EA201691940A1 20170228 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/201691940 Полный текст описания [**] EA201691940 20150326 Регистрационный номер и дата заявки EP14161820.7 20140326 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2015/056507 Номер международной заявки (PCT) WO2015/144803 20151001 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21702 Номер бюллетеня [**] НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ Название документа [8] C07D403/14, [8] A61K 31/4985, [8] A61P 35/00 Индексы МПК [BE] Вермелен Вим, [BE] Хостин Стивен Анна, [BE] Кюикенс Филип Альберт Селин, [CH] Джонс Расселл Марк, [CH] Броджини Диего Фернандо Доменико Сведения об авторах [GB] АСТЕКС ТЕРАПЬЮТИКС ЛТД. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201691940a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I) - производным хиноксалина, к фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений при лечении заболеваний, например рака.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I) - производным хиноксалина, к фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений при лечении заболеваний, например рака.


Евразийское (21) 201691940 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.02.28
(22) Дата подачи заявки 2015.03.26
(51) Int. Cl.
C07D 403/14 (2006.01) A61K31/4985 (2006.01) A61P35/00 (2006.01)
(54) НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
(31) 14161820.7
(32) 2014.03.26
(33) EP
(86) PCT/EP2015/056507
(87) WO 2015/144803 2015.10.01
(71) Заявитель:
АСТЕКС ТЕРАПЬЮТИКС ЛТД. (GB)
(72) Изобретатель:
Вермелен Вим, Хостин Стивен Анна, Кюикенс Филип Альберт Селин (BE), Джонс Расселл Марк, Броджини Диего Фернандо Доменико (CH)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Изобретение относится к новым соединениям формулы (I) - производным хиноксалина, к фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений при лечении заболеваний, например рака. R3
2420-537866ЕА/081
НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к новым соединениям - производным хиноксалина, к фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, к способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений в лечении заболеваний, например, рака.
Сущность изобретения
Согласно первому аспекту изобретения предложены соединения формулы (I):
(I)
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, Ci-балкил, который замещен -С (=0) NHCH3, или Ci-балкил, который замещен -S (=0) 2-С1-4алкилом;
R2a представляет собой водород, фтор или хлор;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
R3 представляет собой водород, С1_6алкил, С3_6циклоалкил или С1_2алкил, который замещен С3_6циклоалкилом;
R4 представляет собой водород, метил или этил;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
В одном варианте осуществления предложены соединения формулы (1а):
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой водород, С1_6алкил, гидроксиС1_6алкил, С1_6алкил, который замещен -C(=0)NHCH3, или С1_6алкил, который замещен -S (=0) 2-С1_4алкилом;
R2a представляет собой водород, фтор или хлор;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
R3 представляет собой водород, С1_6алкил, С3_6циклоалкил или С1-2алкил, который замещен С3-6циклоалкилом;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
В одном варианте осуществления предложены соединения формулы (lb):
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой водород, С1_6алкил, гидроксиС1_6алкил, С1_6алкил, который замещен -С (=0) NHCH3, или С1_6алкил, который замещен -S (=0) 2-С1-4алкилом;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси
или гидроксил;
R3 представляет собой водород, С1-6алкил, С3-6циклоалкил или С1-2алкил, который замещен С3-6циклоалкилом;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
В одном варианте осуществления предложены соединения формулы (1с):
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
Ri представляет собой водород, С1_6алкил, гидроксиС1_6алкил, С1_6алкил, который замещен -С (=0) NHCH3, или С1_6алкил, который замещен -S (=0) 2-С1-4алкилом;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
В одном варианте осуществления предложены соединения формулы (Id):
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
В одном варианте осуществления предложены соединения формулы (1е) :
(1е)
включая их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где:
Ri представляет собой водород, С1_6алкил, гидроксиС1_6алкил, С1_6алкил, который замещен -С (=0) NHCH3, или С1_6алкил, который замещен -S (=0) 2-С1_4алкилом;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.
WO2006/092430, W02008/003702, WO01/68047, WO2005/007099,
WO2004/098494, WO2011/026579, WO2012/154760, WO2000/055153, WO2012/073017,
WO2009/141386,
WO2011/028947, WO2011/047129,
ЕР548934, WO2013/061074,
WO2004/030635, W02008/141065, WO2007/003419, WO00/42026, WO2003/076416, WO2002/096873, US4166117, WO2011/135376, WO2013/061081, WO2013/061077,
WO2013/061080, WO2013/179034, WO2013/179033, W02014/174307, в каждой из которых раскрыт ряд гетероциклильных производных. Подробное описание изобретения
Если из контекста не следует иное, отсылки к формуле (I) во всех разделах настоящего документа (включая применение, способы и другие аспекты изобретения) включают отсылки ко всем остальным подформулам (например, la, lb, Ic, Id) , подгруппам, предпочтениям, вариантам осуществления и примерам, как определено в настоящем описании.
Префикс "Сх_у" (где х и у являются целыми числами) при использовании в настоящем описании относится к количеству атомов углерода в данной группе. Таким образом, С1_6алкильная
группа содержит от 1 до б атомов углерода, Сз-бЦиклоалкильная группа содержит от 3 до б атомов углерода, гидроксиС^алкильная группа содержит от 1 до 4 атомов углерода и так далее.
Термин 'С1_2алкил', 'С^алкил' или 'С1_6алкил', при использовании в настоящем описании в качестве группы или части группы, относится к нормальной или разветвленной насыщенный углеводородной группе, содержащей 1 или 2, или от 1 до 4 или от 1 до б атомов углерода. Примеры таких групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил или гексил и т.п.
Термин 'С3_6циклоалкил' при использовании в настоящем описании относится к насыщенному моноциклическому углеводородному кольцу, содержащему от 3 до б атомов углерода. Примеры таких групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил.
Термин 'гидроксиС1-4алкил' или ' гидроксиС1-балкил' при использовании в настоящем описании в качестве группы или части группы относится к С1_4алкильной или С1_6алкильной группе, определенной в настоящем описании, в которой один или больше одного атома водорода замещены гидроксильной группой. Термины ' гидроксиС1_4алкил' или ' гидроксиС1_6алкил' , таким образом, включают моногидроксиС1_4алкил, моногидроксиС1_6алкил, а также полигидроксиС1-4алкил и полигидроксиС1-балкил. Гидроксильной группой могут быть замещены один, два, три или больше атомов водорода, таким образом, гидроксиС1-4алкил или гидроксиС1-балкил могут иметь одну, две, три или больше гидроксильных группы. Примеры таких групп включают гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил и т.п.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), п представляет собой целое число, равное 1.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), п представляет собой целое число, равное 2.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно этил.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
представляет собой
водород.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2a
представляет собой
водород или фтор.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2a
представляет собой
водород.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2a
представляет собой
фтор.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2b
представляет собой
метокси.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2b
представляет собой
гидрокси.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2c
представляет собой
метокси.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2c
представляет собой
гидрокси.
В одном варианте
осуществления,
соединении
формулы
(I)
R2b представляет собой метокси, a R2c представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления в соединении формулы (I), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления в соединении формулы (I), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R3 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R3 представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно изопропил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R3 представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более
конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R4 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I), R4 представляет собой метил или этил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I):
п представляет собой целое число, равное 1;
Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С1-4алкил, более конкретно метил;
R2a представляет собой водород или фтор, в особенности водород;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1_6алкил, в особенности С1_6алкил, более конкретно С1_4алкил, еще более конкретно изопропил;
R4 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I):
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой С1_6алкил, в особенности С1_4алкил, более конкретно метил или этил;
R2a представляет собой водород или фтор, в особенности водород;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1_6алкил, в особенности С1-6алкил, более конкретно С1-4алкил, еще более конкретно изопропил или метил;
R4 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), п представляет собой целое число, равное 1.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), п представляет собой целое число, равное 2.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно этил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), Ri представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2a представляет собой водород или фтор.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2a представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2a представляет собой фтор.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2b представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2b представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2c представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2b представляет собой метокси, a R2c представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R3 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R3 представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно изопропил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а), R3 представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более
конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а):
п представляет собой целое число, равное 1;
Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил;
R2a представляет собой водород или фтор, в особенности водород;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности С1-6алкил, более конкретно С^алкил, еще более конкретно изопропил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1а):
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой С1_6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил или этил;
R2a представляет собой водород или фтор, в особенности водород;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1_6алкил, в особенности С1_6алкил, более конкретно С^алкил, еще более конкретно изопропил или метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), п представляет собой целое число, равное 1.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), п представляет собой целое число, равное 2.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно этил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), Ri представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb),
R.2b представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R.2b представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R.2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R.2c представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R.2b представляет собой метокси, a R.2C представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R3 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R3 представляет собой С1_6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно изопропил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb), R3 представляет собой С1_6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb):
п представляет собой целое число, равное 1;
Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности С1-6алкил, более конкретно С^алкил, еще более конкретно изопропил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (lb): п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил или этил;
R2b представляет собой метокси; R2c представляет собой метокси;
R3 представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности С1-6алкил, более конкретно С^алкил, еще более конкретно изопропил или метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно этил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), Ri представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2b представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2b представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2c представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2b представляет собой метокси, a R2c представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с):
Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил;
R.2b представляет собой метокси; R.2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1с): Ri представляет собой С1-6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил или этил;
R2b представляет собой метокси; R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2b представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2b представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2c представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2b представляет собой метокси, a R2c представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (Id), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно метил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности Ci_ 6алкил, более конкретно этил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), Ri представляет собой водород.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), R2b представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е),
R.2b представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), R.2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), R.2c представляет собой гидрокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), R.2b представляет собой метокси, a R.2C представляет собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), R2b представляет собой гидроксил, a R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), оба R2b и R2c представляют собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е), оба R2b и R2c представляют собой гидроксил.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е):
Ri представляет собой С1_6алкил, в особенности С^алкил, более конкретно метил;
R2b представляет собой метокси;
R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (1е): Ri представляет С1_6алкил, в особенности С1_4алкил, более конкретно метил или этил;
R2b представляет собой метокси; R2c представляет собой метокси.
В одном варианте осуществления, в соединении формулы (I):
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой водород или С1-6алкил, в особенности С1-4алкил, более конкретно метил или этил;
R2a представляет собой водород или фтор, в особенности водород;
R2b представляет собой метокси или гидроксил; R2c представляет собой метокси или гидроксил; R3 представляет собой С1-6алкил, более конкретно С1-4алкил, даже более конкретно изопропил или метил; R4 представляет собой водород.
В одном варианте осуществления соединение формулы (I), как определено в настоящем описании, выбрано из следующих соединений или является одним из следующих соединений:
их фармацевтически приемлемой солью или их сольватом.
В одном варианте осуществления соединение формулы (I), как определено в настоящем описании, выбрано из следующих соединений или является одним из следующих соединений:
их фармацевтически приемлемой солью или их сольватом.
Во избежание неправильного толкования, следует понимать, что каждое общее и конкретное предпочтение, вариант осуществления изобретения и пример для одного заместителя могут быть комбинированы с каждым общим и конкретным предпочтением, вариантом осуществления изобретения и примером для одного или более, предпочтительно всех, других заместителей, как определено в настоящем описании, и что все такие варианты осуществления изобретения охвачены настоящей заявкой.
Способы получения соединений формулы (I)
В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если из контекста не следует иное, отсылки к формуле (I) также включают все другие ее подгруппы и примеры, как определено в настоящем описании.
В общем, соединения формулы (I) могут быть получены согласно следующей схеме реакции.
Схема 1
R2b н о R2b
(ii) о)
В Схеме 1 применяются следующие условия реакции:
1: реакция промежуточного соединения формулы (II) с
формальдегидом в присутствии подходящего растворителя, такого
как, например, диоксан, N,N-диметилформамид, N,N-
диметилацетамид, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения.
Как предполагают, специалисту в данной области будет известно, при каких условиях и на какой части молекулы может потребоваться защитная группа. Например, защитная группа на заместителе Ri или на пиразольной группе, или защитная группа на заместителе R3 или на заместителе R2a/b,c или их комбинации. Специалисту, как также предполагают, будет известна наиболее подходящая защитная группа, такая как, например, -С(=0)-0-Ci_
или О-Si (СН3) 2 (С (СН3) 3) , или -СН2-0-
сн2сн2-о-сн3.
Настоящее изобретение также включает дейтерированные соединения. Такие дейтерированные соединения могут быть получены при использовании подходящих дейтерированных промежуточных соединений в процессе синтеза.
Соединения формулы (I) также могут быть превращены друг в друга посредством известных в уровне техники реакций или превращений функциональных групп.
Соединения формулы (I), в которых Кг представляет собой водород, могут быть превращены в соединение формулы (I), где Ri представляет собой Ci-балкил или гидроксиС1-балкил, в реакции с С1-балкил-ЭД или гидроксиС1-балкил-1л/, где W представляет собой
подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например, бром и т.п., в присутствии подходящего основания, такого как, например, гидрид натрия или карбонат калия, и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил в или N,N-диметилформамид.
Соединения формулы (I), в которых Ri представляет собой водород, могут быть также превращены в соединение формулы (I), где Ri представляет собой С1-6алкил-0Н, в реакции с W-Ci-балкил-O-Si(СН3) 2 (С(СНз) з) в присутствии подходящего основания, такого как, например, гидрид натрия, и подходящего растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид, с последующей реакцией снятия силильной защитной группы известными методами.
Соединения формулы (I), в которых Ri представляет собой водород, могут быть также превращены в соединение формулы (I), где Ri представляет собой этил, который замещен -S(=0)2_C1_ 6алкилом, в реакции с С1_6алкил-винилсульфоном, в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин, и подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например, метанол, или в реакции с С1_6алкил-2-бромэтилсульфоном в присутствии подходящего депротонирующего агента, такого как, например, NaH, и подходящего растворителя, такого как, например, диметилформамид.
Соединения формулы (I), в которых R2b или R2c представляют собой -ОСН3, могут быть превращены в соединение формулы (I), где R2b или R2c представляют собой -ОН, в реакции с трибромидом бора в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан.
Соединения формулы (I), в которых R2b или R2c представляют собой -ОН, могут быть превращены в соединение формулы (I), где R2b или R2c представляют собой -ОСН3, в реакции с метилиодидом в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат калия, и подходящего растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид.
В общем, соединения формулы (Id) могут быть также получены при их инкубировании с фракциями печени животных, например, крысы или человека, и последующем выделении требуемых продуктов
Промежуточные соединения формулы (II) или (11-а) могут быть получены, как описано в WO2011/135376 (например, соединения формулы (1-Ь) или (1-Ь-З) в WO2011/135376).
Другим аспектом изобретения является способ получения соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, где способ включает:
(i) реакцию соединения формулы (II) с формальдегидом в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, диоксан, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, при подходящей температуре, такой как температура от комнатной температуры до температуры кипения;
(II) •
где Ri, R2a, R2b/ ^2с/ ^з/ R4 и п являются такими, как определено в настоящем описании; и, необязательно, с последующим превращением одного соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I).
Фармацевтически приемлемые соли, сольваты или их производные
В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если из контекста не следует иное, ссылки на формулу (I) включают ссылки на все другие подгруппы, предпочтения, варианты осуществления и примеры, как определено в настоящем описании.
Если не указано иное, отсылка к конкретному соединению также включает ионные формы, соли, сольваты, изомеры, таутомеры, сложные эфиры, пролекарства, изотопы и защищенные формы соединения, например, как описано ниже; предпочтительно ионные формы, или соли, или таутомеры, или изомеры, или сольваты соединения; и более предпочтительно ионные формы или соли, или таутомеры, или сольваты, или защитные формы соединения, еще более предпочтительно соли или таутомеры или сольваты соединения. Многие соединения формулы (I) могут существовать в виде солей, например, солей присоединения кислот, или, в некоторых случаях, в виде солей органических или неорганических оснований, таких как карбоксилатные, сульфонатные и фосфатные соли. Все такие соли включены в объем настоящего изобретения, и ссылки на соединения формулы (I) включают солевые формы соединений. Следует принять во внимание, что ссылки на "производные" включают ссылки на ионные формы, соли, сольваты, изомеры, таутомеры, сложные эфиры, пролекарства, изотопы и защищенные формы соединений.
Согласно одному аспекту изобретения предложено соединение, как определено в описании, или его соль, таутомер или сольват. Согласно другому аспекту изобретения предложено соединение, как определено в описании, или его соль или сольват. Ссылки на соединения формулы (I) и их подгруппы, как определено в описании, включают в свой объем соли или сольваты, или таутомеры соединений.
Соединения в фоме солей согласно настоящему изобретению обычно являются фармацевтически приемлемыми солями, при этом примеры фармацевтически приемлемых солей обсуждаются в публикации Berge et al. (1977) "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19. Впрочем, соли, которые не являются фармацевтически приемлемыми солями, также
могут быть получены в форме промежуточных соединений, которые затем могут быть превращены в фармацевтически приемлемые соли. Такие, не являющиеся фармацевтически приемлемыми, солевые формы, которые могут оказаться пригодными, например, при очистке или разделении соединений согласно изобретению, также составляют часть изобретения.
Соли согласно настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группу, с помощью стандартных химических способов, таких как способы, описанные в Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Как правило, такие соли могут быть получены при взаимодействии указанных соединений в форме свободной кислоты или основания с соответствующим основанием или кислотой в воде или в органическом растворителе, или в их смеси; обычно используют неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Соединения согласно изобретению могут существовать в виде моно- или ди-солей в зависимости от рКа кислоты, из которой образуется соль.
Соли присоединения кислот могут быть образованы с
использованием целого ряда кислот, как неорганических, так и
органических. Примеры солей присоединения кислот включают соли,
образованные с кислотой, выбранной из группы, состоящей из
уксусной, 2,2-дихлоруксусной, адипиновой, альгиновой,
аскорбиновой (например, L-аскорбиновой), L-аспарагиновой,
бензолсульфоновой, бензойной, 4-ацетамидобензойной, бутановой,
(+)камфорной, камфорсульфоновой, (+)-(1S)-камфор-10-
сульфоновой, каприновой, капроновой, каприловой, коричной,
лимонной, цикламовой, додецилсерной, этан-1,2-дисульфоновой,
этансульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, муравьиной,
фумаровой, галактаровой, гентизиновой, глюкогептоновой, D-
глюконовой, глюкуроновой (например, D-глюкуроновой),
глутаминовой (например, L-глутаминовой), а-оксоглутаровой, гликолевой, гиппуровой, бромоводородной, хлороводородной,
иодоводородной, изетионовой, молочной (например, (+)-L-
молочной, (±)-DL-молочной) , лактобионовой, малеиновой,
яблочной, (-)-L-яблочной, малоновой, (±)-DL-миндальной,
метансульфоновой, нафталинсульфоновой (например, нафталин-2-
сульфоновой), нафталин-1,5-дисульфоновой, 1-гидрокси-2-
нафтойной, никотиновой, азотной, олеиновой, оротовой,
щавелевой, пальмитиновой, памовой, фосфорной, пропионовой, L-
пироглутаминовой, пировиноградной, салициловой, 4-
аминосалициловой, себациновой, стеариновой, янтарной, серной, танниновой, (+)-L-винной, тиоциановой, толуолсульфоновой (например, р-толуолсульфоновой), ундециленовой и валериановой кислот, а также ацилированных аминокислот и катионообменных смол.
