EA201692539A1 20170428 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/201692539 Полный текст описания [**] EA201692539 20150626 Регистрационный номер и дата заявки US62/017,812 20140626 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2015/064533 Номер международной заявки (PCT) WO2015/197823 20151230 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21704 Номер бюллетеня [**] АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ, КОТОРЫЕ СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮТСЯ С БЕЛКОМ ТАУ, АССОЦИИРОВАННЫМ С МИКРОТРУБОЧКАМИ Название документа [8] C07K 16/18, [8] A61K 39/395 Индексы МПК [US] Вадиа Джехангир, [US] Паскуал Габриель, [NL] Уилльямсон Роберт Энтони, [NL] Радошевич Катарина, [NL] Гоудсмит Яап Сведения об авторах [NL] ЯНССЕН ВЭКСИНС ЭНД ПРЕВЕНШН Б.В. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201692539a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Настоящее изобретение относится к антителам и антигенсвязывающим фрагментам, которые специфично связываются с белком тау, ассоциированным с микротрубочками. Настоящее изобретение также относится к диагностическим, профилактическим и терапевтическим способам, в которых применяются антитела к тау-белку.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение относится к антителам и антигенсвязывающим фрагментам, которые специфично связываются с белком тау, ассоциированным с микротрубочками. Настоящее изобретение также относится к диагностическим, профилактическим и терапевтическим способам, в которых применяются антитела к тау-белку.


Евразийское (21) 201692539 (13) Al
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07K16/18 (2006.01)
2017.04.28 A61K39/395 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2015.06.26
(54) АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ, КОТОРЫЕ
СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮТСЯ С БЕЛКОМ ТАУ, АССОЦИИРОВАННЫМ С МИКРОТРУБОЧКАМИ
(31)
(32)
(33)
(86) (87) (88) (71)
(72)
(74)
62/017,812; 62/017,789; 62/017,807; 62/017,746; 14179699.5; 14179706.8; 14179719.1; 14179739.9
2014.06.26; 2014.06.26; 2014.06.26; 2014.06.26; 2014.08.04; 2014.08.04; 2014.08.04; 2014.08.04
US; US; US; US; EP; EP; EP; EP
PCT/EP2015/064533
WO 2015/197823 2015.12.30
2016.02.18
Заявитель:
ЯНССЕН ВЭКСИНС ЭНД ПРЕВЕНШН Б.В. (NL)
Изобретатель:
Вадиа Джехангир, Паскуал Габриель (US), Уилльямсон Роберт Энтони, Радошевич Катарина, Гоудсмит Яап
(NL)
Представитель: Медведев В.Н. (RU)
(57) Настоящее изобретение относится к антителам и антигенсвязывающим фрагментам, которые специфично связываются с белком тау, ассоциированным с микротрубочками. Настоящее изобретение также относится к диагностическим, профилактическим и терапевтическим способам, в которых применяются антитела к тау-белку.
2420-539093ЕА/032 АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ, КОТОРЫЕ СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮТСЯ С БЕЛКОМ ТАУ, АССОЦИИРОВАННЫМ С МИКРОТРУБОЧКАМИ Область изобретения
Настоящее изобретение относится к медицине. Настоящее изобретение, в частности, относится к антителам и антигенсвязывающим фрагментам, которые специфично связываются с белком тау, ассоциированным с микротрубочками. Настоящее изобретение также относится к диагностическим, профилактическим и терапевтическим способам, в которых применяются антитела к тау-белку.
Предпосылки изобретения
Деменция является синдромом, который может быть вызван целым рядом прогрессирующих расстройств, влияющих на память, мышление, поведение и способность выполнять повседневные действия. В настоящее время приблизительно 3 6 миллионов человек во всем мире страдают от деменции. По прогнозам количество людей с деменцией увеличится в два раза к 2030 году и больше чем в три раза до 115,4 миллиона человек к 2050 году. Болезнь Альцгеймера является наиболее распространенным типом деменции. На данный момент у одного из девяти человек в возрасте 65 лет и старше (11 процентов) и почти у половины тех, кто старше 85 лет, имеется болезнь Альцгеймера. Согласно Международной ассоциации болезни Альцгеймера текущие глобальные расходы на уход за этими пациентами превышают $600 миллиардов в год. Эти расходы вероятно возрастут даже быстрее, чем распространенность заболевания, особенно в развивающихся странах, так как возникает больше установленных законом систем социальной защиты, и рост доходов приводит к повышению альтернативных издержек (Winblad, В and Jonsson, L, World Alzheimer Report 2010).
В головном мозге пациентов с AD в больших количествах присутствуют две аномальные структуры: амилоидные бляшки и нейрофибриллярные клубки. Особенно это касается определенных областей головного мозга, которые играют важную роль в отношении памяти. Также наблюдается значительная потеря нейронов и синапсов в коре головного мозга и в определенных подкорковых
областях. Как количество нейрофибриллярных клубков, так и потеря нейронов возрастают параллельно с продолжительностью и тяжестью заболевания (Gomez-Isla, t. et al, Ann Neurol 1997; 41:17-24) и было показано, что нейрофибриллярная нагрузка коррелирует с когнитивными нарушениями. (Braak, Н. and Braak, Е, Neurobiol Aging. 1997 Jul-Aug;18(4):351-7.
Нейрофибриллярные клубки являются внутринейрональными очагами, которые состоят из гиперфосфорилированных и нерастворимых скоплений тау-белка, ассоциированного с микротрубочками. Эти скопления являются гистопатологическим отличительным признаком многих нейродегенеративных заболеваний, которые известны под общим названием таупатий. Таупатии включают, например, болезнь Альцгеймера (AD), болезнь Пика
(PiD), прогрессирующий надъядерный паралич (PSP) ,
кортикобазальную дегенерацию (CBD) и лобно-височную лобарную дегенерацию (FTLD). При таупатиях у человека патология прогрессирует, распространяясь от одной области головного мозга к другой характерным для конкретного заболевания образом (Braak, Н. and Braak, Е, Neurobiol Aging. 1997 Jul-Aug;18(4):351-7, Raj et.al. Neuron 2012; 73:1204-1215, Seeley et.al. Neuron 2009; 62: 42-52., и Zhou et.al., Neuron 2012; 73:1216-1227), причем основной механизм этого пока не ясен.
Патологический тау-белок связан со многими таупатиями и может быть их причиной. В нормальной форме тау-белок является хорошо растворимым белком, ассоциированным с микротрубочками
(Jeganathan et al. , Biochemistry 2008; 47:10526-10539.), который связывается с микротрубочками и способствует их сборке (Drechsel et al., Mol Biol Cell 1992; 3:1141-1154.). Однако при таупатиях тау-белок становится гиперфосфорилированным, что приводит к его отсоединению от микротрубочек и, в конечном итоге, к скоплению в виде нейрофибриллярных клубков, которые визуализируются в пределах дистрофического нейрита и клеточных телец (Mandelkow and Mandelkow, Cold Spring Harbor Perspect Med 2, 2012: a006247) . Количество патологического тау-белка коррелирует с прогрессирующей нейрональной дисфункцией, потерей синапсов и функциональными нарушениями у человека и в моделях на
трансгенных мышах (Arriagada et al., Neurology. 1992 Mar;42(3 Pt l):631-9, Bancher et al., Neurosci Lett 1993; 162:179-182., Polydoro et al., J. Neoroscience 2009; 29:10741-10749., и Small and Duff, Neuron. 2008 Nov 2 6; 60 (4) : 534-42) . При том, что при болезни Альцгеймера мутации тау-белка не наблюдаются, мутации в гене тау-белка, по всей видимости, приводят к некоторым формам лобно-височной деменции (Cairns et al, Am J Pathol, 2007; 171: 227-40), при которых проявляются тау-положительные включения, и это означает, что дисфункции тау-белка достаточно для того, чтобы вызвать нейродегенерацию. Более того, патологический тау-белок, по-видимому, является неотъемлемой частью А|3-индуцированной нейротоксичности в культуре клеток и моделях на трансгенных животных (Rapoport, М, PNAS, 2002; 99:9, 6364-6369., Roberson ED, et al, Science, 2007; 316:750-754, Nicholson AM, and Ferreira A, J Neurosci 2009; 2 9:4640-4651, Oakley H, J Neurosci 2006;26(40):10129-10140.).
Пассивную и активную иммунизацию против тау-белка анализировали на мышах с использованием нескольких разных мышиных моделей, включая разные фосфо-тау-пептиды для активной иммунизации и антитела к тау-белку для пассивной иммунотерапии
(Asuni АА, et al, J Neurosci. 2007;27 (34) :9115-9129., Sigurdsson EM. Curr Alzheimer Res. 2009;6(5):446-450., Boutajangout A, et al, J Neurosci. 2010;30 (49) :16559-16566., Rosenmann H, et al. Arch Neurol. 2006; 63(10) :1459-1467., Boimel M, et al, Exp Neurol. 2010;224(2): 472-485.). В первом сообщении, описывающем иммунизации с использованием фосфорилированного тау-пептида длиной 3 0 аминокислот, были показаны влияние на соотношения растворимого и нерастворимого тау-белка, уменьшение образования клубка у иммунизированных мышей и функциональные положительные эффекты, наблюдаемые в поведенческом тесте у этих мышей
(Boutajangout A. et al, J. Neuroscience, 2010; 30:16559-16566). Пассивная иммунизация с использованием хорошо изученных антител к тау-белку, которые вступают в реакцию с фосфорилированным Ser396 и Ser404 гиперфосфорилированного тау-белка на раннем патологическом конформационном эпитопе тау-белка, подтвердила
результаты, полученные в исследованиях с активной иммунизацией. На мышах, обработанных этими антителами, были показаны значительное снижение количества патологического тау-белка, которое измеряли посредством биохимических способов и гистологических методик, а также значительная отсрочка развития нарушения, связанного с потерей двигательной функции, которую оценивали в поведенческих тестах. ( Boutajangout A, et al, J Neurochem. 2011; 118 (4): 658-667 . , Chai X, et al. J Biol Chem. 2011;286(39):34457-34467.)
На сегодняшний день способы терапии, направленные на тау-белок, анализировали только на мышиных моделях. Но принимая во внимание тяжесть таупатий в целом и затраты общества, связанные с болезнью Альцгеймера в частности, все еще существует потребность в эффективных средствах диагностики, мониторинга, предупреждения и лечения таупатий.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение предусматривает антитела, содержащие антигенсвязывающую вариабельную область, которая специфично связывается с тау-белком. Настоящее изобретение, в частности, предусматривает антитела к тау-белку и их антигенсвязывающие фрагменты, которые обнаруживают тау-белок в нормальной ткани головного мозга человека или обнаруживают отложения тау-белка в ткани головного мозга человека с болезнью Альцгеймера (AD) и с прогрессирующим надъядерным параличем (PSP). В некоторых вариантах осуществления антитела к тау-белку и их антигенсвязывающие фрагменты связываются с рекомбинантным тау-белком и/или PHF-тау-белком в ходе вестерн-блот-анализа.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает химерные антитела, содержащие антигенсвязывающую вариабельную область из встречающегося в природе антитела человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область IgGl человека, где константная область химерного антитела является отличной от встречающегося в природе антитела. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает химерные антитела к тау-белку и их антигенсвязывающие фрагменты, которые обнаруживают тау-белок в
нормальной ткани головного мозга человека, но не обнаруживают отложения тау-белка в ткани головного мозга человека с болезнью Альцгеймера (AD) и с прогрессирующим надъядерным параличем (PSP).
В некоторых вариантах осуществления (химерные) антитела к
тау-белку и их антигенсвязывающие фрагменты связываются с
рекомбинантным тау-белком и/или PHF-тау-белком в ходе вестерн-
блот-анализа. В некоторых вариантах осуществления антитела к
тау-белку и их антигенсвязывающие фрагменты не связываются с
рекомбинантным тау-белком или PHF-тау-белком в ходе ELISA.
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты предпочтительно способны
специфично связываться с тау-пептидом. В некоторых вариантах
осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты
предпочтительно способны специфично связываться с
фосфорилированным тау-пептидом, но не связываются с пептидом, когда он не является фосфорилированным. В определенных вариантах осуществления антитела к тау-белку не являются встречающимися в природе. Предпочтительно, антитела являются антителами человека.
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению являются применимыми в качестве диагностических, профилактических и/или терапевтических средств, как отдельно, так и в комбинации с другими диагностическими, профилактическими и/или терапевтическими средствами.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:163, С0К2-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:164 и CDRS-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:165, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:166, С0К2-область легкой цепи с SEQ ID N0:167 и СОИЗ-области легкой цепи с SEQ ID N0:168.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:169, С0К2-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:170 и CDRS-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:171, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRS-области легкой цепи с
SEQ ID NO:174.
Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:175, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:176 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:177, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:178, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:179 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:180.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:181, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:182 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:183, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:184.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:185, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:18 6 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:187, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:188, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:189.
Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:190, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:191 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:192, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:193, CDR2-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:194 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:195.
Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:196, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:197 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:198, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:199, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:200.
Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:216, CDR2-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:217.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:174 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:217.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок CDRl-области тяжелой цепи с SEQ ID N0:219, CDR2-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:22 0 и CDRЗ-oблacти тяжелой цепи с SEQ ID N0:221, CDRl-области легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-области легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacти легкой цепи с SEQ ID N0:217.
Настоящее изобретение дополнительно относится к антигенсвязывающим фрагментам указанных выше антител.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему антигенсвязывающий участок вариабельной области тяжелой цепи (VH) с SEQ ID N0: 87, 91, 95,
99, 103, 107, 111, 123, 127 или 131 и антигенсвязывающий участок
вариабельной области легкой цепи (VL) с SEQ ID N0: 88, 92, 96,
100, 104, 108, 112, 124, 128 или 132, и к его антигенсвязывающим
фрагментам.
Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение
относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную
область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную
последовательность с SEQ ID N0: 87, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 88, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно
дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 91, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 92, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 95, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 96, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 99, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 100, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 103, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 104, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 107, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 108, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 111, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 112, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой
цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 123, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 124, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 127, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 12 8, и к его антигенсвязывающим фрагментам. Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к антителу к тау-белку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 131, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность с SEQ ID N0: 132, и к его антигенсвязывающим фрагментам.
В одном варианте осуществления константная область тяжелой цепи IgGl состоит из аминокислотной последовательности с SEQ ID N0: 83. В другом варианте осуществления константная область легкой цепи IgGl состоит из аминокислотной последовательности с SEQ ID N0: 84.
Настоящее изобретение также предусматривает молекулы
нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела или их
антигенсвязывающие фрагменты. Другой аспект настоящего изобретения представлен вектором, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. Дополнительным объектом настоящего изобретения является клетка-хозяин, содержащая вектор по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также предусматривает способ получения антитела к тау-белку, включающий культивирование клетки-хозяина по настоящему изобретению и выделение антитела, полученного с помощью клетки-хозяина.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает функциональные варианты антител и иммуноконъюгаты, содержащие антитело и/или его антигенсвязывающий фрагмент.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает композиции и наборы, которые содержат одно или несколько антител
по настоящему изобретению и/или их антигенсвязывающие фрагменты.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает
диагностические, профилактические и терапевтические способы, в которых используют антитела к тау-белку. Профилактические и терапевтические способы включают введение людям-субъектам антител к тау-белку и/или их антигенсвязывающих фрагментов для предупреждения или лечения таупатий и/или заболеваний или состояний, опосредованных тау-белком, и/или уменьшения интенсивности одного или нескольких симптомов таупатий. Для комбинированной терапии можно применять комбинации множества разных антител к тау-белку и/или их антигенсвязывающих фрагментов с другими антителами к тау-белку. Также предусмотрены композиции, содержащие антитела к тау-белку и/или их антигенсвязывающие фрагменты в комбинации с другими профилактическими или терапевтическими средствами.
В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению уникальны тем, что вариабельные области выделены из В-клеток памяти, специфичных в отношении тау-белка, от здоровых индивидуумов и обнаруживают отложения тау-белка в головном мозге человека с болезнью Альцгеймера, но не обнаруживают тау-белок в нормальной ткани головного мозга человека и являются фосфозависимыми, а также связываются с тау-пептидом ptau 194-212 (SEQ ID NO: 315), или ptau 200-217 (SEQ ID N0:319), или ptau 5978 (SEQ ID N0:323), или ptau 406-429 (SEQ ID N0:326). В других вариантах осуществления антитела уникальны тем, что вариабельные области выделены из В-клеток памяти, специфичных в отношении тау-белка, от здоровых индивидуумов, и обнаруживают отложения тау-белка в головном мозге человека с болезнью Альцгеймера, и обнаруживают тау-белок в нормальной (т. е. здоровой) ткани головного мозга человека, и являются преимущественно фосфонезависимыми и связываются с тау-пептидом tau 2 04-221 (SEQ ID N0:318) или tau 221-253 (SEQ ID NO: 367). В некоторых других вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению уникальны тем, что вариабельные области выделены из В-клеток памяти, специфичных в отношении тау-белка, от индивидуумов с болезнью Альцгеймера, и являются фосфозависимыми, и связываются
с фосфорилированным тау-пептидом ptau 406-429 (SEQ ID N0:326), и не связываются с нефосфорилированным тау-пептидом tau 389-441 (SEQ ID NO:327)
Краткое описание графических материалов
На фигурах la-t показана реактивность CBTAU-7.1, 8.1, 16.1, 18.1, 20.1, 22.1, 24.1, 27.1, 28.1, 41.1, 41.2, 42.1, 43.1, 44.1, 45.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 в отношении соответствующего родственного и неродственного пептида.
На фигурах 2а-j показана реактивность CBTAU-7.1, 8.1, 16.1, 18.1, 20.1, 22.1, 24.1, 27.1 и 28.1 в отношении рекомбинантного тау-белка (rTau), обогащенных очищенных иммуноаффинным способом спаренных спиральных филаментов (ePHF) и очищенных иммуноаффинным способом спаренных спиральных филаментов (iPHF) в ходе ELISA. В качестве положительного контроля использовали mAb к тау-белку - АТ8.
На фигуре 3 показана иммунореактивность CBTAU-7.1, 18.1, 22.1, 24.1, 27.1 и 28.1 в отношении rtau, ePHF и iPHF в ходе вестерн-блот-анализа.
На фигурах 4а-д показано эпитопное картирование CBTAU-27.1, 28.1, 43.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 с использованием перекрывающихся пептидов, которые соответствуют областям 42-103 и 299-369 tau441 человека.
На фигурах 5a-d показаны результаты иммуногистохимического исследования для mAb CBTAU, подробно описанных в данной заявке. На фигурах 5а-Ь показано иммуноокрашивание с использованием CBTAU-7.1, 8.1, 16.1, 18.1, 20.1, 22.1, 24.1, 27.1 и 28.1 срезов ткани гиппокампа и кортикальной ткани без AD в сравнении с тканью с AD, соответственно. На фигуре с показано иммуноокрашивание с использованием CBTAU-7.1, 8.1, 16.1, 18.1, 20.1, 22.1 и 24.1 срезов кортикальной ткани без PSP и с PSP. На фигуре 5d показано иммуноокрашивание с использованием CBTAU-43.1, 46.1, 47.2 и 49.1 в отношении срезов кортикальной ткани без AD и с AD.
На фигуре 6а показана иммунореактивность CBTAU-28.1 и
контрольных mAb в отношении срезов ткани гиппокампа без AD (мужчина в возрасте 54 лет; без клинических симптомов) и с AD
(женщина латиноамериканского происхождения в возрасте 93 лет).
На фигуре 6Ь показана реактивность CBTAU-28.1 и контрольных mAb в отношении срезов ткани гиппокампа с AD (женщина латиноамериканского происхождения в возрасте 93 лет) в случае обработки фосфатазой из кишечника теленка и без обработки.
На фигуре 7 показана реактивность CBTAU-2 8.1 и mAb к фосфо-тау-белку, АТ8, в отношении iPHF (очищенных иммуноаффинным способом спаренных спиральных филаментов) и образцов iPHF, обработанных фосфатазой из кишечника теленка.
На фигурах 8а-е показана реактивность CBTAU-27.1, 28.1, 43.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 в отношении тау-фосфопептидов, подробно описанных в таблицах 30-34.
Подробное описание изобретения
Определения
Ниже даны определения терминов, используемых в настоящем изобретении.
Предусматривается, что вслед за применяемым в настоящем документе выражением "включенный" или "включающий" следуют слова "без ограничения".
Используемый в данном документе термин "тау-белок" используют взаимозаменяемо с конкретным указанием нативной мономерной формы тау-белка. Термин "тау-белок" также используют для того, чтобы в целом обозначить другие конформеры тау-белка, например, олигомеры или агрегаты тау-белка. Термин "тау-белок" также используют для обозначения совокупности всех типов и форм тау-белка. По причине альтернативного сплайсинга в головном мозге человека присутствует б изоформ тау-белка. Эти изоформы различаются отсутствием или наличием одной или двух вставок 2 9 аминокислот, кодируемых экзонами 2 и 3 в аминоконцевой части, в комбинации с тремя (Rl, R3 и R4) или четырьмя (R1-R4) областями повторов в карбоксиконцевой части. Домен, связывающий микротрубочки, кодируется экзоном 10. Изоформы тау-белка у взрослого человека включают самый длинный компонент из 441 аминокислоты (SEQ ID N0:1), или 4R/2N, компонент из 410 аминокислот (SEQ ID N0:2), или 3R/2N, компонент из 412
аминокислот (SEQ ID N0:3), или 4R/1N, компонент из 381 аминокислоты (SEQ ID N0:4), или 3R/1N, и компонент из 383 аминокислот (SEQ ID N0:5), или 4R/0N. Самая короткая изоформа из 352 аминокислот (SEQ ID N0:6), или 3R/0N, обнаружена в головном мозге плода и, таким образом, ее называют эмбриональной изоформой тау-белка.
Аминокислотную последовательность тау-белка "дикого типа", представленную изоформой из 441 аминокислоты (SEQ ID N0:1), также называют "tau441", "4R/2N", "hTau40", "TauF", "Tau-4" или "полноразмерный тау-белок".
Термин "рекомбинантный тау-белок" в данном документе относится к самой длинной изоформе тау-белка в головном мозге человека (SEQ ID N0:1), экспрессированной в Е. coli и очищенной до гомогенности или почти до гомогенности (Barghorn S., Meth Mol Biol 2004 299:35-51). Рекомбинантный тау-белок является растворимым и нефосфорилированным.
Термин "нейрофибриллярный клубок" (NFT) относится к патологическим структурам, впервые описанным Альцгеймером в головном мозге пациента с деменцией. NFT состоит из упорядоченно расположенных субъединиц, которые называются спаренными спиральными филаментами, агрегатами гиперфосфорилированного белка тау, которые наиболее широко известны как основной маркер болезни Альцгеймера.
Используемый в данном документе термин "спаренный спиральный филамент тау-белка" или "PHF-тау-белок", относится к широко известным агрегатами тау-белка, которые составляют патологические структуры, называемые нейрофибриллярными клубками (NFT), впервые описанные Альцгеймером в головном мозге пациента с деменцией. Они также присутствуют при многих других заболеваниях, известных как таупатий.
"Обогащенный PHF-тау-белок" или "ePHF тау-белок" получают в соответствии с протоколом Greenberg и Davies, как описано в примерах. PHF-тау-белок обогащают при 27200 х g из супернатантов, содержащих 0,8 М NaCl, за счет использования его нерастворимости в цвиттерионных детергентах (Kosik, К. S., et al. (1986) PNAS USA 83, 4044-4048, Rubenstein, R., et al (1986)
Brain Res. 372, 80-88) и меркаптоэтаноле. В PHF, выделенных с использованием цвиттерионных детергентов, по всей видимости, сохраняются антигенные детерминанты, которые могут быть утрачены в ходе выделения нейрофибриллярных клубков, нерастворимых в SDS, и при этом они схожи по структуре и имеют многие антигенные свойства при сравнении с PHF в NFT. "Очищенный иммуноаффинным способом PHF-тау-белок" или "iPHF тау-белок" является аффинно очищенным с помощью моноклонального антитела к тау-белку. Такие протоколы предусматривают препараты PHF-тау-белка, в которых сохраняется классическая структура спаренного спирального филамента, определенная с помощью электронной микроскопии, и при этом они являются полностью растворимыми при низких концентрациях SDS (Jicha, G. , 1997, 48 (2) :128-32) . PHF-тау-белок также образуется из рекомбинантного тау-белка посредством индукции полимеризации in-vitro с использованием гепарина
(Mandelkow, et al Methods in Molecular Biology 299:35-51(2004). В качестве альтернативы, PHF-тау-белок выделяют с помощью многих других способов из головного мозга пациентов с AD с использованием протоколов, таких как описанные Rostagna и Ghiso
(Rostagna, A. and Ghiso, J., Curr Protoc Cell Biol. Sep 2009; CHAPTER: Unit-3.3333.). Определяют характеристики выделенного PHF-тау-белка по его чистоте и состоянию гиперфосфорилирования с использованием антител, которые, как известно, вступают в реакцию с PHF-тау-белком. В стандартном препарате PHF-тау-белка гиперфосфорилированные полосы, мигрирующие при приблизительно 60, 64, 68 и 72кДа в ходе вестерн-блоттинга (Spillantini and Goedert Trends Neurosci 21:428-33, 1998), обнаруживают посредством антитела АТ8, которое специфично связывается с гиперфосфорилированным PHF-тау-белком и не связывается с дефосфорилированным PHF-тау-белком.
Применяемый в данном документе термин "антитела" следует понимать в широком смысле, и он охватывает молекулы иммуноглобулина или антитела, включая поликлональные антитела, моноклональные антитела, в том числе мышиные, человеческие, адаптированные для человека, гуманизированные и химерные моноклональные антитела, биспецифичные или мультиспецифичные
антитела и фрагменты антител. Как правило, антитела представляют собой белки или пептидные цепи, которые проявляют специфичность связывания с определенным антигеном. Структуры антител являются широко известными. Иммуноглобулины можно отнести к пяти основным классам, а именно IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелой цепи. IgA и IgG дополнительно подразделены на изотипы IgAl, IgA2, IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4. Легкие цепи антитела любого вида позвоночных животных можно отнести к одному из двух четко различающихся типов, а именно каппа (К) и лямбда {X) , исходя из аминокислотных последовательностей их константных доменов.
Термин "антигенсвязывающие фрагменты " означает часть
интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают Fab,
Fab', F(ab')2 и Fv-фрагменты, CDR, антигенсвязывающий участок,
вариабельную область тяжелой или легкой цепи, диатела, триотела,
молекулы одноцепочечных антител (scFv) и мультиспецифичные
антитела, образованные по меньшей мере из двух интактных антител
или их фрагментов, или (поли)пептиды, содержащие по меньшей мере
фрагмент иммуноглобулина, которого достаточно для придания
(поли)пептиду способности связывать антиген и т.д.
Антигенсвязывающий фрагмент может содержать пептид или
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность по
меньшей мере из 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70,
80, 90, 100, 125, 150, 175, 200 или 2 50 смежных аминокислотных
остатков из аминокислотной последовательности антитела.
Антигенсвязывающие фрагменты можно получить путем синтеза или
посредством ферментативного или химического расщепления
интактных иммуноглобулинов, или их можно получить
генноинженерным путем с использованием методик рекомбинантной ДНК. Способы получения хорошо известны из уровня техники и описаны, например, в Antibodies: A Laboratory Manual, Edited by: E. Harlow and D, Lane (1988), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, которое включено в данный документ посредством ссылки. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут иметь один или несколько участков связывания. При наличии
более одного участка связывания участки связывания могут быть идентичны друг другу или они могут отличаться.
Вариабельная область легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина состоит из "каркасной" области, которая прерывается "антигенсвязывающими участками". Антигенсвязывающие участки определены с использованием множества терминов, приведенных ниже. (i) Определяющие комплементарность участки (CDR) основаны на вариабельности последовательности (Wu and Rabat J Exp Med 132:211-50, 1970). Как правило, антигенсвязывающий участок имеет три CDR в каждой вариабельной области (HCDR1, HCDR2 и HCDR3 в вариабельной области тяжелой цепи (VH) и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 в вариабельной области легкой цепи (VL)) (Rabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). (ii) Термин "гипервариабельная область", "HVR" или "HV" относится к областям вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными по структуре, как определено Chothia и Lesk (Chothia and Lesk J Mol Biol 96:901-17, 1987). Как правило, антигенсвязывающий участок имеет три гипервариабельные области в каждой VH (HI, Н2, НЗ) и VL (LI, L2, L3). Chothia и Lesk относят структурно консервативные HV к "каноническим структурам". Системы нумерации, а также аннотации CDR и HV недавно были пересмотрены Abhinandan и Martin (Abhinandan and Martin Mol Immunol 45:38329, 2008) . (iii) Другое определение областей, которые образуют антигенсвязывающий участок предложил Lefranc (Lefranc, et al. Dev Camp Immunol 27:55-77, 2003), исходя из сравнения V-доменов из иммуноглобулинов и Т-клеточных рецепторов. Международная база данных по иммуногенетике (The International ImMunoGeneTics database) (IMGT) (http:_//www imgt_ org) предусматривает стандартизованную нумерацию и определение этих областей. Соответствие между CDR, HV и картированием согласно IMGT описано Lefranc et al. Антигенсвязывающий участок можно также картировать исходя из частоты использования остатков, определяющих специфичность (SDRU) (Almagro J Mol Recognit 17:132-43, 2004), где остатки, определяющие специфичность (SDR) ,
относятся к аминокислотным остаткам иммуноглобулина, которые непосредственно участвуют в контакте с антигеном.
Rabat et al. также определили систему нумерации для последовательностей вариабельного домена, которая является применимой к любому антителу. Специалист в данной области техники может однозначно применить эту систему "нумерации по Rabat" по отношению к любой последовательности вариабельного домена, не полагаясь на какие-либо экспериментальные данные, помимо самой последовательности. Используемая в данном документе "нумерация по Rabat" относится к системе нумерации, изложенной в Rabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983). Если конкретно не указано иное, упоминание нумерации определенных положений остатков аминокислот в антителе или антигенсвязывающем фрагменте, варианте или их производном по настоящему изобретению соответствует системе нумерации по Rabat, которая, однако, является теоретической и, в то же время, может не применяться к каждому антителу по настоящему изобретению. Например, в зависимости от положения первого CDR, следующие CDR могут быть сдвинуты в любом направлении.
"Каркас" или "каркасная последовательность" являются остальными последовательностями в пределах вариабельной области антитела, помимо тех, которые определены как последовательности антигенсвязывающего участка. Поскольку точное определение антигенсвязывающего участка можно получить при помощи множества методик картирования, как описано выше, точная каркасная последовательность зависит от определения антигенсвязывающего участка.
Используемый в данном документе термин "моноклональное антитело" (mAb) означает антитело (или фрагмент антитела), полученное из популяции практически однородных антител. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, при этом они обычно направлены против одной антигенной детерминанты.
Согласно одному аспекту антитело по настоящему изобретению является химерным человеческим антителом. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением термины "химерное
человеческое антитело", или "рекомбинантное человеческое антитело" и т.п. используют для обозначения связывающей молекулы с антигенсвязывающими свойствами, которая происходит из человеческой клетки, т.е. антигенсвязывающий участок которой происходит из нуклеиновых кислот, полученных из человеческой клетки, такой как В-клетка, или частичную cDNA которой клонировали из mRNA человеческой клетки, например человеческой В-клетки памяти. Химерное антитело все еще является "человеческим", даже если в антителе были произведены аминокислотные замены, например, для улучшения биофизических или фармакокинетических характеристик. По сравнению с искусственно образованными антителами, подобными человеческим антителам, такими как фрагменты одноцепочечного антитела (scFv), полученные из фагового дисплея библиотеки антител или от мыши, экспрессирующей ксеногенные последовательности, химерное человеческое антитело по настоящему изобретению характеризуется (i) антигенсвязывающей областью, полученной с использованием иммунного ответа человека вместо имитации с использованием животных, т.е. антигенсвязывающая область была образована в ответ на природный тау-белок с его соответствующей конформацией в организме человека, и/или (ii) защитой индивидуума, или оно по меньшей мере является значимым для выявления присутствия тау-белка .
Антитела, которые происходят из библиотек иммуноглобулинов человека или из животных, трансгенных по одному или нескольким иммуноглобулинам человека и не экспрессирующих эндогенные иммуноглобулины, как описано ниже и, например, в патенте США № 5939598, выданном Kucherlapati et al., обозначают антитела, подобные человеческим антителам, с тем, чтобы отличить их от антител, полученных от человека, по настоящему изобретению.
Например, спаривание тяжелой и легкой цепей антител, подобных человеческим антителам, таких как синтетические и частично синтетические антитела, обычно выделенные из фагового дисплея, не обязательно отражает встречающееся в природе спаривание, которое происходит во встречающейся в природе В-клетке человека. Соответственно, Fab- и scFv-фрагменты,
полученные из библиотек с рекомбинантной экспрессией, использование которых является общеизвестным из предшествующего уровня техники, можно рассматривать как искусственные со всеми возможными ассоциированными с этим эффектами в отношении иммуногенности и стабильности. В отличие от этого, настоящее изобретение предусматривает антигенсвязывающие области антител с созревшей аффинностью к тау-белку от выбранных субъектов-людей, причем в некоторых вариантах осуществления они рекомбинантно экспрессируются как химеры с константной областью из обычного IgGl.
