EA201790482A1 20170831 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/201790482 Полный текст описания [**] EA201790482 20150827 Регистрационный номер и дата заявки US62/043,922 20140829 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2015/047071 Номер международной заявки (PCT) WO2016/033265 20160303 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21708 Номер бюллетеня [**] МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ VIP3 Название документа [8] A61K 39/00, [8] A61K 38/00 Индексы МПК [US] Уоттс Джозеф М. Сведения об авторах [CH] ЗИНГЕНТА ПАРТИСИПЕЙШНС АГ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201790482a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Настоящее изобретение относится к вегетативным инсектицидным белкам (VIP), модифицированным так, что они содержат гетерологичные углевод-связывающие модули, а также способам их применения.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение относится к вегетативным инсектицидным белкам (VIP), модифицированным так, что они содержат гетерологичные углевод-связывающие модули, а также способам их применения.


Евразийское (21) 201790482 d3) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61K39/00 (2006.01)
2017.08.31 A61K 38/00 (2006.01)
(54) МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ VIP3
(22) Дата подачи заявки 2015.08.27
(31) (32)
62/043,922 2014.08.29
(33) US
(86) PCT/US2015/047071
(87) WO 2016/033265 2016.03.03
(71) Заявитель:
ЗИНГЕНТА ПАРТИСИПЕЙШНС АГ (CH)
(72) Изобретатель:
Уоттс Джозеф М. (US)
(74) Представитель:
Веселицкая И.А., Веселицкий М.Б., Кузенкова Н.В., Каксис Р.А., Белоусов Ю.В., Куликов А.В., Кузнецова Е.В., Соколов Р.А., Кузнецова Т.В. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к вегетативным инсектицидным белкам (VIP), модифицированным так, что они содержат гетерологичные углевод-связывающие модули, а также способам их применения.
128449
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ VIP3
ЗАЯВЛЕНИЕ ОБ ЭЛЕКТРОННОЙ ПОДАЧЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Перечень последовательностей в текстовом формате ASCII, предоставленный в соответствии с 37 C.F.R. § 1.821, под названием 9207-116WO_ST25.txt, размером 341238 байт, созданный 25 августа 2015 года и поданный с помощью EFS-Web, представлен вместо бумажной копии. Данный перечень последовательностей включен с помощью ссылки в описание данного документа для его раскрытия.
ИНФОРМАЦИЯ КАСАТЕЛЬНО РОДСТВЕННОЙ ЗАЯВКИ
Данная заявка заявляет приоритет предварительной заявки на патент США № 62/043922, поданной 29 августа 2014 года, раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к вегетативным инсектицидным белкам (Vip), модифицированным так, что они содержат гетерологичные углевод-связывающие модули, а также способам их применения.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Bacillus thuringiensis (Bt) представляют собой повсеместно распространенные почвенные грам-положительные спорообразующие бактерии. Bt вырабатывают белковые токсины, которые являются активными при пероральном проникновении и высокоспецифичными для отдельных отрядов и видов насекомых (К. van Frankenhuyzen, J. Invertebr. Pathol. 101, 1-16 (2009)). Так, белки Bt и бациллы, которые их вырабатывают, использовали в сельском хозяйстве с 1920-ых годов для контроля насекомых-вредителей (J. Lord, J Invertebr Pathol. 89, 19-29 (2005)). Для облегчения применения в полевых условиях и целенаправленного воздействия на растительные ткани, не защищенные путем внекорневого внесения, с 1990-ых годов выбранные белки были трансгенно экспрессированы в сельскохозяйственных культурах.
Bt вырабатывают три известных класса инсектицидных белковых токсинов: кристаллические (Cry), цитолитические (Cyt) и вегетативные инсектицидные белки (Vip). Белки Cry вырабатываются в виде параспоральных внутриклеточных телец включения с микроскопической кристаллической морфологией. Белки Cyt не 5 характеризуются гомологией последовательностей с белками Cry, но подобным образом вырабатываются в виде телец включения в ходе спорообразования. Белки Vip представляют собой растворимые токсины из Bt, которые вырабатываются в течение вегетативной фазы жизненного цикла бактерий (A. Bravo et al. Insect Biochem Mol Biol. 41(7):423-31 (2011)).
10 Биологические средства для контроля вредителей, такие как штаммы Bacillus
thuringiensis, экспрессирующие пестицидные полипептиды, применялись для культурных растений с удовлетворительными результатами, представляя таким образом альтернативу или дополнение к химическим пестицидам. Экспрессия белков Cry в трансгенных растениях обеспечила эффективную защиту от определенных
15 насекомых-вредителей, а из трансгенных растений, экспрессирующих такие белки, извлекли коммерческую выгоду, что позволило фермерам уменьшить или упразднить применение химических средств борьбы с насекомыми.
Vip3 представляет собой отдельный класс вегетативных инсектицидных белков, который характеризуется широким спектром токсичности в отношении видов
20 вредителей из отряда чешуекрылых и является подходящим для экспрессии в трансгенных растениях (J. Estruch et al. Proc Natl Acad Sci USA 93, 5389-94 (1996)). Первым продуктом, содержащим Vip3, была генетически модифицированная кукуруза, продаваемая Syngenta в 2011 году под торговым названием AGRISURE VIPTERA(tm) (также см. патенты США №№ 7378493 и 7244820, выданные Syngenta). Тем не менее,
25 по сравнению с большим количеством рецензируемой литературы по белкам Cry, относительно мало сообщается о белках Vip3. Белки Vip3 не характеризуются гомологией с белками Cry или Cyt. Vip3 не подвергается выравниванию в BLAST с другими консервативными белками в базах данных nr-белков с ожидаемыми значениями менее 1.0. На сегодняшний день описанные последовательности
30 показывают гораздо меньшее расхождение последовательностей между белками Vip3 по сравнению с расхождением, наблюдаемым для белков Cry.
Белки Vip3 имеют размер примерно 88 кДа и вырабатываются и секретируются Bacillus в ходе их вегетативной стадии роста (вегетативные инсектицидные белки, Vip). Белок Vip3A обладает инсектицидной активностью в отношении широкого спектра
чешуекрылых вредителей, в том числе без ограничения совки-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), табачной совки (TBW, Heliothis virescens) и хлопковой совки (CEW, Helicoverpa zed), но не обладает активностью в отношении кукурузного мотылька (ЕСВ, Ostrinia nubilalis). Таким 5 образом, белок Vip3A проявляет уникальный спектр инсектицидных активностей. Недавно было обнаружено, что растения, экспрессирующие белок Vip3A, являются устойчивыми к повреждению, вызываемому поеданием полужесткокрылыми насекомыми-вредителями (патент США № 6429360). Были идентифицированы дополнительные представители класса белков Vip3 (см., например, WO03/075655,
10 WO02/078437, WO 98/18932, WO 98/33991, WO 98/00546 и WO 99/57282).
Многочисленные коммерчески ценные растения, в том числе широко распространенные сельскохозяйственные культуры, восприимчивы к поражению насекомыми-вредителями, что приводит к существенному снижению показателей урожайности и качества культур. Например, производители маиса (Zea mays)
15 сталкиваются с серьезной проблемой при борьбе с заражением вредителями. Насекомые, в том числе чешуекрылые и жесткокрылые насекомые, ежегодно уничтожают примерно 15% сельскохозяйственных культур в Соединенных Штатах, а в развивающихся странах процентная доля еще больше. Кроме того, конкуренция с сорняками и паразитическими, а также сапрофитными растениями приводит к еще
20 большим потенциальным потерям урожая. Ежегодно такие вредители являются причиной нанесения ущерба урожаю на сумму свыше 100 миллиардов долларов только в Соединенных Штатах.
В целях борьбы с заражением вредителями применялись различные способы для сокращения численности или уничтожения вредителей на определенных участках
25 земли. Эти усилия включают чередование кукурузы с другими сельскохозяйственными культурами, которые не являются хозяином для конкретного вредителя, а также нанесение пестицидов на надземную часть сельскохозяйственной культуры, внесение пестицидов в почву и вокруг корневой системы пораженной сельскохозяйственной культуры. Традиционно фермеры в значительной степени полагались на химические
30 пестициды для борьбы с вредителями.
Существует потребность в альтернативных инсектицидных средствах для сельскохозяйственных культур. Например, встраивание в растения маиса генетически модифицированных генов, которые вызывают продуцирование инсектицидных белков, обеспечивающих защиту от целевого вредителя(вредителей), представляет собой еще
один подход для контроля вредителей. Следовательно, остается необходимость в поиске новых и эффективных средств для контроля вредителей, которые обеспечивают экономическую пользу фермерам. Особенно необходимыми являются средства контроля, целенаправленно воздействующие на более широкий спектр экономически 5 важных насекомых-вредителей и обладающие высокой специфической активностью в отношении насекомых-вредителей, которые являются или могут стать устойчивыми к имеющимся средствам для контроля насекомых.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
10 В некоторых вариантах осуществления предусматривают модифицированный
полипептид Vip3, содержащий гетерологичный углевод-связывающий модуль (СВМ). В некоторых аспектах на гетерологичный СВМ замещают весь или часть домена III полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 содержит весь или часть домена I и/или домена II полипептида Vip3.
15 В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 содержит весь или часть домена IV полипептида Vip3 или, в качестве альтернативы, весь или часть домена IV полипептида Vip3 отсутствует. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении, например, насекомого, такого как, например, кукурузная листовая совка. В некоторых вариантах
20 осуществления модифицированный полипептид Vip3, описанный в данном документе, демонстрирует инсектицидную активность в отношении устойчивой к Vip3 колонии кукурузной листовой совки, как например, устойчивой к Vip3A колонии кукурузной листовой совки.
В другом аспекте предусматривают композицию, при этом композиция 25 содержит модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению в приемлемом для сельскохозяйственного применения носителе.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривают молекулы нуклеиновой кислоты и/или нуклеотидные последовательности, кодирующие модифицированные полипептиды Vip3 по 30 настоящему изобретению, а также кассеты экспрессии и рекомбинантный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты и/или нуклеотидные последовательности, кодирующие модифицированные полипептиды Vip3 по настоящему изобретению.
В дополнительных аспектах предусматривают экстракт из трансгенного семени или трансгенное растение по настоящему изобретению, при этом экстракт содержит
молекулу нуклеиновой кислоты и/или модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предусматривают композицию, содержащую указанный экстракт. В дополнительном варианте осуществления композиция может содержать указанный экстракт в 5 приемлемом для сельскохозяйственного применения носителе.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ, предоставляющий фермеру средство для контроля вредителя растений, при этом способ включает обеспечение фермера растительным материалом или бактериями, при этом указанные растительный материал или бактерии содержат молекулу нуклеиновой
10 кислоты, которая кодирует модифицированный полипептид Vip3 в соответствии с настоящим изобретением.
В некоторых аспектах предусматривают способ получения модифицированного полипептида Vip3 по настоящему изобретению, включающий стадии: (а) трансформации клетки-хозяина молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты,
15 содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид Vip3; и (Ь) культивирования клетки-хозяина из стадии (а) в условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, с получением, таким образом, модифицированного полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ получения
20 модифицированного полипептида Vip3, при этом способ включает трансформацию клетки-хозяина молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей промотор, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению; выращивание клетки-хозяина в условиях, при которых обеспечивается экспрессия
25 модифицированного полипептида Vip3; и выделение модифицированного полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ получения модифицированного полипептида Vip3, при этом способ включает выращивание клетки-хозяина по настоящему изобретению в условиях, при которых обеспечивается экспрессия модифицированного полипептида Vip3; и выделение модифицированного
3 0 полипептида Vip3.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ уменьшения повреждения трансгенного растения, вызванного вредителем растений, при этом способ включает посадку семени трансгенного растения, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, которая экспрессирует модифицированный полипептид Vip3 по
настоящему изобретению, уменьшая тем самым повреждение, вызванное вредителем у трансгенного растения, выращенного из семени трансгенного растения.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривает способ контроля вредителя, включающий обеспечение трансгенного 5 растения по настоящему изобретению и нанесение на растение или семя средства защиты сельскохозяйственных культур. В некоторых вариантах осуществления вредитель представляет собой кукурузную листовую совку.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ контроля вредителей, при этом способ включает приведение вредителей в контакт с пестицидно
10 эффективным количеством композиции по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ защиты растения и/или материала для размножения растений, при этом способ включает приведение растения и/или материала для размножения растений в контакт с эффективным количеством композиции по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления
15 способ включает способ контроля колонии кукурузной листовой совки.
В дополнительных аспектах предусматривают способ повышения пестицидной активности в растении, части растения или растительной клетке, при этом способ включает введение одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей один или несколько модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему
20 изобретению, в растение, часть растения или растительную клетку с получением трансгенного растения, части растения или растительной клетки, которая экспрессирует одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, где одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты кодируют полипептид, предусматривающий пестицидную активность, повышая тем самым пестицидную активность в трансгенном
25 растении, части растения или растительной клетке по сравнению с контролем.
В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 и/или композиция, описанные в данном документе, являются активными и/или инсектицидными в отношении устойчивой к Vip3 колонии кукурузной листовой совки, как например, устойчивой к Vip3 А колонии кукурузной листовой совки.
30 В некоторых вариантах осуществления предусматривают трансгенные клетки-
хозяева, в том числе бактериальные и растительные клетки, растения и части растения, в том числе семена, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты и/или нуклеотидные последовательности, кодирующие модифицированные полипептиды Vip3 по
настоящему изобретению, а также сельскохозяйственные культуры и полученные из них собранные и обработанные продукты.
Эти и другие аспекты настоящего изобретения изложены более подробно в нижеследующем описании настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фиг. 1 показан гель после проведения электрофореза в полиакриламидном геле (PAGE) с растворимой фракцией лизированных E.coli, экспрессирующих различные замены СВМ домена III Vip3D. Проанализированные образцы, 10 представленные в таблице 1, представляют собой, слева направо: маркеры молекулярной массы, 10F3, 1РМН, 1WKY, 2BGP, 2ZEZ, CenC, gp21, PsHGF7.
На фиг. 2 показаны ленточные схемы структур СВМ. Верхний ряд, слева направо: домен III Vip3D, 2ZEZ, 2BGP. Средний ряд: 10F3, 2ZEX, 1РМН. Нижний: 15 1WKY. Показан кальций (изображен в виде сфер). Лиганды-сахара структур в виде сокристаллов показаны в их желобках связывания (палочкообразные структуры). Границы клонирования на полипептидной цепи показаны в виде палочек.
На фиг. 3 показаны результаты выравнивания последовательностей трех замен 20 доменов, которые были сделаны исходя из сходства аминокислотной последовательности с 2ZEX. Последовательности являются на 84% консенсусными и на 8% идентичными.
На фиг. 4 показан гель после проведения PAGE с додецилсульфатом натрия 25 (SDS) с растворимыми неочищенными экстрактами индуцированных химер Vip3A-СВМ из E.coli (номера дорожек в скобках): Vip3A (1), 2ZEX (2), 2ZEZ (3), 10FE (4), 1РМН (5), 2GBP (6), CENC (7), GP21 (8) и PSHGF7 (9).
На фиг. 5А-5С показано схематическое изображение замещений СВМ в Vip3. 30 На фиг. 5А показаны часть последовательности Р021 Vip3D с отмеченными аминокислотными остатками 541 и 668, а также обмен аминокислотных остатков 542667 Р021 Vip3D на 2ZEX СВМ и 2ZEZ СВМ; на фиг. 5В показан обмен аминокислотных остатков 542-667 Р021 Vip3D на 10FE СВМ, 1РМН СВМ и 2BGP
СВМ; на фиг. 5С показан обмен аминокислотных остатков 542-667 Р021 Vip3D на GP21 СВМ, CENC СВМ, PsHGF7 СВМ или 1WKY СВМ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ В ПЕРЕЧНЕ 5 ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
SEQ Ш N0:1 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3D. SEQ Ш N0:2 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3 А. SEQ Ш N0:3 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3B. SEQ Ш N0:4 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3C. 10 SEQ Ш N0:5 представляет собой консенсусную аминокислотную последовательность Vip3.
SEQ Ш N0:6 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 (lOHis-Vip3D-AAPF).
SEQ Ш N0:7 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой 15 домена III на 2ZEX.
SEQ Ш N0:8 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на 2ZEZ.
SEQ Ш N0:9 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на 10FE.
20 SEQ Ш N0:10 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на 1РМН.
SEQ Ш N0:11 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на 2BGP.
SEQ Ш N0:12 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с 25 заменой домена III на GP21.
SEQ Ш N0:13 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на СепС.
SEQ Ш N0:14 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на PSHGF7. 30 SEQ Ш N0:15 представляет собой аминокислотную последовательность Р021 с заменой домена III на 1WKY.
SEQ Ш N0:16 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3A с заменой домена III на 2ZEX.
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
SEQ Ш N0:17 представляет
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
заменой домена III на 2ZEZ.
SEQ Ш N0:18 представляет
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
заменой домена III на 10FE. 5 SEQ Ш N0:19 представляет
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
заменой домена III на 1РМН.
SEQ ГО N0:20 представляет
заменой домена III на 2BGP.
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
SEQ ГО N0:21 представляет 10 заменой домена III на gp21.
SEQ ГО N0:22 представляет
собой аминокислотную последовательность Vip3A с
заменой домена III на СепС.
SEQ ГО N0:23 представляет
заменой домена III на PsHGF7. 15 SEQ ГО N0:24 представляет собой аминокислотную последовательность домена 2ZEX.
SEQ ГО N0:25 представляет собой аминокислотную последовательность домена 2ZEZ.
SEQ ГО N0:26 представляет собой аминокислотную последовательность домена 10FE.
SEQ ГО N0:27 представляет собой аминокислотную последовательность домена 1РМН.
SEQ ГО N0:28 представляет собой аминокислотную последовательность домена 2BGP. 20 SEQ ГО N0:29 представляет собой аминокислотную последовательность домена gp21.
SEQ ГО N0:30 представляет собой аминокислотную последовательность домена СепС.
SEQ ГО N0:31 представляет собой аминокислотную последовательность домена
PsHGF7.
SEQ ГО N0:32 представляет собой аминокислотную последовательность домена 25 1WKY.
SEQ ГО N0:33 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3D с заменой домена III на 2ZEX.
SEQ ГО N0:34 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3D с заменой домена III на 2ZEZ. 30 SEQ ГО N0:35 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3D с заменой домена III на 10FE.
SEQ ГО N0:36 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3D с заменой домена III на 1РМН.
SEQ Ш N0:37 представляет собой заменой домена III на 2BGP. SEQ Ш N0:38 представляет собой заменой домена III на GP21. 5 SEQ Ш N0:39 представляет собой заменой домена III на СепС. SEQ Ш N0:40 представляет собой заменой домена III на PSHGF7. SEQ Ш N0:41 представляет собой
10 заменой домена III на 2ZEX.
SEQ Ш N0:42 представляет собой заменой домена III на 2ZEZ. SEQ Ш N0:43 представляет собой заменой домена III на 10FE.
15 SEQ Ш N0:44 представляет собой заменой домена III на 1РМН. SEQ Ш N0:45 представляет собой заменой домена III на 2BGP. SEQ Ш N0:46 представляет собой
20 заменой домена III на GP21.
SEQ Ш N0:47 представляет собой заменой домена III на СепС. SEQ Ш N0:48 представляет собой заменой домена III на PSHGF7.
25 SEQ Ш N0:49 представляет собой заменой домена III на 2ZEX. SEQ Ш N0:50 представляет собой заменой домена III на 2ZEZ. SEQ Ш N0:51 представляет собой
30 заменой домена III на 10FE.
SEQ Ш N0:52 представляет собой заменой домена III на 1РМН. SEQ Ш N0:53 представляет собой заменой домена III на 2BGP.
аминокислотную последовательность Vip3D с
аминокислотную последовательность Vip3D с
аминокислотную последовательность Vip3D с
аминокислотную последовательность Vip3D с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3B с
аминокислотную последовательность Vip3C с
аминокислотную последовательность Vip3C с
аминокислотную последовательность Vip3C с
аминокислотную последовательность Vip3C с
аминокислотную последовательность Vip3C с
SEQ Ш N0:54 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3C с заменой домена III на GP21.
SEQ Ш N0:55 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3C с заменой домена III на СепС. 5 SEQ Ш N0:56 представляет собой аминокислотную последовательность Vip3C с заменой домена III на PSHGF7.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение далее будет описано со ссылкой на прилагаемые
10 графические материалы и примеры, в которых отображены варианты осуществления по настоящему изобретению. Не подразумевается, что данное описание является подробным перечнем всех различных путей, с помощью которых может быть реализовано настоящее изобретение, или всех признаков, которые можно добавить к настоящему изобретению. Например, признаки, проиллюстрированные в отношении
15 одного варианта осуществления, могут быть включены в некоторые варианты осуществления, а признаки, проиллюстрированные в отношении конкретного варианта осуществления, могут быть удалены из данного варианта осуществления. Таким образом, настоящим изобретением предполагается, что в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения можно исключить или опустить любой
20 признак или комбинацию признаков, изложенных в данном документе. Кроме того, многочисленные изменения и дополнения к различным вариантам осуществления, предлагаемым в данном документе, будут очевидны для специалистов в данной области в свете настоящего раскрытия, которое не отступает от сути настоящего изобретения. Следовательно, следующие описания предназначены для иллюстрации
25 некоторых конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, а не исчерпывающего определения всех их преобразований, комбинаций и вариаций.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое значение, которое обычно понятно специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Терминология,
30 применяемая в описании настоящего изобретения в данном документе, используется только в целях описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения настоящего изобретения.
Все публикации, заявки на патенты, собственно патенты и другие ссылки, приведенные в данном документе, включены во всей полноте посредством ссылки
касательно идей, относящихся к предложению и/или пункту, в котором приведена данная ссылка.
Если контекст не указывает иное, в частности, предполагается, что различные признаки настоящего изобретения, описанные в данном документе, можно применять в 5 любой комбинации. Более того, настоящим изобретением также предполагается, что в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения любой признак или комбинацию признаков, изложенных в данном документе, можно исключить или опустить. Для иллюстрации, если в описании утверждается, что композиция содержит компоненты А, В и С, это, в частности, предполагает, что любое из А, В или С или их 10 комбинации можно опустить и отклонить по отдельности или в любой комбинации.
Применяемые в описании настоящего изобретения и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа, как предполагается, также включают формы множественного числа, если контекст явно не указывает иное.
Применяемое в данном документе "и/или" относится к любой и всем возможным 15 комбинациям одного или нескольких связанных перечисленных элементов и охватывает их, а также к отсутствию комбинаций при интерпретации в качестве альтернативы ("или").
Выражение "приблизительно", применяемое в данном документе при упоминании измеряемой величины, такой как дозировка или период времени и т. п., 20 относится к изменениям определенного количества на± 20%,+ 10%,+ 5%, +1%, +0,5% или даже +0,1%.
Применяемые в данном документе фразы, такие как "от X до Y" и "от приблизительно X до Y" следует интерпретировать как включительно X и Y. Применяемые в данном документе фразы, такие как "от приблизительно X до Y" 25 означают "от приблизительно X до приблизительно Y", а фразы, такие как "приблизительно X-Y" означают "от приблизительно X до приблизительно Y."
Выражения "содержат", "содержит" и/или "содержащий", применяемые в данном документе, указывают на присутствие определенных признаков, целых чисел, стадий, действий, элементов и/или компонентов, но не исключают присутствие или 30 добавление одного или нескольких других признаков, целых чисел, стадий, действий, элементов, компонентов и/или их групп.
Применяемая в данном документе переходная фраза "состоящий главным образом из" означает, что объем пункта формулы изобретения следует интерпретировать как охватывающий определенные материалы или стадии,
перечисленные в пункте формулы изобретения, а также таковые, которые существенно не влияют на основную(-ые) и новую(-ые) характеристику(-и) заявляемого изобретения. Таким образом, выражение "состоящий главным образом из", применяемое в пункте формулы настоящего изобретения, не предназначено для 5 интерпретации как эквивалентное выражению "содержащий".
Применяемое в данном документе выражение "химерный" относится к молекуле нуклеиновой кислоты или полипептиду, в которых по меньшей мере два компонента происходят из разных источников (например, разных организмов, разных кодирующих участков).
10 Выражение "комплементарная последовательность", применяемое в данном
документе, может означать 100% комплементарность со сравниваемой нуклеотидной последовательностью или оно может означать менее чем 100% комплементарность (например, приблизительно 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
15 97%, 98%, 99% и т. д. комплементарность).
Выражения "комплементарный" или "комплементарность", применяемые в данном документе, относятся к естественному связыванию полинуклеотидов в условиях содержания солей и температуры, допускающих это, путем спаривания оснований. Например, последовательность "A-G-T" связывается с комплементарной
20 последовательностью "T-C-A". Комплементарность между двумя однонитевыми молекулами может быть "частичной," при которой связываются только некоторые из нуклеотидов, или она может быть полной, когда имеет место абсолютная комплементарность между однонитевыми молекулами. Степень комплементарности между нитями нуклеиновой кислоты значительно влияет на эффективность и прочной
25 гибридизации между нитями нуклеиновой кислоты.
Применяемые в данном документе фразы "приводить в контакт", "приведение в контакт", "приведенный в контакт" и их грамматические варианты относятся к помещению компонентов необходимой реакции вместе в условиях, подходящих для проведения необходимой реакции (например, интеграции, трансформации, сайт-
30 специфического расщепления (однонитевого разрыва, расщепления), амплификации, сайт-специфического нацеливания представляющего интерес полипептида и т. д.). Способы и условия для проведения таких реакций хорошо известны в данной области (см., например, Gasiunas et al. (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. 109:E2579-E2586; M R. Green
and J. Sambrook (2012) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 4th Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).
"Контроль" организма (например, насекомого-вредителя) означает ингибирование, посредством токсического эффекта, способности организма (например, 5 насекомого-вредителя) к выживанию, росту, питанию и/или размножению или ограничение повреждений или потери урожая культурных растений, связанных с активностью организма. "Контроль" организма может означать или может не означать уничтожение организма, но предпочтительно означает уничтожение организма.
Выражение "пестицидно эффективное количество," "количество, эффективное
10 для контроля вредителя," или "количество, эффективное для контроля насекомых" означает концентрацию или количество полипептида, которое обеспечивает ингибирование, посредством токсического эффекта, способности соответственно вредителей или насекомых к выживанию, росту, питанию и/или размножению или ограничение повреждений или потери урожая культурных растений, связанных с
15 вредителями или насекомыми. Выражение "пестицидно эффективное количество", " количество, эффективное для контроля вредителя" или "количество, эффективное для контроля насекомых" может означать или может не означать уничтожение соответственно вредителей или насекомых, но предпочтительно оно означает уничтожение вредителей или насекомых.
20 Применяемые в данном документе выражения "пестицидный" или
"инсектицидный" и т. д. относятся к способности модифицированного полипептида Vip3 обеспечивать контроль вредного организма или количеству модифицированного полипептида Vip3, которое обеспечивает контроль вредного организма, определенного в данном документе. Таким образом, пестицидный модифицированный полипептид
25 Vip3 может ингибировать способность вредного организма (например, насекомого-вредителя) к выживанию, росту, питанию и/или размножению или обеспечивать его уничтожение. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению может быть пестицидным или инсектицидным.
Будет понятно, что "фрагмент" или "часть" нуклеотидной последовательности
30 или аминокислотной последовательности по настоящему изобретению означает нуклеотидную или аминокислотную последовательность с уменьшенной длиной (например, уменьшенной на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов) по сравнению с эталонной нуклеиновой кислотой, нуклеотидной последовательностью или аминокислотной последовательностью и
содержащую, состоящую главным образом из и/или состоящую из нуклеотидной последовательности смежных нуклеотидов идентичных или почти идентичных (например, идентичных на 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 5 97%, 98%, 99%) эталонной нуклеиновой кислоте, нуклеотидной последовательности или аминокислотной последовательности. Такой фрагмент или часть в соответствии с настоящим изобретением могут быть при необходимости включены в полинуклеотид большего размера, составляющими которого они являются.
Таким образом, например, фрагменты полипептидов Vip3 можно применять для
10 реализации некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления выражение "полипептид Vip3" относится к полной длине, а также частям или фрагментам полипептидов Vip3. В целом, длина таких фрагментов составляет по меньшей мере 20 или 30 смежных аминокислотных остатков. В некоторых вариантах осуществления длина фрагмента полипептида Vip3 может
15 составлять по меньшей мере приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или больше смежных аминокислотных остатков. В некоторых вариантах осуществления длина фрагмента полипептида Vip3 может составлять менее приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450,
20 475, 500, 525, 550, 575 или больше смежных аминокислотных остатков. Фрагмент может содержать по меньшей мере один, два, три или четыре из домена I, домена II, домена III и/или домена IV полипептида Vip3, необязательно с 1, 2, 3, 5, 7, 10, 12, 20, 30, 40, 50, 100 или больше дополнительными смежными N-концевыми и/или С-концевыми аминокислотными остатками. Фрагмент Vip3 может содержать весь или
25 часть домена I, II, III, или IV. Длина фрагмента (т. е. число смежных аминокислотных остатков) может составлять приблизительно 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше от полноразмерного полипептида Vip3. Фрагмент может содержать, состоять главным образом из и/или состоять из аминокислотной последовательности из смежных аминокислот,
30 идентичной или почти идентичной (например, идентичной на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) соответствующей части полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 может содержать по меньшей мере два фрагмента полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 может содержать первый
фрагмент полипептида Vip3 и второй фрагмент, где указанный первый фрагмент может содержать от приблизительно 100 аминокислотных остатков до приблизительно 600 аминокислотных остатков, и включать любое значение или диапазон в этих пределах, а указанный второй фрагмент может содержать от приблизительно 100 до 5 приблизительно 300 аминокислотных остатков, и включать любое значение или диапазон в этих пределах.
В некоторых вариантах осуществления фрагменты углевод-связывающих модулей (СВМ) можно применять для реализации некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления выражение "углевод-
10 связывающий модуль" (СВМ) относится к полноразмерным СВМ, а также частям или фрагментам СВМ. В целом, длина таких фрагментов составляет по меньшей мере 50 смежных аминокислотных остатков. В некоторых вариантах осуществления длина фрагмента СВМ может составлять по меньшей мере приблизительно 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300 или больше смежных аминокислотных
15 остатков. В некоторых вариантах осуществления длина фрагмента полипептида СВМ может составлять менее приблизительно 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или больше смежных аминокислотных остатков. Фрагмент может необязательно содержать 1, 2, 3, 5, 7, 10, 12, 20, 30, 40, 50, 100 или больше дополнительных смежных N-концевых и/или С-
20 концевых аминокислотных остатков. Длина фрагмента (т. е. число смежных аминокислотных остатков) может составлять приблизительно 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или больше от полноразмерного СВМ. Фрагмент может содержать, состоять главным образом из и/или состоять из аминокислотной последовательности из смежных аминокислот,
25 идентичной или почти идентичной (например, идентичной на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) СВМ активного в отношении углеводов фермента.
Необязательно, фрагмент СВМ включает металл-связывающий домен (и/или любой другой известный функциональный домен).
В некоторых вариантах осуществления фрагмент СВМ может содержать,
30 состоять главным образом из или состоять из СВМ с усеченным N- и/или С-концом. В некоторых вариантах осуществления СВМ может предусматривать С-концевое усечение приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 аминокислотных остатков и т. д., или включать любой диапазон или изменяемое значение в этих пределах. В некоторых вариантах
осуществления СВМ может предусматривать N-концевое усечение приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 аминокислотных остатков и т. д., или включать любой диапазон или изменяемое значение в этих пределах. В некоторых вариантах осуществления СВМ, применимый в 5 соответствии с настоящим изобретением, может быть усечен как по его N-концу, так и по С-концу.
Применяемый в данном документе термин "ген" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, допустимой к применению для получения мРНК, антисмысловой РНК, микроРНК, антисмыслового олигодезоксирибонуклеотида,
10 подавляющего микроРНК (АМО) и т. д. Гены могут или не могут являться допустимыми к применению для получения функционального белка или продукта гена. Гены могут содержать как кодирующие, так и некодирующие участки (например, интроны, регуляторные элементы, промоторы, энхансеры, терминирующие последовательности и/или 5'- и З'-нетранслируемые участки). Ген может являться
15 "выделенным", под чем подразумевается нуклеиновая кислота, которая в значительной степени или практически не содержит компоненты, обычно обнаруживаемые вместе с нуклеиновой кислотой в ее природном состоянии. Такие компоненты включают другой клеточный материал, среду для культивирования после получения рекомбинантов и/или различные химические вещества, применяемые при химическом синтезе
20 нуклеиновой кислоты.
"Гетерологичная" или "рекомбинантная" нуклеотидная последовательность представляет собой нуклеотидную последовательность, которая в природных условиях не связана с клеткой-хозяином, в которую она вводится, включая не встречающиеся в природе множественные копии встречающейся в природе нуклеиновой кислоты и
25 нуклеотидные последовательности, которые вводятся в клетку-хозяина в той форме, в которой они не встречаются в природе (например, функционально связанные с регуляторной последовательностью(последовательностями), которая(которые) в природе не встречается(встречаются) с такой нуклеотидной последовательностью).
Различные нуклеиновые кислоты или белки, обладающие гомологией,
30 именуются в данном документе "гомологичными". Выражение "гомолог" включает гомологичные последовательности из того же или другого вида и ортологичные последовательности из того же или другого вида. "Гомология" относится к уровню сходства или идентичности между двумя или более последовательностями нуклеиновых кислот и/или аминокислот, выраженному в виде процента идентичности
по положениям (т. е. сходства или идентичности последовательностей). Гомология также относится к представлению о сходных функциональных свойствах различных нуклеиновых кислот или белков. Таким образом, композиции и способы по настоящему изобретению могут предусматривать гомологи нуклеотидных последовательностей и 5 полипептидных последовательностей по настоящему изобретению. Термин "ортолог", применяемый в данном документе, относится к гомологичным нуклеотидным последовательностям и/или аминокислотным последовательностям у различных видов, которые произошли от общего предкового гена в ходе видообразования. Гомолог нуклеотидной последовательности по настоящему изобретению характеризуется
10 значительной идентичностью последовательности (например, по меньшей мере приблизительно 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100%) с указанной нуклеотидной последовательностью по настоящему изобретению. Таким образом, например, гомолог СВМ, применимый в соответствии с
15 настоящим изобретением, может быть по меньшей мере на приблизительно 70% или больше гомологичным любой из последовательностей СВМ, предусмотренных в данном документе, где гомолог последовательности СВМ характеризуется функцией связывания углевода(углеводов). В некоторых вариантах осуществления гомолог последовательности СВМ характеризуется функцией связывания целлюлозы и/или
20 глюкоманнана. В некоторых вариантах осуществления гомолог последовательности СВМ характеризуется функцией внутреннего связывания цепочек гликанов. В некоторых вариантах осуществления гомолог полипептида Vip3, применимый в соответствии с настоящим изобретением, может быть на приблизительно 70% или больше гомологичным любой из полипептидных последовательностей Vip3,
25 предусмотренных в данном документе, где гомолог обладает пестицидной активностью.
