[RU]

Изобретение относится к производным азаиндолуксусной кислоты формулы (I)

в которой R ¹ и R ² являются такими, как определено в описании, и их применению в качестве модуляторов рецепторов простагландина, особенно предпочтительно в качестве модуляторов рецепторов простагландина D2, при лечении различных опосредствованных простагландином заболеваний и нарушений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способу их получения.

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к производным азаиндолуксусной кислоты формулы (I)

в которой R ¹ и R ² являются такими, как определено в описании, и их применению в качестве модуляторов рецепторов простагландина, особенно предпочтительно в качестве модуляторов рецепторов простагландина D2, при лечении различных опосредствованных простагландином заболеваний и нарушений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способу их получения.

---

(19)
Евразийское
патентное
ведомство
(21) 201691855 (13) A1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.02.28
(22) Дата подачи заявки 2015.03.16
(51) Int. Cl.
C07D 471/04 (2006.01) A61K31/437 (2006.01) A61P37/00 (2006.01)
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ АЗАИНДОЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ РЕЦЕПТОРОВ ПРОСТАГЛАНДИНА D2
(31) (32) (33)
(86) (87) (71)
(72)
(74)
PCT/IB2014/059883
2014.03.17
PCT/IB2015/051895
WO 2015/140684 2015.09.24
Заявитель:
АКТЕЛИОН ФАРМАСЬЮТИКЛЗ ЛТД. (CH)
Изобретатель:
Аиссаоуи Хамед, Босс Кристоф, Буи Патрик, Хаземанн Жульен, Зигрист Ромен (CH)
Представитель:
Веселицкая И.А., Веселицкий М.Б., Кузенкова Н.В., Каксис Р.А., Белоусов Ю.В., Куликов А.В., Кузнецова Е.В., Соколов Р.А., Кузнецова Т.В. (RU)
в которой R1 и R2 являются такими, как определено в описании, и их применению в качестве модуляторов рецепторов простагландина, особенно предпочтительно в качестве модуляторов рецепторов простагландина D2, при лечении различных опосредствованных простагландином заболеваний и нарушений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способу их получения.
126852
Заявка № 201691855 Заявитель АКТЕЛИОН ФАРМАСЬЮТИКЛЗ ЛТД, СН
ПРОИЗВОДНЫЕ АЗАИНДОЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ РЕЦЕПТОРОВ
ПРОСТАГЛАНДИНА D2
Предпосылки к созданию изобретения:
Настоящее изобретение относится к производным азаиндолуксусной кислоты формулы (I) и их применению в качестве модуляторов рецепторов простагландина, особенно предпочтительно в качестве модуляторов рецепторов простагландина D2 ("DP-рецепторов"), при лечении различных опосредствованных простагландином заболеваний и нарушений, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способу их получения. В частности, такие производные могут применяться отдельно или в фармацевтических композициях для лечения как хронических, так и острых аллергических/иммунных заболеваний/нарушений, таких как астма, аллергическая астма, эозинофильная астма, тяжелая астма, ринит, аллергический ринит, отек Квинке, аллергия на укус насекомых, лекарственная аллергия,
аллергический синусит, аллергический нефрит, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальная астма, пищевая аллергия, системный мастоцитоз, анафилактический шок, крапивница, экзема, неспецифический язвенный колит, хроническая обструктивная болезнь легких (COPD), воспалительное заболевание кишечника и ревматоидный артрит; эозинофил-связанных заболеваний, включающих системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера, микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит (эозинофильный пустулез Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром Уэллса), хроническую эозинофильную лейкемию и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными проявлениями); и базофил-связанных заболеваний, включающих базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз. Предшествующий уровень техники:
В ответ на аллергенную стимуляцию в аллергических состояниях, тучные клетки активируются и высвобождают медиаторы, такие как гистамин, тромбоксан А2 (ТхА2), цистеиниловые лейкотриены (CysLTs) и простагландин D2 (PGD2). Эти медиаторы взаимодействуют со своими соответствующими рецепторами и вызывают физиологические эффекты, такие как увеличение сосудистой проницаемости, отек, зуд, отек носа и легких, бронхоспазм и секреция слизи. Увеличение сосудистой проницаемости, например, допускает чрезмерную инфильтрацию эозинофильных и базофильных лейкоцитов в ткани и, таким образом, усиливает аллергическую реакцию.
Современные способы лечения аллергических заболеваний включают лекарственные средства, которые могут блокировать или иным образом прерывать такие взаимодействия, например, антигистамины (антагонисты гистаминовых HI-рецепторов), антагонисты лейкотриеновых рецепторов, бета-агонисты адренорецепторов и кортикостероиды. Как правило, методы лечения антигистаминами и антагонистами лейкотриеновых рецепторов имеют
ограниченную эффективность, а долгосрочное применение кортикостероидов часто приводит к нежелательным побочным эффектам.
Как известно, PGD2 является агонистом, действующим на два G-белок сопряженных рецептора, PGD2 рецептор DPI и недавно идентифицированный 5 рецептор CRTH2 (хемоаттрактантный рецептор, гомологичный молекуле, экспрессирующейся на Th2) (также упоминается как "DP2 рецептор").
Считается, что повышенные уровни PGD2 вызывают воспаление, что наблюдается при аллергических заболеваниях, включающих ринит, аллергическую астму, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит и
10 т.п. Таким образом, блокирование взаимодействия PGD2 с его рецепторами считается полезной терапевтической стратегией для лечения таких заболеваний.
GB 2388540 описывает применение раматробана ((37?)-3-(4-фторбензол-сульфонамидо)-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол-9-пропионовая кислота), рецептора ТхА2 (также называемого "TP-рецептор") антагониста с дополнительной
15 антагонистической активностью в отношении CRTH2, для профилактики и лечения аллергических заболеваний, таких как астма, аллергический ринит или аллергический конъюнктивит. В Т. Ishizuka и др., Cardiovascular Drug Rev. 2004, 22(2), 71-90 описаны эффекты действия раматробана на поздней фазе воспаления. Кроме того, сообщалось о биодоступности при пероральном
20 введении раматробана и его способности ингибировать простагландин D2-индуцированной миграции эозинофилов in vitro {Журнал по фармакологии и экспериментальной терапии, 305(1), с. 347-352 (2003)).
Производные азаиндолуксусной кислоты с антагонистической активностью в отношении CRTH2 описаны в WO 2010/054113, WO 2010/054114 и В.A. Stearns
25 и др., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 4647-4651.
WO 2011/117798 и WO 2012/140612 раскрывают производные (3-гетероариламино-1,2,3,4-тетрагидро-9Н-карбазол-9-ил)-уксусной кислоты и (7-гетероариламино-6,7,8,9-тетрагидропиридо[1,2-а]индол-10-ил)-уксусной кислоты, соответственно, которые проявляют антагонистическую активность.
30 Неожиданно было обнаружено, что отдельные производные
азаиндолуксусной кислоты, замещенной 5-хлорпиримидин-2-иламиногруппой, имеют значительно улучшенные свойства в in vitro анализе на цитотоксичность в гепатоцитах первичных культур крыс. Таким образом, ожидается, что
соединения в соответствии с настоящим изобретением, имеют улучшенный профиль токсичности in-vivo. Описание изобретения:
1) Настоящее изобретение относится к производным азаиндолуксусной 5 кислоты формулы (I)
(I),
в которой
R1 представляет собой водород, (Сь4)алкил, (Сь2)фторалкил, (Сь4)алкокси, 10 или галоген; и
R2 представляет собой водород или метил;
и к солям (в частности фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
Приведенные ниже определения предназначены для применения в равной
15 степени к соединениям формулы (I), как определено в любом из вариантов 1)-19), а также, с необходимыми изменениями, в описании и формуле изобретения, если только прямо предусмотренное определение не обеспечивает иное более широкое или более узкое определение. Хорошо известно, что определение или предпочтительное определение термина определяет и может заменить
20 соответствующий термин независимо от (и в сочетании с) любого определения или предпочтительного определения любого или всех других терминов, как определено в данном документе.
Соединения формулы (I), как определено в любом из вариантов осуществления 1) - 19), могут содержать один или несколько стереогенных или
25 асимметричных центров, таких как один или несколько асимметричных атомов углерода. Соединения формулы (I), таким образом, могут присутствовать в виде смеси стереоизомеров или в стереоизомерно обогащенной форме, предпочтительно в виде чистых стереоизомеров. Смеси стереоизомеров могут быть разделены таким образом, известным специалисту в данной области
30 техники.
Термин "обогащенный", например, при использовании в контексте энантиомеров, следует особенно понимать в контексте настоящего изобретения в том смысле, что соответствующий энантиомер присутствует в соотношении (с соответствующими изменениями: чистота) по меньшей мере 70:30, и, в 5 частности, по меньшей мере 90:10 (с учетом соответствующих изменений: чистота 70% / 90%) по отношению к соответствующему другому энантиомеру. Предпочтительно этот термин относится к соответствующему по существу чистому энантиомеру. Термин "по существу", когда используется, например, в значении "по существу чистый" понимается в контексте настоящего изобретения
10 таковым, который означает, в частности, что соответствующий
стереоизомер/композиция/соединение и т.д. составляет по меньшей мере, 90, в
особенности по крайней мере, 95, и в частности по меньшей мере 99 процентов
от количества по массе соответствующего чистого
стереоизомера/композиции/соединения и т.п.
