EA201691641A1 20170228 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/201691641 Полный текст описания [**] EA201691641 20150317 Регистрационный номер и дата заявки US61/954,674 20140318 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок GB2015/050765 Номер международной заявки (PCT) WO2015/140527 20150924 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [PDF] eaa21702 Номер бюллетеня [**] ХИМИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ Название документа [8] C07D401/06, [8] C07D241/28, [8] A61K 31/497, [8] A61P 11/00 Индексы МПК [SE] Берглунд Сусанн Элисабет, [GB] Коннолли Стивен, [SE] Хеммерлинг Мартин, [SE] Хоссаин Нафизал, [GB] Кристофферссон Анна, [GB] Лундквист Йохан Руне Микаэль, [SE] Никитидис Григориос, [SE] Рипа Лена Элисабет, [SE] Шамовский Игорь Сведения об авторах [SE] АСТРАЗЕНЕКА АБ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea201691641a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

Согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль; способ получения такого соединения и применение такого соединение в лечении опосредуемого эпителиальными натриевыми каналами (ENaC) болезненного состояния (такого как астма, кистозный фиброз (CF) или хроническая обструктивная болезнь легких (COPD)).


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль; способ получения такого соединения и применение такого соединение в лечении опосредуемого эпителиальными натриевыми каналами (ENaC) болезненного состояния (такого как астма, кистозный фиброз (CF) или хроническая обструктивная болезнь легких (COPD)).


<19> .^^^ч Евразийское (2D 201691641 <13> А1
патентное ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. C07D 401/06 (2006.01)
2017.02.28 C07D 241/28 (2006.01)
A61K 31/497 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки A61P11/00 (2006.01)
2015.03.17
(54) ХИМИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ
(31) 61/954,674
(32) 2014.03.18
(33) US
(86) PCT/GB2015/050765
(87) WO 2015/140527 2015.09.24
(71) Заявитель: АСТРАЗЕНЕКА АБ (SE)
(72) Изобретатель:
Берглунд Сусанн Элисабет (SE), Коннолли Стивен (GB), Хеммерлинг Мартин, Хоссаин Нафизал (SE), Кристофферссон Анна, Лундквист Йохан Руне Микаэль (GB), Никитидис Григориос, Рипа Лена Элисабет, Шамовский Игорь (SE)
(57) Согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль; способ получения такого соединения и применение такого соединение в лечении опосредуемого эпителиальными натриевыми каналами (ENaC) болезненного состояния (такого как астма, кистозный фиброз (CF) или хроническая обструктивная болезнь легких (COPD)).
(74)
Представитель: Поликарпов А.В. (RU)
PCT/GB2015/050765
МПК: C07D 401/06 (2006.01) А61К31/497 (2006.01) С07В 241/28 (2006.01) А61Р11/00 (2006.01)
ХИМИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к производным пиразина, обладающим фармацевтической активностью, к способам получения таких производных, к фармацевтическим композициям, содержащим такие производные, и к применению таких производных в качестве активных терапевтических агентов.
Увлажнение эпителия дыхательных путей и легких обеспечивает эффективное функционирование ресничек, а мукоцилиарный клиренс (МСС) является первой линией одного из важнейших врожденных защитных механизмов дыхательных путей. Нарушение полноценного выведения слизи приводит к застою слизи и риску обструкции дыхательных путей и провоцирует развитие хронической бактериальной инфекции. Повышенное образование слизи, загустение слизи и снижение скорости мукоцилиарного клиренса являются хорошо известными характеристиками патофизиологии как кистозного фиброза (CF), так и хронической обструктивной болезни легких (COPD), и вносят значительный вклад в заболеваемость и смертность от этих заболеваний. Недостаточный МСС приводит к закупорке дыхательных путей застойной слизью, что ухудшает функционирование легких и служит очагом инфекции, облегчая бактериальную колонизацию и приводя к повышению интенсивности и тяжести обострений заболеваний.
Патофизиология CF хорошо охарактеризована и обусловлена мутациями в гене трансмембранного регулятора проводимости при кистозном фиброзе (CFTR), приводящими к нарушению увлажнения дыхательных путей, и CF остается одним из самых распространенных наследственных заболеваний со смертельным исходом в мировом масштабе. Несмотря на то, что CF является комплексным, затрагивающим многие органы заболеванием, заболеваемость и смертность определяются главным образом хронической обструктивной болезнью легких, которая развивается как следствие изначальной закупорки слизью малых дыхательных путей, хронического нейтрофильного воспаления дыхательных путей и бактериальной инфекции.
Патофизиология COPD сложна и плохо изучена. Современные руководства по клинической практике описывают COPD как болезненное
состояние, характеризующееся снижением поступления воздуха, которое не является полностью обратимым. Как правило, снижение поступления воздуха и прогрессирует, и ассоциируется с аномальной воспалительной реакцией легких на вредные частицы и газы. Наиболее весомым дополнительным источником таких частиц и газов является табачный дым. У пациентов с COPD имеются различные симптомы, включая кашель, затруднение дыхания и чрезмерную выработку мокроты; такие симптомы возникают в результате функциональных нарушений у целого ряда категорий клеток, включая нейтрофилы, макрофаги и эпителиальные клетки.
Достаточное увлажнение дыхательных путей имеет ключевое значение для поддержания МСС и соответствующего содержания воды в слизи. Регуляция увлажнения дыхательных путей тесно связана с движением электролитов и воды над слоем клеток эпителия. Околоресничная жидкость (PCL) у поверхности эпителия дыхательных путей, окружающая реснички, отделяет вязкий слой слизи от поверхности эпителия и облегчает биение ресничек. Показано, что объем/толщина слоя PCL является существенным фактором, определяющим скорость МСС.
ENaC (эпителиальный натриевый канал) представляет собой амилорид-чувствительный, потенциал-независимый ионный канал, широко экспрессированный в эпителии дыхательной, мочевыделительной, пищеварительной, репродуктивной систем и кожи. В организме в целом, ENaC играет ключевую роль в гомеостазе электролитов и балансе объема жидкостей посредством регуляции транспорта Na+ через эпителий почек. Посредством контролирования транспорта ионов натрия ENaC регулирует осмотический градиент через эпителий дыхательных путей и тем самым регулирует объем PCL. Блокирование ENaC-опосредуемого транспорта ионов натрия ослабляет осмотический градиент через эпителий, приводит к удерживанию воды у поверхности дыхательных путей (возрастанию объема PCL), усилению увлажнения слизи и возрастанию скорости МСС.
Роль ENaC как ключевого регулятора объема поверхностной жидкости дыхательных путей (ASL) и мукоцилиарного клиренса (МСС) in vivo установлена в литературе. Исследования на а-, (3- и y-ENaC (-/-) мышах, соответственно, демонстрируют критическую роль участия ENaC в выведении жидкости из
легких в перинатальный период (Barker et al., J. Clin. Invest., 1998, 102(8): 1634; Bonny and Hummler, Kidney Int., 2000, 57(4): 1313; Pradervand et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96(4): 1732). У трансгенных мышей, сверхэкспрессирующих (3-субъединицу ENaC, отмечается усиленное всасывание Na+ в дыхательных путях, истощение объема ASL, нарушение увлажнения слизи и замедление МСС. У мышей развивается тяжелое легочное заболевание с клиническими признаками, схожими с CF и COPD, включая закупорку дыхательных путей слизью, метаплазию бокаловидных клеток, нейтрофильное воспаление, нарушенный бактериальный клиренс и эмфизему (Mall et al., Nature Med., 2004, 10: 487; Mall et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2007, 177: 730). Уровень смертности среди трансгенных животных во время первых 20 дней их жизни составляет примерно 50% вследствие обширной закупорки слизью дыхательных путей, приводящей к асфиксии, тем не менее уровень смертности значительно снижается в результате введения амилорида в легкие мышей в течение 14 дней после рождения (Mall и др., реферат стендового доклада № G55 конференции Американского торакального общества (ATS; American Thoracic Society), 2008).
Кроме того, показано, что у людей с псевдогипоальдостеронизмом 1 типа (РНА1), заболеванием, вызываемым мутациями с потерей функции в генах, кодирующих а-, (3- и y-ENaC, увеличивается объем ASL и усиливается активация МСС (Kerem et al., N. Engl. Med., 1999, 341: 156). Лечение обычных пациентов блокирующим EnaC-канал соединением амилоридом приводит к увеличению объема ASL и повышению скорости МСС (Sood et al., Am. J. Crit. Care Med., 2003, 167: 158).
Амилорид и бензамил представляют собой фармацевтически активные производные пиразина, известные тем, что они блокируют эпителиальный натриевый канал.
Кратко, в этой заявке описывается, помимо всего прочего, соединение формулы (I):
N (I) R2
где:
R1 выбран из атома водорода или С^алкила; m равно 1 или 2;
А выбран из фенила или гетероциклила;
X выбран из -С(=0)-, -C(=0)-NR4- или -0-C(=0)-NR5-;
п равно 2 или 3;
R2 выбран из атома водорода или С^алкила;
R3 представляет собой Cs-балкил-ОН, где указанная Cs-балкильная группа дополнительно замещена дополнительными 3 или 4 группами -ОН; и R4 и R5 выбраны из атома водорода или С^алкила; или его фармацевтически приемлемая соль.
В этой заявке также описываются, помимо всего прочего, фармацевтические композиции, которые содержат соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый адъювант, разбавитель или носитель.
В этой заявке также описывается, помимо всего прочего, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
В этой заявке также описывается, помимо всего прочего, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для лечения или предупреждения ENaC-опосредуемого болезненного состояния.
В этой заявке также описывается, помимо всего прочего, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения ENaC-опосредуемого болезненного состояния.
В этой заявке также описывается, помимо всего прочего, способ лечения или предупреждения ENaC-опосредуемого болезненного состояния у млекопитающего, страдающего от указанного болезненного состояния или имеющего риск его развития, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Дальнейшие аспекты изобретения будут очевидны специалисту в данной области техники после прочтения данного описания.
Соединения по изобретению могут существовать в солевой форме или в несолевой форме (т.е. в виде свободного основания), и настоящее изобретение охватывает как солевые формы, так и несолевые формы.
Соединения, описанные в этой заявке, могут образовывать соли присоединения кислоты. В общем случае, соль присоединения кислоты может быть получена с использованием различных неорганических или органических кислот. Обычно такие соли могут быть образованы, например, посредством смешивания соединения с кислотой (например, со стехиометрическим количеством кислоты) с использованием различных методов, известных в данной области техники. Такое смешивание можно осуществлять в воде, в органическом растворителе (например, эфире, этилацетате, этаноле, метаноле, изопропаноле или ацетонитриле) или в водно-органической смеси.
Согласно другому аспекту изобретения солями присоединения кислоты являются, например, трифторацетат, формиат, ацетат или гидрохлорид.
Специалисту известны общие принципы и методы получения фармацевтических солей, такие как, например, описанные в Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19(1977).
Соединения и соли, описанные в этой заявке, могут содержать один или более хиральных (т.е. асимметрических) центров. В тех случаях, когда в этом описании в структуре или химическом названии не указывается хиральность, подразумевается, что данные структура или название охватывают любой индивидуальный стереоизомер (т.е. любой индивидуальный хиральный изомер), соответствующий этой структуре или этому названию, а также любую смесь стереоизомеров (например, рацемат). В некоторых воплощениях индивидуальный стереоизомер получают путем выделения из смеси изомеров
(например, из рацемата) с использованием, например, хирального хроматографического разделения. В других воплощениях индивидуальный стереоизомер получают посредством прямого синтеза, например, из хирального исходного вещества.
Если существующее в твердой кристаллической форме соединение формулы (I) может быть в форме сокристалла с другой химической разновидностью, то данное изобретение охватывает все такие сокристаллы.
Соединения по изобретению могут существовать в форме сольвата (такого как гидрат), а также в несольватированных формах, и настоящее изобретение охватывает все такие сольваты.
Соединения и соли, описанные в этой заявке, могут существовать в различных таутомерных формах, и данное изобретение охватывает все такие таутомерные формы. "Таутомеры" представляют собой структурные изомеры, которые существуют в равновесии благодаря миграции атома водорода.
Соединения и соли, описанные в этой заявке, могут быть мечены изотопом (или "мечены радиоактивной меткой"). В этом случае один или более атомов заменены на атом, имеющий атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе. Примеры радионуклидов, которые могут быть инкорпорированы, включают 2Н (также обозначаемый как "D" - дейтерий), 3Н (также обозначаемый как "Т" - тритий), 11С, 13С, 14С, 13N, 15N, 150, 170, 180 и 36CI. Использование того или иного радионуклида будет зависеть от конкретного применения указанного меченного радиоактивной меткой производного. Например, для введения метки в рецептор in vitro и проведения конкурентных анализов часто используют 3Н или 14С. Для применений с целью радиоизопотной визуализации часто используют 11 С. В некоторых воплощениях радионуклид представляет собой 3Н. В некоторых воплощениях радионуклид представляет собой 14С. В некоторых воплощениях радионуклид представляет собой 11 С.
Алкильные группы и группировки представляют собой прямую или разветвленную цепь, например С-^алкил, Ci-балкил, С^алкил или Cs-балкил. Примерами алкильных групп являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н
бутил, mpem-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил и н-октил, как например, метил или н-гексил.
Гетероциклил представляет собой неароматическое 5- или 6-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, независимо выбранных из атома азота, кислорода или серы; или их N-оксид либо их S-оксид или S-диоксид. Примером гетероциклила является неароматическое 5- или 6-членное кольцо, содержащее один или два атома азота; или их N-оксид либо их S-оксид или S-диоксид, например, пирролидинил или пиперидинил, например пиперидин-4-ил. Во избежание неясности, заместители на гетероциклильном кольце могут быть присоединены или через атом углерода, или через гетероатом.
Термин "фармацевтически приемлемый" используется для описания какого-либо компонента (например, соли, лекарственной формы или эксципиента) как подходящего для применения предполагаемым пациентом.
Согласно одному конкретному аспекту R1 является заместителем фенильной группы по положению 2 относительно места ее присоединения к остальной части соединения формулы (I).
Согласно следующему аспекту R1 представляет собой С^алкил.
Согласно следующему аспекту R1 представляет собой метил.
Согласно следующему аспекту m равно 1.
Согласно еще одному аспекту А выбран из фенила или пиперидинила.
Согласно следующему аспекту А представляет собой фенил.
Согласно следующему аспекту А представляет собой пиперидинил.
Согласно другому аспекту X представляет собой -C(=0)-NR4-.
Согласно следующему аспекту X представляет собой -C(=0)-NH-.
Согласно одному из аспектов, когда группа X представляет собой -С(=0)-NR4-, тогда карбонильная группа в X присоединена к А, а аминогруппа в X к (СН2)п- Согласно другому аспекту, когда группа X представляет собой -С(=0)-NR4-, тогда аминогруппа в X присоединена к А, а карбонильная группа в X к (СН2)П.
Согласно одному из аспектов, когда группа X представляет собой -0-C(=0)-NR5-, тогда атом кислорода простой эфирной группы в X присоединен к А, а аминогруппа в X к (СН2)П- Согласно другому аспекту, когда группа X
представляет собой -0-C(=0)-NR5-, тогда аминогруппа в X присоединена к А, а атом кислорода простой эфирной группы в X к (Ch^V
Согласно другому аспекту группа X является заместителем группировки А по положению 4 относительно места ее присоединения к остальной части соединения формулы (I).
Согласно другому аспекту п равно 2.
Согласно следующему аспекту R2 представляет собой С^алкил.
Согласно еще одному аспекту R2 представляет собой н-гексил.
Согласно другому аспекту R3 представляет собой С5алкил-ОН, где указанная СбЭлкильная группа дополнительно замещена дополнительными 3 группами -ОН.
Согласно другому аспекту R3 представляет собой Сбалкил-ОН, где указанная Сбалкильная группа дополнительно замещена дополнительными 4 группами -ОН.
Согласно другому аспекту R3 выбран из следующего:
Согласно другому аспекту R3 выбран из (2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентила, (2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пeнтaгидpoкcигeкcилa, (2R,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пeнтaгидpoкcигeкcилa или (2R,3S,4S)-2,3,4,5-тетрагидроксипентила.
Согласно следующему аспекту R3 выбран из (2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентила, (2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пeнтaгидpoкcигeкcилa или (2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-neHTarHflpoKcnreKcmia.
Согласно другому аспекту R5 представляет собой атом водорода.
Согласно следующему аспекту R1 представляет собой С-малкил; m равно 1 или 2; А представляет собой фенил или пиперидинил; X выбран из -С(=0)-, -C(=0)-NR4- или -0-C(=0)-NR5-; п равно 2 или 3; R2 представляет собой атом водорода или С^алкил; R3 представляет собой Cs-балкил-ОН, где указанная С5. балкильная группа дополнительно замещена дополнительными 3 или 4 группами -ОН; и R4 и R5 оба представляют собой атом водорода.
Согласно другому аспекту R1 представляет собой С-^алкил; m равно 1; А представляет собой фенил или пиперидинил; X представляет собой -C(=0)-NH-; п равно 2; R2 представляет собой С-^алкил; R3 выбран из следующего:
или
Согласно другому аспекту R1 представляет собой С-^алкил; m равно 1; А
представляет собой фенил; X представляет собой -C(=0)-NH-; п равно 2; R2
представляет собой С-^алкил; и R3 выбран из следующего:
,он но.
или
Согласно следующему аспекту изобретения, соединения по изобретению демонстрируют стереохимическую конфигурацию R при углеродном центре, помеченном звездочкой (*) в приведенной ниже формуле (1а):
Примером соединения по изобретению является:
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(2-(2-метилбензил)-3-(((1-(3-((2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((1-(2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((1-(3-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((1-(3-(гексил(2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((1-(4-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(2-(2-метилбензил)-3-((1-(3-(2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-1\1-(3-((1-(3-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-1Ч-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
4-((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенил-2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамат;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил(2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-(3-(2-(гексил(2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другим примером соединения по изобретению является:
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(2-(2-метилбензил)-3-(((1-(3-(((28,ЗР,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-(3-((4-((2-(гексил((28,ЗР,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((1-(2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-(3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-(3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((1-(4-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диaминo-6-xлop-N-(2-(2-мeтилбeнзил)-3-((1-(3-((2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((1-(3-(reKCMn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((4-((2-(reKCMn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
4-((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-мeтилбeнзил)пpoпилaминo)мeтил)фeнил-2-(гeкcил((2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамат;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-(3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-(3-((4-((2-(гексил((2К,38,48)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-(3-(3-(2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другим примером соединения по изобретению является:
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-2-(2-метилбензил)-3-(((1-(3-(((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗР,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(4-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-2-(2-метилбензил)-3-((1-(3-((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(3-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
4-((^)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенил-2-(гексил((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамат;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((S)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((S)-3-((4-((2-(reKCMn((2R,3S,4S)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-(3-(2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид;
или его фармацевтически приемлемая соль.
Дополнительным признаком данного изобретения является любое из воплощений, описанных выше, при условии, что любое из конкретных соединений из примеров каждое в отдельности исключены из притязаний. Например, следующим признаком является любое из воплощений, описанных выше, при условии, что любое из соединений, выбранных из приведенного выше списка примеров соединений по изобретению каждое в отдельности, исключены из притязаний.
В некоторых воплощениях соединение представляет собой соединение формулы (I), за исключением по меньшей мере одного соединения, приведенного ниже в примерах. В целях иллюстрации, например, в некоторых таких воплощениях соединение представляет собой соединение формулы (I), за исключением соединения, описанного в примере X, где X может представлять собой 1, 2, 3 и т.д. В других воплощениях соединение представляет собой соединение формулы (I), за исключением соединения, описанного в примерах Y, где Y может представлять собой любую комбинацию из 1, 2, 3 и т.д.
Соединения формулы (I) могут быть получены из соединений формулы (II) в соответствии со схемой 1, где R1, R2, R3, А, X, m и п являются такими, как определено в формуле (I), и где р равно т-1.
Х-(СН2)п - N з
Схема 1
a) NaH(OAc)3, АсОН, THF (тетрагидрофуран) или NaBH4, МеОН Альтернативно, соединения формулы (I) могут быть получены способом, описанным на схеме 2, где R1, R2, R3, А, X, m и п являются такими, как определено в формуле (I), и где Y представляет собой атом галогена, например, хлора, брома или йода, и р равно т-1.
Х-(СН2)п - N з
Схема 2
a) NaH, или К2СОз, или CS2CO3, или DIEA (диизопропилэтиламин), DMF (диметилформамид)
Альтернативно, соединения формулы (I) могут быть получены в результате введения R3 на заключительной стадии путем восстановительного алкилирования подходящих полигидроксилированных алкилальдегидов, таких как гексозы или пентозы ^3-альдегид), как описано на схеме 3, и где R1, R2, R3, А, X, m и п являются такими, как определено в формуле (I). Имеющиеся в R3 полигидроксиалкильные цепи могут быть защищены любыми подходящими защитными группами для спирта, например, как описано в P.G.M. Wuts, Th.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-lnterscience, New York, 2006. Кроме того, как известно специалисту и как описано в примерах в данной заявке, дополнительные аминогруппы, имеющиеся в соединениях формулы (II), могут быть защищены подходящими амино-защитными группами, например, как описано Wuts и Greene (выше), такими как защитные группы ди-трет-бутилдикарбонат (Вое) или флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc).
Схема 3
a) NaBH(OAc)3 или NaBH3CN, АсОН, THF или NaBH4, МеОН
Соединения формулы (II) могут быть получены энантиоселективными
методами, описанными на схеме 5 (J.C.D. Muller-Hartwieg, L. La Vecchia, Н. Meyer, А.К. Beck, D. Seebach, Org. Synth. 85 (2008), 295), или методом, показанным на схемах 4 и 6, где R1 является таким, как определено в формуле (I).
Схема 4
а) 1) L-пролин, DMF, 2) NaBH4, МеОН; Ь) фталимид, PPh3 (трифенилфосфин), DEAD (диэтилазадикарбоксилат), THF; с) CH3NH2, EtOH, d) Boc20, DCM (дихлорметан), TEA (триэтиламин); e) Pd(OH)2, H2, MeOH, 70 фунт/кв. дюйм (483 кПа); f) (3-хлор-5-(1 Н-имидазол-1-илкарбонил)пиразин-2,6-диамин, DIPEA (диизопропилэтиламин), NMP (N-метилпирролидинон); g) TFA (трифторуксусная кислота), DCM; h) NaOH, THF.
Схема 5
a) BuLi, THF; b) TiCU, TEA, DCM; c) LiOH, H202, THF, H20; d) (COCI)2, NH4OH, DCM; e) BH3*THF; f) NMP; g) TFA, DCM; h) NaOH, THF.
Схема 6
а) Диаллилкарбонат, липаза Amano II из PS-C {Pseudomonas cepacia), МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир); Ь) кислота (например, D-тартрат), перекристаллизация; с) 10 М NaOH, МТВЕ; d) (ВОС)20, МТВЕ; е) LiBH4, Pd(PPh3)4 (тетракис(трифенилфосфин)палладий(О)), THF; f) CDI (карбонилдиимидазол); iPrOAc; g) TFA, DCM; h) NaOH, THF.
Схемы 4, 5 и 6 описывают подход к получению (Я?)-энантиомера соединений формулы (II). Реакции, описанные на этих схемах, в равной степени могут быть применены для подхода к получению соответствующего (S)-энантиомера путем использования исходных веществ с противоположной абсолютной конфигурацией или ферментов с другой стереоспецифичностью.
Альтернативно, соединения формулы (II) с (З)-конфигурацией могут быть получены так, как показано на схеме 7.
Схема 7
a) CDI; iPrOAc; b) LiBH4, Pd(PPh3)4, THF.
Способ, описанный на стадии (а) схемы 6, включает фермент-опосредованную десимметризацию диамина (III) с использованием диаллилкарбоната.
H2N
Ферменты, подходящие для этой реакции, включают липазы, в частности,
липазы, происходящие из Candida antarctica или Pseudomonas cepacia. Подходящие ферменты включают IMM CALB (липазу В из Candida antarctica), IMM CALBY (липазу В из Candida antarctica), Novozym 435 (липазу В из Candida antarctica), липазу Amano PS-C1 (липазу из Pseudomonas cepacia), липазу Amano PS-IM (липазу из Pseudomonas cepacia) и липазу Amano PS-D (липазу из Pseudomonas cepacia), например, липазу Amano PS-C1, липазу Amano PS-D и липазу Amano PS-IM. Данная реакция может быть проведена в разнообразных полярных и неполярных растворителях и их смесях, включая трет-бутил-диметиловый эфир (ТВМЕ), тетрагидрофуран (THF), метил-THF (MeTHF, например 2-метил-ТНР), гептаны, циклогексан и толуол, например MeTHF. Реакция может быть проведена в диапазоне температур, например, от 0°С до 50°С, например, от 15°С до 35°С, например, при температуре около 30°С. Энантиомерный избыток полученного неочищенного продукта возможно можно повысить путем применения способов разделения, известных специалистам в данной области техники, например путем кристаллизации из соли винной кислоты.
Согласно следующему аспекту изобретения предложен способ
получения соединения формулы (IV), где R1 является таким, как определено
выше (такого как соединение (Я?)-аллил-(3-амино-2-(2-
метилбензил)пропил)карбамат):
(IV),
включающий фермент-опосредованную десимметризацию диамина (III) в присутствии диаллилкарбоната и возможно последующее проведение разделения энантиомеров. Согласно следующему аспекту фермент выбран из одного из ферментов, происходящих либо из Candida antarctica, либо из Pseudomonas cepacia, таких как IMM CALB (липаза В из Candida antarctica), IMM CALBY (липаза В из Candida antarctica), Novozym 435 (липаза В, Candida antarctica), липаза Amano PS-C1 (липаза из Pseudomonas cepacia), липаза
Amano PS-IM (липаза из Pseudomonas cepacia) и липаза Amano PS-D (липаза из Pseudomonas cepacia). Согласно другому аспекту фермент выбран из липазы Amano PS-C1, липазы Amano PS-D и липазы Amano PS-IM, например, липазы Amano PS-IM.
Согласно другому аспекту изобретения предложено соединение (R)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат.
Согласно следующему аспекту предложено применение соединения (R)-
аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамата в качестве
фармацевтического промежуточного соединения. Согласно следующему аспекту предложено применение соединения (Я?)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамата в качестве промежуточного соединения для получения соединения формулы (I).