Таким образом, гомолог полипептида Vip3 включает без ограничения: (1) полипептиды, которые по меньшей мере на приблизительно 70% - по меньшей мере приблизительно 90% (например, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 30 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90% 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) являются идентичными на уровне последовательности представителю класса полипептидов Vip3, сохраняя в то же время пестицидную активность; (2) полипептиды, перекрестно реагирующие с антителами, которые иммунологически распознают представителя класса полипептидов Vip3, (3)
полипептиды, которые перекрестно реагируют с рецептором представителя класса полипептидов Vip3 и сохраняет пестицидную активность и (4) полипептиды, которые по меньшей мере на приблизительно 70% - по меньшей мере на приблизительно 90% (например, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 5 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90% 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) являются идентичными на уровне последовательности участку токсичной сердцевины представителя класса полипептидов Vip3, сохраняя в то же время пестицидную активность. Гомологи Vip3 были раскрыты в WO 98/18932, WO 98/33991, WO 98/00546 и WO 99/57282. На Фиг. 1 представлен результат выравнивания 10 полипептидов Vip3A и Vip3D и показана значительная степень сходства во вторичной структуре.
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полипептиды являются по меньшей мере на 70% идентичными на уровне последовательностей представителю класса полипептидов Vip3 и/или участку
15 токсичной сердцевины представителя класса полипептидов Vip3, и в то же время сохраняют пестицидную активность. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полипептиды являются по меньшей мере на 80% идентичными на уровне последовательностей представителю класса полипептидов Vip3 и/или участку токсичной сердцевины представителя класса полипептидов Vip3, и в то же
20 время сохраняют пестицидную активность. В некоторых вариантах осуществления полипептиды являются по меньшей мере на 90% идентичными на уровне последовательностей представителю класса полипептидов Vip3 и/или участку токсичной сердцевины представителя класса полипептидов Vip3, и в то же время сохраняют пестицидную активность.
25 Применяемые в данном документе выражения "гибридизация",
"гибридизируется", "гибридизирующийся" и их грамматические варианты относятся к связыванию двух полностью комплементарных нуклеотидных последовательностей или практически комплементарных последовательностей, в которых присутствует некоторое количество несовпадающих пар оснований. Условия гибридизации хорошо
30 известны в данной области и варьируются в зависимости от длины нуклеотидных последовательностей и степени комплементарности между нуклеотидными последовательностями. В некоторых вариантах осуществления условия гибридизации могут соответствовать высокой жесткости, или они могут соответствовать умеренной жесткости или низкой жесткости, в зависимости от степени комплементарности и
длины последовательности, подлежащей гибридизации. Условия, создающие низкую, умеренную и высокую жесткость в целях гибридизации нуклеотидных последовательностей хорошо известны в данной области (см., например, Gasiunas et al. (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. 109:E2579-E2586; MR. Green and J. Sambrook (2012) 5 Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 4th Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).
Применяемые в данном документе выражения "увеличивать", "увеличение", "увеличенный", "повышать", "повышенный", "повышающий" и "повышение" (и их грамматические варианты) описывают повышение по меньшей мере на приблизительно 10 25%, 50%, 75%, 100%, 150%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше по сравнению с контролем.
"Нативная" или "дикого типа" нуклеиновая кислота, нуклеотидная последовательность, полипептид или аминокислотная последовательность относится к встречающейся в природе или эндогенной нуклеиновой кислоте, нуклеотидной
15 последовательности, полипептиду или аминокислотной последовательности. Таким образом, например, "Vip3 дикого типа" представляет собой Vip3, который в природе встречается в организме или является эндогенным по отношению к нему.
В отличие от этого, "гетерологичная" нуклеиновая кислота или полипептид представляет собой нуклеиновую кислоту или полипептид, которые в природных
20 условиях не связаны с клеткой-хозяином, в которую они вводятся, в той форме, в которой они не встречаются в природных условиях в клетке, в которую они вводятся.
Также применяемые в данном документе выражения "нуклеиновая кислота", "молекула нуклеиновой кислоты", "конструкция нуклеиновой кислоты", "нуклеотидная последовательность" и "полинуклеотид" относятся к РНК или ДНК, которая является
25 линейной или разветвленной, одно- или двунитевой или их гибридом. Выражение также охватывает гибриды РНК/ДНК. В случаях, когда dsRNA получают синтетическим путем, менее распространенные основания, такие как инозин, 5-метилцитозин, 6-метиладенин, гипоксантин и другие также можно применять для спаривания антисмысловых последовательностей, dsRNA и рибозимов. Например,
30 полинуклеотиды, которые содержат С-5-пропиновые аналоги уридина и цитидина, как было показано, связывают РНК с высокой степенью сродства и являются сильными антисмысловыми ингибиторами экспрессии генов. Также можно производить другие модификации, например, модификацию фосфодиэфирного остова или 2'-гидрокси группы сахара рибозы РНК. Конструкции нуклеиновой кислоты согласно настоящему
раскрытию могут представлять собой ДНК или РНК, но предпочтительно ДНК. Таким
образом, хотя конструкции нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению можно
описывать и применять в форме ДНК, в зависимости от предполагаемого применения
их также можно описывать и применять в форме РНК.
5 Выражение "синтетическая" нуклеиновая кислота или нуклеотидная
последовательность, применяемый в данном документе, относится к нуклеиновой кислоте или нуклеотидной последовательности, которая не обнаруживается в природе, а является сконструированной посредством вмешательства человека и, соответственно, не является природным продуктом.
10 Применяемое в данном документе выражение "нуклеотидная
последовательность" относится к гетерополимеру нуклеотидов или последовательности этих нуклеотидов от 5'- к З'-концу молекулы нуклеиновой кислоты и включает молекулы ДНК или РНК, в том числе кДНК, фрагмент или часть ДНК, геномную ДНК, синтетическую (например, химически синтезированную) ДНК, плазмидную ДНК,
15 мРНК и антисмысловую РНК, любая из которых может быть однонитевой или двунитевой. Выражения "нуклеотидная последовательность", "нуклеиновая кислота", "молекула нуклеиновой кислоты", "олигонуклеотид" и "полинуклеотид" также применяют в данном документе взаимозаменяемо для обозначения гетерополимера нуклеотидов. За исключением случаев, когда указано иное, молекулы нуклеиновых
20 кислот и/или нуклеотидные последовательности, предусмотренные в данном документе, представлены в данном документе в направлении от 5'- к 3'- концу, слева направо, и обозначены с использованием стандартного кода для обозначения символов нуклеотидов, как установлено правилами США для изложения последовательностей, §§1.821-1.825 раздела 37 CFR и стандартом ST.25 Всемирной организации
25 интеллектуальной собственности (WIPO). Выражение "5'-участок", применяемое в данном документе, может означать участок полинуклеотида, ближайший к 5'-концу. Так, например, элемент в 5'-участке полинуклеотида может быть расположен в любом месте от первого нуклеотида, расположенного на 5'-конце полинуклеотида, до нуклеотида, расположенного в середине полинуклеотида. Выражение "3'-участок",
30 применяемое в данном документе, может означать участок полинуклеотида, ближайший к З'-концу. Так, например, элемент в 3'-участке полинуклеотида может быть расположен в любом месте от первого нуклеотида, расположенного на 3'-конце полинуклеотида, до нуклеотида, расположенного в середине полинуклеотида.
Применяемое в данном документе выражение "процентная идентичность последовательностей" или "процентная идентичность" относится к процентной доле идентичных нуклеотидов в линейной полинуклеотидной последовательности эталонной ("запрашиваемой") молекуле полинуклеотида (или ее комплементарной 5 нити) по сравнению с тестовой ("из базы данных") полинуклеотидной молекулой (или ее комплементарной нитью), когда две последовательности оптимально выровнены. В некоторых вариантах осуществления "процентная идентичность" может относиться к процентной доле идентичных аминокислот в аминокислотной последовательности.
Выражения "модифицировать," "модифицирование" и/или "модификация" (и их
10 грамматические варианты), применяемые в данном документе по отношению к полипептидам Vip3 и полинуклеотидам, кодирующим полипептиды Vip3, относятся к изменению эталонного полипептида Vip3 или полипептида Vip3 дикого типа и его соответствующей нуклеотидной последовательности с включением гетерологичного углевод-связывающего модуля. В некоторых вариантах осуществления токсичность
15 полученного модифицированного полипептида Vip3 изменена по сравнению с токсичностью эталонного полипептида Vip3 или полипептида Vip3 дикого типа. "Изменение токсичности" включает без ограничения повышение и/или снижение токсичности, которое касается любого конкретного целевого организма и/или изменения организма (организмов), являющихся целевыми (например, когда
20 модифицированный полипептид Vip3 становится пестицидным в отношении одного или нескольких дополнительного организма(организмов) по сравнению с эталонным полипептидом Vip3 или полипептидом Vip3 дикого типа), включая изменение максимальной активности, изменение LC50 и/или изменение времени, необходимого для достижения токсичности.
25 Применяемые в данном документе выражения "снижать," "сниженный,"
"снижающий," "снижение," "сокращать," "подавлять" и "уменьшать" (и их грамматические варианты), описывают, например, уменьшение по меньшей мере на приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 35%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% и т. д., или любое значение или диапазон в этих пределах, по
30 сравнению с контролем. В некоторых вариантах осуществления снижение может не приводить или практически не приводить (т. е., незначительное количество, например, менее приблизительно 10% или даже 5%) к выявляемым активности или количеству. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления у трансгенного растения, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, которая экспрессирует
модифицированный полипептид Vip3, может снижаться повреждение, вызванное вредителем растений, по меньшей мере на приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 35%, 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% и т. д. или любое значение или диапазон в этих пределах, по сравнению с контролем (например, 5 растением, которое не содержит указанную молекулу нуклеиновой кислоты, которая экспрессирует модифицированный полипептид Vip3).
Применяемое в данном документе выражение "регуляторная(регуляторные) последовательность(последовательности)" означает нуклеотидную(нуклеотидные) последовательность(последовательности), расположенную(расположенные) выше (5'-
10 некодирующие последовательности), в пределах кодирующей последовательности или ниже (3'-некодирующие последовательности), которая(которые) влияет(влияют) на транскрипцию, процессинг или стабильность РНК или трансляцию связанной кодирующей последовательности. Регуляторные последовательности включают без ограничения промоторы, энхансеры, экзоны, интроны, трансляционные лидерные
15 последовательности, сигналы терминации и сигнальные последовательности полиаденилирования. Регуляторные последовательности включают природные и синтетические последовательности, а также последовательности, которые могут представлять собой комбинацию синтетических и природных последовательностей. "Энхансер" представляет собой нуклеотидную последовательность, которая может
20 стимулировать активность промотора и может представлять собой природный элемент промотора или гетерологичный элемент, вставленный для повышения уровня тканевой специфичности промотора. Основная последовательность может находиться в пределах каждой из нитей двунитевой молекулы ДНК, и она способна функционировать даже в случае расположения как выше, так и ниже относительно промотора. Значение
25 выражения "промотор" может включать "промоторные регуляторные последовательности".
Применяемое в данном документе выражение "идентичность последовательностей" относится к степени инвариантности двух оптимально выровненных последовательностей полинуклеотидов или пептидов по всему окну
30 выравнивания компонентов, например, нуклеотидов или аминокислот. "Идентичность" можно легко рассчитать при помощи известных способов, в том числе без ограничения описанных в Computational Molecular Biology (Lesk, A. M., ed.) Oxford University Press, New York (1988); Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D. W., ed.) Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I (Griffin, A.
M., and Griffin, H. G., eds.) Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology (von Heinje, G., ed.) Academic Press (1987); и Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.) Stockton Press, New York (1991).
Применяемая в данном документе фраза "в значительной степени идентичный" 5 или "значительная идентичность" в отношении двух молекул нуклеиновых кислот, нуклеотидных последовательностей или белковых последовательностей, относится к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, характеризующимся по меньшей мере приблизительно 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%,
10 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичностью нуклеотидов или аминокислотных остатков при сравнении и выравнивании с максимальным соответствием, измеряемой с применением одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем визуальной проверки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения значительная идентичность
15 наблюдается в пределах участка последовательностей, длина которого составляет по меньшей мере от приблизительно 50 остатков до приблизительно 750 остатков. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления значительная идентичность наблюдается в пределах области последовательностей, длина которых составляет по меньшей мере от приблизительно 50 остатков до приблизительно 250 остатков, от
20 приблизительно 75 остатков до приблизительно 225 остатков, от приблизительно 100 остатков до приблизительно 200 остатков, от приблизительно 125 остатков до приблизительно 175 остатков, от приблизительно 200 остатков до приблизительно 400 остатков, от приблизительно 300 остатков до приблизительно 450 остатков, от приблизительно 400 остатков до приблизительно 500 остатков, от приблизительно 500
25 остатков до приблизительно 550 остатков, от приблизительно 550 остатков до приблизительно 650 остатков, и/или приблизительно от 650 остатков до приблизительно 750 остатков, или любое значение или диапазон в этих пределах.
Для сравнения последовательностей одна последовательность обычно выступает в качестве эталонной последовательности, с которой сравнивают тестовые
30 последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тестовые и эталонные последовательности вводят в компьютер, если необходимо, задают координаты подпоследовательности и задают программные параметры алгоритма сравнения последовательностей. Затем с помощью алгоритма сравнения последовательностей на основе заданных программных параметров вычисляют
процентную идентичность последовательностей для тестовой(тестовых) последовательности(последовательностей) по отношению к эталонной последовательности.
Оптимальное выравнивание последовательностей для выравнивания в окне 5 сравнения хорошо известно специалистам в данной области и может проводиться с помощью инструментов, таких как алгоритм поиска локальной гомологии Смита-Уотермана, алгоритм выравнивания областей гомологии Нидлмана-Вунша, способ поиска сходства Пирсона-Липмана, и, необязательно, с помощью компьютеризированных путей реализации данных алгоритмов, таких как GAP,
10 BESTFIT, FASTA и TFASTA, доступных как часть GCG(r) Wisconsin Package(r) (Accelrys Inc., Сан-Диего, Калифорния). "Доля идентичности" для выровненных сегментов тестовой последовательности и эталонной последовательности представляет собой число идентичных компонентов, которые являются общими для двух выровненных последовательностей, разделенное на общее число компонентов в
15 сегменте эталонной последовательности, т. е всей эталонной последовательности или меньшей определенной части эталонной последовательности. Процентная идентичность последовательностей представлена как доля идентичности, умноженная на 100. Сравнение одной или нескольких полинуклеотидных последовательностей может производиться с полноразмерной полинуклеотидной последовательностью или
20 ее частью, или с более длинной полинуклеотидной последовательностью. Для целей настоящего изобретения "процентная идентичность" может быть также определена с применением BLASTX версии 2.0 для транслируемых нуклеотидных последовательностей и BLASTN версии 2.0 для полинуклеотидных последовательностей.
25 Программное обеспечение для проведения анализов BLAST общедоступно
благодаря Национальному центру биотехнологической информации. Данный алгоритм включает первоначальную идентификацию пар последовательностей с наибольшим сходством (HSP) путем идентификации коротких "слов" с длиной W в запрашиваемой последовательности, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому
30 положительному пороговому баллу T при выравнивании со "словом" такой же длины в последовательности из базы данных. T называется пороговым показателем соседнего "слова" (Altschul et al., 1990). Эти исходные совпадения соседних "слов" выступают в качестве затравки для начала поисков с целью обнаружения более длинных HSP, содержащих их. Совпадения "слов" затем продлевают в обоих направлениях вдоль
каждой последовательности настолько, насколько может быть увеличен совокупный показатель выравнивания. Совокупные показатели рассчитывают с использованием, для нуклеотидных последовательностей, параметров М (балл, начисляемый для пары совпадающих остатков; всегда > 0) и N (штрафной балл для несовпадающих остатков; 5 всегда < 0). В случае аминокислотных последовательностей для расчета совокупного показателя используется матрица замен. Продление совпадений "слов" в каждом направлении прекращают, когда совокупный показатель выравнивания снижается на величину X по сравнению с его максимальным достигнутым значением, совокупный показатель падает до нуля или ниже вследствие накопления одного или нескольких
10 выравниваний остатков с отрицательными показателями, либо в случае достижения конца одной из последовательностей. Параметры алгоритма BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программа BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) использует по умолчанию длину "слова" (W), равную 11, ожидаемое значение (Е), равное 10, пороговое значение, равное 100, М = 5,
15 N = -4 и сравнение обеих нитей. Для аминокислотных последовательностей программа BLASTP использует по умолчанию длину "слова" (W), равную 3, среднее значение (Е), равное 10, а также матрицу замен BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc Natl Acad. SciUSA 89: 10915 (1989)).
Вдобавок к расчету процентной идентичности последовательностей алгоритм
20 BLAST также выполняет статистический анализ сходства или идентичности между двумя последовательностями (см., например, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90: 5873-5787 (1993)). Одной мерой сходства или идентичности, предоставляемой алгоритмом BLAST, является наименьшая суммарная вероятность (P(N)), которая предусматривает определение вероятности, с которой могут случайным образом
25 встречаться совпадения между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями. Например, тестовая последовательность нуклеиновой кислоты считается подобной эталонной последовательности, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестовой нуклеотидной последовательности с эталонной нуклеотидной последовательностью составляет от менее приблизительно 0,1 до менее
30 приблизительно 0,001. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестовой нуклеотидной последовательности с эталонной нуклеотидной последовательностью составляет менее приблизительно 0,001.
Две нуклеотидные последовательности также могут считаться в значительной степени комплементарными, если две последовательности гибридизируются друг с другом в жестких условиях. В некоторых вариантах осуществления две нуклеотидные последовательности, которые считаются в значительной степени комплементарными, 5 гибридизируются друг с другом при очень жестких условиях.
"Жесткие условия гибридизации" и "жесткие условия отмывки при гибридизации" применительно к экспериментам по гибридизации нуклеиновых кислот, например, Саузерн- и нозерн-гибридизациям, зависят от последовательностей и отличаются при разных параметрах окружающей среды. Расширенное руководство по
10 гибридизации нуклеиновых кислот можно найти в Tijssen Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes part I chapter 2 "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays" Elsevier, New York (1993). Как правило, условия гибридизации и отмывки высокой жесткости выбирают так, чтобы температура была приблизительно на 5°С ниже точки
15 плавления (Тш) для конкретной последовательности при определенных ионной силе и рН.
Тш является температурой (при определенных ионной силе и рН), при которой 50% целевой последовательности гибридизируется с абсолютно совпадающим зондом. Для очень жестких условий выбирают температуру, равную Тш для конкретного зонда.
20 Примером жестких условий гибридизации для гибридизации комплементарных последовательностей нуклеотидов, которые имеют более 100 комплементарных остатков на фильтре при Саузерн- или нозерн-блоттинге, является 50% формамид с 1 мг гепарина при 42°С, при этом гибридизацию проводят в течение ночи. Примером условий отмывки высокой жесткости является 0,15 М NaCl при 72°С в течение
25 приблизительно 15 минут. Примером жестких условий отмывки является отмывка с помощью 0,2х SSC при 65°С в течение 15 минут (описание буфера SSC см. в Sambrook ниже). С целью избавления от фонового сигнала зонда зачастую отмывке в условиях высокой жесткости предшествует отмывка в условиях низкой жесткости. Примером условий отмывки средней жесткости для дуплекса, например, с более чем 100
30 нуклеотидами является lx SSC при 45°С в течение 15 минут. Примером условий отмывки низкой жесткости для дуплекса, например, с более чем 100 нуклеотидами является 4-6х SSC при 40°С в течение 15 минут. Для коротких зондов (например, длиной от приблизительно 10 до 50 нуклеотидов) жесткие условия обычно предусматривают концентрации солей, составляющие менее чем приблизительно 1,0 М
ионов Na, как правило, концентрации, составляющие приблизительно 0,01-1,0 М ионов Na (или других солей) при рН 7,0-8,3, а также температуру, как правило, равную по меньшей мере приблизительно 30°С. Жесткие условия также могут быть достигнуты с добавлением дестабилизирующих средств, таких как формамид. В целом, соотношение 5 сигнал-шум, в 2 (или более) раза превышающее наблюдаемое для несвязанного зонда при конкретном гибридизационном анализе, указывает на выявление специфической гибридизации. Нуклеотидные последовательности, которые не гибридизируются друг с другом в жестких условиях, все еще являются в значительной степени идентичными, если белки, которые они кодируют, в значительной степени идентичны. Это может 10 происходить, например, если копия нуклеотидной последовательности создана с применением максимальной вырожденности кодонов, допускаемой генетическим кодом.
Ниже приведены примеры комплексов условий гибридизации/отмывки, которые можно применять для клонирования гомологичных нуклеотидных
15 последовательностей, которые являются в значительной степени идентичными эталонным нуклеотидным последовательностям по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления эталонная нуклеотидная последовательность гибридизируется с "тестовой" нуклеотидной последовательностью в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPCU, 1 ммоль EDTA при 50°С с отмывкой в 2Х SSC, 0,1% SDS при 50°С. В
20 некоторых вариантах осуществления эталонная нуклеотидная последовательность гибридизируется с "тестовой" нуклеотидной последовательностью в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPC> 4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в IX SSC, 0,1% SDS при 50°С или в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaP04, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 0,5Х SSC, 0,1% SDS при 50°С. В некоторых вариантах
25 осуществления эталонная нуклеотидная последовательность гибридизируется с "тестовой" нуклеотидной последовательностью в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPC-4, 1 ммоль EDTA при 50°С с отмывкой в 0,1Х SSC, 0,1% SDS при 50°С или в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPC> 4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 0,IX SSC, 0,1% SDS при 65°С.
30 Любая нуклеотидная последовательность и/или молекула рекомбинантной
нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть кодон-оптимизирована для экспрессии в любом виде, представляющем интерес. Оптимизация кодонов хорошо известна в области техники и предполагает модификацию нуклеотидной последовательности в отношении сдвига частоты использования кодонов с
применением видоспецифичных таблиц частоты использования кодонов. Таблицы частоты использования кодонов созданы на основе секвенирования генов с наиболее высоким уровнем экспрессии для вида, представляющего интерес. Если нуклеотидные последовательности должны быть экспрессированы в ядре, таблицы частоты 5 использования кодонов создают на основе секвенирования ядерных генов, с наиболее высоким уровнем экспрессии для вида, представляющего интерес. Модификации нуклеотидных последовательностей определяют путем сравнивания видоспецифичной таблицы частоты использования кодонов с кодонами, присутствующими в нативных полинуклеотидных последовательностях. Как известно из области техники,
10 оптимизация кодонов нуклеотидной последовательности приводит к тому, что нуклеотидная последовательность менее чем на 100% идентична (например, на 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и т. д.) нативной нуклеотидной последовательности, но все еще кодирует полипептид,
15 характеризующийся такой же функцией, как полипептид, кодируемый исходной, нативной нуклеотидной последовательностью. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеотидная последовательность и/или молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть кодон-оптимизирована для экспрессии в конкретных видах, представляющих
20 интерес (например, растении, таком как кукуруза, соя, сахарный тростник, сахарная свекла, рис или пшеница).
В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, нуклеотидные последовательности и полипептиды по настоящему изобретению являются "выделенными." "Выделенная" молекула нуклеиновой
25 кислоты, "выделенная" нуклеотидная последовательность или "выделенный" полипептид представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, нуклеотидную последовательность или полипептид, который посредством вмешательства человека находится отдельно от своей естественной среды и, следовательно, не является природным продуктом. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, нуклеотидная
30 последовательность или полипептид могут находиться в очищенной форме, то есть быть по меньшей мере частично отделенными от по меньшей мере некоторых других компонентов встречающегося в природе организма или вируса, например, структурных компонентов клетки или вируса или других полипептидов или нуклеиновых кислот, обычно связанных с полинуклеотидом. В некоторых вариантах осуществления
выделенная молекула нуклеиновой кислоты, выделенная нуклеотидная последовательность и/или выделенный полипептид являются по меньшей мере на приблизительно 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или больше чистыми.
5 В некоторых вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой
кислоты, нуклеотидная последовательность или полипептид могут находится в среде, не относящейся к естественной, такой как, например, рекомбинантная клетка-хозяин. Таким образом, например, что касается нуклеотидных последовательностей, выражение "выделенная" означает, что она отделена от хромосомы и/или клетки, в
10 которой она встречается в природе. Полинуклеотид также является выделенным, если он отделен от хромосомы и/или клетки, в которой он встречается в природе, и затем встроен в генетическое окружение, в хромосому и/или клетку, в которых он не встречается в природе (например, другая клетка-хозяин, другие регуляторные последовательности и/или другое положение в геноме относительно природных
15 условий). Соответственно, рекомбинантные молекулы нуклеиновых кислот, нуклеотидные последовательности и кодируемые ими полипептиды являются "выделенными", поскольку они, посредством вмешательства человека, существуют отдельно от их естественной среды и, следовательно, не являются природными продуктами, однако в некоторых вариантах осуществления они могут быть введены и
20 могут существовать в рекомбинантной клетке-хозяине.
В любых вариантах осуществления, описанных в данном документе, нуклеотидные последовательности и/или молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут быть функционально ассоциированы с рядом промоторов и других регуляторных элементов для экспрессии в клетках
25 различных организмов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления рекомбинантная нуклеиновая кислота по настоящему изобретению может дополнительно содержать один или несколько промоторов, функционально связанных с одной или несколькими нуклеотидными последовательностями.
Под применяемыми в данном документе выражениями "функционально
30 связанный" или "функционально ассоциированный" подразумевают, что указанные элементы являются функционально связанными друг с другом, а также обычно являются физически связанными. Таким образом, применяемое в данном документе выражение "функционально связанный" или "функционально ассоциированный" относится к нуклеотидным последовательностям в одной молекуле нуклеиновой
кислоты, которые ассоциированы функционально. Таким образом, первая нуклеотидная последовательность, функционально связанная со второй нуклеотидной последовательностью, означает ситуацию, когда первая нуклеотидная последовательность находится в функциональной взаимосвязи со второй нуклеотидной 5 последовательностью. К примеру, промотор функционально ассоциирован с нуклеотидной последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию указанной нуклеотидной последовательности. Специалистам в данной области будет понятно, что регуляторные последовательности (например, промотор) не обязательно должны быть смежными с той нуклеотидной последовательностью, с
10 которой они функционально ассоциированы, пока регуляторные последовательности выполняют функцию управления ее экспрессией. Таким образом, например, промежуточные нетранслируемые и при этом транскрибируемые последовательности могут присутствовать между промотором и нуклеотидной последовательностью, и промотор может все еще считаться "функционально связанным" с нуклеотидной
15 последовательностью.
"Промотор" представляет собой нуклеотидную последовательность, которая контролирует или регулирует транскрипцию нуклеотидной последовательности (т. е. кодирующей последовательности), функционально ассоциированной с промотором. Как правило, "промотор" относится к нуклеотидной последовательности, которая
20 содержит сайт связывания для РНК-полимеразы II и управляет инициацией транскрипции. В целом, промоторы находятся в направлении 5' или выше относительно начала кодирующего участка соответствующей кодирующей последовательности. Промоторный участок может содержать другие элементы, которые действуют как регуляторы экспрессии гена. Они включают консенсусную последовательность TATA-
25 бокс и часто консенсусную последовательность CAAT-бокс (Breathnach and Chambon, (1981) Аппи. Rev. Biochem. 50:349). У растений CAAT-бокс может быть замещен AGGA-боксом (Messing et al, (1983) в Genetic Engineering of Plants, T. Kosuge, C. Meredith and A. Hollaender (eds.), Plenum Press, pp. 211-227).
В кассетах экспрессии по настоящему изобретению можно применять любой
30 промотор, подходящий для инициации транскрипции в клетке растения или бактерии. Промоторы могут включать, например, конститутивные, индуцируемые, регулируемые во времени, регулируемые в процессе развития, химически регулируемые, тканепредпочтительные и/или тканеспецифические промоторы для применения при получении рекомбинантных молекул нуклеиновой кислоты, т. е., "химерных генов" или
"химерных полинуклеотидов". Эти различные типы промоторов хорошо известны в уровне техники.
Выбор промотора будет различным в зависимости от временных и пространственных требований касательно экспрессии, а также в зависимости от клетки-5 хозяина (например, растения или бактерий), подлежащей трансформации. Промоторы для множества различных организмов хорошо известны в уровне техники. Основываясь на обширных знаниях из уровня техники, можно выбирать подходящий промотор для конкретного организма-хозяина, представляющего интерес. Так, например, многое известно о расположенных выше по цепи промоторах генов, конститутивно 10 экспрессируемых на высоком уровне в модельных организмах, и такие данные являются легко доступными и по необходимости могут быть реализованы в других системах.
Кроме того, например, экспрессия гетерологичного полинуклеотида, кодирующего модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению,
15 может осуществляться в любом растении, части растения, (например, в листьях, в цветоножках или стеблях, в колосьях, в соцветиях (например, в колосках, метелках, початках и т. д.), в корнях, семенах и/или проростках и т. п.), растительных клетках или бактериальных клетках. Например, в случае многоклеточного организма, такого как растение, если желательной является экспрессия в конкретной ткани или органе, можно
20 применять тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор (например, промотор, специфический/пред почтительный для корня). В отличие от этого, если желательной является экспрессия в ответ на стимул, можно применять промотор, индуцируемый определенными стимулами или химическими веществами. В некоторых вариантах осуществления может требоваться защита от более чем одного типа
25 насекомого-вредителя, и, следовательно, желательной является экспрессия в нескольких тканях. Если желательной является постоянная экспрессия на относительно стабильном уровне во всех клетках или тканях организма, может быть выбран конститутивный промотор.
Так, промоторы, применимые в соответствии с настоящим изобретением,
30 включают без ограничения промоторы, которые управляют экспрессией нуклеотидной последовательности конститутивно, промоторы, которые управляют экспрессией при индукции, и промоторы, которые управляют экспрессией тканеспецифически или тканепредпочтительно или специфически или предпочтительно по отношению к стадии развития. Эти различные типы промоторов хорошо известны в уровне техники.
Промоторы могут быть идентифицированы в растении, дрожжах или бактериях, подлежащих трансформации, и выделены из них, а затем вставлены в кассету экспрессии, которая будет применяться для трансформации растения, дрожжей или бактерий.
5 Неограничивающие примеры промотора включают промотор гена 1 малой
субъединицы RubisCo (PrbcSl), промотор гена актина (Pactin), промотор гена нитратредуктазы (Рпг) и промотор гена 1 карбоангидразы с внутренними повторами (Pdcal) (См., Walker et al. Plant Cell Rep. 23:727-735 (2005); Li et al. Gene 403:132-142 (2007); Li et al. Mol Biol. Rep. 37:1143-1154 (2010)). PrbcSl и Pactin являются
10 конститутивными промоторами, a Pnr и Pdcal являются индуцируемыми промоторами. Рпг индуцируется нитратом и подавляется аммонием (Li et al. Gene 403:132-142 (2007)), a Pdcal индуцируется солью (Li et al. Mol Biol. Rep. 37:1143-1154 (2010)).
Примеры конститутивных промоторов, применимых для растений, включают без ограничения промотор вируса цеструма (стр) (патент США № 7166770), промотор
15 гена актина-1 риса (Wang et al. (1992) Mol. Cell. Biol. 12:3399-3406; а также патент США № 5641876), промотор 35S CaMV (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812), промотор CaMV 19S (Lawton et al. (1987) Plant Mol. Biol. 9:315-324), промотор гена nos (Ebert etal. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci USA 84:5745-5749), промотор гена Adh (Walker et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:6624-6629), промотор гена сахарозосинтазы
20 (Yang & Russell (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4144-4148) и промотор гена убиквитина. Конститутивный промотор, полученный из гена убиквитина, накапливается во многих типах клеток. Убиквитиновые промоторы были клонированы из нескольких видов растений для применения у трансгенных растений, например, у подсолнечника (Binet et al., 1991. Plant Science 79: 87-94), маиса (Christensen et al., 1989.
25 Plant Molec. Biol. 12: 619-632) и арабидопсиса (Norris et al. 1993. Plant Molec. Biol. 21:895-906). Убиквитиновый промотор маиса (UbiP) был разработан в трансгенных системах однодольных, и его последовательность и векторы, сконструированные для трансформации однодольных растений, раскрыты в патентной заявке ЕР 0342926. Убиквитиновый промотор является подходящим для экспрессии нуклеотидных
30 последовательностей по настоящему изобретению у трансгенных растений, особенно однодольных растений. Дополнительно, кассеты экспрессии с промотором, описанные в McElroy etal. {Mol. Gen. Genet. 231: 150-160 (1991)) можно легко модифицировать для экспрессии нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению, и они являются особенно подходящими для применения у однодольных хозяев.
В некоторых вариантах осуществления для экспрессии гетерологичного
полинуклеотида в растительной клетке можно применять
тканеспецифические/тканепредпочтительные промоторы. Паттерны
тканеспецифической или тканепредпочтительной экспрессии включают без 5 ограничения паттерны экспрессии, специфической или предпочтительной по отношению к зеленым тканям, специфической или предпочтительной по отношению к корню, специфической или предпочтительной по отношению к стеблю и специфической или предпочтительной по отношению к цветку. Промоторы, подходящие для экспрессии в зеленой ткани, включают множество промоторов, 10 которые осуществляют регуляцию генов, участвующих в фотосинтезе, и многие из них были клонированы как из однодольных, так и из двудольных растений. В одном варианте осуществления промотор, применимый в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой промотор РЕРС маиса из гена фосфоенолкарбоксилазы (Hudspeth & Grula, Plant Molec. Biol. 12:579-589 (1989)). 15 Неограничивающие примеры тканеспецифических промоторов включают промоторы, ассоциированные с генами, кодирующими запасные белки семян (такие как Р-конглицинин, круциферин, напин и фазеолин), зеин или белки масляных телец (такие как олеозин) или белки, вовлеченные в биосинтез жирных кислот (в том числе ацилпереносящий белок, стеароил-АСР-десатуразу и десатуразы жирных кислот (fad 220 1)), и другими нуклеиновыми кислотами, экспрессируемыми в ходе эмбрионального развития (например, Все4, см., например, Kridl et al. (1991) Seed Sci. Res. 1:209-219; a также патент ЕР № 255378). Тканеспецифические или тканепредпочтительные промоторы, применимые для экспрессии нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению у растений, в частности, маиса, включают без ограничения 25 промоторы, которые управляют экспрессией в корне, сердцевине стебля, листе или пыльце. Такие промоторы раскрыты, например, в WO 93/07278, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Другие неограничивающие примеры тканеспецифических или тканепредпочтительных промоторов, применимых в соответствии с настоящим изобретением, представляют 30 собой промотор гена rubisco хлопчатника, раскрытый в патенте США № 6040504; промотор гена сахарозосинтазы риса, раскрытый в патенте США № 5604121; промотор, специфический для корня, описанный de Framond (FEBS 290:103-106 (1991); в патенте ЕР 0452269, выданном Ciba-Geigy); промотор, специфический для стебля, описанный в патенте США № 5625136 (выданный Ciba-Geigy) и при этом он управляет экспрессией
гена trpA маиса; и промотор вируса желтой курчавости листьев цеструма, раскрытый в WO 01/73087.