Используемый в данном документе термин "функциональный
вариант" относится к антителу, которое содержит нуклеотидную
и/или аминокислотную последовательность, которая изменена на
один или несколько нуклеотидов и/или аминокислот в сравнении с
нуклеотидными и/или аминокислотными последовательностями
эталонного антитела, и которое способно конкурировать за
специфичное связывание с партнером по связыванию, т.е. тау-
белком, с эталонным антителом. Другими словами, модификации
аминокислотной и/или нуклеотидной последовательности эталонного
антитела существенно не влияют или не изменяют характеристики
связывания антитела, кодируемого нуклеотидной
последовательностью или содержащего аминокислотную
последовательность, т.е. антитело все еще способно специфично
распознавать и связывать свою мишень. Функциональный вариант
может иметь модификации в консервативной последовательности, в
том числе нуклеотидные и аминокислотные замены, присоединения и
делеции. Примеры функциональных вариантов включают снижение
риска наличия свободного цистеина или аминокислоты с
потенциальной посттрансляционной модификацией в
гипервариабельной области, а также конструирование Fc для
увеличения/снижения аффинности связывания антитела IgG с FcRn,
увеличения/снижения периода полужизни в сыворотке.
Функциональный вариант также может быть образован из антитела в виде химерного или нехимерного изотипа человеческого IgG2, IgG3 или IgG4 или в виде химерного или нехимерного изотипа, полученного от другого вида. Функциональный вариант также может
представлять собой мутацию или мутации константных областей для увеличения образования биспецифичных антител. Эти модификации можно вводить с помощью стандартных методик, известных из уровня техники, таких как ПЦР, сайт-направленный мутагенез и ненаправленный опосредованный ПЦР мутагенез, и они могут включать природные, а также неприродные нуклеотиды и аминокислоты.
Используемый в данном документе термин "специфичное связывание" или "специфичное распознавание", который относится к взаимодействию антитела с его партнером по связыванию, например, с антигеном, означает, что взаимодействие зависит от присутствия определенной аминокислотной последовательности или структуры, например, антигенной детерминанты или эпитопа, у партнера по связыванию. Другими словами, антитело предпочтительно связывается с партнером по связыванию или распознает его, даже если партнер по связыванию присутствует в смеси с другими молекулами или организмами. Связывание может быть опосредовано ковалентными или нековалентными взаимодействиями или их комбинацией. Другими словами, термин "специфичное связывание" или "специфичное распознавание" означает, что антитело обладает специфичной иммунореактивностью по отношению к антигенной детерминанте или эпитопу и не является иммунореактивным по отношению к другим антигенным детерминантам или эпитопам. Антитело, которое (иммуно)специфично связывается с антигеном, может связываться с другими пептидами или полипептидами с более низкой аффинностью, как определено, например, посредством радиоиммунных анализов (RIA), иммуноферментных анализов (ELISA), BIACORE или других анализов, известных из уровня техники. Антитела или их фрагменты, которые специфично связываются с антигеном, могут характеризоваться перекрестной реактивностью с родственными антигенами, несущими такой же эпитоп. Предпочтительно, антитела или их фрагменты, которые специфично связываются с антигеном, не проявляют перекрестную реактивность с другими антигенами.
Используемый в данном документе термин "эпитоп" означает ту часть антигена, с которой контактируют петли CDR антитела.
"Структурный эпитоп" состоит из приблизительно 15-22 контактных остатков на поверхности антигена и включает много аминокислотных остатков, которые контактируют с большой группой остатков в CDR, совместно именуемых паратопом антитела. Непосредственный контакт между остатками эпитопа и паратопа осуществляется посредством электростатических сил, таких как водородные связи, солевые мостики, ван-дер-ваальсовы силы на гидрофобных поверхностях и геометрическая комплементарность. Зона взаимодействия имеет также связанные молекулы воды или другие кофакторы, которые способствуют специфичности и аффинности взаимодействий антиген-антитело. Энергия связывания комплекса антиген-антитело в основном опосредована небольшой совокупностью контактных остатков в зоне взаимодействия эпитопа-паратопа. Данные "остатки, важные с точки зрения энергии связывания" часто находятся в центре зоны взаимодействия эпитопа-паратопа и составляют функциональный эпитоп. Контактные остатки на периферии зоны взаимодействия, как правило, вносят незначительные вклады в энергию связывания; при этом их замены зачатую слабо влияют на связывание с антигеном. Таким образом, связывание или функциональная активность эпитопа предусматривает небольшую совокупность остатков, важных с точки зрения энергии связывания, расположенных в центре структурного эпитопа, с которыми контактируют CDR, определяющие специфичность. Определение функционального эпитопа на антигенном белке можно произвести с использованием нескольких способов, включая аланин-сканирующий мутагенез, или путем определения кристаллической структуры антигена с использованием антитела.
Эпитоп может быть линейным по своей природе или прерывистым эпитопом, например, конформационный эпитоп, который образован посредством пространственных взаимоотношений между несмежными аминокислотами антигена, а не линейным рядом аминокислот. Конформационный эпитоп предусматривает эпитопы, возникшие вследствие укладки антигена, при которой аминокислоты из различных участков линейной последовательности антигена находятся в непосредственной близости в 3-мерном пространстве. Для прерывистых эпитопов возможно получить связывание одного или
нескольких линейных пептидов с уменьшенной аффинностью к так называемому частичному эпитопу, например, распределенному по разным областям последовательности белка (Cragg, М. S. (2011) Blood 118 (2): 219-20.).
Используемый в данном документе термин "аффинность"
относится к степени силы связывания отдельного эпитопа или
частичного эпитопа с CDR связывающей молекулы, например,
молекулы иммуноглобулина; см., например, Harlow et al.,
Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 2nd ed. (1988) на страницах 27-28. Используемый в данном
документе термин "авидность" относится к общей стабильности
комплекса между популяцией иммуноглобулинов и антигеном, то есть
к объединенной силе функционального взаимодействия смеси
иммуноглобулинов с антигеном; см., например, Harlow на страницах
29-34. Авидность связана как с аффинностью отдельных молекул
иммуноглобулина в популяции со специфичными эпитопами, так и с
валентностью иммуноглобулинов и антигена. Например,
взаимодействие между бивалентным моноклональным антителом и антигеном с высокоповторяющейся структурой эпитопа, например, полимером, будет характеризоваться высокой авидностью. Аффинность или авидность антитела к антигену можно определить экспериментально с использованием подходящего способа; см., например, Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions" в Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press New York, N.Y. (1984), Kuby, JanisHMMyHology, W.H. Freeman and Company New York, N Y (1992), и способов, описанных в данном документе. Общие методики измерения аффинности антитела к антигену включают ELISA, RIA и поверхностный плазмонный резонанс. Измеренная аффинность определенного взаимодействия антитело-антиген может варьироваться при измерении в разных условиях, например, концентрация солей, рН. Таким образом, измерения аффинности и других антигенсвязывающих параметров, например, KD, IC50, предпочтительно проводят со стандартными растворами антитела и антигена и стандартным буфером.
Антитела или антигенсвязывающие фрагменты или их варианты по настоящему изобретению можно также описать или определить с
точки зрения их способности специфично обнаруживать присутствие антигена. Термин "обнаруживать" или "обнаружение" используют в наиболее широком смысле, так что он охватывает количественные, полуколичественные или качественные измерения в отношении целевой молекулы. Согласно одному аспекту антитела, описанные в данном документе, могут обеспечивать только определение наличия или отсутствия тау-полипептида в биологическом образце, например, посредством иммуногистохимической методики, и, таким образом, тау-полипептид является поддающимся обнаружению или, в качестве альтернативы, не поддающимся обнаружению в образце, как определено посредством данного способа.
Используемый в данном документе термин "фосфоспецифичное
антитело" или "фосфозависимое антитело" означает специфичное
антитело, в котором по меньшей мере часть или целый эпитоп
основан на фосфорилированном аминокислотном остатке.
Фосфоспецифичное или фосфозависимое антитело не обнаруживает
нефосфорилированный антиген. Термин "фосфоселективное антитело"
означает специфичное антитело, которое предпочтительно
связывается с фосфорилированным остатком и имеет более высокую
аффинность к фосфорилированному, чем к нефосфорилированному
антигену. Термин "нефосфоселективное антитело" или
"фосфонезависимое" означает специфичное антитело, которое предпочтительно связывается с нефосфорилированным остатком и имеет более высокую аффинность к нефосфорилированному, чем к фосфорилированному антигену. В определенных вариантах осуществления антитела к тау-белку по настоящему изобретению или их антигенсвязывающие фрагменты являются фосфозависимыми. В других определенных вариантах осуществления антитела к тау-белку по настоящему изобретению или их антигенсвязывающие фрагменты являются фосфонезависимыми.
Термин "полинуклеотид" предназначен для охвата как единичной нуклеиновой кислоты, так и множества нуклеиновых кислот, и относится к выделенной молекуле или конструкции нуклеиновой кислоты, например, информационной РНК (mRNA) или плазмидной ДНК (pDNA). Полинуклеотид может содержать обычную фосфодиэфирную связь или нетрадиционную связь (например, амидную
связь, такую как обнаруженная в пептидных нуклеиновых кислотах (PNA) ) . Термин "молекула нуклеиновой кислоты" относится к любой одной или нескольким частям нуклеиновой кислоты, например, фрагментам ДНК или РНК, присутствующим в полинуклеотиде. Под "выделенной" нуклеиновой кислотой или полинуклеотидом подразумевают молекулу нуклеиновой кислоты, ДНК или РНК, которая была извлечена из ее нативной окружающей среды. Например, рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий антитело, содержащийся в векторе, считается выделенным для целей настоящего изобретения.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид или нуклеиновая кислота представляет собой ДНК. В случае ДНК, полинуклеотид, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептид, обычно может содержать промотор и/или другие элементы контроля транскрипции или трансляции, функционально связанные с одной или несколькими кодирующими областями. Функциональная связь наблюдается, когда область, кодирующая продукт гена, например, полипептид, ассоциирована с одним или несколькими регуляторными последовательностями таким образом, чтобы экспрессия продукта гена находилась под влиянием или контролем регуляторной последовательности(ей). Таким образом, промоторная область будет функционально связанной с нуклеиновой кислотой, которая кодирует полипептид, если промотор был способен к осуществлению транскрипции этой нуклеиновой кислоты. Промотор может являться клеточноспецифичным промотором, который управляет транскрипцией ДНК на существенном уровне только в предварительно определенных клетках. Другие элементы контроля транскрипции, кроме промотора, например энхансеры, операторы, репрессоры и сигналы терминации транскрипции, могут быть функционально связанными с полинуклеотидом для управления клеточноспецифичной транскрипцией. В данном документе раскрыты подходящие промоторы и другие области контроля транскрипции.
Используемые в данном документе термины "лечить" или "лечение" относятся к терапевтическому лечению, а также профилактическим или превентивным мерам, где целью является предупреждение или замедление (уменьшение) нежелательного
физиологического изменения или расстройства, такого как развитие паркинсонизма или болезни Альцгеймера. Благоприятные или желательные клинические результаты включают без ограничения ослабление симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (т.е. не ухудшающееся) состояние заболевания, отсрочку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение состояния заболевания и ремиссию (либо частичную, либо полную), которые являются либо поддающимися обнаружению, либо не поддающимися обнаружению. "Лечение" также может означать продление выживания по сравнению с ожидаемой выживаемостью без получения лечения. Нуждающиеся в лечении включают тех, у кого уже имеются состояние или расстройство, а также лиц, склонных к развитию состояния или расстройства, или тех, у кого необходимо предотвратить проявление состояния или расстройства. Используемый в данном документе термин "лекарственный препарат" относится к средству, используемому для лечения нежелательного физиологического изменения или расстройства.
Под "субъектом", или "индивидуумом", или "животным", или "пациентом", или "млекопитающим" подразумевается любой субъект, в частности, субъект, являющийся млекопитающим, например, пациент-человек, для которого необходимы диагностика, прогнозирование, предупреждение или терапия.
Описание
Тау-белок является часто встречающимся белком центральной и периферической нервной системы, характеризующимся множеством широко известных изоформ. В CNS человека по причине альтернативного сплайсинга существуют шесть основных изоформ тау-белка, которые варьируются по размеру от 352 до 441 (Hanger, et al. Trends Mol Med 15:112-9, 2009) . Эти изоформы отличаются одна от другой по подвергающемуся регуляции включению 0-2 N-концевых вставок и 3 или 4 тандемно расположенных повторов, связывающихся с микротрубочками, и при этом они упоминаются как ON3R (SEQ ID NO: б), 1N3R (SEQ ID N0:4), 2N3R (SEQ ID N0:2), 0N4R (SEQ ID N0:5), 1N4R (SEQ ID N0:3) и 2N4R (SEQ ID N0:1). Используемый в данном документе термин "рекомбинантный тау
белок" относится к изоформе тау-белка с SEQ ID N0:1, которая лишена фосфорилирования и других посттрансяционных модификаций. Тау-белок может быть рекомбинантно экспрессирован в больших количествах, например, в Е. coli, бакуловирусе, млекопитающем или бесклеточных системах. "Рекомбинантный тау-белок" может быть рекомбинантно экспрессирован и очищен посредством стандартных способов. (Barghorn, et al 2004, Meth Mol Biol 35-51).
Тау-белок связывает микротрубочки и регулирует транспорт груза в клетках, процесс, который может модулироваться с помощью фосфорилирования тау-белка, которое наблюдается в случае многих из 7 9 потенциальных сайтов фосфорилирования серина (Ser) и треонина (Thr). Тау-белок подвергается высокому уровню фосфорилирования в ходе развития головного мозга. Степень фосфорилирования снижается в зрелом возрасте. Некоторые сайты фосфорилирования расположены в пределах доменов связывания микротрубочек тау-белка, и было показано, что повышение уровня фосфорилирования тау-белка приводит к отрицательной регуляции связывания микротрубочек. Например, Ser2 62 и Ser396, которые расположены в пределах мотивов связывания микротрубочек или примыкают к ним, являются гиперфосфорилированными в тау-белках аномальных спаренных спиральных филаментов (PHF), основном компоненте нейрофибриллярных клубков (NFT) в головном мозге пациентов с AD. PHF являются филаментными агрегатами тау-белков, которые являются аномально гиперфосфорилированными и могут быть окрашены специфичными антителами к тау-белку и обнаружены посредством световой микроскопии. То же самое справедливо и для так называемых прямых филаментов тау-белка. PHF образуют перекрученные ленты, состоящие из двух филаментов, перекрученных один вокруг другого с периодичностью приблизительно 8 0 нм. Эти патологические особенности обычно называют "тау-белок-патологией", "таупатологией" или "патологией, связанной с тау-белком" . Для более подробного описания нейропатологических особенностей таупатий см. Lee et al., Annu. Rev. Neurosci. 24 (2001), 1121-1159, и Gotz, Brain. Res. Rev. 35 (2001), 266-286, содержание раскрытия которого включено в данный документ посредством ссылки. Физиологический тау-белок стабилизирует
микротрубочки в нейронах. Патологическое фосфорилирование приводит к локализации и агрегации аномального тау-белка, который вызывает дестабилизацию микротрубочек и нарушение клеточного транспорта. Агрегированный тау-белок является нейротоксичным in vitro (Khlistunova et al. , J. Biol. Chem. 281
(2006), 1205-1214). Разновидности, точно являющиеся
нейротоксичными, остаются неустановленными, однако, так же, как
и механизм(ы), посредством которых они приводят к гибели
нейронов. Агрегаты тау-белка можно наблюдать в качестве главного
компонента нейрофибриллярных клубков (NFT) при многих таупатиях,
таких как болезнь Альцгеймера (AD), лобно-височные деменции,
надъядерный паралич, болезнь Пика, заболевания,
характеризующиеся появлением аргирофильных зерен (AGD), кортикобазальная дегенерация, FTDP-17, болезнь Паркинсона, деменция боксеров (обзор в Gendron and Petrucelli, Mol. Neurodegener. 4:13 (2009)) . Помимо этих наблюдений, появляется доказательство того, что гибель нейронов, опосредованная тау-белком, может наблюдаться даже при отсутствии образования клубков. Растворимые разновидности фосфо-тау-белка присутствуют в CSF (Aluise et al. , Biochim. Biophys. Acta. 1782 (2008), 549558) . Агрегаты тау-белка могут передавать неправильно уложенное состояние с внешней стороны во внутреннюю часть клетки и передавать его между клетками, которые совместно культивируются
(Frost et al., J. Biol. Chem. 284 (2009), 12845-12852).
Помимо участия в нейродегенеративных таупатиях наблюдались изменения в фосфорилировании тау-белка во время и после ишемии/реперфузии и после травмы головы вследствие удара, что свидетельствует о том, что тау-белок играет важную роль в нейрональном повреждении и клинической патофизиологии нейроваскулярных расстройств, таких как ишемический инсульт
(Zheng et al. , J. Cell. Biochem. 109 (2010), 26-29), а также изменения тау-белка обнаружены при хронической травматической энцефалопатии, таупатий у спортсменов, получивших сотрясение головного мозга, и военных ветеранов с черепно-мозговой травмой
(TBI) .
Настоящее изобретение предусматривает моноклональные
антитела, при этом антитела связываются с отложениями тау-белка в ткани головного мозга человека с AD.
В определенных вариантах осуществления антитела а) связываются с отложениями тау-белка в ткани головного мозга человека с AD и Ь) не связываются с тау-белком в нормальной ткани головного мозга.
В определенных вариантах осуществления антитела а) связываются с отложениями тау-белка в ткани головного мозга человека с AD, Ь) не связываются с тау-белком в нормальной ткани головного мозга человека и с) не связываются с отложениями тау-белка в ткани головного мозга с прогрессирующим надъядерным параличем (PSP).
В определенных вариантах осуществления антитела а) образуют иммунный комплекс с отложениями тау-белка в ткани головного мозга человека с AD и Ь) не образуют иммунный комплекс с тау-белком в нормальной ткани головного мозга человека.
В определенных вариантах осуществления антитела являются химерными антителами.
В определенных вариантах осуществления антитела являются
химерными антителами, содержащими антигенсвязывающую
вариабельную область из антитела человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область IgGl человека, и при этом химерные антитела являются отличными от антитела человека.
В некоторых вариантах осуществления антитела являются
химерными антителами, содержащими антигенсвязывающую
вариабельную область из антитела человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область IgGl человека, при этом константная область химерного антитела является отличной от константной области антитела человека.
В некоторых вариантах осуществления антитела являются химерными антителами, содержащими встречающуюся в природе антигенсвязывающую вариабельную область человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область антитела IgGl человека.
В определенных вариантах осуществления антитела являются
химерными антителами, содержащими встречающиеся в природе вариабельные области легкой и тяжелой цепей из антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
В определенных вариантах осуществления антитела являются химерными антителами, содержащими вариабельные области тяжелой и легкой цепей из встречающегося в природе антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
В некоторых вариантах осуществления антитела являются химерными антителами, содержащими вариабельные области тяжелой и легкой цепей из антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
В определенных вариантах осуществления антитела не являются встречающимися в природе.
Человеческие антитела к тау-белку, раскрытые в данном документе, специфично связываются с тау-белком и его эпитопами и с различными конформациями тау-белка и его эпитопов. Например, в данном документе раскрыты антитела, которые специфично связываются с патологически модифицированными изоформами тау-белка и агрегатами тау-белка. В одном примере антитело к тау-белку, раскрытое в данном документе, связывается с тау-белком или его эпитопом и не демонстрирует связывания с другими белками, превышающего фоновый уровень приблизительно в 3 раза. Антитело, которое "специфично связывается" или "селективно связывается" с конформером тау-белка, относится к антителу, которое не связывается со всеми конформациями тау-белка, т.е. не связывается по меньшей мере с одним другим конформером тау-белка, таким как рекомбинантный тау-белок.
Вариабельные домены химерных моноклональных антитела к тау-белку по настоящему изобретению могут происходить из группы здоровых субъектов-людей, у которых проявляется специфичный иммунный ответ по отношению к тау-белку, или из субъекта, пораженного болезнью Альцгеймера. Антитела к тау-белку по настоящему изобретению можно также называть "антителами, полученными от человека" для того, чтобы подчеркнуть, что эти
антигенсвязывающие области антитела действительно были
экспрессированы субъектами и не были выделены, например, из
человеческого иммуноглобулина, экспрессирующего фаговую
библиотеку, что до сих пор являлось единственным обычным способом попытки получения антител, подобных человеческим антителам. Например, антитела по настоящему изобретению отличаются от mAb АТ8, MCI и АТ100 тем, что они являются антителами, полученными от человека.
Антитела к тау-белку по настоящему изобретению можно охарактеризовать по их связывающим свойствам в отношении рекомбинантного тау-белка в ходе ELISA. Рекомбинантный тау-белок, полученный посредством очистки из Е. coli, характеризуется высоким уровнем растворимости благодаря его гидрофильным свойствам. У него отсутствует фосфорилирование остатков Ser, Thr и Туг, что является характерным для тау-белка, наблюдаемого при таупатиях. В одном варианте осуществления настоящего изобретения моноклональные антитела к тау-белку, раскрытые в данном документе, не связываются специфично с рекомбинантным тау-белком в ходе ELISA. В другом варианте осуществления настоящего изобретения моноклональные антитела к тау-белку связываются с рекомбинантным тау-белком в ходе ELISA.
В одном варианте осуществления было показано, что антитело к тау-белку по настоящему изобретению специфично связывается с фосфорилированным тау-пептидом с SEQ ID NO: 315, или SEQ ID NO: 3 65. В другом варианте осуществления было показано, что антитело к тау-белку по настоящему изобретению связывается как с фосфорилированным тау-пептидом с SEQ ID NO: 317, так и с нефосфорилированным тау-пептидом с SEQID N0:318 или как с фосфорилированным пептидом с SEQ ID N0:329, так и нефосфорилированным тау-пептидом с SEQ ID N0:367.
Антитела к тау-белку, раскрытые в данном документе, в определенных вариантах осуществления специфично связываются с тау-пептидом в ходе ELISA с применением пептидов. В одном варианте осуществления антитело к тау-белку связывается с тау-пептидом, например, GTPGSRSRTPSLPTPPTR (SEQ ID N0: 318), что соответствует аминокислотам 204-221 tau441. В другом варианте
осуществления антитело к тау-белку связывается с тау-пептидом, например,
GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAWRTPPKSPSSAKSRLQTAPVP MPDL (SEQ ID N0: 367), что соответствует аминокислотам 221-253 tau441. Антитело к тау-белку по настоящему изобретению не похоже на ранее раскрытые моноклональные антитела человека к тау-белку
(US20130295021), которые, как сообщалось, связываются с различными тау-пептидами. Моноклональные антитела N1-105.4Е4, N1-105.4АЗ и N1-105.4Е4 связываются с пептидами 329-351+387-397, 337-343 и 35-49 tau441, соответственно.
Антитела к тау-белку по настоящему изобретению можно охарактеризовать по их связывающим свойствам в отношении PHF-тау-белка в ходе ELISA. Антитела к PHF-тау-белку клона АТ8 связываются с PHF-тау-белком и широко используются для обнаружения PHF-тау-белка в нейрофибриллярных клубках в образцах от пациентов с болезнью Альцгеймера. АТ8 является фосфоспецифичным моноклональным антителом и связывается с фосфорилированным Ser2 02 и Thr 2 05 PHF-тау-белка, и при этом согласно многим публикациям оно используется в ELISA, иммуногистохимии, иммуноблоттинге, вестерн-блоттинге и подобных применениях. Клон АТ8 распознает тау-белок при болезни Альцгеймера, а также PHF-тау-белок в ходе ELISA и не связывает нефосфорилированный тау-белок от здоровых индивидуумов или рекомбинантный тау-белок. В одном примере антитело к тау-белку по настоящему изобретению не связывается с PHF-тау-белком в ходе ELISA. В другом примере антитело к тау-белку по настоящему изобретению связывается с PHF-тау-белком в ходе ELISA.
Антитела к тау-белку по настоящему изобретению можно охарактеризовать по их связывающим свойствам в отношении PHF-тау-белка и рекомбинантного тау-белка посредством вестерн-блоттинга. При нейродегенеративных расстройствах в агрегации тау-белков с образованием PHF участвует несколько механизмов
(фосфорилирование, убиквитинирование, окисление, гликирование). Эти патологические тау-белки визуализируются в ходе вестерн-блоттинга как три основные полосы от 55 до 69 кДа и минорная полоса в 74 кДа. Тау-белок 55 является результатом
фосфорилирования самой короткой изоформы (SEQ ID N0:6), тау-белок 64 - фосфорилирования вариантов тау-белка с одним кассетным экзоном (SEQ ID N0:4 и/или SEQ ID N0:5), тау-белок 69 фосфорилирования вариантов тау-белка с двумя кассетными экзонами (SEQ ID N0:2 и/или SEQ ID N0:3). Фосфорилирование самой длинной изоформы тау-белка (SEQ ID N0:1) приводит к образованию дополнительного гиперфосфорилированного варианта - тау-белка 74. В определенных вариантах осуществления антитела к тау-белку связываются с PHF-тау-белком в ходе вестерн-блот-анализа.
Антитела к тау-белку можно применять в
иммуногистохимическом (IHC) исследовании срезов ткани нормального головного мозга или головного мозга с AD и охарактеризовать посредством такого исследования. Антитела к фосфо-тау-белку, в частности, указывают на нейрофибриллярную патологию с высоким уровнем чувствительности и специфичности, в то время как в нормальном здоровом головном мозге обнаружение тау-белка не наблюдается. Клинико-патологические исследования продемонстрировали, что отложения или скопления фосфо-тау-белка более точно соответствуют клиническим признакам по сравнению со скоплениями амилоида-р, и при этом постадийное прогрессирование от трансэнторинальной до лимбической и до изокортикальной областей является основой для определения стадий AD [R.J. Castellani, et al, Acta Neuropathol (Berl) 111, 503(2006); H. Braak and E. Braak, Acta Neuropathol (Berl) 82, 239 (1991) . Моноклональные антитела к тау-белку, которые часто используются в иммуногистохимическом исследовании, включают АТ8 (тау-белок р202 / р205), АТ180 (тау-белок р231), АТ270 (тау-белок р181), АТ100 (рТ212 и S214) и МС-1 (Mercken М, et al, 1992 Acta Neuropatho 84:265-272, Zheng-Fischhofer 1998 Eur J Biochem 252:542-552, Goedert M, et. Al. 1994 Biochem J 301:871-877). В одном варианте осуществления моноклональные антитела к тау-белку по настоящему изобретению обнаруживают тау-белок в нормальной (т. е. здоровой) ткани головного мозга человека и обнаруживают отложения тау-белка в ткани головного мозга человека с AD. В другом примере антитела к тау-белку по настоящему изобретению
обнаруживают отложения тау-белка в ткани головного мозга человека с AD, но не обнаруживают тау-белок в нормальной ткани головного мозга человека.
Антитела к тау-белку по настоящему изобретению можно применять в иммуногистохимическом исследовании в отношении дополнительных таупатий, включающих прогрессирующий надъядерный паралич, болезнь Пика и другие, и охарактеризовать посредством такого исследования. Патологические филаментные включения тау-белка в PSP состоят из ошибочно фосфорилированных тау-белков, но при этом наблюдается преимущественное накопление аномальных изоформ тау-белка 4R. . Панель моноклональных антител к тау-белкам, включая Alz50, Tau-2, Т46, PHF-1, PHF-б, 12E8, PHF-1, RD4 и AT8, используют для характеристики отложений при PSP (J Neuropathol Exp Neurol. 1998 (б):588-601.). Все моноклональные антитела окрашивают внутринейрональные и глиальные включения, однако, 12Е8 и PHF-б окрашивают их с меньшей интенсивностью. Эти антитела обнаруживают разные эпитопы тау-белка, например, фосфоспецифичные, специфичные к изоформе, а также обнаруживают отложения тау-белка в головном мозге с AD. RD3, моноклональное антитело к тау-белку, которое специфично обнаруживает изоформу тау-белка с 3 повторами, демонстрирует ограниченное IHC обнаружение PSP, но интенсивно окрашивает отложения тау-белка в тканях головного мозга человека с AD. Ограниченное обнаружение PSP этим антителом обусловлено сниженными уровнями изоформы тау-белка с 3 повторами при PSP (De Silva, R. et al, Neuropath and Appl Neurobio (2003) 2 9(3)288-302). В одном варианте осуществления антитела к тау-белку по настоящему изобретению обнаруживают отложения тау-белка в ткани головного мозга человека с AD, но не обнаруживают тау-белок в нормальной ткани головного мозга человека и не обнаруживают отложения тау-белка в головном мозге человека с PSP.
В определенных вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую: а) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:163, ста2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:164 и CDRS-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:165, b) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:169, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:170 и CDR3
область тяжелой цепи с SEQ ID N0:171, с) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:175, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:176 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:177, d) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:181, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:182 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:183, е) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:185, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:186 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:187, f) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:190, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:191 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:192, g) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:196, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:197 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:198, h) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, i) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:219, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:220 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:221. В определенных вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую: а) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:166, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:167 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:168,
b) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174,
c) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:178, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:179 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:180,
d) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:184,
e) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:188, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:189,
f) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:193, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:194 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:195,
g) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:199, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:200,
h) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:216, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217 и i) CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217.
В определенных вариантах осуществления антитело выбрано из группы, состоящей из: а) антитела, содержащего, CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:163, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:164 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:165, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:166, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:167 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:168; b) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:169, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:170 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:171, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174; с) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:175, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:176 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:177, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:178, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:179 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:180; d) CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:181, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:182 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:183, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:184; е) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:185, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:18 6 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:187, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:188, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:189; f) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:190, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:191 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:192, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:193, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:194 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:195; g) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:196, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:197 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:198, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:199, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:200; h) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:216, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и
CDRS-область легкой цепи с SEQ ID N0:217; i) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:174 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217; j) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:219, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:220 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:221, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217.
В определенных вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности с SEQ ID N0: 87, 91, 95, 99, 103, 107, 111, 123, 127 и 131. В определенных вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности с SEQ ID N0: 88, 92, 96, 100, 104, 108, 112, 124, 128, 132.
В некоторых вариантах осуществления предложены
антигенсвязывающие фрагменты вышеописанных антител.
Антигенсвязывающие фрагменты предпочтительно связываются с одним и тем же эпитопом. Моноклональные антитела к тау-белку и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с разными эпитопами в сравнении с эпитопами для известных человеческих антител к тау-белку, таких как, например, N1-105.4Е4 и N1-105.4АЗ. Связывание с другим эпитопом подразумевает, что антитело связывается с другими критически важными аминокислотными остатками по сравнению с известными антителами.
В некоторых вариантах осуществления антитела действуют синергически, если применяются в комбинации с другими антителами, связывающими тау-белок. Используемый в данном документе термин "синергический" означает, что комбинированный эффект антител или антигенсвязывающих фрагментов, если их применяют в комбинации, превышает их аддитивные эффекты при отдельном применении. Способ расчета синергии осуществляют с
помощью показателя аддитивности. Общее представление о показателе аддитивности (CI) было описано у Chou and Talalay (Adv Enzyme Regul., 22:27-55, 1984).
В некоторых вариантах осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты предназначены для применения в качестве лекарственного препарата и предпочтительно для применения в диагностике, терапевтическом и/или профилактическом лечении нейродегенеративных заболеваний. Человеческие антитела к тау-белку по настоящему изобретению или их фрагменты, включая Fab, (Fab')2, scFv-фрагменты или антитела, содержащие антигенсвязывающие участки антител по настоящему изобретению, можно использовать для лечения, уменьшения или предупреждения симптомов у пациентов с нейродегенеративным заболеванием, которое предполагает накопление тау-белка или патологического тау-белка или агрегацию тау-белка в пределах головного мозга, например, у пациентов, страдающих AD, а также любой другой таупатией или другой патологией, связанной с тау-белком, при которой тау-белок может сверхэкспрессироваться. Без ограничения конкретной теорией предполагается, что антитела по настоящему изобретению могут проявлять благоприятный эффект за счет уменьшения или устранения патологического тау-белка или агрегации тау-белка и, следовательно, количества PHF-тау-белка в головном мозге. Антитела по настоящему изобретению можно использовать для лечения пациента-животного, относящегося к любой систематической группе. Примеры таких животных включают млекопитающих, таких как люди, грызуны, собаки, кошки и сельскохозяйственные животные. Например, антитела по настоящему изобретению пригодны для получения лекарственного препарата для лечения AD, где лекарственный препарат получают для введения в дозах, определенных в данном документе.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уменьшения агрегации тау-белка у пациентов, нуждающихся в этом, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества выделенного антитела по настоящему изобретению в течение времени, достаточного для уменьшения агрегации тау-белка. Другой вариант осуществления
настоящего изобретения представляет собой способ лечения или уменьшения симптомов нейродегенеративного заболевания, которое предполагает агрегацию тау-белка у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества выделенного антитела по настоящему изобретению в течение времени, достаточного для лечения или уменьшения симптомов нейродегенеративного заболевания. Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уменьшения количества тау-белка у пациентов, нуждающихся в этом, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества выделенного антитела по настоящему изобретению в течение времени, достаточного для уменьшения количества тау-белка.
