[RU]

В вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы, соединения и композиции для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, посредством введения субъекту специфического ингибитора фактора комплемента В (CFB).

(57) Реферат / Формула:

В вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы, соединения и композиции для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, посредством введения субъекту специфического ингибитора фактора комплемента В (CFB).

---

Евразийское (21) 201692204 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.04.28
(22) Дата подачи заявки 2015.05.01
(51) Int. Cl.
C12N 5/00 (2006.01) A61K38/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
(54) КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ФАКТОРА КОМПЛЕМЕНТА B
(31) 61/987,471; 62/076,273
(32) 2014.05.01; 2014.11.06
(33) US
(86) PCT/US2015/028916
(87) WO 2015/168635 2015.11.05
(88) 2016.01.07
(71) Заявитель:
ИОНИС ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.
(US)
(72) Изобретатель:
Пракаш Тража П., Сэт Пунит П., Свэйз Эрик Э., Гроссмэн Тамар Р., Маккалеб Майкл Л., Ватт Эндрю Т., Фрэйер Сьюзан М. (US)
(74) Представитель:
Карпенко О.Ю., Лыу Т.Н., Угрюмов В.М., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Клюкин В.А., Строкова О.В., Христофоров А.А. (RU)
(57) В вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы, соединения и композиции для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, посредством введения субъекту специфического ингибитора фактора комплемента В (CFB).
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ФАКТОРА
КОМПЛЕМЕНТА В
Перечень последовательностей
Настоящее изобретение зарегистрировано вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей представлен в виде файла под названием BIOL0251WOSEQ_ST25.txt, созданного 28 апреля 2015 года, размером 204 Кб. Информация о перечне последовательностей в электронном формате в полном объеме включена в настоящий документ посредством ссылки.
Область техники
В вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы, соединения и композиции для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, посредством введения субъекту специфического ингибитора фактора комплемента В (CFB).
Уровень техники
Система комплемента представляет собой часть врожденной иммунной системы хозяина, участвующую в лизинге чужеродных клеток, усилении фагоцитоза антигенов, агрегации антиген-несущих агентов и привлечении макрофагов и нейтрофилов. Систему комплемента подразделяют на три пути инициации - классический, лектиновый и альтернативный пути - которые сходятся у компонента СЗ с образованием ферментного комплекса, известного как СЗ-конвертаза, которая расщепляет СЗ на СЗа и СЗЬ. СЗЬ через CFB связывается с СЗ-конвертазой и приводит к образованию С5-конвертазы, которая расщепляет С5 на С5а и С5Ь, что инициирует мембраноатакующий каскад, приводящий к формированию мембраноатакующего комплекса (MAC), содержащего компоненты С5Ь, С6, С7, С8 и С9. Мембраноатакующий комплекс (MAC) образует трансмембранные каналы и разрушает двойной фосфолипидный слой клеток-мишеней, приводя к лизису клеток.
В гомеостатическом состоянии альтернативный путь непрерывно активируется на нижнем "холостом" уровне в результате активации альтернативного пути спонтанным гидролизом СЗ и выработкой СЗЬ, который образует С5-конвертазу.
Сущность изобретения
Система комплемента опосредует врожденный иммунитет и играет важную роль в нормальной воспалительной реакции на травму, но ее дисрегуляция может вызывать тяжелое повреждение. Активация альтернативного пути комплемента выше конститутивного "холостого" уровня может приводить к неограниченной гиперактивности и проявлению в форме заболеваний дисрегуляции комплемента.
Некоторые варианты реализации изобретения относятся к способам лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, у субъекта посредством введения специфического ингибитора фактора комплемента В (CFB). Некоторые варианты реализации, предложенные в настоящем документе, относятся к способу ингибирования экспрессии CFB у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, посредством введения субъекту специфического ингибитора CFB. В некоторых вариантах реализации изобретения способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в глазу субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту специфического ингибитора CFB. В некоторых вариантах реализации изобретения способ снижения или ингибирования накопления отложения СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту специфического ингибитора CFB.
Подробное описание изобретения
Следует понимать, что изложенное выше общее описание и следующее подробное описание являются лишь примерными и пояснительными, и не являются ограничивающими заявленное изобретение. В настоящем документе использование единственного числа включает множественное число, если специально не указано иное. При использовании в настоящем документе, термин "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, использование термина "включая", а также других форм, таких
как "включает" и "включенный", не является ограничивающим. Также, такие термины как "элемент" или "компонент" охватывают как элементы и компоненты, содержащие одну единицу, так и элементы и компоненты, которые содержат более одной субъединицы, если специально не указано иное.
Названия разделов, используемые в настоящем документе, предназначены лишь для организационных целей, и их не следует толковать как ограничение описанного объекта изобретения. Все документы или части документов, цитируемые в настоящей заявке, включая, но не ограничиваясь ими, патенты, патентные заявки, статьи, книги и трактаты, в явной форме включены в настоящий документ посредством ссылки в отношении частей документов, обсуждаемых в данном описании, а также в полном объеме.
При отсутствии конкретных определений, номенклатура, используемая в связи с ними, а также в связи с приемами и методиками аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанная в настоящем документе, является общеизвестной и общепринятой в данной области техники. Для химического синтеза и химического анализа могут быть использованы стандартные методики. Некоторые такие методики и приемы представлены, например, в публикациях "Carbohydrate Modifications in Antisense Research)) под редакцией Sangvi и Cook, American Chemical Society, федеральный округ Вашингтон, 1994; "Remington's Pharmaceutical Sciences,)) Mack Publishing Co., Истон, штат Пенсильвания, 21е издание, 2005; и "Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications)) под редакцией Stanley Т. Crooke, CRC Press, Бока-Ратон, штат Флорида; а также в книге Sambrook et al., "Molecular Cloning, A laboratory Manual,)) 2е издание, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, которые включены в настоящий документ посредством ссылки для всех целей. Если это допустимо, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, а также другие данные, упоминаемые в тексте настоящего описания, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Если не указано иное, следующие термины имеют следующие значения:
"2'-F нуклеозид" относится к нуклеозиду, содержащему сахар, который содержит фтор в 2'-положении. Если не указано иное, то фтор в 2'-F нуклеозиде находится в рибо-положении (заменяя ОН природной рибозы).
"2'-0-метоксиэтил" (также 2'-МОЕ и 2'-0(СН2)2-ОСНз) относится к О-метоксиэтил модификации в 2' положении фуранозного кольца. 2'-0-метоксиэтил-модифицированный сахар представляет собой модифицированный сахар.
"2'-МОЕ нуклеозид" (также 2'-0-метоксиэтил-нуклеозид) означает нуклеозид, содержащий 2'-МОЕ модифицированный сахарный фрагмент.
"2'-замещенный нуклеозид" означает нуклеозид, содержащий заместитель в 2'-положении фуранозного кольца, отличный от Н или ОН. В неких вариантах реализации 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями.
"3' Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный 3'-крайнему нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.
"5' Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный 5'-крайнему нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.
"5-метилцитозин" означает цитозин модифицированный метальной группой в 5 положении. 5-метилцитозин представляет собой модифицированное азотистое основание.
"Около" означает в пределах ±10 % от значения. Например, если указано, что "соединения вызывают по меньшей мере около 70 % ингибирования CFB", подразумевается, что уровни CFB ингибируются в пределах 60-80 %.
"Вводить" или "введение" относится к способам введения субъекту антисмыслового соединения, предложенного в настоящем документе, для выполнения его предназначенной функции. Пример способа введения, который может быть использован, включает, но не ограничивается им, парентеральное введение, такое как подкожная, внутривенная или внутримышечная инъекция или инфузия.
"Алкил" в данном контексте означает насыщенный прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, без ограничения, метил, этил, пропил, бутил, изопропил, н-гексил, октил, децил, додецил и т.п. Алкильные группы обычно содержат от 1 до около 24 атомов углерода, более часто от 1 до около 12 атомов углерода (С1-С12 алкил), более предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода.
В данном контексте "алкенил" означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Примеры алкенильных групп включают, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, диены, такие как 1,3-бутадиен и т.п. Алкенильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более часто от 2 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. Алкенильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.
В данном контексте "алкинил" означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь. Примеры алкинильных групп включают, без ограничения, этинил, 1-пропинил, 1-бутинил и т.п. Алкинильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более часто от 2 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. Алкинильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.
В данном контексте "ацил" означает радикал, образованный за счет удаления гидроксильной группы от органической кислоты, и имеет общую формулу -С(0)-Х, где X обычно является алифатическим, алициклическим или ароматическим. Примеры включают алифатические карбонилы, ароматические карбонилы, алифатические сульфонилы, ароматические сульфинилы, алифатические сульфинилы, ароматические фосфаты,
алифатические фосфаты и т.п. Ацильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
В данном контексте "алициклическая" означает циклическую кольцевую систему, в которой кольцо является алифатическим. Кольцевая система может содержать одно или более колец, при этом по меньшей мере одно кольцо является алифатическим. Предпочтительные алициклические системы включают кольца, имеющие от около 5 до около 9 атомов углерода в кольце. Алициклические группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
В данном контексте "алифатический" означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода, в котором насыщенность между любыми двумя атомами углерода представляет собой одинарную, двойную или тройную связь. Алифатическая группа предпочтительно содержит от 1 до около 24 атомов углерода, более часто от 1 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода. Прямая или разветвленная цепь алифатической группы может быть прервана одним или более гетероатомами, которые включают азот, кислород, серу и фосфор. Такие алифатические группы, прерванные гетероатомами, включают, без ограничения, полиалкокси, такие как полиалкиленгликоли, полиамины и полиимины. Алифатические группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
В данном контексте "алкокси" означает радикал, образованный между алкильной группой и атомом кислорода, при этом атом кислорода используется для присоединения алкокси-группы к исходной молекуле. Примеры алкокси-групп включают, без ограничения, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, неопентокси, н-гексокси и т.п. Алкокси-группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
В данном контексте "аминоалкил" означает аминозамещенный С1-С12 алкильный радикал. Алкильная часть указанного радикала образует ковалентную связь с исходной молекулой. Аминогруппа может быть расположена в любом положении, и аминоалкильная
группа может быть замещена дополнительной группой заместителя в алкильной и/или амино-части.
В данном контексте "аралкил" и "арилалкил" означает ароматическую группу, которая ковалентно связана с С1-С12 алкильным радикалом. Часть алкильного радикала образовавшейся аралкильной (или арилалкильной) группы образует ковалентную связь с исходной молекулой. Примеры включают, без ограничения, бензил, фенетил и т.п. Аралкильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей, присоединенные к алкильной, арильной или к обеим группам, которые образуют указанную радикальную группу.
В данном контексте "арил" и "ароматический" означают радикалы моно- или полициклической карбоциклической кольцевой системы, имеющие одно или более ароматических колец. Примеры арильных групп включают, без ограничения, фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, инденил и т.п. Предпочтительные ар ильные кольцевые системы имеют от около 5 до около 20 атомов углерода в одном или более кольцах. Ар ильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
"Ослабление" относится к уменьшению по меньшей мере одного показателя, признака или симптома связанного заболевания, расстройства или патологического состояния. В некоторых вариантах реализации ослабление включает отсрочку или замедление развития одного или более показателей патологического состояния или заболевания. Степень тяжести показателей может быть определена субъективными или объективными показателями, которые известны специалистам в данной области техники.
"Животное" относится к человеку или животному, не являющемуся человеком, включающему, но не ограничивающемуся ими, мышей, крыс, кроликов, собак, кошек, свиней и приматов, включая, но не ограничиваясь ими, обезьян и шимпанзе.
"Антисмысловая активность" означает любую обнаруживаемую или поддающуюся измерению активность, обусловленную гибридизацией антисмыслового соединения с его нуклеиновой кислотой-мишенью. В неких вариантах реализации антисмысловая
активность представляет собой уменьшение количества или экспрессии нуклеиновой кислоты-мишени или белка, кодируемого такой нуклеиновой кислотой-мишенью.
"Антисмысловое соединение" обозначает олигомерное соединение, которое способно к гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородной связи. Примеры антисмысловых соединений включают одноцепочечные и двухцепочечные соединения, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, миРНК, мшРНК, оцРНК и соединения на их основе.
"Антисмысловое ингибирование" означает снижение уровней нуклеиновой кислоты-мишени в присутствии антисмыслового соединения, комплементарного нуклеиновой кислоте-мишени, по сравнению с уровнями нуклеиновой кислоты-мишени в отсутствие антисмыслового соединения.
"Антисмысловые механизмы" представляют собой все механизмы, принимающие участие в гибридизации соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью, причем результат или эффект гибридизации представляет собой разложение мишени или оккупацию мишени с сопутствующей остановкой клеточного аппарата, включая, например, транскрипцию или сплайсинг.
"Антисмысловой олигонуклеотид" означает одноцепочечный олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований, обеспечивающую возможность гибридизации с соответствующей областью или сегментом нуклеиновой кислоты-мишени.
"Комплементарность основания" относится к способности спаривания конкретной пары азотистых оснований антисмыслового олигонуклеотида с соответствующими азотистыми основаниями в нуклеиновой кислоте-мишени (т.е. гибридизации), опосредованной уотсон-криковским, хугстиновским или обратным хугстиновским водородным связыванием между соответствующими азотистыми основаниями.
"Бициклический сахарный фрагмент" означает модифицированный сахарный фрагмент, содержащий 4-7-членное кольцо (включая, но не ограничиваясь им, фуранозил), содержащее мостик, связывающий два атома 4-7-членного кольца с
образованием второго кольца, что приводит к получению бициклической структуры. В некоторых вариантах реализации 4-7-членное кольцо представляет собой сахарное кольцо. В некоторых вариантах реализации 4-7-членное кольцо представляет собой фуранозил. В некоторых таких вариантах реализации мостик соединяет 2'-углерод и 4'-углерод фуранозила.
"Бициклическая нуклеиновая кислота" или "БНК" или "БНК нуклеозид" означает, что мономеры нуклеиновой кислоты имеют мостик, соединяющий два атома углерода между 4' и 2' положениями нуклеозидной сахарной единицы, тем самым образуя бициклический сахар. Примеры такого бициклического сахара включают, но не ограничиваются ими, А) a-L-метиленокси (4'-СН2-0-2') LNA , (В) P-D-метиленокси (4'-СН2-0-2') LNA , (С) этиленокси (4'-(СН2)2-0-2') LNA , (D) аминоокси (4'-CH2-0-N(R)-2') LNA и (Е) оксиамино (4'-CH2-N(R)-0-2') LNA, как показано ниже.
В данном контексте соединения LNA включают, но не ограничиваются ими, соединения, имеющие по меньшей мере один мостик между 4' и 2' положениями сахара, причем каждый из мостиков независимо содержит 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(Ri)(R2)]n-, -C(Ri)=C(R2)-, -C(Ri)=N-, -C(=NRi)-, -C(=0)-, -C(=S)-, -0-, -Si(Ri)2-, -S(=0)x- и -N(Ri)-; где: x равен 0, 1 или 2; n равен 1, 2, 3 или 4; каждый Ri и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, С1-С12 алкил, замещенный С1-С12 алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил, замещенный С2-С12 алкинил, С5-С20 арил, замещенный С5-С20 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, С5-С7 алициклический радикал, замещенный С5-С7 алициклический радикал, галоген, OJi, NJ1J2, SJi, N3, COOJi, ацил (С(=0)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=0)2-Ji) или сульфоксил (S(=0)-Ji); и каждый Ji и J2 независимо представляет собой Н, С1-С12 алкил, замещенный С1-С12 алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил,
замещенный С2-С12 алкинил, С5-С20 арил, замещенный С5-С20 арил, ацил (С(=0)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, С1-С12 аминоалкил, замещенный С1-С12 аминоалкил или защитную группу.
Примеры 4'- 2' мостиковых групп, входящих в определение LNA, включают, но не ограничиваются ими, одну из формул: -[C(Ri)(R2)]n-, -[C(Ri)(R2)]n-0-, -C(RiR2)-N(Ri)-0-or -C(RiR2)-0-N(Ri)-. Кроме того, другие мостиковые группы, входящие в определение LNA, представляют собой мостики 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)з-2', 4'-СН2-0-2', 4'-(СН2)2-0-2', 4'-CH2-0-N(Ri)-2' и 4'-CH2-N(Ri)-0-2'-, где каждый Ri и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу или С1-С12 алкил.
Также в определение LNA согласно настоящему изобретению включены LNA, в которых 2'-гидроксильная группа рибозильного сахарного кольца соединена с 4' атомом углерода сахарного кольца, с образованием таким образом мостика метиленокси (4'-СН2-0-2'), формируя бициклический сахарный фрагмент. Мостик также может быть метиленовой группой (-СН2-), соединяющей атом кислорода 2' и атом углерода 4', для которой используется термин метиленокси (4'-СН2-0-2') LNA. Кроме того, в случае бициклического сахарного фрагмента, содержащего этиленовую мостиковую группу в данном положении, применяется термин этиленокси (4'-СН2СН2-0-2') LNA. a -L-метиленокси (4'-СН2-0-2'), изомер метиленокси (4'-СН2-0-2') LNA, также попадает под определение LNA в данном контексте.
"Кэп-структура" или "кэп-терминальный фрагмент" означает химические модификации, которые были сделаны у любого конца антисмыслового соединения.
"Углевод" означает природный углевод, модифицированный углевод или производное углевода.
"Углеводный кластер" означает соединение, имеющее один или более углеводных остатков, присоединенных к скелету или линкерной группе, (см., например, Maier et al., "Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting,)) Bioconjugate Chemistry, 2003, (14): 18-29, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, или Rensen et al., "Design and
Synthesis of Novel jV-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor," J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808, где представлены примеры углеводных сопряженных кластеров).
"Производное углевода" означает любое соединение, которое может быть синтезировано с использованием углевода в качестве исходного материала или промежуточного соединения.
"cEt" или "стерически затрудненный этил" означает бициклический сахарный фрагмент, содержащий мостик, соединяющий 4'-углерод и 2'-углерод, причем мостик имеет формулу: 4'-СН(СН3)-0-2'.
"Химическая модификация" означает химическое отличие в соединении, по сравнению с природным аналогом. Химические модификации олигонуклеотидов включают нуклеозидные модификации (включая модификации сахарного фрагмента и модификации азотистого основания) и модификации межнуклеозидных линкеров. В отношении олигонуклеотида химическая модификация включает не только отличия в последовательности азотистых оснований.
"Расщепляемая связь" означает любую химическую связь, которая может быть расщеплена. В некоторых вариантах реализации расщепляемая связь выбрана из: амида, полиамида, сложного эфира, эфира, одного или обоих сложных эфиров фосфодиэфира, фосфатного сложного эфира, карбамата, дисульфида или пептида.
"Расщепляемый фрагмент" означает связь или группу, которая может быть расщеплена при физиологических условиях. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент расщепляется внутри клетки или во внутриклеточных отделах, таких как лизосома. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент расщепляется эндогенными ферментами, такими как нуклеазы. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент содержит группу атомов, имеющую один, два, три, четыре или более четырех расщепляемых связей.
"Конъюгат" или "группа конъюгата" означает атом или группу атомов, связанную с олигонуклеотидом или олигомерным соединением. Как правило, группы конъюгата
модифицируют одно или более свойств соединения, к которому они присоединены, включая, но не ограничиваясь ими, свойства фармакодинамики, фармакокинетики, связывания, поглощения, клеточного распределения, клеточного захвата, заряда и/или выведения.
"Линкер конъюгата" или "линкер" к контексте группы конъюгата означает часть группы конъюгата, содержащую любой атом или группу атомов и ковалентно связывающую (1) олигонуклеотид с другой частью группы конъюгата или (2) две или более частей группы конъюгата.
Группы конъюгата представлены в настоящем документе как радикалы, обеспечивающие связь для образования ковалентного присоединения к олигомерному соединению, такому как антисмысловой олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации точка присоединения в олигомерном соединении представляет собой З'-атом кислорода З'-гидроксильной группы 3'-концевого нуклеозида олигомерного соединения. В некоторых вариантах реализации точка присоединения у олигомерного соединения представляет собой 5' -атом кислорода 5' -гидроксильной группы 5' -концевого нуклеозида олигомерного соединения. В некоторых вариантах реализации связь для образования присоединения к олигомерному соединению представляет собой расщепляемую связь. В некоторых таких вариантах реализации такая расщепляемая связь составляет весь или часть расщепляемого фрагмента.
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат расщепляемый фрагмент (например, расщепляемую связь или расщепляемый нуклеозид) и часть углеводного кластера, такую как часть кластера GalNAc. Такая часть углеводного кластера содержит: нацеливающий фрагмент и необязательно линкер конъюгата. В некоторых вариантах реализации часть углеводного кластера определяют по количеству и сущности лиганда. Например, в некоторых вариантах реализации часть углеводного кластера содержит 3 группы GalNAc и обозначена "GalNAc3". В некоторых вариантах реализации часть углеводного кластера содержит 4 группы GalNAc и обозначена "GalNAc4". Конкретные части углеводных кластеров (имеющие конкретную связку,
группы ветвления и линкера конъюгата) описаны в настоящем документе и обозначены римской цифрой с последующим нижним индексом "а". Соответственно, "GalNac3-la" относится к конкретной части углеводного кластера группы конъюгата, имеющей 3 группы GalNac и конкретно определенную связку, группы ветвления и линкера Такой фрагмент углеводного кластера присоединен к олигомерному соединению через расщепляемый фрагмент, такой как расщепляемая связь или расщепляемый нуклеозид.
"Сопряженное соединение" означает любые атомы, группы атомов или группу связанных атомов, подходящую для применения в качестве группы конъюгата. В некоторых вариантах реализации сопряженные соединения могут обладать или влиять на одно или более свойств, включая, но не ограничиваясь ими, свойства фармакодинамики, фармакокинетики, связывания, абсорбции, клеточного распределения, клеточного захвата, заряда и/или выведения.
"Нуклеозид со стерически затрудненным этилом" (также cEt нуклеозид) означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, содержащий 4'-СН(СНз)-0-2' мостик.
"Фактор комплемента В (CFB)" означает любую нуклеиновую кислоту или белок CFB. "Нуклеиновая кислота CFB" означает любую нуклеиновую кислоту, кодирующую CFB. Например, в некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота CFB включает последовательность ДНК, кодирующую CFB, последовательность РНК, транскрибированную из ДНК, кодирующей CFB (включая геномную ДНК, содержащую интроны и экзоны), включая некодирующую белок (т.е. некодирую щую) последовательность РНК, и последовательность мРНК, кодирующую CFB. "мРНК CFB" означает мРНК, кодирующую белок CFB.
"Специфический ингибитор CFB" относится к любому агенту, способному специфически ингибировать экспрессию РНК CFB и/или белка CFB или активность на молекулярном уровне. Например, CFB-специфические ингибиторы включают нуклеиновые кислоты (включая антисмысловые соединения), пептиды, антитела, низкомолекулярные
соединения и другие агенты, способные ингибировать экспрессию РНК CFB и/или белка CFB.
"Химически различимый участок" относится к участку антисмыслового соединения, который в некотором роде химически отличается от другого участка того же антисмыслового соединения. Например, участок, содержащий 2'-0-метоксиэтиловые нуклеозиды, является химически отличным от участка, содержащего нуклеозиды без 2'-0-метоксиэтиловых модификаций.
"Химерное антисмысловое соединение" означает антисмысловое соединение, которое имеет по меньшей мере 2 химически различных участка, каждая позиция имеет множество субъединиц.
"Комплементарность" означает способность спаривания азотистых оснований первой и второй нуклеиновых кислот.
"Включать", "включает" и "включающий" следует понимать как обозначение включения указанной стадии или элемента, или группы элементов или стадий, но не исключения любого другого элемента или стадии, или группы стадий или элементов.
"Непрерывные азотистые основания" означают азотистые основания, непосредственно примыкающие друг к другу.
"Дезоксинуклеозид" означает нуклеозид, содержащий 2'-Н фуранозильный сахарный фрагмент, находящийся в природных дезоксирибонуклеозидах (ДНК). В некоторых вариантах реализации 2'-дезоксинуклеозид может содержать модифицированное азотистое основание или может содержать азотистое основание РНК (например, урацил).
"Дезоксирибонуклеотид" означает нуклеотид, имеющий водород в 2' положении сахарной части нуклеотида. Дезоксирибонуклеотиды могут быть модифицированы с помощью любого из множества заместителей.
"Конструирование" или "разработка" относится к процессу конструирования олигомерного соединения, которое специфически гибридизуется с выбранной молекулой нуклеиновой кислоты.
"По-разному модифицированные" означает химические модификации или химические заместители, которые отличны друг от друга, включая отсутствие модификаций. Так, например, МОЕ нуклеозид и немодифицированный нуклеозид ДНК являются "по-разному модифицированными", даже несмотря на то, что нуклеозид ДНК не является модифицированным. Точно так же, ДНК и РНК являются "по-разному модифицированными", даже несмотря на то, что оба представляют собой природные не модифицированные нуклеозиды. Нуклеозиды, которые являются одинаковыми, но содержат различные азотистые основания, не являются по-разному модифицированными. Например, нуклеозид, содержащий 2'-ОМе модифицированный сахар и немодифицированное азотистое основание аденин, и нуклеозид, содержащий 2'-ОМе модифицированный сахар и немодифицированное азотистое основание тимин, не являются по-разному модифицированными.
"Двухцепочечные" относится к двум отдельным олигомерным соединениям, которые гибридизованы друг с другом. Такие двухцепочечные соединения могут иметь один или более негибридизованных нуклеозидов у одного или обоих концов одной или обеих цепей (выступы) и/или один или более внутренних негибридизованных нуклеозидов (несоответствий), при условии, что существует достаточная комплементарность для сохранения гибридизации при физиологически релевантных условиях.
"Эффективное количество" означает количество активного фармацевтического агента, достаточное для достижения желаемого физиологического результата у индивидуума, нуждающегося в таком агенте. Эффективное количество может варьировать среди индивидуумов в зависимости от здоровья и физического состояния индивидуума, подлежащего лечению, таксономической группы индивидуумов, подлежащих лечению, рецептуры композиции, оценки индивидуального состояния здоровья и других релевантных факторов.
"Эффективность" означает способность производить желаемый эффект.
"Экспрессия" включает в себя все функции, благодаря которым информация, закодированная в гене, преобразуется в структуры, присутствующие и функционирующие в клетке. Такие структуры включают, но не ограничиваются ими, продукты транскрипции и трансляции.
"Полностью комплементарный" или "100 % комплементарный" означает, что каждое азотистое основание первой нуклеиновой кислоты имеет комплементарное азотистое основание во второй нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, а нуклеиновая кислота-мишень представляет собой вторую нуклеиновую кислоту.
"Фуранозил" означает структуру, содержащую 5-членное кольцо, содержащее четыре атома углерода и один атом кислорода.
"Гэпмер" означает химерное антисмысловое соединение, в котором внутренний участок, имеющий множество нуклеозидов, которые поддерживают расщепление РНКазой Н, располагается между внешними участками, имеющими один или несколько нуклеозидов, причем нуклеозиды, составляющие внутренние участки, химически отличаются от нуклеозида или нуклеозидов, составляющих внешние участки. Внутренний участок может быть описан как "гэп", а внешние участки могут быть описаны как "крылья".
"Гало" и "галоген" означают атом, выбранный из фтора, хлора, брома и йода.
"Гетероарил" и "гетероароматический" означают радикал, содержащий моно- или полициклическое ароматическое кольцо, кольцевую систему или конденсированную кольцевую систему, в которой по меньшей мере одно из колец является ароматическим и содержит один или более гетероатомов. Гетероарил включает также конденсированные кольцевые системы, включая системы, в которых одно или более из конденсированных колец не содержат гетероатомов. Гетероарильные группы, как правило, содержат один кольцевой атом, выбранный из серы, азота или кислорода. Примеры гетероарильных групп
включают, без ограничения, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тиофенил, фуранил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, хиноксалинил и т.п. Гетероарильные радикалы могут быть присоединены к исходной молекуле напрямую или через линкерный фрагмент, такой как алифатическая группа или гетероатом. Гетероарильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
"Гибридизация" означает соединение комплементарных молекул нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах реализации комплементарные молекулы нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваются ими, антисмысловые соединения и нуклеиновую кислоту-мишень. В некоторых вариантах реализации комплементарные молекулы нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваются ими, антисмысловой олигонуклеотид и нуклеиновую кислоту-мишень.
"Идентификация животного, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, расстройства и/или патологического состояния" обозначает идентификацию животного, которому поставлен диагноз заболевания, расстройства и/или патологического состояния, или идентификацию животного, предрасположенного к развитию заболевания, расстройства и/или патологического состояния. Такая идентификация может быть выполнена любым способом, включая оценку истории болезни индивидуума и стандартные клинические испытания или оценки.
"Непосредственно примыкающий" означает, что нет никаких промежуточных элементов между непосредственно примыкающими элементами.
"Индивидуум" означает человека или животное, не являющееся человеком, выбранное для лечения или терапии.
"Ингибирование экспрессии или активности" означает снижение, блокаду экспрессии или активности и не обязательно говорит о полном прекращении экспрессии или активности.
"Межнуклеозидная связь" относится к химической связи между нуклеозидами.
"Межнуклеозидная нейтральная линкерная группа" означает нейтральную линкерную группу, которая напрямую связывает два нуклеозида.
"Межнуклеозидная фосфорная линкерная группа" означает фосфорную линкерную группу, которая напрямую связывает два нуклеозида.
"Удлиненные" антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой олигонуклеотиды, которые имеют один или более дополнительных нуклеозидов, по сравнению с антисмысловым олигонуклеотидом, описанным в настоящем документе.
"Линкерный мотив" означает характерный участок линкерных модификаций в олигонуклеотид е или его области. Нуклеозиды такого олигонуклеотид а могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, мотивы, описывающие в настоящем документе только линкеры, представляют собой линкерные мотивы. Следовательно, в таких случаях нуклеозиды не ограничены.
"Связанный дезоксинуклеозид" означает основание нуклеиновой кислоты (A, G, С, Т, U), замещенное дезоксирибозой, связанной фосфатным эфиром, с образованием нуклеотида.
"Связанные нуклеозиды" означают соседние нуклеозиды, связанные между собой межнуклеозидной связью.
"Нуклеозид закрытой нуклеиновой кислоты" или "LNA" означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, который содержит мостик 4'-СН2-0-2'.
"Несоответствие" или "некомплементарное азотистое основание" относится к случаю, когда азотистое основание первой нуклеиновой кислоты не способно связываться с соответствующим азотистым основанием второй или нуклеиновой кислоты-мишени.
"Модифицированная межнуклеозидная связь" обозначает замену или любое изменение природной межнуклеозидной связи (т.е. фосфодиэфирной межнуклеозидной связи).
"Модифицированное азотистое основание" означает любое азотистое основание, отличное от аденина, цитозина, гуанина, тимидина или урацила. "Немодифицированное азотистое основание" означает пуриновые основания: аденин (А) и гуанин (G), и пиримидиновые основания: тимин (Т), цитозин (С), и урацил (U).
"Модифицированный нуклеозид" обозначает нуклеозид, содержащий независимо модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное азотистое основание.
"Модифицированный нуклеотид" означает нуклеотид, содержащий независимо модифицированный сахарный фрагмент, модифицированную межнуклеозидную связь или модифицированное азотистое основание.
"Модифицированный олигонуклеотид" обозначает олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь, модифицированный сахар, и/или модифицированное азотистое основание.
"Модифицированный сахар" означает замещение и/или измену любого из природных сахарных фрагментов.
"Модулирование" относится к изменению или регулированию характеристики в клетке, ткани, органе или организме. Например, модулирование мРНК CFB может означать увеличение или снижение уровня мРНК CFB и/или белка CFB в клетке, ткани, органе или организме. "Модулятор" вызывает изменение в клетке, ткани, органе или организме. Например, антисмысловое соединение CFB может представлять собой модулятор, который снижает количество мРНК CFB и/или белка CFB в клетке, ткани, органе или организме.
"Мономер" означает одно звено олигомера. Мономеры включают, но не ограничиваются ими, нуклеозиды и нуклеотиды, природные или модифицированные.
"Моно- или полициклическая кольцевая система" включает все кольцевые системы, выбранные из одиночных или полициклических радикальных кольцевых систем, в которых указанные кольца конденсированы или связаны, и включает одиночные или смешанные кольцевые системы, индивидуально выбранные из алифатических, алициклических,
арильных, гетероарильных, аралкильных, арилалкильных, гетероциклических, гетероарильных, гетероароматических и гетероарилалкильных. Такие моно- и полициклические структуры могут содержать кольца, каждое из которых имеет одинаковую степень насыщенности, или каждое независимо имеет переменные степени насыщенности, включая полностью насыщенные, частично насыщенные или полностью ненасыщенные. Каждое кольцо может содержать кольцевые атомы, выбранные из С, N, О и S с образованием гетероциклических колец, а также колец, содержащих только кольцевые атомы С, которые могут быть представлены в смешанном мотиве, как, например, в бензимидазоле, в котором одно кольцо имеет только кольцевые атомы углерода, а конденсированное кольцо имеет два атома азота. Моно- или полициклическая кольцевая система может быть дополнительно замещена группами заместителей, как, например, фталимид, который имеет две группы =0, присоединенные к одному из колец. Моно- или полициклические кольцевые системы могут быть присоединены к исходным молекулам при помощи различных способов, таких как непосредственно через кольцевой атом, путем конденсации через несколько кольцевых атомов, через группу заместителя или через бифункциональный линкерный фрагмент.
"Мотив" означает конфигурацию из немодифицированных и модифицированных нуклеозидов в антисмысловом соединении.
"Природный сахарный фрагмент" означает фрагмент сахара, находящийся в ДНК (2'-Н)или РНК (2'-ОН).
"Природная межнуклеозидная связь" означает 3' к 5' фосфодиэфирную связь.
"Нейтральная линкерная группа" означает линкерную группу, которая не имеет заряда. Нейтральные линкерные группы включают, без ограничения, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, MMI (-CH2-N(CH3)-0-), амид-3 (-CH2-C(=0)-N(H)-), амид-4 (-СН2-N(H)-C(=0)-), формацеталь (-0-СН2-0-) и тиоформацеталь (-S-CH2-0-). Дополнительные нейтральные группы включают неионные линкеры, содержащие силоксан (диалкилсилоксан), карбоксилатный эфир, карбоксамид, сульфид, сульфонатный эфир и амиды (см., например: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi and
P.D. Cook Eds. ACS Symposium Series 580; главы 3 и 4, (cc. 40-65)). Дополнительные нейтральные линкерные группы включают неионные линкеры, содержащие смешанные составные части N, О, S и СН2.
"Некомплементарное азотистое основание" относится к паре азотистых оснований нуклеиновых кислот, которые не образуют водородных связей друг с другом или иным образом не поддерживают гибридизацию.
"Немежнуклеозидная нейтральная линкерная группа" означает нейтральную линкерную группу, которая не связывает напрямую два нуклеозида. В некоторых вариантах реализации немежнуклеозидная нейтральная линкерная группа связывает нуклеозид с группой, отличной от нуклеозида. В некоторых вариантах реализации немежнуклеозидная нейтральная линкерная группа связывает две группы, ни одна из которых не является нуклеозидом.
"Немежнуклеозидная фосфорная линкерная группа" означает фосфорную линкерную группу, которая не связывает напрямую два нуклеозида. В некоторых вариантах реализации немежнуклеозидная фосфорная линкерная группа связывает нуклеозид с группой, отличной от нуклеозида. В некоторых вариантах реализации немежнуклеозидная фосфорная линкерная группа связывает две группы, ни одна из которых не является нуклеозидом.
"Нуклеиновая кислота" означает молекулы, состоящие из мономерных нуклеотидов. Нуклеиновая кислота включает, но не ограничивается ими, рибонуклеиновые кислоты (РНК), дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), одноцепочечные нуклеиновые кислоты их двуцепочечные нуклеиновые кислоты.
"Азотистое основание" означает гетероциклический фрагмент, способный спариваться с основанием другой нуклеиновой кислоты.
"Комплементарность азотистого основания" относится к азотистому основанию, способному к спариванию с другим основанием. Например, в ДНК аденин (А) комплементарен тимину (Т). Например, в РНК аденин (А) комплементарен урацилу (U). В
некоторых вариантах реализации комплементарное азотистое основание относится к азотистому основанию антисмыслового соединения, способному спариваться с азотистым основанием своей нуклеиновой кислоты-мишени. Например, если азотистое основание в определенном положении антисмыслового соединения способно к водородному связыванию с азотистым основанием в определенном положении нуклеиновой кислоты-мишени, то это положение водородного связывания между олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью считается комплементарным по этой паре азотистых оснований.
"Мотив модификации азотистого основания" означает характерный участок модификаций азотистых оснований вдоль олигонуклеотида. Если не указано иное, то мотив модификации азотистого основания не зависит от последовательности азотистого основания.
"Последовательность азотистых оснований" означает порядок последовательных азотистых оснований, независимый от любого сахара, связи и/или модификации азотистого основания.
"Нуклеозид" означает азотистое основание связанное с сахаром.
"Миметик нуклеозида" включает структуры, используемые для замены сахара или сахара и основания и необязательно связи в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, например, такие как миметики нуклеозидов, содержащие морфолино, циклогексенил, циклогексил, тетрагидропиранил, бицикло или трицикло сахара-миметики, например, нефуранозные сахарные звенья. Нуклеотид-миметик включает в себя структуры, используемые для замены нуклеозида и связи в одном или более положениях олигомерного соединения, такие как, например, пептидные нуклеиновые кислоты или морфолино-соединения (морфолино-соединения, связанные -N(H)-C(=0)-0-или другой нефосфодиэфирной связью). Заменитель сахара пересекается более широким термином нуклеозид-миметик, но предназначен для обозначения замены только сахарной единицы (фуранозного кольца). Тетрагидропираниловые кольца, представленные в настоящем документе, иллюстрируют пример заменителя сахара, в котором сахарная
фуранозная группа заменена тетрагидропираниловой кольцевой системой. "Миметик" относится к группам, которые заменяют сахар, азотистое основание и/или межнуклеозидную связь. Как правило, миметик используют вместо сахара или комбинации сахара с межнуклеозидной связью, а азотистое основание сохраняется для гибридизации с выбранной мишенью.
"Нуклеозидный мотив" означает характерный участок нуклеозидных модификаций в олигонуклеотиде или его области. Связи такого олигонуклеотида могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, мотивы, описывающие в настоящем документе только нуклеозиды, представляют собой нуклеозидные мотивы. Следовательно, в таких случаях связи не ограничены.
"Нуклеотид" означает нуклеозид, имеющий фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида.
"Олигомерное соединение" означает полимер из связанных мономерных субъединиц, которые способны к гибридизации с по меньшей мере областью молекулы нуклеиновой кислоты.
"Олигонуклеозид" означает олигонуклеотид, в котором ни одна из межнуклеозидных связей не содержит атома фосфора.
"Олигонуклеотид" означает полимер связанных нуклеозидов, каждый из которых может быть модифицированным или немодифицированным, независимо друг от друга.
"Парентеральное введение" означает введение путем инъекций или инфузии. Парентеральное введение включает подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или внутричерепное введение, например, интратекальное или интрацеребровентрикулярное введение.
"Фармацевтическая композиция" означает смесь веществ, пригодных для введения индивидууму. Например, фармацевтическая композиция может содержать один или более активных фармацевтических агентов и стерильный водный раствор.
"Фармацевтически приемлемые соли" обозначает физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, т.е. соли, которые сохраняют желательную биологическую активность исходного олигонуклеотида и не вызывают нежелательных токсикологических эффектов.
"Тиофосфатная связь" означает связь между нуклеозидами, где фосфодиэфирные связи модифицированы путем замены одного из немостиковых атомов кислорода на атом серы. Тиофосфатная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.
"Фосфорная линкерная группа" означает линкерную группу, содержащую атом фосфора. Фосфорные линкерные группы включают, без ограничения, группы, имеющие формулу:
Rb=P-Rc Rd
%/vw
где:
Ra и Rd, каждый независимо, представляют собой О, S, СШ, NH или NJi, где Ji представляет собой Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; Rb представляет собой О или S;
Rc представляет собой ОН, SH, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, амино или замещенный амино; и
Ji представляет собой Rb представляет собой О или S. Фосфорные линкерные группы включают, без ограничения, фосфодиэфир, тиофосфат, дитиофосфат, фосфонат, фосфорамидат, фосфортиоамидат, тионоалкилфосфонат, фосфотриэфиры, тионоалкил-фосфотриэфиры и боранофосфат.
"Часть" означает определенное количество смежных (т.е. связанных) азотистых оснований нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации часть представляет собой определенное число смежных азотистых оснований нуклеиновой кислоты-мишени.
В некоторых вариантах реализации часть представляет собой определенное число смежных азотистых оснований антисмыслового соединения.
"Предупреждать" относится к задержке или предотвращению появления, развития или прогрессирования заболевания, расстройства или патологического состояния в течение периода времени от нескольких минут до неопределенного срока. Предупреждение означает также снижение риска развития заболевания, расстройства или патологического состояния.
"Пролекарство" означает неактивную или менее активную форму соединения, которая при введении субъекту метаболизируется с образованием активного или более активного соединения (например, лекарства).
"Профилактически эффективное количество" означает такое количество фармацевтического агента, которое обеспечивает профилактический или превентивный эффект для животного.
"Защитная группа" означает любое соединение или защитную группу, известную специалистам в данной области техники. Неограничивающие примеры защитных групп представлены в книге "Protective Groups in Organic Chemistry", Т. W. Greene, P. G. M. Wuts, ISBN 0-471-62301-6, John Wiley & Sons, Inc, Нью-Йорк, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
"Участок" определяют как фрагмент нуклеиновой кислоты-мишени, имеющий по меньшей мере одну идентифицируемую структуру, функцию или характеристику.
"Рибонуклеотид" означает нуклеотид, имеющий гидрокси-группу в 2' положении сахарного фрагмента нуклеотида. Рибонуклеотиды могут быть модифицированы с помощью любого из множества заместителей.
"Антисмысловое соединение на основе RISC" означает антисмысловое соединение, в котором по меньшей мере часть антисмысловой активности антисмыслового соединения обусловлена РНК-индуцируемым комплексом сайленсинга (RISC).
"Антисмысловое соединение на основе РНКазы Н" означает антисмысловое соединение, в котором по меньшей мере часть антисмысловой активности антисмыслового соединения обусловлена гибридизацией антисмыслового соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью и последующим расщеплением нуклеиновой кислоты-мишени под действием РНКазы Н.
"Сегменты" определяют как меньшие или субфрагменты участков в составе нуклеиновой кислоты-мишени.
"Отдельные участки" означает части олигонуклеотида, в которых химические модификации или мотив химических модификаций любой из соседних частей содержит по меньшей мере одно отличие для обеспечения возможности различать участки друг от друга.
"Мотив последовательности" означает характерный участок азотистых оснований, расположенных вдоль олигонуклеотида или его части. Если не указано иное, то мотив последовательности не зависит от химических модификаций и, следовательно, может иметь любую комбинацию химических модификаций, включая отсутствие химических модификаций.
"Побочные эффекты" означают физиологическое заболевание и/или состояния, обусловленные лечением, которые отличны от желаемого эффекта. В некоторых вариантах реализации побочные эффекты включают реакции в месте инъекции, аномалии функциональных проб печени, отклонения в функциях почек, гепатотоксичность, нефротоксичность, аномалии центральной нервной системы, миопатии и недомогание. Например, повышение уровней аминотрансферазы в сыворотке может указывать на гепатотоксичность или нарушение функции печени. Например, повышенный билирубин может указывать на гепатотоксичность или нарушение функции печени.
"Сайты" в данном контексте определяют как уникальные положения азотистых оснований в нуклеиновой кислоте-мишени.
"Замедляет прогрессирование" означает ослабление развития указанного заболевания.
"Специфично гибридизуется" обозначает антисмысловое соединение, обладающее достаточной степенью комплементарности между антисмысловым олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью, чтобы вызывать желаемый эффект, минимально или никак не влияния на нецелевые нуклеиновые кислоты в условиях, в которых специфическое связывание является желательным, т.е., в физиологических условиях в случае анализов in vivo и терапевтического лечения. "Строгие условия гибридизации" или "жесткие условия" означают условия, при которых олигомерное соединение гибридизируется со своей целевой последовательностью, но с минимальным количеством других последовательностей.
"Субъект" означает человека или животного, не являющегося человеком, выбранного для лечения или терапии.
"Заместитель" и "группа заместителя" означает атом или группу, которая вытесняет атом или группу указанного исходного соединения. Например, заместитель модифицированного нуклеозида представляет собой любой атом или группу, которая отлична от атома или группы, находящейся в природном нуклеозиде (например, модифицированный 2'-заместитель представляет собой любой атом или группу в 2'-положении нуклеозида, отличную от Н или ОН). Группы заместителей могут быть защищенными или незащищенными. В некоторых вариантах реализации соединения настоящего описания имеют заместители в одном или более чем в одном положении исходного соединения. Заместители также могут быть дополнительно замещены другими группами заместителей и могут быть присоединены напрямую или через линкерную группу, такую как алкильная или углеводородная группа, к исходному соединению.
Точно так же, в данном контексте "заместитель" в отношении химической функциональной группы означает атом или группу атомов, которая отлична от атома или группы атомов, обычно содержащихся в указанной функциональной группе. В некоторых вариантах реализации заместитель вытесняет атом водорода функциональной группы (например, в некоторых вариантах реализации заместитель замещенной метильной группы представляет собой атом или группу, отличную от водорода, которая вытесняет один или более атомов водорода незамещенной метильной группы). Если не указано иное, группы,
которые могут быть использованы в качестве заместителей, включают, без ограничения,
галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, ацил (-C(O)Raa), карбоксил (-C(O)O-Raa),
алифатические группы, алициклические группы, алкокси, замещенный окси (-O-Raa), арил,
аралкил, гетероциклический радикал, гетероарил, гетероарилалкил, амино (N(Rbb)(Rcc)),
имино (=NRbb), амидо (C(0)N(Rbb)(Rcc) или N(Rbb)C(0)Raa), азидо (-N3), нитро (N02),
циано (-CN), карбамидо (OC(0)N(Rbb)(Rcc) или N(Rbb)C(0)ORaa), уреидо
(N(Rbb)C(0)N(Rbb)(Rcc)), тиоуреидо (N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc)), гуанидинил
(N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)), амидинил (C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc) или
N(Rbb)C(=NRbb)(Raa)), тиол (-SRbb), сульфинил (S(O)Rbb), сульфонил (-S(0)2Rbb) и сульфонамидил (-S(0)2N(Rbb)(Rcc) или N(Rbb)S(0)2Rbb). Где каждый Raa, Rbb и Rcc независимо представляет собой Н, необязательно связанную химическую функциональную группу или дополнительную группу заместителя, при этом предпочтительный перечень включает, без ограничения, алкил, алкенил, алкинил, алифатические, алкокси, ацил, арил, аралкил, гетероарил, алициклические, гетероциклические и гетероарилалкил. Выбранные заместители в соединениях, описанных в настоящем документе, находятся в рекурсивной степени.
"Замещенный сахарный фрагмент" означает фуранозил, который не является природным сахарным фрагментом. Замещенные сахарные фрагменты включают, но не ограничиваются ими, фуранозилы, содержащие заместители в 2'-положении, 3'-положении, 5'-положении и/или 4'-положении. Некоторые замещенные сахарные фрагменты представляют собой бициклические сахарные фрагменты.
"Сахарный фрагмент" означает природный сахарный фрагмент или модифицированный сахарный фрагмент нуклеозида.
"Сахарный мотив" означает характерный участок сахарных модификаций в олигонуклеотиде или его области.
"Заменитель сахара" означает структуру, которая не содержит фуранозила и способна заменять природный сахарный фрагмент нуклеозида, так что образующиеся нуклеозидные субъединицы могут связываться вместе и/или связываться с другими
нуклеозидами с образованием олигомерного соединения, которое может гибридизоваться с комплементарным олигомерным соединением. Такие структуры включают кольца, содержащие другое количество атомов, чем фуранозил (например, (например, 4, 6 или 7-членные кольца); замену кислорода фуранозила некислородным атомом (например, углеродом, серой или азотом); или одновременное изменение количества атомов и замену кислорода. Такие структуры также могут содержать замещения, соответствующие замещениям, описанным для замещенных сахарных фрагментов (например, 6-членные карбоциклические бициклические заменители сахара, необязательно содержащие дополнительные заместители). Заменители сахара включают также более сложные сахарные замены (например, некольцевые системы пептидной нуклеиновой кислоты). Заменители сахара включают, без ограничения, морфолино, циклогексенилы и циклогекситы.
"Мишень" обозначает белок, модуляция которого является желательной. "Ген-мишень" означает ген, кодирующий белок-мишень.
"Таргетинг" означает процесс конструирования и выбора антисмыслового соединения, которое будет специфически гибридизироваться с нуклеиновой кислотой-мишенью и вызывать желаемый эффект.
"Нуклеиновая кислота-мишень", "РНК-мишень", транскрипт РНК-мишени" и "целевая нуклеиновая кислота" означают нуклеиновую кислоту, способную подвергаться целевому воздействию антисмысловых соединений.
"Целевой участок" означает фрагмент целевой нуклеиновой кислоты, на который нацелено одно или более антисмысловых соединений.
"Целевой сегмент" означает последовательность нуклеотидов нуклеиновой кислоты-мишени, на который нацелено антисмысловое соединение. "5' целевой сайт" относится к 5' -крайнему нуклеотиду целевого сегмента. "3' целевой сайт" относится к 3' -крайнему нуклеотиду целевого сегмента.
"Концевая группа" означает один или более атомов, присоединенных к любому или к обоим 3'- или 5'-концам олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации концевая группа представляет собой группу конъюгата. В некоторых вариантах реализации концевая группа содержит один или более нуклеозидов концевой группы.
"Концевая межнуклеозидная связь" означает связь между последними двумя нуклеозидами олигонуклеотида или его определенной области.
"Терапевтически эффективное количество" означает количество фармацевтического агента, которое обеспечивает терапевтический эффект для индивидуума.
"Лечение" означает введение композиции животному для изменения или облегчения заболевания, расстройства или патологического состояния у животного. В некоторых вариантах реализации животному может быть введена одна или более фармацевтических композиций.
"Немодифицированные" азотистые основания означают пуриновые основания: аденин (А) и гуанин (G), и пиримидиновые основания: тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U).
"Немодифицированный нуклеотид" означает нуклеотид, состоящий из природных азотистых оснований, сахарных фрагментов и межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения немодифицированный нуклеотид представляет собой РНК нуклеотид (т.е. P-D-рибонуклеозиды) или ДНК нуклеотид (т.е. P-D-дезоксирибонуклеозид).
Некоторые варианты реализации изобретения
В некоторых вариантах реализации изобретения предложены способы, соединения и композиции для ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB).
В некоторых вариантах реализации предложены антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту CFB. В некоторых вариантах реализации
нуклеиновая кислота CFB имеет последовательность с номером доступа GENBANK NM_001710.5 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 1), с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 2), с номером доступа GENBANK NW_001116486.1, усеченную с нуклеотида 536000 по 545000 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 3), с номером доступа GENBANK ХМ_001113553.2 (включенную в настоящий документ как SEQ ID NO: 4) или с номером доступа GENBANK NM_008198.2 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 5).
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ Ш NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 9 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ Ш NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ Ш NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 11 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ Ш NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 12 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ Ш N0: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из последовательности азотистых оснований SEQ Ш NO: 6-808.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, комплементарных азотистым основаниям 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 11351154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 11711186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 12081227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 13281347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 16211640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 20732092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 21952214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 22262245, 2227-2242, 2227-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 23972416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 24612476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 25522571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-
2570, 2575, 2577, 2579, 2583, 2586, 2589, 2590, 2596, 2599, 2601, 2603, 2602, 2607, 2607, 2607, 2612, 2612, 2612, 2615, 2615, 2619, 2619, 2623, 2623, 2623, 2627, 2627, 2631,
2555-2572 2557-2576 2560-2578 2562-2581 2566-2585 2569-2588 2572-2590 2575-2591 2578-2594 2581-2597 2583-2599 2585-2601 2587-2603
2589- 2604
2590- 2608 2592-2608
2594- 2609
2595- 2613
2597- 2612
2598- 2616
2600- 2616
2601- 2620 2603-2620
2605- 2620
2606- 2624
2608- 2624
2609- 2628 2611-2628 2613-2628 2555-2574 2558-2575 2560-2579 2563-2578 2567-2582 2570-2585 2572-2591 2575-2592 2578-2596 2581-2598 2583-2600 2585-2603 2587-2605
2610- 2605
2611- 2609 2592-2609
2594- 2610
2595- 2614
2597- 2613
2598- 2617 2600-2617
2602- 2617
2603- 2621
2605- 2621
2606- 2625 2608-2625
2610- 2625
2611- 2629 2613-2629 2556-2573 2558-2576 2561-2576 2563-2580 2567-2584 2570-2587 2573-2590 2575-2594 2578-2597 2581-2599 2583-2601 2585-2604 2587-2606
2612- 2606
2613- 2609 2592-2610 2594-2611
2596- 2611
2597- 2614
2599- 2614
2600- 2618
2602- 2618
2603- 2622 2605-2622
2607- 2622
2608- 2626
2610- 2626
2611- 2630 2613-2630 2556-2574 2558-2577 2561-2578 2563-2582 2567-2586 2570-2589 2573-2592 2576-2593 2579-2598 2581-2600 2583-2602 2586-2601
2612- 2603
2613- 2607
2591- 2607
2592- 2611 2594-2612
2596- 2612
2597- 2615
2599- 2615
2600- 2619 2602-2619
2604- 2619
2605- 2623
2607- 2623
2608- 2627 2610-2627
2612- 2627
2613- 2631 2556-2575 2559-2576 2561-2579 2564-2581 2568-2583 2571-2586 2574-2590 2576-2595 2580-2596 2582-2598 2584-2600 2586-2602
2614- 2604
2615- 2608 2591-2608
2593- 2608
2594- 2613
2596- 2613
2597- 2616 2599-2616
2601- 2616
2602- 2620
2604- 2620
2605- 2624 2607-2624
2609- 2624
2610- 2628 2612-2628 2614-2629 2557-2573 2559-2577 2561-2580 2564-2583 2568-2585 2571-2588 2574-2591 2577-2594 2580-2597 2582-2599 2584-2601 2586-2604 2588-2605
2611- 2605
2612- 2609 2593-2609
2595- 2610
2596- 2614
2598- 2613
2599- 2617
2601- 2617
2602- 2621 2604-2621
2606- 2621
2607- 2625
2609- 2625
2610- 2629 2612-2629 2614-2630 2557-2574 2559-2578 2562-2577 2565-2584 2568-2587 2571-2590 2574-2593 2577-2595 2580-2598 2582-2600 2584-2602 2586-2605 2588-2606
2611- 2606
2612- 2610 2593-2610
2595- 2611
2596- 2615
2598- 2614
2599- 2618 2601-2618
2603- 2618
2604- 2622
2606- 2622
2607- 2626 2609-2626
2611- 2626
2612- 2630 2614-2631
25572560256225662569257225752577258025822584258725882590259225932595259725982600260126032604260626082609261126122615-
2630, 2615-2631 или 2616-2631 SEQ Ш NO: 1, и при этом указанный модифицированный олигонуклеотид по меньшей мере на 85 %, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 95 % или на 100 % комплементарен SEQ Ш NO: 1.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части азотистых оснований 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177,
480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757,
1089-
-1108,
1135-1154,
1141-1160,
1147-1166,
1150-1169,
1153-1172,
1159-
-1178,
1162
-1181,
1165
-1184,
1171-1186,
1171-1190,
1173-1188,
1173-1192,
1175-1190,
1175-
-1194,
1177
-1196,
1183
-1202,
1208-1227,
1235-1254,
1298-1317,
1304-1323,
1310-1329,
1316-
-1335,
1319
-1338,
1322
-1341,
1328-1347,
1349-1368,
1355-1374,
1393-1412,
1396-1415,
1399-
-1418,
1405
-1424,
1421
-1440,
1621-1640,
1646-1665,
1646-1665,
1647-1666,
1689-1708,
1749-
-1768,
1763
-1782,
1912
-1931,
2073-2092,
2085-2104,
2166-2185,
2172-2191,
2189-2208,
2191-
-2210,
2193
-2212,
2195
-2210,
2195-2214,
2196-2215,
2197-2212,
2197-2216,
2202-2221,
2223-
-2238,
2223
-2242,
2225
-2240,
2226-2245,
2227-2242,
2227-2246,
2238-2257,
2241-2260,
2267-
-2286,
2361
-2380,
2388
-2407,
2397-2416,
2448-2467,
2453-2472,
2455-2474,
2457-2472,
2457-
-2476,
2459
-2474,
2459
-2478,
2461-2476,
2461-2480,
2532-2551,
2550-2569,
2551-2566,
2551-
-2570,
2552
-2568,
2552
-2570,
2552-2571,
2553-2568,
2553-2570,
2553-2571,
2553-2572,
2554-
-2571,
2554
-2572,
2554
-2573,
2555-2570,
2555-2572,
2555-2574,
2556-2573,
2556-2574,
2556-
-2575,
2557
-2573,
2557
-2574,
2557-2575,
2557-2576,
2558-2575,
2558-2576,
2558-2577,
2559-
-2576,
2559
-2577,
2559
-2578,
2560-2577,
2560-2578,
2560-2579,
2561-2576,
2561-2578,
2561-
-2579,
2561
-2580,
2562
-2577,
2562-2579,
2562-2581,
2563-2578,
2563-2580,
2563-2582,
2564-
-2581,
2564
-2583,
2565
-2584,
2566-2583,
2566-2585,
2567-2582,
2567-2584,
2567-2586,
2568-
-2583,
2568
-2585,
2568
-2587,
2569-2586,
2569-2588,
2570-2585,
2570-2587,
2570-2589,
2571-
-2586,
2571
-2588,
2571
-2590,
2572-2589,
2572-2590,
2572-2591,
2573-2590,
2573-2592,
2574-
-2590,
2574
-2591,
2574
-2593,
2575-2590,
2575-2591,
2575-2592,
2575-2594,
2576-2593,
2576-
-2595,
2577
-2594,
2577
-2595,
2577-2596,
2578-2594,
2578-2596,
2578-2597 2581-2599 2583-2601 2585-2604 2587-2606
2589- 2606
2590- 2609 2592-2610 2594-2611
2596- 2611
2597- 2614
2599- 2614
2600- 2618
2602- 2618
2603- 2622 2605-2622
2607- 2622
2608- 2626
2610- 2626
2611- 2630 2613-2630 2579-2598 2581-2600 2583-2602 2586-2601
2612- 2603
2613- 2607
2591- 2607
2592- 2611 2594-2612
2596- 2612
2597- 2615
2599- 2615
2600- 2619 2602-2619
2604- 2619
2605- 2623
2607- 2623
2608- 2627 2610-2627
2612- 2627
2613- 2631 2580-2596 2582-2598 2584-2600 2586-2602
2614- 2604
2615- 2608 2591-2608
2593- 2608
2594- 2613
2596- 2613
2597- 2616 2599-2616
2601- 2616
2602- 2620
2604- 2620
2605- 2624 2607-2624
2609- 2624
2610- 2628 2612-2628 2580-2597 2582-2599 2584-2601 2586-2604 2588-2605
2611- 2605
2612- 2609 2593-2609
2595- 2610
2596- 2614
2598- 2613
2599- 2617
2601- 2617
2602- 2621 2604-2621
2606- 2621
2607- 2625
2609- 2625
2610- 2629 2612-2629 2580-2598 2582-2600 2584-2602 2586-2605 2588-2606
2611- 2606
2612- 2610 2593-2610
2595- 2611
2596- 2615
2598- 2614
2599- 2618 2601-2618
2603- 2618
2604- 2622
2606- 2622
2607- 2626 2609-2626
2611- 2626
2612- 2630 2580-2599 2582-2601 2584-2603
2613- 2602
2614- 2607 2590-2607
2592- 2607
2593- 2612 2595-2612
2597- 2612
2598- 2615
2600- 2615
2601- 2619
2603- 2619
2604- 2623 2606-2623
2608- 2623
2609- 2627
2611- 2627
2612- 2631 2581-2597 2583-2599 2585-2601 2587-2603
2613- 2604
2614- 2608 2592-2608
2594- 2609
2595- 2613
2597- 2612
2598- 2616
2600- 2616
2601- 2620 2603-2620
2605- 2620
2606- 2624
2608- 2624
2609- 2628 2611-2628 2613-2628 2581-2598, 2583-2600, 2585-2603, 2587-2605,
2610- 2605,
2611- 2609, 2592-2609,
2594- 2610,
2595- 2614,
2597- 2613,
2598- 2617, 2600-2617,
2602- 2617,
2603- 2621,
2605- 2621,
2606- 2625, 2608-2625,
2610- 2625,
2611- 2629, 2613-2629,
2610-
2288-2307, 2808-2827, 3831-3850, 3834-3853, 4184-4203, 4211-4230, 4686-4705, 4689-4708, 5830-5849, 5890-5909, 6977-6996, 6979-6998, 6990-7009, 7122-7141, 7690-7709, 7692-7707, 7785-7804, 7786-7801, 7788-7807, 7789-7806, 7791-7809, 7791-7810, 7793-7812, 7794-7811, 7796-7813, 7796-7814, 7798-7817, 7799-7816, 7802-7821, 7803-7818, 7805-7824, 7806-7821, 7808-7827, 7809-7825, 7811-7828, 7811-7830, 7814-7833, 7815-7831, 7816-7835, 7817-7833, 7818-7837, 7819-7835, 7821-7836, 7821-7837,
7823- 7838, 7823-7839.
7824- 7840, 7824-784L
7825- 7844, 7826-7842: 7827-7845, 7827-7846. 7829-7846, 7829-7847.
7831- 7846, 7831-7847:
7832- 7850, 7832-785L
2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7819-7836, 7819-7837, 7819-7838, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7837,
7823- 7839, 7823-7840, 7823-784L
7824- 7842, 7824-7843, 7825-7840. 7826-7843, 7826-7844, 7826-7845:
7828- 7843, 7828-7844, 7828-7845:
7829- 7848, 7830-7845, 7830-7846. 7831-7848, 7831-7849, 7831-7850: 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850: 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7804-7823, 7805-7820, 7805-7822, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7810-7826, 7810-7827, 7810-7829, 7813-7829, 7813-7831, 7813-7832, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839,
7830- 7838, 7822-7840, 7822-7841,
7831- 7842, 7824-7839, 7824-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843,
7827- 7842, 7827-7843, 7827-7844,
7828- 7847, 7829-7844, 7829-7845, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849,
7832- 7847, 7832-7848, 7832-7849,
7833- 7851, 7833-7852, 7834-7849,
7832-
7834- 7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853,
7835- 7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857,
7839- 7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857,
7840- 7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857,
7842- 7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861,
7843- 7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 или 7846-7862 SEQ Ш NO: 2, и где указанный модифицированный олигонуклеотид по меньшей мере на 85 %, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 95 % или на 100 % комплементарен SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах реализации предложено соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части азотистых оснований 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705, 1751-1770, 1769-1784, 1871-1890, 1872-1891, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1878-1897, 1879-1894, 1879-1898, 2288-2307, 2808-2827, 2846-2865, 2852-2871, 2946-2965, 3773-3792, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3834-3853, 3837-3856, 3843-3862, 4151-4166, 4151-4170, 4153-4172, 4159-4178, 4184-4203, 4211-4230, 4609-4628, 4612-4631, 4615-4634, 4621-4640, 4642-4661, 4648-4667, 4686-4705, 4689-4708, 4692-4711, 4698-4717, 4714-4733, 5270-5289, 5295-5314, 5296-5315, 5830-5849, 5890-5909, 5904-5923, 6406-6425, 6662-6681, 6674-6693, 6954-6973, 6960-6979, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6984-7003, 6985-7000, 6985-7004, 6990-7009, 7122-7141, 7125-7144, 7151-7170, 7353-7372, 7362-7381, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7694-7713, 7696-7711, 7696-7715, 7767-7786, 7785-7804, 7786-7801, 7787-7803, 7787-7805, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7805, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7808, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7811, 7796-7813, 7796-7814,
7796-7815 7799-7818 7803-7820 7806-7823 7809-7826 7812-7829 7815-7832 7817-7834 7819-7836 7821-7839
7823- 7839
7824- 7842 7826-7843
7828- 7843
7829- 7848 7831-7848
7833- 7848
7834- 7852
7836- 7852
7837- 7856 7839-7856
7841- 7856
7842- 7860 7844-7860 7797-7812 7800-7819 7803-7822 7806-7825 7809-7828 7812-7830 7815-7833 7817-7835 7819-7837 7821-7840
7843- 7840
7844- 7843 7826-7844 7828-7844
7830- 7845
7831- 7849
7833- 7849
7834- 7853 7836-7853
7838- 7853
7839- 7857
7841- 7857
7842- 7861 7844-7861 7797-7814 7801-7818 7804-7821 7807-7824 7810-7825 7812-7831 7815-7834 7817-7836 7819-7838
7843- 7837
7844- 7841
7825- 7840
7826- 7845 7828-7845
7830- 7846
7831- 7850 7833-7850
7835- 7850
7836- 7854
7838- 7854
7839- 7858 7841-7858
7843- 7858
7844- 7862 7797-7816 7801-7820 7804-7823 7807-7825 7810-7826 7813-7829 7816-7832 7818-7834 7820-7836
7845- 7838
7846- 7842 7825-7841
7827- 7842
7828- 7847 7830-7847
7832- 7847
7833- 7851
7835- 7851
7836- 7855 7838-7855
7840- 7855
7841- 7859 7843-7859 7798-7813 7802-7817 7805-7820 7807-7826 7810-7827 7813-7831 7816-7833 7818-7835 7820-7838 7822-7840
7842- 7839
7843- 7842 7827-7843
7829- 7844
7830- 7848
7832- 7848
7833- 7852 7835-7852
7837- 7852
7838- 7856
7840- 7856
7841- 7860 7843-7860 7798-7815 7802-7819 7805-7822 7808-7825 7810-7829 7813-7832 7816-7834 7818-7836 7820-7839 7822-7841
7842- 7840
7843- 7843 7827-7844
7829- 7845
7830- 7849 7832-7849
7834- 7849
7835- 7853
7837- 7853
7838- 7857 7840-7857
7842- 7857
7843- 7861 7798-7817 7802-7821 7805-7824 7808-7827 7811-7828 7814-7833 7816-7835 7818-7837 7821-7836
7844- 7838
7845- 7840
7846- 7844 7827-7845 7829-7846
7831- 7846
7832- 7850
7834- 7850
7835- 7854 7837-7854
7839- 7854
7840- 7858
7842- 7858
7843- 7862 7799-7816, 7803-7818, 7806-7821, 7809-7825, 7811-7830, 7815-7831, 7817-7833, 7819-7835, 7821-7837,
7844- 7839,
7845- 7841,
7826- 7842,
7827- 7846, 7829-7847,
7831- 7847,
7832- 7851, 7834-7851,
7836- 7851,
7837- 7855,
7839- 7855,
7840- 7859, 7842-7859, 7844-7859,
7839-
вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды, направленные на область нуклеиновой кислоты CFB, имеют часть смежных азотистых оснований, которая комплементарна равной по длине части азотистых оснований указанной области. Например, область может представлять собой часть из по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части области, указанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из конъюгата и модифицированного олигонуклеотида, направленного на любые из следующих нуклеотидных областей SEQ Ш NO: 1: 30-49, 4863, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-
177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154,
1141-1160,
1147-
1166,
1150
-1169,
1153-1172,
1159
-1178,
1162-1181,
1165-1184,
1171-1186,
1171-1190,
1173-
1188,
1173
-1192,
1175-1190,
1175
-1194,
1177-1196,
1183-1202,
1208-1227,
1235-1254,
1298-
1317,
1304
-1323,
1310-1329,
1316
-1335,
1319-1338,
1322-1341,
1328-1347,
1349-1368,
1355-
1374,
1393
-1412,
1396-1415,
1399
-1418,
1405-1424,
1421-1440,
1621-1640,
1646-1665,
1646-
1665,
1647
-1666,
1689-1708,
1749
-1768,
1763-1782,
1912-1931,
2073-2092,
2085-2104,
2166-
2185,
2172
-2191,
2189-2208,
2191
-2210,
2193-2212,
2195-2210,
2195-2214,
2196-2215,
2197-
2212,
2197
-2216,
2202-2221,
2223
-2238,
2223-2242,
2225-2240,
2226-2245,
2227-2242,
2227-
2246,
2238
-2257,
2241-2260,
2267
-2286,
2361-2380,
2388-2407,
2397-2416,
2448-2467,
2453-
2472,
2455
-2474,
2457-2472,
2457
-2476,
2459-2474,
2459-2478,
2461-2476,
2461-2480,
2532-
2551,
2550
-2569,
2551-2566,
2551
-2570,
2552-2568,
2552-2570,
2552-2571,
2553-2568,
2553-
2570,
2553
-2571,
2553-2572,
2554
-2571,
2554-2572,
2554-2573,
2555-2570,
2555-2572,
2555-
2574,
2556
-2573,
2556-2574,
2556
-2575,
2557-2573,
2557-2574,
2557-2575,
2557-2576,
2558-
2575,
2558
-2576,
2558-2577,
2559
-2576,
2559-2577,
2559-2578,
2560-2577,
2560-2578,
2560-
2579,
2561
-2576,
2561-2578,
2561
-2579,
2561-2580,
2562-2577,
2562-2579,
2562-2581,
2563-
2578,
2563
-2580,
2563-2582,
2564
-2581,
2564-2583,
2565-2584,
2566-2583,
2566-2585,
2567-
2582,
2567
-2584,
2567-2586,
2568
-2583,
2568-2585,
2568-2587,
2569-2586,
2569-2588,
2570-
2585,
2570
-2587,
2570-2589,
2571
-2586,
2571-2588,
2571-2590,
2572-2589,
2572-2590,
2572-
2591,
2573
-2590,
2573-2592,
2574
-2590,
2574-2591,
2574-2593,
2575-2590,
2575-2591,
2575-
2592,
2575
-2594,
2576-2593,
2576
-2595,
2577-2594,
2577-2595,
2577-2596,
2578-2594,
2578-
2596,
2578-2597,
2579
-2598,
2580
-2596,
2580
-2597,
2580-2598,
2580
-2599,
2581
-2597,
2581-
2598,
2581-2599,
2581
-2600,
2582
-2598,
2582
-2599,
2582-2600,
2582
-2601,
2583
-2599,
2583-
2600,
2583-2601,
2583
-2602,
2584
-2600,
2584
-2601,
2584-2602,
2584
-2603,
2585
-2601,
2585-
2603,
2585-2604,
2586
-2601,
2586
-2602,
2586
-2604,
2586-2605,
2587
-2602,
2587
-2603,
2587-
2605,
2587-2606,
2588
-2603,
2588
-2604,
2588
-2605,
2588-2606,
2588
-2607,
2589
-2604,
2589-
2605,
2589-2606,
2589
-2607,
2589
-2608,
2590
-2605,
2590-2606,
2590
-2607,
2590
-2608,
2590-
2609,
2590-2609,
2591
-2607,
2591
-2608,
2591
-2609,
2591-2610,
2592
-2607,
2592
-2608,
2592-
2609,
2592-2610,
2592
-2611,
2593
-2608,
2593
-2609,
2593-2610,
2593
-2612,
2594
-2609,
2594-
2610,
2594-2611,
2594
-2612,
2594
-2613,
2595
-2610,
2595-2611,
2595
-2612,
2595
-2613,
2595-
2614,
2596-2611,
2596
-2612,
2596
-2613,
2596
-2614,
2596-2615,
2597
-2612,
2597
-2612,
2597-
2613,
2597-2614,
2597
-2615,
2597
-2616,
2598
-2613,
2598-2614,
2598
-2615,
2598
-2616,
2598-
2617,
2599-2614,
2599
-2615,
2599
-2616,
2599
-2617,
2599-2618,
2600
-2615,
2600
-2616,
2600-
2617,
2600-2618,
2600
-2619,
2601
-2616,
2601
-2617,
2601-2618,
2601
-2619,
2601
-2620,
2602-
2617,
2602-2618,
2602
-2619,
2602
-2620,
2602
-2621,
2603-2618,
2603
-2619,
2603
-2620,
2603-
2621,
2603-2622,
2604
-2619,
2604
-2620,
2604
-2621,
2604-2622,
2604
-2623,
2605
-2620,
2605-
2621,
2605-2622,
2605
-2623,
2605
-2624,
2606
-2621,
2606-2622,
2606
-2623,
2606
-2624,
2606-
2625,
2607-2622,
2607
-2623,
2607
-2624,
2607
-2625,
2607-2626,
2608
-2623,
2608
-2624,
2608-
2625,
2608-2626,
2608
-2627,
2609
-2624,
2609
-2625,
2609-2626,
2609
-2627,
2609
-2628,
2610-
2625,
2610-2626,
2610
-2627,
2610
-2628,
2610
-2629,
2611-2626,
2611
-2627,
2611
-2628,
2611-
2629,
2611-2630,
2612
-2627,
2612
-2628,
2612
-2629,
2612-2630,
2612
-2631,
2613
-2628,
2613-
2629,
2613-2630,
2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 и 2616-
2631.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB. В некоторых вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды, направленные на область нуклеиновой кислоты CFB, имеют часть смежных азотистых оснований, которая комплементарна равной по длине части азотистых оснований указанной области. Например, область может представлять собой часть из по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части
области, указанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из конъюгата и модифицированного олигонуклеотида, направленного на следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 2: 1608-1627, 1685-1704,
1686-1705 1877-1892 2852-2871 3843-3862 4612-4631 4698-4717 6406-6425 6983-6998 7151-7170 7694-7709 7787-7805 7789-7808 7792-7809 7794-7813 7797-7812 7800-7819 7803-7822 7806-7825 7809-7828 7812-7830 7815-7833 7817-7835 7819-7837 7821-7840
7823- 7840
7824- 7843 1751-1770 1877-1896 2946-2965 4151-4166 4615-4634 4714-4733 6662-6681 6983-7002 7353-7372 7694-7713 7787-7806 7790-7805 7792-7810 7795-7812 7797-7814 7801-7818 7804-7821 7807-7824 7810-7825 7812-7831 7815-7834 7817-7836 7819-7838
7825- 7837
7826- 7841 7825-7840 1769-1784 1878-1897 3773-3792 4151-4170 4621-4640 5270-5289 6674-6693 6984-7003 7362-7381 7696-7711 7788-7803 7790-7807 7792-7811 7795-7813 7797-7816 7801-7820 7804-7823 7807-7825 7810-7826 7813-7829 7816-7832 7818-7834 7820-7836
7827- 7838
7828- 7842 7825-7841 1871-1890 1879-1894 3819-3838 4153-4172 4642-4661 5295-5314 6954-6973 6985-7000 7683-7702 7696-7715 7788-7805 7790-7809 7793-7810 7795-7814 7798-7813 7802-7817 7805-7820 7807-7826 7810-7827 7813-7831 7816-7833 7818-7835 7820-7838 7822-7840
7829- 7839
7830- 7842 1872-1891 1879-1898 3825-3844 4159-4178 4648-4667 5296-5315 6960-6979 6985-7004 7688-7707 7767-7786 7788-7806 7791-7808 7793-7811 7796-7811 7798-7815 7802-7819 7805-7822 7808-7825 7810-7829 7813-7832 7816-7834 7818-7836 7820-7839 7822-7841
7831- 7840
7832- 7843 1873-1892 2288-2307 3831-3850 4184-4203 4686-4705 5830-5849 6977-6996 6990-7009 7690-7709 7785-7804 7788-7807 7791-7809 7793-7812 7796-7813 7798-7817 7802-7821 7805-7824 7808-7827 7811-7828 7814-7833 7816-7835 7818-7837 7821-7836
7833- 7838
7834- 7840
7835- 7844 1875-1890 2808-2827 3834-3853 4211-4230 4689-4708 5890-5909 6979-6998 7122-7141 7692-7707 7786-7801 7789-7806 7791-7810 7794-7811 7796-7814 7799-7816 7803-7818 7806-7821 7809-7825 7811-7830 7815-7831 7817-7833 7819-7835 7821-7837
7836- 7839
7837- 7841 7826-7842 1875-1894, 2846-2865, 3837-3856, 4609-4628, 4692-4711, 5904-5923, 6981-7000, 7125-7144, 7692-7711, 7787-7803, 7789-7807, 7792-7808, 7794-7812, 7796-7815, 7799-7818, 7803-7820, 7806-7823, 7809-7826, 7812-7829, 7815-7832, 7817-7834, 7819-7836, 7821-7839,
7838- 7839,
7839- 7842, 7826-7843,
7823-
7826-
-7844,
7826-7845,
7827-
-7842,
7827-
-7843,
7827-7844,
7827-
-7845,
7827-
-7846,
7828-
-7843,
7828-
-7844,
7828-7845,
7828-
-7847,
7829-
-7844,
7829-7845,
7829-
-7846,
7829-
-7847,
7829-
-7848,
7830-
-7845,
7830-7846,
7830-
-7847,
7830-
-7848,
7830-7849,
7831-
-7846,
7831-
-7847,
7831-
-7848,
7831-
-7849,
7831-7850,
7832-
-7847,
7832-
-7848,
7832-7849,
7832-
-7850,
7832-
-7851,
7833-
-7848,
7833-
-7849,
7833-7850,
7833-
-7851,
7833-
-7852,
7834-7849,
7834-
-7850,
7834-
-7851,
7834-
-7852,
7834-
-7853,
7835-7850,
7835-
-7851,
7835-
-7852,
7835-7853,
7835-
-7854,
7836-
-7851,
7836-
-7852,
7836-
-7853,
7836-7854,
7836-
-7855,
7837-
-7852,
7837-7853,
7837-
-7854,
7837-
-7855,
7837-
-7856,
7838-
-7853,
7838-7854,
7838-
-7855,
7838-
-7856,
7838-7857,
7839-
-7854,
7839-
-7855,
7839-
-7856,
7839-
-7857,
7839-7858,
7840-
-7855,
7840-
-7856,
7840-7857,
7840-
-7858,
7840-
-7859,
7841-
-7856,
7841-
-7857,
7841-7858,
7841-
-7859,
7841-
-7860,
7842-7857,
7842-
-7858,
7842-
-7859,
7842-
-7860,
7842-
-7861,
7843-7858,
7843-
-7859,
7843-
-7860,
7843-7861,
7843-
-7862,
7844-
-7859,
7844-
-7860,
7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 и 7846-7862.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из конъюгата и модифицированного олигонуклеотида, направленного на 3' НТО нуклеиновой кислоты CFB. В некоторых аспектах модифицированный олигонуклеотид направлен на диапазон нуклеотидов 2574-2626 нуклеиновой кислоты CFB, имеющей последовательность азотистых оснований SEQ Ш NO: 1. В некоторых аспектах модифицированный олигонуклеотид имеет часть из по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части в диапазоне нуклеотидов 2576-2626 нуклеиновой кислоты CFB, имеющей последовательность азотистых оснований SEQ Ш NO: 1.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из конъюгата и модифицированного олигонуклеотида, направленного на область нуклеиновой кислоты CFB, имеющую последовательность азотистых оснований SEQ Ш NO: 1 в диапазоне азотистых оснований 2457-2631, 2457-2472, 2457-2474, 2457-2476, 2457-2566, 2457-2570, 2457-2571, 2457-2572, 2457-2573, 2457-2574, 2457-2575, 2457-2576, 2457-2577, 2457-2578, 2457-2579, 2457-2580, 2457-2581, 2457-2582, 2457-2583, 2457-2584, 2457-2585, 2457-2586, 2457-2587, 2457-2588, 2457-2589, 2457-2590, 2457-2591, 2457-2592, 2457-2593, 2457-2594, 2457-2595, 2457-2596, 2457-2597, 2457-2598, 2457-2599, 2457-2600, 2457-2601, 2457-2602,
2457-2603 2457-2611 2457-2619 2457-2627 2459-2570 2459-2578 2459-2586 2459-2594 2459-2602 2459-2610 2459-2618 2459-2626 2461-2570 2461-2578 2461-2586 2461-2594 2461-2602 2461-2610 2461-2618 2461-2626 2551-2571 2551-2579 2551-2587 2551-2595 2551-2603 2551-2611 2551-2619 2551-2627 2553-2573 2457-2604 2457-2612 2457-2620 2457-2628 2459-2571 2459-2579 2459-2587 2459-2595 2459-2603 2459-2611 2459-2619 2459-2627 2461-2571 2461-2579 2461-2587 2461-2595 2461-2603 2461-2611 2461-2619 2461-2627 2551-2572 2551-2580 2551-2588 2551-2596 2551-2604 2551-2612 2551-2620 2551-2628 2553-2574 2457-2605 2457-2613 2457-2621 2457-2629 2459-2572 2459-2580 2459-2588 2459-2596 2459-2604 2459-2612 2459-2620 2459-2628 2461-2572 2461-2580 2461-2588 2461-2596 2461-2604 2461-2612 2461-2620 2461-2628 2551-2573 2551-2581 2551-2589 2551-2597 2551-2605 2551-2613 2551-2621 2551-2629 2553-2575 2457-2606 2457-2614 2457-2622 2457-2630 2459-2573 2459-2581 2459-2589 2459-2597 2459-2605 2459-2613 2459-2621 2459-2629 2461-2573 2461-2581 2461-2589 2461-2597 2461-2605 2461-2613 2461-2621 2461-2629 2551-2574 2551-2582 2551-2590 2551-2598 2551-2606 2551-2614 2551-2622 2551-2630 2553-2576 2457-2607 2457-2615 2457-2623 2457-2631 2459-2574 2459-2582 2459-2590 2459-2598 2459-2606 2459-2614 2459-2622 2459-2630 2461-2574 2461-2582 2461-2590 2461-2598 2461-2606 2461-2614 2461-2622 2461-2630 2551-2575 2551-2583 2551-2591 2551-2599 2551-2607 2551-2615 2551-2623 2551-2631 2553-2577 2457-2608 2457-2616 2457-2624 2459-2474 2459-2575 2459-2583 2459-2591 2459-2599 2459-2607 2459-2615 2459-2623 2459-2631 2461-2575 2461-2583 2461-2591 2461-2599 2461-2607 2461-2615 2461-2623 2461-2631 2551-2576 2551-2584 2551-2592 2551-2600 2551-2608 2551-2616 2551-2624 2553-2570 2553-2578 2457-2609 2457-2617 2457-2625 2459-2476 2459-2576 2459-2584 2459-2592 2459-2600 2459-2608 2459-2616 2459-2624 2461-2476 2461-2576 2461-2584 2461-2592 2461-2600 2461-2608 2461-2616 2461-2624 2551-2566 2551-2577 2551-2585 2551-2593 2551-2601 2551-2609 2551-2617 2551-2625 2553-2571 2553-2579 2457-2610, 2457-2618, 2457-2626, 2459-2566, 2459-2577, 2459-2585, 2459-2593, 2459-2601, 2459-2609, 2459-2617, 2459-2625, 2461-2566, 2461-2577, 2461-2585, 2461-2593, 2461-2601, 2461-2609, 2461-2617, 2461-2625, 2551-2570, 2551-2578, 2551-2586, 2551-2594, 2551-2602, 2551-2610, 2551-2618, 2551-2626, 2553-2572, 2553-2580,
2553-2581 2553-2589 2553-2597 2553-2605 2553-2613 2553-2621
2553- 2629
2554- 2578 2554-2586 2554-2594 2554-2602 2554-2610 2554-2618
2554- 2626
2555- 2574 2555-2582 2555-2590 2555-2598 2555-2606 2555-2614 2555-2622
2555- 2630
2556- 2579 2556-2587 2556-2595 2556-2603 2556-2611 2556-2619 2556-2627 2553-2582 2553-2590 2553-2598 2553-2606 2553-2614 2553-2622
2557- 2630
2558- 2579 2554-2587 2554-2595 2554-2603 2554-2611 2554-2619
2554- 2627
2555- 2575 2555-2583 2555-2591 2555-2599 2555-2607 2555-2615 2555-2623
2555- 2631
2556- 2580 2556-2588 2556-2596 2556-2604 2556-2612 2556-2620 2556-2628 2553-2583 2553-2591 2553-2599 2553-2607 2553-2615 2553-2623
2557- 2631
2558- 2580 2554-2588 2554-2596 2554-2604 2554-2612 2554-2620
2554- 2628
2555- 2576 2555-2584 2555-2592 2555-2600 2555-2608 2555-2616
2555- 2624
2556- 2573 2556-2581 2556-2589 2556-2597 2556-2605 2556-2613 2556-2621 2556-2629 2553-2584 2553-2592 2553-2600 2553-2608 2553-2616
2557- 2624
2558- 2573 2554-2581 2554-2589 2554-2597 2554-2605 2554-2613 2554-2621
2554- 2629
2555- 2577 2555-2585 2555-2593 2555-2601 2555-2609 2555-2617
2555- 2625
2556- 2574 2556-2582 2556-2590 2556-2598 2556-2606 2556-2614 2556-2622 2556-2630 2553-2585 2553-2593 2553-2601 2553-2609 2553-2617
2557- 2625
2558- 2574 2554-2582 2554-2590 2554-2598 2554-2606 2554-2614 2554-2622
2554- 2630
2555- 2578 2555-2586 2555-2594 2555-2602 2555-2610 2555-2618
2555- 2626
2556- 2575 2556-2583 2556-2591 2556-2599 2556-2607 2556-2615 2556-2623 2556-2631 2553-2586 2553-2594 2553-2602 2553-2610 2553-2618
2557- 2626
2558- 2575 2554-2583 2554-2591 2554-2599 2554-2607 2554-2615 2554-2623
2554- 2631
2555- 2579 2555-2587 2555-2595 2555-2603 2555-2611 2555-2619
2555- 2627
2556- 2576 2556-2584 2556-2592 2556-2600 2556-2608 2556-2616
2556- 2624
2557- 2574 2553-2587 2553-2595 2553-2603 2553-2611 2553-2619
2558- 2627
2559- 2576 2554-2584 2554-2592 2554-2600 2554-2608 2554-2616
2554- 2624
2555- 2572 2555-2580 2555-2588 2555-2596 2555-2604 2555-2612 2555-2620
2555- 2628
2556- 2577 2556-2585 2556-2593 2556-2601 2556-2609 2556-2617
2556- 2625
2557- 2575 2553-2588, 2553-2596, 2553-2604, 2553-2612, 2553-2620,
2558- 2628,
2559- 2577, 2554-2585, 2554-2593, 2554-2601, 2554-2609, 2554-2617,
2554- 2625,
2555- 2573, 2555-2581, 2555-2589, 2555-2597, 2555-2605, 2555-2613, 2555-2621,
2555- 2629,
2556- 2578, 2556-2586, 2556-2594, 2556-2602, 2556-2610, 2556-2618,
2556- 2626,
2557- 2576,
2556-
2557-2577 2557-2585 2557-2593 2557-2601 2557-2609 2557-2617
2557- 2625
2558- 2576 2558-2584 2558-2592 2558-2600 2558-2608 2558-2616
2558- 2624
2559- 2576 2559-2584 2559-2592 2559-2600 2559-2608 2559-2616
2559- 2624
2560- 2577 2560-2585 2560-2593 2560-2601 2560-2609 2560-2617
2560- 2625
2561- 2579 2557-2578 2557-2586 2557-2594 2557-2602 2557-2610 2557-2618
2562- 2626
2563- 2577 2558-2585 2558-2593 2558-2601 2558-2609 2558-2617
2558- 2625
2559- 2577 2559-2585 2559-2593 2559-2601 2559-2609 2559-2617
2559- 2625
2560- 2578 2560-2586 2560-2594 2560-2602 2560-2610 2560-2618
2560- 2626
2561- 2580 2557-2579 2557-2587 2557-2595 2557-2603 2557-2611 2557-2619
2562- 2627
2563- 2578 2558-2586 2558-2594 2558-2602 2558-2610 2558-2618
2558- 2626
2559- 2578 2559-2586 2559-2594 2559-2602 2559-2610 2559-2618
2559- 2626
2560- 2579 2560-2587 2560-2595 2560-2603 2560-2611 2560-2619
2560- 2627
2561- 2581 2557-2580 2557-2588 2557-2596 2557-2604 2557-2612 2557-2620
2562- 2628
2563- 2579 2558-2587 2558-2595 2558-2603 2558-2611 2558-2619
2558- 2627
2559- 2579 2559-2587 2559-2595 2559-2603 2559-2611 2559-2619
2559- 2627
2560- 2580 2560-2588 2560-2596 2560-2604 2560-2612 2560-2620
2560- 2628
2561- 2582 2557-2581 2557-2589 2557-2597 2557-2605 2557-2613 2557-2621
2562- 2629
2563- 2580 2558-2588 2558-2596 2558-2604 2558-2612 2558-2620
2558- 2628
2559- 2580 2559-2588 2559-2596 2559-2604 2559-2612 2559-2620
2559- 2628
2560- 2581 2560-2589 2560-2597 2560-2605 2560-2613 2560-2621
2560- 2629
2561- 2583 2557-2582 2557-2590 2557-2598 2557-2606 2557-2614 2557-2622
2562- 2630
2563- 2581 2558-2589 2558-2597 2558-2605 2558-2613 2558-2621
2558- 2629
2559- 2581 2559-2589 2559-2597 2559-2605 2559-2613 2559-2621
2559- 2629
2560- 2582 2560-2590 2560-2598 2560-2606 2560-2614 2560-2622
2560- 2630
2561- 2584 2557-2583 2557-2591 2557-2599 2557-2607 2557-2615 2557-2623
2562- 2631
2563- 2582 2558-2590 2558-2598 2558-2606 2558-2614 2558-2622
2558- 2630
2559- 2582 2559-2590 2559-2598 2559-2606 2559-2614 2559-2622
2559- 2630
2560- 2583 2560-2591 2560-2599 2560-2607 2560-2615 2560-2623
2560- 2631
2561- 2585 2557-2584, 2557-2592, 2557-2600, 2557-2608, 2557-2616,
2562- 2624,
2563- 2575, 2558-2583, 2558-2591, 2558-2599, 2558-2607, 2558-2615, 2558-2623,
2558- 2631,
2559- 2583, 2559-2591, 2559-2599, 2559-2607, 2559-2615, 2559-2623,
2559- 2631,
2560- 2584, 2560-2592, 2560-2600, 2560-2608, 2560-2616,
2560- 2624,
2561- 2578, 2561-2586,
2560-
2561-2587 2561-2595 2561-2603 2561-2611 2561-2619
2561- 2627
2562- 2580 2562-2588 2562-2596 2562-2604 2562-2612 2562-2620
2562- 2628
2563- 2584 2563-2592 2563-2600 2563-2608 2563-2616
2563- 2624
2564- 2581 2564-2589 2564-2597 2564-2605 2564-2613 2564-2621
2564- 2629
2565- 2589 2565-2597 2565-2605 2561-2588 2561-2596 2561-2604 2561-2612 2561-2620
2566- 2628
2567- 2581 2562-2589 2562-2597 2562-2605 2562-2613 2562-2621
2562- 2629
2563- 2585 2563-2593 2563-2601 2563-2609 2563-2617
2563- 2625
2564- 2582 2564-2590 2564-2598 2564-2606 2564-2614 2564-2622
2564- 2630
2565- 2590 2565-2598 2565-2606 2561-2589 2561-2597 2561-2605 2561-2613 2561-2621
2566- 2629
2567- 2582 2562-2590 2562-2598 2562-2606 2562-2614 2562-2622
2562- 2630
2563- 2586 2563-2594 2563-2602 2563-2610 2563-2618
2563- 2626
2564- 2583 2564-2591 2564-2599 2564-2607 2564-2615 2564-2623
2564- 2631
2565- 2591 2565-2599 2565-2607 2561-2590 2561-2598 2561-2606 2561-2614 2561-2622
2566- 2630
2567- 2583 2562-2591 2562-2599 2562-2607 2562-2615 2562-2623
2562- 2631
2563- 2587 2563-2595 2563-2603 2563-2611 2563-2619
2563- 2627
2564- 2584 2564-2592 2564-2600 2564-2608 2564-2616
2564- 2624
2565- 2584 2565-2592 2565-2600 2565-2608 2561-2591 2561-2599 2561-2607 2561-2615 2561-2623
2566- 2631
2567- 2584 2562-2592 2562-2600 2562-2608 2562-2616
2562- 2624
2563- 2580 2563-2588 2563-2596 2563-2604 2563-2612 2563-2620
2563- 2628
2564- 2585 2564-2593 2564-2601 2564-2609 2564-2617
2564- 2625
2565- 2585 2565-2593 2565-2601 2565-2609 2561-2592 2561-2600 2561-2608 2561-2616
2566- 2624
2567- 2577 2562-2585 2562-2593 2562-2601 2562-2609 2562-2617
2562- 2625
2563- 2581 2563-2589 2563-2597 2563-2605 2563-2613 2563-2621
2563- 2629
2564- 2586 2564-2594 2564-2602 2564-2610 2564-2618
2564- 2626
2565- 2586 2565-2594 2565-2602 2565-2610 2561-2593 2561-2601 2561-2609 2561-2617
2566- 2625
2567- 2578 2562-2586 2562-2594 2562-2602 2562-2610 2562-2618
2562- 2626
2563- 2582 2563-2590 2563-2598 2563-2606 2563-2614 2563-2622
2563- 2630
2564- 2587 2564-2595 2564-2603 2564-2611 2564-2619
2564- 2627
2565- 2587 2565-2595 2565-2603 2565-2611 2561-2594, 2561-2602, 2561-2610, 2561-2618,
2566- 2626,
2567- 2579, 2562-2587, 2562-2595, 2562-2603, 2562-2611, 2562-2619,
2562- 2627,
2563- 2583, 2563-2591, 2563-2599, 2563-2607, 2563-2615, 2563-2623,
2563- 2631,
2564- 2588, 2564-2596, 2564-2604, 2564-2612, 2564-2620,
2564- 2628,
2565- 2588, 2565-2596, 2565-2604, 2565-2612,
2564-
2565-2613 2565-2621
2565- 2629
2566- 2588 2566-2596 2566-2604 2566-2612 2566-2620
2566- 2628
2567- 2588 2567-2596 2567-2604 2567-2612 2567-2620
2567- 2628
2568- 2589 2568-2597 2568-2605 2568-2613 2568-2621
2568- 2629
2569- 2591 2569-2599 2569-2607 2569-2615 2569-2623 2569-2631 2569-2593 2569-2601 2565-2614 2565-2622
2570- 2630
2571- 2589 2566-2597 2566-2605 2566-2613 2566-2621
2566- 2629
2567- 2589 2567-2597 2567-2605 2567-2613 2567-2621
2567- 2629
2568- 2590 2568-2598 2568-2606 2568-2614 2568-2622
2568- 2630
2569- 2592 2569-2600 2569-2608 2569-2616 2569-2624 2569-2586 2569-2594 2569-2602 2565-2615 2565-2623
2570- 2631
2571- 2590 2566-2598 2566-2606 2566-2614 2566-2622
2566- 2630
2567- 2590 2567-2598 2567-2606 2567-2614 2567-2622
2567- 2630
2568- 2591 2568-2599 2568-2607 2568-2615 2568-2623
2568- 2631
2569- 2593 2569-2601 2569-2609 2569-2617 2569-2625 2569-2587 2569-2595 2569-2603 2565-2616
2570- 2624
2571- 2583 2566-2591 2566-2599 2566-2607 2566-2615 2566-2623
2566- 2631
2567- 2591 2567-2599 2567-2607 2567-2615 2567-2623
2567- 2631
2568- 2592 2568-2600 2568-2608 2568-2616
2568- 2624
2569- 2586 2569-2594 2569-2602 2569-2610 2569-2618 2569-2626 2569-2588 2569-2596 2569-2604 2565-2617
2570- 2625
2571- 2584 2566-2592 2566-2600 2566-2608 2566-2616
2566- 2624
2567- 2584 2567-2592 2567-2600 2567-2608 2567-2616
2567- 2624
2568- 2585 2568-2593 2568-2601 2568-2609 2568-2617
2568- 2625
2569- 2587 2569-2595 2569-2603 2569-2611 2569-2619 2569-2627 2569-2589 2569-2597 2569-2605 2565-2618
2570- 2626
2571- 2585 2566-2593 2566-2601 2566-2609 2566-2617
2566- 2625
2567- 2585 2567-2593 2567-2601 2567-2609 2567-2617
2567- 2625
2568- 2586 2568-2594 2568-2602 2568-2610 2568-2618
2568- 2626
2569- 2588 2569-2596 2569-2604 2569-2612 2569-2620 2569-2628 2569-2590 2569-2598 2569-2606 2565-2619
2570- 2627
2571- 2586 2566-2594 2566-2602 2566-2610 2566-2618
2566- 2626
2567- 2586 2567-2594 2567-2602 2567-2610 2567-2618
2567- 2626
2568- 2587 2568-2595 2568-2603 2568-2611 2568-2619
2568- 2627
2569- 2589 2569-2597 2569-2605 2569-2613 2569-2621 2569-2629 2569-2591 2569-2599 2569-2607 2565-2620,
2570- 2628,
2571- 2587, 2566-2595, 2566-2603, 2566-2611, 2566-2619,
2566- 2627,
2567- 2587, 2567-2595, 2567-2603, 2567-2611, 2567-2619,
2567- 2627,
2568- 2588, 2568-2596, 2568-2604, 2568-2612, 2568-2620,
2568- 2628,
2569- 2590, 2569-2598, 2569-2606, 2569-2614, 2569-2622, 2569-2630, 2569-2592, 2569-2600, 2569-2608,
2568-
2569-2609 2569-2617 2569-2625 2571-2589 2571-2597 2571-2605 2571-2613 2571-2621
2571- 2629
2572- 2594 2572-2602 2572-2610 2572-2618
2572- 2626
2573- 2592 2573-2600 2573-2608 2573-2616
2573- 2624
2574- 2591 2574-2599 2574-2607 2574-2615 2574-2623
2574- 2631
2575- 2599 2575-2607 2575-2615 2575-2623 2569-2610 2569-2618 2569-2626 2571-2590 2571-2598 2571-2606 2571-2614 2571-2622
2576- 2630
2577- 2595 2572-2603. 2572-2611 2572-2619
2572- 2627
2573- 2593 2573-2601 2573-2609 2573-2617
2573- 2625
2574- 2592 2574-2600 2574-2608 2574-2616
2574- 2624
2575- 2592 2575-2600 2575-2608 2575-2616 2575-2624 2569-2611 2569-2619 2569-2627 2571-2591 2571-2599 2571-2607 2571-2615 2571-2623
2576- 2631
2577- 2596 2572-2604 2572-2612 2572-2620
2572- 2628
2573- 2594 2573-2602 2573-2610 2573-2618
2573- 2626
2574- 2593 2574-2601 2574-2609 2574-2617
2574- 2625
2575- 2593 2575-2601 2575-2609 2575-2617 2575-2625
2569-2612, 2569-2613 2569-2620, 2569-2621 2569-2628, 2569-2629 2571-2592, 2571-2593 2571-2600, 2571-2601 2571-2608, 2571-2609 2571-2616, 2571-2617
2571- 2624, 2571-2625
2572- 2589, 2572-2590 2572-2597, 2572-2598 2572-2605, 2572-2606 2572-2613, 2572-2614 2572-2621, 2572-2622
2572- 2629, 2572-2630
2573- 2595, 2573-2596. 2573-2603, 2573-2604 2573-2611, 2573-2612 2573-2619, 2573-2620
2573- 2627, 2573-2628
2574- 2594, 2574-2595 2574-2602, 2574-2603 2574-2610, 2574-2611 2574-2618, 2574-2619
2574- 2626, 2574-2627
2575- 2594, 2575-2595 2575-2602, 2575-2603 2575-2610, 2575-2611 2575-2618, 2575-2619 2575-2626, 2575-2627 2569-2614, 2569-2615 2569-2622, 2569-2623 2569-2630, 2569-2631 2571-2594, 2571-2595 2571-2602, 2571-2603 2571-2610, 2571-2611 2571-2618, 2571-2619
2576- 2626, 2571-2627.
2577- 2591, 2572-2592. 2572-2599, 2572-2600 2572-2607, 2572-2608 2572-2615, 2572-2616 2572-2623, 2572-2624
2572- 2631, 2573-2590
2573- 2597, 2573-2598. 2573-2605, 2573-2606 2573-2613, 2573-2614 2573-2621, 2573-2622
2573- 2629, 2573-2630
2574- 2596, 2574-2597 2574-2604, 2574-2605 2574-2612, 2574-2613 2574-2620, 2574-2621.
2574- 2628, 2574-2629
2575- 2596, 2575-2597 2575-2604, 2575-2605 2575-2612, 2575-2613 2575-2620, 2575-2621 2575-2628, 2575-2629
2569-2616, 2569-2624, 2571-2588, 2571-2596, 2571-2604, 2571-2612, 2571-2620,
2571- 2628,
2572- 2593, 2572-2601, 2572-2609, 2572-2617,
2572- 2625,
2573- 2591, 2573-2599, 2573-2607, 2573-2615, 2573-2623,
2573- 2631,
2574- 2598, 2574-2606, 2574-2614, 2574-2622,
2574- 2630,
2575- 2598, 2575-2606, 2575-2614, 2575-2622, 2575-2630,
2574-
2576- 2631.
2577- 2600 2576-2608 2576-2616
2576- 2624
2577- 2594 2577-2602 2577-2610 2577-2618
2577- 2626
2578- 2599 2578-2607 2578-2615 2578-2623
2578- 2631
2579- 2605 2579-2613 2579-2621
2579- 2629
2580- 2603 2580-2611 2580-2619
2580- 2627
2581- 2600 2581-2608 2581-2616
2581- 2624
2582- 2600 2582-2608 2576-2593 2576-2601 2576-2609 2576-2617
2583- 2625
2584- 2595 2577-2603 2577-2611 2577-2619
2577- 2627
2578- 2600 2578-2608 2578-2616
2578- 2624
2579- 2598 2579-2606 2579-2614 2579-2622
2579- 2630
2580- 2604 2580-2612 2580-2620
2580- 2628
2581- 2601 2581-2609 2581-2617
2581- 2625
2582- 2601 2582-2609 2576-2594 2576-2602 2576-2610 2576-2618
2583- 2626
2584- 2596 2577-2604 2577-2612 2577-2620
2577- 2628
2578- 2601 2578-2609 2578-2617
2578- 2625
2579- 2599 2579-2607 2579-2615 2579-2623
2579- 2631
2580- 2605 2580-2613 2580-2621
2580- 2629
2581- 2602 2581-2610 2581-2618
2581- 2626
2582- 2602 2582-2610 2576-2595. 2576-2603 2576-2611 2576-2619
2583- 2627
2584- 2597 2577-2605 2577-2613. 2577-2621
2577- 2629
2578- 2602 2578-2610 2578-2618
2578- 2626
2579- 2600 2579-2608 2579-2616
2579- 2624
2580- 2598 2580-2606 2580-2614 2580-2622
2580- 2630
2581- 2603 2581-2611 2581-2619
2581- 2627
2582- 2603 2582-2611 2576-2596 2576-2604 2576-2612 2576-2620
2583- 2628
2584- 2598 2577-2606 2577-2614 2577-2622
2577- 2630
2578- 2603 2578-2611 2578-2619
2578- 2627
2579- 2601 2579-2609 2579-2617
2579- 2625
2580- 2599 2580-2607 2580-2615 2580-2623
2580- 2631
2581- 2604 2581-2612 2581-2620
2581- 2628
2582- 2604 2582-2612 2576-2597 2576-2605 2576-2613 2576-2621
2583- 2629
2584- 2599 2577-2607 2577-2615 2577-2623
2577- 2631
2578- 2604 2578-2612 2578-2620
2578- 2628
2579- 2602 2579-2610 2579-2618
2579- 2626
2580- 2600 2580-2608 2580-2616
2580- 2624
2581- 2597 2581-2605 2581-2613 2581-2621
2581- 2629
2582- 2605 2582-2613 2576-2598 2576-2606 2576-2614 2576-2622
2583- 2630
2584- 2600 2577-2608 2577-2616
2577- 2624
2578- 2597 2578-2605 2578-2613 2578-2621
2578- 2629
2579- 2603 2579-2611 2579-2619
2579- 2627
2580- 2601 2580-2609 2580-2617
2580- 2625
2581- 2598 2581-2606 2581-2614 2581-2622
2581- 2630
2582- 2606 2582-2614 2576-2599, 2576-2607, 2576-2615, 2576-2623,
2583- 2631,
2584- 2601, 2577-2609, 2577-2617,
2577- 2625,
2578- 2598, 2578-2606, 2578-2614, 2578-2622,
2578- 2630,
2579- 2604, 2579-2612, 2579-2620,
2579- 2628,
2580- 2602, 2580-2610, 2580-2618,
2580- 2626,
2581- 2599, 2581-2607, 2581-2615, 2581-2623,
2581- 2631,
2582- 2607, 2582-2615,
2581-
2582-2616
2582- 2624
2583- 2601 2583-2609 2583-2617 2583-2625 2585-2604 2585-2612 2585-2620
2585- 2628
2586- 2608 2586-2616
2586- 2624
2587- 2605 2587-2613 2587-2621
2587- 2629
2588- 2611 2588-2619
2588- 2627
2589- 2610 2589-2618
2589- 2626
2590- 2608 2590-2616
2590- 2624
2591- 2610 2591-2618 2591-2626 2582-2617
2592- 2625
2593- 2602 2583-2610 2583-2618 2583-2626 2585-2605 2585-2613 2585-2621
2585- 2629
2586- 2609 2586-2617
2586- 2625
2587- 2606 2587-2614 2587-2622.
2587- 2630
2588- 2612 2588-2620
2588- 2628
2589- 2611 2589-2619
2589- 2627
2590- 2609 2590-2617
2590- 2625
2591- 2611 2591-2619 2591-2627 2582-2618
2592- 2626
2593- 2603 2583-2611 2583-2619 2583-2627 2585-2606 2585-2614 2585-2622
2585- 2630
2586- 2610 2586-2618
2586- 2626
2587- 2607 2587-2615 2587-2623
2587- 2631
2588- 2613 2588-2621
2588- 2629
2589- 2612 2589-2620
2589- 2628
2590- 2610 2590-2618
2590- 2626
2591- 2612 2591-2620 2591-2628 2582-2619
2592- 2627.
2593- 2604 2583-2612 2583-2620 2583-2628 2585-2607 2585-2615 2585-2623
2585- 2631
2586- 2611 2586-2619
2586- 2627
2587- 2608 2587-2616
2587- 2624
2588- 2606 2588-2614 2588-2622
2588- 2630
2589- 2613 2589-2621
2589- 2629
2590- 2611 2590-2619
2590- 2627
2591- 2613 2591-2621 2591-2629 2582-2620
2592- 2628
2593- 2605 2583-2613 2583-2621 2583-2629 2585-2608 2585-2616
2585- 2624
2586- 2604 2586-2612 2586-2620
2586- 2628
2587- 2609 2587-2617
2587- 2625
2588- 2607 2588-2615 2588-2623
2588- 2631
2589- 2614 2589-2622
2589- 2630
2590- 2612 2590-2620
2590- 2628
2591- 2614 2591-2622 2591-2630 2582-2621
2592- 2629
2593- 2606 2583-2614 2583-2622 2583-2630 2585-2609 2585-2617
2585- 2625
2586- 2605 2586-2613 2586-2621
2586- 2629
2587- 2610 2587-2618
2587- 2626
2588- 2608 2588-2616
2588- 2624
2589- 2607 2589-2615 2589-2623
2589- 2631
2590- 2613 2590-2621
2590- 2629
2591- 2615 2591-2623 2591-2631 2582-2622
2592- 2630
2593- 2607 2583-2615 2583-2623 2583-2631 2585-2610 2585-2618
2585- 2626
2586- 2606 2586-2614 2586-2622
2586- 2630
2587- 2611 2587-2619
2587- 2627
2588- 2609 2588-2617
2588- 2625
2589- 2608 2589-2616
2589- 2624
2590- 2606 2590-2614 2590-2622
2590- 2630
2591- 2616
2591- 2624
2592- 2611 2582-2623.