Одна отдельная группа солей состоит из солей, образованных
из уксусной, хлороводородной, иодоводородной, фосфорной,
азотной, серной, лимонной, молочной, янтарной, малеиновой,
яблочной, изетионовой, фумаровой, бензолсульфоновой,
толуолсульфоновой, метансульфоновой (мезилат), этансульфоновой, нафталинсульфоновой, валериановой, уксусной, пропановой, бутановой, малоновой, глюкуроновой и лактобионовой кислот. Другая группа солей присоединения кислот включает соли, образованные из уксусной, адипиновой, аскорбиновой, аспарагиновой, лимонной, DL-молочной, фумаровой, глюконовой, глюкуроновой, гиппуровой, хлороводородной, глутаминовой, DL-яблочной, метансульфоновой, себациновой, стеариновой, янтарной и винной кислот.
Если соединение является анионным или имеет функциональную группу, которая может быть анионной, то тогда соль может быть образована с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, без ограничения, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и К+, катионы щелочноземельных металлов, такие как Са2+ и Мд2+, и другие катионы, такие как А13+. Примеры подходящих органических катионов включают, без ограничения, ион аммония (т.е. NH4+) и ионы замещенного аммония (например, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+) .
Примерами некоторых подходящих ионов замещенного аммония являются такие ионы, которые получены из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером обычного иона четвертичного аммония является N(CH3)4+.
В случаях, когда соединения формулы (I) содержат функциональную аминогруппу, такие соединения могут образовывать соли четвертичного аммония, например, в результате реакции с алкилирующим агентом, согласно способам, хорошо известным специалистам. Такие соединения четвертичного аммония включены в объем формулы (I) . Соединения формулы (I), содержащие функциональную аминогруппу, также могут образовывать N-оксиды. Ссылка в описании на соединение формулы (I), которое содержит функциональную аминогруппу, также включает N-оксид. В случае, когда соединение содержит несколько функциональных аминогрупп, один или более одного атомов азота могут быть окислены с образованием N-оксида. Конкретными примерами N-оксидов являются N-оксиды третичного амина или атома азота азотсодержащего гетероцикла. N-оксиды могут быть образованы при обработке соответствующего амина окислителем, таким как пероксид водорода или перкислота (например, пероксикарбоновая кислота), смотреть, например, Advanced Organic Chemistry, Jerry March, 4th Edition, Wiley Interscience, pages. Более конкретно, N-оксиды могут быть получены способом, описанным L. W. Deady (Syn. Comm. (1977), 7, 509-514), в котором аминосоединение подвергают взаимодействию с м-хлорпероксибензойной кислотой (МХПБК), например, в инертном растворителе, таком как дихлорметан.
Соединения согласно изобретению могут образовывать сольваты, например, с водой (т.е. гидраты) или с обычными органическими растворителями. При использовании в настоящем описании, термин "сольват" означает физическую ассоциацию соединений согласно настоящему изобретению с одной или более молекулами растворителя. Указанная физическая ассоциация включает различные степени ионного и ковалентного связывания,
включая водородное связывание. В некоторых случаях сольват можно будет выделять, например, когда одна или более молекул растворителя включены в кристаллическую решетку твердого кристаллического вещества. Термин "сольват" охватывает как сольваты в фазе раствора, так и выделяемые сольваты. Неограничивающие примеры подходящих сольватов включают соединения согласно изобретению в комбинации с водой, изопропанолом, этанолом, метанолом, ДМСО, этилацетатом, уксусной кислотой или этаноламином и т.п. Соединения согласно изобретению могут оказывать свое биологическое действие, когда они находятся в растворе.
Сольваты хорошо известны в фармацевтической химии. Они
могут играть важную роль в способах получения вещества
(например, в отношении его очистки, хранения вещества
(например, его стабильности) и легкости обращения с веществом)
и часто образуются как часть стадий выделения или очистки
химического синтеза. Специалист в данной области сможет
определить посредством стандартных и длительно используемых
методик, образовался ли гидрат или другой сольват в условиях
выделения или условиях очистки, применяемых для получения
данного соединения. Примеры таких методик включают
термогравиметрический анализ (ТГА), дифференциальную
сканирующую калориметрию (ДСК), рентгеновскую кристаллографию (например, рентгеновскую кристаллографию монокристаллов или порошковую рентгеновскую дифракцию) и ЯМР твердого тела (ЯМР-ТТ, также известную как ЯМР с вращением образца под магическим углом или ЯМР-ВМУ). Такие методики представляют собой такую же часть стандартного аналитического инструментального набора опытного химика, как и ЯМР, ИК, ВЭЖХ и МС. В альтернативе, специалист в данной области может получить сольват искусственно, при использовании условий кристаллизации, которые включают количество растворителя, требуемое для конкретного сольвата. Затем описанные выше стандартные методы могут быть использованы для установления факта образования сольватов. Также формула (I) охватывает любые комплексы (например, комплексы включения или клатраты с соединениями, такими как
циклодекстрины, или комплексы с металлами) соединений.
Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению могут иметь одну или более полиморфных (кристаллических) или аморфных форм и в таком качестве должны быть включены в объем изобретения.
Соединения формулы (I) могут существовать в виде ряда
различных геометрических изомерных и таутомерных форм, при этом
ссылки на соединения формулы (I) включают все такие формы. Во
избежание неопределенности, если соединение может существовать
в одной из нескольких геометрических изомерных и таутомерных
форм, и при этом только одна конкретно описана или показана,
все остальные охвачены формулой (I). Другие примеры таутомерных
форм включают, например, кето-, енольные и енолятные формы,
как, например, в следующих таутомерных парах: кето/енол
(представлены ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт,
амидин/ендиамины, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол и
нитро/ацинитро.
V ,? ч он н+ х а -с-с - с=с - с=с
| \ / \ н+ / \
кето енол енолят
В случаях, когда соединения формулы (I) содержат один или более хиральных центров и могут существовать в виде двух или более оптических изомеров, ссылки на соединения формулы (I) включают все их оптические изомерные формы (например, энантиомеры, эпимеры и диастереоизомеры), либо в виде индивидуальных оптических изомеров, либо в виде смесей (например, рацемических смесей) двух или более оптических изомеров, если из контекста не требуется иное. Оптические изомеры могут быть охарактеризованы и идентифицированы по их оптической активности (т.е., как+и - изомеры, или о! и 1 изомеры), или они могут быть охарактеризованы на основе их абсолютной стереохимии, с использованием "R и S" номенклатуры, разработанной Каном, Ингольдом и Прелогом, см. Advanced Organic Chemistry, Jerry March, 4th Edition, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 109-114, а также см. Cahn, Ingold & Prelog
(1966) Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415. Оптические изомеры могут быть разделены с помощью ряда методик, включающих хиральную хроматографию (хроматографию на хиральной подложке), при этом такие методики хорошо известны специалисту в данной области. В качестве альтернативы хиральной хроматографии, оптические изомеры могут быть разделены путем образования диастереоизомерных солей с хиральными кислотами, такими как
(+)-винная кислота, (-)-пироглутаминовая кислота, (-)-ди-толуоил-Ъ-винная кислота, (+)-миндальная кислота, (-)-яблочная кислота и (-)-камфорсульфоновая кислота, разделения диастереоизомеров предпочтительной кристаллизацией, а затем диссоциации солей с получением индивидуального энантиомера свободного основания.
В случаях, когда соединения формулы (I) существуют в виде
двух или более оптических изомерных форм, один энантиомер в
паре энантиомеров может проявлять преимущества над другим
энантиомером, например, в отношении биологической активности.
Таким образом, в некоторых случаях может оказаться желательным
использовать в качестве терапевтического средства только один
из пары энантиомеров или только один из множества
диастереоизомеров. Соответственно, в изобретении предложены
композиции, содержащие соединение формулы (I), имеющее один или
более хиральных центров, где по меньшей мере 55% (например, по
меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95%)
соединения формулы (I) присутствует в виде одиночного
оптического изомера (например, энантиомера или
диастереоизомера). В одном общем варианте осуществления, 99%
или более (например, по существу все) от общего количества
соединения формулы (I) может присутствовать в виде одиночного
оптического изомера (например, энантиомера или
диастереоизомера). Если изомерная форма идентифицирована
(например, S конфигурация или Е изомер), это означает, что указанная изомерная форма присутствует в количестве по меньшей мере 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше (например, по существу все) от общего количества соединения согласно изобретению.
Во всех случаях, когда в настоящем описании, выше или
ниже, соединения включают следующую связь , это означает, что соединение является отдельным стереоизомером с неизвестной конфигурацией или смесью стереоизомеров.
Соединения согласно изобретению включают соединения с одним или более изотопными замещениями, при этом ссылка на конкретный элемент включает в себя все изотопы элемента. Например, ссылка на водород включает в себя гН, 2Н (D) и 3Н (Т). Аналогично, ссылки на углерод и кислород включают в себя соответственно 12С, 13С и 4С и 160 и 180. Изотопы могут быть радиоактивными и нерадиоактивными. В одном варианте осуществления изобретения, соединения не содержат радиоактивные изотопы. Такие соединения являются предпочтительными для терапевтического применения. Впрочем, в другом варианте осуществления изобретения, соединение может содержать один или более радиоизотопов. Соединения, содержащие такие радиоизотопы, могут применяться в контексте диагностики.
Сложные эфиры, такие как сложные эфиры карбоновых кислот и ацилоксиэфиры соединений формулы (I), несущих карбоксильную группу или гидроксильную группу, также охвачены формулой (I). В одном варианте осуществления изобретения, формула (I) включает в себя сложные эфиры соединений формулы (I), несущих гидроксильную группу. В другом варианте осуществления изобретения формула (I) не включает в себя сложные эфиры соединений формулы (I), несущих гидроксильную группу. Примеры ацилоксигрупп (обратимых сложноэфирных групп) представлены -OC(=0)R, где R является ацилокси-заместителем, например, Ci_7 алкильной группой, С3_20 гетероциклильной группой или С5_20 арильной группой, предпочтительно Ci_7 алкильной группой. Конкретные примеры ацилоксигрупп включают, без ограничения, ОС(=0)СН3 (ацетокси), -ОС (=0) СН2СН3, -ОС (=0) С (СН3) 3, -ОС (=0) Ph и -ОС(=0)CH2Ph.
Например, некоторые пролекарства являются сложными эфирами действующего соединения (например, физиологически приемлемым метаболически лабильным сложным эфиром). Под "пролекарствами"
подразумевают, например, любое соединение, которое in vivo превращается в биологически активное соединение формулы (I) . В процессе метаболизма сложноэфирная группа отщепляется с получением активного лекарственного вещества. Такие сложные эфиры могут быть образованы при этерификации, например, любой из гидроксильных групп в исходном соединении, с предварительной защитой, в соответствующих случаях, любых других реакционноспособных групп, присутствующих в исходном соединении, и последующим удалением защитной группы, в случае необходимости.
Примеры таких метаболически лабильных сложных эфиров включают Ci-баминоалкил [например, аминоэтил; 2-(N,N-диэтиламино)этил; 2-(4-морфолино)этил); и ацилокси-С^алкил
[например, ацилоксиметил; ацилоксиэтил; пивалоилоксиметил;
ацетоксиметил; 1-ацетоксиэтил; 1-(1-метокси-1-
метил)этилкарбонилоксиэтил; 1-(бензоилокси)этил;
изопропоксикарбонилоксиметил; 1-изопропоксикарбонилоксиэтил;
циклогексилкарбонилоксиметил; 1-циклогексилкарбонилоксиэтил ;
циклогексилоксикарбонилоксиметил; 1-циклогексилоксикарбонил-
оксиэтил; (4-тетрагидропиранилокси)карбонилоксиметил; 1-(4-
тетрагидропиранилокси)карбонилоксиэтил; (4-
тетрагидропиранил)карбонилоксиметил; и 1-(4-
тетрагидропиранил)карбонилоксиэтил]. Кроме того, некоторые пролекарства активируются энзиматически с образованием активного соединения или соединения, которое в результате дальнейшей химической реакции превращается в действующее соединение (например, как в антиген-направленной терапии с использованием фермента и пролекарства (ADEPT), ген-направленной терапии с использованием фермента и пролекарства
(GDEPT) и лиганд-направленной терапии с использованием фермента и пролекарства (LIDEPT) и т.д.). Например, пролекарство может быть производным сахара или другим гликозидным конъюгатом, или может быть сложноэфирным производным аминокислоты. Тирозиновая протеинкиназа (РТК)
Соединения согласно изобретению, представленные в описании, ингибируют или модулируют активность некоторых
тирозинкиназ, и, следовательно, соединения будут пригодны в лечении или профилактике, в частности лечении заболеваний или состояний, опосредованных указанными тирозинкиназами, в частности FGFR. FGFR
Семейство протеинтирозинкиназных (РТК) рецепторов фактора роста фибробластов (FGF) регулирует различные типы физиологических функций, включающих митогенез, заживление ран, дифференцировку клеток, ангиогенез и развитие. Как нормальный, так и злокачественный рост клеток, а также пролиферация находятся под воздействием изменений в локальной концентрации факторов FGF, молекул внеклеточной сигнализации, которые действуют как аутокринные, а также паракринные факторы. Аутокринная сигнализация FGF может быть особенно важной в развитии раковых опухолей, зависимых от стероидных гормонов, до гормононезависимого состояния. Факторы FGF и их рецепторы экспрессируются при повышенных уровнях в нескольких линиях тканей и клеток, при этом повышенная экспрессия, как полагают, вносит вклад в злокачественный фенотип. Кроме того, ряд онкогенов являются гомологами генов, кодирующих рецепторы факторов роста, и существует вероятность аномальной активации FGF-зависимой сигнализации при раке поджелудочной железы человека (Knights et al., Pharmacology and Therapeutics 2010 125:1 (105-117); Korc. et al Current Cancer Drug Targets 2009 9:5 (639-651)).
Двумя типичными предствителями являются кислотный фактор роста фибробластов (aFGF или FGF1) и основный фактор роста фибробластов (bFGF или FGF2), и на сегодняшний день идентифицированы по меньшей мере двадцать различных предствителей семейства FGF. Клеточный ответ на факторы FGF передается через четыре типа трансмембранных протеинтирозинкиназных рецепторов факторов роста фибробластов (FGFR) с высоким сродством, обозначенных номерами от 1 до 4 (от FGFR1 до FGFR4).
Прерывание сигнального пути FGFR1 должно влиять на пролиферацию опухолевых клеток, поскольку данная киназа
активируется во многих типах опухолей в добавление к пролиферирующим эндотелиальным клеткам. Повышенная экспрессия и активация FGFR1 в опухолеассоциированной сосудистой сети указывает на роль этих молекул в ангиогенезе опухоли.
Недавнее исследование продемонстрировало связь между экспрессией FGFR1 и туморогенностью в классических дольковых карциномах (КДК). Карциномы КДК являются причиной 10-15% всех опухолей молочной железы и, как правило, недостатка экспрессии р53 и Нег2 при сохранении экспрессии рецептора эстрогена. Амплификация гена 8р12-р11.2 была продемонстрирована в -50% случаев КДК, причем было показано, что она связана с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с миРНК, направленными против FGFR1, или низкомолекулярным ингибитором рецептора показали, что клеточные линии, имеющие указанную амплификацию, особенно чувствительны к ингибированию данного сигнального пути. Рабдомиосаркома (RMS) является наиболее распространенной саркомой мягких тканей у детей, которая вероятно, возникает в результате нарушения пролиферации и дифференцировки в течение миогенеза скелета. Рецептор FGFR1 оверэкспрессирован в первичных рабдомиосаркомах и ассоциирован с гипометилированием 5'CpG-островков и нарушенной экспрессией генов АКТ1, NOG и ВМР4. Рецептор FGFR1 также связывали с плоскоклеточным раком легкого, раком толстой и прямой кишки, глиобластомой, астроцитомой, раком предстательной железы, мелкоклеточным раком легкого, меланомой, раковыми опухолями головы и шеи, раком щитовидной железы, раком матки.
Рецептор 2 фактора роста фибробластов проявляет высокое
сродство к кислотному и/или основному факторам роста
фибробластов, а также к лигандам фактора роста кератиноцитов.
Рецептор 2 фактора роста фибробластов также распространяет
мощные остеогенные эффекты факторов FGF в процессе роста и
дифференцировки остеобластов. Мутации в рецепторе 2 фактора
роста фибробластов, приводящие к сложным функциональным
изменениям, как было показано, вызывают аномальное окостенение
черепных швов (краниосиностоз) , что свидетельствует о главной
роли FGFR сигнализации в костеобразовании в
соединительнотканной мембране. Например, при синдроме Аперта (АР) , который характеризуется преждевременным окостенением черепных швов, большинство случаев связано с точечными мутациями, приводящими к приобретению новой и патологической функции в рецепторе 2 фактора роста фибробластов. Кроме того, скрининг мутаций у больных синдромной формой краниосиностоза указывает на то, что повторные мутации FGFR2 служат причиной тяжелых форм синдрома Пфейфера. Конкретные мутации FGFR2 включают W290C, D321A, Y340C, C342R, C342S, C342W, N549H, K641R в FGFR2.
Несколько тяжелых нарушений в развитии скелета человека, включая синдромы Аперта, Крузона, Джексона-Вейсса, Вира-Стивенсона (синдром складчатой кожи) и Пфейфера, ассоциированы с наличием мутаций в рецепторе 2 фактора роста фибробластов. Большинство случаев, если не все, синдрома Пфейфера (PS) также вызваны de novo мутацией гена рецептора 2 фактора роста фибробластов, и недавно было показано, что мутации в рецепторе 2 фактора роста фибробластов нарушают один из критериев, обусловливающих лигандную специфичность. А именно, две мутантные сплайс-формы рецептора фактора роста фибробластов, FGFR2c и FGFR2b, приобретают способность связывать атипичные лиганды FGF и активироваться ими. Такая потеря лигандной специфичности приводит к нарушению сигнализации, и, как полагают, тяжелый фенотип указанных синдромов заболевания является результатом эктопической лиганд-зависимой активации рецептора 2 фактора роста фибробластов.
Генетические аберрации рецепторной тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводят к эктопически экспрессируемым или нерегулируемым, конститутивно активным FGFR3-pe4enTopaM. Такие нарушения связаны с подгруппой множественных миелом и наблюдаются при карциноме мочевого пузыря, гепатоцеллюлярной карциноме, плоскоклеточной карциноме полости рта и цервикальных карциномах. Соответственно, ингибиторы FGFR3 могут применяться в лечении множественной миеломы, карциномы мочевого пузыря и цервикальной карциномы. Экспрессия FGFR3 также повышена при
раке мочевого пузыря, в частности, при инвазивном раке мочевого
пузыря. Рецептор FGFR3 часто активирован при мутациях в
уротелиальной карциноме (UC). Повышенную экспрессию
ассоциировали с мутацией (8 5% опухолей с мутациями обнаружили высокий уровень экспрессии), но также 42% опухолей без обнаружимой мутации показывали оверэкспрессию, включая многие мышечно-инвазивные опухоли. Рецептор FGFR3 также связан с раком эндометрия и щитовидной железы.