В любом из указанных выше вариантов осуществления
нейродегенеративное заболевание, которое предполагает агрегацию
тау-белка, является таупатией. Используемый в данном документе
термин "таупатия" охватывает любое нейродегенеративное
заболевание, которое предполагает патологическую агрегацию тау-
белка в пределах головного мозга. В дополнение к семейной и
спорадической AD, другими иллюстративными таупатиями являются
лобно-височная деменция с паркинсонизмом, связанная с хромосомой
17 (FTDP-17), прогрессирующий надъядерный паралич,
кортикобазальная дегенерация, болезнь Пика, прогрессирующий
подкорковый глиоз, деменция, характеризующаяся только клубками,
диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, деменция,
характеризующаяся появлением аргирофильных зерен, комплекс
боковой амиотрофический склероз-паркинсонизм-деменция, синдром
Дауна, синдром Герстмана-Штраусслера-Шейнкера, болезнь
Галлервордена-Шпатца, миозит с включенными тельцами, болезнь
Крейтцфельдта-Якоба, мультисистемная атрофия, болезнь Ниманна-
Пика типа С, прион-протеинцеребральная амилоидная ангиопатия,
подострый склерозирующий лейкоэнцефалит, миотоническая
дистрофия, негуанамианная болезнь двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, постэнцефалитический паркинсонизм и хроническая травматическая энцефалопатия, такая как деменция боксеров (болезнь боксеров). (Morris, et al. Neuron 70:410-26, 2011) .
Поведенческий фенотип, связанный с тау-белком, включает
когнитивные нарушения, ранее изменение личности и
расторможенность, апатию, абулию, мутизм, апраксию,
персеверацию, стереотипные движения/стереотипное поведение,
гиперорализм, неорганизованность, неспособность планировать или
организовывать последовательные задания,
эгоизм/бесчувственность, антисоциальные черты, отсутствие эмпатии, запинание, неграмотную речь с частыми инверсионными ошибками, но относительно сохранившимся пониманием, нарушение понимания и нехватку словарного запаса, медленно прогрессирующую нестабильность походки, ретропульсию, замирание, частое падение, аксиальную ригидность, нечувствительную к леводопе, надъядерный паралич взора, подергивания глазных яблок с прямоугольным сигналом, медленные вертикальные саккады, псевдобульбарный синдром, апраксию конечностей, дистонию, потерю кортикальной чувствительности и тремор.
Пациенты, подлежащие лечению, включают индивидуумов, у которых не наблюдаются симптомы, с риском возникновения AD или другой таупатий, а также пациентов, у которых в настоящее время проявляются симптомы. Пациенты, подлежащие лечению, включают индивидуумов с известным генетически обусловленным риском возникновения AD, таким как семейный анамнез AD или присутствие генетических факторов риска в геноме. Типичными факторами риска являются мутации в белке-предшественнике амилоида (АРР), особенно в положении 717 и положениях 67 0 и 671 (мутации Hardy и Swedish, соответственно). Другими факторами риска являются мутации в генах пресенилина, PS1, и PS2, и АроЕ4, семейный анамнез гиперхолестеринемии или атеросклероза. Индивидуумов, которые в настоящее время страдают AD, можно отличить от индивидуумов с типичной деменцией по наличию факторов риска, описанных выше. Кроме того, доступен ряд диагностических тестов для выявления индивидуумов с AD. Они включают измерение уровней тау-белка и А|342 в спинномозговой жидкости. Повышенные уровни тау-белка и пониженные уровни А|342 означают наличие AD. Индивидуумов, страдающих AD, можно также диагностировать
посредством критериев Ассоциации AD и родственных заболеваний.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уменьшения количества тау-белка у пациентов, нуждающихся в этом, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества выделенного антитела к тау-белку по настоящему изобретению в течение времени, достаточного для уменьшения количества тау-белка. Пациенты, подлежащие лечению, могут страдать от болезни, ассоциированной со сверхэкспрессией тау-белка. Некоторые мутации, включая мутации в интроне 10, индуцируют повышенные уровни функционально нормальной изоформы тау-белка с четырьмя повторами, что приводит к нейродегенерации. Сверхэкспрессия изоформы человеческого тау-белка с четырьмя повторами, в особенности в нейронах трансгенной мыши, ведет к развитию аксональной дегенерации в головном мозге и спинном мозге. В модели зарегистрировали аксональную дилатацию с накоплением нейрофиламентов, митохондрий и везикул. Аксонопатия и сопутствующая дисфункция сенсомоторных способностей зависели от дозы трансгена. При помощи этих результатов было доказано, что всего лишь повышения концентрации изоформы тау-белка с четырьмя повторами достаточно для повреждения нейронов в центральной нервной системе без образования внутринейрональных нейрофибриллярных клубков (Spittaels, et al, Am J Pathology 155(6) 2153-2165, 1999).
Введение/фармацевтические композиции
Антитела к тау-белку по настоящему изобретению пригодны для использования в качестве как терапевтического, так и профилактического средства для лечения или предупреждения нейродегенеративных заболеваний, которые предполагают накопление тау-белка и/или патологическую агрегацию тау-белка, таких как AD, или другие таупатий, или болезни, ассоциированные с тау-белком. У пациентов, у которых не наблюдаются симптомы, лечение можно начинать в любом возрасте (например, в возрасте приблизительно 10, 15, 20, 25, 30 лет) . Как правило, однако, не обязательно начинать лечение до тех пор, пациент не достигнет приблизительно 40, 50, 60 или 7 0 лет. Лечение обычно предусматривает многократные дозы в течение некоторого периода
времени. Лечение можно контролировать путем осуществления анализа ответов с участием антител, или активированных Т-клеток, или В-клеток в отношении терапевтического средства в зависимости от времени. Если уровень ответа понижается, назначается введение бустерной дозы.
При применении в профилактических целях фармацевтические
композиции или лекарственные препараты вводятся пациенту,
предрасположенному к AD или другим болезням с вовлечением тау-
белка или иным образом имеющему риск их возникновения, в
количестве, достаточном для устранения или уменьшения риска,
уменьшения тяжести или отсрочки начала заболевания, включая
биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы
заболевания, его осложнения и промежуточные патологические
фенотипы, которые проявляются в ходе развития заболевания. При
применении в терапевтических целях композиции или лекарственные
препараты вводятся пациенту с подозрением на такое заболевание
или пациенту, уже страдающему ним, в количестве, достаточном для
уменьшения, приостановки или отсрочки любых симптомов
заболевания (биохимических, гистологических и/или
поведенческих). Введение терапевтического средства может уменьшить или устранить умеренное когнитивное нарушение у пациентов, у которых еще не развилась патология, характерная для болезни Альцгеймера. Количество, достаточное для осуществления терапевтического или профилактического лечения, определяется как терапевтически или профилактически эффективная доза. В обеих из профилактического и терапевтического режимов композиции или лекарственные препараты, как правило, вводят в нескольких дозах до достижения достаточного иммунного ответа.
Антитела к тау-белку или их фрагменты по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с другими средствами, которые являются эффективными для лечения родственных нейродегенеративных заболеваний. В случае AD антитела по настоящему изобретению можно вводить в комбинации со средствами, которые уменьшают или предотвращают отложение бета-амилоида (А|3) . Возможно, что патологии с PHF-тау-белком и А|3 являются
синергичными. Таким образом, комбинированная терапия, нацеленная на устранение патологий, связанных как с PHF-тау-белком, так и с AJ3 одновременно, может быть более эффективна, чем целенаправленное воздействие на каждую из них по отдельности.
В случае болезни Паркинсона и родственных
нейродегенеративных заболеваний также возникает способ терапии путем иммуномодуляции для устранения агрегированных форм белка а-синуклеина. Комбинированная терапия, которая нацелена на устранение как тау-белка, так и белка а-синуклеина одновременно, может быть более эффективной, чем целенаправленное воздействие на каждый белок по отдельности. В способах по настоящему изобретению "терапевтически эффективное количество" антитела для лечения или уменьшения тяжести симптомов таупатий можно определить с помощью стандартных методик исследования. Например, дозу антитела можно определить путем введения средства в соответствующих животных моделях, хорошо известных из уровня техники.
Кроме того, для определения оптимальных диапазонов доз
можно необязательно использовать анализы in vitro. Специалисты в
данной области техники могут сделать выбор конкретной
эффективной дозы (например, с помощью клинических исследований)
с учетом нескольких факторов. Такие факторы включают
заболевание, которое подлежит лечению или предупреждению,
связанные с ним симптомы, массу тела пациента, иммунный статус
пациента и другие факторы, известные специалисту в данной
области техники. Точная доза для использования в составе также
будет зависеть от пути введения и тяжести заболевания, и она
должна быть определена в соответствии с заключением лечащего
врача и обстоятельствами для каждого пациента. Эффективные дозы
можно экстраполировать исходя из кривых доза-ответ, полученных
из тест-систем in vitro или на животных моделях. Способ введения
антител по настоящему изобретению для терапевтического
применения может представлять собой любой подходящий путь,
посредством которого средство доставляют хозяину.
Фармацевтические композиции на основе этих антител пригодны для
парентерального введения, например, внутрикожного,
внутримышечного, интраперитонеального, внутривенного,
подкожного, интраназального или интракраниального, или их можно вводить в спинномозговую жидкость головного мозга или спинного мозга.
Антитела по настоящему изобретению можно получить в виде
фармацевтических композиций, содержащих эффективное количество
антитела в качестве активного ингредиента в фармацевтически
приемлемом носителе. Термин "носитель" относится к разбавителю,
вспомогательному средству, наполнителю или среде, с которыми
вводится антитело. Такие фармацевтические среды могут
представлять собой жидкости, такие как вода и масла, включая
масла, полученные из нефти, животного, растительного или
синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое
масло, минеральное масло, кунжутное масло и тому подобное.
Например, можно использовать 0,4% солевой раствор и 0,3% глицин.
Эти растворы являются стерильными и, как правило, не содержат
твердые частицы. Они могут быть стерилизованы с помощью обычных,
хорошо известных методик стерилизации (например, фильтрации).
Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые
вспомогательные вещества, которые необходимы для
приблизительного соответствия физиологическим условиям, например, для доведения рН, и буферные вещества, стабилизирующие, загущающие, смазывающие и красящие вещества и т.д. Концентрация антител по настоящему изобретению в таком фармацевтическом составе может варьироваться в широком диапазоне, т.е. от менее чем приблизительно 0,5%, обычно приблизительно 1% или по меньшей мере приблизительно 1% вплоть до 15 или 20% по весу, и при этом она будет выбрана, в первую очередь, исходя из требуемой дозы, значений объема текучей среды, значений вязкости и т.д., в зависимости от конкретного выбранного способа введения.
Лечение можно проводить в режиме введения с одной дозой или в режиме введения с несколькими дозами, при котором исходный курс лечения может состоять из 1-10 отдельных доз, с последующими другими дозами, вводимыми в последующие временные
интервалы, которые необходимы для поддержания и/или усиления ответа, например, через 1-4 месяца вводят вторую дозу и, при необходимости, последующую(ие) дозу(ы) через несколько месяцев. Примеры приемлемых схем лечения включают: (i) 0, 1 месяц и б месяцев, (ii) 0, 7 день и 1 месяц, (iii) 0 и 1 месяц, (iv) 0 и б месяцев, или другие схемы, достаточные для получения необходимых ответов, которые, как ожидается, приведут к уменьшению симптомов заболевания или уменьшению тяжести заболевания. Таким образом, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению для внутримышечной инъекции можно получить с содержанием 1 мл стерильной буферной воды и от приблизительно 1 нг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 50 нг до приблизительно 3 0 мг или от приблизительно 5 мг до приблизительно 2 5 мг антитела по настоящему изобретению. Подобным образом, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению для внутривенной инфузии можно получить с содержанием приблизительно 250 мл стерильного раствора Рингера и от приблизительно 1 мг до приблизительно 3 0 мг или от приблизительно 5 мг до приблизительно 2 5 мг антитела по настоящему изобретению. Широко известны актуальные способы получения композиции для парентерального введения, которые более подробно описаны, например, в "Remington's Pharmaceutical Science", 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA.
Антитела по настоящему изобретению можно лиофилизировать для хранения и повторно растворить в подходящем носителе непосредственно перед использованием. Было показано, что эта методика эффективна в случае антитела и других препаратов, содержащих белки, и при этом можно использовать известные из уровня техники методики лиофилизации и восстановления.
Способы диагностики и наборы
Антитела по настоящему изобретению можно использовать в способах диагностики AD или другой таупатий у субъекта. Этот способ включает обнаружение у субъекта присутствия тау-белка с помощью диагностического реактива, такого как антитело или его фрагмент по настоящему изобретению. Тау-белок можно обнаружить в биологическом образце от субъекта (например, в крови, моче,
спинномозговой жидкости) посредством приведения в контакт биологического образца с диагностическим реактивом, представляющим собой антитело, и обнаружения связывания диагностического реагента, представляющего собой антитело, с PHF-тау-белком в образце от субъекта. Анализы для осуществления обнаружения включают хорошо известные способы, такие как ELISA, иммуногистохимия, вестерн-блоттинг или in vivo визуализация. Иллюстративными диагностическими антителами являются антитела CBTAU-7.1, CBTAU-8.1, CBTAU-16.1, CBTAU-18.1, CBTAU-20.1, CBTAU-22.1, CBTAU-24.1, CBTAU-41.1, CBTAU-41.2 и CBTAU-42.1 по настоящему изобретению, и при этом они относятся к типу К IgGl.
Диагностические антитела или подобные реактивы можно вводить путем внутривенной инъекции в организм пациента или непосредственно в головной мозг любым подходящим путем, посредством которого средство доставляют хозяину, как проиллюстрировано выше. Доза антитела должна находиться в тех же диапазонах, что и для способов лечения. Как правило, антитело является меченым, хотя в некоторых способах первичное антитело с аффинностью к тау-белку является немеченым, и при этом вторичное средство для мечения используют для связывания с первичным антителом. Выбор метки зависит от средств обнаружения. Например, флуоресцентная метка подходит для оптического обнаружения. Использование парамагнитных меток подходит для томографического обнаружения без хирургического вмешательства. Радиоактивные метки также можно обнаружить с использованием PET или SPECT.
Диагностику осуществляют путем сравнения количества, размера и/или интенсивности для меченых тау-белков, накопления тау-белка, агрегатов тау-белка и/или нейрофибриллярных клубков в образце от субъекта или в субъекте с соответствующими исходными значениями. Исходные значения могут представлять собой средние уровни в популяции индивидуумов без заболевания. Исходные значения также могут отражать предыдущие уровни, определенные у одного и того же субъекта.
Способы диагностики, описанные выше, можно также использовать для контроля ответа субъекта на терапию путем обнаружения присутствия тау-белка у субъекта до, во время или
после лечения. Изменение значений может быть по отношению к исходному уровню сигналов для ответа на лечение. Значения также могут временно изменяться в биологических жидкостях по мере того, как головной мозг очищается от патологического тау-белка.
Настоящее изобретение дополнительно относится к набору для осуществления вышеописанных способов диагностики и контроля. Обычно такие наборы содержат диагностический реактив, такой как антитела по настоящему изобретению, и необязательно детектируемую метку. Диагностическое антитело само по себе может содержать детектируемую метку (например, флуоресцентную молекулу, биотин и т.д.), которая поддается непосредственному обнаружению или обнаружению с помощью вторичной реакции (например, реакции со стрептавидином). В качестве альтернативы, можно использовать второй реагент, содержащий детектируемую метку, при этом второй реагент обладает специфичностью связывания с первичным антителом. В диагностический набор, пригодный для измерения уровня тау-белка в биологическом образце, можно включать антитела для набора, предварительно связанные с твердой фазой, например, с лунками микротитрационного планшета.
Содержание всех приведенных в данной заявке документов (включая ссылки на литературные источники, выданные патенты, опубликованные заявки на патенты и одновременно находящиеся на рассмотрении заявки на патенты), таким образом, специально включены в данный документ посредством ссылки.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
Конструирование и мечение тау-пептида
Гиперфосфорилирование тау-белка, которое приводит к высвобождению из микротрубочек и приводит к деполимеризации, является патологическим признаком, встречающимся при болезни Альцгеймера (AD) и других родственных таупатиях. По мере того, как баланс свободного тау-белка к тау-белку, связанному с микротрубочками смещается в сторону первого, считается, что неассоциированный тау-белок накапливается в неправильно свернутом, агрегированном состоянии. Предполагается, что в
процессе развития болезни тау-белок принимает различные конформации с прогрессированием от растворимых димерных и олигомерных форм к нерастворимым агрегатам более высокого порядка, таким как спаренные спиральные филаменты (PHF) и нейрофибриллярные клубки (NFT). Однако, точные формы тау-белка, которые вносят вклад в развитие патологии и, следовательно, оптимальные для терапевтического целенаправленного воздействия, остаются неизвестными. Следовательно, попытки целенаправленного воздействия на тау-белок, способствующий развитию заболевания, часто ограничены выбором цели. В целях получения новых молекул, связывающих тау-белок, вариабельные области антитела к тау-белку выделяли из человеческих В-клеток памяти с помощью фосфорилированных и нефосфорилированных тау-пептидов в качестве антигенов-приманок с использованием подхода с использованием одиночных клеток.
В свойственном человеку спектре антител, вероятно, редко встречаются человеческие В-клетки памяти к тау-белку; поэтому было решено пометить приманки с тау-белком самыми яркими флуорофорами. Все тау-пептиды синтезировали с аминоконцевой группой биотина, с тем чтобы способствовать мечению двумя яркими флуорофорами, стрептавидином-АРС или стрептавидином-РЕ (также называемыми тау-пептидными тетрамерами). Каждый тау-пептид метили обоими флуорофорами, с тем чтобы увеличить отношение сигнал-шум во время скрининга в отношении человеческих В-клеток памяти (подробно описано в примере 2) из образцов от доноров. Меченые тау-пептидные тетрамеры получали путем перемешивания биотинилированного пептида при молярном отношении пептида к стрептавидиновой метке 35:1 в течение ночи при 4°С посредством осторожного перемешивания. Свободный пептид удаляли путем разделения на колонке BioSpin 30 (Biorad) . Все тау-пептидные тетрамеры хранили при 4°С в течение до 2 месяцев.
ПРИМЕР 2
Выделение В-клеток памяти, специфичных к тау-белку, посредством FAC-сортинга с использованием меченых пептидных тетрамеров
Моноклональные антитела к тау-белку выделяли из В-клеток памяти (CD22+CD19+CD27+IgG+), выделенных из мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), которые были получены от доноров крови человека, у которых не проявляются симптомы (без AD), причем кровь была получена из Банка крови Сан-Диего и Службы нормальной донорской крови TSRI. Кроме того, образцы крови пациентов с AD получали от CRO, Quintiles, причем выделяли три антитела, подробно описанные в данной части документа. РВМС выделяли на Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare) и криоконсервировали при 50 миллионах клеток на мл в 90% FBS и 10% DMSO. Аликвоту плазмы крови инактивировали нагреванием при 5б°С и хранили при -2 0°С для последующей оценки реактивности плазмы крови.
Для каждого эксперимента по сортингу РВМС от 3-4 доноров оттаивали и перемещали в пробирки, содержащие предварительно нагретую полную RPMI (RPMI, 10% инактивированной нагреванием FBS и 1% пенициллина/стрептомицина), промывали и инкубировали по отдельности при 37°С в течение 16 ч. Объединенные РВМС обогащали в отношении зрелых В-клеток с помощью положительного отбора с использованием CD22+ магнитных шариков (Miltenyi Biotec). Клетки ресуспендировали в забуференном Tris солевом растворе с рН 7,4, содержащем 2 мМ EDTA и 0,25% бычьего сывороточного альбумина фракции V (TBS Buffer). Клетки окрашивали внеклеточными маркерами IgG-FITC, CD19-РегСРСу5.5 и CD27-PECy7 (все от BD Biosciences), для того чтобы пометить В-клетки. Отбирали десять миллионов клеток и в качестве отрицательного контроля использовали конъюгаты, меченые биотином и стрептавидином. Оставшиеся клетки инкубировали с пулом из десяти тау-пептидных тетрамеров с двойной меткой (SA-APC и SA-PE) при 16,8 нМ каждого. Клетки инкубировали в течение 60 мин. при 4°С с осторожным перемешиванием, дважды промывали и повторно суспендировали при 2 0 миллионах клеток на мл в TBS-буфере. Перед сортингом добавляли DAPI (Thermo Fisher) в качестве маркера живых клеток, и клетки сортировали с помощью Beckman Coulter MoFlo XDP. Образцы отрицательного контроля использовали для
определения неспецифичного связывания и соотношения сигнал-шум. CD19+, IgG+, CD27hi и положительные в отношении двух антигенов клетки собирали, и помещали в отдельные лунки 9б-луночного планшета для ПЦР, и хранили при -8 0°С. ПРИМЕР 3
Выделение генов тяжелой и легкой цепи из одиночных В-клеток, специфичных к тау-белку
Как подробно описано в примере 2, В-клетки памяти с реактивностью к тау-пептидным тетрамерам идентифицировали, выделяли и сортировали в отдельные микротитрационные лунки. cDNA тяжелой и легкой цепи выделяли посредством двухстадийного подхода, основанного на ПЦР, из отдельных В-клеток, и при этом последовательности вариабельного домена клонировали и экспрессировали in vitro в качестве полноразмерных рекомбинантных антител IgGl и, таким образом, они представляли собой человеческие химерные антитела.
Синтез первой цепи cDNA
Первую цепь комплементарной ДНК (cDNA) получали из одиночных отсортированных клеток в соответствии с протоколом производителя (Superscript III, Invitrogen Corp.) со следующими модификациями: в каждую лунку, содержащую одну В-клетку, добавляли 0,5 мкл 10% NP-40, 1,0 мкл олиго-о!Т, 1,0 мкл dNTP и инкубировали образцы при 65°С в течение 5 мин. После инкубирования образцы помещали на лед на 1 мин. В каждую лунку добавляли следующее: 2,0 мкл DTT, 4,0 мкл МдС1г, 1,0 мкл Superscript RT и 0,5 мкл RNaseOut. Образцы инкубировали при 50°С в течение 50 мин. с последующим инкубированием при 8 5°С в течение 5 мин.
Стадия I. Амплификация
Для исходной ПЦР (стадия I) 2,5 мкл препарата cDNA использовали в качестве матрицы для амплификации тяжелой и легкой каппа- или лямбда-цепей. Использовали пулы праймеров, специфичных к лидерным областям тяжелой цепи антитела (праймеры СВ-5'LVH, таблица 1), легкой каппа-цепи (праймеры СВ-5'LVk, таблица 2) и легкой лямбда-цепи (праймеры СВ-5' LVlam, таблица
3) . На стадии I ПЦР-реакции использовали один обратный праймер, специфичный к CHI-области, СК и CL-областям тяжелой цепи, легкой каппа-цепи и легкой лямбда-цепи, соответственно.
Таблица 1
ПРЯМЫЕ ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ VH НА СТАДИИ I
ID праймера
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (5'-3')
SEQ ID NO:
СВ-5'LVH1а
ATGGACTGGACCTGGAGGTTCCTC
СВ-5'LVHlb
ATGGACTGGACCTGGAGGATCCTC
СВ-5'LVHlc
ATGGACTGGACCTGGAGGGTCTTC
СВ-5'LVHld
ATGGACTGGACCTGGAGCATCC
СВ-5'LVH2
GGACATACTTTGTTCCACGCTCCTGC
СВ-5'LVH3a
AGGT GTCCAGTGT CAGGT GCAGC
СВ-5'LVH3b
AGGT GTCCAGTGT GAGGT GCAGC
СВ-5'LVH 3 с
AGGT GT CCAGT GT CAGGTACAGC
СВ-5'LVH4
GCAGCTCCCAGATGGGTCCTG
СВ-5'LVH5
TCAACCGCCATCCTCGCCCTC
СВ-5'LVH6
GTCTGTCTCCTTCCTCATCTTCCTGC
3'CgCHl
GGAAGGTGTGCACGCCGCTGGTC
Таблица 2
ПРЯМЫЕ ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ VK НА СТАДИИ I
ID праймера
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (5'-3')
SEQ ID NO:
СВ-5'LVkla
ATGAGGGTCCCCGCTCAGCTC
CB-5'LVklb
ATGAGGGTCCCTGCTCAGCTC
CB-5'LVklc
ATGAGAGTCCTCGCTCAGCTC
CB-5'LVk2
TGGGGCTGCTAATGCTCTGG
CB-5'LVk3
CCTCCTGCTACTCTGGCTCCCAG
CB-5'LVk4
TCTCTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGC
CB-5'LVk5
CTCCTCAGCTTCCTCCTCCTTTGG
CB-5'LVk6
AACTCATTGGGTTTCTGCTGCTCTGG
3'Ck-Rev543
GTTTCTCGTAGTCTGCTTTGCTCAGC
3'Ck-Rev494
GTGCTGTCCTTGCTGTCCTGCTC
3'Ck-Rev
GCACTCTCCCCTGTTGAAGCTCTTTG
Таблица 3
ПРЯМЫЕ ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ VL НА СТАДИИ I (5'-3')
Primer ID
DNA SEQUENCE (5'-3')
SEQ ID NO:
CB-5' L Vlaml
CTCCTCGCTCACTGCACAGG
CB-5' L Vlam2
CTCCTCTCTCACTGCACAGG
CB-5' L Vlam3
CTCCTCACTCGGGACACAGG
CB-5' L Vlam4
ATGGCCTGGACCCCTCTCTG
CB-5' L Vlam5
ATGGCATGGATCCCTCTCTTCCTC
3'C1 -Rev
CACTAGTGTGGCCTTGTTGGCTTG
Стадия II. Амплификация
Для стадии II 2,5 мкл ПЦР-продукта из стадии I использовали в качестве матрицы для амплификации вариабельных областей тяжелой цепи и легких каппа- или лямбда-цепей. Для получения ДНК из вариабельных областей использовали пул прямых и обратных праймеров, специально сконструированных для области каркаса 1 тяжелой цепи (праймеры pCB-IgG-VH и 3'SalIJH, таблица 4), легкой каппа-цепи (праймеры pCB-IgG-VK и 3'Jk, таблица 5) и легкой лямбда-цепи антитела (праймеры CB-VL и 3'Clam для стадии II, таблица 6) . Кроме того, праймеры из стадии II были сконструированы для введения сайтов рестрикции Xbal (прямые праймеры VK и VL) и Xhol (праймеры 3'SalIJH) для последующего клонирования. После реакций амплификации на стадии II ПЦР-продукты вариабельного домена тяжелой и легкой цепи анализировали с использованием 1% агарозного геля. Фрагменты вариабельной области тяжелой и легкой цепи очищали в соответствии с протоколом производителя (Qiagen) и использовали на стадии III ПЦР-реакции.
Таблица 4
Прямые и обратные праймеры для VH на стадии II
ID праймера
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (5' - 3')
SEQ ID NO:
pCB-IgG-VHla
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
pCB-IgG-VHlb
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTCCAGCTGGTGCAGTC
pCB-IgG-VHlc
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTTCAGCTGGTGCAGTC
pCB-IgG-VHld
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTCCAGCTTGTGCAGTC
pCB-IgG-VH2a
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTCACCTTGAGGGAGTCTGG
pCB-IgG-VH2b
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGG
pCB-IgG-VH3a
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
pCB-IgG-VH3b
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTC
pCB-IgG-VH3c
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
pCB-IgG-VH3d
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTACAGCTGGTGGAGTCTG
pCB-IgG-VH4a
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGSTGCAGCTGCAGGAG
pCB-IgG-VH4b
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTGCAGCTACAGCAGTGG
pCB-IgG-VH5
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
pCB-IgG-VH6
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTACAGCTGCAGCAGTCAG
pCB-IgG-VH7
CCTGTCTGGAATTCAGCATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAATCTG
3'SailJH 1/2/4/5
TCGGGCCTCGAGACTCACCTGAGGAGACGGTGACCAG
3'SailJH3
TCGGGCCTCGAGACTCACCTGAAGAGACGGTGACCATTG
3'SailJH6
TCGGGCCTCGAGACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTG
Таблица 5
ПРЯМЫЕ и ОБРАТНЫЕ ПРАЙМЕРЫ для VK на СТАДИИ II
ID праймера
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (5'-3')
SEQ ID NO:
pCB-IgG-VKla
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGACATCCAGATGACCCAGTCTCC
pCB-IgG-VKlb
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGACATCCAGTTGACCCAGTCTCC
pCB-IGG-VKlc
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCC
pCB-IGG-VK2a
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGATRTTGTGATGACTCAGTCTCCAC
pCB-IgG-VK3a
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAG
pCB-IgG-VK3b
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAG
pCB-IgG-VK3c
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAG
pCB-IgG-VK4
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGACATCGTGATGACCCAGTCTCC
pCB-IgG-VK5
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGAAACGACACTCACGCAGTCTCC
pCB-IgG-VK6
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGGAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAG
3'Jkl Rev Ila
CGCAAAGTGCACTTACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCCTTGGC
3'Jk2 Rev lib
CGCAAAGTGCACTTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCCCTGGC
3'Jk4 Rev lie
CGCAAAGTGCACTTACGTTTGATATCCACTTTGGTCCCAGGGC
3'Jk3 Rev lie
CGCAAAGTGCACTTACGTTTGATCTCCACCTTGGTCCCTCCGC
3'Jk5 Rev lid
CGCAAAGTGCACTTACGTTTAATCTCCAGTCGTGTCCCTTGGC
Таблица 6
ПРЯМЫЕ и ОБРАТНЫЕ ПРАЙМЕРЫ для VL на СТАДИИ II
ID праймера
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (5'-3')
EQ ID NO:
CB-VL1
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGAATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTC
CB-VL2
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGTCCTATGTGCTGACTCAGCC
CB-VL3
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGCAGTCTGTGCTGACGCAGCC
CB-VL4
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGCAGTCTGTCGTGACGCAGCC
CB-VL5
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGCAGTCTGCCCTGACTCAGCC
CB-VL6
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGTCTTCTGAGCTGACTCAGGACC
CB-VL7
CCGGTCTAGAGTTTTCCATGGCGTCCTATGAGCTGACTCAGCCACC
3'Clam для
С Т СAGAG GAG G GY G G GAACAGAGT GAC
стадии II
Стадия III. Амплификация: ПЦР с перекрывающимися праймерами Для стадии III фрагменты ДНК вариабельной области тяжелой и легкой цепи, полученные на стадии II, соединяли в одну кассету с помощью ПЦР с перекрывающимися праймерами с использованием следующего: 1) каппа-линкера или лямбда-линкера (способ получения линкера см. ниже), который отжигается на З'-конце фрагмента легкой цепи из стадии II и на 5'-конце фрагмента тяжелой цепи из стадии II и содержит константную область либо каппа-, либо лямбда-цепи, 2) прямого перекрывающегося праймера с сайтом рестрикции Xbal и 3) обратного праймера с сайтом рестрикции Xhol. В результате этой реакции получают ампликон из приблизительно 2400 п.о. или 2200 п.о. (т.е. кассету) для каппа-или лямбда-цепей, соответственно, состоящую из вариабельной области легкой цепи, линкера и вариабельной области тяжелой цепи. После амплификации продукт ПЦР-реакции с перекрывающимися праймерами очищали посредством ПЦР в соответствии с инструкциями производителя (Qiagen PCR Purification Kit). Получение линкера
Линкерный фрагмент амплифицировали при помощи pCB-IgG, причем вектор с двумя промоторами из CMV получали в лаборатории и использовали в качестве матрицы для экспрессии генов как тяжелой, так и легкой цепи, и при этом праймеры приведены в таблице 7. Длина линкерного фрагмента составляла 17 65 или 153 6 пар оснований для каппа- или лямбда-линкера, соответственно. Каппа-линкер содержал, в направлении от 5' к 3', последовательность интрона, за которой следовала константная область каппа-цепи, поли(А)-последовательность терминации и последовательность промотора цитомегаловируса, обеспечивающая возможность экспрессии рекомбинантных антител с одного вектора. Лямбда-линкер содержал константную область лямбда-цепи, поли(А)-поледовательность терминации и последовательность промотора цитомегаловируса. Использовали стандартный обратный праймер (Linker_VH_HAVT20_pCB-IgG-R) и каппа-специфичный прямой праймер (Linker СК intron pCB-IgG-F) (таблица 7). Амплифицированный
фрагмент отделяли с использованием 1% агарозного геля и очищали в соответствии с протоколом производителя (Qiagen Gel Extraction Kit) .
После очистки продукта, полученного в результате ПЦР с перекрывающимися праймерами, фрагмент расщепляли посредством Xhol и Xbal и затем отделяли с использованием 1% агарозного геля. Полосу, соответствующую перекрывающейся кассете (~2,4 т.п.о.), очищали и лигировали в вектор экспрессии IgGl, pCB-IgG. Гены вариабельных цепей антител субклонировали в этот вектор и осуществляли рекомбинантную экспрессию антител в виде IgGl, независимо от их первоначального (нативного) изотипа. (Пример аминокислотной последовательности константной области тяжелой цепи IgGl показан в SEQ ID N0:83 и аминокислотной последовательности константной области легкой каппа-цепи показан в SEQ ID N0:84). Все трансформации проводили с использованием клеток DH5a Max Efficiency (Invitrogen Corp.) и выделяли с использованием 250 мкл S0C в течение 1 ч. при 37°С. Приблизительно 100 мкл выделенных клеток высевали на чашки Петри с карбенициллином, дополненным 2 0 мМ глюкозы. Чашки Петри инкубировали в течение ночи при 37°С для обеспечения роста колоний. Оставшуюся смесь выделенных клеток культивировали с использованием 4 мл среды Super Broth (SB), дополненной 50 мкг/мл карбенициллина и инкубировали в течение ночи при 37°С со встряхиванием при 2 50 об. /мин. На следующий день с каждой чашки Петри отбирали 5 колоний и выращивали в 3 мл среды SB, дополненной 50 мкг/мл карбенициллина в течение ночи при 37°С.
