[RU]

Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые включают десятые домены фибронектина III типа ( ¹⁰ Fn3), которые связываются с сывороточным альбумином, с заменами в петле "южного полюса". Настоящее изобретение дополнительно относится к гибридным молекулам, содержащим связывающий сывороточный альбумин ¹⁰ Fn3, соединенный с гетерологичным белком, для применения в диагностических и терапевтических целях.

(57) Реферат / Формула:

Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые включают десятые домены фибронектина III типа ( ¹⁰ Fn3), которые связываются с сывороточным альбумином, с заменами в петле "южного полюса". Настоящее изобретение дополнительно относится к гибридным молекулам, содержащим связывающий сывороточный альбумин ¹⁰ Fn3, соединенный с гетерологичным белком, для применения в диагностических и терапевтических целях.

---

Евразийское (21) 201691669 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2017.01.30
(22) Дата подачи заявки 2015.03.19
(51) Int. Cl.
C07K14/765 (2006.01) A61K 38/39 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K14/78 (2006.01) C12N15/62 (2006.01)
(54) СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЫВОРОТОЧНЫЙ АЛЬБУМИН ДОМЕНЫ ФИБРОНЕКТИНА III ТИПА
(31) 61/968,181
(32) 2014.03.20
(33) US
(86) PCT/US2015/021535
(87) WO 2015/143199 2015.09.24
(71) Заявитель: БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72) Изобретатель:
Митчелл Трейси С., Госселин Майкл Л., Липовсек Даса, Паркер Рекс, Камфаузен Рэй, Дэвис Джонатан, Фабрицио Давид (US)
(74) Представитель:
Угрюмов В.М., Карпенко О.Ю., Гизатуллина Е.М., Лыу Т.Н., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Строкова О.В. (RU)
5-10 10
(57) Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые включают десятые домены фиб-ронектина III типа (10Fn3), которые связываются с сывороточным альбумином, с заменами в петле "южного полюса". Настоящее изобретение дополнительно относится к гибридным молекулам, содержащим связывающий сывороточный альбумин 10Fn3, соединенный с гетерологичным белком, для применения в диагностических и терапевтических целях.
СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЫВОРОТОЧНЫЙ АЛЬБУМИН ДОМЕНЫ
ФИБРОНЕКТИНА Ш ТИПА
ОПИСАНИЕ Ссылка на родственную заявку
В соответствии с настоящей заявкой испрашивается приоритет согласно предварительной заявке на выдачу патента США № 61/968181, под названием "Новые связывающие сывороточный альбумин домены фибронектина III типа (Novel Serum Albumin-Binding Fibronectin Type III Domains))), поданной 20 марта 2014 года, содержимое которой, таким образом, включено в настоящее описание с помощью ссылки во всей его полноте.
Уровень техники
Неудовлетворительные периоды полужизни терапевтических средств часто делают необходимым их введение с высокой частотой и/или с более высокими дозами или применение составов с замедленным высвобождением для того, чтобы сохранить уровни в сыворотке, необходимые для достижения терапевтических эффектов. Кроме того, это часто связано с отрицательными побочными эффектами. Например, частые систематические введения инъекцией обеспечивают существенный дискомфорт субъекту, и подвергают высокому риску связанного с введением инфицирования, и могут предусматривать госпитализацию или частые визиты в больницу, в частности при необходимости внутривенного введения терапевтического средства. Кроме того, при долгосрочных схемах лечения ежедневные внутривенные введения инъекцией также могут приводить к существенным побочным эффектам в виде рубцевания ткани и патологии сосудов, вызванным периодическим прокалыванием сосудов. Схожие проблемы известны для всех частых системных введений терапевтических средств, таких как, например, введение инсулина больному сахарным диабетом или лекарственных средств на основе интерферона пациентам, страдающим рассеянным склерозом. Все эти факторы приводят к понижению у пациента согласия соблюдать режим и повышения затрат для системы здравоохранения.
В настоящей заявке предложены соединения, которые повышают период полужизни в сыворотке различных терапевтических средств, соединения с повышенным периодом полужизни в сыворотке и способы повышения у терапевтических средств периода их полужизни в сыворотке. Такие соединения и способы повышения у терапевтических средств периода их полужизни в сыворотке могут быть реализованы рентабельным путем, могут сохранять необходимые биофизические свойства (например, Тт, практически мономерное состояние или правильную укладку) и обладать достаточно малым размером для обеспечения их проникновения в ткань.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
Настоящее изобретение основано, по меньшей мере частично, на открытии новых аднектинов (аднектинов РКЕ2), содержащих десятый домен фибронектина III типа (10Fn3), связывающегося с сывороточным альбумином за счет петли "южного полюса", которые обеспечивают улучшенные свойства относительно аднектинов, содержащих 10Fn3 домен, связывающий сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса".
В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к полипептиду, содержащему 10Fn3 домен, причем 10Fn3 домен содержит а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, Ь) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью по отношению к последовательности соответствующей петли CD человеческого 10Fn3 домена, и с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления 10Fn3 домен дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резуса, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы. Например, 10Fn3 домен может связываться с HSA, сывороточным альбумином макака-резус и сывороточным альбумином яванского макака, или 10Fn3 домен может связываться с HSA, сывороточным альбумином макака-резус, сывороточным альбумином яванского макака, сывороточным альбумином мыши и сывороточным альбумином крысы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 10Fn3 домен связывается с соответствующим сывороточным альбумином с KD менее 500 нМ, например, с KD менее 100 нМ или даже KD менее 10 нМ. В соответствии
с некоторыми вариантами осуществления 1(lFn3 домен связывается с сывороточным альбумином в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления 10Fn3 домен связывается с
доменом I-IIHS А.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке полипептида, содержащего 10Fn3 домен, в присутствии сывороточного альбумина человека составляет по меньшей мере 10 часов, как, например, по меньшей мере 20 часов или по меньшей мере 30 часов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления петля CD содержит аминокислотную последовательность, соответствующую формуле G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-Xio-Xii-Xi2-E (SEQ ID NO: 170), где
(a) Xi выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Хг выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Хз выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) Х4 выбран из группы, состоящей из I, К, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Хб выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) Х7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(h) Xs выбран из группы, состоящей из Р или Т;
(i) Х9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) Хю выбран из группы, состоящей из I или V;
(к) Хп выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(1) Х12 выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления (a) Xi представляет собой R; (Ь) Хг представляет собой Е; (с) Хз представляет собой Q; (d) Х4 представляет собой К; (е) Х5 представляет собой Y; (f) Хб представляет собой D; (g) Х7 представляет собой L или W; (h) Х8 представляет собой Р; (i) Х9 представляет собой L; (j) Хю представляет собой I; (к) Хп представляет собой Y; и (1) Х12 представляет собой Q или N.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом осуществления (a) Xi представляет собой R; (Ь) Хг представляет собой Е; (с) Хз представляет собой Q; (d) Хд представляет собой К; (е) Х5 представляет собой Y; (f) Хб представляет собой D; (g) Х7
представляет собой L; (h) Xs представляет собой Р; (i) Х9 представляет собой L; (j) Хю представляет собой I; (к) Хп представляет собой Y; и (1) Х12 представляет собой Q.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом осуществления (a) Xi представляет собой R; (Ь) Хг представляет собой Е; (с) Хз представляет собой Q; (d) Хд представляет собой К; (е) Х5 представляет собой Y; (f) Хб представляет собой D; (g) Х7 представляет собой W; (h) Xs представляет собой Р; (i) Х9 представляет собой L; (j) Хю представляет собой I; (к) Хп представляет собой Y; и (1) Х12 представляет собой N.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления петля CD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 101-125. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления петля CD содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ Ш N0: 106 или 113.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления настоящее изобретение относится к полипептиду, содержащему 10Fn3 домен, содержащий (i) петлю CD, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую консенсусную последовательность SEQ ID NO: 170, или аминокислотную последовательность под любой одной из SEQ ID NO: 101-125, и (ii) аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична отличным от петли CD участкам под SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260 или которая отличается от одной из SEQIDNO: 23-100, 184-209 и 235-260 не более чем на 1, 1-2,1-5, 1-10 или 1-20 аминокислот. В соответствии с конкретными вариантами осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260 или которая отличается от одной из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260 не более чем на 1, 1-2, 1-5, 110 или 1-20 аминокислот. Аминокислотные отличия могут представлять собой замены, присоединения или делеции.
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к гибридному полипептиду, содержащему десятый домен фибронектина III типа (10Fn3) и гетерологичный белок, причем 10Fn3 домен содержит а) петли А В, ВС, CD, DE, EF и FG, Ь) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью по отношению к последовательности соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена, и с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления гибридный поли пептид содержит связывающий альбумин аднектин, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260 или которая отличается от одной из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260 не более чем на 1, 1-2, 1-5, 110 или 1 -20 аминокислот. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления гибридный полипептид содержит связывающий альбумин аднектин, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, 81, 190 или 241. В соответствии с еще другим предпочтительным вариантом осуществления гибридный полипептид содержит связывающий альбумин аднектин, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ГО NO: 62, 88, 197 или 248.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления гибридный полипептид содержит связывающий альбумин аднектин и гетерологичный фрагмент, причем гетерологичный фраг мен т представляет собой терапевтический фрагмент.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления гетерологичный белок представляет собой полипептид, содержащий '"Fn3 домен. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 10Fn3 домен связывается с отличным от сывороточного альбумина целевым белком. В соответствии с одним вариан том осуществления "ТпЗ домен связывается с PCSK9 (т. е. аднектином PCSK9) и содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 167 или которая отличается от SEQ ID NO: 167 не более чем на 1, 1-2, 1-5, 1-10 или 1-20 аминокислот.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления гибридный полипептид представляет собой тандемнын аднектин PCSK9-PKE2, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 168. 169 или 261 или которая отличается от одной из SEQ ID NO: 168, 169 или 261 не более чем на 1, 1 -2, 1 -5, 1-10 или 1 -20 аминокислот (и может содержать или не содержать N-концевой метионин).
В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибридного полипептида в присутствии сывороточного альбумина мыши составляет по меньшей мере 10 часов. В соответствии с некоторыми вариантами
осуществления период полужизни в сыворотке гибридного пол и пептида в присутствии сывороточного альбумина яванского макака составляет по меньшей мере 50 часов. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибридного пол и пептида в присутствии сывороточного альбумина мыши или сывороточного альбумина яванского макака составляет 10-100 часов, как. например, 10-90 часов, 10-80 часов, 10-70 часов, 10-60 часов, 10-50 часов, 10-40 часов, 10-30 часов. 10-20 часов. 50-100 часов, 60 -1 (X) часов, 70-100 часов. 80-100 часов, 90-100 часов, 20-90 часов, 3080 часов, 40-70 часов или 50-60 часов.
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к аднектину РКЕ2 или тандемному аднектин у PCSK9-PKE2, содержащему аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-100, 168, 169, 184209, 235-260 и 261.
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к композиции, содержащей любой из связывающих альбумин аднектинов или гибридных белков, включая такие, которые описаны в настоящем документе, и носитель.
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей любой из связывающих альбумин аднектинов или гибридных белков, включая такие, которые описаны в настоящем документе, например, такие, которые изложены в SEQ ID NO: 126-151 и 172, к векторам экспрессии, кодирующим молекулы нуклеиновой кислоты, и к клеткам, содержащим такие молекулы нуклеиновой кислоты. Также настоящее изобретение относится к нуклеиновым кислотам, содержащим нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентична любой из таких нуклеотидных последовательностей, которые описаны в настоящем документе или которые отличаются от них не более чем на 1-5, 1-10, 1-50 или 1-100 нуклеогидов.
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к способу получения связывающих альбумин аднектинов или гибридных белков, в том числе таких, которые описаны в настоящем документе, предусматривающему кул ы и в и рован и е клетки, содержащей молекулы нуклеиновой кислоты, которые их кодируют, в условиях, подходящих для экспрессии аднектинов или гибридных белков, и их очистку.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показана блок-схема конкурентного анализа alpha-screen, описываемого в разделе Пример 6.
Фиг. 2 представляет собой график, отображающий конкуренцию различных аднектинов с человеческим рецептором FcRn за связывание с сывороточным альбумином человека (HSA).
Фиг. 3 представляет собой график, отображающий период полужизни в плазме аднектинов РКЕ2 2629_Е06 и 2630_D02 у мышей WT.
Фиг. 4 представляет собой график, отображающий результаты Т-клеточной пролиферации для процента антигенности и и эффективности пролиферативных реакций на аднектины 2629_Е06 и 2630_D02 и исходную молекулу 2270_С01.
На фиг. 5 проиллюстрировано сравнение модульности тандемных аднектинов. Аднектин 1318Н04 соответствует аднектину, связывающему сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса". "X" относится к конфигурации специфичного к отличной от РКЕ цели аднектина (т. е. миостатину; "туо" или PCSK9). В нижней секции указана легенда для оттенков серого в каждом прямоугольном поле, которые соответствуют соотношениям тандем :моноаднектин для ЕС50 связывания HSA, по результатам определения при помощи ИФА с непосредственным связыванием (т. е. чем темнее оттенок серого, тем сильнее связывание с HSA).
На фиг. 6 показаны сенсограммы интерферометрии биослоя тандемных аднектинов PCSK9-PKE2, связывающихся с hPCSK9, в присутствии или в отсутствии HSA.
Фиг. 7 представляет собой сенсограмму Biacore, на которой видно связывание тандемного аднектина PCSK9-PKE2 4472 С06 сначала с HSA, а затем с PCSK9 после введения инъекцией соответствующих белков.
Фиг. 8 представляет собой график, на котором изображен РК профиль in vivo тандемного аднектина PCSK9-PKE2 4772_С06 у мышей С57 В1/6 дикого типа.
На фиг. 9 показаны уровни свободного PCSK9 после введения дозы наполнителя или аднектина PCSK9-PKE2 4472_С06 в количестве 0,5 мг/кг или 2 мг/кг у трансгенных мышей hPCSK9.
Фиг. 10 представляет собой график, на котором изображены РК профили и периоды полужизни в плазме аднектина РКЕ2 2629_Е06, аднектина 5190_Е01, представляющего собой тандем PCSK9-PKE2, и пэгилированного PCSK9 у яванских макаков.
Фиг. 11 представляет собой график, на котором изображен период полужизни в плазме аднектина РКЕ2 2270_С01 у яванских макаков.
Фиг. 12 представляет собой график, на котором показан фармакодинамический профиль LDL-c и PCSK9 у яванских макаков после введения тандемного аднектина PCSK9-РКЕ2 5190Е01 яванским макакам. На профиле видно сильное понижение LDL-c, ингибирование свободного PCSK9 и повышение общего PCSK9, при этом все они возвращаются на исходный уровень к концу исследования.
Фиг. 13 представляет собой график, на котором изображены понижающие LDL-c эффекты аднектина 5190 Е01, представляющего собой тандем PCSK9-PKE2, и препарата сравнения, представляющего собой пэгилированный аднектин PCSK9, наряду с контрольным 2629 Е06 РКЕ2 у яванских макаков.
На фиг. 14 показано захват цели тандемным аднектином PCSK9-PKE2 в двух различных концентрациях по сравнению с пэгилированным аднектином PCSK9 и аднектином РКЕ2 2629 Е06 у яванских макаков.
На фиг. 15 показаны общие уровни PCSK9 с течением времени у яванских макаков после введения тандемного аднектина PCSK9-PKE2, пэгилированного аднектина PCSK9 или аднектина РКЕ2 2629_Е06.
Фиг. 16 представляет собой график, на котором изображены результаты Т-клеточной пролиферации в виде процента и эффективности пролиферативных реакций на тандемные аднектины PCSK9-PKE2 4472_F08, 4472_Е06 и 4472_С06, а также входящий в состав аднектин РКЕ2 2629 Е06 и входящий в состав аднектин PCSK9 2382 D09. Столбцы на левом краю графика относятся к контрольным белкам с низкой, средней и высокой антигенностью.
На фиг. 17 показаны аминокислотные последовательности описываемых в настоящем документе аднектинов РКЕ2.
На фиг. 18А-18С показаны нуклеотидные последовательности описываемых в настоящем документе аднектинов РКЕ2 и тандемных аднектинов PCSK9-PKE2.
Подробное раскрытие настоящего изобретения Определения
Если не указано иное, все применяемые в настоящем документе технические и научные термины имеют такое же значение, которое обычно понимается специалистом в настоящей области. Хотя при практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения можно применять любые способы и композиции, сходные или эквивалентные описанным в настоящем документе, в настоящем документе описаны предпочтительные способы и композиции.
В контексте настоящего описания "полипептид" относится к любой последовательности из двух или более аминокислот, независимо от длины, посттрансляционной модификации или функции. В настоящем документе "полипептид", "пептид" и "белок" применяют взаимозаменяемо. Полипептиды могут включать встречающиеся в природе аминокислоты и не встречающиеся в природе аминокислоты, таких как описанные в патенте США № 6559126, который включен в настоящий документ при помощи ссылки. Полипептиды также можно модифицировать при помощи любого из ряда стандартных химических способов (например, аминокислоту можно модифицировать защитной группой; карбокси-концевую аминокислоту можно превратить в концевую амидную группу; амино концевой остаток можно модифицировать при помощи групп, например, для усиления липофильности; или полипептид можно химически гликозилировать или иначе модифицировать для повышения стабильности или периода полужизни in vivo). Полипептидные модификации могут включать присоединение другой структуры, такой как циклическое соединение или другая молекула, к полипептиду, а также могут включать полипептиды, которые содержат одну или несколько аминокислот в измененной конфигурации (т. е. R или S; или L или D).
В контексте настоящего описания "полипептидная цепь" относится к полипептиду, в котором каждый из его доменов присоединен к другому домену(доменам) при помощи пептидной связи(связей), а не нековалентных взаимодействий или дисульфидных связей.
"Выделенный" полипептид является полипептидом, который выявлен и отделен и/или выделен от компонента его естественной окружающей среды. Посторонние компоненты его естественной окружающей среды представляют собой материалы, которые могут препятствовать диагностическим или терапевтическим применениям полипептида и могут
включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные компоненты. В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления полипептид будет очищен (1) до более 95% по массе полипептида, по результатам определения при помощи способа Лоури и наиболее предпочтительно до более 99% по массе, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с помощью секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до однородности при помощи SDS-PAGE в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с применением красителя Кумасси синего или, предпочтительно, серебрянки. Выделенный полипептид включает полипептид in situ в рекомбинантных клетках, так как по меньшей мере один компонент естественной окружающей среды полипептида не будет присутствовать. Тем не менее, обычно выделенный полипептид будет получен по меньшей мере за одну стадию очистки.
В контексте настоящего описания "участок" 10Fn3 домена относится к любой петле (АВ, ВС, CD, DE, EF и FG), Р-цепи (А, В, С, D, Е, F и G), N-концу (соответствующему аминокислотным остаткам 1-7 из SEQ ID NO: 1) или С-концу (соответствующему аминокислотными остаткам 93-94 из SEQ ID NO: 1) человеческого 10Fn3 домена.
"Петля "северного полюса"" относится к любой одной из петель ВС, DE и FG десятого фибронектинового домена 3 типа (10Fn3) фибронектина человека.
"Петля "южного полюса"" относится к любой одной из петель АВ, CD и EF десятого фибронектинового домена 3 типа (10Fn3) фибронектина человека.
"Каркасный участок" относится к любому непетлевому участку человеческого 10Fn3 домена. Каркасный участок включает Р-цепи А, В, С, D, Е, F и G, а также N-концевой участок (аминокислоты, соответствующие остаткам 1-8 из SEQ ID NO: 1) и С-концевой участок (аминокислоты, соответствующие остаткам 93-94 из SEQ ID NO: 1 и необязательно содержащие 7 аминокислот, составляющий естественный линкер между 10-м и 11-м повтором Fn3 домена в фибронектине человека).
"Процент (%) идентичности аминокислотных последовательностей" в настоящем документе определяют как процент аминокислотных остатков в потенциальной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в выбранной последовательности после выравнивания последовательностей и внесения гэпов, в случае необходимости, до достижения максимального процента идентичности
последовательностей и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательностей. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотных последовательностей можно выполнить различными способами, которые известны специалисту в настоящей области, например, при помощи общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 или Megalign (DNASTAR). Специалисты в настоящей области могут определить соответствующие параметры для оценки выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для осуществления максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Применительно к настоящему описанию, однако, значения % идентичности аминокислотных последовательностей получают как описано ниже при помощи компьютерной программы для сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 была написана Genentech, Inc. подана с документацией пользователя в Бюро регистрации авторских прав США, город Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где она зарегистрирована под № TXU510087 регистрации авторского права, и является общедоступной от Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния. Программу ALIGN-2 необходимо скомпилировать для применения на операционной системе UNIX, предпочтительно цифровой UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей выставлены программой ALIGN-2 и являются неизменными.
Применительно к настоящему описанию, % идентичности аминокислотных последовательностей заданной аминокислотной последовательности А к, с, или относительно заданной аминокислотной последовательности В (что альтернативно можно перефразировать как заданная аминокислотная последовательность А, которая имеет или содержит конкретный % идентичности аминокислотной последовательности к, с или относительно заданной аминокислотной последовательности В) рассчитывают следующим образом: 100 кратную долю X/Y, где X представляет собой число аминокислотных остатков, оцененных как идентичные соответствия программой для выравнивания последовательностей ALIGN-2 в таком программном выравнивании А и В, и где Y представляет собой общее число аминокислотных остатков в В. Следует понимать, что если длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной
последовательности В, то % идентичности аминокислотной последовательности А к В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В к А.
Термины "специфически связывается", "специфичное связывание", "селективное связывание" и "селективно связывается", применяемые в контексте настоящего описания взаимозаменяемо, относятся к аднектину, который характеризуется аффинностью к сывороточный альбумин, но практически не связывается (например, менее приблизительно 10% связывание) с отличным полипептидом, что оценивают при помощи доступной в настоящей области методики, такой как без ограничения анализ Скэтчарда и/или анализы конкурентного связывания (например, конкурентный ИФА, анализ BIACORE). Этот термин также применим, например, если связывающий домен аднектина по настоящему изобретению является специфичным к сывороточному альбумину.
"Период полужизни" полипептида обычно можно определить как фактическое время до уменьшения концентрации в сыворотке полипептида на 50%, in vivo, например, в связи с разрушением и/или выведением из организма полипептида или секвестрации полипептида при помощи естественных механизмов. Период полужизни можно определить по сути любым известным способом, например, при помощи фармакокинетического анализа. Подходящие методики будут очевидны специалисту в настоящей области и, в целом, могут, например, предусматривать стадии введения подходящей дозы полипептида примату; забора образцов крови или других образцов от указанного примата через равные промежутки времени; определения уровня или концентрации полипептида в указанном образце крови; и вычисления по полученным таким образом (представленным графически) данным времени до уменьшения уровня или концентрации полипептида на 50% по сравнению с исходным уровнем после введения дозы. Способы определения периода полужизни можно найти, например, в работе Kenneth et al, Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists (1986); Peters et al, Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996); и "Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982).
Период полужизни можно выразить при помощи параметров, таких как ti/г-альфа, ti/2-бета и площадь под кривой (AUC). В соответствии с настоящим описанием "повышение периода полужизни" относится к повышению любого одного из таких параметров, любых двух из таких параметров или всех трех таких параметров. В соответствии с конкретными
вариантами осуществления повышение периода полужизни относится к повышению tm-бета, независимо с повышением, или без него, ti/2-альфа и/или AUC или как первого, так и второго.
Термин "KD" В контексте настоящего описания предназначен для обозначения равновесной константы диссоциации конкретного взаимодействия аднектин-белок или аффинности аднектина к белку (например, сывороточному альбумину), по результатам измерения при помощи анализа поверхностного плазмонного резонанса или анализа связывания клеток. В контексте настоящего описания "необходимая KD" ОТНОСИТСЯ К KD аднектина, которая является достаточной для предполагаемых целей. Например, необходимая KD может относиться к KD аднектина, необходимой для достижения функционального эффекта в анализе in vitro, например, клеточном люциферазном анализе.
В контексте настоящего описания термин "kass" предназначен для обозначения константы скорости ассоциации для ассоциации аднектина в комплекс аднектин/белок.
В контексте настоящего описания термин "kdiSs" предназначен для обозначения константы скорости диссоциации для диссоциации аднектина из комплекса аднектин/белок.
В контексте настоящего описания термин "ICso" относится к концентрации аднектина, которая ингибирует реакцию, либо в анализе in vitro, либо в анализе in vivo, до уровня, который составляет 50% от максимальной ингибирующей реакции, т. е. посередине от максимальной ингибирующей реакции и реакции при отсутствии обработки.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству лекарственного средства, эффективному для лечения заболевания или нарушения у млекопитающего и/или ослабления до некоторой степени одного или нескольких связанных с нарушением симптомов.
Применяемое в контексте настоящего описания "предупреждение" заболевания или нарушения относится к уменьшению вероятности появления болезненного состояния в статистической выборке по отношению к контрольной выборке без обработки, или к задержке начала или уменьшению тяжести одного или нескольких симптомов заболевания или нарушения по отношению к контрольной выборке. Для превентивной терапии пациентов можно выбирать на основании факторов, которые известны как повышающие риск возникновения клинического болезненного состояния относительно общей популяции. В контексте настоящего описания термин "лечение" включает (а) ингибирование
болезненного состояния, т. е. остановку его развития; и/или (Ь) облегчение болезненного состояния, т. е. достижение регрессии болезненного состояния после его выявления.
Общий обзор
Новые описываемые в настоящем документе фибронектиновые каркасные полипептиды связываются с сывороточным альбумином различных видов и могут соединяться с дополнительной молекулой(молекулами), такой как другие 10Fn3 домены, которые связываются с другими целями, или полипептиды, для которых повышенный период полужизни является благоприятным.
А. Общая структура фибронектиновых каркасов
Fn3 относится к домену Ш типа из фибронектина. Fn3 домен является малым, мономерным, растворимым и стабильным. Он не имеет дисульфидных связей и поэтому стабилен в восстанавливающих условиях. Общая структура Fn3 напоминает укладку цепи иммуноглобулинов. Fn3 домены содержат, в порядке от N-конца к С-концу, бета или бета-подобную цепь А; петлю АВ; бета или бета-подобную цепь В; петлю ВС; бета или бета-подобную цепь С; петлю CD; бета или бета-подобную цепь D; петлю DE; бета или бета-подобную цепь Е; петлю EF; бета или бета-подобную цепь F; петлю FG; и бета или бета-подобную цепь G. Семь антипараллельных Р-цепей сгруппированы в виде двух бета-листов, которые формируют стабильную сердцевину, при этом создавая две "поверхности", которые сформированы из петель, соединяющих бета или бета-подобные цепи. Петли АВ, CD и EF расположены на одной поверхности ("южный полюс"), а петли ВС, DE и FG расположены на противоположной поверхности ("северный полюс"). Любые или все петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG могут принимать участие в связывании лигандов. В фибронектине человека есть по меньшей мере 15 различных Fn3 модулей, и поскольку гомология последовательностей между модулями низка, то они все имеют высокое сходство в третичной структуре.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления Fn3 домен представляет собой Fn3 домен, полученный из десятого модуля дикого типа домена фибронектина человека III типа (10Fn3):
VSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETGGNSPVOEFTVPGSKST ATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPASSKPISINYRT (SEQ ID NO: 1) (петли АВ, CD и EF подчеркнуты).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления нелигандные связывающие последовательности 10Fn3, т. е. "каркас 10Fn3", могут быть изменены при условии, что 10Fn3 сохраняет функцию связывания лиганда и/или структурную стабильность. Сообщалось о различных мутантных каркасах 10Fn3. В соответствии с одним аспектом один или несколько из Asp 7, Glu 9 и Asp 23 заменены на другую аминокислоту, такую как, например, не имеющий отрицательный заряд аминокислотный остаток (например, Asn, Lys и т. п.). Сообщалось, что такие мутации оказывают эффект, способствующий большей стабильности мутантного 10Fn3 при нейтральном рН по сравнению с формой дикого типа (см., например, публикацию патентной заявки РСТ № WO 02/04523). Было раскрыто множество дополнительных изменений в каркасе 10Fn3, которые являются либо благоприятными, либо нейтральными. См., например, работу Batori et al., Protein Eng., 15(12): 1015-1020 (December 2002); Koide et al., Biochemistry, 40(34): 10326-10333 (Aug. 28, 2001).
Оба варианта белков 10Fn3 дикого типа характеризуются сходной структурой, а именно семью бета-цепочечными последовательностями домена, которые обозначены A-G, и шестью петлевыми участками (петля АВ, петля ВС, петля CD, петля DE, петля EF и петля FG), которые связывают семь бета-цепочечных последовательностей домена. Бета-цепи, расположенные наиболее близко к N- и С-концам, могут принимать бета-подобную конформацию в растворе. В SEQ ID NO: 1 петля АВ соответствует остаткам 14-17, петля ВС соответствует остаткам 23-31, петля CD соответствует остаткам 37-47, петля DE соответствует остаткам 51-56, петля EF соответствует остаткам 63-67, и петля FG соответствует остаткам 76-87.
Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин аднектин по настоящему изобретению представляет собой 10Fn3 полипептид, который по меньшей мере на 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90% идентичен человеческому 10Fn3 домену, показанному под SEQ ID NO: 1. Основная часть изменчивости обычно будет иметь место в одной или нескольких петлях. Каждая из бета- или бета-подобных цепей 10Fn3 полипептида может фактически состоять из
аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95% или 100% идентична последовательности соответствующей бета или бета-подобной цепи с SEQ Ш NO: 1 при условии, что такая вариация не нарушает стабильность полипептида в физиологических условиях.
Дополнительно, также можно создать вставки и делеции в петлевых участках, при этом все еще получая высокую аффинность связывания в сыворотке у связывающих 10Fn3 доменов. Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления одна или несколько петель, выбранных из АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, могут быть удлинены или укорочены относительно соответствующей петли в человеческом 10Fn3 дикого типа. В любом заданном полипептиде одна или несколько петель могут быть удлинены, одна или несколько петель могут быть укорочены или иметь их комбинацию. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления длина заданной петли может быть увеличена на 225, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 5-25, 5-20, 5-15, 5-10, 10-25, 10-20 или 10-15 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления длина данной петли может может уменьшена на 1-15, 1-11, 1-10, 1-5, 1-3, 1-2, 2-10 или 2-5 аминокислот.
Как описано выше, аминокислотные остатки, соответствующие остаткам 14-17, 23-30, 37-47, 51-56, 63-67 и 76-87 из SEQ ID NO: 1, определяют соответственно петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG. Однако, следует понимать, что не каждое основание в петлевом участке нуждается в модификации для получения связывающего 10Fn3 домена, обладающего сильной аффинностью к необходимой цели. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления только остатки в петле, например петле CD, модифицируют для получения 10Fn3 доменов, связывающихся с целью с высокой аффинностью.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее изобретение относится к полипептидам, содержащим 10Fn3 домен, причем 10Fn3 домен содержит петли АВ, ВС, CD, DE и FG и имеет по меньшей мере одну петлю, выбранную из петель АВ, CD и EF, с измененной аминокислотной последовательностью относительно последовательности соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена с SEQ ID NO: 1. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления петли изменены АВ, CD и EF. В соответствии с конкретными вариантами осуществления изменена только петля АВ. В соответствии с конкретными вариантами осуществления изменена только петля CD. В соответствии с конкретными вариантами осуществления изменена только петля EF. В
соответствии с конкретными вариантами осуществления изменены как петля АВ, так и петля и CD. В соответствии с конкретными вариантами осуществления изменены как петля АВ, так и петля EF. В соответствии с конкретными вариантами осуществления изменены как петля CD, так и петля EF. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления одно или несколько конкретных каркасных изменений объединены в комбинации с одним или несколькими петлевыми изменениями. Под "измененный" понимают одно или несколько изменений в аминокислотной последовательности относительно матричной последовательности (т. е. соответствующего домена дикого типа фибронектина человека) и включает аминокислотные дополнения, делеции и замены.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления каркасный фибронектиновый белок содержит 10Fn3 домен, имеющий комбинацию из изменений петель "северного" и "южного полюса". Например, одна или несколько петель АВ, CD и EF в комбинации с одной или несколькими из петель ВС, DE и FG могут быть изменены относительно соответствующих петель человеческого 10Fn3 домена с SEQ ID NO: 1.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полипептид содержит 10Fn3 домен, который содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную непетлевым участкам и/или немодифицированным петлевым участкам SEQ ID NO: 1, причем изменена по меньшей мере одна петля, выбранная из АВ, CD и EF. Например, в соответствии с конкретными вариантами осуществления петля АВ может иметь до 4 аминокислотных замен, до 10 аминокислотных вставок, до 3 аминокислотных делеций или их комбинации; петля CD может иметь до 6 аминокислотных замен, до 10 аминокислотных вставок, до 4 аминокислотных делеций или их комбинации; и петля EF может иметь до 5 аминокислотных замен, до 10 аминокислотных вставок, до 3 аминокислотных делеций или их комбинации; и/или петля FG может иметь до 12 аминокислотных замен, до 11 аминокислотных делеций, до 25 аминокислотных вставок или их комбинации.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления один или несколько остатков интегрин-связывающего мотива "аргинин-глицин-аспарагиновая кислота" (RGD) (аминокислоты 78-80 из SEQ Ш NO: 1) могут быть заменены так, чтобы нарушить связывание с интегрином. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления петля FG полипептидов, описываемых в настоящем документе, не содержит связывающий
интегрин сайт RGD. В соответствии с одним вариантом осуществления последовательность RGD заменена на последовательность полярная аминокислота - нейтральная аминокислота - кислая аминокислота (в направлении от N-конца до С-конца). В соответствии с конкретными вариантами осуществления последовательность RGD заменена на SGE. В соответствии с еще одними вариантами осуществления последовательность RGD заменена на RGE.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления каркасный фибронектиновый белок содержит 10Fn3 домен, который обычно определен следующей последовательностью:
VSDVPRDLEVVAA(X)uLLISW(X)vYRITY(X)wFTV(X)xATISGL(X)yYTITVYA(X)zISI NYRT (SEQ ID NO: 2)
В SEQ ID NO: 2 петля АВ представлена (X)u, петля ВС представлена (X)v, петля CD представлена (X)w, петля DE представлена (Х)х, петля EF представлена (Х)у и петля FG представлена Xz. X представляет собой любую аминокислоту, а нижний индекс после X представляет собой целое число аминокислот. В частности, каждый из u, v, w, х, у и z может независимо представлять собой любое число в диапазоне 2-20, 2-15, 2-10, 2-8, 5-20, 5-15, 510, 5-8, 6-20, 6-15, 6-10, 6-8, 2-7, 5-7 или 6-7 аминокислот. Последовательности бета-цепей (подчеркнутые) могут иметь любое число из 0-10, 0-8, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, 0-2 или 0-1 замен, делеций или дополнений во всех 7 каркасных участках относительно соответствующих аминокислот, показанных в SEQ Ш NO: 2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления последовательности бета-цепей могут иметь любое число из 0-10, 0-8, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, 0-2 или 0-1 консервативных замен во всех 7 каркасных участках относительно соответствующих аминокислот, показанных в SEQ Ш NO: 2. В соответствии с конкретными вариантами осуществления гидрофобные сердцевинные аминокислотные остатки (выделенныежирным остатки в описанной выше SEQ Ш NO: 2) являются фиксированными, и любые замены, консервативные замены, делеций или дополнения происходят в остатках, отличных от гидрофобных сердцевинных аминокислотных остатков. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления гидрофобные сердцевинные остатки полипептидов, описываемых в настоящем документе, не модифицированы относительно человеческого 10Fn3 домена дикого типа (SEQ ID NO: 1).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления аминокислотные последовательности N-концевых и/или С-концевых участков полипептидов, описываемых в настоящем документе, могут быть модифицированы делецией, заменой или вставкой относительно аминокислотных последовательностей соответствующих участков человеческого 10Fn3 домена дикого типа (SEQ ID NO: 1). 10Fn3 домены обычно начинаются с аминокислоты номер 1 из SEQ ID NO: 1. Однако, домены с аминокислотными делециями также охватываются настоящим изобретением. Дополнительные последовательности также можно добавить к N- или С-концу 10Fn3 домена, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. Например, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления N-концевое удлинение состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: М, MG и G.
В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления альтернативный N-концевой участок, имеющий длину в 1-20, 1-15, 1-10, 1-8, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2 или 1 аминокислоту, можно добавить к N-концевому участку SEQ Ш NO: 1. Иллюстративные альтернативные N-концевые участки включают (представленные при помощи однобуквенного аминокислотного кода) М, MG, G, MGVSDVPRDL (SEQ Ш N0: 3) и GVSDVPRDL (SEQ ID N0: 4). Другие подходящие альтернативные N-концевые участки включают, например, XnSDVPRDL (SEQ ID NO: 5), XnDVPRDL (SEQ ID NO: 6), XnVPRDL (SEQ ID NO: 7), XnPRDL (SEQ ID NO: 8) XnRDL (SEQ ID NO: 9), XnDL (SEQ ID NO: 10) или XnL, где n = 0, 1 или 2 аминокислоты, причем если n = 1, то X представляет собой Met или Gly, и если п = 2, то X представляет собой Met-Gly. При добавлении Met-Gly последовательности к N-концу 10Fn3 домена М обычно будет отщепляться, оставляя G на N-конце. В соответствии с конкретными вариантами осуществления альтернативный N-концевой участок содержит аминокислотную последовательность MASTSG (SEQ ID NO:
11) .
В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления альтернативный С-концевой участок, имеющий длину в 1-20,1-15, 1-10, 1-8,1-5,1-4,1-3,1-2 или 1 аминокислот, можно добавить к С-концевому участку SEQ ID NO: 1. Конкретные примеры альтернативных последовательностей С-концевых участков включают, например, полипептиды, содержащие, фактические состоящие из или состоящие из EIEK (SEQ Ш N0:
12) , EGSGC (SEQ ID NO: 13), EIEKPCQ (SEQ ID NO: 14), EIEKPSQ (SEQ ID NO: 15), EIEKP
12)
(SEQ ID NO: 16), EIEKPS (SEQ ID NO: 17) или EIEKPC (SEQ ID NO: 18). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления альтернативный С-концевой участок содержит EIDK (SEQ Ш N0: 19), и в соответствии с конкретными вариантами осуществления альтернативный С-концевой участок представляет собой или EIDKPCQ (SEQ ID NO: 20), или EIDKPSQ (SEQ ID NO: 21). Дополнительные подходящие альтернативные С-концевые участки включают изложенные в Таблице 20 и SEQ ID NO: 210-220.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления последовательности С-концевого удлинения содержат остатки Е и D остатки и могут составлять в длину от 8 до 50, от 10 до 30, от 10 до 20, от 5 до 10 и от 2 до 4 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления хвостовые последовательности включают ED-линкеры, в которых последовательность содержит тандемные повторы ED. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления хвостовая последовательность содержит 210,2-7, 2-5, 3-10, 3-7, 3-5, 3, 4 или 5 повторов ED. В соответствии с конкретными вариантами осуществления ED-хвостовые последовательности также могут включать дополнительные аминокислотные остатки, такие как, например, EI, ЕЮ, ES, ЕС, EGS и EGC. В основе таких последовательностей лежат, отчасти, известные хвостовые последовательности аднектина, такие как EIDKPSQ (SEQ Ш NO: 21), в которых были удалены остатки D и К. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления ED-хвост перед повторами ED содержит остатки Е, I или EI.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления альтернативный С-концевой фрагмент, который может быть присоединен к С-концевым аминокислотам RT (т. е. аминокислотам 93-94 из SEQ ID NO: 1) любого из описываемых в настоящем документе аднектинов, содержит аминокислоты PmXn, где Р представляет собой пролин, X является любой аминокислотой, m является целым числом, которое составляет по меньшей мере 1, и п равен 0 или представляет собой целое число, которое составляет по меньшей мере 1. В соответствии с конкретными вариантами осуществления альтернативный С-концевой фрагмент содержит аминокислоты PC. В соответствии с конкретными вариантами осуществления альтернативный С-концевой фрагмент содержит аминокислоты PI, PC, PID, PIE, PIDK (SEQ ID NO: 221), PIEK (SEQ ID NO: 222), PIDKP (SEQ ID NO: 223), PIEKP (SEQ ID NO: 224), PIDKPS (SEQ ID NO: 225), PIEKPS (SEQ ID NO: 226), PIDKPC (SEQ ID NO: 227), PIEKPC (SEQ ID NO: 228), PIDKPSQ (SEQ ID NO: 229), PIEKPSQ (SEQ ID NO: 230),
PIDKPCQ (SEQ ID NO: 231), PIEKPCQ (SEQ ID NO: 232), PHHHHHH (SEQ ID NO: 233) и PCHHHHHH (SEQ ID NO: 234).