Повышенную экспрессию FGFR4 связывали с карциномами предстательной железы и щитовидной железы. Кроме того, зародышевый полиморфизм (Gly388Arg) ассоциирован с повышением частоты возникновения рака легкого, молочной железы, толстой кишки, печени (ГПК) и предстательной железы. Кроме того, усеченная форма FGFR4 (включающая киназный домен), как было обнаружено, также присутствует в 40% опухолей гипофиза, но не присутствует в нормальной ткани. Повышенную экспрессию FGFR4 наблюдали в опухолях печени, толстой кишки и легкого. Рецептор FGFR4 связан с раком толстой и прямой кишки и раком печени, где экспрессия его лиганда FGF19 часто повышена. Рецептор FGFR4 также связан с астроцитомами, рабдомиосаркомой.
Фиброзные состояния представляют главную медицинскую проблему, возникающую в результате аномального или избыточного отложения фиброзной ткани. Такие отложения встречаются при многих заболеваниях, включая цирроз печени, гломерулонефрит, легочный фиброз, системный фиброз, ревматоидный артрит, а также при естественном процессе заживления ран. Механизмы развития фиброза не полностью изучены, но, как полагают, он возникает в результате действий различных цитокинов (включающих фактор некроза опухоли (ФИО), факторы роста фибробластов (FGF), фактор роста тромбоцитов (PDGF) и трансформирующий фактор роста бета). Фактор (TGF|3) вовлечен в пролиферацию фибробластов и отложение белков внеклеточного матрикса (включающих коллаген и фибронектин). Это приводит к изменению структуры ткани и функции и последующей патологии.
Ряд доклинических исследований продемонстрировал активацию
факторов роста фибробластов в доклинических моделях фиброза
легкого. Как было показано, TGF|3l и PDGF вовлечены в процесс
фиброгенеза, и в последующей опубликованной работе
предполагается, что повышение факторов FGF и последующее
усиление пролиферации фибробластов могут происходить в ответ на
повышение TGF|3l. Потенциальный терапевтический эффект,
направленный на фиброзный механизм при таких состояниях, как
идиопатический легочный фиброз (IPF), предполагается на основе
описанного клинического эффекта противофиброзного средства
пирфенидона. Идиопатический легочный фиброз (также называемый
криптогенным фиброзирующим альвеолитом) является
прогрессирующим заболеванием, включающим рубцевание легкого. Постепенно альвеолярные мешочки легких замещаются фиброзной тканью, которая становится толще, что вызывает необратимую потерю способности ткани переносить кислород в кровоток. Симптомы заболевания включают одышку, хронический сухой кашель, утомляемость, боль в груди и потерю аппетита, приводящую к быстрой потере массы тела. Заболевание является крайне серьезным, с приблизительно 50% смертности после 5 лет.
В таком качестве, соединения, которые ингибируют FGFR-рецептор, будут пригодными в представлении средств для предотвращения роста опухолей или индуцирования апоптоза в опухолях, в особенности путем ингибирования ангиогенеза. Поэтому ожидается, что соединения окажутся полезными в лечении или предотвращении пролиферативных нарушений, таких как рак. В частности, опухоли с активирующими мутантными формами рецепторных тирозинкиназ (РТК) или апрегуляцией рецепторных тирозинкиназ могут быть особенно чувствительными к ингибиторам. Больные с активирующими мутантными формами любой из изоформ специфических РТК, представленных в описании, могут также найти лечение ингибиторами РТК особенно благоприятным, например, больные с опухолями, например, опухолями мочевого пузыря или головного мозга, с транслокацией FGFR3-TACC3.
Рецептор фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR)
Хронические пролиферативные заболевания часто
сопровождаются сложным ангиогенезом, который может вносить вклад или поддерживать воспалительное и/или пролиферативное состояние, или приводит к деструкции ткани посредством инвазивной пролиферации кровеносных сосудов.
Ангиогенез обычно используется для описания развития новых или замены кровеносных сосудов или неоваскуляризации. Он представляет собой необходимый и физиологически нормальный процесс, при котором сосудистая система развивается в эмбрионе. Ангиогенез не происходит, как правило, в большинстве тканей взрослых в норме, за исключением участков овуляции, менструаций и заживления ран. Многие заболевания, впрочем, характеризуются постоянным и нерегулируемым ангиогенезом. Например, при артритах новые капиллярные кровеносные сосуды прорастают в сустав и разрушают хрящ. При диабете (и при многих болезнях глаз) новые сосуды заполняют желтое пятно или сетчатку или другие структуры глаза и могут вызывать слепоту. Процесс атеросклероза связывали с ангиогенезом. Рост опухоли и метастазирование, как было найдено, являются ангиогенез-зависимыми.
Распознавание участия ангиогенеза в основных заболеваниях сопровождается исследованием с целью идентификации и разработки ингибиторов ангиогенеза. Указанные ингибиторы обычно классифицируют исходя из ответа на отдельные мишени в каскаде реакций ангиогенеза, таких как активация эндотелиальных клеток под действием ангиогенного сигнала; синтез и высвобождение деструктивных ферментов; миграция эндотелиальных клеток; пролиферация эндотелиальных клеток; и образование капиллярных трубочек. Следовательно, ангиогенез протекает на многих стадиях, и предпринимаются попытки открытия и создания соединений, которые действуют путем блокирования ангиогенеза на указанных различных стадиях.
Опубликованные работы свидетельствуют о том, что ингибиторы ангиогенеза, функционирующие посредством различных механизмов, являются эффективными при таких заболеваниях, как рак и метастазирование, болезни глаз, артрит и гемангиома.
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), полипептид,
является митогенным в отношении эндотелиальных клеток in vitro и стимулирует ангиогенные ответы in vivo. Фактор VEGF также связывали с нарушенным ангиогенезом. Рецепторы VEGFR представляют собой тирозиновые протеинкиназы (РТК). РТК-киназы катализируют фосфорилирование специфических остатков тирозина в белках, участвующих в клеточной функции, и таким образом регулируют рост клеток, их выживание и дифференцировку.
Были идентифицированы три рецептора РТК для VEGF: VEGFR-1
(Flt-1), VEGFR-2 (Flk-1 или KDR) и VEGFR-3 (Flt-4). Указанные
рецепторы вовлечены в ангиогенез и участвуют в сигнальной
трансдукции. Особый интерес представляет рецептор VEGFR-2,
который является трансмембранной рецепторной РТК,
экспрессируемой в основном в эндотелиальных клетках. Активация VEGFR-2 посредством VEGF является критической стадией пути передачи сигнала, которая инициирует ангиогенез опухоли. Экспрессия VEGF может быть конститутивной по отношению к опухолевым клеткам и может быть также апрегулирована в ответ на некоторые стимулы. Одним таким стимулом является гипоксия, при которой экспрессия VEGF апрегулируется как в опухолевых, так и ассоциированных тканях хозяина. Лиганд VEGF активирует VEGFR-2 путем связывания с его внеклеточным VEGF-связывающим сайтом. Такое связывание приводит к димеризации рецепторов VEGFR и аутофосфорилированию остатков тирозина на внутриклеточном киназном домене VEGFR-2. Киназный домен функционирует, перенося фосфат от АТФ к остаткам тирозина, представляя, таким образом, сайты связывания для сигнальных белков, активируемых ниже по каскаду после VEGFR-2, что, в конечном счете, приводит к инициации ангиогенеза.
Ингибирование сайта связывания киназного домена VEGFR-2 может блокировать фосфорилирование остатков тирозина и способствовать нарушению инициации ангиогенеза.
Ангиогенез является физиологическим процессом образования новых кровеносных сосудов, который опосредован различными цитокинами, называемыми ангиогенными факторами. Хотя возможная патофизиологическая роль ангиогенеза в солидных опухолях широко изучали в течение более чем трех десятилетий, совсем недавно
было выявлено усиление ангиогенеза при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) и при других злокачественных гематологических нарушениях. Повышенный уровень ангиогенеза был подтвержден различными экспериментальными методами, как в костном мозге, так и в лимфоузлах больного ХЛЛ. Хотя роль ангиогенеза в патофизиологии указанного заболевания сохраняется полностью проясненной, исходя из экспериментальных данных, предположили, что несколько ангиогенных факторов играют роль в прогрессировании заболевания. Биологические маркеры ангиогенеза, как было показано, также представляют собой прогностическое значение при ХЛЛ. Из этого следует, что ингибиторы VEGFR-рецептора также могут приносить пользу больным лейкозом, таким как ХЛЛ.
Для того чтобы масса опухоли выходила за пределы критического размера, она должна развить ассоциированную сосудистую сеть. Было сделано предположение, что направленное воздействие на сосудистую сеть опухоли должно ограничить экспансию опухоли, и может оказаться пригодным в качестве терапии рака. Наблюдения за ростом опухоли показали, что небольшие массы опухолей могут сохраняться в ткани без какой-либо опухолеспецифической сосудистой сети. Остановку роста неваскуляризированных опухолей связывали с эффектами гипоксии в центре опухоли. Недавно был идентифицирован ряд проангиогенных и антиангиогенных факторов, и была изложена концепция "ангиогенного переключения", процесса, в котором нарушение нормального соотношения ангиогенных стимулов и ингибиторов в массе опухоли создает возможность автономной васкуляризации. Ангиогенное переключение, по-видимому, регулируется под действием одних и тех же генетических изменений, которые запускают злокачественную трансформацию: активацию онкогенов и потерю генов-супрессоров опухолей. Несколько факторов роста действуют как положительные регуляторы ангиогенеза. Основными из них являются фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), основный фактор роста фибробластов (bFGF) и ангиогенин. Белки, такие как тромбоспондин (Tsp-1), ангиостатин и эндостатин, функционируют как отрицательные регуляторы ангиогенеза.
Ингибирование VEGFR2, но не VEGFR1, в значительной степени
нарушает ангиогенное переключение, устойчивый ангиогенез и начальный рост опухоли в модели на мышах. На поздней стадии роста опухоли появляется фенотипическая устойчивость к блокированию VEGFR2, поскольку опухоли снова растут в процессе терапии после первоначального периода подавления роста. Такая устойчивость к блокированию VEGF вызывает реактивацию ангиогенеза опухоли, независимого от VEGF и ассоциированного с гипоксия-опосредованной индукцией других проангиогенных факторов, которые включают представителей семейства FGF. Указанные другие проангиогенные сигналы функционально причастны к реваскуляризации и к восстановлению роста опухолей в фазе эвазии, поскольку блокировка FGF уменьшает прогрессирование на фоне ингибирования VEGF.
Имеются данные о нормализации кровеносных сосудов глиобластом у больных, проходивших лечение ингибитором пан-VEGF-рецепторной тирозинкиназы, AZD2171, в фазе 2 исследования. Определение нормализации сосудов с помощью МРТ в сочетании с определением циркулирующих биомаркеров дает возможность эффективными способами оценить ответ на антиангиогенные средства.
PDGFR
Злокачественная опухоль является результатом
неконтролируемой пролиферации клеток. Рост клеток
контролируется посредством хрупкого баланса между
стимулирующими рост и ингибирующими рост факторами. В
нормальной ткани продукция и активность указанных факторов
приводит к дифференцированным клеткам, растущим в
контролируемых и регулируемых условиях, которые поддерживают
нормальную целостность и функционирование органа.
Злокачественная клетка избегает этого контроля; природный баланс нарушается (посредством различных механизмов) и становится нерегулируемым, происходит аберрантный рост клеток. Фактором роста, играющим важную роль в развитии опухоли, является фактор роста тромбоцитов (PDGF), который включает семейство пептидных факторов роста, которые передают сигнал посредством тирозинкиназных рецепторов клеточной поверхности
(PDGFR) и стимулируют различные клеточные функции, включая рост, пролиферацию и дифференцировку.
Преимущества селективного ингибитора
Разработка ингибиторов FGFR киназ с профилем дифференциальной селективности дает новую возможность применения указанных направленных средств в подгруппах больных, заболевание которых обусловлено нарушением регуляции FGFR. Соединения, которые оказывают сниженное ингибиторное воздействие на дополнительные киназы, в частности VEGFR2 и PDGFR-бета, обеспечивают дифференцированный профиль побочных эффектов или токсичности и в таком качестве предоставляют возможность более эффективного лечения этих показаний. Ингибиторы VEGFR2 и PDGFR-бета ассоциируют с такими токсическими явлениями, как гипертензия или отек, соответственно. В случае ингибиторов VEGFR2, указанный гипертензивный эффект оказывается часто дозолимитирующим, может быть противопоказан в некоторых группах пациентов и требует клинического контроля.
Биологическая активность и терапевтические применения
Соединения согласно изобретению, а также их подгруппы, проявляют ингибирующую или модулирующую активность в отношении рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) и/или ингибирующую или модулирующую активность в отношении рецептора фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR), и/или ингибирующую или модулирующую активность в отношении рецептора фактора роста тромбоцитов (PDGFR), и которые могут применяться в предотвращении или лечении заболеваний или состояний, описанных в настоящей заявке. Кроме того, соединения согласно изобретению, а также их подгруппы, могут применяться в предотвращении или лечении заболеваний или состояний, опосредуемых киназами. Ссылки на предотвращение или профилактику или лечение заболевания или состояния, такого как рак, включают в рамках их объема ослабление или уменьшение частоты заболеваемости раком.
Используемый в описании термин "модуляция", применительно к активности киназы, определяет изменение уровня биологической активности протеинкиназы. Таким образом, модуляция охватывает
физиологические изменения, которые вызывают увеличение или уменьшение соответствующей протеинкиназной активности. В последнем случае модуляция может быть описана как "ингибирование". Модуляция может проявляться прямо или косвенно, и может быть опосредована любым механизмом и на любом физиологическом уровне, в том числе, например, на уровне экспрессии генов (включая, например, транскрипцию, трансляцию и/или посттрансляционную модификацию), на уровне экспрессии генов, кодирующих регуляторные элементы, которые прямо или косвенно влияют на уровни киназной активности. Таким образом, модуляция может выражаться в повышенной/подавленной экспрессии или в сверх- или недостаточной экспрессии киназы, включая амплификацию гена (т.е., множество копий гена) и/или повышенную или пониженную экспрессию под влиянием транскрипционного эффекта, а также гипер- (или гипо-) активность и (де)активацию протеинкиназы(киназ) (включая (де)активацию) под действием мутации(ий). Термины "модулированный", "модулирующий" и "модулировать" следует интерпретировать соответственным образом.
Используемый в описании термин "опосредованный", при использовании в связи с киназой (и применяемый, например, к различным физиологическим процессам, заболеваниям, статусам, состояниям, терапиям, лечениям или вмешательствам), предназначен для ограничительного использования в силу того, что различные процессы, заболевания, симптомы, состояния, лечения и вмешательства, к которым термин применяется, являются такими, в которых киназа играет биологическую роль. В случаях, когда термин применяют к заболеванию, симптому или состоянию, биологическая роль, которую играет киназа, может быть прямой или косвенной и может быть необходимой и/или достаточной для проявления симптомов заболевания или состояния (или его этиологии или развития). Таким образом, активность киназы (и в частности аберрантные уровни активности киназы, например, оверэкспрессия киназы) необязательно должна быть ближайшей причиной заболевания или состояния: скорее, ожидается, что опосредованные киназой заболевания, симптомы или состояния
включают такие, которые имеют многофакторные этиологии и сложное развитие, в которых рассматриваемая киназа участвует только частично. В случаях, когда термин применяют к лечению, профилактике или вмешательству, роль, которую киназа играет, может быть прямой или косвенной и может быть необходимой и/или достаточной для проведения лечения, профилактики или исхода вмешательства. Таким образом, заболевание или состояние, опосредованное киназой, включает развитие устойчивости к любому конкретному лекарственному средству или лечению рака.
Таким образом, например, соединения согласно изобретению могут применяться в ослаблении или уменьшении заболеваемости раком.
Более конкретно, соединения формул (I) и их подгрупп являются ингибиторами FGFR-рецепторов. Например, соединения согласно изобретению проявляют активность против FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4 и, в частности, против FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2 и FGFR3; или, в частности, соединения формулы (I) и их подгрупп являются ингибиторами FGFR4.
Предпочтительными соединениями являются соединения, которые ингибируют один или более рецепторов FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4. Предпочтительными соединениями согласно изобретению являются соединения, которые имеют значения IC50 менее 0,1 мкМ.
Соединения согласно изобретению также проявляют активность против VEGFR.
Кроме того, многие из соединений согласно изобретению проявляют селективность по отношению к FGFR 1, 2 и/или 3, и/или 4, по сравнению с VEGFR (в частности VEGFR2) и/или PDGFR, и такие соединения представляют собой один предпочтительный вариант осуществления изобретения. В частности соединения проявляют селективность в отношении VEGFR2. Например, многие соединения согласно изобретению имеют значения IC50 против FGFR1, 2 и/или 3 и/или 4, которые составляют диапазон между десятой и сотой от IC50 против VEGFR (в частности, VEGFR2) и/или PDGFR В. В частности предпочтительные соединения согласно
изобретению имеют, по меньшей мере, в 10 раз более высокую активность против FGFR или ингибирование FGFR, в частности FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4, чем VEGFR2. Более предпочтительно, соединения согласно изобретению имеют, по меньшей мере, в 100 раз более высокую активность против FGFR или ингибирование FGFR, в частности FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4, чем VEGFR2. Это можно определить, используя методы, представленные в описании.
Как результат их активности в модулировании или ингибировании киназ FGFR и/или VEGFR, соединения могут применяться в предоставлении средств предотвращения роста или индукции апоптоза неоплазий, в особенности путем ингибирования ангиогенеза. Таким образом, следует ожидать, что соединения окажутся полезными в лечении или предотвращении пролиферативных нарушений, таких как рак. Кроме того, соединения согласно изобретению могут быть пригодными в лечении заболеваний, при которых имеется нарушение пролиферации, апоптоза или дифференцировки.
В частности, опухоли с активирующими мутациями VEGFR или
апрегуляцией VEGFR и пациенты с повышенными уровнями
лактатдегидрогеназы в сыворотке могут быть особенно
чувствительными к соединениям согласно изобретению. Пациенты с
активирующими мутациями любой из изоформ специфических РТК,
представленных в описании, также могут проходить лечение
соединениями согласно изобретению особенно благоприятно.
Например, оверэкспрессия VEGFR в лейкозных клетках при остром
лейкозе, когда клон клеток-предшественников может
экспрессировать VEGFR. Кроме того, отдельные опухоли с активирующими мутациями или положительной регуляцией или сверхэкспрессией любой из изоформ FGFR-рецептора, такой как FGFR1, FGFR2 или FGFR3 или FGFR4, могут быть особенно чувствительными к соединениям согласно изобретению, и, таким образом, пациенты, как описано в настоящей заявке, с такими конкретными опухолями также могут проходить лечение соединениями согласно изобретению как особенно благоприятное. Может оказаться предпочтительным, что лечение связано с или
направлено на мутантную форму одной из рецепторных протеинкиназ, таких как обсуждаемые в настоящем описании. Диагностику опухолей с такими мутациями можно осуществлять с использованием методов, известных специалисту в данной области и описанных в настоящей заявке, таких как ОТ-ПЦР и FISH.