Подробные способы получения соединений по изобретению также описаны ниже в примерах.
Соединения и соли, описанные в этой заявке, в общем случае могут быть использованы в способах лечения различных расстройств у животных, в частности, млекопитающих. Млекопитающие включают, например, людей.
Соединения по изобретению и их фармацевтически приемлемые соли обладают активностью в качестве фармацевтических средств, в частности в качестве модуляторов ENaC, и их можно использовать в лечении заболевания дыхательных путей, заболевания кости и суставов и других аутоиммунных и аллергических расстройств.
Болезненные состояния, которые могут быть подвергнуты лечению соединением по изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, включают, но не ограничиваются этим, заболевания дыхательных путей, такие как обструктивные заболевания дыхательных путей, включая: астму, в том числе бронхиальную, аллергическую, наследственную, приобретенную, индуцированную физической нагрузкой, индуцированную приемом лекарственных средств (включая индуцированную приемом аспирина и NSAID (нестероидное противовоспалительное лекарственное средство)) и индуцированную пылью астму, как перемежающуюся, так и персистирующую и всех степеней тяжести, и другие случаи гиперчувствительности дыхательных путей; хроническую обструктивную болезнь легких (COPD); бронхит, в том
числе инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфизему; бронхоэктаз; кистозный фиброз; саркоидоз; экзогенный аллергический альвеолит и родственные заболевания; гиперчувствительный пневмонит; фиброз легких, в том числе криптогенный фиброзирующий альвеолит, идиопатические интерстициальные пневмонии, идиопатический легочный фиброз, фиброз, являющийся осложнением противоопухолевой терапии и хронической инфекции, включая туберкулез и аспергиллез и другие грибковые инфекции; осложнения легочной трансплантации; васкулитоподобные и тромботические расстройства легочной сосудистой сети и легочную гипертензию; противокашлевую активность, в том числе при лечении хронического кашля, ассоциированного с воспалительными и связанными с секреторной функцией состояниями дыхательных путей, и ятрогенного кашля; острый и хронический ринит, в том числе медикаментозный ринит и вазомоторный ринит; круглогодичный и сезонный аллергический ринит, в том числе поллиноз (сенную лихорадку); назальный полипоз; острую вирусную инфекцию, в том числе вирусную инфекцию верхних дыхательных путей и инфекцию вследствие респираторного синцитиального вируса, вируса гриппа, коронавируса (включая SARS (атипичная пневмония)) и аденовируса; острое повреждение легких; или респираторный дистресс-синдром взрослых (ARDS).
Согласно следующему аспекту изобретения, заболевания дыхательных путей, которые могут быть подвергнуты лечению соединением по изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, включают: хроническую обструктивную болезнь легких (COPD); бронхит, в том числе инфекционный и эозинофильный бронхит; бронхоэктаз; кистозный фиброз; противокашлевую активность, в том числе при лечении хронического кашля, ассоциированного с воспалительными и связанными с секреторной функцией состояниями дыхательных путей, и ятрогенного кашля; астму, в том числе бронхиальную, аллергическую, наследственную, приобретенную, индуцированную физической нагрузкой, индуцированную приемом лекарственных средств (включая индуцированную приемом аспирина и NSAID) и индуцированную пылью астму, как перемежающуюся, так и персистирующую и всех степеней тяжести, и другие случаи гипервосприимчивости дыхательных путей.
Согласно еще одному аспекту изобретения болезненные состояния, которые могут быть подвергнуты лечению соединением по изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, включают хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), кистозный фиброз, астму, хронический бронхит и бронхоэктаз.
Согласно еще одному аспекту изобретения болезненное состояние, которое можно лечить соединением по изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, представляет собой хроническую обструктивную болезнь легких (COPD).
Согласно одному из аспектов изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для лечения COPD.
Согласно следующему аспекту изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для изготовления лекарственного средства для лечения COPD.
Согласно следующему аспекту изобретения предложен способ лечения или предупреждения COPD у млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или имеющего риск его развития, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Согласно еще одному аспекту изобретения болезненное состояние, которое можно лечить соединением по изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, представляет собой кистозный фиброз (CF).
Согласно одному из аспектов изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для лечения CF.
Согласно следующему аспекту изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для изготовления лекарственного средства для лечения CF.
Согласно следующему аспекту изобретения предложен способ лечения или предупреждения CF у млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или имеющего риск его развития, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически
эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Когда соединение или соль, описанные в этой заявке, вводят для лечения расстройства, "терапевтически эффективным количеством" является количество, достаточное для ослабления или полного облегчения симптомов или других вредных воздействий расстройства; излечения от расстройства; реверсирования, полной остановки или замедления прогрессирования расстройства; или для снижения риска ухудшения расстройства.
В некоторых воплощениях, где используют комбинированную терапию, количество соединения или соли, описанных в этой заявке, и количество другого(их) фармацевтически активного(ых) агента(ов) является, после комбинирования, терапевтически эффективным для лечения целевого расстройства у пациента-животного. В этом контексте, комбинированные количества считаются "терапевтически эффективным количеством", если после комбинирования их достаточно для ослабления или полного облегчения симптомов или других вредных воздействий расстройства; излечения от расстройства; реверсирования, полной остановки или замедления прогрессирования расстройства; или для снижения риска ухудшения расстройства. Обычно такие количества могут быть определены специалистом в данной области техники, например, исходя из диапазона дозировок, описанных в этой заявке для соединения или соли, и одобренного(ных) к применению или опубликованного(ных) иным образом диапазона(нов) дозировок для другого(их) фармацевтически активного(ых) соединения(ий).
С целью применения соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для терапевтического лечения млекопитающего, такого как человек, на основе указанного ингредиента обычно изготавливают фармацевтическую композицию в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Ввиду этого, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль (активный ингредиент) и фармацевтически приемлемый адъювант, разбавитель или носитель.
Согласно следующему аспекту настоящего изобретения предложен способ приготовления указанной композиции, включающий смешивание активного ингредиента с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать, например, от 0,05 до 99 масс.% (процентов по массе), как например, от 0,05 до 80 масс.%, например, от 0,10 до 70 масс.%, как например, от 0,10 до 50 масс.%, активного ингредиента, при этом все проценты по массе приведены из расчета на общую массу композиции.
Фармацевтические композицие по данному изобретению можно вводить обычным для болезненного состояния, которое желательно подвергнуть лечению, способом, например, путем местного (такого как введение в легкое и/или дыхательные пути или в кожу), ингаляционного, перорального, ректального или парентерального введения. Для этих целей на основе соединений по данному изобретению могут быть приготовлены композиции способами, известными в данной области техники. Подходящей фармацевтической композицией по данному изобретению является композиция, подходящая для перорального введения в стандартной лекарственной форме, например, в таблетке или капсуле, которая содержит от 0,1 мгдо 1 г активного ингредиента.
Каждый пациент может получить, например, дозу активного ингредиента от 0,0001 мгкг"1 до 10 мгкг"1, например, в диапазоне от 0,005 мгкг"1 до 5 мгкг"1, вводимую, например, от 1 до 4 раз в сутки.
В одном из воплощений изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) вместе с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, которую готовят для ингаляционного введения (в том числе для пероральной и назальной ингаляции).
Соединение формулы (I) можно вводить с использованием подходящего устройства доставки, например, посредством ингалятора сухого порошка, дозирующего ингалятора, небулайзера или устройства для назальной доставки. Такие устройства хорошо известны.
Ингаляторы сухого порошка можно использовать для введения соединения формулы (I), по отдельности или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в последнем случае либо в виде тонкоизмельченного порошка, либо в виде упорядоченной смеси. Ингалятор сухого порошка может представлять собой однодозовый или многодозовый ингалятор, и в нем можно применять сухой порошок или содержащую порошок капсулу.
Соответственно, в одном из воплощений соединение формулы (I) или фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I), вводят посредством ингалятора сухого порошка (DPI).
DPI может быть "пассивным" или активируемым дыхательным усилием либо "активным", когда порошок диспергируют с использованием некоего механизма, отличающегося от вдыхания пациентом, например, внутреннего источника сжатого воздуха. В настоящее время доступны три типа пассивных ингаляторов сухого порошка: однодозовые ингаляторы, ингаляторы с множественными однократными дозами или многодозовые (резервуарные) ингаляторы. В однодозовых устройствах отдельные дозы обычно представлены в желатиновых капсулах и должны быть загружены в ингалятор перед применением, примеры таких устройств включают Spinhaler(r) (Aventis), Rotahaler(r) (GlaxoSmithKline), Aeroliser(tm) (Novartis), Inhalator(r) (Boehringer) и Eclipse (Aventis). Ингаляторы с множественными однократными дозами содержат некоторое количество отдельно упакованных доз, либо в виде множественных желатиновых капсул, либо в блистерах, примеры которых включают устройства Diskhaler(r) (GlaxoSmithKline), Diskus(r) (GlaxoSmithKline), Nexthaler(r) (Chiesi) и Aerohaler(r) (Boehringer). В случае многодозовых устройств лекарственное средство содержится в резервуаре для нерасфасованного порошка, из которого отмеряются отдельные дозы, примеры таких устройств включают Genuair(r) (AstraZeneca), Turbuhaler(r) (AstraZeneca), Easyhaler(r) (Orion), Novolizer(r) (ASTA Medica), Clickhaler(r) (Innovata Biomed), Spiromax(r) (Teva) и Pulvinal(r) (Chiesi).
Ингаляционная фармацевтическая композиция для применения в DPI может быть приготовлена путем смешивания тонкоизмельченного активного ингредиента (имеющего аэродинамический диаметр, обычно равный или меньше 10 мкм, как например, равный или меньше 5 мкм, например, от 1 до 5
мкм) с веществом-носителем, например, моно-, ди- или полисахаридом, сахарным спиртом или другим полиолом. Подходящими носителями являются сахара, например лактоза, глюкоза, раффиноза, мелицитоза, лактит, мальтит, трегалоза, сахароза, маннит; и крахмал. Удобным образом, частицы активного ингредиента прилипают к частицам носителя с образованием упорядоченной (взаимосвязанной) порошковой смеси. Частицы носителя могут иметь медианно-массовый диаметр от 20 до 1000 мкм, в более обычном случае от 50 до 500 мкм.
Альтернативно, ингаляционная фармацевтическая композиция может быть приготовлена путем превращения тонкоизмельченного порошка (например, состоящего из тонкоизмельченного активного ингредиента и тонкоизмельченных частиц носителя) в сферы, которые разрушаются при процедуре вдыхания.
Затем порошковую смесь, при желании, можно размещать в твердых желатиновых капсулах, при этом каждая будет содержать желаемую дозу активного ингредиента. Альтернативно, такой порошковой смесью можно заполнить резервуар многодозового ингалятора, например, Genuair(r) или Turbuhaler(r).
В следующем воплощении соединение формулы (I) вводят посредством дозирующего ингалятора, в частности, дозирующего ингалятора под давлением (pMDI). pMDI содержит активный ингредиент в виде подходящего раствора или суспензии в находящемся под давлением контейнере. Активный ингредиент доставляется посредством приведения в действие клапана на pMDI устройстве. Приведение в действие может осуществляться вручную или посредством дыхательного усилия. Что касается pMDI, приводимых в действие вручную, то данное устройство приводится в действие пользователем на вдохе, например, путем нажатия на подходящий механизм высвобождения, расположенный на pMDI устройстве. Активируемые дыхательным усилием pMDI приводятся в действие, когда пациент вдыхает через мундштук pMDI. Это можно считать преимуществом, поскольку приведение в действие такого устройства согласуется с вдохом пациента и может приводить к более правильному введению активного вещества. Примеры pMDI устройств включают, например Rapihaler(r) (AstraZeneca).
Ингаляционная фармацевтическая композиция для применения в pMDI может быть приготовлена путем растворения или диспергирования соединения формулы (I) в подходящем пропелленте и с добавлением или без добавления дополнительных эксципиентов, таких как растворители (например, этанол), поверхностно-активные вещества, смазывающие вещества или стабилизирующие агенты. Подходящие пропелленты включают углеводородные, хлорфторуглеродные и гидрофторалкановые (например, гептафторалкановые) пропелленты или смеси любых таких пропеллентов. Предпочтительными пропеллентами являются Р134а и Р227, каждый из которых можно использовать по отдельности или в комбинации с другими пропеллентами и/или поверхностно-активным веществом и/или другими эксципиентами.
В следующем воплощении соединение формулы (I) вводят посредством дозирующего ингалятора в комбинации с спейсером. Подходящие спейсеры хорошо известны и включают Nebuchamber(r) (AstraZeneca) или Volumatic(r) (GlaxoSmithKline).
В следующем воплощении соединение формулы (I) вводят посредством небулайзера. Подходящие небулайзеры хорошо известны и включают eFlow(r) (PARI GmbH).
Ингаляционная фармацевтическая композиция для применения в небулайзере может быть приготовлена путем диспергирования или предпочтительно растворения соединения формулы (I) в подходящей водной среде. Композиция также может включать, например, подходящие вещества для регулирования рН и/или тоничности, поверхностно-активные вещества и консерванты. Например, подходящая композиция для ингаляции из небулайзера содержит соединение формулы (I), диспергированное в водной среде (мг/г в воде Mill-Q), содержащей хлорид натрия (9 мг/г); безводную лимонную кислоту (0,0735 мг/г); цитрат натрия (0,19 мг/г); бензалконийхлорид (0,1 мг/г), EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота; 0,1 мг/г) и полисорбат 80 (0,3 мг/г).
В следующем воплощении соединение формулы (I) вводят назально в виде спрея из подходящего устройства для назальной доставки, например, пульверизатора или дозирующего ингалятора (MDI). Альтернативно,
соединение можно вводить назально в виде порошка с использованием подходящего DPI устройства, например Rhinocort(r), Turbuhaler(r) (AstraZeneca).
Ингаляционная фармацевтическая композиция для применения с пульверизатором или MDI устройства для назальной доставки может быть приготовлена путем диспергирования или предпочтительно растворения соединения формулы (I) в подходящей водной среде. Композиция также может включать, например, подходящие вещества для регулирования рН и/или тоничности, поверхностно-активные вещества, консерванты, смазывающие вещества, корригенты или модификаторы вязкости. При необходимости могут быть включены вспомогательные вещества для усиления всасывания из носовой полости, такие как подходящий биоадгезивный полимер. Подходящими сухими порошковыми композициями для назальной доставки являются такие, которые описаны ранее в отношении доставки посредством DPI. Однако, когда желательно ограничить проникновение соединения в легкое и удержать соединение в носовой полости, может быть необходимым использовать соединение в виде частиц большего размера, например со средним диаметром частиц более чем примерно 10 мкм, например, от 10 мкм до 50 мкм.
Соответственно, согласно настоящему изобретению также предложено ингалирующее устройство (например, ингалятор сухого порошка, в частности, мультидозовый ингалятор сухого порошка или ингалятор pMDI), содержащее ингаляционную фармацевтическую композицию по изобретению.
Изобретение также относится к комбинированной терапии, при которой соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и второй активный ингредиент вводят одновременно, последовательно или в смеси для лечения одного или более перечисленных выше состояний. Такую комбинацию можно использовать в смеси с одним или более чем с одним другим активным ингредиентом.
Согласно следующему аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция (например, для применения в качестве лекарственного средства для лечения одного из заболеваний или состояний, перечисленных в данном описании, таких как CF или COPD), содержащая соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один дополнительный активный ингредиент, выбранный из:
а) агониста бета-адренорецепторов;
б) антагониста мускариновых рецепторов;
в) смешанного антагониста мускариновых рецепторов и агониста бета-
адренорецепторов;
г) агониста Toll-подобных рецепторов (такого как агонист TLR7 или TLR9);
д) антагониста аденозиновых рецепторов;
е) (стероидного или нестероидного) агониста рецептора
глюкокортикоидов;
ж) антагониста р38;
з) антагониста IKK2 (IkB киназный комплекс);
и) антагониста PDE4 (фосфодиэстераза 4);
к) модулятора функционирования хемокиновых рецепторов (такого как антагонист рецептора CCR1, CCR2B, CCR5, CXCR2 или CXCR3);
л) антагониста CRTh2 (молекула-гомолог хемоаттрактантного рецептора, экспрессируемая на Т-хелперных клетках 2 типа); или
м) осмолита, например ионного осмолита, такого как гипертонический физиологический раствор,
как определено ниже.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с агонистом бета-адренорецепторов (включая подтипы 1-4 бета-рецепторов), таким как тербуталин (например, в виде сульфатной соли), сальметерол (например, в виде ксинафоатной соли), сальбутамол (альбутерол) (например, в виде сульфатной соли), прокатерол (например, в виде гидрохлоридной соли), пирбутерол (например, в виде ацетатной соли), орципреналин (метапротеренол) (например, в виде сульфатной соли), милветерол (например, в виде гидрохлоридной соли), левосальбутамол (левальбутерол) (например, в виде гидрохлоридной соли), абедитерол, изопреналин (изопротеренол) (например, в виде гидрохлоридной соли), индакатерол (например, в виде малеатной соли), вилантерол (например, в виде трифенататной соли (трифенилуксусной кислоты)), формотерол (например, в виде фумаратной соли, например, дигидрата фумаратной соли), кармотерол, битолтерол (например, в виде мезилатной соли), олодатерол, бедорадрин (например, в
виде сульфатной соли), бамбутерол (например, в виде гидрохлоридной соли), арформотерол (например, в виде тартратной соли), PF-610355 (2-[3-[2-[[(2R)-2-гидрокси-2-[4-гидрокси-3-(метансульфонамидо)фенил]этил]амино]-2-метил-пропил]фенил]-1Ч-[[3-(4-гидроксифенил)фенил]метил]ацетамид), N-(2-диэтиламиноэтил)-Ы-[2-[2-(4-гидрокси-2-оксо-ЗН-1,3-бензотиазол-7-ил)этиламино]этил]-3-[2-(1-нафтил)этокси]пропанамид, 1Ч-циклогексил-3-[2-(3-фторфенил)этиламино]-Ы-[2-[2-(4-гидрокси-2-оксо-ЗН-1,3-бензотиазол-7-ил)этиламино]этил]пропанамид или Ы-циклогексил-Ы-[2-[2-(5-гидрокси-3-оксо-4Н-1,4-бензоксазин-8-ил)этиламино]этил]-3-[2-[3-(1-метилпиразол-4-ил)фенил]этокси]пропанамид.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом мускариновых (М) рецепторов (например, антагонистом М1-, М2-или МЗ-рецептора, таким как селективный МЗ-антагонист), таким как тиотропий (например, в виде бромидной соли), окситропий (например, в виде бромидной соли), ипратропий (например, в виде бромидной соли), гликопирронийбромид (например, в виде рацемической смеси стереоизомеров или в виде R,R- R,S-, S,R- или S,S-CTepeoH30Mepa или в виде смеси, содержащей два или более R,R- R,S- S,R- или 8,8-стереоизомеров), аклидиний (например, в виде бромидной соли), GSK573719 (3-[2-[3-(5-циклогексилоксикарбонил-тиофен-2-ил)-уреидо]-3-(4-гидрокси-фенил)-пропиониламино]-1-(3-гидрокси-бензил)-1-метил-пиперидиний), ВЕА2180BR (8-метил-8-аза-бицикло[3.2.1 ]окт-6-ен-3-иловый эфир гидрокси-дитиофен-2-илуксусной кислоты) (например, в виде гидробромидной соли), [(3R)-1 -[2-оксо-2-(2-пиридиламино)этил]хинуклидин-1 -ий-3-ил]-1-фенилциклогептанкарбоксилат (например, в виде бромидной соли) или 2-[(4-xлopфeнил)мeтoкcи]этил-[[2-[(R)-циклoгeкcил-гидpoкcи-фeнил-метил]оксазол-5-ил]метил]-диметил-аммоний (например, в виде нападизилатной соли).
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с агентом, представляющим собой смешанный антагонист мускариновых рецепторов (например, антагонист М1-, М2- или МЗ-рецептора, такой как селективный МЗ-антагонист) и агонист бета-адренорецепторов, таким как
PF4348235 ([1 -[9-[[(2К)-2-гидрокси-2-[4-гидрокси-3-
(метансульфонамидо)фенил]этил]амино]нонил]-4-пиперидил]-1Ч-[2-(3-хлор-4-гидрокси-фенил)фенил]карбамат), 3-[2-[2-хлор-3-[[8-(2-этилтиазол-4-карбонил)-1 ^окса-З.в-диазаспироЕб.б^ндекан-З-ил^етилфенил^токси^Ы-циклопентил-М-^-^б-гидрокси-З-оксо^НМ ,4-бензоксазин-8-ил)этиламино]этил]пропанамид, н-бутил-Ы-[2-[2-(5-гидрокси-3-оксо-4Н-1,4-бензоксазин-8-ил)этиламино]этил]-3-[2-[3-[2-[8-(2-изопропилтиазол-4-карбонил)-11-окса-3,8-диазаспиро[5.5]ундекан-3-ил]этил]фенил]этокси]пропанамид или 7-[(1 R)-2-[2-[24pTop-5-[[8-(2-изопропилтиазол-4-карбонил)-11-окса-3,8-диазаспиро[5.5]ундекан-3-ил]метил]фенил]этиламино]-1-гидрокси-этил]-4-гидрокси-ЗН-1,3-бензотиазол-2-он.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с агонистом Toll-подобных рецепторов (в том числе с агонистом TLR7 или TLR9), таким как локсорибин (7-аллил-2-амино-9-[(2К,ЗК,48,5К)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил]-1 Н-пурин-6,8-дион), метил-2-[3-[[3-(6-амино-2-бутокси-8-оксо-7Н-пурин-9-ил)пропил-(3-
морфолинопропил)амино]метил]фенил]ацетат (например, в виде гидробромидной, гидрохлоридной или дималеатной соли), 4-(диметиламино)бутил-2-[4-[[2-амино-4-метил-6-(пентиламино)пиримидин-5-ил]метил]фенил]ацетат (например, в виде бисоли сахарина, бисоли фумаровой кислоты, бисоли 1-гидрокси-2-нафтойной кислоты или моносоли бензойной кислоты) или олигонуклеотид 5'-TCG AAC GTT CGA AGA TGA TGA Т (раскрытый какЭЕО ID 171 в WO2004/0158179).
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом аденозиновых рецепторов, таким как регаденозон, ATL-313 (метил-4-[3-[6-амино-9-[(2К,ЗК,48,58)-5-(циклопропилкарбамоил)-3,4-дигидрокси-тетрагидрофуран-2-ил]пурин-2-ил]проп-2-инил]пиперидин-1-карбоксилат) или ападенозон (метил-4-[3-[6-амино-9-[(2К,ЗК,48,58)-5-(этилкарбамоил)-3,4-дигидрокси-тетрагидрофуран-2-ил]пурин-2-ил]проп-2-инил]циклогексанкарбоксилат).
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с агонистом (стероидным или нестероидным) рецептора глюкокортикоидов, таким как триамцинолон, триамцинолона ацетонид, преднизон, мометазона фуроат, лотепреднола этабонат, флутиказона пропионат, флутиказона фуроат, флуоцинолона ацетонид, дексаметазона ципецилат, дезизобутирил-циклесонид, клобетазола пропионат, циклесонид, бутиксокорта пропионат, будесонид, беклометазона дипропионат, алкометазона дипропионат, (1 R,3aS,3bS, 10aR, 10bS, 11S, 12aS)-1 -{[(цианометил)тио]карбонил}-7-(4-фторфенил)-11 -гидрокси-1 Оа, 12а-диметил-
1,2,3,За,ЗЬ,4,5,7,10,10а, 10b, 11,12,12а-тетрадекагидроциклопента[5,6]нафто[1,2-
т]индазол-1 -ил-2-фуроат, (1 R,2R,3aS,3bS, 10aS, 10bR, 11S, 12aS)-1 ОЬ-фтор-1 -
{[(фторметил)сульфанил]карбонил}-7-(6-фторпиридин-3-ил)-11-гидрокси-
2,10а,12а-триметил-1,2,3,За,ЗЬ,4,5,7,10,10а,10Ь,11,12,12а-
тетрадекагидроциклопента[5,6]нафто[1,2-т]индазол-1 -ил-метоксиацетат, 2,2,2-
тpифтop-N-[(1S,2R)-2-[1-(4-фтopфeнил)индaзoл-5-ил]oкcи-2-(3-мeтoкcифeнил)-
1 -метил-этил]ацетамид, 3-[5-[(1 R,2S)-1 -(4Н-1,3-бензодиоксин-7-ил)-2-(2,2-
дифторпропаноиламино)пропокси]индазол-1-ил]-Ы-(3-пиридилметил)бензамид, 3-[5-[(1 R,2S)-2-(2,2-дифтopпpoпaнoилaминo)-1 -(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)пpoпoкcи]индaзoл-1-ил]-N-[(ЗR)-1,1-диоксотиолап-3-ил]бензамид или 3-[5-[(1 R,2S)-2-(2,2-дифтopпpoпaнoилaминo)-1 -(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)пpoпoкcи]индaзoл-1-ил]-N-[(ЗR)-тeтpaгидpoфypaн-3-ил]бeнзaмид.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации
соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с
антагонист р38, таким как РН797804 (3-[3-бром-4-(2,4-дифтор-бензилокси)-6-
метил-2-оксо-2Н-пиридин-1 -ил]-4, N-диметил-бензамид), лосмапимод,
PF03715455 (1 -[5-/г?ре/г?-бутил-2-(3-хлор-4-гидрокси-фенил)пиразол-3-ил]-3-[[2-[[3-[2-(2-гидроксиэтилсульфанил)фенил]-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил]сульфанил]фенил]метил]мочевина), Ы-циклопропил-4-метил-3-[6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4-оксо-хиназолин-3-ил]бензамид или N-циклопропил-З-фтор-4-метил-5-[3-[[1-[2-[2-(метиламино)этокси]фенил]циклопропил]амино]-2-оксо-пиразин-1 -ил]бензамид.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации
соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с
ингибитором фосфодиэстеразы (PDE), таким как метилксантанин, включая
теофиллин и аминофиллин, или с селективным ингибитором изофермента PDE
(в том числе ингибитором PDE4 или ингибитором изоформы PDE4D), таким как
тетомиласт, рофлумиласт, оглемиласт, ибудиласт, GPD-1116 (З-бензил-5-
фенил-1 Н-пиразоло[4,3-с][1,8]нафтиридин-4-он), рономиласт, NVP ABE 171 (4-
[8-(2,1,3-бензоксадиазол-5-ил)-1,7-нафтиридин-6-ил]бензойная кислота),
RPL554 (2-[(2Е)-9,10-диметокси-4-оксо-2-(2,4,6-триметилфенил)имино-6,7-
дигидропиримидо[6,1-а]изохинолин-3-ил]этилмочевина), CHF5480 ([(Z)-2-(3,5-
дихлор-4-пиридил)-1-(3,4-диметоксифенил)винил](28)-2-(4-
изобутилфенил)пропаноат) или GSK256066 (6-[3-
(диметилкарбамоил)фенил]сульфонил-4-(3-метоксианилино)-8-метил-хинолин-3-карбоксамид).