В соответствии с конкретными вариантами осуществления фибронектиновые каркасные белки содержат 10Fn3 домен, имеющий как альтернативную последовательность N-концевого участка, так и альтернативную последовательность С-концевого участка.
В. Связывающие сывороточный альбумин молекулы, имеющие модифицированную петлю(петли) на "южном полюсе"
10Fn3 домены быстро выводятся из кровотока посредством фильтрации и разрушения в связи с их малым размером, составляющем приблизительно 10 кДа (ti/2=15-45 минут у мышей; 3 часа у обезьян). В соответствии с конкретными аспектами в настоящей заявке предложены 10Fn3 домены с модификациями на "южном полюсе", которые специфично связываются с сывороточным альбумином, например, сывороточным альбумином человека (HSA), для пролонгирования ti/г у 10Fn3 домена.
HSA имеет концентрацию в сыворотке, составляющую 600 мкМ, и ti/г, составляющий 19 дней у людей. Продолжительный ti/2 HSA был отчасти объяснен за счет его рециркуляции с участием неонатального рецептора Fc (FcRn). HSA связывает FcRn в зависимости от рН после эндосомального поглощения в эндотелиальные клетки; эта взаимосвязь позволяет рециркулировать HSA обратно в кровоток, таким образом отдаляя его липосомальное разрушение. FcRn широко экспрессируется, и, согласно предположениям, рециркуляционный путь является конститутивным. В большинстве типов клеток наибольшее количество FcRn находится во внутриклеточной сортирующей эндосоме. HSA легко интернализируется при помощи неспецифического механизма пиноцитоза жидкой фазы и избегает разрушения в липосоме при помощи FcRn. При кислом рН, который имеет место в эндосоме, аффинность HSA к FcRn повышается (5 мкМ при рН 6,0). После связывания с FcRn HSA уходит с липосомного пути разрушения, подвергается трансцитозу и высвобождается на поверхность клетки.
Аднектины, связывающее сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса", называемые в настоящем документе связывающими сывороточный альбумин аднектинами "первого поколения", описаны, например, в WO2011140086. Для того чтобы усовершенствовать связывающие сывороточный альбумин за счет петли "северного
полюса" (SABA) аднектины первого поколения, среди которых некоторые не связывались с сывороточным альбумином мыши или крысы, не обладали высокой аффинностью к сывороточным альбуминам от различных видов, и не всегда были совместимы в мультивалентной платформе на основе 10Fn3, были разработаны связывающие сывороточный альбумин за счет петли "южного полюса" (аднектины РКЕ2) аднектины второго поколения с модифицированными петлями "южного полюса", как описано в разделе Примеры.
Таким образом, в соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к 10Fn3 домену, имеющему (i) модификацию в аминокислотной последовательности по меньшей мере одной петли "южного полюса", выбранной из петель АВ, CD и EF, относительно соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена дикого типа (SEQ ID NO: 1), в которой 10Fn3 домен связывается с сывороточным альбумином (например, сывороточным альбумином человека). Модифицированная петля(петли) "южного полюса" участвует в связывании с одинаковой целью. Предусмотрены различные комбинации модифицированных петель "южного полюса". Например, 10Fn3 может содержать одну модифицированную петлю "южного полюса", две модифицированные петли "южного полюса" или даже все три модифицированные петли "южного полюса". В соответствии с конкретными вариантами осуществления одна или несколько модифицированных петель "южного полюса" можно получить в сочетании с одной или несколькими модифицированными петлями "северного полюса" (т. е. одной или несколькими из петель ВС, DE и FG). Модифицированные петли могут иметь модификации последовательности на протяжении всей петли или только в части петли. В дополнение к этому, одна или несколько из модифицированных петель могут иметь такие вставки или делеций, что длина петли будет варьировать относительно длины соответствующей петли последовательности дикого типа (т. е. SEQ ID NO: 1). В соответствии с конкретными вариантами осуществления дополнительные участки в 10Fn3 домене (т. е. в дополнение к петлям "южного полюса"), такие как Р-цепь, N-концевые и/или С-концевые участки, также могут быть модифицированы в последовательности относительно 10Fn3 домена дикого типа, и такие дополнительные модификации также могут участвовать в связывании с целью. В соответствии с конкретными вариантами осуществления петля "южного полюса" является единственным модифицированным доменом. В соответствии со специфическими
вариантами осуществления петля CD является единственным модифицированным доменом. В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин 10Fn3 домен может быть модифицирован путем включения последовательности N-концевого удлинения и/или последовательности С-концевого удлинения, которые описано ранее.
В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к аднектинам, которые связываются с сывороточным альбумином, имеющим измененную петлю CD относительно соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена дикого типа, например, 10Fn3 доменов, изложенных под SEQ ID N0: 23-100, 184-209 и 235-260. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающие альбумин аднектины содержат или наоборот не содержат 6Х на своем хвосте. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающие альбумин аднектины соответствуют сердцевинным аднектинам, которые не имеют N-концевой лидерной последовательности и С-концевого хвоста, которые изложены под SEQ JD NO: 75-100.
В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 белки связываются с сывороточным альбумином человека с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 нМ, 100 пМ, 100 нМ, 50 пМ или 10 пМ. Kd может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие альбумин аднектины (или 10Fn3 белки) также могут связывать сывороточный альбумин от одного или нескольких из яванского макака, макака-резус, крысы или мыши.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 белки связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA) или сывороточным альбумином яванского макака (CySA) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ
до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 белки связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA), сывороточным альбумином яванского макака (CySA) и сывороточный альбумин мыши (MSA) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 белки связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA), сывороточным альбумином яванского макака (CySA), сывороточным альбумином мыши (MSA) и сывороточным альбумином крысы (RSA) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие альбумин аднектины связываются с сывороточным альбумином в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие альбумин аднектины связываются с доменом I-11 сывороточного альбумина человека.
В соответствии с конкретными вариантами ос уществл ен и я период полужизни в сыворотке связывающих альбумин аднектинов по настоящему изобретению или период полужизни в сыворотке связывающих альбумин аднектинов. соединенных с гетерологичный фрагментом, например, вторым аднектином, составляет по меньшей мере 2 часа, 2,5 часа, 3 часа, 4 часа. 5 часов, 6 часов. 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, ! 5 часов, 20 часов, 25 часов, 30 часов, 35 часов, 40 часов, 50 часов, 60 часов, 70 часов, 80 часов, 90 часов, 100 часов, 110 часов, 120 часов, 130 часов, 135 часов, 140 часов, 150 часов, 160 часов
или 200 часов. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке связывающих альбумин аднектинов или период полужизни в сыворотке связывающих альбумин аднектинов, соединенных с гетерол о ги ч н ы м фрагментом, например, вторым аднектином, составляет 2-200 часов, 5-200 часов, 10-200 часов, 25-200 часов, 50-200 часов, 100-200 часов, 150-200 часов. 2-150 часов, 2-100 часов, 250 часов, 2-25 часов, 2-10 часов. 2-5 часов. 5-150 часов. 10-100 часов или 25-50 часов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающие альбумин аднектины содержат последовательность, которая по меньшей мере на 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80% или 85% идентична 10Fn3 домену дикого типа (SEQ Ш NO: 1). В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере одна из петель АВ, CD или EF модифицирована относительно 10Fn3 домена дикого типа. В соответствии с конкретным вариантом осуществления по меньшей мере две из петель АВ, CD или EF модифицированы относительно 10Fn3 домена дикого типа. В соответствии с конкретным вариантом осуществления все три петли АВ, CD или EF модифицированы относительно 10Fn3 домена дикого типа. В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин 10Fn3 домен содержит последовательность, которая по меньшей мере на 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин 10Fn3 домен (или аднектин) может содержать последовательность, которая изложена под SEQ ID NO: 2, где петля CD представлена (X)w и заменена на петлю CD из любой из 26 сердцевинных последовательностей аднектина РКЕ2 (т. е. SEQ Ш NO: 75-100). Каркасные участки таких связывающих альбумин аднектинов могут иметь любое число в диапазоне 0-20, 0-15, 0-10, 0-8, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, 0-2 или 0-1 замен, консервативных замен, делеций или дополнений относительно каркасных аминокислотных остатков из SEQ Ш NO: 1. Такие каркасные модификации можно создавать при условии, что связывающий альбумин аднектин будет способен связывать сывороточный альбумин, например, HSA, с необходимой KD.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления петлевой участок CD связывающих альбумин аднектинов по настоящему изобретению можно описать при помощи консенсусной последовательности.
Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления петля CD определена консенсусной последовательностью
G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-X10-X11-Х 12-Е (SEQ Ш N0: 170), где
(a) Xi выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Хг выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Хз выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) Х4 выбран из группы, состоящей из I, К, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Хб выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) Х7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(h) Х8 выбран из группы, состоящей из Р или Т;
(i) Х9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) Хю выбран из группы, состоящей из I или V;
(к) Хп выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(1) Хп выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А.
В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления
(a) Xi представляет собой R;
(b) Хг представляет собой Е;
(c) Хз представляет собой Q;
(d) Х4 представляет собой К;
(e) Х5 представляет собой Y;
(f) Хб представляет собой D;
(g) Х7 представляет собой L или W;
(h) Х8 представляет собой Р;
(i) Х9 представляет собой L;
(j) Хю представляет собой I;
(к) Хц представляет собой Y; и
(1) Хп представляет собой Q или N.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления Х7 представляет собой L, а Хп представляет собой Q.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления Х7 представляет собой W, а Х12 представляет собой N.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающие альбумин аднектины по настоящему изобретению содержат петлю CD, имеющую последовательности, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичные последовательностям петли CD, изложенным по SEQ ID NO: 101-125, или содержат не более 1, 1-2 или 1-3 аминокислотных отличий (т. е. замену, например, делецию, добавку или консервативную замену). Каркасные участки таких связывающих альбумин аднектинов могут содержать любое число в диапазоне 0-20, 0-15, 0-10, 0-8, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, 0-2 или 0-1 замен, консервативных замен, делеций или дополнений относительно каркасных аминокислотных остатков из SEQ ID NO: 1. Такие каркасные модификации можно создавать при условии, что аднектины будут способен связывать сывороточный альбумин с необходимой KD.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления петля CD связывающих альбумин аднектинов по настоящему изобретению содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
GRHVQIYSDLGPLYIYTE (SEQ ID NO: 101),
GRHVHIYSDWGPMYIYTE (SEQ ID NO: 102),
GREVQKYSVLGPLYIYTE (SEQ ID NO: 103),
GREVQMYSDLGPLYVYSE (SEQ ID NO: 104),
GREVQKFSDWGPLYIYTE (SEQ ID NO: 105),
GREVQKYSDLGPLYIYQE (SEQ ID NO: 106),
GREVHQYSDWGPMYIYNE (SEQ ID NO: 107),
GREVHKNSDWGTLYIYTE (SEQ ID NO: 108),
GREVQKYSDLGPLYIYAE (SEQ ID NO: 109),
GREVHLYSDWGPMYIYTE (SEQ ID NO: 110),
GRHVQMYSDLGPLYIFSE (SEQ ID NO: 111),
GREVHMYSDFGPMYIYTE (SEQ ID NO: 112),
GREVQKYSDWGPLYIYNE (SEQ ID NO: 113),
GREVQMYSDLGPLYIYNE (SEQ ID NO: 114),
GREVQMYSDLGPLYIYTE (SEQ ID NO: 115),
GRHVQIYSDLGPLYIYNE (SEQ ID NO: 116), GREVQIYSDWGPLYIYNE (SEQ ID NO: 117), GREVQKYSDWGPLYIYQE (SEQ ID NO: 118), GRHVHLYSEFGPMYIYNE (SEQ ID NO: 119), GRDVHMYSDWGPMYIYQE (SEQ ID NO: 120), GRHVQIYSDWGPLYIYNE (SEQ ID NO: 121), GRYVQLYSDWGPMYIYTE (SEQ ID NO: 122), GRQVQVFSDLGPLYIYNE (SEQ ID NO: 123), GRQVQIYSDWGPLYIYNE (SEQ ID NO: 124) и GRQVQMYSDWGPLYIYAE (SEQ ID NO: 125).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающий альбумин аднектин содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой оной из SEQ ID NO: 23100, 184-209 и 235-260 или отличается от нее не более чем на 1, 1-2, 1-3, 1-5, 1-10 или 1-20 аминокислотных отличий, например, аминокислотных делеций, дополнений или замен (например, консервативных замен). В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающие альбумин молекулы содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична отличному от петли CD участку из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления связывающий альбумин аднектин содержит аминокислотную последовательность, изложенную под любым из SEQ ID NO: 29, 55, 81, 190 и 241. В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления связывающий альбумин аднектин содержит аминокислотную последовательность, изложенную под любым из SEQ Ш NO: 36, 62, 88, 197 и 248.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее изобретение относится к мутантным связывающим альбумин молекулам аднектина, которые имеют цистеиновый остаток, введенный в конкретное положение. Иллюстративные примеры цистеиновых мутаций представляют собой А12С, А26С, S55C, Т56С и Т58С (см. Таблицу 7 в разделе Примеры). В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления цистеиновые мутации практически не изменяют у связывающего альбумин аднектина связывание с сывороточным альбумином.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления пролиновый остаток вводят в С-конец 10Fn3 домена, например, как показано, например, в SEQ ID NO: 184-209 и 235-260. В соответствии с конкретными вариантами осуществления пролиновый остаток вводят в С-конец тандемного связывающего альбумин аднектина как показано, например, в SEQ Ш N0: 168 и 261. Добавление пролинового остатка не исключает добавление дополнительных аминокислотных последовательностей к С-концу связывающего альбумин аднектина или тандемного связывающего альбумин аднектина.
С. Перекрестно-конкурирующие аднектины и/или аднектины, которые связываются с одинаковым сайтом связывания аднектина
Настоящее изобретение относится к белкам, таким как аднектины, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, малые молекулы, пептиды и т. п., которые конкурируют (например, перекрестно конкурируют) за связывание с сывороточным альбумином (например, HSA) с отдельными описанными в настоящем документе аднектинами РКЕ2. Такие конкурирующие белки, например, аднектины, можно выявить по их способности конкурентно ингибировать связывание с сывороточным альбумином (например, HSA) у описанных в настоящем документе аднектинов в ходе стандартных анализов на связывание сывороточного альбумина. Например, можно применять стандартные анализы ИФА, в ходе которых белок рекомбинантного сывороточного альбумина иммобилизируют на планшете, один из белков флуоресцентно метят и оценивают способность немеченного белка конкурировать с меченным белком за связывание.
Далее представлены иллюстративные примеры конкурентных анализов в контексте аднектинов, конкурирующих с одним из описанных в настоящем документе белков РКЕ2 за связывание с сывороточным альбумином. Можно осуществить аналогичные анализы, в которых тестируют на конкурентность отличный от аднектина белок. В соответствии с одним вариантом осуществления конкурентный формат ИФА можно осуществлять для определения того, связывают ли два связывающих сывороточный альбумин аднектина перекрывающиеся сайты связывания аднектина (эпитопы) на сывороточном альбумине (например, HSA). В соответствии с одним форматом аднектин №1 наносят на планшет, который затем блокируют и промывают. В этот планшет добавляют либо только сывороточный альбумин, либо сывороточный альбумин, предварительно инкубированный
с насыщающей концентрацией аднектина №2. После соответствующего периода инкубации планшет промывают и зондируют при помощи поликлонального антитела к сывороточному альбумину с последующей детекцией при помощи конъюгата стрептавидин-HRP и стандартных процедур проявления при помощи тетраметилбензидина. Если сигнал OD является одинаковым с или без предварительной инкубации с аднектином №2, то два аднектина связываются независимо друг от друга, и их сайты связывания аднектина не перекрываются. Однако, если сигнал OD для лунок, в которые были внесены смеси сывороточного альбумина/аднектина №2, ниже для лунок, в которые был внесен только сывороточный альбумин, то связывание аднектина №2 подтверждают как блокирующее связывание аднектина №1 с сывороточным альбумином.
В качестве альтернативы, аналогичный эксперимент проводят при помощи поверхностного плазмонного резонанса (SPR, например, BIAcore). Аднектин №1 иммобилизируют на поверхности чипа для SPR с последующими введениями инъекцией либо только сывороточного альбумина, либо сывороточного альбумина, предварительно инкубированного с насыщающей концентрацией аднектина №2. Если сигнал связывания для смесей сывороточного альбумина/аднектина №2 является одинаковым или выше, чем только у сывороточного альбумина, то два аднектина связываются независимо друг от друга, и их сайты связывания аднектина не перекрываются. Однако, если сигнал связывания для смесей сывороточного альбумина/аднектина №2 ниже сигнала связывания только для сывороточного альбумина, то связывание аднектина №2 подтверждают как блокирующее связывание аднектина №1 с сывороточным альбумином. Особенностью таких экспериментов является применение насыщающих концентраций аднектина №2. Если сывороточный альбумин не насыщается аднектином №2, то указанные выше заключения не сохраняются. Такие же эксперименты можно применять для определения того, связываются ли любые два связывающих сывороточных альбумин белка с перекрывающимися сайтами связывания аднектина.
Оба приведенных выше в качестве примера анализа также можно осуществлять в обратном порядке, при котором иммобилизируют аднектин №2 и в планшет добавляют сывороточный альбумин - аднектин №1. В качестве альтернативы, аднектин №1 и/или №2 можно заменить на моноклональное антитело и/или растворимый гибридный белок рецептора-Fc.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления конкурирование можно определить при помощи сэндвич-анализа HTR.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления конкурентным аднектином является аднектин, который связывает тот же сайт связывания аднектина на сывороточном альбумине, что и описанный в настоящем документе конкретный аднектин РКЕ2. Для определения того, связывается ли аднектин с тем же сайтом связывания аднектина, что и эталонный аднектин, можно применять стандартные методики картирования, такие как протеазное картирование, мутационный анализ, рентгеновская кристаллография и 2-мерный ядерный магнитный резонанс (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)).
Потенциальные конкурирующие связывающие альбумин белки, например, аднектины, могут ингибировать связывание аднектинов РКЕ2 по настоящему изобретению с сывороточным альбумином (например, HSA) по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. % конкурирования можно определить при помощи описанных выше способов.
D. Мультивалентные/тандемные аднектины
Настоящее изобретение относится к мультивалентным белкам, которые содержат два или более 10Fn3 доменов, специфически связывающихся с целью (аднектины). Например, мультивалентный белок может содержать 2, 3 или более 10Fn3 доменов, которые ковалентно связаны. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления мультивалентный белок является биспецифичным или димерным белком, содержащим два 10Fn3 домена. В соответствии с конкретными вариантами осуществления мультивалентный белок содержит первый 10Fn3 домен, который связывается с сывороточным альбумином (например, сывороточным альбумином человека), и второй 10Fn3 домен, который связывается со второй целевой молекулой (например, PCSK9). Если как первая, так и вторая целевые молекулы являются сывороточным альбумином, то первый и второй 10Fn3 домены могут связываться с одинаковыми или отличными эпитопами. Кроме того, если первая и вторая целевые молекулы являются одинаковыми, то участки модификации в 10Fn3 домене, который
ассоциирован с целевым связыванием, могут быть одинаковыми или отличаться. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления такой 10Fn3 домен мультивалентного фибронектинового белкового каркаса связывается с необходимой целью с KD менее 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 100 пМ или менее. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления такой 10Fn3 домен мультивалентного фибронектинового белкового каркаса связывается с необходимой целью с KD ОТ 1 пМ до 1 мкМ, от 100 пМ до 500 нМ, от 1 нМ до 500 нМ или от 1 нМ до 100 нМ. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления такой 10Fn3 домен мультивалентного фибронектинового белкового каркаса специфично связывается с целью, которая не связывается 10Fn3 доменом дикого типа, в частности человеческим 10Fn3 доменом дикого типа.
10Fn3 домены в мультивалентном фибронектиновом каркасном белке могут соединяться полипептидным линкером. Иллюстративные полипептидные линкеры включают полипептиды с 1-20, 1-15, 1-10, 1-8, 1-5, 1-4, 1-3 или 1-2 аминокислотами. Подходящие линкеры для соединения 10Fn3 доменов являются линкерами, которые позволяют разделить домены для независимой друг от друга укладки с образованием трехмерной структуры, которая обеспечивает высокоаффинное связывание с целевой молекулой. Конкретные примеры подходящих линкеров включают глицин-сериновые линкеры, глицин-пролиновые линкеры, пролин-аланиновые линкеры, а также линкеры с аминокислотной последовательностью PSTPPTPSPSTPPTPSPS (SEQ Ш NO: 152). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления линкер представляет собой глицин-сериновый линкер. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления линкер представляет собой глицин-сериновый линкер. Такие линкеры содержат глициновые и сериновые остатки и могут иметь длину от 8 до 50, от 10 до 30 и от 10 до 20 аминокислот. Примеры включают линкеры с аминокислотной последовательностью (GS)7 (SEQ ID NO: 153), G(GS)6 (SEQ ID NO: 154) и G(GS)7G (SEQ ID NO: 155). Другие линкеры содержат глутаминовую кислоту и включают, например, (GSE)5 (SEQ Ш NO: 156) и GGSEGGSE (SEQ Ш NO: 157). Другие иллюстративные глицин-сериновые линкеры включают (GS)4 (SEQ ID NO: 158) (GGGGS)7 (SEQ ID NO: 159) (GGGGS)5 (SEQ ID NO: 160) и (GGGGS)3G (SEQ ID NO: 161). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления линкер представляет собой глицин-пролиновый линкер. Такие линкеры содержат глициновые и пролиновые
остатки и могут иметь длину от 3 до 30, от 10 до 30 и от 3 до 20 аминокислот. Примеры включают линкеры с аминокислотной последовательностью (GP)3G (SEQ ID NO: 162), (GP)5G (SEQ ID NO: 163) и GPG В соответствии с конкретными вариантами осуществления линкер может представлять собой пролин-аланиновый линкер с длиной от 3 до 30, от 10 до 30 и от 3 до 20 аминокислот. Примеры пролин-аланиновых линкеров включают, например, (РА)3 (SEQ ID NO: 164), (РА)6 (SEQ ID NO: 165) и (PA)9 (SEQ ID NO: 166). Предполагают, что оптимальную длину линкера и аминокислотный состав можно определить путем постановки стандартного эксперимента при помощи способов, хорошо известных в настоящей области техники. В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления линкер не содержит пары Asp-Lys (DK).
В соответствии с конкретными вариантами осуществления линкер имеет
аминокислотную последовательность PSPEPPTPEP (SEQ Ш NO: 173),
PSPEPPTPEPPSPEPPTPEP (SEQ ID NO: 174), PSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEP (SEQ
ID NO: 175) или PSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEP (SEQ ID NO: 176).
Обычно линкер может содержать аминокислотную последовательность (PSPEPPTPEP)n
(SEQ ID NO: 262), где n равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1-5 или 1-10. В соответствии с
конкретными вариантами осуществления линкер имеет аминокислотную
последовательность EEEEDE (SEQ ID NO: 177), EEEEDEEEEDE (SEQ ID NO: 178),
EEEEDEEEEDEEEEDEEEEDE (SEQ ID NO: 179),
EEEEDEEEEDEEEEDEEEEDEEEEDEEEEDE (SEQ ID NO: 180). Обычно линкер может содержать последовательность (EEEEDE)nE (SEQ Ш NO: 263), где п равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1-5 или 1-10. В соответствии с конкретными вариантами осуществления линкер имеет аминокислотную последовательность RGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP (SEQ ID NO: 181). Такие линкеры можно применять для соединения связывающего альбумин аднектина с другим полипептидом (например, другим аднектином). Иллюстративные применения линкера PSPEPPTPEP (SEQ ID NO: 173) показаны ниже.
N-концевой аднектин, соединенный с С-концевым полипептидом: ...NYRTPGPSVEPPTPEP-полипептид (SEQ ID NO: 182)
N-концевой полипептид, соединенный с С-концевым аднектином:
полипептид-PSmPPTPEPGVSDV... (SEQ ID NO: 183)
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мультивалентный аднектин представляет собой тандемный аднектин, содержащий первый '"Fn3 домен, ко торы й связывается с сывороточным альбумином (например, аднектин РКЕ2), и второй 10Fn3 домен, который связывается с конкретной целью. Тандем ные аднектины могут иметь конфигурацию связывающий альбумин аднектин-Х и Х-связывающий альбумин аднектин, где X является специфичным к цели '"Г'пЗ доменом. Специалисту в настоящей области хорошо известны способы тестирования фун кционал ьн ой активности и оценки биологических свойств таких тандемных молекул аднектина.
В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к гибридному полипептиду, содержащему первый десятый домен фибронектина III типа (10Fn3) и второй 10Fn3 домен, г де первый 10Fn3 домен содержит а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, b) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью по отношению к последовательности соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена, и с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ. "Первый" домен и "второй" домен могут находиться в N-C-концевой или C-N-концевой ориентации.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, например, мультивалентных аднектинов, первый 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO 23-100, 184-209 и 235-260 или отличается от нее не более чем на 1, 1-2, 1-5, 1-10 или 1 -20 аминокислот, например, ам и н ок и сл отн ы х делеций, дополнений или замен (например, консервативных аминокислотных замен).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первый 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
В соответствии с предпочтител ьным вариантом осуществления первый 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29, 55, 81, 190 или 241. В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления первый домен 10Fn3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ Ш NO: 36, 62, 88, 197 или 248.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мультивалентный аднектин содержит второй 10Fn3 домен, который представляет собой !"Fn3 домен, специфично связывающийся с целевым белком, отличным от сывороточного альбумина.
В соответствии с предлiочтительным вариантом осуществления второй !"Fn3 домен специфично связывается с PCSK9.
Таким образом, в соответствии с одним вариантом осуществления второй 10Fn3 домен содержит а м и н о к и с л отн у ю последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 168 или 261 или отличается от нее не более чем на 1, I -2, 1-5, 1-10 или 1-20 аминокислот, например, аминокислотных делеций, дополнений или замен (например, к о н сер ва т \ i в н ы х а м и н ок и сл отн ы х замен). Дополнительные подходящие 10Fn3 домены, которые связываются с PCSK9, раскрыты, например, в WO2011/130354, содержание которой включено в настоящий документ при помощи ссылки.
В соответствии с одним вариантом осу ществл ен и я второй 10Fn3 домен имеет аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 168 или 261.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления настоящее изобретение относится к связывающему PCSK9 и сывороточный альбумин тандемному аднектину, содержащему аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 168 или 261, а также к связывающим PCSK9 и сывороточный альбумин тандемным аднектинам с ам и н ок и сл отн ы м и последовательностями, которые по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны им или отличаются от них не более чем на 1, 1-2, 1-5, 1-10 или 1-20 аминокислот, например, а м и н о к и сл отн ы х делеций, дополнений или замен (например, консервати вных аминокислотных замен), причем тандемный аднектин сохраняет связывание с PCSK9 и сывороточным альбумином.
В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей связывающий PCSK9 и сывороточный альбумин тандемный аднектин, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, изложенную под SEQ ID NO: 172, а также по сл ело ва тел ь и о с т и нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны ей, причем кодируемый связывающий PCSK9 и сывороточный альбумин тандемный аднектин сохраняет связывание с PCSK9 и сывороточным альбумином. В соответствии с
некоторыми вариантами осуществления нуклеотидные замены не изменяют получаемую в результате транслируемую а м и н о к и с л от н у ю п осл едовател ьн ость (т. е. молчащие мутации).
В соответствии с одним аспектом основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-PKE2), описываемые в настоящем документе, связываются с сывороточным альбумином человека с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 100 пМ, 100 пМ, 50 пМ или 10 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, также могут связываться с сывороточным альбумином от одного или нескольких из яванского макака, макака-резус, крысы или мыши.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA) или сывороточным альбумином яванского макака (CySA) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA), сывороточным альбумином яванского макака (CySA) и сывороточным альбумином мыши (MSА) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, связываются с сывороточным альбумином макака-резус (RhSA), сывороточным альбумином яванского макака (CySA), сывороточным альбумином мыши (MSA) и сывороточным альбумином крысы (RSA) с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1 нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, связываются с сывороточным альбумином в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, связываются с доменом 1-11 сывороточного альбумина человека.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-РКЕ2), описываемые в настоящем документе, имеют период полужизнн в сыворотке в присутствии альбумина человека, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина мыши и или сывороточного альбумина крысы, еоставля ющем по меньшей мере I час, 2 часа, 5 часов, 10 часов, 20 часов, 30 часов, 40 часов, 50 часов, 60 часов, 70 часов, 80 часов, 90 часов, 100 часов, 150 часов, 200 часов или по меньшей мере приблизительно 300 часов. В соответствии с конкретными вариантами осуществления основанные на связывании сывороточного альбумина тандемные аднектины (например, тандемный аднектин PCSK9-PKE2), описываемые в настоящем документе, имеют период полужизни в сыворотке в присутствии альбумина человека, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина мыши и/или сывороточного альбумина крысы, составляющий 1-300 часов, например, 1-250 часов, 1-200 часов, 1 -150 часов, 1 -100
часов, 1-90 часов, 1-80 часов, 1-70 часов, 1-60 часов, 1-50 часов, 1-40 часов, 1-30 часов, 1-20 часов, 1-10 часов, 1 -5 часов, 5-300 часов, 10-300 часов. 20-300 часов, 30-300 часов, 40-300 часов, 50-300 часов, 60-300 часов, 70-300 часов, 80-300 часов, 90-300 часов, 100-300 часов, 150-300 часов, 200-300 часов, 250-300 часов, 5-250 часов. 10-200 часов. 50-150 часов или 80120 часов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке партнерского аднектина в основанном на связывании сывороточного альбумина тандемном аднектине (например, аднектина PCSK9 в случае тандемного аднектина PCSK9-РКЕ2) повышен относительно периода полужизни в сыворотке партнерского аднектина без конъюгации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании сывороточного альбумина тандемного аднектина по меньшей мере на 20, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1500, 1800, 1900, 2000, 2500 или 3000% дольше относительно периода полужизни в сыворотке партнерского аднектина без конъюгации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании сывороточного альбумина тандемного аднектина на 20-3000%, например, 403000%, 60-3000%, 80-3000%, 100-3000%, 120-3000%, 150-3000%, 180-3000%, 200-3000%, 400-3000%, 600-3000%, 800-3000%, 1000-3000%, 1200-3000%, 1500-3000%, 1800-3000%, 1900-3000%, 2000-3000%, 2500-3000%, 20-2500%, 20-2000%, 20-1900%, 20-1800%, 201500%, 20-1200%, 20-1000%, 20-800%, 20-600%, 20-400%, 20-200%, 20-180%, 20-150%, 20120%, 20-100%, 20-80%, 20-60%, 20-40%, 50-2500%, 100-2000%, 150-1500%, 200-1000%, 400-800% или 500-700% дольше относительно периода полужизни в сыворотке партнерского аднектина без конъюгации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании сывороточного альбумина тандемного аднектина по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 3,5 раза, 4 раз, 4,5 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 10 раз, 12 раз, 13 раз, 15 раз, 17 раз, 20 раз, 22 раза, 25 раз, 27 раз, 30 раз, 35 раз, 40 раз или 50 раз больше периода полужизни в сыворотке партнерского аднектина без конъюгации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании
сывороточного альбумина тандемного аднектина в 1,5-50 раз, например, в 1,5-40 раз, 1,5-35 раз, 1,5-30 раз, 1,5-27 раз, 1,5-25 раз, 1,5-22 раза, 1,5-20 раз, 1,5-17 раз, 1,5-15 раз, 1,5-13 раз, 1,5-12 раз, 1,5-10 раз, 1,5-9 раз, 1,5-8 раз, 1,5-7 раз, 1,5-6 раз, 1,5-5 раз, 1,5-4,5 раза, 1,5-4 раза, 1,5-3,5 раза, 1,5-3 раза, 1,5-2,5 раза, 1,5-2 раза, 2-50 раз, 2,5-50 раз, 3-50 раз, 3,5-50 раз, 4-50 раз, 4,5-50 раз, 5-50 раз, 6-50 раз, 7-50 раз, 8-50 раз, 10-50 раз, 12-50 раз, 13-50 раз, 15-50 раз, 17-50 раз, 20-50 раз, 22-50 раз, 25-50 раз, 27-50 раз, 30-50 раз, 40-50 раз, 2-40 раз, 5-35 раз, 10-20 раз или 10-15 раз больше периода полужизни в сыворотке партнерского аднектина без конъюгации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании сывороточного альбумина тандемного аднектина составляет по меньшей мере 2 часа, 2,5 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 15 часов, 20 часов, 25 часов, 30 часов, 35 часов, 40 часов, 50 часов, 60 часов, 70 часов, 80 часов, 90 часов, 100 часов, ПО часов, 120 часов, 130 часов, 135 часов, 140 часов, 150 часов, 160 часов или 200 часов. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке основанного на связывании сывороточного альбумина тандемного аднектина составляет 2-200 часов, 2,5-200 часов, 3-200 часов, 4-200 часов, 5-200 часов, 6200 часов, 7-200 часов, 8-200 часов, 9-200 часов, 10-200 часов, 15-200 часов, 20-200 часов, 25-200 часов, 30-200 часов, 35-200 часов, 40-200 часов, 50-200 часов, 60-200 часов, 70-200 часов, 80-200 часов, 90-200 часов, 100-200 часов, 125-200 часов, 150-200 часов, 175-200 часов, 190-200 часов, 2-190 часов, 2-175 часов, 2-150 часов, 2-125 часов, 2-100 часов, 2-90 часов, 2-80 часов, 2-70 часов, 2-60 часов, 2-50 часов, 2-40 часов, 2-35 часов, 2-30 часов, 2-25 часов, 2-20 часов, 2-15 часов, 2-10 часов, 2-9 часов, 2-8 часов, 2-7 часов, 2-6 часов, 2-5 часов, 2-4 часов, 2-3 часов, 5-175 часов, 10-150 часов, 15-125 часов, 20-100 часов, 25-75 часов или 30-60 часов.
Е. Конъюгаты связывающих сывороточный альбумин аднектинов
В соответствии с конкретными аспектами настоящее изобретение относится к конъюгатам, содержащим связывающий сывороточный альбумин аднектин и по меньшей мере один дополнительный фрагмент (например, терапевтический фрагмент). Дополнительный фрагмент может быть пригоден для любой диагностической, визуализационной или терапевтической цели.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин аднектин гибридизирован со вторым фрагментом, который представляет собой малую органическую молекулу, нуклеиновую кислоту, пептид или белок. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающий сывороточный альбумин аднектин гибридизирован с терапевтическим фрагментом, который нацелен на рецепторы, лиганды рецепторов, белки вирусной оболочки, белки иммунной системы, гормоны, ферменты, антигены или сигнальные белки клеток. Гибрид можно сформировать путем присоединения второго фрагмента к любому концу связывающего сывороточный альбумин аднектина, т. е. связывающий сывороточный альбумин аднектин-терапевтическая молекула или терапевтическая молекула-связывающий сывороточный альбумин аднектин.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке фрагмента, гибридизированного со связывающим сывороточный альбумин аднектином повышен относительно периода полужизни в сыворотке фрагмента без гибридизации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида связывающего сывороточный альбумин аднектина по меньшей мере на 20, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1500, 1800, 1900, 2000, 2500 или 3000% дольше относительно периода полужизни в сыворотке фрагмента без гибридизации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида связывающего сывороточный альбумин аднектина на 20-3000%, например, 40-3000%, 60-3000%, 80-3000%, 100-3000%, 120-3000%, 150-3000%, 180-3000%, 200-3000%, 400-3000%, 600-3000%, 8003000%, 1000-3000%, 1200-3000%, 1500-3000%, 1800-3000%, 1900-3000%, 2000-3000%, 2500-3000%, 20-2500%, 20-2000%, 20-1900%, 20-1800%, 20-1500%, 20-1200%, 20-1000%, 20800%, 20-600%, 20-400%, 20-200%, 20-180%, 20-150%, 20-120%, 20-100%, 20-80%, 20-60%, 20-40%, 50-2500%, 100-2000%, 150-1500%, 200-1000%, 400-800% или 500-700% дольше относительно периода полужизни в сыворотке фрагмента без гибридизации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида аднектина РКЕ2 по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 3,5 раза, 4 раза, 4,5 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз,
8 раз, 10 раз, 12 раз, 13 раз, 15 раз, 17 раз, 20 раз, 22 раза, 25 раз, 27 раз, 30 раз, 35 раз, 40 раз или 50 раз больше периода полужизни в сыворотке фрагмента без гибридизации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида аднектина РКЕ2 в 1,550 раз, например, 1,5-40 раз, 1,5-35 раз, 1,5-30 раз, 1,5-27 раз, 1,5-25 раз, 1,5-22 раза, 1,5-20 раз, 1,5-17 раз, 1,5-15 раз, 1,5-13 раз, 1,5-12 раз, 1,5-10 раз, 1,5-9 раз, 1,5-8 раз, 1,5-7 раз, 1,56 раз, 1,5-5 раз, 1,5-4,5 раза, 1,5-4 раз, 1,5-3,5 раза, 1,5-3 раза, 1,5-2,5 раза, 1,5-2 раза, 2-50 раз, 2,5-50 раз, 3-50 раз, 3,5-50 раз, 4-50 раз, 4,5-50 раз, 5-50 раз, 6-50 раз, 7-50 раз, 8-50 раз, 10-50 раз, 12-50 раз, 13-50 раз, 15-50 раз, 17-50 раз, 20-50 раз, 22-50 раз, 25-50 раз, 27-50 раз, 30-50 раз, 40-50 раз, 2-40 раз, 5-35 раз, 10-20 раз или 10-15 раз больше периода полужизни в сыворотке фрагмента без гибридизации со связывающим сывороточный альбумин аднектином. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида связывающего сывороточный альбумин аднектина составляет по меньшей мере 2 часа, 2,5 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 15 часов, 20 часов, 25 часов, 30 часов, 35 часов, 40 часов, 50 часов, 60 часов, 70 часов, 80 часов, 90 часов, 100 часов, 110 часов, 120 часов, 130 часов, 135 часов, 140 часов, 150 часов, 160 часов или 200 часов. В соответствии с конкретными вариантами осуществления период полужизни в сыворотке гибрида связывающего сывороточный альбумин аднектина составляет 2-200 часов, 2,5-200 часов, 3-200 часов, 4-200 часов, 5-200 часов, 6-200 часов, 7200 часов, 8-200 часов, 9-200 часов, 10-200 часов, 15-200 часов, 20-200 часов, 25-200 часов, 30-200 часов, 35-200 часов, 40-200 часов, 50-200 часов, 60-200 часов, 70-200 часов, 80-200 часов, 90-200 часов, 100-200 часов, 125-200 часов, 150-200 часов, 175-200 часов, 190-200 часов, 2-190 часов, 2-175 часов, 2-150 часов, 2-125 часов, 2-100 часов, 2-90 часов, 2-80 часов, 2-70 часов, 2-60 часов, 2-50 часов, 2-40 часов, 2-35 часов, 2-30 часов, 2-25 часов, 2-20 часов, 2-15 часов, 2-10 часов, 2-9 часов, 2-8 часов, 2-7 часов, 2-6 часов, 2-5 часов, 2-4 часов, 2-3 часов, 5-175 часов, 10-150 часов, 15-125 часов, 20-100 часов, 25-75 часов или 30-60 часов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления гибридные белки связывающего сывороточный альбумин аднектина связываются с HSA с KD, составляющей менее 3 мкМ, 2,5 мкМ, 2 мкМ, 1,5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 100 пМ, 100 пМ, 50 пМ или 10 пМ. KD может, например, находиться в диапазоне от 0,1
нМ до 50 нМ, от 0,1 нМ до 100 нМ, от 0,1 нМ до 1 мкМ, от 0,5 нМ до 50 нМ, от 0,5 нМ до 100 нМ, от 0,5 нМ до 1 мкМ, от 1 нМ до 50 нМ, от 1 нМ до 100 нМ или от 1 нМ до 1 мкМ.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтический фрагмент может быть напрямую или опосредовано связан со связывающим сывороточный альбумин аднектином при помощи описанного в настоящем документе полимерного линкера. Полимерные линкеры можно применять для оптимального изменения расстояния между каждым компонентом гибрида для создания белкового гибрида с одной или несколькими из следующих характеристик: 1) уменьшенные или увеличенные стерические затруднения связывания одного или нескольких белковых доменов при связывании с представляющим интерес белком, 2) повышенная стабильность или растворимость белка, 3) пониженная агрегация белка и 4) повышенная общая авидность или аффинность белка.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления описанные в настоящем документе гибриды связаны со связывающим сывороточный альбумин аднектином с помощью полипептидного линкера, имеющего сайт узнавания протеазами, который расщепляется протеазой в крови или целевой ткани. Такие варианты осуществления можно применять для высвобождения терапевтического белка для лучшей доставки или улучшения терапевтических свойств или более эффективной продуктивности.