2593- 2631
2594- 2608 2583-2616 2583-2624 2585-2603 2585-2611 2585-2619
2585- 2627
2586- 2607 2586-2615 2586-2623
2586- 2631
2587- 2612 2587-2620
2587- 2628
2588- 2610 2588-2618
2588- 2626
2589- 2609 2589-2617
2589- 2625
2590- 2607 2590-2615 2590-2623
2590- 2631
2591- 2617
2591- 2625
2592- 2612
2591-
2592-2613 2592-2621
2592- 2629
2593- 2616
2593- 2624
2594- 2612 2594-2620
2594- 2628
2595- 2615 2595-2623
2595- 2631
2596- 2621
2596- 2629
2597- 2617
2597- 2625
2598- 2614 2598-2622
2598- 2630
2599- 2620
2599- 2628
2600- 2619
2600- 2627
2601- 2619
2601- 2627
2602- 2621
2602- 2629
2603- 2625
2604- 2620 2604-2628 2592-2614 2592-2622
2605- 2630
2606- 2617
2593- 2625
2594- 2613 2594-2621
2594- 2629
2595- 2616
2595- 2624
2596- 2614 2596-2622
2596- 2630
2597- 2618
2597- 2626
2598- 2615 2598-2623
2598- 2631
2599- 2621
2599- 2629
2600- 2620
2600- 2628
2601- 2620
2601- 2628
2602- 2622
2602- 2630
2603- 2626
2604- 2621 2604-2629 2592-2615 2592-2623
2605- 2631
2606- 2618
2593- 2626
2594- 2614 2594-2622
2594- 2630
2595- 2617
2595- 2625
2596- 2615 2596-2623
2596- 2631
2597- 2619
2597- 2627
2598- 2616
2598- 2624
2599- 2614 2599-2622
2599- 2630
2600- 2621
2600- 2629
2601- 2621
2601- 2629
2602- 2623
2602- 2631
2603- 2627
2604- 2622 2604-2630 2592-2616
2605- 2624
2606- 2608 2593-2619
2593- 2627
2594- 2615 2594-2623
2594- 2631
2595- 2618
2595- 2626
2596- 2616
2596- 2624
2597- 2612 2597-2620
2597- 2628
2598- 2617
2598- 2625
2599- 2615 2599-2623
2599- 2631
2600- 2622
2600- 2630
2601- 2622
2601- 2630
2602- 2624
2603- 2620
2603- 2628
2604- 2623 2604-2631 2592-2617
2605- 2625
2606- 2612 2593-2620
2593- 2628
2594- 2616
2594- 2624
2595- 2611 2595-2619
2595- 2627
2596- 2617
2596- 2625
2597- 2613 2597-2621
2597- 2629
2598- 2618
2598- 2626
2599- 2616
2599- 2624
2600- 2615 2600-2623
2600- 2631
2601- 2623
2601- 2631
2602- 2625
2603- 2621
2603- 2629
2604- 2624
2605- 2620 2592-2618
2606- 2626
2607- 2613 2593-2621
2593- 2629
2594- 2617
2594- 2625
2595- 2612 2595-2620
2595- 2628
2596- 2618
2596- 2626
2597- 2614 2597-2622
2597- 2630
2598- 2619
2598- 2627
2599- 2617
2599- 2625
2600- 2616
2600- 2624
2601- 2616
2601- 2624
2602- 2618
2602- 2626
2603- 2622
2603- 2630
2604- 2625
2605- 2621 2592-2619
2606- 2627
2607- 2614 2593-2622
2593- 2630
2594- 2618
2594- 2626
2595- 2613 2595-2621
2595- 2629
2596- 2619
2596- 2627
2597- 2615 2597-2623
2597- 2631
2598- 2620
2598- 2628
2599- 2618
2599- 2626
2600- 2617
2600- 2625
2601- 2617
2601- 2625
2602- 2619
2602- 2627
2603- 2623
2603- 2631
2604- 2626
2605- 2622 2592-2620
2606- 2628
2607- 2615 2593-2623
2593- 2631
2594- 2619
2594- 2627
2595- 2614 2595-2622
2595- 2630
2596- 2620
2596- 2628
2597- 2616
2597- 2624
2598- 2613 2598-2621
2598- 2629
2599- 2619
2599- 2627
2600- 2618
2600- 2626
2601- 2618
2601- 2626
2602- 2620
2602- 2628
2603- 2624
2604- 2619
2604- 2627
2605- 2623
2604-
2606- 2624, 2605-2625, 2605-2626, 2605-2627, 2605-2628, 2605-2629, 2605-2630, 2605-2631,
2607- 2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2606-2626, 2606-2627, 2606-2628,
2606- 2629, 2606-2630, 2606-2631, 2607-2622, 2607-2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626,
2607- 2627, 2607-2628, 2607-2629, 2607-2630, 2607-2631, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625,
2608- 2626, 2608-2627, 2608-2628, 2608-2629, 2608-2630, 2608-2631, 2609-2624, 2609-2625,
2609- 2626, 2609-2627, 2609-2628, 2609-2629, 2609-2630, 2609-2631, 2610-2625, 2610-2626,
2610- 2627, 2610-2628, 2610-2629, 2610-2630, 2610-2631, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628,
2611- 2629, 2611-2630, 2611-2631, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 или 2616-2631. В некоторых аспектах антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных азотистых оснований в пределах вышеуказанных областей азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш NO: 1, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 50 % ингибирование: 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412, 1396-1415, 1399-1418, 1405-1424, 1421-1440, 1621-1640, 1646-1665, 1646-1665, 1647-1666, 1689-1708, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2073-2092, 2085-2104, 2166-2185, 2172-2191, 2189-2208, 2191-2210, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2196-2215, 2197-2212, 2197-2216, 2202-2221, 2223-2238, 2223-2242, 2225-2240, 2226-2245, 2227-2242, 2227-2246, 2238-2257, 2241-2260, 2267-2286, 2361-2380, 2388-2407, 2397-2416, 2448-2467, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472, 2457-2476, 2459-2474, 2459-2478, 2461-2476, 2461-2480, 2532-2551, 2550-2569, 2551-2566, 2551-2570, 2552-2568, 2552-2570, 2552-2571, 2553-2568, 2553-2570, 2553-2571, 2553-2572, 2554-2571, 2554-2572, 2554-2573, 2555-2570, 2555-2572, 2555-2574, 2556-2573, 2556-2574, 2556-2575, 2557-2573, 2557-2574, 2557-2575, 2557-2576, 2558-2575, 2558-2576, 2558-2577,
2559-2576 2561-2579 2564-2581 2568-2583 2571-2586 2574-2590 2576-2595 2580-2596 2582-2598 2584-2600 2586-2602
2588- 2604
2589- 2608 2591-2608
2593- 2608
2594- 2613
2596- 2613
2597- 2616 2599-2616
2601- 2616
2602- 2620
2604- 2620
2605- 2624 2607-2624
2609- 2624
2610- 2628 2612-2628 2614-2629 2559-2577 2561-2580 2564-2583 2568-2585 2571-2588 2574-2591 2577-2594 2580-2597 2582-2599 2584-2601 2586-2604 2588-2605
2611- 2605
2612- 2609 2593-2609
2595- 2610
2596- 2614
2598- 2613
2599- 2617
2601- 2617
2602- 2621 2604-2621
2606- 2621
2607- 2625
2609- 2625
2610- 2629 2612-2629 2614-2630 2559-2578 2562-2577 2565-2584 2568-2587 2571-2590 2574-2593 2577-2595 2580-2598 2582-2600 2584-2602 2586-2605 2588-2606
2611- 2606
2612- 2610 2593-2610
2595- 2611
2596- 2615
2598- 2614
2599- 2618 2601-2618
2603- 2618
2604- 2622
2606- 2622
2607- 2626 2609-2626
2611- 2626
2612- 2630 2614-2631 , 2560-2577 , 2562-2579 , 2566-2583 , 2569-2586 , 2572-2589 , 2575-2590 , 2577-2596 , 2580-2599 , 2582-2601 , 2584-2603 , 2587-2602 , 2588-2607 , 2590-2607 , 2592-2607 , 2593-2612 , 2595-2612 , 2597-2612 , 2598-2615 , 2600-2615 , 2601-2619 , 2603-2619 , 2604-2623 , 2606-2623 , 2608-2623 , 2609-2627 , 2611-2627 , 2612-2631 , 2615-2630, 2560-2578 2562-2581 2566-2585 2569-2588 2572-2590 2575-2591 2578-2594 2581-2597 2583-2599 2585-2601 2587-2603
2613- 2604
2614- 2608 2592-2608
2594- 2609
2595- 2613
2597- 2612
2598- 2616
2600- 2616
2601- 2620 2603-2620
2605- 2620
2606- 2624
2608- 2624
2609- 2628 2611-2628 2613-2628 2560-2579 2563-2578 2567-2582 2570-2585 2572-2591 2575-2592 2578-2596 2581-2598 2583-2600 2585-2603 2587-2605
2610- 2605
2611- 2609 2592-2609
2594- 2610
2595- 2614
2597- 2613
2598- 2617 2600-2617
2602- 2617
2603- 2621
2605- 2621
2606- 2625 2608-2625
2610- 2625
2611- 2629 2613-2629 2561-2576 2563-2580 2567-2584 2570-2587 2573-2590 2575-2594 2578-2597 2581-2599 2583-2601 2585-2604 2587-2606
2612- 2606
2613- 2609 2592-2610 2594-2611
2596- 2611
2597- 2614
2599- 2614
2600- 2618
2602- 2618
2603- 2622 2605-2622
2607- 2622
2608- 2626
2610- 2626
2611- 2630 2613-2630 2561-2578, 2563-2582, 2567-2586, 2570-2589, 2573-2592, 2576-2593, 2579-2598, 2581-2600, 2583-2602, 2586-2601,
2612- 2603,
2613- 2607,
2591- 2607,
2592- 2611, 2594-2612,
2596- 2612,
2597- 2615,
2599- 2615,
2600- 2619, 2602-2619,
2604- 2619,
2605- 2623,
2607- 2623,
2608- 2627, 2610-2627,
2612- 2627,
2613- 2631,
2612-
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 2, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 50 % ингибирование: 1608-1627, 1685-1704, 1686-1705,
1751-1770 1877-1896 2946-2965 4151-4166 4615-4634 4714-4733 6662-6681 6983-7002 7353-7372 7694-7713 7787-7806 7790-7805 7792-7810 7795-7812 7797-7814 7801-7818 7804-7821 7807-7824 7810-7825 7812-7831 7815-7834 7817-7836 7819-7838
7822- 7837
7823- 7841 7825-7840 1769-1784 1878-1897 3773-3792 4151-4170 4621-4640 5270-5289 6674-6693 6984-7003 7362-7381 7696-7711 7788-7803 7790-7807 7792-7811 7795-7813 7797-7816 7801-7820 7804-7823 7807-7825 7810-7826 7813-7829 7816-7832 7818-7834 7820-7836
7824- 7838
7825- 7842 7825-7841 1871-1890 1879-1894 3819-3838 4153-4172 4642-4661 5295-5314 6954-6973 6985-7000 7683-7702 7696-7715 7788-7805 7790-7809 7793-7810 7795-7814 7798-7813 7802-7817 7805-7820 7807-7826 7810-7827 7813-7831 7816-7833 7818-7835 7820-7838 7822-7840
7826- 7839
7827- 7842 1872-1891 1879-1898 3825-3844 4159-4178 4648-4667 5296-5315 6960-6979 6985-7004 7688-7707 7767-7786 7788-7806 7791-7808 7793-7811 7796-7811 7798-7815 7802-7819 7805-7822 7808-7825 7810-7829 7813-7832 7816-7834 7818-7836 7820-7839 7822-7841
7828- 7840
7829- 7843 1873-1892 2288-2307 3831-3850 4184-4203 4686-4705 5830-5849 6977-6996 6990-7009 7690-7709 7785-7804 7788-7807 7791-7809 7793-7812 7796-7813 7798-7817 7802-7821 7805-7824 7808-7827 7811-7828 7814-7833 7816-7835 7818-7837 7821-7836
7830- 7838
7831- 7840
7832- 7844 1875-1890 2808-2827 3834-3853 4211-4230 4689-4708 5890-5909 6979-6998 7122-7141 7692-7707 7786-7801 7789-7806 7791-7810 7794-7811 7796-7814 7799-7816 7803-7818 7806-7821 7809-7825 7811-7830 7815-7831 7817-7833 7819-7835 7821-7837
7833- 7839
7834- 7841 7826-7842
1875-1894, 1877-1892, 2846-2865, 2852-2871, 3837-3856, 3843-3862, 4609-4628, 4612-4631, 4692-4711, 4698-4717, 5904-5923, 6406-6425, 6981-7000, 6983-6998, 7125-7144, 7151-7170, 7692-7711, 7694-7709, 7787-7803, 7787-7805, 7789-7807, 7789-7808, 7792-7808, 7792-7809, 7794-7812, 7794-7813, 7796-7815, 7797-7812, 7799-7818, 7800-7819, 7803-7820, 7803-7822, 7806-7823, 7806-7825, 7809-7826, 7809-7828, 7812-7829, 7812-7830, 7815-7832, 7815-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7819-7836, 7819-7837, 7821-7839, 7821-7840,
7823- 7839, 7823-7840,
7824- 7842, 7824-7843, 7826-7843, 7826-7844,
7823-
7826
-7845,
7827-7842,
7827
-7843,
7827
-7844,
7827-7845,
7827-
-7846,
7828
-7843,
7828
-7844,
7828
-7845,
7828-7847,
7829
-7844,
7829
-7845,
7829-7846,
7829-
-7847,
7829
-7848,
7830
-7845,
7830
-7846,
7830-7847,
7830
-7848,
7830
-7849,
7831-7846,
7831-
-7847,
7831
-7848,
7831
-7849,
7831
-7850,
7832-7847,
7832
-7848,
7832
-7849,
7832-7850,
7832-
-7851,
7833
-7848,
7833
-7849,
7833
-7850,
7833-7851,
7833
-7852,
7834
-7849,
7834-7850,
7834-
-7851,
7834
-7852,
7834
-7853,
7835
-7850,
7835-7851,
7835
-7852,
7835
-7853,
7835-7854,
7836-
-7851,
7836
-7852,
7836
-7853,
7836
-7854,
7836-7855,
7837
-7852,
7837
-7853,
7837-7854,
7837-
-7855,
7837
-7856,
7838
-7853,
7838
-7854,
7838-7855,
7838
-7856,
7838
-7857,
7839-7854,
7839-
-7855,
7839
-7856,
7839
-7857,
7839
-7858,
7840-7855,
7840
-7856,
7840
-7857,
7840-7858,
7840-
-7859,
7841
-7856,
7841
-7857,
7841
-7858,
7841-7859,
7841
-7860,
7842
-7857,
7842-7858,
7842-
-7859,
7842
-7860,
7842
-7861,
7843
-7858,
7843-7859,
7843
-7860,
7843
-7861,
7843-7862,
7844-
-7859,
7844
-7860,
7844
-7861,
7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 и 7846-7862.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 1, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 60 % ингибирование: 48-63, 150-169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 600-619, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166,
1153
-1172,
1171
-1186,
1173
-1188,
1175
-1190,
1749-1768,
1763
-1782,
1763-1782,
1912
-1931,
2189
-2208,
2191
-2210,
2193
-2212,
2195
-2210,
2195-2214,
2197
-2212,
2197-2216,
2223
-2238,
2225
-2240,
2227
-2242,
2238
-2257,
2448
-2467,
2453-2472,
2455
-2474,
2457-2472,
2457
-2476,
2459
-2474,
2459
-2478,
2461
-2476,
2461
-2480,
2550-2569,
2551
-2566,
2552-2571,
2553
-2568,
2553
-2570,
2553
-2571,
2553
-2572,
2554
-2571,
2554-2572,
2554
-2573,
2555-2572,
2555
-2574,
2556
-2573,
2556
-2574,
2556
-2575,
2557
-2574,
2557-2575,
2557
-2576,
2558-2575,
2558
-2576,
2558
-2577,
2559
-2576,
2559
-2577,
2559
-2578,
2560-2577,
2560
-2578,
2560-2579,
2561
-2578,
2561
-2579,
2561
-2580,
2562
-2577,
2562
-2579,
2562-2581,
2563
-2578,
2563-2580,
2563
-2582,
2564
-2581,
2564
-2583,
2565
-2584,
2566
-2583,
2566-2585,
2567
-2582,
2567-2584,
2567
-2586,
2568
-2583,
2568
-2585,
2568
-2587,
2569
-2586,
2569-2588,
2570
-2587,
2570-2589,
2571
-2588,
2572
-2590,
2572
-2591,
2573
-2590,
2573
-2592,
2574-2591,
2574
-2593,
2575-2590,
2575
-2592,
2575
-2594,
2576
-2593,
2576
-2595,
2577
-2594,
2577-2595,
2577
-2596,
2578-2594,
2578
-2597,
2579
-2598,
2580
-2596,
2580
-2597,
2580
-2598,
2580-2599,
2581
-2597,
2581-2598,
2581
-2599,
2581
-2600,
2582-2598,
2582
-2599,
2582
-2600,
2582
-2601,
2583
-2599,
2583
-2600,
2583
-2601,
2583
-2602,
2584-2600,
2584
-2602,
2584
-2603,
2585
-2601,
2585
-2603,
2585
-2604,
2586
-2602,
2586
-2604,
2586-2605,
2587
-2603,
2587
-2605,
2587
-2606,
2588
-2603,
2588
-2604,
2588
-2606,
2588
-2607,
2589-2605,
2589
-2606,
2589
-2607,
2589
-2608,
2590
-2605,
2590
-2606,
2590
-2607,
2590
-2608,
2590-2609,
2591
-2607,
2591
-2609,
2591
-2610,
2592
-2608,
2592
-2609,
2592
-2611,
2593
-2608,
2593-2609,
2593
-2612,
2594
-2609,
2594
-2610,
2594
-2611,
2594
-2612,
2594
-2613,
2595
-2610,
2595-2611,
2595
-2612,
2595
-2613,
2595
-2614,
2596
-2611,
2596
-2612,
2596
-2613,
2596
-2614,
2596-2615,
2597
-2612,
2597
-2613,
2597
-2614,
2597
-2615,
2597
-2616,
2598
-2613,
2598
-2614,
2598-2615,
2598
-2616,
2598
-2617,
2599
-2614,
2599
-2615,
2599
-2616,
2599
-2617,
2599
-2618,
2600-2615,
2600
-2616,
2600
-2617,
2600
-2618,
2600
-2619,
2601
-2616,
2601
-2617,
2601
-2618,
2601-2619,
2601
-2620,
2602
-2617,
2602
-2618,
2602
-2619,
2602
-2620,
2602
-2621,
2603
-2618,
2603-2619,
2603
-2620,
2603
-2621,
2603
-2622,
2604
-2619,
2604
-2620,
2604
-2621,
2604
-2622,
2604-2623,
2605
-2620,
2605
-2621,
2605
-2622,
2605
-2623,
2605
-2624,
2606
-2621,
2606
-2622,
2606-2623,
2606
-2624,
2606
-2625,
2607
-2622,
2607
-2623,
2607
-2624,
2607
-2625,
2607
-2626,
2608-2623,
2608
-2624,
2608
-2625,
2608
-2625,
2608
-2626,
2608
-2627,
2609
-2624,
2609
-2625,
2609-2626,
2609
-2627,
2609
-2628,
2610
-2625,
2610
-2626,
2610
-2627,
2610
-2628,
2610
-2629,
2611-2626,
2611
-2626,
2611
-2627,
2611
-2628,
2611
-2629,
2611
-2630,
2612
-2627,
2612
-2628,
2612-2629,
2612
-2630,
2612
-2631,
2613
-2628,
2613
-2629,
2613
-2630,
2613
-2631,
2614
-2629,
2614-2630,
2614-2631, 2615-2630, 2615-2630, 2615-2631, 2615-2631 и 2616
-2631.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 2, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 60 % ингибирование: 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784, 1871-1890, 1873-1892, 1875-1890, 1875-1894, 1877-1892, 1877-1896, 1879-1894, 1879-1898, 2808-2827, 3819-3838, 3825-3844, 3831-3850, 3837-3856, 4151-4166, 5890-5909, 5904-5923, 5904-5923, 6406-6425, 6977-6996, 6979-6998, 6981-7000, 6983-6998, 6983-7002, 6985-7000, 6985-7004, 7122-7141, 7683-7702, 7688-7707, 7690-7709, 7692-7707, 7692-7711, 7694-7709, 7696-7711, 7696-7715, 7786-7801, 7787-7806, 7788-7803, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7806, 7789-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7810, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7793-7812, 7794-7811, 7794-7812,
7794-7813
7795-7812
7795-7813
7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812,
7797-7814, 7797-7816, 7798-7813, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818, 7800-7819, 7801-7818, 7801-7820, 7802-7817, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7818, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7805-7824, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7825, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7825, 7810-7827, 7810-7829, 7811-7828, 7811-7830, 7812-7829, 7812-7830, 7812-7831, 7813-7829, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7831, 7815-7832, 7815-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7833, 7816-7834, 7816-7835, 7817-7833, 7817-7834, 7817-7835, 7817-7836, 7818-7834, 7818-7835, 7818-7836, 7818-7837, 7819-7835, 7819-7837, 7819-7838, 7820-7836, 7820-7838, 7820-7839, 7821-7837, 7821-7839, 7821-7840, 7822-7838, 7822-7840, 7822-7841, 7823-7838, 7823-7839, 7823-7841, 7823-7842,
7824- 7840, 7824-7841, 7824-7842, 7824-7843, 7825-7840, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7843,
7825- 7844, 7826-7842, 7826-7844, 7826-7845, 7827-7843, 7827-7844, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7844, 7828-7847, 7829-7844, 7829-7845, 7829-7846, 7829-7847, 7829-7848, 7830-7845,
7830- 7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 7831-7849,
7831- 7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 7834-7853,
7835- 7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7853,
7836- 7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 7838-7853,
7838- 7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 7839-7857,
7839- 7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861,
7843- 7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 7844-7861,
7844- 7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861, 7846-7862 и 7847-7862.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 1, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 70 % ингибирование: 48-63, 150-169, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 158-173, 158-177, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1171-1186, 1173-1188, 1175-1190, 1749-1768, 1763-1782, 1912-1931, 2193-2212, 2195-2210, 2195-2214, 2197-2212, 2197-2216, 2223-2238, 2225-2240, 2227-2242, 2453-2472, 2455-2474, 2457-2472,
2457
-2476,
2459-2474,
2461
-2476,
2461
-2480,
2550
-2569,
2551
-2566,
2552
-2571,
2553
-2570,
2553
-2571,
2553-2572,
2554
-2571,
2554
-2572,
2554
-2573,
2554
-2573,
2555
-2572,
2555
-2574,
2555
-2574,
2556-2573,
2556
-2574,
2556
-2575,
2557
-2574,
2557
-2576,
2558
-2575,
2558
-2576,
2558
-2577,
2559-2576,
2559
-2577,
2559
-2578,
2560
-2577,
2560
-2578,
2560
-2579,
2561
-2578,
2561
-2579,
2561-2580,
2562
-2577,
2562
-2579,
2562
-2581,
2563
-2578,
2563
-2580,
2563
-2582,
2564
-2581,
2564-2583,
2565
-2584,
2566
-2583,
2566
-2585,
2567
-2582,
2567
-2584,
2567
-2586,
2568
-2585,
2568-2587,
2569
-2586,
2569
-2588,
2570
-2587,
2570
-2589,
2571
-2588,
2571
-2590,
2572
-2589,
2572-2591,
2573
-2590,
2573
-2592,
2574
-2591,
2574
-2593,
2575
-2592,
2575
-2594,
2576
-2593,
2576-2595,
2577
-2594,
2577
-2596,
2578
-2597,
2579
-2598,
2580
-2596,
2580
-2598,
2580
-2599,
2581-2597,
2581
-2600,
2582
-2598,
2582
-2600,
2582
-2601,
2583
-2599,
2583
-2601,
2583
-2602,
2584-2600,
2584
-2602,
2584
-2603,
2585
-2601,
2585
-2603,
2585
-2604,
2586
-2605,
2587
-2606,
2588-2604,
2588
-2606,
2588
-2607,
2589
-2605,
2589
-2606,
2589
-2607,
2589
-2608,
2590
-2605,
2590-2606,
2590
-2607,
2590
-2609,
2591
-2607,
2591
-2610,
2592
-2611,
2593
-2608,
2593
-2612,
2594-2609,
2594
-2610,
2594
-2612,
2594
-2613,
2595
-2610,
2595
-2611,
2595
-2612,
2595
-2613,
2595-2614,
2596
-2611,
2596
-2614,
2596
-2615,
2597
-2612,
2597
-2613,
2597
-2614,
2597
-2615,
2597-2616,
2598
-2613,
2598
-2614,
2598
-2615,
2598
-2616,
2598
-2617,
2599
-2614,
2599
-2615,
2599-2616,
2599
-2617,
2599
-2618,
2600
-2615,
2600
-2616,
2600
-2617,
2600
-2618,
2600
-2619,
2601-2616,
2601
-2617,
2601
-2618,
2601
-2619,
2601
-2620,
2602
-2617,
2602
-2618,
2602
-2619,
2602-2620,
2602
-2621,
2603
-2619,
2603
-2620,
2603
-2621,
2603
-2622,
2604
-2619,
2604
-2620,
2604-2621,
2604
-2622,
2604
-2623,
2605
-2620,
2605
-2621,
2605
-2622,
2605
-2623,
2605
-2624,
2606-2621,
2606
-2622,
2606
-2623,
2606
-2624,
2606
-2625,
2607
-2622,
2607
-2623,
2607
-2624,
2607-2625,
2607
-2626,
2608
-2623,
2608
-2624,
2608
-2625,
2608
-2626,
2608
-2627,
2609
-2624,
2609-2625,
2609
-2626,
2609
-2627,
2609
-2628,
2610
-2625,
2610
-2626,
2610
-2627,
2610
-2628,
2610-2629,
2611
-2626,
2611
-2627,
2611
-2629,
2611
-2630,
2612
-2627,
2612
-2628,
2612
-2629,
2612-2630,
2612
-2631,
2613
-2628,
2613
-2629,
2613
-2630,
2613
-2631,
2614
-2629,
2614
-2630,
2614-2631,
2615-2630, 2615-2630, 2615-2631 и 2616-2631
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 2, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 70 % ингибирование: 1685-1704, 1686-1705, 1769-1784,
3819-3838 6983-6998 7694-7709 7789-7806 7792-7809 7795-7812 7797-7816 7801-7820 7805-7822 7809-7826 7814-7833 7817-7836 7820-7838 7824-7841 7826-7845 7830-7845
7832- 7847
7833- 7851
7835- 7851
7836- 7855 7838-7856
7840- 7856
7841- 7860 7843-7860 7845-7861 3825-3844 6983-7002 7696-7711 7789-7807 7792-7811 7795-7813 7798-7813 7802-7817 7805-7824 7809-7828 7815-7831 7818-7834 7820-7839 7824-7842 7827-7846 7830-7846
7842- 7848
7843- 7852 7835-7852
7837- 7852
7838- 7857 7840-7857
7842- 7857
7843- 7861 7845-7862 1875-1890 3831-3850 6985-7000 7696-7715 7789-7808 7793-7810 7795-7814 7798-7815 7802-7819 7806-7823 7810-7827 7815-7833 7818-7836 7821-7840 7824-7843 7828-7843 7830-7847 7832-7849
7844- 7849
7845- 7853 7837-7853
7839- 7854
7840- 7858
7842- 7858
7843- 7862 4151-4166 6985-7004 7786-7801 7790-7807 7793-7811 7796-7813 7798-7817 7802-7821 7806-7825 7811-7828 7815-7834 7818-7837 7822-7841 7825-7840 7828-7847 7830-7848 7832-7850
7844- 7850
7845- 7854 7837-7854
7839- 7855
7840- 7859 7842-7859 7844-7859 5890-5909 7688-7707 7787-7806 7790-7809 7793-7812 7796-7814 7799-7816 7803-7820 7807-7824 7811-7830 7816-7832 7819-7835 7823-7839 7825-7841
7841- 7844
7842- 7849 7832-7851 7834-7851
7836- 7851
7837- 7855 7839-7856
7841- 7856
7842- 7860 7844-7860 1877-1896 5904-5923 7690-7709 7788-7805 7791-7808 7794-7811 7796-7815 7799-7818 7803-7822 7807-7826 7812-7829 7816-7835 7819-7837 7823-7841 7825-7842 7829-7845 7831-7846
7843- 7848
7844- 7852
7836- 7852
7837- 7856 7839-7857
7841- 7857
7842- 7861 7844-7861 5904-5923 7692-7707 7788-7806 7791-7809 7794-7812 7797-7812 7800-7819 7804-7821 7808-7825 7812-7831 7817-7833 7819-7838 7823-7842 7825-7844 7829-7847 7831-7849
7843- 7849
7844- 7853 7836-7853
7838- 7854
7839- 7858 7841-7858
7843- 7858
7844- 7862 6406-6425, 7692-7711, 7788-7807, 7791-7810, 7794-7813, 7797-7814, 7801-7818, 7804-7823, 7808-7827, 7813-7832, 7817-7835, 7820-7836, 7824-7840, 7826-7842, 7829-7848, 7831-7850, 7833-7850,
7845- 7850,
7846- 7854, 7838-7855,
7840- 7855,
7841- 7859, 7843-7859, 7845-7860,
7840-
1135
-1154,
1171-1186,
1173
-1188,
1175
-1190,
1763
-1782,
1912
-1931,
2197
-2212,
2223
-2238,
2225
-2240,
2227-2242,
2457
-2472,
2459
-2474,
2461
-2476,
2551
-2566,
2553
-2570,
2553
-2571,
2553
-2572,
2554-2573,
2555
-2572,
2555
-2574,
2556
-2573,
2556
-2574,
2556
-2575,
2557
-2574,
2557
-2576,
2558-2575,
2558
-2576,
2559
-2577,
2559
-2578,
2560
-2577,
2560
-2578,
2560
-2579,
2561
-2578,
2561-2579,
2561
-2580,
2562
-2577,
2562
-2579,
2562
-2581,
2563
-2580,
2563
-2582,
2564
-2581,
2564-2583,
2565
-2584,
2566
-2583,
2567
-2584,
2567
-2586,
2568
-2585,
2568
-2587,
2569
-2586,
2569-2588,
2570
-2587,
2571
-2588,
2571
-2590,
2572
-2589,
2572
-2591,
2573
-2590,
2573
-2592,
2574-2591,
2574
-2593,
2575
-2592,
2576
-2593,
2576
-2595,
2577
-2594,
2577
-2596,
2578
-2597,
2580-2598,
2580
-2599,
2581
-2597,
2581
-2600,
2582
-2601,
2583
-2602,
2584
-2603,
2585
-2604,
2586-2605,
2587
-2606,
2588
-2607,
2589
-2608,
2590
-2606,
2590
-2607,
2590
-2609,
2591
-2610,
2592-2611,
2593
-2608,
2593
-2612,
2594
-2613,
2595
-2611,
2595
-2614,
2596
-2615,
2597
-2612,
2597-2613,
2597
-2614,
2597
-2615,
2597
-2616,
2598
-2613,
2598
-2613,
2598
-2614,
2598
-2615,
2598-2616,
2598
-2617,
2599
-2614,
2599
-2617,
2599
-2618,
2600
-2615,
2600
-2617,
2600
-2618,
2600-2619,
2601
-2616,
2601
-2617,
2601
-2619,
2601
-2620,
2602
-2618,
2602
-2621,
2603
-2620,
2603-2621,
2603
-2622,
2604
-2619,
2604
-2620,
2604
-2621,
2604
-2622,
2604
-2623,
2605
-2620,
2605-2621,
2605
-2622,
2605
-2623,
2605
-2624,
2606
-2621,
2606
-2622,
2606
-2623,
2606
-2624,
2606-2625,
2607
-2622,
2607
-2623,
2607
-2624,
2607
-2625,
2607
-2626,
2608
-2623,
2608
-2624,
2608-2625,
2608
-2627,
2609
-2624,
2609
-2626,
2609
-2627,
2609
-2628,
2610
-2625,
2610
-2626,
2610-2628,
2610
-2629,
2611
-2626,
2611
-2627,
2611
-2629,
2611
-2630,
2612
-2627,
2612
-2628,
2612-2630,
2612
-2631,
2613
-2628,
2613
-2629,
2613
-2631,
2614
-2629,
2614
-2630,
2614
-2631,
2615-2630 и 2616-2631
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0: 2, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 80 % ингибирование: 1685-1704, 1686-1705, 1873-1892, 1875-1890, 1877-1892, 1879-1894, 3819-3838, 4151-4166, 5904-5923, 6406-6425, 6985-7000, 7692-7707, 7694-7709, 7696-7711, 7786-7801, 7788-7805, 7788-7806, 7788-7807, 7789-7808, 7790-7807, 7790-7809, 7791-7808, 7791-7809, 7791-7810, 7792-7809, 7792-7811, 7793-7810, 7793-7811, 7794-7812, 7794-7813, 7795-7812, 7795-7813, 7795-7814, 7796-7813, 7796-7814, 7796-7815, 7797-7812, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7799-7818,
7800-7819, 7801-7818, 7802-7819, 7802-7821, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7804-7823, 7805-7822, 7806-7823, 7806-7825, 7807-7824, 7807-7826, 7808-7825, 7808-7827, 7809-7826, 7809-7828, 7810-7827, 7811-7828, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7814-7833, 7815-7834, 7816-7832, 7816-7835, 7817-7836, 7818-7837, 7819-7838, 7820-7839, 7821-7840, 7822-7841, 7823-7842, 7824-7843, 7825-7841, 7825-7842, 7825-7844, 7826-7845, 7827-7846, 7828-7843, 7828-7847, 7829-7848, 7830-7846, 7830-7849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 7833-7849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7852, 7834-7853, 7835-7850, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 7836-7854, 7836-7855, 7837-7853, 7837-7856, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854,
7839- 7855, 7839-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858,
7840- 7859, 7841-7856, 7841-7857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 7842-7861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7846-7862 и 7847-7862.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш N0:
1, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 90 % ингибирование: 154-169, 156-171, 158-173, 11351154, 1171-1186, 1173-1188, 1763-1782, 1912-1931, 2223-2238, 2227-2242, 2459-2474, 24612476, 2554-2573, 2555-2574, 2560-2577, 2561-2578, 2561-2579, 2562-2581, 2563-2580, 25632582, 2564-2581, 2566-2583, 2567-2584, 2568-2585, 2568-2587, 2569-2586, 2570-2587, 25762593, 2577-2594, 2577-2596, 2578-2597, 2580-2599, 2581-2600, 2582-2601, 2583-2602, 25842603, 2586-2605, 2587-2605, 2587-2606, 2588-2607, 2589-2608, 2590-2607, 2590-2609, 25922611, 2595-2614, 2596-2615, 2597-2612, 2597-2613, 2597-2615, 2597-2616, 2598-2613, 25982613, 2598-2617, 2599-2614, 2599-2618, 2600-2615, 2600-2619, 2601-2617, 2601-2620, 26022621, 2603-2622, 2604-2623, 2605-2621, 2605-2622, 2605-2624, 2606-2625, 2607-2626, 26082623, 2608-2625, 2609-2628, 2611-2627, 2611-2630, 2612-2628, 2612-2631, 2613-2629, 26142629, 2615-2630 и 2616-2631.
В некоторых вариантах реализации следующие нуклеотидные области SEQ Ш NO:
2, при направленном воздействии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 90 % ингибирование: 1685-1704, 1686-1705, 1875-1890,
1877-1892, 1879-1894, 3819-3838, 5904-5923, 6406-6425, 7694-7709, 7696-7711, 7789-7808, 7790-7809, 7795-7812, 7795-7813, 7796-7813, 7796-7814, 7797-7814, 7797-7816, 7798-7815, 7798-7817, 7799-7816, 7801-7818, 7802-7819, 7803-7820, 7803-7822, 7804-7821, 7805-7822, 7811-7828, 7812-7829, 7812-7831, 7813-7832, 7815-7834, 7818-7837, 7819-7838, 7821-7840, 7822-7840, 7822-7841, 7825-7842, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7850, 7833-7848, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7853, 7835-7850, 7836-7852, 7836-7855, 7837-7856, 7838-7856, 7839-7857, 7839-7858, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7859, 7843-7858, 7843-7860 и 7846-7862.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по
меньшей мере 50 % ингибирование мРНК CFB, ISIS NO:
516350,
532614,
532632,
532635,
532638,
532639,
532686,
532687,
532688,
532689,
532690,
532691,
532692,
532692,
532693,
532694,
532695,
532696,
532697,
532698,
532699,
532700,
532701,
532702,
532703,
532704,
532705,
532706,
532707,
532770,
532775,
532778,
532780,
532791,
532800,
532809,
532810,
532811,
532917,
532952,
588509,
588510,
588511,
588512,
588513,
588514,
588515,
588516,
588517,
588518,
588519,
588520,
588522,
588523,
588524,
588525,
588527,
588528,
588529,
588530,
588531,
588532,
588533,
588534,
588535,
588536,
588537,
588538,
588539,
588540,
588541,
588542,
588543,
588544,
588545,
588546,
588547,
588548,
588549,
588550,
588551,
588552,
588553,
588554,
588555,
588556,
588557,
588558,
588559,
588560,
588561,
588562,
588563,
588564,
588565,
588566,
588567,
588568,
588569,
588570,
588571,
588572,
588573,
588574,
588575,
588576,
588577,
588580,
588581,
588585,
588586,
588589,
588590,
588599,
588603,
588606,
588608,
588610,
588614,
588616,
588628,
588631,
588632,
588634,
588636,
588638,
588640,
588645,
588646,
588654,
588656,
588658,
588660,
588662,
588664,
588670,
588672,
588676,
588682,
588688,
588696,
588698,
588807,
588808,
588809,
588813,
588814,
588815,
588819,
588820,
588822,
588823,
588838,
588839,
588840,
588841,
588842,
588846,
588847,
588848,
588849,
588850,
588851,
588852,
588853,
588854,
588855,
588856,
588857,
588858,
588859,
588860,
588861,
588862,
588863,
588864,
588865,
588866,
588867,
588868,
588870,
588871,
588872,
588873,
588874,
588875,
588876,
588877,
588878,
588879,
588880,
588881,
588882,
588883,
588884,
598999,
599000,
599001,
599002,
599003,
599004,
599005,
599006,
599007,
599008,
599009,
599010,
599011,
599012,
599013,
599014,
599015,
599018,
599019,
599023,
599024,
599025,
599026,
599027,
599028,
599029,
599030,
599031,
599032,
599033,
599034,
599035,
599058,
599062,
599063,
599064,
599065,
599070,
599071,
599072,
599073,
599074,
599076,
599077,
599078,
599079,
599080,
599081,
599082,
599083,
599084,
599085,
599086,
599087,
599088,
599089,
599090,
599091,
599092,
599093,
599094,
599095,
599096,
599097,
599098,
599102,
599119,
599123,
599124,
599125,
599126,
599127,
599128,
599132,
599133,
599134,
599135,
599136,
599137,
599138,
599139,
599140,
599141,
599142,
599143,
599144,
599145,
599147,
599148,
599149,
599150,
599151,
599152,
599153,
599154,
599155,
599156,
599157,
599158,
599159,
599178,
599179,
599180,
599181,
599182,
599186,
599187,
599188,
599189,
599190,
599191,
599192,
599193,
599194,
599195,
599196,
599197,
599198,
599199,
599200,
599201,
599202,
599203,
599204,
599205,
599206,
599207,
599208,
599209,
599210,
599211,
599212,
599213,
599214,
599215,
599216,
599217,
599218,
599219,
599220,
599221,
599221,
599222,
599223,
599224,
599225,
599226,
599227,
599228,
599229,
599230,
599231,
599232,
599233,
599234,
599235,
599236,
599241,
599247,
599248,
599249,
599255,
599256,
599257,
599258,
599260,
599261,
599262,
599263,
599264,
599265,
599266,
599267,
599268,
599269,
599270,
599271,
599272,
599273,
599274,
599275,
599276,
599277,
599278,
599279,
599280,
599297,
599299,
599306,
599307,
599308,
599309,
599311,
599312,
599313,
599314,
599315,
599316,
599317,
599318,
599319,
599320,
599321,
599322,
599323,
599324,
599325,
599326,
599327,
599328,
599329,
599330,
599338,
599349,
599353,
599354,
599355,
599356,
599357,
599358,
599359,
599360,
599361,
599362,
599363,
599364,
599369,
599371,
599372,
599373,
599376,
599378,
599379,
599382,
599383,
599384,
599385,
599386,
599387,
599388,
599389,
599390,
599391,
599392,
599393,
599394,
599395,
599396,
599397,
599398,
599399,
599400,
599401,
599402,
599403,
599404,
599405,
599406,
599407,
599408,
599409,
599410,
599412,
599413,
599414,
599415,
599416,
599417,
599418,
599419,
599420,
599421,
599422,
599423,
599424,
599425,
599426,
599433,
599434,
599435,
599436,
599437,
599438,
599439,
599440,
599441,
599442,
599443,
599444,
599445,
599446,
599447,
599448,
599450,
599454,
599455,
599456,
599467,
599468,
599469,
599471,
599472,
599473,
599474,
599475,
599476,
599477,
599478,
599479,
599480,
599481,
599482,
599483,
599484,
599485,
599486,
599487,
599488,
599489,
599490,
599491,
599492,
599493,
599494,
599495,
599496,
599497,
599498,
599499,
599500,
599501,
599502,
599503,
599504,
599505,
599506,
599507,
599508, 599509, 599512, 599515, 599518, 599531, 599541, 599541, 599546, 599547, 599548, 599549, 599550, 599552, 599553, 599554, 599555, 599557, 599558, 599561, 599562, 599563, 599564, 599565, 599566, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599579, 599580, 599581, 599581, 599582, 599584, 599585, 599586, 599587, 599588, 599589, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 599595, 601321, 601322, 601323, 601325, 601327, 601328, 601329, 601330, 601332, 601333, 601334, 601335, 601336, 601337, 601338, 601339, 601341, 601342, 601343, 601344, 601345, 601346, 601347, 601348, 601349, 601362, 601367, 601368, 601369, 601371, 601372, 601373, 601374, 601375, 601377, 601378, 601380, 601381, 601382, 601383, 601384, 601385, 601386, 601387 и 601388.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 50 % ингибирование мРНК CFB, SEQ ID NO: 12, 30, 33, 36, 37, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 198, 203, 206, 208,
219,
228,
237,
238,
239, 317,
395,
396, 397,
398,
399,
400,
401,
402,
403, 404, 405,
406, 407,
408,
409,
410,
411,
412, 413,
414,
415, 416,
417,
418,
419,
420,
421,
422, 423, 424,
425, 426,
427,
428,
429,
430,
431, 432,
433,
434, 434,
435,
436,
437,
438,
439,
440, 441, 442,
443, 444,
445,
446,
447,
448,
449, 450,
451,
452, 453,
454,
455,
456,
457,
458,
459, 460, 461,
462, 463,
464,
465,
468,
472,
473, 475,
478,
479, 488,
492,
494,
495,
498,
499,
500, 502, 503,
509, 510,
511,
512,
513,
514,
515, 517,
518,
522, 523,
524,
525,
529,
530,
531,
534, 535, 537,
540, 541,
542,
543,
544,
545,
546, 547,
549,
550, 551,
552,
553,
554,
555,
556,
557, 558, 559,
563, 564,
565,
569,
570,
572,
573, 577,
588,
589, 590,
591,
592,
594,
595,
596,
597, 598, 599,
600, 601,
602,
603,
604,
605,
606, 607,
608,
609, 610,
611,
612,
613,
614,
615,
616, 617, 618,
619, 623,
640,
641,
644,
645,
646, 647,
648,
649, 650,
651,
652,
653,
654,
655,
656, 657, 658,
659, 660,
661,
662,
663,
664,
665, 666,
667,
668, 669,
670,
671,
672,
673,
674,
675, 676, 677,
678, 679,
680,
681,
682,
683,
684, 685,
686,
687, 688,
689,
700,
704,
705,
706,
707, 708, 709,
711, 712,
713,
714,
715,
716,
717, 718,
720,
721, 722,
723,
724,
725,
726,
727,
728, 729, 730,
731, 732,
733,
734,
735,
736,
737, 738,
739,
740, 741,
742,
743,
744,
745,
745,
746, 747, 748,
749, 750,
751,
752,
753,
754,
755, 756,
758,
759, 760,
761,
762,
766,
767,
768,
769, 770, 771,
772, 773,
774, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 850, 867 и 873.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по
меньшей мере 60 % ингибирование мРНК CFB, ISIS NO:
516350,
532614,
532635,
532686,
532687,
532688,
532689,
532770,
532800,
532809,
532810,
532811,
532917,
532952,
588512,
588513,
588514,
588515,
588516,
588517,
588518,
588519,
588522,
588523,
588524,
588525,
588527,
588528,
588529,
588530,
588531,
588532,
588533,
588534,
588535,
588536,
588537,
588538,
588539,
588540,
588541,
588542,
588543,
588544,
588545,
588546,
588547,
588548,
588549,
588550,
588551,
588552,
588553,
588554,
588555,
588556,
588557,
588558,
588559,
588560,
588561,
588562,
588563,
588564,
588565,
588566,
588567,
588568,
588569,
588570,
588571,
588572,
588573,
588574,
588575,
588576,
588577,
588636,
588638,
588640,
588664,
588676,
588696,
588698,
588807,
588808,
588814,
588815,
588819,
588820,
588840,
588842,
588846,
588847,
588848,
588849,
588850,
588851,
588852,
588853,
588854,
588855,
588856,
588857,
588858,
588859,
588860,
588861,
588862,
588863,
588864,
588866,
588867,
588868,
588870,
588871,
588872,
588873,
588874,
588875,
588876,
588877,
588878,
588879,
588880,
588881,
588882,
588883,
588884,
598999,
599000,
599001,
599002,
599003,
599004,
599005,
599006,
599007,
599008,
599009,
599010,
599011,
599012,
599013,
599014,
599015,
599019,
599024,
599025,
599026,
599027,
599028,
599029,
599030,
599031,
599032,
599033,
599034,
599035,
599064,
599065,
599071,
599072,
599077,
599078,
599079,
599080,
599083,
599084,
599085,
599086,
599087,
599088,
599089,
599090,
599091,
599092,
599093,
599094,
599095,
599096,
599097,
599125,
599126,
599127,
599133,
599134,
599135,
599136,
599138,
599139,
599140,
599141,
599142,
599148,
599149,
599150,
599151,
599152,
599154,
599155,
599156,
599157,
599158,
599159,
599178,
599179,
599180,
599181,
599187,
599188,
599190,
599192,
599193,
599194,
599195,
599196,
599197,
599198,
599199,
599200,
599201,
599202,
599203,
599204,
599205,
599206,
599207,
599208,
599209,
599210,
599211,
599212,
599213,
599214,
599215,
599216,
599217,
599218,
599219,
599220,
599221,
599222,
599223,
599224,
599225,
599226,
599227,
599228,
599229,
599230,
599231,
599232,
599233,
599234,
599235,
599236,
599247,
599255,
599256,
599257,
599263,
599264,
599265,
599266,
599270,
599271,
599272,
599273,
599274,
599275,
599276,
599277,
599278,
599279,
599280,
599306,
599307,
599308,
599311,
599312,
599313,
599314,
599315,
599316,
599317,
599318,
599319,
599320,
599321,
599322,
599323,
599324,
599325,
599327,
599328,
599329,
599330,
599349,
599353,
599355,
599356,
599357,
599358,
599359,
599360,
599361,
599362,
599363,
599364,
599369,
599371,
599372,
599373,
599376,
599378,
599379,
599382,
599384,
599386,
599387,
599388,
599389,
599390,
599391,
599392,
599393,
599394,
599395,
599396,
599397,
599398,
599399,
599400,
599401,
599402,
599403,
599404,
599405,
599406,
599407,
599408,
599409,
599410,
599412,
599413,
599414,
599415,
599416,
599417,
599418,
599419,
599420,
599421,
599422,
599423,
599424,
599425,
599433,
599434,
599435,
599436,
599437,
599438,
599439,
599440,
599441,
599442,
599443,
599444,
599445,
599446,
599447,
599448,
599456,
599467,
599468,
599471,
599472,
599473,
599474,
599475,
599476,
599477,
599478,
599479,
599480,
599481,
599482,
599483,
599484,
599485,
599486,
599487,
599488,
599489,
599490,
599491,
599492,
599493,
599494,
599495,
599496,
599497,
599498,
599499,
599500,
599501,
599502,
599503,
599504,
599505,
599506,
599507,
599508,
599512,
599531,
599547,
599548,
599549,
599552,
599553,
599554,
599555,
599557,
599558,
599562,
599563,
599564,
599565,
599566,
599567,
599568,
599569,
599570,
599577,
599578,
599579,
599580,
599581,
599582,
599584,
599585,
599586,
599587,
599588,
599589,
599590,
599591,
599592,
599593,
599594,
599595,
601323,
601327,
601329,
601332,
601333,
601333,
601334,
601335,
601336,
601338,
601339,
601341,
601342,
601343,
601344,
601345,
601346,
601347,
601348,
601349,
601368,
601369,
601371,
601372,
601374,
601375,
601377,
601378,
601380,
601381,
601382,
601383,
601384,
601385,
601386,
601387 и 601388.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 60 % ингибирование мРНК CFB, SEQ ID NO: 12, 33, 84, 85, 86, 87, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 531, 537, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555,
556, 557, 558, 564, 565, 569, 570, 577, 590, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 700, 704, 706, 707, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 758, 759, 760, 761, 767, 768, 770, 772, 773, 774, 775, 775, 776, 776, 777, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 783, 784, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849 и 850.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по
меньшей мере 70 % ингибирование мРНК CFB, ISIS NO:
516350,
532614,
532686,
532687,
532688,
532770,
532800,
532809,
532810,
532811,
532917,
532952,
588512,
588513,
588514,
588515,
588516,
588517,
588518,
588524,
588529,
588530,
588531,
588532,
588533,
588534,
588535,
588536,
588537,
588538,
588539,
588540,
588541,
588542,
588543,
588544,
588545,
588546,
588547,
588548,
588549,
588550,
588551,
588552,
588553,
588554,
588555,
588556,
588557,
588558,
588559,
588560,
588561,
588562,
588563,
588564,
588565,
588568,
588569,
588570,
588571,
588572,
588573,
588574,
588575,
588577,
588636,
588638,
588640,
588696,
588698,
588807,
588814,
588815,
588819,
588842,
588847,
588848,
588849,
588850,
588851,
588852,
588853,
588856,
588857,
588858,
588859,
588860,
588861,
588862,
588863,
588866,
588867,
588870,
588871,
588872,
588873,
588874,
588875,
588876,
588877,
588878,
588879,
588880,
588881,
588882,
588883,
588884,
599000,
599001,
599003,
599004,
599005,
599008,
599009,
599010,
599011,
599014,
599015,
599024,
599025,
599027,
599028,
599029,
599030,
599031,
599032,
599033,
599034,
599072,
599077,
599080,
599085,
599086,
599087,
599088,
599089,
599090,
599091,
599093,
599094,
599095,
599096,
599097,
599125,
599126,
599134,
599138,
599139,
599148,
599149,
599150,
599151,
599152,
599154,
599155,
599156,
599157,
599158,
599187,
599188,
599193,
599195,
599196,
599197,
599198,
599199,
599200,
599201,
599202,
599203,
599204,
599205,
599206,
599207,
599208,
599210,
599211,
599212,
599213,
599214,
599215,
599216,
599217,
599218,
599219,
599220,
599221,
599222,
599223,
599224,
599225,
599226,
599227,
599228,
599229,
599230,
599231,
599232,
599233,
599234,
599235,
599236,
599266,
599272,
599272,
599273,
599274,
599275,
599277,
599278,
599279,
599280,
599280,
599306,
599311,
599312,
599313,
599314,
599315,
599316,
599317,
599318,
599319,
599320,
599321,
599322,
599323,
599325,
599327,
599328,
599329,
599330,
599355,
599357,
599358,
599359,
599360,
599361,
599362,
599363,
599364,
599369,
599371,
599372,
599373,
599378,
599379,
599382,
599384,
599386,
599387,
599388,
599389,
599390,
599391,
599392,
599393,
599394,
599395,
599396,
599397,
599398,
599399,
599400,
599401,
599402,
599403,
599404,
599405,
599406,
599407,
599408,
599409,
599410,
599413,
599414,
599415,
599416,
599417,
599418,
599419,
599420,
599421,
599422,
599423,
599424,
599433,
599434,
599435,
599436,
599437,
599438,
599439,
599440,
599441,
599442,
599443,
599445,
599446,
599447,
599448,
599472,
599473,
599474,
599475,
599476,
599477,
599478,
599479,
599480,
599481,
599482,
599483,
599484,
599485,
599486,
599487,
599488,
599489,
599490,
599491,
599492,
599493,
599494,
599495,
599496,
599497,
599498,
599499,
599500,
599501,
599502,
599503,
599504,
599505,
599506,
599507,
599508,
599512,
599547,
599548,
599552,
599553,
599554,
599555,
599558,
599562,
599563,
599564,
599566,
599567,
599568,
599569,
599570,
599577,
599578,
599579,
599580,
599581,
599582,
599585,
599586,
599587,
599588,
599589,
599590,
599591,
599592,
599593,
599594,
599595,
601332,
601335,
601341,
601343,
601344,
601345,
601346,
601347,
601348,
601349,
601371,
601372,
601380,
601382,
601383,
601384,
601385,
601386 и 601387.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 70 % ингибирование мРНК CFB, SEQ ID NO: 12, 84, 85, 86, 198, 228, 237, 238, 239, 317, 395, 396, 397, 398, 399, 402, 403, 404, 405, 407, 408, 410, 411, 412, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 464, 465, 472, 473, 513, 514, 515, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 565, 569, 592, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 606, 607, 608, 609, 610, 611,
612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 653, 654, 655, 656, 659, 660, 662, 663, 664, 665, 666, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 677, 678, 679, 680, 682, 683, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 767, 768, 773, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 793, 794, 795, 797, 798, 799, 813, 833, 834, 841, 846, 849, 867 и 873.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по
меньшей мере 80 % ингибирование мРНК CFB, ISIS NO:
532686,
532809,
532810,
532811,
532917,
532952,
588512,
588517,
588518,
588533,
588534,
588535,
588536,
588537,
588538,
588539,
588540,
588542,
588543,
588544,
588545,
588546,
588547,
588548,
588549,
588550,
588551,
588552,
588553,
588554,
588555,
588556,
588557,
588558,
588559,
588560,
588561,
588562,
588563,
588564,
588565,
588571,
588638,
588640,
588696,
588698,
588807,
588814,
588849,
588850,
588851,
588853,
588857,
588858,
588859,
588860,
588861,
588862,
588863,
588866,
588867,
588871,
588872,
588873,
588874,
588875,
588876,
588877,
588878,
588879,
588880,
588881,
588882,
588883,
599001,
599024,
599025,
599033,
599086,
599087,
599088,
599089,
599093,
599094,
599095,
599096,
599134,
599139,
599148,
599149,
599151,
599154,
599155,
599156,
599158,
599188,
599195,
599196,
599198,
599201,
599202,
599203,
599204,
599205,
599206,
599207,
599212,
599213,
599215,
599216,
599217,
599218,
599219,
599220,
599221,
599222,
599223,
599224,
599225,
599226,
599227,
599228,
599229,
599230,
599231,
599232,
599233,
599234,
599235,
599236,
599272,
599273,
599275,
599277,
599278,
599279,
599280,
599311,
599313,
599314,
599316,
599317,
599318,
599320,
599321,
599322,
599323,
599327,
599328,
599329,
599330,
599355,
599357,
599358,
599359,
599360,
599361,
599362,
599363,
599364,
599371,
599372,
599373,
599378,
599379,
599382,
599384,
599386,
599387,
599388,
599389,
599390,
599391,
599392,
599393,
599397,
599398,
599399,
599400,
599401,
599403,
599404,
599405,
599407,
599408,
599409,
599410,
599413,
599414,
599415,
599416,
599417,
599418,
599419,
599420,
599421,
599422,
599423,
599424,
599433,
599434,
599435,
599436,
599437,
599438,
599439,
599440,
599441,
599445,
599446,
599447,
599448,
599474,
599476, 599477, 599479, 599481, 599482, 599483, 599485, 599486, 599487, 599488, 599489, 599490, 599491, 599492, 599494, 599495, 599496, 599497, 599498, 599499, 599500, 599502, 599503, 599504, 599505, 599506, 599507, 599508, 599547, 599552, 599553, 599554, 599558, 599563, 599567, 599568, 599569, 599570, 599577, 599578, 599581, 599582, 599585, 599587, 599588, 599590, 599591, 599592, 599593, 599594, 601332, 601344, 601345, 601382, 601383 и 601385.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 80 % ингибирование мРНК CFB, SEQ ID NO: 84, 237, 238, 239, 317, 395, 397, 411, 412, 413, 414, 415, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 425, 426, 427, 429, 430, 431, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 564, 595, 599, 600, 601, 602, 603, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 646, 655, 660, 662, 663, 666, 669, 670, 671, 672, 673, 675, 676, 677, 678, 679, 682, 684, 686, 687, 688, 689, 706, 708, 709, 711, 712, 713, 714, 715, 720, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 729, 730, 731, 732, 733, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 768, 775, 776, 778, 781, 782, 783, 784, 785, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 799, 813, 833, 834, 841, 849, 867 и 873.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 90 % ингибирование мРНК CFB, ISIS NO: 532686, 532811, 532917, 588536, 588537, 588538, 588539, 588544, 588545, 588546, 588548, 588551, 588552, 588553, 588554, 588555, 588556, 588557, 588558, 588559, 588560, 588561, 588562, 588564, 588638, 588640, 588696, 588698, 588849, 588850, 588851, 588860, 588866, 588867, 588872, 588873, 588874, 588876, 588877, 588878, 588879, 588881, 588883, 599149, 599188, 599203, 599206, 599220, 599221, 599222, 599223, 599224, 599225, 599226, 599227, 599228, 599229, 599235, 599236, 599279, 599280, 599314, 599321, 599362, 599378, 599390, 599391, 599398, 599399, 599404, 599413, 599414, 599416, 599419, 599420, 599422, 599435, 599437, 599438, 599441, 599483,
599494, 599508, 599552, 599553, 599554, 599568, 599570, 599577, 599581, 599591, 599592 и 599593.
В некоторых вариантах реализации следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты CFB и вызывают по меньшей мере 90 % ингибирование мРНК CFB, SEQ ID N0: 84, 238, 239, 317, 412, 413, 420, 421, 426, 434, 436, 437, 438, 439, 440, 442, 443, 444, 445, 446, 448, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 551, 553, 555, 556, 599, 600, 601, 602, 610, 616, 617, 618, 662, 666, 670, 676, 677, 678, 688, 689, 713, 723, 729, 730, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 755, 756, 768, 783, 793, 833 и 867.
В некоторых вариантах реализации соединение может содержать или состоять из любого олигонуклеотида, направленного на CFB, описанного в настоящем документе, и группы конъюгата.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, комплементарных в диапазоне нуклеотидов 2193-2212, 21952210, 2457-2476, 2571-2590, 2584-2603, 2588-2607, 2592-2611, 2594-2613, 2597-2616, 26002619 или 2596-2611 SEQ ГО NO: 1.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, состоящую из любой из SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598.
В некоторых вариантах реализации любое из предыдущих соединений или олигонуклеотидов может содержать по меньшей мере одну модифицированную
межнуклеозидную связь, по меньшей мере один модифицированный сахар и/или по меньшей мере одно модифицированное азотистое основание.
В некоторых аспектах любое из предыдущих соединений или олигонуклеотидов может содержать по меньшей мере один модифицированный сахар. В некоторых аспектах по меньшей мере один модифицированный сахар содержит 2'-0-метоксиэтильную группу. В некоторых аспектах по меньшей мере один модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар, такой как группа 4'-СН(СНз)-0-2', группа 4'-СНг-0-2' или группа 4'-(СН2)2-0-2'.
В некоторых аспектах модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь, такую как тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.
В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфирной межнуклеозидной связи и тиофосфатной межнуклеозидной связи.
В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида представляет собой тиофосфатную связь.
В некоторых вариантах реализации любые предыдущие соединения или олигонуклеотиды содержат по меньшей мере одно модифицированное азотистое основание, такое как 5-метилцитозин.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит группу конъюгата и модифицированный олигонуклеотид, содержащий:
сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов;
сегмент 5'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов; и
сегмент 3' -крыла, состоящий из связанных нуклеозидов;
причем сегмент гэп расположен между сегментом 5' -крыла и сегментом 3' -крыла и, при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID N0: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 или 598.
В некоторых вариантах реализации модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую или состоящую из последовательности, указанной в SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 или 455, причем модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов;
сегмент 5'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и
сегмент 3'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
где каждый сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла, причем каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-0-метоксиэтильный сахар; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь, и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из последовательности, указанной в SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 или 455, причем олигонуклеотид содержит:
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и сегмент З'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
где сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла, где каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-0-метоксиэтильный сахар; причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь; и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из ISIS 588540 и группы конъюгата. В некоторых вариантах реализации ISIS 588540 имеет следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую или состоящую из
последовательности, указанной в SEQ Ш N0: 549, где модифицированный олигонуклеотид содержит
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов; и сегмент 3' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов;
где сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла; причем каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит cEt сахар; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь; и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
В некоторых аспектах модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую или состоящую из последовательности, указанной в SEQ Ш N0: 598, где модифицированный олигонуклеотид содержит
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов; и сегмент 3' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов;
где сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла; где сегмент 5'-крыла содержит 2'-0-метоксиэтильный сахар, 2'-0-метоксиэтильный сахар и cEt сахар в направлении от 5' к 3'; где сегмент З'-крыла содержит cEt сахар, cEt сахар и 2'-0-метоксиэтильный сахар в направлении от 5' к 3'; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь; и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
В некоторых предыдущих вариантах реализации соединение или олигонуклеотид может быть по меньшей мере на 85 %, по меньшей мере на 90 %, по меньшей мере на 95 %, по меньшей мере на 98 %, по меньшей мере на 99 % или на 100 % комплементарен нуклеиновой кислоте, кодирующей CFB.
В любых предыдущих вариантах реализации соединение или олигонуклеотид может быть одноцепочечным.
В некоторых вариантах реализации группа конъюгата связана с модифицированный олигонуклеотидом на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата связана с модифицированным олигонуклеотидом на 3'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата содержит по меньшей мере один N- ацетилгалактозамин (GalNAc), по меньшей мере два N- ацетилгалактозамина (GalNAc) или по меньшей мере три N-ацетилгалактозамина (GalNAc).
В некоторых вариантах реализации соединение, имеющее следующую химическую структуру, содержит или состоит из ISIS 588540 с 5'-Х, где X представляет собой группу конъюгата, содержащую GalNAc, как описано в настоящем документе:
В некоторых вариантах реализации соединение содержит или состоит из SEQ Ш N0: 440, 5'-GalNAc и химических модификаций, как показано следующей химической структурой:
где любой R1 представляет собой -ОСШСШОСНз (МОЕ), и R2 представляет собой Н; или R1 и R2 вместе образуют мостик, где R1 представляет собой -О-, и R2 представляет собой -СШ-, -СН(СНз)- или -СН2СН2-, и R1 и R2 напрямую связаны так, что полученный мостик выбран из: -0-СН2-, -О-СН(СНз)- и -0-СН2СН2-;
И для каждой пары R3 и R4 в одном кольце, независимо для каждого кольца: каждый R3 выбран из Н и -ОСН2СН2ОСН3, и R4 представляет собой Н; или R3 и R4 вместе образуют мостик, где R3 представляет собой -О-, и R4 представляет собой -СШ-, -СН(СНз)- или -СН2СН2-, и R3 и R4 напрямую соединены так, что полученный мостик выбран из: -О-СН2-, -О-СН(СНз)- и -О-СН2СН2-; И R5 выбран из Н и -СНз; И Z выбран из S" и О".
В некоторых вариантах реализации соединение содержит ISIS 696844. В некоторых вариантах реализации соединение состоит из ISIS 696844. В некоторых вариантах реализации ISIS 696844 имеет следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации соединение содержит ISIS 696845. В некоторых вариантах реализации соединение состоит из ISIS 696845. В некоторых вариантах реализации ISIS 696845 имеет следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации соединение содержит ISIS 698969. В некоторых вариантах реализации соединение состоит из ISIS 698969. В некоторых вариантах реализации ISIS 698969 имеет следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации соединение содержит ISIS 698970. В некоторых вариантах реализации соединение состоит из ISIS 698970. В некоторых вариантах реализации ISIS 698970 имеет следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации изобретения предложены композиции, содержащие любое соединение, содержащее или состоящее из модифицированного олигонуклеотида, направленного на CFB, или его соль, и группу конъюгата, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
В некоторых вариантах реализации соединения или композиции, описанные в настоящем документе, эффективны в том отношении, что они имеют по меньшей мере одну in vitro IC50 менее 250 нм, менее 200 нМ, менее 150 нМ, менее 100 нМ, менее 90 нМ, менее 80 нМ, менее 70 нМ, менее 65 нМ, менее 60 нМ, менее 55 нМ, менее 50 нМ, менее 45 нМ, менее 40 нМ, менее 35 нМ, менее 30 нМ, менее 25 нМ или менее 20 нМ.
В некоторых вариантах реализации соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются хорошо переносимыми, что демонстрируется наличием по меньшей мере одного из показателей: повышения значения ALT или AST не более чем в 4 раза, 3 раза или 2 раза по сравнению с животными, обработанными солевым раствором, или увеличения массы печени, селезенки или почек не более чем на 30 %, 20 %, 15 %, 12 %, 10 %, 5 % или 2 %. В некоторых вариантах реализации соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются хорошо переносимыми, что демонстрируется отсутствием увеличения ALT или AST по сравнению с животными, обработанными солевым раствором. В некоторых вариантах реализации соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются хорошо переносимыми, что демонстрируется отсутствием увеличения массы печени, селезенки или почек по сравнению с животными, обработанными солевым раствором.
В некоторых вариантах реализации предложена композиция, содержащая соединение по любому из предыдущих вариантов реализации или его соль и по меньшей мере один из фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя. В некоторых аспектах композиция имеет вязкость менее около 40 сантипуаз (сП), менее около 30 сантипуаз (сП), менее около 20 сантипуаз (сП), менее около 15 сантипуаз (сП) или мене около 10 сантипуаз (сП). В некоторых аспектах композиция, имеющая любую вышеуказанную вязкость, содержит соединение, предложенное в настоящем документе, в концентрации около 100 мг/мл, около 125 мг/мл, около 150 мг/мл, около 175 мг/мл, около 200 мг/мл, около 225 мг/мл, около 250 мг/мл, около 275 мг/мл или около 300 мг/мл. В некоторых аспектах композиция, имеющая любую вышеуказанную вязкость и/или концентрацию соединения, имеет температуру комнатной температуры или около 20 °С,
около 21 °С, около 22 °С, около 23 °С, около 24 °С, около 25 °С, около 26 °С, около 27 °С, около 28 °С, около 29 °С или около 30 °С.
В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или ослабления заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, тем самым обеспечивая лечение, предупреждение или облегчение заболевания. В некоторых аспектах альтернативный путь комплемента активирован выше нормального уровня. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ Ш N0: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970.
В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения дегенерации желтого пятна, такой как возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), у субъекта включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в
настоящем документе, тем самым обеспечивая лечение, предупреждение или облегчение AMD. В некоторых аспектах альтернативный путь комплемента активирован выше нормального уровня. В некоторых аспектах AMD представляет собой влажную AMD. В некоторых вариантах реализации AMD представляет собой сухую AMD или географическую атрофию. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения дегенерации желтого пятна у субъекта, такой как возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), влажная AMD, сухая AMD или географическая атрофия, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ Ш N0: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения дегенерации желтого пятна, такой как возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), влажная AMD, сухая AMD или географическая атрофия у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ Ш NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения дегенерации желтого пятна, такой как возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), влажная AMD, сухая AMD или географическая атрофия у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970. В некоторых аспектах соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания почек, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, обеспечивая тем самым лечение, предупреждение или облегчение заболевания почек. В некоторых вариантах реализации способ лечения,
предупреждения или облегчения заболевания почек, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ Ш N0: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания почек, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любУю из SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания почек, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента у субъекта, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970. В некоторых аспектах альтернативный путь комплемента активирован выше нормального уровня. В некоторых аспектах заболевание почек представляет собой волчаночный нефрит, системную красную волчанку (SLE), болезнь плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрит (C3GN), CFHR5 нефропатию или атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS), или любую их комбинаци. В некоторых аспектах заболевание почек связано с отложением СЗ, например, отложением СЗ в гломеруле. В некоторых аспектах заболевание почек связано с более низкими по сравнению с нормальными уровнями циркулирующего СЗ, например, уровнями СЗ в сыворотке или плазме. В некоторых аспектах введение соединение или композиции снижает или ингибирует накопление содержания СЗ в глазах, например, содержания белка СЗ. В некоторых аспектах введение соединения или композиции снижает уровень отложений СЗ в глазах или ингибирует накопление содержания СЗ в глазах. В некоторых аспектах соединение или композицию вводят субъекту парентерально. В некоторых аспектах введение соединения или композиции снижает или ингибирует накопление
содержания СЗ в почках, например, содержания белка СЗ. В некоторых аспектах введение соединения или композиции снижает уровни отложений СЗ в почках или ингибирует накопление отложений СЗ в почках, например, уровней СЗ в гломеруле. В некоторых аспектах субъекта идентифицируют как страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, например, путем определения уровней комплемента или уровней мембраноатакующего комплекса в крови субъекта и/или путем генетического теста на генетические мутации факторов комплемента, связанные с заболеванием.
В некоторых вариантах реализации способ ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB) у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, обеспечивая тем самым ингибирование экспрессии CFB у субъекта. В некоторых вариантах реализации способ ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB) у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ Ш N0: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB) у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB) у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает
введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970. В некоторых аспектах введение соединения или композиции ингибирует экспрессию CFB в глазах. В некоторых аспектах субъект страдает или имеет риск возникновения возрастной дегенерации желтого пятна (AMD), такой как влажная AMD или сухая AMD. В некоторых аспектах сухая AMD может представлять собой географическую атрофию. Географическую атрофию считают прогрессирующей формой сухой AMD, затрагивающей дегенерацию сетчатки. В некоторых аспектах введение соединения или композиции ингибирует экспрессию CFB в почках, например, в гломеруле. В некоторых аспектах субъект страдает или имеет риск возникновения волчаночного нефрита, системной красной волчанки (SLE), болезни плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрита C3GN), CFHR5 нефропатии или атипического гемолитико-уремического синдрома (aHUS), или любой их комбинации.
В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложения СЗ в глазу субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, тем самым снижая или ингибируя накопление отложений СЗ в глазу субъекта. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в глазу субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ Ш N0: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в глазу субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный
олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ID N0: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в глазу субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970. В некоторых аспектах субъект страдает или имеет риск возникновения возрастной дегенерации желтого пятна (AMD), такой как влажная AMD или сухая AMD. В некоторых аспектах сухая AMD может представлять собой географическую атрофию. В некоторых аспектах соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе, тем самым снижая или ингибируя накопление отложений СЗ в почках субъекта. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ ГО NO: 6-808. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность
азотистых оснований любой из SEQ ID N0: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598. В некоторых вариантах реализации способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включает введение субъекту соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970. В некоторых аспектах субъект страдает или имеет риск возникновения волчаночного нефрита, системной красной волчанки (SLE), болезни плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрита C3GN), CFHR5 нефропатии или атипического гемолитико-уремического синдрома (aHUS), или любой их комбинации. В некоторых аспектах соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
Некоторые варианты реализации изобретения относятся к применению соединения или композиции, описанной в настоящем документе, для лечения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента. Некоторые варианты реализации относятся к применению соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ ГО NO: 6-808, для лечения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к применению соединения, содержащего или состоящего из модифицированного олигонуклеотида и группы конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598, для лечения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента. Некоторые варианты реализации относятся к применению соединения, содержащего или состоящего из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970, для лечения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента. В некоторых аспектах альтернативный путь комплемента активирован выше нормального уровня. В некоторых аспектах заболевание представляет собой дегенерацию желтого пятна, такую как возрастная
дегенерация желтого пятна (AMD), которая может быть влажной AMD или сухой AMD. В некоторых аспектах сухая AMD может представлять собой географическую атрофию. В некоторых аспектах заболевание представляет собой болезнь почек, такую как волчаночный нефрит, системная красная волчанка (SLE), болезнь плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрит (C3GN), CFHR5 нефропатия или атипичный гемолитико-уремический синдром (aHTJS), или любая их комбинация. В некоторых аспектах соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
В некоторых вариантах реализации соединение или композицию, описанную в настоящем документе, вводят парентерально. Например, в некоторых вариантах реализации соединение или композиция может быть введена через инъекцию или инфузию. Парентеральное введение включает подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или внутричерепное введение, например, интратекальное или интрацеребровентрикулярное введение.
Антисмысловые соединеия
Олигомерные соединения включают, но не ограничиваются ими, олигонуклеотиды, олигонуклеозиды, аналоги олигонуклеотидов, миметики олигонуклеотидов, антисмысловые соединения, антисмысловые олигонуклеотиды и миРНК. Олигомерное соединение может быть "антисмысловым" к нуклеиновой кислоте-мишени, что означает, что оно способно подвергаться гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородного связывания.
В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение содержит последовательность азотистых оснований, которая при написании в 5'-3' направлении содержит обратный комплемент целевого сегмента нуклеиновой кислоты-мишени, на которую она нацелена.
В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 10-30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 12 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое
соединение имеет от 12 до 22 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение содержит от 14 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 14 до 20 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 15 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 15 до 20 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 16 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 16 до 20 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 17 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 17 до 20 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 18 до 30 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 18 до 21 субъединицы в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 18 до 20 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет от 20 до 30 субъединиц в длину. Другими словами, такие антисмысловые соединения имеет от 12 до 30 связанных субъединиц, от 14 до 30 связанных субъединиц, от 14 до 20 субъединиц, от 15 до 30 субъединиц, от 15 до 20 субъединиц, от 16 до 30 субъединиц, от 16 до 20 субъединиц, от 17 до 30 субъединиц, от 17 до 20 субъединиц, от 18 до 30 субъединиц, от 18 до 20 субъединиц, от 18 до 21 субъединицы, от 20 до 30 субъединиц или от 12 до 22 связанных субъединиц, соответственно. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 14 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 16 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 17 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 18 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 19 субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 20 субъединиц в длину. В других вариантах реализации антисмысловое соединение имеет 8-80, 12-50, 1330, 13-50, 14-30, 14-50, 15-30, 15-50, 16-30, 16-50, 17-30, 17-50, 18-22, 18-24, 18-30, 18-50, 19-22, 19-30, 19-50 или 20-30 связанных субъединиц. В некоторых таких вариантах
реализации антисмысловые соединения содержат 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 или 80 связанных субъединиц в длину или диапазон, определяемый любыми двумя из указанных выше значений. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение представляет собой антисмысловый олигонуклеотид, а связанные субъединицы представляют собой нуклеотиды.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые олигонуклеотиды могут быть укороченными или усеченными. Например, одна субъединица может быть удалена с 5' конца (5' усечение), или же с 3' конца (3' усечение). Укороченное или усеченное антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту CFB, может иметь две субъединицы удаленные с 5' конца, или же может иметь две субъединицы удаленные с 3' конца антисмыслового соединения. В альтернативном варианте, удаленные нуклеозиды могут быть рассеяны по всему антисмысловому соединению, например, в антисмысловом соединении с одним нуклеозидом, удаленным с 5' конца, и одним нуклеозидом, удаленным с 3' конца.
Если одна дополнительная субъединица присутствует в удлиненном антисмысловом соединении, дополнительная субъединица может быть расположена на 5' или 3' конце антисмыслового соединения. Если присутствуют две или более дополнительных субъединиц, присоединенные субъединицы могут быть смежными друг с другом, например, в антисмысловом соединении, имеющем две субъединицы присоединенные к 5' концу (5' присоединение), или же к 3' концу (3' присоединение) антисмыслового соединения. В альтернативном варианте присоединенные субъединицы могут быть рассеяны по всему антисмысловому соединению, например, в антисмысловом соединении, имеющем одну субъединицу, присоединенную к 5' концу, и одну субъединицу, присоединенную к 3' концу.
Возможно увеличение или уменьшение длины антисмыслового соединения, такого как антисмысловой олигонуклеотид, и/или введение некомплементарного азотистого основания без устранения активности. Например, Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA
89:7305-7309, 1992), описывают ряд антисмысловых олигонуклеотидов длиной 13-25 азотистых оснований, которые были испытаны на их способность индуцировать расщепление РНК-мишени в модели инъекции в ооцит. Антисмысловые олигонуклеотиды длиной 25 азотистых оснований с 8 или 11 некомплементарными основаниями вблизи концов антисмысловых олигонуклеотидов были в состоянии управлять прямым специфическим расщеплением мРНК-мишени, хотя и в меньшей степени, чем антисмысловые олигонуклеотиды, которые не содержали никаких несоответствий. Аналогичным образом, целевое специфическое расщепление было получено с применением антисмысловых олигонуклеотидов из 13 азотистых оснований, включая такие, что имели 1 или 3 несоответствия.
Gautschi et al. (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, март, 2001) продемонстрировали способность олигонуклеотида, обладающего 100 % комплементарностью к мРНК bcl-2 и содержащего 3 рассогласованных основания по отношению к мРНК bcl-xL, уменьшать экспрессию как bcl-2, так и bcl-xL in vitro и in vivo. Кроме того, данный олигонуклеотид продемонстрировал высокую противоопухолевую активность in vivo.
Maher and Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) испытания серии тандемов антисмысловых олигонуклеотидов из 14 азотистых оснований и антисмысловых олигонуклеотидов из 28 и 42 азотистых оснований, состоящий из последовательности двух или трех тандемов антисмысловых олигонуклеотидов, соответственно, на их способность к блокированию трансляции ДГФР человека в анализе на ретикулоцитах кролика. Каждый из трех антисмысловых олигонуклеотидов из 14 азотистых оснований в одиночку был способен ингибировать трансляцию, хотя и на более низком уровне, чем антисмысловые олигонуклеотиды из 28 или 42 азотистых оснований.
Некоторые мотивы и механизмы антисмысловых соединений
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат химически модифицированные субъединицы, организованные в паттерны или мотивы, для придания антисмысловым соединениям таких свойств, как усиленная
ингибирующая активность, повышенная аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью или сопротивление разложению нуклеазами in vivo
Химерные антисмысловые соединения обычно содержат по меньшей мере один участок, измененный таким образом, чтобы придать повышенную устойчивость к деградации под действием нуклеаз, усиление клеточного поглощения, повышенную аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью и/или повышенную ингибирующую активность. Второй участок химерного антисмыслового соединения может обеспечивать другое требуемое свойство, например, служить в качестве субстрата для клеточной эндонуклеазы РНКазы Н, которая расщепляет спираль РНК в дуплексе РНК:ДНК.
Антисмысловая активность может быть результатом любого механизма, затрагивающего гибридизацию антисмыслового соединения (например, олигонуклеотида) с нуклеиновой кислотой-мишенью, при этом гибридизация в конечном итоге приводит к биологическому эффекту. В некоторых вариантах реализации модулируют количество и/или активность нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации снижают количество и/или активность нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации гибридизация антисмыслового соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью в конечном итоге приводит к разрушению нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации гибридизация антисмыслового соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью не приводит к разрушению нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации наличие антисмыслового соединения, гибридизованного с нуклеиновой кислотой-мишенью (занятость), приводит к модулированию антисмысловой активности. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, имеющие определенный химический мотив или паттерн химических модификаций, особенно подходят для функционирования одного или более механизмов. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения функционируют более чем по одному механизму и/или по механизмам, которые не были выяснены. Соответственно, антисмысловые соединения, описанные в настоящем документе, не ограничены конкретным механизмом.
Антисмысловые механизмы включают, без ограничения, антисенс, опосредованный РНКазой Н; механизмы РНКи, в которых используется путь RISC и которые включают, без ограничения, механизмы миРНК, оцРНК и микроРНК; и механизмы на основании занятости. Некоторые антисмысловые соединения могут действовать более чем по одному такому механизму и/или по дополнительным механизмам.
Антисенс, опосредованный РНКазой Н
В некоторых вариантах реализации антисмысловая активность по меньшей мере частично обусловлена разрушением РНК-мишени РНКазой Н. РНКаза Н представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет спираль РНК дуплекса РНК:ДНК. В данной области техники известно, что одноцепочечные антисмысловые соединения, которые являются "ДНК-подобными", вызывают активность РНКазы Н в клетках млекопитающих. Соответственно, антисмысловые соединения, содержащие по меньшей мере часть ДНК или ДНК-подобных нуклеозидов, могут активировать РНКазу Н, приводя к расщеплению нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, использующие РНКазу Н, содержат один или более модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации такие антисмысловые соединения содержат по меньшей мере один блок из 1-8 модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации модифицированные нуклеозиды не поддерживают активность РНКазы Н. В некоторых вариантах реализации такие антисмысловые соединения представляют собой гэпмеры, как описано в настоящем документе. В некоторых таких вариантах реализации гэп гэпмера содержит ДНК нуклеозиды. В некоторых таких вариантах реализации гэп гэпмера содержит ДНК-подобные нуклеозиды. В некоторых таких вариантах реализации гэп гэпмера содержит ДНК нуклеозиды и ДНК-подобные нуклеозиды.
Некоторые антисмысловые соединения, имеющие гэмперный мотив, считаются химерными антисмысловыми соединениями. В гэпмере внутренний участок имеет множество нуклеотидов, которые поддерживают расщепление РНКазой Н, расположенных между внешними областями, имеющими множество нуклеотидов, химически отличных от
нуклеозидов внутренней области. В случае, когда антисмысловой олигонуклеотид имеет гэпмерный мотив, сегмент гэп, как правило, служит в качестве субстрата для расщепления эндонуклеазой, в то время, как сегменты крыльев содержат модифицированные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации участки гэпмера различаются по типам сахарных фрагментов в составе каждого отдельного участка. Типы сахарных фрагментов, используемых для дифференциации участков гэпмера, в некоторых вариантах реализации могут включать P-D-рибонуклеозиды, P-D-дезоксирибонуклеозиды, 2'-модифицированные нуклеозиды (такие 2'-модифицированные нуклеозиды могут включать, среди прочих, 2'-МОЕ и 2'-0-СНз) и модифицированные нуклеозиды с бициклическим сахаром (такие модифицированные нуклеозиды с бициклическим сахаром могут включать те, которые содержат стерически затрудненный этил). В некоторых вариантах реализации нуклеозиды в крыльях могут содержать несколько модифицированных сахарных фрагментов, включая, например, 2'-МОЕ и бициклические сахарные фрагменты, такие как стерически затрудненный этил или LNA. В некоторых вариантах реализации крылья могут содержать несколько модифицированных и немодифицированных сахарных фрагментов. В некоторых вариантах реализации крылья могут содержать различные комбинации 2'-МОЕ нуклеозидов, бициклических сахарных фрагментов, таких как нуклеозиды со стерически затрудненным этилом или LNA нуклеозиды, и 2'-дезоксинуклеозиды.
Каждый отдельный участок может содержать одинаковые сахарные фрагменты, отличные или чередующиеся сахарные фрагменты. Мотив крыло-гэп-крыло часто описывают как "Х-Y-Z", где "X" обозначает длину 5' крыла, "Y" обозначает длину гэпа, а "Z" обозначает длину 3' крыла. "X" и "Z" могут содержать одинаковые, отличные или чередующиеся сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации "X" и "Y" могут содержать один или более 2'-дезоксинуклеозидов. "Y" может содержать 2'-дезоксинуклеозиды. В данном контексте гэпмер, описанный как "Х-Y-Z", имеет конфигурацию, в которой гэп расположен непосредственно прилегая к 5' крылу и 3' крылу. Таким образом, между 5' крылом и гэпом или гэпом и 3' крылом не существует промежуточных нуклеотидов. Любые антисмысловые соединения, описанные в настоящем документе, могут иметь гэпмерный мотив. В некоторых вариантах реализации "X" и "Z"
являются одинаковыми; в других вариантах реализации они различны. В некоторых вариантах реализации "Y" содержит от 8 до 15 нуклеозидов. X, Y или Z могут содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 или более нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту CFB, имеет гэпмерный мотив, в котором гэп состоит из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид имеет сахарный мотив, описанный Формулой А, представленной ниже: (J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z
где:
каждый А независимо представляет собой 2'-замещенный нуклеозид; каждый В независимо представляет собой бициклический нуклеозид; каждый J независимо представляет собой либо 2'-замещенный нуклеозид, либо 2'-дезоксинуклеозид;
каждый D представляет собой 2'-дезоксинуклеозид;
m равен 0-4; п равен 0-2; р равен 0-2; г равен 0-2; t равен 0-2; v равен 0-2; w равен 04; х равен 0-2; у равен 0-2; z равен 0-4; g равен 6-14; при условии, что:
по меньшей мере один из m, п и г отличен от 0; по меньшей мере один из w и у отличен от 0; сумма m, n, р, г и t равна от 2 до 5; и сумма v, w, х, у и z равна от 2 до 5.
Соединения РНКи
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения представляют собой соединения интерферирующей РНК (РНКи), которые включают двухцепочечные соединения РНК (также называемые малой интерферирующей РНК или миРНК) и одноцепочечные соединения РНКи (или оцРНК). Такие соединения по меньшей мере
частично действуют по пути RISC для разрушения и/или изолирования нуклеиновой кислоты-мишени (следовательно, включают соединения микроРНК/микроРНК-миметики). В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения содержат модификации, которые делают их особенно подходящими для таких механизмов.
/'. Соединения оцРНК
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, включая соединения, особенно подходящие для применения в качестве одноцепочечных РНКи соединений (оцРНК), содержат модифицированный 5'-терминальный конец. В некоторых таких вариантах реализации 5'-теримнальный конец содержит модифицированный фосфатный фрагмент. В некоторых вариантах реализации такой модифицированный фосфат является стабилизированным (например, усттойчивым к разложению/расщеплению по сравнению с немодифицированным 5'-фосфатом). В некоторых вариантах реализации такие 5'-концевые нуклеозиды стабилизируют 5'-фосфорный фрагмент. Некоторые модифицированные 5'-концевые нуклеозиды описаны в известном уровне техники, например, в WO/2011/139702.
В некоторых вариантах реализации 5'-нуклеозид соединения оцРНК имеет формулу Пс:
где:
Ti представляет собой необязательно защищенный фосфорный фрагмент; Тг представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, связывающую соединение Формулы Пс с олигомерным соединением; А имеет одну из формул:
Qi и СЬ, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил, замещенный d-d алкинил или N(R.3)(R4);
Q3 представляет собой О, S, N(Rs) или C(R6)(Rv);
каждый R3, R4 R5, R, и R7 независимо представляет собой Н, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил или Ci-Сб алкокси;
М3 представляет собой О, S, NR14, C(Ri5)(Ri6), C(Ri5)(Ri6)C(Ri7)(Ri8), C(Ri5)=C(Riv), OC(Ris)(Ri6) или OC(Ri5)(Bx2);
R14 представляет собой H, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил;
R15, Ri6, R17 и Ris, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил;
Bxi представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
или если присутствует Вхг, то Вхг представляет собой фрагмент гетероциклического основания, a Bxi представляет собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил;
J4, J5, Je и J7, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил;
или J4 образует мостик с одним из J5 или J7, где указанный мостик состоит из 1 -3 связанных бирадикальных групп, выбранных из О, S, NR19, C(R2o)(R2i), C(R2o)=C(R2i), C[=C(R2o)(R2i)] и С(=0), а другие два из J5, Je и J7, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, Сг-Сб алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил;
каждый R19, R20 и R21 независимо представляет собой Н, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, С2-Сб алкенил, замещенный С2-Сб алкенил, С2-Сб алкинил или замещенный С2-Сб алкинил;
G представляет собой Н, ОН, галоген или 0-[C(R8)(R9)]n-[(C=0)m-Xi]j-Z;
каждый R8 и R9 независимо представляет собой Н, галоген, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил;
Xi представляет собой О, S или N(Ei);
Z представляет собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил, замещенный С2-Сб алкинил или N(E2)(E3);
Ei, Е2 и Ез, каждый независимо, представляют собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил;
п равен от 1 до около 6; m равен 0 или 1; j равен 0 или 1;
каждая замещенная группа содержит одну или более необязательно защищенных групп заместителей, независимо выбранных из галогена, OJi, N(Ji)(J2), =NJi, SJi, N3, CN, OC(=X2)Ji, 0C(=X2)N(Ji)(J2) и C(=X2)N(Ji)(J2);
X2 представляет собой О, S или Юз;
каждый Ji, J2 и J3 независимо представляет собой Н или Ci-Сб алкил;
если] равен 1, то Z отличен от галогена или ТчГ(Е2)(Ез); и
где указанное олигомерное соединение содержит от 8 до 40 мономерных
субъединиц и может подвергаться гибридизации с по меньшей мере частью нуклеиновой
кислоты-мишени.
В некоторых вариантах реализации Мз представляет собой О, СН=СН, ОСН2 или ОС(Н)(Вх2). В некоторых вариантах реализации Мз представляет собой О.
В некоторых вариантах реализации J4, J5, Je и J7 представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации J4 образует мостик с одним из J5 или J7.
В некоторых вариантах реализации А имеет одну из формул:
где:
Qi и СЬ, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси или замещенный Ci-Сб алкокси. В некоторых вариантах реализации Qi и Q2 представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации Qi и Q2, каждый независимо, представляют собой Н или галоген. В некоторых вариантах реализации Qi и Q2 представляет собой Н, а другой из Qi и Q2 представляет собой F, СНз или ОСНз.
В некоторых вариантах реализации Ti имеет формулу:
где:
Ra и Rc, каждый независимо, представляют собой защищенный гидроксил, защищенный тиол, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Ci-Сб алкокси, замещенный Ci-Сб алкокси, защищенный амино или замещенный амино; и
Rb шредставляет собой О или S. В некоторых вариантах реализации Rb представляет собой О, a Ra и Rc, каждый независимо, представляют собой ОСНз,
ОСН2СН3 или СН(СН3)2.
В некоторых вариантах реализации G представляет собой галоген, ОСНз, OCH2F, OCHF2, OCF3, ОСН2СН3, 0(CH2)2F, OCH2CHF2, OCH2CF3, 0СН2-СН=СН2, 0(СН2)2-0СН3, 0(CH2)2-SCH3, 0(CH2)2-0CF3, 0(CH2)3-N(Rio)(Rn), 0(CH2)2-ON(Rio)(Rn), 0(CH2)2-0(CH2)2-N(Rio)(Rn), OCH2C(=0)-N(Rio)(Rn), OCH2C(=0)-N(Ri2)-(CH2)2-N(Rio)(Rn) или 0(CH2)2-N(Ri2)-C(=NRi3)[N(Rio)(Rn)], где Rio, R11, R12 и R13, каждый независимо, представляют собой Н или Ci-Сб алкил. В некоторых вариантах реализации G представляет собой галоген, ОСНз, OCF3, ОСН2СН3, OCH2CF3, 0СН2-СН=СН2, 0(СН2)2-ОСНз, 0(CH2)2-0(CH2)2-N(CH3)2, 0CH2C(=0)-N(H)CH3, 0CH2C(=0)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2
или OCH2-N(H)-C(=NH)NH2. В некоторых вариантах реализации G представляет собой F, ОСНз или 0(СН2)2-0СНз. В некоторых вариантах реализации G представляет собой 0(СН2)2-0СН3.
В некоторых вариантах реализации 5'-концевой нуклеозид имеет Формулу Не:
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, включая соединения, которые особенно подходят для оцРНК, содержат один или более типов модифицированных сахарных фрагментов и/или природных сахарных фрагментов, расположенных вдоль олигонуклеотида или его области в определенном паттерне или мотиве сахарной модификации. Такие мотивы могут содержать любые сахарные модификации, рассмотренные в настоящем документе, и/или другие известные модификации сахара.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат или состоят из области, имеющей одинаковые сахарные модификации. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области содержит одинаковую РНК-подобную сахарную модификацию. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области представляет собой 2'-F нуклеозид. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области представляет собой 2'-0Ме нуклеозид. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области представляет собой 2'-М0Е нуклеозид. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области представляет собой cEt нуклеозид. В некоторых вариантах реализации каждый нуклеозид области представляет собой LNA нуклеозид. В некоторых вариантах реализации однородная область образует весь или по существу весь олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации область образует весь нуклеотид, за исключением 1-4 концевых нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат одну или более областей чередующихся сахарных модификаций, где нуклеозиды чередуются между нуклеотидами, имеющими сахарную модификацию первого типа, и нуклеотидами, имеющими сахарную модификацию второго типа. В некоторых вариантах реализации нуклеозиды обоих типов представляют собой РНК-подобные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации чередующиеся нуклеозиды выбраны из: 2'-ОМе, 2'-F, 2'-МОЕ, LNA и cEt. В некоторых вариантах реализации чередующиеся модификации представляют собой 2-F и 2'-ОМе. Такие области могут быть смежными или могут быть прерваны по-другому модифицированными нуклеозидами или конъюгированными нуклеозидами.
В некоторых вариантах реализации каждая чередующаяся область чередующихся модификаций состоит из одного нуклеозида (т.е. паттерн представляет собой (АВ)ХАУ, где А представляет собой нуклеозид, имеющий сахарную модификацию первого типа, и В представляет собой нуклеозид, имеющий сахарную модификацию второго типа; х равен 1 -20, и у равен 0 или 1). В некоторых вариантах реализации одна или более чередующихся областей в чередующемся мотиве содержит более одного нуклеозида некоторого типа. Например, олигонуклеотиды могут содержать одну или более областей любого из следующих нуклеозидных мотивов: ААВВАА; АВВАВВ; ААВААВ; АВВАВААВВ; АВАВАА; ААВАВАВ; АВАВАА;
ABB ААВВ АВАВАА; ВАВВААВВАВАВАА; или АВ ABB ААВВ АВАВАА;
где А представляет собой нуклеозид первого типа, и В представляет собой нуклеозид второго типа. В некоторых вариантах реализации каждый А и В выбран из 2'-F, 2'-ОМе, БНК и МОЕ.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды, имеющие такой чередующийся мотив, содержат также модифицированный 5'-концевой нуклеозид, такой как нуклеозид формулы Пс или Не.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат область, имеющую мотив 2-2-3. Такие области содержат следующий мотив:
-(А)2-(В)х-(А)2-(С)у-(А)з-
где: А представляет собой первый тип модифицированного нуклеозида; В и С представляют собой нуклеозиды, модифицированные иначе, чем А, однако В и С могут иметь одинаковые или разные модификации относительно друг друга; х и у равны от 1 до 15.
В некоторых вариантах реализации А представляет собой 2'-0Ме модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации В и С представляют собой 2-F модифицированные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации А представляет собой 2'-0Ме модифицированный нуклеозид, а В и С представляют собой 2'-F модифицированные нуклеозиды.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеозиды имеют следующий сахарный
мотив:
5'-(Q)-(AB)xAy-(D)z где:
Q представляет собой нуклеозид, содержащий стабилизированный фосфатный фрагмент. В некоторых вариантах реализации Q представляет собой нуклеозид, имеющий Формулы Пс или Не;
А представляет собой первый тип модифицированного нуклеозида;
В представляет собой второй тип модиицированного нуклеозида;
D представляет собой модифицированный нуклеозид, содержащий модификацию, отличную от нуклеозида, смежного с ним. Так, если у равен 0, то D должен быть
модифицирован иначе, чем В, а если у равен 1, то D должен быть модифицирован иначе, чем А. В некоторых вариантах реализации D отличен и от А, и от В.
X равен 5-15;
Y равен 0 или 1;
Z равен 0-4.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеозиды имеют следующий сахарный
мотив:
5'-(Q)-(A)x-(D)z где:
Q представляет собой нуклеозид, содержащий стабилизированный фосфатный фрагмент. В некоторых вариантах реализации Q представляет собой нуклеозид, имеющий Формулы Пс или Не;
А представляет собой первый тип модифицированного нуклеозида;
D представляет собой модифицированный нуклеозид, содержащий модификацию, отличную от А.
X равен 11-30;
Z равен 0-4.
В некоторых вариантах реализации А, В, С и D В представленных выше мотивах выбраны из: 2'-ОМе, 2'-F, 2'-МОЕ, LNA и cEt. В некоторых вариантах реализации D представляет собой концевые нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации такие концевые нуклеозиды не предназначены для гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью (хотя может происходить случайная гибридизация одного или более из них). В некоторых вариантах реализации азотистое основание каждого нуклеозида D представляет собой аденин, независимо от идентичности азотистого основания в соответствующем положении нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации азотистое основание каждого нуклеозида D представляет собой тимин.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, включая соединения, которые особенно подходят для применения в качестве оцРРЖ, содержат модифицированные межнуклеозидные связи, расположенные вдоль олигонуклеотида или
его области в определенном порядке или в мотиве модифицированной межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат область, имеющую мотив чередующихся межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат область одинаково модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотид содержит область, которая равномерна связана тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид равномерно связан тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата, и по меньшей мере одна межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфат.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 6 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 8 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 6 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 8 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 10 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 12 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен на 3' конце олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен в пределах 3 нуклеозидов от 3' конца олигонуклеотида.
Олигонуклеотиды, имеющие любые из различных сахарных мотивов, описанных в
настоящем документе, могут иметь любой связывающий мотив. Например, олигонуклеотиды, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые описаны выше, могут иметь связывающий мотив, выбранный из неограничивающей таблицы, представленной ниже:
5' крайняя связь
Центральная область
3'-область
Чередующиеся PO/PS
6PS
Чередующиеся PO/PS
7PS
Чередующиеся PO/PS
8PS
П. Соединения миРНК
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения представляют собой двухцепочечные РНКи соединения (миРНК). В таких вариантах реализации одна или обе цепи могут содержать любой мотив модификации, описанный выше для оцРНК. В некоторых вариантах реализации оцРНК соединения могут представлять собой немодифицированные РНК. В некоторых вариантах реализации соединения миРНК могут содержать немодифицированные нуклеозиды РНК, но модифицированные межнуклеозидные связи.
Некоторые варианты реализации относятся к двухцепочечным композициям, в которых каждая цепь содержит мотив, определенный положением одного или более модифицированных или немодифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации предложены композиции, содержащие первое и второе олигомерное соединение, которые полностью или по меньшей мере частично гибридизованы с образованием дуплексной области, и дополнительно содержащие область, которая комплементарна нуклеиновой кислоте-мишени и гибридизуется с ней. Удобно, что такая композиция содержит первое олигомерное соединение, которое представляет собой антисмысловую цепь, имеющую полную или частичную комплементарность нуклеиновой кислоте-мишени, и второе олигомерное соединение, которое представляет собой
смысловую цепь, имеющую одну или более областей, комплементарных и образующих по меньшей мере одну дуплексную область с первым олигомерным соединением.
Композиции согласно некоторым вариантам реализации модулируют геннуюю экспрессию посредством гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью, что приводит к потере ее нормальной функции. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота-мишень представляет собой CFB. В некоторых вариантах реализации разрушение CFB-мишени облегчается активированным комплексом RISC, который образуется с композициями согласно настоящему изобретению.
Некоторые варианты реализации относятся к двухцепочечным композициям, в которых одна из цепей подходит, например, для воздействия на предпочтительное включения противоположной цепи в RISC (или расщепляющий) комплекс. Указанные композиции подходят для направленного воздействия на выбранные молекулы нуклеиновых кислот и для модулирования экспрессии одного или более генов. В некоторых вариантах реализации композиции согласно настоящему изобретению гибридизуются с частью РНК-мишени, что приводит к потере нормальной функции РНК-мишени.
Некоторые варианты реализации относятся к двухцепочечным композициям, в которых обе цепи содержат гемимерный мотив, полностью модифицированный мотив, позиционно модифицированный мотив или чередующийся мотив. Каждая цепь композиций согласно настоящему изобретению может быть модифицирована для выполнения определенной роли, например, в каскаде миРНК. Используя различные мотивы в каждой цепи или одинаковый мотив с различными химическими модификациями в каждой цепи, может быть обеспечено направленное воздействие на антисмысловую цепь комплекса RISC при ингибировании внедрения смысловой цепи. В рамках такой модели каждая цепь может быть модифицирована независимо, так что она лучше выполняет свою конкретную роль. Антисмысловая цепь может быть модифицирована на 5'-конце для усиления его роли в одной области RISC, тогда как 3'-конец может быть модифицирован иначе для усиления его роли в другой области RISC.
Молекулы двухцепочечных олигонуклеотидов могут представлять собой молекулу двухцепочечного полинуклеотида, содержащую самокомплементарные смысловые и
антисмысловые области, где антисмысловая область содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты-мишени или ее части, а смысловая область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую последовательности нуклеиновой кислоты-мишени или ее части. Молекулы двухцепочечных олигонуклеотидов могут быть собраны из двух отдельных олигонуклеотидов, где одна цепь представляет собой смысловую цепь, а другая представляет собой антисмысловую цепь, при этом антисмысловая и смысловая цепи являются самокомплементарными (т.е. каждая цепь содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности в другой цепи; например, если антисмысловая цепь и смысловая цепь образуют дуплекс или двухцепочечную структуру, например, если двухцепочечная область имеет от около 15 до около 30, например, около 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 пар оснований); антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты-мишени или ее части, а смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую последовательности нуклеиновой кислоты-мишени или ее части (например, от около 15 до около 25 или более нуклеотидов молекулы двухцепочечного олигонуклеотида комплементарны нуклеиновой кислоте-мишени или ее части). В альтернативном варианте, двухцепочечный олигонуклеотид собирается из одного олигонуклеотида, где самокомплементарные смысловые и антисмысловые области миРНК связаны посредством линкера(-ов) на основе нуклеиновой кислоты или не на основе нуклеиновой кислоты.
Двухцепочечный олигонуклеотид может представлять собой полинуклеотид с дуплексом, асимметричным дуплексом, шпилечной или асимметричной шпилечной вторичной структурой, имеющий самокомплементарные смысловые и антисмысловые области, при этом антисмысловая область содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности в отдельной молекуле нуклеиновой кислоты-мишени или ее части, а смысловая область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую последовательности нуклеиновой кислоты-мишени
или ее части. Двухцепочечный олигонуклеотид может представлять собой кольцевой одноцепочечный полинуклеотид, имеющий две или более петлевых структур и ствол, содержащий самокомплементарные смысловые и антисмысловые области, при этом антисмысловая область содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты-мишени или ее части, а смысловая область имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую последовательности нуклеиновой кислоты-мишени или ее части, и при этом кольцевой полинуклеотид может быть процессирован in vivo или in vitro с получением активной молекулы миРНК, способной опосредовать РНКи.
В некоторых вариантах реализации двухцепочечный олигонуклеотид содержит отдельные смысловые и антисмысловые последовательности или области, при этом смысловая и антисмысловая области ковалентно связаны нуклеотидными или ненуклеотидными линкерными молекулами, известными в данной области техники, или в альтернативном варианте реализации связаны нековалентно посредством ионных взаимодействий, водородного связывания, ван-дер-ваальсовских взаимодействий, гидрофобных взаимодействий и/или стэкинг-взаимодействий. В некоторых вариантах реализации двухцепочечный олигонуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности гена-мишени. В другом варианте реализации двухцепочечный олигонуклеотид взаимодействует с нуклеотидной последовательностью гена-мишени таким образом, который вызывает ингибирование экспрессии гена-мишени.
В данном контексте двухцепочечные олигонуклеотиды не ограничены молекулами, содержащими только РНК, а дополнительно охватывают химически модифицированные нуклеотиды и ненуклеотиды. В некоторых вариантах реализации молекулы малой интерферирующей нуклеиновой кислоты не имеют нуклеотидов, содержащих 2'-гидрокси (2'-ОН). В некоторых вариантах реализации малые интерферирующие нуклеиновые кислоты необязательно не содержат рибонуклеотидов (например, нуклеотидов, имеющих группу 2'-ОН). Такие двухцепочечные олигонуклеотиды, которые не требуют наличия рибонуклеотидов в молекуле для
поддержания РНКи, могут тем не менее иметь присоединенный линкер или линкеры или другие присоединенные или связанные группы, фрагменты или цепи, содержащие один или более нуклеотидов с группами 2'-ОН. Необязательно, двухцепочечный олигонуклеотиды могут содержать рибонуклеотиды в около 5, 10, 20, 30, 40 или 50 % положений нуклеотидов. В контексте настоящего документа термин миРНК считают эквивалентным другим терминам, используемым для описания молекул нуклеиновых кислот, которые могут опосредовать последовательность-специфичную РНКи, например, малой интерферирующей РНК (миРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микро-РНК (микроРНК), короткой шпилечной РНК (кшРНК), малого интерферирующего олигонуклеотида, малой интерферирующей нуклеиновой кислоты, малого интерферирующего модифицированного олигонуклеотида, химически модифицированной миРНК, РНК посттранскрипционного сайленсинга гена (ptgsPHK) и других. Кроме того, в данном контексте термин РНК считают эквивалентным другим терминам, используемым для описания последовательность-специфической интерференции РНК, такой как посттранскрипционный сайленсинг гена, трансляционное ингибирование или эпигенетика. Например, двухцепочечные олигонуклеотиды могут быть использованы для эпигенетического сайленсинга генов на посттранскрипционном уровне и на дотранскрипционном уровне. В неограничивающем примере эпигенетическое регулирование генной экспрессии молекулами миРНК согласно настоящему изобретению может быть результатом миРНК-опосредованной модификации структуры хроматина или паттерна метилирования для изменения генной экспрессии (см., например, Verdel et al., 2004, Science, 303, 672-676; Pal-Bhadra et al., 2004, Science, 303, 669672; Allshire, 2002, Science, 297, 1818-1819; Volpe et al., 2002, Science, 297, 1833-1837; Jenuwein, 2002, Science, 297, 2215-2218; и Hall et al., 2002, Science, 297, 2232-2237).
Подразумевается, что соединения и композиции согласно некоторым вариантам реализации, предложенным в настоящем документе, могут направленно воздействовать на CFB посредством дцРНК-опосредованного сайленсинга гена или механизма РНКи, включая, например, эффекторные молекулы "шпилечной" или двухцепочечной РНК из ствола-петли, в которых одна цепь РНК с самокомплементарными последовательностями может принимать двухцепочечную конформацию, или эффекторные молекулы дуплексной
дцРНК, содержащие две отдельные цепи РНК. В различных вариантах реализации дцРНК полностью состоит из рибонуклеотидов или состоит из смеси рибонуклеотидов и дезоксинуклеотидов, таких как гибриды РНК/ДНК, описанные, например, в WO 00/63364, поданной 19 апреля 2000 года, или в патенте США с серийным номером 60/130377, поданном 21 апреля 1999 года. дцРНК или эффекторная молекула дцРНК может представлять собой одну молекулу с областью самокомплементарности, так что нуклеотиды в одном сегменте молекулы участвуют в спаривании оснований с нуклеотидами в другом сегменте молекулы. В различных вариантах реализации дцРНК, которая состоит из одной молекулы, полностью состоит из рибонуклеотидов или содержит область рибонуклеотидов, которая комплементарна области дезоксирибонуклеотидов. В альтернативном варианте реализации дцРНК может содержать две разные цепи, которые имеют область комплементарности друг с другом.
В различных вариантах реализации обе цепи полностью состоят из рибонуклеотидов, одна цепь полностью состоит из рибонуклеотидов, и одна цепь полностью состоит из дезоксирибонуклеотидов, или одна или обе цепи содержат смесь рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации области комплементарности по меньшей мере на 70, 80, 90, 95, 98 или 100 % комплементарны друг другу и последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации область дцРНК, которая находится в двухцепочечной конформации, содержит по меньшей мере 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 50, 75,100, 200, 500, 1000, 2000 или 5000 нуклеотидов или содержит все нуклеотиды в кДНК или другой последовательности нуклеиновой кислоты-мишени, находящейся в дцРНК. В некоторых вариантах реализации дцРНК не содержит одноцепочечных областей, таких как одноцепочечные концы, или дцРНК представляет собой шпильку. В других вариантах реализации дцРНК имеет одну или более одноцепочечных областей или выступов. В некоторых вариантах реализации гибриды РНК/ДНК содержат цепь или область ДНК, которая представляет собой антисмысловую цепь или область (например, имеет по меньшей мере 70, 80, 90, 95, 98 или 100 % комплементарность с нуклеиновой кислотой-мишенью), и цепь или область РНК, которая представляет собой смысловую цепь или
область (например, имеет по меньшей мере 70, 80, 90, 95, 98 или 100 % идентичность с нуклеиновой кислотой-мишенью) и наоборот.
В различных вариантах реализации гибрид РНК/ДНК получают in vitro с помощью методов ферментного или химического синтеза, таких как описаны в настоящем документе или в WO 00/63364, поданной 19 апреля 2000 года, или в патенте США с серийным номером 60/130377, поданном 21 апреля 1999 года. В других вариантах реализации цепь ДНК, синтезированная in vitro, связана в комплекс с цепью РНК, полученной in vivo или in vitro до, после или одновременно с трансформацией ДНК цепи в клетку. В других вариантах реализации дцРНК представляет собой одну кольцевую нуклеиновую кислоту, содержащую смысловую и антисмысловую область, или дцРНК содержит кольцевую нуклеиновую кислоту и вторую кольцевую нуклеиновую кислоту или линейную нуклеиновую кислоту (см., например, WO 00/63364, поданную 19 апреля 2000 года, или в патенте США с серийным номером 60/130377, поданном 21 апреля 1999 года). Иллюстративные кольцевые нуклеиновые кислоты включают лариатные структуры, в которых свободная 5' фосфор ильная группа нуклеотида становится связанной с 2' гидроксильной группой другого нуклеотида путем закольцовывания.
В других вариантах реализации дцРНК содержит один или более модифицированных нуклеотидов, в которых 2' положение сахара содержит галоген (такой как группа фтора) или содержит алкокси-группу (такую как метокси-группа), что увеличивает период полувыведения дцРНК in vitro или in vivo по сравнению с соответствующей дцРНК, в которой соответствующее 2' положение содержит водород или гидроксильную группу. В других вариантах реализации дцРНК содержит одну или более связей между смежными нуклеотидами, отличных от природной фосфодиэфирной связи. Примеры таких связей включают фосфорамидные, тиофосфатные и дитиофосфатные связи. дцРНК также могут представлять собой химически модифицированные молекулы нуклеиновых кислот, как описано в патенте США № 6673661. В других вариантах реализации дцРНК содержит одну или две кэпированных цепей, как описано, например, в WO 00/63364, поданной 19 апреля 2000 года, или в патенте США с серийным номером 60/130377, поданном 21 апреля 1999 года.
В других вариантах реализации дцРНК может представлять собой любую из по меньшей мере частично дцРНК молекул, описанных в WO 00/63364, а также любую из дцРНК молекул, описанных в предварительной заявке США 60/399998; и в предварительной заявке США 60/419532, и в PCT/US2003/033466, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Любая из дцРНК может быть экспрессирована in vitro или in vivo с помощью способов, описанных в настоящем документе, или стандартных способов, таких как описаны в WO 00/63364.
Занятость
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения предположительно не приводят к расщеплению нуклеиновой кислоты-мишени посредством РНКазы Н или не приводят к расщеплению или секвестрации по пути RISC. В некоторых таких вариантах реализации антисмысловая активность может быть результатом занятости, при этом наличие гибридизованного антисмыслового соединения нарушает активность нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых таких вариантах реализации антисмысловое соединение может быть равномерно модифицировано или может содержать смесь модификаций и/или модифицированных и немодифицированных нуклеозидов.
Нуклеиновые кислоты-мишени, области-мишени и нуклеотидные последовательности
Нуклеотидные последовательности, кодирующие фактор комплемента В (CFB), включают, без ограничения, следующие: с номером доступа GENBANK NM_001710.5 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 1), с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 2), с номером доступа GENBANK NW_001116486.1, усеченную с нуклеотида 536000 по 545000 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 3), с номером доступа GENBANK ХМ_001113553.2 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 4) или с номером доступа GENBANK NM_008198.2 (включенную в настоящий документ как SEQ Ш NO: 5). Гибридизация
В некоторых вариантах реализации гибридизация происходит между антисмысловым соединением, описанным в настоящем документе, и нуклеиновой кислотой CFB. Наимболее распространенный механизм гибридизации включает водородное связывание (например, уотсон-криковское, хугстиновское или обратное хугстиновское водородное связывание) между комплементарными азотистыми основаниями молекул нуклеиновых кислот.
Гибридизация может происходить в различных условиях. Жесткие условия являются последовательность-зависимыми и определяются природой и составом гибридизируемых молекул нуклеиновых кислот.
Способ определения, является ли последовательность специфически гибридизируемой с целевой нуклеиновой кислотой, хорошо известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, являются специфически гибридизируемыми с нуклеиновой кислотой CFB. Комплементарност ъ
Антисмысловое соединение и нуклеиновая кислота-мишень являются комплементарными друг к другу, если достаточное количество азотистых оснований антисмыслового соединения могут образовать водородные связи с соответствующими азотистыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени, таким образом, чтобы возникал желаемый эффект (например, антисмысловое ингибирование нуклеиновой кислоты-мишени, такой как нуклеиновая кислота CFB).
Некомплементарные азотистые основания между антисмысловым соединением и нуклеиновой кислотой CFB могут быть приемлемыми при условии, что антисмысловое соединение по-прежнему способно специфически гибридизироваться с нуклеиновой кислотой-мишенью. Кроме того, антисмысловое соединение может гибридизоваться более чем с одним или более сегментами нуклеиновой кислоты CFB так, чтобы промежуточные или соседние сегменты не участвовали в гибридизации (например, петлевая структура, некомплементарное основание или шпилька).
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, представленные в настоящем изобретении, или определенные их части, являются или по меньшей мере на 70 %, 80 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, или 100 % комплементарны к нуклеиновой кислоте CFB, области-мишени, сегменту-мишени или определенной ее части. Процент комплементарности антисмыслового соединения с целевой нуклеиновой кислотой может быть определен с использованием стандартных методов.
Например, антисмысловое соединение, в котором 18 из 20 азотистых оснований антисмыслового соединения являются комплементарными к области-мишени, и поэтому будут специфически гибридизоваться, имеет 90 процентов комплементарности. В данном примере оставшиеся некомплементарные азотистые основания могут быть расположены кластерно или вперемешку с комплементарных азотистыми основаниями и не обязаны быть смежными друг с другом или комплементарными азотистыми основаниям. Таким образом, антисмысловое соединение, длина которого составляет 18 азотистых оснований, содержащее четыре некомплементарных азотистых основания, фланкированных двумя участками полной комплементарности с нуклеиновой кислотой-мишенью, обладает общей комплементарностью с нуклеиновой кислотой-мишенью 77,8 %, и таким образом, входит в пределы объема настоящего изобретения. Процент комплементарности антисмыслового соединения с областью нуклеиновой кислоты-мишени может быть определен с помощью программ BLAST (основное средство поиска локального выравнивания) и программ PowerBLAST, известных в данной области техники (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang и Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). Процент гомологии, идентичность или комплементарность последовательностей, могут быть определены, например, программой Gap (висконсинский пакет анализа последовательностей, версия 8 для Unix, Genetics Computer Group, Висконсинский Университет, Мэдисон, штат Висконсин), с использованием настроек по умолчанию, которые использует алгоритм Смита и Ватермана (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489).
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, предложенные в настоящем документе, или их определенные части полностью комплементарны (т.е. на 100
% комплементарны) нуклеиновой кислоте-мишени или ее определенной части. Например, антисмысловое соединение может быть полностью комплементарно нуклеиновой кислоте CFB или ее области-мишени, или ее сегменту-мишени, или ее последовательности-мишени. В данном контексте "полностью комплементарный" означает, что каждое азотистое основание антисмыслового соединения способно точно спариваться с соответствующими азотистыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени. Например, антисмысловое соединение из 20 азотистых оснований полностью комплементарно целевой последовательности, имеющей 400 азотистых оснований, если существует соответствующий фрагмент из 20 азотистых оснований нуклеиновой кислоты-мишени, полностью комплементарный антисмысловому соединению. Полностью комплементарный может также использоваться в ссылке на определенный фрагмент первой и/или второй нуклеиновой кислоты. Например, фрагмент из 20 азотистых оснований антисмыслового соединения, состоящего из 30 азотистых оснований, может быть "полностью комплементарным" к последовательности-мишени, которая имеет 400 азотистых оснований в длину. Фрагмент из 20 азотистых оснований олигонуклеотида, состоящего из 30 азотистых оснований, полностью комплементарен целевой последовательности, если целевая последовательность имеет соответствующий фрагмент из 20 азотистых оснований, при этом каждое его азотистое основание комплементарно фрагменту из 20 азотистых оснований антисмыслового соединения. В то же время, всё антисмысловое соединение из 30 азотистых оснований может быть или не быть полностью комплементарным целевой последовательности в зависимости от того, будут ли остальные 10 азотистых оснований антисмыслового соединения также комплементарны целевой последовательности.
Некомплементарное азотистое основание может располагаться на 5' конце или 3' конце антисмыслового соединения. В альтернативном варианте некомплементарное азотистое основание или азотистые основания могут быть внутри антисмыслового соединения. Если присутствуют два или более некомплементарных азотистых оснований, они могут быть смежными (т.е. связанными) или не смежными. В одном варианте реализации некомплементарное азотистое основание располагается в сегменте крыла гэпмера антисмыслового олигонуклеотида.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, которые содержат точно или до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 азотистых оснований в длину, содержат не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного азотистого основания(-ий) относительно нуклеиновой кислоты-мишени, такой как нуклеиновая кислота CFB, или ее определенной части.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, которые содержат точно или до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 азотистых оснований в длину, содержат не более 6, не более 5, не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного азотистого основания(-ий) относительно нуклеиновой кислоты-мишени, такой как нуклеиновая кислота CFB, или ее определенной части.
Предложенные антисмысловые соединения включают также соединения, которые комплементарны части нуклеиновой кислоты-мишени. В данном контексте "часть" относится к определенному количеству смежных (т.е. связанных) азотистых оснований в пределах области или сегмента нуклеиновой кислоты-мишени. "Часть" также может относиться к определенному количеству смежных азотистых оснований антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 8 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 9 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 10 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 11 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 12 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 13 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 14 азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации антисмысловые
соединения комплементарны части целевого сегмента из по меньшей мере 15 азотистых оснований. Также рассматриваются антисмысловые соединения, которые являются комплементарными по меньшей мере 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более азотистым основаниям части целевого сегмента, или диапазон, определяемый любыми двумя из указанных значений. Идентичность
Антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, также могут иметь определенный процент идентичности конкретной нуклеотидной последовательности, SEQ Ш N0, или соединению, представленному конкретным номером Isis, или его части. В данном контексте антисмысловое соединение идентично последовательности, описанной в настоящем документе, если оно имеет такую же способность к спариванию азотистых оснований. Например, РНК, которая содержит урацил вместо тимидина в описанной последовательности ДНК, считают идентичной последовательности ДНК, поскольку и урацил, и тимидин спариваются с аденином. Рассматриваются также укороченный и удлиненный варианты антисмысловых соединений, описанных в настоящем документе, а также соединений, обладающих неидентичными основаниями по отношению к антисмысловым соединениям, предложенным в настоящем документе. Неидентичные основания могут быть смежными друг с другом или рассеянными по всему антисмысловому соединению. Процент идентичности антисмыслового соединения рассчитывают по количеству оснований, которые имеют идентичное спаривание оснований, относительно последовательности, с которой идет сравнение.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения или их части по меньшей мере на 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % или 100 % идентичны одному или более антисмысловым соединениям из SEQ Ш NO, или их части, как описано в настоящем документе.
В некоторых вариантах реализации фрагмент антисмыслового соединения сравнивают с равной по длине части нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах
реализации сравнивают часть из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 азотистых оснований с равной по длине частью нуклеиновой кислоты-мишени.
В некоторых вариантах реализации часть антисмыслового олигонуклеотида сравнивают с равной по длине частью нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации сравнивают часть из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 азотистых оснований с равной по длине частью нуклеиновой кислоты-мишени. Модификации
Нуклеозид представляет собой комбинацию азотистое основание-сахар. Азотистое основание (также известное как основание) - часть нуклеозида, обычно представляющая собой фрагмент гетероциклического основания. Нуклеотиды представляют собой нуклеозиды, которые дополнительно содержат фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида. Для тех нуклеозидов, которые содержат пентофуранозильный сахар, фосфатная группа может быть связана с 2', 3' или 5' гидроксильным фрагментом сахара. Олигонуклеотиды образуются посредством ковалентного связывания соседних нуклеозидов друг с другом с образованием линейного полимерного олигонуклеотида. В олигонуклеотидной структуре фосфатные группы обычно называют как образующие межнуклеозидные связи олигонуклеотида.
Модификации антисмысловых соединений охватывают замещения или изменения межнуклеозидных связей, сахарных фрагментов или азотистых оснований. Модифицированные антисмысловые соединения зачастую предпочтительны по сравнению с нативными формами за счет желаемых свойств, таких как, например, улучшенное клеточное поглощение, повышенная аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью, повышенная стабильность в присутствии нуклеаз или повышенная ингибирующая активность.
Химически модифицированные нуклеозиды также могут быть использованы для повышения аффинности связывания укороченного или усеченного антисмыслового олигонуклеотида с его нуклеиновой кислотой-мишенью. Следовательно, сопоставимые
результаты часто могут быть получены с помощью более коротких антисмысловых соединений, которые имеют такие химически модифицированные нуклеозиды.
ModiKpuifiipoeaHHue межнуклеозидные связи
Природная межнуклеозидная связь РНК и ДНК представляет собой 3'-5' фосфодиэфирную связь. Антисмысловые соединения, имеющие одну или более модифицированных, т.е. неприродных межнуклеозидных связей, часто предпочтительны по сравнению с антисмысловыми соединениями, имеющими природные межнуклеозидные связи, благодаря желаемым свойствам, таким как, например, улучшенное клеточное поглощение, усиленная аффинность связывания с нуклеиновыми кислотами-мишенями и повышенная стабильность в присутствии нуклеаз.
Олигонуклеотиды, имеющие модифицированные межнуклеозидные связи, включают межнуклеозидные связи, которые сохраняют атом фосфора, а также межнуклеозидные связи, которые не имеют атома фосфора. Иллюстративные фосфорсодержащие межнуклеозидные связи включают, но не ограничиваются ими, фосфодиэфиры, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосфорамидаты и тиофосфаты. Способы получения фосфорсодержащих и не содержащих фосфор связей хорошо известны.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту CFB, содержат одну или более модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации модифицированные межнуклеозидные связи представляют собой тиофосфатные связи. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь антисмыслового соединения представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат модифицированные межнуклеозидные связи, расположенные вдоль олигонуклеотида или его области определенным образом в виде мотива модифицированной межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах реализации межнуклеозидные связи расположены в разорванном мотиве. В таких вариантах реализации межнуклеозидные связи в каждой из двух областей крыльев отличны от межнуклеозидных связей в области гэп. В некоторых
вариантах реализации межнуклеозидные связи в крыльях являются фосфодиэфирными, а межнуклеозидные связи в гэп являются тиофосфатными. Нуклеозидный мотив выбран независимо, так что олигонуклеотиды, имеющие разорванный мотив межнуклеозидных связей может иметь или не иметь разорванный нуклеозидный мотив, и если он имеет разорванный нуклеозидный мотив, то длина крыльев и гэп может быть или не быть одинаковой.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат область, имеющую мотив чередующихся межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды согласно настоящему изобретению содержат область одинаково модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотид содержит область, которая равномерна связана тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид равномерно связан тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата, и по меньшей мере одна межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфат.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 6 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 8 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 6 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 8 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 10 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 12
последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен на 3' конце олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен в пределах 3 нуклеозидов от 3' конца олигонуклеотида.
В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат одну или более метилфосфонатных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды, имеющие гэпмерный нуклеозидный мотив, содержат мотив связи, содержащий все тиофосфатные межнуклеозидные связи, за исключением одной или двух метилфосфонатных связей. В некоторых вариантах реализации одна метилфосфонатная связь находится в центральном гэп олигонуклеотида, имеющего гэпмерный нуклеозидный мотив.
В некоторых вариантах реализации желательно распределять количество тиофосфатных межнуклеозидных связей и фосфодиэфирных межнуклеозидных связей для сохранения устойчивости к действию нуклеаз. В некоторых вариантах реализации желательно распределять количество и положение тиофосфатных межнуклеозидных связей и количество и положение фосфодиэфирных межнуклеозидных связей для сохранения устойчивости к действию нуклеаз. В некоторых вариантах реализации количество тиофосфатных межнуклеозидных связей может быть уменьшено, а количество фосфодиэфирных межнуклеозидных связей может быть увеличено. В некоторых вариантах реализации количество тиофосфатных межнуклеозидных связей может быть уменьшено, а количество фосфодиэфирных межнуклеозидных связей может быть увеличено при сохранении устойчивости к действию нуклеаз. В некоторых вариантах реализации желательно уменьшить количество тиофосфатных межнуклеозидных связей при сохранении устойчивости к действию нуклеаз. В некоторых вариантах реализации желательно увеличить количество фосфодиэфирных межнуклеозидных связей при сохранении устойчивости к действию нуклеаз. Модифицированные сахарные фрагменты
Антисмысловые соединения могут необязательно содержать один или более нуклеозидов, в которых модифицирована сахарная группа. Указанные нуклеозиды с
модифицированным сахаром могут обеспечивать повышенную устойчивость к действию нуклеаз, повышенную аффинность связывания или некоторые другие полезные биологические свойства антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации нуклеозиды содержат химически модифицированные фрагменты рибофуранозного кольца. Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец включают, без ограничения, добавление групп заместителей (включая 5' и 2' группы заместителей, соединение мостиком негеминальных кольцевых атомов с образованием бициклических нуклеиновых кислот (БНК), замену рибозильного кольцевого атома кислорода на S, N(R) или C(Ri)(R2) (R, Ri и R2, каждый независимо, представляют собой Н, С1-С12 алкил или защитную группу) и их комбинации. Примеры химически модифицированных Сахаров включают 2'-Р-5'-метилзамещенный нуклеозид (см. международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08, где описаны другие 5',2'-бис-замещенные нуклеозиды) или замену рибозильного кольцевого атома кислорода на S с дополнительным замещением в 2'-положении (см. опубликованную заявку на патент США US2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005 года), или в альтернативном варианте 5'-замещение БНК (см. международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, где LNA замещена, например, 5'-метильной или 5'-винильной группой).
Примеры нуклеозидов, имеющих модифицированные сахарные фрагменты, включают, без ограничения, нуклеозиды, содержащие 5'-винильные, 5'-метильные (R или^, 4'-S, 2'-F, 2'-ОСН3, 2'-ОСН2СН3, 2'-OCH2CH2F и 2'-0(СН2)2ОСНз группы заместителей. Заместитель в 2' положении также может быть выбран из аллила, амино, азидо, тио, О-аллила, O-Ci-Сю алкила, OCF3, OCH2F, 0(CH2)2SCH3, 0(CH2)2-0-N(Rm)(Rn), 0-CH2-C(=0)-N(Rm)(Rn) и 0-CH2-C(=0)-N(Ri)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), где каждый Ri, Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный Ci-Сю алкил.
