(57) Реферат / Формула:
Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения каротиноидов из каротиноид-продуцирующего биоорганизма, а также к композиции, содержащей такие каротиноиды, и к применению такой твердой композиции в кормовых продуктах (или премиксах).
Евразийское (21) 201691949 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.02.28
(22) Дата подачи заявки 2015.03.26
(51) Int. Cl.
C07C 403/24 (2006.01) C12P23/00 (2006.01) C11B1/10 (2006.01)
(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КАРОТИНОИДА ИЗ КАРОТИНОИД-ПРОДУЦИРУЮЩЕГО БИООРГАНИЗМА
(31) 14162365.2
(32) 2014.03.28
(33) EP
(86) PCT/EP2015/056594
(87) WO 2015/144831 2015.10.01
(71) Заявитель:
ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(57) Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения каротиноидов из каро-тиноид-продуцирующего биоорганизма, а также к композиции, содержащей такие каротиноиды, и к применению такой твердой композиции в кормовых продуктах (или премиксах).
(72) Изобретатель:
Треганован Джеймс, Сантос Карлос, Кесслер Джулия, Гринфелл-Ли Даниель (CH)
(74) Представитель:
Фелицына С.Б., Саломатина И.С. (RU)
1611555
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КАРОТИНОИДА ИЗ КАРОТИНОИД-ПРОДУЦИРУЮЩЕГО БИООРГАНИЗМА
Настоящее изобретение относится к усовершенствованному способу выделения каротиноидов из каротиноид-продуцирующего биоорганизма, а также к композиции, содержащей такие каротиноиды, и к применению такой твердой композиции в кормовых продуктах (или премиксах).
Каротиноиды представляют собой органические пигменты, от желтого до красного цвета, которые естественным образом вырабатываются определенными биоорганизмами, в том числе фотосинтезирующими организмами (например, растениями, водорослями, цианобактериями), а также некоторыми грибами. Каротиноиды ответственны за оранжевый цвет моркови, а также за розовый цвет фламинго и лосося, и красный цвет омаров и креветок. Животные, однако, не могут продуцировать каратиноиды и должны получать их через пищу.
Каротиноидные пигменты (например, Р-каротин и астаксантин) используются в промышленности в качестве ингредиентов для пищевых и кормовых материалов, и оба выполняют пищевую функцию и повышают приемлемость для потребителя. Например, астаксантин широко используется в аквакультуре лосося для того, чтобы обеспечить розовой/красный пигмент, характерный для их диких собратьев. Некоторые каротиноиды обеспечивают потенциальные благоприятное воздействие на здоровье, например, в качестве предшественников витамина А или антиоксидантов (см, например, Jyonouchi et al, Nutr, Cancer 16:93, 1991; Giovannucci et al, /. Natl. Cancer Inst. 87:1767, 1995; Miki, Pure Appl. Chem 63:141, 1991; Chew et al, Anticancer Res. 19:1849, 1999; Wang et al., Antimicrob. Agents Chemother. 44:2452, 2000). Некоторые каротиноиды, такие как астаксантин, Р-каротин, ликопин, лютеин и зеаксантин, в настоящее время продаются как пищевые добавки.
Природные каротиноиды могут быть либо получены путем экстракции растительного материала, либо путем микробного синтеза; но лишь немногие растения широко используются для коммерческого производства каротиноидов и производительность синтеза каротиноидов в этих растениях является относительно низкой. Микробное продуцирование каротиноидов является более привлекательным путем производства. Примеры каротиноид-продуцирующих микроорганизмов (=биоорганизмов) включают: водоросли (Haematococcus Pluvialis, продающиеся под торговым названием NatuRose (ТМ) у Cyanotech Corp., Кайлуа-Кона, Гаваи; Dunaliella sp.;.