Дополнительные линкеры или спэйсеры можно внести на С-конце 10Fn3 домена между 10Fn3 доменом и полипептидным линкером.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтический фрагмент присоединен к связывающему сывороточный альбумин аднектину посредством биосовместимого полимера, такого как полимерный сахар. Полимерный сахар может включать сайт ферментативного расщепления, который расщепляется ферментом в крови или целевой ткани. Такие варианты осуществления можно применять для высвобождения терапевтических белков для лучшей доставки или улучшения терапевтических свойств или более эффективной продуктивности.
Описываемые в настоящем документе гибридные молекулы связывающего сывороточный альбумин аднектина пригодны для повышения периода полужизни терапевтического фрагмента путем создания гибрида между терапевтическим фрагментом и связывающим сывороточный альбумин аднектином. Такие гибридные молекулы можно применять для лечения состояний, которые отвечают на биологическую активность
содержащегося в гибриде терапевтического фрагмента. Настоящее изобретение относится к применению гибридных молекул связывающего сывороточный альбумин Fn3 при заболеваниях, вызванных нарушением регуляции любого из приведенных белков или молекул.
В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления терапевтический фрагмент, который соединен (либо на С-конце, либо на N-конце) со связывающим сывороточный альбумин аднектином, представляет собой VEGF, VEGF-R1, VEGF-R2, VEGF-R3, Her-1, Her-2, Her-3, EGF-I, EGF-2, EGF-3, альфаЗ, cMet, ICOS, CD40L, LFA-I, с-Met, ICOS, LFA-I, IL-6, B7.1, W1.2, OX40, IL-lb, TACI, IgE, BAFF или BLys, TPO-R, CD19, CD20, CD22, CD33, CD28, IL-I-R1, TNF-альфа, TRAIL-R1, рецептор комплемента 1, FGFa, остеопонтин, витронектин, эфрин А1-А5, эфрин В1-ВЗ, альфа-2-макроглобулин, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CXCL16, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, PDGF, TGFb, GMCSF, SCF, p40 (IL12/IL23), ILlb, ILla, ILlra, IL2, IL3, IL4, IL5, IL6, IL8, ILIO, IL12, IL15, IL23, Fas, FasL, лиганд Flt3, 41BB, ACE, ACE-2, KGF, FGF-7, SCF, нетрин1,2, IFNa,b,g, каспаза-2,3,7,8,10, ADAM S1,S5,8,9,15,TS1,TS5; адипонектин, ALCAM, ALK-I, APRIL, аннексии V, ангиогенин, амфирегулин, ангиопоэтин-1,2,4, B7-1/CD80, В7-2/CD86, В7-Н1, В7-Н2, В7-НЗ, Bcl-2, BACE-I, ВАК, ВСАМ, BDNF, bNGF, bECGF, ВМР2,3,4,5,6,7,8; CRP, кадгерин 6, 8, 11; катепсин A,B,C,D,E,L,S,V,X; CD1 la/LFA-1, LFA-3, GP2b3a, рецептор GH, F белок RSV, IL-23 (p40, pi9), IL-12, CD80, CD86, CD28, CTLA-4, альфа4-бета1, альфа4-бета7, TNF/лимфотоксин, IgE, CD3, CD20, IL-6, IL-6R, BLYS/BAFF, IL-2R, HER2, EGFR, CD33, CD52, дигоксин, Rho (D), белок вируса ветряной оспы, белок вируса гепатита, белок CMV, белок возбудителя столбняка, белок вируса коровьей оспы, антитоксин против змеиного яда, ботулинический белок, Trail-Rl, Trail-R2, cMet, представители семейства TNF-R, такие как LA NGF-R, CD27, CD30, CD40, CD95, рецептор а/b лимфотоксина, Wsl-I, TL1A/TNFSF15, BAFF, В AFF-R/TNFRSF13 С, TRAIL R2/TNFRSF10B, TRAIL R2/TNFRSF10B, Fas/TNFRSF6 CD27/TNFRSF7, DR3/TNFRSF25, HVEM/TNFRSF14, TROY/TNFRSF19, CD40 лиганд/ТМР8Р5, BCMA/TNFRSFl 7, CD30/TNFRSF8, LIGHT/TNFSF14, 4-1BB/TNFRSF9, CD40/TNFRSF5, GITR/[raMMa]NFRSF 18, остеопротегерин/TNFRSFl IB, RANK/TNFRSF1 IA, TRAIL R3/TNFRSF10C, TRAIL/TNFSFIO, TRANCE/RANK L/TNFSF11, 4-1BB лиганд/Т№8Р9, TWEAK/TNFSF12,
CD40 лиганд/TNFSFS, Fas лиганд/TNFSFe, RELT/TNFRSF19L, APRIL/TNFSF13, DcR3/TNFRSF6B, TNF RI/TNFRSFIA, TRAIL Rl/TNFRSFIOA, TRAIL R4/TNFRSF10D, CD30 лиганд/TNFSFS, GITR лиганд/TNFSFlS, TNFSF18, TACLTNFRSF13B, NGF R/TNFRSF16, OX40 лиганд/ТОТ8Р4, TRAIL R2/TNFRSF10B, TRAIL R3/TNFRSF10C, TWEAK R/TNFRSF12, BAFF/BLyS/TNFSFl 3, DR6/TNFRSF21, TNF^b В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления терапевтический фрагмент, который соединен (либо на С-конце, либо на N-конце) со связывающим сывороточный альбумин аднектином, представляет собой любой из приведенных далее белков или связывающихся с ним белков: 4ЕВР1, 14-3-3 дзета, 53ВР1, 2B4/SLAMF4, CCL21/6CKHH, 4-1BB/TNFRSF9, 8D6A, 4-1ВВ лиганд/Т№8Р9, 8-оксо-сЮ, 4-амино-1,8-нафталимид, А2В5, аминопептидаза LRAP/ERAP2, АЗЗ, аминопептидаза N/ANPEP, Aag, аминопептидаза P2/XPNPEP2, ABCG2, аминопептидаза P1/XPNPEP1, АСЕ, аминопептидаза PILS/ARTS1, АСЕ-2, амнионлесс, актин, амфирегулин, бета-актин, АМРК альфа 1/2, активин А, АМРК альфа 1, активин АВ, АМРК альфа 2, активин В, АМРК бета 1, активин С, АМРК бета 2, активин RTA/ALK-2, андроген R/NR3C4, активин RTB/ALK-4, ангиогенин, активин RTIA, ангиопоэтин-1, активин RIIB, ангиопоэтин-2, ADAMS, ангиопоэтин-3, ADAM9, ангиопоэтин-4, ADAM10, ангиопоэтин-подобный фактор 1, ADAM12, ангиопоэтин-подобный фактор 2, ADAM15, ангиопоэтин-подобный фактор 3, TACE/ADAM17, ангиопоэтин-подобный фактор 4, ADAM19, ангиопоэтин-подобный фактор 7/CDT6, ADAM33, ангиостатин, ADAMTS4, аннексии А1/аннексин I, ADAMTS5, аннексии А7, ADAMTS1, аннексии А10, ADAMTSL-1/пунктин, аннексии V, адипонектин/АсгрЗО, ANP, AEBSF, АР-сайт, аггрекан, APAF-I, агрин, АРС, AgRP, АРЕ, AGTR-2, APJ, AIF, APLP-I, Akt, APLP-2, Aktl, аполипопротеин Al, Akt2, аполипопротеин В, Akt3, АРР, сывороточный альбумин, APRIL/TNFSF13, ALCAM, ARC, ALK-I, артемин, ALK-7, арилсульфатаза AJARSA, щелочная фосфатаза, А8АН2/М-ацилсфингозин амидогидролаза-2, альфа 2и-глобулин, ASC, альфа-1-кислый гликопротеин, ASGR1, альфа-фетопротеин, ASK1, ALS, ATM, амелобластический ATRIP, AMICA/JAML, Aurora А, AMIGO, Aurora В, AMIG02, аксин-1, AMIG03, Axl, аминоацилаза/ACYl,
азуроцидин/САР37/НВР, аминопептидаза A/ENPEP, B4GALT1, BIM, B7-1/CD80, 6-биотин-17-NAD, B7-2/CD86, BLAME/SLAMF8, B7-H1/PD-L1, CXCL13/BLC/BCA-1, В7-Н2, BLIMP 1, В7-НЗ, BIk, В7-Н4, BMI-I, BACE-I, ВМР-1/РСР, BACE-2, BMP-2, Bad, BMP-3, BAFF/TNFSF13B, BMP-3b/GDF-10, BAFF R/TNFRSF 13C, BMP-4, Bag-1, BMP-5, ВАК, BMP-6, BAMBI/NMA, BMP-7, BARD 1, BMP-8, Bax, BMP-9, BCAM, BMP-10, Bel-10, BMP-15/GDF-9B, Bcl-2, BMPR-IA/ALK-3, Bcl-2 родственный белок Al, BMPR-IB/ALK-6, Bcl-w, BMPR-II, Bcl-x, BNIP3L, Bcl-xL, BOC, BCMA/TNFRSF17, BOK, BDNF, BPDE, бензамид, брахиурия, общая бета-цепь, B-Raf, бета IG-H3, CXCL14/BRAK, бета-целлюлин, BRCA1, бета-дефензин 2, BRCA2, BID, BTLA, бигликан, Bub-1, Bik-подобный белок-убийца, c-jun, CD90/Thyl, c-Rel, CD94, CCL6/C10, CD97, CIqRl/CD93, CD151, ClqTNFl, CD160, ClqTNF4, CD163, ClqTNF5, CD164, компонент комплемента CIr, CD200, компонент комплемента CIs, CD200 Rl, компонент комплемента C2, CD229/SLAMF3, компонент комплемента СЗа, CD23/Fc эпсилон R11, компонент комплемента C3d, CD2F-10/SLAMF9, компонент комплемента С5а, CD5L, кадгерин-4Л^-кадгерин, CD69, кадгерин-6, CDC2, кадгерин-8, CDC25A, кадгерин-11, CDC25B, кадгерин-12, CDCP1, кадгерин-13, CDO, кадгерин-17, CDX4, Е-кадгерин, CEACAM-l/CD66a, N-кадгерин, СЕАСАМ-6, Р-кадгерин, Cerberus 1, VE-кадгерин, CFTR, кальбиндин D, cGMP, кальциневрин A, Chem R23, кальциневрин В, хемерин, калретикулин-2, наборы образцов хемокинов, СаМ-киназа II, хитиназа 3-подобный фактор 1, сАМР, хитотриозидаза/СШТ1, каннабиноид Rl, Chkl, каннабиноид R2/CB2/CNR2, Chk2, CAR/NR1I3, CHL-1/L1CAM-2, карбоангидраза I, холинацетилтрансфераза/СЬАТ, карбоангидраза II, хондролектин, карбоангидраза III, хор дин, карбоангидраза IV, хордин-подобный фактор 1, карбоангидраза VA, хордин-подобный фактор 2, карбоангидраза VB, CINC-I, карбоангидраза VI, CINC-2, карбоангидраза VII, CINC-3, карбоангидраза VTII, класпин, карбоангидраза IX, клаудин-6, карбоангидраза X, CLC, карбоангидраза XII, CLEC-I, карбоангидраза XIII, CLEC-2, карбоангидраза XIV, CLECSF 13/CLEC4F, карбоксиметиллизин, CLECSF8, карбоксипептидаза А1/СРА1, CLF-I, карбоксипептидаза А2, CL-P1/COLEC12, карбоксипептидаза А4, кластерин, карбоксипептидаза В1, кластерин-подобный фактор 1, карбоксипептидаза Е/СРЕ, CMG-2, карбоксипептидаза XI, CMV UL146, кардиотрофин-1, CMV UL147, карнозиндипептидаза 1, CNP, Caronte, CNTF, CART, CNTF R альфа, каспаза, фактор коагуляции П/тромбин, каспаза-1, фактор коагуляции II 1/тканевой фактор, каспаза
2, фактор коагуляции VTI, каспаза-3, фактор коагуляции X, каспаза-4, фактор коагуляции ХГ, каспаза-6, фактор коагуляции XIV/белок С, каспаза-7, COCO, каспаза-8, когезин, каспаза-9, коллаген I, каспаза-10, коллаген II, каспаза-12, коллаген IV, каспаза-13, общая гамма-цепьЯЬ-2 R гамма, пептидные ингибиторы каспаз, СОМР/тромбоспондин-5, каталаза, компонент комплемента CIrLP, бета-катенин, компонент комплемента ClqA, катепсин 1, компонент комплемента ClqC, катепсин 3, фактор D комплемента, катепсин 6, фактор I комплемента, катепсин A, MASP3 комплемента, катепсин В, коннексин 43, катепсин C/DPPI, контактин-1, катепсин D, контактин-2/TAGl, катепсин Е, контактин-4, катепсин F, контактин-5, катепсин Н, корин, катепсин L, корнулин, катепсин О, CORS26/ClqTNF,3, катепсин S, кортикальные стволовые клетки крысы, катепсин V, кортизол, катепсин XITJ?, COUP-TF I/NR2F1, СВР, COUP-TF II/NR2F2, CCI, COX-I, ССК-А R, СОХ-2, CCL28, CRACC/SLAMF7, CCR1, С-реактивный белок, CCR2, креатинкиназа, мышечная/СКММ, CCR3, креатинин, CCR4, CREB, CCR5, CREG, CCR6, CRELD1, CCR7, CRELD2, CCR8, CRHBP, CCR9, CRHR-I, CCRIO, CRIM1, CD155/PVR, Cripto, CD2, CRISP-2, CD3, CRISP-3, CD4, Crossveinless-2, CD4+/45RA-, CRTAM, CD4+/45RO, CRTH-2, CD4+/CD62L-/CD44, CRY1, CD4+/CD62L+/CD44, Cryptic, CD5, CSB/ERCC6, CD6, CCL27/CTACK, CD8, CTGF/CCN2, CD8+/45RA-, CTLA-4, CD8+/45RO-, кубилин, CD9, CX3CR1, CD14, CXADR, CD27/TNFRSF7, CXCL16, CD27 лиганд/ТОТ8Р7, CXCR3, CD28, CXCR4, CD30/TNFRSF8, CXCR5, CD30 лиганд/TNFSFS, CXCR6, CD31/PECAM-1, циклофилин A, CD34, Cyr61/CCN1, CD36/SR-B3, цистатин A, CD38, цистатин В, CD40/TNFRSF5, цистатин С, CD40 лиганд/TNFSFS, цистатин D, CD43, цистатин Е/М, CD44, цистатин F, CD45, цистатин Н, CD46, цистатин Н2, CD47, цистатин S, CD48/SLAMF2, цистатин SA, CD55/DAF, цистатин SN, CD58/LFA-3, цитохром С, CD59, апоцитохром С, CD68, голоцитохром с, CD72, цитокератин 8, CD74, цитокератин 14, CD83, цитокератин 19, CD84/SLAMF5, цитонин, D6, DISP1, DAN, Dkk-1, DANCE, Dkk-2, DARPP-32, Dkk-3, DAX1/NR0B1, Dkk-4, DCC, DLEC, DCIR/CLEC4A, DLL1, DCAR, DLL4, DcR3/TNFRSF6B, d-люциферин, DC-SIGN, ДНК-лигаза IV, DC-SIGNR/CD299, ДНК-полимераза бета, DcTRAIL R1/TNFRSF23, DNAM-I, DcTRAIL R2/TNFRSF22, DNA-PKcs, DDR1, DNER, DDR2, допа-декарбоксилаза/DDC, DEC-205, DPCR-I, декапентаплегический транскрипт, DPP6, декорин, DPP A4, дектин-1/CLEC7A, DPPA5/ESG1, дектин-2/СЬЕС6А, DPPII/QPP/DPP7, DEP-1/CD148, DPPIV/CD26, Desert Hedgehog, DR3/TNFRSF25, десмин, DR6/TNFRSF21, десмоглеин-l, DSCAM,
десмоглеин-2, DSCAM-L1, десмоглеин-3, DSPG3, Dishevelled-1, Dtk, Dishevelled-3, динамин, EAR2/NR2F6, EphA5, ECE-I, EphA6, ECE-2, EphA7, ECF-L/CHI3L3, EphA8, ECM-I, EphBl, Ecotin, EphB2, EDA, EphB3, EDA-A2, EphB4, EDAR, EphB6, EDG-I, эфрин, EDG-5, эфрин-Al, EDG-8, эфрин-А2, eEF-2, эфрин-АЗ, EGF, эфрин-А4, EGFR, эфрин-А5, EGR1, эфрин-В, EG-VEGF/PK1, эфрин-В 1, eIF2 альфа, эфрин-В2, eIF4E, эфрин-ВЗ, Elk-I, эпиген, EMAP-II, эпиморфин/синтаксин 2, EMMPRIN/CD147, эпирегулин, CXCL5/ENA, EPR-l/Xa рецептор, эндокан, ErbB2, эндоглин/СО105, ЕгЬВЗ, эндогликан, ErbB4, эндонуклеаза III, ERCC1, эндонуклеаза IV, ERCC3, эндонуклеаза V, ERK1/ERK2, эндонуклеаза VIII, ERK1, эндорепеллин/перлекан, ERK2, эндостатин, ERK3, эндотелин-1, ERK5/BMK1, Engrailed-2, ERR альфа/№13В1, EN-RAGE, ERR 6eTa/NR3B2, энтеропептидаза/энтерокиназа, ERR raMMa/NR3B3, CCL1 1/эотаксин, эритропоэтин, ССЬ24/эотаксин-2, эритропоэтин R, ССЬ26/эотаксин-3, ESAM, EpCAM/TROP-1, ER альфа/ШЗА1, EPCR, ER 6eTa/NR3A2, Eph, экзонуклеаза III, EphAl, экзостозин-подобный фактор 2/EXTL2, EphA2, экзостозин-подобный фактор 3/EXTL3, Eph A3, FABP1, FGF-BP, FABP2, FGF Rl-4, FABP3, FGF Rl, FABP4, FGF R2, FABP5, FGF R3, FABP7, FGF R4, FABP9, FGF R5, фактор В комплемента, Fgr, FADD, FHR5, FAM3A, фибронектин, FAM3B, фиколин-2, FAM3C, фиколин-3, FAM3D, FITC, белок активации фибробластов альфа/FAP, FKBP38, Fas/TNFRSF6, Flap, Fas лиганд/ЮТ8Р6, FLIP, FATP1, FLRG, FATP4, FLRT1, FATP5, FLRT2, Fc гамма R1/CD64, FLRT3, Fc гамма RIIB/CD32b, Flt-3, Fc гамма RIIC/CD32c, Flt-3 лиганд, Fc гамма RIIA/CD32a, фоллистатин, Fc гамма RIII/CD16, фоллистатин-подобный фактор 1, FcRHl/IRTA5, FosB/G0S3, FcRH2/IRTA4, FoxD3, FcRH4/IRTAl, FoxJl, FcRH5/IRTA2, FoxP3, Fc рецептор-подобный фактор 3/CD16-2, Fpg, FEN-I, FPR1, фетуин A, FPRL1, фетуин В, FPRL2, FGF кислый, СХЗСЫ/фракталкин, FGF основный, Frizzled-1, FGF-3, Frizzled-2, FGF-4, Frizzled-3, FGF-5, Frizzled-4, FGF-6, Frizzled-5, FGF-8, Frizzled-6, FGF-9, Frizzled-7, FGF-IO, Frizzled-8, FGF-11, Frizzled-9, FGF-12, Frk, FGF-13, sFRP-1, FGF-16, sFRP-2, FGF-17, sFRP-3, FGF-19, sFRP-4, FGF-20, фурин, FGF-21, FXR/NR1H4, FGF-22, Fyn, FGF-23, G9a/EHMT2, GFR альфа-3/GDNF R альфа-3, GABA-A-R альфа 1, GFR альфа-4/GDNF R альфа-4, GABA-A-R альфа 2, GITR/TNFRSFl 8, GABA-A-R альфа 4, GITR лиганд/TNFSFl 8, GABA-A-R альфа 5, GLI-I, GABA-A-R альфа 6, GLI-2, GABA-A-R бета 1, GLP/EHMT1, GABA-A-R бета 2, GLP-IR, GABA-A-R бета 3, глюкагон, GABA-A-R гамма 2, глюкозамин-(№ацетил)-6-сульфатаза/ОШ, GABA-B-R2, GIuRl, GAD1/GAD67, GluR2/3, GAD2/GAD65,
GluR2, GADD45 альфа, GluR3, GADD45 бета, Glutl, GADD45 гамма, Glut2, галектин-1, Glut3, галектин-2, Glut4, галектин-3, Glut5, галектин-3 BP, глутаредоксин 1, галектин-4, глицин R, галектин-7, гликофорин А, галектин-8, глипикан 2, галектин-9, глипикан 3, GalNAc4S-6ST, глипикан 5, GAP-43, глипикан 6, GAPDH, GM-CSF, Gasl, GM-CSF R альфа, Gas6, GMF-бета, GASP-1/WFIKKNRP, gpl30, GASP-2/WFIKKN, гликогенфосфорилаза BB/GPBB, GATA-I, GPR15, GATA-2, GPR39, GATA-3, GPVI, GATA-4, GR/NR3C1, GATA-5, Gr-1/Ly-6G, GATA-6, гранулизин, GBL, гранзим A, GCNF/NR6A1, гранзим В, CXCL6/GCP-2, гранзим D, G-CSF, гранзим G, G-CSF R, гранзим H, GDF-I, GRASP, GDF-3 GRB2, GDF-5, Gremlin, GDF-6, GRO, GDF-7, CXCL1/GRO альфа, GDF-8, CXCL2/GRO бета, GDF-9, CXCL3/GRO гамма, GDF-11, гормон роста, GDF-15, гормон роста R, GDNF, GRP75/HSPA9B, GFAP, GSK-3 альфа/бета, GFI-I, GSK-3 альфа, GFR альфа-1/GDNF R альфа-1, GSK-3 бета, GFR альфа-2/GDNF R альфа-2, EZFIT, H2AX, гистидин, H60, HM74A, HAI-I, HMGA2, HAI-2, HMGB1, HAI-2A, TCF-2/HNF-1 бета, HAI-2B, HNF-3 6eTa/FoxA2, HANDl, HNF-4 альфаМЯ2А1, HAPLN1, HNF-4 raMMa/NR2A2, трипсин-подобная протеаза воздухоносных путей/НАТ, HO-1/HMOX1/HSP32, HB-EGF, НО-2/НМОХ2, CCL 14a/HCC-1, HPRG, CCL14b/HCC-3, Hrk, CCL16/HCC-4, HRP-I, альфа HCG, HS6ST2, Hck, HSD-I, HCR/CRAM-A/B, HSD-2, HDGF, HSP 10/EPF, гемоглобин, HSP27, Hepassocin, HSP60, HES-1, HSP70, HES-4, HSP90, HGF, HTRA/протеаза Do, активатор HGF, HTRA1/PRSS11, HGF R, HtrA2/Omi, HIF-I альфа, HVEM/TNFRSF14, HIF-2 альфа, гиалуронан, HIN-1/секретоглобулин 3A1, 4-гидроксиноненал, Hip, ССЫЯ-309/ТСА-3, IL-IO, cIAP (общая), IL-IO R альфа, cIAP-l/HIAP-2, IL-10 R бета, с1АР-2/ШАР-1, IL-11, IBSP/сиалопротеин II, EL-11 R альфа, ICAM-1/CD54, IL-12, ICAM-2/CD102,1Ь-12ЯЬ-23 p40, ICAM-3/CD50, IL-12 R бета 1, ICAM-5, IL-12 R бета 2, 1С AT, IL-13, ICOS, IL-13 R альфа 1, идуронат-2-сульфатазаЯЮв, IL-13 R альфа 2, EFN, IL-15, IFN-альфа, IL-15 R альфа, IFN-альфа 1, IL-16, IFN-альфа 2, IL-17, IFN-альфа 4b, IL-17 R, IFN-альфа A, IL-17 RC, IFN-альфа B2, IL-17 RD, IFN-альфа C, IL-17B, IFN-альфа D, IL-17B R, IFN-альфа F, IL-17C, IFN-альфа G, IL-17D, IFN-альфа H2, IL-17E, IFN-альфа I, IL-17F, IFN-альфа Л, IL-^L-1F4, IFN-альфа К, IL-18 BPa, IFN-альфа WA, IL-18 BPc, IFN-альфа/бета Rl, IL-18 BPd, IFN-альфа/бета R2, IL-18 R альфаЯЕ-l R5, IFN-бета, IL-18 R бета/IL-l R7, IFN-гамма, IL-19, IFN-гамма Rl, IL-20, IFN-гамма R2, IL-20 R альфа, IFN-омега, IL-20 R бета, IgE, IL-21, IGFBP-I, IL-21 R, IGFBP-2, IL-22, IGFBP-3, IL-22 R, IGFBP-4, IL-22BP, IGFBP-5, IL-23, IGFBP-6, IL-23 R, IGFBP-L1, IL-24,
IGFBP-rpl/IGFBP-7, IL-26/AK155, IGFBP-rPIO, IL-27, IGF-I, EL-28A, IGF-I R, IL-28B, IGF-П, IL-29/EFN-лямбда 1, IGF-II R, IL-31, IgG, EL-31 RA, IgM, IL-32 альфа, IGSF2, IL-33, IGSF4A/SynCAM, ILT2/CD85J, IGSF4B, ILT3/CD85k, IGSF8, ILT4/CD85d, IgY, ILT5/CD85a, IkB-бета, ILT6/CD85e, IKK альфа, Indian Hedgehog, IKK эпсилон, INSRR, ЕКК гамма, инсулин, IL-1 альфаЛЬ-1Е1, инсулин R/CD220, IL-1 бетаЯЬ-1Е2, проинсулин, 1Ь-1гаЯЬ-1ЕЗ, инсулизин/EDE, IL-1F5^IL1 дельта, интегрин альфа 2/CD49b, IL-1F6^IL1 эпсилон, интегрин альфа 3/CD49c, IL-1F7/FIL1 дзета, интегрин альфа 3 бета l/VLA-3, IL-1F8/FIL1 эта, интегрин альфа 4/CD49d, IL-1F9/IL-1 HI, интегрин альфа 5/CD49e, IL-lFmL-lHY2, интегрин альфа 5 бета 1, IL-I RI, интегрин альфа 6/CD49f, 1ЬЯ ЯП, интегрин альфа 7, 1ЬЯ ЮЯЬ-1 R АсР, интегрин альфа 9, IL-I R4/ST2, интегрин альфа E/CD103,IL-I R6ЯL-l R гр2, интегрин альфа L/CD1 1а, 1ЬЯ R8, интегрин альфа L бета 2,1ЬЯ R9, интегрин альфа M/CD1 lb, IL-2, интегрин альфа М бета 2, IL-2 R альфа, интегрин альфа V/CD51, IL-2 R бета, интегрин альфа V бета 5, IL-3, интегрин альфа V бета 3, IL-3 Rальфа, интегрин альфа V бета 6, IL-3 R бета, интегрин альфа XJCD1 Ic, IL-4, интегрин бета 1/CD29, IL-4 R, интегрин бета 2/CD18, IL-5, интегрин бета 3/CD61, IL-5 R альфа, интегрин бета 5, IL-6, интегрин бета 6, IL-6 R, интегрин бета 7, IL-7, CXCL10№10/CRG-2, IL-7 R альфа/CD 127, IRAKI, CXCRmL-8 RA, IRAK4, CXCR2/IL-8 RB, ERS-I, CXCL8/IL-8, Islet-1, IL-9, CXCL1 1/I-TAC, IL-9 R, Jagged 1, JAM-4flGSF5, Jagged 2, JNK, JAM-A, JNK1/JNK2, JAM-B/VE-JAM, JNK1, JAM-C, JNK2, кининоген, калликреин ЗЯ^А, каниностатин, калликреин 4, KER/CD158, калликреин 5, KER2D1, калликреин 6/нейрозин, KIR2DL3, калликреин 7, KIR2DL4/CD158d, калликреин 8/нейропсин, KIR2DS4, калликреин 9, KTR3DL1, калликреин плазмыЯСЬКВ1, KER3DL2, калликреин 10, Kirrel2, калликреин 11, KLF4, калликреин 12, KLF5, калликреин 13, KLF6, калликреин 14, Klotho, калликреин 15, Klotho бета, КС, KOR, Keapl, Kremen-1, Kell, Kremen-2, KGF/FGF-7, LAG-3, LINGO-2, LAIR1, липин 2, LAIR2, липокалин-1, ламинин альфа 4, липокалин-2ЛЧОАЬ, ламинин гамма 1,5-липоксигеназа, ламинин I, LXR альфаЯЖШЗ, ламинин S, LXR бетаЯЖ1Н2, ламинин-1, ливин, ламинин-5, LEX, LAMP, LMIR1/CD300A, лангерин, LMIR2/CD300c, LAR, LMIR3/CD300LF, латексин, LMIR5/CD300LB, лайилин, LMIR6/CD300LE, LBP, LM02, LDL R, LOX-1/SR-E1, LECT2, LRH-1/NR5A2, LEDGF, LRIG1, Lefty, LRIG3, Lefty-1, LRP-I, Lefty-A, LRP-6, легумаин, LSECtin/CLEC4G, лептин, люмикан, лептин R, CXCL15^ungkine, лейкотриен B4, XCLl/лимфотактин, лейкотриен B4 Rl, лимфотоксин, LEF, лимфотоксин 6eTa/TNFSF3, LIF
R альфа, лимфотоксин бета R/TNFRSF3, LIGHT/TNFSF14, Lyn, лимитин, Lyp, LIMPII/SR-В2, гомолог лизилоксидазы 2, LIN-28, LYVE-I, LINGO-I, альфа-2-макроглобулин, CXCL9/MIG, MAD2L1, мимекан, MAdCAM-1, миндин, MafB, минералокортикоид R/NR3C2, MafF, CCL3L1/MIP-1 альфа-изоформа LD78 бета, MafG, CCL3/MIP-1 альфа, MafK, CCL4L1/LAG-1, MAG/Siglec-4-а, CCL4/MIP-1 бета, MANF, CCL15/MEP-1 дельта, МАР2, CCL9/10/MIP-1 гамма, МАРК, MIP-2, марапсин/панкреазин, CCL19/MIP-3 бета, MARCKS, CCL20/MIP-3 альфа, MARCO, MIP-I, Mashl, MIP-II, матрилин-2, MIP-III, матрилин-3, MIS/АМН, матрилин-4, MIS RII, матриптаза/8Т14, МГХЫ, MBL, MKK3/MKK6, MBL-2, МККЗ, меланокортин 3R/MC3R, MKK4, MCAM/CD146, MKK6, MCK-2, MKK7, Mcl-I, MKP-3, MCP-6, MLH-I, CCL2/MCP-1, MLK4 альфа, МСР-11, ММР, CCL8/MCP-2, ММР-1, CCL7/MCP-3/MARC, ММР-2, CCL13/MCP-4, ММР-3, CCL12/MCP-5, ММР-7, М-CSF, ММР-8, M-CSF R, ММР-9, MCV-типа II, ММР-Ю, MD-I, ММР-1 1, MD-2, ММР-12, CCL22/MDC, ММР-13, MDL- 1/CLEC5A, ММР-14, MDM2, ММР-15, MEA-I, ММР-16/МТЗ-ММР, МЕК1/МЕК2, ММР-24/МТ5-ММР, МЕК1, ММР-25/МТ6-ММР, МЕК2, ММР-26, мелузин, MMR, МЕРЕ, MOG, меприн-альфа, CCL23/MPIF-1, меприн-бета, M-Ras/R-Ras3, Мег, Mrel 1, мезотелин, метеорин MRP1, MSK1/MSK2, метионинаминопептидаза 1, MSK1, метионинаминопептидаза, MSK2, метионинаминопептидаза 2, MSP, MFG-E8, MSP R/Ron, MFRP, Mug, MgcRacGAP, MULT-I, MGL2, Musashi-l, MGMT, Musashi-2, MIA, MuSK, MICA, ДНК-гликозилаза MutY, MICB, MyD88, MICL/CLEC12A, миелопероксидаза, микроглобулин бета 2, миокардин, мидкин, миоцилин, MIF, миоглобин, NAIP NGFI-B raMMa/NR4 A3, Nanog, NgR2/NgRHl, CXCL7/NAP-2, NgR3/NgRH2, Nbsl, нидоген-l/энтактин, NCAM-1/CD56, нидоген-2, NCAM-L1, синтаза оксида азота, нектин-1, нитротирозин, нектин-2/CDl 12, NKG2A, нектин-3, NKG2C, нектин-4, NKG2D, неогенин, NKp30, неприлизин/CDIO, NKp44, неприлизин-2/ММЕЬ1/ММЕЬ2, NKp46/NCRl, нестин, NKp80/KLRFl, NET02, NKX2.5, нетрин-1, NMDA R, NR1 субъединица, нетрин-2, NMDA R, NR2A субъединица, нетрин-4, NMDA R, NR2B субъединица, нетрин-Gla, NMDA R, NR2C субъединица, нетрин-С2а, N-Me-6,7-diOH-TIQ, нейрегулин-1/NRGl, Nodal, нeйpeгyлин-3/NRGЗ, Noggin, нейритин, рецептор Nogo, NeuroDl, Nogo-A, нейрофасцин, NOMO, нейрогенин-l, Nope, нейрогенин-2, норрин, нейрогенин-3, eNOS, нейролизин, iNOS, нейрофизин II, nNOS, нейропилин-1, Notch-1, нейропилин-2, Notch-2, нейропоэтин, Notch-3, нейротримин, Notch-4, нейртурин, NOV/CCN3, NFAM1, NRAGE, NF-H, NrCAM, NFkBl,
NRL, NFkB2, NT-3, NF-L, NT-4, NF-M, NTB-A/SLAMF6, NG2/MCSP, NTH1, NGF R/TNFRSF16, нуклеостемин, бета-NGF, Nurr-1/NR4A2, NGFI-B альфа/№14А1, OAS2, орексин В, ОВСАМ, OSCAR, ОСАМ, OSF-2/периостин, OCIL/CLEC2d, онкостатинМ/OSM, OCILRP2/CLEC21, OSMR бета, Oct-3/4, остеоактивин/GPNMB, OGG1, остеоадгерин, Olig 1, 2, 3, остеокальцин, Oligl, остеокрин, 01ig2, остеопонтин, 01ig3, остеопротегерин/TNFRSFl IB, олигодендроцитный маркер 01, Otx2, олигодендроцитный маркер 04, OV-6, OMgp, OX40/TNFRSF4, оптицин, OX40 лиганд/ТОТ8Р4, орексин A, OAS2, орексин В, ОВСАМ, OSCAR, ОСАМ, OSF-2/периостин, OCIL/CLEC2d, онкостатинМ/OSM, OCILRP2/CLEC2i, OSM R бета, Oct-3/4, остеоактивин/GPNMB, OGG1, остеоадгерин, Olig 1, 2, 3, остеокальцин, Oligl, остеокрин, 01ig2, остеопонтин, 01ig3, остеопротегерин/TNFRSFl IB, олигодендроцитный маркер 01, Otx2, олигодендроцитный маркер 04, OV-6, OMgp, OX40/TNFRSF4, оптицин, OX40 лигандЯШ^Ж, орексин А, RACK1, Ret, Radl, REV-ERB альфа/NRlDl, Radl7, REV-ERB 6eTa/NRlD2, Rad51, Rex-1, Rae-1, RGM-A, Rae-1 альфа, RGM-B, Rae-1 бета, RGM-C, Rae-1 дельта, Rheb, Rae-1 эпсилон, рибосомальный белок S6, Rae-1 гамма, RIP1, Raf-1, ROBOl, RAGE, ROB02, RalA/RalB, ROB03, RalA, ROB04, RalB, ROR/NR1F1-3 (общий), RANK/TNFRSF1 1A, ROR альфа/NRlFl, CCL5/RANTES, ROR raMMa/NRlF3, RaplA/B, RTK-подобный "сиротский" рецептор 1/ROR1, RARaльфa/NRlBl, RTK-подобный "сиротский" рецептор 2/ROR2, RAR 6eTa/NRlB2, RP105, RAR гамма/NRlB3, RP A2, Ras, RSK (общий), RBP4, RSK1/RSK2, RECK, RSK1, Reg 2/PAP, RSK2, Reg I, RSK3, Reg II, RSK4, Reg III, R-спондин 1, Reg Ilia, R-спондин 2, Reg IV, R-спондин 3, релаксин-l, RUNX1/CBFA2, релаксин-2, RUNX2/CBFA1, релаксин-3, RUNX3/CBFA3, RELM альфа, RXR альфа/№2В1, RELM бета, RXR 6eTa/NR2B2, RELT/TNFRSFl 9L, RXR raMMa/NR2B3, резистин, S100A10, SLITRK5, S100A8, SLPI, S100A9, SMAC/Diablo, SIOOB, Smadl, SIOOP, Smad2, SALL1, Smad3, дельта-саркогликан, Smad4, Sca-1/Ly6, Smad5, SCD-I, Smad7, SCF, Smad8, SCFR/c-kit, SMC1, SCGF, альфа-гладкомышечный актин, SCL/Tall, SMUG1, SCP3/SYCP3, Snail, CXCL12/SDF-1, натриево-кальциевый обменник 1, SDNSF/MCro2, Soggy-1, альфа-секретаза, Sonic Hedgehog, гамма-секретаза, S или CS1, бета-секретаза, S или CS3, Е-селектин, сортилин, L-селектин, SOST, Р-селектин, SOX1, семафорин ЗА, SOX2, семафорин ЗС, SOX3, семафорин ЗЕ, SOX7, семафорин 3F, SOX9, семафорин 6А, SOX10, семафорин 6В, SOX 17, семафорин 6С, SOX21 семафорин 6D, SPARC, семафорин 7 А, SPARC-подобный фактор 1, сепараза,
SP-D, серин/треониновой фосфатазы субстрат I, спинезин, серпин А1, F-спондин, серпин
A3, SR-AI/MSR, серпин А4/каллистатин, Src, серпин А5/ингибитор белка С, SREC-I/SR-F1,
серпин А8/ангиотензиноген, SREC-II, серпин В5, SSEA-I, серпин С1/антитромбин-Ш,
SSEA-3, серпин Dl/гепариновый кофактор II, SSEA-4, серпин El/PAI-1, ST7/LRP12, серпин
Е2, стабилин-1, серпин F1, стабилин-2, серпин F2, станниокальцин 1, серпин G1/C1-
ингибитор, станниокальцин 2, серпин 12, STAT1, сывороточный амилоид Al, STAT2, SF-
1/NR5A1, STAT3, SGK, STAT4, SHBG, STAT5a/b, SHIP, STAT5a, SHP/NR0B2, STAT5b,
SHP-I, STATE, SHP-2, VE-статин, SIGIRR, Stella/Dppa3, Siglec-2/CD22, STRO-I, Siglec-
3/CD33, вещество P, Siglec-5, сульфамидаза/SGSH, Siglec-6, сульфатаза-модифицирующий
фактор 1/SUMF1, Siglec-7, сульфатаза-модифицирующий фактор 2/SUMF2, Siglec-9,
SUMOl, Siglec-10, SUM02/3/4, Siglec-11, SUM03, Siglec-F, супероксиддисмутаза,
SIGNR1/CD209, супероксиддисмутаза-1/Си[0099]-2п SOD, SIGNR4,
супероксиддисмутаза-2/Mn-SOD, SIRP бета 1, супероксиддисмутаза-3/EC-SOD, SKI, сурвивин, SLAM/CD150, синапсин I, транспозаза "спящей красавицы", синдекан-I/CD 138, Slit3, синдекан-2, SLITRK1, синдекан-3, SLITRK2, синдекан-4, SLITRK4, TACI/TNFRSF13B, TMEFF 1/томорегулин-1, ТА02, TMEFF2, ТАРР1, ТОТ-альфа/ТОТ8Р IA, CCL17/TARC, ТОТ-бета/TNFSFlB, Таи, TNF RI/TNFRSFIA, TC21/R-Ras2, TNF RII/TNFRSF1B, TCAM-I, TOR, TCCR/WSX-1, TP-I, TC-PTP, TP63/TP73L, TDG, TR, CCL25/TECK, TR альфа/NRlAl, тенасцин С, TR бета 1/NR1A2, тенасцин R, TR2/NR2C1, TER-119, TR4/NR2C2, TERT, TRA-1-85, тестикан 1/SPOCK1, TRADD, тестикан 2/SPOCK2,TRAF-l, тестикан 3/SPOCK3, TRAF-2, TFPI, TRAF-3, TFPI-2, TRAF-4, TGF-альфа, TRAF-6, TGF-бета, TRAIL/TNFSF10, TGF-бета 1, TRAIL Rl /TNFRSFIO A, LAP (TGF-бета 1), TRAIL R2/TNFRSF10B, латентный TGF-бета 1, TRAIL R3/TNFRSF10C, TGF-бета 1.2, TRAIL R4/TNFRSF10D, TGF-бета 2, TRANCE/TNFSF1 1, TGF-бета 3, TfR (трансферрин R), TGF-бета 5, апотрансферрин, латентный TGF-бета bpl, холотрансферрин, латентный TGF-бета bp2, траппин-2/элафин, латентный TGF-бета bp4, TREM-1, TGF-бета Rl/ALK-5, TREM-2, TGF-бета Rll, TREM-3, TGF-бета Rllb, TREML1/TLT-1, TGF-бета RIII, TRF-I, термолизин, TRF-2, тиоредоксин-1, TRH-расщепляющий эктофермент/TRHDE, тиоредоксин-2, TRIMS, тиоредоксин-80, трипептидилпептидаза I, тиоредоксин-подобный фактор 5/TRP14, TrkA, ТНОР1, TrkB, тромбомодулин/С0141, TrkC, тромбопоэтин, TROP-2, тромбопоэтин R, пептид 3 тропонина I, тромбоспондин-1, тропонин Т, тромбоспондин-2,
TROY/TNFRSF 19, тромбоспондин-4, трипсин 1, тимопоэтин, трипсин 2/PRSS2, тимусный хемокин-1, трипсин 3/PRSS3, Tie-1, TpmiTa3a-5/Prss32, Tie-2, триптаза альфа/TPSl, TIM-ЖШ-I/HAVCR, триптаза бета-1/МСРТ-7, TIM-2, триптаза 6eTa-2/TPSB2, TIM-3, триптаза 3ncmiOH/BSSP-4, TIM-4, триптаза гамма-1/TPSG1, TIM-5, триптофангидроксилаза, TIM-6, TSC22, TTMP-I, TSG, TIMP-2, TSG-6, TIMP-3, TSK, TIMP-4, TSLP, TL1A/TNFSF15, TSLP R, TLR1, TSP50, TLR2, бета-Ш тубулин, TLR3, TWEAK/TNFSF12, TLR4, TWEAK R/TNFRSF 12, TLR5, Tyk2, TLR6, фосфотирозин, TLR9, тирозингидроксилаза, TLX/NR2E1, тирозинфосфатазный субстрат I, убиквитин, UNC5H3, Ugi, UNC5H4, UGRP1, UNG, ULBP-I, uPA, ULBP-2, uPAR, ULBP-3, URB, UNC5H1, UVDE, UNC5H2, ваннилоид Rl, VEGF R, VASA, VEGF Rl/Flt-1, вазохибин, VEGF R2/KDR/Flk-1, вазорин, VEGF R3/FU-4, вазостатин, версикан, Vav-1, VG5Q, VCAM-1, VHR, VDR/NR1I1, виментин, VEGF, витронектин, VEGF-B, VLDLR, VEGF-C, vWF-A2, VEGF-D, синуклеин-альфа, Ku70, WASP, Wnt-7b, WIF-I, Wnt-8a WISP-1/CCN4, Wnt-8b, WNK1, Wnt-9a, Wnt-1, Wnt-9b, Wnt-3a, Wnt-lOa, Wnt-4, Wnt-lOb, Wnt-5a, Wnt-11, Wnt-5b, wnvNS3, Wnt7a, XCR1, XPE/DDB1, XEDAR, XPE/DDB2, Xg, XPF, XIAP, XPG, XPA, XPV, XPD, XRCC1, Yes, YY1, EphA4.