Примеры типов рака, которые можно лечить (или ингибировать), включают, без ограничения, карциному, например, карциному мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки
(например, карциномы толстой и прямой кишки, такие как аденокарциному толстой кишки и аденому толстой кишки), почки, уротелиальную, матки, эпидермиса, печени, легкого (например, аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточные карциномы легких, плоскоклеточный рак легкого), пищевода, головы и шеи, желчного пузыря, яичника, поджелудочной железы
(например, карциному экзокринного отдела поджелудочной железы), желудка, желудочно-кишечный (также называемый рак ЖКТ) рак
(например, желудочно-кишечные стромальные опухоли), шейки матки, эндометрия, щитовидной железы, предстательной железы или кожи (например, плоскоклеточную карциному или возвышающуюся дерматофибросаркому); рак гипофиза, гемобластоз лимфоидного происхождения, например, лейкоз, острый лимфолейкоз, хронический лимфолейкоз, В-клеточную лимфому (например, диффузную В-крупноклеточную лимфому), Т-клеточную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, волосатоклеточную лимфому или лимфому Беркитта; гемобластоз миелоидного происхождения, например, острые и хронические миелогенные лейкозы, хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММЛ), миелопролиферативное нарушение, миелопролиферативный синдром, миелодиспластический синдром или промиелоцитарный лейкоз; множественную миелому; фолликулярный рак щитовидной железы; гепатоцеллюлярный рак, опухоль мезенхимального происхождения
(например, саркому Юинга), например, фибросаркому или рабдомиосаркому; опухоль центральной или периферической нервной системы, например, астроцитому, нейробластому, глиому (такую как мультиформная глиобластома) или шванному; меланому; семиному; тератокарциному; остеосаркому; ретикуллярный
прогрессирующий меланоз; кератоакантому; фолликулярный рак щитовидной железы или саркому Капоши. В частности, плоскоклеточный рак легких, рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, глиобластому, астроцитомы, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легких, меланому, раковые опухоли головы и шеи, рак щитовидной железы, рак матки, рак желудка, гепатоцеллюлярный рак, рак шейки матки, множественную миелому, рак мочевого пузыря, рак эндометрия, уротелиальный рак, рак толстой кишки, рабдомиосаркому, рак гипофиза.
Примеры типов рака, которые можно лечить (или ингибировать), включают, но не ограничены, рак мочевого пузыря, уротелиальный рак, метастатический уротелиальный рак, хирургически неоперабельный уротелиальный рак, рак молочной железы, глиобластому, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, легочную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, рак яичника, рак эндометрия, рак шейки матки, саркому мягких тканей, плоскоклеточный рак головы и шее, рак желудка, рак пищевода, плоскоклеточный рак пищевода, аденокарциному пищевода, холангиокарциному, гепатоцеллюлярный рак.
Некоторые типы рака являются резистентными к лечению определенными лекарственными средствами. Это может быть обусловлено типом опухоли или может возникать вследствие лечения соединением. В этой связи, ссылки на множественную миелому включают чувствительную к бортезомибу множественную миелому или рефрактерную форму множественной миеломы. Подобным образом, ссылки на хронический миелогенный лейкоз включают чувствительный к иматинибу хронический миелогенный лейкоз и рефрактерную форму хронического миелогенного лейкоза. Хронический миелогенный лейкоз также известен как хронический миелобластный лейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз или ХМЛ. Аналогично, острый миелогенный лейкоз также назван как острый миелобластный лейкоз, острый гранулоцитарный лейкоз, острый нелимфоцитарный лейкоз или ОМЛ.
Соединения согласно изобретению также могут применяться в лечении заболеваний системы кроветворения с нарушенной
клеточной пролиферацией, будь то предзлокачественные или стабильные заболевания, такие как миелопролиферативные заболевания. Миелопролиферативные заболевания ("МПЗ") представляют собой группу заболеваний костного мозга, в котором продуцируются избыточные клетки. Они связаны с и могут переходить в миелодиспластический синдром. Миелопролиферативные заболевания включают истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию и первичный миелофиброз. Другим гематологическим нарушением является гиперэозинофильный синдром. Т-клеточные лимфопролиферативные заболевания включают заболевания, которые связаны с натуральными киллерными клетками.
Кроме того, соединения согласно изобретению могут применяться для лечения желудочно-кишечного рака (также называемого как рак ЖКТ), например, гастроинтестинальных стромальных опухолей. Желудочно-кишечный рак относится к злокачественным состояниям желудочно-кишечного тракта, включающего пищевод, желудок, печень, билиарную систему, поджелудочную железу, кишечник и анус.
Таким образом, в фармацевтических композициях, применениях или способах данного изобретения для лечения заболевания или состояния, включающего аномальный рост клеток, заболеванием или состоянием, включающим аномальный рост клеток, в одном варианте осуществления является рак.
Конкретные подклассы рака включают множественную миелому, карциномы мочевого пузыря, шейки матки, предстательной железы и щитовидной железы, рак легкого, молочной железы и толстой кишки.
Другой подкласс рака включают множественную миелому, карциномы мочевого пузыря, гепатоцеллюлярную карциному, плоскоклеточную карциному полости рта и карциномы шейки матки.
Соединение согласно изобретению, обладающее ингибиторной активностью по отношению к FGFR-рецептору, такому как FGFR1, может быть особенно полезным в лечении или предотвращении рака молочной железы, в частности, классических дольковых карцином (КДК) .
Поскольку соединения согласно изобретению обладают FGFR4
активностью, они также будут применяться в лечении рака предстательной железы или гипофиза, или они будут применяться в лечении рака молочной железы, рака легкого, рака предстательной железы, рака печени (ГЦК) или рака легкого.
В частности, соединения согласно изобретению, в качестве ингибиторов FGFR, пригодны в лечении множественной миеломы, миелопролиферативных нарушений, рака эндометрия, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака легкого, рака яичника, рака молочной железы, рака желудка, рака толстой и прямой кишки и плоскоклеточной карциномы полости рта.
Другими подклассами рака являются множественная миелома, рак эндометрия, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки и карциномы щитовидной железы.
В частности, соединения согласно изобретению могут применяться в лечении множественной миеломы (в частности, множественной миеломы с транслокацией t(4;14) или повышенной экспрессией FGFR3), рака предстательной железы (гормон-рефрактерных карцином предстательной железы), рака эндометрия (в частности, опухолей эндометрия с активирующими мутациями в FGFR2) и рака молочной железы (в частности, долькового рака молочной железы).
В частности, соединения могут применяться в лечении дольковых карцином, таких как КДК (классическая дольковая карцинома).
Поскольку соединения проявляют активность против FGFR3, они будут пригодны в лечении множественной миеломы и рака мочевого пузыря.
В частности, соединения обладают активностью против опухолей с транслокацией FGFR3-TACC3, в частности опухолей мочевого пузыря или головного мозга с транслокацией FGFR3-ТАССЗ.
В частности, соединения могут применяться для лечения t(4;14)-транслокация-положительной множественной миеломы.
В одном варианте осуществления соединения могут применяться для лечения саркомы. В одном варианте осуществления
соединения могут применяться для лечения рака легкого, например, плоскоклеточной карциномы.
Поскольку соединения проявляют активность против FGFR2, они могут применяться в лечении рака эндометрия, яичника, желудка, гепатоцеллюлярного рака, матки, шейки матки и рака толстой и прямой кишки. FGFR2 также оверэкспрессирован при эпителиальном раке яичников, поэтому соединения согласно изобретению могут быть особенно полезными в лечении рака яичников, такого как эпителиальный рак яичников.
В одном варианте осуществления, соединения могут применяться для лечения рака легкого, в частности, НМРЛ, плоскоклеточной карциномы, рака печени, рака почки, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака толстой и прямой кишки, рака предстательной железы.
Соединения согласно изобретению также могут применяться в лечении опухолей, предварительно обработанных ингибитором VEGFR2 или антителом VEGFR2 (например, авастином).
В частности, соединения согласно изобретению могут применяться в лечении VEGFR2-резистентных опухолей. Ингибиторы и антитела VEGFR2 применяют в лечении карциномы щитовидной железы и почечно-клеточной карциномы, поэтому соединения согласно изобретению могут применяться в лечении VEGFR2-резистентной карциномы щитовидной железы и почечно-клеточной карциномы.
Раковые опухоли могут быть такими опухолями, которые являются чувствительными к ингибированию любого одного или более рецепторов FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, например, одного или более FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2 или FGFR3.
Является ли конкретный тип рака или нет таким типом рака, который чувствителен к ингибированию сигнализации FGFR или VEGFR, можно определить посредством анализа роста клеток, как описано ниже, или способом, представленным в разделе, озаглавленном "Способы диагностики".
Соединения согласно изобретению и, в частности, такие соединения, которые обладают FGFR или VEGFR ингибирующей
активностью, могут быть особенно полезными в лечении или предотвращении рака, ассоциированного с наличием или характеризующегося наличием повышенных уровней FGFR или VEGFR, например, раковых опухолей, упоминаемых в этом контексте во вводном разделе настоящей заявки.
Соединения согласно настоящему изобретению могут применяться в лечении взрослых больных. Соединения согласно настоящему изобретению могут применяться для лечения больных детского возраста.
Было обнаружено, что некоторые ингибиторы FGFR могут применяться в комбинации с другими противоопухолевыми средствами. Например, комбинирование ингибитора, который индуцирует апоптоз, с другим средством, которое действует по другому механизму, регулируя рост клеток, может оказаться благоприятным, обеспечивая, таким образом, воздействие на две из характерных особенностей развития рака. Примеры таких комбинаций представлены ниже.
Соединения согласно изобретению могут применяться в
лечении других состояний, которые вызваны нарушением
пролиферации, таких как сахарный диабет II типа или
инсулинонезависимый сахарный диабет, аутоиммунные заболевания,
черепно-мозговая травма, инсульт, эпилепсия,
нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера,
заболевание двигательных нейронов, прогрессирующий
супрануклеарный паралич, кортико-базальная дегенерация и болезнь Пика, например, аутоиммунные заболевания и нейродегенеративные заболевания.
Одна подгруппа заболеваний и состояний, при которых могут применяться соединения согласно изобретению, состоит из воспалительных заболеваний, сердечнососудистых заболеваний и заживления ран.
Также известно, что FGFR и VEGFR играют роль в апоптозе, ангиогенезе, пролиферации, дифференцировке и транскрипции, и поэтому соединения согласно изобретению могут применяться в лечении следующих заболеваний помимо рака: хронических воспалительных заболеваний, например, системной красной
волчанки, аутоиммунного опосредованного гломерулонефрита,
ревматоидного артрита, псориаза, воспалительного заболевания
кишечника, аутоиммунного сахарного диабета, реакций
гиперчувствительности в виде экземы, астмы, ХОБЛ, ринита и
заболевания верхних дыхательных путей; сердечнососудистых
заболеваний, например, гипертрофии сердца, рестеноза,
атеросклероза; нейродегенеративных нарушений, например, болезни
Альцгеймера, СПИД-ассоциированной деменции, болезни Паркинсона,
амиотрофического бокового склероза, пигментного ретинита,
спинальной мышечной атрофии и мозжечковой дегенерации;
гломерулонефрита; миелодиспластических синдромов,
ассоциированного с ишемическим повреждением инфаркта миокарда,
инсульта и реперфузионного повреждения, аритмии, атеросклероза,
заболеваний печени, индуцированных токсином и связанных с
алкоголем, гематологических заболеваний, например, хронической
анемии и гипопластической анемии; дегенеративных заболеваний
костно-мышечной системы, например, остеопороза и артрита,
аспирин-чувствительного риносинусита, фиброзно-кистозной
дегенерации, рассеянного склероза, заболеваний почек и боли при раке.
Кроме того, мутации FGFR2 ассоциированы с несколькими тяжелыми нарушениями в развитии скелета человека, и таким образом, соединения согласно изобретению могут быть пригодными в лечении нарушений развития скелета человека, включающих аномальную оссификацию черепных швов (краниосиностоз), синдром Аперта (АР), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром складчатой кожи Бира-Стивенсона и синдром Пфейффера.
Соединение согласно изобретению, обладающее ингибиторующей активностью в отношении рецептора FGFR, такого как FGFR2 или FGFR3, может быть особенно полезным в лечении или предотвращении заболеваний скелета. Конкретными заболеваниями скелета являются ахондроплазия или танатофорная карликовость (также известная как танатофорная дисплазия).
Соединение согласно изобретению, проявляющее ингибиторную активность по отношению к рецептору FGFR, такому как FGFR1, FGFR2 или FGFR3, может быть наиболее пригодным в лечении или
предотвращении патологий, в которых прогрессирующий фиброз является симптомом. Фибротические состояния, при которых соединения согласно изобретению могут применяться в лечении, включают заболевания, характеризующиеся аномальным или избыточным отложением фиброзной ткани, например, при циррозе печени, гломерулонефрите, фиброзе легких, системном фиброзе, ревматоидном артрите, а также при естественном процессе заживления ран. В частности, соединения согласно изобретению могут также применяться в лечении фиброза легких, в частности, идиопатического легочного фиброза.
Оверэкспрессия и активация рецепторов FGFR и VEGFR в опухолеассоциированной сосудистой сети также свидетельствует о роли соединений согласно изобретению в предотвращении и нарушении инициации ангиогенеза в опухоли. В частности, соединения согласно изобретению могут применяться в лечении рака, метастазирования, лейкозов, таких как ХЛЛ, заболеваний глаз, таких как возрастная макулодистрофия, в частности, влажная форма возрастной макулодистрофии, ишемические пролиферативные ретинопатии, такие как ретинопатия недоношенных (ROP) и диабетическая ретинопатия, ревматоидный артрит и гемангиома.
Активность соединений согласно изобретению в качестве ингибиторов FGFR1-4, VEGFR и/или PDGFR А/В можно измерить посредством анализов, представленных в примерах ниже, а уровень активности, проявляемой данным соединением, можно определить в значениях 1С50. Предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению являются соединения, имеющие значения
IC50 меньше чем 1 мкМ, более предпочтительно меньше чем 0,1 мкМ.
В изобретении предложены соединения, которые обладают ингибирующей или модулирующей активностью в отношении FGFR, и которые могут применяться в предотвращении или лечении заболеваний или состояний, опосредованных FGFR-киназами.
В одном варианте осуществления предложено соединение, как определено в настоящем описании, для применения в терапии, для
применения в качестве лекарственного препарата. В другом варианте осуществления изобретения предложено соединение, как определено в настоящем описании, для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, заболевания или состояния, опосредованного FGFR-киназой.
Таким образом, например, соединения согласно изобретению могут применяться в ослаблении или уменьшении числа случаев рака. Следовательно, в другом варианте осуществления предложено соединение, как определено в настоящем описании, для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, рака. В одном варианте осуществления, соединение, как определено в настоящем описании, предложено для применения в профилактике или лечении FGFR-зависимого рака. В одном варианте осуществления, соединение, как определено в настоящем описании, предложено для применения в профилактике или лечении рака, опосредованного FGFR-киназами.
Таким образом, в изобретении помимо прочего предложено следующее:
Способ профилактики или лечения заболевания или состояния, опосредованного FGFR-киназой, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Способ профилактики или лечения заболевания или состояния, как определено в настоящем описании, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Способ профилактики или лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
- Способ ослабления или уменьшения частоты возникновения заболевания или состояния, опосредованного FGFR-киназой, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Способ ингибирования FGFR-киназы, включающий контакт киназы с ингибирующим киназу соединением формулы (I), как определено в настоящем описании.
Способ модулирования клеточного процесса (например, клеточное деление) путем ингибирования активности FGFR-киназы с использованием соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Соединение формулы (I), как определено в настоящем описании, для применения его в качестве модулятора клеточного процесса (например, деления клеток) путем ингибирования активности FGFR-киназы.
Соединение формулы (I), как определено в настоящем описании, для применения его в профилактике или лечении рака, в частности лечении рака.
Соединение формулы (I), как определено в настоящем описании, для применения его в качестве модулятора (например, ингибитора) FGFR.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболевания или состояния, опосредованного FGFR-киназой, соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболевания или состояния, как описано в настоящей заявке.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения, в частности, лечения рака.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для модулирования (например, ингибирования) активности FGFR.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для модулирования клеточного процесса (например, деления клеток) путем ингибирования активности FGFR-киназы.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболевания или состояния, характеризующегося положительной регуляцией FGFR-киназы (например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4).
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака, рака, который характеризуется апрегуляцией FGFR-киназы (например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4).
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака у больного, выбранного из субпопуляции, обладающей генетическими аберрациями FGFR3-KHHa3bi.
Применение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака у больного, который согласно поставленному диагнозу является частью субпопуляции, обладающей генетическими аберрациями FGFR3-киназы.
Способ профилактики или лечения заболевания или
состояния, характеризующегося апрегуляцией FGFR-киназы
(например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4), включающий введение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
- Способ облегчения или уменьшения частоты заболевания или
состояния, характеризующегося апрегуляцией FGFR-киназы
(например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4), включающий введение соединения формулы (I), как определено в настоящем описании.
Способ профилактики или лечения (или облегчения или уменьшения числа случаев) рака у пациента, страдающего от рака или у которого подозревают рак; включающий (i) прохождение пациентом диагностического исследования с целью определения, имеет ли пациент генетические аберрации гена FGFR3; и (ii) в
случае присутствия у пациента указанного варианта, впоследствии введение пациенту соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, проявляющего ингибиторную активность по отношению к FGFRS-киназе.
Способ профилактики или лечения (или облегчения или уменьшения числа случаев) заболевания или состояния, характеризующегося апрегуляцией FGFR-киназы (например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4), включающий (i) прохождение пациентом диагностического исследования с целью определения маркера, характерного для апрегуляции FGFR-киназы (например, FGFR1 или FGFR2 или FGFR3 или FGFR4), и (ii) в случае, где результат диагностического исследования свидетельствует об апрегуляции FGFR-киназы, впоследствии введение пациенту соединения формулы (I), как определено в настоящем описании, проявляющего ингибиторную активность по отношению к FGFR-киназе.
В одном варианте осуществления, заболеванием,
опосредованным FGFR-киназами, является связанное с онкологией
заболевание (например, рак) . В одном варианте осуществления,
заболеванием, опосредованным FGFR-киназами, является
несвязанное с онкологией заболевание (например, любое представленное в описании заболевание, исключая рак) . В одном варианте осуществления, заболеванием, опосредованным FGFR-киназами, является состояние, описанное в настоящей заявке. В одном варианте осуществления изобретения, заболеванием, опосредованным FGFR-киназами, является патологическое состояние скелета, представленное в описании. Конкретные нарушения развития скелета человека включают нарушение оссификации черепных швов (краниосиностоз), синдром Аперта (АР), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром складчатой кожи Вира-Стивенсона, синдром Пфейффера, ахондроплазию и танатофорную карликовость (также известную как танатофорная дисплазия).
Мутантные киназы
Лекарственно-устойчивые мутации киназы могут возникать в популяции больных, которые проходили лечение ингибиторами киназы. Такие мутации образуются, отчасти, в областях белка,
которые связываются или взаимодействуют с конкретным ингибитором, используемым в терапии. Такие мутации снижают или повышают способность ингибитора связываться и ингибировать данную киназу. Эти мутации могут появляться по любым аминокислотным остаткам, которые взаимодействуют с ингибитором или представляют важность для поддержания связывания указанного ингибитора с мишенью. Ингибитор, который связывается с мишенью-киназой без необходимости взаимодействия с мутировавшим аминокислотным остатком, вероятно, не будет зависеть от мутации, и будет оставаться эффективным ингибитором фермента.