Thraustochytrium sp.), дрожжи (Phaffia rhodozyma, которые недавно были переименованы в Xanthophyllomyces dendrorhous; Labyrinthula sp.; Saccharomyces cerevisiae и Yarrowia lipolytica), и бактерии (Paracoccus marcusii, Bradyrhizobium, Rhodobacter sp., Brevibacterium, Escherichia coli и Methylomonas sp). Кроме того, также возможно рекомбинантное производство каротиноидов, так как гены, участвующие в биосинтезе каротиноидов, хорошо известны и были гетерологично экспрессированы в различных клетках-хозяевах (например, E.coli, Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae, Methylomonas sp ). К настоящему времени некоторые из этих примеров пригодны для производства каротиноидных продуктов в значительных количествах экономически эффективным способом для промышленного применения.
Настоящее изобретение относится к усовершенствованному способу выделения каротиноидов из каротиноид-продуцирующих биоорганизмов, а также к композиции, содержащей такие каротиноиды, и к применению такой твердой композиции в кормовых продуктах (или премиксах).
Как правило, эти биоорганизмы продуцируют каротиноид(ы), соединение(я) ретинола или другой низкомолекулярный липофильный агент(ы) и накапливают полученное соединение в количестве превышающем или равном 1% от массы сухого вещества их клеток.
В настоящее время каротиноиды получают следующим образом.
После окончания продуцирования каратиноида биоорганизмом каротиноид отделяют, промывают, а затем дополнительно включают в искомую форму для применения.
Неожиданно мы обнаружили, что, когда выделенный каротиноид обрабатывают, по меньшей мере, один раз стадией промывки с использованием водного раствора кислоты Бренстеда, то полученный каротиноид обладает лучшими свойствами (например, чистотой кристаллической формы, что дает лучшую композицию (стабильную эмульсию) из-за меньшего количества нежелательного липофильного остатка после проведения способа).
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (С) выделения каротиноида из каротиноид-продуцирующего биоорганизма, который включает следующие стадии:
(i) извлечение каротиноида из биомассы, по меньшей мере, одним растворителем (I);
(ii) необязательно, по меньшей мере, одна стадия промывки с использованием, по меньшей мере, одного растворителя, (II), который не смешивается с растворителем (I); и
(ii)
(iii) необязательно, сушка полученного раствора, содержащего каротиноид,
в котором, после стадии (i) осуществляется, по меньшей мере, одна стадия промывки с использованием водного раствора кислоты Бренстеда (стадия (Г)).
Предпочтительным является способ, в котором кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из фосфорной кислоты и органических кислот.
Более предпочтительной кислотой Бренстеда является органическая кислота.
Более предпочтительно кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из лимонной кислоты, винной кислоты и малеиновой кислоты.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (Ci), который является способом (С), в котором кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из фосфорной кислоты и органической кислоты.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (С2), который является способом (С), в котором кислота Бренстеда представляет собой органическую кислоту.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (Сз), который является способом (С), в котором кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из лимонной кислоты, винной кислоты и малеиновой кислоты.
Концентрация водного раствора кислоты Бренстеда в способе согласно настоящему изобретению может изменяться. Концентрация водного раствора кислоты Бренстеда, как правило, составляет до 10% по массе (масс. %), в пересчете на общую массу водного раствора. Обычно концентрация кислоты Бренстеда составляет, по меньшей мере, 0,01 масс. %, предпочтительно концентрация кислоты Бренстеда составляет 0,01 - 10 масс.%, более предпочтительно 1-5 масс.%, в пересчете на общую массу водного раствора.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (С4), который является способом (С), (CI), (С2) или (Сз), в котором концентрация водного раствора кислоты Бренстеда составляет 0,01 - 10 % по массе (масс. %), в пересчете на общую массу водного раствора, предпочтительно 1-5 масс. %, в пересчете на общую массу водного раствора.
Способ в соответствии с настоящим изобретением может быть осуществлен как в периодическом режиме, так и в непрерывном. Такая гибкость также является большим преимуществом.
Полученный кристалл действительно имеет лучшие свойства, чем полученный способами предшествующего уровня техники.
