|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Описаны соединения и композиции, в которых единица кватернизированного лекарственного средства связана с единицей нацеливающего лиганда, из которой лекарственное средство, содержащее третичный амин, высвобождается в являющемся мишенью месте действия. Также описаны способы лечения заболеваний, характеризующихся являющимися мишенью аномальными клетками, такие как раковые или аутоиммунные заболевания, с применением соединений и композиций в соответствии с данным изобретением. 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Описаны соединения и композиции, в которых единица кватернизированного лекарственного средства связана с единицей нацеливающего лиганда, из которой лекарственное средство, содержащее третичный амин, высвобождается в являющемся мишенью месте действия. Также описаны способы лечения заболеваний, характеризующихся являющимися мишенью аномальными клетками, такие как раковые или аутоиммунные заболевания, с применением соединений и композиций в соответствии с данным изобретением.
Евразийское (21) 201790521 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07K 7/02 (2006.01)
2017.06.30 A61K 45/06 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2015.09.10
(54) НАПРАВЛЕННАЯ ДОСТАВКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ, СОДЕРЖАЩИХ ТРЕТИЧНЫЙ АМИН
(31) 62/049,206; 62/087,218; 62/087,755
(32) 2014.09.11; 2014.12.03; 2014.12.04
(33) US
(86) PCT/US2015/049494
(87) WO 2016/040684 2016.03.17
(71) Заявитель:
СИЭТЛ ДЖЕНЕТИКС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Берк Патрик Дж., Джеффри Скотт, Хэмилтон Джозеф З. (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU) (57) Описаны соединения и композиции, в которых единица кватернизированного лекарственного средства связана с единицей нацеливающего ли-ганда, из которой лекарственное средство, содержащее третичный амин, высвобождается в являющемся мишенью месте действия. Также описаны способы лечения заболеваний, характеризующихся являющимися мишенью аномальными клетками, такие как раковые или аутоиммунные заболевания, с применением соединений и композиций в соответствии с данным изобретением.
Ксенотрансплантат лимфогранулематоза L540cy, КАЛ в количестве 4 лекарственных средства/АЬ
"| I -*- необработанный
2420-540394ЕА/026 НАПРАВЛЕННАЯ ДОСТАВКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ, СОДЕРЖАЩИХ
ТРЕТИЧНЫЙ АМИН
ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
В данной заявке заявлен приоритет на основании заявок США №№ 62/049,206, поданной 11 сентября 2014, 62/087,218, поданной 3 декабря 2014, и 62/087,755, поданной 4 декабря 2014, которые все включены сюда путем ссылки полностью.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Данное изобретение относится к конъюгатам лиганд-лекарственное средство (КЛЛ) для направленной доставки лекарственных средств, содержащих третичный амин, в аномальные клетки, связанные с данным болезненным состоянием, или в ближайшее окружение таких клеток. Нацеливающий лиганд таких КЛЛ селективно подвергает воздействию на аномальные клетки, в отличие от нормальных клеток, отличающихся от аномальных клеток, лекарственного средства, содержащего третичный амин. Такое селективное воздействие достигается благодаря концентрации лекарственного средства в желаемом месте действия через связывание направляющего лиганда КЛЛ с, или рядом с, аномальными клетками. В результате воздействие лекарственного средства на отдаленную нормальную клетку снижается, тем самым снижая нежелательные побочные эффекты при одновременном снижении роли аномальных клеток в болезненном состоянии.
В общем, конструирование КЛЛ включает рассмотрение множества факторов, включая требование того, чтобы лекарственное средство имело место присоединения к части линкера, которая соединяет лекарственное средство с направляющим лигандом, и которая способна высвобождать лекарственное средство в сайт-мишень. Соединение, содержащее третичный амин, может не иметь подходящего места присоединения, поэтому может потребоваться модификация исходного лекарственного средства для присоединения к линкерной части КЛЛ. В таких случаях высвобождаемое лекарственное средство не является исходным лекарственным средством, но является модифицированным лекарственным средством. Например, лекарственное средство, содержащее третичный амин,
может быть модифицирования путем удаления одного из его аминовых заместителей с получением вторичного амина, который затем может быть введен в КЛЛ через карбонилсодержащую функциональную группу. Однако часто модифицированное лекарственное средство будет иметь значительно более низкую биологическую активность или нежелательные изменения в других фармакологических свойствах, по сравнению с исходным лекарственным средством, содержащим третичный амин.
Из-за того, что трудно подобрать альтернативное место для конъюгации, и того, что желательно сохранить максимальную биологическую активность лекарственного средства, содержащего третичный амин, в данной области техники существует необходимость в КЛЛ, в которых атом азота третичного амина используется в качестве места конъюгации для того, чтобы высвобождать полностью активное лекарственное средство, содержащее третичный амин, сайт-мишень действия. Даже если пониженная биологическая активность или изменения в других фармакологических свойствах приемлемы при изменении лекарственного средства, содержащего третичный амин, через удаление одного из азотных заместителей, или если имеется альтернативное место конъюгации, или оно может быть введено без серьезных последствий для желаемой биологической активность, все равно в данной области техники сохраняется потребность в применении атома азота третичного амина в качестве места конъюгации. Эта потребность существует потому, что невозможно предсказать, какое из возможных мест конъюгации, которые могут иметься в лекарственном средстве, содержащем третичный амин, обеспечит наиболее эффективное высвобождение активного лекарственного средства и, следовательно, даст наиболее активный КЛЛ.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Основными вариантами данного изобретения являются композиции конъюгата лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), где композиция КЛЛ представлена структурой формулы 1
где "Лиганд" из нацеливающей части, которая селективно связывается с являющейся мишенью группой; Lb является лигандной ковалентно связывающей группой; Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей так, что индекс а равен О, если А отсутствует, или а равен 1, если А присутствует и, необязательно, состоит из двух, трех или четырех субъединиц; Q2 является W'W'-E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w. являются расщепляемыми единицами; где Ww из Q1 способен селективно расщепляться под воздействием регуляторной или внутриклеточной протеазой по сравнению с сывороточными протеазами, где внутриклеточная или регуляторная протеаза может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клетками, по сравнению с нормальными клетками, или способен селективно расщепляться протеазой, выделяемой в больших количествах являющимися мишенями аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или способен расщепляться глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособным к гидролизу в условиях более низкого рН, присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки, и W-E из Q2 представляет гликозидную связь, расщепляемую гликозидазой, расположенной внутриклеточно, где гликозидаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальными или другим нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или способен селективно расщепляться гликозидазой, выделяемой в больших количествах являющихся мишенями аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, где индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен О, или W присутствует, если w равен 1, и w' равен 0 или 1, где
W'-E отсутствует, если w' равен 0, или W'-E присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равно 1 (т.е., один и только один из W, W присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или -C(R8) (R9)-D+, где, по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V, Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1,
при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу,
при условии, что если w' равен 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9) -D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу;
R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R' является водородом или является галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является электронодонорной группой; D+ является структурой кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин D; и р равно среднему содержанию лекарственного вещества, имеющему значение от 1 до 24; где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление дает отделение D от КЛЛ в композиции КЛЛ.
В некоторых аспектах, нацеливающей частью является
антитело, образуя конъюгат антитело-лекарственное средство (КАЛ), и являющейся мишенью группой является антиген поверхности клетки целевых аномальных клеток, который способен к клеточной интернализации связанного КАЛ, где антиген преимущественно присутствует в аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
В некоторых аспектах, W из Q1 состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется внутриклеточной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где внутриклеточная протеаза может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, и где действие внутриклеточной протеазы на W вызывает высвобождение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) , из КЛЛ. В других аспектах пептидная связь расщепляется протеазой, которая выделяется аномальными клетками с больше степени, чем нормальными клетками.
В других аспектах W' способен к селективному расщеплению регуляторной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где регуляторная протеаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным клетками или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками.
В других аспектах W' способен к селективному расщеплению лизосомной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где лизосомная протеаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками.
В других аспектах, W' из Q2 является связанным гликозидом углеводородом, где гликозидная связь в W'-E из Q2 является местом расщепления для внутриклеточной гликозидазы, где воздействие гликозидазы на W'-E вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) , из КЛЛ, где гликозидаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению гликозидазой,
выделяемой с больших количествах целевыми аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками.
Другие основные варианты данного изобретения представляют соединения, имеющие структуру формулы 2:
-Q1
(Формула 2)
где Lb' является частью предшественника, ковалентно связывающего линкер; Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей, необязательно состоящей из двух, трех или четырех субъединиц, так, что индекс а равен 0 или 1, где А отсутствует, если а равен 0, и А присутствует, если а равен 1; Q2 является W'-E, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами, способными расщепляться в КЛЛ, имеющем структуру формулы I, который включает структуру формулы 1 или формулы 2; где Ww из Q1 состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется регулаторной или внутриклеточной протеазой, которая может быть или не быть более специфической к аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или селективно расщепляется протеазой, преимущественно выделяемой аномальными клетками или нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или состоит из дисульфидной части, которая расщепляется глутатионом через дисульфидный обмен, или состоит из гидразоновой части, которая является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН, присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки, и W'-E из Q2 являются гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, где гликозидаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным или другим нежелательным
клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению гликозидазой, выделяемой в больших количествах целевыми аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, где индекс w равен 0 или 1, где W присутствует, если w равен 1, или W отсутствует, если w is 0, и w' равен 0 или 1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, и W'-E присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равен 1 (т.е., один и только один W присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или C(R8) (R9)-D+, при условии, что если w равно 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу, и при условии, что если w' равно 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим одним V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу, R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R' является водородом или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или электронодонорной группой; и D+ является структурой кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин D, где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление дает выделение D из D+ из КЛЛ, полученного из соединения формулы 2.
В некоторых аспектах, в данном изобретении представлены композиции конъюгатов КЛЛ, полученных взаимодействием соединения формулы 1 со нацеливающей группой, имеющей реакционноспособную сульфгидрильную, амино или альдегидную часть, в подходящих условиях, с получением конденсации реакционноспособной части с Lb' частью соединения формулы 2, где Lb' превращается в Lb в результате такого взаимодействия.
В некоторых аспектах, Lb' имеет одну структуру из
H2N NH-
-S S-?-
-о-х2-Ч
0^=C^=N X2 V
где R является водородом или Ci-Сб необязательно замещенным алкилом; R' является водородом или галогеном, или R и R' являются независимо выбранным галогеном; Т является -CI, -Br, -I, -0-мезилом или -0-тозилом или другой сульфонатной уходящей группой; U является -F, -CI, -Br, -I, -O-N-сукцинимидом, -0-(4-нитрофенилом), -О-пентафторфенилом, -О-тетрафторфенилом или -0-C(=0)-OR57; X2 является Ci-ю алкиленом, С3-С8-карбоциклом, -О-(Ci-С6 алкилом), -ариленом-, Ci-Сю алкилен-ариленом, -арилен-С^-Сю
алкиленом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С6-карбоциклом)-, - (С3-С8
карбоцикл) -Ci-Сю алкиленом-, С3-С8-гетероциклом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С8 гетероцикло) -, -С3-С8-гетероцикло) -Ci-Сю алкиленом, (CH2CH20)u или - (CH2CH20) U-CH2-, где и является целым числом от 1 до 10, и R57 является Ci-Сб алкилом или арилом. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1. Обработка ксенотрансплантата лимфогранулематоза
L540cy конъюгатом лиганд-лекарственное средство с
кватернизированным-связанным ауристатиновым антителом (сАСЮ-14), имеющим катепсиновую расщепляемую единицу, которая высвобождает свободное лекарственное средство, содержащее третичный амин (ауристатин Е) , по сравнению с соответствующим конъюгатом лиганд-лекарственное средство с карбамат-связанным антителом (сАС10-С), которое выделяет дезметиловое лекарственное средство (ММАЕ) по сравнению с их соответствующими не специфическими контрольными конъюгатами h00-14 и h00-C.
Фигура 2. Обработка ксенотрансплантата лимфогранулематоза
L540cy конъюгатом лиганд-лекарственное средство с
кватернизированным-связанным ауристатиновым антителом (сАС10-8), имеющим глюкуронидазную расщепляемую единицу, которая выделяет свободное лекарственное средство, содержащее третичный амин (ауристатин Е) , по сравнению с соответствующим конъюгатом лиганд-лекарственное средство с карбамат-связанным антителом (сАС10-В) , которое выделяет дезметиловое лекарственное средство (ММАЕ) по сравнению с их соответствующими не специфическими контрольными конъюгатами h00-8 и h00-B.
Фигура 3. Ex vivo стабильность плазмы для КЛЛ с кватернизированным-связанным ауристатином, имеющих катепсиновую расщепляемую единицу или глюкуронидазную расщепляемую единицу.
Фигура 4. Кинетика свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин (ауристатин Е), выделяемого из модели системы кватернизированного-связанного КЛЛ.
Фигура 5. Обработка модели ксенотрансплантата Karpas299 ALCL кватернизированным конъюгатом лиганд-лекарственное средство Тубулизин М, где сАСЮ антитело лигандной единицы нацелено на CD30 антиген, в DAR 4 D+ единицы лекарственного средства/мАт,
однократно, в. б., в дозе 0,3 мг/кг и 1 мг/кг по сравнению с
контрольным ненацеливающим конъюгатом идентичного
кватернизированного лекарственного средства-линкера и
эквивалентной нагрузке.
Фигура б. Обработка модели ксенотрансплантата
лимфогранулематоза L54 0cy кватернизированным конъюгатом лиганд-лекарственное средство Тубулизин М, полученным из лекарственного средства-линкера 32, где сАСЮ антитело лигандной единицы нацелено на CD3 0 антиген в DAR б D+ единиц лекарственного средства/мАт, однократно, в.б., в дозе 0,3 мг/кг и 1 мг/кг по сравнению с обработкой плацебо.
Фигура 7. Оценка потери ацетата из тубувалинового компонента конъюгата лиганд-лекарственное средство Тубулизин М, полученного из кватернизированного лекарственного средства-линкера 32, который имеет -Val-Ala- расщепляемую единицу, в DAR б D+ единиц лекарственного средства/мАт, однократно, в.б., в дозе 0,3 мг/кг, 1 мг/кг и 3,0 мг/кг к ксенотрансплантату L540cy, где сАСЮ антитело лигандной единицы конъюгата нацелено на CD3 0 антиген, по сравнению с контрольным конъюгатом из крови, взятой через 4 дня после введения на 17 день исследования.
Фигура 8. Оценка потери ацетата из тубувалинового компонента конъюгата лиганд-лекарственное средство Тубулизин М, полученного из кватернизированного лекарственного средства-линкера 32 в DAR б D+ единиц лекарственного средства/мАт, введенного однократно в. б., в дозе 0,3 мг/кг, 1 мг/кг и 3,0 мг/кг к ксенотрансплантату L54 0cy, где сАСЮ антитело лигандной единицы конъюгата нацелено на CD3 0 антиген, по сравнению с контрольным конъюгатом из крови, взятой через 10 дней после введения на 11 день исследования.
Фигура 9. Сравнения обработки модели ксенотрансплантата
лимфогранулематоза L540cy в дозе 0, б мг/кг и 2 мг/кг,
однократно, в.б., конъюгатами лекарственного средства, где сАСЮ
антитело лигандной единицы конъюгата нацелено на CD3 0 антиген,
имеющий 4 кватернизированные тубулизиновые единицы
лекарственного средства/cACl0 антитело лигандной единицы, где конъюгат получают из соединения лекарственное средство-линкер
32, которое имеет кватернизированный Тубулизин М с -Val-Ala-расщепляемой единицей, и из соединений лекарственное средство-линкер 79, 80 и 104, которые имеют кватернизированные Tubu(OEt), Tubu(O-Pr) и Тубулизин М единицы лекарственного средства, соответственно, и идентичными по условному высвобождению глюкуронидазы единицами линкера.
Фигура 10. Сравнения обработки модели ксенотрансплантата лимфогранулематоза L540cy в дозе 0,5 мг/кг или 0,6 мг/кг и 2 мг/кг, однократно в.б., сАСЮ конъюгатами лиганд-лекарственное средство, где антитело лигандной единицы нацелено на CD3 0 антиген, где один конъюгат имеет 8 кватернизированных единиц лекарственного средства ауристатин F/лигандную единицу, и его получают из соединения лекарственное средство-линкер 189 по сравнению с другим конъюгатом, который имеет 4 кватернизированных единиц лекарственного средства Tubu(0-CH3) на сАСЮ антитело лигандной единицы, полученным из соединения лекарственное средство-линкер 78, где оба конъюгата имеют идентичные по условному высвобождению глюкуронидазы единицы линкера.
Фигура 11. Сравнения обработки модели ксенотрансплантата лимфогранулематоза L540cy в дозе 0,4 мг/кг и 0,8 мг/кг, однократно, в.б., сАСЮ конъюгатами лиганд-лекарственное средство, имеющими 4 группы лекарственное средство-линкер, где антитело лигандной единицы нацелено на CD3 0 антиген, где один конъюгат имеет кватернизированный Доластатин 10, и его получают из лекарственного средства-линкера 177, по сравнению с не кватернизированным конъюгатом Доластатина 10, полученным из лекарственного средства-линкера 183, в котором оба конъюгата имеют идентичные по условному высвобождению глюкуронидазы единицы линкера.
Фигура 12. Фармакокинетический профиль конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих 4 к 8 кватернизированных единиц лекарственного средства, имеющих лигандные единицы человеческого IgG, по сравнению с не конъюгированным антителом в дозе 1 мг/кг в. в. у крыс, где конъюгаты получают из лекарственного средства-линкера 32, имеющего кватернизированные единицы лекарственного
средства Тубулизин М и условно высвобождающие катепсиновые единицы линкера, и которые получают из лекарственного средства-линкера 113, также имеющего единицы лекарственного средства Тубулизин М, но имеющего условно высвобождающие глюкуронидазу единицы линкера.
Фигура 13. Фармакокинетический профиль конъюгата лиганд-лекарственное средство с 8 кватернизированными единицами лекарственного средства и имеющего не специфическое антитело лигандных единиц в дозе 1 мг/кг в. в. крысам, где конъюгат получают из соединения лекарственного средства-линкера 80, в котором кватернизированные единицы лекарственного средства представляют собой простой эфирный вариант Тубулизина М, в котором О-связанная ацетатная часть тубувалинового компонента заменена пропокси, и который имеет условно высвобождающие глюкуронидазу единицы линкера.
Фигура 14. Фармакокинетический профиль конъюгатов лиганд-лекарственное средство с 8 кватернизированными единицами лекарственного средства, где конъюгаты получают из соединения лекарственного средства-линкера 8, имеющего кватернизированные единицы лекарственного средства Ауристатин Е и условно высвобождающие катепсиновые единицы линкера, лекарственного средства-линкера 177, имеющего кватернизированные единицы лекарственного средства Доластатин 10 и условно высвобождающие глюкуронидазу единицы линкера, и соединения лекарственного средства-линкера 183, имеющего не кватернизированный конъюгат Доластатина 10, а также имеющего условно высвобождающие глюкуронидазу единицы линкера к не конъюгированному не специфическому антителу.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определения
В данном описании и если не указано иначе или не подразумевается контекстом, применяемые термины имеют представленные ниже значения. Если иное не противопоказано и не подразумевается, например, добавлением совместно исключительных элементов или опций, в этих определениях и в данном описании термин в единственном числе означает один или более, и союз
"или" означает и/или, где это разрешено контекстом. Таком образом, в данном описании и в формуле изобретения, термины в единственном числе включают множество определяемых объектов, если контекст однозначно не указывает на обратное.
В различных частях данного описания, например, в любых описанных вариантах или в формуле изобретения, даны ссылки на соединения, композиции или способы, которые "включают" один или более определенных компонентов, элементов или стадий. Варианты данного изобретения также конкретно включают такие соединения, композиции или способы, которые являются, или которые по существу состоят из этих конкретных компонентов, элементов или стадий. Термин "состоит из" применяют взаимозаменяемо с термином "состоящий", и они заявлены в качестве эквивалентных форм. Например, описанные композиции, устройства, промышленные изделия или способы, которые "состоят из" компонента или стадии являются открытыми, и они включают или охватывают такие композиции или способы плюс дополнительные компонент(ы) или стадию(и). Однако эти термины не охватывают не перечисленные элементы, которые могут нарушить функциональность описанных композиций, устройств, промышленных изделий или способов в том, что касается их целевого назначения. Также, описанные композиции, устройства, промышленные изделия или способы, которые "состоит из" компонента или стадии, являются закрытыми, и они не будут включать или охватывать такие композиции или способы, которые имеют приемлемые количества дополнительных компонентов или дополнительных стадий. Более того, применение термина "включая", а также других форм, таких как "включать", "включает" и "включен" не является ограничивающим. Наконец, термин "состоящий по существу из" применяется для включения не перечисленных элементов, которые не оказывают материального воздействия на функциональность описанных композиций, устройств, промышленных изделий или способов в том, что касается их целевого назначения, как определено ниже. Заголовки разделов, применяемые здесь, даны только в целях упорядочивания, и не должны рассматриваться как ограничивающие описанный объект изобретения. Если не указано
иначе, применяют обычные методы масс спектроскопии, ЯМР, ВЭЖХ, химии белков, биохимии, методов рекомбинантной ДНК и фармакологии.
"Около" в данном описании при использовании с численным значением или интервалом значений представлен для описания конкретной характеристики соединения или композиции, и показывает, что значение или интервал значения может изменяться до той степени, которая считается разумной с точки зрения специалиста в данной области техники, продолжая при этом описывать конкретную характеристику. Разумные отклонения включают такие, которые находятся в пределах точности или погрешности инструмента(ов), применяемых для измерения, определения или получения конкретной характеристики. Более конкретно, термин "около", применяемый в данном контексте, показывает, что численное значение или интервал значений может варьироваться на 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0,01% от указанного значения или интервала значений, обычно от 10% до 0,5%, более конкретно, от 5% до 1%, продолжая при этом описывать конкретную характеристику.
"По существу сохраняет", "сохранение по существу" и подобные термины, применяемые здесь, относятся к свойству, характеристике или активности соединения или композиции или части, которые не имеют определяемых изменений или изменены в пределах экспериментальной ошибки определения того же действия, характеристики или свойства другого соединения или композиции или группы, из которых они получены.
"Ничтожно" или "ничтожный" в данном описании относится к количеству примеси ниже предела количественного определения по анализу ВЭЖХ, и если она присутствует, количество соответствует от около 0,5% до около 0,1% масс./масс, композиции, которая ее содержит. В зависимости от контекста, эти термины также могут означать, что никакого статистически значимого отличия не наблюдается между измеренными значениями или выходами или в пределах экспериментальной ошибки инструмента, применяемого для
получения этих значений. Ничтожные различия в значениях параметра, определенного экспериментально, не означает, что примесь, характеризуемая этим параметром, присутствует в ничтожном количестве.
"Практически сохраняется" в данном описании относится к измеренному значению физического свойства соединения или композиции или группы, которое статистически отличается от определения того же самого физического свойств другого соединения или композиции или группы, из которого оно получено, но которое такое отличие не переводит ему статистически значимое различие в биологическом действии в подходящей системы для биологического тестирования для оценки этой активности (т.е., биологическая активность практически сохраняется). Таким образом, фраза "практически сохраняется" применяется по отношению к тому действию, которое физическое свойство соединения или композиции оказывает на биологическую активность, которая непосредственно ассоциируется с этим свойством.
"Преимущественно содержащий", "преимущественно имеющий" и подобные термины относятся к основному компоненту смеси. Если смесь состоит из двух компонентов, тогда основной компонент составляет более 50% массовых смеси. Если смесь состоит из трех или более компонентов, преимущественным компонентом является тот, который присутствует в наибольшем количестве в смеси, и может представлять или не составлять основную часть массы смеси.
Термин "электроноакцепторная группа" относится к функциональной группе или электроотрицательному атому, который снижает концентрацию электронов атома, с которым он связан индукционно и/или через резонанс, смотря что является доминирующим (т.е. функциональная группа или атом может быть электроноакцепторным индукционно, но может в целом быть электронодонорным через резонанс), и имеет тенденцию к стабилизации анионов или насыщенных электронами частей. Электроноакцепторное действие обычно передается индукционно, хоть и в уменьшенной форме, на другие атомы, присоединенные к связанному атому, который становится электронодефицитным в
результате действия группы, выделяющей электрон (ГВЭ), тем самым влияя на электрофильность более удаленного реакционноспособного центра. Типовые группы, выделяющие электрон, включают, но не ограничены ими, -С (=0) , -CN, -N02, -СХ3, -X, -С (=0) OR, -C(=0)NR2, -C(=0)R, -C(=0)X, -S(=0)2R, -S(=0)20R, -S(=0)2NHR, -S(=0)2NR2, -P(=0) (OR) 2, -P(=0) (CH3) NHR, -NO и -NR3+, где X является -F, -Br, -CI или -I, и R, в каждом случае, независимо выбирают из группы, включающей водород и Ci-б алкил. Типовые ГВЭ также могут включать арильные группы (например, фенил), в зависимости от замещения, и определенные гетероарильные группы (например, пиридин). Таким образом, термин "группы, выделяющие электроны" также включает арилы или гетероарилы, которые далее замещены группами, выделяющими электроны. Обычно группами, выделяющими электроны, являются -С(=0), -CN, -N02, -СХ3 и -X, где X является галогеном. В зависимости от их заместителей, ненасыщенная алкильная часть также может быть группой, выделяющей электрон.
Термин "электронодонорная группа" относится к функциональной группе или электроположительному атому, который повышает концентрацию электронов атома, с которым он связан индукционно и/или через резонанс, смотря что является доминирующим (т.е. функциональная группа или атом может быть электронодонорным через резонанс, но может в целом быть электроноакцепторным индукционно), и имеет тенденцию к стабилизации катионов или бедных электронами систем. Электронодонорное действие обычно передается через резонанс другим атомам, присоединенным к связанному атому, который становится насыщенным электронами под воздействием электронодонорной группы (ГВЭ), тем самым влияя на нуклеофильность более удаленного реакционноспособного центра. Типовые электронодонорные группы включают, но не ограничены ими, -ОН и -NH2. В зависимости от их заместителей, арильная, гетероарильная или ненасыщенным алкильная части также могут быть электронодонорной группой.
"Часть" в данном описании означает определенный сегмент, фрагмент или функциональную группу молекулы или соединения. Химические части иногда обозначены как химические структурные
единицы, которые вставлены или присоединены (т.е., заместитель или переменная группа) к молекуле, соединению или химической формуле.
Для любой замещающей группы или части, описанной здесь данным интервалом атомов углерода, указанный интервал означает, что описано любое индивидуальное количество атомов углерода. Таким образом, например, "необязательно замещенный Ci-C4 алкил", "необязательно замещенный алкенил С2-6 алкенил", "необязательно замещенный С3-С8 гетероцикл" конкретно означают, что присутствует необязательно замещенная алкильная часть, имеющая 1, 2, 3 или 4 атома углерода как определено здесь, или присутствует алкенил,
имеющий 2,
3, 4,
5 или б атомов углерода, или часть, содержащая
гетероцикл
или
необязательно замещенную алкенильную часть,
содержащая
3, 4,
5, б, 7 или 8 атомов углерода, как определено
здесь. Все
такие
численные обозначения определенно предназначены
для того,
чтобы
описать все отдельные группы атома углерода; и,
таким образом, "необязательно замещенный С1-С4 алкил" включает метил, этил, алкилы с 3 атомами углерода и алкилы с 4 атомами углерода, включая все их позиционные изомеры, замещенные или не замещенные. Таким образом, если алкильная часть замещена, численные обозначения относятся к не замещенной основной части, и не включают атомы углерода, которые могут присутствовать в заместителях этой основной части. Для сложных эфиров, карбонатов, карбаматов и мочевин, как определено здесь, которые идентифицированные как имеющие данный интервал атомов углерода, обозначенный интервал включает атома углерода карбонила соответствующей функциональной группы. Таким образом, Ci сложный эфир относится к сложному эфиру формиата, С2 сложный эфир относится к сложному эфиру ацетата, и незамещенная Ci мочевина относится к NH2(C=0)NH2.
Органические заместители, части и группы, описанные здесь, и для других любых частей, описанных здесь, обычно не включают нестабильные части, за исключением тех, в которых такие нестабильные части являются промежуточными видами, которые применяются для получения соединения с достаточной химической
стабильностью для одной или более областей применения, указанных здесь. Заместители, части или группы, по представленным здесь определениям, которые дают пятивалентный углерод, особенно исключены.
"Алкил" в данном описании, сам по себе или как часть другого термина, относится к метилу или множеству атомов углерода, где один или более из атомов углерода насыщены (т.е., состоят из одного или более sp3 атомов углерода), которые ковалентно связаны вместе в обычном, вторичном, третичном или циклическом порядке, т.е., в линейном, разветвленном или циклическом порядке, или некоторых их сочетаниях. Если соседние насыщенные атомы углерода находятся в циклическом порядке, такие алкильные части иногда называют циклоалкил, как определено здесь. Насыщенные алкильные заместители содержат насыщенные атомы углерода (т.е., sp3 атомы углерода) и не ароматические, sp2 или sp атомы углерода (т.е., не замещенные ненасыщенными, ароматическими и гетероароматическими частями). Ненасыщенные алкильные заместители включают алкильные части, замещенные частями, такими как описаны здесь для алкенильных, алкинильных, арильных и гетероарильных частей.
Таким образом, если не указано иначе, термин "алкил" означает насыщенный не циклический углеводородный радикал, необязательно замещенный одной или более циклоалкильной или ненасыщенной, ароматической или гетероароматической частями или некоторыми их сочетаниями, где насыщенный углеводородный радикал имеет указанное количество ковалентно связанных насыщенных атомов углерода {например, "Ci-C6 алкил" или "С1-С6 алкил" означает алкильную часть или группу, содержащую 1, 2, 3, 4, 5 или б соседних не циклических насыщенных атомов углерода, и "Ci-С8 алкил" относится к алкильной части или группе, содержащей 1, 2, 3, 4, 5, б, 7 или 8 соседних насыщенных не циклических атомов углерода). Количество насыщенных атомов углерода в алкильной части или группе может варьироваться и обычно составляет 1-50, 1-30 или 1-20, и более предпочтительно, составляет 1-8 или 1-6. Обычно, алкильным заместителем является насыщенная Ci-C8 алкильная часть, или более предпочтительно, является Ci-C6 или
С1-С4 алкильная часть, где последнюю иногда называют низшим алкилом. Если количество атомов углерода не указано, алкильная группа имеет от 1 до 8 атомов углерода.
Если алкильную часть или группу называют алкильным заместителем, таким алкильным заместителем структуры Маркуша или другой органической части, с которой он связан, является цепь соседних насыщенных атомов углерода, ковалентно присоединенных к структуре или части через sp3 атом углерода алкильного заместителя. Поэтому алкильный заместитель, в данном описании, содержит, по крайней мере, одну насыщенную часть, и также может содержать (т.е., быть замещенным ими) циклоалкил, ненасыщенный алкил, ароматические или гетероароматические части или группы. Таким образом, алкильный заместитель может дополнительно содержать одну, две, три или более независимо выбранных двойных связей, тройных связей или циклоалкильных, ароматических или гетероароматических частей или некоторых их сочетаний, обычно одну двойную связь, одну тройную связь (т.е., замещен одной алкенильной или алкинильной частью), или замещен одной циклоалкильной, ароматической или гетероароматической частью. Если алкильный заместитель, часть или группа определены, виды включают такие, которые получены удалением атома водорода из исходного алкана (т.е., являются одновалентными) и могут включать метил, этил, 1-пропил (н-пропил), 2-пропил (изопропил, -СН(СН3)2), 1-бутил (н-бутил), 2-метил-1-пропил (изобутил, СН2СН (СН3) 2) , 2-бутил (втор-бутил, -СН (СН3) СН2СН3) , 2-метил-2-пропил (трет-бутил, -С(СН3)3), амил, изоамил, втор-амил и другие линейные, циклические и разветвленные алкильные части.
"Алкилен" в данном описании, сам по себе или как часть другого термина, относится к насыщенному, разветвленному, циклическому или прямому углеводородному дирадикалу, замещенному или не замещенному, где один или более из атомов углерода не замещен (т.е., состоит из одного или более sp3 атомов), с указанным количеством атомов углерода, обычно 1-10 атомами углерода, и имеющему два радикальных центра (т.е., являющемуся двухвалентным), полученному удалением двух атомов водорода из
одного и того же или двух различных насыщенных (т.е., sp3) атомов углерода исходного алкана. Алкиленовые части могут также включать алкильные радикалы, такие как описаны здесь, в которых атом водорода удален из насыщенной части или радикального атома углерода алкильного радикала с получением дирадикала. Обычно алкиленовые части включают двухвалентные части, полученные удалением атома водорода из насыщенного атома углерода исходной алкильной части, но не ограничены ими: метилен (-СН2-), 1,2-этилен (-СН2СН2-), 1,3-пропилен (-СН2СН2СН2-) , 1,4-бутилен (-СН2СН2СН2СН2-) и подобные дирадикалы. Обычно алкиленом является разветвленный или прямой углеводород, обычно содержащий только sp3 атомы углерода (т.е., полностью насыщенный, несмотря на радикальные атомы углерода).
"Циклоалкил" в данном описании является радикалом моноциклической, бициклической или трициклической кольцевых систем, где каждый из атомов, образующих кольцевую систему (т.е., скелетных атомов), является атомом углерода и если один или более из этих атомов углерода в каждом кольце циклической кольцевой системы является насыщенным (т.е., содержит один или более sp3 атомов углерода). Таким образом, циклоалкилом является циклическая структура из насыщенных атомов углерода, но он также может содержать ненасыщенные атомы углерода и, поэтому, его карбоциклическое кольцо может быть насыщено или частично ненасыщенно, или может быть конденсировано с ароматическим кольцом, где места конденсации с циклоалкилом и ароматическим кольцом находятся на соседних ненасыщенных атомах углерода циклоалкильной части или группы или заместителя, и соседних ароматических атомах углерода ароматического кольца.
Если не указано иначе, циклоалкильная часть, группа или заместитель могут быть замещены частями, описанными для алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, алкиларила и подобных, или могут быть замещены другими циклоалкильными частями. Циклоалкильные части, группы или заместители включают циклопропил, циклопентил, циклогексил, адамантил или другие циклические части, имеющие только атомы углерода. Циклоалкилы
также включают циклобутил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептил и циклооктил. В зависимости от структуры, циклоалкильный заместитель может быть монорадикальным, как описано выше для циклоалкильных частей или групп, или дирадикальным (т.е., циклоалкиленом, таким как, но не ограниченным ими, циклопропан-1,1-диил, циклобутан-1,1-диил, циклопентан-1,1-диил, циклогексан-1,1-диил, циклогексан-1, 4-диил, циклогептан-1,1-диил и подобные).
Если циклоалкил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), циклоалкил присоединен к формуле Маркуша или другой органической части, с которой он связан, через атом углерода, который включен в карбоциклическую кольцевую систему циклоалкильной группы при условии, что атом углерода не является ароматическим атомом углерода. Если ненасыщенный атом углерода алкеновой части, содержащей циклоалкильный заместитель, присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан, такой циклоалкил иногда называют циклоалкенильный заместитель. Количество атомов углерода в циклоалкильном заместителе определено общим количеством скелетных атомов кольцевой системы. Это количество может варьироваться и обычно составляет от 3 до 50, 1-30 или 1-20, и более предпочтительно, 3-8 или З-б, если не указано иначе, например, С3_8 циклоалкил означает циклоалкильный заместитель, часть или группу, содержащую 3, 4, 5, б, 7 или 8 карбоциклических атомов углерода, и С3_6 циклоалкил означает циклоалкильный заместитель, часть или группу, содержащую 3, 4, 5 или б карбоциклических атомов углерода. Поэтому циклоалкильные заместители, части или группы обычно имеют 3, 4, 5, б, 7, 8 атомов углерода в своей карбоциклической кольцевой системе и могут содержать ехо или елс/о-циклические двойные связи или endo-циклические тройные связи или сочетание обеих, где endo-циклические двойные или тройные связи, или сочетание обеих, не образуют циклическую конъюгированную систему 4п+2 электрона. Бициклическая кольцевая система может иметь один общий (т.е., являться спиро кольцевой системой) или два атома углерода, и трициклическая кольцевая система может иметь всего 2, 3 или 4 общих атома углерода, обычно 2 или 3.
"Алкенил" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит одну или более двойных связей
(например, -СН=СН- или =СН2 функциональную группу для endo и ехо двойных связей, соответственно) или 1, 2, 3, 4, 5 или б или более, обычно 1, 2 или 3 таких частей, и может быть замещена арильной частью или группой, такой как бензол, или связанными нормальными, вторичными, третичными или циклическими атомами углерода, т.е., линейными, разветвленными, циклическими или любым их сочетанием, при условии, если алкенильный заместитель, часть или группа не являются винильной частью (например, -СН=СН2 функциональная группа). Алкенильная часть, группа или заместитель, имеющие множественные двойные связи, могут иметь двойные связи, расположенные рядом (т.е., 1,3 бутадиенильная часть) или не рядом, с одним или более расположенными между насыщенными атомами углерода или их сочетаниями, при условии, что циклическое, соседнее расположение двойных связей не образует циклическую конъюгированную систему 4п+2 электрона
(т.е., не является ароматическим).
Если алкенильная часть, группа или заместитель определен, его виды включают, в качестве примера и без ограничения, любую из алкильных или циклоалкильных групп, частей или заместителей, описанных здесь, которые имеют ехо или одну или более endo двойных связей, включая метилен (=СН2) , метилметилен (=СН-СН3) , этилметилен (=СН-СН2-СН3) , =СН-СН2-СН2-СН3 и одновалентные части, полученные удалением атома водорода из sp2 атома углерода исходного алкенового соединения. Такие одновалентные части обычно включают винил (-СН=СН2) , аллил, 1-метилвинил, бутенил, изо-бутенил, З-метил-2-бутенил, 1-пентенил, циклопентенил, 1-метилциклопентенил, 1-гексенил, 3-гексенил, циклогексенил и другие линейные, циклические и разветвленные цепи, где все углеродсодержащие части содержат, по крайней мере, одну двойную связь. Если алкенил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), алкенил присоединен к формуле Маркуша или другой органической части, с которой он связан, через соединенный двойной связью атом углерода (т.е., sp2 атом углерода)
алкенильной части или группы. Количество атомов углерода в алкенильном заместителе определено количеством sp2 атомов углерода алкеновой функциональной группы, которая определяет его как алкенильный заместитель, и общим количеством соседних не ароматических атомов углерода, присоединенных к каждому из этих sp2 атомов углерода. Это количество может варьироваться, и если не указано иначе, составляет от 1 до 50, например, обычно 1-30 или 1-20, более предпочтительно, 1-8 или 1-6, если функциональная группа с двойной связью является ехо в структуре Маркуша, или может варьироваться, и составляет от 2 до 50, обычно 2-30 или 2-20, более предпочтительно, от 2 до 8 или 2-6, если функциональная группа с двойной связью является endo к структуре Маркуша. Например, С2-8 алкенил или С2-8 алкенил означает алкенильную часть, содержащую 2, 3, 4, 5, б, 7 или 8 атомов углерода, где, по крайней мере, два являются sp2 атомами углерода, находящимися в сочетании друг с другом, и С2_6 алкенил или С2-6 алкенил означает алкенильную часть, содержащую 2, 3, 4, 5 или б атомов углерода, где, по крайней мере, два являются sp2 атомами углерода, находящимися в сочетании друг с другом. Обычно, алкенильным заместителем является С2-С6 или С2-С4 алкенильная часть, имеющая два sp2 атома углерода, которые находятся в сочетании друг с другом.
"Алкенилен" в данном описании, сам по себе или как часть другого термина, относится к заместителю, части или группе, которая содержит одну или более частей с двойной связью, как описано выше для алкенила, с указанным количеством атомов углерода, обычно 1-10 атомами углерода, если функциональная группа с двойной связью находится в положении ехо к большей части, или 2-10, если функциональная группа с двойной связью находится в положении endo в алкенильной части, и имеет два радикальных центра, полученных удалением двух атомов водорода из одного и того же или двух разных sp2 атомов углерода части с двойной связью в исходном алкене. Алкениленовые части также включают алкенильные радикалы, такие как описаны здесь, в которых атом водорода удален из одного и того же или разных sp2
атомов углерода части с двойной связью алкенильного радикала с получением дирадикала, или из sp2 атома углерода другой части, соединенной двойной связью, с получением другого радикального атома углерода. Обычно, алкениленовые части включают дирадикалы, имеющие структуру -С=С- или -С=С-Х1-С=С-, где X1 отсутствует или является алкиленом, как определено здесь.
"Алкинил" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит одну или более части с тройной связью (т.е., -С=С- функциональную группу), например, 1, 2, 3, 4, 5, б или более, обычно 1 или 2 тройные связи, необязательно содержащую 1, 2, 3, 4, 5, б или более двойных связей (т.е., необязательно замещенную алкенильной частью), где оставшиеся связи (если присутствуют) являются одинарными связями и могут дополнительно содержать присоединенные нормальные, вторичные или третичные атомы углерода, т.е., их линейное, разветвленное или циклическое сочетание, при условии, если алкинильная часть не является этинилом.
Если алкинильная часть или группа определены, их виды включают, в качестве примера и без ограничения, любые алкильные части, группы или заместители, описанные здесь, которые имеют одну или более двойных связей, этинил, пропинил, бутинил, изо-бутинил, З-метил-2-бутинил, 1-пентинил, циклопентинил, 1-метилциклопентинил, 1-гексинил, 3-гексинил, циклогексинил, и другие линейные, циклические и разветвленные, содержащие только атомы углерода части, содержащие, по крайней мере, одну тройную связь. Если алкинил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), алкинил присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан, через один из sp атомов углерода алкинильной функциональной группы. Количество атомов углерода в алкинильном заместителе определено двумя sp атомами углерода алкиновой функциональной группы, которая определяет его как алкинильный заместитель, и общим количеством соседних не ароматических атомов углерода, присоединенных к sp атому углерода, не замещенному структурой Маркуша. Это количество может варьироваться и составляет от 2 до около 50, обычно 2-30 или 2
20 или более предпочтительно, 2-8, если не указано иначе, например, С2-8 алкинил означает алкинильную часть, содержащую 2, 3, 4, 5, б, 7 или 8 атомов углерода. Алкинильные группы обычно содержат 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 2 0 атомов углерода.
"Алкинилен" в данном описании, сам по себе или как часть другого термина, относится к заместителю, части или группе, которые включают одну или более тройных связей, как описано выше для алкинила, с указанным количеством атомов углерода, обычно 210 атомами углерода, и имеющему два радикальных центра, полученных удалением двух атомов водорода из двух различных sp атомов углерода части с тройной связью в исходном алкине. Алкиниленовые части также включают алкинильные радикалы, такие как описаны здесь, в которых два атома водорода удалены из ацетилена или из двух sp атомов углерода частей с тройной связью с получением дирадикала. Обычно, алкиниленовые части включают дирадикалы, имеющие структуру -С=С- или -С=С-Х-С=С-, где X является алкиленовой, алкениленовой или ариленовой частью, как определено здесь.
"Ароматическое", "ароматическая кольцевая система" или
подобные термины в данном описании относятся к плоскому кольцу,
имеющему делокализованную систему пи-электронов, содержащую 4п+2
пи электронов, где п является положительным целым числом.
Ароматические кольца могут быть образованы из пяти, шести, семи,
восьми, девяти, десяти или более десяти атомов. Ароматические
соединения необязательно замещены. Термин "ароматическое"
включает карбоциклическую арильную ("арил", например, фенил) и
гетероциклическую арильную (или "гетероарил" или
"гетероароматическую") группы (например, пиридин). Термин включает моноциклические или конденсированные полициклические (т.е., кольца, которые имеют общие соседние пары атомов углерода) группы.
"Арил" в данном описании означает органическую часть, заместитель или группу, определенную ароматической кольцевой системой или конденсированной кольцевой системой, не содержащую
гетероатомы в кольце, содержащую 1, 2, 3 или 4-6 колец, обычно от 1 до 3 колец, где кольца состоят только из атомов углерода, которые участвуют в циклически конъюгированной системе 4п+2 электронов (правило Хюккеля), обычно б, 10 или 14 электронов, некоторые из которых могут дополнительно участвовать в экзоциклическом конъюгировании с гетероатомом (поперечно конъюгированный (например, хинон). Арильные заместители, части или группы обычно образуются из шести, восьми, десяти или более ароматических атомов углерода. Арильные заместители, части или группы необязательно замещены. Типовые арилы включают Сб_Сю арилы, такие как фенил и нафталенил и фенантрил. Так как ароматичность в нейтральной арильной части требует четного количества электронов, должно быть понятно, что данный интервал для этой части не включает виды с нечетным количеством ароматических атомов углерода. Если арил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), арил присоединен к формуле Маркуша или другой органической части, с которой он связан, через ароматический атом углерода арильной группы.
В зависимости от структуры, арильная группа может быть монорадикальной (т.е., одновалентной) или дирадикальной (т.е., ариленовой группой, такой как описана выше, которая является двухвалентной).
"Арилалкил" в данном описании является заместителем, частью
"Арилен" или "гетероарилен" в данном описании, сам по себе или как часть другого термина, относится арильной или гетероарильной части, группе или заместителю, как определено здесь, которые образуют две ковалентных связи (т.е., он является двухвалентным) в большей части, которая может быть в орто, мета или пара конфигурациях, или ароматической дирадикальной части. Типовые арилены включают, но не ограничены ими, фенил-1,2-ен, фенил-1,3-ен и фенил-1,4-ен, как показано в следующих структурах:
или группой, где арильная часть связана с алкильной частью, т.е., -алкиларилом, где алкильная и арильная группы такие, как описаны выше, например, -СН2-СбН5 или -СН2СН (СН3)-СбН5. Если арилалкил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя) , алкильная часть арилалкила присоединена к формуле Маркуша, с которой она связана, через sp3 атом углерода алкильной части.
"Алкиларил" в данном описании означает заместитель, часть или группу, где алкильная часть связана с арильной частью, т.е., -арилалкил, где арильная и алкильная группы такие, как описаны выше, например, -СбН4-СН3 или -СбН4-СН2СН (СН3) . Если алкиларил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя) арильная часть алкиларила присоединена к формуле Маркуша, с которой она связана, через sp2 атом углерода арильной части.
"Необязательно замещенный алкил", "необязательно замещенный
алкенил", "необязательно замещенный алкинил", "необязательно
замещенный алкиларил", "необязательно замещенный арилалкил",
"необязательно замещенный гетероцикл", "необязательно замещенный
арил", "необязательно замещенный гетероарил", "необязательно
замещенный алкилгетероарил", "необязательно замещенный
гетероарилалкил" и подобные термины относятся к алкилу, алкенилу, алкинилу, алкиларилу, арилалкилу, гетероциклу, арилу, гетероарилу, алкилгетероарилу, гетероарилалкилу или другому заместителю, части или группе, таким как определены или описаны здесь, где атом(ы) водорода этого заместителя, части или группы необязательно замещены различными частями или группами, или где алициклическая углеродная цепь, которая содержит один из этих заместителей, частей или групп, прерывается замещением атома(ов) углерода этой цепи различными частями или группами.
Необязательные заместители, замещающие атом водорода в любом из представленных выше заместителей, частей или групп, независимо выбирают из группы, включающей галоген, -CN, -NH2, -ОН, -N(CH3)2, алкил, фторалкил, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, алкилсульфоксид, арилсульфоксид, алкилсульфон и
арилсульфон, или их независимо выбирают из группы, включающей галоген, -CN, -NH2, -ОН, -NH(CH3), -N(CH3)2, -С (=0) ОН (т.е., С02Н) , -С (=0) 0-алкил (т.е., С02-алкил) , -C(=0)NH2, С(=0)NH(алкил), -С(=0)N(алкил)2, -S(=0)2NH2, -S (=0) 2NH(алкил), -S (=0) 2N(алкил)2, алкил, циклоалкил, фторалкил, гетероалкил, алкокси, фторалкокси, -S-алкил и -S (=0) 2алкил.
Обычно, необязательный заместитель, замещающий водород в любом из представленных выше заместителей, частей или групп, независимо выбирают из группы, включающей алкил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероалициклическое кольцо, гидрокси, алкокси, арилокси, циано, галоген, нитро, галоалкил, фторалкил, фторалкокси и амино, включая моно-, ди- и тризамещенные аминогруппы, и их защищенные производные, или их выбирают из группы, включающей галоген, -CN, -NH2, -ОН, -NH(CH3), -N(CH3)2, -СН3, -СН2СН3, -CF3, -ОСН3 и -0CF3. Обычно, в любом из представленных выше заместителей, частей или групп, которые необязательно замещены замещением одного или более атомов водорода в них, атом водорода замещен одним или двумя из представленных выше необязательных заместителей, или более предпочтительно, одним из представленных выше необязательных заместителей. Необязательный заместитель на насыщенном алифатическом атоме углерода в ациклической или циклической кольцевой системе, дополнительной включает оксо (=0) . Для фенильной или б-членной гетероарильной части, положением любых двух заместителей, присутствующих на ароматическом или гетероароматическом кольце, может быть орто (о), мета (т) или пара (р).
Обычно, необязательный заместитель, замещающий атом углерода в ациклической углеродной цепи, выбирают из группы, включающей -0-, -С(=0)-, -С(=0)0-, -S-, -S(=0)-, -S(=0)2-, -NH-, -NHC(=0)-, -C(=0)NH-, S(=0)2NH-, -NHS(=0)2, -0C(=0)NH- и -NHC(=0)0-.
Обычно, любой из представленных выше заместителей, частей или групп, который необязательно замещен замещение одного или более алициклического атома углерода, имеет атом(ы) углерода, замещенные одним или двумя представленными выше необязательными
заместителями, или более предпочтительно, одним из представленных выше необязательных заместителей.
"Гетероциклил" в данном описании означает исходную одновалентную карбоциклическую часть, заместитель или группу, которые включают циклоалкил, циклоалкенил, арил или из конденсированное сочетание, где один или более, но не все, скелетные атомы углерода в кольце исходной карбоциклической части замещены независимо гетероатомом, необязательно замещенным, где это возможно, включая N, О, S, Se, В, Si, Р, где два или более гетероатома могут быть соседними по отношению друг к другу, или разделены одним или более атомами углерода в той же кольцевой системе, обычно, 1-3 атомами. Эти гетероатомы обычно включают N, О или S. Таким образом, гетероциклы включают такие, которые имеют гетероароматическое кольцо (также известное как гетероарил) или гетероциклоалкильное кольцо, любое из которых может быть конденсировано с карбоциклической, арильной или гетероарильной частью, и включает фенил- (т.е., бензо) конденсированные гетероциклоалкильную и гетероарильную части, при условии, что если гетероарильная часть конденсирована с гетероциклоалкильной или карбоциклической частью (т.е., если гетероциклическая часть конденсированной кольцевой системы является одновалентной) полученная конденсированная кольцевая система классифицируется как гетероциклоалкил.
Гетероциклы обычно содержат всего от одного до четырех гетероатомов в кольце, при условии, что не все скелетные атомы любой из кольцевых систем в гетероциклической части являются гетероатомами, где каждый гетероатом в кольце(ах), необязательно замещенный, где это допускается, независимо выбирают из О, S and N, где гетероциклическая группа имеет всего от 4 до 10 атомов в моноциклической или конденсированной кольцевой системе, и при условии, что любое кольцо не содержит два соседних О или S атома. Гетероциклоалкилы имеют, по крайней мере, 3 атома в кольцевой системе, и гетероарильные группы имеют, по крайней мере, 5 атомов в их кольцевой системе. Гетероциклы включают, в качестве примера и без ограничений, гетероциклы и гетероарилы,
которые являются ароматизированными гетероциклами, как описано у Paquette, Leo А. ; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), в частности, в главах 1, 3, 4, б, 7 и 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 до настоящего времени), в частности, в томах 13, 14, 16, 19 и 28; и в J. Am. Спет. Soc. I960, 82:5545-5473, в частности, 5566-5573).
Гетероарилы обычно содержат всего от одного до четырех гетероатомов в кольце(ах) гетероарильной кольцевой системы, при условии, что не все скелетные атомы любой кольцевой системы в гетероциклической части являются гетероатомами, необязательно замещенных, где это допускается, и имеющих 0-3 атома N, 1-3 атома N или 0-3 атома N с 0-1 атомами О или 0-1 атомами S, при условии, что присутствует, по крайней мере, один гетероатом. Гетероарил может быть моноциклическим или бициклическим. Кольцевая система гетероарильных колец обычно содержит 1-9 атомов углерода (т.е., Ci-C9 гетероарил). Моноциклические гетероарилы включают Ci-C5 гетероарилы. Моноциклические гетероарилы включают такие, которые имеют 5-членные или 6-членные кольцевые системы. 5-членным гетероарилом является Ci-C4 гетероарил, который содержит от 1 до 4 атомов углерода и необходимое количество гетероатомов в гетероароматической кольцевой системе. б-членным гетероарилом является Ci-C5 гетероарил, содержащий от 1 до 5 атомов углерода и необходимое количество гетероатомов в гетероароматической кольцевой системе. Гетероарилы, которые являются 5-членными, включают Ci, С2, С3 и С4 гетероарилы, имеющие четыре, три, два или один ароматический гетероатом(а), соответственно, и гетероарилы, которые являются б-членными, включают С2, С3, С4 и С5 гетероарилы, имеющие четыре, три, два или один ароматический гетероатом(а), соответственно. С1-С4 гетероарилы, которые являются 5-членными, представлены одновалентными частями, полученными удалением атома водорода из ароматического углерода или электрона из ароматического гетероатома, где это разрешено, из следующих исходных гетероциклических соединений: пиррол, фуран, тиофен, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, имидазол, пиразол, триазол и
тетразол. С2-С4 гетероарилы, которые являются б-членными,
представлены одновалентными частями, полученными удалением атома
водорода из ароматического углерода или электрона из
ароматического гетероатома, где это разрешено, из следующих
исходных гетероциклических соединений: пиридин, пиридазин,
пиримидин и триазин. Бициклические гетероарилы (т.е.,
гетероарилы, которые имеют конденсированные ароматические
кольца, в которых, по крайней мере, одно является
гетероароматическим) включают Сб-Сд гетероарилы (т.е.,
гетероароматические части, содержащие всего 6-9 ароматических
атома углерода и, по крайней мере, один ароматический
гетероатом). Некоторые бициклические гетероарилы представлены
одновалентными частями, полученными удалением атома водорода из
ароматического атома углерода или электрона из ароматического
гетероатома, где это разрешено, гетероароматического кольца
следующих исходных б,5-бициклических гетероциклических
соединений: бензофуран (01), изобензофуран (01), индол (N1),
изоиндол (N1), индолизин (N1), индолин (N1), изоиндолин (N1),
пурин (N4), бензимидазол (N2), индазол (N2), бензоксазол (N101),
бензизоксазол (N101), бензодиоксол (02), бензофуразан (N201),
бензотриазол (N3), бензотиофуран (S1), бензотиазол (N1S1),
бензотиадиазол (N2S). Другие бициклические гетероарилы
представлены одновалентными частями, полученными удалением атома
водорода из ароматического углерода или электрона из
ароматического гетероатома, где это разрешено,
гетероароматического кольца следующих исходных б,б-бициклических гетероциклических соединений: хромен (01), изохромен (01), хроман (01), изохроман (01), бензодиоксан (02), хинолин (N1), изохинолин (N1), хинолизин (N1), бензоксазин (N101), бензодиазин (N2), пиридопиридин (N2), хиноксалин (N2), хиназолин (N2), циннолин (N2), фталазин (N2), нафтиридин (N2), птеридин (N4) . Для указанных выше 5,6- и б,б-бициклических гетероароматических соединений заключенные в скобки выражения означают гетероатоматические композиции конденсированных ароматических кольцевых систем. В зависимости от структуры, гетероарильная группа может быть монорадикальной или дирадикальной (т.е.,
гетероариленовой группой).
Более предпочтительно, гетероарилом является арильная часть, где один 1, 2 или 3 из атомов углерода ароматического кольца(ец) исходной арильной части замещен гетероатомом, необязательно замещенным, где это разрешено, включая N, О и S, при условии, что не все скелетные атомы любой ароматической кольцевой системы в арильной части замещены гетероатомами и, более предпочтительно, замещены кислородом (-0-), серой (-S-), азотом (=N-) или -NR-, где R является -Н, защитной группой или алкилом, арилом, или является азотом, замещенным другой органической частью так, чтобы сохранить циклическую конъюгированную систему, где гетероатом азота, серы или кислорода участвует в конъюгированной системе либо через пи-связывание с соседним атомом в кольцевой системе, либо через неподеленную пару электронов на гетероатоме.
Не ограничивающие примеры гетероарилов включают пиридил, тиазолил, пиримидинил, фуранил, тиенил, пирролил, пиразолил, пуринил, имидазолил, бензофуранил, индолил, изоиндолил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, пиридазинил, пиразинил, бензотиопиран, бензотриазин, изоксазолил, пиразолопиримидинил, хиноксалинил, тиадиазолил, триазолил и подобные. Моноциклические гетероарилы включают, в качестве примера и без ограничения, пиридинил, имидазолил, пиримидинил, пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, пиридазинил, триазинил, оксадиазолил, тиадиазолил, и фуразанил.
Не ограничивающие примеры гетероциклов, которые не являются
гетероарилами, включают тетрагидротиофенил, тетрагидрофуранил,
индоленил, пиперидинил, пирролидинил, 2-пирролидонил,
тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, декагидрохинолинил, октагидроизохинолинил, 2Н-пирролил, ЗН-индолил, 4Н-хинолизинил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиперазинил, хинуклидинил, морфолинил и оксазолидинил.
Обычно, гетероциклоалкилом является циклоалкильная группа, часть или заместитель, где 1, 2 или 3 атома углерода циклоалкильной цепи замещены гетероатомом, выбранным из группы,
включающей азот, кислород и серу, и является С2-Сю
гетероциклоалкилом, более предпочтительно, С4-Сю
гетероциклоалкилом. Не ограничивающие гетероциклоалкилы могут содержать 0-2 N атомов, 0-2 О атомов или 0-1 S атом или некоторые их сочетания, при условии, что, по крайней мере, один из указанных гетероатомов присутствует в циклической кольцевой системе и может быть замещен одной или двумя оксо (=0) частями, как в пирролидин-2-оне. Более предпочтительно, гетероциклоалкилы включают пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, индолинил и моносахариды.
Гетероциклоалкилы включают, в качестве примера, но без
ограничений, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил,
тетрагидротиенил, оксазолидинонил, тетрагидропиранил,
дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидинил, морфолинил,
тиоморфолинил, тиоксанил, пиперазинил, азиридинил, азетидинил,
оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил,
оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 1,2,3,6-
тетрагидропиридинил, пирролин-2-ил, пирролин-3-ил, индолинил,
2Н-пиранил, 4Н-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил,
дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил,
дигидрофуранил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3,1,0]гексанил, 3-азабицикло[4,1,0]гептанил, ЗН-индолил и хинолизинил. Гетероциклоалкилы также включают все кольцевые формы углеводородов, включая, но не ограничиваясь ими моносахариды, дисахариды и олигосахариды.
Если гетероцикл применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), гетероцикл присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан, через атом углерода или гетероатом гетероцикла, где такое присоединение не дает нестабильную или недопустимую формальную валентность, соответствующую степени окисления этого атома углерода или гетероатома. Гетероцикл, который С-соединен, связан с молекулой через атом углерода, иногда называемый -СХгетероцикл, где С < является атомом углерода в гетероциклическом кольце. Гетероцикл, который N-соединен, является азотсодержащим гетероциклом, который связан с атомом азота гетероциклического кольца, иногда называемый
Ы <гетероцикл, где N < является атомом азота в гетероциклическом кольце. Таким образом, азотсодержащие гетероциклы могут быть С-соединенными или N-соединенными и включают пиррольные заместители, которые могут включать пиррол-1-ил (N-соединенный) или пиррол-3-ил (С-соединенный), имидазольные заместители, которые включают имидазол-1-ил или имидазол-3-ил (оба N-соединенные) или имидазол-2-ил, имидазол-4-ил или имидазол-5-ил (все которые являются С-соединенными).
"5-членный азотный гетероарил" включает 5-членную
гетероароматическую часть, содержащую, по крайней мере, один
атом азота в его ароматической кольцевой системе, и включает
моноциклический гетероарил, или сконденсирован с арильной или
другой гетероарильной кольцевой системой, и может содержать один
или более других независимо выбранных гетероатомов, таких как N,
О или S. Типовые 5-членные гетероарилы включают тиазол,
имидазол, оксазол, триазол, пирролопиримидины,
пиразолопиримидины, индол и изоиндол.
"Гетероарилалкил" в данном описании означает заместитель, часть или группу, где гетероарильная часть связана с алкильной частью, т.е., -алкилгетероарил, где алкильная и гетероарильная группы такие, как описаны выше. Если гетероарилалкил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), алкильная часть гетероарилалкила присоединена к формуле Маркуша, с которой она связана, через sp3 атом углерода алкильной части.
"Алкилгетероарил" в данном описании означает заместитель, часть или группу, где гетероарильная часть связана с алкильной частью, т.е., -гетероарилалкил, где гетероарильная и алкильная группы такие, как определены выше. Если гетероарилалкил применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), гетероарильная часть гетероарилалкила присоединена к формуле Маркуша, с которой она связана, через sp2 атом углерода или гетероатом алкильной части.
"О-соединенная часть", "О-соединенный заместитель" и подобные термины в данном описании относятся к группе или заместителю, которые присоединены к части непосредственно через атом
кислорода группы или заместителя. О-соединенная группа может быть одновалентной, включая группы, такие как -ОН, ацетокси
(т.е., -ОС(=0)СН3), ацилокси (т.е., -OC(=0)Ra, где Ra является -Н, необязательно замещен алкил, необязательно замещен циклоалкил, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом, необязательно замещенным арилом, необязательно замещенным гетероарилом или необязательно замещенным гетероциклом), а также включает одновалентные группы, такие как арилокси (Арил-О-), фенокси (Ph-O-), гетероарилокси
(Гетероарил-О-), силилокси (т.е., R3SiO-, где R независимо являются алкилом или арилом, необязательно замещенным), и -0RPR, где RPR является защитной группой, как определено выше, или 0-соединенная группа может быть двухвалентной, т.е., =0 или -X-
(CH2)n-Y-, где X и Y независимо являются S и О и п равно от 2 до 3, с получением спиро кольцевой системы с атомом углерода, к которому X и Y присоединены.
"Галоген" или "гало" в данном описании означает фтор, хлор, бром или йод, и обычно является -F или -С1.
"Защитная группа" в данном описании означает часть, которая защищает или снижает способность атома или функциональной группы, с которой она связана, участвовать в нежелательных реакциях. Типовые защитные группы для атомов или функциональных групп даны в Greene (1999), "Protective groups in organic synthesis, 3rd ed.", Wiley Interscience. Защитные группы для гетероатомов, таких как кислород, сера и азот, иногда применяют для минимизации или избегания их нежелательных реакций с электрофильными соединениями. В других случаях защитную группу применяют для снижения или исключения нуклеофильности и/или щелочности не защищенного гетероатома. Не ограничивающие примеры защищенного кислорода представлены -0RPR, где RPR является защитной группой для гидроксила, где гидроксил обычно защищают в виде сложного эфира (например, ацетата, пропионата или бензоата). Другие защитные группы для гидроксила позволяют избежать взаимодействия с нуклеофильностью металлорганических реагентов или других высоко щелочных реагентов, где гидроксил
обычно защищают в виде простого эфира, включая простые эфиры алкила или гетероциклоалкила (например, простые эфиры метила или тетрагидропиранила) , простые эфиры алкоксиметила (например, простые эфиры метоксиметила или этоксиметила), необязательно замещенные простые эфиры арила и простые эфиры силила (например, триметилсилил (ТМС), триэтилсилил (ТЭС) , трет-бутилдифенилсилил (ТБДФС), трет-бутилдиметилсилил (ТБС/ТБДМС), триизопропилсилил (ТИПС) и [2-(триметилсилил)этокси]метилсилил (СЭМ)). Азотные защитные группы включают защитные группы для первичных и вторичных аминов, как в -NHRPR или -N(RPR)2_, где, по крайней мере, один из RPR является защитной группой атома азота, или оба RPR вместе являются защитной группой.
Защитная группа дает подходящую защиту, когда она способна предотвратить или позволяет избежать нежелательные побочные реакции или преждевременную потерю защитной группы в условиях реакции, требуемых для проведения желаемого химического превращения в любой части молекулы, и во время очистки свежее полученной молекулы, при необходимости, и когда она может быть удалена в условиях, которые не оказывают неблагоприятного воздействия на структуру или стереохимическую целостность такой свежее полученной молекулы. В качестве примера и без ограничений, подходящая защитная группа может включать группы, описанные ранее для защитных функциональных групп. Подходящей защитной группой обычно является защитная группа, применяемая в реакциях пептидного сочетания.
"Сложный эфир" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит -С(=0)-О- структуру (т.е., сложную эфирную функциональную группу), где атом углерода структуры не связан непосредственно с другим гетероатомом, и прямо связан с -Н или другим атомом углерода органической части, и одновалентный атом кислорода присоединен к той же органической части с получением лактона или другой органической части. Обычно, сложные эфиры содержат или составляют органические части, содержащие 1-50 атомов углерода, обычно 1-2 0 атомов углерода или, более предпочтительно, 1-8 атомов углерода и от 0 до 10
независимо выбранных гетероатомов (например, О, S, N, Р, Si, но обычно О, S и N), обычно 0-2, где органические части связаны через -С(О)-О- структуру (т.е., через сложную эфирную функциональную группу). Если сложный эфир является заместителем или переменной группой структуры Маркуша, то заместитель связан со структурой через одновалентный атом кислорода сложной эфирной функциональной группы. В таких случаях органическая часть присоединена к атому углерода карбонила сложной эфирной функциональной группы содержит любую из органических групп, описанных здесь, например, С1-20 алкильные части, С2-2о алкенильные части, С2-2о алкинильные части, Сб_Сю арильные части, CVs гетероциклы или замещенные производные любого из них, например, содержащие 1, 2, 3, 4 или более заместителей, где каждый заместитель выбирают независимо. Типовые сложные примеры включают, в качестве примера и без ограничений, сложные эфиры ацетата, пропионата, изопропионата, изобутирата, бутирата, валерата, изовалерата, капроата, изокапроата, гексаноата, гептаноата, октаноата, фенилацетата или сложные эфиры бензоата.
"Простой эфир" в данном описании означает органическую часть, группу или заместитель, который включает 1, 2, 3, 4 или более -О- (т.е., окси) частей, которые не связаны с карбонильной частью(ями), обычно 1 или 2, где две -О- части не могут быть соседними (т.е., непосредственно связанными) друг другу. Обычно, простая эфирная структура содержит или состоит из формулы -0-органическая часть, где органическая часть такая, как описана для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группы. Более предпочтительно, простая эфирная часть, группа или заместитель имеет формулу -О-органическая часть, где органическая часть такая, как описана здесь для необязательно замещенной алкильной группы. Если простой эфир применяют в качестве группы Маркуша (т.е., простого эфирного заместителя), кислород простой эфирной функциональной группы присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан. Если простой эфир применяют в качестве заместителя в группе Маркуша, его иногда обозначают как "алкокси" группу. Алкокси включает простые
С1-С4 эфирные заместители, такие как, в качестве примера и без ограничений, метокси, этокси, пропокси, изо-пропокси и бутокси.
"Амид" или "карбоксамид" в данном описании означает часть,
которая содержит -C(=0)N(R)2 или R-C(=0)N(R)- структуру (т.е.,
карбоксамидную или амидную функциональную группу,
соответственно), не содержащую другие гетероатомы,
непосредственно присоединенные к атому углерода карбонила структуры, и где R, выбранный независимо, является водородом, защитной группой или органической частью, где органическая часть такая, как описана здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой, и обычно является необязательно замещенной алкильной группой. Обычно, водород или органическая часть, независимо выбранная из R, связана с карбоксамидной или амидной функциональной группой, где органическая часть также такая, как описана здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой. Если она связана с органической частью, полученная структура представлена органической частью-С(=0)N(R)2 или R-С(=0)N(R)-органической частью. Если амид указан как переменная для структуры Маркуша, атом азота амида связан с этой структурой. Для карбоксамидных заместителей, атом углерода карбонила амидной функциональной группы связан со структурой Маркуша. Амиды и карбоксамиды обычно получают конденсацией галогенида кислоты, такого как хлорангидрид, с молекулой, содержащей первичный или вторичный амин. Альтернативно, применяют реакции амидного сочетания, хорошо известные в области пептидного синтеза, которые часто проходят через активированный сложный эфир молекулы, содержащей карбоновую кислоту. Типовые примеры получения амидных связей через методы сочетания пептидов представлены в Benoiton (2006) Chemistry of peptide synthesis CRC Press, Bodansky "Peptide synthesis: A practical textbook" (1988) Springer-Verlag; Frinkin, M. et al. "Peptide Synthesis" Алл. Rev. Biochem. (1974) 43: 419-443. Реагенты, применяемые для получения активированных карбоновых кислот, представлены в Han, et al. "Recent development of peptide coupling agents in organic
synthesis" Tet. (2004) 60: 2447-2476.
"Карбонат" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит -О-С(=0)-О- структуру (т.е., карбонатную функциональную группу). Обычно, применяемые здесь карбонатные группы содержат или состоят из органической части, где органическая часть такая, как описана здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой, связанной через -О-С(=0)-О- структуру, например, органическая часть-О-С(=0)-О-. Если карбонат применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), один из одинарно связанных атомов кислорода карбонатной функциональной группы присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан, и другой связан с атомом углерода органической части, как описано выше для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группы.
"Карбамат" или "уретан" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит структуру, представленную -О-С(=0)N(Ra) - (т.е., карбаматную функциональную группу) или -О-С(=0)N(Ra) 2, -О-С(=0)NH(необязательно замещенным алкилом) или -0-С(=0)N(необязательно замещенным алкилом)2 (т.е., типовые карбаматные заместители) , где Ra и необязательно замещенный алкил выбраны независимо, где Ra, выбранный независимо, является водородом, защитной группой или органической частью, где органическая часть такая, как описана здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой, и обычно является необязательно замещенным алкилом. Обычно, карбаматные группы в данном описании содержат или состоят из органической части, независимо выбранной из Ra, где органическая часть такая, как описана здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой, связанной через -0-С(=0)-N(Ra) - структуру, где полученная структура имеет формулу органическая часть-0-С(=0)-N(Ra)- или -0-С (=0)-N (Ra)-органическая часть. Если карбамат применяют в качестве группы Маркуша (т.е., заместителя), одинарно связанный атом кислорода (0-соединенный) или азота (N-соединенный) карбаматной функциональной группы присоединен к
формуле Маркуша, с которой он связан. Связь карбаматного заместителя либо четко обозначена (N- или О-соединенный) , либо подразумевается в контексте, в котором упоминается этот заместитель.
"Мочевина" в данном описании означает заместитель, часть или группу, которая содержит структуру, представленную -N(Ra)-C(=0)N(Ra)- (т.е., мочевинную функциональную группу), и обычно она представлена -NH-C(=0)NH(необязательно замещенным алкилом) или -NH-C(=0)N(необязательно замещенным алкилом) 2~ (т.е., необязательно замещенные алкилы являются типовыми заместителями мочевины), где Ra и необязательно замещен алкил выбирают независимо, где каждый Ra независимо является -Н, защитной группой или органической частью, как описано для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой. Если органическая часть связана через мочевинную функциональную группу, полученная структура представлена органической частью-N (Ra)-С (=0)-N (Ra) - или -N (Ra)-С (=0)-N (Ra)-органической частью. Если мочевину применяют в качестве группы Маркуша (т.е., в качестве заместителя), одинарно связанный атом азота мочевинной функциональной группы присоединен к формуле Маркуша, с которой он связан, в то время как другой одинарно связанный атом азота не замещен или моно- или дизамещен одной или двумя независимо выбранными органическими частями, где органическая часть(и) такие, как описаны здесь для органической части, связанной со сложной эфирной функциональной группой.
"Антитело" в данном описании применяется в широчайшем смысле
и конкретно охватывает интактные моноклональные антитела,
поликлональные антитела, моноспецифические антитела,
мультиспецифические антитела (например, биспецифические
антитела), и фрагменты антител, которые обладают желаемым биологическим действием, при условии, что фрагмент антитела имеет необходимое количество мест присоединения для лекарственного средства-линкера. Природные формы антитела представляют собой тетрамер и состоят из двух идентичных пар иммуноглобулиновых цепей, где каждая пара имеет одну легкую цепь
и одну тяжелую цепь. В каждой паре вариабельные участки легкой и тяжелой цепей (VL и VH) вместе в первую очередь ответственны за связывание с антигеном. Вариабельные домены легкой цепи и тяжелой цепи состоят из каркасной области, прерываемой тремя гипервариабельными участками, также называемыми "участками, определяющими комплементарность" или "CDR". Постоянные участки могут быть распознаны через взаимодействие с иммунной системой
(см., например, Janeway et al. , 2 001, Immunol. Biology, 5 th Ed., Garland Publishing, New York). Антитело может иметь любой тип
(например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA) , класс (например, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl и IgA2) или подкласс. Антитело может быть получено из любых подходящих видов. В некоторых вариантах, антитело получают из человека или мыши. Антитело может быть, например, человеческим, гуманизированным или химерным. Антитело или фрагмент антитела является типовой нацеливающей лигандной частью, которая введена в КЛЛ в соответствии с данным изобретением.
В некоторых аспектах антитело селективно и специфически связывается с эпитопом гиперпролиферирующих клеток или гиперстимулированных клеток человека (т.е., аномальных клеток), где эпитоп преимущественно демонстрирует или является более типическим для аномальных клеток, по сравнению с нормальными клетками, или преимущественно демонстрирует или является более типическим для нормальных клеток, находящихся рядом с аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, не расположенными рядом с аномальными клетками. В этих аспектах клетками млекопитающих обычно являются клетки человека.
"Моноклональное антитело" в данном описании относится к антителу, полученному из популяции практически гомогенных антител, т.е., отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высоко специфическими, направлены против отдельного антигенного сайта. Модификатор "моноклональное" характеризует антитело как
полученное из практически гомогенной популяции антител, и не должен рассматриваться как указывающий на получение антитела каким-либо конкретным способом.
"Цитотоксическое действие" в данном описании относится к убивающему клетки действию лекарственного средства, конъюгата лиганд-лекарственное средство, или внутриклеточного метаболита конъюгата лиганда-лекарственного средства. Цитотоксическое действие может быть выражено через значение IC50, которое представляет собой концентрацию (молярную или массовую) на единицу объема, при которой выживает половина клеток.
"Цитостатическое действие" в данном описании относится к антипролиферативному действию лекарственного средства, конъюгата лиганд-лекарственное средство или внутриклеточного метаболита конъюгата лиганд-лекарственное средство, которое не зависит от смерти клеток, но действие которого обусловлено ингибированием деления гиперпролиферирующих клеток, гиперстимулированных иммунных клеток или других аномальных или нежелательных клеток.