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом IKK2, таким как 5-(2-изопропилизоиндолин-5-ил)-3-[1-(2-метоксиэтилсульфонил)-4-пиперидил]-1 Н-индол-7-карбоновая кислота.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с модулятором функционирования хемокиновых рецепторов, таким как антагонист CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 или CCR11 (для семейства С-С), например, антагонист рецептора CCR1, CCR2B или CCR5; CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 или CXCR5 (для семейства С-Х-С), например, антагонист рецептора CXCR2 или CXCR3; или CX3CR1 для семейства С-Х3-С. Например, настоящее изобретение относится к комбинации соединения по изобретению с PS-031291 (1-[(4-трифторметил-фенил)-амидом] 2-[(4-хлор-бензил)-метил-амида] пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты), ССХ-354 (1-[4-(4-хлор-3-метокси-фенил)пиперазин-1 -ил]-2-[3-(1 Н-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-Ь]пиридин-1 -ил]этаноном), викривироком, маравироком, ценикривироком, навариксином (2-гидрокси-Ы,Ы-диметил-3-[[2-[[(1 R)-1-(5-мeтил-2-фypил)пpoпил]aминo]-3,4-диoкco-циклoбyтeн-1 -ил]амино]бензамидом), SB656933 (1 -(2-хлор-3-фтор-фенил)-3-(4-хлор-2
гидрокси-З-пиперазин-1 -илсульфонил-фенил)мочевиной), N-[1 -[(3R)-3-(3,5-дифторфенил)-3-(1-метилсульфонил-4-пиперидил)пропил]-4-пиперидил]-1Ч-этил-2-(4-метилсульфонилфенил)ацетамидом, N-[2-[(2S)-3-[[1-[(4-хлорфенил)метил]-4-пиперидил]амино]-2-гидрокси-2-метил-пропокси]-4-гидрокси-фенил]ацетамидом, 2-[2-хлор-5-[(28)-3-(5-хлорспиро[ЗН-бензофуран-2,4'-пиперидин]-1'-ил)-2-гидрокси-пропокси]-4-(метилкарбамоил)фенокси]-2-метил-пропановой кислотой, Ы-[2-[(2,3-дифторфенил)метилсульфанил]-6-[(1 К,28)-2,3-дигидрокси-1 -метил-пропокси]пиримидин-4-ил]азетидин-1 -сульфонамидом или Ы-[2-[(2,3-дифторфенил)метилсульфанил]-6-[[(1 R,2R)-2,3-дигидрокси-1-метил-пропил]амино]пиримидин-4-ил]азетидин-1-сульфонамидом.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации
соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с
ингибитором биосинтеза лейкотриенов, ингибитором 5-липоксигеназы (5-LO)
или антагонистом белка, активирующего 5-липоксигеназу (FLAP), такими как
ТА270 (4-гидрокси-1 -метил-3-октилокси-7-синапиноиламино-2(1 Н)-хинолинон),
PF-4191834 (2Н-пиран-4-карбоксамид, тетрагидро-4-[3-[[4-(1-метил-1 Н-пиразол-
5-ил)фенил]тио]фенил]-), сетилейтон, CMI977 (1-[4-[(2S,5S)-5-[(4-
фторфенокси)метил]тетрагидрофуран-2-ил]бут-3-инил]-1-гидрокси-мочевина),
фибофлапон (3-[3-/г?ре/г?-бутилсульфанил-1 -[[4-(6-этокси-3-
пиридил)фенил]метил]-5-[(5-метил-2-пиридил)метокси]индол-2-ил]-2,2-диметил-пропановая кислота), GSK2190915 (1 Н-индол-2-пропановая кислота, 3-[(1,1-диметилэтил)тио]-1-[[4-(6-метокси-3-пиридинил)фенил]метил]-а,а-диметил-5-[(2-пиридинил)метокси]-), ликофелон, квифлапон (3-[3-/г?ре/г?-бутилсульфанил-1-[(4-хлорфенил)метил]-5-(2-хинолилметокси)индол-2-ил]-2,2-диметил-пропановая кислота), велифлапон ((2R)-2-4H^onem^-2-[4-(2-хинолилметокси)фенил]уксусная кислота), АВТ080 (4,4-бис[4-(2-хинолилметокси)фенил]пентановая кислота), зилейтон, зафирлукаст или монтелукаст.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом CRTh2 или антагонистом DP2, таким как АСТ129968 (2-[2-[(5-ацетил-2-метокси-фенил)метилсульфанил]-5-фтор-бензимидазол-1-ил]уксусная кислота), AMG853 (2-[4-[4-(трет-бутилкарбамоил)-2-[(2-хлор-4-циклопропил
фенил)сульфониламино]фенокси]-5-хлор-2-фтор-фенил]уксусная кислота),
АМ211 (2-[3-[2-[[бензилкарбамоил(этил)амино]метил]-4-(трифторметил)фенил]-
4-метокси-фенил]уксусная кислота), 2-[4-ацетамидо-3-(4-
хлорфенил)сульфанил-2-метил-индол-1 -ил]уксусная кислота, (2Э)-2-[4-хлор-2-(2-хлор-4-этилсульфонил-фенокси)фенокси]пропановая кислота, 2-[4-хлор-2-[2-фтор-4-(4-фторфенил)сульфонил-фенил]фенокси]уксусная кислота или (2S)-2-[2-[3-хлор-4-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)фенил]-4-фтор-фенокси]пропановая кислота.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом МК2 (МАРКАР киназа 2 (протеинкиназа 2, активируемая митоген-активируемой протеинкиназой)), таким как вареспладиб, PF-3644022 ((10R)-10-метил-3-(6-метилпиридин-3-ил)-9,10,11,12-тетрагидро-8Н-
[1,4]диазепино[5',6':4,5]тиено[3,2-т]хинолин-8-он) или 4-бензоил-0-фенилаланил-0-серил-0-триптофил-0-серил-2,3,4,5,6-пентафтор-0-фенилаланил-3-циклогексил-О-аланил-О-аргинил-О-аргинил-О-аргинил-О-глутаминил-О-аргинил-О-аргинин.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с антагонистом миелопероксидазы, таким как ресвератрол, пикеатаннол, 3-[[(2R)-тетрагидрофуран-2-ил]метил]-2-тиохо-7Н-пурин-6-он или 1 -(2-изопропоксиэтил)-2-тиохо-5Н-пирроло[3,2-а!]пиримидин-4-он.
Помимо этого, настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с осмолитом. Использованный в данном описании термин "осмолит" относится к осмотически активной небольшой молекуле, и подразумевается, что он охватывает как ионные, так и неионные осмолиты. Согласно следующему аспекту изобретения предложена комбинация соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с ионным осмолитом, таким как гипертонический физиологический раствор.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция (например, для применения в качестве лекарственного средства для лечения одного из заболеваний или состояний,
перечисленных в данном описании, таких как CF или COPD), содержащая соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один дополнительный активный ингредиент, выбранный из:
а) агониста бета-адренорецепторов;
б) антагониста мускариновых рецепторов;
в) смешанного антагониста мускариновых рецепторов и агониста бета-
адренорецепторов; или
г) (стероидного или нестероидного) агониста рецептора
глюкокортикоидов; или
д) осмолита, например ионного осмолита, такого как гипертонический
физиологический раствор,
как определено выше.
Согласно еще одному аспекту изобретения по меньшей мере одним дополнительным активным ингредиентом является агонист бета-адренорецепторов. Согласно другому аспекту по меньшей мере одним дополнительным активным ингредиентом является антагонист мускариновых рецепторов. Согласно следующему аспекту по меньшей мере одним дополнительным активным ингредиентом является агонист (стероидный или нестероидный) рецептора глюкокортикоидов. Согласно еще одному аспекту по меньшей мере одним дополнительным активным ингредиентом является смешанный антагонист мускариновых рецепторов и агонист бета-адренорецепторов. Согласно еще одному аспекту по меньшей мере одним дополнительным активным ингредиентом является осмолит.
Соединения, описанные в этой заявке, далее проиллюстрированы в приведенных ниже примерах. Эти примеры приведены только для иллюстрации и не являются ограничивающими.
Сокращения:
водн. водный;
(ВОС)20/Вос ди-трет-бутил-дикарбонат/тре/тьбутилоксикарбонил;
CV объем колонки;
DEA диэтиламин;
DEAD диэтилазадикарбоксилат;
DIPA диизопропиламин;
DIEA/DIPEA диизопропилэтиламин;
ESI ионизация электрораспылением;
FA муравьиная кислота;
FMOC/Fmoc флуоренилметилоксикарбонил;
HATU гексафторфосфат 1-[бис(диметиламино)метилен]-1 Н-1,2,3-
триазоло[4,5-Ь]пиридиний-3-оксида;
HBSS сбалансированный солевой раствор Хэнкса;
HBTU гексафторфосфат 2-(1 Н-бензотриазол-1 -ил)-1,1,3,3-
тетраметилурония;
HEPES 2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил]этансульфоновая кислота;
HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография;
IPA изопропиламин;
LC/MS жидкостная хроматография/масс-спектроскопия;
MeTHF метил-тетрагидрофуран;
МТВЕ метил-тре/тьбутиловый эфир;
NMP N-метилпирролидинон;
Rt время удерживания;
насыщ. насыщенный;
SFC сверхкритическая жидкостная хроматография;
ТВМЕ трет-бутил-метиловый эфир;
TEA триэтиламин;
THF тетрагидрофуран;
масс.% % по массе.
Общие методы
Спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) регистрировали на спектрометре Avance, Avance II или Avance III от Bruker на рабочей частоте (proton frequency) 400, 500 или 600 МГц. В тех случаях, когда приводится рабочая частота 270 МГц, использовали спектрометр JEOL ЕХ-270. Центральные пики хлороформа-5 (Н 7,26 млн"1), ацетона (Н 2,04 млн"1), дихлорметана-сУ2 (Н 5,32 млн"1), CH3OD (Н 3,30 млн"1) или DMSO-cf6 (Н 2,49 млн"1) использовали в качестве внутренних стандартов. Как хорошо известно в данной области техники, в результате вариаций в приготовлении образцов,
таких как вариации в концентрациях аналитов и наличие или отсутствие добавок (например, стандартов для ЯМР-анализа или трифторуксусной кислоты), могут иметь место небольшие изменения химических сдвигов.
Эксперименты по LC/MS проводили, используя систему для UPLC (сверхэффективная жидкостная хроматография) Acquity от Waters, объединенную с квадрупольным времяпролетным (quadrupole time-of-flight; Q-ToF) масс-спектрометром Xevo от Waters в режиме ESI. LC проводили в двух режимах: 1) колонка ВЕН С18 (1,7 мкм; 2,1x50 мм) с градиентом (2-95% В в течение 5 мин) водного 46 мМ буфера на основе карбоната аммония/аммиака при рН 10 (А) и MeCN (ацетонитрил) (В) при скорости потока 1,0 мл/мин; 2) колонка HSS С18 (1,8 мкм; 2,1x50 мм) с градиентом (2-95% В в течение 5 мин) водного 10 мМ буфера на основе FA/1 мМ формиата аммония при рН 3 (А) и MeCN (В) при скорости потока 1,0 мл/мин.
Оптическую чистоту, указанную в виде энантиомерного избытка (% ее), определяли хиральной HPLC, используя хроматограф серии Agilent 1100. Метод А: система, оснащенная колонкой Chiralpak 1С, 250x4,6 мм; 5 мкм. В качестве подвижной фазы использовали смесь гептанЛРЮН/этаноламин (60:40:0,1) при скорости потока 1 мл/мин. Вводимый объем составлял 10 мкл и детекцию соединения проводили в ультрафиолетовой области (УФ) при 268 нм. Метод В: система, оснащенная колонкой Chiralpak 1С, 150x4,6 мм; 3 мкм. В качестве подвижной фазы использовали СОг, 120 бар (12 МПа) (А) и МеОН (0,5% DEA) (В) в соотношении А/В, равном 80/20, при скорости потока 4 мл/мин. Вводимый объем составлял 5 мкл.
Препаративную HPLC выполняли, используя систему FractionLynx от Waters, совмещенную с MS детекцией и оснащенную препаративной колонкой С18 OBD (5 мкм, 19 х 150 мм) с носителями марки X-Bridge или Sunfire. Альтернативно, использовали систему GX-281 от Gilson, совмещенную с детекцией в УФ и оснащенную колонкой Kromasil С8, 10 мкм, размером либо 250x20 мм (внутр. диам. - внутренний диаметр), либо 250x50 мм. В качестве градиентов для элюирования применяли смесь вода/MeCN/AcOH (95/5/0,1), или вода/0,05% TFA, или вода/0,1% NH4HCO3 (А) и MeCN (В).
Препаративную SFC выполняли, используя систему для SFC РгерЮО от Waters, совмещенную с MS детекцией и оснащенную колонкой Viridis 2-ЕР или
Phenomenex Luna Hilic, 30 x 250 мм, 5 мкм, от Waters. В качестве градиентов для элюирования применяли СОг (100 г/мин, 120 бар (12 МПа), 40°С) (А) и МеОН/ЫНз (20 мМ), или МеОН (5% FA), или МеОН (В).
Если не указано иное, исходные вещества имелись в продаже или их получение было описано в литературе ранее. Все растворители и имеющиеся в продаже реагенты имели марку "для лабораторных целей" и использовались по получении, если не указано иное.
Химические названия, описанные ниже в примерах, присваивали, используя пакет программ для присвоения названий ChemDraw (Ultra 11). Специалист осведомлен, что при использовании разных пакетов программ для присвоения названий можно получить разные химические названия для одного и того же соединения. Только в качестве иллюстрации, химические названия, полученные и приведенные ниже для соединений из примеров 1-16 с использованием пакета программ для присвоения названий ACD/Name 2012, представляют собой, соответственно:
3,5-диамино-6-хлор-М-[(2К)-2-(2-метилбензил)-3-({[1-(3-{[(28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]амино}пропаноил)пиперидин-4-ил]метил}амино)пропил]пиразин-2-карбоксамид;
1-дезокси-1-[(2-{[4-({[(2К)-3-{[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)карбонил]-амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)бензоил]амино}этил)(гексил)-амино]-0-ксилит;
1-дезокси-1-{[2-({[4-({[(2К)-3-{[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)пиперидин-1-ил]карбонил}амино)этил](гексил)амино}-0-глюцит;
3,5-диамино-6-хлор-М-[(2К)-3-({[1-(3-{гексил[(28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил]амино}пропаноил)пиперидин-4-ил]метил}амино)-2-(2-метилбензил)пропил]пиразин-2-карбоксамид;
3,5-диамино-6-хлор-М-[(2К)-3-({[1-(3-{гексил[(28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]амино}пропаноил)пиперидин-4-ил]метил}амино)-2-(2-метилбензил)пропил]пиразин-2-карбоксамид;
1 -дезокси-1 -[{4-[4-({[(2К)-3-{[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}(гексил)амино]-0-глюцит;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-[(2R)-2-(2-MeTMn6eH3Mn)-3-({[1-(3-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил]амино}пропаноил)пиперидин-4-ил]метил}амино)пропил]пиразин-2-карбоксамид;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-[(2R)-3-({[1-(3-{reKCMn[(2Rl3Rl4Rl5R)-2l 3,4,5,6-пентагидроксигексил]амино}пропаноил)пиперидин-4-ил]метил}амино)-2-(2-метилбензил)пропил]пиразин-2-карбоксамид;
1 -дезокси-1 -[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-flMaMMHO-6^opnMpa3MH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)бензоил]амино}-этил)(гексил)амино]-0-маннит;
1 -дезокси-1 -[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-flMaMMHO-6^opnMpa3MH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)бензоил]амино}-этил)(гексил)амино]-0-глюцит;
1-дезокси-1-{[2-({[4-({[(2R)-3-{[(3,5-flMaMMHO-6^opnMpa3MH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)фенокси]-карбонил}амино)этил](гексил)амино}-0-глюцит;
1-дезокси-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-flMaMMHO-6^opnMpa3MH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}этил)бензоил]амино}этил)-(гексил)амино]-0-глюцит;
1-дезокси-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-flMaMMHO-6^opnMpa3MH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}этил)бензоил]амино}этил)-(гексил)амино]-0-ксилит;
1 -дезокси-1 -[(2-{[4-({[(28)-3-{[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)бензоил]амино}-этил)(гексил)амино]-0-ксилит;
5-дезокси-5-[(2-{[4-({[(28)-3-{[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}метил)бензоил]амино}-этил)(гексил)амино]-0-ксилит;
1-дезокси-1-[(2-{[3-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-flnaMHHO-6^opnnpa3HH-2-ил)карбонил]амино}-2-(2-метилбензил)пропил]амино}этил)бензоил]амино}-этил)(гексил)амино]-0-глюцит.
Пример 1
3,5-Диaминo-6-xлop-N-((R)-2-(2-мeтилбeнзил)-3-(((1-(3-(((2S.ЗR,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-
Стадия 1
(Р0-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3-(4-(((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)пиперидин-1-ил)-3-оксопропил)карбамат
Смесь (К)-3,5-диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамида (318 мг; 0,91 ммоль) (промежуточное соединение А), (9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(4-формилпиперидин-1-ил)-3-оксопропил-карбамата (440 мг; 1,08 ммоль) (промежуточное соединение F) и уксусной кислоты (80 мкл; 1,40 ммоль) в безводном THF (6 мл) перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (340 мг; 1,60 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение еще 1,5 ч. Добавляли воду, смесь перемешивали в течение 5 мин и растворители выпаривали. Оставшееся вещество распределяли между ЕЮАс и водой. К водной фазе добавляли 10%-ный (водн.) раствор ЫаНСОз до момента достижения рН 8-9. Проводили разделение фаз и водную фазу повторно экстрагировали ЕЮАс. Объединенные желтые органические фазы сушили над MgS04, фильтровали и растворители выпаривали. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (Kromasil С8; H20/MeCN/AcOH, 95/5/0,2). Релевантные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Добавляли 10%-ный (водн.) раствор ЫаНСОз и водную фазу экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу сушили над MgS04, фильтровали и упаривали. Оставшееся густое масло растворяли в
смеси DCM/гептан, получая после упаривания указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества (196 мг; 29%; чистота 87%).
LC/MS: m/z 739 [М+Н]+.
Стадия 2
(Р0-3,5-Диамино-1Ч-(3-(((1-(3-аминопропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
(К)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-3-(4-((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)пиперидин-1-ил)-3-оксопропилкарбамат (196 мг; 0,27 ммоль) (со стадии 1) растворяли в DCM (5 мл) и обрабатывали пиперидином (0,5 мл). Раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч, затем упаривали, получая желтое твердое вещество.
Неочищенное вещество растворяли в THF (5 мл) и DIPEA (280 мкл; 1,60 ммоль) и обрабатывали (ВОС)20 (0,141 мл; 0,61 ммоль) в THF (1 мл). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 3 ч LC/MS показала лишь незначительное превращение в моно-Вос-защищенный продукт, большая часть все еще представляла собой непрореагировавший амин. Добавляли большой избыток DIPEA и ВОС2(0) и смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды. Для повышения растворимости добавляли MeCN (2-3 мл) и смесь нагревали при 50°С в течение 2 ч, затем при температуре окружающей среды в течение выходных.
Летучие вещества выпаривали в вакууме и остаток распределяли между ЕЮАс и водой. Водную фазу подкисляли путем добавления 0,5 М лимонной кислоты. Добавляли рассол для облегчения разделения фаз. Органическую фазу промывали водой и рассолом.
Растворитель выпаривали, остаток растворяли в DCM и очищали флэш-хроматографией (EtOAc/гептан, градиент 30-100% ЕЮАс). Растворители выпаривали, получая ди-ВОС-защищенное указанное в заголовке соединение
(96 МГ).
Полученное ди-ВОС-защищенное вещество (96 мг) растворяли в DCM (2 мл) и обрабатывали TFA (0,5 мл), раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2,5 часа. Смесь упаривали, остаток растворяли в воде и очищали препаративной HPLC (Kromasil С8; НгО/МеСЫ/НСОгН, от 95/5/0,2 до 60/40/0,2 в течение 16 мин). После сублимационной сушки получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества (64 мг; 45%).
LC/MS: m/z517 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, MeOD) 5 1.13-1.34 (m, 2Н), 1.83-2.06 (m, ЗН), 2.29-2.39 (m, 1Н), 2.35 (s, ЗН), 2.59-2.93 (m, 9Н), 3.08-3.23 (т, ЗН), 3.32-3.37 (т, 1Н), 3.673.74 (т, 1Н), 3.87-3.96 (т, 1Н), 4.52-4.6 (т, 1Н), 7.11-7.22 (т, 4Н), 8.51 (s, 0.4Н, остаток муравьиной кислоты).
Стадия 3
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((К)-2-(2-метилбензил)-3-(((1-(3-(((28.3К,4т-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)пропил)пиразин-2-карбоксамид
^)-3,5-Диамино-1Ч-(3-(((1-(3-аминопропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (900 мг; 1,74 ммоль) растворяли в метаноле (10 мл). Добавляли (2R,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентаналь (261 мг; 1,74 ммоль), затем пять капель воды. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (328 мг; 5,22 ммоль) и рН подводили до приблизительно 7,0 путем подавления уксусной кислоты. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Летучие вещества удаляли и полученный неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (H20/MeCN/AcOH, от 95/5/0,2 до 60/40/0,2 в течение 20 мин). Релевантные фракции собирали и подвергали сублимационной сушке. Указанное в заголовке
соединение растворяли в 2 М растворе HCI (4 мл) и подвергали сублимационной сушке, процедуру повторяли три раза, получая НС1-соль указанного в заголовке соединения (144 мг; 11%).
1Н-ЯМР (500 МГц, MeOD) 5 1.30 (ddd, 2Н), 1.84-2.13 (m, ЗН), 2.32-2.45 (m, 4Н), 2.62-2.77 (m, 2Н), 2.81-2.98 (m, 7Н), 3.15 (dd, 1Н), 3.26 (d, 2Н), 3.32-3.42 (m, 2Н), 3.58-3.83 (m, 6Н), 3.95 (t, 1Н), 4.06 (dd, 1Н), 4.55 (s, 1Н), 7.05-7.33 (m, 4Н).
Пример 2
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((4-((2-(гексил((28.3Р,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Метод А
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(8)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (промежуточное соединение Е; 1,23 г; 1,73 ммоль), (2R,3S,4R)-2,3,4,5
тетрагидроксипентаналь (0,521 г; 3,47 ммоль) и DIPEA (0,303 мл; 1,73 ммоль) растворяли в МеОН (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия (0,327 г; 5,20 ммоль) и уксусную кислоту (0,099 мл; 1,73 ммоль) и перемешивание продолжали при 50°С в течение 3 суток. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз, перемешивали в течение 15 мин и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (100 мл) и 8%-ном растворе ЫаНСОз (водн.) (50 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (100 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм; 250x50 мм внутр. диам.), используя градиент 20-60% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 268 нм. Фракции, содержащие соединение, собирали и подвергали сублимационной сушке, получая трет-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-
тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)-карбамат (1,21 г; 83%) в виде белого твердого вещества. LC/MS: m/z 843,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.74-0.85 (т, ЗН), 1.12-1.27 (т, 6Н), 1.271.45 (т, 11Н), 2.20 (s, ЗН), 2.25-2.35 (т, 1Н), 2.39-2.66 (т, 6Н), 2.9-3.06 (т, 1Н), 3.06-3.51 (т, 12Н), 3.53-3.6 (т, 1Н), 3.6-3.72 (т, 1Н), 4.2-4.68 (т, 5Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.03-7.19 (т, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.78-7.99 (т, 1Н), 8.21-8.36 (т, 1Н).
Стадия 2
Дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((4-((2-(гексил((23,ЗК4Р0-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Ацетилхлорид (5,69 мл; 80,0 ммоль) по каплям добавляли в охлажденную в бане со льдом колбу с МеОН (20 мл). Смесь перемешивали в течение 5 мин и добавляли /т?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)-амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (1,21 г; 1,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч и затем упаривали в вакууме. Остаток растворяли в воде и подвергали сублимационной сушке, получая дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)-амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида (1,17 г; 100%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 743,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУб) 5 0.8-0.9 (т, ЗН), 1.2-1.33 (т, 6Н), 1.62-1.74 (т, 2Н), 2.26 (s, ЗН), 2.3-2.41 (т, 1Н), 2.59-2.74 (т, 2Н), 2.74-2.85 (т, 1Н), 2.862.98 (т, 1Н), 3.09-3.51 (т, 11Н), 3.56-3.62 (т, 1Н), 3.62-3.75 (т, 2Н), 3.99-4.09 (т, 1Н), 4.14-4.29 (т, 2Н), 4.58 (s, 4Н), 7-7.21 (т, 6Н), 7.62 (d, 2Н), 7.92 (d, 2Н), 8.27 (t, 1Н), 8.91-9 (т, 1Н), 9.16 (d, 2Н), 9.52 (d, 1Н).
Стадия 3
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((4-((2-(гексил((28.3Р,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Дигидрохлорид 3,5-flnaMHHO-6^op-N-((R)-3-((4-((2-(reKcmi((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида (1,17 г; 1,43 ммоль) растворяли в воде (15 мл) и подщелачивали, добавляя 10%-ный раствор ЫагСОз (водн.) до рН приблизительно 11. Продукт экстрагировали ЕЮАс (5x70 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме, получая полутвердое вещество/масло. Остаток растворяли в смеси ацетонитрил/вода и подвергали сублимационной сушке, получая 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (1,02 г; 96%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 743,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.75-0.85 (т, ЗН), 1.12-1.26 (т, 6Н), 1.311.43 (т, 2Н), 1.94-2.05 (т, 1Н), 2.24 (s, ЗН), 2.35-2.49 (т, 5Н), 2.54-2.65 (т, 4Н), 3.14-3.23 (т, 1Н), 3.25-3.4 (т, 5Н), 3.4-3.49 (т, 2Н), 3.53-3.59 (т, 1Н), 3.62-3.78 (т, ЗН), 4.26 (d, 1Н), 4.38 (d, 1Н), 4.45 (t, 1Н), 4.51 (d, 1Н), 6.96 (bs, 2Н), 7.03-7.14 (т, 4Н), 7.40 (d, 2Н), 7.74 (d, 2Н), 8.24-8.37 (т, 2Н).