В данном контексте "бициклические нуклеозиды" относятся к модифицированным нуклеозидам, содержащим бициклический сахарный фрагмент. Примеры бициклических нуклеозидов включают без ограничения нуклеозиды, содержащие мостик между 4' и 2' атомами рибозильного кольца. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, предложенные в настоящем документе, содержат один или более
бициклических нуклеозидов, содержащих 4'-2' мостик. Примеры таких бициклических нуклеозидов с 4'-2' мостиками включают, но не ограничиваются одной из формул: 4'-(СН2)-0-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(СН2)2-0-2' (ENA); 4'-СН(СН3)-0-2' (также называемая стеричиски затруденнным этилом или cEt) и 4'-СН(СН20СНз)-0-2' (и их аналоги, см. патент США 7399845, выданный 15 июля 2008 года); 4'-С(СН3)(СН3)-0-2' (и их аналоги, см. опубликованную международную заявку WO 2009/006478, опубликованную 8 января 2009 года); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (и их аналоги, см. опубликованную международную заявку WO/2008/150729, опубликованную 11 декабря 2008 года); 4'-CH2-0-N(CH3)-2' (см. опубликованную заявку на патент CIHAUS2004-0171570, опубликованную 2 сентября 2004 года); 4'-CH2-N(R)-0-2', где R представляет собой Н, Ci-Ci2 алкил или защитную группу (см. патент США 7427672, выданный 23 сентября 2008 года); 4'-СН2-С(Н)(СН3)-2' (см. Zhou et al, J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-CH2-C(=CH2)-2' (и их аналоги, см. опубликованную международную заявку WO 2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008 года).
Дальнейшие сообщения, связанные с бициклическими нуклеозидами могут также быть найдены в опубликованной литературе (см., например: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin etal, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt^al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar etal, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 22192222; Singh et al, J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al, J. Am. Chem. Soc, 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi etal, Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al, Chem. Biol, 2001, 8, 1-7; и Orum et al, Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №6268490; 6525191; 6670461; 6770748; 6794499; 7034133; 7053207; 7399845; 7547684;
8530640; и 7696345; публикации патентов США № US2008-0039618; US2009-0012281; патенты США с серийными номерами 61/026995 и 61/097787; опубликованные международные заявки РСТ; WO 2009/067647; WO 2011/017521; WO 2010/036698 WO 1999/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; и WO 2009/006478. Каждый из указанных бициклических нуклеозидов можно получить, имея одну или более стереохимическую сахарную конфигурацию, включающие,
например, a-L-рибофуранозу и P-D-рибофуранозу (см. международную заявку РСТ PCT/DK98/00393, опубликованную 25 марта 1999 как WO 99/14226).
В некоторых вариантах реализации бициклические сахарные фрагменты нуклеозидов БНК включают, но не ограничиваются ими, соединения, имеющие по меньшей мере один мостик между 4' и 2' положением пентофуранозильного сахарного фрагмента, где такие мостики независимо содержат 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -С(=0)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -О-, -Si(Ra)2-, -S(=0)x- и -N(Ra)-;
где:
x равен 0, 1 или 2; п равен 1, 2, 3 или 4;
каждый Ra и Rb независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, Ci-С12 алкил, замещенный Ci-Co алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил, замещенный С2-С12 алкинил, С5-С20 арил, замещенный С5-С20 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, С5-С7 алициклический радикал, замещенный С5-С7 алициклический радикал, галоген, OJi, NJ1J2, SJi, N3, COOJi, ацил (С(=0)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=0)2-Ji) или сульфоксил (S(=0)-Ji); и
каждый Ji и J2 независимо представляет собой Н, С1-С12 алкил, замещенный С1-С12 алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил, замещенный С2-С12 алкинил, С5-С20 арил, замещенный С5-С20 арил, ацил (С(=0)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, С1-С12 аминоалкил, замещенный С1-С12 аминоалкил или защитную группу.
В некоторых вариантах реализации мостик бициклического сахарного фрагмента представляет собой -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-0-, -C(RaRb)-N(R)-0- или -C(RaRb)-0-N(R)-. В некоторых вариантах реализации мостик представляет собой 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)з-2', 4'-СН2-0-2', 4'-(СН2)2-0-2', 4'-CH2-0-N(R)-2' и 4'-CH2-N(R)-0-2'-, где каждый R независимо представляет собой Н, защитную группу или С1-С12 алкил.
В некоторых вариантах реализации бициклические нуклеозиды дополнительно определяют по изомерной конфигурации. Например, нуклеозид, содержащий мостик 4'-2'-метиленокси, может быть в a-L конфигурации или в P-D конфигурации. Ранее a-L-метиленокси (4'-СН2-0-2') БНК были внедрены в антисмысловые олигонуклеотиды, которые демонстрировали антисмысловую активность (Frieden etal, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
В некоторых вариантах реализации бициклические нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, (А) a-L-метиленокси (4'-СН2-0-2') БНК , (В) P-D-метиленокси (4'-СН2-0-2') БНК , (С) этиленокси (4'-(СН2)2-0-2') БНК , (D) аминоокси (4'-CH2-0-N(R)-2') БНК, (Е) оксиамино (4'-CH2-N(R)-0-2') БНК и (F) метил(метиленокси) (4'-СН(СНз)-0-2') БНК, (G) метилентио (4'-CH2-S-2') БНК, (Н) метиленамино (4'-CH2-N(R)-2') БНК, (I) метилкарбоциклические (4'-СН2-СН(СНз)-2') БНК, (J) пропиленкарбоциклические (4'-(СНг)з-2') БНК и (К) винил БНК, как показано ниже:
где Вх представляет собой фрагмент основания, а R независимо представляет собой Н, защитную группу, С1-С12 алкил или С1-С12 алкокси.
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды, имеющие формулу I:
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
-Qa-Qb-Qc- представляет собой -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=0)-N(Rc)-CH2-, -CH2-0-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-0- или -N(Rc)-0-CH2;
Rc представляет собой Ci-Ci2 алкил или аминозащитную группу; и
Та иТь, каждый независимо, представляют собой Н, гидроксил-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки.
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды, имеющие формулу II:
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;
Za представляет собой Ci-Сб алкил, С2-Сб алкенил, С2-Сб алкинил, замещенный Ci-Сб алкил, замещенный С2-Сб алкенил, замещенный С2-Сб алкинил, ацил, замещенный ацил, замещенный амид, тиол или замещенный тио.
В одном из вариантов реализации каждая из замещенных групп независимо является моно или полизамещенной группами заместителей, выбранными из галогена, оксо, гидроксила, OJc, NJcJd, SJC, N3, OC(=X)Jc и NJeC(=X)NJcJd, где каждый Jc, Jd и Je независимо представляет собой Н, Ci-Сб алкил ил изамещенный Ci-Сб алкил, и X представляет собой О или NJC.
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды, имеющие формулу III:
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;
Ъо представляет собой Ci-Сб алкил, Сг-Сб алкенил, Сг-Сб алкинил, замещенный Ci-Сб алкил, замещенный Сг-Сб алкенил, замещенный Сг-Сб алкинил или замещенный ацил (С(=0)-).
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды,
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;
Rd представляет собой Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, Сг-Сб алкенил, замещенный Сг-Сб алкенил, d-d алкинил ил изамещенный d-d алкинил;
каждый qa, qt> , qc и qd независимо представляет собой Н, галоген, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, d-d алкенил, замещенный d-d алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил, Ci-Сб алкоксил, замещенный Ci-Сб алкоксил, ацил, замещенный ацил, Ci-Сб аминоалкил или замещенный Ci-Сб аминоалкил;
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды, имеющие формулу V:
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;
qa, qt> , qe и qf, каждый независимо, представляют собой водород, галоген, Сл-Спалкил, замещенный С1-С12 алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил, замещенный С2-С12 алкинил, С1-С12 алкокси, замещенный С1-С12 алкокси, OJj, SJj, SOJj, S02Jj, NJjJk, N3, CN, C(=0)OJj, C(=0)NJjJk, C(=0)Jj, 0-C(=0)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=0)NJj Jk или N(H)C(=S)NJj Jk;
qg и qh, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, С1-С12 алкил или замещенный С1-С12 алкил.
Описаны синтез и получение метиленокси (4'-СН2-0-2') мономеров БНК: аденина, цитозина, гуанина, 5-метилцитозина, тимина и урацила, а также их олигомеризация и свойства распознавания нуклеиновых кислот (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 36073630). БНК и их получение также описаны в WO 98/39352 и WO 99/14226.
Были также получены аналоги метиленокси (4'-СН2-0-2') БНК и 2'-тио-БНК (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Описано также получение аналогов запертых нуклеозидов, содержащих олигодезоксирибонуклеотидные дуплексы в качестве субстратов полимераз нуклеиновых кислот (Wengel et al., WO 99/14226 ). Кроме того, в данной области техники описан синтез 2'-амино-БНК, нового конформационно ограниченного высокоаффинного аналоге олигонуклеотида (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Кроме того, ранее были получены 2'-амино- и 2'-метиленамино БНК, и была описана термостабильность их дуплексов с комплементарными нитями РНК и
ДНК.
В некоторых вариантах реализации представлены бициклические нуклеозиды,
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;
каждый qi, qj, qk и qi независимо представляет собой Н, галоген, С1-С12 алкил, замещенный С1-С12 алкил, С2-С12 алкенил, замещенный С2-С12 алкенил, С2-С12 алкинил, замещенный С2-С12 алкинил, С1-С12 алкоксил, замещенный С1-С12 алкоксил, OJj, SJj, SOJj, S02Jj, NJjJk, N3, CN, C(=0)OJj, C(=0)NJjJk, C(=0)Jj, 0-C(=0)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=0)NJjJkMH N(H)C(=S)NJjJk; и
qi и qj или qi и qk вместе представляют собой =C(qg)(qh), где qg и qh, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, С1-С12 алкил или замещенный С1-С12 алкил.
Описан один карбоциклический бициклический нуклеозид, имеющий мостик 4'-(СН2)з-2', и мостик из аналога алкенила 4'-СН=СН-СН2-2' (Freier et al, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al, J. Org. Chem., 2006, 71,11Ъ\-11Щ. Описан также синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов вместе с их олигомеризацией и биохимическими исследованиями (Srivastava et al, J. Am. Chem. Soc, 2007, 129(26), 8362-8379).
В данном контексте "4'-2' бициклический нуклеозид" или "4' к 2' бициклический нуклеозид" относится к бициклическому нуклеозиду, содержащему фуранозное кольцо, содержащее мостик, соединяющий два атома углерода фуранозного кольца, соединяющий 2' атом углерода и 4' атом углерода сахарного кольца.
В данном контексте "моноциклические нуклеозиды" относятся к нуклеозидам, содержащим модифицированные сахарные фрагменты, которые не являются бициклическими сахарными фрагментами. В некоторых вариантах реализации сахарный фрагмент или аналог сахарного фрагмента нуклеозида может быть модифицирован или замещен в любом положении.
В данном контексте "2'-модифицированный сахар" означает фуранозильный сахар, модифицированный в 2' положении. В некоторых вариантах реализации такие модификации включают заместители, выбранные из: галогенидов, включая, но не ограничиваясь ими, замещенный и незамещенный алкокси, замещенный и незамещенный тиоалкил, замещенный и незамещенный аминоалкил, замещенный и незамещенный алкил, замещенный и незамещенный аллил и замещенный и незамещенный алкинил. В некоторых вариантах реализации 2' модификации выбраны из заместителей, включающих, но не
ограничиваясь ими: 0[(CH2)nO]mCH3, 0(CH2)nNH2, 0(CH2)"CH3, 0(CH2)"F, 0(CH2)"ONH2, OCH2C(=0)N(H)CH3 HO(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, где n и m равны от 1 до около 10. Другие 2' группы заместителей также могут быть выбраны из: С1-С12 алкила, замещенного алкила, алкенила, алкинила, алкарила, аралкила, О-алкарила или О-аралкила, SH, SCH3, OCN, С1, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, S02CH3, ON02, N02, N3, NH2, гетероциклоалкила, гетероциклоалкарила, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенного силила, РЕПС расщепляющей группы, репортерной группы, интеркалятора, группы для улучшения фармакокинетических свойств или группы для улучшения фармакодинамических свойств антисмыслового соединения, и других заместителей с подобными свойствами. В некоторых вариантах реализации модифицированные нуклеозиды содержат 2'-МОЕ боковую цепь (Baker etal, J. Biol Chem., 1997, 272, 11944-12000). Такие 2'-M0E замещения описаны как улучшающие аффинность связывания по сравнению с немодифицированными нуклеозидами и с другими модифицированными нуклеозидами, такими как 2'- О-метил, О-пропил и О-аминопропил. Было показано, что олигонуклеотиды, имеющие 2'-М0Е заместитель, являются антисмысловыми ингибиторами экспрессии генов с перспективными возможностями для применения in vivo (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al, Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al, Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; и Altmann etal, Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
В данном контексте "модифицированный тетрагидропирановый нуклеозид" или "модифицированный ТГП нуклеозид" означает нуклеозид, имеющий шестичленный тетрагидропирановый "сахар", заменивший пентофуранозильный остаток в обычных нуклеозидах (заменитель сахара). ТГП-модифицированные нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, те, которые в данной области техники называют гекситоловой нуклеиновой кислотой (ГРЖ), анитоловой нуклеиновой кислотой (АНК), манитоловой нуклеиновой кислотой (МЕЖ) (см. Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854) или фтор-ГРЖ (F-ГРЖ), имеющие тетрагидропирановую кольцевую систему, представленную ниже:
VII:
В некоторых вариантах реализации выбраны заменители сахара, имеющие формулу
VII
где независимо для каждого из указанного по меньшей мере одного тетрагидропиранового нуклеозидного аналога формулы VII:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Та и Тъ, каждый независимо, представляют собой межнуклеозидную линкерную группу, которая связывает тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, или один из Та и Тъ представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, которая связывает тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из Та и Тъ представляет собой Н, гидроксил-защитную группу, связанную группу конъюгата или 5' или З'-концевую группу;
qi, q2, q3, q4, qs, qe и q7, каждый независимо, представляют собой Н, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, С2-С5 алкенил, замещенный С2-С5 алкенил, d-d алкинил или замещенный d-d алкинил; и каждый из Ri и R2 выбран из водорода, гидроксила, галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ1J2, SJi, N3, OC(=X)Ji, OC(=X)NJiJ2, NJ3C(=X)NJiJ2 и CN, где X представляет собой О, S или NJi, и каждый Ji, J2 и1з независимо представляет собой Н или Ci-Сб алкил.
В некоторых вариантах реализации предложены модифицированные ТГП нуклеозиды формулы VII, где qi, q2, q3, q4, qs, qe и q7 представляют собой H. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один из qi, q2, q3, q4, qs, qe и q7 является отличным от H. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один из qi, q2, q3, q4, qs, qe и q7 представляет собой метил. В некоторых вариантах реализации предложены ТГП
нуклеозиды формулы VII, где один из Ri и R2 представляет собой фтор. В некоторых вариантах реализации Ri представляет собой фтор, a R2 представляет собой Н; Ri представляет собой метокси, a R2 представляет собой Н, и Ri представляет собой метоксиэтокси, a R2 представляет собой Н.
в некоторых вариантах реализации заменители сахара содержат кольца, имеющие более 5 атомов и более одного гетероатома. Например, описаны нуклеозиды, содержащие морфолиносахарные фрагменты, и их применение в олигомерных соединениях (см., например: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; и патенты США 5698685; 5166315; 5185444; и 5034506). В данном контексте термин "морфолино" означает заменитель сахара, имеющий следующую формулу:
В некоторых вариантах реализации морфолино могут быть модифицированными, например, добавлением или изменением различных групп заместителей относительно представленной выше структуры морфолино. Такие заменители сахара в данном контексте называют "модифицированными морфолино".
Предложены также комбинации модификаций, без ограничения, такие как 2'-F-5'-метил-замещенные нуклеозиды (см. международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08, где описаны другие 5', 2'-бис-замещенные нуклеозиды) и замену рибозильного кольцевого атома кислорода на S с дополнительным замещением в 2'-положении (см. опубликованную заявку на патент CIHAUS2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005 года) или в альтернативном варианте с 5'-замещением бициклической нуклеиновой кислоты (см. международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, где 4'-СН2-0-2' бициклический нуклеозид дополнительно замещен в 5' положении 5'-метильной или 5'-винильной группой). Описан также синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов вместе с их олигомеризацией и
биохимическими исследованиями (см., например, Srivastava et al, J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения содержат один или более модифицированных циклогексенильных нуклеозидов, которые представляют собой нуклеозиды, имеющие шестичленный циклогексенил вместо пентофуранозильного остатка в природных нуклеозидах. Модифицированные циклогексенильные нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, нуклеозиды, описанные в данной области техники (см., например, параллельную опубликованную заявку РСТ WO 2010/036696, опубликованную 10 апреля, 2010, Robeyns et al, J. Am. Chem. Soc, 2008, 130(6), 1979-1984; Horvath et al, Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts etal, J. Am. Chem. Soc, 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al.,, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al, Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al, Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al, Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang etal, J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure etal, Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang etal, J. Org. Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang et al, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al, J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; опубликованную заявку РСТ WO 06/047842; и опубликованную заявку РСТ WO 01/049687; полное содержание каждой из которых включено в настоящий документ посредством ссылки). Некоторые модифицированные циклогексенильные нуклеозиды имеют формулу X.
где независимо для каждого указанного по меньшей мере одного циклогексенильного нуклеозидного аналога формулы X:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
Тз и Т4, каждый независимо, представляют собой межнуклеозидную линкерную группу, которая связывает циклогексенильный нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, или один из Тз и Т4 представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, которая связывает тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из Тз и Т4 представляет собой Н, гидроксил-защитную группу, связанную группу конъюгата или 5'-или З'-концевую группу; и
qi, q2, q3, q4, qs, qe, q7, qs и q9, каждый независимо, представляют собой Н, Ci-Сб алкил, замещенный Ci-Сб алкил, С2-С6 алкенил, замещенный С2-С5 алкенил, С2-С5 алкинил, замещенный С2-С6 алкинил или другие группы-заместители сахара.
В данном контексте "2'-модифицированный" или "2'-замещенный" относится к нуклеозиду, содержащему сахар, содержащий заместитель в 2' положении, отличный от Н или ОН. 2'-модифицированные нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, бициклические нуклеозиды, в которых мостик, соединяющий два атом углерода сахарного кольца, соединяет 2' атом углерода и другой атом углерода сахарного кольца; и нуклеозиды с немостиковыми 2' заместителями, такими как аллил, амино, азидо, тио, О-аллил, O-Ci-Cio алкил, -OCF3, 0-(СН2)2-0-СН3, 2'-0(CH2)2SCH3, 0-(CH2)2-0-N(Rm)(Rn), or 0-CH2-C(=0)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный Ci-Сю алкил. 2'-модифицированные нуклеозиды могут также содержать другие модификации, например, в других положениях сахара и/или азотистого основания.
В данном контексте "2'-F" относится к нуклеозиду, содержащему сахар, содержащий группу фтора в 2' положении сахарного кольца.
В данном контексте "2'-ОМе" или "2'-ОСНз", или "2'-0-метил" относится к нуклеозиду, содержащему сахар, содержащий группу -ОСНз в 2' положении сахарного кольца.
В данном контексте "МОЕ" или "2'-МОЕ", или "2'-ОСН2СН2ОСНз", или "2'-0-метоксиэтил" относится к нуклеозиду, содержащему сахар, содержащий группу -ОСН2СН2ОСН3 в 2' положении сахарного кольца.
В данном контексте "олигонуклеотид" относится к соединению, содержащему множество связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации один или более из
множества нуклеозидов являются модифицированными. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит один или более рибонуклеозидов (РНК) и/или дезоксирибонуклеозидов (ДНК).
В данной области техники известны также многие другие бициклические и трициклические кольцевые системы заменителей сахара, которые могут быть использованы для модификации нуклеозидов для внедрения в антисмысловые соединения (см., например, обзорную статью: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854). Такие кольцевые системы могут подвергаться различным дополнительным замещениям для повышения активности.
Способы получения модифицированных Сахаров хорошо известны специалистам в данной области техники. Некоторые иллюстративные патенты США, которые описывают получение таких модифицированных Сахаров, включают, без ограничения, патенты США: 4981957; 5118800; 5319080; 5359044; 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5670633; 5700920; 5792847 и 6600032, а также международную заявку PCT/US2005/019219, поданную 2 июня 2005 года и опубликованную как WO 2005/121371 12 декабря 2005 года, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки.
В нуклеотидах, имеющих модифицированные сахарные фрагменты, фрагменты азотистых оснований (природные, модифицированные или их комбинации) сохраняются для гибридизации с соответствующей нуклеиновой кислотой-мишенью.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения содержат один или более нуклеозидов, имеющих модифицированные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ. В некоторых вариантах реализации 2'-МОЕ модифицированные нуклеозиды расположены в гэпмерном мотиве. В некоторых вариантах реализации модифицированный сахарный фрагмент представляет собой бициклический нуклеозид, имеющий мостиковую группу (4'-СН(СН3)-0-2'). В некоторых вариантах реализации (4'-СН(СН3)-0-2') модифицированные нуклеозиды расположены в крыльях гэпмерного мотива.
Модифицированные азотистые основания
Модификации или замещения азотистого основания (или основания) структурно отличаются и функционально взаимозаменимы с природными или синтетическими немодифицированными азотистыми основаниями. Природные и модифицированные азотистые основания могут участвовать в водородном связывании. Такие модификации азотистых оснований могут влиять на стабильность к действию нуклеаз, аффинность связывания или некоторые другие полезные биологические свойства антисмысловых соединений. Модифицированные азотистые основания включают синтетические и природные азотистые основания, такие как, например, 5-метилцитозин (5-те-С). Некоторые замещения азотистых оснований, включая 5-метилцитозиновые замещения, особенно подходят для повышения аффинности связывания антисмыслового соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью. Например, было показано, что 5-метилцитозиновые замещения повышают стабильность дуплекса нуклеиновой кислоты на 0,6-1,2°С (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. и Lebleu, В., ред., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, cc. 276-278).
Дополнительные модифицированные азотистые основания включают 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинил (-С=С-СНЗ) урацил и цитозин и другие алкинильные производные пиримидиновых оснований, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности, 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 2-Р-аденин, 2-аминоаденин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-дезазагуанин и 7-дезазааденин, и 3-дезазагуанин и 3-дезазааденин.
Фрагменты гетероциклических оснований также могут включать те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменено другими гетероциклами, например, 7-дезазааденин, 7-дезазагуанозин, 2-аминопиридин и 2-пиридон. Азотистые основания,
которые особенно подходят для повышения аффинности связывания антисмысловых соединений, включают 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2, N-6 и 0-6 замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин.
В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту CFB, содержат одно или более модифицированных азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации укороченные или гэп-расширенные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту CFB, содержат одно или более модифицированных азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации модифицированное азотистое основание представляет собой 5-метилцитозин. В некоторых вариантах реализации каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
Сопряженные антисмысловые соединения
В некоторых вариантах реализации настоящего описания предложены сопряженные антисмысловые соединения. В некоторых вариантах реализации настоящего описания предложены сопряженные антисмысловые соединения, содержащие антисмысловый олигонуклеотид, комплементарный транскрипту нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации настоящего описания предложены способы, включающие приведение в контакт клетки с сопряженным антисмысловым соединением, содержащим антисмысловый олигонуклеотид, комплементарный транскрипту нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации настоящего описания предложены способы, включающие приведение в контакт клетки с сопряженным антисмысловым соединением, содержащим антисмысловый олигонуклеотид, и уменьшение количества или активности транскрипта нуклеиновой кислоты в клетке.
Ранее был описан асиалогликопротеиновый рецептор (ASGP-R). См. например, Park et al., PNAS, том. 102, № 47, cc. 17125-17129 (2005). Такие рецепторы экспрессируются на клетках печени, в частности, гепатоцитах. Кроме того, было показано, что соединения, содержащие кластеры трех N-ацетилгалактозаминовых (GalNAc) лигандов, способны связываться с ASGP-R, приводя к захвату указанного соединения в клетку. См. например,
Khorev et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry, 16, 9, cc. 5216-5231 (май, 2008). Соответственно, конъюгаты, содержащие такие кластеры GalNAc, использовали для облегчения захвата некоторых соединений в клетки печени, в частности, гепатоциты. Например, было показано, что некоторые GalNAc-содержащие конъюгаты увеличивают активность дуплексных миРНК соединений в клетках печени in vivo. В таких случаях GalNAc-содержащий конъюгат, как правило, прикрепляется к смысловой спирали дуплекса миРНК. Поскольку смысловая спираль отбрасывается перед окончательной гибридизацией антисмысловой спирали с нуклеиновой кислотой-мишенью, то маловероятно, что такой конъюгат будет влиять на активность. Как правило, конъюгат присоединяется к 3'-концу смысловой спирали миРНК. См. например, патент США 8106022. Некоторые группы конъюгата, описанные в настоящем документе, более активны и/или синтезируются легче, чем группы конъюгата, описанные ранее.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения конъюгаты присоединяются к односпиральным антисмысловым соединениям, включая, но не ограничиваясь ими, антисмысловые соединения на основе РНКазы Н и антисмысловые соединения, которые изменяют сплайсинг целевой нуклеиновой кислоты пре-мРНК. В таких вариантах реализации конъюгат должен оставаться присоединенным к антисмысловому соединению достаточно долго для обеспечения преимущества (улучшенного захвата в клетки), но затем он должен либо расщепляться, либо иным образом не препятствовать последующим стадиям, необходимым для активности, таким как гибридизация с целевой нуклеиновой кислотой и взаимодействие с РНКазой Н или ферментами, связанными со сплайсингом или модулированием сплайсирования. Такой баланс свойств более важен при осаждении односпиральных антисмысловых соединений, чем соединений миРНК, где конъюгат может быть просто присоединен к смысловой спирали. В настоящем документе описаны односпиральные антисмысловые соединения, обладающие улучшенной активностью в клетках печени in vivo, по сравнению с таким же антисмысловым соединением, не имеющим конъюгата. Учитывая необходимый баланс свойств для этих соединений, такая улучшенная активность является неожиданной.
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата по настоящему документу
содержат расщепляемый фрагмент. Как было отмечено, не ограничиваясь каким-либо механизмом, логично, что конъюгат должен сохраняться у соединения достаточно долго для обеспечения усиления захвата, но после этого желательно, чтобы некоторая его часть или, в идеале, весь конъюгат расщеплялся, выделяя исходное соединение (например, антисмысловое соединение) в его наиболее активной форме. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемый нуклеозид. Такие варианты реализации обладают преимуществом эндогенных нуклеаз в клетке за счет присоединения остальной части конъюгата (кластера) к антисмысловому олигонуклеотиду через нуклеозид при помощи одной или более расщепляемых связей, таких как фосфодиэфирная связь. В некоторых вариантах реализации кластер связан с расщепляемым нуклеозидом через фосфодиэфирную связь. В некоторых вариантах реализации расщепляемый нуклеозид присоединен к антисмысловому олигонуклеотиду (антисмысловому соединению) фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата может содержать два или три расщепляемых нуклеозида. В таких вариантах реализации указанные расщепляемые нуклеозиды связаны друг с другом, с антисмысловым соединением и/или с кластером посредством расщепляемых связей (таких как фосфодиэфирная связь). Некоторые конъюгаты по настоящему документу не содержат расщепляемый нуклеозид, а вместо этого содержат расщепляемую связь. Показано, что достаточное расщепление конъюгата из олигонуклеотида обеспечивается по меньшей мере за счет одной связи, которая легко поддается расщеплению в клетке (расщепляемая связь).
В некоторых вариантах реализации сопряженные антисмысловые соединения представляют собой пролекарства. Такие пролекарства вводят животному, и они в конечном итоге метаболизируются до более активной формы. Например, сопряженные антисмысловые соединения расщепляются с удалением всего или части конъюгата, приводя к активной (или более активной) форме антисмыслового соединения, не содержащего всего или части конъюгата.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты присоединены у 5'-конца олигонуклеотида. Некоторые такие 5'-конъюгаты расщепляются более эффективно, чем
аналоги, имеющие такую же группу конъюгата, присоединенную у 3'-конца. В некоторых вариантах реализации улучшенная активность может коррелировать с улучшенным расщеплением. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды, содержащие конъюгат у 5'-конца, обладают более высокой эффективностью, чем олигонуклеотиды, содержащие конъюгат у З'-конца (см., например, Примеры 56, 81, 83 и 84). Кроме того, 5'-присоединение обеспечивает более простой синтез олигонуклеотида. Как правило, олигонуклеотиды синтезируют на твердой подложке в направлении от 3' к 5'. Для получения 3' -сопряженного олигонуклеотида, как правило присоединяют предварительно сопряженный 3'-нуклеозид к твердой подложке, а затем обычным путем создают олигонуклеотид. Однако присоединение такого сопряженного нуклеозида к твердой подложке усложняет синтез. Кроме того, используя такой подход, конъюгат затем присутствует в ходе всего синтеза олигонуклеотида и может разрушаться во время последующих стадий или может ограничивать типы реакций и реагентов, которые можно использовать. Используя структуры и методики, описанные в настоящем документе для 5'-сопряженных олигонуклеотидов, можно синтезировать олигонуклеотид при помощи стандартных автоматизированных методик и внедрять в конъюгат последний (5' -крайний) нуклеозид или после отделения олигонуклеотида от твердой подложки.
С учетом известного уровня техники и настоящего описания, специалисты в данной области техники могут легко получить любые из конъюгатов и сопряженных олигонуклеотидов, описанных в настоящем документе. Кроме того, синтез некоторых таких конъюгатов и сопряженных олигонуклеотидов, описанных в настоящем документе, проще и/или требует меньше стадий и, следовательно, менее дорогой, чем синтез ранее описанных конъюгатов, что дает преимущество при производстве. Например, синтез некоторых групп конъюгата состоит из меньшего количества синтетических стадий, что приводит к увеличению выхода, по сравнению с ранее описанными группами конъюгата. Группы конъюгатов, такие как GalNAc3-10 в Примере 46 и GalNAc3-7 в Примере 48 гораздо проще, чем ранее описанные конъюгаты, такие как описаны в публикациях U.S. 8106022 или U.S. 7262177, для которых необходима сборка большего количества химических промежуточных соединений. Соответственно, эти и другие конъюгаты, описанные в
настоящем документе, обладают преимуществом по сравнению с ранее описанными соединениями для применения с любым олигонуклеотидом, включая односпиральные олигонуклеотиды и любую спираль двухспиральных олигонуклеотидов (например, миРНК).
Точно так же, в настоящем документе описаны группы конъюгатов, имеющие только один или два лиганда GalNAc. Как показано, такие сопряженные группы усиливают активность антисмысловых соединений. Такие соединения гораздо проще получить, чем конъюгаты, содержащие три лиганда GalNAc. Группы конъюгатов, содержащие один или два лиганда GalNAc, могут быть присоединены к любым антисмысловым соединениям, включая односпиральные олигонуклеотиды и любую спираль двухспиральных олигонуклеотидов (например, миРНК).
В некоторых вариантах реализации конъюгаты, описанные в настоящем документе, существенно не изменяют некоторые показатели переносимости. Например, в настоящем документе показано, что сопряженные антисмысловые соединения являются не более иммуногенными, чем несопряженные исходные соединения. Поскольку активность улучшается, то варианты реализации, в которых переносимость остается такой же (или в действительности если даже переносимость ухудшается лишь незначительно, по сравнению с приростом активности), обладают улучшенными характеристиками для терапии.
В некоторых вариантах реализации сопряжение позволяет изменять антисмысловые соединения так, чтобы они обладали менее выраженными последствиями в отсутствие сопряжения. Например, в некоторых вариантах реализации замена одной или более тиофосфатных связей полностью тиофосфатного антисмыслового соединения на фосфодиэфирные связи приводит к улучшению некоторых показателей переносимости. Например, в некоторых случаях такие антисмысловые соединения, имеющие один или более фосфодиэфиров, являются менее иммуногенными, чем такие же соединения, в которых каждая связь представляет собой тиофосфат. Однако в некоторых случаях, как показано в Примере 26, такое же замещение одной или более тиофсофатных связей на фосфодиэфирные связи приводит также к снижению клеточного захвата и/или к снижению
активности. В некоторых вариантах реализации сопряженные антисмысловые соединения, описанные в настоящем документе, допускают такое изменение связей с небольшим снижением или без снижения захвата и активности, по сравнению с сопряженным полностью тиофосфатным аналогом. В действительности, в некоторых вариантах реализации, например, в Примерах 44, 57, 59 и 86, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат и по меньшей мере одну фосфодиэфирную межнуклеозидную связь, фактически демонстрируют повышенную активность in vivo даже по сравнению с полностью тиофосфатным аналогом, также содержащим такой же конъюгат. Более того, поскольку сопряжение приводит к значительному увеличению захвата /активности, то небольшое снижение такого существенного прироста может быть приемлемым для достижения улучшенной переносимости. Соответственно, в некоторых вариантах реализации сопряженные антисмысловые соединения содержат по меньшей мере одну фосфодиэфирную связь.
В некоторых вариантах реализации сопряжение антисмысловых соединений по настоящему документу приводит к улучшенной доставке, захвату и активности в гепатоцитах. Следовательно, в ткань печени доставляется большее количество соединения. Однако в некоторых вариантах реализации такая улучшенная доставка сама по себе не объясняет общего увеличения активности. В некоторых таких вариантах реализации в гепатоциты поступает большее количество соединения. В некоторых вариантах реализации даже такой улучшенный захват гепатоцитов сам по себе не объясняет общего увеличения активности. В таких вариантах реализации увеличивается продуктивный захват сопряженного соединения. Например, как показано в Примере 102, некоторые варианты реализации GalNAc-содержащих конъюгатов увеличивают обогащение антисмысловых олигонуклеотидов в гепатоцитах, по сравнению с не паренхимальными клетками. Такое обогащение преимущественно для олигонуклеотидов, которые направлены на гены, экспрессируемые в гепатоцитах.
В некоторых вариантах реализации сопряженные антисмысловые соединения по настоящему документу приводят к уменьшению воздействия на почки. Например, как показано в Примере 20, концентрации антисмысловых олигонуклеотидов, содержащих
некоторые варианты реализации GalNAc-содержащих конъюгатов, в почках ниже, чем концентрации антисмысловых олигонуклеотидов, не имеющих GalNAc-содержащего конъюгата. Это имеет несколько преимущественных терапевтических применений. Для терапевтических показаний, в которых не требуется проявление активности в почках, воздействие на почки подвергает их риску токсичности без соответствующей пользы. Более того, высокая концентрация в почках обычно приводит к выводу соединения с мочой, обеспечивая более быстрое выведение. Соответственно, для внепочечных мишеней накопление в почках является нежелательным.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания предложены сопряженные антисмысловые соединения, представленные формулой:
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент С представляет собой линкер конъюгата D представляет собой группу ветвления каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
На представленной выше схеме и в аналогичных схемах в настоящем документе группа ветвления "D" разветвляется такое количество раз, которое необходимо для соответствия количеству групп (E-F), указанному количеством "q". Следовательно, если q = 1, то формула представляет собой:
А В С D Е F
если q = 2, то формула представляет собой:
Е F
-В-
\Е-Р
если q = 3, то формула представляет собой:
Е F
Е F
Е F
если q = 4, то формула представляет собой:
Е F
Е F
Е F
Е F
если q = 5, то формула представляет собой:
Е F
Е F
А В С D;
Е F
Е F
Е F
соединения, имеющие структуру:
Направляющий фрагмент
г I
Расщепляемый
Группа ветвления Фрагмент
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые соединения, имеющие структуру:
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые соединения, имеющие структуру:
Расщепляемый AS( I фрагмент
НО-Р=0 /vJ *
... Х-Г>
НО-P-U
¦ \
'п ¦•
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые соединения, имеющие структуру:
ASO
Юун
Лиганд
норн
но-
Расщепляемый Связка фрагмент
н , х
НО Р
-О]
AcHN
ноон
AcHN О
ноон J
AcHN О
Линкер конъюгата
Группа ветвления
Фрагмент, направляющий на клетку
В настоящем описании предложены следующие неограничивающие нумерованные варианты реализации:
Вариант реализации 1. Сопряженное антисмысловое соединение по любому из
вариантов реализации 1179-1182, в котором связка имеет структуру, выбранную из:
; где каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5,
6 или 7.
Вариант реализации 2. Сопряженное антисмысловое соединение по любому из вариантов реализации 1179-1182, в котором связка имеет структуру:
Вариант реализации 3. Сопряженное антисмысловое соединение по любому из
вариантов реализации 1179-1182 или 1688-1689, в котором линкер имеет структуру, выбранную из:
0 0 (r)
Вариант реализации 4. Сопряженное антисмысловое соединение по любому из
вариантов реализации 1179-1182 или 1688-1689, в котором линкер имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен О, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.
Вариант реализации 5.Сопряженное антисмысловое соединение по любому из
вариантов реализации 1179-1182 или 1688-1689, в котором линкер имеет структуру:
О О
В вариантах реализации, имеющих более одной конкретной переменной (например, более одного "т" или "п"), если не указано иное, каждая такая конкретная переменная выбрана независимо. Следовательно, для структуры, имеющей более одного п, каждый п выбран независимо, так что они могут быть или не быть одинаковыми между собой.
В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемую связь. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент содержит расщепляемую связь. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата содержит расщепляемый фрагмент. В некоторых таких вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединяется к антисмысловому олигонуклеотиду. В некоторых таких вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединяется непосредственно к фрагменту, направляющему на клетку. В некоторых таких вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединяется к линкеру конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент содержит фосфат или фосфодиэфир. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемый нуклеозид или нуклеозидный аналог. В некоторых вариантах реализации нуклеозид или нуклеозидный аналог содержит необязательно защищенное гетероциклическое основание, выбранное из пурина, замещенного пурина, пиримидина или замещенного пиримидина. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой нуклеозид, содержащий необязательно защищенное гетероциклическое основание, выбранное из урацила, тимина, цитозина, 4-N-бензоилцитозина, 5-метилцитозина, 4-Гч[-бензоил-5-метилцитозина, аденина, 6-N-бензоиладенина, гуанина и 2-Гч[-изобутирилгуанина. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой 2'-дезоксинуклеозид, который присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной или тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой 2'-дезоксиаденозин, который присоединен к 3' -положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной или тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой 2'-дезоксиаденозин, который присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной связью.
В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к 5'-положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к 2'-положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к антисмысловому олигонуклеотиду фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к указанному линкеру либо фосфодиэфирной, либо тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент присоединен к указанному линкеру фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата не содержит расщепляемый фрагмент.
В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент расщепляется после введения указанного комплекса в организм животного только после его поглощения целевой клеткой. Внутри клетки расщепляемый фрагмент расщепляется, высвобождая таким образом активный антисмысловый олигонуклеотид. Не ограничиваясь теорией, предполагают, что расщепляемый фрагмент расщепляется под действием одной или более нуклеаз внутри клетки. В некоторых вариантах реализации одна или более нуклеаз расщепляют фосфодиэфирную связь между расщепляемым фрагментом и линкером. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент имеет структуру, выбранную из следующих:
где каждый из Вх, Bxi, Вхг и Вхз независимо представляет собой фрагмент гетероциклического основания. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент имеет структуру, выбранную из следующих:
н. Некоторые линкеры
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат линкер. В некоторых таких вариантах реализации линкер ковалентно связан с расщепляемым фрагментом. В некоторых таких вариантах реализации линкер ковалентно связан с антисмысловым олигонуклеотидом. В некоторых вариантах реализации линкер ковалентно связан с фрагментом, направляющим на клетку. В некоторых вариантах реализации линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к твердой подложке. В некоторых вариантах реализации линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к твердой подложке и дополнительно содержит ковалентное присоединение к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации линкер содержит несколько положений для присоединения связанных лигандов. В некоторых вариантах реализации линкер содержит несколько положений для присоединения связанных лигандов и не присоединен к группе ветвления. В некоторых вариантах реализации линкер дополнительно содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата не содержит линкер.
В некоторых вариантах реализации линкер содержит по меньшей мере одну линейную группу, содержащую группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, тиоэфирных (-S-) и гидроксиламино (-0-N(H)-) групп. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит группы, выбранные из алкильных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит по меньшей мере одну фосфорную линкерную группу. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит по меньшей мере одну фосфодиэфирную группу. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит по меньшей мере одну нейтральную линкерную группу. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, направляющему на клетку, и к расщепляемому фрагменту. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, направляющему на клетку, и к антисмысловому олигонуклеотиду. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, направляющему на клетку, к расщепляемому фрагменту и к твердой подложке. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, направляющему на клетку, к расщепляемому фрагменту, к твердой подложке и к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации линейная группа содержит одну или более расщепляемых связей.
В некоторых вариантах реализации линкер содержит линейную группу, ковалентно присоединенную к группе скелета. В некоторых вариантах реализации скелет содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, простых эфирных, тиоэфирных и гидроксиламино-групп. В некоторых вариантах реализации скелет содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации скелет содержит по меньшей мере одну моно- или полициклическую кольцевую систему. В некоторых вариантах реализации скелет содержит по меньшей мере две моно- или
полициклические кольцевые системы. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту и линкеру. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру и твердой подложке. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру и белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру, белковому связывающему фрагменту и твердой подложке. В некоторых вариантах реализации группа скелета содержит одну или более расщепляемых связей.
В некоторых вариантах реализации линкер содержит белок связывающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации белок связывающий фрагмент представляет собой липид, такой как, например, включая, но не ограничиваясь ими, холестерин, холевая кислота, адамантан-уксусная кислота, 1 -пирен-масляная кислота, дигидротестостерон, 1,3-бис-0(гексадецил)глицерин, геранилоксигексиловая группа, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадециловая группа, пальмитиновая кислота, миристиновая кислота, 03-(олеоил)литохолевая кислота, 03-(олеоил)холеновая кислота, диметокситритил или феноксазин, витамин (например, фолат, витамин А, витамин Е, биотин, пиридоксаль), пептид, углевод (например, моносахарид, дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид, полисахарид), эндосомолитический компонент, стероид (например, уваол, гецигенин, диосгенин), терпен (например, тритерпен, например, сарсасапогенин, фриделин, литохолевая кислота, дериватизованная эпифриделанолом) или катионный липид. В некоторых вариантах реализации белок связывающий фрагмент представляет собой насыщенную или ненасыщенную жирную кислоту с длиной цепи от С16 до С22, холестерин, холевую кислоту, витамин Е, адамантан или 1-пентафторпропил.
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20; и р равен от 1 до 6.
< о i п
О, °
-А ° ° -ч
<
о 1 он
но'
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
где каждый L независимо представляет собой фосфорную линкерную группу или нейтральную линкерную группу; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
"он
у , 9 HN^O
о о
о ?
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
где п равен от 1 до 20.
о v о
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
он он
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации линкер конъюгата имеет структуру: О N
В некоторых вариантах реализации линкер конъюгата имеет структуру: В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.
Hi. Некоторые фрагменты, направляющие на клетку
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат фрагменты, направляющие на клетку. Некоторые такие фрагменты,- направляющие на клетку, увеличивают клеточный захват антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации фрагменты, направляющие на клетку, содержат группу ветвления, одну или более связок и один или более лигандов. В некоторых вариантах реализации фрагменты, направляющие на клетку, содержат группу ветвления, одну или более связок, один или более лигандов и одну или более расщепляемых связей.
1. Некоторые группы ветвления
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат нацеливающий фрагмент, содержащий группу ветвления и по меньшей мере два связанных лиганда. В некоторых вариантах реализации группа ветвления присоединяет линкер конъюгата. В некоторых вариантах реализации группа ветвления присоединяет расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах реализации группа ветвления присоединяет антисмысловый олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации группа ветвления ковалентно присоединена к линкеру и каждому из связанных лигандов. В некоторых вариантах реализации группа ветвления содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, простых эфирных, тиоэфирных и гидроксиламино-групп. В некоторых вариантах реализации группа ветвления содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации группа ветвления содержит группы, выбранные из алкильных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации группа ветвления содержит моно- или полициклическую кольцевую систему. В некоторых вариантах реализации группа
ветвления содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации группа конъюгата не содержит группу ветвления.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
j равен от 1 до 3; и m равен от 2 до 6.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
_Ь А,-
где каждый Ai независимо представляет собой О, S, С=0 или NH; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
* А1 А,
J' Vi I 'in
где каждый Ai независимо представляет собой О, S, С=0 или NH; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
п и
где Ai представляет собой О, S, С=0 или NH; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
-NH
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
2. Некоторые связки
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат одну или более связок, ковалентно присоединенных к группе ветвления. В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат одну или более связок, ковалентно присоединенных к линкерной группе. В некоторых вариантах реализации каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, простых эфирных, тиоэфирных, дисульфидных, амидных и полиэтиленгликолевых групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, замещенных алкильных, простых эфирных, тиоэфирных, дисульфидных, амидных, фосфодиэфирных и полиэтиленгликолевых групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, простых эфирных и амидных групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, замещенных алкильных, фосфодиэфирных, простых эфирных и амидных групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкила и
фосфодиэфира в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации каждая связка содержит по меньшей мере одну фосфорную линкерную группу или нейтральную линкерную группу.
В некоторых вариантах реализации связка содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к группе ветвления либо через амидную, либо через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к группе ветвления через фосфордиэфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к группе ветвления через фосфорную линкерную группу или через нейтральную линкерную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к группе ветвления через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к лиганду либо через амидную, либо через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к лиганду через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к лиганду либо через амидную, либо через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации связка присоединена к лиганду через простую эфирную группу.
В некоторых вариантах реализации каждая связка имеет длину от около 8 до около 20 атомов в цепи между лигандом и группой ветвления. В некоторых вариантах реализации каждая связка имеет длину от около 10 до около 18 атомов в цепи между лигандом и группой ветвления. В некоторых вариантах реализации каждая связка имеет длину около 13 атомов в цепи.
В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20; и каждый р равен от 1 до около 6.
В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20. В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
где L представляет собой либо фосфорную линкерную группу, либо нейтральную линкерную группу; Zi представляет собой C(=0)0-R2;
каждый mi независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один ггц
больше 0 для каждой связки. В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
О СООН Ol
U V U bUUI ( им
где Z2 представляет собой Н или СШ; и
каждый ггц независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один ггц больше 0 для каждой связки. В некоторых вариантах реализации связка имеет структуру, выбранную из:
^ или ; где каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4,
5, 6 или 7.
В некоторых вариантах реализации связка содержит фосфорную линкерную группу. В некоторых вариантах реализации связка не содержит ни одной амидной связи. В некоторых вариантах реализации связка содержит фосфорную линкерную группу и не содержит ни одной амидной связи. 3. Некоторые лиганды В некоторых вариантах реализации настоящего описания представлены лиганды, при этом каждый лиганд ковалентно присоединен к связке. В некоторых вариантах реализации каждый лиганд выбран так, чтобы он обладал аффинностью по меньшей мере к одному типу рецептора на клетке-мишени. В некоторых вариантах реализации лиганды
выбраны так, чтобы они обладали аффинностью по меньшей мере к одному типу рецептора на поверхности клетки печени млекопитающего. В некоторых вариантах реализации лиганды выбраны так, чтобы они обладали аффинностью к печеночному асиалогликопротеиновому рецептору (ASGP-R). В некоторых вариантах реализации каждый лиганд представляет собой углевод. В некоторых вариантах реализации каждый лиганд независимо выбран из галактозы, N-ацетилгалактозамина, маннозы, глюкозы, глюкозамина и фукозы. В некоторых вариантах реализации каждый лиганд представляет собой N-ацетилгалактозамин (GalNAc). В некоторых вариантах реализации нацеливающий фрагмент содержит 2-6 лигандов. В некоторых вариантах реализации нацеливающий фрагмент содержит 3 лиганда. В некоторых вариантах реализации нацеливающий фрагмент содержит 3 N-ацетилгалактозаминовых лиганда.
В некоторых вариантах реализации лиганд представляет собой углевод, углеводное производное, модифицированный углевод, поливалентный углеводный кластер, полисахарид, модифицированный полисахарид или полисахаридное производное. В некоторых вариантах реализации лиганд представляет собой аминосахар или тиосахар. Например, аминосахара могут быть выбраны из любого количества соединений, известных в данной области техники, например, глюкозамина, сиаловой кислоты, a-D-галактозамина, N-ацетилгалактозамина, 2-ацетамидо-2-дезокси-Б-галактопиранозы (GalNAc), 2-амино-3-0-[(7?)-1-карбоксиэтил]-2-дезокси-Р-Б-глюкопиранозы (Р-мурамовой кислоты), 2-дезокси-2-метиламино-Ь-глюкопиранозы, 4,6-дидезокси-4-формамидо-2,3-ди-О-метил-О-маннопиранозы, 2-дезокси-2-сульфоамино-0-глюкопиранозы и ТУ-сульфо-О-глюкозамина, и iV-гликолоил-а-нейраминовой кислоты. Например, тиосахара могут быть выбраны из группы, состоящей из 5-тио-Р-0-глюкопиранозы, метил-2,3,4-три-0-ацетил-1-тио-6-0-тритил-а-О-глюкопиранозида, 4-тио-Р-0-галактопиранозы и этил-3,4,6,7-тетра-0-ацетил-2-дезокси-1,5-дитио-а-В-^/исо-гептопиранозида.
В некоторых вариантах реализации "GalNac" или "Gal-NAc" относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси-0-галактопиранозе, обычно упоминаемой в литературе как N-ацетилгалактозамин. В некоторых вариантах реализации "N-ацетилгалактозамин" относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси-0-галактопиранозе. В некоторых вариантах
2-(Ацетиламино)-2-дезокси-Р-Б-галактопираноза
реализации "GalNac" или "Gal-NAc" относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси-0-галактопиранозе. В некоторых вариантах реализации "GalNac" или "Gal-NAc" относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси-Б-галактопиранозе, которая включает и Р-форму: 2-(ацетиламино)-2-дезокси-Р-В-галактопиранозу, и а-форму: 2-(ацетиламино)-2-дезокси-В-галактопиранозу. В некоторых вариантах реализации обе формы, Р-форма: 2-(ацетиламино)-2-дезокси-Р-Б-галактопираноза, и а-форма: 2-(ацетиламино)-2-дезокси-Б-галактопираноза, могут быть использованы взаимозаменяемо. Соответственно, в структурах, в которых изображена одна форма, подразумевается, что эти структуры включают также и другую форму. Например, если показана структура для а-формы: 2-(ацетиламино)-2-дезокси-Б-галактопиранозы, то подразумевается, что эта структура включает также и другую форму. В некоторых предпочтительных вариантах реализации Р-форма 2-(ацетиламино)-2-дезокси-0-галактопиранозы является предпочтительным вариантом реализации.
2-(Ацетиламино)-2-дезокси-а-Б-галактопираноза В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную
где каждый Ri выбран из ОН и NHCOOH.
из:
В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную
из:
НО-~Л^--л^Д/0\/ NHAc ^
i. Некоторые конъюгаты
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации группы конъюгата содержат структурные особенности, представленные выше. В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
Z представляет собой Н или связанную твердую подложку;
Q представляет собой антисмысловое соединение;
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
AcHN ^^Ь <К <,
О 0 -*^Р^ v ;п ОН
НОРН OH^Jn
AcHN ОН ° .
НО он
NHAc
NHAc
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
оум
норн
норн
AcHN ОН °
AcHN
но он о V
О, Х-// >
¦o-p-o'^rV4 v=/
он -'
НО-Р=О
NHAc
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
NH2
NHAc
NHn
НО-Р=О
норн
Л НМ
AcHN он
но-р=о
((In
0он Yn
AcHN OH 110
AcHN ^
но он О ^
но-n он
NHAc
(On O
"0-P=0
В некоторых вариантах реализации конъюгаты не содержат пирролидин.
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
норн
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
но он
о о
NH N-(CH2)6-O-P-|
И н о о. Л^-Ам
О О О'
но-~
NHAC HN' - rV ~
/\ Н ° он г-* о
HQ НО
NHAc
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую
структуру
норн но
AcHN ^0
НООН о ^ О О
HO^^O^N^^O^
ноон
AcHN О НО
AcHN
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую
структуру
норн но
AcHN *Q
норн О > О О
HO^^O^N
AcHN о
норн j-^ но-
AcHN
AcHN
норн
AcHN
ноон
и I н
AcHN V
ООН 9 | О О
\cHN /
AcHN
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
AcHN
норн
и I н
AcHN V
ООН 9 | О О
орн
AcHN
норн
^°^ГйМй^^й^о-?-1
AcHN
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
HOQH
AcHN I
0=P-OH
норн
AcHN ?
O=P-OH
ООН r <
I О ^-O- см
AcHN 1
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
.он
ООН f-л AcHN |
о=р-он
рон r-f
AcHN ?
0=Р-ОН
норн
оон
,^^o^YNV о
AcHN л
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
норн
но^Ь-р^°\.х
AcHN \ НООН °ч
AcHN
ноон X
AcHN
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из шести-одиннадцати последовательно связанных атомов.
ЮОН
AcHN \
AcHN q/*
ноон т/
AcHN
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
норн но-
норн UN но-
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на
клетку, имеет следующую структуру: HOQH
AcHN
ноон °\
^рЛ/О-X О.
норн У.
AcHN
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-одиннадцати последовательно связанных атомов, и при этом указанная связка содержит только одну амидную связь.
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
ноон
н°^Ч X о
AcHN N Z"°4
норн О Н 1
НО-* '
I Н и
AcHN Н z
НООН Y'NY °
AcHN
где Y и Z независимо выбраны из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной, алкенильной или алкинильной группы или группы, содержащей эфир, кетон, амид, сложный эфир, карбамат, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир, тиофосфат, триазол, пирролидин, дисульфид или тиоэфир.
где Y и Z независимо выбраны из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной группы или группы, содержащей только один эфир или только два эфира, амид, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир или тиофосфат.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где Y и Z независимо выбраны из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной группы.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где тип независимо выбраны из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 12.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где m равен 4, 5, 6, 7 или 8, и п равен 1, 2, 3 или 4.
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов, и при этом X не содержит эфирную группу. В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из восьми последовательно связанных атомов, и при этом X не содержит эфирную группу. В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов, и при этом указанная связка содержит только одну амидную связь, а X не содержит эфирную группу.
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов, и при этом указанная связка состоит из амидной связи и замещенной или незамещенной С2-С11 алкильной группы.
где Y выбран из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной, алкенильной или алкинильной группы или группы, содержащей эфир, кетон, амид, сложный эфир, карбамат, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир, тиофосфат, триазол, пирролидин, дисульфид или тиоэфир.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где Y выбран из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной группы или группы, содержащей эфир, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир или тиофосфат. В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
V^Q о-Y .О
но-^-р^/
AcHN
ноон о
V^Q O N
ио~л-н
AcHN
норн
НО- -~ *
AcHN
где Y выбран из С1-С12 замещенной или незамещенной алкильной группы.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на
клетку, имеет следующую структуру:
ноон н
Hoi^^Y
AcHN V
НООН . О
но*-^
kcHN
AcHN
норн но
AcHN
где п равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12.
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
ноон н HoisfVW
AcHN \
НООН . О
но-
AcHN
норн
№HN
\CO^OUNA>
AcHN
где п равен 4, 5, 6, 7 или 8.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты не содержат пирролидин.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2', 3' или 5' положении нуклеозида. В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
А В С D (-Е F]
^ ' q
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент С представляет собой линкер конъюгата D представляет собой группу ветвления каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
А С D г-Е F]
^ 'q
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; С представляет собой линкер конъюгата D представляет собой группу ветвления каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и
В некоторых таких вариантах реализации линкер конъюгата содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых таких вариантах реализации группа ветвления содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации каждая связка содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2', 3' или 5' положении нуклеозида.
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент С представляет собой линкер конъюгата каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2', 3' или 5' положении нуклеозида. В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; С представляет собой линкер конъюгата каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент D представляет собой группу ветвления каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где
А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
D представляет собой группу ветвления
каждый Е представляет собой связку;
В некоторых таких вариантах реализации линкер конъюгата содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации каждая связка содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет
структуру, выбранную из следующих:
Расщепляемый фрагмент
9'""' t > -р=о
ASO
Расщепляемый фрагмент
НО-Р=О
NH,
Фрагмент, направляющий на клетку
0 f
НО -Р-О
Г НООН
HC-fc^"0
AcHN
но он
AcHN Лиганд
но он но
NHAc
Q "
Группа ветвления
Иллюстративные патенты Соединенных штатов Америки, публикации патентных заявок Соединенных штатов Америки и публикации международных патентных заявок, в которых описано получение некоторых из указанных выше конъюгатов, сопряженных антисмысловых соединений, связок, линкеров, групп ветвления, лигандов, расщепляемых фрагментов, а также других модификаций, включают, без ограничения, US 5994517, US 6300319, US 6660720, US 6906182, US 7262177, US 7491805, US 8106022, US 7723509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO 2013/033230 и WO 2012/037254, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Иллюстративные публикации, в которых описано получение некоторых из указанных выше конъюгатов, сопряженных антисмысловых соединений, связок, линкеров, групп ветвления, лигандов, расщепляемых фрагментов, а также других модификаций,
включают, без ограничения, BIESSEN et al., "The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor: a Potent Cholesterol Lowering Agent" J. Med. Chem. (1995) 38:1846-1852, BIESSEN et al., "Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1995) 38:1538-1546, LEE et al., "New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes" Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011) 19:2494-2500, RENSEN et al., "Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo" J. Biol. Chem. (2001) 276(40):37577-37584, RENSEN et al., "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (2004) 47:5798-5808, SLIEDREGT et al., "Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor)) J. Med. Chem. (1999) 42:609-618, и Valentijn et al, "Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor)) Tetrahedron, 1997, 53(2), 759-770, каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах реализации сопряженные антисмысловые соединения содержат олигонуклеотид на основе РНКазы Н (такой как гэпмер) или сплайс-модулирующий олигонуклеотид (такой как полностью модифицированный олигонуклеотид) и любую группу конъюгата, содержащую по меньшей мере одну, две или три группы GalNAc. В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение содержит любую группу конъюгата, описанную в любой из следующих ссылок: Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly et al., JBiolChem, 1982, 257, 939-945; Pavia et al., Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548; Lee et al., Biochem, 1984, 23, 4255-4261; Lee et al., Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328; Toyokuni et al., Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546; Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770; Kim et al., Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490; Lee et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765; Kato et al., Glycobiol, 2001, 11, 821-829; Rensen et al., J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584; Lee et al., Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43; Westerlind et al., Glycoconj J, 2004, 21, 227-241; Lee et al.,
BioorgMed Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135; Maierhofer et al., BioorgMed Chem, 2007, 15, 7661-7676; Khorev et al., BioorgMed Chem, 2008, 16, 5216-5231; Lee et al., BioorgMed Chem, 2011, 19, 2494-2500; Kornilova et al., Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46; Pujol et al., Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852; Sliedregt et al., JMedChem, 1999, 42, 609-618; Rensen et al., JMedChem, 2004, 47, 5798-5808; Rensen et al., Arterioscler Thromb Vase Biol, 2006, 26, 169-175; van Rossenberg et al., Gene Ther, 2004, 11, 457-464; Sato et al., J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022; Lee et al., J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571; Biessen et al., FASEBJ, 2000, 14, 1784-1792; Rajur et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940; Duff et al., Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321; Maier et al., Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29; Jayaprakash et al., Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128; Merwin et al., Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620; Tomiya et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281; в международных заявках WO1998/013381; WO2011/038356; WO 1997/046098; WO2008/098788; WO2004/101619; WO2012/037254; WO2011/120053; WO2011/100131; WO2011/163121; WO2012/177947; WO2013/033230; WO2013/075035; WO2012/083185; WO2012/083046; WO2009/082607; WO2009/134487; WO2010/144740; WO2010/148013; WO 1997/020563; WO2010/088537; WO2002/043771; WO2010/129709; WO2012/068187; WO2009/126933; WO2004/024757; WO2010/054406; WO2012/089352; WO2012/089602; WO2013/166121; WO2013/165816; в патентах США 4751219; 8552163; 6908903; 7262177; 5994517; 6300319; 8106022; 7491805; 7491805; 7582744; 8137695; 6383812; 6525031; 6660720; 7723509; 8541548; 8344125; 8313772; 8349308; 8450467; 8501930; 8158601; 7262177; 6906182; 6620916; 8435491; 8404862; 7851615; в опубликованных заявках на патент США US2011/0097264; US2011/0097265; US2013/0004427; US2005/0164235; US2006/0148740; US2008/0281044; US2010/0240730; US2003/0119724; US2006/0183886; US2008/0206869; US2011/0269814; US2009/0286973; US2011/0207799; US2012/0136042; US2012/0165393; US2008/0281041; US2009/0203135; US2012/0035115; US2012/0095075; US2012/0101148; US2012/0128760; US2012/0157509; US2012/0230938; US2013/0109817; US2013/0121954; US2013/0178512; US2013/0236968; US2011/0123520; US2003/0077829; US2008/0108801; и US2009/0203132; полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки.
Описываемые в настоящем документе способы лечения клеток с помощью антисмысловых олигонуклеотидов могут быть изменены соответствующим образом для лечения другими антисмысловыми соединениями.
Клетки могут быть обработаны антисмысловыми олигонуклеотидами при 60-80 % уровне конфлюентности в культуре.
Реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, включает катионный липидный трансфекционный реагент Липофектин (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния). Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть смешаны с Липофектином в OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) для достижения желаемой конечной концентрации антисмысловых олигонуклеотидов и концентрации Липофектина в пределах от 2 до 12 мкг/мл при 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.
Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, включает Липофектамин (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния). Антисмысловой олигонуклеотид смешивают с Липофектамином в среде OPTI-MEM 1 со сниженным содержанием сыворотки (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) для достижения желаемой концентрации антисмысловых олигонуклеотидов и концентрации Липофектамина в пределах от 2 до 12 мкг/мл при 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.
Еще одна методика, используемая для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, включает электропорацию.
Другая методика, используемая для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, включает свободный захват олигонуклеотидов клетками.
Клетки обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами с помощью стандартных способов. Клетки могут быть отобраны через 16-24 часов после обработки антисмысловым олигонуклеотидом, после чего уровни РНК или белков нуклеиновых кислот-мишеней измеряют методами, известными в данной области техники и описанными
Концентрация используемого антисмыслового олигонуклеотида варьируется в зависимости от линии клеток. Способы определения оптимальной концентрации антисмыслового олигонуклеотидна для конкретной линии клеток хорошо известны в данной области техники. Антисмысловые олигонуклеотиды обычно используют в концентрациях от 1 нМ до 300 нМ, при трансфецировании с использованием Липофектамина. Антисмысловые олигонуклеотиды используют в более высоких концентрациях в диапазоне от 625 до 20000 нМ при трансфецировании с использованием электропорации.
Изоляция РНК
Анализ РНК может быть проведен на общей клеточной РНК или поли(А)+ мРНК. Способы изоляции РНК хорошо известны в данной области техники. РНК получают с использованием способов, хорошо известных в данной области техники, например, с использованием реагента Тризол (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) по рекомендуемым протоколам производителя.
Некоторые показания
Некоторые варианты реализации, предложенные в настоящем документе, относятся к способам лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, у субъекта посредством введения специфического ингибитора CFB, такого как антисмысловое соединение, направленное на CFB.
Примеры почечных заболеваний, связанных с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, которые можно лечить, предупреждать и/или облегчать по способам, предложенным в настоящем документе, включают СЗ гломерулопатию, атипичный
Дополнительные почечные заболевания, связанные с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, которые можно лечить, предупреждать и/или облегчать по способам, предложенным в настоящем документе, включают IgA нефропатию; мезангиокапиллярный (мембранопролиферативный) гломерулонефрит (MPGN); аутоиммунные расстройства, включая волчаночный нефрит и системную красную волчанку (SLE); инфекционный гломерулонефрит (также известный как постинфекционный гломерулонефрит) и ишемически-реперфузионное повреждение почек, например, ишемически-реперфузионное повреждение почек после пересадки органа.
Примеры внепочечных расстройств, связанных с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, которые можно лечить и/или предупреждать по способам, предложенным в настоящем документе, включают глазные заболевания, такие как дегенерация желтого пятна, например, возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), включая влажную AMD и сухую AMD, такую как географическая атрофия; нейромиелит зрительного нерва; болезнь роговицы, такую как воспаление роговицы; аутоиммунные увеиты; и диабетическую ретинопатию. Описано, что система комплемента участвует в глазных заболеваниях. Jha Р, et al., MolImmunol (2007) 44(16): 3901-3908. Дополнительные примеры внепочечных расстройств, связанных с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, которые можно лечить и/или предупреждать по способам, предложенным в настоящем документе, включают ANCA-связанные васкулиты, антифосфолипидный синдром (также известный как синдром антифосфолипидных антител (APS)), астму, ревматоидный артрит, миастению гравис и рассеянный склероз.
Некоторые варианты реализации, предложенные в настоящем документе, относятся к способам лечения, предупреждения или облегчения почечного заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, у субъекта посредством введения специфического ингибитора CFB, такого как антисмысловое соединение, направленное на
CFB. В некоторых аспектах почечное заболевание представляет собой волчаночный нефрит, системную красную волчанку (SLE), болезнь плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрит (C3GN), CFFIR5 нефропатию или атипичный гемолитико-уремический синдром), или любую их комбинацию.
Некоторые варианты реализации, предложенные в настоящем документе, относятся к способам лечения, предупреждения или облегчения дегенерации желтого пятна, такой как возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), у субъекта посредством введения специфического ингибитора CFB, такого как антисмысловое соединение, направленное на CFB. В некоторых аспектах AMD представляет собой влажную AMD или сухую AMD. В некоторых аспектах сухая AMD может представлять собой географическую атрофию. В исследованиях показана связь дисрегуляции альтернативного пути комплемента с AMD. Компоненты комплемента представляют собой обычные составляющие глазной друзы, внеклеточного материала, который накапливается в желтом пятне пациентов с AMD. Кроме того, было описано, что CFH и CFB варианты составляют около 75 % случаев AMD в Северной Европе и Северной Америке. связана с AMD. Nitsch, D. et al., Ophthalmic Epidemiol (2009) 16(3): 181-6; Choi, J. et al, Ophthalmic Epidemiol (2011) 18(6):259-63. Болезнь плотного осадка (DDD), заболевание почек, связанное с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, характеризуется острым нефритическим синдромом и глазными друзами. Cruz and Smith, GeneReviews (2007) Jul 20. Кроме того, мыши, несущие генетическую делецию компонента альтернативного пути комплемента, одновременно демонстрируют фенотипы почечной и глазной болезни. Описано, что у гомозиготных по нулевому CFH мышей развивается DDD и присутствуют патологии сетчатки, а также зрительная дисфункция. Pickering et al., Nat Genet. (2002) 31(4):424-8. Мышиные модели почечных заболеваний, связанных с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, также являются общепринятыми моделями AMD. Pennesi ME et al., Mol Aspects Med (2012) 33:487-509. Нулевые no CFH мыши, например, представляют собой общепринятую модель почечных заболеваний, таких как DDD, и AMD. Кроме того, описано, что AMD связана с системным источником факторов комплемента, которые локально накапливаются в глазах, приводя в действие альтернативный путь активации комплемента. Loyet et al., Invest Ophthalmol Vis Sci. (2012) 53(10):6628-37.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры иллюстрируют некоторые варианты реализации настоящего описания и не являются ограничивающими. Более того, если представлены конкретные варианты реализации, авторы изобретения подразумевают общее применение указанных конкретных вариантов реализации. Например, описание олигонуклеотида, содержащего конкретный мотив, дает обоснованное основание для дополнительных олигонуклеотидов, содержащих такой же или похожий мотив. И, например, если конкретная высокоаффинная модификация возникает в определенном положении, то в этом же положении считаются подходящими другие высокоаффинные модификации, если не указано иное.
Пример 1: Общий способ получения фосфорамидитов, Соединений 1,1а и 2
омто^> Вх пш^У* ом(tm)3^ВЖ
сгМо-0Ме HjC rfV
Nc^()i^N(fPr)2 Nc^0i.N(:.Pr)2 ж~^Ащт2
1 la 2
Вх представляет собой гетероци кл ичес кое ос нова н ие;
Соединения 1, 1 а и 2 были получены по способам, общеизвестным в данной области техники, как описано в настоящем документе (см. Seth et al., Bioorg. Med. Chem., 2011, 21(4), 1122-1125, J. Org. Chem., 2010, 75(5), 1569-1581, Nucleic Acids Symposium Series, 2008, 52(1), 553-554); и см. также опубликованные Международные заявки РСТ (WO 2011/115818, WO 2010/077578, WO2010/036698, WO2009/143369, WO 2009/006478 и WO 2007/090071) и патент США 7569686).
Пример 2: Получение Соединения 7
Соединение 3 (2-ацетамидо-1,3,4,6-тетра-0-ацетил-2-дезокси-Р-Б-галактопираноза или галактозамина пентаацетат) имеется в продаже. Соединение 5 получили по опубликованным методикам (Weber et al, J. Med. Chem., 1991, 34, 2692).
Пример 3: Получение Соединения 11
но. _.4-NH. но
КОН водн 1.4-диоксан
(40%)
йе-
не , ЕЮН
кппяч. с обр. холод коми т-ра (56°'о)
EiO,
о 6-.
-О.
¦-NH-
бензил хлорформиат б о о
ЕЮ. У пи1 диоксан.ма-со, г'°-v-x^o.._L]-N-JL"o'^V> Li0H'H'"0 -
АсООАс
Н О О 9 AcHN О
HBTU, DIEA, НОВ!
ДМФА
(64%)
Соединение 11 получили по способам, описанным в Примере 3. Соединение 14 имеется в продаже. Соединение 17 получили по такому же способу, как описан в публикации Rensen etal, J. Med. Chem., 2004, 47, 5798-5808.
О - . _ " TBDMSCI
0;=| '{ ¦ ДМФА нмидазоп
8?%
Ns " коми т-ра
\ / 2, РФС, Н2, МеЮН, rt
'он
OTBDMS
HBIU. DlbA
ДМ ФА коми т-ра (65%)
2 TEA ЗН", TEA ТГФ
(72%)
1. DMTCI, руг,
2. LiOH, диоксан
(В7%)
комн. т-ра (75%)
DMTO
Соединения 19 и 21 имеются в продаже.
Пример 6: Получение Соединения 24
1 Ч FJI bpOHlSJ I
/ *ти г IF4 ДМФА (76%)" Ни И N_.
АсООАс АсО
AcHN
АсООАс
АсООАс
ODMT
АсООАс н 7
AcHN
Соединения 18 и 23 получили так, как описано в способах в Примерах 4 и 5.
Пример 9: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GaINAc3-l у З'-конца, Соединения 29
АсООАс
АсО
ODMT
евт- синтезатор
АсООАс АсО
AcHN О
О=Р-О
AcHN О
АсООАс н AcHN
АсООАс
ACO- &^°---^.''YN "
AcHN О
AcQOAe AcO
I IK \. Д~М " "Vj
: in NMI, n ^
t-.ct-.piv/д^. j авт. синтезатор -тр-.-т !r:r , [ ДН-'.Р-Ж
1 К' и )H
DMTO-v,0 Вх
o4-a-"v-CN
G*P 4 ^"
AcHN
\. DCA, ДХМ 2. DCI.NMI.ACK
Фасфорамид1ттные .тр-t'T SrcKi-' j "-'зг и реванше I n-t 5 с i д f:ai-TaHa in- t-hij( > i iH " UMlli Nil h ' < Mi веди pa:j,errsH^e'
Г OL'ICQ
о хФ, о
О-v о Вх
У-ОМе
X = О ига* S j
0=p-O
НООН
H H I/
ноон Ac(tm) 0 S " _ о
AcHN
ACHN О О
ноон н %
AcHN 29
Где защищенный GalNAc3-l имеет структуру:
0 fV
O=P-O-о
о о 'он
ноон
но-*--р^
AcHN
Кластерная часть GalNAcs группы конъюгата GalNAc3-l (GalNAc3-la) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Где GalNAc3-la имеет формулу:
Защищенный GalNAc3-l, связанный с твердой подложкой, Соединение 25, получили по способам, представленным в Примере 7. Олигомерное соединение 29, содержащее GalNAc3-l у З'-конца, получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy etal, Angew. Chem. Int. Ed, 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамидитные строительные блоки, Соединения 1 и la, получили так, как описано в способах в примере 1. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть использованы другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерных соединений, имеющих заданную последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения разорванных олигомерных соединений, описанных в настоящем документе. Такие разорванные олигомерные соединения могут иметь заданный состав и последовательность оснований, продиктованную любой данной мишенью.
ОГЛ1Т
ф-1 \t-i 'Г > ЧТ I
,11 1 IXЧ д\м
2. IX [, \\И 4N
гтрЖИТЕЛЬ
ШИШ о
1 CAPS rr, I-Hurt К i(i j IX Л. Д-'.u
4, rx'f. МЧИ, \t"N
1ссфсЕЭ'.ч*дит ]
авт. зинт &^атср °| ДНК FhK I
''о-1'
АсО
AcHN
АсООАс
If О
,Ьа°.,-...-"...й
Af.O
AcHN
N О
н о.
'--"N-> .- - О... N " f-Г N
П Н
о о
ЛсООЛс
н . HN о
AcO
AcHN
1 Кзп-рсгэииЕ I Ли-I 3. NMI. руг!
: t-BuiM)H
3. R % U!il'\ (I 1 = 5 -5 I
4. ГХ Л. д.м
5. N 1KCI/H т-ра ;рз:.цеггенв")
\> г;=о о
НООН
но-^-т^1
НООН НО-^-т^'
Unylinker(tm) 30 имеется в продаже. Олигомерное соединение 34, содержащее кластер GalNAc3-l у 5'-конца, получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy etal, Angew. Chem. Int. Ed, 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамидитные строительные блоки, Соединения 1 и la, получили так, как описано в способах в примере 1. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть использованы другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерных соединений, имеющих заданную последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения разорванных олигомерных соединений, описанных в настоящем документе. Такие разорванные олигомерные соединения могут иметь заданный состав и последовательность оснований, продиктованную любой данной мишенью. Пример 11: Получение Соединения 39
AcHN
ОАс
АсО, О Ac
АЮ4^°, ^о. н ,оомт
АсО
NHAc О о"
* л ОАс
АсО 4 - - 'NH 38
\~ГЧ-N о 1 <
IHAc 3 ОАс
AcHN АсО ОАс
АсО-Д^Я о ODMT
AcHN '"Y"^ °\ '"S
Соединения 4, 13 и 23 получили так, как описано в способах в Примерах 2, 4 и 5. Соединение 35 получили по такому же способу, как описан в публикации Rouchaud et al, Eur. J. Org. Chem., 2011, 72, 2346-2353.
АсО ОАс АсО-
AcHN * 'а
1. Н2, Р*С, ЫеОН
о о Г
2. HBTU, DIEA, ДМФА Соединение 23
АсО,
АсО
AcHN 42 АсО ОАс
ACHN 8 О Фоофиггипироввние
АСО 9- > J Ас0Х^ЙХ^^Н
AcHN АсО ОАс
AcO-^__ v '°ч^^ ^ Н "GDMT
AcHN ' в
лаз
0 0J NL^0'%(/Pr)?
АСО. fС ^ 44
AcHN
Соединения 23 и 36 получили так, как описано в способах в Примерах 5 и 11. Соединение 41 получили по такому же способу, как описан в публикации WO 2009082607.
AcHN ^i^^
АсО °АС
Ас0^^0^44-Л-'"Й 1. Якорный ¦"пярпд.РМАР.Дта
AcHN 2. ДМФА , HBTU, EtN(/Pr)2, PS-SS
ACQ ОАс АсО
AcHN ' ?
о °
ОАС W ^ "
АсО
AcHN
Соединение 43 получили по способам, представленным в Примере 13. Пример 15: Получение Соединения 47
,R 2. Pd/C, H2l МеОН с
НО НО
Соединение 46 имеется в продаже.
Соединения 48 и 49 имеются в продаже. Соединения 17 и 47 получили так, как описано в способах в Примерах 4 и 15.
Соединение 53 получили по способам, представленным в Примере 16.
Пример 18: Получение Соединения 55
ООАс Ас/
NHAc
^0 И HN' ^ " Ы-^Ъ '
-* '" ни I 'I i
., ОАс "*"" О
0АУ о J н ,. X /- . -он
АгО Л -
NHAc HN"- Л L 6 /
-О \
OA(?Af О "\ f"''f
U.X -O ^ * ii-5J
NHAC
J 1 Рнтэрнвй ангидрид, DMAF, Д\? / ДМФА . HBIU, LtN(;Pr),. PS-SS
пд OA-- * OA с, о
AcO -l4. --f-i_Q . . "'NH NHAc t
1 О о
_Л OAt r-J О "Г"" --^ .
0/V 0 H " 'i -
,", OAc. ОАс ^
^. --o
О ^ ODMT
L.^,0 " . > 1 -NH 55
AcO-v---0 "
NHAc
Соединение 53 получили по способам, представленным в Примере 16. Пример 19: Общий способ получения сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l в 3'-положении, при помощи твердофазных методик (получение ISIS 647535, 647536 и 651900)
Если не указано иное, все реагенты и растворы, использованные для синтеза олигомерных соединений, приобретены у коммерческих поставщиков. Стандартные фосфорамидитные строительные блоки и твердую подложку использовали для внедрения нуклеозидных остатков, которые включают, например, остатки Т, A, G и ШС. 0,1 М раствор фосфорамидита в безводном ацетонитриле использовали для |3-D-2'-дезоксирибонуклеозида и 2'-МОЕ.
Синтез антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) выполнили на синтезаторе ABI394 (в масштабе 1-2 мкмоль) или на синтезаторе АКТА Oligopilot производства GE Healthcare Bioscience (в масштабе 40-200 мкмоль) по способу фосфорамидитного связывания на твердой подложке VIMAD, наполненной GalNAc3-l (ПО мкмоль/г, Guzaev et al, 2003),
упакованной в колонку. Для стадии связывания фосфорамидиты вводили в 4-кратном избытке по сравнению с загрузкой на твердой подложке, а конденсацию фосфорамидита выполняли в течение 10 минут. Все остальные стадии выполняли по стандартным протоколам, предоставленным производителем. Для удаления диметокситритильной (DMT) группы с 5'-гидроксильной группы нуклеотида использовали 6 % раствор дихлоруксусной кислоты в толуоле. На стадии связывания в качестве активатора использовали 4,5-дицианоимидазол (0,7 М) в безводном CH3CN. Тиофосфатные связи внедряли сульфированием при помощи 0,1 М раствора гидрида ксантана в 1:1 смеси пиридина/СНзСМ в течение 3 минут времени контакта. В качестве окислительного агента для получения фосфодиэфирных межнуклеозидных связей использовали 20 % раствор дареда-бутилгидропероксида в CH3CN , содержащий 6 % воды, в течение 12 минут времени контакта.
После сборки требуемой последовательности цианоэтил-фосфатные защитные группы снимали при помощи 1:1 (об./об.) смеси триэтиламина и ацетонитрила в течение 45 минут времени контакта. Связанные с твердой подложкой ASO суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 масс. %) и нагревали при 55 °С в течение 6 часов.
Затем отфильтровывали не связанные ASO и выпаривали аммиак кипячением. Остаток очищали жидкостной хроматографией высокого давления на сильной анионообменной колонке (GE Healthcare Bioscience, Source 30Q, 30 мкм, 2,54 х 8 см, А = 100 мМ ацетата аммония в 30 % водном CH3CN, В = 1,5 М NaBr в А, 0-40 % В за 60 мин., скорость потока 14 мл.мин-1, X = 260 нм). Остаток обессоливали при помощи ВЭЖХ на обращенно-фазовой колонке с получением заданных ASO с выделенным выходом 15-30 % относительно первоначальной загрузки на твердую подложку. ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Антисмысловые олигонуклеотиды, не содержащие конъюгат, синтезировали по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов, общеизвестным в данной области техники.
Применяя эти способы, получили три отдельных антисмысловых соединения, направленных на АроС III. Как показано ниже в Таблице 17, каждое из трех антисмысловых
нуклеооснований. ISIS 304801 представляет собой 5-10-5 МОЕ гэпмер, содержащий только
тиофосфатные связи; ISIS 647535 является таким же, как ISIS 304801, за исключением того,
что он содержит GalNAc3-l, сопряженный у его 3'-конца; и ISIS 647536 является таким же,
как ISIS 647535, за исключением того, что некоторые межнуклеозидные связи этого
соединения представляют собой фосфодиэфирные связи. Как дополнительно показано в
Таблице 17, были синтезированы два отдельных антисмысловых соединения,
направленных на SRB-1. ISIS 440762 представляет собой 2-10-2 cEt гэпмер, содержащий
только тиофосфатные межнуклеозидные связи; ISIS 651900 является таким же, как ISIS
440762, за исключением того, что он содержит GalNAc3-l у его 3'-конца.
Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает P-D-2'-дезоксирибонуклеозид; "к" означает 6'-(5^)-СНз бициклический нуклеозид (например, cEt); "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); "о" означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО); и "o'" означает -0-Р(=0)(ОН)-. Верхний индекс "т" означает 5-метилцитозины. "GalNAc3-l" означает группу конъюгата, имеющую структуру, показанную ранее в Примере 9. Следует отметить, что GalNAc3-l содержит расщепляемый аденозин, которые связывает ASO с остальной частью конъюгата, обозначенной "GalNAc3-la." Номенклатура, используемая в представленной выше таблице, показывает полную последовательность азотистых оснований, включая аденозин, который является частью конъюгата. Следовательно, в представленной выше таблице последовательности также могут быть перечислены с окончание "GalNAc3-l", без "Аао". Такое условное применение нижнего индекса "а" для обозначения части группы конъюгата, не содержащей расщепляемого нуклеозида или расщепляемого фрагмента, используется во всех представленных Примерах. Эта часть группы конъюгата, не содержащая расщепляемого фрагмента, упоминается в настоящем документе как "кластер" или "кластер конъюгата" или "кластер GalNAc3". В некоторых случаях группа конъюгата для удобства описана путем отдельного представления ее кластера и ее расщепляемого фрагмента.
Пример 20: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого АроС III у huApoC III трансгенных мышей
ISIS 304801 и ISIS 647535, каждый из которых направлен на человеческий АроС III и описан выше, отдельно испытывали и оценивали в дозозависимом исследовании на их способность ингибировать человеческий АроС III у трансгенных мышей с человеческим АроС III.
Лечение
Трансгенных мышей с человеческим АроСШ выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали ad libitum доступ к пище Teklad lab. До начала
эксперимента животных акклиматизировали по меньшей мере в течение 7 дней в исследовательской лаборатории. Получили ASO в PBS и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 микрона. ASO растворили в 0,9 % PBS для инъекций.
Трансгенным мышам с человеческим АроС III один раз в неделю в течение двух недель внутрибрюшинно вводили инъекции ISIS 304801 или 647535 при 0,08, 0,25, 0,75, 2,25 или 6,75 мкмоль/кг или PBS в качестве контроля. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Через сорок восемь часов после введения последней дозы каждую мышь обескровили и усыпили, и собрали ткани. Анализ мРНК АроС III
Уровни мРНК АроС-Ш в печени мышей определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК АроС III определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК АроС III для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как " % PBS". Полумаксимальная эффективная доза (ED50) каждого ASO представлена также ниже в Таблице 18.
Влияние ASO лечения на уровни мРНК АроС III у трансгенных мышей с человеческим
АроС III
Показано, что оба антисмысловых соединения снижают РНК АроС III, по сравнению с контрольным образцом, обработанным PBS. Кроме того, антисмысловое соединение, сопряженное с GalNAc3-l (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 304801).
0,08
ISIS
0,75
0,77
нет
PS/20
821
304801
2,25
6,75
0,08
ISIS
0,75
0,074
GalNAcs-l
PS/20
822
647535
2,25
6,75
Анализ белка АроС III (турбидиметрический анализ)
Анализ белка АроС III в плазме выполнили по способам, описанным в работе Graham etal, Circulation Research, до печати опубликованной онлайн 29 марта 2013 года.
Приблизительно 100 мкл плазмы, выделенной из мышей, анализировали без разбавления, используя клинический анализатор Olympus и имеющийся в продаже турбидиметрический аналитический набор АроС III (Kamiya, кат. № KAI-006, Kamiya Biomedical, Сиэтл, штат Вашингтон). Протокол анализа выполняли по описанию поставщика.
Влияние ASO лечения на уровни белка АроС III в плазме у трансгенных мышей с
человеческим АроС III
Как показано ниже в Таблице 19, оба антисмысловых соединения снижают белок АроС III, по сравнению с PBS контрольным образцом. Кроме того, антисмысловое соединение, сопряженное с GalNAc3-l (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 304801).
PBS
100
0,08
ISIS
0,75
0,73
нет
PS/20
821
304801
2,25
6,75
0,08
ISIS
0,75
0,19
GalNAcs-l
PS/20
822
647535
2,25
6,75
Триглицериды и холестерин плазмы выделили по способу Bligh и Dyer (Bligh, E.G. и Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959)(Bligh, E and Dyer, W, CanJBiochem Physiol, 37, 911-917, 1959)(Bligh, E and Dyer, W, Can J Biochem Physiol, 37, 911-917, 1959) и измерили при помощи клинического анализатора Beckmann Coulter и имеющихся в продаже реагентов.
Влияние ASO лечения на уровни триглицеридов у трансгенных мышей
Уровни триглицеридов измерили относительно мышей, инъецированных PBS, и выразили как " % PBS". Результаты представлены в Таблице 20. Показано, что оба антисмысловых соединения снижают уровни триглицеридов. Кроме того, антисмысловое соединение, сопряженное с GalNAc3-l (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 304801).
0,08
ISIS
0,75
0,63
нет
PS/20
821
304801
2,25
6,75
0,08
ISIS
0,75
0,13
GalNAc3-
PS/20
822
647535
2,25
6,75
Образцы плазмы анализировали при помощи ВЭЖХ для определения количества общего холестерина и различных фракций холестерина (HDL и LDL). Результаты представлены в таблицах 21 и 22. Показано, что оба антисмысловых соединения снижают общие уровни холестерина; оба снижают LDL; и оба повышают HDL. Кроме того, антисмысловое соединение, сопряженное с GalNAc3-l (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 304801). Увеличение уровней HDL и снижение уровней LDL представляет собой преимущественный сердечно-сосудистый эффект антисмыслового ингибирования АроС III.
Влияние ASO лечения на уровни общего холестерина у трансгенных мышей
Влияние ASO лечения на уровни HDL и LDL холестерина у трансгенных мышей
ASO
Доза (мкмоль/кг)
HDL
(мг/дл)
LDL
(мг/дл)
3'-конъюгат
Межнуклеозидная связь/длина
SEQ ID NO
PBS
0,08
ISIS
0,75
нет
PS/20
821
304801
2,25
6,75
0,08
ISIS
0,75
GalNAcs-
PS/20
822
647535
2,25
6,75
Фармакокинетический анализ (ФК)
Исследовали также ФК ASO. Образцы печени и почек измельчали и экстрагировали по стандартным протоколам. Образцы анализировали на MSD1, используя ИП-ВЭЖХ-МС. Определили содержание (мкг/г) в ткани ISIS 304801 и 647535 полной длины, и результаты представлены в Таблице 23. Показано, что концентрации в печени антисмысловых соединений полной длины были одинаковыми для двух антисмысловых соединений. Следовательно, даже несмотря на то, что СаШАсз-1-сопряженное антисмысловое
соединение является более активным в печени (как показано по данным РНК и белка, представленным выше), его содержание в печени не намного выше. Действительно, рассчитанное значение ЕС50 (представленное в Таблице 23) подтверждает, что наблюдаемое увеличение эффективности сопряженного соединения не может быть приписано исключительно повышенному накоплению. Такой результат позволяет предположить, что конъюгат улучшает эффективность по другому механизму, чем простое накопление в печени, возможно за счет увеличения продуктивного захвата антисмыслового соединения в клетки.
ФК анализ ASO лечения у трансгенных мышей
Эти результаты показывают также, что концентрация GalNAc3-l-сопряженного антисмыслового соединения почках ниже, чем концентрация антисмыслового соединения, не содержащего конъюгата GalNAc. Это имеет несколько преимущественных терапевтических применений. Для терапевтических показаний, в которых не требуется проявление активности в почках, воздействие на почки подвергает их риску токсичности без соответствующей пользы. Более того, высокая концентрация в почках обычно приводит к выводу соединения с мочой, обеспечивая более быстрое выведение. Соответственно, для внепочечных мишеней накопление в почках является нежелательным. Эти данные позволяют предположить, что сопряжение с GalNAc3-l снижает накопление в почках.
2,3
106,8
111,4
6,8
237,2
179,3
Наблюдаемые метаболиты полной длины ISIS 647535
Идентифицировали также метаболиты ISIS 647535 и подтвердили их массы при помощи масс-спектрометрического анализа высокого разрешения. Сайты расщепления и структуры наблюдаемых метаболитов представлены ниже. Относительный % от общей длины ASO рассчитали по стандартным технологиям, а результаты представлены в Таблице 23а. Основной метаболит ISIS 647535 представляет собой ASO полной длины без всего конъюгата (то есть ISIS 304801), который образуется в результате расщепления по сайту расщепления А, представленному ниже. Кроме того, наблюдали также дополнительные метаболиты, образующиеся из других сайтов расщепления. Эти результаты позволяют предположить, что может быть пригодным также внедрение других расщепляемых связей, таких как сложные эфиры, пептиды, дисульфиды, фосфорамидаты или ацил-гидразоны, между сахаром GalNAc3-l и ASO, которые могут расщепляться под действием ферментов внутри клетки или которые могут расщепляться в восстановительной среде цитозоля, или которые лабильны в кислотном рН внутри эндосом и лизосом.
[3 GalNAc + 3 связки 5-гидроксипентановой кислоты]
Пример 21: Антисмысловое ингибирование человеческого АроС III у трансгенных мышей с АроС III в исследовании одного введения
ISIS 304801, 647535 и 647536, каждый из которых направлен на человеческий АроС III и описан в Таблице 17, дополнительно оценивали в исследовании однокраного введения на их способность ингибировать человеческий АроС III у трансгенных мышей с человеческим АроС III. Лечение
Трансгенных мышей с человеческим АроСШ выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали ad libitum доступ к пище Teklad lab. До начала
эксперимента животных акклиматизировали по меньшей мере в течение 7 дней в исследовательской лаборатории. Получили ASO в PBS и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 микрона. ASO растворили в 0,9 % PBS для инъекций.
Трансгенным мышам с человеческим АроС III внутрибрюшинно ввели однократную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 304801, 647535 или 647536 (описанных выше), или PBS в качестве контрольного образца. Экспериментальная группа состояла из 3 животных, а контрольная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения.
Образцы собрали и анализировали для определения уровней мРНК АроС III и белка в печени; триглицеридов в плазме; и холестерина, включая фракции HDL и LDL, которые анализировали так, как описано выше (Пример 20). Данные этих анализов представлены ниже в Таблицах 24-28. Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Уровни ALT и AST показали, что антисмысловые соединения хорошо переносятся при всех введенных дозах.
Эти результаты демонстрируют усиление эффективности антисмысловых соединений, содержащих конъюгат GalNAc3-l у З'-конца (ISIS 647535 и 647536), по сравнению с антисмысловым соединением, не содержащим конъюгат GalNAc3-l (ISIS 304801). Кроме того, ISIS 647536, который содержит конъюгат GalNAc3-l и несколько фосфодиэфирных связей, был таким же эффективным, как ISIS 647535, который содержит тот же конъюгат, и все межнуклеозидные связи в этом ASO являются тиофосфатными.
Влияние ASO лечения на уровни мРНК АроС III у трансгенных мышей с человеческим
АроС III
Влияние ASO лечения на уровни белка АроС III в плазме у трансгенных мышей с
человеческим АроС III
ASO
Доза (мг/кг)
PBS
ED50 (мг/кг)
3'-конъюгат
Межнуклеозидная связь/длина
SEQID NO
PBS
104
23,2
ISIS
нет
PS/20
821
304801
о,з
2,1
ISIS
GalNAcs-
PS/20
822
647535
218
0,3
143
ISIS
187
GalNAc3-
PS/PO/20
822
647536
213
221
Эти результаты подтверждают, что конъюгат GalNAc3-l улучшает эффективность антисмыслового соединения. Эти результаты показывают также равную эффективность GalNAc3-l-сопряженных антисмысловых соединений, в которых антисмысловые олигонуклеотиды имеют смешанные связи (ISIS 647536, который имеет шесть фосфодиэфирных связей), и полностью тиофосфатной версии того же антисмыслового соединения (ISIS 647535).
Тиофосфатные связи обеспечивают несколько свойств антисмысловых соединений. Например, они устойчивы к нуклеазному расщеплению и связываются с белками, что приводит к накоплению соединения в печени, а не в почках/моче. Эти свойства являются желательными, особенно при лечении показаний в печени. Однако тиофосфатные связи связаны также с воспалительной реакцией. Соответственно, уменьшение количества -тиофосфатных связей в соединении предположительно снижает риск воспаления, но снижает также концентрацию соединения в печени, повышает концентрацию в почках и моче, снижает стабильность в присутствии нуклеаз и уменьшает общую эффективность. Представленные результаты демонстрируют, что СаШАсз-1-сопряженное антисмысловое соединение, в котором некоторые тиофосфатные связи заменены фосфодиэфирными связи, настолько же эффективно против мишени в печени, как и аналог, содержащий только -тиофосфатные связи. Такие соединения предположительно являются менее провоспалительными (см. Пример 24, в котором описан эксперимент, демонстрирующий, что уменьшение тиофосфатов (PS) приводит к снижению воспалительного действия).
ISIS 440762 и 651900, каждый из которых направлен на SRB-1 и описан в Таблице 17, оценили в дозозависимом исследовании на их способность ингибировать SRB-1 у Balb/c мышей.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 48 часов после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи П1 IP в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как " % PBS".
Как показано в Таблице 29, оба антисмысловых соединения снижают уровни мРНК SRB-1. Кроме того, антисмысловое соединение, содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 651900), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-l (ISIS 440762). Эти результаты демонстрируют, что преимущество эффективности конъюгатов GalNAc3-l наблюдается при использовании антисмысловых олигонуклеотидов, комплементарных различным мишеням и имеющих различные химически модифицированные нуклеозиды, в этом случае модифицированные нуклеозиды содержат стерически затрудненные этил-сахарные фрагменты (бициклический сахарный фрагмент).
ASO
Доза (мг/кг)
Пече нь %
PBS
ED50 (мг/кг)
3'-конъюгат
Межнуклео
зидная связь/длина
SEQ ГО NO
PBS
100
ISIS 44076 2
0,7
2,2
нет
PS/14
823
0,07
ISIS
0,2
65190
0,7
0,3
GalNAcs-l
PS/14
824
Пример 23: Протокол анализа человеческих мононуклеарных клеток периферической крови (hPBMC)
Анализ hPBMC выполнили при помощи пробирочного способа BD Vautainer СРТ. Получили образец цельной крови, полученной от доноров-добровольцев, давших информированное согласие в Медицинской клинике США (Faraday & El Camino Real, Карлсбад), и собрали его в 4-15 пробирки BD Vacutainer СРТ по 8 мл (VWR, кат. № BD362753). Приблизительный исходный общий объем цельной крови в пробирке СРТ для каждого донора записали в формуляре анализа РВМС.
Непосредственно перед центрифугированием образец крови повторно перемешали, осторожно переворачивая пробирки 8-10 раз. Пробирки СРТ центрифугировали при комнатной температуре (18-25 °С) в горизонтальном (с избыточной поворачиваемостью) роторе в течение 30 минут с фактором разделения (RCF) 1500-1800 с затормаживанием
(2700 об./мин. Beckman Allegra 6R). Клетки сняли с лейкоцитарной поверхности раздела (между слоями фиколла и полимерного геля); перенесли в стерильную 50 мл коническую пробирку и сгруппировали по 5 СРТ пробирок/50 мл коническая пробирка/донор. Затем клетки дважды промыли PBS (без Са++, Mg++; GIBCO). Пробирки пополнили до 50 мл и перемешали, переворачивая несколько раз. Затем образец центрифугировали при 330 х g в течение 15 минут при комнатной температуре (1215 об./мин. в Beckman Allegra 6R) и аспирировали максимальное количество надосадочной жидкости, не нарушая осадок. Клеточный осадок сняли, осторожно поворачивая пробирку, и повторно суспендировали клетки в RPMI+10 % FBS+пенициллин/стрептомицин (~1 мл / 10 мл исходного объема цельной крови). Пипеткой взяли 60 мкл образца и поместили во флакон с пробой (Beckman Coulter), содержащий 600 мкл реагента VersaLyse (Beckman Coulter, кат. № А09777), и осторожно перемешивали на вортексе в течение 10-15 секунд. Образец оставили инкубироваться в течение 10 минут при комнатной температуре, и снова перемешали перед подсчетом. Суспензию клеток считывали на анализаторе жизнеспособности клеток Vicell XR (Beckman Coulter), используя клетки типа РВМС (сохранили фактор разбавления 1:11с другими параметрами). Записали количество живых клеток/мл и жизнеспособность. Клеточную суспензию разбавили до 1 х 107 живых РВМС/мл в RPMI+ 10 % FB S+пенициллин/стрептомицин.
Клетки поместили на планшет при 5 х 105 в 50 мкл/лунку 96-луночного тканевого культурального планшета (Falcon Microtest). 50 мкл/лунку 2х концентрации олигомеров/контроля, разбавленных в RPMI+10 % FBS+пенициллин/стрептомицин, добавили в соответствии с экспериментальной матрицей (в целом 100 мкл/лунку). Планшеты установили на шейкер и оставили перемешиваться в течение около 1 мин. После инкубации в течение 24 часов при 37 °С; 5 % СО2, планшеты центрифугировали при 400 х g в течение 10 минут, затем удалили над осадочную жидкость для анализа цитокинов MSD (то есть человеческих IL-6, IL-10, IL-8 и МСР-1).
Пример 24: Оценка провоспалительных эффектов в анализе hPBMC для GalNAc3-l-сопряженных ASO
Антисмысловые олигонуклеотиды (ASO), перечисленные в Таблице 30, оценили на провоспалительное действие в анализе hPBMC, используя протокол, описанный в Примере 23. ISIS 353512 представляет собой внутренний стандарт, который, как известно, обладает высоким ответом на высвобождение IL-6 в этом анализе. hPBMC выделили из свежих образцов, полученных от доноров-добровольцев, и обработали ASO в концентрациях 0, 0,0128, 0,064, 0,32, 1,6, 8, 40 и 200 мкМ. Через 24 часа обработки измерили уровни цитокинов.
Уровни IL-6 использовали в качестве первичного значения. ЕС50 и Ешах расчитывали по стандарным способам. Результаты выразили как среднее отношение Emax/ECso для двух доноров и обозначили как "ЕШах/ЕС5о". Более низкое соотношение означает относительное снижение провоспалительного ответа, а более высокое соотношение означает относительное увеличение провоспалительного ответа.
В отношении исследуемых соединений, наименее провоспалительным соединением было ASO, соединенное при помощи PS/PO (ISIS 616468). GalNAc3-l-сопряженное ASO, ISIS 647535, было немного менее провоспалительным, чем его несопряженный аналог, ISIS 304801. Эти результаты показывают, что внедрение нескольких РО связей снижает провоспалительную реакцию, а добавление конъюгата GalNAc3-l не делает соединение более провоспалительным, и может снижать провоспалительную реакцию. Соответственно, можно ожидать, что антисмысловое соединение, содержащее смешанные PS/PO связи и конъюгат GalNAc3-l, может вызывать более слабые провоспалительные реакции, по сравнению с антисмысловым соединением, связанным только посредством PS, с конъюгатом GalNAc3-l или без него. Эти результаты показывают, что GalNAc3-l-сопряженные антисмысловые соединения, в частности, соединения, имеющие меньшее содержание PS, являются менее провоспалительными.
В целом, эти результаты позволяют предположить, что GalNAc3-l-сопряженное соединение, в частности, соединение со сниженным содержанием PS, может быть введено в более высокой дозе, чем аналогичное полностью PS антисмысловое соединение без конъюгата GalNAc3-l. Поскольку не ожидается, что период полувыведения для этих соединений будет существенно различаться, то такое введение в более высокой дозе
обусловит менее частое введение доз. В действительности, такое введение может быть еще более редким, поскольку GalNAc3-l-сопряженные соединения являются более эффективными (см. Примеры 20-22), а повторное введение дозы необходимо только при снижении концентрации соединения ниже заданного уровня, при этом такой заданный уровень обусловлен эффективностью.
Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает
Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "к" означает 6'-(5^)-СНз бициклический нуклеозид
(например, cEt); "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); "о" означает
фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО); и "o'" означает -0-Р(=0)(ОН)-. Верхний
индекс "т" означает 5-метилцитозины. "Ado'-GalNAc3-la" означает конъюгат, имеющий
структуру GalNAc3-l, показанную в Примере 9, присоединенную к З'-концу
антисмыслового олигонуклеотида, как показано.
Таблица 31
Провоспалительное действие ASO, направленных на АроС III, в анализе hPBMC
ASO
ECso (мкМ)
Emax
(мкМ)
Emax/ECsO
3'-конъюгат
Межнуклеозидная связь/длина
SEQ ID NO
ISIS 353512 (повышенная реакция)
0,01
265,9
26590
нет
PS/20
826
ISIS 304801
0,07
106,55
1522
нет
PS/20
821
ISIS 647535
0,12
138
1150
GalNAcs-1
PS/20
822
ISIS 616468
0,32
71,52
224
нет
PS/PO/20
821
Пример 25: Влияние модифицированного СаШАсз-1-сопряженного ASO, направленного на человеческий АроС III, in vitro
ISIS 304801 и 647535, описанные выше, испытали in vitro. Первичные гепатоцитарные клетки трансгенных мышей при плотности 25000 клеток на лунку обработали концентрациями 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 и 20 мкМ модифицированных олигонуклеотидов. После обработки в течение приблизительно 16 часов, из клеток выделили РНК и измерили уровни мРНК при помощи количественной ПЦР в реальном времен, а уровни мРНК hApoC III скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, измеренным при помощи RIBOGREEN.
IC50 рассчитали по стандартным способам, а результаты представлены в Таблице 32.
Показано, что наблюдали сравнимую эффективность в клетках, обработанных ISIS 647535,
по сравнению с контрольным образцом, ISIS 304801.
В этом эксперименте in vitro не наблюдали такого большого преимущества эффективности сопряжения с GalNAc3-l, как наблюдали in vivo. Последующие эксперименты свободного захвата в первичных гепатоцитах in vitro не показали повышенной эффективности олигонуклеотидов, содержащих различные конъюгаты GalNAc, по сравнению с олигонуклеотидами, не содержащими конъюгаты GalNAc (см. Примеры 60, 82 и 92).
Пример 26: Влияние линкеров PO/PS на кативность ASO в отношении АроС III
Трансгенным мышам с человеческим АроС III внутрибрюшинной инъекцией вводили 25 мг/кг ISIS 304801 или ISIS 616468 (оба описаны выше) или PBS в качестве контрольного образца, один раз в неделю в течение двух недель. Экспериментальная группа состояла из 3 животных, а контрольная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения.
Образцы собрали и анализировали для определения уровней белка АроС III в печени, как описано выше (Пример 20). Данные этих анализов представлены ниже в Таблице 33.
Эти результаты демонстрируют снижение эффективности антисмысловых соединений с PO/PS (ISIS 616468) в крыльях, по сравнению с соединениями, содержащими только PS (ISIS 304801).
недель
ISIS 616468
мг/кг/неде
лю в течение 2 недель
нет
14 PS/6 РО
821
Пример 27: Соединение 56
вмто^^г, Y*b
DMTO^^O J^o"P"o^^CN DMTO'
Соединение 56 имеется в продаже у компании Glen Research или может быть получено по опубликованным методикам, описанным авторами Shchepinov et al, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454.
Пример 28: Получение Соединения 60
\i Ul > V.
" \ НО"
1ММШ.Д..Э VI! <
Соединение 4 получили по способам, представленным в Примере 2. Соединение 57 имеется в продаже. Соединение 60 подтвердили структурным анализом.
Соединение 57 является иллюстративным, и его не следует считать ограничивающим, поскольку могут быть использованы другие монозащищенные замещенные или незамещенные алкилдиолы, включая, но не ограничиваясь ими, те,
Пример 29: Получение Соединения 63
f I или .он 1 :> \пп. ;п, Ц ^|> ])\1г
0 4 \:1[RO, ^ОН Wn. "1ЛП
61 62 6.3
Соединения 61 и 62 получили по такому же способу, как описан в публикации Tober et al., Eur. J. Org. Chem., 2013, 3, 566-577; и Jiang et al, Tetrahedron, 2007, 63(19), 3982-3988.
Альтернативно, Соединение 63 получили по таким же способам, как описаны в научной и патентной литературе авторами Kim et al, Synlett, 2003, 12, 1838-1840; и Kim et al, в опубликованной международной заявке РСТ WO 2004063208.Пример 30: Получение Соединения 63Ь
Соединение 63а получили по таким же способам, как описаны авторами Hanessian etal, Canadian Journal of Chemistry, 1996, 74(9), 1731-1737.
Соединение 63c получили по таким же способам, как описаны авторами Chene^ al, Chinese Chemical Letters, 1998, 9(5), 451-453.
Соединение 64 получили по способам, представленным в Примере 2. Соединение 65 получили по таким же способам, как описаны авторами Or et al, в опубликованной международной заявке РСТ WO 2009003009. Защитные группы, использованные для Соединения 65, являются иллюстративным, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть использованы другие защитные группы, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании.
Пример 33: Получение Соединения 70
Соединение 64 получили по способам, представленным в Примере 2. Соединение 68 имеется в продаже. Защитная группа, использованная для Соединения 68, является иллюстративной, и ее не следует считать ограничением, поскольку могут быть использованы другие защитные группы, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании.
Пример 34: Получение Соединения 75а
NC' J
1. TBDMSCI, [> yr
2. Pd/C. H,
3. CFX'OjEi, McOH
Соединение 75 получили по опубликованным способам, описанным авторами Shchepinov et al, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454.
Соединение 76 получили по опубликованным способам, описанным авторами Shchepinov etal, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454.
JJ^X^/^O 3, Фоофетипирование Ьтлс1 > '" ^
77 79a
Соединение 77 получили по способам, представленным в Примере 35.
Пример 37: Общий способ получения сопряженного олигомерного соединения 82, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца, via твердой подложки (Способ I),
Г)\ИО ~Ч
v Г
'О Р=1)
<|
I
.0-
ODMT
-~~оомт
ODMT
OLIGO
Q-\'l\f \!)-i)-i;.4)-'
Гп1 к.о1
7ЧЬ
ф \-|\!\[)-i> -r.(,N
х s гл о-
J 1-"u ||
AcOOAo
..!. DC А. Д''Л|
M t IX J MMI. \t X
AcO X2^2: О
^ 3> 1сфсрз*.'ИД11Т 60 ^/
AcHN
ACQOAC
AcO
, о
о1'-о
1 ,04^WVBx
AcHN АС0 9АС
\W-o, p..
AcO ^"T~
NHAc
I GO
ф \1МЛ!)-(ч'-(
2. t-Birt> Oi!
3. ?H% НЛН t rzrjzrt \z* zl)
•1. N11,, 55't.
норн
О^ ^Вх
О=Р-О-
OLIGO
NHAc
где GalNAc3-2 имеет структуру
юун
норн но
Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-2 (GalNAc3-2a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Где GalNAc3-2a имеет формулу:
норн
VIMAD-связанное олигомерное соединение 79b получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy etal, Angew. Chem. Int. Ed., 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамидитные Соединения 56 и 60 получили так, как описано в способах в Примерах 27 и 28, соответственно. Изображенные фософорамидиты являются иллюстративными, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть использованы другие фосфорамидитные строительные блоки, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании, для получения олигомерного соединения, содержащего фосфодиэфир-связанную группу конъюгата у 5'-конца. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений, описанных в настоящем документе, которые имеют любую заданную последовательность и состав.
Пример 38: Альтернативный способ получения олигомерного соединения 82, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца (Способ II)
DMTO
ПСА. д> .м
о I
2.1X1, N Ml. At'N
Pz. с ф с р з мидит 7Э
OLIGO
ДМ" FhK
Q-V1MAD-04.0^CN Х% V~0^
ж ?9Ь
2. i-BuOOH
Л [,г,ЧГИ <С Ml:lc! Й)
4 NH., 55 "С
О' О"
' 6
[ (Ч ИЮ |
0~MM AD-U-P-(^-( N
Олигомерное соединение ?12
VIMAD-связанное олигомерное соединение 79Ь получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy et al, Angew. Chem. Int. Ed., 2006, 45, 3623-3627). ОаШАсз-2-кластерный фосфорамидит, Соединение 79 получили по способам, представленным в Примере 35. Альтернативный способ обеспечивает возможность одностадийной установки фосфодиэфир-связанногоОаШАсз-2 конъюгата на олигомерное соединение на последней стадии синтеза. Изображенные фософорамидиты являются иллюстративными, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть использованы другие фосфорамидитные строительные блоки, включая, но не
ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании, для получения олигомерных соединений, содержащих фосфодиэфирный конъюгат у 5'-конца. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений, описанных в настоящем документе, которые имеют любую заданную последовательность и состав.
Пример 39: Общий способ получения олигомерного соединения 83h, содержащего конъюгат GalNAc3-3 у 5'-конца (GalNAc3-l, модифицированный для 5'-концевого присоединения), via твердой подложки.
1 Г г ]Г Н..ПЦ
АсО
^
I- p.i'i Чвг.н
АеСЧ
АсО-
83е
НИР-
т 5-
?use > О-Р-СИСН,
и н Д tj __iti
Also
83d
Бвратннй буфер. ДМСО, рН 8.S "Н4* т-ра
AcHN
но он
.0-
NHAc
° об Л-^А . , -
Н Н r^0.J-NH N- 83h
О J HN" " ""К-^-р.
, -4 н и о
NHAc
Соединение 18 получили по способам, представленным в Примере 4. Соединения 83а и 83Ь имеются в продаже. Олигомерное Соединение 83е, содержащее связанный через фосфодиэфир гексиламин, получили по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. В результате обработки защищенного олигомерного соединения водным раствором аммиака получили 5'-GalNAc3-3 сопряженное олигомерное соединение (83h).
Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-3 (GalNAc3-3a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Где GalNAc3-3a имеет формулу:
OH HQ ^ 0 HO
NHAc
Пример 40: Общий способ получения олигомерного соединения 89, содержащего связанный фосфодиэфирным линкером GalNAc3-4 конъюгат у З'-конца via твердой подложки
I- 1ч пир*ргд^н, "?. П < .1, NMI, ЛС\
1> 2Сф^СЭ?^Д^Т 7rs
1 Ш i ACM t t-Hu(> nl[
Q-! \|- < I-V-()-^V^:N 6
Где СМ представляет собой расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой:
Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-4 (GalNAc3-4a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Где GalNAc3-4a имеет формулу:
NHAc
Защищенное Соединение 30 на функционализированной твердой подложке Unylinker имеется в продаже. Соединение 84 получили по таким же способам, как описаны в литературе (см. Shchepinov et al, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454; Shchepinov et al, Nucleic Acids Research, 1999, 27, 3035-3041; и Hornet et al, Nucleic Acids Research, 1997, 25, 4842-4849).
Фосфорамидитные строительные блоки, Соединения 60 и 79а, получили так, как описано в способах в примерах 28 и 36. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть использованы другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерного соединения, имеющего фосфодиэфир-связанный конъюгат у 3'-конца и заданную последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений,
Пример 41: Общий способ получения ASO, содержащих фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 (см. Пример 37, Вх представляет собой аденин) в 5'-положении via твердофазному способу (получение ISIS 661134)
Если не указано иное, все реагенты и растворы, использованные для синтеза олигомерных соединений, приобретены у коммерческих поставщиков. Стандартные фосфорамидитные строительные блоки и твердую подложку использовали для внедрения нуклеозидных остатков, которые включают, например, остатки Т, A, G и ШС. Фосфорамидитные соединения 56 и 60 использовали для синтеза фосфодиэфир-связанного конъюгата GalNAc3-2 у 5'-конца. 0,1 М раствор фосфорамидита в безводном ацетонитриле использовали для |3-0-2'-дезоксирибонуклеозида и 2'-МОЕ.
Синтез антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) выполнили на синтезаторе ABI394 (в масштабе 1-2 мкмоль) или на синтезаторе АКТА Oligopilot производства GE Healthcare Bioscience (в масштабе 40-200 мкмоль) по способу фосфорамидитного связывания на твердой подложке "VTMAD (110 мкмоль/г, Guzaev et al, 2003), упакованной в колонку. Для стадии связывания фосфорамидиты вводили в 4-кратном избытке по сравнению с исходной загрузкой на твердой подложке, а конденсацию фосфорамидита выполняли в течение 10 минут. Все остальные стадии выполняли по стандартным протоколам, предоставленным производителем. Для удаления диметокситритильных (DMT) групп с 5'-гидроксильных групп нуклеотида использовали 6 % раствор дихлоруксусной кислоты в толуоле. На стадии связывания в качестве активатора использовали 4,5-дицианоимидазол (0,7 М) в безводном CH3CN. Тиофосфатные связи внедряли сульфированием при помощи 0,1 М раствора гидрида ксантана в 1:1 смеси пиридина/СНзСМ в течение 3 минут времени контакта. В качестве окислительного агента для получения фосфодиэфирных межнуклеозидных связей использовали 20 % раствор дареда-бутилгидропероксида в CH3CN , содержащий 6 % воды, в течение 12 минут времени контакта.
После сборки требуемой последовательности цианоэтил-фосфатные защитные группы снимали при помощи 20 % диэтиламина в толуоле (об./об.) в течение 45 минут времени контакта. Связанные с твердой подложкой ASO суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 масс. %) и нагревали при 55 °С в течение 6 часов.
Затем отфильтровывали не связанные ASO и выпаривали аммиак кипячением. Остаток очищали жидкостной хроматографией высокого давления на сильной анионообменной колонке (GE Healthcare Bioscience, Source 30Q, 30 мкм, 2,54 х 8 см, А = 100 мМ ацетата аммония в 30 % водном CH3CN, В = 1,5 М NaBr в А, 0-40 % В за 60 мин., скорость потока 14 мл.мин-1, X = 260 нм). Остаток обессоливали при помощи ВЭЖХ на обращенно-фазовой колонке с получением заданных ASO с выделенным выходом 15-30 % относительно первоначальной загрузки на твердую подложку. ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Таблица 34
ASO, содержащие фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 в 5'-положении,
Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "к" означает 6'-(5^)-СНз бициклический нуклеозид (например, cEt); "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); "о" означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО); и "o'" означает -0-Р(=0)(ОН)-. Верхний индекс "т" означает 5-метилцитозины. Структура GalNAc3-2a показана в Примере 37.
Пример 42: Общий способ получения ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-3 в 5'-положении, via твердофазным методикам (получение ISIS 661166)
Синтез ISIS 661166 выполнили по таким же способам, как представлены в Примерах 39и41.
ISIS 661166 представляет собой 5-10-5 МОЕ гэпмер, в котором 5'-положение содержит конъюгат GalNAc3-3. Это ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные линкеры (PS); "о" означает фосфодиэфирные межнуклеозидные линкеры (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Верхний индекс "т" означает 5-метилцитозины. Структура "5'-GalNAc3-3a" показана в Примере 39.
Пример 43: Дозозависимое исследование фосфодиэфир-связанного GalNAc3-2 (см. Примеры 37 и 41, Вх представляет собой аденин) у 5'-конца, направленного на SRB-1, in vivo
ISIS 661134 (см. Пример 41), содержащий фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца, испытывали в дозозависимом исследовании на антисмысловое ингибирование SRB-1 у мышей. Несопряженные ISIS 440762 и 651900 (конъюгат (GalNAc3-
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900, 661134 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как " % PBS". ЕОбоизмеряли по таким же способам, как описаны ранее, и указанные значения представлены ниже.
Как показано в Таблице 35, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца (ISIS 661134) или конъюгат GalNAc3-l, связанный у З'-конца (ISIS 651900), демонстрируют значительное улучшение эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 440762). Кроме того, ISIS 661134, который содержит фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца, был настолько же эффективным, как ISIS 651900, который содержит конъюгат GalNAc3-l у З'-конца.
Таблица 35
ASO, содержащие GalNAc3-l или GalNAc3-2, направленные на SRB-1
Фармакокинетический анализ (ФК)
ФК для ASO из группы высокой дозы (7 мг/кг) исследовали и оценили таким же образом, как описано в Примере 20. Образцы печени измельчили и экстрагировали по стандартным протоколам. Идентифицировали метаболиты полной длины 661134 (5' GalNAc3-2) и ISIS 651900 (3' GalNAc3-l) и подтвердили их массы при помощи масс-спектрометрического анализа высокого разрешения. Результаты показали, что основной метаболит, обнаруженный для ASO, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 у 5'-конца (ISIS 661134), представлял собой ISIS 440762 (данные не показаны). Не наблюдали никаких дополнительных метаболитов в обнаруживаемом количестве. В
отличие от него, для ASO, содержащего конъюгат GalNAc3-l у З'-конца (ISIS 651900), наблюдали дополнительные метаболиты, аналогичные тем, которые описаны ранее в Таблице 23а. Эти результаты позволяют предположить, что наличие фосфодиэфир-связанного конъюгата GalNAc3-l или GalNAc3-2 может улучшать ФК профиль ASO без ухудшения их эффективности.
Пример 44: Влияние PO/PS линкеров на антисмысловое ингибирование ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-l (см. Пример 9) у З'-конца, направленных на SRB-1
ISIS 655861 и 655862, содержащие конъюгат GalNAc3-l у З'-конца, каждый из которых направлен на SRB-1, испытали в исследовании однократного введения на их способность ингибировать SRB-1 у мышей. Исходное несопряженное соединение, ISIS 353382, включили в исследование для сравнения.