Ночные культуры использовали для получения плазмидной ДНК (Qiagen) .
ПРИМЕР 4
Секвенирование последовательностей антител, идентификация последовательностей зародышевого типа и подтверждение реактивности в отношении тау-пептида в супернатанте трансфекции
Для экспрессии IgGl получали плазмидную ДНК из вышеупомянутых 4 мл культур с использованием минипрепов (Qiagen) и использовали для трансфицирования клеток 2 93Expi с применением ExpiFectamine согласно протоколам производителя (Invitrogen, Corp.). Продолжительность трансфекций составляла минимум 72 ч. в 10 мл культурах, с тем чтобы обеспечить достаточную экспрессию IgGl. Клеточную среду собирали после трансфекции и центрифугировали, с тем чтобы удалить клетки и дебрис. Количественное определение в супернатантах проводили с использованием сенсорных наконечников с белком А на системе Octet Red (ForteBio). Каждый супернатант затем исследовали посредством ELISA с пептидом-приманкой, для того чтобы подтвердить присутствие антител с реактивностью в отношении тау-белка. Получали плазмидную ДНК с использованием минипрепа (Qiagen) из четырех отдельно отобранных культур из примера 3, и при этом тяжелые и легкие цепи секвенировали с использованием праймеров pC9_seq_HC-R (5'CATGTCACCGGGGTGTGG3 ' ) (SEQ ID NO: 85) и pC9_seq_LC-R (5'TCACAGGGGATGTTAGGGACA3')(SEQ ID N0:86). Для последующих экспериментов выбрали один клон из четырех.
При помощи белковой и нуклеотидной последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепи клонов антител CBTAU-7.1 (SEQ ID N0:87, 88, 89, 90), CBTAU-8.1 (SEQ ID N0:91, 92, 93, 94), CBTAU-16.1 (SEQ ID N0:95, 96, 97, 98), CBTAU-18.1 (SEQ ID N0: 99, 100, 101, 102), CBTAU-20.1 (SEQ ID N0:103, 104, 105, 106), CBTAU-22.1 (SEQ ID N0:107, 108, 109, 110), CBTAU-24.1 (SEQ ID N0:111, 112, 113, 114), CBTAU-27.1 (SEQ ID N0:115, 116, 117, 118), CBTAU-28.1 (SEQ ID N0:119, 120, 121, 122), CBTAU-41.1 (SEQ ID N0:123, 124, 125, 126), CBTAU-41.2 (SEQ ID N0:127, 128, 129, 130), CBTAU-42.1 (SEQ ID N0:131, 132, 133, 134), CBTAU-43.1 (SEQ ID N0:135, 136, 137, 138), CBTAU-44.1 (SEQ ID N0:139, 140, 141,
142), CBTAU-45.1 (SEQ ID N0:143, 144, 145, 146), CBTAU-46.1 (SEQ ID N0:147, 148, 149, 150), CBTAU-47.1 (SEQ ID N0:151, 152, 153, 154), CBTAU-47.2 (SEQ ID N0:155, 156, 157, 158) и CBTAU-49.1 (SEQ ID N0:159, 160, 161, 162) определяли новые CDR для выбранных антител к тау-белку (таблица 8).
Получали антитело к тау-белку CBTAU-7.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 87, и VL с SEQ ID N0: 88, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-8.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 91, и VL с SEQ ID N0: 92, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-16.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 95, и VL с SEQ ID N0: 96, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-18.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 99, и VL с SEQ ID N0: 100, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-2 0.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 103, и VL с SEQ ID N0: 104, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-22.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 107, и VL с SEQ ID N0: 108, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-24.1, содержащее VH с SEQ ID NO: 111, и VL с SEQ ID NO: 112, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-2 7.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 115, и VL с SEQ ID N0: 116, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-2 8.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 119, и VL с SEQ ID N0: 120, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-41.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 123, и VL с SEQ ID N0: 124, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-41.2, содержащее VH с SEQ ID N0: 127, и VL с SEQ ID N0: 12 8, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-42.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 131, и VL с SEQ ID N0: 132, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-43.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 135, и VL с SEQ ID N0: 136, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-44.1, содержащее VH с SEQ ID N0: 139, и VL с SEQ ID N0: 140, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-45.1,
содержащее VH с SEQ ID NO: 143, и VL с SEQ ID NO: 144, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-4 6.1, содержащее VH с SEQ ID NO: 147, и VL с SEQ ID NO: 148, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-47.1, содержащее VH с SEQ ID NO: 151, и VL с SEQ ID NO: 152, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU-47.2, содержащее VH с SEQ ID NO: 155, и VL с SEQ ID NO: 156, и константную область IgGl человека. Получали антитело к тау-белку CBTAU 4 9.1, содержащее VH с SEQ ID NO: 159, и VL с SEQ ID NO: 160, и константную область IgGl человека.
CBTAU 22 . 1
406-429
DYNVH (190)
RISPNSGGTKYAQKFQG (191)
GHCDGTTCSRAY (192)
RSSQSLLHRSGHKYLH (193)
LGSNRAS (194)
MQTLQTPWT (195)
CBTAU 24 . 1
221-245
GYYLH (196)
WVNPRSGGTSYPPKFQG (197)
GRIPDVTAFDI (198)
KSSESLLYDSNNKNYLA (199)
WASTRES (173)
QQYFSTPWT (200)
CBTAU 27 . 1
299-328
DYWTA (201)
IIYSGDSDTRYHPSVQG (202)
LDARVDAGWQLDS (203)
KSSQSVFSRDNNKNYLA (204)
WASSRES (205)
QHYFNTPHN (206)
CBTAU 28 . 1
52-71
NYWIG (207)
IIYPGDSDTRYSPPFQG (208)
VGRPSKGGWFDP (209)
ESSQTLLYSSNEKNYLA (210)
WASTPES (211)
QQYYNSPYT (212)
CBTAU 41.1
406-429
DSYMS (213)
YISRSSSHTNYADSVKG (214)
VQTTMIEGKTKLNYFDY (215)
ESSHSLLYRSNNRNYLA (216)
WASTRES (173)
QQFYTTPYT (217)
CBTAU 41.2
406-429
DSYMS (213)
YISRSSSHTNYADSVKG (214)
VQTTMIEGKTKLNYFDY (215)
ESSHSLLYRSNNRNYLA (218)
WASTRES (173)
QQFYTTPYT (217)
CBTAU 42 . 1
406-429
KAWMS (219)
RIKSKVDGETTDYAAPV RG (220)
LIHCDLSACLPHF (221)
ESSHSLLYRSNNRNYLA (218)
WASTRES (173)
QQFYTTPYT (217)
CBTAU 43. 1
299-328
NYWIA (222)
IIYPGDSDTTYSPSFQG (223)
LPRTDGDNSIGYFEY (224)
KSSQSVLYSSNSENYLA (225)
WASTRES (173)
QQYYSTPFT (226)
CBTAU 44 . 1
406-429
SYSMN (227)
YISSSTTTIYYADSVKG (228)
VPAPRLGGSYTY (229)
RASQSVSSSYLA
GASSRAT
QQYGTSPLT
(230)
(167)
(231)
CBTAU 45. 1
406-429
DAWMS (232)
RIKSKNVGETTD YAE HV RG (233)
GLGGGTYG (234)
RSSAGLRNNDGDILLS (235)
RVSRRDS (236)
MRGPY (237)
CBTAU 46.1
82-103
IYEMN (238)
YITNRGSTIYYADSVKG (239)
PRIGARVFDV (240)
KSSQTLLYKSNNENYLA (241)
WASTRES (173)
QQYFTTALT (242)
CBTAU 47 . 1
52-71
DHWIG (243)
IIFPEDSDTRYSGSFEG (244)
VSWRKGGWFDP (245)
KSSQSLLYTSNNKNYLA (246)
WASTRES (173)
QQYYNSPYT (212)
CBTAU 47.2
52-71
DHWIG (243)
IIFPGDSDIRYSPSFEG (247)
VAWRKGGWFDS (248)
KSTQSLLWSANNKNYLA (249)
WASTRES (173)
QQYYNSPYT (212)
CBTAU 49.1
52-71
SYWIG (250)
IIYPDDSDTRYNASLEG (251)
RDRNCSGTTCYPRWFDS (252)
KSSQSLFYSGNSKDFLA (253)
WASTRDS (254)
HQYHSTPLS (255)
Антитело CBTAU-7.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:163, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:164 и CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:165, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:166, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:167 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID N0:168. Антитело CBTAU-8.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:169, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:170 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:171, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174. Антитело CBTAU-16.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:175, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:176 и CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:177, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:178, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:179 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID N0:180. Антитело CBTAU-18.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:181, CDR2-oблacть
тяжелой цепи с SEQ ID N0:182 и CDRS-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:183, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRS-область легкой цепи с SEQ ID N0:184. Антитело CBTAU-20.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:185, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:186 и CDRS-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:187, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:188, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRS-область легкой цепи с SEQ ID N0:189. Антитело CBTAU-22.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:190, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:191 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:192, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:193, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:194 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:195. Антитело CBTAU-24.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:196, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:197 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:198, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:199, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:200. Антитело CBTAU-27.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:201, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:2 02 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:203, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:204, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:205 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:206. Антитело CBTAU-2 8.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:207, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:208 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:209, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:210, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:211 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:212. Антитело CBTAU-41.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:216, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217. Антитело CBTAU-41.2 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217. Антитело CBTAU-42.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:219, CDR2-oблacть
тяжелой цепи с SEQ ID N0:22 0 и CDRS-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:221, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRS-область легкой цепи с SEQ ID N0:217. Антитело CBTAU-43.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:222, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:223 и CDRS-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:224, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:225, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRS-область легкой цепи с SEQ ID N0:226. Антитело CBTAU-44.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:227, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:22 8 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:229, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:230, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:167 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:231. Антитело CBTAU-45.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:232, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:233 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:234, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:235, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:236 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:237. Антитело CBTAU-4 6.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:238, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:239 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:240, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:241, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:242. Антитело CBTAU-47.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:243, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:244 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:245, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:246, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:212. Антитело CBTAU-47.2 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:243, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:247 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:248, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:249, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:212. Антитело CBTAU-49.1 содержит CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:250, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:251 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:252, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:254, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:254 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:255.
Нуклеотидные последовательности вариабельных областей
тяжелой и легкой цепи моноклональных антител к тау-белку сравнивали с известными последовательностями зародышевого типа посредством IgBLAST, инструмента анализа последовательностей вариабельного домена иммуноглобулинов, доступного в NCBI. (Nucleic Acids Res. 2013 Jul;41(Web Server issue):W34-40). Выравнивания последовательностей областей каркаса HI и LI тяжелой и легкой цепи с их соответствующей предложенной последовательностью зародышевой типа и ПЦР-праймером приведены в таблице 9. Подтвержденные последовательности увеличены в масштабе для экспрессии и очистки (подробно описано в примере 5) . Выбранные клоны размножали в 50 мл культуры, и при этом получали плазмидную ДНК с использованием мидипрепа (набор Machery Nagel Midi Prep). Плазмидную ДНК затем использовали для трансфекции 30 мл культуры клеток 293Expi, как подробно описано в примере 5.
Таблица 9. Нуклеиновые кислоты каркаса HI и L1, выровненные с последовательностью зародышевого типа и праймером
(Аминокислоты, приведенные выше) Различия отмечены нижним регистром букв. Нативный относится к антителу
mAb
SEQ ID NO
Аминоконцевая последовательность белка и N-концевая последовательность нуклеиновой кислоты
CBTAU-7.1
(Q V Q L V Е S)
pCB-IgG-VHlb
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU-7 . 1VH
CAGGTCCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTAGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTG AGACTCTCCT
IGHV3-74*01.
256
gAGGTgCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTAGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTG AGACTCTCCT
нативного 7 . 1
257
(е V Q L V Е )
(D I V М Т Q S Р)
pCB-IgG-Vk4
GACAT C GT GAT GAC C CAGTCTCC
CBTAU-7.1 VL
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAGAGA GCCACCCTCT
IGKV3-NL5*01
258
GAaATtGTGtTGACgCAGTCTCCAGcCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAaAGA GCCACCCTCT
нативного 7 . 1
259
(e I V 1 T Q S P)
CBTAU-8.1
(Q V A L V E S)
pCB-IgG-VH3a
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
CBTAU-8.1 VH
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGAGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGACGTCCCTG AGACTCTCCT
IGHV3-33*01
260
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCtgGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGACGTCCCTG AGACTCTCCT
261
нативного 8 . 1
(Q V A L V E S)
(E T T L T Q S P)
pCB-IgG-Vk5
GAAAC GACAC T CAC G CAGT С T С C
CBTAU-8.1
GAAACGACACTCACGCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GCCACCATCA
IGKV4-1*01
262
GAcAtcgtgaTgACcCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATCA
263
нативного 8 . 1
(d i v m T Q S P)
CBTAU-16.1
(E V Q L V Q)
pCB-IgG-VH5
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU-16.1
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTG
AGACTCTCCT
IGHV3-64*01
264
GAGGTGCAGCTGGTGgAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTG AGACTCTCCT
265
нативного
(E V Q L V e S)
16.1
(E I V M T Q S P)
pCB-IgG-VK3c
GAAATAGT GAT GAC GCAGT СT С C GG
CBTAU-
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCGGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGA
16. 1VL
GCCACCCTCT
IGKV3-15*01
266
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCaGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGA GCCACCCTCT
267
нативного
(E I V M T Q S P)
16.1
CBTAU-18.1
(Q V Q L L E S)
Нет точного соответствия праймера
CBTAU-18.1 VH
101
CAGGTGCAGCTGTTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAACCCTTCACAGACCCTG TCCCTCACCT
IGHV4-31*05
268
CAGGTGCAGCTGcaGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTG TCCCTCACCT
нативного 18 . 1
269
(Q V Q L q E S)
100
(E I V L T Q S P)
pCB-IgG-VK3b
GAAAT T GT GT T GACACAGT CT C CAG
CBTAU-18.1 VL
102
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCAACATTA
IGKV4-1*01
262
GAcATcGTGaTGACcCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCAcCATcA
нативного 18 . 1
270
(d I V m T Q S P)
CBTAU-20.1
103
(Q V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3d
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTG
CBTAU-2 0.1 VH
105
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTG AGACTCTCCT
IGHV3-23*04
271
gAGGTgCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTG AGACTCTCCT
нативного 20.1
272
(e V Q L V E S)
104
(D I Q M T Q S P)
pCB-IgG-VKla
GACAT С CAGAT GACCCAGTCTCC
CBTAU-2 0.1 VL
106
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATCA
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATCA
нативного 20.1
273
(D I v M T Q S P)
CBTAU-22.1
107
(Q V Q L V Q S)
pCB-IgG-VHla
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU-22.1
109
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCCCAGTG
AAGGTCTC
274
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCtCAGTG
IGHVl-2*02
AAGGTCTC
275
нативного
22 . 1
(Q V Q L V Q S)
108
(DVVMTQSPL)
Нет точного соответствия праймера
CBTAU-22.1
110
GATGTTGTGATGACGCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCG
GCCTCCATC
276
GATaTTGTGATGACtCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCG
IGKV2-28*01
GCCTCCATC
277
нативного
22 . 1
(DiVMTQSPL)
CBTAU-24.1
111
(Q V Q L V S G)
pCB-IgG-VHld
CAGGTCCAGCTTGTGCAGTC
CBTAU-2 4.1
113
CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTG
AAGGTCTCC
278
CAGGTCCAGCTTGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTG
IGHV1-3*01
AAGGTtTCC
279
нативного
24 . 1
(Q V Q L V S G)
112
(D I Q M T Q S P)
pCB-IgG-VKla
GACAT С CAGAT GACCCAGTCTCC
CBTAU-2 4.1
114
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
280
нативного
24 . 1
(D I v M T Q S P)
CBTAU27.1
115
(Q V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3a
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
CBTAU2 7.1
117
CAGGTTCAGCTGGTGGAGTCTGGACCGGAGATGAGAAAGCCCGGGGAGTCTCTG
AAAATTTCC
IGHV5-51*01
281
gAGGTgCAGCTGGTGcAGTCTGGAgCaGAGgTGAaAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAgATcTCC
282
нативного
27 . 1
(e V Q L V q S)
116
(D I Q L T Q S P)
pCB-IgG-VKlb
GACAT С CAGT T GAC C CAGTCTCC
CBTAU2 7.1
118
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGATTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGCGG
GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
283
нативного
27 . 1
(D I vmT Q S) P
CBTAU28.1
119
(Q V Q L Q Q S)
pCB-IgG-VH6
CAG GT a CAG С T g CAG CAGT CAG
CBTAU2 8.1
121
CAGGTGCAGCTACAGCAGTCAGGAGCAGAAGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG
AAGATCTCC
IGHV5-51*01
281
gAGGTGCAGCTggtGCAGTCtGGAGCAGAAGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
284
нативного
28 . 1
(e V Q L v Q S)
120
(D I Q M T Q S P)
pCB-IgG-VKla
GACAT С CAGAT GACCCAGTCTCC
CBTAU2 8.1
122
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
285
нативного
28 . 1
(D I v M T Q S P)
CBTAU41.1
123
(E V Q L L E S)
pCB-IgG-VH3b
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTC
CBTAU41.1
125
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTG
AGACTCTCC
IGHV3-11*06
286
cAGGTGCAGCTGgTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTG AGACTCTCC
287
нативного
41.1
(q V Q L v E S)
124
(D I Q M T Q S P)
pCB-IgG-VKla
GACAT С CAGAT GACCCAGTCTCC
CBTAU41.1
126
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GTCACCATC
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GTCACCATC
288
нативного
41.1
(D I v M T Q S P)
CBTAU41.2
127
(E V Q L V Q S)
pCB-IgG-VH3b
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU41.2
129
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTG
AGACTCTCC
IGHV3-11*06
286
cAGGTGCAGCTGGTGgAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTG AGACTCTCC
289
нативного
41.2
(q V Q L v E S)
128
(A I Q L T Q S P)
pCB-IgG-VKlc
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCC
CBTAU41.2
130
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GTCACCATC
262
gaCATCgtGaTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
IGKV4-1*01
GTCACCATC
290
(d I v m T Q S P)
41.2
CBTAU42.1
131
(Q L V Q S E G)
pCB-IgG-VHla-c
CAGCTGGTGCAGTC
CBTAU42.1
133
CAGCTGGTGCAGTCTGAGGGAGGCCTGGCAGAGCCTGGGGGGTCCCTTAGACTC
291
IGHV3-15*01
CAGCTGGTGgAGTCTGgGGGAGGCCTGGCAGAGCCTGGGGGGTCCCTTAGACTC
292
нативного
42 . 1
(Q L V e S g g)
132
(E I V L T Q S P)
pCB-IgG-VK3a
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTСCAG
CBTAU41.1
134
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GTCACCATC
262
GAcATcGTGaTGACcCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
IGKV4-1*01
GTCACCATC
293
нативного
42 . 1
(d I V m T Q S P)
CBTAU43.1
135
(Q V Q L V Q S)
pCB-IgG-VHla
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU4 3.1
137
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGGAGAGGTGAAAAAGCCGGGGGAGTCTCTG
AAGATCTCC
IGHV5-51*03
294
gAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGGAGAGGTGAAAAAGCCGGGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
295
нативного
43. 1
(e V Q L V Q S)
136
(E I V L T Q S P)
pCB-IgG-VK3b
GAAAT T GT GT T GACACAGT CT C CAG
CBTAU4 3.1
138
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GAcATcGTGaTGACcCAGTCTCCAGCCTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG
GCCACCATC
296
нативного
43. 1
(d I V m T Q S P)
CBTAU44.1
139
(E V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3c
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
CBTAU4 4.1
141
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTG
AGACTCTCC
297
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTG
IGHV3-48*01
AGACTCTCC
298
нативного
44 . 1
(E V Q L V E S)
140
(D I Q M T Q S)
pCB-IgG-VKla
GACAT С CAGAT GACCCAGTCTCC
CBTAU4 4.1
142
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGA
GCCACCCTC
IGKV3-20*01
299
GAaATtgtGtTGACgCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGA GCCACCCTC
300
нативного
44 . 1
(e I v L T Q S)
CBTAU45.1
143
(E V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3c
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTC
CBTAU4 5.1
145
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGCCACCCTTGGACAGCCG
GCCTCCATC
301
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTAAAGCCTGGGGGGTCCCTT
IGHV3-15*02
AGACTCTCC
302
нативного
45. 1
(E V Q L V E S)
144
(E I V L T Q S P)
pCB-IgG-VK3b
GAAAT T GT GT T GACACAGT CT C CAG
CBTAU4 5.1
146
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGCCACCCTTGGACAGCCG
GCCTCCATC
IGKV2-30*01
303
GAtgTTGTGaTGACtCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGCCACCCTTGGACAGCCG GCCTCCATC
304
нативного 45. 1
(d v V m T Q S P)
CBTAU46.1
147
(Q V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3d
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTG
CBTAU4 6.1 VH
149
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGAGAGTCCCTG AGACTCTCC
IGHV3-48*03
305
gAGGTgCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGAGAGTCCCTG AGACTCTCC
306
нативного 46.1
(E V Q L V E S)
148
(D I Q L T Q S P)
pCB-IgG-VKlb
GACAT C CAGT T GAC C CAGT CT С C
CBTAU4 6.1 VL
150
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GACATCgtGaTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
307
нативного 46.1
(D I v m T Q S P)
CBTAU47.1
151
(Q V Q L V Q S)
pCB-IgG-VHla
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU4 7.1 VH
153
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGTGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTC
IGHV5-51*01
308
gAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGTGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTC
309
нативного 47 . 1
(E V Q L V Q S)
152
(A I Q L T Q S P)
pCB-IgG-
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCC
VKlc
CBTAU4 4.1 VL
154
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GaCATCgtGaTGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
310
нативного 47 . 1
(d I v m T Q S P)
CBTAU47.2
155
(Q V Q L V E S)
pCB-IgG-VH3d
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTG
CBTAU4 7.1 VH
157
CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGAGCAGAACTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
IGHV5-51*01
281
gAGGTgCAGCTGGTGcAGTCTGGAGCAGAACTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
Native 47.2 VH
311
(e V Q L V q S)
156
(E I V M T Q S P)
pCB-IgG-VK3c
GAAATAGT GAT GAC GCAGT CT C CAG
CBTAU4 4.1 VL
158
GAAATTGTGATGACCCAGTCTCCAGAGTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GAcATcGTGATGACCCAGTCTCCAGAGTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
312
нативного 47.2
(d I V M T Q S P)
CBTAU49.1
159
(Q V Q L V Q S)
pCB-IgG-VHla
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTC
CBTAU4 9.1 VH
161
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCAGAGGTGAAAAAGCCGTGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
IGHV5-51*03
294
gAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCAGAGGTGAAAAAGCCGTGGGAGTCTCTG AAGATCTCC
313
нативного 49.1
(e V Q L V Q S)
160
(E I V L T Q S P)
pCB-IgG-VK6
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAG
CBTAU4 9.1 VL
162
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
IGKV4-1*01
262
GAcATcGTGaTGACcCAGTCTCCAGACTTCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGG GCCACCATC
нативного 49.1
314
(d I V m T Q S P)
Исследовали реактивность супернатантов IgGl, полученного в результате трансфекции, в отношении тау-пептидов посредством ELISA. Сначала 9б-луночные планшеты с половинным объемом лунки для ELISA (Costar) покрывали 50 мкл бычьего актина (1 мкг/мл, Sigma) в качестве отрицательного контроля и антителом козы к F (ab) 2-фрагменту человека, очищенным аффинной хроматографией (2 мкг/мл, Jackson Immunoresearch) для подтверждения получения антитела. Планшеты покрывали в TBS в течение ночи при 4°С. На следующий день планшеты промывали 5 раз TBS/0,05% Tween (TBS-T) и блокировали 150 мкл TBS-T плюс 2,5% BSA (блокирующий буфер) в течение 2 ч. Тау-пептиды захватывали на планшетах, покрытых стрептавидином (Pierce) в концентрации 0,43 мкМ в 100 мкл TBS. Тау-пептиды, используемые для настройки анализа ELISA, были такими же, как и приманки в соответствующем эксперименте по сортингу. Планшеты, покрытые тау-пептидом, затем инкубировали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Все планшеты затем промывали 5 раз TBS/0,05% Tween, и блокировали 150 мкл и 300 мкл
(только планшеты с тау-пептидом) блокирующего буфера, и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч. Супернатанты с IgG, полученным в результате трансфекции, разводили до 5 мкг/мл (исходя из количественной оценки при помощи Octet Red) и титровали в 5 раз в TBS/0,25% BSA. Мышиное антитело к актину (Sigma, № по кат. А3853) использовали в концентрации 1,25 мкг/мл в качестве положительного контроля для планшетов, покрытых бычьим актином. Коммерческие антитела использовали в концентрации 1 мкг/мл в качестве положительного контроля для анализа ELISA, включая моноклональное антитело АТ8
(Thermo, MN1020), моноклональное антитело АТ100 (Thermo, MN1060) и моноклональное антитело ATI 8 0 (Thermo, MN104 0) . Первичные
антитела инкубировали в течение 2 ч. при комнатной температуре и промывали 5 раз в TBS-T. В конечном итоге, Fab-антитело козы к IgG человека или конъюгированное с HRP антитело козы к IgG мыши (Jackson Labs) использовали при 1:2000 и 1:4000, соответственно, и инкубировали в течение 1 ч. при комнатной температуре. Планшеты промывали 5 раз в TBS-T и проявляли субстратом для пероксидазы SureBlue Reserve ТМВ Microwell (KPL). Реакцию останавливали посредством добавления 50 мкл и 100 мкл (планшеты с пептидами) ТМВ Stop Solution (KPL) и измеряли поглощение при 450 нм с использованием планшет-ридера для ELISA. Результаты для супернатантов с указанными выше активностями связывания затем повторно подтверждали в независимом исследовании посредством ELISA. После повторного подтверждения выбирали клон для последующей экспрессии IgG и очистки (пример 5). ПРИМЕР 5
Экспрессия IgGl и очистка клонированных химерных mAb к тау-белку
После скрининга посредством ELISA и подтверждения
реактивности антител выбранные клоны экспрессировали как IgGl,
как указано в примере 4. Среду для культуры клеток собирали и
центрифугировали, чтобы удалить клетки, по прошествии от не
менее 72 ч. до не более 168 ч. Очищенные образцы надосадочной
жидкости затем дважды пропускали через колонку с белком А на
сефарозе (GE Healthcare Life Sciences) и промывали в 50 мл PBS.
IgG затем элюировали 10 мл элюирующего буфера для IgG (Pierce) и
нейтрализовали Tris с рН 8,0, а затем в течение ночи
диализировали против PBS. Диализированные образцы
концентрировали с использованием ультрацентрифужного блока с MWCO 10000 (Amicon) до конечного объема приблизительно 1 мл, и значения концентрации антител определяли с помощью сенсорных наконечников с белком А, используя IgG человека в качестве стандарта, на Octet Red384 (ForteBio). Очищенные антитела дополнительно подвергали контролю качества посредством осуществления SDS-PAGE в невосстанавливающих и восстанавливающих условиях и посредством эксклюзионной хроматографии.
ПРИМЕР 6
Связывание с IgG
Реактивность по отношению к тау-пептидам
IgGl, полученные и подвергнутые контролю качества, как
описано выше, тестировали посредством ELISA в отношении их
способности связываться с определенным(определенными)
родственным(родственными) пептидом(пептидами), а также
неродственным пептидом (таблица 10) . 9б-луночные планшеты для ELISA (Costar) или планшеты, покрытые стрептавидином (Pierce), покрывали соответственно антигеном (бычьим актином и антителом козы к F (ab) 2-фрагменту человека, очищенным аффинной хроматографией) или тау-пептидами, как подробно описано в примере 4. Очищенные IgG к тау-белку разводили до 5 мкг/мл в TBS, содержащем 0,25% BSA, и титровали в 5-кратных разведениях. Контрольные антитела и вторичные антитела использовали, как подробно описано в примере 4 . Реактивность антител при 1 мкг/мл определяли посредством ELISA и оценивали как отсутствие связывания (-), слабую (-/+), среднюю ( + ) или сильную ( + +) . (-) для среднего значения двух показателей O.D. при 450 нм < 0,3; (-/+) для > 0,5 и < 1,0; ( + ) для > 1,0 и < 1,5; ( + +) для > 1,5. Таблица
ptau 58-76 (pS68,pT69)
EPGSETSDAK(pS)(pT)PTAEDVT
322
CBTAU-
ptau 59-78 (pT69, pT71)
PGSETSDAKS(pT)P(pT)AEDVTAP
323
20.1
ptau 61-78 (pT71)
SETSDAKSTP(pT)AEDVTAP
324
-/ +
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
CBTAU-
ptau 406-429 (pS416,pS422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
22 . 1
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
ptau 221-245 (pT231,pS238)
REPKKVAWR (pT) PPKSPS (pS ) AKSRLQT
328
CBTAU-
ptau 228-245 (pS238)
WRTPPKSPS (pS)AKSRLQT
329
24 . 1
ptau 225-245 (pS235,pS238)
KVAWRTPPK (pS) PS (pS) AKSRLQT
330
GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTP
tau 186-253
PTREPKKVAWRT PPKSPS SAKS RLQTAPVPMP DL
321
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHK
CBTAU-27 . 1
tau 299-369
PGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVP GGGNK
331
ptau 194-212 (pS202,pT205)
RSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
315
CBTAU-
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
28 . 1
ptau 257-272
KSKIG(pS)TENLKHQPGG
332
CBTAU-
ptau 406-429 (p416, p422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
41.1
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGS IDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
CBTAU-
ptau 406-429 (p416, p422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
41.2
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGS IDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
CBTAU-42 . 1
ptau 406-429 (p416, p422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGS IDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
CBTAU-43.1
tau 299-369
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHK PGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVP GGGNK
331
ptau 194-212 (pS202,pT205)
RSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
315
CBTAU-44 . 1
ptau 406-429 (p416, p422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
-/ +
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGS IDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
CBTAU-45.1
ptau 406-429 (p416, p422)
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
326
tau 389-441
GAEIVYKSPWSGDTSPRHLSNVSSTGS IDMVD SPQLATLADEVSASLAKQGL
327
CBTAU-46.1
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
ptau 224-241 (pT231, pS235)
KKVAWR(pT) PPK(pS) PSSAKS
333
CBTAU-47 . 1
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
ptau 257-272 (pS262)
KSKIG(pS)TENLKHQPGG
332
CBTAU-47 .2
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
ptau 257-272 (pS262)
KSKIG(pS)TENLKHQPGG
332
CBTAU-49.1
tau 42-103
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAED VTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTA
325
ptau 224-241 (pT231, pS235)
KKVAWR(pT) PPK(pS) PSSAKS
333
AT 8
ptau 194-212 (pS202,pT205)
RSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
315
tau 194-212
RSGYSSPGSPGTPGSRSRT
316
*Аминокислотный участок в изоформе tau441 человека
Результаты показаны на фигуре 1 a-t. Описанные в данном документе mAb к тау-белку можно подразделить на две основные группы: те, которые вступают в реакцию только с фосфорилированными пептидами (фосфозависимые mAb), и те, которые вступают в реакцию как с фосфорилированными, так и с нефосфорилированными пептидами (фосфонезависимые mAb). mAb к тау-белку CBTAU-7.1, CBTAU-8.1, CBTAU-18.1 и CBTAU-22.1 выделяли из индивидуумов без AD, используя подход, подробно описанный в примере 3. Эти mAb являются фосфозависимыми и, как показано посредством ELISA (фиг. 1), вступают в реакцию только с фосфорилированным пептидом, но не с нефосфорилированным пептидом, охватывающим этот участок, и не с нефосфорилированным вариантом этого пептида. mAb к тау-белку CBTAU-7.1 и CBTAU-8.1 вступают в специфичную реакцию с фосфорилированным пептидом, содержащим АТ8-связывающий эпитоп. Этот пептид охватывает аминокислоты с 194 по 212 и содержит фосфорилированные остатки в положениях 202 и 205. CBTAU-18.1 вступает в реакцию с фосфорилированным пептидом, охватывающим аминокислоты 2 0 0-217 с фосфорилированным сериновым остатком в положении 210. Наконец, CBTAU-22.1 вступает в реакцию с пептидом, охватывающим аминокислоты 4 0 6-42 9, с двумя фосфорилированными сериновыми остатками в положениях 416 и 422.