Метод В
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((4-((2-(гексил((28.3Р,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В снабженную фланцем колбу емкостью 5 л загружали раствор 4-формил-М-(2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)-бензамида (промежуточное соединение I; 133 г; 108,5 г по активному ингредиенту; 0,26 моль) в ЕЮН (1500 мл), (К)-3,5-диамино-Ы-(3-амино-2-(2-
метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
(промежуточное
соединение А; 108,8 г; 0,31 моль), ЕЮН (230 мл) и DIPEA (64,4 мл; 0,37 моль). Смесь нагревали до 40°С в течение 1 ч. В этот прозрачный раствор загружали АсОН (45,4 мл; 0,79 моль). Раствор перемешивали при 40°С в течение 20 мин. В него порциями в течение 10 мин загружали ЫаСЫВНз (23,2 г; 0,37 моль), отмечая выделение газа. Смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, осторожно гасили насыщ. водн. ЫаНСОз (3100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь экстрагировали, используя 10% MeOH/EtOAc (2 х 5000 мл) и 10% MeOH/DCM (5000 мл). Органические фазы объединяли и концентрировали в вакууме, получая 271 г неочищенного вещества. ЯМР-анализ показал чистоту приблизительно 80%, при этом присутствовали сигналы от NaCNBH3. Остаток растворяли в DCM (12 л) и IPA (770 мл). Смесь промывали смесью насыщ. водн. раствора ЫаНСОз (2700 мл) и воды (770 мл). Водную фазу экстрагировали DCM (1200 мл). Органические экстракты объединяли и концентрировали в вакууме, получая 298 г (191 г по активному ингредиенту; 97%) в виде желтого твердого вещества. По данным HPLC-MS чистота составляла 88,0%. По данным 1Н-ЯМР чистота составляла приблизительно 60%, при этом IPA составлял приблизительно 27 масс.%, а промежуточное соединение А приблизительно 8 масс.%.
Полученное таким образом неочищенное вещество (290 г; 235 ммоль) разбавляли в теплом МеОН (750 мл) и в непрерывном режиме добавляли ацетонитрил (15 л), выпаривая при этом азеотроп из смеси. После выпаривания приблизительно 10 л растворителя оставшуюся смесь, содержащую смолообразный осадок, перемешивали в течение еще 4 сут при комнатной температуре.
Жидкую фазу декантировали от смолообразного остатка. К остатку добавляли 2,5 л ацетонитрила и после перемешивания в течение 1 ч ацетонитрил декантировали. Полученное таким образом неочищенное вещество (приблизительно 175 г) подвергали заключительной хроматографической очистке посредством HPLC (CelluCoat, 250x100 мм, 10 мкм; подвижная фаза: MeOH/MeCN/TEA = 95:5:0,1; вводимое количество: 1,0 г/цикл; продолжительность цикла: 3,5 мин). Выход указанного в заголовке соединения: 148 г (77%).
LC/MS: m/z 743,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (600 МГц, DMSO; в случае атропизомерных пиков приведен сдвиг только основного атропизомера) 5 0.80 (t, ЗН), 1.34-1.4 (m, 2Н), 1.09-1.24 (т, 6Н), 1.34-1.4 (т, 2Н), 2.00 (s, 1Н), 2.00 (s, 1Н), 2.24 (s, ЗН), 2.36-2.42 (т, 1Н), 2.43-2.49 (т, 4Н), 2.51-2.54 (т, 1Н), 2.56-2.64 (т, 4Н), 3.15-3.22 (т, 1Н), 3.23-3.3 (т, ЗН), 3.35-3.4 (т, 1Н), 3.42 (s, 1Н), 3.43-3.49 (т, 1Н), 3.54-3.59 (т, 1Н), 3.623.7 (т, 2Н), 3.74 (d, 1Н), 4.27 (s, 1Н), 4.39 (s, 1Н), 4.46 (t, 1Н), 4.52 (s, 1Н), 6.96 (s, 1Н), 7.03-7.08 (т, 2Н), 7.40 (d, 2Н), 7.74 (d, 2Н), 8.26-8.31 (т, 1Н), 8.31-8.35 (т, 1Н).
13С-ЯМР (151 МГц, DMSO) 5 13.91, 19.04, 22.08, 26.48, 26.61, 31.27, 34.23, 37.42, 38.60, 41.55, 50.84, 53.06, 53.44, 54.55, 57.43, 62.65, 69.23, 71.12, 72.61, 112.95, 117.12, 125.54, 125.83, 126.89, 127.72, 129.63, 130.03, 132.85, 135.82, 138.74, 144.02, 152.69, 154.14, 165.55, 166.01.
Хиральная HPLC (метод А; гептан/IP А/ТЕ А 75:25:0,1): ее 98,9%; Rt = 14,75 мин (R), 18,63 мин (S).
Пример 3
3,5-Диaминo-6-xлop-N-((R)-3-((1-(2-(гeкcил((2S.ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-2-(((28.3К)-2,3-дигидрокси-3-((4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)этилкарбамат
В круглодонную колбу емкостью 100 мл помещали гидрохлорид 9Н-флуорен-9-илметил Ы-(2-аминоэтил)карбамата (1,50 г; 4,71 ммоль; 1,0 экв.), (2К,4аК,7К,8К,8а8)-2-фенил-гексагидро-2Н-пирано[3,2-с1][1,3]диоксин-6,7,8-триол (1,51 г; 5,63 ммоль; 1,20 экв.), метанол (30 мл). После перемешивания указанной выше смеси в течение 30 мин добавляли ЫаВНзСЫ (590 мг; 9,39 ммоль; 2,00 экв.), АсОН (570 мг; 9,49 ммоль; 2,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляли гексаналь (530 мг; 5,29 ммоль; 1,50 экв.), после чего еще раз NaBH3CN (450 мг; 7,16 ммоль; 2,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Затем его концентрировали под вакуумом. Полученную смесь промывали водой, экстрагировали этилацетатом, органические слои объединяли и сушили над ЫагЭОч. Твердые вещества отфильтровывали. В результате получали 1,6 г (73%) указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого масла.
LC/MS: m/z619 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 1.80-1.92 (m, ЗН), 1.15-1.40 (m, 6Н), 1.41-1.72
(m, 2H), 2.88-3.15 (m, 5H), 3.33-3.43 (m, 2H), 3.55-3.61 (m, 1H), 3.67-3.83 (m, 1H), 3.85-4.12 (m, ЗН), 4.22-4.40 (m, 4H), 5.57 (s, 1H), 7.33-7.65 (9H, m), 7.67 (d, 2H), 7.83 (d, 2H).
Стадия 2
(1R,2S)-3-((2-AMMH03TMn)(reKCMn)aMMH0)-1-[(2R,4R,5R)-5-rMflP0KCM-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил]пропан-1,2-диол
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали 9Н-флуорен-9-илметил N-(2-[[(2S,ЗR)-2,3-дигидpoкcи-3-[(2R,4R,5R)-5-гидpoкcи-2-фeнил-1,3-диoкcaн-4-ил]пропил](гексил)амино]этил)карбамат (1,6 г; 2,59 ммоль; 1,0 экв.), метанол (10 мл), диэтиламин (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью аммиак/МеОН (1:100). В результате получали 600 мг (59%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 397 [М+Н]+.
Стадия 3
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-кapбoкcaмидo)-2-(2-мeтилбeнзил)пpoпил((1-(2-(((2S,ЗR)-2,3-дигидpoкcи-3-((2R,4R,5R)-5-n/igpoKCH-24freHm-i-1,3-диоксан-4-
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (8)-(9Н-флуорен-9-
ил)пропил)(гексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
ил)метил-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(пиперидин-4-илметил)карбамат (промежуточное соединение В; 400 мг; 0,60 ммоль; 1,0 экв.), триэтиламин (177 мг; 1,75 ммоль; 3,0 экв.), трифосген (173 мг; 0,58 ммоль; 1,0 экв.) в DCM (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Полученную смесь промывали водой (3x10 мл). Полученную смесь концентрировали под вакуумом, получая промежуточный хлорформамид, который по каплям добавляли (растворенный в DCM) к раствору триэтиламина (177 мг; 1,75 ммоль; 3,0 экв.) и (1 К,28)-3-[(2-аминоэтил)(гексил)амино]-1-[(2R,4R,5R)-5-rnflpoKCH-24peHm-|-1,3-диоксан-4-ил]пропан-1,2-диола (347 мг; 0,88 ммоль; 1,50 экв.) в DCM (5 мл) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной тонкослойной хроматографией (TLC) с использованием смеси DCM/MeOH (10:1). В результате получали 145 мг (22%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 1090 [М+Н]+.
Стадия 4
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2Ч2-метилбензил)пропил((1Ч2Чгексил((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
Во флакон емкостью 8 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(2-(((2S,ЗR)-2,3-дигидpoкcи-3-((2R,4R,5R)-5-гидpoкcи-2-фeнил-1,3-диoкcaн-4-ил)пропил)(гексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (144 мг; 0,13 ммоль; 1,0 экв.), этанол (0,5 мл), 4 М раствор HCI (3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре.
Полученную смесь концентрировали под вакуумом. В результате получали 120 мг (неочищенного) указанного в заголовке соединения в виде желтого масла.
LC/MS: m/z 1002 [М+Н]+.
Стадия 5
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((1-(2-(гексил((28.3Р,4Р,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали 9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (120 мг; 0,12 ммоль; 1,0 экв.), диэтиламин (2 мл) в Ы,Ы-диметилформамиде (4 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (100 мг) очищали препаративной HPLC в следующих условиях (2#-Analyse HPLC-SHIMADZU (HPLC-10)): колонка - препаративная С18 OBD, XBridge, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза - вода с 0,05% TFA и ACN (ацетонитрил) (от 23,0% до 33,0% ACN в течение 15 мин); детектор - MS, УФ при 254 нм. В результате получали 8 мг (7%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 780 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 0.91-0.95 (т, ЗН), 1.27-1.38 (т, 8Н), 1.81-1.97 (т, 5Н), 2.36 (s, 4Н), 2.62-2.69(т, 1Н), 2.86-2.96 (т, 7Н), 3.31-3.55 (т, ЗН), 3.633.68 (т, 6Н), 3.70-3.83 (т, 6Н), 4.05-4.17 (т, ЗН), 7.13-7.20 (т, 4Н).
Пример 4
3,5-Диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-
Стадия 1
Бензил-3-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-сЬенил-1,3-
диоксан-4-ил)пропиламино)пропаноат
В круглодонную колбу емкостью 100 мл помещали бензил-3-аминопропаноат 4-метилбензол-1-сульфоновой кислоты (2,00 г; 5,69 ммоль; 1,0 экв.), (2К,4аК,7К,8К,8а8)-2-фенил-гексагидро-2Н-пирано[3,2-с1][1,3]диоксин-6,7,8-триол (2,29 г; 8,54 ммоль; 1,5 экв.), метанол (30 мл). Через 30 мин добавляли NaBH3CN (720 мг; 11,46 ммоль; 2,00 экв.), АсОН (680 мг; 11,32 ммоль; 2,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Твердые вещества отфильтровывали. В результате удаления растворителей в вакууме получали 1,9 г (77%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла, которое использовали непосредственно на следующей стадии.
LC/MS: m/z 967 [М+Н]+.
Стадия 2
Бензил-3-(((28.3К)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)пропаноат
В круглодонную колбу емкостью 100 мл помещали бензил-3-[[(28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-[(2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил]пропил]амино]-пропаноат (1,90 г; неочищенный), гексаналь (660 мг; 6,59 ммоль; 1,5 экв.), метанол (30 мл). Через 30 мин добавляли NaBH3CN (550 мг; 8,75 ммоль; 2,0 экв.) и АсОН (530 мг; 8,83 ммоль; 2,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом и промывали водой, органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Твердые вещества отфильтровывали. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (1:2). В результате получали 1,3 г (57%) бензил-3-[[(28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-[(2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил]пропил](гексил)амино]пропаноата в виде светло-желтого масла.
LC/MS: m/z 516 [М+Н]+.
Стадия 3
3-(((28,ЗР)-2,3-Дигидрокси-3-((2Р,4Р,5Р)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)пропановая кислота
В круглодонную колбу емкостью 100 мл помещали бензил-3-[[(28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-[(2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил]пропил](гексил)амино]пропаноат (1,3 г; 2,52 ммоль; 1,0 экв.), Pd/C (5 масс.%-ный, 700 мг), этанол (20 мл). Указанную выше смесь Нг (газ.). Полученный раствор перемешивали в атмосфере Нг в течение ночи при комнатной температуре. Твердые вещества отфильтровывали. Фильтрат концентрировали
под вакуумом. В результате получали 0,5 г (47%) 3-[[(28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-[(2R,4R,5R)-5-rMflpoKCM-2-cpeHi/m-1,3-диоксан-4-
ил]пропил](гексил)амино]пропановой кислоты в виде бесцветного масла. LC/MS: m/z 426 [М+Н]+. Стадия 4
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2Ч2-метилбензил)пропил((1ЧЗЧ((28^)-2,3-дигидрокси-3-((2R,4R,5R)-5-n/igpoKCH-24freHm-i-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали 3-[[(2S,3R)-2,3-дигидpoкcи-3-[(2R,4R,5R)-5-гидpoкcи-2-фeнил-1,3-диоксан-4-ил]пропил](гексил)амино]пропановую кислоту (381,49 мг; 0,90 ммоль; 3,00 экв.), (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(пиперидин-4-илметил)карбамат (промежуточное соединение В; 200,0 мг; 0,30 ммоль; 1,0 экв.), HATU (170,5 мг; 0,45 ммоль; 1,5 экв.), DIEA (57,9 мг; 0,45 ммоль; 1,5 экв.), Ы,Ы-диметилформамид (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. В указанную выше смесь добавляли воду и суспензию экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли и промывали рассолом. Смесь сушили над безводным сульфатом натрия. Твердые вещества отфильтровывали и фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали препаративной TLC (DCM:MeOH, 10:1). Релевантные фракции собирали и после удаления летучих веществ получали 200 мг (62%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 1076 [М+Н]+.
Стадия 5
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-(((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия 4; 200 мг; 0,19 ммоль; 1,0 экв.) и раствор HCI (4Mb этаноле, 2 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После упаривания летучих веществ получали 200 мг неочищенного указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 987 [М+Н]+.
Стадия 6
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((1-(3-(гексил((28.3Р,4Р,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия
5; 200 мг; 0,20 ммоль; 1,00 экв.), метанол (6 мл), диэтиламин (3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (100 мг) очищали препаративной HPLC в следующих условиях (препаративная HPLC-019): колонка - препаративная XSelect CSH С18 OBD; 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза - вода с 0,05% TFA и MeCN (от 22,0% до 30,0% MeCN в течение 8 мин, до 100% в течение 1 мин, выдерживание при 100% в течение 1 мин, возвращение к 22% в течение 2 мин); детектор - УФ при 254/220 нм. В результате получали 38 мг (21%) 3,5-диамино-6-хлор-Ы-[(2К)-3-([[1-(3-[reKCi/m[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил]амино]пропаноил)-пиперидин-4-ил]метил]амино)-2-[(2-метилфенил)метил]пропил]пиразин-2-карбоксамида, соли трифторуксусной кислоты, в виде желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 0.95-0.97 (m, ЗН), 1.22-1.50 (m, 8Н), 1.70-2.10 (m, 5Н), 2.30-2.51 (m, 4Н), 2.63-2.81 (m, 2Н), 2.88-3.16 (m, 7Н), 3.16-3.20 (m, 2Н), 3.34-3.78 (m, 5Н), 3.51-3.87 (m, 7Н), 3.95-4.10 (m, 1Н), 4.10-4.25 (m, 1Н), 4.54 (d, 1Н), 7.14-7.22 (m, 4Н).
LC/MS: m/z 765 [М+Н]+.
Пример 5
3,5-flHaMHHO-6^op-N-((R)-3-((1-(3-(reK^((2S.3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
(3)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(1-(3-/т?ре/т?-бутоксикарбониламинопропаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
NHBoc
В колбу (25 мл) загружали (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(пиперидин-4-илметил)карбамат (промежуточное соединение В; 300 мг; 0,45 ммоль), 3-(/77ре/77-бутоксикарбониламино)пропановую кислоту (100 мг; 0,53 ммоль), DIPEA (145 мг; 1,13 ммоль), HATU (342 мг; 0,9 ммоль) и добавляли DMF (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли 25 мл этилацетата и промывали водой (3 х 25 мл). Органический слой сушили над безводным Na2S04. Осадок отфильтровывали и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем с элюированием смесью дихлорметан/метанол (20:1, об./об.), получая указанное в заголовке соединение (280 мг; 67%) в виде светло-желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 839 [М+Н]+.
Стадия 2
(3)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(1-(3-аминопропаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-(1-(3-трет-бутоксикарбониламинопропаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 1; 216 мг; 0,26 ммоль; 1,0 экв.) и раствор
хлористого водорода (4Mb метаноле, 5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. После упаривания летучих веществ получали 190 мг неочищенного указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 739 [М+Н]+.
Стадия 3
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-(1-(3-аминопропаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 2; 190 мг; 0,26 ммоль; 1,0 экв.), (ЗР,48,5Р)-оксан-2,3,4,5-тетрол (39 мг; 0,26 ммоль; 1,0 экв.), метанол (6 мл). Через 30 мин медленно добавляли NaBH3CN (66 мг; 1,05 ммоль; 4,0 экв.) при 0°С. Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляли гексаналь (39 мг; 0,39 ммоль; 1,0 экв.), после чего еще раз NaBH3CN (66 мг; 1,05 ммоль; 4,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли, получая неочищенный продукт, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
LC/MS: m/z 957 [М+Н]+.
Стадия 4
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗР,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия 3; 230 мг; 0,24 ммоль; 1,00 экв.), метанол (5 мл), диэтиламин (0,5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC в следующих условиях (препаративная HPLC-019): колонка - препаративная XSelect CSH С18 OBD, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза - вода с 0,05% TFA и MeCN (от 18,0% до 35,0% MeCN в течение 8 мин, до 100,0% в течение 1 мин, выдерживание при 100,0% в течение 1 мин, возвращение к 18,0% в течение 2 мин); детектор - УФ при 254/220 нм. В результате получали 36,9 мг (16%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 735 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 0.96 (d, ЗН), 1.26-1.40 (m, 8Н), 1.81 -2.01 (m, 5Н), 2.37 (s, 4Н), 2.62-2.94 (m, 9Н), 3.17-3.47 (т, 7Н), 3.55-3.78 (т, 6Н), 3.98 (d, 1Н), 4.15 (s, 1Н), 4.56 (d, 1Н), 7.14-7.21 (т, 4Н).
Пример 6
3,5-Диамино-6-хлор^-((К)-3-((1-(4-(гексил((28.3К,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
(3)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-((1-(4-((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-
метилбензил)пропил)(пиперидин-4-илметил)карбамат
(промежуточное
соединение В; 900 мг; 1,35 ммоль), 4-((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)амино)-бутановую кислоту (821 мг; 4,04 ммоль), HATU (2305 мг; 6,06 ммоль) и DIEA (1,06 мл; 6,06 ммоль) в DMF (10 мл), получая желтый раствор. Полученный раствор перемешивали при 25°С в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (50 мл) и после этого промывали водой (50 мл). Органический слой сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали в вакууме, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, элюировали градиентом 20-70% ЕЮАс в петролейном эфире. Чистые фракции упаривали досуха, получая указанное в заголовке соединение (834 мг; 73%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 853 [М+Н]+.
Стадия 2
(3)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(1-(4-аминобутаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2
метилбензил)пропил)карбамат
^NH2
(8)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-((1-(4-((тре/7?-бутоксикарбонил)амино)-бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 1; 834 мг; 0,98 ммоль) растворяли в метанольном растворе HCI (4 М) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель выпаривали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 753 [М+Н]+.
Стадия 3
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К4К5Р0-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропиламино)бутаноил)-пиперидин-4-ил)метил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали (8)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-(1-(4-аминобутаноил)пиперидин-4-ил)метил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 2; 250 мг; 0,33 ммоль; 1,0 экв.), (2К,4аК,7К,8К,8а8)-2-фенил-гексагидро-2Н-пирано[3,2-о!][1,3]диоксин-6,7,8-триол с ацетальной защитой по D-глюкозному циклу (acetal protected D-glucose) (133 мг; 0,50 ммоль; 1,5 экв.) и метанол (5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли ЫаВНзСЫ (41 мг; 0,65 ммоль; 2,0 экв.) и АсОН (40 мг; 0,67 ммоль; 2,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель
удаляли при пониженном давлении, получая 210 мг (неочищенного) (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропиламино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамата в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 1005 [М+Н]+.
Стадия 4
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-(((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К4К5Р0-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропиламино)бутаноил)-пиперидин-4-ил)метил)карбамат (210 мг; неочищенный) растворяли в МеОН (5 мл), добавляли гексаналь (42 мг; 0,42 ммоль; 2,00 экв.), затем NaBH3CN (26 мг; 0,41 ммоль; 2,00 экв.) и АсОН (25 мг; 0,42 ммоль; 2,00 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и затем концентрировали под вакуумом. Остаток переносили в воду и экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Объединенные органические слои концентрировали под вакуумом и получали 152 мг (67%) указанного в заголовке соединения в виде неочищенного желтого масла.
LC/MS: m/z 1089 [М+Н]+.
Стадия 5
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-(((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия 4; 152 мг; 0,14 ммоль; 1,00 экв.), HCI (4MB этаноле, 5 мл) и этанол (1 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После упаривания летучих веществ получали 138 мг неочищенного указанного в заголовке соединения в виде желтого масла.
LC/MS: m/z 1002 [М+Н]+.
Стадия 6
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((1-(4-(гексил((28.3Р,4Р,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(4-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия 4; 138 мг; 0,14 ммоль; 1,0 экв.), диэтиламин (2 мл), Ы,Ы-диметилформамид (2 мл). Полученный раствор перемешивали в течение в течение ночи при
комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (110 мг) очищали препаративной HPLC в следующих условиях: колонка - препаративная XSelect CSH С18 OBD, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза - вода с 0,05%TFA и MeCN (от 23% MeCN до 30% в течение 8 мин, до 100% в течение 1 мин, выдерживание при 100% в течение 1 мин, возвращение к 23,0% в течение 2 мин); детектор - УФ при 254/220 нм. Получали 15,7 мг (13%) трифторацетата указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 779,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 0.92-0.96 (m, ЗН), 1.21-1.39 (m, 8Н), 1.78-2.03 (m, 7Н), 2.36 (s, 4Н), 2.61-2.69 (m, 4Н), 2.87-2.93 (т, 5Н), 3.13-3.31 (т, 5Н), 3.323.36 (т, 1Н), 3.63-3.77 (s, 6Н), 3.78-3.96 (т, 1Н), 4.15-4.18 (т, 1Н), 4.84-4.86 (т, 1Н), 7.13-7.20 (т, 4Н).
Пример 7
3,5-Диамино-6-хлор^-((К)-2-(2-метилбензил)-3-((1-(3-((28.3К,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К4К5Р0-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропиламино)пропаноил)-пиперидин-4-ил)метил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)-пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (пример 5/стадия 2; 20 мг; 0,27 ммоль; 1,0 экв.) и (2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-фенилгексагидропирано[3,2-о!][1,3]диоксин-6,7,8-триол с ацетальной защитой по D-глюкозному циклу (218 мг; 0,81 ммоль; 3,0 экв.) в метаноле (5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Добавляли NaBH3CN (34 мг; 0,54 ммоль; 2,0 экв.), АсОН (30 мг; 0,50 ммоль; 2,0 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. В результате гашения водой и обработки посредством экстракции получали после удаления растворителей 220 мг неочищенного указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 992 [М+Н]+.
Стадия 2
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали (9Н-флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2Ч2-метилбензил)пропил((1-(3-((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
метилбензил)пропил((1-(3-((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (стадия 1; 200 мг; 0,20 ммоль; 1,0 экв.), этанол (1,5 мл) и HCI (4 М раствор в этаноле, 5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем концентрировали под вакуумом. Получали 180 мг неочищенного указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 904 [М+Н]+.
Стадия 3
3,5-Диaминo-6-xлop-N-((R)-2-(2-мeтилбeнзил)-3-((1-(3-((2S.ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали 9Н-флуорен-9-илметил Ы-[(28)-3-[(3,5-диамино-6-хлор-3,4-дигидропиразин-2-ил)^гтамидо]-2-[(2-метилфенил)метил]пропил]-Ы-[[1-(3-[[(28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил]амино]пропаноил)пиперидин-4-ил]метил]карбамат (стадия 2; 180 мг; 0,20 ммоль; 1,0 экв.), диэтиламин (2 мл) и Ы,Ы-диметилформамид (4 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре и после этого концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (150 мг) очищали препаративной HPLC, используя следующие условия: колонка - препаративная С18 OBD, XBridge, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза, вода с 0,05% TFA и ACN (от 16,0% ACN до 26,0% в течение 15 мин); детектор -MS, УФ при 254/220 нм. В результате получали 15,5 мг (10%) трифторацетата указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 681,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 1.12-1.43 (m, 2Н), 1.87-2.12 (m, ЗН), 2.14 (s, 4Н), 2.62-2.75 (m, 2Н), 2.87-2.93 (m, 7Н), 3.01-3.19 (m, ЗН), 3.31-3.37(m, 1Н), 3.77
3.80 (m, 5H), 3.87-3.95 (m, 2H), 4.07-4.58 (s, 1H), 4.80-4.96 (d, 1H), 7.13-7.20 (m, 4H).