Изучение образцов, взятых у больных раком желудка, показало наличие двух мутаций в FGFR2, Serl67Pro в экзоне II1а и мутацию сайта сплайсинга 94 0-2A-G в экзоне Шс. Указанные мутации идентичны зародышевым активирующим мутациям, которые вызывают синдромы краниосиностоза, и которые наблюдали в 13% исследованных тканях первичного рака желудка. Кроме того, активирующие мутации в FGFR3 наблюдали в 5% образцов, взятых у исследуемых пациентов, при этом повышенная экспрессия рецепторов FGFR коррелировала с неблагоприятным прогнозом в данной группе пациентов.
Кроме того, существуют хромосомные транслокации или точковые мутации, которые наблюдали в FGFR, которые приводят к приобретению новой функции белкового продукта гена, повышенной экспрессии или конститутивно активным биологическим состояниям.
Таким образом, соединения согласно изобретению должны найти конкретное применение в отношении раковых опухолей, которые экспрессируют мутантную молекулярную мишень, такую как FGFR. Диагностику опухолей с такими мутациями можно осуществить, используя методы, известные специалисту в данной области и представленные в описании, такие как RTPCR и FISH.
Было сделано предположение, что мутации консервативного остатка треонина у АТФ-связывающего сайта FGFR должны приводить к устойчивости к ингибиторам. Аминокислотный остаток валин 561 был мутирован до метионина в FGFR1, что соответствует ранее сообщенным данным о мутациях, найденных в АЫ (Т315) и EGFR (Т766), которые, как было показано, придают устойчивость к
селективным ингибиторам. Данные анализа FGFR1 V561M показали, что указанная мутация придавала устойчивость к ингибитору тирозинкиназного рецептора по сравнению с диким типом. Способы диагностики
Перед введением соединения формулы (I) пациент может быть подвергнут скринингу с целью определения, является ли заболевание или состояние, которым пациент страдает или может страдать, заболеванием или состоянием, которое может быть чувствительным к лечению соединением, обладающим активностью против FGFR и/или VEGFR.
Например, биологический образец, полученный от пациента, может быть проанализирован с целью определения, является ли заболевание или состояние, такое как рак, которым пациент страдает или может страдать, заболеванием или состоянием, которое характеризуется генетическим нарушением или аномальной белковой экспрессией, что приводит к апрегуляции уровней или активности FGFR и/или VEGFR или к сенсибилизации пути до нормальной активности FGFR и/или VEGFR, или к апрегуляции указанных путей внутриклеточной сигнализации, связанных с фактором роста, таких как уровни лиганда фактора роста или активность лиганда фактора роста, или к апрегуляции биохимического пути, следующего после активации FGFR и/или VEGFR.
Примеры таких нарушений, которые приводят к активации или сенсибилизации сигнала FGFR и/или VEGFR, включают потерю или ингибирование апоптических путей, апрегуляцию рецепторов или лигандов или присутствие мутантных вариантов рецепторов или лигандов, например, вариантов РТК. Опухоли с мутациями в FGFR1, FGFR2 или FGFR3 или FGFR4, или апрегуляцией, в частности оверэкспрессией FGFR1, или мутанты FGFR2 или FGFR3 с приобретением новой функции, могут быть особенно чувствительными к ингибиторам FGFR.
Например, точковые мутации с приобретением функции в FGFR2 были идентифицированы при ряде заболеваний. В частности, активирующие мутации в FGFR2 были идентифицированы в 10% опухолей эндометрия.
Кроме того, генетические аберрации рецепторной тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точковые мутации, приводящие к эктопически экспрессированным или нерегулируемым, конститутивно активным рецепторам FGFR3, были идентифицированы и связаны с подгруппой множественных миелом, карцином мочевого пузыря и шейки матки. Конкретная мутация T674I рецептора PDGF была идентифицирована у пациентов, проходивших лечение иматинибом. Кроме того, амплификация гена 8р12-р11.2 была продемонстрирована в -50% случаев долькового рака молочной железы (КДК) , и, как было показано, она была связана с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с миРНК, направленными против FGFR1, или низкомолекулярным ингибитором рецептора, выявили клеточные линии, делающие такую амплификацию особенно чувствительной к ингибированию данного сигнального пути.
В альтернативе, биологический образец, полученный от пациента, может быть проанализирован на предмет потери негативного регулятора или супрессора FGFR или VEGFR. В настоящем контексте, термин "потеря" охватывает делецию гена, кодирующего регулятор или супрессор, усечение гена (например, в результате мутации), усечение транскрибируемого продукта гена или инактивацию транскрибируемого продукта (например, в результате токовой мутации) или секвестрацию другим генным продуктом.
Термин апрегуляция включает повышенную экспрессию или оверэкспрессию, включающую амплификацию гена (т.е., множественные копии генов) и повышенную экспрессию посредством транскрипционного эффекта, а также гиперактивность и активацию, включающую активацию в результате мутаций. Таким образом, больной может быть подвергнут диагностическому исследованию с целью определения маркера, характерного для апрегуляции FGFR и/или VEGFR. Термин диагностика включает скрининг. Под маркером подразумеваются генетические маркеры, включающие, например, измерение состава ДНК для идентификации мутаций FGFR и/или VEGFR. Термин маркер также включает маркеры, характерные для апрегуляции FGFR и/или VEGFR, включая ферментативную
активность, уровни фермента, состояние фермента (например, фосфорилированное или нет) и уровни мРНК указанных выше белков.
Диагностические испытания и скрининги обычно проводят на биологическом образце, выбранном из биопсийных образцов опухоли, образцов крови (выделение и обогащение выделенных опухолевых клеток), образцов кала, мокроты, анализа хромосом, плевральной жидкости, перитонеальной жидкости, соскоба со щеки, биоптата и мочи.
Методы идентификации и анализ мутаций и апрегуляции белков известны специалисту в данной области. Методы скрининга могут включать, без ограничения, стандартные методы, такие как полимеразную цепную реакцию с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) или гибридизацию in situ, такую как флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).
Идентификация индивида, несущего мутацию в FGFR и/или VEGFR, может означать, что больной может быть особенно подходящим для лечения ингибитором FGFR и/или VEGFR. Опухоли могут предпочтительно подвергнуты скринингу на присутствие варианта FGFR и/или VEGFR до лечения. Способ скрининга обычно включает прямое секвенирование, анализ с олигонуклеотидными чипами или мутант-специфичным антителом. Кроме того, диагностика опухолей с такими мутациями может быть осуществлена с использованием методов, известных специалисту в данной области и представленных в описании, таких как ОТ-ПЦР и FISH.
Кроме того, мутантные формы, например FGFR или VEGFR2, могут быть идентифицированы путем прямого секвенирования, например, опухолевых биопсий при использовании ПЦР и методов прямо секвенирования продуктов ПЦР, как описано в тексте выше. Специалисту в данной области будет очевидно, что все такие хорошо известные методы определения оверэкспрессии, активации или мутаций указанных выше белков могут быть применимы к данному случаю.
В скрининге с помощью ОТ-ПЦР, уровень мРНК в опухоли оценивают путем создания кДНК копии мРНК с последующей амплификацией кДНК с помощью ПЦР. Методы ПЦР амплификации, выбор праймеров и условия амплификации хорошо известны
специалисту в данной области. Манипуляции с нуклеиновой кислотой и ПЦР осуществляют стандартными способами, как описано, например, в руководстве Ausubel, F.M. et al., eds.
(2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., or Innis, M.A. et al., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Реакции и манипуляции, включающие методы исследования нуклеиновых кислот, также описаны в руководстве Sambrook et al. , (2001), 3rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. В альтернативе, может быть использован коммерчески доступный набор для ОТ-ПЦР (например, Roche Molecular Biochemicals) или методики, описанные в патентах США 4666828; 4683202; 4801531; 5192659, 5272057, 5882864 и 6218529 и включенные в настоящее описание посредством отсылки. Примером способа гибридизации in situ для оценки экспрессии мРНК может быть флуоресцентная гибридизация in situ
(FISH) (см., Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152:649).
Как правило, гибридизация in situ включает следующие основные стадии: (1) фиксацию анализируемой ткани; (2) предварительную гибридизацию образца для повышения доступности заданной нуклеиновой кислоты и снижения неспецифического связывания; (3) гибридизацию смеси нуклеиновых кислот с нуклеиновой кислотой в биологической структуре или ткани; (4) промывки после гибридизации для удаления фрагментов нуклеиновой кислоты, не связавшихся при гибридизации, и (5) детектирование гибридизованных фрагментов нуклеиновой кислоты. Зонды, используемые в таких способах, обычно являются меченными, например, радиоизотопами или флуоресцентными репортерами. Предпочтительные зонды являются достаточно длинными, например, приблизительно от 50, 100 или 200 нуклеотидов до 1000 или более нуклеотидов, для осуществления специфической гибридизации с заданной нуклеиновой кислотой(ами) в жестких условиях. Стандартные методы осуществления метода FISH описаны в руководстве Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett
in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-7 60-2; March 2004, pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.
Методы анализа уровня экспрессии генов описаны в DePrimo et al. (2003), ВМС Cancer, 3:3. Кратко, методика является следующей: двухцепочечную кДНК синтезируют из суммарной РНК с использованием олигомера (dT)24 для праймирования синтеза первой цепи кДНК с последующим синтезом второй цепи кДНК со случайными гексамерными праймерами. Двухцепочечную кДНК используют в качестве матрицы для in vitro транскрипции кРНК с использованием биотинилированных рибонуклеотидов. кРНК химически фрагментируют согласно методикам, описанным Affymetrix (Santa Clara, СА, USA), а затем подвергают гибридизации в течение ночи на чипах Human Genome.
В альтернативе, белковые продукты, экспрессированные из
мРНК, могут быть проанализированы с помощью
иммуногистохимического анализа образцов опухоли, твердофазного иммуноферментного анализа с микротитровальными планшетами, Вестерн-блоттинга, 2-мерного электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН, ELISA, проточной цитометрии и других методов, известных в данной области для определения специфических белков. Методы определения могут включать сайтспецифические антитела. Специалисту в данной области будет очевидно, что все такие хорошо известные методы определения апрегуляции FGFR и/или VEGFR, или определения вариантов FGFR и/или VEGFR, или их мутаций могут быть применимы к данному случаю.
Аномальные уровни белков, таких как FGFR или VEGFR, могут быть измерены при использовании стандартных ферментных анализов, например, таких анализов, которые описаны в настоящей заявке. Активацию или оверэкспрессию также можно определять в образце ткани, например, в ткани опухоли. При измерении активности тирозинкиназы с помощью такого анализа, как анализ Chemicon International, представляющая интерес тирозинкиназа должна быть иммунопреципитирована из лизата образца и измерена ее активность.
Альтернативные способы измерения оверэкспрессии или
активации FGFR или VEGFR, включая их изоформы, включают измерение плотности микрососудистой сети. Плотность можно измерить, например, с помощью методов, описанных Orre and Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101-8) . Методы анализа также включают использование маркеров, например, в случае VEGFR, такие маркеры включают CD31, CD34 и CD105.
Таким образом, все перечисленные способы также могут быть применены для идентификации опухолей, особенно подходящих для лечения соединениями согласно изобретению.
Соединения согласно изобретению особенно пригодны в лечении пациента с мутантным вариантом FGFR. Мутацию G697C в FGFR3 наблюдают в 62% плоскоклеточных карцином полости рта, при этом она вызывает конститутивную активацию киназной активности. Активирующие мутации FGFR3 также были идентифицированы в случаях карциномы мочевого пузыря. Указанные мутации состояли из б видов с различными степенями распространенности: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Кроме того, полиморфизм Gly3 8 8Arg в FGFR4, как было обнаружено, ассоциирован с повышением числа случаев и агрессивностью рака предстательной железы, толстой кишки, легкого, печени (ГЦГ) и молочной железы. Соединения изобретения, в частности, могут применяться в лечении пациента, имеющего транслокацию FGFR3-TACC3.
Таким образом, в другом аспекте изобретение включает применение соединения согласно изобретению для производства лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания или состояния у пациента, который был подвергнут скринингу, и в результате было определено, что он страдает или подвергается риску развития заболевания или состояния, которое может поддаваться лечению соединением, обладающим активностью против FGFR.
Конкретные мутации, на наличие которых пациент проходит скрининг, включают G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q в FGFR3 и полиморфизм Gly388Arg в FGFR4.
В другом аспекте изобретение включает соединение согласно изобретению для применения в профилактике или лечении рака у пациента, выбранного из субпопуляции, обладающей вариантом гена
FGFR (например, мутация G697C в FGFR3 и полиморфизм Gly388Arg в FGFR4).
Определение нормализации сосудов с помощью МРТ (например, с использованием МРТ градиентного эха, спинового эха и повышения контрастности для измерения объема крови, относительного размера сосуда и сосудистой проницаемости) в сочетании с циркулирующими биомаркерами (циркулирующие клетки-предшественники (СРС), СЕС, SDF1 и FGF2) также может быть использовано с целью идентификации VEGFR2-pe3HCTeHTHbix опухолей для лечения соединением согласно изобретению.
Фармацевтические композиции и комбинации
Исходя из полезных фармакологических свойств соединений, рассматриваемые соединения могут быть включены в различные фармацевтические формы в целях введения.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция
(например, лекарственная форма) содержит, по меньшей мере, одно
активное соединение согласно изобретению вместе с одним или
более фармацевтически приемлемыми носителями, адъювантами,
вспомогательными веществами, разбавителями, наполнителями,
буферами, стабилизаторами, консервантами, скользящими
веществами или другими материалами, хорошо известными специалистам в данной области, и, необязательно, другими терапевтическими или профилактическими средствами.
Для приготовления фармацевтической композиции согласно изобретению, эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению, в качестве действующего вещества, объединяют с фармацевтически приемлемым носителем в виде однородной смеси, причем носитель может иметь различные формы в зависимости от формы препарата, требуемого для введения. Фармацевтические композиции могут быть приготовлены в любой форме, подходящей для перорального, парентерального, местного, интраназального, офтальмологического, ушного, ректального, внутривагинального или чрескожного введения. Указанные фармацевтические композиции желательно находятся в стандартной дозированной форме, подходящей, предпочтительно, для введения перорально, ректально, подкожно или посредством парентеральной
инъекции. Например, для приготовления композиции в лекарственной форме для перорального применения, может быть использована любая из обычных фармацевтических сред, такая как, например, вода, гликоли, масла, спирты и тому подобное в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, скользящие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.
Благодаря легкости введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее благоприятную пероральную стандартную лекарственную форму, в случае которой, безусловно, используются твердые фармацевтические носители. Относительно парентеральных композиций, носитель, как правило, будет содержать стерильную воду, по меньшей мере, в значительной степени, хотя могут быть включены другие ингредиенты, например для увеличения растворимости. Например, могут быть приготовлены растворы для инъекций, в которых носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также могут быть приготовлены суспензии для инъекций, в случае которых могут быть использованы соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и тому подобное. В композициях, подходящих для подкожного введения, носитель необязательно представляет собой вещество, усиливающее проникновение, и/или подходящее увлажняющее вещество, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в малых пропорциях, не оказывающими значительного повреждающего действия на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение в кожу и/или могут быть полезными для приготовления требуемых композиций. Указанные композиции могут быть введены различными путями, например, в виде чрескожного пластыря, в виде капель, в виде мази. Они являются наиболее благоприятными для приготовления указанных выше фармацевтических композиций в стандартной лекарственной форме благодаря легкости введения и однородности дозировки. Стандартная лекарственная форма, при использовании в
настоящем описании и формуле изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных дозировок, при этом каждая единица содержит заданное количество действующего вещества, рассчитанное на достижение желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (включающие таблетки с насечками или таблетки с оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки, столовые ложки и тому подобное, и их раздельное множество.
Наиболее предпочтительно приготавливать вышеуказанные фармацевтические композиции в стандартной лекарственной форме для легкости введения и однородности дозировки. Стандартная лекарственная форма, при использовании в описании и формуле изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных дозировок, при этом каждая единица содержит заданное количество действующего вещества, рассчитанное на достижение желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (включающие таблетки с насечками или таблетки с оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки, столовые ложки и тому подобное, и их раздельное множество.
Соединение согласно изобретению вводят в количестве, достаточном для проявления его противоопухолевой активности.
Специалисты в данной области смогут легко определить эффективное количество, исходя из результатов тестирования, представленных ниже. В общем, предполагается, что терапевтически эффективное количество должно составлять от 0, 005 мг/кг до 100 мг/кг массы тела, и, в частности, от 0,005 мг/кг до 10 мг/кг массы тела. Указанное количество может быть соответствующим введению требуемой дозы как единственной, в виде двух, трех, четырех или более субдоз при соответствующих интервалах в течение дня. Указанные субдозы могут быть
приготовлены в виде стандартных лекарственных форм, например, содержащих от 0,5 до 500 мг, в частности, от 1 мг до 500 мг, более конкретно, от 10 мг до 500 мг действующего вещества на стандартную лекарственную форму.
В зависимости от способа введения, фармацевтическая композиция предпочтительно будет содержать от 0,05 до 99% по массе, более предпочтительно от 0,1 до 70% по массе, даже более предпочтительно от 0,1 до 50% по массе соединения согласно настоящему изобретению, и, от 1 до 99,95% по массе, более предпочтительно от 30 до 99, 9% по массе, даже более предпочтительно от 50 до 99,9% по массе фармацевтически приемлемого носителя, где все проценты основаны на полной массе композиции.
В качестве другого аспекта настоящего изобретения, предусматривают комбинацию соединения согласно настоящему изобретению с другим противоопухолевым средством, в особенности для применения в качестве лекарственного средства, более конкретно для применения в лечении рака или связанных с раком заболеваний.
