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys
420 425 430
Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu
435 440 445
Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys
450 455 460
Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg
465 470 475 480
Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile
485 490 495
Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys
500 505 510
Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val
515 520 525
Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly
530 535 540
Arg Ile Lys His His His His His His
545 550
<210> 284
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<221> misc_feature
<222> (1)..(5)
<223> Hinge region amino acid
<400> 284
Val Asp Lys Arg Val 1 5
<210> 285
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(5)
<223> Hinge region amino acid
<400> 285
Val Asp Lys Thr Val 1 5
<210> 286
<211> 10
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(10)
<223> Hinge region amino acid
<400> 286
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 287
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(12)
<223> Hinge region amino acid
<400> 287
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(4)
<223> Hinge region amino acid
<400> 288
Glu Pro Lys Ser
<210> 289
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(7)
<223> Hinge region amino acid
<400> 289
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 1 5
<210> 290
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(5)
<223> Hinge region amino acid
<400> 290
Cys Pro Pro Cys Pro 1 5
<210> 291
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(9)
<223> Hinge region amino acid
<400> 291
<210> 292
<211> 50
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(50)
<223> Hinge region amino acid
<400> 292
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
35 40 45
Cys Pro
<210> 293
<211> 35
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(35)
<223> Hinge region amino acid
<400> 293
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Arg Cys Pro
<210> 294
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
misc_feature
(1)..(20)
<223> Hinge region amino acid
<400> 294
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro
<210> 295
<211> 41
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(41)
<223> Hinge region amino acid
<400> 295
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys
1 5 10 15
Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp
20 25 30
Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
35 40
<210> 296
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(11)
<223> Hinge region amino acid
<400> 296
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10
<210> 297
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(5)
<223> Hinge region amino acid
<400> 297
Cys Pro Ser Cys Pro 1 5
<210> 298
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(7)
<223> Hinge region amino acid
<400> 298
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 1 5
<210> 299
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(6)
<223> Hinge region amino acid
<400> 299
Ala Pro Pro Val Ala Gly 1 5
<210> <211> <212> <213>
<220> <223>
<400>
300 330 PRT
Artificial Sequence
Synthetic: G2-G1-G1-G1
300
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 301
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G1-G1-G1
<400> 301
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 302
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-G2.3-G2-G2
<400> 302
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
<210> 303
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-KRGEGSSNLF
<400> 303
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 304
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-KRGEGS
<400> 304
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-SNLF
<400> 305
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 306
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-ITNDRTPR
<400> 306
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 307
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-SNLFPR
<400> 307
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 308
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-RKEGSGNSFL
<400> 308
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 309 <211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-RKEGSG
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 310
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-NSFL
<400> 310
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 311
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2-TIDNTRRP
<400> 311
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 312
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-NSFLRP
<400> 312
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 313
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-G1-G2-G1-AY
<400> 313
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 314
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-G1-G2-G1-KH
<400> 314
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 315
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-G2.3-G1-G2-KH
<400> 315
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 316
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G2.3-G1-G2-KH
<400> 316
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 317
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-G2.3-G1-G2-AY
<400> 317
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 318
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G2.3-G1-G2-AY
<400> 318
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 319
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G1-G2.3-G1-G1-KH
<400> 319
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
<210> 320
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-G1-G2-G2-AY
<400> 320
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 321
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G1-G2-G2-AY
<400> 321
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
<220>
<223> Synthetic: G1-G2-G1-G1-AY <400> 322
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 323
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: G2-G1-G2-G2-KH
<400> 323
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 324
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 324
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 325
<211> 323
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-deltaHinge
<400> 325
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
100 105 110
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
115 120 125
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
130 135 140
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
145 150 155 160
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
165 170 175
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
180 185 190
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
195 200 205
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
210 215 220
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
225 230 235 240
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
245 250 255
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
260 265 270
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
275 280 285
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
290 295 300
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
305 310 315 320
Pro Gly Lys
<210> 326
<211> 322
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2-deltaHinge
<400> 326
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
115 120 125
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
130 135 140
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
145 150 155 160
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
165 170 175
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
180 185 190
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
195 200 205
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
210 215 220
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
225 230 235 240
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
245 250 255
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
275 280 285
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
290 295 300
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
305 310 315 320
Gly Lys
<210> 327
<211> 322
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.5-deltaHinge
<400> 327
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
115 120 125
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
130 135 140
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
145 150 155 160
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
165 170 175
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
180 185 190
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
195 200 205
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
210 215 220
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
225 230 235 240
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
245 250 255
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
260 265 270
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
275 280 285
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
290 295 300
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
305 310 315 320
Gly Lys
<210> 328
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG1-deltaG237
<400> 328
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 329
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2-plusG237
<400> 329
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 330
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.4
<400> 330
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 331
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3/4
<400> 331
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 332
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V13
<400> 332
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 333
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V14
<400> 333
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 334
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V15
<400> 334
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
<210> 335
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V16
<400> 335
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 336
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V17
<400> 336
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
<211> <212> <213>
326 PRT
Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V18
<400> 337
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 338
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3-V19
<400> 338
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Phe Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 339
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 339
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 1 5
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
35 40
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 50 55
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 65 70
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 85
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val 100
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val 115 120
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 130 135
Asp Val Ser His Glu Asp Pro 145 150
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 165
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 180
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 210 215
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 225 230
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
10 15
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
25 30
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
75 80
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
90 95
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 105 110
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
125
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 140
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 170 175
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 185 190
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
205
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 220
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 340
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V21
<400> 340
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 341 <211> 327 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V22
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 342
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V23
<400> 342
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
Asp Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 343
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V24
<400> 343
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 344
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V25
<400> 344
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Asp Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 345
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V26
<400> 345
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Asp Leu Leu Gly Asp Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 346
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V27
<400> 346
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 347
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V2 8
<400> 347
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Phe
195 200 205
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> <211> <212> <213>
<220> <223>
<400>
348 18
PRT
Artificial Sequence
Synthetic: Alternative hinge
348
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 349
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 349
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 350
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 350
Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 351
Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 352
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 352
Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly
<210> 353
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 353
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
Ala Gly Xaa
<210> 354
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 354
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Xaa
<210> 355
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 355
Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Xaa
<210> 356
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 356
Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Xaa
<210> 357
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 357
Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Xaa
<210> 358
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 358
<210> 359
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 359
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> <211> <212> <213>
<220> <223>
<400>
360
PRT
Artificial Sequence
Synthetic: Alternative hinge
360
Glu Arg Lys Cys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gly
<210> 361
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 361
Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 362
Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 363
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 363
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly
<210> 364
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 364
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly
<210> 365
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 365
Glu Arg Lys Cys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
1 5 10 15
Leu Leu Gly
<210> 366
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 366
Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly
<210> 367
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 367
Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<400> 368
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<210> <211> <212> <213>
<220> <223>
<400>
369
PRT
Artificial Sequence
Synthetic: Alternative hinge
369
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<210> <211> <212> <213>
<220> <223>
<400>
370
14 PRT
Artificial Sequence
Synthetic: Alternative hinge
370
Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 371
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 371
Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 372
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 372
Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 373
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 373
Pro Val Ala Gly 1
<210> 374
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 374
Glu Leu Leu Gly
<210> <211> <212>
375 5
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 375
Glu Leu Leu Gly Gly
<210> 376
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 1 5
<210> 377
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 377
Cys Cys Val Glu 1
<210> 378
<211> 98
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: wt IgG2 CH1 domain
<400> 378
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val
<210> 379
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 379
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly 115
<210> <211> <212>
380 7
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 380
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Выделенное человеческое антитело или его антигенсвязывающая часть, которые
связываются с человеческим кластером дифференцировки 73 (CD73) и проявляют одно
или несколько из следующих свойств:
(a) связываются с человеческим CD73 с KD, составляющей 10 нМ или менее;
(b) ингибируют ферментативную активность CD73;
(c) интернализируют CD73 с помощью опосредованной антителом
интернализации CD73 в клетки, например, опухолевые клетки; и
(d) связываются с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83
и 157-172 в человеческом CD73.
2. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 1, причем антитело
интернализируется в опухолевые клетки с Тш, составляющим не более 10 мин.
3. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 1 или п. 2, причем антитело связывается с человеческим CD73 с KD, составляющей приблизительно 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r).
4. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из предыдущих пунктов, причем антитело связывается с человеческим CD73 с ЕС50, составляющей 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью метода FACS.
5. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из предыдущих пунктов, причем антитело связывается с CD73 яванского макака с ЕС50, составляющей 0,1-10 нМ или менее при измерении с помощью метода FACS.
6. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из предыдущих пунктов, причем антитело связывается с эпитопом на человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1), который включает в себя все или часть аминокислотных остатков FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш NO: 97).
7. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 6, причем антитело связывается с эпитопом на человеческом CD73 (SEQ Ш NO: 1), который включает в себя все или часть аминокислотных остатков FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш NO: 96) и все или часть аминокислотных остатков LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш NO: 97).
3.
8. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из предыдущих пунктов,
причем антитело выбрано из группы, состоящей из IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 или его
варианта.
9. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат три CDR вариабельного участка тяжелой цепи и три CDR вариабельного участка легкой цепи, которые находятся соответственно в парах из вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, выбранных из группы, состоящей из:
(a) SEQ ГО N0: 4 и 8;
(b) SEQ ГО N0: 4 и 12;
(c) SEQ ГО N0: 16 и 20;
(d) SEQ IDNO: 16 и 24;
(e) SEQ IDNO: 16 и 28;
(f) SEQ ID NO: 32 и 36;
(g) SEQ ID NO: 40 и 44;
(h) SEQ ID NO: 40 и 48;
(i) SEQ ID NO: 52 и 56;
G) SEQ ID NO: 60 и 64;
(k) SEQ ID NO: 68 и 72;
(1) SEQ ID NO: 68 и 76;
(m) SEQ ID NO: 80 и 84;
(n) SEQ ID NO: 88 и 92;
(о) SEQ ID NO: 135 и 8 и
(p) SEQ ID NO: 135 и 12.
10. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73, содержащим:
(а) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ ГО N0: 9, 10 и 11, соответственно;
(b) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно;
(c) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 21, 22 и 23, соответственно;
(d) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 25, 26 и 27, соответственно;
(e) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 17, 18 и 19, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 29, 30 и 31, соответственно;
(f) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 33, 34 и 35, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 37, 38 и 39, соответственно;
(g) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 45, 46 и 47, соответственно;
(h) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 41, 42 и 43, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 49, 50 и 51, соответственно;
(i) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш
N0: 53, 54 и 55, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой
цепи, содержащие SEQ Ш N0: 57, 58 и 59, соответственно;
(j) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 61, 62 и 63, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 65, 66 и 67, соответственно;
(к) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 73, 74 и 75, соответственно;
(1) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 69, 70 и 71, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 77, 78 и 79, соответственно;
(ш) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 81, 82 и 83, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 85, 86 и 87, соответственно; или
(п) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 89, 90 и 91, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 93, 94 и 95, соответственно.
11. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 10, причем антитело содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 9, 10 и 11, соответственно.
12. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 11, причем антитело содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 5, 6 и 7, соответственно, и/или последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, содержащие SEQ Ш N0: 13, 14 и 15, соответственно.
13. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88 и 135.
14. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, причем вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ Ш N0: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84 и 92.
15. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с человеческим CD73 и содержат вариабельные участки тяжелой и
11.
легкой цепей, которые по меньшей мере на 85% идентичны аминокислотным последовательностям вариабельных участков тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из:
(a) SEQ ГО N0: 4 и 8;
(b) SEQ ГО N0: 4 и 12;
(c) SEQ ГО N0: 16 и 20;
(d) SEQ ГО NO: 16 и 24;
(e) SEQ ГО N0: 16 и 28;
(f) SEQ ГО N0: 32 и 36;
(g) SEQ ГО NO: 40 и 44;
(h) SEQ ГО NO: 40 и 48;
(i) SEQ ID NO: 52 и 56;
(j) SEQ ID NO: 60 и 64;
(k) SEQ ID NO: 68 и 72;
(1) SEQ ID NO: 68 и 76;
(m) SEQ ID NO: 80 и 84;
(n) SEQ ID NO: 88 и 92;
(о) SEQ ID NO: 135 и 8 и
(p) SEQ ID NO: 135 и 12.
16. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 15, причем вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную вариабельным участкам тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из (а)-(р).
17. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 16, причем вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную вариабельным участкам тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из (а)-(р).
18. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 17, причем вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранные из группы, состоящей из (а)-(р).
16.
19. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 18, причем антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 135, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ IDNO: 8.
20. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 18, причем антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ Ш N0: 135, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ IDNO: 12.
21. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с тем же эпитопом на CD73, что и антитело по любому из пп. 1-20.
22. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 9-21, причем антитело проявляет любое из следующих свойств:
(1) связывание с человеческим CD73, например, с изоформой 1 и 2 мономерного человеческого и димерного человеческого CD73, связанного с гранулами, например, с KD, составляющей 10 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ), например, при измерении с помощью анализа SPR методом BIACORE(r);
(2) связывание с мембраносвязанным человеческим CD73, например, с ЕС50, составляющей 1 нМ или менее (например, от 0,01 нМ до 1 нМ);
(3) связывание с CD73 яванского макака, например, связывание с
мембраносвязанным CD73 яванского макака, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или
менее (например, от 0,01 нМ до 10 нМ);
(4) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73, например, с ЕС 5 0, составляющей 10 нМ или менее;
(5) ингибирование ферментативной активности CD73 макака-крабоеда, например, с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(6) ингибирование ферментативной активности эндогенного (клеточного)
человеческого CD73 в Calu6 клетках с ЕС50, составляющей 10 нМ или менее;
(7) ингибирование ферментативной активности человеческого CD73 in vivo;
(8) интернализация, например, опосредуемая антителом (или зависимая от антитела) интернализация CD73 в клетки, например, с Тш, составляющим менее 1 часа, 30 минут или 10 минут, и/или Ymax, составляющим по меньшей мере 70%, 80% или 90%;
(7)
(9) связывание с конформационным эпитопом на человеческом CD73, например,
прерывающимся эпитопом с аминокислотной последовательностью (SEQ Ш NO: 1),
который включает в себя все или часть аминокислотных остатков
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ Ш N0: 96) и/или LYLPYKVLPVGDEWG (SEQ Ш N0:
97);
(10) конкуренция в любом из направлений или в обоих направлениях для связывания с человеческим CD73 с CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4СЗ-1, 4СЗ-2, 4СЗ-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2, 6Е11 и/или 7А11 за связывание с человеческим CD73; и
(11) взаимодействие с человеческим CD73 по схеме, подобной CD73.4, что определено с помощью рентгеновской кристаллографии.
23. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с CD73 и содержат последовательности тяжелой цепи и легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны аминокислотным последовательностям тяжелой и легкой цепей, соответственно, выбранным из группы, состоящей из:
(a) SEQ Ш N0: 100 и 101, соответственно;
(b) SEQ ГО N0: 100 и 102, соответственно;
(c) SEQ Ш NO: 103 и 104, соответственно;
(d) SEQ Ш NO: 103 и 105, соответственно;
(e) SEQ Ш NO: 103 и 106, соответственно;
(f) SEQ Ш NO: 107 и 108, соответственно;
(g) SEQ Ш NO: 109 и 110, соответственно;
(h) SEQ Ш NO: 109 и 111, соответственно;
(i) SEQ Ш NO: 112 и 113, соответственно;
(j) SEQ Ш NO: 114 и 115, соответственно;
(k) SEQ Ш NO: 116 и 117, соответственно;
(1) SEQ Ш NO: 116 и 118, соответственно;
(ш) SEQ Ш NO: 119 и 120, соответственно;
(n) SEQ Ш NO: 121 и 122, соответственно;
(о) SEQ Ш NO: 133 и 101, соответственно; и
(p) SEQ ГО NO: 133 и 102, соответственно;
24. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 23, причем тяжелая и легкая цепи содержат тяжелые и легкие цепи, выбранные из группы, состоящей из (а)-(р).
25. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 24, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 135, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 101.
26. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 24, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 135, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ГО N0: 102.
27. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 23-26, причем антитело проявляет любое из следующих свойств:
(a) ингибирует ферментативную активность CD73;
(b) интернализирует CD73 с помощью опосредованной антителом к CD73 интернализации CD73 в клетки, например, опухолевые клетки; и
(c) связывается с конформационным эпитопом, содержащим аминокислоты 65-83 и 157-172 человеческого CD73.
28. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из предыдущих пунктов, причем антитело связывается с CD73 яванского макака.
29. Антитело или его антигенсвязывающая часть по пп. 10-22, причем антитело содержит Fc с отсутствующей эффекторной функцией.
30. Антитело или его антигенсвязывающая часть по пп. 1-7 и пп. 9-22, причем антитело содержит модифицированный константный участок тяжелой цепи, содержащий человеческий СН1 домен, человеческий шарнирный домен, человеческий СН2 домен и человеческий СНЗ домен в порядке от N- к С-концу.
31. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 30, причем
модифицированный константный участок содержит по меньшей мере 2 домена
отличающихся изотипов, выбранных из группы изотипов, состоящей из IgGl, IgG2, IgG3 и
IgG4.
32. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 30 или п. 31, причем модифицированный константный участок содержит СН1 домен человеческого IgG2 и по меньшей мере один из СН2, СНЗ и шарнирного доменов не представляет собой изотип IgG2.
33. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 32, причем СН1 домен IgG2 содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 124.
34. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 30-33, причем модифицированный константный участок содержит шарнирный домен человеческого IgG2, который, например, снижает неоднородность в образовании связей с участием цистеина.
35. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 34, причем шарнирный домен содержит аминокислотную замену в С219 по сравнению с шарнирным доменом человеческого IgG2 дикого типа (SEQ N0 136).
36. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 35, причем шарнирный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 123.
37. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 30-36, причем модифицированный константный участок содержит СН2 домен человеческого IgGl, который ослабляет или устраняет эффекторные функции.
38. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 37, причем СН2 домен содержит аминокислотные замены A330S и P331S по сравнению с СН2 доменом человеческого IgGl дикого типа (SEQ Ш N0: 137).
39. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 38, причем СН2 домен содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 125.
40. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 30-39, причем модифицированный константный участок содержит СНЗ домен человеческого IgGl.
41. Антитело или его антигенсвязывающая часть по п. 40, причем СНЗ домен содержит аминокислотную последовательность SEQ Ш N0: 128.
42. Антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп. 9-29, причем антитело или его антигенсвязывающая часть представляют собой человеческое или гуманизированное антитело.
32.
43. Антитело или его антигенсвязывающая часть по пп. 1-8, причем метиониновые остатки в CDR участках заменены на аминокислотные остатки, которые не подвергаются окислению.
44. Биспецифичная молекула, содержащая антитело по любому из предыдущих пунктов, которое связано с молекулой, характеризующейся второй специфичностью связывания.
45. Иммуноконъюгат, содержащий антитело по любому из пп. 1-43, связанное со вторым отличающимся средством.
46. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельный участок тяжелой и/или легкой цепи антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп. 1-43.
47. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 46.
48. Клетка, трансформированная вектором экспрессии по п. 47.
49. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающую часть, биспецифичную молекулу или иммуноконъюгат по любому из пп. 1-45 и носитель.
50. Набор, содержащий антитело или его антигенсвязывающую часть, или биспецифичную молекулу, или иммуноконъюгат по любому из пп. 1-45 и инструкции к применению.
51. Способ получения антитела к CD73 или его антигенсвязывающей части, включающий экспрессию антитела или его антигенсвязывающей части в клетке по п. 48 и выделение антитела или его антигенсвязывающей части из клетки.
52. Способ снижения уровней аденозина в опухолевой клетке, экспрессирующей CD73, включающий приведение клетки в контакт с антителом, его антигенсвязывающей частью, биспецифичной молекулой или иммуноконъюгатом по любому из пп. 1-45, в результате чего уровни аденозина снижаются.
53. Способ стимуляции Т-клеточного ответа в отношении опухолевой клетки, экспрессирующей CD73, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата по любому из пп. 1-45, в результате чего стимулируется Т-клеточный ответ в отношении опухолевой клетки.
32.
54. Способ стимуляции иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата по любому из пп. 1-45, в результате чего у субъекта стимулируется иммунный ответ.
55. Способ по п. 54, при котором субъект имеет опухолевую клетку, экспрессирующую CD73, и стимулируется иммунный ответ в отношении опухолевой клетки.
56. Способ ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих CD73, у субъекта, включающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата по любому из пп. 1-45, в результате чего ингибируется рост опухоли у субъекта.
57. Способ лечения злокачественной опухоли, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающей части, биспецифичной молекулы или иммуноконъюгата по любому из пп. 1-45 для лечения злокачественной опухоли.
58. Способ по п. 57, при котором злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из: злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли матки/шейки матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичка, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудочно-кишечного тракта, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли ободочной кишки, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли легкого, злокачественной опухоли желудка, герминогенной злокачественной опухоли, злокачественной опухоли кости, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли щитовидной железы, злокачественной опухоли кожи, новообразований центральной нервной системы, лимфомы, лейкоза, миеломы, саркомы и злокачественной опухоли, связанной с вирусом.
59. Способ по п. 57 или п. 58, при котором злокачественная опухоль представляет собой метастазирующую злокачественную опухоль, невосприимчивую к лечению злокачественную опухоль или рецидивирующую злокачественную опухоль.
32.
60. Способ по любому из пп. 53-59, дополнительно предусматривающий введение одного или нескольких дополнительных терапевтических средств.
61. Способ по п. 60, при котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой иммунопотенциирующую молекулу (например, антагонист PD-1, антагонист PD-L1, антагонист CTLA-4, антагонист LAG-3), антитело к CD39 или антитело к A2AR.
62. Способ выявления наличия человеческого CD73 в образце, включающий приведение образца в контакт с антителом или его антигенсвязывающей частью по любому из пп. 1-45 при условиях, которые обеспечивают возможность образования комплекса между антителом или его антигенсвязывающей частью и CD73, и выявление образования комплекса.
32.
VH антитела к CD73 CD73.4-1
V-ce г we нт: D-ce гмент: J-сегмент:
Щ13 / 3-33 D6 / 6-13 ЛУЗ / 3
103
154
205
256
307
35 8
G V Q Т, V F, 5 G G G V V Q Р G R S
С AG GTG CAG CTG GTG GAG ТСТ GGG GGA GGC GTG GTC CAG ССТ GGG AGG ТСС
_СПГЛ
L Н L S С A A S G Р Т F S N Y G И
CTG AGА СТС ТСС TGT GCA GCC ТСТ GGA ТТС АСС ТТС AGT AAC TAT GGC АТС
_СТЖ2
Н К V R Q А Р G К G Т, К К V А V Т
САС TGG СТС CGC СAG ССТ CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG GCA GTT ATA
L Y I) G S N К Y Y P D S V К G R F
TTG TAT GAT GGA AGT AAT AAA ТАС TAT CCA GAG TCC GTG AAG GGC CGA TTC
T T S R D N 5 К M T T, Y T, Q M N С
АСС АТС TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA АТС AAC AGС
L R A E D T A VYYCARCGSS
CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAG TGT GCG AGA GGG GGC AGC AGС
W Y ? D Б F D 1 W G Q G T M V T V TGG TAG CCT GAT ТСТ TTT GAT ATС TGG GGC CAA GGA АСА ATG GTC ЛСС GTC
Фиг.