15 Термин "алкил", используемый отдельно или в комбинации, относится к
линейной или разветвленной алкильной группе, содержащей от одного до четырех атомов углерода. Термин "(Сх.у)алкил" (х и у каждый представляет собой целое число), относится к алкильной группе, как определено выше, содержащей от х до у атомов углерода. Например, (Сь4)алкильная группа
20 содержит от одного до четырех атомов углерода. Примеры алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, вдаор-бутил и трет-бутил; предпочтительным является метил.
Термин "алкокси", используемый отдельно или в комбинации, обозначает алкил-О-группу, где алкильная группа определена ранее. Термин "(Сх.у)алкокси"
25 (х и у каждый представляет собой целое число) относится к алкоксильной группе, как определено ранее, содержащей от х до у атомов углерода. Например, (С1-4)алкокси-группа содержит от одного до четырех атомов углерода. Примеры алкоксигрупп включают метокси, этокси, н-пропокси, изо-пропокси, н-бутокси, г/зо-бутокси, вдаор-бутокси и mpem-бутокси; предпочтительным является
30 метокси.
Термин "(Сх.у)фторалкил" (х и у каждый представляет целое число), относится к алкильной группе, как определено ранее, содержащей от х до у атомов углерода, в которой один или несколько (и, возможно, все) атомов водорода замещены фтором. Например, (С^фторалкильная группа содержит
один или два атома углерода, где от одного до пяти атомов водорода замещены фтором. Примерами указанных групп являются дифторметил, трифторметил, 2,2-дифторэтил и 2,2,2-трифторэтил; предпочтительным является трифторметил.
Термин галоген означает фтор, хлор, бром или йод; преимущественно фтор.
5 2) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям формулы (I) в соответствии с вариантом 1), в которых
R1 представляет собой водород, метил, трифторметил, метокси, или фтор;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
10 3) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям формулы (I) в соответствии с вариантом 1), в которых
R1 представляет собой водород, (Сь4)алкил, или (Сь4)алкокси;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
15 4) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям формулы (I) в соответствии с вариантом 1), в которых R1 представляет собой водород, метил, или метокси;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
20 5) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям в соответствии с любым из вариантов 1) - 4), в которых R2 представляет собой метил;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
25 6) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям в соответствии с любым из вариантов 1) - 4), в которых R2 представляет собой водород;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
30 7) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям в соответствии с любым из вариантов 1) - 6), в которых абсолютная конфигурация стереогенного центра является такой, как отображено в формуле (Isti)
4}02H
(Isti)
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
5 8) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям в соответствии с любым из вариантов 1) - 6), в которых абсолютная конфигурация стереогенного центра является такой, как отображено в формуле (Isti)
Чх> 2н
Ю (Isti)
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
9) Следующий вариант осуществления изобретения относится к
соединениям формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) или 5) - 8),
15 в которых
R1 представляет собой фтор;
и к солям (в частности к фармацевтически приемлемым солям) таких соединений.
10) Примеры соединений формулы (I), как определено в варианте 1),
20 выбирают из группы, состоящей из:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты; 25 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты; и 5 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
или солей (в частности фармацевтически приемлемых солей) таких соединений;
причем для любого из вышеперечисленных соединений следует понимать,
10 что стереогенный центр, который особым образом не обозначен, может
находиться в абсолютной (R) - или (S) -конфигурации; например, соединение,
включенное в список как 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-
метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота может
быть (7?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-
15 тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой, (?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой или любой их смесью.
11) Предпочтительные примеры соединений формулы (I), как определено в варианте 1), выбраны из группы, состоящей из: 20 (?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,925 тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
( <5')-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты; и 30 (,5')-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
или солей (в частности фармацевтически приемлемых солей) таких соединений;
12) В предпочтительном варианте соединение формулы (I), как определено
в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (S)-2-(8-((5-5 хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) такого соединения;
13) В предпочтительном варианте соединение формулы (I), как определено
10 в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-
пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (?)-2-(8-((5-
хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-
5-ил)уксусной кислотой);
15 или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) такого
соединения;
14) В другом предпочтительном варианте соединение формулы (I), как
определено в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-20 5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) такого соединения;
25 15) В другом предпочтительном варианте соединение формулы (I), как
определено в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-30 Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) соединения; 16) В другом предпочтительном варианте соединение формулы (I), как определено в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-
5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (?)-2-(8-((5-
хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-
пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
5 или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) соединения;
17) В другом предпочтительном варианте соединение формулы (I), как определено в варианте 1), является:
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно 10 (,5')-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) соединения;
18) В другом предпочтительном варианте соединение формулы (I), как определено в варианте 1), является
15 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-
пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой (и предпочтительно (S)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислотой);
или солью (в частности фармацевтически приемлемой солью) соединения;
20 19) Изобретение, таким образом, относится к соединениям формулы (I), как
определено в варианте 1), и к другим таким соединениям, в дальнейшем ограниченным характеристиками любого из вариантов 2) - 18), все при рассмотрении их соответствующих зависимостей; к их фармацевтически приемлемым солям; и к применению таких соединений в качестве
25 лекарственных средств, особенно для лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из хронических и острых аллергических/иммунных заболеваний/нарушений, включающих астму, аллергическую астму, эозинофильную астму, тяжелую астму, ринит, аллергический ринит, отек Квинке, аллергию на укус насекомых, лекарственную аллергию, аллергический
30 синусит, аллергический нефрит, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальную астму, пищевую аллергию, системный мастоцитоз, анафилактический шок, крапивницу, экзему, неспецифический язвенный колит, хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), воспалительное заболевание кишечника и ревматоидный артрит; эозинофил-связанных
заболеваний, включающих системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера, микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная 5 пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит (эозинофильный пустулез Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром
10 Уэллса), хроническую эозинофильную лейкемию и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными проявлениями); и базофил-связанных заболеваний, включающих базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз.
Предпочтительно следующие варианты, относящиеся к соединениям
15 формулы (I) возможны таким образом и при этом конкретно раскрыты в индивидуализированной форме: 1, 2+1, 3 + 1, 4+1, 5+1, 5+2+1, 5+3 + 1, 5+4+1, 6+1, 6+2+1, 6+3 + 1, 6+4+1, 7+1, 7+2+1, 7+3 + 1, 7+4+1, 7+5+1, 7+5+2+1, 7+5+3 + 1, 7+5+4+1, 7+6+1, 7+6+2+1, 7+6+3 + 1, 7+6+4+1, 8+1, 8+2+1, 8+3 + 1, 8+4+1, 8+5+1, 8+5+2+1, 8+5+3 + 1, 8+5+4+1, 8+6+1, 8+6+2+1, 8+6+3 + 1, 8+6+4+1, 9+1, 9+5+1,
20 9+6+1, 9+7+1, 9+7+5+1, 9+7+6+1, 9+8+1, 9+8+5+1, 9+8+6+1, 10+1, 11 + 1, 12+1, 13 + 1, 14+1, 15+1, 16+1, 17+1, и 18+1; в вышеназванном списке номера относятся к вариантам в соответствии с их вышеуказанной нумерацией, где "+" означает зависимость от другого варианта. Различные конкретные варианты разделены запятыми. Другими словами, "5+2+1". Например, относится к варианту 5),
25 зависимому от варианта 2), в зависимого от варианта 1), то есть вариант "5+2+1" находится в соответствии с соединениями варианта 1), в свою очередь ограниченными признаками вариантов осуществления 2) и 5).
При использовании формы множественного числа для соединений, солей, фармацевтических композиций, заболеваний и т.п., подразумевается также одно
30 соединение, соль, фармацевтическая композиция, заболевание или тому подобное.
Любая ссылка на соединение формулы (I) как определено в любом из вариантов 1) - 19), подразумевается как относящаяся так же к солям ( и особенно
фармацевтически приемлемым солям) таких соединений, по мере необходимости и целесообразности.
Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые сохраняют желаемую биологическую активность рассматриваемого соединения 5 и обладают минимальными нежелательными токсикологическими эффектами. Такие соли включают соли неорганической или органической кислоты и/или основно-аддитивные соли в зависимости от наличия основных и/или кислотных групп в соединении в соответствии с изобретением. Для справки см., например, Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use.', P. Heinrich Stahl,
10 Camille G. Wermuth (Eds.), Wiley-VCH, 2008 и 'Pharmaceutical Salts and Co-crystals', Johan Wouters and Luc Quere (Ред.), RSC Publishing, 2012.
Настоящее изобретение также включает изотопно-меченые, особенно 2Н (дейтерий)-меченые соединения формулы (I), где указанные соединения идентичны соединениям формулы (I), за исключением того, что один или
15 несколько атомов, каждый был заменен на атом, который имеет тот же атомный номер, но атомная масса которого отличается от атомной массы, обычно встречающейся в природе. Меченные изотопами, особенно 2Н (дейтерий), меченные соединения формулы (I) и их соли, находятся в пределах объема настоящего изобретения. Замещение водорода более тяжелым изотопом (2Н)
20 дейтерием может привести к большей метаболической стабильности, что выражается, например, в увеличении in-vivo полураспада или снижении требований дозировки, или может привести к уменьшению ингибирования ферментов цитохрома Р450, в результате чего, например, улучшается профиль безопасности. В одном из вариантов осуществления изобретения соединения
25 формулы (I) не мечены изотопами, или они мечены только одним или несколькими атомами дейтерия. В подварианте осуществления соединения формулы (I) не мечены изотопами вообще. Меченные изотопами соединения формулы (I) могут быть получены по аналогии с нижеописанным методом, но с использованием соответствующей изотопной вариации подходящих реагентов
30 или исходных веществ.