Пример 8
3,5-flnaMHHO-6-xnop-N-((R)-3-((1-(3-(reKcnn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-кapбoкcaмидo)-2-(2-мeтилбeнзил)пpoпил((1-(3-(((2R,ЗR)-2,3-дигидpoкcи-3-((2R,4R,5R)-5-rnflpoKCM-2-cbeHH^-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)-пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
Цианоборгидрид натрия (57,0 мг; 0,91 ммоль) добавляли порциями к смеси гексаналя (45,5 мг; 0,45 ммоль) и (9Н-флуорен-9-ил)метил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)((1-(3-(((2R,ЗR)-2,3-дигидpoкcи-3-((2R,4R,5R)-5-гидpoкcи-2-фeнил-1,3-диoкcaн-4-ил)пропил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамата (полученного по аналогичной методике, описанной для примера 7/стадия 1; начиная при этом с (2R,4aR,7S,8R,8aS)-24peHm-ireKcarHflponnpaHo[3,2-d][1,3]диоксин-6,7,8-триола с ацетальной защитой по D-манниту) (acetal protected D-mannitol) (300 мг; 0,30 ммоль) в МеОН (20 мл). Полученный раствор перемешивали при 25°С в
течение 4 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали препаративной TLC (DCM:MeOH, 25:1), получая (9Н-флуорен-9-ил)метил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)((1-(3-(((2К,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (270 мг; 83%) в виде желтого смолообразного вещества. LC/MS: m/z 1076 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 0.89-1.19 (m, 8Н), 1.23-1.37 (т, 11Н), 1.591.65 (т, 4Н), 2.16-2.21 (т, 6Н), 2.62-3.04 (т, 14Н), 3.34-3.68 (т, 2Н), 3.87-3.96 (т, 4Н), 4.11-4.27 (т, 4Н), 4.70-4.80 (т, 2Н), 5.57 (s, 1Н), 7.07-7.29 (т, 4Н), 7.31-7.50 (т, 7Н), 7.50-7.53 (т, 4Н), 7.78 (d, 2Н).
Стадия 2
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил((1-(3-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)((1-(3-(((2К,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)-пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)карбамат (270 мг; 0,25 ммоль) добавляли к раствору HCI (4 М, водн., 15 мл) в этаноле (5 мл). После перемешивания при 25°С в течение 2 ч смесь концентрировали при пониженном давлении и получали указанное в заголовке соединение (200 мг; 81%) в виде желтого масла.
LC/MS: m/z 987 [М+Н]+.
Стадия 3
3,5-Диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(3-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-
Диэтиламин (3 мл) добавляли к (9Н-флуорен-9-ил)метил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)((1-(3-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)-пиперидин-4-ил)метил)карбамату (стадия 2; 200 мг; 0,20 ммоль) в DMF (6 мл). Полученную смесь перемешивали при 25°С в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC. Колонка: XBridge С18, 19x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: вода/0,05% TFA, подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; элюирование градиентом: от 30% В до 70% В в течение 10 мин; 254 нм. Фракции, содержащие желаемое соединение, упаривали досуха, получая 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-(((1-(3-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (23,5 мг) в виде желтого смолообразного вещества.
LC/MS: m/z 765,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 0.94 (t, ЗН), 1.29-1.40 (m, 8Н), 1.80-2.04 (т, 5Н), 2.35 (s, ЗН), 2.35 (т, 1Н), 2.62-2.71 (т, 2Н), 2.85-2.97 (т, 7Н), 3.15-3.30 (т, 4Н), 3.31-3.69 (т, 4Н), 3.71-3.83 (т, 6Н), 4.03-4.06 (т, 2Н), 4.86-4.87(т, 1Н),7.13-7.20 (т, 1Н).
Пример 9
Дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((2К,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((2КЗРч,4Рч,5Рч)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(5)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (промежуточное соединение Е; 500 мг; 0,70 ммоль), (3S,4S,5S,6R)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2,3,4,5-тетраол (254 мг; 1,41 ммоль) и DIPEA (0,123 мл; 0,70 ммоль) растворяли в МеОН (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия (133 мг; 2,11 ммоль) и уксусную кислоту (0,040 мл; 0,70 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 18 ч и затем при 50°С в течение 30 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили, добавляя 3 М раствор HCI (водн.), перемешивали в течение 15 мин и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (50 мл) и 8%-ном растворе ЫаНСОз (водн.) (50 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (3x50 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм,
250x50 мм внутр. диам.), используя градиент 20-60% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 268 нм. Соединение собирали и подвергали сублимационной сушке, получая указанное в заголовке соединение (195 мг; 32%) в виде бесцветного твердого вещества. LC/MS: m/z 873,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.76-0.85 (m, ЗН), 1.13-1.27 (m, 6Н), 1.31.44 (m, 11Н), 2.21 (s, ЗН), 2.24-2.38 (m, 1Н), 2.39-2.53 (m, 4Н), 2.57-2.66 (m, 2Н), 2.77 (d, 1Н), 2.91-3.06 (m, 1Н), 3.06-3.41 (m, 8Н), 3.43-3.49 (m, 1Н), 3.51 (d, 1Н), 3.55-3.65 (m, ЗН), 4.23-4.55 (m, 5Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.18 (m, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.78-7.99 (m, 1Н), 8.27-8.37 (m, 1Н).
Стадия 2
Дигидрохлорид 3,5-flnaMHHO-6^op-N-((R)-3-((4-((2-(reKcm-i((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
В охлажденный в бане со льдом флакон с МеОН (5 мл; 124 ммоль) по каплям добавляли ацетилхлорид (1,42 мл; 20 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 мин и затем добавляли /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(reKcm-|((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)-бензил)карбамат (190 мг; 0,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч и затем упаривали в вакууме. Остаток растворяли в воде и подвергали сублимационной сушке, получая указанное в заголовке соединение (184 мг; 100%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 773,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.81-0.89 (m, ЗН), 1.2-1.33 (m, 6Н), 1.621.77 (m, 2Н), 2.26 (s, ЗН), 2.3-2.41 (m, 1Н), 2.6-2.73 (m, 2Н), 2.75-2.84 (m, 1Н), 2.86-2.97 (m, 1Н), 3.11-3.27 (m, ЗН), 3.27-3.45 (m, 5Н), 3.45-3.52 (m, 2Н), 3.52-3.76 (m, 5Н), 3.89-3.99 (m, 1Н), 4.03-4.48 (m, 7Н), 6.88-7.23 (m, 6Н), 7.63 (d, 2Н), 7.93 (d, 2Н), 8.26 (t, 1Н), 8.93-9.02 (m, 1Н), 9.13-9.34 (m, 2Н), 9.55 (bs, 1Н).
Пример 10
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S.3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(8)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (промежуточное соединение Е; 1,25 г; 1,76 ммоль), (3R,4S,5S,6R)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2,3,4,5-тетраол (0,635 г; 3,52 ммоль) и DIPEA (0,308 мл; 1,76 ммоль) растворяли в МеОН (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия
(0,332 г; 5,29 ммоль) и уксусную кислоту (0,101 мл; 1,76 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 40 ч при 50°С. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз, перемешивали в течение 30 мин и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (100 мл) и 8%-ном (водн.) растворе ЫаНСОз (100 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x100 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Ma2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм; 250x50 мм внутр. диам.), используя градиент 20-60% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 268 нм. Соединение собирали и подвергали сублимационной сушке, получая /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)-бензил)карбамат (1,26 г; 82%) в виде белого твердого вещества. LC/MS: m/z 873,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.73-0.86 (т, ЗН), 1.1-1.27 (т, 6Н), 1.271.46 (т, 11Н), 2.20 (s, ЗН), 2.24-2.38 (т, 1Н), 2.38-2.49 (т, ЗН), 2.53-2.69 (т, ЗН), 2.9-3.06 (т, 1Н), 3.06-3.47 (т, ЮН), 3.47-3.54 (т, 1Н), 3.54-3.76 (т, ЗН), 4.18-4.65 (т, 6Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.03-7.19 (т, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.78-8 (т, 1Н), 8.24-8.37 (т, 1Н).
Стадия 2
Дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4Р,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Ацетилхлорид (5,69 мл; 80,0 ммоль) по каплям добавляли в охлажденную в бане со льдом колбу с МеОН (20 мл). Смесь перемешивали в течение 5 мин и затем добавляли /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (1,26 г; 1,44 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч и затем упаривали в вакууме. Остаток растворяли в воде и подвергали сублимационной сушке, получая дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)-амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида (1,29 г; 106%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 773,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.78-0.89 (т, ЗН), 1.18-1.32 (т, 6Н), 1.621.76 (т, 2Н), 2.26 (s, ЗН), 2.33-2.44 (т, 1Н), 2.67 (d, 2Н), 2.73-2.84 (т, 1Н), 2.842.96 (т, 1Н), 3.1-3.44 (т, 9Н), 3.44-3.54 (т, 2Н), 3.55-3.62 (т, 1Н), 3.62-3.75 (т, ЗН), 4.02-4.12 (т, 1Н), 4.12-4.3 (т, 2Н), 5.58 (bs, 5Н), 6.91-7.21 (т, 6Н), 7.64 (d, 2Н), 7.94 (d, 2Н), 8.25 (t, 1Н), 8.97-9.06 (т, 1Н), 9.28 (bs, 1Н), 9.41 (bs, 1Н), 9.70 (d, 1Н).
Стадия 3
3,5-Диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28.3К,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида (1,23 г; 1,45 ммоль) растворяли в воде (15 мл) и подщелачивали, добавляя 10%-ный раствор Ыа2СОз (водн.) до
рН приблизительно 11. Продукт экстрагировали ЕЮАс (6x70 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме, получая полутвердое вещество/масло. Остаток растворяли в смеси ацетонитрил/вода и подвергали сублимационной сушке, получая 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (1,08 г; 96%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 773,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.75-0.84 (т, ЗН), 1.13-1.26 (т, 6Н), 1.321.42 (т, 2Н), 1.94-2.05 (т, 1Н), 2.24 (s, ЗН), 2.34-2.49 (т, 6Н), 2.54-2.66 (т, 4Н), 3.14-3.23 (т, 1Н), 3.25-3.35 (т, 4Н), 3.35-3.42 (т, 1Н), 3.42-3.47 (т, 1Н), 3.47-3.54 (т, 1Н), 3.55-3.61 (т, 1Н), 3.61-3.77 (т, 4Н), 4.26-4.33 (т, 2Н), 4.47 (d, 1Н), 4.51 (d, 2Н), 6.96 (bs, 2Н), 7.04-7.14 (т, 4Н), 7.40 (d, 2Н), 7.74 (d, 2Н), 8.26-8.37 (т, 2Н).
Пример 11
(Р0-4-((3-(3,5-Диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенилацетат
4-(((К)-3-(3,5-Диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенил-2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамат
В грушевидную колбу емкостью 50 мл с DCM (30 мл) добавляли (R)-3,5-диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (промежуточное соединение А; 1,6 г; 4,59 ммоль) и 4-формилфенилацетат (0,753 г; 4,59 ммоль), получая желтый раствор. После перемешивания в течение 1 ч добавляли триацетоксиборгидрид натрия (3,89 г; 18,4 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь разбавляли DCM и промывали водой и рассолом. Органический слой сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали в вакууме, получая неочищенный (R)-4-(((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)-метил)фенилацетат (1,70 г; 75%) в виде желтого твердого вещества. Продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
LC/MS: m/z 467 [М+Н]+.
Стадия 2
(3)-4-((/т?ре/т?-Бутоксикарбонил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)фенилацетат
(ВОС)гО (1,07 мл; 4,59 ммоль) добавляли к смеси (К)-4-(((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)-фенилацетата (1,9 г; 3,82 ммоль) и Na2C03 (0,81 г; 7,65 ммоль) в смеси растворителей диоксана (25 мл) и воды (8 мл) при 0°С. Смесь оставляли достигать комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс и промывали насыщенным рассолом.
Органический слой сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя градиент 1040% ЕЮАс в петролейном эфире. Фракции, содержащие чистый продукт, упаривали досуха, получая указанное в заголовке соединение (1,30 г; 57%) в виде желтого твердого вещества. LC/MS: m/z 597 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 1.47 (s, 9Н), 2.25-2.2.51 (m, 7Н), 2.54-2.65 (т, 2Н), 3.05-3.22 (т, 2Н), 3.31-3.39 (т, 2Н), 4.13-4.45 (т, 2Н), 6.93-7.00 (т, 2Н), 7.06-7.10 (т, 6Н).
Стадия 3
(3)-/т?ре/т?-Бутил-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(4-гидроксибензил)карбамат
Раствор NaOH (0,174 г; 4,35 ммоль) в воде (8 мл) по каплям добавляли к охлажденному раствору (8)-4-(((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)фенил-ацетата (1,3 г; 2,18 ммоль) в МеОН (20 мл). Реакционный раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь подкисляли 2 М водн. раствором HCI. Реакционную смесь экстрагировали ЕЮАс и органическую фазу промывали водой и рассолом, сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали, получая неочищенное указанное в заголовке соединение (1,20 г; 99%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 555 [М+Н]+.
Стадия 4
(3)-4-((/т?ре/т?-Бутоксикарбонил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)фенилхлорформиат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл с THF (10 мл) добавляли (S)-тре/77-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-гидроксибензил)карбамат (250 мг; 0,45 ммоль) и DIEA (0,354 мл; 2,03 ммоль), получая желтый раствор. Смесь охлаждали с использованием бани со льдом и добавляли трифосген (200 мг; 0,68 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали ЕЮАс (3 х 20 мл). Органический слой сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали, получая указанное в заголовке соединение (250 мг; 90%) в виде желтого масла.
LC/MS: m/z 617 [М+Н]+.
Стадия 5
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-(((2-(((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)этил)карбамоил)окси)бензил)-карбамат
В круглодонной колбе емкостью 50 мл растворяли (1R,2S)-3-((2-аминоэтил)(гексил)амино)-1-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропан-1,2-диол (пример 3/стадия 2; 96 мг; 0,24 ммоль) и DIEA (0,064 мл; 0,36 ммоль) в THF (10 мл), получая бесцветный раствор. Добавляли (S)-4-(((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)фенилхлорформиат (стадия 4; 150 мг; 0,24
ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3 х 20 мл). Органические фазы сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали препаративной TLC (DCM:MeOH, 10:1), получая указанное в заголовке соединение (200 мг; 84%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 977 [М+Н]+.
Стадия 6
4-(((Р0-3-(3,5-Диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенил-2-(гексил((28,ЗК4К5К)-2,ЗА5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамат
В круглодонную колбу емкостью 25 мл с ЕЮН (1 мл) добавляли /т?ре/т?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)-пропил)(4-(((2-(((28,ЗК)-2,3-дигидрокси-3-((2К,4К,5К)-5-гидрокси-2-фенил-1,3-диоксан-4-ил)пропил)(гексил)амино)этил)карбамоил)окси)бензил)карбамат (стадия 5; 200 мг; 0,20 ммоль), получая желтый раствор. Добавляли водн. раствор HCI (4 М, 3 мл) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (препаративная колонка С18 OBD, XBridge, от Waters, диоксид кремния, 5 мкм, диаметр 50 мм, длина 150 мм), используя в качестве элюента градиент воды (0,05% TFA) и MeCN с уменьшающейся полярностью. Фракции, содержащие желаемое соединение, упаривали досуха, получая указанное в заголовке соединение (28,0 мг; 13%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 789,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 0.79-0.99 (т, ЗН), 1.25-1.55 (т, 6Н), 1.69-1.91 (т, 2Н), 2.25-2.45 (т, 4Н), 2.51-2.84 (т, 1Н), 2.81-3.01 (т, ЗН,), 3.28-3.31 (т, 4Н),
3.34-3.82 (m, 12H), 3.86-3.92 (m, 1H), 4.09-4.37 (m, 3H), 7.03-7.35 (m, 6H), 7.453 (d, 2H).
Пример 12
Дигидрохлорид 3,5-flnaMHHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKcnn((2S,3R,4R,5R)-2,ЗА5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Стадия 1 EN06927-61
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат
(8)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат (промежуточное соединение D; 500 мг; 0,69 ммоль), (3R,4S,5S,6R)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2,3,4,5-тетраол (249 мг; 1,38 ммоль) и DIPEA (0,121 мл; 0,69 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) и перемешивали при 50°С в течение 40 мин, после чего добавляли цианоборгидрид натрия (130 мг; 2,07 ммоль) и уксусную кислоту (0,044 мл; 0,76 ммоль). Перемешивание продолжали при 50°С в течение 21 ч и затем реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакцию гасили добавлением 8%-ного
(водн.) раствора ЫаНСОз. Смесь разбавляли в ЕЮАс (50 мл) и 8%-ном (водн.) растворе ЫаНСОз (50 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (4x50 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Ma2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 265 нм. Соединение собирали и подвергали сублимационной сушке, получая указанное в заголовке соединение (385 мг; 63%) в виде бледного твердого вещества. LC/MS: m/z 887,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.80 (t, ЗН), 1.12-1.26 (m, 6Н), 1.29-1.43 (m, 11Н), 2.16-2.29 (m, 4Н), 2.41-2.48 (m, 2Н), 2.56-2.67 (m, 2Н), 2.71 (t, 2Н), 2.96 (dd, 1Н), 3.02-3.42 (m, 12Н), 3.44 (dd, 1H), 3.47-3.54 (m, 1H), 3.55-3.74 (m, ЗН), 4.184.79 (m, 4H), 6.96 (bs, 2H), 7.06-7.19 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.8-7.97 (m, 1H), 8.248.34 (m, 1H).
Стадия 2
Дигидрохлорид 3,5-flnaMHHO-6^op-N-((R)-3-((4-((2-(reKcm-i((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Ацетилхлорид (1,42 мл; 20 ммоль) по каплям добавляли в охлажденный в бане со льдом раствор МеОН (5 мл; 124 ммоль). Раствор перемешивали в течение 5 мин и затем добавляли к /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(reKcm-|((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)-фенетил)карбамату (стадия 1; 385 мг; 0,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде и подвергали
сублимационной сушке, получая указанное в заголовке соединение (369 мг; 99%) в виде желтого твердого вещества. LC/MS: m/z 787,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-cfe) 5 0.78-0.88 (m, ЗН), 1.17-1.31 (m, 6Н), 1.61.74 (m, 2Н), 2.23-2.39 (m, 4Н), 2.64-2.75 (m, 2Н), 2.75-2.87 (m, 1Н), 2.87-2.99 (m, 1Н), 3.05 (t, 2Н), 3.09-3.44 (m, 11Н), 3.44-3.54 (m, 2Н), 3.55-3.75 (m, 4Н), 4-4.1 (m, 1Н), 4.69 (bs, 7Н), 6.88-7.2 (m, 5Н), 7.23-7.3 (m, 1Н), 7.36 (d, 2Н), 7.88 (d, 2Н), 8.24 (t, 1Н), 8.85-9.16 (m, ЗН), 9.63 (d, 1Н).
Пример 13
Дигидрохлорид 3,5-flHaMHHO-6^op-N-((R)-3-((4-((2-(reKcmi((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат
(8)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат (промежуточное соединение D; 500 мг; 0,69 ммоль), (2R,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентаналь (208 мг; 1,38 ммоль) и DIPEA (0,121 мл; 0,69 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) и перемешивали при 50°С в течение 40 мин, после
чего добавляли цианоборгидрид натрия (130 мг; 2,07 ммоль) и уксусную кислоту (0,044 мл; 0,76 ммоль). Перемешивание продолжали при 50°С в течение 21 ч и затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакцию гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз. Смесь разбавляли в ЕЮАс (50 мл) и 8%-ном (водн.) растворе ЫаНСОз (50 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (4x50 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Ma2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм, 250x50 мм внутр. диам.), используя градиент 20-60% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 265 нм. Соединение собирали и подвергали сублимационной сушке, получая трет-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)-пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)-карбамоил)фенетил)карбамат (374 мг; 63%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z 857,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.74-0.85 (т, ЗН), 1.11-1.28 (т, 6Н), 1.281.44 (т, 11Н), 2.14-2.29 (т, 4Н), 2.46 (dd, 2Н), 2.55-2.65 (т, 2Н), 2.71 (t, 2Н), 2.96 (dd, 1Н), 3.02-3.51 (т, 14Н), 3.52-3.6 (т, 1Н), 3.6-3.71 (т, 1Н), 4.17-4.77 (т, ЗН), 6.96 (bs, 2Н), 7.05-7.2 (т, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.8-7.97 (т, 1Н), 8.23-8.34 (т, 1Н).
Стадия 2
Ацетилхлорид (1,42 мл; 20,0 ммоль) по каплям добавляли в охлажденный в бане со льдом раствор МеОН (5 мл; 123,59 ммоль). Раствор перемешивали в
Дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((К)-3-((4-((2-(гексил((23,ЗК4Р0-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида
течение 5 мин и затем добавляли к /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил-((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)-карбамату (374 мг; 0,44 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде и подвергали сублимационной сушке, получая дигидрохлорид 3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида (361 мг; 100%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 757,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1-1.09 (m, ЗН), 1.39-1.53 (m, 6Н), 1.84-1.95 (m, 2Н), 2.50 (s, ЗН), 2.53-2.62 (m, 1Н), 2.86-2.97 (т, 2Н), 2.97-3.07 (т, 1Н), 3.093.2 (т, 1Н), 3.22-3.73 (т, 15Н), 3.77-3.96 (т, ЗН), 4.23-4.32 (т, 1Н), 4.84 (bs, 6Н), 7.15-7.42 (т, 5Н), 7.45-7.52 (т, 1Н), 7.58 (d, 2Н), 8.11 (d, 2Н), 8.46 (t, 1Н), 9.13-9.2 (т, 1Н), 9.30 (d, 2Н), 9.92 (d, 1Н).
Пример 14
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((8)-3-((4-((2-(гексил((28.3К,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид, соль уксусной кислоты
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(К)-тре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (промежуточное соединение Н; 163 мг; 0,23 ммоль), (2R,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентаналь (69,0 мг; 0,46 ммоль) и DIPEA (0,040 мл; 0,23 ммоль) растворяли в МеОН (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия (14,44 мг; 0,23 ммоль) и уксусную кислоту (0,039 мл; 0,69 ммоль), реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 20 ч и затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакцию гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз и перемешивали в течение 30 мин. Растворитель концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (25 мл) и 8%-ном (водн.) растворе ЫаНСОз (25 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x25 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм, 250x20 мм внутр. диам.), используя градиент 30-70% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 НгО/АСЫ/АсОН, в течение 20 минут при скорости потока 19 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ (by UV) при 265 нм. Содержащие продукт фракции собирали и подвергали сублимационной сушке, получая /г?ре/г?-бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)-карбамат (127 мг; 65,5%) в виде твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.75-0.84 (m, ЗН), 1.13-1.26 (m, 6Н), 1.291.42 (m, 11Н), 2.20 (s, ЗН), 2.25-2.35 (m, 1Н), 2.41-2.47 (m, 2Н), 2.56-2.62 (m, 2Н), 2.89-3.05 (m, 1Н), 3.07-3.15 (m, 1Н), 3.2-3.49 (m, 13Н), 3.52-3.59 (m, 1H), 3.61-3.69 (m, 1H), 4.21-4.35 (m, 2H), 4.35-4.55 (m, ЗН), 6.96 (bs, 1H), 7.04-7.19 (m, 6H), 7.71 (d, 2H), 7.77-7.98 (m, 1H), 8.24-8.32 (m, 1H).
MS ES+: m/z 843,4 [M+H]+. Стадия 2
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((S)-3-((4-((2-(reKCMn((2S.3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид, соль уксусной кислоты
Ацетилхлорид (0,711 мл; 10 ммоль) по каплям добавляли в охлажденный в бане со льдом флакон с МеОН (2,5 мл; 61,79 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин, после чего добавляли /г?ре/г?-бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил-((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)-карбамат (127 мг; 0,15 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (25 мл) и 5%-ном (водн.) растворе Ыа2СОз (25 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (5x25 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм, 250x20 мм внутр. диам.), используя градиент 5-45% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/ACN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 19 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 268 нм. Продукт подвергали сублимационной сушке, получая 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((8)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (100 мг; 82%) в виде бледного твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.77-0.83 (m, ЗН), 1.13-1.25 (m, 6Н), 1.321.41 (m, 2Н), 1.90 (s, 4Н), 1.96-2.05 (m, 1Н), 2.24 (s, ЗН), 2.35-2.55 (т, 6Н), 2.55
2.63 (m, 4H), 3.14-3.23 (m, 2H), 3.24-3.4 (m, 9H), 3.4-3.49 (m, 4H), 3.56 (q, 1H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.74 (d, 1H), 6.96 (bs, 2H), 7.04-7.14 (m, 4H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (t, 1H).
MS ES+: m/z 743,5 [M+H]+.
Пример 15
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((S)-3-((4-((2-(reKCMn((2R,3S.4S)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид, соль уксусной кислоты
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((2К38,4S)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(К)-/г?ре/г?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат, (промежуточное соединение G) (163 мг; 0,23 ммоль), (2S,3R,4S)-2,3,4,5-тетрагидроксипентаналь (69,0 мг; 0,46 ммоль) и DIPEA (40,1 мкл; 0,23 ммоль) растворяли в МеОН и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия (14,44 мг; 0,23 ммоль) и уксусную кислоту (39,5 мкл; 0,69 ммоль), реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 20 ч и
затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакцию гасили
добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз и перемешивали в течение 30
мин. Растворитель концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс
(25 мл) и 8%-ном (водн.) растворе ЫаНСОз (25 мл), встряхивали и проводили
разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (5x25 мл). Объединенные
органические фазы сушили с использованием Ma2S04 (тверд.), фильтровали и
упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке
Kromasil С8 (10 мкм, 250x20 мм внутр. диам.), используя градиент 30-70%
ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/ACN/AcOH, в течение 20 минут
при скорости потока 19 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 265
нм. Содержащие продукт фракции собирали и подвергали сублимационной
сушке, получая /г?ре/г?-бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-
карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил((2К,38,48)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (135 мг; 69,7%) в виде твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.79 (d, ЗН), 1.16 (d, 6Н), 1.36 (s, 11Н), 2.20 (s, ЗН), 2.31 (s, 1Н), 2.50 (dt, 5Н), 2.58 (s, ЗН), 2.92-3.05 (m, 1Н), 3.06-3.15 (m, 1Н), 3.31 (s, 6Н), 3.39-3.5 (m, 2Н), 3.53-3.59 (m, 1Н), 3.61-3.69 (m, 1Н), 4.22-4.34 (m, 2Н), 4.34-4.55 (m, ЗН), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.18 (m, 6Н), 7.71 (d, 2Н), 7.78-7.97 (m, 1Н), 8.25-8.32 (m, 1Н).