Термины "специфическое связывание" и "специфически связывает" означают, что антитело или антитело в КЛЛ в качестве нацеливающей части способно связываться, высоко селективным образом, со своим соответствующим целевым антигеном, а не с множеством других антигенов. Обычно антитело или производное антитела связывается со сродством, по крайней мере, около lxlCr7 М, и, предпочтительно, от 1СГ8 М до 1СГ9 М, 1СГ10 М, 1СГ11 М или 10" 12 М, и связывается с заранее определенным антигеном со сродством, которое, по крайней мере, в два раза больше, чем его сродство для связывания с не специфическим антигеном {например, АБС, казеин), отличным от близкородственного антигена.
"Конъюгат лиганд-лекарственное средство" или "КЛЛ" в качестве термина, применяемого здесь, относится к конструкции, состоящей из лигандной единицы из нацеливающей части и кватернизированного лекарственного средства, содержащего единицу третичного амина (D+) , соответствующую по структуре содержащему третичный амин лекарственному средству, которые связаны друг с другом через линкерную единицу, где КЛЛ селективно связывается с частью,
являющейся мишенью, через его лигандную единицу. В некоторых случаях термин КЛЛ относится к множеству (т.е., композиции) отдельных соединений КЛЛ, отличающихся, в первую очередь, количеством D+ единиц, связанных с каждой лигандной единицей, или расположением на лигандной единице, с которой связаны D+ единицы. В других случаях, термин КЛЛ применяется для отдельного члена композиции.
"Нацеливающая часть", как применяемый здесь термин, относится к части, введенной в качестве лигандной единицы в КЛЛ, которая селективно связывается с частью, являющейся мишенью, обычно находящейся на, в или рядом с гиперпролиферирующими клетками, гиперстимулированными иммунными клетками или другими аномальными или нежелательными клетками, по сравнению с другими частями, находящимися на, в или рядом с нормальными клетками, где такие аномальные или нежелательные клетки обычно не присутствуют. Иногда часть, являющаяся мишенью, присутствует на, в или рядом с аномалиями в большем избытке, по сравнению с нормальными клетками или окружением нормальных клеток, где аномальные клетки обычно не присутствуют. В некоторых случаях, нацеливающей частью является антитело, которое специфически связывается с доступным антигеном, характерным для аномальной клетки, или является доступным антигеном, который является особенным для окружающей среды, в которой найдены эти клетки. В других случаях, нацеливающей частью является лиганд, который специфически связывается с доступным рецептором, характерным для, или находящемся в большом количестве на, аномальных клетках или других нежелательных клетках, или является доступным рецептором, который является особенным для окружающей среды, в которой найдены аномальные клетки. Обычно нацеливающей частью является антитело, такое как определено здесь, которое селективно связывается с частью, являющейся мишенью, аномальной или нежелательной клетки млекопитающего, более предпочтительно, частью, являющейся мишенью, аномальной или нежелательной клетки человека.
"Клетки-мишени" в качестве применяемого здесь термина
относятся к предполагаемых для использования клеткам (т.е., аномальным или другим нежелательным клеткам), для которых создают КЛЛ для взаимодействия для ингибирования пролиферации или другой нежелательной активности предполагаемых для использования клеток. В некоторых случаях, клетками-мишенями являются гиперпролиферирующие клетки или гиперактивированные иммунные клетки, которые являются типовыми аномальными клетками. Обычно такие аномальные клетки являются клетками млекопитающего, и более предпочтительно, клетками человека. В других случаях, клетки-мишени находятся рядом с аномальными или нежелательными клетками так, что действие КЛЛ на соседние клетки оказывает предполагаемое действие на аномальные или нежелательные клетки. Например, соседние клетки могут быть клетками эпителия, которые являются типовыми для аномальной васкулатуры опухоли. Поражение этих клеток сосудов КЛЛ будет иметь либо цитотоксическое, либо цитостатическое действие на эти клетки, что ингибирует доставку питания к аномальным клеткам опухоли и, следовательно, косвенно оказывает цитотоксическое или цитостатическое действие на аномальные клетки, и/или оказывать прямое цитотоксическое или цитостатическое действие на аномальные клетки через выделение части активного лекарственного средства рядом с этими клетками.
"Часть, являющаяся мишенью" в качестве применяемого здесь термина относится к части, преимущественно распознаваемой нацеливающей частью или лигандной единицей конъюгата лиганд-лекарственное средство из этой нацеливающей части (т.е., селективно связываемой лигандной единицей), и присутствует на, внутри или рядом с целевыми клетками. Иногда частью, являющейся мишенью, является антиген, доступный для селективного связывания антителом, которое является типичной нацеливающей частью, которая вставлена в КЛЛ в качестве лигандной единицы. В таких случаях, таким антигеном является белок поверхности клетки, присутствующий на аномальных клетках или других нежелательных клетках, или присутствующий на клетках, которые характерны для окружающей среды, в которой найдены аномальные или нежелательные клетки, таких как клетки сосудов, которые являются типовыми для
окружающей среды гиперпролиферирующих клеток в опухоли. Более предпочтительно, антигеном является белок поверхности клетки на аномальной клетке или другой нежелательной клетке, который способен интернализироваться при связывании с ее родственным нацеливающим лигандом. В других случаях, нацеливающей частью является лиганд для внеклеточно доступного рецептора мембраны клетки, который может быть интернализирован при связывании нацеливающей части или способен к пассивному или усиленному транспорту КЛЛ, нацеленного на рецептор поверхности клетки. В некоторых аспектах, часть, являющаяся мишенью, присутствует на аномальных клетках млекопитающего или на клетках млекопитающего, характерных для окружающей среды таких аномальных клеток.
"Конъюгат антитело-лекарственное средство" или "КАЛ" в
качестве применяемого здесь термина относится к КЛЛ, в котором
нацеливающей частью является антитело, где антитело ковалентно
присоединено к единице кватернизированного лекарственного
средства (D+) , обычно через спейсерную линкерную единицу. Часто
термин относится к множеству (т.е., популяции или множеству)
конъюгатов, имеющих одно и то же антитело, единицу
лекарственного средства и линкерную единицу, но имеющих разное
количество или распределение частей линкер-лекарственное
средство для каждого антитела (например, когда количество D+
любых двух КАЛ во множестве таких конструктов является
одинаковым, но расположение их мест присоединения к нацеливающей
части отличается). В таких случаях КАЛ описывается через среднее
содержание лекарственного средства для конъюгатов. КАЛ,
получаемые описанными здесь способами, имеют общую структуру АЬ-
Lb-LQ-D+, где Lb-LQ определяет линкерную единицу, где Lb является
лигандной ковалентно связывающей частью, иногда называемой
первичный линкер (LR) , так как присутствие этой части необходимо
в лигандной единице КАЛ, LQ является вторичным линкером,
подверженным ферментному (например, протеазному или
гликозидазному) или не ферментному (например, восстановительному или гидролитическому) расщеплению. В некоторых случаях такое расщепление усиливается рядом с аномалией, или возникает после
внутриклеточной интернализации КАЛ после связывания
специфического антитела КАЛ с его родственным антигеном. D+ является единицей лекарственного средства, содержащего кватернизированный третичный амин D, где D выделяется в результате такого ферментного и не ферментного действия на LQ.
Среднее количество лигандных единиц на антитело или его
фрагмент в композиции КАЛ (т.е., среднее количество для КАЛ
конъюгатов, которые отличаются количеством единиц
конъюгированного лекарственного средства или их расположением в каждом КАЛ, которые присутствуют в этой популяции) обозначено как р, или если линкеры не разветвлены, р равно среднему количеству частей лекарственное средство-линкер. В этом контексте, р равно числу от около 2 до около 20, и обычно равно около 2, около 4 или около 8. В других контекстах, р представляет количество единиц лекарственного средства или единиц линкер-лекарственное средство, если линкеры не разветвлены, которые ковалентно связаны с отдельным антителом КАЛ в популяции конъюгатов антитело-лекарственное средство, которые отличаются количеством или расположением конъюгированных единиц линкер-лекарственное средство в каждом из КАЛ, и обозначен как р'. В этом контексте, р' является целым числом от 1 до 20, обычно от 1 до 12, от 1 до 10, и более предпочтительно, от 1 до 8.
Среднее количество единиц лекарственного средства на единицу лиганда в результате реакции конъюгирования может быть охарактеризовано обычными средствами, такими как масс спектроскопия, анализ ELISA, ГИХ и/или ВЭЖХ. Количественное распределение конъюгатов лекарственное средство-линкер-лиганд относительно р также может быть определено. В некоторых случаях, разделение, очистка и характеризация гомогенных конъюгатов лиганд-лекарственное средство, где р равно определенному значению из конъюгата лиганд-лекарственное средство с другими значениями содержания лекарственного средства, могут быть проведены такими средствами, как ВЭЖХ с обращенной фазой или электрофорез.
"Антиген" представляет собой частицу, которая способна к
селективному связыванию с не конъюгированным антителом или его
фрагментом или с КАЛ, содержащим лигандную единицу из антитела
или его фрагмента. В некоторых аспектах, антигеном является
доступный вне клетки белок поверхности клетки, гликопротеин или
углеводород, преимущественно воспроизводимый аномальными или
другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными
клетками. В некоторых случаях, нежелательными клетками, имеющими
антиген, являются гиперпролиферирующие клетки у млекопитающих. В
других случаях, нежелательными клетками, имеющими антиген,
являются гиперактивированные иммунные клетки у млекопитающих. В
других аспектах, специфически связанный антиген присутствует в
конкретной среде гиперпролиферирующих клеток или
гиперактивированных иммунных клеток у млекопитающего, по сравнению со средой, обычно создаваемой нормальными клетками при отсутствии таких аномальных клеток. В других аспектах, антиген поверхности клетки способен к интернализации при селективном связывании КАЛ, связанным с клетками, которые являются конкретными для среды, в которой гиперпролиферирующие или гиперстимулированные иммунные клетки найдены при отсутствии таких аномальных клеток. Антиген является типовой являющейся мишенью частью КЛЛ, у которого лигандная единица из нацеливающей части является антителом, которое преимущественно распознает этот антиген через селективное связывание.
Антигены, связанные с гиперпролиферирующими клетками, которые доступны для КАЛ на поверхности клетки, включают, в качестве примера и без ограничений, CD19, CD70, CD30, CD33, NTB-А, av|36 и CD123.
"Лигандная ковалентно связывающая часть" является частью, содержащей КЛЛ, которая связывается селективно с ее когнатной целью, и иногда называется нацеливающей частью. Лигандная ковалентно связывающая часть включает, без ограничений, лиганды рецептора, антитела к антигенам поверхности клетки и субстратам транспортеров. Иногда рецептор, антиген или транспортер, с которым связывается КЛЛ, присутствует в большем избытке на
аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками. В других вариантах, рецептор антиген или транспортер, с которым связывается КЛЛ, присутствует в большем избытке на аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
"Предшественник лигандной ковалентно связывающей части" представляет собой часть линкерной единицы или ее подструктуру, применяемую для получения линкерной единицы, которая способна ковалентно связываться со нацеливающей частью во время получения КЛЛ, после чего предшественник лигандной ковалентно связывающей части (Lb') превращается в лигандную ковалентно связывающую часть (Lb) . В некоторых аспектах, Lb' часть обычно имеет функциональную группу, способную взаимодействовать с нуклеофилом или электрофилом, присущим антителу или его фрагменту, или который вводят в антитело химическим превращением или генной инженерией. В некоторых аспектах, нуклеофилом является N-концевая аминогруппа пептида, содержащего антитело, или эпсилон аминогруппа лизинового остатка. В других аспектах, нуклеофилом является сульфгидрильная группа цистеинового остатка, введенная методами генной инженерии или химическим восстановлением межцепного дисульфида антитела. В некоторых аспектах электрофилом является альдегид, введенный селективным окислением углеводородной части антитела, или кетон из искусственной аминокислоты, введенной в антитело с применением генно-инженерной пары тРНК/тРНК синтетазы. Эти и другие методы представлены у Behrens and Liu "Methods for site-specific drug conjugation to antibodies" mAB (2014) 6(1): 46-53.
"Лигандная ковалентно связывающая часть" представляет собой
часть лигандной единицы в КЛЛ, которая ковалентно связывает
остаток лигандной единицы, которая нацелена на аномальные или
нежелательные клетки или их окружение, и которую получают
взаимодействием соответствующей Lb' в предшественнике лигандной
единицы, со нацеливающей частью. Например, если Lb' содержит
малеимидную часть, взаимодействие этой части с
реакционноспособной сульфгидрильной группой нацеливающей части
превращает Lb' в Lb, которая содержит тиозамещенную сукцинимидную часть. В другом примере, если Lb' содержит активированную функциональную группу карбоновой кислоты, взаимодействие этой функциональной группы с эпсилон аминогруппой лизина в нацеливающей части превращает функциональную группу в амид, где этот амид содержит Lb часть присоединенной лигандной единицы. Другие Lb части и их превращение из Ъь'-содержащих частей описаны в вариантах данного изобретения. В некоторых случаях нацеливающую часть получают с би-функциональной молекулой с получением промежуточного соединения, которое конденсировано с предшественником лигандной ковалентно связывающей части. В результате такой конденсации полученная Lb часть имеет атомы, связанные с бифункциональной молекулой и Lb'.
"Линкерная единица" в качестве применяемого здесь термина относится к органической части в конъюгате лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), находящейся между, и ковалентно присоединенной к кватернизированной единице лекарственного средства (D+) и лигандной единице из нацеливающей части. Обычно, линкерная единица (L) содержит лигандную ковалентно связывающую (Lb) часть или предшественник лигандной ковалентно связывающей (Lb') части и вторичную линкерную часть, такую как описана здесь. В некоторых аспектах лигандный ковалентно связывающий предшественник содержит малеимидную (М1) часть. Присоединение нацеливающей части через М1 происходит через цистеиновую сульфгидрильную группу нацеливающей части с применением добавления Майкла сульфгидрильной группы к малеимидной кольцевой системе М1. В результате такого добавления получают сукцинимидную (М2) часть, имеющую замещенную серой сукцинимидную кольцевую систему. Последующий гидролиз этой кольцевой системы, спонтанный или в контролируемых условиях, когда эта система является частью самостабилизирующейся линкерной (Lss) части, дает часть янтарная кислота-амид (М3) , которая является типовой самостабилизированной
(Ls) частью, как описано ниже. Также к Lb или Lb' которые являются первичным линкером (LR части), ковалентно привязана вторичная линкерная (LQ) часть, которая затем встает между нацеливающей
частью и единицей кватернизированного лекарственного средства в КЛЛ и ковалентно связывается с LR через посредничество простой эфирной, сложной эфирной, карбонатной, мочевинной, дисульфидной, амидной или карбаматной функциональной группы, более предпочтительно, через простую эфирную, амидную или карбаматную функциональную группу.
"Первичный линкер" в данном описании относится к лигандной ковалентно связывающей части (Lb) или предшественнику лигандной ковалентно связывающей части (Lb') , и присутствует в виде компонента линкерной единицы КЛЛ, или в качестве компонента Lb'-содержащей части, такой как Lb'-L0 или Lb'-L0-D+. Lb' первичный линкер состоит из реакционноспособной функциональной группы, способной взаимодействовать с электрофильной или нуклеофильной функциональной группой нацеливающей части. В результате этой реакции нацеливающая часть становится ковалентно связанной в качестве лигандной единицы с Lb первичным линкером через функциональную группу, полученную из реакционноспособной функциональной группы Lb'.
"Вторичная линкерная" часть в данном описании относится к органической части в линкерной единице, где вторичный линкер (LQ) ковалентно присоединен к Lb или Lb' части (т.е., первичной линкерной единице) через посредничество функциональной группы между Lb или Lb' частью и остатком линкерной единицы, к которому может быть ковалентно присоединена единица кватернизированного лекарственного средства. В КЛЛ, вторичный линкер также ковалентно присоединен к единице кватернизированого лекарственного средства (D+) через бензильное положение БПА или БПА-типа самоуничтожающейся части, которая составляет промежуточную единицу. В дополнение к промежуточной единице (Y) , вторичные линкеры содержат расщепляемую (W) , где W, Y и D+ расположены линейно или ортогонально друг к другу и могут также содержать удлиняющую единицу (А). Если она присутствует, А иногда содержит субъединицу А1г которая представляет собой поддерживающую часть, которая связывает реакционноспособную
функциональную группу Lb' или полученную из нее функциональную группу Lb, с остатком вторичного линкера.
В КЛЛ L0 состоит из спейсерной единицы (Y), которая содержит самоуничтожающуюся часть (СУ), ковалентно присоединенную к единице расщепляемой части (W) так, что расщепление W в определенных условиях наиболее вероятно происходит на или рядом с аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или из обычной среде, что дает саморазрушение самоуничтожающейся части с сопутствующим выделением D. Обычно такое саморазрушение происходит через 1,б-расщепление СУ части, как описано здесь. В таких случаях СУ часть присоединена к лекарственному средству, содержащему третичный амин, кватернизацией атома азота третичного амина этого лекарственного средства.
Вторичный линкер (LQ) , связанный с D+ обычно представлен структурой (1) или (2):
ww.
-|"Аа Ww Yy D+ -?-Аа Yy D+
< (1), < У (2),
где Aa является удлиняющей единицей; Ww и W'w' являются расщепляемыми единицами; и Yy является спейсерной единицей, где а равно 0 или 1, w или w' равно 1 и у равно 1. Если а равно 1, волнистая линия перед Аа означает ковалентную связь этой L0
субъединицы с Lb' или Lb (получаемой из Lb' после ее введения в КЛЛ). Если а равно 0, эта волнистая линия означает ковалентную связь Lb' или Lb с расщепляемой единицей W в структуре (1) или Y в структуре (2).
В некоторых аспектах данного изобретения, Y в структуре (1) содержит или состоит из самоуничтожающейся (СУ) части, как описано здесь, замещенной W и D+. В других аспектах данного изобретения, Y в структуре (2) содержит или состоит из самоуничтожающейся части, такой как описана здесь, замещенной D+ через атом азота четвертичного амина, и далее замещенной W и лиганд-Ъь-А- или Lb'-A-, где А присутствует необязательно (т.е., А связан с СУ части Y, если А присутствует, или Lb или Lb' связан с СУ части Y, если А отсутствует).
Обычно вторичные линкеры, имеющие представлены
структуру
1),
вторичные
линкеры,
имеющие структуру (2), представлены
, где Y состоит из СУ и Е, J, V, Z1, Z2, Z3, R', R8 и R9 такие, как определены в вариантах для БПА или БПА-типа самоуничтожающихся единиц.
части,
как описано здесь,
"Малеимидной частью" в данном описании является лигандный ковалентно связывающий предшественник, имеющий малеимидную кольцевую систему. Малеимидная часть (М1) способна участвовать в добавлении Майкла (т.е., добавлении 1,4-конъюгата) полученной из нацеливающей части сульфгидрильной группы с получением
(м2;
тиозамещеннои сукцинимиднои
которая присутствует в линкерной единице в КЛЛ.
часть
присоединена к остатку линкерной единицы через атом азота имида до превращения в тиозамещенную сукцинимидную часть. Кроме атома азота имида, М1 часть обычно не замещена, но может быть асимметрично замещена на циклической двойной связи малеимидной кольцевой системы. Такое замещение обычно дает региохимически предпочтительное добавление сульфгидрильной группы к наименее затрудненному или более электронодефицитному атому углерода двойной связи (в зависимости от более доминантного участия)
малеимидной кольцевой системы. Если он происходит в самостабилизирующейся линкерной (Lss) части, ожидается, что контролируемый гидролиз сукцинимидной кольцевой системы тиозамещенной сукцинимидной части М2, полученной из такой замещенной М1 части, дает региохимические изомеры частей янтарная кислота-амид (М3) в самостабилизированной линкерной (Ls) части, что, из-за разницы в реакционной способности двух атомов углерода карбонила в М2, объясняется заместителем(ями), которые присутствуют в М1 предшественнике.
"Сукцинимидной частью" в данном описании является органическая часть, из которой состоит линкерная единица в КАЛ, и которая возникает при добавлении Майкла полученной из антитела сульфгидрильной группы к малеимидной кольцевой системе малеимидной части (М1). Сукцинимидная (М2) часть поэтому состоит из тиозамещенной сукцинимидной кольцевой системы, и ее атом азота имида замещен остатком линкерной единицы и необязательно замещен заместителем(ями), которые присутствуют на М1 предшественнике. Обычно, если присутствует А, атом азота имида ковалентно присоединен к удлиняющей части (А) или ее субъединице (т.е., Ai) , как описано здесь. Иногда М2-А (или М.2-А1) обеспечивает самостабилизирующуюся линкерную (Lss) часть, как описано здесь.
"Часть янтарная кислота-амид" в данном описании относится к янтарной кислоте, имеющей амидный заместитель, которую получают из тиозамещенной сукцинимидной кольцевой системы сукцинимидной части М2, в которой произошел разрыв одной из связей карбонил-азот вследствие гидролиза. Гидролиз, дающий часть янтарная кислота-амид (М3) , позволяет получить линкерную единицу, которая менее предрасположена к преждевременной потере антитела в КЛЛ, содержащем такую М3 часть, при исключении антитело-тио заместителя. Если она присутствует в самостабилизирующейся линкерной (Lss) части, ожидается, что контролируемый гидролиз сукцинимидной кольцевой системы тиозамещенной сукцинимидной части М2, полученной из такой замещенной части М1, дает региохимические изомеры частей М3 (по-отдельности названные МЗА и
Мзв), что, из-за разницы в реакционной способности двух атомов углерода карбонила в М2, объясняется заместителем(ями), которые присутствуют в М1 предшественнике.
"Самостабилизирующийся линкер" в данном описании относится к Lb-содержащей части линкерной единицы КЛЛ или ее предшественника (т.е., Ъь'-содержащей части), которая в контролируемых условиях способна к химическому превращению в самостабилизированную линкерную часть (Ls) , так, что КЛЛ, изначально содержащий самостабилизирующуюся (Lss) часть, становится более устойчивым к преждевременной потере нацеливающей части из КЛЛ. Обычно Lss часть, в дополнение к Lb или Lb' части, состоит из удлиняющей единицы или ее субъединицы. В некоторых таких случаях, содержащих Lss, W и Y в линейном порядке, Lss ковалентно присоединена через удлиняющую единицу или другую ее субъединицу к расщепляемой единице (W) . В других подобных случаях, содержащих W ортогональное к Lss-Y, Lss ковалентно присоединена к Y через удлиняющую единицу или другую ее субъединицу. Однако иногда спейсерная А не присутствует и Lss ковалентно присоединена непосредственно к W или Y, в зависимости от относительного расположения Lss, W и Y компонентов линкера. В некоторых аспектах, Lss перед введением в КЛЛ содержит малеимидную (М1) часть в качестве Lb' части (через которую должна быть присоединена нацеливающая часть) и удлиняющую единицу (А) или ее субъединицу (т.е., Ai), и представлена формулой М1-А или M1-Ai. После введения в КЛЛ (т.е., после присоединения нацеливающей части через добавление Майкла к малеимидной части), М1-А (или М1-Ai) часть Lss превращается в соответствующую тиозамещенную сукцинимидную часть М2-А (или M2-Ai) . Обычно Lss также содержит основную единицу (ОЕ), как описано здесь, в качестве заместителя удлиняющей единицы, связанной с М2 или ее предшественником М1. В этих аспектах, ОЕ способствует гидролизу сукцинимидной части М2 до соответствующей формы М3 с раскрытым кольцом [т.е., М2-А(ОЕ)-или M2-Ai(OE)- превращается в М3-А(ОЕ) или M3-Ai(OE)].
"Самостабилизированный линкер" является органической частью, полученной из Lss части, обе которых являются Lb-содержащими
частями, КЛЛ, которая гидролизуется, обычно в контролируемых
условиях, с получением новой Lb-содержащей части, которая менее
вероятно обращает реакцию конденсации нацеливающей части с Ъь'-
содержащей частью, которая обеспечивает оригинальную Lb-
содержащую часть. Обычно самостабилизированный линкер (Ls)
состоит из удлиняющей единицы или ее субъединицы, ковалентно
присоединенной к части, полученной превращением сукцинимидной
части (М2) , которая имеет тио-замещенную сукцинимидную кольцевую
систему, получаемую добавлением Майкла сульфгидрильной группы
нацеливающей части к малеимидной кольцевой системе М1, в другую
часть, где такая полученная из М2 часть имеет пониженную
реакционную способность для удаления ее тио заместителя по
сравнению с соответствующим заместителем в М2. В этих аспектах,
полученная из М2 часть имеет структуру янтарная кислота-амид
(М3), соответствующую М2, где М2 перенесла гидролиз одной из
связей карбонил-азот в сукцинимидной кольцевой системе. Этот
гидролиз может происходить спонтанно или, более предпочтительно,
его катализируют основной функциональной группой ОЕ, которая
ковалентно присоединена к удлиняющей единице, связанной с М2, и
находится в соответствующей близости в результате такого
присоединения, для того, чтобы способствовать разрыву связи
карбонил-азот. Поэтому продукт такого гидролиза имеет
функциональную группу карбоновой кислоты и амидную
функциональную группу, замещенную на атоме азота амида, которая
соответствует атому азота имида в содержащем М2 предшественнике
Lss, по структуре указанной выше удлиняющей единицы. Обычно такой
основной функциональной группой является аминогруппа,
реакционная способность которой в катализированном основанием
гидролизе контролируется рН. Таким образом,
самостабилизированный линкер (Ls) обычно имеет структуру М3, ковалентно связанную с каркасной единицей или ее субъединицей, которая, в свою очередь, ковалентно связана с остатком вторичного линкера L0 (L0') в линейном порядке, и с основной единицей, ковалентно присоединенной к связанной с М3 удлиняющей единицей, ортогональной к LQ. Ls с М3, А, ОЕ и LQ, расположенные в
указанном порядке, представлены формулой М3-А (ОЕ)-L0' или М3-Ai (ОЕ) -L0'.
После гидролиза полученный самостабилизированный линкер (Ls) обычно имеет структуру М3, ковалентно связанной с ОЕ-замещенной удлиняющей единицей (М3-А(ОЕ)- или M3Ai(OE)-). Такая удлиняющая единица, в свою очередь, ковалентно связана с остатком L0 (L0') в линейном порядке с основной единицей, ортогонально расположенной в отношении М3 и другой LQ компонентной единицам. Типовые структуры Lss и Ls частей с М2 или М3, А(ОЕ) [или А^ОЕ) ] и L0', расположенными указанным образом, показаны, в качестве примера, но без ограничений:
> А или Ai
где указанная СН(CH2NH2)С(=0) часть является структурой удлиняющей единицы или ее субъединицы, ковалентно связанной с атомом азота имида или амида М2 или М3, где -CH2NH2 часть является ОЕ заместителем этой удлиняющей единицы. Остаток структур представляет сукцинимидную часть М2 или часть янтарная кислота-амид М3, полученную гидролизом сукцинимидного кольца М2, которые замещены на атоме азота имида или соответствующего амида sp3-атомом углерода удлиняющей единицы. Волнистая линия означает присоединение полученной из нацеливающей части сульфгидрильной группы в результате добавления Майкла этой группы к малеимидной кольцевой системе М1. Так как сукцинимидная кольцевая система М2 асимметрически замещена из-за полученного из нацеливающей части тио заместителя, региохимические изомеры частей янтарная кислота-амид (М3) , как определено здесь, отличаются положением относительно высвобожденной группы карбоновой кислоты, получаемой обычно гидролизом М2. В указанной выше структуре, карбонил указанной удлиняющей единицы представляет усилитель
гидролиза (УГ), как определено здесь, который введен в структуру такой единицы.
М3-А(ОЕ) представляет типовую структуру
самостабилизированных линкерных (Ls) групп, так как эти структуры с меньшей вероятностью исключают тио заместители нацеливающей части, и, таким образом, вызывают потерю этой части, по сравнению с соответствующей М2-А(ОЕ) структурой Lss части. Это повышает стабильность благодаря большей конформационной гибкости в М3 по сравнению с М2, которая больше не держит тио заместитель в конформации, благоприятной для удаления Е2.
"Основная единица" в данном описании представляет собой органическую часть в самостабилизирующейся линкерной (Lss) части, как описано здесь, которая может быть перенесена в соответствующую Ls часть через участие в усиленном основанием гидролизе сукцинимидной кольцевой системы в М2 части, содержащей Lss (т.е., катализирует добавление молекулы воды к одной из карбонил-азотных связей сукцинимида) , и может быть инициирована в контролируемых условиях, приемлемых для нацеливающей части, присоединенной к Lss. Для этой цели, основную функциональную группу основной единицы (ОЕ) и ее положение в Lss по отношению к М2 компоненту, выбирают на основе способности связываться через атом водорода с карбонильной группой М2, что эффективно повышает электрофильность и, следовательно, подверженность к воздействию воды. Альтернативно, эти переменные выбирают таким образом, что молекула воды, нуклеофильность которой повышается благодаря связыванию через атом водорода с основной функциональной группой ОЕ, направляется к М2 карбонильной группе. Обычно ОЕ, действуют через свой механизм, состоит из 1-6 соседних атомов углерода, которые соединяют основную аминогруппу с Lss частью, к которой они присоединены. Для повышения электрофильности М2 карбонила через водородное связывание, необходимо, чтобы ОЕ имела первичный или вторичный амин в качестве основной функциональной группы, в то время как повышение нуклеофильности воды описанным выше способом может быть проведено с первичным, вторичным или третичным амином в качестве основной функциональной группы. Для
того, чтобы основной амин находится в близости, необходимой для гидролиза сукцинимидной части М2 с соответствующим амидом карбоновой кислоты с открытым кольцом М3 с применением любого механизма, обычно применяемого для присоединения содержащей амин углеродной цепи ОЕ к удлиняющей части Lss на альфа атоме углерода этой части по отношению к точке присоединения А (или Ai) к атому азота сукцинимида М2 (и, следовательно, атому азота малеимида соответствующей М1-А или M1-Ai структуры). Обычно такой альфа углерод имеет (S) стереохимическую конфигурацию.
"Единица, усиливающая гидролиз" в данном описании относится к группе, выделяющей электрон, или части, которая является необязательным заместителем удлиняющей единицы, содержащей Lss часть. Если он присутствует, единицу, усиливающую гидролиз (УГ), обычно вводят в удлиняющую единицу, связанную с атомом азота имида М2 части так, что выделение ей электрона повышает электрофильность карбонильных групп сукцинимида в этой части. Если удлиняющая единица также имеет ОЕ заместитель, действие УГ на карбонильные группы объединяется с действием ОЕ, которое зависит от щелочности ОЕ основной функциональной группы и расстояния, на котором находится эта функциональная группа от карбонила, и сбалансировано так, что преждевременный гидролиз М1 или М2 до М3 не происходит или незначителен во время получения КЛЛ из Lss предшественника, имеющего структуру М1-А(ОЕ)-, но позволяет гидролиз (т.е., превращение КЛЛ-содержащей -М2-А(ОЕ)-части в соответствующую -М3-А(ОЕ)- часть) в контролируемых условиях (например, при намеренно повышенном рН) , которые приемлемы для присоединенной нацеливающей части. Обычно УГ единицей является карбонильная часть (т.е., кетон или -С(=0)-) или карбонилсодержащая функциональная группа, расположенная в наибольшем отдалении от конца удлиняющей единицы, которая связана с М2 или полученной из нее М3, и которая также ковалентно присоединяет эту удлиняющую единицу в остатку вторичного линкера. Карбонилсодержащие функциональные группы, отличные от кетона, включают сложные эфиры, карбаматы, карбонаты и мочевины. Если УГ является карбонилсодержащая функциональная группа,
отличная от кетона, карбонильная часть такой функциональной
группы обычно связана с А. В некоторых аспектах, если ОЕ
заместитель отсутствует, УГ единица может быть в достаточной
мере удалена в пределах удлиняющей единицы от атома азота имида,
с которым удлиняющая единица ковалентно связана, так, что
отсутствует заметное действие на гидролитическую
чувствительность карбонил-азотных связей сукцинимида М2-содержащей части.
"Удлиняющая единица" в качестве применяемого здесь термина относится к органической части во вторичном линкере, которая физически отделяет специфическую часть от других спейсерных компонентов линкерной единицы, которая находится в наибольшем удалении от удлиняющей единицы, таких как расщепляемая единица и/или спейсерная единица. Удлиняющие единицы обычно требуются, если Lb часть КЛЛ не обеспечивает достаточное пространственное разбавление, необходимое для обработки линкерной единицы на W так, чтобы высвобождалось лекарственное средство, содержащее третичный амин, введенное в D+. Удлиняющая единица (А) может содержать одну или множество удлиняющих групп или субъединиц, как описано здесь. До введения в КЛЛ, А имеет функциональные группы, способные ковалентно связывать Lb' с расщепляемой единицей (W) в определенных линкерных конструкциях (например, если A, W и Y расположены в линейном порядке) или с спейсерной единицей (Y) в других линкерных конструкциях (например, если W расположена ортогонально к A-Y). В некоторых аспектах данного изобретения, удлиняющая единица способна присоединять более одной расщепляемой единицы, спейсерной единицы и/или единицы лекарственного средства как, например, в случае, когда А является дендримером или другой многофункциональной разветвленной структурой. В некоторых аспектах данного изобретения, вторичный линкер присоединен к Lb или Lb' части через одну из удлиняющих субъединиц, тогда как остальные, или их субъединицы, ковалентно связаны с остатком вторичного линкера.
Удлиняющая единица (А), если присутствует в КЛЛ, представляет собой органическую часть, ковалентно присоединенную
к лигандной ковалентно связывающей части или предшественнику лигандной ковалентно связывающей части и к другой вторичной линкерной единице, и может содержать или состоять из двух, трех или более субъединиц. Обычно А является одной отдельной единицей или имеет две отдельные субъединицы, названные Ai и А0. В случаях, когда А имеет две субъединицы, индекс а равен 2 в конъюгатах лекарственное средство-линкер или лиганд-лекарственное средство, которые состоят из частей, таких как-Аа-Ww-Yy- или Aa-Yy(Ww)-, и Аа в качестве -Ai~A2- иногда обозначают как -Ai-A0-. Количество соседних атомов в удлиняющей единице выбирают так, чтобы ослабить пространственное влияние лигандной части, не относящееся к лигандной ковалентно связывающей части, которая будет мешать выделению свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин, в результате обработки внутри или на поверхности аномальных клеток W из КЛЛ, содержащего такую ковалентную лигандную связывающую часть, удлиняющую единицу и расщепляемую единицу. Обычно удлиняющая единица или ее субъединица имеет от одного до шести соседних атомов углерода, которые расположены между лигандной ковалентно связывающей частью или предшественником лигандной ковалентно связывающей части и функциональной группой, которая ковалентно присоединяет удлиняющую единицу А к расщепляемой (W) или спейсерной (Y) единице вторичного линкера, или другой субъединице А. В некоторых аспектах эта функциональная группа также может служить единицей, усиливающей гидролиз.
"Разветвляющая единица" в данном описании относится к трифункциональной органической части, которая является необязательной субъединицей удлиняющей единицы (А). Иногда Ai или А0, которые являются субъединицами А, действуют как разветвляющие единицы, и в других случаях, разветвляющая единица является дополнительной субъединицей А. Если Ai А0 и В присутствуют в качестве субъединиц А, В может быть соседней субъединицей к лигандной ковалентно связывающей части (Lb) или ее предшественнику Lb' (т.е., находится до -А!-А0-), или отдаленной субъединицей А (т.е., находится после -Ai-A0-.). Разветвляющая
единица является трифункциональной для того, чтобы быть введенной во вторичную линкерную единицу (L0) или для связывания L0 с первичной линкерной единицей (LR) и для дополнительного соединения с солюбилизирующей единицей (S), если эта единица присутствует в качестве компонента линкерной единицы (ЛЕ). В тех аспектах, в которых А имеет две субъединицы, одна из которых является разветвляющей единицей, индекс а равен 2 в конъюгатах лекарственное средство-линкер или лиганд-лекарственное средство, которые состоят из частей, таких как -Aa-Ww-Yy- или Aa-Yy(Ww)-, и в этих случаях Аа в качестве -Ai-A2- иногда обозначают как -А-В-или -В-А-. В тех аспектах, в которых А имеет три две субъединицы, одна из которых является разветвляющей субъединицей, индекс а равен 3 в конъюгатах лекарственное средство-линкер или лиганд-лекарственное средство, которые состоят из частей, таких как -Aa-Ww-Yy- или Aa-Yy(Ww)-, и в этих случаях Аа в качестве -А1-А2-А3- иногда обозначают как -Ai-B-Ao или -B-Ai-Ao- или -А!-А0-В-, в зависимости от относительного расположения А1г А0 и В в линкерной единице конъюгата лекарственное средство-линкер или лиганд-лекарственное средство.
В некоторых аспектах природная или искусственная аминокислоты или соединение другой аминсодержащей кислоты, имеющее функционализированные боковые цепи, является разветвляющей единицей. Обычно если разветвляющая единица (В) и солюбилизирующая единица (S) являются компонентами линкерной единицы, функционализированная боковая цепь В соединяет S с остатком ЛЕ. Типовые структуры В включают такие, которые описаны здесь для других субъединиц А (например, Ai, А0) при условии, что структура имеет требуемую указанную выше трифункциональность. В некоторых аспектах В является лизин, глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота в L- или D-конфигурации, в которых функциональная группа эпсилон-амино, гамма-карбоновая кислота или бета-карбоновая кислота, соответственно, соединяет солюбилизирующую единицу с остатком ЛЕ.
"Солюбилизирующая единица" в данном описании относится к
органической части, которая является гидрофильной.
Солюбилизирующая единица (S), если она присутствует, ковалентно присоединена к разветвляющей единице и служит для противодействия, по крайней мере, частично, гидрофобности единицы лекарственного средства, когда гидрофобность единицы лекарственного средства ограничивает среднюю нагрузку лекарственного средства в конъюгате лиганд-лекарственное средство (КЛЛ). Это ограничение в конъюгировании гидрофобных лекарственных средств обычно возникает из-за гидрофобно медиированной агрегации отдельных соединений КАЛ в композиции КАЛ. Введение подходящего солюбилизирующего агента дает видимое снижение агрегированных видов, измеренное гель-проникающей хроматографией (ГПХ) по сравнению с соответствующим контрольным КАЛ, не имеющим солюбилизирующую единицу.
"Расщепляемая единица", такая как определена здесь, обеспечивает реакционноспособный центр, в котором реакционная способность в отношении этого центра больше внутри или вокруг гиперпролиферирующей клетки или гиперстимулированной иммунной клетки (т.е., аномальной клетки) по сравнению с нормальной клеткой, таким образом, что действие в этом центре обеспечивает преимущественное воздействие на аномальную клетку лекарственного средства, содержащего третичный амин. Такое воздействие является результатом возможного высвобождения свободного лекарственного средства из КЛЛ, имеющего такую расщепляемую единицу. В некоторых аспектах данного изобретения, W состоит из реакционноспособного центра, расщепляемого ферментом (т.е., W состоит из ферментного субстрата), активность или избыток которого больше внутри или вокруг гиперпролиферирующей, иммуностимулирующей или другой аномальной или нежелательной клетки. В других аспектах, W состоит из реакционноспособного центра, расщепляемого другими механизмами (т.е., не ферментными), более вероятно работающего в окружении внутри или вокруг аномальных клеток сайт-мишени, по сравнению с окружением нормальных клеток, где аномальные клетки обычно не присутствуют. В других аспектах данного изобретения, реакционноспособный центр наиболее вероятно работает после клеточной интернализации КЛЛ в
аномальную клетку. Такая интернализация наиболее вероятно происходит в таких клетках, по сравнению с нормальными клетками, из-за большего присутствия являющейся мишенью части, которая распознается нацеливающей частью КЛЛ на клеточной мембране аномальных или нежелательных клеток. Поэтому клетки-мишени наиболее вероятно подвергаются воздействию активного лекарственного средства, высвобожденного из КЛЛ, внутри клетки. Расщепляемая единица может содержать один или множество центров, подверженных расщеплению в условиях сайт-мишени, но обычно имеет только один такой центр.
В некоторых аспектах данного изобретения, расщепляемой единицей является субстрат для регулирующей протеазы, гидролазы или гликозидазы, расположенной внутри клетки в являющихся мишенью клетках (т.е., реакционноспособный центр W представляет собой пептидную связь или гликозидную связь, расщепляемую регулирующей протеазой, гидролазой или гликозидазой), где пептидная или гликозидная связь способна к селективному расщеплению регулирующей протеазой, гидролазой или гликозидазой по сравнению с сывороточными протеазами, гидролазами или гликозидазами, где регулирующая протеаза, гидролаза или гликозидаза может быть или не быть более специфической к аномальным или другим нежелательным клеткам-мишеням по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению протеазой, гидролазой или гликозидазой, выделяемой в больших количествах аномальными или другими нежелательными клетками-мишенями по сравнению с нормальными клетками. Альтернативно, W является функциональной группой, которая при введении в КЛЛ чувствительна к кислой среде лизозимов, когда КЛЛ преимущественно интернализован в аномальную клетку, или к более восстановительной среде в или вокруг таких клеток, по сравнению с окружением нормальных клеток, где аномальные клетки обычно не присутствуют, таким образом, что выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин, преимущественно обеспечивает воздействие такого лекарственного средства на аномальные клетки по сравнению с нормальными клетками.
Расщепляемая единица (W), до введения в КЛЛ, способна
связываться с спейсерной единицей (Y) . После введения в КЛЛ, W
становится расщепляемой связью (т.е., реакционноспособным
центром), которая под воздействием фермента, присутствующего в
гиперпролиферирующей клетке или гиперактивированных иммунных
клетках, или который является характерным для непосредственного
окружения таких аномальных или нежелательных клеток, или под в
результате не ферментного воздействия условий, в которых
наиболее вероятно находятся гиперпролиферирующие клетки, по
сравнению с нормальными клетками, выделяет свободное
лекарственное средство, содержащее третичный амин.
Альтернативно, W является расщепляемой связью, которая наиболее вероятно действует внутриклеточно в гиперпролиферирующей клетке или гиперактивированной иммунной клетке благодаря тому, что она проникает преимущественно в такие клетки, по сравнению с нормальными клетками. Обычно W в КАЛ ковалентно присоединена к спейсерной единице (Y) , которая содержит или состоит из самоуничтожающейся части, таким образом, что такое ферментное воздействие на W запускает саморазрушение этой части в Y-D+ для выделения свободного D.
Функциональные группы, которые применяют в качестве расщепляемых связей, включают, в качестве примера и без ограничений, (а) сульфгидрильные группы, которые образуют дисульфидную связь, которые чувствительны к более восстанавливающим условиям аномальных клеток, по сравнению с нормальными клетками, или избытку глутатиона, вырабатываемого в гипоксических условиях такими клетками, (Ь) альдегидные, кетоновые или гидразиновые группы, которые образуют основание шиффа или гидразоновые функциональные группы, которые чувствительны к кислым условиям лизозимов при селективной интернализации КЛЛ, имеющего линкерную единицу с такой расщепляемой связью, в аномальную клетку по сравнению с интернализацией в нормальные клетки, (с) карбоксильные или аминогруппы, которые образуют амидную связь, как в пептидных связях, которая чувствительна к ферментному расщеплению протеазами, производимыми или выделяемыми преимущественно
аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или
регулирующей протеазой в клетке-мишени, (d) амино или
гидроксильные группы, которые формируют определенные мочевинные
или карбаматные группы, или карбоксильные или гидроксигруппы,
которые образуют сложные эфирные или карбонатные группы, которые
чувствительны к ферментному расщеплению гидролазами или
эстеразами, которые вырабатываются или выделяются
преимущественно аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками.
Другие функциональные группы, которые применяют в качестве расщепляемых связей, найдены в сахарах или углеводородах, имеющих гликозидную связь, которые являются субстратом для гликозидов, которые иногда могут вырабатываться преимущественно аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками. Альтернативно, ферменты протеаза, гидролаза или гликозидаза, необходимые для обработки линкерной единицы для выделения активного лекарственного средства, содержащего третичный амин, не обязательно должны вырабатываться преимущественно аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, при условии, что процессинговый фермент не выделяется нормальными клетками в той степени, которая может вызвать нежелательные побочные эффекты от преждевременного выделения свободного лекарственного средства. В других случаях, требуемые ферменты протеаза, гидролаза или гликозидаза могут выделяться, но для того, чтобы избежать нежелательного преждевременного выделения лекарственного средства, предпочтительно, чтобы процессинговый фермент выделялся рядом с аномальными клеткамии оставался локализованным в этой среде, независимо от того, произведен он аномальными клетками или соседними нормальными клетками в ответ на аномальную окружающую среду, созданную аномальными клетками. В связи с этим W выбирают так, чтобы она преимущественно подвергалась воздействию протеазы, гидролазы или гликозидазы в или в пределах окружения аномальных клеток, по сравнению со свободно циркулирующими ферментами. В таких случаях менее вероятно, что КЛЛ будет выделять лекарственное средство, содержащее третичный амин, рядом с нормальными клетками, и что
он будет интернализован в нормальные клетки, которые вырабатывают, но не выделяют выбранный фермент, так как менее вероятно, что такие клетки являются являющейся мишенью частью, требуемой для проникновения КЛЛ.
В некоторых аспектах, W состоит из аминокислоты или включает или состоит из одной или более последовательностей аминокислот, которые являются субстратом для протеазы, присутствующей в аномальных клетках или локализованной в окружающей среде таких аномальных клеток. Таким образом, W может включать или состоять из дипептидной, трипептидной, тетрапептидной, пентапептидной, гексапептидной, гептапептидной, октапептидной, нонапептидной, декапептидной, ундекапептидной или додекапептидной части, введенной в линкерную единицу через амидную связь с СУ из Y, где этой частью является распознающей последовательностью для этой протеазы. В других аспектах, W содержит или состоит из углеводородной части, присоединенной к СУ из Y гликозидной связью, которая расщепляется гликозидазой, преимущественно вырабатываемой аномальными клетками, или находящейся в таких клетках, в которые КЛЛ, содержащий эту СУ и углеводородную часть, селективно проникает благодаря присутствию являющейся мишенью части на аномальных клетках.
"Спейсерная единица" в данном описании представляет собой органическую часть во вторичном линкере (L0) в линкерной единице, которая ковалентно связана с расщепляемой единицей (W) или удлиняющей единицей (А) (или с Lb или Lb', если А отсутствует) , в зависимости от их конфигурации относительно друг друга. Обычно, в одной конфигурации, единица кватернизированого лекарственного средства (D+) и W обе ковалентно связаны с Y, которая, в свою очередь, связана с А (или Lb или Lb', если А отсутствует) так, что W находится в ортогональном положении к остатку L0, в то время как в другой конфигурации W, Y, D расположены в линейной конфигурации с D+, связанной с Y. При любом расположении, Y служит для отделения сайта расщепления W от D+ для того, чтобы избежать пространственных взаимодействий с той единицей, которая будет взаимодействовать при расщеплении W, в случаях, когда
такое расщепление происходит под воздействием фермента.
Обычно спейсерная единица содержит или состоит из самоуничтожающейся части (СУ), как определено здесь, где такая часть ковалентно связана с расщепляющейся единицей (W) так, чтобы in vivo обработка W активировала самоуничтожение СУ с выделением свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин. Часто СУ из Y связана с W через амидную (или анилидную) функциональную группу с Y, также ковалентно связанной с атомом азота четвертичного амина из D+ через СУ так, чтобы в результате самоуничтожения СУ происходило выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин.
"Самоуничтожающаяся часть" в данном описании относится к
бифункциональной части в спейсерной единице (Y) , имеющей
органическую часть, которая вставлена между первой и второй
функциональными группами и ковалентно вводит эти группы в обычно
стабильную тройную молекулу, если она не активирована. При
активации, когда расщепляется ковалентная связь с первой
функциональной группой, вторая функциональная группа спонтанно
отделяется от тройной молекулы в результате саморазрушения
остатка СУ части. Такое саморазрушение при активации позволяет
выделять лекарственное средство, содержащее третичный амин (D) .
В некоторых аспектах такое саморазрушение происходит после
клеточной интернализации КЛЛ, содержащего D+ и линкерную единицу,
имеющую самоуничтожающуюся часть (СУ) в Y линкерной единицы.
Органической частью, вставленной между функциональными группами
самоуничтожающейся (СУ) части, иногда является ариленовая или
гетероариленовая часть, способная к фрагментированию с
получением хинонметида или родственной структуры через 1,4 или
1,б-расщепление с последующим выделением свободного
лекарственного средства, содержащего третичный амин. Такие СУ
части представлены необязательно замещенными частями п-
аминобензилового спирта (БПА), орто- или пара-
аминобензилацеталями или ароматическими соединениями, которые электронно схожи с БПА группой (т.е., БПА-типа) , такими как производные 2-аминоимидазол-5-метанола (см., например, Hay et
al. , 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) и другими гетероарилами, как описано здесь.
Обычно, для одной из функциональных групп в СУ части, ароматический атом углерода ариленовой или гетероариленовой группы БПА или БПА-типа СУ, часто введенной в линкерную единицу, замещен электронодонорным (ЭДГ) гетероатомом, присоединенным к сайту расщепления W через функциональную группу, содержащую гетероатом, где этот гетероатом функционализирован так, чтобы ослаблялась его электронодонорная активность (т.е., ЭДГ маскируют введением СУ из Y в линкерную единицу). Другим заместителем, который является второй функциональной группой, является атом углерода бензила, имеющий четвертичный аминовый заместитель, где четвертичный амин, который содержит лекарственное средство, содержащее третичный амин, связан через атом углерода бензила, присоединенный к другому ароматическому атому углерода центральной ариленовой или гетероариленовой группой, где ароматический атом углерода, несущий ослабленный электронодонорный гетероатом, расположен рядом с (т.е., 1,2-положение) или через два дополнительных положения (т.е., 1,4-положение) от этого атома углерода бензила. ЭДГ выбирают так, чтобы обработка сайта расщепления W позволяла восстановить электронодонорную активность скрытой ЭДГ, таким образом, запуская 1,4- или 1,б-расщепление для выделения лекарственного средства, содержащего третичный амин, из бензильного четвертичного аминового заместителя.
Типовые БПА или родственные БПА СУ части, если они присутствуют во вторичной линкер-Б+ части структуры (1), имеющей арилен или гетероарилен с необходимым замещением 1,2 или 1,4 схем замещения, которое позволяет 1,4- или 1,б-фрагментирование для выделения D из части кватернизированого лекарственного средства, представлены
где D+ присоединен в -C(R8) (R9)-D+ через атом азота четвертичного амина, ковалентно связанный с указанным выше атомом углерода бензила, и J является скрытой ЭДГ, где J, которая связана с W через разбавляющую функциональную группу, содержащую J, является -0-, -N(R33)- или -S-, и R8, R9, R33, R', V, Z1, Z2, Z3 такие, как определены в вариантах БПА и БПА-типа СУ единиц. Эти переменные выбраны так, чтобы реакционная способность J при выделении при обработке W в сайт-мишени была уравновешена с реакционной способностью третичного амина, удаленного из СУ и стабильностью промежуточного соединения хинонметидного типа, получаемого при таком удалении.
В некоторых аспектах, для части вторичный линкер-Б+ структуры (1), БПА или БПА-типа СУ часть, связанная с D+, имеет структуру
Определения других структур и их переменных групп, вводящих СУ часть в часть вторичный линкер-Б+ структуры (1), представлены в вариантах.
В некоторых аспектах, для вторичного линкера структуры (2), БПА или БПА-типа СУ часть, если она присутствует во вторичном линкере структуры (2) имеет структуру
где волнистая линия к J означает стабильное ковалентное связывание (т.е., не обрабатываемое в сайт-мишени) с лигандом-Ъь-или Lb'-, если а равно 0, или через А или ее субъединицу, если а равно 1, где J является -0-, -N(R33)- или -S-, связанным непосредственно с Lb, Lb', А или субъединицу А или через
функциональную группу, содержащую J, и где R', R8, R9, V, Z1, Z2 и Z3 такие, как определены в формуле 1, и Е, независимо выбранная из J, является электронодонорной группой, такой как -О-, -N(R33)-или -S-, где электронодонорная способность Е ослаблена ее связыванием с W, где W'-E является сайтом расщепления для гликозидазы, и Е и атом углерода бензила в -C(R8) (R9)-D+ части связаны с ариленовой или гетероариленовой группой в положениях, определенных V, Z1, Z2 или Z3, так, чтобы Е и -C(R8) (R9)-D+ часть находились в 1,2 или 1,4 взаимосвязи так, чтобы разрешить 1,4-или 1,б-фрагментирование, которое позволяет выделять лекарственное средство, содержащее третичный амин.
В некоторых аспектах, для вторичной части линкер-Б+ структуры (2), БПА или БПА-типа СУ часть, связанная с D+, имеет структуру
Определения других структур и их переменных групп, вводящих СУ часть в часть вторичный линкер-Б+ структуры (2), представлены в вариантах.
Арилен или гетероарилен СУ части может быть далее замещен для получения кинетики 1,2- или 1,4-расщепления для того, чтобы модулировать выделение D, или для того, чтобы улучшить физико-химические свойства конъюгата лиганд-лекарственное средство (например, снизить гидрофобность), в который она введена.
Типовые и не ограничивающие примеры СУ структур, которые модифицированы для того, чтобы разместить бензильные четвертичные аминовые заместители, представлены в Blencowe et al. "Self-immolative linkers in polymeric delivery systems" Polym. Chem. (2011) 2: 773-790; Greenwald et al. "Drug delivery
systems employing 1,4- or 1,б-elimination: poly(ethylene glycol) prodrugs of amine-containing compounds" J. Med. Chem. (1999) 42: 3657-3667; и в патентах США №№ 7,091,186; 7,754,681; 7,553,816; и 7,989,434, все которые включены сюда в качестве ссылки полностью, где структуры и переменные группы, представленные в них, специально включены сюда в качестве ссылки.
"Цитотоксичное лекарственное средство" в данном описании относится к соединению или метаболиту, полученному из КЛЛ, который оказывает убивающее действие на гиперпролиферирующие клетки, гиперактивированные иммунные клетки и другие аномальные или нежелательные клетки. В некоторых аспектах цитотоксическое лекарственное средство действует непосредственно на эти клетки, или действует косвенно, через воздействие на аномальную сосудистую сеть, которая поддерживает выживание и/или рост гиперпролиферирующих или других аномальные или нежелательные клетки, или цитотоксическое лекарственное средство действует в центрах инфильтрации гиперактивированных иммунных клеток. Обычно аномальными или нежелательными клетками, на которые воздействует цитотоксическое лекарственное средство, являются клетки млекопитающего, более предпочтительно, клетки человека. Цитотоксическое действие цитотоксического лекарственного средства может быть выражено как значение 1С50, которое означает эффективную концентрацию, обычно молярное количество на единицу объема, при которой половина раковых клеток в in vitro клеточной модели выживает после обработки цитотоксическим агентом. Таким образом, значение IC50 зависит от модели. Обычно цитотоксический агент, вводимый в КЛЛ, имеет значение IC50 в in vitro клеточной модели, включающей гиперпролиферирующие клетки, от 100 нМ до 0,1 пМ, или более предпочтительно, от около 10 нМ до 1 пМ. Высоко токсичное цитотоксическое лекарственное средство обычно имеет значение IC50 в таких моделях от 100 пМ или ниже. Хотя множество ингибиторов резистентности к лекарственному средству, которые изменяют на обратную резистентность к цитотоксическим лекарственным средствам, не являются цитотоксичными сами по себе, их иногда добавляют в качестве цитотоксических
лекарственных средств.
"Цитостатическое лекарственное средство" в данном описании относится к соединению или метаболиту, полученному из КЛЛ, которое обладает ингибирующим действием на рост и пролиферацию гиперпролиферирующих клеток, гиперактивированных иммунных клеток или других аномальных или нежелательных клеток. В некоторых аспектах, цитостатические лекарственные средства действуют непосредственно на такие клетки, или действует косвенно, через воздействие на аномальную сосудистую сеть, которая поддерживает выживание и/или рост гиперпролиферирующих или других аномальные или нежелательные клетки, или цитотоксическое лекарственное средство действует в центрах инфильтрации гиперактивированных иммунных клеток. Обычно аномальными или нежелательными клетками, на которые воздействует цитотоксическое лекарственное средство, являются клетки млекопитающего, более предпочтительно, клетки человека. Хотя множество ингибиторов резистентности к лекарственному средству, которые изменяют на обратную резистентность к цитостатическим лекарственным средствам, не являются цитостатическими сами по себе, их иногда добавляют в качестве цитостатических лекарственных средств.
"Гематологическая злокачественная опухоль" в качестве применяемого здесь термина относится к опухоли клеток крови, которая возникает из клеток лимфоидного или миелоидного происхождения, и она является синонимом термина "жидкая опухоль". Гематологические злокачественные опухоли могут быть поделены на категории, включающие медленно растущую, умеренно агрессивную и высоко агрессивную.
"Лимфома" в данном описании представляет собой гематологическую злокачественную опухоль, которая обычно развивается из гиперпролиферирующих клеток лимфоидного происхождения. Лимфомы иногда классифицируют на два основных типа: лимфогранулематоз (ЛГ) и не ходжкинская лимфома (НХЛ). Лимфомы также могут быть классифицированы согласно нормальному типу клеток, которые наиболее совпадают с раковыми клетками, в соответствии с фенотипическими, молекулярными или цитогенными
маркерами. Подтипы лимфомы согласно этой классификации включают,
без ограничений, зрелые В-клеточные новообразования, зрелые Т-
клеточные и натуральные киллеры (НК) клеточные новообразования,
лимфогранулематоз и связанные с иммунодефицитом
лимфопролиферативные расстройства. Подтипы лимфомы включают предшественник ТРЕТ-клеточной лимфобластной лимфомы (иногда называемый лимфобластный лейкоз, так как лимфобласты ТРЕТ-клеток образуются в костном мозге), фолликулярную лимфому, диффузную В-крупноклеточную лимфому, мантийноклеточную лимфому, В-клеточную хроническую лимфоцитную лимфому (иногда называемую лейкоз из-за вовлечения периферийной крови), MALT лимфому, лимфому Буркитта, грибовидный микоз и его боле агрессивную форму болезнь Сезари, периферийные ТРЕТ-клеточные лимфомы, не определенные другим образом, нодулярный склероз при лимфогранулематозе и подтип лимфогранулематоза со смешанной насыщенностью клетками.
"Лейкоз" в качестве применяемого здесь термина представляет собой гематологическую злокачественную опухоль, которая обычно развивается из гиперпролиферирующих клеток миелоидного происхождения, и включает, без ограничений, острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический лимфоцитный лейкоз (ХЛЛ), хронический миелогенный лейкоз (ХМЛ) и острый моноцитный лейкоз (ОМоЛ). Другие лейкозы включают лейкоз ворсистых клеток (ЛВК), ТРЕТ-клеточный лимфатический лейкоз (TPET-PLL), лейкоз из больших зернистых лимфоцитов и острый ТРЕТ-клеточный лейкоз.
"Единицей кватернизированого лекарственного средства" в данном описании может быть любое содержащее третичный амин соединение (D) , обладающее цитотоксическим, цитостатическим, иммунодепрессивным или противовоспалительным свойством, обычно против клеток млекопитающих, которое введено в КЛЛ в виде соответствующей четвертичной аминовой соли (D+) . Термин "лекарственное средство" не подразумевает соединение, которое только одобрено регулирующим органом для применения для лечения пациента, имеющего стимулированное гиперпролиферацией или гипериммунитетом заболевание или состояние, или подходит для
любой такой цели вне контекста КЛЛ. Таким образом, D+ также
охватывает кватернизированые соединения, которые не
конъюгированы (т.е., находятся в содержащей третичный амин "свободной" форме, и, таким образом, не присутствуют в КЛЛ) , которые не подходят для введения пациенту. Например, лекарственное средство, содержащее третичный амин (D) при введении в КЛЛ в виде D+ может быть цитотоксическим соединением, неподходящим для лечения рака у пациента из-за непереносимой системной токсичности в требуемой терапевтической дозе. В некоторых аспектах, кватернизированное лекарственное средство получают конденсацией атома азота третичного амина лекарственного средства, содержащего третичный амин, с вторичным линкером L0, имеющим подходящую уходящую группу. В некоторых аспектах лекарственное средство, содержащее третичный амин, вводимое в D+, подходит для применения для лечения рака. В других аспектах лекарственное средство, содержащее третичный амин, вводимое в D+, подходит для применения для лечения рака. В некоторых аспектах лекарственное средство, содержащее третичный амин, вводимое в D+ КЛЛ является цитотоксичным или цитостатическим соединением. В других аспектах, лекарственное средство, содержащее третичный амин, вводимое в D+ КЛЛ является противовоспалительным или иммунодепрессивным соединением. В других аспектах лекарственное средство, содержащее третичный амин, вводимое в D+ КЛЛ является ингибитором множественной лекарственной резистентности. Другие лекарственные средства, содержащие третичные амины, которые могут быть введены в D+, дополнительно включены в определение лекарственного средства, содержащего третичный амин.
"Лекарственным средством, содержащим третичный амин" в данном описании являются такие соединения, которые обладают цитотоксическим, цитостатическим или противовоспалительным действием и характеризуются алифатической третичной аминовой частью (D), которая способна выделяться из соответствующей части четвертичного амина (D+) КЛЛ после связывания нацеливающей части КЛЛ с когнатной являющейся мишенью частью. Часто соединение,
содержащее третичный амин, превращают в кватернизированную форму, если его сначала вводят в часть, содержащую Lb или Lb'. Однако иногда предшественник, содержащий вторичный амин или первичный амин, вводят в часть, содержащую Lb или Lb', которую затем кватернизируют с получением D+ части из которой может быть выделено лекарственное средство, содержащее третичный амин. Поэтому структуры, такие как L-Lb-L0-D+ и Lb'-L0-D+ не относятся к конкретному способу, в котором получают D+, и не требуют чтобы реагент, применяемый при его получении, был лекарственным средством, содержащим третичный амин.
Классы лекарственных средств, содержащих третичный амин,
выделяемых из КЛЛ в соответствии с данным изобретением,
включают, например, но без ограничений, соединения, имеющие
третичную аминовую функциональную группу, которые применяют для
лечения рака или аутоиммунного заболевания. Эти соединения
включают агенты, разрывающие микротрубочки, агенты,
связывающиеся с малой бороздой ДНК, ингибиторы репликации ДНК, агенты, алкилирующие ДНК, химиотерапевтические сенсибилизаторы и ингибиторы топоизомеразы, такие как тубулизины, ауристатины, димеры феназина, определенные ингибиторы множественной лекарственной резистентности (МЛР) и ингибиторы фосфорибозил-трансферазы никотинамида (NAMPT).
"Гиперпролиферирующие клетки" в данном описании относятся к клеткам, которые характеризуются нежелательной клеточной пролиферацией или аномально высокой скоростью или непрекращающимся состоянием деления клеток, которое не связано и не скоординировано с делением в окружающих нормальных тканях. Обычно гиперпролиферирующими клетками являются клетки млекопитающих. В некоторых аспектах гиперпролиферирующими клетками являются гиперстимулированные иммунные клетки, как определено здесь, в которых непрекращающееся состояние деления клеток возникает после прекращения стимулирования, которое, возможно, и вызвало первоначальное изменение клеточного деления. В других аспектах гиперпролиферирующими клетками являются трансформированные нормальные клетки или раковые клетки, и их
неконтролируемое и развивающееся состояние пролиферации клеток может вызвать образование опухоли, которая является доброкачественной, потенциально злокачественной (предопухолевой) или злокачественной. Условия гиперпролиферации, возникающие в трансформированных нормальных клетках или раковых клетках, включают, но не ограничены ими, такие, которые характеризуются как предраковые, гиперплазия, дисплазия, аденома, саркома, бластома, карцинома, лимфома, лейкоз или папиллома. Предрак обычно определяют как опухолевые очаги, которые демонстрируют гистологические изменения, которые связаны с повышенным риском развития рака и иногда имеют некоторые, но не все, молекулярные и фенотипические свойства, которые характеризуют рак. Связанные с гормонами или чувствительные к гормонам предраки включают внутриэпителиальную неоплазию предстательной железы (ВНПЖ), в частности, низкодифференцированную ВНПЖ (ДНВНПЖ), атипичную мелкую ацинарную пролиферацию (АМАП), дисплазию шейки матки и карциному протоков in situ. Гиперплазии обычно относятся к пролиферации клеток в органе или ткани за пределами обычного, которая может вызвать значительное увеличение органа или образование доброкачественной опухоли или рост. Гиперплазии включают, но не ограничены ими, гиперплазию эндометрия (эндометриоз), доброкачественную гиперплазию предстательной железы и гиперплазию протоков.
"Нормальные клетки" в данном описании относятся к клеткам, демонстрирующим скоординированное деление клеток, относящееся к поддержанию клеточной целостности нормальной ткани или восполнению циркулирующих лимфатических или кровяных клеток, которые требуются для регулируемого обновления клеток, или восстановлению ткани, требуемому после повреждения, или к регулируемой иммунной или воспалительной реакции после воздействия патогена или другого клеточного повреждения, где спровоцированное деление клеток или иммунная реакция заканчиваются после завершения необходимого поддержания, восстановления или очистки от патогена. Нормальные клетки включают нормально пролиферирующие клетки, нормальные неактивные
клетки и нормально активированные иммунные клетки.
"Нормальные неактивные клетки" включают не раковые клетки и состоянии отдыха Go, которые не стимулированы стрессом или митогеном, или иммунные клетки, которые обычно являются не активными или не активированы воздействием провоспалительного цитокина.
"Гиперстимулированные иммунные клетки" в качестве
применяемого здесь термина относятся к клеткам, вовлеченным во
врожденный или адаптивный иммунитет, характеризуемые аномально
непрекращающейся пролиферацией или неподходящим состоянием
стимулирования, которое возникает после прекращения
стимулирования, которое, возможно, и вызвало первоначальное изменение пролиферации или стимулирования, или которое возникает в отсутствие какого-либо внешнего повреждения. Часто непрекращающаяся пролиферация или неподходящее состояние стимулирования вызывает хроническое воспаление, характерное для заболевания или болезненного состояния. В некоторых случаях, стимул может изначально вызывать изменение пролиферации или стимулирования, не относящееся к внешнему повреждению, но развившееся внутри в результате, например, аутоиммунного заболевания. В некоторых аспектах гиперстимулированными иммунными клетками являются провоспалительные иммунные клетки, которые гиперактивированы под воздействием хронического провоспалительного цитокина.
В некоторых аспектах данного изобретения КЛЛ связывается с антигеном, преимущественно демонстрируемым провоспалительными иммунными клетками, которые аномально пролиферируют или неподходящим образом активированы. Такие иммунные клетки включают классически активированные макрофаги или Т-клетки-помощники 1 типа (Thl), которые вырабатывают интерферон-гамма (ИНФ-у) , интерлейкин-2 (ИЛ-2), интерлейкин-10 (ИЛ-10) фактор некроза опухоли-бета (ФН0-(3) , которые являются цитокинами, вовлеченными в активацию макрофагов и CD8+ Т-клеток.
"Гликозидаза" в данном описании относится к белку, способному к ферментному расщеплению гликозидной связи. Обычно
расщепляемая гликозидная связь присутствует в расщепляемой единице (W) в КЛЛ. Иногда гликозидаза, действующая на КЛЛ, присутствует внутриклеточно и гиперпролиферирующих клетках, гиперактивированных иммунных клетках или других аномальных или нежелательных клетках, к которым КЛЛ имеет преимущественный доступ, по сравнению с нормальными клетками, что связано со специфической способностью связывающего лиганд компонента (т.е., лигандной единицы). Иногда гликозид является более специфическим к аномальным или нежелательным клеткам, или преимущественно выделяется аномальными или нежелательными клетками по сравнению с нормальными клетками, или присутствует в большем количестве рядом с аномальными или нежелательными клетками по сравнению с количествами в сыворотке. Часто гликозидная связь в W, на которую воздействует гликозидаза, присоединяет аномерный атом углерода углеводородной части (СУ) к атому кислорода фенола самоуничтожающейся (СУ) части, которая содержит удлиняющую единицу (Y) так, чтобы гликозидное расщепление этой связи запускает 1,4- или 1,б-расщепление лекарственного средства, содержащего третичный амин, из четвертичной аминовой части, связанной с бензильным положением СУ.
В соединениях лекарственное средство-линкер или конъюгатах лиганд-лекарственное средство, содержащих части, такие как-Аа-Yy(Ww)-D+, в которых индексы w и у, каждый M3-Y(W)-, обычно
являются Su-O'-СУ частью, как определено здесь, где A, W и D присоединены к СУ, таким образом, который позволяет самоуничтожающееся выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин, под воздействием гликозидазы. Такие -Y(W)- части иногда называют глюкуронидные единицы, в которых Su не ограничена глюкуроновой кислотой.
Обычно Su-O'-СУ часть (где -О'- является атомом кислорода гликозидной связи и Su является углеводородной частью) представлена структурой, описанной для самоуничтожающихся групп, в которых Е, связанная с арильной частью СУ, является кислородом, где этот гетероатом замещен углеводородной частью через аномерный атом углерода этой части. Более предпочтительно,
ИЛИ
где R24A, R24B и R24c, такие, как определены для R24 в разделе "Сущность изобретения", и их выбирают так, чтобы электронодонорная способность фенольного -ОН, выделенного из гликозидной связи, чувствительность к селективному расщеплению желаемой гликозидазой гликозидной связи с углеводородной частью Su, и стабильность хинонметидного спейсерного соединения при фрагментации, была сбалансирована с уходящей способностью третичного амина, так, чтобы провести эффективное высвобождение D из D+ через 1,4- или 1, б-расщепление. Такие Su-O'-СУ структуры являются типовыми глюкуронидными единицами. Если гликозидная связь принадлежит глюкуроновой кислоте, гликозидазой, способной к ферментному расщеплению этой гликозидной связи, является глюкуронидаза. "Углеводородная часть" в данном описании относится к моносахариду, имеющему эмпирическую формулу Cm(H20)n, где п равно т, содержащему альдегидную часть в полуацетальной форме или ее производном, где СН2ОН часть в этой формуле окислена до карбоновой кислоты (например, глюкуроновой кислоты после окисления СН2ОН группы глюкозы). Обычно углеводородной частью (Su) является циклическая гексоза, такая как пираноза, или циклическая пентоза, такая как фураноза. Обычно пиранозой является глюкуронид или гексоза в конформации |3-D. В некоторых случаях, пиранозой является p-D-глюкуронидная часть (т.е., (3-D-глюкуроновая кислота, связанная с самоуничтожающейся частью -СУ-через гликозидную связь, которая отцепляется р-глюкуронидазой). Часто углеводородная часть не замещена {например, является натуральной циклической гексозой или циклической пентозой). В других случаях, углеводородная часть может быть замещена P-D-глюкуронидом (т.е., глюкуроновая кислота замещена одной или более группами, такими как водород, гидроксил, галоген, сера,
азот или низший алкил.
"Аминокислотой" в данном описании является органическая часть, содержащая карбоновую кислоту и алифатическую аминовую функциональную группу, обычно первичную или вторичную аминовую функциональную группу, способную образовывать амидную связь с другой органической частью в реакциях образования стандартной пептидной связи, хорошо известных в области синтеза пептидов. Аминокислота включает природные, искусственные и не классические аминокислоты, как определено здесь. Гидрофобная аминокислота содержит гидрофобный заместитель, обычно Ci-Сб алкильную группу, присоединенную к атому углерода в цепи атомов, вставленной между карбоновой кислотой и аминовыми функциональными группами, и обычно находится на атоме углерода альфа по отношению к функциональной группе амина или карбоновой кислоты. Для гидрофобной натуральной аминокислоты гидрофобным заместителем на альфа атоме углерода является валин, аланин, лейцин или изолейцин.
"Натуральная аминокислота" относится природным
аминокислотам аргинину, глутамину, фенилаланину, тирозину, триптофану, лизину, глицину, аланину, гистидину, серину, пролину, глутаминовой кислоте, аспарагиновой кислоте, треонину, цистеину, метионину, лейцину, аспарагину, изолейцину и валину, в L или D конфигурации, если в контексте не указано иначе.
"Искусственными аминокислотами" в данном описании являются аминсодержащие кислотные соединения, которые имеют основную структуру натуральных аминокислот (т.е., альфа-аминосодержащие кислоты, но содержащие R группы, присоединенные к альфа атому углерода, который не присутствует в натуральных аминокислотах.
"Не классическими аминокислотами" в данном описании являются аминсодержащие кислотные соединения, которые не имеют аминовый заместитель, связанный с альфа атомом углерода с карбоновой кислотой (т.е., не являются альфа-аминокислотой). Не классические аминокислоты включают р-аминокислоты, в которых метилен вставлен между карбоновой кислотой и амино функциональными группами в натуральной аминокислоте или
искусственной аминокислоте.
"Пептид" в данном описании относится к полимеру двух или более аминокислот, где группа карбоновой кислоты одной аминокислоты образует амидную связь с альфа-аминогруппой следующей аминокислоты в пептидной последовательности. Способы получения амидных связей в полипептидах дополнительно описаны в определении амида.
Пептиды могут состоять из природных аминокислот в L- или D-
конфигурации, или искусственных или не классических аминокислот,
которые включают, но не ограничены ими, орнитин, ЦИТРУЛЛИН,
диаминомасляную кислоту, норлейцин, пирилаланин, тиенилаланин,
нафтилаланин и фенилглицин. Другие примеры не натуральных и не
классических аминокислот включают альфа* и альфа-дизамещенные*
аминокислоты, N-алкиламинокислоты*, молочную кислоту*,
галогенидные производные натуральных аминокислот, такие как
трифтортирозин*, п-С1-фенилаланин*, п-Вг-фенилаланин*, n-F-
фенилаланин*, L-аллилглицин*, бета-аланин*, L-альфа-
аминомасляная кислота*, L-гамма-аминомасляная кислота*, L-альфа-
аминоизомасляная кислота*, L-эпсилон-аминокапроновая кислота#,
7-аминогептановая кислота*, L-метионинсульфон*, L-норлейцин*, L-
норвалин*, п-нитро-Ь-фенилаланин*, Ь-гидроксипролин#, L-
тиопролин*, метильные производные фенилаланина (Phe), такие как
4-метил-Рпе*, пентаметил-Phe*, L-Phe (4-амино)#, L-Tyr (метил)*,
L-Phe (4-изопропил)*, L-Tic (1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-З-
карбоновая кислота)*, L-диаминопропионовая кислота, L-Phe (4-
бензил)*, 2,4-диаминомасляная кислота, 4-аминомасляная кислота
(гамма-Abu), 2-аминомасляная кислота (альфа-Abu), б-
аминогексановая кислота (эпсилон-Ahx) , 2-аминоизомасляная
кислота (Aib), 3-аминопропионовая кислота, орнитин, норлейцин,
норвалин, гидроксипролин, саркозин, цитруллин, гомоцитруллин,
цистеиновая кислота, трет-бутилглицин, трет-бутилаланин,
фенилглицин, циклогексилаланин, фтораминокислоты, бета-
метил аминокислоты, альфа-метиламинокислоты, N-метиламинокислоты, нафтилаланин, и подобные. Обозначение * указывает на производное, имеющее гидрофобные характеристики, # указывает на
производное, имеющее гидрофильные характеристики, и #* указывает на производное, имеющее амфипатические характеристики.