Каждый раз, когда слово "между" используется для описания числового диапазона, следует понимать, что конечные точки указанного диапазона явно включены в диапазон. Например: если температурный диапазон устанавливается в пределах от 40 °С до 80 °С, это означает, что конечные точки 40 °С и 80 °С
включены в диапазон; или, если переменная определяется как целое число от 1 до 4, это означает, что переменная является целым числом 1, 2, 3, или 4.
При использовании в отношении температур, термин "приблизительно" (или в качестве альтернативы "около"), поставленный перед числовым 5 значением "X", относится в текущей заявке к интервалу от X минус 10% от X до X плюс 10% от X, и предпочтительно к интервалу от X минус 5% от X до X плюс 5% от X. В конкретном примере температур, термин "приблизительно" (или в качестве альтернативы "около"), поставленный перед температурой "Y", относится в данной заявке к интервалу от температуры Y минус 10°С до плюс
10 10°С Y, и предпочтительно к интервалу от Y минус 5°С до Y плюс 5°С. Кроме того, термин "комнатная температура", используемый здесь, относится к температуре около 25°С.
Соединения формулы (I), как определено в любом из вариантов осуществления 1) - 19), и их фармацевтически приемлемые соли могут
15 применяться в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических композиций для энтерального (особенно предпочтительно перорального) или парентерального введения (в том числе и местного применения или ингаляции).
Получение фармацевтических композиций может быть осуществлено таким
20 образом, который будет знаком любому специалисту в данной области (см., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21-е Издание (2005), Часть 5, "Pharmaceutical Manufacturing)) [под издательством Lippincott Williams & Wilkins]), путем введения описанных соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, необязательно в комбинации с другими
25 терапевтически ценными веществами, в галеновую форму вместе с подходящими, не токсичными, инертными, терапевтически совместимыми твердыми или жидкими веществами-носителями и, при желании, обычными фармацевтическими вспомогательными веществами.
Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или
30 лечения заболевания или расстройства, указанных здесь, который включает введение субъекту фармацевтически активного количества соединения формулы (I), как определено в любом из вариантов осуществления 1) - 19).
В предпочтительном варианте осуществления изобретения вводимое количество составляет от 1 до 1000 мг в сутки, в частности от 5 мг до 500 мг в
сутки, более предпочтительно от 25 мг до 400 мг в сутки, особенно в пределах от 50 мг до 200 мг в сутки.
Во избежание каких-либо сомнений, если соединения описаны как полезные для профилактики или лечения некоторых заболеваний, такие соединения также пригодны для использования в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения указанных заболеваний.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу профилактики или лечения заболевания или расстройства, как упомянуто ниже, у пациента, который включает введение указанному пациенту фармацевтически активного количества соединения формулы (I), как определено в любом из вариантов 1) -19), или его фармацевтически приемлемой соли.
Соединения формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19) или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из хронических и острых аллергических/иммунных заболеваний/нарушений, включающих астму, аллергическую астму, эозинофильную астму, тяжелую астму, ринит, аллергический ринит, отек Квинке, аллергию на укус насекомых, лекарственную аллергию, аллергический синусит, аллергический нефрит, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальную астму, пищевую аллергию, системный мастоцитоз, анафилактический шок, крапивницу, экзему, неспецифический язвенный колит, хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), воспалительное заболевание кишечника и ревматоидный артрит; эозинофил-связанных заболеваний, включающих системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера, микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит (болезнь Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром Уэллса), хроническую эозинофильную лейкемию и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными
проявлениями); и базофил-связанных заболеваний, включающих базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз.
В другом варианте соединения формулы (I) в соответствии с любым одним из вариантов 1) - 19), или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из носового полипоза, болезни Стилла (ювенильного идиопатического артрита с системным началом) и муковисцидоза.
В предпочтительном варианте соединения формулы (I) в соответствии с любым одним из вариантов 1) - 19), или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из астмы, аллергической астмы, эозинофильной астмы, тяжелой астмы, аллергического ринита, отека Квинке, аллергии на укус насекомых, лекарственной аллергии, аллергического синусита, аллергического нефрита, аллергического конъюнктивита, атопического дерматита, пищевой аллергии, системного мастоцитоза, анафилактического шока, крапивницы и экземы.
В другом предпочтительном варианте соединения формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19), или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из заболеваний, связанных с эозинофилами, включающей системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера, микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит (эозинофильный пустулез Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром Уэллса), хроническую эозинофильную лейкемию и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными проявлениями).
В еще одном предпочтительном варианте соединения формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19), или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из заболеваний, связанных с отклонением от нормы базофилов, включающей базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз.
В наиболее предпочтительном варианте соединения формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19), или их фармацевтически приемлемые соли можно применять для приготовления лекарственного средства, и пригодны для профилактики и/или лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из астмы, эозинофильной астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, назального полипоза, пищевой аллергии (особенно IgE-опосредованной пищевой аллергии), крапивницы (в частности, хронической крапивницы), эозинофильного эзофагита, синдрома Черджа-Стросс, гиперэозинофильного синдрома, эозинофильной пневмонии (особенно хронической эозинофильной пневмонии), синдрома синдром лекарственной гиперчувствительности, болезни Стилла-Шоффара, и кистозного фиброза (и особенно астмы, эозинофильной астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, IgE-опосредованной пищевой аллергии, хронической крапивницы, эозинофильного эзофагита и синдрома Черджа-Стросса).
Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19) для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения и/или профилактики вышеуказанных заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтически приемлемым солям и к фармацевтическим композициям и рецептурам соединений формулы (I) в соответствии с любым из вариантов 1) - 19).
Фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением содержит, по меньшей мере, одно соединение формулы (I) в соответствии с любым одним из вариантов 1) - 19) (или его фармацевтически приемлемую соль) в качестве активного агента и дополнительно носители и/или разбавители и/или вспомогательные вещества.
Любую ссылку на соединение формулы (I), (ISTI) ИЛИ (IST2) В ЭТОМ тексте следует понимать как такую, которая относится также к солям (и особенно
фармацевтически приемлемым солям) таких соединений, в зависимости от обстоятельств и целесообразности. Предпочтения, указанные для соединений формулы (I), конечно, применяются с соответствующими изменениями к соединениям формулы (ISTI) И соединениям формулы (IST2), а также к солям и 5 фармацевтически приемлемым солям соединений формулы (I), формулы (ISTI) или формулы (IST2). То же самое относится и к этим соединениям как лекарственным средствам, к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения в качестве активных веществ, или к применению этих соединений для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения
10 заболеваний, в соответствии с настоящим изобретением.
Как упоминалось ранее, соединения формулы (I), модулируют как антагонисты активацию PGD2 рецептора CRTH2. Биологическое действие таких соединений может быть протестировано в ряде in vitro, ex vivo и in vivo исследований. Способность соединений формулы (I) связываться с рецептором
15 CRTH2 может быть измерена с помощью методов, аналогичных описанным в литературе (Arimura А. и др., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 298 (2) , 411-419; и Sawyer Н. и др, Br, J. Pharmacol, 2002, 137, 1163-1172, в соответствии с), а также с помощью анализов, описанных ниже в экспериментальной части.
Следующим аспектом данного изобретения является способ получения
20 соединений формулы (I). Соединения в соответствии с формулой (I) по настоящему изобретению могут быть получены в соответствии с
1 2
последовательностью реакций, описанных в схемах ниже, R и R являются такими, как определено для формулы (I). Другие используемые сокращения определены в экспериментальной части.
25 Как правило, все химические превращения могут быть выполнены в
соответствии с хорошо известными стандартными методиками, описанными в литературе, или как это описано в приведенных ниже методиках. Полученные соединения также могут быть превращены в их фармацевтически приемлемые соли известным самим по себе путем.
30 Соединения формулы (I) могут быть получены из соответствующего
азаиндольного производного (4), которое само по себе может быть синтезировано путем MB облучения соответствующего З-амино-2-бромпиридинового или З-амино-2-хлорпиридинового производного (1) с 4-(5-хлорпиримидин-2-ил)аминоциклогексаноновым производным (3) в присутствии
катализатора, такого как Pd(Pri3P)4, в пиридине, или путем реакции соответствующего Вос-защищенного производного гидразина (6) с 4-(5-хлорпиримидин-2-ил)аминоциклогексаноновым производным (3) в присутствии кислоты, такой как серная кислота. Вос-защищенный гидразин (6) может быть получен путем взаимодействия соответствующего производного бромпиридина (5) с ди-да/?еда-бутил-азадикарбоксилатом в присутствии основания, такого как бутиллитий, в апротонном растворителе, таком как ТГФ.
Производное 4-(5-хлорпиримидин-2-ил)аминоциклогексанона (3) может быть получено путем восстановительного аминирования коммерчески доступного 1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-она (2) целевым амином R2-NH2 в присутствии восстановителя, такого как NaBH(OAc)3, в апротонном растворителе, таком как ДХМ, с последующим взаимодействием с 2,5-дихлорпиримидином (R3-C1) в присутствии основания, такого как DIEA в апротонном растворителе, таком как ДМФА, и с удалением ацетальной защиты в кислых условиях, таких как НС1 в метаноле. Алкилирование азаиндольного производного (4) этилбромацетатом в присутствии основания, такого как NaH, в апротонном растворителе, таким как ДМФА, с последующим омылением основанием, таким как NaOH, приводит к соединениям формулы (I).
1) R2-NH2/ NaBH(OAc)3/ DCM ДХМ
2) R3-CI/DIEA/DMF ДМФА
3) HCI/ MeOH
RvVz Z = Br,CI КЛт2 1
(Рг)3Р)4Ра7 pyridir пиридин мв: r2
Bocv ',N r1 n N Boc ^ - •
N,NHBOC-.