Экстрагирование (стадия (i)) обычно проводят при температуре окружающей среды (20-25°С). Но способ также может быть осуществлен при более высокой или более низкой температуре (при необходимости под давлением).
Предпочтительно способ проводят при температуре, которая ниже температуры
кипения растворителя, используемого для экстракции.
Предпочтительно экстракция каротиноидов из биомассы осуществляется, по меньшей мере, в одном растворителе (стадия (i)). Этот растворитель или смесь растворителей, предпочтительно, не смешиваются с водой.
Подходящими растворителями для стадии (i), являются, например, CH2CI2, хлороформ, н-гептан и н-гексан.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (С5), который является способом (С), (Ci), (С2), (Сз) или (С4), в котором извлечение каротиноидов из биомассы осуществляется, по меньшей мере, в одном растворителе (стадия (i)), не смешивающемся с водой.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (Сб), который является способом (С), (Ci), (С2), (Сз), (С4) или (С5), в котором экстракция каротиноидов из биомассы осуществляется, по меньшей мере, в одном растворителе (стадия (i)), который выбран из группы, состоящей из CH2CI2, хлороформа, н-гептана и н-гексана.
Экстрагирование (стадия (i)) обычно проводят при температуре окружающей среды (20-25°С). Но способ также может быть осуществлен при более высокой или более низкой температуре (при необходимости под давлением).
Предпочтительно способ проводят при температуре, которая ниже температуры кипения растворителя, который используется для экстракции (для того, чтобы избежать требования применения давления).
Биомасса может быть извлечена как таковая; или биомасса может быть вначале измельчена (и, необязательно, высушена), а затем экстрагирована; или биомасса может быть измельчена и экстрагирована одновременно. Кроме того, также возможно объединение этих процедур.
Способ в соответствии с настоящим изобретением, также может включать дополнительные одну или несколько стадий промывки. Это не является существенным признаком настоящего изобретения, но в дальнейшем может улучшить качество получаемого каротиноида.
Такая стадия промывки (стадия (ii)) проводится после стадии (i), а также до и/или после стадии (i1).
Стадию промывки осуществляют, по меньшей мере, с одним растворителем (II), который не смешивается с растворителями (I), используемыми на стадии (i).
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу (С7), который является способом (С), (Ci), (С2), (Сз), (С4), (С5) или (Сб), в котором одну или несколько стадий промывки (стадия (ii)) проводят после стадии (i), а также до и/или после стадии (i1).
И, наконец, на стадии (ш), состав можно высушить с получением каротиноида в сухом виде.
Но также можно использовать каротиноид в растворителе (или диспергированным в экстракционном растворителе).
Кроме того, после стадии экстракции (стадии (i)) возможно удаление растворителя в дополнительной стадии. Это может быть полезно, когда весь способ выделения проводят, например, в двух разных местах и/или хранят выделенный материал перед следующей стадией. Транспортировку и хранение проще осуществлять без какого-либо растворителя.
Биоорганизм продуцирует каротиноид(ы) (или также соединение(я) ретинола или другой низкомолекулярный липофильный агент(ы)) и накапливает полученное соединение в количестве превышающем или равном 1% от массы сухого вещества клеток.
Термин "биоорганизм", при использовании в данном документе, включает, например, биоорганизмы животные, млекопитающие, насекомые, растения, грибы, дрожжи, водоросли, бактерии, цианобактерии, архебактерии и протозои.
Биоорганизм, который продуцирует каротиноиды, может быть натуральным (поскольку может быть найден в природе), или может быть модифицированным.
Подходящие биоорганизмы известны в данной области, то есть из WO2006102342.