Вариантные последовательности аминокислот в пептиде иногда могут включать подходящие спейсерные группы, вставленные между любыми двумя остатками аминокислоты последовательности, включая алкильные группы, такие как метильные, этильные или пропильные группы в дополнение к аминокислотным спейсерам, таким как глициновые или [3-аланиновые остатки. Также пептид может содержать или состоять из пептоидов. Термин "пептоиды" относится к вариантным аминокислотным структурам, в которых альфа-углеродная замещающая группа находится на атоме азота скелета скорее, чем альфа-углерод. Способы получения пептидов в пептоидной форме известны в данной области техники (см., например, Simon et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) (1992) 89(20): 9367-9371; и Norwell, Trends Biotechnol. 13(4): 132-134 (1995)).
"Протеаза", как определено здесь, относится к белку, способному к ферментному расщеплению связи карбонил-азот, такой как амидная связь, обычно присутствующая в пептиде. Протеазы классифицируют на шесть основных классов: серинпротеазы, треонинпротеазы, цистеинпротеазы, протеазы глутаминовой кислоты, протеазы аспарагиновой кислоты и металлопротеазы, названные так по каталитическому остатку в активном центре, который в первую очередь отвечает за расщепление связи карбонил-азот от ее субстрата. Протеазы характеризуются различными специфичностями, которые зависят от идентификационных характеристик остатков на N-концевой и/или С-концевой стороны связи карбонил-азот и различных распределений.
Если W состоит из амидной или другой карбонил-азот-содержащей функциональной группы, расщепляемой протеазой, то сайт расщепления часто ограничен теми, которые распознаются протеазами, которые найдены в гиперпролиферирующих клетках или гиперстимулированных иммунных клетках, характерных для среды, в которой присутствуют гиперпролиферирующие клетки или гиперстимулированные иммунные клетки. В таких случаях нет необходимости в том, чтобы протеаза обязательно преимущественно
присутствовала или находилась в большем избытке в клетках, на которые нацелен КЛЛ, так как КЛЛ будет иметь худший доступ к тем клеткам, которые, не имеют которые предпочтительную специфическую часть. В других случаях, протеаза преимущественно выделяется аномальными клетками или клетками в окружающей среде, в которых такие аномальные клетки найдены, по сравнению с нормальными клетками, или типовых окружающих средах, в которых такие нормальные клетки находятся при отсутствии аномальных клеток. Таким образом, в тех случаях, когда выделяется протеаза, необходимо, чтобы протеаза преимущественно присутствовала или была найдена в большем избытке рядом с клетками, на которые нацелен КЛЛ, по сравнению с нормальными клетками.
При введении в КЛЛ, пептид, который содержит W, будет являться распознаваемой последовательностью для протеазы, которая расщепляет связь карбонил-азот в W, что вызывает фрагментирование линкерной единицы с последующим выделением лекарственного средства, содержащего третичный амин, из D+. Иногда распознаваемая последовательность селективно распознается внутриклеточной протеазой, присутствующей в аномальных клетках, к которым КЛЛ имеет преимущественный доступ, по сравнению с нормальными клетками, благодаря специфичности к аномальным клеткам, или преимущественно вырабатываемой аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, в целях надлежащей доставки лекарственного средства в желаемое место действия. Обычно пептид является резистентным к циркулирующим протеазам для того, чтобы минимизировать преждевременное выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин, и, таким образом, минимизировать нежелательного системного воздействия лекарственного средства. Обычно пептид содержит одну или более искусственных или не классических аминокислот в последовательность, чтобы обладать такой резистентностью. Часто амидной связью, которая специфически расщепляется протеазой, выделяемой аномальной клеткой, является анилид, где атомом азота такого анилида является выделяющимся электронодонорным гетероатомом (т.е., J) СУ части, имеющей определенные ранее структуры. Таким образом, действие протеазы на такую пептидную
последовательность в W приводит к выделению лекарственного средства из линкерного фрагмента 1,4- или 1,б-расщеплением через ариленовую часть СУ.
Регулирующие протеазы обычно расположены внутриклеточно и требуются для регулирования клеточной активности, которая иногда становится нарушенной или разрегулированной в аномальных или других нежелательных клетках. В некоторых случаях, если W направлена на протеазу, имеющую преимущественно внутриклеточное распределение, такая протеаза является регулирующей протеазой, которая вовлечена в поддержание или пролиферацию клетки. В некоторых случаях, такие протеазы включают катепсины. Катепсины включают серинпротеазы, Катепсин А, Катепсин G, протеазы аспарагиновой кислоты, Катепсин D, Катепсин Е и цистеинпротеазы, Катепсин В, Катепсин С, Катепсин F, Катепсин Н, Катепсин К, Катепсин L1, Катепсин L2, Катепсин О, Катепсин S, Катепсин W и Катепсин Z.
В других случаях, если W направлена на протеазу, которая преимущественно распределена рядом с гиперпролиферирующими или гиперстимулированными иммунными клетками из-за того, что она преимущественно выделяется такими клетками или соседними клетками, выделение которых свойственно окружающей среде для гиперпролиферирующих или гиперстимулированных иммунных клеток, такой протеазой обычно является металлпротеаза. Обычно эти протеазы вовлечены в ремоделирование тканей, что способствует инвазивности гиперпролиферирующих клеток или нежелательному аккумулированию гиперактивированных иммунных клеток, что вызывает дальнейшее пополнение таких клеток.
"Тубулиновый разрывающий агент" в данном описании относится к цитотоксическому или цитостатическому соединению, которое связывается с тубулином или его субъединицей и, в результате, ингибирует элонгацию тубулина или полимеризацию тубулина, отрицательно воздействуя на динамику тубулина, в частности, в гиперпролиферирующих или гиперстимулированных иммунных клетках. Примеры антитубулиновых агентов (т.е., тубулиновых разрывающих агентов) включают, но не ограничены ими, таксаны, алкалоиды
барвинка, майтансин и майтансиноиды, доластатины и ауристатины. Тубулиновым разрывающим агентом, содержащим третичный амин, является тубулиновый разрывающий агент, такой как определен здесь, который содержит или может быть модифицирован так, чтобы содержать третичную аминовую функциональную группу.
Доластатин 10
"Доластатиновое лекарственное средство" в качестве применяемого здесь термина относится к пентапептидам, выделенным из морских источников, обладающим цитотоксическим действием в качестве тубулиновых разрывающих агентов. Доластатин 10 и Доластатин 15 представляют доластатины, содержащие третичный амин, и имеют следующие структуры:
Некоторые типовые доластатины являются родственными
доластатину 10, где фенильный и тиазольный заместители заменены
независимо выбранными арильными или гетероарильными частями.
Другие типовые доластатины являются родственными доластатину 15,
где С-концевая сложная эфирная часть замещена амидом, где атом
азота амида замещен арилалкильной или гетероарилалкильной
частью. Их структуры и структуры других типовых доластатинов,
содержащих третичный амин, и методы их введения в КЛЛ
представлены в вариантах единиц кватернизированого
лекарственного средства.
"Ауристатиновое лекарственное средство" в качестве применяемого здесь термина относится к тубулиновому разрывающему агенту на основе пептидила, родственному доластатину 10. Некоторые ауристатины, содержащие третичный амин, имеют структуру DE или DF:
где Z является -0-, -S- или -N(R19)-, и где R10-R21 такие, как определены в вариантах ауристатиновых лекарственных средств, содержащих кватернизированный третичный амин. При введении в КЛЛ или его предшественник, указанный (t) атом азот третичной аминовой части кватернизирован ковалентным связыванием с L0 или с L0 из Lb или Ъь'-содержащей части, которая состоит из L0. Обычно эту кватернизированую часть D+ получают ковалентным связыванием третичной аминовой части с атомом углерода бензила БПА или БПА-типа части, которую содержит или из которой состоит самоуничтожающаяся спейсерная единица (Y) в L0. Структуры других типовых ауристатинов, содержащих третичный амин, и методы их введения в КЛЛ, представлены в вариантах единиц кватернизированых лекарственных средств на основе ауристатина и включают Ауристатин Е и Ауристатин F.
"Тубулизиновое лекарственное средство" в данном описании представляет собой тубулиновые разрывающие агенты на основе пептида, обладающие цитотоксическим действием и состоящие из одного компонента на основе натуральной или искусственной аминокислоты и трех других компонентов на основе искусственных аминокислот, где один из этих компонентов характеризуется центральной 5-членной или б-членной гетероариленовой частью, и другой является третичным амином для введения в единицу кватернизированого лекарственного средства.
Некоторые тубулизины, содержащие третичный амин, имеют структуру DG или DH:
R RJ
R4A ° R5 R3 R7 DH;
амин,
имеют
где круг представляет 5-членный или б-членный азот-гетероарил, где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3- или мета-положении друг к другу при необязательном замещении в остальных положениях; R4, R4A, R4B, R8A каждый является необязательно замещенным алкилом, независимо выбранным; R7 является необязательно замещенным арилалкилом или необязательно замещенным гетероарилалкилом; R7A является необязательно замещенным арилом или необязательным гетероарилом; R2 является двухвалентным О-связанным заместителем (т.е., присутствует двойная связь или атом углерода, имеющий переменную
группу, дизамещен одним вариантом R2
или двойная связь
отсутствует (т.е., R2 связан одинарной связью с атомом углерода, имеющим эту переменную группу) или R2 является водородом, необязательно замещенным алкилом или одновалентным О-связанным
заместителем; m равно 0 или 1; и R2A, R3, R5 и R6 такие, как определены в вариантах для кватернизированого лекарственного средства, содержащего третичные амины, на основе тубулизина. Природные тубулизины имеют структуру
и для удобства поделены на четыре аминокислотных субъединицы, как указано вертикальными пунктирными линиями, названные, N-метилпипеколиновой кислотой (Мер), изолейцином (Не), тубувалином (Tuv) и, либо тубуфенилаланином (Тир, если R7A является водородом), либо тубутирозином (Tut, если R7A является -ОН) . Существует около дюжины природных тубулизинов, известных в настоящее время, названных Тубулизин A-I, Тубулизин U, Тубулизин V и Тубулизин Z, структуры которых обозначены переменными группами в структуре DG_6, определенной в вариантах единиц кватернизированого лекарственного средства, на основе тубулизина.
Претубулизины имеют структуру DG или DH, где R3 является -СН3 и R2 является водородом, и дезметилтубулизины имеют структуру DG, DG_i, DG_6, DH, DH-i и другие тубулизиновые структуры, представленные в вариантах единиц кватернизированого лекарственного средства на основе тубулизина, где R3 является водородом, и где другие переменные группы такие, как описаны для тубулизинов. Претубулизины и дезметилтубулизины необязательно включены в определение тубулизинов.
В структурах DG, DG_!, DG_6, DH, DH-i и других тубулизиновых
структурах, описанных здесь в вариантах единиц
кватернизированого лекарственного средства на основе тубулизина обозначенный (t) атом азота является местом кватернизации при введении таких структур в КЛЛ или его предшественник. При введении в КЛЛ или его предшественник этот атом азота становится кватернизированым через ковалентное связывание с L0 или с L0 из
Lb или Ъь'-содержащей части, содержащей LQ. Обычно такую
кватернизированую часть D+ получают ковалентным присоединением
третичной аминовой части к атому углерода бензила БПА или БПА-
типа части, которую содержит или из которой состоит Y единица в
L0. Структуры других типовых содержащих третичный амин
тубулизинов и претубулизинов и методы их введения в КЛЛ
представлены в вариантах единиц кватернизированого
лекарственного средства на основе тубулизина.
Типовые способы получения тубулизиновых лекарственных средств и взаимоотношения структура-активность представлены в Shankar et al. "Synthesis and structure-activity relationship studies of novel tubulysin U analogs-effect on cytotoxicity of structural variations in the tubuvaline fragment" Org. Biomol. Chem. (2013) 11: 2273-2287; Xiangming et al. "Recent advances in the synthesis of tubulysines" Mini-Rev. Med. Chem. (2013) 13: 1572-8; Shankar et al. "Synthesis and cytotoxic evaluation of diastereomers and N-terminal analogs of Tubulysin-U" Tet. Lett.
(2013) 54: 6137-6141; Shankar et al. "Total synthesis and cytotoxicity evaluation of an oxazole analogue of Tubulysin U" Synlett (2011) 2011(12): 1673-6; Raghavan et al. J. Med. Chem.
(2008) 51: 1530-3; Balasubramanian, R. et al. "Tubulysin analogs incorporating desmethyl and dimethyl tubuphenylalanine derivatives" Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008) 18: 2996-9; и
Raghavan et al. "Cytotoxic simplified tubulysin analogues" J. Med. Chem. (2008) 51: 1530-3.
"Феназиновое димерное лекарственное средство" в данном описании представляет собой содержащее третичный амин соединение, имеющее две арильные конденсированные феназиновые кольцевые системы, связанные вместе через карбоксамидные функциональные группы в положениях С-1, где связывающая часть состоит из содержащей третичный амин части, которая кватернизирована при введении в виде D+ в КЛЛ в соответствии с данным изобретением. Некоторые содержащие третичный амин феназиновые димеры имеют структуру Dz:
где кольцо А и кольцо В являются независимо выбранным необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, конденсированным с феназиновой кольцевой системой, необязательно замещенной одним, двумя или тремя независимо выбранными RA и/или RB заместителями, R9A и R9B являются независимо выбранными необязательно замещенными алкилами или, взятые вместе с атомами азота, к которым они присоединены, и промежуточными атомами углерода между этими атомами азота, составляют гетероциклоалкильную кольцевую систему, и где RA, RB, R11A, R11B, n, s и о такие, как определены в вариантах кватернизированных лекарственных средств, содержащих третичные амины.
Некоторые типовые содержащие третичный амин димеры феназина или феназины, имеющие конденсированный арил или гетероарил, которые составляют димер феназина структуры Dz представлены в Moorthy et al. "Fused aryl-phenazines: scaffold for the development of bioactive molecules" Curr. Drug Targets (2014) 15(7) : 681-8; Zhuo et al. "Synthesis and biological evaluation of benzo[a]phenazine derivatives as a dual inhibitor of topoisomerase I and II" Org. Biomol. Chem. (2013) 11(24): 39894005; Kondratyuk et al. "Novel marine phenazines as potential cancer chemopreventive and anti-inflammatory agents" Marine Drugs (2012) 10 (2) :451-64; Gamage et al. "Phenazine-l-carboxamides: structure-cytotoxicity relationships for 9-substituents and changes in the H-bonding pattern of the cationic side chain" Bioorg. Med. Chem. (2006) 14 (4) : 1160-8; Yang et al. "Novel synthetic isoquinolino[5,4-ab]phenazines: inhibition toward topoisomerase I, antitumor and DNA photo-cleaving activities"
Bioorg. Med. Chem. (2005) 13(21): 5909-14. Gamage et al.
"Structure-activity relationships for pyrido-, imidazo-,
pyrazolo-, pyrazino-, and pyrrolophenazinecarboxamides as
topoisomerase-targeted anticancer agents" J. Med. Chem. (2002)
45(3): 740-3; Vicker et al. "Novel angular benzophenazines: dual
topoisomerase I and topoisomerase II inhibitors as potential
anticancer agents" J. Med. Chem. (2002) 45 (3) : 721-39; Mekapati et
al. "QSAR of anticancer compounds: bis(11-oxo-llH-indeno[1, 2-
b] quinoline-б-carboxamides) , bis(phenazine-1- carboxamides), and
bis(naphthalimides) " Bioorg. Med. Chem. (2001) 9(11):2757-62 ;
Gamange et al. "Dicationic bis (9-methylphenazine-l-
carboxamides): relationship between biological activity and linker chain structure for a series of potent topoisomerase targeted anticancer agents" J. Med. Chem. (2001) 44: 1407-1415; и Spicer et al. "Bis(phenazine-1- carboxamides): structure-activity relationships for a new class of dual topoisomerase I/II-directed anticancer drugs" J. Med. Chem. (2000) 43(7): 1350-8.
"MJIP ингибирующие лекарственные средства" в данном описании
представляют собой содержащие третичный амин соединения, которые
обращают или ослабляют множественную лекарственную
резистентность из-за медиированного транспортером оттока
гидрофобных цитотоксических, цитостатических или
противовоспалительных лекарственных средств, что придает гиперпролиферирующим клеткам или гиперактивированныи иммунным клеткам резистентность к действию этих соединений. Такие транспортеры обычно принадлежат к семейству транспортеров АТФ-связывающей кассеты (АСК) и включают Р-гликопротеин, резистентный к раку молочной железы белок и связанный с множественной лекарственной резистенстностью белок 1. Другие МЛР-наделяющие транспортеры АСК описаны в Xia and Smith "Drug efflux and multidrug resistance in acute leukemia: therapeutic impact and novel approaches to mediation" Mol. Pharmacol. (2012) 82(6) : 1008-1021. Типовые содержащие третичный амин МЛР ингибирующие лекарственные средства представлены в Zinzi et al.
"Small and innovative molecules as new strategy to revert MDR"
Front. Oncol. (2014) doi: 10,3389/onc,2014,00002 и включают
Tariquidar(tm) и Elacridar(tm) и их производные, представленные в
Paleva et al. "Interactions of the multidrug resistance
modulators Tariquidar and Elacridar and their analogues with p-
glycoprotein" Chem. Med. Chem. (2013) doi:
10,1002/cmdc,201300233. Хотя содержащие третичный амин МЛР ингибирующие лекарственные средства не являются цитотоксическими или цитостатическими сами по себе, они классифицируются как таковые для включения в содержащие третичный амин цитотоксические или цитостатические лекарственные средства, которые выделяются из КЛЛ в соответствии с данным изобретением.
Типовые МЛР ингибирующие лекарственные средства, содержащие третичный амин, которые вводят в единицу кватернизированого лекарственного средства, представлены в вариантах для кватернизированых лекарственных средств, содержащих третичный амин. Обычно эти лекарственные средства характеризуются изохинолиновой структурой, атом азота которой является сайтом кватернизации при введении в КЛЛ. Некоторые типовые МЛР ингибиторы, таким образом, имеют структуру:
где Аг является необязательно
замещенным арилом, и включают Tariquidar(tm) и Elacridar(tm).
"Предотвращать", "профилактика" и подобные термины в данном описании имеют обычное и общепринятое значение, применяемое в области медицины, и поэтому не требует, чтобы каждый случай упоминания этого термина уверенно избегался.
"Внутриклеточный метаболит" в данном описании относится к соединению, получаемому в процессе метаболизма или реакции внутри клетки на КЛЛ. Процесс метаболизма или реакция могут быть ферментным процессом, таким как протеолитическое расщепление пептидного линкера КЛЛ. Внутриклеточные метаболиты включают, но не ограничены ими, специфическую часть и свободное лекарственное
средство, которое перенесло внутриклеточное расщепление после внедрения, диффузии, поглощения или транспортировки в клетку-мишень .
"Внутриклеточно расщепленный", "внутриклеточное
расщепление" и подобные термины, применяемые здесь, относятся к метаболическому процессу или реакции внутри клетки на КЛЛ или подобном, где ковалентное присоединение, например, линкера, между четвертичным амином и антителом, разрушается с выделением свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин, или другой метаболит конъюгата, отделенный от нацеливающей части внутри клетки. Расщепленные части КЛЛ, таким образом, являются внутриклеточными метаболитами.
"Биодоступность" в данном описании относится к системной доступности (т.е., уровням в крови/плазме) данного количества лекарственного средства, вводимого пациенту. Биодоступность является абсолютным термином, которые показывает на изменение времени (скорости) и общего количества (объема) лекарственного средства, которое достигается в общем кровотоке при введении лекарственной формы.
"Пациент" в данном описании относится к человеку, не человекообразному примату или млекопитающему, страдающему расстройством гиперпролиферации, воспаления или иммунитета, или предрасположенному к такому расстройству, который получает пользу от введения эффективного количества КЛЛ. Не ограничивающие примеры пациента включают человека, крысу, мышь, морскую свинку, обезьяну, свинью, козу, корову, лошадь, собаку, кошку, птицу и курицу. Обычно пациентом является человек, не человекообразный примат, крыса, мышь или собака.
Термин "ингибировать" или "ингибирование" означает снижение до измеримого количества или до полного предотвращения. Ингибирование пролиферации гиперпролиферирующих клеток КАЛ обычно определяют по отношению к не леченым клеткам (леченым плацебо с носителем) в подходящей системе для тестирования, такой как клеточная культура (in vitro) или модель ксенотрансплантата (in vivo) . Обычно КЛЛ состоит из нацеливающей
части к антигену, который не присутствует на являющихся мишенью
гиперпролиферирующих клетках или активированных
иммуностимулирующих клетках, которые применяют в качестве отрицательного контроля.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству лекарственного средства, эффективному для лечения заболевания или расстройства у млекопитающего. В случае рака, терапевтически эффективное количество лекарственного средства может снижать количество раковых клеток; снижать размер опухоли; ингибировать (т.е., замедлять до некоторой степени и, предпочтительно, останавливать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (т.е., замедлять до некоторой степени и, предпочтительно, останавливать) метастазы опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или облегчать, до некоторой степени, один или более симптомов, связанных с раком. В зависимости от того, до какой степени лекарственные средства могут ингибировать рост и/или убивать существующие раковые клетки, они могут быть цитостатическими и/или цитотоксическими. Для противораковой терапии эффективность может измеряться, например, через оценку времени до прогрессирования заболевания (ВПЗ) и/или определение скорости реакции (CP).
В случае иммунных расстройств, вызываемых
гиперстимулированными иммунными клетками, терапевтически
эффективное количество лекарственного средства может снижать
количество гиперстимулированных иммунных клеток, степень их
стимулирования и/или инфильтрацию в нормальную ткань и/или
облегчение до некоторой степени одного или более симптомов,
связанных с разрегулированной иммунной системой из-за
гиперстимулированных иммунных клеток. Для иммунных расстройств,
вызванных гиперстимулированными иммунными клетками,
эффективность может быть измерена, например, через оценку одного или более воспалительных суррогатов, включая один или более уровней цитокинов, таких как для ИЛ-1(3, ФНОа, ИНФу и МСР-1, или количество классически активированных макрофагов.
В некоторых аспектах данного изобретения конъюгат лиганд-
лекарственное средство связывается с антигеном на поверхности
клетки-мишени (т.е., гиперпролиферирующей клетки или
гиперстимулированной иммунной клетки), лиганд конъюгата лекарственного средства затем попадает вовнутрь клетки-мишени через медиированный рецептором эндоцитоз. Находясь внутри клетки, одна или более расщепляющихся единиц в единице линкер расщепляются, что вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин. Выделенное лекарственное средство, содержащее третичный амин, затем свободно мигрирует в цитозоль и вызывает цитотоксическое или цитостатическое действие, или в случае гиперстимулированных иммунных клеток, может альтернативно ингибировать трансдукцию провоспалительного сигнала. В другом аспекте изобретения, лекарственное средство расщепляется от конъюгата лиганд-лекарственное средство вне клетки-мишени, но рядом с клеткой-мишенью так, что выделенная единица, содержащая третичный амин, далее проникает в клетку, а не выделяется в отдаленных местах.
"Носитель" в качестве применяемого здесь термина относится к разбавителю, адъюванту или наполнителю, вместе с которым вводят соединение. Такие фармацевтические носители могут быть жидкостями, такими как вода и масла, включая масла нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, конопляное масло. Носители могут включать физиологический раствор, аравийскую камедь, желатин, крахмальную пасту, тальк, кератин, коллоидную двуокись кремния, мочевину. Кроме того, могут применяться вспомогательные, стабилизирующие, загущающие, смазывающие и красящие агенты. В одном варианте, при введении пациенту, соединение или композиции и фармацевтически приемлемые носители являются стерильными. Вода является типовым носителем при внутривенном введении соединений. Физиологические растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также могут применяться в качестве жидких носителей, особенно для растворов для инъекций. Подходящие фармацевтические носители также включают наполнители,
такие как крахмал, глюкоза, лактоза, сахароза, желатин, солод, рис, мука, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропиленгликоль, вода и этанол. Композиции в соответствии с данным изобретением, при желании, также могут содержать незначительные количества смачивающих или эмульгирующих агентов и рН буферных агентов.
"Лечить", "лечение" и подобные термины, если контекстом не указано иначе, относятся к терапевтическому лечению и профилактическим мерам для предотвращения возврата заболевания, где целью является ингибирование или замедление (снижение) нежелательных физиологических изменений или расстройства, такого как развитие или распространение рака, или повреждение ткани при хроническом воспалении. Обычно благоприятные или желаемые клинические результаты такого терапевтического лечения включают, но не ограничены ими, облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизация (т.е., отсутствие ухудшения) состояния заболевания, задержка или замедление развития заболевания, облегчение или ослабление болезненного состояния, и ремиссия (частичная или полная), определяемые или не определяемые. "Лечение" также может означать увеличение выживаемости или качества жизни, по сравнению с ожидаемым выживанием или качеством жизни при отсутствии лечения. Нуждающиеся в лечении включают тех, которые уже имеют состояние или расстройство, а также таких, которые предрасположены к такому состоянию или расстройству.
В контексте рака или болезненного состояния, связанного с хроническим воспалением, термин "лечение" включает любое или все из ингибирования роста опухолевых клеток, раковых клеток или опухоли; ингибирования репликации опухолевых клеток или раковых клеток, ингибирования распространения опухолевых клеток или раковых клеток, снижения общего опухолевого бремени или снижения количества раковых клеток, ингибирования репликации или стимулирования провоспалительных иммунных клеток, ингибирования или снижения хронического воспалительного состояния разрегулированной иммунной системы, или снижения частоты и/или
интенсивности внезапных обострений болезни у пациентов, страдающих аутоиммунным состоянием или заболеванием, или облегчения одного или более симптомов, связанных с раком или гипериммунным стимулированным заболеванием или состоянием.
"Фармацевтически приемлемая соль" в данном описании
относится к фармацевтически приемлемым органическим или
неорганическим солям соединения. Соединение обычно содержит, по
крайней мере, одну аминогруппу и, следовательно, кислотно-
аддитивные соли могут быть образованы с этой аминогруппой.
Типовые соли включают, но не ограничены ими, сульфат, цитрат,
ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат,
фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый
цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат,
сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат,
сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат,
этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис(2-гидрокси-З-нафтоат)).
Фармацевтически приемлемая соль может содержать другую молекулу, такую как ион ацетата, ион сукцината иди другой противоион. Противоионом может быть любая органическая или неорганическая часть, которая стабилизирует заряд исходного соединения. Более того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более одного заряженного атома в своей структуре. Варианты, в которых множество заряженных атомов является частью фармацевтически приемлемой соли, могут иметь множество противоионов. Следовательно, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или более заряженных атомов и/или один или более противоионов.
Обычно фармацевтически приемлемую соль выбирают из тех, которые описаны в P. Н. Stahl and С. G. Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zurich:Wiley-VCH/VHCA, 2002. Выбор соли зависит от свойств, которыми должно обладать лекарственное средство, включая приемлемую растворимость в воде при различных уровнях рН, в зависимости от предполагаемого способа введения, кристалличность с характеристиками текучести и низкую
гигроскопичность (т.е., абсорбцию воды к относительной влажности), подходящие для обработки и требуемого срока годности при определении химической стабильности и стабильности в твердом состоянии при более жестких условиях (т.е., для определения разрушения или изменений твердого состояния при хранении при 4 0°С и 75% относительной влажности).
"Загрузка", "содержание лекарственного вещества", "загрузка полезной нагрузки" или подобные термины представляют или относятся к среднему количеству нагрузок ("нагрузка" и "нагрузки" применяются здесь взаимозаменяемо с "лекарственное средство" и "лекарственные средства") в популяции КЛЛ (т.е., композициях КЛЛ, отличающихся количеством присоединенных D+ единиц, имеющих одинаковые или разные места присоединения, но практически идентичных по структуре). Содержание лекарственного вещества может варьироваться от 1 до 24 лекарственных средств на специфическую часть. Иногда этот показатель называют DAR, или отношение лекарственного средства к нацеливающей части. Композиции КЛЛ, описанные здесь, обычно имеет DAR от 1-24, и, в некоторых аспектах, от 1-8, от 2-8, от 2-6, от 2-5 и от 2-4. Типовые значения DAR составляет около 2, около 4, около б и около 8. Среднее количество лекарственных средств на антитело, или значение DAR, может быть охарактеризовано обычными методами, такими как спектроскопия в УФ/видимом свете, масс спектрометрия, анализ ELISA и ВЭЖХ. Количественное значение DAR также может быть определено. В некоторых случаях, отделение, очистка и характеризация гомогенных КЛЛ, имеющих определенное значение DAR, может достигаться такими методами, как ВЭЖХ с обращенной фазой или электрофорез. DAR может быть ограничено количеством мест присоединения на нацеливающей части.
Например, если нацеливающей частью является антитело и местом присоединения является тиол цистеина, антитело может иметь только один или несколько достаточно реакционноспособных тиольных групп, которые взаимодействуют с Ъь'-содержащей частью. Иногда тиолом цистеина является тиольная группа, полученная из цистеинового остатка, который участвует в межцепной дисульфидной
связи. В других вариантах, тиолом цистеина является тиольная группа цистеинового остатка, которая не участвует в межцепной дисульфидной связи, но ее вводят методами генной инженерии. Обычно менее, чем теоретический максимум частей D+ конъюгируются с антителом во время реакции конъюгации. Например, антитело может содержать много лизиновых остатков, которые не взаимодействуют с Ъь'-содержащей частью, так как только наиболее реакционноспособные лизиновые группы могут взаимодействовать с этой частью.
"Антибиотик", как определено здесь, означает соединение природного, полусинтетического или синтетического происхождения, который преимущественно или селективно воздействует на прокариотные клетки (например, бактерии), по сравнению с клетками млекопитающих. Антибиотик обычно ингибирует рост микроорганизмов не вызывая излишней токсичности у человека или животного, которому вводят антибиотик. Антибиотики включают, например, пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы и анзамизины. Антибиотики применяют главным образом для лечения инфекционных заболеваний. Лекарственные средства, рассматриваемые в соответствии с данным изобретением, не являются антибиотиками.
I. Варианты
Представлены конъюгаты лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), способные предпочтительно доставлять лекарственное средство, содержащее третичный амин, в гиперпролиферирующие клетки или гиперактивированные иммунные клетки или рядом с такими аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или в окружающую среду нормальных клеток, где аномальные клетки обычно отсутствуют, которые применяются для лечения заболеваний и состояний, характеризуемых такими аномальными клетками.
1.1 Общие сведения:
КЛЛ имеет три основных компонента: (1) лигандную единицу из нацеливающей части, которая селективно связывается с являющейся мишенью частью, присутствующей на, в или рядом с аномальными клетками или другими нежелательными клетками, по сравнению с другими частями, присутствующими на, в или рядом с нормальными
клетками, где такие аномальные или нежелательные клетки обычно не присутствуют, или присутствующей на, в или рядом с аномальными или другими нежелательными клетками в большем избытке по сравнению с нормальными клетками, или в окружающей среде нормальных клеток, где аномальные или нежелательные клетки обычно не присутствуют, (2) единицу кватернизированого лекарственного средства, включающую структуру, соответствующую лекарственному средству, содержащему третичный амин, и (3) линкерную единицу, которая соединяет D+ с лигандной единицей и способна при определенных условиях выделять свободное лекарственное средство, содержащее третичный амин, в или рядом с аномальными или нежелательными клетками, на которые нацелена лигандная единица.
Лекарственным средством, содержащим третичный амин, применяемый в соответствии с данным изобретением, является такое, которое преимущественно или селективно оказывает действие (например, цитотоксическое, цитостатическое действие) на клетки млекопитающих по сравнению с прокариотными клетками. В некоторых аспектах являющейся мишенью частью является эпитоп воспроизводимого внеклеточно белка мембраны, который преимущественно находится на аномальных или нежелательных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
В некоторых аспектах, единицу цитотоксического, цитостатического, иммунодепрессивного или противовоспалительного лекарственного средства (D), имеющего третичную аминогруппу, вводят в КЛЛ в виде единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) , и она обладает внутриклеточным действием в отношении гиперпролиферирующих клеток, гиперактивированных иммунных клеток или других аномальных или нежелательных клеток, будучи в "свободной" форме (т.е., D выделяется из D+) и может быть или не быть специфической к этим клеткам. Поэтому D может обладать селективным или неспецифическим цитотоксическим, цитостатическим, иммунодепрессивным или противовоспалительным действием в отношении аномальных или нежелательных клеток по сравнению с нормальными клетками, которые не связаны с
аномальными или нежелательными клетками. Специфичность в отношении аномальных или нежелательных клеток (т.е., клеток-мишеней) в любом случае обуславливается лигандной единицей (L) КЛЛ, в которую введена D. В дополнение к L и D+, КЛЛ, который нацелен на аномальные или нежелательные клетки, обычно имеет линкерную единицу, которая ковалентно присоединяет единицу кватернизированного лекарственного средства к лигандной единице. В некоторых аспектах, лигандную единицу получают из антитела, которое является типовой нацеливающей частью, которое распознает аномальные клетки млекопитающего.
В некоторых аспектах являющейся мишенью частью,
распознаваемой лигандной единицей, является эпитоп
воспроизводимого внеклеточно белка мембраны, который
преимущественно находится на аномальных или нежелательных
клетках, по сравнению с нормальными клетками. В некоторых из
этих аспектов, в качестве еще одного требования, белок мембраны,
на который нацелена лигандная единица, должен иметь достаточное
число копий и быть интернализован при связывании КЛЛ для того,
чтобы внутриклеточно доставлять эффективное количество
связанного цитотоксического, цитостатического,
иммунодепрессивного или противовоспалительного лекарственного средства преимущественно в аномальные клетки. Благодаря этим ограничениям, лекарственным средством, выделяемым из D+, обычно является высоко активное соединение, то есть отдельное лекарственное средство обычно не может быть введено пациенту из-за непереносимых побочных эффектов в виде разрушения, повреждения или нежелательного ингибирования нормальных клеток, находящихся на расстоянии или на периферии от желаемого места действия.
При условии, что содержащее третичный амин лекарственное средство, имеющее неблагоприятное периферическое действие, необходимо доставлять с помощью его КЛЛ, линкерная единица КЛЛ является не только пассивной структурой, которая служит в качестве мостика между нацеливающей частью и D+, из которой выделяется содержащее третичный амин лекарственное средство, но должна быть тщательно спроектирована для того, чтобы быть
стабильной в месте введения КЛЛ до его доставки в являющееся мишенью место, и затем должна эффективно выделять активное лекарственное средство. Для осуществления этой задачи, специфическую част подвергают взаимодействию с Ъь'-содержащей частью с получением Ъь-содержащей части. Если полученной Lb-содержащей частью является КЛЛ, такие соединения обычно состоят из нацеливающей части в форме лигандной единицы, лигандной связующей части (Lb) , также называемой первичным линкером (LR), кватернизированого содержащего третичный амин лекарственного средства (D+) и вторичного линкера (LQ) , расположенного между Lb и D+.
1.1 Первичный линкер (LR) :
Первичным линкером (LR) является лигандная связывающая часть (Lb) или предшественник лигандной связывающей части (Lb') , и она обычно присутствует в качестве компонента линкерной единицы КЛЛ или Ъь'-содержащей части так, чтобы Lb'-LQ или Lb'-LQ-D+. Первичный линкер Ъь'-содержащей части состоит из функциональной группы, способной взаимодействовать с электрофильной или нуклеофильной функциональной группы нацеливающей части. В результате этой реакции нацеливающая часть становится ковалентно связанной с первичным линкером через Lb, где первичным линкер становится Lb, содержащая функциональную группу, полученную из Lb'.
В некоторых вариантах Lb' в Ъь'-содержащей части имеет одну из следующих структур:
необязательно замещенным алкилом; Т является -CI, -Br, -I, -0-мезилом, -0-тозилом или другой сульфонатной уходящей группой; U является -F, -CI, -Br, -I, -O-N-сукцинимидом, -О-(4-нитрофенилом), -О-пентафторфенилом, тетрафторфенилом или -0-C(=0)-OR57; X2 является Ci-ю алкиленом, С3-С8-карбоциклом, -0-(Ci-С6 алкилом), -ариленом-, Ci-Сю алкиленариленом, -арилен-С^-Сю алкиленом, -Ci-Сю алкилен (С3-С6-карбоциклом)-, - (С3-С8 карбоцикл)-Ci-Сю алкиленом-, С3-С8-гетероциклом, -Ci-Сю алкилен- (С3-С8 гетероцикло) -, - (С3-С8-гетероцикло) -Ci-Сю алкиленом, -(CH2CH20)u или - (CH2CH20) U-CH2-, где и является целым числом от 1 до 10 и R57 является Ci-Сб алкилом или арилом; и волнистая линия означает ковалентную связь с субъединицей L0.
При взаимодействии с электрофилом или нуклеофилом нацеливающей части Lb' превращается в лиганд-Ъь часть, как показано ниже, где изображена схема одного из таких взаимодействий:
Лиганд-S-СН2-
Лиганд-s
-S-?-
Лигащ
-X2
Лиганд-NH
^ , где указанный (#) атом получают из реакционноспособной части лиганда и X2 такой, как определен. 1.2 Вторичные линкеры (Ъ^) :
Вторичные линкеры в КЛЛ или Ъь'-содержащем его предшественнике представляют собой органическую часть, расположенную между первичным линкером (LR) и единицей кватернизированого лекарственного средства (D+) , которая обеспечивает обработку расщепляемой единиц в линкерной единице КЛЛ после селективного связывания нацеливающей части КЛЛ с родственной ему являщейся мишенью частью, присутствующей на, в или рядом с гиперпролиферирующими клетками, гиперактивированными иммунными клетками или другими аномальными или нежелательными клетками, на которые нацелен КЛЛ. В некоторых вариантах W является субстратом для протеазы, которая присутствует в гиперпролиферирующих клетках или гиперактивированных иммунных клетках. Предпочтительными являются такие расщепляемые единицы, которые не распознаются протеазами, выделяемыми нормальными клетками, которые обычно отсутствуют в присутствии
гиперпролиферирующих клеток или гиперактивированных иммунных клеток, или являются субстратами для протеаз, которые системно циркулируют для того, чтобы минимизировать выделение не целевых лекарственных средств или системное воздействие на лекарственные средства, содержащие третичный амин, из-за из преждевременного выделения из КЛЛ. Более предпочтительными являются такие протеазы, которые являются регулирующими протеазами или протеазами, найденными в лизосомах, которые являются клеточным компартментом, в который доставляется КЛЛ при интернализации рецептора поверхности мембраны, с котором специфически связывается КЛЛ. Регулирующие и лизосомные протеазы являются типовыми внутриклеточными протеазами.
В одном варианте W внутри вторичного линкера включает или состоит из дипептидной части, имеющей следующую структуру:
R 0 , где R29 является бензилом, метилом,
изопропилом, изобутилом, втор-бутилом, -СН(ОН)СН3, или имеет
сн2-> -
следующую структуру п , и R30 является метилом,
(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2, - (СН2) 3NH (C=NH) NH2, или -(CH2)2C02H, где дипептидная часть является сайтом узнавания для регулирующей или лизосомной протеазы.
В предпочтительных вариантах дипептидом является валин-аланин (val-ala). В другом варианте, W включает или состоит из дипептида валин-цитруллин (val-cit). В другом варианте, W включает или состоит из дипептида треонин-глутаминовая кислота (thr-glu). В некоторых таких вариантах, дипептидная часть ковалентно присоединена к СУ единице Y через амидную связь, образованную между аланином или цитруллином функциональной группы карбоновой кислоты или функциональной группы альфа карбоновой кислоты глумамата, и арилом или гетероарилом
аминогруппы СУ. Таким образом, в этих вариантах СУ содержит ариламиновую или гетероариламиновую часть и указанную выше функциональную группу карбоновой кислоты дипептидной части, образуя анилидную связь с атомом азота амино такой ариламиновой части.
В другом варианте, W во вторичном линкере содержит связанную с гликозидом углеводородную часть, имеющую сайт узнавания для расположенных внутриклеточно гликозидаз. В таких вариантах W является углеводородной частью, связанной с Е, где W-E является сайтом узнавания для отщепления W от Е, и связь между W и Е является гликозидной связью. В таких вариантах W-E обычно имеет структуру
, где R45 является -СН2ОН или -С02Н и Е
является гетероатомом, таким как -О-, -S- или -NH-, связанным с углеводородной частью и с самоуничтожающейся частью Y (на что указывает волнистая линия), где связь с углеводородной частью является сайтом узнавания для гликозидазы. Предпочтительно, этот сайт распознается гликозидазой лизосомы. В некоторых вариантах, гликозидазой является глюкуронидаза, в которой R45 является С02Н.
Вторичные линкеры, в дополнение к W, также содержат спейсерную единицу (Y) и могут дополнительно содержать удлиняющую единицу (А) , расположенную относительно W в линейном или ортогональном порядке, и представлены:
-^"Аа Ww Yy-Ј- - ?-Аа Yy-§-
4 4 или ^ ^ ,
соответственно, где индекс w равен 1, у равен 1 и индексы а
равны 0 или 1 ;
где волнистая линия к Y означает ковалентную связь Y с D+, и
волнистая линия к А, если а равен 1, в обеих структурах, или к
W, если имеется линейное положение с Y-D+, или к Y, если W находится в ортогональном положении с Y-D+, если а равно 0, означает ковалентную связь A, W или Y, соответственно, с Sc из Lb или Lb'. В предпочтительных вариантах, каждый из a, w и у равен единице.
Структуры некоторых типовых A, W и Y частей в LQ и их заместители описаны в WO 2004/010957, WO 2007/038658, патентах США №№ 6,214,345, 7,498,298, 7,968,687 и 8,163,888, и публикациях патента США №№ 200 9-0111756, 200 9-0018086 и 200 90274713, которые включены сюда в качестве ссылки.
В некоторых вариантах А части или их субъединицы (например, А1г А0) имеют структуру
где волнистая линия к карбонильной части любой структуры означает место присоединения к амино концу дипептидной части, содержащей W, расположенную линейно по отношению к А или к самоуничтожающейся части СУ в Y, описанной здесь, в которой W связана Y и расположена ортогонально к А, и где волнистая линия к амино части любой структуры является местом присоединения к карбонилсодержащей функциональной группе Sc в Lb или Lb';
где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что если К или L являются О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 к L отсутствуют, и если К или L являются N, один из R41, R42 к К или один из R42, R43 к L отсутствует, и при условии, что никакие два соседних L независимо не выбирают из N, О, или S;
где q является целым числом от 0 до 12, иг является целым числом от 1 до 12;
где G является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, -ОН, -ORPR, -C02H, C02RPR, где RPR является подходящей защитной группой, -N(RPR) (RPR) , где RPR независимо являются защитной группой или RPR вместе образуют подходящую защитную
группу, или -N(R45) (R46) , где один из R45, R46 является водородом или RPR, где RPR является подходящей защитной группой, и другой является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом;
где R38 является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R39-R44 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R39, R40 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, составляют Сз-Сб циклоалкил, или R41, R42 вместе с К, к которому они присоединены когда К является С, или R43, R44 вместе с L, к которому они присоединены если L является С, составляют Сз-Сб циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43, или R41 и R43 вместе с атомом углерода или гетероатомом, к которому они присоединены, и атомами, расположенными между этими атомом углерода и/или гетероатомом, образуют 5- или б-членный циклоалкил или гетероциклоалкил, при условии, что если К является О или S, R41 и R42 отсутствуют, we ели К является N, один из R41, R42 отсутствует, если L является О или S, R43 и R44 отсутствуют, и если L является N, один из R43, R44 отсутствует.
В некоторых вариантах R38 является водородом. В других вариантах -K(R41) (R42) является -(СН2)-. В других вариантах, если р не равен 0, R39 и R40 являются водородом в каждом случае. В других вариантах, если q не равен 0, -L(R43) (R44)- является -СН2-в каждом случае.
В предпочтительных вариантах G является -С02Н. В других предпочтительных вариантах К и/или L являются С. В других предпочтительных вариантах, q или р равно 0. В других предпочтительных вариантах, p+q является целым числом от 1 до 4.
В некоторых вариантах, А или его субъединица имеет структуру -NH-Ci-Сю алкилен-С(=0)-, -NH-Ci-Сю алкилен-NH-C(=0)-Ci-Сю алкилен-С (=0) -, -NH-Ci-Сю алкилен-С (=0)-NH-Ci-Сю алкилен (С=0)-, -NH- (CH2CH20) S-CH2 (С=0)-, -NH-(C3-C8 карбоцикло) (С=0)-, -NH-(арилен-)-С(=0)- и -NH-(С3-С8 гетероцикло-)С(=0).
В других вариантах А, или его субъединица имеет структуру
где R13 является -Ci-Сю алкиленом-, -С3-
С8карбоцикло-, -ариленом-, -С1-С30гетероалкиленом-, _С3-
С8гетероцикло-, -Ci-Сю алкиленариленом-, -арилен-С^-Сюалкиленом-, -Ci-Сю алкилен-(С3-С8карбоцикло)-, - (С3-С8 карбоцикло)-Ci-Сю алкиленом-, -Ci-Сю алкилен-(С3-С8 гетероцикло)-, - (С3-С8 гетероцикло)-Ci-Сю алкиленом-, - (СН2СН20) !_10 (-СН2) 1-3- или (CH2CH2NH) !_10 (-СН2) !_3-. В некоторых вариантах, R13 является -Ci-Сю алкиленом- или -Ci-Сэогетероалкиленом-. В некоторых вариантах, R13 является -Ci-Сю алкиленом-, - (СН2СН20) i-ю (-СН2) i_3- или (CH2CH2NH) 1-ю (-СН2) 1-3-. В некоторых вариантах, R13 является -Ci-Сю алкиленполиэтиленгликолем или полиэтиленимином.
В более предпочтительных вариантах А или его субъединица соответствуют по структуре альфа-аминокислоте-, бета-аминокислотной части или другой аминсодержащей кислоте. Другие варианты А и субъединиц Ai и А0 описаны в вариантах для LR-LQ в качестве линкерных единиц.
В некоторых вариантах, Y части способны проходить реакцию 1,4- или 1,б-расщепления после ферментной обработки W, ковалентно связанной с Y (т.е., Y содержит СУ) . В некоторых вариантах СУ из Y расположена линейно в LQ, имеющей структуру:
где V, Z1, Z2 и Z3 независимо являются -C(R24)= или -N=; U является -О-, -S- или -N(R25)-;
R24 независимо являются водородом, галогеном, -N02, -CN, OR25, -SR26, -N(R27) (R28) , необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или -С (R29) =С (R30)-R31, где R25 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, R26 является необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или
необязательно замещенным гетероарилом, R27 и R28 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R27 и R28 вместе с атомом азота, которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероцикл, R29 и R30 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, и R31 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом, необязательно замещенным гетероарилом, -С (=0) OR32 или -C(=0)NR32, где R32 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом, или необязательно замещенным гетероарилом, R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом; и R' является водородом или является галогеном, -N02, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является электронодонорной группой,
при условии, что не более двух R24 не являются водородом;
где J является -0-, S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом;
где волнистая линия к Е представляет ковалентное связывание Е с функциональной группой W, которая в достаточной степени ингибирует электронодонорную способность Е для стабилизации ариленовой части СУ до 1,4- или 1, б-расщепления, и где ферментная обработка W дает дис-ингибирование этой способности для того, чтобы вызвать расщепление, позволяющее выделить часть активного лекарственного средства, связанного с Y (например, если Е связана с карбонильной частью карбонилсодержащей функциональной группы W);
где при 1,4- или 1,б-расщеплении выделяется содержащее третичный амин соединение из D+.
В предпочтительных вариантах, если СУ расположена линейно в L0 по отношению к W иБ+, СУ имеет структуру
В предпочтительных вариантах -J- является -О- или -NH-, и V, Z1 или Z2 является =C(R24), где R24 является водородом или электронодонорной группой. В других предпочтительных вариантах R8 и R9 являются водородом, и V, Z1 или Z2 является =СН-. В других предпочтительных вариантах -J- является -NH, V, Z1 или Z2 является =СН- и R' является водородом или электронодонорной группой.
В других вариантах W-Y расположены ортогонально в LQ (т.е., являются -Y(W)- в линкерной единице), где СУ из Y связана со связанной с гликозидом углеводородной частью, имеющей сайт узнавания для гликозидазы, где ортогональное расположение, включающее СУ, обычно представлено структурой он
, где Е связан с одним из V, Z1, Z3, при
условии, что другой V, Z1,
.т.е.
не связанный с
определяется =C(R24)- или =N-, или СУ представлена структурой
Г < D+
R43 R1
где V, Z1 и Z3 независимо являются -C(R24)= или -N=; R24 независимо является водородом, галогеном, -N02, -CN, -OR25, -SR26, -N(R27) (R28) , -C (R29) =C (R30)-R31 или необязательно замещенным Ci-C6;
где R25 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; R26 является необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно
замещенным гетероарилом, и R:
независимо являются
водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R27 и R28 вместе с атомом азота, к которому они присоединены,
образуют 5- или б-членный гетероцикл, R29 и R
независимо
являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, и R31 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом, необязательно замещенным гетероарилом, -CN, -С (=0) OR32 или -C(=0)NR32; где R32 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом;
R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом; R' является водородом или галогеном, -N02, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является группой, выделяющей электрон; R45 является -СН20Н, -С02Н; Е является -О- или -NH-; J является -NH-; и D+ такой, как определен в вариантах, описанных для единицы кватернизированого лекарственного средства.
В предпочтительных вариантах, если W-Y расположены
ортогонально в LQ, СУ из Y имеет структуру
В предпочтительных вариантах -Е- является -О- или -NH- и V или Z3 является =C(R24), где R24 является водородом или группой, выделяющей электрон. В других предпочтительных вариантах R8 и R9
являются водородом и V, Z]
или
является =СН-. В других
предпочтительных вариантах -J- является -NH, V, Z1
или
является =СН- и R' является водородом или группой, выделяющей электрон.
1.3 Lp-Ln в качестве линкерных единиц
Единицы четвертичного лекарственного средства (D+),
присоединенные к любой из указанных выше СУ частей, описанных
здесь, могут представлять любые кватернизированные
цитотоксические, цитостатические, иммунодепрессивные или противовоспалительные лекарственные средства, имеющие третичную аминовую часть (т.е., D+ является кватернизированным лекарственным средством, содержащим третичный амин), кватернизированный атом азота которой присоединен к бензильному положению СУ части.
В некоторых вариантах -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+ имеет структуру
-5-U
где волнистая линия к Lb означает ковалентную связь со
нацеливающей частью КЛЛ, Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей, необязательно состоящей из двух, трех или четырех субъединиц, и индекс а равен 0 или 1; Q2 является W'W'-E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами; где Ww из Q1 способен к селективному расщеплению протеазой, вырабатываемой аномальными клетками, на которые нацелена нацеливающая часть, по сравнению с протеазами, циркулирующими в сыворотке, или глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособным к гидролизу в условиях низкого рН, присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки, и W-E из Q2 расщепляется гликозидазой, где индекс w равен 0 или 1 и w' равен 0 или 1, где w+w' равен 1 (т.е., присутствует один и только один W) ; V, Z1, Z2 и Z3 являются =N-или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -N02, CN, или другой группой, выделяющей электрон, или электронодонорной группой, -Q2 или -C(R8) (R9)-D+, при условии, что если w' равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан одним из V, Z1, Z2, Z3 и Q1-J-, и -C(R8) (R9) -D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу,
при условии, что если w' равен 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим V, Z1, Z2, Z3, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу; R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; D+ является структурой кватернизированого лекарственного средства, содержащего третичный амин D; и р равен числу от 1 до 24; где расщепление указанной протеазой, дисульфидный обмен, гидролиз или гликозидазное расщепление дает выделение D из D+.
В предпочтительных вариантах, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
-Lb Q1
^ //
R8 R9
*R' ИЛИ R'
где V, Z1 и Z2 независимо являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, и R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом.
В других предпочтительных вариантах, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
ИЛИ
где V, Z2 и Z3 независимо являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, и R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом.
В других предпочтительных вариантах, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
или
где V является =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом,
необязательно замещенным алкилом или группой, выделяющей
электрон, Z1 является =N- или =C(R24)-, где R24 является
водородом, необязательно замещенным алкилом или
электронодонорной группой, и R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -0-или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом.
В более предпочтительных вариантах указанного выше, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ структуры содержат Q2, V является =C(R24)-, где R24 является водородом, галогеном или -NO2.
В других предпочтительных вариантах, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
L0-D+
Л
-?-ц
или
где V и Z1 независимо являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, и R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом, и R' является водородом или группой, выделяющей электрон.
В других предпочтительных вариантах, -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+
имеет структуру:
ИЛИ
где Z1 является =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, Z3 является =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом, необязательно замещенным алкилом или группой, выделяющей электрон, и R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом, и R' является водородом или электронодонорной группой.
R24 является водородом, галогеном или -NO
В более предпочтительных вариантах указанного выше, -Lb-L0-D+ или Lb'-LQ-D+ структуры содержат Q2, Z3 является =C(R24)-, где
2 •
В других предпочтительных вариантах, -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+ имеет структуру:
или
где V и Z3 независимо являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом
или низшим алкилом, и R' является водородом или группой, выделяющей электрон.
В некоторых вариантах LR-L0-D+ (т.е., -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+) имеет структуру
где V, Z1 и Z2 независимо являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом, и R' является водородом или электронодонорной группой.
В предпочтительных вариантах, по крайней мере, один из V,
Z1, Z2, Z3 в любой из указанных выше LR-LQ-D+ (т.е., -Lb-LQ-D+ и Lb'-L0-D+) структур является -СН= или не является =N-.
В более предпочтительных вариантах LR-LQ-D+ (т.е., -Lb-LQ-D+ или Lb'-L0-D+) имеет структуру
где V, Z1 или Z3 является =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом, и R' является водородом или группой, выделяющей электрон.
В более предпочтительных вариантах R8 и R9 в любой из
представленных выше структур LR-LQ, содержащей Q1, являются водородом. В других более предпочтительных вариантах, в любой из представленных выше структур LR-LQ, содержащих Q1, V, Z1 или Z2 является =C(R24)-, где R24 является водородом или электронодонорной группой. Таким образом, некоторые из этих более предпочтительных вариантов имеют структуру
В других более предпочтительных вариантах, А в Q1, если А присутствует (т.е., а равно 1), является любая из указанных выше LR-L0 структур, содержащих Q1, соответствующая по структуре аминсодержащей кислоте, где конец карбоновой кислоты аминсодержащей кислоты связан с J в виде сложного эфира или амида, и его N-конец связан с Lb или Lb' через карбонилсодержащую функциональную группу.
В других вариантах LR-L0-D+ (т.е., -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+) имеет структуру
где V, Z1 или Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24, выбранный независимо, является водородом, необязательно замещенным алкилом или электронодонорной группой, R8 и R9 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, и J является -О- или -N(R33), где R33 является водородом или низшим алкилом, и R' является водородом или группой, выделяющей электрон.
В более предпочтительных вариантах R8 и R9, в любой из представленных выше LR-LQ структур, содержащей Q2, являются водородом. В других более предпочтительных вариантах, V или Z3 является =C(R24)-, где R24 является водородом или электронодонорной группой. Таким образом, некоторые из этих более предпочтительных вариантов имеют структуру
В других более предпочтительных вариантах, А, если А присутствует в любой из указанных выше LR-L0 структур, содержащих Q2, соответствует по структуре аминсодержащей кислоте, где конец карбоновой кислоты аминсодержащей связи связан с J в виде
сложного эфира или амида, и его N-конец связан с Lb или Lb' через карбонилсодержащую функциональную группу. В особенно предпочтительных вариантах, -Lb-A- или Lb'-A в любом из указанных выше -Lb-LQ-D+, Lb'-LQ-D+ или LR-LQ-D+ вариантов, имеет структуру М1-А, M1-Ai-A0-, М2-А или M2-Ai-AG-, представленную:
I N-^-R
[C(Rb14Rb1)]m[yr]-^-
О ч ;
Ra1 N-^-Ra2
[C(Rb1)(Rb1)]m[yn-i
О v >
Lb (=М2)
Lb' (= M1)
I N-^-R
R/S^ [C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-Ao-I-
O ч j
A. ИЛИ
за1
N-^-Ra2
[C(Rb1)(Rb1)]m[yr] A0
О ч _ J
где Ai и А0 являются субъединицами A, Lb является сукцинимидной (М2) частью и Lb' является малеимидной частью (М1) , где -[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А или субъединицей (Ai) из A; R и Ra2 независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом; Ral является водородом, низшим алкилом или ОЕ; УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза (УГ); m является целым числом от 0 до б; каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил, и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; ОЕ является основной единицей, имеющей структуру-[С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где п равно 0, 1, 2 или 3, R1 независимо является водородом или низшим алкилом, или два R1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С6 циклоалкил, R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют С3-С6 циклоалкил, или один R1 и один R2, вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода образуют 5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены; R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, или R22 и R23 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; и где сульфгидрильная часть нацеливающей части связана с М2, как показано волнистой линией к сукцинимидной части, и где волнистая линия к УГ (или к [C(Rbl) (Rbl)]m, если УГ не присутствует) показывает ковалентную связь с другой субъединицей А или с W в тех вариантах, где присутствует Qlr или с V, Z1, Z2 или Z3 СУ
части в тех вариантах, где присутствует Q2.
В этих вариантах -Lb и Lb' относятся к сукцинимидным (М2) частям, и соответствующие им -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-A!- или Lb'-A! относятся к сукцинимидсодержащим частям, которые являются типовыми Lss частями.
В других, особенно предпочтительных вариантах, -Lb-A- или -Lb-Ai-AQ в любом из указанных выше Lb-содержащих вариантов, имеет структуру М3-А или M3-Ai-AQ, представленную:
где Ai и А0 являются субъединицами А, и МЗА и Мзв являются региоизомерами М3, и где переменные группы и связность с сульфгидрильной группой нацеливающей части и УГ (или [C(Rbl) (Rbl)]m) такие, как определены для соответствующих сукцинимидсодержащих частей, показанных выше. В данных вариантах, Lb относится к части янтарная кислота-амид (М3) и -Lb-А-, Lb'-A, -Lb-Ai- или Lb'-Ai относятся к частям, содержащим янтарную кислоту-амид, которые являются типовыми Ls частями.
В любом из таких вариантов -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-Ai- и Lb'-Ai или
M!-A, M1-A1-A0-, M2-A, M2-Ai-AG-, M3-A и M3-Ai-AG каждый Rb независимо предпочтительно является водородом или низшим алкилом, и m равно 0 или 1, Ral предпочтительно является водородом, низшим алкилом или ОЕ, или Ra2 предпочтительно является водородом.
В любом из указанных выше вариантов, содержащих Q1, в которых Q1 содержит А или Ai-AQ, предпочтительными вариантами являются такие, где W из Q1 связан с А или А0 через амидную функциональную группу. В таких вариантах, предпочтительно, A, Ai и А0 имеют выбранные независимо структуры, соответствующие аминсодержащим кислотам, как описано здесь для вариантов удлиняющей единицы. В любом из указанных выше -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-Ai- и Lb'-Ai вариантов, содержащих А или А1г А и Ai предпочтительно имеют структуры, соответствующие аминсодержащим кислотам, как описано здесь для вариантов удлиняющей единицы, где А связан с W или Ai связан с А0 через амидную функциональную группу. В любом из указанных М1-А, М1-А1-А0-, М2-А, M2-Ai-A0-, М3-А и M3-Ai-A0 вариантов, предпочтительно, А, Аг и А0 имеют выбранные независимо структуры, соответствующие аминсодержащим кислотам, как описано здесь для вариантов удлиняющей единицы А и субъединицы А0. В любом из указанных выше Lss или Ls вариантов, которые содержат -А(ОЕ)- или -А^ОЕ)- части, А и Ах предпочтительно имеют структуры, соответствующие аминсодержащим кислотам, замещенным ОЕ, и поэтому являются диаминосодержащими кислотами, как описано здесь для вариантов удлиняющей единицы и основной единицы. В содержащих М1, М2 и М3 частях, имеющих А или Ai части, соответствующие по структуре аминсодержащей кислоте, атом азота амина аминсодержащей кислоты введен в виде атома азота имина М1 или М2 кольцевой системы или атома азота амида М3 части. В Lss или Ls-содержащих частях N-концевой атом азота амина диаминосодержащей кислоты введен в виде атома азота имина М1 или М2 кольцевой системы или атом азота амида М3 части. Предпочтительно для любой из указанных выше частей, содержащих М1, М2 и М3, или частей, содержащих Lss или Ls, карбоновая кислота из аминсодержащей кислоты иди диаминосодержащей кислоты введена
в амидную функциональную группу к А0 для тех частей, которые содержат Ai-AQ-, или к W для тех частей, которые содержат А, если А0 отсутствует.
В других предпочтительных вариантах W содержит дипептид, распознаваемый катепсиновой протеазой, где дипептид связан с J из СУ через другую амидную функциональную группу, где катепсин способен к расщеплению амидной связи W от СУ, вызывая фагментирование СУ для выделения D из D+, связанной с СУ.
В этих и любом из указанных выше вариантов, содержащих УГ, УГ предпочтительно является -С(=0)-. В любом из указанных выше вариантов, где W из Qi содержит дипептид, который распознается катепсиновой протеазой, предпочтительные дипептиды имеют
О R35
структуру
где R
является бензилом,
метилом, изопропилом, изобутилом, втор-бутилом, -СН(ОН)СН3, или
имеет структуру " и R35 является метилом, -(CH2)4-NH2, -
(СН2) 3NH (С=0) NH2, (СН2) 3NH (C=NH) NH2, или -(СН2)2С02Н, где волнистая линия на N-конце дипептида показывает ковалентную связь с А или с Lb или Lb', и волнистая линия на С-конце дипептида означает ковалентную связь с J СУ части.
В предпочтительных вариантах, содержащих Q1, -Lb-LQ-D+ или Lb'-L0-D+ имеет структуру:
где Ai и A0 являются субъединицами А, где A0 является необязательной субъединицей (т.е., Аг становится А если А0 отсутствует), где R34 является метилом, изопропилом или СН(ОН)СН3, и R35 является метилом, - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или (СН2)2С02Н, где R', R8, R9, J, V, Z1 и Z2 такие, как определены выше для формулы I. В более предпочтительных вариантах R8 и R9 являются водородом. В других более предпочтительных вариантах J является -NH-. В еще более предпочтительных вариантах, J, V, Z1 и Z2 каждый является -СН=. Также более предпочтительными являются такие варианты, где Lb' имеет структуру малеимидной части (М1) или где Lb имеет структуру сукцинимидной части (М2) или части янтарная кислота-амид (М3) .
В других предпочтительных вариантах, содержащих Q1, конъюгат лиганд-лекарственное средство или соединение лекарственное средство-линкер формулы LR-L0-D+ имеет структуру
где индекс w равен 1, 2, 3 или
или
более, предпочтительно 2, and где W содержит или состоит из дипептида, где дипептидом являются последовательные субъединицы
аминокислоты из Ww, где дипептидная субъединица находится на дальнем конце от Ww (т.е., дипептид имеет формулу -W2-Wi_) , и указанной связью является амидная связь, специфически расщепляемая внутриклеточной протеазой по сравнению со свободно циркулирующей сывороточной протеазой. В некоторых вариантах, если индекс а равен 1, удлиняющей единицей (А) является разветвляющая единица. В других вариантах, если Аа содержит разветвляющую единицу (В) и индекс а равен 2 или более, В предпочтительно находится на расстоянии от субъединицы Аа. В других вариантах В предпочтительно соединен с ближним концом Ww, и В предпочтительно находится на дальнем конце Аа (например, В является А0, если Аа является -Ai-A0- или Аа является -Ai-A0-B-) . Для любого из этих вариантов, разветвляющая единица замещена солюбилизирующей единицей.
В более предпочтительных вариантах А или А± и А0 в -A^AQ-независимо представлены структурами (3) или (4):
,38
где волнистая линия к карбонильной части любой структуре представляет точку присоединения А или А0 к W или Ai к А0 предпочтительно через амидную функциональную группу, и где волнистая линия к амино части любой структуры представляет точку присоединения А или АГ к Lb или Lb' или к карбонилсодержащей функциональной группе Ai, предпочтительно образующую амидную функциональную группу; где переменные группы такие, как описаны выше для структур, представляющих А. В предпочтительных вариантах L отсутствует (т.е., q равно 0) и G является водородом, ОЕ, -С02Н или -NH2 или боковой цепью природной аминокислоты, такой как аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота или лизин. В других предпочтительных вариантах L и К являются углеродом и R41, R42, R43 и R44 в каждом случае является водородом. В других предпочтительных вариантах R38-R44 в каждом
случае является водородом. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (3), где К является азотом и один из R41, R42 отсутствует и другой является водородом. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (4), где г равен 1, К является азотом и один из R41, R42 отсутствует и другой является водородом. В других предпочтительных вариантах р и q из структуры (3) равны 0, или q и г из структуры (4) равны 0. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (3) , где р и q оба равны 0 и К вместе с R41 и R42 является -С(=0)-. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (4) , где q равно 1 и L вместе с R43 и R44 является -С(=0)-.
Структуры (3) и (4) также представляют предпочтительные варианты для W2 в -W3-W2-Wi-, и разветвляющей единицей, представленной в последнем варианте G, является -С02Н или -NH2 или боковой цепью природной аминокислоты, такой как аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота и лизин.
В более предпочтительных вариантах, А, Аг или А0 имеет структуру (За) или (4а)
(За)
где р или q равны 0 или 1.
Если Lss или Ls часть содержит А или Ai, предпочтительные А или Ai структуры соответствуют тем, которые показаны в (3), (За), (4) и (4а), где R38 отсутствует, G является основной единицей (ОЕ) и N-концевой азот введен в М1 или М2 часть как атом азота имина кольцевой системы этой части, или введен в М3 часть как атом азота амида янтарной кислоты.
В других более предпочтительных вариантах А или Аг и А0 из А независимо соответствуют по структуре альфа-амино-, бета-амино-или другой аминсодержащей кислоте. Если Lss или Ls часть содержит А или А1г предпочтительные А или Аг части соответствуют по структуре альфа-амино-, бета-амино- или другой аминсодержащей кислоте, замещенной ОЕ (т.е., диаминосодержащей кислоте), где N
концевой азот ОЕ-замещенной альфа-амино-, бета-амино- или другой амин-содержащей кислоты, которая представлена А(ОЕ) или Ai(OE), введен в М1 или М2 часть как атом азота имина кольцевой системы этих частей, или введен в М3 часть как атом азота амида янтарной кислоты.
В этих вариантах особенно предпочтительные А(ОЕ) или Ai(OE) имеют структуру (3) или (За), где р равно 0 и G является ОЕ, или имеют структуру (4) или (4а), где q равно 1 и G является ОЕ. В вариантах, содержащих Q1, где А0 присутствует, особенно предпочтительные аминсодержащие кислоты, которые соответствуют А0, имеют структуру -NH2-X1-C02H, где X1 является необязательно замещенным С1-С6-алкиленом, включая s-аминокапроновую кислоту и
Р-аминопропионовую кислоту.
В предпочтительных вариантах линкерных единиц КЛЛ и их предшественников, лекарственное средство-линкер содержит Q2, которая является связанным с гликозидом углеводородом, имеющим сайт узнавания для гликозидазы. В других предпочтительных вариантах, содержащих Q2, -Lb-LQ-D+ или Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
где Ai и А0 являются субъединицами А, необязательной субъединицей (т.е., если А0
где А0 является отсутствует, Аг
становится А) , R45 является -СН2ОН или -С02Н, и R8, R9, V, Z3, Е и
J такие, как определены выше. В более вариантах, R8 и R9 являются водородом, предпочтительных вариантах, Е является -О-. предпочтительных вариантах J является -NH-.
предпочтительных В других более В других более В других более
предпочтительных вариантах, один или оба V и Z3 являются -СН=. Также более предпочтительными являются такие варианты, где Lb' имеет структуру малеимидной части (М1) или где Lb имеет структуру сукцинимидной части (М2) или части янтарная кислота-амид (М3) . Более предпочтительными являются такие варианта, в которых Lb'-A! имеет структуру M1-Ai, или Lb-Ai имеет структуру, данную выше для M2-Ai или M3-Ai. В любом из этих вариантов
В предпочтительных вариантах, содержащих Q2, А0 присутствует и имеет структуру, ранее определенную для (3), (За), (4) или (4а), где волнистая линия к карбонильной части любой из структур является местом присоединения А0 к J предпочтительно через амидную функциональную группу, и где волнистая линия к амино части любой из структур представляет место присоединения к карбонилсодержащей функциональной группе А1г предпочтительно образующей амидную функциональную группу; где переменные группы являются такими, как описаны выше для структур, представляющих А. В предпочтительных вариантах L отсутствует (т.е., q равно 0) и G является водородом, -С02Н или -NH2 или боковой цепью природной аминокислоты, такой как аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота или лизин. В других предпочтительных вариантах, L и К являются углеродом, и R41, R42, R43 и R44 в каждом случае является водородом. В других предпочтительных вариантах R38-R44 в каждом случае является водородом. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (3), где К является азотом и один из R41, R42 отсутствует и другой является водородом. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (4) где г равно 1, К является азотом и один из R41, R42 отсутствует и другой является водородом. В других предпочтительных вариантах р и q из структуры (3) равны 0, или q и г из структуры (4) равны 0. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (3), где р и q оба равны 0 и К вместе с R41 и R42 является -С(=0)-. Другие предпочтительные варианты имеют структуру (4), где q равно 1 и L вместе с R43 и R44 является -С(=0)-.
В более предпочтительных вариантах, А или Ai и А0 из А независимо соответствуют по структуре альфа-амино-, бета-амино
или другой аминсодержащей кислоте. В других более предпочтительных вариантах, имеющих Lss или Ls часть, эта часть содержит А или Ai с предпочтительными структурами, соответствующими структурам, показанным для (3), (За), (4) и
(4а), где R38 отсутствует, G является основной единицей (ОЕ) и N-концевой азот введен в М1 или М2 часть как атом азота имина кольцевой системы этих частей, или введен в М3 часть как атом азота амида янтарной кислоты. Другие предпочтительные А или Ai части для Lss или Ls соответствуют по структуре альфа-амино-, бета-амино- или другой аминсодержащей кислоте, замещенной ОЕ
(т.е., диаминосодержащей кислоте), где N-концевой азот замещенной ОЕ альфа-амино-, бета-амино- или другой аминсодержащей кислоты, которая представлены А(ОЕ) или Ai(OE), введен в М1 или М2 часть как атом азота имина кольцевой системы этих частей, или введен в М3 часть как атом азота амида янтарной кислоты.
В вариантах, содержащих Q2, где присутствует А0, особенно предпочтительные аминсодержащие кислоты, которые соответствуют А0, имеют структуру -NH2-X1-C02H, где X1 является необязательно замещенным Ci-Сб-алкиленом, включая s-аминокапроновую кислоту и
Р-аминопропионовую кислоту.
Особенно предпочтительными являются любые из представленных выше вариантов, содержащих Lb, где нацеливающей частью, связанной с Lb, является антитело.
1.4 Единица кватернизированого лекарственного средства Полезные классы лекарственных средств, содержащих третичные амины, включают, в качестве примера и без ограничений, такие, которые обладают цитостатическим или цитотоксическим действием на аномальные клетки или нормальные клетки рядом с аномальными клетками (т.е., связанные с опухолью клетки). В некоторых вариантах лекарственные средства, содержащие третичный амин, обладают цитостатическим или цитотоксическим действием на гиперстимулированные иммунные клетки. В других вариантах лекарственные средства, содержащие третичный амин, обладают цитостатическим или цитотоксическим действием на опухолевые
клетки или связанные с опухолью клетки. Такие лекарственные средства, содержащие третичные амины, включают тубулизины, доластатины и ауристатины, имеющие N-концевую третичную аминовую часть, феназиновые димеры и МЛР ингибиторы на основе тетрагидрохинолина.
1.4.1 Кватернизированные доластатины и ауристатины
В некоторых вариантах, антипролиферативным
кватернизированным лекарственным средством, содержащим третичный амин, является содержащий третичный амин доластатин, включая доластатин 10, доластатин 15 и родственные соединения, где указанный азот (t), представленный для доластатина 10 и доластатина 15, кватернизирован через ковалентное связывание с бензильным положением БПА или БПА-типа самоуничтожающейся части в L0.
Доластатин 10
О V^4 <
о о Доластатин 15
В этих вариантах типовыми доластатинами, которые являются родственными к доластатину 10, являются такие, где фенильный и тиазольный заместители доластатина 10 замещены выбранными независимо арильными или гетероарильными частями. Другие типовые доластатины являются родственными к доластатину 15, где С-концевая сложная эфирная часть замещена амидной функциональной группой, где атом амида азота этой функциональной группы замещен арилалкильной или гетероарилалкильной частью.
Структуры тубулиновых других разрывающих агентов на основе доластатина представлены ниже, где указанный атом азота (t) кватернизирован ковалентным связыванием с бензильным положением БПА или БПА-типа самоуничтожающейся части:
где каждый R10, R11 и R18 является независимо выбранным необязательно замещенным Ci-C6 алкилом и Аг, или Агг и Аг2, выбранные независимо, являются необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом. Другие пептоидные миметики доластатинов, имеющие третичный амин, способный к кватернизации, представлены в Schmitt et al. "Synthesis of dolastatin 15 peptoids" Bioorg. Med. Chem. Lett. (1998) 8(4): 385-8. В предпочтительных вариантах R10 и R11 являются метилом. В другом предпочтительном варианте, R18 является трет-бутилом. В других предпочтительных вариантах Аг является необязательно замещенным фенилом, или Ari и/или Аг2, выбранный независимо, являются необязательно замещенным фенилом. В других предпочтительных вариантах Ari является фенилом и Аг2 является 2-тиазолилом.
В некоторых вариантах, кватернизированым лекарственным средством является ауристатин, имеющий N-концевой третичный амин, атом азота которого кватернизированан через ковалентное связывание с бензильным положением БПА или БПА-типа самоуничтожающейся части. Синтез и структуры ауристатинов, имеющих N-концевой третичный амин, описаны в публикациях заявок на патент США №№ 2003-0083263, 2005-0238649, 2 0 05-0009751, 2009
0111756 и 2011-0020343; публикации заявки на международный патент № WO 04/010957, публикации заявки на международный патент № WO 02/088172 и патентах США №№ 7,659,241 и 8,343,928; каждый из которых включен сюда в качестве ссылки полностью для всех целей. В частности, ауристатиновые структуры и их переменные группы, имеющие третичный амин, способный к кватернизации, которые описаны в этих патентных документах, включены сюда в качестве ссылки, при этом описанные структуры и синтез ауристатина специально включены в качестве ссылок. Типовые ауристатины, содержащие третичный амин, выделенные из КЛЛ в соответствии с данным изобретением, связывают тубулин и оказывают цитотоксическое или цитостатическое действие на желаемые клетки (т.е., клетки-мишени) в результате такого связывания.