Дополнительные примеры тканеспецифических/тканепредпочтительных промоторов включают без ограничения * <ис-элементы, специфические для корневых 5 волосков (RHE) (Kim et al. The Plant Cell 18:2958-2970 (2006)),специфические для корня промоторы RCc3 (Jeong et al. Plant Physiol. 153:185-197 (2010)) и RB7 (патент США № 5459252), промотор гена лектина (Lindstrom et al. (1990) Der. Genet. 11:160-167; и Vodkin (1983) Prog. Clin. Biol. Res. 138:87-98), промотор гена алкогольдегидрогеназы 1 кукурузы (Dennis et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12:3983-4000), гена S-аденозил-Ь-
10 метионинсинтетазы (SAMS) (Vander Mijnsbrugge et al. (1996) Plant and Cell Physiology, 37(8): 1108-1115), промотор генов светособирающего комплекса кукурузы (Bansal et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3654-3658), промотор гена белка теплового шока кукурузы (O'Dell et al. (1985) EMBO J. 5:451-458; и Rochester et al. (1986) EMBO J. 5:451-458), промотор гена малой субъединицы RuBP-карбоксилазы гороха (Cashmore,
15 "Nuclear genes encoding the small subunit of ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase" pp. 2939 в: Genetic Engineering of Plants (Hollaender ed., Plenum Press 1983; и Poulsen et al. (1986) Mol. Gen. Genet. 205:193-200), промотор гена маннопинсинтазы Ti-плазмиды (Langridge et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:3219-3223), промотор гена нопалинсинтазы Ti-плазмиды (Langridge et al. (1989), выше), промотор гена халкон-
20 изомеразы петунии (van Tunen et al. (1988) EMBO J. 7:1257-1263), промотор гена богатого глицином белка 1 фасоли (Keller et al. (1989) Genes Dev. 3:1639-1646), усеченный промотор 35S CaMV (O'Dell et al. (1985) Nature 313:810-812), промотор гена пататина картофеля (Wenzler et al. (1989) Plant Mol. Biol. 13:347-354), промотор из клеток корней (Yamamoto et al. (1990) Nucleic Acids Res. 18:7449), промотор гена зеина
25 маиса (Kriz et al. (1987) Mol. Gen. Genet. 207:90-98; Langridge et al. (1983) Cell 34:10151022; Reina et al. (1990) Nucleic Acids Res. 18:6425; Reina et al. (1990) Nucleic Acids Res. 18:7449; и Wandelt et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:2354), промотор гена глобулина 1 (Belanger et al. (1991) Genetics 129:863-872), cab-промотор гена а-тубулина (Sullivan et al. (1989) Mol. Gen. Genet. 215:431-440), промотор PEPCase (Hudspeth & Grula (1989)
30 Plant Mol. Biol. 12:579-589), промоторы, связанные с комплексами R-генов (Chandler et al. (1989) Plant Cell 1:1175-1183) и промоторы гена халкон-синтазы (Franken et al. (1991) EMBO J. 10:2605-2612).
Особенно применимым для экспрессии, специфической для семян, является промотор гена вицилина гороха (Czako et al. (1992) Mol. Gen. Genet. 235:33-40; а также
специфические для семян промоторы, раскрытые в патенте США № 5625136.
Промоторы, применимые для экспрессии в зрелых листьях, представляют собой
промоторы, которые включаются при наступлении старения, такие как промотор SAG
из Arabidopsis (Gan et al. (1995) Science 270:1986-1988).
5 Кроме того, можно применять промоторы, функционирующие в хлоропластах.
Неограничивающие примеры таких промоторов включают промотор 5'-UTR гена 9 бактериофага ТЗ и другие промоторы, раскрытые в патенте США № 7579516. Другие промоторы, применимые в соответствии с настоящим изобретением, включают без ограничения промотор S-E9 гена малой субъединицы RuBP-карбоксилазы и промотор
10 гена ингибитора трипсина Кунитца (Kti3).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения можно использовать индуцируемые промоторы. Так, например, промоторы, регулируемые химическими веществами, можно применять для модуляции экспрессии гена в организме путем применения экзогенного химического регулятора. Регуляция
15 экспрессии нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению посредством промоторов, регулируемых химическими веществами, обеспечивает синтез полипептидов по настоящему изобретению только тогда, когда, например, культурные растения обрабатывают индуцирующими химическими веществами. В зависимости от цели промотор может представлять собой промотор, индуцируемый
20 химическим веществом, где применение химического вещества индуцирует экспрессию гена, или промотор, подавляемый химическим веществом, где применение химического вещества подавляет экспрессию гена.
Индуцируемые химическими веществами промоторы, применимые для растений, известны из уровня техники и включают без ограничения промотор Ы2-1
25 маиса, который активируется антидотами бензолсульфонамидных гербицидов, промотор GST маиса, который активируется гидрофобными электрофильными соединениями, которые применяются в качестве предвсходовых гербицидов, и промотор PR-la табака, который активируется салициловой кислотой (например, системы PRla), стероид-зависимые промоторы (см., например, промотор,
30 индуцируемый глюкокортикоидами, в Schena et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 10421-10425 и McNellis et al. (1998) Plant J. 14, 247-257) и промоторы, индуцируемые тетрациклинами и подавляемые тетрациклинами (см., например, Gatz et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 227, 229-237 и патенты США №№ 5814618 и 5789156), промоторы системы Lac-penpeccopa, промоторы системы, индуцируемой медью, промоторы системы,
индуцируемой салицилатом (например, системы PRla), промоторы, индуцируемые глюкокортикоидами (Aoyama et al. (1997) Plant J. 11:605-612) и промоторы системы, индуцируемой экдизоном.
Другие неограничивающие примеры индуцируемых промоторов включают 5 промоторы, которые индуцируются ABA и тургорным давлением, промотор гена белка, связывающегося с ауксином (Schwob et al. (1993) Plant J. 4:423-432), промотор гена УДФ-глюкозофлавоноидгликозилтрансферазы (Ralston et al. (1988) Genetics 119:185197), промотор гена ингибитора протеиназы MPI (Cordero et al. (1994) Plant J. 6:141150) и промотор гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (Kohler et al. (1995) Plant
10 Mol. Biol. 29:1293-1298; Martinez et al. (1989) J. Mol. Biol. 208:551-565; и Quigley et al. (1989) J. Mol. Evol. 29:412-421). Также включены системы, индуцируемые бензолсульфонамидом (патент США № 5364780) и индуцируемые спиртами (публикации международных патентных заявок №№ WO 97/06269 и WO 97/06268), и промоторы гена глутатион-Б-трансферазы. Подобным образом можно применять
15 любой индуцируемый промотор, описанный в Gatz (1996) Current Opinion Biotechnol. 7:168-172 и Gatz (1997) Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48:89-108. Другие промоторы, индуцируемые химическими веществами, применимые для управления экспрессией нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению у растений, раскрыты в патенте США № 5614395, включенном в данный документ
20 посредством ссылки во всей своей полноте. Химическая индукция экспрессии генов также подробно изложена в опубликованной заявке ЕР 0332104 (выданной Ciba-Geigy) и в патенте США № 5614395. В некоторых вариантах осуществления промотор для химической индукции может представлять собой промотор PR-1а табака.
В некоторых вариантах осуществления промоторы, применимые для
25 водорослей, включают без ограничения промотор гена 1 малой субъединицы RubisCo (PrbcSl), промотор гена актина (Pactin), промотор гена нитратредуктазы (Рпг) и промотор гена 1 карбоангидразы с внутренними повторами (Pdcal) (См., Walker et al. Plant Cell Rep. 23:727-735 (2005); Li et al. Gene 403:132-142 (2007); Li et al. Mol Biol. Rep. 37:1143-1154 (2010)), промотор о70 типа гена рРНК пластид (Prrn), промотор гена
30 psbA (кодирующего белок D1 реакционного центра фотосистемы II) (PpsbA), промотор гена psbD (кодирующего белок D2 реакционного центра фотосистемы II) (PpsbD), промотор гена psaA (кодирующего апопротеин фотосистемы I) (PpsaA), промотор гена субъединицы альфа АТФ-синтазы (PatpA) и промотор гена большой субъединицы RuBisCo (PrbcL), а также любую их комбинацию (см., например, De Cosa et al. Nat.
Biotechnol. 19:71-74 (2001); Daniell et al. BMC Biotechnol. 9:33 (2009); Muto et al. BMC Biotechnol. 9:26 (2009); Surzycki et al. Biologicals 37:133-138 (2009)).
В некоторых вариантах осуществления промоторы, применимые для бактерий и дрожжей, включают без ограничения конститутивный промотор (например, 1рр (ген 5 липопротеина)) и/или промотор, индуцируемый оксидативным стрессом (например, промотор гена супероксиддисмутазы или промотор гена каталазы).
Так, в некоторых вариантах осуществления промотор, применимый для дрожжей, может включать без ограничения промотор гена фосфоглицераткиназы (PGK), гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAP), гена
10 триозофосфатизомеразы (ТРГ), промотор из галактозного регулона (GAL1, GAL10), гена
алкогольдегидрогеназы (ADH1, ADH2), гена фосфатазы (РН05), гена металлотионена,
активируемого медью (CUP1), промотор, связанный с оператором MFal, PGK/a2,
оператором TPI/a2, GAP/GAL, PGK/GAL, GAP/ADH2, GAP/PH05, изо-1-цитохром
с/глюкокортикоид-отвечающим элементом (CYC/GRE),
15 фосфоглицераткиназа/андроген-отвечающим элементом (PGK/ARE), фактором элонгации транскрипции EF-la (TEF1), промотор гена триозофосфатдегидрогеназы (TDH3), фосфоглицераткиназы 1 (PGK1), пируваткиназы 1 (PYK1) и/или транспортера гексоз (НХТ7) (См., Romanos et al. Yeast 8:423-488 (1992); и Partow et al. Yeast 27:955964 (2010)).
20 В некоторых вариантах осуществления промотор, применимый для бактерий,
может включать без ограничения промотор, индуцируемый L-арабинозой (araBAD, PBAD), любой /ас-промотор, промотор, индуцируемый L-рамнозой (rhaPBAD), промотор РНК-полимеразы T7, ^гс-промотор, toc-промотор, промотор фага лямбда (pi, PL-9G-50), промотор, индуцируемый ангидротетрациклином (tetA), trp, Ipp, phoA, recA, proll, cst-1,
25 cadA, nar, Ipp-lac, cspA, Tl-lac оператор, T3-/ac оператор, гена 32 фага T4 , T5-/ac оператор, nprM-lac оператор, Vhb, гена белка А, промоторы, подобные промоторам рода коринебактерий Е. coli, thr, hom, промотор гена дифтерийного токсина, sig A, sig В, nusG, SoxS, katb, а-амилазы (Pamy), Puns, ?43 (содержит два перекрывающихся сайта распознавания фактора о РНК-полимеразы, GА, оВ)4 Ptms, ?43, rplK-rplA, промотор
30 гена ферредоксина и/или промотор гена ксилозы. (См., К. Terpe Appl. Microbiol, Biotechnol. 72:211-222 (2006); Hannig et al. Trends in Biotechnology 16:54-60 (1998); и Srivastava et al., Protein Expr Purif40:221-229 (2005)).
Применяемое в данном документе выражение "кассета экспрессии" означает молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную
последовательность, кодирующую модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению, где указанная нуклеотидная последовательность функционально ассоциирована по меньшей мере с контрольной последовательностью (например, промотором). Таким образом, в некоторых аспектах настоящего 5 изобретения предусматриваются кассеты экспрессии, сконструированные для экспрессии нуклеотидных последовательностей, кодирующих модифицированные полипептиды Vip3 по настоящему изобретению.
Кассета экспрессии, содержащая представляющую интерес нуклеотидную последовательность может быть химерной, что означает, что по меньшей мере один из
10 ее компонентов является гетерологичным по отношению по меньшей мере к одному из ее остальных компонентов. Кассета экспрессии также может представлять собой таковую, которая встречается в природе, но которая была получена в рекомбинантной форме, применимой для гетерологичной экспрессии.
В дополнение к промоторам, функционально связанным с нуклеотидными
15 последовательностями по настоящему изобретению, кассета экспрессии по настоящему изобретению может также содержать другие регуляторные последовательности. Таким образом, кассета экспрессии также необязательно может содержать участок терминации транскрипции и/или трансляции (т. е., участок терминации), функционирующий в выбранной клетке-хозяине. Разнообразные терминаторы
20 транскрипции доступны для применения в кассетах экспрессии, и они отвечают за терминацию транскрипции за пределами представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательности и правильное полиаденилирование мРНК. Участок терминации может быть нативным по отношению к участку инициации транскрипции, может быть нативным по отношению к функционально связанной представляющей
25 интерес нуклеотидной последовательности, может быть нативным по отношению к клетке-хозяину или может быть получен от другого источника (т. е, быть чужеродным или гетерологичным по отношению к промотору, представляющей интерес нуклеотидной последовательности, клетке-хозяину или любой их комбинации). Соответствующие терминаторы транскрипции представляют собой таковые, которые,
30 как известно, функционируют в представляющей интерес клетке-хозяине. В случае растений такие терминаторы могут включать без ограничения терминатор 3 5 S САМ V, терминатор гена tml, терминатор гена нопалинсинтазы и терминатор гена rbcs Е9 гороха.
Было обнаружено, что многочисленные нуклеотидные последовательности усиливают экспрессию генов в пределах единицы транскрипции и эти последовательности можно применять в сочетании с кассетами экспрессии по настоящему изобретению для повышения уровня экспрессии представляющего интерес 5 полинуклеотида в клетке-хозяине.
Было показано, что различные интронные последовательности усиливают экспрессию, в частности, в клетках однодольных растений. Например, интронные последовательности обычно включают в векторы для трансформации растений, как правило, в пределах нетранслируемой лидерной последовательности.
10 Как известно, ряд нетранслируемых лидерных последовательностей,
полученных от вирусов, усиливают экспрессию, и они охватываются данным документом. В частности, лидерные последовательности вируса табачной мозаики (TMV, "Q-последовательность"), вируса хлоротической пятнистости маиса (MCMV) и вируса мозаики люцерны (AMV) продемонстрировали эффективность в отношении
15 усиления экспрессии (см., например, Gallie et al. (1987) Nucleic Acids Res. 15:8693-8711; Skuzeski et al. (1990) Plant Molec. Biol. 15:65-79). Другие лидерные последовательности, известные из уровня техники, включают без ограничения лидерные последовательности пикорнавирусов, например, лидерную последовательность EMCV (5'-некодирующий участок вируса энцефаломиокардита) (Elroy-Stein et al. (1989) Proc.
20 Natl. Acad. Sci. USA 86:6126-6130); лидерные последовательности потивирусов, например, лидерную последовательность TEV (вируса гравировки табака) (Allison et al. (1986) Virology 154:9-20; и Gallie et al. (1995) Gene 165:233-238); лидерную последовательность MDMV (вируса карликовой мозаики маиса; Allison et al. (1986) Virology 154:9-20); лидерную последовательность белка, связывающего тяжелые цепи
25 иммуноглобулина человека (BiP) (Macejak and Samow (1991) Nature 353:90-94); нетранслируемую лидерную последовательность из мРНК белка оболочки вируса мозаики люцерны (AMV РНК 4) (Jobling et al. (1987) Nature 325:622-625); лидерную последовательность вируса табачной мозаики (TMV; Gallie et al. (1987) Nucleic Acids Res. 15:3257-3273; Gallie et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16:883-893; Gallie et al. (1992)
30 Nucleic Acids Res. 20:4631-4638); и лидерную последовательность вируса хлоротической пятнистости маиса (MCMV; Lommel et al. (1991) Virology 81:382-385). Также см. Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiology 84:965-968.
Кассета экспрессии также может включать нуклеотидную последовательность селектируемого маркера, который можно применять для отбора трансформированной
клетки-хозяина. Применяемое в данном документе выражение "селектируемый маркер" означает нуклеотидную последовательность, которая при экспрессии придает отличительный фенотип клетке-хозяину, экспрессирующей маркер и, таким образом, позволяет отличать такие трансформированные клетки от тех, которые не имеют 5 маркера. Такая нуклеотидная последовательность может кодировать либо селектируемый, либо подвергаемый скринингу маркер в зависимости от того, придает ли маркер признак, по которому можно провести отбор с помощью химических средств, например, с помощью селективного средства (например, антибиотика и т. п.), или от того, является ли маркер просто признаком, который можно идентифицировать
10 посредством наблюдения или тестирования, например, путем скрининга (например, на основе флюоресценции). Разумеется, существует много примеров подходящих селектируемых маркеров, которые известны из уровня техники и могут применяться в кассетах экспрессии, описываемых в данном документе.
В дополнение к кассетам экспрессии, молекулы нуклеиновых кислот и
15 нуклеотидные последовательности, описываемые в данном документе, можно применять вместе с векторами. Выражение "вектор" относится к композиции для переноса, доставки или введения нуклеиновой кислоты (или нуклеиновых кислот) в клетку. Вектор содержит молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную(нуклеотидные) последовательность(последовательности),
20 подлежащую(подлежащие) переносу, доставке или введению. Векторы для применения в трансформации организмов-хозяев хорошо известны из уровня техники. Неограничивающие примеры общих классов векторов включают без ограничения вирусный вектор, плазмидный вектор, фаговый вектор, фагмидный вектор, космидный вектор, фосмидный вектор, искусственную хромосому или бинарный вектор
25 Agrobacterium в двухнитевой или однонитевой линейной или кольцевой форме, который может быть самопередающимся или мобилизуемым, или не быть таковым. С помощью вектора, определенного в данном документе, можно трансформировать прокариотического или эукариотического хозяина либо путем встраивания в клеточный геном, либо за счет существования его внехромосомно (например,
30 автономно реплицирующаяся плазмида с точкой начала репликации). Кроме того, включены челночные векторы, с помощью которых предназначенный носитель ДНК может, естественным или спланированным образом, реплицироваться в двух различных организмах-хозяевах, которые могут быть выбраны из актиномицетов и родственных видов, бактерий и эукариот (например, высших растений,
млекопитающих, грибов, в том числе дрожжей). В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота в векторе находится под контролем соответствующего промотора или других регуляторных элементов транскрипции в клетке-хозяине и функционально связана с ними. Вектор может представлять собой бифункциональный вектор 5 экспрессии, который функционирует во многих хозяевах. Что касается геномной ДНК, она может содержать свой собственный промотор или другие регуляторные элементы, а что касается кДНК, она может находиться под контролем соответствующего промотора или других регуляторных элементов экспрессии в клетке-хозяине. Соответственно, молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и/или
10 кассеты экспрессии могут содержаться в векторах, описанных в данном документе, и они известны из уровня техники.
В некоторых вариантах осуществления желательным может быть направление модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему изобретению в конкретные части клетки, как например, хлоропласт, клеточную стенку, митохондрию и т. п.
15 Нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнальный пептид, может быть функционально связана с 5'- или 3'- концом гетерологичной нуклеотидной последовательности или молекулы нуклеиновой кислоты.
Известно, что в растениях имеют место различные механизмы направления генных продуктов, и последовательности, регулирующие функционирование таких
20 механизмов, описаны довольно подробно. Например, направление генных продуктов в хлоропласт регулируется сигнальной последовательностью, найденной на амино-конце ряда белков, которая отщепляется в процессе доставки в хлоропласт с получением зрелого белка (см., например, Comai et al. (1988) J. Biol. Chem. 263:15104-15109). Эти сигнальные последовательности могут быть слиты с продуктами гетерологичных генов
25 для обеспечения доставки гетерологичных продуктов в хлоропласт (van den Broeck et al. (1985) Nature 313:358-363). ДНК, кодирующая соответствующие сигнальные последовательности, может быть выделена из 5'-конца молекул кДНК, кодирующих белок RUBISCO, белок CAB, фермент синтазу EPSP, белок GS2 и ряд других белков, известных своей ядерной локализацией. Также см. раздел под названием "Экспрессия с
30 направлением в хлоропласт" в примере 37 патента США № 5639949.
Вышеописанные направляющие последовательности можно использовать не только в сочетании с их промоторами, но также в сочетании с гетерологичными промоторами. Применение промоторов, которые являются гетерологичными по отношению к направляющей последовательности, предусматривает не только
возможность направления последовательности, но также предусматривает паттерн экспрессии, отличный от такого в случае промотора, от которого изначально происходит направляющий сигнал.
Так, сигнальные пептиды (и направляющие нуклеотидные последовательности, 5 кодирующие их) хорошо известны из уровня техники и могут быть найдены в общедоступных базах данных, например, "Signal Peptide Website: An Information Platform for Signal Sequences and Signal Peptides." (www.signalpeptide.de); the "Signal Peptide Database" (proline.bic.nus.edu.sg/spdb/index.html) (Choo et al., BMC Bioinformatics 6:249 (2005)(доступный по адресу www.biomedcentral.com/1471-2105/6/249/abstract);
10 ChloroP (www.cbs.dtu.dk/services/ChloroP/; для определения наличия транзитных пептидов хлоропласта (сТР) в белковых последовательностях и расположения потенциальных сайтов расщепления сТР); LipoP (www.cbs.dtu.dk/services/LipoP/; для определения липопротеинов и сигнальных пептидов в грам-отрицательных бактериях); MITOPROT (ihg2.helmholtz-muenchen.de/ihg/mitoprot.html; для определения
15 направляющих в митохондрию последовательностей); PlasMit (gecco.org.chemie.uni-firankfurt.de/plasmit/index.html; для определения митохондриальных транзитных пептидов в Plasmodium falciparum); Predotar (urgi.versailles.inra.fr/predotar/predotar.html; для определения направляющих в митохондрию и пластиды последовательностей); PTS1 (mendel.imp.ac.at/mendeljsp/sat/ptsl/PTSlpredictor.jsp; для определения белков,
20 содержащих направляющий в пероксисому сигнал 1); SignalP (www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/; для определения наличия и расположения сайтов расщепления сигнального пептида в аминокислотных последовательностях из разных организмов: грам-положительных прокариот, грам-отрицательных прокариот и эукариот).
25 Так, например, с целью локализации в пластиде можно использовать
транзитный пептид из ферредоксин: NADP+оксидоредуктазы (FNR) пластид шпината, раскрытый в Jansen et al. (1988) Current Genetics 13:517-522. В частности, можно применять последовательность, варьирующую в пределах нуклеотидов -171-165 последовательности кДНК, раскрытой в данном документе, которая содержит 5'-
30 нетранслируемый участок, а также последовательность, кодирующую транзитный пептид. Другим примером транзитного пептида является воскообразный белок маиса, включающий первых 34 аминокислотных остатка зрелого воскообразного белка (Klosgen et al. (1989) Mol. Gen. Genet. 217:155-161). Допускается также применение данного транзитного пептида без первых 34 аминокислот зрелого белка. Кроме того,
можно применять сигнальные пептиды малой субъединицы рибулозобисфосфаткарбоксилазы (Wolter etal. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:846850; Nawrath et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:12760-12764), NADP-малатдегидрогеназы (Galiardo et al. (1995) Planta 197:324-332), глутатионредуктазы 5 (Creissen et al. (1995) Plant J. 8:167-175) и/или белка Rl (Lorberth et al. (1998) Nature Biotechnology 16:473-477).
"Введение", "вводить", "введенный" (и их грамматические варианты) в контексте представляющего интерес полинуклеотида означает предоставление представляющей интерес нуклеотидной последовательности организму-хозяину или
10 клетке указанного организма (например, клетке-хозяину) таким образом, что нуклеотидная последовательность попадает внутрь клетки. Если введению подлежит более чем одна нуклеотидная последовательность, то такие нуклеотидные последовательности можно собрать в виде части одной конструкции на основе полинуклеотида или конструкции нуклеиновой кислоты или в виде отдельных
15 конструкций на основе полинуклеотидов или конструкций нуклеиновой кислоты и можно расположить в одних и тех же или различных экспрессирующих конструкциях или векторах для трансформации. Соответственно, эти полинуклеотиды можно вводить в клетки во время одного события трансформации, во время отдельных событий трансформации/трансфекции, или, например, они могут быть встроены в организм с
20 применением традиционных протоколов селекции (например, скрещиваний). Так, в некоторых аспектах настоящего изобретения одну или несколько конструкций нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению (например, молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению) можно вводить в
25 организм-хозяин или клетку указанного организма-хозяина.
Термин "трансформация" или "трансфекция", применяемый в данном документе, относится к введению гетерологичной нуклеиновой кислоты в клетку. Трансформация клетки может быть стабильной или транзиентной. Так, в некоторых вариантах осуществления клетку-хозяина или организм-хозяина стабильно
30 трансформируют молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления клетку-хозяина или организм-хозяина транзиентно трансформируют молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению.
"Транзиентная трансформация" применительно к полинуклеотиду означает, что полинуклеотид вводят в клетку, и он не интегрируется в геном клетки.
Термин "стабильная трансформация" или "стабильно трансформированный", применяемый в данном документе, означает, что молекулу нуклеиновой кислоты 5 вводят (например, "стабильное введение" или "стабильно введенный") в клетку, и она интегрируется в геном клетки. В связи с этим интегрированная молекула нуклеиновой кислоты способна наследоваться потомством, более конкретно, потомством нескольких последовательных поколений. Термин "геном", применяемый в данном документе, также включает ядерный и пластидный геном, и, следовательно, предусматривается
10 интеграция нуклеиновой кислоты, например, в геном хлоропласта или митохондрии. Термин "стабильная трансформация", применяемый в данном документе, может также относиться к трансгену, который поддерживается внехромосомно, например в виде минихромосомы или плазмиды.
Транзиентную трансформацию можно выявить, например, с помощью
15 твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) или вестерн-блоттинга, с помощью которых можно выявить присутствие пептида или полипептида, кодируемого одним или несколькими трансгенами, введенными в организм. Стабильная трансформация клетки может быть выявлена, например, с помощью анализа на основе саузерн-блот-гибридизации геномной ДНК клетки с последовательностями
20 нуклеиновых кислот, которые специфически гибридизируются с нуклеотидной последовательностью трансгена, введенного в организм (например, растение, млекопитающее, насекомое, архебактерии, бактерию и т. д.). Стабильную трансформацию клетки можно выявить, например, с помощью анализа на основе нозерн-блот-гибридизации РНК клетки с последовательностями нуклеиновых кислот,
25 которые специфически гибридизируются с нуклеотидной последовательностью трансгена, введенного в растение или другой организм. Стабильную трансформацию клетки также можно выявить, например, с помощью полимеразной цепной реакции (ПНР) или других реакций амплификации, хорошо известных в данной области техники, в которых используются специфические последовательности праймеров,
30 которые гибридизируются с целевой последовательностью (целевыми последовательностями) трансгена, что приводит в результате к амплификации последовательности трансгена, которую можно выявить в соответствии со стандартными способами. Трансформацию также можно выявить с помощью
протоколов прямого секвенирования и/или гибридизации, хорошо известных в данной области техники.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты, нуклеотидные последовательности, конструкции, кассеты экспрессии могут 5 быть экспрессированы транзиентно и/или они могут быть стабильно встроены в геном организма-хозяина.
Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты/полинуклеотид по настоящему изобретению могут быть введены в клетку с помощью любого способа, известного специалистам в данной области. В некоторых вариантах осуществления настоящего
10 изобретения трансформация клетки предусматривает трансформацию ядра. В некоторых вариантах осуществления трансформация клетки предусматривает трансформацию пластид (например, трансформацию хлоропластов). В некоторых вариантах осуществления молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты/полинуклеотид по настоящему изобретению могут быть введены в клетку
15 посредством традиционных методик селекции (например, скрещивания).
Процедуры трансформации как эукариотических, так и прокариотических организмов хорошо известны и являются общепринятыми в данной области техники и они описаны в литературе во всех отношениях (См., например, Jiang et al. 2013. Nat. Biotechnol. 31:233-239; Ran et al. Nature Protocols 8:2281-2308 (2013))
20 Нуклеотидную последовательность, таким образом, можно вводить в организм-
хозяин или его клетку любым из ряда способов, хорошо известных в данной области техники. Способы согласно настоящему изобретению не зависят от конкретного способа введения одной или нескольких нуклеотидных последовательностей в организм, если только они попадают во внутреннюю часть по меньшей мере одной
25 клетки организма. Если введению подлежит более чем одна нуклеотидная последовательность, то их можно собрать в виде части одной конструкции нуклеиновой кислоты или в виде отдельных конструкций нуклеиновой кислоты и можно расположить в одной и той же или различных конструкциях нуклеиновой кислоты. Соответственно, нуклеотидные последовательности можно вводить в
30 представляющую интерес клетку в ходе одного события трансформации или отдельных событий трансформации, или, в качестве альтернативы, при необходимости, нуклеотидная последовательность может быть встроена в растение как часть протокола селекции.
В некоторых вариантах осуществления конструкцию нуклеиновой кислоты, молекулу нуклеиновой кислоты и/или нуклеотидную последовательность по настоящему изобретению можно вводить в клетку организма-хозяина. Можно использовать любую клетку/организм-хозяин, для которой применимо настоящее 5 изобретение. Иллюстративные организмы-хозяева включают растение, бактерию, архебактерию, вирус, животное (например, насекомое) и/или гриб (например, дрожжи).
Применяемое в данном документе выражение "растение" означает любое растение и включает, таким образом, например, покрытосеменные растения, в том числе как однодольные, так и двудольные растения, голосеменные растения, мхи,
10 папоротники и/или родственные папоротникам растения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретение растение является семенным растением. Кроме того, "растение" по настоящему изобретению является любым растением на любой стадии развития.
Применяемое в данном документе выражение "часть растения" или
15 "растительный материал" включает без ограничения зародыши, пыльцу, семязачатки, семена, листья, стебли, корни, цветки или части цветков, ветви, плоды, зерна, колосья, початки, пленки, цветоножки, корни, корневые кончики, пыльники, пыльцу, яйцеклетки, зиготы, черенки, растительные клетки, в том числе растительные клетки, которые являются интактными в растениях и/или частях растений, протопласты
20 растений, растительные ткани, тканевые культуры растительных клеток, каллюсы растений, скопления растительного материала или любую другую часть или продукт растения. Дополнительно, применяемое в данном документе выражение "растительная клетка" относится к структурной и физиологической единице растения, содержащей протопласт и клеточную стенку. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления
25 растительная клетка по настоящему изобретению может находиться в виде отдельной выделенной клетки, или может являться культивируемой клеткой, или может являться частью более высокоорганизованной единицы, такой как, например, растительная ткань или орган растения.
"Протопласт" является выделенной растительной клеткой, не имеющей 30 клеточной стенки или имеющей лишь части клеточной стенки.
"Культура растительных клеток" означает культуры единиц растения, таких как, например, протопласты, клетки в культуре клеток, клетки в растительных тканях, пыльца, пыльцевые трубки, семязачатки, зародышевые мешки, зиготы и зародыши на различных стадиях развития.
Применяемое в данном документе выражение "орган растения" означает отдельную и визуально структурированную и дифференцированную часть растения, такую как корень, стебель, лист, цветочная почка или зародыш.
Выражение "растительная ткань", применяемое в данном документе, означает 5 группу растительных клеток, организованных в структурную и функциональную единицу. Предусматривается любая ткань растения in planta или в культуре. Данное выражение включает без ограничения целые растения, органы растений, семена растений, тканевую культуру и любые группы растительных клеток, организованных в структурные и/или функциональные единицы. Применение данного выражения в 10 сочетании с любым специфическим типом растительной ткани, приведенным выше или иным образом охваченным данным определением, или без такового, не предназначено для исключения любого другого типа растительной ткани.
Настоящее изобретение относится к модифицированным вегетативным инсектицидным белкам (Vip), содержащим их композициям и способам их применения. 15 В некоторых вариантах осуществления полипептид Vip представляет собой полипептид Vip3.
Полипептиды Vip3 и кодирующие их нуклеиновые кислоты известны и описаны, например, в J. Estruch et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 5389-5394 (May 1996); J. Liu et al., Letters in Applied Microbiology 45, 432-438 (2007); G. Warren, патенте
20 США № 5990383; Z. Shen et al., патенте США № 7378493; P. Miles et al., патенте США №7244820; патенте США № 5877012; патенте США №6107279, патенте США №6137033, и патенте США №6291156, раскрытие каждого из которых включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте. Названия белков Vip, присвоенные выявившими соответствующие белки исследовательскими группами,
25 отличаются. Однако недавно была разработана стандартная номенклатура и ее можно найти в базе данных о токсинах Bacillus thuringiensis (www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html). В настоящем раскрытии, в частности, приводятся примеры модификаций полипептидов Vip3A, Vip3B, Vip3C и Vip3D, однако настоящее изобретение может быть осуществлено для любого
30 полипептида Vip (например, любого полипептида Vip3), известного в настоящее время или полипептида, который будет выявлен позднее.
Соответственно, "полипептид Vip3" в контексте настоящего изобретения означает любой вегетативный инсектицидный белок (VIP), идентифицированный в настоящее время или который будет идентифицирован позднее, который является
представителем класса Vip3, включая без ограничения, например, Vip3A, Vip3B, Vip3C, Vip3D и другие гомологи. В некоторых вариантах осуществления полипептид Vip3, применимый в соответствии с настоящим изобретением, может быть мутантным Vip3, который встречается в природе или не встречается в природе. Некоторые структурные характеристики, по которым идентифицируют белок как принадлежащий к классу белков Vip3, включают 1) размер, составляющий приблизительно 80-88 кДа и уменьшающийся в результате протеолитической обработки насекомыми или трипсином до размера токсичной сердцевины, составляющего приблизительно 62-66 кДа (Lee et al. 2003. Appl. Environ. Microbiol. 69:4648-4657); и 2) высококонсервативный N-концевой сигнал секреции, который в естественных условиях не обрабатывается в ходе секреции в В. thuringiensis. Неограничивающими примерами представителей класса Vip3, включающего таковые, упомянутые ранее, а также их соответствующие номера доступа в GenBank, номера в патентах или патентных публикациях США, являются Vip3Aal (ААС37036), Vip3Aa2 (ААС37037), Vip3Aa3 (патент США 6137033), Vip3Aa4 (AAR81079), Vip3Aa5 (AAR81080), Vip3Aa6 (AAR81081), Vip3Aa7 (AAK95326), Vip3Aa8 (AAK97481), Vip3Aa9 (CAA76665), Vip3Aal0 (AAN60738), Vip3Aall (AAR36859), Vip3Aal2 (AAM22456), Vip3Aal3 (AAL69542), Vip3Aal4 (AAQ12340), Vip3Aal5 (AAP51131), Vip3Aal6 (AAW65132), Vip3Aal7 (патент США 6603063), Vip3Aal8 (AAX49395), Vip3Aal9 (DQ241674), Vip3Aal9 (DQ539887), Vip3Aa20 (DQ539888), Vip3Aa21 (ABD84410), Vip3Aa22 (AAY41427), Vip3Aa23 (AAY41428), Vip3Aa24 (BI 880913), Vip3Aa25 (EF608501), Vip3Aa26 (EU294496), Vip3Aa27 (EU332167), Vip3Aa28 (FJ494817), Vip3Aa29 (FJ626674), Vip3Aa30 (FJ626675), Vip3Aa31 (FJ626676), Vip3Aa32 (FJ626677), Vip3Aa33 (GU073128), Vip3Aa34 (GU073129), Vip3Aa35 (GU733921), Vip3Aa36 (GU951510), Vip3Aa37 (HM132041), Vip3Aa38 (HM117632), Vip3Aa39 (HM117631), Vip3Aa40 (HM132042), Vip3Aa41 (HM132043), Vip3Aa42 (HQ587048), Vip3Aa43 (HQ594534), Vip3Aa44 (HQ650163), Vip3Abl (AAR40284), Vip3Ab2 (AAY88247), Vip3Acl (публикация заявки на патент США 20040128716), Vip3Adl (публикация заявки на патент США 20040128716), Vip3Ad2 (CAI43276), Vip3Ael (CAI43277), Vip3Afl (патент США 7378493), Vip3Af2 (ADN08753), Vip3Af3 (НМ117634), Vip3Agl (ADN08758), Vip3Ag2 (FJ556803), Vip3Ag3 (HM117633), Vip3Ag4 (HQ414237), Vip3Ag5 (HQ542193), Vip3Ahl (DQ832323), Vip3Bal (AAV70653), Vip3Ba2 (HM117635), Vip3Bbl (патент США 7378493), Vip3Bb2 (ABO30520), Vip3C (Palma et al. Appl. Environ Microbiol78(19):7163-7165 (2012)) и/или Vip3Bb3 (ADI48120).
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что модифицирование полипептида Vip3 таким образом, чтобы он содержал гетерологичный углевод-связывающий модуль (СВМ), дает в результате модифицированный полипептид Vip3 с измененными характеристиками, в том числе 5 измененной токсичностью по отношению к вредителям растений, по сравнению с этим же полипептидом Vip3, который не является модифицированным с содержанием указанного гетерологичного СВМ (т. е., эталонным Vip3).
Соответственно, в одном аспекте настоящего изобретения предусматривается модифицированный полипептид Vip3 содержит, состоит главном образом из или
10 состоит из гетерологичного углевод-связывающего модуля (СВМ). В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip 3 может содержать, состоять главным образом из или состоять из двух или больше СВМ, которые могут быть одинаковыми или различными, необязательно расположенных вместе. В некоторых вариантах осуществления на гетерологичный СВМ можно замещать весь
15 или часть домена III полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 содержит весь или часть домена I и/или домена II полипептида Vip3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 может содержать, состоять главным образом из или состоять из всего или части домена IV полипептида Vip3 и/или весь или часть домена IV полипептида
20 Vip3 может отсутствовать. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 содержит, состоит главным образом из или состоит из, в направлении от амино-конца к карбокси-концу, всего или части домена I полипептида Vip3, всего или части домена II полипептида Vip3, гетерологичного СВМ и, необязательно, всего или части домена IV полипептида Vip3.
25 В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по
настоящему изобретению содержит, состоит главным образом из или состоит из всей или части любой из SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6 или аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 70% идентичной указанной части SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID
30 NO:4 или SEQ ID NO:6
В некоторых вариантах осуществления домен III полипептида Vip3 содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислот 518-684 указанного полипептида Vip3. В конкретных вариантах осуществления домен III содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислот 542-667 SEQ ID NO: 1-3 или
соответствующей аминокислотной последовательности другого полипептида Vip3,
аминокислот 550-675 SEQ ID NO:4 или соответствующей аминокислотной
последовательности другого полипептида Vip3 или аминокислот 552-667 SEQ ID NO:6
или соответствующей аминокислотной последовательности другого полипептида Vip3.
5 "Соответствующий" в контексте настоящего изобретения означает, что если
аминокислотные последовательные определенных белков выровнены друг с другом, аминокислоты, которые "соответствуют" определенным перечисленным положениям согласно настоящему изобретению, являются такими, которые выравниваются с этими положениями в эталонной последовательности, но не обязательно находятся именно в
10 этих числовых положениях относительно конкретной аминокислотной последовательности по настоящему изобретению.
В некоторых вариантах осуществления домен III полипептида Vip3 содержит, состоит главным образом из или состоит из:
(а) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:l;
15 (b) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:2;
(c) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:3;
(d) аминокислоты 550-675 SEQ ID NO:4;
(e) аминокислоты 552-677 SEQ ID NO:6;
(f) соответствующей аминокислотной последовательности другого 20 полипептида Vip3, описанного в данном документе; или
(g) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на
приблизительно 70% идентичной любой из (a)-(f), выше.
Гетерологичный СВМ может быть встроен в полипептид Vip3, например, посредством вставки или замещения части полипептида Vip3. В вариантах
25 осуществления, в которых СВМ замещает часть полипептида Vip3, часть полипептида Vip3, которую заменяют гетерологичным СВМ, может содержать весь домен III, часть домена III (например, с меньшим количеством аминокислотных остатков, чем полный домен III) или может быть частью полипептида Vip3, большей по размеру чем полный домен III (например, может продлеваться в N-концевом направлении за пределами
30 домена III и в сторону или внутрь домена II и/или в С-концевом направлении за пределами домена III и в сторону или внутрь домена IV). Таким образом, например, если домен III полипептида Vip3 заменяется или замещается гетерологичным СВМ, один или несколько аминокислотных остатков (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, или больше остатков) полипептида Vip3, со стороны
амино-конца и/или со стороны карбокси-конца домена III, также могут быть включены в замещение. Таким образом, например, если домен III содержит аминокислоты 542667 SEQ ID NO:l, замещение может включать один или несколько аминокислотных остатков 500-541 (например, аминокислота 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 5 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541 или любой диапазон в этих пределах) со стороны амино-конца и/или одна или несколько аминокислот 668-700 (например, аминокислота 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 700
10 или любой диапазон в этих пределах) со стороны карбокси-конца указанного домена III в любой комбинации. В некоторых вариантах осуществления замещение может содержать, состоять главным образом из или состоять из части домена III, которая на приблизительно один - приблизительно четыре (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных остатка короче, чем полный домен III на С-конце и/или N-конце. В
15 некоторых вариантах осуществления замещение может содержать, состоять главным образом из или состоять из домена III и на дополнительных от одного до приблизительно десяти (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) аминокислотных остатков больше, чем полный домен III на С-конце и/или N-конце.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере часть домена III Vip3,
20 описанного в данном документе, может быть замещена СВМ. Так, например, если домен III составляют аминокислоты 550-675 SEQ ID NO:4, замещение может включать меньшее количество, а не все из аминокислотных остатков 550-675, с сохранением в полипептиде Vip3 одного или нескольких из аминокислотных остатков (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или больше остатков и т. д.) со
25 стороны амино-конца и/или со стороны карбокси-конца домена III SEQ ID NO:4 (например, аминокислотных остатков 550-675). В качестве примера, в случае SEQ ID NO:4 часть домена III, которая замещается, может представлять собой полноразмерную аминокислотную последовательность из остатков 550-675, или она может представлять собой, например, остатки 551-675, 552-675, 553-675, 554-675, 551-674, 551-673, 551-672,
30 550-673, 555-670, 560-675, 560-670 и т. д.
Таким образом, участок полипептида Vip3, который замещается гетерологичным СВМ, может представлять собой любую комбинацию из всего домена III, или большего и/или меньшего количества аминокислотных остатков на карбокси-конце и/или амино-конце домена III полипептида Vip3.
В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 70% (например, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 5 100%) сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ
10 ID N0:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID N0:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID
15 NO:54, SEQ ID NO:55 или SEQ ID NO:56 (т. e SEQ ID NO:l-23 или SEQ ID NO:33-56). В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 75% сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56.
20 В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 80% сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по
25 настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 85% сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 90%
30 сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 95% сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной
последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56.
В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется по меньшей мере приблизительно 90 -приблизительно 100% сходством или идентичностью аминокислотной 5 последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению характеризуется 100% сходством или идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или
10 SEQ ID N0:33-56
В типичных вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению может представлять собой "улучшенный полипептид Vip3" по сравнению с его эталонным исходным полипептидом Vip3 или полипептидом Vip3 дикого типа, в том смысле, что он проявляет одну или несколько из следующих
15 характеристик: 1) повышенная эффективность в отношении целевого вредителя (более высокая специфическая активность) и/или повышенные темпы уничтожения (более быстрое уничтожение при сопоставимом уровне белка); 2) расширенный или суженный спектр целевых вредителей; 3) сниженная склонность к развитию устойчивости у целевых вредителей; 4) повышенные уровни экспрессии в трансгенном хозяине или
20 клетке-хозяине; 5) повышенная устойчивость к расщеплению протеазами насекомого (повышенная стабильность в кишечнике целевого насекомого); 6) повышенная стабильность в окружающей среде и 7) сниженная токсичность в отношении полезных насекомых, нецелевых вредителей и растений.
Таким образом, в контексте настоящего изобретения выражения "улучшает
25 пестицидную (например, инсектицидную, нематоцидную) активность" или "улучшенная пестицидная (например, инсектицидная) активность" или любые их грамматические варианты означают, что в результате модификации полипептида Vip3 получают сконструированный полипептид по настоящему изобретению, обладающий одной или несколькими следующими характеристиками: 1) повышенная
30 эффективность в отношении целевого вредителя (например, насекомого) (т. е. более высокая специфическая активность) и/или повышенные темпы уничтожения (более быстрое уничтожение при сопоставимом уровне белка), 2) расширенный или суженный спектр целевых вредителей, 3) сниженная склонность к развитию устойчивости у целевых вредителей, 4) повышенные уровни экспрессии в трансгенном хозяине или
клетке-хозяине, 5) повышенная устойчивость к расщеплению протеазами насекомого
(повышенная стабильность в кишечнике целевого насекомого), 6) повышенная
стабильность в окружающей среде и 7) сниженная токсичность в отношении полезных
насекомых, нецелевых вредителей и растений.
5 Углевод-связывающие модули (СВМ) представляют собой свернутые по
отдельности домены, которые находятся в белке, который является активным в отношении углеводов ферментом. Как следует из их названия, СВМ характеризуются активностью в отношении углеводов (см., например, Boraston et al. Biochem J. 382:769781) (2004)). СВМ представляют собой некаталитические домены, связанные с
10 каталитическими модулями в пределах полипептида большего размера с помощью линкерных последовательностей, которые в некоторых случаях обладают высокой гибкостью (Gilbert et al. Curr. Op. Structural Biol. 23:669-677 (2013)). В целом предполагается, что СВМ выполняют функцию приведения фермента, частью которого они являются, в непосредственную близость с целевым субстратом, что приводит к
15 повышению скорости катализа.
На данный момент углевод-связывающие модули классифицированы на 67 семейств на основании сходства аминокислотных последовательностей (см., Carbohydrate Active enZyme database (www.cazy.org/Welcome-to-the-Carbohydrate-Active.html); Cantarel et al. (2009). "The Carbohydrate-Active EnZymes database (CAZy):
20 An expert resource for Glycogenomics". Nucleic Acids Research 37 (Database issue): D233-D238. doi:10.1093/nar/gkn663).
Гетерологичный СВМ, применимый в соответствии с настоящим изобретением, может представлять собой СВМ типа В из любого белка. СВМ типа В представляют собой связывающие цепочки гликанов СВМ, имеющие желобки, или углубления.
25 (Boraston et al. Biochem J. (382:769-781 (2004)). В некоторых вариантах осуществления СВМ типа В, применимый в соответствии с настоящим изобретением, содержит Р-структуру. В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислотной последовательности СВМ из Р-1,4-маннаназы, необязательно аминокислотной последовательности СВМ типа В
30 из Р-1,4-маннаназы.
В некоторых вариантах осуществления СВМ, применимый в соответствии с настоящим изобретением, происходит из Р-1,4-маннаназы. Номером в соответствии с ЕС, предусмотренным Международным союзом биохимии и молекулярной биологии (IUBMB) для этого семейства ферментов, является ЕС 3.2.1.78. Так, в некоторых
вариантах осуществления СВМ, применимый в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой фермент из класса ферментов ЕС 3.2.1.78. Принятое название для этого класса ферментов маннан эндо-1,4-бета-маннозидаза, однако эти ферменты также известны под названиями Р-1,4-маннаназа, эндо-1,4-маннаназа, бета-5 маннаназа; эндо-1,4-Р-маннаназа, эндо-Р-1,4-манназа, Р-маннаназа В, Р-1, 4-маннан-4-маннаногидролаза, эндо-Р-маннаназа, P-D-маннаназа и/или 1,4-Р-0-маннан-маннаногидролаза.
В некоторых вариантах осуществления модифицированный Vip3 может содержать функциональную часть гетерологичного СВМ, например, СВМ типа В, или
10 СВМ типа В из 1,4-Р маннаназы. Функциональная часть СВМ может включать любой аминокислотный остаток, который находится в пределах от около приблизительно 3 ангстрем до приблизительно 8 ангстрем (например, приблизительно 3, 4, 5, 6, 7, 8 ангстрем и т. д.) сайта связывания углеводов и/или влияет на конформацию аминокислоты, которая взаимодействует с углеводом. Аминокислотные остатки,
15 которые могут влиять на конформацию аминокислоты, которая взаимодействует с углеводом, могут включать таковые, которые могут образовывать водородную связь, вступать во Ван-дер-ваальсовое взаимодействие, гидрофобное взаимодействие или менять заряд за счет самого углевода, воды и/или иона, который непосредственно взаимодействует с углеводом. Так, в некоторых вариантах осуществления
20 гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из всей или функциональной части аминокислотной последовательности СВМ из Р-1,4-маннаназы, необязательно аминокислотной последовательности СВМ типа В из Р-1,4-маннаназы.
СВМ, применимый в соответствии с настоящим изобретением, можно найти, например, в базе данных Carbohydrate-Active enZYmes Database
25 (www.cazy.org/W elcome-to-the-Carbohydrate-Active.html). Некоторые неограничивающие примеры включают СВМ из: маннан эндо-1,4-бета-маннозидазы из ОВ47 Caldicellulosiruptor obsidiansis (№ доступа в GenBank ADL41540.1); маннан эндо-1,4-бета-маннозидазы из 3016 Paenibacillus mucilaginosus (№ доступа в GenBank AFC29293.1); бета-1,4-маннаназы из Geobacillus stearothermophilus (№ доступа в
30 GenBank ААС71692.1); или бета-1,4-маннаназы из МА-138 Vibrio sp. (№ доступа в GenBank BAG69482.2).
Дополнительные неограничивающие примеры полипептидов бета-1,4-маннаназы, из которых можно получать СВМ, применимый в соответствии с настоящим изобретением, включают СВМ из бета-1,4-маннаназы из: Caldicellulosiruptor
saccharolyticus (№ доступа в GenBank ААС44232.1); МА-138 Vibrio sp. (№ доступа в GenBank BAG69482.2); HY-\3Cellulosimicrobium sp. (№ доступа в GenBank AEE43708.1); Bacillus subtilis (№ доступа в GenBank AEB98481.1); Haliotis discus discus (№ доступа в GenBank BAI99559.1); s6-204 Streptomyces sp. (№ доступа в GenBank 5 ABY90130.1); MA-138 Vibrio sp. (№ доступа в GenBank BAA25188.1); KPNIH27
Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae (№ доступа в GenBank AIA43525.1); Klebsiella oxytoca (№ доступа в GenBank АГЕ71926.1); Aeromonas caviae (№ доступа в GenBank KEP91190.1); KPR0928 Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae (№ доступа в GenBank АГЕ29885.1); Cronobacterpulveris (эталонная последовательность из NCBI:
10 WP 029591781.1); Gemmobacter nectariphilus (эталонная последовательность из NCBI: WP_028029945.1); ALJ24 Thioalkalivibrio sp. (эталонная последовательность из NCBI: WP_026287860.1); N5 Paracoccus sp. (эталонная последовательность из NCBI: WP_026155388.1); JGI 0001002-C21 Rhizobium sp. (эталонная последовательность из NCBI: WP_025570492.1); Cronobacter sakazakii (№ доступа в GenBank KDP99185.1);
15 Enterobacter asburiae (эталонная последовательность из NCBI: WP_024908493.1); 8081 Yersinia enterocolitica subsp. enterocolitica (эталонная последовательность из NCBI: YP 001008241.1); JCM 21531 Clostridium straminisolvens (№ доступа в GenBank GAE87707.1); mniNCTC 11218 Vibriofurnissii (GenBank: ADT88758.1). Другие неограничивающие примеры полипептидов бета-1,4-маннаназы можно найти в базе
20 данных Carbohydrate Active enZYmes (CAZY) (www.cazy.org).
В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислотной последовательности СВМ, которая по меньшей мере на приблизительно 70%-100% (например, по меньшей мере приблизительно 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% или любое
25 изменяемое значение или диапазон в этих пределах) идентична или схожа с аминокислотной последовательностью встречающегося в природе СВМ, например, СВМ типа В из Р 1,4-маннаназы (например, любая из SEQ ID N0:24-32). В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислотной последовательности СВМ, которая по меньшей мере на
30 приблизительно 75% идентична или схожа с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID N0:24-32. В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислотной последовательности СВМ, которая по меньшей мере на приблизительно 80% -приблизительно 95% идентична или схожа с аминокислотной последовательностью под
любым из SEQ ID N0:24-32. В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит, состоит главным образом из или состоит из аминокислотной последовательности СВМ, которая по меньшей мере на приблизительно 95% идентична или схожа с аминокислотной последовательностью (например, на 95%, 96%, 97%, 98%, 5 99% или больше) под любым из SEQ ID N0:24-32.
В некоторых вариантах осуществления гетерологичный СВМ содержит сайт связывания металла. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания металла гетерологичного СВМ связывает кальций и/или магний. Сайт связывания металла СВМ может быть скоординирован заряженными атомами и может связывать сам по себе, или 10 в мотивах "петля" на поверхности СВМ и/или белка, в котором находится СВМ. В некоторых вариантах осуществления металл может быть вовлечен в связывание углевода. В некоторых вариантах осуществления металл может не соответствовать функции связывания углевода СВМ в белке, в котором СВМ находится в естественных условиях.
15 В некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3
является пестицидным в отношении, например, насекомого. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении насекомого, например, чешуекрылого насекомого.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления насекомые-вредители
20 включают без ограничения насекомых, выбранных из отрядов Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera и т. д. В некоторых вариантах осуществления насекомые-вредители включают без ограничения Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Plutella xylostella (капустную моль), Spodoptera frugiperda
25 (кукурузную листовую совку), Agrotis ipsilon (совку-ипсилон), Agrotis orthogonia (прямоугольную совку), Striacosta albicosta (западную бобовую совку), Helicoverpa zea (американскую кукурузную совку), Heliothis virescens (табачную совку), Spodoptera exigua (совку малую), Helicoverpa punctigera (австралийскую хлопковую совку), Helicoverpa armigera (хлопковую совку), Manduca sexta (бражника табачного),
30 Trichoplusia ni (совку ни), Pectinophora gossypiella (хлопковую моль), Diatraea grandiosella (огневку кукурузную юго-западную), Diatraea saccharalis (огневку тростниковую^, Elasmopalpus lignosellus (малую кукурузную стеблевую огневку), Psuedoplusia includens (совку соевую), Anticarsia gemmatalis (гусеницу совки бархатных бобов), Plathypena scabra (клеверную усатку), Homoeosoma electellum (огневку
подсолнечниковую), Cochylis hospes (окаймленную подсолнечниковую моль) или любую их комбинацию.
В некоторых вариантах осуществления предусматривается композиция, содержащая модифицированный полипептид Vip3. В некоторых вариантах 5 осуществления композиция, содержащая модифицированный полипептид Vip3, может быть получена из экстракта трансгенного растения или части растения (например, семя), при этом указанные трансгенное растение или часть растения содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую указанный модифицированный полипептид Vip3. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая
10 модифицированный полипептид Vip3, может быть получена посредством экспрессии полинуклеотида, кодирующего полипептид по настоящему изобретению в бактериальных клетках, способных экспрессировать указанный полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит модифицированный полипептид Vip3 в приемлемом для сельскохозяйственного применения носителе.
15 Применяемое в данном документе выражение "приемлемый для
сельскохозяйственного применения носитель" может включать природный или синтетический, органический или неорганический материал, который объединен с активным компонентом для содействия его нанесению на растение или его часть. Приемлемый для сельскохозяйственного применения носитель включает без
20 ограничения инертные компоненты, диспергирующие средства, поверхностно-активные вещества, вспомогательные средства, вещества для повышения клейкости, клейкие вещества, связующие вещества или их комбинации, которые можно применять в составах, используемых в сельском хозяйстве. Другим носителем, приемлемым с точки зрения сельского хозяйства, может быть трансгенное растение или часть
25 растения.
Такие композиции можно наносить любым способом, который обеспечивает приведение пестицидных полипептидов в контакт с вредителями, что приводит в результате к токсическому эффекту и контролю вредителя(вредителей). Соответственно, композиции можно наносить на поверхности растений или части 30 растений, в том числе на семена, листья, цветки, стебли, клубни, корни и т. п. Таким образом, композиция(композиции) модифицированных полипептидов Vip3 (может)могут быть доставлена(доставлены) множеством известных путей, например, перорально при поедании вредителем или за счет контакта с вредителем посредством экспрессии в трансгенном растении, с помощью составленной композиции
(композиций) белков, распыляемой(распыляемых) композиции(композиций), матрицы с приманкой или любой другой известной из уровня техники системы доставки токсинов.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении 5 предусматривается молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, состоящая главным образом, состоящая из нуклеотидной последовательности, кодирующей один или более одного модифицированных полипептида Vip3, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит, состоит главным образом из или состоит из одной или более одной нуклеотидной
10 последовательности(последовательностей) SEQ ID N0:7-23 и/или SEQ ID N0:33-56. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая модифицированный полипептид Vip3, может быть кодон-оптимизирована для экспрессии в конкретном организме-хозяине или клетке-хозяине.
Так, в некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота по настоящему
15 изобретению экспрессируется в трансгенных растениях. Для экспрессии в трансгенных растениях для нуклеотидных последовательностей, кодирующих модифицированные полипептиды Vip3 по настоящему изобретению, могут требоваться другие модификации и/или оптимизация. Хотя во многих случаях нуклеотидные последовательности микроорганизмов могут быть экспрессированы в растениях на
20 высоком уровне без модификации, низкий уровень экспрессии в трансгенных растениях может быть результатом того, что нуклеотидные последовательности микроорганизмов имеют кодоны, которые не являются предпочтительными в растениях. Из уровня техники известно, что все организмы имеют определенные предпочтения в отношении частоты использования кодонов, и что кодоны
25 последовательностей нуклеиновых кислот/нуклеотидных последовательностей, описанных в данном документе, могут быть изменены с целью соответствия предпочтениям у растений, с сохранением при этом кодируемой ими аминокислотной последовательности. Кроме того, высокий уровень экспрессии в растениях лучше всего достигается в случае кодирующих последовательностей с содержанием GC по меньшей
30 мере приблизительно 35%, предпочтительно более приблизительно 45%, более предпочтительно более приблизительно 50% и наиболее предпочтительно более приблизительно 60%. Нуклеиновые кислоты микроорганизмов с низким содержанием GC могут недостаточно экспрессироваться в растениях в связи с наличием мотивов ATTTA, которые могут дестабилизировать транскрипты, и мотивов AATAAA, которые
могут обуславливать неуместное полиаденилирование. Хотя нуклеотидные последовательности могут надлежащим образом экспрессироваться как в видах однодольных, так и двудольных растений, последовательности можно модифицировать с учетом предпочтений в отношении кодонов и предпочтений в отношении содержания 5 GC для однодольных или двудольных растений, поскольку было показано, что эти предпочтения отличаются (Murray etal. Nucl. Acids Res. 17:477-498 (1989)). Кроме того, нуклеотидные последовательности можно подвергнуть скринингу на наличие сайтов неправильного сплайсинга, которые могут обуславливать усечение транскриптов. Все изменения, которые необходимо произвести в последовательностях нуклеиновых
10 кислот/нуклеотидных последовательностях, например таковых, описанных выше, производятся с применением хорошо известных методик сайт-направленного мутагенеза, П1 IP и конструирования синтетических генов (см., например, ЕР 0 385 962, ЕР 0 359 472 и WO 93/07278.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении
15 предусматривают трансгенные клетки-хозяева, отличные от клеток человека, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. Клетка-хозяин, отличная от клетки человека, может включать без ограничения растительную клетку, бактериальную клетку, клетку гриба (например, дрожжей) или клетку насекомого. В некоторых вариантах осуществления трансгенная клетка-хозяин
20 является клеткой трансгенного растения или клеткой трансгенной бактерии. В некоторых вариантах осуществления растительная клетка является клеткой, не относящейся к размножению.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривают растение, часть растения и/или растительную клетку, содержащие
25 молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. Неограничивающие примеры растений, применимых в соответствии с настоящим изобретением, включают овощные культуры, в том числе разновидности артишока, кольраби, рукколу, лук-порей, спаржу, латук (например, кочанный, листовой, римский), бок чой, ксантосому, разновидности дыни (например, мускусную дыню, арбуз, креншо, белую мускатную
30 дыню, канталупу), культурные виды капусты (например, брюссельскую капусту, кочанную капусту, цветную капусту, брокколи, разновидности коровьей капусты, кормовую капусту, китайскую капусту, бок чой), испанский артишок, разновидности моркови, пекинскую капусту, окру, разновидности лука, сельдерей, петрушку, разновидности турецкого гороха, разновидности пастернака, цикорий, разновидности
перца, разновидности картофеля, тыквенные (например, кабачок, огурец, цуккини, крупноплодную столовую тыкву, обыкновенную тыкву), разновидности редьки, разновидности лука репчатого, брюкву, баклажан (также называемый бадриджаном), козлобородник, эскариоль, разновидности лука-шалота, эндивий, чеснок, шпинат, 5 разновидности зеленого лука, крупноплодную столовую тыкву, зелень, свеклу (сахарную свеклу и кормовую свеклу), разновидности сладкого картофеля, листовую свеклу, хрен, разновидности томата, разновидности репы и пряные растения; плодовые и/или лозовые культуры, такие как разновидности яблони, разновидности абрикоса, разновидности вишни, разновидности нектарина, разновидности персика,
10 разновидности груши, разновидности слив, разновидности домашней сливы, вишня, айва, разновидности миндаля, разновидности каштана, разновидности лещины, разновидности ореха-пекана, разновидности фисташки, разновидности грецкого ореха, цитрусовые растения, разновидности голубики, разновидности бойзеновой ягоды, разновидности клюквы, разновидности смородины, разновидности логановой ягоды,
15 разновидности малины, разновидности земляники, разновидности ежевики, разновидности винограда, разновидности авокадо, разновидности банана, киви, разновидности хурмы, гранат, ананас, тропические плодовые растения, семечковые плодовые растения, дыню, манго, папайю и личи; полевые культурные растения, такие как клевер, люцерна, ослинник двухлетний, пенник луговой, кукуруза/маис (полевая,
20 сахарная, лопающаяся), разновидности хмеля, жожоба, разновидности земляного ореха, рис, сафлор, мелкозерновые культуры (ячмень, разновидности овса, рожь, пшеница и т. д.), сорго, табак, капок, бобовые растения (разновидности фасоли, разновидности чечевицы, разновидности гороха, разновидности сои), масличные растения (например, рапс, горчица, мак, олива, подсолнечник, кокосовая пальма, клещевина, бобы какао,
25 земляные орехи), Arabidopsis, травянистые растения (газонные травы, декоративные травы), волокнистые растения (хлопчатник, лен, конопля, джут), растения семейства Lauraceae (коричное дерево, камфорное дерево) или такие растения, как кофейное дерево, сахарный тростник, чай и растения, из которых получают натуральный каучук; и/или грядковые культуры, такие как цветковые растения, кактус, суккулент и/или
30 декоративные растения, а также деревья, такие как лесные (широколиственные и вечнозеленые деревья, такие как хвойные), плодовые, декоративные и орехоплодные деревья, а также кустарники и другие сеянцы.
В конкретных вариантах осуществления растение, часть растения или растительная клетка по настоящему изобретению может представлять собой сорго,
пшеницу, подсолнечник, томат, культурный вид капусты, хлопчатник, рис, сою,
сахарную свеклу, сахарный тростник, табак, ячмень, масличный рапс и/или маис. В
некоторых вариантах осуществления растение представляет собой маис. В некоторых
вариантах осуществления растение представляет собой сою.
5 В типичных вариантах осуществления растение, содержащее молекулы
нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой маис, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении насекомого-вредителя из отрядов Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera,
10 Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera или любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой маис, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении насекомого-
15 вредителя из отряда Lepidoptera. В некоторых вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой маис, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении, например, Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой
20 совки), Agrotis ipsilon (совки-ипсилон), Agrotis orthogonia (прямоугольной совки), Striacosta albicosta (западной бобовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки), Spodoptera exigua (совки малой), Helicoverpa punctigera (австралийской хлопковой совки), Helicoverpa armigera (хлопковой совки), Diatraea grandiosella (огневки кукурузной юго-западной), Diatraea saccharalis (огневки
25 тростниковой), Elasmopalpus lignosellus (малой кукурузной стеблевой огневки) или любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой маис, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении Ostrinia nubilalis
30 (кукурузного мотылька), Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки) или Agrotis ipsilon (совки-ипсилон) или любой их комбинации.
В типичных вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид
Vip3, представляет собой сою, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении насекомого-вредителя из отрядов Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera или 5 любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой сою, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении насекомого-вредителя из отряда Lepidoptera. В некоторых вариантах осуществления растение,
10 содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой сою, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении, например, Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Agrotis ipsilon (совки-ипсилон), Agrotis orthogonia (прямоугольной совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной
15 совки), Heliothis virescens (табачной совки), Spodoptera exigua (совки малой), Helicoverpa punctigera (австралийской хлопковой совки), Helicoverpa armigera (хлопковой совки), Trichoplusia ni (совки ни), Elasmopalpus lignosellus (малой кукурузной стеблевой огневки) , Psuedoplusia includens (совки соевой), Anticarsia gemmatalis (гусеницы совки бархатных бобов), Plathypena scabra (клеверной усатки),
20 Homoeosoma electellum (огневки подсолнечниковой) или Cochylis hospes (окаймленной подсолнечниковой моли) или любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления растение, содержащее молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению и экспрессирующее полипептид Vip3, представляет собой сою, и при этом полипептид Vip3, вырабатываемый растением, является пестицидным в отношении
25 Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки) или Agrotis ipsilon (совки-ипсилон) или любой их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления вирус, такой как бакуловирус, может содержать в своем геноме полинуклеотид, кодирующий модифицированный
30 полипептид Vip3 по настоящему изобретению. Указанные рекомбинантные вирусы могут экспрессировать большие количества соответствующего модифицированного полипептида Vip3 после инфицирования эукариотической клетки, подходящей для репликации вируса и экспрессии полинуклеотида. Пестицидный полипептид, полученный таким образом, можно применять в качестве пестицидного или
инсектицидного средства. В качестве альтернативы, вирусы (например, бакуловирусы), сконструированные с включением одного или нескольких полинуклеотидов по настоящему изобретению, можно применять для инфицирования насекомых in vivo и их уничтожения либо с помощью экспрессии пестицидного полипептида, либо с 5 помощью комбинации вирусной инфекции и экспрессии пестицидного полипептида.
Бактериальные клетки также могут быть хозяевами для экспрессии нуклеиновых кислот по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления применяют непатогенные симбиотические бактерии, способные жить и размножаться в растительных тканях, так называемые эндофиты, или непатогенные симбиотические
10 бактерии, способные колонизировать филлосферу или ризосферу, так называемые эпифиты. Такие бактерии включают бактерии родов Agrobacterium, Alcaligenes, Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Clavibacter, Enterobacter, Erwinia, Flavobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Rhizobium, Serratia, Streptomyces и Xanthomonas. Симбиотические грибы, такие как Trichoderma и Gliocladium, также могут быть
15 хозяевами для экспрессии нуклеиновых кислот по настоящему изобретению для тех же целей.
Так, в некоторых вариантах осуществления, в качестве биологических пестицидных средств контроля, пестицидные полипептиды по настоящему изобретению можно получать посредством экспрессии полинуклеотидов, кодирующих 20 полипептиды по настоящему изобретению в гетерологичных клетках-хозяевах, способных экспрессировать указанные полинуклеотиды. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления предусматривают дрожжи, бактериальную или растительную клетку, содержащие один или несколько полинуклеотидов по настоящему изобретению.
25 Методики трансформации различных организмов/клеток-хозяев известны в
данной области техники. Например, векторы экспрессии рКК223-3 и рКК223-2 можно применять для экспрессии гетерологичных генов в Е. coli в виде транскрипционного или трансляционного слияния, после промотора tac или trc. Для экспрессии оперонов, кодирующих несколько ORF, одной из процедур является вставка оперона в вектор,
30 такой как рКК223-3, в виде транскрипционного слияния, что позволяет применять когнатный сайт связывания рибосом гетерологичных генов. Методики для сверхэкспрессии в грам-положительных видах, таких как Bacillus, также известны в данной области техники, и их можно применять в контексте настоящего изобретения (Quax et al., в Industrial Microorganisms:Basic and Applied Molecular Genetics, Eds. Baltz
et al., American Society for Microbiology, Washington (1993)). Альтернативные системы для сверхэкспрессии основаны, например, на векторах для экспрессии в дрожжах и включают применение Pichia, Saccharomyces и/или Kluyveromyces (Sreekrishna, в Industrial Microorganisms:Basic and Applied Molecular Genetics, Baltz, Hegeman, and 5 Skatrud eds., American Society for Microbiology, Washington (1993); Dequin & Barre, Biotechnology L2:173- 177 (1994); van den Berg et al., Biotechnology 8:135-139 (1990)).