Особенный интерес представляют различные ионные каналы человека. Неограничивающие примеры включают В субъединицу 5-гидрокситриптаминового 3 рецептора, предшественника 5-гидрокситриптаминового 3 рецептора, субъединицу С 5-гидрокситриптаминового рецептора 3, белок AAD 14, предшественник альфа-субъединицы белка ацетилхолинового рецептора, предшественник бета-субъединицы белка ацетилхолинового рецептора, предшественник дельта-субъединицы белка ацетилхолинового рецептора, предшественник эпсилон-субъединицы белка ацетилхолинового рецептора, предшественник гамма-субъединица белка ацетилхолинового рецептора, сплайс-вариант b чувствительного к кислой среде ионного канала 3, сплайс-вариант с чувствительного к кислой среде ионного канала 3, чувствительный к кислой среде ионный канал 4, АДФ-рибозопирофосфатазу, митохондриальный предшественник, альфа1 А-потенциал-зависимый кальциевый канал, амилорид-чувствительный катионный канал 1, нейрональный, амилорид-чувствительный катионный канал 2, нейрональный амилорид-чувствительный катионный канал 4, изоформу 2, амилорид-чувствительный натриевый канал, альфа-субъединицу амилорид-чувствительного натриевого канала, бета-субъединицу амилорид-чувствительного натриевого канала, дельта-субъединицу
амилорид-чувствительного натриевого канала, гамма-субъединицу амилорид-чувствительного натриевого канала, аннексии А7, Apical-подобный белок, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 1, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 10, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 11, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 14, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 15, АТФ-чувствительный калиевый канал входящего выпрямления тока 8, альфа12.2 субъединицу кальциевого канала, альфа12.2 субъединицу кальциевого канала, альфаШ субъединицу кальциевого канала, сплайс-вариант дельта19 дельта40 дельта46, альфа субъединицу 1 активируемого кальцием калиевого канала, бета-субъединицу 1 активируемого кальцием калиевого канала, бета-субъединицу 2 активируемого кальцием калиевого канала, бета-субъединицу 3 активируемого кальцием калиевого канала, кальций-зависимый канал переноса ионов хлора-1, катионный канал TRPM4B, CDNA FLJ90453 fis, клон NT2RP3001542, с высокой степенью сходства с доменом тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 6, CDNA FLJ90663 fis, клон PLACE 1005031, с высокой степенью сходства с белком 5 внутриклеточного канала ионов хлора, бета-субъединицу CGMP-зависимого катионного канала, белок канала ионов хлора, белок 2 канала ионов хлора, белок 3 канала ионов хлора, белок 4 канала ионов хлора, белок 5 канала ионов хлора, белок 6 канала ионов хлора, белок канала ионов хлора С1С-Ка, белок канала ионов хлора С1С-КЬ, белок канала ионов хлора, белок 6 внутриклеточный канал ионов хлора скелетной мышцы, белок 3 внутриклеточного канала ионов хлора, белок 4 внутриклеточного канала ионов хлора, белок 5 внутриклеточного канала ионов хлора, белок CHRNA3, белок ОспЗе, белок CLCNKB, белок CNGA4, куллин-5, зависимый от циклической GMP калиевый канал, зависимый от циклических нуклеотидов катионный канал 4, зависимый от циклических нуклеотидов катионный канал альфа 3, зависимый от циклических нуклеотидов катионный канал бета 3, зависимый от циклических нуклеотидов канал нейронов рецепторов обоняния, регулятор трансмембранной проводимости, вызывающий муковисцидоз, тяжелая цепь В-245 цитохрома, предшественник альфа-2/дельта субъединиц дигидропиридин-чувствительного кальциевого канала L-типа, предшественник FXYD домен-содержащего регулятора транспорта ионов 3, предшественник FXYD домен-содержащего регулятора транспорта ионов 5, предшественник FXYD домен-содержащего регулятора транспорта
ионов 6, предшественник FXYD домен-содержащего регулятора транспорта ионов 7, предшественник FXYD домен-содержащего регулятора транспорта ионов 8, G-белок-активируемый калиевый канал входящего выпрямления тока 1, G-белок-активируемый калиевый канал входящего выпрямления тока 2, G-белок-активируемый калиевый канал входящего выпрямления тока 3, G-белок-активируемый калиевый канал входящего выпрямления тока 4, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-1, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-2 предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-3, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-4, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-5, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты альфа-6, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты бета-1, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты бета-2, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты бета-3, предшественник дельта-субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты эпсилон, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты гамма-1, предшественник субъединицы рецептора гамма-аминомасляной кислоты гамма-3, предшественник субъединицы рецептора пи гамма-аминомасляной кислоты, предшественник субъединицы рецептора rho-1 гамма-аминомасляной кислоты, предшественник субъединицы рецептора rho-2 гамма-аминомасляной кислоты, предшественник субъединицы рецептора тета гамма-аминомасляной кислоты, каинатный рецептор GluR6, предшественник глутаматного рецептора 1, предшественник глутаматного рецептора 2, предшественник глутаматного рецептора 3, предшественник глутаматного рецептора 4, глутаматный рецептор 7, глутаматный рецептор В, предшественник субъединицы глутаматного рецептора дельта-1, предшественник ионотропного каинатного глутаматного рецептора 1, предшественник ионотропного каинатного глутаматного рецептора 2, предшественник ионотропного каинатного глутаматного рецептора 3, предшественник ионотропного каинатного глутаматного рецептора 4, предшественник ионотропного каинатного глутаматного рецептора 5, предшественник субъединицы ЗА глутаматного [NMDA] рецептора, предшественник субъединицы ЗВ глутаматного [NMDA]
рецептора, предшественник субъединицы эпсилон 1 глутаматного [NMDA] рецептора, предшественник субъединицы эпсилон 2 глутаматного [NMDA] рецептора, предшественник субъединицы эпсилон 4 глутаматного [NMDA] рецептора, предшественник субъединицы дзета 1 глутаматного [NMDA] рецептора, предшественник цепи альфа-1 глицинового рецептора, предшественник цепи альфа-2 глицинового рецептора, предшественник цепи альфа-3 глицинового рецептора, предшественник бета-цепи глицинового рецептора, субъединицу 1 рибонуклеопротеидного комплекса Н/АСА, высокоаффинную бета-субъединицу рецептора иммуноглобулина эпсилон, гипотетический белок DKFZp31310334, гипотетический белок DKFZp761M1724, гипотетический белок FLJ12242, гипотетический белок FLJ14389, гипотетический белок FLJ14798, гипотетический белок FLJ14995, гипотетический белок FLJ16180, гипотетический белок FLJ16802, гипотетический белок FLJ32069, гипотетический белок FLJ37401, гипотетический белок FLJ38750, гипотетический белок FLJ40162, гипотетический белок FLJ41415, гипотетический белок FLJ90576, гипотетический белок FLJ90590, гипотетический белок FLJ90622, гипотетический белок KCTD15, гипотетический белок MGC15619, инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор 1-го типа, инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор 2-го типа, инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор 3-го типа, белок 4 активируемого кальцием калиевого канала со средней проводимостью, калиевый канал входящего выпрямления тока 13, калиевый канал входящего выпрямления тока 16, калиевый канал входящего выпрямления тока 4, отрицательный регулятор К(+) канала входящего выпрямления тока Kir2.2v, субъединицу КА2а кианатного рецептора, белок KCNH5, белок KCTD 17, белок KCTD2, ассоциированный с кератиноцитами трансмембранный белок 1, взаимодействующий с Kv каналом белок 4, мелестатин 1, мембранный белок MLC1, белок MGC 15619, муколипин-1, муколипин-2, муколипин-3, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью белок 4, предшественник субъединицы 2С №метил-0-аспартатного рецептора, гомолог НАДФН-оксидазы 1, Navl.5, предшественник субъединицы альфа-10 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-2 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-3 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-4 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-5 нейронального белка ацетилхолинового рецептора,
предшественник субъединицы альфа-6 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-7 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы альфа-9 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы бета-2 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы бета-3 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, предшественник субъединицы бета-4 нейронального белка ацетилхолинового рецептора, субъединица альфа-20 нейронального потенциал-зависимого кальциевого канала, белок 1 пуринергического рецептора Р2Х, белок 2 пуринергического рецептора Р2Х, белок 3 пуринергического рецептора Р2Х, белок 4 пуринергического рецептора Р2Х, белок 5 пуринергического рецептора Р2Х, белок 6 пуринергического рецептора Р2Х, белок 7 пуринергического рецептора Р2Х, калиевый канал клеток поджелудочной железы TALK-Ib, калиевый канал клеток поджелудочной железы TALK-Ic, калиевый канал клеток поджелудочной железы TALK-Id, предшественник фосфолеммана, плазмолипин, связанный с поликистозным заболеванием почек белок 2, подобный фактору поликистозного заболевания почек 2 белок 1, подобный фактору 2 поликистозного заболевания почек белок 2, предшественник белка, связанного с поликистозным заболеванием почек и рецептором к слизистой оболочки яйца, полицистин-2, регулятор калиевого канала, член 1 подсемейства К калиевого канала, член 10 подсемейства К калиевого канала, член 12 подсемейства К калиевого канала, член 13 подсемейства К калиевого канала, член 15 подсемейства К калиевого канала, член 16 подсемейства К калиевого канала, член 17 подсемейства К калиевого канала, член 2 подсемейства К калиевого канала, член 3 подсемейства К калиевого канала, член 4 подсемейства К калиевого канала, член 5 подсемейства К калиевого канала, член 6 подсемейства К калиевого канала, член 7 подсемейства К калиевого канала, член 9 подсемейства К калиевого канала, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 3, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 12, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 14, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 2, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 4, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 5, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 10, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 13, домен тетрамеризации калиевого канала, содержащий белок 1, член 1 подсемейства А
калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства А калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства А калиевого потенциал-зависимого канала, член 5 подсемейства А калиевого потенциал-зависимого канала, член 6 подсемейства А калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства В калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства В калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства С калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства С калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства С калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства D калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства D калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства D калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства Е калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства Е калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства Е калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства Е калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства F калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства G калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства G калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства G калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства G калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 5 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 6 подсемейства D калиевого потенциал-зависимого канала, член 7 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 8 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства KQT калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства KQT калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства KQT калиевого потенциал-зависимого канала, член 4 подсемейства KQT калиевого потенциал-зависимого канала, член 5 подсемейства KQT калиевого потенциал-зависимого канала, член 1 подсемейства S калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства S калиевого потенциал-зависимого канала, член 3 подсемейства S калиевого потенциал-зависимого канала, член 2 подсемейства V калиевого потенциал-зависимого канала, изоформа 2 члена 7 подсемейства Н калиевого потенциал-зависимого канала, калий/натриевый активируемый гиперполяризацией управляемый циклическими нуклеотидами канал 1, калий/натриевый
активируемый гиперполяризацией управляемый циклическими нуклеотидами канал 2, калий/натриевый активируемый гиперполяризацией управляемый циклическими нуклеотидами канал 3, калий/натриевый активируемый гиперполяризацией управляемый циклическими нуклеотидами канал 4, возможный гомолог субъединицы ТОМ40 митохондриального рецептора импорта, изоформа А пуринергического рецептора Р2Х5, предполагаемый белок ионного потенциал-зависимого канала с 4 повторами, предполагаемый белок 7 канала ионов хлора, предполагаемый белок кианатного рецептора GluR6, предполагаемый вариант 1 белка CATSPER2 ионного канала, предполагаемый вариант 2 белка CATSPER2 ионного канала, предполагаемый вариант 3 белка CATSPER2 ионного канала, предполагаемый вариант 1 белка регулятора калиевых каналов, предполагаемую тирозиновую протеинфосфатазу ТРТЕ, белок 1 рецептора рианодина, белок 2 рецептора рианодина, белок 3 рецептора рианодина, SH3 КВР1-связывающий белок 1, короткий белок канала транзиентного рецепторного потенциала 1, короткий белок канала транзиентного рецепторного потенциала 4, короткий белок канала транзиентного рецепторного потенциала 5, короткий белок канала транзиентного рецепторного потенциала 6, короткий белок канала транзиентного рецепторного потенциала 7, белок с малой проводимостью активируемого кальцием калиевого канала 1, белок с малой проводимостью активируемого кальцием калиевого канала 2, изоформа Ь, белок с малой проводимостью активируемого кальцием калиевого канала 3, изоформа Ь, белок с малой проводимостью активируемого кальцием калиевого канала SK2, белок с малой проводимостью активируемого кальцием калиевого канала SK3, натриевого канала, предшественник субъединицы бета-1 натриевого канала, альфа-субъединицу белка II типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка Ш типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка IV типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка ГХ типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка V типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка VII типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка VTII типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка X типа натриевого канала, альфа-субъединицу белка ХГ типа натриевого канала, активируемый натрием и хлором АТФ-чувствительный калиевый канал, гамма-цепь натрий/калиевой транспортной АТФазы, катионный канал спермы 1, катионный канал спермы 2, изоформа 4, синтаксин-1В1, член 1 подсемейства А катионного канала транзиентного рецепторного потенциала, член 2 подсемейства М катионного канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала,
член
подсемейства
катионного
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала
, эпсилон-сплайс-вариант
белка 4
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала, дзета-сплайс-вариант
белка 4
канала
транзиентного
рецепторного
потенциала, гамма-сплайс-вариант
белка 7
канала
транзиентного рецепторного потенциала, фактор некроза опухоли, альфа-индуцируемый белок 1, эндотелиальный, белок 2 двухпорового кальциевого канала, белок VDAC4, белок Kv3.2b потенциал-зависимого калиевого канала, бетаШ субъединицу потенциал-зависимого натриевого канала, потенциал-зависимый анионный канал, белок 2 потенциал-зависимого анионного канала, белок 1 потенциал-зависимого анион-селективного канала, белок 2 потенциал-зависимого анион-селективного канала, белок 3 потенциал-зависимого анион-селективного канала, гамма-1 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-2 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-3 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-4 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-5 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-6 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-7 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, гамма-8 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала, альфа-1С субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, альфа-1D субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, альфа-1S субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, бета-1 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, бета-2 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, бета-3 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, бета-4 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, альфа-1В субъединицу потенциал-зависимого кальциевого
канала N-типа, альфа-1А субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала P/Q-типа, альфа-IE субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала R-типа, альфа-Ю субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала Т-типа, альфа-1Н субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала Т-типа, альфа-II субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала Т-типа, альфа-1 субъединицу потенциал-зависимого кальциевого канала L-типа, бета-1 субъединицу потенциал-зависимого калиевого канала, бета-2 субъединицу потенциал-зависимого калиевого канала, бета-3 субъединицу потенциал-зависимого калиевого канала, KCNA7 потенциал-зависимого калиевого канала. Также многообещающей целью является семейство Navl.x человеческих потенциал-зависимых натриевых каналов. Это семейство включает, например, каналы Navl.6 и Navl.8.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления терапевтический белок может представлять собой сопряженный с G-белком рецептор (GPCR). Иллюстративные GPCR включают без ограничения родопсин-подобные рецепторы класса А, такие как мускариновый (Muse.) ацетилхолиновый позвоночных 1 типа, Muse, ацетилхолиновый позвоночных 2 типа, Muse, ацетилхолиновый позвоночных 3 типа, Muse, ацетилхолиновый позвоночных 4 типа; адренорецепторы (альфа-адренорецепторы 1 типа, альфа-адренорецепторы 2 типа, бета-адренорецепторы 1 типа, бета-адренорецепторы 2 типа, бета-адренорецепторы 3 типа, допаминовый позвоночных 1 типа, допаминовый позвоночных 2 типа, допаминовый позвоночных 3 типа, допаминовый позвоночных 4 типа, гистаминовый 1 типа, гистаминовый 2 типа, гистаминовый 3 типа, гистаминовый 4 типа, серотониновый 1 типа, серотониновый 2 типа, серотониновый 3 типа, серотониновый 4 типа, серотониновый 5 типа, серотониновый 6 типа, серотониновый 7 типа, серотониновый 8 типа, другие типы серотониновых рецепторов, следового амина, ангиотензиновый 1 типа, ангиотензиновый 2 типа, бомбезиновый, брадикининовый, С5а анафилотоксина, Fmet-leu-phe, APJ-подобный, интерлейкина-8 типа А, интерлейкина-8 типа В, интерлейкина-8 других типов, С-С хемокиновый 1-11 типа и других типов, С--Х--С хемокиновый (2-6 и других типов), С--ХЗ-С хемокиновый, холецистокининовый ССК, ССК типа А, ССК типа В, ССК других типов, эндотелиновый, меланокортиновый (меланоцит-стимулирующего гормона, адренокортикотропного гормона, гормона меланокортин), антигена Duffy, пролактин-высвобождающего пептида (GPR10), нейропептида Y (1-7 типа), нейропептида Y, нейропептида Y других типов, нейротензина, опиоидные (типа D, К, М, X),
соматостатиновые (1-5 типа), тахикининовые (вещества Р (NK1), вещества К (NK2), нейромедина К (NK3), тахикинин-подобного фактора 1, тахикинин-подобного фактора 2, вазопрессин/вазотоциновые (1-2 типа), вазотоциновые, окситоцин/мезотоциновые, конопрессиновый, галанин-подобного фактора, рецептор фактора, подобного протеиназа-активирующему, орексинов и нейропептидов FF.QRFP, подобный хемокиновому рецептору, рецептор нейромедин U-подобного фактора (нейромедина U, PRXamide), белковых гормонов (фолликулостимулирующего гормона, лютропин-хориогонадотропного гормона, тиротропина, гонадотропина I типа, гонадотропина II типа), (род)опсина, родопсина позвоночных (1-5 типа), родопсина позвоночных 5 типа, родопсина членистоногих, родопсина членистоногих 1 типа, родопсина членистоногих 2 типа, родопсина членистоногих 3 типа, родопсина моллюсков, родопсина, обонятельные (семейства II обонятельных рецепторов 1-13 типа), простагландина (простагландина Е2 подтипа подтипа ЕР1, простагландина E2/D2 подтипа ЕР2, простагландина Е2 подтипа ЕРЗ, простагландина Е2 подтипа ЕР4, простагландина Е2-альфа, простациклина, тромбоксана, аденозина 1 -3 типа, пуринергические рецепторы, пуринергический рецептор P2RY1-4,6,1 1 GPR91, пуринергический рецептор P2RY5,8,9,10 GPR35,92,174, пуринергический рецептор P2RY12-14 GPR87 (УДФ-глюкозы), каннабиноида, тромбоцит-активирующего фактора, гонадотропин-высвобождающего гормона, гонадотропин-высвобождающего гормона I типа, гонадотропин-высвобождающего гормона II типа, фактора, подобного адипокинетическому гормону, коразонина, тиротропин-высвобождающего гормона и секретагога, тиротропин-высвобождающего, гормона роста секретагог, фактора, подобного гормону роста секретагог, запускающего линьку гормона (ETHR), мелатонина, лизосфинголипида и LPA (EDG), сфингозин 1-фосфата Edg-1, лизофосфатидиловой кислоты Edg-2, сфингозин 1-фосфата Edg-З, лизофосфатидиловой кислоты Edg-4, сфингозин 1-фосфата Edg-5, сфингозин 1-фосфата Edg-б, лизофосфатидиловой кислоты Edg-7, сфингозин 1-фосфата Edg-8, другой рецептор Edg лейкотриена В4, рецептор BLT1 лейкотриена В4, рецептор BLT2 лейкотриена В4, сиротский рецептор класса/другого типа, предполагаемых нейротрансмиттеров, SREB, протоонкогена Mas и Mas-родственных факторов (MRG), GPR45-подобного, цистеинил-лейкотриена, сопряженного с G-белком рецептор желчных кислот, рецептор свободных кислот (GP40, GP41, GP43), секретиноподобного фактора класса В, кальцитонина, кортикотропин-рилизинг фактора,
желудочного ингибиторного пептида, глюкагоана, гормона высвобождающего гормон роста, паратиреоидного гормона, РАСАР,секретина, вазоактивного интестинального полипептида, латрофилина, латрофилина 1 типа, латрофилина 2 типа, латрофилина 3 типа, ETL рецепторы, мозгоспецифичного ингибитора ангиогенеза (BAI), Methuselah-подобных белков (МТН), кадгерина EGF LAG (CELSR), сверхбольшой сопряженный с G-белком рецептор, метаботропного глутамата класса С/феромона, метаботропного глутамата группы I-III, фактора, подобной кальций-чувствительному, внеклеточного кальций-чувствительного фактора, феромона, фактора, подобного кальций-чувствительному, другого типа, рецепторы предполагаемых феромонов, GABA-B, GABA-B 1 подтипа, GABA-В 2 подтипа, GABA-B-подобного фактора, сиротского GPRC5, сиротского GPCR6, белков гена bride of sevenless (BOSS), рецепторы вкуса (T1R), грибного феромона класса D, фактора, подобного фактору грибного феромона A (STE2.STE3), фактора, подобного грибному феромону класса В (BAR,BBR,RCB,PRA), цАМФ-рецепторы класса Е, белков глазного альбинизма, белков семейства Frizzled/Smoothened, фактора frizzled группы A (Fz 1, и 2, и 4, и 5, и 7-9), фактора frizzled группы В (Fz 3 и 6), фактора frizzled группы С (другие), сошниково-носовые рецепторы, хеморецепторы нематод, рецепторы пахнущих веществ насекомых и опсинов класса Z простейших/бактерий/грибов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин Fn3 гибриды могут включать любой из следующих активных полипептидов: BOTOX, миоблок, нейроблок, диспорт (или другие серотипы ботулинических нейротоксинов), аглюкозидазу-альфа, даптомицин, YH-16, хорионический гонадотропин-альфа, филграстим, цетрореликс, интерлейкин-2, альдеслейкин, тецелейкин, денилейкин-дифтиток, интерферон-альфа-пЗ (инъекционный), интерферон-альфа-nl, DL-8234, интерферон, Suntory (гамма-la), интерферон-гамма, тимозин-альфа 1, тасонермин, DigiFab, ViperaTAb, EchiTAb, CroFab, несиритид, абатацепт, алефацепт, Ребиф, эптотерминальфа, терипаратид (при остеопорозе), кальцитонин инъекционный (при заболевании костей), кальцитонин (назальный, при остеопорозе), этанерцепт, гемоглобин глутамер 250 (бычий), дротрекогин альфа, коллагеназу, карперитид, рекомбинантный эпидермальный фактор роста человека (местный гель, для заживления ран), DWP-401, дарбэпоэтин альфа, эпоэтин омега, эпоэтин бета, эпоэтин альфа, дезирудин, лепирудин, бивалирудин, нонаког альфа, мононин, эптаког альфа (активированный),
рекомбинантный фактор VTII+VWF, рекомбинат, рекомбинантный фактор VTII, фактор VIII (рекомбинантный), альфанат, октоког альфа, фактор VIII, палифермин, индикиназу, тенектеплазу, альтеплазу, памитеплазу, ретеплазу, натеплазу, монтеплазу, фоллитропин альфа, rFSH, hpFSH, микафунгин, пэгфилграстим, ленограстим, нартограстим, сермолин, глюкагон, эксенатид, прамлинтид, имиглуцеразу, галсульфазу, лейкотропин, молграмостим, трипторелина ацетат, гистрелин (подкожный имплант, гидрон), деслорелин, гистрелин, нафарелин, депо лейпролида с замедленным высвобождением (ATRIGEL), имплант с лейпролидом (DUROS), гозерелин, соматотропин, эутропин, КР-102 program, соматропин, соматропин, мекасермин (при нарушении роста), энфувиртид, Org-33408, инсулин гларгин, инсулин глулизин, инсулин (ингалируемый), инсулин лиспро, инсулин детемир, инсулин (трансбуккальный, RapidMist), мекасермин ринфабат, анакинра, целмолейкин, 99 тТс-апцитид инъекционный, миелопид, бетасерон, глатирамера ацетат, гепон, сарграмостим, опрелвекин, человеческие лейкоцитарные альфа-интерфероны, билив, инсулин (рекомбинантный), рекомбинантный человеческий инсулин, инсулин аспарт, мекасермин, роферон-А, интерферон-альфа 2, альфаферон, интерферон альфакон-1, интерферон-альфа, Авонекс - рекомбинантный лютеинизирующий гормон человека, дорназу альфа, трафермин, зиконотид, талтирелин, диботерминальфа, атосибан, бекаплермин, эптифибатид, земайру, СТС-111, шанвак-В, вакцину против HPV (тетравалентную), NOV-002, октреотид, ланреотид, анцестим, агалсидазу бета, агалсидазу альфа, ларонидазу, презатид ацетат меди (гель для местного применения), расбуриказу, ранибизумаб, актиммун, пегинтрон, трикомин, рекомбинантный инъекционный гипосенсибилизирующий фактор против аллергена клеща домашней пыли, рекомбинантный человеческий паратиреоидный гормон (РТН) 1-84 (подкожный, при остеопорозе), эпоэтин дельта, трансгенный антитромбин III, грандитропин, витразу, рекомбинантный инсулин, интерферон-альфа (пероральную пастилку), GEM-2 IS, вапреотид, идурсульфазу, омапатрилат, рекомбинантный сывороточный альбумин, цертолизумаб пегол, глюкарпидазу, человеческий рекомбинантный ингибитор эстеразы С1 (при болезни Квинке), ланотеплазу, рекомбинантный человеческий гормон роста, энфувиртид (для безыгольной инъекции, Biojector 2000), VGV-I, интерферон (альфа), люцинактант, авиптадил (ингалируемый, при заболевании легких), икатибант, экаллантид, омиганан, Aurograb, пексиганана ацетат, ADI-PEG-20, LDI-200, дегареликс, цинтредекина бесудотокс, Favld, MDX-1379, ISAtx-247,
лираглутид, терипаратид (при остеопорозе), тифакогин, АА-4500, липосомный лосьон T4N5, катумаксомаб, DWP-413, ART-123, хризалин, десмотеплазу, амедиплазу, корифоллитропин альфа, ТН-9507, тедуглутид, диамид, DWP-412, гормон роста (инъекция с замедленным высвобождением), рекомбинантный G-CSF, инсулин (ингалируемый, AIR), инсулин (ингалируемый, Technosphere), инсулин (ингалируемый, AERx), RGN-303, DiaPep277, интерферон бета (при инфекции вирусом гепатита С (HCV)), интерферон-альфа-пЗ (пероральный), белатацепт, трансдермальный пластырь с инсулином, AMG-531, МВР-8298, ксерецепт, опебакан, AIDS VAX, GV-1001, LymphoScan, ранпирназу, липоксилан, лусупултид, МР52 (бета-трикальцийфосфатный носитель, для регенерации кости), вакцина против меланомы, сипулейцел-Т, СТР-37, инседжиа, витеспен, человеческий тромбин (замороженный, при кровотечении в ходе оперативного вмешательства), тромбин, TransMID, алфимепразу, пуриказу, терлипрессин (внутривенный, при гепаторенальном синдроме), EUR-1008M, рекомбинантный FGF-I (инъекционный, при заболевании сосудов), BDM-E, ротигаптид, ЕТС-216, Р-113, MBI-594AN, дурамицин (ингалируемый, при муковисцидозе), SCV-07, OPI-45, эндостатин, ангиостатин, АВТ-510, концентрат ингибитора Боумена-Бирка, ХМР-629, аннексии V 99 mTc-Hynic, кахалалид F, СТСЕ-9908, теверликс (с продленным высвобождением), озареликс, ромидепсин, BAY-50-4798, интерлейкин-4, PRX-321, пепскан, ибоктадекин, rh-лактоферрин, TRU-015, IL-21, ATN-161, циленгитид, альбуферон, Biphasix, IRX-2, омега-интерферон, РСК-3145, САР-232, пасиреотид, huN901-DMl, иммунотерапевтическую вакцину против карциномы яичника, SB-249553, Oncovax-CL, OncoVax-P, BLP-25, CerVax-16, вакцину на основе мультиэпитопного пептида против меланомы (MART-I, gplOO, тирозиназа), немифитид, гААТ (ингалируемый), гААТ (при дерматологических заболеваниях), CGRP (ингалируемый, при астме), пегсунерцепт, тимозин бета-4, плитидепсин, GTP-200, рамопланин, GRASPA, OBI-I, АС-100, кальцитонин лососевых рыб (пероральный, eligen), кальцитонин (пероральный, при остеопорозе), эксаморелин, капроморелин, Cardeva, велафермин, 1311-ТМ-601, КК-220, ТР-10, уларитид, депелестат, гематид, хризалин (для местного применения), rNAPc2, рекомбинантный фактор VTII (пэгилированный липосомальный), bFGF, пэгилированный рекомбинантный вариант стафилокиназы, V-10153, SonoLysis Prolyse, NeuroVax, CZEN-002, терапевтическое средство для неогенеза островковых клеток, rGLP-1, BIM-51077, LY-548806, эксенатид (с контролируемым высвобождением, Medisorb),
AVE-0010, GA-GCB, аверолин, AOD-9604, линаклотида ацетат, CETi-I, гемоспан, VAL (инъекционный), быстродействующий инсулин (инъекционный, Viadel), интраназальный инсулин, инсулин (ингалируемый), инсулин (пероральный, eligen), рекомбинантный метионил-лептин человека, питракинру (подкожная инъекция, при экземе), питракинру (ингалируемый сухой порошок, при астме), Multikine, RG-1068, ММ-093, NBI-6024, АТ-001, PI-0824, Org-39141, СрпЮ (при аутоиммунных заболеваниях/воспалении), талактоферрин (для местного применения), rEV-131 (для офтальмологического применения), rEV-131 (при респираторном заболевании), пероральный рекомбинантный человеческий инсулин (при сахарном диабете), RPI-78M, опрелвекин (пероральный), CYT-99007 CTLA4-Ig, DTY-001, валатеграст, интерферон-альфа-пЗ (для местного применения), IRX-3, RDP-58, тауферон, стимулируемую солями желчных кислот липазу, мериспазу, щелочную фосфатазу, ЕР-2104R, меланотан-П, бремеланотид, ATL-104, рекомбинантный человеческий микроплазмин, АХ-200, SEMAX, ACV-I, Xen-2174, CJC-1008, динорфин A, SI-6603, LAB GHRH, AER-002, BGC-728, вакцину против малярии (виросомы, PeviPRO), ALTU-135, вакцину против парвовируса В 19, вакцину против гриппа (рекомбинантную нейраминидазу), вакцину против малярии/HBV, вакцину против сибирской язвы, Vacc-5q, Vacc-4x, вакцину против ВИЧ (пероральную), вакцину против HPV, столбнячный токсоид, YSPSL, CHS-13340, РТН(1-34) липосомальный крем (Novasome), остаболин-С, аналог РТН (для местного применения, при псориазе), MBRI-93.02, вакцину на основе MTB72F (против туберкулеза), вакцину на основе MVA-Ag85 А (при туберкулезе), FAR-404, ВА-210, вакцину на основе рекомбинантного F1V чумы, AG-702, OxSODrol, rBetVl, Der-pl/Der-p2/Der-p7 целенаправленную против аллергена вакцину (при аллергии, вызванной клещом домашней пыли), пептидный антиген PR1 (при лейкозе), вакцину на основе мутантного ras, вакцину на основе липопептида HPV-16 Е7, вакцину против лабиринтина (при аденокарциноме), вакцину против CML, вакцину на основе WT1-пептида (при злокачественной опухоли), IDD-5, CDX-110, Pentrys, норелин, CytoFab, Р-9808, VT-111, икрокаптид, телбермин (для дерматологического применения, при язве диабетической стопы), рупинтривир, ретикулозу, rGRF, PI А, альфа-галактозидазу А, АСЕ-011, ALTU-140, CGX-1160, ангиотензиновую терапевтическую вакцину, D-4F, ЕТС-642, АРР-018, rhMBL, SCV-07 (пероральный, при туберкулезе), DRF-7295, АВТ-828, ЕгЬВ2-специфический иммунотоксин (против злокачественной опухоли), DT388IL-3, TST-10088, PRO-1762,
комботокс, пептиды, связывающиеся с рецептором холецистокинина-В/гастрина, 1 1 11п-hEGF, АЕ-37, трастузумаб-DMl, антагонист G, IL-12 (рекомбинантный), РМ-02734, IMP-321, rhIGF-ВРЗ, BLX-883, CUV-1647 (для местного применения), радиоиммунотерапевтические средства на основе L-19 (при злокачественной опухоли), Re-188-Р-2045, AMG-386, БСЯ540/КЬН-вакцину (при злокачественной опухоли), VX-001, AVE-9633, АС-9301, NY-ESO-I-вакцину (пептиды), МА17.А2-пептиды, вакцину против меланомы (терапевтическое средство для сенсибилизации антигеном), вакцину против злокачественной опухоли предстательной железы, СВР-501, рекомбинантный человеческий лактоферрин (при синдроме сухого глаза), FX-06, АР-214, WAP-8294A2 (инъекционный), АСР-ШР, SUN-11031, пептид YY [3-36] (при ожирении, интраназальный), FGLL, атацицепт, BR3-Fc, BN-003, ВА-058, человеческий паратиреоидный гормон 1-34 (назальный, при остеопорозе), F-18-CCR1, АТ-1001 (при глютеиновой болезни/сахарном диабете), JPD-003, РТН(7-34) липосомальный крем (Novasome), дурамицин (для офтальмологического применения, при синдроме сухого глаза), САВ-2, СТСЕ-0214, гликопэгилированный эритропоэтин, EPO-Fc, CNTO-528, AMG-114, Ж-013, фактор XIII, аминокандин, PN-951, 716155, SUN-E7001, ТН-0318, BAY-73-7977, тевереликс (с немедленным высвобождением), ЕР-51216, hGH (с контролируемым высвобождением, Biosphere), OGP-I, сифувиртид, TV-4710, ALG-889, Org-41259, rhCCIO, F-991, тимопентин (при заболевании легких), r(m)CRP, избирательный для печени инсулин, субалин, L 19-IL-2 гибридный белок, элафин, NMK-150, ALTU-139, EN-122004, rhTPO, агонист тромбопоэтинового рецептора (при тромбоцитопенических нарушениях), AL-108, AL-208, антагонисты фактора роста нервов (при боли), SLV-317, CGX-1007, INNO-105, пероральный терипаратид (eligen), GEM-OS 1, АС-162352, PRX-302, вакцину на основе гибридного белка LFn-p24 (Therapore), ЕР-1043, вакцину для детей против S. pneumoniae, вакцину против малярии, вакцину против Neisseria meningitidis группы В, вакцину для новорожденных против стрептококков группы В, вакцину против сибирской язвы, вакцину против HCV (gpEl+gpE2+MF-59), средство терапии против отита среднего уха, вакцину против HCV (коровый антиген+ISCOMATRIX), hPTH(l-34) (для трансдермального применения, ViaDerm), 768974, SYN-101, PGN-0052, авискумин, BIM-23190, вакцину против туберкулеза, мультиэпитопный тирозиназный пептид, вакцину против злокачественной опухоли, энкастим, АРС-8024, Gl-5005, АСС-001,
TTS-CD3, ориентированный на сосуды TNF (солидные опухоли), десмопрессин (для трансбуккального введения с контролируемым высвобождением), онерцепт, ТР-9201.
Дополнительные модификации
В соответствии с конкретными вариантами осуществления связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибриды с ними могут дополнительно включать посттрансляционные модификации. Иллюстративные посттрансляционные модификации белка включают фосфорилирование, ацетилирование, метилирование, АДФ-рибозилирование, убиквитинирование, гликозилирование, карбонилирование, сумоилирование, биотинилирование или присоединение полипептидной боковой цепи или гидрофобной группы. В результате, модифицированные связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибриды с ними могут содержать неаминокислотные элементы, такие как липиды, поли- или моносахариды и фосфаты. Предпочтительной формой гликозилирования является сиалирование, при котором с полипептидом происходит конъюгирование одной или нескольких фрагментов сиаловой кислоты. Фрагменты сиаловой кислоты улучшают растворимость и период полужизни в сыворотке, при этом также уменьшая возможную иммуногенность белка. См., например, работу Raju et al. Biochemistry. 2001 Jul. 31; 40(30):8868-76. Эффекты от таких неаминокислотных элементов на функциональные свойства связывающих сывороточный альбумин молекул или гибридов с ними можно протестировать по их способности связывать конкретный сывороточный альбумин (например, HSA или RhSA) и/или по функциональной роли, придаваемой конкретным отличным от 10Fn3 фрагментом, в контексте гибрида.
F. Методика гибридизации нуклеиновой кислоты и белка
В соответствии с одним аспектом в настоящей заявке предложены фибронектиновые каркасные белки, содержащие домен фибронектина III типа, который связывается с HSA. Одним способом быстрого получения и тестирования Fn3 доменов со свойствами специфического связывания является методика гибридизации нуклеиновой кислоты и белка от Adnexus, Bristol-Myers Squibb Company. Такую методику in vitro экспрессии и мечения, называемую PROfusion, которая предусматривает использование гибридов нуклеиновой кислоты и белка (гибридов РНК и ДНК с белком), можно применять для выявления новых
полипептидов и аминокислотных мотивов, которые важны для связывания с белками. Методика гибридизации нуклеиновой кислоты и белка представляет собой методику, при помощи которой ковалентно связывают белок с кодирующим его носителем генетической информации. Для подробного описания методики гибридизации РНК и белка и способов скрининга библиотек фибронектиновых каркасных белков см. Szostak et al., патенты США №: 6258558, 6261804, 6214553, 6281344, 6207446, 6518018; публикации РСТ № WO00/34784, WO01/64942, WO02/032925; и работу Roberts and Szostak, Proc Natl. Acad. Sci. 94: 1229712302, 1997, которые включены в настоящий документ при помощи ссылки.
G. Варианты осуществления векторов и полинуклеотидов
Также в настоящее раскрытие включены последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие любой из описанных в настоящем документе белков. Специалисты в настоящей области поймут, что в связи с вырожденностью кодона по третьему основанию почти каждая аминокислота в кодирующей нуклеотидной последовательности может быть представлена несколькими триплетами. Кроме того, изменения в парах минорных оснований могут привести к консервативной замене в кодируемой аминокислотной последовательности, но без предполагаемого практического изменения биологической активности генного продукта. Следовательно, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую описанный в настоящем документе белок, может быть немного модифицирована в последовательности и все еще кодировать свой соответствующий генный продукт. Некоторые иллюстративные нуклеиновые кислоты, кодирующие описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибриды с ними, включают нуклеиновые кислоты с последовательностями, изложенными под SEQ ID NO: 126-151. Также настоящим изобретением охватываются последовательности нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 50%, например, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99% идентичны SEQ ID NO: 126151, и предпочтительно кодируют белок, который связывается с сывороточным альбумином, а для нуклеиновых кислот, кодирующих тандемный аднектин PCSK9-PKE2,
предпочтительно чтобы они связывались с сывороточным альбумином и PCSK9. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления нуклеотидные замены вводят так, чтобы не изменять получаемую в результате транслируемую аминокислотную последовательность.
Нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из различных раскрываемых в настоящем документе белков или полипептидов, можно синтезировать химическими способами. Частоту использования кодона можно подобрать так, чтобы повысить экспрессию в клетке. Такая частота использования кодона будет зависеть от выбранного типа клетки. Специализированные паттерны частоты использования кодона были разработаны для Е. coli и других бактерий, а также для клеток млекопитающих, клеток растений, дрожжевых клеток и клеток насекомых. См., например: Mayfield et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2003 100(2):438-42; Sinclair et al. Protein Expr Purif. 2002 (1):96-105; Connell ND. Curr Opin Biotechnol. 2001 (5):446-9; Makrides etal. Microbiol. Rev. 1996 60(3):512-38; и Sharp etal. Yeast. 1991 7(7):657-78.
Общие методики для манипуляции с нуклеиновыми кислотами известны специалисту в настоящей области, а также описаны, например, в работе Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989, или F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987) и периодических дополнениях, которые включены в настоящий документ при помощи ссылки. ДНК, кодирующая белок, функционально связана с подходящими транскрипционными или трансляционными элементами, происходящими от генов млекопитающих, вирусов или насекомых. Такие регуляторные элементы включают транскрипционный промотор, необязательную операторную последовательность для контроля транскрипции, последовательность, кодирующую подходящие сайты связывания с рибосомой на мРНК, и последовательности, которые контролируют окончание транскрипции и трансляции. Дополнительно включают способность реплицироваться у хозяина, обычно придаваемую точкой начала репликации, и ген для отбора, облегчающий распознание трансформантов. Подходящие регуляторные элементы хорошо известны из уровня техники.
Описанные в настоящем документе белки и гибридные белки можно получить в виде гибридного белка с гетерологичным полипептидом, который предпочтительно представляет
собой сигнальную последовательность или другой полипептид со специфическим сайтом расщепления на N-конце зрелого белка или полипептида. Выбранная гетерологичная сигнальная последовательность предпочтительно является такой, чтобы она распознавалась и процессировалась (т. е. отщеплялась сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином. Для прокариотических клеток-хозяев, которые не распознают и не процессируют нативную сигнальную последовательность, сигнальную последовательность замещают прокариотической сигнальной последовательностью, выбранной, например, из группы, состоящей из лидерных последовательностей щелочной фосфатазы, пенициллиназы, 1 рр или термостабильного энтеротоксина П. Для секреции у дрожжей нативную сигнальную последовательность можно заместить, например, лидерной последовательностью дрожжевой инвертазы, лидерной последовательностью фактора (в том числе лидерными последовательностями альфа-факторов Saccharomyces и Kluyveromyces) или лидерной последовательностью кислой фосфатазы, лидерной последовательностью глюкоамилазы С. albicans или сигнальной последовательностью, описанной в публикации РСТ № WO 90/13646. При экспрессии в клетках млекопитающих пригодны сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например, сигнальная последовательность gD простого герпеса. ДНК для таких участков-предшественников можно лигировать в рамке считывания с ДНК, кодирующей белок.
Векторы экспрессии, применяемые в эукариотических клетках-хозяевах (например, дрожжевых, грибных, насекомых, растений, животных, человека или ядросодержащих клетках других многоклеточных организмов), также будут содержать последовательности, необходимые для окончания транскрипции и для стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно доступны на 5' и, изредка 3', нетранслируемых участках эукариотических или вирусных ДНК или кДНК. Эти участки содержат нуклеотидные сегменты, траскрибируемые в виде полиаденилированных фрагментов в нетранслируемой части мРНК, кодирующей мультивалентное антитело. Одним пригодный компонентом для окончания транскрипции является участок полиаденилирования бычьего гормона роста. См. публикацию РСТ № WO 94/11026 и раскрытый в ней вектор экспрессии.
Рекомбинантная ДНК также может включать последовательность белковой метки любого типа, которая может быть полезна для очистки белка. Примеры белковых меток
включают без ограничения гистидиновую метку, метку FLAG, метку туе, метку НА или метку GST. Подходящие для применения с бактериальными, грибными, дрожжевыми клетками-хозяевами и клетками-хозяевами млекопитающих векторы клонирования и экспрессии можно найти в работе Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, New York, 1985), соответствующее раскрытие которой, таким образом, включено с помощью ссылки.
Конструкцию экспрессии вводят в клетку-хозяина при помощи способа, подходящего для клетки-хозяина, что будет очевидно специалисту в настоящей области. Из уровня техники известен ряд способов введения нуклеиновых кислот в клетки-хозяева, в том числе без ограничения электропорация; трансфекция с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировка микрочастицами; липофекция и инфекция (в которой вектором является инфекционный агент).
Подходящие клетки-хозяева включают прокариоты, дрожжевые клетки, клетки млекопитающих или бактериальные клетки. Подходящие бактерии включают грамположительные организмы, например, Е. coli или Bacillus spp. Для получения полипептидов также можно использовать дрожжи, предпочтительно из видов рода Saccharomyces, таких как S. cerevisiae. Для экспрессии рекомбинантных белков также можно использовать различные системы культуры клеток млекопитающих или насекомых. Бакуловирусные системы для получения гетерологичных белков в клетках насекомых рассмотрены в работе Luckow и Summers, (Bio/Technology, 6:47, 1988). В некоторых случаях будет необходимо получение белков в клетках позвоночных, например для гликозилирования, а размножение клеток позвоночных в культуре (тканевой) уже стало стандартной процедурой. Примеры подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих включают эндотелиальные клетки, клетки почек обезьян COS-7, CV-1, L-клетки, С127, ЗТЗ, клетки яичника китайского хомячка (СНО), человеческие эмбриональные клетки почек, линии клеток HeLa, 293, 293Т и ВНК. Для многих применений малый размер белковых мультимеров, описанных в настоящем документе, делает Е. coli предпочтительным способом экспрессии.
Н. Получение белка
Клетки-хозяева трансформируют описанными в настоящем документе векторами экспрессии или клонирования для получения белка и культивируют в традиционных питательных средах, надлежащим образом модифицированных для индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих необходимые последовательности.
Клетки-хозяева, применяемые для получения фибронектиновых каркасных белков или гибридов с ними, можно культивировать в различных средах. Для культивирования клеток-хозяев подходят коммерчески доступные среды, такие как Ham's F10 (Sigma), минимальная питательная среда ((MEM), (Sigma)), RPMI-1640 (Sigma) и среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко ((DMEM), (Sigma)). Кроме того, любую из описанных в работе Ham etal., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes etal, Anal. Biochem. 102:255 (1980), патентах США№№ 4767704, 4657866, 4927762, 4560655 или 5122469; WO90/03430; WO87/00195 или патенте США № Re. 30985 сред можно применять в качестве культуральной среды для клеток-хозяев. Любую из такие сред можно при необходимости дополнить гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальций, магний и фосфат), буферами (такими как HEPES), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как лекарственное средство GENTAMYCIN(tm)), микроэлементами (определяемыми как неорганические соединения, обычно присутствующие в конечных концентрациях в микромольном диапазоне) и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Также можно включить любые другие необходимые добавки в соответствующих концентрациях, которые будут известны специалистам в настоящей области. Условия культивирования, такие как температура, рН и т. п., являются такими, которые в прошлом уже были использованы с клетками-хозяевами, выбранными для экспрессии, и будут известны рядовому специалисту в настоящей области.
Раскрываемые в настоящем документе фибронектиновые каркасные белки или гибриды с ними также можно получить с помощью бесклеточных систем трансляции. Для этих целей нуклеиновые кислоты, кодирующие фибронектиновый каркасный белок, должны быть модифицированы так, чтобы сделать возможной in vitro транскрипцию для получения мРНК и для обеспечения бесклеточной трансляции мРНК в конкретной
используемой бесклеточной системе (эукариотической, такой как бесклеточная система трансляции млекопитающих или дрожжей, или прокариотической, такой как бактериальная бесклеточная система трансляции).
Фибронектиновые каркасные белки или гибриды с ними также можно получить с помощью химического синтеза (например, с помощью способов, описанных в работе Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, IL). Модификации в фибронектиновом каркасном белке также можно получить с помощью химического синтеза.
Раскрываемые в настоящем документе фибронектиновые каркасные белки или гибриды с ними можно очистить с помощью способов выделения/очистки для белков, которые в целом известны в области химии белков. Неограничивающие примеры включают экстракцию, рекристаллизацию, высаливание (например, при помощи сульфата аммония или сульфата натрия), центрифугирование, диализ, ультрафильтрацию, адсорбционную хроматографию, ионообменную хроматографию, гидрофобную хроматографию, нормально-фазовую хроматографию, обращенно-фазовую хроматографию, гель-фильтрацию, эксклюзионную хроматографию, аффинную хроматографию, электрофорез, противоточное распределение или любую комбинацию из них. После очистки фибронектиновые каркасные белки можно подвергнуть обмену в различных буферах и/или сконцентрировать при помощи любого из ряда известных в настоящей области техники способов, в том числе без ограничения фильтрации и диализа.
Очищенный фибронектиновый каркасный белок или гибриды с ним предпочтительно является по меньшей мере на 85% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% чистым и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 98% чистым. Независимо от конкретного числового значения степени чистоты фибронектиновый каркасный белок является достаточно чистым для применения в качестве фармацевтического продукта.
I. Визуализационные, диагностические и другие области применения
Предлагаемые в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 гибриды можно применять для лечения ряда заболеваний и нарушений, исходя из особенности гетерогенной молекулы, гибридизированной со связывающимся с сывороточным альбумином 10Fn3 доменом. Области применения для связывающих
сывороточный альбумин 10Fn3 гибридов специалист в настоящей области сможет определить, исходя из сведений, известных из уровня техники, и приведенной в настоящем документе информации. В настоящем документе подробно описаны применения для различных связывающих сывороточный альбумин 10Fn3 гибридных белков. Связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 гибриды можно вводить любому субъекту-млекопитающему или пациенту-млекопитающему, в том числе в организм человека или другие организмы.
Связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибридные молекулы, описанные в настоящем документе, можно пометить детектируемой меткой и применять для вхождения в контакт с клетками, экспрессирующими, например, белок, связанный гибридной молекулой для визуализационных или диагностических областей применения. Можно использовать любой известный в настоящей области техники способ конъюгирования белка с детектируемым фрагментом, включая такие способы, которые описаны в работе Hunter, et al, Nature 144:945 (1962); David, et al., Biochemistry 13:1014 (1974); Pain, et al., J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); и в работе Nygren, J. Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982).
В соответствии с конкретными вариантами осуществления описанные в настоящем документе связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибридные молекулы дополнительно присоединяют к метке, которую можно детектировать (например, меткой может быть радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, фермент или ферментный кофактор). Меткой может быть радиоактивное средство, такое как: радиоактивные тяжелые металлы, такие как хелаты железа, радиоактивные хелаты гадолиния или марганца, излучатели позитронов кислорода, азота, железа, углерода или галлия, 43К, 52Fe, 57Со, 67Си, 67Ga, 68Ga, 123I, 125I, 131I, 132I или "Тс. В соответствии с конкретными вариантами осуществления метка может представлять собой флуоресцентное или хемилюминесцентное соединение, такое как флуоресцинизотиоцианат, родамин или люциферин; или фермент, такой как щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза или пероксидаза хрена. Связывающую сывороточный альбумин молекулу или гибридную молекулу, прикрепленную к такому фрагменту, можно применять в качестве визуализирующего средства и вводить в количестве, эффективном для диагностического применения на млекопитающих, таких как человек, а затем детектирования локализации и накопления визуализирующего средства. Локализацию и накопление визуализирующего средства можно детектировать с помощью
радиосцинтиграфии, визуализации ядерного магнитного резонанса, компьютерной томографии или позитронно-эмиссионной томографии. Специалисту в настоящей области техники будет очевидно, что количество подлежащего введению радиоизотопа зависит от конкретного радиоизотопа. Рядовые специалисты в настоящей области смогут легко определить количество подлежащего введению визуализирующего средства, исходя из удельной радиоактивности и энергии заданного радионуклида, используемого в качестве активного фрагмента.
Связывающие сывороточный альбумин молекулы и гибридные молекулы также пригодны в качестве средств для аффинной очистки. В соответствии с таким способом белки иммобилизируют на подходящей подложке, такой как смола или фильтровальная бумага Сефадекс, с помощью способов, которые хорошо известны из уровня техники. Такие белки можно использовать в любом известном аналитическом способе, таком как анализы конкурентного связывания, прямой и непрямой сэндвич-анализы и иммунопреципитационные анализы (Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)).
J. Биофизическая и биохимическая характеристика
Связывание связывающего сывороточный альбумин аднектина, описанного в настоящем документе, с сывороточным альбумином (например, HSA) можно оценить при помощи констант равновесия (например, диссоциации, Ко) и при помощи констант скорости реакции (например, константы скорости ассоциации, kon, и константы скорости диссоциации, k0ff). Связывающий сывороточный альбумин аднектин (например, РКЕ2-моно- или тандемный аднектин) обычно будет связываться с целевой молекулой с Ко менее 500 нМ, 100 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 200 пМ или 100 пМ, хотя могут допускаться более высокие значения Ко, если k0ff является достаточно низкой или kon является достаточно высокой.
In vitro анализы аффинности связывания
РКЕ2-аднектин, который связывается с сывороточным альбумином (например, HSA), можно выявить с помощью различных in vitro анализов. В соответствии с конкретными
вариантами осуществления такие анализы являются высокопроизводительными анализами, которые осуществляют одновременный скрининг множества потенциальных аднектинов.
Ил л юстра та в н ы е анализы для определения аффинности связывания аднектина с его целью включают без ограничения жидкофазные способы, такие как анализ кинетического исключения (КшЕхА) (Blake et al, JBC 1996; 271:27677-85; Drake et al., Anal Biochem 2004; 328:35-43), анализы на основе п о верх н ос гн о го плазмонного резонанса (SPR) с применением системы Biacore (Уппсала, Швеция) (Welford et al.. Opt. Quant. Elect 1991; 23:1; Morton and Myszka, Methods in Enzymology 1998; 295:268) и гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF) (Newton et al., J Biomol Screen 2008; 13:674-82; Patel et al., Assay Drug Dev Techno! 2008; 6:55-68).
В соответствии с конкретными вариантами осуществления би ом ол екул я рн ы е взаимодействия можно отслеживать в реальном времени с помощью системы Biacore, которая использует SPR для обнаружения изменений угла резонанса света на поверхности тонкой золотой пленки на стеклянной подложке вследствие изменений коэффициента преломления у поверхности на величину до 300 им. Анализ Biacore (например, описанный в Примере 2) позволяет получить константы скорости ассоциации, константы скорости диссоциации, равновесные константы диссоциации и константы аффинности. Аффинность связывания получают путем опенки констант скорости ассоциации и диссоциации с помощью системы для оценки п о верх н остн о то плазмонного резонанса Biacore (Biacore, Inc.). Биосенсорный чип активируется при ковалентном связывании цели. Затем цели разводят и вводят на чип для получения сигнала в единицах ответа иммобилизованного материала. Поскольку сигнал в единицах ответа (RU) н ропорци опален массе и м м обил и зован н ого материала, он представляет диапазон значений плотности им мобилизован н ых целей на матрице. Данные по ассоциации и диссоциации совместно согласуют в общем анализе для решения соотношения чистой скорости для б и о м ол екул я р н о го соотношения 1:1 с получением значений наилучшего согласи я для kon, k0ff и Rmax (макси мал ьн ы й ответ при насыщении). Равновесные константы диссоциации для связывания Ко рассчитывают из результатов измерений SPR в виде k0ff/k0n.
Следует понимать, что вышеописанные в настоящем документе анализы являются ил л юстрати в н ы м и и что можно использовать любой известный из уровня техники способ определения аффинности связывания белков (например, анализ переноса энергии
флуоресценции (FRET), твердофазный и м м у н оферм ентн ы й анализ и конкурентно-связывающие анализы (например, радиоиммунологические анализы)) для оценки значений аффинности связывания описываемых в настоящем документе РКЕ2-аднектинов.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления температура плавления (Тщ) у связывающего сывороточный альбумин аднектина, который описан в настоящем документе, у гибридных, белков, которые его содержат, составляет по меньшей мере 50°С, например, по меньшей мере 51°С, по меньшей мере 52°С, по меньшей мере 53°С, по меньшей мере 54°С, по меньшей мере 55°С, по меньшей мере 56°С, по меньшей мере 57°С, по меньшей мере 58°С, по меньшей мере 59°С, по меньшей мере 60°С, по меньшей мере 61 °С, по меньшей мере 62°С, по меньшей мере 63°С, по меньшей мере 64°С, по меньшей мере 65°С, по меньшей мере 66°С, по меньшей мере 67°С, по меньшей мере 68°С, по меньшей мере 69°С, по меньшей мере 70°С, по меньшей мере 71 °С, по меньшей мере 72°С, по меньшей мере 73°С, по меньшей мере 74°С, или по меньшей мере 75°С, при измерении с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) или термической сканирующей флуоресцентной спектроскопии (TSF), например, как описано в разделе Примеры. В соответствии с конкретными вариантами осуществления температура плавления (Тт) у связывающего сывороточный альбумин аднектина, который описан в настоящем документе, или у гибридных белков, которые его содержат, составляет 50-75°С, например, 51-75°С, 52-75°С, 53-75°С, 54-75°С, 55-75°С, 56-75°С, 57-75°С, 58-75°С, 59-75°С, 60-75°С, 61-75°С, 62-75°С, 63-75°С, 64-75°С, 65-75°С, 66-75°С, 67-75°С, 68-75°С, 69-75°С, 70-75°С, 50-74°С, 50-73°С, 50-72°С, 50-71 С, 50-7()°С, 50-69°С, 50-68 С, 50-67 С, 50-66°С, 50-65°С, 50-64°С, 50-63 С. 50-62°С, 50-61 С, 50-60°С, 50-59 С. 50-58°С, 50-57°С, 50-56°С, 50-55°С, 51-74°С, 52-73°С, 53-71°С, 54-70°С или 55-65°С, при измерении с помощью дифференциальной калориметрии (DSC) или термической сканирующей флуоресцентной спектроскопии (TSF), например, как описано в разделе Примеры.
1С Терапевтические применения in vivo
Настоящее изобретение относится к фибронектиновым каркасным белкам, которые пригодны при лечении нарушений. В случае гибридных белков, содержащих связывающий сывороточный альбумин аднектин, поддающиеся лечению заболевания или нарушения будут определяться специфичностью связывания фрагмента, например, второго аднектина,
который соединен с аднектином. Как описано в настоящем документе, фибронектиновые каркасные белки могут быть предназначены для связывания любой представляющей интерес цели. В соответствии с одним вариантом осуществления целью является PCSK9. Фибронектиновые каркасные белки, которые связываются с PSCK9, и гибридные белки, которые их содержат, можно применять для лечения атеросклероза, гиперхолестеринемии и других связанных с повышенный уровнем холестерина заболеваний.
В настоящей заявке также представлены способы введения субъекту фибронектиновых каркасных белков. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъектом является человек. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фибронектиновые каркасные белки являются фармацевтически приемлемыми для млекопитающего, в частности человека. "Фармацевтически приемлемая" композиция относится к композиции, которую вводят животному без существенных побочных медицинских последствий. Примеры фармацевтически приемлемых композиций включают композиции, содержащие 10Fn3 домены, у которых отсутствует интегрин-связывающий домен (RGD), и композиции, которые фактически не содержат эндотоксин или пироген или содержат очень низкие уровни эндотоксина или пирогена.
L. Составы и введение
В настоящей заявке предложены способы введения терапевтического фрагмента, гибридизированного со связывающим сывороточный альбумин 10Fn3 доменом, причем период полужизни терапевтического фрагмента продлен при гибридизации со связывающим сывороточный альбумин 10Fn3 доменом. Методики и дозировки для введения гибридных конструкций будут варьировать в зависимости от типа терапевтического фрагмента, гибридизованного со связывающим сывороточный альбумин 10Fn3 доменом, и конкретного подвергаемого лечению состояния, но специалист в настоящей области без труда определит их. В целом, контролирующие органы требуют, чтобы белковый реагент, подлежащий применению в качестве терапевтического средства, был смешан в состав так, чтобы он содержал приемлемо низкие уровни пирогенов. Соответственно, терапевтические составы обычно будут отличаться от других составов в том, что они практически не будут содержать пироген или по меньшей мере будут содержать не превышающие приемлемые уровни пирогена, которые определены соответствующим контролирующим органом
(например, FDA). В соответствии с конкретными вариантами осуществления фармацевтические составы со связывающими сывороточный альбумин 10Fn3 доменами и гибридными с ними молекулами содержат, например, 1-20 мМ янтарной кислоты, 2-10% сорбита и 1-10% глицина с рН 4,0-7,0. В соответствии с иллюстративным вариантом осуществления фармацевтические составы со связывающими сывороточный альбумин 10Fn3 доменами и гибридными с ними молекулами содержат, например, 10 мМ янтарной кислоты, 8% сорбита и 5% глицина с рН 6,0.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления связывающие сывороточный альбумин 10Fn3 домены и гибриды с ними являются фармацевтически приемлемыми для млекопитающего, в частности для человека. "Фармацевтически приемлемый" полипептид относится к полипептиду, который вводят животному без существенных побочных медицинских последствий. Примеры фармацевтически приемлемого связывающего сывороточный альбумин 10Fn3 домена и гибридов с ним включают 10Fn3 домены, которые не содержат интегрин-связывающий домен (RGD), и композиции со связывающими сывороточный альбумин 10Fn3 доменами или гибридами со связывающим сывороточный альбумин 10Fn3 доменом, которые фактически не содержат эндотоксин или имеют очень низкие уровни эндотоксина.
Терапевтические композиции можно вводить с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или формообразующим в стандартной лекарственной форме. Введение может быть, в качестве неограничивающих примеров, парентеральным (например, внутривенный, подкожным), пероральным или местным применением. Композиция может иметь форму пилюли, таблетки, капсулы, жидкости или таблетки с замедленным высвобождением для перорального введения; жидкости для внутривенного, подкожного или парентерального введения; или геля, лосьона, мази, крема или полимерного или другого типа наполнителя с замедленным высвобождением для местного применения.
Способы получения составов, которые хорошо известны настоящей области техники, можно найти, например, в работе "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20th ed., ed. A. R. Gennaro A R, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.). Составы для парентерального введения могут содержать, например, формообразующие, стерильную воду, солевой раствор, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения или гидрогенизированные нафталины. Для контроля
высвобождения соединения можно применять биосовместимый, биоразлагаемый лактидный полимер, сополимер лактида/гликолида или сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена. Для контроля биораспределения соединения можно применять составы в форме наночастиц (например, биоразлагаемые наночастицы, твердые липидные наночастицы, липосомы). Другие потенциально пригодные системы парентеральной доставки включают частицы на основе сополимера этилена и винилацетата, осмотические насосы, имплантируемые инфузионные системы и липосомы. Концентрация соединения в составе варьирует в зависимости от ряда факторов, в том числе дозировки подлежащего введению лекарственного средства и пути введения.
Полипептид необязательно можно вводить в виде фармацевтически приемлемой соли, такой как нетоксичные соли присоединения кислоты, или комплексов с металлами, которые традиционно применяют в фармацевтической промышленности. Примеры солей присоединения кислоты включают органические кислоты, такие как уксусная, молочная, памовая, малеиновая, лимонная, яблочная, аскорбиновая, янтарная, бензойная, пальмитиновая, пробковая, салициловая, виннокаменная, метансульфоновая, толуолсульфоновая или тифторуксусная кислоты или другие; полимерные кислоты, такие как дубильная кислота, карбоксиметилцеллюлоза или другие; и неорганическую кислоту, такую как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота или другие. Комплексы с металлами включают цинк, железо и другие. В соответствии с одним примером полипептид смешан в составе в присутствии ацетата натрия для повышения термостабильности.
Составы для перорального применения включают таблетки, содержащие активный ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми формообразующими. Такие формообразующие могут представлять собой, например, инертные разбавители или наполнители (например, сахарозу и сорбит), смазывающие вещества, вещества, способствующие скольжению, и противоадгезивные средства (например, стеарат магния, стеарат цинка, стеариновую кислоту, разновидности диоксида кремния, гидрогенизированные растительные масла или тальк).
Составы для перорального применения также могут быть представлены в виде жевательных таблеток или в виде твердых желатиновых капсул, в которых активных
ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой.
Терапевтически эффективная доза относится к дозе, которая производит терапевтические эффекты, с целью которых ее вводят. Точная доза будет зависеть от подлежащего лечению нарушения и может быть установлена специалистом в настоящей области с помощью известных методик. В целом, гибрид со связывающими сывороточный альбумин 10Fn3 доменами или со связывающим сывороточный альбумин 10Fn3 доменом вводят в количестве от приблизительно 0,01 мкг/кг до приблизительно 50 мг/кг в день, предпочтительно от 0,01 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг в день, наиболее предпочтительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг в день. Полипептид можно давать ежедневно (например, один, два, три раза или четыре раза в день) или реже (например, один раз в два дня, один или два раза в неделю, один раз в две недели или раз в месяц). Кроме того, как известно из уровня техники, могут быть необходимы корректировки на возраст, а также массу тела, общее состояние здоровья, пол, рацион, время введения, взаимодействие с другими лекарственными средствами и тяжесть заболевания, и специалисты в настоящей области смогут установить их с помощью простого эксперимента.
Содержание всех фигур и всех литературных источников, последовательностей из Genbank, патентов и опубликованных заявок на выдачу патентов, которые упомянуты в настоящей заявке, однозначно включено в настоящий документ при помощи ссылки. В частности, раскрытие предварительной заявки на выдачу патента США № 61/968181 (поданной 20 марта 2014 года) явно включено в настоящий документ при помощи ссылки.
В приведенном выше раскрытии в целом описано настоящее раскрытие, которое дополнительно проиллюстрировано приведенными далее примерами. Данные конкретные примеры описаны лишь с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения объема настоящего раскрытия. Несмотря на то, что в настоящем документе были использованы конкретные нормы, термины и значения, такие нормы, термины и значения будут аналогично пониматься как иллюстративные и неограничивающие в отношении объема настоящего раскрытия.
Примеры
Высокопроизводительное получение белка (НТРР)
Выбранные связывающие молекулы, которые были клонированы в вектор PET9d перед НКб-меткой и трансформированы в клетки BL21 DE3 plysS Е. coli, инокулировали в 5 мл среде LB, которая содержала 50 мкг/мл канамицина, в 24-луночном формате и выращивали при 37°С в течение ночи. Получали свежие 5 мл культуры в среде LB (50 мкг/мл канамицина) для индуцируемой экспрессии путем аспирации 200 мкл из полученной за ночь культуры и внесения их в соответствующую лунку. Культуры выращивали при 37°С до достижения Абоо 0,6-0,9. После индукции при помощи 1 мМ изопропил-Р-тиогалактозида (IPTG) культуре позволяли экспрессироваться в течение 6 часов при 30°С и собирали полученный продукт при помощи центрифугирования в течение 10 минут на 2750 g при 4°С.
Клеточные осадки (в 24-луночном формате) лизировали путем ресуспендирования в 450 мкл лизирующего буфера (50 мМ МаНгРОд, 0,5 М NaCl, 1х коктейль ингибиторов протеаз без ЭДТА Complete (tm) (Roche), 1 мМ PMSF, 10 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, 1 мг/мл лизоцима, 30 мкг/мл ДНКазы, 2 мкг/мл апротонина, рН 8,0) и встряхивали при комнатной температуре в течение 1-3 часов. Лизаты осветляли и повторно декантировали в 96-луночном формате путем переноса в 96-луночный Whatman GF/D Unifilter, оснащенный 96-луночным, 1,2 мл планшетом для улавливания, и фильтровали под положительным давлением. Осветленные лизаты переносили в 96-луночный планшет для хелатирования никеля или кобальта, который уравновешивали при помощи равновесного буфера (50 мМ МаНгРОд, 0,5 М NaCl, 40 мМ имидазола, рН 8,0) и инкубировали в течение 5 минут. Несвязавшийся материал удаляли под положительным давлением. Смолу дважды промывали при помощи 0,3 мл/лунка промывочного буфера №1 (50 мМ МаНгРОд, 0,5 М NaCl, 5 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, рН 8,0). Каждый смыв удаляли под положительным давлением. Перед элюированием каждую лунку промывали при помощи 50 мкл элюирующего буфера (PBS + 20 мМ EDTA), инкубировали в течение 5 минут и удаляли такой смыв под положительным давлением. Белок элюировали путем внесения дополнительных 100 мкл элюирующего буфера в каждую лунку. Спустя 30 минут инкубации при комнатной температуре планшет(ы) центрифугировали в течение 5 минут на 200 g и элюированный белок собирали в 96-луночные планшеты для улавливания, которые
содержали 5 мкл 0,5 М MgCh, добавленного на дно планшета для улавливания элюата перед элюированием. Элюированный белок количественно оценивали с помощью анализа общего белка с 10Fn3 доменом дикого типа в качестве стандарта белка.
Среднемасштабная экспрессия и очистка нерастворимых молекул, связывающих фибронектиновый каркасный белок
Для экспрессии нерастворимых клонов клон(ы), после которых шла НКб-метка, клонировали в вектор pET9d (EMD Bioscience, Сан-Диего, Калифорния) и экспрессировали в клетках HMS174 Е. coli. Двадцать мл инокулируемой культуры (полученной от одной высеянной колонии) использовали для инокуляции 1 литра среды LB, которая содержала 50 мкг/мл карбенициллина и 34 мкг/мл хлорамфеникола. Культуру выращивали при 37°С до достижения Абоо 0,6-1,0. После индукции при помощи 1 мМ изопропил-Р-тиогалактозида (IPTG) культуру выращивали в течение 4 часов при 30°С и полученный продукт собирали при помощи центрифугирования в течение 30 минут на > 10000 g при 4°С. Клеточные осадки замораживали при -80°С. Клеточный осадок ресуспендировали в 25 мл лизирующего буфера (20 мМ МаНгРОд, 0,5 М NaCl, 1х коктейль ингибиторов протеаз без ЭДТА Complete (Roche), 1 мМ PMSF, рН 7,4) с применением гомогенизатора ULTRA-TURRAX(r) (IKA works) на льду. Клеточный лизис осуществляли при помощи гомогенизации под высоким давлением (> 18000 psi) с применением микрофлюидизатора MICROFLUIDIZER(r) модели М-1 10S (Microfluidics). Нерастворимую фракцию отделяли при помощи центрифугирования в течение 30 минут на 23300 g при 4°С. Нерастворимый осадок, полученный в результате центрифугирования лизата, промывали посредством 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl, рН7,4. Осадок повторно растворяли в 6,0 М гуанидина гидрохлориде в 20 мМ фосфате натрия/500 М NaCl, рН 7,4 путем обработки ультразвуком с последующим инкубированием при 37 градусах в течение 1-2 часов. Повторно растворенный осадок фильтровали до 0,45 мкм и загружали на колонку со смолой для очистки по гистидиновой метке, уравновешенной при помощи буфера 20 мМ фосфата натрия/500 М NaCl/6,0 М гуанидина, рН 7,4. После загрузки колонку промывали дополнительными 25 объемами колонки того же буфера. Связавшийся белок элюировали при помощи 50 мМ имидазола в 20 мМ фосфате натрия/500 мМ NaCl/6,0 М гуанидин-НС1,
рН7,4. Очищенный белок подвергали рефолдингу путем диализа против 50 мМ ацетата натрия/150 мМ NaCl, рН 4,5.
Среднемасштабная экспрессия и очистка растворимых молекул, связывающих фибронектиновый каркасный белок
Для экспрессии растворимых клонов клон(ы), после которых шла НКб-метка, клонировали в вектор pET9d (EMD Bioscience, Сан-Диего, Калифорния) и экспрессировали в клетках HMS174 Е. coli. Двадцать мл инокулируемой культуры (полученной от одной высеянной колонии) использовали для инокуляции 1 литра среды LB, которая содержала 50 мкг/мл карбенициллина и 34 мкг/мл хлорамфеникола. Культуру выращивали при 37°С до достижения Абоо 0,6-1,0. После индукции при помощи 1 мМ изопропил-Р-тиогалактозида (IPTG) культуру выращивали в течение 4 часов при 30°С и полученный продукт собирали при помощи центрифугирования в течение 30 минут на > 10000 g при 4°С. Клеточные осадки замораживали при -80°С. Клеточный осадок ресуспендировали в 25 мл лизирующего буфера (20 мМ NaH2P02, 0,5 М NaCl, 1х коктейль ингибиторов протеаз без ЭДТА Complete (Roche), 1 мМ PMSF, рН 7,4) с применением гомогенизатора ULTRA-TURRAX(r) (IKA works) на льду. Клеточный лизис осуществляли при помощи гомогенизации под высоким давлением (> 18000 psi) с применением микрофлюидизатора MICROFLUIDIZER(r) модели М-1 10S (Microfluidics). Растворимую фракцию отделяли при помощи центрифугирования в течение 30 минут на 23300 g при 4°С. Надосадочную жидкость осветляли при помощи 0,45 мкм фильтра. Осветленный лизат загружали на колонку со смолой для очистки по гистидиновой метке (GE), предварительно уравновешенную посредством 20 мМ фосфата натрия/500 MNaCl, рН 7,4. Затем колонку промывали 25 объемами колонки того же буфера с последующим промыванием 20 объемами колонки 20 мМ фосфата натрия/500 М NaCl/ 25 мМ имидазола, рН 7,4, а затем 35 объемами колонки 20 мМ фосфата натрия/500 М NaCl/40 мМ имидазола, рН 7,4. Белок элюировали 15 объемами колонки 20 мМ фосфата натрия/500 М NaCl/500 мМ имидазола, рН 7,4, фракции объединяли по их поглощению на А250 и диализировали против lx PBS, 50 мМ Tris, 150 MMNaCl; рН 8,5, или 50 MMNaOAc; 150 мМ NaCl; рН 4,5. Какой-либо осадок удаляли посредством фильтрации на 0,22 мкм фильтре.
Пример 1. Скрининг исходных связывающих молекул, которые связывают сывороточный альбумин за счет петли "южного полюса" (петли CD)
Для усовершенствования связывающих сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса" аднектинов (SABA) первого поколения, которые не связывались с сывороточным альбумином мыши и крысы, не обладали высокой аффинностью к сывороточным альбуминам различных видов и не всегда были совместимы в мультивалентной платформе на основе 10Fn3, отбирали при помощи скрининга связывающие сывороточный альбумин за счет петли "южного полюса" аднектины (аднектины РКЕ2) второго поколения с модифицированными последовательностями петли CD с помощью мРНК-дисплея как описано ниже.
Библиотеки полипептидов связывающих молекул на основе петли CD, содержащих модифицированный 10Fn3 домен, подвергали скринингу с помощью мРНК-дисплея (Xu et al., Chem Biol 2002;9:933-42) по способности связываться с сывороточным альбумином человека (HSA). Конструировали связывающие молекулы с петлей CD с различными длинами петли CD до +7 аминокислот, а остальную последовательность 10Fn3 оставляли дикого типа. Связывание с целью отслеживали при помощи qPCR и, если наблюдали сигнал специфического связывания, популяции клонировали и экспрессировали в Е. coli.
Пример 2. Выявление связывающих молекул с петлей CD, способных связывать HSA и вступать в перекрестную реакцию с Rh-SA и MSA
Формат ИФА с непосредственным связыванием использовали для выявления связывающих молекул с петлей CD, которые были получены в Примере 1 и которые связывали HSA и вступали в перекрестную реакцию с сывороточным альбумином макака-резус (Rh-SA) и/или с сывороточным альбумином мыши (MSA). На планшеты для ИФА MaxiSorp(tm) наносили покрытие посредством 10 мкг/мл либо HSA, либо Rh-SA, либо MSA и очищенные связывающие молекулы с петлей CD тестировали в количестве 1 мкМ. Связавшиеся аднектины детектировали с помощью конъюгированных с HRP mAb к гистидину (R &D Systems) и реагентами для детекции на основе ТМВ (BD Biosciences). Результаты ИФА подтверждали с помощью системы Biacore как описано ниже. Затем связывающие молекулы с петлей CD, выявленные в эксперименте ИФА как вступающие в перекрестную реакцию с Rh-SA и/или MSA (> 2Х фон), анализировали с помощью SEC в
отношении агрегации для демонстрации того, что связывание обусловлено мономерной частицей, что и предполагали для стабильного белка с правильной укладкой. Стабильность белка подтверждали с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) как описано ниже.
Один из выявленных клонов, называемый в настоящем документе 2270_С01, имел следующую аминокислотную последовательность:
MASTSGVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGWOVOMYSDWGPLYIYKEF TVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEGDKPSQHHHHHH (2270_С01; SEQ ID NO: 23)
Петля CD подчеркнута. Петли АВ, ВС, DE, EF и FG имели последовательности, идентичные человеческому 10Fn3 домену дикого типа (SEQ ID NO: 1). Проводили анализы на основе эксклюзионной хроматографии и DSC на полученном среднемасштабным способом 2270_С01 для подтверждения мономерности и определения термостабильности.
Проводили стандартную эксклюзионную хроматографию (SEC) на 2270_С01, полученном в результате среднемасштабного процесса. SEC полученного с помощью средиемасштабного способа материала проводили с применением Superdex 200 10/30 или на колонке Superdex 75 10/30 (GE Healthcare) на ВЭЖХ-системе Agilent 1100 или 1200 с УФ-детекцией на А214 нм и А28О нм и с флуоресцентной детекцией (возбуждение = 280 нм, испускание = 350 нм). Использовали буфер из 100 мМ сульфата натрия, 100 мМ фосфата натрия, 150 мМ хлорида натрия, рН 6,8, с соответствующей скоростью потока в колонке для SEC. Для калибровки по молекулярной массе использовали гельфильтрационные стандарты (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния). Как показано в Таблице 2, 2270 С01 был преимущественно мономерным (98% мономера).
Проводили анализы на основе дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) полученных с помощью среднемасштабного способа аднектинов для определения их соответствующих Тт. Сканировали 0,5 мг/мл раствор в дифференциальном сканирующем калориметре с VP-капиллярной ячейкой (GE Microcal) путем линейного изменения температуры от 15°С до 110°С со скоростью 1 градус в минуту под давлением 70 psi. Данные анализировали относительно контрольного прогона соответствующего буфера с помощью метода наилучшего приближения с применением программного обеспечения Origin (OriginLab Corp). Как показано в Таблице 2, 2270_С01 имел Тт, равную 64°С.
Для определения кинетики связывания с сывороточным альбумином человека, макака-резус и мыши, а также того, сохранялось ли связывание как при физиологическом, так и при эндосомальном рН, соответствующие сывороточные альбумины иммобилизировали на чипе Biacore СМ5 с плотностью распределения по поверхности -1200 RU с помощью стандартного NHS/EDC связывания. Для иммобилизации альбуминов применяли диапазон концентраций (0,25 нМ - 5 мкМ) 2270_С01 в HBS-P+ (0,01 MHEPES рН 7,4, 0,15 М NaCl, 0,05 об. % поверхностно-активного вещества Р-20) или ацетатном (0,02 мМ ацетата натрия, рН 5,5, 0,15 М NaCl, 0,05 об. % поверхностно-активного вещества Р-20) подвижных буферах. Кинетические измерения проводили с помощью фазы 3-минуты ассоциации и 6-10 минут диссоциации. Кинетические кривые сенсограмм с вычтенными эталонными значениями приводили в соответствие с 1:1 моделью связывания с помощью программного обеспечения Biaevaluation. Как показано в Таблице 1, 2270 С01 связывался с эквивалентной аффинностью при нейтральном и низком рН с альбумином каждого вида, однако аффинность к альбумину мыши была примерно в 10 раз слабее, чем аффинность связывания к альбумину человека или макака-резус.
Для усовершенствования свойств 2270 С01, а именно прогнозируемой in silico иммуногенности, последовательность 2270_С01 подвергали оптимизации с помощью мРНК-дисплея. Полученные в результате такой оптимизации аднектины в настоящем документе называются аднектины РКЕ2.
Пример 3. Создание производных аднектинов 2270 С01 с дополнительно модифицированной петлей CD; аднектинов РКЕ2
Последовательность 2270 С01 подвергали оптимизации с помощью мРНК-дисплея с использованием специально разработанных библиотек для уменьшения потенциала иммуногенности и подвергали скринингу в отношении связывания как с человеческими, так и с сывороточными альбуминами мыши в процессе мРНК-дисплея с целью получения производных молекул с более низкой иммуногенностью, которые сохраняли межвидовое связывание альбумина. Полученные в результате последовательности оценивали в отношении in silico прогнозируемой иммуногенности, и лишь клоны, которые имели in silico показатель иммуногенности ниже предварительно определенного предела отсечения, использовали в последующей стадии получения белка с помощью методики НТРР. Полученные в результате аднектины очищали с помощью НТРР и подвергали скринингу с помощью ИФА с непосредственным связыванием и SEC-HPLC как описано выше.
Из 308 аднектинов РКЕ2, полученных при скрининге производной 2270 С01 и подвергнутых тестированию, приведенные далее 25 молекул имели наилучшие характеристики в отношении in silico прогнозируемой иммуногенности, мономерности, по результатам определения с помощью SEC, и связывания с сывороточным альбумином от различных видов, по результатам определения с помощью ИФА с непосредственным связыванием. Определение аффинности наилучших кандидатов анализировали с помощью SPR как описано выше.
SEQID
Аднектины РКЕ2
Последовательность (с подчеркнутой петлей CD)
2629_А09
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY RTEIDKPSQHHHHHH
2629_A11
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVHIYSDWG PMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY RTEIDKPSQHHHHHH
2629_C10
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSVLG
PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2629_D09
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDL
GPLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN
YRTEIDKPSQHHHHHH
2629_E05
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKFSDW GPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2629_E06
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2629_F04
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHOYSDW
GPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN
YRTEIDKPSQHHHHHH
2629_H01
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVHKNSDW GTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVXAVTGSGEXPASSKPISIN YRTEIDKXSQHHHHHH
2629_H06
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2629_H07
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHLYSDW
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN
YRTEIDKPSQHHHHHH
2630_A02
MGVSDVPRDLEVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOMYSDL
GPLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2630_A11
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHMYSDF
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN
YRTEIDKPSQHHHHHH
2630_D02
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2630_D10
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDL GPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2630_F04
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDL GPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2630_G03
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY RTEIDKPSQHHHHHH
2630_G10
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2630_H03
MGVSDVPRDLEVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKXSQHHHHHH
2631_B04
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYGRHVHLYSEFG PMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY RTEIDKPSQHHHHHH
2631_E03
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRDVHMYSDW GPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2631_G01
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2631_G03
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRYVOLYSDW GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
2631_H09
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOVFSDLG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
2632_G01
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINY
RTEIDKPSQHHHHHH
4079_A04
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOMYSDW GPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH
Пример 4. Биофизические свойства аднектинов РКЕ2
Эксклюзионную хроматографию (SEC) проводили как описано выше на двух аднектинах РКЕ2, 2629 Е06 и 2630 D02, выявленных при скрининге как такие, которые имели наилучшие свойства в Примере 3. Как показано в Таблице 2, обе молекулы РКЕ2 были преимущественно мономерными.
Проводили анализы на основе дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) двух аднектинов РКЕ2 для определения их соответствующих Тт как описано выше. Как показано в Таблице 2, 2629_Е06 и 2630_D02 имели Тм соответственно 56°С и 57°С.
Таблица 2
Аднектин РКЕ2
Связывающая петля
SEC (% мономера)
TM(°C)
2270_С01
98%
2629_Е06
> 95%
2630_D02
> 95%
Пример 5. Характеристика связывания аднектинов РКЕ2 с сывороточным альбумином от различных видов
Кинетику связывания сывороточных альбуминов с помощью 2629 Е06 и 2630 D02, а также кинетику связывания связывающего сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса" аднектина первого поколения, 1318Н04, определяли как описано выше. Кроме того, осуществляли связывание с альбумином в различных условиях рН в диапазоне от рН 5,5 до рН 7,4. Ни у 2629_Е06, ни у 2630_D02 не наблюдали зависимого от рН связывания с сывороточным альбумином человека, макака-резус или мыши, что свидетельствовало о том, что они могли сохранять связывание в эндосоме. Как показано в
Таблице 3,1318_Н04 имел более низкую аффинность к сывороточному альбумину человека, яванского макака и макака-резус, относительно 2629_Е06 и 2630_D02, и, кроме того, не связывался с сывороточным альбумином мыши или крысы. Более того, 1318 Н04 характеризовался в 10 раз более слабой аффинностью к сывороточному альбумину макака-резус, по сравнению с сывороточным альбумином человека, в то время как значения аффинности аднектинов РКЕ2 к альбуминам от различных видов были относительно эквивалентными.
У обоих аднектинов РКЕ2, 2629_Е06 и 2630_D02, наблюдали существенно более высокую аффинность ко всем протестированным сывороточным альбуминам, относительно 1318 Н04, как обсуждалось выше, со значениями KD ДЛЯ сывороточного альбумина человека, яванского макака, макака-резус и мыши в нижнем наномольном диапазоне. 2629 Е06 также характеризовался KD ДЛЯ сывороточного альбумина крысы в нижнем наномольном диапазоне, a 2630 D02 характеризовался KD ДЛЯ сывороточного альбумина крысы, равной 200 нМ.
Пример 6. Конкуренция аднектинов РКЕ2 с hFcRn за связывание с HSA
Принимая во внимание тот факт, что ингибирование связывания HSA с рецептором hFcRn будет предотвращать рециркуляцию HSA с участием hFcRn и уменьшать длинный период полужизни HSA, таким образом потенциально снижая степень улучшения фармакокинетики, тестировали уровень конкуренции с hFcRn за связывание с HSA для аднектинов РКЕ2 с помощью конкурентного анализа Alphascreen, который изображен на фиг. 1. Аднектины серийно разводили в буфере для подготовки пробы (50 мМ ацетата /150 MMNaCl / 0,1% Tween-20, рН 5,5 + 0,005% пеногасителя-204) до получения необходимого конечного диапазона концентраций для анализа. Мастер-микс белков и гранул для анализа Alphascreen готовили в буфере для подготовки пробы с получением конечных концентраций для анализа 6,5 нМ hFcRn-GST (BMS), 30 нМ биотинилированного сывороточного альбумина человека (Abeam) и 5 мкг/мл как донорных гранул со стрептавидином для анализа Alphascreen, так и акцепторных гранул с глутатионом для анализа AlphaLISA (Perkin Elmer). 10 мкл/лунка серийно разведенного аднектина, с последующими 10 мкл/лунка раствора белки + гранулы добавляли в 384-луночный аналитический планшет с малым объемом лунок (Greiner Bio-one). Гранулы для анализа Alphascreen и все вносимые в аналитический планшет вещества защищали от внешнего освещения. Аналитический планшет герметично закрывали клейкой пленкой из фольги и инкубировали в течение 2-2,5 часа со встряхиванием при комнатной температуре. Планшет считывали в ридере Synergy 4 (Biotek) с возбуждением на 570 нм и испусканием на 680 нм. Средний сигнал от контрольных лунок без аднектина устанавливали как 0% ингибирования и рассчитывали процент ингибирования взаимодействия FcRn-HSA относительно такого сигнала; из всех частных значений данных вычитали средний фоновый сигнал от контрольных лунок без биотинилированного HSA.
В Таблице 4 и фиг. 2 показаны результаты скрининга. В частности, 1318 Н04 сильнее конкурировал с hFcRn за связывание с HSA, чем исходный аднектин второго поколения 2270_С01 и аднектины РКЕ2 2629_Е06 и 2630_D02, что свидетельствовало о том, что аднектины РКЕ2 могут обеспечивать большее улучшение РК по сравнению с 1318 Н04.
Помимо этого, с помощью SPR определяли домены на HSA, связываемые 1318 Н04, 2629 Е06 и 2630 D02. Как показано в Таблице 4, аднектин 1318 Н04 связывался с доменом IHSA, а 2270_С01, 2629_Е06 и 2630_D02 связывались с доменом I-IIHSA, но не отдельным
доменом I, что свидетельствовало о том, что аднектины 1318 Н04 и РКЕ2 связывались с различными эпитопами на HSA. Ни один из показанных в Таблице 4 аднектинов не связывался с доменом III HSA, домен которого является важным участком взаимодействия HSA с FcRn.
Таблица 4
IC50
конкурентного
связывания
Домен связывания
hFcRn:HSA
HuSA по
Аднектин
(нМ)
результатам SPR
1318_Н04
8,0
2270_С01
37,0
III
2629_Е06
III
2630_D02
28,7
III
HuSA
2941
HuSA. домен Ml
. 10 мк\1
*дозозависимый эффект не насыщался до 2 мкМ, хотя процент ингибирования (т. е. ингибирование связывания hFcRn с HSA) составлял приблизительно 80%.
Пример 7. In vivo период полужизни потенциальных аднектинов РКЕ2
Аднектины РКЕ2 2629_Е06 и 2630_D02 получали, очищали и удаляли эндотоксин. Мышам дикого типа (п=3/группа) вводили инъекцией либо 2629_Е06, либо 2630_D02 в количестве 1 мг/кг в хвостовую вену и определяли концентрацию в образцах крови, взятых через интервалы после инъекции, с помощью количественного ИФА-анализа, который был разработан для детекции аднектина в образцах плазмы крови. В частности, уровни аднектинового лекарственного средства измеряли в плазме крови мыши с помощью платформы на основе технологии Mesoscale или стандартных колориметрических методов ИФА. 2629 Е06 и 2630 D02 захватывали с помощью mAb к His (BMS) и детектировали с помощью антисыворотки кролика к аднектиновому каркасу в комбинации с
конъюгированным с HRP pAb козы к антителам кролика. Альтернативно, их детектировали с помощью видоспецифичного альбумина, связывающегося с аднектином, и видоспецифичного вторичного антитела к альбумину с сульфо-меткой. Фармакокинетические параметры каждого аднектина определяли с помощью построения некомпартментной модели с применением программного обеспечения Phoenix WinNonlin.
Сравнивали фармакокинетические профили 2629 Е06 и 2630 D02 как показано на фиг. 3 и в Таблице 5. Период полужизни 2629_Е06 в плазме крови мыши составлял 33-41 час, в то время как период полужизни 2630_D02 составлял 35-39 часов.
Пример 8. Иммуногенность аднектинов РКЕ2
In silico прогнозирование связывания HLA оценивали с помощью программного обеспечения Epimatrix (Epivax). Сравнение показателей показано в Таблице 6. У аднектинов РКЕ2 2629 Е06 и 2630 D09 наблюдали сниженные in silico показатели относительно 2270 С01. Дополнительно, in vitro пролиферацию CD4+ Т-клеток в ответ на 1318 Н04, 2270_С01 и аднектины РКЕ2 оценивали в виде ex vivo оценки потенциальной иммуногенности у человека. Способ градиента плотности фиколла использовали для выделения мононуклеаров периферической крови (РВМС) из цельной крови, полученной от 40 независимых доноров, которые были приведены в соответствие по МНС II класса относительно генеральной совокупности. Клетки от каждого донора после выделения хранили в жидком N2 и оттаивали перед применением. Клетки от каждого донора метили флуоресцентным красителем карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловый сложный эфир (CFSE) и инкубировали с представлявшими интерес аднектинами в течение 7 дней при 37 ? С. Т-клетки метили антителом к CD4 и оценивали пролиферацию с помощью проточной цитометрии с применением аналитического программного обеспечения BD FACS Canto и
FlowJo. Антигенность белка рассчитывали как процент доноров, у которых наблюдали значимое увеличение пролиферации CD4+ клеток.
Сравнения исходного 2270_С01 и двух его производных 2629_Е06 или 2630_D02 выявляло, что исходная молекула имела более высокую антигенность (фиг. 4 и Таблица 6), что свидетельствовало о том, что два производных аднектина РКЕ2 характеризовались уменьшенным потенциалом иммуногенности относительно исходной молекулы.
Пример 9. Эффекты одноцистеиновых мутантов аднектинов РКЕ2 на связывание альбумина
В сайты включали отдельные цистеиновые остатки, отличающиеся от HSA-связывающих остатков аднектинов РКЕ-2, с целью обеспечения возможности химической конъюгации представляющих интерес терапевтических молекул путем стандартных химических реакций с малеимидной группой. Важно было сохранить связывание с сывороточным альбумином (и, таким образом, улучшение РК) в контексте цистеиновой мутации, поэтому тестировали эффекты таких мутаций на связывание с сывороточным альбумином от различных видов с применением молекулы 2629_Е06 в качестве основы для
мутации. Скорость диссоциации (koff) каждого мутанта анализировали посредством SPR-анализа с иммобилизованными альбуминами и аднектинами, которые использовали в качестве анализируемых веществ в количестве 250 нМ. Как показано в Таблице 7, при введении одноцистеиновых мутаций в 2629_Е06 наблюдали схожие скорости диссоциации от сывороточных альбуминов у различных видов, как и у исходной молекулы 2629_Е06, что указывало на то, что связывание с сывороточным альбумином сохранялось в контексте таких конкретных мутаций. Таким образом, любой из таких цистеиновых мутантов мог служить в качестве партнера химической конъюгации с представляющими интерес терапевтическими молекулами и обеспечивать улучшение РК.
Пример 10. Биофизические свойства одноцистеиновых мутантов 2629 Е06
Оценивали биофизические свойства одноцистеиновых мутантов, описанных в Примере 9, и результаты показаны в Таблице 8. Каждый мутант давал термически стабильный и мономерный белок.
Пример 11. Модульность тандемных молекул аднектина РКЕ2
Одним из ограничений связывающих сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса" аднектинов было отсутствие совместимости для применения в тандеме с другими 10Fn3 белками. Поэтому исследовали совместимость аднектинов РКЕ2 с другими 10Fn3 белками. Тестировали биофизические характеристики аднектинов РКЕ2 при гибридизации в тандеме с аднектином, который был специфичен к другой цели. Тестировали аднектины РКЕ2 в обоих возможных конфигурациях: в N-концевом расположении (РКЕ2-Х) и в С-концевом расположении (Х-РКЕ2). Характеристики, получаемые с помощью эксклюзионной хроматографии, тестировали с применением молекул, полученных с помощью НТРР способа. Гибриды с аднектином первого поколения 1318_Н04 с петлей "северного полюса" непосредственно сравнивали с гибридами с
аднектинами РКЕ2 2629_Е06 и 2630_D02. Тестируемые партнеры гибридизации включали связывающий миостатин 10Fn3 домен (2987_Н07; см. WO2014/043344), два связывающих PCSK9 10Fn3 домена (2013_Е01 и 2382_D09) и связывающий EGFR 10Fn3 домен (1312_Е01). Последовательности аднектинов PCSK9 2382 D09 и 2013Е01 можно найти в WO2011/130354, которая включена в настоящий документ с помощью ссылки. Как показано в Таблице 9, молекулы обоих аднектинов РКЕ2 постоянно сохраняли хорошие биофизические характеристики, что отражалось в доле молекул с SEC классом А (т. е. который соответствует тому, что > 90% являются мономерными аднектинами), относительно молекулы SABA 1318_Н04 с петлей "северного полюса", в контексте тандемного аднектина. РКЕ в таблице относится к связывающему сывороточный альбумин 10Fn3 домену (т. е. улучшающему РК 10Fn3 домену). Соотношения представляют собой число клонов с SEC=A/o6niee число протестированных клонов. Тандемы, которые не были созданы, обозначены "-".
Таблица 9
% тандемов РКЕ с SEC = А
Аднектин
2987_Н07 (Муо)
2013_Е01 (PCSK9)
1312_Е01 (EGFR)
2382_D09 (PCSK9)
Ориентация
Х-РКЕ
РКЕ-X
Х-РКЕ
РКЕ-X
Х-РКЕ
РКЕ-X
Х-РКЕ
РКЕ-X
РКЕ
1318_Н04
(8/26)
(0/26)
(8/26)
(8/26)
2629_Е06
(3/10)
(8/10)
(9/10)
(8/10)
(7/10)
(7/10)
(51/88)
2630_D02
(2/10)
(6/10)
(5/10)
(8/10)
(7/10)
(7/10)
Данные на фиг. 5 отражают данные, представленные в Таблице 9, для связывающего
2987_Н07 миостатин 10Fn3 домена и связывающего 2013_Е01 PCSK9 10Fn3 домена, за
исключением того, что различные оттенки серого отражают способность тандемных
молекул уменьшать связывание с HSA, по результатам определения в анализе ИФА
непосредственным связыванием, который описан выше. Различные оттенки серого на фиг.
5 соответствуют различным соотношениям ЕС5о_тандемного
аднектина/ЕС5о_моноаднектина в отношении связывания с HSA, причем более темные оттенки представляют более сильное связывание тандемных молекул с HSA. Из данных на
фиг. 5 видно, что РКЕ2-тандемные молекулы имели лучшую мономерность (т. е. были менее склонны к димеризации и агрегации) и связывание с HSA (т. е. теряли меньше связывания с HSА и RhSA) относительно аднектина 1318 Н04. Схожие картины наблюдали с четырьмя дополнительными связывающими цель аднектинами. Из этих данных видно, что аднектины РКЕ2 представляют собой более стабильный и активный партнер связывания с другими 10Fn3 белками, чем связывающие сывороточный альбумин за счет петли "северного полюса" аднектины.
Пример 12. Тандемные молекулы PCSK9-PKE2 характеризуются хорошей активностью в биохимических анализах PCSK9, низкими показателями EpiMatrix, хорошими биофизическими свойствами и межвидовым связыванием альбумина
Получали различные тандемные аднектины PCSK9-PKE2 на основе аднектина РКЕ2 2629 Е06 и аднектина PCSK9 2382 D09, которые показаны в Таблице 10. Каждая из тандемных молекул отличались лишь линкером, и их все тестировали в отношении их биофизических и функциональных свойств для подтверждения сохранения активностей как связывающего альбумин РКЕ2, так и связывающего PCSK9 аднектина. Межвидовое связывание альбумина определяли с помощью способа ИФА, который описан выше. Относительную термостабильность оценивали с помощью термической сканирующей флуоресцентной спектроскопии (TSF). Образцы из НТРР нормализовали к 0,2 мг/мл в PBS. 1 мкл красителя Sypro orange, разведенного 1:40 при помощи PBS, добавляли к 25 мкл каждого образца и запечатывали планшет прозрачной клейкой лентой для 96-луночных микропланшетов. Образцы сканировали с помощью RT-PCR машины BioRad путем линейного изменения температуры с 25°С до 95°С со скоростью 2 градуса в минуту. Данные анализировали с помощью программного обеспечения BioRad CFX manager 2.0. Было показано, что полученные с помощью TSF значения хорошо коррелировали со значениями Тт, полученными с помощью DSC, в диапазоне плавления 40°С - 70°С. Его считают приемлемым рабочим диапазоном для такой методики. Результат ND ("нет данных") получали в случае, когда угловой коэффициент кривой фазового перехода был слишком мал для того, чтобы можно было отличить его производный пик (скорость изменения флуоресценции со временем) от шума.
С помощью FRET анализа PCSK9:EGFA измеряли ингибирование связывания PCSK9 с доменом, подобным предшественнику эпидермального фактора роста (EGFA-доменом), рецептора липопротеинов низкой плотности (LDLR) с применением рекомбинантного PCSK9 человека, который экспрессировался в бакуловирусе, и синтетического EGFA-пептида из 40 мономеров (биотинилированного). Было показано, что EGFA представляет собой ключевой домен взаимодействия LDLR с PCSK9 (Kwon, H.J. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105(6): 1820-1825 (2008)). Этот анализ предусматривал применение mAb, связывающегося с С-концевым доменом PCSK9 (mAb 4Н5), меченного Еи-хелатом, обеспечивающим взаимодействие FRET с биотинилированным EGFA посредством флуорофор-содержащего комплекса стрептавидин/аллофикоцианин. FRET анализ PCSK9-LDLR проводили аналогичным образом с использованием внеклеточного домена LDLR вместо пептида EGFA.
Все тандемные молекулы обладали низкой иммуногенностью (отрицательным показателем Epimatrix), высокой мономерностью (по оценке с помощью SEC), приемлемой относительной термостабильностью (TSF) и благоприятным межвидовым связыванием альбумина по оценке с помощью ИФА-анализа. Кроме того, тандемные аднектины PCSK9-РКЕ2 сохраняли хорошую активность в биохимических анализах PCSK9 со значениями ICso, схожими с непереформатированным аднектином 2382_D09.
Пример 13. Кинетика связывания тандемных молекул PCSK9-PKE2 с PCSK9 человека
Связывание тандемного аднектина PCSK9-PKE2 с иммобилизованным PCSK9 человека измеряли в присутствии или в отсутствии HSA с помощью интерферометрии биослоя (Octet Red 96, с помощью наконечников с датчиками Superstreptavidin, ForteBio, Менло-Парк, Калифорния). События ассоциации и диссоциации захватывали в реальном времени для серии концентраций аднектина при помощи биотинилированных полноразмерных PCSK9, захваченных на наконечниках с датчиками. Кривые связывания приводили в целом в соответствие с получением значений KD, kon и k0ff.
Комплексы тандемный аднектин-HSA предварительно формировали путем инкубирования тандема в избытке и проведения анализа связывания в случае избыточного HSA. Считали, что комплекс между комплексами тандемный аднектин-HSA и PCSK9 человека сформировался, если имела место повышенная кажущаяся масса для тандемных аднектинов в случае HSA в той же концентрации (см., например, фиг. 6). Как показано в Таблице 11, все протестированные тандемные молекулы PCSK9-PKE2 имели схожую кинетику связывания и активности в отношении PCSK9. Наблюдали небольшое уменьшение для ассоциации и немного более быструю диссоциацию для комплекса HSA-аднектин, связывающегося с huPCSK9.
Пример 14. Характеристика связывания тандемных молекул PCSK9-PKE2 с сывороточным альбумином от различных видов
Аффинности тандемных молекул PCSK9-PKE2 в отношении сывороточного альбумина от различных видов, наряду с аффинностью аднектина РКЕ2 2629_Е06, оценивали с помощью анализа Biacore, как описано в Примере 2.
Как показано в Таблице 12, у всех трех тандемных молекул PCSK9-PKE2 наблюдали сравнимые аффинности к сывороточным альбуминам среди видов, при этом аффинности у тандемов были в 5-7 раз слабее (со схожими скоростями диссоциации) в сравнении с аднектином РКЕ2 2629_Е06.
Таблица 12
Тандемный аднектин
Связывание с
ka (1/Mc)
kd (1/c)
KD (нМ)
Rmax (RU)
2629 \т
HuSA
1J4E+04
2ДЗЕ-04
12,3
106,8
RhSA
l,95E+04
2,83E-04
14,5
86,24
MuSA
6,84E+04
2,42E-04
3,6
97,99
4472_F08
HuSA
4,82E+03
3,24E-04
67,1
187,8
RhSA
5,34E+03
3,67E-04
68,7
157,9
MuSA
l,35E+04
3,44E-04
25,5
166,7
4472 Е06
HuSA
5,30E+03
3,62E-04
68,4
215,4
RhSA
5J7E+03
4Д5Е-04
71,9
181,4
MuSA
l,50E+04
3,00E-04
20,0
186,2
4472_С06
HuSA
3,92E+03
2,89E-04
73,7
182,5
RhSA
4,38E+03
3,37E-04
77,0
155,9
MuSA
1Д5Е+04
3,01E-04
26,1
163,1
Схожий эксперимент (в условиях, которые описаны в Примере 2) проводили с тандемным аднектином 4472_С06 без 6Х гистидинового хвоста (называемым 5190_Е01). Как показано в Таблице 13, 5190 Е01 связывался с сывороточным альбумином мыши с KD, аналогичной таковой для сывороточного альбумина человека, яванского макака и макака-резус, и связывался с сывороточным альбумином крысы с KD, равной 200 нМ.
Также тестировали эффекты рН на связывание аднектина РКЕ2 2629 Е06 и тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 4472_С06, 4427_Е06 и 4472_F08. Как показано в Таблицах 14 и 15, у всех протестированных аднектинов наблюдали рН-независимое связывание с сывороточным альбумином от различных видов.
Пример 15. Двойное связывание тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 с альбуминами и PCSK9
Способность тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 одновременно связываться с сывороточным альбумином и PCSK9 оценивали с помощью SPR. По-видимому, тандем будет связываться с альбумином большей частью in vivo, и поэтому при связывании с альбумином будет необходимо сохранение активности аднектина PCSK9. Связывание тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 одновременно с обеими целями тестировали в режиме двойной инъекции с первой инъекцией тандема на иммобилизованный альбумин на поверхности чипа, за которой следовала вторая инъекция PCSK9 человека и регистрация уровней связывания после 3-минутной фазы ассоциации для каждой инъекции. Повышение сигнала связывания в SPR при инъекции PCSK9 относительно буфера свидетельствовало об одновременном связывании тандема с HSA и PCSK9, как показано на фиг. 7. У PCSK9
наблюдали -40% ожидаемого уровня связывания с 500 нМ или 1 мкМ тандемного аднектина, предварительно связанного с HSA. В качестве дополнительного контроля, у PCSK9 не наблюдали связывания только с РКЕ-2 (данные не показаны).
Пример 16. In vivo выведение аднектинов PCSK9-PKE2 у мышей WT С57 BL/6
In vivo период полужизни тандемного аднектина PCSK9-PKE2 4772_С06 определяли в 2-недельном исследовании с одной внутривенной дозой 2 мг/кг на мышах С57 В1/6 дикого типа. Уровни в плазме тандемного аднектина определяли с помощью платформы MesoScale Discovery. Биотинилированный PCSK9 человека использовали для захвата аднектина, а детекцию осуществляли при помощи сывороточного альбумина мыши, связавшегося с тандемом, и вторичного рАЬ с сульфо-меткой к сывороточному альбумину мыши. Некомпартментные анализы проводили с помощью Phoenix WinNonlin 6.3 (Pharsight Corporation, Маунтин-Вью, Калифорния) с применением способа линейно-логарифмического расчета и моделирования условий плазмы. Как показано в Таблице 16 и на фиг. 8, средний период полужизни тандемного аднектина 4772_С06 составлял 16,7 часа.
Пример 17. Тандемные аднектины PCSK9-PKE2 характеризовались робастным захватом цели PCSK9 in vivo
Фармакодинамическую активность тандемного аднектина PCSK9-PKE2 4472_С06 оценивали на мышиной модели, трансгенной по PCSK9 человека, которая характеризовалась нормальными уровнями PCSK9 человека. Эта модель представляла собой геномный трансгенный hPCSK9 (ВАС-трансгенный), который регулировался в печени аналогично PCSK9 мыши и который экспрессировался с почти нормальными для человека уровнями hPCSK9 в плазме. Несвязанный hPCSK9 оценивали после однократной внутрибрюшинной дозы PBS в качестве наполнителя или 0,5 или 2 мг/кг тандема с 8
животными на группу. Был разработан твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), специфичный к свободному (несвязанному) PCSK9 человека, который не детектировал PCSK9 мыши. Этот анализ предусматривал использование предварительно обработанных стрептавидином 96-луночных планшетов, покрытых 2 мкг/мл биотинилированного PCSK9-аднектина 2013 Е01 в качестве захватывающего реагента. Образцы плазмы, замороженные лишь не более одного раза, разводили надлежащим образом в буфере для ИФА (25 мМ Tris, 150 мМ NaCl, рН 7,2 с 0,05% Tween-20 и 0,1% BSA), добавляли в лунки и инкубировали в течение 1 часа при 20°С. Затем лунки промывали и инкубировали с 5 мкг/мл поликлонального IgG кролика к PCSK9 человека (разработанное BMS антитело, произведенное компанией Lampire Biological Labs, Пайперсвилл, Пенсильвания) в течение 1 часа с последующей обработкой HRP-меченным антителом к IgG кролика с ТМВ с помощью стандартных для ИФА способов. Строили стандартные кривые с помощью очищенного рекомбинантного PCSK9 человека.
Как показано на фиг. 9, результаты анализа уровней свободного hPCSK9 свидетельствовали о сильном захвате цели тандемным аднектином PCSK9-PKE2 в обеих тестированных дозах. Свободный hPCSK9 ингибировался дозозависимым образом, что было видно по большей длительности ответа на 2 мг/кг дозу относительно 0,5 мг/кг дозы. Из этих данных видна in vivo активность тандемного аднектина PCSK9-PKE2.
Пример 18. In vivo период полужизни моноаднектинов РКЕ2 и тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 у яванских макаков
PK/PD исследования с однократной дозой проводили на нормальных худых самках яванского макака со сравнениями тандема PCSK9-PKE2 с моноаднектином РКЕ2 или препаратом сравнения, который представлял собой пэгилированный аднектин PCSK9, в мольных эквивалентах дозы, которые указаны при помощи штриховки в приведенной ниже Таблице 17. Аднектин РКЕ2 2629_Е06, или аднектин 5190_Е01, который представлял собой тандем PCSK9-PKE2, или пэгилированный аднектин PCSK9 (называемый ATI-1476) в качестве препарата сравнения, вводили яванским макакам в указанных концентрациях и указанными путями (см. Таблицу 17 и фиг 10) и собирали образцы плазмы крови (K2EDTA) и сыворотки через промежутки времени для фармакокинетической и фармакодинамической оценки. Уровни аднектинового лекарственного средства измеряли в плазме крови мыши с
помощью платформы на основе технологии Mesoscale. 2629 Е06 захватывали посредством антител к His (BMS) и детектировали с помощью связанного с аднектином сывороточного альбумина макака и вторичного рАЬ с сульфо-меткой к сывороточному альбумину яванского макака. Для анализов тандемов биотинилированный PCSK9 человека использовали для захвата аднектина, а детекцию осуществляли при помощи альбумина яванского макака как описано выше. Пэгилированный аднектин ATI-1476 захватывали посредством биотинилированного hPCSK9 и детектировали посредством mAb к ПЭГ (Epitomics) в конъюгации с рАЬ козы с сульфо-меткой к антителу кролика. Некомпартментные анализы проводили с помощью Phoenix WinNonlin 6.3 (Pharsight Corporation, Маунтин-Вью, Калифорния) с применением способа линейно-логарифмического расчета и моделирования условий плазмы.
Как показано в Таблице 17, периоды полужизни 2629_Е06 и ATI-1476 в плазме были эквивалентными и составляли 112 часов. Период полужизни 5190-Е01 был короче периода полужизни моноаднектина РКЕ2 и варьировал в диапазоне от 60 до 82 часов после внутривенного введения. 5190Е01 характеризовался дозопропорциональным воздействием в промежутке от 3 до 10 мг/кг внутривенных доз (AUCALL соотношение 1,02). Для всех протестированных белков объем распределения был меньше объема плазмы, что свидетельствовало о том, что распределение тандемного аднектина PCSK9-PKE2 и пэгилированного аднектина было в основном ограничено пространством сосудов. Выведение в целом было низким и сравнимым для различных доз и форматов. Подкожная биодоступность тандемного аднектина 5190_Е01 составляла 41-49%.
PKE2 2629 E06
1,5 мг/кг IV
112 + 7,3
0,37 + 0,05
56 + 5,2
305 + 49
328 + 45
6,92 + 6,6
152 + 8,2
Также в отдельном исследовании у яванских макаков тестировали фармакокинетику исходного аднектина 2270_С01. Уровни аднектинового лекарственного средства количественно оценивали как описано выше для РК исследований на мышах. Как показано в Таблице 18 и на фиг. 11, аднектин 2270_С01 имел период полужизни 83,5 часа после однократной внутривенной болюсной дозы 1 мг/кг.
Пример 19. Тандемный аднектин PCSK9-PKE2 функционировал как ингибитор PCSK9 у яванских макаков
Результаты описанного выше PK/PD исследования на яванских макаках оценивали в отношении фармакодинамических эффектов ингибирования PCSK9. Были разработаны твердофазные иммуноферментные анализы (ИФА), специфичные для PCSK9 яванского макака. Анализ свободного (несвязанного) PCSK9 предусматривал использование платформы MesoScale Discovery и включал предварительно обработанные стрептавидином 96-луночные MSD планшеты, покрытые 2 мкг/мл биотинилированного РС8К9-аднектина 2013 Е01 в качестве захватывающего реагента. Образцы разводили 1:4 блокирующим и меченным сульфо-меткой поликлональным IgG кролика к PCSK9 человека (разработанное BMS антитело, произведенное компанией Lampire Biological Labs, Пайперсвилл, Пенсильвания), добавляли в лунки и инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем лунки промывали и считывали с применением 2Х буфера для
считывания MSD. ИФА анализ общего PCSK9 проводили аналогично описанному выше, за исключением того, что mAb-4H5 (разработанное BMS антитело, произведенное компанией Lampire Biological Labs, Пайперсвилл, Пенсильвания) включали в качестве антитела для захвата, а стадию детектирования выполняли отдельно от стадии захвата. МАЬ-4Н5 связывалось с С-концевым доменом PCSK9 и в связанном с 96-луночными планшетами состоянии эффективно захватывало общий PCSK9 (как комплекс аднектин-РС8К9, так и свободный PCSK9). В ходе стадий захвата и детекции общего PCSK9 проводили инкубацию в течение 1 часа. Строили стандартные кривые с помощью очищенного рекомбинантного PCSK9 человека или яванского макака.
Аналиты сыворотки анализировали на системе Siemens Advia 1800 Clinical Chemistry System с помощью стандартных ферментативных процедур. LDL-холестерин оценивали с помощью прямого способа оценки LDL (Roche Diagnostics). Другие тестируемые аналиты представляли собой следующие: аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфатаза, гамма-глютамилтрансфераза, общий билирубин, азот мочевины крови, креатинин, общий холестерин, триглицерид, липопротеин высокой плотности, липопротеин низкой плотности, глюкоза, общий белок, альбумин, глобулин, соотношение альбумин/глобулин, кальций, неорганический фосфор, натрий, калий, хлор.
Как показано на фиг. 12, у 5190_Е01 наблюдали фармакодинамические эффекты в отношении несвязанного/свободного PCSK9, общего PCSK9 и LDL-c, которые ранее наблюдали с другими ингибиторами аднектина PCSK9. В частности, наблюдали быстрый захват цели, при котором свободный PCSK9 резко падал до недетектируемых уровней в пределах 1 часа после введения дозы. LDL-c снижался до -50% исходного уровня в результате ингибирования PCSK9, при этом максимальное ингибирование наблюдали в рамках 2-5-дневного интервала. Кроме того, общий PCSK9 возрастал по мере накопления комплекса аднектин PCSK9-PKE2:PCSK9. После диссоциации комплекса и выведения лекарственного средства уровни PCSK9 и LDL-c возвращались к исходному уровню через -15 дней исследования. Сходную тенденцию наблюдали с препаратом сравнения, представлявшим собой пэгилированный аднектин PCSK9. Как показано на фиг. 13, 5190 Е01 характеризовался сходным робастным снижением LDL-c при 10 мг/кг, как и молярный эквивалент дозы препарата сравнения, представлявшего собой пэгилированный аднектин PCSK9.
Пример 20. Зависимость от дозы при захвате цели PCSK9
Дозозависимый ответ ингибирования свободного PCSK9 наблюдали в дозах 3 и 10мг/кг 5190_Е01, как показано на фиг. 14. Доза 10 мг/кг характеризовалась более длительным периодом захвата цели PCSK9, чем доза 3 мг/кг. На этой фигуре также проиллюстрирован эквивалентный захват цели PCSK9 для мольных эквивалентов дозы для тандемного и пэгилированного аднектинов. Как и ожидали, 2629_Е06 не изменял свободный PCSK9; любое наблюдаемое отклонение свободного PCSK9, по всей вероятности, было связано с суточным ритмом и вариабельностью исходного уровня.
На фиг. 15 проиллюстрировано отличие эффектов тандемного и пэгилированного аднектинов PCSK9 на общий PCSK9. Несмотря на то, что общая тенденция была такой же, общий PCSK9 возрастал и возвращался к исходному уровню быстрее у макак, которым была введена доза 5190 Е01, относительно препарата сравнения, который представлял собой пэгилированный аднектин PCSK9, что свидетельствовало об иных механизмах выведения для комплекса РС8К9:аднектиновое лекарственное средство в зависимости от используемого способа улучшения РК (выведение почками для тандема в сравнении с поглощением макрофагами для пэгилированного аднектина). И в этом случае также, как и ожидали, в этом анализе у 2629_Е06 не наблюдали фармакодинамического эффекта.
Пример 21. Тандемный формат характеризовался эквивалентным in vitro иммуногенным ответом относительно компонентов
In vitro оценку потенциальной иммуногенности проводили для нескольких тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 с помощью анализа пролиферации Т-клеток, как описано в Примере 8.
Как показано на фиг. 16, процент и степень иммуногенного ответа на тандемные аднектины были схожими с таковыми для моноаднектиновых компонентов (т. е. PCSK9 или РКЕ2; середина фиг. 16). Эти результаты свидетельствовали о минимальном риске/полном отсутствии риска иммуногенности для тандемных аднектинов в сравнении с моноаднектинами. Кроме того, различия в пролиферативном ответе на тандемы наблюдали в зависимости от последовательности линкера, соединявшего аднектины PCSK9 и РКЕ2. Относительно тандемных аднектинов PCSK9-PKE2 4472_F08 и 4472_Е06, у тандемного аднектина 4472_С06 наблюдали наиболее низкую иммуногенность. Одним потенциальным
механизмом для таких наблюдаемых отличий могли быть отличия в переработке белка Т-клетками в ответ на последовательности линкера.
Сводка свойств 4472_С06 представлена ниже в Таблице 19.
Таблица 19
Свойство
Система
4472 С06
Молекулярная
Ьиофи 5H4CCKOC
I4. SK9 KI) (37 С) KI.) альбумина
Ьпочимическая а к шинос i ь
КлеI очная ак Iпиное Iь
I Ipoi позпруемая MMMVHOI епносп.
Мя '.KOCI \>
Теплоешбплыюегь. Т,:, Мономсриои ь
Че.юиек. япапекпн макак Че.юиек. яианскип макак, мышь.
I'CNk" I (. I \ I КI I. че.мге!-.