MS ES+: m/z 843,5 [M+H]+.
Стадия 2
3,5-Диамино-6-хлор-Ы-((8)-3-((4-((2-(гексил((2К,38.48)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид, соль уксусной кислоты
Ацетилхлорид (0,711 мл; 10 ммоль) по каплям добавляли в охлажденный в бане со льдом флакон с МеОН (2,5 мл; 61,79 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин, после чего добавляли /г?ре/г?-бутил-((К)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексил-((2К,38,48)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)-карбамат (135 мг; 0,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем упаривали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (25 мл) и 5%-ном (водн.) растворе Na2C03 (25 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (5x25 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм, 250x20 мм внутр. диам.), используя градиент 5-45% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/ACN/AcOH, в течение 20 минут при скорости потока 19 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 268 нм. Продукт подвергали сублимационной сушке, получая 3,5-диамино-6-хлор-Ы-((8)-3-((4-((2-(гексил((2К,38,48)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (93 мг; 70,2%) в виде бледного твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.76-0.83 (m, ЗН), 1.14-1.25 (m, 6Н), 1.311.42 (m, 2Н), 1.91 (s, ЗН), 1.95-2.06 (m, 1Н), 2.24 (s, ЗН), 2.35-2.54 (m, 6Н), 2.60 (dd, 4Н), 3.14-3.5 (m, 11Н), 3.56 (q, 1Н), 3.66 (dd, 2Н), 3.74 (d, 1Н), 6.96 (s, 2Н), 7.04-7.14 (m, 4Н), 7.40 (d, 2Н), 7.74 (d, 2Н), 8.28 (t, 1Н), 8.33 (t, 1Н).
MS ES+: m/z 743,4 [M+H]+.
Пример 16
3,5-Диамино-6-хлор-М-((К)-3-(3-(2-(гексил((28.3К,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-(8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(3-(2-(гексил((28.3К,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетил)карбамат
В круглодонную колбу емкостью 50 мл с МеОН (15 мл) добавляли (S)-тре/77-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(3-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат (промежуточное соединение D; 370 мг; 0,51 ммоль) и (3R,4S,5S,6R)-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2,3,4,5-тетраол (138 мг; 0,77 ммоль), получая желтый раствор. После перемешивания в течение 30 мин указанной выше смеси добавляли NaCNBH3 (32,1 мг; 0,51 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 50°С в течение 16 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая неочищенный продукт /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(3-((2-(reKcm-|((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)-фенетил)карбамат (500 мг; 110%) в виде желтого твердого вещества. Продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
LC/MS: m/z 887 [M+H]+. Стадия 2
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-(3-(2-(reKCMn((2S.3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)фенетиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид
В круглодонную колбу емкостью 50 мл со смесью НС1/МеОН (20 мл; 0,56 ммоль) добавляли /г?ре/г?-бутил-((8)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-кapбoкcaмидo)-2-(2-мeтилбeнзил)пpoпил)(3-((2-(гeкcил((2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат (500 мг; 0,56 ммоль), получая желтый раствор. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре (КТ) в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (препаративная колонка С18 OBD, XBridge, от Waters, диоксид кремния, 5 мкм, диаметр 50 мм, длина 150 мм), используя в качестве элюентов смеси воды (содержащей 0,1% NH4HC03) и MeCN с уменьшающейся полярностью. Фракции, содержащие желаемое соединение, упаривали досуха, получая 3,5-диaминo-6-xлop-N-((R)-3-((3-((2-(гeкcил((2S,ЗR,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)-фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамид (87 мг; 20%) в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z 788 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (300 МГц, CD3OD, 25°С): 5 0.85-0.91 (т, ЗН), 1.15-1.35 (т, 6Н), 1.39-1.59 (т, 2Н), 2.12-2.25 (т, 1Н), 2.31 (s, ЗН), 2.57-2.89 (т, 13Н, 3.29-3.33 (т, 2Н), 3.38-3.64 (т, ЗН), 3.66-3.84 (т, 6Н), 7.09-7.16 (т, 4Н),7.38 (d, 2Н), 7.70-7.73 (т, 2Н).
Синтез промежуточных соединений
Промежуточное соединение А
(К)-3,5-Диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
NH2 о I
В реактор загружали диметилмалонат (6,00 кг; 45,4 моль) и метанол (21,3 л). В течение 10 минут добавляли смесь 25% NaOMe/MeOH (10,37 л; 45,2 моль) и затем добавляли 2-метилбензилхлорид (4,26 кг; 30,3 моль) в течение 1,5 ч, поддерживая температуру реакционной смеси ниже 30°С. В реакционную смесь добавляли насыщ. NH4CI (53,1 л), получая рН 8,5. Продукт экстрагировали изопропилацетатом (3 х 25 л), объединенные органические слои промывали 10%-ным рассолом (10 л) и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение в виде масла (8,63 кг; 68 масс.%-ное; 83%). Полученное таким образом указанное в заголовке соединение содержало диалкилированный малонат. Чистота поданным HPLC: 86%.
LC/MS: m/z 237 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (DMSO-de, 270 МГц) 5 7.17-7.05 (4Н, т), 3.60 (6h, s), 3.82 (1Н, t), 3.12 (2Н, s), 2.21 (ЗН, s); 13С-ЯМР (DMSO-d6, 270 МГц) 5 169.5, 136.6, 136.3, 130.8, 129.5, 127.3, 126.4, 52.8, 52.0, 31.8, 19.4.
Стадия 2
В реактор загружали диметил-2-(2-метилбензил)малонат (стадия 1; 5,9 кг; 68 масс.%-ный; 17,0 моль) и метанол (14,8 л). Добавляли 34%-ный раствор
2-(2-Метилбензил)малонамид
гидроксида аммония (24 л; 36 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 25°С до тех пор, пока реакция не считалась завершенной по данным HPLC-анализа. Твердые вещества отфильтровывали и затем добавляли МТВЕ (15,3 л). Через 30 мин твердые вещества отфильтровывали, промывали МТВЕ (2 х 15,3 л) и сушили при пониженном давлении при 60°С, получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (3,2 кг; 91%). LC/MS: m/z 206,9 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (DMSO-de, 270 МГц) 5 7.32-7.21 (2Н, br s), 7.15-7.00 (6Н, т), 3.33 (1Н, t), 2.96 (2Н, d), 2.28 (ЗН, s); 13С-ЯМР (DMSO-d6, 270 МГц) 5 171.0, 137.5, 136.0, 129.9, 128.9, 126.1, 125.6, 53.2, 32.5, 19.1.
Стадия 3
2-(2-Метилбензил)пропан-1,3-диамин
В реактор загружали 2-(2-метилбензил)малонамид (1,32 кг; 6,40 моль) и THF (5,4 л). Вязкую смесь охлаждали до 0°С и в течение 2 ч добавляли 1 М боран-THF (25,6 л; 25,6 моль), поддерживая температуру реакционной смеси ниже 2°С. Реакционную смесь нагревали до 15°С и затем перемешивали при 50°С в течение ночи. Когда по данным HPLC-анализа было показано присутствие менее 8% оставшегося исходного вещества, реакционную смесь гасили добавлением в 4 М раствор КОН (8 л), поддерживая температуру ниже 30°С. Органический слой концентрировали при пониженном давлении и водный слой дважды экстрагировали МТВЕ (2x10 л). Объединенные МТВЕ-экстракты добавляли к концентрированному органическому слою и затем объединенные органические слои загружали в 6 М раствор HCI (10 л), поддерживая температуру ниже 30°С. Водную фазу промывали МТВЕ (10 л) и затем подщелачивали 6 М раствором КОН (12 л). Водную фазу дважды экстрагировали THF (10 л и затем 5 л) и объединенную органическую фазу концентрировали при пониженном давлении. Добавляли толуол (5 л) и затем проводили азеотропную отгонку для удаления всей оставшейся воды. Смесь растирали с толуолом (5 л), твердые вещества отфильтровывали и промывали толуолом (3 л). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая
указанное в заголовке соединение в виде свободного амина (1,13 кг; выход 70%). Чистота поданным HPLC: 91%. LC/MS: m/z 179,0 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.12-7.00 (4Н, т), 2.72-2.59 (4Н, т), 2.52 (2Н, d), 2.27 (ЗН, s), 1.64 (1Н, т), 1.48-1.25 (4Н, br s); 13С-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 139.0, 136.3, 130.5, 129.9, 126.2, 125.9, 44.7, 43.8, 34.3, 19.6.
Стадия 4
2-(2-Метилбензил)пропан-1,3-диамин, L-тартрат
К неочищенному диамину (со стадии 3) (1,62 кг; 9,1 моль) добавляли этанол (4 л). Добавляли раствор L-винной кислоты (1,62 кг; 10,8 моль) в этаноле (11 л), поддерживая температуру ниже 40°С. Смесь перемешивали при 25°С в течение 3 суток, затем твердые вещества отфильтровывали, промывали этанолом (2 х 2 л) и сушили при пониженном давлении при 50°С, получая указанное в заголовке соединение в виде его моносоли - L-тартрата (3,21 кг; количественный выход). Чистота по данным HPLC: 92,2%.
LC/MS: m/z 179,0 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (D20, 270 МГц) 5 7.30-7.15 (4Н, т), 4.27 (2Н, s), 3.20-3.07 (2Н, dd), 3.04-2.94 (2Н, dd), 2.79 (2Н, d), 2.41 (1Н, т), 2.27 (ЗН, s); 13С-ЯМР (D20, 270 МГц) 5 178.4, 137.2, 135.7, 131.0, 130.0, 127.6, 126.7, 73.9, 40.5, 35.9, 32.8, 18.7.
Стадия 5
(Я?)-Аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1 -(Я?))
В реактор загружали L-тартрат 2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диамина (3,57 кг; 10,9 моль) и воду (17 л). Добавляли 10 М раствор NaOH (17 л; 170 моль), поддерживая температуру реакционной смеси ниже 25°С. Смесь перемешивали по 30 мин при 25°С в течение 3 сут и затем добавляли 2-MeTHF (14 л). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали 2-MeTHF (14 л). Объединенную органическую фазу сушили (сульфат натрия), фильтровали и
концентрировали при пониженном давлении, получая свободный диамин. В реактор загружали этот свободный диамин, 2-MeTHF (37,4 л) и диаллилкарбонат (1,80 кг; 12,6 моль). Порциями добавляли иммобилизованную липазу Amano PS IM (5,61 кг; 3 масс, эквивалента) в течение 30 мин и температуру устанавливали на 30°С. Через 4 суток содержание оставшегося исходного вещества по данным 1Н-ЯМР составляло менее 5%, и реакционную смесь с целью очистки фильтровали через целит и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (2,68 кг; ее 82%; выход 100%). Чистота поданным HPLC: 84,7%. LC/MS: m/z 263,1 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.15-7.05 (4Н, т), 5.99-5.81 (1Н, т), 5.80-5.60 (1Н, brs), 5.35-5.15 (2Н, т), 4.54 (2Н, d), 3.40-3.14 (2Н, т), 2.85-2.52 (4Н, т), 2.29 (ЗН, s), 1.90-1.77 (1Н, т), 1.50-1.10 (2Н, brs); 13С-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 156.6, 138.1, 136.1, 133.0, 130.5, 129.7, 126.3, 125.9, 117.5, 65.4, 44.0, 43.4, 41.6, 34.2, 19.5.
Стадия 6
(Я?)-Аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1 -(Я?)), Р-тартрат
Неочищенный (Я?)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (2,68 кг; 10,2 моль) добавляли к ЕЮН (7,1 л). Добавляли раствор D-винной кислоты (1,53 кг; 10,2 моль) в ЕЮН (8 л), поддерживая температуру ниже 25°С. Приблизительно через 1 ч начинало происходить образование осадка, и смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Добавляли MeCN (5 л) при 25°С и твердые вещества отфильтровывали, промывали MeCN (2 х 5 л) и сушили при пониженном давлении при 40°С, получая 2,94 кг указанного в заголовке соединения ((R) D-тартрат; выход 100%) в стехиометрическом соотношении основание/ди-кислота, равном 2:1. Чистота поданным HPLC: 91,6%.
LC/MS: m/z 263,1 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (DMSO-сУе, 270МГц) 5 7.50 (1Н, t), 7.22-7.05 (4Н, т), 5.98-5.85 (1Н, т), 5.35-5.12 (2Н, т), 4.48 (2Н, d), 3.95 (2Н, s), 3.13-2.99 (2Н, т), 2.90-2.79 (1Н, т), 2.75-2.58 (2Н, т), 2.26 (ЗН, s), 2.08 (1Н, т); 13С-ЯМР (DMSO-d6, 270 МГц) 5
174.6, 156.6, 137.4, 136.1, 133.7, 130.3, 129.7, 126.3, 125.8, 117.0, 71.8, 64.4, 65.5, 37.6, 32.7, 19.1, 18.9.
Хиральная HPLC (метод А): ее 88,3%; Rt = 11,14 мин (S), 14,57 мин (R).
Стадия 7
(Р:)-Аплил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
В сосуд емкостью 50 л в атмосфере азота добавляли воду (14,7 л) и МТВЕ (14,7 л), после этого добавляли (Я?)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1-(Я?)), D-тартрат, (стадия 6; 2940 г). К смеси добавляли 10 М NaOH (14,7 л) и температуру поддерживали ниже 30°С. Смесь перемешивали в течение 30 мин, органические слои отделяли и водный слой повторно экстрагировали МТВЕ (14,7 л). Часть органических слоев концентрировали в вакууме (1 л), получая на выходе предположительно 1779 г (95%).
LC/MS: m/z 263,1 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.05-7.15 (4Н, т), 5.80-5.99 (1Н, т), 5.32-5.14 (т, 2Н), 4.52 (d, 2Н), 3.15-3.38 (т, 2Н), 2.55-2.81 (т, 2Н), 2.54 (d, 2Н), 2.29 (s, ЗН), 1.76-1.87 (т, 1Н).
Стадия 8
(3)-Аллил-/т?ре/т?-бутил-(2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диил)дикарбамат
В сосуд емкостью 50 л в атмосфере азота добавляли (Я?)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1740 г), растворенный в МТВЕ (29,4 л). После этого добавляли триэтиламин (922 мл). Смесь охлаждали до 0°С и обрабатывали ВОС-ангидридом (1600 мл; 1518 г), растворенным в МТВЕ (3,48 л). Реакционную смесь нагревали до 20°С и перемешивали в течение 2 ч. Завершение реакции подтверждали посредством 1Н-ЯМР. В реакционную
смесь загружали воду (8,7 л) и в течение 15 мин осуществляли перемешивание. Органические слои отделяли, промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты (8,7 л) и рассолом (8,7 л), после чего сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (2320 г; 94%). По данным 1Н-ЯМР чистота составляла больше 90%.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.02-7.10 (m, 4Н), 5.82-5.99 (т, 1Н), 5.55 (t, 1Н), 5.32-5.15 (т, 2Н), 5.02 (t, 1Н), 4.52 (d, 2Н), 3.17-3.30 (т, 2Н), 2.95-3.15 (т, 2Н), 2.51 (d, 2Н), 2.28 (s, ЗН), 1.87-1.95 (т, 1Н), 1.43 (s, 9Н).
Стадия 9
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
В сосуд емкостью 50 л в атмосфере азота добавляли (S)-annwn-mpem-бутил-(2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диил)дикарбамат (2330 г), растворенный в DCM (12,9 л) и МеОН (10,3 л), после этого добавляли Pd(PPh3)4 (148,4 г). Реакционную смесь охлаждали до 5°С и в нее порциями в течение 2 ч вносили NaBH4 (729 г). Реакционную смесь нагревали до 20°С и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь осторожно гасили, выливая в воду (46,6 л), и затем перемешивали в течение 20 мин. Органические слои отделяли и водный слой повторно экстрагировали DCM (23,6 л). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (1679 г; выход 100% (чистота приблизительно 80% по данным 1Н-ЯМР)).
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.02-7.15 (m, 4Н), 5.22 (br s, 1Н), 3.10-3.28 (т, 2Н), 2.62-2.80 (т, 2Н), 2.52 (d, 2Н), 2.29 (s, ЗН), 1.75-1.82 (т, 1Н), 1.92 (s, 9Н), 1.30 (brs, 2Н).
Стадия 10
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
В сосуд емкостью 50 л в атмосфере азота добавляли 3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоновую кислоту (100 г), HBTU (202,8 г), THF (1200 мл) и DIPEA (111 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при комнатной температуре. В реакционную смесь добавляли (8)-/г?ре/г?-бутил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 9; 148,6 г), растворенный в THF (1,49 л). Следует отметить, что в процессе добавления наблюдался экзотермический эффект с повышением температуры на 10°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при комнатной температуре; данные LCMS указывали на присутствие 5% оставшегося аддукта. Смесь нагревали до 35°С в течение 4 ч. Данные LC/MS указывали на присутствие 2% оставшегося аддукта. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Остаток переносили в этилацетат (1,5 л) и МТВЕ (1,5 л) и промывали насыщенным раствором ЫаНСОз (1 л), 5%-ным раствором лимонной кислоты (700 мл) и рассолом (700 мл). Органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток переносили в МТВЕ (1 л) и повторно концентрировали, после чего переносили в МТВЕ (500 мл) и диэтиловый эфир (500 мл) и фильтровали для удаления соли DIPEA. Фильтрат концентрировали, и результаты аналиа указывали на присутствие некоторого количества оставшейся соли DIPEA. Остаток повторно растирали с МТВЕ (750 мл) и диэтиловым эфиром (750 мл), и фильтрование проводили еще раз. Фильтрат концентрировали, получая указанное в заголовке соединение (225 г; 94% (с учетом растворителя и TMU (1,1,3,3-тетраметилмочевина))).
LC/MS: m/z 349,2 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.46 (t, 1Н), 7.13 (m, 4Н), 5.52 (t, 1Н), 5.22 (brs, 2Н), 3.62-3.75 (т, 1Н), 3.00-3.40 (т, 5Н), 2.80 (s, ЗН), 2.49-2.75 (т, 2Н), 1.95-2.02 (т, 1Н), 1.42 (s, 9Н).
Стадия 11
3,5-Диамино-Ы-[(2Р:)-3-амино-2-(2-метилбензил)пропил1-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
NH2 о I
В снабженную фланцем колбу емкостью 20 л в атмосфере азота добавляли (8)-/г?ре/г?-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (стадия 10; 2215 г) в диоксане (6 л). Смесь перемешивали в течение 20 мин до полного растворения. Затем к реакционной смеси добавляли 4 М раствор HCI в диоксане (10 л). В ходе этой реакции выделялось значительное количество газа и температура повышалась до 35°С, после чего применяли охлаждение. В ходе этой реакции наблюдали образование вязкого маслянистого осадка. LC/MS-анализ реакционной смеси через 1 ч показал полное завершение реакции. Надосадочную жидкость декантировали и концентрировали в вакууме. Маслянистое вязкое твердое вещество растворяли в воде (6 л) и объединяли с концентрированной надосадочной жидкостью, растворенной в воде (2 л). Водный слой промывали МТВЕ (5 л). Затем водный слой подщелачивали 10 М раствором NaOH (2 л) и экстрагировали 2-Me-THF (4 х 10 л). Органические экстракты сушили, фильтровали и концентрировали в вакууме. Затем остаток концентрировали из МТВЕ (2 х 4 л) для удаления оставшегося 2-MeTHF. Твердое вещество растирали со смесью МТВЕтептан (9 л:1,8 л) и оставляли перемешиваться в течение выходных. Твердое вещество отфильтровывали и сушили в сушильном шкафу при 40°С, получая указанное в заголовке соединение (1657 г; 96%).
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц) 5 7.60 (t, 1Н), 7.08-7.15 (m, 4Н), 5.75 (br s, 2Н), 5.12 (Ь s, 2Н), 3.38-3.45 (т, 2Н), 2.52-2.82 (т, 4Н), 2.30 (s, ЗН), 1.80-1.98 (т, 2Н), 1.20-1.28 (т, 2Н).
Стадия 12
(Р0-3,5-Диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамида (2К38)-2-бензоил-3-(бензоилокси)сукцинат
В сосуд емкостью 50 л в атмосфере азота добавляли 3,5-диамино-1Ч-[(2Рч)-3-амино-2-(2-метилбензил)пропил]-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (127,4 г) и метанол (892 мл). Смесь осторожно нагревали до 30°С до полного растворения всего твердого вещества. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли (+)-дибензоил-0-винную кислоту (65,5 г) в метаноле (458 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться; приблизительно через 2 ч начиналось осаждение твердого вещества. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение выходных. К смеси добавляли изопропилацетат (1,5 л) и перемешивание продолжали в течение 4 ч. Далее осадок отфильтровывали и промывали изопропилацетатом (2 х 1 л). Твердое вещество затем сушили в сушильном шкафу в течение 3 суток при 40°С. В целом получали 147,5 г вещества (74%) со стехи о метрическим соотношением основание/ди-кислота, равным 2:1.
1Н-ЯМР (CDCI3, 270 МГц): 5 7.60 (t, 1Н), 7.08-7.15 (m, 4Н), 5.75 (br s, 2Н), 5.12 (b s, 2Н), 3.38-3.45 (т, 2Н), 2.52-2.82 (т, 4Н), 2.30 (s, ЗН), 1.80-1.98 (т, 2Н), 1.20-1.28 (т, 2Н).
Хиральная HPLC (метод А): ее 98,7%; Rt =11,93 мин (R), 14,24 мин (S). Стадия 13
(Р0-3,5-Диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
(Рч)-3,5-Диамино-1\1-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамида (2Рч,38)-2-бензоил-3-(бензоилокси)сукцинат (20 г; 38,46 ммоль) суспендировали в 2-метил-ТНР (200 мл) и воде (200 мл) и охлаждали в бане со льдом. Медленно добавляли 1 М раствор гидроксида натрия (42,3 мл; 42,31 ммоль) и смесь далее перемешивали при 40°С до полного растворения всего вещества. Смесь охлаждали до комнатной температуры и проводили
разделение фаз. Водную фазу экстрагировали 2-метил-ТНР (2x200 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом (200 мл), сушили с использованем фазового сепаратора и упаривали в вакууме, получая (R)-3,5-диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (13,3 г; 99%) в виде бледного твердого вещества. LC/MS: m/z: 349,3 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.50 (bs, 2Н), 1.76-1.87 (m, 1Н), 2.26 (s, ЗН), 2.4-2.49 (m, 2Н), 2.52-2.62 (m, 2Н), 3.18-3.28 (m, 2Н), 6.95 (bs, 2Н), 7.04-7.17 (m, 4Н), 8.14 (t, 1Н).
Хиральная HPLC (метод В): ее 99,3%; Rt =11,55 мин (S), 13,28 мин (R). [а\1°: +11,8 (с 1,0; MeCN). Промежуточное соединение В
(3)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил(пиперидин-4-илметил)карбамат
Стадия 1
В круглодонную колбу емкостью 50 мл помещали смесь /г?ре/г?-бутил-4-формилпиперидин-1-карбоксилата (122 мг; 0,57 ммоль; 1,00 экв.) и 3,5-
(R)-/т?pe/т?-Бvтил-4-((3-(3,5-диaминo-6-xлopпиpaзин-2-кapбoкcaмидo)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)пиперидин-1-карбоксилат
диамино-1\1-[(2Рч)-3-амино-2-[(2-метилфенил)метил]пропил]-6-хлорпиразин-2-карбоксамида (промежуточное соединение А; 200 мг; 0,57 ммоль; 1,0 экв.) в дихлорметане (5 мл), смесь перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (486 мг; 2,29 ммоль; 4,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученную смесь промывали водой (3x10 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. В результате получали 250 мг (80%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z: 546 [М+Н]+.
Стадия 2
(3)-/т?ре/т?-Бутил-4-(((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)-метил)пиперидин-1 -карбоксилат
FMOC-хлорид (19 мг; 0,07 ммоль; 1,00 экв.) в диоксане (2,0 мл) по каплям добавляли к смеси (К)-/г?ре/г?-бутил-4-((3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (стадия 1; 40 мг; 0,07 ммоль; 1,0 экв.) и Ыа2СОз (12 мг; 0,11 ммоль; 1,5 экв.) в смеси вода/диоксан (1:2; 3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, экстрагировали этилацетатом (3x5 мл). Объединенные органические фазы сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителей в вакууме получали 42 мг (75%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z: 768 [М+Н]+.
Стадия 3
В круглодонную колбу емкостью 25 мл помещали раствор (S)-/r?pe/r?-бутил-4-(((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (стадия 2; 20 мг; 0,03 ммоль; 1,0 экв.) в смеси HCI/MeOH (4 М; 3 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. В результате получали 15 мг (86%) 9Н-флуорен-9-илметил-Ы-[(28)-3-[(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-ил)формамидо]-2-[(2-метилфенил)метил]пропил]-Ы-(пиперидин-4-илметил)карбамата в виде желтого твердого вещества.
LC/MS: m/z: 668 [М+Н]+.
Промежуточное соединение С
Гидрохлорид (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата
о ^/
Стадия 1
/т?ре/т?-Бутил-(2-(бензил(гексил)амино)этил)карбамат н
Ы-Бензилгексан-1-амин (2,69 г; 14,1 ммоль), /г?ре/г?-бутил-(2
оксоэтил)карбамат (4,48 г; 28,1 ммоль) и DIPEA (2,46 мл; 14,1 ммоль) растворяли в МеОН (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Добавляли цианоборгидрид натрия (1,77 г; 28,1 ммоль) и уксусную кислоту (0,806 мл; 14,1 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 18 ч. Реакционную смесь гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс (2x100 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на двух колонках Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 550% ЕЮАс в гептане в объеме 12 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая тре/г?-бутил-(2-(бензил(гексил)амино)этил)карбамат (3,19 г; 68%) в виде бесцветного масла. LC/MS: m/z: 335,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 0.84-0.92 (m, ЗН), 1.19-1.35 (m, 6Н), 1.38-1.66 (m, 11Н), 2.43 (t, 2Н), 2.52 (t, 2Н), 3.09-3.21 (m, 2Н), 3.56 (s, 2Н), 4.83-4.93 (m, 1Н), 7.22-7.37 (m, 5Н).
Стадия 2
/т?ре/т?-Бутил-(2-(гексиламино)этил)карбамат
/г?ре/г?-Бутил-(2-(бензил(гексил)амино)этил)карбамат (3,19 г; 9,54 ммоль) растворяли в МеОН (25 мл) и добавляли 20%-ный Pd(OH)2/C (0,201 г; 0,29 ммоль). Реакционную смесь гидрировали в гидрогенизаторе Buchi при 4 бар (0,4 МПа) и комнатной температуре в течение 18 ч. Затем реакцию останавливали. Добавляли дополнительное количество 20%-ного Pd(OH)2/C (200 мг; 0,28 ммоль) и гидрирование продолжали в течение 6 ч, затем гидрирование останавливали. Катализатор отфильтровывали, промывали МеОН и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в МеОН (15
мл), добавляли 20%-ный Ро!(ОН)2/С (250 мг; 0,36 ммоль) и гидрирование продолжали при 4 бар (0,4 МПа) и комнатной температуре в течение 16 ч. Катализатор отфильтровывали, промывали МеОН и фильтрат упаривали в вакууме. Содержимое реакционной смеси еще раз растворяли в МеОН, добавляли 20%-ный Ро!(ОН)2/С (250 мг; 0,36) и гидрирование продолжали в течение 3 суток. Катализатор отфильтровывали, промывали МеОН и фильтрат упаривали в вакууме, получая /г?ре/г?-бутил-(2-(гексиламино)этил)карбамат (2,38 г; 102%) в виде бесцветного масла.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 0.89 (t, ЗН), 1.22-1.36 (m, 6Н), 1.41-1.53 (m, 11Н), 2.61 (t, 2Н), 2.75 (t, 2Н), 3.19-3.28 (m, 2Н), 4.97 (bs, 1Н).
Стадия 3
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(2-((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)амино)этил)-(гексил)карбамат
В охлажденный в бане со льдом раствор /г?ре/г?-бутил-(2-(гексиламино)этил)карбамата (2,38 г; 9,74 ммоль) в DCM (40 мл) добавляли DIPEA (1,79 мл; 10,2 ммоль) и (9Н-флуорен-9-ил)метилхлорформиат (2,65 г; 10,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали с охлаждением в течение 10 мин и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду (20 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали DCM (2x20 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 5-30% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV, затем 30%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 264 нм. Собранные фракции упаривали в вакууме, получая (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)амино)этил)-(гексил)карбамат (3,70 г; 81%) в виде бесцветного масла.
LC/MS: m/z: 467,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 0.89 (t, ЗН), 1.06-1.36 (m, 8Н), 1.43 (s, 9Н), 2.78-2.87 (m, 1Н), 2.95-3.08 (m, 2Н), 3.11-3.36 (m, ЗН), 4.18-4.26 (m, 1Н), 4.49-4.63 (m, 2Н), 4.89 (bs, 1Н), 7.3-7.36 (m, 2Н), 7.41 (t, 2Н), 7.59 (d, 2Н), 7.77 (d, 2Н).
Стадия 4
Гидрохлорид (9Н-с|элуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата
Ацетилхлорид (2,84 мл; 40,0 ммоль) по каплям добавляли в охлажденный в бане со льдом флакон с МеОН (10 мл; 247 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин. Этот раствор затем добавляли к (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)амино)этил)(гексил)карбамату (3,7 г; 7,93 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Растворитель концентрировали в вакууме, получая гидрохлорид (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата (2,92 г; 91%) в виде белого твердого вещества.
LC/MS: m/z: 367,3 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-de) 5 0.82-0.97 (m, 4Н), 0.99-1.51 (m, 7Н), 2.682.88 (m, ЗН), 3.23-3.39 (m, ЗН), 4.23-4.4 (m, 2Н), 4.52 (d, 1Н), 7.29-7.37 (m, 2Н), 7.37-7.46 (m, 2Н), 7.64 (d, 2Н), 7.83-8.09 (m, 5Н).
Промежуточное соединение D
Стадия 1
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат
Метил-4-(2-гидроксиэтил)бензоат
4-(2-Гидроксиэтил)бензойную кислоту (2,41 г; 14,5 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) и добавляли H2SO4 (0,06 мл; 1,13 ммоль). Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе при 120°С в течение 1 ч и затем упаривали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (150 мл), промывали 8%-ным раствором ЫаНСОз (водн.) (150 мл), рассолом (50 мл), сушили с использованием фазового сепаратора и упаривали в вакууме, получая метил-4-(2-гидроксиэтил)бензоат (2,41 г; 92%) в виде бледного масла.
LC/MS: m/z: 181,0 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 2.94 (t, 2Н), 3.88-3.94 (m, 5Н), 7.32 (d, 2Н), 7.97-8.02 (т, 2Н). Стадия 2
Метил-4-(2-оксоэтил)бензоат
Метил-4-(2-гидроксиэтил)бензоат (2,41 г; 13,37 ммоль) растворяли в DCM (50 мл) и добавляли периодинан Десса-Мартина (6,24 г; 14,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем гасили, добавляя смесь (водн.) 3:2 15% ЫагЭгОз/МаНСОз (50 мл) и энергично перемешивали в течение 30 мин. Проводили разделение фаз и водную фазу экстрагировали DCM (2x50 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) КР-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 5-40% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV, затем 50%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 245 нм. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая метил-4-(2-оксоэтил)бензоат (0,880 г; 36,9%) в виде желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 3.78 (d, 2Н), 3.93 (s, ЗН), 7.29-7.34 (m, 2Н),
8.03-8.09 (m, 2H), 9.79 (t, 1H). Стадия 3
(8)-Метил-4-(2-((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензоат
(Рч)-3,5-Диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (промежуточное соединение А; 2,00 г; 5,56 ммоль), метил-4-(2-оксоэтил)бензоат (1,09 г; 6,12 ммоль) и DIPEA (0,971 мл; 5,56 ммоль) растворяли в МеОН (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (1,05 г; 16,7 ммоль) и уксусную кислоту (0,318 мл; 5,56 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакцию гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (100 мл), перемешивали в течение 30 мин и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (100 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом (50 мл), сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в DCM (20 мл) и добавляли ВОСгО (1,290 мл; 5,56 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5,5 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 10-80% ЕЮАс в гептане в объеме 10 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 270 нм. Фракции пика, соответствующего продукту, собирали и упаривали в вакууме, получая (8)-метил-4-(2-((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензоат (1,84 г; 54%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z: 611,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 1.36 (d, 9Н), 2.15-2.26 (m, 4Н), 2.45-2.49 (т,
2Н), 2.75 (t, 2Н), 2.93 (dd, 1Н), 3.01-3.4 (m, 5Н), 3.84 (s, ЗН), 6.97 (bs, 2Н), 7.057.17 (m, 4Н), 7.21 (d, 2Н), 7.82 (d, 2Н), 7.85-7.94 (m, 1Н). Стадия 4
(3)-4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензойная кислота
(8)-Метил-4-(2-((трет-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензоат (1,84 г; 2,56 ммоль) растворяли в МеОН (20 мл) и добавляли гидроксид натрия (3,37 мл; 12,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 суток. Затем растворитель (МеОН) выпаривали в вакууме. Добавляли воду (50 мл) и MeTHF (50 мл) и рН подводили до приблизительно 2, используя 3 М (водн.) раствор HCI. Проводили разделение фаз и водную фазу экстрагировали L-MeTHF (50 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме, получая (8)-4-(2-((трет-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензойную кислоту (1,53 г; 100%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z: 597,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-de) 5 1.33 (s, 9Н), 2.21 (d, 4Н), 2.38-2.49 (m, 2Н), 2.73 (t, 2Н), 2.83-3.43 (m, 6Н), 6.84-7.26 (m, 8Н), 7.78-7.98 (m, ЗН), 12.80 (bs, 1Н). Стадия 5
(3)-/т?ре/т?-Бутил-4-((2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(гексил)-амино)этил)карбамоил)фенетил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
(8)-4-(2-((тре/т?-Бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)этил)бензойную кислоту (1,24 г; 1,77 ммоль), тетрафторборат 2-(1 Н-бензо[о1][1,2,3]триазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилизоурония (0,623 г; 1,94 ммоль) и DIPEA (1,54 мл; 8,83 ммоль) растворяли в DCM (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, после чего добавляли гидрохлорид (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата (промежуточное соединение С, 0,95 г; 2,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч. Реакционную смесь промывали 8%-ным раствором ЫаНСОз (водн.) (150 мл). Водную фазу экстрагировали DCM (150 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 20-80% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV, затем 80%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая (8)-/г?ре/г?-бутил-4-((2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(гексил)амино)этил)карбамоил)фенетил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1,56 г; 93%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z: 945,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.82 (t, ЗН), 0.87-0.97 (m, 2Н), 1-1.27 (т, 5Н), 1.33 (s, 9Н), 1.38-1.47 (т, 1Н), 2.15-2.27 (т, 4Н), 2.45 (dd, 1Н), 2.69 (s, 2Н), 2.81-2.89 (т, 1Н), 2.9-3 (т, 1Н), 3.01-3.41 (т, 11Н), 4.15-4.27 (т, 2Н), 4.48 (d, 1Н), 6.96 (bs, 2Н), 7.05-7.18 (т, 6Н), 7.30 (t, 2Н), 7.39 (t, 2Н), 7.55-7.65 (т, 2Н), 7.71 (dd, 2Н), 7.8-7.97 (т, ЗН), 8.37-8.51 (т, 1Н).
Стадия 6
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)фенетил)карбамат
(8)-/г?ре/г?-Бутил-4-((2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(гексил)-амино)этил)карбамоил)фенетил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (1,59 г; 1,68 ммоль) растворяли в THF (15 мл) и добавляли пиперидин (1,67 мл; 16,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 4-8% (2 М аммиака в МеОН) в DCM в объеме 5 CV, затем 8%-ный (2 М аммиак в МеОН) в DCM в объеме 10 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая (8)-/г?ре/г?-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)-карбамоил)фенетил)карбамат (1,03 г; 85%) в виде бледного твердого вещества.
LC/MS: m/z: 723,6 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.84 (t, ЗН), 1.19-1.44 (m, 17Н), 2.15-2.29 (m, 4Н), 2.45 (dd, 1Н), 2.54 (t, 2Н), 2.65-2.75 (m, 4Н), 2.94 (dd, 1Н), 3.02-3.18 (m, 2Н), 3.18-3.3 (m, ЗН), 3.3-3.4 (m, 4Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.05-7.2 (m, 7Н), 7.73 (d, 2Н), 7.79-7.97 (m, 1Н), 8.32 (t, 1Н).
Промежуточное соединение Е
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
Стадия 1
(8)-Метил-4-(((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензоат
(Рч)-3,5-Диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (промежуточное соединение А; 2,17 г; 6,22 ммоль), метил-4-формилбензоат (1,12 г; 6,84 ммоль) и DIPEA (1,09 мл; 6,22 ммоль) растворяли в МеОН (15 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,782 г; 12,4 ммоль) и уксусную кислоту (0,392 мл; 6,84 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Если мониторинг с использованием LCMS-анализа показывал неполное превращение в продукт, то добавляли метил-4-формилбензоат (200 мг; 1,22 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 3 ч. Затем снова добавляли метил-4-формилбензоат (200 мг; 1,22 ммоль) и цианоборгидрид натрия (200 мг; 3,18 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 18 ч. Реакцию гасили добавлением 8%-ного (водн.) раствора ЫаНСОз. Растворитель концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ЕЮАс (250 мл) и 8%-ном (водн.) растворе Ыа2СОз (250 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (250 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Ma2S04
(тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в DCM (50 мл), добавляли ВОСгО (1,63 г; 7,46 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме и затем очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 2080% ЕЮАс в гептане в объеме 12 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 265 нм. Фракции пика, соответствующего продукту, упаривали в вакууме, получая (8)-метил-4-(((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)-метил)бензоат (2,85 г; 77%) в виде твердого вещества. LC/MS: m/z: 597,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.36 (d, 9Н), 2.21 (s, ЗН), 2.24-2.38 (m, 1Н), 2.45-2.57 (m, 2Н), 2.95-3.3 (m, 4Н), 3.83 (s, ЗН), 4.33-4.51 (m, 2Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.17 (m, 4Н), 7.22 (d, 2Н), 7.76-7.96 (m, ЗН).
Стадия 2
(3)-4-(((/т?ре/т?-Бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензойная кислота
(8)-Метил-4-(((тре/т?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензоат (2,85 г; 4,77 ммоль) растворяли в МеОН (40 мл) и добавляли 3,8 М раствор гидроксида натрия (6,28 мл; 23,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч и затем растворитель (МеОН) концентрировали в вакууме. Добавляли воду (75 мл) и MeTHF (75 мл) и рН подводили до значения приблизительно 2, используя 3 М раствор HCI (водн.). Проводили разделение фаз и водную фазу экстрагировали MeTHF (75 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием фазового сепаратора и упаривали в вакууме, получая (8)-4-(((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино
6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)-бензойную кислоту (2,75 г; 99%) в виде твердого вещества. LC/MS: m/z: 583,4 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-cfe) 5 1.32-1.42 (m, 9Н), 2.20 (s, ЗН), 2.24-2.38 (m, 1Н), 2.5-2.55 (m, 2Н), 2.92-3.36 (m, 4Н), 4.27-4.54 (m, 2Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.03-7.17 (m, 4Н), 7.19 (d, 2Н), 7.78-8 (m, ЗН), 12.85 (bs, 1Н).
Стадия 3
(8)-трет-Бутил-4-((2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(гексил)амино)этил)карбамоил)бензил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
(Э)-4-(((трет-Бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензойную кислоту (1,61 г; 2,76 ммоль), тетрафторборат 2-(1 H-6eH3o[d][1,2,3]триазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилизоурония (0,975 г; 3,04 ммоль) и DIPEA (2,41 мл; 13,8 ммоль) растворяли в DCM (150 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, после чего добавляли гидрохлорид (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата (промежуточное соединение С; 1,48 г; 3,31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Реакционную смесь промывали 8%-ным раствором ЫаНСОз (водн.) (100 мл). Водную фазу экстрагировали DCM (100 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 20-80% ЕЮАс в гептане в объеме 12 CV, затем 80%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая (8)-тре/г?-бутил-4-((2-((((9Н-флуорен
9-ил)метокси)-карбонил)(гексил)амино)этил)карбамоил)бензил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (2,38 г; 93%) в виде бледного твердого вещества. LC/MS: m/z: 931,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.82 (t, ЗН), 0.86-0.96 (m, 1Н), 0.99-1.27 (т, 6Н), 1.27-1.48 (т, ЮН), 2.19 (s, ЗН), 2.23-2.35 (т, 1Н), 2.45-2.54 (т, 2Н), 2.8-2.9 (т, 1Н), 2.9-3.05 (т, 1Н), 3.05-3.38 (т, 8Н), 4.16-4.32 (т, ЗН), 4.39-4.56 (т, 2Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.02-7.18 (т, 6Н), 7.30 (t, 2Н), 7.39 (t, 2Н), 7.60 (t, 2Н), 7.64-7.76 (т, 2Н), 7.78-7.99 (т, ЗН), 8.37-8.52 (т, 1Н).
Стадия 4
(3)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
Хиральный
(8)-трет-Бутил-4-((2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(гексил)амино)этил)карбамоил)бензил(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (2,38 г; 2,55 ммоль) растворяли в THF (25 мл) и добавляли пиперидин (2,53 мл; 25,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 2,5-8% (2 М аммиака в МеОН) в DCM в объеме 9 CV, затем 8%-ный (2 М аммиак в МеОН) в DCM в объеме 3 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая (8)-/г?ре/г?-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат (1,60 г; 88%) в виде бледного
твердого вещества.
LC/MS: m/z: 709,5 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 0.84 (t, ЗН), 1.17-1.31 (m, 6Н), 1.31-1.45 (m, 11Н), 2.20 (s, ЗН), 2.24-2.37 (m, 1Н), 2.51-2.57 (m, ЗН), 2.68 (t, 2Н), 2.91-3.06 (m, 1Н), 3.06-3.4 (m, 6Н), 4.23-4.36 (m, 1Н), 4.4-4.53 (m, 1Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.19 (m, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.79-7.98 (m, 1Н), 8.28-8.35 (m, 1Н).
Промежуточное соединение F
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3-(4-формилпиперидин-1-ил)-3-оксопропил)-карбамат
Стадия 1
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-3-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил)-3-оксопропилкарбамат
К перемешиваемому раствору пиперидин-4-илметанола (200 мг; 1,74 ммоль), 3-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)пропановой кислоты (541 мг; 1,74 ммоль) и HATU (660 мг; 1,74 ммоль) в безводном DMF (5 мл) добавляли DIPEA (0,910 мл; 5,21 ммоль). Желтую смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (50 мл) и промывали 15%-ным водн. раствором NaCI (50 мл) и 30%-ным водн. NaCI раствором (50 мл). Растворители выпаривали и остаток очищали препаративной HPLC. После проведения сублимационной сушки остаток перерастворяли в DCM и добавляли гептан. После упаривания
получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (378 мг; 53%).
LC/MS: m/z: 409 [М+Н]+.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO) d 0.88-1.09 (m, 2Н), 1.51-1.73 (m, ЗН), 2.44 (t, 2Н), 2.47-2.52 (m, 1Н + пик от DMSO), 2.93 (t, 1Н), 3.18 (dd, 2Н), 3.23 (d, 2Н), 3.80 (d, 1Н), 4.20 (t, 1Н), 4.29 (d, 2Н), 4.37 (d, 1Н), 7.21 (t, 1Н), 7.33 (dt, 2Н), 7.41 (t, 2Н), 7.68 (d, 2Н), 7.89 (d, 2Н).
Стадия 2
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(3-(4-формилпиперидин-1-ил)-3-оксопропил)-карбамат
К раствору (9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1 -ил)-3-оксопропилкарбамата (362 мг; 0,89 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли твердый периодинан Десса-Мартина (413 мг; 0,97 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2,5 ч. К реакционной смеси добавляли 10%-ный раствор ЫагЗгОз (3 мл), 10%-ный раствор ЫаНСОз (3 мл) и DCM (2 мл), смесь энергично перемешивали в течение 10 мин и оставляли отстаиваться. Слои разделяли и водную фазу, содержащую нерастворимые соли, повторно экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы сушили над MgS04, фильтровали и растворители выпаривали, получая неочищенный продукт (440 мг), который использовали без дополнительной очистки.
LC/MS: m/z: 407 [М+Н]+.
Промежуточное соединение G
(К)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
Стадия 1
(Р0-Аллил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
(3,5-Диамино-6-хлорпиразин-2-ил)(1 Н-имидазол-1-ил)метанон (858 мг; 3,59 ммоль) и (Рч)-аллил-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (промежуточное соединение А, стадия 5) (990 мг; 3,77 ммоль) суспендировали в NMP (15 мл) и нагревали до 100°С в течение 4 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Добавляли ЕЮАс (50 мл) и воду (50 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x50 мл). Объединенные органические фазы промывали 0,1 М раствором HCI (водн.) (50 мл), водой (2x50 мл), рассолом (50 мл), сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 20-80% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 270 нм. Собиранные фракции объединяли и упаривали в вакууме, получая (Рч)-аллил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)-карбамат (714 мг; 45,9%) в виде бледного твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.9-2.02 (m, 1Н), 2.23 (s, ЗН), 2.41-2.55 (m, 2Н), 2.91-3.09 (m, 2Н), 3.12-3.23 (m, 2Н), 4.48 (d, 2Н), 5.17 (d, 1Н), 5.24-5.32 (m,
1Н), 5.85-5.96 (m, 1Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.15 (m, ЗН), 7.21-7.25 (m, 1Н), 7.28 (t, 1Н), 8.00 (t, 1Н).
LC/MS: m/z 433,3 [M+H]+.
Стадия 2
(8)-3,5-Диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
(Рч)-Аллил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат (694 мг; 1,60 ммоль), 1,3-диметилпиримидин-2,4,6(1 Н,ЗН,5Н)-трион (688 мг; 4,41 ммоль), ацетат палладия(И) (14,4 мг; 0,06 ммоль) и трифенилфосфин (50,5 мг; 0,19 ммоль) растворяли в DCM (7 мл) и нагревали до 35°С в течение 1,5 ч. Образовывалась суспензия. Добавляли DCM (50 мл) и 5%-ный (водн.) раствор Ыа2СОз (50 мл) и смесь перемешивали в течение 15 мин. Проводили разделение фаз и водную фазу экстрагировали DCM (50 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Соединение очищали препаративной HPLC на колонке Kromasil С8 (10 мкм, 250x50 мм внутр. диам.), используя градиент 545% ацетонитрила в буферной смеси 95/5/0,2 H20/MeCN/AcOH в течение 20 минут при скорости потока 100 мл/мин. Детекцию соединений проводили в УФ при 270 нм. Содержащие продукт фракции собирали и подвергали сублимационной сушке, получая 586 мг соли уксусной кислоты. Эту соль перемешивали в ЕЮАс (50 мл) и 5%-ном (водн.) растворе ЫагСОз в течение 15 мин и затем проводили разделение слоев. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (3x50 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме, получая (8)-3,5-диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (411 мг; 73,5%) в виде светло-желтого твердого вещества. Хиральная чистота: ее 60%; определена с использованием колонки для хиральной SFC: Chiralpak 1С
(150x4,6 мм), размер частиц 3 мкм, подвижная фаза: 20% MeOH/DEA (100:0,5) в СОг, 120 бар (12 МПа), скорость потока 4 мл/мин.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.73 (bs, 2Н), 2.01-2.12 (m, 1Н), 2.50 (s, ЗН), 2.64-2.73 (m, 2Н), 2.76-2.86 (m, 2Н), 3.4-3.53 (m, 2Н), 7.19 (bs, 2Н), 7.28-7.41 (m, 4Н), 8.39 (t, 1Н).
LC/MS: m/z 349,2 [М+Н]+.
Стадия 3
(К)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбамат
(8)-3,5-Диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (1,19 г; 3,41 ммоль), ВОС20 (0,871 мл; 3,75 ммоль) и DIPEA (0,596 мл; 3,41 ммоль) растворяли в DCM (100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь промывали 0,1 М раствором HCI (водн.), сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 3070% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV, затем 70%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 268 нм. Продукт упаривали в вакууме, получая (1,150 г; 75%) в виде бледного твердого вещества.
Энантиомер очищали, используя препаративную хиральную HPLC (колонка: Chiralpak AY (250x20 мм), размер частиц 20 мкм, подвижная фаза: смесь 20/80:0,1 гептан/ЕЮН/ТЕА, скорость потока 120 мл/мин). Элюирующееся первым соединение собирали, получая 866 мг вещества; хиральная чистота: ее
98,6%. Оптическое вращение[af° =-6 (ацетонитрил, с = 1).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.38 (d, 9Н), 1.88-2 (m, 1Н), 2.23 (s, ЗН), 2.39-2.49 (m, 2Н), 2.83-2.93 (m, 1Н), 2.93-3.03 (m, 1Н), 3.09-3.23 (m, 2Н), 6.89 (t, 1Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.04-7.15 (m, ЗН), 7.22 (d, 1Н), 8.01 (t, 1Н).
LC/MS: m/z 449,2 [M+H]+. Стадия 4
(5)-3,5-Диамино-1Ч-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид
Ацетилхлорид (1,422 мл; 20 ммоль) по каплям добавляли в охлажденную в бане со льдом колбу с МеОН (5 мл; 123,59 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 мин и затем добавляли в колбу с (Рч)-/г?ре/77-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)карбаматом (866 мг; 1,93 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин и затем упаривали в вакууме. Остаток перемешивали в ЕЮАс (125 мл) и 8%-ном (водн.) растворе NaHC03 (125 мл) в течение 15 мин. Проводили разделение фаз и водную фазу экстрагировали ЕЮАс (3x125 мл). Объединенные органические фазы сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме, получая (8)-3,5-диамино-Ы-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (459 мг; 68,2%) в виде бледного твердого вещества. Хиральная чистота: ее 99%; определена с использованием колонки для хиральной SFC: Lux С4 (150x4,6 мм), размер частиц 3 мкм, подвижная фаза: 35% EtOH/NH3 (100:0,5) в С02, 120 бар (12 МПа), скорость потока 4 мл/мин. Оптическое вращение [aЈ°=-45,9 (CHCI3, с =
1).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-de) 5 1.57 (bs, 2Н), 1.78-1.88 (m, 1Н), 2.26 (s, ЗН), 2.39-2.48 (m, 2Н), 2.52-2.62 (m, 2Н), 3.18-3.28 (m, 2Н), 6.95 (bs, 2Н), 7.04-7.17 (m, 4Н), 8.14 (t, 1Н).
LC/MS: m/z 349,2 [М+Н]+.
Стадия 5
(К)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(2-(4-(((/т?ре/т?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензамидо)этил)(гексил)карбамат
(8)-3,5-Диамино-1\1-(3-амино-2-(2-метилбензил)пропил)-6-хлорпиразин-2-карбоксамид (215 мг; 0,62 ммоль), (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-(4-формилбензамидо)этил)(гексил)карбамат (промежуточное соединение Н) (293 мг; 0,59 ммоль) и DIPEA (0,103 мл; 0,59 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (38,8 мг; 0,62 ммоль) и уксусную кислоту (0,101 мл; 1,76 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили, добавляя 8%-ный (водн.) раствор NaHC03. Добавляли DCM (25 мл) и 8%-ный (водн.) раствор ЫаНСОз (25 мл), встряхивали и проводили разделение фаз. Водную фазу экстрагировали DCM (25 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя фазовый сепаратор, и упаривали в вакууме.
Остаток и ВОС20 (0,150 мл; 0,65 ммоль) растворяли в DCM (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Продукт очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (50 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 50-100% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 265 нм. Содержащие продукт фракции упаривали в вакууме, получая (К)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-(4-(((/г?ре/г?-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)метил)бензамидо)этил)(гексил)карбамат (511 мг; 93%) в виде бесцветной пленки.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.82 (t, ЗН), 0.87-0.96 (m, 1Н), 0.99-1.26 (т, 6Н), 1.27-1.5 (т, ЮН), 2.19 (s, ЗН), 2.23-2.35 (т, 1Н), 2.8-2.9 (т, 1Н), 2.9-3.04 (т, 1Н), 3.05-3.39 (т, ЮН), 4.16-4.32 (т, ЗН), 4.39-4.57 (т, 2Н), 6.88-7.18 (т, 8Н), 7.30 (t, 2Н), 7.39 (t, 2Н), 7.55-7.76 (т, 4Н), 7.77-7.99 (т, ЗН), 8.37-8.52 (т, 1Н).