Процедуры трансформации растений являются хорошо известными и общепринятыми в данной области техники и описаны в литературе во всех отношениях. Неограничивающие примеры способов трансформации растений
10 включают трансформацию с помощью доставки нуклеиновых кислот, опосредованной бактериями (например, с помощью видов рода Agrobacteria), доставки нуклеиновых кислот, опосредованной вирусами, доставки нуклеиновых кислот, опосредованной карбидом кремния или микроиглами с нуклеиновыми кислотами, доставки нуклеиновых кислот, опосредованной липосомами, микроинъекцию, бомбардировку
15 микрочастицами, трансформацию, опосредованную фосфатом кальция, трансформацию, опосредованную циклодекстринами, электропорацию, трансформацию, опосредованную наночастицами, обработку ультразвуком, инфильтрацию, поглощение нуклеиновых кислот, опосредованное PEG, а также любой другой электрический, химический, физический (механический) и/или биологический
20 механизм, который обеспечивает введение нуклеиновой кислоты в растительную клетку, включая любую их комбинацию. Общие руководства по разнообразным способам трансформации растений, известным в данной области техники, включают Miki et al. ("Procedures for Introducing Foreign DNA into Plants" в Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick, B. R. and Thompson, J. E., Eds. (CRC Press,
25 Inc., Boca Raton, 1993), pages 67-88) и Rakowoczy-Trojanowska (Cell. Mol. Biol. Lett. 7:849-858 (2002)).
Для трансформации, опосредованной Agrobacterium, подходят бинарные векторы или векторы, несущие по меньшей мере одну граничную последовательность Т-ДНК, тогда как для прямого переноса генов (например, с помощью бомбардировки 30 частицами и т. п.) подходит любой вектор, при этом можно применять линейную ДНК, содержащую только конструкцию, представляющую интерес. В случае прямого переноса генов можно применять трансформацию с помощью одного вида ДНК или котрансформацию (Schocher et al., Biotechnology 4:1093-1096 (1986)). В случае как прямого переноса генов, так и переноса, опосредованного Agrobacterium,
трансформацию обычно (но не обязательно) выполняют с селектируемым маркером, который может представлять собой средство положительной селекции (фосфоманнозоизомеразу), обеспечивая устойчивость к антибиотику (канамицину, гигромицину или метотрексату) или гербициду (глифосату или баете). Однако выбор 5 селектируемого маркера не является критически важным для настоящего изобретения.
Трансформация, опосредованная Agrobacterium, является широко применяемым способом трансформации растений, в частности, двудольных растений, в связи с его высокой эффективностью трансформации и в связи с его широким применением в отношении множества различных видов. Трансформация, опосредованная
10 Agrobacterium, как правило, предполагает перенос бинарного вектора, несущего чужеродную ДНК, представляющую интерес, в соответствующий штамм Agrobacterium, что может зависеть от набора v/'r-генов штамма-хозяина Agrobacterium, расположенного либо в корезидентной Ti-плазмиде, либо в хромосоме (Uknes et al. (1993) Plant Cell 5:159-169). Перенос рекомбинантного бинарного вектора в
15 Agrobacterium можно выполнять с помощью процедуры трехродительского скрещивания с использованием Escherichia coli, несущей рекомбинантный бинарный вектор, хелперного штамма E.coli, несущего плазмиду, которая способна мобилизировать рекомбинантный бинарный вектор в целевом штамме Agrobacterium. В качестве альтернативы, рекомбинантный бинарный вектор можно переносить в
20 Agrobacterium путем трансформации нуклеиновой кислоты (HOfgen & Willmitzer (1988) Nucleic Acids Res. 16:9877).
Трансформация растения с помощью рекомбинантной Agrobacterium обычно включает совместное культивирование Agrobacterium с эксплантатами растения и проводится в соответствии со способами, хорошо известными в данной области.
25 Трансформированную ткань регенерируют на селективной среде, содержащей маркер устойчивости к антибиотикам или гербицидам между граничными последовательностями бинарной плазмиды с Т-ДНК.
Как обсуждалось ранее, другой способ трансформации растений, частей растений и растительных клеток включает внедрение инертных или биологически
30 активных частиц в растительные ткани и клетки. См, например, патенты США №№4945050; 5036006 и 5100792. Как правило, этот способ включает внедрение в растительные клетки инертных или биологически активных частиц в условиях, эффективных для проникновения через наружную поверхность клетки и возможности включения в ее внутреннюю часть. При использовании инертных частиц вектор можно
вводить в клетку путем покрытия частиц вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, представляющую интерес. В качестве альтернативы, клетка или клетки могут быть окружены вектором так, чтобы вектор переносился в клетку вслед за частицей. Биологически активные частицы (например, высушенная дрожжевая клетка, 5 высушенная бактерия или бактериофаг, каждый(каждый) из которых содержит одну или несколько нуклеиновых кислот, подлежащих введению) также можно внедрять в растительную ткань.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может быть непосредственно трансформирован в геном пластид.
10 Основное преимущество трансформации пластид состоит в том, что пластиды, как правило, способны экспрессировать бактериальные гены без существенной модификации, причем пластиды способны экспрессировать несколько открытых рамок считывания под контролем одного промотора. Технология трансформации пластид подробно описана в патентах США №№ 5451513, 5545817 и 5545818, в заявке согласно
15 PCT № WO 95/16783 и в McBride et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91, 7301-7305. Основная методика трансформации хлоропластов включает введение участков клонированной пластидной ДНК, фланкирующих селектируемый маркер, вместе с представляющим интерес геном в подходящую целевую ткань, например, с применением биолистики или трансформации протопластов (например,
20 трансформации, опосредованной хлоридом кальция или PEG). Фланкирующие участки размером 1-1,5 т.п.о., называемые направляющими последовательностями, содействуют гомологичной рекомбинации с геномом пластид и, таким образом, обеспечивают замещение или модификацию специфических участков пластома. Сначала в качестве селектируемого маркера трансформации можно использовать
25 точечные мутации в генах 16S рРНК и rpsl2 хлоропластов, придающие устойчивость к спектиномицину и/или стрептомицину (Svab, Z., Hajdukiewicz, P., and Maliga, P. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 8526-8530; Staub, J. M, and Maliga, P. (1992) Plant Cell 4, 39-45). Наличие сайтов клонирования между этими маркерами позволяет создать вектор, направленный на пластиды, для введения чужеродных генов (Staub, J. М., and
30 Maliga, P. (1993) EMBO J. 12, 601-606). Существенное повышение частоты трансформации можно получить путем замещения рецессивных генов рРНК или г-белка, обеспечивающего устойчивость к антибиотикам, на доминантный селектируемый маркер, бактериальный ген aadA, кодирующий фермент аминогликозид-З'-аденилтрансферазу, обезвреживающий спектиномицин (Svab, Z., and
Maliga, P. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 913-917). Ранее этот маркер успешно применяли для трансформации с высокой частотой генома пластид зеленой водоросли Chlamydomonas reinhardtii (Goldschmidt-Clermont, М. (1991) Nucl. Acids Res. 19:40834089). Другие селектируемые маркеры, применимые для трансформации пластид, 5 известны в данной области техники и они включены в объем настоящего изобретения. Как правило, для достижения состояния, при котором все пластиды являются идентичными, требуется около 15-20 циклов клеточного деления после трансформации. Экспрессия в пластидах, при которой гены вставлены с помощью гомологической рекомбинации во все несколько тысяч копий кольцевого генома пластид,
10 присутствующих в каждой растительной клетке, использует преимущество огромного числа копий по сравнению с генами, экспрессируемыми в ядре, с обеспечением уровней экспрессии, которые легко могут превышать 10% от общего количества растворимого растительного белка. В одном варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может быть вставлен в вектор, направленный на
15 пластиды, и введен в геном пластид желаемого растения-хозяина путем трансформации. Таким образом, можно получить растения с пластидами, идентичными в отношении геномов пластид, содержащих нуклеотидную последовательность по настоящему изобретению, способные экспрессировать полинуклеотид на высоком уровне.
20 Способы отбора трансформированных трансгенных растений, растительных
клеток и/или культур растительных тканей являются общепринятыми в данной области техники и могут использоваться в способах настоящего изобретения, предусмотренных в данном документе.
Следовательно, полинуклеотид можно вводить в растение, часть растения и/или
25 растительную клетку посредством любого из ряда способов, хорошо известных в данной области техники, описанных выше. Следовательно, не руководствуются каким-либо конкретным способом введения одного или нескольких полинуклеотидов в растение, а наоборот, можно применять любой способ, обеспечивающий попадание одного или нескольких полинуклеотидов внутрь по меньшей мере одной клетки
30 растения. Если введению подлежат несколько полинуклеотидов, то соответствующие полинуклеотиды можно собрать в виде части одной молекулы нуклеиновой кислоты или в виде отдельных молекул нуклеиновых кислот и можно расположить в пределах одной и той же или различных молекулах нуклеиновых кислот. Соответственно, введение полинуклеотидов в клетку, представляющую интерес, можно осуществлять в
ходе одного события трансформации, в ходе отдельных событий трансформации или, например, в растения, как часть протокола селекции.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения введенная молекула нуклеиновой кислоты может поддерживаться в растительной клетке 5 стабильно, если она встроена в нехромосомный автономный репликон или интегрирована в хромосому (хромосомы) растения. В качестве альтернативы, введенная молекула нуклеиновой кислоты может присутствовать во внехромосомном нереплицирующемся векторе и подвергаться транзиентной экспрессии или обладать транзиентной активностью. Независимо от того, присутствует молекула нуклеиновой
10 кислоты во внехромосомном нереплицирующемся векторе или в векторе, который интегрирован в хромосому, она может присутствовать в кассете экспрессии в растении. Кассета экспрессии в растениях может содержать регуляторные последовательности, которые управляют экспрессией генов в растительных клетках, и которые функционально связаны так, что каждая последовательность может выполнять свою
15 функцию, например, терминации транскрипции с помощью сигналов полиаденилирования. Иллюстративные сигналы полиаденилирования могут представлять собой таковые, происходящие от Т-ДНК Agrobacterium tumefaciens, например, из гена, известного как ген октопинсинтазы Ti-плазмиды pTiACH5 (Gielen et al. EMBO J. 3:835 (1984)) или их функциональные эквиваленты, однако также
20 подходящими являются все прочие терминаторы, функционально активные в растениях. Кассета экспрессии в растениях согласно настоящему изобретению может также содержать другие функционально связанные последовательности, подобные трансляционным энхансерам, таким как последовательность, усиливающая перенос, содержащая 5'-нетранслируемую лидерную последовательность от вируса табачной
25 мозаики, увеличивающую соотношение полипептида и РНК (Gallie et al. Nucl. Acids Research 15:8693-8711 (1987)).
Кроме того, как хорошо известно в данной области техники, интактные трансгенные растения можно регенерировать из трансформированных растительных клеток, культуры растительных тканей и/или культивируемых протопластов с
30 помощью любой из разнообразных известных методик. Регенерация растений из растительных клеток, культуры растительных тканей и/или культивируемых протопластов описана, например, в Evans et al. (Handbook of Plant Cell Cultures, Vol. 1, MacMilan Publishing Co. New York (1983)); и Vasil I. R. (ed.) (Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Acad. Press, Orlando, Vol. I (1984), and Vol. II (1986)).
Дополнительно, описанные выше наследственные свойства, выработанные в трансгенных семенах и растениях, частях растений и/или растительных клетках по настоящему изобретению, могут передаваться путем полового размножения или вегетативного роста и, следовательно, могут поддерживаться и передаваться по 5 наследству растениям-потомкам. Как правило, поддержание и передача по наследству используются в известных сельскохозяйственных способах, разработанных с учетом конкретных целей, таких как уборка урожая, посев или возделывание.
Соответственно, в настоящем изобретении предусматривают трансгенные растения, части растения и растительные клетки, а также регенерированные из них
10 растения, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую, состоящую главным образом из или состоящую из нуклеотидной последовательности, кодирующей модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления трансгенное растение, часть растения или растительная клетка выбраны из группы растений, состоящей из сорго, пшеницы,
15 подсолнечника, томата, капустной культуры, хлопчатника, риса, сои, сахарной свеклы, сахарного тростника, табака, ячменя, масличного рапса и маиса.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения может предусматриваться собранный продукт, полученный из трансгенных клеток, растений и/или частей растения по настоящему изобретению, а также обработанный продукт,
20 полученный из указанного собранного продукта. Собранный продукт может представлять собой целое растение или любую часть растения, описанные в данном документе, где указанный собранный продукт содержит молекулу нуклеиновой кислоты/нуклеотидную последовательность или полипептид по настоящему изобретению. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления
25 неограничивающий пример собранного продукта включает семя, плод, цветок или их
часть (например, пыльник, рыльце и т. п.), лист, стебель, цветоножку, корень, клубень и
т. д. В конкретных вариантах осуществления собранный продукт представляет собой
семя, где семя содержит в своем геноме молекулу(молекулы) нуклеиновой
кислоты/нуклеотидную последовательность(последовательности) и/или
30 полипептид (полипептиды) по настоящему изобретению.
В некоторых вариантах осуществления обработанный продукт включает без ограничения муку, муку грубого помола, масло, крахмал, сахар, волокно, биотопливо или зерно и т. д., или полученный из них продукт. В некоторых вариантах осуществления обработанный продукт представляет собой экстракт из семени, где
экстракт содержит молекулу нуклеиновой кислоты, нуклеотидную последовательность
или полипептид по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления
обработанный продукт содержит молекулу нуклеиновой кислоты/нуклеотидную
последовательность или полипептид по настоящему изобретению.
5 В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно
предусматривают сельскохозяйственную культуру, включающую множество растений по настоящему изобретению, высаженных вместе на сельскохозяйственном поле. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривают сельскохозяйственную культуру, включающую множество трансгенных растений по
10 настоящему изобретению, высаженных вместе на поле для гольфа, газоне при частном доме, обочине дорог, стадионе и/или участке рекреационной зоны.
Также в данном документе предусматривают способы применения модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему изобретению и/или молекул нуклеиновой кислоты/полинуклеотидов, кодирующих указанные модифицированные
15 полипептиды Vip3.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления предусматривают способ получения растения, части растения или растительной клетки с повышенной устойчивостью или толерантностью к одному или нескольким вредителям, при этом способ включает введение одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты,
20 содержащих одну или несколько нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или несколько модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему изобретению, в растение, часть растения или растительную клетку с получением трансгенного растения, части растения или растительной клетки, которые экспрессируют одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, причем с
25 обеспечением экспрессии, таким образом, одного или нескольких модифицированных полипептидов Vip3 и повышением устойчивости или толерантности к одному или нескольким вредителям у указанного трансгенного растения, части растения или растительной клетки по сравнению с контрольными растением, частью растения или растительной клеткой, которые не содержат указанные одну или несколько молекул
30 нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления способ включает регенерацию трансгенного растения из указанной трансгенной растительной клетки или части растения, где трансгенное растение содержит в своем геноме одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты и обладает повышенной пестицидной активностью.
В другом аспекте предусматривают способ повышения пестицидной активности в растении, части растения или растительной клетке, при этом способ включает введение одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, содержащих одну или несколько нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или несколько 5 модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему изобретению в растение, часть растения или растительную клетку с получением трансгенного растения, части растения или растительной клетки, которые экспрессируют одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, причем с обеспечением экспрессии, таким образом, (продукции) одного или нескольких модифицированных полипептидов Vip3 и
10 повышением пестицидной активности в трансгенном растении, части растения или растительной клетке по сравнению с контрольными растением, частью растения или растительной клеткой, которые не содержат указанные одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления способ включает регенерацию трансгенного растения из указанной трансгенной растительной клетки
15 или части растения, где трансгенное растение содержит в своем геноме одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты и обладает повышенной пестицидной активностью.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ, предоставляющий фермеру средство для контроля вредителя растений, при этом 20 способ включает обеспечение фермера растительным материалом или бактериями, при этом указанный растительный материал или бактерии содержат молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ получения 25 модифицированного полипептида Vip3 по настоящему изобретению, при этом способ включает стадии: (а) трансформации клетки-хозяина молекулой рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид Vip3; и (Ь) культивирования клетки-хозяина из стадии (а) в условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует молекулу рекомбинантной 30 нуклеиновой кислоты, с получением, таким образом, модифицированного полипептида Vip3.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предусматривают способ получения модифицированного полипептида Vip3, при этом способ включает выращивание клетки-хозяина по настоящему изобретению в условиях,
при которых обеспечивается экспрессия модифицированного полипептида Vip3; и выделение модифицированного полипептида Vip3.
В некоторых вариантах осуществления предусматривают способ уменьшения повреждения трансгенного растения, вызванного вредителем растений, при этом 5 способ включает посадку семени трансгенного растения, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, которая экспрессирует модифицированный полипептид Vip3 по настоящему изобретению, с уменьшением, таким образом, повреждения, вызванного вредителем у трансгенного растения, выращенного из семени трансгенного растения. В некоторых вариантах осуществления молекула(молекулы) нуклеиновой кислоты
10 содержится/содержатся в кассете экспрессии или рекомбинантном векторе.
В любом из вариантов осуществления, описанном в данном документе, молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению могут содержаться в одной или нескольких кассете(кассетах) экспрессии и/или векторе(векторах), где указанные молекулы нуклеиновых кислот могут быть функционально ассоциированы с одним или
15 несколькими промоторами (и/или другими регуляторными элементами), функционирующими в клетке-хозяине (например, растения, бактерий и т. д.). В некоторых вариантах осуществления одна или несколько кассет экспрессии или векторов могут содержать селектируемый маркер. В некоторых вариантах осуществления одна или несколько кассет экспрессии или векторов не содержат
20 селектируемый маркер.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривают способ контроля вредителей, включающий приведение вредителей в контакт с пестицидно эффективным количеством композиции по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения
25 предусматривают способ защиты растения и/или материала для размножения растений, при этом способ включает приведение растения и/или материала для размножения растений в контакт с пестицидно эффективным количеством композиции по настоящему изобретению.
Модифицированные полипептиды Vip3 по настоящему изобретению можно
30 применять в комбинации с другими пестицидными веществами или средствами защиты сельскохозяйственных культур (т. е. пестицидно активными ингредиентами) для расширения спектра целевых вредителей. Так, модифицированный полипептид Vip3 можно применять в комбинации с другими пестицидными веществами отличной природы для предупреждения устойчивости у насекомых и/или управления ею. Другие
инсектицидные вещества включают, например, ингибиторы протеаз (как серинового, так и цистеинового типов), лектины, альфа-амилазу, пероксидазу и холестеролоксидазу. Аналогично, белки Cry, такие как белки семейств CrylA, СгуШ и CrylC, также можно применять в комбинации с модифицированными белками Vip3 по 5 настоящему изобретению.
Коэкспрессия более одного инсектицидного вещества в одном и том же трансгенном растении или части растения (например, семени) может быть достигнута путем получения с помощью методов генной инженерии растения, которое содержит и в котором экспрессируются все необходимые гены. В качестве альтернативы, растение,
10 родителя 1, можно получить с помощью методов генной инженерии для экспрессии генов по настоящему изобретению. Второе растение, родителя 2, можно получить с помощью методов генной инженерии для экспрессии дополнительного вещества для контроля насекомых. Путем скрещивания родителя 1 с родителем 2 получают потомство растений, которые экспрессируют все гены введенные родителям 1 и 2.
15 Трансгенные растения, или части растения, или трансгенное семя по
настоящему изобретению также можно обрабатывать пестицидным активным ингредиентом/средством защиты сельскохозяйственных культур. Если как пестицидный активный ингредиент, так и трансгенное растение, или часть растения, или трансгенное семя по настоящему изобретению являются активными в отношении
20 одного и того же целевого насекомого, то комбинация применима (i) в способе повышения активности модифицированного полипептида Vip3 по настоящему изобретению в отношении целевого насекомого и (ii) в способе предупреждения развития устойчивости к модифицированному полипептиду Vip3 по настоящему изобретению за счет обеспечения второго механизма действия в отношении целевого
25 насекомого. Так, в настоящем изобретении предусматривают способ повышения активности в отношении целевого насекомого или предупреждения развития устойчивости у целевого насекомого, включающий, например, нанесение инсектицидного покрытия для семян, как описано в патентах США №№ 5849320 и 5876739, включенных в данный документ посредством ссылки, на трансгенное семя,
30 содержащее один или несколько модифицированных полипептидов Vip3 по настоящему изобретению.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ контроля вредителей сельскохозяйственных культур путем обеспечения трансгенного растения или части трансгенного растения (например,
трансгенного семени) по настоящему изобретению и нанесения на трансгенное растение, часть растения или семя пестицидно активного ингредиента/средства защиты сельскохозяйственных культур. При этом повышается активность модифицированного полипептида Vip3 по настоящему изобретению в отношении целевого насекомого и (ii) 5 в способе предупреждения развития устойчивости к модифицированному полипептиду Vip3 по настоящему изобретению за счет обеспечения второго механизма действия в отношении целевого насекомого. Кроме того, нанесение средства защиты сельскохозяйственных культур на трансгенное растение или часть растения можно выполнять с целью увеличения числа видов вредителей сельскохозяйственных культур,
10 контроль которых осуществляют с помощью нанесения защиты сельскохозяйственной культуры, эффективной в отношении дополнительных вредителей сельскохозяйственных культур.
Такие активные ингредиенты, которые можно наносить на трансгенное растение и/или часть трансгенного растения (например, семя) по настоящему изобретению,
15 описанные выше, включают без ограничения (1) ингибиторы ацетилхолинэстеразы (AChE), например карбаматы, например аланикарб, альдикарб, альдоксикарб, алликсикарб, аминокарб, бендиокарб, бенфуракарб, буфенкарб, бутакарб, бутокарбоксим, бутоксикарбоксим, карбарил, карбофуран, карбосульфан, клоэтокарб, диметилан, этиофенкарб, фенобукарб, фенотиокарб, форметанат, фуратиокарб,
20 изопрокарб, метам-натрия, метиокарб, метомил, метолкарб, оксамил, пиримикарб, промекарб, пропоксур, тиодикарб, тиофанокс, триметакарб, ХМС и ксилилкарб; или органофосфаты, например ацефат, азаметифос, азинфос (-метил, -этил), бромофос-этил, бромфенвинфос (-метил), бутатиофос, кадусафос, карбофенотион, хлорэтоксифос, хлорфенвинфос, хлормефос, хлорпирифос (-метил/-этил), кумафос, цианофенфос,
25 цианофос, хлорфенвинфос, деметон-5-метил, деметон-5-метил сульфон, диалифос, диазинон, дихлофентион, дихлорвос/DDVP, дикротофос, диметоат, диметилвинфос, диоксабензофос, дисульфотон, EPN, этион, этопрофос, этримфос, фамфур, фенамифос, фенитротион, фенсульфотион, фентион, флупиразофос, фонофос, формотион, фосметилан, фостиазат, гептенофос, йодофенфос, ипробенфос, исазофос, изофенфос,
30 изопропил О-салицилат, изоксатион, малатион, мекарбам, метакрифос, метамидофос, метидатион, мевинфос, монокротофос, налед, ометоат, оксидеметон-метил, паратион (-метил/-этил), фентоат, форат, фозалон, фосмет, фосфамидон, фосфокарб, фоксим, пиримифос (-метил/-этил), профенофос, пропафос, пропетамфос, протиофос, протоат, пираклофос, пиридафентион, пиридатион, квиналфос, себуфос, сульфотеп, сульпрофос,
тебупиримфос, темефос, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиометон, триазофос, трихлорфон, вамидотион и имициафос. (2) антагонисты GABA-управляемых хлоридных каналов, например хлорорганические соединения, например камфехлор, хлордан, эндосульфан, гамма-НСН, НСН, гептахлор, линдан и метоксихлор; или 5 фипролы (фенилпиразолы), например ацетопрол, этипрол, фипронил, пирафлупрол, пирипрол, ванилипрол. (3) Модуляторы натриевых каналов/блокаторы потенциалозависимых натриевых каналов, например пиретроиды, например акринатрин, аллетрин (d-цис-транс, d-транс), бета-цифлутрин, бифентрин, биоаллетрин, биоаллетрин-Б-циклопентил-изомер, биоэтанометрин, биоперметрин, биоресметрин,
10 хловапортрин, цис-циперметрин, цис-ресметрин, цис-перметрин, клоцитрин, циклопротрин, цифлутрин, цигалотрин, циперметрин (альфа-, бета-, тета-, дзета-), цифенотрин, дельтаметрин, эмпентрин (lR-изомер), эсфенвалерат, этофенпрокс, фенфлутрин, фенпропатрин, фенпиритрин, фенвалерат, флуброцитринат, флуцитринат, флуфенпрокс, флуметрин, флувалинат, фубфенпрокс, гамма-цигалотрин, имипротрин,
15 кадетрин, лямбда-цигалотрин, метофлутрин, перметрин (цис-, транс-), фенотрин (1R-транс-изомер), праллетрин, профлутрин, протрифенбут, пиресметрин, ресметрин, RU 15525, силафлуофен, тау-флювалинат, тефлутрин, тераллетрин, тетраметрин (1R-изомер), тралометрин, трансфлутрин, ZXI 8901, пиретрин (пиретрум), эфлусиланат; DDT или метоксихлор. (4) Агонисты/антагонисты никотинэргических
20 ацетилхолиновых рецепторов, например хлороникотинилы, например ацетамиприд, клотианидин, динотефуран, имидаклоприд, имидаклотиз, нитенпирам, нитиазин, тиаметоксам, AKD-1022, никотин, бенсултап, картап, тиосултап-натрий и тиоцилам. (5) Аллостерические модуляторы (агонисты) ацетилхолинового рецептора, например спинозины, например спиносад и спинеторам. (6) Активаторы хлоридных каналов,
25 например мектины/макролиды, например абамектин, эмамектин, эмамектинбензоат, ивермектин, лепимектин и милбемектин; или аналоги ювенильного гормона, например гидропрен, кинопрен, метопрен, эпофенонан, трипрен, феноксикарб, пирипроксифен и диофенолан. (7) Активные ингредиенты с неустановленными или неспецифическими механизмами действия, например фумиганты, например метилбромид, хлорпикрин и
30 сульфурилфторид; селективные антифидинги, например криолит, пиметрозин, пирифлуквиназон и флоникамид; или ингибиторы роста клещей, например клофентезин, гекситиазокс, этоксазол. (8) Ингибиторы окислительного фосфорилирования, вещества, разрушающие АТФ, например диафентиурон; оловоорганические соединения, например азоциклотин, цигексатин и
фенбутатиноксид; или пропаргит, тетрадифон. (9) Разобщители окислительного фосфорилирования, которые нарушают Н-протонный градиент, например хлорфенапир, бинапацирл, динобутон, динокап и DNOC. (10) Микроорганизмы, разрушающие оболочку кишки насекомого, например штаммы Bacillus thuringiensis. 5 (11) Ингибиторы биосинтеза хитина, например бензоилмочевины, например бистрифлуорон, хлорфлуазурон, дифлубензурон, флуазурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, новалурон, новифлумурон, пенфлуорон, тефлубензурон или трифлумурон. (12) Бупрофезин. (13) Средства, препятствующие линьке, например циромазин. (14) Агонисты экдизона/разрушающие экдизон вещества,
10 например диацилгидразины, например хромафенозид, галофенозид, метоксифенозид, тебуфенозид и фуфенозид (JS118); или азадирахтин. (15) Октопаминергические агонисты, например амитраз; (16) ингибиторы транспорта электронов участка Ill/ингибиторы транспорта электронов участка II, например гидраметилнон; ацеквиноцил; флуакрипирим или цифлуметофен и циенопирафен. (17) Ингибиторы
15 транспорта электронов, например ингибиторы транспорта электронов сайта I из группы METI акарицидов, например феназаквин, фенпироксимат, пиримидифен, пиридабен, тебуфенпирад, толфенпирад и ротенон; или блокаторы потенциалозависимых натриевых каналов, например индоксакарб и метафлумизон. (18) Ингибиторы биосинтеза жирных кислот, например производные тетроновой кислоты, например
20 спиродиклофен и спиромезифен; или производные тетрамовой кислоты, например спиротетрамат. (19) Нейронные ингибиторы с неустановленным механизмом действия, например бифеназат. (20) Эффекторы рецепторов рианодина, например диамиды, например флубендиамид, (R)-, (8)-3-хлор-М1-{2-метил-4-[1,2,2,2-тетрафтор-1-(трифторометил)-этил] фенил } -N2-( 1 -метил-2-метилсульфонилэтил)фталамид,
25 хлорантранилипрол (ринаксипир) или циантранилипрол (циазипир). (21) Дополнительные активные ингредиенты с неустановленным механизмом действия, например амидофлумет, бенклотиаз, бензоксимат, бромопропилат, бупрофезин, хинометионат, хлордимеформ, хлоробензилат, клотиазобен, циклопрен, дикофол, дицикланил, феноксакрим, фентрифанил, флубензимин, флуфенерим, флутензин,
30 госсиплур, японилур, метоксадиазон, керосин, олеат калия, пиридалил, сульфурамид, тетрасул, триаратен или вербутин, или следующие известные активные соединения: 4-{[(6-бромпиридин-3-ил)метил](2-фторэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), 4-{[(6-фторпирид-3-ил)метил](2,2-дифтороэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), 4-{[(2-хлор-1,3-тиазол-5-ил)метил](2
фтороэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из W0 2007/115644 ), 4-{[(6-хлорпирид-
3-ил)метил](2-фтороэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115644), 4-
{[(6-хлорпирид-3-ил)метил](2,2-дифтороэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из
WO 2007/115644), 4-{[(6-хлор-5-фторпирид-3-ил)метил](метил)амино}фуран-2(5Н)-он
5 (известный из WO 2007/115643), 4-{[(5,6-дихлорпирид-3-ил)метил](2-
фтороэтил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из WO 2007/115646), 4-{[(6-хлор-5-
фторпирид-3 -ил)метил] (циклопропил)амино } фуран-2(5Н)-он (известный из
WO 2007/115643), 4-{[(6-хлорпирид-З-ил)метил](циклопропил)амино}фуран-2(5Н)-он (известный из ЕР-А-0 539 588), 4-{[(6-хлорпирид-З-ил)метил](метил)амино}фуран-
10 2(5Н)-он (известный из ЕР-А-0 539 588), [(6-хлорпиридин-З-ил) метил](метил)оксидо-
лямбда4-сульфанилиден-цианамид (известный из WO 2007/149134), [1-(6-хлорпиридин-
З-ил )этил](метил)оксидо-лямбда4-сульфанилиден-цианамид (известный из
WO 2007/149134) и его диастереомеры (А) и (В) (также известные из WO 2007/149134),
[(6-трифторометилпиридин-3-ил)метил](метил)оксидо-лямбда4-сульфанилиден-
15 цианамид (известный из WO 2007/095229) или [1-(6-трифторометилпиридин-3-
ил)этил](метил)оксидо-лямбда4-сульфанилиден-цианамид (известный из
WO 2007/149134) и его диастереомеры (С) и (D), а именно сульфоксафлор (также известный из WO 2007/149134).
Далее настоящее изобретение будет описано со ссылкой на следующие
20 примеры. Следует иметь в виду, что эти примеры не предназначены для ограничения объема формулы изобретения настоящего изобретения, а, скорее, предназначены быть иллюстративными для некоторых вариантов осуществления. Подразумевается, что любые изменения проиллюстрированных способов, которые могут предлагаться специалистом в данной области, находятся в пределах объема настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Замена домена в мутанте Vip3D (10His-Vip3D-AAPF; Р021)
Сто двадцать шесть аминокислот в 10His-Vip3D-AAPF (Р012) (SEQ ID NO: 6) замещали углевод-связывающим модулем из Р-1,4-манназы (МапА) из 30 Thermoanaerobacterium polysaccharolyticum (Caldanaerobius polysaccharolyticus). Соответсвенно, 137 аминокислот, соответствующих СВМ из GenBank Ш: AAD09354.1
(620 EGGVNMVSNP GFEDGLDSWQ DWQQDMSAVP EAAHNGALGL KIGGGKAAGG GQDIPLKPNT TYILGAWAKF DSKPAGTFDV WQYHLKDAN NTYVQHILNF NETDWTYKQL LFTTPDVFGS TPQLALWKGD TSKANLYVDD VYLVEV 75 6) (SEQ ID
NO:24) вставляли вместо аминокислот 542-667 Р021 (542 GSIEEDNLEP WKANNKNAYV DHTGGVNGTK ALYVHKDGGF SQFIGDKLKP KTEYVIQYTV KGKPSIHLKD ENTGYIHYED TNNNLKDYQT ITKRFTTGTD LKGVYLILKS QNGDEAWGDK FTILEI 667) (SEQ ID NO:6, aa 542-667). Конструирование 5 основывалось на структуре Vip3D с атомным разрешением.
Для получения частей СВМ химер использовали таблицы кодонов для Bacillus
thuringiensis. Однако поскольку экспрессию химерных нуклеотидных
последовательностей осуществляли в Е. coli, то таблицей кодонов могла быть таблица
кодонов для Е. coli или другого прокариота.
10 Было определено, что мутант с заменой на химерный домен (называемый
Vip3Dd3to2ZEX) обладает активностью (инсектицидной) в отношении совки-ипсилон (BCW) (LC50 ~ 700 нг/см2) и частичной активностью в отношении кукурузной листовой совки (FAW) и западного кукурузного жука (WCR).
15 Пример 2. Дополнительные замены домена III в Р021
На основе успешных результатов с Vip3Dd3to2ZEX, восемью другими СВМ из эубактериальных ферментов Р-1,4-маннаназ заменяли домен III Vip3D (аминокислоты 542-667) (Vip3Dd3) из последовательности Р021. Применяемые восемь СВМ представляли собой SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID NO:ll, SEQ 20 ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14 и SEQ ID NO:15 Один белок с заменой домена (Vip3Dd3 на lWKy (SEQ ID NO: 15) был нерастворимым после экспрессии в E.coli, а остальные 7 обеспечивали уничтожение 100% личинок BCW спустя 7 дней при анализе в виде растворимого неочищенного экстракта из E.coli (таблица 1).