Аналогично, CBTAU-20.1 был идентифицирован у индивидуума без AD и является преимущественно фосфозависимым, так как он вступает в реакцию с тремя различными фосфорилированными пептидами, охватывающими аминокислоты 59-77. Два из этих пептидов характеризуются двойным фосфорилированием, один в положениях 68 и 69 и второй в положениях 69 и 71. CBTAU-20.1 также вступает в реакцию с третьим пептидом, который характеризуется одинарным фосфорилированием в положении 71, что позволяет предположить, что фосфорилирование треонина 71 является достаточным и важным для реактивности CBTAU-20.1. CBTAU-2 0.1 проявляет слабую реактивность по отношению к нефосфорилированному пептиду, охватывающему участок 42-103.
Подобно вышеупомянутым mAb, CBTAU-16.1 и CBTAU-24.1 также выделяли из индивидуумов без AD; однако, оба mAb являются
фосфонезависимыми и, как было видно из ELISA, вступают в реакцию как с фосфорилированным, так и с нефосфорилированным пептидом, охватывающим определенный участок. CBTAU-16.1 вступает в реакцию с аминокислотным участком 204-221, тогда как CBTAU-24.1 вступает в реакцию с тремя различными пептидами, охватывающими аминокислоты 221-245. Кроме того, два дополнительных mAb к тау-белку (CBTAU-2 7.1 и CBTAU-2 8.1) идентифицировали посредством скрининга, проводимого с образцами из доноров без AD с использованием нефосфорилированных пептидов длиной 60-7 0 аминокислот, соответствующих аминокислотным участкам 42-103 и 299-369 соответственно; следовательно, оба mAb являются специфичными к нефосфорилированному тау-белку.
В заключение, mAb CBTAU 41.1, 41.2, 42.1, 43.1, 44.1, 45.1,
46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 идентифицировали посредством небольшого
исследования, в котором скринингу подвергали 25 молодых
индивидуумов без AD (18-27 лет), 25 индивидуумов без AD (55+
лет), и 2 5 индивидуумов с AD (55+ лет) . Набор пептидов, которые
использовали для этого исследования, включал 8 фосфорилированных
пептидов (в том числе родственный пептид для CBTAU-22.1) и 2
нефосфорилированных пептида (родственные пептиды для CBTAU-27.1
и CBTAU-28.1). mAb CBTAU 41.1, 41.2 и 42.1 выделяли из доноров с
AD и подвергали реакции с родственным пептидом для CBTAU-22.1.
Аналогично CBTAU-22.1, эти mAb являются фосфозависимыми, как
показано на фиг. 1 j-1. У индивидуумов без AD (55+ лет)
идентифицировали два дополнительных mAb (CBTAU-44.1 и CBTAU-
45.1) с реактивностью по отношению к родственному пептиду для
CBTAU-22.1. Как и ожидалось, эти два антитела также являлись
фосфозависимыми (фиг. 1 n-o) . CBTAU-43.1 также идентифицировали
посредством скрининга, проводимого с индивидуумами без AD (55+
лет) ; однако, mAb было выделено с помощью родственного пептида
для CBTAU-27.1 и является специфичным к нефосфорилированному
тау-белку (фиг. 1 т) . В заключение, CBTAU-46.1, 47.1, 47.2 и
49.1 были выделены из индивидуумов без AD (18-27 лет) с
реактивностью по отношению к пептиду для CBTAU-2 8.1 и,
аналогично CBTAU-2 8.1, являются специфичными к
нефосфорилированному тау-белку (фиг. 1 p-s).
ПРИМЕР 7
Реактивность по отношению к парным спиральным филаментам и рекомбинантному тау-белку, определяемая посредством ELISA
Для того, чтобы дополнительно охарактеризовать
специфичность некоторых химерных антител, тестировали их реактивность по отношению к рекомбинантному тау-белку, обогащенным и очищенным иммуноаффинным способом парным спиральным филаментам посредством ELISA.
PHF-тау-белок очищали иммуноаффинным способом в соответствии с протоколом Greenberg и Davies. Вкратце, кортикальные ткани, соответствующие индивидуумам с болезнью Альцгеймера, гомогенизировали в 10 объемах холодного буфера (10 мМ Tris, рН 7,4, 1 мМ EGTA, 0,8 М NaCl и 10% сахарозы) и центрифугировали при 27200 х g в течение 20 мин. при 4°С. К надосадочной жидкости добавляли N-лаурилсаркозин и 2-меркаптоэтанол для достижения конечной концентрации 1% (вес/об.) и 1% (об./об.) соответственно. Смесь инкубировали при 37°С в течение 2-2,5 ч. с постоянным покачиванием, после чего следовало центрифугирование при 108000 х g в течение 3 0 мин. при комнатной температуре. Осадок, содержащий PHF-тау-белок, промывали 3 раза в PBS и растворяли в PBS без ингибиторов белков и дополнительно центрифугировали при 12000 х g в течение 5 мин. Выделенную надосадочную жидкость, содержащую обогащенный PHF-тау-белок (ePHF-тау-белок), подвергали иммуноаффинной очистке на колонке для аффинной хроматографии с hTaulO и элюировали с помощью 3 М или 4 М KSCN в течение ночи при 4°С, после чего следовал диализ против 1 л. PBS при 4°С с 3 заменами буфера. hTaulO является антителом, образованным в собственной лаборатории при иммунизации рекомбинантным тау-белком. Оно связывается как с рекомбинантным, так и с PHF-тау-белком по аминоконцевому эпитопу. Очищенный иммуноаффинным способом PHF-тау-белок (iPHF-тау-белок) концентрировали с помощью устройства для центрифужной фильтрации от Sartorius.
Для ELISA 9б-луночные планшеты для связывания с половинным объемом лунок (Costar) покрывали 50 мкл антигена в TBS (2 мкг/мл
рекомбинантного тау-белка, 2 мкг/мл бычьего актина и антитела козы к F(ab)2-фрагменту человека, очищенного аффинной хроматографией, 1 мкг/мл аффинно очищенных парных спиральных филаментов и 1 мкг/мл моноклонального антитела к тау-белку НТ7
(Thermo Scientific, MN1000)). На следующий день планшеты промывали в TBS-T и затем блокировали 150 мкл TBS с 2,5% BSA в течение 2 ч. при RT. После блокирования ePHF-тау-белок захватывали в течение 2 ч. при RT на планшете, покрытом антителом к тау-белку. Очищенные IgG к тау-белку разводили до 10 мкг/мл в TBS с 0,25% BSA, и IgG титровали в 5-кратных разведениях при RT в течение 2 ч. АТ8 (10 мкг/мл) использовали в качестве положительного контроля для iPHF-тау-белка и захваченного ePHF-тау-белка. Планшеты промывали 5 раз в TBS-T, и добавляли вторичные антитела, разведенные в TBS с 0,25% BSA, и инкубировали при RT в течение 1 ч. Антитело козы к F(ab')2 IgG человека (Jackson Labs) использовали в разведении 1:2000, и антитело козы к иммуноглобулинам мыши, конъюгированное с HRP
(Jackson Labs), использовали в разведении 1:4000 (используемом для антитела к актину в качестве контроля). После инкубирования планшеты промывали 4 раза в TBS-T и проявляли субстратом пероксидазы для микролунок SureBlue Reserve ТМВ (KPL) в течение примерно 2 мин. Реакцию немедленно останавливали посредством добавления останавливающего раствора ТМВ (KPL), и измеряли поглощение при 450 нм, используя планшет-ридер для ELISA.
Результаты показаны на фигуре 2 a-j . Как и ожидалось, посредством ELISA было выявлено, что фосфозависимые mAb CBTAU-7.1, CBTAU-8.1 и CBTAU-18.1 не вступают в реакцию с рекомбинантным тау-белком (фиг. 2 a, b, d) . CBTAU-20.1 проявляет незначительную реактивность по отношению к рекомбинантному тау-белку, что согласуется с его слабой реактивностью по отношению к нефосфорилированному пептиду, охватывающему участок 42-103. Примечательно, что эти фосфозависимые mAb не проявляют какую-либо реактивность по отношению к парным спиральным филаментам
(т.е. ePHF-тау-белку и iPHF-тау-белку), за исключением CBTAU-7.1, которое проявляет незначительную реактивность по отношению к ePHF-тау-белку при более высоких концентрациях антитела.
Наконец, фосфозависимое CBTAU-22.1 не проявляет реактивность по отношению к рекомбинантному тау-белку, но вступает в реакцию как с iPHF-тау-белком, так и с ePHF-тау-белком (фиг. 2f).
Фосфонезависимые mAb к тау-белку CBTAU-16.1 и CBTAU-2 4.1 вступают в реакцию как с рекомбинантным тау-белком, так и с обоими форматами парных спиральных филаментов (т.е. iPHF-тау-белком и ePHF-тау-белком; фиг. 2с и g) . CBTAU-28.1 проявляет сильное связывание с рекомбинантным тау-белком при слабой иммунореактивности к обоим форматам PHF-тау-белка (фиг. 2i) . В заключение, CBTAU-27.1 проявляет слабую иммунореактивность по отношению как к рекомбинантному тау-белку, так и к PHF-тау-белку (фиг. In).
ПРИМЕР 8
Реактивность по отношению к парным спиральным филаментам и рекомбинантному тау-белку, определяемая посредством вестерн-блот-анализа
Для расширения наблюдений связывания rTau и PHF в ELISA и исследования того, играет ли вторичная структура роль в реактивности, рекомбинантный тау-белок, обогащенные и очищенные иммуноаффинным способом парные спиральные филаменты тестировали посредством вестерн-блот-анализа. Примерно 0,5 мкг iPHF, ePHF и 1 мкг rTau в IX конечной концентрации буфера для образца NuPAGE LDS (конечная концентрация 0,5% LDS) (Novex, NP0007) нагревали при 7 0°С в течение 10 минут. Образцы загружали в 2б-луночный 412% гель Bis-Tris Novex NuPAGE (Invitrogen) с подвижным буфером MOPS SDS (Novagen, NP0001) и затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрану блокировали в течение ночи в IX Tris-буферизированном физиологическом растворе (TBS) с 0,05% Tween20 и 4% обезжиренного сухого молока. mAb CBTAU использовали в качестве первичных при 25 мкг/мл в IX TBS с 0,05% Tween20 и 4% обезжиренного сухого молока и инкубировали в течение 2 ч. при комнатной температуре. Затем мембрану промывали 3 раза, каждый раз в течение 5 мин., в IX TBS с 0,05% Tween2 0. Очищенное аффинной хроматографией конъюгированное с пероксидазой антитело козы к IgG человека, специфичное к Fcy-фрагменту (Jackson
ImmunoResearch), затем использовали в качестве вторичного в разведении 1:2000 в IX TBS с 0,05% Tween20 и 4% обезжиренного сухого молока и инкубировали в течение 4 5 мин. при RT. Мембрану промывали 3 раза, каждый раз в течение 5 мин., и проявляли с использованием набора Supersignal West Pico (Pierce).
Результаты вестерн-блот-анализа показаны на фигуре 3. На фигуре показана реактивность трех контрольных антител АТ8, АТ100 и НТ7 (соответственно двух специфичных к фосфо-тау-белку и специфичного к общему тау-белку) . Как для АТ8, так и для АТ100 показана характеристика PHF-тау-белка в виде трех полос, которые соответствуют приблизительно 68, 64 и 60 кДа. В отличие от результатов ELISA, посредством вестерн-блоттинга было выявлено, что фосфозависимые mAb CBTAU-7.1 и CBTAU-18.1 вступают в реакцию как с iPHF-тау-белком, так и с ePHF-тау-белком, что позволяет предположить, что эпитопы для этих моноклональных антител недоступны, когда тау-белок принимает конформации более высокого порядка, присутствующие в PHF-тау-белке. Однако, эти эпитопы становятся доступными в сильных денатурирующих условиях SDS-PAGE. CBTAU-27.1 проявляет связывание с рекомбинантным тау-белком и PHF, выявляемое в ходе вестерн-блоттинга, но слабую реактивность по отношению к ним, определяемую в ходе ELISA, что позволяет предположить, что эпитоп для этого антитела доступен только в сильных денатурирующих условиях. CBTAU-28.1 вступает в интенсивную реакцию с рекомбинантным тау-белком, выявляемую в ходе как вестерн-блоттинга, так и ELISA, и также проявляет реактивность по отношению к PHF-тау-белку, определяемую в ходе обоих анализов. CBTAU-28.1 вступает в реакцию с участком Е1/Е2 тау-белка (аминокислоты 42-103), который присутствует не во всех изоформах тау-белка; таким образом, с помощью CBTAU-28.1 обнаруживают только полосы 68 и 64 кДа PHF-тау-белка. В заключение, CBTAU-22.1 и CBTAU-24.1 демонстрируют аналогичные результаты в анализе ELISA, вступая в реакцию соответственно с PHF-тау-белком, но не с рекомбинантным тау-белком либо как с PHF-тау-белком, так и с рекомбинантным тау-белком.
ПРИМЕР 9
Реактивность по отношению к пептидным фрагментам тау-белка,
определяемая в ходе ELISA
Для определения характеристик специфичности выделенных антител, проводили тестирования их реактивности по отношению к фосфорилированным и нефосфорилированным тау-пептидам (таблица 11-21, фигура 4 а-g) посредством ELISA. Биотинилированные тау-пептиды синтезировали в промышленных масштабах и растворяли в воде при 1 нг/мл и замораживали при -8 0°С. Вкратце, 9б-луночные планшеты для связывания стрептавидина (Thermo-Fisher) покрывали 2 мкг/мл тау-пептидов, разведенных в TBS, и инкубировали в течение ночи при 4°С. На следующий день планшеты промывали в TBS-Т и затем блокировали 2,5% BSA в TBS в течение 2 ч. при RT. После блокирования очищенные IgG к тау-белку разводили до 2 мкг/мл (или до 5 мкг/мл и титровали в 5-кратных разведениях для более тонкого картирования CBTAU-27.1, 28.1, 43.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1, используя последовательности пептидов из таблиц 1520) в TBS с 0,2 5% BSA и инкубировали при RT в течение 2 ч. Химеризированный человеческими участками вариант IgG AT8 (при 2 мкг/мл), описанный в примере 11, использовали в качестве положительного контроля в каждом эксперименте по картированию. Планшеты промывали 5 раз в TBS-T, после чего добавляли вторичное антитело [антитело козы к F(ab')2 IgG человека (Jackson Labs) в разведении 1:2000], разведенное в TBS с 0,25% BSA, и инкубировали при RT в течение 1 ч. После инкубирования планшеты промывали 4 раза в TBS-T и проявляли субстратом пероксидазы для микролунок SureBlue Reserve ТМВ (KPL) в течение примерно 90 с. Реакцию немедленно останавливали посредством добавления останавливающего раствора ТМВ (KPL), и измеряли поглощение при 450 нм, используя планшет-ридер для ELISA. Каждый эксперимент проводили в трех повторностях в три разных дня. Реактивность считали положительной, если значения OD были равными или превышающими 0,4 в анализе ELISA. Для определения реактивности каждого mAb по отношению к фосфорилированным и нефосфорилированным тау-пептидам определяли реактивность антител при 2 мкг/мл посредством ELISA и оценивали как отсутствие связывания (-), слабую (-/+), среднюю ( + ) или сильную ( + +) . (-)
для среднего значения двух показателей O.D. при 450 нм < 0,3; (-/+) для > 0,5 и < 1,0; ( + ) для > 1,0 и < 1,5; ( + +) для > 1,5. Для более тонкого картирования CBTAU-27.1, 28.1, 43.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 (подробно описанного в таблицах 15-20) определяли реактивность антител при 1 мкг/мл посредством ELISA и оценивали как отсутствие связывания (-) , слабую (-/+), среднюю ( + ) или сильную ( + +) . (-) для среднего значения трех показателей O.D. при 450 нм < 0,3; (-/+) для > 0,5 и < 1,0; (+) для > 1,0 и < 1,5; (++) для > 1,5.
Пептид
SEQ ID NO.
Последовательность пептида
(pX) обозначает фосфорилированную
аминокислоту
Результаты
tau 221-253
367
GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREP KKVAWRT PPKSPS SAKS RLQTAPVPMPDL
ptau 221-238
368
REPKKVAWR (pT) PPKSPSS
ptau 221-242
369
REPKKVAWR (pT) PPK(pS) PSSAKSR
ptau 221-244
370
REPKKVAWR (pT) PPKSP (pS) SAKSRLQ
ptau 221-245
328
REPKKVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 225-242
371
KVAWRTPPK (pS) PSSAKSR
ptau 225-244
372
KVAWRTPPK (pS) P (pS) SAKSRLQ
-/ +
ptau 225-245
330
KVAWRTPPK (pS) PS (pS) AKSRLQT
ptau 227-244
373
AWRTPPKSP (pS) SAKSRLQ
ptau 227-245
374
AWRTPPKSP (pS) (pS) AKSRLQT
ptau 228-245
329
WRTPPKSPS (pS) AKSRLQT
Таблица 15. CBTAU-27.1: пептиды для определения реактивности в ходе ELISA
Пептид
SEQ ID
Последовательность пептида
Результаты
Несмотря на то, что CBTAU-7.1 выделяли с использованием пептида, содержащего эпитоп для АТ8 (таблица 21; 192-212; pS2 02, рТ2 05), фосфорилированные остатки, способствующие связыванию CBTAU-7.1, оказались беспорядочно расположенными, включающими положения S202+T205, но также и комбинации S198+S202, S198+T205, S199+T205 и, возможно, Y197+T205. Нефосфорилированные пептиды не проявляли реактивность по отношению к CBTAU-7.1. Для CBTAU-18.1 установили, что минимальный эпитоп состоит из аминокислот 198217 и зависит от pS210, но не в тех случаях, когда Т212, S214 или Т217 также являлись фосфорилированными. Установили, что реактивность CBTAU-22.1 зависит от pS422, при этом для антитела CBTAU-24.1 было выявлено сильное связывание с его соответствующим нефосфорилированным пептидом, и на него, таким образом, не влияет фосфорилирование.
CBTAU-27.1 и CBTAU-43.1 выделяли с использованием нефосфорилированного пептида, охватывающего аминокислоты 2 99369. Примечательно, что для перекрывающихся пептидов в пределах этого участка были выявлены аналогичные требования к связыванию обоих mAb (т.е. CBTAU-27.1 и CBTAU-43.1 вступали в реакцию с пептидами, охватывающими соответственно аминокислоты 299-318 и 309-328), что позволяет предположить, что эпитоп для обоих mAb находится в пределах участка 299-328 в tau441 (фиг. 4а и с).
CBTAU-2 8.1, 46.1, 47.1, 47.2 и 49.1 выделяли из образцов донора-человека с использованием пептида, охватывающего участок
42-103 в tau441. Тестирования реактивности каждого mAb в отношении меньшего набора перекрывающихся пептидов показали связывание для CBTAU-47.1, 47.2 и 49.1, аналогичное CBTAU-28.1 (т.е. реактивность по отношению к пептиду, охватывающему участок 52-71), что позволяет предположить сравнимые требования к связыванию; однако, CBTAU-4 6.1 связывается с участком, расположенным в С-концевом направлении относительно участка для вышеупомянутых mAb (т.е. 82-103; фиг. 4Ь и d-g) ПРИМЕР 10
Аланиновое сканирование пептидных эпитопов
Для определения дополнительных характеристик специфичности и вклада аминокислот в связывание каждого выделенного mAb проводили тестирования их реактивности по отношению к тау-пептидам посредством ELISA при замещении аланином в каждом положении. Все протоколы экспериментов были идентичны примеру 9. Реактивность антител при 1 мкг/мл определяли посредством ELISA и оценивали как отсутствие связывания (-) , слабую (-/+), среднюю ( + ) или сильную ( + +) . (-) для среднего значения двух показателей O.D. при 450 нм < 0,3; (-/+) для > 0,5 и < 1,0; (+) для > 1,0 и < 1,5; (++) для > 1,5. Результаты для каждого антитела показаны в таблицах 22-29.
(А191)
ptau 187-212 (A192)
393
EPPKSADRSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A193)
394
EPPKSGARSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A194)
395
EPPKSGDASGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A195)
396
EPPKSGDRAGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A196)
397
EPPKSGDRSAYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A197)
398
EPPKSGDRSGASSPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A198)
399
EPPKSGDRSGYASPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A199)
400
EPPKSGDRSGYSAPG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A200)
401
EPPKSGDRSGYSSAG(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A201)
402
EPPKSGDRSGYSSPA(pS)PG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A2 02)
403
EPPKSGDRSGYSSPGAPG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A203)
404
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)AG(pT)PGSRSRT
ptau 187-212 (A204)
405
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PA(pT)PGSRSRT
-/ +
ptau 187-212 (A205)
406
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PGAPGSRSRT
-/ +
-/ +
ptau 187-212 (A206)
407
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PG(pT)AGSRSRT
-/ +
ptau 187-212 (A207)
408
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PG(pT)PASRSRT
-/ +
ptau 187-212 (A208)
409
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PG(pT)PGARSRT
ptau 187-212 (A209)
410
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSASRT
ptau 187-212
411
EPPKSGDRSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRART
22 .1
Участок (Таи441)
SEQ ID NO
Последовательность пептида (pX) обозначает фосфорилированную аминокислоту
Результаты
ptau 406-429
326
RHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (А406)
414
AHLSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A407)
415
RALSNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A408)
416
RHASNVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A409)
417
RHLANVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A410)
418
RHLSAVSSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A411)
419
RHLSNASSTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A412)
420
RHLSNVASTG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A413)
421
RHLSNVSATG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A414)
422
RHLSNVSSAG(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A415)
423
RHLSNVSSTA(pS)IDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A416)
424
RHLSNVSSTGAIDMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A417)
425
RHLSNVSSTG(pS)ADMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429 (A418)
426
RHLSNVSSTG(pS)IAMVD(pS)PQLATLA
ptau 406-429
427
RHLSNVSSTG(pS)IDAVD(pS)PQLATLA
24 . 1
Участок (Tau441)
SEQ ID NO
Последовательность пептида (pX) обозначает фосфорилированную аминокислоту
Результаты
ptau 221-245
328
REPKKVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A222)
436
RAPKKVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A223)
437
REAKKVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A224)
438
REPAKVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A225)
439
REPKAVAWR (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A226)
440
REPKKAAWR (pT) PPKSPS (pS ) AKSRLQT
ptau 221-245 (A228 )
441
REPKKVAAVR(pT)PPKSPS(pS)AKSRLQT
ptau 221-245 (A229)
442
REPKKVAVAR(pT)PPKSPS(pS)AKSRLQT
ptau 221-245 (A230)
443
REPKKVAWA (pT) PPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A231)
444
REPKKVAWRAPPKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A232)
445
REPKKVAWR (pT)APKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A233)
446
REPKKVAWR (pT) PAKSPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A234)
447
REPKKVAWR (pT) PPASPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A235)
448
REPKKVAWR (pT) PPKAPS (pS) AKSRLQT
ptau 221-245 (A236)
449
REPKKVAWR (pT) PPKSAS (pS) AKSRLQT
27 .1
Участок (Таи441)
SEQ ID NO:
Последовательность пептида
Результаты
tau 299-323
458
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(А299)
459
AVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A300)
460
HAPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A301)
461
HVAGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A302)
462
HVPAGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A303)
463
HVPGAGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A304)
464
HVPGGASVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A305)
465
HVPGGGAVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A306)
466
HVPGGGSAQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A307)
467
HVPGGGSVAIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A308)
468
HVPGGGSVQAVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A309)
469
HVPGGGSVQIAYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A310)
470
HVPGGGSVQIVAKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A311)
471
HVPGGGSVQIVYAPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A312)
472
HVPGGGSVQIVYKAVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A313)
473
HVPGGGSVQIVYKPADLSKVTSKCG
tau 299-323(A314)
474
HVPGGGSVQIVYKPVALSKVTSKCG
-/ +
tau 299-323(A315)
475
HVPGGGSVQIVYKPVDASKVTSKCG
tau 299-323(A316)
476
HVPGGGSVQIVYKPVDLAKVTSKCG
tau 299-323(A317)
477
HVPGGGSVQIVYKPVDLSAVTSKCG
tau 299-323(A318)
478
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKATSKCG
tau 299-323(A319)
479
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVASKCG
tau 299-323(A320)
480
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTAKCG
tau 299-323(A321)
481
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSACG
Участок (Таи441)
SEQ ID NO:
Последовательность пептида
Результаты
tau 299-323
458
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(А299)
459
AVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A300)
460
HAPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A301)
461
HVAGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A302)
462
HVPAGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A303)
463
HVPGAGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A304)
464
HVPGGASVQIVYKPVDLSKVTSKCG
tau 299-323(A305)
465
HVPGGGAVQIVYKPVDLSKVTSKCG
Участок (Таи441)
SEQ ID NO
Последовательность пептида
Результаты CBTAU-47.1
Результаты CBTAU-47.2
tau 52-71
382
TEDGSEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (А52)
484
AEDGSEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A53)
485
TADGSEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A54)
486
TEAGSEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A55)
487
TEDASEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A56)
488
TEDGAEEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A57)
489
TEDGSAEPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A58)
490
TEDGSEAPGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A59)
491
TEDGSEEAGSETSDAKSTPT
tau 52-71 (A60)
492
TEDGSEEPASETSDAKSTPT
tau 52-71 (A61)
493
TEDGSEEPGAETSDAKSTPT
-/ +
tau 52-71 (A62)
494
TEDGSEEPGSATSDAKSTPT
tau 52-71 (A63)
495
TEDGSEEPGSEASDAKSTPT
tau 52-71 (A64)
496
TEDGSEEPGSETADAKSTPT
tau 52-71 (A65)
497
TEDGSEEPGSETSAAKSTPT
tau 52-71 (A67)
498
TEDGSEEPGSETSDAASTPT
tau 52-71 (A68)
499
TEDGSEEPGSETSDAKATPT
tau 52-71 (A69)
500
TEDGSEEPGSETSDAKSAPT
tau 52-71 (A70)
501
TEDGSEEPGSETSDAKSTAT
tau 52-71 (A71)
502
TEDGSEEPGSETSDAKSTPA
Несмотря на то, что CBTAU-7.1 и CBTAU-8.1 выделяли с использованием тау-фосфопептида, содержащего эпитоп для АТ8 (т.е. pS202, рТ205), оба mAb характеризовались различными требованиями к эпитопу в соответствии с результатами аланинового сканирования (таблица 22) . В дополнение к S202 и Т205, замены в положениях G2 04 и Р2 0 6 приводят к ослаблению связывания CBTAU-7.1. В противоположность этому, замены на аланин в положениях G204, Т205, Р206 и R209 уменьшали реактивность CBTAU-8.1 по отношению к пептиду, а замена S2 02A не имела эффекта. Как и АТ8, оба mAb являются фосфозависимыми, но требуют дополнительных
(нефосфорилированных остатков) для связывания. Результаты аланинового сканирования для CBTAU-22.1 показали зависимость от фосфорилирования в S422 (таблица 23) , так как замена в этом положении полностью подавляла связывание. Замена в D421 приводила к ослаблению, но не к полному подавлению связывания. В заключение, результаты аланинового сканирования для CBTAU-24.1 показали, что Р2 3 6 является единственным критически важным для связывания остатком (таблица 24).
Для картирования критически важных контактных остатков для CBTAU-27.1 и 43.1 также проводили аланиновое сканирование в пределах участка 299-323 тау-белка (таблица 25 и таблица 27 соответственно). Было показано, что критически важными контактными остатками для связывания CBTAU-27.1 являются D314, L315 и К317. Результаты позволяют предположить, что остатки D314 и КЗ17 могут обеспечивать взаимодействия между эпитопом и остатками CDR в mAb посредством образования солевых мостиков. Хотя CBTAU-43.1 выделяли с использованием родственного пептида для CBAU-27.1, критически важные остатки в соответствии с аланиновым сканированием были разными. В дополнение к L315 и К317, было показано, что пролин в положении 312 является важным контактным остатком для связывания CBTAU-43.1. Наконец, также проводили аланиновое сканирование для CBTAU-2 8.1, а также для CBTAU-47.1, 47.1 и 49.1 (таблицы 26, 28, 29). Как показано в примере 9, mAb CBTAU 47.1, 47.2, 49.1 по результатам картирования соответствовали тому же пептидному участку, что и CBTAU-28.1 (т.е. 52-71). Примечательно, что все mAb обладали требованиями к связыванию, идентичными CBTAU-28.1. Было показано, что критически важными контактными остатками являются Р59, S61, Е62, ТбЗ, D65 и К67. Было обнаружено, что некоторые из этих остатков являются заряженными, что подразумевает важные взаимодействия по типу солевых мостиков между эпитопом и mAb.
ПРИМЕР 11
Иммуногистохимическое исследование
Полагают, что тау-патология инициируется в пределах энторинальной области коры (ЕС) и распространяется вдоль соединительных нейронных путей в гиппокампе перед переходом в
кору. Для определения реактивности выделенных IgG к отложениям
патогенного тау-белка вдоль этих нейронных путей ткани
гиппокампа получали от 82-летнего здорового мужчины (без AD;
Abeam, № по кат. аЬ4 3 05) и 88-летнего мужчины с болезнью
Альцгеймера (AD; Abeam, № по кат. ab4583) (Abeam). Кортикальные
ткани получали от 71-летнего здорового (без AD) индивидуума и
71-летнего индивидуума с болезнью Альцгеймера (AD) (Banner Sun
Health). В дополнение к AD, существует много неврологических
нарушений, которые характеризуются тау-патологией, также
известных как таупатий. Для расширения полученных результатов
авторы настоящего изобретения тестировали выделенные mAb в
тканях, полученных из лобных долей с прогрессирующим надъядерным
параличом (PSP) и непрогрессирующим надъядерным параличом (без
PSP), полученных соответственно от 73-летнего мужчины и 81-
летней женщины (Biochain). Ткани головного мозга
депарафинировали и регидратировали путем промывания дважды в
течение 10 мин. в ксилоле (VWR International) с последующим
промыванием дважды в течение 3 мин. в 10 0% этаноле, дважды в
течение 3 мин. в 95% этаноле, трижды в течение 3 мин. в 70%
этаноле и один раз в течение 3 0 с. в дистиллированной Н20 с
использованием набора для окрашивания микропрепаратов Tissue-
Tek(r) (VWR International) . Срезы тканей подвергали демаскированию
антигена под действием тепла с использованием цитратного буфера
(10 мМ лимонной кислоты, рН 6,0) для обнажения антигенных
детерминант. Срезы затем инкубировали с блокирующим буфером [10%
нормальной козьей сыворотки (Jackson ImmunoResearch, Inc.), 1%
BSA и 0,3% Triton-XlOO в PBS)] при RT в течение 1 ч. Избыток
воды удаляли, и срезы тканей обводили гидрофобным барьерным
карандашом ImmEdge (Vector Labs). Готовили влажную камеру путем
покрытия нижней части ванночки для окрашивания Н20, и срезы затем
3 раза промывали в PBS в течение 5 мин. путем отсасывания.
Активность эндогенной пероксидазы гасили в 10% Н2Ог в течение 30
мин. при RT. После гашения микропрепараты 3 раза промывали в PBS
в течение 5 мин. путем отсасывания. Микропрепараты затем
блокировали в течение 1 ч. при RT раствором 10% нормальной
козьей сыворотки, 0,3% TritonX-100, 1% BSA в IX PBS. Первичные антитела метили биотином, используя набор для мечения IgG человека Zenon (Life Technologies) согласно инструкциям производителя. В качестве отрицательного контроля использовали антитело человека, специфичное к RSV. Химеризированный человеческим Fc-участком вариант IgG АТ8 использовали в качестве положительного контроля. После мечения первичные антитела разводили по отдельности в блокирующем буфере в концентрациях 5 мкг/мл и 2 0 мкг/мл. Для экспериментов по конкуренции пептидов 13,3 мкМ родственного пептида (т.е. пептида, используемого для выделения mAb в экспериментах по сортировке) предварительно инкубировали с первичным антителом в течение 3 0 мин. при RT перед инкубированием со срезами тканей. Срезы тканей инкубировали при RT в течение двух часов со 100 мкл разведенного первичного антитела, меченного биотином, или антитела, за которое конкурируют пептиды. После удаления антитела путем отсасывания проводили вторую фиксацию среза ткани в 4% формальдегиде в PBS, и его инкубировали в течение 15 мин. при RT. Срезы 3 раза промывали в PBS в течение 5 мин. путем отсасывания. Срезы затем инкубировали в течение 3 0 мин. вместе со стрептавидиновым субстратом реагентом Vectastain ABC (Vector Labs) перед промыванием в PBS. Затем ткани проявляли субстратом DAB (Vector Labs) в присутствии никеля. Срезы затем 2 раза промывали в ddH20 и оставляли для полного высушивания при RT перед заливкой в 50 мкл стабильной заливочной среды VectaMount (Vector Labs). В заключение, срезы тканей подвергали контрастному окрашиванию гематоксилином (Vector Labs). Иллюстративные изображения получали с помощью прямого микроскопа Olympus ВХ-41, используя программное обеспечение MetaMorph.
Результаты иммуногистохимического исследования показаны на фигурах 5a-d. CBTAU-7.1 и CBTAU-8.1 продемонстрировали положительную специфичную иммунореактивность в тканях головного мозга с AD, но не в тканях здорового головного мозга, что позволяет предположить связывание с отложениями патогенного тау-белка, присутствующими в пораженных тканях головного мозга. Эти антитела узнают AT8-положительные клубки из тау-белка и
нейтрофильные нити в подобластях гиппокампа (фиг. 5а;
энторинальная область коры) и коре головного мозга (фиг. 5Ь) .