Для лечения указанных выше состояний, соединения согласно изобретению могут эффективно применяться в комбинации с одним или более лекарственными средствами, более конкретно с другими противоопухолевыми средствами или адъювантами, используемыми в терапии рака. Примеры противоопухолевых средств или вспомогательных средств (поддерживающих средств в терапии) включают, без ограничения:
комплексные соединения платины, например, цисплатин, необязательно в комбинации с амифостином, карбоплатином или оксалиплатином;
соединения таксана, например, паклитаксел, частицы паклитаксела, связанного с белком (Abraxane(tm)) или доцетаксел;
ингибиторы топоизомеразы I, такие как соединения камптотецина, например, иринотекан, SN-38, топотекан, топотекан hcl;
- ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые
эпиподофиллотоксины или производные подофиллотоксина, например, этопозид, этопозида фосфат или тенипозид;
противоопухолевые алкалоиды барвинка, например, винбластин, винкристин или винорелбин;
- противоопухолевые нуклеозидные производные, например, 5-фторурацил, лейковорин, гемцитабин, гемцитабин hcl, капецитабин, кладрибин, флударабин, неларабин;
алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, например, циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин, тиотепа, мефалан (мелфалан), ломустин, алтретамин, бусульфан, дакарбазин, эстрамустин, ифосфамид необязательно в комбинации с месна, пипоброман, прокарбазин, стрептозоцин, телозоломид, урацил;
противоопухолевые производные антрациклина, например, даунорубицин, доксорубицин, необязательно в комбинации с дексразоксаном, доксил, идарубицин, митоксантрон, эпирубицин, эпирубицин hcl, валрубицин;
- молекулы, направленно воздействующие на рецептор IGF-1, например, пикроподофиллин;
- производные тетракарцина, например, тетракарцин А;
- глюкокортикоид, например, преднизон;
антитела, например, трастузумаб (антитело HER2), ритуксимаб (антитело CD20), гемтузумаб, гемтузумаб озогамицин, цетуксимаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, экулизумаб, ибритумомаб тиуксетан, нофетумомаб, панитумумаб, тозитумомаб, CNTO 32 8;
антагонисты рецепторов эстрогена или селективные модуляторы рецепторов эстрогена или ингибиторы синтеза эстрогена, например, тамоксифен, фулвестрант, торемифен, дролоксифен, фазлодекс, ралоксифен или летрозол;
- ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол, тестолактон и ворозол;
средства, влияющие на дифференцировку, такие как ретиноиды, витамин D или ретиноевая кислота, и средства, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты (RAMBA), например, аккутан;
ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например, азацитидин или децитабин;
- антифолаты, например, преметрексед динатрия;
антибиотики, например, актиномицин D, блеомицин, митомицин С, дактиномицин, карминомицин, дауномицин, левамизол, пликамицин, митрамицин;
антиметаболиты, например, клофарабин, аминоптерин, цитозина арабинозид или метотрексат, азацитидин, цитарабин, флоксуридин, пентостатин, тиогуанин;
средства, индуцирующие апоптоз, и антиангиогенные средства, такие как ингибиторы Вс1-2, например, YC 137, ВН 312, АВТ 737, госсипол, НА 14-1, TW 37 или декановая кислота;
тубулинсвязывающие средства, например, комбрестатин, колхицины или нокодазол;
- ингибиторы киназы (например, ингибиторы EGFR (рецептора фактора роста эпителия), MTKI (многонаправленные ингибиторы киназы), ингибиторы mTOR, ингибиторы cmet), например, флавоперидол, иматиниба мезилат, эрлотиниб, гефитиниб, дасатиниб, лапатиниб, лапатиниба дитозилат, сорафениб, сунитиниб, сунитиниба малеат, темсиролимус, б-{дифтор[б-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил) [1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-3-
ил]метил}хинолин или его фармацевтически приемлемая соль, б-[дифтор(б-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемая соль;
- ингибиторы фарнезилтрансферазы, например, типифарниб;
- ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC), например, бутират натрия, субероиланилид гидроксамовой кислоты (SAHA), депсипептид (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, трихостатин А, вориностат;
- ингибиторы убиквитин-протеасомного пути, например, PS-341, MLN.41 или бортезомиб;
- Йонделис;
- ингибиторы теломеразы, например, теломестатин;
ингибиторы матриксных металлопротеиназ, например, батимастат, маримастат, приностат или метастат;
Рекомбинантные интерлейкины, например, алдеслейкин,
денилейкина дифтитокс, интерферон альфа 2а, интерферон альфа 2Ь, пегинтерферон альфа 2Ь;
- ингибиторы МАРК;
Ретиноиды, например, алитретиноин, бексаротен,
третиноин;
- Триоксид мышьяка;
- Аспарагиназа;
- Стероиды, например, дромостанолона пропионат, мегестрола ацетат, нандролон (деканоат, фенпропионат), дексаметазон;
- Агонисты или антагонисты гонадотропин-рилизинг гормона, например, абареликс, гозерелина ацетат, гистрелина ацетат, лейпролида ацетат;
- Талидомид, леналидомид;
Меркаптопурин, митотан, памидронат, пегадемас, пегаспаргаза, расбуриказа;
- Миметики ВНЗ, например, АВТ-7 37;
- Ингибиторы МЕК, например, PD98059, AZD6244, CI-1040;
аналоги колониестимулирующего фактора, например, филграстим, пегфилграстим, сарграмостим; эритропоэтин или его аналоги (например, дарбепоэтин альфа); интерлейкин 11; опрелвекин; золедронат; золедроновая кислота; фентанил; бисфосфонат; палифермин;
стероидный ингибитор цитохром Р450 17-альфа-гидроксилазы-17,2 0-лиазы (CYP17), например, абиратерон, абиратерона ацетат.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или любых соответствующих подгрупп и примеров, и б-{дифтор[б-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-3-ил]метил}хинолина или его фармацевтически приемлемой соли.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или любых соответствующих подгрупп и примеров, и б-[дифтор(б-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-3-ил)метил]хинолина или его
фармацевтически приемлемой соли.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или любые соответствующие подгруппы и примеры, и 6-{дифтор[б-(1-метил-1п-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пирида-зин-3-ил]метил}хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или любые соответствующие подгруппы и примеры, и б-[дифтор(б-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.
Соединения согласно настоящему изобретению также имеют терапевтические применения в сенсибилизации опухолевых клеток для радиотерапии и химиотерапии.
Поэтому соединения согласно настоящему изобретению могут применяться в качестве "радиосенсибилизатора" и/или "хемосенсибилизатора" или могут быть представлены в комбинации с другим "радиосенсибилизатором" и/или "хемосенсибилизатором". Термин "радиосенсибилизатор", используемый в настоящем описании, определяют как молекулу, предпочтительно молекулу низкой молекулярной массы, вводимую животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к ионизирующему излучению и/или эффективности лечения заболеваний, поддающихся лечению ионизирующим излучением.
Термин "хемосенсибилизатор", используемый в настоящем описании, определяют как молекулу, предпочтительно молекулу низкой молекулярной массы, вводимую животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к химиотерапии и/или эффективности лечения заболеваний, поддающихся лечению химиотерапией.
Некоторые механизмы способа действия радиосенсибилизаторов были предложены и описаны в литературе, включая: гипоксические клеточные радиосенсибилизаторы (например, соединения 2
нитроимидазола и соединения бензотриазина диоксида), имитирующие кислород или альтернативно, ведущие себя подобно биовосстановительным средствам при гипоксии; негипоксические клеточные радиосенсибилизаторы (например, галогенированные пиримидины) могут быть аналогами оснований ДНК и предпочтительно включаться в ДНК раковых клеток и, тем самым, стимулировать индуцированное излучением разрушение молекул ДНК и/или предотвращать механизмы репарации ДНК до нормы; и различные другие потенциальные механизмы действия были предположены для радиосенсибилизаторов в лечении заболевания.
В настоящее время, во многих методиках лечения рака применяют радиосенсибилизаторы в сочетании с рентгеновским излучением. Примеры радиосенсибилизаторов, активированных рентгеновским излучением, включают, без ограничения, следующие соединения: метронидазол, мизонидазол, десметилмизонидазол, пимонидазол, этанидазол, ниморазол, митомицин С, RSU 1069, SR 4233, Е09, RB 6145, никотинамид, 5-бромдезоксиуридин (BUdR), 5-иоддезоксиуридин (IUdR), бромдезоксицитидин, фтордезоксиуридин (FudR), гидроксимочевину, цисплатин и терапевтически эффективные аналоги и производные перечисленных соединений.
В фотодинамической терапии (ФДТ) рака используется видимый
свет в качестве радиационного активатора сенсибилизирующего
средства. Примеры фотодинамических радиосенсибилизаторов
включают, без ограничения, следующие соединения: производные
гематопорфирина, фотофрин, производные бензопорфирина,
этиопорфирин олова, феоборбид-а, бактериохлорофилл-а,
нафталоцианины, фталоцианины, фталоцианин цинка и
терапевтически эффективные аналоги и производные перечисленных соединений.
Радиосенсибилизаторы могут быть введены в сочетании с терапевтически эффективным количеством одного или более других соединений, включающих, без ограничения: соединения, которые способствуют включению радиосенсибилизаторов в клетки-мишени; соединения, которые регулируют поток терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода к клеткам-мишеням; химиотерапевтические средства, которые действуют на опухоль с
дополнительным излучением или без него; или другие терапевтически эффективные соединения, предназначенные для лечения рака или других заболеваний.
Хемосенсибилизаторы могут быть введены в сочетании с
терапевтически эффективным количеством одного или более других
соединений, включающих, без ограничения: соединения, которые
способствуют включению хемосенсибилизаторов в клетки-мишени;
соединения, которые регулируют поток терапевтических средств,
питательных веществ и/или кислорода к клеткам-мишеням;
химиотерапевтические средства, которые действуют на опухоль,
или другие терапевтически эффективные соединения,
предназначенные для лечения рака или других заболеваний.
Антагонисты кальция, например, верапамил, как было обнаружено,
могут применяться в комбинации с антинеопластическими
средствами для достижения чувствительности к
химиотерапевтическим препаратам в опухолевых клетках, устойчивых к общепринятым химиотерапевтическим средствам, и усиления эффективности таких соединений в чувствительных к лекарственным средствам злокачественных опухолях.
Исходя из их полезных фармакологических свойств, компоненты комбинаций согласно изобретению, т.е. одно или более других лекарственных средств и соединение согласно настоящему изобретению, могут быть включены в различные фармацевтические формы в целях введения. Компоненты могут быть включены раздельно в индивидуальные фармацевтические композиции или в одну фармацевтическую композицию, содержащую все компоненты.
Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей одно или более других лекарственных средств и соединение согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтическим носителем.
Настоящее изобретение также относится к применению комбинации согласно изобретению в производстве фармацевтической композиции, направленной на ингибирование роста опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему в качестве первого действующего вещества соединение
согласно изобретению, а в качестве второго действующего вещества - одно или более противоопухолевых средств, как комбинированному препарату для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациентов, страдающих раком.
Одно или более других лекарственных средств и соединение согласно настоящему изобретению могут быть введены одновременно (например, в раздельных или единых композициях) или раздельно в любом порядке. В последнем случае, два или более соединений вводят в течение такого периода, в таком количестве и таким способом, которые достаточны для обеспечения достижения благоприятного или синергического эффекта. Следует отметить, что предпочтительный способ и порядок введения, а также соответствующие количества дозировки и схемы лечения для каждого компонента комбинации будут зависеть от другого конкретного лекарственного средства и соединения согласно настоящему изобретению, которые вводят, способа их введения, конкретной опухоли, подвергаемой лечению, и конкретного реципиента, подвергаемого лечению. Оптимальный способ и порядок введения, а также количества дозировки и схема лечения могут быть легко определены специалистами в данной области с использованием стандартных методов и с учетом информации, изложенной в настоящем описании.
Массовое отношение соединения согласно настоящему изобретению и одного или более других противоопухолевых средств, в случае их применения в виде комбинации, может быть определено специалистом в данной области. Указанное отношение, точная дозировка и частота введения зависят от конкретного соединения согласно изобретению и другого применяемого противоопухолевого средства (средств), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы тела, пола, питания, времени введения и общего физического состояния отдельного больного, способа введения, а также других лекарственных средств, которые может принимать индивид, как хорошо известно специалистам в данной области. Кроме того, очевидно, что эффективное суточное
количество может быть уменьшено или увеличено в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки врача, назначившего соединения согласно настоящему изобретению. Конкретное массовое отношение для настоящего соединения формулы (I) и другого противоопухолевого средства может изменяться в пределах от 1/10 до 10/1, более конкретно от 1/5 до 5/1, еще конкретнее от 1/3 до 3/1.
Комплексное соединение платины предпочтительно вводят в дозировке, составляющей от 1 до 500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 50 до 400 мг/м2, конкретно для цисплатина - в дозировке приблизительно 7 5 мг/м2, и для карбоплатина - приблизительно 300 мг/м2 на курс лечения.
Соединение таксана предпочтительно вводят в дозировке от 50 до 400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 75 до 250 мг/м2, конкретно для паклитаксела в дозировке приблизительно от 175 до 250 мг/м2, и для доцетаксела - приблизительно от 75 до 150 мг/м2 на курс лечения.
Соединение камптотецина предпочтительно вводят в дозировке от 0,1 до 400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 1 до 300 мг/м2, конкретно для иринотекана -в дозировке приблизительно от 100 до 350 мг/м2 и для топотекана - приблизительно от 1 до 2 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое производное подофиллотоксина
предпочтительно вводят в дозировке от 30 до 300 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 50 до 250 мг/м2, конкретно для этопозида - в дозировке приблизительно от 35 до 100 мг/м2, и для тенипозида приблизительно от 50 до 250 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевый алкалоид барвинка предпочтительно вводят в дозировке от 2 до 3 0 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, конкретно для винбластина - в дозировке приблизительно от 3 до 12 мг/м2, для винкристина - в дозировке приблизительно от 1 до 2 мг/м2, и для винорелбина - в дозировке приблизительно от 10 до 3 0 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое нуклеозидное производное предпочтительно
вводят в дозировке от 200 до 2500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 700 до 500 мг/м2, конкретно для - 5-ФУ в дозировке от 200 до 500 мг/м2, для гемцитабина - в дозировке приблизительно от 800 до 1200 мг/м2, и для капецитабина - приблизительно от 1000 до 2500 мг/м2 на курс лечения.
Алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, предпочтительно вводят в дозировке от 100 до 500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 120 до 200 мг/м2, конкретно для циклофосфамида - в дозировке приблизительно от 100 до 500 мг/м2, для хлорамбуцила в дозировке приблизительно от 0,1 до 0,2 мг/м2, для кармустина - в дозировке приблизительно от 150 до 200 мг/м2, и для ломустина - в дозировке приблизительно от 100 до 150 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое антрациклиновое производное
предпочтительно вводят в дозировке от 10 до 75 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например, от 15 до 60 мг/м2, конкретно для доксорубицина - в дозировке приблизительно от 4 0 до 7 5 мг/м2, для даунорубицина - в дозировке приблизительно от 2 5 до 4 5 мг/м2, и для идарубицина - в дозировке приблизительно от 10 до 15 мг/м2 на курс лечения.
Антиэстрогенное средство предпочтительно вводят в
дозировке приблизительно от 1 до 100 мг ежедневно в зависимости
от конкретного средства и состояния, подвергаемого лечению.
Тамоксифен предпочтительно вводят перорально в дозировке от 5
до 50 мг, предпочтительно от 10 до 20 мг дважды в день,
продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения
и сохранения терапевтического эффекта. Торемифен
предпочтительно вводят перорально в дозировке приблизительно 60 мг один раз в день, продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения и сохранения терапевтического эффекта. Анастрозол предпочтительно вводят перорально в дозировке приблизительно 1 мг один раз в день. Дролоксифен предпочтительно вводят перорально в дозировке приблизительно 20-100 мг один раз в день. Ралоксифен предпочтительно вводят
перорально в дозировке приблизительно 60 мг один раз в день. Эксеместан предпочтительно вводят перорально в дозировке приблизительно 2 5 мг один раз в день.
Антитела предпочтительно вводят в дозировке приблизительно от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, или как известно в данной области, если есть различия. Трастузумаб предпочтительно вводят в дозировке от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, конкретно от 2 до 4 мг/м2 на курс лечения. Указанные дозировки могут быть введены, например, один раз, дважды или более на курс лечения, который может быть повторен, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.
Соединения формулы (I), фармацевтически приемлемые соли присоединения, в частности фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот, и их стереоизомерные формы могут проявлять значимые диагностические свойства, благодаря которым они могут применяться для определения или идентификации комплекса, образованного между меченым соединением и другими молекулами, пептидами, белками, ферментами или рецепторами.
В способах определения или идентификации могут применяться соединения, меченные такими метками, как радиоактивные изотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и т.д. Примеры радиоактивных изотопов включают 1251, 1311, 3Н и 14С. Ферменты обычно обнаруживают посредством конъюгирования соответствующего субстрата, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Соответствующие примеры включают, например, бета-галактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена. Люминесцентные вещества включают, например, люминол, производные люминола, люциферин, экворин и люциферазу.
Биологические образцы могут быть определены как ткань тела или физиологические жидкости. Примерами физиологических жидкостей являются спинномозговая жидкость, кровь, плазма, сыворотка, моча, мокрота, слюна и тому подобное.
Общие пути синтеза
Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, но представляют собой лишь примеры и не должны ограничивать объем формулы изобретения каким-либо образом.
Экспериментальная часть
В дальнейшем, термин 'ДХМ' означает дихлорметан, 'Me'
означает метил, 'Et' означает этил, 'МеОН' означает метанол,
'ДМФА' означает диметилформамид, 'Et20' означает диэтиловый эфир,
'EtOAc' означает этилацетат, 'ACN' означает ацетонитрил, 'Н20'
означает воду, 'ТГФ' означает тетрагидрофуран, 'MgS04' означает
сульфат магния, 'NH4OH' означает гидроксид аммония, 'К2СОз'
означает карбонат дикалия, 'МдС12' означает хлорид магния,
'iPrNH2' означает изопропиламин, 'ЫН4НСОз' означает бикарбонат
аммония, 'ДМСО' означает диметилсульфоксид, 'ЭДТА' означает
этилендиаминтетрауксусную кислоту, 'НАДФ' означает
никотинамидадениндинуклеотид фосфат, 'СКЖХ' означает
сверхкритическую жидкостную хроматографию, 'Тп' означает температуру плавления.
А. Получение промежуточных соединений
Промежуточное соединение 1 или N-(3, 5-диметоксифенил)-N'-(1-метилэтил)-N-[3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-бил]этан-1,2-диамин описано как соединение 4 в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для соединения 4.
Промежуточное соединение 2 или N-(3,5-диметоксифенил)-N'-(1-метилэтил)-N-[3-(1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]этан-1,2-диамин описано как соединение 137 в форме свободного основания в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для соединения 137.
Промежуточное соединение 3 или N-(3,5-диметоксифенил)-N'-(1 метил)-N-[3-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]этан-1,2-диамин описано как соединение 449 в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для соединения 44 9.
Промежуточное соединение 4 или N-(3,5-диметоксифенил)-N'
(1-метилэтил)-N-[3-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]этан-1,2-диамин описано как свободное основание или как соль НС1 соединения 135 в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для соединения 135.
Промежуточное соединение 5 или N-(3,5-диметоксифенил)-N'-
(1-метилэтил)-N-[3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]пропан-1,3-диамин описано как соединение 382 в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для соединения 382.
Промежуточное соединение б или 7-бром-2-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-хиноксалин описано как промежуточное соединение 2 в WO2011/135376 и может быть получено согласно методикам, описанным в указанном документе для промежуточного соединения 2 .
WO2011/135376 включена в настоящую заявку посредством отсылки.
Пример А1
а) Получение промежуточного соединения 7
Смесь промежуточного соединения б (5 г; 17 ммоль), 2-фтор-3,5-диметоксианилина (3,6 г; 21 ммоль), трет-бутилата натрия (5 г; 52 ммоль) и рац-бис (дифенилфосфино)-1, 1'-бинафтила (0,54 г; 0,87 ммоль) в диоксане (100 мл) дегазировали при комнатной температуре под током азота. Через 10 минут ацетат палладия (II) (38 8 мг; 1,7 ммоль) добавляли порциями при комнатной температуре под током азота. Реакционную смесь нагревали при 95°С в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и вливали в воду со льдом и ДХМ. Смесь фильтровали через слой целита(r). Органический слой отделяли,
сушили над MgSC> 4, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток кристаллизовали из диэтилового эфира и осадок отфильтровывали, сушили в вакууме, получив 4 г (61%) промежуточного соединения 7 .