Неочищенный экстракт
из Е. coli
День 5
День 7
Обработка
Общее количество
Количество мертвых
% смертности
Общее количество
Количество мертвых
% смертности
Vip3Dd3tolWKY (нерастворимый)
Vip3Dd3toCENC
83%
100%
Vip3Dd3toGP21
100%
Vip3Dd3toPsHGF7
100%
100%
Растворимая фракция лизированных клеток Е. coli, экспрессирующих белки с различными заменами домена III Vip3D на СВМ (Р021) представлена на фигуре 2. Как показано, замена 3d на 1WKY в Vip3D не давала растворимый белок. Таким образом, 5 этот белок слияния нельзя протестировать в отношении эффективности.
Каждый из 2ZEX, 2ZEZ, 10F3, 1РМН, 1WKY и 2GBP происходит из растворимых структур, содержащих углевод-связывающие модули из ферментов Р-1,4-маннаназ типа В (фигура 3).
В дополнение к тестированию белков с заменами СВМ исходя из 10 существующих данных Protein Databank, три белка слияния с СВМ на основе других белков Р-1,4-маннаназ тестировали основываясь на их сходстве согласно BLAST: СепС, gp21 и PsHGF7 (фигура 4).
Первая замена, приведенная в таблице 1 (Vip3Dd3to2ZEZ), представляет собой СВМ из такого же фермента, как используемый для Vip3Dd3to2ZEX, GenBank ID: 15 AAD09354.1. Эта конкретная маннаназа имеет два СВМ, последовательно расположенных после каталитического домена. 2ZEX является первым СВМ, расположенным сразу после 2ZEZ. Несмотря на то, что СВМ 2ZEZ имеет тот же субстрат и связан с тем же ферментом, его последовательность на 64% идентична 2ZEX. Последовательность 2ZEZ представляет собой (75 6 GMDGWPDWGY 20 PVSAVPE7AAY GGTKGFKLSG GKQAGMGQKV ALKPNTTYIL GAWGKF ТАКР GTYCDVIVQY HLKDANNTYV QNILRFTETD WTYKQWFTT PDAFGSDPEF VLWKDDASNA DFYADNITLV EV 899) (SEQ ID NO:25). Как 2ZEX, так и 2ZEZ классифицировали как принадлежащие семейству 16 СВМ.
Ниже представлены последовательности СВМ, которыми были заменены 25 аминокислоты 542-667 Р021.
2BGP GenBank: АА031761.1 эндо-Ь1,4-маннаназа 5С [Cellvibriojaponicus]. СВМ35
(208 TAASASI TAP AQLVGNVGEL QGAGSAVIWN VDVPVTGEYR INLTWSSPYS SKVNTLVMDG TALSYAFAEA TVPVTYVQTK TLSAGNHSFG VRVGSSDWGY MNVHSLKLEL LG 319) (SEQ ID NO:28)
5 10FE происходит из С-концевых 176 аминокислот эндо-Р-1,4-маннаназы Thermotoga maritima. Он был классифицирован как принадлежащий семейству 27 СВМ. Аминокислоты NP_229032 (505 DFSSPEEVKN WWNSGTWQAE FGSPDIEWNG EVGNGALQLN VKLPGKSDWE EVRV7ARKFER LSECEILEYD IYIPNVEGLK GRLRPYAVLN PGWVKIGLDM NN7ANVESAEI ITFGGKEYRR FHVRIEFDRT 10 AGVKELHIGV VGDHLRYDGP IFIDNVRLYKR 665) (SEQ ID NO:26) клонировали в домен 3 Vip3D.
1РМН. СВМ27-1. GenBank: AAC44232.1. р-1,4-маннаназа Caldicellulosiruptor saccharolyticus.
15 (4 5 DFEDGTVMSF GEAWGDSLKC IKKVSVSQDL QRPGNKY7ALR LDVE FNPNNG WDQGDLGTWI GGWEGQFDF TGYKSVE FEM FIPYDEFSKS QGGFAYKWI NDGWKELGSE FN IT7ANAGKK VKINGKDY TV IHKAFAIPED FRTKKRAQLV FQFAGQNSNY KGPIYLDNVR IRPE 218) (SEQ ID NO:27)
20 1WKY. CBM59. Р-1,4-маннаназа. Caldicellulosiruptor saccharolyticus. (Щелочная маннаназа) (Amn5). GenBank: AAC44232.1; (34 5 DFEESTQGWT GSSLSRGPWT VTEWSSKGNH SLKADIQMSS NSQHYLHVIQ NRSLQQNSRI QAT VKHANW G SVGNGM TARL YVKTGHGYTW YSGSFVPING SSGTTLSLDL SNVQNLSQVR EIGVQFQSES NSSGQTSIYI DNVIVE 490) (SEQ ID NO:32)
СепС. Углевод-связывающий. Белок с доменом СепС \Paenibacillus sp. JDR-2]. Эталонная последовательность из NCBI: YP_003011283.1.; (202 PGLEDGINNW QAWGEGFT7AA SDMSHTGSAS LKVLLNNGGR QWALQPGKS YKLGVWGKTA GTGTGTQTAT VMINYKKPED DSSHTYGSFQ FGPDNSEFTY KEITFETPDD 30 MAQEWGTQFV SIWSEGADQV YLDDFTLSEV 341) (SEQ ID N0:30).
Gp21. Gp21 [Klebsiella pneumoniae подвид pneumoniae HS11286]. Эталонная последовательность из NCBI: YP_005220866.1.; (69 PSFERGTEGY TGWSGIATW TLQVPHLGTK 7AAKL7AAGGSA GVGQKISFKK DRSYKIGIWA KQDPNTTIQS 35 TDNTKFRV7AD GNGLIASKAY GPFTSNWQEV SWTWKATKDV L7ADVQFTAFL SAGAMYFDDF YWDV 203) (SEQ ID NO:29)
PsHGF7. Белок с углевод-связывающим доменом [Paenibacillus sp. HGF7]. Эталонная последовательность из NCBI: WP_009674454.1.
40 (66 PGFEDNLASW TNWGNTSSVT S PAFAGAKAA RIASGEGGAG QIIPGIPSGT TYVLSGHGSV SAGTDTAIVG VDCLD7ANNNV L7AKNTLRFNQ TLYEFKSTAF TTVPGT7AKLQ VYIYKNADSG ANAFLDDLSL VEV 195) (SEQ ID NO:31).
Схемы замещений представлены на фигурах 6А-6С.
Пример 3. Тест для определения спектра активности
Все растворимые конструкции очищали с помощью никель-хелатной аффинной хроматографии. Белки помещали в фосфатно-солевой буфер (PBS) и тестировали в
отношении различных видов чешуекрылых на стадии L1-L2 (п=12) с помощью наслаивания на питательную среду. Тестировали две дозы: 32 мкг/см2 и 1 мкг/см2. Контролями служили очищенный Р021, который представляет собой меченный 10-гистидином Vip3D с замещениями аминокислот AAPF в активном сайте (SEQ ID 5 NO:6), и буфер в качестве контроля (PBS). Активность каждой из конструкций тестировали в отношении кукурузного мотылька (ЕСВ), американской кукурузной совки (СЕМ), совки-ипсилон (BCW) и кукурузной листовой совки (FAW). Результаты тестов активности представлены в таблице 2 ниже.
10 Таблица 2. Активность белков Р012 с заменами в отношении кукурузного мотылька (ЕСВ), американской кукурузной совки (СЕМ), совки-ипсилон (BCW) и кукурузной листовой совки (FAW).
144-часовой анализ Наслаивание на питательную среду
смертности 32 мкг/см2
смертности 1 мкг/см2
0/ /0
смертности 32 мкг/см2
смертности 1 мкг/см2
Кукурузный мотылек
Американская кукурузная совка
Р021
(HisVip3D_AAPF)
100
Р021 (HisVip3D_AAPF)
100
Vip3Dd3_to_2ZEX
Vip3Dd3_to_2ZEX
100
Vip3Dd3_to_2ZEZ
Vip3Dd3_to_2ZEZ
Vip3Dd3_to_10FE
Vip3Dd3_to_10FE
Vip3Dd3_to_lPMH
Vip3Dd3_to_lPMH
Vip3Dd3_to_2BGP
Vip3Dd3_to_2BGP
Vip3Dd3_to_GP21
Vip3Dd3_to_GP21
100
Vip3Dd3_to_CENC
Vip3Dd3_to_CENC
Vip3Dd3_to_PSHGF7
Vip3Dd3_to_PSHGF7
PBS
PBS
Совка-ипсилон
смертности 32 мкг/см2
смертности 1 мкг/см2
Кукурузная листовая совка
смертности 32 мкг/см2
смертности 1 мкг/см2
P021
(HisVip3D_AAPF)
100
100
P021 (HisVip3D_AAPF)
100
100
Vip3Dd3_to_2ZEX
100
Vip3Dd3_to_2ZEX
100
Vip3Dd3_to_2ZEZ
100
Vip3Dd3_to_2ZEZ
100
Vip3Dd3_to_10FE
Vip3Dd3_to_10FE
Vip3Dd3_to_lPMH
Vip3Dd3_to_lPMH
Vip3Dd3_to_2BGP
Vip3Dd3_to_2BGP
Vip3Dd3_to_GP21
100
100
Vip3Dd3_to_GP21
100
100
Vip3Dd3_to_CENC
100
Vip3Dd3_to_CENC
Vip3Dd3_to_PSHGF7
100
Vip3Dd3_to_PSHGF7
100
PBS
PBS
Результаты произведения замен домена III Vip3D на последовательности СВМ Р-1,4-маннаназы типа В очевидны. При применении очищенных белков наблюдался контроль широкого спектра Lepidoptera. Определенные химеры характеризовались большей или меньшей токсичностью в отношении любого данного насекомого при 5 конкретной дозе. Например, Vip3Dd3_to_GP21 по всей видимости является одним из наиболее токсичных белков слияния в отношении конкретных тестируемых насекомых; однако он менее токсичен в отношении CEW по сравнению с Vip3Dd3_to_2ZEX. Химеры вероятно пригодны для контроля множества чешуекрылых и других сельскохозяйственных вредителей.
Пример 4. Vip3A с заменами
Этими же доменами СВМ, которыми заменяли домен III Р021, как описано в примерах 1 и 2, заменяли домен III полипептидов Vip3A. Домены СВМ клонировали в каркасную последовательность Vip3A по тем же точкам соединения (например,
15 аминокислоты 541 и 668), как и в Р021 Vip3D. Белки Vip3A не имели изменение AAPF в активном сайте и не содержали N-концевую гистидиновую метку, как в Р021. В связи с отсутствием стадии очистки на одной колонке, для теста с целью определения спектра применяли наслаивание на питательную среду растворимого неочищенного экстракта из E.coli. Эти конструкции хорошо экспрессировались в неочищенных
20 экстрактах, и в связи с этим такие анализы представляли собой тест с высокой дозой. Неочищенный экстракт из E.coli с пустым вектором был включен в качестве контроля. Результаты представлены в таблице 3 ниже.
Как видно на геле после SDS-PAGE, почти все белки были высокорастворимыми, за исключением химер 2ZEX и 10FE (фигура 5). Эти две
25 конструкции характеризовались экспрессией некоторого количества растворимого белка и активностью, как показано в таблице 3 (ниже).
Из результатов видно, что аналогичные замены СВМ в Vip3A являются эффективными для контроля широкого спектра чешуекрылых. Общий паттерн для ЕСВ схож с таковым для высоких доз белков Vip3D с заменами на 2ZEZ и GP21, которые являются наиболее активными. Другие 3 вида тестируемых видов насекомых также 10 были высоко восприимчивыми к этим белкам слияния. Однако замена 10FE была токсичной только для BCW. Из результатов анализа в геле видно, что 10FE экспрессировался на значительно более низких уровнях по сравнению с большинством других белков (фигура 5), что может объясняться ошибочной инактивацией. Белок
слияния 2ZEX экспрессировался на более низких уровнях, но демонстрировал более высокую активность в отношении всех личинок насекомых, за исключением ЕСВ. Из данных в вышеприведенных примерах видно, что домен III полипептидов Vip3 может быть заменен углевод-связывающими модулями типа В из ферментов 0-1,45 маннаназ с получением активных токсинов. Эти токсины продемонстрировали различающуюся активность в отношении четырех тестируемых видов Lepidoptera с уничтожением большинства FAW, CEW и BCW. На ЕСВ эффективно целенаправленно воздействовали две химеры. Как Vip3D, так и Vip3A служили в качестве подходящих каркасов для этих вариантов конструирования и давали различающуюся активность.
10 Тестируемые насекомые являются примерами типов, которые подвергаются контролю с помощью конструкции по настоящему изобретению. Кроме того, определенные СВМ, которыми заменяют домен III полипептидов Vip3, также являются примерами типов доменов СВМ, которые можно применять в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, любой СВМ Р-1,4-маннаназы, в частности, любой СВМ типа В Р-1,4-
15 маннаназы, может быть применимым в соответствии с настоящим изобретением, в случае включения в полипептид Vip3 или замещения домена III полипептида Vip3. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления любой СВМ, который является по меньшей мере на 70% гомологичным или идентичным любой из аминокислотных последовательностей под SEQ ID N0:24-32, может быть применимым в соответствии с
20 настоящим изобретением, в случае включения в полипептид Vip3 или замещения домена III полипептида Vip3.
Следует отметить, что в дополнение к контролю насекомых непосредственно с помощью композиций, описанных в данном документе, конструкции также могут быть экспедированы в трансгенных растениях, что обеспечивает фермера дополнительными
25 инструментами для контроля вредителей растений.
Примеры, представленные выше, явно иллюстрируют преимущества настоящего изобретения. Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано со ссылкой на конкретные детали некоторых его вариантов осуществления, не подразумевается, что такие детали следует считать ограничениями объема заявленного изобретения, за
30 исключением и до такой степени, в которой они включены в прилагаемую формулу изобретения настоящего изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ЗИНГЕНТА ПАРТИСИПЕЙШНС АГ
<120> МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ VIP3
<130> 9207-116WO
<150> US 62/043,922
<151> 2014-08-29
<160> 56
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 788
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (1)..(788)
<223> Аминокислотная последовательность Vip3D
<400> 1
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile
530 535 540
Glu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Gly Phe Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His
595 600 605
Leu Lys Asp Glu Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn
610 615 620
Asn Leu Lys Asp Tyr Gln Thr Ile Thr Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Ala Trp Gly Asp Lys Phe Thr Ile Leu Glu Ile Lys Pro Ala Glu Asp
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro
675 680 685
Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn
690 695 700
Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser
705 710 715 720
Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His
740 745 750
Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val
755 760 765
Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn
770 775 780
Val Ser Ile Lys
785
<210> 2
<211> 789
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (1)..(789)
<223> Аминокислотная последовательность Vip3A
<400> 2
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile
530 535 540
Glu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Gly Ile Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His
595 600 605
Leu Lys Asp Glu Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn
610 615 620
Asn Leu Glu Asp Tyr Gln Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Ala Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Ser Pro Ser Glu Lys
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly
675 680 685
Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg
690 695 700
Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg
705 710 715 720
Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val
740 745 750
Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu
755 760 765
Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr
770 775 780
Asp Val Ser Ile Lys
785
<210> 3 <211> 787 <212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> ДРУГ0Й_ПРИЗНАК <222> (1)..(787)
<223> Аминокислотная последовательность Vip3B <400> 3
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Asn Leu
530 535 540
Glu Gly Glu Asn Leu Glu Pro Trp Ile Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Ile Asn Gly Thr Lys Val Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Glu Phe Ser Gln Phe Val Gly Gly Lys Leu Lys Ser Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Ile Val Lys Gly Lys Ala Ser Ile Tyr
595 600 605
Leu Lys Asp Lys Lys Asn Glu Asn Ser Ile Tyr Glu Glu Ile Asn Asn
610 615 620
Asp Leu Glu Gly Phe Gln Thr Val Thr Lys Arg Phe Ile Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Ser Ser Gly Ile His Leu Ile Phe Thr Ser Gln Asn Gly Glu Gly
645 650 655
Ala Phe Gly Gly Asn Phe Ile Ile Ser Glu Ile Arg Thr Ser Glu Glu
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln
675 680 685
Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn
690 695 700
Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser
705 710 715 720
Met Asn Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp
740 745 750
Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val
755 760 765
Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe
770 775 780
Ser Ile Lys
785
<210> 4
<211> 803
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (1)..(803)
<223> Аминокислотная последовательность Vip3C
<400> 4
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145
150
155
160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405
410
415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Trp Asp Ile Glu Glu Asp Ser Leu Glu Pro Trp
545 550 555 560
Val Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr Val Asp Asn Thr Gly Gly Ile Glu
565 570 575
Arg Ser Lys Ala Leu Phe Thr Gln Gly Asp Gly Glu Phe Ser Gln Phe
580 585 590
Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Asn Thr Asp Tyr Ile Ile Gln Tyr Thr
595 600 605
Val Lys Gly Lys Pro Ala Ile Tyr Leu Lys Asn Lys Ser Thr Gly Tyr
610 615 620
Ile Thr Tyr Glu Asp Thr Asn Gly Asn Ser Glu Glu Phe Gln Thr Ile
625 630 635 640
Ala Val Lys Phe Thr Ser Glu Thr Asp Leu Ser Gln Thr His Leu Val
645 650 655
Phe Lys Ser Gln Asn Gly Tyr Glu Ala Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile
660
665
670
Leu Glu Ala Lys Leu Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys
675 680 685
Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu
690 695 700
Leu Arg Ile Asp His Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn
705 710 715 720
Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu
725 730 735
Trp Ala Lys Val Ile Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu
740 745 750
Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe
755 760 765
Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu
770 775 780
Arg Thr Ser Ser Thr Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu
785 790 795 800
Lys Ile Glu
<210> 5
<211> 781
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная аминокислотная последовательность Vip3
<400> 5
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile
530 535 540
Glu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr
545 550 555 560
Val Asp His Thr Gly Gly Ile Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His
565 570 575
Lys Asp Gly Gly Phe Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys
580 585 590
Thr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His
595 600 605
Leu Lys Asp Lys Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn
610 615 620
Asn Leu Glu Asp Phe Gln Thr Ile Thr Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Ser Gly Val His Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Ala Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Lys Pro Ser Glu Asp
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Ser Asn Ala Trp Ile Ser Thr Gly
675 680 685
Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Gly Asn Gly Thr
690 695 700
Phe Arg Gln Ser Leu Asn Leu Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser
705 710 715 720
Phe Ser Val Ser Gly Phe Ala Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu
725 730 735
Val Leu Phe Glu Lys Ser Met Ser Ser Lys Asp Ile Ser Glu Ser Phe
740 745 750
Thr Thr Ala Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Ile Glu Leu Ser Arg Ser
755 760 765
Thr Ser Gly Gly Ile Ser Phe Arg Asp Val Ser Ile Lys
770 775 780
<210> 6
<211> 798
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Аминокислотная последовательность 10His-Vip3D-AAPH
<400> 6
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260
265
270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515
520
525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile Glu Glu Asp Asn Leu Glu
545 550 555 560
Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr Val Asp His Thr Gly Gly
565 570 575
Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His Lys Asp Gly Gly Phe Ser
580 585 590
Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys Thr Glu Tyr Val Ile Gln
595 600 605
Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His Leu Lys Asp Glu Asn Thr
610 615 620
Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asn Leu Lys Asp Tyr Gln
625 630 635 640
Thr Ile Thr Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr Asp Leu Lys Gly Val Tyr
645 650 655
Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu Ala Trp Gly Asp Lys Phe
660 665 670
Thr Ile Leu Glu Ile Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu
675 680 685
Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly
690 695 700
Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser
725 730 735
Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu
740 745 750
Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys
755 760 765
Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser
770 775 780
Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 7
<211> 809
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021d3_to_2ZEX
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(688)
<223> Домен 2ZEX
<400> 7
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420
425
430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe Glu Asp Gly Leu Asp Ser
545 550 555 560
Trp Gln Asp Trp Gln Gln Asp Met Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala His
565 570 575
Asn Gly Ala Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly Gly Lys Ala Ala Gly Gly
580 585 590
Gly Gln Asp Ile Pro Leu Lys Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala
595 600 605
Trp Ala Lys Phe Asp Ser Lys Pro Ala Gly Thr Phe Asp Val Val Val
610 615 620
Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr Tyr Val Gln His Ile Leu
625 630 635 640
Asn Phe Asn Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys Gln Leu Leu Phe Thr Thr
645 650 655
Pro Asp Val Phe Gly Ser Thr Pro Gln Leu Ala Leu Trp Lys Gly Asp
660 665 670
Thr Ser Lys Ala Asn Leu Tyr Val Asp Asp Val Tyr Leu Val Glu Val
675
680
685
Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser
690 695 700
Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile
705 710 715 720
Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser
725 730 735
Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val
740 745 750
Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met
755 760 765
Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn
770 775 780
Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His
785 790 795 800
Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys 805
<210> 8
<211> 809
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021d3_to2ZEZ
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(688)
<223> Домен 2ZEZ
<400> 8
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305
310
315
320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe Glu Asn Gly Met Asp Gly
545 550 555 560
Trp Pro Asp Trp Gly Tyr Pro Val Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala Tyr
565 570 575
Gly Gly Thr Lys Gly Phe Lys Leu Ser Gly Gly Lys Gln Ala Gly Met
580 585 590
Gly Gln Lys Val Ala Leu Lys Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala
595 600 605
Trp Gly Lys Phe Thr Ala Lys Pro Gly Thr Tyr Cys Asp Val Ile Val
610 615 620
Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr Tyr Val Gln Asn Ile Leu
625 630 635 640
Arg Phe Thr Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys Gln Val Val Phe Thr Thr
645 650 655
Pro Asp Ala Phe Gly Ser Asp Pro Glu Phe Val Leu Trp Lys Asp Asp
660 665 670
Ala Ser Asn Ala Asp Phe Tyr Ala Asp Asn Ile Thr Leu Val Glu Val
675 680 685
Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser
690 695 700
Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile
705 710 715 720
Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser
725 730 735
Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val
740 745 750
Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met
755 760 765
Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn
770 775 780
Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His
785 790 795 800
Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys 805
<210> 9
<211> 833
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021d3_to_1OFE
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(712)
<223> Домен 1OFE
<400> 9
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195
200
205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Ser Ser Pro Glu Glu Val Lys
545 550 555 560
Asn Trp Trp Asn Ser Gly Thr Trp Gln Ala Glu Phe Gly Ser Pro Asp
565 570 575
Ile Glu Trp Asn Gly Glu Val Gly Asn Gly Ala Leu Gln Leu Asn Val
580 585 590
Lys Leu Pro Gly Lys Ser Asp Trp Glu Glu Val Arg Val Ala Arg Lys
595 600 605
Phe Glu Arg Leu Ser Glu Cys Glu Ile Leu Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile
610 615 620
Pro Asn Val Glu Gly Leu Lys Gly Arg Leu Arg Pro Tyr Ala Val Leu
625 630 635 640
Asn Pro Gly Trp Val Lys Ile Gly Leu Asp Met Asn Asn Ala Asn Val
645 650 655
Glu Ser Ala Glu Ile Ile Thr Phe Gly Gly Lys Glu Tyr Arg Arg Phe
660 665 670
His Val Arg Ile Glu Phe Asp Arg Thr Ala Gly Val Lys Glu Leu His
675 680 685
Ile Gly Val Val Gly Asp His Leu Arg Tyr Asp Gly Pro Ile Phe Ile
690 695 700
Asp Asn Val Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser
705
710
715
720
Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser
725 730 735
Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe
740 745 750
Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe
755 760 765
Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val
770 775 780
Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly
785 790 795 800
Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser
805 810 815
Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile
820 825 830
Lys
<210> 10
<211> 846
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021d3_to_1PMH
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(725)
<223> Домен 1PMH
<400> 10
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305
310
315
320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Glu Asp Gly Thr Val Met Ser
545 550 555 560
Phe Gly Glu Ala Trp Gly Asp Ser Leu Lys Cys Ile Lys Lys Val Ser
565 570 575
Val Ser Gln Asp Leu Gln Arg Pro Gly Asn Lys Tyr Ala Leu Arg Leu
580 585 590
Asp Val Glu Phe Asn Pro Asn Asn Gly Trp Asp Gln Gly Asp Leu Gly
595 600 605
Thr Trp Ile Gly Gly Val Val Glu Gly Gln Phe Asp Phe Thr Gly Tyr
610 615 620
Lys Ser Val Glu Phe Glu Met Phe Ile Pro Tyr Asp Glu Phe Ser Lys
625 630 635 640
Ser Gln Gly Gly Phe Ala Tyr Lys Val Val Ile Asn Asp Gly Trp Lys
645 650 655
Glu Leu Gly Ser Glu Phe Asn Ile Thr Ala Asn Ala Gly Lys Lys Val
660 665 670
Lys Ile Asn Gly Lys Asp Tyr Thr Val Ile His Lys Ala Phe Ala Ile
675 680 685
Pro Glu Asp Phe Arg Thr Lys Lys Arg Ala Gln Leu Val Phe Gln Phe
690 695 700
Ala Gly Gln Asn Ser Asn Tyr Lys Gly Pro Ile Tyr Leu Asp Asn Val
705 710 715 720
Arg Ile Arg Pro Glu Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu
725 730 735
Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly
740 745 750
Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser
755 760 765
Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser
770 775 780
Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu
785 790 795 800
Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys
805 810 815
Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser
820
825
830
Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
835 840 845
<210> 11
<211> 784
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021_to_2BGP
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(663)
<223> Домен 2BGP
<400> 11
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420
425
430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Thr Ala Ala Ser Ala Ser Ile Thr Ala
545 550 555 560
Pro Ala Gln Leu Val Gly Asn Val Gly Glu Leu Gln Gly Ala Gly Ser
565 570 575
Ala Val Ile Trp Asn Val Asp Val Pro Val Thr Gly Glu Tyr Arg Ile
580 585 590
Asn Leu Thr Trp Ser Ser Pro Tyr Ser Ser Lys Val Asn Thr Leu Val
595 600 605
Met Asp Gly Thr Ala Leu Ser Tyr Ala Phe Ala Glu Ala Thr Val Pro
610 615 620
Val Thr Tyr Val Gln Thr Lys Thr Leu Ser Ala Gly Asn His Ser Phe
625 630 635 640
Gly Val Arg Val Gly Ser Ser Asp Trp Gly Tyr Met Asn Val His Ser
645 650 655
Leu Lys Leu Glu Leu Leu Gly Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro
660 665 670
Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile
675
680
685
Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg
690 695 700
Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr
705 710 715 720
Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu
725 730 735
Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr
740 745 750
Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg
755 760 765
Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
770 775 780
<210> 12
<211> 807
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021_to_GP21
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(686)
<223> Домен GP21
<400> 12
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340
345
350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Ser Phe Glu Arg Gly Thr Glu Gly
545 550 555 560
Tyr Thr Gly Trp Ser Gly Ile Ala Thr Val Val Thr Leu Gln Val Pro
565 570 575
His Leu Gly Thr Lys Ala Ala Lys Leu Ala Ala Gly Gly Ser Ala Gly
580 585 590
Val Gly Gln Lys Ile Ser Phe Lys Lys Asp Arg Ser Tyr Lys Ile Gly
595
600
605
Ile Trp Ala Lys Gln Asp Pro Asn Thr Thr Ile Gln Ser Thr Asp Asn
610 615 620
Thr Lys Phe Arg Val Ala Asp Gly Asn Gly Leu Ile Ala Ser Lys Ala
625 630 635 640
Tyr Gly Pro Phe Thr Ser Asn Trp Gln Glu Val Ser Trp Thr Trp Lys
645 650 655
Ala Thr Lys Asp Val Leu Ala Asp Val Gln Phe Thr Ala Phe Leu Ser
660 665 670
Ala Gly Ala Met Tyr Phe Asp Asp Phe Tyr Val Val Asp Val Lys Pro
675 680 685
Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile
690 695 700
Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu
705 710 715 720
Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser
725 730 735
Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val
740 745 750
Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser
755 760 765
Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly
770 775 780
Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser
785 790 795 800
Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys 805
<210> 13
<211> 812
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021_to_CENC
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(691)
<223> Домен CenC
<400> 13
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225
230
235
240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485
490
495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Leu Glu Asp Gly Ile Asn Asn
545 550 555 560
Trp Gln Ala Trp Gly Glu Gly Phe Thr Ala Ala Ser Asp Met Ser His
565 570 575
Thr Gly Ser Ala Ser Leu Lys Val Leu Leu Asn Asn Gly Gly Arg Gln
580 585 590
Val Val Ala Leu Gln Pro Gly Lys Ser Tyr Lys Leu Gly Val Trp Gly
595 600 605
Lys Thr Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gln Thr Ala Thr Val Met Ile
610 615 620
Asn Tyr Lys Lys Pro Glu Asp Asp Ser Ser His Thr Tyr Gly Ser Phe
625 630 635 640
Gln Phe Gly Pro Asp Asn Ser Glu Phe Thr Tyr Lys Glu Ile Thr Phe
645 650 655
Glu Thr Pro Asp Asp Met Ala Gln Glu Trp Gly Thr Gln Phe Val Ser
660 665 670
Ile Trp Ser Glu Gly Ala Asp Gln Val Tyr Leu Asp Asp Phe Thr Leu
675 680 685
Ser Glu Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn
690 695 700
Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys
705 710 715 720
Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser
725 730 735
Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro
740
745
750
Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser
755 760 765
Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu
770 775 780
Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly
785 790 795 800
Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys 805 810
<210> 14
<211> 805
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021_to_PsHGF7
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(684)
<223> Домен PSHGF7
<400> 14
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
1 5 10 15
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115
120
125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260 265 270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515 520 525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe Glu Asp Asn Leu Ala Ser
545 550 555 560
Trp Thr Asn Trp Gly Asn Thr Ser Ser Val Thr Ser Pro Ala Phe Ala
565 570 575
Gly Ala Lys Ala Ala Arg Ile Ala Ser Gly Glu Gly Gly Ala Gly Gln
580 585 590
Ile Ile Pro Gly Ile Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Val Leu Ser Gly His
595 600 605
Gly Ser Val Ser Ala Gly Thr Asp Thr Ala Ile Val Gly Val Asp Cys
610 615 620
Leu Asp Ala Asn Asn Asn Val Leu Ala Lys Asn Thr Leu Arg Phe Asn
625
630
635
640
Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Lys Ser Thr Ala Phe Thr Thr Val Pro Gly
645 650 655
Thr Ala Lys Leu Gln Val Tyr Ile Tyr Lys Asn Ala Asp Ser Gly Ala
660 665 670
Asn Ala Phe Leu Asp Asp Leu Ser Leu Val Glu Val Lys Pro Ala Glu
675 680 685
Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr
690 695 700
Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr
705 710 715 720
Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr
725 730 735
Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn
740 745 750
Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser
755 760 765
His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr
770 775 780
Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu
785 790 795 800
Asn Val Ser Ile Lys
805
<210> 15
<211> 818
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность P021_to_1WKY
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (552)..(697)
<223> Домен 1WKY
<400> 15
Met His His His His His His His His His His Asn Met Asn Asn Thr
Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe Ile Asp Tyr Phe Asn Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp Ile Met Asn Met Ile Phe
35 40 45
Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys Leu Asp Gly Val Asn Gly
65 70 75 80
Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser
85 90 95
Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln Asn Gln Val Leu Asn Asp
100 105 110
Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr Met Leu His Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val Met Lys Gln Asn Tyr Ala
130 135 140
Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Leu Gln Glu Ile Ser
145 150 155 160
Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val Leu Ile Asn Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile Lys Tyr Val Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ala Ala Pro Phe Val Lys Lys
195 200 205
Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Leu Thr Glu
210 215 220
Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr
225 230 235 240
Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile Ala Lys Glu Asn Val Lys
260
265
270
Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu
275 280 285
Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys
290 295 300
Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His
305 310 315 320
Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala Lys Val Lys Gly Ser Asp
340 345 350
Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys Pro Gly His Ala Leu Val
355 360 365
Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu
370 375 380
Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu
385 390 395 400
Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe Cys Pro Asp Gln Ser Glu
405 410 415
Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile
420 425 430
Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val
435 440 445
Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys
450 455 460
Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Ala Asn
465 470 475 480
Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu
485 490 495
Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala Asp Glu Asn Ser Arg Leu
500 505 510
Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Ala Thr
515
520
525
Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile Val Pro Pro Ser Gly Phe
530 535 540
Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Glu Glu Ser Thr Gln Gly Trp
545 550 555 560
Thr Gly Ser Ser Leu Ser Arg Gly Pro Trp Thr Val Thr Glu Trp Ser
565 570 575
Ser Lys Gly Asn His Ser Leu Lys Ala Asp Ile Gln Met Ser Ser Asn
580 585 590
Ser Gln His Tyr Leu His Val Ile Gln Asn Arg Ser Leu Gln Gln Asn
595 600 605
Ser Arg Ile Gln Ala Thr Val Lys His Ala Asn Trp Gly Ser Val Gly
610 615 620
Asn Gly Met Thr Ala Arg Leu Tyr Val Lys Thr Gly His Gly Tyr Thr
625 630 635 640
Trp Tyr Ser Gly Ser Phe Val Pro Ile Asn Gly Ser Ser Gly Thr Thr
645 650 655
Leu Ser Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Asn Leu Ser Gln Val Arg Glu
660 665 670
Ile Gly Val Gln Phe Gln Ser Glu Ser Asn Ser Ser Gly Gln Thr Ser
675 680 685
Ile Tyr Ile Asp Asn Val Ile Val Glu Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu
690 695 700
Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala
705 710 715 720
Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr
725 730 735
Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser
740 745 750
Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu
755 760 765
Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser
770 775 780
Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu
785 790 795 800
Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser
805 810 815
Ile Lys
<210> 16
<211> 800
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_2ZEX
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(678)
<223> Домен 2ZEX
<400> 16
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385
390
395