Boc n-BuLi/THF ТГФ
4% H2S04 6 5
1) Br C02Et NaH/DMF ДМФА
2) NaOH ?2
N-R3
COzH
(I)
Схема I: Общий путь синтеза для получения соединений формулы (I) (R3 представляет собой 5-хлорпиримидин-2-ил)
Альтернативно, соединения формулы (I), в которой R2 представляет собой водород, могут быть получены от соответствующих азаиндольных производных (9), которые сами по себе синтезируются микроволновым излучением соответствующего З-амино-2-бромпиридина (7) с коммерчески доступным трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбаматом (8) в присутствии катализатора, такого как Рс1(РЬзР)4, в пиридине.
Алкилирование азаиндольного производного (9) этилбромацетатом в присутствии основания, такого как NaH, в апротонном растворителе, таком как
ДМФА, с последующим снятием Вос-защиты кислотой, такой как НС1 в диоксане, дает целевой сложный этиловый эфир азаиндолуксусной кислоты (10). Реакция амина (10) с 2,5-дихлорпиримидином (R3-C1) в присутствии основания, такого как К2СО3, в апротонном растворителе, таком как ДМФА, с последующим омылением основанием, таким как NaOH, приводит к соединениям формулы (I).
Схема 2: Общий путь синтеза для получения соединений формулы (I), в которой R2 представляет собой водород (R3 представляет собой 5-хлорпиримидин-2-ил)
Соединения формулы (I), в которой R2 представляет собой водород, также могут быть получены из соответствующего азаиндольного производного (13), которое само по себе может быть синтезировано по реакции соответствующего коммерчески доступного производного гидрохлорида пиридингидразина (11) с коммерчески доступным бензил (4-оксоциклогексил)карбаматом (12) в присутствии кислоты, такой как серная кислота. Алкилирование азаиндольного производного (13) этилбромацетатом в присутствии основания, такого как NaH, в апротонном растворителе, таком как ДМФА, с последующим снятием Cbz-защиты кислотой, такой как НВг в уксусной кислоте, дает целевой сложный этиловый эфир азаиндолуксусной кислоты (14). Реакция амина (14) с 2,5-дихлорпиримидином (R3-C1) в присутствии основания, такого как К2СО3, в апротонном растворителе, таком как DMA, с последующим омылением основанием, таким как NaOH, приводит к соединениям формулы (I).
Схема 3: Общий путь синтеза для получения соединений формулы (I), в которой R2 представляет собой водород, (R3 представляет собой 5-хлорпиримидин-2-ил)
Каждый раз, когда соединения формулы (I) или промежуточные соединения структур 4, 9 и 13 получают в виде смесей энантиомеров, энантиомеры могут быть разделены с помощью методов, известных специалисту в этой области техники: например, путем образования и разделения диастереомерных солей или с помощью ВЭЖХ на хиральной стационарной фазе, например, на колонке Regis Whelk-01(R,R) (10 мкм), колонке Daicel ChiralCel OD-H (5-10 мкм) или колонке Daicel ChiralPak IA (10 мкм) или колонке AD-H (5 мкм). Типичными условиями хиральной ВЭЖХ являются изократическая смесь элюента A (EtOH, в присутствии или при отсутствии амина, такого как TEA и/или DEA) и элюента В (гексан), при скорости потока от 0,8 до 150 мл/мин.
Экспериментальная часть:
Сокращения (в контексте настоящего документа):
Ас Ацетил
водн. Водный
АРС Аллофикоцианин
Вое Треда-бутоксикарбонил
BSA Альбумин бычьей сыворотки
Cbz Бензилоксикарбонил
d Дублет
ДХМ Дихлорметан
DEA Диэтиламин
DIEA Диизопропилэтиламин
5 ДМФА Диметилформамид
DMA Диметилацетамид
ДМСО Диметилсульфоксид
dpm Распады в минуту
ЭА Этилацетат
10 ЭДТУ Этилендиаминтетрауксусная кислота
экв. Эквивалент
Et Этил
ФХ Флэш-хроматография
ч Час (ы)
15 HEPES 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота
ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография
HSA Человеческий сывороточный альбунин (ЧСА)
л. Литр(ы)
ЖХ-МС Жидкостная хроматография - Масс-спектроскопия (ЖХ-МС)
20 m Мультиплет
MeCN Ацетонитрил
МеОН Метанол
мин Минута(ы)
Me Метил
25 МС Масс-спектроскопия
MB Микроволновый
н. Нормальность раствора
PBS Забуференный фосфатом физиологический раствор
PEI Полиэтиленимин
30 PGD2 Простагландин D2
Ph Фенил
к.т. Комнатная температура
с Секунда(ы)
насыщ. Насыщенный
tBu Треда-бутил
ТЭА Триэтиламин
ТФУ Трифторуксусная кислота
ТГФ Тетрагидрофуран
5 tR Время удерживания
Tris Трис-(гидроксиметил)аминометановый буфер
Химия
Общие положения
10 Все растворители и реагенты, если не оговорено иначе, используют в том
виде, как получено из коммерческих источников.
Температуры указываются в градусах Цельсия (°С). Если не оговорено иначе, реакции проводятся при комнатной температуре (к.т.).
В смесях, соотношения частей растворителя или элюента или смеси 15 реагентов в жидком виде, если не оговорено иначе, приведены в объемных соотношениях (об/об).
Аналитические условия ВЭЖХ используются в нижеприведенных примерах:
Анализы ВЭЖХ/МС выполняют на системе Agilent 1100, оснащенной 20 насосом для двухкомпонентных смесей Dionex Р580, детектором с фотодиодной матрицей Dionex PDA-100 и масс-спектрометром Finnigan AQA.
Время удержания при проведении ЖХ получают при следующих условиях элюирования:
- Аналитическая ВЭЖХ на колонке Zorbax(r) SB-AQ (4.6x50 мм, 3.5 мкм, 25 агилент); линейный градиент вода/0.04% ТФУ (А) и MeCN (В) от 5% до 95% В в течение 1.5 мин; объемная скорость потока 4.5 мл/мин, детектирование на 210 нм.
Очистки с помощью препаративной ВЭЖХ/МС (кислая среда) выполняют на системе Gilson 333/334 с насосом для создания бинарного градиента в области 30 высокого давления с автодозатором Gilson 215 и сборником фракций, детектором Dionex UVD340U DAD, детектором polymerlabs PL-ELS 1000 ELS и детектором Thermo MSQ Plus MS/MC, с использованием колонки Waters Atlantis T3 (10 мкм, 30 x 75 мм), с линейным градиентом вода/0.5% муравьиной кислоты
(В) и MeCN (А), начиная от 80/20 до 5/95 (В)/(А) в течение 5 мин; объемная скорость потока 75 мл/мин.
Очистки с помощью препаративной ВЭЖХ/МС (основные условия) выполняют на системе Gilson 333/334 с насосом для создания бинарного 5 градиента в области высокого давления с автодозатором Gilson 215 и сборником фракций, детектором Dionex UVD340U DAD, детектором polymerlabs PL-ELS 1000 ELS и детектором Thermo MSQ Plus MS/MC, с использованием колонки Waters XBridge C18 (10 мкм, 30 x 75 мм), с линейным градиентом вода/0.5% 25% NH4OH (В) и MeCN (А), начиная от 80/20 до 5/95 (В)/(А) в течение 5 мин;
10 объемная скорость потока 75 мл/мин.
Аналитическую ВЭЖХ на хиральной стационарной фазе выполняют на колонке Daicel ChiralPak AD-H (4.6 X 250 мм, 5 мкм) или колонке Chiralpak AY-Н (4.6 X 250 мм, 5 мкм). Типичными условиями хиральной ВЭЖХ являются изократическая смесь 30% гептана + 0.05% DEA и 70% ЕЮН + 0.05% DEA, при
15 объемной скорости потока 0.8 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-1), или изократическая смесь 40% гептана и 60% ЕЮН + 0.1% ТФУ, при объемной скорости потока 1.0 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-2) или изократическая смесь 50% гептана + 0.05% DEA и 50% ЕЮН + 0.05% DEA, при объемной скорости потока 0.8 мл/мин, детектирование на 210
20 нм (хиральная ВЭЖХ-3), или изократическая смесь 20% гептана и 80% ЕЮН + 0.1% ТФУ, при объемной скорости потока 0.8 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-4).
Препаративную ВЭЖХ на хиральной стационарной фазе выполняют на колонке Daicel ChiralPak AD-H (20 X 250 мм 5 мкм). Типичными условиями
25 хиральной ВЭЖХ являются изократическая смесь 50% ЕЮН и 50% гептана, при объемной скорости потока 16 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-5), или изократическая смесь 50% ЕЮН + 0.05% DEA и 50% гептана, при объемной скорости потока 34 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-6) или изократическая смесь 50% ЕЮН + 0.1% DEA и 50% гептана, при
30 объемной скорости потока 16 мл/мин, детектирование на 210 нм (хиральная ВЭЖХ-7).
АЛ Синтез производных 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты
АЛЛ. Синтез 4-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)циклогексанона
К раствору коммерчески доступного 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-амина (1 экв.) в ДХМ (20 мл/ 10 моль) при 0°С последовательно добавляли метиламин (8М в ЕЮН, 1 экв.) и NaBH(OAc)3 (1.5 экв.). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор NaHCC> 3, органический слой промывали солевым раствором, сушили над MgSC> 4 и упаривали в вакууме, с получением /У-метил-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-амина, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
К раствору /У-метил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-8-амина (1 экв.) в ДМФА (10.5 мл/6 моль) добавляли DIEA (2 экв.) и 2,5-дихлорпиримидин (1.05 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры добавляли изопропилацетат. Смесь промывали водой и 10% раствором лимонной кислоты. Органический слой сушили (MgS04) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью ФХ (0 до 15% ЭА в гептане) с получением целевого промежуточного соединения в виде твердого вещества .
Раствор данного промежуточного соединения (1 экв.) в смеси 2 н. НС1 (2.7 мл/ 5 моль) и МеОН (2.7 мл/5 моль) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Водный слой экстрагировали с помощью ДХМ. Органический слой сушили (MgS04) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью ФХ (0 до 17% ЭА в гептане) с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества.
ЖХ-МС: tR = 0.78 мин; [М+Н]+ = 240.2
(R3 представляет собой 5-хлорпиримидин-2-ил)
5 Общая методика:
Раствор соответствующего производного З-амино-2-бромпиридина (1 экв),
4-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)циклогексанона (1.2 экв), (РпзР^Ра1
(0.05 экв), и пиридина (8.17 экв) объединяли в колбе. Колбу подвергали
воздействию MB излучения при температуре 160°С в течение 1 часа. Повторно
10 добавляли (РпзР)4Рс1 (0.025 экв) и реакционную смесь подвергали воздействию
MB излучения при 160°С в течение 30 минут. После охлаждения до комнатной
температуры, реакционную смесь объединяли с водой и дважды экстрагировали
ДХМ. Объединенные органические слои сушили (MgS04), фильтровали и
концентрировали в вакууме.
15 Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (основные условия) с получением
целевого продукта.
Следующие производные /Уг-(5-хлорпиримидин-2-ил)-/уг-метил-6,7,8,9-
тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-амина синтезировали в соответствии с
вышеуказанной общей методикой.
20 Таблица 1
Название
[М+Н]+ m/z
tR [мин] ЖХ-МС
М-(5-хлорпиримидин-2-ил)-М,2-диметил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-8-амин
328.11
0.66
М-(5-хлорпиримидин-2-ил)-2-фтор-М-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-8-амин
332.09
0.87
CF3
М-(5-хлорпиримидин-2-ил)-М-метил-2-
(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-
Ь]индол-8-амин
381.99
0.94
А. 1.3. Синтез /Уг-(5-хлорпиримидин-2-ил)-/уг-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-аминных производных азаиндолуксусных кислот (метод В)
А. 1.3.1 Синтез ди-трет-бутил 1-(пиридин-3-ил)гидразин-1,2-5 дикарбоксилата
Общая методика:
1.6 М раствор бутиллития в гексане (1.1 экв.) добавляли по каплям при -40°С к раствору соответствующего производного 3-бромпиридина (1 экв.) в
10 диэтиловом эфире (14.5 экв.) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при -40°С и затем по каплям добавляли к раствору ди-mpem-бутил-азодикарбоксилата (1.1 экв.) в ТГФ (18.5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при -40°С в течение 30 мин и давали нагреться до комнатной температуры в течение 30 минут. Вслед за водой добавляли ДХМ. Органическую
15 фазу отделили и сушили над MgS04, фильтровали концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью ФХ (ЭА/н-гептан: 2/8) с получением целевого продукта.
Следующие производные ди-трет-бутил 1-(пиридин-3-ил)гидразин-1,2-дикарбоксилата синтезировали в соответствии с вышеуказанной методикой.
Название
[М+Н]+ m/z
tR [мин] ЖХ-МС
ОМе
ди-трет-бутил 1-(6-метоксипиридин-3-ил)гидразин-1,2-дикарбоксилат
340.16
0.88
ди-трет-бутил 1 -(6-фторпирид ин-3 -ил)гидразин-1,2- дикарбоксилат
328.12
0.88
А. 1.3.2 Синтез производных /Уг-(5-хлорпиримидин-2-ил)-/уг-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-амина
(R3 представляет собой 5-хлорпиримидин -2-ил)
5 Общая методика:
Раствор соответствующего производного ди-трет-бутил 1-(пиридин-3-
ил)гидразин-1,2-дикарбоксилата (1 экв.), 4-((5-хлорпиримидин-2-
ил)(метил)амино)циклогексанона (1 экв.) в 4%-ной водной H2SO4 (10 мл/0.04 моль) перемешивали при 100°С в течение 2 часов 30 минут. После охлаждения 10 до комнатной температуры реакционную смесь перемешивали с насыщ. NaHC03 и экстрагировали с помощью ЭА. Объединенные органические слои сушили (MgS04), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (основные условия) с получением целевого продукта.
Следующие производные /Уг-(5-хлорпиримидин-2-ил)-/Уг-метил-6,7,8,915 тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-амина синтезировали в соответствии с вышеуказанной методикой.
Название
[М+Н]+ m/z
tR [мин] ЖХ-МС
ОМе
М-(5-хлорпиримидин-2-ил)-2-метокси-М-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-8-амин
344.12
0.67
М-(5-хлорпиримидин-2-ил)-2-фтор-М-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-8-амин
332.03
0.87
А. 1.3. Синтез производных 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты
Общая методика:
К холодному (0°С) раствору подходящего производного N-(5-хлорпиримидин-2-ил)-/Уг-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-амина (1 экв.) в сухом ДМФА (0.2 мл/0.08 моль) добавляли NaH (1.1 экв., 60% дисперсия в минеральном масле). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течении 10 мин, добавляли этилбромацетат (1.1 экв.) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду (0.07 мл) и 30% водн. NaOH (0.07 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течении 2 часов и затем добавляли 37% водн. НС1 (0.07 мл). Продукты без замедления очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (основные условия) с получением конечного соединения.
Получение примеров
Следующие производные 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты синтезировали в соответствии с вышеуказанной методикой.
А.2 Синтез производных 2-(8-(5-хлорпиримидин-2-иламино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты
А.2.1 Синтез трет-бутил (6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата
Г I NHBoc
Раствор З-амино-2-бромпиридина (1.0 г, 5.78 моль, 1.0 экв.), трет-бутил (4-оксоциклогексил)карбамата (1.48 г, 6.94 моль, 1.2 экв.), (Ph3P)4Pd (334 мг, 0.289 моль, 0.05 экв.), и пиридина (3.8 мл, 47.2 моль, 8.17 экв.) объединяли в пробирке. Пробирку нагревали MB излучением при 160°С в течение 2 часов 30 минут. Реакционную смесь объединяли с насыщ. раствором NaHCCb и экстрагировали с помощью ЭА. Органический слой промывали водой, солевым раствором, сушили (MgSO^, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток растирали с диэтиловым эфиром и собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке продукта в виде бежевого твердого вещества.
ЖХ-МС: tR = 0.59 мин; [М+Н]+ = 288.27.
А.2.2 Синтез этил 2-(8-амино-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата (хлористоводородной соли)
К холодному (0°С) раствору mpem-бутил (6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата (403 мг, 1.4 моль, 1.0 экв.) в сухом ДМФА (3.8 мл) добавляли NaH (37 мг, 1.54 моль, 1.1 экв., 60% дисперсии в минеральном масле). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течении 10 мин, добавляли этилбромацетат (0.16 мл, 1.4 моль, 1.0 экв.) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли воду и реакционную смесь экстрагировали дважды с помощью ЭА.
Объединенные органические слои промывали водой, выдерживали в солевом растворе, сушили (MgSO/i), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (кислая среда) с получением целевого продукта.
ЖХ-МС: tR = 0.67 мин; [М+Н]+ = 373.96.
5 К этил 2-(8-((да/?еда-бутоксикарбонил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-
пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетату (23 мг, 0.06 моль, 1.0 экв.) добавляли НС1 в диоксане (4М, 0.21 мл, 0.85 моль, 14 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течении 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке продукта, 10 который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХ-МС: tR = 0.37 мин; [М+Н]+ = 273.91
А.2.3 Синтез производных 2-(8-(5-хлорпиримидин-2-иламин)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты 2HCI
15 (R3 представляет собой 5-хлорпиримидин-2-ил)
Общая методика:
Смесь этил 2-(8-амино-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата (гидрохлоридная соль) (0.06 моль), 2,5-дихлорпиримидина (0.06 моль), и К2СОз (0.25 моль) в DMA (0.4 мл) перемешивали при 80°С в течении 12
20 часов. После охлаждения до комнатной температуры к реакционной смеси добавляли воду (0.06 мл) и 30% водн. NaOH (0.06 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течении 2 часов и затем добавляли 37% водн. НС1 (0.06 мл). Продукты без промедления очищали препаративной ВЭЖХ (основные условия) с получением конечных соединений в виде белого вещества.
25 Получение примеров
Следующие производные 2-(8-(5-хлорпиримидин-2-иламино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты синтезировали в соответствии с вышеуказанной методикой.
А.З Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты
А.3.1 Синтез трет-бутил метил(6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата
Вое
NH2 (Ph3P)4Pdy пиридин MB V160°C
В колбе З-амино-2-бромпиридин (2.0 г, 11.6 моль, 1.0 экв.), 4-(N-Boc-N-метиламино)циклогексанон (3.15 г, 13.9 моль, 1.2 экв.), и (РпзР^Ра1 (668 мг, 0.58 моль, 0.05 экв.) растворяли в пиридине (7.6 мл). Колбу нагревали MB излучением при 160°С в течении 60 минут. Реакционную смесь выливали в воду (9.5 мл) и полученное вещество собирали фильтрованием, высушивали, растирали в диэтиловым эфире и повторно собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения.