Ь) Получение промежуточного соединения 8
Гидрид натрия (0,21 г; 5,35 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 7 (0,7 г; 1,8 5 ммоль) в ДМФА (25 мл) при 5°С под током азота. Смесь перемешивали при 5°С в течение 1 часа. (2-Бромэтокси)-трет-бутилдиметилсилан (0,51 мл; 2,4 0 ммоль) добавляли по каплям при 5°С под током азота, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 4 часов. Смесь вливали в холодную воду и экстрагировали продукт EtOAc. Органический слой промывали Н20, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали, получив 1,2 г (колич.) промежуточного соединения 8. Неочищенный продукт использовали без очистки в следующей стадии.
с) Получение промежуточного соединения 9
Фторид тетрабутиламмония (1 М в ТГФ) (2 мл; 2 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 8 (1 г; 1,8 5 ммоль) в ТГФ (20 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение
3 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь делили между водой и EtOAc. Органический слой промывали рассолом, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток (1,2 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (нерегулярный SiOH, 15-40 мкм; 80 г; растворитель для элюирования: 98% ДХМ, 2% МеОН, 0,1% NH4OH) . Чистые фракции собирали и выпаривали растворитель. Остаток (500 мг) кристаллизовали из диэтилового эфира. Осадок отфильтровывали и сушили, получив 410 мг (52%) промежуточного соединения 9. Тп: 172°С (К).
d) Получение промежуточного соединения 10
Метансульфонилхлорид (0,3 мл; 3,8 8 ммоль) при 5°С по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения 9 (54 7 мг; 1,2 9 ммоль) и триэтиламина (0,9 мл; б,4 6 ммоль) в ДХМ (15 мл) . Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа, разбавляли ДХМ и вливали в 10% водный раствор К2СОз. Органический слой декантировали, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали, получив 850 мг (> 100%) промежуточного соединения 10. Неочищенный продукт использовали без очистки в следующей стадии.
е) Получение промежуточного соединения 11
Смесь промежуточного соединения 10 (0,64 8 г; 1,29 ммоль) и изопропиламина (2,4 мл; 2 8 ммоль) в CH3CN (15 мл) нагревали при 10 0°С в течение 2 4 часов в запаянной пробирке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли ДХМ и вливали в воду. Органический слой декантировали, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (нерегулярный SiOH; 2 4 г; градиент: от 3% МеОН, 97% ДХМ до 10% МеОН, 90% ДХМ) . Чистые фракции собирали и выпаривали, получив 4 52 мг (75%) промежуточного соединения 11.
В. Получение соединений формулы (I)
Пример В1:
Получение соединения 1
Раствор N- (3,5-диметоксифенил)-N'-(1-метилэтил)-N-[3-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]этан-1,2-диамина (промежуточного соединения 1) (0,42 г; 0,9 ммоль), формальдегида (37% раствор в воде; 0,21 мл; 2,8 ммоль) в диоксане (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавляли воду и EtOAc. Органический слой декантировали, промывали водой, сушили над MgS04 и выпаривали досуха. Остаток (0,52 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: сферический немодифицированный силикагель 5 мкм 150x30,0 мм, подвижная фаза: градиент от 0,2% NH4OH, 98% ДХМ, 2% МеОН до 1,2% NH4OH, 88% ДХМ, 12% МеОН). Фракции, содержащие целевой продукт, собирали и выпаривали досуха. Остаток (0,37 г) кристаллизовали из смеси МеОН и Et20. Осадок отфильтровывали и сушили, получив 0,27 г (64%) соединения 1 (Тп: 190°С (ДСК)).
Пример В2:
Получение соединения 2
Раствор N- (3,5-диметоксифенил)-N'-(1-метилэтил)-N-[3-(1Н-
пиразол-4-ил)хиноксалин-б-ил]этан-1,2-диамина
(промежуточного
соединения 2) (0,24 г; 0,52 ммоль), формальдегида (37% раствор в воде; 0,12 мл; 1,55 ммоль) в диоксане (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней без превращения. Добавляли К2С03 (0,22 г; 1,55 ммоль) и раствор перемешивали при комнатной температуре еще в течение 3 дней. Органический слой экстрагировали, сушили над MgS04 и выпаривали досуха. Остаток (0,17 6 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (неподвижная фаза: сферический немодифицированный силикагель 5 мкм 150x30, 0 мм, подвижная фаза: градиент от 0,2% NH4OH, 98% ДХМ, 2% МеОН до 1,3% NH4OH, 87% ДХМ, 13% МеОН). Фракции, содержащие целевой продукт, собирали и выпаривали досуха. Остаток (79 мг) подвергали лиофильной сушке с ацетонитрилом/водой 20/80, получив 66 мг (34%) соединения 2 в виде желтого вязкого порошка. Пример ВЗ:
Получение соединения 3 и 4
50 мкм промежуточного соединения 1 инкубировали при 37°С с 12 000 g фракцией из крысиной печени в течение 60 минут при концентрации белка 1 мг/мл. Стоковый 10 мМ раствор промежуточного соединения 1 в метаноле получали и разбавляли в 200 раз (0,25 мл в 50 мл) в среде для инкубирования (конечная концентрация метанола 0,5% при инкубировании). Буфер для инкубирования содержал 1 мМ ЭДТА, 5 мМ МдС12 и 100 мМ калий-фосфатного буфера (рН 7,4). Реакцию инициировали добавлением НАДФ (конечная концентрация 1 мМ) . Инкубирование останавливали быстрым замораживанием на сухом льду.
Полученные метаболиты первоначально экстрагировали при
использовании этилацетата. Фракцию метаболитов выпаривали досуха, ресуспендировали в ДМСО:вода (1:1, об/об) и разделяли с помощью обращенно-фазовой СВЭЖХ. Разделение проводили при использовании двух колонок Interchim Strategy С18-2, 2,2 мкм, (150 мм х 3,0 мм внутр. диам. ) , используя растворитель А с линейным градиентом 5-70% В в течение 20 минут при скорости 0,8 мл/мин. Растворители состояли из Растворителя А, 25 мМ ацетата аммония, рН 4,0, и Растворителя В, ацетонитрил/метанол (60/40, об/об). Пиковые фракции, соответствующие целевым продуктам, собирали и выпаривали досуха, получив соединение 3 и 4. Соединение 3
Соединение 3 также может быть получено согласно методике, описанной в Примере 1, начиная с соединения 64 5 в WO2011/135376.
Соединение 4
В альтернативе соединения 3 и 4 также получали следующим образом:
Трибромид бора (1 М в ДХМ; б мл; б ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения 1 (4 85 мг; 1,0 6 ммоль) в ДХМ (25 мл) при 5°С под током азота. Раствор оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ, вливали в рассол и
подщелачивали твердым К2СОз. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле
(нерегулярный SiOH, 4 0 г; подвижная фаза: градиент от 0,5% NH4OH, 94,5% ДХМ, 5% МеОН до 0,5% NH4OH, 89,5% ДХМ, 10% МеОН). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали досуха, получив 110 мг (23%) соединения 1 и 287 мг смеси соединений 3 и 4. Эту последнюю фракцию очищали с помощью ахиральной СКЖХ
(Chiralpak AD-H 5 мкм 250x30 мм; подвижная фаза: 0,3% изопропиламин, 70% С02, 30% МеОН). Чистые фракции собирали, концентрировали и кристаллизовали из Et20/ACN. Осадки отфильтровывали с получением 53 мг (11%) соединения 3 (Тп: 255°С, К) и 148 мг (31%) соединения 4 (Тп: 25б°С, К) . Пример В4:
Стоковый раствор 2 мм промежуточного соединения 1 получали в метаноле и разбавляли в 200 раз в среде для инкубирования (конечная концентрация метанола 0,5% при инкубировании). Инкубирование проводили при 37°С с 12 0 00 g фракцией из крысиной печени в течение 60 минут при концентрации белка 1 мг/мл. Буфер для инкубирования содержал 1 мМ ЭДТА, 5 мМ МдС12 и 100 мМ калий-фосфатного буфера (рН 7,4). Реакцию инициировали добавлением НАДФ (конечная концентрация 1 мМ) . Инкубирование останавливали быстрым замораживанием на сухом льду.
После инкубирования смесь (1 мл) смешивали с 5 объемами ацетонитрила, перемешивали на вортексе и обрабатывали ультразвуком в течение 10 минут. Белок удаляли с помощью центрифугирования при 32 0 0 об/мин и 8°С в течение 3 0 минут. Супернатант удаляли и выпаривали досуха под током азота при 30°С. Экстракт ресуспендировали в ацетонитриле/воде (1:1, об/об). Образец анализировали следующим образом:
СВЭЖХ с МС детектированием
Насос для сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии
Acquity Binary Solvent Manager/Waters 2777 инжектор CTC-
Pal
- УФ детектор:
Waters Acquity PDA
- MC детектор:
Waters G2 (S) QToF MS/Thermo LTQ-Orbitrap
- Система обработки данных: Waters Masslynx 4.1
Режим работы:
- Колонка:
Interchim, Strategy C18-2, 2,2 мкм 2x(150 мм x 3,0 мм внутр. диам.)
- Температура колонки:
Т=60°С
- Температура образца:
Т=10°С
- Подвижная фаза:
Растворитель А: 0,025 М ацетат аммония, рН 4,0 Растворитель В: 60/40 (об/об) ацетонитрил/метанол
- Режим элюирования: линейный градиент:
Время (мин)
22, 5
25,5
100
100
- Время цикла: 3 0 мин
- Поток: 0,8 мл/мин Введение шприцем:
- Подвижная фаза: ацетонитрил:вода (1:1, об/об)
- Поток: 5 мкл/мин Условия детектирования
Условия МС - масс-спектрометры Waters synapt g2 и g2s МС анализ проводили при использовании масс-спектрометров Waters SYNAPT G2 и G2S, оборудованных двухканальным зондом электрораспылительной ионизации, работающих с высоким разрешением в режиме детектирования положительных ионов. Напряжение на капилляре было установлено на 3 кВ, а на конусе -4 0 В. Температура образца составляла 12 0°С, температура
десольватации - 400°С. Масс-спектрометр калибровали раствором формиата натрия, подаваемым через распылитель образца. Зонд LockSpray(tm) ESI обеспечивал независимый источник калибрующего вещества фиксированной массы, лейцин-энкефалина. Ион лейцина при m/z 556,2771 использовали в качестве фиксированной массы в полном МС и в МСМС-режиме. Данные QTOF (МС, МСМС) регистрировали в центроидном режиме с переменным временем сканирования (0,5-1,0 сек) . Все данные обрабатывали при использовании программного обеспечения Masslynx.
Условия МС - масс-спектрометр Thermo LTQ-Orbitrap Масс-спектрометр LTQ-Orbitrap был оборудован источником электрораспылительной ионизации, работающим в режиме детектирования положительных ионов. Точные измерения массы получали при использовании внешней калибровки или калибровки фиксированной массы (ион фиксированной массы при m/z 391, 2843) . Параметры источника были установлены на максимальную чувствительность при использовании 10 нг/мкл неизменяемого стандартного раствора лекарственного средства. Такой же раствор использовали для определения оптимальной энергии столкновения, используемой при МСп фрагментации. Метаболиты отбирали для МСп фрагментации из ЖХ-МС следа при использовании сканирования, зависимого от данных. Данные получали в центроидном режиме и обрабатывали при использовании программного обеспечения XCalibur.
В эксперименте выше были обнаружены соединение 4 ([МН]+ m/z 445), соединение 3 ([МН]+ m/z 445) и соединение 5 ([МН]+ m/z 431).
Пример В5
Соединение 5:
Раствор промежуточного соединения 3 (292 мг; 0,675 ммоль), формальдегида (37% раствор в воде; 151 мкл; 2,02 ммоль) в 1,4-диоксане (5,48 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. При наблюдении начала превращения, добавляли дополнительное количество формальдегида (37% раствор в воде; 252 мкл; 3,37 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 70°С в течение 16 часов.
Добавляли Н20 и EtOAc. Органический слой декантировали, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха.
Остаток (0,325 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (нерегулярный SiOH, 40 г, подвижная фаза: градиент от 95% ДХМ, 5% МеОН, 0,5% NH4OH до 90% ДХМ, 10% МеОН, 1% NH4OH) . Фракции, содержащие продукт, смешивали и выпаривали, получив фракцию промежуточного соединения (106 мг), которую кристаллизовали из смеси Et20/ACN с получением после фильтрования и сушки 86 мг (28%) соединения 6. Тп:170°С (К)
Пример В6
Получение соединения 7 в виде соли НС1 (1,65НС1 2,2Н20)
Раствор промежуточного соединения 4 (293 мг; 0,638 ммоль), формальдегида (37% раствор в воде; 143 мкл; 1,91 ммоль) в 1,4-диоксане (5,16 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Поскольку не наблюдали превращения, добавляли
дополнительное количество формальдегида (37% раствор в воде; 238 мкл; 3,18 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 70°С в течение 16 часов. Снова добавляли дополнительное количество формальдегида (37% раствор в воде; 477 мкл; 6,36 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 7 0°С в течение 16 часов. Добавляли Н20 и EtOAc. Органический слой декантировали, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха.
Остаток (0,48 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (сферический немодифицированный силикагель 5 мкм 150x30,0 мм, подвижная фаза: градиент от 0,2% NH4OH, 98% ДХМ, 2% МеОН до 1% NH4OH, 90% ДХМ, 10% МеОН) . Фракции, содержащие продукт, смешивали и выпаривали с получением 14 8 мг промежуточной фракции, которую очищали с помощью ахиральной СКЖХ (неподвижная фаза: CYANO б мкм 150x21,2 мм, подвижная фаза: 90% С02, 10% МеОН (0,3% iPrNH2) ) . Фракции, содержащие продукт, смешивали и выпаривали с получением 100 мг промежуточной фракции, которую растворяли в 0,1 мл МеОН. Добавляли НС1 в (2-5N) iPrOH при 0°С. Затем смесь выпаривали и с полученный остаток собирали в Et20. Осадок отфильтровывали и сушили, получив 103 мг (29%) соединения 7 в виде красного твердого вещества. Тп: 152°С (К)
Пример В7
Получение соединения 8
Раствор промежуточного соединения 11 (382 мг; 0,82 ммоль) и формальдегида (37% раствор в воде; 308 мкл; 4,11 ммоль) в диоксане (10 мл) нагревали при 60°С в течение 3 дней. Добавляли Н20 и EtOAc. Органический слой декантировали, сушили над MgS04, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток очищали с помощью
хроматографии на силикагеле (сферический немодифицированный силикагель 5 мкм 150x30,0 мм; градиент: от 71% гептана, 1% МеОН ( + 10% NH4OH) , 28% EtOAc до 0% гептана, 20% МеОН ( + 10% NH4OH) , 8 0% EtOAc). Чистые фракции собирали и выпаривали досуха. Остаток (65 мг) очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии (X-Bridge-Cl8 5 мкм 30x150 мм; градиент: от 80% NH4HCO3 0,5%, 20% CH3CN до 0% NH4HCO3 0,5%, 100% CH3CN) . Чистые фракции собирали и выпаривали, получив 15 мг (4%) соединения 8. Тп: 266°С (К) . Пример В8
Получение соединения 9
Раствор промежуточного соединения 5 (0,21 г; 0,46 ммоль) и формальдегида (37% раствор в воде; 0,1 мл; 1,4 ммоль) в 1,4-диоксане (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Через неделю добавляли дополнительное количество формальдегида (37% раствор в воде; 0,5 мл; 20,55 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 2 дней. Добавляли Н20 и EtOAc. Органический слой экстрагировали, сушили над MgS04 и выпаривали досуха.
Полученный остаток (17 0 мг) очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии (неподвижная фаза: X-Bridge-C18 5 мкм 30x150 мм, подвижная фаза: градиент от 85% NH4HCO3 0,5%, 15% ACN до 0% NH4HCO3 0,5%, 100% ACN) . Фракции, содержащие продукт, смешивали и выпаривали с получением промежуточной фракции (10 мг) , которую подвергали лиофильной сушке с ацетонитрилом/водой 20/80, получив 9 мг (4%) соединения 9 в виде желтого порошка. Тп: смола при 8 0°С (К) .
Аналитическая часть
ЖХ-МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) (см.
Таблицу Al)
Измерение ВЭЖХ проводили при использовании системы СВЭЖХ
(сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии) Acquity
(Waters), включающей двухканальный насос с дегазатором,
автосамплер, детектор на диодной матрице (DAD) и колонку,
указанную в соответствующих способах ниже, температуру колонки
поддерживали на уровне 4 0°С. Поток с колонки направляли на МС-
детектор. МС-детектор был снабжен источником
электрораспылительной ионизации. Напряжение на игле капилляра составляло 3 кВ, температуру источника поддерживали на уровне 13 0°С на Quattro (тройной квадрупольный масс-спектрометр производства Waters). Азот использовали в качестве газа в распылительном устройстве. Регистрацию данных осуществляли с помощью системы Waters-Micromass MassLynx-Openlynx.
Обращенно-фазовую СВЭЖХ проводили на колонке С18 (1,7 мкм, 2,1x100 мм) Waters Acquity ВЕН (с гибридным мостиковым этилсилоксаном/силикагелем) со скоростью потока 0,343 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ ацетат аммония/5% ацетонитрил; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) использовали для создания условий градиента от 84,2% А и 15,8% В (удерживали в течение 0,49 минут) до 10,5% А и 89,5% В за 2,18 минуты, удерживали в течение 1,94 мин и возвращались к исходным условиям за 0,73 мин, удерживали в течение 0,73 минут. Использовали вводимый объем 2 мкл. Напряжение на конусе составляло 2 0 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали при сканировании от 100 до 1000 за 0,2 секунды, используя задержку между каналами 0,1 секунды. ДСК
Для ряда соединений значения температуры плавления (Тп) определяли с помощью DSC1 (Mettler-Toledo). Температуры плавления измеряли с температурным градиентом 10°С/минута. Максимальная температура составляла 350°С. Значения являются пиковыми значениями.
Для ряда соединений значения температуры плавления
получали при использовании нагревательного столика Кофлера, состоящего из термостолика с линейным температурным градиентом, скользящего движка-указателя и температурной шкалы в градусах Цельсия. ЯМР
Для соединений 1, 2, 6-9 эксперименты ЯМР проводили на спектрометре Bruker Avance III 500 с использованием внутренней дейтериевой стабилизации, который был снабжен реверсивной измерительной головкой для детектирования тройного резонанса (1Н, 13С, 15N TXI) . Химические сдвиги (8) приведены в миллионных долях (м.д.).
Для соединения 3 и 4, каждую фракцию растворяли в 2 50 мкл безводного ДМСО-о!б, и полученный раствор переносили в 5 мм пробирку для ЯМР Shigemi с магнитной чувствительностью, подобранной для соответствующего растворителя.
Эксперименты регистрировали на спектрометре Bruker Avance 600 МГц, оборудованном 5 мм криодатчиком обратного детектирования (CPTCI) . 1D гЕ и 2D NOESY, HSQC и НМВС спектры регистрировали с помощью стандартных импульсных программ Bruker. Спектр NOESY использовали для определения межпространственных корреляций; спектр НМВС - для межсвязных корреляций. Химические сдвиги (8) приведены в м.д. Данные химических сдвигов 1Н-ЯМР были получены из 1D гН спектра при использовании центра мультиплета ДМС0-о!5 при 2,50 м.д. или центра мультиплета ацетонитрила-о!2 при 1,94 м.д. в качестве внутреннего стандарта. Константы взаимодействия измерены в Гц. Химические сдвиги 13С-ЯМР были получены при использовании центра мультиплета ДМСО-о!б при 39,51 м.д. в качестве внутреннего стандарта.