I loi лощение I4SK9 IIcioineiiiie 1.1)1 R 11ролпферанпя PUMC l-pimairi\
Co.iepvK послед ЮГпЗ\\Т Грана сипая п.ш \VT мышь Я намеки ii макак
IJ необходимой копией ipainni lie.ioK 25 к Да
0.14 пМ. 39 п\| (сердпепппа. (> eiel Red i
57 ц\1. 51 нМ. 43 пМ. 200 пМ
19 пМ (сер/и LCISII на) 21
('I а идем)
9.4 пМ (кшдем)
Средняя низкая
(сердпенппа кшдем)
11п жая
Мысокая
17-24 ч
S2 ч
11п;кая
Иллюстративные варианты осуществления
1. Полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (10Fn3), причем 10Fn3 домен содержит а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, b) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью по отношению к последовательности соответствующей петли CD человеческого 10Fn3 домена, и с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ.
2. Полипептид по варианту осуществления 1, причем 10Fn3 домен дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резус,
1.
сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы.
3. Полипептид по варианту осуществления 2, причем 10Fn3 домен связывается с сывороточным альбумином макака-резус и сывороточным альбумином яванского макака.
4. Полипептид по варианту осуществления 3, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 500 нМ.
5. Полипептид по варианту осуществления 4, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 100 нМ.
6. Полипептид по варианту осуществления 5, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 10 нМ.
7. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин мыши и крысы.
8. Полипептид по варианту осуществления 7, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 500 нМ.
9. Полипептид по варианту осуществления 8, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 100 нМ.
10. Полипептид по варианту осуществления 9, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин макака-резус и сывороточный альбумин яванского макака с KD менее 10 нМ.
11. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем !"Fn3 домен связывает сывороточный альбумин в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.
12. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем "'РпЗ домен связывается с доменом I-II USA.
13. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем период полужизни в сыворотке полипептида в присутствии сывороточного альбумина человека составляет по меньшей мере 30 часов.
10.
14. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем петля CD содержит аминокислотную последовательность, соответствующую формуле G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-X10-X11-X12-E, где,
(a) Xi выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Хг выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Хз выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) Х4 выбран из группы, состоящей из I, К, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Хб выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) Х7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(h) Х8 выбран из группы, состоящей из Р или Т;
(i) Х9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) Хю выбран из группы, состоящей из I или V;
(к) Хп выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(1) Хп выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А.
15. Полипептид по варианту осуществления 14, где:
(a) Xi представляет собой R;
(b) Хг представляет собой Е;
(c) Хз представляет собой Q;
(d) Х4 представляет собой К;
(e) Х5 представляет собой Y;
(f) Хб представляет собой D;
(g) Х7 представляет собой L или W;
(h) Х8 представляет собой Р;
(i) Х9 представляет собой L;
(j) Хш представляет собой I;
(к) Хп представляет собой Y; и
(1) Хп представляет собой Q или N.
16. Полипептид по варианту осуществления 15, где Хю представляет собой L, а Х12 представляет собой Q.
16.
17. Полипептид по варианту осуществления 15, где Хю представляет собой W, а Х12 представляет собой N.
18. Полипептид по варианту осуществления 14, причем петля CD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 101-125.
19. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем петля CD содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ LD N0: 106.
20. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем петля CD содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ LD N0: 113.
21. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную отличным от петли CD участкам SEQ LD NO: 23-100, 184-209 и 235-260.
22. Полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 23100, 184-209 и 235-260.
23. Гибридный поли пептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (10Fn3) и гетерологи чн ы й белок, причем "Т'пЗ домен содержит а) петли А В, ВС, CD, DE, EF и FG, b) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью по отношению к последовательности соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена, и с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ.
24. Гибридный полипептид по варианту осуществления 23, причем !"Fn3 домен содержит а м и н о к и с л от н у ю п оследовател ьн ость, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 23-100, 184209 и 235-260.
25. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 24, причем 10Fn3 домен содержит амин о к и с л от и у ю и осл едовател ьн ость, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 55, 81. 190 или 241.
26. Гибридный полипептид по варианту осуществления 25, причем 10Fn3 домен содержит а м и н о к и сл отн у ю п осл едо вател ь н ость под SEQ ID NO: 55, 81. 190 или 241.
16.
27. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 24, причем 10Fn3 домен содержит а м и н о к и с л о т н у ю п осл едовател ьн ость, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 62, 88, 197 или 248.
28. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 27, причем 10Fn3 домен содержит аминокислотную и осл едо вател ь н ость под SEQ ID NO: 62, 88, 197 или 248.
29. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 23, причем гегерол or и ч н ы й белок представляет собой терапевтический фрагмент.
30. Гибридный полипептид по варианту осуществления 23, причем гегерол or и ч н ы й белок представляет собой полипептид, содержащий 10Fn3 домен.
31. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 30, причем 10Fn3 домен связывается с целевым белком, отличным от сывороточного альбумина.
32. Гибридный полипептид по варианту осуществления 31, причем '"Fn3 домен связывается с PCSK9.
33. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 32, причем 10Fn3 домен содержит аминокислотную п оследовател ьн ость, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 167.
34. Гибридный пол и пептид по варианту осуществления 33, причем '"Fn3 домен содержит а м и н о к и сл отн у ю последовательность под SEQ ID NO: 167.
35. Гибридный полипептид по варианту осуществления 23, причем гибридный п оли пептид содержит а м и н о к и с л от н у ю последовательность, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 168. 169 или 261.
36. Гибридный полипептид по варианту осуществления 35, причем гибридный полипептид содержит а м и н о к и сл отн у ю п осл едо вател ь н ость, изложенную под SEQ ID NO 168. 169 или 261.
37. Гибридный полипептид по любому из вариантов осуществления 23-36, причем период полужизни в сыворотке полипептида в присутствии сывороточного альбумина мыши составляет по меньшей мере 10 часов.
38. Гибридный пол и пептид по любому из вариантов осуществления 23-36. причем период полужизни в сыворотке полипептида в присутствии сывороточного альбумина яванского макака составляет по меньшей мере 50 часов.
16.
39. Пол и пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-125, 184-209 и 235-260, 168 и 169.
40. Композиция, содержащая полипептид по любому из предыдущих вариантов осуществления и носитель.
41. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из вариантов осуществления 1-39.
42. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 41, причем молекула нуклеиновой кислоты имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 126-151 и 172, или нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична ей.
43. Вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную последовательность по вариантам осуществления 41 или 42.
44. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 41 или 42 или вектор экспрессии по варианту осуществления 43.
45. Способ получения полипептидов по любому из вариантов осуществления 1-39, предусматривающий культивирование клетки по варианту осуществления 44 в условиях, подходящих для экспрессии полипептида, и очистку полипептида.
16.
39.
N-концевая лидерная
последовательность
X"RDL
N-концевая лидерная
последовательность
X"DL
N-концевая лидерная
последовательность
MASTSG
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEK
С-концевая хвостовая
последовательность
EGSGC
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEKPCQ
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEKPSQ
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEKP
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEKPS
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEKPC
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDK
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPCQ
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPSQ
6Х His-хвостовая метка
НННННН
Аднектин РКЕ2 2270_С01 (аминокислотная последовательность)
MASTSGVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITY GWOVOMYSDWGPLYIYKEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEGDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_А09 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVOIYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_А11 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVHIYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_С10 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSVLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_D09 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOMYSDLGPLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_Е05 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKFSDWGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_Е06 (аминокислотная последовательность) (также называемый ATI-1490)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSDLGPLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_F04 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHOYSDWGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_Н01 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYG REVHKNSDWGTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVXAVTGSGEXPASSKPISINYRTEIDKXSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_Н06 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSDLGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2629_Н07 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_А02 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RHVOMYSDLGPLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_А11 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHMYSDFGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_D02 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOKYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_D10 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOMYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_Е04 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOMYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_G03 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVOIYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_G10 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2630_Н03 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITY GREVOKYSDWGPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDY TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKXSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2631_В04 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYG
RHVHLYSEFGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2631_Е03 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RDVHMYSDWGPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDY
TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2631_G01 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RHVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2631_G03 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RYVOLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2631_Н09 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
ROVOVFSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 2632_G01 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
ROVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
Аднектин РКЕ2 4079_А04 (аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG ROVOMYSDWGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH
2270_С01 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MASTSGVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITY GWOVOMYSDWGPLYIYKEFTVPGSKSTATISGLKPGVD YTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEGDKPSQ
2629_А09 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVOIYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_А11 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVHIYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_С10 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSVLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_D09 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOMYSDLGPLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_Е05 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKFSDWGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_Е06 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSDLGPLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_F04 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHOYSDWGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_Н01 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYG REVHKNSDWGTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVXAVTGSGEXPASSKPISINYRTEIDKXSQ
2629_Н06 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOKYSDLGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2629_Н07 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_А02 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RHVOMYSDLGPLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_А11 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVHMYSDFGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_D02 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOKYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_D10 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG REVOMYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_F04 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOMYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_G03 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RHVOIYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_G10 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
REVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2630_Н03 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITY GREVOKYSDWGPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDY TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKXSQ
2631 В04 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYG
RHVHLYSEFGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2631 Е03 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RDVHMYSDWGPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDY
TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2631_G01 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
RHVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2631_G03 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG RYVOLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2631_Н09 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
ROVOVFSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2632_G01 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG
ROVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI
TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
4079_А04 без HIS-метки
(аминокислотная последовательность)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG ROVOMYSDWGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYT ITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQ
2270_С01,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGWOVOMYSDW
GPLYIYKEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRT
2629_А09,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG
PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES
PASSKPISINYRT
2629_А11,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVHIYSDWG PMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRT
2629_С10,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSVLG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRT
2629_D09,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG
PLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2629_Е05,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKFSDWG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRT
2629_Е06,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2629_Е04,
сердцевинная
последовательность
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHOYSDW
GPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRT
(аминокислотная последовательность)
2629_Н01,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVHKNSDW GTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVXAVTGSG EXPASSKPISINYRT
2629_Н06,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2629_Н07,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHLYSDW
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRT
2630_А02,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOMYSDLG
PLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES
PASSKPISINYRT
2630_А11,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHMYSDFG
PMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2630_D02,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRT
2630_D10,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2630_F04,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRT
2630_G03,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRT
2630_G10,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOIYSDWG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRT
2630_Н03,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRT
2631_В04,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYGRHVHLYSEFG PMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRT
2631_Е03,
сердцевинная
последовательность
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRDVHMYSDW GPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRT
(аминокислотная последовательность)
2631_G01,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
2631_G03,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRYVOLYSDW
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRT
2631_Н09,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOVFSDLG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRT
2632_G01,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRT
100
4079_А04,
сердцевинная
последовательность
(аминокислотная
последовательность)
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOMYSDW GPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRT
101
2629_А09, петля CD
GRHVQIYSDLGPLYIYTE
102
2629_А11, петля CD
GRHVHIYSDWGPMYIYTE
103
2629_С10, петля CD
GREVQKYSVLGPLYIYTE
104
2629_D09, петля CD
GREVQMYSDLGPLYVYSE
105
2629_Е05, петля CD
GREVQKFSDWGPLYIYTE
106
2629_Е06, петля CD
GREVQKYSDLGPLYIYQE
107
2629_F04, петля CD
GREVHQYSDWGPMYIYNE
108
2629 H01, петля CD
GREVHKNSDWGTLYIYTE
109
2629_H06, петля CD
GREVQKYSDLGPLYIYAE
2629_Н07, петля CD
GREVHLYSDWGPMYIYTE
111
2630_А02, петля CD
GRHVQMYSDLGPLYIFSE
112
2630_А11, петля CD
GREVHMYSDFGPMYIYTE
113
2630_D02, петля CD
GREVQKYSDWGPLYIYNE
114
2630_D10, петля CD
GREVQMYSDLGPLYIYNE
115
2630_F04, петля CD
GREVQMYSDLGPLYIYTE
116
2630_G03, петля CD
GRHVQIYSDLGPLYIYNE
117
2630_G10, петля CD
GREVQIYSDWGPLYIYNE
118
2630_H03, петля CD
GREVQKYSDWGPLYIYQE
119
2631_B04, петля CD
GRHVHLYSEFGPMYIYNE
120
2631_E03, петля CD
GRDVHMYSDWGPMYIYQE
121
2631 G01, петля CD
GRHVQIYSDWGPLYIYNE
122
2631 G03, петля CD
GRYVQLYSDWGPMYIYTE
123
2631 H09, петля CD
GRQVQVFSDLGPLYIYNE
124
2632_G01, петля CD
GRQVQIYSDWGPLYIYNE
125
4079_A04, петля CD
GRQVQMYSDWGPLYIYAE
126
2270_C01
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGCTAGCACTAGTGGCGTGCCGCGCGACTTGGAAG
TGGTTGCCGCGACCCCGACGTCTCTGCTTATTAGCTGG
GATGCACCTGCCGTCACAGTGAGATATTATCGCATTAC
ATATGGTTGGCAGGTTCAGATGTACTCTGACTGGGGTC
CGCTGTACATCTACAAAGAGTTCACGGTACCTGGGAG
CAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGTCTCAAACCTGGA
GTTGATTACACCATTACGGTATACGCAGTCACCGGCTC
TGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATT
AATTATCGGACCGAAGGCGACAAACCATCCCAGCACC
ATCACCACCACCACTGA
127
2629_А09
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGACGGCATGTTCAGATCTATTCTGACTTAGGCCCGC
TGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAA
GTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT
GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGG
AGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAAT
TACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATC
ACCACCACCACTGA
128
2629_А11
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGACACGTTCATATCTACTCAGACTGGGGTCCG
ATGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
129
2629_С10
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGGAGAGAGGTTCAGAAATACTCTGTCTTGGGTCCA
CTGTACATATACACGGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
130
2629_D09
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA CGGGAGGGAGGTTCAGATGTACTCTGACTTGGGTCCA
TTGTACGTATACAGCGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
131
2629_Е05
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTCGGGAGGTACAGAAGTTCTCGGACTGGGGTCCG
CTGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
132
2629_Е06
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGCAGGGAGGTTCAGAAGTACTCGGACTTGGGTCCG
TTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
133
2629_F04
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGGGAGGTTCATCAATACTCTGACTGGGGTCCG
ATGTACATCTACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT CACCACCACCACTGA
134
2629_Н01
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCRATATTACCGCATCACTTA
CGGTCGGGAGGTTCATAAGAACTCAGACTGGGGTACG
CTGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTRTGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGARCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAAMCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
135
2629_Н06
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGACGGGAGGTTCAGAAGTATTCAGACTTGGGTCCA
CTGTACATCTACGCAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
136
2629_Н07
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGGCGGGAGGTCCACCTGTACTCCGACTGGGGGCCG
ATGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
137
2630_А02
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTACCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGGCACGTTCAAATGTACTCTGACCTTGGTCCGT
TGTACATCTTCAGTGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAG
TCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTG
ATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGA
GAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAATT
ACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCA
CCACCACCACTGA
138
2630_А11
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGACGGGAGGTTCATATGTACTCTGACTTCGGTCCG
ATGTACATATACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
139
2630_D02
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGAGAAGTTCAGAAATACTCTGACTGGGGCCCG
CTCTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAA
GTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT
GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGG
AGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAAT
TACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATC
ACCACCACCACTGA
140
2630_D10
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA CGGTCGGGAGGTTCAGATGTACTCGGACTTGGGTCCG
CTCTACATCTACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
141
2630_F04
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGAGAGGTCCAGATGTACTCAGACTTGGGGCCG
CTGTACATCTATACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGGTTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
142
2630_G03
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGACGGCATGTTCAGATCTACTCCGACTTGGGTCCTC
TGTATATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAA
GTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT
GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGG
AGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAAT
TACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATC
ACCACCACCACTGA
143
2630_G10
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTCGGGAGGTTCAAATATACTCTGACTGGGGTCCG
CTGTATATATACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT CACCACCACCACTGA
144
2630_Н03
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCSCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCSATATTACCGCATCACTTA
CGGACGTGAAGTRCAGAAATACTCTGACTGGGGCCCG
CTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCR
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAAMCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
145
2631_В04
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GTACCTGCCGTTACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGCAGGCACGTACATTTGTACTCGGAGTTCGGTCCG
ATGTATATCTACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
146
2631_Е03
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGGGATGTCCACATGTACTCTGACTGGGGTCCG
ATGTACATATACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
147
2631_G01
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGGCATGTTCAGATATACTCGGACTGGGGTCCG
CTGTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
148
2631_G03
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTACTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGAAGGTATGTTCAGCTATACTCTGACTGGGGTCCG
ATGTACATCTACACGGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
149
2631_Н09
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGACGGCAAGTGCAAGTGTTCTCAGACTTGGGTCCG
CTGTACATATACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
150
2632_G01
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA CGGTAGACAGGTGCAGATCTACTCTGACTGGGGACCG
CTGTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGT
TGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTG
GAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAA
TTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT
CACCACCACCACTGA
151
4079_А04
(последовательность нуклеиновой кислоты)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAT
GCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTA
CGGTAGGCAGGTACAGATGTACTCTGACTGGGGTCCA
CTTTACATCTACGCCGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAA
GTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT
GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGG
AGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAAT
TACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATC
ACCACCACCACTGA
152
Линкер
PSTPPTPSPSTPPTPSPS
153
Линкер
GSGSGSGSGSGSGS
154
Линкер
GGSGSGSGSGSGS
155
Линкер
GGSGSGSGSGSGSGSG
156
Линкер
GSEGSEGSEGSEGSE
157
Линкер
GGSEGGSE
158
Линкер
GSGSGSGS
159
Линкер
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
160
Линкер
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
161
Линкер
GGGGSGGGGSGGGGSG
162
Линкер
GPGPGPG
163
Линкер
GPGPGPGPGPG
164
Линкер
PAP АРА
165
Линкер
PAPAPAPAPAPA
166
Линкер
PAPAPAPAPAPAPAPAPA
167
PCSK9 10Fn3 домен
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAEGYGYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGVDYTITVYAVEF DFPGAGY YHRPISINYRT
168
Тандемный аднектин PCSK9-PKE2 без HIS-метки
5190_Е01 (ATI-1676)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAEGYGYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGVDYTITVYAVEF
DFPGAGYYHRPISINYRTEPSTPPTPSPSTPPTPSPSGVSDV
PRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKY
SDLGPLYIYQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVT
GSGESPASSKPISINYRTP
169
Тандемный аднектин PCSK9-PKE2 с HIS-меткой
4472_С06 (ATI-1574)
MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAEGYGYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGVDYTITVYAVEF
DFPGAGYYHRPISINYRTEPSTPPTPSPSTPPTPSPSGVSDV
PRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKY
SDLGPLYIYQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVT
GSGESPASSKPISINYRTEHHHHHH
170
Консенсусная последовательность петли CD
G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-X10-X11-X12-E
171
3852_F10
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAC
GCTCCGGCTGTTGACGGTCGATATTACCGCATCACTTA
CGGCGAAACAGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTC
ACTGTGCCTGGTTCTAAATCTACAGCTACCATCAGCGG
CCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG
CTGTCACTCCGTACGAATTCCATTTCCCGTACACTCAT
TACTCTTCTAAACCAATTTCCATTAATTACCGCACAGA
AATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC
TGA
172
Последовательность нуклеиновой кислоты тандемного аднектина PCSK9-PKE2 5190_Е01 (ATI-1676)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGG
TTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGAC
GCTCCGGCTGAAGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTA
CGGCGAAACAGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTC
ACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGG
CCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG
CTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT
CGTCCAATTTCCATTAATTACCGGACCGAACCGAGCA
CACCTCCGACCCCGAGTCCGTCAACACCACCGACACC
GTCACCGAGCGGAGTTTCTGACGTCCCGCGCGACCTG
GAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCA
GCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCG
CATCACTTACGGCAGGGAGGTTCAGAAGTACTCGGAC
TTGGGTCCGTTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCC
TGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAA
CCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCAC
TGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATT
TCCATTAATTACCGCACACCGTGA
173
Линкер
PSPEPPTPEP
174
Линкер
PSPEPPTPEPPSPEPPTPEP
175
Линкер
PSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEP
176
Линкер
PSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEPPSPEPPTPEP
177
Линкер
EEEEDE
178
Линкер
EEEEDEEEEDE
179
Линкер
EEEEDEEEEDEEEEDEEEEDE
180
Линкер
EEEEDEEEEDEEEEDEEEEDEEEEDEEEEDE
181
Линкер
RGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP
182
Иллюстративное применение линкера
NYRTPGPSPEPPTPEP
183
Иллюстративное применение линкера
PSPEPPTPEPGVSDV
184
2270_С01, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGWOVOMYSDW
GPLYIYKEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRTP
185
2629_А09, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG
PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES
PASSKPISINYRTP
186
2629_А11, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVHIYSDWG PMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRTP
187
2629_С10, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSVLG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRTP
188
2629_D09, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG
PLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
189
2629_Е05, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKFSDWG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRTP
190
2629_Е06,
сердцевинная
последовательность
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
(аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
191
2629_F04, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHOYSDW
GPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRTP
192
2629_Н01, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVHKNSDW GTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVXAVTGSG EXPASSKPISINYRTP
193
2629_Н06, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDLG
PLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
194
2629_Н07, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHLYSDW
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRTP
195
2630_А02, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOMYSDLG
PLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGES
PASSKPISINYRTP
196
2630_А11, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHMYSDFG
PMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
197
2630_D02, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRTP
198
2630_D10, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
199
2630_F04, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOMYSDLG PLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTITVYAVTGSGES PASSKPISINYRTP
200
2630_G03, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDLG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRTP
201
2630_G10,
сердцевинная
последовательность
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVOIYSDWG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRTP
(аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
202
2630_Н03, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVOKYSDW GPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRTP
203
2631_В04, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYGRHVHLYSEFG PMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRTP
204
2631_Е03, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRDVHMYSDW GPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRTP
205
2631_G01, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
206
2631_G03, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRYVOLYSDW
GPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG
ESPASSKPISINYRTP
207
2631_Н09, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOVFSDLG PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE SPASSKPISINYRTP
208
2632_G01, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOIYSDWG
PLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGE
SPASSKPISINYRTP
209
4079_А04, сердцевинная последовательность (аминокислотная последовательность) с С-концевым пролином
EVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGROVOMYSDW GPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSG ESPASSKPISINYRTP
210
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEPKSS
211
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPC
212
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKP
213
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPS
214
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPSQLE
215
С-концевая хвостовая
последовательность
EIEDEDEDEDED
216
С-концевая хвостовая
последовательность
EGSGS
217
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPCQLE
218
С-концевая хвостовая
последовательность
EIDKPSQHHHHHH
219
С-концевая хвостовая
последовательность
GSGCHHHHHH
220
С-концевая хвостовая
последовательность
EGSGCHHHHHH
221
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDK
222
С-концевая хвостовая
последовательность
РШК
223
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDKP
224
С-концевая хвостовая
последовательность
РШКР
225
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDKPS
226
С-концевая хвостовая
последовательность
PIEKPS
227
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDKPC
228
С-концевая хвостовая
последовательность
РШКРС
229
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDKPSQ
230
С-концевая хвостовая
последовательность
PIEKPSQ
231
С-концевая хвостовая
последовательность
PIDKPCQ
232
С-концевая хвостовая
последовательность
PIEKPCQ
233
С-концевая хвостовая
последовательность
РНННННН
234
С-концевая хвостовая
последовательность
РСНННННН
235
2270_С01 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
ASTSGVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG WOVOMYSDWGPLYIYKEFTVPGSKSTATISGLKPGVDY TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEGDKPSQP
236
2629_А09 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR HVOIYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITV Y A VTGSGESP AS S KPISINYRTEIDKPS QP
237
2629_А11 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR HVHIYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
238
2629_С10 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR
EVOKYSVLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT
VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
239
2629_D09 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOMYSDLGPLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
240
2629_Е05 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOKFSDWGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
241
2629_Е06 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOKYSDLGPLYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
242
2629_F04 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVHOYSDWGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
243
2629_Н01 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGR EVHKNSDWGTLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VXAVTGSGEXPASSKPISINYRTEIDKXSQP
244
2629_Н06 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOKYSDLGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
245
2629_Н07 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVHLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
246
2630_А02 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR HVOMYSDLGPLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
247
2630_А11 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVHMYSDFGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
248
2630_D02 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOKYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
249
2630_D10 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOMYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
250
2630_F04 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR EVOMYSDLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVGYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
251
2630_G03 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR HVOIYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITV Y A VTGSGESP AS S KPISINYRTEIDKPS QP
252
2630_G10 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR
EVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT
VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
253
2630_Н03 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGR EVOKYSDWGPLYIYOEFTVPGSXSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKXSQP
254
2631_В04 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYGR HVHLYSEFGPMYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
255
2631_Е03 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR DVHMYSDWGPMYIYOEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
256
2631_G01 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR HVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
257
2631_G03 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR
YVOLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT
VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
258
2631 Н09 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR
OVOVFSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT
VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
259
2632_G01 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR OVOIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIT VYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
260
4079_А04 без HIS-метки и N-концевого метионина и с С-концевым пролином
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGR OVOMYSDWGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTI TVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQP
261
Тандемный аднектин PCSK9-PKE2 без HIS-метки и N-концевого метионина 5190_Е01 (ATI-1676)
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAEGYGYYRITYGE
TGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGVDYTITVYAVEFD
FPGAGYYHRPISINYRTEPSTPPTPSPSTPPTPSPSGVSDVP
RDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKYS
DLGPLYIYQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTG
SGESPASSKPISINYRTP
262
Иллюстративный линкер
(PSPEPPTPEP)n п=1-10
263
Иллюстративный линкер
(EEEEDE)nE п=1-10
Эквиваленты
Специалисты в настоящей области поймут, или смогут установить при помощи постановки всего-лишь стандартного эксперимента, многие эквиваленты описанных в настоящем документе конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения. Подразумевают, что такие эквиваленты охватываются приведенной далее формулой изобретения.
<120> NOVEL SERUM ALBUMIN-BINDING FIBRONECTIN TYPE III DOMAINS
<130> MXI-536PC
<140> PCT/US2015/021535
<141> 2015-03-19
<150> US 61/968,181
<151> 2014-03-20
<160> 266
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 94
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc feature
<223> Wild-type human 10Fn3 domain
<400> 1
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr
1 5 10 15
Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr
20 25 30
Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe
35 40 45
Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro
50 55 60
Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp
65 70 75 80
Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
168
<210> <211>
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<223> Wild-type human 10Fn3 domain w/loop sequences generically defined
<220>
<221> misc feature <222> (14)7.(33)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<220>
<221> misc_feature <222> (39)..(58)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<220>
<221> misc_feature <222> (65)..(84)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<220>
<221> misc_feature <222> (88)..(107)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(133)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<220>
<221> misc_feature
<222> (142)..(161)
<223> Xaa, if present, can be any naturally occurring amino acid; at least two Xaa must be present
<400> 2
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Leu Leu Ile Ser Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
35 40 45
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr
50 55 60
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Thr Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Thr Ile Ser Gly
100 105 110
Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
115 120 125
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Xaa Xaa Xaa
130 135 140
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
145 150 155 160
Xaa Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
165
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<400> 3
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu
1 5 10
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<400> 4
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu 1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
Xaa Xaa Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu 1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
<400> 6
Xaa Xaa Asp Val Pro Arg Asp Leu 1 5
<210> <211> <212>
? О 1 О ^
7 7
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
<400> 7
Xaa Xaa Val Pro Arg Asp Leu 1 5
<210> 8
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
<210> <211> <212>
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature <222> (1).7(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
<400> 9
Xaa Xaa Arg Asp Leu 1 5
<210> <211> <212>
10 4
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid and may or may not be present; If one is present, Xaa is Met or Gly; if both are present, then Xaa Xaa is Met-Gly
<400> 10
Xaa Xaa Asp Leu
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: N-terminal leader
<400> 11
Met Ala Ser Thr Ser Gly
1 5
<210> 12
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 12
Glu Ile Glu Lys
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 13
Glu Gly Ser Gly Cys
1 5
<210> <211> <212>
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 14
Glu Ile Glu Lys Pro Cys Gln
1 5
15 7
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 15
Glu Ile Glu Lys Pro Ser Gln
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: C-terminal tail
<210> <211> <212>
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 17
Glu Ile Glu Lys Pro Ser
1 5
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 18
Glu Ile Glu Lys Pro Cys 1 5
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 19
Glu Ile Asp Lys
<210> <211> <212>
20 7
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 20
Glu Ile Asp Lys Pro Cys Gln 1 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 21
Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln 1 5
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6X His tail
<400> 22
His His His His His His 1 5
<210> 23
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2270_C01
<400> 23
Met Ala Ser Thr Ser Gly Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala
1 5 10 15
Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val
20 25 30
Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Trp Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp
35 40 45
Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile
65 70 75 80
Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys
85 90 95
Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Gly Asp Lys Pro Ser Gln His
100 105 110
<210> 24
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_A09
<400> 24
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 25
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_A11
<400> 25
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 26
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_C10
<400> 26
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
<210> 27
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_D09
<400> 27
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Val Tyr Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 28
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_E05
<400> 28
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Phe Ser Asp Trp
35 40 45
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 29
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_E06 (also referred to as ATI-1490)
<400> 29
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
<210> 30
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_F04
<400> 30
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Gln Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 31
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_H01
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (90)..(90)
<220>
<221> misc feature
<222> (108)..(108)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 31
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Lys Asn Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Xaa Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Xaa Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 32
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_H06
<400> 32
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 33
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2629_H07
<400> 33
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Leu Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 34 <211> 116 <212> PRT
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_A02
<400> 34
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Thr Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Phe Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 35
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_A11
<400> 35
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Met Tyr Ser Asp Phe
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 36
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_D02
<400> 36
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 37
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_D10
<400> 37
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 38
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_F04
<400> 38
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Gly Tyr Thr Ile Thr
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 39
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_G03
<400> 39
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 40
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_G10
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 41
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2630_H03
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)7.(17)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (63)..(63)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (108)..(108)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
Xaa Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Xaa Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 42
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2631_B04
<400> 42
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Leu Tyr Ser Glu Phe
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 43
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2631_E03
<400> 43
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 44
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2631_G01
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 45
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2631_G03
<400> 45
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Tyr Val Gln Leu Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
His His His His
115
<210> 46
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2631_H09
<400> 46
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Val Phe Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 47
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 2632_G01
<400> 47
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
His His His His
115
<210> 48
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PKE2 Adnectin 4079_A04
<400> 48
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
His His His His
115
<210> 49
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2270_C01 w/o his tag
<400> 49
Met Ala Ser Thr Ser Gly Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala
1 5 10 15
Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val
20 25 30
Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Trp Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp
35 40 45
Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile
65 70 75 80
Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys
85 90 95
Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Gly Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 50
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09 w/o his tag
<400> 50
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 51
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11 w/o his tag
<400> 51
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 52
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 2629_С10 w/o his tag <400> 52
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 53
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09 w/o his tag
<400> 53
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Val Tyr Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
<210> 54
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E05 w/o his tag
<400> 54
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Phe Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 55
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06 w/o his tag
<400> 55
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 56
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_F04 w/o his tag
<400> 56
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Gln Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 57
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H01 w/o his tag
<220>
<221> misc feature
<222> (32)7.(32)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (82)..(82)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (90)..(90)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (108)..(108)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 57
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Lys Asn Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Xaa Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Xaa Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln
100 105 110
<210> 58
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H06 w/o his tag
<400> 58
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 59
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07 w/o his tag
<400> 59
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Leu Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 w/o his tag
<400> 60
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Thr Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Phe Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 61
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A11 w/o his tag
<400> 61
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Met Tyr Ser Asp Phe
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 62
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 w/o his tag
<400> 62
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 63
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D10 w/o his tag
<400> 63
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 64
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 w/o his tag
<400> 64
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Gly Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 65 <211> 110 <212> PRT
<220>
<223> Synthetic: 2630_G03 w/o his tag
<400> 65
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 66
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10 w/o his tag
<400> 66
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 67
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03 w/o his tag
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)7.(17)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (63)..(63)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (108)..(108)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 67
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Xaa Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Xaa Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
<210> 68
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_B04 w/o his tag
<400> 68
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Leu Tyr Ser Glu Phe
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 69
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_E03 w/o his tag
<400> 69
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 70
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G01 w/o his tag
<400> 70
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 71
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G03 w/o his tag
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Tyr Val Gln Leu Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 72
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_H09 w/o his tag
<400> 72
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Val Phe Ser Asp Leu
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
<210> 73
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632 G01 w/o his tag
<400> 73
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 74
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4079_A04 w/o his tag
<400> 74
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
<210> 75
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2270_C01 core
<400> 75
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Trp Gln Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
76 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09 core
<400> 76
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 77
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11 core
<400> 77
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
His Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 78
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_C10 core
<400> 78
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Val Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
79 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09 core <400> 79
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Val Tyr Ser Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 80
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E05 core
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Phe Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
81 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06 core
<400> 81
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 82
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_F04 core
<400> 82
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Gln Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 83
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H01 core
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)7.(22)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (72)..(72)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (80)..(80)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 83
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Xaa Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Xaa
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 84
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H06 core
<400> 84
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 85
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07 core
<400> 85
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
86 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 core <400> 86
Glu Val Val Ala Thr Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Phe Ser Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 87
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A11 core
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Met Tyr Ser Asp Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 88
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 core
<400> 88
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 89
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 2630_D10 core <400> 89
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
90 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 core
<400> 90
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Gly Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G03 core
<400> 91
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
92 93
<210> <211> <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10 core <400> 92
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<210> 93
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03 core
<220>
<221> misc_feature
<222> (7).7(7)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 93
Glu Val Val Ala Ala Thr Xaa Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Xaa Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 94
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_B04 core
<400> 94
His Leu Tyr Ser Glu Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 95
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_E03 core
<400> 95
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val
20 25 30
His Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 96
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G01 core
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
97 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G03 core
<400> 97
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Tyr Val
20 25 30
Gln Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 98
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_H09 core
<400> 98
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Val Phe Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
99 93
<210> <211>
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632_G01 core <400> 99
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<210> 100
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4079_A04 core
<400> 100
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 101
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09 CD loop
<400> 101
Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 102
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11 CD loop
<400> 102
<210> 103
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_C10 CD loop
<400> 103
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Val Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 104
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09 CD loop
<400> 104
Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Val Tyr
1 5 10 15
Ser Glu
<210> 105
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E05 CD loop
<400> 105
Gly Arg Glu Val Gln Lys Phe Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 106
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06 CD loop
<400> 106
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Gln Glu
<210> 107
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_F04 CD loop
<400> 107
Gly Arg Glu Val His Gln Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 108
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H01 CD loop
<400> 108
Gly Arg Glu Val His Lys Asn Ser Asp Trp Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 109
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H06 CD loop
<400> 109
<210> 110
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07 CD loop
<400> 110
Gly Arg Glu Val His Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 111
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 CD loop
<400> 111
Gly Arg His Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Phe
1 5 10 15
Ser Glu
<210> 112
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A11 CD loop
<400> 112
Gly Arg Glu Val His Met Tyr Ser Asp Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 113
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 113
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser 1 5
Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr 10 15
Asn Glu
<210> 114
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D10 CD loop
<400> 114
Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 115
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 CD loop
<400> 115
Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 116
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G03 CD loop
<400> 116
Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 117
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10 CD loop
<400> 117
Gly Arg Glu Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 118
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03 CD loop
<400> 118
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Gln Glu
<210> 119
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_B04 CD loop
<400> 119
Gly Arg His Val His Leu Tyr Ser Glu Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr 10 15
Gln Glu
<210> 121
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G01 CD loop
<400> 121
Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 122
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G03 CD loop
<400> 122
Gly Arg Tyr Val Gln Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
<210> 123
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_H09 CD loop
<400> 123
Gly Arg Gln Val Gln Val Phe Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 124
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632_G01 CD loop
<400> 124
Gly Arg Gln Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Asn Glu
<210> 125
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4079_A04 CD loop
<400> 125
Gly Arg Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Ala Glu
<210> 126
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<210> 127
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 2270_C01
<400> 127 atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggacgg
catgttcaga
tctattctga
cttaggcccg
ctgtacatct
acacagagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<210> 128
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11
<400> 128
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtaga
cacgttcata
tctactcaga
ctggggtccg
atgtacatct
acacagagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<210> 129
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_C10
<400> 129
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacgggaga
gaggttcaga
aatactctgt
cttgggtcca
ctgtacatat
acacggagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<210> 130
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09
<210> 131
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E05
<210> 132
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggcagg
gaggttcaga
agtactcgga
cttgggtccg
ttgtacatct
accaagagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_F04
<400> 133
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtagg
120
gaggttcatc
aatactctga
ctggggtccg
atgtacatct
acaacgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 134 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H01
<400> 134
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcratatt
accgcatcac
ttacggtcgg
120
gaggttcata
agaactcaga
ctggggtacg