ЖХ-МС: tR = 0.63 мин; [М+Н]+ = 302.15.
А.3.2 Синтез (8)-этил 2-(8-((да/?еда-бутоксикарбонил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата и (Я)-этил 2-( &-((трет-бутокскарбонил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата
ВГ ^C02Et №НУ ДМФА
C02Et
C02Et
К холодному (0°С) раствору трет-бутил метил(6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата (1.37 г, 4.56 моль) в сухом ДМФА (12.5 мл), добавляли NaH (120 мг, 5.02 моль, 60% дисперсии в минеральном масле). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течении 10 мин, добавляли 5 этилбромацетат (0.52 мл, 4.56 моль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли воду и полученный осадок собирали фильтрованием и промывали водой. Неочищенное вещество очищали с помощью ФХ (8% МеОН в ДХМ) с последующим растиранием с диэтиловым эфиром с получением целевого продукта в виде 10 рацемата.
ЖХ-МС: tR: 0.7 мин./ [М+Н]+: 388.50
Два энантиомера полученного продукта разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-5):
(Я)-этил 2-(8-((да/?еда-бутокскарбонил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-15 пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетат
(487 мг, 28%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-1): tR: 6.03 мин; (8)-этил 2-(8-((да/?еда-бутоксикарбонил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетат
(491мг, 28%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-1): tR: 7.36 мин.
20 А.3.3. Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты (пример 6)
К (8)-этил 2-(8-((да/?еда-бутоксикарбонил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетату (100 мг, 0.258 моль) добавляли 4 н. НС1 в 25 диоксане (0.895 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течении 1 часа и концентрировали с получением целевого продукта в виде гидрохлорида, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХ-МС: tR: 0.38 мин./ [М+Н]+: 288.25.
К раствору данного промежуточного соединения (93 мг, 0.26 моль) в DMA
(1.8 мл) добавляли 2,5-дихлорпиримидин (38.5 мг, 0.26 моль) и К2СО3 (143 мг,
1.03 моль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 20 часов.
5 После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (0.26 мл) и 30%
водн. NaOH (0.26 мл) и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течении 2
часов. Затем добавляли 37% водн. НС1 (0.26 мл), и полученный осадок собрали
фильтрованием и очищали препаративной ВЭЖХ (основные условия) с
получением указанного в заголовке соединения в виде белого вещества.
10 ЖХ-МС: tR: 0.61 мин./ [М+Н]+: 372.18.
ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-2): tR: 7.87 мин.
А.4 Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты
А.4.1 Синтез (8)-этил 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-15 6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)ацетата и (Я)-этил 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)ацетата
NaH 95% (56.1 мг, 2.22 моль, 1.2 экв.) осторожно добавляли к холодному 20 (0°С) раствору ^(5-хлорпиримидин-2-ил)-2-фтор^-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-8-амина (614 мг, 1.85 моль, 1 экв.) в ДМФА (6.36 мл). Реакционную смесь перемешивали в течении 20 минут. Постепенно добавляли этилбромацетат (0.233 мл, 2.04 моль, 1.1 экв.) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течении 2 часов. 25 Реакционную смесь растворяли в ЭА и промывали насыщенным раствором NaHC03. Органический слой сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью ФХ (от н-гептана до н-гептан/ЭА: 7/3) с получением целевого продукта в виде рацемата. ЖХ-МС: tR: 0.96 мин./ [М+Н]+: 418.01
Два энантиомера полученного продукта разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-6):
(8)-этил 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)ацетат
5 (271 мг, 35%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-3): tR: 6.22 мин;
(Я)-этил 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)ацетат
(273 мг, 35%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-3): tR: 7.66 мин.
А.4.2 Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-10 6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты (пример 7)
К раствору (8)-этил 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)ацетата (271 мг, 0.649 моль, 1 экв.) в ТГФ (10 мл) добавляли 1 н. NaOH (10 мл, 10 моль, 15.42 экв.) при 15 комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течении 1 часа. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для того, чтобы удалить только ТГФ. Затем ее подкисляли конц. НС1 до рН~5-6 и перемешивали при комнатной температуре. Суспензию экстрагировали с помощью EtOAc (4х). Объединенные органические слои сушили над MgS04, фильтровали и концентрировали в 20 вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (255 мг, 100%).
ЖХ-МС: tR: 0.82 мин./ [М+Н]+: 390.12
ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-2): tR: 4.96 мин.
А. 5 Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты
А.5.1 Синтез бензил (2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата
N,NH2.HCI
Н 4% H2S04
Раствор гидрохлорида 2-фтор-5-гидразинилпиридина (200 мг, 1 экв.), бензил (4-оксоциклогексил)карбамата (296 мг, 1экв.) в 4% водной H2SO4 (3.3 мл) перемешивали при 80°С в течении 16 часов. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь перемешивали с насыщ. NaHCCb и
10 экстрагировали с помощью ЭА. Объединенные органические слои сушили (MgS04), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением целевого продукта (305 мг, 77%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХ-МС: tR: 0.82 мин./ [М+Н]+: 340.13.
15 А.5.2 Синтез (8)-этил-2-(8-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата и (Я)-этил-2-(8-
(((бензилокси)карбонил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Я-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата
NaH 95% (20.8 мг, 2.22 моль, 1.2 экв.) осторожно добавляли к холодному раствору (0°С) бензил (2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Я-пиридо[3,2-й]индол-8-ил)карбамата (295 мг, 1.85 моль, 1 экв.) в ДМФА (6.36 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут. Постепенно добавляли этилбромацетат (0.086 25 мл, 1.1 экв.) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 часов 30 минут. Дополнительно добавляли NaH 95%
(3.5 мг, 0.2 экв.), затем этилбромацетат (0.016 мл, 0.2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Затем реакционную смесь растворили в ЭА и промыли насыщенным раствором NaHCCb. Органический слой сушили над MgS03, фильтровали и 5 концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью ФХ (от н-гептана до н-гептан/ЭА: 1/1) с получением целевого продукта в виде рацемата (150мг, 50%).
ЖХ-МС: tR: 0.9 мин./ [М+Н]+: 426.15
Два энантиомера полученного продукта разделяли препаративной 10 хиральной ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-7):
(К)-этил-2-(8-(((бензилокси)карбонил)амино)2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Я-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетат
(67 мг, 23%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-3): tR: 5.96 мин;
(8)-этил-2-(8-(((бензилокси)карбонил)амино)2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5#-15 пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетат
(86 мг, 29%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-3): tR: 7.27 мин.
А.5.3 Синтез (8)-этил-2-(8-амино-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5#-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата (гидробромидная соль)
NHCbz
20 К раствору (8)-этил-2-(8-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата (42 мг, 1экв.) в уксусной кислоте (1 мл) добавляли 33% НВг в уксусной кислоте (0.22 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течении 1 часа и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке продукта (94
25 мг, 100%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХ-МС: tR: 0.55 мин./ [М+Н]+: 292.12
А. 5.4 Синтез (8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусной кислоты (пример 8)
К раствору (8)-этил-2-(8-амино-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5#-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)ацетата (гидробромидная соль) (48 мг, 1экв.) в DMA (1 мл) последовательно добавляли 2,5-дихлорпиримидин (15.6 мг, 1.4 экв.) и безводный К2СО3 (41.5 мг, 4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 16 часов. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали с помощью ЭА. Объединенные органические слои сушили над MgS04; фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (кислая среда) с получением промежуточного сложного этилового эфира (9 мг, 30%).
ЖХ-МС: tR: 0.88 мин./ [М+Н]+: 404.05
К раствору промежуточного сложного этилового эфира (9 мг, 1 экв.) в ТГФ (0.5 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, подкисляли до рН 1-2 посредством 1 н. НС1 и экстрагировали с помощью ЭА. Объединенные органические слои сушили над MgS04; фильтровали и концентрировали в вакууме, с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (6 мг ,24%).
ЖХ-МС: tR: 0.75 мин./ [М+Н]+: 376.18
ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-4): tR: 6.6 мин.
А. 6 Синтез (8)-2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-3,4-дигидро-1Н-карбазол-9(2Н)-ил)уксусной кислоты (сравнительный пример 1)
А.6.1 Синтез (8)-метил 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-1,2,3,4-тетрагидро-9Н-карбазол-9-ил)ацетата и (Я)-метил 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-5 ил)(метил)амино)-1,2,3,4-тетрагидро-9Н-карбазол-9-ил)ацетата
К раствору 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-3,4-дигидро-1Н-карбазол-9(2Н)-ил)уксусной кислоты (описана в примере 53 в WO 2011/117798) (100 мг, 0.27 моль) в МеОН (1 мл), добавляли концентрированную H2SO4 (0.2
10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток смешивали с насыщ. раствором NaHCCb и экстрагировали с ЭА. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над MgS04 и упаривали в вакууме с получением целевого продукта в виде
15 рацемата (86 мг, 83%).
ЖХ-МС: tR: 1.01 мин./ [М+Н]+: 385.10
Два энантиомера полученного продукта разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-5):
(8)-метил 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-1,2,3,4-тетрагидро-20 9Н-карбазол-9-ил)ацетат
(22 мг, 21%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-1): tR: 7.21 мин; и
(Я)-метил 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-1,2,3,4-тетрагидро-9Н-карбазол-9-ил)ацетат
(21 мг, 20%): ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-1): tR: 9.06 мин.