VK антитела к CD73 CD73.4-1
V-сегкент; VK3 / 7,20
J-cer'r*ce нт: JK4 / А
EIVLTQSFATLSLS ? G Е
1 GAA ATT GTG TTG АСА CAG TGT CCA GCC ACC CTG TCT TTG TCT CCA GGG GAA
CDRl
RATLSCRA5QG V 3 5 Y T, A
52 AGA GCC АСС CTC TCC TGC AGG GCC AGT CAG GGT GTT AGC AGС TAC TTA GCC
CDR2 _
WYQQKPGQAPRLLI Y D л"
103 TGG ТЖС CAG CAG AAA CCT GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC АТС TAT GAT GCA
SNRATGIPARFSGSGPG
154 TCC AAC AGG GCC ACT GGC АТС CCA GCC AGG TTC AGT GGC AGT GGG CCT GGG
TDFTLTISSLEPEDFAV
205 АСА GAC TTC ACT CTC АСС АТС AGC AGC СТА GAG CCT GAA GAT TTT GCA GTT
CDR3
Y Y С О О R S N W Jl L T F G G G T
25 6 TAT TAC TGT CAG CAG С GT AGC AAC TGG CAT CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
К V E I К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
Фиг. 1B
та ажтяша к CD73 Ш73.4-2
V-сегкент: VH3 / 3-33 D-се г №. н т: D6 / 6-13 J-с с- г кем IT : JII3 / 3
0 GAG
GTG
U CAG
L CTG
V GTG
E GAG
TCT
G GGG
G GGA
G GGC
V GTG
GTC
C' CAG
? CCT
G GGG
R AGG
S TCC
CDR1
L CTG
AGA
CTC
TCC
С TGT
A GCA
A GCC
S TCT
G GGA
E TTC
T ACC
F TTC
S AGT
AAC
Y TAT
G GGC
ATG
103
С АС
К TGG
GTC
R CGC
0 CAG
GCT
P CCA
G GGC
AAG
G GGG
CTG
F. GAG
TGG
GTG
A GCA
CDR 2
GTT ATA
154
L TTG
Y TAT
D GAT
G GGA
AGT
N AAT
К AAA
Y TAC
Y TAT
? CCA
GAC
5 TCC
\ T
GTG
К AAG
GGC
R CGA
F TTC
205
Т АСС
АТС
TCC
R AGA
GAC
AAT
S TCC
К AAG
N AAC
ACG
L CTG
TAT
CTG
CAA
ATG
И AAC
AGC
CDR3
256
L CTG
AGA
A GCC
E GAG
D GAC
T ACG
A GCT
V GTG
Y TAT
Y TAC
С TGT
A GCG
R AGA
G GGG
G GGC
AGC
S AGC
307
Т; ~"
'1GG
" Y
TAC
P CCT
GAT
5 TCT
F " TTT
GAT
"~T~ A'lC
К TGG
G GGC
Q CAA
GGA
T АСА
M ATG
GTC
T ACC
GTC
s s
35 8 TCT TCA
Фиг. 2A
?Ж аииетжла к CD73 CD73.4-2
У-сегмент: VK1 / тл 5
J-сегментj "JK4 / 4
DIQMTQSPSSLSASVGD
GAC АТС CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCA CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC
CDR1
R V T T T С R A S Q G T S S W T, A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
_CDR2
WYQQKFEKAPKSLIYAA
103 TGG TAT CAG CAG AAA. CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
3GL0SGVPSKP SGSGSG ?5
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
Y Y С О О Y N S Y P L T F G G G T
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. 2B
VH вжтжштм & к Ш7/3 11F11-1
V-сегмент: ?НЗ / 3-33 D-сегмент: D6 / 6-13 J-ce гмент: JH3 / 3
QVQLVESGGGVVQPGRS
1 CAG GTG CAG CTG GTG GAG ТСТ GGG GGA GGC GTG GTC CAG ССТ GGG AGG ТСС
__CDR1
LRLSCATSGFTFSNYGM
52 CTG AGA CTC TCC TGT GCA ACG TCT GGA TTC ACC TTC AGT AAC TAT GGC ATG
_ CDR2
H W ? R Q A P G К G L E 1 V Л V T
103 CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AA.G GGG CTG GAG TGG GTG GCA GTT ATA
L Y D G S N К Y Y P D S V К G R F
154 TTG TAT GAT GGA AGT AAT AAA TAC TAT CCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA TTC 5j
TISRDNSKMTLfLQMIS
205 ACC АТС TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGC
_CDR3
L R A E D T A V Y Y С A P G G S S
25 6 CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCG AGA GGG GGC AGC AGC
W Y P D S F D 1 W G Q G T M V T V
307 TGG TAC CCT GAT TCT TTT GAT ATС TGG GGC CAA GGA АСА ATG GTC ACC GTC
s s
35 8 TCT TCA
Фиг. ЗА
?Ж шиттела к CD73 11F11-1
V-сегмент: ?КЗ / L20
J-сегмент: JK4 / 4
Е i V' L Т Q S ? A Т L Б L S Р G Е
1 GAA ЛТТ GTG TTG АСА CAG ТСТ CCA GCC АСС CTG ТСТ TTG ТСТ CCA GGG GAA
CDR1 I | _ _
R А Т Т, 5 С R А Я ~" Q G" V Я ' S Y Т," Л
52 AG A GCC АСС CTC ТСС ТС-С AGG GCC AGT CAG GGT GTT AG С AGC ТЛС ТТА GCC
CDR2
WYQQKPGQAPRLLIYDA
103 TGG TAG CAG CAG AAA CCT GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC АТС TAT GAT GCA
154 TCC AAC AGG GCC ACT GGC АТС CCA GCC AGG TTC AGT GGC AGT GGG CCT GGG
TDFTLT1SSLEPEDFAV
205 АСА GAC TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC СТА GAG CCT GAA GAT TTT GCA GTT
CDR3
Y Y С О О R S N W 11LTFGGGT
25 6 TAT TAC TGT CAG CAG CGT AGC AAC TGG CAT CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. 3B
V-сегмент: VH3 / 3-33 D-еегкент: D6 / 6-13 J-ссгкеит: JU3 / 3
0 CAG
GTG
0 CAG
L CTG
GTG
GAG
5 TCT
G GGG
G GGA
G GGC
GTG
GTC
0 CAG
P CCT
G GGG
R AGG
S TCC
С DPI
CTG
R AGA
L CTC
S TCC
С TGT
A GCA
T ACG
S TCT
G GGA
F TTC
T ACC
F TTC
S AGT
AAC
Y TAT
GGC
ATG
103
CAC
TGG
GTC
CGC
Q CAG
A GCT
P CCA
G GGC
К AAG
G GGG
CTG
GAG
TGG
GTG
A GCA
CDR 2
"~v T~
GTT ATA
154
L TTG
Y TAT
D GAT
GGA
Б AGT
M AAT
К AAA
Y TAC
Y TAT
P CCA
D GAC
TCC
GTG
К AAG
G GGC
CGA
F TTC
205
ACC
АТС
S TCC
R AGA
GAC
AAT
S TCC
К AAG
AAG
T ACG
CTG
TAT
CTG
Q CAA
ATG
AAC
AGC
CDR3
256
CTG
R AGA
GCC
GAG
D GAC
ACG
A GCT
GTG
Y TAT
Y TAC
С TGT
A GCG
AGA
G GGG
G GGC
AGC
S AGC
307
TGG
Y TAC
~ p '~
CCT
GAT
TCT
TTT
GAT
АТС
TGG
G GGC
Q CAA
G GGA
T АСА
ATG
? GTC
T ACC
GTC
s s
35 8 TCT TCA
Фиг. 4A
?Ж аляротела к CD73 11F11-2
V-сегмент: VKI / L15 J-eeгкент: JKA / 4
DIQMTQSPSSLSASVGD
1 GAC АТС СAG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
_CDRl__ i
R V T I T С R A S Q G I S Б 'л L A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
_CDR2
WYQQKFEKAPKSLIYAA
103 TGG TAT CAG CAG AAA, CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
~~S ~""3 L ~п~~~?Г GVPSRFSGSGSG ^
15 4 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLOPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
Y Y С 0 Q Y N S ? P L T F G G G T
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. 4B
VH антитела ш СШЗ 4СЗ-1
V-сегмент: VH3 / 3-09 П-г:егыент: D3 / 3-9 J-ее г мент : J114 / 4
Н GAA
сте-
CAG
L CTG
GTG
E GAG
TCT
G GGG
G GGA
G GGC
L TTG
V GT A
0 CAG
P CCT
G GGC
AGG
TCC
CDR1
CTG
AGA
CTC
S TCC
TGT
GCA
GCC
TCT
G GGA
TTC
T ACC
F TTT
GAT
D GAT
Y TAT
GCC
M ATG
103
САС
TGG
GTC
CGG
Q CAA
A GCT
CCA
G GGG
AAG
G GGC
CTG
F. GAG
TGG
GTC
5 TCA
CDR2 G T GGT ATT
154
S AGT
TGG
К AAG
S AGT
GGT
S AGC
ATA
GGC
TAT
A GCG
D GAC
Б TCT
GTG
К AAG
GGC
CGA
F TTC
205
Т АСС
АТС
TCC
AGA
D GAC
AAC
GCC
К AAG
N AAC
TCC
L CTG
TAT
CTG
Q CAA
ATG
AAC
AGT
CDR3
25 6
CTG
AGA
A GCT
GAG
D GAC
T ACG
A GCC
TTG
Y TAT
Y TAC
TGT
GTA
AAA
GGG
TAT
Y TAC
V GTT
30?
AT'Г
TTG
A CI
GGC
CTT
GAC
Y TAC
TGG
G GGC
0 CAG
G GGA
T ACC
CTG
? GTC
ACC
GTC
TCC
Фиг, 5A
V-сегмент: ?КЗ / А27
J-сегкент; JK4 / 4
Е I V L Т Q й Р G Т L Б L S Р G Е
1 GAA ATT GTG TTG ACG CAG TCT CCA GGC ACC CTG TCT TTG TCT CCA GGG GAA
jz mi r _____
R A T T, S С R A S О Я V Я 5 Y T,
52 AGA GCC ACC CTC TCC TGC AGG GCC AGT CAG AGT GTT AGC AGC ,,. TAC TTA
A W Y Q Q К F G Q A F R Т. I, I Y G
103 GCC TGG TAC CAG CAG AAA CCT GGC CAG CCT CCC AGG CTC CTC АТС TAT GGT
_CDR2
Я S P A TGT FDRF5G5G8
154 GCA TCC AGC AGG GCC ACT GGC АТС CCA GAC AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT
GTDF TLTISRLEPEDFA
205 GGG АСА GAC TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGA CTG GAG CCT GAA GAT TTT GCA
__CDR3
Y Y С 0 0 Y G S S P L T F GGG
25 6 GTG TAT TAC TGT CAG CAG TAT GGT AGC TCA CCG CTC ACT TTC GGC GGA GGG
Фиг. 5B
VH штеютела к Ш73 4СЗ-2
V-сегмент: VH3 / 3-09 D-еегмент: D3 / 3-9 J-сегмент : JI14 / 4
F, GAA
GTG
Q CAG
L CTG
GTG
E GAG
S TCT
G GGG
G GGA
G GGC
L TTG
GTA
Q CAG
CCT
G GGC
R AGG
S TCC
CDF1
CTG
R AGA
L CTC
S TCC
TGT
A GCA
A GCC
S TCT
G GGA
F TTC
ACC
F TTT
D GAT
D GAT
Y TAT
A GCC
M ATG
103
САС
TGG
GTC
CGG
Q CAA
A GCT
? CCA
G GGG
AAG
G GGC
CTG
CAG
TGG
GTC
TCA
CDR2 G T GGT ATT
154
S AGT
TGG
AAG
AGT
G GGT
5 AGC
ATA
G GGC
TAT
A GCG
D GAC
S TCT
GTG
К AAG
G GGC
CGA
F TTC
205
АСС
АТС
TCC
R AGA
D GAC
AAC
GCC
К AAG
AAC
S TCC
L CTG
TAT
L CTG
CAA
ATG
AAC
AGT
С OR 3
256
1> CTG
R AGA
A GCT
ii GAG
D GAC
T ACG
A GCC
L TTG
Y TAT
Y TAC
С TGT
GTA
К AAA
G GGG
TAT
Y TAC
GTT
307
АТТ
L TTG
T ACT
G GGC
L CTT
D GAC
Y TAC
TGG
G GGC
CAG
G GGA
ACC
CTG
GTC
ACC
GTC
TCC
Фиг. 6A
?Ж а"и"ела ж GD73 4СЗ-2
V-сегмент: VK1 / L15
J-сегкент: JK1 / 1
DI QMTQS PSSLSASVGD GAC ЛТС СAG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
CDR1
R V T F T С R A 5 Q G I S S W L A
52 AGA GTC ACC TTC ACT TGT GGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
CDR2
W ? О О К P F К A P К Я T, T Y "A A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG AlС 1AT GCT GCA
"я я "т, о f7 GVPSRFSGSGSG жл
154 TCC AGT TTG С AA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
T D с T L T 1 S 3 L U P E D F A T
205 АСА GAT TTC ACT CTC AC С АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
Y Y С О 0 Y N 5 Y P P T F G О G T
256 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CCA ACG TTC GGC CAG GGG ACC
Фиг. 6B
VH шштптжж ж GD73 1СЗ-3
V-сегмент: VH3 / 3-09 D-сег'кент: D3 /3-9 J-сегкопт : JH4 / 4
GAA
GTG
CAG
CTG
GTG
GAG
TCT
GGG
GGA
GGC
TTG
GTA
CAG
CCT
GGC
AGG
TCC
С OKI
CTG
AG А
CTC
TCC
TGT
GCA
GCC
TCT
GGA
TTC
ACC
TTT
GAT
GAT
TAT
GCC
ATG
CDR2
f~~"
103
САС
TGG
GTC
CGG
CAA
GCT
CCA
GGG
AAG
GGC
CTG
GAG
TGG
GTC
TCA
GGT
ATT
¦ ;-
154
AGT
TGG
AAG
AGT
GGT
AGC
ATA
GGC
TAT
GCG
GAC
TCT
GTG
AAG
GGC
CGA
TTC
:-i
205
АСС
АТС
TCC
AGA
GAC
AAC
GCC
AAG
AAG
TCC
CTG
TAT
CTG
CAA
ATG
AAC
AGT
CDR3
25 8
CTG
AGA
GCT
GAG
GAC
ACG
GCC
TTG
TAT
TAC
TGT
GTA
АЛЛ
GGG
TAT
TAC
GTT
307
АТТ
TTG
ACT
GGC
CTT
GAC
TAC
TGG
GGC
CAG
GGA
ACC
CTG
GTC
ACC
GTC
TCC
Фт, 7A
V-сегмент: VKl / LI 5
J-се гаднт; JК ! / 1
DIQMTQSPSSLSAHVGD
GAC АТС CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCA CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC
CDR1
R V TFTCRASQGISS W L A
52 AGA GTC ACC TTC ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
_CDR2
К Y Q О К P E К A P К 5 L I Y A A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG A'I С TAT GCT GCA
SS TiQSGVPSRFSGSGSG "
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
YYCOQYNSYPPTFGQGT
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CCA ACG TTC GGC CAA GGG ACC
Фиг. ТВ
VH аняпюела ж Ш73 4D4-1
V-сегмент: VH3 / 3-33 Г)-се пмент : Пб / 6-13 J-со гконт: JH3 / 3
Фиг. 8A
V-сегмент: VK1 / L15
J-сегкент; JK4 /4
DIQMTQSPSSLSASVGD
1 GAC ATG CAG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
_CDR1
R ? Т I Т С R A S Q G I S S W L А
52 AGA GTC АСС АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
W У Q Q К ? F К A ? К S T, T Y A A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС 1AT GCT GCA
Г T", ~~~F~ GVPSRFSGSGSG ^
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
Г D F T L T I 5 S L Q P E D F A T
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
_CDR3
Y ? С Q Q Y M 5 Y P L T F G G G f
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCG CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. 8B
V-ce гкент :
D-еегкент: J-c:e, гкент :
VI13 / 3-3 3 D6 / 6-13 JH6 / 6
Q V С L V К Б G G G V v' Q ? G R Б
1 С AG GTG CAG CTG GTG GAG ТСТ GGG GGA GGC GTG GTC CAG ССТ GGG AGG ТСС
_CDR1
L R Т, 5 С Л А 5 G F Т F S N Y G Т,
52 CTG AGA CTC ТСС TGT GCA GCG ТСТ GGA ТТС АСС ТТС AGT АAC TAT GGC CTG
CDR2
" НП WVRQAPGKGLEWVA " V I
103 САС TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG GCA GTT ATA
-R" Y~-ti~G 5 tr-T~-r-7 д rr^-5~-^-R~ R F
154 CGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA TTC
T 1 5 R D Ы Б К N T L Y L Q M S Б
205 ACC АТС TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AGC AGC
256
__CDR3__
T, R А К D T A V Y Y С A R G G'" О О
CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCG AGG GGG GGC AGC AGC
W Y ? D G L D W G Q G T T V T
307 TGG TAC CCG GAC GGT TTG GAC GTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC
S S
TCC TCA
Фиг. 9A
VK шш9штж & к Ш73 10D2-1
?-сегмемт: ҐKi / LIB
J-сегмент:: JK4 / 4
A10LTQS PSS GCC АТС CAG TTG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC
С DPI.