400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Gly Leu Asp Ser Trp Gln Asp Trp Gln Gln Asp Met Ser Ala
545 550 555 560
Val Pro Glu Ala Ala His Asn Gly Ala Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly
565 570 575
Gly Lys Ala Ala Gly Gly Gly Gln Asp Ile Pro Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Ala Lys Phe Asp Ser Lys Pro Ala Gly
595 600 605
Thr Phe Asp Val Val Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln His Ile Leu Asn Phe Asn Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Leu Leu Phe Thr Thr Pro Asp Val Phe Gly Ser Thr Pro Gln Leu
645 650 655
Ala Leu Trp Lys Gly Asp Thr Ser Lys Ala Asn Leu Tyr Val Asp Asp
660 665 670
Val Tyr Leu Val Glu Val Ser Pro Ser Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln
705 710 715 720
Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val
725 730 735
Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val Ser Glu Met Phe Thr
755 760 765
Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn
770 775 780
Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys
785 790 795 800
<210> 17
<211> 800
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_2ZEZ
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(678)
<223> Домен 2ZEZ
<400> 17
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asn Gly Met Asp Gly Trp Pro Asp Trp Gly Tyr Pro Val Ser Ala
545
550
555
560
Val Pro Glu Ala Ala Tyr Gly Gly Thr Lys Gly Phe Lys Leu Ser Gly
565 570 575
Gly Lys Gln Ala Gly Met Gly Gln Lys Val Ala Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Gly Lys Phe Thr Ala Lys Pro Gly Thr
595 600 605
Tyr Cys Asp Val Ile Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln Asn Ile Leu Arg Phe Thr Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Val Val Phe Thr Thr Pro Asp Ala Phe Gly Ser Asp Pro Glu Phe
645 650 655
Val Leu Trp Lys Asp Asp Ala Ser Asn Ala Asp Phe Tyr Ala Asp Asn
660 665 670
Ile Thr Leu Val Glu Val Ser Pro Ser Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln
705 710 715 720
Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val
725 730 735
Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val Ser Glu Met Phe Thr
755 760 765
Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn
770 775 780
Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys
785 790 795 800
<210> 18
<211> 824
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_1OFE
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(702)
<223> Домен OFE
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(702)
<223> Домен 1OFE
<400> 18
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Ser
530 535 540
Ser Pro Glu Glu Val Lys Asn Trp Trp Asn Ser Gly Thr Trp Gln Ala
545 550 555 560
Glu Phe Gly Ser Pro Asp Ile Glu Trp Asn Gly Glu Val Gly Asn Gly
565 570 575
Ala Leu Gln Leu Asn Val Lys Leu Pro Gly Lys Ser Asp Trp Glu Glu
580 585 590
Val Arg Val Ala Arg Lys Phe Glu Arg Leu Ser Glu Cys Glu Ile Leu
595 600 605
Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asn Val Glu Gly Leu Lys Gly Arg Leu
610 615 620
Arg Pro Tyr Ala Val Leu Asn Pro Gly Trp Val Lys Ile Gly Leu Asp
625 630 635 640
Met Asn Asn Ala Asn Val Glu Ser Ala Glu Ile Ile Thr Phe Gly Gly
645 650 655
Lys Glu Tyr Arg Arg Phe His Val Arg Ile Glu Phe Asp Arg Thr Ala
660 665 670
Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly Val Val Gly Asp His Leu Arg Tyr
675 680 685
Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn Val Arg Leu Tyr Lys Arg Ser Pro
690 695 700
Ser Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr
705 710 715 720
Ser Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln
725 730 735
Gly Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser
740 745 750
Thr Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile
755 760 765
Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala
770 775 780
Lys Asp Val Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe
785 790 795 800
Tyr Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val
805 810 815
His Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys 820
<210> 19
<211> 837
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_1PMH
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(715)
<223> Домен 1PMH
<400> 19
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Glu
530 535 540
Asp Gly Thr Val Met Ser Phe Gly Glu Ala Trp Gly Asp Ser Leu Lys
545 550 555 560
Cys Ile Lys Lys Val Ser Val Ser Gln Asp Leu Gln Arg Pro Gly Asn
565 570 575
Lys Tyr Ala Leu Arg Leu Asp Val Glu Phe Asn Pro Asn Asn Gly Trp
580 585 590
Asp Gln Gly Asp Leu Gly Thr Trp Ile Gly Gly Val Val Glu Gly Gln
595 600 605
Phe Asp Phe Thr Gly Tyr Lys Ser Val Glu Phe Glu Met Phe Ile Pro
610 615 620
Tyr Asp Glu Phe Ser Lys Ser Gln Gly Gly Phe Ala Tyr Lys Val Val
625 630 635 640
Ile Asn Asp Gly Trp Lys Glu Leu Gly Ser Glu Phe Asn Ile Thr Ala
645 650 655
Asn Ala Gly Lys Lys Val Lys Ile Asn Gly Lys Asp Tyr Thr Val Ile
660 665 670
His Lys Ala Phe Ala Ile Pro Glu Asp Phe Arg Thr Lys Lys Arg Ala
675 680 685
Gln Leu Val Phe Gln Phe Ala Gly Gln Asn Ser Asn Tyr Lys Gly Pro
690 695 700
Ile Tyr Leu Asp Asn Val Arg Ile Arg Pro Glu Ser Pro Ser Glu Lys
705 710 715 720
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly
725 730 735
Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg
740 745 750
Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg
755 760 765
Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser
770 775 780
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val
785 790 795 800
Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu
805 810 815
Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr
820 825 830
Asp Val Ser Ile Lys
835
<210> 20
<211> 775
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_2BGP
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(653)
<223> Домен 2BGP
<400> 20
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Thr Ala Ala
530 535 540
Ser Ala Ser Ile Thr Ala Pro Ala Gln Leu Val Gly Asn Val Gly Glu
545 550 555 560
Leu Gln Gly Ala Gly Ser Ala Val Ile Trp Asn Val Asp Val Pro Val
565 570 575
Thr Gly Glu Tyr Arg Ile Asn Leu Thr Trp Ser Ser Pro Tyr Ser Ser
580 585 590
Lys Val Asn Thr Leu Val Met Asp Gly Thr Ala Leu Ser Tyr Ala Phe
595 600 605
Ala Glu Ala Thr Val Pro Val Thr Tyr Val Gln Thr Lys Thr Leu Ser
610 615 620
Ala Gly Asn His Ser Phe Gly Val Arg Val Gly Ser Ser Asp Trp Gly
625 630 635 640
Tyr Met Asn Val His Ser Leu Lys Leu Glu Leu Leu Gly Ser Pro Ser
645 650 655
Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser
660 665 670
Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly
675 680 685
Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr
690 695 700
Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg
705 710 715 720
Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys
725 730 735
Asp Val Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr
740 745 750
Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His
755 760 765
Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys 770 775
<210> 21
<211> 798
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_Gp21
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(676)
<223> Домен Gp21
<400> 21
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Ser Phe
530 535 540
Glu Arg Gly Thr Glu Gly Tyr Thr Gly Trp Ser Gly Ile Ala Thr Val
545 550 555 560
Val Thr Leu Gln Val Pro His Leu Gly Thr Lys Ala Ala Lys Leu Ala
565 570 575
Ala Gly Gly Ser Ala Gly Val Gly Gln Lys Ile Ser Phe Lys Lys Asp
580 585 590
Arg Ser Tyr Lys Ile Gly Ile Trp Ala Lys Gln Asp Pro Asn Thr Thr
595 600 605
Ile Gln Ser Thr Asp Asn Thr Lys Phe Arg Val Ala Asp Gly Asn Gly
610 615 620
Leu Ile Ala Ser Lys Ala Tyr Gly Pro Phe Thr Ser Asn Trp Gln Glu
625 630 635 640
Val Ser Trp Thr Trp Lys Ala Thr Lys Asp Val Leu Ala Asp Val Gln
645 650 655
Phe Thr Ala Phe Leu Ser Ala Gly Ala Met Tyr Phe Asp Asp Phe Tyr
660 665 670
Val Val Asp Val Ser Pro Ser Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile
675 680 685
Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn
690 695 700
Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu
705 710 715 720
Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly
725 730 735
Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys
740 745 750
Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys
755 760 765
Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu
770 775 780
Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 22
<211> 803
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_CenC
<220> <221> <222>
ДРУГОЙ_ПРИЗНАК (542)..(681)
<223> Домен CenC
<400> 22
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Leu
530 535 540
Glu Asp Gly Ile Asn Asn Trp Gln Ala Trp Gly Glu Gly Phe Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ser Asp Met Ser His Thr Gly Ser Ala Ser Leu Lys Val Leu Leu
565 570 575
Asn Asn Gly Gly Arg Gln Val Val Ala Leu Gln Pro Gly Lys Ser Tyr
580 585 590
Lys Leu Gly Val Trp Gly Lys Thr Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gln
595 600 605
Thr Ala Thr Val Met Ile Asn Tyr Lys Lys Pro Glu Asp Asp Ser Ser
610 615 620
His Thr Tyr Gly Ser Phe Gln Phe Gly Pro Asp Asn Ser Glu Phe Thr
625 630 635 640
Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Glu Thr Pro Asp Asp Met Ala Gln Glu Trp
645 650 655
Gly Thr Gln Phe Val Ser Ile Trp Ser Glu Gly Ala Asp Gln Val Tyr
660 665 670
Leu Asp Asp Phe Thr Leu Ser Glu Val Ser Pro Ser Glu Lys Leu Leu
675 680 685
Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly Ser Thr
690 695 700
Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg Gly Ile
705 710 715 720
Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg Val Tyr
725 730 735
Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser Arg Glu
740 745 750
Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val Ser Glu
755 760 765
Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu Leu Ser
770 775 780
Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr Asp Val
785 790 795 800
Ser Ile Lys
<210> 23
<211> 796
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Ad3_to_PsHGF7
<220>
<221> ДРУГОЙ_ПРИЗНАК
<222> (542)..(674)
<223> Домен PsHGF7
<400> 23
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Gln Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Asn Leu Ala Ser Trp Thr Asn Trp Gly Asn Thr Ser Ser Val
545 550 555 560
Thr Ser Pro Ala Phe Ala Gly Ala Lys Ala Ala Arg Ile Ala Ser Gly
565 570 575
Glu Gly Gly Ala Gly Gln Ile Ile Pro Gly Ile Pro Ser Gly Thr Thr
580 585 590
Tyr Val Leu Ser Gly His Gly Ser Val Ser Ala Gly Thr Asp Thr Ala
595 600 605
Ile Val Gly Val Asp Cys Leu Asp Ala Asn Asn Asn Val Leu Ala Lys
610 615 620
Asn Thr Leu Arg Phe Asn Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Lys Ser Thr Ala
625 630 635 640
Phe Thr Thr Val Pro Gly Thr Ala Lys Leu Gln Val Tyr Ile Tyr Lys
645 650 655
Asn Ala Asp Ser Gly Ala Asn Ala Phe Leu Asp Asp Leu Ser Leu Val
660 665 670
Glu Val Ser Pro Ser Glu Lys Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr
675 680 685
Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly Ser Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu
690 695 700
Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg Gly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu
705 710 715 720
Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg Val Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala
725 730 735
Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr
740 745 750
Met Ser Gly Ala Lys Asp Val Ser Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu
755 760 765
Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu Leu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly
770 775 780
Gly Pro Ile Val His Phe Tyr Asp Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 24
<211> 137
<212> БЕЛОК
<213> Thermoanaerobacterium polysaccharolyticum
<400> 24
Pro Gly Phe Glu Asp Gly Leu Asp Ser Trp Gln Asp Trp Gln Gln Asp
1 5 10 15
Met Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala His Asn Gly Ala Leu Gly Leu Lys
20 25 30
Ile Gly Gly Gly Lys Ala Ala Gly Gly Gly Gln Asp Ile Pro Leu Lys
35 40 45
Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Ala Lys Phe Asp Ser Lys
50 55 60
Pro Ala Gly Thr Phe Asp Val Val Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala
Asn Asn Thr Tyr Val Gln His Ile Leu Asn Phe Asn Glu Thr Asp Trp
85 90 95
Thr Tyr Lys Gln Leu Leu Phe Thr Thr Pro Asp Val Phe Gly Ser Thr
100 105 110
Pro Gln Leu Ala Leu Trp Lys Gly Asp Thr Ser Lys Ala Asn Leu Tyr
115 120 125
Val Asp Asp Val Tyr Leu Val Glu Val 130 135
<210> 25
<211> 137
<212> БЕЛОК
<213> Thermoanaerobacterium polysaccharolyticum
<400> 25
Pro Gly Phe Glu Asn Gly Met Asp Gly Trp Pro Asp Trp Gly Tyr Pro
1 5 10 15
Val Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala Tyr Gly Gly Thr Lys Gly Phe Lys
20 25 30
Leu Ser Gly Gly Lys Gln Ala Gly Met Gly Gln Lys Val Ala Leu Lys
35 40 45
Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Gly Lys Phe Thr Ala Lys
50 55 60
Pro Gly Thr Tyr Cys Asp Val Ile Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala
65 70 75 80
Asn Asn Thr Tyr Val Gln Asn Ile Leu Arg Phe Thr Glu Thr Asp Trp
85 90 95
Thr Tyr Lys Gln Val Val Phe Thr Thr Pro Asp Ala Phe Gly Ser Asp
100 105 110
Pro Glu Phe Val Leu Trp Lys Asp Asp Ala Ser Asn Ala Asp Phe Tyr
115 120 125
Ala Asp Asn Ile Thr Leu Val Glu Val 130 135
<210> 26 <211> 161
<212> БЕЛОК
<213> Thermotoga maritima
<400> 26
Asp Phe Ser Ser Pro Glu Glu Val Lys Asn Trp Trp Asn Ser Gly Thr
1 5 10 15
Trp Gln Ala Glu Phe Gly Ser Pro Asp Ile Glu Trp Asn Gly Glu Val
20 25 30
Gly Asn Gly Ala Leu Gln Leu Asn Val Lys Leu Pro Gly Lys Ser Asp
35 40 45
Trp Glu Glu Val Arg Val Ala Arg Lys Phe Glu Arg Leu Ser Glu Cys
50 55 60
Glu Ile Leu Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asn Val Glu Gly Leu Lys
65 70 75 80
Gly Arg Leu Arg Pro Tyr Ala Val Leu Asn Pro Gly Trp Val Lys Ile
85 90 95
Gly Leu Asp Met Asn Asn Ala Asn Val Glu Ser Ala Glu Ile Ile Thr
100 105 110
Phe Gly Gly Lys Glu Tyr Arg Arg Phe His Val Arg Ile Glu Phe Asp
115 120 125
Arg Thr Ala Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly Val Val Gly Asp His
130 135 140
Leu Arg Tyr Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn Val Arg Leu Tyr Lys
145 150 155 160
Arg
<210> 27
<211> 174
<212> БЕЛОК
<213> Caldicellulosiruptor saccharolyticus
<400> 27
Asp Phe Glu Asp Gly Thr Val Met Ser Phe Gly Glu Ala Trp Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Lys Cys Ile Lys Lys Val Ser Val Ser Gln Asp Leu Gln Arg
20 25 30
Pro Gly Asn Lys Tyr Ala Leu Arg Leu Asp Val Glu Phe Asn Pro Asn
35 40 45
Asn Gly Trp Asp Gln Gly Asp Leu Gly Thr Trp Ile Gly Gly Val Val
50 55 60
Glu Gly Gln Phe Asp Phe Thr Gly Tyr Lys Ser Val Glu Phe Glu Met
65 70 75 80
Phe Ile Pro Tyr Asp Glu Phe Ser Lys Ser Gln Gly Gly Phe Ala Tyr
85 90 95
Lys Val Val Ile Asn Asp Gly Trp Lys Glu Leu Gly Ser Glu Phe Asn
100 105 110
Ile Thr Ala Asn Ala Gly Lys Lys Val Lys Ile Asn Gly Lys Asp Tyr
115 120 125
Thr Val Ile His Lys Ala Phe Ala Ile Pro Glu Asp Phe Arg Thr Lys
130 135 140
Lys Arg Ala Gln Leu Val Phe Gln Phe Ala Gly Gln Asn Ser Asn Tyr
145 150 155 160
Lys Gly Pro Ile Tyr Leu Asp Asn Val Arg Ile Arg Pro Glu 165 170
<210> 28
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Cellvibrio japonicus
<400> 28
Thr Ala Ala Ser Ala Ser Ile Thr Ala Pro Ala Gln Leu Val Gly Asn
1 5 10 15
Val Gly Glu Leu Gln Gly Ala Gly Ser Ala Val Ile Trp Asn Val Asp
20 25 30
Val Pro Val Thr Gly Glu Tyr Arg Ile Asn Leu Thr Trp Ser Ser Pro
35 40 45
Tyr Ser Ser Lys Val Asn Thr Leu Val Met Asp Gly Thr Ala Leu Ser
50 55 60
Tyr Ala Phe Ala Glu Ala Thr Val Pro Val Thr Tyr Val Gln Thr Lys
65 70 75 80
Thr Leu Ser Ala Gly Asn His Ser Phe Gly Val Arg Val Gly Ser Ser
85 90 95
Asp Trp Gly Tyr Met Asn Val His Ser Leu Lys Leu Glu Leu Leu Gly
100 105 110
<210> 29
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Klebsiella pneumoniae
<400> 29
Pro Ser Phe Glu Arg Gly Thr Glu Gly Tyr Thr Gly Trp Ser Gly Ile
1 5 10 15
Ala Thr Val Val Thr Leu Gln Val Pro His Leu Gly Thr Lys Ala Ala
20 25 30
Lys Leu Ala Ala Gly Gly Ser Ala Gly Val Gly Gln Lys Ile Ser Phe
35 40 45
Lys Lys Asp Arg Ser Tyr Lys Ile Gly Ile Trp Ala Lys Gln Asp Pro
50 55 60
Asn Thr Thr Ile Gln Ser Thr Asp Asn Thr Lys Phe Arg Val Ala Asp
65 70 75 80
Gly Asn Gly Leu Ile Ala Ser Lys Ala Tyr Gly Pro Phe Thr Ser Asn
85 90 95
Trp Gln Glu Val Ser Trp Thr Trp Lys Ala Thr Lys Asp Val Leu Ala
100 105 110
Asp Val Gln Phe Thr Ala Phe Leu Ser Ala Gly Ala Met Tyr Phe Asp
115 120 125
Asp Phe Tyr Val Val Asp Val 130 135
<210> 30
<211> 140
<212> БЕЛОК
<213> Paenibacillus sp. JDR-2
<400> 30
Pro Gly Leu Glu Asp Gly Ile Asn Asn Trp Gln Ala Trp Gly Glu Gly
1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Ser Asp Met Ser His Thr Gly Ser Ala Ser Leu Lys
20 25 30
Val Leu Leu Asn Asn Gly Gly Arg Gln Val Val Ala Leu Gln Pro Gly
35 40 45
Lys Ser Tyr Lys Leu Gly Val Trp Gly Lys Thr Ala Gly Thr Gly Thr
50 55 60
Gly Thr Gln Thr Ala Thr Val Met Ile Asn Tyr Lys Lys Pro Glu Asp
65 70 75 80
Asp Ser Ser His Thr Tyr Gly Ser Phe Gln Phe Gly Pro Asp Asn Ser
85 90 95
Glu Phe Thr Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Glu Thr Pro Asp Asp Met Ala
100 105 110
Gln Glu Trp Gly Thr Gln Phe Val Ser Ile Trp Ser Glu Gly Ala Asp
115 120 125
Gln Val Tyr Leu Asp Asp Phe Thr Leu Ser Glu Val
130 135 140
<210> 31
<211> 133
<212> БЕЛОК
<213> Paenibacillus sp. HGF7
<400> 31
Pro Gly Phe Glu Asp Asn Leu Ala Ser Trp Thr Asn Trp Gly Asn Thr
1 5 10 15
Ser Ser Val Thr Ser Pro Ala Phe Ala Gly Ala Lys Ala Ala Arg Ile
20 25 30
Ala Ser Gly Glu Gly Gly Ala Gly Gln Ile Ile Pro Gly Ile Pro Ser
35 40 45
Gly Thr Thr Tyr Val Leu Ser Gly His Gly Ser Val Ser Ala Gly Thr
50 55 60
Asp Thr Ala Ile Val Gly Val Asp Cys Leu Asp Ala Asn Asn Asn Val
65 70 75 80
Leu Ala Lys Asn Thr Leu Arg Phe Asn Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Lys
85 90 95
Ser Thr Ala Phe Thr Thr Val Pro Gly Thr Ala Lys Leu Gln Val Tyr
100 105 110
Ile Tyr Lys Asn Ala Asp Ser Gly Ala Asn Ala Phe Leu Asp Asp Leu
115 120 125
Ser Leu Val Glu Val 130
<210> 32
<211> 146
<212> БЕЛОК
<213> Caldicellulosiruptor saccharolyticus
<400> 32
Asp Phe Glu Glu Ser Thr Gln Gly Trp Thr Gly Ser Ser Leu Ser Arg
1 5 10 15
Gly Pro Trp Thr Val Thr Glu Trp Ser Ser Lys Gly Asn His Ser Leu
20 25 30
Lys Ala Asp Ile Gln Met Ser Ser Asn Ser Gln His Tyr Leu His Val
35 40 45
Ile Gln Asn Arg Ser Leu Gln Gln Asn Ser Arg Ile Gln Ala Thr Val
50 55 60
Lys His Ala Asn Trp Gly Ser Val Gly Asn Gly Met Thr Ala Arg Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Thr Gly His Gly Tyr Thr Trp Tyr Ser Gly Ser Phe Val
85 90 95
Pro Ile Asn Gly Ser Ser Gly Thr Thr Leu Ser Leu Asp Leu Ser Asn
100 105 110
Val Gln Asn Leu Ser Gln Val Arg Glu Ile Gly Val Gln Phe Gln Ser
115 120 125
Glu Ser Asn Ser Ser Gly Gln Thr Ser Ile Tyr Ile Asp Asn Val Ile
130 135 140
Val Glu 145
<210> 33
<211> 799
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_2ZEX
<400>
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Gly Leu Asp Ser Trp Gln Asp Trp Gln Gln Asp Met Ser Ala
545 550 555 560
Val Pro Glu Ala Ala His Asn Gly Ala Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly
565 570 575
Gly Lys Ala Ala Gly Gly Gly Gln Asp Ile Pro Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Ala Lys Phe Asp Ser Lys Pro Ala Gly
595 600 605
Thr Phe Asp Val Val Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln His Ile Leu Asn Phe Asn Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Leu Leu Phe Thr Thr Pro Asp Val Phe Gly Ser Thr Pro Gln Leu
645 650 655
Ala Leu Trp Lys Gly Asp Thr Ser Lys Ala Asn Leu Tyr Val Asp Asp
660 665 670
Val Tyr Leu Val Glu Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln
705 710 715 720
Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe
755 760 765
Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg
770 775 780
Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 34
<211> 799
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_2ZEZ
<400> 34
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180
185
190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435
440
445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asn Gly Met Asp Gly Trp Pro Asp Trp Gly Tyr Pro Val Ser Ala
545 550 555 560
Val Pro Glu Ala Ala Tyr Gly Gly Thr Lys Gly Phe Lys Leu Ser Gly
565 570 575
Gly Lys Gln Ala Gly Met Gly Gln Lys Val Ala Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Gly Lys Phe Thr Ala Lys Pro Gly Thr
595 600 605
Tyr Cys Asp Val Ile Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln Asn Ile Leu Arg Phe Thr Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Val Val Phe Thr Thr Pro Asp Ala Phe Gly Ser Asp Pro Glu Phe
645 650 655
Val Leu Trp Lys Asp Asp Ala Ser Asn Ala Asp Phe Tyr Ala Asp Asn
660 665 670
Ile Thr Leu Val Glu Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln
705 710 715 720
Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe
755 760 765
Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg
770 775 780
Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 35
<211> 823
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_1OFE
<400> 35
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Ser
530 535 540
Ser Pro Glu Glu Val Lys Asn Trp Trp Asn Ser Gly Thr Trp Gln Ala
545 550 555 560
Glu Phe Gly Ser Pro Asp Ile Glu Trp Asn Gly Glu Val Gly Asn Gly
565 570 575
Ala Leu Gln Leu Asn Val Lys Leu Pro Gly Lys Ser Asp Trp Glu Glu
580 585 590
Val Arg Val Ala Arg Lys Phe Glu Arg Leu Ser Glu Cys Glu Ile Leu
595 600 605
Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asn Val Glu Gly Leu Lys Gly Arg Leu
610 615 620
Arg Pro Tyr Ala Val Leu Asn Pro Gly Trp Val Lys Ile Gly Leu Asp
625 630 635 640
Met Asn Asn Ala Asn Val Glu Ser Ala Glu Ile Ile Thr Phe Gly Gly
645 650 655
Lys Glu Tyr Arg Arg Phe His Val Arg Ile Glu Phe Asp Arg Thr Ala
660 665 670
Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly Val Val Gly Asp His Leu Arg Tyr
675 680 685
Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn Val Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Pro
690 695 700
Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile
705 710 715 720
Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu
725 730 735
Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser
740 745 750
Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val
755 760 765
Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser
770 775 780
Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly
785 790 795 800
Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser
805 810 815
Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys 820
<210> 36
<211> 836
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_1PMH
<400> 36
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260
265
270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515
520
525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Glu
530 535 540
Asp Gly Thr Val Met Ser Phe Gly Glu Ala Trp Gly Asp Ser Leu Lys
545 550 555 560
Cys Ile Lys Lys Val Ser Val Ser Gln Asp Leu Gln Arg Pro Gly Asn
565 570 575
Lys Tyr Ala Leu Arg Leu Asp Val Glu Phe Asn Pro Asn Asn Gly Trp
580 585 590
Asp Gln Gly Asp Leu Gly Thr Trp Ile Gly Gly Val Val Glu Gly Gln
595 600 605
Phe Asp Phe Thr Gly Tyr Lys Ser Val Glu Phe Glu Met Phe Ile Pro
610 615 620
Tyr Asp Glu Phe Ser Lys Ser Gln Gly Gly Phe Ala Tyr Lys Val Val
625 630 635 640
Ile Asn Asp Gly Trp Lys Glu Leu Gly Ser Glu Phe Asn Ile Thr Ala
645 650 655
Asn Ala Gly Lys Lys Val Lys Ile Asn Gly Lys Asp Tyr Thr Val Ile
660 665 670
His Lys Ala Phe Ala Ile Pro Glu Asp Phe Arg Thr Lys Lys Arg Ala
675 680 685
Gln Leu Val Phe Gln Phe Ala Gly Gln Asn Ser Asn Tyr Lys Gly Pro
690 695 700
Ile Tyr Leu Asp Asn Val Arg Ile Arg Pro Glu Lys Pro Ala Glu Asp
705 710 715 720
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro
725 730 735
Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn
740 745 750
Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser
755 760 765
Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser
770 775 780
Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His
785 790 795 800
Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val
805 810 815
Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn
820 825 830
Val Ser Ile Lys
835
<210> 37
<211> 774
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_2BGP
<400> 37
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Thr Ala Ala
530 535 540
Ser Ala Ser Ile Thr Ala Pro Ala Gln Leu Val Gly Asn Val Gly Glu
545 550 555 560
Leu Gln Gly Ala Gly Ser Ala Val Ile Trp Asn Val Asp Val Pro Val
565 570 575
Thr Gly Glu Tyr Arg Ile Asn Leu Thr Trp Ser Ser Pro Tyr Ser Ser
580 585 590
Lys Val Asn Thr Leu Val Met Asp Gly Thr Ala Leu Ser Tyr Ala Phe
595 600 605
Ala Glu Ala Thr Val Pro Val Thr Tyr Val Gln Thr Lys Thr Leu Ser
610 615 620
Ala Gly Asn His Ser Phe Gly Val Arg Val Gly Ser Ser Asp Trp Gly
625 630 635 640
Tyr Met Asn Val His Ser Leu Lys Leu Glu Leu Leu Gly Lys Pro Ala
645 650 655
Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr
660 665 670
Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly
675 680 685
Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr
690 695 700
Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg
705 710 715 720
Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr
725 730 735
Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu
740 745 750
Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe
755 760 765
Glu Asn Val Ser Ile Lys 770
<210> 38
<211> 797
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_GP21
<400> 38
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340
345
350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Ser Phe
530 535 540
Glu Arg Gly Thr Glu Gly Tyr Thr Gly Trp Ser Gly Ile Ala Thr Val
545 550 555 560
Val Thr Leu Gln Val Pro His Leu Gly Thr Lys Ala Ala Lys Leu Ala
565 570 575
Ala Gly Gly Ser Ala Gly Val Gly Gln Lys Ile Ser Phe Lys Lys Asp
580 585 590
Arg Ser Tyr Lys Ile Gly Ile Trp Ala Lys Gln Asp Pro Asn Thr Thr
595
600
605
Ile Gln Ser Thr Asp Asn Thr Lys Phe Arg Val Ala Asp Gly Asn Gly
610 615 620
Leu Ile Ala Ser Lys Ala Tyr Gly Pro Phe Thr Ser Asn Trp Gln Glu
625 630 635 640
Val Ser Trp Thr Trp Lys Ala Thr Lys Asp Val Leu Ala Asp Val Gln
645 650 655
Phe Thr Ala Phe Leu Ser Ala Gly Ala Met Tyr Phe Asp Asp Phe Tyr
660 665 670
Val Val Asp Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile
675 680 685
Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn
690 695 700
Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu
705 710 715 720
Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly
725 730 735
Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg
740 745 750
Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr
755 760 765
Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly
770 775 780
Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 39
<211> 802
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_CenC
<400> 39
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys 370 375
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile
385 390
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile 405
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys 420
Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp 380
Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe 395 400
Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe 410 415
Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Leu
530 535 540
Glu Asp Gly Ile Asn Asn Trp Gln Ala Trp Gly Glu Gly Phe Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ser Asp Met Ser His Thr Gly Ser Ala Ser Leu Lys Val Leu Leu
565 570 575
Asn Asn Gly Gly Arg Gln Val Val Ala Leu Gln Pro Gly Lys Ser Tyr
580 585 590
Lys Leu Gly Val Trp Gly Lys Thr Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gln
595 600 605
Thr Ala Thr Val Met Ile Asn Tyr Lys Lys Pro Glu Asp Asp Ser Ser
610 615 620
His Thr Tyr Gly Ser Phe Gln Phe Gly Pro Asp Asn Ser Glu Phe Thr
625 630 635 640
Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Glu Thr Pro Asp Asp Met Ala Gln Glu Trp
645 650 655
Gly Thr Gln Phe Val Ser Ile Trp Ser Glu Gly Ala Asp Gln Val Tyr
660 665 670
Leu Asp Asp Phe Thr Leu Ser Glu Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu
675 680 685
Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala
690 695 700
Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr
705 710 715 720
Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser
725 730 735
Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu
740 745 750
Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser
755 760 765
Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu
770 775 780
Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser
785 790 795 800
Ile Lys
<210> 40
<211> 795
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Dd3_to_PSHGF7
<400> 40
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180
185
190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Met Ser Asn Asp Ser Ile Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Thr Asp Lys Leu Phe
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435
440
445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Asn Leu Ala Ser Trp Thr Asn Trp Gly Asn Thr Ser Ser Val
545 550 555 560
Thr Ser Pro Ala Phe Ala Gly Ala Lys Ala Ala Arg Ile Ala Ser Gly
565 570 575
Glu Gly Gly Ala Gly Gln Ile Ile Pro Gly Ile Pro Ser Gly Thr Thr
580 585 590
Tyr Val Leu Ser Gly His Gly Ser Val Ser Ala Gly Thr Asp Thr Ala
595 600 605
Ile Val Gly Val Asp Cys Leu Asp Ala Asn Asn Asn Val Leu Ala Lys
610 615 620
Asn Thr Leu Arg Phe Asn Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Lys Ser Thr Ala
625 630 635 640
Phe Thr Thr Val Pro Gly Thr Ala Lys Leu Gln Val Tyr Ile Tyr Lys
645 650 655
Asn Ala Asp Ser Gly Ala Asn Ala Phe Leu Asp Asp Leu Ser Leu Val
660 665 670
Glu Val Lys Pro Ala Glu Asp Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Pro
675 680 685
Asn Ser Trp Ile Thr Thr Pro Gly Ala Ser Ile Ser Gly Asn Lys Leu
690 695 700
Phe Ile Asn Leu Gly Thr Asn Gly Thr Phe Arg Gln Ser Leu Ser Leu
705 710 715 720
Asn Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Ile Ser Phe Thr Ala Ser Gly Pro Phe
725 730 735
Asn Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Arg Ser Asn
740 745 750
Leu Met Ser Ser Thr Ser His Ile Ser Gly Thr Phe Lys Thr Glu Ser
755 760 765
Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Arg Ser Gly Gly Gly
770 775 780
Gly His Ile Ser Phe Glu Asn Val Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 41
<211> 798
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_2ZEX
<400> 41
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Gly Leu Asp Ser Trp Gln Asp Trp Gln Gln Asp Met Ser Ala
545 550 555 560
Val Pro Glu Ala Ala His Asn Gly Ala Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly
565 570 575
Gly Lys Ala Ala Gly Gly Gly Gln Asp Ile Pro Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Ala Lys Phe Asp Ser Lys Pro Ala Gly
595 600 605
Thr Phe Asp Val Val Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln His Ile Leu Asn Phe Asn Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Leu Leu Phe Thr Thr Pro Asp Val Phe Gly Ser Thr Pro Gln Leu
645 650 655
Ala Leu Trp Lys Gly Asp Thr Ser Lys Ala Asn Leu Tyr Val Asp Asp
660 665 670
Val Tyr Leu Val Glu Val Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln
705 710 715 720
Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val
725 730 735
Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe
755 760 765
Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser
770 775 780
Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 42
<211> 798
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_2ZEZ
<400> 42
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asn Gly Met Asp Gly Trp Pro Asp Trp Gly Tyr Pro Val Ser Ala
545
550
555
560
Val Pro Glu Ala Ala Tyr Gly Gly Thr Lys Gly Phe Lys Leu Ser Gly
565 570 575
Gly Lys Gln Ala Gly Met Gly Gln Lys Val Ala Leu Lys Pro Asn Thr
580 585 590
Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Gly Lys Phe Thr Ala Lys Pro Gly Thr
595 600 605
Tyr Cys Asp Val Ile Val Gln Tyr His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr
610 615 620
Tyr Val Gln Asn Ile Leu Arg Phe Thr Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys
625 630 635 640
Gln Val Val Phe Thr Thr Pro Asp Ala Phe Gly Ser Asp Pro Glu Phe
645 650 655
Val Leu Trp Lys Asp Asp Ala Ser Asn Ala Asp Phe Tyr Ala Asp Asn
660 665 670
Ile Thr Leu Val Glu Val Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu
675 680 685
Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser
690 695 700
Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln
705 710 715 720
Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val
725 730 735
Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe
740 745 750
Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe
755 760 765
Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser
770 775 780
Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 43
<211> 822
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_1OFE
<400> 43
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Ser
530 535 540
Ser Pro Glu Glu Val Lys Asn Trp Trp Asn Ser Gly Thr Trp Gln Ala
545 550 555 560
Glu Phe Gly Ser Pro Asp Ile Glu Trp Asn Gly Glu Val Gly Asn Gly
565 570 575
Ala Leu Gln Leu Asn Val Lys Leu Pro Gly Lys Ser Asp Trp Glu Glu
580 585 590
Val Arg Val Ala Arg Lys Phe Glu Arg Leu Ser Glu Cys Glu Ile Leu
595 600 605
Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asn Val Glu Gly Leu Lys Gly Arg Leu
610 615 620
Arg Pro Tyr Ala Val Leu Asn Pro Gly Trp Val Lys Ile Gly Leu Asp
625 630 635 640
Met Asn Asn Ala Asn Val Glu Ser Ala Glu Ile Ile Thr Phe Gly Gly
645 650 655
Lys Glu Tyr Arg Arg Phe His Val Arg Ile Glu Phe Asp Arg Thr Ala
660 665 670
Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly Val Val Gly Asp His Leu Arg Tyr
675 680 685
Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn Val Arg Leu Tyr Lys Arg Arg Thr
690 695 700
Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val
705 710 715 720
Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser
725 730 735
Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser
740 745 750
Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val
755 760 765
Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser
770 775 780
Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly
785 790 795 800
Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe
805 810 815
Arg Asp Phe Ser Ile Lys
820
<210> 44
<211> 876
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_1PMH
<400> 44
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115
120
125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Asp Phe Glu
530 535 540
Asp Gly Thr Val Met Ser Phe Gly Glu Ala Trp Gly Asp Ser Leu Lys
545 550 555 560
Cys Ile Lys Lys Val Ser Val Ser Gln Asp Leu Gln Arg Pro Gly Asn
565 570 575
Lys Tyr Ala Leu Arg Leu Asp Val Glu Phe Asn Pro Asn Asn Gly Trp
580 585 590
Asp Gln Gly Asp Leu Gly Thr Trp Ile Gly Gly Val Val Glu Gly Gln
595 600 605
Phe Asp Phe Thr Gly Tyr Lys Ser Val Glu Phe Glu Met Phe Ile Pro
610 615 620
Tyr Asp Glu Phe Ser Lys Ser Gln Gly Gly Phe Ala Tyr Lys Val Val
625
630
635
640
Ile Asn Asp Gly Trp Lys Glu Leu Gly Ser Glu Phe Asn Ile Thr Ala
645 650 655
Asn Ala Gly Lys Lys Val Lys Ile Asn Gly Lys Asp Tyr Thr Val Ile
660 665 670
His Lys Ala Phe Ala Ile Pro Glu Asp Phe Arg Thr Lys Lys Arg Ala
675 680 685
Gln Leu Val Phe Gln Phe Ala Gly Gln Asn Ser Asn Tyr Lys Gly Pro
690 695 700
Ile Tyr Leu Asp Asn Val Arg Ile Arg Pro Glu Phe His Val Arg Ile
705 710 715 720
Glu Phe Asp Arg Thr Ala Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly Val Val
725 730 735
Gly Asp His Leu Arg Tyr Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn Val Arg
740 745 750
Leu Tyr Lys Arg Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile
755 760 765
Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn
770 775 780
Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu
785 790 795 800
Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val Asn Gly
805 810 815
Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys
820 825 830
Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr
835 840 845
Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser
850 855 860
Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile Lys
865 870 875
<210> 45
<211> 773
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_2BGP
<400> 45
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Thr Ala Ala
530 535 540
Ser Ala Ser Ile Thr Ala Pro Ala Gln Leu Val Gly Asn Val Gly Glu
545 550 555 560
Leu Gln Gly Ala Gly Ser Ala Val Ile Trp Asn Val Asp Val Pro Val
565 570 575
Thr Gly Glu Tyr Arg Ile Asn Leu Thr Trp Ser Ser Pro Tyr Ser Ser
580 585 590
Lys Val Asn Thr Leu Val Met Asp Gly Thr Ala Leu Ser Tyr Ala Phe
595 600 605
Ala Glu Ala Thr Val Pro Val Thr Tyr Val Gln Thr Lys Thr Leu Ser
610 615 620
Ala Gly Asn His Ser Phe Gly Val Arg Val Gly Ser Ser Asp Trp Gly
625 630 635 640
Tyr Met Asn Val His Ser Leu Lys Leu Glu Leu Leu Gly Arg Thr Ser
645 650 655
Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly
660 665 670
Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn
675 680 685
Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr
690 695 700
Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg
705 710 715 720
Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro
725 730 735
Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu
740 745 750
Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg
755 760 765
Asp Phe Ser Ile Lys
770
<210> 46
<211> 796
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_GP21
<400> 46
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165
170
175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420
425
430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Ser Phe
530 535 540
Glu Arg Gly Thr Glu Gly Tyr Thr Gly Trp Ser Gly Ile Ala Thr Val
545 550 555 560
Val Thr Leu Gln Val Pro His Leu Gly Thr Lys Ala Ala Lys Leu Ala
565 570 575
Ala Gly Gly Ser Ala Gly Val Gly Gln Lys Ile Ser Phe Lys Lys Asp
580 585 590
Arg Ser Tyr Lys Ile Gly Ile Trp Ala Lys Gln Asp Pro Asn Thr Thr
595 600 605
Ile Gln Ser Thr Asp Asn Thr Lys Phe Arg Val Ala Asp Gly Asn Gly
610 615 620
Leu Ile Ala Ser Lys Ala Tyr Gly Pro Phe Thr Ser Asn Trp Gln Glu
625 630 635 640
Val Ser Trp Thr Trp Lys Ala Thr Lys Asp Val Leu Ala Asp Val Gln
645 650 655
Phe Thr Ala Phe Leu Ser Ala Gly Ala Met Tyr Phe Asp Asp Phe Tyr
660 665 670
Val Val Asp Val Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile
675
680
685
Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn
690 695 700
Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu
705 710 715 720
Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val Asn Gly
725 730 735
Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys
740 745 750
Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr
755 760 765
Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser
770 775 780
Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile Lys
785 790 795
<210> 47
<211> 801
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_CenC
<400> 47
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260 265 270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515 520 525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Leu
530 535 540
Glu Asp Gly Ile Asn Asn Trp Gln Ala Trp Gly Glu Gly Phe Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ser Asp Met Ser His Thr Gly Ser Ala Ser Leu Lys Val Leu Leu
565 570 575
Asn Asn Gly Gly Arg Gln Val Val Ala Leu Gln Pro Gly Lys Ser Tyr
580 585 590
Lys Leu Gly Val Trp Gly Lys Thr Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gln
595 600 605
Thr Ala Thr Val Met Ile Asn Tyr Lys Lys Pro Glu Asp Asp Ser Ser
610 615 620
His Thr Tyr Gly Ser Phe Gln Phe Gly Pro Asp Asn Ser Glu Phe Thr
625 630 635 640
Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Glu Thr Pro Asp Asp Met Ala Gln Glu Trp
645 650 655
Gly Thr Gln Phe Val Ser Ile Trp Ser Glu Gly Ala Asp Gln Val Tyr
660 665 670
Leu Asp Asp Phe Thr Leu Ser Glu Val Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu
675 680 685
Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr
690 695 700
Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr
705 710 715 720
Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn
725 730 735
Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu
740 745 750
Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser
755 760 765
Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu
770 775 780
Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile
785 790 795 800
Lys
<210> 48
<211> 794
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Bd3_to_PSHGF7
<400> 48
Met Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr
180 185 190
Thr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val
210 215 220
Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly
225 230 235 240
Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile
245 250 255
Ala Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr
260
265
270
Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr
275 280 285
Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr
290 295 300
Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val
305 310 315 320
Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala
325 330 335
Lys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr
355 360 365
Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp
370 375 380
Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu
385 390 395 400
Cys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe
405 410 415
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys
420 425 430
Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly
435 440 445
Glu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr
450 455 460
Arg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val
465 470 475 480
Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala
485 490 495
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg
500 505 510
Glu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile
515
520
525
Val Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Pro Gly Phe
530 535 540
Glu Asp Asn Leu Ala Ser Trp Thr Asn Trp Gly Asn Thr Ser Ser Val
545 550 555 560
Thr Ser Pro Ala Phe Ala Gly Ala Lys Ala Ala Arg Ile Ala Ser Gly
565 570 575
Glu Gly Gly Ala Gly Gln Ile Ile Pro Gly Ile Pro Ser Gly Thr Thr
580 585 590
Tyr Val Leu Ser Gly His Gly Ser Val Ser Ala Gly Thr Asp Thr Ala
595 600 605
Ile Val Gly Val Asp Cys Leu Asp Ala Asn Asn Asn Val Leu Ala Lys
610 615 620
Asn Thr Leu Arg Phe Asn Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Lys Ser Thr Ala
625 630 635 640
Phe Thr Thr Val Pro Gly Thr Ala Lys Leu Gln Val Tyr Ile Tyr Lys
645 650 655
Asn Ala Asp Ser Gly Ala Asn Ala Phe Leu Asp Asp Leu Ser Leu Val
660 665 670
Glu Val Arg Thr Ser Glu Glu Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser
675 680 685
Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu
690 695 700
Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn Gly Thr Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu
705 710 715 720
Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser Met Asn Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly
725 730 735
Lys Val Thr Val Arg Asn Ser Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr
740 745 750
Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp Ile Ser Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala
755 760 765
Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val Glu Leu Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly
770 775 780
Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe Ser Ile Lys 785 790
<210> 49
<211> 814
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_2ZEX
<400> 49
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Pro Gly Phe Glu Asp Gly Leu Asp Ser Trp Gln
545 550 555 560
Asp Trp Gln Gln Asp Met Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala His Asn Gly
565 570 575
Ala Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly Gly Lys Ala Ala Gly Gly Gly Gln
580 585 590
Asp Ile Pro Leu Lys Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Ala
595 600 605
Lys Phe Asp Ser Lys Pro Ala Gly Thr Phe Asp Val Val Val Gln Tyr
610 615 620
His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr Tyr Val Gln His Ile Leu Asn Phe
625 630 635 640
Asn Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys Gln Leu Leu Phe Thr Thr Pro Asp
645 650 655
Val Phe Gly Ser Thr Pro Gln Leu Ala Leu Trp Lys Gly Asp Thr Ser
660 665 670
Lys Ala Asn Leu Tyr Val Asp Asp Val Tyr Leu Val Glu Val Lys Leu
675 680 685
Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu
690 695 700
Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu Leu Arg Ile Asp His
705 710 715 720
Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser
725 730 735
Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile
740 745 750
Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn
755 760 765
Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn
770 775 780
Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr
785 790 795 800
Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu Lys Ile Glu 805 810
<210> 50
<211> 814
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_2ZEZ
<400> 50
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100
105
110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355
360
365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Pro Gly Phe Glu Asn Gly Met Asp Gly Trp Pro
545 550 555 560
Asp Trp Gly Tyr Pro Val Ser Ala Val Pro Glu Ala Ala Tyr Gly Gly
565 570 575
Thr Lys Gly Phe Lys Leu Ser Gly Gly Lys Gln Ala Gly Met Gly Gln
580 585 590
Lys Val Ala Leu Lys Pro Asn Thr Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Trp Gly
595 600 605
Lys Phe Thr Ala Lys Pro Gly Thr Tyr Cys Asp Val Ile Val Gln Tyr
610 615 620
His Leu Lys Asp Ala Asn Asn Thr Tyr Val Gln Asn Ile Leu Arg Phe
625 630 635 640
Thr Glu Thr Asp Trp Thr Tyr Lys Gln Val Val Phe Thr Thr Pro Asp
645 650 655
Ala Phe Gly Ser Asp Pro Glu Phe Val Leu Trp Lys Asp Asp Ala Ser
660 665 670
Asn Ala Asp Phe Tyr Ala Asp Asn Ile Thr Leu Val Glu Val Lys Leu
675 680 685
Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu
690 695 700
Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu Leu Arg Ile Asp His
705 710 715 720
Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser
725 730 735
Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile
740 745 750
Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn
755 760 765
Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn
770 775 780
Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr
785 790 795 800
Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu Lys Ile Glu 805 810
<210> 51
<211> 838
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_1OFE
<400> 51
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Asp Phe Ser Ser Pro Glu Glu Val Lys Asn Trp
545 550 555 560
Trp Asn Ser Gly Thr Trp Gln Ala Glu Phe Gly Ser Pro Asp Ile Glu
565 570 575
Trp Asn Gly Glu Val Gly Asn Gly Ala Leu Gln Leu Asn Val Lys Leu
580 585 590
Pro Gly Lys Ser Asp Trp Glu Glu Val Arg Val Ala Arg Lys Phe Glu
595 600 605
Arg Leu Ser Glu Cys Glu Ile Leu Glu Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asn
610 615 620
Val Glu Gly Leu Lys Gly Arg Leu Arg Pro Tyr Ala Val Leu Asn Pro
625 630 635 640
Gly Trp Val Lys Ile Gly Leu Asp Met Asn Asn Ala Asn Val Glu Ser
645 650 655
Ala Glu Ile Ile Thr Phe Gly Gly Lys Glu Tyr Arg Arg Phe His Val
660 665 670
Arg Ile Glu Phe Asp Arg Thr Ala Gly Val Lys Glu Leu His Ile Gly
675 680 685
Val Val Gly Asp His Leu Arg Tyr Asp Gly Pro Ile Phe Ile Asp Asn
690 695 700
Val Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Leu Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu
705 710 715 720
Leu Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr
725 730 735
Gly Asn Glu Leu Arg Ile Asp His Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln
740 745 750
Ser Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe
755 760 765
Ser Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val
770 775 780
Leu Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser
785 790 795 800
Glu Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu
805 810 815
Thr Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser
820 825 830
Ile Lys Glu Lys Ile Glu 835
<210> 52
<211> 851
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_1PMH
<400> 52
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145
150
155
160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405
410
415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Asp Phe Glu Asp Gly Thr Val Met Ser Phe Gly
545 550 555 560
Glu Ala Trp Gly Asp Ser Leu Lys Cys Ile Lys Lys Val Ser Val Ser
565 570 575
Gln Asp Leu Gln Arg Pro Gly Asn Lys Tyr Ala Leu Arg Leu Asp Val
580 585 590
Glu Phe Asn Pro Asn Asn Gly Trp Asp Gln Gly Asp Leu Gly Thr Trp
595 600 605
Ile Gly Gly Val Val Glu Gly Gln Phe Asp Phe Thr Gly Tyr Lys Ser
610 615 620
Val Glu Phe Glu Met Phe Ile Pro Tyr Asp Glu Phe Ser Lys Ser Gln
625 630 635 640
Gly Gly Phe Ala Tyr Lys Val Val Ile Asn Asp Gly Trp Lys Glu Leu
645 650 655
Gly Ser Glu Phe Asn Ile Thr Ala Asn Ala Gly Lys Lys Val Lys Ile
660
665
670
Asn Gly Lys Asp Tyr Thr Val Ile His Lys Ala Phe Ala Ile Pro Glu
675 680 685
Asp Phe Arg Thr Lys Lys Arg Ala Gln Leu Val Phe Gln Phe Ala Gly
690 695 700
Gln Asn Ser Asn Tyr Lys Gly Pro Ile Tyr Leu Asp Asn Val Arg Ile
705 710 715 720
Arg Pro Glu Lys Leu Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys
725 730 735
Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu
740 745 750
Leu Arg Ile Asp His Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn
755 760 765
Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu
770 775 780
Trp Ala Lys Val Ile Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu
785 790 795 800
Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe
805 810 815
Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu
820 825 830
Arg Thr Ser Ser Thr Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu
835 840 845
Lys Ile Glu 850
<210> 53
<211> 789
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_2BGP
<400> 53
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Thr Ala Ala Ser Ala Ser Ile Thr Ala Pro Ala
545 550 555 560
Gln Leu Val Gly Asn Val Gly Glu Leu Gln Gly Ala Gly Ser Ala Val
565 570 575
Ile Trp Asn Val Asp Val Pro Val Thr Gly Glu Tyr Arg Ile Asn Leu
580 585 590
Thr Trp Ser Ser Pro Tyr Ser Ser Lys Val Asn Thr Leu Val Met Asp
595 600 605
Gly Thr Ala Leu Ser Tyr Ala Phe Ala Glu Ala Thr Val Pro Val Thr
610 615 620
Tyr Val Gln Thr Lys Thr Leu Ser Ala Gly Asn His Ser Phe Gly Val
625 630 635 640
Arg Val Gly Ser Ser Asp Trp Gly Tyr Met Asn Val His Ser Leu Lys
645 650 655
Leu Glu Leu Leu Gly Lys Leu Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu
660 665 670
Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly
675 680 685
Asn Glu Leu Arg Ile Asp His Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser
690 695 700
Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser
705 710 715 720
Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu
725 730 735
Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu
740 745 750
Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr
755 760 765
Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile
770 775 780
Lys Glu Lys Ile Glu 785
<210> 54
<211> 812
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_GP21
<400> 54
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195
200
205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450
455
460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Pro Ser Phe Glu Arg Gly Thr Glu Gly Tyr Thr
545 550 555 560
Gly Trp Ser Gly Ile Ala Thr Val Val Thr Leu Gln Val Pro His Leu
565 570 575
Gly Thr Lys Ala Ala Lys Leu Ala Ala Gly Gly Ser Ala Gly Val Gly
580 585 590
Gln Lys Ile Ser Phe Lys Lys Asp Arg Ser Tyr Lys Ile Gly Ile Trp
595 600 605
Ala Lys Gln Asp Pro Asn Thr Thr Ile Gln Ser Thr Asp Asn Thr Lys
610 615 620
Phe Arg Val Ala Asp Gly Asn Gly Leu Ile Ala Ser Lys Ala Tyr Gly
625 630 635 640
Pro Phe Thr Ser Asn Trp Gln Glu Val Ser Trp Thr Trp Lys Ala Thr
645 650 655
Lys Asp Val Leu Ala Asp Val Gln Phe Thr Ala Phe Leu Ser Ala Gly
660 665 670
Ala Met Tyr Phe Asp Asp Phe Tyr Val Val Asp Val Lys Leu Phe Glu
675 680 685
Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe
690 695 700
Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu Leu Arg Ile Asp His Ser Arg
705
710
715
720
Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr
725 730 735
Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile Val Lys
740 745 750
Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser
755 760 765
Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp
770 775 780
Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr Phe His
785 790 795 800
Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu Lys Ile Glu 805 810
<210> 55
<211> 817
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_CenC
<400> 55
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260 265 270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515 520 525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Pro Gly Leu Glu Asp Gly Ile Asn Asn Trp Gln
545 550 555 560
Ala Trp Gly Glu Gly Phe Thr Ala Ala Ser Asp Met Ser His Thr Gly
565 570 575
Ser Ala Ser Leu Lys Val Leu Leu Asn Asn Gly Gly Arg Gln Val Val
580 585 590
Ala Leu Gln Pro Gly Lys Ser Tyr Lys Leu Gly Val Trp Gly Lys Thr
595 600 605
Ala Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gln Thr Ala Thr Val Met Ile Asn Tyr
610 615 620
Lys Lys Pro Glu Asp Asp Ser Ser His Thr Tyr Gly Ser Phe Gln Phe
625 630 635 640
Gly Pro Asp Asn Ser Glu Phe Thr Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Glu Thr
645 650 655
Pro Asp Asp Met Ala Gln Glu Trp Gly Thr Gln Phe Val Ser Ile Trp
660 665 670
Ser Glu Gly Ala Asp Gln Val Tyr Leu Asp Asp Phe Thr Leu Ser Glu
675 680 685
Val Lys Leu Phe Glu Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys Phe Asn
690 695 700
Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu Leu Arg
705 710 715 720
Ile Asp His Ser Arg Gly Gly Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asp
725 730 735
Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu Trp Ala
740 745 750
Lys Val Ile Val Lys Asn Ser Arg Gly Val Val Leu Phe Glu Lys Val
755 760 765
Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe Thr Thr
770 775 780
Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu Arg Thr
785 790 795 800
Ser Ser Thr Phe His Ser Phe Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu Lys Ile
805 810 815
Glu
<210> 56
<211> 810
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность Vip3Cd3_to_PSHGF7
<400> 56
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe
Ile Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp
20 25 30
Ile Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys
50 55 60
Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn
65 70 75 80
Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln
85 90 95
Asn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr
100 105 110
Met Leu Asn Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val
115 120 125
Met Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Arg
130 135 140
Gln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu Asn Val
145 150 155 160
Leu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ser Tyr Gln Arg Ile
165 170 175
Lys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Asp Lys Leu Thr Phe Ala Thr Glu Ser
180 185 190
Thr Leu Arg Ala Lys Gln Gly Ile Phe Asn Glu Asp Ser Phe Asp Asn
195 200 205
Asn Thr Leu Glu Asn Leu Thr Asp Leu Ala Glu Leu Ala Lys Ser Ile
210 215 220
Thr Lys Asn Asp Val Asp Ser Phe Glu Phe Tyr Leu His Thr Phe His
225 230 235 240
Asp Val Leu Ile Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Ser Glu Leu Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Thr Ser Gly Ser Glu
260
265
270
Ile Gly Lys Val Tyr Ser Phe Leu Ile Val Leu Thr Ser Leu Gln Ala
275 280 285
Lys Ala Phe Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ser
290 295 300
Asp Ile Asp Tyr Thr Ser Ile Met Asn Glu His Leu Asn Asn Glu Lys
305 310 315 320
Asn Glu Phe Arg Asp Asn Ile Leu Pro Ala Leu Ser Asn Lys Phe Ser
325 330 335
Asn Pro Ser Tyr Ala Lys Thr Ile Gly Ser Asp Asn Tyr Ala Lys Val
340 345 350
Ile Leu Glu Ser Glu Pro Gly Tyr Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ile
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Pro Val Leu Lys Ala Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln
370 375 380
Asn Tyr Gln Val Asp Asn Gln Ser Leu Ser Glu Ile Val Tyr Leu Asp
385 390 395 400
Ile Asp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Asn Ser Glu Gln Lys Tyr Tyr Thr
405 410 415
Lys Asn Leu Thr Phe Pro Asp Gly Tyr Val Ile Thr Lys Ile Thr Phe
420 425 430
Glu Lys Lys Leu Asn Asn Leu Ile Tyr Glu Ala Thr Ala Asn Phe Tyr
435 440 445
Asp Pro Ser Thr Gly Asp Ile Asp Leu Asn Lys Lys Gln Val Glu Ser
450 455 460
Thr Phe Pro Gln Thr Asp Tyr Ile Thr Met Asp Ile Gly Asp Asp Asp
465 470 475 480
Gly Ile Tyr Met Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro
485 490 495
Ile Asn Ser Phe Gly Leu Glu Val Asp Ala Lys Ser Lys Thr Leu Thr
500 505 510
Leu Lys Cys Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Ser Asp Leu
515
520
525
Lys Asn Lys Glu Thr Gly Leu Ile Ala Pro Pro Asn Val Phe Ile Ser
530 535 540
Asn Val Val Lys Asn Pro Gly Phe Glu Asp Asn Leu Ala Ser Trp Thr
545 550 555 560
Asn Trp Gly Asn Thr Ser Ser Val Thr Ser Pro Ala Phe Ala Gly Ala
565 570 575
Lys Ala Ala Arg Ile Ala Ser Gly Glu Gly Gly Ala Gly Gln Ile Ile
580 585 590
Pro Gly Ile Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Val Leu Ser Gly His Gly Ser
595 600 605
Val Ser Ala Gly Thr Asp Thr Ala Ile Val Gly Val Asp Cys Leu Asp
610 615 620
Ala Asn Asn Asn Val Leu Ala Lys Asn Thr Leu Arg Phe Asn Gln Thr
625 630 635 640
Leu Tyr Glu Phe Lys Ser Thr Ala Phe Thr Thr Val Pro Gly Thr Ala
645 650 655
Lys Leu Gln Val Tyr Ile Tyr Lys Asn Ala Asp Ser Gly Ala Asn Ala
660 665 670
Phe Leu Asp Asp Leu Ser Leu Val Glu Val Lys Leu Phe Glu Thr Pro
675 680 685
Glu Ser Pro Glu Leu Ile Lys Phe Asn Asp Trp Glu Arg Phe Gly Thr
690 695 700
Thr Tyr Ile Thr Gly Asn Glu Leu Arg Ile Asp His Ser Arg Gly Gly
705 710 715 720
Tyr Phe Arg Gln Ser Leu Asn Ile Asp Ser Tyr Ser Thr Tyr Asp Leu
725 730 735
Ser Phe Ser Phe Ser Gly Leu Trp Ala Lys Val Ile Val Lys Asn Ser
740 745 750
Arg Gly Val Val Leu Phe Glu Lys Val Lys Asn Asn Gly Ser Ser Tyr
755 760 765
Glu Asp Ile Ser Glu Ser Phe Thr Thr Ala Ser Asn Lys Asp Gly Phe
770
775
780
Phe Ile Glu Leu Thr Ala Glu Arg Thr Ser Ser Thr Phe His Ser Phe
785 790 795 800
Arg Asp Ile Ser Ile Lys Glu Lys Ile Glu
805 810
ПЕРВОНАЧАЛЬНАЯ ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Модифицированный полипептид Vip3, содержащий гетерологичный углевод-связывающий модуль (СВМ).
2. Модифицированный полипептид Vip3 по п. 1, где гетерологичным СВМ заменен весь или часть домена III полипептида Vip3.
3. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из п. 1 или п. 2, где
10 модифицированный полипептид Vip3 содержит весь или часть домена I и/или домена II
полипептида Vip3.
4. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-3, где модифицированный полипептид Vip3 содержит весь или часть домена IV полипептида
15 Vip3.
5. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-3, где модифицированный полипептид Vip3 не содержит весь или часть домена IV полипептида Vip3.
6. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-5, где модифицированный полипептид Vip3 содержит, в направлении от амино-конца к карбокси-концу, весь или часть домена I полипептида Vip3, весь или часть домена II полипептида Vip3, гетерологичный СВМ и необязательно весь или часть домена IV
25 полипептида Vip3.
7. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-6, где полипептид Vip3 содержит всю или часть любой из SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6
8. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 2-7, где весь или часть домена III содержит:
(a) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:l;
(b) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:2;
(a)
(c) аминокислоты 542-667 SEQ ID NO:3;
(d) аминокислоты 550-675 SEQ ID NO:4;
(e) аминокислоты 552-677 SEQ ID NO:6 или
(f) соответствующую аминокислотную последовательность другого полипептида
5 Vip3.
9. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-8, где модифицированный полипептид Vip3 характеризуется по меньшей мере 75% сходством аминокислотной последовательности с аминокислотной 10 последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID N0:1-23 или SEQ ID N0:33-56.
10. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-9, где гетерологичный СВМ содержит всю или функциональную часть аминокислотной последовательности СВМ из Р-1,4-маннаназы, необязательно аминокислотной последовательности СВМ 15 типа В из Р-1,4-маннаназы.
11. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-10, где гетерологичный СВМ содержит аминокислотную последовательность СВМ, которая характеризуется по меньшей мере 75% сходством аминокислотной последовательности
20 с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID N0:24-32.
12. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-11, где гетерологичный СВМ содержит сайт связывания металла.
25 13. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-12, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным.
14. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-13, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении насекомого.
15. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-14, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении чешуекрылого насекомого.
15.
16. Модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-15, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении по меньшей мере одного из следующего: Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Plutella xylostella (капустной моли), Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Agrotis
5 ipsilon (совки-ипсилон), Agrotis orthogonia (совки прямоугольной), Striacosta albicosta (западной бобовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки), Heliothis virescens (табачной совки), Spodoptera exigua (совки малой), Helicoverpa punctigera (австралийской хлопковой совки), Helicoverpa armigera (хлопковой совки), Manduca sexta (бражника табачного), Trichoplusia ni (совки ни), Pectinophora gossypiella
10 (хлопковой моли), Diatraea grandiosella (огневки кукурузной юго-западной), Diatraea saccharalis (огневки тростниковой), Elasmopalpus lignosellus (малой кукурузной стеблевой огневки), Psuedoplusia includens (совки соевой), Anticarsia gemmatalis (гусеницы совки бархатных бобов), Plathypena scabra (клеверной усатки), Homoeosoma electellum (огневки подсолнечниковой) и Cochylis hospes (окаймленной
15 подсолнечниковой моли) или любой их комбинации.
17. Композиция, содержащая модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-17 в приемлемом для сельскохозяйственного применения носителе.
20 18. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид по любому из пп. 1-16.
19. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 18, где нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности под SEQ ID
25 NO:7-23, SEQ ID N0:33-56 и любой их комбинации.
20. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из п. 18 или п. 19, где нуклеотидная последовательность была кодон-оптимизирована для экспрессии в растении.
30 21. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 18-20, дополнительно содержащая гетерологичную промоторную последовательность, функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей полипептид.
22. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 21, где указанный промотор является
промотором, обеспечивающим экспрессию в растении.
23. Кассета экспрессии и/или рекомбинантный вектор, содержащие молекулу
5 нуклеиновой кислоты по любому из пп. 18-22.
24. Трансгенная клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по
любому из пп. 18-22 или кассету экспрессии и/или рекомбинантный вектор по п. 23.
10 25. Трансгенная клетка-хозяин по п. 24, где трансгенная клетка-хозяин представляет собой клетку трансгенного растения или клетку трансгенной бактерии.
26. Трансгенная клетка-хозяин по п. 25, где клетка трансгенного растения выбрана
из группы, состоящей из клетки сорго, клетки пшеницы, клетки подсолнечника, клетки
15 томата, клетки культурного вида капусты, клетки хлопчатника, клетки риса, клетки сои, клетки сахарной свеклы, клетки сахарного тростника, клетки табака, клетки ячменя, клетки масличного рапса и клетки маиса.
27. Трансгенное растение, содержащее клетку трансгенного растения по п. 25 или
20 п. 26.
28. Трансгенное растение по п. 27, где трансгенное растение выбрано из группы, состоящей из растения сорго, растения пшеницы, растения подсолнечника, растения томата, растения культурного вида капусты, растения хлопчатника, растения риса,
25 растения сои, растения сахарной свеклы, растения сахарного тростника, растения табака, растения ячменя, растения масличного рапса и растения маиса.
29. Трансгенное растение по п. 27, где растение представляет собой растение маиса или растение сои, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты, которая
30 предусматривает модифицированный полипептид Vip3, где указанный модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении насекомого.
30. Трансгенное растение по п. 29, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении чешуекрылого насекомого.
30.
31. Трансгенное растение по п. 29 или п. 30, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении по меньшей мере одного из следующего: Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Plutella xylostella (капустной моли),
5 Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Agrotis ipsilon (совки-ипсилон), Agrotis orthogonia (совки прямоугольной), Striacosta albicosta (западной бобовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки), Heliothis virescens (табачной совки), Spodoptera exigua (совки малой), Helicoverpa punctigera (австралийской хлопковой совки), Helicoverpa armigera (хлопковой совки), Manduca sexta (бражника
10 табачного), Trichoplusia ni (совки ни), Pectinophora gossypiella (хлопковой моли), Diatraea grandiosella (огневки кукурузной юго-западной), Diatraea saccharalis (огневки тростниковой), Elasmopalpus lignosellus (малой кукурузной стеблевой огневки), Psuedoplusia includens (совки соевой), Anticarsia gemmatalis (гусеницы совки бархатных бобов), Plathypena scabra (клеверной усатки), Homoeosoma electellum (огневки
15 подсолнечниковой) и Cochylis hospes (окаймленной подсолнечниковой моли) или любой их комбинации.
32. Трансгенное растение по п. 29 или п. 30, где модифицированный полипептид Vip3 является пестицидным в отношении по меньшей мере одного из следующего:
20 Ostrinia nubilalis (кукурузного мотылька), Spodoptera frugiperda (кукурузной листовой совки), Helicoverpa zea (американской кукурузной совки) или Agrotis ipsilon (совки-ипсилон) или любой их комбинации.
33. Продукт, собранный с растения по любому из п. 27 или п. 28.
34. Обработанный продукт, полученный из собранного продукта по п. 33.
35. Обработанный продукт по п. 34, где продукт выбран из муки, муки грубого помола, масла, волокна, сахара, крахмала и зерна или продукта, полученного из них.
36. Семя, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 18-22 или кассету экспрессии и/или рекомбинантный вектор по п. 23.
36.
37. Экстракт из семени по п. 35 или трансгенного растения по любому из пп. 27-32, где экстракт содержит молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 18-22 и/или модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-16.
5 38. Сельскохозяйственная культура, включающая множество растений по любому из пп. 27-31, высаженных вместе на сельскохозяйственном поле.
39. Способ, предоставляющий фермеру средство для контроля вредителя растений,
при этом способ включает обеспечение фермера растительным материалом или
10 бактериями, при этом указанные растительный материал или бактерии содержат молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-16.
40. Способ получения модифицированного полипептида Vip3 по любому из пп. 1-
15 16, включающий стадии: (а) трансформации клетки-хозяина молекулой нуклеиновой
кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-16; и (Ь) культивирования клетки-хозяина из стадии (а) в условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, с получением, таким образом, 20 модифицированного полипептида Vip3.
41. Способ уменьшения повреждения трансгенного растения, вызванного
вредителем растений, при этом способ включает посадку семени трансгенного
растения, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, которая экспрессирует
25 модифицированный полипептид Vip3 по любому из пп. 1-16, с уменьшением, таким образом, повреждения, вызванного вредителем у трансгенного растения, выращенного из семени трансгенного растения.
42. Способ контроля вредителя, включающий обеспечение трансгенного растения
30 по любому из пп. 27-31 или семени по п. 35 и нанесение на растение или семя средства
защиты сельскохозяйственных культур.
43. Способ получения модифицированного полипептида Vip3, включающий
выращивание клетки-хозяина по любому из пп. 24-26 в условиях, при которых
обеспечивается экспрессия модифицированного полипептида Vip3; и выделение модифицированного полипептида Vip3.
44. Способ контроля вредителей, включающий приведение вредителей в контакт с
5 пестицидно эффективным количеством композиции по п. 17.
45. Способ защиты растения и/или материала для размножения растений, включающий приведение растения и/или материала для размножения растений в контакт с эффективным количеством композиции по п. 17.
46. Способ повышения пестицидной активности в растении, части растения или растительной клетке, при этом способ включает:
введение одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты по любому из пп. 18-22 в растение, часть растения или растительную клетку с получением 15 трансгенного растения, части растения или растительной клетки, которые экспрессируют одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, причем с обеспечением экспрессии, таким образом, кодируемого ими модифицированного полипептида Vip3 и с повышением пестицидной активности в трансгенном растении, части растения или растительной клетке, по сравнению с контролем.
47. Способ по п. 46, где одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты содержатся в одной или нескольких кассетах экспрессии или векторах, которые содержат одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, функционально ассоциированных с одним или несколькими промоторами, которые функционируют в
25 растительной клетке.
48. Способ по п. 47, где одна или несколько кассет экспрессии содержат селектируемый маркер.
30 49. Способ по любому из пп. 46-48, где способ включает регенерацию трансгенного растения из трансгенной растительной клетки или части растения, где трансгенное растение содержит в своем геноме одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты и обладает повышенной пестицидной активностью.
ФИГ. 1
1/6
ФИГ.З
Vlp3D541
22ЕХ 62? 4 остатка из
Ш1%
ACCESSION ДАШ9354 B2ZEZ,! SS
Фиг. 5В
505 из последовательности с № доступа NP_229032
655
ГПЗг^^^???.я r^^Tnf! I ^ ^J-J-L г*4- ^^^^^^^^^^^^^^^^ 5^ l^^j^^^l ^ ^ j ^ > ^
45 из последовательности с № доступа ААС44232.1
208 из AA031761.1
319
Фиг. 5С
69roYP 005220866.1
.... I
203
202 из YP_003011283.1 I
341 !
66из\?Р 009674454.1
Я- ?8
345 из ААС44232.1
(19)