Типовые ауристатины, имеющие N-концевой третичный амин, представлены следующей формулой, где обозначенный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) :
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом; R12 является водородом, Ci-Ce алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом); R14 является водородом или метилом, или R13 и R14 вместе с атомом углерода, к которому
они присоединены, содержат С3-С8 циклоалкил;
является
водородом или Ci-C8 алкилом; R16 является водородом, Ci-CЈ
алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8
циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R17
независимо являются водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8
циклоалкилом и О- (Ci-C8 алкилом) ; R18 является водородом или Ci-C8
алкилом; R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом,
-С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 циклоалкилом) , где каждый R19A независимо является водородом, Ci-С8 алкилом, -ОН или -0-Ci-C8 алкилом;
R20 является водородом, Ci-C2o алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и - (R470) m-CH (R49) 2; R21 является арилалкилом, включая -СН2Рп, гидроксилалкилом, включая -СН(СН3)-ОН, или С3-С8 гетероциклом; Z является О, S, NH или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом; m является целым числом 1-1000; R47 является С2-С8 алкилом; R48 является водородом или Ci-C8 алкилом; R49 независимо являются -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, -(CH2)n-S03H или - (СН2) n~S03-Ci-C8 алкилом; R50 независимо является Ci-C8 алкилом или -(СН2) n-COOH; п является целым числом от 0 до 6; и X1 является Ci~ Сю алкиленом.
Некоторые предпочтительные ауристатины, имеющие N-концевой третичный амин, представлены следующими формулами, где указанный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) :
где R10 и R11 независимо являются Ci-C6 алкилом в структурах DE_!, DE_2 и DF_!, Аг в DE_! или DE_2 является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, и в DF_! Z является -0-, или -NH-, R20 является водородом, Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, и R21 является необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилалкилом или необязательно замещенным гетероарилалкилом.
В более предпочтительных вариантах R10 и R11 является метилом. В других более предпочтительных вариантах в DE_i или DE_2 Аг является необязательно замещенным фенилом или необязательно замещенным 2-пиридилом. В других более предпочтительных вариантах в DF_i, R21 является X1-S-R21a или Х1-Аг, где X1 является Ci-Сб алкиленом, R21a является низшим алкилом и Аг является необязательно замещенным фенилом или гетероарилом. В других предпочтительных вариантах -Z- является -О- и R20 является низшим алкилом. В других предпочтительных вариантах, Z является -NH- и R20 является необязательно замещенным фенилом или необязательно замещенным гетероарилом. В других вариантах R21 является -Х1-Аг, X является -NH- и R20 является Аг, где X1 и Аг, выбранные независимо, такие, как определены выше для R21.
Некоторые предпочтительные ауристатины, имеющие N-концевой
третичный амин, представлены следующей формулой, где указанный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения введены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) :
DF/E-З
где R10 и R11 являются метилом, R13 является изопропилом или -СН2-СН (СН3) 2, и R19B является -СН (CH2Ph)-2-тиазолом, -СН (CH2Ph) -2-пиридилом, -СН (СН2-п-С1-Рп) , -СН (C02Me)-CH2Ph, -СН(С02Ме)-CH2CH2SCH3, СН (CH2CH2SCH3) С (=0) NH-3-хинолилом, -СН (CH2Ph) С (=0) NH-п-
содержащие третичный амин единицу кватернизированого
Cl-Ph, или R19B имеет структуру
Особенно предпочтительные
ауристатины, введенные в
лекарственного средства, включают, но не ограничены ими, Ауристатин Е, Ауристатин РЕ, Ауристатин РНЕ, Ауристатин PYE, Ауристатин EFP, Ауристатин ЕВ и Ауристатин EVB.
В некоторых вариантах, Lb'-LQ-D+ часть, которая содержит доластатин или ауристатин, имеющий N-концевой третичный амин, имеет структуру
N-A-W-N
4 о ^Х^ о о
N-A-W
-N^Z1 Н
О J\ Me ОМе О ОМе О
,Аг
N-A-W-N
|| N-A-W-N^^Z1
О Me ОМе О ОМе О 1
или
где Lb' является малеимидной частью (М1) , и A, W, V, Z1 и Z2 такие, как определены выше для формулы 1, и Аг, Ari, Аг2 и R19 такие, как определены выше для содержащих третичный амин
доластатинов и ауристатинов, где атом азота анилина СУ (из которой состоит спейсерная единица Y) связан с W через карбонил анилидной функциональной группы. В предпочтительных вариантах
один, два или все V, Z1, Z2
являются
=СН-. В других
предпочтительных вариантах, Аг или Ari и Аг2 независимо являются необязательно замещенным фенилом. В более предпочтительных вариантах, Аг является фенилом или Ari и Аг2 оба являются фенилом и V, Z1 и Z2 является =СН-.
В других предпочтительных вариантах, соединение лекарственное средство-линкер формулы Lb'-L0-D+, имеющее пептидную расщепляемую единицу, где D+ является кватернизированным ауристатином, имеет одну из следующих структур:
N-A-W-N
В любом из указанных выше вариантов, содержащих единицу кватернизированого ауристатинового лекарственного средства, предпочтительными вариантами являются такие, в которых Lb' (т.е., М1) замещена Lb частью, которая также связана со нацеливающей частью с получением КЛЛ, где этой Lb частью является М2 или М3 часть, и/или А замещен -Ai-AQ, где Ai и А0 являются субъединицами А.
В любой из указанных выше Lb или Ъь'-содержащих частей,
включающих единицу кватернизированого ауристатинового
лекарственного средства, соответствующую по структуре DE, DF, DF_ i, DE_i, DE_2 или DF/E_3, предпочтительная расщепляемая единица (W) состоит из дипептида, распознаваемого катепсиновой протеазой, способной расщеплять анилидную связь, которая ковалентно соединяет W с СУ. В более предпочтительных вариантах, W содержит
> 35
дипептид, имеющий структуру к~ ° , где R34 и R3j и
присоединения, показанные волнистыми линиями к А (или ее субъединице) и Y единицы такие, как определены выше. В особенно предпочтительных вариантах, R34 является -СН(СН3)2 и R35 является - (СН2) 3-NH (=0) NH2, или R34 является -СН(СН3)2 и R35 является -СН3; и где альфа атомы углерода к R34 и R35 находятся в одинаковой абсолютной конфигурации L-аминокислоты.
В любой из указанных выше Lb или Lb'-содержащих частей,
содержащих единицу кватернизированного ауристатинового
лекарственного средства, предпочтительная удлиняющая единица А или ее субъединица (т.е., Ai) соответствует по структуре альфа аминокислоте, бета аминокислоте или другой аминсодержащей кислоте, такой как аминсодержащая кислота, имеющая формулу NH2-Х1-С02Н, где X1 является Ci-Сб алкиленом, где N-концевой азот аминсодержащей кислоты соответствует атому азота малеимид- или сукцинимидимида М1 или М2 части, или атому азота амида части янтарная кислота-амид (М3) , и карбонильная группа соответствует С-концу аминсодержащей кислоты, которая связана с W через амидную функциональную группу. Таким образом, предпочтительные М1-А-, М2-А или М3-А части или предпочтительные M1-Ai-, M2-Ai или М.3-А1 части имеют структуру
но2с
но2с-
или
Более предпочтительными являются такие А единицы или их
субъединицы, которые соответствуют или получены из (3-аминопропионовой кислоты, у-аминомасляной кислоты или s-аминокапроновой кислоты. Другие предпочтительные А или Ai части соответствуют по структуре, или их получают из диаминосодержащих кислот, имеющих формулу NH2-C (Ral) (Ra2) - [С (Rbl) (Rbl) ] m-C (=0) ОН, где Ral имеет формулу - [С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где переменные группы такие, как определены выше для А(0Е)- и Ai(OE)-частей. Более предпочтительными являются такие А или Ai части, где Ral является -CH2NH2. Таким образом, предпочтительная -А- или Ai имеет структуру -C(Ral) (Ra2) - [С (Rbl) (Rbl) ] m-C (=0) - .
В более предпочтительных вариантах соединений лекарственное
средство-линкер формулы Lb'-L0-D+, имеющие пептидную расщепляемую единицу W, где D+ является кватернизированным ауристатином, имеющим структуру:
В некоторых вариантах, более предпочтительные соединения
лекарственное средство-линкер формулы Lb'-LQ-D+, имеющими
пептидную расщепляемую единицу, где D+ является
кватернизированным ауристатином и удлиняющая единица содержит М1 и X1, имеют структуры:
В любой из указанных выше Lb или Lb'-содержащих частей,
содержащих единицу кватернизированого ауристатинового
лекарственного средства, соответствующую по структуре DE, DF, DF_
i, DE_!, DE_2 или DF/E_3, А может содержать 2 субъединицы, где -А- в
указанных выше структурах замещен -А!-А0-, где Аг имеет такую
структуру, как определена выше для А, и где А0 соответствует по
структуре другой аминсодержащей кислоте. Предпочтительными
являются -Ai-Ao- части, которые имеют формулу -C(Ral) (Ra2)-
[С (Rbl) (Rbl) ]m-(С=0)-А0-, где Ral имеют формулу - [С (R1) (R1) ]-
[C(R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где AG связана с W, и Ai связана с А0
через амидные функциональные группы, и где атом углерода,
имеющий Ral и Ra2 заместители, связан с атомом азота имида М1 или
М2 части или с атомом азота амида М3 части амид-кислота. В более
предпочтительных вариантах, -Ai-AQ- имеет формулу -C(Ral) (Ra2)-
[C(Rbl) (Rbl) ]m-(C=0)-NH-(CH2)m.-C(=0)-, -C(Ral) (Ra2) - [C (Rbl) (Rbl)]m-
(C=0) -NH-CH (C02H) - (CH2) m'-i-C (=0) - или -C(Ral) (Ra2) - [C (Rbl) (Rbl)]m-(C=0)-NH-(CH2) m'_!-CH (C02H)-C (=0)где m является целым числом от О до 5, и т' равно целому числу от 1 до 5, и другие переменные группы такие, как определены для А. В любой из указанных выше Lb-А- или Lb'-A-содержащих частей, содержащих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, соответствующую по структуре DE, DF, DE_lf DE_2 или DFi DF1 или DF/E_3, особенно предпочтительными являются такие, в которых Lb' является
M1, Lb является М2 или Lb является МЗА или Мзв, где МЗА и Мзв являются региоизомерами части янтарная кислота-амид М3 после открытия гидролитического кольца М2, где М1-А-, М2-А-, МЗА-А-, Мзв-А, M1-Ai-A0, M2-Ai-AG, M3A-Ai-AG или M3B-Ai-AG имеют структуру:
где волнистые линии к карбонильным частям означают ковалентное связывание с W, и другая волнистая линия означает ковалентную связь с сульфгидрильной группой нацеливающей части.
Предпочтительные варианты соединений лекарственное средство-линкер, где Lb' является М1, и D+ является кватернизированным ауристатином, и -Ai-A0- имеет структуру C(Ral) (Ra2) - [С (Rbl) (Rbl) ]m- (C=0) -NH- (CH2)m--C (=0)-, имеющую структуры:
В других вариантах соединение лекарственное средство-линкер формулы Lb'-LQ-D+ содержит единицу кватернизированного доластатинового или ауристатинового лекарственного средства и W' единицу, расщепляемую гликозидазой, где эта Lb'-LQ-D+ часть имеет структуру:
где Ьь' является малеимидной частью (М1) , А, V и Z3 такие, как определены выше для вариантов формулы 1 и единицы СУ, Аг, Arz, Аг2 и R18 такие, как определены выше для единиц кватернизированного лекарственного средства на основе ауристатина, и R45 является -С02Н или СН2ОН, где атом азота анилина СУ в качестве спейсерной единицы Y связан с А через карбонил анилидной функциональной группы. В предпочтительных вариантах, один или оба V, Z3 являются =СН-.
В любой из указанных выше Lb или Lb'-содержащих частей,
содержащих кватернизированное ауристатиновое лекарственное средство и W' в качестве гликозидазной расщепляемой единицы (т.е., глюкуронидной единицы), А может содержать 2 субъединицы, где -А- в указанных выше структурах замещен -Ai-AQ-, где Ai имеет структуру, как определена выше для А, и где А0 соответствует по структуре другой аминсодержащей кислоте. В более предпочтительных вариантах, Lb'-L0-D+ часть, содержащая единицу кватернизированного доластатинового или ауристатинового лекарственного средства, имеет структуру:
В других предпочтительных вариантах Lb' (т.е., М1) замещена Lb частью, которая также связана со нацеливающей частью с получением КЛЛ, где Lb частью является М2 или М3 часть. В более предпочтительных вариантах, углеводородная часть ковалентно присоединена к СУ через гликозидную связь, имеющую аномерный атом углерода в р-конфигурации. В других более предпочтительных вариантах R45 является -С02Н.
В вариантах, имеющих удлиняющую единицу и глюкуронидную единицу, более предпочтительными являются такие, которые имеют структуру:
В вариантах, имеющих удлиняющую единицу, содержащую М1 и X1 и глюкуронидную единицу, более предпочтительными являются такие, которые имеют структуру:
где R45 предпочтительно является -C02H и индекс m равен 4.
В других предпочтительных вариантах А в любом из указанных выше вариантов замещен-А!-А0-, как определено здесь для Lb или Lb'-содержащих частей, содержащих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, и расщепляемую протеазой W единицу с -А!-А0-, имеющей формулу -C(Ral) (Ra2)-
[C(Rbl) (Rbl) ]m-(C=0)-NH-(CH2)m-C(=0)-, -C(Ral) (Ra2)-[C(Rb) (Rb)]m-
(C=0) -NH-CH (C02H) - (CH2) m'-i-C (=0) - или -C(Ral) (Ra2) - [C (Rbl) (Rbl)]m-(C=0) -NH- (CH2) m-_i-CH (C02H) -C (=0) - . Другие предпочтительные -Ai-AG-
части описаны для соответствующих единиц кватернизированого
тубулизинового лекарственного средства.
В таких вариантах предпочтительные соединения лекарственное
средство-линкер имеют структуру:
1.4.1 Кватернизированные тубулизины
В одной группе вариантов, кватернизированные лекарственные средства соответствуют по структуре тубулизину, имеющему третичный амин в N-конце, где атом азот такого третичного амина включен в единицу кватернизированного лекарственного средства.
В некоторых вариантах, кватернизированым лекарственным средством является тубулизин, представленный структурами следующей формулы, где указанный атом азота (t) является сайтом кватернизации, если такие соединения введены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированного лекарственного средства (D+) :
о ff ? о
"hVW
? 4A U D5 d3 K
R° RD DH
где круг является 5-членным или б-членным атомом азота гетероарила, где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3- или мета-положении друг к другу с необязательным замещением на оставшихся положениях; R2 является XA-R2A, где ХА является -0-, -S-, -N (R2B) -, -СН2-, - (С=0) N (R2B) -или -О (С=0) N (R2B)-, где R2B является водородом или необязательно замещенным алкилом, R2A является водородом, необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным арилом или -C(=0)Rc, где Rc является водородом, необязательно замещенным алкилом или необязательно замещенным арилом, или R2 является О-связанным заместителем; R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо, один R7 является водородом или необязательно замещенным алкилом и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом или необязательно замещенным гетероарилалкилом, и m равно 0 или 1. В других вариантах, кватернизированным лекарственным средством является тубулизин, представленный структурой DG, где один R7 является водородом или необязательно замещенным алкилом, предпочтительно, низшим алкилом, и другой R7 является выбранным независимо необязательно замещенным алкилом, предпочтительно, Ci-Сб алкилом, и m равен 0 или 1, предпочтительно 1, где другая переменная группа такая, как определена выше.
В некоторых аспектах, R2 является XA-R2A, где ХА является -0, -S-, -N (R2B) - -СН2- или -О (С=0) N (R2B)-, где R2B является водородом или необязательно замещенным алкилом, R2A является водородом, необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным арилом или -C(=0)Rc, где Rc является водородом, необязательно замещенным алкилом или необязательно замещенным арилом, или R2 является О-связанным заместителем.
В некоторых аспектах, R2 является XA-R2A, где ХА является -О
, -S-, -N (R2B) - или - (C=0) N (R2B)-, где R2A и R2B независимо являются водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2 является О-замещенным заместителем.
В других аспектах -N(R7) (R7) в DG или DH замещен -N(R7)-CH(R10) (CH2R11) для определения кватернизированных тубулизиновых лекарственных средств формулы DH' и DG':
где R10 является Ci-C6 алкилом, замещенным -С02Н, или его сложным эфиром, и R7 является водородом или Ci-C6 алкилом, выбранным независимо из R10, или R7 и R10 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 5 или б-членный гетероцикл; и R11 является арилом или 5- или б-членным гетероарилом, необязательно замещенным одним или более, предпочтительно, 1 или 2, более предпочтительно 1, заместителем, выбранным независимо из группы, включающей галоген, низший алкил, -ОН и -O-Ci-Сб алкил, предпочтительно -F, -СН3 и -ОСН3; и оставшиеся переменные группы такие, как определены для DG и DH.
В других аспектах, один R7 в -N(R7) (R7) в DG или DH является водородом или Ci-Сб алкилом, и другой R7 является выбранным независимо Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным -С02Н или его сложным эфиром, или необязательно замещенным фенилом.
В некоторых вариантах структуры DG и DH, один R7 является водородом и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом, имеющим структуру:
, где R7B является водородом или О-связанным заместителем, предпочтительно, водородом или -ОН в пара положении, и R8A является водородом или низшим алкилом, предпочтительно метилом; и волнистая линия означает точку присоединения к остатку DG или DH.
В предпочтительных вариантах структуры DG или DH, один R7 является водородом, и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом, имеющим структуру
О , где R7B является -Н или -ОН; и где волнистая
линия означает точку присоединения к остатку DG или DH.
В других вариантах структуры DG и DH, один R7 является водородом или низшим алкилом, предпочтительно, водородом или метилом, более предпочтительно, водородом, и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом, имеющим структуру:
> 7В - ,R7B
, О и v г Где 2 является
необязательно замещенным алкиленом или необязательно замещенным алкениленом, R7B является водородом или О-связанным заместителем, предпочтительно, водородом или -ОН в пара положении, R8A является водородом или низшим алкилом, предпочтительно, метилом, и индекс п равен 0, 1 или 2, предпочтительно 0 или 1; и где волнистая линия означает точку присоединения к остатку DG или DH. В других вариантах структуры DG и DH, -N(R7) (R7) является -NH(Ci-C6
алкилом), где Ci-C6 алкил необязательно замещен -С02Н или его сложным эфиром, или необязательно замещенным фенилом. В предпочтительных вариантах -N(R7) (R7) выбирают из группы, включающей-NH (СН3) , -CH2CH2Ph и -СН2-С02Н, -СН2СН2С02Н и СН2СН2СН2С02Н.
В некоторых вариантах структуры DG' и DH', R7 и R10 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют необязательно замещенный 5 или б-членный гетероцикл, где -N (R7)-СН (R10) (CH2R11)
имеет структуру: J , где волнистая линия означает место
присоединения к остатку DG' или DH'.
Некоторые предпочтительные тубулизины представлены следующей формулой, где указанный атом азота (t) являются местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированного лекарственного средства (D+) :
4А О
t н 0 f ? °
R R;
где круг представляет 5-членный или б-членный гетероарил, где указанные требуемые заместители гетероарила находятся в 1,3- или мета-положении друг к другу с необязательным замещением в оставшихся положениях; R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует 0-связанный заместитель; R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно
замещенным алкилом, выбранным независимо; R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом, и m равно 0 или 1.
В некоторых предпочтительных вариантах структуры DG, DG_i, DH или DH-i, R4 является метилом, или R4A и R4B являются метилом. В другом предпочтительном варианте структуры DG' или DH', R4 является метилом, или R4A и R4B являются метилом. В других предпочтительных вариантах, R7A является необязательно замещенным фенилом. В другом предпочтительном варианте, R8A является метилом в (S)-конфигурации. В других предпочтительных вариантах R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует 0-связанный заместитель, отличный от -ОН, более предпочтительно, сложный эфир, простой эфир или 0-связанный карбамат. В более предпочтительных вариантах, круг представляет 5-членный азот-гетероарилен, где особенно предпочтительна двухвалентная оксазольная или тиазольная часть. В других предпочтительных вариантах, R4 является метилом, или R4A и R4B являются метилом. В других предпочтительных вариантах, R7 является необязательно замещенным арилалкилом, где арилом является фенил, и R7A является необязательно замещенным фенилом.
В других вариантах DG, DG', DG_i, DH, DH' или DH-i круг представляет 5-членный азотгетероарилен, предпочтительно
представленный структурой л^ , где Хв является О, S, или N-RB, где RB является водородом или низшим алкилом. Предпочтительно, кватернизированным лекарственным средством является тубулизин, представленный структурой DG, DG' или DG_i, где m равно 1. Более предпочтительными являются тубулизины, представленные структурой DG, где m равно 1 и круг представляет необязательно замещенную двухвалентную тиазольную часть.
Другие предпочтительные тубулизины представлены следующей формулой, где указанный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) :
где R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, предпочтительно, сложный эфир, простой эфир или О-связанный карбамат, R3 является низшим алкилом или -СН2ОС (=0) R3A, где R3A является необязательно замещенным низшим алкилом, и R7B является водородом или 0-связанным заместителем, предпочтительно, в положении пара. В более предпочтительных вариантах, R3 является метилом или R3A является метилом, этилом, пропилом, изопропилом, изобутилом или -СН2С=(СНз) 2 • В других предпочтительных вариантах, R2A является метилом, этилом, пропилом (т.е., -0R2A является простым эфиром) или является -C(=0)R2B (т.е., -0R2A является сложным эфиром), где R2B является низшим алкилом, где более предпочтительным R2B является метил (т.е., -0R2A является ацетатом). Более предпочтительные тубулизины, имеющие N-концевой третичный амин в качестве места конъюгирования, имеют структуру, представленную одной из указанных ниже формул:
где R7B является водородом или -ОН, R3 является низшим алкилом, предпочтительно, метилом или этилом, и R2B и R2C независимо являются водородом или низшим алкилом. В некоторых предпочтительных вариантах любой из структур DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DH, DH-i и DH-2, R3 является метилом или является -СН2ОС (=0) R3A, где R3A является необязательно замещенным алкилом. В других предпочтительных вариантах любой из структур DG' и DH', R3 является метилом или является -СН20С (=0) R3A, где R3A является необязательно замещенным алкилом. В других предпочтительных вариантах любой из этих структур, R3 является -С (R3A) (R3A) С (=0) -Xе, где Xе является -0R3B или -N(R3C) (R3C) , где each R3A, R3B и R3C независимо является водородом, необязательно замещенным алкилом или необязательно замещенным циклоалкилом. Предпочтительно, R3 является -С (R3A) (R3A) С (=0) -N (R3C) (R3C) , где, более предпочтительно, каждый R3A является водородом, один R3C является атомом водорода и другой R3C является н-бутилом или изопропилом.
В других предпочтительных вариантах любой из структур DG, DG'
DG_i, DG_2, DG-3, DG-4, DG-5, DH, DH', DH-i и DH-2, R3 является этилом или пропилом.
В других предпочтительных вариантах любой из структур DG_i, DG_2, DG-3, DG-4, DG-5, DG-6, DH-i и DH-2, средний гетероцикл тиазол
yrV Vu. W
S^y замещен О-"/ или
В некоторых предпочтительных вариантах любой из структур DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DH, DH-i, DH-2, DH-3 и DH-4, R3 является метилом или является -СН2ОС (=0) R3A, где R3A является необязательно замещенным алкилом. В других предпочтительных вариантах любой из этих структур R3 является -С (R3A) (R3A) С (=0) -Xе, где Xе является -0R3B или -N(R3C) (R3C) , где каждый R3A, R3B и R3C независимо является водородом, необязательно замещенным алкилом или необязательно замещенным циклоалкилом. Предпочтительно R3 является С (R3A) (R3A) С (=0)-N (R3C) (R3C) , где более предпочтительно каждый R3A является водородом, один R3C является водородом и другой hydrogen R3C является н-бутилом или изопропил.
В других предпочтительных вариантах любой из структур DG_3,
DG_4, DG_5, DH-3 и DH-4, средний гетероцикл тиазол G^ замещен
или
В более предпочтительных вариантах тубулизин имеет структуру DG_3 или DG_4, где m равно 1, R3 является необязательно замещенным метилом, этилом или пропилом, предпочтительно, метилом, этилом или пропилом.
В особенно предпочтительных вариантах, тубулизин имеет структуру DG_3, где m равно 1, R3 является метилом, этилом или пропилом, -0C(0)R2B является -0-C(0)H, 0-C(0)-Ci-C6 алкилом или -ОС2-С6 алкенилом, необязательно замещенным, предпочтительно, 0С(0)СН3, -ОС (О) СН2СН3, -ОС (О) СН (СН3) 2, -ОС (О) С (СН3) з или ОС(О)СН=СН2.
В других, особенно предпочтительных вариантах тубулизин имеет структуру DG_4, где m равно 1, R3 является метилом, этилом
или пропилом и -OCH2R2B является -ОСН3, -ОСН2СН3, -ОСН2СН2СН3 или -ОСН2ОСН3.
Особенно предпочтительные тубулизины, имеющие N-концевой третичный амин в качестве места конъюгирования, имеют структуру
где R2B является -СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)2, СН2СН(СН3)2, -СН2С(СН3)3, и указанный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) .
Другие, особенно предпочтительные тубулизины, имеющие N-концевой третичный амин в качестве места конъюгирования, имеют структуру
где R2B является водородом, метилом или -ОСН3 (т.е., -OCH2R2B является метилэтильным, метоксиметильным простым эфирным заместителем).
В других предпочтительных вариантах тубулизином, включенным
в качестве D+ в КЛЛ, является природный тубулизин, включая Тубулизин А, Тубулизин В, Тубулизин С, Тубулизин D, Тубулизин Е, Тубулизин F, Тубулизин G, Тубулизин Н, Тубулизин I, Тубулизин U, Тубулизин V, Тубулизин W, Тубулизин X или Тубулизин Z, структуры которых даны в следующей структуре и определениях переменных групп, где указанный атом азота (t) является местом кватернизации, если такие соединения включены в КЛЛ в качестве единицы кватернизированого лекарственного средства (D+) :
В особенно предпочтительных вариантах структуры DG_6 кватернизированым тубулизином является Тубулизин М, где R3 является -СНз, R2 является С (=0) СН3 и R7B является водородом.
В некоторых вариантах Lb- или предшественник, содержащий Lb', содержащий LQ и D+ включает тубулизиновое лекарственное средство в единицу четвертичного амина, где Lb- или его Lb'-содержащий предшественник имеет структуру, соответствующую любой из -LR-D+, Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+, Lss-L0-D+, Ls-D+, Мг-А, M2-A, M3-A, M1^, M2-
Ai, M3-Ai M1-A(OE), M2-A(OE), M3-A(OE), M^A^OE), M2-Ai(OE) или M3-Ai(OE) частей, описанных здесь, где D+ является кватернизированым ауристатиновым лекарственным средством. В предпочтительных вариантах тубулизин, имеющий структуру DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DG-6, DH, DH-i, DH-2, DH-3 или DH-4, заменяет DE, DE_i, DE_2, DF, DF_i или DF/G_3 в каждом варианте, имеющем такую ауристатиновую структуру на указанном (t) атоме азота третичного амина.
Таким образом, некоторые предпочтительные варианты -Lb-LQ-D+ или Lb'-L0-D+ имеют структуру:
тубулизиновых лекарственных средств в свободной форме, обозначенными DG и DH, где Lb, Lb', Qlf V, Z1 и Z2 такие, как описаны выше для вариантов Lb и Ъь'-содержащих частей, включающих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, и LQ и Y единицы содержат или состоят из СУ единицы, и J является -0-, -S- или N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом.
Другие предпочтительные -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+ варианты имеют структуру:
для тубулизиновых лекарственных средств в свободной форме в структурах DG_i и DH-i, где Lb, Lb', Qlr V, Z1 и Z2 такие, как описано выше для вариантов Lb и Ъь'-содержащих частей, содержащих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, и L0 и Y единицы содержит или состоят из СУ единицы, и J является -0-, -S- или N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом.
В более предпочтительных вариантах R7A является фенилом, необязательно замещенным -ОН, или R8A является метилом. В других более предпочтительных вариантах, R4 или R4A и R4B являются метилом. В других предпочтительных вариантах J является -О-.
В других предпочтительных вариантах -Lb-L0-D+ или Lb'-L0-D+ имеет структуру:
В более предпочтительных вариантах, R7A является водородом или -ОН в пара положении.
В любой из указанных выше Lb или Ъь'-содержащих частей,
включающих единицу кватернизированого тубулизинового
лекарственного средства, Lb' является малеимидной частью (М1) или Lb является сукцинимидной (М2) частью или частью янтарная кислота-амид (М3) .
В предпочтительных вариантах любой из указанных выше Lb или
Ъь'-содержащей частей, включающих кватернизированное
тубулизиновое лекарственное средство, R8 и R9 являются водородом. В других предпочтительных вариантах V, Z1 и Z2 являются =СН-. В более предпочтительных вариантах -OR2 является сложным эфиром или R3 является низшим алкилом. В других более предпочтительных вариантах, J является -NH-. В еще более предпочтительных вариантах, Q1 содержит дипептидную ковалентную связь с J через
амидную функциональную группу, которая расщепляется
внутриклеточной или регулирующей протеазой так, чтобы протеолиз этой группы приводил к выделению СУ, способной на 1,6-фрагментацию.
В любом из указанных выше вариантов, содержащих единицу кватернизированного тубулизинового лекарственного средства, более предпочтительные варианты включают такие, где Lb' (т.е., М1) замещена Lb частью, которая также связана со нацеливающей частью с получением КЛЛ, где такой Lb частью является М2 или М3 часть.
Следовательно, более предпочтительные варианты Lb-LQ-D+ или Lb'-L0-D+ имеют одну структуру из:
где волнистая линия означает ковалентную связь М2 или М3 части с сульфгидрильной группой нацеливающей части. В предпочтительных вариантах -0R2A является Сг-Сб сложным эфиром или
R3 является низшим алкилом и R7B является водородом или -ОН. В других более предпочтительных вариантах -R2A является необязательно замещенным низшим алкилом, R3 является низшим алкилом, выбранным независимо из R2A, и R7B является водородом или -ОН. В особенно предпочтительных вариантах R3 является метилом, этилом или пропилом, и R2A является -С(О)СНз, метилом, этилом, пропилом или -СН2ОСН3.
или Lh-L0-D+
В других предпочтительных вариантах Lb'-L0-D4 имеет структуру:
R R
где R2, R2A, R3, R4, R4A, R4B, R5, R6, R7, R7A и R8A такие, как описаны для тубулизиновых лекарственных средств в свободной форме в структуре DG, DG', DG_i, DH, DH' или DH-i, Lb, Lb', A, V и Z3 такие, как описано выше для соответствующих Lb и Lb'-содержащих частей, включающих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, и их L0 и Y единицы сдержит или состоят из СУ единицы; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33), где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; и R45 является С02Н или СН2ОН. В более предпочтительных вариантах J является -NH-. В других предпочтительных вариантах Е является -О- .
Более предпочтительными являются такие варианты, в которых Lb' является малеимидной (М1) частью или Lb является сукцинимидной
(М2) частью или частью амид-кислота (М3) .
В других более предпочтительных вариантах Lb'-LQ-D+ имеет структуру:
У=\ сн3 ~ . -Ч
о он о^он
R45 ОН
или
н ° "Т" ОР2А О
,. О 1, S-J/ н
О он о^он
R45 ОН
где A, R2A, R3, R45, R7B и R45 такие, как определены выше. В более предпочтительных вариантах один или оба V, Z3 являются =СН-
В более предпочтительных вариантах Lb'-LQ-D+ или -Lb-LQ-D+ часть, содержащая единицу кватернизированного тубулизинового лекарственного средства, имеет структуру:
°уГон
R45 ОН
где волнистая линия означает ковалентную связь с сульфгидрильной группой нацеливающей части. В более предпочтительных вариантах, углеводородная часть ковалентно присоединена к СУ через гликозидную связь, имеющую аномерный атом углерода в р-конфигурации. В других более предпочтительных вариантах, R45 является -СН2ОН или -С02Н.
В любом из указанных выше вариантов Lb-, Lb'-, М1-, М2- или М3-содержащей части, состоящей из кватернизированного тубулизинового лекарственного средства, R3 предпочтительно
является метилом или R2 предпочтительно является ацетатом, или m предпочтительно равно 1. Также предпочтительными для таких Lb-, Lb'-, М1-, М2- или М3-содержащих частей являются такие, где R3
является метилом, этилом или пропилом, ОС (О) СН3, -ОСН3, -ОСН2СН3 или -ОСН2СН2СН3.
Особенно предпочтительные варианты имеют структуру:
Г^4 Н ° "Т^ ОАс О
но 034 н Д
I = н 9 Y ?Ac о
где волнистая линия означает ковалентную связь с сульфгидрильной группой нацеливающей части, и где R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом, втор-бутилом,
СН(ОН)СН3, или имеет структуру
и R
является
метилом, -(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2, (СН2) 3NH (C=NH) NH2 или -(СНг^СОгН, и R7B является водородом или -ОН.
Другие, особенно предпочтительные варианты, имеют структуру:
пропилом, или R2 является -С(0)СН3 и R3 является метилом, этилом или пропилом.
В любой из Lb-содержащих частей, включающих кватернизированное тубулизиновое лекарственное средство, особенно предпочтительными являются такие, в которых связанной нацеливающей частью является антитело, и в любой из М2- или М3-содержащих частей, включающих кватернизированное тубулизиновое лекарственное средство, особенно предпочтительными являются такие, в которых связанная сульфгидрильная группа принадлежит антителу нацеливающей части.
В любой из структур для Lb- или Ъь'-содержащей части,
включающей А, А замещен-А!-А0-, где эти субъединицы А такие, как
описаны для таких групп, которые присутствуют в соответствующих
Lb- или Ъь'-содержащих частях, включающих единицу
кватернизированного ауристатинового лекарственного средства, и L0, имеющей удлиняющую единицу. Другие такие группы описаны ниже для удлиняющих единиц в М1-А, М2-А, МЗА-А и Мзв.
Для любой из Lb-, Lb', М1, М2 или М3-содержащих частей,
включающих кватернизированное тубулизиновое лекарственное
средство, предпочтительная удлиняющая группа соответствует по
структуре аминсодержащей кислоте, как определено здесь, где
более предпочтительной является у-аминокапроновая кислота. Таким
образом, одна из предпочтительных удлиняющих единиц имеет
структуру - (СН2) 5-С (=0) - . Другие предпочтительные удлиняющие
группы имеют формулу -С (Ral) (Ra2) - [С (Rbl) (Rbl) ] m- (C=0) -NH- (CH2) m--
C(=0)-, -C(Ral) (Ra2) - [C (Rbl) (Rbl) ]m-(C=0)-NH-CH(C02H)-(CH2)m._1-C(=0)-
или -C(Ral) (Ra2) - [C (Rbl) (Rbl) ]m-(C=0)-NH-(СН2)т._!-СН (C02H)-C (=0)-,
где m является целым числом от 0 до 5 и m' равно целому числу от 1 до 5, где Ral является водородом или имеет формулу -[C(R1) (R1)]-[C(R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , и где другие переменные группы такие, как определены выше. Для таких удлиняющих единиц, предпочтительным Ral является -CH2NH2.
Более предпочтительны такие удлиняющие единицы, которые дают М1-А, М2-А, МЗА-А и Мзв части, имеющие следующие структуры:
Другими более предпочтительными удлиняющими единицами являются такие, которые дают М1-А1-А0-, М2-А!-А0, МЗА-А!-А0- и Мзв-Ai-Ao- части, имеющие структуры:
М1 А м2
1.6 Лечение гиперпролиферирующих состояний
Конъюгаты лиганд-лекарственное средство применяют для
ингибирования размножения опухолевых клеток или раковых клеток, вызывая апоптоз в опухолевых или раковых клетках, или для лечения рака у пациента. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство, следовательно, могут применяться во множестве подходов в лечении рака. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство могут применяться для доставки лекарственного средства в опухолевую клетку или раковую клетку. Не будучи связанными теорией, в одном варианте, лигандная единица конъюгата лиганд-лекарственное средство связывается с или ассоциируется с поверхностью клетки антигена или рецепторов, связанного с раковой клеткой или опухолевой клеткой, и при связывании конъюгат лиганд-лекарственное средство может быть помещен (интернализован) внутрь опухолевой клетки или раковой клетки через медиированный антигеном или рецептором эндоцитоз или другой механизм интернализации. Антиген может быть присоединен к опухолевой клетке или раковой клетке, или может быть белком внутриклеточной матрица, связанным с опухолевой клеткой или раковой клеткой. Будучи внутри клетки, через ферментный или не ферментный механизм расщепления, в зависимости от компонентов линкерной системы, лекарственное средство выделяется в клетку. В альтернативном варианте, лекарственное средство или единица лекарственного средства расщепляется от конъюгата лиганд-лекарственное средство рядом с опухолевой клеткой или раковой клеткой, и лекарственное средство или единица лекарственного средства затем проникает в клетку.
Конъюгаты лиганд-лекарственное средство обеспечивают направленную доставку лекарственного средства к специфической к конъюгированию опухоли или раку, таким образом, снижая общую токсичность лекарственного средства.
В некоторых вариантах, линкерные единицы стабилизируют конъюгаты лиганд-лекарственное средство в крови, а также способны высвобождать лекарственное средство, будучи внутри клетки.
В одном варианте, лигандная единица связывается с опухолевой клеткой или раковой клеткой.
В другом варианте, лигандная единица связывается с
антигеном опухолевой клетки или раковой клетки, который находится на поверхности опухолевой клетки или раковой клетки.
В другом варианте, лигандная единица связывается с антигеном опухолевой клетки или раковой клетки, который является белком внеклеточной матрицы, связанным с опухолевой клеткой или раковой клеткой.
Специфичность лигандной единицы к конкретной опухолевой клетке или раковой клетке может быть важной для определения тех опухолей или раков, которые наиболее эффективно поддаются лечению. Например, конъюгат лиганд-лекарственное средство, имеющий BR9 6 лигандную единицу, может применяться для лечения антиген-положительных карцином, включая карциномы легких, молочной железы, толстой кишки, яичников и поджелудочной железы. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство, имеющие анти-СБЗО или анти-СБ7 0 связывающую лигандную единицу, могут применяться для лечения гематологических злокачественных образований.
Другие конкретные типы рака, которые можно лечить конъюгатами лиганд-лекарственное средство, включают, но не ограничены ими, солидные опухоли, гемоконтактные раки, острые и хронические лейкозы и лимфомы.
Солидные опухоли включают, но не ограничены ими,
фибросаркому, миксосаркому, липосаркому, хондросаркому,
остеогенную саркому, хордому, ангиосаркому, эндотелиосаркому,
лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, синовиому,
мезотелиому, опухоль Юинга, лейомиосаркому, рабдомиосаркому, рак толстой кишки, рак прямой и ободочной кишки, рак почек, рак поджелудочной железы, рак костей, рак молочной железы, рак яичников, рак предстательной железы, рак пищевода, рак желудка, рак ротовой полости, рак носовой полости, рак горла, плоскоклеточный рак, базально-клеточный рак, аденокарциному, карциному потовых желез, карциному сальных желез, папиллярную карциному, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарциному, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, почечно-клеточную карциному, гепатому, карциному желчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, рак шейки матки, рак матки, рак яичек, мелкоклеточную карциному легких,
карциному мочевого пузыря, рак легких, эпителиальную карциному,
глиому, мультиформную глиобластому, астроцитому,
медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, геменгиобластому, невриному слухового нерва, олигодендроглиому, менингиому, рак кожи, меланому, нейробластому и ретинобластому.
Гемоконтактные раки включают, но не ограничены ими, острый лимфобластный лейкоз "ОЛЛ", острый лимфобластный В-клеточный лейкоз, острый лимфобластный ТРЕТ-клеточный лейкоз, острый миелобластный лейкоз "ОМЛ", острый промиелоцитарный лейкоз "ОПЛ", острый монобластный лейкоз, острый эритролейкоз, острый мегакариобластный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз, острый нелимфоцитарный лейкоз, острый недифференцированный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз "ХМЛ", хронический лимфоцитарный лейкоз "ХЛЛЪ", лейкоз ворсистых клеток и множественную миелому.
Острые и хронические лейкозы включают, но не ограничены ими, лимфобластные, миелогенные, лимфоцитарные и миелоцитарные лейкозы.
Лимфомы включают, но не ограничены ими, лимфогранулематоз,
не ходжкинскую лимфому, множественную миелому,
макроглобулинемию, болезнь тяжелых цепей и истинную полицитемию.
Раки, включая, но не ограничиваясь ими, опухоль, метастазы или другие заболевания, характеризуемые гиперпролиферирующими клетками, могут быть подвергнуты лечению, или их развитие может быть ингибировано введением композиции КАЛ.
В других вариантах, представлены способы лечения рака, включающие введение пациенту, нуждающемуся в таковом, эффективного количества композиции КЛЛ и химиотерапевтического агента. В одном варианте, не обнаружено, что рак, лечимый химиотерапевтическим агентом в сочетании с КЛЛ, не поддается лечению химиотерапевтическим агентом. В другом варианте, рак, лечимый химиотерапевтическим агентом в сочетании с КАЛ, не поддается лечению химиотерапевтическим агентом. Композиции КЛЛ могут вводиться пациенту, который также перенес хирургическое вмешательство в качестве лечения рака.
В некоторых вариантах, пациент также получает дополнительное лечение, такое как радиационная терапия. В конкретном варианте, конъюгат лиганд-лекарственное средство вводят одновременно с химиотерапевтическим агентом или с радиационной терапией. В другом конкретном варианте, химиотерапевтический агент или радиационную терапию вводят до или после введения конъюгата лиганд-лекарственное средство.
Химиотерапевтический агент может вводиться несколькими сессиями. Может вводиться любой из или сочетание химиотерапевтических агентов, такое как стандарт лечения химиотерапевтическими агентами.
Дополнительно, способы лечения конъюгатом лиганд-лекарственное средство представлены как альтернатива химиотерапии или радиационной терапии, где химиотерапия или радиационная терапия были признаны или могут быть признаны слишком токсичными, например, вызывают неприемлемые или непереносимые подобные эффекты у лечимого пациента. Лечимый пациент, необязательно, может быть подвергнут лечению другим противораковым лечением, таким как хирургическое вмешательство, радиационная терапия или химиотерапия, в зависимости от того, какое лечение было признано неприемлемым или непереносимым.
1.7 Фармацевтические композиции, содержащие КЛЛ
В данном изобретении представлены фармацевтические композиции, содержащие композиции КЛЛ, описанные здесь, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтические композиции могут быть в любой форме, которая позволяет вводить КЛЛ пациенту для лечения расстройства, связанного с экспрессией антигена, с которым связывается антитело КАЛ. Например, фармацевтические композиции могут быть в форме жидкости или лиофилизированного твердого вещества. Предпочтительным способом введения является парентеральное. Парентеральное введе5ние включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные и внутригрудинные инъекции или инфузии. В предпочтительных вариантах, фармацевтические композиции, содержащие КАЛ, вводят внутривенно в форме жидкого раствора.
Фармацевтические композиции могут быть составлены так,
чтобы делать соединение биодоступным при введении композиции пациенту. Такие композиции могут быть в форме одной или более дозированных единиц, где, например, лиофилизированное твердое вещество может обеспечивать однократную дозированную единицу при восстановлении в виде раствора или суспензии добавлением подходящего жидкого носителя.
Материалы, применяемые для получения фармацевтических композиций, предпочтительно являются не токсичными в применяемых количествах. Должно быть очевидно специалисту в данной области техники, что оптимальная доза активного ингредиента в фармацевтической композиции будет зависеть от множества факторов. Соответствующие факторы включают, без ограничения, тип животного {например, человек), конкретную форму фармацевтической композиции, способ введения и применяемую композицию КЛЛ.
Фармацевтические композиции могут быть, например, в форме жидкости. Жидкость может применяться для доставки инъекцией. В композиции для введения инъекцией также могут быть включены один или более из поверхностно-активного вещества, консерванта, смачивающего агента, диспергирующего агента, суспендирующего агента, стабилизатора и изотонического агента.
Жидкие композиции, являются ли они растворами, суспензиями или другими подобными формами, также могут включать один или боле из следующих: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, солевой раствор, предпочтительно, физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия, нелетучие масла, такие как синтетические моно- или диглицериды, которые полиэтиленгликоли, глицерин, циклодекстрин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как аминокислоты, ацетаты, цитраты или фосфаты; моющие средства, такие как неионные поверхностно-активные вещества, многоатомные спирты; и агенты для корректировки тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Парентеральные композиции могут быть помещены в ампулу, одноразовый шприц или многодозный флакон из
стекла, пластика или другого материала. Физиологический раствор является типовым адъювантом. Вводимые инъекцией фармацевтические композиции предпочтительно являются стерильными.
Количество конъюгата, которое является эффективным для лечения конкретного расстройства или состояния, зависит от природы расстройства или состояния, и может быть определено стандартными клиническими методами. Кроме того, in vitro или in vivo анализы могут необязательно применяться для того, чтобы помочь идентифицировать оптимальные интервалы дозы. Точная доза, применяемая для композиции, также зависит от способа введения и тяжести заболевания или расстройства, и должна определяться практикующим врачом и характеристиками каждого пациента.
Фармацевтическая композиция содержит эффективное количество композиции КЛЛ, так, чтобы получить подходящую дозу для веления пациенту, нуждающемуся в таковом. Обычно, такое количество составляет, по крайней мере, около 0,01% массовых фармацевтической композиции.
Для внутривенного введения фармацевтическая композиция может содержать от около 0,01 до около 100 мг композиции КЛЛ на килограмм массы тела животного. В одном аспекте, фармацевтическая композиция может включать от около 1 до около 100 мг композиции КАЛ на кг массы тела животного. В другом аспекте, вводимое количество составляет от около 0,1 to около 25 мг/кг массы тела композиции КАЛ.
В общем,
доза композиции КЛЛ
, вводимая пациенту, обычно
составляет
около 0,01 мг/кг до
около
100 мг/кг
массы тела
пациента.
некоторых вариантах,
доза,
вводимая
пациенту,
составляет
около 0,01 мг/кг до
около
15 мг/кг
массы тела
пациента.
некоторых вариантах,
доза,
вводимая
пациенту,
составляет
около 0,1 мг/кг до
около
15 мг/кг
массы тела
пациента.
некоторых вариантах,
доза,
вводимая
пациенту,
составляет
около 0,1 мг/кг до
около
2 0 мг/кг
массы тела
пациента.
В некоторых вариантах,
вводимая доза составляет от
около 0,1 мг/кг до около 5 мг/кг или от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг массы тела пациента. В некоторых вариантах, вводимая доза составляет от около 1 мг/кг до около 15 мг/кг массы тела
пациента. В некоторых вариантах, вводимая доза составляет от около 1 мг/кг до около 10 мг/кг массы тела пациента. В некоторых вариантах, вводимая доза составляет от около 0,1 до 4 мг/кг, предпочтительно, от 0,1 до 3,2 мг/кг, или более предпочтительно, от 0,1 to 2,7 мг/кг массы тела пациента за цикл лечения.
КЛЛ может вводиться любым удобным способом, например, вливанием или болюсной инъекцией, через абсорбцию эпителиальные или кожно-слизистые выстилки {например, слизистую оболочку ротовой полости, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника). Введение может быть системным или местным. Известны различные системы доставки, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, капсулы, и они могут применяться для введения соединения. В определенных вариантах, пациенту вводят более одного соединения или композиции.
В одном варианте, конъюгаты составлены в соответствии с обычными методами в виде фармацевтических композиций, адаптированных для внутривенного введения животным, особенно человеку. Обычно, носителями или наполнителями для внутривенного введения являются стерильные изотонические водные буферные растворы. Если необходимо, композиции также могут включать солюбилизирующий агент. Композиции для внутривенного введения необязательно могут содержать местный анестетик, такой как лигнокаин, для облегчения боли в месте инъекции. В общем, ингредиенты предоставляют по-отдельности или смешанными в стандартной лекарственной форме, например, в виде сухого лиофилизированного порошка или не содержащего воды концентрата в герметически запечатанном контейнере, таком как ампула или саше, на котором указано количество активного агента. Если конъюгат вводят вливанием, он может быть помещен, например, в инфузионный флакон, содержащий стерильную фармацевтическую воду или солевой раствор. Если конъюгат вводят инъекцией, предоставляют ампулу со стерильной водой или солевым раствором так, чтобы смешивать ингредиенты перед введением.
Фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением содержат композиции КЛЛ в соответствии с данным изобретением и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых
предпочтительных вариантах, все, или практически все, или более 50% КЛЛ в фармацевтической композиции содержат гидролизованный тиозамещенный сукцинимид. В некоторых предпочтительных вариантах, более 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% конъюгатов лиганд-лекарственное средство присутствующих в фармацевтической композиции, содержат гидролизованный тиозамещенный сукцинимид.
1.8 Получение
Схема 1:
Схема 1 представляет типовое получение соединения лекарственное средство-линкер формулы Lb'-Ai (ОЕ)-AQ-Y (W)-D+, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является углеводородной (Su) частью, связанной с СУ через гликозидную связь, где указанная связь расщепляется гликозидаой, и D+ является кватернизированным ауристатином. В этой конкретной Lb'-L0-D+ части Lb'-A! (ОЕ)-структура является типовой Lss частью.
Схема 2:
Схема 2 представляет типовое получение соединения лекарственное средство-линкер формулы Lb'-Ai (ОЕ) -AQ-Y-W-D+, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является дипептидной частью, связанной с СУ через анилидную связь, где указанная связь расщепляется регулирующей протеазой, и D+ является кватернизированным ауристатином. В этой конкретной Lb'-LQ-D+ части, Lb'-Ai(OE)- структура представляет типовую Lss часть, ковалентно связанную с другой удлиняющей субъединицей и val-cit дипептидная часть дана для распознавания указанной регулирующей протеазой, которой, в данном случае, является Катепсин В.
Схема 3:
Схема 3 представляет типовое получение Lb'-Ai (ОЕ) -AQ-Y (W) -D+ соединения лекарственное средство-линкер, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является углеводородной (Su) частью, связанной с СУ через гликозидную связь, где указанная связь расщепляется гликозидазой, и D+ является кватернизированным феназиновым димером. В этом конкретном соединении Lb'-L0-D+, Lb'-A!-A0-структура является М1-А- частью, имеющей две удлиняющие субъединицы (т.е., -А- является -A^AQ-) .
Схема 4:
Схема 4 представляет типовое получение соединения NH2-W-Y-D+ в качестве промежуточного соединения для получения соединения лекарственное средство-линкер формулы Lb'-LQ-D+, где Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является дипептидной частью, связанной с СУ через анилидную связь, где указанная связь расщепляется регулирующей протеазой и D+ является единицей кватернизированого тубулизинового лекарственного средства.
Схема 5:
Схема 5 представляет типовое получение Lb'-A-W-Y-D+ соединения лекарственное средство-линкер и Lb'-A (ОЕ)-W-Y-D+ соединения лекарственное средство-линкер, полученного пептидным сочетанием NH2-W-Y-D+ промежуточного соединения со Схемы 4 с Lb'-А-С02Н или Lb'-A (ОЕ)-С02Н промежуточного соединения, где Lb' является малеимидной (М1) частью. Полученные продукты, M1-A-W-Y-
D+ и M1-A (ОЕ)-W-Y-D+, являются типовыми Lb'-LQ-D+ соединениями
лекарственное средство-линкер, имеющими единицу
кватернизированного тубулизинового лекарственного средства. Схема 6:
Схема б представляет типовое получением Lb'-Ai (ОЕ) -AQ-Y (W) -D+ части, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является углеводородной (Su) частью, связанной с СУ через гликозидную связь, где указанная часть расщепляется гликозидазой, и D+ является кватернизированным МЛР ингибитором, где ингибитором является Тариквидар. В данной конкретной Lb'-L0-D+ части, Lb'-A(OE)- структура является типовой Lss частью.
Схема 7:
Вос_
Схема 7 представляет типовые получения тубулизинов формулы
DG_4, где R7B является водородом и R2B является водородом, метилом
или этилом, которые содержат простой эфир (т.е. метиловый,
этиловый или пропиловый эфир) в качестве О-связанного
заместителя, заменяющего ацетат в тубувалиновой части Тубулизина
М, и которые не содержат химически нестабильные N,О-ацетальные
функциональные группы таких тубулизинов. Соединения 64-66 далее
стабилизированы, по сравнению с Тубулизином М, замещением
гидролитически нестабильного тубувалинового ацетатного
заместителя простой эфирной частью.
О , где R7B является водородом или О-связанным заместителем, предпочтительно, водородом или -ОН в пара положении, и R8A является водородом или низшим алкилом,
предпочтительно метилом; и где волнистая линия означает точку присоединения к остатку DG или DH.
В предпочтительных вариантах структуры DG или DH, один R7 является водородом, и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом, имеющим структуру
О , где R7B является -Н или -ОН; и где волнистая
линия означает точку присоединения к остатку DG или DH.
В других вариантах структуры DG и DH, один R7 является водородом или низшим алкилом, предпочтительно, водородом или метил, более предпочтительно, водородом, и другой R7 является необязательно замещенным арилалкилом, имеющим структуру:
и ^ , где Z является
необязательно замещенным алкиленом или необязательно замещенным алкениленом, R7B является водородом или О-связанным заместителем, предпочтительно, водородом или -ОН в пара положении, R8A является водородом или низшим алкилом, предпочтительно метилом, и индекс п равен 0, 1 или 2, предпочтительно 0 или 1; и где волнистая линия означает точку присоединения к остатку DG или DH. В других вариантах структуры DG и DH, -N(R7) (R7) является -NH(Ci~C6 алкилом), где Ci-C6 алкил необязательно замещен -С02Н или его сложным эфиром, или необязательно замещенным фенилом. В предпочтительных вариантах -N(R7) (R7) выбирают из группы, включающей-NH (СН3) , -CH2CH2Ph и -СН2-С02Н, -СН2СН2С02Н и СН2СН2СН2С02Н.
В некоторых вариантах структуры DG' и DH', R7 и R10, вместе с атомами, к которым они присоединены, определяют необязательно
замещенный 5 или б-членный гетероцикл, где -N (R7)-СН (R10) (CH2R11;
имеет структуру: ""^ , где волнистая линия означает точку
присоединения к остатку DG' или DH'. Схема 8:
Схема 8 представляет типовое получение соединений лекарственное средство-линкер формулы Lb'-L0-D+, где D+ является соединением кватернизированного тубулизина, которое имеет простую эфирную часть в качестве О-связанного заместителя, замещающего ацетат в тубувалиновой части тубулизина М, и которое не имеет химически нестабильную N,О-ацетальную функциональную группу таких тубулизинов. В представленных соединениях,- L0-D+ имеет структуру Aa-Yy (Ww) -D+, где каждый из индексов а, у и w равен единице. Поэтому соединения 78-80 представляют типовые соединения лекарственное средство-линкер, где W является углеводородной частью, присоединенной к самоуничтожающейся спейсерной единице (Y), имеющей структуру БПА части, через
гликозидную связь, расщепляемую гликозидазой, к которой присоединена D+, где D+ является соединением кватернизированного тубулизина. Соединения 78-80 также представляют соединения лекарственное средство-линкер, в которых Lb' компоненты содержат М1 часть и основную единицу так, чтобы получить самостабилизирующийся линкерный component (Lss) конъюгата лиганд-лекарственное средство при его конденсации со нацеливающей частью, имеющей реакционноспособную тиольную функциональную группу в качестве цистеин тиола антитела. Схема 9:
Схемы 9 и 10 вместе представляют альтернативное получением соединений лекарственное средство-линкер формулы Lb'-L0-D+, где -L0-D+ имеет структуру Aa-Yy (Ww) -D+, где каждый индекс а, у и w равен единице, где -А- является -A^AQ-. Поэтому соединение 104 представляет типовое соединение лекарственное средство-линкер формулы Lb-Ai (ОЕ)-A0-Y (W)-D+, где W является углеводородной частью, присоединенной к самоуничтожающейся спейсерной единице (Y), имеющей структуру БПА части, через гликозидную связь, расщепляемую гликозидазой, в которой присоединена D+, где D+ является соединением кватернизированого тубулизина. Для соединения 104 кватернизированным тубулизином является Тубулизин М, имеющий простую эфирную часть, которая удерживает тубувалиновый ацетатный компонент, но не имеет химически нестабильную N,О-ацетальную функциональную группу таких
Схема 11 представляет типовой синтез промежуточного соединения W"w-Yy-D+ для получения соединения лекарственное средство-линкер Lb'-L0-D+ формулы DG_3, где R7B является -Н и R2B является метилом, и где индексы w и у каждый равен 1, и где W" является предшественником W в соединении лекарственное средство-линкер или конъюгате лиганд-лекарственное средство, полученном из промежуточного соединения лекарственное средство-линкер compound. Соединение 111 также представляет промежуточное соединение лекарственное средство-линкер, где W является
дипептидной частью и Y является самоуничтожающейся спейсерной единицей, представленной БПА частью. В соединении 111 этот дипептид представлен -валином-глутаматом- и D+ представлена кватернизированным Тубулизином М. Схема 12:
Схема 12 представляет получение соединения лекарственное средство-линкер Lb'-L0-D+ формулы DG_3, где R7B является -Н и R2B является метилом, из промежуточного соединения формулы H-Ww-Yy-D+, а именно, соединения 111, где каждый индекс w и у равен 1, и W, Y и D+ представлены дипептидной частью (-валин-глутамат-), самоуничтожающейся БПА частью и кватернизированным Тубулизином М, соответственно. Соединение 113 также представляет продукт, имеющий формулу Lb'-A (ОЕ)-W-Y-D' введения предшественника лигандной ковалентно связывающей части (Lb') в соединение
лекарственное средство-линкер, где Lb'-A(OE)- состоит из малеимидной части (М1) , удлиняющей единицы (А) , замещенной
основной единицей (ОЕ) конденсацией соединения 6, имеющего части Ml, и ОЕ-замещенного предшественника удлиняющей единицы (Аа') , где индекс а равен 1, где этот предшественник при конденсации с W"-Yy-D+ соединения 111 закончит образование L0 компонента линкерной единицы Lb'-L0- после снятия защиты ВОС. Схема 13:
122
123
Способ 1
135, R=CH2CH3
136, R=CH2CH2CH3
137, R=CH(CH3)2
138, R=CH2CH(CH3)2
139, R=CH2C(CH3)3
Fmoc-lle.rATy, ДИПЭА, ДМФ
ч° | 145, R=CH2CH3
146, R=CH2CH2CH3
147, R=CH(CH3)2
148, R=CH2CH(CH3)2
149, R=CH2C(CH3)3
140, R=CH2CH3
141, R=CH2CH2CH3
142, R=CH(CH3)2
143, R=CH2CH(CH3)2
144, R=CH2C(CH3)3
140,
140,
ГАТУ,
ДИПЭА,
ДМФ
50, R=CH2CH3
151, R=CH2CH2CH3
152, R=CH(CH3)2
153, R=CH2CH(CH3)2
154, R=CH2C(CH3)3
о Y сЧэ о
155, R=CH2CH3
156, R=CH2CH2CH3
157, R=CH(CH3)2
158, R=CH2CH(CH3)2
159, R=CH2C(CH3)3
155,
Схемы 13 и 14 вместе представляют типовые синтезы тубулизинов, в которых ацетатная часть тубувалинового компонента Тубулизина М замещена другими 0-связанными частями, имеющими формулу -0C(0)R2B, как показано в структуре DG-3 •
Схема 15:
Вое 0
167
Схема 15 показывает типовой синтез соединения лекарственное средство-линкер для получения конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих не-кватернизированные тубулизиновые единицы лекарственного средства, где ацетатный О-связанный заместитель тубувалинового компонента дез-метила Тубулизина М замещен простой эфирной частью в качестве присоединенного О-связанного заместителя, и где Tub(OCH3) единица лекарственного средства присоединена через N-концевой компонент к линкерной единице карбонильной функциональной группой удлиняющей единицы. КЛЛ из соединения 172 представляет не расщепляемый конъюгат (т.е., устойчивый к медиированному протеазой выделению свободного дез-метила Тубулизина М (ОСН3) -ОН) , и имеет общую формулу M1-A-D, где М1 является малеимидной частью, удлиняющей единицей А является алкилен и единицей не-кватернизированного лекарственного средства D является дез-MeTub(ОСН3)-ОН. Конъюгат лиганд-лекарственное средство из такого соединения лекарственное средство-линкер имеет общую формулу L-S-M2-A-D, где М2 является сукцинимидной частью, получаемой конъюгированием тиола нацеливающей части с М1 соединения лекарственное средство-линкер. Активная часть, которая, в конце концов, выделяется при не специфическом протеолизе, если лигандная единица КЛЛ является нацеливающей частью антитела (т.е., является КАЛ), имеет структуру Cys-S-M2-A-Tub(ОСН3)-ОН, где Cys-S- часть получают из цистеиновой аминокислоты антитела лигандной единицы.
Соединения лекарственное средство-линкер, заменяющие Тубулизин М другим содержащим третичный амин тубулизином, сохраняют ацетатную часть в тубувалиновом компоненте или в них эта часть замещена простым эфиром или другим ацилокси или 0-связанным заместителем (например, О-связанным карбаматом) формулы DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DG_6, DG_7, DG_8, DH, DH-i или DH-2, получают аналогично Схеме 4, Схеме 7, Схеме 8, Схемам 9+10, Схеме 11, Схеме 12 или Схемам 13+14.
Схема 16:
Схема 16 показывает типовой синтез соединения лекарственное средство-линкер для получения конъюгата лиганд-лекарственное средствоз, имеющего формулу Lb'-A! (ОЕ)-A0-Y (W)-D+, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является углеводородной (Su) частью, связанной с СУ через гликозидную связь, где указанная связь расщепляется гликозидазой, и D+ является кватернизированным Доластатином 10. В этом варианте лекарственное средство-линкер формулы Lb'-LQ-D+, Lb'-Ai (ОЕ)- структура представляет типовую Lss часть. Compound 177 является аналогичным соединению 8 со схемы 1, в котором
кватернизированный ауристатин Е замещен кватернизированным Доластатином 10. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство, полученные из соединения 177, выделяют свободный доластатин 10, который является другим членом ауристатинового класса соединений, и который содержит третичную аминовую функциональную группу, вод воздействием р-глюкуронидазы. Схема 17:
Схема 17 показывает типовой синтез соединения лекарственное средство-линкер для получения конъюгата лиганд-лекарственное средствоз, в котором монометиловый доластатин 10 конъюгирован через карбаматную функциональную группу с БПА частью. Связанный карбаматом конъюгат лиганд-лекарственное средство не подходит для содержащего третичный амин лекарственного средства, в котором такая аминовая функциональная группа является точкой присоединения к БПА части. Конъюгаты из соединения 183 выделяют содержащее вторичный амин свободное лекарственное средство (т.е., монометиловый доластатин 10) и конъюгаты из соединения 177 выделяют исходное содержащее третичный амин свободное лекарственное средство (т.е., доластатин 10) через ту же
Схема 18 показывает типовой синтез соединения лекарственное средство-линкер для получения конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих формулу Lb'-A! (ОЕ)-A0-Y (W)-D+, где Lb' является М1 частью, Y является БПА самоуничтожающейся (СУ) частью, W является углеводородной (Su) частью, связанной с СУ через гликозидную связь, где указанная связь расщепляется гликозидазой, и D+ является кватернизированным Ауристатином F. В этом варианте лекарственное средство-линкер формулы Lb'-L0-D+, Lb'-Ai (ОЕ)- структура представляет типовую Lss часть. Соединение 189 аналогично соединению 8, соединению 14 и соединению 17 со схем 1, 4 и 17, соответственно, в котором кватернизированный ауристатин Е или кватернизированный доластатин 10 замещены кватернизированным MMAF. MMAF является еще одним лекарственным средством, содержащим третичный амин, ауристатинового класса соединений.
Соединения лекарственное средство-линкер, замещающие
Ауристатин Е, Доластатин 10 или Ауристатин F соединениями формулы DA, DB, Dc, DE, DE_i, DE_2, DF, DF_i или DE/F_3, получают no методике, представленной на Схеме 1, Схеме 2, Схеме 5, Схема 16 или Схеме 18 соответствующим образом. Схема 19.
Схема 19 показывает типовой синтез соединения лекарственное средство-линкер для получения конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих не единицу кватернизированого тубулизинового лекарственного средства, где единица лекарственного средства Тубулизин М присоединена через С-концевой компонент к линкерной единице гидразиновой функциональной группой удлиняющей единицы. КЛЛ из соединения 172 представляет расщепляемый конъюгат, содержащий часть-W-Y-, где W является дипептидом -валин-цитруллин-, и имеет общую формулу M1-A-W-Y-D или M1-A-W2-Wi-EriAC-D, где М1 является малеимидной частью, удлиняющая единица А является алкиленом, W является пептидной расщепляемой единицей формулы -W2-Wi~, где Wi является цитруллином и W2 является валином, БПАС является п-аминобензилоксикарбонильной частью в качестве самоуничтожающейся спейсерной единицы Y, удлиняющей единицей А является алкилен и единицей не кватернизированного лекарственного средства D является TubM-NHNH-. Конъюгат лиганд-лекарственное средство из соединения лекарственное средство
линкер имеет общую формулу L-S-M2-A-W-Y-D или L-S-M2-A-W2-Wi-BriAC-D, где М2 является сукцинимидной частью, получаемой конъюгированием тиола нацеливающей части с М1 соединения лекарственное средство-линкер. Активной частью лекарственного средства, которая выделяется в результате определенного в контексте протеолиза на W, имеет структуру TubM-NH.-NH.2-. II. Пронумерованные варианты
1. Композиция конъюгат лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), где композиция КЛЛ представлена структурой формулы 1:
R' (формула 1)
где "лиганд" лиганд принадлежит нацеливающей части, которая селективно связывается с являющейся мишенью частью; Lb является лигандной ковалентно связывающей частью; Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей, необязательно содержащей две, три или четыре субъединицы, так, что индекс а равен 1, если А присутствует, и равен 0, если А отсутствует; Q2 является W'W'-E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами; где Ww из Q1 способен к селективному расщеплению внутриклеточной или регулирующей протеазой в аномальных или других нежелательных клетках, по сравнению с сывороточными протеазами, где регулирующая протеаза может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, и где действие регулирующей протеазы на W вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) , из КЛЛ, или Ww из Q1 способен к расщеплению протеазой, которая выделяется аномальными клетками в большей степени, чем нормальными клетками, или является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН, присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки,
и W'-E из Q2 является гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно в аномальных или других нежелательных клетках, по сравнению с гликозидазами сыворотки, где гликозидаза может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению гликозидазой, выделяемой в больших количествах являющимся мишенью аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, где индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен
0, или присутствует, если w равен 1, и w' равен 0 или 1, где W-
Е отсутствует, если w' равен 0, или присутствует, если w' равен
1, и где w+w' равна 1 (т.е., один и только один из W, W
присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24
является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом,
необязательно замещенным, или галогеном, -N02, -CN или другой
группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или
-C(R8) (R9)-D+, где по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3
является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V,
Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1, при условии, что
если w равен 1, Q2 отсутствует, и один и только один R24 является
-C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2,
Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -
C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях
друг к другу, при условии, что если w' равен 1, один и только
один R24 является -C(R8) (R9) -D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с
одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является
=C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2
связан с другим из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа
является =C(R24)-, и Q2 and -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в
орто или пара положениях друг к другу; R8 и R9 независимо
являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом,
необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом,
необязательно замещенным; Е и J независимо являются -О-, -S- или
-N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным
алкилом; R' является водородом или является галогеном, -NO2, -CN
или другой группой, выделяющей электрон, или является
электронодонорной группой; D+ представляет структуру
кватернизированого лекарственного средства, содержащего третичный амин D; и р является средним содержанием лекарственного вещества, имеющим интервал значений от 1 до 24; где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление вызывает отделение D от КЛЛ в композиции КЛЛ.
В некоторых вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+ является доластатин, такой как доластатин 10 или доластатин 15.
В некоторых вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+, является доластатин, имеющий структуру DA, DB или Dc.
В других вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+, является содержащий третичный амин ауристатин, включая ауристатин, имеющий одну структуру из DE, DE_ ir DE_2, DF, DF_! и DF/G_3.
В предпочтительных вариантах, содержащим третичный амин ауристатином, введенным в единицу кватернизированого лекарственного средства является ауристатин Е, ауристатин F, ауристатин РЕ, ауристатин РНЕ, ауристатин PYE и ауристатин С, GRP18112, GRP18290, GRP18158, ауристатин М, ауристатин MQ, и ауристатин РАС. Предпочтительными являются ауристатин Е, ауристатин F, ауристатин РЕ, ауристатин РНЕ и ауристатин PYE, более предпочтительны ауристатин Е и ауристатин F, и особенно предпочтителен ауристатин Е.
В других вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+, является тубулизин. В этих вариантах предпочтительны природные тубулизины или тубулизины, имеющие структуру DG_6. Другие предпочтительные тубулизины, введенные в единицу кватернизированного лекарственного средства, имеют одну структуру из DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DG_6, DH, DH-i и DH-2, более предпочтительно, имеют структуру DG_3, DG_4, DG_5.
В других вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+, является содержащий третичный амин феназиновый димер, предпочтительно имеющий структуру Dx.
В других вариантах, лекарственным средством, содержащим третичный амин D из D+, является МЛР ингибитор, предпочтительно, имеющих изохинолиновую подструктуру, атом азота которой является местом кватернизации.
В предпочтительных вариантах D из D+ является тубулизин М или ауристатин Е. В других предпочтительных вариантах Q1 присутствует и является место расщепления для регулирующей протеазы. В других предпочтительных вариантах Q2 присутствует и является метом расщепления для гликозидазы, такой как глюкуронидаза.
В более предпочтительных вариантах, нацеливающей частью является антитело и являющейся мишенью частью является антиген, который селективно распознается антителом нацеливающей части, где антигеном является доступный антиген поверхности клетки, преимущественно выделяемый аномальными, по сравнению с нормальными клетками.
В других предпочтительных вариантах, нацеливающей частью является лиганд для доступного рецептора поверхности клетки, и являющейся мишенью частью является рецептор, который селективно связывается со специфическим лигандом, где рецептор преимущественно выделяется аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками.
В особенно предпочтительных вариантах, являющейся мишенью частью является доступный антиген или рецептор поверхности клетки, где антиген или рецептор интернализует после связывания с КАЛ, где рецептор преимущественно выделяется аномальными клетками, по сравнению с нормальными клетками.
В особенно предпочтительных вариантах, являющейся мишенью частью является доступный транспортер поверхности клетки, который находится в большем избытке или более активен в аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками, и нацеливающей частью является субстрат к такому рецептору, где при связывании с транспортером КЛЛ, содержащего такую
специфическую часть, увеличивается преимущественное
проникновение в аномальные клетки, по сравнению с нормальными клетками.
[формула 2А)
2. Композиция КЛЛ по варианту 1, где формула 1 имеет структуру формулы 2А или формулы 2В:
(Формула 2В)
В некоторых вариантах Lb формулы 2А является М2 или М3 частью, тогда КЛЛ композиция по варианту 1 представлена структурой формулы 2А-1:
R' (Формула 2А-1) .
В других вариантах Lb в формуле 2В является М2 или М3 часть,
тогда КЛЛ композиция по варианту 1 представлена структурой
формулы 2В-1:
Ra г (Формула 2В-1) .
В любом из этих двух вариантов М является М2 или М3 часть (т.е., Ъь-Q1- формулы 2А-1 или формулы 2В-1 имеет формулу M2-A-W или M3-A-W) .
В других вариантах Lb в формуле 2А-1 или 2В-1 является М2 часть и Q1 является A-W или -A!-A0-W-, где Аг и А0 являются субъединицами А. Для этих вариантов, КЛЛ композиция по варианту 1 представлена структурой формулы 2А-2 или формулы 2В-2:
r8 1 (Формула 2В-2) ,
где Lss является самостабилизирующей лигандной единицей и А0 является необязательной удлиняющей субъединицей, где Lss является M2-Ai, если А0 присутствует, или является М2-А, если А0 отсутствует (т.е., Lb-Q1- формулы 2А или формулы 2В имеет формулу Lss~W, если Lss является М2-А, или формулу Lss-A0-W, если L
является M2-Ai
В других вариантах, Lb в формуле 2А-1 или 2В-1 является М3 частью и Q1 является A-W или -A!-A0-W-, где Аг и А0 являются субъединицами А. Для таких вариантов КЛЛ композиция по варианту 1 представлена структурой формулы 2А-1 или формулы 2В-1, где М
является М3 частью, или формулы 2А-2 и формулы 2В-2, если Lss замещена Ls частью.
В некоторых вариантах, имеющих одну из представленных выше структур, по крайней мере, один из V, Z1, Z2, Z3 является =C(R24)-В предпочтительных вариантах этот R24 является водородом или электронодонорной группой. В более предпочтительных вариантах, два или более из V, Z1, Z2, Z3 являются =C(R24)-, где R24 переменные группы в каждом случае являются водородом, или один является электронодонорной группой и другой является водородом.
В предпочтительных вариантах, если любая из указанных выше структур имеют V, Z1, Z2, Z3 =C(R24)-, где R24 является электронодонорной группой, тогда R24 предпочтительно находится в положении орто или пара к ароматическому углероду, имеющему -C(R8) (R9)-D+ заместитель. В предпочтительных вариантах, если R' является электронодонорной группой, тогда R' предпочтительно находится в положении орто или пара к ароматическому углероду, имеющему -C(R8) (R9)-D+ заместитель.
В других предпочтительных вариантах для любой из представленных выше структур R8 и R9 является водородом.
Другие предпочтительные варианты имеют структуру формулы 2А-1 или формулы 2-А-2. Среди этих вариантов более предпочтительными являются такие, где V и Z1 являются =СН- и Z2 является =C(R24)-, где R24 является водородом или электронодонорной группой. В других предпочтительных вариантах формулы 2А-1 или формулы 2А-2, V, Z1 и Z2 являются =СН-. В более предпочтительных вариантах формулы 2А-1 или формулы 2А-2, R8 и R9 являются водородом и V, Z2 и Z3 являются =СН-.
В других более предпочтительных вариантах, имеющих одну из представленных выше формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, структурами нацеливающей части (т.е., лиганда) является антитело и р равно 2-8. В других более предпочтительных вариантах, имеющих одну из представленных выше структур, J является -NH-, связанным с дипептидом, содержащим W в Q1, образуя анилидную функциональную группу, расщепляемую регулирующей протеазой. В еще более предпочтительных вариантах КЛЛ композиции представлены
формулой 2А. В особенно предпочтительных вариантах, нацеливающей частью является антитело, и Lb является сукцинимидная часть (М2) или часть янтарная кислота-амид (М3) . В других, особенно предпочтительных вариантах, Q1 является -Ai-AQ-W-, где Ai и А0 являются удлиняющими А субъединицами, и Lb-Ai является самостабилизирующейся (Lss) линкерной частью. В других, особенно предпочтительных вариантах, -Q1- является -Ai-AQ-Ww-, где индекс w равен 1, и где Ai и А0 являются удлиняющими А субъединицами и Lb-Ai является стабилизированной (Ls) линкерной частью.