Эти ASO представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, в которых гэп-область содержит десять 2'-дезоксирибонуклеозидов, и каждая область крыльев содержит пять 2'-МОЕ модифицированных нуклеозидов. Эти ASO получили по таким же способам, как показаны ранее в Примере 19, и они описаны ниже в Таблице 36.
mCdsTdsTeomCeomCeSTesTeoAao-GalNAc3-la
конъюгатом GalNAc3-l
Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-В-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные линкеры (PS); "о" означает фосфодиэфирные межнуклеозидные линкеры (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Верхний индекс "т" означает 5-метилцитозины. Структура "GalNAc3-l" показана в Примере 9. Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 655862 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RTBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как " % PBS". ЕОбоизмеряли по таким же способам, как описаны ранее, и указанные значения представлены ниже.
Как показано в Таблице 37, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом, по сравнению с контрольным образцом, обработанным PBS. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc3-l у З'-конца (ISIS 655861 и 655862), демонстрируют значительное усиление эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). Кроме того, ISIS 655862 со смешанными PS/PO
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также массу органов. Результаты показывают, что не наблюдали какого-либо увеличения уровней трансаминазы (Таблица 38) или массы органов (данные не показаны) у мышей, обработанных ASO, по сравнению с PBS контролем. Кроме того, ASO со смешанными PS/PO линкерами (ISIS 655862) демонстрирует схожие уровни трансаминазы, по сравнению с соединением, содержащим только PS (ISIS 655861).
103а; п"1 ЮЗЬ; п= 7
АсО
AcHN 104л: п=1
104Ь; п= 7
EtOAc, МоОН
АсО AcHN
1ГЛ,г п-1
Ы5о п=7
ОАоГ-^-t^
106а; п=1 106b; п=7
ОАс
Ra-NI, Н2
MeOH, EtOAc AcHN V /" -у-^-^-МНг
HBTU, DIE А, ДМ*А
АсО AcHN
107а; п=1 107Ь; п= 7
OAi
•IN
AcO AcHN
108a; n=1 108b; n= 7
Соединение 4 (9,5 г, 28,8 ммоль) обработали по отдельности соединением 103а или ЮЗЬ (38 ммоль) и TMSOTf (0,5 экв.), и молекулярными ситами в дихлорметане (200 мл), и перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Затем органический слой отфильтровали через целит, затем промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (2 %-> 10 % метанол/дихлорметан) с получением
Соединения 104а и 104Ь обработали в тех же условиях, что и соединения 100a-d (Пример 47), с получением соединений 105а и 105Ь с выходом > 90 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 105а и 105Ь по отдельности обработали соединением 90 при тех же условиях, что и соединения 901a-d, с получением соединений 106а (80 %) и 106Ь (20 %). Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 106а и 106Ь обработали в тех же условиях, что и соединения 96a-d (Пример 47), с получением соединения 107а (60 %) и 107Ь (20 %). Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 107а и 107Ь обработали в тех же условиях, что и соединения 97a-d (Пример 47), с получением соединений 108а and 108b с выходом 40-60 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 108а (60 %) и 108Ь (40 %) обработали в тех же условиях, что и соединения ЮОа-d (Пример 47), с получением соединений 109а и 109Ь с выходом > 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 109а обработали в тех же условиях, что и соединения 101a-d (Пример 47), с получением соединения 110а с выходом 30-60 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой. Альтернативно, Соединение 110b может быть получено таким же образом, исходя из Соединения 109Ь.
Пример 46: Общий способ сопряжения с PFP эфирами (олигонуклеотид 111); получение ISIS 666881 (GalNAc3-10)
Синтезировали и очистили 5'-гексиламино-модифицированный олигонуклеотид по стандартным способам твердофазного получения олигонуклеотидов. 5'-Гексиламино-модифицированный олигонуклеотид растворили в 0,1 М растворе тетрабората натрия, рН 8,5 (200 мкл) и добавили 3 эквивалента выбранного PFP-эстерифицированного кластера GalNAc3, растворенного в ДМСО (50 мкл). Если при добавлении раствора ASO эфир PFP выпадал в осадок, то добавляли ДМСО до перехода всего эфира PFP в раствор. Реакция
была завершена примерно через 16 часов перемешивания при комнатной температуре. Полученный раствор разбавили водой до 12 мл, а затем центрифугировали при 3000 об./мин. в центробежном фильтре с отсечением по массе 3000 Да. Этот прием повторили два раза для удаления низкомолекулярных примесей. Затем раствор лиофилизировали досуха и повторно растворили в концентрированном водном растворе аммиака, и перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 часов, затем концентрировали in vacuo для удаления большей части аммиака. Сопряженный олигонуклеотид очистили и обессолили при помощи ОФ-ВЭЖХ, и лиофилизировали с получением GalNAc3 сопряженного олигонуклеотида.
110а
о 83е
i' 5' ||
f OLIGO 1 • О -P-CHCH:)e-NH2
%, Боратн> ый ёуфер, ДМСО.
р-Н 3 3. коми, т-ра 2. МНз *юдч ; коин т-ра
Олигонуклеотид 111 сопряжен с GalNAc3-10. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-10 (GalNAc3-10a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-, как показано ниже в олигонуклеотиде (ISIS 666881), синтезированном с GalNAc3-10. Структура GalNAc3-10 (GalNAc3-10a-CM-) представлена ниже:
AcHN
но?н
и У н
AcHN V
ООН j? | О О
AcHN
норн
AcHN
По указанному общему способу получили ISIS 666881. Синтезировали и очистили 5'-гексиламино-модифицированный олигонуклеотид, ISIS 660254, по стандартным способам твердофазного получения олигонуклеотидов. ISIS 660254 (40 мг, 5,2 мкмоль) растворили в 0,1 М растворе тетрабората натрия, рН 8,5 (200 мкл) и добавили 3 эквивалента PFP эфира (Соединения 110а), растворенного в ДМСО (50 мкл). Эфир PFP выпал в осадок при добавлении раствора ASO, поэтому потребовалось добавление дополнительного количества ДМСО (600 мкл) для полного растворения PFP эфира. Реакция была завершена через 16 часов перемешивания при комнатной температуре. Раствор разбавили водой до общего объема 12 мл, а затем центрифугировали при 3000 об./мин. в центробежном фильтре с отсечением по массе 3000 Да. Этот прием повторили два раза для удаления низкомолекулярных примесей. Раствор лиофилизировали досуха и повторно растворили в концентрированном водном растворе аммиака, перемешивая при комнатной температуре в течение 2,5 часов, затем концентрировали in vacuo для удаления большей части аммиака. Сопряженный олигонуклеотид очистили и обессолили при помощи ОФ-ВЭЖХ, и лиофилизировали с получением ISIS 666881 с выходом 90 % по массе (42 мг, 4,7 мкмоль).
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
93а; п=1
ШЬ, п=2
93а (93Ь) HBTU, DIPEA, ДМ*А
Kv п=1 п=1 9GU п=1 14=2 Уix. ' - J. гп~1 9fad, П"1 п~2
ад 1 п=/ n-y
J7d i(tm)t, rn-
I'ti T~i, in-;
J,',- г ? ~l 1
J?j rn=Z
H5TU, [J FA ДМ*Д 0ACACHNAS;
Трехкислотное соединение 90 (4 г, 14,43 ммоль) растворили в ДМФА (120 мл) и N,N-диизопропилэтиламине (12,35 мл, 72 ммоль). По каплям добавили пентафторфенила трифторацетат (8,9 мл, 52 ммоль) в атмосфере аргона и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавили Вос-диамин 91а или 91Ь (68,87 ммоль) вместе с /У,/У-диизопропилэтиламином (12,35 мл, 72 ммоль) и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Затем упарили ДМФА на > 75 % при пониженном давлении, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (2 %-> 10 % метанол/дихлорметан) с получением соединений 92а и 92Ь с приблизительным выходом 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 92а или 92Ь (6,7 ммоль) обрабатывали 20 мл дихлорметана и 20 мл трифторуксусной кислоты при комнатной температуре в течение 16 часов. Полученный раствор выпарили, а затем растворили в метаноле и обрабатывали смолой DOWEX-OH в течение 30 минут. Полученный раствор отфильтровали и упарили до маслянистого вещества при пониженном давлении с получением 85-90 % выхода соединений 93а и 93Ь.
Соединения 7 или 64 (9,6 ммоль) обрабатывали HBTU (3,7 г, 9,6 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламином (5 мл) в ДМФА (20 мл) в течение 15 минут. К смеси добавили либо соединение 93а, либо 93Ь (3 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 часов. Затем упарили ДМФА на > 75 % при пониженном давлении, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (5 %-> 20 % метанол/дихлорметан) с получением соединений 96a-d с выходом 20-40 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 96a-d (0,75 ммоль) по отдельности гидрировали на никеле Ренея в течение 3 часов в этаноле (75 мл). Затем катализатор удалили фильтрованием через целит, а этанол удалили при пониженном давлении с получением соединений 97a-d с выходом 80-90 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 23 (0,32 г, 0,53 ммоль) обрабатывали HBTU (0,2 г, 0,53 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламином (0,19 мл, 1,14 ммоль) в ДМФА (3 0 мл) в течение 15 минут. К смеси по отдельности добавили соединения 97a-d (0,38 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 часов. Затем упарили ДМФА на > 75 % при пониженном давлении, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (2 %-> 20 % метанол/дихлорметан) с получением соединений 98a-d с выходом 30-40 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 99 (0,17 г, 0,76 ммоль) обрабатывали HBTU (0,29 г, 0,76 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламином (0,35 мл, 2,0 ммоль) в ДМФА (50 мл) в течение 15 минут. К смеси по отдельности добавили соединения 97a-d (0,38 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 часов. Затем упарили ДМФА на > 75 % при пониженном давлении, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (5 %-> 20 % метанол/дихлорметан) с получением соединений ЮОа-d с выходом 40-60 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 100a-d (0,16 ммоль) по отдельности гидрировали на 10 % Pd(OH)2/C в течение 3 часов в метаноле/этилацетате (1:1, 50 мл). Затем катализатор удалили фильтрованием через целит, а органические растворители удалили при пониженном
Соединения 101a-d (0,15 ммоль) по отдельности растворили в ДМФА (15 мл) и пиридине (0,016 мл, 0,2 ммоль). По каплям добавили пентафторфенила трифторацетат (0,034 мл, 0,2 ммоль) в атмосфере аргона и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем упарили ДМФА на > 75 % при пониженном давлении, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили при пониженном давлении до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили хроматографией на силикагеле (2 %-> 5 % метанол/дихлорметан) с получением соединений 102a-d с приблизительным выходом 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
( г- ,yi Ю-Р-0-|ГИ,|, NH
Олигомерное соединение 160, содержащее группу конъюгата GalNAc3-8, получили по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-8 (GalNAc3-8a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В предпочтительном варианте реализации расщепляемый фрагмент представляет co6oft-P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-.
Структура GalNAc3-8 (GalNAc3-8a-CM-) представлена ниже:
Пример 48: Получение олигонуклеотида 119, содержащего GalNAc3-7
Соединение 112 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Med. Chem. 2004, 47, 5798-5808).
Соединение 112 (5 г, 8,6 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (22 мл/22 мл). Добавили гидроксид палладия на углероде (0,5 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой 1:1 смесью метанола/этилацетата. Фильтрат и промывочные растворы объединили и концентрировали досуха с получением Соединения 105а (количественно). Структуру подтвердили по ЖХМС.
Соединение 113 (1,25 г, 2,7 ммоль), HBTU (3,2 г, 8,4 ммоль) и DIEA (2,8 мл, 16,2 ммоль) растворили в безводном ДМФА (17 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 минут. К этой смеси добавили раствор Соединения 105а (3,77 г, 8,4 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Растворитель удалили при пониженном давлении с получением маслянистого вещества. Остаток растворили в СШСЬ (100 мл) и промыли
насыщенным водным раствором NaHCCb (100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Органическую фазу отделили, высушили (Na2S04), отфильтровали и выпарили. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали от 10 до 20 % МеОН в дихлорметане с получением Соединения 114 (1,45 г, 30 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и *Н ЯМР.
Соединение 114 (1,43 г, 0,8 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (4 мл/4 мл). Добавили палладий на углероде (влажный, 0,14 г). Реакционную смесь продували водородом и перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 часов. Реакционную смесь фильтровали через слой целита . Слой целита промыли метанолом/этилацетатом (1:1). Фильтрат и промывочные растворы объединили и выпарили при пониженном давлении с получением Соединения 115 (количественно). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и ХН ЯМР.
Соединение 83а (0,17 г, 0,75 ммоль), HBTU (0,31 г, 0,83 ммоль) и DIEA (0,26 мл, 1,5 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 минут. К этой смеси добавили раствор Соединения 115 (1,22 г, 0,75 ммоль) в безводном ДМФА и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 6 часов. Растворитель удалили при пониженном давлении, а остаток растворили вСШСЬ. Органический слой промыли насыщенным водным раствором NaHC03 и насыщенным солевым раствором, и высушили над безводным Na2S04 , и отфильтровали. Органический слой концентрировали досуха, а полученный остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали от 3 до 15 % МеОН в дихлорметане с получением Соединения 116 (0,84 г, 61 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и *Н ЯМР.
Pd/C, Н2, EtOAc, МеОН
Соединение 116 (0,74 г, 0,4 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (5 мл/5 мл). Добавили палладий на углероде (влажный, 0,074 г). Реакционную смесь продували водородом и перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 часов. Реакционную смесь фильтровали через слой целита . Слой целита промыли метанолом/этилацетатом (1:1). Фильтрат и промывочные растворы объединили и выпарили при пониженном давлении с получением соединения 117 (0,73 г, 98 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и ХН ЯМР.
Соединение 117 (0,63 г, 0,36 ммоль) растворили в безводном ДМФА (3 мл). К этому раствору добавили /У,/У-диизопропилэтиламин (70 мкл, 0,4 ммоль) и пентафторфенила трифторацетат (72 мкл, 0,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов и вылили в насыщенный водный раствор NaHCCb . Смесь экстрагировали дихлорметаном, промыли насыщенным солевым раствором и высушили над безводньшиЧагЗОч. Дихлорметановый раствор концентрировали досуха и очистили силикагелевой колоночной хроматографией, и элюировали от 5 до 10 % МеОН в дихлорметане с получением соединения 118 (0,51 г, 79 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и'Ни^и 19F ЯМР.
3' 5' j|
[ P[ i и bO-P-P-iCILy-Mli;
1 EccjT-.i i, Jip ДИIZ, fh B.f, V.ZMH. т-ра
118 ""
2, Ашшк шда, комн. т-ра
Олигомерное соединение 119, содержащее группу конъюгата GalNAc3-7, получили по общим способам, представленным в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-7 (GalNAc3-7a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-7 (GalNAc3-7a-CM-) представлена ниже:
Соединение 120 (14,01 г, 40 ммоль) и HBTU (14,06 г, 37 ммоль) растворили в безводном ДМФА (80 мл). Добавили триэтиламин (11,2 мл, 80,35 ммоль) и перемешивали в течение 5 минут. Реакционную смесь охладили на ледяной бане и добавили раствор соединения 121 (10 г, ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Добавили дополнительное количество триэтиламина (4,5 мл, 32,28 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 18 часов в атмосфере аргона. Реакцию контролировали по ТСХ (этилацетат:гексан; 1:1; Rf = 0,47). Растворитель удалили при пониженном давлении. Остаток растворили в EtOAc (300 мл) и промыли 1 М раствором NaHS04 ( 3 х 150 мл), насыщенным водным раствором NaHC03 (3 х 150 мл) и насыщенным солевым раствором (2 х 100 мл). Органический слой высушили над Na2S04. Высушивающий агент удалили фильтрованием, а органический слой концентрировали на ротационном испарителе. Неочищенную смесь очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали при помощи 35-50 % EtOAc в гексане с получением соединения 122 (15,50 г, 78,13 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и *Н ЯМР. Масса m/z 589,3 [М + Н]+.
К охлажденному раствору соединения 122 (7,75 г, 13,16 ммоль), растворенного в метаноле (15 мл), добавили раствор LiOH (92,15 ммоль) в воде (20 мл) и ТГФ (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут и контролировали по ТСХ (EtOAc: гексан; 1:1). Реакционную смесь концентрировали до половины объема при пониженном давлении. Оставшийся раствор охладили на ледяной бане и нейтрализовали добавлением концентрированной НС1. Реакционную смесь
разбавили, экстрагировали EtOAc (120 мл) и промыли насыщенным солевым раствором (100 мл). При стоянии в течение ночи образовалась и осветлилась эмульсия. Органический слой отделили, высушили (Na2S04), отфильтровали и выпарили с получением Соединения 123 (8,42 г). Избыточную массу вероятно обусловливает остаточная соль. ЖХМС согласовался со структурой. Продукт использовали без какой-либо дополнительной очистки. Мол. масса, расчетная: 574,36; мол. масса, найденная: 575,3 [М + Н]+.
Соединение 126 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Am. Chem. Soc. 2011, J33, 958-963).
Cf3COCT (c)NHj 128
¦ОН
Соединение 123 (7,419 г, 12,91 ммоль), HOBt (3,49 г, 25,82 ммоль) и соединение 126 (6,33 г, 16,14 ммоль) растворили в ДМФА (40 мл), а полученную реакционную смесь охладили на ледяной бане. К смеси добавили ЛуУ-диизопропилэтиламин (4,42 мл, 25,82 ммоль), РуВор (8,7 г, 16,7 ммоль), затем Bop-связывающий агент (1,17 г, 2,66 ммоль) в атмосфере аргона. Ледяную баню убрали и оставили раствор нагреваться до комнатной температуры. Реакция была завершена через 1 час, по результатам ТСХ (ДХМ:МеОН: АА; 89:10:1). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворили в EtOAc (200 мл) и промыли 1 М NaHS04 (3x100 мл), насыщенным водным раствором NaHC03 (3x100 мл) и насыщенным солевым раствором (2x100 мл). Отделенную органическую фазу высушили (Na2S04), отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили хроматографией на силикагелевой колонке с градиентом от 50 % гексанов/ЕЮАс до 100 % EtOAc с получением Соединения 127 (9,4 г) в виде белого пенистого вещества. Данные ЖХМС и ХН ЯМР согласовались со структурой. Масса m/z 778,4 [М + Н]+.
Трифторуксусную кислоту (12 мл) добавили к раствору соединения 127 (1,57 г, 2,02 ммоль) в дихлорметане (12 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь выпарили совместно с толуолом (30 мл) при пониженном давлении досуха. Полученный остаток два раза совместно выпарили с ацетонитрилом (30 мл) и толуолом (40 мл) с получением Соединения 129 (1,67 г) в виде трифторацетатной соли и использовали для следующей стадии без дополнительной очистки. Данные ЖХМС и ХН ЯМР согласовались с указанной структурой. Масса m/z 478,2 [М + Н] +.
Соединение 7 (0,43 г, 0,963 ммоль), НАШ (0,35 г, 0,91 ммоль) и НО At (0,035 г, 0,26 ммоль) объединили и высушивали в течение 4 часов над Р2О5 при пониженном давлении в круглодонной колбе, а затем растворили в безводном ДМФА (1 мл) и перемешивали в течение 5 минут. К полученной смеси добавили раствор соединения 128 (0,20 г, 0,26 ммоль) в безводном ДМФА (0,2 мл) и ЛуУ-диизопропилэтиламине (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакция была завершена через 30 минут, по данным ЖХМС и ТСХ (7 % МеОН/ДХМ). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворили в ДХМ (30 мл) и промыли 1 М NaHS04 (3x20 мл), насыщенным водным раствором NaHC03 (3 х 20 мл) и насыщенным солевым раствором (3x20 мл). Органическую фазу отделили, высушили над Na2S04, отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле, используя 5-15 % МеОН в дихлорметане, с получением Соединения 129 (96,6 мг). Данные ЖХМС и ХН ЯМР согласовались со структурой. Масса m/z 883,4 [М + 2Н]+.
Соединение 129 (0,09 г, 0,051 ммоль) растворили в метаноле (5 мл) в сцинтилляционной пробирке объемом 20 мл. К смеси добавили небольшое количество 10 % Pd/C (0,015 мг) и продували реакционный сосуд газообразным Ш. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосере Ш в течение 18 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли слой целита метанолом. Фильтрат и промывочные растворы слили вместе и концентрировали при пониженном давлении с получением Соединения 130 (0,08 г). Данные ЖХМС и ХН ЯМР согласовались с указанной структурой. Продукт использовали без дополнительной очистки. Масса m/z 838,3 [М + 2Н]+.
В коническую круглодонную колбу объемом 10 мл добавили соединение 130 (75,8 мг, 0,046 ммоль), 0,37 М пиридин/ДМФА (200 мкл) и мешалку. К этому раствору по каплям добавили 0,7 М пентафторфенилтрифторацетат/ДМФА (100 мкл) при перемешивании. По данным ЖХМС реакция была завершена через 1 час. Растворитель удалили при пониженном давлении и растворили остаток в СНСЬ (~ 10 мл). Органический слой разделили между NaHS04 (1 М, 10 мл), насыщенным водным раствором NaHC03 (10 ил) и насыщенным солевым раствором (10 мл), с каждым раствором по три раза. Органическую фазу отделили и высушили над Na2S04, отфильтровали и концентрировали с получением Соединения 131 (77,7 мг). ЖХМС согласовался со структурой. Использовали без дополнительной очистки. Масса m/z 921,3 [М + 2Н]+.
Олигомерное Соединение 132, содержащее группу конъюгата ОаШАсз-5,получили по общим способам, представленным в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-5 (GalNAc3-5a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-.
Структура GalNAc3-5 (GalNAc3-5a-CM-) представлена ниже:
О О 2. Ас^О Котированию
^""""Л. /"^^ Кайзер: отрицательный
133
134
pp-DBU ДМ**. i2 2 96S
DMTO
135
45 ~ <УО
1 pip DBU ДМФА
2 Dde-Lvs(Frrx> ci-OH !138) HATU, DlEA ДМ"~ Гэйсер стрицэтегьиа и
0 "'
1 ",t i гиде 9 - и <- ' ДМФД I- gt" ьр пггеп'тегьн!:
7 Гтгк-i ^irrrnrj-OHiMO) HATU DlEA дм*д
139
DMTr
Синтез Соединения 134. В колбу Меррифилда добавили аминометиловую смолу VIMAD (2,5 г, 450 мкмоль/г), которую промыли ацетонитрилом, диметилформамидом, дихлорметаном и ацетонитрилом. Смолу оставили набухать в ацетонитриле (4 мл). Соединение 133 предварительно активировали в 100 мл кругл од онной колбе путем добавления 20 (1,0 ммоль, 0,747 г), TBTU (1,0 ммоль, 0,321 г), ацетонитрила (5 мл) и DIEA (3,0 ммоль, 0,5 мл). Этот раствор оставили перемешиваться на 5 минут, а затем добавили в колбу Меррифилда при встряхивании. Суспензию оставили встряхиваться на 3 часа. Реакционную смесь слили, а смолу промыли ацетонитрилом, ДМФА и ДХМ. Заполнение новой смолы количественно определили по измерению абсорбции DMT катиона при 500 нм (коэффициент экстинкции = 76000) в ДХМ, которое составило 238 мкмоль/г. Смолу кэпировали трехкратным суспендированием в растворе уксусного ангидрида в течение десяти минут.
Соединение 141, связанное с твердой подложкой, синтезировали многократным повторением способов твердофазного синтеза пептидов при помощи Fmoc. Взяли небольшое количество твердой подложки и суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 масс. %) в течение 6 часов. Расщепленное соединение анализировали по ЖХ-МС и наблюдали, что масса согласуется со структурой. Масса m/z 1063,8 [М + 2Н]+.
синтезатор ДНК
142
Соединение 143, связанное с твердой подложкой, синтезировали при помощи стандартного твердофазного синтеза на ДНК синтезаторе.
Соединение 143, связанное с твердой подложкой, суспендировали в водном аммиаке (28-30 масс. %) и нагревали при 55 °С С в течение 16 часов. Раствор охладили, а твердую подложку отфильтровали. Фильтрат концентрировали, а остаток растворили в воде и очистили при помощи ВЭЖХ на сильной анионообменной колонке. Фракции, содержащие соединение 144 полной длины, слили вместе и обессолили. Полученное GalNAc4-ll-сопряженное олигомерное соединение анализировали при помощи ЖХ-МС и наблюдали, что масса согласуется со структурой.
Кластерная часть GalNAc4 группы конъюгата GalNAc4-ll (GalNAc4-l 1а) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-.
Структура GalNAc4-l 1 (GalNAc4-l 1а-СМ) представлена ниже:
Пример 51: Получение олигонуклеотида 155, содержащего GalNAc3-6
но он
Соединение 146 синтезировали так, как описано в литературе (Analytical Biochemistry 1995, 229, 54-60).
N "О
4 - - "• AcU- Д*"**р"* ~~
T\iS OTf, ¦ * А ч'сле^грсьь5 С41ТЭ CB-.GI-, KH"'h т-ра д Н
' М 1 V
П Ы "и
Ai О (> Аг . • р " он
i У
н PIUOH) ч: о 0 " . ч и и"
"¦ А..О-Л-7*-* ' '-' "> '" ' ' " мн,. "-
["[UA'.'MrUH At HN 1("ы HBTU 01:"А,ДП"А r-'.'н т-ра
Д, О UAt.
ALO-3
A'. HN
,-L,-0 ,, - 'lL N О Jf'" ,f Н?.Р(1!ОН)гУС. ЫОАсУМоОН
н Ji 148 О
Ai О -'
AcHf
149
Соединение 4 (15 г, 45,55 ммоль) и соединение 35Ь (14,3 грамм, 57 ммоль) растворили в CH2CI2 (200 мл). Добавили активированные молекулярные сита (4 А, 2 г, порошкообразные) и оставили реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут в атмосфере азота. Добавили TMS-OTf (4,1 мл, 22,77 ммоль) и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции смесь погасили, вылив в насыщенный водный раствор NaHCCb (500 мл) с дробленым льдом (~ 150 г). Органический слой отделили, промыли насыщенным солевым раствором, высушили над MgS04, отфильтровали и концентрировали до оранжевого маслянистого вещества при пониженном давлении. Неочищенный материал очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 2-10 % МеОН в CH2CI2 с получением Соединения 112 (16,53 г, 63 %). ЖХМС и ^ЯМР согласовались с ожидаемым соединением.
Соединение 112 (4,27 г, 7,35 ммоль) растворили в 1:1 МеОН/ЕЮАс (40 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 минут. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия на углероде, 400 мг) и пропускали через раствор газообразный водород в течение 30 минут. После завершения (ТСХ, 10 % МеОН в CH2CI2, и ЖХМС), катализатор удалили фильтрованием через слой целита. Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под
Соединение 147 (2,31 г, 11 ммоль) растворили в безводном ДМФА (100 мл). Добавили ЛуУ-диизопропилэтиламин (DIEA, 3,9 мл, 22 ммоль), затем HBTU (4 г, 10,5 ммоль). Реакционную смесь оставили перемешиваться в течение ~15 минут в атмосфере азота. К этой смеси добавили раствор соединения 105а (3,3 г, 7,4 ммоль) в сухом ДМФА и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли насыщенным водным раствором NaHC03 и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили (MgS04), отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией и элюировали 2-5 % МеОН в СШСЬ с получением Соединения 148 (3,44 г, 73 %). ЖХМС и 1Н ЯМР согласовались с ожидаемым продуктом.
Соединение 148 (3,3 г, 5,2 ммоль) растворили в 1:1 МеОН/ЕЮАс (75 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 минут. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия на углероде) (350 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 минут. После завершения (ТСХ, 10 % МеОН в ДХМ, и ЖХМС), катализатор удалили фильтрованием через слой целита. Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением Соединения 149 (2,6 г). Данные ЖХМС согласовались с заданным продуктом. Остаток растворили в сухом ДМФА (10 мл) и сразу использовали на следующей стадии.
Соединение 146 (0,68 г, 1,73 ммоль) растворили в сухом ДМФА (20 мл). К нему добавили DIEA (450 мкл, 2,6 ммоль, 1,5 экв.) и HBTU (1,96 г, 0,52 ммоль). Реакционную смесь оставили перемешиваться в течение 15 минут при комнатной температуре в атмосфере азота. Добавили раствор соединения 149 (2,6 г) в безводном ДМФА (10 мл). рН реакционной смеси довели до рН = 9-10 добавлением DIEA (при необходимости). Реакционную смесь оставили перемешиваться в течение 2 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. После завершения реакции смесь разбавили EtOAc (100 мл) и промыли насыщенным водным раствором№НСОз, затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили над MgS04, отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 2-10 % МеОН в СН2СЬ с получением Соединения 150 (0,62 г, 20 %). ЖХМС и ХН ЯМР согласовались с заданным продуктом.
Соединение 150 (0,62 г) растворили в 1:1 МеОН/ЕЮАс (5 л). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 минут. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия на углероде) (60 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 минут. После завершения (ТСХ, 10 % МеОН в ДХМ, и
ЖХМС), катализатор удалили фильтрованием (тефлоновый фильтр с переходной канюлей шприца, 0,45 мкм). Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением Соединения 151 (0,57 г). Данные ЖХМС согласовались с заданным продуктом. Продукт растворили в 4 мл сухого ДМФА и сразу использовали на следующей стадии.
АсО °Ас
AcO-^-fiv^
151 _ AcHN 3 Н v Ч^О
PFP-ТФК, DIEA, ДМФА
iBn
АсО
NHAc
152
АсО ОАс
МеОН. EtOAc AcHN * н ^с=0
АсО ОАс о АсО
АсООАс AcHN 3 Ц V° О О
J Н О [ с
3 ОАс о I
NHAc
153
NHAc
Соединение 83a (0,11 r, 0,33 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) и добавили ЛуУ-диизопропилэтиламин (75 мкл, 1 ммоль) и PFP-ТФК (90 мкл, 0,76 ммоль). При соприкосновении реакционная смесь стала пурпурной и постепенно изменила цвет на оранжевый в течение следующих 30 минут. Ход реакции контролировали по ТСХ и ЖХМС. После завершения (образования эфира PFP) добавили раствор соединения 151 (0,57 г, 0,33 ммоль) в ДМФА. рН реакционной смеси довели до рН = 9-10 добавлением N,N
диизопропилэтиламина (при необходимости). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение ~ 30 минут. После завершения реакции большую часть растворителя удалили при пониженном давлении. Остаток разбавили CH2CI2 и промыли насыщенным водным раствором NaHC03, затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили над MgS04, отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (2-10 % МеОН в СН2С12) с получением Соединения 152 (0,35 г, 55 %). ЖХМС и ХН ЯМР согласовались с заданным продуктом.
Соединение 152 (0,35 г, 0,182 ммоль) растворили в 1:1 МеОН/ЕЮАс (10 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 минут. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия на углероде) (35 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 минут. После завершения (ТСХ, 10 % МеОН в ДХМ, и ЖХМС), катализатор удалили фильтрованием (тефлоновый фильтр с переходной канюлей шприца, 0,45 мкм). Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением Соединения 153 (0,33 г, количественно). Данные ЖХМС согласовались с заданным продуктом.
Соединение 153 (0,33 г, 0,18 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) при перемешивании в атмосфере азота. К нему добавили добавили Л^У-диизопропилзтиламин (65 мкл, 0,37 ммоль) и PFP-ТФК (35 мкл, 0,28 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение ~ 30 минут. При соприкосновении реакционная смесь стала пурпурной и постепенно изменила цвет на оранжевый. рН реакционной смеси поддерживали при рН = 9-10 добавлением дополнительного количества N,~N-диизопропилэтиламина. Ход реакции контролировали по ТСХ и ЖХМС. После завершения реакции большую часть растворителя удалили при пониженном давлении. Остаток разбавили CH2CI2 (50 мл) и промыли насыщенным водным раствором NaHC03, затем насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над MgS04, отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Остаток очистили колоночной хроматографией и элюировали 2-10 % МеОН в CH2CI2 с получением Соединения 154 (0,29 г, 79 %). ЖХМС и ЧТЯМР согласовались с заданным продуктом.
( OLIGO > -0-P-0-tCHj)fi Nhfe OH
154
Олигомерное Соединение 155, содержащее группу конъюгата GalNAc3-6, получили по общим способам, представленным в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-6 (GalNAc3-6a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-.
Структура GalNAc3-6 (GalNAc3-6a-CM-) представлена ниже:
АсО?Ас
^0 AcHN
АсООАс
TMSOTf, 50 °С А(гХ> -Л^_\
То
CICH2CH2CI, комн. т-ра, 93% N-t^J
TMSOTf, дхэ.66%
0 РАс АсО ОАс
Л им 101 МеОН. 95% W1fJ R
AcHN О ADHN U0
156
157
НВТU, ДМФА, EtN(iPr)2
DMTO
Э ОАс
АсО РАс АсО
AcHN
158
ODMT
Фэсфитил и рова н ие
81%
я-Р.
Э ОАс \ N{rPr)z
AcHN О ODMT
159
Соединение 112 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Med. Chem. 2004, 47, 5798-5808).
Соединение 156 (18,60 г, 29,28 ммоль) растворили в метаноле (200 мл). Добавили палладий на углероде (6,15 г, загрузка 10 масс. % (в пересчете на сухое вещество), матрица из порошкообразного углерода, влажный). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 18 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и тщательно промыли слой целита метанолом. Объединенный фильтрат промыли и концентрировали досуха. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 5-10 % метанола в дихлорметане с получением Соединения 157 (14,26 г, 89 %). Масса m/z 544,1 [М-Н]".
Соединение 157 (5 г, 9,17 ммоль) растворили в безводном ДМФА (30 мл). Добавили HBTU (3,65 г, 9,61 ммоль) и ЛуУ-диизопропилэтиламин (13,73 мл, 78,81 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 минут. К нему добавили раствор соединения 47 (2,96 г, 7,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали
при комнатной температуре в течение 8 часов. Реакционную смесь вылили в насыщенный водный раствор NaHCCb. Смесь экстрагировали этилацетатом, а органический слой промыли насыщенным солевым раствором и высушили (Na2S04), отфильтровали и выпарили. Полученный остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 50 % этилацетатом в гексане с получением Соединения 158 (8,25 г, 73,3 %). Структуру подтвердили анализом МС и ЧТЯМР.
Соединение 158 (7,2 г, 7,61 ммоль) высушили над Р2О5 при пониженном давлении. Высушенное соединение растворили в безводном ДМФА (50 мл). К нему добавили Ш-тетразол (0,43 г, 6,09 ммоль) и iV-метилимидазол (0,3 мл, 3,81 ммоль), и цианоэтил-ЛУ^,Л^,Л^-тетраизопропил-фосфородиамидит (3,65 мл, 11,50 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 4 часов. Реакционную смесь разбавили этилацетатом (200 мл). Реакционную смесь промыли насыщенным раствором NaHCCb и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили (Na2S04), отфильтровали и выпарили. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 50-90 % этилацетатом в гексане с получением Соединения 159 (7,82 г, 80,5 %). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 31Р ЯМР.
норн
AcHN 1
О=Р-0Н
1 Си нтезатс-р ДН К
159
ноон гЛ
2. NH,OH (tm)". HO^^^^TYV AcHN 1 I
но?н г\
AcHN ^ '1 '
160
Олигомерное соединение 160, содержащее группу конъюгата GalNAc3-9, получили по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. Три единицы соединения 159 связали с твердой подложкой, затем с фосфорамидитами нуклеотидов. В результате обработки защищенного олигомерного соединения водным раствором аммиака получили соединение
160. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-9 (GalNAc3-9a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-9 (GalNAc3-9a-CM) представлена ниже:
ООН гл AcHN ?
о=р-он
ноон г <
AcHN I
0=Р-ОН
ООН
I О *-о- см
AcHN 1
о H*N ^ NHR НО.ллХл^НЙ (tm)S0TF
R = Н или Cbz А п*. ОАс
ОАс
1S1 - R = H,162a
Г Н3С
(tm) ОАс
ОАс | О О
-NHCBZ
МЮ.НгГ ? = 163а PFPO-^ R- Н, 163Ь 164
ОАс J Q
Acofc^^-MA Н
NHAc П|ч--^^|1дч^_
ОАс " 1
OAcj 0 О О-
Acok^^O^^N^^N '
NHAc ООО'
лл ОАс )L J
АСОЛ^^О^^Л NHAc
-NHCBZ
Выполнили реакцию лактона 161 с диаминопропаном (3-5 экв.) или моно-Вос-защищинным диаминопропаном (1 экв.) с получением спирта 162а или 162Ь. При использовании для описанной выше реакции незащищенного пропандиамина, избыток диамина удалили выпариванием под высоким вакуумом, а свободную аминогруппу в 162а защитили при помощи CbzCl с получением 162Ь в виде белого твердого вещества после очистки колоночной хроматографией. Спирт 162Ь затем взаимодействовал с соединением 4 в присутствии TMSOTf с получением 163а, которое преобразовали в 163Ь путем снятия Cbz группы при помощи каталитического гидрирования. Пентафторфениловый (PFP) эфир 164 получили взаимодействием трехкислотного соединения 113 (см. Пример 48) cPFP-ТФК (3,5 экв.) и пиридином (3,5 экв.) в ДМФА (от 0,1 до 0,5 М). Триэфир 164 непосредственно взаимодействовал с амином 163Ь (3-4 экв.) и DIPEA (3-4 экв.) с получением Соединения 18. Представленный выше способ значительно облегчает очистку промежуточных соединений
Пример 54: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
но2с
PFP-ТФК ДМФА. РУГ
PFPO
но2с
-NHCBZ
PFPO
-NHCBZ
О 113
BocHN.
PFPO^4^
164
BocHN.^---~^NH2
DIPEA
BQCHN
о о-
BocHN N
-NHCBZ
1, HCI или ТФК
Лд ОАс ОАс I
п OPFF
АСОЛ^^О^^Л NHAc
ОАс 9* Q AcO^Vy^L NHAc
Лд ОАс ОАс j
АсоХ^З^О^-^
NHAc
-NHCBZ
NHAc 166
1 - 1 .в-гекганднол
или 1 .й-пе-нтандиол TMSOTf + соединение 4
2, TEMPO
3, PFP-ТФК. р-уг
Три-PFP эфир 164 получили из кислоты 113 по способу, представленному выше в Примере 53, выполнили реакцию этого эфира с моно-Вос-защищенным диамином с получением 165 практически с количественным выходом. Вое группы сняли хлористоводородной кислотой или трифторуксусной кислотой с получением триамина, который взаимодействовал с активированной кислотой PFP 166 в присутствии подходящего основания, такого как DIPEA, с получением Соединения 18.
PFP-защищенную кислоту Gal-NAc 166 получили из соответствующей кислоты обработкой PFP-ТФК (1-1,2 экв.) и пиридином (1-1,2 экв.) в ДМФА. Кислоту-предшественник, в свою очередь, получили из соответствующего спирта окислением с
использованием TEMPO (0,2 экв.) и ВАШ в ацетонитриле и воде. Спирт-предшественник получили из сахарного промежуточного соединения 4 взаимодействием с 1,6-гександиолом (или 1,5-гександиолом или другим диолом для других значений п) (2-4 экв.) и TMSOTf, используя условия, описанные ранее в Примере 47.
Пример 55: Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих либо 3', либо 5'-группу конъюгата (сравнение GalNAc3-l, 3, 8 и 9), направленных на SRB-1, in vivo
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Несопряженный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из различных групп конъюгата GalNAc3 была присоединена либо к 3', либо к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида (расщепляемый фрагмент).
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9. Структура GalNAc3-9 показана ранее в Примере 52. Структура GalNAc3-3 показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-8 показана ранее в Примере 47.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 664078, 661161, 665001 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RJBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблице 40, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанные конъюгаты GalNAc3-l и GalNAc3-9 у З'-конца (ISIS 655861 и ISIS 664078), а также конъюгаты GalNAc3-3 и GalNAc3-8, связанные у 5'-конца (ISIS 661161 и ISIS 665001) демонстрируют существенное улучшение эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). Кроме того, ISIS 664078, содержащий конъюгат GalNAc3-9 у З'-конца, был по существу настолько же эффективным, как ISIS 655861, который содержит конъюгат GalNAc3-l у З'-конца. 5'-сопряженные антисмысловые олигонуклеотиды, ISIS 661161 и ISIS 665001, содержащие GalNAc3-3 или GalNAc3-9, соответственно, обладают
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в таблице.
31.
Пример 56: Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих либо 3', либо 5'-группу конъюгата (сравнение GalNAc3-l, 2, 3, 5, 6, 7 и 10), направленных на SRB-1, in vivo
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Несопряженный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из различных групп конъюгатаОаШАсз была присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида фосфодиэфир-связанным 2'-дезоксиаденозиновым нуклеозидом (расщепляемый фрагмент), за исключением ISIS 655861, в котором группа конъюгата GalNAc3 присоединена к 3'-концу.
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
ISIS 666981
GalNAc3-7a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAc3-7
831
ISIS 666881
GalNAc3-10a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAc3-10
831
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9. Структура GalNAc3-2a показана ранее в Примере 37. Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-5a показана ранее в Примере 49. Структура GalNAc3-6a показана ранее в Примере 51. Структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере 48. Структура GalNAc3-10a показана ранее в Примере 46.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 664507, 661161, 666224, 666961, 666981, 666881 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой
Как показано в Таблице 43, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Действительно, сопряженные антисмысловые олигонуклеотиды демонстрируют значительное усиление эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). 5'-сопряженные антисмысловые олигонуклеотиды демонстрируют небольшое усиление эффективности, по сравнению с 3'-сопряженным антисмысловым олигонуклеотидом.
0,5
96,1
666224
1,5
61,6
GalNac3-5 (5 )
25,6
11,7
0,5
85,5
666961
1,5
56,3
GalNAc3-6 (5 )
34,2
13,1
0,5
84,7
666981
1,5
59,9
GalNAc3-7 (5')
24,9
8,5
0,5
100,0
666881
1,5
65,8
GalNAc3-10 (5 )
26,0
13,0
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 44.
0,2
655861
0,5
0,2
GalNacs-l (3 )
1,5
0,2
0,2
0,2
664507
0,5
0,2
GalNac3-2 (5 )
1,5
0,2
0,2
661161
0,5
0,2
GalNac3-3 (5 )
1,5 г
0,2
5 г
0,2
0,2
666224
0,5
0,2
GalNac3-5 (5 )
1,5
0,2
0,2
666961
0,5
0,2
GalNAc3-6 (5 )
1,5
0,2
0,2
107
0,2
666981
0,5
0,2
GalNAc3-7 (5')
1,5
0,2
666881
0,5
0,2
GalNAcs-lO
(5')
1,5
0,2
0,2
0,2
Пример 57: Исследование продолжительности действия олигонуклеотидов, содержащих З'-группу конъюгата, направленных на АроС III, in vivo
Модифицированные ASO, направленные на АроС III
Мышам однократно ввели инъекцию дозы, указанной ниже, и в течение 42 дней наблюдали уровни АроС-Ш и триглицеридов в плазме (TG в плазме). Исследование выполнили, используя в каждой группе 3 трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий АРОС-Ш.
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9.
Как можно видеть в представленной выше таблице, продолжительность действия увеличивается при добавлении 3'-группы конъюгата, по сравнению с несопряженным олигонуклеотидом. Дополнительное увеличение продолжительности действия наблюдали для смешанного сопряженного PO/PS олигонуклеотида 647536, по сравнению с сопряженным олигонуклеотидом 647535, содержащим только PS.
Пример 58: Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих З'-группу конъюгата (сравнение GalNAc3-l и GalNAc4-ll), направленных на SRB-1, in vivo
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Несопряженный ISIS 440762 включили в качестве несопряженного стандарта. Каждая из групп конъюгата была присоединена к 3'-
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9. Структура GalNAc3-ll а показана ранее в Примере 50.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900, 663748 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Как показано в Таблице 47,лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанные конъюгаты GalNAc3-l и GalNAc4-ll у З'-конца (ISIS 651900 и ISIS 663748), демонстрируют значительное усиление эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 440762). Эти два сопряженных олигонуклеотида, GalNAc3-l и GalNAc4-ll, были одинаково эффективными.
440762
mCdsTdsTksmCk
59,66
23,50
ISIS 651900
TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds
mCdsTdsTksmCkoAao'-GalNAc3-la
0,2
62,75
824
0,6
29,14
8,61
5,62
ISIS 663748
TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAls
mCdsTdsTkSmCkoAao'-GalNAc4-l la
0,2
63,99
824
0,6
33,53
7,58
5,52
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "к" означает 6'-(5^)-СНз бициклический нуклеозид; "d" означает P-D-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатную межнуклеозидную связь (PS); "о" означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь (РО); и "o'" означает -0-Р(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 48.
440762
0,60
нет
651900
0,2
115
0,2
GalNacs-l (3 )
0,6
663748
0,2
0,2
GalNac4-ll
(3')
0,6
Пример 59: Действие СаШАсз-1-сопряженных ASO, направленных на FXI, in vivo
Модифицированные ASO, направленные на FXI
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в исследовании действия многократных нарастающих доз на антисмысловое ингибирование FXI у мышей. ISIS 404071 включили в качестве несопряженного стандарта. Каждая из групп конъюгата была присоединена к 3' -концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
GalNAc3-la
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) дважды в неделю в течение 3 недель вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 404071, 656172, 656173 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК FXI в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Измерили также уровни белка FXI в плазме при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Уровни мРНК FXI определяли относительно общей РНК (при помощи RIBOGREEN(r)), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК FXI для каждой экспериментальной группы. Данные нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначили как " % PBS". ED50 измеряли по таким же способам, как описаны ранее, и указанные значения представлены ниже.
Солевой раствор
100
нет
ISIS 404071
нет
ISIS 656172
0,7
GalNAcs-l
ISIS 656173
0,7
GalNAcs-l
PO/PS
Как показано в Таблице 50, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК FXI дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата 3'-GalNAc3-l, демонстрируют значительное усиление эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 404071). Между эти двумя сопряженными олигонуклеотидами дополнительное усиление эффективности было обеспечено за счет замены некоторых PS линкеров на РО (ISIS 656173).
Как показано в Таблице 50а, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает
уровни белка FXI дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие группу
конъюгата 3'-GalNAc3-l, демонстрируют значительное усиление эффективности, по
сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 404071). Между эти
двумя сопряженными олигонуклеотидами дополнительное усиление эффективности было
обеспечено за счет замены некоторых PS линкеров на РО (ISIS 656173).
ISIS 404071
127
нет
ISIS 656172
0,7
GalNAcs-l
ISIS 656173
0,7
GalNAcs-l
PO/PS
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин, общий альбумин, CRE и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в таблице.
85,8
71,5
3,2
0,2
0,2
21,0
(3')
114,0
101,8
3,3
0,2
0,2
22,7
Пример 60: Действие сопряженных ASO, направленных на SRB-1, in vitro
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в исследовании действия многократных нарастающих доз на антисмысловое ингибирование SRB-1 в первичных гепатоцитах мышей. ISIS 353382 включили в качестве несопряженного стандарта. Каждая из групп конъюгата была присоединена к 3' или 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
ISIS 664507
GalNAc3-2a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAc3-2
831
ISIS 666881
GalNAc3-10a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAcs-lO
831
ISIS
666224
GalNAc3-5a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAc3-5
831
ISIS 666981
GalNAc3-7a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
5/10/5
GalNAc3-7
831
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9. Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-8a показана ранее в Примере 47. Структура GalNAc3-9a показана ранее в Примере 52. Структура GalNAc3-6a показана ранее в Примере 51. Структура GalNAc3-2a показана ранее в Примере 37. Структура GalNAc3-10a показана ранее в Примере 46. Структура GalNAc3-5a показана ранее в Примере 49. Структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере 48.
Лечение
Олигонуклеотиды, перечисленный выше, испытывали in vitro в первичных гепатоцитах мышей, помещенных на планшет при плотности 25000 клеток на лунку, и обрабатывали 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 или 20 нМ модифицированного олигонуклеотида. После
обработки в течение приблизительно 16 часов, из клеток выделили РНК и измерили уровни мРНК при помощи количественной ПНР в реальном времени, а уровни мРНК SRB-1 III скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, измеренным при помощи RIBOGREEN(r).
IC50 рассчитали по стандартным способам, а результаты представлены в Таблице 53. Результаты показывают, что при условиях свободного поглощения, в которых не использованы никакие реагенты или электроимпульсные приемы для искусственного ускорения входа олигонуклеотидов в клетки, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были существенно более эффективными в гепатоцитах, чем исходный олигонуклеотид (ISIS 353382), который не содержит конъюгат GalNAc.
Пример 61: Получение олигомерного соединения 175, содержащего GalNAc3-12
Соединение 169 имеется в продаже. Соединение 172 получили добавлением бензил(перфторфенил)глутарата к соединению 171. Бензил(перфторфенил)глутарат получили добавлением PFP-ТФК и DIEA к 5-(бензилокси)-5-оксопентановой кислоте в ДМФА. Олигомерное соединение 175, содержащее группу конъюгата GalNAc3-12, получили из соединения 174, используя общие способы, описанные в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-12 (GalNAc3-12a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой-Р(=0)(ОН)-Аа-Р(=0)(ОН)-. Структура GalNAc3-12 (GalNAc3-12a-CM-) представлена ниже:
о ЭЗв
э; I ||
( OLIGO j-0-P-0-(CH;)6-NH^ ОН
1, Бэратный буфер, ДМСО. рН Е.5, комн. т-ра
2. аммиак водн.. комн. т-ра
Соединение 176 получили по общему способу, представленному в Примере 2. Олигомерное соединение 180, содержащее группу конъюгата GalNAc3-13, получили из соединения 177, используя общие способы, описанные в Примере 49. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-13 (GalNAc3-13a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-13 (GalNAc3-13a-CM-) представлена ниже:
0 83е HO\LL N
-1Д7 ...
рН 8,Б. комн. т-рв NHAC О О
* но0н
2. аммиак водн.. комн. т-ра \^^* OL/TN
NHAc
Соединения 181 и 185 имеются в продаже. Олигомерное соединение 188, содержащее
группу конъюгата GalNAc3-14, получили из соединения 187, используя общие способы,
описанные в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-14
(GalNAc3-14a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с
получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации
расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура
GalNAc3-14 (GalNAc3-14a-CM-) представлена ниже: норн
но-
ДлЦМ X
AcHN
AcHN
норн
AcHN
норн
AcHN
Пример 64: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-15
191
Соединение 189 имеется в продаже. Соединение 195 получили по общему способу, представленному в Примере 31. Олигомерное соединение 197, содержащее группу конъюгата GalNAc3-15, получили из соединений 194 и 195 по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-15 (GalNAc3-15a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-15 (GalNAc3-15a-CM-) представлена ниже:
Пример 65: Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих 5'-группу конъюгата (сравнение GalNAc3-3,12,13,14 и 15), направленных на SRB-1, in vivo
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Несопряженный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из групп конъюгата GalNAc3 была присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
670061
GalNAc3-13a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds
m m 1 es Ces Ces 1 es 1 e
GalNAc3-13
831
671261
GalNAc3-14a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds
m m 1 es *^es *^es 1 es 1 e
GalNAc3-14
831
671262
GalNAc3-15a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds
m m 1 es *^es *^es 1 es 1 e
GalNAc3-15
831
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-12a показана ранее в Примере 61. Структура GalNAc3-13a показана ранее в Примере 62. Структура GalNAc3-14a показана ранее в Примере 63. Структура GalNAc3-15a показана ранее в Примере 64.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам С57Ы6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один или два раза ввели подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 661161, 671144, 670061, 671261, 671262 или солевого раствора. Мыши, которым вводили дозу два раза, вторую дозу вводили через три дня после первой дозы. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при
помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблице 55, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Не наблюдали значительной разницы нокдауна мишени между животными, получавшими одну дозу, и животными, получавшими две дозы (см. ISIS 353382 в дозах 30 и 2 х 15 мг/кг; и ISIS 661161 в дозах 5 и 2 х 2,5 мг/кг). Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанные конъюгаты GalNAc3-3, 12, 13, 14 и 15, демонстрируют существенное усиление эффективности, по сравнению с несопряженным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 335382).
32,0
17,6
0,5
94,8
670061
1,5
57,8
2,1
GalNAc3-13
20,7
13,3
0,5
110,7
671261
1,5
81,9
4,1
GalNAc3-14
39,8
14,1
0,5
109,4
671262
1,5
99,5
9,8
GalNAc3-15
69,2
36,1
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 56.
2х 15
0,2
661161
0,5
0,2
GalNAc3-3
1,5
0,2
0,2
2x2,5
0,2
0,2
671144
0,5
0,2
GalNAc3-12
1,5
0,2
0,2
0,2
670061
0,5
0,2
GalNAc3-13
1,5
0,2
671261
0,5
GalNAc3-14
1,5
0,2
671262
0,5
0,2
GalNAc3-15
1,5
0,2
Пример 66: Влияние различных расщепляемых фрагментов на антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих кластер 5'-GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Каждая из групп конъюгата GalNAc3 была
Заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-0-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-13a показана ранее в Примере 62.
Шести-восьминедельным мышам С57Ы6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 661161, 670699, 670700, 670701, 671165 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи П1 IP в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблице 58, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Все антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие различные расщепляемые фрагменты, демонстрируют одинаковую эффективность.
17,1
0,5
79,0
670700
1,5
63,3
GalNAc3-3a
32,8
17,9
0,5
79,1
670701
1,5
59,2
GalNAc3-3a
35,8
17,7
0,5
76,4
671165
1,5
43,2
GalNAc3-13a
22,6
10,0
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 56.
0,2
0,5
0,2
670699
1,5
0,2
GalNAc3-3a
0,2
0,2
0,5
0,2
670700
1,5
0,2
GalNAc3-3a
0,2
0,5
0,2
670701
1,5
0,2
GalNAc3-3a
101
0,2
0,2
0,5
0,2
671165
1,5
GalNAc3-
0,2
13a
0,2
_.о " н н
AcHN * \ QDMT
АсООАс \ Q UUMI
АсО
AcHN
АсООАс АсО
нтезатс-р- ДНК
AcHN
ноон
AcHN
НООН
AcHN 1М
Олигомерное соединение 199, содержащее группу конъюгата GalNAc3-16, получили с помощью общих способов, описанных в Примерах 7 и 9 . Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-16 (GalNAc3-16a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-16 (GalNAc3-16a-CM-) представлена ниже:
ООН о о
AcHN н
/ см 1-1
AcHN
Пример 68: Получение олигомерного соединения 200, содержащего GalNAc3-17
83е
AcHN
AcO^^^N^(tm)^^
AcHN"" Н Д J Н I
AcHN А
I OLIGOЮ-Р-0- <СН2)6-NН2 ОН
1. Борятный Буфер. ДМСО, рН В,Б. комн. т-рв
102а
(tm), ACHN ноон о
AcHN
но9н О но
Олигомерное Соединение 200, содержащее группу конъюгата GalNAc3-17, получили по
общим способам, представленным в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы
конъюгата GalNAc3-17 (GalNAc3-17a) может быть комбинирована с любым расщепляемым
фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации
расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура
GalNAc3-17 (GalNAc3-17a-CM-) представлена ниже:
норн о о
ноРн но
AcHN
М-^^оЧсм]-\
^j^O^N AcHN
норн но-
X^O-^N
оон
AcHN
Пример 70: Получение олигомерного соединения 204, содержащего GalNAc3-19
Олигомерное Соединение 201, содержащее группу конъюгата GalNAc3-18, получили по общим способам, представленным в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-18 (GalNAc3-18a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-18 (GalNAc3-18a-CM-) представлена ниже:
АсООАс
Фосфитил и рова н ие
NQ 1. Синтеовтор ДНК
2. NHg водн.
НО ОН НО
AcHN I
0=Р-ОН
НО он НО
НО ОН
AcHN I
о=р-ОН
AcHN
-["см~| foLIGo)
104
Олигомерное соединение 204, содержащее группу конъюгата GalNAc3-19, получили из соединения 64, используя общие способы, описанные в Примере 52.. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-19 (GalNAc3-19a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-Р(=0)(ОН)-. Структура GalNAc3-19 (GalNAc3-19a-CM-) представлена ниже:
НООН г-\ AcHN |
о=р-он
норн
ООН г-{ AcHN ?
о=р-он
ноон [- <
AcHN 1
1 fV> -> О.
1, си нтезатор- ДН К
NC
\p^O^J 2. NH3 водн.
209 DMTO (Pr)sN ОН
НО ОН
AcHN ° |
0=Р-ОН
ОН о
AcHN
ОН о
о-Р-он
- , - . -IOLIGO|
AcHN 2Ю
Соединение 205 получили добавлением PFP-ТФК и DIEA к 6-(2,2,2-трифторацетамидо)гексановой кислоте в ацетонитриле, которую получили добавлением трифторуксусного ангидрида к 6-аминогексановой кислоте. Реакционную смесь нагрели до 80 °С, затем охладили до комнатной температуры. Олигомерное соединение 210, содержащее группу конъюгата GalNAc3-20, получили из соединения 208, используя общие способы, представленные в Примере 52. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-20 (GalNAc3-20a) может быть комбинирована с любым расщепляемым
фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура GalNAc3-20 (GalNAc3-20a-CM-) представлена ниже:
но-
АсООАс
-NH
ОН 211
AcHN 176 ВОР, EtN{iPrb 1.2-дихпорягган
АсООАс
АсО
AcHN
212
"ОН
?MTCI, пиридин.
АсООАс
АсО
ODMT
Фосфнтнл и ровв Н НЕ-
комн. т-ра
AcHN
213
-ОН
N0.
1П СинтЕФВтор ДНК
ООАс
АсООАс АсО
N[;Pr)2
AcHN
214
-ODMT
ОН НО /
0=Р-ОН f
AcHN
0=ip-OH
но /
но-Х^°^ТЧ
AcHN
-[см ] [OLIGO]
215
Соединение 211 имеется в продаже. Олигомерное соединение 215, содержащее группу конъюгата GalNAc3-21, получили из соединения 213, используя общие способы, представленные в Примере 52. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-21 (GalNAc3-21a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации
Соединение 220 получили из соединения 219, используя тетразолид диизопропиламмония. Олигомерное соединение 221, содержащее группу конъюгата GalNAc3-21, получили из
соединения 220, используя общий способ, описанный в Примере 52. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-22 (GalNAc3-22a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-Р(=0)(ОН)-. Структура GalNAc3-22 (GalNAc3-22a-CM-) представлена ниже:
Ч см Н
Пример 74: Влияние различных расщепляемых фрагментов на антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих конъюгат 5'-GalNAc3
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Каждая из групп конъюгата GalNAc3 была присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида.
66116 1
GalNAc3-3a-
°'A(loGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds
Л rp rp mr-^ m^ rp rp
GdsAds ^ds^dsTes ^es ^es^es^e
GalNAc3-3a
831
66690 4
GalNAc3-3a-o'GesmCesTesTesmCesAdSGdsTdsmCdsAdsTds
Л rp rp mr-^ m^ rp rp
GdsAds ^ds^ds^es ^es ^es^es^
GalNAc3-3a
829
67544 1
GalNAc3-17a-
°'A(loGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds
г д mr т т mr mr T T
^WMs Ws1ds1es ^es ^es1es1e
GalNAc3-17a
831
67544 2
GalNAc3-18a-
°'A(loGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds
Л rp rp rp rp
GdsAds ^ds^ds^es ^es ^es^^e
GalNAc3-18a
831
Во всех таблицах заглавные буквы указывают нуклеооснование для каждого нуклеозида, а ШС означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-ГЗ-2'-дезоксирибонуклеозид; "s" означает тиофосфатный межнуклеозидный линкер (PS); "о" означает фосфодиэфирный межнуклеозидный линкер (РО); и "o'" означает ОР(=0)(ОН)-. Группы конъюгата выделены жирным.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39. Структура GalNAc3-17a показана ранее в Примере 68, а структура GalNAc3-18a показана ранее в Примере 69.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам С57Ы6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 60, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные
ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблице 61, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом. Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, демонстрируют равные эффективности и являются значительно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не имеющий конъюгата GalNAc.
13,49
0,5
95,03
675442
1,5
60,06
GalNAc3-18a
31,04
19,40
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 62.
1,5
0,16
17а
0,14
0,14
0,5
0,15
675442
1,5
0,15
GalNAc3-
0,15
18а
0,14
Пример 75: Фармакокинетический анализ олигонуклеотидов, содержащих 5'-группу конъюгата
ФК ASO, представленных выше в Таблицах 54, 57 и 60, оценили с использованием образцов печени, которые получили после выполнения способов лечения, описанных в Примерах 65, 66 и 74. Образцы печени измельчили и экстрагировали по стандартным протоколам, и анализировали при помощи ИП-ВЭЖХ-МС вместе с внутренним стандартом. Суммарный уровень (мкг/г) всех метаболитов в ткани измерили интегрированием соответствующих УФ пиков, а уровни в ткани ASO полной длины, не содержащих конъюгата ("исходное", в данном случае Isis № 353382), измерили с использованием подходящих ион-экстракционных хроматограмм (ЕЮ).
671144
20,5
19,2
GalNAc3-12a
48,6
41,5
670061
31,6
28,0
GalNAc3-13a
67,6
55,5
671261
19,8
16,8
GalNAc3-14a
64,7
49,1
671262
18,5
7,4
GalNAc3-15a
52,3
24,2
670699
16,4
10,4
GalNAc3-3a
31,5
22,5
670700
19,3
10,9
GalNAc3-3a
38,1
20,0
670701
21,8
8,8
GalNAc3-3a
35,2
16,1
671165
27,1
26,5
GalNAc3-13a
48,3
44,3
666904
30,8
24,0
GalNAc3-3a
52,6
37,6
675441
25,4
19,0
GalNAc3-17a
54,2
42,1
675442
22,2
20,7
GalNAc3-18a
39,6
29,0
Результаты, представленные выше в Таблице 63, демонстрируют, что наблюдали более высокие уровни в печени олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгата GalNAc3, чем исходного олигонуклеотида, не содержащего группу GalNAc3 (ISIS 353382) через 72 часа после введения олигонуклеотида, особенно с учетом введения различных доз для олигонуклеотидов с группой конъюгата GalNAc3 и без нее. Кроме того, через 72 часа 40-98 % каждого олигонуклеотида, содержащего группу конъюгата GalNAc3, было
Пример 76: Получение олигомерного соединения 230, содержащего GalNAc3-23
слой концентрировали досуха и очистили колоночной хроматографией, элюировали градиентом от 2 до 4 % метанола в дихлорметане с получением соединения 225. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 225 (11,9 г, 23,59 ммоль) гидрировали в ЕЮ Ас/метаноле (4:1, 250 мл) на катализаторе Перлмана. Через 8 часов катализатор удалили фильтрованием, а растворители удалили досуха с получением соединения 226. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой.
Для получения соединения 227 раствор нитрометантриспропионовой кислоты (4,17 г, 15,04 ммоль) и основание Хюнига (10,3 мл, 60,17 ммоль) в ДМФА (100 мл) по каплям обработали пентафтортрифторацетатом (9,05 мл, 52,65 ммоль). Через 30 минут реакционную смесь вылили в ледяную воду и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой промыли водой, насыщенным солевым раствором и высушили над Na2S04. Органический слой концентрировали досуха, а затем перекристаллизовали из гептана с получением соединения 227 в виде белого твердого вещества. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 227 (1,5 г, 1,93 ммоль) и соединение 226 (3,7 г, 7,74 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в ацетонитриле (15 мл) в течение 2 часов. Затем реакционную смесь выпарили досуха и очистили колоночной хроматографией, элюируя градиентом от 2 до 10 % метанола в дихлорметане, с получением соединения 228. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 228 (1,7 г, 1,02 ммоль) обработали никелем Ренея (около 2 г, влажный) в этаноле (100 мл) в атмосфере водорода. Через 12 часов катализатор удалили фильтрованием, а органический слой выпарили до твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Это твердое вещество (0,87 г, 0,53 ммоль) обработали бензилглутаровой кислотой (0,18 г, 0,8 ммоль), HBTU (0,3 г, 0,8 ммоль) и DIEA (273,7 мкл, 1,6 ммоль) в ДМФА (5 мл). Через 16 часов ДМФА удалили при пониженном давлении при 65 °С до маслянистого вещества, и это маслянистое вещество растворили в дихлорметане. Органический слой промыли насыщенным раствором NaHC03, насыщенным солеым раствором и высушили над Na2S04. После выпаривания органического слоя соединение очистили колоночной хроматографией и элюировали градиентом от 2 до 20 % метанола в дихлорметане с получением связанного
продукта. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. С бензилового эфира сняли защиту на катализаторе Перлмана в атмосфере водорода в течение 1 часа. Затем катализатор удалили фильтрованием, а растворители удалили досуха с получением кислоты. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Эту кислоту (486 мг, 0,27 ммоль) растворили в сухом ДМФА (3 мл). Добавили пиридин (53,61 мкл, 0,66 ммоль) и продули реакционную смесь аргоном. К реакционной смеси медленно добавили пентафтортрифторацетат (46,39 мкл, 0,4 ммоль). Цвет реакционной смеси изменился с бледно-желтого на винный, и появился легкий дымок, который улетучился с потоком аргона. Реакционную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре на один час (завершение реакции подтвердили по ЖХМС). Растворитель удалили при пониженном давлении (ротационный испаритель) при 70 °С. Остаток разбавили ДХМ и промыли 1 н. NaHS04, насыщенным солевым раствором, насыщенным раствором бикарбоната натрия и снова насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na2S04, отфильтровали и концентрировали досуха с получением 225 мг соединения 229 в виде хрупкой желтой пены. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой.
Олигомерное соединение 230, содержащее группу конъюгата GalNAc3-23, получили из соединения 229, используя общий способ, описанный в Примере 46. Кластерная часть GalNAc3 группы конъюгата GalNAc3-23 (GalNAc3-23a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAc3-23 (GalNAc3-23a-CM) представлена ниже:
Пример 77: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3
антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
GdsAds CdsTdsTes ^es CeSTesTeoAdo'-GalNAc3-20a
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39, GalNAc3-9a показана в Примере 52, GalNAc3-10a показана в Примере 46, GalNAc3-19a показана в Примере 70, GalNAc3-20a показана в Примере 71 и GalNAc3-23a показана в Примере 76.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам С57Ы6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) вели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 64, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблице 65, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом.
12,64
0,5
93,11
666904
1,5
55,85
GalNAc3-3a
21,29
13,43
0,5
77,75
673502
1,5
41,05
GalNAc3-10a
19,27
14,41
0,5
87,65
677844
1,5
93,04
GalNAc3-9a
40,77
16,95
0,5
102,28
677843
1,5
70,51
GalNAc3-23a
30,68
13,26
0,5
79,72
655861
1,5
55,48
GalNAc3-la
26,99
17,58
0,5
67,43
677841
1,5
45,13
GalNAc3-19a
27,02
12,41
0,5
64,13
677842
1,5
53,56
GalNAc3-20a
20,47
10,23
Измерили также уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в Таблице 66.
0,5
0,13
677843
1,5
0,13
GalNAc3-
0,15
23a
0,12
0,5
0,15
655861
1,5
0,12
GalNAc3-la
0,13
0,17
0,5
0,13
677841
1,5
0,14
GalNAc3-
0,18
19a
0,15
0,5
0,15
677842
1,5
0,14
GalNAc3-
0,15
20a
0,14
Пример 78: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на ангиотензиноген, содержащих конъюгат GalNAc3
Модифицированные ASO, направленные на AGT
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования ангиотензиногена (AGT) у нормотензивных мышей Спрага-Доули.
66950
mCesAesmCesTesGesAdsTdsTdsTdsTdsTdsGdsmCdsmCdsmCdsA
GalNAc3-la
836
esGes GesAesTeoAdo'-GalNAc3-la
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9.
Лечение
Шестинедельным самцам крыс Спрага-Доули один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 67, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Крыс усыпили через 72 часа после последней дозы. Уровни мРНК AGT в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка AGT в плазме измерили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа для определения общего ангиотензиногена (кат. № JP27412, IBL International, Торонто, штат Онтарио) с разбавлением плазмы 1:20000. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент от уровней мРНК AGT в печени или от уровней белка AGT в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу с PBS.
Уровни мРНК AGT в печени и белка в плазме
Как показано в Таблице 68, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК AGT в печени и уровни белка в плазме дозозависимым образом, и олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был значительно более эффективным, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc.
0,3
669509
129
GalNAc3-la
Измерили также уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT)
и аспартат-аминотрансферазы (AST) в плазме, а также массу тела в момент умерщвления,
используя стандартные протоколы. Результаты представлены ниже в Таблице 69.
Уровни трансаминазы в печени и массы тела крыс
Пример 79: Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, направленных на АРОС-Ш, содержащих конъюгат GalNAc3
однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Модифицированные ASO, направленные на АРОС-Ш
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39, GalNAc3-7a показана в Примере 48, GalNAc3-10a показана в Примере 46 и GalNAc3-13a показана в Примере 62.
Лечение
Шести-восьминедельным трансгенным мышам, экспрессирующим человеческий АРОС-Ш, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 70, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови брали до введения дозы для определения исходного значения, а также через 72 часа, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель и 6 недель после введения дозы. Уровни триглицеридов и белка АРОС-Ш в плазме измеряли так, как описано в Примере 20.
Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент от уровней триглицеридов и АРОС-Ш в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных и исходным значениям, и они демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата GalNAc, обладают более продолжительным действием, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий группу конъюгата (ISIS 304801) даже несмотря на то, что доза исходного соединения была в три раза выше, чем доза олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгата GalNAc.
102
663083
GalNAc3-3a
674449
GalNAc3-7a
GalNAc3-10a
674450
674451
GalNAc3-
13a
Пример 80: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов,
направленных на альфа-1 антитрипсин (А1АТ), содержащих конъюгат GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 72, испытали в исследовании дозозависимого ингибирования Al AT у мышей.
Модифицированные ASO, направленные на А1АТ
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39, GalNAc3-7a показана в Примере 48, GalNAc3-10a показана в Примере 46 и GalNAc3-13a показана в Примере 62.
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 72, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения. Уровни мРНК А1АТ в печени определили при помощи П1 IP в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка А1АТ в плазме определили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа для определения мышиного альфа 1-антитрипсина (кат. № 41-A1AMS-E01, Alpco, Салем, штат Нью-Гэмпшир). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК А1АТ в печени и белка в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу с PBS.
Уровни мРНК А1АТ в печени и белка в плазме
Как показано в Таблице 73, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК А1АТ в печени и уровни белка А1АТ в плазме дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем исходное соединение (ISIS 476366).
0,6
105
678381
GalNAc3-3a
0,6
678382
GalNAc3-7a
0,6
678383
GalNAc3-10a
0,6
106
678384
GalNAc3-13a
Во время умерщвления измерили уровни трансаминазы в печени и АМК в плазме по стандартным протоколам. Измерили также массы тела и массы органов. Результаты представлены ниже в Таблице 74. Масса тела представлена как % относительно исходного значения. Массы органов представлены как % от массы тела относительно контрольной группы с PBS.
Пример 81: Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, направленных на А1АТ, содержащих кластер GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 72, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 72, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходного значения, а также на 5, 12, 19 и 25 день после введения дозы. Уровни белка А1АТ в плазме измерили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (см. Пример 80). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней белка Al AT в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными и имели более продолжительное действие, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 476366). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 678381, 678382, 678383 и 678384), были, в целом, еще более эффективными с еще более продолжительным действием, чем олигонуклеотид, содержащий 3'-GalNAc конъюгат (ISIS 656326).
476366
100
н.д.
н.д.
656326
GalNAc3-la
678381
GalNAc3-3a
678382
GalNAc3-7a
678383
GalNAc3-
10a
678384
GalNAc3-
13a
Пример 82: Антисмысловое ингибирование in vitro под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3
Первичные гепатоциты печени мышей высеивали в 96-луночные планшеты при 15000 клеток на лунку за 2 часа до обработки. Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 76, добавили в концентрации 2, 10, 50 или 250 нМ в среде Уильяма Е, и инкубировали клетки в течение ночи при 37 °С в 5 % СОг. Клетки лизировали через 16 часов после добавления олигонуклеотида, а общую РНК очистили при помощи RNease 3000 BioRobot (Qiagen). Уровни мРНК SRB-1 определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Значения IC50 определили при помощи программы Prism 4 (GraphPad). Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие множество различных групп конъюгата GalNAc и множество различных расщепляемых фрагментов, являются значительно более эффективными в in vitro эксперименте свободного поглощения, чем исходные олигонуклеотиды, не содержащие группу конъюгата GalNAc (ISIS 353382 и 666841).
CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Teo Ceo CesTesTe
664078
GesmCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGds Ads mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoA(lo'-
GalNAc3-9a
GalNAc з-9а
830
665001
GalNAc3-8a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCds_ AdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
GalNAc з-8а
831
666224
GalNAc3-5a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAlsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
GalNAc з-5а
831
666841
Ges CeoTeoTeo CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGds
rp rp mr-^ m^ rp rp
Ads Cds ids leo Ceo Ceslesle
PO/PS
н.д.
н.д.
> 250
829
666881
GalNAc3-10a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAlsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
GalNAc
3-10a
831
666904
GalNAc3-3a-
o'Ges CesTesTes CesAdsGdsTds Cds AdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe
GalNAc з-За
829
666924
GalNAc3-3a-
o'TdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds
m m m m CdsAdsTdsGdsAds Cds ids les Ces Ceslesle
GalNAc з-За
834
666961
GalNAc3-6a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAlsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
GalNAc
3-6a
150
831
666981
GalNAc3-7a-
o'AdoGesmCesTesTesmCesAdsGdsTds
GalNAc
3-7a
831
mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTesmCesmCesTesTe
670061
GalNAc3-13a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds
m m m m CdsAls 1 dsGdsAds Cds ids les Ces Ceslesle
GalNAc
3-13a
831
670699
GalNAc3-3a-
°'TlloGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds
mr д т г д mr т т mr mr T T
Ws^dsL ds ^WMs Wsidsieo ^eo ^esiesie
PO/PS
GalNAc з-За
834
670700
GalNAc3-3a-
°'AeoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds
mr д т г д mr т т mr mr T T
Ws/Ms1ds*Jds/Ms Wsidsieo ^eo ^esiesi
PO/PS
GalNAc з-За
831
670701
GalNAc3-3a-
°'TeoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds
m m m m ^dsAds^ds GdsAds ^ds^ds^eo 4o ^es^es^e
PO/PS
GalNAc з-За
834
671144
GalNAc3-12a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe
GalNAc
3-12a
831
671165
GalNAc3-13a-
°'AdoGesmCeoTeoTeomCeoAdsGdsTds
m m m m 4sAds ^ds GdsAds ^ds^dsTeo 4o ^es^es^
PO/PS
GalNAc
3-13a
831
671261
GalNAc3-14a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds
m m m m CdsAdsTdsGdsAds Cds ids les Ces Ceslesle
GalNAc
3-14a
> 250
831
671262
GalNAc3-15a-
GalNAc
3-15a
> 250
831
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds
m m m m CdsAls 1 dsGdsAds Cds ids les Ces Ceslesle
673501
GalNAc3-7a-
o'AdoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds
m m m m Cds Ads 1 dsGds Ads Cdsldsleo Ceo Ceslesle
PO/PS
GalNAc з-7а
831
673502
GalNAc3-10a-
o'AdoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Teo Ceo CesTesTe
PO/PS
GalNAc
3-10a
831
675441
GalNAc3-17a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds
m m m m CdsAdsTdsGdsAds Cds ids les Ces Ceslesle
GalNAc
3-17a
831
675442
GalNAc3-18a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe
GalNAc
3-18a
831
677841
GesmCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGds Ads mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoAdo'-
GalNAc3-19a
GalNAc
3-19a
830
677842
GesmCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGds Ads mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoAdo'-
GalNAc3-20a
GalNAc з-20а
830
677843
GalNAc3-23a-
o'AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe
GalNAc
3-23a
831
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39,
GalNAc3-5a показана в Примере 49, GalNAc3-6a показана в Примере 51, GalNAc3-7a показана
в Примере 48, GalNAc3-8a показана в Примере 47, GalNAc3-9a показана в Примере 52, GalNAc3-10a показана в Примере 46, GalNAc3-12a показана в Примере 61, GalNAc3-13a показана в Примере 62, GalNAc3-14a показана в Примере 63, GalNAc3-l Ьа показана в Примере 64, GalNAc3-17a показана в Примере 68, GalNAc3-18a показана в Примере 69, GalNAc3-19a показана в Примере 70, GalNAc3-20a показана в Примере 71 и GalNAc3-23a показана в Примере 76.
Пример 83: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на фактор XI, содержащих кластер GalNAc3
Модифицированные олигонуклеотиды, направленные на фактор XI
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 77, испытали в исследовании дозозависимого ингибирования фактора XI у мышей.
o'AdoTesGeoGeoTeoAeoAdsTdsmCdsmCdsAdsmCds TdsTdsTdsmCdsAeoGeo AesGesGe
13a
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39, GalNAc3-7a показана в Примере 48, GalNAc3-10a показана в Примере 46 и GalNAc3-13a показана в Примере 62.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного ниже, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последней дозы. Уровни мРНК фактора XI в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени и нормализовали к циклофилину по стандартным протоколам. Измерили также трансаминазы в печени, АМК и билирубин. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент для каждой экспериментальной группы, нормализованный к контролю с PBS.
Уровни мРНК фактора XI в печени, трансаминазы в печени, АМК и билирубина
Как показано в Таблице 78, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК фактора XI в печени дозозависимым образом. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 404071). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 663086, 678347, 678348 и 678349), были еще более эффективными, чем олигонуклеотид, содержащий З'-GalNAc конъюгат (ISIS 656173).
0,14
0,7
0,16
656173
0,17
GalNAc3-la
833
0,15
0,7
169
0,16
663086
0,16
GalNAc3-3a
841
0,14
0,7
0,14
678347
180
149
0,18
GalNAc3-7a
841
0,15
0,7
0,16
GalNAc3-10a
678348
0,17
841
0,14
0,7
0,16
GalNAc3-13a
678349
0,14
841
0,14
Пример 84: Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, направленных на фактор XI, содержащих конъюгат GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 77, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 77, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали из хвостовой вены за день до введения дозы для определения исходного значения, а также на 3, 10 и 17 день после введения дозы. Уровни белка фактора XI в плазме определяли твердофазным иммуноферментным анализом, используя иммобилизованные и биотинилированные
детекторные антитела для фактора XI производства R &D Systems, Миннеаполис, штат Миннесота (кат. № AF2460 и № BAF2460, соответственно), а также реагент OptEIA, набор В (кат. № 550534, BD Biosciences, Сан-Хосе, штат Калифорния). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней белка фактора XI в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными и имели более продолжительное действие, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 404071). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 663086, 678347, 678348 и 678349), были еще более эффективными с еще более продолжительным действием, чем олигонуклеотид, содержащий 3'-GalNAc конъюгат (ISIS 656173).
678347
GalNAc3-7a
841
678348
GalNAc3-10a
841
678349
GalNAc3-13a
841
Пример 85: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 76, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам C57BL/6 один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 76, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 48 часов после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 при помощи П1 IP в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 в печени для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в Таблицах 80 и 81, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами
снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом.
Таблица 80 мРНК SRB-1 в печени
ISIS №
Доза (мг/кг)
мРНК SRB-1 ( % от солевого раствора)
Кластер GalNAc3
107
661161
0,3
GalNAc3-3a
677841
0,3
GalNAc3-19a
Измерили также уровни трансаминазы в печени, общего билирубина, АМК и массы тела по стандартным протоколам. Средние значения для каждой экспериментальной группы представлены ниже в Таблице 82.
0,3
0,16
119
0,14
117
0,15
112
0,14
113
666981
0,3
0,16
112
GalNAc3-7a
0,15
111
0,18
115
0,18
111
670061
0,3
0,15
115
GalNAc3-13a
0,14
115
0,12
116
0,17
114
677842
0,3
0,17
117
GalNAc3-20a
0,15
119
0,14
118
Пример 86: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 83, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого транстиретина (TTR) у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий TTR ген.
Лечение
Восьминедельным TTR трансгенным мышам один раз в неделю в течение трех недель, в целом три дозы, вводили подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленных в представленных ниже таблицах, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения. В течение эксперимента в различных временных точках брали образцы крови из хвостовой вены и измеряли уровни белка TTR в плазме, ALT и AST, которые представлены в Таблицах
85-87. После усыпления животных измерили уровни ALT, AST и человеческого TTR в плазме, а также массы тела, массы органов и уровни мРНК человеческого TTR в печени. Уровни белка TTR измерили при помощи клинического анализатора (AU480, Beckman Coulter, штат Калифорния). ПТ TP в реальном времени и реагент для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) использовали по стандартным протоколам для определения уровней мРНК человеческого TTR в печени. Результаты, показанные в Таблицах 84-87, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы. Уровни мРНК представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы. Уровни белка в плазме представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы в исходном состоянии. Массы тела представляют собой среднее процентное изменение массы от исходного значения до умерщвления для каждой отдельной экспериментальной группы. Представленные массы органов нормализованы к массе тела животного, а затем представлена средняя нормализованная масса органов для каждой экспериментальной группы относительно средней нормализованной массы органов для PBS группы.
Олигонуклеотиды, направленные на человеческий TTR
В Таблицах 84-87 "BL" означает исходное значения измерений, выполненных непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в Таблицах 84 и 85,лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии TTR дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 420915). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и смешанные PS/PO межнуклеозидные линкеры, были еще более эффективными, чем олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc и только PS линкеры.
Примере 9. Структура GalNAc3-3a показана в Примере 39. Структура GalNAc3-7 а показана в Примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в Примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в Примере 62. Структура GalNAc3-19a показана в Примере 70.
Антисмысловое ингибирование человеческого TTR in vivo
Белок TTR в плазме ( % PBS при
мРНК
BL)
Isis №
Доза (мг/кг)
TTR (
% PBS)
3 день
10 день
17 день (после усыпления)
Кластер GalNAc
SEQ ID NO
PBS
н.д.
100
100
114
н.д.
н.д.
106
420915
102
н.д.
н.д.
842
0,6
GalNAc3-За
682883
842
0,6
GalNAc3-7а
682884
842
0,6
GalNAc3-10а
682885
842
0,6
GalNAc3-13а
682886
842
102
Уровни трансаминазы, изменение массы тела и относительные массы органов
Isis №
До за (мг /кг)
ALT (
ед./л)
AST (ед./л)
Масс а
тела ( % BL)
Пече нь ( % PBS)
Селе зенк а(% PBS)
Почк и(% PBS)
де нь
10 де нь
17 де нь
3 ден ь
10 ден ь
17 ден ь
PBS
н.д
104
100
100
100
н.д.
420915
102
103
102
105
842
106
107
135
101
106
105
104
682883
0,6
104
101
112
842
107
116
103
105
103
143
682884
0,6
101
100
130
842
104
103
122
100
105
129
682885
0,6
100
109
109
112
842
102
111
102
102
113
682886
0,6
104
120
101
842
103
105
107
109
100
102
684057
0,6
104
102
843
103
100
112
104
121
108
Пример 87: Продолжительность действия in vivo однократных доз олигонуклеотидов, направленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3
ISIS № 420915 и 660261 (см. Таблицу 83), испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей. ISIS № 420915, 682883 и 682885 (см. Таблицу 83) также испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение
Восьминедельным самцам трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий TTR, ввели однократную подкожную инъекцию 100 мг/кг ISIS № 420915 или
13,5 мг/кг ISIS № 660261. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3, 7, 10, 17, 24 и 39 день после введения дозы. Уровни белка TTR в плазме измерили так, как описано в Примере 86. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней TTR в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням.
Лечение
Восьминедельным самкам трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий TTR, ввели однократную подкожную инъекцию 100 мг/кг ISIS № 420915, 10,0 мг/кг ISIS № 682883 или 10,0 мг/кг 682885. Каждая экспериментальная группа состояла из
4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3, 7, 10, 17, 24 и 39 день после введения дозы. Уровни белка TTR в плазме измерили так, как описано в Примере 86. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней TTR в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням.
Результаты в Таблицах 88 и 89 демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, являются более эффективными и имеют более продолжительное действие, чем исходный олигонуклеотид без конъюгата (ISIS 420915).
Пример 88: Сплайсинг-модулирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SMN, содержащих конъюгат GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 90, испытали на сплайсинг-
модулирование человеческих генов выживаемости мотонейронов (SMN) у мышей.
Модифицированные ASO, направленные на SMN
полученный компанией Gene Tools (Филомат, штат Орегон), a GalNAc3-7b означает структуру GalNAc3-7a, не содержащую часть -NH-Сб-О линкера, как показано ниже:
ISIS № 703421 и 703422 представляют собой морфолино-олигонуклеотиды, при этом каждый нуклеотид из двух олигонуклеотидов представляет собой морфолино-нуклеотид.
Лечение
Шестинедельным трансгенным мышам, экспрессирующим человеческий SMN, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 91, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 2 самцов и 2 самок. Мышей усыпили через 3 дня после введения дозы для определения уровней мРНК человеческого SMN в печени с экзоном 7 и без него, используя П1 IP в реальном времени по стандартным протоколам. Общую РНК измерили при помощи реагента Ribogreen. Уровни мРНК SMN нормализовали к общей мРНК, а затем нормализовали к средним значениям в группе, обработанной солевым раствором. Полученные средние отношения мРНК SMN, содержащей экзон 7, к мРНК SMN, не содержащей экзон 7, представлены в Таблице 91. Результаты демонстрируют, что полностью модифицированные олигонуклеотиды, которые модулируют сплайсинг и содержат конъюгат GalNAc, являются значительно более эффективными для изменения сплайсинга в печени, чем исходные олигонуклеотиды, не содержащие конъюгат GalNAc. Кроме того, эта тенденция сохраняется для химизма многократных модификаций, включая 2'-МОЕ и морфолино-модифицированные олигонуклеотиды.
Солевой раствор
н.д.
1,00
н.д.
н.д.
н.д.
387954
1,65
н.д.
н.д.
844
387954
288
5,00
н.д.
н.д.
844
699819
7,84
GalNAc3-7a
844
699821
7,22
GalNAc3-7a
844
700000
6,91
GalNAc3-la
845
703421
1,27
н.д.
н.д.
844
703422
4,12
GalNAc3-7b
н.д.
844
Пример 89: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на аполипопротеин А (Аро(а)), содержащих конъюгат GalNAc3
Модифицированные ASO, направленные на Аро(а)
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 92, испытали в исследовании дозозависимого ингибирования Аро(а) у трансгенных мышей.
Лечение
Восьминедельным самкам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом шесть доз олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 92, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3-4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали за день до введения первой дозы и еженедельно после введения каждой дозы для
определения уровней белка Аро(а) в плазме. Мышей усыпили через два дня после последнего введения. Уровни мРНК Аро(а) в печени определили при помощи П1 IP в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка Аро(а) в плазме определили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа, и определили уровни трансаминазы в печени. Результаты анализа мРНК и белка в плазме в Таблице 93 представлены как среднее процентное значение для экспериментальной группы относительно группы, обработанной PBS. Уровни белка в плазме дополнительно нормализовали к исходному значению (BL) для группы с PBS. Средние абсолютные уровни трансаминазы и массы тела ( % относительно среднего исходного значения) представлены в Таблице 94.
Уровни мРНК Аро(а) в печени и белка в плазме
Как показано в Таблице 93, лечение олигонуклеотидами снижает уровни мРНК Аро(а) в печени и уровни белка в плазме дозозависимым образом. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был значительно более эффективным с более продолжительным действием, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгат GalNAc. Как показано в Таблице 94, представленные олигонуклеотиды не влияют на уровни трансаминазы и массы тела, что указывает на хорошую переносимость олигонуклеотидов.
Пример 90: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 95, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого транстиретина (TTR) у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий TTR ген.
Лечение
TTR трансгенным мышам один раз в неделю в течение трех недель, в целом три дозы, вводили подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленных в Таблице 96, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Перед введением первой дозы взяли образец крови из хвостовой вены для определения уровней белка TTR в плазме в исходном состоянии (BL). Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения. Уровни белка TTR измерили при помощи клинического анализатора (AU480, Beckman Coulter, штат Калифорния). При помощи ПЦР в реальном времени и реагента для
Олигонуклеотиды, направленные на человеческий TTR
количественного определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) использовали по стандартным протоколам для определения уровней мРНК человеческого TTR в печени. Результаты, показанные в Таблице 96, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы. Уровни мРНК представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы. Уровни белка в плазме представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы в исходном состоянии. "BL" означает исходное значения измерений, выполненных непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в Таблице 96, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии TTR дозозависимым образом. Олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был более эффективным, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 420915), а олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфирный или дезоксиаденозиновый расщепляемый фрагмент, демонстрировали значительное усиление эффективности, по сравнению с исходным соединением, не содержащим конъюгат (см. ISIS № 682883 и 666943 по сравнению с 420915, а также см. Примеры 86 и 87).
o'AdoTesmCeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe
682888
GalNAc3-10a-
o'A(loTesmCeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAlsAeoTeomCesmCesmCe
PS/PO
GalNAc3-10a
846
682889
GalNAc3-13a-
o'AaoTesmCeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe
PS/PO
GalNAc3-13a
846
Антисмысловое ингибирование человеческого TTR in vivo
Легенда для Таблицы 95 представлена в Примере 74. Структура GalNAc3-3 а показана в Примере 39. Структура GalNAc3-7a показана в Примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в Примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в Примере 62.
0,6
682888
GalNAc3-10a
0,6
682889
GalNAc3-13a
Пример 91: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на фактор VII, содержащих конъюгат GalNAc3, у приматов, не являющихся человеком
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 97, испытали в нетерминальном исследовании повышения дозы на антисмысловое ингибирование фактора VII у обезьян.
Лечение
Обезьянам, ранее не подверженным экспериментам, на 0, 15 и 29 день вводили подкожные инъекции повышающихся доз олигонуклеотидов, перечисленных в Таблице 97, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 самцов и 1 самки. Перед введением первой дозы и в различные временные точки после нее брали образцы крови для определения уровней белка фактора VII в плазме. Уровни белка фактора VII определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты, показанные в Таблице 98, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы относительно среднего значения для группы PBS в исходном состоянии (BL), измерения выполнены непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в Таблице 98, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии фактора VII дозозависимым образом, и олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был значительно более эффективным у обезьян, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc.
Таблица 97
Олигонуклеотиды, направленные на фактор VII
Пример 92: Антисмысловое ингибирование в первичных гепатоцитах под действием олигонуклеотидов, направленных на Аро-СШ, содержащих конъюгат GalNAc3
клеток на лунку и добавляли олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 99, направленные
на мышиный АроС-Ш в концентрации 0,46, 1,37, 4,12 или 12,35, 37,04, 111,11 или 333,33
нМ, или 1,00 мкМ. После инкубации с олигонуклеотидами в течение 24 часов клеки
лизировали и очистили общую РНК при помощи RNeasy (Qiagen). Уровни мРНК АроС-Ш
определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного
определения РНК RIBOGREEN(r) (Molecular Probes, Inc.) по стандартным протоколам.
Значения IC50 определили при помощи программы Prism 4 (GraphPad). Результаты
демонстрируют, что независимо от того, является ли расщепляемый фрагмент
фосфодиэфиром или фосфодиэфир-связанным дезоксиаденозином, олигонуклеотиды,
содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем исходный
олигонуклеотид, не содержащий конъюгата.
0'mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCes AesGes CesAe
681272
GalNAc3-3a-
o'mCesAeoGeomCeoTeoTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCeo AeoGes CesAe
< 0,46
849
681273
GalNAc3-3a-
o'AaomCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAds ^es-rt-esvJes ^es-rt-e
1,10
851
683733
mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCes AesGesmCesAeoAao'-GalNAc3-19a
2,50
850
Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, GalNAc3-3a показана в Примере 39, GalNAc3-7a показана в Примере 48, GalNAc3-10a показана в Примере 46, GalNAc3-13a показана в Примере 62 и GalNAc3-19a показана в Примере 70.
Пример 93: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих смешанные крылья и 5'-GalNAc3 конъюгат
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 100, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
TdsTksmCksmCk
699813
GalNAc3-7a-o'TksTdSmCksAdSGdSTdsmCds AdsTds GdsAdSmCds TdsTksmCdsmCk
GalNAc3-7a
852
699815
GalNAc3-7a-o'TeSTkSmCksAdSGdSTdsmCds AdsTds GdsAdSmCds
TdsTksmCksmCe
GalNAc3-7a
852
Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере 48. Нижние индексы: "е" означает 2'-МОЕ модифицированный нуклеозид; "d" означает Р-ГЗ-2'-дезоксирибонуклеозид; "к" означает 6'-(5^)-СНз бициклический нуклеозид (cEt); "s" означает тиофосфатные межнуклеозидные линкеры (PS); "о" означает фосфодиэфирные межнуклеозидные линкеры (РО). Верхний индекс "т" означает 5-метилцитозины.
Лечение
Шести-восьминедельным мышам С57Ы6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 100, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения. Уровни мРНК SRB-1 в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК SRB-1 нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, по сравнению с контрольной группой, обработанной солевым раствором. Как показано в Таблице 101, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом, а гэпмерные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и имеющие крылья, которые представляют собой либо полностью cEt, либо смешанные сахарные модификации, были существенно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата и содержащий полностью cEt модифицированные крылья.
АМК, а средние значения для каждой экспериментальной группы представлены в Таблице
101. Масса тела показана как средний процент массы тела относительно исходной массы
тела ( % BL), измеренный непосредственно перед введением дозы олигонуклеотида.
0,14
106
Пример 94: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих 2'-сахарные модификации и 5'-GalNAc3 конъюгат
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 102, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Верхний индекс "m" означает 2'-0-метил-модифицированный нуклеозид. Полная легенда к таблице представлена в Примере 74. Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере 48.
Лечение
Исследование проводили по протоколу, описанному в Примере 93. Результаты представлены ниже в Таблице 103 и демонстрируют, что и 2'-МОЕ, и 2'-ОМе-модифицированные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем соответствующие исходные олигонуклеотиды, не содержащие конъюгата. Результаты измерений массы тела, трансаминазы в печени, общего билирубина и АМК демонстрируют, что эти соединения хорошо переносятся.
Пример 95: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на SRB-1, содержащих бициклические нуклеозиды и 5'-GalNAc3 конъюгат
Модифицированные ASO, направленные на SRB-1
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 104, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
699782
GalNAc3-7a-
o'TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdSTdsGdsAdsmCdsTdsTksmCk
GalNAc3-7a
823
699783
GalNAc3-3a-
o'TismCisAdSGdSTdSmCdsAdSTdSGdSAdSmCdsTdsTismCi
GalNAc3-3a
823
653621
TismCisAdSGdSTdSmCdsAdSTdSGdSAdSmCdsTdsTismCioAao'-GalNAcs-la
GalNAc3-la
824
439879
TgsmCgsAdsGdsTdsmCdsAdsTd GdsAdsmCdsTdsTgsmCg
н.д.
н.д.
823
699789
GalNAc3-3a-o'TgSmCgSAdSGdSTdSmCdsAdsTd
GdsAdsmCdsTdsTgsmCg
GalNAc3-3a
823
Нижний индекс "g" означает фтор-ГНК нуклеозид, нижний индекс "1" означает закрытый нуклеозид, содержащий мостик 2'-0-СН2-4'. Другие сокращения представлены в легенде таблицы Примера 74. Структура GalNAc3-la показана ранее в Примере 9, структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере
48.
Лечение
Исследование проводили по протоколу, описанному в Примере 93. Результаты представлены ниже в Таблице 105 и демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и различные бициклические нуклеозидные модификации, были значительно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата и содержащий бициклические нуклеозидные модификации. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc и фтор-ГНК модификации, был существенно более эффективным, чем исходное соединение, не содержащее конъюгата и содержащее фтор-ГНК модификации. Результаты измерений массы тела, трансаминазы в печени, общего билирубина и АМК демонстрируют, что эти соединения хорошо переносятся.
105
666905
о,з
699782
о,з
105
699783
0,3
109
653621
0,3
439879
699789
0,3
Пример 96: Связывание белка плазмы антисмысловыми олигонуклеотидами, содержащими группу конъюгатаСаШАсз
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 70, направленные на АроС-III, и олигонуклеотиды в Таблице 106, направленные на Аро(а), испытали в анализе ультрафильтрации для оценки связывания белка в плазме.
ISIS №
Последовательность (от 5' к 3')
Кластер GalNAc3
SEQ ID
494372
TesGesmCesTesmCesmCdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGdsmCdsTdsTesGes
rp rp т/-" les les
н.д.
н.д.
847
693401
TesGeomCeoTeomCeomCdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGdsmCdsTdsTeoGe
rp rp т/-"
o-ies -les
н.д.
н.д.
847
681251
GalNAc3-7a-
0'TesGesmCesTesmCesmCdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGdsmCds TdsTesGesTesTesmCe
GalNAc3-
847
681257
GalNAc3-7a-
o'TesGeomCeoTeomCeomCdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGdsmCds TdsTeoGeoTesTesmCe
GalNAc3-
847
Легенда таблицы представлена в Примере 74. Структура GalNAc3-7a показана ранее в Примере 48.
Элементы для ультрафильтрации Ultrafree-MC (номинальное ограничение молекулярной массы 30000, слабосвязывающая регенерированная целлюлозная мембрана, Millipore, Бедфорд, штат Массачусетс) предварительно кондиционировали с 300 мкл 0,5 % Tween 80 и центрифугировали при 2000 g в течение 10 минут, затем с 300 мкл 300 мкг/мл раствора контрольного олигонуклеотида в ШО и центрифугировали при 2000 g в течение 16 минут. Для оценки неспецифического связывания с фильтрами каждого исследуемого олигонуклеотида из Таблиц 70 и 106, используемых в испытаниях, 300 мкл 250 нг/мл раствора олигонуклеотида в ШО при рН 7,4 поместили в предварительно кондиционированные фильтры и центрифугировали при 2000 г в течение 16 минут. Нефильтрованные и фильтрованные образцы анализировали твердофазным иммуноферментным анализом для определения концентраций олигонуклеотидов. Для получения средней концентрации для каждого образца использовали три экземпляра. Среднюю концентрацию фильтрованного образца относительно нефильтрованного образца использовали для определения процента олигонуклеотида, прошедшего через фильтр без плазмы ( % выделения).
Замороженные образцы цельной плазмы, собранные в КЗ-ЭДТК и полученные от здоровых, не принимающих лекарства людей-добровольцев, яванских макак и мышей CD-1, приобрели у компании Bioreclamation LLC (Вестбери, штат Нью-Йорк). Исследуемые олигонуклеотиды добавляли к 1,2 мл аликвотам плазмы в двух концентрациях (5 и 150 мкг/мл). Аликвоту (300 мкл) каждого маркированного образца плазмы поместили на предварительно кондиционированный фильтровальный элемент и инкубировали при 37°С в течение 30 минут, затем сразу выполнили центрифугирование при 2000 g в течение 16 минут. Аликвоты фильтрованных и нефильтрованных маркированных образцов плазмы анализировали твердофазным иммуноферментным анализом для определения концентрации олигонуклеотида в каждом образце. Использовали три экземпляра каждой концентрации для определения среднего процента связанного и несвязанного олигонуклеотида в каждом образце. Среднюю концентрацию фильтрованного образца относительно концентрации нефильтрованного образца использовали для определения процента олигонуклеотида в плазме, не связанного с белками плазмы ( % несвязанного). Окончательные значения несвязанного олигонуклеотида корректировали на неспецифическое связывание путем деления % несвязанного на % выделения для каждого олигонуклеотида. Окончательные значения % связанного олигонуклеотида определили вычитанием окончательных значений % несвязанного из 100. Результаты показаны в Таблице 107 для двух концентраций испытанного олигонуклеотида (5 и 150 мкг/мл) в плазме каждого вида. Результаты демонстрируют, что группы конъюгата GalNAc не оказывают существенного влияния на связывание белка плазмы. Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие только PS межнуклеозидные линкеры и смешанные PO/PS линкеры, - оба варианта связывают белки плазмы, при этом олигонуклеотиды, содержащие только PS линкеры, связывают белки плазмы в несколько большей степени, чем олигонуклеотиды, содержащие смешанные PO/PS линкеры.
304801
99,2
98,0
99,8
99,5
98,1
97,2
663083
97,8
90,9
99,3
99,3
96,5
93,0
674450
96,2
97,0
98,6
94,4
94,6
89,3
494372
94,1
89,3
98,9
97,5
97,2
93,6
693401
93,6
89,9
96,7
92,0
94,6
90,2
681251
95,4
93,9
99,1
98,2
97,8
96,1
681257
93,4
90,5
97,6
93,7
95,6
92,7
Пример 97: Модифицированные олигонуклеотиды, направленные на TTR, содержащие группу конъюгата GalNAc3
Олигонуклеотиды, представленные в Таблице 108, содержащие конъюгат GalNAc,
предназначены для воздействия на TTR.
Модифицированные олигонуклеотиды, направленные на TTR
mCds Ads Tds Gds Ads Ais Aes Tes mCes mCes mCe
682881
GalNAc3-10a-o'Ado Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds
Ads mCds Ads Tds Gds Ais Ads Aes Tes mCes mCes mCe
GalNAc3-10
846
682882
GalNAc3-13a-o'Ado Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds
Ads mCds Ads Tds Gds Ais Ads Aes Tes mCes mCes mCe
GalNAc3-13
846
684056
Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds
Ads Ads Aes Tes mCes mCes mCeo Ado'-GalNAc3-19a
GalNAc3-19
846
Легенда для Таблицы 108 представлена в Примере 74. Структура GalNAc3-l показана в Примере 9. Структура GalNAc3-3a показана в Примере 39. Структура GalNAc3-7a показана в Примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в Примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в Примере 62. Структура GalNAc3-19a показана в Примере 70.
Пример 98: Оценка провоспалительного действия олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc, в анализе hPMBC
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 109, исследовали на провоспалительное действие в анализе hPMBC, описанном в Примерах 23 и 24. (См. Таблицы 30, 83, 95 и 108, где представлено описание олигонуклеотидов). ISIS 353512 обладает высоким ответом, и его использовали в качестве положительного контроля, а другие олигонуклеотиды описаны в Таблицах 83, 95 и 108. Результаты, представленные в Таблице 109, получены с использованием крови, полученной от одного донора-добровольца. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие смешанные PO/PS межнуклеозидные линкеры, вызывают значительно более слабые провоспалительные реакции, по сравнению с теми же олигонуклеотидами, содержащими только PS линкеры. Кроме того, в этом анализе группа конъюгата GalNAc не оказывает существенного влияния.
420915
802
н.д.
н.д.
682881
1311
GalNAc3-10
682888
0,26
GalNAc3-10
PO/PS
684057
1,03
GalNAc3-19
PO/PS
Пример 99: Связывающие аффинности олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc, в отношении асиалогликопротеинового рецептора
Связывающие аффинности олигонуклеотидов, перечисленных в Таблице 110 (см. Таблицу 76, в которой представлено описание олигонуклеотидов), в отношении асиалогликопротеинового рецептора испытали в анализе конкурентного связывания рецепторов. Конкурирующий лиганд, al-кислый гликопротеин (AGP), инкубировали в 50 мМ ацетатно-натриевом буфере (рН 5) с 1 ед. нейраминидазы-агарозы в течение 16 часов при 37 °С, а > 90 % дезалилирование подтвердили анализом с сиаловой кислотой или эксклюзионной хроматографией (SEC). Для йодирования АГФ использовали монохлорид йода по способу, описанному авторами Atsma et al. (см. J Lipid Res. январь 1991 г.; 32(1): 173-81.) В этом способе дезалилированный а 1-кислый гликопротеин (de-AGP) добавляли к 10 мМ хлориду йода, Na125I и 1 М глицина в 0,25 М NaOH. После инкубации в течение 10 минут при комнатной температуре, 1251 -меченный de-AGP отделили от свободного 1251 двукратным концентрированием смеси с использованием спин-колонки с номинальным отсечением по молекулярной массе 3 кДа. Белок испытали на эффективность мечения и чистоту на системе ВЭЖХ, оснащенной колонкой Agilent SEC-3 (7,8x300 мм) и счетчиком B-RAM. Конкуретные исследования с использованием 1251 -меченного de-AGP и ASO, содержащих различные GalNAc-кластеры, выполнили следующим образом. Человеческие клетки HepG2 (106 клеток/мл) поместили на 6-луночные планшеты в 2 мл соответствующей питательной среды. Использовали среду MEM с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина и 10 мМ HEPES. Клетки выращивали в течение 16-20 часов при 37°Сс5%и10% СО2, соответственно. Перед экспериментом клетки промыли средой без FBS. Клетки выращивали в течение 30 минут при 37 °С с 1 мл конкурентной смеси, содержащей соответствующую питательную среду с
2 % FBS, 10"8 M 125I -меченным de-AGP и ASO, содержащим GalNAc-кластер в концентрациях в диапазоне от 10"11 до 10"5 М. Неспецифическое связывание определили в присутствии 10"2 М GalNAc сахара. Клетки дважды промыли средой без FBS для удаления несвязанного 1251 -меченного de-AGP и конкурирующего GalNAc ASO. Клетки лизировали с использованием буфера RLT производства компании Qiagen, содержащего 1 % В-меркаптоэтанола. Лизаты перенесли в круглодонные аналитические пробирки после быстрого 10-минутного цикла замораживания/оттаивания, и анализировали на у-счетчике. Неспецифическое связывание вычли, а затем разделили импульсы белка 1251 на значение импульсов при самой низкой концентрации GalNAc-ASO. Кривые ингибирования построили по уравнению моносайтового конкурентного связывания, используя алгоритм нелинейной регрессии для расчета связывающей аффиности (KD).
Результаты в Таблице 110 были получены в экспериментах, выполненных в пять разных дней. Результаты для олигонуклеотидов, отмеченных верхним индексом "а", представляют собой средние значения экспериментов, выполненных в два разных дня. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата GalNAc у 5'-конца, связывают асиалогликопротеиновый рецептор человеческих клеток HepG2 с аффинностью, которая в 1,5-16 раз больше, чем для олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгата GalNAc у 3' -конца.
677841я
GalNAc3-19
60,8
Пример 100: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгата GalNAc, направленных на Аро(а), in vivo
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 111а, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение
Каждой самке трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий Аро(а), один раз в неделю, в целом 6 доз, вводили подкожную инъъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленной в Таблице 111b, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходных уровней белка Аро(а) в плазме, а также через 72 часа, 1 неделю и 2 недели после введения первой дозы. Дополнительные пробы крови брали через 3 недели, 4 недели, 5 недель и 6 недель после введения первой дозы. Уровни белка Аро(а) в плазме измеряли при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты в Таблице 111b представлены как средний процент от уровней белка Аро(а) в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням ( % BL). Результаты показывают, что олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата GalNAc, демонстрируют эффективное снижение экспрессии Аро(а). Этот мощный эффект наблюдали для олигонуклеотида,
Пример 101: Антисмысловое ингибирование олигонуклеотидами, содержащими кластер GalNAc, связанный через стабильный фрагмент
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 112, испытали на ингибирование экспрессии мышиного АРОС-Ш in vivo. Мышам С57В1/6 ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 112, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Каждой мыши, обработанной ISIS 440670, вводили дозу 2, 6, 20 или 60 мг/кг. Каждой мыши, обработанной 680772 или 696847, вводили 0,6, 2, 6 или 20 мг/кг. Группа конъюгата GalNAc в ISIS 696847 связана через стабильный фрагмент, тиофосфатную связь, вместо легко расщепляемой фосфодиэфир-содержащей связи. Животных усыпили через 72 часа после введения дозы. Уровни мРНК АРОС-Ш в печени измерили при помощи 1ТЦР в реальном времени. Уровни мРНК АРОС-III нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Результаты
представлены в Таблице 112 как средний процент уровней мРНК АРОС-Ш для каждой экспериментальной группы, по сравнению с контрольной группой, обработанной солевым раствором. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата GalNAc, были существенно более эффективными, чем олигонуклеотид, не содержащий группу конъюгата. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий группу конъюгата GalNAc, связанную с олигонуклеотидом через расщепляемый фрагмент (ISIS 680772), был еще более эффективным, чем олигонуклеотид, содержащий группу конъюгата GalNAc, связанную с олигонуклеотидом через стабильный фрагмент (ISIS 696847).
Пример 102: Распределение в печени антисмысловых олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc
Оценили распределение в печени ISIS 353382 (см. Таблицу 36), который не содержит конъюгата GalNAc, и ISIS 655861 (см. Таблицу 36), который содержит конъюгат GalNAc. Самцам мышей balb/c ввели однократную подкожную инъекцию ISIS 353382 или 655861 в дозе, перечисленной в Таблице 113. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных, за исключением группы с дозой 18 мг/кг для ISIS 655861, которая состояла из 2 животных. Животных усыпили через 48 часов после введения дозы для определения распределения олигонуклеотидов в печени. Для измерения количества молекул антисмыслового олигонуклеотида на клетку, метку трис-бипиридина рутения (II) (MSD TAG, Meso Scale Discovery) конъюгировали с олигонуклеотидным образцом, используемым для обнаружения антисмысловых олигонуклеотидов. Результаты, представленные в Таблице 113, представляют собой средние концентрации олигонуклеотида для каждой экспериментальной группы в единицах измерения миллионов молекул олигонуклеотида на клетку. Результаты демонстрируют, что при равных дозах олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, содержался в более высоких концентрациях в целом в печени и в гепатоцитах, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, содержался в более низких концентрациях в непаренхиматозных клетках печени, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc. И тогда как концентрации ISIS 655861 в гепатоцитах и непаренхиматозных клетках печени были одинаковыми в расчете на одну клетку, содержание гепатоцитов в печени составляет приблизительно 80 % по объему. Следовательно, основная часть олигонуклеотида ISIS 655861, содержащегося в печени, находилась в гепатоцитах, тогда как основная часть олигонуклеотида ISIS 353382, содержащегося в печени, находилась в непаренхиматозных клетках печени.
17,3
4,5
34,0
23,6
6,6
65,6
29,1
11,7
80,0
73,4
14,8
98,0
89,6
18,5
119,9
0,5
2,6
2,9
3,2
6,2
7,0
8,8
655861
19,1
25,1
28,5
44,1
48,7
55,0
76,6
82,3
77,1
Пример 103: Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, направленных на АРОС-Ш, содержащих конъюгат GalNAc3
Модифицированные ASO, направленные на АРОС-Ш
Структура GalNAc3-3a показана в примере 39, a GalNAc3-19a показана в Примере 70.
Лечение
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 114, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Самкам трансгенных мышей, экспрессирующим человеческий АРОС-Ш, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 114, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови из брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3, 7, 14, 21, 28, 35 и 42 день после введения дозы. Уровни триглицеридов и белка АРОС-Ш в плазме измеряли так, как описано в Примере 20. Результаты в Таблице 115 представлены как средний процент уровней триглицеридов и АРОС-Ш в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Сравнение результатов в Таблице 71 примера 79 с результатами, представленными ниже в таблице 115, демонстрирует, что олигонуклеотиды, содержащие смесь фосфодиэфирных и тиофосфатных межнуклеозидных линкеров, обладают увеличенной продолжительностью действия, чем эквивалентные олигонуклеотиды, содержащие только тиофосфатные межнуклеозидные линкеры.
GalNAc3-За
663084
GalNAc3-19a
679241
Соединение 120 имеется в продаже, а синтез соединения 126 описан в Примере 49. Соединение 120 (1 г, 2,89 ммоль), HBTU (0,39 г, 2,89 ммоль) и HOBt (1,64 г, 4,33 ммоль) растворили в ДМФА (10 мл) и добавили ЛуУ-диизопропилэтиламин (1,75 мл, 10,1 ммоль). Примерно через 5 минут в реакционную смесь добавили бензиловый эфир аминогексановой кислоты (1,36 г, 3,46 ммоль). Через 3 часа реакционную смесь вылили в 100 мл 1 М раствора NaHS04 и экстрагировали 2 х 50 мл этилацетата. Органические слои объединили и промыли 3 х 40 мл насыщенного раствора NaHC03 и 2 х насыщенным солевым раствором, высушили при помощи Na2S04, отфильтровали и концентрировали. Продукт очистили силикагелевой колоночной хроматографией (ДХМ:ЕА:гексаны, 1:1:1) с получением соединения 231. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 231 (1,34 г, 2,438 ммоль) растворили в дихлорметане (10 мл) и добавили трифторуксусную кислоту (10 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и выпарили вместе с толуолом (3 х 10 мл). Остаток высушили при пониженном давлении с получением соединения 232 в виде трифторацетатной соли. Синтез соединения 166 описан в Примере 54. Соединение 166 (3,39 г, 5,40 ммоль) растворили в ДМФА (3 мл). Раствор соединения
Пример 105: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-25
232 (1,3 г, 2,25 ммоль) растворили в ДМФА (3 мл) и добавили ЛуУ-иизопропилэтиламин (1,55 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем вылили в воду (80 мл), а водный слой экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Органическую фазу отделили и промыли насыщенным водным раствором NaHC03 (3 х 80 mL), 1 М NaHS04 (3 х 80 мл) и насыщенным солевым раствором (2 х 80 мл), затем высушили (Na2S04), отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией с получением соединения 233. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 233 (0,59 г, 0,48 ммоль) растворили в метаноле (2,2 мл) и этилацетате (2,2 мл). Добавили палладий на углероде (10 масс. % Pd/C, влажный, 0,07 г) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 3 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и концентрировали с получением карбоновой кислоты. Карбоновую кислоту (1,32 г, 1,15 ммоль, не содержащая кластера кислота) растворили в ДМФА (3,2 мл). К ней добавили ЛуУ-диизопропилэтиламин (0,3 мл, 1,73 ммоль) и PFP-ТФК (0,30 мл, 1,73 ммоль). Через 30 минут перемешивания при комнатной температуре реакционную смесь вылили в воду (40 мл) и экстрагировали EtOAc (2 х 50 мл). Выполнили стандартную процедуру выделения продукта, как описано выше, с получением соединения 234. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Олигонуклеотид 235 получили по общему способу, описанному в Примере 46. Кластерная часть GalNAc2 (GalNAc2-24a) группы конъюгата GalNAc2-24 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAc2-24 (GalNAc2-24a-CM) представлена ниже:
О 8Эе
з; ||
F f OLIGO l-O-P-O-Itm-NH,
О F4yS^-r-F ОН
1. Борвтный буфер, ДМСО. рН В .5, комн. т-ра
2. аммиак водн., комн. т-ра
но..
-м-^о-^ЁЮ-н; qligq J
Синтез соединения 166 описан в Примере 54. Олигонуклеотид 236 получили по общему способу, описанному в Примере 46.
Альтернативно, олигонуклеотид 236 синтезировали по схеме, изображенной ниже, а соединение 238 использовали для получения олигонуклеотида 236 по способам, описанным в Примере 10.
4 PFP-ТФК
TEA. Ацетон итрил
тетрвзол. 1-метилимидвзол. ДМФА 2-циа ноогтилтетра иэоп роп илфоофордиа м идит
Синтез
с-л и гс-н у кл E-rj-т ида
он он
AcHN
Jr^JbTj-[ опор ]
236
Кластерная часть GalNAci (GalNAci-25a) группы конъюгата GalNAci-25 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, присутствующим в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAci-25 (GalNAci-25a-CM) представлена ниже:
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблицах 116 и 117, испытали в дозозависимых исследованиях антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Лечение
Модифицированные олигонуклеотиды, направленные на SRB-1
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию 2, 7 или 20 мг/кг ISIS № 440762; или 0,2, 0,6, 2, 6 или 20 мг/кг ISIS № 686221, 686222 или 708561; или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 72 часа после последнего введения. Уровни мРНК SRB-1 в печени измерили при помощи П1 IP в реальном времени. Уровни мРНК SRB-1 нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Антисмысловые олигонуклеотиды, снижающие уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом, а также результаты ED50 представлены в Таблицах 116 и 117. Хотя в предыдущих исследованиях показано, что трехвалентные GalNАс-сопряженные олигонуклеотиды существенно более эффективны, чем двухвалентные GalNAc-сопряженные олигонуклеотиды, которые в свою очередь существенно более эффективны, чем одновалентные GalNAc-сопряженные олигонуклеотиды (см., например, Khorev et al., Bioorg. & Med. Chem., т. 16, 5216-5231 (2008)), обработка антисмысловыми олигонуклеотидами, содержащими одновалентные, двухвалентные и трехвалентные кластеры GalNAc, приводит к снижению уровней мРНК SRB-1 с одинаковой эффективностью, как показано в Таблицах 116 и 117.
68622
GalNAc3-13a-
o'AdoTksmCksAdsGdsTdsmCdsAdSTdsGdsAds
GalNAc3-13a
0,41
827
mCdsTdsTkSmCk
Легенда к таблице представлена в Примере 93. Структура GalNAc3-13a показана в примере 62, а структура GalNAc2-24 показана в Примере 104.
105.
Оценили также концентрации олигонуклеотидов, представленных в Таблицах 116 и 117, в печени, используя способы, описанные в Примере 75. Результаты, показанные ниже в Таблицах 117а и 117Ь, представляют собой средние значения общего содержания антисмысловых олигонуклеотидов в тканях для каждой экспериментальной группы, измеренные по УФ, в единицах измерения мкг олигонуклеотида на грамм ткани печени. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие группу конъюагата GalNAc, накапливаются в печени в существенно более высоких количествах, чем при той же дозе олигонуклеотида, не содержащего группу конъюгата GalNAc. Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие один, два или три лиганда GalNAc в своих соответствующих группах конъюгата, накапливаются в печени в равных количествах. Этот результат является неожиданным с учетом данных, представленных выше в литературном источнике Khorev et al., и он согласуется с данными активности, представленными выше в Таблицах 116 и 117.
Таблица 117а
Олигонуклеотид 239 синтезировали связыванием соединения 47 (см. Пример 15) с кислотой 64 (см. Пример 32), используя HBTU и DIEA в ДМФА. Полученное амид-содержащее соединение фосфитилировали, затем присоединили к 5'-концу олигонуклеотида по способам, описанным в Примере 10. Кластерная часть GalNAci (GalNAci-26a) группы конъюгата GalNAci-26 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAci-26 (GalNAci-26a-CM) представлена ниже:
Для присоединения группы конъюгата GalNAci к 3'-концу олигонуклеотида амид, образованный по реакции соединений 47 и 64, присоединили к твердой подложке по способам, описанным в Примере 7. Затем выполнили синтез олигонуклеотида по способам, описанным в Примере 9, с получением олигонуклеотида 240.