Кроме того, в нескольких экспериментах в цитоплазме и отростках
нейронов неизменно обнаруживали положительную
иммунореактивность. Кроме того, CBTAU-18.1, 22.1 и 24.1 также тестировали в отношении срезов тканей гиппокампа и кортикальных тканей (фиг. 5а-Ь). Аналогично CBTAU-7.1 и CBTAU-8.1, все mAb вступали в специфичную реакцию с тау-белком в срезах тканей с AD, но не с тау-белком в срезах тканей без AD. Примечательно, что CBTAU-24.1, не специфичное к фосфорилированному тау-белку, вступает в специфичную реакцию с патологическим тау-белком в срезах тканей с AD, но не с тау-белком в срезах тканей без AD. В заключение, CBTAU-16.1 и CBTAU-2 0.1 проявляют реактивность по отношению к тау-белку в срезах тканей как без AD, так и с AD.
Кроме того, CBTAU-7.1, 8.1, 16.1, 18.1, 20.1, 22.1 и 24.1
тестировали в срезах кортикальных тканей, соответствующих
прогрессирующему надъядерному параличу (фиг. 5с) . В отличие от
АТ8, CBTAU-7.1 и CBTAU-8.1 не смогли обнаружить клубки из тау-
белка в головном мозге человека с PSP, что позволяет
предположить, что эпитоп для обоих mAb отсутствует при PSP.
CBTAU-16.1 и CBTAU-2 0.1 демонстрировали положительную
иммунореактивность по отношению к тау-белку в кортикальных
срезах головного мозга без PSP и с PSP, что позволяет
предположить связывание как с нормальными формами тау-белка, так
и с патогенными формами тау-белка. В срезах головного мозга без
AD эти антитела продемонстрировали положительное
иммуноокрашивание тау-белка в цитоплазме и отростках нейронов (фиг. 5а и 5Ь), при этом оба mAb обнаруживали клубки и нейтрофильные нити в срезах головного мозга с AD аналогично АТ8. Аналогичную AT 8 иммунореактивность по отношению к клубкам из тау-белка также обнаружили в срезах тканей головного мозга с PSP, что позволяет предположить, что как CBTAU-16.1, так и CBTAU-20.1 узнают типичные формы патогенного тау-белка при других таупатиях, отличных от AD. Кроме того, CBTAU-22.1 и CBTAU-24.1 демонстрировали иммунореактивность исключительно в тканях головного мозга с AD при положительной иммунореактивности
к клубкам и нейтрофильным нитям. CBTAU-18.1 демонстрировало слабую иммунореактивность в тканях головного мозга без AD, но вступало в более интенсивную реакцию в образцах тканей с AD. CBTAU-18.1, CBTAU-22.1 и CBTAU-24.1 также обладали положительной реактивностью по отношению к клубкам из тау-белка в срезах тканей головного мозга с PSP (фиг. 5с).
CBTAU-27.1 и CBTAU-28.1 демонстрировали селективное иммуноокрашивание в срезах тканей головного мозга без AD с диффузным иммуноокрашиванием в цитоплазме и отростках нейронов. Примечательно, что оба антитела не смогли продемонстрировать иммунореактивность в срезах тканей с AD (как в тканях гиппокампа, так и в кортикальных тканях), определяя новый эпитоп, который утрачивается в ходе прогрессирования заболевания. В отличие от большинства mAb человека к тау-белку, идентифицированных авторами настоящего изобретения, CBTAU-27.1 и CBTAU-28.1 выделяли путем скрининга образцов доноров с использованием набора нефосфорилированных пептидов, охватывающих весь участок tau441 человека. Эти антитела не требуют фосфорилирования для связывания (фиг. 1) и, как показано на фиг. 2, не вступают в реакцию с PHF, что выявляется в ходе ELISA. Поэтому наблюдаемый для этих двух mAb диффузный характер иммуноокрашивания был ожидаемым. Кроме того, CBTAU-43.1, которое изначально выделили с использованием родственного пептида для CBTAU-27.1, тестировали в отношении срезов кортикальной ткани. CBTAU-43.1 вступало в реакцию аналогично CBTAU-27.1, окрашивая тау-белок в срезах тканей без AD, но не тау-белок в срезах тканей с AD. Аналогичным образом, CBTAU-46.1, 47.2 (тестировали только один вариант), и 49.1, которые выделяли с использованием родственного пептида для CBTAU-2 8.1, вступали в специфичную реакцию с тау-белком в срезах тканей без AD, но не в срезах тканей с AD (фиг. 5d). Интересно отметить, что все эти mAb имеют общие последовательности зародышевого типа генов тяжелой и легкой цепей (т.е. VH5-51 и VK4-1), связываются с одними и теми же участками в тау-белке и, как показано на фиг. 5d, обладают аналогичными иммуногистохимическими свойствами.
Результаты иммуногистохимического исследования,
представленные в данном документе для CBTAU-7.1, 8.1, 18.1, 22.1, 24.1, 27.1 и 28.1, были подтверждены по нескольким участкам образцов головного мозга и тканей, соответствующих нескольким индивидуумам без AD и с AD. Иммунореактивность mAb CBTAU 43.1, 46.1, 47.2 и 49.1 была в свое время подтверждена при использовании того же образца ткани и еще не была подтверждена на образцах, соответствующих другим индивидуумам с AD и без AD. ПРИМЕР 12
IHC с дефосфорилированием
Учитывая, что результаты IHC для CBTAU-28.1
продемонстрировали иммунореактивность по отношению к тау-белку в срезах тканей без AD, но не к тау-белку в срезах тканей с AD, авторы настоящего изобретения выдвинули гипотезу, что утрата этого эпитопа в ходе прогрессирования заболевания была результатом модификации(модификаций) (т.е. фосфорилирования). Для тестирования этой гипотезы срезы тканей головного мозга человека дефосфорилировали перед оцениванием иммунореактивности CBTAU-28.1. Залитые в парафин срезы тканей головного мозга человека (Abeam, № по кат. аЬ4305, от 54-летнего мужчины без клинических симптомов в сравнении с Abeam, № по кат. аЬ4 58 3, от 93-летней женщины латиноамериканского происхождения с болезнью Альцгеймера) депарафинировали и регидратировали путем промывания дважды в течение 10 мин. в ксилоле (VWR International) с последующим промыванием дважды в течение 3 минут в 10 0% этаноле, дважды в течение 3 мин. в 95% этаноле, трижды в течение 3 мин. в 70% этаноле и один раз в течение 30 с. в дистиллированной Н20 с использованием набора для окрашивания микропрепаратов Tissue-Tek(r) (VWR International). Чтобы свести к минимуму неспецифичное связывание антитела, тканям при промываниях никогда не позволяли высохнуть. Срезы тканей подвергали демаскированию антигена под действием тепла с использованием цитратного буфера (лимонная кислота, рН 6,0) для обнажения антигенных детерминант. Избыток воды удаляли, и срезы тканей обводили гидрофобным барьерным карандашом ImmEdge (Vector Labs). Готовили влажную камеру путем покрытия нижней части ванночки для окрашивания Н20, и срезы затем
3 раза промывали в PBS в течение 5 мин. путем отсасывания. Активность эндогенной пероксидазы гасили в Н2Ог в течение 15 минут при RT. После гашения микропрепараты 3 раза промывали в PBS в течение 5 мин. путем отсасывания. Срезы после этого обрабатывали 130 единицами/мл кишечной щелочной фосфатазы теленка (CIAP) в течение 2,5 ч. при 32°С. Микропрепараты затем блокировали в течение 1 ч. при RT раствором 10% нормальной козьей сыворотки, 0,3% TritonX-100, 1% BSA в IX PBS. Муринизированное антитело CBTAU-28.1 (муринизированный Fc-участок) и контрольные mAb АТ8 и изотипический контроль (mAb 4.1 к RSV) инкубировали в течение ночи на срезах гиппокампа в конечной концентрации 1 мкг/мл. Срезы промывали и инкубировали с антителом, специфичным к Fcy-фрагменту иммуноглобулина мыши, в течение 2 ч. при комнатной температуре. Образцы проявляли раствором субстрата пероксидазы DAB в присутствии никеля. Образцы подвергали контрастному окрашиванию гематоксилином
(Vector Labs). Иллюстративные изображения получали с помощью прямого микроскопа Olympus ВХ-41, используя программное обеспечение MetaMorph.
Результаты показаны на фигуре 6а и Ь. Как и ожидалось, CBTAU-28.1 вступает в реакцию с тау-белком, присутствующем в срезах тканей гиппокампа без AD, но не вступает в реакцию с тау-белком в срезах тканей с AD. В противоположность этому, контрольное mAb АТ8 не вступает в реакцию с тау-белком в срезах без AD, но однозначно вступает в реакцию с отложениями патогенного тау-белка, присутствующими в срезах тканей с AD
(фиг. 6а) . Однако, предварительная обработка срезов тканей с AD фосфатазой восстанавливает реактивность CBTAU-28.1, позволяя ему окрашивать отложения патогенного тау-белка, присутствующие в этих срезах. Как и ожидалось, реактивность АТ8 при предварительной обработке срезов тканей с AD фосфатазой снижалась (фиг. 6Ь). ПРИМЕР 13
ELISA с дефосфорилированием
Для подтверждения результатов из примера 12
дефосфорилированные парные спиральные филаменты тестировали на реактивность по отношению к CBTAU-28.1 посредством ELISA. 96-луночные планшеты для связывания с половинным объемом лунок (Costar) покрывали 50 мкл антигена в TBS (2 мкг/мл бычьего актина и антитела козы к F (ab) 2_фрагменту человека, очищенного аффинной хроматографией, и 1 мкг/мл аффинно очищенных парных спиральных филаментов iPHF, подвергнутых и не подвергнутых предварительной обработке кишечной фосфатазой теленка CIP) . iPHF, обработанный фосфатазой, получали следующим образом. Образцы iPHF ресуспендировали в IX буфере NEB 4 (50 мМ ацетата калия, 20 мМ Tris-ацетата, 10 мМ ацетата магния и 1 мМ DTT) в конечной концентрации 0,05 мкг/мл. Добавляли одну единицу CIP на мкг iPHF (CIP, NEB, № по кат. M0290S). Образцы iPHF инкубировали с CIP в течение 90 мин. при 37°С перед покрыванием планшетов для связывания для ELISA. После связывания антигена в течение ночи планшеты промывали в TBS-T и затем блокировали 150 мкл TBS с 2,5% BSA в течение 2 ч. при RT. Очищенные контрольные IgG и IgG к тау-белку CBTAU-28.1 титровали в 5-кратных разведениях, начиная с 25 мкг/мл в TBS/0,25% BSA, и инкубировали в течение 1,5 ч. Планшеты промывали 4 раза в TBS-T, и добавляли вторичное антитело (антитело к Fab человека, конъюгированное с HRP, Jackson Immunoresearch, № по кат. 109-036-097) и инкубировали при RT в течение 4 5 мин. После инкубирования планшеты промывали 4 раза в TBS-T и проявляли субстратом пероксидазы для микролунок SureBlue Reserve ТМВ (KPL) в течение примерно 2 мин. Реакцию немедленно останавливали посредством добавления останавливающего раствора ТМВ (KPL), и измеряли поглощение при 450 нм, используя планшет-ридер для ELISA. Для каждой экспериментальной точки использовали три повторности.
Результаты показаны на фигуре 7. Как раньше было показано в примере 7, CBTAU-2 8.1, в отличие от АТ8, вступает в слабую реакцию с iPHF, что выявляется в ходе ELISA. Однако, дефосфорилирование iPHF с помощью CIP восстанавливает реактивность CBTAU-2 8.1 по отношению к образцам филаментов. Как и ожидалось, реактивность контрольного mAb АТ8 по отношению к
фосфо-тау-белку устраняется после дефосфорилирования iPHF с помощью CIP.
ПРИМЕР 14
Реактивность CBTAU-27.1, 28.1, 43.1, 47.1, 47.2 и 49.1 по отношению к фосфопептидам
Результаты иммуногистохимического исследования для CBTAU-27.1 (а также CBTAU-43.1) и CBTAU-28.1 (а также CBTAU-46.1, 4 7.2, 49.1) позволяют предположить, что эти mAb вступают в реакцию с эпитопом на тау-белке, который присутствует в срезах нормальных тканей без AD, но утрачивается или маскируется в ходе формирования заболевания (фигура 5). Авторы настоящего изобретения выдвинули гипотезу, что это было обусловлено явлением фосфорилирования в пределах участка, которое приводит к маскировке эпитопа(эпитопов). Эксперименты, освещенные в примерах 12 и 13, показали, что это действительно было справедливым для 2 8.1. Таким образом, авторы настоящего изобретения желали конкретно определить сайт(сайты), которые могут быть потенциально намечены для фосфорилирования и обуславливать утрату реактивности CBTAU-28.1. Поскольку 47.1, 47.2 и 49.1 связываются с тем же участком на тау-белке, что и CBTAU-2 8.1 (т.е. 52-71), авторы настоящего изобретения решили протестировать также и эти mAb в данных экспериментах. Кроме того, авторы настоящего изобретения также произвели те же действия для CBTAU-43.1 и CBTAU-27.1, поскольку они ведут себя аналогично CBTAU-2 8.1, что выявляется в ходе IHC.
Тау-пептиды с одинарным и двойным фосфорилированием были предназначены для охвата всех потенциальных сайтов фосфорилирования в участках 52-71 и 299-323 (участках связывания для CBTAU-28.1 и CBTAU-27.1 соответственно). mAb CBTAU-27.1 и CBTAU-43.1 тестировали в отношении пептидов, перечисленных в таблице 30 и 32. 9б-луночные планшеты для ELISA, покрытые стрептавидином (Pierce), покрывали фосфорилированными тау-пептидами, как подробно описано в примере 9. Очищенные IgG к тау-белку разводили до 5 мкг/мл в TBS, содержащем 0,25% BSA, и титровали в 5-кратных разведениях. Контрольное антитело и вторичные антитела использовали, как подробно описано в примере
9. Реактивность антител при 1 мкг/мл определяли посредством ELISA и оценивали как отсутствие связывания (-), слабую (-/+), среднюю ( + ) или сильную ( + +) . (-) для среднего значения двух показателей O.D. при 450 нм < 0,3; (-/+) для > 0,5 и < 1,0; (+) для > 1,0 и < 1,5; ( + +) для > 1,5. Результаты для каждого антитела показаны в таблицах 30-34 и на фигуре 8.
реактивности в ходе ELISA
Пептид
SEQ ID NO.
Результат
tau 299-369
331
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIH HKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI THVPGGGNK
tau 299-323
458
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCG
ptau 299-323 р305
503
HVPGGG(pS)VQIVYKPVDLSKVTSKCG
ptau 299-323 рЗЮ
504
HVPGGGSVQIV(pY)KPVDLSKVTSKCG
ptau 299-323 р316
505
HVPGGGSVQIVYKPVDL(pS) KVTSKCG
ptau 299-323 р319
506
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKV(pT)SKCG
ptau 299-323 р320
507
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT(pS)KCG
ptau 299-323 р305, 310
508
HVPGGG(pS)VQIV(pY)KPVDLSKVTSKCG
ptau 299-323 р305, 316
509
HVPGGG(pS)VQIVYKPVDL(pS)KVTSKCG
ptau 299-323 р305, 320
510
HVPGGG(pS)VQIVYKPVDLSKV (pT)SKCG
ptau 299-323 р305, 321
511
HVPGGG(pS)VQIVYKPVDLSKVT(pS)KCG
ptau 299-323 рЗЮ, 316
512
HVPGGGSVQIV(pY)KPVDL(pS)KVTSKCG
ptau 299-323 рЗЮ, 320
513
HVPGGGSVQIV(pY)KPVDLSKV(pT)SKCG
ptau 299-323 рЗЮ, 321
514
HVPGGGSVQIV(pY)KPVDLSKVT(pS)KCG
ptau 299-323 р316, 320
515
HVPGGGSVQIVYKPVDL(pS) KV(pT)SKCG
-/ +
ptau 299-323 р316, 321
516
HVPGGGSVQIVYKPVDL(pS) KVT(pS)KCG
ptau 299-323 р320,
517
HVPGGGSVQIVYKPVDLSKV(pT)(pS)KCG
321
Таблица
33.
CBTAU-4
7.1
CBTAU-47.2:
пептиды
для
определения реактивности в ходе ELISA
реактивности в ходе ELISA
Пептид
SEQ ID NO.
Результат
tau 42-103
325
GLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTA E DVTAP LVD E GAP GKQAAAQ P HT EIPEGTTA
tau 48-71
518
LQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPT
ptau 48-71 (р71)
519
LQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTP(pT)
ptau 48-71 (рбЗ)
520
LQTPTEDGSEEPGSE(pT)SDAKSTPT
ptau 48-71 (p61)
521
LQTPTEDGSEEPG(pS)ETSDAKSTPT
ptau 48-71 (p56)
522
LQTPTEDG(pS)EEPGSETSDAKSTPT
ptau 48-71 (p52)
523
LQTP(pT)EDGSEEPGSETSDAKSTPT
ptau 48-71 (p68)
524
LQTPTEDGSEEPGSETSDAK(pS)TPT
ptau 48-71 (p69)
525
LQTPTEDGSEEPGSETSDAKS(pT)PT
-/ +
ptau 48-71 (Ser64)
526
LQTPTEDGSEEPGSET(pS)DAKSTPT
ptau 48-71 (p61,Ser64)
527
LQTPTEDGSEEPG(pS)ET(pS)DAKSTPT
ptau 48-71 (p61,p63)
528
LQTPTEDGSEEPG(pS)E(pT)SDAKSTPT
ptau 48-71 (p63,p64)
529
LQTPTEDGSEEPGSE(pT)(pS)DAKSTPT
Результаты для CBTAU-27.1 и CBTAU-43.1 демонстрируют, что фосфорилирование по S316 является достаточным для полного подавления реактивности (таблица 30 и таблица 32). Это позволяет предположить, что утрата реактивности по отношению к тау-белку в срезах тканей с AD (пример 11) может быть результатом фосфорилирования по S316, явления, которое может происходить на ранней стадии течения заболевания. Для CBTAU-28.1, 47.1, 47.2, 49.1 фосфорилирование по S61 либо ТбЗ является достаточным для полного подавления реактивности. В совокупности результаты для CBTAU-2 8.1, 47.1, 47.2 и 49.1 позволяют предположить, что фосфорилирование по S61 и/или ТбЗ является механизмом, который обуславливает утрату этого эпитопа в ходе течения заболевания.
ПРИМЕР 15
Образование химерных mAb мыши/человека и изотипов mAb человека к тау-белку
Для тестирования эффективности mAb человека к тау-белку в мышиной модели таупатий образовывали химерные антитела мыши/человека посредством замены Fc-участка человека на Fc IgGl мыши. Вкратце, CHI-участок IgGl человека амплифицировали из вектора pCB-IgG, используя праймеры прямой SteplHMchim и обратный SteplHMchim (таблица 35), с образованием фрагмента размером 0,95 т.п.о., содержащего сайт 5'-XhoI (фрагмента 1) . СН2- и СНЗ-домены (Fc-участок) IgGl мыши амплифицировали из синтезированной генетической конструкции, используя праймеры прямой Step2HMchim и обратный Step2HMchim (таблица 30), с образованием фрагмента размером 0,82 т.п.о. (фрагмента 2). Третий фрагмент (фрагмент 3), который включает в себя сайт 3'-
Drain, образовывали путем амплификации поли-А-участка вектора pCB-IgG, используя праймеры прямой Step3HMchim и обратный Step3HMchim (таблица 30) . Эти три фрагмента соединяли в одну кассету посредством ПЦР с перекрывающимися праймерами с образованием перекрывающегося фрагмента размером 2,3 т.п.о, содержащего СН1 человека, за которым расположены СН2-СНЗ-домены мыши. Перекрывающийся фрагмент затем клонировали с помощью сайтов Xhol и Drain в вектор pCB-IgG CBTAU-7.1 с образованием химерного CBTAU-7.1 мыши/человека, содержащего вариабельный, СН1-, шарнирный и Ck-участки человека, за которыми расположены СН2 и СНЗ-участки мыши. Химерные CBTAU-22.1, 24.1, 27.1, 28.1, 47.1, 47.2, 46.1, 49.1 и 43.1 затем образовывали путем расщепления химерной конструкции CBTAU-7.1 и конструкций pCB-IgG CBTAU mAb человека с помощью Xhol и Xbal, и соответствующие фрагменты субклонировали. Нуклеотидные последовательности для всех конструкций проверяли согласно стандартным методикам, известным специалистам в данной области. Химерные антитела затем экспрессировали и очищали, как подробно описано в примере 5, используя белок G на агарозе вместо белка А.
Таблица 35. ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ХИМЕРНЫХ ФОРМ МЫШИ/ЧЕЛОВЕКА
ID праймера ПОСЛЕДОВАТЕЛБНОСТБ ДНК (5'-3') SEQ ID NO: Прямой SteplHMchim TCTCCGCCGGTGAGTCTCGAGGC 53 0 Обратный SteplHMchim TGTCCCTGGATGCAGGCTACTCTAGG 531 Прямой Step2HMchim AGAG TAG С С T G CAT С CAG G GACAG 532 Обратный Step2HMchim T С TAGAT CAT T TAC CAG GAGAG T G G GAGAG 533 Прямой Step3HMchim TCTCCTGGTAAATGATCTAGAGTTTAAACCGCTG 534 Обратный Step3HMchim AT G G С С СAC TAC G T GAAC CAT СAC С 535 ПРИМЕР 16.
Получение изотипов IgG2, 3 и 4
Как упоминалось в примере 3, все mAb CBTAU клонировали и экспрессировали в виде химерного IgGl человека независимо от их изначального изотипа. Для образования дополнительных вариантов изотипов человека (т.е. IgG2/3/4) участки СН1-СНЗ, соответствующие каждому изотипу IgG человека, амплифицировали
посредством ПЦР из синтезированной генетической конструкции, содержащей соответствующие последовательности константного участка, шарнирного участка и интрона. ПЦР-ампликоны содержали сайты 5'-Xhol и З'-DraIII, используемые для субклонирования фрагментов в соответствующую конструкцию антитела pCB-IgG CBTAU. Таким образом, для каждого mAb к тау-белку образовывали варианты изотипов IgG2, 3 и 4 человека. ПРИМЕР 17
Образование вариантов химерных моноклональных антител к тау-белку со сниженным риском и сконструированным Fc
Вариабельные участки тяжелой и легкой цепи (VH и VL) для каждого клона антитела к тау-белку, выделенного в примере 3, анализировали на наличие свободных цистеиновых остатков и потенциальных сайтов посттрансляционных модификаций, включающих сайты гликозилирования, дезамидирования и оксидирования. Для изменения этих сайтов использовали аминокислотные мутации, состоящие из структурно консервативных замен и/или замен в последовательностях зародышевого типа. Неконсервативные цистеиновые остатки в вариабельных участках подвергали мутации по типу замены на серии. Для сайтов гликозилирования использовали несколько мутаций, включая замену аспарагина на консервативный глутамин или мутации в последовательностях зародышевого типа. Модификации в сайтах дезамидирования включали замену аспарагиновой кислоты на аспарагин и серина или аланина на глицин. Сайты потенциального оксидирования не подвергали модификации. Для повышения аффинности связывания с FcRn и увеличения таким образом периода полужизни mAb IgGl in vivo создавали несколько мутаций, расположенных на границе между СН2 и СНЗ-участком. Эти мутации включали M252Y/S254T/T256E в комбинации с H433K/N434F (Vaccaro С. et al. , 2005) или T250Q/M428L (Hinton PR. et al., 2004), которые, как было показано, усиливают связывание IgGl с FcRn. Все замены создавали путем сайт-направленного мутагенеза согласно инструкциям производителя (QuickChange II, Agilent Technologies, № по кат. 200521). Нуклеотидные последовательности для всех конструкций проверяли согласно стандартным методикам, известным специалистам в данной области техники.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Круцелл Холланд Би.Ви.
<120> Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые специфично
связываются с белком тау, ассоциированным с микротрубочками
<130> 0239 WO 00 ORD
<160> 535
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 441
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly
1 5 10 15
Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His
20 25 30
Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu
35 40 45
Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser
50 55 60
Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val
65 70 75 80
Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu
85 90 95
Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro
100 105 110
Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val
115 120 125
Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly
130 135 140
Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro
145 150 155 160
Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro
165 170 175
Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly
180 185 190
Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser
195 200 205
Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys
210 215 220
Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys
225 230 235 240
Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val
245 250 255
Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly
260 265 270
Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln
275 280 285
Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser
305 310 315 320
Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln
325 330 335
Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser
340 345 350
Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn
355 360 365
Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala
370 375 380
Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser
385 390 395 400
Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser
405 410 415
Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val
420 425 430
Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu
435 440
<210> 2
<211> 410
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly
1 5 10 15
Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His
20 25 30
Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu
35 40 45
Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser
50 55 60
Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val
65 70 75 80
Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu
85 90 95
Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro
100 105 110
Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val
115 120 125
Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly
130 135 140
Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro
145 150 155 160
Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro
165 170 175
Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly
180 185 190
Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser
195 200 205
Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys
210 215 220
Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys
225 230 235 240
Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val
245 250 255
Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly
260 265 270
Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr
275 280 285
Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly
290 295 300
Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln
305 310 315 320
Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly
325 330 335
Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys
340 345 350
Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val
355 360 365
Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly
370 375 380
Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu
385 390 395 400
Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 405 410
<210> 3
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly
1 5 10 15
Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His
20 25 30
Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu
35 40 45
Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser
50 55 60
Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly
65 70 75 80
Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala
85 90 95
Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys
100 105 110
Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala
115 120 125
Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala
130 135 140
Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro
145 150 155 160
Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr
165 170 175
Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg
180 185 190
Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser
195 200 205
Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu
210 215 220
Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln
225 230 235 240
Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser
245 250 255
Asn Val Gln Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys
275 280 285
Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly
290 295 300
Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg
305 310 315 320
Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly
325 330 335
Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn
340 345 350
Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro
355 360 365
Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser
370 375 380
Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala
385 390 395 400
Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 405 410
<210> 4
<211> 383
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 4
Thr Ala Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His
1 5 10 15
Ala Gly Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr
20 25 30
Met His Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser
35 40 45
Pro Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu
50 55 60
Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Ala Glu Glu Ala Gly
65 70 75 80
Ile Gly Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr
85 90 95
Gln Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp
100 105 110
Lys Lys Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg
115 120 125
Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile
130 135 140
Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu
145 150 155 160
Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro
165 170 175
Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro
180 185 190
Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser
195 200 205
Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro
210 215 220
Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys
225 230 235 240
His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
245 250 255
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His
260 265 270
Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe
275 280 285
Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His
290 295 300
Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe
305 310 315 320
Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr
325 330 335
Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn
340 345 350
Val Ser Ser Thr Gly Ser lie Asp Met Val Asp Ser Pro Gin Leu Ala
355 360 365
Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu
370 375 380
<210> 5
<211> 385
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 5
Thr Ala Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His
1 5 10 15
Ala Gly Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr
20 25 30
Met His Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Ala Glu
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly
50 55 60
His Val Thr Gln Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly
65 70 75 80
Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala
85 90 95
Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala
100 105 110
Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser
115 120 125
Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro
145 150 155 160
Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro
165 170 175
Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val
180 185 190
Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu
195 200 205
Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys
210 215 220
Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn
225 230 235 240
Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro
245 250 255
Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile
260 265 270
His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu
275 280 285
Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile
290 295 300
Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu
305 310 315 320
Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile
325 330 335
Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu
340 345 350
Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln
355 360 365
Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly
370 375 380
Leu
385
<210> 6
<211> 352
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6
Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly
1 5 10 15
Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His
Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Ala Glu Glu Ala
35 40 45
Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val
50 55 60
Thr Gln Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp
65 70 75 80
Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro
85 90 95
Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg
100 105 110
Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly
115 120 125
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
130 135 140
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro
145 150 155 160
Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys
165 170 175
Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met
180 185 190
Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu
195 200 205
Lys His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val
210 215 220
Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His
225 230 235 240
His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp
245 250 255
Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr
260 265 270
His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr
275 280 285
Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val
290 295 300
Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser
305 310 315 320
Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu
325 330 335
Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu
340 345 350
<210> 7 <211> 24
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 7
atggactgga cctggaggtt cctc 24
<210> 8 <211> 24 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 8
atggactgga cctggaggat cctc 24
<210> 9 <211> 24 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 9
atggactgga cctggagggt cttc 24
<210> 10 <211> 22 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 10
atggactgga cctggagcat cc 22
<210> 11
<211> 26
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 11
ggacatactt tgttccacgc tcctgc
<210> 12 <211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 12
aggtgtccag tgtcaggtgc agc 23
<210> 13 <211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 13
aggtgtccag tgtgaggtgc agc 23
<210> 14 <211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 14
aggtgtccag tgtcaggtac agc 23
<210> 15 <211> 21 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 15
gcagctccca gatgggtcct g 21
<210> 16 <211> 21 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 16
tcaaccgcca tcctcgccct c 21
<210> 17 <211> 26 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 17
gtctgtctcc ttcctcatct tcctgc 26
<210> 18 <211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 18
ggaaggtgtg cacgccgctg gtc 23
<210> 19
<211> <212> <213>
21 ДНК
синтетическая
<400> 19
atgagggtcc ccgctcagct c
<210> 20
<211> 21
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 20
atgagggtcc ctgctcagct c 21
<210> 21
<211> 21
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 21
atgagagtcc tcgctcagct c
<210> 22
<211> 20
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 22
tggggctgct aatgctctgg 20
<210> 23
<211> 23
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 23
cctcctgcta ctctggctcc cag
<210> 24
<211> 26
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 24
tctctgttgc tctggatctc tggtgc 26
<210> 25
<211> 24
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 25
ctcctcagct tcctcctcct ttgg
<210> 26 <211> 26
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 26
aactcattgg gtttctgctg ctctgg
<210> 27
<211> 26
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 27
gtttctcgta gtctgctttg ctcagc 26
<210> 28
<211> 23
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 28
gtgctgtcct tgctgtcctg ctc
<210> 29
<211> 26
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 29
gcactctccc ctgttgaagc tctttg 26
<210> 30
<211> 20
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 30
ctcctcgctc actgcacagg
<210> 31
<211> 20
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 31
ctcctctctc actgcacagg 20
<210> 32
<211> 20
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 32
ctcctcactc gggacacagg
<210> <211> <212>
33 20 ДНК
<213> синтетическая
<400> 33
atggcctgga cccctctctg 20
<210> 34 <211> 24 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 34
atggcatgga tccctctctt cctc 24
<210> 35
<211> 24 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 35
cactagtgtg gccttgttgg cttg 24
<210> 36
<211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 36
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtgc agctggtgca gtc 43
<210> 37
<211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 37
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtcc agctggtgca gtc 43
<210> 38
<211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 38
cctgtctgga attcagcatg gcccaggttc agctggtgca gtc 43
<210> 39
<211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 39
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtcc agcttgtgca gtc 43
<210> 40
<211> 46
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 40
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtca ccttgaggga gtctgg
<210> 41 <211> 46 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 41
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtca ccttgaagga gtctgg 46
<210> 42 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 42
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtgc agctggtgga gtc 43
<210> 43 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 43
cctgtctgga attcagcatg gccgaggtgc agctgttgga gtc 43
<210> 44 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 44
cctgtctgga attcagcatg gccgaggtgc agctggtgga gtc 43
<210> 45 <211> 45 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 45
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtac agctggtgga gtctg 45
<210> 46 <211> 41 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 46
cctgtctgga attcagcatg gcccagstgc agctgcagga g 41
<210> 47
<211> 44
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 47
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtgc agctacagca gtgg
<210> 48 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 48
cctgtctgga attcagcatg gccgaggtgc agctggtgca gtc 43
<210> 49 <211> 45 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 49
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtac agctgcagca gtcag 45
<210> 50 <211> 45 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 50
cctgtctgga attcagcatg gcccaggtgc agctggtgca atctg 45
<210> 51 <211> 37 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 51
tcgggcctcg agactcacct gaggagacgg tgaccag 37
<210> 52 <211> 39 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 52
tcgggcctcg agactcacct gaagagacgg tgaccattg 39
<210> 53 <211> 38 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 53
tcgggcctcg agactcacct gaggagacgg tgaccgtg 38
<210> 54
<211> 46
<212> ДНК
<213> синтетическая
ccggtctaga gttttccatg gcggacatcc agatgaccca gtctcc
<210> 55
<211> 46
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 55
ccggtctaga gttttccatg gcggacatcc agttgaccca gtctcc 46
<210> 56
<211> 46
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 56
ccggtctaga gttttccatg gcggccatcc agttgaccca gtctcc 46
<210> 57
<211> 50
<212> ДНК
<213> синтетическая
<220>
<221> r
<222> (7)..(7)
<223> A или G
<220>
<221> r
<222> (7)..(7)
<223> a или g
<400> 57
ccggtctaga gttttccatg gcggatrttg tgatgactca gtctccactc 50
<210> 58
<211> 48
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 58
ccggtctaga gttttccatg gcggaaattg tgttgacgca gtctccag 48
<210> 59
<211> 48
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 59
ccggtctaga gttttccatg gcggaaattg tgttgacaca gtctccag 48
<210> 60
<211> 48
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 60
ccggtctaga gttttccatg gcggaaatag tgatgacgca gtctccag
<210> 61 <211> 46 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 61
ccggtctaga gttttccatg gcggacatcg tgatgaccca gtctcc 46
<210> 62 <211> 46 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 62
ccggtctaga gttttccatg gcggaaacga cactcacgca gtctcc 46
<210> 63 <211> 48 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 63
ccggtctaga gttttccatg gcggaaattg tgctgactca gtctccag 48
<210> 64 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 64
cgcaaagtgc acttacgttt gatttccacc ttggtccctt ggc 43
<210> 65 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 65
cgcaaagtgc acttacgttt gatctccagc ttggtcccct ggc 43
<210> 66 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 66
cgcaaagtgc acttacgttt gatatccact ttggtcccag ggc 43
<210> 67
<211> 43
<212> ДНК
<213> синтетическая
cgcaaagtgc acttacgttt gatctccacc ttggtccctc cgc
<210> 68 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 68
cgcaaagtgc acttacgttt aatctccagt cgtgtccctt ggc 43
<210> 69 <211> 49 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 69
ccggtctaga gttttccatg gcgaatttta tgctgactca gccccactc 49
<210> 70 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 70
ccggtctaga gttttccatg gcgtcctatg tgctgactca gcc 43
<210> 71 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 71
ccggtctaga gttttccatg gcgcagtctg tgctgacgca gcc 43
<210> 72 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 72
ccggtctaga gttttccatg gcgcagtctg tcgtgacgca gcc 43
<210> 73 <211> 43 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 73
ccggtctaga gttttccatg gcgcagtctg ccctgactca gcc 43
<210> 74
<211> 45
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 74
ccggtctaga gttttccatg gcgtcttctg agctgactca ggacc
<210> 75 <211> 46 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 75
ccggtctaga gttttccatg gcgtcctatg agctgactca gccacc 46
<210> 76
<211> 27
<212> ДНК
<213> синтетическая
<220> <221> y
<222> (13)..(13)
<223> c или t
<400> 76
ctcagaggag ggygggaaca gagtgac 27
<210> 77 <211> 1766 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 77
aaacgtaagt gcactttgcg gccgctagga agaaactcaa aacatcaaga ttttaaatac 60
gcttcttggt ctccttgcta taattatctg ggataagcat gctgttttct gtctgtccct 120
aacatgccct gtgattatcc gcaaacaaca cacccaaggg cagaactttg ttacttaaac 180
accatcctgt ttgcttcttt cctcaggaac tgtggctgca ccatctgtct tcatcttccc 240
gccatctgat gagcagttga aatctggaac tgcctctgtt gtgtgcctgc tgaataactt 300
ctatcccaga gaggccaaag tacagtggaa ggtggataac gccctccaat cgggtaactc 360
ccaggagagt gtcacagagc aggacagcaa ggacagcacc tacagcctca gcagcaccct 420
gacgctgagc aaagcagact acgagaaaca caaagtctac gcctgcgaag tcacccatca 480
gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga gagtgttagt taacggatcg 540
atccgagctc ggtaccaagc ttaagtttaa accgctgatc agcctcgact gtgccttcta 600
gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca 660
ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc 720
attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata 780
gcaggcatgc tggggatgcg gtaatctgct tagggttagg cgttttgcgc tgcttcgcta 840
ggtggtcaat attggccatt agccatatta ttcattggtt atatagcata aatcaatatt 900
ggctattggc cattgcatac gttgtatcca tatcataata tgtacattta tattggctca 960
tgtccaacat taccgccatg ttgacattga acggggtcat tagttcatag cccatatatg ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc cccatagtaa cgccaatagg gactttccat actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat aatgacggta aatggcccgc ctggcattat acttggcagt acatctacgt attagtcatc tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aactccgccc cattgacgca aatgggcggt agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc catagaagac accgggaccg atccagcctc gtaccgagct cggatccgcc accatggcct gcacctgtct ggaattcagc atggcc ttattgacta gttattaata gtaatcaatt gagttccgcg ttacataact tacggtaaat cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc cgcggccggg aacggtgcat tggaagcttg gccccggatt tctgtgggcc ctggtcatca
1020 1080 1140 1200
1260
1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1766
<210> 78
<211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая <400> 78
ggccatgctg aattccagac agg
<210> 79 <211> 29
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 79
aaacgtaagt gcactttgcg gccgctagg
<210> 80
<211> 25
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 80
actctgttcc crccctcctc tgagg
<210> 81 <211> 23 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 81
ccggtctaga gttttccatg gcg
<210> 82 <211> 19 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 82
tcgggcctcg agactcacc 19
<210> 83
<211> 330
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 83
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 84
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 84
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105
<210> 85
<211> 18
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 85
catgtcaccg gggtgtgg
<210> 86 <211> 21 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 86
tcacagggga tgttagggac a 21
<210> 87
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Arg Ser Tyr Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser 115
<210> 88
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 88
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 89 <211> 354 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 89
caggtccagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagc agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcccgt attaatagtg atgggagtga cacaaactac 180
gcggactccg tgaagggccg attcaccttc tccagagaca acgccaagaa cacattgtat 240
ctgcagatga ccagtctgcg agccgaggac acggctatat attactgtac aagggggcgc 300
agttatggtt tctttgacta ctggggccag ggagccctgg tcaccgtctc ctca
354
<210> 90
<211> 324
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 90
gacatcgtga tgacccagtc tccagacacc ctgtctttgt ctccagggga gagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gattattagc agcaactact tagcctggta ccaacaacaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac aggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgcgaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta cctcacctcg gacgttcggc 300
caggggacca agctggagat caaa 324
<210> 91
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 91
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Trp Glu Ala Gly Cys Arg Pro Cys Tyr Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 92
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 92
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 93 <211> 372
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 93
caggtgcagc tggtggagtc gaggggaggc gtggtccagc ctgggacgtc cctgagactc 60 tcctgtaaag cgtctggatt caccttcagc acttatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg cgctggagtg ggtggcagtt atatggtttg atggaaataa caaatattat
180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggctgttt attactgtgc gagagattgg 300 tgggaagccg ggtgccggcc ctgttatttc tttgactact ggggccaggg aagcctggtc 360 accgtctcct ca 372
<210> 94
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 94
gaaacgacac tcacgcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aaggtgctca tttactgggc ttctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggaccgattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtcct 300
ccgctcactt tcggcggagg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 95
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Ala Ala Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Glu Asn Ser Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Lys Asp Ala His Tyr Tyr Asp Arg Asn Arg Asn Asn Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 96
<211> 107 <212> БЕЛОК <213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 96
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ala Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 97 <211> 381 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 97
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactattgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaatcaag atggaagtgc tgcatactat 180
gtggactctg tgaggggccg attcaccatc tccagagaca gcgccgagaa ctcactgaat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatgca 300
cattactacg atcgtaatcg taataattat tactactact ttgacttctg gggccaggga 360
accctggtca ccgtctcctc a 381
<210> 98 <211> 321 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 98
gaaatagtga tgacgcagtc tccggccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc gccaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
gggcaggctc ccaggctcct catctattct gcatccacca gggccactgg tgtcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 99 <211> 127 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 99
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Asn Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Arg Met Ser Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Glu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Ser Gly Ser Ser Trp Gln Asn His Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 100
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 100
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Asn Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 101
<211> 381
<212> ДНК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 101
caggtgcagc tgttggagtc gggcccagga ctggtgaacc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtaatt actactggag ctggatccgg 120
cagcccgccg ggaagggact ggagtggatt gggcgtatgt ctagtagtgg gagcaccaac 180
tacaacccct ccctcaagag tcgagtcacc atgtcagaag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagt tgagctctgt gaccgccgca gacacggccg tgtattactg tgccagagaa 300
tcgggtagca gctggcaaaa tcactactac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 102
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 102
gaaattgtgt tgacacagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccaac 60
attaattgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaatcagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
cctctcactt tcggcggagg gaccaaagtg gatatcaaa 339
<210> 103
<211> 123
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 103
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Val Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Glu Ser Gly Arg Trp Gly Gly Gly Thr Leu Tyr Gly Ala His Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 104 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 104
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 105 <211> 369
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 105
caggtacagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagg aactatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggc attagtagtg acggtaatac attctacgca 180
gactccgtga agggccggtt caccgtctcc agagacaatt ccaagaacac gttgtatctg 240
caagtgaaca gtctgagagc cgacgacacg gccgtatatt actgtgcgaa agagagtggc 300
cgttggggtg gtggaacctt atacggggcg cactactggg gccagggaac cccggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 106
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 106
gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtttgtta tacaactcca ataataagaa ctacttaact 120
tggtaccagc aaaaaccagg acagcctcct aagttgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtagt 300
cctctcactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 107
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 107
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Val Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Arg Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Ser Met Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly His Cys Asp Gly Thr Thr Cys Ser Arg Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 108 <211> 112 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 108
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
20 25 30
Ser Gly His Lys Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Val Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Thr
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 109
<211> 363
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 109
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcccc agtgaaggtc 60
tcctgcgaga cttctggata caggttcagc gactacaatg tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gataggacgg atcagcccta acagcggtgg cacaaagtat 180
gcacagaagt ttcaaggcag ggtcaccatg accagggaca tgtccatgaa cacagcctac 240
atggagctga gcgggctgag atctgacgac acggccgtgt attattgtgt aagaggacat 300
tgtgatggta ccacttgctc tcgtgcctac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 110
<211> 336
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 110
gatgttgtga tgacgcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagaagtg gacacaagta tttgcattgg 120
tacctgcaga ggccagggca gtctccacag gtcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggctt tattactgca tgcaaactct acaaaccccc 300
tggacattcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336
<210> 111
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 111
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Val Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Thr Trp Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Gly Arg Ile Pro Asp Val Thr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 112 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 112
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Leu Leu Tyr Asp
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr His Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 113
<211> 360
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 113
caggtccagc ttgtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgtacgg cctctggata cactttcacc ggctattatt tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatggggtgg gtcaacccta ggagtggtgg cacaagctat 180
ccaccgaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcaa cacagcctac 240
atggacctga cctggctgac atctgacgac acggccgtct attattgtgc ggtcggaaga 300
atacctgatg taactgcttt cgatatctgg ggccagggga caccggtcac cgtctcctca 360
<210> 114
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 114
gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcga gagtctttta tacgactcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagttgctca tttattgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg agacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttatcact gtcaacaata tttcagtact 300
ccttggacgt tcggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 115
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 115
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Glu Met Arg Lys Pro Gly Glu
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Thr Ala Trp Val Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Ser Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr His Pro Ser Val
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Met Ser Thr Asp Ser Ser Leu Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asp Ala Arg Val Asp Ala Gly Trp Gln Leu Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 116 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 116
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Arg
20 25 30
Asp Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Phe Phe Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asp Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Tyr Phe Asn Thr Pro His Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 117
<211> 366
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 117
caggttcagc tggtggagtc tggaccggag atgagaaagc ccggggagtc tctgaaaatt 60
tcctgcaaga cttctggcta catatttagc gactactgga ctgcctgggt gcgccagctg 120
cccgggaagg gccttcagtg gatgggaatc atctattctg gtgactctga taccagatat 180
catccgtccg tccaaggcca cgtcaccatg tcaaccgaca gttccctcac caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accggcatat attactgtgc gcgccttgat 300
gcaagagttg atgctggatg gcaattagat tcgtggggcc aggggaccct ggtcaccgtc 360
tcttca 366
<210> 118
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 118
gacatccagt tgacccagtc tccagattcc ctggctgtgt ctctgggcga gcgggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgttttc tccagggaca acaataaaaa ctacctagct 120
tggtaccagc acaaatcagg gcagcctcct aagttgctct ttttctgggc gtccagtcgt 180
gaatctgggg tctcagaccg attcagcggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcgacaacc tgcaggctga agatgtggca ctttattact gtcaacatta ttttaatact 300
ccccacaatt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 119
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 119
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Pro Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Arg Pro Ser Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 120 <211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Glu Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Pro Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 121
<211> 363
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 121
caggtgcagc tacagcagtc aggagcagaa gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtgagg cctctggata cagcttcacc aattactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccggtaaag gcctggagtg gatgggaatc atctatcctg gtgactctga caccagatac 180
agtccgccct tccaaggcca ggtcaccatc acagccgaca ggtccatcac caccgcctac 240
ttggagtgga gcagtctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc aagagttggg 300
agaccttcta aaggaggctg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 122
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 122
gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgtg agtccagcca gactctttta tacagttcca acgaaaagaa ctacctagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagttgctca tttcctgggc ttctaccccg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agtgggtctg ggacaagttt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga ggatgtggca gtttattact gtcagcaata ttataacagt 300
ccatacactt ttggccaagg gacacgactg gagattaaa 339
<210> 123 <211> 126 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 123
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser His Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Thr Thr Met Ile Glu Gly Lys Thr Lys Leu Asn Tyr
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 124 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 124
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 125 <211> 378 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 125
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgtcg cctctggaat caccttcagt gactcctaca tgagctggat ccgccagact 120
ccagggaagg ggctagagtg gctttcatac attagtcgta gtagttctca cacaaattac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ttcactatat 240
ctccaaatga atagcctgag aggcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagtccag 300
acaactatga tagaagggaa aacgaaactt aactactttg actactgggg ccagggaacc 360
caggtcaccg tctcctca 378
<210> 126 <211> 339 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 126
gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggtcacc 60
atcacctgcg agtccagcca cagtctttta tacaggtcca acaataggaa ctacttagct 120
tggtaccagc aaaaaccaag acagcctcct aagttgctca tttactgggc atctacccgg 180
gagtccgggg tcccagaccg attcagcggc agcgggtctg agacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcgggctga agatgtggcg gtatattact gtcaacaatt ttatactact
300
ccttacactt ttggccaagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 127 <211> 126 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser His Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Thr Thr Met Ile Glu Gly Lys Thr Lys Leu Asn Tyr
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 128
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством
ПЦР, и последовательности человека
<400> 128
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 129 <211> 378 <212> ДНК
<213> искусственная <220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 129
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgtcg cctctggaat caccttcagt gactcctaca tgagctggat ccgccagact 120
ccagggaagg ggctagagtg gctttcatac attagtcgta gtagttctca cacaaattac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ttcactatat 240
ctccaaatga atagcctgag aggcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagtccag 300
acaactatga tagaagggaa aacgaaactt aactactttg actactgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcctca 378
<210> 130 <211> 339 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 130
gccatccagt tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggtcacc 60
atcagctgcg agtccagcca cagtctttta tacaggtcca acaataagaa ctacttagct
120
tggtaccagc agaaaccaag acagcctcct aagttgctca tttactgggc atctacccgg 180
gagtccgggg tcccagaccg attcagcggc agcgggtctg agacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcgggctga agatgtggca gtgtattact gtcaacaatt ttatactact 300
ccttacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 131 <211> 122
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 131
Gln Leu Val Gln Ser Glu Gly Gly Leu Ala Glu Pro Gly Gly Ser Leu
1 5 10 15
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg
35 40 45
Ile Lys Ser Lys Val Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Thr Leu Ile His Cys Asp Leu Ser Ala Cys Leu Pro His Phe Trp
100 105 110
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 132
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 132
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 133 <211> 378
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 133
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgtcg cctctggaat caccttcagt gactcctaca tgagctggat ccgccagact 120
ccagggaagg ggctagagtg gctttcatac attagtcgta gtagttctca cacaaattac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ttcactatat 240
ctccaaatga atagcctgag aggcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagtccag 300
acaactatga tagaagggaa aacgaaactt aactactttg actactgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcctca 378
<210> 134
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 134
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggtcacc 60
atcagctgcg agtccagcca cagtctttta tacaggtcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccaag acagcctcct aagttgctca tttactgggc atctacccgg 180
gagtccgggg tcccagaccg attcagcggc agcgggtctg agacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcgggctga agatgtggca gtgtattact gtcaacaatt ttatactact 300
ccttacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 135
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Cys Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Val Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Pro Arg Thr Asp Gly Asp Asn Ser Ile Gly Tyr Phe Glu
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> <211> <212> 136 113 БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 136
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Ser Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 137 <211> 372 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 137
caggtgcagc tggtgcagtc tggaggagag gtgaaaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctgggta ctcctttagt aactactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg catgggaatc atctatcctg gtgactctga taccacatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatt tctgccgaca agtccgtcag taccacctac 240
ctacaatgga gcagcctgaa ggcctcggac agcgccatgt attattgtgc gaggctaccc 300
cgtacagatg gcgacaattc catcggctac tttgaatatt ggggccaggg aaccatggtc 360
accgtctctt ca 372
<210> 138
<211> 345
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 138
gaaattgtgt tgacacagtc tccagcctcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acagtgagaa ctacttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctccc aagttgctca tttactgggc gtctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
ccattcactt tcggccaagg gacacgactg gagattaaac gtaag 345
<210> 139
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 139
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Pro Ala Pro Arg Leu Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
<210> 140 <211> 108 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 141 <211> 357 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 141
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtactactac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca atgtcaagaa ctctctgtat 240
ctgcaaatgc acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgt cccggccccc 300
cggttgggtg ggagctacac ttactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 142
<211> 324
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 142
gacatccaga tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggca cctcaccgct cactttcggc 300
ggagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 143
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 143
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Thr Asp Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Asn Val Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
His Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asp Ser Asn Arg Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Ser Asn Leu Lys Ile Asp Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Leu Gly Gly Gly Thr Tyr Gly Trp Gly Arg Gly
100 105 110
<210> 144 <211> 108
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 144
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Ala Gly Leu Arg Asn Asn
20 25 30
Asp Gly Asp Ile Leu Leu Ser Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Phe Tyr Arg Val Ser Arg Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Asn Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Asn Ser Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Arg Gly
85 90 95
Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105
<210> 145 <211> 357 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 145
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cgttttcact gacgcctgga tgagctgggt ccgccagagt 120
cccgggaagg ggccggagtg gcttggccgt atcaaaagta aaaatgtcgg tgagacaaca 180
gactacgctg aacacgtgag aggcagattt accatcgcaa gagatgattc caaccgcact 240
ctatatctac aaatgagcaa cctgaaaatc gacgacacag ccgtctatta ttgtaccact 300
ggactgggag gagggaccta cggatggggc cggggaaccc gggtcaccgt ctcttca 357
<210> 146
<211> 324
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 146
gaaattgtgt tgacacagtc tccactctcc ctgcccgcca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgca ggtcgagtgc aggcctccga aacaacgatg gtgacatcct cttgagttgg 120
tttcatcagc ggccaggcca gtctccgagg cgcctatttt atagagtttc taggcgtgac 180
tctggagtcc cagacagatt caacggcagt gggtcagcca ctgatttcac actgagaatc 240
aattctgtgg aggctgaaga tgttggcatt tactactgca tgcgaggacc atattggggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 147
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asn Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Thr Asn Arg Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro Arg Ile Gly Ala Arg Val Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
<210> 148 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 148
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Lys
20 25 30
Ser Asn Asn Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Thr Thr Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 149 <211> 357 <212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 149
caggtacagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagagtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cctctggatt caacttcagt atttatgaga tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attaccaatc gaggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgcccagaa ctcactgtat
240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggctgttt attactgtgc gaaaccccgt
300
ataggagctc gtgtatttga tgtctggggc caagggacaa tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 150
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 150
gacatccagt tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gactctttta tacaagtcca acaatgagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcca aagctgctca tttactgggc atctactcgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga ggatgtggca gtttactact gtcagcaata ttttactact 300
gcgctcactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 151
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220> <223>
Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 151
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Val Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Met Phe Leu Asp His
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Glu Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gly Ser Phe
50 55 60
Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Arg Ser Val Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100
105
110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 152
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 152
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Thr Pro Lys Leu Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 153 <211> 363
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 153
caggtgcagc tggtgcagtc tggagcagtg gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtgagg cttctggata catgttcctc gatcactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatgggaatc atctttcctg aggactctga taccagatat 180
agtgggtcct tcgaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca ggtccgtcaa caccgtctac 240
ctggagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attattgtgc gagagtctca 300
gtagttcgta aagggggctg gttcgaccca tggggccagg gaaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 154
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством
ПЦР, и последовательности человека
<220>
<221> другой_признак
<222> (5)..(6)
<223> n представляет собой a, c, g или t
<400> 154
gaaanncaac tgacgcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtctttta tacacctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagactcct aaactgctca ttatctgggc ctctacccga 180
gaatccgggg tccctgaccg attcactggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttataatagt 300
ccgtacactt ttggccaagg gacacgactg gagattaaa 339
<210> 155 <211> 121 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 155
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ala Asp His
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Gly Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Val Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Ser Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 156 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 156
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Thr Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Ala Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Thr Pro Glu Leu Leu Ile Thr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Thr Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 157 <211> 363
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 157
caggtacagc tggtggagtc tggagcagaa ctgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtgagg catctggata catctttgcc gatcactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatgggaatc atctttcctg gtgactctga tatcagatat 180
agtccgtcct tcgaaggcca ggtcaccatc tcagtcgaca ggtccgtcag taccgccttc 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttttgtgc gagagtcgca 300
gtagtgcgta aagggggctg gttcgactcc tggggccagg gaacccgggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 158
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 158
gaaattgtga tgacccagtc tccagagtcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccaccca gagtctttta tggagcgcca acaacaagaa ctacttagct 120
tggtaccggc agaaaccacg acagactcct gaactgctca ttacgtgggc ttccacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcaccagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattatt gtcaacaata ttataatagt 300
ccgtacactt ttggccaagg gacacgactg gagattaaa 339
<210> 159
<211> 126
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Trp Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Leu Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Ala Ser Leu
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Thr Ser Leu Lys Val Ser Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Arg Asn Cys Ser Gly Thr Thr Cys Tyr Pro Arg Trp
100 105 110
Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 160 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 160
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Tyr Ser
20 25 30
Gly Asn Ser Lys Asp Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Arg Leu Leu Val Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Arg Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr His Ser Thr Pro Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 161
<211> 378
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 161
caggtgcagc tggtgcagtc tggggcagag gtgaaaaagc cgtgggagtc tctgaagatc 60
tcctgtttgg cttctggata cgactttgcc tcctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg ggtggggatc atctatcctg atgactctga taccagatac 180
aatgcgtcac tagaaggccg ggtcaccatg tcagtcgaca cgtccaccaa taccgcctac 240
ctgcagtgga ccagcctgaa ggtctcggac accggcatgt attactgtgc gagacgggat 300
cgcaattgta gtgggactac gtgttatccg aggtggttcg actcctgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcttca 378
<210> 162
<211> 339
<212> ДНК
<213> искусственная
<220>
<223> Комбинация последовательности, образованной посредством ПЦР, и последовательности человека
<400> 162
gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtcttttc tacagcggca acagtaagga cttcttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct cgcttgctcg tttactgggc atctacccgg 180
gattccgggg tccctgagcg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt tactctcacc 240
atcagccgcc tgcaggctga agatgtggct ctttattact gtcaccaata tcatagtact 300
cctctctctt tcggcggagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 163
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 163
Ser Tyr Trp Met His 1 5
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 164
Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 165
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 165
Gly Arg Ser Tyr Gly Phe Phe Asp Tyr 1 5
<210> 166
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 166
Arg Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 167
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 167
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
<210> 168
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 168
Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro Arg Thr 1 5
<210> 169
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Thr Tyr Gly Met His 1 5
<210> 170
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 170
Val Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 171
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 171
Asp Trp Trp Glu Ala Gly Cys Arg Pro Cys Tyr Phe Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 172
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 172
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 173
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 173
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5
<210> 174
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Gln Gln Tyr Tyr Ser Pro Pro Leu Thr 1 5
<210> 175
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 175
Asp Tyr Trp Met Ser 1 5
<210> 176
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 176
Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Ala Ala Tyr Tyr Val Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 177
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 177
Asp Ala His Tyr Tyr Asp Arg Asn Arg Asn Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Phe
<210> 178
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 178
Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ala Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 179
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 179
<210> 180
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 180
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Arg Thr 1 5
<210> 181
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 181
Ser Gly Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5
<210> 182
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 182
Arg Met Ser Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 183
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 183
Glu Ser Gly Ser Ser Trp Gln Asn His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 184
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 184
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5
<210> 185 <211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 185
Asn Tyr Ala Met Ser 1 5
<210> 186
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 186
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 187
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 187
Glu Ser Gly Arg Trp Gly Gly Gly Thr Leu Tyr Gly Ala His Tyr
1 5 10 15
<210> 188
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 188
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 189
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 189
Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Leu Thr 1 5
<210> 190
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Asp Tyr Asn Val His 1 5
<210> 191
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 191
Arg Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 192
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 192
Gly His Cys Asp Gly Thr Thr Cys Ser Arg Ala Tyr
1 5 10
<210> 193
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 193
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg Ser Gly His Lys Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 194
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 194
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
<210> 195
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 195
Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Trp Thr 1 5
<211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 196
Gly Tyr Tyr Leu His 1 5
<210> 197
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 197
Trp Val Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 198
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 198
Gly Arg Ile Pro Asp Val Thr Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 199
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 199
Lys Ser Ser Glu Ser Leu Leu Tyr Asp Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 200
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 200
Gln Gln Tyr Phe Ser Thr Pro Trp Thr 1 5
<210> 201 <211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 201
Asp Tyr Trp Thr Ala 1 5
<210> 202
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 202
Ile Ile Tyr Ser Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr His Pro Ser Val Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 203
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 203
Leu Asp Ala Arg Val Asp Ala Gly Trp Gln Leu Asp Ser
1 5 10
<210> 204
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 204
Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 205
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 205
Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5
<210> <211> <212> 206 9
БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 206
Gln His Tyr Phe Asn Thr Pro His Asn
<210> 207
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 207
Asn Tyr Trp Ile Gly 1 5
<210> 208
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 208
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Pro Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 209
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 209
Val Gly Arg Pro Ser Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 210
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 210
Glu Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Glu Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 211
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 211
Trp Ala Ser Thr Pro Glu Ser 1 5
<210> 212
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 212
Gln Gln Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr 1 5
<210> 213
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 213
Asp Ser Tyr Met Ser 1 5
<210> 214
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 214
Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser His Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 215
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 215
Val Gln Thr Thr Met Ile Glu Gly Lys Thr Lys Leu Asn Tyr Phe Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 216
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 217
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 217
Gln Gln Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
<210> 218
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 218
Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 219
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 219
Lys Ala Trp Met Ser
<210> 220
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 220
Arg Ile Lys Ser Lys Val Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Arg Gly
<210> 221 <211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 221
Leu Ile His Cys Asp Leu Ser Ala Cys Leu Pro His Phe
1 5 10
<210> 222
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 222
Asn Tyr Trp Ile Ala 1 5
<210> 223
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 223
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 224
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 224
Leu Pro Arg Thr Asp Gly Asp Asn Ser Ile Gly Tyr Phe Glu Tyr
1 5 10 15
<210> 225
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 225
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Ser Glu Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> <211> <212> 226
БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 226
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
<210> 227
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 227
Ser Tyr Ser Met Asn 1 5
<210> 228
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 228
Tyr Ile Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 229
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 229
Val Pro Ala Pro Arg Leu Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 230
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 230
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 231
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 231
Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro Leu Thr
<210> 232
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 232
Asp Ala Trp Met Ser 1 5
<210> 233
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 233
Arg Ile Lys Ser Lys Asn Val Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Glu His
1 5 10 15
Val Arg Gly
<210> 234
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 234
Gly Leu Gly Gly Gly Thr Tyr Gly
1 5
<210> 235
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 235
Arg Ser Ser Ala Gly Leu Arg Asn Asn Asp Gly Asp Ile Leu Leu Ser
1 5 10 15
<210> 236
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 236
Arg Val Ser Arg Arg Asp Ser 1 5
<210> 237 <211> 5
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 237
Met Arg Gly Pro Tyr 1 5
<210> 238
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 238
Ile Tyr Glu Met Asn 1 5
<210> 239
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 239
Tyr Ile Thr Asn Arg Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 240
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 240
Pro Arg Ile Gly Ala Arg Val Phe Asp Val
1 5 10
<210> 241
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 241
Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Lys Ser Asn Asn Glu Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> <211> <212> 242 9
БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 242
Gln Gln Tyr Phe Thr Thr Ala Leu Thr
<210> 243
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 243
Asp His Trp Ile Gly 1 5
<210> 244
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 244
Ile Ile Phe Pro Glu Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 245
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 245
Val Ser Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 246
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 246
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 247
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 247
Ile Ile Phe Pro Gly Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 248
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 248
Val Ala Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Ser
<210> 249
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 249
Lys Ser Thr Gln Ser Leu Leu Trp Ser Ala Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 250
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 250
Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5
<210> 251
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 251
Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Ala Ser Leu Glu
1 5 10 15
Gly
<211> <212> <213>
БЕЛОК
Homo sapiens
<400> 252
Arg Asp Arg Asn Cys Ser Gly Thr Thr Cys Tyr Pro Arg Trp Phe Asp
1 5 10 15
Ser
<210> 253
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 253
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Tyr Ser Gly Asn Ser Lys Asp Phe Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 254
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 254
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser 1 5
<210> 255
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 255
His Gln Tyr His Ser Thr Pro Leu Ser 1 5
<210> 256
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 256
gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaagctac 180
gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagaga
296
<210> 257
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 257
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Arg Ser Tyr Gly Phe Phe Asp Tyr 100 105
<210> 258 <211> 288 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 258
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtcta ttactgtcag cagcgtagca actggcat 288
<210> 259 <211> 98 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 259
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro
85 90 95
Arg Thr
<210> 260 <211> 296 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 260
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 261
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 261
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Trp Glu Ala Gly Cys Arg Pro Cys Tyr Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr
<210> 262 <211> 305 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 262
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
cctcc 305
<210> 263
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 263
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Pro Pro Leu Thr
100
<210> 264
<211> 296 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 264
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatattat 180
gcaaactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 265
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 265
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Ala Ala Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Glu Asn Ser Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala His Tyr Tyr Asp Arg Asn Arg Asn Asn Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Phe Asp Phe 115
<210> 266 <211> 287
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 266
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctcc 287
<210> 267
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 267
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ala Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr
<210> 268 <211> 291 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 268
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120
cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcacctac
180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc
240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgcggac gcggccgtgt attactgtgc g 291
<210> 269 <211> 116 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 269
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Asn Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Arg Met Ser Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Glu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Ser Gly Ser Ser Trp Gln Asn His Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val 115
<210> 270
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 270
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Asn Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 100
<210> 271
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 271
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaga 296
<210> 272
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 272
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Val Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Glu Ser Gly Arg Trp Gly Gly Gly Thr Leu Tyr Gly Ala His Tyr
100 105 110
<210> 273
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 273
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ser Pro Leu Thr 100
<210> 274
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 274
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 275
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 275
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
Pro Val Lys Val Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Arg Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Ser Met Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly His Cys Asp Gly Thr Thr Cys Ser Arg Ala Tyr
100 105 110
<210> 276
<211> 302
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 276
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct 300
cc 302
<210> 277
<211> 102
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 277
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
20 25 30
Ser Gly His Lys Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Val Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Thr
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr 100
<210> 278
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 278
caggtccagc ttgtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcact agctatgcta tgcattgggt gcgccaggcc 120
cccggacaaa ggcttgagtg gatgggatgg atcaacgctg gcaatggtaa cacaaaatat 180
tcacagaagt tccagggcag agtcaccatt accagggaca catccgcgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 279
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 279
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Val Asn Pro Arg Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Thr Trp Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Gly Arg Ile Pro Asp Val Thr Ala Phe Asp Ile 100 105
<210> 280
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 280
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Leu Leu Tyr Asp
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr His Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ser Thr Pro Trp Thr 100
<210> 281
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 281
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagaca 296
<210> 282
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Met Arg Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Thr Ala Trp Val Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Ser Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr His Pro Ser Val
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Met Ser Thr Asp Ser Ser Leu Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asp Ala Arg Val Asp Ala Gly Trp Gln Leu Asp Ser
100 105 110
<210> 283
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 283
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Arg
20 25 30
Asp Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Phe Phe Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asp Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His
85 90 95
Tyr Phe Asn Thr Pro His Asn 100
<211> 110 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 284
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Pro Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Arg Pro Ser Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro
100 105 110
<210> 285
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 285
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Glu Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Pro Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr 100
<210> 286 <211> 296 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 286
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtta cacaaactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 287
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 287
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser His Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Thr Thr Met Ile Glu Gly Lys Thr Lys Leu Asn Tyr
100 105 110
Phe Asp Tyr 115
<210> <211> <212> 288 103 БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 288
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr 100
<210> 289
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 289
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser His Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Thr Thr Met Ile Glu Gly Lys Thr Lys Leu Asn Tyr
Phe Asp Tyr
115
<210> 290
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 290
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr 100
<210> 291 <211> 302 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 291
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
ga 302
<210> <211> <212> 292 111 БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 292
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Glu Pro Gly Gly Ser Leu
1 5 10 15
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Lys Ala Trp Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg
35 40 45
Ile Lys Ser Lys Val Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Thr Leu Ile His Cys Asp Leu Ser Ala Cys Leu Pro His Phe
100 105 110
<210> 293
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 293
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Glu Ser Ser His Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
<210> 294 <211> 294
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 294
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294
<210> 295 <211> 113 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 295
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Cys Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Val Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Pro Arg Thr Asp Gly Asp Asn Ser Ile Gly Tyr Phe Glu
100 105 110
Tyr
<210> 296
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Ser Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 100
<210> 297
<211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 297
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296
<210> 298
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 298
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Pro Ala Pro Arg Leu Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr 100 105
<210> 299 <211> 290 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 299
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc 290
<210> 300 <211> 98 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 300
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro
85 90 95
Leu Thr
<210> 301 <211> 302 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 301
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
ga 302
<210> 302 <211> 108 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 302
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Thr Asp Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Asn Val Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
His Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asp Ser Asn Arg Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Ser Asn Leu Lys Ile Asp Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Gly Leu Gly Gly Gly Thr Tyr Gly 100 105
<210> 303
<211> 302
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 303
gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta tacagtgatg gaaacaccta cttgaattgg 120
tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt ataaggtttc taaccgggac 180
tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240
agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaggtac acactggcct 300
cc 302 <210> 304
<211> 98
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 304
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Ala Gly Leu Arg Asn Asn
20 25 30
Asp Gly Asp Ile Leu Leu Ser Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Phe Tyr Arg Val Ser Arg Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Asn Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Asn Ser Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Arg Gly
85 90 95
Pro Tyr
<210> 305 <211> 296 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 305
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagaga
296
<210> 306
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 306
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asn Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Thr Asn Arg Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro Arg Ile Gly Ala Arg Val Phe Asp Val 100 105
<210> 307
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 307
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Lys
20 25 30
Ser Asn Asn Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Thr Thr Ala Leu Thr 100
<210> 308 <211> 296
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 308
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagaca 296
<210> 309 <211> 110 <212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 309
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Val Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Met Phe Leu Asp His
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Glu Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gly Ser Phe
50 55 60
Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Arg Ser Val Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Pro
100 105 110
<210> <211> <212> 310 103 БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 310
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Thr Pro Lys Leu Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr 100
<210> 311
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 311
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ala Asp His
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Gly Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Val Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Val Val Arg Lys Gly Gly Trp Phe Asp Ser
<210> 312
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 312
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Thr Gln Ser Leu Leu Trp Ser
20 25 30
Ala Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Thr Pro Glu Leu Leu Ile Thr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Thr Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Ser Pro Tyr Thr 100
<210> 313
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 313
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Trp Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Leu Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Ala Ser Leu
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Thr Ser Leu Lys Val Ser Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Arg Asn Cys Ser Gly Thr Thr Cys Tyr Pro Arg Trp
100 105 110
Phe Asp Ser 115
<210> 314
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 314
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Phe Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Tyr Ser
20 25 30
Gly Asn Ser Lys Asp Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Arg Leu Leu Val Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Arg Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr His Ser Thr Pro Leu Ser
100
<210> 315
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (9)..(9)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg
1 5 10 15
Ser Arg Thr
<210> 316
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 316
Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg
1 5 10 15
Ser Arg Thr
<210> 317
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (9)..(9)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 317
Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro
1 5 10 15
Thr Arg
<210> 318
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 318
Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro
1 5 10 15
Thr Arg
<210> 319
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 319
Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Thr
<210> 320
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 320
Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Thr
<210> 321
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 321
Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr
20 25 30
Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro
35 40 45
Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro
50 55 60
Met Pro Asp Leu
<210> 322
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 322
Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu
1 5 10 15
Asp Val Thr
<210> 323
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (13)..(13)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 323
Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp
1 5 10 15
Val Thr Ala Pro 20
<210> 324
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ <400> 324
Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr
1 5 10 15
Ala Pro
<210> 325
<211> 62
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 325
Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu
1 5 10 15
Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu
20 25 30
Asp Val Thr Ala Pro Leu Val Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala
35 40 45
Ala Ala Gln Pro His Thr Glu Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala
50 55 60
<210> 326
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 326
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 327
<211> 53
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 327
Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser
1 5 10 15
Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val
20 25 30
Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu
35 40 45
Ala Lys Gln Gly Leu 50
<210> 328
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 328
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 329
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 329
Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu
1 5 10 15
Gln Thr
<210> 330
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 330
Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys
1 5 10 15
Ser Arg Leu Gln Thr 20
<210> 331
<211> 71
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 331
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His
20 25 30
Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe
35 40 45
Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His
50 55 60
Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys 65 70
<210> 332
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (6)..(6)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 332
Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
<210> 333
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (8)..(8)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 333
Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala
1 5 10 15
Lys Ser
<210> 334
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 334
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 335
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> Фосфорилирование
<222> (11)..(12)
<223> Фосфорилирование серина в положении аминокислоты 11
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 335
Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro
1 5 10 15
Gly Thr
<210> 336
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 336
Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro
1 5 10 15
Gly Thr Pro
<210> 337
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (15)..(15)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 337
Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro
1 5 10 15
Gly Thr Pro Gly Ser Arg 20
<210> 338
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 338
Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro
1 5 10 15
Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 339
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 339
Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly
1 5 10 15
Thr Pro
<210> <211> <212> 340 21
БЕЛОК
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 340
Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly
1 5 10 15
Thr Pro Gly Ser Arg 20
<210> 341
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 341
Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly
1 5 10 15
Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20
<210> 342
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 342
Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr
1 5 10 15
Pro Gly Ser Arg 20
<210> 343
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (11)..(11)
<400> 343
Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ser Arg
<210> 344
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 344
Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ser Arg Ser Arg Thr 20
<210> 345
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
<210> 346
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ <400> 346
Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr
20 25
<210> 347
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 347
Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser
1 5 10 15
Arg Thr
<210> 348
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (11)..(11)
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 348
Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser
1 5 10 15
Arg Thr Pro Ser Leu
<210> 349
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 349
Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser
1 5 10 15
Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr 20
<210> 350
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 350
Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser
1 5 10 15
Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro
20 25
<210> 351
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 351
Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser
1 5 10 15
Arg Thr Pro Ser 20
<210> 352
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 352
Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
Ser Leu
<210> 353
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (13)..(13)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 353
Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
<210> 354
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (15)..(15)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 354
Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
Ser Leu Pro Thr Pro Pro
<210> 355
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 355
Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg
<210> 356
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 356
Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
Ser Leu Pro Thr
<210> 357
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (13)..(13)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 357
Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Thr Pro Pro
<210> 358
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (15)..(15)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 358
Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Thr Pro Pro Thr Arg 20
<210> 359
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 359
Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 20 25
<210> 360
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 360
Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met
1 5 10 15
Val Asp
<210> 361
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 361
Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met
1 5 10 15
Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala
<210> 362
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 362
Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val
1 5 10 15
Asp Ser Pro
<210> 363
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 363
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro
<210> 364
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 364
Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln
1 5 10 15
Leu Ala Thr Leu 20
<210> 365
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 365
Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr
1 5 10 15
Leu Ala
<210> 366
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16) <223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 366
Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr
1 5 10 15
Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala 20
<210> 367
<211> 68
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 367
Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr
20 25 30
Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro
35 40 45
Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro
50 55 60
Met Pro Asp Leu 65
<210> 368
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 368
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 369
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (15)..(15)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 369
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg
<210> 370
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 370
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln
<210> 371
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 371
Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys
1 5 10 15
Ser Arg
<210> 372
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (13)..(13)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 372
Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys
1 5 10 15
Ser Arg Leu Gln
<210> 373
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg
1 5 10 15
Leu Gln
<210> 374
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 374
Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg
1 5 10 15
Leu Gln Thr
<210> 375
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 375
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val
<210> 376
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 376
Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser
1 5 10 15
Leu Gly Asn Ile
<210> 377
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 377
Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gln Val Glu 20
<210> 378
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 378
His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu
1 5 10 15
Asp Phe Lys Asp
<210> 379
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 379
Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile
1 5 10 15
Gly Ser Leu Asp
<210> 380
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 380
Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro
1 5 10 15
Gly Gly Gly Asn Lys 20
<210> 381
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 381
Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu
1 5 10 15
Glu Pro Gly Ser 20
<210> 382
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 382
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 383
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ <400> 383
Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 384
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 384
Glu Thr Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala
1 5 10 15
Pro Leu Val Asp
<210> 385 <211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 385
Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Gln Ala Ala Ala 20
<210> 386
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 386
Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu Ile
1 5 10 15
Pro Glu Gly Thr Thr Ala 20
<210> 387
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 387
Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ser Arg Ser Arg
<210> 388
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 388
Ala Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 389
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 389
Glu Ala Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> 390
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 390
Glu Pro Ala Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> <211> <212> <213>
391 26
БЕЛОК
синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 391
Glu Pro Pro Ala Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 392
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 392
Glu Pro Pro Lys Ala Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 393
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 393
Glu Pro Pro Lys Ser Ala Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
<210> 394
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 394
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> 395
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 395
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Ala Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> <211> <212> <213>
396 26
БЕЛОК
синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 396
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ala Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 397
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 397
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Ala Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 398
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Ala Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 399
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 399
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> 400
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 400
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ala Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> <211> <212> 401 26
БЕЛОК
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 401
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Ala Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 402
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 402
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Ala Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 403
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 403
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ala
1 5 10 15
<210> 404
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 404
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ala Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> 405
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 405
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Ala Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
<210> <211> <212> <213>
406 26
БЕЛОК
синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 406
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Ala Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 407
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 407
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Ala Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<210> 408
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 408
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Ala Ser Arg Ser Arg Thr
<210> 409
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 409
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ala Arg Ser Arg Thr
<210> 410
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 410
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Ala Ser Arg Thr
<210> <211> <212> <213>
411 26
БЕЛОК
синтетическая
<220> <221> <222>
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК (16)..(16)
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 411
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ala Arg Thr 20 25
<210> 412
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 412
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Ala Thr 20 25
<210> 413
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (19)..(19)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 413
Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser
1 5 10 15
<210> 414
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 414
Ala His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 415
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 415
Arg Ala Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 416
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 416
Arg His Ala Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 417
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 417
Arg His Leu Ala Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 418
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 418
Arg His Leu Ser Ala Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 419
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 419
Arg His Leu Ser Asn Ala Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 420
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 420
Arg His Leu Ser Asn Val Ala Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 421
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 421
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ala Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 422
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 422
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Ala Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 423
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Ala Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 424
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 424
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ala Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 425
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 425
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ala Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 426
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220> <221>
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 426
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Ala Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 427
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 427
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Ala Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 428
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 428
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Ala Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 429
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 429
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Ala
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 430
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 430
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ala Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 431
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 431
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 432
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 432
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Ala Leu Ala Thr Leu Ala 20
<210> 433
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 433
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Ala Ala Thr Leu Ala
<210> 434
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 434
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Ala Leu Ala 20
<210> 435
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 435
Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp
1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Ala Thr Ala Ala 20
<210> 436
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220> <221> <222>
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК (11)..(11)
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 436
Arg Ala Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 437
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 437
Arg Glu Ala Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 438
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 438
Arg Glu Pro Ala Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
<210> 439
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 439
Arg Glu Pro Lys Ala Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Pro Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr
<210> 440
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 440
Arg Glu Pro Lys Lys Ala Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr
<210> <211> <212> <213>
441 25
БЕЛОК
синтетическая
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ <220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18) <223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 441
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Ala Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 442
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 442
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Ala Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 443
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 443
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Ala Thr Pro Pro Lys Ser Pro
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 444 <211> 25 <212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 444
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Ala Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 445
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 445
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Ala Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 446
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 446
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 447
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 447
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Ala Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 448
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 448
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ala Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 449
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 449
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr
<210> 450
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 450
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ala Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr
<210> <211> <212> <213>
451 25
БЕЛОК
синтетическая
<220> <221>
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11) <223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 451
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ala Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 452
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 452
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Ala Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 453
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 453
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ala Arg Leu Gln Thr 20 25
<210> 454
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 454
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Ala Leu Gln Thr 20 25
<210> 455
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 455
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Ala Gln Thr 20 25
<210> 456
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 456
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Ala Thr 20 25
<210> 457
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (11)..(11)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 457
Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Ala 20 25
<210> 458
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 458
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 459
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 459
Ala Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 460
<211> 25 <212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 460
His Ala Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 461
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 461
His Val Ala Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 462
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 462
His Val Pro Ala Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 463
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 463
His Val Pro Gly Ala Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> 464
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 464
His Val Pro Gly Gly Ala Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 465
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 465
His Val Pro Gly Gly Gly Ala Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 466
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 466
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 467
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 467
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Ala Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<211> <212> <213>
БЕЛОК
синтетическая
<400> 468
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 469
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 469
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Ala Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 470
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 470
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Ala Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 471
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 471
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Ala Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 472
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Ala Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 473
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 473
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Ala Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 474
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 474
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Ala
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 475
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 475
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Ala Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 476
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 476
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ala Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 477
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 477
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Ala Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 478
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 478
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Ala Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 479
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 479
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Ala Ser Lys Cys Gly
20 25
<210> 480
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 480
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ala Lys Cys Gly 20 25
<210> 481
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 481
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Ala Cys Gly 20 25
<210> 482
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 482
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Ala Gly 20 25
<210> 483
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 483
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Ala 20 25
<210> 484
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 484
Ala Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 485 <211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 485
Thr Ala Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 486
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 486
Thr Glu Ala Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 487
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 487
Thr Glu Asp Ala Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 488
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 488
Thr Glu Asp Gly Ala Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 489
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
Thr Glu Asp Gly Ser Ala Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 490
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 490
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Ala Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 491
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 491
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Ala Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 492
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 492
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Ala Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 493
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 493
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ala Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
<210> 494
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 494
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Ala Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 495
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 495
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Ala Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 496
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 496
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ala Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 497
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 497
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 498
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 498
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Ala
1 5 10 15
Ser Thr Pro Thr 20
<210> 499
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 499
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ala Thr Pro Thr 20
<210> 500
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 500
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Ala Pro Thr 20
<210> 501
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 501
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala Thr 20
<210> <211> <212> 502 20
БЕЛОК
<400> 502
Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp Ala Lys
1 5 10 15
Ser Thr Pro Ala 20
<210> 503
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (7)..(7)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 503
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 504
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 504
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 505
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 506
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 506
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 507
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 507
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 508
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (7)..(7)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 508
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 509
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (7)..(7)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 509
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 510
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (7)..(7)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 510
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> 511
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (7)..(7)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 511
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> 512
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 512
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> <211> <212> <213>
513 25
БЕЛОК
синтетическая
<220> <221> <222>
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 513
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 514
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (12)..(12)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 514
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<210> 515
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 515
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
<210> 516
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (18)..(18)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 516
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> 517
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 517
His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp
1 5 10 15
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly
<210> <211> <212> <213>
518 24
БЕЛОК
синтетическая
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 519
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (24)..(24)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 519
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 520
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 520
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 521
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 521
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 522
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (9)..(9)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 522
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 523
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (5)..(5)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 523
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 524
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (21)..(21)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 524
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 525
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (22)..(22)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 525
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 526
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 526
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 527
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 528
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (14)..(14)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 528
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 529
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (16)..(16)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<220>
<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК
<222> (17)..(17)
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<400> 529
Leu Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr 20
<210> 530 <211> 23
<212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 530
tctccgccgg tgagtctcga ggc 23
<210> 531 <211> 26 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 531
tgtccctgga tgcaggctac tctagg 26
<210> 532 <211> 24 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 532
agagtagcct gcatccaggg acag 24
<210> 533 <211> 30 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 533
tctagatcat ttaccaggag agtgggagag 30
<210> 534 <211> 34 <212> ДНК
<213> синтетическая
<400> 534
tctcctggta aatgatctag agtttaaacc gctg 34
<210> 535
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> синтетическая
<400> 535
Ala Thr Gly Gly Cys Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Ala
1 5 10 15
Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys 20 25
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Моноклональное антитело, при этом антитело связывается с отложениями тау-белка в ткани головного мозга человека с AD.
2. Антитело по п 1, где антитело является химерным антителом, содержащим антигенсвязывающую вариабельную область из антитела человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область IgGl человека, и при этом химерное антитело является отличным от антитела человека.
3. Антитело по п. 1, где антитело является химерным антителом, содержащим антигенсвязывающую вариабельную область из антитела человека, которая специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную константную область IgGl человека, при этом константная область химерного антитела является отличной от константной области антитела человека.
4. Антитело по п. 1, где антитело является химерным
антителом, содержащим встречающуюся в природе
антигенсвязывающую вариабельную область человека, которая
специфично связывается с тау-белком, и рекомбинантную
константную область антитела IgGl человека.
5. Антитело по п. 1, где антитело является химерным антителом, содержащим встречающиеся в природе вариабельные области человека легкой и тяжелой цепей из антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
6. Антитело по п. 1, где антитело является химерным антителом, содержащим вариабельные области тяжелой и легкой цепей из встречающегося в природе антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
7. Антитело по п. 1, где антитело является химерным антителом, содержащим вариабельные области тяжелой и легкой цепей из антитела человека и константные области тяжелой и легкой цепей рекомбинантного IgGl человека.
8. Антитело по любому из пп. 1-7, где антитело а) связывается с отложениями тау-белка в ткани головного мозга
1.
человека с AD, b) не связывается с тау-белком в нормальной ткани головного мозга человека и с) не связывается с отложениями тау-белка в ткани головного мозга с прогрессирующим надъядерным параличем (PSP).
9. Антитело по п. 8, где антитело является
фосфоспецифичным.
10. Антитело по п. 8 или п 9, где моноклональное антитело
связывается с пептидом, содержащим аминокислотную
последовательность с SEQ ID N0:315 или SEQ ID N0:353, и не
связывается с пептидом, содержащим аминокислотную
последовательность с SEQ ID N0: 316 или SEQ ID N0:356.
11. Антитело по любому из пп. 8-10, где антитело выбрано из группы, состоящей из а) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:163, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:164 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:165, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:166, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:167 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:168; b) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:169, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:170 и CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:171, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174.
12. Антитело по любому из пп. 8-11, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:87 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:88.
13. Антитело по любому из пп. 8-11, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:91 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:92.
14. Антитело по любому из пп. 1-7, где антитело выбрано из
группы, состоящей из а) антитела, содержащего CDRl-область
тяжелой цепи с SEQ ID N0:175, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ
ID N0:176 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:177, CDRl-
область легкой цепи с SEQ ID N0:178, CDR2-oблacть легкой цепи с
SEQ ID N0:179 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:180, b)
антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID
N0:181, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:182 и CDR3-
область тяжелой цепи с SEQ ID N0:183, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:172, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:184, с) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:185, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:18 6 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:187, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:188, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:189, d) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:190, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:191 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:192, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:193, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:194 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:195, е) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:196, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:197 и CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:198, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:199, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:200, f) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:216, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217; g) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:213, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:214 и CDRЗ-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:215, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:174 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217; h) антитела, содержащего CDRl-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:219, CDR2-oблacть тяжелой цепи с SEQ ID N0:220 и CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID N0:221, CDRl-область легкой цепи с SEQ ID N0:218, CDR2-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:173 и CDRЗ-oблacть легкой цепи с SEQ ID N0:217.
15. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:95 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:96.
16. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:99 и
15.
антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:100.
17. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:103 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:104.
18. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:107 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:108.
19. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:111 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:112.
20. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:123 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:124.
21. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:127 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:128.
22. Антитело по любому из пп. 1-7, содержащее антигенсвязывающий участок VH с SEQ ID N0:131 и антигенсвязывающий участок VL с SEQ ID N0:132.
23. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по любому из предыдущих пунктов 1-22.
24. Функциональный вариант антитела по любому из предыдущих пунктов 1-23.
25. Иммуноконъюгат, содержащий антитело по любому из пп. 1-22, и/или антигенсвязывающий фрагмент по п. 23, и/или функциональный вариант по п. 24, при этом иммуноконъюгат дополнительно содержит по меньшей мере одно терапевтическое средство и/или детектируемое средство.
26. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающий фрагмент по п. 23 и/или функциональный вариант по п. 24.
27. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 26.
28. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 27.
29. Способ получения антитела по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающего фрагмента по п. 23 и/или функционального варианта по п. 24, включающий культивирование клетки-хозяина по
25.
п. 2 8 и выделение антитела или его фрагмента, полученных с помощью клетки-хозяина.
30. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающий фрагмент по п. 23, функциональный вариант по п. 2 4 и/или иммуноконъюгат по п. 25, при этом фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
31. Антитело по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающий фрагмент по п. 23, функциональный вариант по п. 24, иммуноконъюгат по п. 2 5 или фармацевтическая композиция по п. 30 для применения в качестве лекарственного препарата.
32. Химерное антитело по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающий фрагмент по п. 23, функциональный вариант по п. 24, иммуноконъюгат по п. 2 5 или фармацевтическая композиция по п. 3 0 для применения в профилактике, или лечении, или их комбинации в отношении болезни Альцгеймера, или расстройств памяти, и/или когнитивных расстройств, ассоциированных с тау-белком.
33. Набор, содержащий по меньшей мере одно химерое антитело по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающий фрагмент по п. 23, функциональный вариант по п. 24, иммуноконъюгат по п. 25, или фармацевтическую композицию по п. 30, или их комбинацию.
34. Способ обнаружения или диагностики болезни Альцгеймера, или расстройств памяти, и/или когнитивных расстройств, ассоциированных с тау-белком, включающий а) осуществление анализа в отношении уровня антигена, представляющего собой тау-белок, в образце с применением химерного антитела по любому из пп. 1-22, антигенсвязывающего фрагмента по п. 23, функционального варианта по п. 2 4 или иммуноконъюгата по п. 25, Ь) обнаружение или диагностику болезни Альцгеймера, или расстройств памяти, и/или когнитивных расстройств с применением биологического образца от человека.
35. Способ по п. 34, где биологический образец от человека
представляет собой периферическую кровь, сыворотку крови,
плазму крови, мочу, спинномозговую жидкость, биоптат ткани,
операционный препарат, тонкоигольные пунктаты, аутопсийный материал, супернатант клеточной культуры, выделенные клетки, супернатант, полученный при ферментации, или гомогенат ткани.
По доверенности
539093
194-212 (pS202.pT205)
194-212
-1 11 i- i- i
0,001 0.01 0,1 1
IgG Log [мкг/мл]
CBTAU-8.1
1 94-212 (pS202, pT205) 194-212
6 1
s •t
204-221 ipT212.S214l
204-221
0.001
0.01 0,1 1
IgG Log [мкг/мл]
Фиг. 1 a-c
С В ТА U 1 8 .1
d О 11
200-217 {pS210) 1 86-253 200-217
0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
Фиг. 1 d-f
CBTAU-24,1
CBTAU-27.1
CBTAU-28.1
-•- 406-429 (pS416. pS422) -a- 389-441
CBTAU-42.1
-•- 406-429 (pS416. pS422) -B- 389-441
Я 2-
с 1-d
-m- 299-369
-о- 194-212 (pS202, pT205)
о- -•
.Ш....Ж....Ш.
.?¦¦¦¦P....J3..
-; 1
406-42:9 (pS416. pS422)
-в- 389-441
CBTAU-45.1
I 2
d 1
04.
406-429 (pS416, pS422) 389-441
0.001 0.1 10
IgG Log [мкг/мл]
CBTAU-47.1
Фиг. 1 p-r
CBTAU-49.1
С 04
42-103
224-241 (pT231, pS235)
-i-1 I I 11111 1-пгттпп 1-S I I lllll 1-I I I lllll 1-I I I I
0.001 0.01 0,1
IgG Leg [мкг/мл]
TTT]
AT 8
3 1
E О
194-212 (pS202, pT205)
194-21 2
I I lllll 1-I I 111 III 1-I I I lllll 1-I I I I I III 1-I I I 11 III
0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл}
10 100
• iPHF
? ePHF
A rTau
¦ Актин
S 2-о
• iPHF
? ePHF
a rTau
¦ Актин
0-1
a nni n m n 1 IgG Log [мкг/мл]
o.oi од i IgG Log [мкг/мл]
I III!
CBTAU-16.1
CBTAU-18.1
• iPHF
? ePHF
A rTau
¦ Актин
d 1
-• • ¦ *-
* iPHF
? ePHF
* rTau
¦ Актин
T | | 1 III 11II | 1-! ! 11 Mlj
0.001 0,01 0,1 1
d) IgG Log [мкг/мл]
Фиг. 2 a-d
CBTAU-20.1
CB-TAU-22.1
о 2-
• iPHF
? ePHF
A rTau
¦ Актин
Е с о
Oi О
A rTau
? ePHF
• iPHF
¦ Актин
-а-i-щ.-f-~H.
0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [МКГ/МЛ]
0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
о If) -*
• iPHF
о ePHF
A rTau
¦ Актин
= 2-
• iPHF
? ePHF
A rTau
¦ Актин
0,001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
о О
I , ¦ ¦
• iPHF
о ePHF
A rTau
¦ Актин
E 2
• iPHF
? ePHF
A rTau
¦ Актин
0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
iPHF ePHF rTau iPHF ePHF rTau iPHF ePHF rTau
= i
AT 8
AT 100
HT7
iPHF ePHF rTau iPHF ePHF rTau
iPHF ePHF
rTau
CBTAU-7.1 CBTAU-18.1 CBTAU-22.1
iPHF ePHF rTau iPHF ePHF rTau iPHF ePHF rTau
ш 1t
CBTAU-24.1 CBTAU-27.1 CBTAU-28.1
2,0
I U
1 1.0
О 0,5
0,0
A6897: роде те пепт. (аа 299-369} Неродственный пепт.
А8119: {аа 299-318) V1158-19: (аа 309-328) V1158-20: (аа 319-338) V1158-21: (аа 329-348) V1158-22: (аа 339-358) V1158-13:(аа 349-369)
0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
CBTAU-28.1
# А6940: роде тв пепт. (аа 42-103)
О Неродственный пепт.
? 2722-2: (аа 42-61)
¦ А7731: (аа 52-71)
А 2722-4: (аа 62-81)
Д 2722-5: (аа 72-91)
Ў 2722-1: (аа 82-103)
0.0001 0,001 0,01 0.1 1
b) IgG Log [мкг/мл]
ш 2-1
CBTAU-43.1
, А6897: роде тв. пепт. (аа 299-369)
щ Неродственный пепт.
А А8119: (аа 299-318)
? V1158-19: (аа 309-328)
Д V1158-20: (аа 319-338)
v V1158-21: (аа 329-348)
Ў V1158-22: (аа 339-358)
о V1158-13:(aa 349-369)
0,0001 0,001 0,01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
s в
TICS 6
A6940: роде те, пепт. (аа 42-103) Неродственный пепт.
2722-2: {аа 42-61) А7731: (аа 52-71) 2722-4: (аа 62-81) 2722-5: (аа 72-91) 2722-1: {аа 82-103)
А6940: родств. пепт. (аа 42-103) Неродственный пепт.
2722-4 2722-5: 2722-1
2722-2: (аа 42-61) А7731: (аа 52-71)
(аа 62-81) (аа 72-91) (аа 82-103)
IgG Log [мкг/мл]
CBTALM7.2
* А6940: родств. пепт. (аа 42-103)
с Неродственный пепт.
? 2722-2: (аа 42-61)
¦ А7731: (аа 52-71)
д 2722-4: (аа 62-81)
Д 2722-5: (аа 72-91)
Ў 2722-1: (аа 82-103)
Фиг. 4 d-f
CBTAU-49.1
IgG Log [мкг/мл]
Фиг. 4 g
. - Ш
1 . I.- Г* 1
3 ' 8
Э 6 2 ?
Фиг. 5a
Без AD
С AD
Км AD
С AD
Без AD
С AD
CQ U
ш и
mAb иютипический контроль
ATS mAb
CBTAU-28.1 mAb
Ш11
mAb тотнпическнй контроль
AT8 mAb
CBTAU-28.1 mAb
W3184 W3173 W3171 W3169 W3140
A6897: родств. пепт. (аа 299-369) Неродственный пепт. W2843-2: нефосф (аа 299-323)
фосф (S316) фосф (S305; S316) фосф (Y308; S316)
фосф (S316; Т319) фосф (S316; S320)
W9743 (Т319; S320)
0.0001 0.001 0.01 0.1 1
IgG Log [мкг/мл]
CBTAU-28.1
¦ А6940: родств. пепт. (аа42-103)
? Неродственный пепт.
• А8474: нефосф. (аа 48-71)
о А8481:фосф. (S61)
А А8480: фосф. (Т63)
д W3075: фосф. (S64)
Ў W3432: фосф. (S61;S64)
ч А9691:фосф. (S6LT63)
¦ А9692 (Т63: S64)
CBTAU-43.1
W3184 W3173 W3171 W3169 W3140
A6897: родств. пепт. (аа 299-369) Неродственный пепт. W2843-2: нефосф. (аа 299-323)
фосф. (S316) фосф. (S305;S316) фосф. (Y309;S316) фосф. (S316;T319) фосф. (S316;S320)
W9743 (T319; S320)
IgG Log [мкг/мл]
CBTAU-47.2
•г.
А6940: родств. пепт. (аа 42-103) Неродственный пепт.
нефосф. (аа 48-71) фосф.(Б61)
фосф. (ТбЗ)
А8474 А8481 А8480 \/?3075:фосф. (S64)
CBTAU-49.1
¦ А6940: родств. пепт. (аа 42-103)
с Неродственный пепт.
• А8474: нефосф.(аа 48-71)
о А8481:фосф.(Б61)
* А8480:фосф.(Т63)
д Л3075:фосф. (S64)
4 W2428(T69)
Фиг. 8 d-f
Ill
Ill
<400> 54
<400> 54
<400>
<400>
<220>
<220>
<220>
<220>
<220>
Thr Leu Val Thr Val Ser
Thr Leu Val Thr Val Ser
115
Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
115
<210> 164
<210> 164
<400> 169
<400> 169
<400> 169
<400> 169
<400> 169
<400> 169
<400> 174
<400> 174
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
<400> 190
<400> 190
<210> 196
<210> 196
<210> 196
<210> 196
<210> 196
<210> 196
<400> 216
<400> 216
<400> 216
<400> 216
<400> 216
<400> 216
<210> 252
<210> 252
<210> 252
<210> 252
<210> 252
<210> 252
<210> 252
10 15
10 15
50 55 60
50 55 60
<400> 282
<400> 282
<210> 284
<210> 284
100
110
105
100
110
105
100
110
105
100
110
105
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
Phe Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
100
100
<400> 296
<400> 296
100
110
105
<400> 315
<400> 315
<220>
<220>
<213>
синтетическая
<213>
синтетическая
345
<400>
345
<400>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Ser Leu Pro Thr
Ser Leu Pro Thr
373
<400>
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr
20 25
398
<400>
398
<400>
<213>
синтетическая
<213>
синтетическая
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 20 25
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Ala 20 25
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Ala 20 25
<220>
<220>
423
<400>
423
<400>
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
<223> ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<220>
<220>
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<220>
<220>
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<220>
<220>
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<220>
<220>
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr 20 25
<220>
<220>
<221>
<221>
<210> 468
<210> 468
<400> 472
<400> 472
<400> 489
Ser Thr Pro Thr 20
Ser Thr Pro Thr 20
<213> синтетическая
<213> синтетическая
<400> 505
<400> 505
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<400> 518
<400> 518
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<400> 518
<400> 518
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<400> 518
<400> 518
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<400> 518
<400> 518
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly 20 25
<400> 518
<400> 518
<400> 527
<400> 527
112
112
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
1/21
CBTAU-7.1
2/21
2/21
2/21
2/21
2/21
2/21
3/21
3/21
Фиг. I g-i
Фиг. I g-i
4/21
CBTAU-41.1
4/21
CBTAU-41.1
Фиг. 1 j-1
Фиг. 1 j-1
4/21
CBTAU-41.1
4/21
CBTAU-41.1
Фиг. 1 j-1
Фиг. 1 j-1
4/21
CBTAU-41.1
4/21
CBTAU-41.1
Фиг. 1 j-1
Фиг. 1 j-1
4/21
CBTAU-41.1
4/21
CBTAU-41.1
Фиг. 1 j-1
Фиг. 1 j-1
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
5/21
CBTAU-43.1
5/21
CBTAU-43.1
Фиг. 1 ПН)
Фиг. 1 ПН)
6/21
CBTAU-46.1
3-,
6/21
CBTAU-46.1
3-,
6/21
CBTAU-46.1
3-,
6/21
CBTAU-46.1
3-,
7/21
7/21
Фиг. 1 s-t
Фиг. 1 s-t
7/21
7/21
Фиг. 1 s-t
Фиг. 1 s-t
7/21
7/21
Фиг. 1 s-t
Фиг. 1 s-t
7/21
7/21
Фиг. 1 s-t
Фиг. 1 s-t
7/21
7/21
Фиг. 1 s-t
Фиг. 1 s-t
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
8/21
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
3-\
9/21
3-\
9/21
Фиг. 2 e-j
Фиг. 2 e-j
10/21
10/21
Фиг. 3
Фиг. 3
10/21
10/21
Фиг. 3
Фиг. 3
10/21
10/21
Фиг. 3
Фиг. 3
10/21
10/21
Фиг. 3
Фиг. 3
10/21
10/21
Фиг. 3
Фиг. 3
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU-27.1
11/21
CBTAU-27.1
11/21
Фиг. 4 а-с
Фиг. 4 а-с
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
CBTAU46.1
12/21
13/21
13/21
14/21
14/21
14/21
14/21
15/21
15/21
Фиг. 5Ь
Фиг. 5Ь
15/21
15/21
Фиг. 5Ь
Фиг. 5Ь
16/21
16/21
Фиг. 5с
Фиг. 5с
17/21
17/21
Фиг. 5d
Фиг. 5d
17/21
17/21
Фиг. 5d
Фиг. 5d
18/21
18/21
Фиг. 6
Фиг. 6
19/21
19/21
CBTAU-27.1
20/21
CBTAU-27.1
20/21
Фиг. 8
Фиг. 8
CBTAU-27.1
20/21
CBTAU-27.1
20/21
Фиг. 8
Фиг. 8
CBTAU-27.1
20/21
CBTAU-27.1
20/21
Фиг. 8
Фиг. 8
CBTAU-27.1
20/21
CBTAU-27.1
20/21
Фиг. 8
Фиг. 8
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21
CBTAU-47.1
21/21