Более предпочтительными вариантами являются любые из представленных выше структур формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, где D+ является кватернизированный содержащий третичный амин ауристатин, такой как Ауристатин Е или имеющий структуру кватернизированный DE, DE_!, DE_2, DF, DF_! или DF/E_3.
Другими более предпочтительными вариантами являются любые из представленных выше структур формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, где D+ является кватернизированный содержащий третичный амин тубулизин, такой как тубулизин М или имеющий структуру кватернизированный DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DG_6, DG_7, DG_8, DH, DH_! или DH_2.
Другими более предпочтительными вариантами являются любые из представленных выше структур формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, где D+ является кватернизированный феназиновый димер, имеющий структуру Dz.
Еще более предпочтительными вариантами являются любые из представленных выше структур формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, где D+ является кватернизированный МЛР ингибитор на основе изохинолина (т.е., МЛР ингибитор, имеющий изохинолиновую подструктуру, где атом азота этой подструктуры кватернизирован) , такой как Элакридар или Тариквидар.
В некоторых вариантах формулы 2А-1 или формулы 2В-1 удлиняющая единица отсутствует (т.е., индекс а равен 0). В других вариантах, удлиняющая единица в формуле 2А-1 или формуле 2В-1 присутствует (т.е., индекс а равен 1) . В некоторых вариантах, удлиняющая единица в формуле 2А-1 или формуле 2В-1 присутствует в виде одинарной единицы. В некоторых из этих
вариантов, А является разветвляющей единицей (В), имеющей в качестве заместителя солюбилизирующий агент (СА) . В других вариантах, удлиняющая единица, если присутствует, состоит из 2, 3 или 4 субъединиц, предпочтительно 2 или 3, и более предпочтительно, 2 субъединиц. В некоторых из этих вариантов, одна из субъединиц А является разветвляющей единицей (В), имеющей с качестве заместителя солюбилизирующий агент (СА) (т.е., Ai, А2, А3 или А4, которые являются субъединицами А, являются -В(СА)-). В других таких вариантах, разветвляющая единица отсутствует в А в формуле 2А-1 или формуле 2А-В, если индекс а равен 1.
В некоторых вариантах формулы 2А-1 или формулы 2В-1, если индекс а равен 1 (т.е., удлиняющая единица присутствует), -А-является -AX-AQ-, в которой АГ и А0 являются субъединицами А. В некоторых из этих вариантов, А± субъединицей А является -В(СА)-. В других из этих вариантов, А0 субъединицей А является -В(СА)-. В других из этих вариантов, ни АГ ни А0 не являются -В(СА)- (т.е., разветвляющая единица отсутствует) или солюбилизирующий агент не присутствует в А.
В некоторых вариантах формулы 2А-2 или формулы 2В-2, -А0-является -А-, если А является единственной единицей и присутствует необязательно, или если А включает или состоит из 1, 2, 3 или 4 субъединиц, -А0- является субъединицей А. В некоторых из этих вариантов, -А0- является -В(СА)-, если А0 присутствует. В других вариантах формулы 2А-2 или формулы 2В-2, солюбилизирующий агент в -А0- отсутствует.
3. Композиция КЛЛ по варианту 1, где формула 1 имеет структуру формулы ЗА или формулы ЗВ:
Р (формула ЗА)
R' " (формула ЗВ) .
4. Композиция КЛЛ по варианту 1, где структура формулы 1 имеет структуру формулы ЗС или формулы 3D:
[формула ЗС)
Лиганд -|_|_ь да j , Z6
R' ' (формула 3D) . 5. Композиция КЛЛ по варианту 1, где структура формулы 1 имеет структуру формулы ЗЕ или формулы 3F:
Р (формула ЗЕ)
(формула 3F).
В любой из формул 3A-3F, R8 и R9 предпочтительно являются водородом. В других предпочтительных вариантах структуры формулы 3A-3F, V, Z1, Z2 или Z3 переменные группы являются =C(R24)-. В предпочтительных вариантах этот R24 является водородом или электронодонорной группой, где если этот R24 является электронодонорной группой, он предпочтительно находится в положении орто или пара к ароматическому углероду, имеющему -C(R8) (R9)-D+ заместитель. В других предпочтительных вариантах, если R' является электронодонорной группой, этот R' предпочтительно находится в положении орто или пара к ароматическому углероду, имеющему -C(R8) (R9)-D+ заместитель. В других предпочтительных вариантах, V, Z1, Z2 или Z3 переменной группой является =C(R24)-, где R24 является группой, выделяющей электрон, находящейся в положении орто к ароматическому углероду, имеющему Q2 заместитель. В предпочтительных вариантах, имеющих структуру формулы 2В или 2F, R' предпочтительно является водородом или группой, выделяющей электрон, такой как -N02 или -С1.
В других предпочтительных структурах формулы 3A-3F, J является -NH-, и Е в Q2 является -О-. В более предпочтительном варианте, W является углеводородом, где E-W связь Q2 расщепляется гликозидазой.
В предпочтительных вариантах, композиция КЛЛ по варианту 1 представлена формулой 3F, где R' является водородом или группой, выделяющей электрон, и один или оба V, Z3 являются =C(R24)-, где R24 является водородом.
В некоторых вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, 3D, ЗЕ или 3F удлиняющая единица отсутствует (т.е., индекс а равен 0). В
других вариантах, удлиняющая единица в формуле ЗА или формуле ЗВ присутствует (т.е., индекс а равен 1) . В некоторых вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, 3D, ЗЕ или 3F удлиняющая единица присутствует в виде единственной единицы. В некоторых из этих вариантов, А является разветвляющей единицей, имеющей солюбилизирующий агент. В других вариантах, удлиняющая единица, если присутствует, состоит из 2, 3 или 4 субъединиц, предпочтительно 2 или 3, и более предпочтительно, 2. В некоторых из этих вариантов, одной из субъединиц А является разветвляющая единица (В) , имеющая солюбилизирующий агент (СА) в качестве заместителя (т.е., Ai, А2, А3 или А4, которые являются субъединицами А, является -В(СА)-). В других из этих вариантов, разветвляющая единица отсутствует в А, если индекс а равен 1 в формуле ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, 3D, ЗЕ или 3F.
В некоторых вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, 3D, ЗЕ или 3F, если индекс а равен 1 (т.е., удлиняющая единица присутствует) , -А- является -A^AQ-, где АГ и А0 являются субъединицами А. В некоторых из этих вариантов АГ из А является -В(СА)-. В других из этих вариантов, А0 из А является -В(СА)-. В других таких вариантах, ни АГ ни А0 не являются -В(СА)- (т.е., разветвляющая единица отсутствует), или солюбилизирующий агент отсутствует в А.
В других предпочтительных вариантах, для любого из вариантов 1-5, -А-, если присутствует (т.е., если а равен 1), замещен-А!-А0-, где АГ и А0 являются субъединицами, где А0 является необязательной субъединицей (т.е., АГ становится А, если А0 отсутствует, или А является Ai-AQ, если А0 присутствует) . В некоторых из этих вариантов -А0- является -В(СА)-, если А0 присутствует. В других из этих вариантов, -Ai- является -В(СА)-. В других вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, 3D, ЗЕ или 3F, солюбилизирующий агент в -А0- отсутствует, или разветвляющая единица в А отсутствует.
В более предпочтительных вариантах, представленных формулой 3F, Lb является М2 или М3 частью, где КЛЛ композиция по варианту 1 представлена структурой формулы 3F-1 или формулы 3F-2:
(формула 3F-1)
(формула 3F-2),
где М является М2 или М3 частью и Ai и А0 являются субъединицами удлиняющей единицы А.
В более предпочтительных вариантах, имеющих структуру формулы 3F-1 или формулы 3F-2, R8 и R9 являются водородом, V и Z3 являются =СН- и R' является водородом или группой, выделяющей электрон, предпочтительно -С1 или -N02. В особенно предпочтительных вариантах, "лигандом" формулы 3F-1 или формулы 3F-2 является антитело. В других, особенно предпочтительных вариантах формулы 3F-1 или формулы 3F-2, М является М2, где М2-А или М.2-А1 является Lss частью. В других, особенно предпочтительных вариантах формулы 3F-1 или формулы 3F-2, М является М3, где М3-А или М.3-А1 является Ls частью.
В некоторых вариантах формулы 3F-1 А является -В(СА)-, где В является разветвляющей единицей и СА является солюбилизирующим агентом. В других вариантах А формулы 3F-1 не является -В(СА) или не содержит солюбилизирующий агент. В некоторых вариантах формулы 3F-2 присутствует А0, где Ai или А0 является -В(СА)-. В других вариантах формулы 3F-1 или 3F-2, А или -Ai-A0-, соответственно, не содержит разветвляющую единицу. В других вариантах формулы 3F-1 или 3F-2 солюбилизирующий агент отсутствует в -А- или -Ai-A0-.
В любом из предпочтительных вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС,
3D, ЗЕ, 3F, 3F-1 или 3F-2 более предпочтительными являются такие, где D+ является кватернизированный, содержащий третичный амин, ауристатин, такой как Ауристатин Е или имеющий структуру кватернизированого DE, DE_i, DE_2, DF, DF_i или DF/E_3.
В любом из предпочтительных вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, ЗЕ, 3F, 3F-1 или 3F-2, также более предпочтительными являются такие, где D+ является кватернизированый, содержащий третичный амин, тубулизин, такой как тубулизин М, или имеющий структуру кватернизированный DG, DG_i, DG_2, DG_3, DG_4, DG_5, DG_6, DG_7, DG_8, DH, DH-i или DH-2.
В любом из предпочтительных вариантах формулы ЗА, ЗВ, ЗС, 3D, ЗЕ, 3F, 3F-1 или 3F-2, также более предпочтительными являются такие, где D+ является кватернизированый феназиновый димер, имеющий структуру Dz.
Другими еще более предпочтительными вариантами являются такие из представленных выше структур формул 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2, где D+ является кватернизированный МЛР ингибитор на основе изохинолина (т.е., МЛР ингибитор, имеющий изохинолиновую подструктуру, где атом азота этой подструктуры кватернизирован), такой как Элакридар или Тариквидар.
6. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-5, где нацеливающей частью является антитело, следовательно, определяющая конъюгат антитело-лекарственное средство (КАЛ), и являющейся мишенью частью является антиген поверхности клетки являющихся мишенью аномальных клеток, способных к клеточной интернализации связанного КАЛ, где антиген преимущественно присутствует на аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
В предпочтительных вариантах являющийся мишенью антиген
выбирают из группы, включающей CD19, CD7 0, CD3 0, CD33, NTB-A,
av|36, CD123 b LW-1. В других предпочтительных вариантах,
являющейся мишенью антигеном является доступный антиген
поверхности клетки гиперпролиферирующей клетки. В других
предпочтительных вариантах, являющейся мишенью антигеном
является доступный антиген поверхности клетки
гиперактивированной иммунной клетки.
7. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-5, где
нацеливающей частью является субстрат транспортера поверхности
клетки, и являющейся мишенью частью является такой транспортер
поверхности клетки на аномальных клетках, способный к клеточному
поглощению связанного КЛЛ, содержащего субстрат в качестве
нацеливающей части, где этот транспортер преимущественно
присутствует или является более активным на аномальных клетках,
по сравнению с нормальными клетками.
В предпочтительных вариантах, транспортером является фолатный транспортер. В других вариантах, нацеливающей частью является лиганд рецептора поверхности клетки, и являющейся мишенью частью является рецептор поверхности клетки, где являющийся мишенью рецептор на аномальной клетке способен к клеточной интернализации связанного КЛЛ, содержащего лиганд рецептора в качестве нацеливающей части, где являющийся мишенью рецептор преимущественно присутствует на аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
8. Композиция КЛЛ по варианту 1 или 2, где W из Q1 состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется регулирующей протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где действие регулирующей протеазы на W вызывает внутриклеточное выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) из КЛЛ композиции.
9. Композиция КЛЛ по варианту 3, 4 или 5, где W из Q2 является связанным гликозидом углеводородом, где гликозидная связь W-E из Q2 является местом расщепления для гликозидазы, где действие гликозидазы на W-E вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) из КЛЛ композиции.
10. Композиция КЛЛ по варианту 8, где пептидная часть W
включает или состоит из дипептидной части, имеющей структуру
формулы б:
(формула б),
где R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом,
втор-бутилом, -СН(ОН)СН3 или имеет структуру v н и R35
является метилом, -(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2,
(СН2) 3NH (C=NH) NH2, или -(СН2)2С02Н, где волнистая связь с С-концом дипептида означает связь с J ариленовой частью формулы 2А или 2В, и волнистая линия к N-концу дипептида означает ковалентную связь с остатком W, если такой остаток присутствует, или с А или его субъединицей, если а равен 1, или с Lb, если а равен 0, и где дипептидная связь с J расщепляется регулирующей протеазой.
11. Композиция КЛЛ по варианту 9, где W в Q2 является углеводородной частью, которая связана через гликозид с Е, где гликозидная связь расщепляется гликозидазой, и где W-E имеет структуру формулы 7: ОН
.он
(формула 7),
где волнистая линия представляет Е, связанную с одним из V, Z1, Z2, или Z3, если эта переменная группа является =CH(R24)-, где Е является -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; и где R45 является -СН2ОН или -С02Н.
12. Композиция КЛЛ по любому варианту из вариантов 1-11, где а равен 1 так, что А или его субъединица (т.е., Az) в Q1 связана с Lb формулы 1, где -Lb-A или -Lb-A! формулы 1, и имеет структуру формулы 8:
I N-(-RA2 R-^ [C(Rb1"(Rw)]m[yr]-|-
0 * v '
I. А или A-.
b (формула 8)
где -[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - часть представляет структуру А или ее субъединицы (Az); R и Ra2 независимо являются водородом или метилом; Ral является водородом, метилом, этилом или основной единицей (ОЕ); УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза (УГ) ; m является целым числом от 0 до б; каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил, и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; где ОЕ имеет структуру -[С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где п равен 0, 1, 2 или 3, где каждый R1 независимо является водородом или низшим алкилом, или два R1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил; каждый R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода образуют С3-С6 циклоалкил, или один R1 и один R2 вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода образуют 5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены; R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; и где волнистая линия к сукцинимидному кольцу означает ковалентную связь серы, полученной из сульфгидрильной
группы нацеливающей части, и другая волнистая линия означает ковалентную связь А (или Ai) с остатком структуры формулы 1, 2А, 2В, 2А-1, 2В-1, 2А-2, 2В-2 3A-3F, 3F-1 или 3F-2.
В предпочтительных вариантах R является водородом. В других предпочтительных вариантах [УГ] присутствует и является карбонилом (т.е., -С(=0)-) или содержащей карбонил функциональной группой, где карбонил такой функциональной группы предпочтительно связан непосредственно с [C(Rbl) (Rbl)]m частью А или Ai. В других предпочтительных вариантах каждый Rb и Ral и Ra2 являются водородом, более предпочтительно, m равно 5.
В других предпочтительных вариантах [УГ] присутствует и является карбонилом (т.е., -С(=0)-), и Ral является основной единицей и Ra2 является водородом, более предпочтительно, ОЕ, имеет структуру -CH2NH2.
13. Композиция КЛЛ по варианту 10, где нацеливающей частью является антитело с формулой 1, имеющей структуру формулы 9:
(формула 9)
где R8 является водородом; R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом; R34 является метилом, изопропилом или СН(ОН)СН3; R35 является метилом, - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(СН2)2С02Н; J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; и
V и Z1 независимо являются =СН- или =N-.
В предпочтительных вариантах R8 и R9 являются водородом. В
других предпочтительных вариантах R34 является изопропилом и R35
является - (СН2) 3NH (С=0) NH2, где атомы углерода, к которым
присоединены эти заместители, находятся в одной и той же
абсолютной конфигурации L-аминокислоты. В других
предпочтительных вариантах R34 является изопропилом и R35 является
метилом, где атомы углерода, к которым присоединены эти заместители, находятся в одной и той же абсолютной конфигурации L-аминокислоты.
В некоторых вариантах А в формуле 9 замещен Ai-AQ и/или Lb является М2 или М3 частью.
14. Композиция КЛЛ по варианту 13, где нацеливающей частью является антитело, где формула 1 имеет структуру формулы 10:
(формула 10)
где А0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - частью является А, если А0 отсутствует, и является Ai, если А0 присутствует так, что А становится Ai-AQ; R является -Н; Ral является -Н или основной единицей (ОЕ), где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m является целым числом от 1 до 5; каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R34 является метилом, изопропилом или СН(ОН)СН3; R35 является - (СН2) 3NH (С=0) NH2, -(CH2)2C02H; J является -NH-; V, Z1 и Z2 являются =СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом; и где S является атомом серы сульфгидрильной группы, полученной из антитела нацеливающей части.
15. Композиция КЛЛ по варианту 11, где нацеливающей частью является антитело с формулой 1, имеющей структуру формулы 11:
(формула 11)
где Ai и A0 независимо являются выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А (т.е., Az становится А, если А0 отсутствует, и А является А!-А0, если А0 присутствует); Е является -О- или -NH-; J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом;
V и Z3 независимо являются =СН- или =N-; R8 является водородом; R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или необязательно замещенным фенилом; и R45 является -С02Н.
В других вариантах углеводородная часть в формуле 11 замещена другой углеводородной частью, где гликозидная часть к этой части расщепляется гликозидазой.
В некоторых вариантах формулы 11 -Ai- или -А0- является -В(СА)-, где В является разветвляющей единицей и СА является солюбилизирующим агентом. В других вариантах ни Ai ни А0 формулы 11 не являются -В(СА), или -Ai-A0- не содержит солюбилизирующий агент.
16. Композиция КЛЛ по варианту 15, где нацеливающей частью является антитело, где формула 1 имеет структуру формулы 12:
(формула 12)
где Ai и А0 независимо являются выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А, где -[C(Rb) (Rb)]m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, and является А1г если А0 присутствует так, что А становится А!-А0; где А0, если присутствует, соответствует по структуре аминсодержащей кислоте, связанной с J через С-концевой карбонил аминсодержащей кислоты;
где R является водородом; R' является водородом или группой, выделяющей электрон; Ral является водородом или основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m является целым числом от 1 до 5; каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R45 является -С02Н; Е является -О-; J является -NH-; V и Z3 являются =СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом; и где S является серой, полученной из сульфгидрильной группы антитела.
В других вариантах, углеводородная часть в формуле 12 замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь с этой частью расщепляется гликозидазой.
17. Композиция КЛЛ по варианту 14, 15 или 16, где А0, если присутствует, имеет структуру формулы 13 или формулы 14:
где волнистая линия к карбонильной части любой структуры
означает точку присоединения А0 к W, и где волнистая линия к
аминочасти любой структуры означает точку присоединения А0 к А1;
где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что
если К или L является О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 к L
отсутствуют, и если К или L являются N, один из R41, R42 к К или
один из R43, R44 к L отсутствует, и при условии, что никаких два
соседних L не выбирают независимо как N, О, или S; где q
является целым числом от 0 до 12, иг является целым числом от 1
до 12; где G является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб
алкилом, -ОН, -0RG, -C02H, C02RG, где RG является Ci-C6 алкилом,
арилом или гетероарилом, необязательно замещенным, или RPR, где
RPR является подходящей защитной группой, -NH2, или -N(RG) (RG) ,
где RG, выбранный независимо, такой, как определен выше, или оба
RG вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют
5- или б-членный гетероциклоалкил, или оба RG в качестве RPR
вместе сообразуют подходящую защитную группу; где R38 является
водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R39-R44
независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб
алкилом, необязательно замещенным, или необязательно замещенным
гетероарилом, или оба R39, R40, вместе с атомом углерода, к
которому они присоединены, образуют С3-С6 циклоалкил, или R41,
R42, вместе с К, к которому они присоединены, если К является С,
или R43, R44 вместе с L, к которому они присоединены, если L
является С, образуют С3-С6 циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43,
или R41 и R43, вместе с атомом углерода или гетероатомом, к
которому они присоединены, и атомами, расположенными между этим
атомом углерода и/или гетероатомами, образуют 5- или б-членный
циклоалкил или гетероциклоалкил, или где А0 имеет структуру,
соответствующую альфа-амино, бета-амино или другой
аминсодержащей кислоте.
В некоторых вариантах, А0 формулы 13 или формулы 14 является разветвляющей единицей, имеющей солюбилизирующий агент в качестве заместителя (т.е. -А0- является -В(СА)-). В таких случаях G содержит солюбилизирующий агент (СА) и, предпочтительно, является боковой цепью D- или L-аминокислоты, замещенной этим СА, и оставшиеся переменные группы такие, как определены.
18. Композиция КЛЛ по варианту 14 или 16, где обозначенный звездочкой (*) атом углерода преимущественно находится в той же самой карбоп абсолютной конфигурацией, как и альфа углерод L-аминокислоты, если этот углерод является хиральным.
19. Композиция КЛЛ по варианту б, где формула 1 имеет лигандную единицу из антитела в качестве нацеливающей части так, что каждая композиция КЛЛ формулы 1 представлена структурой формулы 1 бА или формулы 1 бВ:
18.
A-i или A Q1
А илиА.,
V Q1
(формула 16B)
где Q1' является AQ-WW, где AQ является необязательной субъединицей А так, что -Q1'- является -Ww-, если А0 отсутствует, или является -AQ-WW-, если А0 присутствует так, что А становится
Ai-Ao, где - [С (Rbl) (Rbl) ]m-[УГ] - часть становится А, если А0 отсутствует, или является Ai, если А0 присутствует, и где w равен 1, если Q2 отсутствует, или равен 0 (т.е., W отсутствует), если Q2 присутствует;
R является водородом; Ral является -Н или ОЕ, где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом или метилом или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m является целым числом от 1 до 5; Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; J является -О- или -NH-; Q2, если присутствует, является W-E, где Е является -О- или -NH-; р' является целым числом от 1 до 24; и где S является атомом серы, полученным из сульфгидрильной группы нацеливающей части антитела.
20. Композиция КЛЛ по варианту 19, где каждая композиция КЛЛ формулы 1 представлена структурой формулы 17А или формулы 17В:
является водородом, -С1 или -N02, и другой V, Z1 и Z2 является
=СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или
метилом.
21. Композиция КЛЛ по варианту 19, где каждая композиция
КЛЛ формулы 1 представлена структурой формулы 18А или формулы 18В:
но рн
(формула 18В)
где А0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - часть является А, если А0 отсутствует, и является А1г если А0 присутствует так, что А становится А!-А0; R является -Н; Ral является -Н или основной единицей (ОЕ), где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 независимо является водородом или метилом или оба R22 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m является целым числом от 1 до 5; Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R8 является водородом; и R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или необязательно замещенным фенилом.
В других вариантах, углеводородная часть в формуле 18А или 18В замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь
с этой частью расщепляется гликозидазой.
В некоторых вариантах формулы 18А или формулы 18В А0 присутствует. В некоторых из этих вариантов -А0- является -В(СА)-, где В является разветвляющей единицей и СА является солюбилизирующим агентом. В других вариантах А0 формулы 18А или формулы 18В, если присутствует, не является -В(СА)- или не содержит солюбилизирующий агент.
22. Композиция КЛЛ по варианту 21, где каждая композиция КЛЛ формулы 1 представлена структурой формулы 19А или формулы 19В:
(формула 19В)
где R является водородом; Ral является водородом или
основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом ли метилом или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m является целым числом от 1 до 5; каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R45 является -С02Н; Е является -0-; J является -NH-; V и Z3 являются =СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом.
В других вариантах, углеводородная часть в формуле 19А или 19В замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь с этой частью расщепляется гликозидазой.
23. Композиция КЛЛ по варианту 19, 20, 21 или 22, где отмеченный звездочкой (*) атом углерода преимущественно находится в той же самой абсолютной конфигурации, что и альфа атом углерода L-аминокислоты, если этот атом углерода является хиральным.
24. Композиция КЛЛ по варианту 1, где -D+ имеет структуру формулы 2 0 (DE') или формулы 21 (DF') :
(формула 21)
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом; R12 является водородом, Ci-Ce алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом); R14 является водородом
или метилом; или R13 и R14 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8 циклоалкил; R15 является водородом или Ci-Ce алкилом; R16 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R17 независимо является водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом и О-(Ci-C8 алкилом); R18 независимо является водородом или Ci-C8 алкилом; R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом, -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 циклоалкилом) , где R19A является водородом, Ci-C6 алкилом или -ОН; R21 является арилом или С3-С8 гетероциклом; R20 является водородом, Ci-C2o алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и - (R470) m-CH (R49) 2; m является целым числом 1-1000; R47 является С2-С8 алкилом; R48 является водородом или Ci-C8 алкилом; R49 независимо является -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, -(CH2)n-S03H или - (СН2) n~S03-Ci-C8 алкилом; R50 независимо является Ci-C8 алкилом, или - (СН2) n-COOH; Z является О, S, NH, или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом; X1 является Ci-Сю алкиленом; и п является целым числом от 0 до б; и где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ tc остатком структуры формулы 1.
25. Композиция КЛЛ по варианту 1, где -D+ имеет структуру формулы 22 (D/)
(формула 22)
где кольцо А и кольцо В независимо выбирают из арила или гетероарила, необязательно замещенного на кольце А одним, двумя или тремя RA заместителями и/или необязательно замещенного на кольце В одним, двумя или тремя RB заместителями, конденсированного с феназиновыми кольцевыми системами, где одна феназиновая кольцевая система необязательно замещена одним, двумя или тремя выбранными независимо Rc заместителями, и другое
феназиновое кольцо необязательно замещено одним, двумя или тремя выбранными независимо RD заместителями, где RA, RB, Rc и RD, если присутствуют, являются галогеном, необязательно замещенным
алкилом или О-связанным заместителем; RyA и R
независимо
выбирают из необязательного замещенного алкила, или вместе с
атомом азота, к которому они присоединены, и промежуточными
атомами углерода между этим атомом азота, образуют
гетероциклоалкильную кольцевую систему, и где n, s и о
независимо являются целыми числами от 2 до 4; и где волнистая
линия к N+ означает ковалентную связь D+ с остатком структуры
формулы 1.
26. Композиция КЛЛ по варианту 1, где -D+ имеет структуру
формулы 2 3 (DG_!') или формулы 2 4 (DH_!') .
,R7A
О (формула 24)
где круг представляет 5-членный гетероарил или б-членный арил или гетероарил, где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3- или мета положении друг к другу при необязательном замещении в оставшихся положениях; R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует 0-связанный заместитель, отличный от -ОН; R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо; R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом и m равен 0 или 1; и где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ в остатком структуры формулы 1.
В предпочтительных вариантах R7A является необязательно замещенным фенилом. В других предпочтительных вариантах, круг представляет тиазол. В других предпочтительных вариантах, R3 является -СНз. В более предпочтительных вариантах R7A является необязательно замещенным фенилом, круг представляет тиазол и R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует сложный эфир.
27. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-2 6, где нацеливающей частью является антитело.
28. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-27, где лигандная единица из нацеливающей части нацелена на антиген на клетках млекопитающего.
29. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-2 8, где лигандная единица из нацеливающей части не связывается с антигеном на бактерии.
30. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-2 8, где лигандная единица из нацеливающей части не связывается с бактериальными полисахаридами.
31. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-2 8, где лигандная единица из нацеливающей части не связывается с тейхоевыми кислотами стенки клетки.
32. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-23, где D+ не соответствует по структуре антибиотику.
33. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-23, где D+ не соответствует по структуре антибиотику.
34. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-23, где D+ не соответствует по структуре соединению, которое применяют для лечения бактериальных инфекций.
35. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-23, где D+ является химическим соединением, применяемым для лечения рака, имеющим третичную аминовую функциональную группу или способным к модификации, дающей такую функциональную группу.
36. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1-23, где D+ является химическим соединением, применяемым для лечения аутоиммунного заболевания, имеющим третичную аминовую функциональную группу или способным к модификации, дающей такую
27.
функциональную группу.
1А. Соединение, имеющее структуру формулы I
(формула I)
где
является
линкером,
ковалентно
связывающим
предшественник; Q1 является Aa-Ww, где индекс а равен 0 или 1, и А является необязательной удлиняющей единицей, необязательно состоящей из двух, трех или четырех субъединиц так, что индекс а равен 1, если А присутствует, и равен 0, если А отсутствует; Q2 является W-E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами; где Ww из Q1 содержит пептидную часть, имеющую пептидную связь с J, которая селективно расщепляется регулирующей протеазой по сравнению с сывороточными протеазами, где внутриклеточная или регулирующая протеаза может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению протеазой, выделяемой в больших количествах являющимся мишенью аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или содержит дисульфидную часть, которая расщепляется глутатионом через дисульфидный обмен, или содержит гидразоновую часть, которая более реакционноспособна к гидролизу в условиях низкого рН, присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки (т.е., в более кислых условиях) при введении в КЛЛ формулы 1, структура которого соответствует структуре формулы I, и W'-E из Q2 является гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, где гликозидаз может быть или не быть более специфической к являющимся мишенью аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с
нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению гликозидазой, выделяемой в больших количествах целевыми аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, при введении в КЛЛ формулы 1, структура которого соответствует структуре формулы I, где индекс w равен О или 1 так, что W отсутствует, если w равен 0, или присутствует, если w равен 1, и w' равен 0 или 1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, или присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равно 1 (т.е., один и только один из W, W' присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN, или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или -C(R8) (R9)-D+, где, по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V, Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1, при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует, и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу, и при условии, что если w' равен 1 один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу; R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным; R' является водородом или является галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является электронодонорной группой; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; D+ является структурой кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин D; где расщепление под действием указанной внутриклеточной или
регулирующей протеазой, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление вызывает выделение D из D+ из указанного КЛЛ.
2А. Соединение по варианту 1А, где Lb' имеет одну структуру
из:
где R является водородом или Ci-C6 необязательно замещенным
алкилом; Т является -CI, -Br, -I, -О-мезилом или -О-тозилом; U
является -F, -CI, -Br, -I, -0-N-сукцинимидом, -О-(4-
нитрофенилом), -О-пентафторфенилом, -О-тетрафторфенилом или -0-
C(=0)-OR57; X2 является Ci-ю алкиленом, С3-С8-карбоциклом, -О-(Ci-
С6 алкилом), -ариленом-, Ci-Сю алкиленариленом, -арилен-Ci-Cio
алкиленом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С6-карбоциклом)-, - (С3-С8
карбоцикл) -Ci-Сю алкиленом-, С3-С8-гетероциклом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С8 гетероцикло)-, - (С3-С8-гетероцикло) -Ci-Сю алкиленом, (CH2CH20)u или - (CH2CH20) U-CH2-, где и является целым числом от 1 до 10 и R57 является Ci-Сб алкилом или арилом.
ЗА. Соединение по варианту 2А, где соединение имеет структуру формулы На или формулы lib:
(формула lib)
где А является удлиняющей единицей; индекс а равен 1; индекс w равен 1; индекс w' равен 1; R является водородом или метилом; Е и J независимо являются -0-, или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом; индекс w равен 1, и W формулы На является пептидной частью (т.е., W является 2 или более субъединицами аминокислоты, предпочтительно, от 2 до 4), где пептидная связь к J селективно расщепляется регулирующей или лизосомной протеазой по сравнению с сывороточными протеазами, и W' формулы lib является связанным с гликозидом углеводородом, где гликозидная связь с Е в W'-E расщепляется лизосомной или внутриклеточной гликозидазой; R8 является водородом; R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом. Предпочтительно, пептидом W формулы На является -Wi-W2-, в котором Wi и W2 являются субъединицами аминокислоты W,которые вместе являются сайтом узнавания для цистеинпротеазы, такой как катепсин.
В некоторых вариантах формулы На или формулы НЬ -А-является -В(СА)-, где В(СА) является разветвляющей единицей (В), замещенной солюбилизирующим агентом (СА) . В других вариантах А формулы На или формулы НЬ -А- не содержит разветвляющую единицу. В некоторых вариантах формулы На или формулы На -А
является -AI-AQ-, где Ai или А0 является -В(СА)-. В других вариантах формулы На или формулы НЬ А не содержит разветвляющую единицу. В других вариантах формулы На или НЬ солюбилизирующий агент в -А- отсутствует.
(формула II1а)
4А. Соединение по варианту ЗА, где соединение формулы На имеет структуру формулы II1а или формулы IIlb:
(формула IIlb)
где индекс w равен 1; индекс w' равен 1; А0 является необязательной субъединицей А, где -[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - частью является A, when А0 отсутствует, и является А1г если А0 присутствует так, что А становится А!-А0; где R и Ra2 независимо являются водородом или метилом; Ral является водородом, метилом, этилом или основной единицей (ОЕ) ; УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза; m является целым числом от 0 до б; каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ вместе с атомом углерода, к
которому они присоединены, образуют 5- или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил, и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; ОЕ имеет структуру - [С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где п равен О, 1, 2 или 3, каждый R1 независимо является водородом или низшим алкилом или два R1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, и каждый R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один R1 и один R2 вместе с атомами углерода к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют 5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены; R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; R8 является водородом; и R9 является водородом или Ci-C6 алкилом.
В некоторых вариантах формулы II1а или формулы II lb А0 присутствует. В некоторых из этих вариантов -А0- является -В(СА)-, где В(СА) является разветвляющей единицей (В), замещенной солюбилизирующим агентом (СА) . В других вариантах формулы II 1а или формулы Hlb -А0- присутствует, но не является-В (СА) - или не содержит солюбилизирующий агент.
4А. Соединение по варианту 2А, где соединение формулы I имеет структуру формулы IVa или формулы IVb:
(формула IVb),
где в формуле IVa, один из V, Z1 или Z2 является =C(R24)-, где R24 является водородом или электронодонорной группой, и другой V, Z1 или Z2 является =СН2- или =N-, и R' является водородом или электронодонорной группой, или где в формуле IVb, V and Z3 являются =C(R24)-, где один R24 является водородом и другой R24 является водородом, электронодонорной группой или групп, выделяющей электрон, или V и Z3 независимо являются =СН2-или =N-; и где R' является водородом или группой, выделяющей электрон, Е является -О- или -NH-; J является -N(R33), где R33 является водородом или метилом; R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом, втор-бутилом, -СН(ОН)СН3 или имеет
сн2-^-
структуру ; R35 является метилом, -(CH2)4-NH2,
(СН2) 3NH (С=0) NH2, - (СН2) 3NH (C=NH) NH2, или -(СН2)2С02Н; и R45 является -СН2ОН или -С02Н.
В других вариантах углеводородная часть в формуле IVb замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь с этой частью расщепляется гликозидазой.
В некоторых вариантах -А- формулы IVa является -В(СА)- или является Ai-A0-, где Ai или А0 является -В(СА)-, где В(СА) является разветвляющей единицей (В) с заместителем солюбилизирующим агентом (СА). В некоторых вариантах формулы IVb
Ai или A0 является -B(CA)-. В других вариантах формулы IVa или формулы IVb ни один из -А-, Ai и А0 не является -В(СА)-, или -А-в формуле IVa или -Ai-A0- формулы IVb не содержит солюбилизирующий агент.
(формула Va)
5А. Соединение по варианту 4А, где соединение формулы IVa или формулы IVb имеет структуру формулы Va или формулы Vb:
(формула Vb)
где А0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rb) (Rb)]m-[yr]- часть является А, если А0 отсутствует, и является А1г если А0 присутствует так, что А становится А!-А0; R является -Н, где R является водородом; Ral является водородом или ОЕ, где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; m
является целым числом от 1 до 5; Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R45 является -C02H; Е является -0-; J является -NH-; V, Z1, Z2 и Z3 каждый является =СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом.
В других вариантах, углеводородная часть в формуле Vb замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь к этой части расщепляется гликозидазой.
В некоторых вариантах формулы Va или формулы Vb А0 является -В(СА)-. В других вариантах формулы IVa или формулы IVb А0 не является -В(СА)- или не содержит солюбилизирующий агент.
6А. Соединение по варианту 5А, где А0 в формуле Vb имеет структуру
где волнистая линия к С-концу карбонильной части любой структуры означает точку присоединения к J, и где волнистая линия к N-концу амино части любой структуры означает точку присоединения к карбонилсодержащей функциональной группе Ai; где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что если К или L является О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 к L отсутствуют, и если К или L являются N, один из R41, R42 к К или один из R43, R44 к L отсутствует, и при условии, что никакие два соседние L независимо не выбирают как N, О или S; где q является целым числом от 0 до 12, и г является целым числом от 1 до 12: где G является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, -ОН, -0RG, -C02H, C02RG, где RG является Ci-C6 алкилом, арилом или гетероарилом, необязательно замещенным, или RPR, где RPR является подходящей защитной группой, -NH2, или -N(RG) (RG) , где RG выбран независимо, как определено выше, или оба RG вместе с атомом азота, к которому они присоединены, содержат 5- или б-членный гетероциклоалкил, или оба RG в качестве RPR вместе образуют подходящую защитную группу; где R38 является водородом или
необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R39-R44 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным, или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R39, R40 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или R41, R42, вместе с К, к которому они присоединены, если К является С, или R43, R44, вместе с L, к которому они присоединены, если L является С, образуют -Сб циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43, или R41 и R43, вместе с атомом углерода или гетероатомом, к которому они присоединены, и атомами, расположенными между этими атомом углерода и/или гетероатомами, образуют 5- или б-членный циклоалкил или гетероциклоалкил, или где А0 в формуле Vb имеет структуру, соответствующую альфа-аминокислоте, бета-аминокислоте или другой аминсодержащей кислоте.
В некоторых вариантах А0 является разветвляющей единицей, имеющей заместитель солюбилизирующий агент (т.е. -А0- является -В(СА)-). В таких случаях, G содержит солюбилизирующий агент (СА) и предпочтительно является боковой цепью D- или L-аминокислоты, замещенной этим СА, и оставшиеся переменные группы такие, как определены.
8А. Соединение по варианту 6А, где А0 имеет структуру
ИЛИ
где X3 отсутствует или является X2, и где X2 такой, как определен в варианте 2А; и Ra является боковой цепью лизина, аспарагиновой кислоты или глутаминовой кислоты.
9А. Соединение по варианту 7А или 8А, где А0 имеет структуру
р46В
0 или • -• ,
где R46a и R46B независимо являются Н или Ci-Сб алкилом [предпочтительно, метилом) или вместе с атомом азота, к которому
они присоединены, содержат 5- или б-членный гетероциклоалкил, или один из R46A и R46B является водородом или Ci-Сб алкилом, и другой является солюбилизирующим агентом, предпочтительно связанным с гетероатомом азота через амидную функциональную группу. В предпочтительных вариантах каждый R46A И R46b является водородом или метилом. В других предпочтительных вариантах, один из R46A И R46B является водородом, и другой является солюбилизирующим агентом, предпочтительно, связанным с гетероатомом азота через амидную функциональную группу.
10А. Соединение по любому из вариантов 1А-6А, где А0 является разветвляющей единицей, замещенной солюбилизирующим агентом.
НА. Соединение по любому из вариантов 1А-9А, где А0 является лизином, предпочтительно L-лизином, необязательно замещенным на s-аминогруппе солюбилизирующим агентом.
1В. Композиция конъюгата антитело-лекарственное средство (КАЛ), полученная взаимодействием соединения по варианту 2А с антителом, имеющим реакционноспособную сульфгидрильную, амино или альдегидную часть в подходящих условиях для проведения конденсации реакционноспособной части с Lb' частью соединения формулы 1, где Ьь' превращается в Lb, где Ab-Lb- часть в структуре, представляющей композицию КАЛ после такой конденсации, имеет любую структуру из:
-s-сн2
Ab NH-
Ab S S-?-
-0 X2-
Ab NH-
где указанный (#) атом получают из реакционноспособной части антитела, и X2 такой, как определен в варианте 2А,
где Ab является лигандной единицей антитела из специфического антитела.
2В. Композиция КАЛ по варианту 1В, где реакционной частью антитела является сульфгидрилом цистеина, который получают методами генной инженерии цистеинового остатка в постоянную область тяжелой цепи антитела в доступном для растворителя месте, или взаимодействием антитела с дисульфидом в условиях, подходящих для селективного восстановления шарнирных дисульфидных частей антитела.
ЗВ. Композиция КАЛ по варианту 2В, где композиция представлены структурой Ab-S-формула 1 или Ab-S-формула 2:
где индекс а равен 1; индекс w равен 1; индекс w' равен 1 и индекс у равен 1 (т.е., присутствуют удлиняющая, расщепляющая и спейсерная единицы); индекс р' варьируется от 1 до 8, где переменные группы такие, как определены в варианте 1А, и D+ является структурой кватернизированого лекарственного средства, содержащего третичный амин.
4В. Композиция КАЛ по варианту ЗВ, где композиция представлены структурой Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11:
(Ab-S-формула 11)
где переменные группы Ab-S-формула 5 и Ab-S-формула 11 такие, как определены в варианте 4А или варианте 12А, соответственно.
В некоторых вариантах Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11 А0 отсутствует. В других вариантах Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11 А0 присутствует. В других вариантах Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11, А0, если присутствует, является -В(СА)-, где В(СА) является разветвляющей единицей (В) с заместителем солюбилизирующим агентом (СА). В других вариантах Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11, А0 не является -В(СА)- или не содержит солюбилизирующий агент.
В других вариантах, углеводородная часть замещена другой углеводородной частью, где гликозидная связь с этой частью расщепляется гликозидазой.
5В. Композиция КАЛ по варианту ЗВ, где композиция представлена структурой Ab-S-формула 9 или Ab-S-формула 12:
V о
(Ab-S-формула 12)
где атом углерода в положении а к атому азота имида замещен ОЕ или, в другом случае, замещен водородом, и где переменные группы Ab-S-формула 9 и Ab-S-формула 12 такие, как определены в варианте 8А или варианте 12А, соответственно.
В некоторых вариантах Ab-S-формула 9 или Ab-S-формула 12 А0 отсутствует. В других вариантах Ab-S-формула 9 или Ab-S-формула 12 А0 присутствует. В других вариантах Ab-S-формула 9 или Ab-S-формула 12, А0, если присутствует, является -В(СА)-, где В(СА) является разветвляющей единицей (В) с заместителем солюбилизирующим агентом (СА). В других вариантах Ab-S-формула 5 или Ab-S-формула 11, А0 не является -В(СА)- или не содержит солюбилизирующий агент.
6В. Композиция КАЛ по варианту 5В, где ОЕ отсутствует и замещен атомом водорода, указанным в скобках, или имеет структуру - [С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) , где n, R1, R2, R22 и R23 такие, как определены в варианте 2А.
7В. Композиция КАЛ по варианту 5В, где композиция представлена структурой Ab-S-формула 13 или Ab-S-формула 14:
(Ab-S-формула 14)
где каждый конъюгат композиции КАЛ имеет не более 10% противоположного стереоизомера в указанном звездочкой (*) положении в каждом случае р', если ОЕ присутствует,
где ОЕ, если присутствует, является -CH2N(R22) (R23) , где один из R22 и R23 является -Н, и другой является водородом или Ci-C6 алкилом.
8В. Композиция КАЛ по варианту 5В, где ОЕ отсутствует (т.е., замещение атомом водорода, указанным в скобках) и [С (Rbl) (Rbl) ] m- является -(СН2)4-.
9В. Композиция КАЛ по варианту 5В, где ОЕ является -CH2NH2 и m равен 0.
10В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где Ab выбирают из специфического антитела, которое нацелено на антиген на клетках млекопитающих.
11В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где Ab
выбирают из специфического антитела, которое не связывается с антигеном на бактерии.
12В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где Ab выбирают из специфического антитела, которое не связывается с бактериальными полисахаридами.
13В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где Ab выбирают из специфического антитела, которое не связывается с тейхоевой кислотой стенки клетки.
14В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где D+ не соответствует по структуре антибиотику.
15В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где D+ не соответствует по структуре соединению, применяемому для лечения бактериальных инфекций.
16В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где D+ является химическим соединением, применяемым для лечения рака, имеющим третичную аминовую функциональную группу или способным к модификации, позволяющей получить такую функциональную группу.
18В. Композиция КАЛ по любому из вариантов 1В-9В, где D+ является химическим соединением, применяемым для лечения аутоиммунного заболевания, имеющего третичную аминовую функциональную группу или способному к модификации, позволяющей получить такую функциональную группу.
1С. Композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), где композиция КЛЛ представлена структурой формулы 1:
Лиганд
R' (формула 1)
где "лигандом" является лигандная единица из нацеливающей части, которая селективно связывается с являющейся мишенью частью; Lb является лигандной ковалентно связывающей частью; Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей, необязательно содержащей две, три или четыре субъединицы, так, что индекс а равен 0, если А отсутствует, или
1, если А присутствует; Q2 является W'w> -E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами; где Ww из Q1 селективно расщепляется внутриклеточной или регулирующей протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где внутриклеточная или регулирующая протеаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению протеазы, выделяемой в больших количествах целевыми аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, или глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки, и W'-E из Q2 является гликозидной связью, селективно расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, где гликозидаза может быть или не быть более специфической к целевым аномальным или другим нежелательным клеткам, по сравнению с нормальными клетками, или способна к селективному расщеплению гликозидазы, выделяемой в больших количествах целевыми аномальными или другими нежелательными клетками, по сравнению с нормальными клетками, где индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен 0 или присутствует, если w равен 1, и w' равен О или 1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, или присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равно 1 (т.е., один и только один из W, W' присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или -C(R8) (R9)-D+, где, по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V, Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1, при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связана с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)- и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу, при условии, что если w' равен 1, один и только один R24
является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V,
Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и
только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим из
V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2
и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях
друг к другу; R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом,
алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом
или гетероарилом, необязательно замещенным; Е и J независимо
являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или
необязательно замещенным алкилом; R' является водородом или
является галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей
электрон, или электронодонорной группой; D+ представляет
структуру кватернизированного лекарственного средства,
содержащего третичный амин D; и р представляет среднее содержание лекарственного вещества и имеет значение от 1 до 24; где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление вызывает выделение D из КЛЛ композиции КЛЛ.
2С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ является единицей кватернизированного ауристатинового лекарственного средства.
ЗС. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ имеет структуру DE' или DF'
(DF')
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом; R12 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8
циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом); R14 является водородом или метилом, или R13 и R14 взятые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8 циклоалкил; R15 является водородом или Ci-C8 алкилом; R16 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R17 независимо является водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом и О-(Ci-C8 алкилом); R18 независимо является водородом или Ci-C8 алкилом; R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом,
-С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 циклоалкилом) ; R21 является арилом или С3-С8 гетероциклом; где R19A является водородом, Ci-C8 алкилом или -ОН; R20 является водородом, Ci-C2o алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и -(R470)m-CH(R49)2; m является целым числом 1-1000; R47 является С2-С8 алкилом; R48 является водородом или Ci-C8 алкилом; R49 независимо является -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, - (СН2) n-S03H, или - (СН2) n-S03-Ci-C8 алкилом; R50 независимо является Ci-C8 алкилом, или - (СН2) n-COOH; Z является О, S, NH, или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом; X1 является Ci-Сю алкиленом; и п является целым числом от 0 до б; где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ с остатком структуры формулы 1.
4С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где the формула 1 композиции представлена структурой
OR35 / \ II 1 1 11
НМ-А^ О Me ОМе О
?А*
где R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; и р является числом от 1 до 24. Предпочтительно, р равно от 1 до 8.
5С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела из специфического антитела, и Ab-S- часть связана с атомом углерода а или Р с М3 карбоновой кислотой; R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; и р' является целым числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р' является целым числом от 1 до 8.
6С. Композиция КЛЛ по варианту 4С, где композиция формулы 1 представлена структурой:
1С. Композиция КЛЛ по варианту 5С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой:
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или Р с М3 карбоновой кислотой.
где р является числом от 1 до 24. В предпочтительных
8С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где композиция формулы 1 представлена структурой
вариантах, р является числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р является числом от 1 до 8.
9С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой; где р' является целым числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р' является целым числом от 1 до 8.
ЮС. Композиция КЛЛ по варианту 8С, где композиция формулы 1 представлена структурой
НС. Композиция КЛЛ по варианту 9С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой.
12С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ является единица
кватернизированного тубулизинового лекарственного средства.
13С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ имеет структуру
(формула DG_i')
О (формула DH-i')
где круг представляет 5-членный азот-гетероарил, и где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3- положении друг к другу при необязательном замещении на оставшихся положениях; R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому они присоединены, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН;
R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо; R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом; и m равен 0 или 1, где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ с остатком структуры формулы 1.
14С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где композиция формулы 1 представлена структурой
CH2CH2CH2NH (C=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и р равен числу от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р равно числу от 1 до 8.
15С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где композиция формулы 1 представлена структурой
где R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и р является числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р является числом от 1 до 8.
16С. Композиция КЛЛ по варианту 14С, где композиция формулы 1 представлена структурой
17С. Композиция КЛЛ по варианту 15С, где композиция формулы 1 представлена структурой
18С. Композиция КЛЛ по варианту 1С где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
Ab-
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой;
R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и р' является целым числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р' является целым числом от 1 до 8.
19С. Композиция КЛЛ по варианту 1С где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
со2н
Д н
Г N-А-N
Н02С Т он ОН
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и р' является целым числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р' является целым числом от 1 до 8.
20С. Композиция КЛЛ по варианту 18С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
4 ' р
21С. Композиция КЛЛ по варианту 19С, где каждый КЛЛ композиции представлен структурой
22С. Композиция КЛЛ по варианту 4С, 5С, 8С, 9С, 14С, 15С, 18С или 19С, где А является -СН2 (СН2) 4 (С=0) - или СН2 (СН2) 4 (С=0) NHCH2CH2 (С=0) - .
23С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ является кватернизированным феназиновым димером
24С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ имеет структуру
где кольцо А и кольцо В независимо выбирают из арила или гетероарила, необязательно замещенного одним, двумя или тремя RA и/или RB заместителями, конденсированными с феназиновой кольцевой системой, необязательно замещенной одним, двумя или тремя выбранными независимо Rc и/или RBD заместителями, где RA, RB, Rc и RD, если присутствует, независимо являются галогеном, необязательно замещенным алкилом или О-связанным заместителем; R9A и R9B независимо выбирают из необязательно замещенного алкила, или взятые вместе с атомами азота, к которым они присоединены, и
промежуточными атомами углерода между этими атомами азота, образуют гетероциклоалкильную кольцевую систему, и где n, s и о независимо являются целыми числами от 2 до 4; где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ с остатком структуры формулы 1.
25С. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ имеет структуру
где RA и RB присутствуют и являются низшим алкилом. 26С. Композиция КЛЛ по варианту 2 5С, где композиция КЛЛ представлена структурой
где р является числом 1-24.
В предпочтительных вариантах, R45 является -С02Н. В более предпочтительных вариантах, углеводородом является глюкуроновая кислота. В других предпочтительных вариантах, RA и RB являются -СН3. В других предпочтительных вариантах, Lb является М2 или М3 частью, более предпочтительно, если М2-А является Lss частью или М3-А является Ls частью. В других более предпочтительных вариантах, А замещен -Ai-AQ- так, что М2-А1 является Lss частью или М3-А1 является Ls частью. В еще более предпочтительных вариантах,р является числом 1-8.
27С. Композиция КЛЛ по варианту 2 6С, где композиция формулы
где р является числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р является числом от 1 до 8.
28С. Композиция КЛЛ по варианту 27С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой, и р' является целым числом от 1 до 8.
29С. Композиция КЛЛ по варианту 2 6С, где композиция формулы 1 представлена структурой
где Q является -W-A или -W-A!-A0- и р является числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р является числом от 1 до 8 .
В предпочтительных вариантах, W является субстратом для регулирующей протеазы, которая расщепляет связь между Q1 и СУ частью. В других предпочтительных вариантах, Lb является М2 или М3 частью, более предпочтительно, если М2-А или M2-Ai является Lss частью или М3-А или М3-А1 является Ls частью. В других более предпочтительных вариантах, р является числом 1-8.
ЗОС. Композиция КЛЛ по варианту 1С, где -D+ является кватернизированным ингибитором МЛР, имеющим изохинолиновую подструктуру.
31С. Композиция КЛЛ по варианту ЗОС, где композиция формулы 1 представлена структурой
где Аг является необязательно замещенным арилом или гетероарилом, и р является числом от 1 до 24.
В предпочтительных вариантах, R45 является -СОгН. В более предпочтительных вариантах, углеводородом является глюкуроновая кислота. В других предпочтительных вариантах, RA и RB являются -СН3. В других предпочтительных вариантах, "лигандом" является специфическое антитело и LB является М2 или М3 частью, более предпочтительно, если М2-А является LSS частью или М3-А является LS частью. В других более предпочтительных вариантах, А замещен -AI-AQ- так, что М2-А1 является LSS частью или М3-А1 является LS частью. В еще более предпочтительных вариантах, "лиганд" является специфическим антителом и р является числом 1-24. В предпочтительных вариантах, р является числом от 1 до 8.
32С. Композиция КЛЛ по варианту 31С, где композиция формулы 1 представлена структурой
где р является числом от 1 до 8.
ЗЗС. Композиция КЛЛ по варианту 31С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой и р' является целым числом от 1 до 8.
34С. Композиция КЛЛ по варианту ЗОС, где композиция формулы 1 представлена структурой
где Q является -W-A или -W-A!-A0- и р является числом от 1
до 24.
В предпочтительных вариантах W является субстратом для
регулирующей протеазы, которая расщепляет связь между Q1 и СУ частью. В других предпочтительных вариантах "лигандом" является специфическое антитело и Lb является М2 или М3 частью, более предпочтительно, если М2-А или М.2-А1 является Lss частью или М3-А или М3-А1 является Ls частью. В еще более предпочтительных вариантах, "лигандом" является специфическое антитело и р является числом 1-8.
35С. Композиция КЛЛ по варианту 34С, где композиция формулы 1 представлена структурой
4 / Р .
36С. Композиция КЛЛ по варианту 31С, где каждый КЛЛ композиции формулы 1 представлен структурой
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой и р' является целым числом от 1 до 24. В предпочтительных вариантах, р' является целым числом от 1 до 8.
37С. Композиция КЛЛ по варианту 31С, где композиция формулы 1 представлена структурой
со2н но"-Ло
где р является числом от 1 до 8. 38С. Композиция КЛЛ по варианту 31С, композиции формулы 1 представлен структурой:
где каждый КЛЛ
С02Н
но, X но^-^о °-
OH X ^NH
NH,
N C02H
о o^^S-l-
где Ab-S- часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой и р' является целым числом от 1 до 8.
39С. Композиция КЛЛ по варианту 31С, 32С, ЗЗС, 34С, 35С или ЗбС, где Аг имеет структуру
-O-^^NH
ОМе
4N , где волнистая линия
означает связь арильной части с указанной карбонильной функциональной группой.
40С. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1С-39С, где лигандная единица или Ab из нацеливающей части нацелена на антиген на клетках млекопитающих.
41С. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1С-39С, где лигандная единица или Ab из нацеливающей части не связывается с антигеном на бактерии.
42С. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1С-39С, где лигандная единица или Ab из нацеливающей части не связывается с бактериальными полисахаридами.
43С. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1С-39С, где лигандная единица или Ab из нацеливающей части не связывается с тейхоевыми кислотами стенки клетки.
1D. Соединение лекарственное средство-линкер, где соединение имеет структуру формулы I:
(формула I)
где L'b является предшественником лигандной ковалентно связывающей части; Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей так, что индекс а равен О, если А отсутствует, или 1, если А присутствует, и необязательно содержит две, три или четыре субъединицы; Q2 является W'w.-E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3; Ww и W'w. являются расщепляемыми единицами, где Ww из Q1 способна к селективному расщеплению внутриклеточной или регулирующей протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, или глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН (т.е., в более кислых), присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки, W'-E из Q2 является гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, и индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен О,
или W присутствует, если w равен 1, и индекс w' равен 0 или 1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, или W'-E присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равно 1 (т.е., один и только один из W, W' присутствует); V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или -C(R8) (R9)-D+, где, по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V, Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1, при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -C(R8) (R9) -D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу, при условии, что если w' равен 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9) -D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу; R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным; R' является водородом или является галогеном, -N02, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является электронодонорной группой; Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом; D+ является структурой кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин; и индекс р является числом от 1 до 24; и где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление вызывает выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин (D), из соединения лекарственное средство-линкер или конъюгата лиганд-лекарственное средство или конъюгата N-ацетилцистеина,
полученного из него.
2D. Соединение лекарственное средство-линкер из варианта 1D, где соединение имеет структуру формулы НА или формулы IIB:
ID,
IIIB:
R (формула IIB) .
3D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту где соединение имеет структуру формулы IIIA или формулы
ID,
HID
R' (формула IIIB) .
4D. Соединение лекарственное средство-линкер из варианта где соединение имеет структуру формулы II1С или формулы
L'h Аа J (ч^ ,7?
R' (формула IIIDJ 5D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 1D, где соединение имеет структуру формулы IIIE или формулы IIIC:
6D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-5D, где Lb'- имеет структуру, выбранную из группы, включающей:
где R является водородом или Ci-Сб необязательно замещенным
алкилом; R' является водородом или галогеном или R и R' независимо
выбирают из галогена; Т является -CI, -Br, -I, -О-мезилом или -
О-тозилом или другой сульфонатной уходящей группой; U является -
F, -CI, -Br, -I, -0-N-сукцинимидом, -О-(4-нитрофенилом), -О-
пентафторфенилом, -О-тетрафторфенилом или -0-С(=0)-OR57; и X2
является Ci-io алкиленом, С3-С8-карбоциклом, -О- (Ci-C6 алкилом),
ариленом-, Ci-Сю алкиленариленом, -арилен-Ci-Cio алкиленом, -Ci~
Сю алкилен-(С3-С6-карбоциклом)-, - (С3-С8 карбоцикл)-Ci-Сю
алкиленом-, С3-С8-гетероциклом, -Ci-Сю алкилен- (С3-С8
гетероцикло)-, - (С3-С8-гетероцикло) -Ci-Сю алкиленом, -(CH2CH20)u или - (CH2CH20) U-CH2-, где индекс и является целым числом от 1 до 10 и R57 является Ci-C6 алкилом или арилом.
7D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-6D, где индекс а равен 1 так, что А в Q1 связан с L'b
формулы I и Lb'-A имеет общую формулу M1-Ai-A0-, где М1 является малеимидной частью и А0 является необязательной субъединицей А
так, что А состоит из двух субъединиц, если А0 присутствует, или состоит из одной единицы, если А0 отсутствует.
8D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 7D, где М1-А1-А0- имеет структуру формулы VIII: О
Ra1
N-(-RA2
[C(RB1)(Rb1)]m[yr]-A0-|-
° * у '
_М1 А или AT
Lb"м (формула VIII)
где A0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и является А1г если А0 присутствует так, что А становится -А!-А0-; R и Ra2 независимо являются водородом или метилом; Ral является водородом, метилом, этилом или основной единицей (ОЕ); УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза (УГ) ; m является целым числом от 0 до 6; каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5 или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил, и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; ОЕ имеет структуру -[C(R1) (R1)]-[C(R2) (R2)]n~ N(R22) (R23) , где индекс n равен 0, 1, 2 или 3; каждый R1 независимо является водородом или низшим алкилом, или два R1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, и каждый R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2 вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют С3-С6 циклоалкил, или один R1 и один R2, вместе с атомами углерода к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют
5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены; R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; и волнистая линия означает ковалентную связь А (или А0) с остатком структуры формулы VIII.
В некоторых вариантах, часть -[C(R1) (R1)]-[C(R2) (R2)]n~ N(R22) (R23) присутствует в виде своей кислотно-аддитивной соли, где кислотно-аддитивной солью является соль неорганической кислоты, предпочтительно, НС1, или соль органической кислоты, такой как ТФК. В других вариантах, кислотно-аддитивная соль является фармацевтически приемлемой солью.
9D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 7D или 8D, где М1-А1-А0- формулы I имеет структуру О
N-f-H
О [C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-А0-
О [C(Rb1)(Rb1)]m[yr|-А0-^-
ч J
^-7--;4 Y '
L'b-M АилиА-,
где R22 и R23 каждый является водородом или один из R22, R23 является водородом и другой является кислотолабильной карбаматной защитной группой; и индекс m является целым числом от 0 до 4.
В некоторых вариантах, часть -N(R22) (R23) присутствует в виде своей кислотно-аддитивной соли, где кислотно-аддитивной солью является соль неорганической кислоты, предпочтительно, НС1, или соль органической кислоты, такой как ТФК. В других вариантах, кислотно-аддитивная соль является фармацевтически приемлемой солью.
10D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
где индекс m равен 0 или 4, и R22 и R23 каждый является водородом, или один из R22, R23 является водородом и другой является-С(О)Ot-Bu.
В некоторых вариантах, часть -N(R22) (R23) присутствует в виде своей кислотно-аддитивной соли, где кислотно-аддитивной солью является соль неорганической кислоты, предпочтительно, НС1, или соль органической кислоты, такой как ТФК. В других вариантах, кислотно-аддитивная соль является фармацевтически приемлемой солью.
11D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-10D, где W из Q1 включает или состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется внутриклеточной или регулирующей протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где действие регулирующей протеазы на W вызывает выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин, (D) из соединения лекарственное средство-линкер или конъюгата лиганд-лекарственное средство или конъюгата N-ацетилцистеина, полученного из него.
12D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-10D, где W из Q2 является связанным гликозидом углеводородом, где гликозидная связь W'-E из Q2 является местом расщепления для гликозидазы, расположенной внутриклеточно, где действие гликозидазы на W'-E вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин, (D) из соединения лекарственное средство-линкер или конъюгата лиганд-лекарственное
средство или конъюгата N-ацетилцистеина, полученного из него.
13D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 11D, где пептидная часть W включает или состоит из дипептидной части, имеющей структуру формулы VI: О R35
(формула VI),
где R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом,
втор-бутилом, -СН(ОН)СН3 или имеет структуру ^ н , и R35
является метилом, -(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2,
(СН2) 3NH (C=NH) NH2 или - (СН2) 2С02Н, где волнистая линия к С-концу дипептида означает ковалентную связь с J ариленовой части формулы НА или IIB, и волнистая линия к N-концу дипептида означает ковалентную связь с остатком W, если любой такой остаток присутствует, или к А или его субъединице, если индекс а равен 1, или к Lb, если а равен 0, и где дипептидная связь к J расщепляется внутриклеточной или регулирующей протеазой.
14D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 12D, где W' в Q2 является углеводородной частью, которая связана гликозидом с Е, где гликозидная связь расщепляется внутриклеточной гликозидазой, и где W'-E имеет структуру формулы VII:
.он
(формула VII),
где волнистая линия связана Е с одним из V, Z1, Z2 или Z3, если эта переменная группа является =C(R24), где Е является -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; и где R45 является -СН2ОН или -С02Н.
В предпочтительных вариантах, R45 является -С02Н. В других
предпочтительных вариантах, углеводородная часть W'-E имеет D-конфигурацию.
15D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 11D или 13D, где соединение имеет структуру формула IX:
(формула IX)
где R' является водородом или электронодонорной группой; R8 является водородом; R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или необязательно замещенным фенилом; R34 является метилом, изопропилом или -СН(ОН)СН3; R35 является метилом, - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(CH2)2C02H; J является -N (R33) -, где R33 является водородом или метилом; и V и Z1 независимо являются =СН- или =N-.
В некоторых вариантах А содержит Ci-Сб алкилен, необязательно замещенный основной единицей. В других вариантах, один или два из V, Z1, Z2 является =СН-, и другой является =N-. В предпочтительных вариантах, каждый из V, Z1, Z2 является =СН-.
16D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 15D, где соединение имеет структуру формула X:
О R35
V=Z2
D+ R9
I N^-Ra2 н - -л v=z_
R/S^ * [C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-A0-N^H. ,1 J-(\ /W
ь v-v-, *xF
АилиА-i K
(формула X)
где звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода; А0 является необязательной субъединицей А, где -[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и является Ai, если А0 присутствует так, что А становится Ai-A0; R является -Н; Ral является -Н или основной единицей (ОЕ), где ОЕ
имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; индекс m является целым числом от 0 до б; каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R34 является метилом, изопропилом или СН(ОН)СН3; R35 является - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(CH2)2C02H; J является -NH-; V, Z1 и Z2 являются =СН2-; R' является водородом или электронодонорной группой; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом.
В предпочтительных вариантах, УГ присутствует и индекс m варьируется от 0 до 4. В других предпочтительных вариантах УГ присутствует, и индекс m равен 0 или 4, и А0 отсутствует. В других предпочтительных вариантах, Ral является ОЕ и m равен 0.
В некоторых вариантах, Ral является ОЕ, где -N(R22) (R23) из ОЕ присутствует в виде своей кислотно-аддитивной соли, где кислотно-аддитивной солью является соль неорганической кислоты, предпочтительно, НС1, или соль органической кислоты, такой как ТФК. В других вариантах, кислотно-аддитивная соль является фармацевтически приемлемой солью.
(формула XI)
где Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А,
17D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 12D или 14D, где compound имеет структуру формула XI:
где А0 является необязательной субъединицей А (т.е., Ai становится А, если А0 отсутствует, и А является -Ai-A0-, если А0
присутствует); Е является -О- или -NH-; J является -N(R
33 \
где
R33 является водородом или метилом; V и Z3 независимо являются =СН- или =N-; R' является водородом или группой, выделяющей электрон; R8 является водородом; R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом; и R45 является -СОгН или -СН2ОН.
В предпочтительных вариантах R4
является
-С02Н, и
углеводородная часть W'-E имеет D-конфигурацию.
18D. Соединение лекарственное средство-линкер по вариантам 12D, 14D или 17D, где соединение имеет структуру формулы XII:
Л ^\ /
(формула XII)
где звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода; Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А, где -[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и Ai, если А0 присутствует, так, что А становится 1ку-1к0; где А0, если присутствует, соответствует по структуре аминсодержащей кислоте, связанной с J через С-концевой карбонил аминсодержащей кислоты; R является водородом; R' является водородом или группой, выделяющей электрон; Ral является водородом или основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5
или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом; индекс m является целым числом от 0 до б; каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; УГ отсутствует или является -С(=0)-; R45 является -СОгН или -СН2ОН; Е является -0-; J является -NH-; V и Z3 являются =СН2-; R8 является водородом; и R9 является водородом или метилом.
В некоторых вариантах, Ral является ОЕ, где -N(R22) (R23) из ОЕ присутствует в виде своей кислотно-аддитивной соли, где кислотно-аддитивной солью является соль неорганической кислоты, предпочтительно, НС1, или соль органической кислоты, такой как ТФК. В других вариантах, кислотно-аддитивная соль является фармацевтически приемлемой солью, и R45 является -С02Н. В других предпочтительных вариантах, УГ присутствует и индекс m варьируется от 0 до 4, и R45 является -С02Н. В других предпочтительных вариантах, УГ присутствует и индекс m равен О или 4, А0 отсутствует и R45 является -С02Н. В других предпочтительных вариантах, Ral является ОЕ, m равен О, А0 присутствует и R45 является -С02Н. В любом из этих предпочтительных вариантов, углеводородная часть Q2 имеет D-конфигурацию.
19D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-19D, где А0, если присутствует, имеет структуру формулы XIII или формулы XIV:
где волнистая линия к карбонильной части любой структуры представляет точку присоединения А0 к W, и где волнистая линия к амино части любой структуры представляет точку присоединения А0 к А1г где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что если К или L является О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 ко L отсутствуют, и если К или L является N, один из R41, R42 к К или один из R43, R44 к L отсутствуют, и при условии, что никаких два
соседних L не являются независимо выбранными N, О, или S; где индекс q является целым числом от 0 до 12, и индекс г является целым числом от 1 до 12; где G является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, -ОН, -0RG, -СО2Н, C02RG, где RG является Ci-Сб алкилом, арилом или гетероарилом, необязательно замещенным, или RPR, где RPR является подходящей защитной группой, -NH2, или -N(RG) (RPG) , где RG, выбранный независимо, такой, как определен выше, или оба RG вместе с атомом азота к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил, или оба RPR вместе образуют подходящую защитную группу; где R38 является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R39-R44 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным, или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R39, R40, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С6 циклоалкил, или R41, R42 вместе с К к которому они присоединены, если К является С, или R43, R44 вместе с L к которому они присоединены, если L является С, образуют С3-С6 циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43, или R41 и R43, вместе с атомом углерода, или гетероатом к которому они присоединены, и атомами, расположенными между этими атомами углерода и/или гетероатомами, образуют 5- или б-членный циклоалкил или гетероциклоалкил, или где А0 имеет структуру, соответствующую альфа-амино, бета-амино или другой аминсодержащей кислоте.
20D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 18D, где обозначенный звездочкой (*) атом углерода преимущественно находится в той же абсолютной конфигурацией, как альфа атом углерода L-аминокислоты, если указанный атом углерода имеет хиральность.
21D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-2 0D, где -D+ является кватернизированным содержащим третичный амин, тубулиновым разрывающим агентом.
22D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
21D, где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+
является единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства.
23D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
22D, где единица кватернизированого тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру формулы DG-i' или формулы DH-i':
R4B
О R6 OR2A о
D4A О D5 _3
R ~ R° RJ R8
~ (формула DH-i)
где круг означает 5-членный азотгетероарил, и где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3-положениях друг к другу при необязательном замещении на оставшихся положениях; R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН; R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом; R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо; R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом; и индекс m равен О или 1, где волнистая линия означает ковалентную связь D+ в остатком соединения лекарственное средство-линкер.
24D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
23D, где единица кватернизированого тубулизинового
где Z является необязательно замещенным низшим алкиленом
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
или необязательно замещенным низшим алкениленом; индекс q, показывающий количество заместителей R7B, равен 1, 2 или 3; каждый R7B выбирают независимо из водорода и О-связанного заместителя; и где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
25D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
24D, где единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, или R2 вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН; R3 является необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R5 и R6 являются остатками боковой цепи природных гидрофобных аминокислот; -N(R7) (R7) является -NH(Ci~C6 алкилом) или -NH-N(Ci~ С6 алкилом) 2, где один и только один Ci-C6 алкил необязательно замещен -СОгН или ее сложным эфиром или необязательно замещен фенилом; и где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
26D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 25D, где -N(R7) (R7) выбирают из группы, включающей -NH(CH3), NHCH2CH2Ph и -NHCH2-C02H, -NHCH2CH2C02H и -NHCH2CH2CH2CO2H.
27D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
23D, где единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
28D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 23D-27D, где О-связанный заместитель -0R2A отличен от -ОН (т.е., R2A не является водородом).
29D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту
2 8D, где единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R4A является метилом; R3 является Н, метилом, этилом, пропилом, -СН2-ОС (О) R3A, -СН2СН (R3B) С (О) R3A или -СН (R3B) С (О) NHR3A, где R3A является Ci-C6 алкилом и R3B является Н или Ci-C6 алкилом, выбранным независимо из R3A; и -0R2A является О-связанным заместителем, выбранным из группы, включающей -0R2B, -OC(0)R2B или -OC(0)N(R2B) (R2C) , где R2B и R2C независимо выбирают из группы, включающей Н, Ci-Сб алкил и С2-Сб алкенил; и R7B является водородом или -ОН.
30D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
2 9D, где единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A и R3 независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, пропил и изопропил; R2B является метилом, этилом, пропилом и изопропилом, или -0R2A такой, как определен выше; R3 является метилом, этилом или пропилом; и R7B является водородом
или -ОН.
31D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
2 9D, где единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2B является метилом, этилом, пропилом, изопропилом, 3-метилпроп-1-илом, 3,З-диметилпроп-1-илом или винилом; R3 является метилом, этилом или пропилом; и R7B является водородом или -ОН.
32D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 23D-29D и 31D, где R2B является -СНз, R3 является -СН3 и R7B является Н или -ОН.
33D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 23-30, где R2A является -СН2СН3.
34D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 23D-29D и 31D, где R2B является -СН3, R3 является -СН3 и R7B является Н.
35D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 22D, где соединение имеет структуру:
где R34 является изопропилом и R35 является -СНз, изопропилом, -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 или -CH2CH2C02H; R7B является водородом или -ОН; и R2A является Ci-Сб алкилом, С2-Сб алкенилом, -OCH2OR2B, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом или Ci-Сб алкилом.
36D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 35D, где R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; и R2A является
низшим алкилом, -C(=0)R2B или -С (=0) NHR2B, где R2B является низшим алкилом.
37D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 35D, где соединение имеет структуру
где R7B является водородом или -ОН; R2A является Ci-C6 алкилом, С2-С6 алкенилом, -OCH2OR2B, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом или Ci-Сб алкилом; и R45 является -С02Н или -СН20Н.
38D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 102, где R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; и R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом.
39D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 35D или 3 6D, где соединение имеет структуру
40D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 1D-8D, 15D, 17D и 35D-37D, где А или -А!-А0- является -СН2 (СН2) 4 (С=0) - или -СН2 (СН2) 4 (С=0) NHCH2CH2 (С=0) - .
41D. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из вариантов 35-40D и где R2A является -С(О)СНз, метилом, этилом или пропилом.
42D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
2ID, где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+ является единица кватернизированого ауристатинового или доластатинового лекарственного средства.
43D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 42D, где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+ является кватернизированный доластатин 10 или доластатин 15.
44D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту
42D, где единица кватернизированого ауристатинового
лекарственного средства -D+ имеет структуру DE' или DF':
(DF')
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом; R12 является водородом, Ci-Ce алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом); R14 является водородом или метилом, или R13 и R14 взятые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8 циклоалкил; R15 является водородом или Ci-C8 алкилом; R16 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ; R17 независимо является водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом и О-(Ci-C8 алкилом); R18 независимо является водородом или Ci-C8 алкилом; R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом,
-С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 циклоалкилом) ; R21 является арилом или С3-С8 гетероциклом; где R19A
является водородом, Ci-C8 алкилом или -ОН; R20 является водородом, Ci-C2o алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и -(R470)m-CH(R49)2; индекс m является целым числом 1-1000; R47 является С2-С8 алкилом; R48 является водородом или Ci-C8 алкилом; R49 независимо является -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, - (СН2) n-S03H, или - (СН2) n-S03-Ci-C8 алкилом; R50 независимо является Ci-C8 алкилом или - (СН2) n-COOH; Z является О, S, NH, или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом; X1 является Ci-Сю алкиленом; и индекс п является целым числом от 0 до б; где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
45D. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 4 4D, где соединение имеет структуру:
где R34 является изопропилом и R35 является -СНз, -СН2СН2СООН или -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 .
46D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту 4 5D, где соединение имеет структуру:
где R45 является -С02Н или СН2ОН.
48D. Соединение лекарственное средство-линкер по варианту
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; R34 является изопропилом и R35 является -СН3, изопропилом, CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 или -CH2CH2C02H; R7B является водородом или -ОН; R2A является Ci-C6 алкилом, С2-С6 алкенилом, -OCH2OR2B, C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом или Ci-Сб алкилом; и индекс р является числом от 1 до 8.