К раствору (8)-метил 2-(3-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-1,2,3,4-
5 тетрагидро-9Н-карбазол-9-ил)ацетата (22 мг) в ТГФ (1 мл) добавляли 5 н. NaOH
(10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в
течение 2 часов, подкисляли концентрированной НС1 и перемешивали при
комнатной температуре. Полученный осадок отфильтровали и сушили, с
получением указанного в заголовке соединения в виде белого вещества.
10 ЖХ-МС: tR: 0.93 мин./ [М+Н]+: 371.13.
ВЭЖХ (хиральная ВЭЖХ-2): tR: 4.59 мин.
Биологические анализы:
Получение мембран пСРуТН2-рецепторов и радиолигандный анализ:
15 Во-первых, рекомбинантные клетки HEK293-hCRTH2 отделяли от
культуральных планшетов в 5 мл буфера А/планшет (буфер А: 5 мМ Tris, 1 мМ MgCl2-6H20 рН=7.4) с помощью резинового шпателя. Затем клетки переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали в течение 5 мин при 400 g. Клеточный осадок ресуспендировали в том же буфере и пробирки замораживали
20 при -80°С. Клетки размораживали и мембранные фрагменты получали путем гомогенизации с использованием политронного гомогенизатора (30 секунд). Затем фрагменты мембраны центрифугировали при 3000 g в течение 20 мин и вновь суспендировали в буфере С (буфер С: 75 мМ Tris, 25 мМ MgCb, 250 мМ Сахароза рН 7,4). Аликвоты фрагментов мембраны хранили при -20°С.
25 Анализ связывания осуществляли в конечном аналитическом объеме 250
мкл. Во-первых, 250 мкл испытуемого соединения, предварительно разведенного в буферном растворе для связывания (буферный раствор для связывания: 50 мМ Tris-основание, 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 0,1% BSA (без протеазы), 0,01% NaN3, 10 мМ МпСЬ рН 7,0 ) помещали в каждую лунку. После добавления 75
30 мкл буферного раствора, 50 мкл радиолиганда 3H-PGD2 (при дозе 2,5 нМ
(220.000 dpm/лунка) от ANAWA ART0662) добавляли в каждую лунку. Анализ связывания инициировали добавлением 100 мкл CRTH2 фрагментов мембран, достигая конечной концентрации 20 мкг/лунка. Для неспецифического связывания, PGD2 добавляли в реакционную смесь до 10 мМ конечной 5 концентрации. Эту аналитическую смесь инкубировали в течение 90 минут при комнатной температуре, а затем фильтровали через GF/C фильтровальный 96-луночный планшет, который предварительно вымачивали в течение 3-х часов в 0,5% полиэтиленимине (PEI). Фильтр-лунки промыли три раза охлажденным льдом буферным раствором для связывания. Затем, 40 мкл Microscint-40 10 (Packard) добавляли в каждую лунку, и удержанную радиоактивность подсчитывали в приборе Topcount (Packard).
Антагонистические действия иллюстрируемых соединений показаны в
Таблице 4.
Пример
Название
1С50 [нМ]
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
1.9
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
3.1
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
2.3
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
5.6
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
Анализ замещения радиолиганда -человеческий сывороточный альбумин (HSA):
Анализ замещения радиолиганда в присутствии человеческого сывороточного альбумина (HSA) проводили, как описано выше, со следующими 5 изменениями. Буферный раствор HSA для связывания: буферный раствор для связывания + 0.5% Sigma Albumin из человеческой сыворотки А1887 (вместо 0.1% BSA). Объем тестируемого соединения 25 мкл, предварительно растворенного в буферном растворе HSA для связывания, помещали в каждую лунку. После добавления 75 мкл буферного раствора HSA для связывания, 50 10 мкл 3H-PGD2 (при 2.5 нМ (220.000 dmp /лунка) от ANAWA ART0662) добавляли в каждую лунку. Оставшийся протокол был идентичен вышеописанному.
Антагонистические действия иллюстрируемых соединений показаны в
Таблице 5.
Пример
Название
1С50 [нМ]
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
3.9
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
2.3
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
2.1
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
5.0
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5//-пиридо[3,2-й]индол-5-ил)уксусная
кислота
15 Анализ изменения формы эозинофильной клетки с человеческой плазмой
После получения информированного согласия, отбирали образцы крови путем венопункции в соответствии с протоколом, утвержденным комитетом по
этике, Базель, Швейцария. Полиморфноядерные лейкоциты (содержащие эозинофилы, базофилы и нейтрофилы) выделяли с помощью метода Polymorphprep(tm) (Axis-Shield). Вкратце, антикоагулированную цельную кровь наслаивали на градиент Polymorphprep (плотность 1,113 г/мл) и 5 центрифугировали при 500 g в течение 30 минут. Фракцию полиморфноядерных клеток собирали и истощали относительно эритроцитов путем гипотонического солевого лизиса.
Полиморфноядерные клетки повторно суспендировали в аналитическом буфере (lx PBS с Ca2+/Mg2+, дополненный 0,1% BSA, 10 мМ HEPES и 10 мМ
10 глюкозы, рН 7,4) при 5х 106 клеток/мл и окрашивали aHTH-CD49d-APC ((АРС = аллофикоцианин) в течение 1 часа при комнатной температуре. Исследуемые соединения в различных концентрациях подвергали предварительной инкубации в течение 10 мин в плазме крови человека (антикоагулированной ингибитором тромбина). Затем плазму крови человека добавляли к полиморфноядерным
15 клеткам до 50% от конечного аналитического объема, достигая плотности полиморфноядерных клеток 4x106 клеток/мл. После инкубации в течение 10 минут при 37°С, полиморфноядерные клетки активировали в течение 5 мин при температуре 37°С добавлением PGD2 при 100 нМ конечной концентрации. Активацию прекращали добавлением 0,5 мл параформальдегида (1%).
20 Сразу же после фиксации параформальдегидом, образцы анализировали с
помощью проточного цитометра FACSCanto (BD Biosciences) и целевые клетки идентифицировали с помощью характеристик их прямого рассеяния (FSC) и бокового рассеяния (SSC). Эозинофилы идентифицировали с помощью сигнала aHTH-CD49d-APC и профиля их характерного боковой рассеяния (SSC). Ответное
25 изменения формы, что свидетельствует об активации эозинофилов, было определено количественно как процент клеток с увеличенным прямым рассеянием.
Антагонистические действия иллюстрируемых соединений показаны в
Таблице 6.
Пример
Название
1С50 [нМ]
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-
6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
Пример
Название
1С50 [нМ]
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-
6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
4.2
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-
6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
148
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
417
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная кислота
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
5.8
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-
6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
3.1
(8)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-
тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусная
кислота
Анализ внутриклеточной мобилизации кальция (FLIPR):
Клетки (НЕК-293), стабильно экспрессирующие рецептор hCRTH2 под контролем цитомегаловирусного промотора из отдельной вставки 5 экспрессирующего вектора pcDNA5 (Invitrogen), выращивали до конфлюэнтности в DMEM (низкий уровень глюкозы, Gibco) среде, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки (Bioconcept, Швейцария) в стандартных условиях культивирования клеток млекопитающих (37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СОг). Клетки отделяли от чашки для
10 культивирования с использованием диссоциационного буфера (0,02% ЭДТУ в PBS, Gibco) в течение 1 мин, и собирали центрифугированием при 200 g при комнатной температуре в течение 5 мин в аналитическом буфере (равные части сбалансированного солевого раствора Хэнка (HBSS, Bioconcept) и DMEM (низкий уровень глюкозы, без фенолового красного, Gibco)). После инкубации в
15 течение 45 мин (37°С и 5% СОг) в присутствии 1 мкМ Fluo-4 и 0,04% Pluronic F-127 (оба от Molecular Probes), и 20 мМ HEPES (Gibco) в аналитическом буфере, клетки промывали и ресуспендировали в аналитическом буфере, а затем высевали на 384-луночные планшеты для анализа FLIPR (Greiner) при плотности 50000 клеток в 66 мкл на лунку, и осаждали центрифугированием.
Маточные растворы тестируемых соединений приготовляли с концентрацией 10 мМ в ДМСО, и их последовательно разводили в аналитическом буфере до концентрации, необходимой для кривой ингибирующая доза-ответ. Простагландин D2 (Biomol, Plymouth Meeting, PA), 5 использовали в качестве агониста.
Прибором FLIPR Terra (Molecular Devices) управляли в соответствии со стандартными инструкциями изготовителя, добавляя 4 мкл испытуемого соединения, растворенного до концентрации 10 мМ в ДМСО и разбавленного до эксперимента в аналитическом буфере для получения желаемой конечной
10 концентрации. Затем добавляют 10 мкл 80 нМ простагландина D2 (Biomol, Plymouth Meeting, PA) в аналитическом буфере, дополненном 0,8% BSA (содержание жирных кислот <0,02%, Sigma), чтобы получить конечную концентрацию 10 нМ и 0,1 %, соответственно. Изменения флуоресценции контролировали до и после добавления испытуемых соединений при Хех = 488 нм
15 и Хет = 540 нм. Пиковые значения эмиссии выше базового уровня после добавления простагландина D2 экспортировали после вычитания базовой линии. Значения нормировали для контроля высшего уровня (без добавления тестируемого соединения) после вычитания значения базовой линии (без добавления простагландина D2). Программу XLlfit 3.0 (IDBS) использовали для
20 того, чтобы подогнать данные к односайтовой кривой доза-эффект уравнения (A+((B-A)/(l+((C/x)AD)))) и для расчета значений 1С50.
In vitro цитотоксичность в гепатоцитах первичных культур крыс 1. Методы
25 1.1 Цитотоксичность в гепатоцитах первичных культур крыс
Взрослых самцов крыс линии Вистар наркотизировали пентобарбиталом натрия и гепатоциты выделяли в соответствии со стандартной процедурой, т.е. с помощью перфузии печени in-situ раствором коллагеназы. Жизнеспособность очищенных гепатоцитов, проверенная с помощью метода вытеснения
30 трипанового синего, была более 85%. Выделенные гепатоциты ресуспендировали в стандартной среде Williams Medium Е, без фенолового красного, дополненной (WME Supp.) трансферрином (100 мкг/мл), трийодтиронином (10 мкг/мл), гентамицином (50 мкг/мл), гидрокортизона гемисукцинатом (13,36 мкг/мл), глюкагоном (5 мкг/мл), HEPES (10 мМ),
инозином (10 мкг/мл), инсулином (10 мкг/мл), стрептомицином (100 мкг/мл) и пенициллином (100 ед/мл) и 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS). Клетки помещали в покрытые коллагеном 24-луночные планшеты при исходной плотности 2x105 клеток/лунка. Через 4 часа для прикрепления к культуральному 5 планшету, среду аспирировали и заменяли свежей WME без фетальной бычьей сыворотки (FBS), содержащей тестируемые соединения, и инкубировали в течение 24 ч при 37°С в 95% 02 и 5% атмосфере С02. Для каждого эксперимента, т.е. с каждой серией гепатоцитов, процедуры с использованием тестируемых соединений выполняли в четырех повторениях. Контроли в 10 четырех повторениях (обработка только средой) также присутствовали на каждом культуральном планшете.
1.2 In vitro воздействие на испытуемые соединения
Маточные растворы испытываемых соединений готовили в диметилсульфоксиде/ДМСО за несколько часов до начала обработки. 15 Соответствующие разбавления этих растворов добавляли в культуральную среду непосредственно перед обработкой с целью получения конечной концентрации 0, 3, 10, 30, 100 и 300 мкМ. Конечная концентрация среды - ДМСО составляла 1% (об/об).
1.3 Жизнеспособность клеточных культур 20 1.3.1 Контроль морфологии монослоя
Морфологию монослоев гепатоцитов контролировали с помощью световой микроскопии по истечению 24 часов воздействия испытуемых соединений. Связанные с обработкой эффекты описаны в соответствии со следующей классификацией:
25 0 Без морфологических изменений, наблюдаемых при обработки, по
сравнению с контрольными культурами
1-3 Обработка приводила к каким-либо морфологическим изменениям, например, внутриклеточному гранулированию, вакуолизации или гибели клеток. В зависимости от тяжести, эти изменения рассматривались как незначительные 30 (1), умеренные (2) или сильные(З).
К Обработка приводила к 100% мертвых клеток и/или полному отрыву монослоя, приводя к прозрачному, свободному от клеток планшету.
1.3.2 Утечка лактатдегидрогеназы
После 24 часов обработки культур гепатоцитов, аликвоты культуральной среды тщательно собрали и использовали для анализа активности лактатдегидрогеназы (LDH) спектрофотометрически с использованием набора 5 для обнаружения цитотоксичности LDH от Clontech (кат. № 630117, Mountain View, СА, США). Для каждого эксперимента дополнительные культуры использовали для определения общей внутриклеточной активности LDH в начале обработки. С этой целью 4 лунки культуры клеток на эксперимент промывали холодным солевым раствором перед началом обработки, 10 обрабатывали ультразвуком в свежей среде и гомогенат анализировали на общую активность LDH. Активность фермента в культуральной среде оценивали и выражали в процентах от общей активности, присутствующей в культуре гепатоцитов в начале обработки.
2. Анализ данных
15 Самую низкую цитотоксическую концентрацию (LCC) и концентрацию, не
приводящую к какому-либо ответу (NoEC) указывали для каждого соединения на основании морфологии клеток и утечки LDH после 24 часов обработки. LCC определяется как самая низкая концентрация испытуемого соединения, ведущая к явному эффекту на культуре гепатоцитов крыс (классификация морфология > 2
20 или > 2-кратное увеличение утечки LDH). Значение LCC > 300 мкМ указывало на отсутствие эффекта на обеих конечных точках при самой высокой тестовой концентрации 300 мкМ. Соединения, которые проявляли лишь незначительную цитотоксичность (классификация морфология 1 или < 2-кратное увеличение утечки LDH) при самой высокой концентрации тестируемого вещества были
25 отмечены как "300s". NoEC определяли как наивысшую тестовую концентрацию соединения без влияния на культуры гепатоцитов крыс (морфологию и утечку LDH).
3. Результаты
пример 1
пример 2
Чю2Н
пример 3
300s
100
"ad
Чю2Н
пример 4
300s
100
со2н
пример 6
> 300
> 300
/^С1
Чю2н
сравнительный пример 1
((?)-энантиомер примера 53 из WO 2011/117798)
300
со2н
пример 7
> 300
> 300
ЧД V
/^Cl
со2н
сравнительный пример 2
(пример 9 из WO 2011/117798)
300
со2н
пример 8
> 300
> 300
In-vivo печеночная токсичность:
Печеночная токсичность соединения формулы (I) может быть проанализирована во время перорального лечения крыс и видов, не являющихся грызунами, до 4-х недель с использованием трех различных доз соединения. Обратимость возможной токсичности может быть исследована в последующий период отсутствия обработки (восстановительный период). Уровни дозы выбираются на основе исследования определения диапазона доз для соответствующих соединений. Ожидается, что высокая доза определяет токсичность на орган близко к максимально переносимой дозе. Средняя и низкая дозы выбираются исходя из оценки терапевтических воздействий на человека. Воздействие соединения измеряют при каждом уровне дозы.
По окончанию лечения и восстановления печеночные биомаркеры (такие как, например, ферменты печени, белки, триглицериды или холестерин) измеряются в крови. В дополнение к этому, окрашенные гематоксилином-эозином срезы печени исследуют микроскопически для того, чтобы непосредственно оценить возможные повреждения органа. Для того, чтобы дополнительно охарактеризировать возможные показатели печени, может потребоваться специализированное окрашивание срезов печени.
7. Соединение формулы (I) по любому из пунктов 1) - 6), в котором абсолютная конфигурация стереогенного центра является такой, как отображено в формуле (Isti)
или соль такого соединения.
8. Соединение по пункту 1, которое выбрано из группы, состоящей из: 10 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-
Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-15 5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты; и 20 2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
или соль такого соединения.
9. Соединение по пункту 1, которое выбрано из группы, состоящей из:
25 (?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метил-6,7,8,930 тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
(?)-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
( <5')-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-метокси-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты; и 5 (,5')-2-(8-((5-хлорпиримидин-2-ил)(метил)амино)-2-(трифторметил)-6,7,8,9-тетрагидро-5Н-пиридо[3,2-Ь]индол-5-ил)уксусной кислоты;
или соль такого соединения.
10. Фармацевтическая композиция, включающая соединение, по любому из
10 пунктов 1-9 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически
приемлемый носитель.
11. Соединение по любому из пунктов 1-9 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства.
12. Применение соединения по любому из пунктов 1-9 или его фармацевтически приемлемой соли для приготовления лекарственного средства для предотвращения и/или лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из хронических и острых аллергических/иммунных
20 заболеваний/нарушений, включающих астму, аллергическую астму,
эозинофильную астму, тяжелую астму, ринит, аллергический ринит, отек Квинке, аллергию на укус насекомых, лекарственную аллергию, аллергический синусит, аллергический нефрит, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальную астму, пищевую аллергию, системный мастоцитоз,
25 анафилактический шок, крапивницу, экзему, неспецифический язвенный колит, хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), воспалительное заболевание кишечника и ревматоидный артрит; эозинофил-связанных заболеваний, включающих системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера,
30 микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит
(эозинофильный пустулез Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром Уэллса), хроническую эозинофильную лейкемию и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными проявлениями); и базофил-связанных заболеваний, включающих базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз.
13. Соединение по любому из пунктов 1-9 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для предотвращения и/или лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из хронических и острых аллергических/иммунных заболеваний/нарушений, включающих астму, аллергическую астму, эозинофильную астму, тяжелую астму, ринит, аллергический ринит, отек Квинке, аллергию на укус насекомых, лекарственную аллергию, аллергический синусит, аллергический нефрит, аллергический конъюнктивит, атопический дерматит, бронхиальную астму, пищевую аллергию, системный мастоцитоз, анафилактический шок, крапивницу, экзему, неспецифический язвенный колит, хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), воспалительное заболевание кишечника и ревматоидный артрит; эозинофил-связанных заболеваний, включающих системный васкулит, поражающий сосуды мелкого калибра, такой как синдром Черджа-Стросс, гранулематоз Вегенера, микроскопический поливаскулит (и орган-специфические разновидности последнего), гиперэозинофильные синдромы, такие как эозинофильная пневмония, эозинофильный эзофагит, рефлюксный эзофагит, эозинофильный эндокардит (эндокардит Леффлера), синдром миалгии эозинофилии, эозинофильный фасциит, эозинофильный пустулезный фолликулит (эозинофильный пустулез Офуджи), эозинофильные язвы, ангиолимфоидная гиперплазия с эозинофилией (ALHE), эозинофильный целлюлит (синдром Уэллса), хроническая эозинофильная лейкемия и синдром лекарственной гиперчувствительности (лекарственная сыпь с эозинофилией и системными проявлениями); и базофил-связанных заболеваний, включающих базофильную лейкемию и базофильный лейкоцитоз.