ctgtacatct
acacagagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtrtgctg
tcactggctc
tggagagarc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa
amcatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 135 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H06
<400> 135
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggacgg
120
gaggttcaga
agtattcaga
cttgggtcca
ctgtacatct
acgcagagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 136
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacgggcgg
gaggtccacc
tgtactccga
ctgggggccg
atgtacatct
acacagagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<210> 137
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 <400> 137
atgggagttt ctgatgtgcc gcgcgacctg gaagtggttg ctaccacccc caccagcctg 60
ctgatcagct gggatgcacc tgccgtcaca gtgcgatatt accgcatcac ttacggtagg 120
cacgttcaaa tgtactctga ccttggtccg ttgtacatct tcagtgagtt cactgtgcct 180
gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttgatta taccatcact 240
gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag aaattgacaa accatcccag caccatcacc accaccactg a 351
<210> 138
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A11
atgggagttt
ctgatgtgcc
gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc
tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggacgg
gaggttcata
tgtactctga
cttcggtccg
atgtacatat
acacagagtt
cactgtgcct
gggagcaagt
ccacagctac
catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
gtgtatgctg
tcactggctc
tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
taccgcacag
aaattgacaa
accatcccag
caccatcacc
accaccactg
60 120 180 240 300 351
<210> 139
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 <400> 139
atgggagttt ctgatgtgcc gcgcgacctg gaagtggttg ctgccacccc caccagcctg 60
ctgatcagct gggatgcacc tgccgtcaca gtgcgatatt accgcatcac ttacggtaga 120
gaagttcaga aatactctga ctggggcccg ctctacatct acaatgagtt cactgtgcct 180
gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttgatta taccatcact 240
gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag aaattgacaa accatcccag caccatcacc accaccactg a 351
<210> 140
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D10 <400> 140
atgggagttt ctgatgtgcc gcgcgacctg gaagtggttg ctgccacccc caccagcctg 60
ctgatcagct gggatgcacc tgccgtcaca gtgcgatatt accgcatcac ttacggtcgg 120
gaggttcaga tgtactcgga cttgggtccg ctctacatct acaacgagtt cactgtgcct 180
gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttgatta taccatcact 240
gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag aaattgacaa accatcccag caccatcacc accaccactg a 351
<210> 141
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 <400> 141
atgggagttt ctgatgtgcc gcgcgacctg gaagtggttg ctgccacccc caccagcctg 60 ctgatcagct gggatgcacc tgccgtcaca gtgcgatatt accgcatcac ttacggtaga 120 gaggtccaga tgtactcaga cttggggccg ctgtacatct atacagagtt cactgtgcct 180 gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttggtta taccatcact 240 gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 142 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G03
<400> 142
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggacgg
120
catgttcaga
tctactccga cttgggtcct
ctgtatatct
acaatgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 143 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10
<400> 143
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtcgg
120
gaggttcaaa
tatactctga ctggggtccg
ctgtatatat
acaacgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 144 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03
<400> 144
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccaccsc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcsatatt
accgcatcac
ttacggacgt
120
gaagtrcaga
aatactctga ctggggcccg
ctgtacatct
accaagagtt
cactgtgcct
180
gggagcragt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa amcatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 145 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631 B04
<400> 145
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgtacc tgccgttaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggcagg
120
cacgtacatt
tgtactcgga gttcggtccg
atgtatatct
acaacgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 146 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_E03
<400> 146
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtagg
120
gatgtccaca
tgtactctga ctggggtccg
atgtacatat
accaagagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 147
<211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G01
<400> 147
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtagg
120
catgttcaga
tatactcgga ctggggtccg
ctgtacatct
acaatgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 148 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G03
<400> 148
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagccta
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggaagg
120
tatgttcagc
tatactctga ctggggtccg
atgtacatct
acacggagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 149
<211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_H09
<400> 149
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggacgg
120
caagtgcaag
tgttctcaga cttgggtccg
ctgtacatat
acaacgagtt
cactgtgcct
180
gggagcaagt
ccacagctac catcagcggc
cttaaacctg
gcgttgatta
taccatcact
240
gtgtatgctg
tcactggctc tggagagagc
cccgcaagca
gcaagccaat
ttccattaat
300
taccgcacag
aaattgacaa accatcccag
caccatcacc
accaccactg
351
<210> 150 <211> 351 <212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632_G01
<400> 150
atgggagttt
ctgatgtgcc gcgcgacctg
gaagtggttg
ctgccacccc
caccagcctg
ctgatcagct
gggatgcacc tgccgtcaca
gtgcgatatt
accgcatcac
ttacggtaga
120
caggtgcaga tctactctga ctggggaccg ctgtacatct acaatgagtt cactgtgcct 180
gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttgatta taccatcact 240
gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag aaattgacaa accatcccag caccatcacc accaccactg a 351
<210> 151
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4079_A04
<400> 151
atgggagttt ctgatgtgcc gcgcgacctg gaagtggttg ctgccacccc caccagcctg 60
ctgatcagct gggatgcacc tgccgtcaca gtgcgatatt accgcatcac ttacggtagg 120
caggtacaga tgtactctga ctggggtcca ctttacatct acgccgagtt cactgtgcct 180
gggagcaagt ccacagctac catcagcggc cttaaacctg gcgttgatta taccatcact 240
gtgtatgctg tcactggctc tggagagagc cccgcaagca gcaagccaat ttccattaat 300
taccgcacag aaattgacaa accatcccag caccatcacc accaccactg a 351
<210> 152
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 152
Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser
1 5 10 15
Pro Ser
<210> 153
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 153
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 154
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 155
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 155
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
<210> 156
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 156
Gly Ser Glu Gly Ser Glu Gly Ser Glu Gly Ser Glu Gly Ser Glu
1 5 10 15
157
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 157
Gly Gly Ser Glu Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 158
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 159
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 159
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser 35
<210> 160
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 160
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25
<210> 161
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 161
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
<210> 162
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 162
Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly 1 5
<210> 163
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 163
Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly
1 5 10
164 6
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 164
Pro Ala Pro Ala Pro Ala 1 5
<210> 165
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 165
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10
<210> 166
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 166
<210> 167
<211> 97
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PCSK9 10Fn3 domain
<400> 167
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Glu Gly Tyr Gly
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln
35 40 45
Glu Phe Thr Val Pro Val Ser Lys Gly Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu
50 55 60
Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Glu Phe Asp
65 70 75 80
Phe Pro Gly Ala Gly Tyr Tyr His Arg Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg
85 90 95
Thr
<210> 168
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PCSK9-PKE2 tandem Adnectin w/o his tag 5190_E01
(ATI-1676)
<400> 168
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Glu Gly Tyr Gly
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln
Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Glu Phe Asp
65 70 75 80
Phe Pro Gly Ala Gly Tyr Tyr His Arg Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg
85 90 95
Thr Glu Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr
100 105 110
Pro Ser Pro Ser Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val
115 120 125
Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val
130 135 140
Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr
145 150 155 160
Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly
165 170 175
Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr
180 185 190
Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 210 215
<210> 169 <211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PCSK9-PKE2 tandem Adnectin w/ his tag 4472_C06
(ATI-1574) <400> 169
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Glu Phe Thr Val Pro Val Ser Lys Gly Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu
50 55 60
Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Glu Phe Asp
65 70 75 80
Phe Pro Gly Ala Gly Tyr Tyr His Arg Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg
85 90 95
Thr Glu Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr
100 105 110
Pro Ser Pro Ser Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val
115 120 125
Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val
130 135 140
Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr
145 150 155 160
Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly
165 170 175
Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr
180 185 190
Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu His His His His His
210 215 220
His
225
<210> 170
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CD loop consensus
<221> misc feature
<222> (2).7(2)
<223> Xaa is R or W
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is H, E, D, Y, or Q
<220>
<221> misc_feature
<223> Xaa is Q or H
<220>
<221> misc_feature
<222> (6).7(6)
<223> Xaa is I, K, M, Q, L, or V
<220>
<221> misc feature
<222> (7).7(7)
<223> Xaa is Y, F, or N
<220>
<221> misc feature
<222> (9).7(9)
<223> Xaa is D, V, or E
<220>
<221> misc feature
<222> (10)77(10)
<223> Xaa is L, W, or F
<220>
<221> misc feature
<222> (12)77(12)
<223> Xaa is P or T
<220>
<221> misc feature
<222> (13)77(13)
<223> Xaa is L or M
<220>
<221> misc feature
<222> (15)77(15)
<223> Xaa is I or V
<220>
<221> misc feature
<222> (16)77(16)
<223> Xaa is Y or F
<220>
<221> misc feature
<222> (17)77(17)
<223> Xaa is T, S, Q, N, or A
<400> 170
<210> 171
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3852_F10
<400> 171
Ala Thr Gly Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr Gly Cys Cys Gly Cys Gly Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala
20 25 30
Ala Gly Thr Gly Gly Thr Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys
35 40 45
Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala
50 55 60
Thr Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Gly Cys Thr Cys Cys
65 70 75 80
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Gly Thr Cys Gly Ala
85 90 95
Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr
100 105 110
Ala Cys Gly Gly Cys Gly Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly
115 120 125
Cys Ala Ala Thr Ala Gly Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Cys Ala Gly
130 135 140
Gly Ala Gly Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr Gly
145 150 155 160
Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys
165 170 175
Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Thr
180 185 190
Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Thr Thr Gly Ala Thr Thr
Thr Gly Cys Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys
225 230 235 240
Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Ala Thr Thr Thr Cys Cys Cys Gly Thr
245 250 255
Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Thr Thr Ala Cys Thr Cys Thr Thr Cys
260 265 270
Thr Ala Ala Ala Cys Cys Ala Ala Thr Thr Thr Cys Cys Ala Thr Thr
275 280 285
Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Cys Ala Cys Ala Gly Ala Ala Ala
290 295 300
Thr Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Ala
305 310 315 320
Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys
325 330 335
Cys Ala Cys Thr Gly Ala 340
<210> 172 <211> 660
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PCSK9-PKE2 tandem Adnectin nucleic acid sequence 5190_E01 (ATI-1676)
<400> 172
Ala Thr Gly Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly
1 5 10 15
Thr Gly Cys Cys Gly Cys Gly Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala
20 25 30
Ala Gly Thr Gly Gly Thr Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys
35 40 45
Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Thr Ala Cys Gly Gly Thr
85 90 95
Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr
100 105 110
Ala Cys Gly Gly Cys Gly Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly
115 120 125
Cys Ala Ala Thr Ala Gly Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Cys Ala Gly
130 135 140
Gly Ala Gly Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr Gly
145 150 155 160
Thr Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ala Cys Ala Gly Cys
165 170 175
Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Thr
180 185 190
Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Thr Thr Gly Ala Thr Thr
195 200 205
Ala Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala
210 215 220
Thr Gly Cys Thr Gly Thr Cys Gly Ala Ala Thr Thr Cys Gly Ala Cys
225 230 235 240
Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Gly Cys Gly Cys Cys Gly Gly Thr Thr
245 250 255
Ala Cys Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Gly Thr Cys Cys Ala Ala Thr
260 265 270
Thr Thr Cys Cys Ala Thr Thr Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Gly
275 280 285
Ala Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys
290 295 300
Cys Cys Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Gly Ala Gly
340 345 350
Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala Cys Gly Thr Cys Cys Cys Gly Cys Gly
355 360 365
Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Gly Gly Thr Thr
370 375 380
Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala
385 390 395 400
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Thr Gly
405 410 415
Gly Gly Ala Thr Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Thr Cys
420 425 430
Ala Cys Ala Gly Thr Gly Cys Gly Ala Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys
435 440 445
Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr Ala Cys Gly Gly Cys Ala Gly
450 455 460
Gly Gly Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Ala Ala Gly Thr Ala Cys
465 470 475 480
Thr Cys Gly Gly Ala Cys Thr Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys Gly Thr
485 490 495
Thr Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala
500 505 510
Gly Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly
515 520 525
Ala Gly Cys Ala Ala Gly Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly Cys Thr Ala
530 535 540
Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Thr Ala Ala
545 550 555 560
Cys Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Gly
595 600 605
Ala Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Cys Ala Ala Gly Cys
610 615 620
Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Thr Thr Thr Cys Cys Ala
625 630 635 640
Thr Thr Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Cys Ala Cys Ala Cys Cys
645 650 655
Gly Thr Gly Ala 660
<210> 173
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 173
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro
1 5 10
<210> 174
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 174
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro
1 5 10 15
Thr Pro Glu Pro 20
<210> 175
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: Linker
<400> 175
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro
1 5 10 15
Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro
20 25 30
<210> 176
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 176
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro
1 5 10 15
Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser
20 25 30
Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro 35 40
177 6
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 177
Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5
<210> 178
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 178
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 179
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Glu Glu Asp Glu 20
<210> 180
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 180
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
20 25 30
<210> 181
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Linker
<400> 181
Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu
1 5 10 15
Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro 20
<210> 182
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Exemplary use of linker
<400> 182
<210> 183
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Exemplary use of linker
<400> 183
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Gly Val Ser Asp Val
1 5 10 15
<210> 184
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2270_C01 core with C-terminal proline
<400> 184
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Trp Gln Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 185
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09 core with C-terminal proline
<400> 185
Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 186
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11 core with C-terminal proline
<400> 186
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
His Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 187
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Val Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 188
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09 core with C-terminal proline
<400> 188
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Val Tyr Ser Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 189
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 2629_E05 core with C-terminal proline
<400> 189
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Phe Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 190
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06 core with C-terminal proline
<400> 190
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629 F04 core with C-terminal proline
<400> 191
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Gln Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 192
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H01 core with C-terminal proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)7.(22)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (72)..(72)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (80)..(80)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 192
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Xaa Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Xaa
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 193
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629 H06 core with C-terminal proline
<400> 193
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 194
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07 core with C-terminal proline
<400> 194
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 195
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 core with C-terminal proline
<400> 195
Glu Val Val Ala Thr Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Phe Ser Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 196
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Met Tyr Ser Asp Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 197
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 core with C-terminal proline
<400> 197
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 198
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 198
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 199
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 core with C-terminal proline
<400> 199
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Gly Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<210> 200
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630 G03 core with C-terminal proline
<400> 200
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 201
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10 core with C-terminal proline
<400> 201
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 202
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03 core with C-terminal proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (7).Т(7)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 202
Glu Val Val Ala Ala Thr Xaa Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Xaa Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 203
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
His Leu Tyr Ser Glu Phe Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 204
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_E03 core with C-terminal proline
<400> 204
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val
20 25 30
His Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 205
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 205
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 206
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G03 core with C-terminal proline
<400> 206
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Tyr Val
20 25 30
Gln Leu Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631 H09 core with C-terminal proline
<400> 207
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Val Phe Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 208
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632_G01 core with C-terminal proline
<400> 208
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<210> 209
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 4079_A04 core with C-terminal proline
<400> 209
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val
20 25 30
Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr
35 40 45
Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
50 55 60
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 210
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 210
Glu Ile Glu Pro Lys Ser Ser
1 5
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 211
<210> 212
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 212
Glu Ile Asp Lys Pro 1 5
<210> 213
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 213
Glu Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
<210> <211> <212>
214 9
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 214
Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Leu Glu 1 5
<210> 215
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 215
Glu Ile Glu Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp Glu Asp
1 5 10
<210> 216
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Glu Gly Ser Gly Ser 1 5
<210> <211> <212>
217 9
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 217
Glu Ile Asp Lys Pro Cys Gln Leu Glu 1 5
<210> 218
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 218
Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His His His His His
1 5 10
<210> 219
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 219
Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 220
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 221
Pro Ile Asp Lys
<210> 222
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 222
Pro Ile Glu Lys 1
<210> <211> <212>
223 5
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 223
Pro Ile Asp Lys Pro 1 5
224 5
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 224
Pro Ile Glu Lys Pro 1 5
225 6
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<210> 226
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 226
Pro Ile Glu Lys Pro Ser 1 5
<210> <211> <212>
227 6
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 227
Pro Ile Asp Lys Pro Cys 1 5
228 6
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 228
Pro Ile Glu Lys Pro Cys 1 5
<210> <211> <212>
? О 1 О ^
229 7
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 229
Pro Ile Asp Lys Pro Ser Gln 1 5
<210> 230
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 230
Pro Ile Glu Lys Pro Ser Gln 1 5
<210> 231
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 231
Pro Ile Asp Lys Pro Cys Gln 1 5
232 7
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 232
Pro Ile Glu Lys Pro Cys Gln 1 5
<210> <211> <212>
233 7
PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 233
Pro His His His His His His 1 5
234
PRT
<210> <211> <212>
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 234
<210> 235
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2270 C01 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 235
Ala Ser Thr Ser Gly Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Trp Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Gly Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 236
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 236
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 237
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_A11 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 237
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Ile Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 238
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_C10 w/o his tag and N-terminal methionine and w/
C-terminal proline
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Val Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 239
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_D09 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 239
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Val Tyr Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
<210> 240
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E05 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 240
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Phe Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 241
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_E06 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 241
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly
Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 242
<211> 110 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_F04 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 242
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Gln Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 243
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
Synthetic: 2629 H01 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)7.(31)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (81)..(81)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (89)..(89)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (107)..(107)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 243
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Lys Asn Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Xaa Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Xaa Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 244
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629 H06 w/o his tag and N-terminal methionine and w/
C-terminal proline
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 245 <211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2629_H07 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 245
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Leu Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
<210> 246 <211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A02 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 246
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Thr Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Phe Ser Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 247
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_A11 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 247
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 248
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 248
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 249
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_D10 w/o his tag and N-terminal methionine and w/
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 250
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_F04 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 250
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Gly Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
<210> 251
<211> 110 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630 G03 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 251
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 252
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_G10 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 252
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 253
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2630_H03 w/o his tag and N-terminal methionine and w/
C-terminal proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)7.(16)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (31)..(31)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (62)..(62)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc feature
<222> (107)..(107)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 253
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Xaa
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr
20 25 30
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 254 <211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631 B04 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 254
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val His Leu Tyr Ser Glu Phe Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 255
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631 E03 w/o his tag and N-terminal methionine and w/
C-terminal proline
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 256
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_G01 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 256
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
<210> 257 <211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631 G03 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 257
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Tyr Val Gln Leu Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Met Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 258
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2631_H09 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 258
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 259
<211> 110 <212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2632_G01 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 259
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 260
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Synthetic: 4079 A04 w/o his tag and N-terminal methionine and w/ C-terminal proline
<400> 260
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
65 70 75 80
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 261
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: PCSK9-PKE2 tandem Adnectin w/o his tag and N-terminal
methionine 5190_E01 (ATI-1676) <400> 261
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Glu Gly Tyr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu
35 40 45
Phe Thr Val Pro Val Ser Lys Gly Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys
50 55 60
Glu Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro
100 105 110
Ser Pro Ser Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala
115 120 125
Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr
130 135 140
Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser
145 150 155 160
Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser
165 170 175
Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr
180 185 190
Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser
195 200 205
Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 210 215
<210> 262
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Exemplary linker
<220>
<221> misc_feature <222> (11)7.(100)
<223> any Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro may or may not be present
<400> 262
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro
1 5 10 15
Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser
20 25 30
Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro
65 70 75 80
Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro
85 90 95
Thr Pro Glu Pro 100
<210> 263
<211> 61
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Exemplary linker
<220>
<221> misc_feature
<222> (7).7(60)
<223> any Glu Glu Glu Glu Asp Glu may or may not be present
<400> 263
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu
1 5 10 15
Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu
20 25 30
Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu
35 40 45
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu
50 55 60
<210> 264
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<400> 264
<210> 265
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<400> 265
Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln
1 5 10 15
<210> 266
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<400> 266
Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Asn
1 5 10 15
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (10Fn3), причем 10Fn3 домен содержит а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, b) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью относительно последовательности соответствующей петли CD человеческого 10Fn3 домена, с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ, и d) причем 10Fn3 домен дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы с KD менее 500 нМ, например менее 100 нМ или менее 10 нМ.
2. Полипептид по п. 1, причем 10Fn3 домен связывается с:
a) сывороточным альбумином макака-резус и сывороточным альбумином яванского макака,
b) сывороточным альбумином мыши и сывороточным альбумином крысы или
c) сывороточным альбумином макака-резус, сывороточным альбумином яванского макака, сывороточным альбумином мыши и сывороточным альбумином крысы.
3. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем 10Fn3 домен связывает сывороточный альбумин в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.
4. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем 10Fn3 домен связывается с доменом I-II HSA.
5. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем петля CD содержит аминокислотную последовательность, соответствующую формуле G-X1-X2-V-X3-X4-X5-S-X6-X7-G-X8-X9-Y-Xio-Xii-Xi2-E,rAe,
(a) Xi выбран из группы, состоящей из R или W;
(b) Хг выбран из группы, состоящей из Н, Е, D, Y или Q;
(c) Хз выбран из группы, состоящей из Q или Н;
(d) Х4 выбран из группы, состоящей из I, К, М, Q, L или V;
(e) Х5 выбран из группы, состоящей из Y, F или N;
(f) Хб выбран из группы, состоящей из D, V или Е;
(g) Х7 выбран из группы, состоящей из L, W или F;
(a)
(h) X$ выбран из группы, состоящей из Р или Т;
(i) Х9 выбран из группы, состоящей из L или М;
(j) Хю выбран из группы, состоящей из I или V;
(к) Хп выбран из группы, состоящей из Y или F; и
(1) Хп выбран из группы, состоящей из Т, S, Q, N или А.
6. Полипептид по п. 5, причем петля CD содержит аминокислотную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 113, 101-105,
107-112 и 114-125.
7. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную отличным от петли CD участкам SEQ ID NO: 81, 88, 23-80, 82-87, 89-100, 184-209 и 235-260.
8. Полипептид по любому из предыдущих пунктов, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 81, 88, 23-80, 82-87, 89-100, 184-209 и 235-260.
9. Гибридный полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (10Fn3) и гетерологичный белок, причем 10Fn3 домен содержит а) петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG, b) петлю CD с измененной аминокислотной последовательностью относительно последовательности соответствующей петли человеческого 10Fn3 домена, с) причем полипептид связывается с сывороточным альбумином человека с KD менее 500 нМ, и причем 10Fn3 домен дополнительно связывается с одним или несколькими из сывороточного альбумина макака-резус, сывороточного альбумина яванского макака, сывороточного альбумина мыши и сывороточного альбумина крысы с KD менее 500 нМ, например менее 100 нМ или менее 10 нМ.
10. Гибридный полипептид по п. 9, причем гетерологичный белок представляет собой терапевтический фрагмент.
11. Гибридный полипептид по п. 9, причем гетерологичный белок представляет собой полипептид, содержащий 10Fn3 домен.
12. Гибридный полипептид по п. 11, причем 10Fn3 домен связывается с целевым белком, отличным от сывороточного альбумина, таким как PCSK9.
10.
13. Гибридный полипептид по п. 9, причем 10Fn3 домен содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 81, 88, 23-80, 82-87, 89-100, 184-209 и 235-260.
14. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ Ш NO: 81, 88, 23-80, 82-87, 89-100, 168-169, 184-209 и 235-261.
15. Композиция, содержащая полипептид по любому из предыдущих пунктов и носитель.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из пунктов 1-14.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 16, причем молекула
нуклеиновой кислоты имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ
LD NO: 126-151 и 172, или последовательность, которая по меньшей мерена 70%, 75%, 80%,
85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична ей.
18. Вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид по любому из пп. 1-14.
19. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 16 или п. 17 или вектор экспрессии по п. 18.
20. Способ получения полипептидов по любому из пп. 1-14, предусматривающий культивирование клетки по п. 19 в условиях, подходящих для экспрессии полипептида, и очистку полипептида.
18.
1/20 Фиг. 1
Конкурентный формат анализа Alphascreen
570 нм
Ингибитор
Немеченный HuSA: 4,6 нМ - 10 мкМ Аднектины: 0,1 нМ - 2 мкМ
Фиг. 2
Конкурирование с hFcRn за связывание HSA
2629 Е06
-2 0 2 4
Log (Конц. нм)
Фиг. 4
Процент разделения антигенности донорной группы 2
Высокий
Эффективность пролиферативной реакции донорной
группы 2
(сумма кратности сверх фона для всех 40 доноров)
Высокая
Средний
2270 С01
Аднектин
5013-€01 (PCSK9)
РКЕ
HSA ЕС50
(нМ)
Х-РКЕ
РКЕ-Х
Х-РКЕ
РКЕ-Х
1318 Н04
31%
(8/26)
(0/26)
¦31
Щ (8/26)
30% (3/10)
Ъ (2/10)
Р. (5/10)
HSA ЕС,П /ЕС,,П
•50_тандем I -50 моно
X = тандемы не образуются
9 т 1Ю 153 т 250 зоо ш т т т ж i i i т
Время (ч)
Связывание PCSK9 с тандемом
(вторая инъекция) /
Фаза дисссоциации
Без введения инъекцией PCSK9
Связывание тандема с альбумином (первая инъекция)
1 Ч Ч Ч ' И 1 Ч ' 1
0 100 2D0 3D0 400 SGG Ш Ш
Время
Фиг. 9
Захват цели у мышей hPCSK9 Tg
УУ^Л Наполнитель |
Тандем 0,5 мг/кг
Тандем 2 мг/кг
Предварительная 4 ч
1 Г
24 ч 48 ч
72 ч
7 дней
Однократная IP доза, N = 8/группа
доза
Время (дней)
Фиг. 14
Время (дней)
Анализ пролиферации РВМС
Аднектин Полная последовательность белка
2270_С01 MASTSGVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGWQVQMYSDWGPLYIYKEFWPGSKSTATISGLKPGVD> TITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEGDKPSQHHHHHH*
2629..А09 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVQ1YSDLGPLY1YTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2629...All MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYR1TYGRHVHIYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2629 СЮ MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVnVRYYRITYGREVQKYSVLGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH'
2629..D09 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQMYSDLGPLYVYSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2629 Е05 MGVSOVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKFSDWGPLYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2629 .Е06 MGVSOVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKYSDLGPLYIYQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2629..F04 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITYGREVHQYSOWGPMYIYNEFWPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH*
2629..H01 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVXYYR1TYGREVH KNSDWGTLYIYTEFWPGSKSTATISGLKPGVDYTITVXAVTGSGEXPASSKPISINYRTEIDKXSQHHHHHH*
2629. H06 MGVSOVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQKYSDLGPLYIYAEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH*
2629..H07 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVHLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGW *
2630. A02 MGVSOVPRDLEVVATTPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRHVQMYSDLGPLYIFSEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2630_A11 MGVSDVPRDl EVVAATPTSl IISWDAPAVTVRYYRITYGRFVHMYSDFGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGI KPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTFIDKPSQHHHHHH *
2630..D02 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITYGREVQKYSDWGPLYIYNEFWPGSKSTAT1SGLKPGVDVTIWYAVTGSGESPASSKPIS1NYRTE1DKPSQHHHHHH*
2630 D10 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQMYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2630...F04 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRWRITYGREVQMYSDLGPLYIWEFWPGSKSTATISGLKPGVGYTiTVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2630 .603 MGVS0VPRDLEVVAATPISLLISWDAPAV1VRYYRIIYGRHVQIYSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2630_G10 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGREVQIYSDWGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH*
2630..H03 MGVSDVPRDLEVVAATXTSLLISWDAPAVTVXYYRITYGREVQKYSDWGPLYIYQEFTVPGSXSTATISGLKPGVDYTIWYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKXSQHHHHHH*
2631 B04 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDVPAVTVRYYRITYGRHVHIYSEFGPMYIYNEFTVPGSKSTATI^ HHHHH*
2631_E03 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITYGRDVHMYSDWGPMYIYQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTIWYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2631_G01 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITYGRHVQIYSDWGPLYIYNEFWPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2631 G03 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRWRITYGRYVQLYSDWGPMYIYTEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISiN YRTEIDKPSQHHHHHH*
2631...H09 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGRQVQVFSDLGPLYIYNEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGSGESPASSKPISIN YRTEIDKPSQHHHHHH*
2632_G01 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITYGRQVQIYSDWGPLYIYNEFWPGSKSTATISGLKPGVDYTIWYAVTGSGESPASSKPISINYRTEIDKPSQHHHHHH*
4079 A04 MGVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVWRYYRITl'GRQVQMYSDWGPLYlYAEFWPGSKSTATISGLKPGVDYTITWAVTGSGESPASSKPiSINYRTEIDKPSQHHHHHH*
2270_С01
ATGGCTAGCACTAGTGGCGTGCCGC6CGACTTGGAAGTGGTTGCCGCGACCCCGACGTCTCTGCTTATTAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGA CATTACATATGGTTGGCAGGTTCAGATGTACTCTGACTGGGGTCCGCTGTACATCTACAAAGAGTTCACGGTACCTGGGA6CAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGTC TCAAACCTG G AGTTG ATTACACCATTACG 6ТАТАШ AAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_А09
А 1 bbbAb 1 1 IL IGAlb IGLLbLbLbALL ! GbAAG IGblIbCI GLLALLLLLALLAGLC 1 GLI ЬА 1 LAGJ, 1 ЬЬЬА1 bLALL 1 bLLU 1 LA LAG 1 ЬСЬА 1A 1 1 ALLbLA 1 CACTTACGGACGGCATGTTCAGATCTATTCTGACTTAGGCCCGCTGTACATCTACACAGAGTTCACT
ACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGC^AGCAGCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACC ATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_А11
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT CACTTACGGTAGACACGTTCATATCTACTCAGACTGGGGTCCGATGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAA ACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGC^AGCAGCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACC ATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_С10
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCrGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT CACTTACGGGAGAGAGGTTCAGAAATACTCTGTCTTGGGTCCACTGTACATATACACGGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTA AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGG CT CATCCCAG СACCATCACCACCAC CACTGA
2629..D09
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT CACTTACGGGAGGGAGGTTCAGATGTACTCTGACTTGGGTCGATTGTACGTATACAGCGAGTTCACT
AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGG CTCTGGAGAGAGCCCCGCAAG CAGCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAAC CATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_Е05
ATGGGAGTTrCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT CACTTACGGTCGGGAGGTACAGAAGWCTCGGACTGGGGTCCGCTGTACATCTACACAGAGWCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTA AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGG CTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAAC CATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_Е06
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT
CACTTACGGCAGGGAGGTTCA6AAGTACTCGGACTTGGGTCCGTTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCAT AACCTGGCGTTGATTATACCATGACTGTGTATG CTGTCACTGG CTCTGGAGAGAGCCCCGCAAG CAGCAAGCCAATTT^ CATCCCAG СACCATCACCACCAC CACTGA
2629_F04
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCT
CACTT ACGGTAG GG AGGTTCATCAATACTCTGACTGG GGTCCG ATGTACATCTACAACGAGTTCACTGTG CCTG GGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTA AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGG CTCTGGAGAGAGCCCCGCAAG CAGCAAGCCAATTTCCATTA^ CATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629 HOI
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCG CGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCRATATTACCGCAT
CACTTACGGTCGGGAGGTTCATAAGAACTCAGACTGGGGTACGCTGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTA
AACCTGGCGTTGATTATACC^TCACrGTGT^^
MCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_Н06
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCX3CGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATG(^CCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCAT CACTTACGGACGGGAGGTTCAGAAGTATTCAGACTTGGGTCCACTGTACATCTACGCAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGG AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGG CTCTGGAGAGAGCCCC^ CATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2629_Н07
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGGCGGGAGGTCCACCTGTACTCCGACTGGGGGCCGATGTACATCTACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGC AAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCA GCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2630_А02
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAG TGGTTGCTACCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG
CG ATATTACCGCATCACTTACG GTAG GCACGTTCAAATGTACTCTG ACCTTG GTCCGTTGTACATCTTCAGTGAGTTCACTGTG CCTGGGAG CA
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG
CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2630.AH
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGACGGGAGGWCATATGTACTCTGACTTCGGTCCGATGTACATATACACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTfAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2630^002
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTG CTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGTAGAGAAGTTCAGAAATACTCTGACTGGGGCCCGCTCTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGG
AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCWAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2630_D10
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCrGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGTCGGGAGGTTCAGATGTACTCGGACTTGGGTCCGCTCTACATCTACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA AGICCACAGCIACCAICAGCGGCCF lAAACCIGGCGf IGAI IAIACCA1 CACIG 1G IAIGCIGICACIGGCI CI GGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2630_F04
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTG CCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGTAGAGAGGTCCAGATGTACTCAGACTTGGGGCCGCTGTACATCTATACAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGC AAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGGTTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCA GCAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAG CACCATCACCACCACCACTGA
2630.G03
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CG ATATTACCGCATCACTTACG GACGGCATGTTCAGATCTACTCCG ACTTG GGTCCTCTGTATATCTACAATGAGTTCACTGTG CCTGGGAG CA AGTCCACAGCrACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAG CACCATCACCACCACCACTGA
2630_G10
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTG CTG CCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGTCGGGAGGTTCAAATATACTCTGACTGGGGTCCGCTGTATATATACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATG CTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTrCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAG CACCATCACCACCACCACTGA
2630_Н03
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTG CTGCCACCSCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTG CSATATTACCGCATCACTTACGGACGTGAAGTRCAGAAA TACT CTG ACTGGGGCCCGCTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCR AGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAAM CATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2631..В04
ATGGGAG1 1 IL 1GATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGTACCTGCCGTTACAGTG CGATATTACCGCATCACTTACGGCAGGCACGTACATTTGTACTCGGAGTTCGGTCCGATGTATATCTACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCA AGTCCACAGCTACC^TCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAG CAAGCCAA1 1 1 CCA 1 IAAI 1ACCG CACAG AAA 1 1GACAAACCAICCCAGCACCATCACCACCACCACI GA
2631 ЕОЗ
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTGCGAT ATTACCGCATCAC7TACGGTAGGGATGTCCACATGTACTCTGACTGGGGTCCGATGTACATATACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCAC
AGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTT CCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAG CACCATCACCACCACCACTGA
2631J301
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTGCGAT ATTACCGCATCACTTACGGTAGGCATGTTCAGATATACTCGGACTGGGGTCCGCTGTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACA GCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTC
CATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2631 G03
ATGGGAGTTTCTGATGTG CCG CGCGACCTGGAAG TG GTTGCTG CCACCCCCACCAGCCTACTG ATCAGCTGG G ATG CACCTG CCGTCACAGTG CG AT ATTACCGCATCACTTACGGAAGGTATGTTCAGCTATACTCTGACTGGGGTCCGATGTACATCTACACGGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACA GCTACCATCAGCGGCCTITAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTC CATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT CACCACCACCACTGA
2631 Н09
AlGGGAGI I !С1GA1G 1GCCGCGCGACCIGGAAG IGG I I GOGCCACCCCCACCAGCCIGCIGAICAGCIGGGAIGCACC1GCCGICACAG IGCGA1 ATTACCGCATCACTTACGGACGGCAAGTGCAAGTGTTCTCAGACTTGGGTCCGCTGTACATATACAACGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCAC AGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTT CCATTAATTACCG CACAG AAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
2632J301
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTG CTG CCACCCCCACCAGCCTGCTG AT CAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTGCGAT ATTACCGCATC^CTTACGGTAGACAGGTGCAGATCTACTCTGACTGGGGACCGCTGTACATCTACAATGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCAC AGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTT CCATTAATTACCG CACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCACTGA
3852J10
ATGGGAGTTTCTGATGTG CCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTG CCACCCCCACCAGCCTGCTG AT CAGCTGGGACGCTCCGGCTGTTGACGGTCG AT
ATTACCGCATCACWACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAATCTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAA CCTGGCGWGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTCCGTACGAATTCCATTTCCCGTACACTCATTACTCTTCTAAACCAATTTC GCACAGAAATTGACAAACCATCCCAG CACCATCACCACCACCACTGA
4079 А04
ATGGGAGTTTCTGATGTG CCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTG CCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGATGCACCTG CCGTCACAGTGCGAT ATTACCG CATCA CTTACGGTAG G CAG GTACAG ATGTACTCTG ACTG GGGTCCAC1 1 1ACATCTACGCCGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACA GCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCACTGGCTCTGGAGAGAGCCCCGCAAGCAGCAAGCCAATTTC CATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCAT CACCACCACCACTGA
5190 Е01
ATGGGAGTTTCTGATGTG CCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTG CCACCCCCACCAGCCTGCTG AT CAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGGGTACGGT TATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAA ACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCATTAATTACCGGACCGA ACCGAGCACACCTCCGACCCCGAGTCCGTCAACACCACCGACACCGTCACCGAGCGGAGTTTCTGACGTCCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCC
ACCCCCACCAGCCTGCTGATCAGCTGGGATGCACCTGCCGTCACAGTGCGATATTACCGCATCACTTACGGCAGGGAGGTTCAGAAGTACTCGGACT TGGGTCCGTTGTACATCTACCAAGAGTTCACTGTGCCTGGGAGCAAGTCCACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACT
GTGTATG CTGTCACTGG CTCTG GAGAGAGCCCCG CAAG CAG CAAG CCAATTTCCATTAATTAC CG CACACCGTG A
to о
to о
(19)
(19)
(19)
103
103
106
106
109
112
112
114
114
114
114
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
SEQUENCE LISTING
<110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY
<400>
<400>
<400>
<400>
<400>
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 8
Xaa Xaa Pro Arg Asp Leu 1 5
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
<400> 16
Glu Ile Glu Lys Pro 1 5
<210> 21 <211> 7
His His His His His 115
His His His His His 115
His His His His
115
His His His His
115
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
His His His His
115
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
His His His His
115
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
His His His His
115
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
<400> 40
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
<400> 40
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
<400> 41
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
<400> 41
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
<400> 44
<400> 44
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gin His His
100 105 110
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gin His His
100 105 110
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln His His
100 105 110
<220>
<220>
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg
20 25 30
<210> 60
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Met Tyr Ser Asp Leu
35 40 45
<213> Artificial Sequence
<213> Artificial Sequence
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
85 90 95
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln
100 105 110
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Xaa Ser Gln
100 105 110
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser Asp Trp
35 40 45
<400> 71
<400> 71
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Met Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln
100 105 110
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Ala Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr
65 70 75 80
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 80
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Lys Asn Ser Asp Trp Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
His Lys Asn Ser Asp Trp Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 87
<400> 87
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<220>
<220>
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
<210> 91 <211> 93
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Val
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
<400> 96
<400> 96
<400> 96
<400> 96
<400> 96
<400> 96
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr 85 90
Gly Arg His Val His Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Gly Arg His Val His Ile Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Met Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Thr Glu
Thr Glu
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr
1 5 10 15
Ala Glu
Ala Glu
<220>
<220>
<223> Synthetic: 2630_D02 CD loop
<223> Synthetic: 2630_D02 CD loop
Asn Glu
Asn Glu
<223> Synthetic: 2631_E03 CD loop
<223> Synthetic: 2631_E03 CD loop
<400> 120
Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser 1 5
<400> 120
Gly Arg Asp Val His Met Tyr Ser 1 5
Asn Glu
Asn Glu
<220>
<220>
<223> Synthetic: 2629_A09
<223> Synthetic: 2629_A09
<210> 133 <211> 351
<210> 133 <211> 351
<210> 133 <211> 351
<210> 133 <211> 351
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<223> Synthetic: Linker
<223> Synthetic: Linker
<223> Synthetic: Linker
<223> Synthetic: Linker
<400> 158
<400> 158
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala
Pro Ala
Glu Phe Thr Val Pro Val Ser Lys Gly Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu
50 55 60
Glu Phe Thr Val Pro Val Ser Lys Gly Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu
50 55 60
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Glu Gly Tyr Gly
20 25 30
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Glu Gly Tyr Gly
20 25 30
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln
35 40 45
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln
35 40 45
<220>
<220>
Gly Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa
1 5 10 15
Gly Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Glu
Xaa Glu
195
200
205
Ala Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala
210 215 220
195
200
205
Ala Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala
210 215 220
Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala
50 55 60
Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala
50 55 60
Thr Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Gly Cys Thr Cys Cys
65 70 75 80
Thr Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Gly Cys Thr Cys Cys
65 70 75 80
Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Thr Cys Cys
305 310 315 320
Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Thr Cys Cys
305 310 315 320
Gly Thr Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Ala
325 330 335
Gly Thr Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Ala
325 330 335
Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr
565 570 575
Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr
565 570 575
Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Gly
580 585 590
Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Gly
580 585 590
<220>
<220>
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10
<210> 179 <211> 21
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10
<210> 179 <211> 21
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10
<210> 179 <211> 21
Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10
<210> 179 <211> 21
Asn Tyr Arg Thr Pro Gly Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro
1 5 10 15
Asn Tyr Arg Thr Pro Gly Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val
20 25 30
<223> Synthetic: 2629_C10 core with C-terminal proline
<400> 187
<223> Synthetic: 2629_C10 core with C-terminal proline
<400> 187
<220>
<220>
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 191 <211> 94
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 191 <211> 94
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
Pro Ala Val Thr Val Xaa Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val
20 25 30
His Lys Asn Ser Asp Trp Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
His Lys Asn Ser Asp Trp Gly Thr Leu Tyr Ile Tyr Thr Glu Phe Thr
35 40 45
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<223> Synthetic: 2630_A11 core with C-terminal proline
<223> Synthetic: 2630_A11 core with C-terminal proline
<400> 196
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<400> 196
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala
1 5 10 15
<220>
<223> Synthetic: 2630 D10 core with C-terminal proline
<220>
<223> Synthetic: 2630 D10 core with C-terminal proline
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser
65 70 75 80
<223> Synthetic: 2631_B04 core with C-terminal proline
<400> 203
<223> Synthetic: 2631_B04 core with C-terminal proline
<400> 203
<220>
<220>
<223> Synthetic: 2631 G01 core with C-terminal proline
<223> Synthetic: 2631 G01 core with C-terminal proline
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 207 <211> 94
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
<210> 207 <211> 94
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Pro 85 90
Glu Ile Asp Lys Pro Cys 1 5
Glu Ile Asp Lys Pro Cys 1 5
<223> Synthetic: C-terminal tail
<223> Synthetic: C-terminal tail
<223> Synthetic: C-terminal tail
<223> Synthetic: C-terminal tail
<223> Synthetic: C-terminal tail
<223> Synthetic: C-terminal tail
<400> 216
<400> 216
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
<400> 216
<400> 216
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
<400> 216
<400> 216
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
Glu Gly Ser Gly Cys His His His His His His
1 5 10
<210> 221 <211> 4
225
<400>
225
<400>
225
<400>
225
<400>
225
<400>
225
<400>
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Ile Asp Lys Pro Ser 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Pro Cys His His His His His His 1 5
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg His Val Gln Ile Tyr Ser Asp Leu Gly
35 40 45
<400> 238
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
<400> 238
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
35 40 45
35 40 45
<220>
<220>
<223>
<223>
244
<400>
244
<400>
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Met Tyr Ser Asp Phe Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val His Met Tyr Ser Asp Phe Gly
35 40 45
C-terminal proline
<400> 249
C-terminal proline
<400> 249
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Ile Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Glu Val Gln Lys Tyr Ser Asp Trp Gly
35 40 45
Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Xaa Ser Thr
50 55 60
Pro Leu Tyr Ile Tyr Gln Glu Phe Thr Val Pro Gly Ser Xaa Ser Thr
50 55 60
<400> 255
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
<400> 255
Gly Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1 5 10 15
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Tyr Ala Val Thr Gly Ser Gly Glu Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile
85 90 95
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Gln Pro
100 105 110
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
20 25 30
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Val Phe Ser Asp Leu Gly
35 40 45
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Arg Gln Val Gln Val Phe Ser Asp Leu Gly
35 40 45
<220>
<220>
Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Glu Phe Asp Phe
65 70 75 80
Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Glu Phe Asp Phe
65 70 75 80
Pro Gly Ala Gly Tyr Tyr His Arg Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
85 90 95
Pro Gly Ala Gly Tyr Tyr His Arg Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
85 90 95
Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro
35 40 45
Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro
35 40 45
Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu
50 55 60
Glu Pro Pro Ser Pro Glu Pro Pro Thr Pro Glu Pro Pro Ser Pro Glu
50 55 60
Trp Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys
1 5 10 15
Trp Gln Val Gln Met Tyr Ser Asp Trp Gly Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys
1 5 10 15
155
155
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 3
Фиг. 5
Фиг. 5
Фиг. 5
Фиг. 5
Фиг. 5
Фиг. 5
7/20
Фиг. 7
7/20
Фиг. 7
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
7/20
Фиг. 7
7/20
Фиг. 7
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Фиг. 8
Фиг. 8
Фиг. 8
Фиг. 8
Фиг. 10
Фиг. 11
Фиг. 11
12/20
12/20
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
13/20
Фиг. 13
13/20
Фиг. 13
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
ЗАМЕЩАЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Фиг. 15
Фиг. 15
Фиг. 16
Фиг. 16
Фиг. 17
Фиг. 17
Фиг. 18А
Фиг. 18А
Фиг. 18В
Фиг. 18В
Фиг. 18С
Фиг. 18С