В V T I T С R A S 0 G 1 S S A L A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGC CGG GCA AGT CAG GGC ATT AGC AGT GCT TTA GCC
CDR2
WYQQKPGKAPKLL1Y D A ~
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCT CCT AAG CTC CTG АТС TAT GAT GCC
SSLESGVPSRFSGSGSG
154 TCC AGT TTG GAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
YYCQQFNGYPTFGGGTK
25 6 TAT TAC TGT CAA CAC TTT AAT AGT TAC CCC ACT TTC GGC GGA GGG ACC AAG
Фиг. 9B
?М иптш к GD73 10D2-2
V-сегмент: VH3 / 3-33 U-сегмент: 06 / 6-13 J-сегмент: JH6 / 6
С AG
V GTG
0 CAG
CTG
GTG
GAG
S TCT
GGG
G GGA
GGC
GTG
GTC
CAG
CCT
GGG
R AGG
TCC
CDR1
L CTG
AGA
CTC
S TCC
С TGT
A GCA
GCG
S TCT
G GGA
TTC
T ACC
TTC
S AGT
N AAC
TAT
G GGC
L CTG
103
GAG
TGG
GTC
CGC
Q CAG
A GCT
CCA
GGC
AAG
GGG
L CTG
E GAG
TGG
V GTG
GCA
CDR? V I GTT ATA
154
R CGG
Y TAT
GAT
GGA
Б AGT
AAT
К АЛЛ
Y TAC
Y TAT
A GCA
D GAC
S TCC
V GTG
К AAG
G GGC
CGA
F TTC
205
ACC
АТС
S TCC
R AGA
D GAC
AAT
TCC
К AAG
AAC
T ACG
L CTG
Y TAT
CTG
CAA
ATG
S AGC
AGC
С OR 3
25 8
CTG
AGA
A GCC
E GAG
D GAC
ACG
GCT
V GTG
Y TAT
Y TAC
С TGT
GCG
AGG
G GGG
GGC
S AGC
S AGC
30?
TGG
Y 1 AC
CCG
D GAC
G GGT
' 7,
TIG
D GAC
GTC
TGG
G GGC
CAA
G CGG
ACC
ACG
GTC
ACC
V GTC
s s
35В TCC TCA
Фиг. 10A
V-сегмент: VKI / L15
J-ceгкент; JK4 / 4
D I Q М Т Q 5 ? Б Б L Б A S V С- D
GAC АТС С AG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
CDR1
R V T 1 T С R A S Q G I S S К L A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GO"
_CDR2_
W У Q О К P F, К A P К 5 Т. T Y " Л A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
SSLQSGVFSRFSG5GSG
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
T D F T L T I S S L Q P E D f A T
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
YYCQQYNSYPLTFGGGT
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCG CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. 10В
V-сегмент: VH3 / 3-09 D-сегмент: D3 / 3-9 J-сегмент: Л14 / 4
Е GAA
GTG
CAG
L CTG
GTG
F, GAA
TCT
GGG
G GGA
AAC
TTG
GTA
Q GAG
COT
GGC
R AGG
TCC
CDR1
L CTG
Р, AG А
L CTC
TCC
С TGT
A GCA
A GCC
5 TCT
G GGA
F TTC
ACC
F TTT
D GAT
GAT"
Y TAT
A GCC
ATG
103
~ТГ
САС
TGG
GTC
R CCG
Q CAA
A GCT
P CCA
G GGG
К AAG
G GGC
CTC
F. GAG
TGG
GTC
5 TCA
CDR2 "G T"
GGT ATT
15 4
лот
TGG
M AAT
AAT
AAT
D GAC
ATA
G GGC
Y TAT
A GCG
GAC
Б TCT
GTG
К MG
G GGC
R С GA
F TTC
205
АТС
АТС
S TCC
R AGA
D GAC
AAC
GCC
К AAG
AAC
S TCC
L CTG
TAT
CTG
Q CAA
ATG
AAC
AGT
CDF 3
25 6
CTG
AGA
CCT
GAG
GAC
ACG
GCC
TTG
TAT
TAT
С TGT
GTA
К АЛЛ
G GGT
Y TAT
Y TAC
GTT
30?
АТТ
TTG
T ACT
G GGT
L CTT
D GAC
Y TAC
TGG
G GGC
Q CAG
G GGA
T ACC
? CCG
GTC
T ACC
GTC
S TCC
Фиг. 11A
VK umvana ж CD73 11A6-1
v-сргкент: VKi / L15
J-се н/ент ; JK4 /4
D I Q К T 0 S ? S S L S A S V G D
1 GAC АТС CAG ATG ACC CAG TCI CCA TCC TCA CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC
_CDR1_
К V T I T С R A S Q G i Б Б W L A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
CDR2
W Y Q Q К ? E К A ? К S L I Y A A ~"
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
~Ь Г TT(tm)Q~" 1T~ G V P S R F S G 5 G S G ?a
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
Y Y С 0 Q Y N S Y P L T F G G G T
2 56 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCG CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
К V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
Фиг. 11В
V-сегмонт: VII3 / 3-33 D-сегмент: D6 / 6-13
J-сегмент: JH3 / 3
Q V Q L V Е 3
1 CAG GTG CAA CTG GTG GAG ТСТ
Т, Р, Т, 5 С А А
52 С ТС- АСА С ТС ТСС TGT GCA GCG
Н W V R Q A P
103 CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA
G G G V V Q P G R S GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG TCC
_CDR1 _ ______
S G F T ? S N Y G И TCT GGA TTC ACC TTC AGT AAC TAT GGC ATG
_CDR2
G К G L E W V A V I
GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG GCA GTT ATA
154
_^r_"_r__,-_^_ r ^.> ___g_ R F
TGG TAT GAT GGA GGT AAT AAA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA TTC
~-4
TISRDMSKNTLPLQMNS
205 ACC АТС TCC AGS, GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TTT CTG CAA ATG AAC AGC
25 6
L R A ED T A ? Y Y С A R G G Я "5 CTG aga GCC GAA GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCG AGA GGG GGC AGC AGC
W Y PDA F D I W G Q G T M V T V
307 TGG TAC CCT GAT GCT TTT GAT АТС TGG GGC CAA GGG АСА ATG GTC ACC GTC
35 8
S 5 TCT TCA
Фиг. 12A
VK шютюала к CD73 24М2-1
V-сегмент: VК1 / L15
J-eeгкент: J К. 4 /4
D I Q M T Q S ? S S L S A S V G D
1 GAC АТС CAG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCA CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC
CDR1
R V T I T С R A" S м С I S S V L A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG ТТЛ GCC
_CDR2__
WYQQKFEKAPKSLIYAA
103 TGG TAT CAG CAG AAA. CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
- T, GVPflRFSGSGSG "
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCЈ AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
_CDR3
Y Y С О Q Y N 5 Y P L T F G G G T
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CTC ACT TTC GGC GGA GGG ACC
Фиг. №
VH аятимла к CD73 5F8-1
V-сегмеит : VII3 / 3-74 D-сегмент: D6 / 6-19 J-сегмент: JH4 / А
EVQLVESGGGLVQPGGS
1 GAG GTG CAG CTG GTG GAG TCC GGG GGA GGC TTA GTT CAG CCT GGG GGG TCC
_CDRl__
L R L Б CAAS GFTFS Б Y W ' M
52 CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAC TGG ATG
CDR2
HWVRQAPGKGLVWVSRT~~
103 GAC TGG GTC CGC CAA GCT CCA GGG AAG GGG CTG GTG TGG GTC 1СA CGT ATT
ISDGSSTGYADSVKGRF
154 ATT AGT GAT GGG AGT AGC АСА GGT TAC GCG GAT TCC GTG AAG GGC CGA TTC
TISRDNAKNTLYLQM.4S
205 ACC АТС TCC AGA GAC AAC GCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGT
CDR3
LRAEDTA. VYYCARE FS S
25 6 CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA GAG TTT AGC AGT
G W YFDYW GQGTLVTVSS
307 GGC TGG TAC TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA
Фиг. 13A
?К аиммла к CD73 5F8-1
V-сегмент: VK1 / Lie
J-сегмент: JK1 / 1
A I Q L Т О S PSSLSASVGU
1 GCC АТС СAG TTG АСС CAG ТСТ CCA ТСС ТСС CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
_CDR1
RVTITC RASQGISSALA
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGC CGG GCA AGT CAG GGC ATT AGC AGT GCT TTA GCC
CDR2
W YQQKPGKAPKLLIYDA
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCT CCT AAG CTC CTG АТС TAT GAT GCC
- GVPSRFSGSGSG Ж!
154 TCC AGT TTG GAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA. GAT TTT GCA ACT
_CDR3
Y Y С О 0 F S S Y P R T F G О С- T
256 TAT TAC TGT CAA CAG TTT AGT AGT TAC CCT CGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC
Фиг. 13B
V-сегмент: VH3 / 3-74 ?-сегмент: D6 / 6-19 J-сегмент: JH4 / 4
EVQLVESGGGLVQPGGS
1 GAG GTG CAG CTG GTG GAG TCC GGG GGA GGC TTA GTT CAG CCT GGG GGG TCC
_CDR1___
T, R I, Г, С A A S G F T F Я S Y W M~~
52 CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAC TGG ATG
CDR2
H W V R Q Л P G К G Т. V W V 3 R T
103 CAC TGG GTC CGC CAA GCT CCA GGG AAG GGG CTG GTG TGG GTC TCA CGT ATT
I S D G S 5 T G ? A D S V К G R F
154 ATT AGT GAT GGG AGT AGC АСА GGT TAC GCG GAT TCC GTG AAG GGC CGA TTC
TISRDNAKNTLYLQMNS
205 ACC АТС TCC AGA GAC AAC GCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGT
CDR3
LRAEDTAVYYCAREFSS
25 6 CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA GAG TTT AGC AGT
G W Y F D Y W G Q G T L V T V S S
307 GGC TGG TAC TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA
Фиг. 14A
?1 анкимла к СВ73 SF8-2
V-сегмент: VK1 / L15
J-сегмент: JK1 / 1
D i О М Т О S ? S 3 L 5 А S V G О
1 GAC АТС СAG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
_CDR1
R V T 1 T С R A S Q G I S S W L A
,52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG GGT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
CDR2
W Y Q Q К ? E К A P К S L I Y A A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
"1Г Q--~я- GVPSRFSGSGSG "
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TGFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GGT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
_CDR3
Y Y С О 0 Y N S Y P R T F G Q G T
25 6 TAT TAC TGC CAA CAG TAT AAT AGT TAC CCT CGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC
Фиг, 14B
V-сегкент: VH3 / 3-74 D-сегмент: D6 / 6-19 J-сегмент: JH4 / 4
EVQLVESGGGLVQPGGS
1 GAG GTG GAG CTG GTG GAG TCC GGG GGA GGC TTA GTT CAG CCT GGG GGG TCC
_CDR1
LRLSCAASGFTFSSYWM
52 CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAC TGG ATG
__C UR2
"Н" W V R Q A P G К G L V W V SRI