Термин "каротиноид", как он понимается в данной области, относится к структурно разнообразному классу пигментов, полученных из промежуточных продуктов изопреноидного пути. Стадией коммитирования в биосинтезе каротиноидов является образование фитоена из геранилгеранилпирофосфата. Каротиноиды могут быть ациклическими или циклическими, и могут содержать или не содержать кислород, так что термин каротиноиды включают как каротины, так и ксантофиллы. В общем, каротиноиды представляют собой углеводородные соединения, имеющие сопряженный полиеновый углеродный скелет, формально получаемые из пятиуглеродного соединения IPP, включая тритерпены (Сзо диапокаротиноиды) и тетратерпены (С40 каротиноиды), а также их кислородсодержащие производные и других соединения, которые, например, имеют длину С35, С50, Сбо, С70, С8о или другие длины. Многие каротиноиды имеют сильные свойства поглощения света и могут варьировать по длине свыше С200-С30 диапокаротеноидов, как правило, состоящих из шести изопреновых единиц, соединенных таким образом, что расположение изопреновых единиц инвертируется в центре молекулы так, что две центральные метальные группы находятся в 1,6-положении относительно друг друга, а остальные неконцевые метальные группы в 1,5-положении относительно друг друга. Такие Сзо каротиноиды могут быть формально получены из ациклической С30Н42 структуры, имеющей длинную центральную цепь с сопряженными двойными
связями, путем: (i) гидрогенизации (ii) дегидрогенизации, (iii) циклизации, (iv) окисления, (v) эстерификации/гликозилирования или любой комбинации этих процессов. С40 каротиноиды обычно состоят из восьми изопреновых единиц, соединенных таким образом, что расположение изопреновых единиц инвертируется в центре молекулы, так что две центральные метальные группы находятся в 1,6-положении относительно друг друга, а остальные неконцевые метальные группы в 1,5-положении относительно друг друга. Такие С40 каротиноиды могут быть формально получены из ациклической С40Н56 структуры, имеющей длинную центральную цепь с сопряженными двойными связями, путем (i) гидрогенизации, (ii) дегидрирования, (iii) циклизации, (iv) окисления, (v) этерификации/гликозилирования, или любой комбинации этих процессов. Класс С40 каротиноидов также включает некоторые соединения, которые возникают при перестройках углеродного скелета, либо при (формальном) удалении части этой структуры. Более чем 600 различных каротиноидов были идентифицированы в природе.
Каротиноиды включают, без ограничения перечисленным: антераксантин, адонирубин, адониксантин, астаксантин, кантаксантин, капсорубин, Р-криптоксантин, а-каротин, Р-каротин, 8-каротин, s-каротин, эхиненон, 3-гидроксиэхиненон, 3'-гидроксиэхиненон, у-каротин, \|/-каротин, 4-кето-у-каротин, (^-каротин, а-криптоксантин, деоксифлексиксантин, диатоксантин, 7,8-дидегидроастаксантин, дидегидроликопен, фукоксантин, фукоксантинол, изорениератен, Р-изорениератен, лактукаксантин, лютеин, ликопин, миксобактон, мимулаксантин, неоксантин, нейроспорен, гидроксинейроспорен, перидинин, фитоен, родопин, родопин глюкозид, родоксантин, 4- кето-рубиксантин, сифонаксантин, сфероидин, сфероиденон, спириллоксантин, торулен, 4- кето-торулен, 3-гидрокси 4-кето-торулен, уриолид, уриолид ацетат, виолаксантин, зеаксантин-Р-диглюкозид, зеаксантин и Сзо каротиноиды. Кроме того, каротиноидные соединения включают производные этих молекул, которые могут включать гидрокси-, метокси-, оксо-, эпокси-, карбокси- или альдегидные функциональные группы. Кроме того, включенные каротиноидные соединения включают сложный эфир (например, сложный эфир гликозида, сложный эфир жирной кислоты, ацетилирование) и сульфатные производные (например, этерифицированные ксантофиллы).
Предпочтительно, если каротиноиды выбирают из группы, состоящей из астаксантина, производных астаксантина (таких как этерифицированный астаксантин), зеаксантина и производных зеаксантина (например, этерифицированного зеаксантина).
Каротиноиды, полученные согласно настоящему изобретению, могут быть использованы в любом из множества применений, например, путем использования их биологических или питательных свойств (например, в качестве антиоксиданта и т.п.)
и/или их свойств пигмента. Например, каротиноиды, могут быть использованы в фармацевтических препаратах (см, например, Bertram, Nutr. Rev. 57:182, 1999; Singh et al, Oncology 12:1643, 1998; Rock, Pharmacol. Titer. 75:185, 1997; Edge et al, J. Photochem Photobiol 41:189, 1997; заявка на пат. США 2004/0116514; заявка на пат. США 2004/0259959) пищевых добавках (см., например, Koyama et al, J. Photochem Photobiol 9:265, 1991 ; Bauernfeind, Carotenoids as colorants and vitamin A precursors, Academic Press, NY, 1981 ; заявка на пат. США 2004/0115309; заявка на пат. США 2004/0234579), электрооптических приложениях, добавках для кормов для животных (см., например, Krinski, Pure Appl. Chem. 66:1003, 1994; Polazza et al, Meth. E nzymol. 213: 403, 1992), косметических средствах (в качестве антиоксидантов и/или в качестве косметических средств, в том числе отдушек, см., например, заявку на пат. США 2004/0127554) и т.д. Каротиноиды, продуцируемые в соответствии с настоящим изобретением, могут также быть использованы в качестве промежуточных продуктов получения других соединений (например, стероидов и т.д.).
В качестве примеров фармацевтических и/или медицинских приложений, астаксантин и/или их сложные эфиры могут быть полезны при лечении воспалительных заболеваний, астмы, атопического дерматита, аллергии, множественной миеломы, атеросклероза, сердечнососудистых заболеваний, заболеваний печени, заболеваний сосудов головного мозга, тромбоза, заболеваний, связанных с неоангиогенезом, включая рак, ревматизм, диабетическую ретинопатию; дегенерации желтого пятна и расстройства мозга, гиперлипидемии, ишемии почек, диабета, гипертензии, пролиферации и метастазирования опухолей; и нарушения обмена веществ. Кроме того, каротиноиды и астаксантин могут быть полезны при профилактике и лечении усталости, для улучшения функции почек при нефропатии из-за воспалительных заболеваний, а также при профилактике и лечении других заболеваний, связанных с жизненными привычками. Далее, было установлено, что астаксантин играет роль ингибитора различных биологических процессов, в том числе ингибитора интерлейкинов, ингибитора I фосфодиэстеразы, ингибитора фосфолипазы А2, ингибитора циклооксигеназы-2, ингибитора матриксных металлопротеиназ, ингибитора пролиферации клеток эндотелия капилляров, ингибитора липоксигеназы. См., например, японскую публикацию № 2006022121, опубликованную 20060126 (JP Appl No. 2005-301156 подана 20051017); японскую публикацию № 2006016408, опубликованную 20060119 (JP Appl No. 2005301155 подана 20051017); японскую публикацию № 2006016409, опубликованную 20060119 (JP Appl No. 2005-301157 подана 20051017); японскую публикацию № 2006016407, опубликованную 20060119 (JP Appl No. 2005-301153 подана 20051017);
японскую публикацию № 2006008717, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005301151 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008716, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005-301150 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008720, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005- 301158 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008719, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005301154 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008718, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005-301152 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008713, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005-301147 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008715, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005301149 подана 20051017); японскую публикацию № 2006008714, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005-301148 подана 20051017); и японскую публикацию № 2006008712, опубликованную 20060112 (JP Appl No. 2005-301146 подана 20051017).
Каротиноиды в кристаллической форме, полученные способом в соответствии с настоящим изобретением, далее могут быть включены в составы с помощью способов, обычно применяемых к каротиноидам.
Например, они могут быть использованы в жидкой, гелеобразной или твердой композициях. Они могут быть приготовлены в виде эмульсии/дисперсии или любой другой широко известной форме.