2Е. Композиция КЛЛ по варианту 1Е, где R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и индекс р является числом от 1 до 8.
ЗЕ. Композиция КЛЛ по варианту 1Е, где композиция представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; R7B является водородом или -ОН; R2A является Ci-Сб алкилом, -OCH2OR2B -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является Ci-C6 алкилом или С2-С6 алкенилом; и индекс р является числом от 1 до 8.
4Е. Композиция КЛЛ по варианту ЗЕ, где R7B является
водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и индекс р является числом от 1 до 8.
5Е. Композиция КЛЛ по варианту 1Е, где структура композиции представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; индекс р является числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
6Е. Композиция КЛЛ по варианту ЗЕ, где структура композиции представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела;
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; Ab-S-часть связана с атомом углерода а или |3 с карбоновой кислотой; R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и индекс р' является целым числом от 1 до 8.
2F. Композиция КЛЛ по варианту 1F, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; Ab-S-часть связана с атомом углерода а или |3 с М3 карбоновой кислотой; R7B является водородом или -ОН; R2A является низшим алкилом, C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и индекс р' является целым числом от 1 до 8.
3F. Композиция КЛЛ по варианту 1F, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; Ab-S-часть связана с атомом углерода а или Р с М3 карбоновой кислотой; индекс р' является целым числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
4F. Композиция КЛЛ по варианту 2F где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей на основе антитела; S является атомом серы лигандной единицы на основе антитела; Ab-S-часть связана с атомом углерода а или Р с М3 карбоновой кислотой;
индекс р' является целым числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
5F. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1F или 2F, где А является -СН2 (СН2) 4 (С=0) - или -СН2 (СН2) 4 (С=0) NHCH2CH2 (С=0) - .
6F. Композиция КЛЛ по любому из вариантов 1Е-6Е и 1F-5F, где R2A является -С(О)СНз, метилом, этилом или пропилом.
ПРИМЕРЫ
Общее: Химия
Все коммерчески доступные безводные растворители применяют без дальнейшей очистки. Аналитическую тонкослойную хроматографию проводят на алюминиевых пластинах с силикагелем 60 F254 (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ) . Радиальную хроматографию проводят на аппарате Chromatotron (Harris Research, Palo Alto, СА) . Хроматографию на колонке проводят на системе флэш-очистки Biotage Isolera One(tm) (Charlotte, NC) . Аналитическую ВЭЖХ проводят на системе доставки растворителя Varian ProStar 210(tm)П предусматривающую определитель Varian ProStar 330 PDA. Образцы элюируют над колонкой с обращенной фазой С12 Phenomenex Synergi(tm) 2,0x150 мм, 4 мкм, 80 А. Кислая подвижная фаза состоит из ацетонитрила и воды, где обе жидкости содержат либо 0,05% трифторуксусную кислоту, либо 0,1% муравьиную кислоту (обозначено для каждого соединения). Соединения элюируют линейным градиентом кислого ацетонитрила от 5% через 1 мин после впрыскивания, до 95% через 11 мин, затем изократным 95% ацетонитрилом до 15 мин (скорость потока=1,0 мл/мин). ЖХ-МС проводят на двух различных системах. ЖХ-МС система 1 состоит из масс-спектрометра ZMD Micromass, связанного интерфейсом с колонкой с обращенной фазой С12 Phenomenex Synergi 2,0x150 мм, 4 мкм, 8 0 А. Кислый элюент состоит из линейного градиента ацетонитрила от 5% до 95% в 0,1% водной муравьиной кислоте в течение более 10 мин, затем из изократного 95% ацетонитрила в течение 5 мин (скорость потока=0,4 мл/мин). ЖХ-МС система 2 состоит из масс-спектрометра Waters Xevo G2(tm) ToF, соединенных интерфейсом с Waters 2695 Separations Module с Waters 2996 Photodiode Array Detector; колонка, подвижные фазы, градиент и скорость потока такие же, как для ЖХ-МС системы 1. СЭЖХ-МС
система 1 состоит из массового детектора Waters SQ, соединенного интерфейсом с Acquity(tm) Ultra Performance LC, оборудованным колонкой с обращенной фазой Acquity UPLC ВЕН С18 2,1x50 мм, 1,7 мкм. Кислая подвижная фаза (0,1% муравьиная кислота) состоит из градиента 3% ацетонитрил/97% вода до 100% ацетонитрила (скорость потока=0,5 мл/мин). СЭЖХ-МС система 2 состоит из масс-спектрометра Waters Xevo G2 ToF, связанного интерфейсом с Waters Acquity H-Class Ultra Performance LC, оборудованным колонкой с обращенной фазой Acquity UPLC ВЕН С18 2,1x50 мм, 1,7 мкм. Кислая подвижная фаза (0,1% муравьиная кислота) состоит из градиента 3% ацетонитрил/97% вода до 100% ацетонитрила (скорость потока=0,7 мл/мин). Препаративную ВЭЖХ проводят на системе доставки растворителя Varian ProStar 210, предусматривающей детектор Varian ProStar 330 PDA. Продукты очищают над колонкой с обращенной фазой С12 Phenomenex Synergi 10,0x250 мм, 4 мкм, 80 А, элюируя 0,1% трифторуксусной кислотой в воде (растворитель А) и 0,1% трифторуксусной кислотой в ацетонитриле (растворитель В) . Способы очистки обычно включают линейные градиенты растворителя А до растворителя В, при линейном изменении от 90% водного растворителя А до 10% растворителя А. Скорость потока составляет 4,6 мл/мин, отслеживание при 254 нм. Данные спектра ЯМР собирают на спектрометре Varian Mercury 400 МГц. Константы взаимодействия (J) представлены в герцах. Общее: Биология
Анализы in vitro. Клетки, культивированные в фазе логарифмического роста, засевают в течение 24 ч в 9б-луночные планшеты, содержащие 150 мкл RPMI 1640 с добавлением 20% ФБС. Серийные разведения конъюгатов антитело-лекарственное средство в клеточной культуре готовят в 4х рабочих концентрациях; 50 мкл каждого разведения добавляют к 9б-луночные планшеты. После добавления КАЛ клетки инкубируют с тестируемыми образцами в течение 4 дней при 37°С. Через 96 ч ингибирование роста оценивают с помощью CellTiter-Glo(tm) (Promega, Madison, WI) и люминесценцию измеряют на планшетном ридере. Значение 1С50, определенное трижды, определено здесь как концентрация, которая дает 50%
снижение роста клеток по сравнению с необработанными контрольными образцами.
In vivo модели ксенотрансплантатов. Все эксперименты
проводят в соответствии с правилами Институционального комитета
по уходу за животными и их использованию (США) на оборудовании,
полностью одобренном Международной ассоциацией оценки и
аккредитации лабораторных исследований на животных. Эксперименты
по определению эффективности проводят на модели
ксенотрансплантата L54 0cy лимфогранулематоза. Опухолевые клетки L54 0cy, в виде суспензии плеток, имплантируют подкожно SCID мышам с ослабленным иммунитетом. При приживлении опухоли мышей произвольно делят на группы для исследования, когда средний объем опухоли достигает около 100 мм3. КАЛ или контрольные образцы вводят единожды внутрибрюшинной инъекцией. Объем опухоли в зависимости от времени определяют с применением формулы (LxW2)/2. Животных умерщвляют, когда объем опухоли достигает 1000 мм3. Мышей, которые показали устойчивую регрессию, выводят из исследования примерно на 100 день после имплантации.
Ex vivo исследование стабильности. Оценку содержания лекарственного средства гуманизированных КАЛ в образцах плазмы грызунов с применением ЖХ-МС с обращенной фазой проводят, начиная с выделения КАЛ с помощью смолы IgSelect(tm) (GE Healthcare), которая селективно связывается с человеческим доменом Fc. КАЛ получают с 8 лекарственными средствами на антитело либо MDPR-глюкуронид-четвертичный амин-АЕ 8, либо mDPR-Val-Cit-PAB-четвертичный амин-АЕ (mDPR-vcPAB4-AE) 14 с применением полностью восстановленного сАСЮ. КАЛ (1,0 мг/мл) инкубируют в стерильной плазме крысы и мыши в течение 10 дней при 37°С. В восемь моментов времени в течение инкубирования отбирают 50 мкл аликвоту каждого КАЛ и замораживают при -8 0°С. После завершения курса КАЛ очищают от каждого образца и анализируют ВЭЖХ с обращенной фазой на масс-спектрометре TOF для определения соотношения лекарственное средство:антитело.
Исследование ферментного отделения лекарственного средства. Пятнадцать мкл 10 мМ исходного раствора лекарственное средство
линкер 8 в ДМА добавляют в 2 7 мкл ДМСО и гасят N-ацетилцистеином (30 мкл 100 мМ исходного раствора в ФРФБ) в пробирке Эппендорфа. Добавляют 4 8 мкл ФРФБ, и пробирку выдерживают при комнатной температуре в течение 1 часа. Ферментные исходные растворы готовят одновременно растворением р-глюкуронидазы (из бычьей печени, > 1000000 единиц/г твердого вещества) в 100 мМ NaOAc до конечной концентрации 1 или 2 мг/мл, при этом 3 8 мкл погашенного раствора линкера объединяют с 170 мкл свежего ферментного исходного раствора и 132 мкл 100 мМ NaOAc, затем инкубируют при 37°С. 25 мкл берут в каждый момент времени, добавляют к 150 мкл
МеОН, герметично закрывают и хранят при -80°С до тех пор, пока не будут собраны все моменты времени. Затем образцы центрифугируют при высокой скорости и анализируют СЭЖХ-МС, подсчитывая ионы непрореагировавшего погашенного линкера и выделенного лекарственного средства.
Внутриклеточное выделение лекарственного средства. Клетки TFla, L428 и НСТРЕТ-15 применяют в исследовании. Клетки, которые культивированы в нормальных условиях, собирают и промывают свежей средой при П5х105 клеток/мл. Для каждого условия обработки, 5-15х106 клеток помещают в Т25 или Т150 колбы. Добавляют СОКТ9-5023 (8-лекарственных средств/АЬ) при 1 мкг/ил к культурам, и их инкубируют при 37°С, 5% С02 в течение 24 ч. Для получения суспензии клеток известный объем клеточной культуры собирают центрифугированием (500хд, 5 мин, 4°С) , и аликвоту среды
забирают и хранят для масс-спектрального анализа (-20°С). Для прилипающих клеток среду осторожно удаляют (аликвоту хранят для масс-спектрального анализа), и клетки поднимают трипсином-ЭДТК с последующим центрифугированием (500хд, 5 мин, 4°С) для сбора сгустка клеток. Для суспензии и прилипающих клеток собранные сгустки клеток повторно суспендируют в ледяном ФРФБ, и аликвоту отбирают для подсчета и определения средних диаметров клеток с применением анализатора жизнеспособности клеток Vi-Cell XR2,03 (Beckman Coulter, Fullerton, СА) . Оставшиеся суспензии клеток осаждают центрифугированием (500хд, 5 мин) и затем промывают еще
раз 1 мл ледяного ФРФБ. Полученные сгустки хранят при -2 0°С.
Необработанные образцы получают с применением
необработанных сгустков клеток и культуральной среды для
применения в градуировочных кривых. В необработанные сгустки
клеток добавляют известное количество определяемого вещества 4
мкл 25Х стандартного аналита. Сгустки клеток с добавлением
известного количества определяемого вещества и обработанные
суспендируют при интенсивном перемешивании в 4 00 мкл содержащего
МеОН внутреннего стандарта и помещают при -2 0°С в течение 15 мин.
Образцы затем центрифугируют при 1б000хд, и надосадочные жидкости
готовят для твердофазной экстракции. В необработанные образцы
культуральной среды (0,5 мл) добавляют известное количество
определяемого вещества 4 мкл 25Х стандарта. Культуральную среду
с добавлением известного количества определяемого вещества и
обработанную смешивают с 10 мкл внутреннего стандарта и готовят
для твердофазной экстракции. Образцы подвергают твердофазной
экстракции, и выделенные растворы, содержащие лекарственное
средство, сушат и восстанавливают для количественной оценки ЖХ-
МС/МС. Для получения уравнения для количественной оценки
выделенного лекарственного средства в экспериментальных
неизвестных образцах, площадь пика для каждого стандарта
лекарственного средства делят на площадь пика, полученную для
внутреннего стандарта. Полученные отношения площади пика строят
как функцию от отмеренных точно количеств стандарта, и данные
сопоставляют с кривой с применением линейной регрессии.
Отношения площади пика, полученной для выделенного
лекарственного средства к площади пика внутреннего стандарта в
экспериментальных образцах превращают в количества
лекарственного средства с применением производного уравнения.
Пример 1: триацетат (2S,3R,4S,5S,6S) -2- (2- (3- ((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(бромметил)фенокси)-6- (метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-Зг4г5-триила (2):
В высушенную пламенем колбу загружают известный (Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831-840) фрагмент глюкуронидного
линкера (1, 210 мг, 281 мкмоль) в 4,5 мл безводного ТГФ. Раствор перемешивают при комнатной температуре под N2. Последовательно добавляют трифенилфосфин (111 мг, 421,5 мкмоль) и N-бромсукцинимид (75 мг, 421,5 мкмоль) и раствор перемешивают в течение 2 часов. Реакционную смесь конденсируют при пониженном давлении и очищают над двуокисью кремния через колонку Biotage (Гексан/EtOAc, 30%-50%-70%) с получением соединения 2 (222 мг, 97%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,36 мин, m/z (ЭР+) найдено 811,34.
Пример 2: (S) -N- (3- (3- ((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S, 3R, 4S, 5S, 6S) -3г4,5-триацетокси-6-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил) окси) бензил) -1- (((S) -1- (((3Rr4Sr5S) -1-((S) -2-((1R,2R) -3-
(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1 -оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-З-триметил-1-оксобутан-2-аминий (4) : В сосуд под давлением загружают бромированное промежуточное соединение удлиняющей-глюкуронидной единицы (2, 111 мг, 137 мкмоль) из примера 1 и ауристатин Е (3, 100 мг, 137 мкмоль) в безводном 2-бутаноне (4,2 мл) . Реакционный сосуд ополаскивают N2 и герметично закрывают. Реакционную смесь затем перемешивают и нагревают до 80°С в течение 12 часов. Полученную смесь охлаждают, конденсируют при пониженном давлении и очищают над двуокисью кремния через колонку Biotage (СН2С12/МеОН, 2%-20%-100%) с получением соединения 4 (113 мг, 5 6%) . Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 1): tr=2,02 мин, m/z (ЭР+) найдено 1462,53.
Пример 3 : (S) -N- (3- (3-аминопропанамидо) -4-
(((2S r3Rr4S r5S r 6S)-6-карбокси-З г4 г5-тригидрокситетрагидро-2Е-пиран-2-ил) окси) бензил) -1- (((S) -1- (((3R,4S,5S) -1- ((S) -2-
((lRr2R) -3-(((ISr2R) -1 -гидрокси-1 -фенилпропан-2-ил) амино) -1 -метокси-2-метил-З-оксопропил)пирролидин-1-ил)-З-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N, З-триметил-1-оксобутан-2-аминий (5) :
В колбу загружают глюкуронид-АЕ (4, 113 мг, 7 7 мкмоль) в
ТГФ (1,3 мл) и МеОН (1,3 мл). Этот раствор перемешивают под N2 и охлаждают до 0°С. LiOH*H20 (19 мг, 4 62 мкмоль) солюбилизируют в Н20 (1,3 мл), затем добавляют по каплям. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 часа. Затем реакционную смесь гасят уксусной кислотой (2 6 мкл, 4 62 мкмоль) и конденсируют при пониженном давлении. Остаток помещают в минимальное количество ДМСО и очищают препаративной ЖХ с получением соединения 5 (34 мг, 4 0%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,20 мин, m/z (ЭР+) найдено 1100,51.
Пример 4 : (S) -N- (3- (3- ((S) -3- ((трет-бутоксикарбонил) амино) -2- (2,5-диоксо-2г5-дигидро-1Е-пиррол-1-
ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2Sr3Rr 4Sr5Sr 6S)-6-карбокси-3 г4 г5-тригидрокситетрагидро-2Е-пиран-2-ил) окси) бензил)-1- (((S)-1- ( ( (3Rr4Sr5S) -1- ( (S) -2-( (1R,2R) -3-( ( (1S,2R) -1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-
оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,Nг3-триметил-1-оксобутан-2-аминий (7):
В колбу загружают глюкуронид-АЕ со снятой защитой (5, 34 мг, 31 мкмоль) в безводном ДМФ (0,31 мл) . Добавляют mDPR(Boc)-OSu (6, 14 мг, 37 мкмоль) под N2. Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (27 мкл, 155 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь затем гасят уксусной кислотой (27 мкл) и очищают препаративной ЖХ с получением соединения 7 (29 мг, 68%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,52 мин, m/z (ЭР+) найдено 1366,40.
Пример 5: (S) -N- (3- (3- ((S) -З-амино-2- (2 , 5-диоксо-2 , 5-
дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-
(((2S r3Rr4S r5S r 6S)-6-карбокси-З г4 г5-тригидрокситетрагидро-2Е-пиран-2-ил) окси) бензил) -1- (((S) -1- (((3R,4S,5S) -1- ((S) -2-
((lRr2R) -3-(((ISr2R) -1 -гидрокси-1 -фенилпропан-2-ил) амино) -1 -метокси-2-метил-З-оксопропил)пирролидин-1-ил)-З-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N, З-триметил-1-оксобутан-2-аминий (8) :
Колбу, содержащую mDPR(Вое)-Глюкуронид-АЕ (7, 29 мг, 21 мкмоль) охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в CH2CI2 (1,1 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь затем помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ЖХ с получением соединения 8 (20 мг, 7 5%) . Аналитическая СЭЖХ-МС: tr=l,2 3 мин, m/z (ЭР+) найдено 1266, 39. Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 2) : tr=9,53 мин, m/z (ЭР+) найдено 1266,70.
Пример 6: (9Н-флуорен-9-ил)метил ((S)-1-(((S)-1-((4-
(бромметил)фенил)амино)-1-оксо-5-уреидопентан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)карбамат (10):
Дипептид Fmoc-Val-Cit-PAB (9, 75 мг, 125 мкмоль) добавляют
в высушенную пламенем колбу под N2 и охлаждают до 0°С. Раствор А 33% НВг в уксусной кислоте (1,3 мл) добавляют по каплям. Раствор нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 часов. Оставшийся НВг затем выдувают через поток N2, и реакционную смесь далее конденсируют при пониженном давлении. Полученный остаток помещают в ТГФ и повторно конденсируют 3 раза, затем переносят без дальнейшей очистки. Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,19 мин, m/z (ЭР+) найдено 664,47.
Пример 7 : (S) -N- (4-((S) -2- ((S) -2-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо) бензил) -1 - (((S) -1- (((3R, 4S,5S) -1 - ((S) -2-((lRr2R) -3-(((ISr2R) -1 -гидрокси-1 -фенилпропан-2-ил) амино) -1 -метокси-2-метил-З-оксопропил)пирролидин-1-ил)-З-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-З-триметил-1-оксобутан-2-аминий (11) :
В сосуд под давлением, загруженный неочищенным бромированным дипептидом (10, 48 мг, 72 мкмоль), добавляют ауристатин Е (3, 30 мг, 41 мкмоль) и безводный 2-бутанон (2,2 мл) . Сосуд ополаскивают N2 и герметично закрывают. Реакционную смесь затем нагревают до 8 0°С при перемешивании в течение 3 часов. ЖХ-МС реакцию не показывает, добавляют N,N-диизопропилэтиламин (7 мкл, 41 мкмоль), и реакционную смесь повторно герметично закрывают на 12 часов. Реакционную смесь
конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ЖХ с получением 11 (13 мг, 24%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,88 мин, m/z (ЭР+) найдено 1315,57.
Пример 8: (S)-N-(4 - ((S)-2 - ((S)-2-амино-З-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо) бензил) -1 - (((S) -1- (((3R, 4S,5S) -1 - ((S) -2-((1R,2R) -3-(((IS,2R) -1 -гидрокси-1 -фенилпропан-2-ил) амино) -1 -метокси-2-метил-З-оксопропил)пирролидин-1-ил)-З-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N, З-триметил-1-оксобутан-2-аминий (12) :
Fmoc-Val-Cit-PAB-AE (11, 13 мг, 10 мкмоль) добавляют в колбу с безводным ДМФ (0,4 мл). Добавляют пиперидин (0,1 мл) под N2. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 0 минут. Реакционную смесь непосредственно очищают препаративной ЖХ с получением соединения 12 (8 мг, 74%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,2 7 мин, m/z (ЭР+) найдено 1093, 62 .
Пример 9 : (S)-N-(4-((7S,10S,13S)-7- (2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-10-изопропил-2г2-диметил-4г8,11-триоксо-13-(3-уреидопропил)-З-окса-5,9,12-триазатетрадеканамидо)бензил)-1-( ( (S) -1- ( ( (3R,4S,5S) -1 - ( (S) -2-( (1R,2R) -3-( ( (1S,2R) -1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-
оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил) амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминий (13):
В колбу загружают Val-Cit-PAB-AE (12, 8 мг, 7,3 мкмоль) в безводном ДМФ (146 мкл). Добавляют mDPR(Вое)-OSu (6, 3,3 мг, 8,8 мкмоль) под N2. Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (6 мкл, 35 мкмоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь затем гасят уксусной кислотой (6 мкл) и очищают препаративной ЖХ с получением 13 (2 мг, 17%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tr=l,66 мин, m/z (ЭР+) найдено 1359,51.
Пример 10 : (S) -N- (4- ((S) -2- ((S) -2- ((S) -З-амино-2- (2,5-
диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил)-1- (((S)-1-( ( (3R,4S,5S) -1- ( (S) -2-( (1R,2R) -3-( ( (1S,2R) -1-гидрокси-1
фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-
оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил) (метил) амино) -З-метил-1 -оксобутан-2-ил) амино) -N',Nг 3-триметил-1-оксобутан-2-аминий (14):
Колбу, содержащую mDPR(Вое)-Val-Cit-PAB-AE (13, 2 мг, 1,5 мкмоль) охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (2 94 мкл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 3 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ЖХ с получением соединения 14 (2,2 мг, 99%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,30 мин, m/z (ЭР+) найдено 1259, 69. Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 2) : tr=9,22 мин, m/z (ЭР+) найдено 1259,78.
Пример 11: N- (3- (3- ((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)-пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-б-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-N-метил-З-(метил(2-(9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)амино)-N- (2- (9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)пропан-1-аминий (16):
Бромированную удлиняющую-глюкуронидную единицу,
промежуточное соединение 2 (25 мг, 3 0 мкмоль) из Примера 1 и симметричный феназиновый димер 15 (J. Med. Chem., 2001, 44, 1407) (19 мг, 30 мкмоль) растворяют в безводном бутаноне (0,48 мл) и безводном диметилформамиде (0,48 мл) . Реакционную смесь продувают азотом и нагревают до 8 0°С в герметично закрытой пробирке в течение 18 ч. ЖХ/МС анализ показывает продукт в присутствии исходного материала и бис-алкилированный побочный продукт. Неочищенный продукт затем концентрируют и очищают препаративной ВЭЖХ с получением четвертичного амина 16 (8,5 мг, 21%). Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 1): tr=12,52 мин, m/z (ЭР+) найдено 1359,19.
Пример 12: N-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2Sr3Rr4S,5Sr 6S)-6-карбокси-Зr4r5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-N-метил-З- (метил(2-(9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)амино)-N- (2- (9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)пропан-1-аминий (17):
В колбу загружают четвертичный аминовый линкер 16 (8,5 мг, 6,0 мкмоль), растворенный в метаноле (0,2 мл) и тетрагидрофуране
(0,2 мл), затем охлаждают под азотом до 0°С на ледяной бане. Моногидрат гидроксида лития (0,75 мг, 18 мкмоль) растворяют в воде (0,1 мл), и раствор добавляют по каплям в реакционную колбу. Добавляют еще воду (0,2 мл), метанол (0,2 мл) и тетрагидрофуран (0,2 мл). Реакционную смесь затем перемешивают в течение 1,5 часов при 0°С, затем добавляют еще гидроксид лития
(0,75 мг, 18 мкмоль) в 0,1 мл воды для реакции. Через 3 часа реакция завершается, по данным ЖХ, затем реакционную смесь гасят ледяной уксусной кислотой (2,1 мкл) и концентрируют роторным выпариванием. Неочищенный продукт очищают препаративной ВЭЖХ с получением четвертичного аминового линкера 17 с полностью снятой защитой (3,7 мг, 62%) . Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 1) : tr=10,26 мин, m/z (ЭР+) найдено 997,45.
Пример 13 ; N-(4-(((2Sr3Rr4S,5S, 6S)-6-карбокси-З,4,5-
тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-3-(3-(6-(2г5-диоксо-2г5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)пропанамидо)бензил)-N-метил-3- (метил (2- (9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)амино)-N-
(2-(9-метилфеназин-1-карбоксамидо)этил)пропан-1-аминий (19) :
К перемешиваемому раствору линкера 17 (3,7 мг, 3,6 мкмоль) в безводном диметилформамиде (0,18 мл) под азотом добавляют малеимидокапроилсукцинимидовый эфир 18 (1,2 мг, 4,0 мкмоль) в виде раствора в безводном диметилформамид (0,18 мл), затем диизопропилэтиламид (3,8 мкл). После перемешивания реакционной смеси в течение 1 часа при комнатной температуре под азотом, добавляют еще соединение 18 (0,6 мг) в 90 мкл диметилформамида, затем 90 мкл диметилсульфоксида для того, чтобы способствовать растворению всех реагентов. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом в течение еще двух часов, затем очищают множеством впрысков препаративной ВЭЖХ для удаления остаточного соединения 18 из продукта, четвертичного амин-феназинового димерного линкера 19 (2,1 мг, 45%) . Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 1): tr=10,76 мин, m/z (ЭР+) найдено 1190,35.
Пример 14: (S)-2-((S)-2-((трет-бутоксикарбонил) амино)-3
метилбутанамидо)пропановая кислота (22):
В колбу загружают Boc-Val-OSu (20, 1,0 г, 3,18 ммоль) и Н-А1а-0Н (21, 312 мг, 3,5 ммоль) в безводном диметилформамиде (10,6 мл) . Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (1,1 мл, 6,4 ммоль), и раствор перемешивают под N2 при 50°С в течение 12 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 22 (8 08 мг, 8 8%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,38 мин, m/z (ЭР+) найдено 289,60.
Пример 15_: трет-бутил ((S)-1-(((S)-1-((4-
(гидроксиметил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)карбамата (24):
В высушенную пламенем колбу загружают дипептид 22 (8 08 мг, 2,8 ммоль) и 4-аминобензойный спирт 23 (345 мг, 2,8 ммоль) в безводном дихлорметане (14 мл) . ЭЭДХ (762 мг, 3,1 ммоль) добавляют в виде твердого вещества и перемешивают под азотом при комнатной температуре в течение 12 ч. Затем реакционную смесь конденсируют и очищают над двуокисью кремния через колонку Biotage (СН2С12/МеОН, 0%-10%) с получением соединения 24 (660 мг, 60%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,51 мин, m/z (ЭР+) найдено 394,51.
Пример 16: трет-бутил ((S)-1-(((S)-1-((4-
(бромметил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)карбамата (25):
Колбу, содержащую Boc-Val-Ala-PABA-OH (24, 100 мг, 254 мкмоль), N-бромсукцинимид (68 мг, 381 мкмоль) и трифенилфосфин (100 мг, 381 мкмоль) ополаскивают азотом. Реакционную смесь помещают в ТГФ (4 мл) и перемешивают в течение 12 часов. Реакционную смесь конденсируют и очищают над двуокисью кремния через колонку Biotage (гексан/EtOAc, 10%-100%) с получением соединения 25 (94 мг, 81%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tr=2,09 мин, m/z (ЭР+) найдено 456,10.
Пример 17 : (2Sr 4R) -трет-бутил 4-(2-((lRr3R)-1-ацетокси-З-((2S,3S)-NгЗ-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-
карбоксамидо)пентанамидо)- 4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (27):
В высушенную пламенем колбу загружают Тубулизин М (26, 10 мг, 14 мкмоль) в безводном ДХМ (0,7 мл) и трет-бутанол (0,7 мл) . Добавляют диизопропилкарбодиимид (3,2 мкл, 21 мкмоль) и ДМАП
(0,08 мг, 0,7 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 8 часов. Реакционную смесь конденсируют, помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 27 (3,5 мг, 32%). Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 1): tr=l,35 мин, m/z (ЭР+) найдено 784,56.
Пример 18 : (2R) -2- (((2S,3S) -1- (((1R,3R) -1-ацетокси-1 - (4-
(((2Rr4S)-5-(трет-бутокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил) (метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1- (4-((S)-2-((S)-2 - ((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-метилбутанамидо)пропанамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ий (28):
В сосуд под давлением загружают Boc-Val-Ala-PAB-Br (25, 3,5 мг, 7,7 мкмоль) и защищенный Тубулизин М (4,0 мг, 5,1 мкмоль) в безводном бутаноне (0, 765 мл) . Добавляют N,N-диизопропилэтиламин
(1,8 мкл, 10 мкмоль), и реакционную смесь ополаскивают азотом. Сосуд герметично закрывают и перемешивают при 8 0°С в течение 12 часов. Реакционную смесь конденсируют, помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 28 (3,5 мг, 58%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,51 мин, m/z (ЭР+) найдено 1159,58.
Пример 19 : (2R) -2- (((2S,3S) -1- (((1R,3R) -1-ацетокси-1 - (4-(((2Rr4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил) (метил)амино)-З-метил-1-океопентан-2-ил) карбамоил) -1- (4- ((S) -2- ((S) -2-амино-З-
метилбутанамидо)пропанамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ий (29):
В колбу, содержащую Boc-Val-Ala-PAB-TubM-OtBu (28, 3,5 мг, 3 мкмоль) охлаждают до 0°С под азотом. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,3 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь конденсируют, помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 29 (1,9 мг, 63%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,05 мин, m/z (ЭР+) найдено 1003,60.
Пример 20 : (2R) -2- (((2S,3S) -1- (((1R,3R) -1-ацетокси-1- (4-
(((2Rr4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил) (метил)амино)-З-метил-1-океопентан-2-ил) карбамоил) -1- (4 - ((S) -2 - ((S) -2- (6- (2 г5-диоксо-2 г 5-дигидро-IE-пиррол-!-ил) гексанамидо) -3-метилбутанамидо)пропанамидо) бензил)-1-метилпиперидин-1-ий (30):
MC-OSu (18, 0,6 мг, 2 мкмоль) помещают в безводный диметилформамид (0,2 мл) и добавляют в колбу, содержащую Val-Ala-PAB-TubM (29, 1,9 мг, 2 мкмоль). Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (1,0 мг, 8 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают под азотом в течение 3 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением тубулизинового линкера, содержащего четвертичный амин 30 (1,2 мг, 53%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tr=l,25 мин, m/z
(ЭР+) найдено 1196,45.
Пример 21: (2R) -2- (((2S,3S) -1- (((1R,3R) -1-ацетокси-1 - (4-
(((2Rr4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил) (метил)амино)-З-метил-1-океопентан-2-ил) карбамоил) -1- (4 - ((7S, 10S, 13S) -7- (2г5-диоксо-2г 5-дигидро-IE-пиррол-! -ил)-10-изопропил-2г2г13-триметил-4г8,11-триоксо-3-окса-5,9,12-триазатетрадеканамидо)-бензил)-1-метилпиперидин-1-ий
(31) :
MDPR(Вое)-OSu (6, 1,3 мг, 3,5 мкмоль) помещают в безводный диметилформамид (0,3 мл) и добавляют в колбу, содержащую Val-Ala-PAB-TubM (29, 3,2 мг, 3,2 мкмоль). Добавляют N, N-диизопропилэтиламин (1,6 мг, 13 мкмоль) и реакционную смесь перемешивают под азотом в течение 3 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 31 (2,0 мг, 49%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,35 мин, m/z (ЭР+) найдено 1269,76.
Пример 22: (2R) -2- (((2S,3S) -1- (((1R,3R) -1-ацетокси-1 - (4-(((2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил) (метил)амино)-З-метил-1-океопентан-2-ил) карбамоил) -1- (4 - ((S) -2 - ((S) -2 - ((S) -3-амино-2- (2, 5-диоксо-2,5-дигидро-1Е-пиррол-1-ил)пропанамидо)-3-
метилбутанамидо)пропанамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ий (32):
Колбу, содержащую MDPR(Вое)-Val-Ala-PAB-TubM (31, 2 мг, 1,6 мкмоль) охлаждают до 0°С под азотом. Раствор 10% ТФК в CH2CI2 (1,6 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь конденсируют, помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 32 (1,0 мг, 54%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,02 мин, m/z (ЭР+) найдено 1169,72.
Пример 2_3 : 2- (3- (3- ((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-6-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-(4-(4,5-диметокси-2-(хинолин-3-карбоксамидо)бензамидо)фенэтил)-6,1-диметокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ий (34) :
В сосуд под давлением загружают бромированное промежуточное соединение удлиняющую-глюкуронидную единицу (2, 7 8 мг, 9 6 мкмоль) из примера 1 и Тариквидар (33, 62 мг, 9 6 мкмоль) в безводном 2-бутаноне (2,9 мл). Реакционный сосуд затем продувают азотом и герметично закрывают. Реакционную смесь затем перемешивают и нагревают до 80°С в течение 4 часов, когда ЖХ/МС показывает превращение в кватернизированный продукт. Полученный продукт охлаждают, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 34 (12 3 мг, 90%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,05 мин, m/z (ЭР+) найдено 1377,74. Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 2): tr=ll,23 мин, m/z (ЭР+) найдено 1377,47.
Пример 24 : 2- (3- (3-аминопропанамидо)-4-(((3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-(4-(4,5-диметокси-2-(хинолин-3-
карбоксамидо)бензамидо)фенэтил)-6,7-диметокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ий (35) :
В колбу загружают четвертичный аминовый линкер 34 (12 3 мг, 83 мкмоль), растворенный в метаноле (1,4 мл) и тетрагидрофуране (1,4 мл), затем охлаждают под азотом до 0°С на ледяной бане. Моногидрат гидроксида лития (21 мг, 500 мкмоль) растворяют в воде (1,4 мл), и раствор добавляют по каплям в реакционную
колбу. Реакционную смесь затем перемешивают в течение 2 часов при 0°С, затем добавляют еще гидроксид лития (7 мг, 170 мкмоль) в 0,45 мл воды для реакции. Через 3 часа завершение реакции подтверждают ЖХ, смесь гасят ледяной уксусной кислотой (28 мкл) и концентрируют роторным выпариванием. Неочищенный продукт очищают препаративной ВЭЖХ с получением четвертичного аминового линкера 35 с полностью снятой защитой (71 мг, 85%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,2 9 мин, m/z (ЭР+) найдено 1015,74.
Пример 2 5: 2-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3 г4 г5-тригидрокситетрагидро-2Е-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-(4-(4,5-диметокси-2- (хинолин-3-карбоксамидо)бензамидо)-фенэтил)-6г 7'-диметокси-1r2r3г4-тетрагидроизохинолин-2-ий (36):
Раствор MDPR(Вое)-OSu 6 (20 мг, 52 мкмоль) в безводном диметилформамиде (0,9 мл) добавляют в колбу, содержащую глюкуронид-Тариквидар 35 со снятой защитой (40 мг, 35 мкмоль). Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (30 мкл) добавляют, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом в течение 3 часов, в этот момент ЖХ-МС подтверждает превращение в продукт. Неочищенный продукт реакции очищают препаративной ВЭЖХ с получением сопряженного продукта, MDPR(Вое)-глюкуронид-Тариквидар (30 мг, 67%). Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 2): tr=9,99 мин, m/z (ЭР+) найдено 1281,45. Колбу, содержащую mDPR(Вое)-глюкуронид-Тариквидар (28 мг, 20 мкмоль) охлаждают до 0°С под азотом. Раствор 10% ТФК в СН2С1г (2 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре, в этот момент ЖХ-МС показывает полное снятие защиты. Реакционную смесь разбавляют в 2 мл ДМСО, концентрируют роторным выпариванием и очищают препаративной ВЭЖХ с получением соединения 36 (20 мг, колич.). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,30 мин, m/z (ЭР+) найдено 1181,64. Аналитическая ВЭЖХ-МС (система 2): tr=8,95 мин, m/z (ЭР+) найдено 1181,41.
Пример 2 6: Общая методика получения промежуточных
соединений простого эфира тубувалина
Этерификация: В высушенную пламенем колбу загружают Вос-
защищенный тубувалин (J. Org. Chem., 2008, 73, 4362-4369),
промежуточное соединение 41 в безводном тетрагидрофуране (50
мМ) , к которому добавляют 18-краун-б (2,0 эквивалента) и
охлаждают до -78°С. Гексаметилдисилазид калия (1,5 эквивалента) в
виде 1М раствора в тетрагидрофуране добавляют по каплям, и
реакцию затем перемешивают в течение 1 часа при -7 8°С под азотом.
Затем добавляют йодалкан (2-5 эквивалентов) и реакционную смесь
медленно нагревают до комнатной температуры с последующей
СЭЖХ/МС. После полного расходования исходного материала
реакционную смесь охлаждают на льду и гасят насыщенным хлоридом
аммония и разбавляют в дихлорметане (10 объемов). Органический
слой промывают 0,1М НС1, и полученную водную фазу дважды
экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические фазы затем
сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха.
Очистку неочищенного ВОС-защищенных О-алкилированных продуктов
этилового эфира (BOC-Tuv(О-эфир)OEt) проводят флэш-
хроматографией на силикагеле или препаративной ВЭЖХ. Соединения 42, 43 и 44 (Схема 7) получают для того, чтобы проиллюстрировать обую методику.
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-1-
метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксилат (42): СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=l,62 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 401,21, найдено 401,28.
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксилат (43): Тубувалиновое промежуточное соединение 41 (17 0 мг, 44 0 мкмоль) О-этилируют как описано выше с йодэтаном (89 мкл, 880 мкмоль) с получением указанного в заголовке соединения после очистки силикагелем, элюируя смесями метанола и дихлорметана. СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,66 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 415,23 (М+Н)+, найдено 415,29
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-4-
метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксилат (44): СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=l,77 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 428, 23 (М+Н)+,
найдено 451,30 (M+Na)+. гН ЯМР (1:1 смесь ротамеров, CDC13) 5 (ч./млн.) 0,91 (м, 9Н) , 1,40 (т, J=7,0 Гц, ЗН) , 1,47 (два с из-за ротамеров, 9Н) , 1,64 (м, ЗН) , 1,87 (м, 2Н) , 2,74 (м, ЗН) , 3,42 (м, 2Н) , 4,10 (м, 1Н) , 4,42 (кв, J=7,0 Гц, 2Н) , 4,50 (м, 1Н), 8,14 (два с из-за ротамеров, 1Н).
Снятие защиты: Омыление очищенных О-алкилированных
продуктов (BOC-Tuv(О-эфир)OEt) с получением соответствующих
соединений свободной кислоты простого эфира тубувалина (BOC-
Tuv (О-эфир) ОН) проводят при концентрации реакции 20 мМ с
применением 1:1:1 смеси растворителей
тетрагидрофуран:метанол:вода следующим образом. О-алкилированные промежуточные соединения тубувалина растворяют в 1 объеме каждого из тетрагидрофурана и метанола. Смесь затем охлаждают на ледяной бане при 0°С. Моногидрат гидроксида лития (2-3 эквивалента) растворяют в 1 объеме дистиллированной воды и добавляют по каплям в реакционную колбу при перемешивании при 0°С. Реакционную смесь затем нагревают до комнатной температуры и отслеживают СЭЖХ/МС. После превращения исходного материала в свободную кислоту реакцию гасят ледяной уксусной кислотой (2-3 эквивалента) и концентрируют роторным выпариванием. Неочищенные карбоновые кислоты затем очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 45, 46 и 47 (Схема 7) получают из соединений 42, 43 и 44, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-1-
метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксилат (45): СЭЖХ-МС
(система 1) : tr=l,47 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 373, 18, найдено 373, 41. гЯ ЯМР (1:1 смесь ротамеров, CDC13) 5 (ч./млн.) 0,87 (дд, J=6,7, 2,0 Гц, ЗН) , 0,96 (дд, J=6,7, 1,2 Гц, ЗН) , 1,49 (два с из-за ротамеров, 9Н) , 1,67 (м, 1Н) , 1,85 (м, 1Н) , 2,01 (м, 1Н) , 2,70 (м, ЗН) , 3,41 (с, ЗН) , 4,12 (м, 1Н), 4,36 (первый ротамер, дд, J=10,5, 2,3 Гц, 0,5Н), 4,48 (второй ротамер, д, J=8,6 Гц, 0,5Н), 8,28 (два с из-за ротамеров, 1Н).
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксилат (46): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,48 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 387,20 (М+Н)+, найдено
387, 26. гН ЯМР (CDC13) 5 (ч./млн.) 0,88 (дд, J=6,7, 2,0 Гц, ЗН) , 0,96 (д, J=6, б Гц, ЗН) , 1,49 (два с из-за ротамеров, 9Н) , 1,68 (м, 1Н), 1,86 (м, 1Н), 2,00 (м, 1Н), 2,69 (м, ЗН), 3,53 (м, 2Н), 4,09 (м, 1Н) , 4,43 (первый ротамер, дд, J=10,2, 2,7 Гц, 0,5Н), 4,54 (второй ротамер, д, J=7,0 Гц, 0,5Н), 8,24 (два с из-за ротамеров, 1Н).
Этил 2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-4-
метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксилат (47): СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=l,58 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 401,21 (М+Н)+, найдено 4 01,28 (M+Na)+.
Пример 2 7: Общая методика введения тубуфенилаланинового компонента амидным сочетанием.
Пептидное сочетание: О-алкилированные свободные кислоты тубувалина (BOC-Tuv(О-эфир)ОН) из примера 2 6 предварительно активируют растворением в безводном диметилформамиде (25-50 мМ) и добавлением ГАТУ (2,4 эквивалента) и ДИПЭА (5 эквивалентов). Реакционную смесь затем перемешивают под азотом при комнатной температуре в течение 10 минут. Активированную кислоту затем добавляют к аллиловому эфиру тубуфенилаланина 40 (Org. Lett., 2007, 9, 1605-1607), и реакционную смесь затем перемешивают при температуре окружающей среды под азотом, развитие отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакции добавляют ледяную уксусную кислоту (14 эквивалентов) и продукт (BOC-Tuv(О-эфир)Tup-0-аллил) очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 48, 49 и 50 (Схема 7) получают из соединений 45, 46 и 47, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (48): СЭЖХ-МС (система
1) : tr=l,96 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 602, 33 (М+Н)+, найдено 602,26.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (49): СЭЖХ-МС (система
2) : tr=l,84 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 616,34 (М+Н)+, найдено
616,43.
(2S,4R)-аллил 4- (2-( (1R,3R)-3-( (трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-4-метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (50): СЭЖХ-МС (система 2) : tr=2,00 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 630, 36 (М+Н)+, найдено 630, 45. гЕ ЯМР (CDC13) 5 (ч./млн.) 0,94 (м, 9Н) , 1,19 (д, J=7,4 Гц, ЗН) , 1,49 (с, 9Н) , 1,64 (м, 5Н) , 1,84 (м, 1Н) , 2,03 (м, 2Н) , 2,63 (м, 1Н), 2,73 (м, ЗН), 2,93 (м, 2Н), 3,41 (м, 2Н), 4,07 (м, 2Н) , 4,29 (м, 1Н) , 4,41 (м, 2Н) , 4,55 (м, 2Н) , 5,25 (м, 2Н) , 5,88 (м, 1Н), 7,24 (м, 5Н), 8,05 (два с из ротамеров, 1Н).
Снятие защиты: С очищенных О-алкилированных дипептидов тубувалин-тубуфенилаланин (BOC-Tuv(О-эфир)Tup-O-аллил) снимают защиту для освобождения вторичной аминовой функциональной группы тубувалина в кислых условиях с 10% ТФК в дихлорметане (25 мМ) . Конкретно, исходный материал растворяют в безводном дихлорметане (9 объемов) и перемешивают под азотом при 0°С. Трифторуксусную кислоту (1 объем) затем добавляют по каплям в перемешиваемый раствор. Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакционную смесь концентрируют роторным выпариванием и откачивают на вакуумной линии в течение ночи. Свободные амины (NH(СН3)-Tuv(0-эфир)Tup-O-аллил) переносят дальше без дальнейшей очистки. Соединения 51, 52 и 53 (Схема 7) получают из соединений 48, 49 и 50, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-1-метокси-4-метил-3-
(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (51): СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,17 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 524,26 (M+Na)+, найдено 524,27.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R, 3R)-1-этокси-4-метил-3-
(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (52): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,ll мин, m/z (ЭР+) рассчитано 516,29 (М+Н)+, найдено 516,37.
(2S,4R)-аллил 2-метил-4-(2-((1R,3R)-4-метил-З-(метиламино)-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-фенилпентаноат (53) : СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,16 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 530,31
(М+Н)+, найдено 530,40.
Аналогичные дипептиды получают заменой подходящего защищенного тубуфенилаланина соединения 40 другой аминокислотой или аминсодержащими кислотами, подходящим образом защищенными как показано на схеме 7, включая
где R7B является О-связанным заместителем, предпочтительно, -ОН, индекс п равен 0, 1 или 2, предпочтительно 0 или 1; и далее включает NH2-CH2-C02H, NH2-CH2CH2C02H и NH2-CH2CH2CH2C02H.
Пример 2 8: Общая методика амидного сочетания 0-алкилированных дипептидов на основе алкилового эфира тубувалина-тубуфенилаланина с Fmoc-защищенным L-изолейцином.
FMOC-L-Изолейцин (1,3-2 эквивалента) растворяют в безводном диметилформамиде (50-200 мМ) и предварительно активируют ГАТУ (1,5-2 эквивалента) и ДИПЭА (2 эквивалента); смесь перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре под азотом. Активированную кислоту затем добавляют к NH2-Tuv(О-эфир)Тир-О-аллильным дипептидам, полученным по примеру 27; Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом и отслеживают СЭЖХ/МС. После остановки развития реакции или завершения добавляют ледяную уксусную кислоту (13 эквивалентов), и полученные трипептидные продукты FMOC-Ile-Tuv(О-эфир)ТирО-аллил очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 54, 55 и 56 (Схема 7) получают из соединений 51, 52 и 53, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (5S,8R,10R)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-8-изопропил-7-метил-3,б-диоксо-2,11-диокса-4,7-диазадодекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (54): СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,07 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 837,43 (М+Н)+, найдено 837,20
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (5S,8R,10R)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н
флуорен-9-ил)-8-изопропил-7-метил-3,б-диоксо-2,11-диокса-4,7-диазатридекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (55): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 851,44 (М+Н)+, найдено 851,54.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (5S,8R,1 OR)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-8-изопропил-7-метил-3,б-диоксо-2,11-диокса-4,7-диазатетрадекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (56): СЭЖХ-МС (система 2): tr=2,25 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 865,46 (М+Н)+, найдено 865,65.
Аналогичные трипептиды получают по общей методике из
примеров 2 6-2 8, заменяя подходящим образом защищенный
тубуфенилаланин соединения 40 в примере 2 6 другими
аминокислотами или аминсодержащими кислотами, подходящим образом
защищенными, как показано на схеме 7. Альтернативно, или в
дополнение к замене подходящим образом защищенного
тубуфенилаланина, другие трипептиды получают заменой FM0C-L-
Изолейцина другими подходящим образом защищенными
аминокислотами, имеющими гидрофобную боковую цепь, такими как FMOC-L-лейцин.
Пример 2 9: Общая методика амидного сочетания трипептидов на
основе аллилового эфира изолейцин-тубувалин(О-эфир)-
тубуфенилаланин с содержащими третичный амин кислотами для введения тубулизинового N-концевого компонента.
Снятие защиты: С FMOC-трипептидов (FMOC-Ile-Tuv(О-эфир)ТирО-аллил), полученных по примеру 28, снимают защиту удалением защитной группы FM0C с применением 2 0% пиперидина в диметилформамиде (20 мМ), при перемешивании под азотом при комнатной температуре. После завершения снятия защиты, подтвержденного СЭЖХ/МС, реакционную смесь концентрируют роторным выпариванием. Неочищенный продукт затем очищают препаративной ВЭЖХ с получением свободных аминовых трипептидов (NH2-Ile-Tuv(О-эфир)TupO-аллил). Соединения 57, 58 и 59 (Схема 7) получают из соединений 54, 55 и 56, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4
карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (57): СЭЖХ-МС (система
1) : tr=l,30 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 637, 34 (M+Na)+, найдено 637, 57 .
(2S, 4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S, 3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (58): СЭЖХ-МС (система
2) : tr=l,18 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 629, 38 (М+Н)+, найдено 629,45.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-4-метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (59): СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,29 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 643, 39 (М+Н)+, найдено 643,55.
Пептидное сочетание: (R) -ЛЬметилпипеколиновую кислоту (D-
Мер) 60 (1,5-2 эквивалента) растворяют в безводном
диметилформамиде (25-50 мМ) и предварительно активируют ГАТУ (2
эквивалента) и ДИПЭА (4 эквивалента); реакционную смесь
перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре под
азотом. Активированную кислоту затем добавляют к NH2-Ile-Tuv(О-
эфир)TupO-аллил трипептидам, полученным снятием защиты FMOC;
реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под
азотом и отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакции добавляют
ледяную уксусную кислоту (14 эквивалента) и тетрапептидные
продукты (D-Mep-Ile-Tuv(О-эфир)-TupO-аллил) очищают
препаративной ВЭЖХ. Соединения 61, 62 и 63 (Схема 7) получают из соединений 57, 58 и 59, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-N,З-диметил-2-( (R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат
(61) : СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,29 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 762,42 (M+Na)+, найдено 762,32.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат
(62) : СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,25 мин, m/z (ЭР+) рассчитано
(62)
754,46 (М+Н)+, найдено 754,55.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3- ( (2S, 3S)-N,З-диметил-2-( (R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (63): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,36 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 768,48 (М+Н)+, найдено 768,55.
Для получения соответствующих тубулизиновых эфиров в виде свободных лекарственных средств (D-Mep-Ile-Tuv(О-эфир)-ТирОН), с защищенных аллиловым эфиром тетрапептидов на основе эфира тубулизина снимают защиту с получением тубулизиновых эфиров, имеющих свободную часть тубуфенилаланиновой кислоты, растворением в безводном дихлорметане (20 мМ) и обработкой тетракис(трифенилфосфин) палладием (0,1 экв.), трифенилфосфином (0,2 эквивалента) и безводным пирролидином (8 эквивалентов), и реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды под азотом. После того, как СЭЖХ/МС покажет превращение в свободную кислоту, реакцию гасят ледяной уксусной кислотой (22 эквивалента), разбавляют ацетонитрилом и диметилформамидом и затем концентрируют роторным выпариванием. Неочищенный тубулизиновый эфир затем очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 64, 65 и 66 (Схема 7) получают из соединений 61, 62 и 63, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (64): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,05 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 700,41 (М+Н)+, найдено 700,50.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-этокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (65): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,09 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 714,43 (М+Н)+, найдено 714,51
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-пропоксипентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (66): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,19 мин, m/z (ЭР+)
рассчитано 728,44 (М+Н)+, найдено 728,54.
Дополнительные тубулизиновые эфиры, включая такие, которые
имеют вариации в аминокислоте или аминсодержащих кислотах,
заменяющих тубуфенилаланин (Compound 40) из примера 27, как
показано здесь, и/или FMOC-аминокислоту (FMOC-Ile) из примера
28, получают заменой D-Mep на другую N-алкилированные
пипеколиновые кислоты или на N-алкилированную азетидинил-2-
карбоновую кислоту, Ы-алкил-Б-пролин- или N,N-
диалкиламинокислоту, такую как N,N-диметилглицин.
Пример 30: Получение Lss предшественника (S)-перфторфенил 3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2- (2г5-диоксо-2г5-дигидро-IE-пиррол-1-ил) пропаноат а (68) .
В колбу загружают mDPR(Вое)-ОН (67) {Nature Biotech, 2014, 32, 1059-1062) 67 (500 мг, 1,76 ммоль), к которому добавляют раствор пентафторфенола (324 мг, 1,7 6 ммоль) в ДМФ (8,8 мл), затем 1-этил-З-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (371 мг, 1,93 ммоль) в виде твердого вещества. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре, затем гасят 50 мл насыщенного NH4C1 в Н20 и 50 мл Н20. Водный слой дважды экстрагируют ДХМ, органические слои затем промывают насыщенным раствором соли, сушат над NaS04 и конденсируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (589 мг, 74%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,51 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 473,07 (M+Na)+, найдено 473,14.
Соединение 68, аббревиатура которого mDPR(ВОС)-OPFF, является типовым Lss предшественником (т.е., типом Ъь'-содержащей части) формулы Мг-А'(ОЕ)-СООН в активированной форме для получения соединений лекарственное средство-линкер, включая соединения общей формулы M^Ai (ОЕ) -A0-W-Y-D+ и М1-А (ОЕ) -Y (W) -D+, где М1 является малеимидной частью, А' является предшественником удлиняющей под(единицы), Ai и А0 являются субъединицами удлиняющей единицы А, ОЕ является основной единицей, такой как аминоалкильная часть, Y является самоуничтожающейся спейсерной единицей и -Y(W)- является глюкуронидной частью и содержит, например остаток глюкуроновой кислоты в качестве углеводородной
части и остаток БПА в качестве самоуничтожающейся части; и D+ является кватернизированным тубулизином.
Пример 31: Общая методика получения промежуточных соединений соединения лекарственное средство-линкер с применением механизма выделения глюкуроновой кислоты из (0-эфир)аллиловых эфиров тубулизина.
Типовые промежуточные соединения для соединения лекарственное средство-линкер формулы A'-Yy (W'w-) -D+, где индексы w' и у каждый равен 1, А' является предшественником удлиняющей единицы, D+ является единицей кватернизированного лекарственного средства на основе (О-эфира) тубулизина и -Y(W')- является глюкуронидной единицей получают из (О-эфир)аллиловых эфиров тубулизина из примера 2 9 следующим образом. Полученные продукты представлены общей формулой FMOC-GlucQ-Tub(О-эфир)-О-аллил.
Высвобождение линкерной единицы: В сосуд под давлением загружают D-Mep-Ile-Tuv(О-эфир)-Tup-O-аллил (1 эквивалент) и бромированное промежуточное соединение удлиняющей-глюкуронидной единицы 2 (1,5 эквивалента) из примера 1 в безводном 2-бутаноне
(50 мМ) . Реакционный сосуд ополаскивают N2 и герметично закрывают. Реакционную смесь затем перемешивают и нагревают до 60°С в течение 18 часов. Полученную смесь охлаждают, конденсируют до остатка при пониженном давлении, затем переносят далее неочищенным или помещают в минимальное количество ДМСО для очистки препаративной ВЭЖХ с получением указанных в заголовке соединений. Соединения 69, 70 и 71 (Схема 8) получают из соединений 61, 62 и 63, соответственно, и соединения 2 для иллюстрирования общей методики.
(2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-б-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ((1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-5-
(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-
2-ил)-1-метокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-З-метил-1-
оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (69) :
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tx=l,61 мин, m/z (ЭР+)
рассчитано 1470,68 (М)+, найдено 1471,68.
(2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-б-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ((1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-5-
(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-
2-ил)-1-этокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-З-метил-1-
оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (70):
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,49 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1484,69 (М)+, найдено 1484,84.
(2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-б-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-5-
(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-
2-ил)-4-метил-1-пропоксипентан-3-ил)(метил)амино)-З-метил-1-
оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (71):
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tx=l,47 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1498,71 (М)+, найдено 1498,85.
Снятие защиты: Продукты FMOC-GlucQ-Tub(О-эфир)-0-аллил в целом подвергают снятию защиты в ТГФ и МеОН, охлажденных до 0°С. LiOH"H20 (6,0 эквивалентов), к которому по каплям добавляют Н20
(1:1:1 ТГФ:МеОН:Н20, 50 мМ конечная концентрация), после чего реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. ТГФ и МеОН удаляют при пониженном давлении, и полученный осадок повторно солюбилизируют с применением минимального количества ДМСО, и смесь очищают препаративной ВЭЖХ. Продукты с полностью снятой защитой называют H-GlucQ-Tub(О-эфир)-ОН. Соединения 72, 73 и 74 (Схема 8) получают из соединений 69, 70 и 71, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2R)-1-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2- ( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-метокси-4-метилпентан-3
ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (72) : С Fmoc-GlucQ-Tub(ОМе)-ОАллил 69 (17 мг, 12 мкмоль)снимают защиту как описано выше соединения 72 (4,3 мг, 34%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tx=l,08 мин, m/z
(ЭР+) рассчитано 1068,53 (М)+, найдено 1068,66.
(2R)-1-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2- ( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-этокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (73): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tx=0,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1082,55 (М)+, найдено 1082,68.
(2R)-1-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2- ( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метил-1-пропоксипентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (74): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tx=0,98 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1096,56 (М)+, найдено 1096,67.
Пример 32: Общая методика получения соединений
лекарственное средство-линкер амидным сочетанием предшественника 133-удлиняющей субъединицы с промежуточным соединением лекарственное средство-линкерг содержащим глюкуронидную единицу и единицу кватернизированного лекарственного средства на основе
(О-эфира) тубулизина.
Типовые соединения лекарственное средство-линкер формулы Lb'-Aa-Yy (W'w-) ~D+, где индексы а, у и w' каждый равен 1, и в которой Lb'-A- имеет формулу M^Ai (ОЕ) -А0-, где M1-Ai(OE)- является предшественником самостабилизирующейся части (Lss) , которая является одним из типов Lb'-содержащей части в конъюгате лиганд-лекарственное средство, где Ai является субъединицей удлиняющей единицы А с А0 в качестве другой субъединицы, D+ является единицей кватернизированного лекарственного средства на основе
(О-эфира) тубулизина, и -Y(W')- является глюкуронидной единицей, получают из соединений H-GlucQ-Tub(О-эфир)-ОН по представленной
ниже методике, и их обозначают как mDPR-GlucQ-Tub(О-эфир)-ОН, где mDPR- является М1-А1 (ОЕ)-А0- частью.
Высвобождение линкерной единицы: В колбу загружают амин Н-GlucQ-Tub(О-эфир)-ОН из примера 31, к которому добавляют mDPR(Вое)-OPFP (68, 1,2 эквивалента) из примера 30 в виде раствора в ДМФ (10 мМ) . N, N-диизопропилэтиламин (4,0 эквивалента) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакцию гасят АсОН (4,0 эквивалента), затем разбавляют в ДМСО (1 объем) и очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 75, 76 и 77 (Схема 8) получают из соединений 72, 73 и 74, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2R)-1-(3-(3-( (S)-3- ( (трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-
(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-З,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ((1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-метокси-4-метилпентан-З-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (75): Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 1) : tx=l,22 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1334, 62 (М)+, найдено 1334,68
(2R)-1-(3-(3-( (S)-3- ( (трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-
(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-этокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (76): Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=l,19 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1348, 64 (М)+, найдено 1348,79.
(2R)-1-(3-(3-( (S) -3-( (трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-
(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метил-1-пропоксипентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2
ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (77): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,24 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1362, 65 (М)+, найдено 1362,78.
Снятие защиты: Продукты образования амидной связи подвергают снятию защиты для удаления ВОС защитной группы по следующей методике. В колбу загружают mDPR(ВОС)-GlucQ-Tub(0-эфир)-ОН и охлаждают до 0°С. Добавляют 10% раствор ТФК в ДХМ (50 мМ) , и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры при перемешивании в течение 1 часа. Затем реакционную смесь разбавляют ДМСО (1 объем), удаляют ДХМ при пониженном давлении, затем очищают препаративной ВЭЖХ. Соединения 78, 79 и 80 (Схема 8) получают из соединений 75, 76 и 77, соответственно, для иллюстрирования общей методики.
(2R)-1-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил) -2- ( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-метокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (78): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tx=l,09 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1234,57 (М)+, найдено 1234,65.
(2R)-1-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2- ( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-этокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ий (79): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tx=0,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1248,59 (М)+, найдено 1248,72.
(2R)-1-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S, 3S) -1-( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метил-1-пропоксипентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1
метилпиперидин-1-ий (80): Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,03 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1262,60 (М)+, найдено 1262,73.
Пример 33: Получение аллилового эфира изолейцин-тубувалин(ОАс)-тубуфенилаланина
Омыление: В колбу загружают BOC-Tuv(ОАс)-Tup-OEt (90, 50 мг, 81 мкмоль) в ТГФ (1,35 мл) и МеОН (1,35 мл) и охлаждают до 0°С. LiOH*H20 (27 мг, 647 мкмоль) солюбилизируют в Н20 (1, 35 мл), затем добавляют по каплям. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 3 часов. Затем реакционную смесь гасят уксусной кислотой (37 мкл, 647 мкмоль) и конденсируют при пониженном давлении. Остаток помещают в ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-
((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-1-гидрокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановой кислоты (91) (44 мг, колич.) (Схема 9) . Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=l,53 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 548, 28 (М+Н)+, найдено 548,24.
Ацетилирование и снятие защиты с аллилового эфира: Продукт BOC-Tuv(ОН)-Тир-ОН (91, 44 мг, 81 мкмоль) солюбилизируют в безводном пиридине (1,6 мл) и перемешивают при комнатной температуре под N2. Уксусный ангидрид (15,4 мкл, 162 мкмоль) добавляют по каплям. 1,0 дополнительный эквивалент уксусного ангидрида добавляют через один час перемешивания, и завершение реакции подтверждают ЖХМС через 2 часа. Реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении, затем повторно солюбилизируют в безводном аллиловом спирте (1,6 мл) . Добавляют диаллилпирокарбонат (54 мкл, 325 мкмоль), затем твердый ДМАП (3,0 мг, 2 4 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре и отслеживают ЖХМС, при необходимости добавляют еще диаллилпирокарбонат для ускорения завершения реакции (4,0 дополнительных эквивалента). Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением (2S,4R)-аллил 4-(2-( (1R,3R)-1-ацетокси-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата
(92) (Схема 9) (33 мг, 65%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,75 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 630,32 (М+Н)+, найдено 630,42.
Снятие защиты с дипептида: В колбу загружают BOC-Tuv(ОАс)-Tup-0-аллил (92, 33 мг, 21 мкмоль), охлажденный до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в CH2CI2 (0,52 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, повторно солюбилизируют в ДХМ и конденсируют 3 раза для удаления ТФК с получением неочищенного
(2S,4R)-аллил 4-(2-((lR,3R)-1-ацетокси-4-метил-3-
(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (93) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,03 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 530,27 (М+Н)+, найдено 530,36. Соединение 93 (Схема 9) применяют далее без дальнейшей очистки.
Пептидное сочетание: В колбу, содержащую H-Tuv(ОАс)-Tup-O-аллил (93, 28 мг, 53 мкмоль), добавляют BOC-L-Ile-OH (15 мг, 63 мкмоль) и ГАТУ (40 мг, 106 мкмоль) в виде твердых веществ, затем ДМФ (1,0 мл) . Добавляют ЛУ^Л/'-диизопропилэтиламин (37 мкл, 211 мкмоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 8 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением (2S,4R)-аллил 4-(2-( (6S,9R,11R)-б-((S)-втор-бутил)-9-изопропил-2,2,8-триметил-4,7,13-триоксо-3,12-диокса-5,8-диазатетрадекан-11-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (94) (Схема 9) (19 мг, 49%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,72 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 743,41 (М+Н)+, найдено 743,51.
Снятие защиты с трипептида: Колбу, содержащую ВОС-Не-Tuv(ОАс)-Tup-0-аллил (94, 19 мг, 26 мкмоль), охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,52 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, повторно растворяют в ДХМ и конденсируют 3 раза для удаления ТФК с получением неочищенного
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-1-ацетокси-З-((2S,3S)-2-амино-Ы,3-диметилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (95). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2):
tr=l,18 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 643,36 (M+H)+, найдено 643,42. Compound 95 (Схема 9), названное Ile-Tuv(ОАс)-Tup-0-аллил
(аллиловый эфир изолейцин-тубувалин(ОАс)-тубуфенилаланина), применяют далее без дальнейшей очистки.
Пример 34. Получение гетероциклоалкила с кватернизированным атомом азота, соответствующего N-концевой части свободного тубулизинового лекарственного средства.
N-концевой предшественник (D-Mep): H-Pip-OtBu (96, 500 мг, 2,70 ммоль) помещают в МеОН (4,50 мл), АсОН (4,50 мл) и 37% СН20 в Н20 (4,50 мл) и перемешивают в течение 2 0 минут. Медленно добавляют NaBH3CN (509 мг, 8,10 ммоль) в виде твердого вещества для энергичного барботирования, перемешивают в течение 30 минут. Реакционную смесь затем выливают в 2 00 мл насыщенного раствора NaHC03 и экстрагируют Зх 2 00 мл ДХМ. Органические слои промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2S04 и конденсируют при пониженном давлении с получением (R)-трет-бутил 1-метилпиперидин-2-карбоксилата (97) (516 мг, 96%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=0,53 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 200,17
(М+Н)+, найдено 200,21. Соединение 97 (Схема 10), названное ВОС-D-Mep-OtBu, применяют далее без дальнейшей очистки для конденсации с бромированным промежуточным соединением удлиняющей-глюкуронидной единицы 2 из примера 1 по описанной ниже методике.
Кватернизация: В сосуд под давлением загружают
бромированное промежуточное соединение удлиняющей-глюкуронидной
единицы (2, 104 мг, 12 8 мкмоль) и D-Mep-OtBu (97, 34 мг, 171
мкмоль) в безводном 2-бутаноне (1,71 мл). Реакционный сосуд
ополаскивают N2 и герметично закрывают. Затем реакционную смесь
перемешивают и нагревают до 60°С в течение 12 часов. Полученную
смесь охлаждают, конденсируют при пониженном давлении, помещают
в минимальное количество ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с
получением (2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-б-(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-(трет-бутоксикарбонил)-1-метилпиперидин-1-ия
(98) (97 мг, 82%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,32 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 930,40 (М)+, найдено 930,49. Затем удаляют защитные группы углеводородной части с последующей повторной защитой в качестве аллилового эфира с получением соединения 99 (Схема 10) по представленной ниже методике.
Снятие защиты с гликозида: В высушенную пламенем колбу, содержащую соединение 98 (97 мг, 104 мкмоль), имеющее защитные группы ацетата и метилового эфира, в безводном аллиловом спирте
(2,09 мл) под N2 добавляют Ti(OC2H5)4 (87 мкл, 417 мкмоль), и
полученную реакционную смесь нагревают до 8 0°С при перемешивании
в течение 2 часов. Реакционную смесь затем охлаждают до
комнатной температуры и выливают в 50 мл 1М НС1. После
выдерживания в течение 45 минут, НС1 экстрагируют Зх 50 мл ДХМ.
Полученные органические слои промывают насыщенным раствором
соли, сушат над Na2S04, конденсируют и очищают препаративной ВЭЖХ
с получением (2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)-пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-
((аллилокси)карбонил)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-(трет-бутоксикарбонил)-1-метилпиперидин-1-ия
(99) (42 мг, 48%). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,18 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 830,39 (М)+, найдено 830,49.
Пример 35. Получение промежуточного соединения для
соединения лекарственное средство-линкер амидным сочетанием
промежуточного соединения трипептида тубулизина, имеющего
тубувалин-(О-ацилвную) частв с гетероциклоалкилом с
кватернизированным атомом азота, соответствующим свободному тубулизиновому лекарственному средству.
С соединения 99 (схема 10), обозначенного как FMOC-Gluc(0-аллил)Q-D-Mep-OtBu, из примера 34, снимают защиту удалением защитной группы трет-бутилового эфира с получением соединения 100, которое затем сочетают с аллиловым эфиром изолейцин-тубувалин(ОАс)-тубуфенилаланина (соединение 95) из примера 33 образованием пептидной связи представленными ниже способами.
Снятие защиты с N-конца (D-Mep): Колбу, содержащую FMOC-Gluc(О-Аллил)Q-D-Mep-OtBu (99, 42 мг, 50 мкмоль), охлаждают до
0°С под N2. Раствор 30% ТФК в СН2С12 (2,5 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, помещают в минимальное количество ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 2 5 мг
(64%) (2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-
((аллилокси)карбонил)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-
ил)окси)бензил)-2-карбокси-1-метилпиперидин-1-ия (100).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,05 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 774,32 (М)+, найдено 774,42.
Пептидное сочетание: Соединение 100 (Схема 10),
обозначенное как FMOC-Gluc(О-Аллил)Q-D-Mep-OH, конденсируют с
трипептидом 95, добавляя соединение 100 (28 мг, 3 6 мкмоль) и
ГАТУ (27 мг, 72 мкмоль) в виде твердых веществ в колбу,
содержащую H-Ile-Tuv(ОАс)-Tup-0-Аллил (95, 2 3 мг, 3 6 мкмоль) с
последующим добавлением ДМФ (0,714 мл) . Затем добавляют N,N-
диизопропилэтиламин (25 мкл, 143 мкмоль) и реакционную смесь
перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа.
Реакционную смесь помещают в ДМСО и очищают препаративной ЖХ с
получением 23 мг (46%) (2R)-1-(3-(3-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-
((аллилокси)карбонил)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-
(((2R,4S)-5-(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-метилпиперидин-1-ия (101). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,39 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1398,66 (М)+, найдено 1398,81.
Снятие защиты гликозида и Tup: FM0C и аллильную защитные группы продукта FMOC-Gluc(О-Аллил)Q-Mep-Ile-Tuv(ОАс)-Tup-0-Аллил
(т.е., соединения 101), далее обозначенного как Fmoc-Gluc(0-Аллил)Q-TubM-ОАллил, сохраняя при этом ацетат тубувалина, осуществляют по представленной ниже методике. FMOC-Gluc(0-Аллил)Q-TubM-ОАллил (101, 21 мг, 15 мкмоль) помещают в ДХМ (1,5 мл), перемешивая под N2. Pd(PPh3)4 (3,5 мг, 3,1 мкмоль) и PPh3
(1,6 мг, 6,1 мкмоль) добавляют в виде твердых веществ с последующим добавлением пирролидина (20,1 мкл, 245 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают до 2 часов при комнатной температуре, затем помещают в 1 мл ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ЖХ с получением 13 мг (79%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1-( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-(3-(3-аминопропанамидо)-4-( ( (2S, 3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (102) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=0,94 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1096, 53 (М)+, найдено 1096, 65.
Соединение 102, обозначенное как H-GlucQ-TubM-OH,
представляет собой типовое промежуточное соединение для
соединения лекарственное средство-линкер формулы A'-Yy (W'w-) -D+,
где индексы у и w' каждый равен 1, и где А' является
предшественником удлиняющей (под)единицы, -Y(W)- является
глюкуронидной единицей, которая содержит БПА спейсерную единицу,
способную к самоуничтожению с выделением тубулизинового
лекарственного средства (D) и части глюкуроновой кислоты, и D+
является кватернизированным тубулизином М. Для получения
аналогичных промежуточных соединений для соединения
лекарственное средство-линкер, имеющих альтернативный
кватернизированный тубулизин, содержащий тубувалин (О-ацильный) компоненты, в котором ацетатная часть BOC-Tuv(О-Ас)-Tup(OEt)
(90) замещают соединением общей формулы BOC-Tuv(О-Ацил)-Tup(OEt) в примере 33 с получением H-Ile-Tuv(О-Ацил)-Tup-0-аллила, соответствующего соединению 95. Это промежуточное соединение затем применяют дальше в соответствии с примерами 34 и 35 с получением соединений общей формулы H-GlucQ-D-Mep-Ile-Tuv(0-Ацил)-Tup-OH, далее обозначенных как H-GlucQ-Tub(О-Ацил)-ОН, которые соответствуют промежуточному соединению для соединения лекарственное средство-линкер соединения 102.
Другие варианты включают, или дальше включают, замену подходящим образом защищенного б-членного гетероциклоалкила,
содержащего третичный амин, BOC-D-Mep-OtBu (соединение 97), со
схемы 10, другим подходящим образом защищенным 5- или б-членным
гетероциклом, содержащим третичный амин, таким как трет-
бутиловый эфир BOC-N-этилпипеколиновой кислоты, трет-бутиловый
эфир BOC-N-метилпролина или трет-бутиловый эфир BOC-N-
метилазетидинил-2-карбоновой кислоты с получением соединений,
аналогичных соединению 99 и соединению 102, соответственно, со
схемы 10, в которых кватернизированная D-Mep часть FMOC-Gluc(0-
Аллил)Q-D-Mep-OtBu и H-GlucQ-D-Mep-Ile-Tuv(О-Ас)-Тир ОН, ИЛИ,
обобщенно, H-GlucQ-D-Mep-Ile-Tuv(О-Ацил)-Тир-ОН, замещена другим
кватернизированным гетероциклоалкилом, содержащим третичный
амин. Дополнительные варианты промежуточных соединений для
соединения лекарственное средство-линкер, в которых
гетероциклоалкил замещен карбоновой кислотой, содержащей третичный амин, также получают по схеме 10 с получением вариантов кватернизированных тубулизинов с открытым N-концевым кольцом для соединений лекарственное средство-линкер.
Пример 3 б: Получение соединений лекарственное средство-линкер амидным сочетанием предшественника Ъ55-удлиняющей субъединицы с промежуточным соединением лекарственное средство-линкер, содержащим глюкуронидную единицу и единицу лекарственного средства с кватернизированным тубулизин (0-ацилом).
Сочетание предшественника Lss (mDPR): В колбу загружают Н-GlucQ-TubM-OH (102, 13,1 мг, 11,9 мкмоль) из примера 35 в безводном ДМФ (0,595 мл), к которому добавляют mDPR(ВОС)-OSu (6, 4,6 мг, 11,9 мкмоль) под N2. Добавляют N,N-диизопропилэтиламин
(8,3 мкл, 47,8 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем реакцию гасят уксусной кислотой (8,3 мкл) и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 5,2 мг (33%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1-( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1- (4- ( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-(3-(3-((S)-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-
(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н
пиран-2-ил)окси)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (103).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,20 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1362,62 (М)+, найдено 1362,75.
Снятие защиты с предшественника Lss: ВОС защитную группу на mDPR(ВОС)-GlucQ-TubM-OH (103) удаляют как описано ниже с получением соединений лекарственное средство-линкер, подходящих для получения конъюгатов лиганд-лекарственное средство конденсированием со нацеливающей частью, содержащей тиол.
Колбу, содержащую mDPR(Вое)-GlucQ-TubM-OH (103, 5,2 мг, 3,8 мкмоль), охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,84 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 4,8 мг (81%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (104) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=0,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1262,56 (М)+, найдено 1262,68.
Также по примеру 3 6 получают соединения лекарственное средство-линкер, имеющие вариации в N-концевом остатке кватернизированного тубулизина, в котором кватернизированная D-Мер часть в Тубулизине М замещена другим кватернизированным 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим третичный амин. Также по примеру 3 6 получают другие соединения лекарственное средство-линкер, получаемые из замещенных карбоновой кислотой 4- или 5-членных гетероциклоалкилов, содержащих третичный амин. В других вариантах замещают кватернизированный б-членный гетероциклоалкил из D-Mep ациклическими вариантами, с применением примера Пример 33, подходящим образом замещенных кислот, содержащих третичный амин, с получением варианта соединений лекарственное средство-линкер на основе кватернизированного тубулизина с открытым N-концевым кольцом. В других вариантах заменяют ацетатную часть
тубувалинового компонента, как описано в примере 33-35 для промежуточных соединений для соединения лекарственное средство-линкер, другой ацилоксигруппой с получением аналогичных соединений лекарственное средство-линкер. Другие варианты включают оба изменения, т.е., изменение N-концевой части и тубувалиновой ацилокси части.
Соединения, полученные по примеру 3 6, являются типовыми соединениями лекарственное средство-линкер формулы M1-Ai (ОЕ)-А0-Y(W)-D+ или Lb'-A0-Y (W)-D+, в которых Lb' содержит малеимидную часть (М1) , основную единицу (ОЕ) и субъединицу (Ai) удлиняющей единицы, и А0 является другой субъединицей удлиняющей единицы, где Lb' является предшественником Lss в конъюгате лиганд-лекарственное средство, полученном из соединения лекарственное средство-линкер.
Пример 37: Общая методика получения промежуточных соединений для соединения лекарственное средство-линкер введением механизма высвобождения пептида, имеющего единицу лекарственного средства на основе кватернизированого тубулизин(О-ацила).
Типовые промежуточные соединения для соединения лекарственное средство-линкер формулы A'-Ww-Yy-D+ получают как описано ниже, где индексы w и у каждый равен единицу, и где А' является предшественником удлиняющей единицы, D+ является единицей кватернизированного тубулизинового лекарственного средства и -W-Y- является пептидной расщепляемой единицей (W) , ковалентно присоединенной к самоуничтожающейся спейсерной единице (Y) , где W является местом узнавания протеазы, действие которой высвобождает свободное тубулизиновое лекарственное средство из конъюгата лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), где КЛЛ содержит такую A'-Ww-Yy-D+ в качестве -L0-D+ части. В общем, подходящим образом защищенное промежуточное соединение пептид-спейсерная единица формулы BOC-W2-Wi-PAB-Br, где Wi и W2 являются субъединицамиБ аминокислоты из W и БПА является промежуточным соединением самоуничтожающейся спейсерной единицы Y, сначала получают сочетание пептидной связи ВОС защищенного W2 с H-Wi-PAB-
ОН с последующим бромированием атома углерода бензила с получением промежуточного соединения пептид-спейсерная единица BOC-W2-Wi-PAB-Br. Тубулизин, подходящим образом защищенный на С-концевом компоненте, например, в виде аллилового эфира, затем конденсируют с промежуточным соединением пептид-спейсерная единица для кватернизации его компонента, содержащего третичный амин, с получением, после полного снятия защиты, промежуточного соединения лекарственное средство-линкер формулы H-W-Y-D+ (т.е., H-W2-Wi-PAB-D+) . Продукт этой последовательности реакций представлен описанным ниже получением H-Val-Glu-PAB4-TubM-0H (Схема 11), где дипептидный остаток -Val-Glu- соответствует -W2-Wi.
Сочетание пептида спейсерной единицы: Колбу, содержащую
FMOC-Glu(OtBu)-ОН (105, 2,0 г, 4,7 ммоль), Н-РАВ-ОН (23, 579 мг,
4,7 ммоль) и С12СН2 (25 мл), перемешивают при комнатной
температуре. ЭЭДХ (1,40 г, 5,6 ммоль) добавляют в виде твердого
вещества, и смесь перемешивают в течение ночи. Продукт элюируют
из 4 мм тарелки хроматотрона с помощью EtOAc, фракции,
содержащие продукт, конденсируют. Полученный остаток помещают в
2 0% пиперидин в ДХМ, перемешивают в течение 15 минут, затем
конденсируют до масла. Масло растворяют в ДХМ и элюируют из 2 мм
тарелки хроматотрона с применением градиента 10%-2 0% МеОН в ДХМ
с получением 860 мг (60%) (S)-трет-бутил 4-амино-5-((4-
(гидроксиметил)фенил)амино)-5-оксопентаноата (106).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=0,65 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 309,18 (М+Н)+, найдено 309,24.
Сочетание пептида расщепляемой единицы: В колбу, содержащую H-Glu (OtBu) -РАВ-ОН (106, 860 мг, 2,78 ммоль) в ДМФ (10 мл), добавляют BOC-Val-OSu (20) (1,13 г, 3,60 ммоль) и ДИПЭА (0,75 мл) . Через 3 0 минут реакционную смесь выливают в 100 мл EtOAc и промывают Н20 Зх, насыщенным раствором соли 1х, и сушат над Na2S04. Раствор сушат при пониженном давлении, солюбилизируют в 50 мл EtOAc и осаждают 10% EtOAc в гексане (50 мл) . Твердые вещества собирают и сушат с получением 0,97 г (70%) (S)-трет-бутил 4-((S)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-метилбутанамидо)
5-((4-(гидроксиметил)фенил)амино)-5-оксопентаноата (107).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,37 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 508,30 (М+Н)+, найдено 508,38.
Функционализация спейсерной единицы: Колбу, содержащую ВОС-Val-Glu(OtBu)-РАВ-ОН (107, 200 мг, 394 мкмоль), N-бромсукцинимид
(105 мг, 591 мкмоль) и трифенилфосфин (155 мг, 591 мкмоль), ополаскивают N2. Реакционную смесь помещают в ТГФ (4 мл) и перемешивают в течение 12 часов. Реакционную смесь конденсируют и очищают над двуокисью кремния через колонку Biotage
(гексан/EtOAc, 10%-100%) с получением 210 мг (93%) (S)-трет-
бутил 5-( (4-(бромметил)фенил)амино)-4-( (S)-2- ( (трет-
бутоксикарбонил) амино)-3-метилбутанамидо)-5-оксопентаноата
(108). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,56 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 570,22 (М+Н)+, найдено 570,30.
Кватернизация: Колбу, содержащую BOC-Val-Glu(OtBu)-PAB-Br
(108, 4 0 мг, 7 0 мкмоль) и TubM-ОАллил (Org. Lett., 2007, 9, 1605-1607) (109, 45 мг, 59 мкмоль), ополаскивают N2. Добавляют бутанон (1,17 мл), и реакционную смесь нагревают до 60°С при перемешивании. Через 18 часов реакционную смесь конденсируют досуха, помещают в минимальное количество ДХМ и очищают на Biotage (0-20% ДХМ/МеОН) с получением 62 мг (85%) (2R)-2-
( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-( ((2R,4S)-5-(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-l-(4-((S)-5-(трет-бутокси)-2-( (S)-2 - ( (трет-бутоксикарбонил) амино)-3-метилбутанамидо)-5-
оксопентанамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (НО).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,47 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1257,72 (М)+, найдено 1257,85.
Снятие защиты: Колбу, содержащую BOC-Val-Glu(OtBu)-PABQ-TubM-ОАллил (НО, 42 мг, 50 мкмоль) охлаждают до 0°С под N2. Раствор 30% ТФК в СН2С12 (0,99 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, помещают в ДХМ и повторно конденсируют 3 раза. Остаток помещают в ДХМ (0,98 мл), туда добавляют
Pd(PPh3)4 (5,7 мг, 4,9 мкмоль) и PPh3 (2,6 мг, 9,8 мкмоль) в виде
твердых веществ, затем пирролидин (32 мкл, 3 92 мкмоль). Через 1
час реакционную смесь помещают в минимальное количество ДМСО,
конденсируют и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 4 7 мг
(90%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1- ( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-( ( (2R,4S)-4-
карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-
метилпентан-3-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-
ил)карбамоил)-l-(4-((S)-2-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-4-
карбоксибутанамидо) бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (Ш) •
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=0,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1061,57 (М)+, найдено 1061,69.
Другие промежуточные соединения для соединения лекарственное средство-линкер, аналогичные соединению Ш, получают заменой FMOC-Glu(Отрет-Bu)-ОН (105) и BOC-Val-OSu (20) на W2 и W1, соответственно, другими подходящими аминокислотами так, что полученные промежуточные соединения для соединения
лекарственное средство-линкер формулы H-W2-W!-PAB-D4
имеют
структуру бензилом,
является
метилом, изопропилом, изобутилом, втор-бутилом,
СН(ОН)СН3 или имеет структуру ^ н г И R35 является метилом, -(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2, (СН2) 3NH (C=NH) NH2 или -(CH2)2C02H, где волнистая линия на N-конце дипептида означает ковалентную связь с А или с Lb или Lb', и волнистая линия на С-конце дипептида означает ковалентную связь с J из СУ части.
Пример 3_8: Общая методика получения соединений
лекарственное средство-линкер введением предшественника Lss части в промежуточные соединения для соединения лекарственное средство-линкер введением механизма выделения пептида, имеющего единицу лекарственного средства, имеющую кватернизированный тубулизин(О-ацил).
Соединения лекарственное средство-линкер формулы Lb'-Y-W-D+, где Ьь'- является М1-А(ОЕ)- и -Y-W-D+ соответствует промежуточным соединениям для соединения лекарственное средство-линкер из примера 37, как представлено на схеме 12. Получение примера проводят как описано ниже для синтеза соединения лекарственное средство-линкер mDPR-Val-Glu-PABQ-TubM-OH (113), обобщенная формула которого М1-А(ОЕ) -W2-Wi-PABQ-TubM-OH .
Сочетание Lss (mDPR) : В колбу загружают H-ValGluPAB4-TubM
(111, 22,5 мг, 21,2 мкмоль) в безводном ДМФ (0, 42 0 мл), туда добавляют mDPR(Вое)-OSu (6, 8,9 мг, 23,3 мкмоль) в виде твердого вещества под N2. Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (14,8 мкл, 8 4,7 мкмоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь затем гасят уксусной кислотой (14,8 мкл) и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 11,5 мг (40%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1-( ( (1R,3R)-1-ацетокси-1-(4-(((2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентан-З-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)-1-(4-( (7S,10S,13S)-13- (2-карбоксиэтил)-7-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-10-изопропил-2,2-диметил-4,8,11-триоксо-3-окса-5, 9, 12-триазатетрадеканамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (112) (11,5 мг, 40%) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,31 мин, m/z
(ЭР+) рассчитано 1327,66 (М)+, найдено 1327,94.
Снятие защиты: Колбу, содержащую mDPR(Вое)-ValGluPAB4-TubM
(112, 11,5 мг, 8,6 мкмоль) охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10%
ТФК в СН2С12 (0,86 мл) добавляют по каплям и перемешивают в
течение 2 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют
при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с
получением 9,9 мг (93%) (2R)-2-( ( (2S,3S)-1-( ( (1R,3R)-1-ацетокси-
1- (4- ( ( (2R,4S)-4-карбокси-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-
ил)-4-метилпентан-З-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-
ил)карбамоил)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-
дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-3-метилбутанамидо)-4-
карбоксибутанамидо)бензил)-1-метилпиперидин-1-ия (ИЗ).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=0,99 мин, m/z (ЭР+)
рассчитано 1227,61 (М)+, найдено 1227,83.
Пример 39 : Получение тубулизиновых промежуточных
соединений, имеющих алвтернативные ацилокси части в замещении ацетата в тубувалиновом компоненте.
Получение указанных в заголовке соединений осуществляют из ВОС-защищенного дес-ацетилового соединения тубувалина через пептидное сочетание до тубуфенилаланина в виде его аллилового эфира. Ацильную часть затем повторно вводят с применением подходящего кислотного ангидрида (способ 1), как показано на примерах пропионилокси и бутурилокси, или хлорангидрида (способ 2), как показано на примерах хлорида изомасляной кислоты для замещения ацетатной части тубувалина (т.е., изобутурилокси замещает ацетокси). Альтернативно, гидроксил тубувалина эстерифицируют через активацию ДЦК алифатической карбоновой кислоты (способ 3), как показано на примерах диметилбутурилокси и изовалерилового замещения ацетатной части тубувалина. Полученные соединения имеют общую формулу BOC-Tuv(О-ацил)-Tup-O-аллил, как показано на схеме 13. Защитную группу ВОС удаляют для того, чтобы позволить пептидное сочетание для введения N-концевого компонента с получением аналогов Тубулизина М.
Гидролиз Tuv: В колбу загружают ацетат тубувалина {Org.
Lett., 2007, 9, 1605-1607) 122 (225 мг, 560 мкмоль),
растворенный в метаноле (5 мл) и тетрагидрофуране (5 мл), затем
охлаждают под азотом до 0°С на ледяной бане. Моногидрат
гидроксида лития (71 мг, 1680 мкмоль) растворяют в воде (5 мл) и
раствор добавляют по каплям в реакционную колбу. Затем
реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре до тех
пор, пока СЭЖХ/МС не подтвердит полное превращение в продукт.
Затем продукт разбавляют дихлорметаном и промывают 0,1М НС1.
Водный слой дважды экстрагируют дихлорметаном, затем
объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия,
фильтруют и концентрируют с получением 2 00 мг (колич.)
соединения свободной кислоты 2-((1R,3R)-3-((трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-гидрокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоновой кислоты (123) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) :
tr=l,33 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 359,17 (M+H)+, найдено 359,14.
Пептидное сочетание: Соединение свободной кислоты
тубувалина 123 (2 00 мг, 5 60 мкмоль) предварительно активируют
растворение в безводном диметилформамиде (5,4 мл, 100 мМ) и
добавляют ГАТУ (250 мг, 670 мкмоль) и ДИПЭА (0,59 мл, 3,36
ммоль); Затем смесь перемешивают под азотом при комнатной
температуре в течение 10 минут. Активированную кислоту затем
добавляют к аллиловому эфиру тубуфенилаланина 40 {Org. Lett.,
2007, 9, 1605-1607), и реакционную смесь затем перемешивают при
температуре окружающей среды под азотом, течение реакции
отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакции добавляют ледяную
уксусную кислоту (14 эквивалентов), и продукт очищают
препаративной ВЭЖХ с получением 272 мг (83%) Tuv(ОН)-Тир-Оаллил
дипептида (2S,4R)-аллила 4-(2-((1R,3R)-3-((трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-гидрокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (124). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,84 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 588,31
(М+Н)+, найдено 588,29.
Повторное ацилирование (способ 1) : Tuv(ОН)-Тир-Оаллил дипептид 124 (2 6 мг, 4 4 мкмоль) растворяют в безводном пиридине
(1,8 мл, 25 мМ) и перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре. Пропионовый ангидрид 125 (113 мкл, 2 0 эквивалентов) добавляют по каплям, и реакционную смесь затем отслеживают СЭЖХ/МС. Добавляют еще пропионовый альдегид (20 эквивалентов) для достижения превращения в продукт. Продукт разбавляют дихлорметаном и промывают 0,1М НС1. Водный слой дважды экстрагируют дихлорметаном, затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением неочищенного продукта, который далее очищают препаративной ВЭЖХ с получением 17 мг (61%) BOC-Tuv (пропионилокси)-Tup-O-аллилового продукта (2S,4R)-аллил 4-(2-
((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-4-метил-1-
(пропионилокси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (127). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,99 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 644,34 (М+Н)+, найдено 644,26.
Tuv(ОН)-Tup-Оаллильный дипептид 124 (27 мг, 46 мкмоль)
растворяют в безводном пиридине (0,9 мл, 50 мМ) и перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре. Винный ангидрид 126
(225 мкл, 30 эквивалентов) добавляют по каплям, и реакцию
отслеживают СЭЖХ/МС. Дополнительный винный ангидрид (40
эквивалентов) добавляют тремя порциями для достижения
превращения продукта. Продукт разбавляют дихлорметаном и
промывают 0,1М НС1. Водный слой дважды экстрагируют
дихлорметаном, затем объединенные органические фазы сушат над
сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением
неочищенного продукта, который затем очищают препаративной ВЭЖХ
с получением 24 мг (80%) BOC-Tuv(бутурилокси)-Tup-0-аллильного
продукта (2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((трет-
бутоксикарбонил ) (метил)амино)-1-(бутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата
(128). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,13 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 658,35 (М+Н)+, найдено 658,23.
Повторное ацилирование (способ 2): Tuv(ОН)-Тир-Оаллильный дипептид 124 (2 6 мг, 4 4 мкмоль) растворяют в безводном пиридине
(1,8 мл, 25 мМ) и перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре. Хлорид изобутурила 129 (93 мкл, 2 0 эквивалентов) добавляют по каплям, и реакцию затем отслеживают СЭЖХ/МС. После превращения в продукт его разбавляют дихлорметаном и промывают 0,1М НС1. Водный слой дважды экстрагируют дихлорметаном, затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением неочищенного продукта, который затем очищают препаративной ВЭЖХ с получением 2 9 мг
(колич.) BOC-Tuv(Изобутурилокси)-Tup-O-аллильного продукта
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (трет-
бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-(изобутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата
(130). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,13 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 658,35 (М+Н)+, найдено 658,33.
Повторное ацилирование (способ 3) : В колбу загружают изовалериановую кислоту 131 (94 мкл, 851 мкмоль), растворенную с безводном дихлорметане (5,6 мл, 15 мМ), и раствор перемешивают
при 0°С в атмосфере азота. Затем добавляют ДМАП (10 мг, 85 мкмоль), затем ДЦК (88 мг, 425 мкмоль) и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры в течение более 2 часов. Полученную активированную кислоту затем добавляют к Tuv(ОН)-Тир-Оаллильному дипептиду 124 (50 мг, 85 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают в течение ночи, после чего СЭЖХ/МС подтверждает превращение в продукт. Реакционную смесь затем разбавляют дихлорметаном и промывают 0,1М НС1. Водный слой дважды экстрагируют дихлорметаном, затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением неочищенного продукта, который затем очищают препаративной ВЭЖХ с получением 52 мг (91%) BOC-Tuv (изовалирилокси)-Tup-O-аллильного продукта (2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-4-метил-1-((3-метилбутаноил)окси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноата (133). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,91 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 672,37 (М+Н)+, найдено 672,46.
В колбу загружают гем-диметилмасляную кислоту 132 (98 мкл, 766 мкмоль), растворенную с безводном дихлорметане (5,1 мл, 15 мМ) и раствор перемешивают при 0°С в атмосфере азота. Затем добавляют ДМАП (9 мг, 77 мкмоль), затем ДЦК (79 мг, 383 мкмоль), и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры в течение более 2 часов. Полученную активированную кислоту затем добавляют к Tuv(ОН)-Tup-Оаллильному дипептиду 124 (45 мг, 77 мкмоль), и реакционную смесь перемешивают в течение ночи, после чего СЭЖХ/МС подтверждает превращение в продукт. Затем реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают 0,1М НС1. Водный слой дважды экстрагируют дихлорметаном, затем объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением неочищенного продукта, который затем очищают препаративной ВЭЖХ с получением 4 9 мг (93%) BOC-Tuv (диметилбутурилокси)-Tup-O-аллильного продукта (2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (трет-бутоксикарбонил) (метил)амино)-1-( (3,3-диметилбутаноил)окси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (134). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2):
tr=l,88 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 686,39 (M+H)+, найдено 686,47.
Снятие защиты: С промежуточного соединения BOC-Tuv(О-ацил)-Tup-O-аллила, полученного способом 1, 2 или 3, снимают защиту в кислых условиях с применением 10% ТФК в дихлорметане (25 мМ) с выделением вторичной аминовой функциональной группы следующим образом. ВОС-защищенное промежуточное соединение растворяют в безводном дихлорметаном (9 объемов) и перемешивают под азотом при 0°С. Трифторуксусную кислоту (1 объем) затем добавляют по каплям к перемешиваемому раствору. Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакционную смесь концентрируют роторным выпариванием и откачивают на вакуумной линии в течение ночи. Полученные свободные амины общей формулы H-Tuv(О-ацил)-Tup-0-аллил переносят далее для введения N-концевого компонента без дальнейшей очистки.
H-Tuv(О-ацил)-Tup-O-аллильные соединения, которые получают (соединения 135-139), показаны на схеме 14 и перечислены ниже.
(2S,4R)-аллил 2-метил-4-(2-((1R,3R)-4-метил-З-(метиламино)-1-(пропионилокси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-фенилпентаноат (135): СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,24 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 544,29 (М+Н)+, найдено 544,25.
(2S,4R)-аллил 4 - (2 - ( (1R,3R)-1-(бутурилокси)-4-метил-3-
(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (136): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,20 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 558,30 (М+Н)+, найдено 558,38.
(2S,4R)-аллил 4 - (2 - ( (1R,3R)-1-(изобутурилокси)-4-метил-3-(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (137): СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,30 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 558,30 (М+Н)+, найдено 557,93.
(2S,4R)-аллил 2-метил-4-(2-((1R,3R)-4-метил-З-(метиламино)-1-((3-метилбутаноил)окси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-фенилпентаноат (138): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,23 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 572,32 (М+Н)+, найдено 572,40.
(2S,4R)-аллил 4 - (2 - ( (lR,3R)-l-( (3,3-диметилбутаноил)окси)-4-метил-З-(метиламино)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5
фенилпентаноат (139): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,27 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 586,33 (М+Н)+, найдено 586,42.
Пример 4 0: Общая методика амидного сочетания изолейцина с дипептидом аллилового эфира тубувалин (О-ацил)-тубуфенилаланина
Fmoc-L-Изолейцин (4 эквивалента) растворяют в безводном
диметилформамиде (50 мМ) и предварительно активируют ГАТУ (4
эквивалента) и ДИПЭА (8 эквивалентов); смесь перемешивают в
течение 10 минут при комнатной температуре под азотом.
Активированную кислоту затем добавляют к дипептидам общей
формулы H-Tuv(О-ацил)-Tup-O-аллил; реакционную смесь
перемешивают при комнатной температуре под азотом и отслеживают
СЭЖХ/МС. После того, как развитие реакции остановится или
реакция достигнет завершения, добавляют ледяную уксусную кислоту
(13 эквивалентов), и продукт реакции очищают препаративной ВЭЖХ.
FMOC защитную группу затем удаляют обработкой Fmoc-Ile-Tuv(0-
Ацил)-Tup-O-аллильных трипептидов 20% пиперидином в
диметилформамиде (20 мМ), при перемешивании под азотом при комнатной температуре. После полного снятия защиты, отслеживаемого СЭЖХ/МС, реакционную смесь концентрируют роторным выпариванием. Неочищенный продукт общей формулы H-Ile-Tuv(0-Ацил)-Tup-O-аллил затем очищают препаративной ВЭЖХ с получением свободных аминовых трипептидов.
Соединения 140-144 общей формулы FMOC-Ile-Tuv(О-ацил)-TupO-аллил, показанные на схеме 14 и перечисленные ниже, получают по указанной выше методике пептидного сочетания.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (5S,8R,10R)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-8-изопропил-7-метил-3,б,12-триоксо-2,11-диокса-4,7-диазатетрадекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (140): СЭЖХ-МС (система 1): tr=2,ll мин, m/z (ЭР+) рассчитано 879,44 (М+Н)+, найдено 879,60.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( ( 5S,8R,10R)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-8-изопропил-7-метил-3,б,12-триоксо-2,11-диокса-4,7-диазапентадекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (141): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,94 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 893,45 (М+Н)+, найдено 893,56.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( ( 5S,8R,10R)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н
флуорен-9-ил)-8-изопропил-7,14-диметил-З,б,12-триоксо-2,11-диокса-4,7-диазапентадекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (143) : СЭЖХ-МС (система 2) : tr=2,06 мин, m/z
(ЭР+) рассчитано 907,47 (М+Н)+, найдено 907,58.
(2S,4R)-аллил 4-(2-( (5S,8R,1 OR)-5-( (S)-втор-бутил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-8-изопропил-7,14,14-триметил-З,б,12-триоксо-2,11-диокса-4,7-диазапентадекан-10-ил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (144) : СЭЖХ-МС (система 2) : tr=2,50 мин, m/z
(ЭР+) рассчитано 921,49 (М+Н)+, найдено 921,59.
Соединения 145-149 общей формулы H-Ile-Tuv(О-ацил)-Тир-Оаллил, показанные на схеме 14 и перечисленные ниже, получают в соответствии с указанной выше методикой снятия защиты FMOC из соединений 140-144, соответственно.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-4-метил-1-(пропионилокси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (145): СЭЖХ-МС (система
1) : tr=l,29 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 657, 37 (М+Н)+, найдено 658, 04 .
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3- ( (2S, 3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-1-(бутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (146): СЭЖХ-МС (система
2) : tr=l,24 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 671, 39 (М+Н)+, найдено 671, 48 .
(2S, 4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3- ( (2S, 3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-1-(изобутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (147): СЭЖХ-МС (система 1) : tr=l,33 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 671, 39 (М+Н)+, найдено 671,33
(2S, 4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S, 3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-4-метил-1-((3-
метилбутаноил)окси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (148): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,31 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 685,40 (М+Н)+, найдено 685,49.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-амино-Ы,3-
диметилпентанамидо)-1-((3,3-диметилбутаноил)окси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат
(149): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,30 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 699,42 (М+Н)+, найдено 699,51.
Другие трипептиды, вводящие тубувалин-(О-ацильный)
компонент, похожим образом получают заменой FMOC-Ile на другие
алифатические аминокислоты (например, FMOC-Leu) или
алифатические аминсодержащие кислоты.
Пример 41: Общая методика амидного сочетания трипептида аллилового эфира изолейцин-тубувалин(О-О-ацил)тубуфенилаланина с содержащими третичный амин кислотами для введения N-концевого компонента тубулизина.
(R)-ЛЬметилпипеколиновую кислоту (D-Mep) 60 (2 эквивалента) растворяют в безводном диметилформамиде (20-25 мМ) и предварительно активируют добавлением ГАТУ (2 эквивалента) и ДИПЭА (4 эквивалента); смесь перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре под азотом. Активированную кислоту затем добавляют к трипептиду из примера 40, имеющему общую формулу Н-Ile-Tuv(О-Ацил)-Tup-O-аллил; реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом и отслеживают СЭЖХ/МС. После завершения реакции добавляют ледяную уксусную кислоту (14 эквивалентов) , и тетрапептидный продукт общей формулы D-Mep-Не-Tuv(О-Ацил)-Tup-O-аллил очищают препаративной ВЭЖХ. Аллильную защитную группу затем удаляют без потери ацильной части тубувалина растворением защищенного аллиловым эфиром тубулизинового тетрапептида (150-154) в безводном дихлорметане (20 мМ) , обработкой тетракис(трифенилфосфин) палладием (0,1 эквив.), трифенилфосфином (0,2 эквивалента) и безводным пирролидином (8 эквивалентов), и реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды под азотом. Как только СЭЖХ/МС покажет превращение в свободную кислоту продукта, реакцию гасят ледяной уксусной кислотой (22 эквивалента), разбавляют ацетонитрилом и диметилформамидом, и затем концентрируют роторным выпариванием. Неочищенные соединения тубулизина общей формулы D-Mep-Ile-Tuv(О-Ацил)-Tup-O-аллил затем очищают препаративной ВЭЖХ.
Соединения 150-154 общей формулы D-Mep-Ile-Tuv(О-ацил)-TupO-аллил, показанные на схеме 14 и перечисленные ниже, получают в
соответствии с указанной выше методикой пептидного сочетания из соединений 145-149, соответственно.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-N,З-диметил-2-( (R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-(пропионилокси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (150): СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,33 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 782,45 (М+Н)+, найдено 781,82.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-1-(бутурилокси)-3-( (2S,3S)-N,3-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат
(151) : СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,31 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 796, 47 (М+Н)+, найдено 796, 57.
(2S,4R)-аллил 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-(изобутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат
(152) : СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,37 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 796,47 (М+Н)+, найдено 795,78.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-N,З-диметил-2-( (R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-((3-метилбутаноил)окси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (153) : СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,35 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 810,49 (М+Н)+, найдено 810,59.
(2S,4R)-аллил 4- (2- ( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-N,З-диметил-2-( (R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-((3,3-диметилбутаноил)окси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентаноат (154) : СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,38 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 824,50 (М+Н)+, найдено 824,60.
Соединения 155-159 общей формулы D-Mep-Ile-Tuv(О-ацил)-ТирОН, показанные на схеме 14 и перечисленные ниже, получают в соответствии с указанной выше методикой снятия защиты аллила из соединений 150-154, соответственно.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-(пропионилокси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (155): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,ll мин, m/z (ЭР+) рассчитано 742,42 (М+Н)+, найдено 742,51.
(2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-1-(бутурилокси)-3-((2S,3S)-N,3-диметил-2-( (R)-1-ме тилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (156): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,16 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 756,44 (М+Н)+, найдено 756,54.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-(изобутурилокси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (157): СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,23 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 756,44 (М+Н)+, найдено 756,82.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метил-1-((3-метилбутаноил)окси)пентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (158): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,22 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 770,45 (М+Н)+, найдено 770,55.
(2S,4R)-4-(2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-((3,3-диметилбутаноил)окси)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая кислота (159): СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,23 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 784,47 (М+Н)+, найдено 784,57.
Дополнительные соединения тубулизин О-ацила, включая такие, которые имеют изменения в аминокислоте или аминсодержащей кислоте, заменяющей тубуфенилаланиновую часть (соединение 40) из примера 39, как показано в примере 27, и/или FMOC-аминокислоте (FMOC-Ile) из примера 40, получают заменой D-Mep другими N-алкилированными пиколиновыми кислотами или N-алкилированной азетидинил-2-карбоновой кислотой, N-алкилированным D-пролином или N,N-диалкиламинокислотой, такой как N,N-диметилглицин.
Пример 42: Получение соединения лекарственное средство-линкер, имеющего не расщепляемую единицу тубулизинового лекарственного средства с N-концевым присоединением к удлиняющей единице.
Соединение лекарственное средство-линкер общей формулы М1-А-D, где М1 является малеимидной частью, А является удлиняющей единицей и D является тубулизином с N-концевым присоединением к М.г-А предшественнику линкерной единицы, получают как показано на
схеме 15. На этой схеме соединение 172 представляет соединение лекарственное средство-линкер, получение которого описано ниже, где единицей лекарственного средства является дезметил-Тубулизин М (О-СНз) (170), в котором О-связанный ацетатный заместитель тубувалинового компонента замещен -0СН3. Такое соединение лекарственное средство-линкер дает конъюгат лиганд-лекарственное средство (КЛЛ) в результате присоединения лигандной единицы через тиольную функциональную группу из нацеливающей части, которая устойчива к выделению свободного лекарственного средства. Для КЛЛ, полученного из соединения 172 и антитела нацеливающей части, выделенная активная часть обычно представлена общей структурой Cys-M2-A-D, где М2 является сукцинимидной частью, получаемой добавлением Майкла тиола цистеина к малеимидной части M1-A-D соединения лекарственное средство-линкер. Активная часть, впоследствии выделяемая из таких КЛЛ,эможет считаться Тубулизин М (0-эфиром), в котором метильный заместитель D-Mep части замещен тиолом замещенной алкильной части.
Дез-метил-Tub(ОМе)-0-аллил: (R)-ЛЬВОС-пипеколиновую кислоту 60 (б мг, 2 4 мкмоль) растворяют в безводном диметилформамиде
(0,46 мл, 25 мМ) и предварительно активируют добавлением ГАТУ (9 мг, 24 мкмоль) и ДИПЭА (9 мкл, 48 мкмоль); смесь перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре под азотом. Активированную кислоту затем добавляют к H-Ile-Tuv(ОМе)-Тир-О-аллильному трипептиду 57 (10 мг, 12 мкмоль) из примера 28; реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом и отслеживают СЭЖХ/МС. Затем реакцию гасят уксусной кислотой и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 12 мг
(колич.) (R)-трет-бутил 2-( ( (2S,3S)-1-( ( (1R,3R)-1-(4-( ( (2R,4S)-
5-(аллилокси)-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-
ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-1-метокси-4-метилпентан-3-
ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)пиперидин-
1-карбоксилата (168) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tr=l,99
мин, m/z (ЭР+) рассчитано 847,47 (M+Na)+, найдено 847,87.
Снятие защиты: BOC-Tub(ОМе)-ОАллил (168, 12 мг, 15 мкмоль) помещают в ДХМ (0,75 мл) перемешивая под N2. Pd(PPh3)4 (1,7 мг,
1,5 мкмоль) и PPh3 (0,8 мг, 3 мкмоль) добавляют в виде твердых вещества, затем добавляют пирролидин (11 мкл, 12 0 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают до 2 часов при комнатной температуре, затем помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 9 мг (76%)
(2S,4R)-4-(2-( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-2- ( (R)-1-(трет-
бутоксикарбонил) пиперидин-2-карбоксамидо)-N, 3-
диметилпентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-
карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановая acid (169):
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1): tr=l,80 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 786,45 (М+Н)+, найдено 786,67.
Снятие защиты с N-конца: Колбу, содержащую BOC-TubOMe-OH
(169, 9 мг, 11 мкмоль), охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,5 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением (5 мг) 63% (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-пиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановой кислоты (170) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 1) : tr=l,15 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 686,40 (М+Н)+, найдено 685,59.
Lb'-A- сочетание: Малеимидкапроновую кислоту 171 (2 мг, 9,5 мкмоль) растворяют в безводном диметилформамиде (0,5 мл, 20 мМ) и предварительно активируют добавлением ГАТУ (2,3 мг, б мкмоль) и ДИПЭА (5 мкл, 29 мкмоль); смесь перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре под азотом. Активированную кислоту затем добавляют к метиловому эфиру тубулизина 170 (5 мг, 7,3 мкмоль); реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом и отслеживают СЭЖХ/МС. Затем реакцию гасят уксусной кислотой и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 7 мг (колич.) (2S,4R)-4-(2-( (1R,3R)-3-( (2S,3S)-2-
((R)-1-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-
ил)гексаноил)пиперидин-2-карбоксамидо)-N,3-диметилпентанамидо)-1-метокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-фенилпентановой кислоты (172). Аналитическая СЭЖХ-МС (система
1) : tr=l,60 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 879, 47 (M+H)+, найдено 879,11.
Конъюгаты четвертичного амина, описанные здесь, при определенных условиях выделяют тубулизины, имеющие N-концевой компонент, содержащий третичный амин, где атом азота этого компонента непосредственно замещен алкильной частью (т.е., через связь азот-углерод). Наоборот, часть активного лекарственного средства, без особых условий выделенная из конъюгата лиганд-лекарственное средство, полученного из соединения лекарственное средство-линкер 172, имеет содержащий вторичный амин N-концевой компонент, замещенный до алкилена через амидную функциональную группу.
Пример 4 3: Получение соединения лекарственное средство-линкер, имеющего кватернизированый Доластатин 10, содержащий глюкуронидную единицу.
Кватернизация: В сосуд под давлением загружают бромированное промежуточное соединение удлиняющей-глюкуронидной единицы 2 (62 мг, 76 мкмоль) из примера 1 и доластатин 10 (173, 45 мг, 51 мкмоль) в безводном 2-бутаноне (1,0 мл) . Реакционный сосуд ополаскивают N2 и герметично закрывают. Реакционную смесь затем перемешивают и нагревают до 80°С в течение 12 часов. Полученную смесь охлаждают, конденсируют при пониженном давлении и переносят далее без дальнейшей очистки с получением (S)-N-(3-
(3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-
( ( (2S, 3R,4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-6-
(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-З-метокси-1-((S)-2-((1R,2R)-1-метокси-2-метил-3-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-
ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (174) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,42 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1515,74 (М)+, найдено 1515,91.
Снятие защиты гликозида: В колбу загружают FMOC-GlucQ-Dl0 (174, 39 мг, 26 мкмоль) в ТГФ (0,42 мл) и МеОН (0,42 мл). Этот раствор перемешивают под N2 и охлаждают до 0°С. Затем добавляют
LiOH*H20 (8,6 мг, 206 мкмоль), солюбилизированный в Н20 (0,42 мл). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 часов. Затем реакцию гасят уксусной кислотой (12 мкл, 206 мкмоль) и конденсируют при пониженном давлении. Остаток помещают в минимальное количество ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 7 мг (24%) (S)-N-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-( ( (S)-1-( ( (3R,4S,5S)-З-метокси-1-( (S) -2-( (1R,2R)-1-метокси-2-метил-3-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-
ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (175) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=0,90 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1153,62 (М)+, найдено 1153,78.
Сочетание Lss (mDPR): В колбу загружают H-GlucQ-D10 (175, 7,0 мг, 6,0 мкмоль) в безводном ДМФ (0,62 мл) . Добавляют mDPR (ВОС)-OSu (6, 2,3 мг, 6,1 мкмоль) под N2. Добавляют N, N-диизопропилэтиламин (4,2 мкл, 24 мкмоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем реакцию гасят уксусной кислотой (4,2 мкл) и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 5,5 мг (64%) (S)-N-(3-(3-((S)-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил) -1- ( ( (S)-1- ( ( (3R,4S,5S)-З-метокси-1-( (S)-2- ( (1R,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-
ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (176) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,18 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1419,71 (М)+, найдено 1419,87.
Снятие защиты Lss (mDPR): Колбу, содержащую mDPR(ВОС)-GlucQ-D10 (176, 5,5 мг, 3,9 мкмоль), охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,39 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с
получением 5,1 мг (99%) (S)-N-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-
(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-( ( (S)-1- ( ( (3R,4S,5S)-З-метокси-1-( (S)-2-((1R,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (177). Аналитическая СЭЖХ-МС: tr=0,95 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1319,66 (М)+, найдено 1319,81.
Пример 4 4: Получение соединения лекарственное средство-линкер, имеющего Доластатин 10 с карбаматным присоединением к глюкуронидной единице
Присоединение единицы карбаматного лекарственного средства: В колбу загружают FMOC-Gluc-PNP (Bioconjugate Chem., 2006, 17, 831-840.) (178, 60 мг, 66 мкмоль) и монометил доластатин 10
(179, 46 мг, 60 мкмоль) в безводном ДМФ (0,96 мл), к которому
добавляют пиридин (0,24 мл), затем ГОБт (3,2 мг, 24 мкмоль).
Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в
течение ночи, конденсируют при пониженном давлении, очищают
флэш-хроматографией (ДХМ/МеОН) с получением 54 мг (59%)
триацетата (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9Н-флуорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)(пропанамидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-
((S)-втор-бутил)-5,8-диизопропил-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-З-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-4,10-диметил-3,б,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-6-
(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триила (180).
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,65 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1545,71 (М+Н)+, найдено 1545,98.
Снятие защиты гликозида: В колбу загружают Fmoc-Gluc-MMDl0
(180, 54 мг, 35 мкмоль) в ТГФ (0,78 мл) и МеОН (0,78 мл). Этот раствор перемешивают под N2 и охлаждают до 0°С. Затем по каплям добавляют LiOH*H20 (12 мг, 278 мкмоль), солюбилизированный в Н20
(0,78 мл) . Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 часов. Затем реакцию гасят уксусной
кислотой (17 мкл, 27 8 мкмоль) и конденсируют при пониженном давлении. Остаток помещают в минимальное количество ДМСО и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 9,6 мг (23%) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S) -6- (2- (3-аминопропанамидо) -4- ( (5S, 8S, US, 12R) -11-( (S)-втор-бутил)-5,8-диизопропил-12-(2-( (S) -2-( (1R,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-З-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-4,10-диметил-3,б,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,1О-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты (181). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,13 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1183,60 (М+Н)+, найдено 1183,70.
Сочетание единицы глюкуронид-лекарственное средство: В
колбу загружают H-Gluc-MMD10 (181, 9,6 мг, 8,1 мкмоль) в
безводном ДМФ (0,81 мл). Добавляют mDPR(Вое)-OSu (6, 3,4 мг, 8,9
мкмоль) под N2. Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (5,7 мкл, 32
мкмоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной
температуре в течение 3 часов. Затем реакцию гасят уксусной
кислотой (5,7 мкл) и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 5,2
мг (44%) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-( (S)-3-( (трет-
бутоксикарбонил) амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-втор-бутил) -5,8-диизопропил-12-(2-((S)-2-((lR,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-
ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-4,10-диметил-3,б,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,1О-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты (182). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,40 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1449,69 (М+Н)+, найдено 1449,80.
Снятие защиты: Колбу, содержащую mDPR(Вое)-Gluc-MMDIO (182, 5,6 мг, 3,9 мкмоль), охлаждают до 0°С под N2. Раствор 10% ТФК в СН2С12 (0,39 мл) добавляют по каплям и перемешивают в течение 4 часов. Реакционную смесь помещают в ДМСО, конденсируют при пониженном давлении и очищают препаративной ВЭЖХ с получением 5,2 мг (99%) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4
( (5S, 8S, US, 12R) -11- ( (S) -втор-бутил) -5, 8-диизопропил-12- (2- ( (S) -2-((1R,2R)-1-метокси-2-метил-З-оксо-3-(((S)-2-фенил-1-(тиазол-2-ил)этил)амино)пропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-4,10-диметил-3,б,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,1О-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновой кислоты (183). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,13 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1349,64 (М+Н)+, найдено 1349,75.
Схема 17 для примера 4 4 представляет типовую последовательность реакции получения соединений лекарственное средство-линкер, имеющих присоединенные через карбамат единицы лекарственного средства. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство, получаемые из такого карбаматного соединения лекарственное средство-линкер, которое содержит единицы не кватернизированного лекарственного средства, могут сравниваться с кватернизированной версией, синтез которой из необходимых кватернизированного соединения лекарственное средство-линкер представлен генерализацией схемы 16. Для адаптации к карбаматному соединению лекарственное средство-линкер, алкильный заместитель должен быть удален из третичной аминовой функциональной группы лекарственного средства, содержащего третичный амин, если его присоединение в качестве единицы лекарственного средства осуществляется через атом азота этой функциональной группы. Выделение свободного лекарственного средства из конъюгата лиганд-лекарственное средство, имеющего такую модификацию в единице лекарственного средства, является выделением модифицированного лекарственного средства, которое, как ожидается, будет иметь другие свойства по сравнению с исходным лекарственным средством, которые могут быть нежелательны.
Пример 4 5: Получение соединения лекарственное средство-линкер, имеющего кватернизированный Ауристатин F, содержащий глюкуронидную единицу
С-концевая защита Ауристатина F: В круглодонную колбу загружают Ауристатин F 184 (150 мг, 201 мкмоль) и растворяют в аллиловом спирте (10 мл) . Реакционную смесь охлаждают до 0°С и
добавляют пирокарбонат аллила (149 мг, 804 мкмоль), затем добавляют ДМАП (7,3 мг, 60 мкмоль). Реакционная смесь энергично выделяет С02 и замедляется через 15 мин. Реакционную смесь анализируют СЭЖХ после перемешивания при КТ в течение 2 ч и она показывает > 90% превращения. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, и неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (0-25% МеОН). Фракции концентрируют досуха с получением 111 мг (71%) (S)-аллил 2-( (2R,3R)-3-( (S)-1-
( (3R,4S,5S)-4-( (S) -2-( (S)-2-(диметиламино)-3-метилбутанамидо)-
N,3-диметилбутанамидо)-З-метокси-5-метилгептаноил)пирролидин-2-
ил)-З-метокси-2-метилпропанамидо)-3-фенилпропаноата (185) .
Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,l мин, m/z (ЭР+) рассчитано 786,54 (М+Н)+, найдено 786,72.
Кватернизация: В 2 0 мл колбу, содержащую AF-ОАллил 185 (111 мг, 141 мкмоль), добавляют бромированное промежуточное соединение удлиняющей-глюкуронидной единицы 2 (160 мг, 197 мкмоль) и сухой ДМФ (5 мл) . Раствор перемешивают при 65°С в течение 16 ч, завершение реакции подтверждают СЭЖХ. Реакционную смесь сушат, помещают в ДМСО и очищают ВЭЖХ. Фракции продукта концентрируют досуха с получением 85 мг (40%) (S)-N-(3-(3-
((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)пропанамидо)-4-
( ( (2S, 3R, 4S,5S,6S)-3,4,5-триацетокси-6-
(метоксикарбонил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-(((S)-1-( ( (3R,4S,5S)-1-( (S)-2- ( (1R,2R)-3-( ( (S)-1-(аллилокси)-1-оксо-З-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-
оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (186) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2) : tr=l,45 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1516,77 (М)+, найдено 1517,03.
Снятие защиты гликозида: В 2 0 мл пробирку, содержащую защищенный GlucQ-AF-ОАллил 186 (85 мг, 56 мкмоль), добавляют ТГФ (4 мл) и МеОН (4 мл) . Реакционную смесь охлаждают до 0°С и раствор LiOH (18 мг/мл в воде) добавляют одной порцией. Реакционную смесь перемешивают при КТ в течение 3 ч и завершение реакции подтверждают СЭЖХ. Растворитель удаляют в вакууме и
остаток помещают в ДМСО/Н20 (1:1) . Препаративная ВЭЖХ с последующей лиофилизацией дает 42 мг (62%) (S)-N-(3-(3-аминопропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-( ( (S)-1-
( ( (3R,4S,5S)-1-( (S)-2- ( (1R,2R)-3-( ( (S)-1-карбокси-2-фенилэтил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (187) . Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=0,88 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1114,63 (М)+, найдено 1114,83.
Сочетание Lss (mDPR) : В 3 мл пробирку загружают NH2-GluQ-AF 187 (42 мг, 39 мкмоль) и сухой ДМФ (1,6 мл) . Раствор перемешивают и добавляют mDPR-(Вое)-OPfp 68 (19 мг, 42 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 5 мин при КТ, затем добавляют ДИПЭА (13 мкл, 7 7 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ, и завершение реакции подтверждают СЭЖХ. Препаративная ВЭЖХ неочищенного продукта с последующей лиофилизацией дает 13 мг (24%) (S)-N-(3-(3-( (S)-3-
((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-пропанамидо)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1- ( ( (S)-1- ( ( (3R,4S,5S)-1-( (S)-2- ( (1R,2R)-3-( ( (S)-1-карбокси-2-фенилэтил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-З-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (188). Аналитическая СЭЖХ-МС (система 2): tr=l,12 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1380,72 (М)+, найдено 1380,87.
Снятие защиты Lss (mDPR) -A0-Y (W) -D+: 20 мл пробирку, содержащую Boc-mDPR-GlucQ-AF (13 мг, 9 мкмоль), охлаждают до 0°С и добавляют раствор 20% ТФК в ДХМ (1,0 мл) . Реакционную смесь медленно нагревают до КТ и перемешивают в течение 4 ч, и завершение реакции подтверждают СЭЖХ. ДМСО/0,1% ТФК в Н20 добавляют в реакционную смесь и затем очищают на ВЭЖХ с получением 1,5 мг (33%) (S)-N-(3-(3-((S)-З-амино-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)пропанамидо)-4
(((2S,3R,4S,5S,6S)-б-карбокси-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бензил)-1-( ( (S)-1- ( ( (3R,4S,5S)-1-( (S)-2-
((lR,2R)-3-(((S)-1-карбокси-2-фенилэтил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-N,N,3-триметил-1-оксобутан-2-аминия (189). Аналитическая СЭЖХ-МС
(система 2) : tr=0,86 мин, m/z (ЭР+) рассчитано 1280, 67 (М)+, найдено 1280,80.
Схема 18 для примера 4 5 и схема 16 для примера 4 3 вместе со схемой 1 представляют типовые способы получения соединений лекарственное средство-линкер общей формулы Lb'-A0-Y (W)-D+, более конкретно, Mi-Ai-Ao-Y (W) -D+, где D+ является кватернизированным ауристатином (т.е., доластатином 10, ауристатином Е или ауристатином F, соответственно). Другие соединения лекарственное средство-линкер этой общей формулы получают с дополнительными соединениями ауристатина, имеющими третичную аминовую функциональную группу, особенно если она присутствует в качестве функциональной группы N-концевого компонента аминокислоты.
Пример 4 6: Получение соединения лекарственное средство-линкер, имеющего выделяемую при определенных условиях единицу тубулизинового лекарственного средства с С-концевым присоединением к удлиняющей единицей.
Тубулизин М-гидразид синтезируют в виде свободного лекарственного средства (190) и сочетают с Val-Cit-PAB-PNP активированным промежуточным соединением для соединения лекарственное средство-линкер (192) как показано на схеме 24. Коротко, тубулизин М (26) сочетают с третичным бутилкарбазатом через активацию с 1-этил-З-(3-диметиламинопропил)карбодиимидом в присутствии гидроксибензотриазола. С сопряженного продукта снимают защиту ВОС в стандартных условиях с трифторуксусной кислотой в дихлорметане с получением свободного лекарственного средства, тубулизин М-гидразида ацетата (1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-1-
(4-(((2R,4S)-5-гидразинил-4-метил-5-оксо-1-фенилпентан-2-ил)карбамоил)тиазол-2-ил)-4-метилпентила (190). Расщепляемое
соединение MC-Val-Cit-PABN-D лекарственное средство-линкер общей
формулы M1-A-W-Y-D, где М1 является малеимидной частью, А
является алкиленом в качестве спейсерной единицы, W является -W2-
Wi~, где Wi является цитруллином и W2 является валином, Y
является БПА частью в качестве самоуничтожающейся спейсерной
единицы, присоединенной к единице тубулизинового лекарственного
средства через гидразидную функциональную группу, получают
взаимодействием атома азота гидразида с PNP-активированным
промежуточным соединением для соединения лекарственное средство-
линкер (4-нитрофенил)карбоната 4-( (S)-2-( (S)-2-(б-(2,5-диоксо-
2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-
уреидопентанамидо)бензила (191) в присутствии
диизопропилэтиламина, гидроксибензотриазола и пиридина в качестве сорастворителя, с получением соединения лекарственное средство-линкер 2-( (2S,4R)-4-(2-( (1R,3R)-1-ацетокси-З-( (2S,3S)-N,З-диметил-2-((R)-1-метилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-
фенилпентаноил)гидразинкарбоксилата 4-( (S)-2- ( (S)-2-(6-(2,5-
диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-
метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензила (192) с 33% выходом из Тубулизин М-гидразида (190).
Условный протеолиз конъюгата лиганд-лекарственное средство, полученного из соединения лекарственное средство-линкер 192 приводит к выделению соединения 190 в качестве части активного лекарственного средства, в котором С-концевой остаток остается модифицированным в виде его гидразида. Конъюгаты четвертичного амина, описанные здесь, выделяют тубулизины, имеющие свободную функциональную группу карбоновой кислоты на С-конце.
Пример 47: Оценка деацилирования тубувалин (О-ацилвного) компонента конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих кватернизированную единицу лекарственного средства Tub(О-ацил).
В каждую лунку 2,5 мкм полипропиленового 9б-луночного фильтровального планшета добавляют 1 мл ФРФБ. 200 мкл суспензии смолы mAbSelect(tm) Protein А вносят в каждую лунку, и водный компонент отсасывают. 2 0 мкл аликвоты каждого оттаянного образца
плазмы вносят в смолу и перемешивают при 4°С в течение 1 часа. Элюат собирают в планшет центрифугированием (500д, 3 минуты) и смолу промывают 2 00 мкл [2Х] папаиновым буфером (40 мМ КРО4, 2 0 мМ ЭДТК, рН 7) другим центрифугированием.
Папаиновый фермент растворяют в количестве 2,5 мг/мл в [IX] папаиновом буфере (20 мМ КРО4, 10 мМ ЭДТК, 2 мМ цистеина, рН 7) и инкубируют при 37°С в течение 15 минут. 2 00 мкл аликвоту папаина добавляют в каждую лунку со смолой. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 2 часов при 37°С. Элюат восстанавливают центрифугированием (500д, 3 минуты). Смолу промывают 100 мкл [IX] папаинового буфера и объединяют с элюатом. Образцы переносят в пробирки Эппендорфа и в каждую пробирку добавляют 1000 мкл ледяного МеОН и инкубируют на льду в течение 15 минут. Образцы осаждают центрифугированием при 1б000д в течение 5 минут при 4°С, и надосадочные жидкости переносят в 9б-луночный планшет.
Стандартный раствор для градуировки с восемью концентрациями от 1 до 10000 нМ для каждого лекарственного средства получают в 50% МеОН. 2 0 мкл аликвоту каждого стандарта добавляют в 9б-луночный планшет, который также содержит образцы. 300 мкл аликвоту 2 0 мМ КР04, 10 мМ ЭДТК, 2 мМ цистеина (IX папаиновый буфер) и 1000 мкл МеОН добавляют в каждую лунку со стандартом. Планшет выпаривают под азотом досуха.
Планшет восстанавливают 70 мкл 20% ацетонитрила+0,1% муравьиной кислоты и 50 мкл аликвоту впрыскивают в Waters Acquity LC, соединенный с масс-спектрометром с тремя квадрупольными линзами Quattro Premier. Масс-спектрометр измеряет переход исходных ионов в МС/МС фрагментарные ионы с получением площади пика для каждого анализируемого вещества в образце и стандарте. Площади пиков стандарта наносят на график как функцию от концентрации лекарственного средства, и площади пиков образцов подвергают количественному анализу с применением уравнения прямой, определенного стандартной кривой.
Пример 4 7. In vitro цитотоксичность конъюгата лиганд-лекарственное средство, имеющего кватернизированный тубулизин в качестве D+ части.
Композицию КЛЛ, которая нацелена на клетки лимфомы, получают из соединения лекарственное средство-линкер 30 со схемы 5 и моноклонального антитела cACIO, где композиция преимущественно содержит КЛЛ, имеющий 8 D+ единиц, где D+ является кватернизированным тубулизином М. Такой преобладающий КЛЛ представлен следующей структурой:
где Ab является cACIO и р' равен 8 и S является атомом серы цистеинового остатка антитела. Цитотоксичность этого КЛЛ, который содержит моноклональное антитело, специфическую лигандную единицу CD3 0 антитела, дипептидную расщепляемую единицу и кватернизированный тубулизин М, в отношении панели CD3 0+ колоний клеток лимфомы, сравнивают с контрольным конъюгатом, в котором cACIO антитело замещено контрольным антителом (п2Н12), которое нацелено на CD33. Цитотоксичность cAC10-D+ конъюгата проявляется после его клеточной интернализации в CD30+ клетки и протеолитического расщепления Val-Ala дипептида, который является расщепляемой единицей КЛЛ, для выделения свободного тубулизина М. Результаты такого сравнения представлены в таблице 2, в которой значения IC50 ингибирования роста клеток представлены в единицах нг/мл.
связывают через карбамат с БПА самоуничтожающейся частью, которая активирована катепсиновым расщеплением расщепляемой единицы валин-цитруллин (vc) . Обнаружено, что такая композиция КЛЛ, которую получают из соединения лекарственное средство-линкер 172, как описано в примере 53, является не активной, что подтверждает важность фармакора третичного амина для цитотоксической активности тубулизинов.
Также обнаружено, что часть карбоновой кислоты в Tup/Tut остатке не устойчива к модификации при использовании в качестве альтернативного места конъюгирования. Таким образом, было обнаружено, что когда карбоновая кислота превращается в гидразид для того, чтобы позволить присоединение тубулизина М через его Тир остаток к той же БПА самоуничтожающейся части (также через карбаматную функциональную группу), конъюгат, полученный из соединения лекарственное средство-линкер MC-Val-Cit-PABC-NHNH-Tub М, указанный в таблице 3 как vcPABN (гидразид), теряет значительную часть активности по сравнению с конъюгатом, полученным из соединения кватернизированное лекарственное средство-линкер MC-Val-Ala-PAB4-TubM, обозначенным как vaPAB4. Этот результат подтверждает важность свободной карбоновой кислоты для цитотоксичости Тубулизина М (так как выделенное лекарственное средство модифицировано в виде гидразида в этом положении) и суммирован в таблице 3 для сОКТ9 конъюгатов, которые нацелены на CD71 антиген. В таблице 3, cOKT9-vaPAB4 (имеющий преимущественную нагрузку 8), который выделяет свободный тубулизин М, соответствует по структуре cACIO конъюгату из таблицы 2, в котором cACIO нацеливающая часть замещена сОКТ9. cOKT9-vcPABN (гидразид), имеющий DAR 6,7, из таблицы 3, представляет собой связанную карбаматом тубулизиновую конструкцию, соответствующую тубулизину М, в которой выделяемый тубулизин модифицирован на Тир остатке как описано выше. Указанный КЛЛ в обеих композициях содержит 8 лекарственных средств (или 8 единиц кватернизированного лекарственного средства), привязанных к антителу.
Таблица 3. In vitro Цитотоксичность кватернизированного тубулизинового конъюгата лиганд-лекарственное средство,
нацеленного на С71+ клетки лимфомы по сравнению с не кватернизированным тубулизиновым конъюгатом лиганд-лекарственное средство, имеющим присоединение к С-концевому компоненту.
С0КТ9 КАЛ
НСТРЕТ-116
L428
КМ-Н2
L548cy
MM, 1R
LH60cy
vaPAB4
15 (7)
83 (29)
4 (0)
6 (7)
4 (2)
28(0)
vcPABN (гидразид)
302 (1)
284 (16)
56 (0)
117 (7)
19 (4)
85 (0)
Значения в скобках показывают процент жизнеспособных клеток, остающихся в нижней части дозозависимой кривой. Число копий CD71 для НТРЕТ-116, L-427, КН-Н2, L540cy, MM,1R и ЪНбОсу колоний клеток, которые тестируют, составляет 5К, 35К, 121К, ЗЗК, 32К и 228К, соответственно. Результаты из таблицы 3 подтверждаются примером 64, в котором сОКТ9-гидразид КАЛ, имеющий часть лекарственное средство-линкер MC-Val-Cit-PABN-TubM (192), сравнивают с сОКТ9 КАЛ, полученным из соединения лекарственное средство-линкер MC-Val-Ala-PAB4-TubM (30).
Результаты из таблицы 2 и таблицы 3 показывают, что эффективные и иммунологически специфические конъюгаты лиганд-лекарственное средство получают, если тубулизин введен в подобные конструкции в виде единицы кватернизированого лекарственного средства, и тогда такие конъюгаты являются активными против мультирезистетных колоний клеток. Более того, неожиданно обнаружено, что кватернизированный конъюгат, полученный из соединения 30, обладает способностью убивать клетки, не экспрессирующие CD30 антиген, когда такие клетки совместно культивируются с CD30+ клетками, которые поражаются конъюгатом. Таким образом, композиция КЛЛ демонстрирует IC50 б нг/мл против совместной культуры L54Осу:U268Luc+ клеток при 0% жизнеспособных клеток, остающихся в нижней части дозозависимой кривой. L540cy являются CD30+ и U266 являются CD30~.
Пример 48. In vitro цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих кватернизированный ауристатин в качестве D+ части.
Цитотоксичность КЛЛ, содержащего моноклональное антитело
сАСЮ, которое нацелено на CD3 0, и кватернизированный ауристатин Е в отношении панели CD3 0+ клеток лимфомы сравнивают с контрольным конъюгатом, где cACIO антитело замещено контрольным антителом (hOE12), которое нацелено на CD19. Также применяют контрольные клетки, не имеющие определяемый CD3 0+ антиген, но имеющие С19 антиген. Цитотоксичность cAC10-D+ конъюгата проявляется после его клеточной интернализации в CD30+ клетки и катепсинового расщепления Val-Cit дипептида, который является расщепляемой единицей КЛЛ, для конъюгатов, обозначенных в таблице 4 как vcEnA4-AE, или глюкуронидазного расщепления углеводородной гликозидной связи, которая является местом расщепления расщепляемых единиц для cACIO конъюгатов, обозначенных gluc4-AE, для выделения свободного ауристатина Е. Подобным образом, цитотоксичность появляется для аналогичных пОЕ12 конъюгатов, когда такие конъюгаты интернализованы в CD19+ клетки, имеющие достаточное количество копий релевантного антигена. Результаты этих сравнений представлены в таблице 4, в которой 1С50 для ингибирования роста клеток представлены в единицах нг/мл.
Композиции КЛЛ, обозначенные vcEnA4-AE в таблице 4, получают из соединения 14 со схемы 2 и моноклонального антитела cACIO, которое нацелено на CD3 0+ клетки лимфомы, или моноклонального антитела hOE12, которое нацелено на С19+ клетки, где композиция преимущественно содержит КЛЛ, имеющие 8 единиц D+, где D+ является кватернизированным ауристатином Е. Такой преобладающий КЛЛ, после контролируемого гидролиза сукцинимидной кольцевой системы, представлен следующей структурой:
Ч н 0 Т н 0
о } н 8 ч
HoN >
М3-А
NH O^NH2
где Ab-S- часть cACIO или hOE12 связана с атомом углерода,
а или Р, с М3 карбоновой кислотой. М3-А в представленной выше структуре представляет самостабилизированную (Ls) линкерную часть, которая связана с Val-Cit дипептидом, который случит в качестве расщепляемой единицы.
Композиции КЛЛ, обозначенные как gluc4-AE в таблице 4, получают из соединения 8 со схемы 1 и моноклонального антитела cACIO, которое нацелено на CD3 0+ клетки лимфомы, и моноклонального антитела hOE12, которое нацелено на С19+ клетки, где D+ является кватернизированным ауристатином Е. Преобладающий КЛЛ композиции, после контролируемого гидролиза сукцинимидной кольцевой системы, представлен следующей структурой:
где Ab-S- часть cACIO или hOE12 связана с атомом углерода, а или Р, с М3 карбоновой кислотой. М.3-А1 в представленной выше структуре представляет самостабилизированную (Ls) линкерную часть, которая связана с А0 субъединицы А.
Обе vcEnA4-AE и gluc4-AE композиции преимущественно содержат КЛЛ, имеющие 8 D+ единиц на антитело (т.е., р' равно 8).
3903
8614
5080
ПОЕ12-14
VCBIIA4-AE
0,7 (0)
2110 (21)
(Ю)
(41)
(44)
Karpas 299 представляет собой CD30+ (количество копий 238К) и имеет низкое количество CD19 (количество копий 10К), L-428 представляет собой CD30+ (количество копий 77К) и не содержит определимый С19 антиген, и L540cy представляет собой CD30+ (количество копий 433К) и содержит низкое количество CD19 (количество копий 2 3К). С другой стороны, Ramos и RL не содержат определяемые CD3 0 и имеет различные уровни CD19 (32К к 18К, соответственно). Значения в скобках показывают процент жизнеспособных клеток, оставшихся в нижней части дозозависимой кривой.
Результаты из таблицы 4 показывают, что эффективные и иммунологически специфические КЛЛ получают, если содержащий третичный амин ауристатин вводят в такие конструкции в виде единицы кватернизированого лекарственного средства.
Пример 49. In vitro Цитотоксичность соединений Тубулизина (О-эфира) в виде свободных лекарственных средств.
Клетки обрабатывают в течение 9 6 часов соединениями тубулизинового эфира свободной кислоты общей формулы Tub(O-Et)-ОН (64-66), или обрабатывают тубулизином М (26), затем оценивают жизнеспособность как описано в способах. Результаты суммированы в таблице 5, где значения 1С50 даны в нМ единицах концентрации.
Таблица 5. In vitro Цитотоксичность соединений Тубулизина (О-эфира) в качестве свободных лекарственных средств по сравнению с Тубулизином М
эфира и тубулизина М сохраняют высочайший уровень эффективности в отношении МЛР+ L42 8 и ЛГбО/RV колоний клеток.
Пример 50. In vitro Цитотоксичность соединений Тубулизина (О-Ацила) в качестве свободных лекарственных средств.
Клетки обрабатывают в течение 9 6 часов сложными эфирами тубулизина 155-159 (т.е., Tub(О-эфир)-ОН) или тубулизином М (26), затем оценивают жизнеспособность как описано в способах. Результаты суммированы в таблице б, где значения IC50 даны в нМ концентрациях. Сложные эфиры Тубулизина 155-158 действуют сравнимо с Тубулизином М, обладая сходной эффективностью в отношении колоний клеток. Наиболее затрудненное соединение тубулизина О-ацила (159) демонстрирует значительно улучшенную эффективность по сравнению с тубулизином М, где потери эффективности составляют 5-47-раз по сравнению с тубулизином М.
Анти-СБЗО конъюгаты лиганд-лекарственное средство, содержащие кватернизированные эфиры тубулизина (т.е., Tub(соединения О-эфира) сравнивают с соответствующим конъюгатом тубулизина М, каждый из которых имеет 8 единиц кватернизированного лекарственного средства/лигандную единицу антитела, и имеет условные глюкуронидазные линкерные единицы. Клетки обрабатывают сАСЮ (анти-СБЗО) конъюгатами в течение 9 6 ч
и затем оценивают жизнеспособность. IC50S, показанные в таблице 7, даны в нг/мл единицах концентрации. Конъюгаты, полученные из лекарственного средства-линкера на основе этилового эфира тубулизина 79 стабильно являются более эффективными, чем метиловые метил (78) или пропиловые (80) аналоги. За исключением L428, конъюгат, из лекарственного средства-линкера на основе этилового эфира тубулизина 79, демонстрирует эффективность, сравнимую с конъюгатом, полученным из лекарственного средства-линкера на основе тубулизина М 104. Все КЛЛ неактивны (не действуют в дозе 1000 нг/мл) в отношении колонии CD30-отрицательных Ramos NHL клеток, что показывает высокую степень иммунологической специфичности.
Таблица 7 In vitro Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, специфических к CD3 0+ клетками лимфомы, имеющих единицы лекарственного средства Тубулизина (О-эфира) и выделяющие глюкуронидазу в определенных условиях линкерные единицы
Соединение лекарственное средство-линкер на основе четвертичного амина тубулизина MC-Val-Ala-PAB4-TubM (30) конъюгируют с химерным АС10 и гуманизированным 2Н12, которые представляют собой анти-СБЗО и анти-СБЗЗ антитела, соответственно, с 8 единицами кватернизированного лекарственного средства на антитело. Конъюгаты тестируют на панели CD30-положительных и СБЗЗ-положительных колониях клеток лимфомы и
острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), соответственно. Результаты (в нг/мл) для СБЗО-положительных колониях клеток показаны в таблице 8. СБЗО-связывающий конъюгат, сАС10-30, показал высокую эффективность по отношению ко всем колониям клеток; в то время как не связывающий контрольный п2Н12-30 был не активным по отношению к ним, при IC50S > 1000 нг/ил.
Таблица 8. In vitro Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, специфических к CD3 0+ клеткам лимфомы, содержащих единицы кватернизированного лекарственного средства Тубулизин М с различной гидрофобностью линкерной единицы.
КАЛ
Karpas299, ALCL
CD30 + CD33-
L-428, ЛГ
CD30 + CD33-
L540cy, ЛГ
CD30 + CD33-
КМН-2, ЛГ
CD30 + CD33-
DEL, ALCL
CD30 + CD33-
сАСЮ-30
0, 07
0,2
0,3
0,3
П2Н12-30
> 1000
> 1000
> 1000
> 1000
> 1000
Результаты для панели колонии БЗЗ-экспрессирующих клеток ОМЛ показаны в таблице 9. СБЗЗ-связывающий конъюгат, п2Н12-30, показывает эффективность в отношении всех колоний клеток при IC50S от 0,9 до 18 нг/мл. Конъюгат оказался не активным в отношении СБЗЗ-отрицательных L54 0cy, что показывает высокую степень иммунологической специфичности этого КАЛ.
Таблица 9. In vitro Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, специфических к CD33+ клеткам лейкоза, содержащих единицы кватернизированного лекарственного средства Тубулизин М с различной гидрофобностью линкерной единицы.
ЛГбОсу,
KG-1,
TF-la,
ТНР-1,
HNTPET-
yrL9217
L540cy,
КАЛ
AML
AML
AML
AML
34, AML
, AML
CD33 +
CD33 +
CD33 +
CD33 +
CD33 +
CD33 +
CD33-
П2Н12-30
0,9
> 1000
Пример 53. In vitro Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средствог специфических к CD30+ клетками лимфомы,. содержащих единицы кватернизированного лекарственного средства Тубулизин М с различной гидрофобностью линкерной единицы.
Получают несколько гидрофобных соединений лекарственное средство-линкер, содержащих кватернизированный тубулизин М, и полученные из них конъюгаты лиганд-лекарственное средство, специфические к CD30+ клеткам, с 8 единицами лекарственного
средства/лигандную единицу cACIO антитела оценивают in vitro; результаты показаны в таблице 10 (значения IC50 даны в единицах нг/мл). Данные показывают, что конъюгат, содержащий тубулизин М, присоединенный через гидрофильный -Val-Glu- дипептид, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 113, который получен для выделения свободного Тубулизина М в определенных условиях с катепсином, и конъюгат, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 104, содержащий гидрофильную глюкуронидную единицу, который получен для обычного выделения свободного Тубулизина М с глюкуронидазой, являются одинаково эффективными с контрольным -Val-Ala- конъюгатом, полученным из соединения лекарственное средство-линкер 32 для выделения свободного лекарственного средства в определенных условиях с катепсином. Все конъюгаты демонстрируют высокую степень иммунологической специфичности, с IC50s > 1000 нг/мл к антиген-отрицательным НерЗВ клеткам печеночно-клеточной карциномы.
Таблица 10. In vitro Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, содержащих кватернизированный Тубулизин М, специфических к CD3 0+ клеткам лимфомы, с различной гидрофобностью в линкерной единице
До конъюгирования данного изобретения с лекарственным средством, содержащим третичный амин, в котором атом азота амина применяют в качестве точки присоединения, требуется удаление алкильного заместителя из третичного амина. Полученный таким образом вторичный амин позволяет провести либо повторное
алкилирование с компонентом линкерной единицы с получением
абсолютно другой третичной аминовой функциональной группы, либо
ацилирование с получением вторичной амидной функциональной
группы. В обоих вариантах предупреждается выделение
оригинального исходного лекарственного средства. Более того,
часть активного лекарственного средства, которая выделяется,
представляет собой другое содержащее третичный амин или амид
соединение, которое может иметь улучшенную биологическую
активность по сравнению с исходным лекарственным средством, или
представляет собой вторичный амин, который может иметь худшую
кинетику выделения и/или ухудшенную биологическую активность.
Для определения результата применения стратегии удаления
алкильного заместителя из третичного амина тубулизина с
получением точки присоединения для единицы не
кватернизированного лекарственного средства, получают дезметил-тубулизин М и дезметил-Tub(ОСН3) -ОН (170) в соответствии с методиками из W0 2013/08592 5 и примера 42 (см. схему 15), соответственно. Соединение 170 является аналогом дезметил-тубулизина М замещением О-связанного ацетатного заместителя тубувалинового компонента дезметил-тубулизина М на О-связанную эфирную часть -0СН3. Линкерную единицу, имеющая общую формулу М1-А-, обозначенная как МС, в которой М1 является малеимидной частью и удлиняющая единица А является алкиленом, затем присоединяют к дезметил-тубулизину М и дезметил-Tub(0СН3) -ОН через амидную функциональную группу с получением соединений лекарственное средство-линкер 166 и 172, соответственно. При введении в конъюгаты лиганд-лекарственное средство, группы лекарственное средство-линкер этих двух соединений без особых условий выделяются в виде части активного лекарственного средства, которая сохраняет либо часть линкерной единицы (т.е., является амидсодержащим соединением), либо вторичный амин, как в дезметил-Тубулизине М или дезметил-Tub(0СН3)-ОН, который получают при не специфическом расщеплении амидной связи. Так как ожидается, что последний тип отделения будет медленным, соединения лекарственное средство-линкер, такие как соединения 166 и 172, характеризуются как эффективно не расщепляемые.
Анти-СБЗО cACIO конъюгаты получают из соединений
лекарственное средство-линкер 166 и 172, которые получают из
вторичных аминсодержащих тубулизинов, в количестве 8
лекарственных средств/мАт, и сравнивают с содержащими третичный
амин тубулизинами тубулизином М и тубулизином (ОСН3)-ОН, которые
конъюгированы с применением способа четвертичного амина в
соответствии с данным изобретением. Результаты, показанные в
таблице 11 (значения IC50 в единицах нг/мл), показывают, что
конъюгаты cACIO антитело-лиганд-лекарственное средство из
соединений лекарственное средство-линкер 166 и 172, полученные с
применением методики N-деалкилирования содержащего третичный
амин соединения с получением не четвертичного аминового
присоединения единицы тубулизинового лекарственного средства,
являются не активными в отношении колоний клеток лимфомы по
сравнению со связанными через четвертичный амин сопоставляемыми
соединениями, полученными из соединений лекарственное средство-
линкер 104 (4° TubM) и 78 (4° Tub (0СН3)-ОН) , которые выделяют
свободное лекарственное средство, которые сохраняют
функциональную группу третичного амина исходного лекарственного средства.
качестве D+ части.
Модель ксенотрансплантата L540cy лимфогранулематоза
обрабатывают однократно в.б. композицией из таблицы 4,
содержащей cACIO в качестве нацеливающей части и vcBHA4-AE в
качестве единицы линкер-кватернизированое лекарственное
средство, для которой преобладающее антитело конъюгата лиганд-
лекарственное средство имеет 4 D+ единицы на антитело (т.е., р'
равно 4) . Сравнение этого конъюгата проводят с другим cACIO
конъюгатом, в котором конструкция линкер-лекарственное средство
обозначена как vcPABC-MMAE (фигура 1) . В этом КЛЛ метильный
заместитель третичного амина ауристатина Е (АЕ) удаляют с
получением монометила ауристатина Е (ММАЕ), который затем
конъюгируют через его вторичный амин через карбамат с БПА
самоуничтожающейся частью, активированной катепсиновым
расщеплением той же валин-цитруллиновой расщепляемой единицы.
Результаты этого сравнения представлены на фигуре 1. На этой
фигуре cAClO-C представляет карбамат конъюгата cAClO-vcPAB-MMAE,
cAC10-vcPAB4-AE, обозначенный как cAClO-14, представляет
кватернизированный АЕ конъюгат, и пОО-С относится к hOO-vcPAB-
ММАЕ и п00-14 к h00-vcPAB4-AE, где пОО является универсальным не
связывающимся антителом, применяемым в качестве не нацеливающей
контрольной лигандной единицы. Результаты на фигуре 1
показывают, что in vitro цитотоксичность cACIO
кватернизированного АЕ конъюгата, который нацелен на CD30+ клетки
лимфогранулематоза и выделяет свободное лекарственное средство,
содержащее третичный амин (АЕ), транслируется in vivo в
дозозависимой манере и превосходит конъюгат, в котором
выделяется соответствующее содержащее вторичный амин
лекарственное средство (ММАЕ). Результаты введения
соответствующих конъюгатов, которые являются специфическими к антигену, не присутствующему на L54 0cy клетках (моноклональным Ab является пОО), такие же, как при лечении плацебо. Примечательно, что при более высокой тестируемой дозе (2 мг/кг) vcPAB4-AE антитело конъюгата лиганд-лекарственное средство вызывает полную абляцию опухоли, которая не возобновляется во
время оставшегося времени проведения исследования.