LC/MS: m/z 931,4 [М+Н]+.
Стадия 6
(К)-/т?ре/т?-Бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)карбамоил)бензил)карбамат
(К)-(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(2-(4-(((трет-бутоксикарбонил)(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)амино)-метил)бензамидо)этил)(гексил)карбамат (511 мг; 0,55 ммоль) растворяли в THF (5 мл) и добавляли пиперидин (0,543 мл; 5,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (50 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 2,5-8% (2 М аммиака в МеОН) в DCM в объеме 9 CV, затем 8%-ный (2 М аммиак в МеОН) в DCM в объеме 3 CV. Продукт собирали и упаривали в вакууме, получая (К)-/г?ре/г?-бутил-(3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропил)(4-((2-(гексиламино)этил)-карбамоил)бензил)карбамат (326 мг; 84%) в виде бледного твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-сУе) 5 0.84 (t, ЗН), 1.12-1.45 (m, 17Н), 2.20 (s, ЗН), 2.24-2.36 (т, 1Н), 2.51-2.58 (т, 2Н), 2.69 (t, 2Н), 2.92-3.05 (т, 1Н), 3.05-3.4 (т, 7Н), 4.22-4.37 (т, 1Н), 4.38-4.54 (т, 1Н), 6.97 (bs, 2Н), 7.03-7.18 (т, 6Н), 7.72 (d, 2Н), 7.79-7.98 (т, 1Н), 8.28-8.35 (т, 1Н).
LC/MS: m/z 709,4 [М+Н]+.
Промежуточное соединение Н
(9Н-Флуорен-9-ил)метил-(2-(4-формилбензамидо)этил)(гексил)карбамат
4-Формилбензойную кислоту (0,81 г; 5,40 ммоль) и 4-метилморфолин (1,424 мл; 12,95 ммоль) растворяли в THF (10 мл) и охлаждали в бане со льдом. По каплям добавляли изобутилхлорформиат (0,700 мл; 5,40 ммоль), смесь перемешивали в течение 30 мин и добавляли гидрохлорид (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-аминоэтил)(гексил)карбамата (промежуточное соединение С) (1,739 г; 4,32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Полученную суспензию экстрагировали ЕЮАс (50 мл) и водой (50 мл). Органическую фазу промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты (2x50 мл), 10%-ным раствором Ыа2СОз (водн.) (50 мл), рассолом (50 мл), сушили с использованием Na2S04 (тверд.), фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток очищали автоматизированной флэш-хроматографией на колонке Biotage(r) KP-SIL (100 г). В качестве подвижной фазы использовали градиент 20-80% ЕЮАс в гептане в объеме 9 CV, затем 80%-ный ЕЮАс в гептане в объеме 3 CV. Продукт собирали, используя для детекции длину волны 260 нм. Фракции пиков, соответствующих продукту, упаривали в вакууме, получая (9Н-флуорен-9-ил)метил-(2-(4-формилбензамидо)этил)(гексил)карбамат (1,690 г; 79%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCI3) 5 0.82-0.95 (m, ЗН), 1.08-1.46 (m, 8Н), 3.02-3.21 (m, ЗН), 3.48-3.64 (m, ЗН), 4.16-4.25 (m, 1Н), 4.51-4.74 (m, 2Н), 7.2-7.42 (m, 5Н), 7.5-7.67 (m, ЗН), 7.75 (d, 2Н), 7.93 (q, ЗН), 10.06 (s, 1Н).
LC/MS: m/z 499,5 [М+Н]+.
Промежуточное соединение I
4-Формил-Ы-(2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)-этил)бензамид
В снабженную фланцем колбу емкостью 10 л загружали гексиламин (1020 мл; 7,76 моль), Na2C03 (206 г; 1,94 моль) и MeCN (2560 мл). Смесь нагревали до 70°С в течение 1 ч. В эту смесь медленно в течение 1,5 ч загружали раствор /77ре/г?-бутил-2-бромэтилкарбамата (371,3 г; 289,6 г по активному ингредиенту; 1,29 моль) в MeCN (740 мл). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 50°С и концентрировали в вакууме. К перемешиваемому остатку добавляли воду (2100 мл) и ЕЮАс (4200 мл). Проводили разделение слоев и органические фазы промывали водой (3 х 2100 мл). Органические фазы концентрировали в вакууме и азеотропно отгоняли последовательно с водой (3 х 870 мл) и ЕЮН (3 х 870 мл), получая за 1-ую стадию 368,6 г вещества (315,8 г по активному ингредиенту; количественный выход) в виде прозрачного масла.
1Н-ЯМР (270 МГц, CDCI3l) 5 4.95 (1Н, br s), 3.29-3.19 (m, 2Н), 2.71 (t, 2Н), 2.58 (t, 2Н), 1.50-1.40 (br. m, 11Н), 1.35-1.23 (m, 6Н), 0.89 (t, ЗН).
LC/MS: m/z 245 [M+H]+.
Стадия 2
/т?ре/т?-Бутил-2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)-этилкарбамат
ОН OH
н н
В снабженную фланцем колбу емкостью 10 л загружали D-ксилозу (124,3 г; 0,83 моль), /г?ре/г?-бутил-2-(гексиламино)этилкарбамат (стадия 1; 181,8 г; 155,8 г по активному ингредиенту; 0,49 моль), ЕЮН (5000 мл) и DIPEA (110,8 мл; 0,64 моль). Смесь нагревали до 35°С в течение 1 ч до полного растворения. В этот раствор загружали АсОН (36,5 мл; 0,64 моль) и полученную смесь перемешивали при 35°С в течение 15 мин. В нее порциями в течение 5 мин при 35°С загружали NaCNBH3 (56,1 г; 0,89 моль). Не отмечали никакого экзотермического эффекта или выделения газа. Реакционную смесь перемешивали при 35°С в течение ночи. В нее загружали NaCNBH3 (8,0 г; 0,13 моль) и перемешивали при 35°С в течение 3 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры в течение ночи. В эту смесь в течение 10 мин загружали насыщ. водн. раствор ЫаНСОз (1600 мл); наблюдали слабый экзотермический эффект. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение выходных. ЕЮН удаляли в вакууме и все это объединяли со второй партией такого же масштаба (181,8 г со стадии 1) для обработки. В смесь загружали NaCI (311 г). Органические фазы экстрагировали смесью 10% MeOH/DCM (3 х 3000 мл) и объединенные органические фазы концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали хроматографией (ЭЮг, 7 кг), загружая и упаковывая в колонку,_и элюировали смесью 5% MeOH/DCM + 0,2% 7 н. NH3 в МеОН (35 л), 50% MeOH/DCM + 0,2% 7 н. NH3 в МеОН (75 л), далее промывая смесью 65% MeOH/DCM + 0,2% 7 н. NH3 в МеОН (20 л). Фракции, содержащие продукт, объединяли, упаривали в вакууме и азеотропно отгоняли с МеОН (2 х 500 мл), получая 387 г (366 г по активному ингредиенту, 76%) указанного в подзаголовке соединения в виде желтого смолообразного вещества.
1Н-ЯМР (270 МГц, DMSO-сУе) 5 6.80 (br.s, 1Н), 4.80-4.30 (br. m, ЗН), 4.224.05 (br. m, 1Н), 3.74-3.60 (br. m, 1H), 3.59-3.48 (m, 1H), 3.47-3.20 (m, 6H), 3.082.87 (br. m, 2H), 2.70-2.45 (br. m, 3H), 1.51-1.35 (m, 10H), 1.32-1.16 (m, 7H), 0.85 (t, 3H).
LC/MS: m/z 401 [M+H]+.
Стадия 3
H2N
(2КЗК48)-5-((2-Аминоэтил)(гексил)амино)пентан-1,2,3,4-тетраол
трет-бутил-2-(гексил((28,ЗРч,4Рч)-2,3,4,5-
тетрагидроксипентил)амино)этилкарбамата (стадия 2; 365 г; 345 г по активному ингредиенту; 0,91 моль) в МеОН (520 мл) при комнатной температуре в течение 30 мин загружали 4 М раствор HCI в диоксане (1710 мл; 6,84 моль), поддерживая температуру меньше 31 °С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, получая 485,1 г (306 г по активному ингредиенту; 95%) указанного в подзаголовке соединения в виде пурпурно-черного смолообразного вещества.
1Н-ЯМР (270 МГц, DMSO-сУе) 5 8.41 (br. s, ЗН), 4.20-3.00 (br. m, 16Н), 1.771.62 (br. m, 2H), 1.37-1.17 (br. m, 6H), 0.87 (br. t, 3H).
MS ES: m/z 279 [M+H]+.
Стадия 4
4-Формил-Ы-(2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)-этил)бензамид
В снабженную фланцем колбу емкостью 5 л при комнатной температуре загружали 4-формилбензойную кислоту (107,6 г; 0,72 моль) и DMF (1400 мл). В эту же колбу загружали 4-метилморфолин (255,5 мл; 2,3 моль). Смесь охлаждали до -15°С в течение 5 мин. В нее загружали изобутилхлорформиат (93,4 мл; 0,71 моль) в течение 15 мин, поддерживая температуру реакционной
смеси меньше -10°С. Реакционную смесь перемешивали при температуре от -10°С до -15°С в течение 1 ч. В отдельной колбе растворяли (2R,3R,4S)-5-((2-аминоэтил)(гексил)амино)пентан-1,2,3,4-тетраол (стадия 3; 383,9 г; 245,7 г по активному ингредиенту; 0,71 моль) в DMF (1400 мл) и 4-метилморфолине (123 мл; 1,1 моль) при 45°С в течение 1 ч. В перемешиваемую содержащую ангидрид смесь в течение 15 мин загружали смесь со стадии 3, поддерживая температуру реакционной смеси меньше -5°С. Полученную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. В реакционную смесь медленно в течение 30 мин загружали насыщ. водн. раствор ЫаНСОз (2500 мл). Полученную смесь концентрировали в вакууме. К остатку добавляли насыщ. водн. раствор ЫаНСОз (1200 мл) и перемешивали вместе с DCM (4900 мл) в течение 10 мин при КТ. Проводили разделение слоев и водный слой экстрагировали смесью 13% MeOH/DCM (2870 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщ. водн. раствором ЫаНСОз (1200 мл) и концентрировали в вакууме, получая 395,3 г вещества. Остаток объединяли с 10 г неочищенного вещества, извлеченного из реакционной смеси промежуточного масштаба, и очищали хроматографией (на ЭЮг, 3 кг; загруженном в 5% MeOH/DCM и внесенным вместе с этим остатком на колонку; с элюированием смесью 5% MeOH/DCM (30 л), 10% MeOH/DCM (20 л), 20% MeOH/DCM (10 л), 30% MeOH/DCM (30 л), 40% MeOH/DCM (20 л) и 100% МеОН (80 л)). Содержащие продукт фракции объединяли (100 л) и концентрировали в вакууме, получая 138,4 г (112 г по активному ингредиенту, выход 39%) указанного в подзаголовке соединения. 1Н-ЯМР показал 81,4 масс./масс.% активного вещества при наличии приблизительно 5,5% оставшейся примеси формилбензамида. Чистота по данным анализа с применением HPLC-MS составляла 97,4%. Смешанные фракции (20 л) объединяли и концентрировали в вакууме, получая 46 г вещества с чистотой 74,5% по данным HPLC. Его повторно очищали хроматографией (ЭЮг; 600 г) с элюированием смесью 10%-30% MeOH/DCM (18 л). Содержащие продукт фракции объединяли и концентрировали в вакууме, получая дополнительно 21,0 г (20,3 г по активному ингредиенту; 44%) указанного в подзаголовке соединения.
1Н-ЯМР (270 МГц, DMSO-сУе): 5 10.08 (s, 1Н), 8.60 (t, 1Н), 8.02 (d, 2Н), 7.97 (d, 2Н), 4.70-4.20 (br. m, 4Н), 3.66-3.52 (m, 2Н), 3.46-3.34 (m, 8Н), 2.65-2.58 (m, 2Н), 2.51-2.44 (m, 2Н), 1.40-1.28 (br. m, 2H), 1.19-1.08 (m, 6H), 0.79 (t, ЗН).
LC/MS: m/z 411 [M+H]+.
Ферментативная десимметризация 2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диамина
Ферментативную десимметризацию 2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диамина изучали, используя диаллилкарбонат и ряд иммобилизованных липаз.
Скрининг иммобилизованных липаз. К раствору 2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диамина (0,60 г; 3,37 ммоль) в 1,4-диоксане (30 мл) добавляли диаллилкарбонат (0,507 мл; 3,53 ммоль). Аликвоты этого раствора по 1,0 мл добавляли в пробирки с завинчивающимися крышками емкостью 10 мл, содержащие ферменты (0,02 г), описанные в Таблице 1. Пробирки встряхивали со скоростью 500 об./мин при 30°С в течение 3 суток. Из каждой пробирки отбирали образец и анализировали обращенно-фазовой HPLC (4,6 х 50 мм, Thermoquest Hypercarb, детекция в УФ при 260 нм) и хиральной HPLC (4,6 х 250 мм, Chiralpak IC3, детекция в УФ при 260 нм).
Через 3 суток продемонстрировано превращение в продукт более чем на 20% при использовании шести из подвергнутых скринингу липаз (Таблица 1).
Соотношения R/S указаны в виде выраженной в % площади для R-энантиомера, деленной на выраженную в % площадь для S-энантиомера, согласно данным хиральной HPLC.
Скрининг растворителей с липазой PS-IM Amano. Скрининг растворителей с липазой PS-IM Amano проводили, используя 20 относительных объемов растворителей с 1,1 эквивалента диаллилкарбоната, 1 масс-эквивалентом липазы PS-IM Amano и 0,1 г 2-(2-метилбензил)пропан-1,3-диамина. Через 6 суток при 30°С экспериментальные образцы анализировали с использованием тех же методов, которые описаны для скрининга липаз (Таблица 2). 2-(2-Метилбензил)пропан-1,3-диамин не очень хорошо растворялся в таких неполярных растворителях, как метил-тре/тьбутиловый эфир, гептаны и циклогексан. Однако, добавление THF в каждый из этих растворителей способствовало растворению этого диамина, и были протестированы смеси указанных выше растворителей в соотношении 1:1. Полученные результаты дали основание считать, что использование 2-MeTHF обеспечивало наилучшую энантиоселективность, несмотря на некоторую фоновую реакцию. Чтобы свести к минимуму такое фоновое карбоксилирование в 2-MeTHF, проводили эксперимент в масштабе нескольких граммов при 30°С, используя избыток липазы PS-IM Amano (3 масс-эквивалента иммобилизованной липазы, 1,2 эквивалента диаллилкарбоната, 20 об. 2-MeTHF). Реакцию проводили до полного завершения в течение 3 суток и после обработки выделяли неочищенный (Я?)-моноаллилкарбамат 1-(Я?) с ее 85%. Превращение неочищенного продукта в соответствующую соль, D-тартрат, в этаноле повышало энантиомерный избыток до 91,0% (общий выход из диамина составлял 58%).
Превращение в моноаллилкарбамат указано в виде выраженной в % площади согласно данным HPLC.
Соотношения R/S указаны в виде выраженной в % площади для R-энантиомера, деленной на выраженную в % площадь для S-энантиомера, согласно данным хиральной HPLC.
Тестирование натриевых каналов ENaC с использованием камеры Уссинга
Первичные клетки эпителия бронхов человека, подвергнутые дифференцировке на границе раздела водной и воздушной сред (ALI) на проницаемых подложках Snapwell (MatTek Corporation, MA, USA, номер по каталогу AIR-100-SNP), поддерживали при культивировании на ALI в инкубаторе с увлажнением при 37°С и 5% СОг. Базолатеральную среду (№ AIR-100-MM-ASY № по каталогу MatTek Corporation, MA, USA) заменяли каждые двое суток. Слизь или жидкость, образующиеся с апикальной стороны, аккуратно отсасывали каждые двое суток для поддержания жизнеспособности и продуктивности клеток.
Измеряли трансэпителиальную разность потенциалов между люминальной/апикальной и базолатеральной мембраной в камере Уссинга, состоящей из вертикальных камер Уссинга собственного изготовления, устройств DVC-1000 с фиксацией напряжения и тока (V/C) с предусилителями (World Precision Instruments), наборов электродов (ЕК1, World Precision Instruments), системы Power Lab с программным обеспечением Chart5, водяной бани с внешней циркуляцией и распределением газообразного карбогена и системы контроля. Электроды, используемые в этой установке, готовили вручную, используя 4%-ную агарозу в 0,9%-ном стерильном растворе NaCI в соответствии с рекомендацией производителя.
Камеры Уссинга собирали, используя незаполненную мембрану Snapwell (Costar 3407) и электроды, содержащиеся в буфере Кребса (№ К3753 по каталогу SIGMA-ALDRICH), и выдерживали в течение одного часа при 37°С в атмосфере 95% кислорода и 5% углекислого газа. После этой стадии уравновешивания система была сбалансирована по гидродинамическому сопротивлению и входному смещению.
Перед экспериментом все ALI-культуры оценивали в отношении трансэпителиального электрического сопротивления (TEER), применяя
устройство EndOhm (World Precision Instruments), при этом использовали клетки, демонстрирующие сопротивление в диапазоне 400-600 Ом.
Уравновешенные камеры повторно собирали, используя Snapwell с ALI-клетками, и спустя 20 минут стабилизации добавляли кумулятивные дозы соединений с апикальной стороны мембраны. После введения последней дозы добавляли 10 мкМ бензамил для достижения максимума.
Все тестируемые соединения, включая референсное соединение, разбавляли, исходя из 10 мМ концентрированных растворов в 100%-ном DMSO, и добавляли в непрозрачные 96-луночные планшеты (Greiner, № по каталогу 651201). Готовили серии разведений, состоящие из 12 доз в DMSO, начиная с концентрации 3 мкМ, с последующими стадиями разведения в 10 раз.
Для измерения величины тока короткого замыкания после добавления каждого из соединений использовали программное обеспечение Chart5 для Windows. Данные переносили в Excel и анализировали с применением программы ХШ(r) 5.2 от IDBS (ID Business Solutions Ltd). Молярную концентрацию тестируемого или референсного соединения, вызывающую 50%-ное ингибирование (IC50 по кривой), получали путем аппроксимации данных к 4-параметрической логистической функции вида:
у = (А+((В-А)/(1+(((10лС)/х)лО)))), где
А представляет собой нижнее плато кривой, т.е. конечное минимальное значение величины у;
В представляет собой верхнее плато кривой, т.е. конечное максимальное значение величины у;
С представляет собой значение log10x при значении у, равном 50%;
D представляет собой угловой коэффициент Хилла;
х представляет собой известные значения х.
В Таблице 3 показаны значения pICso для соединений примеров 1-14. Таблица 3
№ примера
plC50
№ примера
plC50
9,5
9,5
8,6
8,6
10,1
8,6
9,2
8,8
9,0
9,6
9,5
10,1
8,9
7,5
Оценка проницаемости слизистой оболочки кишечника с использованием монослоя клеток Сасо2
Клетки Сасо2 выращивают в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) на вставках для 96-луночных планшетов с мембранами из поликарбоната Transwell в течение 15 суток до достижения состояния конфлюентности и дифференцировки. После оценки целостности посредством измерения электрического сопротивления через монослой, клетки дважды промывают HBSS (25 мМ HEPES, рН 7,4) и инкубируют при 37°С в течение 30 мин.
Концентрированные растворы тестируемых соединений в DMSO разбавляют HBSS (содержащим 100 мкМ люцифер желтый) до достижения конечной концентрации 10 мкМ; все инкубации проводят в двух повторах. Чтобы определить скорость транспорта лекарственного средства в направлении от апикальной (А) стороны к базолатеральной (В) (от А к В), в апикальный компартмент вставки Transwell добавляют по 100 мкл растворов тестируемых соединений. Базолатеральный компартмент заполняют 300 мкл HBSS.
Для оценки транспорта в направлении от базолатеральной стороны к апикальной (от В к А) базолатеральный компартмент заполняют 300 мкл раствора тестируемого соединения, а в апикальный компартмент добавляют 100 мкл HBSS.
После инкубации планшета при 37°С в течение 2 ч из каждого компартмента извлекают по 50 мкл раствора и переносят в 96-луночные планшеты для измерения флуоресценции в подходящем планшетном ридере с возбуждением при 485 нм и излучением при 530 нм для мониторинга целостности монослоя. Чтобы проанализировать проницаемость в отношении тестируемых соединений, в каждый образец буфера добавляют 3 объема холодного метанола и образцы центрифугируют при 4°С в течение 15 минут. Для LC/MS/MS анализа используют аликвоту супернатанта 5 мкл.
Кажущуюся проницаемость (Ркаж, в единицах см/с) можно рассчитать, используя следующее уравнение:
у, \лек .средство 1
р у /I ^ L г тщептор
шж Плогщдъх время \лек.средство] , ,
где VA представляет собой объем (в мл) в акцепторной лунке (0,3 мл, в направлении от апикальной стороны к базалатеральной), площадь представляет собой площадь поверхности мембраны (0,143 см2 для характеризующихся высокопроизводительным скринингом (HTS) проницаемых подложек Transwell для 96-луночных планшетов), и время представляет собой общее время транспорта в с.
Кажущуюся проницаемость в направлении от апикальной стороны к базалатеральной (среднюю величину Ркаж в направлении от А к В, 1Е-6 см/с) измеряли для каждого соединения из примеров 1-16. Никакой кажущейся проницаемости в направлении от апикальной стороны к базалатеральной не удалось обнаружить для всех соединений из данных примеров. Соединения, для которых продемонстрирована низкая проницаемость, могут быть более желательными для доставки ингибиторов ENaC посредством ингаляционного введения.
Приведенное выше описание иллюстративных воплощений предназначено только для ознакомления других специалистов в данной области техники с изобретением заявителей, его принципами и его практическим применением, для того, чтобы другие специалисты в данной области техники без труда могли адаптировать и применять данное изобретение в его многочисленных формах, поскольку они могут наилучшим образом подходить к требованиям конкретного применения. Это описание и приведенные в нем конкретные примеры, показывающие воплощения по данному изобретению, предназначены только для иллюстрации. Ввиду этого, данное изобретение не ограничивается иллюстративными воплощениями, описанными в этой заявке, и может быть различным образом модифицировано. Кроме того, следует понимать, что различные признаки данного изобретения, которые для наглядности описаны в контексте отдельных воплощений, также могут быть объединены с образованием единого воплощения. И наоборот, различные признаки данного изобретения, которые для краткости изложения описаны в контексте одного воплощения, также могут быть скомбинированы с образованием их подкомбинаций.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
N (I) R2
где:
R1 выбран из водорода или С-малкила; m равно 1 или 2;
А выбран из фенила или гетероциклила;
X выбран из -С(=0)-, -C(=0)-NR4- или -0-C(=0)-NR5-;
п равно 2 или 3;
R2 выбран из водорода или С-^алкила;
R3 представляет собой Cs-балкил-ОН, где указанная Cs-балкильная группа дополнительно замещена дополнительными 3 или 4 группами -ОН; и R4 и R5 независимо выбраны из водорода или С-малкила; или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R1 представляет собой С-^алкил, a R4 и R5 оба представляют собой водород.
3. Соединение по п. 1 или п. 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой фенил.
4. Соединение по любому из п.п. 1-3 или его фармацевтически
приемлемая соль, где X представляет собой -C(=0)-NR4-.
5. Соединение по любому из п.п. 1-4, где:
R1 представляет собой С^алкил;
m равно 1;
А представляет собой фенил;
X представляет собой -C(=0)-NH-;
п равно 2;
R2 представляет собой С^алкил;
или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Соединение по любому из п.п. 1-5 или его фармацевтически
приемлемая соль, где R2 представляет собой н-гексил.
7. Соединение по п. 1, выбранное из:
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-2-(2-метилбензил)-3-(((1-(3-(((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метил)амино)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((4-((2-(гексил((28,ЗК,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(2-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамоил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-Ы-((Р)-3-((1-(3-(гексил((28,ЗР,4К)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-3-((1-(4-(гексил((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)бутаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-диамино-6-хлор-М-((К)-2-(2-метилбензил)-3-((1-(3-((28,ЗК,4К,5К)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексиламино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((1-(3-(reKCMn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пропаноил)пиперидин-4-ил)метиламино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)бензил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
4-((^)-3-(3,5-диамино-6-хлорпиразин-2-карбоксамидо)-2-(2-метилбензил)пропиламино)метил)фенил-2-(гексил((28^^^)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этилкарбамата;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
3,5-flMaMMHO-6-xnop-N-((R)-3-((4-((2-(reKCMn((2S,3R,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил)амино)этил)карбамоил)фенетил)амино)-2-(2-метилбензил)пропил)пиразин-2-карбоксамида;
или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль по любому из п.п. 1-7 и фармацевтически приемлемый адъювант, разбавитель или носитель.
9. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по любому из п.п. 1 -7 для применения в терапии.
10. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по любому из п.п. 1-7 для лечения ЕпаС(эпителиальные натриевые каналы)-опосредуемого болезненного состояния.
11. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по любому из п.п. 1-7 для изготовления лекарственного средства для использования в лечении ENaC-опосредуемого болезненного состояния.
12. Способ лечения или предупреждения ENaC-опосредуемого
болезненного состояния у млекопитающего, страдающего от указанного
болезненного состояния или имеющего риск его развития, включающий
введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по любому из п.п. 1-7.
13. Комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль по любому из п.п. 1-7 и один или более агентов, выбранных из списка, состоящего из:
• агониста бета-адренорецепторов;
• антагониста мускариновых рецепторов;
• смешанного антагониста мускариновых рецепторов и агониста бета-адренорецепторов;
• агониста Toll-подобных рецепторов (такого как агонист TLR7 или TLR9);
• антагониста аденозиновых рецепторов;
(стероидного или нестероидного) агониста рецептора глюкокортикоидов;
• антагониста р38;
• антагониста IKK2 (IkB киназный комплекс);
• антагониста PDE4 (фосфодиэстераза 4);
• модулятора функционирования хемокиновых рецепторов (такого как антагонист рецептора CCR1, CCR2B, CCR5 , CXCR2 или CXCR3);
• антагониста CRTh2 (молекула-гомолог хемоаттрактантного рецептора, экспрессируемая на Т-хелперных клетках 2 типа); или
• осмолита, такого как гипертонический физиологический раствор.
109
112
112
130
130
130
130
130
130
137