Поэтому настоящее изобретение также относится к применению каротиноида, полученного способом в соответствии с настоящим изобретением, как описано выше, в производстве пищевых продуктов, кормов, фармацевтических средств и/или средств личной гигиены.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению, по меньшей мере, одной твердой композиции, как описано выше, в производстве премикса для пищевых продуктов, кормов, фармацевтических средств и/или средств личной гигиены.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к пищевым продуктам, кормовым продуктам, фармацевтическим средствам и/или средствам личной гигиены, содержащим, по меньшей мере, один твердый состав, описанный выше.
Кроме того, данное изобретение относится также к премиксам (для пищевых продуктов, кормов, фармацевтических средств и/или средств личной гигиены), содержащим, по меньшей мере, один твердый состав, описанный выше.
Следующие примеры служат для иллюстрации настоящего изобретения.
Все части и проценты относятся к массе.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры были приготовлены в соответствии с описанием. Пример 1. Ацетшированный астаксантин
Биомассу (Yarrowia lipolytica) экстрагировали CH2CI2. Полученный таким образом раствор, который включал ацетилированный астаксантин, промывали примерно в два раза большим количеством деионизированной воды. Водную фазу отбрасывали. Эту стадию промывки повторяли.
Полученный таким образом раствор промывали водным раствором (3 масс.%) лимонной кислоты.
После этого раствор лимонной кислоты сливали.
Полученный таким образом раствор содержал около 1,6 масс.% (в пересчете на общую массу раствора) ацетилированного астаксантина.
Этот раствор использовали для получения эмульсии (с лигносульфонатом в качестве эмульгатора). Эта эмульсия оставалась стабильной также после удаления (органического) растворителя и распылительной сушки.
Пример 2. Ацетилированный астаксантин
Биомассу (Yarrowia lipolytica) экстрагировали CH2CI2.
Этот раствор разделяли на 3 части, и все части промывали лимонной кислотой, после чего растворы объединяли и еще раз промывали лимонной кислотой.
Этот раствор использовали для получения эмульсии (с лигносульфонатом в качестве эмульгатора). Эта эмульсия также оставалась стабильной после удаления (органического) растворителя и распылительной сушки.
Пример 3 (сравнительный пример). Ацетилированный астаксантин
Биомассу (Yarrowia lipolytica) экстрагировали CH2CI2.
Стадию промывки лимонной кислотой не проводили.
Полученный таким образом раствор предназначен для получения эмульсии (с лигносульфонатом в качестве эмульгатора).
Стабильная эмульсия не была получена, и не было возможности использовать эту эмульсию для дальнейших составов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ выделения каротиноида из каротиноид-продуцирующего биоорганизма, включающий следующие стадии:
(i) экстракция каротиноидов из биомассы, по меньшей мере, одним растворителем
00; и
(ii) необязательно, по меньшей мере, одна стадия промывки с использованием, по меньшей мере, одного растворителя, (II), который не смешивается с растворителем (I); и
(iii) необязательно, сушка полученного раствора, который содержит каротиноид,
отличающийся тем, что после стадии (i), проводится, по меньшей мере, одна стадия
промывки с использованием водного раствора кислоты Бренстеда (стадия (i1)).
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из фосфорной кислоты и органических кислот.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кислоту Бренстеда выбирают из группы, состоящей из лимонной кислоты, винной кислоты и малеиновой кислоты.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что
концентрация водного раствора кислоты Бренстеда составляет 0,5 - 10% по массе (масс.
%), в пересчете на общую массу водного раствора.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что способ осуществляют в периодическом или непрерывном режиме.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что экстракцию (стадия (i)) обычно проводят при температуре ниже точки кипения растворителя.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что извлечение каротиноидов из биомассы осуществляется, по меньшей мере, одним несмешивающимся с водой растворителем.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что извлечение каротиноидов из биомассы осуществляется, по меньшей мере, в одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из СШСк, хлороформа, н-гептана и н-гексана.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что, по меньшей мере, стадии промывки (стадия (ii)) осуществляют после стадии (i), а также до и/или после стадии (ii).
(19)
(19)
(19)
(19)
(19)