103 CAC TGG GTC CGC CAA GCT CCA GGG AAG GGG CTG GTG TGG GTC TCA CGT ATT
oe
' ISDGS5 T G Y A D S V К G R F ^
15 4 ATT AGT GAT GGG AGT AGC АСА GGT TAC GCG GAT TCC GTG AAG GGC CGA TTC
205
TISRDNAKNTLYLQMNS
ACC АТС TCC AGA GAC AAG GCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGT
CUR3 _
> . F'
256
CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA GAG TTT AGC AGT
G W Y F D Y W G 0 G T L У T У S S
307 GGC TGG TAC TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA
Фиг. 15A
Ш анжхмла к CD73 SFS-3
V-сегмент;: УК3 / L6
J-сегмент: JK1 / 1
EXVLTQSPATLSLSPGE GAA ЛТТ GTG TTG ЛСЛ CAG ТСТ CCA GCC ACC CTG ТСТ TTG ТСТ CCA GGG GAA
CDR1
R А Т L б С R A s Q S V s s Y l А
52 AGA GCC АСС CTC ТСС TGC AGG GCC AGT CAG AGT GTT AGС AGC ТАС ТТЛ GCC
J::DF.2
WYQQKPGQAPRLTTYDA
10 3 TGG TAC CAA CAG AAA CCT GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC АТС TAT GAT GCA
~S M_ R~ A"" T " GTPARFSGSGSG ?a
154 ICC AAC AGG GCC ACT GGC АТС CCA GCC AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG
TDFTLTISSLEPEDFAҐ
205 АСА GAC TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC СТА GAG CCT GAA GAT TTT GCA GTT
CDR3
Y i С Q 0 R 3 :i W W T F G С G T К
25 6 TAT TAC TGT CAG CAG CGT AGC AAC TGG TGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG
Фиг. 15B
V-сегмент: VH3 / 3-09 D-еегмент: D6 / 6-13 J-сегмент: J114 / 4
Е GAA
GTG
CAG
L CTG
GTG
E GAG
TCT
G GGG
G GGA
A GCC
TTG
GTA
0 CAG
P CCT
GGC
P AGG
5 TCC
CDR.l
L GTG
AGA
CTC
Б TCC
С TGT
A GCA
A GCC
S TCT
GGA
F TTC
T ACC
F TTT
D GAT
GAT
TAT
A GCC
M ATG
103
CAC
W TGG
GTC
CGG
Q CAA
A GCT
P CCA
G GGG
AAG
G GGC
CTG
GAG
К TGG
GTC
S 1CA
CDR 2 "G T~
GGT ATT
154
ACT
И TGG
AAT
S AGT
G GGT
G GGC
ATA
G GGC
Y TAC
A GCG
GAC
S TCT
V GTG
AAG
GGC
R CGA
F TTC
205
ACC
АТС
TCC
R AGA
D GAC
N AAC
GCC
К AAG
AAC
S TCC
L CTG
Y TAT
CTG
Q CAA
M ATG
\j AAC
S AGT
CDR3
256
CTG
AGA
A GCT
E GAG
GAC
T ACG
A GCC
TTG
Y TAT
Y TAC
С TGT
A GCA
AAA
GAT
R AGG
TAT
Y TAC
307
5 AGC
.J AGT
TGG
CTC
CTC
~T""
TTT
" n
GAC
N AAC
TGG
G GGC
CAG
G GGA
ATT
T, CTG
GTC
T ACC
GTC
s s
35 8 TCC TCA
Фив. 16A
V-сегмент: v'K3 / А2 7
J-ce гьдант; JK3 / 3
EIVLTQSPGTLSLSPGE
GAA ATT GTG TTG ACG CAG TCT CCA GGC ACC CTG TCT TTG TCT CCA GGG GAA
CDR1
R A T L Б С R A S Q Б V Б Б Б Y L
52 AGA GCC ACC CTC TCC TGC AGG GCC AGT CAG AGT GTT AGC AGC AGC TAC TTA
_CDR2
A W Y Q Q К ? G Q A P P T, Т. T Y G
103 GCC TGG TAC CAG CAG AAA CCT GGC CAG GCT CCC AGG CI С CTC АТС TAT GGT
A S 5 R A T G T ? D Г F S G S G S
154 GCA TCC AGC AGG GCC ACT GGC АТС CCA CAC AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT
G T D F T L T I S R L К P К D F A
205 GGG АСА GAC TTC ACT CTC AC С АТС AGC AGA CTG GAG CCT GAA GAT TTT GCA
CDR3
V Y Y С 0 11 Y G 5 S F T F G P G T
25 6 GTG TAT TAC TGT CAG CAT TAT GGT AGC TCA TTC ACT TTC GGC CCT GGG ACC
К V D I К
307 АЛЛ GTG GAT АТС AAA
Фиг. 16B
WE иитяа к Ш73 7А11-1
V-сегмент: VH3 / 3-09 D-сегкент: D3 / 3-10 J-сегкеит: Л14 / 4
EVQLVESGGGLVQTGRS
1 GAA GTG CAG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG ACT GGC AGG TCC
CDR1
L R L S С A A S G F T F П ~D Y A M"
52 CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC ATG
_CDR2
fl W V R О A P G К G L E W V 5 D 1
103 СAC TGG GTC CGG CAA GCT CCA GGG AAG GGC CTG GAG TGG GTC TCA GAT ATT
E"~-?T s~-~ гУ"(tm) т rt _~ T. F
154 AGT TGG AAT AGT GAT ATT ATA GGC TAT GCG GAC TCT GTG AAG GGC CCA TTC
T 1 5 R D N А К N 5 L Y L О M N S
205 ACC АТС TCT AGA GAC AAC GCC AAG AAC TCC CTG TAT CTG CAA ATG AAC AGT
CDR.3
~-4
L R A E D T Л T, Y Y С А К D T Y G
25 6 CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCC TTG TAT TAC TGT GCA AAA GAT ATT TAT GGT
__ _ _ _ _ _ _ __ ^- G Q G 1 L V T V
307 TCG GGG AGT TCT TTT TTT GAC TAC TGG GGC CAG GGA АТС CTG GTC ACC GTC
Фиг, 17A
VK аютиюла к Ш73 7А11-1
"7-сегкент: VK1 / LIS
J-сегкент: JK5 / 5
D 1 О М Т Q 3 PSSLSASVGD GAC АТС СAG ATG АСС CAG ТСТ CCA ТСС TCA CTG ТСТ GCA ТСТ GTA GGA GAC
CDRi
RVTITCRASQYISSWL A
52 AGA GTC ACC АТС ACT TGT CGG GCG AGT CAG TAT ATT AGC AGC TGG TTA GCC
CDR2
WYQQKPEKAPKSLIY A A
103 TGG TAT CAG CAG AAA CCA GAG AAA GCC CCT AAG TCC CTG АТС TAT GCT GCA
SSLQSGVP5R FSGSGSG
154 TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA TCT GGG
TDFTLTISSLQPEDFAT
205 АСА GAT TTC ACT CTC ACC АТС AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT TTT GCA ACT
CDR3
Y Y С Q Q Y H 3 У P ? T F G Q G T
256 TAT TAC TGC CAA CAG TAT CAT AGT TAC CC'I CCC ACC 'ITС GGC CAA GGG АСА
R L E I К
307 CGA CTG GAG ATT AAA
Фиг. 17B
QVQ1.VhS(i(iCiVVQPGRSLRLS(V\gS(iKn:SNYCiM1iWVRQAPGKCil.tiWVvWILYIHiSNKYYPDSVKCiRI IISR DNSKfs f•I.YI.UMNSl.RAIiDTAVYVC"ARCiCiSSWYPf> Sf i)IWGQ(iTMVTVSSASTK(iPSVi fn.APC SRSTSI^S ГД. АШГl_VK!> YГ-РПPVTVS_WNS( iAITSGVMTPPAVLQSStil YSLSSVyi'VPSSM4iT(.}TY"IXjSVj> 11_KPSN 1 КVГ)к TVLRKg'VLC TPC PAPPVAGPSV PLPPPKPKI)I I.MISRI PL-VТСVVVDVSIIP1) 14;VКPNVV YViX"VP VIINAKTK J'RJjljUY NS Г V RV V SY L Г V I, HQ I> WI, N CJ КI; Y К С К V S N К A LI *^ I ¦ К I ISKА К (И ^ RP PQVYJ' LpRS RP JiMJ KJsQ VSJLTH^iaiRTSI)l/WPWFiSISXiQWNNYKTITP_V'U)SIXiSPN.YSKlTV!)KSRWQQ(iNWS('S\^MMTAUIN HYTQKSI.SI.SPCi
He подчеркнуто: VH
CDKl. 2 и 3
IL In pi шр
(TI2 (113
Фиг. 18
нг/мп 1 20000
зтзз1
555.56
92.59
15.43
2.57
0431
0.07
Kd(HrfMnH
F3713.11F11.F3.A4 j 36600
, 237JQCL
27400
12100
4828
2253
1293
788
188.18
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lqG1.1f ; 36900
33400
32800
5598
2272
1505
126.85
mAb-CD73.10-Vb-hHC-lqG2 ? 35700
31200
,29600
13000
5860
2310
1316
843
162.27
mAb-CD73.10-Vh-hriC-lqG2-lqG1.1f I 36500
31300
зоооо
13600
5143
2383.,
1192
708
156.46
mAb-CD73.4-Vh-hHC-loG2 ? 37400
32000
30500
19800
82501
1810
1148
82.57
mAbЈD73.4-Vh-hH C-lqG2-lqG 1. 1f \ 37700
32000
29700
18500
7275
2858
1732
1076
96.41
mAb-CD73^Vh-hHC-lqG1.1f f 36000
32400
31300
18800
7315
3104
1633
793
85.00
без окрашивания I -827
только вторичное антитело \ 30.3
Связывание humab к CD73 с Calu6
tog [антитело] (нМ)
40000 I
нгУмл
20000
3333.33
555.56
92.59
15.43
2.57
0.43
0.07
F3713.11F11.F3A4
962
37.6.
29.7
302
31.3
20.9
30.7
23.1
mAb-CD73.10-Vh-hHC-laG1.1f
59.2
ззГ
30.4
29.1
25.6
н__
25.4
20.8
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lqG2
58.1
27.8
28.2
31.4
20.5
23.8
21.4
mAb-CD73.10-Vh-h
HC-lqG2-lqG1.1f
59.6 j
35.5
29.1
232
29.5
23.6
23.9
23.2
mAb-CD?34-V
h-ЬН
C-bG2
35.7
mAb-CD73.4-V
Ь-hH
C-taG2-kiG1.1f
129
' 36 5
23.8
- (tm).ЙТ
23.1
19.2
26.4
21.9
mAb-CD73.4-V
^vhH
C-hGHf
96.6
48.1
28.4
28.3
28.2
25.3
25.7
21.4
без окрашивания
0.378
только вторичное антитело
39.5
1.Е-02
1.Е+04
1.Е-01
1.Е+03
Связывание humab KCD73CDMS114
-ф-F3713.11F11.F3A4 " -?- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG1.1f -^- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2 ' -•-mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2-l9G1.1f -О-¦ mAb-CD73.4-VfbhHC-lgG2 -¦- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2-lgG1.1f -Д- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f -О- без окрашивания -Ў- только вторичное антитело
п п г% п п п п -=И
1.Е+05
Фиг. 20В1
ШО 8000 7000 ТОО 5000
3000
F3713.11F11.F3A4
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG1.1f
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2-lgG1. 1f
mAb-CD73.4-VfvhHC-lgG1.1f
без окрашивания
только вторичное антитело
1000
-1 0
tog [антитело] (нМ)
Фиг. 20В2
Hfim
20000
3333.33
| 55556
92.59
' 15.43
2.57 j 0.43j 0.07
Kd (нг/мл)
F3713.11F11.F3.A4
2656
1994
1638
1474
1152
670 i 342) 200
20.73
ь-с
D73.1
O-Vh-
hHC-kiG1.1f
2159
1802
738
1594
_Ш54
. 542J 2Q7j 1
16.74
ь-с
D73.1
O-Vh-
hHC-kjG2
2060
f__
528
1350
1 775
326!173
26.59
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lqG2-lqG1 .If
2101
1690
1529
1336
807
371 i 193
104
25.69
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lqG2
2814
2092
1804
1644
1420
891 " 487 • 289
15.55
mAb-C
D73.4-VI
i-h
HC-lqG2-lqG1.1f
2753
2072
1755
573
1426
, 8D4J 487... 255
14.75
mAb-C
D73.4-VI
HC-lqG1.1f 1
2186
!1855
1 1758
703
1515
8161 458
7.11
без окрашивания
4.81
1 1
голью вторичное антитело
18.5
Связывание humab к CD73 с CHo-cynoCD73
Humab к CD73, нг/мл
Фив. 20C1
1E+05
mm r--^
F3713.11F11-F3.A4
нг/мл
20000 3333.33
222 15.4
555.56
15.9
92.59
13.9
15.43
14.1
2.57
17.3
0.43
14.7
0.07
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lqG1.1f
21.6
20.4
15.4
16-5
13.5
10.3
18.9
D73.10-Vh-hHC-lqG2 D73.10-Vh-hHC-lqG
mAb-C D73.4-Vh-hHC-lgG2
D73.4-Vh-hH
без окрашивания
13 "42X
44.6
"6Ж
J2J. 14.7
10.9
13.3
11.7 ITT
14.4
"942
"192
10.