Таблица А1: НС означает номер соединения; время удержания (Rt) в минутах; Тп означает температуру плавления (°С) .
Как известно специалисту в данной области, соединения, синтезированные при использовании приведенных методик, могут существовать в виде сольвата, например, гидрата, и/или могут содержать остаточный растворитель или незначительные примеси.
Соединение
(Kofler(К) или ДСК)
[М+Н]+
190°С
ДСК
2,46 (чистота 98,1%)
459
1 ( ) N-H
80°С (вязкий)
2,29 (чистота 94,3%)
445
Соединение
(Kofler(К) или ДСК)
[М+Н]+
255°С
2, 07 (чистота
100%)
445
256°С
2, 06 (чистота
100%)
445
170°С
2, 47 (чистота 99%)
445
в виде соли НС1
152°С (вязкий)
2, 64 (чистота 95%)
473
266°С
2, 58
(чистота 95%)
477
0-^
80°С (вязкий)
2,23 (чистота 100%)
473
Соединение 1
1Н-ЯМР проводили при 350°К
^-ЯМР (500 МГц, ДМС0-с16) 5 м.д. 0,99 (д, J=6,5 Гц, 6 Н) 2,84 (спт, J=6,5 Гц, 1 Н) 2, 88-2, 93 (м, 2 Н) 3,56 (ш с, 2 Н) 3,76 (с, 3 Н) 3,82-3,91 (м, 5 Н) 3,93 (с, 3 Н) 6,42 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 6,57 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 6,97 (д, J=2,7 Гц, 1 Н) 7,26
(дд, J=9,l, 2,7 Гц, 1 Н) 7,75 (д, J=9, 1 Гц, 1 Н) 8,14 (с, 1 Н) 8,46 (с, 1 Н) 8,87 (с, 1 Н) Соединение 2
1Н-ЯМР проводили при 350°К
гЕ-ЯМ.Р (500 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 0,99 (д, J=6, б Гц, б Н) 2,84 (спт, J=6,6 Гц, 1 Н) 2, 88-2, 95 (м, 2 Н) 3,56 (ш с, 2 Н) 3,76 (с, 3 Н) 3, 80-3, 95 (м, 5 Н) 6,43 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 6,57 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 6,99 (д, J=2,7 Гц, 1 Н) 7,26 (дд, J=9,5, 2,7 Гц, 1 Н) 7,75 (д, J=9,5 Гц, 1 Н) 8,35 (ш с, 2 Н) 8,92 (с, 1 Н) 13, 08 (ш с, 1 Н)
Соединение 3
1Н-ЯМР проводили при 3 0 0°К
!Н-ЯМР (600 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 0,98 (д, J=6,42 Гц, 6 Н) 2,82 (спт, J=6,50 Гц, 1 Н) 2,88 (т, J=4,53 Гц, 2 Н) 3,69 (с, 3 Н) 3,91 (с, 3 Н) 6,29 (д, J=2,27 Гц, 1 Н) 6,42 (д, J=2,27 Гц, 1 Н) 6,89 (ш с, 1 Н) 7,25 (ш с, 1 Н) 7,75 (д, J=9, 07 Гц, 1 Н) 8,18 (с, 1 Н) 8,53 (с, 1 Н) 8,89 (с, 1 Н)
Соединение 4
1Н-ЯМР проводили при 3 0 0°К
ХН-ЯМР (600 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 0,96 (д, J=6,70 Гц, 6 Н) 2,81 (спт, J=6,70 Гц, 1 Н) 2,86 (т, J=4,34 Гц, 2 Н) 3,79 (с, 3 Н) 3,91 (с, 3 Н) 6,26 (д, J=l,89 Гц, 1 Н) 6,41 (д, J=2,27 Гц, 1 Н) 6,91 (ш с, 1 Н) 7,27 (ш с, 1 Н) 7,75 (д, J=9,44 Гц, 1 Н) 8,18 (с, 1 Н) 8,53 (с, 1 Н) 8,89 (с, 1 Н)
Соединение 6
1Н-ЯМР проводили при 3 0 0°К
ХН-ЯМР (500 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 1,43 (т, J=7,3 Гц, 3 Н) 2,22 (ш с, 3 Н) 2,82 (ш с, 2 Н) 3,50-4,10 (м, 10 Н) 4,20 (к, J=7,3 Гц, 2 Н) 6,46 (д, J=l,9 Гц, 1 Н) 6,59 (д, J=l,9 Гц, 1 Н) 6,92 (ш с, 1 Н) 7,25 (ш д, J=7,3 Гц, 1 Н) 7,77 (д, J=9, 1 Гц, 1 Н) 8,20 (с, 1 Н) 8,58 (с, 1 Н) 8,92 (с, 1 Н)
Соединение 7
1Н-ЯМР проводили при 3 0 0°К
ХН-ЯМР (500 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 1,32 (дд, J=9,8, 6,6 Гц, 6
Н) 1,44 (т, J=7,4 Гц, 3 Н) 3, 35-3, 60 (м, 3 Н) 3,93 (с, 3 Н) 3,79 (с, 3 Н) 4,22 (к, J=7,5 Гц, 2 Н) 4,43 (ш д, J=12,9 Гц, 1 Н) 4,58 (ш с, 1 Н) 6,56 (д, J=2,5 Гц, 1 Н) 6,70 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 7,17 (ш д, J=l,9 Гц, 1 Н) 7,30 (дд, J=9,3, 2,4 Гц, 1 Н) 7,84 (д, J=9,l Гц, 1 Н) 8,23 (с, 1 Н) 8,62 (с, 1 Н) 9,02 (с, 1 Н) 10,26 (ш с, 1 Н) Соединение 8
1Н-ЯМР проводили при 350°К
^-ЯМР (500 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 0,99 (д, J=6, 6 Гц, 6 Н) 2,85 (спт, J=6,5 Гц, 1 Н) 2,92 (т, J=4,6 Гц, 2 Н) 3,58 (ш с, 2 Н) 3, 80-4, 05 (м, 11 Н) 6,84 (д, J=6, 9 Гц, 1 Н) 6,92 (ш с, 1 Н) 7,20 (ш д, J=9,5 Гц, 1 Н) 7,79 (д, J=9,l Гц, 1 Н) 8,15 (с, 1 Н) 8,46 (с, 1 Н) 8,89 (с, 1 Н)
Соединение 9
гЕ-ЯМ.Р проводили при 3 0 0°К
^-ЯМР (500 МГц, ДМСО-с16) 5 м.д. 0,97 (ш д, J=5,4 Гц, 6 Н) 1,64 (ш с, 2 Н) 2,72 (ш с, 2 Н) 2,84 (спт, J=6,4 Гц, 1 Н) 3,503,80 (м, 7 Н) 3,84 (с, 3 Н) 3,92 (с, 3 Н) 6,21 (д, J=2,2 Гц, 1 Н) 6,61 (д, J=2,5 Гц, 1 Н) 6,92 (ш с, 2 Н) 7,71 (д, J=9,5 Гц, 1 Н) 8,19 (с, 1 Н) 8,54 (с, 1 Н) 8,91 (с, 1 Н)
Некоторые сигналы диазепинового кольца расширены за пределы обнаружения в спектрах, измеренных при 300 К в ДМСО-с1б.
Фармакологическая часть
Биологические анализы А
FGFR1 (ферментный анализ)
В конечном реакционном объеме 30 мкл, FGFR1 (ч) (25 нг/мл) инкубировали с 50 мМ HEPES, рН 7,5, 6 мМ МпС12, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3V04, 0,01% тритон-Х-100, 500 нМ Btn-Flt3 и 5 мкМ АТФ в присутствии соединения (конечная концентрация ДМСО 1%). После инкубирования в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали смесью 2,27 нМ EU-анти Р-Туг, 7 мМ ЭДТА, 31,25 нМ SA-XL-665 и 0,02% БСА, что продолжалось в течение 60 минут при комнатной температуре. После этого измеряли сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) (возбуждение 340 нм, эмиссия 620 нм,
эмиссия 655 нм) и результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции). В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-1од1С50) . FGFR2 (ферментный анализ)
В конечном реакционном объеме 30 мкл, FGFR2 (ч) (150 нг/мл) инкубировали с 50 мМ HEPES, рН 7,5, 6 мМ МпС12, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3V04, 0,01% тритон-Х-100, 500 нМ Btn-Flt3 и 0,4 мкМ АТФ в присутствии соединения (конечная концентрация ДМСО 1%) . После инкубирования в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали смесью 2,27 нМ EU-анти Р-Туг, 7 мМ ЭДТА, 31,25 нМ SA-XL-665 и 0,02% БСА, что продолжалось в течение 60 минут при комнатной температуре. После этого измеряли сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) (возбуждение 34 0 нм, эмиссия 62 0 нм, эмиссия 655 нм) и результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции). В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-logIC50) • FGFR3 (ферментный анализ)
В конечном реакционном объеме 30 мкл, FGFR3 (ч) (40 нг/мл) инкубировали с 50 мМ HEPES, рН 7,5, 6 мМ МпС12, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3V04, 0,01% тритон-Х-100, 500 нМ Btn-Flt3 и 25 мкМ АТФ в присутствии соединения (конечная концентрация ДМСО 1%). После инкубирования в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали смесью 2,27 нМ EU-анти Р-Туг, 7 мМ ЭДТА, 31,25 нМ SA-XL-665 и 0,02% БСА, что продолжалось в течение 60 минут при комнатной температуре. После этого измеряли сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) (возбуждение 340 нм, эмиссия 620 нм, эмиссия 655 нм) и результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции). В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали данные для вычисления
значений IC50 (М) и pIC50 (-1од1С50) . FGFR4 (ферментный анализ)
В конечном реакционном объеме 30 мкл, FGFR4 (ч) (60 нг/мл) инкубировали с 50 мМ HEPES, рН 7,5, 6 мМ МпС12, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3V04, 0,01% тритон-Х-100, 500 нМ Btn-Flt3 и 5 мкМ АТФ в присутствии соединения (конечная концентрация ДМСО 1%). После инкубирования в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали смесью 2,27 нМ EU-анти Р-Туг, 7 мМ ЭДТА, 31,25 нМ SA-XL-665 и 0,02% БСА, что продолжалось в течение 60 минут при комнатной температуре. После этого измеряли сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) (возбуждение 340 нм, эмиссия 620 нм, эмиссия 655 нм) и результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции). В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-logIC50) •
KDR (VEGFR2) (ферментный анализ)
В конечном объеме 30 мкл, KDR (ч) (150 нг/мл) инкубировали с 50 мМ HEPES рН 7,5, 6 мМ МпС12, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3V04, 0,01% тритон-Х-100, 500 нМ Btn-Flt3 и 3 мкМ АТФ в присутствии соединения (конечная концентрация ДМСО 1%) . После инкубирования в течение 12 0 минут при комнатной температуре реакцию останавливали смесью 2,27 нМ EU-анти Р-Туг, 7 мМ ЭДТА, 31,25 нМ SA-XL-665 и 0,02% БСА, что продолжалось в течение 60 минут при комнатной температуре. После этого измеряли сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) (возбуждение 340 нм, эмиссия 620 нм, эмиссия 655 нм) и результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции). В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-logIC50) .
Ba/F3-FGFR1 (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)
В 384-луночном планшете 100 нл соединения, разведенного в
ДМСО, вносили в лунки перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (RPMI-16406e3 фенолового красного, 10% FBS, 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 Ва/ГЗ-ГСГК1-трансфицированных клеток на лунку. Клетки помещали в инкубатор при 37°С и 5% С02. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора аламарового синего (0,5 мМ K3Fe(CN)6, 0,5 мМ K4Fe (CN) б, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С и 5% С02 до измерения RFU (относительные единицы флуоресценции) (возбуждение 540 нм, эмиссия 590 нм) в спектрофотометре для микропланшетов.
В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали полученные данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-1од1С50) • В качестве обратного скрининга такой же эксперимент выполняли в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.
Ba/F3-FGFR3 (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)
В 384-луночном планшете 100 нл соединения, разведенного в ДМСО, вносили в лунки перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (RPMI-1640 без фенолового красного, 10% FBS, 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 Ba/FЗ-FGFRЗ-тpaнcфициpoвaнныx клеток на лунку. Клетки
помещали в инкубатор при 37°С и 5% С02. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора аламарового синего (0,5 мМ K3Fe(CN)6, 0,5 мМ K4Fe (CN) б, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С и 5% С02 до измерения RFU (относительные единицы флуоресценции) (возбуждение 540 нм, эмиссия 590 нм) в спектрофотометре для микропланшетов.
В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали полученные данные для вычисления значений IC50 (М) и PIC50 (-loglCso) • В качестве обратного скрининга такой же эксперимент выполняли в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.
Ba/F3-KDR (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)
В 384-луночном планшете 100 нл соединения, разведенного в ДМСО, вносили в лунки перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (RPMI-1640 без фенолового красного, 10% FBS, 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 2 0000 Ва/ГЗ-КБК-трансфицированных клеток на лунку. Клетки помещали в инкубатор при 37°С и 5% С02. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора аламарового синего (0,5 мМ K3Fe(CN)6, 0,5 мМ K4Fe (CN) б, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С и 5% С02 до измерения RFU (относительные единицы флуоресценции) (возбуждение 540 нм, эмиссия 590 нм) в спектрофотометре для микропланшетов.
В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали полученные данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-1од1С50) • В качестве обратного скрининга такой же эксперимент выполняли в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.
Ba/F3-FGFR4 (анализ клеточной пролиферации)
В 384-луночном планшете 100 нл соединения, разведенного в ДМСО, вносили в лунки до добавления 50 мкл среды для культивирования клеток (RPMI-1640 без фенолового красного, 10% FBS, 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 Ba/FЗ-FGFR4-тpaнcфициpoвaнныx клеток на лунку. Клетки
помещали в инкубатор при 37°С и 5% С02. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора аламарового синего (0,5 мМ K3Fe(CN)6, 0,5 мМ K4Fe (CN) б, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С и 5% С02 до измерения RFU (относительные единицы флуоресценции) (возбуждение 540 нм, эмиссия 590 нм) в спектрофотометре для микропланшетов.
В данном анализе определяли ингибиторный эффект различных концентраций соединения (диапазон от 10 мкМ до 0,1 нМ) и использовали полученные данные для вычисления значений IC50 (М) и pIC50 (-logIC50) .
Данные для соединений согласно изобретению в представленных выше анализах приведены в таблице А2.
BAF3-
BAF3-
BAF3-KDR
BAF3-FGFR1
BAF3-FGFR1
BAF3-FGFR3
FGFR3
KDR
BAF3-
FGFR1
FGFR2
FGFR3
FGFR4
VEGFR
(ПЛЮС
(МИНУС IL3
(ПЛЮС IL3
(МИНУС IL3
(ПЛЮС
(МИНУС
FGFR4
pIC50
pIC50
pIC50
pIC50
KDR pIC50
IL3
pIC50)
pIC50)
pIC50)
IL3
IL3
(pIC50)
pIC50)
pIC50)
pIC50)
6, 3
6, 5
6,1
5,3
5,6
5,2
<5
-5,0
<5
<5
<5
5,0
Биологические анализы В
Анализы связывания фермента (KINOMEscan(r))
Аффинности связывания фермента киназы соединений, раскрытых в настоящей заявке, определяли при использовании технологии KINOMEscan(r), представленной DiscoveRx Corporation, San Diego, California, USA (www.kinomescan.com). В Таблице A3 приведены полученные значения Kd (нМ), где Kd является константой связывания ингибитора:
Таблица A3
Соединение
Kd FGFR1 (нМ)
Kd FGFR2 (нМ)
Kd FGFR3 (нМ)
Kd FGFR4 (нМ)
Kd VEGFR2 (нМ)
314
674
325
778
> 3010
741
720
620
300
1900
> 3000
740
900
870
> 3000
> 3000
2400
2900
2200
> 3000
> 3000
340
170
230
1700
117
138
355
922
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы (I):
N-Qn
включая его любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где
п представляет собой целое число, равное 1 или 2;
Ri представляет собой водород, С1_6алкил, гидроксиС1_6алкил, Ci-балкил, который замещен -C(=0)NHCH3, или Ci-балкил, который замещен -S (=0) 2-С1-4алкилом;
R2a представляет собой водород, фтор или хлор;
каждый R2b или R2c независимо представляет собой метокси или гидроксил;
R3 представляет собой водород, С1-6алкил, С3-6циклоалкил или С1-2алкил, который замещен С3-6циклоалкилом;
R4 представляет собой водород, метил или этил;
его фармацевтически приемлемая соль или его сольват.
2. Соединение по п.1, где соединение имеет следующую структуру:
3. Соединение по п.1 или 2, где R2a представляет собой водород или фтор.
4. Соединение по п.З, где R2a представляет собой фтор.
5. Соединение по п.1, где соединение имеет следующую структуру:
3.
6. Соединение по любому из п.п.1-5, где п представляет собой целое число, равное 1.
7. Соединение по любому из предыдущих п.п., где R3 представляет собой водород.
8. Соединение по любому из п.п.1-6, где R3 представляет собой С1_6алкил, в особенности С^алкил.
9. Соединение по любому из предыдущих п.п., где соединение имеет следующую структуру:
10. Соединение по любому из предыдущих п.п., где Ri представляет собой водород или С1_6алкил.
11. Соединение по п.10, где Ri представляет собой Ci_ 6алкил.
12. Соединение по п.11, где Ri представляет собой метил.
13. Соединение по любому из предыдущих п.п., где R2b представляет собой метокси.
14. Соединение по любому из п.п.1-12, где R2b представляет собой гидрокси.
15. Соединение по любому из предыдущих п.п., где R2c представляет собой метокси.
16. Соединение по любому из п.п.1-14, где R2c представляет собой гидрокси.
10.
17. Соединение по п.1, где соединение является
или его фармацевтически приемлемой солью или его сольватом.
18. Соединение по п.17, где соединение является
19. Соединение по п.1, где соединение выбрано из
20. Способ получения соединения формулы включающий:
взаимодействие соединения формулы (II)
по п.1,
(II)
с формальдегидом в присутствии подходящего растворителя при подходящей температуре,
где Ri, R2a, R2b, R2cv R4 и n являются такими, как
определено в п.1; и, необязательно, последующее превращение одного соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I).
21. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, определенное в любом из пюп.1-19.
22. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, в терапии.
23. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, для профилактики или лечения заболевания или состояния, опосредованного FGFR киназой.
24. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, в профилактике или лечении рака.
25. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, для производства лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания или состояния, опосредованного FGFR киназой.
21.
26. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, для производства лекарственного средства для профилактики или лечения рака.
27. Применение соединения, определенного в любом из п.п.1-19, для производства лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания или состояния, описанного в настоящей заявке.
28. Способ профилактики или лечения заболевания или состояния, опосредованного FGFR киназой, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения, определенного в любом из п.п.1-19.
29. Способ профилактики или лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения, определенного в любом из п.п.1-19.
По доверенности
(1)
(19)
(19)
(19)
(19)
101
100
103
103