Кластерная часть GalNAci (GalNAci-27a) группы конъюгата GalNAci-27 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAci-27 (GalNAci-27a-CM) представлена ниже:
Пример 108: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгата GalNAc, направленных на Аро(а), in vivo
Модифицированные ASO, направленные на АРО(а)
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 118, испытали в исследовании однократной дозы на мышах.
Самцам трансгенных мышей, экспрессирующим человеческий Аро(а), ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленных в Таблице 119, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходных уровней белка Аро(а) в плазме, а также через 1 неделю после введения первой дозы. Образцы крови брали дополнительно еженедельно в течение около 8 недель. Уровни белка Аро(а) в плазме измеряли при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты в Таблице 119 представлены как средний процент от уровней белка Аро(а) в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням ( % BL). Результаты показывают, что антисмысловые олигонуклеотиды снижают экспрессию белка Аро(а). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие группу конъюгата GalNAc, демонстрируют еще более эффективное снижение экспрессии Аро(а), чем олигонуклеотид не содержащий группу конъюгата.
Олигонуклеотид 241 синтезировали по таким же способам, как описаны в Примере 71, с получением фосфорамидитного промежуточного соединения, после чего выполнили приемы, описанные в Примере 10, для синтеза олигонуклеотида. Кластерная часть GalNAci (GalNAci-28a) группы конъюгата GalNAci-28 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAci-28 (GalNAci-28a-CM) представлена ниже:
Для присоединения группы конъюгата GalNAci к 3'-концу олигонуклеотида использовали такие же способы, как описаны в Примере 71, с получение гидроксильного промежуточного соединения, которое затем присоединили к твердой подложке по
способам, описанным в Примере 7. Затем выполнили синтез олигонуклеотида по способам, описанным в Примере 9, с получением олигонуклеотида 242.
он но /
Кластерная часть GalNAci (GalNAci-29a) группы конъюгата GalNAci-29 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. Структура GalNAci-29 (GalNAci-29a-CM) представлена ниже:
он но/
Пример 110: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-30
TMSOTf
QTBDPS
АсО/
АсО AcHN
243
1. NH3rMeOH
2. DMTrCl
3. АсгО, рут
. _ ODMTr AcO /
AcO AcHN
244
,OTBDPS
1. TBAF
2. Фокритилироввние
Li-0 f AcOA^r-V--1-
AcHN
245
*| , Связывание с 5" концам ASO
JOCE
i 2 Снятие защиты и очистка АБО
с применением методовочистки Е- режиме DMT-эп
ОН НО /
VLo .
НОЛ^г--^с AcHN
О Y
Oligo
Олигонуклеотид 246, содержащий группу конъюгата GalNAci-ЗО, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азид о, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAci (GarNAci-ЗОа) группы конъюгата GalNAci-ЗО может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации Y представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации Y представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAci-ЗОа представлена ниже: ОН
но /
AcHN
Пример 111: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc2-31 или GalNAc2-32
DMTrO.. 2, Фосфитилирование
DMTrO''
ОСЕ Связывание с 5" концом АВО
-0-R
24В
DMTrO Q /
DMTrO О Y
249
1. Удаление групп DMTr
2. Связывание амидита 24 &
Олигонуклеотид 250, содержащий группу конъюгата GalNAc2-31, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азид о, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAc2
(GalNAc2-31a) группы конъюгата GalNAc2-31 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5' -конца олигонуклеотида, представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5' -конца олигонуклеотида, представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAc2-31a представлена ниже:
Синтез олигонуклеотида, содержащего конъюгат GalNAc2-32, представлен ниже.
HtX,
-он
но'
247
1. DMTrCI
2. Алл ил Br
3. ОвОд, NalOa
4. NaBH^ DMTrO..
5. Фосфитилирование-
DMTrO"
251
1, Связывание с &' кс-нцс-м ASQ
2, Удаление групп DMTr
3, Связывание амидите 2.4 &
0^ 4-, Снятие защиты и очистка A SO
Р-NfiPrJ^ с использованием метопов очистки
СЕО в режиме DMT-n-n
но/он
Y s
Олигонуклеотид 252, содержащий группу конъюгата GalNAc2-32, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAc2 (GalNAc2-32a) группы конъюгата GalNAc2-32 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных групп конъюгата. В некоторых вариантах реализации Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5' -конца олигонуклеотида, представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5' -конца олигонуклеотида, представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAc2-32a представлена ниже:
но/он
HO-V-T-V'
Пример 112: Модифицированные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAci
AcHN
Олигонуклеотиды в Таблице 120, направленные на SRB-1, были синтезированы с группой конъюгата GalNAci для дополнительной проверки эффективности олигонуклеотидов, содержащих группы конъюгата, которые содержат один лиганд GalNAc.
713845
Ges ШСео Teo Teo ШСео Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Teo mCeo mCes Tes Teo'-GalNAci-27a
GalNAc i-27a
829
713846
Ges ШСео Teo Teo ШСео Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Teo mCeo mCes Tes Te0 Ado'-GalNAci-27a
GalNAc i-27a
830
713847
Ges mCes Tes Tes mCes Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Tes mCes mCes Tes Teo'-GalNAci-29a
GalNAc i-
29a
829
713848
Ges ШСео Teo Teo ШСео Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Teo mCeo mCes Tes Teo'-GalNAci-29a
GalNAc i-
29a
829
713849
Ges mCes Tes Tes mCes Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Tes mCes mCes Tes Teo Ado'-GalNAci-29a
GalNAc i-
29a
830
713850
Ges ШСео Teo Teo ШСео Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads
mCds Tds Teo mCeo mCes Tes Teo Ado'-GalNAci-29a
GalNAc i-
29a
830
Пример 113: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на CFB
Модифицированные ASO, направленные на CFB
Структура GalNAc3-3a показана ранее в Примере 39.
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 121, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого фактора комплемента В (CFB) у мышей.
Каждой трансгенной мыши, экспрессирующей человеческий CFB (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн), один раз в неделю в течение 3 недель (в целом 4 дозы) вводили подкожную инъъекцию олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 122, или солевого раствора. Четырем экспериментальным группам, которым вводили ISIS № 588540, вводили 6, 12, 25 или 50 мг/кг на дозу. Четырем экспериментальным группам, которым вводили ISIS № 687301, вводили 0,25, 0,5, 2 или 6 мг/кг на дозу. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей усыпили через 2 дня после последнего введения дозы для определения уровней человеческого CFB и мРНК циклофилина в печени и почках, используя П1 IP в реальном времени по стандартным протоколам. Уровни мРНК CFB нормализовали к уровням циклофилина, а средние значения для каждой экспериментальной группы использовали для определения дозы, которая обеспечивает достижение 50 % ингибирования экспрессии транскрипта человеческого CFB (ED50). Результаты представляют собой средине значения для четырех экспериментов, проведенных с двумя разными наборами праймерных зондов, и представлены в Таблице 122.
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, используя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин, азот мочевины крови (АМК) и массу тела. Результаты демонстрируют, что экспериментальные группы не демонстрируют существенных отличий от группы,
Пример 114: Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, направленных на CFB
Олигонуклеотиды, перечисленные в Таблице 123, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого CFB у мышей.
Лечение
Каждой трансгенной мыши, экспрессирующей человеческий CFB (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн), ввели однократную подкожную инъекцию 0,6, 1, 6 или 18 мг/кг олигонуклеотида, перечисленного в Таблице 123, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 или 5 животных. Мышей усыпили через 72 часа после введения дозы для определения уровней человеческого CFB и мРНК циклофилина в печени, используя П1 IP в реальном времени по стандартным протоколам. Уровни мРНК CFB нормализовали к уровням циклофилина, а средние значения для каждой экспериментальной группы использовали для определения дозы, которая обеспечивает достижение 50 % ингибирования экспрессии транскрипта человеческого CFB (ED50). Результаты представлены в Таблице 123.
Пример 115: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов, которые имели аналогичные условия культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицировали с использованием электропорации с 4500 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ГЩР в реальном времени. Набор человеческих праймерных зондов RTS3459 (прямая последовательность AGTCTCTGTGGCATGGTTTGG, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш NO: 810; обратная последовательность
GGGCGAATGACTGAGATCTTG, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 811; последовательность зонда TACCGATTACCACAAGCAACCATGGCA, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 812) был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды, указанные в представленных ниже таблицах, были сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Гэпмеры 5-10-5 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины. "Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ ГО NO: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
Таблица 124
Ингибирование мРНК CFB 5-10-5 МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ ГО NO: 1 и 2
ISIS №
SEQ ID
NO: 1 сайт иниц
нации
SEQ ID
NO: 1 сайт терми нации
Область мишень
Последователь ность
ИНГИ
биро вани я
SEQ ID
NO: 2 сайт
иници ации
SEQID NO: 2 сайт термина ции
SEQID NO:
53260 8
Экзон 1
GCTGAGCTG CCAGTCAAG GA
1741
1760
53260 9
Экзон 1
GGCCCCGCT GAGCTGCCA GT
1747
1766
53261 0
Экзон 1
CGGAACATC CAAGCGGGA GG
1766
1785
53261 1
Экзон 1
CTTTCCCGG ААСАТССАА GC
1772
1791
53261 2
100
119
Экзон 1
ATCTGTGTT CTGGCACCT GC
1821
1840
53261 3
148
167
Экзон 1
GTCACATTC ССТТССССТ GC
1869
1888
53261 4
154
173
Экзон 1
GACCTGGTC АСАТТСССТ ТС
1875
1894
53261 5
160
179
Экзон 1
GACCTAGAC CTGGTCACA ТТ
1881
1900
53261 6
166
185
Экзон 1
ACTCCAGAC CTAGACCTG GT
1887
1906
53261 7
172
191
Экзон 1
GCTGAAACT CCAGACCTA GA
1893
1912
53261
178
197
Экзон 1
GTCCAAGCT
1899
1918
GAAACTCCA GA
53261 9
184
203
Экзон 1
CTCAGTGTC CAAGCTGAA АС
1905
1924
53262 0
246
265
Экзон 1
AGGAGAGAA GCTGGGCCT GG
1967
1986
53262 1
252
271
Экзон 1
GAAGGCAGG AGAGAAGCT GG
1973
1992
53262 2
336
355
Сочлен ение экзона 1-2
GTGGTGGTC АСАССТССА GA
н.д.
н.д.
53262 3
381
400
Экзон 2
CCCTCCAGA GAGCAGGAT СС
2189
2208
53262 4
387
406
Экзон 2
ТСТАССССС ТССAGAGAG СА
2195
2214
53262 5
393
412
Экзон 2
TTGATCTCT ACCCCCTCC AG
2201
2220
53262 6
417
436
Экзон 2
TGGAGAAGT CGGAAGGAG CC
2225
2244
53262 7
423
442
Экзон 2
CCCTCTTGG AGAAGTCGG AA
2231
2250
53262 8
429
448
Экзон 2
GCCTGGCCC TCTTGGAGA AG
2237
2256
53262 9
435
454
Экзон 2
TCCAGTGCC TGGCCCTCT TG
2243
2262
53263
458
477
Экзон 2
AGAAGCCAG
2266
2285
AAGGACACA CG
53263 1
464
483
Экзон 2
ACGGGTAGA AGCCAGAAG GA
2272
2291
53263 2
480
499
Экзон 2
CGTGTCTGC ACAGGGTAC GG
2288
2307
53263 3
513
532
Экзон 2
AGGGTGCTC CAGGACCCC GT
2321
2340
53263 4
560
579
Сочлен ение экзона 2-3
TTGCTCTGC ACTCTGCCT ТС
н.д.
н.д.
53263 5
600
619
Экзон 3
TATTCCCCG TTCTCGAAG ТС
2808
2827
53263 6
626
645
Экзон 3
CATTGTAGT AGGGAGACC GG
2834
2853
53263 7
632
651
Экзон 3
САСТСАСАТ TGTAGTAGG GA
2840
2859
53263 8
638
657
Экзон 3
ТСТСАТСАС TCACATTGT AG
2846
2865
53263 9
644
663
Экзон 3
AAGAGATCT САТСАСТСА СА
2852
2871
53264 0
650
669
Экзон 3
AGTGGAAAG AGATCTCAT СА
2858
2877
53264 1
656
675
Экзон 3
CATAGCAGT GGAAAGAGA ТС
2864
2883
53264
662
681
Экзон 3
AACCGTCAT
2870
2889
AGCAGTGGA АА
53264 3
668
687
Экзон 3
GAGTGTAAC CGTCATAGC AG
2876
2895
53264 4
674
693
Экзон 3
CCCGGAGAG TGTAACCGT СА
2882
2901
53264 5
680
699
Экзон 3
CAGAGCCCC GGAGAGTGT АА
2888
2907
53264 6
686
705
Экзон 3
GATTGGCAG AGCCCCGGA GA
2894
2913
53264 7
692
711
Экзон 3
AGGTGCGAT TGGCAGAGC СС
2900
2919
53264 8
698
717
Экзон 3
CTTGGCAGG TGCGATTGG СА
2906
2925
53264 9
704
723
Экзон 3
САТТСАСТТ GGCAGGTGC GA
2912
2931
53265 0
729
748
Экзон 3
ATCGCTGTC TGCCCACTC СА
2937
2956
53265 1
735
754
Экзон 3
TCACAGATC GCTGTCTGC СС
2943
2962
53265 2
741
760
Экзон 3
CCGTTGTCA CAGATCGCT GT
2949
2968
53265 3
747
766
Сочлен ение экзона 3-4
CCCGCTCCG TTGTCACAG AT
н.д.
н.д.
53265
753
772
Сочлен
CAGTACCCC
н.д.
н.д.
ение экзона 3-4
GCTCCGTTG ТС
53265 5
759
778
Сочлен ение экзона 3-4
TTGGAGCAG TACCCCGCT СС
н.д.
н.д.
53265 6
789
808
Экзон 4
АССТТССТТ GTGCCAATG GG
3152
3171
53265 7
795
814
Экзон 4
CTGCCCACC TTCCTTGTGC С
3158
3177
53265 8
818
837
Экзон 4
CGCTGTCTT CAAGGCGGT АС
3181
3200
53265 9
835
854
Экзон 4
GCTGCAGTG GTAGGTGAC GC
3198
3217
53266 0
841
860
Экзон 4
CCCCCGGCT GCAGTGGTA GG
3204
3223
53266 1
847
866
Экзон 4
GGTAAGCCC CCGGCTGCA GT
3210
3229
53266 2
853
872
Экзон 4
ACGCAGGGT AAGCCCCCG GC
3216
3235
53266 3
859
878
Экзон 4
GGAGCCACG CAGGGTAAG СС
3222
3241
53266 4
866
885
Экзон 4
GCCGCTGGG AGCCACGCA GG
3229
3248
53266 5
891
910
Экзон 4
CAAGAGCCA CCTTCCTGA СА
3254
3273
53266
897
916
Экзон 4
CCGCTCCAA GAGCCACCT
3260
3279
53266
903
922
Экзон 4
TCCGTCCCG С ТС С A AG AG
3266
3285
53266 8
909
928
Экзон 4
GAAGGCTCC GTCCCGCTC СА
3272
3291
53266
915
934
Экзон 4
TGGCAGGAA GGCTCCGTC
3278
3297
53267 0
921
940
Сочлен ение экзона 4-5
GAGTCTTGG CAGGAAGGC ТС
н.д.
н.д.
53267 1
927
946
Сочлен ение экзона 4-5
ATGAAGGAG TCTTGGCAG GA
н.д.
н.д.
53267
956
975
Экзон 5
CTTCGGCCA CCTCTTGAG
3539
3558
53267
962
981
Экзон 5
GGAAAGCTT CGGCCACCT
3545
3564
53267 /1
968
987
Экзон 5
AAGACAGGA AAGCTTCGG
3551
3570
53267
974
993
Экзон 5
TCAGGGAAG ACAGGAAAG
3557
3576
53267
996
1015
Экзон 5
TCGACTCCT TCTATGGTC
3579
3598
53267 7
1033
1052
Сочлен ение
CTTCTGTTGT TCCCCTGGG
н.д.
н.д.
иаци и
53268 6
1135
1154
Экзон 6
ACACTTTTTG GCTCCTGTG А
3819
3838
53268 7
1141
1160
Экзон 6
GACTAGACA CTTTTTGGCT С
3825
3844
53268 8
1147
1166
Экзон 6
TAAGTTGAC TAGACACTT ТТ
3831
3850
53268 9
1153
1172
Экзон 6
СТСААТТАА GTTGACTAG АС
3837
3856
53269 0
1159
1178
Сочлен ение экзона 6-7
САССТТСТСА ATTAAGTTG А
3843
3862
53269 1
1165
1184
Сочлен ение экзона 6-7
ACTTGCCAC СТТСТСААТТ А
н.д.
н.д.
53269 2
1171
1190
Сочлен ение экзона 6-7
АССАТААСТ TGCCACCTTC Т
н.д.
н.д.
53269 3
1177
1196
Экзон 7
СТТСАСАСС ATAACTTGC СА
4153
4172
53269 4
1183
1202
Экзон 7
TCTTGGCTTC АСАССATАА С
4159
4178
53269 5
1208
1227
Экзон 7
ATGTGGCAT ATGTCACTA GA
4184
4203
53269 6
1235
1254
Экзон 7
CAGACACTT TGACCCAAA
4211
4230
53269 7
1298
1317
Сочлен ение экзона 7-8
GGTCTTCAT AATTGATTTC А
н.д.
н.д.
53269 8
1304
1323
Сочлен ение экзона 7-8
ACTTGTGGT СТТСАТААТТ G
н.д.
н.д.
53269 9
1310
1329
Сочлен ение экзона 7-8
АСТТСААСТТ GTGGTCTTC А
н.д.
н.д.
53270 0
1316
1335
Экзон 8
TCCCTGACTT CAACTTGTG G
4609
4628
53270 1
1322
1341
Экзон 8
TGTTAGTCCC TGACTTCAA С
4615
4634
53270 2
1328
1347
Экзон 8
TCTTGGTGTT AGTCCCTGA С
4621
4640
100
53270 3
1349
1368
Экзон 8
TGTACACTG CCTGGAGGG СС
4642
4661
101
53270 4
1355
1374
Экзон 8
TCATGCTGT ACACTGCCT GG
4648
4667
102
53270 5
1393
1412
Экзон 8
GTTCCAGCC TTCAGGAGG GA
4686
4705
103
53270 6
1399
1418
Экзон 8
GGTGCGGTT CCAGCCTTC AG
4692
4711
104
53270 7
1405
1424
Экзон 8
ATGGCGGGT GCGGTTCCA GC
4698
4717
105
53270 8
1411
1430
Экзон 8
GATGACATG GCGGGTGCG GT
4704
4723
106
53270 9
1417
1436
Экзон 8
GAGGATGAT GACATGGCG GG
4710
4729
107
53271 0
1443
1462
Сочлен ение экзона 8-9
CCCATGTTGT GCAATCCAT С
н.д.
н.д.
108
53271 1
1449
1468
Экзон 9
TCCCCGCCC ATGTTGTGC АА
5023
5042
109
53271 2
1455
1474
Экзон 9
ATTGGGTCC CCGCCCATG ТТ
5029
5048
53271 3
1461
1480
Экзон 9
ACAGTAATT GGGTCCCCG СС
5035
5054
111
53271 4
1467
1486
Экзон 9
TCAATGACA GTAATTGGG ТС
5041
5060
112
53271 5
1473
1492
Экзон 9
АТСТСАТСА ATGACAGTA AT
5047
5066
113
53271 6
1479
1498
Экзон 9
TCCCGGATC TCATCAATG АС
5053
5072
114
53271 7
1533
1552
Сочлен ение
экзона 9-10
ACATCCAGA ТААТССТССС Т
н.д.
н.д.
115
53271 8
1539
1558
Сочлен ение
экзона 9-10
ACATAGACA TCCAGATAA ТС
н.д.
н.д.
116
53271
1545
1564
Сочлен
ССАААСАСА
н.д.
н.д.
117
ение экзона 9-10
TAGACATCC AG
53272 0
1582
1601
Экзон 10
AGCATTGAT GTTCACTTG GT
5231
5250
118
53272 1
1588
1607
Экзон 10
AGCCAAAGC ATTGATGTTC A
5237
5256
119
53272 2
1594
1613
Экзон 10
CTTGGAAGC CAAAGCATT GA
5243
5262
120
53272 3
1600
1619
Экзон 10
GTCTTTCTTG GAAGCCAAA G
5249
5268
121
53272 4
1606
1625
Экзон 10
CTCATTGTCT TTCTTGGAA G
5255
5274
122
53272 5
1612
1631
Экзон 10
ATGTTGCTC ATTGTCTTTC T
5261
5280
123
53272 6
1618
1637
Экзон 10
GAACACATG TTGCTCATTG T
5267
5286
124
53272 7
1624
1643
Экзон 10
GACTTTGAA CACATGTTG CT
5273
5292
125
53272 8
1630
1649
Экзон 10
ATCCTTGACT TTGAACACA T
5279
5298
126
53272 9
1636
1655
Экзон 10
TTCCATATCC TTGACTTTGA
5285
5304
127
53273 0
1642
1661
Экзон 10
CAGGTTTTCC ATATCCTTG A
5291
5310
128
53273 1
1686
1705
Экзон 11
CTCAGAGAC TGGCTTTCAT
5827
5846
129
53273 2
1692
1711
Экзон 11
СAGAGАС ТС AGAGACTGG СТ
5833
5852
130
51625 2
1698
1717
Экзон 11
ATGCCACAG AGACTCAGA GA
5839
5858
131
53273 3
1704
1723
Экзон 11
CAAACCATG CCACAGAGA СТ
5845
5864
132
53273 4
1710
1729
Экзон 11
TGTTCCCAA ACCATGCCA СА
5851
5870
133
53273 5
1734
1753
Экзон 11
TTGTGGTAA TCGGTACCC ТТ
5875
5894
134
53273 6
1740
1759
Экзон 11
GGTTGCTTGT GGTAATCGG Т
5881
5900
135
53273 7
1746
1765
Экзон 11
TGCCATGGT TGCTTGTGGT А
5887
5906
136
53273 8
1752
1771
Экзон 11
TTGGCCTGC CATGGTTGC ТТ
5893
5912
137
53273 9
1758
1777
Экзон 11
GAGATCTTG GCCTGCCAT GG
5899
5918
138
53274 0
1803
1822
Экзон 12
ACAGCCCCC ATACAGCTC ТС
6082
6101
139
53274 1
1809
1828
Экзон 12
GACACCACA GCCCCCATA СА
6088
6107
140
53274 2
1815
1834
Экзон 12
TACTCAGAC ACCACAGCC СС
6094
6113
141
53274 3
1821
1840
Экзон 12
ACAAAGTAC TCAGACACC АС
6100
6119
142
53274 4
1827
1846
Экзон 12
GTCAGCACA AAGTACTCA GA
6106
6125
143
53274 5
1872
1891
Экзон 12
TTGATTGAG TGTTCCTTGT С
6151
6170
144
53274 6
1878
1897
Экзон 12
CTGACCTTG ATTGAGTGT ТС
6157
6176
145
53274 7
1909
1928
Экзон 13
TATCTCCAG GTCCCGCTTC Т
6403
6422
146
53274 8
1967
1986
Экзон 13
GAATTCCTG СТТСТТТТТТ С
6461
6480
147
53274 9
1973
1992
Экзон 13
ATTCAGGAA TTCCTGCTTC Т
6467
6486
148
53275 0
1979
1998
Экзон 13
САТААААТТ CAGGAATTC СТ
6473
6492
149
53275 1
1985
2004
Экзон 13
CATAGTCAT AAAATTCAG GA
6479
6498
150
53275 2
2006
2025
Экзон 13
TGAGCTTGA TCAGGGCAA CG
6500
6519
151
53275 3
2012
2031
Экзон 13
TATTCTTGAG CTTGATCAG G
6506
6525
152
53275 4
2048
2067
Сочлен ение
экзона 13-14
GACAAATGG GCCTGATAG ТС
н.д.
н.д.
153
53281 2
н.д.
н.д.
Экзон 1
TCCAGCTCA CTCCCCTGTT G
1593
1612
162
53281 3
н.д.
н.д.
Экзон 1
TAAGGATCC AGCTCACTC СС
1599
1618
163
53281 4
н.д.
н.д.
Экзон 1
CAGAAATAA GGATCCAGC ТС
1605
1624
164
53281 5
н.д.
н.д.
Экзон 1
AGGGACCAG AAATAAGGA ТС
1611
1630
165
53281 6
н.д.
н.д.
Экзон 1
CCACTTAGG GACCAGAAA ТА
1617
1636
166
53281 7
н.д.
н.д.
Экзон 1
TCCAGGACT СТССССТТСА G
1682
1701
167
53281 8
н.д.
н.д.
Экзон 1
AAGTCCCAC CCTTTGCTGC С
1707
1726
168
53281 9
н.д.
н.д.
Экзон 1
CTGCAGAAG ТСССАСССТТ Т
1713
1732
169
53282 0
н.д.
н.д.
Экзон 1
СAGААAC TG CAGAAGTCC СА
1719
1738
170
53282 1
н.д.
н.д.
Эзон 2 -интрон 2
AACCTCTGC ACTCTGCCTT С
2368
2387
171
53282 2
н.д.
н.д.
Эзон 2 -интрон 2
СССТСАААС CTCTGCACTC Т
2374
2393
172
53282 3
н.д.
н.д.
Эзон 2 -интрон 2
TCATTGCCCT САААССТСТ G
2380
2399
173
53282
н.д.
н.д.
Интрон
ССАСАСТСА
2386
2405
174
TTGCCCTCA АА
53282 5
н.д.
н.д.
Интрон 2
CACTGCCCA CACTCATTG СС
2392
2411
175
53282 6
н.д.
н.д.
Интрон 2
TTAGGCCAC TGCCCACAC ТС
2398
2417
176
53282 7
н.д.
н.д.
Интрон 2
CTAGTCCTG ACCTTGCTG СС
2436
2455
177
53282 8
н.д.
н.д.
Интрон 2
СТСАТССТА GTCCTGACC ТТ
2442
2461
178
53282 9
н.д.
н.д.
Интрон 2
CCTAGTCTC ATCCTAGTC СТ
2448
2467
179
53283 0
н.д.
н.д.
Интрон 2
ACCCTGCCT AGTCTCATC СТ
2454
2473
180
53283 1
н.д.
н.д.
Интрон 2
CTTGTCACCC TGCCTAGTCT
2460
2479
181
53283 2
н.д.
н.д.
Интрон 2
GCCCACCTT GTCACCCTG СС
2466
2485
182
53283 3
н.д.
н.д.
Интрон 2
ССТААААСТ GCTCCTACTC С
2492
2511
183
53283 4
н.д.
н.д.
Интрон 4
GAGTCAGAA ATGAGGTCA АА
3494
3513
184
53283 5
н.д.
н.д.
Интрон 11
СССТАСТССС АТТТСАССТТ
5971
5990
185
53283 6
н.д.
н.д.
Интрон 8 -
экзон 9
TGTTGTGCA ATCCTGCAG АА
5013
5032
186
53283
н.д.
н.д.
Интрон
AAAGGCTGA
2123
2142
187
TGAAGCCTG GC
53283 8
н.д.
н.д.
Интрон 7
CCTTTGACC ACAAAGTGG СС
4461
4480
188
53283 9
н.д.
н.д.
Интрон 12
AGGTACCAC CTCTTTGTGG G
6362
6381
189
53284 0
н.д.
н.д.
Интрон 1 -
экзон 2
TGGTGGTCA CACCTGAAG AG
2143
2162
190
53276 3
2133
2152
Сочлен ение
экзона 14-15
GCAGGGAGC AGCTCTTCCT Т
н.д.
н.д.
191
53276 4
2139
2158
Экзон 15
TCCTGTGCA GGGAGCAGC ТС
6927
6946
192
53276 5
2145
2164
Экзон 15
TTGATATCCT GTGCAGGGA G
6933
6952
193
53276 6
2151
2170
Экзон 15
AGAGCTTTG ATATCCTGTG С
6939
6958
194
53276 7
2157
2176
Экзон 15
ACAAACAGA GCTTTGATAT С
6945
6964
195
53276 8
2163
2182
Экзон 15
TCAGACACA AACAGAGCT ТТ
6951
6970
196
53276 9
2169
2188
Экзон 15
TCCTCCTCAG АСАСАААСА G
6957
6976
197
53277 0
2193
2212
Экзон 15
АССТССТТСС GAGTCAGCT Т
6981
7000
198
53277
2199
2218
Экзон
ATGTAGACC
6987
7006
199
TCCTTCCGA GT
53277 2
2205
2224
Экзон 15
TTCTTGATGT AGACCTCCT Т
6993
7012
200
53277 3
2211
2230
Экзон 15
ТССССАТТСТ TGATGTAGA С
6999
7018
201
53277 4
2217
2236
Сочлен ение
экзона 15-16
ТТСТТАТССС CATTCTTGAT
н.д.
н.д.
202
53277 5
2223
2242
Сочлен ение
экзона 15-16
CTGCCTTTCT ТАТССССАТТ
н.д.
н.д.
203
53277 6
2229
2248
Сочлен ение
экзона 15-16
TCACAGCTG ССТТТСТТАТ С
н.д.
н.д.
204
53277 7
2235
2254
Экзон 16
ТСТСТСТСАС AGCTGCCTTT
7119
7138
205
53277 8
2241
2260
Экзон 16
TGAGCATCT CTCTCACAG СТ
7125
7144
206
53277 9
2247
2266
Экзон 16
GCATATTGA GCATCTCTCT С
7131
7150
207
53278 0
2267
2286
Экзон 16
TGACTTTGTC ATAGCCTGG G
7151
7170
208
53278 1
2273
2292
Экзон 16
TGTCCTTGAC TTTGTCATAG
7157
7176
209
53278 2
2309
2328
Экзон 16
CAGTACAAA GGAACCGAG GG
7193
7212
210
53278
2315
2334
Экзон
CTCCTCCAGT
7199
7218
211
ACAAAGGAA С
53278 4
2321
2340
Экзон 16
GACTCACTC CTCCAGTAC АА
7205
7224
212
53278 5
2327
2346
Экзон 16
CATAGGGAC ТСАСТССТСС А
7211
7230
213
53278 6
2333
2352
Экзон 16
GGTCAGCAT AGGGACTCA СТ
7217
7236
214
53278 7
2352
2371
Сочлен ение
экзона 16-17
TCACCTCTGC AAGTATTGG G
7236
7255
215
53278 8
2358
2377
Сочлен ение
экзона 16-17
CCAGAATCA CCTCTGCAA GT
н.д.
н.д.
216
53278 9
2364
2383
Сочлен ение
экзона 16-17
GGGCCGCCA GAATCACCT СТ
н.д.
н.д.
217
53279 0
2382
2401
Экзон 17
CTCTTGTGAA CTATCAAGG G
7347
7366
218
53279 1
2388
2407
Экзон 17
CGACTTCTCT TGTGAACTA Т
7353
7372
219
53279 2
2394
2413
Экзон 17
ATGAAACGA CTTCTCTTGT G
7359
7378
220
53279 3
2400
2419
Сочлен ение
экзона 17-18
ACTTGAATG AAACGACTT СТ
7365
7384
221
53279
2406
2425
Сочлен
АСАССААСТ
н.д.
н.д.
222
ение экзона 17-18
TGAATGAAA CG
53279 5
2427
2446
Экзон 18
ТССАСТАСТС CCCAGCTGA Т
7662
7681
223
53279 6
2433
2452
Экзон 18
CAGACATCC АСТАСТССС СА
7668
7687
224
53279 7
2439
2458
Экзон 18
TTTTTGCAGA САТССАСТА С
7674
7693
225
53279 8
2445
2464
Экзон 18
TTCTGGTTTT TGCAGACAT С
7680
7699
226
53279 9
2451
2470
Экзон 18
TGCCGCTTCT GGTTTTTGCA
7686
7705
227
53280 0
2457
2476
Экзон 18
TGCTTTTGCC GCTTCTGGTT
7692
7711
228
53280 1
2463
2482
Экзон 18
GGTACCTGC TTTTGCCGCT Т
7698
7717
229
53280 2
2469
2488
Экзон 18
TGAGCAGGT ACCTGCTTTT G
7704
7723
230
53280 3
2517
2536
Экзон 18
TTCAGCCAG GGCAGCACT TG
7752
7771
231
53280 4
2523
2542
Экзон 18
ТТСТССТТСА GCCAGGGCA G
7758
7777
232
53280 5
2529
2548
Экзон 18
TGGAGTTTCT CCTTCAGCC А
7764
7783
233
53280 6
2535
2554
Экзон 18
TCATCTTGGA GTTTCTCCTT
7770
7789
234
53280
2541
2560
Экзон
АААТССТСА
7776
7795
235
экзон 17
53284 5
н.д.
н.д.
Интрон 10
AGGAGGAAT GAAGAAGG СТТ
5431
5450
244
53284 6
н.д.
н.д.
Интрон 13
GCCTTTCCT CAGGGATCT GG
6561
6580
245
53284 7
н.д.
н.д.
Интрон 4
AAATGTCTG GGAGTGTCA GG
3477
3496
246
53284 8
н.д.
н.д.
Интрон 15
GCCTAGAGT GCCTCCTTA GG
7038
7057
247
53284 9
н.д.
н.д.
Интрон 17
GGCATCTCC CCAGATAGG АА
7396
7415
248
53285 0
н.д.
н.д.
Интрон 6
AGGGAGCTA GTCCTGGAA GA
3906
3925
249
53285 1
н.д.
н.д.
Интрон 1 -
экзон 2
ACACCTGAA GAGAAAGG CTG
2135
2154
250
53285 2
н.д.
н.д.
Интрон 7
CCCTTTGAC CACAAAGTG GC
4462
4481
251
53285 3
н.д.
н.д.
Интрон 7
GCCCTCAAG GTAGTCTCA TG
4354
4373
252
53285 4
н.д.
н.д.
Интрон 6
AAGGGAAG GAGGACAG ААТА
3977
3996
253
53285 5
н.д.
н.д.
Интрон 1
AAAGGCCAA GGAGGGATG СТ
2099
2118
254
53285 6
н.д.
н.д.
Экзон 8
AGAGGTCCC TTCTGACCA
4736
4755
255
интрон 8
53285 7
н.д.
н.д.
Интрон 8
GCTGGGACA GGAGAGAG GTC
4749
4768
256
53285 8
н.д.
н.д.
Интрон 4
TCAAATGTC TGGGAGTGT СА
3479
3498
257
53285 9
н.д.
н.д.
Интрон 10
AGAAGGAG AATGTGCTG AAA
5801
5820
258
53286 0
н.д.
н.д.
Интрон 17
TGCTGACCA CTTGGCATC ТС
7408
7427
259
53286 1
н.д.
н.д.
Интрон 11
СААСТТТСА САААССАСС AT
6014
6033
260
53286 2
н.д.
н.д.
Интрон 10
AGCTCTGTG ATTCTAAGG ТТ
5497
5516
261
53286 3
н.д.
н.д.
Интрон
6 -экзон 7
CCACCTGTG GGTGAGGAG АА
4136
4155
262
53286 4
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
GAGGACTCA CTTGAATGA АА
7373
7392
263
53286 5
н.д.
н.д.
Интрон 6
TGGAATGAT CAGGGAGCT AG
3916
3935
264
53286 6
н.д.
н.д.
Интрон 5
GTCCCTTCT ССАТТТТСС СС
3659
3678
265
53286 7
н.д.
н.д.
Интрон 7
ТСААСТТТТ TAAGTTAAT СА
4497
4516
266
53286
н.д.
н.д.
Интрон
GGGTGAGGA
4128
4147
267
GAACAAGGC GC
53286 9
н.д.
н.д.
Интрон 7
CTTCCAAGC САТСТТТТА АС
4553
4572
268
53287 0
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
AGGACTCAC TTGAATGAA АС
7372
7391
269
53287 1
н.д.
н.д.
Интрон 10
TTCCAGGCA ACTAGAGCT ТС
5412
5431
270
53287 2
н.д.
н.д.
Экзон 1
CAGAGTCCA GCCACTGTT TG
1557
1576
271
53287 3
н.д.
н.д.
Интрон
17-экзон 18
CCAACCTGC AGAGGCAGT GG
7638
7657
272
53287 4
н.д.
н.д.
Интрон 16
TGCAAGGAG AGGAGAAG CTG
7312
7331
273
53287 5
н.д.
н.д.
Экзон 9
интрон 9
CTAGGCAGG ТТАСТСАСС СА
5120
5139
274
53287 6
н.д.
н.д.
Интрон
6 -экзон 7
САССАТААС TTGCCACCT GT
4148
4167
275
53287 7
н.д.
н.д.
Интрон 12
TAGGTACCA CCTCTTTGT GG
6363
6382
276
53287 8
н.д.
н.д.
Интрон 11
CTTGACCTC АССТССССС АА
5954
5973
277
53287 9
н.д.
н.д.
Интрон 12
ССАССТСТТ TGTGGGCAG
6357
6376
278
53288 0
н.д.
н.д.
Интрон
ТТСАСАААС САССАТСТС ТТ
6009
6028
279
53288 1
н.д.
н.д.
Экзон 3
интрон 3
ТТСТСАССТ CCGTTGTCA СА
2958
2977
280
53288 2
н.д.
н.д.
Интрон 12
GAAAGTGGG AGGTGTTGC СТ
6225
6244
281
53288
н.д.
н.д.
Интрон 1
ACAGCAGGA AGGGAAGGT
2075
2094
282
53288 4
н.д.
н.д.
Интрон 17
CATGCTGAC CACTTGGCA ТС
7410
7429
283
53288 5
н.д.
н.д.
Экзон 4
интрон 4
GGTCACCTT GGCAGGAA GGC
3286
3305
284
53288
н.д.
н.д.
Интрон
GTATAGTGT TACAAGTGG
4804
4823
285
53288
н.д.
н.д.
Интрон
GGACTTCCC TTTGACCAC
4468
4487
286
53288
н.д.
н.д.
Интрон
TCACCTTGA ССТСАССТС
5958
5977
287
53288 9
н.д.
н.д.
Интрон 15
TAGAGTGCC TCCTTAGGA TG
7035
7054
288
53289 0
н.д.
н.д.
Интрон
TGACTTCAA CTTGTGGTC
4605
4624
289
53289
н.д.
н.д.
Интрон
CAGAGAAG
5804
5823
290
GAGAATGTG CTG
53289 2
н.д.
н.д.
Интрон 14-
экзон 15
AGGGAGCA GCTCTTCCT CTG
6919
6938
291
53289 3
н.д.
н.д.
Интрон 5 -
экзон 6
TGTTCCCCT GGGTGCCAG GA
3710
3729
292
53289 4
н.д.
н.д.
Интрон 10
GGCCTGGCT GTTTTCAAG СС
5612
5631
293
53289 5
н.д.
н.д.
Интрон 10-
экзон
GACTGGCTT TCATCTGGC AG
5821
5840
294
53289 6
н.д.
н.д.
Интрон 10
GAAGGCTTT CCAGGCAAC ТА
5419
5438
295
53289 7
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
TCACTTGAA TGAAACGAC ТТ
7367
7386
296
53289 8
н.д.
н.д.
Интрон 1
GGCCCCAAA AGGCCAAGG AG
2106
2125
297
53289 9
н.д.
н.д.
Интрон
16-экзон 17
AATCACCTG CAAGGAGA GGA
7319
7338
298
53290 0
н.д.
н.д.
Интрон 12
GACCTTCAG TTGCATCCT ТА
6183
6202
299
53290 1
н.д.
н.д.
Интрон 1
TGATGAAGC CTGGCCCCA АА
2117
2136
300
53290
н.д.
н.д.
Интрон
TAGAAAGTG
6227
6246
301
GGAGGTGTT GC
53290 3
н.д.
н.д.
Интрон 12
СССАТСССТ GACTGGTCT GG
6295
6314
302
53290
н.д.
н.д.
Интрон
CCATGGGTA TAGTGTTAC
4810
4829
303
53290
н.д.
н.д.
Интрон
GTGTTCTCT TGACTTCCA
2586
2605
304
53290 6
н.д.
н.д.
Интрон 13
GGCCTGCTC СТСАССССА GT
6597
6616
305
53290 7
н.д.
н.д.
Интрон 10
GAGGCCTGG CTGTTTTCA AG
5614
5633
306
53290 8
н.д.
н.д.
Экзон 1
GACTCTCCC CTTCAGTAC СТ
1677
1696
307
53290
н.д.
н.д.
Интрон
CATGGGTAT AGTGTTACA
4809
4828
308
53291 0
н.д.
н.д.
Интрон 10
GAAGGAGA ATGTGCTGA AAA
5800
5819
309
53291 1
н.д.
н.д.
Интрон
TCACCTGGT CTTCCAAGC
4562
4581
310
53291 2
н.д.
н.д.
Интрон 17
CTCCCCAGA TAGGAAAGG GA
7391
7410
311
53291 3
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
GGACTCACT TGAATGAAA CG
7371
7390
312
53291
н.д.
н.д.
Интрон
GGCCGCCAG
7328
7347
313
AATAG
53292 1
н.д.
н.д.
Интрон 4
GAAATGAG GTCAAATG TCTG
3488
3507
320
53292 2
н.д.
н.д.
Интрон 4
GGAGAGTC AGAAATGA GGTC
3497
3516
321
53292 3
н.д.
н.д.
Интрон 12
GTAGAAAG TGGGAGGT GTTG
6228
6247
322
53292 4
н.д.
н.д.
Интрон 10
TAGAAAGA TCTCTGAA GTGC
5521
5540
323
53292 5
н.д.
н.д.
Интрон 13
CTGCTCCT CACCCCAG
тест
6594
6613
324
53292 6
н.д.
н.д.
Интрон 11
CTACTGGG ATTCTGTG СТТА
5927
5946
325
53292 7
н.д.
н.д.
Интрон 1
CCCAAAAG GCCAAGGA GGGA
2103
2122
326
53292 8
н.д.
н.д.
Интрон 17
TGACCACT TGGCATCT СССС
7405
7424
327
53292 9
н.д.
н.д.
Интрон 16-
экзон
CCTGCAAG GAGAGGA GAAGC
7314
7333
328
53293 0
н.д.
н.д.
Экзон
16-
интрон 16
СТСТСАСС TCTGCAAG ТАТТ
7239
7258
329
53293 1
н.д.
н.д.
Интрон 1
ССССАААА GGCCAAGG AGGG
2104
2123
330
53293 2
н.д.
н.д.
Интрон 7
GTCTTCCA AGCCATCT ТТТА
4555
4574
331
53293
н.д.
н.д.
Интрон
GTTACAAG TGGACTTA
4797
4816
332
AGGG
53293 4
н.д.
н.д.
Интрон 8 -
экзон 9
CCCATGTT GTGCAATC CTGC
5017
5036
333
53293 5
н.д.
н.д.
Интрон 15
GAGGTGGG AAGCATGG AGAA
7091
7110
334
53293 6
н.д.
н.д.
Интрон 14
TGCTCCCA CCACTGTC АТСТ
6874
6893
335
53293 7
н.д.
н.д.
Экзон 9
интрон 9
AGGCAGGT ТАСТСАСС CAGA
5118
5137
336
53293
н.д.
н.д.
Интрон
TACTGGGA
5926
5945
337
TTCTGTGC ТТАС
53293 9
н.д.
н.д.
Интрон 13
GCCTTTCC CAGCCTTT ССТС
6571
6590
338
53294 0
н.д.
н.д.
Интрон 8 -
экзон 9
GTGCAATC CTGCAGAA GAGA
5009
5028
339
53294 1
н.д.
н.д.
Интрон 8
ACAGGAGA GAGGTCCC ТТСТ
4743
4762
340
53294 2
н.д.
н.д.
Интрон 10
CCCAAAAG GAGAAAG GGAAA
5717
5736
341
53294 3
н.д.
н.д.
Интрон 2
AAGCCCAG GGTAAATG СТТА
2557
2576
342
53294 4
н.д.
н.д.
Интрон 1
GATGAAGC CTGGCCCC АААА
2116
2135
343
53294 5
н.д.
н.д.
Интрон 10
TGGCAGAG AAGGAGA ATGTG
5807
5826
344
53294 6
н.д.
н.д.
Интрон 13
TTCCCAGC СТТТССТС AGGG
6567
6586
345
53294 7
н.д.
н.д.
Интрон 10
GGCAGAGA AGGAGAAT
5806
5825
346
GTGC
53294 8
н.д.
н.д.
Интрон 10
ACAGTGCC AGGAAACA AGAA
5471
5490
347
53294 9
н.д.
н.д.
Экзон 9
интрон 9
TAGGCAGG ТТАСТСАС CCAG
5119
5138
348
53295 0
н.д.
н.д.
Интрон 2
TTCTCTTG ACTTCCAG GGCT
2583
2602
349
53295 1
н.д.
н.д.
Интрон 13
CCTGCTCC ТСАССССА GTCC
6595
6614
350
53295 3
н.д.
н.д.
Интрон 7
ТСССАСТА АССТССАТ TGCC
4422
4441
351
53295 4
н.д.
н.д.
Интрон 7
ТТСССТТТ GACCACAA AGTG
4464
4483
352
53295 5
н.д.
н.д.
Интрон 9
CTGGGTCC TAGGCAGG ТТАС
5127
5146
353
53295 6
н.д.
н.д.
Интрон 10
TCCAGGCA ACTAGAGC ТТСА
5411
5430
354
53295 7
н.д.
н.д.
Интрон 8 -
GCCCATGT TGTGCAAT
5018
5037
355
экзон 9
CCTG
53295 8
н.д.
н.д.
Интрон 7
GGTTCCCA СТААССТС САТТ
4425
4444
356
53295 9
н.д.
н.д.
Интрон 3
AGGTAGAG AGCAAGAG ТТАС
3052
3071
357
53296 0
н.д.
н.д.
Интрон 7
ССАСТААС CTCCATTG СССА
4420
4439
358
53296 1
н.д.
н.д.
Интрон 11
ТСАСАААС САССАТСТ СТТА
6008
6027
359
53296 2
н.д.
н.д.
Экзон 9
интрон 9
ТАСТСАСС CAGATAAT ССТС
5110
5129
360
53296 3
н.д.
н.д.
Интрон 13
TGCTCCTC ACCCCAGT ССТС
6593
6612
361
53296 4
н.д.
н.д.
Интрон 15 -
экзон
TCTCACAG CTGCCTTT CTGT
7115
7134
362
53296 5
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
GAAAGGG AGGACTCA CTTGA
7379
7398
363
53296 6
н.д.
н.д.
Интрон 7
ССАТСТТТ ТААССССА GAGA
4545
4564
364
53296 7
н.д.
н.д.
Интрон 13
ТССТСАСС CCAGTCCT CCAG
6590
6609
365
53296 8
н.д.
н.д.
Интрон 10
CTGGCAGA GAAGGAG AATGT
5808
5827
366
53296 9
н.д.
н.д.
Интрон 17
ТСТССССА GATAGGAA AGGG
7392
7411
367
53297 0
н.д.
н.д.
Интрон 14
ACTTCAGC TGCTCCCA ССАС
6882
6901
368
53297 1
н.д.
н.д.
Интрон 1
GACAGCAG GAAGGGA AGGTT
2076
2095
369
53297 2
н.д.
н.д.
Интрон
13-экзон 14
GGAGACAA ATGGGCCT АТАА
6640
6659
370
53297 3
н.д.
н.д.
Интрон 14
CTGCTCCC ACCACTGT CATC
6875
6894
371
53297 4
н.д.
н.д.
Интрон 10
AGGAATGA AGAAGGCT ТТСС
5428
5447
372
53297 5
н.д.
н.д.
Интрон 14
GGGATCTC АТССТТАТ ССТС
6741
6760
373
53297 6
н.д.
н.д.
Интрон 9
GTGCTGGG TCCTAGGC AGGT
5130
5149
374
53297 7
н.д.
н.д.
Интрон 1
CAAAAGGC CAAGGAGG GATG
2101
2120
375
53297 8
н.д.
н.д.
Интрон 17
CCATGCTG ACCACTTG GCAT
7411
7430
376
53297 9
н.д.
н.д.
Интрон 8
GGAGGCTG GGACAGGA GAGA
4753
4772
377
53298 0
н.д.
н.д.
Интрон 14-
экзон 15
GGAGCAGC ТСТТССТСТ GGA
6917
6936
378
53298 1
н.д.
н.д.
Экзон 3
интрон 3
ТСТСАССТ CCGTTGTC ACAG
2957
2976
379
53298 2
н.д.
н.д.
Интрон 13
CAGTCCTC CAGCCTTT СССА
6581
6600
380
53298 3
н.д.
н.д.
Интрон 13
AGTCCTCC AGCCTTTC
6580
6599
381
CCAG
53298 4
н.д.
н.д.
Интрон
4 -экзон 5
TGAAGGAG TCTGGGAG AGTC
3509
3528
382
53298 5
н.д.
н.д.
Интрон
16-экзон 17
CAGAATCA CCTGCAAG GAGA
7322
7341
383
53298 6
н.д.
н.д.
Экзон
17-интрон 17
TAGGAAAG GGAGGACT САСТ
7382
7401
384
53298 7
н.д.
н.д.
Экзон 4
интрон 4
ACCTTGGC AGGAAGGC TCCG
3282
3301
385
53298 8
н.д.
н.д.
Интрон
13-экзон 14
GAGACAAA TGGGCCTA ТААА
6639
6658
386
53298 9
н.д.
н.д.
Интрон 1
CTGAAGAG AAAGGCTG ATGA
2131
2150
387
53299 0
н.д.
н.д.
Интрон 6
AATGATCA GGGAGCTA GTCC
3913
3932
388
53299 1
н.д.
н.д.
Интрон 17
CTTAGCTG ACCTAAAG
7557
7576
389
GAAT
53299 2
н.д.
н.д.
Интрон 8
TGGGTATA GTGTTACA AGTG
4807
4826
390
53299 3
н.д.
н.д.
Интрон 1
TGAAGAGA AAGGCTGA TGAA
2130
2149
391
53299 4
н.д.
н.д.
Интрон 8
GTGTTACA AGTGGACT TAAG
4799
4818
392
53299 5
н.д.
н.д.
Интрон 6
ACCTGTGG GTGAGGAG ААСА
4134
4153
393
53299 6
н.д.
н.д.
Экзон 9
интрон 9
TCACCCAG АТААТССТ СССТ
5107
5126
394
53295 2
2608
2627
Экзон 18
TGTTGTCG CAGCTGTT ТТАА
7843
7862
395
Пример 116: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицировали с использованием
электропорации с 4500 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймерных зондов RTS3460_MGB (прямая последовательность CGAAGCAGCTCAATGAAATCAA, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 813; обратная последовательность TGCCTGGAGGGCCTTCTT, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 814; последовательность зонда AGACCACAAGTTGAAGTC, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 815) был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды, указанные в представленных ниже таблицах, были сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Гэпмеры 5-10-5 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины. "Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ ГО NO: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
АССАТА ACTTGC СА
53269 4
1183
1202
Экзон 7
TCTTGGC ТТСАСА ССАТАА С
4159
4178
53269 5
1208
1227
Экзон 7
ATGTGG CATATG ТСАСТА GA
4184
4203
53269 6
1235
1254
Экзон 7
CAGACA CTTTGAC ССАААТ Т
4211
4230
53269 7
1298
1317
Сочлен ение экзона 7-8
GGTCTTC АТААТТ GATTTC А
н.д.
н.д.
53269 8
1304
1323
Сочлен ение экзона 7-8
ACTTGT GGTCTTC АТААТТ G
н.д.
н.д.
53269 9
1310
1329
Сочлен ение экзона 7-8
АСТТСА ACTTGT GGTCTTC А
н.д.
н.д.
53270 0
1316
1335
Экзон 8
TCCCTG АСТТСА ACTTGT GG
4609
4628
53270 1
1322
1341
Экзон 8
TGTTAGT CCCTGA CTTCAA С
4615
4634
53270 2
1328
1347
Экзон 8
TCTTGGT GTTAGT
4621
4640
100
CCCTGA С
53270 3
1349
1368
Экзон 8
TGTACA CTGCCT GGAGGG СС
4642
4661
101
53270 4
1355
1374
Экзон 8
TCATGCT GTACAC TGCCTG G
4648
4667
102
53270 5
1393
1412
Экзон 8
GTTCCA GCCTTC AGGAGG GA
4686
4705
103
53270 6
1399
1418
Экзон 8
GGTGCG GTTCCA GCCTTC AG
4692
4711
104
53270 7
1405
1424
Экзон 8
ATGGCG GGTGCG GTTCCA GC
4698
4717
105
53270 8
1411
1430
Экзон 8
GATGAC ATGGCG GGTGCG GT
4704
4723
106
53270 9
1417
1436
Экзон 8
GAGGAT GATGAC ATGGCG GG
4710
4729
107
53271 0
1443
1462
Сочлен ение экзона 8-9
CCCATG TTGTGC AATCCA TC
н.д.
н.д.
108
53271 1
1449
1468
Экзон 9
TCCCCG CCCATG TTGTGC
5023
5042
109
53271 2
1455
1474
Экзон 9
ATTGGG TCCCCG CCCATG ТТ
5029
5048
53271 3
1461
1480
Экзон 9
ACAGTA ATTGGG TCCCCG СС
5035
5054
111
53271 4
1467
1486
Экзон 9
TCAATG ACAGTA ATTGGG ТС
5041
5060
112
53271 5
1473
1492
Экзон 9
АТСТСАТ CAATGA CAGTAA Т
5047
5066
113
53271 6
1479
1498
Экзон 9
TCCCGG АТСТСАТ CAATGA С
5053
5072
114
53271 7
1533
1552
Сочлен ение
экзона 9-10
АСАТСС AGATAA ТССТССС Т
н.д.
н.д.
115
53271 8
1539
1558
Сочлен ение
экзона 9-10
ACATAG АСАТСС AGATAA ТС
н.д.
н.д.
116
53271 9
1545
1564
Сочлен ение
экзона 9-10
ССАААС ACATAG АСАТСС AG
н.д.
н.д.
117
53272 0
1582
1601
Экзон 10
AGCATT GATGTT CACTTG GT
5231
5250
118
53272 1
1588
1607
Экзон 10
AGCCAA AGCATT GATGTT СА
5237
5256
119
53272 2
1594
1613
Экзон 10
CTTGGA AGCCAA AGCATT GA
5243
5262
120
53272 3
1600
1619
Экзон 10
GTCTTTC TTGGAA GCCAAA G
5249
5268
121
53272 4
1606
1625
Экзон 10
CTCATTG TCTTTCT TGGAAG
5255
5274
122
53272 5
1612
1631
Экзон 10
ATGTTG CTCATTG TCTTTCT
5261
5280
123
53272 6
1618
1637
Экзон 10
GAACAC ATGTTG CTCATTG T
5267
5286
124
53272 7
1624
1643
Экзон 10
GACTTT GAACAC ATGTTG CT
5273
5292
125
53272 8
1630
1649
Экзон 10
ATCCTTG ACTTTG AACACA T
5279
5298
126
53272 9
1636
1655
Экзон 10
TTCCATA TCCTTGA CTTTGA
5285
5304
127
53273 0
1642
1661
Экзон 10
CAGGTT TTCCATA TCCTTGA
5291
5310
440
53273
1686
1705
Сочлен
CTCAGA
5827
5846
129
ение экзона 10-11
GACTGG СТТТСАТ С
53273 2
1692
1711
Экзон 11
CAGAGA CTCAGA GACTGG СТ
5833
5852
130
51625 2
1698
1717
Экзон 11
ATGCCA CAGAGA CTCAGA GA
5839
5858
131
53273 3
1704
1723
Экзон 11
САААСС ATGCCA CAGAGA СТ
5845
5864
132
53273 4
1710
1729
Экзон 11
TGTTCCC AAACСA TGCCAC A
5851
5870
133
53273 5
1734
1753
Экзон 11
TTGTGGT AATCGG TACCCTT
5875
5894
134
53273 6
1740
1759
Экзон 11
GGTTGC TTGTGGT AATCGG T
5881
5900
135
53273 7
1746
1765
Экзон 11
TGCCAT GGTTGC TTGTGGT A
5887
5906
136
53273 8
1752
1771
Экзон 11
TTGGCCT GCCATG GTTGCTT
5893
5912
137
53273 9
1758
1777
Экзон 11
GAGATC TTGGCCT GCCATG G
5899
5918
138
53274 0
1803
1822
Экзон 12
ACAGCC СССАТА CAGCTC ТС
6082
6101
139
53274 1
1809
1828
Экзон 12
GACACC ACAGCC СССАТА СА
6088
6107
140
53274 2
1815
1834
Экзон 12
ТАСТСА GACACC ACAGCC СС
6094
6113
141
53274 3
1821
1840
Экзон 12
ACAAAG ТАСТСА GACACC АС
6100
6119
142
53274 4
1827
1846
Экзон 12
GTCAGC ACAAAG ТАСТСА GA
6106
6125
143
53274 5
1872
1891
Экзон 12
TTGATTG AGTGTT CCTTGTC
6151
6170
144
53274 6
1878
1897
Экзон 12
CTGACC TTGATTG AGTGTT С
6157
6176
145
53274 7
1909
1928
Экзон 13
ТАТСТСС AGGTCC CGCTTCT
6403
6422
146
53274 8
1967
1986
Экзон 13
GAATTC
CTGCTTC
ТТТТТТС
6461
6480
147
53274 9
1973
1992
Экзон 13
ATTCAG GAATTC CTGCTTC Т
6467
6486
148
53275 0
1979
1998
Экзон 13
САТААА ATTCAG GAATTC СТ
6473
6492
149
53275 1
1985
2004
Экзон 13
CATAGT САТААА ATTCAG GA
6479
6498
150
53275 2
2006
2025
Экзон 13
TGAGCT TGATCA GGGCAA CG
6500
6519
151
53275 3
2012
2031
Экзон 13
TATTCTT GAGCTT GATCAG G
6506
6525
152
53275 4
2048
2067
Сочлен ение
экзона 13-14
GACAAA TGGGCC TGATAG TC
н.д.
н.д.
153
53275 5
2070
2089
Экзон 14
GTTGTTC CCTCGG TGCAGG G
6659
6678
154
53275 6
2076
2095
Экзон 14
GCTCGA GTTGTTC CCTCGG T
6665
6684
155
53275 7
2082
2101
Экзон 14
CTCAAA GCTCGA GTTGTTC С
6671
6690
156
53275 8
2088
2107
Экзон 14
GGAAGC CTCAAA GCTCGA GT
6677
6696
157
53275
2094
2113
Экзон
GTTGGA
6683
6702
158
GGAAGC CTCAAA GC
53276 0
2100
2119
Экзон 14
GTGGTA GTTGGA GGAAGC СТ
6689
6708
159
53276 1
2106
2125
Экзон 14
TGGCAA GTGGTA GTTGGA GG
6695
6714
160
53276 2
2112
2131
Экзон 14
TGTTGCT GGCAAG TGGTAG T
6701
6720
161
Пример 117: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов, которые имели аналогичные условия культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку были трансфицированны с использованием электропорации с 5000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ГЩР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r).
Ингибирование мРНК CFB 5-10-5 МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды, указанные в представленных ниже таблицах, были сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Гэпмеры имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины. "Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ Ш NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ Ш N0: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью. Если в определенной таблице не показано выравнивание последовательности к гену-мишени, то следует понимать, что ни один из олигонуклеотидов, представленных в указанной таблице, не выравнивается со 100 % комплементарностью с указанным геном-мишенью.
инициац
терминац
5885 70
150
169
Экзон 1
TGGTCACATTCCCTTCC
ест
396
5885 71
152
171
Экзон 1
CCTGGTCACATTCCCTT ССС
397
5326 14
154
173
Экзон 1
GACCTGGTCACATTCC СТТС
5885 72
156
175
Экзон 1
TAGACCTGGTCACATT СССТ
398
5885 73
158
177
Экзон 1
CCTAGACCTGGTCACA ТТСС
399
5885 66
2189
2208
Экзон 15
CCTTCCGAGTCAGCTTT ТТС
400
5885 67
2191
2210
Экзон 15
CTCCTTCCGAGTCAGCT ТТТ
401
5327 70
2193
2212
Экзон 15
ACCTCCTTCCGAGTCA GCTT
198
5885 68
2195
2214
Экзон 15
AGACCTCCTTCCGAGT CAGC
402
5885 69
2197
2216
Экзон 15
GTAGACCTCCTTCCGA GTCA
403
5885 74
2453
2472
Экзон 18
TTTGCCGCTTCTGGTTT TTG
404
5885 75
2455
2474
Экзон 18
CTTTTGCCGCTTCTGGT ТТТ
405
5328 00
2457
2476
Экзон 18
TGCTTTTGCCGCTTCTG GTT
228
5885 76
2459
2478
Экзон 18
CCTGCTTTTGCCGCTTC TGG
406
5885 77
2461
2480
Экзон 18
TACCTGCTTTTGCCGCT ТСТ
407
5163 50
2550
2569
Экзон 18
AGA А А АСС С А А АТС С Т CATC
408
5885 09
2551
2570
Экзон 18
TAGAAAACCCAAATCC ТСАТ
409
5885
2552
2571
Экзон
ATAGAAAACCCAAATC
410
СТСА
5885 11
2553
2572
Экзон 18
TATAGAAAACCCAAAT ССТС
411
5885 12
2554
2573
Экзон 18
TTATAGAAAACCCAAA
тест
412
5885 13
2555
2574
Экзон 18
CTTATAGAAAACCCAA АТСС
413
5885 14
2556
2575
Экзон 18
CCTTATAGAAAACCCA ААТС
414
5885 15
2557
2576
Экзон 18
CCCTTATAGAAAACCC АААТ
415
5885 16
2558
2577
Экзон 18
CCCCTTATAGAAAACC СААА
416
5885 17
2559
2578
Экзон 18
ACCCCTTATAGAAAAC ССАА
417
5885 18
2560
2579
Экзон 18
AACCCCTTATAGAAAA СССА
418
5885 19
2561
2580
Экзон 18
AAACCCCTTATAGAAA АССС
419
5885 20
2562
2581
Экзон 18
GAAACCCCTTATAGAA ААСС
420
5885 21
2563
2582
Экзон 18
GGAAACCCCTTATAGA АААС
421
5885 22
2564
2583
Экзон 18
AGGAAACCCCTTATAG АААА
422
5885 23
2565
2584
Экзон 18
CAGGAAACCCCTTATA GAAA
423
5885 24
2566
2585
Экзон 18
GCAGGAAACCCCTTAT AGAA
424
5885 25
2567
2586
Экзон 18
AGCAGGAAACCCCTTA TAGA
425
5885 26
2568
2587
Экзон 18
CAGCAGGAAACCCCTT ATAG
426
5885 27
2569
2588
Экзон 18
CCAGCAGGAAACCCCT TATA
427
5885 28
2570
2589
Экзон 18
TCCAGCAGGAAACCCC ТТАТ
428
5328 09
2571
2590
Экзон 18
GTCCAGCAGGAAACCC СТТА
237
5885 29
2572
2591
Экзон 18
TGTCCAGCAGGAAACC ССТТ
429
5885 30
2573
2592
Экзон 18
CTGTCCAGCAGGAAAC СССТ
430
5885 31
2574
2593
Экзон 18
CCTGTCCAGCAGGAAA СССС
431
5885 32
2575
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGCAGGAA АССС
432
5885 33
2576
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCAGGA ААСС
433
5328 10
2577
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCAGCAGG АААС
238
5885 34
2578
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAGCAG GAAA
434
5885 35
2579
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCAGCA GGAA
435
5885 36
2580
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCAGC AGGA
436
5885 37
2581
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCCAG CAGG
437
5885 38
2582
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGTCCA GCAG
438
5885 39
2583
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGTCCA GCA
439
5885 40
2584
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCTGTCC AGC
440
5885 41
2585
2604
Экзон 18
AATCCCACGCCCCTGT CCAG
441
5885 42
2586
2605
Экзон 18
CAATCCCACGCCCCTG ТССА
442
5885 43
2587
2606
Экзон 18
TCAATCCCACGCCCCT GTCC
443
5885 44
2588
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGCCCCT GTC
444
5885
2589
2608
Экзон
ATTCAATCCCACGCCC
445
CTGT
5885 46
2590
2609
Экзон 18
AATTCAATCCCACGCC CCTG
446
5885 47
2591
2610
Экзон 18
TAATTCAATCCCACGC СССТ
447
5885 48
2592
2611
Экзон 18
TTAATTCAATCCCACGC ССС
448
5885 49
2593
2612
Экзон 18
TTTAATTCAATCCCACG ССС
449
5885 50
2594
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТСССАС GCC
450
5885 51
2595
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATCCCA CGC
451
5885 52
2596
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTCAATCCC ACG
452
5885 53
2597
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTCAATCC САС
453
5885 54
2598
2617
Экзон 18
GCTGTTTTAATTCAATC ССА
454
5328 11
2599
2618
Экзон 18
AGCTGTTTTAATTCAAT ССС
239
5328 11
2599
2618
Экзон 18
AGCTGTTTTAATTCAAT ССС
239
5885 55
2600
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTTAATTCAA ТСС
455
5885 56
2601
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAATTCA АТС
456
5885 57
2602
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAATTC ААТ
457
5885 58
2603
2622
Экзон 18
TCGCAGCTGTTTTAATT САА
458
5329 17
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTAAT ТСА
317
5885 59
2605
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTGTTTTAA ТТС
459
5885 60
2606
2625
Экзон 18
TTGTCGCAGCTGTTTTA АТТ
460
Ингибирование мРНК CFB 5-10-5 МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или
58869 2
н.д.
н.д.
Экзон 1
CACCCACTTAG GGACCAGAA
1620
1639
470
58869 4
н.д.
н.д.
Экзон 1
АССАСССАСТТ AGGGACCAG
1622
1641
471
58869 6
н.д.
н.д.
Экзон 1
AGGTC С AGGAC ТСТССССТТ
1685
1704
472
58869 8
н.д.
н.д.
Экзон 1
AAGGTCCAGGA СТСТССССТ
1686
1705
473
58870 0
н.д.
н.д.
Экзон 1
AAACTGCAGAA GTCCCACCC
1716
1735
474
58858 6
Экзон 1
GGAGGGCCCCG CTGAGCTGC
1751
1770
475
58858 7
Экзон 1
TCCCGGAACAT CCAAGCGGG
1769
1788
476
58858 8
Экзон 1
САТСАСТТТСС CGGAACATC
1777
н.д.
477
58858 9
151
170
Экзон 1
CTGGTCACATT СССТТСССС
1872
1891
478
58859 0
157
176
Экзон 1
CTAGACCTGGT САСАТТССС
1878
1897
479
58859 1
339
358
Сочлен ение экзона 1-2
GGAGTGGTGGT САСАССТСС
н.д.
н.д.
480
58859 2
384
403
Экзон 2
ACCCCCTCCAG AGAGCAGGA
2192
2211
481
58859 3
390
409
Экзон 2
АТСТСТАСССС CTCCAGAGA
2198
2217
482
58859 4
467
486
Экзон 2
GGTACGGGTAG AAGCCAGAA
2275
2294
483
58859 5
671
690
Экзон 3
GGAGAGTGTAA CCGTCATAG
2879
2898
484
58859 6
689
708
Экзон 3
TGCGATTGGCA GAGCCCCGG
2897
2916
485
58859 7
695
714
Экзон 3
GGCAGGTGCGA TTGGCAGAG
2903
2922
486
58859
707
726
Экзон 3
GGCCATTCACT
2915
2934
487
TGGCAGGTG
58859 9
738
757
Экзон 3
TTGTCACAGAT CGCTGTCTG
2946
2965
488
58860 0
924
943
Сочлен ение экзона 4-5
AAGGAGTCTTG GCAGGAAGG
н.д.
н.д.
489
58860 1
931
950
Сочлен ение экзона 4-5
GTACATGAAGG AGTCTTGGC
н.д.
н.д.
490
58860 2
959
978
Экзон 5
AAGCTTCGGCC ACCTCTTGA
3542
3561
491
58860 3
1089
1108
Экзон 6
CCATCTAGCAC CAGGTAGAT
3773
3792
492
58860 4
1108
1127
Экзон 6
GGCCCCAATGC TGTCTGATC
3792
3811
493
58860 6
1150
1169
Экзон 6
AATTAAGTTGA CTAGACACT
3834
3853
494
58860 8
1162
1181
Сочлен ение экзона 6-7
TGCCACCTTCT CAATTAAGT
495
58857 8
1167
1186
Сочлен ение экзона 6-7
TAACTTGCCAC СТТСТСААТ
н.д.
н.д.
496
58857 9
1169
1188
Сочлен ение экзона 6-7
CATAACTTGCC АССТТСТСА
н.д.
н.д.
497
53269 2
1171
1190
Сочлен ение экзона 6-7
ACCATAACTTG ССАССТТСТ
н.д.
н.д.
58858 0
1173
1192
Сочлен ение
АСАССАТААСТ TGCCACCTT
н.д.
н.д.
498
экзона 6-7
58858 1
1175
1194
Сочлен ение экзона 6-7
ТСАСАССАТАА CTTGCCACC
4151
4170
499
58861 0
1319
1338
Экзон 8
TAGTCCCTGAC TTCAACTTG
4612
4631
500
58861 2
1325
1344
Экзон 8
TGGTGTTAGTC CCTGACTTC
4618
4637
501
58861 4
1396
1415
Экзон 8
GCGGTTCCAGC CTTCAGGAG
4689
4708
502
58861 6
1421
1440
Экзон 8
TCATGAGGATG ATGACATGG
4714
4733
503
58861 8
1446
1465
Экзон 9
CCGCCCATGTT GTGCAATCC
5020
5039
504
58862 0
1458
1477
Экзон 9
GTAATTGGGTC CCCGCCCAT
5032
5051
505
58862 3
1482
1501
Экзон 9
AAGTCCCGGAT СТСАТСААТ
5056
5075
506
58862 4
1542
1561
Сочлен ение
экзона 9-10
AACACATAGAC ATCCAGATA
н.д.
н.д.
507
58862 6
1585
1604
Экзон 10
CAAAGCATTGA TGTTCACTT
5234
5253
508
58862 8
1621
1640
Экзон 10
TTTGAACACAT GTTGCTCAT
5270
5289
509
58863 1
1646
1665
Экзон 10
CTTCCAGGTTT ТССАТАТСС
5295
5314
510
58863 2
1647
1666
Экзон 10
TCTTCCAGGTT ТТССАТАТС
5296
5315
511
58863 4
1689
1708
Экзон 11
AGACTCAGAGA CTGGCTTTC
5830
5849
512
58863 6
1749
1768
Экзон 11
GCCTGCCATGG TTGCTTGTG
5890
5909
513
58863
1763
1782
Экзон
TGACTGAGATC
5904
5923
514
TTGGCCTGC
58864 0
1912
1931
Экзон 13
ТТСТАТСТССА GGTCCCGCT
6406
6425
515
58864 2
1982
2001
Экзон 13
AGTCATAAAAT TCAGGAATT
6476
6495
516
58864 5
2073
2092
Экзон 14
CGAGTTGTTCC CTCGGTGCA
6662
6681
517
58864 6
2085
2104
Экзон 14
AGCCTCAAAGC TCGAGTTGT
6674
6693
518
58864 8
2091
2110
Экзон 14
GGAGGAAGCCT CAAAGCTCG
6680
6699
519
58865 1
2097
2116
Экзон 14
GTAGTTGGAGG AAGCCTCAA
6686
6705
520
58865 2
2103
2122
Экзон 14
CAAGTGGTAGT TGGAGGAAG
6692
6711
521
58865 4
2166
2185
Экзон 15
ТССТС AGACAC AAACAGAGC
6954
6973
522
58865 6
2172
2191
Экзон 15
ТТСТССТССТСА GACACAAA
6960
6979
523
58865 8
2196
2215
Экзон 15
TAGACCTCCTT CCGAGTCAG
6984
7003
524
58866 0
2202
2221
Экзон 15
TTGATGTAGAC CTCCTTCCG
6990
7009
525
58858 2
2219
2238
Сочлен ение
экзона 15-16
СТТТСТТАТССС CATTCTTG
н.д.
н.д.
526
58858 3
2221
2240
Сочлен ение
экзона 15-16
GCCTTTCTTATC СССАТТСТ
н.д.
н.д.
527
53277 5
2223
2242
Сочлен ение
экзона 15-16
CTGCCTTTCTTA ТССССАТТ
н.д.
н.д.
203
58858 4
2225
2244
Сочлен ение
AGCTGCCTTTC ТТАТССССА
н.д.
н.д.
528
экзона 15-16
58866 2
2226
2245
Сочлен ение
экзона 15-16
CAGCTGCCTTT СТТАТСССС
н.д.
н.д.
529
58858 5
2227
2246
Сочлен ение
экзона 15-16
ACAGCTGCCTT ТСТТАТССС
н.д.
н.д.
530
58866 4
2238
2257
Экзон 16
GCATCTCTCTC ACAGCTGCC
7122
7141
531
58866 6
2276
2295
Экзон 16
AGATGTCCTTG ACTTTGTCA
7160
7179
532
58866 8
2330
2349
Экзон 16
CAGCATAGGGA СТСАСТССТ
7214
7233
533
58867 0
2361
2380
Сочлен ение
экзона 16-17
CCGCCAGAATC ACCTCTGCA
н.д.
н.д.
534
58867 2
2397
2416
Экзон 17
TGAATGAAACG АСТТСТСТТ
7362
7381
535
58867 4
2430
2449
Экзон 18
АСАТССАСТАС TCCCCAGCT
7665
7684
536
58867 6
2448
2467
Экзон 18
CGCTTCTGGTT TTTGCAGAC
7683
7702
537
58867 8
2454
2473
Экзон 18
TTTTGCCGCTTC TGGTTTTT
7689
7708
538
58868 0
2466
2485
Экзон 18
GCAGGTACCTG CTTTTGCCG
7701
7720
539
58868 2
2532
2551
Экзон 18
TCTTGGAGTTT CTCCTTCAG
7767
7786
540
53281 1
2599
2618
Экзон 18
AGCTGTTTTAA ТТСААТССС
7834
7853
239
53291 7
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
317
Пример 118: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов, которые имели аналогичные условия культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку были трансфицированны с использованием электропорации с 3000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ГЩР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в представленных ниже таблицах были сконструированы как 4-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 3-10-4 МОЕ, 3-10-7 МОЕ, 6-7-6- МОЕ, 6-8-6 МОЕ или 5-7-5 МОЕ гэпмеры, или как дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды.
Гэпмеры 4-8-5 МОЕ имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими четыре и пять нуклеозидов соответственно. Гэпмеры 5-9-5 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из девяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 5-10-5 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из
десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 5-7-5 МОЕ имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из семи 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 3-10-4 МОЕ имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими три и четыре нуклеозида соответственно. Гэпмеры 3-10-7 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими три и семь нуклеозидов соответственно. Гэпмеры 6-7-6 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из семи 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Гэпмеры 6-8-6 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем нуклеозид содержит либо модификацию сахара МОЕ, либо модификацию сахара (S)-cEt, либо дезокси модификацию. В колонке "Химизм" описаны модификации сахара для каждого олигонуклеотида. "к" означает (S)-cEt модификацию сахара; "d" означает дезоксирибозу; и "е" означает модификацию МОЕ.
"Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ Ш NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ Ш NO: 2 (с номером доступа GENBANK
NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
Таблица 132
Ингибирование мРНК CFB дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами, направленными
экзона 6-7
58886 9
2193
2208
Экзон 15
CCTTCCGAGTCAG СТТ
6981
6996
eekdddddddddd kke
548
58887 0
2195
2210
Экзон 15
CTCCTTCCGAGTC AGC
6983
6998
eekdddddddddd kke
549
58887 1
2197
2212
Экзон 15
ACCTCCTTCCGAG ТСА
6985
7000
eekdddddddddd kke
550
58888 1
2223
2238
Сочле нение экзона 15-16
СТТТСТТАТССССА ТТ
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
551
58888 2
2225
2240
Сочле нение экзона 15-16
GCCTTTCTTATCCC СА
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
552
58888 3
2227
2242
Сочле нение экзона 15-16
CTGCCTTTCTTATC СС
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
553
58887 5
2457
2472
Экзон 18
TTTGCCGCTTCTGG ТТ
7692
7707
eekdddddddddd kke
554
58887 6
2459
2474
Экзон 18
CTTTTGCCGCTTCT GG
7694
7709
eekdddddddddd kke
555
58887 7
2461
2476
Экзон 18
TGCTTTTGCCGCTT СТ
7696
7711
eekdddddddddd kke
556
58880 7
2551
2566
Экзон 18
АААСССАААТССТ CAT
7786
7801
eekdddddddddd kke
557
58880 8
2553
2568
Экзон 18
GAAAACCCAAATC СТС
7788
7803
eekdddddddddd kke
558
58880 9
2555
2570
Экзон 18
TAGAAAACCCAAA ТСС
7790
7805
eekdddddddddd kke
559
58881 0
2556
2571
Экзон 18
ATAGAAAACCCAA АТС
7791
7806
eekdddddddddd kke
560
58881 1
2559
2574
Экзон 18
CTTATAGAAAACC САА
7794
7809
eekdddddddddd kke
561
58881
2560
2575
Экзон
CCTTATAGAAAAC
7795
7810
eekdddddddddd
562
ССА
kke
58881 3
2561
2576
Экзон 18
CCCTTATAGAAAA ССС
7796
7811
eekdddddddddd kke
563
58881 4
2562
2577
Экзон 18
CCCCTTATAGAAA АСС
7797
7812
eekdddddddddd kke
564
58881 5
2563
2578
Экзон 18
ACCCCTTATAGAA ААС
7798
7813
eekdddddddddd kke
565
58881 6
2564
2579
Экзон 18
AACCCCTTATAGA AAA
7799
7814
eekdddddddddd kke
566
58881 7
2565
2580
Экзон 18
AAACCCCTTATAG AAA
7800
7815
eekdddddddddd kke
567
58881 8
2566
2581
Экзон 18
GAAACCCCTTATA GAA
7801
7816
eekdddddddddd kke
568
58881 9
2567
2582
Экзон 18
GGAAACCCCTTAT AGA
7802
7817
eekdddddddddd kke
569
58882 0
2568
2583
Экзон 18
AGGAAACCCCTTA TAG
7803
7818
eekdddddddddd kke
570
58882 1
2569
2584
Экзон 18
CAGGAAACCCCTT ATA
7804
7819
eekdddddddddd kke
571
58882 2
2570
2585
Экзон 18
GCAGGAAACCCCT TAT
7805
7820
eekdddddddddd kke
572
58882 3
2571
2586
Экзон 18
AGCAGGAAACCCC TTA
7806
7821
eekdddddddddd kke
573
58882 4
2572
2587
Экзон 18
CAGCAGGAAACCC CTT
7807
7822
eekdddddddddd kke
574
58882 5
2573
2588
Экзон 18
CCAGCAGGAAACC CCT
7808
7823
eekdddddddddd kke
575
58882 6
2574
2589
Экзон 18
TCCAGCAGGAAAC CCC
7809
7824
eekdddddddddd kke
576
58882 7
2575
2590
Экзон 18
GTCCAGCAGGAAA CCC
7810
7825
eekdddddddddd kke
577
58882 8
2576
2591
Экзон 18
TGTCCAGCAGGAA ACC
7811
7826
eekdddddddddd kke
578
58882 9
2577
2592
Экзон 18
CTGTCCAGCAGGA AAC
7812
7827
eekdddddddddd kke
579
58883 0
2578
2593
Экзон 18
CCTGTCCAGCAGG AAA
7813
7828
eekdddddddddd kke
580
58883 1
2579
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGCAG GAA
7814
7829
eekdddddddddd kke
581
58883 2
2580
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCA GGA
7815
7830
eekdddddddddd kke
582
58883 3
2581
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCAGC AGG
7816
7831
eekdddddddddd kke
583
58883 4
2582
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAG CAG
7817
7832
eekdddddddddd kke
584
58883 5
2583
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCA GCA
7818
7833
eekdddddddddd kke
585
58883 6
2584
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCC AGC
7819
7834
eekdddddddddd kke
586
58883 7
2585
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTC CAG
7820
7835
eekdddddddddd kke
587
58883 8
2586
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGT ССА
7821
7836
eekdddddddddd kke
588
58883 9
2587
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTG ТСС
7822
7837
eekdddddddddd kke
589
58884 0
2588
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCT GTC
7823
7838
eekdddddddddd kke
590
58884 1
2589
2604
Экзон 18
AATCCCACGCCCC TGT
7824
7839
eekdddddddddd kke
591
58884 2
2590
2605
Экзон 18
CAATCCCACGCCC CTG
7825
7840
eekdddddddddd kke
592
58884 3
2591
2606
Экзон 18
TCAATCCCACGCC
ест
7826
7841
eekdddddddddd kke
593
58884 4
2592
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGC ССС
7827
7842
eekdddddddddd kke
594
58884 5
2593
2608
Экзон 18
ATTCAATCCCACG ССС
7828
7843
eekdddddddddd kke
595
58884 6
2594
2609
Экзон 18
ААТТСААТСССАС GCC
7829
7844
eekdddddddddd kke
596
58884 7
2595
2610
Экзон 18
ТААТТСААТСССА CGC
7830
7845
eekdddddddddd kke
597
58884 8
2596
2611
Экзон 18
ТТААТТСААТССС ACG
7831
7846
eekdddddddddd kke
598
58884
2597
2612
Экзон
ТТТААТТСААТССС
7832
7847
eekdddddddddd
599
kke
58885 0
2598
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТСС СА
7833
7848
eekdddddddddd kke
600
58885 1
2599
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATC СС
7834
7849
eekdddddddddd kke
601
58885 2
2600
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTCAAT СС
7835
7850
eekdddddddddd kke
602
58885 3
2601
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTCAA ТС
7836
7851
eekdddddddddd kke
603
58885 4
2602
2617
Экзон 18
GCTGTTTTAATTCA AT
7837
7852
eekdddddddddd kke
604
58885 5
2603
2618
Экзон 18
AGCTGTTTTAATTC АА
7838
7853
eekdddddddddd kke
605
58885 6
2604
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTTAATT СА
7839
7854
eekdddddddddd kke
606
58885 7
2605
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAA ТТС
7840
7855
eekdddddddddd kke
607
58885 8
2606
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTA АТТ
7841
7856
eekdddddddddd kke
608
58885 9
2607
2622
Экзон 18
TCGCAGCTGTTTT ААТ
7842
7857
eekdddddddddd kke
609
58886 0
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTT ТАА
7843
7858
eekdddddddddd kke
610
58886 1
2609
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTGTT ТТА
7844
7859
eekdddddddddd kke
611
58886 2
2610
2625
Экзон 18
TTGTCGCAGCTGT ТТТ
7845
7860
eekdddddddddd kke
612
58886 3
2611
2626
Экзон 18
GTTGTCGCAGCTG ТТТ
7846
7861
eekdddddddddd kke
613
58886 4
2612
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCT GTT
7847
7862
eekdddddddddd kke
614
58886 5
2613
2628
Экзон 18
TTGTTGTCGCAGC TGT
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
615
58886 6
2614
2629
Экзон 18
TTTGTTGTCGCAG CTG
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
616
58886 7
2615
2630
Экзон 18
TTTTGTTGTCGCAG СТ
н.д.
н.д.
eekdddddddddd kke
617
Ингибирование мРНК CFB 5-10-5 МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или
588588
Экзон 1
САТСАСТТТССС GGAACATC
1777
1796
47 7
588589
151
170
Экзон 1
CTGGTCACATTC ССТТСССС
1872
1891
47 8
588590
157
176
Экзон 1
CTAGACCTGGT САСАТТССС
1878
1897
47 9
588591
339
358
Сочлене
ние экзона 12
GGAGTGGTGGT САСАССТСС
н.д.
н.д.
48 0
588592
384
403
Экзон 2
ACCCCCTCCAG AGAGCAGGA
2192
2211
48 1
588593
390
409
Экзон 2
АТСТСТАССССС ТС CAGAGA
2198
2217
48 2
588594
467
486
Экзон 2
GGTACGGGTAG AAGCCAGAA
2275
2294
48 3
588595
671
690
Экзон 3
GGAGAGTGTAA CCGTCATAG
2879
2898
48 4
588596
689
708
Экзон 3
TGCGATTGGCA GAGCCCCGG
2897
2916
63 8
588597
695
714
Экзон 3
GGCAGGTGCGA TTGGCAGAG
2903
2922
48 6
588598
707
726
Экзон 3
GGCCATTCACTT GGCAGGTG
2915
2934
48 7
588599
738
757
Экзон 3
TTGTCACAGAT CGCTGTCTG
2946
2965
48 8
588600
924
943
Сочлене
ние экзона 34
AAGGAGTCTTG GCAGGAAGG
н.д.
н.д.
588601
931
950
Сочлене
ние экзона 34
GTACATGAAGG AGTCTTGGC
н.д.
н.д.
49 0
588602
959
978
Экзон 5
AAGCTTCGGCC ACCTCTTGA
3542
3561
49 1
588603
1089
1108
Экзон 6
CCATCTAGCAC
3773
3792
CAGGTAGAT
588604
1108
1127
Экзон 6
GGCCCCAATGC TGTCTGATC
3792
3811
49 3
588606
1150
1169
Экзон 6
AATTAAGTTGA CTAGACACT
3834
3853
49 4
588608
1162
1181
Сочлене
ние экзона 67
TGCCACCTTCTC AATTAAGT
н.д.
н.д.
64 8
588578
1167
1186
Сочлене
ние экзона 67
TAACTTGCCAC СТТСТСААТ
н.д.
н.д.
49 6
588579
1169
1188
Сочлене
ние экзона 67
CATAACTTGCC АССТТСТСА
н.д.
н.д.
49 7
532692
1171
1190
Сочлене
ние экзона 67
ACCATAACTTG ССАССТТСТ
н.д.
н.д.
588580
1173
1192
Сочлене
ние экзона 67
АСАССАТААСТ TGCCACCTT
н.д.
н.д.
49 8
588581
1175
1194
Экзон 7
ТСАСАССАТАА CTTGCCACC
4151
4170
49 9
588610
1319
1338
Экзон 8
TAGTCCCTGACT TCAACTTG
4612
4631
50 0
588612
1325
1344
Экзон 8
TGGTGTTAGTCC CTGACTTC
4618
4637
50 1
588614
1396
1415
Экзон 8
GCGGTTCCAGC CTTCAGGAG
4689
4708
50 2
588616
1421
1440
Экзон 8
TCATGAGGATG ATGACATGG
4714
4733
50 3
588618
1446
1465
Экзон 9
CCGCCCATGTT GTGCAATCC
5020
5039
50 4
588620
1458
1477
Экзон 9
GTAATTGGGTC CCCGCCCAT
5032
5051
50 5
588623
1482
1501
Экзон 9
AAGTCCCGGAT СТСАТСААТ
5056
5075
50 6
588624
1542
1561
Сочлене
ние экзона 910
AACACATAGAC АТССAGATА
н.д.
н.д.
50 7
588626
1585
1604
Экзон 10
CAAAGCATTGA TGTTCACTT
5234
5253
50 8
588628
1621
1640
Экзон 10
TTTGAACACAT GTTGCTCAT
5270
5289
50 9
588631
1646
1665
Экзон 10
CTTCCAGGTTTT ССАТАТСС
5295
5314
51 0
588632
1647
1666
Экзон 10
TCTTCCAGGTTT ТССАТАТС
5296
5315
51 1
588634
1689
1708
Экзон 11
AGACTCAGAGA CTGGCTTTC
5830
5849
51 2
588636
1749
1768
Экзон 11
GCCTGCCATGG TTGCTTGTG
5890
5909
51 3
588638
1763
1782
Экзон 11
TGACTGAGATC TTGGCCTGC
5904
5923
51 4
588640
1912
1931
Экзон 13
TTCTATCTCCAG GTCCCGCT
6406
6425
51 5
588642
1982
2001
Экзон 13
AGTCATAAAAT TCAGGAATT
6476
6495
51 6
588645
2073
2092
Экзон 14
CGAGTTGTTCCC TCGGTGCA
6662
6681
51 7
588646
2085
2104
Экзон 14
AGCCTCAAAGC TCGAGTTGT
6674
6693
51 8
588648
2091
2110
Экзон 14
GGAGGAAGCCT CAAAGCTCG
6680
6699
588651
2097
2116
Экзон 14
GTAGTTGGAGG AAGCCTCAA
6686
6705
52 0
588652
2103
2122
Экзон 14
CAAGTGGTAGT TGGAGGAAG
6692
6711
52 1
588654
2166
2185
Экзон 15
TCCTCAGACAC
6954
6973
AAACAGAGC
588656
2172
2191
Экзон 15
ТТСТССТССТСА GACACAAA
6960
6979
52 3
588658
2196
2215
Экзон 15
TAGACCTCCTTC CGAGTCAG
6984
7003
52 4
588660
2202
2221
Экзон 15
TTGATGTAGAC CTCCTTCCG
6990
7009
52 5
588582
2219
2238
Сочлене
ние экзона 15-16
СТТТСТТАТССС CATTCTTG
н.д.
н.д.
52 6
588583
2221
2240
Сочлене
ние экзона 15-16
GCCTTTCTTATC СССАТТСТ
н.д.
н.д.
52 7
532775
2223
2242
Сочлене
ние экзона 15-16
CTGCCTTTCTTA ТССССАТТ
н.д.
н.д.
20 3
588584
2225
2244
Сочлене
ние экзона 15-16
AGCTGCCTTTCT ТАТССССА
н.д.
н.д.
52 8
588662
2226
2245
Сочлене
ние экзона 15-16
CAGCTGCCTTTC ТТАТСССС
н.д.
н.д.
52 9
588585
2227
2246
Сочлене
ние экзона 15-16
ACAGCTGCCTTT СТТАТССС
н.д.
н.д.
53 0
588664
2238
2257
Экзон 16
GCATCTCTCTCA CAGCTGCC
7122
7141
53 1
588666
2276
2295
Экзон 16
AGATGTCCTTG ACTTTGTCA
7160
7179
53 2
588668
2330
2349
Экзон 16
CAGCATAGGGA СТСАСТССТ
7214
7233
53 3
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
АААТССТС А
598974
2553
2569
Экзон 18
AGAAAACC САААТССТС
7788
7804
3-104
62 0
599037
2553
2569
Экзон 18
AGAAAACC САААТССТС
7788
7804
5-7-5
62 0
598975
2554
2570
Экзон 18
TAGAAAAC ССАААТССТ
7789
7805
3-104
62 1
599038
2554
2570
Экзон 18
TAGAAAAC ССАААТССТ
7789
7805
5-7-5
62 1
598976
2555
2571
Экзон 18
ATAGAAAA СССАААТС С
7790
7806
3-104
62 2
599039
2555
2571
Экзон 18
ATAGAAAA СССАААТС С
7790
7806
5-7-5
62 2
598977
2557
2573
Экзон 18
TTATAGAA ААСССААА Т
7792
7808
3-104
62 3
599040
2557
2573
Экзон 18
TTATAGAA ААСССААА Т
7792
7808
5-7-5
62 3
598978
2558
2574
Экзон 18
CTTATAGA АААСССАА А
7793
7809
3-104
62 4
599041
2558
2574
Экзон 18
CTTATAGA АААСССАА А
7793
7809
5-7-5
62 4
598979
2559
2575
Экзон 18
CCTTATAGA АААСССАА
7794
7810
3-104
62 5
599042
2559
2575
Экзон 18
CCTTATAGA АААСССАА
7794
7810
5-7-5
62 5
598980
2560
2576
Экзон 18
CCCTTATAG ААААСССА
7795
7811
3-104
62 6
599043
2560
2576
Экзон 18
CCCTTATAG ААААСССА
7795
7811
5-7-5
62 6
598981
2561
2577
Экзон
ССССТТАТА
7796
7812
3-10-
GAAAACCC
599044
2561
2577
Экзон 18
ССССТТАТА GAAAACCC
7796
7812
5-7-5
62 7
598982
2562
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAACC
7797
7813
3-104
62 8
599045
2562
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAACC
7797
7813
5-7-5
62 8
598983
2563
2579
Экзон 18
ААССССТТА TAGAAAAC
7798
7814
3-104
62 9
599046
2563
2579
Экзон 18
ААССССТТА TAGAAAAC
7798
7814
5-7-5
62 9
598984
2564
2580
Экзон 18
АААССССТТ ATAGAAAA
7799
7815
3-104
63 0
599047
2564
2580
Экзон 18
АААССССТТ ATAGAAAA
7799
7815
5-7-5
63 0
598985
2565
2581
Экзон 18
GAAACCCC TTATAGAA А
7800
7816
3-104
63 1
599048
2565
2581
Экзон 18
GAAACCCC TTATAGAA А
7800
7816
5-7-5
63 1
598986
2566
2582
Экзон 18
GGAAACCC CTTATAGA A
7801
7817
3-104
63 2
599049
2566
2582
Экзон 18
GGAAACCC CTTATAGA A
7801
7817
5-7-5
63 2
598988
2567
2583
Экзон 18
AGGAAACC CCTTATAGA
7802
7818
3-104
63 3
599050
2567
2583
Экзон 18
AGGAAACC CCTTATAGA
7802
7818
5-7-5
63 3
598989
2568
2584
Экзон 18
CAGGAAAC CCCTTATAG
7803
7819
3-104
63 4
598990
2569
2585
Экзон 18
GCAGGAAA ССССТТАТА
7804
7820
3-104
63 5
598991
2570
2586
Экзон 18
AGCAGGAA АССССТТАТ
7805
7821
3-104
63 6
598992
2571
2587
Экзон 18
CAGCAGGA ААССССТТА
7806
7822
3-104
63 7
598993
2572
2588
Экзон 18
CCAGCAGG АААССССТТ
7807
7823
3-104
63 8
598994
2573
2589
Экзон 18
TCCAGCAG GAAACCCC Т
7808
7824
3-104
63 9
598995
2574
2590
Экзон 18
GTCCAGCA GGAAACCC С
7809
7825
3-104
64 0
598996
2575
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGGAAACC С
7810
7826
3-104
64 1
598997
2576
2592
Экзон 18
CTGTCCAGC AGGAAACC
7811
7827
3-104
64 2
598998
2577
2593
Экзон 18
CCTGTCCAG CAGGAAAC
7812
7828
3-104
64 3
598999
2578
2594
Экзон 18
CCCTGTCCA GCAGGAAA
7813
7829
3-104
64 4
599000
2580
2596
Экзон 18
GCCCCTGTC CAGCAGGA
7815
7831
3-104
64 5
599001
2581
2597
Экзон 18
CGCCCCTGT CCAGCAGG
7816
7832
3-104
64 6
599002
2582
2598
Экзон 18
ACGCCCCT GTCCAGCA G
7817
7833
3-104
64 7
599003
2583
2599
Экзон 18
CACGCCCCT GTCCAGCA
7818
7834
3-104
64 8
599004
2584
2600
Экзон 18
CCACGCCC CTGTCCAGC
7819
7835
3-104
64 9
599005
2585
2601
Экзон 18
CCCACGCC CCTGTCCAG
7820
7836
3-104
65 0
599006
2586
2602
Экзон 18
TCCCACGCC CCTGTCCA
7821
7837
3-104
65 1
599007
2587
2603
Экзон 18
ATCCCACG CCCCTGTCC
7822
7838
3-104
65 2
599008
2588
2604
Экзон
AATCCCAC
7823
7839
3-10-
GCCCCTGTC
599009
2589
2605
Экзон 18
СААТСССА CGCCCCTGT
7824
7840
3-104
65 4
599010
2590
2606
Экзон 18
ТСААТСССА CGCCCCTG
7825
7841
3-104
65 5
599011
2591
2607
Экзон 18
ТТСААТССС ACGCCCCT
7826
7842
3-104
65 6
599012
2592
2608
Экзон 18
АТТСААТСС CACGCCCC
7827
7843
3-104
65 7
599013
2593
2609
Экзон 18
ААТТСААТС CCACGCCC
7828
7844
3-104
65 8
599014
2594
2610
Экзон 18
ТААТТСААТ CCCACGCC
7829
7845
3-104
65 9
599015
2595
2611
Экзон 18
ТТААТТСАА TCCCACGC
7830
7846
3-104
66 0
599016
2596
2612
Экзон 18
ТТТААТТСА ATCCCACG
7831
7847
3-104
66 1
599017
2597
2613
Экзон 18
ТТТТААТТС ААТСССАС
7832
7848
3-104
66 2
599018
2598
2614
Экзон 18
GTTTTAATT СААТСССА
7833
7849
3-104
66 3
599019
2599
2615
Экзон 18
TGTTTTAAT ТСААТССС
7834
7850
3-104
66 4
599020
2600
2616
Экзон 18
CTGTTTTAA ТТСААТСС
7835
7851
3-104
66 5
599021
2601
2617
Экзон 18
GCTGTTTTA АТТСААТС
7836
7852
3-104
66 6
599022
2602
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСААТ
7837
7853
3-104
66 7
599023
2603
2619
Экзон 18
CAGCTGTTT ТААТТСАА
7838
7854
3-104
66 8
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGC TGTTTTAAT ТСА
7839
7858
5-105
31 7
599024
2604
2620
Экзон 18
GCAGCTGTT ТТААТТСА
7839
7855
3-104
66 9
599025
2605
2621
Экзон
CGCAGCTG
7840
7856
3-10-
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
59909 8
2552
2568
Экзон 18
GAAAACC САААТССТ СА
7787
7803
4-85
61 9
59909 9
2553
2569
Экзон 18
AGAAAAC ССАААТСС ТС
7788
7804
4-85
62 0
59910 0
2554
2570
Экзон 18
TAGAAAA СССАААТС СТ
7789
7805
4-85
62 1
59910 1
2555
2571
Экзон 18
ATAGAAA АСССАААТ СС
7790
7806
4-85
62 2
59910 2
2557
2573
Экзон 18
TTATAGAA ААСССАА AT
7792
7808
4-85
62 3
59910 3
2558
2574
Экзон 18
CTTATAGA AAACCCA АА
7793
7809
4-85
62 4
59910 4
2559
2575
Экзон 18
CCTTATAG ААААССС АА
7794
7810
4-85
62 5
59910 5
2560
2576
Экзон 18
СССТТАТА GAAAACC СА
7795
7811
4-85
62 6
59910 6
2561
2577
Экзон 18
ССССТТАТ AGAAAAC СС
7796
7812
4-85
62 7
59910 7
2562
2578
Экзон 18
АССССТТА TAGAAAA СС
7797
7813
4-85
62 8
59910 8
2563
2579
Экзон 18
ААССССТТ ATAGAAA АС
7798
7814
4-85
62 9
59910 9
2564
2580
Экзон 18
АААССССТ TATAGAA АА
7799
7815
4-85
63 0
59911
2565
2581
Экзон 18
GAAACCC
7800
7816
4-8-
CTTATAGA АА
59911 1
2566
2582
Экзон 18
GGAAACC CCTTATAG АА
7801
7817
4-85
63 2
59911 2
2567
2583
Экзон 18
AGGAAAC СССТТАТА GA
7802
7818
4-85
63 3
59911 3
2568
2584
Экзон 18
CAGGAAA ССССТТАТ AG
7803
7819
4-85
63 4
59905 1
2568
2584
Экзон 18
CAGGAAA ССССТТАТ AG
7803
7819
5-75
63 4
59911 4
2569
2585
Экзон 18
GCAGGAA ACCCCTTA ТА
7804
7820
4-85
63 5
59905 2
2569
2585
Экзон 18
GCAGGAA ACCCCTTA ТА
7804
7820
5-75
63 5
59911 5
2570
2586
Экзон 18
AGCAGGA AACCCCTT AT
7805
7821
4-85
63 6
59905 3
2570
2586
Экзон 18
AGCAGGA AACCCCTT AT
7805
7821
5-75
63 6
59911 6
2571
2587
Экзон 18
CAGCAGG AAACCCCT ТА
7806
7822
4-85
63 7
59905 4
2571
2587
Экзон 18
CAGCAGG AAACCCCT ТА
7806
7822
5-75
63 7
59911 7
2572
2588
Экзон 18
CCAGCAG GAAACCC CTT
7807
7823
4-85
63 8
59905 5
2572
2588
Экзон 18
CCAGCAG GAAACCC
7807
7823
5-75
63 8
стт
59911 8
2573
2589
Экзон 18
TCCAGCAG GAAACCC СТ
7808
7824
4-85
63 9
59905 6
2573
2589
Экзон 18
TCCAGCAG GAAACCC СТ
7808
7824
5-75
63 9
59911 9
2574
2590
Экзон 18
GTCCAGCA GGAAACC СС
7809
7825
4-85
64 0
59905 7
2574
2590
Экзон 18
GTCCAGCA GGAAACC СС
7809
7825
5-75
64 0
59912 0
2575
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGGAAAC СС
7810
7826
4-85
64 1
59905 8
2575
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGGAAAC CC
7810
7826
5-75
64 1
59912 1
2576
2592
Экзон 18
CTGTCCAG CAGGAAA CC
7811
7827
4-85
64 2
59905 9
2576
2592
Экзон 18
CTGTCCAG CAGGAAA CC
7811
7827
5-75
64 2
59912 2
2577
2593
Экзон 18
CCTGTCCA GCAGGAA AC
7812
7828
4-85
64 3
59906 0
2577
2593
Экзон 18
CCTGTCCA GCAGGAA AC
7812
7828
5-75
64 3
59912 3
2578
2594
Экзон 18
CCCTGTCC AGCAGGA AA
7813
7829
4-85
64 4
59906 1
2578
2594
Экзон 18
CCCTGTCC AGCAGGA AA
7813
7829
5-75
64 4
59912 4
2580
2596
Экзон 18
GCCCCTGT CCAGCAG GA
7815
7831
4-85
64 5
59906 2
2580
2596
Экзон 18
GCCCCTGT CCAGCAG GA
7815
7831
5-75
64 5
59912 5
2581
2597
Экзон 18
CGCCCCTG TCCAGCAG G
7816
7832
4-85
64 6
59906 3
2581
2597
Экзон 18
CGCCCCTG TCCAGCAG G
7816
7832
5-75
64 6
59912 6
2582
2598
Экзон 18
ACGCCCCT GTCCAGCA G
7817
7833
4-85
64 7
59906 4
2582
2598
Экзон 18
ACGCCCCT GTCCAGCA G
7817
7833
5-75
64 7
59912 7
2583
2599
Экзон 18
CACGCCCC TGTCCAGC A
7818
7834
4-85
64 8
59906 5
2583
2599
Экзон 18
CACGCCCC TGTCCAGC A
7818
7834
5-75
64 8
59906 6
2584
2600
Экзон 18
CCACGCCC CTGTCCAG С
7819
7835
5-75
64 9
59906 7
2585
2601
Экзон 18
CCCACGCC CCTGTCCA G
7820
7836
5-75
65 0
59906 8
2586
2602
Экзон 18
TCCCACGC CCCTGTCC A
7821
7837
5-75
65 1
59906 9
2587
2603
Экзон 18
ATCCCACG CCCCTGTC С
7822
7838
5-75
65 2
59907
2588
2604
Экзон 18
AATCCCAC
7823
7839
5-7-
GCCCCTGT С
59907 1
2589
2605
Экзон 18
СААТСССА CGCCCCTG Т
7824
7840
5-75
65 7
59907 2
2590
2606
Экзон 18
ТСААТССС ACGCCCCT G
7825
7841
5-75
65 5
59907 3
2591
2607
Экзон 18
ТТСААТСС CACGCCCC Т
7826
7842
5-75
65 6
59907 4
2592
2608
Экзон 18
АТТСААТС CCACGCCC С
7827
7843
5-75
65 7
59907 5
2593
2609
Экзон 18
ААТТСААТ CCCACGCC С
7828
7844
5-75
65 8
59907 6
2594
2610
Экзон 18
ТААТТСАА TCCCACGC С
7829
7845
5-75
65 9
59907 7
2595
2611
Экзон 18
ТТААТТСА ATCCCACG С
7830
7846
5-75
66 0
59907 8
2596
2612
Экзон 18
ТТТААТТС ААТСССАС G
7831
7847
5-75
66 1
59907 9
2597
2613
Экзон 18
ТТТТААТТ СААТСССА С
7832
7848
5-75
66 2
59908 0
2598
2614
Экзон 18
GTTTTAAT ТСААТССС А
7833
7849
5-75
66 3
59908 1
2599
2615
Экзон 18
TGTTTTAA ТТСААТСС С
7834
7850
5-75
66 4
59908 2
2600
2616
Экзон 18
CTGTTTTA АТТСААТС
7835
7851
5-75
66 5
59908 3
2601
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСААТ С
7836
7852
5-75
66 6
59908 4
2602
2618
Экзон 18
AGCTGTTT ТААТТСАА Т
7837
7853
5-75
66 7
59908 5
2603
2619
Экзон 18
CAGCTGTT ТТААТТСА А
7838
7854
5-75
66 8
53291 7
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGC TGTTTTAA ТТСА
7839
7858
510-5
31 7
59908 6
2604
2620
Экзон 18
GCAGCTGT ТТТААТТС А
7839
7855
5-75
66 9
59908 7
2605
2621
Экзон 18
CGCAGCTG ТТТТААТТ С
7840
7856
5-75
67 0
59908 8
2606
2622
Экзон 18
TCGCAGCT GTTTTAAT Т
7841
7857
5-75
67 1
59908 9
2607
2623
Экзон 18
GTCGCAGC TGTTTTAA Т
7842
7858
5-75
67 2
59909 0
2608
2624
Экзон 18
TGTCGCAG CTGTTTTA А
7843
7859
5-75
67 3
59909 1
2609
2625
Экзон 18
TTGTCGCA GCTGTTTT А
7844
7860
5-75
67 4
59909 2
2610
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTTT Т
7845
7861
5-75
67 5
59909 3
2611
2627
Экзон 18
TGTTGTCG CAGCTGTT Т
7846
7862
5-75
67 6
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
599334
2557
2575
Экзон 18
CCTTATAGA АААСССААА Т
7792
7810
5-95
68 5
599335
2558
2576
Экзон 18
CCCTTATAG ААААСССАА А
7793
7811
5-95
68 6
599336
2559
2577
Экзон 18
ССССТТАТА GAAAACCCA А
7794
7812
5-95
68 7
599337
2560
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAACCC А
7795
7813
5-95
68 8
599338
2561
2579
Экзон 18
ААССССТТА TAGAAAACC С
7796
7814
5-95
68 9
599339
2562
2580
Экзон 18
АААССССТТ ATAGAAAAC С
7797
7815
5-95
69 0
599281
2562
2580
Экзон 18
АААССССТТ ATAGAAAAC С
7797
7815
6-76
69 0
599340
2563
2581
Экзон 18
GAAACCCCT TATAGAAAA С
7798
7816
5-95
69 1
599282
2563
2581
Экзон 18
GAAACCCCT TATAGAAAA С
7798
7816
6-76
69 1
599341
2564
2582
Экзон 18
GGAAACCCC TTATAGAAA А
7799
7817
5-95
69 2
599283
2564
2582
Экзон 18
GGAAACCCC TTATAGAAA А
7799
7817
6-76
69 2
599342
2565
2583
Экзон 18
AGGAAACCC CTTATAGAA А
7800
7818
5-95
69 3
599284
2565
2583
Экзон 18
AGGAAACCC
7800
7818
6-7-
CTTATAGAA А
599343
2566
2584
Экзон 18
CAGGAAACC CCTTATAGA А
7801
7819
5-95
69 4
599285
2566
2584
Экзон 18
CAGGAAACC CCTTATAGA А
7801
7819
6-76
69 4
599344
2567
2585
Экзон 18
GCAGGAAA ССССТТАТА GA
7802
7820
5-95
69 5
599286
2567
2585
Экзон 18
GCAGGAAA ССССТТАТА GA
7802
7820
6-76
69 5
599345
2568
2586
Экзон 18
AGCAGGAA АССССТТАТ AG
7803
7821
5-95
69 6
599287
2568
2586
Экзон 18
AGCAGGAA АССССТТАТ AG
7803
7821
6-76
69 6
599346
2569
2587
Экзон 18
CAGCAGGA ААССССТТА ТА
7804
7822
5-95
69 7
599288
2569
2587
Экзон 18
CAGCAGGA ААССССТТА ТА
7804
7822
6-76
69 7
599347
2570
2588
Экзон 18
CCAGCAGGA ААССССТТА Т
7805
7823
5-95
69 8
599289
2570
2588
Экзон 18
CCAGCAGGA ААССССТТА Т
7805
7823
6-76
69 8
599348
2571
2589
Экзон 18
TCCAGCAGG АААССССТТ А
7806
7824
5-95
69 9
599290
2571
2589
Экзон 18
TCCAGCAGG АААССССТТ
7806
7824
6-76
69 9
599349
2572
2590
Экзон 18
GTCCAGCAG GAAACCCCT Т
7807
7825
5-95
70 0
599291
2572
2590
Экзон 18
GTCCAGCAG GAAACCCCT Т
7807
7825
6-76
70 0
599350
2573
2591
Экзон 18
TGTCCAGCA GGAAACCCC Т
7808
7826
5-95
70 1
599292
2573
2591
Экзон 18
TGTCCAGCA GGAAACCCC Т
7808
7826
6-76
70 1
599351
2575
2593
Экзон 18
CCTGTCCAG CAGGAAACC С
7810
7828
5-95
70 2
599293
2575
2593
Экзон 18
CCTGTCCAG CAGGAAACC С
7810
7828
6-76
70 2
599352
2576
2594
Экзон 18
CCCTGTCCA GCAGGAAA CC
7811
7829
5-95
70 3
599294
2576
2594
Экзон 18
CCCTGTCCA GCAGGAAA CC
7811
7829
6-76
70 3
599353
2577
2595
Экзон 18
CCCCTGTCC AGCAGGAA AC
7812
7830
5-95
70 4
599295
2577
2595
Экзон 18
CCCCTGTCC AGCAGGAA AC
7812
7830
6-76
70 4
599354
2578
2596
Экзон 18
GCCCCTGTC CAGCAGGA AA
7813
7831
5-95
70 5
599296
2578
2596
Экзон 18
GCCCCTGTC CAGCAGGA AA
7813
7831
6-76
70 5
599355
2580
2598
Экзон 18
ACGCCCCTG TCCAGCAGG А
7815
7833
5-95
70 6
599297
2580
2598
Экзон 18
ACGCCCCTG TCCAGCAGG А
7815
7833
6-76
70 6
599356
2581
2599
Экзон 18
CACGCCCCT GTCCAGCAG G
7816
7834
5-95
70 7
599298
2581
2599
Экзон 18
CACGCCCCT GTCCAGCAG G
7816
7834
6-76
70 7
599299
2582
2600
Экзон 18
CCACGCCCC TGTCCAGCA G
7817
7835
6-76
70 8
599300
2583
2601
Экзон 18
CCCACGCCC CTGTCCAGC A
7818
7836
6-76
70 9
599301
2584
2602
Экзон 18
TCCCACGCC CCTGTCCAG С
7819
7837
6-76
71 0
599302
2585
2603
Экзон 18
ATCCCACGC CCCTGTCCA G
7820
7838
6-76
71 1
599303
2586
2604
Экзон 18
AATCCCACG CCCCTGTCC A
7821
7839
6-76
71 2
599304
2587
2605
Экзон 18
CAATCCCAC GCCCCTGTC С
7822
7840
6-76
71 3
599305
2588
2606
Экзон 18
TCAATCCCA CGCCCCTGT С
7823
7841
6-76
71 4
599306
2589
2607
Экзон 18
TTCAATCCC ACGCCCCTG T
7824
7842
6-76
71 5
599307
2590
2608
Экзон 18
ATTCAATCC
7825
7843
6-7-
CACGCCCCT G
599308
2591
2609
Экзон 18
ААТТСААТС CCACGCCCC Т
7826
7844
6-76
71 7
599309
2592
2610
Экзон 18
ТААТТСААТ CCCACGCCC С
7827
7845
6-76
71 8
599310
2593
2611
Экзон 18
ТТААТТСАА TCCCACGCC С
7828
7846
6-76
599311
2594
2612
Экзон 18
ТТТААТТСА ATCCCACGC С
7829
7847
6-76
72 0
599312
2595
2613
Экзон 18
ТТТТААТТС AATCCCACG С
7830
7848
6-76
72 1
599313
2596
2614
Экзон 18
GTTTTAATT СААТСССАС G
7831
7849
6-76
72 2
599314
2597
2615
Экзон 18
TGTTTTAAT ТСААТСССА С
7832
7850
6-76
72 3
599315
2598
2616
Экзон 18
CTGTTTTAA ТТСААТССС А
7833
7851
6-76
72 4
599316
2599
2617
Экзон 18
GCTGTTTTA АТТСААТСС С
7834
7852
6-76
72 5
599317
2600
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСААТС С
7835
7853
6-76
72 6
599318
2601
2619
Экзон 18
CAGCTGTTT ТААТТСААТ С
7836
7854
6-76
72 7
599319
2602
2620
Экзон 18
GCAGCTGTT ТТААТТСАА
7837
7855
6-76
72 8
599320
2603
2621
Экзон 18
CGCAGCTGT ТТТААТТСА А
7838
7856
6-76
72 9
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCТ GTTTTAATT СА
7839
7858
510-5
31 7
599321
2604
2622
Экзон 18
TCGCAGCTG ТТТТААТТС А
7839
7857
6-76
73 0
599322
2605
2623
Экзон 18
GTCGCAGCТ GTTTTAATT С
7840
7858
6-76
73 1
599323
2606
2624
Экзон 18
TGTCGCAGC TGTTTTAAT Т
7841
7859
6-76
73 2
599324
2607
2625
Экзон 18
TTGTCGCAG CTGTTTTAA Т
7842
7860
6-76
73 3
599325
2608
2626
Экзон 18
GTTGTCGCA GCTGTTTTA А
7843
7861
6-76
73 4
599326
2609
2627
Экзон 18
TGTTGTCGC AGCTGTTTT А
7844
7862
6-76
73 5
599327
2610
2628
Экзон 18 /повтор
TTGTTGTCG CAGCTGTTT Т
н.д.
н.д.
6-76
73 6
599328
2611
2629
Экзон 18 /повтор
TTTGTTGTC GCAGCTGTT Т
н.д.
н.д.
6-76
73 7
599329
2612
2630
Экзон 18 /повтор
TTTTGTTGT CGCAGCTGT Т
н.д.
н.д.
6-76
73 8
599330
2613
2631
Экзон 18 /повтор
TTTTTGTTGT CGCAGCTGT
н.д.
н.д.
6-76
73 9
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
TTATAGAAAA
59946 1
2565
2584
Экзон 18
CAGGAAACCC CTTATAGAAA
7800
7819
3-107
42 3
59946 2
2566
2585
Экзон 18
GCAGGAAACC CCTTATAGAA
7801
7820
3-107
42 4
59946 3
2567
2586
Экзон 18
AGCAGGAAAC CCCTTATAGA
7802
7821
3-107
42 5
59946 4
2568
2587
Экзон 18
CAGCAGGAAA CCCCTTATAG
7803
7822
3-107
42 6
59946 5
2569
2588
Экзон 18
CCAGCAGGAA ACCCCTTATA
7804
7823
3-107
42 7
59946 6
2570
2589
Экзон 18
TCCAGCAGGA AACCCCTTAT
7805
7824
3-107
42 8
59946 7
2571
2590
Экзон 18
GTCCAGCAGG AAACCCCTTA
7806
7825
3-107
23 7
59946 8
2572
2591
Экзон 18
TGTCCAGCAGG АААССССТТ
7807
7826
3-107
42 9
59946 9
2573
2592
Экзон 18
CTGTCCAGCAG GAAACCCCT
7808
7827
3-107
43 0
59947 0
2574
2593
Экзон 18
CCTGTCCAGCA GGAAACCCC
7809
7828
3-107
43 1
59947 1
2575
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGC AGGAAACCC
7810
7829
3-107
43 2
59947 2
2576
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAG CAGGAAACC
7811
7830
3-107
43 3
59947 3
2577
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCA GCAGGAAAC
7812
7831
3-107
23 8
59947 4
2578
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCC AGCAGGAAA
7813
7832
3-107
43 4
59947 5
2579
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTC CAGCAGGAA
7814
7833
3-107
43 5
59947 6
2580
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGT CCAGCAGGA
7815
7834
3-107
43 6
59947 7
2581
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTG TCCAGCAGG
7816
7835
3-107
43 7
59947 8
2582
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCT GTCCAGCAG
7817
7836
3-107
43 8
59947 9
2583
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCC TGTCCAGCA
7818
7837
3-107
43 9
59948 0
2584
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCC CTGTCCAGC
7819
7838
3-107
44 0
59948 1
2585
2604
Экзон 18
AATCCCACGCC CCTGTCCAG
7820
7839
3-107
44 1
59948 2
2586
2605
Экзон 18
CAATCCCACGC CCCTGTCCA
7821
7840
3-107
44 2
59948 3
2587
2606
Экзон 18
TCAATCCCACG CCCCTGTCC
7822
7841
3-107
44 3
59948 4
2588
2607
Экзон 18
TTCAATCCCAC GCCCCTGTC
7823
7842
3-107
44 4
59948 5
2589
2608
Экзон 18
ATTCAATCCCA CGCCCCTGT
7824
7843
3-107
44 5
59948 6
2590
2609
Экзон 18
AATTCAATCCC ACGCCCCTG
7825
7844
3-107
44 6
59948 7
2591
2610
Экзон 18
TAATTCAATCC CACGCCCCT
7826
7845
3-107
44 7
59948 8
2592
2611
Экзон 18
ТТ ААТТСААТС CCACGCCCC
7827
7846
3-107
44 8
59948 9
2593
2612
Экзон 18
TTTAATTCAAT CCCACGCCC
7828
7847
3-107
59949 0
2594
2613
Экзон 18
TTTTAATTCAA TCCCACGCC
7829
7848
3-107
45 0
59949 1
2595
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCA ATCCCACGC
7830
7849
3-107
45 1
59949 2
2596
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTC AATCCCACG
7831
7850
3-107
45 2
59949 3
2597
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATT CAATCCCAC
7832
7851
3-107
45 3
59943 3
2597
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATT CAATCCCAC
7832
7851
6-8-6
45 3
59949 4
2598
2617
Экзон 18
GCTGTTTTAAT TCAATCCCA
7833
7852
3-107
45 4
59943 4
2598
2617
Экзон 18
GCTGTTTTAAT TCAATCCCA
7833
7852
6-8-6
45 4
59949
2599
2618
Экзон
AGCTGTTTTAA
7834
7853
3-10-
ТТСААТССС
59943 5
2599
2618
Экзон 18
AGCTGTTTTAA ТТСААТССС
7834
7853
6-8-6
23 9
59949 6
2600
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTTA АТТСААТСС
7835
7854
3-107
45 5
59943 6
2600
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTTA АТТСААТСС
7835
7854
6-8-6
45 5
59949 7
2601
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTT ААТТСААТС
7836
7855
3-107
45 6
59943 7
2601
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTT ААТТСААТС
7836
7855
6-8-6
45 6
59949 8
2602
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTT ТААТТСААТ
7837
7856
3-107
45 7
59943 8
2602
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTT ТААТТСААТ
7837
7856
6-8-6
45 7
59949 9
2603
2622
Экзон 18
TCGCAGCTGTT ТТААТТСАА
7838
7857
3-107
45 8
59943 9
2603
2622
Экзон 18
TCGCAGCTGTT ТТААТТСАА
7838
7857
6-8-6
45 8
53291 7
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
5-105
31 7
59950 0
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
3-107
31 7
59944 0
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
6-8-6
31 7
59950 1
2605
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTG ТТТТААТТС
7840
7859
3-107
45 9
59944 1
2605
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTG ТТТТААТТС
7840
7859
6-8-6
45 9
59950 2
2606
2625
Экзон 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAATT
7841
7860
3-107
46 0
59944 2
2606
2625
Экзон 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAATT
7841
7860
6-8-6
46 0
59950 3
2607
2626
Экзон 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTAAT
7842
7861
3-107
46 1
59944 3
2607
2626
Экзон 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTAAT
7842
7861
6-8-6
46 1
59950 4
2608
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAG CTGTTTTAA
7843
7862
3-107
39 5
59944 4
2608
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAG CTGTTTTAA
7843
7862
6-8-6
39 5
59950 5
2609
2628
Экзон
19/ повтор
TTGTTGTCGCA GCTGTTTTA
н.д.