9.74
167
8.08 _ 15.1
112
7.81
"95
12.9
только вторичное антитело
1000 900
800 700 600 500 400 300
200
100
Связывание humab к CD73 с СНО-К1
-¦-F3713.11F11.F3.A4 -О- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG1.1 f . -A- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2 -•- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2-lgG1.1 f
- -О- mAb-CP73,4-Vh-hHC-lgG2 -¦- mAb-CD73.4-Vb-hHC-lgG2-lgG1.1f
" -A- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
-О- без окрашивания
-Ў- только вторичное антитело
1Е-02
1.Е-01
1.Е+03
1Е+04
1Е+05
Фт. 20D1
ШО 800
700 600 500 400
300
200
100
-¦-F3713.11 F11.F3.A4
-?- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG1.1f
¦-^- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
-•- mAb -CD73.10-Vb-h HC-lgG2-lgG1.1 f
¦-О- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
-¦- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2-lgG1.1f
-Д- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
¦-О- без окрашивания
-Ў- только вторичное антитело
п п п п п п rv^^Pf
~-4
-1 0 log [антитело] (нМ)
Фиг. 20D2
Связывание с человеческими Т-клетками
100 *
D316 mAb-CD73.4-lgG2-lgG1.1f D316mAb-CD73.4-lgG2 D316 rnAb-CD73.4-lgG1.1f D329 mAb-CD73.4-lgG2-lgG1.1f D329 mAb-CD73.4-lgG2 D329 mAb-CD73.4-lgG1.1f FMO собранных донорских С073-отрицательных клеток
-2 0
log [антитело] (нМ)
Фиг. WE
Связывание с человеческими В-клетками
-¦- D316mAb-CD73.4-lgG2-lgG1.1f
log [антитело] (нМ)
¦ D316 mAb-CD73.4-lgG2 D316mAb-CD73.4-lgG1.1f D329 mAb-CD73.4-igG2-lgG1.1f
Ингибирование человеческого CD73
mAbO
F3713.11 F11.F3.A4
mAb-CD73.10-VtvhHC-l9G1.1f
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHCIgG2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-Vh-lgG1.1f
гранулы+С073(безАЬ)
гранулы+С073+АТР (без Ab)
гранулы+С073+АМР (без Ab)
гранулы+С073+АТР/АМР (безАЬ)
гранулы (безАЬ)
гранулы* АТР (безАЬ)
гранулы* AMP (без АЬ)
гранулы*-АТР/AMP (безАЬ)
10 100
HumabK CD73: нг
Фиг. 21А1
1000
10000
Ингибирование рекомбинантного человеческого CD73
500000 т
_ 400000-
<
? 300000Ч
? 200000Н
S 2
100000-
МаЬО
mAb-CD73.44gG2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-lgG2
mAb-CD73.4-lgG1.1f
mAb-CD73.10-Vh-hHC-I§G1.1f
mAb-CD73.1Q-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.410Vh-hHCIgG2-lgG1.1
фанулы+С073 (безАЬ) гранул Ы+С073+АТР (без Ab) фанулы+С073+АМР (без Ab) гранул ы+С D 73+ATP/AM Р (безАЬ) гранулы (безАЬ) гранул ы+ATP (без АЬ) фанулы+АМР (без АЬ)
log [антитело] (нМ)
Фиг. 21А2
Ингибирование С073 макака-крабоеда
450000 400000
100000
350000
mAbO
F3713.11F11.F3.A4 mAb-CD73.10-Vh-hHC-l9G1.1f
mAb-C D73.10-Vh-hHC-lgG2 mAb-CD73.10-Vh-hHC-l9G2-lgG1.1f mAb-CD73.4-Vb-hHC-lgG2 mAb-C D73.4-Vh -hHCIgG2-lgG1.1f mAb-C D73.4-Vh-IgG1.1f гранулы+С073 (без Ab} гарнуяы+С073+АТР (без Ab) гранулы+С073+АМР (без Ab) гран у л ы+CD 73 +АТР/АМ Р (без АЬ) гранулы (без АЬ) гранулы-"-АТР (без АЬ) г ранулы* AMP (безАЬ) гранулы*АТР/AMP (без АЬ)
Ингибирование рекомбинантного CD73 яванского макака
500000
л S 400000
2 300000-
I 5-200000-s Ф S Ф
I 1
| 100000-
МаЬО
mAb-CD73.4-lgG2-lgG1.1f mAb-CD73.4-lgG2 mAb-CD73.4-lgG1.1f mAb-CD73.10-V(vhHC-lgG1.1f mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2 mAb-CD73.410Vh-hHCIgG2-lgG1.1 гранулы* CD 73 (безАЬ) гранулы+С073+АТР (без Ab) гранулы+С073+АМР (без Ab) гранулы+С073+АТР/АМР (безАЬ) гранулы (безАЬ) гранулы*АТР (безАЬ) гранулы+АМР (безАЬ)
0 1
log [антитело] (нМ)
Фиг. 21В2
1000000
"ТОО
юоооо
700000
| 600000
I 500000
| 400000
Ш11
яюооо
тАЬО
mAb-CD73.10-Vb-hHC-lgG1.1f
mAb-CD73.10-Vb-hHC-lgG2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2-lgG21.1f
АМР+АТР
ТМ+АТР
ТМ (без клеток)
AMP (без клеток)
(hCD73+AMP)*ATP (без клеток)
F3713.11F11.F3.A4
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
АМР+ТМ
ТМ+ТМ
АТР (без клеток) АМР+АТР (без клеток)
100000
10.0 100.0 1000.0 10000.0
нг/мл Humab к СD73 в 100 мкл
100000.0
Фею. 22А1
mAbO
F3713.11F11.F3.A4 (исходное}
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG1.1f
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.10-Vh-hHC-^G2-lgGi1f
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD 73.4-Vh -h HC-lgG2 -IgG 1.1 ffBMS-986179)
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
AMP* ATP
AMP+TM
-u-
•1.5
-0.5 0 0.5 1
log [антитело] (нМ)
1.5
2.5
Фиг. 22A2
SOQQQQ
flOOQQQ 700000 600000 500000 400000 300000
imm
100000
глАЬО
mAb-CD73.10-Vh-hHC-l9G1.1f
mAb-CD73.10-Vh-hHC-l9G2-lgG1.1f
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2-lgG21.1f
АМР+АТР
ТМ+АТР
ТМ (без клеток}
AMP (без клеток)
(hCD73+AMP)+ATP (без клеток)
F3713.11F11.F3.A4
mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2
mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
АМР+ТМ
ТМ+ТМ
АТР (без клеток) АМР+АТР (без клеток)
10,0 100.0 1 000.0 10000.0
нг/мл Humab к CD73 в 100 мкл
100000.0
Фиг. 22В1
-ф- mAbO
-D- F3713.11F11.F3.A4 (исходное) A mAb-C D73.10-Vh-hHC-lgG1.1f -m- mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2 - -O(tm) mAb-CD73.10-Vh-hHC-lgG2-lgG 1.1 f -¦- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG2 -^Д- mAb-CD73.4-Vb-hHC-lgG2-lgG1.1f(BMS-986179) -O- mAb-CD73.4-Vh-hHC-lgG1.1f
•1.5
m о o.5 1
log [антитело] (нМ)
Фиг. 22B2
1.5
2.5
Анализ CAMP (Calu-6+НЕКШАК)
Интернализация (Calu-6)
ID клона
EC50, нМ YMAX График
ECSO. нМ YMAX График
IgG
11F11
0,64
MDA-001271.01-001
0,26
100
MDA-001271.01-001
i-i-i-i-i
11F11 Fab
Неактивно
CTL-000001.01-001
Неактивно
CTL-000001.01-001
Г 1 ]
* -•- .
1*1 I" * rw 1
Fab
CTL-000001.01-001
CTL-000001.01-001
11F11Fab'2
0,49
0,10
110
1 1 1 1
t - - -r-1 >
Фиг. 22C
АНАЛИЗ УРОВНЯ АДЕНОЗИНА С ПОМОЩЬЮ LC/MS/MS
Са(и-6; динамика
Опосредованная АЬ интернализация рецептора
(Н2228 клетки)
80000п
100 200 Время (мин.)
-10-Vh-hHC-lgG2-C219S
•• 10-Vh-hHC-lgG2-C219S-lgG1.1 f
- 4-Vh-hHC-igG2-C219S/11F11-Vk2
- 10-Vh-hHC-lgG1.1f/11F11-Vk2 3-Vh-hHC-lgG1.1f/4C3-Vk1
-11F11
-4C3
-6E11
Ф". 23А
10-Vh-hHC-lgG2-C2l9S 10-Vh~hHC-lgG2-C219S-lgG1.1 f
- 4-Vh-hHC-igG2-C219SmF11-Vk2 •- 10-Vh-hHC-lgG1.1f/11F11-Vk2
- 3-Vh-hHC-lgG1.1f/4C3-Vk1 -11F11
4C3 -6E11
Время {мин.)
Опосредованная АЬ интернализация рецептора (НСС15 клетки)
Опосредованная АЬ интернализация рецептора
150
60 90 Время (мин.)
(Calu-б клетки)
Антитела в конц. 2 мкг/мл
11-Vh-hHC-kjG2-C219S-lgG1.1 f 10-Vh-hHC-lgG2-C219S 10-Vh-hHC-kjG2-C219S-lgG1.1f
4-Vh-bHC-lgG2-C219S/11F11 -Vk2 - 10-Vh-hHC-lgG1.1f/11F11-Vk2
3-Vh-hHC-lgG1.1f/4C3-Vk1 -11F11 4C3
Опосредованная АЬ интернализация рецептора (NCI-H2030 клетки)
Антитела в конц. 2 мкг/мл
Фт. 23D
10 15
Время (час)
Фие. 23Е
10 15 Время (час)
Интернализация CD73 в NCI-H292 (без отмывки)
Интернализация CD73 в NCI-H292
mAb-CD73.4-lgG2JgG1.if
mAb-CD73.4-lgG2
mAb-CD73.4-lgG1.1f
10 15 20
Время (час)
Фиг. 23Н
mAb-CD73.4-lgG2.lgG1.1f
mAb-CD73.4-lgG1.1f mAb-CD73.4-lgG2Jg.G1J {без отмывки) mAb-CD73.4-lgG1.1f (без отмывки)
Время (час)
Фиг. 231
Интернализация CD73 в NCI-H1437
mAb-CD73.4-lgG2.lgG1.1f mAtCD73.4-lgG1.1f mAb-CD73.4-lgG2.lgGU {без отмывки) mAb-CD73.4-lgG1.1f (без отмывки)
1 1 1
15 20 25
Время (час)
Фиг. 23J
10 15
Время (час)
mAb-CD734-lgG1lfLC-11F11-Vk2 -Ш- mAb-CD73.4-lgG2.3Gl-AY-pn5.SP -A- mAb-CD73.4-lgG2.3G1-KH
mAb-CD73.4-G1 -G2.3-G1-AY -V- mAb-CD73.4-lgGl4jeltaTHT -О- mAb-CD73.4"G1~G2.3-G1-KH mAb-CD73.4-|gG2.3-ptusTHT mAb-CD73.4-lgG2.3-plusGGG ~f- mAb-CD73.4-lgG2.5
mAb-CD73.4-lgG2.5G1.1f-KH -O mAb-CD73.4-lgG2.5G1-AY О mAb-CD73.4-lgG2.5G1-KH -(r)- mAb-CD73.4-lgG2.5pjusTHT/LC -B- mAb-CD73.4-lgG2-C219S,1C -O- mAb-CD73.4-lgG2-C219S/LC -6- mAb-CD73.4-lgG1.1f+K0.C 25 mAb-CD73.4-lgG2-lgG1.1f
Фиг. 23K
10 15 Время (час)
mAb-CD73.4-IgG1 f/LC-11F11 -Vk2
mAb-CD73.4-lgG2.3G1 - AY-pTT5- SP
mAb-CD73.4-lgG2.3G1-KH
mAb-GD73.4-G1-G2.3-G1-AY
mAb-CD73.4-lgGl4leltaTHT
mAb-CD73.4-G1-G2.3-G1-KH
mAb-CD73.44gG2.3-plusTHT
mAb-CD73.4-lgG2.3-plusGGG
mAb-CD73.4-I§G2.5
mAb"CD73.4-lgG2.5G1.1f-KH
mAb-CD73.4-lgG2.5Gl-AY
mAb-CD73.4-lgG2.5G1-KH
mAb-CD73.44g62.5plwsTHT/LC
mAb-CD73.4-lgG2-C219S/LC
mAb^D73.4-IgG2-C219S/LC
mAb-CD73.4-lgG1.1f+K!C
mAb-CD73.4-lgG2-lgGl.1f
Фиг. 23L
400000 i
Е т
g и 300000 i
8 g 200000 х
Интернализация CD73_rpynna 1
Ш 30 мм. Ш 15 мин.
т § мин.
ЕЗ 0 МИН.
<ЬЧ о4
"N' Л Jc5
# # ,ч ^ _^ # ^ # # ^ #
^V' / J V / /
<5>
Интернализация CD73_rpynna 2
Ш 30 мин. Ш 15 мин.
га 5 мин. п 0 мин.
"V Дх' nNJ oNJ _
^ # #v $ $ & ?
.# ^ ^ of> # ^ ^ ^
Л> ^ ^ л &
Фиг. 23М
.f <5> ^ ? ? <5> *
А. Животные, обработанные контрольными mAb, опухоли собраны через 4 суток после обработки
5х 10х
8. Животные, обработанные антителом к CD73, опухоли собраны через 1 сутки после обработки
1х 5х 10х
т оо
Фиг. 24А-В
С. Животные, обработанные антителом к CD73, опухоли собраны через 2 суток после обработки
D. Животные, обработанные антителом к CD73, опухоли собраны через 3 суток после обработки
wBJBJBJI
щшшшш
щшшшшш
10х
- -г.
г Г/ i
К'"' ¦ л, 7
- ¦ни
¦¦I
Фиг. 24C-D
Животные, обработанные антителом к CD73, опухоли собраны через 7 суток после обработки
10х
Фиг. 24Е
% активности CD73
Контрольное антитело (10 мг/кг массы тела) CD73.4lgG2CS-lgG1.1f {10 мг/кг массы тела) CD73.4IgG2CS-igG1.1f (3 мг/кг массы тепа) CD73.4lgG2CS-igG1.1f {1 мг/кг массы теш)
72 96 188
Время после обработки АЬ (часы)
Фиг. 24F
Контрольные опухоли
Опухоли после получения доз TY23
Фиг. 25А
Т1 День 1
4Т1 День 2
4Т1 День 3
4Т1 День 4
4Т1 День 7
Фив. 25В
120.0
100.0
80.0
60,0
40.0
20.0
0.0
% блокированного 4СЗ-АРС
% блокированного 11F11-APC
V V* v Vs Vs V* V5
<Л> JO /Л4 aN4 A*0 aN4 <Л> <> >
"* * ^ # ^ ^
Фиг. 26Л-В
0,33 мин. ?40 мин.
X С PRAARAPA.Tl L LALGAV Р A A|AWE L Т ! L Н Т N D V Н S R L Е Q Т S Е D 5 S К
С V MAS R CMGG V A R L F 1 К V Q Q I R R Л Е Р М V L L LDAGDQYQGT I Wf TVVKGAE
55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
VA RFWINAL RY D А М Л L GNHE f D N G V Е 1TV I ?' Р L L К ? А К F P^TT'ITA KTl К А К G Р L
105 110 115 120 125 130 135 140 145 150
ASQI SGLYLP YKVLPVGDEVVGIVGYTSKETPFL SNPGTNLVF ? О Е I Т A L
' 155 160 165 170 175 1Й0 185 " 190 195 200
0,33 мин. 240 мин.
QP EVDKLKTLNVNK I IALGHSGFEMDKL I Л Q К VRGVQVVVGGH SN Т F L YT
205 210 215 220 225 230 235 240 245 250
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
0,33 мин. 240 мин.
GNPPSKEVPAGKYPF IVTSDDGRKVPVVQAYAfGKYLGYLKI Eft): ^ И V
255 260 265 270 275 280 285 290 295 U"i
^ _____ ........ 00
I S S Н G N Р I LLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTI VVLDGSS
305 310 315 320 325 330 335 340 345 350
QS С R F R ECNMGN L I С DAMI NNNLRHADETFWNMVSMCI LNGGGIRSPIDE
355 360 365 370 375 380 385 390 395 400
R N N G Т I Т W ? N 1. А А V L PFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFL
405 410 415 420 425 430 435 440 445 450
QV GG I И VVYD LS R KP GD RVVKL DVLCTKC R VPS YDP LKMDC V V К V I L PNF
¦¦ 5 460 46S 470 475 480 48S 490 495 500
LANGGDGFQM IKDEL LRHOSGDQDI NVVSTYI S К М К V I Y Р А V Е G R I К ИНН
505 51.0 515 520 525 530 535 540 545 550
н н н
Относительная доли поглощения; CD73 -С073 + тАЬПГИ
CD73-C073+mAbllFll
6,0*
Картирование структуры с помощью HDX
С-конец Димер CD73 (PDB 4Н15)
N-конец
Два дополнительных взаимодействия
я , " ^ происходят из VL домена:
' * ^ ^ VL CD73
I* 4 * Gly-SMI --"-Ser-31")Y
I *T 7 , Г ^ iyr-91-0 Arg-109-NH2
Большинство взаимодействий ^J - ^*
происходят из VH домена: 4.,^ ^ -iv/ *
VH CD73 v '; CD73
Thr-28-Oy1 Asp-168-О --^ ^ jrT 1 '
Asn-31-No2Gly-167-0/GIU-169-0 " * %\ь,^-
Asp.5J.Oo2 Lys-162-N? ' Г \ ;С " .
Tyr-100-OH Tyr-100-O ' - - ' - Комплекс CD73/11F11
Pro-ЮОА-О Arg-109-NH1
Фш. 28A 4
Сложная структура двух комплексов CD73(NDT)/11F11, наложенная на димер CD73 (запись 4H1S в PDP)
Фиг. 28В
Изображение поверхности 11FI1 (серым) с
взаимодействующими остатками С073(пурпурным).
Внутренняя поверхность показаны желтым и контактная поверхность показана оранжевым
Фиа. 280
Таблица 25, Данные SEC-MALS для комплексов CD73/mAb
Мишень
тАЬ
CD73.m-lGG1.1f
0:1
мишень;
Пж2
UV-еремя элюирования
ТТйГкТ
та"
Пик*
SEC UV- интегрирование в%
Пик 2
"ОТ
гъ'а
Пик 2
140
Пик4
-Z2W
Т7Т
hCD?3^his
hCD?3-tiis
hCD734iis
fiCD73-Ws
"ШТЖ"СТТ
CD73.1W2-C2T9T
0:1
ТО 1:0
1:1
-2.0
Т7Т
-T9.T
-11.7
ЙОТ
-12.0 47.7
жт;
-12.7
-13.0
-20.2
-16.9
________
34.2
17.5 0.6
~97Т
§7.2
"ЖТ
98,7
3.0
4Л_
1100
_11_
120
540 W
180
260
N-hCD73-his
hCD73
N-hCPtTN:
татг
f "KCD73
ТГО7Т
ТШ7Т та
TJD713
С D73.4-гибрид
CD 73.4-гибрид
Ш75.4-гиб|щ
СР73,4-ги6рвд
1:0
ТОТ
1:1
2.5
"ТТ 25
"ТТ
Т2Т
г. 5
гШ 461
44.6 -17.1
ЧТ7 то
-13.4
-11.5
-11J -13.4 -17.1 dlL -Ш Н7Л
-17,1
-13.4
-11.7
ЙТХ
йеТ
-15.3
-17.1
...0,9...
42.0
ж_?
24.1
13.5
Ж7 .
1.9
16.2
"ТГ
364
1.2
.1,1.
56.6
..40..
..3J0.
140 Т50"
120 Ж
44.
520
1000
500 ТГ
TCD7T
СР73.4-1абТТГ
"ТТ
-12.3
_Ш.
-17.1
11.8
49.5
мм_
830
530
120
JCfilL
1:1
1:2
2.5
-12.1
HIT
.-Ill
3.1
5.3
-17
- 7.
.......
55.2
ill
44.5
44.1
IT T
2.2
30.7
.Ж.
1100
910
S40
280
si.
11_Й____ _CDL3.4-lgG1.1f
_1_L_L
J5i
._____?_
_____
_____
JIJL
_ш_
_29_L.
hCD73
TCD7T
HCD73
CD73.1Q-lgG2CS-1.1
1:1
2.5
_.Ь
2.5
2,5
2.5
2А.
тгг
-11.5
тгг
-11.8
-16.9
-17.3
ЧТТ
Ч5Т
"-1То
§5.0
J6_L
2.1
2,8
2.5
3400
Тзоо'
2000
970
1100
320
4ВД ТЯГ
270
390
160
...(1GD.73..
_СЖЗ,10-Ш,11.
шзгжщжщш
HCD73 JCD73.4-lgG2-C219S-laG1.1f
2,1...
1,5
3.4
-15,0
-17,3
84,4
7,6
2.5
5.4
.1000...
2ЭШ
660
460
240
2 9А * ^°raPHb,e концентрации определены дня мономера N-hCD73, мономера 11F11 -Fab. димера hCD73-hts и mAb (бивалентное)
• Молярные концентрации определены для мономера N-hCD73, мономера 11 F11-Fab, димера hCD73-hts и mAb (бивалентного)
Фиг. 29В
hCD73-his+ CD73.4-lgG2-C2l9S
hCD73-his+ CD73.4 + lgG2Ј219S-lgG1.1f
|i hCD73-his+CD73.4-lgG1.1f
i \ ti
i J i
!l I
* v -
~\ 1 1 1 1 1 1-|-г
12.0 14.0
% площади пика 1 % площади пика 2
90 80
70 SO 50 40 30 20 10
СН1+шарнир из lgG2
СИНшарнир из lgG1
1 "••¦•¦¦
Sow JL*(tm)-1 JL*.., J.*... JLhv
UOLJUL..
00 00
? В Щ м
о ъс
^oifnO О A ,1.1- 4-_1 T- CD CD CD ^ ^ Л
L*- ^J" ^iCD 5-D
Uo"ra raV Vpj ?
О Ы
Набор 1
-I f n -I LU >
croc
0- CL
(- u_
1- -J-
So о?
CN CD - < CL
Ll_ о;
"а:
CN Ж
!X I > z > z
SЈ ^ < > - X
^ CN
CN"9 OCN О
. . , . , . . CN
см . .
tsi Ы CN см CDCDtpq5
tNtA JN" PCN'OCN О О
cpoloocpo Фа
XX tfNfsi
CN CN
CDO
l I
OCN
Q. Q. Q, ^ X S XXX QL _
яз ff те 333
i|| Ф ф Ф
ТЭ ТЭ
v' C\l LO
ООЫ
CN Si tDcN
C7>
Фт, 31
мкВ
130000
120000110000 100000
даооо-
8000070000 600005000040000mm-mm-. "ото-
Datsl; 8262015J 443 PMJG 150626j:ofpplex 1.003. led DetectorA СМ:28#гда Data2:8262015J443 PM_JG 150826_CompJex 3J"5.lcd Detector A CM :280"*m Data3:8262015J443 PMJG 150826 .Comdex2.004,)cd DetectorA CM; 280nrr < Data4:8262015J443PMJG 150826_Corr^ex4_006.lcd Detector A Ch 1:280nrr. Data5:8262Q15J443 PMJG 150826_Cornplex5_007.lcd DetectorA CM :28§rtm Data6:8262015.1443 PMJG 150826j:wnplex6,OD8.fc m D3la9:8262015J443 PMJG 150826_Complex9_011 .fed Detector A CM :2№m Data 10:8262015J 443PM_JG 150826_Corr.p!ex 10_012lcd DetectorA CM:280nm Date 11;82"15J 443 PMJG 150826.Comdex 11 "013,lcdDetectorA CM Data 12:8262015..1443 PMJG 150826"Ccmp1ex 12"014 ,fcd Detector A CM Datal 3:8262915 J 443 PM..JG 150B26_Corppta 13_015.1cd Detector A Ch1 DatM4:8262Q15J443PMJG 15(c)B26_Complex 14_016.!cd Detector A CM Datal 5:8262015_1443 PMJG 150B26_Corrpl" 15_017lcd Detector A CM :280nm Data 16:8262015_1443PMJG 150B26_CompJex 16_018lcti DetectorA CM:280nm
~-4
0.0
1 1 1 r-
2.5
5,0
7.5
"I-! i Г
10.0
15.0
17.5
20.0
i-i-i-r-
25.0 МИН,
Фиг. 32A
СН1домен из lgG1
> - X У- ^
й s I | ?
9 Й | Й
5 5 ¦? °
.ЕР
3 ч е
S с о
о 8
N^ ч^ ^ ^ 4> & ^ K^ ^ 4^ ¦' ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ #
HhCD64 Ш hCD32a-H131 OhCD32a-R131 I
Фив. 34
нсоз2ь ттвштт
Выравнивание VH-ъгчасгка
11F11 Q VQ L V E 3 С- G GV VQ P G R S L R L 3 С АП 3 G FIF 3 N Y G M H WV R Q A. F G К G L E YtfVAVIL Y D G 3 N К Y Y~ ? D 3 V К G R F T13 R D N 3 К N T L Y L Q' MN S LRAEDT AV Y Y С A R G G S 5j W Y P С S Г DIWG Q G T MTV TV 3 S
/3 . 4 Q VQL VE 3 GG GVVQP G R5 L RL S С АИЗ GF I F 3N YGMH WVR Q A.PGRGL EWAVIL YDG S NKY Y ? D S VK G RF TIS RDNS KN Г L Y LQMN S L P. AE J T AV Y YC A. RGG 5 S W YP E S F DI WG QGTMV TVS 3
73 . Ь Q VQL VE 3 С С CVVQP G RS L RL S CAMS G FIF 3N YCMH WVR QA.PC KGL EWVAV T L YDC 3 NKY Y ? I) S VK G RF TIS RDNG KN T L Y LQMN S L RAE D TAV Y YCA RCC S 8 W YP E S F DIWC QC T№; TVS 3
73.6 Q'VQL VT 3 GG CVVQP Q RS L RL $ CAgS GF T F $N Y GMR" WVR QAPGKGL EWAVIL YEH $ NKY Y ? D $ VK G RF TIRDKI$ KN T L Y LQMN $ L RAE D TAV Y YCA RGG 3 $ W YP E S 7 DI WG QGTMV TV$ S
73 . 7 f> 'QLVE3CXC^V^CRSLRLSC^
73.8 QVQT^SCCCVVQPCR.ST,RT,SC.M^^
73.9 Q V QL V ^ 3 GG G V VQP G RS L RL S CAMS Gb "1 -13 N M GM_4 W У R QAPGKGL RV-J v'AV THY EB 3 N К Y Y G D 3 V К G Rb 'TIS RT> 3J 5 К N T L Y LQMN S L RAE J ТА V У'-. С A RGG 8 S W Y P E S -1D Y № G GGTMV T V S 3
73.10 Q VQL VE 3 С G CVVQP G RG L RL 3 CAg3 С FIT SNYCMHWVR QAPC KGL ETCVAV lyYEffl 3 NKY YP D 3 VK G КГ T13 RDN3 KN T L Y LQMN 3 L RAE D TAV Y YCA RGG 3 3 W YP E 3 F DI WC QC TMV TVS 3
2 4H2 Q VQL VT 3 GG CVVQP С RS L RL S С A A3 С FIF 3N YCMH WVR QA.PC.KCL E№/AV T V JYDG CNKY YAD 3 VK G RF T13 RDN3 KN T LF LQMN S L R AE J T AV Y YC A RGG 3 3 W YP С A T D T WC QC TMV TVS 3
4D4 Q VQ L V T 3 С С С V VQ P G R 3 L R L 3 С A A 3 С F T T 3 N Y G M H WV R G A P С К G L E №/AV T ?J Y D E 3 N К Y Y A D 3 V К С R F T13 R D N 3 К NIL F L Q MN 3 L R A E D T AV Y Y С A R С Y N 3 R W YP D AF EIW С Q С T > 1 V TV 3 3
I0D2 Q VQL VT 3 GG GVVQP G R5 L RL 5 С A A3 GF T F 3N YG L HWVR QAPGKGL EVTVAV T R YDG 3 NKY YAD 5 VK G RF T13 KDN3 KN T L Y LQMS 5 L R AE D T AV Y YC A. RGG 3 3 W YP E G L DVWG QGT T V TVS 5
6E11 EVQLVESGGALVQPGRSLRLSCAASGFTFEDYAMHWVROAPGKGLEW^
7A11 E VQL VE 3 GG GL VQ T G RS L RL S СААЗ GF T F E DYAMHWVR QAPGKGL EWSDIS WK 3 E ГIG YAD S VK G RF TIS RDNAKN S L Y LQMN S L RAE Э TAL Y YCA. KD I YG S OS 3 F F D YWG QG IL V TVS 3
11A & E VQL VE 3 GG NL VQP G RS L RL $ СААЗ GF T F E DYAMHWVR QAPGKGL EVTVS G T S WTsTOD IG YAD S VK G RF IIS RDNAKN S L Y LQMN S L RP E D TAL Y YCV KG Y YVILT GL T Yffl GQ G T ? VT VS S
4C3 E V Q L V E 3 GG GL VQP G RS L R L S С A A3 Gb' '1 :'JJY АМН W V R Q APGKG L EW V SGI S W К SG31G Y A J S V К G Rb' T1S R D2sl AK JN S L Y LQMN S L RAE J T A L Y Y С V KG Y Y V1 LT" G L J Y V 7 3 т 3 E VQL VE 3 GG GL VQP G R$ L RL $ Q A A$ GF T F E DYAMHWVR Q APGKGL EW$ GI $ WK $ Go I'G YAD $ VK G RF TI? RDNAKN $ L Y LQMN $ L R AE D TAJIYCVKGYW I LT QL С YWGQ G T L VT VЈ 3
Я1" 3 E V QLVE 3 GG C'L VQP GGG L RL G С AAG Gb "I _¦' 3 0 Y WM_ 1W V R Q A.PGKQL V\-4 V 3 R11 S EG 3 G TG Y AD 0 V К G Kb" T1G RD.\AK N 1" L Y LQMN 3 L RAE D ТА V Y Y С A RE1" G G GW Yb'D Y WGQ-5 T_iV С V G G
Выравнивание VL-участка оо
11P11-1 EIVLTGSPATLSLSP^ERATLSC^ 23
HFll-Й PIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYMKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFrLTISSLQPEDFATYYCOQYNSYPLTFGGGrKVEIK
2 4H2 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEEaPKSLIYAASSLQ^^
4D4 DIQMTQS PS S LS AS VGDR VTITCR ASQGIS S WLAWYQQKPEKA PKS LT YAAS S LQ SGVPS RFSGSGSG TDFTL TIS S LQPE DFAT YYCOQYWS YPLrFGGGTKV EI К
10D2-1 AIQLTQS PS S L S AS VGDR VTIRASQGIS S ALAWYMKPGKA PKLLIYDAS S LE SGVPS RFSGSGS GrDFTL TI S S LQ PEDFAT YYCQQFNS YPTFGGGTKVEIК
1QD2-2 DIQMTQS PS S L S AS VGDR VTIГС BASQGIS S WLAWYQQKPEKA PKS LI YAAS S LQ SGVPS RFSGSGS GrDFTL TI S S LQ PEDFAT YYCQQYHS YPLTTGGGTK VEIК
6E1I EI VLTQS PGTLS LS FGER ATL5CR ASQS VS S S YLAW YQQKPGQ APRLLIYGA S S R ATGIP DRFSGSG S GTDFT LTIS RLEP EDFA VY YCQH YG S S FrFGPGTKVD IК
1 All DIQMTQS PS S LS AS VGDR VTITCR A5QYIS S WLAWYQQKPEKA FK5 LI YAAS S LQ 30VPS RFSGSGSG TDFTL TI 5 S LQPE DFAT YYCQQYH:S YPFPFOOGTRL E.IK
11A6 DIQMTQS PS S LS AS VGDR VTITCR ASQGIS S WLAWYQQKPEKA PKS LI YAAS S LQ SGVPS RFSGSGSG TDFTL TI S S LQPE DFAT YYCQQYKS YPLTFGGGTKV EI К
4C3-1 EIVLTQSrcTLSLSFGERATLSCRASQSV^
4 C3 - 2 DIQMTQS PS S L S AS VGDR VTFTC RASQGIS S WLAW YQQKPEKA PKS LT YAAS S LQ SGVPS RFSGSGS GrDFTL TTSSLQ FEDFAT YYCQQYNS YP PTFGQGrK VET К
4C3-3 DIQMTQS PS S L 3 AS VGDR VTFTC RA5QGI3 S WLAW YQQKFEKA FK3 LI YAAS S LQ SOVFS RFSGSGS OTDFPL TI 5 3 LQ PEDFAT Y YC^JQ YH5 YP РТТОО^ГК VET К
5F9-1 AI-QLTQS PS S L 3 A3 VGDR VTI TC RA3QGI g 3 ALAW YQ^KPGKA PKLLI YDAS S LE 30VP3 RFSG5GSG TDFTL TI 5 S LQPE DFAT Y YCQQFS 3 YP RTFi^GTECVE IК
5 F8 - 2 DigMTgS FS S L S A3 VGDR VTI TC RASgCI З S WLAW Yg^KPEKA FK3 LI YAAS 3 LQ SGVPS RFSGSGS GTGFTL TI S S LQ PEDFAT YYOQQY MS YPRTFGQGTK VEIК
5F8-3 EIVLTQSPATL3LSFGERATLSCRA5Q5V33 YIAWY^KPOQAPRLLI YDA3WRATGIPARFSG3G$GTDFTLTIS3LEPEDFAV YYCQQH5NWWTFGQGTECVEIK
Фиг. 35
(19)
(19)
(19)
109
112
112
217
Таблица 12.
217
Таблица 12.
218
Таблица 13.
218
Таблица 13.
219
219
225
Таблица 19.
224
227
227
231
232
Таблица 23.
234
234
241
Таблица 29.
240
243
243
261
Таблица 35.
260
263
263
312
312
312
312
Synthetic: 11F11 VH CDR3
Synthetic: 4D4 VH CDR3
<220>
<223> Synthetic: 11A6 VH CDR1
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH
<400>
<220>
<223> Synthetic: 24H2 VH
<400>
Gly
Gly
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1
<400>
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR3
<220>
<223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR3
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR2
<400>
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR2
<400>
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR2
<400>
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR2
<400>
<220>
<223> Synthetic: 7A11 VH CDR2
<400>
<220>
<223> Synthetic: 11F11 epitope #2
<220>
<223> Synthetic: 11F11 epitope #2
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
210
210
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
210
210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
210
210
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 110 <211> 213 <212> PRT
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 110 <211> 213 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<210> 111
<210> 111
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 113
<210> 113
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<220>
<220>
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 116 <211> 449 <212> PRT
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 116 <211> 449 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<220>
<220>
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 118 <211> 214 <212> PRT
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 118 <211> 214 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 119
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 119
<210> 120 <211> 214 <212> PRT
<210> 120 <211> 214 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 121
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 121
<210> 122 <211> 214 <212> PRT
<210> 122 <211> 214 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 123
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 123
<220>
<220>
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<220>
<220>
<210> 139 <211> 363
<210> 139 <211> 363
<210> 139 <211> 363
<220>
<223> Synthetic: IgG2-IgG1.1f (MHCCR)
<220>
<223> Synthetic: IgG2-IgG1.1f (MHCCR)
<400> 168
<400> 168
Ala Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
450
192 446
PRT
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> <211> <212>
192 446
PRT
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
193
<400>
193
<400>
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 205
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 205
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 205
<210> 206 <211> 446 <212> PRT
<210> 206 <211> 446 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
207
<400>
207
<400>
305
310
320
315
305
310
320
315
<220>
<210> 223
<210> 231
242
<400>
242
<400>
242
<400>
<210> 247 <211> 642 <212> DNA
<210> 247 <211> 642 <212> DNA
<210> 249 <211> 642 <212> DNA
<210> 249 <211> 642 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<210> 258 <211> 642 <212> DNA
<210> 267 <211> 330 <212> PRT
<210> 267 <211> 330 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
225
230
240
235
225
230
240
235
245 250 255
260
270
265
260
270
265
275
280
285
275
280
285
290 295 300
290 295 300
50 55 60
50 55 60
305
310
320
315
305
310
320
315
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
325
325
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 282
<220>
<220>
288 4
PRT
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
1 5 10
<210> <211> <212>
288 4
PRT
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
1 5 10
<210> <211> <212>
<213> Homo sapiens
<213> Homo sapiens
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5
<220> <221> <222>
<220> <221> <222>
50 55 60
50 55 60
305
310
320
315
305
310
320
315
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
325
85 90 95
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 305
100
110
105
115
120
125
<400> 309
130 135 140
145
150
160
155
165 170 175
180
190
185
195
200
205
195
200
205
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
210 215 220
210 215 220
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
322 327 PRT
325 330
<210> <211> <212>
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
322 327 PRT
325 330
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
225
230
240
235
225
230
240
235
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G1-G2-G2-KH
<220>
<223> Synthetic: G2.5-G1-G2-G2-KH
245 250 255
260
270
265
260
270
265
275
280
285
275
280
285
290 295 300
290 295 300
50 55 60
50 55 60
305
310
320
315
305
310
320
315
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
325
85 90 95
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 337
85 90 95
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 337
85 90 95
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 337
100
110
105
100
110
105
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V20
<220>
<223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V20
115
120
125
<400> 341
130 135 140
145
150
160
155
165 170 175
<210> 351
<210> 351
<210> 351
<210> 351
<210> 351
<210> 351
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly
<210> 362
<210> 362
<210> 362
<210> 362
<210> 362
<210> 362
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
368
PRT
<210> <211> <212>
368
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Alternative hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<220>
<223> Synthetic: Portion of hinge
<400> 376
<400> 376
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
<220>
<223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge
326
326
К V E I К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
VH антитела к CD73 llFll-2
VH антитела к CD73 llFll-2
К ? E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К ? E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
?Ж антитела к CD73 4СЗ-1
35 8 TCA
T К V E 1 К
307 ACC AAG GTG GAG АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
35 8 TCA
35 8 TCA
VK антитела к CD73 4СЗ-3
VK антитела к CD73 4СЗ-3
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
VK антитела к CD73 4D4-1
VK антитела к CD73 4D4-1
К V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
?1 антитела к CD73 10D2-1
?1 антитела к CD73 10D2-1
358
358
?1 антитела к CD73 10D2-1
?1 антитела к CD73 10D2-1
358
358
?1 антитела к CD73 10D2-1
?1 антитела к CD73 10D2-1
358
358
?1 антитела к CD73 10D2-1
?1 антитела к CD73 10D2-1
358
358
V E 1 К
307 GTG GAG АТС AAA
V E 1 К
307 GTG GAG АТС AAA
VK антитела к CD73 10D2-2
VK антитела к CD73 10D2-2
К V E i К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E i К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
VH антитела к CD73 11А6-1
VH антитела к CD73 11А6-1
35 8 TCA
35 8 TCA
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
VI антитела к CD73 24Н2-1
E V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
E V E 1 К
307 AAG GTG GAG АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
VH антитела к CD73 5F8-2
VH антитела к CD73 5F8-2
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
К V E I К
307 AAG GTG GAA АТС AAA
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
VH антитела R CD73 5F8-3
У E I К
307 GTG GAA АТС AAA
У E I К
307 GTG GAA АТС AAA
VH антитела к CD73 6Е11-1
VH антитела к CD73 6Е11-1
?Ж антитела к CD73 €111-1
?Ж антитела к CD73 €111-1
35 В TCC TCA
35 В TCC TCA
36/87
36/87
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 Humab к CD73, нг/мл
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 Humab к CD73, нг/мл
Связывание антитела к CD73 с Calu6
Связывание антитела к CD73 с Calu6
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 HumabKCD73, нг/мл
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 HumabKCD73, нг/мл
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 HumabKCD73, нг/мл
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 HumabKCD73, нг/мл
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывание антитела к CD73 с DMS114
Связывайте антитела к CD73 с CHO-cynoCD73
Связывайте антитела к CD73 с CHO-cynoCD73
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 Humab к CD73, нг/мл
1.Е+00 1.Е+01 1.Е+02 Humab к CD73, нг/мл
1000
Связывание антитела к CD73 с СН0-К1
1000
Связывание антитела к CD73 с СН0-К1
1000
Связывание антитела к CD73 с СН0-К1
1000
Связывание антитела к CD73 с СН0-К1
45/87
45/87
45/87
45/87
45/87
45/87
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CD73 в Calu6
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CDI3 в DM8-114
Ингибирование CD73 в DMS-114
Ингибирование CD73 в DMS-114
57/87
57/87
57/87
57/87
57/87
57/87
57/87
57/87
58/87
58/87
59/87
Интернализация CD73 в Calu6
59/87
Интернализация CD73 в Calu6
60/87
Интернализация CD73 в Calu6
60/87
Интернализация CD73 в Calu6
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
61/87
Интернализация в SNU-C1
Интернализация в Calu6
Интернализация в Calu6
Интернализация в Calu6
Интернализация в Calu6
Интернализация в NCI-H292
Интернализация в NCI-H292
64/87
64/87
64/87
64/87
64/87
64/87
64/87
64/87
68/87
68/87
68/87
68/87
68/87
68/87
68/87
71/87
71/87
71/87
71/87
71/87
71/87
79/87
79/87
80/87
80/87
80/87
80/87
80/87
80/87
80/87
80/87
84/87
84/87
80%
80%
140%
140%