Сравнение также проводят между конъюгатом лиганд-лекарственное средство с CD30 специфическим антителом, вводящим единицу кватернизированного АЕ лекарственного средства, и глюкуронидной единицей для условного выделения ауристатинового лекарственного средства через глюкуронидазу, и подобным конъюгатом, в котором единица не кватернизированного ММАЕ лекарственного средства присоединена к глюкуронидной единице через карбамат. Таким образом, композиция кватернизированного конъюгата лиганд-лекарственное средство с gluc4-AE антителом из таблицы 4, снова я преобладающим КЛЛ, имеющим 4 D+ единицы на cACIO антитело, с соответствующей gluc-MMAE композицией. gluc4-АЕ и gluc-MMAE линкеры также конъюгируют с пОО, который, как указано выше, является универсальным не связывающим белком (и, таким образом, не связывается с L540cy клетками лимфогранулематоза) с получением контрольных КЛЛ. Полученные продукты показаны на фигуре 2. На этой фигуре 1 cAC10-glcu4-AE, обозначенный сАС10-8, является кватернизированным АЕ конъюгатом, cAClO-B является связанным с карбаматом cACl0-gluc-MME конъюгатом, и h00-gluc4-AE, обозначенный п00-8, и hOO-glu-MMAE, обозначенный как hOO-В, являются соответствующими контрольными конъюгатами. Как и с cACl0-vcPAB4-AE конъюгатом, in vitro результат для cACl0-gluc4-AE конъюгата, который выделяет свободный, содержащий третичный амин, ауристатин (АЕ), транслирован в дозозависимой манере in vivo и превосходит соответствующий конъюгат (cAClO-gluc-MMAE) , который выделяет дезметиловую версию этого ауристатина (ММАЕ). Более того, фигура 1 и фигура 2 показывают, что in vivo действие кватернизированных конъюгатов является иммунологически специфическим.
Пример 56. In vivo цитотоксичность конъюгата лиганд-лекарственное средство, имеющего кватернизированный тубулизин в качестве D+ части, и пептидную расщепляемую единицу
Конъюгат лиганд-лекарственное средство с cACIO антителом, обозначенный сАС10-32, имеющий четвертичный амин-тубулизин М лекарственное средство-линкерную часть, вводящую -Val-Ala-расщепляемую единицу, полученный из соединения лекарственное
средство-линкер 32, оценивают в двух моделях ксенотрансплантатов CD30+, Karpas299 ALCL и L540cy лимфогранулематоза. Результаты показаны на фигурах 5 и б, соответственно. В обоих экспериментах имеющим опухоль мышам вводят однократно в. б. тестируемый образец, когда средний размер опухоли достигает 100 мм3.
В модели ксенотрансплантата Karpas2 99 (см. фигуру 5), специфический анти-СБЗО сАСЮ конъюгат с 4-лекарственными средствами/мАт вызывает задержку роста опухоли после введения дозы 0,3 мг/кг; в то время как более высокая доза 1 мг/кг дает стойкую полную регрессию у 4 из 5 мышей. Наоборот, h0 0 не связывающий конъюгат не демонстрирует активность в дозе 1 мг/кг dose, что указывает на высокую степень иммунологической специфичности.
Подобные результаты получают в модели ксенотрансплантата L540cy (см. фигуру 6) . Специфический анти-СБЗО конъюгат с б лекарственными средствами/мАт вызывает задержку роста опухоли в дозе 0,3 мг/кг; в то время как более высокая доза 1 мг/кг дает стойкую полную регрессию у 3 из 4 мышей.
Пример 57. In vivo цитотоксичность конъюгата лиганд-лекарственное средство, имеющего кватернизированный тубулизин(0-эфир) в качестве D+ части, присоединенной через глюкуронидную единицу.
Четвертичные аминовые лекарственные средства-линкеры на основе глюкуронида оценивают в модели ксенотрансплантата L54 0cy лимфогранулематоза. Конъюгаты лиганд-лекарственное средство с антителом (КАЛ) получают из соединений лекарственное средство-линкер 104, 79 и 80, имеющие кватернизированный тубулизин М и D+ единицы лекарственного средств на основе кватернизированных сложных эфиров тубулизина тубулизин (О-этиловый) и тубулизин (0-пропиловый) эфир, соответственно, которые присоединены глюкуронидными единицами. Эти КАЛ, обозначенные как cACl0-104, сАСЮ-79 и сАСЮ-80, соответственно, также сравнивают с were сАСЮ-32, который имеет кватернизированный Тубулизин М в качестве D+ и вводят дипептид -Val-Ala- в качестве расщепляемой единицы. Все конъюгаты имеют 4-лекарственных средства/мАт для минимизации действия КАЛ РК. Мышам, имеющим ксенотрансплантаты
CD30+ L540cy, вводят однократно в.б. дозу тестируемого соединения 0, б или 2 мг/кг, когда средний объем опухоли достигает 100 мм3. Как показано на фигуре 9, все КАЛ демонстрируют значительную регрессию опухоли через 3 0 дней. В более низкой дозе 0, б мг/кг сАС10-32, опухоли у 4 из 5 мышей увеличились в объеме на 3 6 день; в то время как у мышей наблюдали полную регрессию опухоли на этот момент после лечения в дозе 0,6 мг/кг сАСЮ-104. Для конъюгатов лиганд-лекарственное средство с антителом, полученных из соединений лекарственное средство-линкер 79 и 80, содержащих кватернизированные тубулизиновые эфиры, наблюдали полную регрессию опухолей в обеих дозах на 36 день исследования.
Пример 58. In vivo цитотоксичность конъюгата лиганд-
лекарственное средство, имеющего альтернативные
кватернизированные ауристатины в качестве D+ части,
присоединенные через глюкуронидную единицу.
Конъюгаты лиганд-лекарственное средство с антителом (КАЛ), имеющие части глюкуронидное четвертичное аминовое лекарственное средство-линкер, оценивают для определения направленной доставки антимитотического доластатина 10 и ауристатина F, и получают из соединений лекарственное средство-линкер 177 и 189, соответственно. Эти КАЛ обозначены сАСЮ-177 на фигуре 11 и сАСЮ-189 на фигуре 10.
сАСЮ-189, содержащий лекарственное средство в количестве 8 единиц лекарственного средства на основе кватернизированого ауристатина F на антитело, оценивают в модели ксенотрансплантата L54 0cy лимфогранулематоза по сравнению с животными, леченными плацебо в однократных в. б. дозах 0,5 мг/кг и 2 мг/кг. В том же исследовании также тестируют КАЛ, обозначенный сАС10-78, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 78, в котором тубулизиновый эфир Tub(ОСН3)-ОН кватернизирован. Для сАСЮ-78 DAR составляет б единиц кватернизированого тубулизинового эфира на антитело. Оба конъюгата имеют единицу кватернизированного лекарственного средства, присоединенную к идентичным линкерным единицам, которая вводит глюкуронидную единицу. Результаты показаны на фигуре 10. Через 20 дней все
тестируемые образцы показали регрессию опухоли для обеих доз.
Конъюгат лиганд-лекарственное средство с антителом, имеющий четвертичный аминовый доластатин 10 в качестве D+, оценивают в той же модели ксенотрансплантата L54 0cy в однократных в.б. дозах 0,4 мг/кг и 0,8 мг/кг по отношению к монометилдоластатину 10, который присоединен к глюкуронидной единице через карбаматную функциональную группу. Конъюгат лиганд-лекарственное средство с антителом (КАЛ) с кватернизированным доластатином 10 получают из соединения лекарственное средство-линкер 177, имеющего глюкуронидную единицу, обозначен на фигуре 11 как cACl0-177, а КАЛ, имеющий единицу не кватернизированного лекарственного средства, присоединенную к такой же глюкуронидной единице, обозначен cACl0-183. Оба КАЛ, по сравнению с соответствующими не специфическими контролями hOO-177 и h00-183, вызывают стойкую полную регрессию в самых низких тестированных дозах 0,4 мг/кг, у 5/5 лечимых животных для связанного четвертичным амином доластатина 10 (177) по сравнению с 4/5 лечимых животных для связанного карбаматом монометилдоластатина 10 (183). В самой высокой тестируемой дозе (0,8 мг/кг), не связывающий h00 контроль, содержащий связанный карбаматом доластатин 10, демонстрирует временную регрессию опухоли по сравнению с краткой задержкой роста опухоли для связанного четвертичным амином доластатина 10. В конечном счете, обе конструкции КАЛ демонстрируют иммунологическую специфичность.
Пример 5_9. Внутриклеточное выделение свободного
лекарственного средства, содержащего третичный амин, из единицы кватернизированного лекарственного средства в конъюгате лиганд-лекарственное средство.
Колонии клеток МЛР, которые содержат CD71+, обрабатывают КЛЛ (1 мкг/мл), содержащим антитело, специфическое к CD71 (сОКТ9), и кватернизированный ингибитор МЛР (Тариквидар(tm)) . Композицию КЛЛ, обозначенную как cOKT9-gluc4-T, получают из соединения 36 со схемы б, и она преимущественно содержит КЛЛ, имеющие 8 D+ единиц, где D+ является кватернизированый Тариквидар. Преобладающий КЛЛ композиции, после контролируемого гидролиза сукцинимидной
где Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или |3, с М3 карбоновой кислотой; и р равен 8.
Концентрация доставленного внутриклеточно и сохраненного лекарственного средства, выделенного из конъюгата лиганд-лекарственное средство, показана в таблице 12 и сравнивается с количеством внутриклеточного лекарственного средства (т.е., рдр-связанного лекарственного средства), полученным при обработке клеток 50 нМ свободного лекарственного средства. При обработке КЛЛ, значения в скобках представляют внеклеточные концентрации ингибитора МЛР, который вытекает из клеток-мишеней, а значения в скобках для обработки свободным лекарственным средством представляют количество свободного лекарственного средства, которое остается вне клетки.
Результаты из таблицы 12 показывают, что ингибитор МЛР Тариквидар эффективно доставляется внутрь клеток МЛР. При анализе с точки зрения пмоль, лекарственное средство, выделенное из 106 клеток cOKT9-glu4-T композиции, доставляет 50-80% содержащегося в нем лекарственного средства в клетки-мишени.
Пример 60. Кинетика ферментного выделения лекарственного средства из единицы кватернизированного лекарственного средства.
N-ацетилцистеиновые (NAC) варианты карбаматного сАСЮ-gluc-
ММАЕ конъюгата и кватернизированного cACl0-gluc4-AE конъюгата
лиганд-лекарственное средство, описанные в примере 53 (т.е.,
сАСЮ замещен NAC, где р' для соответствующей структуры равен 1),
обрабатывают 0,5 мг/мл или 1 мг/мл глюкуронидазой и сравнивают с
контролем, не содержащим глюкуронидазу. Результаты,
представленные на фигуре 4, показывают, что кинетика выделения
АЕ из единицы кватернизированого лекарственного средства NAC-
gluc4-AE конъюгата сравнима с кинетикой выделения ММАЕ из NAC-
gluc-MMAE конъюгата, с полным выделением АЕ в течение 3,5-4,5
часов в зависимости от концентрации фермента. На фигуре 4 NAC-8
является конъюгатом, имеющим единицу кватернизированного
лекарственного средства, которая выделяет свободное
лекарственное средство, содержащее третичный амин (АЕ), и NAC-B является конъюгатом NAC-gluc-MMAE карбамата, который выделяет соответствующий дезметил ауристатин (ММАЕ).
Пример 61: Ex vivo стабильность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих единицу кватернизированного ауристатинового лекарственного средства.
Потеря целостности композициями конъюгатов лиганд-лекарственное средство cACl0-vcEHA4-AE и cACl0-gluc4-AE из примера 55 после инкубирования в плазме мыши и крысы показана на фигуре 3. На фигуре 3 gluc4-AE конъюгат обозначен как сАС10-8, и vcEHA4-AE конъюгат обозначен как сАС10-14. Результаты показывают, что оба типа конструкций кватернизированное лекарственное средство-линкер имеют хорошую стабильность и не выделяют преждевременно свободное лекарственное средство, содержащее третичный амин. Кватернизированный тубулизин и
конъюгаты и модели систем конъюгатов кватернизированного тарквидарового и феназинового димер, в котором N-ацетилцистеин присутствует вместо специфического антитела также подвергают тем же экспериментальным условиям. В этих случаях также отсутствует преждевременное выделение свободного лекарственного средства.
Пример 62. In vivo стабильность конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих единицу кватернизированного тубулизин(О-ацильного) лекарственного средства.
Образцы плазмы их исследования ксенотрансплантата L54 0cy из примера 56, фигура б, в котором исследовали целевую цитотоксичность КАЛ cAClO-32, собирают у всех мышей через 4 и 10 дней после дозирования (дни исследования 11 и 17, соответственно) для оценки степени деацетилирования тубулизина М. Известно что потеря ацетата тубувалина вызывает деактивацию тубулизина. Например, деацетилирование тубулизина U, с получением тубулизина V, дает > 100-кратную потерю эффективности
(J. Med. Chem., 2009, 52, 238-240). Образцы плазмы из ксенотрансплантата L540cy из примера 56 через 4 и 10 дней после дозирования обрабатывают для того, чтобы определить КАЛ, выделенное ферментативно лекарственное средство, и степень деацетилирования, рассчитанную масс-спектрометрией. Через четыре дня после введения (фигура 7), конъюгированное тубулизиновое лекарственное средство было на > 4 0% деацетилировано для всех трех уровней дозирования. Через десять дней после дозирования
(фигура 8), степень деацетилирования составляла > 70% для всех уровней дозирования. Это открытие позволяет предположить, что находящийся в кровотоке КАЛ теряет эффективность в зависимости от времени, вероятно, с ослаблением in vivo активности.
Пример 63: Оценка фармакокинетики (ФК) конъюгатов лиганд-лекарственное средство, имеющих кватернизированный тубулизин в качестве единицы лекарственного средства D+.
Эксперименты по фармакокинетике (ФК) проводят с применением радиомеченных антител или КАЛ. Образцы для тестирования ФК радиоактивно метят с применением следующей методики. К раствору антитела или КАЛ в ФРФБ с добавлением дополнительных 50 мМ фосфата калия (рН 8,0) и 50 мМ хлорида натрия добавляют 55 мкКи
N10 пропионата сукцинимидила, [пропионат-2,3-ЗН]- (Moravek Biochemicals, № по каталогу: МТ 919, 80 Ки/моль, 1 мКи/мл, 9:1 раствор гексан:этилацетат) на мг антитела или КАЛ. Полученную смесь перемешивают на вортексе и выдерживают при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь центрифугируют при 4,000д в течение 5 минут, и нижний водный слой удаляют и разделяют на центрифужных фильтрах Amicon Ultra-15 (Millipore, № по каталогу: UFC903024, 30 кДа НОММ). Не конъюгированную радиоактивность удаляют за 4 разведения и центрифугированием при 4,000д. Полученные продукты фильтруют через стерильные центрифужные фильтры 0,22 мкм Ultrafree-MC (Millipore, № по каталогу: UFC30GV0S), и конечные концентрации антитела или КАЛ измеряют спектрофотометрически. Удельную активность (мкКи/мг) каждого продукта определяют жидкостной сцинтилляционной детекцией.
Фармакокинетические свойства не конъюгированных антител или КАЛ исследуют в нескольких экспериментах. В каждом эксперименте 1 мг радиомеченного антитела или КАЛ на кг веса животного вводят через хвостовую вену. Каждый тестируемый образец вводят один раз животному. Кровь собирают в K2EDTA пробирки через подкожную вену или сердечной пункцией для терминальной крови в различные моменты времени. Плазму выделяют центрифугированием в течение 10 минут при ЮОООд. 10-20 мкл образцы плазмы из каждого момента времени добавляют в 4 мл жидкой сцинтилляционной смеси Ecoscint-А (National Diagnostics), и общую радиоактивность измеряют жидкостной сцинтилляционной детекцией. Полученные значения распадов в минуту превращают в мкКи, и удельную активность радиомеченных тестируемых образцов применяют для расчета концентрации антитела или КАЛ, оставшихся в плазме в каждый момент времени.
На фигуре 12 показаны профили воздействия для конъюгатов, полученных из соединения лекарственное средство-линкер mDPR-Val-Ala-PAB4-TubM (32) и гидрофильных аналогов линкера 113, описанных в примере 51. КАЛ с гуманизированной IgG лигандной единицей и DAR 4 кватернизированного Тубулизина М, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 32, которое имеет -Val-Ala- дипептидную расщепляемую единицу и обозначено как hlgG
32(4), имеет профиль выведения, идентичный профилю для не
модифицированного антитела; однако, КАЛ с DAR 8, обозначенный
как hIgG-32(8), КАЛ выводится из кровотока намного быстрее.
Соответствующий КАЛ с DAR 8 получают из соединения лекарственное
средство-линкер 113, обозначенного hIgG-113(8), в котором
аланиновый остаток в расщепляемой единице, замещенный
глутаматом, не вызывает усиление воздействия. Для hlgG КАЛ,
обозначенного hIgG-104(8), полученного из соединения
лекарственное средство-линкер 104, в котором гидрофобная дипептидная расщепляемая единица hIgG-32(8) замещена более полярной глюкуронидной единицей, отмечается незначительное улучшение клиренса.
На фигуре 13 показана ФК для DAR 8 пОО конъюгатов, имеющих связанный с четвертичным амином глюкуронида тубулизиновый эфир Tub(О-Рг)-ОН, полученных из соединения лекарственное средство-линкер (80) . Такой конъюгат лиганд-лекарственное средство с пОО антителом, имеющий 8 копий части лекарственное средство-линкер, полученный из mDPR-gluc4-Tub(ОРг)-ОН (80), выводится из кровотока быстрее, чем не модифицированное антитело.
На фигуре 14 показаны свойства выведения DAR 8 конъюгатов
лиганд-лекарственное средство с пОО антителом (пОО КАЛ), имеющих
части лекарственное средство-линкер, состоящие из глюкуронидной
единицы и цитотоксина ауристатина Е или доластатина 10 в
качестве единиц кватернизированного лекарственного средства D+, и
эквивалентных конъюгатов, имеющих не кватернизированного
лекарственного средства, связанные с карбаматом единицы
лекарственного средства, в которых метильная группа удалена из
АЕ и доластатина 10 (т.е., конъюгаты единиц не
кватернизированного лекарственного средства ММАЕ и
монометилдоластатина 10) . h00 КАЛ с частью лекарственное средство-линкер на основе четвертичного амина глюкуронида-ауристатина Е, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 8 показывает ФК свойства, идентичные свойствам не модифицированного антитела через 7 дней. Однако h00 КАЛ конъюгат, имеющий связанный с не кватернизированным карбаматом монометилауристатин Е, обозначенный hOO-В, вызывает усиленное
выведение КАЛ. Наоборот, пОО-КАЛ, имеющий кватернизированный доластатин 10,полученный из соединения лекарственное средство-линкер 177 и обозначенный как hOO-177, и пОО-КАЛ, имеющий не кватернизированный монометилдоластатин 10, присоединенный к линкерной единице через карбаматную функциональную группу, который получают из соединения карбамата лекарственное средство-линкер 183, и обозначенный h00-183, выводится быстрее, чем чистое антитело и имеет похожий профиль выделения.
Пример 64: In vitro сравнение in vitro цитотоксичности гидразида тубулизина М и гидразида лекарственного средства тубулизин М в качестве свободных лекарственных средств.
Пример 63. In vitro сравнение тубулизина М в виде не кватернизированного Val-Cit-PABN карбамата гидразида части
С-концевая методика конъюгирования тубулизинов в виде гидразидных аналогов описана {Cancer Res., 2008, 68, 9839-9844) ранее для тубулизина В. Этот подход является альтернативой методике с применением четвертичного амина, описанной здесь, и методике не расщепляемого N-концевого конъюгирования из примера 54, и включает получение производного из С-концевого компонента тубулизина (см. пример 47) . Гидразид тубулизина М (190) оценивают in vitro в виде свободного лекарственного средства в сравнении с не модифицированным тубулизином М (26) на панели колоний клеток; клетки обрабатывают в течение 96, и результаты показаны в таблице 11 (значения 1С50 в нМ концентрации).
лекарственное средство-линкер по сравнению с кватернизированным Val-Ala-PAB4 тубулизином М.
Val-Ala четвертичный амин-тубулизин М соединение лекарственное средство-линкер MC-vaPAB4-TubM (30) и связанный с карбаматом тубулизин М-гидразид соединение лекарственное средство-линкер mDPR-Val-Cit-PABN (192) конъюгировано с сОКТ-9, антитрансферриновым рецептором IgG. Коротко, сОКТ-9 полностью восстанавливают с ТСЕР для того, чтобы открыть 8 конъюгированных цистеиновых остатков. Полученные тиолы алкилируют с малеимидосодержащими соединениями лекарственное средство-линкер 30 и 192, добавленными в избытке. Было обнаружено, что количество конъюгатов сОКТ-9 составляет 8 и 6,7 лекарственных средств/мАт для линкеров 30 и 192, соответственно. Панель колоний раковых клеток обрабатывают полученными конъюгатами в течение 96 часов и оценивают жизнеспособность. Результаты показаны в таблице 1, где 1С50 даны в единицах нг/мл.
Таблица 14. In vitro цитотоксичность кватернизированного тубулизинового конъюгата лиганд-лекарственное средство, специфического к рецептору трансферрину по сравнению с не кватернизированным тубулизиновым конъюгатом лиганд-лекарственное средство, присоединенным к С-концевому компоненту.
Пример 65: In vitro оценка ауристатина Fr связанного через глюкуронидный четвертичный аминовый линкер.
Конъюгат лиганд-лекарственное средство (КАЛ) с сОКТ9 антителом, получаемый из соединения лекарственное средство
линкер с глюкуронидным четвертичным амин-ауристатином F 189, получают как описано и конъюгируют в количестве с 8 лекарственными средствами/7АЬ с сОКТ-9, антителом к анти-трансферриновому рецептору. Полученный КАЛ тестируют на панели колоний раковых клеток для сравнения с соответствующим КАЛ, полученным из соединения карбамат-лекарственное средство-линкер MC-Val-Cit-PABC-MMAF 193 {Bioconjugate Chem., 2006, 17, 114124). Результаты показаны в таблице 13.
Конъюгат, имеющий ауристатин F в качестве единицы четвертичного аминового лекарственного средства, полученный из соединения лекарственное средство-линкер 189, который имеет глюкуронидную единицу и самостабилизирующийся Lss предшественник mDPR, показывают такую же цитотоксичность, как показано в таблице 14 (значения IC50 в единицах нг/мл), как у КАЛ, полученного из Val-Cit БПА карбамата (vcPABC)-MMAF соединения лекарственное средство-линкер 193 для большинства колоний клеток. В отличие от соединения 189 это соединение лекарственное средство-линкер имеет линкерную единицу, которая не содержит Lss предшественник и содержит дипептидную расщепляемую единицу. В колонии клеток ОМЛ ЛГ60 и ЛГбО/RV отмечено умеренное снижение (в 2-3 раза) эффективности, полученной с контрольным Val-Cit-PABC карбаматом, полученным из 193.
Пример б б: Цитотоксичность конъюгатов лиганд-лекарственное средство с кватернизированным феназиновым димеромг специфических
к раковым клеткам.
Соединение лекарственное средство-линкер с феназиновым димером четвертичного амина 19 конъюгируют до химерного АС10 и гуманизированных 1F6 антител, которые являются анти-СБЗО и анти-CD70 антителами, соответственно, при DAR 4-лекарственных средства на антитело. Конъюгаты тестируют на двух колониях клеток CD30+ лимфомы, Karpas299 и L540cy, и двух колониях клеток CD70-положительных клеток почечной карциномы, 786-0 и Caki-1. Данные показаны в таблице 16 (значения IC50 в единицах нг/мл).
Анти-СБЗО связывающий конъюгат, cAC10-19, является эффективным в отношении колонии Karpas299 ALCL; где контроль, hlF6-19, который не распознает CD30 антиген, является не активным, что показывает высокую степень иммунологической специфичности. Оба конъюгата сАС10-19 и hlF6-19 были не активными в отношении CD30+/CD70+ L540cy клеток. В отношении CD30 отрицательных/СБ70 положительных клеток RCC, специфический к CD70 антигену конъюгат, hlF6-19, был значительно более эффективным, чем его контроль, конъюгат сАС10-19, который не распознает CD70 антиген.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство (КЛЛ), где композиция КЛЛ представлена структурой формулы 1:
(формула 1) где
ЛЕ является линкерной единицей;
"Лиганд" является лигандной единицей (L) из нацеливающей части, где L селективно связывается с частью, являющейся мишенью;
Lb является лигандной ковалентно связывающей частью;
Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей так, что индекс а равен 0, если А отсутствует, или 1, если А присутствует, и необязательно содержит две, три или четыре субъединицы;
Q2 является W'w> -E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3;
Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами, где
Ww из Q1 способна к селективному расщеплению внутриклеточной или регуляторной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, или глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН (т.е., в более кислых), присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки,
W'-E из Q2 является гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, и
индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен О или W присутствует, если w равен 1, и индекс w' равен 0 или 1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, или W'-E присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равен 1 (т.е., один и только один из W, W' присутствует);
V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2 или C(R8) (R9)-D+, где по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V, Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1,
при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9) -D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)- и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу,
при условии, что если w' равен 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу;
R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным;
R' является водородом или является галогеном, -NO2, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или является электронодонорной группой;
Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом;
D+ является структурой кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин; и
индекс р равен среднему содержанию лекарственного вещества, являющемуся числом от 1 до 24; и
где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление приводит к высвобождению содержащего третичный амин лекарственного средства (D) из соединения конъюгата лиганд-лекарственное средство из
композиции.
2. Композиция КЛЛ по пункту 1, где структура композиции представлена структурой формулы 2А или формулы 2В:
(формула 2А)
Лиганд-
(формула 2В).
3. Композиция КЛЛ по пункту 1, где структура композиции представлена структурой формулы ЗА или формулы ЗВ:
/ Q2 \
Лиганд¦
V ( D+
-U Ая J-
Z1 К R8 RM
(формула ЗА)
Лиганд-
(формула ЗВ)
4. Композиция КЛЛ по пункту 1, где композиция представлена структурой формулы ЗС или формулы 3D:
(формула 3D).
5. Композиция КЛЛ по пункту 1, где структура композиции представлена структурой формулы ЗЕ или формулы 3F:
(формула ЗЕ)
Лиганд-
(формула 3F).
б. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 1-5, где нацеливающей частью является антитело, тем самым определяя конъюгат антитело-лекарственное средство (КАЛ), где являющейся мишенью частью лигандной единицы антитела является доступный на
поверхности клетки антиген являющихся мишенью аномальных или других нежелательных клеток, способный к клеточной интернализации связанного КАЛ, где антиген преимущественно присутствует на аномальных или других нежелательных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
7. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 1-5, где
нацеливающей частью является лиганд доступного на поверхности
клетки рецептора, и являющейся мишенью частью является такой
рецептор поверхности клетки, где являющийся мишенью рецептор на
аномальных клетках способен к клеточной интернализации
связанного КЛЛ, и где рецептор преимущественно присутствует на
аномальных клетках, по сравнению с нормальными клетками.
8. Композиция КЛЛ по пункту б, где W из Q1 включает или состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется внутриклеточной или регуляторной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где действие регуляторной протеазы на W вызывает высвобождение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) , из соединения конъюгата лиганд-лекарственное средство композиции.
9. Композиция КЛЛ по пункту б, где W' из Q2 является связанным гликозидом углеводородом, где гликозидная связь W'-E из Q2 является местом расщепления для гликозидазы, расположенной внутриклеточно, где действие гликозидазы на W'-E вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D), из конъюгата лиганд-лекарственное средство композиции.
(формула б),
где R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом,
10. Композиция КЛЛ по пункту 8, где пептидная часть W
включает или состоит из дипептидной части, имеющей структуру
формулы б:
втор-бутилом, -СН(ОН)СН3 или имеет структуру
и R
является
метилом,
- (СН2) 4-NH:
- (СН2) 3NH (С=0) NH
(СН2) 3NH (C=NH) NH2 или -(CH2)2C02H,
где волнистая линия к С-концу дипептида показывает ковалентную связь с J ариленовой части формулы 2А или 2В, и волнистая линия к N-концу дипептида показывает ковалентную связь с остатком W, если такой остаток присутствует, или с А, или его субъединицей, если а равен 1, или с Lb, если индекс а равен 0, и где дипептидная связь с J расщепляется внутриклеточной или регуляторной протеазой.
11. Композиция КЛЛ по пункту 9, где W' в Q2 является углеводородной частью, которая связана через гликозид с Е, где гликозидная связь расщепляется гликозидазой, расположенной внутриклеточно, и где W'-E имеет структуру формулы 7:
(формула 7),
где волнистая линия представляет Е, связанную с одним из V, Z1, Z2 или Z3, если эта переменная группа является =C(R24), где Е является -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; и
где R45 является -СН2ОН или -С02Н.
12. Композиция КЛЛ по пункту 1, где а равен 1;
где -Lb-Aa в формуле 1 является -Lb-A, если А0 отсутствует, или -Lb-A является -Lb-Ai-A0, если А0 присутствует так, что А становится Ai-AQ,
где Lb-Aa- имеет структуру формулы 8:
где
-[C(Rbl) (Rbl) ]m- [УГ] - часть является А или А1 ; R и Ra2 независимо являются водородом или метилом; Ral является водородом, метилом, этилом или основной единицей (ОЕ);
УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза
(УГ) ;
индекс m является целым числом от 0 до б;
каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, содержат Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил, и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом;
ОЕ имеет структуру -[C(R1) (R1)]-[C(R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) ,
где индекс n равен 0, 1, 2 или 3;
каждый R1 независимо является водородом или низшим алкилом, или два R1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, и каждый R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2 вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода образуют С3-С6 циклоалкил, или один R1 и один R2, вместе с атомами углерода к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют 5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены;
R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; и
где волнистая линия к сукцинимидному кольцу Lb означает ковалентную связь с атомом серы из сульфгидрильной группы нацеливающей части, и другая волнистая линия означает ковалентную связь А (или Ai) с остатком композиции.
13. Композиция КЛЛ по пункту 10, где структура композиции представлена структурой формулы 9:
(формула 9)
где Ab является лигандной единицей антитела;
R' является водородом или электронодонорной группой;
R8 является водородом;
R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом;
R34 является метилом, изопропилом или -СН(ОН)СН3;
R35 является метилом, - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(СН2)2С02Н;
J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом;
V и Z1 независимо являются =СН- или =N-.
14. Композиция КЛЛ по пункту 13, где структура композиции представлена структурой формулы 10:
/ 0
Г N^fRa2 н 9 f35 v=z2 ,D+
R/S^ * [C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-A0-NvX NA^J^\ /W
^ А или A! R
(формула 10) где
S является атомом серы лигандной единицы антитела (Ab-);
звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода;
А0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и Ai, если А0 присутствует, следовательно А становится -Ai-AQ-;
R является -Н;
Ral является -Н или основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил;
Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 5, если УГ присутствует, или от 1 до 5, если УГ отсутствует;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
R34 является метилом, изопропилом или -СН(ОН)СН3;
R35 является - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(СН2)2С02Н;
J является -NH-;
V, Z1 и Z2 являются =СН2-;
R' является водородом или электронодонорной группой;
R8 является водородом; и
R9 является водородом или метилом.
15. Композиция КЛЛ по пункту 11, где структура композиции представлена структурой формулы 11:
(формула 11) где
Ab является лигандной единицей антитела;
Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А так, что Аг становится А, если А0 отсутствует, и А является -А!-А0-, если А0 присутствует ;
Е является -О- или -NH-;
J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; V и Z3 независимо являются =СН- или =N-; R' является водородом или группой, выделяющей электрон; R8 является водородом;
R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом; R45 является -СОгН; и
индекс р является числом от 1 до 8.
16. Композиция КЛЛ по пункту 15, где структура композиции представлена структурой формулы 12:
(формула 12), где
S является атомом серы лигандной единицы антитела Ab;
звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода;
Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А, где- [C(Rbl) (Rbl)]m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и является Ai, если А0 присутствует так, что А становится Ai-AQ; где А0, если присутствует, соответствует по структуре аминсодержащей кислоте, связанной с J через С-концевой карбонил аминсодержащей кислоты;
R является водородом;
R' является водородом или группой, выделяющей электрон;
Ral является водородом или основной единицей (ОЕ), где ОЕ
имеет структуру -CH2-N(R22) (R
или кислотно-аддитивной соли,
где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 5, если УГ присутствует, или от 1 до 5, если УГ отсутствует;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
R45 является -С02Н;
Е является -0-;
J является -NH-;
V и Z3 являются =СН2-;
R8 является водородом;
R9 является водородом или метилом; и
индекс р является числом от 1 до 8.
17. Композиция КЛЛ по пункту 15, где А0, если присутствует, имеет структуру формулы 13 или формулы 14:
(формула 13) (формула 14)
где волнистая линия к карбонильной части любой структуры представляет точку присоединения А0 к W, и где волнистая линия к амино части любой структуры представляет точку присоединения А0 к Ai,
где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что если К или L является О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 к L отсутствуют, и если К или L являются N, один из R41, R42 к К или один из R43, R44 к L отсутствуют, и при условии, что никакие два соседних L независимо не выбирают из N, О или S;
где q является целым числом от 0 до 12, иг является целым числом от 1 до 12;
где G является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, -ОН, -0RG, -C02H, C02RG, где RG является Ci-C6 алкилом, арилом или гетероарилом, необязательно замещенным, или RPR, где RPR является подходящей защитной группой, -NH2 или -N(RG) (RPG) , где RG, выбранный независимо, такой, как определен выше, или оба RG, вместе с атомом азота к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил, или оба RPR вместе образуют подходящую защитную группу;
где R38 является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом; R39-R44 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным, или
необязательно замещенным гетероарилом, или оба R39, R40 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или R41, R42, вместе с К к которому они присоединены, если К является С, или R43, R44 вместе с L, к которому они присоединены, если L является С, образуют Сз-Сб циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43, или R41 и R43, вместе с атомом углерода, или гетероатомом, к которому они присоединены, и атомами, расположенными между этими атомами углерода и/или гетероатомами, образуют 5- или б-членный циклоалкил или гетероциклоалкил, или
где А0 имеет структуру, соответствующую альфа-амино-, бета-амино- или другой аминсодержащей кислоте.
18. Композиция КЛЛ по пункту 16, где отмеченный звездочкой (*) атом углерода преимущественно находится в той же абсолютной конфигурации, как и альфа атом углерода L-аминокислоты, если этот указанный атом углерода имеет хиральность.
19. Композиция КЛЛ по пункту б, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство независимо представлена структурой формулы 16А или формулы 16В:
Lb Q1
(формула 16В)
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
Q1' является A0-Ww, где А0 является необязательной
субъединицей А так, что -Q1'- является -Ww-, если А0 отсутствует, или является -AQ-WW-, если А0 присутствует,
где -[C(Rb) (Rb)]m-[yr]- становится А, если А0 отсутствует, или является Ai, если А0 присутствует, и
где индекс w равен 1, если Q2 отсутствует, или w равен О так, что W отсутствует и Q2 присутствует;
R является водородом;
Ral является -Н или ОЕ, где ОЕ имеет структуру -СН2-N(R22) (R23) , или кислотно-аддитивной соли, где R22 и R23 независимо являются водородом или метилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил;
Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 5, если УГ присутствует или от 1 до 5, если УГ отсутствует;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
J является -О- или -NH-;
Q2, если присутствует, является W-E, где Е является -О- или -NH-; и
индекс р' является целым числом от 1 до 24.
20. Композиция КЛЛ по пункту 19, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство имеет структуру формулы 17А или формулы 17В:
(формула 17В)
где J является -NH-;
один из V, Z1 является =C(R24)-, где R24 является водородом, -С1 или -N02, и другие V, Z1 и Z2 являются =СН2-; R8 является водородом; R9 является водородом или метилом; и индекс р' является целым числом от 1 до 8.
21. Композиция КЛЛ по пункту 19, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство имеет структуру формулы 18А или формулы 18В:
(формула 18В)
где А0 является необязательной субъединицей А, где
[C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - часть является А, если AQ отсутствует, или часть является Ai, если А0 присутствует так, что А становится -Ai-Ao-;
R является -Н;
Ral является -Н или основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , или кислотно-аддитивной соли, где R22 независимо является водородом или метилом, или оба R22 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или 6-членный гетероциклоалкил;
Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 5, если УГ присутствует, или от 1 до 5, если УГ отсутствует;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-; и
R8 является водородом;
R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или необязательно замещенным фенилом; и индекс р' является целым числом от 1 до 24.
22. Композиция КЛЛ по пункту 21, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство имеет структуру формулы 19А или формулы 19В:
(формула 19В) где
R является водородом;
Ral является водородом или основной единицей (ОЕ), где ОЕ
имеет структуру -CH2-N(R22) (R
или кислотно-аддитивной соли,
где R22 и R23 независимо являются водородом или метилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 5, если УГ присутствует, или от 1 до 5, если УГ отсутствует;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
R45 является -С02Н;
Е является -0-;
J является -NH-;
V и Z3 является =СН2-;
R8 является водородом; и
R9 является водородом или метилом.
23. Композиция КЛЛ по пункту 22, где отмеченный звездочкой (*) атом углерода преимущественно имеет ту же абсолютную конфигурацию, как и альфа атом углерода L-аминокислоты, если этот указанный атом углерода является хиральным.
24. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 1-23, где -D+
является кватернизированным содержащим третичный амин
тубулиновым разрывающим агентом.
25. Композиция КЛЛ по пункту 24, где единица кватернизированного тубулинового разрывающего лекарственного средства -D+ является единицей кватернизированного тубулизинового лекарственного средства.
26. Композиция КЛЛ по пункту 25, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру формулы DG_!' или формулы DH-i':
(формула DG_i')
О (формула DH-i')
где круг означает 5-членный азот-гетероарил, и где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3-положениях друг к другу при необязательном замещении на оставшихся положениях;
R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН;
R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом;
R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо;
R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом; и
R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом,
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком структуры композиции.
27. Композиция КЛЛ по пункту 2 6, где единица
где Z является необязательно замещенным низшим алкиленом или необязательно замещенным низшим алкениленом;
индекс q, показывающий количество R7B заместителей, равен 1, 2 или 3;
где каждый R7B независимо выбирают из группы, включающей водород и О-связанный заместитель; и
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком структуры композиции.
28. Композиция КЛЛ по пункту 2 6, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или R2, вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН;
R3 является необязательно замещенный Ci-Сб алкил;
R5 и R6 являются боковыми цепями остатками природных гидрофобных аминокислот;
-N(R7)(R7) является -NH(d-C6 алкилом) или -NH-N(Ci-C6 алкилом) 2, где один и только один Ci-C6 алкил необязательно замещен -С02Н или ее сложным эфиром, или необязательно замещен фенилом; и
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком структуры композиции.
29. Композиция КЛЛ по пункту 28, где -N(R7) (R7) выбирают из группы, включающей -NH(CH3), -NHCH2CH2Ph и -NHCH2-C02H,
NHCH2CH2C02H и -NHCH2CH2CH2C02H.
30. Композиция КЛЛ по пункту 27, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
31. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 2 6-3 0, где 0-
связанный заместитель -OR2A отличается от -ОН (т.е., R2A не
является водородом).
32. Композиция КЛЛ по пункту 30, где единица
кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+
имеет структуру:
где R4A является метилом;
R3 является Н, метилом, этилом, пропилом, -СН2-ОС (О) R3A, СН2СН (R3B) С (О) R3A или -СН (R3B) С (О) NHR3A, где R3A является Ci-C6 алкилом и R3B является Н или Ci-C6 алкилом, выбранным независимо из R3A; и
-OR2A является О-связанным заместителем, выбранным из группы, включающей -OR2B, -OC(0)R2B или -OC(0)N(R2B) (R2C) , где R2B и R2C независимо выбирают из группы, включающей Н, Ci-C6 алкил и С2-С6 алкенил; и
R7B является водородом или -ОН.
33. Композиция КЛЛ по пункту 31, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A и R3 независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, пропил и изопропил;
R2B является метилом, этилом, пропилом и изопропилом, или -QR2A такой, как определен выше;
R3 является метилом, этилом или пропилом; и
R7B является водородом или -ОН.
34. Композиция КЛЛ по пункту 31, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
R2B является метилом, этилом, пропилом, изопропилом, 3-метилпроп-1-илом, 3,З-диметилпроп-1-илом или винилом; R3 является метилом, этилом или пропилом; и R7B является водородом или -ОН.
35. Композиция КЛЛ по пункту 34, где R2B является -СН3, R3 является -СН3 и R7B является Н или -ОН.
36. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 2 6-32, где R2A является -СН2СН3.
37. Композиция КЛЛ по пункту 33 или 34, где R2B является -
35.
CH3, R3 является -СН3 и R7B является Н или -ОН.
38. Композиция КЛЛ по пункту 1, где композиция представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; R34 является изопропилом и R35 является -СН3, изопропилом, -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 или -СН2СН2С02Н;
R7B является водородом или -ОН;
R2A является Ci-C6 алкилом, С2-С6 алкенилом, -OCH2OR2B, C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом или Ci-Сб алкилом; и
индекс р является числом от 1 до 8.
39. Композиция КЛЛ по пункту 38, где
R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2;
R7B является водородом или -ОН;
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и
индекс р является числом от 1 до 8.
40. Композиция КЛЛ по пункту 1, где композиция представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
R7B является водородом или -ОН;
R2A является Ci-C6 алкилом, -OCH2OR2B -C(=0)R2B или C(=0)NHR2B, где R2B является Ci-Сб алкилом или Сг-Сб алкенилом; и индекс р является числом от 1 до 8.
41. Композиция КЛЛ по пункту 40, где
R7B является водородом или -ОН;
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и
индекс р является числом от 1 до 8.
42. Композиция КЛЛ по пункту 38, где структура композиции
представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
индекс р равен числу от 1 до 8; и
индекс m равен 4.
43. Композиция КЛЛ по пункту 40, где структура композиции представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
индекс р является числом от 1 до 8; и
индекс m равен 4.
44. Композиция КЛЛ по пункту 1, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или |3 с карбоновой кислотой;
R34 является изопропилом, и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2;
R7B является водородом или -ОН;
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом; и
индекс р' является целым числом от 1 до 8.
45. Композиция КЛЛ по пункту 1, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связан с атомом углерода, а или |3 с М3 карбоновой кислотой;
R7B является водородом или -ОН;
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом;
и индекс р' является целым числом от 1 до 8.
46. Композиция КЛЛ по пункту 44, где каждая композиция
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
Ab-S- часть связан с атомом углерода, а или |3 с М
карбоновой кислотой;
индекс р' является целым числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
47. Композиция КЛЛ по пункту 45, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; aAb-S- часть связан с атомом углерода, а или |3 с М3 карбоновой кислотой;
индекс р' является целым числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
48. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 37-40, 43 и 44, где А является -СН2 (СН2) 4 (С=0) - или -СН2 (СН2) 4 (С=0) NHCH2CH2 (С=0) - .
49. Композиция КЛЛ по любому из пунктов 3 8-4 8, где R2A является -С(О)СН3, метилом, этилом или пропилом.
50. Композиция КЛЛ по пункту 1, где -D+ является единицей кватернизированного ауристатинового лекарственного средства или единицей кватернизированного доластатинового лекарственного средства.
51. Композиция КЛЛ по пункту 51, где единицей
кватернизированного доластатинового лекарственного средства является кватернизированный доластатин 10 или кватернизированный доластатин 15.
52. Композиция КЛЛ по пункту 50, где единица кватернизированного ауристатинового лекарственного средства -D+ имеет структуру DE' или DF':
(DF')
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом;
R12 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R14 является водородом или метилом;
или R13 и R14 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8 циклоалкил;
R15 является водородом или Ci-C8 алкилом;
R16 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R17 независимо являются водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом и О-(Ci-C8 алкилом);
R18 независимо являются водородом или Ci-C8 алкилом;
R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом, -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2-(С3-С8 циклоалкилом); R21
является арилом или С3-С8 гетероциклом; где R19A является водородом, Ci-Ce алкилом или -ОН;
R20 является водородом, Ci-C2o алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и - (R470) m-CH (R49) 2;
индекс m является целым числом 1-1000;
R47 является С2-С8 алкилом;
R48 является водородом или Ci-C8 алкилом;
R49 независимо являются -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, -(CH2)n-S03H или - (СН2) n-S03-Ci-C8 алкилом;
R50 независимо являются Ci-C8 алкилом или - (СН2) п-СООН;
Z является О, S, NH или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом;
X1 является Ci-Сю алкиленом; и
индекс п является целым числом от 0 до б;
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком структуры композиции.
53. Композиция КЛЛ по пункту 52, где композиция представлена структурой
CH2CH2CH2NH (С=0) NH2; и
индекс р является числом от 1 до 8.
54. Композиция КЛЛ по пункту 52, где каждая композиция
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
Ab-S- часть связан с атомом углерода, а или )3 с М3 карбоновой кислотой;
R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2;
и индекс р' является целым числом от 1 до 8.
55. Композиция КЛЛ по пункту 53, где композиция представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
индекс р является числом от 1 до 8; и
индекс m равен 4.
56. Композиция КЛЛ по пункту 53, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или (3 с М3 карбоновой кислотой;
индекс р' является целым числом от 1 до 8; и индекс m равен 4.
57. Композиция КЛЛ по пункту 52, где структура композиции
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела; и
индекс р является числом от 1 до 8.
58. Композиция КЛЛ по пункту 52, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или |3 с М3 карбоновой кислотой; и
индекс р' является целым числом от 1 до 8.
59. Композиция КЛЛ по пункту 57, где структура формулы 1 композиции представлена структурой:
или
где Ab является лигандной единицей антитела;
S является атомом серы лигандной единицы антитела;
и индекс р является числом от 1 до 8.
60. Композиция КЛЛ по пункту 58, где каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство представлена структурой:
где Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или (3 с М3 карбоновой кислотой; и
индекс р' является целым числом от 1 до 8.
61. Композиция КЛЛ по пункту 1, где -D+ является кватернизированным феназиновым димером.
62. Композиция КЛЛ по пункту 61, где кватернизированный феназиновый димер -D+ имеет структуру Dz':
61.
(Dz') ,
где кольцо А и кольцо В независимо выбирают из арила или гетероарила, необязательно замещенного на кольце А одним, двумя или тремя RA заместителями и/или необязательно замещенного на кольце В одним, двумя или тремя RB заместителями, конденсированными с феназиновыми кольцевыми системами, где одна феназиновая кольцевая система необязательно замещена одним, двумя или тремя выбранными независимо Rc заместителями, и другое феназиновое кольцо необязательно замещено одним, двумя или тремя выбранными независимо RD заместителями, где RA, RB, Rc и RD, если присутствует, независимо являются галогеном, необязательно замещенным алкилом или О-связанным заместителем;
R9A и R9B являются независимо выбранными необязательно замещенным алкилом, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, и промежуточными атомами углерода между указанным атомом азота, образуют гетероциклоалкильную кольцевую систему, и где n, s и о независимо являются целыми числами от 2 до 4;
где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ с остатком структуры композиции.
63. Композиция КЛЛ по пункту 62, где кватернизированный феназиновый димер -D+ имеет структуру
где RA и RB присутствуют и являются низшим алкилом.
64. Композиция КЛЛ по пункту 62, где структура формулы 1 композиции, или каждое соединение КЛЛ композиции представлено структурой:
соответственно, где
Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или |3 с М3 карбоновой кислотой;
индекс р является числом от 1 до 24; и индекс р' является целым числом от 1 до 24.
65. Композиция КЛЛ по пункту 1, где -D+ является
кватернизированным ингибитором МЛР, имеющим изохинолиновую
структуру.
66. Композиция КЛЛ по пункту 65, где структура композиции,
или каждая композиция конъюгата лиганд-лекарственное средство
представлена структурой:
соответственно, где
Ab является лигандной единицей антитела; S является атомом серы лигандной единицы антитела; Ab-S- часть связана с атомом углерода, а или |3 с М3 карбоновой кислотой;
индекс р является числом от 1 до 24; и индекс р' является целым числом от 1 до 24.
67. Соединение лекарственное средство-линкер, где соединение имеет структуру формулы I:
(формула I) где
L'b является предшественником лигандной ковалентно связывающей части;
Q1 является Aa-Ww, где А является необязательной удлиняющей единицей так, что индекс а равен 0, если А отсутствует, или 1, если А присутствует и необязательно содержит две, три или четыре субъединицы;
Q2 является W'w> -E-, где Q2, если присутствует, связан с V, Z1, Z2 или Z3;
Ww и W'w> являются расщепляемыми единицами, где
Ww из Q1 способна к селективному расщеплению внутриклеточной или регуляторной протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, или глутатионом через дисульфидный обмен, или является более реакционноспособной к гидролизу в условиях низкого рН (т.е., в более кислых), присутствующих в лизосомах, по сравнению с физиологическим рН сыворотки,
W'-E из Q2 является гликозидной связью, расщепляемой гликозидазой, расположенной внутриклеточно, и
индекс w равен 0 или 1 так, что W отсутствует, если w равен
0, или W присутствует, если w равен 1, и индекс w' равен 0 или
1, где W'-E отсутствует, если w' равен 0, или W'-E присутствует, если w' равен 1, и где w+w' равно 1 (т.е., один и только один из W, W' присутствует);
V, Z1, Z2 и Z3 являются =N- или =C(R24)-, где R24 является водородом или алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или галогеном, -N02, -CN или другой группой, выделяющей электрон, электронодонорной группой, -Q2, или C(R8) (R9)-D+, где, по крайней мере, один из V, Z1, Z2 и Z3 является =C(R24)-, если w равен 1, и, по крайней мере, два из V,
Z1, Z2 и Z3 являются =C(R24)-, если w' равен 1,
при условии, что если w равен 1, Q2 отсутствует и один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с одним из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q1-J- и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу,
при условии, что если w' равен 1, один и только один R24 является -C(R8) (R9)-D+ так, что -C(R8) (R9)-D+ связан с один из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и один и только один другой R24 является Q2 так, что Q2 связан с другим из V, Z1, Z2, Z3, если эта переменная группа является =C(R24)-, и Q2 и -C(R8) (R9)-D+ заместители находятся в орто или пара положениях друг к другу;
R8 и R9 независимо являются водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, необязательно замещенным, или арилом или гетероарилом, необязательно замещенным;
R' является водородом или является галогеном, -N02, -CN или другой группой, выделяющей электрон, или электронодонорной группой;
Е и J независимо являются -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или необязательно замещенным алкилом;
D+ представляет структуру кватернизированного лекарственного средства, содержащего третичный амин; и
индекс р является числом от 1 до 24; и
где указанное протеазное расщепление, дисульфидный обмен, кислотный гидролиз или гликозидазное расщепление вызывает выделение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) , из соединения лекарственное средство-линкер, или конъюгата лиганд-лекарственное средство или конъюгата N-ацетилцистеина, полученного из него.
68. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где соединение имеет структуру формулы НА или формулы IIB:
(формула IIB)
69. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где соединение имеет структуру формула IIIA или формулы IIIB:
[C(Rb1)(Rb1)]m[yr] А0 J
4 v '
(формула IIIB)
70. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 1, где соединение имеет структуру формула II1С или формулы HID:
L'h Аа J (ч^ ,7?
R' (формула HID) . 71. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 1, где соединение имеет структуру формула IIIE или формулы II1С:
Q2 R' (формула 11 IF) .
72. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 1-5, где Lb'- имеет структуру, выбранную из группы, включающей:
где R является водородом или Ci-Сб необязательно замещенным алкилом;
R' является водородом или галогеном, или R и R' являются независимо выбранным галогеном;
Т является -CI, -Br, -I, -О-мезилом или -О-тозилом или другой сульфонатной уходящей группой;
U является -F, -CI, -Br, -I, -0-N-сукцинимидом, -О-(4-нитрофенилом), -О-пентафторфенилом, -О-тетрафторфенилом или -0-C(=0)-OR57; и
X2 является Ci-io алкиленом, С3-С8-карбоциклом, -О- (Ci-C6
алкилом), -ариленом-, Ci-Сю алкиленариленом, -арилен-Ci-Cio
алкиленом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С6-карбоциклом)-, - (С3-С8
карбоцикл) -Ci-Сю алкиленом-, С3-С8-гетероциклом, -Ci-Сю алкилен-(С3-С8 гетероцикло)-, - (С3-С8-гетероцикло) -Ci-Сю алкиленом, (CH2CH20)u или - (CH2CH20) U-CH2-, где индекс и является целым числом от 1 до 10 и R57 является Ci-Сб алкилом или арилом.
73. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67,
где индекс а равен 1 так, что А в Q1 связан с L'b формулы I и Lb'-А имеет общую формулу M1-Ai-A0-, где М1 является малеимидной частью и А0 является необязательной субъединицей А так, что А является двумя субъединицами, если А0 присутствует, или является одной единицей, если А0 отсутствует.
74. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 73, где М1-А1-А0- имеет структуру формула VIII: О
Ra1
N-(-RA2
[C(RB1)(Rb1)]m[yr]-A0-|-
° * у '
_М1 А или AT
Lb"м (формула VIII)
где
A0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и является Ai, если А0 присутствует, так, что А становится -Ai-AQ-;
R и Ra2 независимо являются водородом или метилом;
Ral является водородом, метилом, этилом или основной единицей (ОЕ);
УГ является необязательной единицей усилителя гидролиза
(УГ) ;
m является целым числом от 0 до б;
каждый Rbl независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два Rbl, вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один Rbl и УГ, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный циклоалкил или 5- или б-членный гетероциклоалкил и другой Rbl является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом;
ОЕ имеет структуру - [С (R1) (R1) ] - [С (R2) (R2) ] n-N (R22) (R23) или кислотно-аддитивной соли,
где индекс п равен 0, 1, 2 или 3;
каждый R1 независимо является водородом или низшим алкилом
или два R1, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, и каждый R2 независимо является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом, или два R2, вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют Сз-Сб циклоалкил, или один R1 и один R2, вместе с атомами углерода к которому они присоединены, и любыми промежуточными атомами углерода, образуют 5- или б-членный циклоалкил, и оставшиеся R1 и R2 такие, как определены;
R22 и R23 независимо являются водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, или вместе с атомом азота к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил; и
волнистая линия означает ковалентную связь А (или А0) с остатком структуры формулы VIII.
75. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 73, где М1-А1-А0- формулы I имеет структуру О
N-ЙН
[C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-A0i-
й [C(Rb1)(Rb1)]m[yr|-А0-^-
-j \ J
или кислотно-аддитивной соли,
где R22 и R23 каждый является водородом или один из R22, R23 является водородом и другой является кислотной лабильной карбаматной защитной группы; и индекс m является целым числом от О до 4.
76. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 75, где M1-Ai-A0- формулы I имеет структуру:
или кислотно-аддитивной соли,
где индекс m равен 0 или 4, и R22 и R23 каждый является водородом, или один из R22, R23 является водородом и другой является-С(О)Ot-Bu.
77. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где W из Q1 включает или состоит из пептидной части, имеющей пептидную связь с J, которая селективно расщепляется внутриклеточной или регулирующей протеазой, по сравнению с сывороточными протеазами, где действие регулирующей протеазы на W вызывает высвобождение свободного лекарственного средства, содержащего третичный амин (D) из соединения лекарственное средство-линкер или конъюгата лиганд-лекарственное средство или конъюгата N-ацетилцистеина, полученного из него.
78. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где W из Q2 является связанным гликозидом углеводородом, где гликозидная связь W'-E из Q2 является местом расщепления для гликозидазы, расположенной внутриклеточно, где действие гликозидазы на W'-E вызывает выделение лекарственного средства, содержащего третичный амин (D), из соединения лекарственное средство-линкер или конъюгата лиганд-лекарственное средство или конъюгата N-ацетилцистеина, полученного из него.
79. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 77, где пептидная часть W включает или состоит из дипептидной части, имеющей структуру формулы VI:
77.
(формула VI),
где R34 является бензилом, метилом, изопропилом, изобутилом,
втор-бутилом, -СН(ОН)СН3 или имеет структуру ^ н , и R35
является метилом, -(CH2)4-NH2, - (СН2) 3NH (С=0) NH2,
(СН2) 3NH (C=NH) NH2 или -(CH2)2C02H,
где волнистая линия к С-концу дипептида означает ковалентную связь с J ариленовой части формулы НА или IIB, и волнистая линия к N-концу дипептида означает ковалентную связь с остатком W, если любой такой остаток присутствует, или к А или его субъединице, если индекс а равен 1, или к Lb, если а равен О, и где дипептидная связь к J расщепляется внутриклеточной или регуляторной протеазой.
80. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 79, где W' в Q2 является углеводородной частью, которая связана через гликозид с Е, где гликозиднная связь расщепляется внутриклеточной гликозидазой, и где W'-E имеет структуру формулы VII:
.он
(формула VII),
где волнистая линия представляет Е, связанную с одним из V, Z1, Z2 или Z3, если эта переменная группа является =C(R24), где Е является -0-, -S- или -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; и
где R45 является -СН20Н или -С02Н.
81. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 79, где соединение имеет структуру формулы IX:
(формула IX)
где R' является водородом или электронодонорной группой; R8 является водородом;
R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом или необязательно замещенным фенилом;
R34 является метилом, изопропилом или -СН(ОН)СН3;
R35 является метилом, - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(СН2)2С02Н;
J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом;
V и Z1 независимо являются =СН- или =N-.
82. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 80, где соединение имеет структуру формула X:
О R35 v=Z2 D+
Л R-1
| N^fRa2 н
* [C(Rb1)(Rb1)]m[yr]-A0-N^il.
° ' ^4 '¦ о
А илиА-i
(формула X) где
звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода;
А0 является необязательной субъединицей А, где [C(Rbl) (Rbl) ] m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и является А1г если А0 присутствует так, что А становится А!-А0;
R является -Н;
Ral является -Н или основной единицей (ОЕ) , где ОЕ имеет
структуру -CH2-N(R22) (R23) , или кислотно-аддитивной соли, где R:
Rzs независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-
или б-членный гетероциклоалкил; Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 0 до 4;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
R34 является метилом, изопропилом или -СН(ОН)СН3;
R35 является - (СН2) 3NH (С=0) NH2 или -(СН2)2С02Н;
J является -NH-;
V, Z1 и Z2 являются =СН2-;
R' является водородом или электронодонорной группой;
R8 является водородом; и
R9 является водородом или метилом.
83. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 79, где соединение имеет структуру формулы XI:
(формула XI) где
Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А (т.е., АГ становится А, если А0 отсутствует, и А является -A^AQ-, если А0 присутствует) ;
Е является -О- или -NH-;
J является -N(R33)-, где R33 является водородом или метилом; V и Z3 независимо являются =СН- или =N-; R' является водородом или группой, выделяющей электрон; R8 является водородом;
R9 является водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом или необязательно замещенным фенилом; и R45 является -С02Н или -СН2ОН.
84. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 83 где соединение имеет структуру формулы XII:
[C(Rb)(Rb)]m-[УП А0 J
V V '
(формула XII) где
звездочка (*) означает хиральность или ее отсутствие на указанном атоме углерода;
Ai и А0 являются независимо выбранными субъединицами А, где А0 является необязательной субъединицей А, где -[C(Rbl) (Rbl)]m-[УГ] - является А, если А0 отсутствует, и Ai, если А0 присутствует, так, что А становится Ai-A0; где А0, если присутствует, соответствует по структуре аминсодержащей кислоте, связанной с J через С-концевой карбонил аминсодержащей кислоты;
R является водородом;
R' является водородом или группой, выделяющей электрон;
Ral является водородом или основной единицей (ОЕ), где ОЕ имеет структуру -CH2-N(R22) (R23) , или кислотно-аддитивной соли, где R22 и R23 независимо являются водородом, метилом или этилом, или оба, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или б-членный гетероциклоалкил;
Ra2 является водородом;
индекс m является целым числом от 1 до 5;
каждый Rbl независимо является водородом или необязательно
замещенным Ci-Сб алкилом;
УГ отсутствует или является -С(=0)-;
R45 является -С02Н или -СН2ОН;
Е является -0-;
J является -NH-;
V и Z3 являются =СН2-;
R8 является водородом; и
R9 является водородом или метилом.
85. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 81, где А0, если присутствует, имеет структуру формулы XIII или формулы XIV:
(формула XIII) (формула XIV)
где волнистая линия к карбонильной части любой структуры представляет точку присоединения А0 к W, и где волнистая линия к амино части любой структуры представляет точку присоединения А0 к Ai,
где К и L независимо являются С, N, О или S, при условии, что если К или L является О или S, R41 и R42 к К или R43 и R44 ко L отсутствуют, и если К или L является N, один из R41, R42 к К или один из R43, R44 к L отсутствуют, и при условии, что никаких два соседних L не являются независимо выбранными N, О, или S;
где индекс q является целым числом от 0 до 12, и индекс г является целым числом от 1 до 12;
где G является водородом, необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, -ОН, -0RG, -C02H, C02RG, где RG является Ci-C6 алкилом, арилом или гетероарилом, необязательно замещенным, или RPR, где RPR является подходящей защитной группой, -NH2, или -N(RG) (RPG) , где RG, выбранный независимо, такой, как определен выше, или оба RG вместе с атомом азота к которому они присоединены, образуют 5-или б-членный гетероциклоалкил, или оба RPR вместе образуют подходящую защитную группу;
где R38 является водородом или необязательно замещенным Ci-Сб алкилом; R39-R44 независимо являются водородом, необязательно замещенным Ci-Сб алкилом, необязательно замещенным, или необязательно замещенным гетероарилом, или оба R39, R40, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют Сз-Сб циклоалкил, или R41, R42 вместе с К к которому они присоединены, если К является С, или R43, R44 вместе с L к которому они присоединены, если L является С, образуют Сз-Сб циклоалкил, или R40 и R41, или R40 и R43, или R41 и R43, вместе с атомом углерода, или гетероатомом, к которому они присоединены, и атомами, расположенными между этими атомами углерода и/или гетероатомами, образуют 5- или б-членный циклоалкил или гетероциклоалкил, или
где А0 имеет структуру, соответствующую альфа-амино, бета-амино или другой аминсодержащей кислоте.
86. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 84, где обозначенный звездочкой (*) атом углерода преимущественно имеет ту же абсолютную конфигурацию, как и альфа атом углерода L-аминокислоты, если этот обозначенный атом имеет хиральность.
87. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 69-8 6, где -D+ является кватернизированным, содержащим третичный амин, тубулиновым разрывающим агентом.
88. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 87,
где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+
является единица кватернизированного тубулизинового
лекарственного средства.
89. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 88, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру формулы DG-i' или формулы DH-i':
?2А " Я7А
frTN о ff 0R О
О (формула DG_!')
О (формула DH-i')
где круг представляет 5-членный азот-гетероарил, и где указанные требуемые заместители этого гетероарила находятся в 1,3- положении друг к другу при необязательном замещении на оставшихся положениях;
R2A является водородом или необязательно замещенным алкилом, или R2A вместе с атомом кислорода, к которому они присоединены, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН;
R3 является водородом или необязательно замещенным алкилом;
R4, R4A, R4B, R5 и R6 являются необязательно замещенным алкилом, выбранным независимо;
R7A является необязательно замещенным арилом или необязательно замещенным гетероарилом;
R8A является водородом или необязательно замещенным алкилом;
и индекс m равен 0 или 1,
где волнистая линия к N+ означает ковалентную связь D+ с ЛЕ'.
90. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 88, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где Z является необязательно замещенным низшим алкиленом или необязательно замещенным низшим алкениленом;
индекс q, показывающий количество R7B заместителей, равен 1, 2 или 3;
каждый R7B независимо выбирают из водорода и О-связанного заместителя; и
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
91. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 89, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A является водородом или необязательно замещенным Ci-C6 алкилом, или R2 вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует О-связанный заместитель, отличный от -ОН;
R3 является необязательно замещенным Ci-Сб алкилом;
Rfc
являются остатками боковой цепи природных
гидрофобных аминокислот;
-N(R7)(R7) является -NH(Ci-C6 алкилом) или -NH-N(Ci-C6 алкилом) 2/ где один и только один Ci-C6 алкил необязательно замещен -С02Н, или сложным эфиром, или необязательно замещенным фенилом; и
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
92. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 91, где -N(R7) (R7) выбирают из группы, включающей -NH(CH3), NHCH2CH2Ph и -NHCH2-C02H, -NHCH2CH2C02H и -NHCH2CH2CH2C02H.
93. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 90, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
92.
94. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из
пунктов 89-93, где О-связанный заместитель -ок^Л отличен от (т.е., R2A не является водородом).
95. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 93, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного
где R4A является метилом;
R3 является Н, метилом, этилом, пропилом, -СН2-ОС (О) R3A, СН2СН (R3B) С (О) R3A или -СН (R3B) С (О) NHR3A, где R3A является Ci-C6 алкилом и R3B является Н или Ci-C6 алкилом, выбранным независимо из R3A; и
-OR2A является О-связанным заместителем, выбранным из группы B^iQ4aiQiH,eii-OR2B, -OC(0)R2B или -ОС (О) N (R2B) (R2C) , где R2B и R2C выбирают независимо из группы, включающей Н, Ci-Сб алкил и С2-Сб алкенил; и
R7B является водородом или -ОН.
96. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 95, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2A и R3 независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, пропил и изопропил;
R2B является метилом, этилом, пропилом и изопропилом, или -0R2A таким, как определен выше;
R3 является метилом, этилом или пропилом; и R7B является водородом или -ОН.
97. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 95, где единица кватернизированного тубулизинового лекарственного средства -D+ имеет структуру:
где R2B является метилом, этилом, пропилом, изопропилом, 3-метилпроп-1-илом, 3,З-диметилпроп-1-илом или винилом; R3 является метилом, этилом или пропилом; и R7B является водородом или -ОН.
98. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 97, где R2B является -СНз, R3 является -СН3 и R7B является Н или -ОН.
99. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 89-96, где R2A является -СН2СН3.
100. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 96 или 97, где R2B является -СНз, R3 является -СН3 и R7B является Н или -ОН.
101. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где соединение имеет структуру:
где
R34 является изопропилом и R35 является -СНз, изопропилом, -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 или -СН2СН2С02Н;
R7B является водородом или -ОН; и
R2A является Ci-C6 алкилом, С2-С6 алкенилом, -OCH2OR2B, C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом или Ci-Сб
алкилом.
102. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 101, где
R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2;
R7B является водородом или -ОН; и
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом.
103. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 67, где соединение имеет структуру
где
R7B является водородом или -ОН;
R2A является Ci-C6 алкилом, С2-С6 алкенилом, -OCH2OR2B, C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является водородом, или Ci-Сб алкилом; и
R45 является -С02Н или -СН2ОН.
104. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 103, где
R34 является изопропилом и R35 является -СН3 или CH2CH2CH2NH (С=0) NH2;
R7B является водородом или -ОН; и
R2A является низшим алкилом, -C(=0)R2B или -C(=0)NHR2B, где R2B является низшим алкилом.
105. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 103 или 104, где соединение имеет структуру
105.
106. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 81, 82 и 101-104 где А или -А!-А0- является СН2 (СН2) 4 (С=0) - или -СН2 (СН2) 4 (С=0) NHCH2CH2 (С=0) - .
107. Соединение лекарственное средство-линкер по любому из пунктов 89-95, где R2A является -С(0)СН3, метилом, этилом или пропилом.
108. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 87, где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+ является единица кватернизированного ауристатинового или доластатинового лекарственного средства.
109. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 108, где кватернизированным тубулиновым разрывающим агентом -D+ является кватернизированный доластатин 10 или доластатин 15.
110. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 108 где единица кватернизированного ауристатинового лекарственного средства -D+ имеет структуру DE' или DF':
(DF')
где R10 и R11 независимо являются Ci-C8 алкилом;
R12 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом,
арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом) , С3-С8 гетероциклом или -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R13 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R14 является водородом или метилом;
или R13 и R14 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8 циклоалкил;
R15 является водородом или Ci-C8 алкилом;
R16 является водородом, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом, арилом, -Х1-арилом, -X1- (С3-С8 циклоалкилом), С3-С8 гетероциклом и -X1- (С3-С8 гетероциклом) ;
R17 независимо является водородом, -ОН, Ci-C8 алкилом, С3-С8 циклоалкилом и О-(Ci-C8 алкилом);
R18 независимо является водородом или Ci-C8 алкилом;
R19 является -С (R19A) 2-С (R19A) 2-арилом, -С (R19A) 2-С (R19A) 2- (С3-С8 гетероциклом) или -С (R19A) 2-С (R19A) 2-(С3-С8 циклоалкилом); R21 является арилом или С3-С8 гетероциклом; где R19A является водородом, Ci-C8 алкилом или -ОН;
R20 является водородом, Ci-C20 алкилом, арилом, С3-С8 гетероциклом, -(R470)m-R48 и - (R470) m-CH (R49) 2;
m является целым числом 1-10 00;
R47 является С2-С8 алкилом;
R48 является водородом или Ci-C8 алкилом;
R49 независимо является -СООН, - (СН2) n-N (R50) 2, -(CH2)n-S03H или - (СН2) n-S03-Ci-C8 алкилом;
R50 независимо является Ci-C8 алкилом, или - (СН2) п-СООН;
Z является О, S, NH, или NR46, где R46 является Ci-C8 алкилом;
X1 является Ci-Сю алкиленом; и
п является целым числом от 0 до б;
где волнистая линия означает ковалентную связь D+ с остатком соединения лекарственное средство-линкер.
111. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 110, где соединение имеет структуру:
где
R34 является изопропилом и R35 является -СН3, -СН2СН2СООН или -CH2CH2CH2NH (С=0) NH2 .
112. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 111, где соединение имеет структуру:
где индекс m равен 4.
113. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 110, где соединение имеет структуру:
где R45 является -С02Н или СН2ОН.
114. Соединение лекарственное средство-линкер по пункту 113, где соединение имеет структуру:
нсплантат лимфогранулематоза L540cy, КАЛ в количестве 4 лекарственных
ю о
о. о
100
не обработанный сАСЮ-С, 1 мг/кг сАСЮ-С, 2 мг/кг И00-С, 2 мг/кг сАСЮ-14, 1 МГ/КГ сАСЮ-14, 2 МГ/КГ h00-14, 2 МГ/КГ
дни после имплантации
Ксенотрансплантат лимфогранулематоза L540cy, КАЛ в количестве 4 лекарственных средства/АЬ
ю о
о. о
не обработанный
сАСЮ-В, 0.4 МГ/КГ сАСЮ-В, 0.8 мг/кг h00-B, 0.8 мг/кг сАСЮ-8, 0.4 мг/кг сАСЮ-8, 0.8 мг/кг И00-8, 0.8 мг/кг
100
-в- сАСЮ-8, крысиная плазма -и- сАСЮ-8, мышиная плазма -е- сАС 10-14, крысиная плазма сАСю-14, мышиная плазма
время (дни)
Медиированное (3-глюкуронидазой расщепление лекарственного средства-линкера
2 4 6
Время (часы)
NAC-B(0 мг/мл ферм) NAC-B(0,5 МГ/МЛ ферм) NAC-B(1 мг/мл ферм) NAC-8 (0 мг/мл ферм) NAC-8 (0,5 мг/мл ферм) NAC-8 (1 мг/мл ферм)
Модель ксенотрансплантата Karpas299 ALCL, КАЛ в количестве 4 лекарственных средства/мАт, однократная доза, в.б.
ю о
о. о
-*- необработанный
-•- сАСЮ-32, 0.3 МГ/КГ -е- сАС 10-32, 1 МГ/КГ -*- h00-32, 1 МГ/КГ
9 0"
20 40
дни после имплантации
Модель ксенотрансплантата лимфогранулематоза 1_540су, КАЛ в количестве 6 лекарственных средств/мАт, однократная доза, в.б.
Ксенотрансплантат лимфогранулематоза L540cy, отбор крови через 4 дня после дозирования (д11), сАС 10-32(6)
100т
& 80
> > н
'5 60
Ф 40
% 20
<и
.о 0
¦ ¦ ¦ I
А4 А4 А4 г ~#
Ксенотрансплантат лимфогранулематоза L540cy, отбор крови через 10 дней после дозирования (д17), сАС 10-32(6)
100
> . 80
> 5 60 _а
| 40
% 20
.о 0
Модель ксенотрансплантата лимфогранулематоза L540cy HL, КАЛ в количестве 4 лекарственных средства/мАт, однократная доза, в.б.
о. о
ЮООп
не обработанный сАСЮ-32, о.б мг/кг сАСЮ-32, 2 МГ/КГ сАС 10-104, 0.6 МГ/КГ сАС10-104, 2 МГ/КГ
сАС 10-79, 0.6 МГ/КГ сАС 10-79, 2 МГ/КГ
сАС 10-80, 0.6 МГ/КГ сАСЮ-80, 2 МГ/КГ
дни после имплантации
Модель ксенотрансплантата лимфогранулематоза L540cy HL, КАЛ в количестве 4 или 8 лекарственных средств/мАт, однократная доза, в.1
ю о
а> а. о
дни после имплантации
Модель ксенотрансплантата лимфогранулематоза L540cy HL, КАЛ количестве 4 лекарственных средства/мАт, однократная доза, в.б
о. о
20 40 60
дни после имплантации
ФИГ. 11
Фармакокинетика у крыс, 1 мг/кг в.в. - КАЛ в количестве 4 или 8 лекарственных средств/мАт
время (дни)
ФИГ. 12
Фармакокинетика у крыс, 1 мг/кг в.в. - КАЛ в количестве 8 лекарственных средств/мАт
Время (дни)
ФИГ. 13
ФИГ 14
Фармакокинетика у крыс, 1 мг/кг в.в. - glucQ КАЛ в количестве 8 лекарственных средств/мАт
(19)
104
104
104
104
104
104
104
104
109
112
112
113
113
113
113
116
116
116
116
122
122
123
123
126
126
126
126
127
127
127
127
128
128
128
128
129
129
129
129
139
139
139
139
139
139
139
139
139
139
139
139
141
141
141
141
154
154
154
154
165
165
165
165
166
166
167
167
167
167
167
167
169
169
169
169
169
169
169
169
169
169
186
186
186
186
193
193
193
193
194
194
194
194
194
194
194
194
194
194
195
195
197
198
185
200
200
209
209
209
209
209
209
210
210
222
222
222
222
230
230
230
230
230
230
239
239
239
239
241
241
241
241
241
241
241
241
241
241
244
244
244
244
246
246
246
246
249
249
249
249
254
254
254
254
254
254
254
254
258
258
258
258
262
262
262
262
262
262
262
262
284
284
286
287
287
358
358
358
358
381
381
381
381
383
383
383
383
383
383
383
383
383
383
384
384
384
384
384
384
386
386
386
386
389
392
392
397
397
397
397
414
414
415
415
422
422
422
422
427
427
427
427
429
429
429
429
435
435
435
435
435
435
435
435
ФИГ. 1
ФИГ. 1
ФИГ. 1
ФИГ. 1
ФИГ. 1
ФИГ. 1
ФИГ. 2
ФИГ. 2
ФИГ. 2
ФИГ. 2
ФИГ. 3
ФИГ. 3
ФИГ. 3
ФИГ. 3
ФИГ. 3
ФИГ. 3
ФИГ. 4
ФИГ. 4
ФИГ. 4
ФИГ. 4
ФИГ. 5
ФИГ. 5
ФИГ. 5
ФИГ. 5
ФИГ. 6
ФИГ. 6
ФИГ. 7
ФИГ. 7
ФИГ. 7
ФИГ. 7
ФИГ. 8
ФИГ. 8
ФИГ. 9
ФИГ. 9
ФИГ. 10
ФИГ. 10
ФИГ. 10
ФИГ. 10
|