н.д.
3-107
46 2
59944 5
2609
2628
Экзон
19/ повтор
TTGTTGTCGCA GCTGTTTTA
н.д.
н.д.
6-8-6
46 2
59950 6
2610
2629
Экзон
19/ повтор
TTTGTTGTCGC AGCTGTTTT
н.д.
н.д.
3-107
46 3
59944 6
2610
2629
Экзон
19/ повтор
TTTGTTGTCGC AGCTGTTTT
н.д.
н.д.
6-8-6
46 3
59950 7
2611
2630
Экзон
19/ повтор
TTTTGTTGTCG CAGCTGTTT
н.д.
н.д.
3-107
46 4
59944 7
2611
2630
Экзон
19/ повтор
TTTTGTTGTCG CAGCTGTTT
н.д.
н.д.
6-8-6
46 4
59950 8
2612
2631
Экзон
19/ повтор
TTTTTGTTGTC GCAGCTGTT
н.д.
н.д.
3-107
46 5
59944 8
2612
2631
Экзон
19/ повтор
TTTTTGTTGTC GCAGCTGTT
н.д.
н.д.
6-8-6
46 5
Пример 119: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов, которые имели
аналогичные условия культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку были трансфицированны с использованием электропорации с 2000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в представленных ниже таблицах были сконструированы как 4-8-5 МОЕ, 5-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 6-7-6- МОЕ, 3-10-5 МОЕ или 6-8-6 МОЕ гэпмеры.
Гэпмеры 4-8-5 МОЕ имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими четыре и пять нуклеозидов соответственно. Гэпмеры 5-8-5 МОЕ имеют 18 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 5-9-5 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из девяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 5-10-5 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 3-10-5 МОЕ имеют 18 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими три и пять нуклеозидов соответственно. Гэпмеры 6-7-6 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из семи 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Гэпмеры 6-8-6 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в
длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
"Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ Ш NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ Ш N0: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
Таблица 138
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
599 163
2563
2580
Экзо н 18
АААССССТТАТ AGAAAAC
7798
7815
58-5
74 3
599 164
2564
2581
Экзо н 18
GAAACCCCTTA TAGAAAA
7799
7816
58-5
74 4
599 165
2566
2583
Экзо н 18
AGGAAACCCCT TATAGAA
7801
7818
58-5
74 5
599 166
2567
2584
Экзо н 18
CAGGAAACCCC TTATAGA
7802
7819
58-5
74 6
599 167
2568
2585
Экзо н 18
GCAGGAAACCC CTTATAG
7803
7820
58-5
74 7
599 168
2569
2586
Экзо н 18
AGCAGGAAAC С CCTTATA
7804
7821
58-5
74 8
599 169
2570
2587
Экзо н 18
CAGCAGGAAAC CCCTTAT
7805
7822
58-5
74 9
599 170
2571
2588
Экзо н 18
CCAGCAGGAAA CCCCTTA
7806
7823
58-5
75 0
599 171
2572
2589
Экзо н 18
TCCAGCAGGAA ACCCCTT
7807
7824
58-5
75 1
599 172
2573
2590
Экзо н 18
GTCCAGCAGGA AACCCCT
7808
7825
58-5
75 2
599 173
2574
2591
Экзо н 18
TGTCCAGCAGG AAACCCC
7809
7826
58-5
75 3
599 174
2575
2592
Экзо н 18
CTGTCCAGC AG GAAACCC
7810
7827
58-5
75 4
599 175
2576
2593
Экзо н 18
CCTGTCCAGCA GGAAACC
7811
7828
58-5
75 5
599 176
2577
2594
Экзо н 18
CCCTGTCCAGC AGGAAAC
7812
7829
58-5
75 6
599 177
2578
2595
Экзо н 18
CCCCTGTCCAG CAGGAAA
7813
7830
58-5
75 7
599 178
2580
2597
Экзо н 18
CGCCCCTGTCC AGCAGGA
7815
7832
58-5
75 8
599 179
2581
2598
Экзо н 18
ACGCCCCTGTC CAGCAGG
7816
7833
58-5
75 9
599 180
2582
2599
Экзо н 18
CACGCCCCTGT CCAGCAG
7817
7834
58-5
76 0
599
2583
2600
Экзо
CCACGCCCCTG
7818
7835
181
н 18
TCCAGCA
8-5
599 128
2584
2600
Экзо н 18
ССACGCCCCTG TCCAGC
7819
7835
48-5
64 9
599 182
2584
2601
Экзо н 18
СССACGCCCCT GTCCAGC
7819
7836
58-5
76 2
599 129
2585
2601
Экзо н 18
СССACGCCCCT GTCCAG
7820
7836
48-5
65 0
599 183
2585
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCC TGTCCAG
7820
7837
58-5
76 3
599 130
2586
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCC TGTCCA
7821
7837
48-5
65 1
599 184
2586
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCA
7821
7838
58-5
76 4
599 131
2587
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCC
7822
7838
48-5
65 2
599 185
2587
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCC
7822
7839
58-5
76 5
599 132
2588
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTC
7823
7839
48-5
65 3
599 186
2588
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTC
7823
7840
58-5
76 6
599 133
2589
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGT
7824
7840
48-5
65 4
599 187
2589
2606
Экзо н 18
ТСААТСССACG CCCCTGT
7824
7841
58-5
76 7
599 134
2590
2606
Экзо н 18
ТСААТСССACG CCCCTG
7825
7841
48-5
65 5
599 188
2590
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTG
7825
7842
58-5
76 8
599 135
2591
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCT
7826
7842
48-5
65 6
599 189
2591
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCT
7826
7843
58-5
76 9
599 136
2592
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCC
7827
7843
48-5
65 7
599 190
2592
2609
Экзо н 18
AATTCAATCCC ACGCCCC
7827
7844
58-5
77 0
599 137
2593
2609
Экзо н 18
ААТТСААТССС ACGCCC
7828
7844
48-5
65 8
599 191
2593
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТСС CACGCCC
7828
7845
58-5
77 1
599 138
2594
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТСС CACGCC
7829
7845
48-5
65 9
599 192
2594
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТС CCACGCC
7829
7846
58-5
77 2
599 139
2595
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТС CCACGC
7830
7846
48-5
66 0
599 193
2595
2612
Экзо н 18
ТТТААТТСААТ CCCACGC
7830
7847
58-5
77 3
599 140
2596
2612
Экзо н 18
ТТТААТТСААТ CCCACG
7831
7847
48-5
78 6
599 194
2596
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСАА TCCCACG
7831
7848
58-5
77 4
599 141
2597
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСАА ТСССАС
7832
7848
48-5
66 2
599 195
2597
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCA АТСССАС
7832
7849
58-5
77 5
599 142
2598
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCA АТСССА
7833
7849
48-5
66 3
599 196
2598
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTC ААТСССА
7833
7850
58-5
77 6
599 143
2599
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTC ААТССС
7834
7850
48-5
66 4
599 197
2599
2616
Экзо н 18
CTGTTTTAATTC ААТССС
7834
7851
58-5
77 7
599 144
2600
2616
Экзо н 18
CTGTTTTAATTC ААТСС
7835
7851
48-5
66 5
599 198
2600
2617
Экзо н 18
GCTGTTTTAAT ТСААТСС
7835
7852
58-5
77 8
599 145
2601
2617
Экзо н 18
GCTGTTTTAAT ТСААТС
7836
7852
48-5
66 6
599 199
2601
2618
Экзо н 18
AGCTGTTTT АА ТТСААТС
7836
7853
58-5
77 9
599
2602
2618
Экзо
AGCTGTTTT АА
7837
7853
146
н 18
ТТСААТ
8-5
599 200
2602
2619
Экзо н 18
CAGCTGTTTTA АТТСААТ
7837
7854
58-5
78 0
599 147
2603
2619
Экзо н 18
CAGCTGTTTTA АТТСАА
7838
7854
48-5
66 8
599 201
2603
2620
Экзо н 18
GCAGCTGTTTT ААТТСАА
7838
7855
58-5
78 1
532 917
2604
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
5105
31 7
599 148
2604
2620
Экзо н 18
GCAGCTGTTTT ААТТСА
7839
7855
48-5
66 9
599 202
2604
2621
Экзо н 18
CGCAGCTGTTT ТААТТСА
7839
7856
58-5
78 2
599 149
2605
2621
Экзо н 18
CGCAGCTGTTT ТААТТС
7840
7856
48-5
67 0
599 203
2605
2622
Экзо н 18
TCGCAGCTGTT ТТААТТС
7840
7857
58-5
78 3
599 150
2606
2622
Экзо н 18
TCGCAGCTGTT ТТААТТ
7841
7857
48-5
67 1
599 151
2607
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТ
7842
7858
48-5
67 2
599 152
2608
2624
Экзо н 18
TGTCGCAGCTG ТТТТАА
7843
7859
48-5
67 3
599 153
2609
2625
Экзо н 18
TTGTCGCAGCT GTTTTA
7844
7860
48-5
67 4
599 154
2610
2626
Экзо н 18
GTTGTCGCAGC TGTTTT
7845
7861
48-5
67 5
599 155
2611
2627
Экзо н 18
TGTTGTCGCAG CTGTTT
7846
7862
48-5
67 6
599 156
2612
2628
Экзо н 18
повт ор
TTGTTGTCGCA GCTGTT
н.д.
н.д.
48-5
599 157
2613
2629
Экзо н 18
TTTGTTGTCGC AGCTGT
н.д.
н.д.
48-5
67 8
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
274
н 18
САААТССТ
7-6
599 215
2555
2572
Экзо н 18
ТATAGAAAAC С САААТСС
7790
7807
3105
78 7
599 216
2556
2573
Экзо н 18
ТТ ATAGAAAAC ССАААТС
7791
7808
3105
78 8
599 275
2556
2574
Экзо н 18
CTTATAGAAAA СССАААТС
7791
7809
67-6
68 4
599 217
2557
2574
Экзо н 18
CTTATAGAAAA СССАААТ
7792
7809
3105
599 276
2557
2575
Экзо н 18
CCTTATAGAAA АСССАААТ
7792
7810
67-6
68 5
599 218
2558
2575
Экзо н 18
CCTTATAGAAA АСССААА
7793
7810
3105
79 0
599 277
2558
2576
Экзо н 18
CCCTTATAGAA ААСССААА
7793
7811
67-6
68 6
599 219
2559
2576
Экзо н 18
CCCTTATAGAA ААСССАА
7794
7811
3105
79 1
599 278
2559
2577
Экзо н 18
ССССТТАТ AGA АААСССАА
7794
7812
67-6
68 7
599 220
2560
2577
Экзо н 18
ССССТТАТ AGA АААСССА
7795
7812
3105
74 0
599 279
2560
2578
Экзо н 18
АССССТТАТAG ААААСССА
7795
7813
67-6
68 8
599 221
2561
2578
Экзо н 18
АССССТТАТAG ААААССС
7796
7813
3105
74 1
599 280
2561
2579
Экзо н 18
ААССССТТАТА GAAAACCC
7796
7814
67-6
68 9
599 222
2562
2579
Экзо н 18
ААССССТТАТА GAAAACC
7797
7814
3105
74 2
599 223
2563
2580
Экзо н 18
АААССССТТАТ AGAAAAC
7798
7815
3105
74 3
599 224
2564
2581
Экзо н 18
GAAACCCCTTA TAGAAAA
7799
7816
3105
74 4
599 225
2566
2583
Экзо н 18
AGG AAACCCCT TATAGAA
7801
7818
3105
74 5
599 226
2567
2584
Экзо н 18
CAGGAAACCCC TTATAGA
7802
7819
3105
74 6
599 227
2568
2585
Экзо н 18
GCAGGAAACCC CTTATAG
7803
7820
3105
74 7
599 228
2569
2586
Экзо н 18
AGCAGGAAAC CCCTTATA
7804
7821
3105
74 8
599 229
2570
2587
Экзо н 18
CAGCAGGAAA ССССТТАТ
7805
7822
3105
74 9
599 230
2571
2588
Экзо н 18
CCAGCAGGAA ACCCCTTA
7806
7823
3105
75 0
599 231
2572
2589
Экзо н 18
TCCAGCAGGAA ACCCCTT
7807
7824
3105
75 1
599 232
2573
2590
Экзо н 18
GTCCAGCAGGA AACCCCT
7808
7825
3105
75 2
599 233
2574
2591
Экзо н 18
TGTCCAGCAGG AAACCCC
7809
7826
3105
75 3
599 234
2575
2592
Экзо н 18
CTGTCCAGCAG GAAACCC
7810
7827
3105
75 4
599
2576
2593
Экзо
CCTGTCCAGCA
7811
7828
235
н 18
GGAAACC
105
599 236
2577
2594
Экзо н 18
CCCTGTCCAGC AGGAAAC
7812
7829
3105
75 6
599 237
2578
2595
Экзо н 18
CCCCTGTCCAG CAGGAAA
7813
7830
3105
75 7
599 238
2580
2597
Экзо н 18
CGCCCCTGTCC AGCAGGA
7815
7832
3105
75 8
599 239
2581
2598
Экзо н 18
ACGCCCCTGTC CAGCAGG
7816
7833
3105
75 9
599 240
2582
2599
Экзо н 18
CACGCCCCTGT CCAGCAG
7817
7834
3105
76 0
599 241
2583
2600
Экзо н 18
CCACGCCCCTG TCCAGCA
7818
7835
3105
76 1
599 242
2584
2601
Экзо н 18
CCCACGCCCCT GTCCAGC
7819
7836
3105
76 2
599 243
2585
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCC TGTCCAG
7820
7837
3105
76 3
599 244
2586
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCA
7821
7838
3105
76 4
599 245
2587
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCC
7822
7839
3105
76 5
599 246
2588
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTC
7823
7840
3105
76 6
599 247
2589
2606
Экзо н 18
ТСААТСССACG CCCCTGT
7824
7841
310-
76 7
599 248
2590
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTG
7825
7842
3105
76 8
599 249
2591
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCT
7826
7843
3105
76 9
599 250
2592
2609
Экзо н 18
ААТТСААТССС ACGCCCC
7827
7844
3105
77 0
599 251
2593
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТСС CACGCCC
7828
7845
3105
77 1
599 252
2594
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТС CCACGCC
7829
7846
3105
77 2
599 253
2595
2612
Экзо н 18
ТТТААТТСААТ CCCACGC
7830
7847
3105
77 3
599 254
2596
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСАА TCCCACG
7831
7848
3105
77 4
599 255
2597
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCA ATCCCAC
7832
7849
3105
77 5
599 256
2598
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTC AATCCCA
7833
7850
3105
77 6
599 257
2599
2616
Экзо н 18
CTGTTTTAATT CAATCCC
7834
7851
3105
77 7
599 258
2600
2617
Экзо н 18
GCTGTTTTAAT TCAATCC
7835
7852
3105
77 8
599 259
2601
2618
Экзо н 18
AGCTGTTTT AA TTCAATC
7836
7853
3105
77 9
599 260
2602
2619
Экзо н 18
CAGCTGTTTTA АТТСААТ
7837
7854
3105
78 0
599 261
2603
2620
Экзо н 18
GCAGCTGTTTT ААТТСАА
7838
7855
3105
78 1
532 917
2604
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
5105
31 7
599 262
2604
2621
Экзо н 18
CGCAGCTGTTT ТААТТСА
7839
7856
3105
78 2
599 263
2605
2622
Экзо н 18
TCGCAGCTGTT ТТААТТС
7840
7857
3105
78 3
599 264
2606
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТ
7841
7858
3105
78 4
599 265
2607
2624
Экзо н 18
TGTCGCAGCTG ТТТТААТ
7842
7859
3105
79 2
599 205
2607
2624
Экзо н 18
TGTCGCAGCTG ТТТТААТ
7842
7859
58-5
79 2
599 266
2608
2625
Экзо н 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAA
7843
7860
3105
79 3
599 206
2608
2625
Экзо н 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAA
7843
7860
58-5
79 3
599 267
2609
2626
Экзо н 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTA
7844
7861
3105
79 4
599 207
2609
2626
Экзо н 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTA
7844
7861
58-5
79 4
599 268
2610
2627
Экзо н 18
TGTTGTCGCAG CTGTTTT
7845
7862
3105
79 5
599
2610
2627
Экзо
TGTTGTCGCAG
7845
7862
208
н 18
CTGTTTT
8-5
599 269
2611
2628
Экзо н 18
повт ор
TTGTTGTCGCA GCTGTTT
н.д.
н.д.
3105
79 6
599 209
2611
2628
Экзо н 18
повт ор
TTGTTGTCGCA GCTGTTT
н.д.
н.д.
58-5
79 6
599 270
2612
2629
Экзо н 18
повт ор
TTTGTTGTCGC AGCTGTT
н.д.
н.д.
3105
79 7
599 210
2612
2629
Экзо н 18
повт ор
TTTGTTGTCGC AGCTGTT
н.д.
н.д.
58-5
79 7
599 271
2613
2630
Экзо н 18
повт ор
TTTTGTTGTCG CAGCTGT
н.д.
н.д.
3105
79 8
599 211
2613
2630
Экзо н 18
повт ор
TTTTGTTGTCG CAGCTGT
н.д.
н.д.
58-5
79 8
599 272
2614
2631
Экзо н 18
повт ор
TTTTTGTTGTCG CAGCTG
н.д.
н.д.
3105
79 9
599
2614
2631
Экзо
TTTTTGTTGTCG
н.д.
н.д.
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
599 399
2563
2582
Экзо н 18
GGАААССССТТ ATAGAAAAC
7798
7817
68-6
42 1
599 400
2564
2583
Экзо н 18
AGGAAACCCCT TATAGAAAA
7799
7818
68-6
42 2
599 401
2565
2584
Экзо н 18
CAGGAAACCCC TTATAGAAA
7800
7819
68-6
42 3
599 402
2566
2585
Экзо н 18
GCAGGAAACCC CTTATAGAA
7801
7820
68-6
42 4
599 403
2567
2586
Экзо н 18
AGCAGGAAACC CCTTATAGA
7802
7821
68-6
42 5
599 404
2568
2587
Экзо н 18
CAGCAGGAAAC CCCTTATAG
7803
7822
68-6
42 6
599 405
2569
2588
Экзо н 18
CCAGCAGGAAA ССССТТАТА
7804
7823
68-6
42 7
599 406
2570
2589
Экзо н 18
TCCAGCAGGAA АССССТТАТ
7805
7824
68-6
42 8
599 407
2571
2590
Экзо н 18
GTCCAGCAGGA ААССССТТА
7806
7825
68-6
23 7
599 408
2572
2591
Экзо н 18
TGTCCAGCAGG АААССССТТ
7807
7826
68-6
42 9
599 409
2573
2592
Экзо н 18
CTGTCCAGCAG GAAACCCCT
7808
7827
68-6
43 0
599 410
2574
2593
Экзо н 18
CCTGTCCAGCA GGAAACCCC
7809
7828
68-6
43 1
599 411
2575
2594
Экзо н 18
CCCTGTCCAGC AGGAAACCC
7810
7829
68-6
43 2
599 412
2576
2595
Экзо н 18
CCCCTGTCCAG CAGGAAACC
7811
7830
68-6
43 3
599 413
2577
2596
Экзо н 18
GCCCCTGTCCA GCAGGAAAC
7812
7831
68-6
23 8
599 414
2578
2597
Экзо н 18
CGCCCCTGTCC AGCAGGAAA
7813
7832
68-6
43 4
599 415
2579
2598
Экзо н 18
ACGCCCCTGTC CAGCAGGAA
7814
7833
68-6
43 5
599 416
2580
2599
Экзо н 18
CACGCCCCTGT CCAGCAGGA
7815
7834
68-6
43 6
599
2581
2600
Экзо
CCACGCCCCTG
7816
7835
417
н 18
TCCAGCAGG
8-6
599 357
2582
2600
Экзо н 18
CCACGCCCCTG TCCAGCAG
7817
7835
59-5
70 8
599 418
2582
2601
Экзо н 18
CCCACGCCCCT GTCCAGCAG
7817
7836
68-6
43 8
599 358
2583
2601
Экзо н 18
CCCACGCCCCT GTCCAGCA
7818
7836
59-5
70 9
599 419
2583
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCCT GTCCAGCA
7818
7837
68-6
83 3
599 359
2584
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCCT GTCCAGC
7819
7837
59-5
83 4
599 420
2584
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCAGC
7819
7838
68-6
44 0
599 360
2585
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCAG
7820
7838
59-5
71 1
599 421
2585
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCCAG
7820
7839
68-6
44 1
599 361
2586
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCCA
7821
7839
59-5
71 2
599 422
2586
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTCCA
7821
7840
68-6
44 2
599 362
2587
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTCC
7822
7840
59-5
71 3
599 423
2587
2606
Экзо н 18
TCAATCCCACG CCCCTGTCC
7822
7841
68-6
84 1
599 363
2588
2606
Экзо н 18
TCAATCCCACG CCCCTGTC
7823
7841
59-5
71 4
599 424
2588
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTGTC
7823
7842
68-6
44 4
599 364
2589
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTGT
7824
7842
59-5
71 5
599 425
2589
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCTGT
7824
7843
68-6
44 5
599 365
2590
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCTG
7825
7843
59-5
71 6
599 426
2590
2609
Экзо н 18
AATTCAATCCC ACGCCCCTG
7825
7844
68-6
44 6
599 366
2591
2609
Экзо н 18
ААТТСААТССС ACGCCCCT
7826
7844
59-5
71 7
599 427
2591
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТССС ACGCCCCT
7826
7845
68-6
599 367
2592
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТССС ACGCCCC
7827
7845
59-5
71 8
599 428
2592
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТСС CACGCCCC
7827
7846
68-6
44 8
599 368
2593
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТСС CACGCCC
7828
7846
59-5
599 429
2593
2612
Экзо н 18
ТТТ ААТТСААТС CCACGCCC
7828
7847
68-6
599 369
2594
2612
Экзо н 18
ТТТ ААТТСААТС CCACGCC
7829
7847
59-5
72 0
599 430
2594
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСААТ CCCACGCC
7829
7848
68-6
45 0
599 370
2595
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСААТ CCCACGC
7830
7848
59-5
72 1
599 431
2595
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCAA TCCCACGC
7830
7849
68-6
45 1
599 371
2596
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCAA TCCCACG
7831
7849
59-5
72 2
599 432
2596
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTCA ATCCCACG
7831
7850
68-6
45 2
599 372
2597
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTCA ATCCCAC
7832
7850
59-5
72 3
599 373
2598
2616
Экзо н 18
CTGTTTTAATTC AATCCCA
7833
7851
59-5
72 4
599 374
2599
2617
Экзо н 18
GCTGTTTT AATT CAATCCC
7834
7852
59-5
72 5
599 375
2600
2618
Экзо н 18
AGCTGTTTTAAT TCAATCC
7835
7853
59-5
72 6
599 376
2601
2619
Экзо н 18
CAGCTGTTTTAA TTCAATC
7836
7854
59-5
72 7
599 377
2602
2620
Экзо н 18
GCAGCTGTTTTA ATTCAAT
7837
7855
59-5
72 8
599
2603
2621
Экзо
CGCAGCTGTTTT
7838
7856
378
н 18
ААТТСАА
9-5
532 917
2604
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
5105
86 7
599 379
2604
2622
Экзо н 18
TCGC AGCTGTTT ТААТТСА
7839
7857
59-5
73 0
599 380
2605
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТС
7840
7858
59-5
86 9
599 381
2606
2624
Экзо н 18
TGTCGCAGCTG ТТТТААТТ
7841
7859
59-5
73 2
599 382
2607
2625
Экзо н 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAAT
7842
7860
59-5
73 3
599 383
2608
2626
Экзо н 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTAA
7843
7861
59-5
73 4
599 384
2609
2627
Экзо н 18
TGTTGTCGCAG CTGTTTTA
7844
7862
59-5
87 3
599 385
2610
2628
Экзо н 18
повт ор
TTGTTGTCGCAG CTGTTTT
н.д.
н.д.
59-5
73 6
599 386
2611
2629
Экзо н 18
повт ор
TTTGTTGTCGCA GCTGTTT
н.д.
н.д.
59-5
73 7
599 387
2612
2630
Экзо н 18
повт ор
TTTTGTTGTCGC AGCTGTT
н.д.
н.д.
59-5
73 8
599 388
2613
2631
Экзо н 18
повт ор
TTTTTGTTGTCG CAGCTGT
н.д.
н.д.
59-5
73 9
Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРНК CFB. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку были трансфицированны с использованием электропорации с 1000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ГЩР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в представленных ниже таблицах были сконструированы как дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды. Дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем нуклеозид содержит либо модификацию сахара МОЕ, либо модификацию сахара (S)-cEt, либо дезокси модификацию. В колонке "Химизм" описаны модификации сахара для каждого олигонуклеотида. "к" означает (S)-cEt модификацию сахара; "d" означает дезоксирибозу; и "е" означает модификацию МОЕ.
"Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ Ш NO: 1 (с номером доступа GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ Ш NO: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе
Таблица 141
Ингибирование мРНК CFB дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами, направленными
59952 2
256 5
258 0
Экзон 18
АААССССТТ ATAGA АА
780 0
7815
ekkeekkddddd ddkk
567
59952 3
256 6
258 1
Экзон 18
GAAACCCCTTATAG АА
780 1
7816
ekkeekkddddd ddkk
568
59952 4
256 7
258 2
Экзон 18
GGAAACCCCTTATA GA
780 2
7817
ekkeekkddddd ddkk
569
59952 5
256 8
258 3
Экзон 18
AGGAAACCCCTTAT AG
780 3
7818
ekkeekkddddd ddkk
570
59952 6
256 9
258 4
Экзон 18
CAGGAAACCCCTTA ТА
780 4
7819
ekkeekkddddd ddkk
571
59952 7
257 0
258 5
Экзон 18
GCAGGАААССССТТ AT
780 5
7820
ekkeekkddddd ddkk
572
59952 8
257 1
258 6
Экзон 18
AGCAGGAAACCCCT ТА
780 6
7821
ekkeekkddddd ddkk
573
59952 9
257 2
258 7
Экзон 18
CAGCAGGАААСССС ТТ
780 7
7822
ekkeekkddddd ddkk
574
59953 0
257 4
258 9
Экзон 18
TCCAGCAGGAAACC СС
780 9
7824
ekkeekkddddd ddkk
576
59953 1
257 5
259 0
Экзон 18
GTCCAGCAGGАААС СС
781 0
7825
ekkeekkddddd ddkk
577
59953 2
257 6
259 1
Экзон 18
TGTCCAGCAGGAAA СС
781 1
7826
ekkeekkddddd ddkk
578
59953 3
257 7
259 2
Экзон 18
CTGTCC AGCAGGAA AC
781 2
7827
ekkeekkddddd ddkk
820
59953 4
257 8
259 3
Экзон 18
CCTGTCC AGCAGGA AA
781 3
7828
ekkeekkddddd ddkk
580
59953 5
258 0
259 5
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCAG GA
781 5
7830
ekkeekkddddd ddkk
582
59953 6
258 2
259 7
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAGC AG
781 7
7832
ekkeekkddddd ddkk
584
59953 7
258 3
259 8
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCAG CA
781 8
7833
ekkeekkddddd ddkk
585
59953 8
258 4
259 9
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCA GC
781
7834
ekkeekkddddd ddkk
586
59953 9
258 5
260 0
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCC AG
782 0
7835
ekkeekkddddd ddkk
587
59954
258
260
Экзон
CCCACGCCCCTGTC
782
7836
ekkeekkddddd
588
ddkk
59954 1
258 7
260 2
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGT СС
782 2
7837
ekkeekkddddd ddkk
589
59954 2
258 8
260 3
Экзон 18
АТСССACGCCCCTG ТС
782 3
7838
ekkeekkddddd ddkk
590
59954 3
258 9
260 4
Экзон 18
ААТСССACGCCCCT GT
782 4
7839
ekkeekkddddd ddkk
591
59954 4
259 0
260 5
Экзон 18
CAATCCCACGCCCC TG
782 5
7840
ekkeekkddddd ddkk
831
59954 5
259 1
260 6
Экзон 18
TCAATCCCACGCCC СТ
782 6
7841
ekkeekkddddd ddkk
593
59954 6
259 2
260 7
Экзон 18
TTCAATCCCACGCC CC
782 7
7842
ekkeekkddddd ddkk
594
59954 7
259 3
260 8
Экзон 18
ATTCAATCCCACGC CC
782 8
7843
ekkeekkddddd ddkk
595
59954 8
259 4
260 9
Экзон 18
AATTC ААТССС ACG CC
782 9
7844
ekkeekkddddd ddkk
596
59954 9
259 5
261 0
Экзон 18
TAATTCAATCCCAC GC
783 0
7845
ekkeekkddddd ddkk
597
59955 0
259 6
261 1
Экзон 18
TTAATTCAATCCCA CG
783 1
7846
ekkeekkddddd ddkk
598
59955 1
259 7
261 2
Экзон 18
TTTAATTCAATCCC AC
783 2
7847
ekkeekkddddd ddkk
599
59957 7
259 7
261 3
Экзон 18
TTTTAATTCAATCC CAC
783 2
7848
eeekkddddddd kkeee
662
59955 2
259 8
261 3
Экзон 18
TTTTAATTCAATCC CA
783 3
7848
ekkeekkddddd ddkk
600
59957 8
259 8
261 4
Экзон 18
GTTTTAATTCAATC CCA
783 3
7849
eeekkddddddd kkeee
663
59955 3
259 9
261 4
Экзон 18
GTTTTAATTCAATC CC
783 4
7849
ekkeekkddddd ddkk
601
59957 9
259 9
261 5
Экзон 18
TGTTTTAATTC AAT CCC
783 4
7850
eeekkddddddd kkeee
664
59955 4
260 0
261 5
Экзон 18
TGTTTTAATTC AAT CC
783 5
7850
ekkeekkddddd ddkk
602
59958 0
260 0
261 6
Экзон 18
CTGTTTTAATTC AA TCC
783 5
7851
eeekkddddddd kkeee
665
59955 5
260 1
261 6
Экзон 18
CTGTTTTAATTC АА ТС
783 6
7851
ekkeekkddddd ddkk
846
59958 1
260 1
261 7
Экзон 18
GCTGTTTTAATTCA АТС
783 6
7852
eeekkddddddd kkeee
666
59955 6
260 2
261 7
Экзон 18
GCTGTTTTAATTCA AT
783 7
7852
ekkeekkddddd ddkk
604
59958 2
260 2
261 8
Экзон 18
AGCTGTTTTAATTC ААТ
783 7
7853
eeekkddddddd kkeee
849
59955 7
260 3
261 8
Экзон 18
AGCTGTTTTAATTC АА
783 8
7853
ekkeekkddddd ddkk
850
59958 3
260 3
261 9
Экзон 18
CAGCTGTTTTAATT САА
783 8
7854
eeekkddddddd kkeee
668
53291 7
260 4
262 3
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTT ААТТСА
783 9
7858
eeeeedddddddd ddeeeee
317
59955 8
260 4
261 9
Экзон 18
CAGCTGTTTTAATT СА
783 9
7854
ekkeekkddddd ddkk
606
59958 4
260 4
262 0
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAAT ТСА
783 9
7855
eeekkddddddd kkeee
669
59955 9
260 5
262 0
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAAT ТС
784 0
7855
ekkeekkddddd ddkk
607
59958 5
260 5
262 1
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAA ТТС
784 0
7856
eeekkddddddd kkeee
670
59956 0
260 6
262 1
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAA ТТ
784 1
7856
ekkeekkddddd ddkk
608
59958 6
260 6
262 2
Экзон 18
TCGCAGCTGTTTTA ATT
784 1
7857
eeekkddddddd kkeee
671
59956 1
260 7
262 2
Экзон 18
TCGCAGCTGTTTTA AT
784 2
7857
ekkeekkddddd ddkk
609
59958 7
260 7
262 3
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTT AAT
784 2
7858
eeekkddddddd kkeee
672
58886 0
260 8
262 3
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTT AA
784 3
7858
eekddddddddd dkke
610
59956 2
260 8
262 3
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTT AA
784 3
7858
ekkeekkddddd ddkk
610
59958 8
260 8
262 4
Экзон 18
TGTCGC AGCTGTTT TAA
784 3
7859
eeekkddddddd kkeee
673
59956
260
262
Экзон
TGTCGC AGCTGTTT
784
7859
ekkeekkddddd
611
ddkk
59958 9
260 9
262 5
Экзон 18
TTGTCGCAGCTGTT ТТА
784 4
7860
eeekkddddddd kkeee
674
59956 4
261 0
262 5
Экзон 18
TTGTCGCAGCTGTT ТТ
784 5
7860
ekkeekkddddd ddkk
612
59959 0
261 0
262 6
Экзон 18
GTTGTCGCAGCTGT ТТТ
784 5
7861
eeekkddddddd kkeee
675
59956 5
261 1
262 6
Экзон 18
GTTGTCGCAGCTGT ТТ
784 6
7861
ekkeekkddddd ddkk
613
59959 1
261 1
262 7
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCTG ТТТ
784 6
7862
eeekkddddddd kkeee
676
59956 6
261 2
262 7
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCTG ТТ
784 7
7862
ekkeekkddddd ddkk
614
59959 2
261 2
262 8
Экзон
18/ повто
TTGTTGTCGCAGCT GTT
н.д.
н.д.
eeekkddddddd kkeee
677
59956 7
261 3
262 8
Экзон
18/ повто
TTGTTGTCGCAGCT GT
н.д.
н.д.
ekkeekkddddd ddkk
615
59959 3
261 3
262 9
Экзон
18/ повто
TTTGTTGTCGC AGC TGT
н.д.
н.д.
eeekkddddddd kkeee
678
59956 8
261 4
262 9
Экзон
18/ повто
TTTGTTGTCGC AGC TG
н.д.
н.д.
ekkeekkddddd ddkk
616
59959 4
261 4
263 0
Экзон
18/ повто
TTTTGTTGTCGCAG CTG
н.д.
н.д.
eeekkddddddd kkeee
679
59956 9
261 5
263 0
Экзон
18/ повто
TTTTGTTGTCGCAG CT
н.д.
н.д.
ekkeekkddddd ddkk
617
59959 5
261 5
263 1
Экзон
18/ повто
TTTTTGTTGTCGCA GCT
н.д.
н.д.
eeekkddddddd kkeee
680
Экзон
59957
261
263
18/
TTTTTGTTGTCGCA
ekkeekkddddd
н.д.
н.д.
повто
ddkk
618
Пример 121: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту человеческого фактора комплемента В (CFB), и были протестированы на их воздействие in vitro на мРРЖ CFB. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов, которые имели аналогичные условия культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Культивированные клетки HepG2 с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицировали с использованием электропорации с 500 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода обработки в течение около 24 часов, РНК выделяли из клеток и уровни мРНК CFB измеряли методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Впервые сконструированные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в представленных ниже таблицах были сконструированы как дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды или как 5-8-5 МОЕ, 5-9-5 МОЕ, 5-10-5 МОЕ, 6-7-6- МОЕ, 3-10-5 МОЕ или 6-8-6 МОЕ гэпмеры.
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем нуклеозид содержит либо модификацию сахара МОЕ, либо модификацию сахара (S)-cEt, либо дезокси модификацию. В колонке "Химизм" описаны модификации сахара для каждого олигонуклеотида. "к" означает (S)-cEt модификацию сахара; "d" означает дезоксирибозу; и "е" означает модификацию МОЕ.
Гэпмеры 5-8-5 МОЕ имеют 18 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 5-9-5 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из девяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 510-5 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по пять нуклеозидов каждое. Гэпмеры 3-10-5 МОЕ имеют 18 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими три и пять нуклеозидов соответственно. Гэпмеры 6-7-6 МОЕ имеют 19 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из семи 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Гэпмеры 6-8-6 МОЕ имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из восьми 2'-дезоксинуклеозидов и окружен крыльями с 5' конца и в 3' конца, содержащими по шесть нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
"Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. "Сайт терминации" обозначает самый крайний 3' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в представленных ниже таблицах, направлен на мРНК CFB человека, обозначенную в данном описании как SEQ Ш NO: 1 (с номером доступа
GENBANK NM_001710.5) или на геномную последовательность CFB человека, обозначенную в настоящем документе как SEQ Ш N0: 2 (с номером доступа GENBANK NT_007592.15, усеченную с нуклеотида 31852000 по 31861000), или на обе последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
Таблица 142
Ингибирование мРНК CFB дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами, направленными
601222
2555
2570
Экзон 18
TAGAAAACCCAAAT СС
7790
7805
ekkkddddddddkeee
559
601157
2556
2571
Экзон 18
ATAGAAAACCCAAA ТС
7791
7806
eekkddddddddkkee
560
601223
2556
2571
Экзон 18
ATAGAAAACCCAAA ТС
7791
7806
ekkkddddddddkeee
560
601158
2557
2572
Экзон 18
TATAGAAAACCCAA AT
7792
7807
eekkddddddddkkee
802
601224
2557
2572
Экзон 18
TATAGAAAACCCAA AT
7792
7807
ekkkddddddddkeee
802
601159
2558
2573
Экзон 18
TTATAGAAAACCCA AA
7793
7808
eekkddddddddkkee
803
601225
2558
2573
Экзон 18
TTATAGAAAACCCA AA
7793
7808
ekkkddddddddkeee
803
601160
2559
2574
Экзон 18
CTT ATAGAAAACCC AA
7794
7809
eekkddddddddkkee
561
601226
2559
2574
Экзон 18
CTT ATAGAAAACCC AA
7794
7809
ekkkddddddddkeee
561
601161
2560
2575
Экзон 18
CCTTAT AGAAAACC CA
7795
7810
eekkddddddddkkee
562
601227
2560
2575
Экзон 18
CCTTAT AGAAAACC CA
7795
7810
ekkkddddddddkeee
562
601162
2561
2576
Экзон 18
CCCTT ATAGAAAAC CC
7796
7811
eekkddddddddkkee
563
601228
2561
2576
Экзон 18
CCCTT ATAGAAAAC CC
7796
7811
ekkkddddddddkeee
563
601163
2562
2577
Экзон 18
ССССТТАТ AGAAAA CC
7797
7812
eekkddddddddkkee
564
601164
2563
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAA AC
7798
7813
eekkddddddddkkee
565
601165
2564
2579
Экзон 18
AACCCCTTATAGAA AA
7799
7814
eekkddddddddkkee
566
601166
2565
2580
Экзон 18
AAACCCCTTATAGA AA
7800
7815
eekkddddddddkkee
567
601167
2566
2581
Экзон 18
GAAACCCCTTATAG AA
7801
7816
eekkddddddddkkee
568
601168
2567
2582
Экзон 18
GGAAACCCCTTATA GA
7802
7817
eekkddddddddkkee
569
601169
2568
2583
Экзон 18
AGGАААССССТТ AT AG
7803
7818
eekkddddddddkkee
570
601170
2569
2584
Экзон 18
CAGGAAACCCCTTA ТА
7804
7819
eekkddddddddkkee
571
601171
2570
2585
Экзон 18
GC AGG АААССССТТ AT
7805
7820
eekkddddddddkkee
572
601172
2571
2586
Экзон 18
AGC AGG AAACCCCT ТА
7806
7821
eekkddddddddkkee
573
601173
2572
2587
Экзон 18
CAGCAGGAAACCCC TT
7807
7822
eekkddddddddkkee
574
601174
2573
2588
Экзон 18
CCAGCAGGAAACCC CT
7808
7823
eekkddddddddkkee
575
601175
2574
2589
Экзон 18
TCCAGCAGGAAACC CC
7809
7824
eekkddddddddkkee
576
601176
2575
2590
Экзон 18
GTCCAGCAGGAAAC CC
7810
7825
eekkddddddddkkee
577
601177
2576
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGG AAA CC
7811
7826
eekkddddddddkkee
578
601178
2577
2592
Экзон 18
CTGTCCAGC AGG AA AC
7812
7827
eekkddddddddkkee
579
601179
2578
2593
Экзон 18
CCTGTCCAGCAGGA AA
7813
7828
eekkddddddddkkee
580
601180
2579
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGCAGG AA
7814
7829
eekkddddddddkkee
581
601181
2580
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCAG GA
7815
7830
eekkddddddddkkee
582
601182
2581
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCAGCA GG
7816
7831
eekkddddddddkkee
583
601183
2582
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAGCA G
7817
7832
eekkddddddddkkee
584
601184
2583
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCAGC A
7818
7833
eekkddddddddkkee
585
601185
2584
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCAG С
7819
7834
eekkddddddddkkee
586
601186
2585
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCCA
7820
7835
eekkddddddddkkee
587
601187
2586
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGTCC А
7821
7836
eekkddddddddkkee
588
601188
2587
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGTC С
7822
7837
eekkddddddddkkee
589
601189
2588
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCTGT С
7823
7838
eekkddddddddkkee
590
601190
2589
2604
Экзон 18
AATCCCACGCCCCTG Т
7824
7839
eekkddddddddkkee
591
601191
2590
2605
Экзон 18
CAATCCCACGCCCCT G
7825
7840
eekkddddddddkkee
592
601192
2591
2606
Экзон 18
ТСААТСССACGCCCC Т
7826
7841
eekkddddddddkkee
593
601193
2592
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGCCC С
7827
7842
eekkddddddddkkee
594
601194
2593
2608
Экзон 18
ATTCAATCCCACGCC С
7828
7843
eekkddddddddkkee
595
601195
2594
2609
Экзон 18
ААТТС ААТССС ACGC С
7829
7844
eekkddddddddkkee
596
601196
2595
2610
Экзон 18
ТААТТС ААТССС ACG С
7830
7845
eekkddddddddkkee
597
601197
2596
2611
Экзон 18
ТТААТТСААТСССАС G
7831
7846
eekkddddddddkkee
598
601198
2597
2612
Экзон 18
ТТТААТТСААТСССА С
7832
7847
eekkddddddddkkee
599
601199
2598
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТССС А
7833
7848
eekkddddddddkkee
600
601200
2599
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATCC С
7834
7849
eekkddddddddkkee
601
601201
2600
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTC ААТС С
7835
7850
eekkddddddddkkee
602
601202
2601
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTCAAT С
7836
7851
eekkddddddddkkee
603
601203
2602
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСАА Т
7837
7852
eekkddddddddkkee
604
601204
2603
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСА А
7838
7853
eekkddddddddkkee
605
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA АТТСА
7839
7858
eeeeedddddddddde ееее
317
601205
2604
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTT ААТТС А
7839
7854
eekkddddddddkkee
606
601206
2605
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAATT С
7840
7855
eekkddddddddkkee
607
601207
2606
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAAT Т
7841
7856
eekkddddddddkkee
608
601208
2607
2622
Экзон 18
TCGC AGCTGTTTT АА Т
7842
7857
eekkddddddddkkee
609
588860
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA А
7843
7858
eekddddddddddkk e
610
601209
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA А
7843
7858
eekkddddddddkkee
610
601210
2609
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTGTTTT А
7844
7859
eekkddddddddkkee
611
601211
2610
2625
Экзон 18
TTGTCGC AGCTGTTT Т
7845
7860
eekkddddddddkkee
612
601212
2611
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTT Т
7846
7861
eekkddddddddkkee
613
601213
2612
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCTGT Т
7847
7862
eekkddddddddkkee
614
601214
2613
2628
Экзон 18 /повтор
TTGTTGTCGCAGCTG Т
н.д.
н.д.
eekkddddddddkkee
615
601215
2614
2629
Экзон 18 /повтор
TTTGTTGTCGCAGCT G
н.д.
н.д.
eekkddddddddkkee
616
601216
2615
2630
Экзон 18 /повтор
TTTTGTTGTCGCAGC Т
н.д.
н.д.
eekkddddddddkkee
617
601217
2616
2631
Экзон 18 /повтор
TTTTTGTTGTCGCAG С
н.д.
н.д.
eekkddddddddkkee
618
Ингибирование мРНК CFB дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами, направленными
601230
2563
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAA С
7798
7813
ekkkddddddddkeee
565
601296
2563
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAA С
7798
7813
ekkddddddddkkeee
565
601231
2564
2579
Экзон 18
AACCCCTTATAGAAA А
7799
7814
ekkkddddddddkeee
566
601297
2564
2579
Экзон 18
AACCCCTTATAGAAA А
7799
7814
ekkddddddddkkeee
566
601232
2565
2580
Экзон 18
AAACCCCTTATAGAA А
7800
7815
ekkkddddddddkeee
567
601298
2565
2580
Экзон 18
AAACCCCTTATAGAA А
7800
7815
ekkddddddddkkeee
567
601233
2566
2581
Экзон 18
GAAACCCCTTATAGA А
7801
7816
ekkkddddddddkeee
568
601299
2566
2581
Экзон 18
GAAACCCCTTATAGA А
7801
7816
ekkddddddddkkeee
568
601234
2567
2582
Экзон 18
GGAAACCCCTTATAG А
7802
7817
ekkkddddddddkeee
569
601300
2567
2582
Экзон 18
GGAAACCCCTTATAG А
7802
7817
ekkddddddddkkeee
569
601235
2568
2583
Экзон 18
AGGАААССССТТ АТА G
7803
7818
ekkkddddddddkeee
570
601301
2568
2583
Экзон 18
AGGАААССССТТ АТА G
7803
7818
ekkddddddddkkeee
570
601236
2569
2584
Экзон 18
CAGGАААССССТТ AT А
7804
7819
ekkkddddddddkeee
571
601302
2569
2584
Экзон 18
CAGGАААССССТТ AT А
7804
7819
ekkddddddddkkeee
571
601237
2570
2585
Экзон 18
GCAGGАААССССТТ AT
7805
7820
ekkkddddddddkeee
572
601303
2570
2585
Экзон 18
GCAGG АААССССТТ AT
7805
7820
ekkddddddddkkeee
572
601238
2571
2586
Экзон 18
AGC AGG AAACCCCT ТА
7806
7821
ekkkddddddddkeee
573
601304
2571
2586
Экзон 18
AGC AGG AAACCCCT ТА
7806
7821
ekkddddddddkkeee
573
601239
2572
2587
Экзон 18
CAGCAGGАААСССС ТТ
7807
7822
ekkkddddddddkeee
574
601305
2572
2587
Экзон 18
CAGCAGGАААСССС ТТ
7807
7822
ekkddddddddkkeee
574
601240
2573
2588
Экзон 18
ССAGCAGGАААССС СТ
7808
7823
ekkkddddddddkeee
575
601241
2574
2589
Экзон 18
ТССAGCAGGАААСС СС
7809
7824
ekkkddddddddkeee
576
601242
2575
2590
Экзон 18
GTCСAGCAGGAAAC СС
7810
7825
ekkkddddddddkeee
577
601243
2576
2591
Экзон 18
TGTCCAGCAGGAAA СС
7811
7826
ekkkddddddddkeee
578
601244
2577
2592
Экзон 18
CTGTCCAGCAGGAA АС
7812
7827
ekkkddddddddkeee
579
601245
2578
2593
Экзон 18
CCTGTCC AGCAGGA АА
7813
7828
ekkkddddddddkeee
580
601246
2579
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGCAGGA А
7814
7829
ekkkddddddddkeee
581
601247
2580
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCAGG А
7815
7830
ekkkddddddddkeee
582
601248
2581
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCAGCAG G
7816
7831
ekkkddddddddkeee
583
601249
2582
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAGCA G
7817
7832
ekkkddddddddkeee
584
601250
2583
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCAGC А
7818
7833
ekkkddddddddkeee
585
601251
2584
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCAG С
7819
7834
ekkkddddddddkeee
586
601252
2585
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCCA G
7820
7835
ekkkddddddddkeee
587
601253
2586
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGTCC А
7821
7836
ekkkddddddddkeee
588
601254
2587
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGTC С
7822
7837
ekkkddddddddkeee
589
601255
2588
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCTGT С
7823
7838
ekkkddddddddkeee
590
601256
2589
2604
Экзон 18
ААТСССACGCCCCTG
7824
7839
ekkkddddddddkeee
591
601257
2590
2605
Экзон 18
СААТСССACGCCCCT G
7825
7840
ekkkddddddddkeee
592
601258
2591
2606
Экзон 18
TCAATCCCACGCCCC Т
7826
7841
ekkkddddddddkeee
593
601259
2592
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGCCC С
7827
7842
ekkkddddddddkeee
594
601260
2593
2608
Экзон 18
АТТСAATCCCACGCC С
7828
7843
ekkkddddddddkeee
595
601261
2594
2609
Экзон 18
AATTCAATCCCACGC С
7829
7844
ekkkddddddddkeee
596
601262
2595
2610
Экзон 18
TAATTCAATCCCACG С
7830
7845
ekkkddddddddkeee
597
601263
2596
2611
Экзон 18
ТТААТТСААТСССАС G
7831
7846
ekkkddddddddkeee
598
601264
2597
2612
Экзон 18
ТТТААТТСААТСССА С
7832
7847
ekkkddddddddkeee
599
601265
2598
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТССС А
7833
7848
ekkkddddddddkeee
600
601266
2599
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATCC С
7834
7849
ekkkddddddddkeee
601
601267
2600
2615
Экзон 18
TGTTTT ААТТСААТС С
7835
7850
ekkkddddddddkeee
602
601268
2601
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTC ААТ С
7836
7851
ekkkddddddddkeee
603
601269
2602
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСАА Т
7837
7852
ekkkddddddddkeee
604
601270
2603
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСА А
7838
7853
ekkkddddddddkeee
605
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA АТТСА
7839
7858
eeeeedddddddddde eeee
317
601271
2604
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTTAATTC А
7839
7854
ekkkddddddddkeee
606
601272
2605
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAATT С
7840
7855
ekkkddddddddkeee
607
601273
2606
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAAT Т
7841
7856
ekkkddddddddkeee
608
Ингибирование мРНК CFB дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами, направленными
eee
601308
2575
2590
Экзон 18
GTCCAGC AGGAAAC СС
7810
7825
ekkddddddddkk eee
577
601309
2576
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGG AAA СС
7811
7826
ekkddddddddkk eee
578
601310
2577
2592
Экзон 18
CTGTCCAGC AGG АА AC
7812
7827
ekkddddddddkk eee
579
601311
2578
2593
Экзон 18
CCTGTCCAGCAGGA AA
7813
7828
ekkddddddddkk eee
580
601312
2579
2594
Экзон 18
CCCTGTCCAGCAGG AA
7814
7829
ekkddddddddkk eee
581
601313
2580
2595
Экзон 18
CCCCTGTCCAGCAG GA
7815
7830
ekkddddddddkk eee
582
601314
2581
2596
Экзон 18
GCCCCTGTCCAGCA GG
7816
7831
ekkddddddddkk eee
583
601315
2582
2597
Экзон 18
CGCCCCTGTCCAGC AG
7817
7832
ekkddddddddkk eee
584
601316
2583
2598
Экзон 18
ACGCCCCTGTCCAG CA
7818
7833
ekkddddddddkk eee
585
601317
2584
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCA GC
7819
7834
ekkddddddddkk eee
586
601356
2584
2599
Экзон 18
CACGCCCCTGTCCA GC
7819
7834
kkkddddddddke eee
586
601318
2585
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCC AG
7820
7835
ekkddddddddkk eee
587
601357
2585
2600
Экзон 18
CCACGCCCCTGTCC AG
7820
7835
kkkddddddddke eee
587
601319
2586
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGTCC A
7821
7836
ekkddddddddkk eee
588
601358
2586
2601
Экзон 18
CCCACGCCCCTGTCC A
7821
7836
kkkddddddddke eee
588
601320
2587
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGTC С
7822
7837
ekkddddddddkk eee
589
601359
2587
2602
Экзон 18
TCCCACGCCCCTGTC С
7822
7837
kkkddddddddke eee
589
601321
2588
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCTGT С
7823
7838
ekkddddddddkk eee
590
601360
2588
2603
Экзон 18
ATCCCACGCCCCTGT С
7823
7838
kkkddddddddke eee
590
601322
2589
2604
Экзон 18
AATCCCACGCCCCT GT
7824
7839
ekkddddddddkk eee
591
601361
2589
2604
Экзон 18
AATCCCACGCCCCT GT
7824
7839
kkkddddddddke eee
591
601323
2590
2605
Экзон 18
CAATCCCACGCCCC TG
7825
7840
ekkddddddddkk eee
592
601362
2590
2605
Экзон 18
CAATCCCACGCCCC TG
7825
7840
kkkddddddddke eee
592
601324
2591
2606
Экзон 18
TCAATCCCACGCCC CT
7826
7841
ekkddddddddkk eee
593
601363
2591
2606
Экзон 18
TCAATCCCACGCCC CT
7826
7841
kkkddddddddke eee
593
601325
2592
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGCCC С
7827
7842
ekkddddddddkk eee
594
601364
2592
2607
Экзон 18
TTCAATCCCACGCCC С
7827
7842
kkkddddddddke eee
594
601326
2593
2608
Экзон 18
ATTC ААТССС ACGC CC
7828
7843
ekkddddddddkk eee
595
601365
2593
2608
Экзон 18
ATTC ААТССС ACGC CC
7828
7843
kkkddddddddke eee
595
601327
2594
2609
Экзон 18
AATTCAATCCCACG CC
7829
7844
ekkddddddddkk eee
596
601366
2594
2609
Экзон 18
AATTCAATCCCACG CC
7829
7844
kkkddddddddke eee
596
601328
2595
2610
Экзон 18
ТААТТСААТССС AC GC
7830
7845
ekkddddddddkk eee
597
601367
2595
2610
Экзон 18
ТААТТСААТССС AC GC
7830
7845
kkkddddddddke eee
597
601329
2596
2611
Экзон 18
TTAATTC ААТССС AC G
7831
7846
ekkddddddddkk eee
598
601368
2596
2611
Экзон 18
TTAATTC ААТССС AC G
7831
7846
kkkddddddddke eee
598
601330
2597
2612
Экзон 18
TTTAATTCAATCCCA С
7832
7847
ekkddddddddkk eee
599
601369
2597
2612
Экзон
TTTAATTCAATCCCA
7832
7847
kkkddddddddke
599
еее
601331
2598
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТССС А
7833
7848
ekkddddddddkk еее
600
601370
2598
2613
Экзон 18
ТТТТААТТСААТССС А
7833
7848
kkkddddddddke еее
600
601332
2599
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATCC С
7834
7849
ekkddddddddkk еее
601
601371
2599
2614
Экзон 18
GTTTTAATTCAATCC С
7834
7849
kkkddddddddke еее
601
601333
2600
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTC ААТС С
7835
7850
ekkddddddddkk еее
602
601372
2600
2615
Экзон 18
TGTTTTAATTC ААТС С
7835
7850
kkkddddddddke еее
602
601334
2601
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTCAAT С
7836
7851
ekkddddddddkk еее
603
601373
2601
2616
Экзон 18
CTGTTTTAATTCAAT С
7836
7851
kkkddddddddke еее
603
601335
2602
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСАА Т
7837
7852
ekkddddddddkk еее
604
601374
2602
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСАА Т
7837
7852
kkkddddddddke еее
604
601336
2603
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСА А
7838
7853
ekkddddddddkk еее
605
601375
2603
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСА А
7838
7853
kkkddddddddke еее
605
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA АТТСА
7839
7858
eeeeedddddddd ddeeeee
317
601337
2604
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTT ААТТС А
7839
7854
ekkddddddddkk еее
606
601376
2604
2619
Экзон 18
CAGCTGTTTT ААТТС А
7839
7854
kkkddddddddke еее
606
601338
2605
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAATT С
7840
7855
ekkddddddddkk еее
607
601377
2605
2620
Экзон 18
GCAGCTGTTTTAATT С
7840
7855
kkkddddddddke еее
607
601339
2606
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAAT Т
7841
7856
ekkddddddddkk еее
608
601378
2606
2621
Экзон 18
CGCAGCTGTTTTAAT Т
7841
7856
kkkddddddddke еее
608
601340
2607
2622
Экзон 18
TCGC AGCTGTTTT АА Т
7842
7857
ekkddddddddkk еее
609
601379
2607
2622
Экзон 18
TCGC AGCTGTTTT АА Т
7842
7857
kkkddddddddke еее
609
588860
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA А
7843
7858
eekdddddddddd kke
610
601341
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA А
7843
7858
ekkddddddddkk еее
610
601380
2608
2623
Экзон 18
GTCGCAGCTGTTTTA А
7843
7858
kkkddddddddke еее
610
601342
2609
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTGTTTT А
7844
7859
ekkddddddddkk еее
611
601381
2609
2624
Экзон 18
TGTCGCAGCTGTTTT А
7844
7859
kkkddddddddke еее
611
601343
2610
2625
Экзон 18
TTGTCGC AGCTGTTT Т
7845
7860
ekkddddddddkk еее
612
601382
2610
2625
Экзон 18
TTGTCGC AGCTGTTT Т
7845
7860
kkkddddddddke еее
612
601344
2611
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTT Т
7846
7861
ekkddddddddkk еее
613
601383
2611
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTT Т
7846
7861
kkkddddddddke еее
613
601345
2612
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCTGT Т
7847
7862
ekkddddddddkk еее
614
601384
2612
2627
Экзон 18
TGTTGTCGCAGCTGT Т
7847
7862
kkkddddddddke еее
614
601346
2613
2628
Экзон
18/ повтор
TTGTTGTCGCAGCTG Т
н.д.
н.д.
ekkddddddddkk еее
615
601385
2613
2628
Экзон
18/ повтор
TTGTTGTCGCAGCTG Т
н.д.
н.д.
kkkddddddddke еее
615
601347
2614
2629
Экзон
18/ повтор
TTTGTTGTCGCAGCT G
н.д.
н.д.
ekkddddddddkk еее
616
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
NO: 2
SEQ
SEQ
SEQ
SEQ
ISI
NO: 1 сайт
NO: 1 сайт
Обла сть-миш
Последовательное ть
ингибир
NO: 2 сайт
NO: 2 сайт
Mo тив
ования
иници
терми
ень
иници
терми
ации
нации
ации
нации
599 357
2582
2600
Экзо н 18
ССACGCCCCTG TCCAGCAG
7817
7835
59-5
70 8
599 358
2583
2601
Экзо н 18
CCCACGCCCCT GTCCAGCA
7818
7836
59-5
70 9
599 359
2584
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCCT GTCCAGC
7819
7837
59-5
71 0
599 360
2585
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCAG
7820
7838
59-5
71 1
599 361
2586
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCCA
7821
7839
59-5
71 2
599 362
2587
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTCC
7822
7840
59-5
71 3
599 363
2588
2606
Экзо н 18
TCAATCCCACG CCCCTGTC
7823
7841
59-5
71 4
599 364
2589
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTGT
7824
7842
59-5
71 5
599 365
2590
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCTG
7825
7843
59-5
71 6
599 366
2591
2609
Экзо н 18
ААТТСААТССС ACGCCCCT
7826
7844
59-5
71 7
599 367
2592
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТССС ACGCCCC
7827
7845
59-5
71 8
599 368
2593
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТСС CACGCCC
7828
7846
59-5
599 369
2594
2612
Экзо н 18
TTTAATTCAATC CCACGCC
7829
7847
59-5
72 0
599 370
2595
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСААТ CCCACGC
7830
7848
59-5
72 1
599 371
2596
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCAA TCCCACG
7831
7849
59-5
72 2
599 372
2597
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTCA ATCCCAC
7832
7850
59-5
72 3
599 373
2598
2616
Экзо н 18
CTGTTTTAATTC AATCCCA
7833
7851
59-5
72 4
599 374
2599
2617
Экзо н 18
GCTGTTTTAATT CAATCCC
7834
7852
59-5
72 5
599 375
2600
2618
Экзо н 18
AGCTGTTTT AAT TCAATCC
7835
7853
59-5
72 6
599 376
2601
2619
Экзо н 18
CAGCTGTTTT AA TTCAATC
7836
7854
59-5
72 7
599 377
2602
2620
Экзо н 18
GCAGCTGTTTTA ATTCAAT
7837
7855
59-5
72 8
599 378
2603
2621
Экзо н 18
CGC AGCTGTTTT ААТТСАА
7838
7856
59-5
72 9
599 511
2552
2571
Экзо н 18
ATAGAAAACCC AAATCCTCA
7787
7806
68-6
41 0
599
2553
2572
Экзо
TATAGAAAAC С
7788
7807
389
н 18
САААТССТС
8-6
599 390
2554
2573
Экзо н 18
ТТАТAGAAAAC ССАААТССТ
7789
7808
68-6
41 2
599 391
2555
2574
Экзо н 18
CTTATAGAAAA СССАААТСС
7790
7809
68-6
41 3
599 392
2556
2575
Экзо н 18
CCTTATAGAAA АСССАААТС
7791
7810
68-6
41 4
599 393
2557
2576
Экзо н 18
CCCTTATAGAA ААСССАААТ
7792
7811
68-6
41 5
599 394
2558
2577
Экзо н 18
ССССТТАТ AGA АААСССААА
7793
7812
68-6
41 6
599 395
2559
2578
Экзо н 18
АССССТТАТAG ААААСССАА
7794
7813
68-6
41 7
599 396
2560
2579
Экзо н 18
ААССССТТАТА GAAAACCCA
7795
7814
68-6
41 8
599 397
2561
2580
Экзо н 18
АААССССТТАТ AGAAAACCC
7796
7815
68-6
599 398
2562
2581
Экзо н 18
GAAACCCCTTA TAGAAAACC
7797
7816
68-6
42 0
599 399
2563
2582
Экзо н 18
GGАААССССТТ ATAGAAAAC
7798
7817
68-6
42 1
599 400
2564
2583
Экзо н 18
AGG AAACCCCT TATAGAAAA
7799
7818
68-6
42 2
599 401
2565
2584
Экзо н 18
CAGGАААСССС TTATAGAAA
7800
7819
68-6
42 3
599 402
2566
2585
Экзо н 18
GCAGGАААССС СTTATAGAA
7801
7820
68-6
42 4
599 403
2567
2586
Экзо н 18
AGCAGGAAAC С CCTTATAGA
7802
7821
68-6
42 5
599 404
2568
2587
Экзо н 18
CAGCAGGAAAC CCCTTATAG
7803
7822
68-6
42 6
599 405
2569
2588
Экзо н 18
CCAGCAGGAAA ССССТТАТА
7804
7823
68-6
42 7
599 406
2570
2589
Экзо н 18
ТССAGCAGGAA АССССТТАТ
7805
7824
68-6
42 8
599 407
2571
2590
Экзо н 18
GTCCAGCAGGA ААССССТТА
7806
7825
68-6
23 7
599 408
2572
2591
Экзо н 18
TGTCCAGCAGG АААССССТТ
7807
7826
68-6
42 9
599 409
2573
2592
Экзо н 18
CTGTCCAGC AG GAAACCCCT
7808
7827
68-6
43 0
599 410
2574
2593
Экзо н 18
CCTGTCCAGCA GGAAACCCC
7809
7828
68-6
43 1
599 411
2575
2594
Экзо н 18
CCCTGTCCAGC AGGAAACCC
7810
7829
68-6
43 2
599 412
2576
2595
Экзо н 18
CCCCTGTCCAG CAGGAAACC
7811
7830
68-6
43 3
599 413
2577
2596
Экзо н 18
GCCCCTGTCCA GCAGGAAAC
7812
7831
68-6
23 8
599 414
2578
2597
Экзо н 18
CGCCCCTGTCC AGCAGGAAA
7813
7832
68-6
43 4
599 415
2579
2598
Экзо н 18
ACGCCCCTGTC CAGCAGGAA
7814
7833
68-6
43 5
599 416
2580
2599
Экзо н 18
CACGCCCCTGT CCAGCAGGA
7815
7834
68-6
43 6
599 417
2581
2600
Экзо н 18
CCACGCCCCTG TCCAGCAGG
7816
7835
68-6
43 7
599 418
2582
2601
Экзо н 18
CCCACGCCCCT GTCCAGCAG
7817
7836
68-6
43 8
599 419
2583
2602
Экзо н 18
TCCCACGCCCCT GTCCAGCA
7818
7837
68-6
43 9
599 420
2584
2603
Экзо н 18
ATCCCACGCCC CTGTCCAGC
7819
7838
68-6
44 0
599 421
2585
2604
Экзо н 18
AATCCCACGCC CCTGTCCAG
7820
7839
68-6
44 1
599 422
2586
2605
Экзо н 18
CAATCCCACGC CCCTGTCCA
7821
7840
68-6
44 2
599 423
2587
2606
Экзо н 18
TCAATCCCACG CCCCTGTCC
7822
7841
68-6
44 3
599 424
2588
2607
Экзо н 18
TTCAATCCCAC GCCCCTGTC
7823
7842
68-6
44 4
599 425
2589
2608
Экзо н 18
ATTCAATCCCA CGCCCCTGT
7824
7843
68-6
44 5
599
2590
2609
Экзо
ААТТСААТССС
7825
7844
426
н 18
ACGCCCCTG
8-6
599 427
2591
2610
Экзо н 18
ТААТТСААТССС ACGCCCCT
7826
7845
68-6
44 7
599 428
2592
2611
Экзо н 18
ТТААТТСААТСС CACGCCCC
7827
7846
68-6
44 8
599 429
2593
2612
Экзо н 18
ТТТААТТСААТС CCACGCCC
7828
7847
68-6
599 430
2594
2613
Экзо н 18
ТТТТААТТСААТ CCCACGCC
7829
7848
68-6
45 0
599 431
2595
2614
Экзо н 18
GTTTTAATTCAA TCCCACGC
7830
7849
68-6
45 1
599 432
2596
2615
Экзо н 18
TGTTTTAATTCA ATCCCACG
7831
7850
68-6
45 2
532 917
2604
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT ТТТААТТСА
7839
7858
5105
31 7
599 379
2604
2622
Экзо н 18
TCGCAGCTGTTT ТААТТСА
7839
7857
59-5
73 0
599 380
2605
2623
Экзо н 18
GTCGCAGCTGT TTTAATTC
7840
7858
59-5
73 1
599 381
2606
2624
Экзо н 18
TGTCGCAGCTG TTTTAATT
7841
7859
59-5
73 2
599 382
2607
2625
Экзо н 18
TTGTCGCAGCT GTTTTAAT
7842
7860
59-5
73 3
599 383
2608
2626
Экзо н 18
GTTGTCGCAGC TGTTTTAA
7843
7861
59-5
73 4
599 384
2609
2627
Экзо н 18
TGTTGTCGCAG CTGTTTTA
7844
7862
59-5
73 5
599 385
2610
2628
Экзо н 18
повт ор
TTGTTGTCGCAG CTGTTTT
н.д.
н.д.
59-5
73 6
599 386
2611
2629
Экзо н 18
повт
TTTGTTGTCGCA GCTGTTT
н.д.
н.д.
59-5
73 7
Ингибирование мРНК CFB МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или SEQ Ш
АААСССА ААТ
599218
2558
2575
Экзон 18
CCTTATAG ААААССС AAA
7793
7810
3-105
790
599219
2559
2576
Экзон 18
СССТТАТА GAAAACC САА
7794
7811
3-105
791
599220
2560
2577
Экзон 18
ССССТТАТ AGAAAAC CCA
7795
7812
3-105
740
599221
2561
2578
Экзон 18
ACCCCTTA TAGAAAA CCC
7796
7813
3-105
741
599222
2562
2579
Экзон 18
AACCCCTT ATAGAAA ACC
7797
7814
3-105
742
599223
2563
2580
Экзон 18
AAACCCCT TATAGAA AAC
7798
7815
3-105
743
599224
2564
2581
Экзон 18
GAAACCC CTTATAGA AAA
7799
7816
3-105
744
599225
2566
2583
Экзон 18
AGGAAAC СССТТАТА GAA
7801
7818
3-105
745
599226
2567
2584
Экзон 18
CAGGAAA ССССТТАТ AGA
7802
7819
3-105
746
599227
2568
2585
Экзон 18
GCAGGAA ACCCCTTA TAG
7803
7820
3-105
747
599228
2569
2586
Экзон 18
AGCAGGA AACCCCTT ATA
7804
7821
3-105
748
599229
2570
2587
Экзон 18
CAGCAGG AAACCCCT
7805
7822
3-105
749
ТАТ
599230
2571
2588
Экзон 18
CCAGCAG GAAACCC СТТА
7806
7823
3-105
750
599231
2572
2589
Экзон 18
TCCAGCA GGAAACC ССТТ
7807
7824
3-105
751
599232
2573
2590
Экзон 18
GTCCAGC AGGAAAC СССТ
7808
7825
3-105
752
599233
2574
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGGAAAC CCC
7809
7826
3-105
753
599234
2575
2592
Экзон 18
CTGTCCAG CAGGAAA CCC
7810
7827
3-105
754
599235
2576
2593
Экзон 18
CCTGTCCA GCAGGAA ACC
7811
7828
3-105
755
599236
2577
2594
Экзон 18
CCCTGTCC AGCAGGA AAC
7812
7829
3-105
756
599237
2578
2595
Экзон 18
CCCCTGTC CAGCAGG AAA
7813
7830
3-105
757
599238
2580
2597
Экзон 18
CGCCCCTG TCCAGCA GGA
7815
7832
3-105
758
599239
2581
2598
Экзон 18
ACGCCCCT GTCCAGC AGG
7816
7833
3-105
759
599240
2582
2599
Экзон 18
CACGCCCC TGTCCAGC AG
7817
7834
3-105
760
599241
2583
2600
Экзон 18
CCACGCCC CTGTCCAG CA
7818
7835
3-105
761
599242
2584
2601
Экзон 18
CCCACGCC CCTGTCCA GC
7819
7836
3-105
762
599243
2585
2602
Экзон 18
TCCCACGC CCCTGTCC AG
7820
7837
3-105
763
599244
2586
2603
Экзон 18
ATCCCACG CCCCTGTC CA
7821
7838
3-105
764
599245
2587
2604
Экзон 18
AATCCCAC GCCCCTGT CC
7822
7839
3-105
765
599246
2588
2605
Экзон 18
СААТСССА CGCCCCTG TC
7823
7840
3-105
766
599247
2589
2606
Экзон 18
ТСААТССС ACGCCCCT GT
7824
7841
3-105
767
599248
2590
2607
Экзон 18
ТТСААТСС CACGCCCC TG
7825
7842
3-105
768
599249
2591
2608
Экзон 18
АТТСААТС CCACGCCC CT
7826
7843
3-105
769
599250
2592
2609
Экзон 18
AATTCAAT CCCACGCC CC
7827
7844
3-105
770
599251
2593
2610
Экзон 18
TAATTCAA TCCCACGC CC
7828
7845
3-105
771
599252
2594
2611
Экзон 18
TTAATTCA ATCCCACG CC
7829
7846
3-105
772
599253
2595
2612
Экзон 18
TTTAATTC AATCCCAC GC
7830
7847
3-105
773
599254
2596
2613
Экзон
TTTTAATT
7831
7848
3-10-
774
СААТСССА CG
599255
2597
2614
Экзон 18
GTTTTAAT ТСААТССС АС
7832
7849
3-105
775
599256
2598
2615
Экзон 18
TGTTTTAA ТТСААТСС СА
7833
7850
3-105
776
599257
2599
2616
Экзон 18
CTGTTTTA АТТСААТС СС
7834
7851
3-105
777
599258
2600
2617
Экзон 18
GCTGTTTT ААТТСААТ СС
7835
7852
3-105
778
599259
2601
2618
Экзон 18
AGCTGTTT ТААТТСАА ТС
7836
7853
3-105
779
599260
2602
2619
Экзон 18
CAGCTGTT ТТААТТСА AT
7837
7854
3-105
780
599261
2603
2620
Экзон 18
GCAGCTGT ТТТ ААТТС АА
7838
7855
3-105
781
599509
2552
2570
Экзон 18
TAGAAAA СССАААТС СТСА
7787
7805
6-7-6
681
599273
2553
2571
Экзон 18
ATAGAAA АСССААА
тесте
7788
7806
6-7-6
682
599274
2554
2572
Экзон 18
TATAGAA ААСССАА АТССТ
7789
7807
6-7-6
683
599275
2556
2574
Экзон 18
CTTATAGA АААСССА ААТС
7791
7809
6-7-6
684
599276
2557
2575
Экзон 18
CCTTATAG ААААССС
7792
7810
6-7-6
685
АААТ
599277
2558
2576
Экзон 18
СССТТАТА GAAAACC СААА
7793
7811
6-7-6
686
599278
2559
2577
Экзон 18
ССССТТАТ AGAAAAC ССАА
7794
7812
6-7-6
687
599279
2560
2578
Экзон 18
ACCCCTTA TAGAAAA СССА
7795
7813
6-7-6
688
599280
2561
2579
Экзон 18
AACCCCTT ATAGAAA АССС
7796
7814
6-7-6
689
532917
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAG CTGTTTTA АТТСА
7839
7858
5-105
317
599262
2604
2621
Экзон 18
CGCAGCT GTTTTAAT TCA
7839
7856
3-105
782
599263
2605
2622
Экзон 18
TCGCAGCT GTTTTAAT TC
7840
7857
3-105
783
599264
2606
2623
Экзон 18
GTCGCAG CTGTTTTA ATT
7841
7858
3-105
784
599265
2607
2624
Экзон 18
TGTCGCAG CTGTTTTA AT
7842
7859
3-105
792
599266
2608
2625
Экзон 18
TTGTCGCA GCTGTTTT AA
7843
7860
3-105
793
599267
2609
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTTT ТА
7844
7861
3-105
794
599268
2610
2627
Экзон 18
TGTTGTCG CAGCTGTT TT
7845
7862
3-105
795
599269
2611
2628
Экзон
18/ повтор
TTGTTGTC GCAGCTGT ТТ
н.д.
н.д.
3-105
796
599270
2612
2629
Экзон
18/ повтор
TTTGTTGT CGCAGCT GTT
н.д.
н.д.
3-105
797
599271
2613
2630
Экзон
18/ повтор
TTTTGTTG TCGCAGCT GT
н.д.
н.д.
3-105
798
599272
2614
2631
Экзон
18/ повтор
TTTTTGTT GTCGCAG CTG
н.д.
н.д.
3-105
799
599205
2607
2624
Экзон 18
TGTCGCAG CTGTTTTA AT
7842
7859
5-8-5
792
599206
2608
2625
Экзон 18
TTGTCGCA GCTGTTTT AA
7843
7860
5-8-5
793
599207
2609
2626
Экзон 18
GTTGTCGC AGCTGTTT ТА
7844
7861
5-8-5
794
599208
2610
2627
Экзон 18
TGTTGTCG CAGCTGTT TT
7845
7862
5-8-5
795
599209
2611
2628
Экзон
18/ повтор
TTGTTGTC GCAGCTGT TT
н.д.
н.д.
5-8-5
796
599210
2612
2629
Экзон
18/ повтор
TTTGTTGT CGCAGCT GTT
н.д.
н.д.
5-8-5
797
599211
2613
2630
Экзон
18/ повтор
TTTTGTTG TCGCAGCT GT
н.д.
н.д.
5-8-5
798
599212
2614
2631
Экзон
18/ повтор
TTTTTGTT GTCGCAG CTG
н.д.
н.д.
5-8-5
799
Ингибирование мРНК CFB 5-10-5 МОЕ гэпмерами, направленными на SEQ Ш NO: 1 или
58856 9
2197
2216
Экзон 15
GTAGACCT CCTTCCGAG ТСА
6985
7004
40 3
58857 4
2453
2472
Экзон 18
TTTGCCGCT TCTGGTTTT TG
7688
7707
40 4
58857 5
2455
2474
Экзон 18
CTTTTGCCG CTTCTGGTT ТТ
7690
7709
40 5
53280 0
2457
2476
Экзон 18
TGCTTTTGC CGCTTCTGG ТТ
7692
7711
22 8
58857 6
2459
2478
Экзон 18
CCTGCTTTT GCCGCTTCT GG
7694
7713
40 6
58857 7
2461
2480
Экзон 18
TACCTGCTT TTGCCGCTT СТ
7696
7715
40 7
51635 0
2550
2569
Экзон 18
AGAAAACC САААТССТС АТС
7785
7804
40 8
58850 9
2551
2570
Экзон 18
TAGAAAAC ССАААТССТ CAT
7786
7805
40 9
58851 0
2552
2571
Экзон 18
ATAGAAAA СССАААТС СТСА
7787
7806
41 0
58851 1
2553
2572
Экзон 18
TATAGAAA АСССАААТ ССТС
7788
7807
41 1
58851 2
2554
2573
Экзон 18
TTATAGAA ААСССААА
тест
7789
7808
41 2
58851 3
2555
2574
Экзон 18
CTTATAGA АААСССАА АТСС
7790
7809
41 3
58851
2556
2575
Экзон
CCTTATAGA
7791
7810
АААСССАА АТС
58851 5
2557
2576
Экзон 18
CCCTTATAG ААААСССА ААТ
7792
7811
41 5
58851 6
2558
2577
Экзон 18
ССССТТАТА GAAAACCC AAA
7793
7812
41 6
58851 7
2559
2578
Экзон 18
АССССТТАТ AGAAAACC САА
7794
7813
41 7
58851 8
2560
2579
Экзон 18
ААССССТТА TAGAAAAC CCA
7795
7814
41 8
58851 9
2561
2580
Экзон 18
АААССССТТ ATAGAAAA ССС
7796
7815
58852 0
2562
2581
Экзон 18
GAAACCCC TTATAGAA ААСС
7797
7816
42 0
58852 1
2563
2582
Экзон 18
GGAAACCC CTTATAGA АААС
7798
7817
42 1
58852 2
2564
2583
Экзон 18
AGGAAACC CCTTATAGA AAA
7799
7818
42 2
58852 3
2565
2584
Экзон 18
CAGGAAAC CCCTTATAG AAA
7800
7819
42 3
58852 4
2566
2585
Экзон 18
GCAGGAAA ССССТТАТА GAA
7801
7820
42 4
58852 5
2567
2586
Экзон 18
AGCAGGAA АССССТТАТ AGA
7802
7821
42 5
58852 6
2568
2587
Экзон 18
CAGCAGGA ААССССТТА
7803
7822
42 6
TAG
58852 7
2569
2588
Экзон 18
CCAGCAGG АААССССТТ АТА
7804
7823
42 7
58852 8
2570
2589
Экзон 18
TCCAGCAG GAAACCCC ТТАТ
7805
7824
42 8
53280 9
2571
2590
Экзон 18
GTCCAGCA GGAAACCC СТТА
7806
7825
23 7
58852 9
2572
2591
Экзон 18
TGTCCAGC AGGAAACC CCTT
7807
7826
42 9
58853 0
2573
2592
Экзон 18
CTGTCCAGC AGGAAACC CCT
7808
7827
43 0
58853 1
2574
2593
Экзон 18
CCTGTCCAG CAGGAAAC CCC
7809
7828
43 1
58853 2
2575
2594
Экзон 18
CCCTGTCCA GCAGGAAA CCC
7810
7829
43 2
58853 3
2576
2595
Экзон 18
CCCCTGTCC AGCAGGAA ACC
7811
7830
43 3
53281 0
2577
2596
Экзон 18
GCCCCTGTC CAGCAGGA AAC
7812
7831
23 8
58853 4
2578
2597
Экзон 18
CGCCCCTGT CCAGCAGG AAA
7813
7832
43 4
58853 5
2579
2598
Экзон 18
ACGCCCCT GTCCAGCA GGAA
7814
7833
43 5
58853 6
2580
2599
Экзон 18
CACGCCCCT GTCCAGCA GGA
7815
7834
43 6
58853 7
2581
2600
Экзон 18
CCACGCCC CTGTCCAGC AGG
7816
7835
43 7
58853 8
2582
2601
Экзон 18
CCCACGCC CCTGTCCAG CAG
7817
7836
43 8
58853 9
2583
2602
Экзон 18
TCCCACGCC CCTGTCCAG CA
7818
7837
43 9
58854 0
2584
2603
Экзон 18
ATCCCACG CCCCTGTCC AGC
7819
7838
44 0
58854 1
2585
2604
Экзон 18
AATCCCAC GCCCCTGTC CAG
7820
7839
44 1
58854 2
2586
2605
Экзон 18
СААТСССА CGCCCCTGT CCA
7821
7840
44 2
58854 3
2587
2606
Экзон 18
TCAATCCCA CGCCCCTGT CC
7822
7841
44 3
58854 4
2588
2607
Экзон 18
ТТСААТССС ACGCCCCT GTC
7823
7842
44 4
58854 5
2589
2608
Экзон 18
АТТСААТСС CACGCCCCT GT
7824
7843
44 5
58854 6
2590
2609
Экзон 18
ААТТСААТС CCACGCCC CTG
7825
7844
44 6
58854 7
2591
2610
Экзон 18
ТААТТСААТ CCCACGCC CCT
7826
7845
44 7
58854 8
2592
2611
Экзон 18
ТТААТТСАА TCCCACGCC CC
7827
7846
44 8
58854
2593
2612
Экзон
ТТТААТТСА
7828
7847
ATCCCACG ССС
58855 0
2594
2613
Экзон 18
ТТТТААТТС AATCCCAC GCC
7829
7848
45 0
58855 1
2595
2614
Экзон 18
GTTTTAATT СААТСССА CGC
7830
7849
45 1
58855 2
2596
2615
Экзон 18
TGTTTTAAT TCAATCCCA CG
7831
7850
45 2
58855 3
2597
2616
Экзон 18
CTGTTTTAA ТТСААТССС AC
7832
7851
45 3
58855 4
2598
2617
Экзон 18
GCTGTTTTA АТТСААТСС CA
7833
7852
45 4
53281 1
2599
2618
Экзон 18
AGCTGTTTT ААТТСААТС CC
7834
7853
23 9
58855 5
2600
2619
Экзон 18
CAGCTGTTT ТААТТСААТ CC
7835
7854
45 5
58855 6
2601
2620
Экзон 18
GCAGCTGTT ТТААТТСАА ТС
7836
7855
45 6
58855 7
2602
2621
Экзон 18
CGCAGCTG ТТТТААТТС AAT
7837
7856
45 7
58855 8
2603
2622
Экзон 18
TCGCAGCT GTTTTAATT CAA
7838
7857
45 8
53291 7
2604
2623
Экзон 18
GTCGCAGC TGTTTTAAT TCA
7839
7858
31 7
58855 9
2605
2624
Экзон 18
TGTCGCAG CTGTTTTAA
7840
7859
45 9
ТТС
58856 0
2606
2625
Экзон 18
TTGTCGCAG CTGTTTTAA ТТ
7841
7860
46 0
58856 1
2607
2626
Экзон 18
GTTGTCGCA GCTGTTTTA AT
7842
7861
46 1
53295 2
2608
2627
Экзон 18
TGTTGTCGC AGCTGTTTT AA
7843
7862
39 5
58856 2
2609
2628
Экзон
18/ повтор
TTGTTGTCG CAGCTGTTT ТА
н.д.
н.д.
46 2
58856 3
2610
2629
Экзон
18/ повтор
TTTGTTGTC GCAGCTGTT TT
н.д.
н.д.
46 3
58856 4
2611
2630
Экзон
18/ повтор
TTTTGTTGT CGCAGCTG TTT
н.д.
н.д.
46 4
58856 5
2612
2631
Экзон
18/ повтор
TTTTTGTTG TCGCAGCT GTT
н.д.
н.д.
46 5
Пример 122: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2 5-10-5 МОЕ гэпмерами
Гэпмеры из исследований, описанных выше, демонстрирующие значительное in vitro ингибирование мРНК CFB, были выбраны и испытаны в различных дозах в клетках HepG2. Клетки были высеяны с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицированны с использованием электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида, равными 0,313 мкМ, 0,625 мкМ, 1,25 мкМ, 2,50 мкМ, 5,00 мкМ или 10,00 мкМ, как указано в представленной ниже таблице. После периода обработки в течение около 16 часов, РНК выделяли из клеток и измеряли уровни мРНК CFB методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для
измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Указана также полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC50) каждого олигонуклеотида. Обработка антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК CFB в клетках дозозависимым образом.
Пример 123: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2
Гэпмеры из исследований, описанных выше, демонстрирующие значительное in vitro ингибирование мРНК CFB, были выбраны и испытаны в различных дозах в клетках HepG2. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов с аналогичными условиями культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Клетки были высеяны с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицированы с использованием электропорации
с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида, равными 0,08 мкМ, 0,25 мкМ, 0,74 мкМ, 2,22 мкМ, 6,67 мкМ и 20,00 мкМ, как указано в представленной ниже таблице. После периода обработки в течение около 16 часов, РНК выделяли из клеток и измеряли уровни мРНК CFB методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Указана также полумаксимальная ингибирующая концентрация (ICso) каждого олигонуклеотида. Обработка антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК CFB в клетках дозозависимым образом.
588847
0,2
588848
0,3
588851
588854
0,4
588855
0,6
588856
0,3
588857
0,3
588858
0,3
588553
588560
0,3
588561
0,4
Таблица 153
ISIS №
0,08 мкМ
0,25 мкМ
0,74 мкМ
2,22 мкМ
6,67 мкМ
20,00 мкМ
Юзо (мкМ)
532811
0,2
588536
0,6
588537
0,5
588547
0,5
588548
0,4
588554
<од
588555
588556
588562
0,4
588563
0,3
588564
0,5
Таблица 154
ISIS №
0,08 мкМ
0,25 мкМ
0,74 мкМ
2,22 мкМ
6,67 мкМ
20,00 мкМ
ICso (мкМ)
532811
588538
0,3
588539
588540
0,2
588549
588550
588551
<од
588557
<од
588558
<од
588559
<од
588565
0,2
Гэпмеры из исследований, описанных выше, демонстрирующие значительное in vitro ингибирование мРНК CFB, были выбраны и испытаны в различных дозах в клетках HepG2. Антисмысловые олигонуклеотиды были протестированы в серии экспериментов с аналогичными условиями культивирования. Результаты для каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, показанных ниже. Клетки были высеяны с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицированы с использованием электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида, равными 0,06 мкМ, 0,25 мкМ, 1,00 и 4,00 мкМ, как указано в представленной ниже таблице. После периода обработки в течение около 16 часов, РНК выделяли из клеток и измеряли уровни мРНК CFB методом количественной ГЩР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Указана также полумаксимальная ингибирующая концентрация (ICso) каждого олигонуклеотида. Обработка антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК CFB в клетках дозозависимым образом.
599080
0,9
599086
0,8
599087
0,4
599088
0,5
599089
0,7
599093
0,2
599094
0,4
599095
0,3
599096
0,3
599149
0,3
599188
0,8
ISIS №
0,06 мкМ
0,25 мкМ
1,00 мкМ
4,00 мкМ
Юзо (мкМ)
532917
0,2
588860
0,3
601282
601269
0,2
601276
601275
0,4
601344
<0,06
601383
<0,06
601382
601385
<0,06
601332
601345
601371
601384
<0,06
601380
0,2
601387
601341
0,2
601346
601335
0,2
599553
599554
599568
599570
<0,06
599577
0,2
599581
0,2
599591
<0,06
599592
599593
Пример 125: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2
Гэпмеры из исследований, описанных выше, демонстрирующие значительное in vitro ингибирование мРНК CFB, были выбраны и испытаны в различных дозах в клетках HepG2. Дополнительно был сконструирован дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотид, ISIS 594430, имеющий такую же последовательность (CTCCTTCCGAGTCAGC, SEQ ID N0: 549) и область-мишень (целевой сайт инициации 2195 в SEQ ГО NO: 1 и целевой сайт инициации 6983 в SED ГО N0: 2), как ISIS 588870, другой дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотид. ISIS 594430 представляет собой 3-10-3 (S)-cEt гэпмер.
Клетки были высеяны с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицированны с использованием электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида, равными 0,01 мкМ, 0,04 мкМ, 0,12 мкМ, 0,37 мкМ, 1,11 мкМ, 3,33 мкМ и 10,00 мкМ, как указано в представленной ниже таблице. После периода обработки в течение около 16 часов, РНК выделяли из клеток и измеряли уровни мРНК CFB методом количественной ПЦР в реальном времени. Набор человеческих праймеров RTS3459 был использован для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК CFB были скорректированы в соответствии с содержанием суммарной РНК, измеренным с помощью RIBOGREEN(r). Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
Указана также полумаксимальная ингибирующая концентрация (ICso) каждого олигонуклеотида. Обработка антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК CFB в клетках дозозависимым образом.
Пример 126: Переносимость МОЕ гэпмеров, направленных на человеческий CFB, у мышей CD1
Мыши CD1(r) (Чарльз Ривер, штат Массачусетс) представляют собой многоцелевую мышиную модель, часто используемую для испытаний безопасности и эффективности. Мышей лечили антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, выбранными из описанных выше исследований, и оценивали изменения уровней различных химических маркеров в плазме.
Испытание 1 (с 5-10-5 МОЕ гэпмерами)
Группам семинедельных мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг олигонуклеотида ISIS. Одной группе самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Одной группе мышей один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 (CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC, в настоящем документе обозначена как SEQ Ш NO: 809, 5-10-5 МОЕ гэпмер, не имеющий известной мышиной мишени). Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотида ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз и АМК в плазме с использованием автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
624 Таблица 161
ALT
AST
АМК
(ед./л)
(ед./л)
(мг/дл)
PBS
ISIS 532614
513
407
ISIS 532692
131
130
ISIS 532770
ISIS 532775
193
158
ISIS 532800
127
110
ISIS 532809
ISIS 532810
229
286
ISIS 532811
197
183
ISIS 532917
207
204
ISIS 532952
246
207
ISIS 141923
Масса
Перед усыплением мышей на 40 день измерили также массу тела мышей. После усыпления мышей измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS 532810
0,6
2,3
0,2
ISIS 532811
0,7
2,4
0,2
ISIS 532917
0,7
3,0
0,2
ISIS 532952
0,8
2,5
0,3
ISIS 141923
0,6
2,0
Испытание 2 (с 5-10-5 МОЕ гэпмерами)
Группам шести-восьминедельных самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг олигонуклеотида ISIS. Двум группам самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS Одной группе мышей один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг контрольного олигонуклеотида ISIS 141923. Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Химические маркеры в плазме мышей CD1 на 45 день
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина и АМК в плазме, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
ISIS 532952
182
199
2,7
ISIS 588534
276
248
2,6
ISIS 588536
2,9
ISIS 588537
4,0
ISIS 588538
4,5
ISIS 588539
238
177
3,9
ISIS 588545
496
256
4,4
ISIS 588547
323
210
4,4
ISIS 588548
4,2
ISIS 588549
127
132
ISIS 588551
302
282
4,2
ISIS 588552
4,0
ISIS 588558
1066
521
3,9
ISIS 588559
ISIS 588561
502
500
4,4
ISIS 588563
4,4
Масса
Масса (г) мышей CD1 на 40 день
Массу тела мышей измерили на 42 день. После усыпления мышей на 45 день измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS 588538
0,7
2,8
0,2
ISIS 588539
0,6
2,7
0,2
ISIS 588545
0,8
3,3
0,3
ISIS 588547
0,6
3,3
0,3
ISIS 588548
0,6
2,8
0,2
ISIS 588549
0,6
2,8
0,3
ISIS 588551
0,6
2,2
0,2
ISIS 588552
0,6
2,2
0,2
ISIS 588558
0,7
3,3
0,3
ISIS 588559
0,6
2,7
0,3
ISIS 588561
0,7
2,4
0,3
ISIS 588563
0,7
2,4
0,2
Испытание 3 (с 5-10-5 МОЕ гэпмерами)
Группам шести-восьминедельных самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг олигонуклеотида ISIS. Двум группам самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина и АМК в плазме, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
Химические маркеры в плазме мышей CD1 на 42 день
PBS
108
PBS
3,0
ISIS 588544
209
168
2,9
ISIS 588546
526
279
3,0
ISIS 588550
136
2,7
ISIS 588553
105
3,0
ISIS 588554
112
220
3,2
ISIS 588555
162
2,8
ISIS 588556
345
236
3,0
ISIS 588557
393
420
2,8
ISIS 588560
109
148
2,7
ISIS 588562
279
284
2,8
ISIS 588564
152
188
3,0
ISIS 588565
247
271
2,8
Масса
Масса (г) мышей CD1 на 40 день
Массу тела мышей измерили на 42 день. После усыпления мышей на 42 день измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS 588560
0,6
3,2
0,3
ISIS 588562
0,6
2,8
0,2
ISIS 588564
0,6
2,8
0,3
ISIS 588565
0,6
2,2
0,2
Испытание 4 (с (S)-cEt гэпмерами и дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Группам десятинедельных самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 50 мг/кг олигонуклеотида ISIS из исследований, описанных выше. Кроме того, были сконструированы два олигонуклеотида, ISIS 594431 и ISIS 594432, сконструированные как 3-10-3 (S)-cEt гэпмеры, и они также были испытаны в данном исследовании. ISIS 594431(ACCTCCTTCCGAGTCA, SEQ Ш NO: 550) направлен на ту же область, что и ISIS 588871, дезокси, МОЕ и (S)-cEt гэпмер (целевой сайт инициации 2197 в SEQ Ш NO: 1 и целевой сайт инициации 6985 в SEQ Ш NO: 2). ISIS 594432 (TGGTCACATTCCCTTC, SEQ Ш NO: 542) направлен на ту же область, что и ISIS 588872, дезокси, МОЕ и (S)-cEt гэпмер (целевой сайт инициации 154 в SEQ Ш NO: 1 и целевой сайт инициации 1875 в SEQ Ш NO: 2).
Двум группам самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина, креатинина и АМК в плазме с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
630 Таблица 167
ISIS 594432
3-10-3 (S)-cEt
2595
2865
2,4
Масса
На 39 день измерили массу тела мышей. После усыпления мышей на 42 день измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
588861
cEt
ISIS 588862
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,6
2,5
0,4
ISIS 588863
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,6
2,7
о,з
ISIS 588864
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
2,3
0,2
ISIS 588866
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
3,0
0,2
ISIS 594430
3-10-3 (S)-cEt
0,6
2,2
0,2
ISIS 594431
3-10-3 (S)-cEt
0,6
3,2
0,2
ISIS 594432
3-10-3 (S)-cEt
0,4
1,9
Испытание 5 (с МОЕ гэпмерами, (S)-cEt гэпмерами и дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Группам восьми-девятинедельных самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 50 мг/кг олигонуклеотида ISIS. Двум группам самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина, креатинина и АМК в плазме с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции
ISIS 588871
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
723
881
2,5
ISIS 588872
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
649
654
2,7
Масса
На 40 день измерили массу тела мышей. После усыпления мышей на 42 день измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS 588844
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
2,8
0,2
ISIS 588851
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,6
2,6
0,2
ISIS 588854
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
0,2
ISIS 588855
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
2,9
о,з
ISIS 588856
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
3,2
0,2
ISIS 588865
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
2,6
о,з
ISIS 588867
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
3,2
о,з
ISIS 588868
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
2,9
о,з
ISIS 588870
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,6
2,2
0,2
ISIS 588871
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,7
0,2
ISIS 588872
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
0,6
3,2
о,з
Испытание 6 (с дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Группам восьми-девятинедельных самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 50 мг/кг дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидов. Двум группам самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина, креатинина, билирубина и АМК в плазме, используя
автоматический клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
Химические маркеры в плазме мышей CD1 на 45 день
Масса
На 40 день измерили массу тела мышей. После усыпления мышей на 45 день измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Испытание 7 (с МОЕ гэпмерами и дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Группами восьми-девятинедельных самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг олигонуклеотидов ISIS. Одной группе самцов мышей CD 1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина, креатинина и АМК в плазме с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице.
Масса
Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
На 44 день измерили массу тела мышей. На 49 день, после усыпления мышей измерили также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты представлены ниже в таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS
599267
3-10-5 МОЕ
0,8
2,5
о,з
ISIS
599268
3-10-5 МОЕ
0,7
2,1
0,2
ISIS
599322
6-7-6 МОЕ
0,6
2,2
0,2
ISIS
599374
5-9-5 МОЕ
0,6
2,2
0,2
ISIS
599378
5-9-5 МОЕ
0,7
2,7
0,2
ISIS 599441
6-8-6 МОЕ
0,6
2,5
о,з
Испытания 8 (с МОЕ гэпмерами, дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами и (S)-cEt гэпмерами)
Группам восьми-девятинедельных самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 10 мг/кг МОЕ гэпмеров или 50 мг/кг дезокси и (S)-cEt олигонуклеотидов, или (S)-cEt гэпмеров. Одной группе самцов мышей CD1 один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Мышей усыпляли через 48 часов после введения последней дозы и собирали органы и плазму для дальнейших анализов.
Химические маркеры в плазме
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени и почек измеряли уровни трансаминаз, альбумина, креатинина и АМК в плазме с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в таблице.
PBS
2,5
0,08
ISIS 532770
5-10-5 МОЕ
100
2,5
0,07
ISIS 532800
5-10-5 МОЕ
100
126
2,8
0,10
ISIS 532809
5-10-5 МОЕ
100
2,5
0,07
ISIS 588540
5-10-5 МОЕ
100
106
102
2,7
0,09
ISIS 588544
5-10-5 МОЕ
100
2,6
0,10
ISIS 588548
5-10-5 МОЕ
100
2,6
0,08
ISIS 588550
5-10-5 МОЕ
100
106
2,5
0,10
ISIS 588553
5-10-5 МОЕ
100
2,6
0,09
ISIS 588555
5-10-5 МОЕ
100
2,5
0,08
ISIS 588848
Дезокси ,МОЕ H(S)-cEt
2,3
0,07
ISIS 594430
3-10-3 (S)-cEt
2,5
0,10
Масса
Массу тела мышей измеряли на 36 день. После усыпления мышей, на 43 день измеряли также массу органов, печени, почек и селезенки. Результаты измерений массы органов выражены как соотношение к массе тела и нормализованы к соотношению контрольной группы с PBS.
Химизм
Доза (мг/кг/неделю)
Почки/BW
Печень/BW
Селезенка/BW
PBS
1,0
1,0
1,0
ISIS 532770
5-10-5 МОЕ
100
1,4
1,1
1,0
ISIS 532800
5-10-5 МОЕ
100
1,5
1,1
0,9
ISIS 532809
5-10-5 МОЕ
100
1,3
1,2
0,9
ISIS 588540
5-10-5 МОЕ
100
1,3
1,2
1,0
ISIS 588544
5-10-5 МОЕ
100
1,6
1,1
1,0
ISIS 588548
5-10-5 МОЕ
100
1,7
1,2
1,0
ISIS 588550
5-10-5 МОЕ
100
1,5
1,2
1,0
ISIS 588553
5-10-5 МОЕ
100
1,5
1,0
0,8
ISIS 588555
5-10-5 МОЕ
100
1,8
1,2
1,0
ISIS 588848
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
1,3
1,0
0,9
ISIS 594430
3-10-3 (S)-cEt
1,4
1,1
0,9
Анализ цитокинов
Кровь, собранную во всех группах мышей, направили в компанию Antech Diagnostics для измерения уровней различных цитокинов, таких как IL-6, MDC, MIPip, IP-10, МСР1, М1Р-1а и RANTES. Результаты представлены в Таблице 54.
Химизм
IL-6
MDC
MIPlp
IP-10
MCP1
MlP-la
RANTES
PBS
ISIS 532770
5-10-5 МОЕ
101
146
116
101
ISIS 532800
5-10-5 МОЕ
105
ISIS 532809
5-10-5 МОЕ
ISIS 588540
5-10-5 МОЕ
126
ISIS 588544
5-10-5 МОЕ
157
102
ISIS 588548
5-10-5 МОЕ
164
ISIS 588550
5-10-5 МОЕ
222
124
157
ISIS 588553
5-10-5 МОЕ
183
103
ISIS 588555
5-10-5 МОЕ
172
171
178
ISIS 588848
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
ISIS 594430
3-10-3 (S)-cEt
Гематологический анализ
Кровь, собранную во всех группах мышей, направили в компанию Antech Diagnostics для измерения гематокрита (НСТ), а также различных кровяных клеток, таких как белые кровяные тельца, красные кровяные тельца и тромбоциты, а также общего содержания гемоглобина (НЬ). Результаты представлены в Таблице 55.
Таблица 178
Крысы Спрага-Доули представляют собой многоцелевую модель, используемую для оценки безопасности и эффективности. Крыс лечили антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS из исследований, описанных выше в Примерах, и оценивали на изменения уровней различных химических маркеров в крови.
Испытание 1 (с 5-10-5 МОЕ гэпмерами)
Самцов крыс Спрага-Доули возрастом от семи до восьми недель выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг 5-10-5 МОЕ гэпмеров. Одной контрольной группе из 6 крыс один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Функция печени
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы) и представили результаты в следующей Таблице, выраженные в МЕ/л. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали в печени изменения любых маркеров функции печени за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Маркеры функции печени у крыс Спрага-Доули
ISIS 588544
101
329
ISIS 588550
157
ISIS 588553
304
ISIS 588554
202
243
ISIS 588555
113
ISIS 588556
102
117
ISIS 588560
206
317
ISIS 588564
292
594
Функция почек
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни азота мочевины крови (АМК) и креатинина с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Маркеры функции печени (мг/дл) у крыс Спрага-Доули
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы органов за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Испытание 2 (с дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Самцов крыс Спрага-Доули возрастом от девяти до десяти недель выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидов. Двум контрольным группам по 3 крысы один раз в
неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Функция печени
Маркеры функции печени у крыс Спрага-Доули
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме на 42 день, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы), и альбумина в сыворотке, и результаты представлены ниже в Таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали в печени изменения любых маркеров функции печени за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Функция почек
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни азота мочевины крови (АМК) и креатинина с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат
Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Маркеры функции печени (мг/дл) у крыс Спрага-Доули
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы органов за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Масса (г)
588835
ISIS 588842
414
1,5
3,7
ISIS 588843
427
2,5
4,2
ISIS 588846
366
3,3
ISIS 588847
402
1,6
3,1
ISIS 588864
364
3,8
ISIS 594430
420
1,2
3,6
Испытание 3 (с МОЕ гэпмерами)
Самцов крыс Спрага-Доули возрастом от девяти до десяти недель выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг МОЕ гэпмеров. Одной контрольной группе из 6 крыс один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Функция печени
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме на 43 день, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы) и представили результаты в следующей Таблице, выраженные в МЕ/л. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали в печени изменения любых маркеров функции печени за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Химизм
ALT (ед./л)
AST (ед./л)
Альбумин (г/дл)
PBS
3,7
ISIS 588563
5-10-5 МОЕ
175
291
2,9
ISIS 599024
3-10-4 МОЕ
139
173
1,4
ISIS 599093
5-7-5 МОЕ
116
238
2,6
ISIS 599149
4-8-5 МОЕ
232
190
3,4
ISIS 599155
4-8-5 МОЕ
108
215
2,5
ISIS 599202
5-8-5 МОЕ
3,5
ISIS 599203
5-8-5 МОЕ
ISIS 599208
5-8-5 МОЕ
257
467
1,9
ISIS 599261
3-10-5 МОЕ
387
475
1,5
ISIS 599267
3-10-5 МОЕ
201
337
2,7
Функция почек
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни азота мочевины крови (АМК) и креатинина с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
652 Таблица 186
Химизм
АМК
Креатинин
PBS
0,3
ISIS 588563
5-10-5 МОЕ
0,4
ISIS
599024
3-10-4 МОЕ
135
1,2
ISIS
599093
5-7-5 МОЕ
0,4
ISIS
599149
4-8-5 МОЕ
0,4
ISIS 599155
4-8-5 МОЕ
0,4
ISIS
599202
5-8-5 МОЕ
0,4
ISIS
599203
5-8-5 МОЕ
0,4
ISIS
599208
5-8-5 МОЕ
о,з
ISIS
599261
3-10-5 МОЕ
228
1,6
ISIS
599267
3-10-5 МОЕ
0,4
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы органов за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Испытание 4 (с МОЕ гэпмерами)
Самцов крыс Спрага-Доули возрастом от девяти до десяти недель выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг МОЕ гэпмеров. Одной контрольной группе из 6 крыс один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме на 42 день, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы) и представили результаты в следующей Таблице, выраженные в МЕ/л. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали в печени изменения любых маркеров функции печени за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни азота мочевины крови (АМК) и креатинина с помощью автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Маркеры функции печени (мг/дл) у крыс Спрага-Доули
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы органов за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Испытание 5 (с МОЕ гэпмерами и дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами)
Самцов крыс Спрага-Доули возрастом от девяти до десяти недель выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг МОЕ
гэпмера или 50 мг/кг дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидов. Одной контрольной группе из 4 крыс один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Функция печени
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме на 42 день, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы) и представили результаты в следующей Таблице, выраженные в МЕ/л. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали в печени изменения любых маркеров функции печени за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
588870
cEt
Функция почек
Маркеры функции почек (мг/дл) в плазме крыс Спрага-Доули
Маркеры функции почек (мг/дл) в моче крыс Спрага-Доули
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни азота мочевины крови (АМК) и креатинина в плазме и моче при помощи автоматизированного клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены ниже в Таблицах. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
ISIS 588856
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
259
ISIS 588865
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
277
ISIS 588867
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
337
ISIS 588868
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
326
ISIS 588870
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
388
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения массы органов за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Испытание 6 (с МОЕ гэпмерами, дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотидами и (S)-cEt гэпмерами)
Самцов крыс выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к нормальному корму для крыс Purina, рацион 5001. Группам по 4 крысы Спрага-Доули один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции 100 мг/кг МОЕ гэпмеров или 50 мг/кг дезокси, МОЕ и (S)-cEt олигонуклеотида, или (S)-cEt гэпмера. Одной контрольной группе из 4 крыс один раз в неделю в течение 6 недель вводили подкожные инъекции PBS. Через сорок восемь часов после введения последней дозы крыс усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Функция печени
Маркеры функции печени
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени измеряли уровни трансаминаз в плазме на 42 день, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили уровни ALT (аланинтрансаминазы) и AST (аспартаттрансаминазы) и представили результаты в следующей Таблице, выраженные в МЕ/л.
ISIS 588555
5-10-5 МОЕ
100
142
3,8
ISIS 588848
Дезокси, МОЕ и (S)-cEt
3,9
ISIS 594430
3-10-3 (S)-cEt
198
172
4,4
Функция почек
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек измеряли уровни общего белка и креатинина в моче, используя автоматизированный клинический анализатор химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты представлены ниже в Таблице. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывали изменения уровней любых маркеров функции почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмыслоых олигонуклеотидов, не использовали в дальнейших исследованиях.
Соотношение общего белка/креатинина в моче крыс
Масса
На 39 день измеряли массу тела. Массу печени, сердца, селезенки и почек измеряли по окончании исследования на 42 день, и результаты представлены в следующей таблице. Результаты измерений массы органов выражены как соотношение к массе тела и нормализованы к соотношению контрольной группы с PBS.
Выбранные соединения были протестированы на эффективность у трансгенных мышей с человеческим CFB, линия-основатель №6. Ген человеческого CFB расположен на хромосоме 6: положение 31913721- 31919861. Выбрали фосмиду (ABC 14-50933200С23), содержащую последовательность CFB, для получения трансгенных мышей, экспрессирующих ген человеческого CFB. Использовали рестрикционные ферменты Cla I (31926612) и Age I (31926815) для получения фрагмента размером 22127 п.о., содержащего ген CFB, для пронуклеарной инъекции. ДНК подтвердили анализом рестрикционного фермента, используя Pvu I. Фрагмент ДНК размером 22127 п.о. инъецировали в эмбрионы C57BL/6NTac. Вывели 6 положительных основателей. Основатель №6 экспрессировали в мРНК CFB печени человека и скрестили с Зим поколением. Потомство Зег0 поколения мышей использовали для оценки влияния ASO человеческого CFB на восстановлением мРНК человеческого CFB.
Лечение
Группам по 3 крысы два раза в неделю в течение первой недели вводили подкожные инъекции 50 мг/кг олигонуклеотидов ISIS, затем один раз в неделю дозу 50 мг/кг олигонуклеотидов ISIS в течение еще трех недель. Одной контрольной группе из 4 мышей два раза в неделю в течение первой недели вводили подкожные инъекции PBS, затем один раз в неделю в течение дополнительных трех недель. Через сорок восемь часов после введения последней дозы мышей усыпили и собрали органы и плазму для дальнейших анализов.
Анализ РНК
По окончании периода введения доз выделили РНК из печени и почек для анализа ПЦР в реальном времени для определения уровней мРНК CFB. Уровни мРНК человеческого CFB измеряли с помощью набора человеческих праймерных зондов RTS3459. Уровни мРНК CFB нормализовали к RIBOGREEN(r), а также к конститутивному
гену, циклофилину. Результаты рассчитывали как процентное ингибирование экспрессии мРНК CFB по сравнению с контролем. Все антисмысловые олигонуклеотиды вызывали ингибирование уровней мРНК человеческого CFB в печени.
Процентное уменьшение уровней мРНК CFB у мышей hCFB
Пример 129: In vivo антисмысловое ингибирование мышиного CFB
Сконструировали несколько антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на мРНК мышиного CFB (номер доступа GENBANK NM_008198.2, включенная в настоящий документ как SEQ Ш NO: 5). Целевые сайты инициации и последовательности каждого олигонуклеотида описаны в представленных ниже таблицах. Химерные антисмысловые олигонуклеотиды в представленной ниже таблице сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Гэпмеры имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный гэп состоит из 10 2'-дезоксинуклеозидов и с обеих сторон (в направлениях 5' и 3') окружен крыльями, содержащими по 5 нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид 5' крыла и нуклеозид 3' крыла имеет 2'-МОЕ модификации. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют
Лечение
Группам по четыре мыши C57BL/6 вводили подкожные инъекции 50 мг/кг ISIS 516269, ISIS 516272, ISIS 516323, ISIS 516330 или ISIS 516341, один раз в неделю в течение 3 недель. Контрольной группе мышей вводили инъекцию с фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) один раз в неделю в течение 3 недель.
Анализ РНК CFB
По окончании исследования из печеночной ткани выделили РНК для анализа CFB с помощью ПЦР в реальном времени, используя набор праймерных зондов RTS3430 (прямая последовательность GGGCAAACAGCAATTTGTGA, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш NO: 816; обратная последовательность
TGGCTACCCACCTTCCTTGT, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш NO: 817; последовательность зонда CTGGATACTGTCCCAATCCCGGTATTCCX, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш NO: 818). Уровни мРНК нормализовали с помощью RIBOGREEN(r). Как показано в представленной ниже таблице, некоторые антисмысловые олигонуклеотиды обеспечивали снижение мышиного CFB по сравнению с
Анализ белка
Уровни белка CFB измеряли в почках, печени, плазме и глазах с помощью вестерн-блоттинга, используя козье анти-CFB антитело (Sigma-Aldrich). Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца с PBS. "н.д." означает, что для указанного образца измерения не проводили. Как показано в представленной ниже таблице, антисмысловое ингибирование CFB олигонуклеотидами ISIS приводит к снижению белка CFB в различных тканях. Как показано в представленной ниже таблице, системное введение олигонуклеотидов ISIS эффективно для снижения уровней CFB в глазах.
Процентное ингибирование белка мышиного CFB у мышей C57BL/6
Группам по четыре крысы C57BL/6 один раз в неделю в течение 6 недель вводили инъекции 25 мг/кг, 50 мг/кг или 100 мг/кг ISIS 516272 и ISIS 516323. Другим двум группам мышей один раз в неделю в течение 6 недель вводили инъекции 100 мг/кг ISIS 516330 или ISIS 516341. Двум контрольным группам мышей один раз в неделю в течение 6 недель вводили инъекции фосфатно-солевого буферного раствора (PBS).
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа CFB с помощью ПНР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Уровни мРНК нормализовали с помощью RIBOGREEN(r). Как показано в представленной ниже таблице, антисмысловые олигонуклеотиды обеспечивали дозозависимое снижение мышиного CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
Процентное ингибирование мРНК мышиного CFB у мышей C57BL/6
Анализ белка
Уровни белка CFB измеряли в плазме с помощью вестерн-блоттинга, используя козье анти-CFB антитело (Sigma-Aldrich). Как показано в представленной ниже таблице, антисмысловое ингибирование CFB олигонуклеотидами ISIS приводит к снижению белка
CFB. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца с PBS. "н.д." означает, что для указанного образца измерения не проводили.
Уровни белка CFB в глазах также измеряли с помощью вестерн-блоттинга. Все экспериментальные группы демонстрировали ингибирование CFB на 95 %, при этом значения некоторых образцов были ниже предела обнаружения анализа.
Процентное ингибирование белка мышиного CFB у мышей C57BL/6
Пример 131: Влияние антисмыслового ингибирования CFB в мышиной модели NZB/W F1
NZB/W F1 представляет собой старейшую классическую модель волчанки, в которой у мышей развивается тяжелый волчаночный фенотип, сравнимый с фенотипом пациентов с волчанкой (Theofilopoulos, A.N. и Dixon, F.J. Advances in Immunology, т. 37, cc. 269-390, 1985). Такой волчаночный фенотип включает лимфаденопатию, спленомегалию, повышенное содержание антинуклеарных аутоантител в сыворотке (ANA), включая анти-дцДНК IgG, большинство из которых представляют собой IgG2a и IgG3, и иммунокомплексный гломерулонефрит (GN), который становится очевидным в
Испытание 1
Испытание проводили для демонстрации того, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, облегчает почечную патологию в мышиной модели. Самок мышей NZB/W F1 возрастом 17 недель приобрели у компании Jackson Laboratories. Группам из 16 мышей вводили дозы 100 мкг/кг/неделю ISIS 516272 или ISIS 516323 в течение 20 недель. Другой группе из 16 мышей вводили дозы 100 мкг/кг/неделю контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 в течение 20 недель. Другой группе из 10 мышей вводили дозы PBS в течение 20 недель и использовали в качестве контрольной группы, с которой сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа CFB с помощью ПНР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Уровни мРНК нормализовали с помощью RIBOGREEN(r). Как показано в представленной ниже таблице, некоторые антисмысловые олигонуклеотиды обеспечивали снижение мышиного CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
Протеинурия
Протеинурия ожидается у 60 % животных в указанной мышиной модели. Кумулятивную частоту случаев возникновения тяжелой протеинурии измеряли расчетом
соотношения общего белка к креатинину, используя клинический анализатор. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, обеспечивает снижение протеинурии у мышей, по сравнению с контрольной группой с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
Процентная кумулятивная частота случаев тяжелой протеинурии у мышей NZB/W F1
Выживаемости ъ
Количество выживших мышей и % выживаемости
Выживаемость мышей контролировали, подсчитывая количество мышей в начале лечения, затем на 20 неделе. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, увеличивает выживаемость мышей, по сравнению с контрольной группой с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
Гломерулярное отложение
Количество отложения СЗ, а также отложения IgG в гломерулах почек измеряли посредством иммуногистохимии с анти-СЗ антителом. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, обеспечивает снижение отложений СЗ и IgG в гломерулах почек, по сравнению с контрольным образцом с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
Процентное ингибирование отложений в гломерулах у мышей NZB/W F1
Испытание 2
Самок мышей NZB/W F1 возрастом 16 недель приобрели у компании Jackson Laboratories. Группе из 10 мышей вводили дозы 100 мкг/кг/неделю ISIS 516323 в течение 12 недель. Другой группе из 10 мышей вводили дозы 100 мкг/кг/неделю контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 в течение 12 недель. Другой группе из 10 мышей вводили дозы PBS в течение 12 недель и использовали в качестве контрольной группы, с которой сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа CFB с помощью ПЦР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Как показано в представленной ниже таблице, лечение с ISIS 516323 обеспечивает снижение мышиного CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
672 Таблица 208
ISIS №
Печень
Почки
516323
141923
Протеинурия
Кумулятивную частоту возникновения тяжелой протеинурии оценивали путем измерения соотношения общего белка в моче к креатинину, а также путем измерения общего уровня микроальбумина. Результаты представлены в следующих таблицах и демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, снижает протеинурии у мышей, по сравнению с контрольным образцом с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
Протеинурию у мышей NZB/W F1 измеряли как соотношение общего белка к креатинину
Протеинурию у мышей NZB/W F1 измеряли как уровни микроальбумина в моче (мг/дл)
Выживаемост ъ
Выживаемость мышей контролировали путем подсчета количества мышей в начале лечения, а затем на 12 неделе. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на
Пример 132: Влияние антисмыслового ингибирования CFB в мышиной модели MRL
В мышиной модели волчаночного нефрита MRL/lpr развивается волчаночный фенотип, характеризующийся лимфаденопатией в результате накопления двойных отрицательных (CD4" CD8") и В220+ Т-клеток. Указанные мыши демонстрируют ускоренную смертность. Кроме того, мыши имеют более высокие концентрации циркулирующих иммуноглобулинов, включая повышенные уровни аутоантител, таких как ANA, анти-оцДНК, анти-дцДНК, антш-Sm и ревматоидные факторы, что приводит к большому количеству иммунных комплексов (Andrews, В. et al., J. Exp. Med. 148: 11981215, 1978).
Лечение
Проводили испытание для изучения того, вызывает ли лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, регресс почечной патологии в мышиной модели. Самок мышей MRL/lpr возрастом 14 недель приобрели у компании Jackson Laboratories. Группе из 10 мышей вводили дозы 50 мкг/кг/неделю ISIS 516323 в течение 7 недель. Другой группе из 10 мышей вводили дозы 50 мкг/кг/неделю контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 в течение 7 недель. Другой группе из 10 мышей вводили дозы PBS в течение 7 недель и использовали в качестве контрольной группы, с которой
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени для анализа CFB с помощью ПНР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Как показано в представленной ниже таблице, ISIS 516323 обеспечивает снижение CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
Процентное ингибирование мРНК мышиного CFB у мышей MRL/lpr
Почечная патология
Почечную патологию оценивали двумя способами. Гистологические срезы почек окрашивали гематоксилином и эозином. Контрольный образец с PBS демонстрировал наличие мультигломерулярных серповидных трубчатых цилиндров, что является симптомом гломерулосклероза. Напротив, срезы от мышей, обработанных ISIS 516323, демонстрировали отсутствие серповидных трубчатых цилиндров с минимальными фибротическими изменениями боуменовой капсулы, от умеренного до сильного расширение сегментарных мезангиальных клеток и утолщение гломерулярной базальной мембраны.
Накопление СЗ в почках также оценивали с помощью иммуногистохимии с анти-СЗ антителами. Иммуногистохимическую оценку интенсивности СЗ в целой почке рассчитывали по балльной системе интенсивности, которую рассчитывали отбором 10 гломерул на почку и подсчетом интенсивности положительного окрашивания СЗ. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение с ISIS 516323 снижает накопление СЗ в почках, по сравнению с контрольными группами.
Оценка интенсивности СЗ в целой почке
Количественное определение СЗ (площадь/общая площадь), % от PBS среднего
PBS
2,5
100
ISIS 516323
1,6
ISIS 141923
2,2
Уровни СЗ в плазме
Снижение CFB ингибирует активацию альтернативного пути комплемента, препятствуя поглощению СЗ и приводя к заметному повышению уровней СЗ в плазме. Уровни СЗ в плазме терминальной крови измеряли с помощью клинического анализатора. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение с ISIS 516323 повышает уровни СЗ (р <0,001) в плазме, по сравнению с контрольными группами.
Уровни СЗ в плазме (мг/дл) мышей MRL/lpr
Результаты демонстрируют, что лечение антисмысловыми олигонуклеотидами, направленными на CFB, реверсирует почечную патологию в мышиной модели волчанки.
Пример 133: Влияние антисмыслового ингибирования CFB в мышиной модели CFH Het
CFH гетерозиготная (CFH Het, CFH+/") мышиная модель экспрессирует мутантный белок фактора Н в комбинации с мышиным белком полной длины (Pickering, М.С. et al., J.
Exp. Med. 2007. 204: 1249-56). Почечная гистология у этих мышей остается нормальной до шестимесячного возраста. Испытание 1
Группам по 8 мышей CFH+/" возрастом 6 недель вводили дозы 75 мг/кг/неделю ISIS 516323 или ISIS 516341 в течение 6 недель. Другой группе из 8 мышей вводили дозы 75 мг/кг/неделю контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 в течение 6 недель. Другой группе из 8 мышей вводили дозы PBS в течение 6 недель и использовали в качестве контрольной группы, с которой сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа CFB с помощью ПЦР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Как показано в представленной ниже таблице, антисмысловые олигонуклеотиды обеспечивают снижение CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
Процентное ингибирование мРНК мышиного CFB у мышей CFH+/"
Уровни СЗ в плазме
Снижение CFB ингибирует активацию альтернативного пути комплемента, препятствуя поглощению СЗ и приводя к заметному повышению уровней СЗ в плазме. Уровни СЗ в плазме терминальной крови измеряли с помощью клинического анализатора. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение с ISIS 516323 повышает уровни СЗ в плазме до нормальных уровней.
ISIS №
516323
516341
141923
Испытание 2
Группам по 5 мышей CFH+/" вводили дозы 12,5 мг/кг/неделю, 25 мг/кг/неделю, 50 мг/кг/неделю, 75 мг/кг/неделю или 100 мг/кг/неделю ISIS 516323 или ISIS 516341 в течение 6 недель. Другой группе из 5 мышей вводили дозы 75 мкг/кг/неделю контрольного олигонуклеотида ISIS 141923 в течение 6 недель. Другой группе из 5 мышей вводили дозы PBS в течение 6 недель и использовали в качестве контрольной группы, с которой сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
Анализ РНК CFB
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа CFB с помощью 1ТЦР в реальном времени с использованием набора праймерных зондов RTS3430. Как показано в представленной ниже таблице, антисмысловые олигонуклеотиды обеспечивают снижение CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS дозозависимым образом. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
12,5
516341
100
141923
Уровни СЗ в плазме
Уровни СЗ в плазме (мг/дл) мышей CFH"
Снижение CFB ингибирует активацию альтернативного пути комплемента, препятствуя поглощению СЗ и приводя к заметному повышению уровней СЗ в плазме. Уровни СЗ в плазме терминальной крови измеряли с помощью клинического анализатора. Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что лечение олигонуклеотидами ISIS, направленными на CFB, повышает уровни СЗ в плазме.
Пример 134: Влияние антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, нпаравленных на CFB человека, у яванских макак
Яванских макак лечили антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, отобранными в исследованиях, описанных в представленных выше примерах. Оценивали эффективность и переносимость антисмысловых олигонуклеотидов, а также их фармакокинетический профиль в печени и почках.
Во время проведения испытаний геномная последовательность яванских макак отсутствовала в базе данных Национального центра биотехнологической информации (NCBI); поэтому перекрестная реактивность с последовательностью гена яванских макак не может быть подтверждена. Вместо этого последовательности антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, использованные на яванских макаках, сравнивали с последовательностью резус-макак на предмет гомологии. Предполагается, что олигонуклеотиды ISIS с гомологией к последовательности резус-макак, являются также полностью перекрестно реактивными с последовательностью яванских макак. Испытанные человеческие антисмысловые олигонуклеотиды являются перекрестно реактивными с геномной последовательностью резуса (номер доступа GENBANK NW_001116486.1, усеченной по нуклеотидам с 536000 по 545000, обозначенной в настоящем документе как SEQ Ш NO: 3). Чем выше комплементарность между человеческим олигонуклеотидом и последовательностью макаки резус, тем вероятнее, что человеческий олигонуклеотид может перекрестно реагировать с последовательностью макак резус. Сайты инициации и терминации каждого олигонуклеотида, направленного на SEQ Ш NO: 3, представлены в следующей таблице. "Сайт инициации" обозначает самый крайний 5' нуклеозид, на который направлен гэпмер в последовательности гена резус-макаки. "Рассогласование" указывает на количество азотистых оснований в человеческом олигонуклеотиде, которые не соответствуют геномной последовательности резуса.
Таблица 219
Антисмысловые олигонуклеотиды, комплементарные геномной последовательности CFB
532770
6788
5-10-5 МОЕ
198
532800
7500
5-10-5 МОЕ
228
532809
7614
5-10-5 МОЕ
237
588540
7627
5-10-5 МОЕ
440
588544
7631
5-10-5 МОЕ
444
588548
7635
5-10-5 МОЕ
448
588550
7637
5-10-5 МОЕ
450
588553
7640
5-10-5 МОЕ
453
588555
7643
5-10-5 МОЕ
455
588848
7639
Дезокси, МОЕ и cEt
598
594430
6790
3-10-3 cEt
549
Лечение
Перед началом исследования обезьян выдерживали на карантине в течение по меньшей мере 30 дней, в течение которых ежедневно следили за общим состоянием здоровья животных. Возраст обезьян составлял 2-4 года, а масса от 2 до 4 кг. Одиннадцати группам по 4-6 случайным образом распределенных самцов яванских макак вводили подкожные инъекции олигонуклеотида ISIS или PBS в четырех местах на спине по часовой стрелке (т.е. слева, сверху, справа и снизу), по одному месту на дозу. Обезьянам вводили четыре насыщающие дозы PBS или 40 мг/кг ISIS 532800, ISIS 532809, ISIS 588540, ISIS 588544, ISIS 588548, ISIS 588550, ISIS 588553, ISIS 588555, ISIS 588848 или ISIS 594430 в течение первой недели (1, 3, 5 и 7 день), а затем вводили дозы один раз в неделю в течение 12 недель (14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77 и 84 день) PBS или 40 мг/кг олигонуклеотидов ISIS. ISIS 532770 испытали в отдельном исследовании с аналогичными условиями на двух самцах и двух самках яванских макак в одной группе.
Снижение печеночной мишени
Анализ РНК
На 86 день собрали образцы печени и почек в двух экземплярах (примерно по 250 мг каждый) для анализа мРНК CFB. После вскрытия образцы быстро заморозили в жидком азоте в течение около 10 минут после усыпления.
Выделили РНК из тканей печени и почек для анализа экспрессии мРНК CFB с помощью ПЦР в реальном времени. Результаты представлены как процентное изменение мРНК относительно контрольного образца с PBS, нормализованное по RIBOGREEN(r). Уровни РНК нормализовали также по конститутивному гену, циклофилину А. Уровни РНК измеряли с помощью наборов праймерных зондов RTS3459, описанных выше, или RTS4445_MGB (прямая последовательность CGAAGAAGCTCAGTGAAATCAA, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 819; обратная последовательность TGCCTGGAGGGCCCTCTT, обозначенная в настоящем документе как SEQ Ш N0: 820; последовательность зонда AGACCACAAGTTGAAGTC, обозначенная в настоящем документе как SEQ ГО N0: 815).
Как показано в представленных ниже таблицах, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводит к снижению мРНК CFB по сравнению с контрольным образцом с PBS. Анализ уровней мРНК CFB показал, что некоторые олигонуклеотиды ISIS снижают уровни CFB в печени и/или почках. "О" означает, что уровни экспрессии не были ингибированы. "*" означает, что олигонуклеотид испытывали в отдельном исследовании с аналогичными условиями.
Таблица 220
Процентное ингибирование мРНК CFB в печени яванских макак относительно
контрольного образца с PBS
ISIS №
RTS3459/ циклофилин А
RTS3459/ RIBOGREEN
RTS445 MGB/ циклофилин А
RTS445 MGB
RIBOGREEN
532770*
532800
588540
588548
588550
Процентное ингибирование мРНК CFB в почках яванских макак относительно
контрольного образца с PBS
ISIS №
RTS3459/ циклофилин А
RTS3459/ RIBOGREEN
RTS445 MGB/ циклофилин А
RTS445 MGB
RIBOGREEN
532770*
532800
588540
588548
588550
588553
588555
588848
594430
Анализ белка
Около 1 мл крови взяли у всех доступных животных на 85 день и поместили в пробирки, содержащие калиевую соль ЭДТК. Образцы крови сразу поместили на влажный лед или Kryorack и центрифугировали (3000 об./мин. в течение 10 минут при 4°С) с получением плазмы (0,4 мл) в течение 60 минут после сбора. Уровни CFB в плазме измеряли в плазме радиальной иммунодиффузией (RID), используя поликлональное антитело анти-фактор В. Результаты представлены ниже в таблице. ISIS 532770 испытали в отдельном исследовании, и в этой группе уровни белка в плазме измеряли на 91 или 92 день.
Анализ CFB в плазме показал, что некоторые олигонуклеотиды ISIS устойчиво снижают уровни белка. ISIS 532770, который испытывали в отдельном исследовании, обеспечил снижение белка CFB на 91/92 день на 50 % относительно исходных значений.
Исследования переносимости
Измерения массы тела
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на общее состояние здоровья животных измеряли массу тела и органов, и результаты представлены в следующей таблице. "*" означает, что олигонуклеотид испытывали в отдельном исследовании с аналогичными условиями, и значение является средним для измерений у самцов и самок обезьян. Результаты демонстрируют, что влияние лечения антисмысловыми олигонуклеотидами на массу тела и органов находится в пределах ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов.
Таблица 223
Конечная масса тела (г) яванских макак
Конечная масса органов (г) яванских макак
Селезенка
Сердце
Почки
Печень
PBS
2,8
11,6
11,9
55,8
ISIS 532770*
5,0
11,3
20,6
77,9
ISIS 532800
6,2
11,9
18,6
94,4
ISIS 588540
4,0
11,4
13,5
67,1
ISIS 588548
11,7
17,3
72,0
ISIS 588550
5,8
10,9
18,5
81,8
ISIS 588553
5,0
12,7
17,2
85,9
ISIS 588555
4,7
11,8
15,9
88,3
ISIS 588848
5,0
12,7
14,4
75,7
ISIS 594430
3,9
11,9
14,8
69,9
Функция печени
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию печени из всех экспериментальных групп взяли образцы крови. Образцы крови брали из головной, подкожной или бедренной вены через 48 часов после введения дозы. Обезьяны не принимали пищу в течение ночи до сбора крови. Кровь (1,5 мл) собирали в пробирки без
антикоагулянта для отделения сыворотки. Пробирки выдерживали при комнатной температуре в течение не менее 90 минут, а затем центрифугировали (около 3000 об./мин. в течение 10 минут) для получения сыворотки. Уровни различных маркеров функции печени измеряли с помощью анализатора химического состава Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Япония).
Измеряли уровни ALT и AST в плазме, и результаты, выраженные в МЕ/л, представлены в следующей таблице. Таким же образом измеряли билирубин, маркер функции печени, и результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. "*" означает, что олигонуклеотид испытывали в отдельном исследовании с аналогичными условиями, и значение является средним для измерений у самцов и самок обезьян. Результаты демонстрируют, что большинство антисмысловых олигонуклеотидов не оказывают воздействия на функцию печени, выходящего за пределы ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов.
Уровни химических маркеров печени в плазме яванских макак на 86 день
Функция почек
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на функцию почек из всех экспериментальных групп взяли образцы крови. Образцы крови брали из головной, подкожной или бедренной вены через 48 часов после введения дозы. Обезьяны не принимали пищу в течение ночи до сбора крови. Кровь собирали в пробирки без антикоагулянта для отделения сыворотки. Пробирки выдерживали при комнатной температуре в течение не менее 90 минут, а затем центрифугировали (около 3000 об./мин. в течение 10 минут) для получения сыворотки. Уровни АМК и креатинина измеряли с помощью анализатора химического состава Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Япония). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в следующей таблице. "*" означает, что олигонуклеотид испытывали в отдельном исследовании с аналогичными условиями, и значение является средним для измерений у самцов и самок обезьян.
Для анализа мочи свежую мочу всех животных собирали утром, используя чистый лоток для клетки на мокром льду. За день до сбора мочи животным в течение ночи не давали пищу, оставив только воду. Образцы мочи (около 1 мл) анализировали на соотношение белка к креатинину (Р/С) с помощью автоматизированного анализатора химического состава Toshiba 200FRNEO (Toshiba Co., Япония), "н.д." означает, что уровень белка в моче ниже предела обнаружения анализатора.
Данные химического анализа плазмы и мочи показывают, что большинство олигонуклеотидов ISIS не оказывало какого-либо влияния на почечную функцию за пределами ожидаемого для антисмысловых олигонуклеотидов диапазона.
Уровни химических маркеров почек (мг/дл) в плазме яванских макак на 86 день
ISIS 588548
0,9
7,6
ISIS 588550
0,9
7,2
ISIS 588553
0,8
7,2
ISIS 588555
0,8
7,6
ISIS 588848
0,9
7,5
ISIS 594430
0,8
7,2
Гематология
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на гематологические параметры яванских макак, образцы крови объемом около 0,5 мл крови отбирали у каждого из доступных экспериментальных животных в пробирки, содержащие Кг-ЭДТА. Образцы анализировали на содержание красных кровяных телец (RBC), содержание белых кровяных телец (WBC), количество отдельных белых кровяных телец, таких как моноциты, нейтрофилы, лимфоциты, а также на количество тромбоцитов, содержание гемоглобина и гематокрита, используя анализатор гематологии ADVIA120 (Bayer, США). Данные представлены в следующих таблицах. "*" означает, что олигонуклеотид
Количество кровяных клеток у яванских макак
Гематологические параметры у яванских макак
Данные показывают, что олигонуклеотиды не вызывали каких-либо изменений гематологических параметров за пределами ожидаемого для антисмысловых олигонуклеотидов диапазона.
ISIS 588550
13,4
45,0
ISIS 588553
12,6
39,8
ISIS 588555
11,6
38,1
ISIS 588848
13,2
42,7
ISIS 594430
13,4
43,1
Измерение концентрации олигонуклеотида
Распределение антисмысловых олигонуклеотидов
Концентрацию олигонуклеотида полной длины измеряли в тканях почек и печени. Использованные способы представляют собой модификацию ранее опубликованных способов (Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999), которые состоят из экстракции фенолом-хлороформом (жидкость-жидкость) с последующей твердофазной экстракцией. Концентрации в образце ткани рассчитывали с помощью калибровочных кривых, где нижний предел количественного обнаружения (LLOQ) составляет около 1,14 мкг/г. Результаты, выраженные в мкг/г ткани печени или почек, представлены в следующей таблице.
Пример 135: 6-Недельное испытание эффективности несопряженных и 5'-THA-GalNAc3 сопряженных антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на человеческий CFB, у трансгенных мышей
Два антисмысловых олигонуклеотида, имеющих одинаковую последовательность азотистых оснований: несопряженный антисмысловый олигонуклеотид ISIS 588540 и 5-ТНА-GalNAc3-сопряженный антисмысловый олигонуклеотид ISIS 696844, испытывали у трансгенных мышей с человеческим CFB (hCFB-Tg мыши).
Мышам подкожно вводили ISIS 696844 в дозах 0,1, 1,25, 0,5, 2,0, 6,0 или 12,0 мг/кг/неделю или ISIS 588540 в дозах 2, 6, 12, 25 или 50 мг/кг/неделю в течение 6 недель. Контрольной группе мышей подкожно вводили PBS в течение 6 недель. Мышей усыпили через 48 часов после введения последней дозы. Уровни мРНК в печени анализировали с помощью количественной ПЦР в реальном времени.
Испытание 1
Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что 5-THA-GalNAc3-сопряженный антисмысловый олигонуклеотид, направленный на CFB, более эффективен, чем несопряженный антисмысловый олигонуклеотид с такой же последовательностью.
Эффективность антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на CFB
Испытание 2
Уровни мРНК в печени измеряли с двумя различными наборами праймерных зондов, направленными на разные области мРНК, и нормализовали по RIBOGREEN(r) (RGB) или циклофилину. Наборы праймерных зондов представляли собой RTS3459, описанный выше, и RTS3460 (прямая последовательность CGAAGCAGCTCAATGAAATCAA, обозначенная в настоящем документе как SEQ ID NO: 813; обратная последовательность TGCCTGGAGGGCCTTCTT, обозначенная в настоящем документе как SEQ ID NO: 814; последовательность зонда AGACCACAAGTTGAAGTC, обозначенная в настоящем документе как SEQ ID NO: 815). Результаты представлены в следующей таблице и демонстрируют, что 5'-ТНА-
Эффективность антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на CFB
GalNAc3 -сопряженный антисмысловый олигонуклеотид, направленный на CFB, более эффективен, чем несопряженный антисмысловый олигонуклеотид с такой же последовательностью, независимо от используемого набора праймерных зондов.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Isis Pharmaceuticals
<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ФАКТОРА КОМПЛЕМЕНТА B
<130> BIOL0251WO
<150> 62/076273 <151> 2014-11-06
<150> 61/987471
<151> 2014-05-01 <160> 854
<170> PatentIn, версия 3.5
<210> 1 <211> 2646 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
gacttctgca gtttctgttt ccttgactgg cagctcagcg gggccctccc gcttggatgt 60
tccgggaaag tgatgtgggt aggacaggcg gggcgagccg caggtgccag aacacagatt 120
gtataaaagg ctgggggctg gtggggagca ggggaaggga atgtgaccag gtctaggtct 180
ggagtttcag cttggacact gagccaagca gacaagcaaa gcaagccagg acacaccatc 240
ctgccccagg cccagcttct ctcctgcctt ccaacgccat ggggagcaat ctcagccccc 300
aactctgcct gatgcccttt atcttgggcc tcttgtctgg aggtgtgacc accactccat 360
ggtctttggc ccggccccag ggatcctgct ctctggaggg ggtagagatc aaaggcggct 420
ccttccgact tctccaagag ggccaggcac tggagtacgt gtgtccttct ggcttctacc 480
cgtaccctgt gcagacacgt acctgcagat ctacggggtc ctggagcacc ctgaagactc 540
aagaccaaaa gactgtcagg aaggcagagt gcagagcaat ccactgtcca agaccacacg 600
acttcgagaa cggggaatac tggccccggt ctccctacta caatgtgagt gatgagatct 660
ctttccactg ctatgacggt tacactctcc ggggctctgc caatcgcacc tgccaagtga 720
atggccgatg gagtgggcag acagcgatct gtgacaacgg agcggggtac tgctccaacc 780
cgggcatccc cattggcaca aggaaggtgg gcagccagta ccgccttgaa gacagcgtca 840
cctaccactg cagccggggg cttaccctgc gtggctccca gcggcgaacg tgtcaggaag 900
gtggctcttg gagcgggacg gagccttcct gccaagactc cttcatgtac gacacccctc 960
aagaggtggc cgaagctttc ctgtcttccc tgacagagac catagaagga gtcgatgctg 1020
aggatgggca cggcccaggg gaacaacaga agcggaagat cgtcctggac ccttcaggct 1080
ccatgaacat ctacctggtg ctagatggat cagacagcat tggggccagc aacttcacag 1140
gagccaaaaa gtgtctagtc aacttaattg agaaggtggc aagttatggt gtgaagccaa 1200
gatatggtct agtgacatat gccacatacc ccaaaatttg ggtcaaagtg tctgaagcag 1260
acagcagtaa tgcagactgg gtcacgaagc agctcaatga aatcaattat gaagaccaca 1320
agttgaagtc agggactaac accaagaagg ccctccaggc agtgtacagc atgatgagct 1380
ggccagatga cgtccctcct gaaggctgga accgcacccg ccatgtcatc atcctcatga 1440
ctgatggatt gcacaacatg ggcggggacc caattactgt cattgatgag atccgggact 1500
tgctatacat tggcaaggat cgcaaaaacc caagggagga ttatctggat gtctatgtgt 1560
ttggggtcgg gcctttggtg aaccaagtga acatcaatgc tttggcttcc aagaaagaca 1620
atgagcaaca tgtgttcaaa gtcaaggata tggaaaacct ggaagatgtt ttctaccaaa 1680
tgatcgatga aagccagtct ctgagtctct gtggcatggt ttgggaacac aggaagggta 1740
ccgattacca caagcaacca tggcaggcca agatctcagt cattcgccct tcaaagggac 1800
acgagagctg tatgggggct gtggtgtctg agtactttgt gctgacagca gcacattgtt 1860
tcactgtgga tgacaaggaa cactcaatca aggtcagcgt aggaggggag aagcgggacc 1920
tggagataga agtagtccta tttcacccca actacaacat taatgggaaa aaagaagcag 1980
gaattcctga attttatgac tatgacgttg ccctgatcaa gctcaagaat aagctgaaat 2040
atggccagac tatcaggccc atttgtctcc cctgcaccga gggaacaact cgagctttga 2100
ggcttcctcc aactaccact tgccagcaac aaaaggaaga gctgctccct gcacaggata 2160
tcaaagctct gtttgtgtct gaggaggaga aaaagctgac tcggaaggag gtctacatca 2220
agaatgggga taagaaaggc agctgtgaga gagatgctca atatgcccca ggctatgaca 2280
aagtcaagga catctcagag gtggtcaccc ctcggttcct ttgtactgga ggagtgagtc 2340
cctatgctga ccccaatact tgcagaggtg attctggcgg ccccttgata gttcacaaga 2400
gaagtcgttt cattcaagtt ggtgtaatca gctggggagt agtggatgtc tgcaaaaacc 2460
agaagcggca aaagcaggta cctgctcacg cccgagactt tcacatcaac ctctttcaag 2520
tgctgccctg gctgaaggag aaactccaag atgaggattt gggttttcta taaggggttt 2580
cctgctggac aggggcgtgg gattgaatta aaacagctgc gacaacaaaa aaaaaaaaaa 2640
aaaaaa 2646
<210> 2 <211> 9001 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2
ggaggtgagg gtctcaggtt ggggatgctg ggatccccct gtgacagctc ccagaatgtc 60
tctcttcctt ctccaggtct ggctgctttc tctctctgac gcgggtcacc cctcctccca 120
agcctcacaa acctgctagg tgtccctggg tctgcttatt ctttttttgt tgttattgag 180
atggagtctt gctctgtctc ccaggctgga gtgcagtggc acgacctcag ctcactgcaa 240
cttctgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tacttcagcc tcccgagtag ctgagattac 300
aggtgcccac caccacacca gctaattttt gtatttttag tagagacggg atttcgccat 360
gttggccagg atggtcttga actcctgacc tcaagtgatc tgcctgcctc aacctcccaa 420
agtgctgaga ttacaggcgt gagccactgc acccacccgg gtctgcttat tctacccttc 480
tctctggttc cacccctgct gcagtggaca agctgtgccg aggttgtctc ccaagaaaaa 540
accatgttcc ccaacttgac agatgtcagg gaggtggtga cagaccagtt cctatgcagt 600
gggacccagg aggatgagag tccctgcaag ggtgagtccc tcaccatgcc tggattccca 660
aggggaaggc cacctgtgtc tctgtggcca gcatgcatgc cagaacacca gtccactgcc 720
ctagatgaca ctgtctcctg tcaccctttg ctggcaggag aatctggggg agcagttttc 780
cttgagcgga gattcaggtt ttttcaggtg agaaggtaga agcttgcagg acccaggggt 840
tacaggatct cagccttgtt ggggggatga gggaggcctt tgagggatct agggaggttg 900
gggcttacag ttggggctgt ggcagcctcc cagccagttc tctccttttc tccaggtggg 960
tctggtgagc tggggtcttt acaacccctg ccttggctct gctgacaaaa actcccgcaa 1020
aagggcccct cgtagcaagg tcccgccgcc acgagacttt cacatcaatc tcttccgcat 1080
gcagccctgg ctgaggcagc acctggggga tgtcctgaat tttttacccc tctagccatg 1140
gccactgagc cctctgctgc cctgccagaa tctgccgccc ctccatcttc tacctctgaa 1200
tggccaccct tagaccctgt gatccatcct ctctcctagc tgagtaaatc cgggtctcta 1260
ggatgccaga ggcagcgcac acaagctggg aaatcctcag ggctcctacc agcaggactg 1320
cctcgctgcc ccacctcccg ctccttggcc tgtccccaga ttccttccct ggttgacttg 1380
actcatgctt gtttcacttt cacatggaat ttcccagtta tgaaattaat aaaaatcaat 1440
ggtttccaca tctctcagtg cctctatctg gaggccaggt agggctggcc ttgggggagg 1500
gggaggccag aatgactcca agagctacag gaaggcaggt cagagacccc actggacaaa 1560
cagtggctgg actctgcacc ataacacaca atcaacaggg gagtgagctg gatccttatt 1620
tctggtccct aagtgggtgg tttgggctta ctggggagga gctaaggccg gagaggaggt 1680
actgaagggg agagtcctgg acctttggca gcaaagggtg ggacttctgc agtttctgtt 1740
tccttgactg gcagctcagc ggggccctcc cgcttggatg ttccgggaaa gtgatgtggg 1800
taggacaggc ggggcgagcc gcaggtgcca gaacacagat tgtataaaag gctgggggct 1860
ggtggggagc aggggaaggg aatgtgacca ggtctaggtc tggagtttca gcttggacac 1920
tgagccaagc agacaagcaa agcaagccag gacacaccat cctgccccag gcccagcttc 1980
tctcctgcct tccaacgcca tggggagcaa tctcagcccc caactctgcc tgatgccctt 2040
tatcttgggc ctcttgtctg gaggtaagcg agggtaacct tcccttcctg ctgtctccag 2100
catccctcct tggccttttg gggccaggct tcatcagcct ttctcttcag gtgtgaccac 2160
cactccatgg tctttggccc ggccccaggg atcctgctct ctggaggggg tagagatcaa 2220
aggcggctcc ttccgacttc tccaagaggg ccaggcactg gagtacgtgt gtccttctgg 2280
cttctacccg taccctgtgc agacacgtac ctgcagatct acggggtcct ggagcaccct 2340
gaagactcaa gaccaaaaga ctgtcaggaa ggcagagtgc agaggtttga gggcaatgag 2400
tgtgggcagt ggcctaaggc agaaacaggg caggcggcag caaggtcagg actaggatga 2460
gactaggcag ggtgacaagg tgggctgacc gggagtagga gcagttttag ggtggcaggc 2520
ggaaaggggg caagaaaaag cggagttaac ccttactaag catttaccct gggcttccag 2580
gcagccctgg aagtcaagag aacactcaga aatggggagg gagaagcagt ggaaatccat 2640
atgggttgag gagtaggtaa gatgctgctt ctgcgggact gggaatgcgc tgtttctcag 2700
tgacatggtc tccgagacca ggagggatac acctaaggca gcctttccct cttgatgact 2760
tctacttgtc cccccttctc aaagcaatcc actgtccaag accacacgac ttcgagaacg 2820
gggaatactg gccccggtct ccctactaca atgtgagtga tgagatctct ttccactgct 2880
atgacggtta cactctccgg ggctctgcca atcgcacctg ccaagtgaat ggccgatgga 2940
gtgggcagac agcgatctgt gacaacggag gtgagaagca tcccctcccc ctacattgct 3000
gtctccctga cggcgcccag cccgaggagt gggcactcgg ctccggacac tgtaactctt 3060
gctctctacc ttgctcacgg ggcctcaggc ttcagtgctt acctcgatgt ctcatacctc 3120
tgcagcgggg tactgctcca acccgggcat ccccattggc acaaggaagg tgggcagcca 3180
gtaccgcctt gaagacagcg tcacctacca ctgcagccgg gggcttaccc tgcgtggctc 3240
ccagcggcga acgtgtcagg aaggtggctc ttggagcggg acggagcctt cctgccaagg 3300
tgacctttga cctgtacccc caggtcagat cctggtcttc catcctactg tcttctctcc 3360
ccacctcaac cctgctcttt cctcactttg tttaaacctc cctgtacaac tatctcactt 3420
ctgagccttt tataccctgg aaacccatga tcccccgtct ctttggtcac tgtatccctg 3480
acactcccag acatttgacc tcatttctga ctctcccaga ctccttcatg tacgacaccc 3540
ctcaagaggt ggccgaagct ttcctgtctt ccctgacaga gaccatagaa ggagtcgatg 3600
ctgaggatgg gcacggccca ggtttgaaga cagagaaggg aggcagggca gggaactggg 3660
ggaaaatgga gaagggacag aactgttaat gctggagcct gagccactct cctggcaccc 3720
aggggaacaa cagaagcgga agatcgtcct ggacccttca ggctccatga acatctacct 3780
ggtgctagat ggatcagaca gcattggggc cagcaacttc acaggagcca aaaagtgtct 3840
agtcaactta attgagaagg tggaatcctc ctatccctga actcggggga atggaatctc 3900
gctgatcttc caggactagc tccctgatca ttccagcccc tctgaacaac agggccccag 3960
gaaaatctcc aggtcctatt ctgtcctcct tcccttttac ttgaagcagt ttcttgactg 4020
gtaattcctc catgaacctc agcccttgag cctcttactg agagcctccc tgtcccagca 4080
aagtcgctga aatctcccaa tcacagtatt ctattttcaa tgccatggcg ccttgttctc 4140
ctcacccaca ggtggcaagt tatggtgtga agccaagata tggtctagtg acatatgcca 4200
cataccccaa aatttgggtc aaagtgtctg aagcagacag cagtaatgca gactgggtca 4260
cgaagcagct caatgaaatc aattatgaag gtcagaggtt agggaatggt gggaggttca 4320
ctttggggtc aggaggttca gggtggaggg ggtcatgaga ctaccttgag ggcgacaggg 4380
aggaccactt tgtagtcaaa agttgaacag caggatcgtt gggcaatgga ggttagtggg 4440
aacctgttgg gggctggaag ggccactttg tggtcaaagg gaagtccgtg taatgatgat 4500
taacttaaaa agttgaaaga tgtgggattt cagttgcaga ttggtctctg gggttaaaag 4560
atggcttgga agaccaggtg aggtgatggt ctcttccctc tccacagacc acaagttgaa 4620
gtcagggact aacaccaaga aggccctcca ggcagtgtac agcatgatga gctggccaga 4680
tgacgtccct cctgaaggct ggaaccgcac ccgccatgtc atcatcctca tgactgatgg 4740
tcagaaggga cctctctcct gtcccagcct ccccaccttc tcagaccagc atgtggccct 4800
taagtccact tgtaacacta tacccatggt tggggccctg aatgtgactc atagctggct 4860
gttcatctct cctgtgaccc ttcataagga attcttccta agccctgtga tcaactatct 4920
ctaacccttc ctcaacttgc tcaccctgcc atgtgtatcc ctgcctttag ccagtttatc 4980
ttccttatct cctaccctca tggtcctgtc tcttctgcag gattgcacaa catgggcggg 5040
gacccaatta ctgtcattga tgagatccgg gacttgctat acattggcaa ggatcgcaaa 5100
aacccaaggg aggattatct gggtgagtaa cctgcctagg acccagcacc ccacttcctc 5160
agggcttgga ccctcatcct tcctttttat ccctcagatg tctatgtgtt tggggtcggg 5220
cctttggtga accaagtgaa catcaatgct ttggcttcca agaaagacaa tgagcaacat 5280
gtgttcaaag tcaaggatat ggaaaacctg gaagatgttt tctaccaaat gatcggtagg 5340
gagatacaag ggaataaaga acacaactct cctcaggttc ccctgaagta attcattctt 5400
cctctacacc tgaagctcta gttgcctgga aagccttctt cattcctcct tctctacctc 5460
agtgtcacta ttcttgtttc ctggcactgt tcacttaacc ttagaatcac agagctctga 5520
gcacttcaga gatctttcta tagtcctaca tttgacacgt ggaaacagaa gccaaaggag 5580
gtcaagggac agcaagttag caacaagggt gggcttgaaa acagccaggc ctctgacagc 5640
ttgatcccaa gttctttccc ttttcagtcc accatagcag ttttctccta acacgaggaa 5700
acaaataccc gtggtctttc cctttctcct tttgggcctt tgctccccat agactcctac 5760
ccaaaaggct gctgccattt gggaatgaag tgttccgagt tttcagcaca ttctccttct 5820
ctgccagatg aaagccagtc tctgagtctc tgtggcatgg tttgggaaca caggaagggt 5880
accgattacc acaagcaacc atggcaggcc aagatctcag tcattgtaag cacagaatcc 5940
cagtagtggg gacttggggg aggtgaggtc aaggtgaaat gggagtaggg gaaggaaaaa 6000
atggccataa gagatggtgg tttgtgaaag ttgagctttc cctctctact gttgtgtccc 6060
cagcgccctt caaagggaca cgagagctgt atgggggctg tggtgtctga gtactttgtg 6120
ctgacagcag cacattgttt cactgtggat gacaaggaac actcaatcaa ggtcagcgta 6180
ggtaaggatg caactgaagg tcctgggctg cacctatgct ctccaggcaa cacctcccac 6240
tttctacaga tcctacactc cacccatcct caatgcagcc ccattccttg caccccagac 6300
cagtcaggga tgggggaaga cgtgaagtta ggaatgacac ggggccagag gcaggaagct 6360
gcccacaaag aggtggtacc tactctccta cttcaggagg ggagaagcgg gacctggaga 6420
tagaagtagt cctatttcac cccaactaca acattaatgg gaaaaaagaa gcaggaattc 6480
ctgaatttta tgactatgac gttgccctga tcaagctcaa gaataagctg aaatatggcc 6540
agactatcag gtgagagcgt ccagatccct gaggaaaggc tgggaaaggc tggaggactg 6600
gggtgaggag caggcctggt ttgctgttct ccttgtcctt tataggccca tttgtctccc 6660
ctgcaccgag ggaacaactc gagctttgag gcttcctcca actaccactt gccagcaaca 6720
aagtaagaca tacttggcaa gaggataagg atgagatccc aagagacaag tggggcatga 6780
gagggaggtg caataggaag agatgatgcc tggcccagaa cctagctcta gaagggctta 6840
ggggacatct actgagtgac aaaggcaatg gggagatgac agtggtggga gcagctgaag 6900
tgacgcagtc tattcgtcca gaggaagagc tgctccctgc acaggatatc aaagctctgt 6960
ttgtgtctga ggaggagaaa aagctgactc ggaaggaggt ctacatcaag aatggggata 7020
aggtgagaaa cgggcatcct aaggaggcac tctaggcccc aatccttcct aagccacttc 7080
tgttcattac ttctccatgc ttcccacctc ccctacagaa aggcagctgt gagagagatg 7140
ctcaatatgc cccaggctat gacaaagtca aggacatctc agaggtggtc acccctcggt 7200
tcctttgtac tggaggagtg agtccctatg ctgaccccaa tacttgcaga ggtgagagaa 7260
tgctctttgg ttgtgctaca agtgcccaag gcccaacagt ccttttctct acagcttctc 7320
ctctccttgc aggtgattct ggcggcccct tgatagttca caagagaagt cgtttcattc 7380
aagtgagtcc tccctttcct atctggggag atgccaagtg gtcagcatgg gccccaaagc 7440
aggaaagctc aatgcatgtg gctagtaatt cgaggtaggc agagcctgcc tcaccttagg 7500
accgcatgtc ttgcctgcgt gtgtcaagaa cgaggctgag ctgggtccct agtctgattc 7560
ctttaggtca gctaagacac aagcaggaac agccatgctt ccaggattag gaattctact 7620
gaatgatcca tggcacccca ctgcctctgc aggttggtgt aatcagctgg ggagtagtgg 7680
atgtctgcaa aaaccagaag cggcaaaagc aggtacctgc tcacgcccga gactttcaca 7740
tcaacctctt tcaagtgctg ccctggctga aggagaaact ccaagatgag gatttgggtt 7800
ttctataagg ggtttcctgc tggacagggg cgtgggattg aattaaaaca gctgcgacaa 7860
cacctgtgtt ccagatcctt ttggggcaag ggagtgggga acaggcactg gccatgttgt 7920
tacactgaga tcaaacctga cagccgtttt taaaggttta accccaatcc caagtgctga 7980
aaaaccagag gctgagggag atgtgtaagc ttccacctca gtgttttact gagaccagca 8040
ttggggcata tgaggcacaa ggaatccagc tctgttccct agaagccatc cacaaggttt 8100
tccttgtaga cgtcatcact gtagacaatc tgggtcctct tgtcccggtg gcaaccctta 8160
gggctgttct ggacagctag ggagggagga gaggaacagt taaggtctaa aggagatcat 8220
agaacagacc ctgaggctga ctcctgacca cctcactcct ggccactggc ccctggaagc 8280
ccagtttcca cgctgccctc tggtggccag gatggcctgt cttccttagc tcctttgtgc 8340
caacccatgg ccaagaaaag tataagtgga cattttgatg aatgttttgt tcttagaaaa 8400
atcccaaatg tcattgttga gacacgtgaa tgatattaac ccactactta cagtcagtat 8460
gtcagaagct aaaaactaga aaacctctgt agcccttttt tgacatgctg gtcaattcta 8520
gttcctttct tttgcctgaa gggccactgt agctgagccc ttctttctgc tcactccttt 8580
cccaggaaaa tctactttca gggaaaatgg attattcaca ctaagaaatg ctactagctc 8640
caccagaact cattcagggt gtagctttgg ccctcaccat tctctctcaa gcctctagct 8700
gtttcttccc cttcctcttt cctccctcca ccagacatgt tactctcttc accccatcca 8760
atggttccat ccccaccacc cttgagctac agagaatctc tctcacccac tcccatcctg 8820
tgatctctgt gcctcaacac tgctggctac tccctctttc tcaaagtgtg tgtccttttg 8880
cttcagtggc ccaggcccct gcggtgctgc tcccagccct ccgacccctc ctcctgtctc 8940
ctttgctaac gttaggctca acgttagcct aacatgtcag gacagctggg gacatgtggg 9000
g 9001
<210> 3 <211> 9001 <212> ДНК
<213> Macaca mulatta
<400> 3
gatggaatct tgctctgtct cccacactgg agtgcagtgg cacgatcttg gctcactgcg 60
acttctgcct cccagattta agtgattctc ctacctcggc ctcccaagta gctgggatta 120
taggtgcttg ccaccacatg cagctaattt ttgtattttt agtagagaca ggattccgcc 180
atgttggcca ggatggtctt gaactcctga cctcaagtga ttcgcccacc tcagcctccc 240
aaactgctgg gattacaggc gtgagccatt gcacccagtc aggtctgctt attcttccct 300
tctctctggt tccaccccta cggcagtgga caagctgtgc cgaggtcgtc tcccaagaaa 360
aaaccatgtt ccccaacttg acagatgtca gggaggtggt gacagaccag tttctatgca 420
gtgggaccca ggaggatgag agtccctgca agggtgagtc cctcaccatg cctggattcc 480
caaaggggaa ggccacctgt gtctctgtgg ccagggtgca tgccagaaca ccagtccact 540
gccctgtatg acgctgtctc ctgtcaccct ttgctggcag gagaatctgg gggagcagtt 600
ttccttgagc ggagattcag gttttttcag gtgagaaggt ggaagcttgc aggacccagg 660
ggttacagga tgtcagcctt gttgggggga tgagggaggc ctttgaggga tctagggagg 720
ttggggctta cagctggagc tgtggcagcc tcccagccag ttctctcctt ttctccaggt 780
gggtctggtg agctggggtc tttacaaccc ctgccttggc tctgctgaca aaaactcccg 840
caaaagggcc cctcgtagca aggtcccgcc gccacgagac tttcacatca atctcttccg 900
catgcagccc tggctgaggc agcacctggg ggatgtcctg aattttttac ccctttagtc 960
atggccactg agccctctgc tgtcctgtta gaatccgccc cccctccatc ttctacctct 1020
gaatgcccac ccttagactc tgtgacccat gctgtctcct agttgagtaa atctgggtct 1080
ctaggatgcc aggggcagcg cacacaagct gggaaatcct cagggctcct accagcggga 1140
ctgcctcgct gccccacctc ccgctccttg gcctgtcccc aaattcctcc cctggttgac 1200
ttgactcatg ctcatttcac tttcatatgg aatttcccag ttatgaaatt aataaaaatc 1260
agtggtttcc acatctgtct gtgactctat ctggaggcca ggtagggctg gcctgggggg 1320
aaggggaggc cagaatgact ccaagagcca caggaaggca ggtcagagac cccactggac 1380
aaacagtggc tggactctgt accataacac acaagcaaca ggggagtgag ctggatcctt 1440
atttctggtc cctaagtggg tggtctgggc ttgctgggga ggagctgagg ccagaaggag 1500
gtactgaagg ggagagtcct ggaccttggg cagcaaaggg tgggacttct gcagtttctg 1560
cttccttgac tggcagctca gcggggccct cccgcttgga tgttccggga aagtgatgag 1620
ggtaggacag gcggggcaag ctgcaggtgc cagaacacag attgcataaa aggccgggag 1680
ctggtggggg gcaggggaag ggaatgtgac caggtctagg tctggagttt cagcttggac 1740
actgagctaa gtagacaagc aaaacaagcc aggacacgcc atcctgcccc aggcccagct 1800
tctctcctgc cttctaacgc catggggagc agtctcagcc cccagctcta cctgatgccc 1860
ttcatcttgg gcctcttatc tggaggtaag tgagggtaac cttcccttcc tgctgtcccc 1920
agcatccctc cttggccttt tggggccagg cttcatcagc ctttctcttc aggtgtgacc 1980
accactccat tgtcttcggc ccagcctcaa ggatcctgct ctctggaggg ggtagagatc 2040
aaaggtggct ccttccgact tctccaagag ggccaggcac tggaatacgt gtgtccttct 2100
ggcttctacc cgtaccctgt gcagacacgt acctgcagat ccacggggtc ctggagcacc 2160
ctgcagactc aagatcgaaa aactgtcaag aaggcagagt gcagaggttt gagggcaatg 2220
agtgtgggca gtggcctaag ggagaaacag ggcagatggc agcaaggtca ggactaggat 2280
gagactaggc agggtgacaa ggtgggctga ccaggagtag gagcagtttt agggttgtag 2340
agggaaagga agggaaaaaa aaaggggagt taacctttag taagcattta ccctgggctt 2400
ccacgcagcc ctggaagtca agagaacact cagcaatggg gagggaggag cagcggaaac 2460
ccctatgggt tgaagggtag gtaagatgca gcttctgcag gactgggaat gctctgtttc 2520
tcagtgacct ggtctctgag accaggaggg aaacacctaa ggcagccttt ccctcttaat 2580
gacttctact tctcccctct tctcaaagca atccgctgtc cacgaccaca ggacttcgag 2640
aacggggaat accggccccg gtctccctac tacaatgtga gtgatgagat ctctttccac 2700
tgctatgacg gttacactct ccggggctct gccaatcgca cctgccaagt gaatggccgg 2760
tggagtgggc agacagcgat ctgtgacaac ggaggtgaga agcatcctct ccccccacat 2820
tgctgtctcc ctgacagcgc ctagcctgag gagtgggcat ttgcccccgg acactgtaac 2880
tcttgctctc taccttgccc tcggggcctc aggcttcagc gcttacctcc atgtctcatg 2940
cctctgcagc ggggtactgc tccaacccag gcatccccat tggcacaagg aaggtgggca 3000
gccggtaccg ccttgaagac agcgtcacct accactgcag ccgggggctt accctgcgtg 3060
gctcccagcg gcgaacatgt caggaaggtg gctcttggag cgggacggag ccttcctgcc 3120
aaggtgaccc ttgacctgta cccccaggtc agatcctgat cttgcatcct actgtcttct 3180
ctccccacct caaccctgct ctttcctcac ttcttttaaa ccttcctcta gaactgtctc 3240
acttctgagc cttttctacc ctggaaaccc acaatcccct gtctctttgg tcactgtgtc 3300
cctgacactc ccagacattt gacctcattt ctgactctcc cagactcctt catgtacgac 3360
acccctcaag aggtggccga agctttcctg tcttccctga cggagaccat agaaggagtc 3420
gatgccgagg atgggcacag cccaggtttg aaggcagaga ggggaggcaa ggcagggaac 3480
tgggggaaaa tggagaaggg acaagataat cgttcatgct ggagcctgag tcactctcct 3540
ggcacccagg ggaacaacag aagcggagga tcatcctaga cccttcaggc tccatgaaca 3600
tctacctggt gctagatgga tcagacagca ttggggccgg caacttcaca ggagccaaaa 3660
agtgtctagt caacttaatt gagaaggtgg agtcctccta tccctgaact tgggggaatg 3720
gaatcttgct gatcttccag gactagctcc ctgatcattc cagcccctct gaaccgcagg 3780
gccccaggaa agtctccagg tcctattctg tcctccttcc cttgtacttg attcctccat 3840
gaacctgtgc ttgagcctct tcctaagagc ctccctgtcc cagcaacgtt gctgaagtct 3900
cccaatcaca gtattctact ttcaatgcca tggcgccttg ttctcctcac ccacaggtgg 3960
caagttatgg tgtgaagcca agatatgctc tagtgacata tgccacatac cccagaattt 4020
gggtcaaagt gtctgaccaa gagagcagca atgcagactg ggtcacgaag aagctcagtg 4080
aaatcaatta tgaaggtcag aggttaggga atggtgggag gttcactttg gggtcaggag 4140
gttcaggagt gttgtgtgga gggggtcatg agactacctt gagggcaaca gggggaccac 4200
tttgtagtca aaggttgaac agcaggatca ttgggcaatg gaggttagtg ggaacctgct 4260
gagggctgga agggccactt tgtggtcaaa gggaagtcca tatgatgatt aacttaaaaa 4320
gttgaagatg tgagatttca gttgcagatt ggtctctggg gttaaaagat ggcttggaag 4380
accaggtgag gcgatgctct cttccctccc cacagaccac aagttgaagt cagggactaa 4440
caccaagagg gccctccagg cagtgtacag catgatgagt tggccagagg acatccctcc 4500
tgaaggctgg aaccgcaccc gccatgtcat catcctcatg accgatggtc agaagggacc 4560
tctctcctgt cccagcctcc ccaccttctc agaccagcat gtggccctta agtccacttg 4620
taacactata cccatggttg gggccctgaa tgtgactcgt aactggctgt tcatctctcc 4680
tgtgaccctt cataaagaat tattcctaaa gccctgtgat caactacctc taacccttcc 4740
tcaacttact caccctgcca cgtgtatcac tgcctctagc caatttatct tatctcctac 4800
cctcatggtc ccgtctcttc tgcaggattg cacaacatgg gcggggaccc aattactgtc 4860
attgatgaga tccgggactt gttatacatc ggcaaggatc gtaaaaaccc gagggaggat 4920
tatctgggtg agtaacctgc ctaggaccca gcaccctact tcctcagggc ttggaccgtc 4980
atccttcctt tttctccctc agatgtctat gtgtttgggg ttggaccttt ggtggaccaa 5040
gtgaacatca atgctttggc ttccaagaaa gacaatgagc aacatgtgtt caaagtcaag 5100
gatatggaaa acctggaaga cgttttcttc caaatgattg gtaggcagac acaagggaat 5160
caagaacgca actctcctca gcttcccctg aaataattca ttcttcctct acccctgaag 5220
ctctagttgc ctggaaagcc ttcttcattc ctccttctct acctcagtat cactattctt 5280
gtttcctggc actgtttgct tcttaacctt agaatcacag agctctaggc acttcagaga 5340
tctttctatt gtcctacatt tgacacatgt ggaaacaaag gccaaaggag gtcaaggggc 5400
agcaagctag caacagggct gggcttgaaa acagccaggc ctctgatagc ttgatcccaa 5460
gttctttccc ttttcactcc accacagcag ttttctccta acacgaggaa acaaatacct 5520
gtggcctttc cctttctcct tttgggcctc tgccccccac agacttctac ccaaaggctg 5580
ctgccgtttg ggaatgaagt gttccaagtt ttcagcacat tctccttctc tgccagatga 5640
aagccagtct ctgagtctct gtggcatggt ttgggaacac agcaagggta ccgattacca 5700
caagcaacca tggcaggcca agatctcagt cactgtaagc acagaatccc agtagtgagg 5760
acttggggga ggtgaggtca aggtgaaatg ggagtagggg aagggcaaaa tggccgtaag 5820
agatggtggt ttgtgaaagt tgagttttcc ctttctactg ttctgttccc agcgcccttc 5880
gaagggacat gagagctgta tgggggctgt ggtgtctgag tactttgtgc tgacagcagc 5940
acattgtttt actgtggacg acaaggaaca ctcaatcaag gtcagcgtgg gtaaggatgc 6000
aactgaaggt cccgggctgc acctacgccc tccaggcaac acctcccact ttctacagat 6060
cccacactcc actcatctgc aatgcagccc catcccttgc accccagacc agtcagggat 6120
ggggaagact tgaagttagg aatgacatgg ggccagaggc aagaagctgc ccacaaagag 6180
gtggtaccta ttctcctact tcaagggaag aagcgggacc tggagataga aaaagtccta 6240
tttcaccccg actacaacat tagcgagaaa aaagaagcag gaattcctga attttatgac 6300
tatgacgttg ccctgatcaa gctcaagaat aagttgaatt atgacccgac tatcaggtga 6360
gagcatccag atccctgagg aaaggctggg aaaggctgga ggactggggt gaggagcagg 6420
cctagtttgc tgttctttct ccatccttta taggcccatt tgtctcccct gcaccgaggg 6480
aacaactcga gctttgaggc ttcctccaac taccacttgc cagcaacaga gtaagacata 6540
ctagggggga ggataaggat gagatcccga gacaagtgag gcatgagagg gagatgcaat 6600
aggaagagac gatgcctggc ccagaaccta gcactaggaa gggcttaggg gacatctgct 6660
gagtgacaaa gtcaataggg agatgacagt ggtgggagca gctgaagtga tgcagtctat 6720
ttgtccagag gaagagctgc tccctgcaca ggatatcaaa gctctgtttg tgtctgagga 6780
ggagaagaag ctgactcgga aggaggtcta catcaagaat ggggataagg tgagaaatgg 6840
gcatcctaag gaggcactct aggccctaat ccttcctaag ccacctctgt tcattacctt 6900
tctccatgct tcccacctcc cctacagaaa ggcagctgtg agagagatgc tcaatatgcc 6960
ccaggctatg acaaagtcaa ggacatctcg gaggtggtca cccctcggtt cctttgtact 7020
ggaggagtga gtccctatgc tgaccccaat acttgcagag gtgagagaac gctctctggt 7080
tgtgctccaa gtgcccgagg gccaagagtc cttttcccta cagcttctcc tctccttgca 7140
ggtgattctg gcggcccctt gatagttcac aagagaagtc gtttcattca agtgagtcct 7200
ccctttccta tctggggaga tgccaagtgg tcagcatggg ccccaaagca ggaaagcaca 7260
atgcatgtgg ctagtaattc gaggtgggca gagcctgcct cactttagga ctgcatgtct 7320
ggcctgtgtg tgtcaagaat gaggctgagc tgggtcccta gcctgattcc tttaggtcag 7380
ctaagacaca atcaggaaca gtcatgcttc caggattagg aattctatga atgatccatg 7440
gcaccccact gcctctgcag gttggtgtca tcagctgggg agtagtggat gtctgcaaaa 7500
accagaagcg gcaaaagcag gtacctgctc acgcccgaga ctttcacgtc aacctcttcc 7560
aagtgctgcc ctggctgaag gagaaactcc aagatgagga tttgggtttt ctctaagggg 7620
tttcctgctg gacaggggcg cgggattgaa ttaaaacagc tgcgacaaca cttgtgttcc 7680
agatcctttt ggggcaaggg agtggggaac gggcactggc catgttgtta cactgagatc 7740
aaacctgaca cccattttta aaggcttaac cccaatccca agtgctgaaa aaccagaggc 7800
tgagggagat atgtaagctt ccacctcagt gttttactga gaccagcatt ggggcatttg 7860
aggcacaagg aatccagctc tgttccctag aagccatcca caaggttttc cttgtagacg 7920
tcatcactgt agacaatctg ggtcctcttg tcccggtggc aacccttagg gctgttctgg 7980
acagctaggg agggaggaga ggaacagtta aggtctaaag gagatcatag atcagaccct 8040
gaggctgact cctgaccacc tcagtcctgg ctgctggccc ctggaaaccc agtttccacg 8100
ctgccctctg gtggccagga tggcctgtct tccttagctc ctttgtgcca acccatggcc 8160
aaggagagtg taagtggaca ttttgatgaa tgttttgttc ttagaaaaat cccaaatgtc 8220
attgttgaga tatatgaatg atattaaccc actacttata gtcagtatgt cagaagctaa 8280
aaactagaaa acctctgtag ccctttattg acatgctggt caactctagt tcctttcttt 8340
tgcctgaaag gccactgttg ctctgagtcc ttctttctgc tcactccttt cccaggaaaa 8400
tctactttca ggtaaatggg ttactcatac taaggaatgc tactagctcc accagaactc 8460
atccagcatg tagctttggc cctcaccatt ctctctcaag cctctagctg tttcttcccc 8520
ttcctctttt cctccctcca ccagacatgt tactctcttc accccatcca aagattccat 8580
ccccaccacc cttgacctag agagaatctc tcccacccac ttctcatcct gtgatctctg 8640
taccttgaca ctgctggcta ctccctcttt ctcaaagcat gtgtcctttc gcttcagtgg 8700
cccaggcccc tctggtgctg ctcccagccc tctgacccct cctcctgtct cctttgctaa 8760
cgttaggctc aacgttagcc taacgtgtca ggagagctgg agacacgtgg ggcgtaaggt 8820
ggacagtcct gtttcctaac atagtccctg agtattcctc aagtctagtc ctgggtcgtt 8880
ttttttctcc gaaatcagtc tccctcatga tcggggagcc accctgtgat gcagatgact 8940
taatctatgt tttcattcct tacctcacac ctgagttcca gacccctaat ttcaaatact 9000
t 9001
<210> 4 <211> 4086 <212> ДНК
<213> Macaca mulatta
<400> 4
atagatatat tagcatcagg gagacagggc aaaggttcca cccttcagct cagtccccag 60
tccctgctta ttatttccct aacagaagac catccccctt gccactccct gggttttctt 120
ctctggcagc aatgaagcag ctgctgagcc agctctggtt ttcgggaagt cagatgacct 180
tttccctccc gcggctctct gcctctcgct gtccctaggg aggacaccat ggacccactg 240
atggttcttt tttgcctgct gttcctgtac ccaggtccgg cagactcggc tacctcctgc 300
cctcagaacg tgaatatctc tggtggcacc ttcaccctca gccatggctg ggcccctggg 360
agccttctca tctactcctg tccccagggc ctgtacccat ccccagcgtc acggctgtgc 420
aagagcagcg gacagtggca gaccccaaga gccacccggt ctctgactaa ggcggtctgc 480
aaacctggcc actgccccaa ccccggcatt tcgctgggcg cggtgcggac aggctcccgc 540
tttggtcatg gggacaaggt ccgctatcgc tgctcctcga atcttgtgct cacggggtct 600
gcggagcggg agtgccaggg caacggggtc tggagtggaa cggagcccat ctgccgccag 660
ccctactctt atgacttccc tgaggacgtg gcccctgccc tgggcacctc cttctcccac 720
atgcttgggg ccaccaatcc cacccagagg acaaaggatc atgaaaatgg aactgggact 780
aacacctatg cagccctaaa cagtgtctat ctcatgatga acaatcaaat gcaactcctt 840
ggcatgaaaa cgatggcctg gcaggaaatc cgacatgcca tcatccttct gacagatgga 900
aagtccaata tgggtggctc tcccaaaaca gctgttgacc aaatcagaga gatcttgaat 960
atcaaccaga agaggaatga ctatctggac atctatgcca tcggggtggg caagctggat 1020
gtggactgga gagaactgaa tgagctgggg tccaagaagg atggcgagag gcatgccttc 1080
attctgcagg acacaaaggc tctgcaccag gtctttgaac atatgctgga tgtctccaag 1140
ctcacagaca ccatctgcgg ggtggggaac atgtcagcaa acgcctctga ccaagagagg 1200
acaccctggc atgtcactat taagcccaag agccaagaga cctgccgggg agccctcatc 1260
tccgaccaat gggtcctgac agcggctcac tgcttccgcg atggcaacga ccactcccta 1320
tggagggtca atgtgggaga ccccaaatcc cagtggggca aagaattcct tattgagaag 1380
gcagtgattt ccccaggatt tgatgtcttt gccaaaaaga accagggaat cctggagttc 1440
tatggtgatg acatcgccct gctgaagctg gcccagaaag taaagatgtc cacccatgcc 1500
aggcccatct gccttccctg caccatggag gccaatctgg ctctgcggag acctcaaggc 1560
agcacctgta gggaccatga gaatgaactg ctgaacaaac agagtgttcc tgctcatttt 1620
gtcgccttga atgggagcaa actgaacatt aaccttaaga tgggagtgga gtggacaagc 1680
tgtgccgagg tcgtctccca agaaaaaacc atgttcccca acttgacaga tgtcagggag 1740
gtggtgacag accagtttct atgcagtggg acccaggagg atgagagtcc ctgcaagggt 1800
gtgaccacca ctccattgtc ttcggcccag cctcaaggat cctgctctct ggagggggta 1860
gagatcaaag gtggctcctt ccgacttctc caagagggcc aggcactgga atacgtgtgt 1920
ccttctggct tctacccgta ccctgtgcag acacgtacct gcagatccac ggggtcctgg 1980
agcaccctgc agactcaaga tcgaaaaact gtcaagaagg cagagtgcag agcaatccgc 2040
tgtccacgac cacaggactt cgagaacggg gaataccggc cccggtctcc ctactacaat 2100
gtgagtgatg agatctcttt ccactgctat gacggttaca ctctccgggg ctctgccaat 2160
cgcacctgcc aagtgaatgg ccggtggagt gggcagacag cgatctgtga caacggagcg 2220
gggtactgct ccaacccagg catccccatt ggcacaagga aggtgggcag ccggtaccgc 2280
cttgaagaca gcgtcaccta ccactgcagc cgggggctta ccctgcgtgg ctcccagcgg 2340
cgaacatgtc aggaaggtgg ctcttggagc gggacggagc cttcctgcca agactccttc 2400
atgtacgaca cccctcaaga ggtggccgaa gctttcctgt cttccctgac ggagaccata 2460
gaaggagtcg atgccgagga tgggcacagc ccaggggaac aacagaagcg gaggatcatc 2520
ctagaccctt caggctccat gaacatctac ctggtgctag atggatcaga cagcattggg 2580
gccggcaact tcacaggagc caaaaagtgt ctagtcaact taattgagaa ggtggcaagt 2640
tatggtgtga agccaagata tgctctagtg acatatgcca cataccccag aatttgggtc 2700
aaagtgtctg accaagagag cagcaatgca gactgggtca cgaagaagct cagtgaaatc 2760
aattatgaag accacaagtt gaagtcaggg actaacacca agagggccct ccaggcagtg 2820
tacagcatga tgagttggcc agaggacatc cctcctgaag gctggaaccg cacccgccat 2880
gtcatcatcc tcatgaccga tggattgcac aacatgggcg gggacccaat tactgtcatt 2940
gatgagatcc gggacttgtt atacatcggc aaggatcgta aaaacccgag ggaggattat 3000
ctggatgtct atgtgtttgg ggttggacct ttggtggacc aagtgaacat caatgctttg 3060
gcttccaaga aagacaatga gcaacatgtg ttcaaagtca aggatatgga aaacctggaa 3120
gacgttttct tccaaatgat tgatgaaagc cagtctctga gtctctgtgg catggtttgg 3180
gaacacagca agggtaccga ttaccacaag caaccatggc aggccaagat ctcagtcact 3240
cgcccttcga agggacatga gagctgtatg ggggctgtgg tgtctgagta ctttgtgctg 3300
acagcagcac attgttttac tgtggacgac aaggaacact caatcaaggt cagcgtggga 3360
gggaagaagc gggacctgga gatagaaaaa gtcctatttc accccgacta caacattagc 3420
gagaaaaaag aagcaggaat tcctgaattt tatgactatg acgttgccct gatcaagctc 3480
aagaataagt tgaattatga cccgactatc aggcccattt gtctcccctg caccgaggga 3540
acaactcgag ctttgaggct tcctccaact accacttgcc agcaacagaa ggaagagctg 3600
ctccctgcac aggatatcaa agctctgttt gtgtctgagg aggagaagaa gctgactcgg 3660
aaggaggtct acatcaagaa tggggataag aaaggcagct gtgagagaga tgctcaatat 3720
gccccaggct atgacaaagt caaggacatc tcggaggtgg tcacccctcg gttcctttgt 3780
actggaggag tgagtcccta tgctgacccc aatacttgca gaggtgattc tggcggcccc 3840
ttgatagttc acaagagaag tcgtttcatt caagttggtg tcatcagctg gggagtagtg 3900
gatgtctgca aaaaccagaa gcggcaaaag caggtacctg ctcacgcccg agactttcac 3960
gtcaacctct tccaagtgct gccctggctg aaggagaaac tccaagatga ggatttgggt 4020
tttctctaag gggtttcctg ctggacaggg gcgcgggatt gaattaaaac agctgcgaca 4080
acactt 4086
<210> 5 <211> 2767 <212> ДНК
<213> Mus musculus
<400> 5
gctccatcac acagtccatg gaaagactga tcttttaaat tgggggtagt ggaggtggtg 60
gtctgtgctt gttaggaggg gtctgggggc taagagggag ctttgaaagg gaagttctgg 120
cccttggtca gtcaagggtg gggctcacat agtttctgtt tcctcagttg gcagttcagc 180
tggggccctc cttcatgaat gttccgggaa gcagtggctg cgtgcgcagg gtaggctggc 240
caggctgcag atgccagagc agattgcata aaaggttagg ggacagtggg aaaggggtgt 300
agccagatcc agcatttggg tttcagtttg gacaggaggt caaataggca cccagagtga 360
cctggagagg gctttgggcc actggactct ctggtgcttt ccatgacaat ggagagcccc 420
cagctctgcc tcgtcctctt ggtcttaggc ttctcctctg gaggtgtgag cgcaactcca 480
gtgcttgagg cccggcccca agtctcctgc tctctggagg gagtagagat caaaggcggc 540
tcctttcaac ttctccaagg cggtcaggcc ctggagtacc tatgtccctc tggcttctac 600
ccataccccg tgcagactcg aacctgcaga tccacaggct cctggagcga cctgcagacc 660
cgagaccaaa agattgtcca gaaggcggaa tgcagagcaa tacgctgccc acgaccgcag 720
gactttgaaa atggggaatt ctggccccgg tcccccttct acaacctgag tgaccagatt 780
tcttttcaat gctatgatgg ttacgttctc cggggctctg ctaatcgcac ctgccaagag 840
aatggccggt gggatgggca aacagcaatt tgtgatgatg gagctggata ctgtcccaat 900
cccggtattc ctattgggac aaggaaggtg ggtagccaat accgccttga agacattgtt 9 60
acttaccact gcagccgggg acttgtcctg cgtggctccc agaagcgaaa gtgtcaagaa 1020
ggtggctcat ggagtgggac agagccttcc tgccaagatt ccttcatgta tgacagccct 1080
caagaagtgg ccgaagcatt cctatcctcc ctgacagaga ccatcgaagg agccgatgct 1140
gaggatgggc acagcccagg agaacagcag aagaggaaga ttgtcctaga cccctcgggc 1200
tccatgaata tctacctggt gctagatgga tcagacagca tcggaagcag caacttcaca 1260
ggggctaagc ggtgcctcac caacttgatt gagaaggtgg cgagttacgg ggtgaggcca 1320
cgatatggtc tcctgacata tgctacagtc cccaaagtgt tggtcagagt gtctgatgag 1380
aggagtagcg atgccgactg ggtcacagag aagctcaacc aaatcagtta tgaagaccac 1440
aagctgaagt cagggaccaa caccaagagg gctctccagg ctgtgtatag catgatgagc 1500
tgggcagggg atgccccgcc tgaaggctgg aatagaaccc gccatgtcat catcattatg 1560
actgatggct tgcacaacat gggtggaaac cctgtcactg tcattcagga catccgagcc 1620
ttgctggaca tcggcaggga tcccaaaaat cccagggagg attacctgga tgtgtatgtg 1680
tttggggtcg ggcctctggt ggactccgtg aacatcaatg ccttagcttc caaaaaggac 1740
aatgagcatc atgtgtttaa agtcaaggat atggaagacc tggagaatgt tttctaccaa 1800
atgattgatg aaaccaaatc tctgagtctc tgtggcatgg tgtgggagca taaaaaaggc 1860
aacgattatc ataagcaacc atggcaagcc aagatctcag tcactcgccc tctgaaagga 1920
catgagacct gtatgggggc cgtggtgtct gagtacttcg tgctgacagc agcgcactgc 1980
ttcatggtgg atgatcagaa acattccatc aaggtcagcg tggggggtca gaggcgggac 2040
ctggagattg aagaggtcct gttccacccc aaatacaata ttaatgggaa aaaggcagaa 2100
gggatccctg agttctatga ttatgatgtg gccctagtca agctcaagaa caagctcaag 2160
tatggccaga ctctcaggcc catctgtctc ccctgcacgg agggaaccac acgagccttg 2220
aggcttcctc agacagccac ctgcaagcag cacaaggaac agttgctccc tgtgaaggat 2280
gtcaaagctc tgtttgtatc tgagcaaggg aagagcctga ctcggaagga ggtgtacatc 2340
aagaatgggg acaagaaagc cagttgtgag agagatgcta caaaggccca aggctatgag 2400
aaggtcaaag atgcctctga ggtggtcact ccacggttcc tctgcacagg aggggtggat 2460
ccctatgctg accccaacac atgcaaagga gattccgggg gccctctcat tgttcacaag 2520
agaagccgct tcattcaagt tggtgtgatt agctggggag tagtagatgt ctgcagagac 2580
cagaggcggc aacagctggt accctcttat gcccgggact tccacatcaa cctcttccag 2640
gtgctgccct ggctaaagga caagctcaaa gatgaggatt tgggttttct ataaagagct 2700
tcctgcaggg agagtgtgag gacagattaa agcagttaca ataacaaaaa aaaaaaaaaa 2760
aaaaaaa 2767
<210> 6 <211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 6
gctgagctgc cagtcaagga
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 7
ggccccgctg agctgccagt
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 8
cggaacatcc aagcgggagg
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
ctttcccgga acatccaagc
<210> 10
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 10
atctgtgttc tggcacctgc 20
<210> <211> <212> <213>
11 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 11
gtcacattcc cttcccctgc
<210> 12
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 12
gacctggtca cattcccttc 20
<210> 13
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 13
gacctagacc tggtcacatt 20
<210> <211> <212> <213>
14 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 14
actccagacc tagacctggt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 15
gctgaaactc cagacctaga 20
<210> <211> <212> <213>
16 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 16
gtccaagctg aaactccaga 20
<210> 17
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 17
ctcagtgtcc aagctgaaac 20
<210> <211> <212> <213>
18 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 18
aggagagaag ctgggcctgg 20
<210> 19
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 19
gaaggcagga gagaagctgg 20
<210> 20
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 20
gtggtggtca cacctccaga 20
<210> 21
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 21
ccctccagag agcaggatcc 20
<210> 22
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 22
tctaccccct ccagagagca 20
<210> <211> <212> <213>
23 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 23
ttgatctcta ccccctccag
<210> 24
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 24
tggagaagtc ggaaggagcc 20
<210> <211> <212> <213>
25 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ccctcttgga gaagtcggaa
<210> 26
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 26
gcctggccct cttggagaag 20
<210> <211> <212> <213>
27 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 27
tccagtgcct ggccctcttg
<210> 28
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 28
agaagccaga aggacacacg 20
<210> 29
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 29
acgggtagaa gccagaagga 20
<210> <211> <212> <213>
30 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 30
cgtgtctgca cagggtacgg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 31
agggtgctcc aggaccccgt 20
<210> <211> <212> <213>
32 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 32
ttgctctgca ctctgccttc 20
<210> 33
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 33
tattccccgt tctcgaagtc 20
<210> <211> <212> <213>
34 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 34
cattgtagta gggagaccgg 20
<210> 35
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 35
cactcacatt gtagtaggga 20
<210> 36
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 36
tctcatcact cacattgtag 20
<210> 37
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 37
aagagatctc atcactcaca 20
<210> 38
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 38
agtggaaaga gatctcatca 20
<210> <211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 39
catagcagtg gaaagagatc
<210> 40
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 40
aaccgtcata gcagtggaaa 20
<210> <211> <212> <213>
41 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gagtgtaacc gtcatagcag
<210> 42
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 42
cccggagagt gtaaccgtca 20
<210> <211> <212> <213>
43 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 43
cagagccccg gagagtgtaa
<210> 44
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 44
gattggcaga gccccggaga 20
<210> 45
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 45
aggtgcgatt ggcagagccc 20
<210> <211> <212> <213>
46 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 46
cttggcaggt gcgattggca
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 47
cattcacttg gcaggtgcga 20
<210> <211> <212> <213>
48 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 48
atcgctgtct gcccactcca 20
<210> 49
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 49
tcacagatcg ctgtctgccc 20
<210> <211> <212> <213>
50 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 50
ccgttgtcac agatcgctgt 20
<210> 51
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 51
cccgctccgt tgtcacagat 20
<210> 52
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 52
cagtaccccg ctccgttgtc 20
<210> 53
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 53
ttggagcagt accccgctcc 20
<210> 54
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 54
accttccttg tgccaatggg 20
<210> <211> <212> <213>
55 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 55
ctgcccacct tccttgtgcc
<210> 56
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 56
cgctgtcttc aaggcggtac 20
<210> <211> <212> <213>
57 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gctgcagtgg taggtgacgc
<210> 58
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 58
cccccggctg cagtggtagg 20
<210> <211> <212> <213>
59 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 59
ggtaagcccc cggctgcagt
<210> 60
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 60
acgcagggta agcccccggc 20
<210> 61
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 61
ggagccacgc agggtaagcc 20
<210> <211> <212> <213>
62 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 62
gccgctggga gccacgcagg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 63
caagagccac cttcctgaca 20
<210> <211> <212> <213>
64 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 64
ccgctccaag agccaccttc 20
<210> 65
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 65
tccgtcccgc tccaagagcc 20
<210> <211> <212> <213>
66 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 66
gaaggctccg tcccgctcca 20
<210> 67
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 67
tggcaggaag gctccgtccc 20
<210> 68
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 68
gagtcttggc aggaaggctc 20
<210> 69
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 69
atgaaggagt cttggcagga 20
<210> 70
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 70
cttcggccac ctcttgaggg 20
<210> <211> <212> <213>
71 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 71
ggaaagcttc ggccacctct
<210> 72
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 72
aagacaggaa agcttcggcc 20
<210> <211> <212> <213>
73 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tcagggaaga caggaaagct
<210> 74
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 74
tcgactcctt ctatggtctc 20
<210> <211> <212> <213>
75 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 75
cttctgttgt tcccctgggc
<210> 76
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 76
ttcatggagc ctgaagggtc 20
<210> 77
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 77
tagatgttca tggagcctga 20
<210> <211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 78
accaggtaga tgttcatgga
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 79
tctagcacca ggtagatgtt 20
<210> <211> <212> <213>
80 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 80
gatccatcta gcaccaggta 20
<210> 81
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 81
ctgtctgatc catctagcac 20
<210> <211> <212> <213>
82 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 82
ccaatgctgt ctgatccatc 20
<210> 83
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 83
tttggctcct gtgaagttgc 20
<210> 84
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 84
acactttttg gctcctgtga 20
<210> 85
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 85
gactagacac tttttggctc 20
<210> 86
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 86
taagttgact agacactttt 20
<210> <211> <212> <213>
87 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 87
ctcaattaag ttgactagac
<210> 88
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 88
caccttctca attaagttga 20
<210> <211> <212> <213>
89 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
acttgccacc ttctcaatta
<210> 90
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 90
accataactt gccaccttct 20
<210> <211> <212> <213>
91 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 91
cttcacacca taacttgcca
<210> 92
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 92
tcttggcttc acaccataac 20
<210> 93
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 93
atgtggcata tgtcactaga 20
<210> <211> <212> <213>
94 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 94
cagacacttt gacccaaatt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 95
ggtcttcata attgatttca 20
<210> <211> <212> <213>
96 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 96
acttgtggtc ttcataattg 20
<210> 97
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 97
acttcaactt gtggtcttca 20
<210> <211> <212> <213>
98 20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 98
tccctgactt caacttgtgg 20
<210> 99
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 99
tgttagtccc tgacttcaac 20
<210> 100
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 100
tcttggtgtt agtccctgac 20
<210> 101
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 101
tgtacactgc ctggagggcc 20
<210> 102
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 102
tcatgctgta cactgcctgg 20
<210> <211> <212> <213>
103
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 103
gttccagcct tcaggaggga
<210> 104
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 104
ggtgcggttc cagccttcag 20
<210> <211> <212> <213>
105
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
atggcgggtg cggttccagc
<210> 106
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 106
gatgacatgg cgggtgcggt 20
<210> <211> <212> <213>
107
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 107
gaggatgatg acatggcggg
<210> 108
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 108
cccatgttgt gcaatccatc 20
<210> 109
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 109
tccccgccca tgttgtgcaa 20
<210> <211> <212> <213>
110
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 110
attgggtccc cgcccatgtt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 111
acagtaattg ggtccccgcc 20
<210> <211> <212> <213>
112
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 112
tcaatgacag taattgggtc 20
<210> 113
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 113
atctcatcaa tgacagtaat 20
<210> <211> <212> <213>
114
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 114
tcccggatct catcaatgac 20
<210> 115
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 115
acatccagat aatcctccct 20
<210> 116
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 116
acatagacat ccagataatc 20
<210> 117
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 117
ccaaacacat agacatccag 20
<210> 118
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 118
agcattgatg ttcacttggt 20
<210> <211> <212> <213>
119
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 119
agccaaagca ttgatgttca
<210> 120
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 120
cttggaagcc aaagcattga 20
<210> <211> <212> <213>
121
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gtctttcttg gaagccaaag
<210> 122
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 122
ctcattgtct ttcttggaag 20
<210> <211> <212> <213>
123
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 123
atgttgctca ttgtctttct
<210> 124
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 124
gaacacatgt tgctcattgt 20
<210> 125
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 125
gactttgaac acatgttgct 20
<210> <211> <212> <213>
126
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 126
atccttgact ttgaacacat
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 127
ttccatatcc ttgactttga 20
<210> <211> <212> <213>
128
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 128
caggttttcc atatccttga 20
<210> 129
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 129
ctcagagact ggctttcatc 20
<210> <211> <212> <213>
130
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 130
cagagactca gagactggct 20
<210> 131
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 131
atgccacaga gactcagaga 20
<210> 132
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 132
caaaccatgc cacagagact 20
<210> 133
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 133
tgttcccaaa ccatgccaca 20
<210> 134
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 134
ttgtggtaat cggtaccctt 20
<210> <211> <212> <213>
135
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 135
ggttgcttgt ggtaatcggt
<210> 136
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 136
tgccatggtt gcttgtggta 20
<210> <211> <212> <213>
137
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ttggcctgcc atggttgctt
<210> 138
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 138
gagatcttgg cctgccatgg 20
<210> <211> <212> <213>
139
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 139
acagccccca tacagctctc
<210> 140
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 140
gacaccacag cccccataca 20
<210> 141
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 141
tactcagaca ccacagcccc 20
<210> <211> <212> <213>
142
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 142
acaaagtact cagacaccac
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 143
gtcagcacaa agtactcaga 20
<210> <211> <212> <213>
144
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 144
ttgattgagt gttccttgtc 20
<210> 145
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 145
ctgaccttga ttgagtgttc 20
<210> <211> <212> <213>
146
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 146
tatctccagg tcccgcttct 20
<210> 147
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 147
gaattcctgc ttcttttttc 20
<210> 148
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 148
attcaggaat tcctgcttct 20
<210> 149
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 149
cataaaattc aggaattcct 20
<210> 150
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 150
catagtcata aaattcagga 20
<210> <211> <212> <213>
151
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 151
tgagcttgat cagggcaacg
<210> 152
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 152
tattcttgag cttgatcagg 20
<210> <211> <212> <213>
153
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gacaaatggg cctgatagtc
<210> 154
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 154
gttgttccct cggtgcaggg 20
<210> <211> <212> <213>
155
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 155
gctcgagttg ttccctcggt
<210> 156
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 156
ctcaaagctc gagttgttcc 20
<210> 157
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 157
ggaagcctca aagctcgagt 20
<210> <211> <212> <213>
158
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 158
gttggaggaa gcctcaaagc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 159
gtggtagttg gaggaagcct 20
<210> <211> <212> <213>
160
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 160
tggcaagtgg tagttggagg 20
<210> 161
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 161
tgttgctggc aagtggtagt 20
<210> <211> <212> <213>
162
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 162
tccagctcac tcccctgttg 20
<210> 163
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 163
taaggatcca gctcactccc 20
<210> 164
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 164
cagaaataag gatccagctc 20
<210> 165
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 165
agggaccaga aataaggatc 20
<210> 166
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 166
ccacttaggg accagaaata 20
<210> <211> <212> <213>
167
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 167
tccaggactc tccccttcag
<210> 168
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 168
aagtcccacc ctttgctgcc 20
<210> <211> <212> <213>
169
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ctgcagaagt cccacccttt
<210> 170
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 170
cagaaactgc agaagtccca 20
<210> <211> <212> <213>
171
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 171
aacctctgca ctctgccttc
<210> 172
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 172
ccctcaaacc tctgcactct 20
<210> 173
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 173
tcattgccct caaacctctg 20
<210> <211> <212> <213>
174
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 174
ccacactcat tgccctcaaa
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 175
cactgcccac actcattgcc 20
<210> <211> <212> <213>
176
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 176
ttaggccact gcccacactc 20
<210> 177
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 177
ctagtcctga ccttgctgcc 20
<210> <211> <212> <213>
178
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 178
ctcatcctag tcctgacctt 20
<210> 179
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 179
cctagtctca tcctagtcct 20
<210> 180
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 180
accctgccta gtctcatcct 20
<210> 181
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 181
cttgtcaccc tgcctagtct 20
<210> 182
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 182
gcccaccttg tcaccctgcc 20
<210> <211> <212> <213>
183
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 183
cctaaaactg ctcctactcc
<210> 184
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 184
gagtcagaaa tgaggtcaaa 20
<210> <211> <212> <213>
185
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ccctactccc atttcacctt
<210> 186
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 186
tgttgtgcaa tcctgcagaa 20
<210> <211> <212> <213>
187
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 187
aaaggctgat gaagcctggc
<210> 188
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 188
cctttgacca caaagtggcc 20
<210> 189
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 189
aggtaccacc tctttgtggg 20
<210> <211> <212> <213>
190
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 190
tggtggtcac acctgaagag
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 191
gcagggagca gctcttcctt 20
<210> <211> <212> <213>
192
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 192
tcctgtgcag ggagcagctc 20
<210> 193
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 193
ttgatatcct gtgcagggag 20
<210> <211> <212> <213>
194
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 194
agagctttga tatcctgtgc 20
<210> 195
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 195
acaaacagag ctttgatatc 20
<210> 196
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 196
tcagacacaa acagagcttt 20
<210> 197
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 197
tcctcctcag acacaaacag 20
<210> 198
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 198
acctccttcc gagtcagctt 20
<210> <211> <212> <213>
199
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 199
atgtagacct ccttccgagt
<210> 200
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 200
ttcttgatgt agacctcctt 20
<210> <211> <212> <213>
201
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tccccattct tgatgtagac
<210> 202
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 202
ttcttatccc cattcttgat 20
<210> <211> <212> <213>
203
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 203
ctgcctttct tatccccatt
<210> 204
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 204
tcacagctgc ctttcttatc 20
<210> 205
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 205
tctctctcac agctgccttt 20
<210> <211> <212> <213>
206
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 206
tgagcatctc tctcacagct
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 207
gcatattgag catctctctc 20
<210> <211> <212> <213>
208
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 208
tgactttgtc atagcctggg 20
<210> 209
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 209
tgtccttgac tttgtcatag 20
<210> <211> <212> <213>
210
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 210
cagtacaaag gaaccgaggg 20
<210> 211
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 211
ctcctccagt acaaaggaac 20
<210> 212
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 212
gactcactcc tccagtacaa 20
<210> 213
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 213
catagggact cactcctcca 20
<210> 214
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 214
ggtcagcata gggactcact 20
<210> <211> <212> <213>
215
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 215
tcacctctgc aagtattggg
<210> 216
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 216
ccagaatcac ctctgcaagt 20
<210> <211> <212> <213>
217
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gggccgccag aatcacctct
<210> 218
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 218
ctcttgtgaa ctatcaaggg 20
<210> <211> <212> <213>
219
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 219
cgacttctct tgtgaactat
<210> 220
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 220
atgaaacgac ttctcttgtg 20
<210> 221
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 221
acttgaatga aacgacttct 20
<210> <211> <212> <213>
222
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 222
acaccaactt gaatgaaacg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 223
tccactactc cccagctgat 20
<210> <211> <212> <213>
224
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 224
cagacatcca ctactcccca 20
<210> 225
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 225
tttttgcaga catccactac 20
<210> <211> <212> <213>
226
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 226
ttctggtttt tgcagacatc 20
<210> 227
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 227
tgccgcttct ggtttttgca 20
<210> 228
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 228
tgcttttgcc gcttctggtt 20
<210> 229
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 229
ggtacctgct tttgccgctt 20
<210> 230
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 230
tgagcaggta cctgcttttg 20
<210> <211> <212> <213>
231
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 231
ttcagccagg gcagcacttg
<210> 232
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 232
ttctccttca gccagggcag 20
<210> <211> <212> <213>
233
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tggagtttct ccttcagcca
<210> 234
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 234
tcatcttgga gtttctcctt 20
<210> <211> <212> <213>
235
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 235
aaatcctcat cttggagttt
<210> 236
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 236
aaacccaaat cctcatcttg 20
<210> 237
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 237
gtccagcagg aaacccctta 20
<210> <211> <212> <213>
238
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 238
gcccctgtcc agcaggaaac
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 239
agctgtttta attcaatccc 20
<210> <211> <212> <213>
240
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 240
aacttgccac ctgtgggtga
<210> 241
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 241
tcaccttatc cccattcttg 20
<210> <211> <212> <213>
242
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 242
tcaactttca caaaccacca
<210> 243
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 243
ccgccagaat cacctgcaag 20
<210> 244
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 244
aggaggaatg aagaaggctt 20
<210> 245
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 245
gcctttcctc agggatctgg 20
<210> 246
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 246
aaatgtctgg gagtgtcagg 20
<210> <211> <212> <213>
247
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 247
gcctagagtg cctccttagg
<210> 248
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 248
ggcatctccc cagataggaa 20
<210> <211> <212> <213>
249
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
agggagctag tcctggaaga
<210> 250
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 250
acacctgaag agaaaggctg 20
<210> <211> <212> <213>
251
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 251
ccctttgacc acaaagtggc
<210> 252
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 252
gccctcaagg tagtctcatg 20
<210> 253
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 253
aagggaagga ggacagaata 20
<210> <211> <212> <213>
254
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 254
aaaggccaag gagggatgct
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 255
agaggtccct tctgaccatc 20
<210> <211> <212> <213>
256
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 256
gctgggacag gagagaggtc 20
<210> 257
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 257
tcaaatgtct gggagtgtca 20
<210> <211> <212> <213>
258
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 258
agaaggagaa tgtgctgaaa 20
<210> 259
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 259
tgctgaccac ttggcatctc 20
<210> 260
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 260
caactttcac aaaccaccat 20
<210> 261
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 261
agctctgtga ttctaaggtt
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 262
ccacctgtgg gtgaggagaa
263 20
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 263
gaggactcac ttgaatgaaa
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 264
tggaatgatc agggagctag
265 20
<210> <211> <212> <213>
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
gtcccttctc cattttcccc
<210> 266
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 266
tcaacttttt aagttaatca 20
<210> <211> <212> <213>
267
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 267
gggtgaggag aacaaggcgc
<210> 268
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 268
cttccaagcc atcttttaac 20
<210> 269
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 269
aggactcact tgaatgaaac 20
<210> <211> <212> <213>
270
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 270
ttccaggcaa ctagagcttc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 271
cagagtccag ccactgtttg 20
<210> <211> <212> <213>
272
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 272
ccaacctgca gaggcagtgg 20
<210> 273
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 273
tgcaaggaga ggagaagctg 20
<210> <211> <212> <213>
274
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 274
ctaggcaggt tactcaccca 20
<210> 275
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 275
caccataact tgccacctgt 20
<210> 276
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 276
taggtaccac ctctttgtgg 20
<210> 277
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 277
cttgacctca cctcccccaa 20
<210> 278
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 278
ccacctcttt gtgggcagct 20
<210> <211> <212> <213>
279
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 279
ttcacaaacc accatctctt
<210> 280
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 280
ttctcacctc cgttgtcaca 20
<210> <211> <212> <213>
281
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gaaagtggga ggtgttgcct
<210> 282
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 282
acagcaggaa gggaaggtta 20
<210> <211> <212> <213>
283
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 283
catgctgacc acttggcatc
<210> 284
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 284
ggtcaccttg gcaggaaggc 20
<210> 285
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 285
gtatagtgtt acaagtggac 20
<210> <211> <212> <213>
286
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 286
ggacttccct ttgaccacaa
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 287
tcaccttgac ctcacctccc 20
<210> <211> <212> <213>
288
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 288
tagagtgcct ccttaggatg 20
<210> 289
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 289
tgacttcaac ttgtggtctg 20
<210> <211> <212> <213>
290
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 290
cagagaagga gaatgtgctg 20
<210> 291
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 291
agggagcagc tcttcctctg 20
<210> 292
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 292
tgttcccctg ggtgccagga 20
<210> 293
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 293
ggcctggctg ttttcaagcc 20
<210> 294
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 294
gactggcttt catctggcag 20
<210> <211> <212> <213>
295
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 295
gaaggctttc caggcaacta
<210> 296
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 296
tcacttgaat gaaacgactt 20
<210> <211> <212> <213>
297
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ggccccaaaa ggccaaggag
<210> 298
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 298
aatcacctgc aaggagagga 20
<210> <211> <212> <213>
299
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 299
gaccttcagt tgcatcctta
<210> 300
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 300
tgatgaagcc tggccccaaa 20
<210> 301
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 301
tagaaagtgg gaggtgttgc 20
<210> <211> <212> <213>
302
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 302
cccatccctg actggtctgg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 303
ccatgggtat agtgttacaa 20
<210> <211> <212> <213>
304
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 304
gtgttctctt gacttccagg 20
<210> 305
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 305
ggcctgctcc tcaccccagt 20
<210> <211> <212> <213>
306
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 306
gaggcctggc tgttttcaag 20
<210> 307
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 307
gactctcccc ttcagtacct 20
<210> 308
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 308
catgggtata gtgttacaag 20
<210> 309
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 309
gaaggagaat gtgctgaaaa 20
<210> 310
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 310
tcacctggtc ttccaagcca 20
<210> <211> <212> <213>
311
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 311
ctccccagat aggaaaggga
<210> 312
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 312
ggactcactt gaatgaaacg 20
<210> <211> <212> <213>
313
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ggccgccaga atcacctgca
<210> 314
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 314
ctcacttgaa tgaaacgact 20
<210> <211> <212> <213>
315
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 315
ctttcccagc ctttcctcag
<210> 316
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 316
agaaagtggg aggtgttgcc 20
<210> 317
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 317
gtcgcagctg ttttaattca 20
<210> <211> <212> <213>
318
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 318
ccaggactct ccccttcagt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 319
agggaaggag gacagaatag 20
<210> <211> <212> <213>
320
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 320
gaaatgaggt caaatgtctg 20
<210> 321
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 321
ggagagtcag aaatgaggtc 20
<210> <211> <212> <213>
322
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 322
gtagaaagtg ggaggtgttg 20
<210> 323
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 323
tagaaagatc tctgaagtgc 20
<210> 324
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 324
ctgctcctca ccccagtcct 20
<210> 325
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 325
ctactgggat tctgtgctta 20
<210> 326
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 326
cccaaaaggc caaggaggga 20
<210> <211> <212> <213>
327
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 327
tgaccacttg gcatctcccc
<210> 328
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 328
cctgcaagga gaggagaagc 20
<210> <211> <212> <213>
329
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ctctcacctc tgcaagtatt
<210> 330
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 330
ccccaaaagg ccaaggaggg 20
<210> <211> <212> <213>
331
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 331
gtcttccaag ccatctttta
<210> 332
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 332
gttacaagtg gacttaaggg 20
<210> 333
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 333
cccatgttgt gcaatcctgc 20
<210> <211> <212> <213>
334
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 334
gaggtgggaa gcatggagaa
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 335
tgctcccacc actgtcatct 20
<210> <211> <212> <213>
336
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 336
aggcaggtta ctcacccaga 20
<210> 337
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 337
tactgggatt ctgtgcttac 20
<210> <211> <212> <213>
338
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 338
gcctttccca gcctttcctc 20
<210> 339
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 339
gtgcaatcct gcagaagaga 20
<210> 340
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 340
acaggagaga ggtcccttct 20
<210> 341
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 341
cccaaaagga gaaagggaaa 20
<210> 342
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 342
aagcccaggg taaatgctta 20
<210> <211> <212> <213>
343
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 343
gatgaagcct ggccccaaaa
<210> 344
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 344
tggcagagaa ggagaatgtg 20
<210> <211> <212> <213>
345
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ttcccagcct ttcctcaggg
<210> 346
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 346
ggcagagaag gagaatgtgc 20
<210> <211> <212> <213>
347
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 347
acagtgccag gaaacaagaa
<210> 348
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 348
taggcaggtt actcacccag 20
<210> 349
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 349
ttctcttgac ttccagggct 20
<210> <211> <212> <213>
350
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 350
cctgctcctc accccagtcc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 351
tcccactaac ctccattgcc 20
<210> <211> <212> <213>
352
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 352
ttccctttga ccacaaagtg 20
<210> 353
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 353
ctgggtccta ggcaggttac 20
<210> <211> <212> <213>
354
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 354
tccaggcaac tagagcttca 20
<210> 355
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 355
gcccatgttg tgcaatcctg 20
<210> 356
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 356
ggttcccact aacctccatt 20
<210> 357
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 357
aggtagagag caagagttac 20
<210> 358
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 358
ccactaacct ccattgccca 20
<210> <211> <212> <213>
359
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 359
tcacaaacca ccatctctta
<210> 360
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 360
tactcaccca gataatcctc 20
<210> <211> <212> <213>
361
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tgctcctcac cccagtcctc
<210> 362
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 362
tctcacagct gcctttctgt 20
<210> <211> <212> <213>
363
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 363
gaaagggagg actcacttga
<210> 364
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 364
ccatctttta accccagaga 20
<210> 365
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 365
tcctcacccc agtcctccag 20
<210> <211> <212> <213>
366
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 366
ctggcagaga aggagaatgt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 367
tctccccaga taggaaaggg 20
<210> <211> <212> <213>
368
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 368
acttcagctg ctcccaccac 20
<210> 369
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 369
gacagcagga agggaaggtt 20
<210> <211> <212> <213>
370
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 370
ggagacaaat gggcctataa 20
<210> 371
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 371
ctgctcccac cactgtcatc 20
<210> 372
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 372
aggaatgaag aaggctttcc 2 0
<210> 373
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 373
gggatctcat ccttatcctc 20
<210> 374
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 374
gtgctgggtc ctaggcaggt 20
<210> <211> <212> <213>
375
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 375
caaaaggcca aggagggatg
<210> 376
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 376
ccatgctgac cacttggcat 20
<210> <211> <212> <213>
377
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ggaggctggg acaggagaga
<210> 378
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 378
ggagcagctc ttcctctgga 20
<210> <211> <212> <213>
379
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 379
tctcacctcc gttgtcacag
<210> 380
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 380
cagtcctcca gcctttccca 20
<210> 381
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 381
agtcctccag cctttcccag 20
<210> <211> <212> <213>
382
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 382
tgaaggagtc tgggagagtc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 383
cagaatcacc tgcaaggaga 20
<210> <211> <212> <213>
384
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 384
taggaaaggg aggactcact 20
<210> 385
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 385
accttggcag gaaggctccg 20
<210> <211> <212> <213>
386
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 386
gagacaaatg ggcctataaa 20
<210> 387
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 387
ctgaagagaa aggctgatga 20
<210> 388
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 388
aatgatcagg gagctagtcc 20
<210> 389
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 389
cttagctgac ctaaaggaat 20
<210> 390
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 390
tgggtatagt gttacaagtg 20
<210> <211> <212> <213>
391
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 391
tgaagagaaa ggctgatgaa
<210> 392
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 392
gtgttacaag tggacttaag 20
<210> <211> <212> <213>
393
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
acctgtgggt gaggagaaca
<210> 394
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 394
tcacccagat aatcctccct 20
<210> <211> <212> <213>
395
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 395
tgttgtcgca gctgttttaa
<210> 396
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 396
tggtcacatt cccttcccct 20
<210> 397
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 397
cctggtcaca ttcccttccc 20
<210> <211> <212> <213>
398
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 398
tagacctggt cacattccct
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 399
cctagacctg gtcacattcc 20
<210> <211> <212> <213>
400
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 400
ccttccgagt cagctttttc 20
<210> 401
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 401
ctccttccga gtcagctttt 20
<210> <211> <212> <213>
402
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 402
agacctcctt ccgagtcagc 20
<210> 403
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 403
gtagacctcc ttccgagtca 20
<210> 404
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 404
tttgccgctt ctggtttttg 20
<210> 405
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 405
cttttgccgc ttctggtttt 20
<210> 406
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 406
cctgcttttg ccgcttctgg 20
<210> <211> <212> <213>
407
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 407
tacctgcttt tgccgcttct
<210> 408
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 408
agaaaaccca aatcctcatc 20
<210> <211> <212> <213>
409
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tagaaaaccc aaatcctcat
<210> 410
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 410
atagaaaacc caaatcctca 20
<210> <211> <212> <213>
411
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 411
tatagaaaac ccaaatcctc
<210> 412
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 412
ttatagaaaa cccaaatcct 20
<210> 413
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 413
cttatagaaa acccaaatcc 20
<210> <211> <212> <213>
414
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 414
ccttatagaa aacccaaatc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 415
cccttataga aaacccaaat 20
<210> <211> <212> <213>
416
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 416
ccccttatag aaaacccaaa 20
<210> 417
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 417
accccttata gaaaacccaa 20
<210> <211> <212> <213>
418
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 418
aaccccttat agaaaaccca 20
<210> 419
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 419
aaacccctta tagaaaaccc 20
<210> 420
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 420
gaaacccctt atagaaaacc 20
<210> 421
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 421
ggaaacccct tatagaaaac 20
<210> 422
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 422
aggaaacccc ttatagaaaa 20
<210> <211> <212> <213>
423
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 423
caggaaaccc cttatagaaa
<210> 424
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 424
gcaggaaacc ccttatagaa 20
<210> <211> <212> <213>
425
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
agcaggaaac cccttataga
<210> 426
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 426
cagcaggaaa ccccttatag 20
<210> <211> <212> <213>
427
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 427
ccagcaggaa accccttata
<210> 428
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 428
tccagcagga aaccccttat 20
<210> 429
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 429
tgtccagcag gaaacccctt 20
<210> <211> <212> <213>
430
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 430
ctgtccagca ggaaacccct
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 431
cctgtccagc aggaaacccc 20
<210> <211> <212> <213>
432
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 432
ccctgtccag caggaaaccc 20
<210> 433
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 433
cccctgtcca gcaggaaacc 20
<210> <211> <212> <213>
434
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 434
cgcccctgtc cagcaggaaa 20
<210> 435
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 435
acgcccctgt ccagcaggaa 20
<210> 436
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 436
cacgcccctg tccagcagga 20
<210> 437
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 437
ccacgcccct gtccagcagg 20
<210> 438
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 438
cccacgcccc tgtccagcag 20
<210> <211> <212> <213>
439
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 439
tcccacgccc ctgtccagca
<210> 440
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 440
atcccacgcc cctgtccagc 20
<210> <211> <212> <213>
441
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
aatcccacgc ccctgtccag
<210> 442
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 442
caatcccacg cccctgtcca 20
<210> <211> <212> <213>
443
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 443
tcaatcccac gcccctgtcc
<210> 444
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 444
ttcaatccca cgcccctgtc 20
<210> 445
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 445
attcaatccc acgcccctgt 20
<210> <211> <212> <213>
446
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 446
aattcaatcc cacgcccctg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 447
taattcaatc ccacgcccct 20
<210> <211> <212> <213>
448
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 448
ttaattcaat cccacgcccc 20
<210> 449
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 449
tttaattcaa tcccacgccc 20
<210> <211> <212> <213>
450
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 450
ttttaattca atcccacgcc 20
<210> 451
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 451
gttttaattc aatcccacgc 20
<210> 452
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 452
tgttttaatt caatcccacg 20
<210> 453
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 453
ctgttttaat tcaatcccac 20
<210> 454
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 454
gctgttttaa ttcaatccca 20
<210> <211> <212> <213>
455
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 455
cagctgtttt aattcaatcc
<210> 456
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 456
gcagctgttt taattcaatc 20
<210> <211> <212> <213>
457
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
cgcagctgtt ttaattcaat
<210> 458
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 458
tcgcagctgt tttaattcaa 20
<210> <211> <212> <213>
459
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 459
tgtcgcagct gttttaattc
<210> 460
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 460
ttgtcgcagc tgttttaatt 20
<210> 461
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 461
gttgtcgcag ctgttttaat 20
<210> <211> <212> <213>
462
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 462
ttgttgtcgc agctgtttta
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 463
tttgttgtcg cagctgtttt 20
<210> <211> <212> <213>
464
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 464
ttttgttgtc gcagctgttt 20
<210> 465
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 465
tttttgttgt cgcagctgtt 20
<210> <211> <212> <213>
466
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 466
ggatccagct cactcccctg 20
<210> 467
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 467
aaataaggat ccagctcact 20
<210> 468
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 468
gaccagaaat aaggatccag 20
<210> 469
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 469
cttagggacc agaaataagg 20
<210> 470
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 470
cacccactta gggaccagaa 20
<210> <211> <212> <213>
471
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 471
accacccact tagggaccag
<210> 472
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 472
aggtccagga ctctcccctt 20
<210> <211> <212> <213>
473
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
aaggtccagg actctcccct
<210> 474
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 474
aaactgcaga agtcccaccc 20
<210> <211> <212> <213>
475
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 475
ggagggcccc gctgagctgc
<210> 476
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 476
tcccggaaca tccaagcggg 20
<210> 477
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 477
catcactttc ccggaacatc 20
<210> <211> <212> <213>
478
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 478
ctggtcacat tcccttcccc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 479
ctagacctgg tcacattccc 20
<210> <211> <212> <213>
480
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 480
ggagtggtgg tcacacctcc 20
<210> 481
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 481
accccctcca gagagcagga 20
<210> <211> <212> <213>
482
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 482
atctctaccc cctccagaga 20
<210> 483
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 483
ggtacgggta gaagccagaa 20
<210> 484
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 484
ggagagtgta accgtcatag 2 0
<210> 485
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 485
tgcgattggc agagccccgg 20
<210> 486
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 486
ggcaggtgcg attggcagag 20
<210> <211> <212> <213>
487
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 487
ggccattcac ttggcaggtg
<210> 488
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 488
ttgtcacaga tcgctgtctg 20
<210> <211> <212> <213>
489
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
aaggagtctt ggcaggaagg
<210> 490
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 490
gtacatgaag gagtcttggc 20
<210> <211> <212> <213>
491
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 491
aagcttcggc cacctcttga
<210> 492
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 492
ccatctagca ccaggtagat 20
<210> 493
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 493
ggccccaatg ctgtctgatc 20
<210> <211> <212> <213>
494
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 494
aattaagttg actagacact
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 495
tgccaccttc tcaattaagt 20
<210> <211> <212> <213>
496
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 496
taacttgcca ccttctcaat 20
<210> 497
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 497
cataacttgc caccttctca 20
<210> <211> <212> <213>
498
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 498
acaccataac ttgccacctt 20
<210> 499
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 499
tcacaccata acttgccacc 20
<210> 500
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 500
tagtccctga cttcaacttg 20
<210> 501
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 501
tggtgttagt ccctgacttc 20
<210> 502
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 502
gcggttccag ccttcaggag 20
<210> <211> <212> <213>
503
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 503
tcatgaggat gatgacatgg
<210> 504
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 504
ccgcccatgt tgtgcaatcc 20
<210> <211> <212> <213>
505
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gtaattgggt ccccgcccat
<210> 506
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 506
aagtcccgga tctcatcaat 20
<210> <211> <212> <213>
507
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 507
aacacataga catccagata
<210> 508
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 508
caaagcattg atgttcactt 20
<210> 509
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 509
tttgaacaca tgttgctcat 20
<210> <211> <212> <213>
510
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 510
cttccaggtt ttccatatcc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 511
tcttccaggt tttccatatc 20
<210> <211> <212> <213>
512
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 512
agactcagag actggctttc 20
<210> 513
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 513
gcctgccatg gttgcttgtg 20
<210> <211> <212> <213>
514
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 514
tgactgagat cttggcctgc 20
<210> 515
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 515
ttctatctcc aggtcccgct 20
<210> 516
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 516
agtcataaaa ttcaggaatt 20
<210> 517
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 517
cgagttgttc cctcggtgca 20
<210> 518
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 518
agcctcaaag ctcgagttgt 20
<210> <211> <212> <213>
519
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 519
ggaggaagcc tcaaagctcg
<210> 520
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 520
gtagttggag gaagcctcaa 20
<210> <211> <212> <213>
521
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
caagtggtag ttggaggaag
<210> 522
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 522
tcctcagaca caaacagagc 20
<210> <211> <212> <213>
523
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 523
ttctcctcct cagacacaaa
<210> 524
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 524
tagacctcct tccgagtcag 20
<210> 525
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 525
ttgatgtaga cctccttccg 20
<210> <211> <212> <213>
526
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 526
ctttcttatc cccattcttg
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 527
gcctttctta tccccattct 20
<210> <211> <212> <213>
528
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 528
agctgccttt cttatcccca 20
<210> 529
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 529
cagctgcctt tcttatcccc 20
<210> <211> <212> <213>
530
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 530
acagctgcct ttcttatccc 20
<210> 531
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 531
gcatctctct cacagctgcc 20
<210> 532
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 532
agatgtcctt gactttgtca 20
<210> 533
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 533
cagcataggg actcactcct 20
<210> 534
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 534
ccgccagaat cacctctgca 20
<210> <211> <212> <213>
535
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 535
tgaatgaaac gacttctctt
<210> 536
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 536
acatccacta ctccccagct 20
<210> <211> <212> <213>
537
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
cgcttctggt ttttgcagac
<210> 538
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 538
ttttgccgct tctggttttt 20
<210> <211> <212> <213>
539
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 539
gcaggtacct gcttttgccg
<210> 540
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 540
tcttggagtt tctccttcag 20
<210> 541
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 541
ggaacatcca agcggg 16
<210> <211> <212> <213>
542
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 542
tggtcacatt cccttc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 543
cctggtcaca ttccct 16
<210> <211> <212> <213>
544 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 544
gacctggtca cattcc 16
<210> 545
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 545
taacttgcca ccttct 16
<210> <211> <212> <213>
546 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 546
cataacttgc cacctt 16
<210> 547
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 547
accataactt gccacc 16
<210> 548
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 548
ccttccgagt cagctt 16
<210> 549
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 549
ctccttccga gtcagc 16
<210> 550
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 550
acctccttcc gagtca 16
<210> <211> <212> <213>
551
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 551
ctttcttatc cccatt
<210> 552
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 552
gcctttctta tcccca 16
<210> <211> <212> <213>
553 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ctgcctttct tatccc
<210> 554
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 554
tttgccgctt ctggtt 16
<210> <211> <212> <213>
555 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 555
cttttgccgc ttctgg
<210> 556
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 556
tgcttttgcc gcttct 16
<210> 557
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 557
aaacccaaat cctcat 16
<210> <211> <212> <213>
558
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 558
gaaaacccaa atcctc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 559
tagaaaaccc aaatcc 16
<210> <211> <212> <213>
560 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 560
atagaaaacc caaatc 16
<210> 561
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 561
cttatagaaa acccaa 16
<210> <211> <212> <213>
562 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 562
ccttatagaa aaccca 16
<210> 563
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 563
cccttataga aaaccc 16
<210> 564
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 564
ccccttatag aaaacc 16
<210> 565
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 565
accccttata gaaaac 16
<210> 566
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 566
aaccccttat agaaaa 16
<210> <211> <212> <213>
567
16 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 567
aaacccctta tagaaa
<210> 568
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 568
gaaacccctt atagaa 16
<210> <211> <212> <213>
569
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ggaaacccct tataga
<210> 570
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 570
aggaaacccc ttatag 16
<210> <211> <212> <213>
571 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 571
caggaaaccc cttata
<210> 572
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 572
gcaggaaacc ccttat 16
<210> 573
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 573
agcaggaaac ccctta 16
<210> <211> <212> <213>
574
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 574
cagcaggaaa cccctt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 575
ccagcaggaa acccct 16
<210> <211> <212> <213>
576 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 576
tccagcagga aacccc 16
<210> 577
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 577
gtccagcagg aaaccc 16
<210> <211> <212> <213>
578 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 578
tgtccagcag gaaacc 16
<210> 579
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 579
ctgtccagca ggaaac 16
<210> 580
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 580
cctgtccagc aggaaa 16
<210> 581
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 581
ccctgtccag caggaa 16
<210> 582
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 582
cccctgtcca gcagga 16
<210> <211> <212> <213>
583
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 583
gcccctgtcc agcagg
<210> 584
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 584
cgcccctgtc cagcag 16
<210> <211> <212> <213>
585 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
acgcccctgt ccagca
<210> 586
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 586
cacgcccctg tccagc 16
<210> <211> <212> <213>
587 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 587
ccacgcccct gtccag
<210> 588
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 588
cccacgcccc tgtcca 16
<210> 589
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 589
tcccacgccc ctgtcc 16
<210> <211> <212> <213>
590
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 590
atcccacgcc cctgtc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 591
aatcccacgc ccctgt 16
<210> <211> <212> <213>
592 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 592
caatcccacg cccctg 16
<210> 593
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 593
tcaatcccac gcccct 16
<210> <211> <212> <213>
594 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 594
ttcaatccca cgcccc 16
<210> 595
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 595
attcaatccc acgccc 16
<210> 596
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 596
aattcaatcc cacgcc 16
<210> 597
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 597
taattcaatc ccacgc 16
<210> 598
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 598
ttaattcaat cccacg 16
<210> <211> <212> <213>
599
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 599
tttaattcaa tcccac
<210> 600
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 600
ttttaattca atccca 16
<210> <211> <212> <213>
601 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gttttaattc aatccc
<210> 602
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 602
tgttttaatt caatcc 16
<210> <211> <212> <213>
603 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 603
ctgttttaat tcaatc
<210> 604
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 604
gctgttttaa ttcaat 16
<210> 605
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 605
agctgtttta attcaa 16
<210> <211> <212> <213>
606
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 606
cagctgtttt aattca
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 607
gcagctgttt taattc 16
<210> <211> <212> <213>
608 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 608
cgcagctgtt ttaatt 16
<210> 609
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 609
tcgcagctgt tttaat 16
<210> <211> <212> <213>
610 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 610
gtcgcagctg ttttaa 16
<210> 611
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 611
tgtcgcagct gtttta 16
<210> 612
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 612
ttgtcgcagc tgtttt 16
<210> 613
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 613
gttgtcgcag ctgttt 16
<210> 614
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 614
tgttgtcgca gctgtt 16
<210> <211> <212> <213>
615
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 615
ttgttgtcgc agctgt
<210> 616
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 616
tttgttgtcg cagctg 16
<210> <211> <212> <213>
617 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ttttgttgtc gcagct
<210> 618
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 618
tttttgttgt cgcagc 16
<210> <211> <212> <213>
619 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 619
gaaaacccaa atcctca
<210> 620
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 620
agaaaaccca aatcctc 17
<210> 621
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 621
tagaaaaccc aaatcct 17
<210> <211> <212> <213>
622
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 622
atagaaaacc caaatcc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 623
ttatagaaaa cccaaat 17
<210> <211> <212> <213>
624 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 624
cttatagaaa acccaaa 17
<210> 625
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 625
ccttatagaa aacccaa 17
<210> <211> <212> <213>
626 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 626
cccttataga aaaccca 17
<210> 627
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 627
ccccttatag aaaaccc 17
<210> 628
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 628
accccttata gaaaacc 17
<210> 629
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 629
aaccccttat agaaaac 17
<210> 630
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 630
aaacccctta tagaaaa 17
<210> <211> <212> <213>
631
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 631
gaaacccctt atagaaa
<210> 632
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 632
ggaaacccct tatagaa 17
<210> <211> <212> <213>
633 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
aggaaacccc ttataga
<210> 634
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 634
caggaaaccc cttatag 17
<210> <211> <212> <213>
635 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 635
gcaggaaacc ccttata
<210> 636
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 636
agcaggaaac cccttat 17
<210> 637
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 637
cagcaggaaa cccctta 17
<210> <211> <212> <213>
638
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 638
ccagcaggaa acccctt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 639
tccagcagga aacccct 17
<210> <211> <212> <213>
640 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 640
gtccagcagg aaacccc 17
<210> 641
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 641
tgtccagcag gaaaccc 17
<210> <211> <212> <213>
642 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 642
ctgtccagca ggaaacc 17
<210> 643
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 643
cctgtccagc aggaaac 17
<210> 644
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 644
ccctgtccag caggaaa 17
<210> 645
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 645
gcccctgtcc agcagga 17
<210> 646
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 646
cgcccctgtc cagcagg 17
<210> <211> <212> <213>
647
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 647
acgcccctgt ccagcag
<210> 648
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 648
cacgcccctg tccagca 17
<210> <211> <212> <213>
649
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ccacgcccct gtccagc
<210> 650
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 650
cccacgcccc tgtccag 17
<210> <211> <212> <213>
651 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 651
tcccacgccc ctgtcca
<210> 652
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 652
atcccacgcc cctgtcc 17
<210> 653
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 653
aatcccacgc ccctgtc 17
<210> <211> <212> <213>
654
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 654
caatcccacg cccctgt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 655
tcaatcccac gcccctg 17
<210> <211> <212> <213>
656 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 656
ttcaatccca cgcccct 17
<210> 657
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 657
attcaatccc acgcccc 17
<210> <211> <212> <213>
658
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 658
aattcaatcc cacgccc 17
<210> 659
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 659
taattcaatc ccacgcc 17
<210> 660
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 660
ttaattcaat cccacgc 17
<210> 661
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 661
tttaattcaa tcccacg 17
<210> 662
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 662
ttttaattca atcccac 17
<210> <211> <212> <213>
663
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 663
gttttaattc aatccca
<210> 664
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 664
tgttttaatt caatccc 17
<210> <211> <212> <213>
665 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ctgttttaat tcaatcc
<210> 666
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 666
gctgttttaa ttcaatc 17
<210> <211> <212> <213>
667 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 667
agctgtttta attcaat
<210> 668
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 668
cagctgtttt aattcaa 17
<210> 669
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 669
gcagctgttt taattca 17
<210> <211> <212> <213>
670
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 670
cgcagctgtt ttaattc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 671
tcgcagctgt tttaatt 17
<210> <211> <212> <213>
672 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 672
gtcgcagctg ttttaat 17
<210> 673
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 673
tgtcgcagct gttttaa 17
<210> <211> <212> <213>
674 17
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 674
ttgtcgcagc tgtttta 17
<210> 675
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 675
gttgtcgcag ctgtttt 17
<210> 676
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 676
tgttgtcgca gctgttt 17
<210> 677
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 677
ttgttgtcgc agctgtt 17
<210> 678
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 678
tttgttgtcg cagctgt 17
<210> <211> <212> <213>
679
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 679
ttttgttgtc gcagctg
<210> 680
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 680
tttttgttgt cgcagct 17
<210> <211> <212> <213>
681 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
tagaaaaccc aaatcctca
<210> 682
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 682
atagaaaacc caaatcctc 19
<210> <211> <212> <213>
683 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 683
tatagaaaac ccaaatcct
<210> 684
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 684
cttatagaaa acccaaatc 19
<210> 685
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 685
ccttatagaa aacccaaat 19
<210> <211> <212> <213>
686
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 686
cccttataga aaacccaaa
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 687
ccccttatag aaaacccaa 19
<210> <211> <212> <213>
688 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 688
accccttata gaaaaccca 19
<210> 689
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 689
aaccccttat agaaaaccc 19
<210> <211> <212> <213>
690 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 690
aaacccctta tagaaaacc 19
<210> 691
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 691
gaaacccctt atagaaaac 19
<210> 692
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 692
ggaaacccct tatagaaaa 19
<210> 693
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 693
aggaaacccc ttatagaaa 19
<210> 694
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 694
caggaaaccc cttatagaa 19
<210> <211> <212> <213>
695
19 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 695
gcaggaaacc ccttataga
<210> 696
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 696
agcaggaaac cccttatag 19
<210> <211> <212> <213>
697 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
cagcaggaaa ccccttata
<210> 698
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 698
ccagcaggaa accccttat 19
<210> <211> <212> <213>
699 19
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 699
tccagcagga aacccctta
<210> 700
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 700
gtccagcagg aaacccctt 19
<210> 701
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 701
tgtccagcag gaaacccct 19
<210> <211> <212> <213>
702
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 702
cctgtccagc aggaaaccc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 703
ccctgtccag caggaaacc 19
<210> <211> <212> <213>
704
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 704
cccctgtcca gcaggaaac 19
<210> 705
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 705
gcccctgtcc agcaggaaa 19
<210> <211> <212> <213>
706
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 706
acgcccctgt ccagcagga 19
<210> 707
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 707
cacgcccctg tccagcagg 19
<210> 708
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 708
ccacgcccct gtccagcag 19
<210> 709
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 709
cccacgcccc tgtccagca 19
<210> 710
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 710
tcccacgccc ctgtccagc 19
<210> <211> <212> <213>
711
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 711
atcccacgcc cctgtccag
<210> 712
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 712
aatcccacgc ccctgtcca 19
<210> <211> <212> <213>
713
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
caatcccacg cccctgtcc
<210> 714
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 714
tcaatcccac gcccctgtc 19
<210> <211> <212> <213>
715
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 715
ttcaatccca cgcccctgt
<210> 716
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 716
attcaatccc acgcccctg 19
<210> 717
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 717
aattcaatcc cacgcccct 19
<210> <211> <212> <213>
718
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 718
taattcaatc ccacgcccc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 719
ttaattcaat cccacgccc 19
<210> <211> <212> <213>
720
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 720
tttaattcaa tcccacgcc 19
<210> 721
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 721
ttttaattca atcccacgc 19
<210> <211> <212> <213>
722
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 722
gttttaattc aatcccacg 19
<210> 723
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 723
tgttttaatt caatcccac 19
<210> 724
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 724
ctgttttaat tcaatccca 19
<210> 725
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 725
gctgttttaa ttcaatccc 19
<210> 726
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 726
agctgtttta attcaatcc 19
<210> <211> <212> <213>
727
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 727
cagctgtttt aattcaatc
<210> 728
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 728
gcagctgttt taattcaat 19
<210> <211> <212> <213>
729
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
cgcagctgtt ttaattcaa
<210> 730
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 730
tcgcagctgt tttaattca 19
<210> <211> <212> <213>
731
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 731
gtcgcagctg ttttaattc
<210> 732
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 732
tgtcgcagct gttttaatt 19
<210> 733
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 733
ttgtcgcagc tgttttaat 19
<210> <211> <212> <213>
734
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
<400> 734
gttgtcgcag ctgttttaa
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 735
tgttgtcgca gctgtttta 19
<210> <211> <212> <213>
736
19 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 736
ttgttgtcgc agctgtttt 19
<210> 737
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 737
tttgttgtcg cagctgttt 19
<210> <211> <212> <213>
738
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 738
ttttgttgtc gcagctgtt 19
<210> 739
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 739
tttttgttgt cgcagctgt 19
<210> 740
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 740
ccccttatag aaaaccca 18
<210> 741
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 741
accccttata gaaaaccc 18
<210> 742
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 742
aaccccttat agaaaacc 18
<210> <211> <212> <213>
743
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 743
aaacccctta tagaaaac
<210> 744
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 744
gaaacccctt atagaaaa 18
<210> <211> <212> <213>
745
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
aggaaacccc ttatagaa
<210> 746
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 746
caggaaaccc cttataga 18
<210> <211> <212> <213>
747
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 747
gcaggaaacc ccttatag
<210> 748
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 748
agcaggaaac cccttata 18
<210> 749
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 749
cagcaggaaa ccccttat 18
<210> <211> <212> <213>
750
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 750
ccagcaggaa acccctta
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 751
tccagcagga aacccctt 18
<210> <211> <212> <213>
752
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 752
gtccagcagg aaacccct 18
<210> 753
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 753
tgtccagcag gaaacccc 18
<210> <211> <212> <213>
754
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 754
ctgtccagca ggaaaccc 18
<210> 755
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 755
cctgtccagc aggaaacc 18
<210> 756
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 756
ccctgtccag caggaaac 18
<210> 757
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 757
cccctgtcca gcaggaaa 18
<210> 758
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 758
cgcccctgtc cagcagga 18
<210> <211> <212> <213>
759
18 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 759
acgcccctgt ccagcagg
<210> 760
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 760
cacgcccctg tccagcag 18
<210> <211> <212> <213>
761
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ccacgcccct gtccagca
<210> 762
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 762
cccacgcccc tgtccagc 18
<210> <211> <212> <213>
763
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 763
tcccacgccc ctgtccag
<210> 764
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 764
atcccacgcc cctgtcca 18
<210> 765
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 765
aatcccacgc ccctgtcc 18
<210> <211> <212> <213>
766
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 766
caatcccacg cccctgtc
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 767
tcaatcccac gcccctgt 18
<210> <211> <212> <213>
768
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 768
ttcaatccca cgcccctg 18
<210> 769
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 769
attcaatccc acgcccct 18
<210> <211> <212> <213>
770
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 770
aattcaatcc cacgcccc 18
<210> 771
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 771
taattcaatc ccacgccc 18
<210> 772
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 772
ttaattcaat cccacgcc 18
<210> 773
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 773
tttaattcaa tcccacgc 18
<210> 774
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 774
ttttaattca atcccacg 18
<210> <211> <212> <213>
775
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 775
gttttaattc aatcccac
<210> 776
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 776
tgttttaatt caatccca 18
<210> <211> <212> <213>
777
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ctgttttaat tcaatccc
<210> 778
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 778
gctgttttaa ttcaatcc 18
<210> <211> <212> <213>
779
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 779
agctgtttta attcaatc
<210> 780
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 780
cagctgtttt aattcaat 18
<210> 781
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 781
gcagctgttt taattcaa 18
<210> <211> <212> <213>
782
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 782
cgcagctgtt ttaattca
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 783
tcgcagctgt tttaattc 18
<210> <211> <212> <213>
784
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 784
gtcgcagctg ttttaatt 18
<210> 785
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 785
tagaaaaccc aaatcctc 18
<210> <211> <212> <213>
786
18 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 786
atagaaaacc caaatcct 18
<210> 787
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 787
tatagaaaac ccaaatcc 18
<210> 788
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 788
ttatagaaaa cccaaatc 18
<210> 789
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 789
cttatagaaa acccaaat 18
<210> 790
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 790
ccttatagaa aacccaaa 18
<210> <211> <212> <213>
791
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 791
cccttataga aaacccaa
<210> 792
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 792
tgtcgcagct gttttaat 18
<210> <211> <212> <213>
793
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ttgtcgcagc tgttttaa
<210> 794
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 794
gttgtcgcag ctgtttta 18
<210> <211> <212> <213>
795
18 ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 795
tgttgtcgca gctgtttt
<210> 796
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 796
ttgttgtcgc agctgttt 18
<210> 797
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 797
tttgttgtcg cagctgtt 18
<210> <211> <212> <213>
798
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 798
ttttgttgtc gcagctgt
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 799
tttttgttgt cgcagctg 18
<210> <211> <212> <213>
800
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 800
aaaacccaaa tcctca
<210> 801
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 801
agaaaaccca aatcct 16
<210> <211> <212> <213>
802 16
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 802
tatagaaaac ccaaat
<210> 803
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 803
ttatagaaaa cccaaa 16
<210> 804
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 804
gcataagagg gtaccagctg 20
<210> 805
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 805
gtcctttagc cagggcagca 20
<210> 806
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 806
tccacccatg ttgtgcaagc 20
<210> <211> <212> <213>
807
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 807
ccacaccatg ccacagagac
<210> 808
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 808
ttccgagtca ggctcttccc 20
<210> <211> <212> <213>
809
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
ccttccctga aggttcctcc
<210> 810
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 810
agtctctgtg gcatggtttg g 21
<210> <211> <212> <213>
811
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 811
gggcgaatga ctgagatctt g
<210> 812
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд
<400> 812
taccgattac cacaagcaac catggca 27
<210> 813
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 813
cgaagcagct caatgaaatc aa 22
<210> <211> <212> <213>
814
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 814
tgcctggagg gccttctt
<220>
<223> Зонд
<400> 815
agaccacaag ttgaagtc 18
<210> <211> <212> <213>
816
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 816
gggcaaacag caatttgtga 20
<210> 817
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 817
tggctaccca ccttccttgt 20
<210> <211> <212> <213>
818
ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд
<400> 818
ctggatactg tcccaatccc ggtattcc 28
<210> 819
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 819
cgaagaagct cagtgaaatc aa 22
<210> 820
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 820
tgcctggagg gccctctt 18
<210> 821
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 821
agcttcttgt ccagctttat 20
<210> 822
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 822
agcttcttgt ccagctttat a 21
<210> <211> <212> <213>
823
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 823
tcagtcatga cttc
<210> 824
<211> 15
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 824
tcagtcatga cttca 15
<210> <211> <212> <213>
825
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
gctgattaga gagaggtccc
<210> 826
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 826
tcccatttca ggagacctgg 20
<210> <211> <212> <213>
827 15
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 827
atcagtcatg acttc
<210> 828
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 828
cggtgcaagg cttaggaatt 20
<210> 829
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 829
gcttcagtca tgacttcctt 20
<210> 830
21 ДНК
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 830
gcttcagtca tgacttcctt a
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 831
agcttcagtc atgacttcct t 21
<210> <211> <212> <213>
832
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 832
tggtaatcca ctttcagagg
<210> 833
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 833
tggtaatcca ctttcagagg a 21
<210> 834
21 ДНК
7 Л тл ¦
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 834
tgcttcagtc atgacttcct t
<210> 835
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 835
cactgatttt tgcccaggat 20
<210> 836
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 836
cactgatttt tgcccaggat a 21
<210> 837
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 837
aagcttcttg tccagcttta t 21
<210> 838
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 838
acccaattca gaaggaagga 20
<210> 839
21 ДНК
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 839
acccaattca gaaggaagga a
<210> 840
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 840
aacccaattc agaaggaagg a 21
<210> <211> <212> <213>
841
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
atggtaatcc actttcagag g
<210> 842
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 842
tcttggttac atgaaatccc 20
<210> 843
21 ДНК
7 Л тл ¦
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 843
tcttggttac atgaaatccc a
<210> 844
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 844
attcactttc ataatgctgg 20
<210> 845
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 845
attcactttc ataatgctgg a 21
<210> 846
21 ДНК
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 846
atcttggtta catgaaatcc c
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 847
tgctccgttg gtgcttgttc 20
<210> <211> <212> <213>
848
ДНК
Искусственная последовательность
<220> <223>
Синтетический олигонуклеотид
<400> 848
atgcatggtg atgcttctga
<210> 849
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 849
cagctttatt agggacagca 20
<210> 850
21 ДНК
7Л s~i тл ¦
<211> <212>
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 850
cagctttatt agggacagca a
<210> 851
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 851
acagctttat tagggacagc a 21
<210> 852
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<400> 852
ttcagtcatg acttcc 16
<210> 853
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220> <221> <222>
misc_feature (1)..(5)
<223> Основания в указанных положениях представляют собой РНК
<220> <221> <222>
misc_feature
(16)..(20)
<223> Основания в указанных положениях представляют собой РНК
<400> 853
gcuucagtca tgactuccuu
<210> 854 <211> 21 <212>
ДНК
т/г ^ т"-
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 854
tgctccgttg gtgcttgttc a
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, комплементарных по азотистым основаниям 30-49, 48-63, 150-169, 151-170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600-619, 638-657, 644-663,738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 11531172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-
1190 1329 1415 1708 2208 2221 2260 2472 2566 2572 2574 2577 2578 2582 2586 2589 2592 2593 2598 2600 2602 2601
1175-1194 1316-1335 1399-1418 1749-1768 2191-2210 2223-2238 2267-2286 2457-2476 2551-2570 2554-2571 2556-2575 2559-2576 2561-2579 2564-2581 2568-2583 2571-2586 2574-2590 2576-2595 2580-2596 2582-2598 2584-2600 2586-2602 1177-1196 1319-1338 1405-1424 1763-1782 2193-2212 2223-2242 2361-2380 2459-2474 2552-2568 2554-2572 2557-2573 2559-2577 2561-2580 2564-2583 2568-2585 2571-2588 2574-2591 2577-2594 2580-2597 2582-2599 2584-2601 2586-2604 1183-1202 1322-1341 1421-1440 1912-1931 2195-2210 2225-2240 2388-2407 2459-2478 2552-2570 2554-2573 2557-2574 2559-2578 2562-2577 2565-2584 2568-2587 2571-2590 2574-2593 2577-2595 2580-2598 2582-2600 2584-2602 2586-2605 1208-1227 1328-1347 1621-1640 2073-2092 2195-2214 2226-2245 2397-2416 2461-2476 2552-2571 2555-2570 2557-2575 2560-2577 2562-2579 2566-2583 2569-2586 2572-2589 2575-2590 2577-2596 2580-2599 2582-2601 2584-2603 2587-2602 1235-1254 1349-1368 1646-1665 2085-2104 2196-2215 2227-2242 2448-2467 2461-2480 2553-2568 2555-2572 2557-2576 2560-2578 2562-2581 2566-2585 2569-2588 2572-2590 2575-2591 2578-2594 2581-2597 2583-2599 2585-2601 2587-2603 1298-1317 1355-1374 1646-1665 2166-2185 2197-2212 2227-2246 2453-2472 2532-2551 2553-2570 2555-2574 2558-2575 2560-2579 2563-2578 2567-2582 2570-2585 2572-2591 2575-2592 2578-2596 2581-2598 2583-2600 2585-2603 2587-2605 1304-1323 1393-1412 1647-1666 2172-2191 2197-2216 2238-2257 2455-2474 2550-2569 2553-2571 2556-2573 2558-2576 2561-2576 2563-2580 2567-2584 2570-2587 2573-2590 2575-2594 2578-2597 2581-2599 2583-2601 2585-2604 2587-2606
1310139616892189220222412457255125532556255825612563256725702573257625792581258325862588-
2603,
2588
-2604,
2588
-2605,
2588
-2606,
2588-2607,
2589
-2604, 2589
-2605,
2589-2606,
2589-
2607,
2589
-2608,
2590
-2605,
2590
-2606,
2590-2607,
2590
-2608, 2590
-2609,
2590-2609,
2591-
2607,
2591
-2608,
2591
-2609,
2591
-2610,
2592-2607,
2592
-2608, 2592
-2609,
2592-2610,
2592-
2611,
2593
-2608,
2593
-2609,
2593
-2610,
2593-2612,
2594
-2609, 2594
-2610,
2594-2611,
2594-
2612,
2594
-2613,
2595
-2610,
2595
-2611,
2595-2612,
2595
-2613, 2595
-2614,
2596-2611,
2596-
2612,
2596
-2613,
2596
-2614,
2596
-2615,
2597-2612,
2597
-2612, 2597
-2613,
2597-2614,
2597-
2615,
2597
-2616,
2598
-2613,
2598
-2614,
2598-2615,
2598
-2616, 2598
-2617,
2599-2614,
2599-
2615,
2599
-2616,
2599
-2617,
2599
-2618,
2600-2615,
2600
-2616, 2600
-2617,
2600-2618,
2600-
2619,
2601
-2616,
2601
-2617,
2601
-2618,
2601-2619,
2601
-2620, 2602
-2617,
2602-2618,
2602-
2619,
2602
-2620,
2602
-2621,
2603
-2618,
2603-2619,
2603
-2620, 2603
-2621,
2603-2622,
2604-
2619,
2604
-2620,
2604
-2621,
2604
-2622,
2604-2623,
2605
-2620, 2605
-2621,
2605-2622,
2605-
2623,
2605
-2624,
2606
-2621,
2606
-2622,
2606-2623,
2606
-2624, 2606
-2625,
2607-2622,
2607-
2623,
2607
-2624,
2607
-2625,
2607
-2626,
2608-2623,
2608
-2624, 2608
-2625,
2608-2626,
2608-
2627,
2609
-2624,
2609
-2625,
2609
-2626,
2609-2627,
2609
-2628, 2610
-2625,
2610-2626,
2610-
2627,
2610
-2628,
2610
-2629,
2611
-2626,
2611-2627,
2611
-2628, 2611
-2629,
2611-2630,
2612-
2627,
2612
-2628,
2612
-2629,
2612
-2630,
2612-2631,
2613
-2628, 2613
-2629,
2613-2630,
2613-
2631,
2614
-2629,
2614
-2630,
2614
-2631,
2615-2630,
2615
-2631 или 2616-2631 в SEQ Ш NO:
1, и при этом указанный модифицированный олигонуклеотид по меньшей мере на 85 %, 90 %, 95 % или на 100 % комплементарен SEQ ID NO: 1.
2. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 последовательных азотистых оснований, которая на 100 % комплементарна равной по длине части азотистых оснований 30-49, 48-63, 150-169, 151170, 152-171, 154-169, 154-173, 156-171, 156-175, 157-176, 158-173, 158-177, 480-499, 600619, 638-657, 644-663, 738-757, 1089-1108, 1135-1154, 1141-1160, 1147-1166, 1150-1169, 1153-1172, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1171-1186, 1171-1190, 1173-1188, 1173-1192, 1175-1190, 1175-1194, 1177-1196, 1183-1202, 1208-1227, 1235-1254, 1298-1317, 1304-1323, 1310-1329, 1316-1335, 1319-1338, 1322-1341, 1328-1347, 1349-1368, 1355-1374, 1393-1412,
1396-1415 1689-1708 2189-2208 2202-2221 2241-2260 2457-2472 2551-2566 2553-2572 2556-2574 2558-2577 2561-2578 2563-2582 2567-2586 2570-2589 2573-2592 2576-2593 2579-2598 2581-2600 2583-2602 2586-2601
2588- 2603
2589- 2607
2591- 2607
2592- 2611 2594-2612
2596- 2612
2597- 2615
2599- 2615
2600- 2619 1399-1418 1749-1768 2191-2210 2223-2238 2267-2286 2457-2476 2551-2570 2554-2571 2556-2575 2559-2576 2561-2579 2564-2581 2568-2583 2571-2586 2574-2590 2576-2595 2580-2596 2582-2598 2584-2600 2586-2602
2601- 2604
2602- 2608 2591-2608
2593- 2608
2594- 2613
2596- 2613
2597- 2616 2599-2616 2601-2616 1405-1424 1763-1782 2193-2212 2223-2242 2361-2380 2459-2474 2552-2568 2554-2572 2557-2573 2559-2577 2561-2580 2564-2583 2568-2585 2571-2588 2574-2591 2577-2594 2580-2597 2582-2599 2584-2601 2586-2604 2588-2605
2598- 2605
2599- 2609 2593-2609
2595- 2610
2596- 2614
2598- 2613
2599- 2617 2601-2617 1421-1440 1912-1931 2195-2210 2225-2240 2388-2407 2459-2478 2552-2570 2554-2573 2557-2574 2559-2578 2562-2577 2565-2584 2568-2587 2571-2590 2574-2593 2577-2595 2580-2598 2582-2600 2584-2602 2586-2605 2588-2606
2600- 2606
2601- 2610 2593-2610
2595- 2611
2596- 2615
2598- 2614
2599- 2618 2601-2618 1621-1640 2073-2092 2195-2214 2226-2245 2397-2416 2461-2476 2552-2571 2555-2570 2557-2575 2560-2577 2562-2579 2566-2583 2569-2586 2572-2589 2575-2590 2577-2596 2580-2599 2582-2601 2584-2603
2600- 2602
2601- 2607 2590-2607
2592- 2607
2593- 2612 2595-2612
2597- 2612
2598- 2615
2600- 2615
2601- 2619 1646-1665 2085-2104 2196-2215 2227-2242 2448-2467 2461-2480 2553-2568 2555-2572 2557-2576 2560-2578 2562-2581 2566-2585 2569-2588 2572-2590 2575-2591 2578-2594 2581-2597 2583-2599 2585-2601 2587-2603
2602- 2604
2603- 2608 2592-2608
2594- 2609
2595- 2613
2597- 2612
2598- 2616
2600- 2616
2601- 2620 1646-1665 2166-2185 2197-2212 2227-2246 2453-2472 2532-2551 2553-2570 2555-2574 2558-2575 2560-2579 2563-2578 2567-2582 2570-2585 2572-2591 2575-2592 2578-2596 2581-2598 2583-2600 2585-2603 2587-2605
2602- 2605
2603- 2609 2592-2609
2594- 2610
2595- 2614
2597- 2613
2598- 2617 2600-2617 2602-2617 1647-1666, 2172-2191, 2197-2216, 2238-2257, 2455-2474, 2550-2569, 2553-2571, 2556-2573, 2558-2576, 2561-2576, 2563-2580, 2567-2584, 2570-2587, 2573-2590, 2575-2594, 2578-2597, 2581-2599, 2583-2601, 2585-2604, 2587-2606,
2599- 2606,
2600- 2609, 2592-2610, 2594-2611,
2596- 2611,
2597- 2614,
2599- 2614,
2600- 2618, 2602-2618,
2599-
2601- 2619, 2604-2620, 2604-2621, 2604-2622, 2604-2623, 2605-2620, 2605-2621, 2605-2622,
2602- 2623, 2605-2624, 2606-2621, 2606-2622, 2606-2623, 2606-2624, 2606-2625, 2607-2622,
2607- 2623, 2607-2624, 2607-2625, 2607-2626, 2608-2623, 2608-2624, 2608-2625, 2608-2626,
2608- 2627, 2609-2624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2610-2625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2611-2626, 2611-2627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630,
2612- 2627, 2612-2628, 2612-2629, 2612-2630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630,
2613- 2631, 2614-2629, 2614-2630, 2614-2631, 2615-2630, 2615-2631 или 2616-2631 в SEQ Ш N0:1, и при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 85 %, 90 %, 95 % или на 100 % комплементарна SEQ ID NO: 1.
3. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, комплементарных по азотистым основаниям 1608-1627, 1685-1704, 1686-
1705,
1751-1770,
1769-
-1784,
1871
-1890,
1872-1891,
1873-1892, 1875-
-1890,
1875-
-1894,
1877-
1892,
1877-1896,
1878-
-1897,
1879
-1894,
1879-1898,
2288-2307, 2808-
-2827,
2846-
-2865,
2852-
2871,
2946-2965,
3773-
-3792,
3819
-3838,
3825-3844,
3831-3850, 3834-
-3853,
3837-
-3856,
3843-
3862,
4151-4166,
4151-
-4170,
4153
-4172,
4159-4178,
4184-4203, 4211-
-4230,
4609-
-4628,
4612-
4631,
4615-4634,
4621-
-4640,
4642
-4661,
4648-4667,
4686-4705, 4689-
-4708,
4692-
-4711,
4698-
4717,
4714-4733,
5270-
-5289,
5295
-5314,
5296-5315,
5830-5849, 5890-
-5909,
5904-
-5923,
6406-
6425,
6662-6681,
6674-
-6693,
6954
-6973,
6960-6979,
6977-6996, 6979-
-6998,
6981-
-7000,
6983-
6998,
6983-7002,
6984-
-7003,
6985
-7000,
6985-7004,
6990-7009, 7122-
-7141,
7125-
-7144,
7151-
7170,
7353-7372,
7362-
-7381,
7683
-7702,
7688-7707,
7690-7709, 7692-
-7707,
7692-
-7711,
7694-
7709,
7694-7713,
7696-
-7711,
7696
-7715,
7767-7786,
7785-7804, 7786-
-7801,
7787-
-7803,
7787-
7805,
7787-7806,
7788-
-7803,
7788
-7805,
7788-7806,
7788-7807, 7789-
-7806,
7789-
-7807,
7789-
7808,
7790-7805,
7790-
-7807,
7790
-7809,
7791-7808,
7791-7809, 7791-
-7810,
7792-
-7808,
7792-
7809,
7792-7810,
7792-
-7811,
7793
-7810,
7793-7811,
7793-7812, 7794-
-7811,
7794-
-7812,
7794-
7813,
7795-7812,
7795-
-7813,
7795
-7814,
7796-7811,
7796-7813, 7796-
-7814,
7796-
-7815,
7797-
7812,
7797-7814,
7797-
-7816,
7798
-7813,
7798-7815,
7798-7817, 7799-
-7816,
7799-
-7818,
7800-
7819,
7801
-7818,
7801
-7820,
7802
-7817,
7802-7819,
7802
-7821,
7803-
-7818,
7803-7820,
7803-
7822,
7804
-7821,
7804
-7823,
7805
-7820,
7805-7822,
7805
-7824,
7806-
-7821,
7806-7823,
7806-
7825,
7807
-7824,
7807
-7825,
7807
-7826,
7808-7825,
7808
-7827,
7809-
-7825,
7809-7826,
7809-
7828,
7810
-7825,
7810
-7826,
7810
-7827,
7810-7829,
7811
-7828,
7811-
-7830,
7812-7829,
7812-
7830,
7812
-7831,
7813
-7829,
7813
-7831,
7813-7832,
7814
-7833,
7815-
-7831,
7815-7832,
7815-
7833,
7815
-7834,
7816
-7832,
7816
-7833,
7816-7834,
7816
-7835,
7817-
-7833,
7817-7834,
7817-
7835,
7817
-7836,
7818
-7834,
7818
-7835,
7818-7836,
7818
-7837,
7819-
-7835,
7819-7836,
7819-
7837,
7819
-7838,
7820
-7836,
7820
-7838,
7820-7839,
7821
-7836,
7821-
-7837,
7821-7839,
7821-
7840,
7822
-7837,
7822
-7838,
7822
-7840,
7822-7841,
7823
-7838,
7823-
-7839,
7823-7839,
7823-
7840,
7823
-7841,
7823
-7842,
7824
-7839,
7824-7840,
7824
-7840,
7824-
-7841,
7824-7842,
7824-
7843,
7825
-7840,
7825
-7841,
7825
-7842,
7825-7843,
7825
-7844,
7826-
-7842,
7826-7843,
7826-
7844,
7826
-7845,
7827
-7842,
7827
-7843,
7827-7844,
7827
-7845,
7827-
-7846,
7828-7843,
7828-
7844,
7828
-7845,
7828
-7847,
7829
-7844,
7829-7845,
7829
-7846,
7829-
-7847,
7829-7848,
7830-
7845,
7830
-7846,
7830
-7847,
7830
-7848,
7830-7849,
7831
-7846,
7831-
-7847,
7831-7848,
7831-
7849,
7831
-7850,
7832
-7847,
7832
-7848,
7832-7849,
7832
-7850,
7832-
-7851,
7833-7848,
7833-
7849,
7833
-7850,
7833
-7851,
7833
-7852,
7834-7849,
7834
-7850,
7834-
-7851,
7834-7852,
7834-
7853,
7835
-7850,
7835
-7851,
7835
-7852,
7835-7853,
7835
-7854,
7836-
-7851,
7836-7852,
7836-
7853,
7836
-7854,
7836
-7855,
7837
-7852,
7837-7853,
7837
-7854,
7837-
-7855,
7837-7856,
7838-
7853,
7838
-7854,
7838
-7855,
7838
-7856,
7838-7857,
7839
-7854,
7839-
-7855,
7839-7856,
7839-
7857,
7839
-7858,
7840
-7855,
7840
-7856,
7840-7857,
7840
-7858,
7840-
-7859,
7841-7856,
7841-
7857,
7841
-7858,
7841
-7859,
7841
-7860,
7842-7857,
7842
-7858,
7842-
-7859,
7842-7860,
7842-
7861,
7843
-7858,
7843
-7859,
7843
-7860,
7843-7861,
7843
-7862,
7844-
-7859,
7844-7860,
7844-
7861,
7844
-7862,
7845
-7860,
7845
-7861,
7845-7862,
7846
-7861 или 7846-7862 в SEQ Ш NO:
2, и при этом указанный модифицированный олигонуклеотид по меньшей мере на 85 %, 90 %, 95 % или на 100 % комплементарен SEQ ID NO: 2.
4. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 последовательных азотистых оснований, которая на 100 %
комплементарна равной по длине части азотистых оснований 1608-
1627,
1685-1704, 1686-
1705,
1751
-1770,
1769-
-1784,
1871-
-1890,
1872
-1891,
1873
-1892,
1875-
-1890,
1875-1894, 1877-
1892,
1877
-1896,
1878-
-1897,
1879-
-1894,
1879
-1898,
2288
-2307,
2808-
-2827,
2846-2865, 2852-
2871,
2946
-2965,
3773-
-3792,
3819-
-3838,
3825
-3844,
3831
-3850,
3834-
-3853,
3837-3856, 3843-
3862,
4151
-4166,
4151-
-4170,
4153-
-4172,
4159
-4178,
4184
-4203,
4211-
-4230,
4609-4628, 4612-
4631,
4615
-4634,
4621-
-4640,
4642-
-4661,
4648
-4667,
4686
-4705,
4689-
-4708,
4692-4711, 4698-
4717,
4714
-4733,
5270-
-5289,
5295-
-5314,
5296
-5315,
5830
-5849,
5890-
-5909,
5904-5923, 6406-
6425,
6662
-6681,
6674-
-6693,
6954-
-6973,
6960
-6979,
6977
-6996,
6979-
-6998,
6981-7000, 6983-
6998,
6983
-7002,
6984-
-7003,
6985-
-7000,
6985
-7004,
6990
-7009,
7122-
-7141,
7125-7144, 7151-
7170,
7353
-7372,
7362-
-7381,
7683-
-7702,
7688
-7707,
7690
-7709,
7692-
-7707,
7692-7711, 7694-
7709,
7694
-7713,
7696-
-7711,
7696-
-7715,
7767
-7786,
7785
-7804,
7786-
-7801,
7787-7803, 7787-
7805,
7787
-7806,
7788-
-7803,
7788-
-7805,
7788
-7806,
7788
-7807,
7789-
-7806,
7789-7807, 7789-
7808,
7790
-7805,
7790-
-7807,
7790-
-7809,
7791
-7808,
7791
-7809,
7791-
-7810,
7792-7808, 7792-
7809,
7792
-7810,
7792-
-7811,
7793-
-7810,
7793
-7811,
7793
-7812,
7794-
-7811,
7794-7812, 7794-
7813,
7795
-7812,
7795-
-7813,
7795-
-7814,
7796
-7811,
7796
-7813,
7796-
-7814,
7796-7815, 7797-
7812,
7797
-7814,
7797-
-7816,
7798-
-7813,
7798
-7815,
7798
-7817,
7799-
-7816,
7799-7818, 7800-
7819,
7801
-7818,
7801-
-7820,
7802-
-7817,
7802
-7819,
7802
-7821,
7803-
-7818,
7803-7820, 7803-
7822,
7804
-7821,
7804-
-7823,
7805-
-7820,
7805
-7822,
7805
-7824,
7806-
-7821,
7806-7823, 7806-
7825,
7807
-7824,
7807-
-7825,
7807-
-7826,
7808
-7825,
7808
-7827,
7809-
-7825,
7809-7826, 7809-
7828,
7810
-7825,
7810-
-7826,
7810-
-7827,
7810
-7829,
7811
-7828,
7811-
-7830,
7812-7829, 7812-
7830,
7812
-7831,
7813-
-7829,
7813-
-7831,
7813
-7832,
7814
-7833,
7815-
-7831,
7815-7832, 7815-
7833,
7815
-7834,
7816-
-7832,
7816-
-7833,
7816
-7834,
7816
-7835,
7817-
-7833,
7817-7834, 7817-
7835,
7817
-7836,
7818-
-7834,
7818-
-7835,
7818
-7836,
7818
-7837,
7819-
-7835,
7819-7836, 7819-
7837,
7819
-7838,
7820-
-7836,
7820-
-7838,
7820
-7839,
7821
-7836,
7821-
-7837,
7821-7839, 7821-
7840,
7822
-7837,
7822-
-7838,
7822-
-7840,
7822
-7841,
7823
-7838,
7823-
-7839,
7823-7839, 7823-
7840,
7823
-7841,
7823-
-7842,
7824-
-7839,
7824
-7840,
7824
-7840,
7824-
-7841,
7824-7842, 7824-
7843,
7825
-7840,
7825-
-7841,
7825-
-7842,
7825
-7843,
7825
-7844,
7826-
-7842,
7826-7843, 7826-
7844,
7826
-7845,
7827-
-7842,
7827-
-7843,
7827
-7844,
7827
-7845,
7827-
-7846,
7828-7843, 7828-
7844,
7828
-7845,
7828-
-7847,
7829-
-7844,
7829
-7845,
7829
-7846,
7829-
-7847,
7829-7848, 7830-
7845, 7830-7846, 7830-7847, 7830-7848, 7830-7849, 7831-7846, 7831-7847, 7831-7848, 78317849, 7831-7850, 7832-7847, 7832-7848, 7832-7849, 7832-7850, 7832-7851, 7833-7848, 78337849, 7833-7850, 7833-7851, 7833-7852, 7834-7849, 7834-7850, 7834-7851, 7834-7852, 78347853, 7835-7850, 7835-7851, 7835-7852, 7835-7853, 7835-7854, 7836-7851, 7836-7852, 78367853,7836-7854, 7836-7855, 7837-7852, 7837-7853, 7837-7854, 7837-7855, 7837-7856, 78387853, 7838-7854, 7838-7855, 7838-7856, 7838-7857, 7839-7854, 7839-7855, 7839-7856, 78397857, 7839-7858, 7840-7855, 7840-7856, 7840-7857, 7840-7858, 7840-7859, 7841-7856, 78417857, 7841-7858, 7841-7859, 7841-7860, 7842-7857, 7842-7858, 7842-7859, 7842-7860, 78427861, 7843-7858, 7843-7859, 7843-7860, 7843-7861, 7843-7862, 7844-7859, 7844-7860, 78447861, 7844-7862, 7845-7860, 7845-7861, 7845-7862, 7846-7861 и 7846-7862 в SEQ Ш NO: 2, и где последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 85 %, 90 %, 95 % или на 100 % комплементарна SEQ Ш NO: 2.
5. Соединение, содержащее модифицированный нуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид нацелен на 3' НТО нуклеиновой кислоты CFB.
6. Соединение по п. 5, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид нацелен на диапазон нуклеотидов 2574-2626 нуклеиновой кислоты CFB, имеющей последовательность азотистых оснований SEQ Ш NO: 1.
7. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, где модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 последовательных азотистых оснований, которая комплементарна равной по длине части азотистых оснований 2457-2631, 2457-2472, 2457-2474, 2457-2476, 24572566, 2457-2570, 2457-2571, 2457-2572, 2457-2573, 2457-2574, 2457-2575, 2457-2576, 24572577, 2457-2578, 2457-2579, 2457-2580, 2457-2581, 2457-2582, 2457-2583, 2457-2584, 24572585, 2457-2586, 2457-2587, 2457-2588, 2457-2589, 2457-2590, 2457-2591, 2457-2592, 24572593, 2457-2594, 2457-2595, 2457-2596, 2457-2597, 2457-2598, 2457-2599, 2457-2600, 24572601, 2457-2602, 2457-2603, 2457-2604, 2457-2605, 2457-2606, 2457-2607, 2457-2608, 24572609, 2457-2610, 2457-2611, 2457-2612, 2457-2613, 2457-2614, 2457-2615, 2457-2616, 24572617, 2457-2618, 2457-2619, 2457-2620, 2457-2621, 2457-2622, 2457-2623, 2457-2624, 2457-
5.
2625, 2476, 2576, 2584, 2592, 2600, 2608, 2616, 2624, 2476, 2576, 2584, 2592, 2600, 2608, 2616, 2624, 2566, 2577, 2585, 2593, 2601, 2609, 2617, 2625, 2571, 2579, 2587, 2595,
2457-2626 2459-2566 2459-2577 2459-2585 2459-2593 2459-2601 2459-2609 2459-2617 2459-2625 2461-2566 2461-2577 2461-2585 2461-2593 2461-2601 2461-2609 2461-2617 2461-2625 2551-2570 2551-2578 2551-2586 2551-2594 2551-2602 2551-2610 2551-2618 2551-2626 2553-2572 2553-2580 2553-2588 2553-2596 2457-2627 2459-2570 2459-2578 2459-2586 2459-2594 2459-2602 2459-2610 2459-2618 2459-2626 2461-2570 2461-2578 2461-2586 2461-2594 2461-2602 2461-2610 2461-2618 2461-2626 2551-2571 2551-2579 2551-2587 2551-2595 2551-2603 2551-2611 2551-2619 2551-2627 2553-2573 2553-2581 2553-2589 2553-2597 2457-2628 2459-2571 2459-2579 2459-2587 2459-2595 2459-2603 2459-2611 2459-2619 2459-2627 2461-2571 2461-2579 2461-2587 2461-2595 2461-2603 2461-2611 2461-2619 2461-2627 2551-2572 2551-2580 2551-2588 2551-2596 2551-2604 2551-2612 2551-2620 2551-2628 2553-2574 2553-2582 2553-2590 2553-2598 2457-2629 2459-2572 2459-2580 2459-2588 2459-2596 2459-2604 2459-2612 2459-2620 2459-2628 2461-2572 2461-2580 2461-2588 2461-2596 2461-2604 2461-2612 2461-2620 2461-2628 2551-2573 2551-2581 2551-2589 2551-2597 2551-2605 2551-2613 2551-2621 2551-2629 2553-2575 2553-2583 2553-2591 2553-2599 2457-2630 2459-2573 2459-2581 2459-2589 2459-2597 2459-2605 2459-2613 2459-2621 2459-2629 2461-2573 2461-2581 2461-2589 2461-2597 2461-2605 2461-2613 2461-2621 2461-2629 2551-2574 2551-2582 2551-2590 2551-2598 2551-2606 2551-2614 2551-2622 2551-2630 2553-2576 2553-2584 2553-2592 2553-2600 2457-2631 2459-2574 2459-2582 2459-2590 2459-2598 2459-2606 2459-2614 2459-2622 2459-2630 2461-2574 2461-2582 2461-2590 2461-2598 2461-2606 2461-2614 2461-2622 2461-2630 2551-2575 2551-2583 2551-2591 2551-2599 2551-2607 2551-2615 2551-2623 2551-2631 2553-2577 2553-2585 2553-2593 2553-2601 2459-2474 2459-2575 2459-2583 2459-2591 2459-2599 2459-2607 2459-2615 2459-2623 2459-2631 2461-2575 2461-2583 2461-2591 2461-2599 2461-2607 2461-2615 2461-2623 2461-2631 2551-2576 2551-2584 2551-2592 2551-2600 2551-2608 2551-2616 2551-2624 2553-2570 2553-2578 2553-2586 2553-2594 2553-2602
24592459245924592459245924592459246124612461246124612461246124612551255125512551255125512551255125532553255325532553
2603, 2611, 2619, 2627, 2576, 2584, 2592, 2600, 2608, 2616, 2624, 2572, 2580, 2588, 2596, 2604, 2612, 2620, 2628, 2577, 2585, 2593, 2601, 2609, 2617, 2625, 2575, 2583, 2591,
2553-2604 2553-2612 2553-2620
2553- 2628
2554- 2577 2554-2585 2554-2593 2554-2601 2554-2609 2554-2617
2554- 2625
2555- 2573 2555-2581 2555-2589 2555-2597 2555-2605 2555-2613 2555-2621
2555- 2629
2556- 2578 2556-2586 2556-2594 2556-2602 2556-2610 2556-2618
2556- 2626
2557- 2576 2557-2584 2557-2592 2553-2605 2553-2613 2553-2621
2558- 2629
2559- 2578 2554-2586 2554-2594 2554-2602 2554-2610 2554-2618
2554- 2626
2555- 2574 2555-2582 2555-2590 2555-2598 2555-2606 2555-2614 2555-2622
2555- 2630
2556- 2579 2556-2587 2556-2595 2556-2603 2556-2611 2556-2619
2556- 2627
2557- 2577 2557-2585 2557-2593 2553-2606 2553-2614 2553-2622
2558- 2630
2559- 2579 2554-2587 2554-2595 2554-2603 2554-2611 2554-2619
2554- 2627
2555- 2575 2555-2583 2555-2591 2555-2599 2555-2607 2555-2615 2555-2623
2555- 2631
2556- 2580 2556-2588 2556-2596 2556-2604 2556-2612 2556-2620
2556- 2628
2557- 2578 2557-2586 2557-2594 2553-2607 2553-2615 2553-2623
2558- 2631
2559- 2580 2554-2588 2554-2596 2554-2604 2554-2612 2554-2620
2554- 2628
2555- 2576 2555-2584 2555-2592 2555-2600 2555-2608 2555-2616
2555- 2624
2556- 2573 2556-2581 2556-2589 2556-2597 2556-2605 2556-2613 2556-2621
2556- 2629
2557- 2579 2557-2587 2557-2595 2553-2608 2553-2616
2558- 2624
2559- 2573 2554-2581 2554-2589 2554-2597 2554-2605 2554-2613 2554-2621
2554- 2629
2555- 2577 2555-2585 2555-2593 2555-2601 2555-2609 2555-2617
2555- 2625
2556- 2574 2556-2582 2556-2590 2556-2598 2556-2606 2556-2614 2556-2622
2556- 2630
2557- 2580 2557-2588 2557-2596 2553-2609 2553-2617
2558- 2625
2559- 2574 2554-2582 2554-2590 2554-2598 2554-2606 2554-2614 2554-2622
2554- 2630
2555- 2578 2555-2586 2555-2594 2555-2602 2555-2610 2555-2618
2555- 2626
2556- 2575 2556-2583 2556-2591 2556-2599 2556-2607 2556-2615 2556-2623
2556- 2631
2557- 2581 2557-2589 2557-2597 2553-2610 2553-2618
2558- 2626
2559- 2575 2554-2583 2554-2591 2554-2599 2554-2607 2554-2615 2554-2623
2554- 2631
2555- 2579 2555-2587 2555-2595 2555-2603 2555-2611 2555-2619
2555- 2627
2556- 2576 2556-2584 2556-2592 2556-2600 2556-2608 2556-2616
2556- 2624
2557- 2574 2557-2582 2557-2590 2557-2598
25532553255325542554255425542554255425542555255525552555255525552555255525562556255625562556255625562557255725572557
2599, 2607, 2615, 2623, 2631, 2582, 2590, 2598, 2606, 2614, 2622, 2630, 2582, 2590, 2598, 2606, 2614, 2622, 2630, 2583, 2591, 2599, 2607, 2615, 2623, 2631, 2585, 2593, 2601,
2557-2600 2557-2608 2557-2616
2557- 2624
2558- 2575 2558-2583 2558-2591 2558-2599 2558-2607 2558-2615 2558-2623
2558- 2631
2559- 2583 2559-2591 2559-2599 2559-2607 2559-2615 2559-2623
2559- 2631
2560- 2584 2560-2592 2560-2600 2560-2608 2560-2616
2560- 2624
2561- 2578 2561-2586 2561-2594 2561-2602 2557-2601 2557-2609 2557-2617
2562- 2625
2563- 2576 2558-2584 2558-2592 2558-2600 2558-2608 2558-2616
2558- 2624
2559- 2576 2559-2584 2559-2592 2559-2600 2559-2608 2559-2616
2559- 2624
2560- 2577 2560-2585 2560-2593 2560-2601 2560-2609 2560-2617
2560- 2625
2561- 2579 2561-2587 2561-2595 2561-2603 2557-2602 2557-2610 2557-2618
2562- 2626
2563- 2577 2558-2585 2558-2593 2558-2601 2558-2609 2558-2617
2558- 2625
2559- 2577 2559-2585 2559-2593 2559-2601 2559-2609 2559-2617
2559- 2625
2560- 2578 2560-2586 2560-2594 2560-2602 2560-2610 2560-2618
2560- 2626
2561- 2580 2561-2588 2561-2596 2561-2604 2557-2603 2557-2611 2557-2619
2562- 2627
2563- 2578 2558-2586 2558-2594 2558-2602 2558-2610 2558-2618
2558- 2626
2559- 2578 2559-2586 2559-2594 2559-2602 2559-2610 2559-2618
2559- 2626
2560- 2579 2560-2587 2560-2595 2560-2603 2560-2611 2560-2619
2560- 2627
2561- 2581 2561-2589 2561-2597 2561-2605 2557-2604 2557-2612 2557-2620
2562- 2628
2563- 2579 2558-2587 2558-2595 2558-2603 2558-2611 2558-2619
2558- 2627
2559- 2579 2559-2587 2559-2595 2559-2603 2559-2611 2559-2619
2559- 2627
2560- 2580 2560-2588 2560-2596 2560-2604 2560-2612 2560-2620
2560- 2628
2561- 2582 2561-2590 2561-2598 2561-2606 2557-2605 2557-2613 2557-2621
2562- 2629
2563- 2580 2558-2588 2558-2596 2558-2604 2558-2612 2558-2620
2558- 2628
2559- 2580 2559-2588 2559-2596 2559-2604 2559-2612 2559-2620
2559- 2628
2560- 2581 2560-2589 2560-2597 2560-2605 2560-2613 2560-2621
2560- 2629
2561- 2583 2561-2591 2561-2599 2561-2607 2557-2606 2557-2614 2557-2622
2562- 2630
2563- 2581 2558-2589 2558-2597 2558-2605 2558-2613 2558-2621
2558- 2629
2559- 2581 2559-2589 2559-2597 2559-2605 2559-2613 2559-2621
2559- 2629
2560- 2582 2560-2590 2560-2598 2560-2606 2560-2614 2560-2622
2560- 2630
2561- 2584 2561-2592 2561-2600 2561-2608
25572557255725572558255825582558255825582558255925592559255925592559255925602560256025602560256025602561256125612561
2609, 2617, 2625, 2578, 2586, 2594, 2602, 2610, 2618, 2626, 2582, 2590, 2598, 2606, 2614, 2622, 2630, 2587, 2595, 2603, 2611, 2619, 2627, 2587, 2595, 2603, 2611, 2619, 2627,
2561-2610 2561-2618
2561- 2626
2562- 2579 2562-2587 2562-2595 2562-2603 2562-2611 2562-2619
2562- 2627
2563- 2583 2563-2591 2563-2599 2563-2607 2563-2615 2563-2623
2563- 2631
2564- 2588 2564-2596 2564-2604 2564-2612 2564-2620
2564- 2628
2565- 2588 2565-2596 2565-2604 2565-2612 2565-2620 2565-2628 2561-2611 2561-2619
2566- 2627
2567- 2580 2562-2588 2562-2596 2562-2604 2562-2612 2562-2620
2562- 2628
2563- 2584 2563-2592 2563-2600 2563-2608 2563-2616
2563- 2624
2564- 2581 2564-2589 2564-2597 2564-2605 2564-2613 2564-2621
2564- 2629
2565- 2589 2565-2597 2565-2605 2565-2613 2565-2621 2565-2629 2561-2612 2561-2620
2566- 2628
2567- 2581 2562-2589 2562-2597 2562-2605 2562-2613 2562-2621
2562- 2629
2563- 2585 2563-2593 2563-2601 2563-2609 2563-2617
2563- 2625
2564- 2582 2564-2590 2564-2598 2564-2606 2564-2614 2564-2622
2564- 2630
2565- 2590 2565-2598 2565-2606 2565-2614 2565-2622 2565-2630 2561-2613 2561-2621
2566- 2629
2567- 2582 2562-2590 2562-2598 2562-2606 2562-2614 2562-2622
2562- 2630
2563- 2586 2563-2594 2563-2602 2563-2610 2563-2618
2563- 2626
2564- 2583 2564-2591 2564-2599 2564-2607 2564-2615 2564-2623
2564- 2631
2565- 2591 2565-2599 2565-2607 2565-2615 2565-2623 2565-2631 2561-2614 2561-2622
2566- 2630
2567- 2583 2562-2591 2562-2599 2562-2607 2562-2615 2562-2623
2562- 2631
2563- 2587 2563-2595 2563-2603 2563-2611 2563-2619
2563- 2627
2564- 2584 2564-2592 2564-2600 2564-2608 2564-2616
2564- 2624
2565- 2584 2565-2592 2565-2600 2565-2608 2565-2616
2565- 2624
2566- 2583 2561-2615 2561-2623
2567- 2631
2568- 2584 2562-2592 2562-2600 2562-2608 2562-2616
2562- 2624
2563- 2580 2563-2588 2563-2596 2563-2604 2563-2612 2563-2620
2563- 2628
2564- 2585 2564-2593 2564-2601 2564-2609 2564-2617
2564- 2625
2565- 2585 2565-2593 2565-2601 2565-2609 2565-2617
2565- 2625
2566- 2584 2561-2616
2567- 2624
2568- 2577 2562-2585 2562-2593 2562-2601 2562-2609 2562-2617
2562- 2625
2563- 2581 2563-2589 2563-2597 2563-2605 2563-2613 2563-2621
2563- 2629
2564- 2586 2564-2594 2564-2602 2564-2610 2564-2618
2564- 2626
2565- 2586 2565-2594 2565-2602 2565-2610 2565-2618
2565- 2626
2566- 2585
25612561256225622562256225622562256225632563256325632563256325632564256425642564256425642565256525652565256525652566
2586, 2594, 2602, 2610, 2618, 2626, 2586, 2594, 2602, 2610, 2618, 2626, 2587, 2595, 2603, 2611, 2619, 2627, 2589, 2597, 2605, 2613, 2621, 2629, 2591, 2599, 2607, 2615, 2623,
2566-2587 2566-2595 2566-2603 2566-2611 2566-2619
2566- 2627
2567- 2587 2567-2595 2567-2603 2567-2611 2567-2619
2567- 2627
2568- 2588 2568-2596 2568-2604 2568-2612 2568-2620
2568- 2628
2569- 2590 2569-2598 2569-2606 2569-2614 2569-2622 2569-2630 2569-2592 2569-2600 2569-2608 2569-2616 2569-2624 2566-2588 2566-2596 2566-2604 2566-2612 2566-2620
2570- 2628
2571- 2588 2567-2596 2567-2604 2567-2612 2567-2620
2567- 2628
2568- 2589 2568-2597 2568-2605 2568-2613 2568-2621
2568- 2629
2569- 2591 2569-2599 2569-2607 2569-2615 2569-2623 2569-2631 2569-2593 2569-2601 2569-2609 2569-2617 2569-2625 2566-2589 2566-2597 2566-2605 2566-2613 2566-2621
2570- 2629
2571- 2589 2567-2597 2567-2605 2567-2613 2567-2621
2567- 2629
2568- 2590 2568-2598 2568-2606 2568-2614 2568-2622
2568- 2630
2569- 2592 2569-2600 2569-2608 2569-2616 2569-2624 2569-2586 2569-2594 2569-2602 2569-2610 2569-2618 2569-2626 2566-2590 2566-2598 2566-2606 2566-2614 2566-2622
2570- 2630
2571- 2590 2567-2598 2567-2606 2567-2614 2567-2622
2567- 2630
2568- 2591 2568-2599 2568-2607 2568-2615 2568-2623
2568- 2631
2569- 2593 2569-2601 2569-2609 2569-2617 2569-2625 2569-2587 2569-2595 2569-2603 2569-2611 2569-2619 2569-2627 2566-2591 2566-2599 2566-2607 2566-2615 2566-2623
2570- 2631
2571- 2591 2567-2599 2567-2607 2567-2615 2567-2623
2567- 2631
2568- 2592 2568-2600 2568-2608 2568-2616
2568- 2624
2569- 2586 2569-2594 2569-2602 2569-2610 2569-2618 2569-2626 2569-2588 2569-2596 2569-2604 2569-2612 2569-2620 2569-2628 2566-2592 2566-2600 2566-2608 2566-2616
2570- 2624
2571- 2584 2567-2592 2567-2600 2567-2608 2567-2616
2567- 2624
2568- 2585 2568-2593 2568-2601 2568-2609 2568-2617
2568- 2625
2569- 2587 2569-2595 2569-2603 2569-2611 2569-2619 2569-2627 2569-2589 2569-2597 2569-2605 2569-2613 2569-2621 2569-2629 2566-2593 2566-2601 2566-2609 2566-2617
2570- 2625
2571- 2585 2567-2593 2567-2601 2567-2609 2567-2617
2567- 2625
2568- 2586 2568-2594 2568-2602 2568-2610 2568-2618
2568- 2626
2569- 2588 2569-2596 2569-2604 2569-2612 2569-2620 2569-2628 2569-2590 2569-2598 2569-2606 2569-2614 2569-2622 2569-2630
25662566256625662566256725672567256725672567256825682568256825682568256925692569256925692569256925692569256925692569
2631, 2595, 2603, 2611, 2619, 2627, 2592, 2600, 2608, 2616, 2624, 2590, 2598, 2606, 2614, 2622, 2630, 2597, 2605, 2613, 2621, 2629, 2597, 2605, 2613, 2621, 2629, 2598, 2606,
2571-2588 2571-2596 2571-2604 2571-2612 2571-2620
2571- 2628
2572- 2593 2572-2601 2572-2609 2572-2617
2572- 2625
2573- 2591 2573-2599 2573-2607 2573-2615 2573-2623
2573- 2631
2574- 2598 2574-2606 2574-2614 2574-2622
2574- 2630
2575- 2598 2575-2606 2575-2614 2575-2622
2575- 2630
2576- 2599 2576-2607 2571-2589 2571-2597 2571-2605 2571-2613 2571-2621
2577- 2629
2578- 2594 2572-2602 2572-2610 2572-2618
2572- 2626
2573- 2592 2573-2600 2573-2608 2573-2616
2573- 2624
2574- 2591 2574-2599 2574-2607 2574-2615 2574-2623
2574- 2631
2575- 2599 2575-2607 2575-2615 2575-2623
2575- 2631
2576- 2600 2576-2608 2571-2590 2571-2598 2571-2606 2571-2614 2571-2622
2577- 2630
2578- 2595 2572-2603 2572-2611 2572-2619
2572- 2627
2573- 2593 2573-2601 2573-2609 2573-2617
2573- 2625
2574- 2592 2574-2600 2574-2608 2574-2616
2574- 2624
2575- 2592 2575-2600 2575-2608 2575-2616
2575- 2624
2576- 2593 2576-2601 2576-2609 2571-2591 2571-2599 2571-2607 2571-2615 2571-2623
2577- 2631
2578- 2596 2572-2604 2572-2612 2572-2620
2572- 2628
2573- 2594 2573-2602 2573-2610 2573-2618
2573- 2626
2574- 2593 2574-2601 2574-2609 2574-2617
2574- 2625
2575- 2593 2575-2601 2575-2609 2575-2617
2575- 2625
2576- 2594 2576-2602 2576-2610 2571-2592 2571-2600 2571-2608 2571-2616
2577- 2624
2578- 2589 2572-2597 2572-2605 2572-2613 2572-2621
2572- 2629
2573- 2595 2573-2603 2573-2611 2573-2619
2573- 2627
2574- 2594 2574-2602 2574-2610 2574-2618
2574- 2626
2575- 2594 2575-2602 2575-2610 2575-2618
2575- 2626
2576- 2595 2576-2603 2576-2611 2571-2593 2571-2601 2571-2609 2571-2617
2577- 2625
2578- 2590 2572-2598 2572-2606 2572-2614 2572-2622
2572- 2630
2573- 2596 2573-2604 2573-2612 2573-2620
2573- 2628
2574- 2595 2574-2603 2574-2611 2574-2619
2574- 2627
2575- 2595 2575-2603 2575-2611 2575-2619
2575- 2627
2576- 2596 2576-2604 2576-2612 2571-2594 2571-2602 2571-2610 2571-2618
2577- 2626
2578- 2591 2572-2599 2572-2607 2572-2615 2572-2623
2572- 2631
2573- 2597 2573-2605 2573-2613 2573-2621
2573- 2629
2574- 2596 2574-2604 2574-2612 2574-2620
2574- 2628
2575- 2596 2575-2604 2575-2612 2575-2620
2575- 2628
2576- 2597 2576-2605 2576-2613
25712571257125712571257225722572257225722573257325732573257325732574257425742574257425752575257525752575257625762576
2614, 2622, 2630, 2600, 2608, 2616, 2624, 2597, 2605, 2613, 2621, 2629, 2603, 2611, 2619, 2627, 2601, 2609, 2617, 2625, 2598, 2606, 2614, 2622, 2630, 2606, 2614, 2622, 2630,
2576-2615 2576-2623
2576- 2631
2577- 2601 2577-2609 2577-2617
2577- 2625
2578- 2598 2578-2606 2578-2614 2578-2622
2578- 2630
2579- 2604 2579-2612 2579-2620
2579- 2628
2580- 2602 2580-2610 2580-2618
2580- 2626
2581- 2599 2581-2607 2581-2615 2581-2623
2581- 2631
2582- 2607 2582-2615 2582-2623 2582-2631 2576-2616
2583- 2624
2584- 2594 2577-2602 2577-2610 2577-2618
2577- 2626
2578- 2599 2578-2607 2578-2615 2578-2623
2578- 2631
2579- 2605 2579-2613 2579-2621
2579- 2629
2580- 2603 2580-2611 2580-2619
2580- 2627
2581- 2600 2581-2608 2581-2616
2581- 2624
2582- 2600 2582-2608 2582-2616
2582- 2624
2583- 2601 2576-2617
2584- 2625
2585- 2595 2577-2603 2577-2611 2577-2619
2577- 2627
2578- 2600 2578-2608 2578-2616
2578- 2624
2579- 2598 2579-2606 2579-2614 2579-2622
2579- 2630
2580- 2604 2580-2612 2580-2620
2580- 2628
2581- 2601 2581-2609 2581-2617
2581- 2625
2582- 2601 2582-2609 2582-2617
2582- 2625
2583- 2602 2576-2618
2584- 2626
2585- 2596 2577-2604 2577-2612 2577-2620
2577- 2628
2578- 2601 2578-2609 2578-2617
2578- 2625
2579- 2599 2579-2607 2579-2615 2579-2623
2579- 2631
2580- 2605 2580-2613 2580-2621
2580- 2629
2581- 2602 2581-2610 2581-2618
2581- 2626
2582- 2602 2582-2610 2582-2618
2582- 2626
2583- 2603 2576-2619
2584- 2627
2585- 2597 2577-2605 2577-2613 2577-2621
2577- 2629
2578- 2602 2578-2610 2578-2618
2578- 2626
2579- 2600 2579-2608 2579-2616
2579- 2624
2580- 2598 2580-2606 2580-2614 2580-2622
2580- 2630
2581- 2603 2581-2611 2581-2619
2581- 2627
2582- 2603 2582-2611 2582-2619
2582- 2627
2583- 2604 2576-2620
2584- 2628
2585- 2598 2577-2606 2577-2614 2577-2622
2577- 2630
2578- 2603 2578-2611 2578-2619
2578- 2627
2579- 2601 2579-2609 2579-2617
2579- 2625
2580- 2599 2580-2607 2580-2615 2580-2623
2580- 2631
2581- 2604 2581-2612 2581-2620
2581- 2628
2582- 2604 2582-2612 2582-2620
2582- 2628
2583- 2605 2576-2621
2584- 2629
2585- 2599 2577-2607 2577-2615 2577-2623
2577- 2631
2578- 2604 2578-2612 2578-2620
2578- 2628
2579- 2602 2579-2610 2579-2618
2579- 2626
2580- 2600 2580-2608 2580-2616
2580- 2624
2581- 2597 2581-2605 2581-2613 2581-2621
2581- 2629
2582- 2605 2582-2613 2582-2621
2582- 2629
2583- 2606
25762576257725772577257725782578257825782578257925792579257925802580258025802581258125812581258125822582258225822583
2607, 2615, 2623, 2631, 2610, 2618, 2626, 2606, 2614, 2622, 2630, 2611, 2619, 2627, 2609, 2617, 2625, 2608, 2616, 2624, 2606, 2614, 2622, 2630, 2616, 2624, 2611, 2619, 2627,
2583-2608 2583-2616 2583-2624 2585-2603 2585-2611 2585-2619
2585- 2627
2586- 2607 2586-2615 2586-2623
2586- 2631
2587- 2612 2587-2620
2587- 2628
2588- 2610 2588-2618
2588- 2626
2589- 2609 2589-2617
2589- 2625
2590- 2607 2590-2615 2590-2623
2590- 2631
2591- 2617
2591- 2625
2592- 2612 2592-2620 2592-2628 2583-2609 2583-2617 2583-2625 2585-2604 2585-2612 2585-2620
2593- 2628
2594- 2608 2586-2616
2586- 2624
2587- 2605 2587-2613 2587-2621
2587- 2629
2588- 2611 2588-2619
2588- 2627
2589- 2610 2589-2618
2589- 2626
2590- 2608 2590-2616
2590- 2624
2591- 2610 2591-2618
2591- 2626
2592- 2613 2592-2621 2592-2629 2583-2610 2583-2618 2583-2626 2585-2605 2585-2613 2585-2621
2593- 2629
2594- 2609 2586-2617
2586- 2625
2587- 2606 2587-2614 2587-2622
2587- 2630
2588- 2612 2588-2620
2588- 2628
2589- 2611 2589-2619
2589- 2627
2590- 2609 2590-2617
2590- 2625
2591- 2611 2591-2619
2591- 2627
2592- 2614 2592-2622 2592-2630 2583-2611 2583-2619 2583-2627 2585-2606 2585-2614 2585-2622
2593- 2630
2594- 2610 2586-2618
2586- 2626
2587- 2607 2587-2615 2587-2623
2587- 2631
2588- 2613 2588-2621
2588- 2629
2589- 2612 2589-2620
2589- 2628
2590- 2610 2590-2618
2590- 2626
2591- 2612 2591-2620
2591- 2628
2592- 2615 2592-2623 2592-2631 2583-2612 2583-2620 2583-2628 2585-2607 2585-2615 2585-2623
2593- 2631
2594- 2611 2586-2619
2586- 2627
2587- 2608 2587-2616
2587- 2624
2588- 2606 2588-2614 2588-2622
2588- 2630
2589- 2613 2589-2621
2589- 2629
2590- 2611 2590-2619
2590- 2627
2591- 2613 2591-2621
2591- 2629
2592- 2616
2592- 2624
2593- 2608 2583-2613 2583-2621 2583-2629 2585-2608 2585-2616
2594- 2624
2595- 2604 2586-2612 2586-2620
2586- 2628
2587- 2609 2587-2617
2587- 2625
2588- 2607 2588-2615 2588-2623
2588- 2631
2589- 2614 2589-2622
2589- 2630
2590- 2612 2590-2620
2590- 2628
2591- 2614 2591-2622
2591- 2630
2592- 2617
2592- 2625
2593- 2612 2583-2614 2583-2622 2583-2630 2585-2609 2585-2617
2594- 2625
2595- 2605 2586-2613 2586-2621
2586- 2629
2587- 2610 2587-2618
2587- 2626
2588- 2608 2588-2616
2588- 2624
2589- 2607 2589-2615 2589-2623
2589- 2631
2590- 2613 2590-2621
2590- 2629
2591- 2615 2591-2623
2591- 2631
2592- 2618
2592- 2626
2593- 2613
25832583258325852585258525862586258625862587258725872588258825882589258925892590259025902590259125912592259225922593
2614, 2622, 2630, 2618, 2626, 2613, 2621, 2629, 2619, 2627, 2615, 2623, 2631, 2620, 2628, 2618, 2626, 2617, 2625, 2617, 2625, 2619, 2627, 2623, 2631, 2626, 2622, 2630, 2627,
2593-2615 2593-2623
2593- 2631
2594- 2619
2594- 2627
2595- 2614 2595-2622
2595- 2630
2596- 2620
2596- 2628
2597- 2616
2597- 2624
2598- 2613 2598-2621
2598- 2629
2599- 2619
2599- 2627
2600- 2618
2600- 2626
2601- 2618
2601- 2626
2602- 2620
2602- 2628
2603- 2624
2604- 2619
2604- 2627
2605- 2623
2605- 2631
2606- 2628 2593-2616
2607- 2624
2608- 2612 2594-2620
2594- 2628
2595- 2615 2595-2623
2595- 2631
2596- 2621
2596- 2629
2597- 2617
2597- 2625
2598- 2614 2598-2622
2598- 2630
2599- 2620
2599- 2628
2600- 2619
2600- 2627
2601- 2619
2601- 2627
2602- 2621
2602- 2629
2603- 2625
2604- 2620
2604- 2628
2605- 2624
2606- 2621 2606-2629 2593-2617
2607- 2625
2608- 2613 2594-2621
2594- 2629
2595- 2616
2595- 2624
2596- 2614 2596-2622
2596- 2630
2597- 2618
2597- 2626
2598- 2615 2598-2623
2598- 2631
2599- 2621
2599- 2629
2600- 2620
2600- 2628
2601- 2620
2601- 2628
2602- 2622
2602- 2630
2603- 2626
2604- 2621
2604- 2629
2605- 2625
2606- 2622 2606-2630 2593-2618
2607- 2626
2608- 2614 2594-2622
2594- 2630
2595- 2617
2595- 2625
2596- 2615 2596-2623
2596- 2631
2597- 2619
2597- 2627
2598- 2616
2598- 2624
2599- 2614 2599-2622
2599- 2630
2600- 2621
2600- 2629
2601- 2621
2601- 2629
2602- 2623
2602- 2631
2603- 2627
2604- 2622
2604- 2630
2605- 2626
2606- 2623 2606-2631 2593-2619
2607- 2627
2608- 2615 2594-2623
2594- 2631
2595- 2618
2595- 2626
2596- 2616
2596- 2624
2597- 2612 2597-2620
2597- 2628
2598- 2617
2598- 2625
2599- 2615 2599-2623
2599- 2631
2600- 2622
2600- 2630
2601- 2622
2601- 2630
2602- 2624
2603- 2620
2603- 2628
2604- 2623
2604- 2631
2605- 2627
2606- 2624
2607- 2622 2593-2620
2608- 2628
2609- 2616
2594- 2624
2595- 2611 2595-2619
2595- 2627
2596- 2617
2596- 2625
2597- 2613 2597-2621
2597- 2629
2598- 2618
2598- 2626
2599- 2616
2599- 2624
2600- 2615 2600-2623
2600- 2631
2601- 2623
2601- 2631
2602- 2625
2603- 2621
2603- 2629
2604- 2624
2605- 2620
2605- 2628
2606- 2625
2607- 2623 2593-2621
2608- 2629
2609- 2617
2594- 2625
2595- 2612 2595-2620
2595- 2628
2596- 2618
2596- 2626
2597- 2614 2597-2622
2597- 2630
2598- 2619
2598- 2627
2599- 2617
2599- 2625
2600- 2616
2600- 2624
2601- 2616
2601- 2624
2602- 2618
2602- 2626
2603- 2622
2603- 2630
2604- 2625
2605- 2621
2605- 2629
2606- 2626
2607- 2624
25932593259425942595259525952596259625972597259725982598259925992600260026012601260226022603260326042605260526062607-
2625, 2607-2626, 2607-2627, 2607-2628, 2607-2629, 2607-2630, 2607-2631, 2608-2623, 26082624, 2608-2625, 2608-2626, 2608-2627, 2608-2628, 2608-2629, 2608-2630, 2608-2631, 26092624, 2609-2625, 2609-2626, 2609-2627, 2609-2628, 2609-2629, 2609-2630, 2609-2631, 26102625, 2610-2626, 2610-2627, 2610-2628, 2610-2629, 2610-2630, 2610-2631, 2611-2626, 26112627, 2611-2628, 2611-2629, 2611-2630, 2611-2631, 2612-2627, 2612-2628, 2612-2629, 26122630, 2612-2631, 2613-2628, 2613-2629, 2613-2630, 2613-2631, 2614-2629, 2614-2630, 26142631, 2615-2630, 2615-2631 или 2616-2631 нуклеиновой кислоты CFB, имеющей последовательность азотистых оснований SEQ Ш NO: 1, и где последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна SEQ Ш NO: 1.
8. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, комплементарных в диапазоне нуклеотидов 2193-2212, 2195-2210, 2457-2476, 2571-2590, 2584-2603, 2588-2607, 2592-2611, 2594-2613, 2597-2616, 2600-2619 или 25962611 SEQ ID NO: 1.
9. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 8-80 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598.
10. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453,455, 549 и 598.
11. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ ГО NO: 6-808.
12. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных
8.
нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 9 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ ID NO: 6-808.
13. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ ID NO: 6-808.
14. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 11 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ ГО NO: 6-808.
15. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 12 смежных азотистых оснований любой из последовательностей азотистых оснований SEQ ГО NO: 6-808.
16. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность азотистых оснований, содержащую последовательность азотистых оснований любой из SEQ ГО NO: 6-808.
17. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из последовательности азотистых оснований любой из SEQ ГО NO: 6-808.
18. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность азотистых оснований, содержащую часть из по меньшей мере 8 азотистых оснований любой из SEQ ГО NO: 84, 238, 239, 317, 412, 413, 420, 421, 426, 434, 436, 437, 438, 439, 440, 442,
13.
443, 444, 445, 446, 448, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 464, 465, 472, 473, 514, 515, 542, 543, 544, 545, 546, 551, 553, 555, 556, 599, 600, 601, 602, 610, 616, 617, 618, 662, 666, 670, 676, 677, 678, 688, 689, 713, 723, 729, 730, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 755, 756, 768, 783, 793, 833 и 867.
19. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, содержащую любую из SEQ ID NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453, 455, 549 и 598, причем модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов;
сегмент 5'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов; и
сегмент 3' -крыла, состоящий из связанных нуклеозидов; при этом сегмент гэп расположен между сегментом 5' -крыла и сегментом 3' -крыла и, при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар.
20. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из последовательности, указанной в SEQ ГО NO: 198, 228, 237, 440, 444, 448, 450, 453 или 455, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и сегмент 3' -крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; при этом каждый сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла, причем каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-0-метоксиэтильный сахар; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь, и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
21. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных
21.
нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из последовательности, указанной в SEQ Ш N0: 598, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов;
сегмент 5' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов; и
сегмент 3' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов;
при этом сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла; где сегмент 5'-крыла содержит 2'-0-метоксиэтильный сахар, 2'-0-метоксиэтильный сахар и cEt сахар в направлении от 5' к 3'; где сегмент З'-крыла содержит cEt сахар, cEt сахар и 2'-0-метоксиэтильный сахар в направлении от 5' к 3'; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь; и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
22. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и группу конъюгата, причем модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из последовательности, указанной в SEQ Ш N0: 549, где модифицированный олигонуклеотид содержит
сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов; и сегмент 3' -крыла, состоящий из трех связанных нуклеозидов;
при этом сегмент гэп расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом З'-крыла; причем каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит cEt сахар; где каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь; и где каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
23. Соединение по любому из пп. 1-22, отличающееся тем, что олигонуклеотид по меньшей мере на 80 %, 85 %, 90 %, 95 % или на 100 % комплементарен SEQ Ш NO: 1 или 2.
24. Соединение по любому из пп. 1-23, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную
25. Соединение по п. 24, отличающееся тем, что модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.
26. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.
27. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 2 фосфодиэфирные межнуклеозидные связи.
28. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 3 фосфодиэфирные межнуклеозидные связи.
29. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 4 фосфодиэфирные межнуклеозидные связи.
30. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 5 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.
31. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 6 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.
32. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 7 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.
33. Соединение по любому из пп. 26-32, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфирной межнуклеозидной связи и тиофосфатной межнуклеозидной связи.
34. Соединение по п. 25, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида содержит тиофосфатную межнуклеозидную связь.
35. Соединение по любому из пп. 24-34, отличающееся тем, что модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар.
36. Соединение по п. 35, отличающееся тем, что бициклический сахар выбран из группы, состоящей из: 4'-(СН2)-0-2' (LNA); 4'-(СН2)2-0-2' (ENA); и 4*-СН(СНз)-0-2* (cEt).
34.
37. Соединение по любому из пп. 24-37, отличающееся тем, что модифицированное азотистое основание представляет собой 5-метилцитозин.
38. Соединение по любому из пп. 1-38, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит:
(a) сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов;
(b) сегмент 5'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов; и
(c) сегмент З'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов;
причем сегмент гэп расположен непосредственно рядом и между сегментом 5' крыла и сегментом 3' крыла, и при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар.
40. Соединение по любому из пп. 1-39, отличающееся тем, что соединение является одноцепочечным.
41. Соединение по любому из пп. 1-39, отличающееся тем, что соединение является двухцепочечным.
42. Соединение по любому из пп. 1-41, отличающееся тем, что соединение содержит рибонуклеотиды.
43. Соединение по любому из пп. 1-41, отличающееся тем, что соединение содержит дезоксирибонуклеотиды.
44. Соединение по любому из пп. 1-43, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 10-30 связанных нуклеозидов.
45. Соединение по любому из пп. 1-43, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 12-30 связанных нуклеозидов.
46. Соединение по любому из пп. 1-43, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 15-30 связанных нуклеозидов.
47. Соединение, состоящее из ISIS 532770, ISIS 532800, ISIS 532809, ISIS 588540, ISIS 588544, ISIS 588548, ISIS 588550, ISIS 588553, ISIS 588555, ISIS 588848 или ISIS 594430 и группы конъюгата.
48. Соединение по любому из пп. 1-47, отличающееся тем, что группа конъюгата связана с модифицированным олигонуклеотидом на 5' конце модифицированного олигонуклеотида.
49. Соединение по любому из пп. 1-47, отличающееся тем, что группа конъюгата связана с модифицированным олигонуклеотидом на 3' конце модифицированного олигонуклеотида.
50. Соединение по любому из пп. 1-49, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит только один лиганд.
51. Соединение по любому из пп. 1-49, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит только два лиганда.
52. Соединение по любому из пп. 1-49, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит три или более лигандов.
53. Соединение по любому из пп. 1-49, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит только три лиганда.
54. Соединение по любому из пп. 50-53, отличающееся тем, что каждый лиганд выбран из следующих лигандов: полисахарид, модифицированный полисахарид, манноза, галактоза, производное маннозы, производное галактозы, D-маннопираноза, L-маннопираноза, D-арабиноза, L-галактоза, D-ксилофураноза, L-ксилофураноза, D-глюкоза, L-глюкоза, D-галактоза, L-галактоза, a-D-маннофураноза, P-D-маннофураноза, а-D-маннопираноза, P-D-маннопираноза, a-D-глюкопираноза, P-D-глюкопираноза, a-D-глюкофураноза, P-D-глюкофураноза, a-D-фруктофураноза, a-D-фруктопираноза, a-D-галактопираноза, Р -D-галактопираноза, a-D-галактофураноза, Р -D-галактофураноза, глюкозамин, сиаловая кислота, a-D-галактозамин, N-ацетилгалактозамин, 2-амино-З-О-[(7?)-1-карбоксиэтил]-2-дезокси-Р-0-глюкопираноза, 2-дезокси-2-метиламино-Ь-глюкопираноза, 4,6-дидезокси-4-формамидо-2,3-ди-0-метил-Б-маннопираноза, 2-дезокси-2-сульфамино-0-глюкопираноза, iV-гликолоил-а-нейраминовая кислота, 5-THO-P-D-глюкопираноза, метил-2,3,4-три-0-ацетил-1-тио-6-0-тритил-а-В-глюкопиранозид, 4-тио-P-D-галктопираноза, этил-3,4,6,7-тетра-0-ацетил-2-дезокси-1,5-дитио-а-О-гл/о ко-
48.
55. Соединение по п. 54, отличающееся тем, что каждый лиганд представляет собой N-ацетилгалактозамин.
56. Соединение по любому из пп. 1-55, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
но он
AcHN Т tl
NH N-(CH2)6-0-^ Н
О ^NV^ О О HQ ОН^ ^ ^/^N-^Q
\U\P^ О О О'
но-^> т
NHAc HN^N- .-0
Н °
ОН ^
ОН г- О
"но-
NHAc
57. Соединение по любому из пп. 1-55, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
AcHN \-
норн но
AcHN -0
но9н 9 ^ о о
но ¦
AcHN О Н09н
но'
н н 4
AcHN
58. Соединение по любому из пп. 1-55, отличающееся тем, что группа конъюгата
содержит:
норн
AcHN V
но9н о ^
, , ,J, J п Н
AcHN
59. Соединение по любому из пп. 1-55, отличающееся тем, что группа конъюгата
содержит:
60. Соединение по любому из пп. 1-55, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
ноон с
AcHN °
O=P-OH
норн
?он г-г
AcHN °
о=р-он
норн
AcHN *
61. Соединение по любому из пп. 49-60, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит по меньшей мере одну фосфорную связывающую группу или нейтральную связывающую группу.
62. Соединение по любому из пп. 1-61, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит структуру, выбранную из:
где L представляет собой либо фосфорную линкерную группу, либо нейтральную линкерную группу; Zi представляет собой C(=0)0-R2;
Ъг представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; R2 представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; и
каждый mi независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один пи
больше 0 для каждой связки.
64. Соединение по п. 63, отличающееся тем, что группа конъюгата имеет связку, имеющую структуру, выбранную из:
где Z2 представляет собой Н или СШ; и
каждый mi независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один пи больше 0 для каждой связки.
65. Соединение по любому из пп. 1-64, отличающееся тем, что группа конъюгата имеет связку, имеющую структуру, выбранную из:
где п равен от 1 до 12; и где m равен от 1 до 12.
66. Соединение по любому из пп. 1-65, отличающееся тем, что группа конъюгата ковалентно присоединена к модифицированному олигонуклеотиду.
67. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
А В С D (-Е F)
\ /q
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент С представляет собой линкер конъюгата D представляет собой группу ветвления каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
68. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
где:
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
В представляет собой расщепляемый фрагмент
С представляет собой линкер конъюгата
D представляет собой группу ветвления
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд;
каждый п независимо равен 0 или 1; и
q представляет собой целое число от 1 до 5.
69. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент; С представляет собой линкер конъюгата; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
70. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
С представляет собой линкер конъюгата;
D представляет собой группу ветвления; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
71. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; С представляет собой линкер конъюгата; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
72. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
где
В представляет собой расщепляемый фрагмент; D представляет собой группу ветвления; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
73. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; В представляет собой расщепляемый фрагмент; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
74. Соединение по любому из пп. 1-66, отличающееся тем, что соединение имеет структуру, представленную формулой:
А D г-Е Fj
* 'q
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; D представляет собой группу ветвления; каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
где каждый L независимо представляет собой фосфорную линкерную группу или нейтральную линкерную группу; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
78. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
79. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
-O-P-O^-vO
Osu-o-p-o-v 'з он
80. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
81. Соединение по любому из пп. 1-80, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит пирролидин.
83. Соединение по любому из пп. 1-82, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит ПЭГ.
84. Соединение по любому из пп. 1-83, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит амид.
85. Соединение по любому из пп. 1-84, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит по меньшей мере два амида.
86. Соединение по любому из пп. 1-83, отличающееся тем, что линкер конъюгата не содержит амид.
87. Соединение по любому из пп. 1-86, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит полиамид.
88. Соединение по любому из пп. 1-87, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит амин.
89. Соединение по любому из пп. 1-88, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит одну или более дисульфидных связей.
90. Соединение по любому из пп. 1-89, отличающееся тем, что линкер конъюгата содержит белок-связывающий фрагмент.
91. Соединение по п. 90, отличающееся тем, что белок-связывающий фрагмент содержит липид.
83.
92. Соединение по п. 90, отличающееся тем, что белок-связывающий фрагмент выбран из: холестерина, холевой кислоты, адамантан-уксусной кислоты, 1-пирен-масляной кислоты, дигидротестостерона, 1,3-бис-0(гексадецил)глицерина, геранилоксигексиловой группы, гексадецилглицерина, борнеола, ментола, 1,3-пропандиола, гептадециловой группы, пальмитиновой кислоты, миристиновой кислоты, 03-(олеоил)литохолевой кислоты, 03-(олеоил)холеновой кислоты, диметокситритила или феноксазина, витамина (например, фолата, витамина А, витамина Е, биотина, пиридоксаля), пептида, углевода (например, моносахарида, дисахарида, трисахарида, тетрасахарида, олигосахарида, полисахарида), эндосомолитического компонента, стероида (например, уваола, гецигенина, диосгенина), терпена (например, тритерпена, например, сарсасапогенина, фриделина, литохолевой кислоты, дериватизованной эпифриделанолом) или катионного липида.
93. Соединение по п. 90, отличающееся тем, что белок-связывающий фрагмент выбран из: насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты с длиной цепи от С16 до С22, холестерина, холевой кислоты, витамина Е, адамантана или 1 -пентафторпропила.
83.
95. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
96. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
97. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
No 0
где n равен от 1 до 20.
98. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
99. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
где каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.
100. Соединение по любому из пп. 1-94, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
О О
101. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет одну из следующих структур:
.Ai-i
tyn АГ
hAi (
где каждый Ai независимо представляет собой О, S, С=0 или NH; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
102. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет одну из следующих структур:
где каждый Ai независимо представляет собой О, S, С=0 или NH; и каждый п независимо равен от 1 до 20.
103. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления
имеет следующую структуру:
104. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
<ЛЛ/
105. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
106. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
107. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления содержит простой эфир.
каждый п независимо равен от 1 до 20; и m равен от 2 до 6.
110. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
111. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления содержит:
где каждый j представляет собой целое число от 1 до 3; и где каждый п представляет собой целое число от 1 до 20.
112. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления содержит:
113. Соединение по любому из пп. 1-112, отличающееся тем, что связка выбрана
из:
из:
из:
О z
где L выбран из фосфорной линкерной группы и нейтральной линкерной группы; Zi представляет собой C(=0)0-R2;
Z2 представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; R2 представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; и каждый ггц независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один mi больше 0 для каждой связки.
114. Соединение по любому из пп. 1-112, отличающееся тем, что связка выбрана
где Z2 представляет собой Н или СНз; и
каждый шг независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один гщ больше 0 для каждой связки.
115. Соединение по любому из пп. 1-112, отличающееся тем, что связка выбрана
117. Соединение по любому из пп. 1-116, отличающееся тем, что по меньшей мере одна связка содержит амид.
118. Соединение по любому из пп. 1-117, отличающееся тем, что по меньшей мере одна связка содержит полиамид.
119. Соединение по любому из пп. 1-118, отличающееся тем, что по меньшей мере одна связка содержит амин.
120. Соединение по любому из пп. 1-119, отличающееся тем, что по меньшей мере две связки отличны друг от друга.
121. Соединение по любому из пп. 1-120, отличающееся тем, что все связки являются одинаковыми.
117.
где каждый п независимо равен от 1 до 20; и каждый р равен от 1 до около 6.
123. Соединение по любому из пп. 1-122, отличающееся тем, что каждая связка выбрана из:
124. Соединение по любому из пп. 1-123, отличающееся тем, что каждая связка имеет следующую структуру:
126. Соединение по любому из пп. 1-125, отличающееся тем, что связка имеет структуру, выбранную из:
, или ; где каждый п независимо равен 0, 1, 2, 3, 4,
5, 6 или 7.
127. Соединение по п. 126, отличающееся тем, что связка имеет структуру:
128. Соединение по п. 126, отличающееся тем, что п равен 3.
129. Соединение по любому из пп. 1-128, отличающееся тем, что лиганд представляет собой галактозу.
130. Соединение по любому из пп. 1-128, отличающееся тем, что лиганд представляет собой манноза-6-фосфат.
131. Соединение по любому из пп. 1-128, отличающееся тем, что каждый лиганд выбран из:
128.
132. Соединение по любому из пп. 1-128, отличающееся тем, что каждый лиганд выбран из:
133. Соединение по любому из пп. 1-128, отличающееся тем, что каждый лиганд имеет следующую структуру: НООН
но-Л^А/ V
NHAc ^ ¦
134. Сопряженное антисмысловое соединение по любому из пп. 124-127, отличающееся тем, что каждый лиганд имеет следующую структуру:
НО-^-^^/°\/ NHAc ^
135. Соединение по любому из пп. 1-134, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит фрагмент, направляющий на клетку.
136. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит фрагмент, нацеливающий на клетку, имеющий следующую структуру:
135.
ACHN ^'ЬЧ) НООН °Н
но-
AcHN ОН
НОг
NHAc
-^^Р^ Уп ОН
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
137. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
NHAc
138. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
139. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
140. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
ноон о ноон ACHN 9 н Н\°
AcHN
н /
М-V
ноон ( о
AcHN
142. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
юун
норн о но-
AcHN N0
ноон О N
AcHN О
норн но-
AcHN
143. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
норн о о
но-
AcHN
норн о
AcHN
но9н
AcHN °
о=р-он
Р?н ГЛ
AcHN °
о=р-он
ноРн но
Р?н ГЛ
AcHN
145. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
норн
AcHN
норн
AcHN
норн
AcHN
147. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
клетку, содержит: NHAc
149. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
151. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
клетку, имеет следующую структуру: HOQH
ТГ 0 °
HO^T^O^N^N^
AcHN н
НООН О N у. /V
AcHN /
HOQH О \
НоЬ^О-t^N^N^P
AcHN
норн
AcHN
норн но
AcHN
норн
^О Н
AcHN
153. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
ноРн но
AcHN
норн о
норн но-
AcHN
эон
AcHN
НОРН гЛ
AcHN |
О=Р-ОН
оРн г <
^^р-^ГтХ
AcHN ?
Р=Р-ОН
НОРН г\
AcHN
э9н Н м и ГЛ
AcHN I
о=р-он
AcHN Л I
0=P-OH
155. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
норн н , Р
юрн н V ГЛ
AcHN
AcHN I
0=Р-ОН
ООН г-AcHN °
о=р-он
НООН ^ AcHN ^
157. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
но?н и n ir7
но^°^^Ч0 ACHN О=Р-ОН
но?н м Hut/
но^^^Х ACHN О=Р-ОН
ноон н ,9 г
но~^рА/ о ^о-^
AcHN
клетку, имеет следующую структуру:
ОН I
NHAc
он он
OHA^S^°
NHAc
159. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
он он
U/o HO~W^--O
он он
U/o HO-W-^-O
AcHN
AcHN
160. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
он он
HO^V-C-O
где каждый Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила.
162. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
HOAcHN
где каждый Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила.
163. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
но/он
164. Соединение по любому из пп. 1-163, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
165. Соединение по любому из пп. 1-164, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
0-1
166. Соединение по любому из пп. 1-164, отличающееся тем, что группа конъюгата
содержит: ОН
но/
167. Соединение по п. 166, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
ОН НО/
AcHN
168. Соединение по любому из пп. 1-167, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит расщепляемый фрагмент, выбранный из: фосфодиэфира, амида или сложного эфира.
169. Соединение по любому из пп. 1-168, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит фосфодиэфирный расщепляемый фрагмент.
170. Соединение по любому из пп. 1-169, отличающееся тем, что группа конъюгата не содержит расщепляемый фрагмент, и при этом группа конъюгата содержит тиофосфатную связь между группой конъюгата и олигонуклеотидом.
171. Соединение по любому из пп. 1-170, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит амидный расщепляемый фрагмент.
172. Соединение по любому из пп. 1-171, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит сложноэфирный расщепляемый фрагмент.
173. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
168.
NHAc
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
174. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
ноон
NHAc
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
Qi3 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
НО-Р=О
О Вх
но-р=о
но-±^у^ 'п он
NHAc
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
Qi3 представляет собой Н или 0(СШ)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
Z представляет собой Н или связанную твердую подложку; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
NHAc
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
Qi3 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
Z представляет собой Н или связанную твердую подложку; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
178. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)г-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
нрон о но-
AcHN ^с
НООН О N О О
AcHN оУ " Н 'HOVO
норн ¦- ^ Г
NHAc 1°М НО-Р=0
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)г-ОСНз;
180. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
181. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
НО-Р=О
AcHN н
0ОН О \
AcHN
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
182. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
норн но норн но
AnHN
норн
AcHN
4 \
НО-Р=О
но-р=о
где Qi3 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
183. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
ОРН гл.
AcHN I
0=Р-ОН
НОРН гд
AcHN I
Р=Р-ОН А
р НО-Р=О
НОРН ГЛ O^V/O^Bx
184. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
IPPH ГД
норн
AcHN
^-p=o
где Q13 представляет собой H или 0(СН2)г-ОСНз;
185. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
ноон н о гЛ
AcHN ?
О=Р-ОН
ноон н 9 / С
AcHN I
о=р-он
ноон н о г\ НО-Р=О
HO^O^^N^ I х
AcHN \ rf> \3
р=о
где QB представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
следующую структуру
ноон .ОЭН но
AcHN I
о=р-он
ООН
AcHN I
О 1
/И НО-Р=О
о=р-он
но-
НЯ?Н кГ О^О^Вх
AcHN
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
ноон н о r-f
AcHN Y
о=р-он
ноон н ° [
AcHN Y
0=Р-ОН А
I I
о НО-Р=О
ноон н О ^ О^^О^Вх
Л КI
НО-, ^ w3 6 w3 ^ , ^
AcHN I
^¦р=о
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
188. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
но он
AcHN Г v-Л ?1
но он но
О 0 0
Н "О А
^ НО-Р=О
HN^^N-
о wNSo о о
'^о^о^^Л А 73 н он J-4
НО. 4 0 Р
NHAc ОН
NHAc
189. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
/^^0'''> pNA^ О _ ВХ
-A^pV W4 н I н н ^4 их о Вх
AcHN о он )-С
/ о
ноон НО-Р=О
но^Ь^ттиЛ°
AcHN
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
200. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что группа конъюгата содержит:
НЯ?Н н
AcHN ч
норн ~ ^
ACHN У- П OH О, ^
норн I НО-Р=О
- Л. .
AcHN
ДрММ J Н Н ОН Ч,
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)г-ОСНз;
201. Соединение по любому из пп. 173-200, отличающеся тем, что Вх выбран из аденина, гуанина, тимина, урацила или цитозина, или 5-метилцитозина.
202. Соединение по любому из пп. 173-200, отличающееся тем, что Вх представляет собой аденин.
203. Соединение по любому из пп. 173-200, отличающееся тем, что Вх представляет собой тимин.
204. Соединение по любому из пп. 173-200, отличающееся тем, что Q13 представляет собой 0(СН2)2-ОСНз.
205. Соединение по любому из пп. 173-200, отличающееся тем, что Q13 представляет собой Н.
206. Соединение, содержащее ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970.
207. Соединение, состоящее из ISIS 696844, ISIS 696845, ISIS 698969 или ISIS 698970.
208. Композиция, содержащая соединение по любому из пп. 1-207 или его соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
209. Пролекарство, содержащее соединение по любому из пп. 1-208.
210. Способ лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, у субъекта, включающий введение
202.
211. Способ по п. 210, отличающийся тем, что альтернативный путь комплемента активирован выше нормального.
212. Способ по п. 210 или 211, отличающийся тем, что заболевание представляет собой дегенерацию желтого пятна.
213. Способ по п. 212, отличающийся тем, что дегенерация желтого пятна представляет собой возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD).
214. Способ по п. 213, отличающийся тем, что AMD представляет собой влажную AMD.
215. Способ по п. 213, отличающийся тем, что AMD представляет собой сухую
AMD.
216. Способ по п. 215, отличающийся тем, что сухая AMD представляет собой географическую атрофию.
217. Способ по п. 210 или 211, отличающийся тем, что заболевание представляет собой болезнь почек.
218. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет собой волчаночный нефрит.
219. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет собой системную красную волчанку (SLE).
220. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет собой болезнь плотного осадка (DDD).
218.
221. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет собой CFHR5 нефропатию.
222. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет собой атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS).
223. Способ по п. 223, отличающийся тем, что aHUS характеризуется тромботической микроангиопатией.
224. Способ по любому из пп. 217-224, отличающийся тем, что болезнь почек связана с отложением СЗ.
225. Способ по п. 225, отличающийся тем, что болезнь почек связана с отложениями СЗ у гломеруле.
226. Способ по любому из пп. 217-226, отличающийся тем, что болезнь почек связана с уровнями циркулирующего СЗ ниже нормального.
227. Способ по п. 227, отличающийся тем, что уровни циркулирующего СЗ представляют собой уровни СЗ в сыворотке или плазме.
228. Способ по любому из пп. 210-216, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает снижение или ингибирование накопления уровней СЗ в глазах.
229. Способ по п. 229, отличающийся тем, то уровни СЗ представляют собой уровни белка СЗ.
230. Способ по любому из пп. 210-216, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает снижение уровня отложений СЗ в глазах или ингибирует накопление отложений СЗ в глазах.
218.
231. Способ по любому из пп. 217-228, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает снижение или ингибирование накопления уровней СЗ в почках.
232. Способ по п. 233, отличающийся тем, то уровни СЗ представляют собой уровни белка СЗ.
233. Способ по любому из пп. 233 или 234, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает снижение уровня отложений СЗ в почках или ингибирует накопление отложений СЗ в почках.
234. Способ по любому из пп. 233-235, отличающийся тем, что уровни СЗ в почках представляют собой уровни СЗ в гломеруле.
235. Способ по любому из пп. 233-236, отличающийся тем, что соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
236. Способ по любому из пп. 210-237, отличающийся тем, что субъект идентифицирован как имеющий риск или страдающий заболеванием, связанным с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента.
237. Способ по п. 238, отличающийся тем, что идентификация включает определение уровней комплемента или уровней мембраноатакующего комплекса в сыворотке субъекта.
238. Способ по п. 238, отличающийся тем, что идентификация включает проведение генетического теста на генетические мутации факторов комплемента, связанные с заболеванием.
218.
239. Способ ингибирования экспрессии фактора комплемента В (CFB) у субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включающий введение субъекту соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209, обеспечивая тем самым ингибирование экспрессии CFB у субъекта.
240. Способ по п. 241, отличающийся тем, что альтернативный путь комплемента активирован выше нормального.
241. Способ по любому из пп. 241 или 242, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает ингибирование экспрессии CFB в глазах.
242. Способ по п. 243, отличающийся тем, что субъект страдает или имеет риск возникновения возрастной дегенерации желтого пятна (AMD).
243. Способ по любому из пп. 241 или 242, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает ингибирование экспрессии CFB в почках.
244. Способ по любому из пп. 245, отличающийся тем, что введение соединения или композиции обеспечивает ингибирование экспрессии CFB в гломеруле.
245. Способ по любому из пп. 245 или 246, отличающийся тем, что субъект страдает или имеет риск возникновения волчаночного нефрита, болезни плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрита (C3GN), CFFIR5 нефропатии или атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS), или любой их комбинации.
246. Способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в глазах субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включающий введение субъекту соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209, обеспечивая тем самым снижение или ингибирование накопления отложений СЗ в глазах субъекта.
218.
247. Способ по п. 248 или 249, отличающийся тем, что субъект страдает или имеет риск возникновения возрастной дегенерации желтого пятна (AMD).
248. Способ снижения или ингибирования накопления отложений СЗ в почках субъекта, страдающего или имеющего риск возникновения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента, включающий введение субъекту соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209, обеспечивая тем самым снижение или ингибирование накопления отложений СЗ в почках субъекта.
249. Способ по п. 251, отличающийся тем, что альтернативный путь комплемента активирован выше нормального.
250. Способ по любому из пп. 251 или 252, отличающийся тем, что субъект страдает или имеет риск возникновения волчаночного нефрита, болезни плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрита (C3GN), CFHR5 нефропатии или атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS), или любой их комбинации.
251. Способ по любому из пп. 241-253, отличающийся тем, что соединение или композицию вводят субъекту парентерально.
252. Применение соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209 для лечения, предупреждения или облегчения заболевания, связанного с дисрегуляцией альтернативного пути комплемента.
253. Применение по п. 255, отличающееся тем, что альтернативный путь комплемента активирован выше нормального.
254. Применение по п. 255 или 256, отличающееся тем, что заболевание представляет собой дегенерацию желтого пятна.
218.
255. Применение по п. 258, отличающееся тем, что AMD представляет собой влажную AMD.
256. Применение по п. 258, отличающееся тем, что AMD представляет собой сухую AMD.
257. Применение по п. 260, отличающееся тем, что сухая AMD представляет собой географическую атрофию.
258. Применение по п. 255 или 256, отличающееся тем, что заболевание представляет собой болезнь почек.
263. Применение по п. 262, отличающееся тем, что болезнь почек представляет собой волчаночный нефрит, болезнь плотного осадка (DDD), СЗ гломерулонефрит (C3GN), CFHR5 нефропатию или атипический гемолитико-уремический синдром (aHUS), или любую их комбинацию.
(19)
(19)
(19)
103
102
105
105
109
112
112
132
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
132
где:
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;
133
или qe и qf вместе представляют собой =C(qg)(qh);
133
или qe и qf вместе представляют собой =C(qg)(qh);
134
134
149
150
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые
149
150
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые
149
150
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые
151
150
В некоторых вариантах реализации предложены сопряженные антисмысловые
152
152
152
152
152
152
153
154
i. Некоторые расщепляемые фрагменты
156
156
159
159
161
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
160
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
161
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
160
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
161
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
160
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
161
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
160
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
163
163
164
164
164
164
164
164
165
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
165
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
166
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
166
В некоторых вариантах реализации линкер имеет структуру, выбранную из:
167
167
170
равен от 2 до 6.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную
170
равен от 2 до 6.
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
171
В некоторых вариантах реализации группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
172
172
172
172
172
172
172
172
175
Ъг представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; R.2 представляет собой Н, Ci-Сб алкил или замещенный Ci-Сб алкил; и
174
177
177
181
X представляет собой О или S; и
180
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
181
X представляет собой О или S; и
182
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
181
X представляет собой О или S; и
182
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
183
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
184
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
185
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
185
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
187
187
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
187
187
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
187
187
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
187
187
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
188
188
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
188
188
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
188
188
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
188
188
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации группы конъюгата имеют следующую структуру:
189
189
189
189
189
189
190
190
190
190
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
191
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
192
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
192
В некоторых таких вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
193
193
195
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
195
В некоторых вариантах реализации фрагмент группы конъюгата, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
196
НОРН н
197
Некоторые сопряженные антисмысловые соединения
197
Некоторые сопряженные антисмысловые соединения
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
198
q представляет собой целое число от 1 до 5.
где
199
где
199
где
199
где
199
где
199
где
199
200
каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
200
каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
200
каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
200
каждый F представляет собой лиганд; и q представляет собой целое число от 1 до 5.
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
201
В некоторых вариантах реализации сопряженное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
202
202
204
Тестирование антисмысловых олигонуклеотидов in vitro
204
Тестирование антисмысловых олигонуклеотидов in vitro
205
в настоящем документе. Как правило, если обработку проводят в нескольких повторениях, данные представляются как среднее значение для многократных обработок.
205
в настоящем документе. Как правило, если обработку проводят в нескольких повторениях, данные представляются как среднее значение для многократных обработок.
206
геполитико-уремический синдром (aHUS), болезнь плотного осадка (DDD; также известную как MPGN типа II или C3Neph) и CFHR5 нефропатию.
206
геполитико-уремический синдром (aHUS), болезнь плотного осадка (DDD; также известную как MPGN типа II или C3Neph) и CFHR5 нефропатию.
207
207
209
209
209
209
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
210
Соединения 8 и 9 имеются в продаже. Пример 4: Получение Соединения 18
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
211
о о
Пример 5: Получение Соединения 23
212
Пример 7: Получение Соединения 25
212
Пример 7: Получение Соединения 25
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
213
Соединение 24 получили по способам, представленным в Примере 6.
214
214
214
214
214
214
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
215
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
217
216
Пример 10: Общее получение сопряженных ASO, содержащих GalNAc3-l у 5'-конца, Соединения 34
219
Пример 12: Получение Соединения 40
АсО, ОАс
218
219
Пример 12: Получение Соединения 40
АсО, ОАс
218
219
Пример 12: Получение Соединения 40
АсО, ОАс
218
219
Пример 12: Получение Соединения 40
АсО, ОАс
220
219
Пример 12: Получение Соединения 40
АсО, ОАс
220
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
221
Пример 14: Получение Соединения 45
222
Пример 16: Получение Соединения 53
222
Пример 16: Получение Соединения 53
223
Пример 17: Получение Соединения 54
223
Пример 17: Получение Соединения 54
224
224
224
224
225
226
соединений, направленных на АроС III, имеет одну и ту же последовательность
228
228
242
Пример 22: Влияние модифицированного СаШАсз-1-сопряженного ASO, направленного на SRB-1, in vivo
242
Пример 22: Влияние модифицированного СаШАсз-1-сопряженного ASO, направленного на SRB-1, in vivo
243
Таблица 29
Влияние ASO лечения на уровни мРНК SRB-1 у мышейВа1Ь/с
243
Таблица 29
Влияние ASO лечения на уровни мРНК SRB-1 у мышейВа1Ь/с
244
244
250
которые представлены в данном описании, для получения фосфорамидитов, имеющих заданный состав.
250
которые представлены в данном описании, для получения фосфорамидитов, имеющих заданный состав.
251
Пример 32: Получение Соединения 67
251
Пример 32: Получение Соединения 67
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
252
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
254
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
254
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
254
253
Пример 36: Получение Соединения 79а
254
255
255
256
256
256
256
256
256
256
256
257
257
257
257
257
257
257
257
258
258
258
258
258
258
258
258
259
259
259
259
260
260
260
260
260
260
261
262
Где GalNAc3-4 имеет структуру:
261
262
Где GalNAc3-4 имеет структуру:
264
описанных в настоящем документе, которые имеют любую заданную последовательность и состав.
264
описанных в настоящем документе, которые имеют любую заданную последовательность и состав.
265
265
267
1 у 3'-конца, см. Пример 9) включены в исследование для сравнения и описаны ранее в Таблице 17.
266
269
269
271
линкерами демонстрирует усиление эффективности, по сравнению с соединением, содержащим только PS (ISIS 655861).
270
271
линкерами демонстрирует усиление эффективности, по сравнению с соединением, содержащим только PS (ISIS 655861).
272
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
273
Пример 45: Получение PFP эфира, Соединения 110а
275
соединений 104а и 104Ь с выходом > 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
274
275
соединений 104а и 104Ь с выходом > 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
276
275
соединений 104а и 104Ь с выходом > 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
276
275
соединений 104а и 104Ь с выходом > 80 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
276
277
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
277
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
277
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
279
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
279
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
279
278
Пример 47: Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
280
280
281
282
давлении с получением соединений 101a-d с выходом 80-90 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
283
282
давлении с получением соединений 101a-d с выходом 80-90 %. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
284
284
285
116
286
285
116
286
285
116
286
288
Пример 49: Получение олигонуклеотида 132, содержащего GalNAc3-5
288
Пример 49: Получение олигонуклеотида 132, содержащего GalNAc3-5
289
289
129
291
290
129
291
290
129
291
290
293
293
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
294
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
294
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
294
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
294
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
294
295
Пример 50: Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-ll
296
297
Соединение 142, связанное с твердой подложкой, синтезировали по способам твердофазного синтеза пептидов.
297
Соединение 142, связанное с твердой подложкой, синтезировали по способам твердофазного синтеза пептидов.
297
Соединение 142, связанное с твердой подложкой, синтезировали по способам твердофазного синтеза пептидов.
297
Соединение 142, связанное с твердой подложкой, синтезировали по способам твердофазного синтеза пептидов.
298
298
299
300
высоким вакуумом с получением Соединения 105а (3,28 г). Данные ЖХМС и Ш ЯМР согласовались с заданным продуктом.
299
300
высоким вакуумом с получением Соединения 105а (3,28 г). Данные ЖХМС и Ш ЯМР согласовались с заданным продуктом.
302
302
302
302
302
302
302
302
302
302
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
304
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
306
305
Пример 52: Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
306
307
307
307
307
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
308
Пример 53: Альтернативный способ получения Соединения 18(GalNAc3-la и GalNAc3-За)
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
309
и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при использовании способа, описанного в Примере 4.
310
310
311
312
повышенной эффективностью, по сравнению с 3'-сопряженными антисмысловыми соединениями (ISIS 655861 и ISIS 664078).
314
314
315
316
экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
318
318
321
концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
320
323
323
330
330
331
331
332
332
333
333
335
334
335
334
335
336
337
Пример 62: Получение олигомерного соединения 180, содержащего GalNAc3-13
337
Пример 62: Получение олигомерного соединения 180, содержащего GalNAc3-13
338
338
339
340
Пример 63: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-14
339
340
Пример 63: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-14
341
340
Пример 63: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-14
343
342
194
343
342
194
343
344
194
345
345
351
присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи фосфодиэфир-связанного нуклеозида (расщепляемый фрагмент (СМ)).
351
присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи фосфодиэфир-связанного нуклеозида (расщепляемый фрагмент (СМ)).
352
Лечение
352
Лечение
353
353
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
354
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
354
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
354
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
354
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
354
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
356
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
356
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
356
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
356
355
Пример 67: Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
356
357
Пример 69: Получение олигомерного соединения 201, содержащего GalNAc3-18
357
Пример 69: Получение олигомерного соединения 201, содержащего GalNAc3-18
358
358
358
358
358
358
358
358
358
358
358
358
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
360
Пример 71: Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
361
361
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
362
Пример 72: Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
363
расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура
363
расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=0)(OH)-Ad-P(=0)(OH)-. Структура
364
Пример 73: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-22
364
Пример 73: Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-22
365
365
371
метаболизировано до исходного соединения, что указывает на то, что группы конъюгата GalNAc3 расщепляются в указанных олигонуклеотидах.
370
371
метаболизировано до исходного соединения, что указывает на то, что группы конъюгата GalNAc3 расщепляются в указанных олигонуклеотидах.
372
373
373
375
376
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании
375
376
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании
377
376
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании
378
378
383
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в Таблице 70, испытали в исследовании
382
385
385
387
Лечение
386
389
389
419
420
Первичные мышиные гепатоциты высеивали в 96-луночные планшеты при 15000
423
Измерили также массы тела, уровни трансаминазы в печени, общий билирубин и
422
425
425
427
428
Таблица 106
Модифицированные олигонуклеотиды, направленные на Аро(а)
430
430
435
содержащего только PS межнуклеозидные линкеры, и для олигонуклеотида, содержащего смешанные РО и PS линкеры.
434
437
437
441
Пример 104: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат 5'-GalNAc2
440
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
443
444
Пример 106: Антисмысловое ингибирование in vivo олигонуклеотидами, направленными на SRB-1, содержащими конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3
446
Концентрации в печени олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгатаСаШАсг
446
Концентрации в печени олигонуклеотидов, содержащих группу конъюгатаСаШАсг
447
Пример 107: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-26 или GalNAci-27
447
Пример 107: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-26 или GalNAci-27
448
448
449
Лечение
449
Лечение
450
Пример 109: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-28 или GalNAci-29
450
Пример 109: Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-28 или GalNAci-29
451
451
246
246
451
451
246
246
451
451
246
246
451
451
246
246
451
451
246
246
451
451
246
246
451
451
246
246
452
452
452
452
452
452
452
452
454
454
454
454
454
454
454
454
457
Лечение
457
Лечение
458
обработанной солевым раствором (данные не показаны), что указывает на хорошую переносимость обоих олигонуклеотидов.
458
обработанной солевым раствором (данные не показаны), что указывает на хорошую переносимость обоих олигонуклеотидов.
459
459
499
Таблица 129
498
501
501
507
508
Результаты представлены как процентное ингибирование CFB относительно необработанных контрольных клеток.
510
510
520
523
523
549
550
Таблица 137
552
552
573
Пример 120: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
573
Пример 120: Антисмысловое ингибирование человеческого фактора комплемента В (CFB) в HepG2 клетках МОЕ гэпмерами
574
последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
574
последовательности, "н/д" означает, что антисмысловый олигонуклеотид не направлен на указанную конкретную последовательность гена с 100 % комплементарностью.
575
575
582
582
585
586
Таблица 143
585
586
Таблица 143
587
586
Таблица 143
588
588
590
590
591
591
607
Таблица 147
606
609
609
616
616
617
618
Пример 124: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2
617
618
Пример 124: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2
619
618
Пример 124: Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого CFB в клетках HepG2
620
Таблица 157
620
Таблица 157
621
621
623
Химические маркеры в плазме мышей CD1 на 40 день
626
626
629
629
631
633
печени или почек за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых олигонуклеотидов, не использовали для дальнейших исследований.
632
635
635
637
Таблица 172
636
640
640
Таблица 176
Масса органов/масса тела (BW) мышей CD1
Таблица 176
Масса органов/масса тела (BW) мышей CD1
643
Таблица 177
Уровни цитокинов (иг/мл) в плазме мышей CD1
643
Таблица 177
Уровни цитокинов (иг/мл) в плазме мышей CD1
645
Пример 127: Переносимость антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на человеческий CFB, у крыс Спрага-Доули
644
648
648
Таблица 185
Маркеры функции печени у крыс Спрага-Доули
Таблица 185
Маркеры функции печени у крыс Спрага-Доули
Маркеры функции печени (мг/дл) у крыс Спрага-Доули
Маркеры функции печени (мг/дл) у крыс Спрага-Доули
Таблица 187
Таблица 187
654
Функция печени
654
Функция печени
655
Функция почек
655
Функция почек
657
657
663
Пример 128: Эффективность антисмысловых олигонуклеотидов против мРНК CFB у мышей hCFB
663
Пример 128: Эффективность антисмысловых олигонуклеотидов против мРНК CFB у мышей hCFB
664
664
665
собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
665
собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
666
контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
666
контрольным образцом с PBS. Результаты представлены как процент ингибирования CFB относительно контрольного образца.
667
Пример 130: Дозозависимое антисмысловое ингибирование мышиного CFB
667
Пример 130: Дозозависимое антисмысловое ингибирование мышиного CFB
669
возрасте 5-6 месяцев, что приводит к почечной недостаточности и гибели в возрасте 10-12 месяцев.
668
671
671
Процентное ингибирование мРНК мышиного CFB у MbinieftNZB/W F1
Процентное ингибирование мРНК мышиного CFB у MbinieftNZB/W F1
673
CFB, увеличивает выживаемость мышей, по сравнению с контрольной группой с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
673
CFB, увеличивает выживаемость мышей, по сравнению с контрольной группой с PBS и мышами, обработанными контрольным олигонуклеотидом.
674
сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
674
сравнивали все остальные группы. Конечные значения получили через 48 часов после инъекции последней дозы.
675
Таблица 213
Накопление СЗ в почках мышей MRL/lpr
675
Таблица 213
Накопление СЗ в почках мышей MRL/lpr
677
Таблица 216
Уровни СЗ в плазме (мг/дл) мышей CFH"
676
679
679
683
Снижение уровней белка CFB в плазме хорошо коррелирует со снижением уровней мРНК CFB в печени в соответствующих группах животных.
682
685
685
687
испытывали в отдельном исследовании с аналогичными условиями, и значение является средним для измерений у самцов и самок обезьян.
690
690
691
691
<400> 9
<400> 9
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
Синтетический олигонуклеотид
<210> 15
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
Синтетический олигонуклеотид
<210> 31
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
Синтетический олигонуклеотид
<210> 47
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
Синтетический олигонуклеотид
<210> 63
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
Синтетический олигонуклеотид
<210> 79
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
Синтетический олигонуклеотид
<210> 95
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
Синтетический олигонуклеотид
<210> 111
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
Синтетический олигонуклеотид
<210> 127
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<400> 137
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
Синтетический олигонуклеотид
<210> 143
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<400> 153
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
Синтетический олигонуклеотид
<210> 159
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<400> 169
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
Синтетический олигонуклеотид
<210> 175
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<400> 185
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
Синтетический олигонуклеотид
<210> 191
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<400> 201
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
Синтетический олигонуклеотид
<210> 207
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<400> 217
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
Синтетический олигонуклеотид
<210> 223
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<400> 233
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
Синтетический олигонуклеотид
<210> 239
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<400> 249
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
Синтетический олигонуклеотид
<210> 255
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 265
<400> 265
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
Синтетический олигонуклеотид
<210> 271
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<400> 281
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
Синтетический олигонуклеотид
<210> 287
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<400> 297
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
Синтетический олигонуклеотид
<210> 303
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<400> 313
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
Синтетический олигонуклеотид
<210> 319
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<400> 329
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
Синтетический олигонуклеотид
<210> 335
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<400> 345
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
Синтетический олигонуклеотид
<210> 351
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<400> 361
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
Синтетический олигонуклеотид
<210> 367
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<400> 377
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
Синтетический олигонуклеотид
<210> 383
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<400> 393
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
Синтетический олигонуклеотид
<210> 399
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<400> 409
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
Синтетический олигонуклеотид
<210> 415
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<400> 425
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
Синтетический олигонуклеотид
<210> 431
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<400> 441
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
Синтетический олигонуклеотид
<210> 447
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<400> 457
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
Синтетический олигонуклеотид
<210> 463
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<400> 473
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
Синтетический олигонуклеотид
<210> 479
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<400> 489
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
Синтетический олигонуклеотид
<210> 495
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<400> 505
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
Синтетический олигонуклеотид
<210> 511
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<400> 521
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
Синтетический олигонуклеотид
<210> 527
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 20 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
Синтетический олигонуклеотид
<400> 537
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<210> 543
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
Синтетический олигонуклеотид
<400> 553
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<210> 559
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
Синтетический олигонуклеотид
<400> 569
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<210> 575
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
Синтетический олигонуклеотид
<400> 585
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<210> 591
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<400>
Синтетический олигонуклеотид
601
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<210> 607
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 16 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<400>
Синтетический олигонуклеотид
617
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<210> 623
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<400>
Синтетический олигонуклеотид
633
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<210> 639
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<400>
Синтетический олигонуклеотид
649
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<210> 655
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<400>
Синтетический олигонуклеотид
665
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<210> 671
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 17 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
<400>
Синтетический олигонуклеотид
681
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
Синтетический олигонуклеотид
<210> 687
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
<400>
Синтетический олигонуклеотид
697
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
Синтетический олигонуклеотид
<210> 703
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<400> 713
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
Синтетический олигонуклеотид
<210> 719
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<400> 729
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
Синтетический олигонуклеотид
<210> 735
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 19 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
Синтетический олигонуклеотид
<400> 745
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<210> 751
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
Синтетический олигонуклеотид
<400> 761
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<210> 767
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
Синтетический олигонуклеотид
<400> 777
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<210> 783
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
Синтетический олигонуклеотид
<400> 793
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<210> 799
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
18 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
Синтетический олигонуклеотид
<400> 809
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<210> 815
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<211> 18 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
Синтетический олигонуклеотид
<400> 825
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<210> 831
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
21 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
Синтетический олигонуклеотид
<400> 841
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<210> 847
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<211> <212> <213>
20 ДНК
Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
692
692
694
695
2602-2619, 2602-2620, 2602-2621, 2603-2618, 2603-2619, 2603-2620, 2603-2621, 2603-2622,
697
697
712
связь, по меньшей мере один модифицированный сахар или по меньшей мере одно модифицированное азотистое основание.
712
связь, по меньшей мере один модифицированный сахар или по меньшей мере одно модифицированное азотистое основание.
713
37. Соединение по любому из пп. 24-34, отличающееся тем, что модифицированный
сахар представляет собой 2'-0-метоксиэтил.
713
37. Соединение по любому из пп. 24-34, отличающееся тем, что модифицированный
сахар представляет собой 2'-0-метоксиэтил.
714
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
714
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
714
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
714
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
714
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
716
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
716
715
гептопиранозид, 2,5-ангидро-Б-аллонитрил, рибоза, D-рибоза, D-4-тиорибоза, L-рибоза, L-4-тиорибоза.
717
717
где п равен от 1 до 12; и
где п равен от 1 до 12; и
717
717
где п равен от 1 до 12; и
где п равен от 1 до 12; и
717
717
где п равен от 1 до 12; и
где п равен от 1 до 12; и
718
где m равен от 1 до 12.
718
где m равен от 1 до 12.
719
719
720
721
А С D h-E Fj
^ 'q
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
720
721
А С D h-E Fj
^ 'q
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
720
721
А С D h-E Fj
^ 'q
где
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид;
723
75. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
723
75. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет структуру, выбранную из:
724
76. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата
724
76. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
725
77. Соединение по любому из пп. 1-74, отличающееся тем, что линкер конъюгата имеет следующую структуру:
726
82. Соединение по любому из пп. 1-80, отличающееся тем, что линкер конъюгата
не содержит пирролидин.
726
82. Соединение по любому из пп. 1-80, отличающееся тем, что линкер конъюгата
не содержит пирролидин.
728
94. Соединение по любому из пп. 1-93, отличающееся тем, что линкер конъюгата
727
730
730
732
731
,0.
732
731
,0.
732
731
,0.
732
731
,0.
732
731
,0.
732
731
,0.
732
733
,0.
732
733
,0.
732
733
,0.
734
108. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
734
108. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
735
109. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
735
109. Соединение по любому из пп. 1-100, отличающееся тем, что группа ветвления имеет следующую структуру:
736
736
737
737
где п равен от 1 до 12; и
где п равен от 1 до 12; и
738
где m равен от 1 до 12.
116. Соединение по любому из пп. 1-112, отличающееся тем, что по меньшей мере
одна связка содержит этиленгликоль.
738
где m равен от 1 до 12.
116. Соединение по любому из пп. 1-112, отличающееся тем, что по меньшей мере
одна связка содержит этиленгликоль.
739
122. Соединение по любому из пп. 1-121, отличающееся тем, что каждая связка выбрана из:
739
122. Соединение по любому из пп. 1-121, отличающееся тем, что каждая связка выбрана из:
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
где каждый п независимо равен от 1 до 20.
740
125. Соединение по любому из пп. 1-124, отличающееся тем, что каждая связка имеет следующую структуру:
740
125. Соединение по любому из пп. 1-124, отличающееся тем, что каждая связка имеет следующую структуру:
742
НООН
742
НООН
742
НООН
742
НООН
742
НООН
742
НООН
742
НООН
742
НООН
743
норн
743
норн
745
141. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
745
141. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
745
141. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
745
141. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
746
144. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
747
146. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
747
146. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
748
148. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
748
148. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
749
150. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
749
150. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
750
152. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
750
152. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
750
152. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
750
152. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
751
154. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
752
156. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
753
158. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на
754
161. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
754
161. Соединение по п. 135, отличающееся тем, что фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит:
755
где каждый Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила.
755
где каждый Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного Ci-Сю алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила.
756
756
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
756
756
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
756
756
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
где каждый п независимо равен от 1 до 20;
757
Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
757
Q13 представляет собой Н или 0(СН2)2-ОСНз;
758
175. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
758
175. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
759
176. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
759
176. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
760
177. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
760
177. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
761
179. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
761
179. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
762
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
764
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
764
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
765
186. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет
765
186. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет
765
186. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет
765
186. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет
766
187. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
766
187. Соединение по любому из пп. 1-172, отличающееся тем, что соединение имеет следующую структуру:
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)г-ОСНз;
где Q13 представляет собой Н или 0(СН2)г-ОСНз;
767
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
767
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
767
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
767
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
А представляет собой модифицированный олигонуклеотид; и
768
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
768
Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания.
769
субъекту соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209, тем самым обеспечивая лечение, предупреждение или облегчение заболевания.
769
субъекту соединения по любому из пп. 1-207, композиции по п. 208 или пролекарства по п. 209, тем самым обеспечивая лечение, предупреждение или облегчение заболевания.
770
221. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет
собой СЗ гломерулонефрит (C3GN).
770
221. Способ по п. 217, отличающийся тем, что болезнь почек представляет
собой СЗ гломерулонефрит (C3GN).
771
232. Способ по любому из пп. 229-231, отличающийся тем, что соединение
или композицию вводят субъекту парентерально.
771
232. Способ по любому из пп. 229-231, отличающийся тем, что соединение
или композицию вводят субъекту парентерально.
772
772
773
249. Способ по п. 248, отличающийся тем, что альтернативный путь
комплемента активирован выше нормального.
773
249. Способ по п. 248, отличающийся тем, что альтернативный путь
комплемента активирован выше нормального.
774
258. Применение по п. 257, отличающееся тем, что дегенерация желтого пятна представляет собой возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD).
774
258. Применение по п. 257, отличающееся тем, что дегенерация желтого пятна представляет собой возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD).